JP5486783B2 - ペルオキシダーゼを用いた中性下の消臭組成物 - Google Patents
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Description
そこで、本発明者らがバラ科キイチゴ属植物抽出物の消臭組成物中の含有量を増加させること無くその消臭効果を維持あるいは高めることができるような種々の成分との組み合わせを鋭意研究した結果、中性条件下(pH6.0〜8.0)で酵素であるペルオキシダーゼとバラ科キイチゴ層植物抽出物(甜茶、ブラックベリー、ラズベリー)の併用により消臭活性が顕著に向上することを見出した。
例えば、植物抽出物とポリフェノールオキシダーゼの併用による消臭効果に関する論文として非特許文献1乃至4がある。非特許文献1、2、3、4は野菜、果物、キノコと酵素(ポリフェノールオキシダーゼ)の併用による消臭効果および消臭メカニズムについて開示している。しかしながらいずれの論文もバラ科キイチゴ属植物抽出物とペルオキシダーゼとの併用による消臭効果は記載されていない。
Food Science and Technology Research, 5(2), 176−180, 1999 日本食生活学会誌、10(3)、15−19、1999 高砂香料時報 No.133、p6−14(1999.12.05) Biosici. Biotech. Biochem., 61(12), 2080-2084, 1997
歯科審美 Vol.17, No.1, p90−94(2004.09)
J. Agric. Food Chem. 2001, 49(11), 5509-5514 J. Agric. Food Chem. 2004, 52(17), 5513-5518
さらに、本発明によれば、前記バラ科キイチゴ属植物が、甜茶、ブラックベリー、およびラズベリーの各抽出物からなる群から選択される1種または2種以上の抽出物であることを特徴とする上記に記載の消臭組成物が提供される。
また、本発明によれば、前記消臭組成物摂取後の唾液中のpHが6.0以上8.0以下の範囲であることを特徴とする上記に記載の消臭組成物が提供される。
また、本発明によれば、上記に記載の消臭組成物からなるチューインガム、キャンディ、タブレット、またはグミゼリーが提供される。
さらにまた、本発明によれば、前記バラ科キイチゴ属植物の消臭組成物中の含有量が、0.01重量%以上5.0重量%以下であり、前記ペルオキシダーゼの消臭組成物中の含有量が0.01ppm以上10ppm以下である上記に記載の消臭組成物が提供される。
さらにまた、本発明によれば、前記バラ科キイチゴ属植物の消臭組成物中の含有量が、0.01重量%以上5.0重量%以下であり、前記ペルオキシダーゼの添加量が消臭組成物100gに対して0.18U以上180U以下の力価である上記に記載の消臭組成物が提供される。
本発明の消臭組成物は、バラ科キイチゴ属(Rubus)植物を主原料とする。
バラ科キイチゴ属(Rubus)植物としては、ラズベリー(Rubus idaeus)、ブラックベリー(Rubus fruticosus)、カジイチゴ(Rubus trifidus)、クロミキイチゴ(Rubus occidentalis)、甜茶(Rubus suavissimus)等が挙げられる。バラ科キイチゴ属(Rubus)植物は、果皮、葉、果肉、果実、材、樹皮、根、好ましくはその葉を乾燥させたものを使用する。本発明の有効成分である上記植物の抽出物を得る方法については特に限定しないが、上記植物を適当な粉砕手段で粉砕し、二段階抽出を含む溶媒抽出等の方法により抽出物を調製する。抽出溶媒としては、水及びメタノール、エタノール、n−プロパノール並びにn−ブタノール等の低級アルコール、エーテル、クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、グリセリン、プロピレングリコール等の有機溶媒の1種または2種以上を混合して使用するが、好ましくは水または親水性の有機溶媒を使用する。さらに、本発明の抽出物は、人にまたは飲食品として用いられことが多いことを考慮すると、抽出溶媒としては安全性の面から水とエタノールとの組み合わせを用いるのが好ましい。
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、それらによって本発明の範囲を制限するものではない。
試料の調整方法
(実施例1−1)
使用酵素
ペルオキシダーゼ(東洋紡績株式会社、力価180U/mg以上)をリン酸緩衝溶液に溶解させて使用した。
酵素活性測定法
試験管に2.0mlの5%(W/V)ピロガロール溶液、1.0mlの0.147MH2O2水溶液、2.0mlの0.1Mリン酸緩衝液(pH6.0)、14.0mlの蒸留水の混合溶液を調製し、20℃で約5分間予備加温する。この反応液に酵素溶液(0.1Mリン酸緩衝液(pH6.0)で酵素を溶解)1.0mlを加え、反応を開始する。20℃で20秒間反応させた後、2NのH2SO4溶液1.0mlを加え反応を停止させる。反応停止後の混液から生成したPurpurogallinをエーテル15mlで抽出する。この操作を5回繰り返し、抽出液を合わせ、更にエーテルを加えて全量を100mlにする。この液につき420nmにおける吸光度を測定する。ブランクは上記反応液を20℃で20秒間放置後、2NのH2SO4溶液1.0mlを加えて混和し、ついで酵素溶液1.0mlを加えて調製する。この液につき上記同様エーテル抽出を行って吸光度を測定する。
U/ml=(サンプルの吸光度−ブランクの吸光度)×希釈倍率/0.117
U/mg=U/ml×1/C
0.117:1mg%Purpurogallinエーテル溶液の420nmにおける吸光度
C :溶解時の酵素濃度(mg/ml)
使用植物
バラ科キイチゴ属植物として甜茶(Rubus suavissimus)、ブラックベリー(Rubus fruticosus)、対照植物としてローズマリー、緑茶を使用した。
甜茶抽出物の調製法(二段階抽出品(特願2006-223707)使用)
甜茶葉乾燥粉末30gに、前処理剤として100%エタノール300mlを加え、還流冷却器をつけて、60℃・1時間還流しながら抽出した。濾別により得られた抽出残渣を続けて水300mlを加え、還流冷却器をつけて、90℃・1時間還流しながら抽出した。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、凍結乾燥することにより抽出物6.4g(収率21%)を得た。
ブラックベリー、ローズマリー、緑茶抽出物の調製法
ブラックベリー葉乾燥粉末30gに、水300mlを加え、還流冷却器をつけて、90℃・1時間還流しながら抽出した。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、凍結乾燥することにより抽出物5.2g(収率17.4%)を得た。同様にしてローズマリー抽出物は5.2g(17.2%)、緑茶抽出物は9.8g(収率32.6%)を得た。
甜茶抽出物およびペルオキシダーゼ含有タブレットの作製:
下記表1の処方例記載の原料を混合し、常法によりタブレットを得た。
甜茶抽出物およびペルオキシダーゼ含有チューインガムの作製:
調製した甜茶抽出物、ペルオキシダーゼを含む下記表2の処方例記載の原料を混合し、常法により、実施例チューインガムを得た。
さらに、ペルオキシダーゼを含有させず調製した甜茶抽出物のみを消臭素材として含有させた対照例チューインガムを、常法により得た。
消臭試験法
(実施例2-1)
酵素による消臭試験
バイアル瓶に試料を精密に量り取り、リン酸緩衝溶液(pH5.0〜9.0)を1ml加えてよく溶解または分散させた後、酵素溶液を100μl加え、さらに25ppmメチルメルカプタンナトリウム溶液を500μl加えて、テフロン(登録商標)コートされたゴム栓で封をし、37℃で5分間反応させた。反応後のバイアル中のヘッドスペースガス150μlをFPD検出器付きのガスクロマトグラフに注入し、得られたピーク高さからメチルメルカプタン量を算出した。
消臭活性評価
試料を添加した時のメチルメルカプタン量(MS)と無添加時のメチルメルカプタン量(MB)を求め、次式によりメチルメルカプタン消臭率を算出した。
メチルメルカプタン消臭率(%)=(MB − MS)/ MB × 100
作製タブレットの消臭試験法1:
バイアル瓶に試料として作製タブレット2gを精密に量り取り、0.2Mリン酸緩衝溶液(pH7.5)を8ml加えてよく溶解させ試験液とした。試験液1mlに25ppmメチルメルカプタンナトリウム溶液を500μl加えて、テフロン(登録商標)コートされたゴム栓で封をし、37℃で5分間反応させた。反応後のバイアル中のヘッドスペースガス150μlをFPD検出器付きのガスクロマトグラフに注入し、得られたピーク高さからメチルメルカプタン量を算出した。
官能評価法:
官能評価法は、試験10分前に5名の被験者の口臭を採取したあと、餃子6個を2分間で摂取し、餃子摂取直後の呼気を臭い袋に採取し、作製した実施例及び対照例のチューインガム摂取(5分間咀嚼)、もしくはうがい(20mlの水で2回洗浄)を行ない、摂取直後の呼気を臭い袋にて採取し、口臭の程度を3名の官能評価パネラーにより評価した。官能評価パネラーは5名の被験者から採取した臭い袋中の臭いを、下記表3に従い評価し、3名の官能評価パネラーの値を平均化し、数値化した。
バラ科キイチゴ属植物抽出物、緑茶抽出物およびローズマリー抽出物の消臭率:
中性下におけるバラ科キイチゴ属植物抽出物と緑茶抽出物、ローズマリー抽出物とのメチルメルカプタン消臭率の比較試験を、実施例2−1の試験法に従い実施した。なお、本実施例において、pH6.0または7.0の反応系に含まれるバラ科キイチゴ属植物抽出物はそれぞれ1mg、酵素量は0ng(表4中にて「ペルオキシダーゼ(−)」と記載)または100ng(表4中にて「ペルオキシダーゼ(+)」と記載)であり、37℃で5分間反応させた。
その結果、以下の表4から明らかなように、バラ科キイチゴ属植物はpH7の範囲でペルオキシダーゼ添加によるメチルメルカプタン消臭率の増加が認められた。さらに、バラ科キイチゴ属植物はpH6〜7の範囲でペルオキシダーゼ添加により顕著なメチルメルカプタン消臭率の増加が認められた。また、バラ科キイチゴ属植物は対照例として用いたローズマリー、緑茶よりpH6〜7の範囲で消臭活性により優れていることが確認された。
各pHにおけるメチルメルカプタン消臭率とペルオキシダーゼの酵素相対活性:
各pHにおけるメチルメルカプタン消臭率と酵素の相対活性との関係を、実施例1−2、実施例2−1の試験法に準じて実施した。なお、pH4〜8条件におけるペルオキシダーゼの酵素活性はpH6.5における酵素活性を100とした際の相対活性で表した。
なお、本実施例のメチルメルカプタン消臭率の試験条件では、pH5〜9の反応系に含まれる甜茶抽出物量は1.0mg、酵素量は0ngまたは100ngであり、37℃で5分間反応させた。
その結果、図1に示すような結果が得られた。図1から明らかなように、pH6.0〜pH8.0の中性条件下でペルオキシダーゼ添加による消臭率の向上が認められた。刺激による全唾液のpHは約6.8〜7.5との報告1)がされている。本試験では前記した唾液pHの範囲であるpH6.5〜pH7.5でペルオキシダーゼ添加による顕著な消臭率の向上が確認された。
1)唾液の科学 JORMA O. Tenovuo著、p44、一世出版株式会社発行
特に、pH6.5においても顕著なメチルメルカプタン消臭率の増加が確認された。これは、メチルメルカプタン消臭に対し、甜茶抽出物とペルオキシダーゼとによる相乗効果があることを示している。
酵素濃度とメチルメルカプタン消臭率:
酵素濃度とメチルメルカプタン消臭率との関係を、実施例2−1の試験法に従い実施した。なお、本実施例においては、反応系に含まれる甜茶抽出物量は1.0mg、酵素量は0〜1000ngであり、37℃、pH7.0で5分間反応させた。
その結果、以下の表5から明らかなように、甜茶抽出物の添加量を1mgに固定した場合、ペルオキシダーゼの添加量10〜100ngまで添加量の増加に伴いメチルメルカプタン消臭活性の向上が認められた。しかしながら、ペルオキシダーゼ添加量を100ng以上に増やしてもメチルメルカプタン消臭率の顕著な向上は認められなかった。
基質濃度とメチルメルカプタン消臭活性:
甜茶抽出物の基質濃度とメチルメルカプタン消臭率との関係を、実施例2−1の試験法に従い実施した。なお、本実施例においては、反応系に含まれる甜茶抽出物量は0.5〜3.0mg、酵素量は0ng(表6中にて「ペルオキシダーゼ(−)」と記載)または100ng(表6中にて「ペルオキシダーゼ(+)」と記載)であり、37℃、pH7.0で5分間反応させた。
その結果、以下の表6から明らかなように、ペルオキシダーゼの酵素の添加量を100ngに固定した場合、甜茶抽出物の添加量2.0mgまで消臭活性の向上が認められた。しかしながら、甜茶抽出物の添加量を3.0mg以上に増やしてもメチルメルカプタン消臭率の顕著な向上は認められなかった。
作製タブレットでの消臭効果試験:
実施例1−6の試験法で調製したタブレットを用いて、実施例2−3の試験法に従ってメチルメルカプタン消臭率を評価した。
その結果、以下の表7から明らかなように、本試験において用いられるバラ科キイチゴ属抽出物(甜茶抽出物)の組成物中への配合量としては、0.01〜5.0重量%、好ましくは0.05〜2.0重量%が望ましいことが判った。バラ科キイチゴ属抽出物の組成物中への配合量が0.05重量%以下では十分な消臭効果が得られず、2.0重量%を超えて配合しても添加量の増加に見合った消臭効果の上昇が見られない。また、本試験において用いられるペルオキシダーゼの組成物中への配合量としては、組成物の物性にもよるが、ペルオキシダーゼの添加量は0.01〜10ppm、好ましくは0.01〜2ppmが望ましいことが判った。また、上記ペルオキシダーゼの組成物への添加量を力価で示すと組成物100gに対してペルオキシダーゼ0.18U以上180U以下、好ましくは0.18U以上36U以下が望ましいことが判った。
ペルオキシダーゼの組成物中への配合量が0.01ppm(0.18U/組成物100g)以下では十分な消臭効果が得られず、2ppm(36U/組成物100g)を超えて配合しても添加量の増加に見合った消臭効果の上昇が見られなかった。
作製チューインガムのニンニク臭抑制効果(ヒト試験):
実施例1−7の試験法で調製したチューインガムを用いて、実施例2−4の試験法に従って官能評価法を実施した。
その結果、以下の表8に示すように、実施例チューインガムはガム摂取後も最も強くニンニク臭を抑えることが確認された。
実施例1−4および1−5で示した方法により調製した抽出物を用いて、以下の処方により、キャンディ、グミゼリー、トローチを製造した。
キャンディの処方
砂糖 50.0重量%
水あめ 34.0
クエン酸 2.0
ブラックベリー抽出物 0.2
ペルオキシダーゼ 0.00001
(180U/mg)
香料 0.2
水 残
100.0
グミゼリーの処方
ゼラチン 60.0重量%
水あめ 21.40
砂糖 8.5
植物油脂 4.5
マンニトール 3.0
リンゴ酸 2.0
甜茶抽出物 0.1
ペルオキシダーゼ 0.00002
(180U/mg)
香料 0.5
100.0
トローチの処方
ブドウ糖 72.3重量%
乳糖 16.0
アラビアガム 6.0
香料 1.0
モノフルオロリン酸ナトリウム 0.7
甜茶抽出物 1.0
ブラックベリー抽出物 1.0
ペルオキシダーゼ 0.00003
(180U/mg)
乳糖 2.0
100.0
Claims (4)
- 甜茶抽出物とペルオキシダーゼとを含有する消臭組成物であって、該甜茶抽出物の消臭組成物中の含有量が、0.01重量%以上5.0重量%以下であり、該ペルオキシダーゼの消臭組成物中の含有量が0.01ppm以上10ppm以下であることを特徴とする消臭組成物。
- 前記消臭組成物摂取後の唾液中のpHが6.0〜8.0の範囲であることを特徴とする請求項1に記載の消臭組成物。
- 請求項1又は2に記載の消臭組成物からなるチューインガム、キャンディ、タブレット、またはグミゼリー。
- 甜茶抽出物とペルオキシダーゼとを含有する消臭組成物であって、該甜茶抽出物の消臭組成物中の含有量が、0.01重量%以上5.0重量%以下であり、該ペルオキシダーゼの添加量が消臭組成物100gに対して0.18U以上180U以下の力価である消臭組成物。
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