JP5606702B2 - Method for producing oligosaccharide - Google Patents
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Description
本発明は、オリゴ糖の製造方法に関する。 The present invention relates to a method for producing an oligosaccharide.
オリゴ糖は、整腸作用等の様々な生理活性作用を有することから健康食品等に利用されている。オリゴ糖の製造方法としては、酵素を利用してショ糖、乳糖、デンプン等から合成する方法、植物由来の多糖類を酵素分解する方法、酸またはアルカリ条件で糖を異性化する方法、植物に含まれるオリゴ糖を抽出する方法等が挙げられる(例えば、特許文献1)。 Oligosaccharides are used in health foods and the like because they have various physiological activities such as intestinal regulation. Oligosaccharides can be produced by synthesizing sucrose, lactose, starch, etc. using enzymes, enzymatically degrading plant-derived polysaccharides, isomerizing sugars under acid or alkaline conditions, Examples include a method of extracting the oligosaccharide contained therein (for example, Patent Document 1).
上記製造方法のなかで、植物に含まれるオリゴ糖を抽出する方法は、得られるオリゴ糖の安全性が高く、さらには、経済的であるので好ましい。しかしながら、一般に、植物中におけるオリゴ糖の含有量は低く、原料として使用し得る植物種に制限があるのが現状である。 Among the above production methods, a method for extracting oligosaccharides contained in plants is preferable because the resulting oligosaccharides are highly safe and economical. However, in general, the content of oligosaccharides in plants is low, and there are currently restrictions on plant species that can be used as raw materials.
本発明は上記従来の課題を解決するためになされたものであり、その目的とするところは、安全性の高いオリゴ糖、特に、フルクトースを末端に有するオリゴ糖の製造方法を提供することにある。 The present invention has been made to solve the above conventional problems, and an object of the present invention is to provide a method for producing highly safe oligosaccharides, particularly oligosaccharides having fructose at the terminal. .
本発明はオリゴ糖の製造方法を提供する。該製造方法は、カエデ科カエデ属樹木の樹液からオリゴ糖を採取する工程を含む。
好ましい実施形態においては、上記カエデ科カエデ属樹木が、サトウカエデ、イタヤカエデ、クロカエデ、アメリカハナノキ、ギンカエデ、シロスジカエデ、アメリカヤマモミジ、およびノルウェーカエデからなる群より選択される少なくとも一種である。
好ましい実施形態においては、上記樹液が濃縮樹液である。
好ましい実施形態においては、上記濃縮樹液が、メープルシロップおよび/またはメープルシュガーである。
好ましい実施形態においては、上記採取されるオリゴ糖が、末端にフルクトースを有するオリゴ糖を含む。
好ましい実施形態においては、上記採取されるオリゴ糖が、インベルターゼ消化後、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化して下記泳動条件でキャピラリー電気泳動に供したときに、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化グルコースに対して−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖を含む。
[泳動条件]
キャピラリー:内面未修飾のフューズドシリカキャピラリー(内径50μm、長さ62cm、有効長50cm)
印加電圧 :15kV
泳動溶液 :200mM ホウ酸緩衝液(pH10.5)
分析温度 :25℃
好ましい実施形態においては、上記採取されるオリゴ糖が、インベルターゼ消化後、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化して下記泳動条件でキャピラリー電気泳動に供したときに、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化グルコースに対して−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖を含む。
[泳動条件]
キャピラリー:内面未修飾のフューズドシリカキャピラリー(内径50μm、長さ62cm、有効長50cm)
印加電圧 :15kV
泳動溶液 :200mM ホウ酸緩衝液(pH10.5)
分析温度 :25℃
好ましい実施形態においては、上記採取されるオリゴ糖が、インベルターゼ消化することなく、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化して下記泳動条件でキャピラリー電気泳動に供したときに、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化グルコースに対して−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖を含む。
[泳動条件]
キャピラリー:内面未修飾のフューズドシリカキャピラリー(内径50μm、長さ62cm、有効長50cm)
印加電圧 :15kV
泳動溶液 :200mM ホウ酸緩衝液(pH10.5)
分析温度 :25℃
好ましい実施形態においては、上記採取されるオリゴ糖が、インベルターゼ消化することなく、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化して下記泳動条件でキャピラリー電気泳動に供したときに、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化グルコースに対して−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖を含む。
[泳動条件]
キャピラリー:内面未修飾のフューズドシリカキャピラリー(内径50μm、長さ62cm、有効長50cm)
印加電圧 :15kV
泳動溶液 :200mM ホウ酸緩衝液(pH10.5)
分析温度 :25℃
The present invention provides a method for producing an oligosaccharide. The production method includes a step of collecting oligosaccharides from the sap of a maple family tree.
In a preferred embodiment, the maple genus tree is at least one selected from the group consisting of sugar maple, itaya maple, black maple, red maple, gentian maple, white maple, maple, and norwegian maple.
In a preferred embodiment, the sap is a concentrated sap.
In a preferred embodiment, the concentrated sap is maple syrup and / or maple sugar.
In a preferred embodiment, the collected oligosaccharide includes an oligosaccharide having fructose at the end.
In a preferred embodiment, when the collected oligosaccharide is subjected to invertase digestion, derivatized with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone and subjected to capillary electrophoresis under the following electrophoresis conditions, 1-phenyl-3 -Containing oligosaccharides having a relative mobility of -3.2 to -2.9 cm 2 min -1 kV -1 relative to methyl-5-pyrazolone derivatized glucose.
[Electrophoresis conditions]
Capillary: Unmodified inner surface fused silica capillary (inner diameter 50 μm, length 62 cm, effective length 50 cm)
Applied voltage: 15 kV
Electrophoresis solution: 200 mM borate buffer (pH 10.5)
Analysis temperature: 25 ° C
In a preferred embodiment, when the collected oligosaccharide is subjected to invertase digestion, derivatized with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone and subjected to capillary electrophoresis under the following electrophoresis conditions, 1-phenyl-3 -Containing oligosaccharides having a relative mobility of -2.5 to -2.1 cm 2 min -1 kV -1 relative to methyl-5-pyrazolone derivatized glucose.
[Electrophoresis conditions]
Capillary: Unmodified inner surface fused silica capillary (inner diameter 50 μm, length 62 cm, effective length 50 cm)
Applied voltage: 15 kV
Electrophoresis solution: 200 mM borate buffer (pH 10.5)
Analysis temperature: 25 ° C
In a preferred embodiment, when the collected oligosaccharide is derivatized with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone without subjecting to invertase digestion and subjected to capillary electrophoresis under the following electrophoresis conditions, 1-phenyl Includes oligosaccharides having a relative mobility of −3.2 to −2.9 cm 2 min −1 kV −1 with respect to -3-methyl-5-pyrazolone derivatized glucose.
[Electrophoresis conditions]
Capillary: Unmodified inner surface fused silica capillary (inner diameter 50 μm, length 62 cm, effective length 50 cm)
Applied voltage: 15 kV
Electrophoresis solution: 200 mM borate buffer (pH 10.5)
Analysis temperature: 25 ° C
In a preferred embodiment, when the collected oligosaccharide is derivatized with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone without subjecting to invertase digestion and subjected to capillary electrophoresis under the following electrophoresis conditions, 1-phenyl Contains oligosaccharides having a relative mobility of −2.5 to −2.1 cm 2 min −1 kV −1 with respect to -3-methyl-5-pyrazolone derivatized glucose.
[Electrophoresis conditions]
Capillary: Unmodified inner surface fused silica capillary (inner diameter 50 μm, length 62 cm, effective length 50 cm)
Applied voltage: 15 kV
Electrophoresis solution: 200 mM borate buffer (pH 10.5)
Analysis temperature: 25 ° C
本発明によれば、安全性の高いオリゴ糖、特に、フルクトースを末端に有するオリゴ糖の製造方法が提供され得る。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the manufacturing method of highly safe oligosaccharide, especially the oligosaccharide which has fructose at the terminal can be provided.
上記のとおり、オリゴ糖の抽出原料として使用し得る植物種は限られていたところ、本発明者らは、カエデ科カエデ属樹木の樹液中にオリゴ糖が比較的高濃度(例えば、主成分のショ糖100molに対して5.5mol以上)で含まれていることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明のオリゴ糖の製造方法は、カエデ科カエデ属樹木の樹液からオリゴ糖を採取する工程を含む。本発明の製造方法によれば、カエデ科カエデ属樹木の樹液からオリゴ糖を採取するので、得られるオリゴ糖は、天然成分由来であり、これまで長く広範囲で食されてきた食品に含まれている成分であることから、極めて安全性が高い。また、本発明の製造方法によれば、高価な酵素を必要としないので、低コストでオリゴ糖を得ることができる。なお、本明細書において、オリゴ糖とは、鎖中に3〜20の単糖単位を有する重合糖を意味する。 As described above, where the plant species have been limited to be used as a raw material for extraction of the oligosaccharide, the present inventors have found that relatively high concentrations oligosaccharides is in the sap of Aceraceae Maple genus trees (e.g., principal component It was found to be contained in 5.5 mol or more with respect to 100 mol of sucrose, and the present invention was completed. That is, the oligosaccharide production method of the present invention includes a step of collecting oligosaccharide from the sap of a maple tree. According to the production method of the present invention, since oligosaccharides are collected from the sap of a maple tree, the resulting oligosaccharides are derived from natural ingredients and have been included in foods that have been eaten for a long time until now. Because it is a component, it is extremely safe. Moreover, according to the production method of the present invention, an expensive enzyme is not required, and thus an oligosaccharide can be obtained at a low cost. In the present specification, the oligosaccharide means a polymerized sugar having 3 to 20 monosaccharide units in the chain.
上記カエデ科カエデ属樹木としては、その樹液がオリゴ糖を含有する限りにおいて、任意の適切な樹木が採用され得る。カエデ科カエデ属樹木としては、サトウカエデ(Acer saccharum)、イタヤカエデ(Acer mono)、クロカエデ(Acer nigrum)、アメリカハナノキ(Acer rubrum)、ギンカエデ(Acer saccharinum)、シロスジカエデ(Acer pensylvanicum)、アメリカヤマモミジ(Acer spicatum)、および、ノルウェーカエデ(Acer platanoides)が好ましく、サトウカエデがさらに好ましい。これらの樹液は、オリゴ糖を高濃度で含有するので、優れた生産効率でオリゴ糖が得られ得るからである。 As the above-mentioned maple family, any suitable tree can be adopted as long as the sap contains an oligosaccharide. Acer saccharum, Acer nigrum, Acer rubrum, Acer saccharum, Acer saccharum, Acer saccharum, Acer saccharum. spicatum) and Norwegian maple (Acer platanoides) are preferred, and sugar maple is more preferred. This is because these saps contain oligosaccharides at a high concentration, so that oligosaccharides can be obtained with excellent production efficiency.
上記樹液は、上記カエデ科カエデ属樹木の幹に穴を開け、溢出する樹液を採取することにより得られる未加工の樹液(以下、「メープルサップ」と称する場合がある)であってもよく、該未加工の樹液を濃縮して得られる濃縮樹液であってもよい。未加工の樹液およびその濃縮樹液は、樹木からの採取時期に応じて、含有成分比、色、香り等が異なるが、いずれの時期に採取したものであっても用いることができる。 The sap may be a raw sap obtained by drilling a hole in the trunk of the maple genus tree and collecting the overflowing sap (hereinafter sometimes referred to as “maple sap”), It may be a concentrated sap obtained by concentrating the raw sap. The raw sap and its concentrated sap differ in content ratio, color, fragrance, etc. depending on the time of collection from the tree, but can be used at any time.
樹液の濃縮方法としては、任意の適切な方法が採用され得る。例えば、加熱濃縮方法;減圧濃縮、凍結濃縮、膜濃縮等の非加熱濃縮方法;および、それらの組み合わせが挙げられる。加熱濃縮は、濃縮効率に優れる点で好ましい。非加熱濃縮は、オリゴ糖の熱分解のおそれがない点で好ましい。加熱濃縮時の加熱温度は、通常、90〜120℃である。加熱時間は、所望の濃縮倍率等に応じて適切に設定され得る。 Arbitrary appropriate methods may be employ | adopted as a sap concentration method. Examples thereof include a heat concentration method; a non-heat concentration method such as vacuum concentration, freeze concentration, membrane concentration, and the like; and combinations thereof. Heat concentration is preferable in terms of excellent concentration efficiency. Non-heat concentration is preferable in that there is no fear of thermal decomposition of the oligosaccharide. The heating temperature at the time of heating and concentration is usually 90 to 120 ° C. The heating time can be appropriately set according to a desired concentration ratio or the like.
上記濃縮樹液の固形分濃度は、好ましくは5重量%以上、さらに好ましくは10重量%以上、特に好ましくは30重量%以上である。濃縮樹液としては、実質的に水分を含まず、固形分濃度がほぼ100重量%である濃縮物を用いてもよい。メープルサップの固形分濃度は通常2〜3重量%であるので、該固形分濃度を有する濃縮樹液を用いることにより、優れた生産効率でオリゴ糖が得られ得る。 The solid content concentration of the concentrated sap is preferably 5% by weight or more, more preferably 10% by weight or more, and particularly preferably 30% by weight or more. As the concentrated sap, a concentrate that is substantially free of moisture and has a solid content concentration of approximately 100% by weight may be used. Since the solid content concentration of maple sap is usually 2 to 3% by weight, an oligosaccharide can be obtained with excellent production efficiency by using a concentrated sap having the solid content concentration.
上記濃縮樹液としては、メープルシロップ、メープルシュガー等が好ましく用いられ得る。これらは、広く市販されており、入手が容易であるとともに、高濃度でオリゴ糖を含有し得る。 As the concentrated sap, maple syrup, maple sugar and the like can be preferably used. These are widely commercially available, are easily available, and can contain oligosaccharides at high concentrations.
1つの実施形態において、上記樹液から採取されるオリゴ糖は、末端にフルクトースを有するオリゴ糖を含む。In one embodiment, the oligosaccharide collected from the sap includes an oligosaccharide having fructose at the end.
該末端にフルクトースを有するオリゴ糖は、代表的には非還元糖である。該末端にフルクトースを有するオリゴ糖としては、例えば、ラフィノースが挙げられる。また、該末端にフルクトースを有するオリゴ糖の別の例としては、インベルターゼ消化により末端のフルクトースを脱離させた後、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン(以下、「PMP」と称する場合がある)誘導体化して下記泳動条件(A)のキャピラリー電気泳動に供したときに、PMP誘導体化グルコースに対して、−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖(以下、「第1のオリゴ糖」と称する場合がある)が挙げられる。また、該末端にフルクトースを有するオリゴ糖のさらに別の例としては、インベルターゼ消化およびPMP誘導体化して下記泳動条件(A)のキャピラリー電気泳動に供したときに、PMP誘導体化グルコースに対して、−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖(以下、「第2のオリゴ糖」と称する場合がある)が挙げられる。
[泳動条件(A)]
キャピラリー : 内面未修飾のフューズドシリカキャピラリー(内径50μm、長さ62cm、有効長(試料導入側キャピラリー末端から検出部までの長さ)50cm)
印加電圧 : 15kV
泳動溶液 : 200mM ホウ酸緩衝液(pH10.5)
分析温度 : 25℃
Oligosaccharides having fructose to the terminal is typically a non-reducing sugar. Examples of the oligosaccharide having fructose at the terminal include raffinose. As another example of an oligosaccharide having fructose at the terminal, 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (hereinafter referred to as “PMP”) is obtained after elimination of the terminal fructose by invertase digestion. Relative mobility of −3.2 to −2.9 cm 2 min −1 kV −1 with respect to PMP derivatized glucose when derivatized and subjected to capillary electrophoresis under the following electrophoresis conditions (A) (Hereinafter sometimes referred to as “first oligosaccharide”). Further, as another example of an oligosaccharide having fructose at the terminal, when it is subjected to capillary electrophoresis under the following electrophoresis conditions (A) after digestion with invertase and PMP derivatization, An oligosaccharide having a relative mobility of 2.5 to −2.1 cm 2 min −1 kV −1 (hereinafter, may be referred to as “second oligosaccharide”).
[Electrophoresis conditions (A)]
Capillary: Unmodified inner surface fused silica capillary (inner diameter 50 μm, length 62 cm, effective length (length from the sample introduction side capillary end to the detection part) 50 cm)
Applied voltage: 15 kV
Electrophoresis solution: 200 mM borate buffer (pH 10.5)
Analysis temperature: 25 ° C
上記PMP誘導体化グルコースに対する相対移動度は、下記式(I)に示すとおり、各試料の電気泳動移動度からPMP誘導体化グルコースの電気泳動移動度を減ずることによって求められる。すなわち、上記第1のオリゴ糖の相対移動度は、インベルターゼ消化およびPMP誘導体化した第1のオリゴ糖の電気泳動移動度からPMP誘導体化グルコースの電気泳動移動度を減ずることにより求められる。また、上記第2のオリゴ糖の相対移動度は、インベルターゼ消化およびPMP誘導体化した第2のオリゴ糖の電気泳動移動度からPMP誘導体化グルコースの電気泳動移動度を減ずることにより求められる。ここで、電気泳動移動度は、下記式(II)から求められる。なお、式(II)中、中性物質としては、メシチルオキシド、シンナミルアルコール等の任意の適切な中性物質が用いられ得る。 The relative mobility with respect to the PMP derivatized glucose is determined by subtracting the electrophoretic mobility of PMP derivatized glucose from the electrophoretic mobility of each sample as shown in the following formula (I). That is, the relative mobility of the first oligosaccharide is determined by subtracting the electrophoretic mobility of PMP-derivatized glucose from the electrophoretic mobility of the first oligosaccharide digested with invertase and PMP-derivatized. The relative mobility of the second oligosaccharide can be determined by subtracting the electrophoretic mobility of PMP-derivatized glucose from the electrophoretic mobility of invertase-digested and PMP-derivatized second oligosaccharide. Here, the electrophoretic mobility is obtained from the following formula (II). In the formula (II), any appropriate neutral substance such as mesityl oxide and cinnamyl alcohol can be used as the neutral substance.
式(I): [相対移動度(μeprel)]=[試料の電気泳動移動度]−[PMP誘導体化Glcの電気泳動移動度]
=L・l(t0 −1−t−1)V−1−L・l(t0 −1−tIS −1)V−1
=L・l(tIS −1−t−1)V−1 (単位:cm2min−1kV−1)
(L:キャピラリー全長(cm)、l:有効長(cm)、t0: 中性物質の移動時間(min)、t:試料の移動時間(min)、tIS: 標準物質(ここでは、PMP誘導体化グルコース)の移動時間(min)、V:印加電圧(kV))
Formula (I): [Relative Mobility (μep rel )] = [Electrophoretic Mobility of Sample] − [Electrophoretic Mobility of PMP Derivatized Glc]
= L·l (t 0 −1 −t −1 ) V −1 −L·l (t 0 −1 −t IS −1 ) V −1
= L·l (t IS −1 −t −1 ) V −1 (unit: cm 2 min −1 kV −1 )
(L: full length of capillary (cm), l: effective length (cm), t 0 : Neutral substance transfer time (min), t: Sample transfer time (min), t IS : Movement time (min) of standard substance (here, PMP derivatized glucose), V: applied voltage (kV))
式(II): 電気泳動移動度(μep)=L・l(t0 −1−t−1)V−1 (単位:cm2min−1kV−1)
(L:キャピラリー全長(cm)、l:有効長(cm)、t0: 中性物質の移動時間(min)、t:試料の移動時間(min)、V:印加電圧(kV))
Formula (II): Electrophoretic mobility (μep) = L·l (t 0 −1 −t −1 ) V −1 (unit: cm 2 min −1 kV −1 )
(L: full length of capillary (cm), l: effective length (cm), t 0 : Neutral substance transfer time (min), t: sample transfer time (min), V: applied voltage (kV))
キャピラリー電気泳動においては、電気浸透流速(l/t0)の影響によって再現性が低下する場合があるが、相対移動度を求める上記式(I)においては、数式の項から電気浸透流速(l/t0)が相殺され、除かれている。そのため、相対移動度は、信頼性が高い値として、エレクトロフェログラム上のピークの同定に有用である。また、式(II)に示すとおり、通常、電気泳動移動度を算出する際には測定試料に中性物質を添加する必要がある。これに対し、相対移動度は、予め比較対象となる成分を含む測定試料を用いることにより、中性物質を別途添加することなく求められ得る。そのため、相対移動度は、中性物質の添加による分離の影響を受けず、通常の電気泳動移動度よりも信頼性が高いと考えられる。特に、本発明においては、インベルターゼ消化およびPMP誘導体化した第1および第2のオリゴ糖と近い移動時間を有し、分離に関する挙動が類似するPMP誘導体化グルコースを標準物質として用いるので、得られる相対移動度の信頼性は十分に高いものである。 In capillary electrophoresis, reproducibility may decrease due to the influence of the electroosmotic flow rate (l / t 0 ). However, in the above formula (I) for obtaining the relative mobility, the electroosmotic flow rate (l / T 0 ) has been offset and removed. Therefore, the relative mobility is useful for identifying a peak on the electropherogram as a highly reliable value. Further, as shown in the formula (II), it is usually necessary to add a neutral substance to the measurement sample when calculating the electrophoretic mobility. On the other hand, the relative mobility can be obtained without adding a neutral substance separately by using a measurement sample containing a component to be compared in advance. Therefore, the relative mobility is not affected by the separation due to the addition of the neutral substance, and is considered to be more reliable than the normal electrophoretic mobility. In particular, in the present invention, PMP derivatized glucose having a migration time close to that of the first and second oligosaccharides digested with invertase and PMP derivatized and having similar behavior with respect to separation is used as a standard substance. The reliability of mobility is sufficiently high.
別の実施形態において、上記樹液から採取されるオリゴ糖は、末端にフルクトースを有さないオリゴ糖を含む。該末端にフルクトースを有さないオリゴ糖は、代表的には還元糖である。該末端にフルクトースを有さない還元性のオリゴ糖としては、例えば、インベルターゼ消化することなくPMP誘導体化して上記泳動条件(A)のキャピラリー電気泳動に供したときに、PMP誘導体化グルコースに対して、−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖(以下、「第1’のオリゴ糖」と称する場合がある)が挙げられる。また、該末端にフルクトースを有さない還元性のオリゴ糖の別の例としては、インベルターゼ消化することなくPMP誘導体化して上記泳動条件(A)のキャピラリー電気泳動に供したときに、PMP誘導体化グルコースに対して、−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖(以下、「第2’のオリゴ糖」と称する場合がある)が挙げられる。第1’のオリゴ糖および第2’のオリゴ糖はそれぞれ、上記第1のオリゴ糖および第2のオリゴ糖において末端のフルクトースが欠如したオリゴ糖であり得る。なお、それぞれのオリゴ糖の相対移動度の求め方は上述したとおりである。 In another embodiment, the oligosaccharides collected from the sap include oligosaccharides that do not have fructose at the ends. The oligosaccharide having no fructose at the terminal is typically a reducing sugar. As the reducing oligosaccharide having no fructose at the end, for example, when it is derivatized with PMP without digesting with invertase and subjected to capillary electrophoresis under the above electrophoresis conditions (A), , −3.2 to −2.9 cm 2 min −1 kV −1 oligosaccharides (hereinafter sometimes referred to as “first ′ oligosaccharides”). Another example of a reducing oligosaccharide having no fructose at the terminal is PMP derivatization when PMP derivatized without digestion with invertase and subjected to capillary electrophoresis under the above electrophoresis conditions (A). An oligosaccharide having a relative mobility of −2.5 to −2.1 cm 2 min −1 kV −1 with respect to glucose (hereinafter may be referred to as “second ′ oligosaccharide”) may be mentioned. The 1 ′ oligosaccharide and the 2 ′ oligosaccharide may be oligosaccharides lacking terminal fructose in the first oligosaccharide and the second oligosaccharide, respectively. The method for obtaining the relative mobility of each oligosaccharide is as described above.
上記樹液からオリゴ糖を採取する方法としては、任意の適切な方法が採用され得る。該採取方法としては、クロマトグラフィー法、限外ろ過法、再結晶法等が挙げられる。例えば、クロマトグラフィー法を用いる場合は、上記樹液をカラムクロマトグラフィーに供し、示差屈折計(RI)等の検出器でオリゴ糖を検出することにより、オリゴ糖を含む画分を分取することができる。これにより、粗精製または精製されたオリゴ糖が採取され得る。必要に応じて、上記樹液に任意の適切な溶媒を加え、所望の濃度に調整してからカラムクロマトグラフィーに供してもよい。溶媒は、代表的には水、緩衝液、親水性有機溶媒、またはこれらの混合物である。カラムクロマトグラフィーとしては、例えば、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。また、例えば、再結晶法を用いる場合は、水;メタノール、エタノール、アセトニトリル等の親水性(極性)有機溶媒;クロロホルム、ヘキサン等の非極性溶媒;またはこれらの混合液等から再結晶を行うことにより、粗精製または精製されたオリゴ糖を得ることができる。 Any appropriate method can be adopted as a method of collecting oligosaccharide from the sap. Examples of the collection method include a chromatography method, an ultrafiltration method, and a recrystallization method. For example, when the chromatography method is used, the fraction containing the oligosaccharide can be fractionated by subjecting the sap to column chromatography and detecting the oligosaccharide with a detector such as a differential refractometer (RI). it can. As a result, crude or purified oligosaccharides can be collected. If necessary, any appropriate solvent may be added to the sap to adjust the concentration to a desired level, and then subjected to column chromatography. The solvent is typically water, a buffer, a hydrophilic organic solvent, or a mixture thereof. Examples of column chromatography include gel filtration chromatography and ion exchange chromatography. For example, when using the recrystallization method, recrystallization from water; hydrophilic (polar) organic solvent such as methanol, ethanol, acetonitrile; nonpolar solvent such as chloroform, hexane; or a mixed solution thereof. Thus, a crudely purified or purified oligosaccharide can be obtained.
本発明の別の局面によれば、オリゴ糖が提供される。該オリゴ糖は、上記カエデ科カエデ属樹木の樹液に含まれるオリゴ糖である。該オリゴ糖は、インベルターゼ消化後、PMP誘導体化して上記泳動条件(A)でキャピラリー電気泳動に供したときに、PMP誘導体化グルコースに対して、−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖(第1のオリゴ糖)、および、−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖(第2のオリゴ糖)を含み得る。また、該オリゴ糖は、インベルターゼ消化することなく、PMP誘導体化して上記泳動条件(A)でキャピラリー電気泳動に供したときに、PMP誘導体化グルコースに対して、−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖(第1’のオリゴ糖)、および、−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の相対移動度を有するオリゴ糖(第2’のオリゴ糖)を含み得る。これらのオリゴ糖は、カエデ科カエデ属樹木の樹液に含まれているので、該樹液から任意の適切な方法で採取することにより得られ得る。採取方法としては、上述したとおりである。 According to another aspect of the present invention, oligosaccharides are provided. This oligosaccharide is an oligosaccharide contained in the sap of the above-mentioned maple family tree. When the oligosaccharide is digested with invertase and then PMP derivatized and subjected to capillary electrophoresis under the above electrophoresis conditions (A), it is −3.2 to −2.9 cm 2 min −1 with respect to PMP derivatized glucose. an oligosaccharide having a relative mobility of kV −1 (first oligosaccharide) and an oligosaccharide having a relative mobility of −2.5 to −2.1 cm 2 min −1 kV −1 (second oligo) Sugar). In addition, when the oligosaccharide is PMP derivatized without digestion with invertase and subjected to capillary electrophoresis under the above electrophoresis conditions (A), it is −3.2 to −2.9 cm with respect to PMP derivatized glucose. Oligosaccharide having a relative mobility of 2 min −1 kV −1 (first ′ oligosaccharide) and oligosaccharide having a relative mobility of −2.5 to −2.1 cm 2 min −1 kV −1 (Second 'oligosaccharide). Since these oligosaccharides are contained in the sap of a maple tree, they can be obtained by collecting from the sap by any appropriate method. The collection method is as described above.
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例になんら限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention concretely, this invention is not limited to these Examples at all.
[実験例1]
サトウカエデのメープルサップ 83μLを、遠心式減圧装置を用いて常温で蒸発乾固し、得られた常温蒸発乾固物を100mM 酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.5) 50μLに溶かした。得られた溶液に200U/ml インベルターゼ水溶液(生化学工業社製、製品名「Inverterse(candida utilis)」) 5μLを加え、37℃で30分インキュベートした後、沸騰水浴中で1分加熱して酵素反応を停止させた。これにより、メープルサップのインベルターゼ消化物を得た。
[Experimental Example 1]
83 μL of maple sap of sugar maple was evaporated to dryness at room temperature using a centrifugal decompression device, and the resulting room temperature evaporation to dryness was dissolved in 50 μL of 100 mM sodium acetate buffer (pH 4.5). 5 μL of 200 U / ml invertase aqueous solution (manufactured by Seikagaku Corporation, product name “Invertase (candida utilis)”) was added to the resulting solution, incubated at 37 ° C. for 30 minutes, and then heated in a boiling water bath for 1 minute. The reaction was stopped. As a result, an invertase digest of maple sap was obtained.
上記メープルサップのインベルターゼ消化物を蒸発乾固した後、0.3M NaOH 50μLを加えて再度溶解した。得られた溶液に、0.5mol/L 1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン(キシダ化学社製)のメタノール溶液を加えて混和し、70℃で30分反応させた。次いで、該反応液を0.3mol/L HClを用いて中和し、中和後の反応液に精製水 100μLを加えた。得られた溶液に対し、200μLのクロロホルムで3回抽出を行うことにより過剰試薬を除去し、遠心式減圧装置で溶媒を完全に蒸発させて固体反応物を得た。該固体反応物を精製水 100μLに溶解し、分析用試料とした。 The invertase digest of maple sap was evaporated to dryness, and then 50 μL of 0.3 M NaOH was added and dissolved again. To the obtained solution, a methanol solution of 0.5 mol / L 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (manufactured by Kishida Chemical Co., Ltd.) was added and mixed, and reacted at 70 ° C. for 30 minutes. Next, the reaction solution was neutralized with 0.3 mol / L HCl, and 100 μL of purified water was added to the reaction solution after neutralization. The excess solution was removed from the resulting solution by extraction with 200 μL of chloroform three times, and the solvent was completely evaporated with a centrifugal decompression device to obtain a solid reaction product. The solid reaction product was dissolved in 100 μL of purified water to obtain a sample for analysis.
上記分析用試料を以下の条件で、キャピラリー電気泳動に供した。該電気泳動で得られたエレクトロフェログラムを図1に示す。
[分析条件]
装置:キャピラリー電気泳動装置(大塚電子社製、製品名「CAPI−3100」)
キャピラリー:内面未修飾のフューズドシリカキャピラリー(内径50μm、長さ62cm、有効長50cm、ジーエルサイエンス社製、製品名「Fused Silica Capillary Tubing」)
泳動溶液:200mMホウ酸緩衝液(pH10.5)
印加電圧:15kV
検出波長:245nm
試料導入:落差法(2.5cm×30sec)
分析温度:25℃
上記泳動溶液は、四ホウ酸ナトリウム(ナカライテスク社製)を精製水中に溶解し、pHメーターでpHを測定しながら水酸化ナトリウムを加えてpH10.5とした後にメスアップして正確にホウ酸濃度として200mMとすることにより、調製した。使用時は、脱気し、次いで、メンブレンフィルター(0.45μm)でろ過してから使用した。
The sample for analysis was subjected to capillary electrophoresis under the following conditions. The electropherogram obtained by the electrophoresis is shown in FIG.
[Analysis conditions]
Apparatus: Capillary electrophoresis apparatus (manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd., product name “CAPI-3100”)
Capillary: Unmodified inner surface fused silica capillary (inner diameter 50 μm, length 62 cm, effective length 50 cm, manufactured by GL Sciences, product name “Fused Silica Capillary Tubing”)
Electrophoresis solution: 200 mM borate buffer (pH 10.5)
Applied voltage: 15 kV
Detection wavelength: 245 nm
Sample introduction: drop method (2.5 cm × 30 sec)
Analysis temperature: 25 ° C
The above electrophoretic solution was prepared by dissolving sodium tetraborate (manufactured by Nacalai Tesque) in purified water, adding sodium hydroxide to pH 10.5 while measuring pH with a pH meter, and measuring up accurately to obtain boric acid. The concentration was adjusted to 200 mM. At the time of use, it was deaerated and then filtered through a membrane filter (0.45 μm) before use.
[実験例2]
インベルターゼ消化しないこと以外は実験例1と同様にして、キャピラリー電気泳動を行った。該電気泳動で得られたエレクトロフェログラムを図2に示す。
[Experiment 2]
Capillary electrophoresis was performed in the same manner as in Experimental Example 1 except that invertase was not digested. The electropherogram obtained by the electrophoresis is shown in FIG.
図1に示されるとおり、メープルサップのインベルターゼ消化物のPMP誘導体を電気泳動して得られたエレクトロフェログラムには、オリゴ糖に相当する少なくとも4つのピークが明確に認められた(※1〜※4で示したピーク)。図1中の「※1」で示したピーク面積(ピークレスポンス)は、PMP誘導体化グルコースのピーク面積に対して、約6%であった。また、図2に示されるとおり、メープルサップのインベルターゼ未消化物のPMP誘導体を電気泳動して得られたエレクトロフェログラムには、オリゴ糖に相当する少なくとも4つのピークが明確に認められた(※1〜※4で示したピーク)。図1の※1〜※4で示したピークはそれぞれ、図2の※1〜※4で示したピークと検出時間がほぼ一致するものの、その面積は著しく大きかった。このことから、メープルサップ中には、末端にフルクトースを有する少なくとも4種類のオリゴ糖が比較的高濃度で含まれ、これらのオリゴ糖から末端のフルクトースが欠如したオリゴ糖が少量含まれることが示唆される。 As shown in FIG. 1, at least four peaks corresponding to oligosaccharides were clearly observed in the electropherogram obtained by electrophoresis of the PMP derivative of the invertase digest of maple sap (* 1 to * Peak indicated by 4). The peak area (peak response) indicated by “* 1” in FIG. 1 was about 6% with respect to the peak area of PMP-derivatized glucose. In addition, as shown in FIG. 2, at least four peaks corresponding to oligosaccharides were clearly observed in the electropherogram obtained by electrophoresis of PMP derivative of maple sap invertase undigested product (* 1 to * 4 peaks). The peaks indicated by * 1 to * 4 in FIG. 1 are substantially the same as the peaks indicated by * 1 to * 4 in FIG. This suggests that maple sap contains at least 4 types of oligosaccharides with fructose at the ends in a relatively high concentration and a small amount of oligosaccharides lacking terminal fructose from these oligosaccharides. Is done.
図1および2中のピーク「※1」に相当するPMP誘導体化オリゴ糖のPMP誘導体化グルコースに対する相対移動度を求めたところ、これらの相対移動度はともに−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の範囲内であった。また、図1および2中のピーク「※2」に相当するPMP誘導体化オリゴ糖のPMP誘導体化グルコースに対する相対移動度を求めたところ、これらの相対移動度はともに−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の範囲内であった。 When the relative mobility of the PMP-derivatized oligosaccharide corresponding to the peak “* 1” in FIGS. 1 and 2 with respect to the PMP-derivatized glucose was determined, both of these relative mobility values were −3.2 to −2.9 cm 2. It was within the range of min −1 kV −1 . Further, when the relative mobility of the PMP-derivatized oligosaccharide corresponding to the peak “* 2” in FIGS. 1 and 2 with respect to the PMP-derivatized glucose was determined, both of the relative mobility were −2.5 to −2. It was within the range of 1 cm 2 min −1 kV −1 .
[実験例3]
メープルサップ 83μLの常温蒸発乾固物の代わりにメープルシロップ 10μLを用いてインベルターゼ消化を行ったこと以外は実験例1と同様にしてキャピラリー電気泳動を行った。電気泳動で得られたエレクトロフェログラムを図3に示す。
[Experiment 3]
Maple Sap Capillary electrophoresis was carried out in the same manner as in Experimental Example 1, except that 10 μL of maple syrup was used instead of 83 μL of room temperature evaporation to dryness. The electropherogram obtained by electrophoresis is shown in FIG.
[実験例4]
メープルサップ 83μLの常温蒸発乾固物の代わりにメープルシロップ 10μLを用いたこと、および、インベルターゼ消化しないこと以外は実験例1と同様にしてキャピラリー電気泳動を行った。電気泳動で得られたエレクトロフェログラムを図4に示す。
[Experimental Example 4]
Capillary electrophoresis was performed in the same manner as in Experimental Example 1 except that 10 μL of maple syrup was used in place of 83 μL of maple sap at room temperature and evaporated, and no invertase digestion was performed. The electropherogram obtained by electrophoresis is shown in FIG.
図3に示されるとおり、メープルシロップのインベルターゼ消化物のPMP誘導体を電気泳動して得られたエレクトロフェログラムには、オリゴ糖に相当する少なくとも3つのピークが明確に認められた(※1〜※3で示したピーク)。図3中の「※1」で示したピーク面積は、PMP誘導体化グルコースのピーク面積に対して、約8%であった。また、図4に示されるとおり、メープルシロップのインベルターゼ未消化物のPMP誘導体を電気泳動して得られたエレクトロフェログラムには、オリゴ糖に相当する少なくとも3つのピークが明確に認められた(※1〜※3で示したピーク)。図3の※1〜※3で示したピークはそれぞれ、図4の※1〜※3で示したピークと検出時間がほぼ一致していた。 As shown in FIG. 3, at least three peaks corresponding to oligosaccharides were clearly observed in the electropherogram obtained by electrophoresis of the PMP derivative of the invertase digest of maple syrup (* 1 to *). Peak indicated by 3). The peak area indicated by “* 1” in FIG. 3 was about 8% with respect to the peak area of PMP-derivatized glucose. Further, as shown in FIG. 4, at least three peaks corresponding to oligosaccharides were clearly observed in the electropherogram obtained by electrophoresis of PMP derivative of maple syrup invertase undigested product (* 1 to * 3). The peaks indicated by * 1 to * 3 in FIG. 3 almost coincided with the peaks indicated by * 1 to * 3 in FIG.
図3および4中のピーク「※1」に相当するPMP誘導体化オリゴ糖のPMP誘導体化グルコースに対する相対移動度を求めたところ、これらの相対移動度はともに−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の範囲内であった。また、図3および4中のピーク「※2」に相当するPMP誘導体化オリゴ糖のPMP誘導体化グルコースに対する相対移動度を求めたところ、これらの相対移動度はともに−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の範囲内であった。 When the relative mobility of the PMP-derivatized oligosaccharide corresponding to the peak “* 1” in FIGS. 3 and 4 with respect to the PMP-derivatized glucose was determined, both of the relative mobility were −3.2 to −2.9 cm 2. It was within the range of min −1 kV −1 . Further, when the relative mobility of the PMP-derivatized oligosaccharide corresponding to the peak “* 2” in FIGS. 3 and 4 with respect to the PMP-derivatized glucose was determined, both of the relative mobility were −2.5 to −2. It was within the range of 1 cm 2 min −1 kV −1 .
[実験例5]
メープルサップ 83μLの常温蒸発乾固物の代わりにメープルシュガー(メープルファームズジャパン社製、製造番号「201004」) 3.5mgを用いてインベルターゼ消化を行ったこと以外は実験例1と同様にしてキャピラリー電気泳動を行った。電気泳動で得られたエレクトロフェログラムを図5に示す。
[Experimental Example 5]
Maple Sap Capillary electricity in the same manner as in Experimental Example 1 except that 83 mg of maple sugar (manufactured by Maple Farms Japan, production number “201004”) was used in place of 83 μL of normal temperature evaporated to dryness, and invertase digestion was performed. Electrophoresis was performed. The electropherogram obtained by electrophoresis is shown in FIG.
[実験例6]
メープルサップ 83μLの常温蒸発乾固物の代わりにメープルシュガー(メープルファームズジャパン社製、製造番号「201004」) 3.5mgを用いたこと、および、インベルターゼ消化しないこと以外は実験例1と同様にしてキャピラリー電気泳動を行った。電気泳動で得られたエレクトロフェログラムを図6に示す。
[Experimental Example 6]
Maple Sap As in Experimental Example 1 except that 83 mg of maple sugar (manufactured by Maple Farms Japan Co., Ltd., production number “201004”) was used instead of 83 μL of room temperature evaporated to dryness, and invertase was not digested. Capillary electrophoresis was performed. An electropherogram obtained by electrophoresis is shown in FIG.
図5に示されるとおり、メープルシュガーのインベルターゼ消化物のPMP誘導体を電気泳動して得られたエレクトロフェログラムには、オリゴ糖に相当する少なくとも3つのピークが明確に認められた(※1〜※3で示したピーク)。図5中の「※1」で示したピーク面積は、PMP誘導体化グルコースのピーク面積に対して、約7%であった。また、図6に示されるとおり、メープルシュガーのインベルターゼ未消化物のPMP誘導体を電気泳動して得られたエレクトロフェログラムには、オリゴ糖に相当する少なくとも3つのピークが明確に認められた(※1〜※3で示したピーク)。図5の※1〜※3で示したピークはそれぞれ、図6の※1〜※3で示したピークと検出時間がほぼ一致していた。 As shown in FIG. 5, at least three peaks corresponding to oligosaccharides were clearly observed in the electropherogram obtained by electrophoresis of the PMP derivative of the invertase digest of maple sugar (* 1 to *). Peak indicated by 3). The peak area indicated by “* 1” in FIG. 5 was about 7% with respect to the peak area of PMP derivatized glucose. Moreover, as shown in FIG. 6, at least three peaks corresponding to oligosaccharides were clearly observed in the electropherogram obtained by electrophoresis of PMP derivative of maple sugar invertase undigested product (* 1 to * 3). The peaks indicated by * 1 to * 3 in FIG. 5 almost coincided with the peaks indicated by * 1 to * 3 in FIG.
図5および6中のピーク「※1」に相当するPMP誘導体化オリゴ糖のPMP誘導体化グルコースに対する相対移動度を求めたところ、これらの相対移動度はともに−3.2〜−2.9cm2min−1kV−1の範囲内であった。また、図5および6中のピーク「※2」に相当するPMP誘導体化オリゴ糖のPMP誘導体化グルコースに対する相対移動度を求めたところ、これらの相対移動度はともに−2.5〜−2.1cm2min−1kV−1の範囲内であった。 When the relative mobility of the PMP-derivatized oligosaccharide corresponding to the peak “* 1” in FIGS. 5 and 6 with respect to the PMP-derivatized glucose was determined, both of these relative mobility values were −3.2 to −2.9 cm 2. It was within the range of min −1 kV −1 . Further, when the relative mobility of the PMP-derivatized oligosaccharide corresponding to the peak “* 2” in FIGS. 5 and 6 with respect to the PMP-derivatized glucose was determined, both of these relative mobility were −2.5 to −2. It was within the range of 1 cm 2 min −1 kV −1 .
[実験例7]
実験例1と同様にして得たメープルサップの分析試料、イソマルトペンタオース(Glcがα1−6結合した五糖)標品(生化学工業社製)のPMP誘導体、および、マルトースシリーズ(Glcがα1−4結合したオリゴ糖)(マルトヘプタオース(東京化成社製)、マルトテトラオース(シグマ社製)、およびマルトトリオース(和光純薬社製)を含む)標品のPMP誘導体を混合して得た試料を以下の条件でキャピラリー電気泳動に供した。該電気泳動で得られたエレクトロフェログラムを図7に示す。なお、図7中、GlcはPMP誘導体化グルコース、Mal3はPMP誘導体化マルトトリオース、Mal4はPMP誘導体化マルトテトラオース、Isomal5はPMP誘導体化イソマルトペンタオース、Mal7は、PMP誘導体化マルトヘプタオースを表す。
[分析条件]
装置:キャピラリー電気泳動装置(大塚電子社製、製品名「CAPI−3100」)
キャピラリー:内面未修飾のフューズドシリカキャピラリー(内径50μm、長さ62cm、有効長50cm、ジーエルサイエンス社製、製品名「Fused Silica Capillary Tubing」)
泳動溶液:50mMホウ酸緩衝液(pH10.5)
印加電圧:20kV
検出波長:245nm
試料導入:落差法(2.5cm×30sec)
分析温度:25℃
[Experimental Example 7]
An analytical sample of maple sap obtained in the same manner as in Experimental Example 1, a PMP derivative of isomaltopentaose (pentasaccharide in which Glc is α1-6 linked) (manufactured by Seikagaku Corporation), and maltose series (Glc is α1-4 linked oligosaccharides) (including maltoheptaose (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.), maltotetraose (manufactured by Sigma), and maltotriose (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)) The sample obtained was subjected to capillary electrophoresis under the following conditions. An electropherogram obtained by the electrophoresis is shown in FIG. In FIG. 7, Glc is PMP derivatized glucose, Mal 3 is PMP derivatized maltotriose, Mal 4 is PMP derivatized maltotetraose, Isomal 5 is PMP derivatized isomaltopentaose, and Mal 7 is a PMP derivative. Represents maltoheptaose.
[Analysis conditions]
Apparatus: Capillary electrophoresis apparatus (manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd., product name “CAPI-3100”)
Capillary: Unmodified inner surface fused silica capillary (inner diameter 50 μm, length 62 cm, effective length 50 cm, manufactured by GL Sciences, product name “Fused Silica Capillary Tubing”)
Electrophoresis solution: 50 mM borate buffer (pH 10.5)
Applied voltage: 20 kV
Detection wavelength: 245 nm
Sample introduction: drop method (2.5 cm × 30 sec)
Analysis temperature: 25 ° C
図7に示されるとおり、イソマルトペンタオースおよびマルトースシリーズ標品のPMP誘導体はすべて重合度が大きい順に検出され、メープルサップインベルターゼ消化物由来のオリゴ糖のピーク(「※」で示す)はイソマルトペンタオース(五糖)のピークとマルトテトラオース(四糖)のピークとの間に検出された。重合度が同じであるマルトースシリーズのオリゴ糖とイソマルトシリーズのオリゴ糖とでは、イソマルトシリーズのオリゴ糖の方が大きい泳動速度を有することを考慮すると、「※」のピークは四糖または五糖のオリゴ糖に相当することが予測される。したがって、インベルターゼ未消化のメープルサップは、末端にフルクトースを有し、五糖または六糖であるオリゴ糖を含むと考えられる。 As shown in FIG. 7, all of the PMP derivatives of isomaltopentaose and maltose series were detected in descending order of degree of polymerization, and the peak of oligosaccharide derived from the maple sap invertase digestion (shown by “*”) is isomalt. It was detected between the pentaose peak and the maltotetraose peak. Considering that maltose-series oligosaccharides and isomalt-series oligosaccharides with the same degree of polymerization have higher migration speeds, the peak of “*” is tetrasaccharide or five-saccharide. It is expected to correspond to a sugar oligosaccharide. Therefore, invertase-undigested maple sap is thought to contain oligosaccharides that have fructose at the ends and are pentasaccharide or hexasaccharide.
本発明の製造方法によって得られるオリゴ糖は、安全性が高く、整腸作用、保湿作用等の高い機能性が期待されることから、飲食品、化粧品、飼料等の分野において好適に利用され得る。また、メープルシロップおよびメープルシュガーの風味に寄与することが期待されることから、飲食品の分野において特に好適に利用され得る。 The oligosaccharide obtained by the production method of the present invention is highly safe and is expected to have high functionality such as intestinal regulation and moisturizing action, and therefore can be suitably used in the fields of food and drink, cosmetics, feed, etc. . Further, since it is expected to contribute to the flavor of maple syrup and maple sugar, it can be particularly suitably used in the field of food and drink.
Claims (4)
・インベルターゼ消化後、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化して下記泳動条件でキャピラリー電気泳動に供したときに、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化グルコースに対して−2.5〜−2.1cm 2 min −1 kV −1 の相対移動度を有するオリゴ糖(1)、
・インベルターゼ消化することなく、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化して下記泳動条件でキャピラリー電気泳動に供したときに、1−フェニル−3−メチル−5−ピラゾロン誘導体化グルコースに対して−2.5〜−2.1cm 2 min −1 kV −1 の相対移動度を有するオリゴ糖(2)。
[泳動条件]
キャピラリー:内面未修飾のフューズドシリカキャピラリー(内径50μm、長さ62cm、有効長50cm)
印加電圧 :15kV
泳動溶液 :200mM ホウ酸緩衝液(pH10.5)
分析温度 :25℃ A method for producing an oligosaccharide, comprising a step of collecting the following oligosaccharide (1) and / or oligosaccharide (2) from a sap of a maple tree of the maple family ;
-After invertase digestion, when derivatized with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone and subjected to capillary electrophoresis under the following electrophoresis conditions-against 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone derivatized glucose An oligosaccharide (1) having a relative mobility of 2.5 to −2.1 cm 2 min −1 kV −1 ,
When 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone derivatized without digestion with invertase and subjected to capillary electrophoresis under the following electrophoresis conditions, 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone derivatized glucose And oligosaccharide (2) having a relative mobility of −2.5 to −2.1 cm 2 min −1 kV −1 .
[Electrophoresis conditions]
Capillary: Unmodified inner surface fused silica capillary (inner diameter 50 μm, length 62 cm, effective length 50 cm)
Applied voltage: 15 kV
Electrophoresis solution: 200 mM borate buffer (pH 10.5)
Analysis temperature: 25 ° C
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