JP5130999B2 - 抗癌剤の有効性予測方法 - Google Patents
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Description
再発・進行乳癌患者に対しトラスツズマブ単独療法を受け、かつインフォームド・コンセントの得られた患者24例について、治療開始前に血液を採取し、血漿を遠心分離した。採取した検体(血漿)は連結可能匿名化を行った後、−80度で凍結保存した。
[血漿中の糖タンパク質糖鎖の分析]
糖タンパク質糖鎖の分析は、質量分析装置を用いて以下のように行った。27μLの血漿に、トリプシン及びN−グリコシダーゼFを加えて反応させ、タンパク質と修飾糖鎖を遊離させた。遊離した糖鎖を、糖鎖捕捉ビーズを用いて選択的に捕捉し、ラベル化を行った。その後、ビーズに捕捉された糖鎖を精製、分離し、MALDI−TOF−MS型分析機(Voyager-DETM STR Workstation;Applied Biosystems社製)により質量分析を行った。得られたシグナルは、内部標準と比較することにより定量化を行った。統計解析はt検定を用いた。また、質量分析の結果得られたシグナルから、GlycoSuite on line database(Proteome Systems)を用いて糖鎖の構造式を決定した。半数以上の症例で見られる31種類の糖鎖を表1にまとめた。
得られた31のピーク(糖鎖)について、臨床情報との相関を検討したところ、2534m/z糖鎖の検出強度はトラスツズマブ療法非奏功例(PD群;8例)では、4.33±8.13であるのに対し、トラスツズマブ療法奏功例(non−PD群;16例)では、16.07±11.60であり、non−PD群において有意に高いことが明らかとなった (図1)。さらに、2534m/z糖鎖の検出強度の高い群(High group;15例)は、低い群(Low group;9例)と比較して、無増悪期間の有意な延長が認められた(図2)。これらの結果から、血漿中の2534m/z糖鎖を指標として、トラスツズマブの治療効果の予測が可能であることが示された。
Claims (3)
- トラスツズマブ(trastuzumab)投与前に乳癌治療におけるトラスツズマブの奏功性を分析するためのデータを収集する方法であって、以下の(1)〜(4)の工程を順次備えたことを特徴とする方法;
(1)癌患者より採取された血漿中の糖タンパクからN結合型糖鎖を遊離させる工程;
(2)遊離させた糖鎖を精製する工程;
(3)精製した糖鎖の質量分析を行う工程;
(4)MALDI−TOF−MS型分析機を用いたときの2534m/zの糖鎖、又はそれに相当するピークの糖鎖の検出強度とトラスツズマブの奏功性とが、正の相関関係にあることを指標として、前記癌患者におけるトラスツズマブの奏功性を分析するためのデータを収集する工程; - トラスツズマブ(trastuzumab)投与前に乳癌治療におけるトラスツズマブによる無増悪期間の延長性を分析するためのデータを収集する方法であって、以下の(1)〜(4)の工程を順次備えたことを特徴とする方法;
(1)癌患者より採取された血漿中の糖タンパクからN結合型糖鎖を遊離させる工程;
(2)遊離させた糖鎖を精製する工程;
(3)精製した糖鎖の質量分析を行う工程;
(4)MALDI−TOF−MS型分析機を用いたときの2534m/zの糖鎖、又はそれに相当するピークの糖鎖の検出強度とトラスツズマブの無増悪期間延長性とが、正の相関関係にあることを指標として、前記癌患者におけるトラスツズマブの無増悪期間の延長性を分析するためのデータを収集する工程; - トリプシン及びN−グリコシダーゼFを用いて、N結合型糖鎖を遊離させることを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。
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