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JP5085198B2 - Antioxidant - Google Patents

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JP5085198B2
JP5085198B2 JP2007157379A JP2007157379A JP5085198B2 JP 5085198 B2 JP5085198 B2 JP 5085198B2 JP 2007157379 A JP2007157379 A JP 2007157379A JP 2007157379 A JP2007157379 A JP 2007157379A JP 5085198 B2 JP5085198 B2 JP 5085198B2
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Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
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Description

本発明は、キク科の白眉草の抽出物を含有する抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤、並びにこれらを含む皮膚化粧料及び美容用飲食品に関する。   The present invention relates to an antioxidant, an anti-aging agent, and an anti-inflammatory agent containing an extract of Asteraceae white eyebrows, and skin cosmetics and cosmetic foods and drinks containing them.

近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン(・O )、過酸化水素(H)、一重項酸素()、ヒドロキシラジカル(・OH)〕等がある。このような活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
しかし、前記活性酸素の過剰な生成は生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ(SOD)の触媒作用により逐次消去されている。しかし、スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、或いはSODの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の一つであると考えられている。これらの中でも、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため、スーパーオキサイドが生成し易い器官であるから、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解、変性、又は架橋したり、また油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成して、皮膚のしわを形成したり、皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着を引き起こすという問題がある(非特許文献1参照)。
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物(特許文献1参照)、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物の抽出物(特許文献2参照)、タマコチョウの抽出物(特許文献3参照)、スイオウの抽出物(特許文献4参照)、などに有効性が確認されている。
In recent years, active oxygen has attracted attention as a factor that oxidizes biological components, and its adverse effect on living organisms has become a problem. Reactive oxygen is generated in the process of energy metabolism in living cells, and superoxide [that is, superoxide anion (· O 2 ) generated by one-electron reduction of oxygen molecules, hydrogen peroxide (H 2 O 2 ), Singlet oxygen ( 1 O 2 ), hydroxy radical (.OH)], and the like. Such active oxygen is essential for the phagocytic sterilization mechanism and plays an important role in removing viruses and cancer cells.
However, excessive generation of the active oxygen attacks in vivo molecules constituting membranes and tissues in the living body and induces various diseases. Superoxide, which is produced in vivo and is a starting material for other active oxygen, is usually eliminated sequentially by the catalytic action of superoxide dismutase (SOD) contained in cells. However, when the production of superoxide is excessive or when the action of SOD is reduced, the superoxide concentration becomes high due to insufficient superoxide elimination. This is one of the causes of tissue damage such as rheumatoid arthritis, Behcet's disease, myocardial infarction, stroke, cataract, spots, freckles, wrinkles, diabetes, arteriosclerosis, shoulder stiffness, coldness, skin aging, etc. It is considered. Among these, since the skin is directly affected by environmental factors such as ultraviolet rays, superoxide is likely to be generated. Therefore, when the superoxide concentration is increased, biological tissues such as collagen are decomposed, denatured, or crosslinked. Or oxidize fats and oils to produce lipid peroxides that damage cells, forming skin wrinkles, causing skin aging, inflammation, and skin pigmentation (See Non-Patent Document 1).
Therefore, attempts have been made to obtain active oxygen scavenging substances, radical scavenging substances, hydrogen peroxide scavenging substances, etc. from natural products advantageous in terms of safety, and extracts of Brassica Brassica plants (see Patent Document 1), Efficacy has been confirmed for extracts of plants belonging to the genus Ryukyubekei (see Patent Document 2), extracts of scallops (see Patent Document 3), extracts of sulfur (see Patent Document 4), and the like.

また、グルタチオンはグルタミン酸、システイン、グリシンの3つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。細胞内におけるグルタチオンの役割はラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、各種酵素のSH供与体であり、抗酸化成分としても知られている。グルタチオンの作用発現はそのシステイン残基に由来すると考えられている。しかし、皮膚中のグルタチオン量は、加齢に伴って低下することが報告されており、このことが皮膚における酸化防御能を低下させ、細胞のDNA及びタンパク質などの構成成分にダメージを与える一因であると考えられている。
このように皮膚においてグルタチオンの産生を促進することは、加齢により衰える酸化ストレスの防御を高め、かつ紫外線による酸化ストレスに対する傷害を抑制することにつながり、皮膚の老化の予防、治療、あるいはシミ等の色素沈着に対する改善が期待できると考えられる。そこで、グルタチオン産生促進作用を有するものとして、例えばビルベリー抽出物又はウォルナット抽出物(特許文献5参照)、クチナシ属植物の抽出物(特許文献6参照)、などが開示されている。
Glutathione is a tripeptide composed of three amino acids, glutamic acid, cysteine and glycine, and is a compound having a major intracellular cysteine residue. The role of glutathione in cells is radical scavenging, regulation of cell functions by redox, SH donors of various enzymes, and is also known as an antioxidant component. It is thought that the action expression of glutathione is derived from the cysteine residue. However, it has been reported that the amount of glutathione in the skin decreases with aging, which reduces the ability of the skin to oxidize and damages cellular components such as DNA and proteins. It is considered to be.
In this way, promoting the production of glutathione in the skin increases the defense against oxidative stress that declines with aging, and also suppresses damage against oxidative stress caused by ultraviolet rays, preventing skin aging, treating it, or causing stains, etc. It is considered that an improvement in pigmentation can be expected. Then, as a thing which has glutathione production promotion effect | action, the bilberry extract or walnut extract (refer patent document 5), the extract of gardenia plant (refer patent document 6), etc. are disclosed, for example.

皮膚は、表皮、基底膜、及び真皮から構成されている。前記基底膜は、表皮と真皮との境界部に存在し、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしている(非特許文献2参照)。前記基底膜の主要骨格はIV型コラーゲンからなる網目構造をしている。若い皮膚においては、線維芽細胞の増殖が活発であり、基底膜の働きにより表皮、真皮の相互作用が恒常性を保つことで水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、線維芽細胞の増殖が遅くなり、細胞外マトリックス産生能力が低下することによって、肌は張りや弾力を失い、肌荒れシワ等の老化症状を呈するようになる。また、基底膜の主要構成成分であるIV型コラーゲンは分解乃至変質を起こし、基底膜構造が破壊される(非特許文献3参照)。その結果、皮膚の保湿機能及び弾力性が低下し、角質が異常剥離を始め、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、基底膜成分の減少、基底膜の構造変化が関与していることが知られている。
The skin is composed of the epidermis, basement membrane, and dermis. The basement membrane is present at the boundary between the epidermis and the dermis, and plays an important role in maintaining the skin function as well as connecting the epidermis and the dermis (see Non-Patent Document 2). The main skeleton of the basement membrane has a network structure made of type IV collagen. In young skin, the proliferation of fibroblasts is active, and the interaction of the epidermis and dermis keeps the homeostasis by the action of the basement membrane, ensuring moisture retention, flexibility, elasticity, etc., and the skin is appearance It is also kept fresh with tension and gloss.
However, the growth of fibroblasts slows down due to the influence of certain external factors such as UV irradiation, significant drying of air, excessive skin washing, etc., and the ability to produce extracellular matrix. As the skin level decreases, the skin loses tension and elasticity, and exhibits aging symptoms such as rough skin wrinkles. In addition, type IV collagen, which is a main component of the basement membrane, is decomposed or altered, and the basement membrane structure is destroyed (see Non-Patent Document 3). As a result, the moisturizing function and elasticity of the skin are reduced, the exfoliation of the keratin begins to be abnormally peeled, the skin loses its tension and gloss, and exhibits aging symptoms such as roughness and wrinkles. Thus, it is known that changes associated with skin aging, that is, wrinkles, dullness, disappearance of texture, decrease in elasticity, etc. are associated with a decrease in basement membrane components and a change in basement membrane structure. Yes.

近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックス系プロテアーゼの関与が指摘されている。このマトリックス系プロテアーゼの中でも、MMP−1(マトリックスメタロプロテアーゼ−1)は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるタイプIコラーゲン、タイプIIIコラーゲンなどを分解する酵素として知られている。その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
また、加齢に伴う皮膚老化の一因として、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することがある。エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっており、その分泌不足は種々の内科的疾患を招く他、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等の好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。
したがってIV型コラーゲン産生の促進、MMP−1活性の阻害、皮膚線維芽細胞増殖の促進、あるいは加齢によるエストロゲン分泌減退を補うことにより、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の皮膚の老化を予防乃至治療できると考えられる。
In recent years, the involvement of matrix proteases has been pointed out as a factor for inducing reduction or denaturation of dermal matrix components. Among these matrix proteases, MMP-1 (matrix metalloprotease-1) is known as an enzyme that degrades type I collagen, type III collagen, and the like, which are main components of the dermal matrix of the skin. The expression is greatly increased by the irradiation of ultraviolet rays, contributes to the decrease or degeneration of collagen by ultraviolet rays, and is considered to be a major factor such as the formation of wrinkles on the skin.
In addition, as a cause of skin aging associated with aging, secretion of estrogen, a type of female hormone, may decrease. Estrogen is deeply involved in maintaining the health of adult women, and its lack of secretion leads to various medical illnesses and can cause unwanted skin changes such as skin sensitivities, reduced elasticity and reduced moisture. It has been known.
Therefore, it promotes type IV collagen production, inhibition of MMP-1 activity, promotion of skin fibroblast proliferation, or reduction of estrogen secretion due to aging, thereby reducing skin aging such as formation of skin wrinkles and reduced elasticity. It can be prevented or treated.

炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎(かぶれ)、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は多種多様である。その原因としてヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、シクロオキシダーゼ−2(COX−2)によるものが知られている。
前記ヒスタミン遊離は肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。このようなヒスタミン遊離抑制剤として、例えばトラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジンなどが用いられてきた。しかし、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題があった。
前記一酸化窒素(NO)は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物である。また、近年、一酸化窒素(NO)は、血管内皮由来弛緩因子(EDRF)、神経伝達物質、生体防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生される一酸化窒素が細菌やウイルスの感染を防御することが知られている。しかし、前記マクロファージから産生される一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすこともある。
したがって炎症性疾患において、一酸化窒素(NO)の過剰な産生を抑制することが重要となる。このような一酸化窒素の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液(いずれも、特許文献7参照)、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒(いずれも、非特許文献4参照)、などが報告されている。
There are various causes and onset mechanisms of inflammatory diseases such as contact dermatitis (rash), psoriasis, pemphigus vulgaris, and various other skin diseases with rough skin. As its cause, histamine release inhibiting action, nitric oxide (NO) production inhibiting action, and cyclooxidase-2 (COX-2) are known.
The histamine release is a phenomenon in which histamine in mast cells is released outside the cell, and the released histamine causes an inflammatory reaction. For this reason, attempts have been made to prevent or treat allergic diseases and inflammatory diseases with substances that inhibit or suppress histamine release. As such histamine release inhibitors, for example, tranilast, sodium cromoglycate, baicalin, baicalein, promethazine hydrochloride and the like have been used. However, all of these substances have side effects and have problems in terms of safety.
Nitric oxide (NO) is a nitrogen oxide that causes air pollution, acid rain, and the like. In recent years, nitric oxide (NO) is a physiologically active substance that exhibits various functions in vivo, such as vascular endothelium-derived relaxing factor (EDRF), neurotransmitters, microorganisms in biological defense, and tumor cell injury factors. It has been reported. As a physiologically active substance, it is known that nitric oxide produced from macrophages protects against bacterial and viral infections. However, when a large amount of nitric oxide produced from the macrophages is biosynthesized, it is not non-toxic to the living body and causes destruction of the self-tissue, which may cause pathological conditions such as worsening inflammation, rheumatism and diabetes. . Also, large amounts of biosynthesized nitric oxide can cause vascular smooth muscle relaxation and excessive permeability, and can cause endotoxin shock due to a significant decrease in blood pressure.
Therefore, it is important to suppress excessive production of nitric oxide (NO) in inflammatory diseases. Examples of herbal medicines having an inhibitory effect on the production of nitric oxide include, for example, rosemary extract, carnosol, carnosic acid, coffee bean extract, primrose extract, auren extract, buckwheat extract, licorice extract, Inu rose extract, Senkyu extract, Tounin extract, Peonies extract, Yakuinin extract, Red grape extract (all refer to Patent Document 7), Tang Dynasty, Cod root bark, Japanese continuation, Car front, Far There have been reported pupae, licorice root, half-branches, spikelets, flower buds (see Non-Patent Document 4).

また、炎症は、発赤、浮腫、発熱、痛み、機能障害等の症状を示す複雑な反応である。微視的に見ると、血漿漏出を起こす血管反応、白血球の浸潤、炎症性細胞による組織破壊などの共通する反応からなり、発熱反応、痛覚過敏等の中枢神経系が関与する全身の反応も引き起こす場合がある。このような炎症の個々の反応にはプロスタグランジンが重要な役割を果たしており、炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−2(COX−2)の関与が知られている。このため、炎症反応の防止乃至予防を図る目的で、アスピリンに代表される多くのシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤が報告されている(非特許文献5参照)。また、植物由来のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤としては、マンゴスチン果皮抽出物中のα−マンゴスチン及びγ−マンゴスチンが開示されている(特許文献8参照)。また、シクロオキシゲナーゼ−2活性阻害作用を有する化合物として、例えば2−フェニル−1,2−ベンズイソセレナゾール−3(2H)−オン、2−フェニル−1,2−ベンズイソセレナゾール−3(2H)−オンの塩、又は2−フェニル−1,2−ベンズイソセレナゾール−3(2H)−オンの水和物が開示されている(特許文献9参照)。
このようにヒスタミンの遊離を抑制し、過剰な一酸化窒素(NO)の産生を抑制し、シクロオキシダーゼ−2(COX−2)の活性を阻害することは、炎症性疾患を防止乃至改善する上で極めて重要である。
Inflammation is a complex reaction that exhibits symptoms such as redness, edema, fever, pain, and dysfunction. Microscopically, it consists of common reactions such as blood vessel reaction that causes plasma leakage, leukocyte infiltration, tissue destruction by inflammatory cells, and also causes systemic reactions involving the central nervous system such as fever and hyperalgesia. There is a case. Prostaglandins play an important role in such individual reactions of inflammation, and the production of prostaglandins during inflammation mainly involves the involvement of cyclooxygenase-2 (COX-2), an inducible cyclooxygenase. Are known. For this reason, many cyclooxygenase activity inhibitors represented by aspirin have been reported for the purpose of preventing or preventing inflammatory reactions (see Non-Patent Document 5). As plant-derived cyclooxygenase activity inhibitors, α-mangostin and γ-mangostin in mangosteen peel extract are disclosed (see Patent Document 8). Examples of compounds having a cyclooxygenase-2 activity inhibitory action include 2-phenyl-1,2-benzisoselenazole-3 (2H) -one, 2-phenyl-1,2-benzisoselenazole-3 (2H ) -One salts or hydrates of 2-phenyl-1,2-benzisoselenazol-3 (2H) -one are disclosed (see Patent Document 9).
Thus, inhibiting the release of histamine, inhibiting the production of excess nitric oxide (NO), and inhibiting the activity of cyclooxidase-2 (COX-2) can prevent or improve inflammatory diseases. It is extremely important.

しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料及び美容用飲食物に広く使用可能な抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。   However, to date, it is a natural product that is easy to obtain, inexpensive, and highly safe, and does not adversely affect the quality of the additive in terms of taste, smell, feeling of use, etc. Antioxidants, anti-aging agents, and anti-inflammatory agents that can be widely used in cosmetics and beauty foods and drinks have not yet been provided, and there is a strong demand for prompt provision thereof.

特開2003−81848号公報JP 2003-81848 A 特開2005−29483号公報JP 2005-29483 A 特開2006−321730号公報JP 2006-321730 A 特開2007−8902号公報JP 2007-8902 A 特開2006−241062号公報JP 2006-241062 A 特開2006−347934号公報JP 2006-347934 A 特開2002−87975号公報JP 2002-87975 A 特開2002−47180号公報JP 2002-47180 A 特開2000−16935号公報JP 2000-16935 A フレグランスジャーナル 臨時増刊No.14、p156 1995年Fragrance Journal Special Issue No. 14, p156 1995 Marinkovich MP et al.,J. Cell.Biol.1992 199:695−703Marinkovich MP et al. , J .; Cell. Biol. 1992 199: 695-703 Lavker et al.,J.Invest.Dermatol.1979 73: 59−66Lavker et al. , J .; Invest. Dermatol. 1979 73: 59-66 「和漢医薬学雑誌」,Vol.15, p.302−303,1998年発行“Wakan Journal of Pharmaceutical Sciences”, Vol. 15, p. 302-303, issued in 1998 薬理学アトラス(P184)、福原武彦監訳、文光堂Pharmacology Atlas (P184), translated by Takehiko Fukuhara, Bunkodo

本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、第1に、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、過酸化水素消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗酸化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第2に、皮膚線維芽細胞増殖作用、IV型コラーゲン産生促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第3に、ヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、及びシクロオキシダーゼ−2(COX−2)活性阻害作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗炎症剤を提供することを目的とする。
本発明は、第4に、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、及び前記抗炎症剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した皮膚化粧料及び美容用飲食品を提供することを目的とする。
An object of the present invention is to solve the conventional problems and achieve the following objects. That is, the present invention first has at least one of a superoxide scavenging action, a radical scavenging action, a hydrogen peroxide scavenging action, and a glutathione production promoting action, and is a natural product that is highly safe and easy to obtain raw materials. An object of the present invention is to provide a system antioxidant.
In addition, the present invention secondly has at least one of skin fibroblast proliferation action, type IV collagen production promotion action, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibition action, and estrogen-like action, An object of the present invention is to provide a natural anti-aging agent that is highly safe and easily available.
Thirdly, the present invention has at least one of histamine release inhibitory action, nitric oxide (NO) production inhibitory action, and cyclooxidase-2 (COX-2) activity inhibitory action, and is highly safe. An object of the present invention is to provide a natural anti-inflammatory agent whose raw materials are easily available.
A fourth object of the present invention is to provide skin cosmetics and cosmetic foods and drinks containing at least one of the antioxidant, the anti-aging agent, and the anti-inflammatory agent of the present invention as active ingredients. And

前記課題を解決するため、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料及び美容用飲食物に広く使用可能な抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤について本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、キク科の白眉草の抽出物が、(1)優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、過酸化水素消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有し、抗酸化剤として有用であること、(2)優れた皮膚線維芽細胞増殖作用、IV型コラーゲン産生促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有し、抗老化剤として有用であること、及び(3)優れたヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、及びシクロオキシダーゼ−2(COX−2)活性阻害作用の少なくともいずれかを有し、抗炎症剤として有用であることを、それぞれ知見した。   In order to solve the above-mentioned problems, it is a natural product that is easy to obtain, inexpensive, and highly safe, and does not adversely affect the quality of the added object in terms of taste, smell, feeling of use, etc. As a result of extensive studies by the present inventors on antioxidants, anti-aging agents, and anti-inflammatory agents that can be widely used in cosmetics and beauty foods and drinks, an extract of white eyebrows of Asteraceae (1) It has at least one of an excellent superoxide scavenging action, radical scavenging action, hydrogen peroxide scavenging action, and glutathione production promoting action, and is useful as an antioxidant. (2) Excellent skin fibroblast proliferation action Have a type IV collagen production promoting action, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibiting action, and estrogen-like action, and are useful as an anti-aging agent, and (3 It has at least one of excellent histamine release inhibitory action, nitric oxide (NO) production inhibitory action, and cyclooxidase-2 (COX-2) activity inhibitory action, and is found to be useful as an anti-inflammatory agent. did.

本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
<1> 白眉草の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
<2> スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、過酸化水素消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有する前記<1>に記載の抗酸化剤である。
<3> 白眉草の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
<4> 皮膚線維芽細胞増殖作用、IV型コラーゲン産生促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有する前記<3>に記載の抗老化剤である。
<5> 白眉草の抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
<6> ヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、及びシクロオキシダーゼ−2(COX−2)活性阻害作用の少なくともいずれかを有する前記<5>に記載の抗炎症剤である。
<7> 前記<1>から<6>のいずれかに記載の白眉草の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする皮膚化粧料である。
<8> 前記<1>から<6>のいずれかに記載の白眉草の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美容用飲食品である。
The present invention is based on the above findings of the present inventors, and means for solving the above problems are as follows. That is,
<1> An antioxidant containing an extract of white eyebrows.
<2> The antioxidant according to <1>, having at least one of a superoxide scavenging action, a radical scavenging action, a hydrogen peroxide scavenging action, and a glutathione production promoting action.
<3> An anti-aging agent characterized by containing an extract of white eyebrows.
<4> Anti-aging according to the above <3>, which has at least one of dermal fibroblast proliferation action, type IV collagen production promotion action, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibition action, and estrogen-like action It is an agent.
<5> An anti-inflammatory agent characterized by containing an extract of white eyebrows.
<6> The anti-inflammatory agent according to <5>, which has at least one of a histamine release inhibitory action, a nitric oxide (NO) production inhibitory action, and a cyclooxidase-2 (COX-2) activity inhibitory action.
<7> A skin cosmetic comprising an extract of white eyebrows according to any one of <1> to <6> as an active ingredient.
<8> A cosmetic food or drink comprising the white eyebrow extract according to any one of <1> to <6> as an active ingredient.

本発明の抗酸化剤によると、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、過酸化水素消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを通じて、生体内の酸化防止、皮膚の老化を防止乃至改善することができる。
本発明の抗老化剤によると、優れた皮膚線維芽細胞増殖作用、IV型コラーゲン産生促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚のシワ及び皮膚の弾力低下の防止乃至改善することができる。
本発明の抗炎症剤によると、優れたヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、及びシクロオキシダーゼ−2(COX−2)活性阻害作用の少なくともいずれかを通じて、炎症性疾患を防止乃至改善することができる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤は、天然系抽出物であり安全性に優れ、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさないので皮膚化粧料に配合したり、美容用飲食品に添加して用いるのに好適なものである。
According to the antioxidant of the present invention, through at least one of excellent superoxide scavenging action, radical scavenging action, hydrogen peroxide scavenging action, and glutathione production promoting action, preventing or improving in vivo oxidation and skin aging can do.
According to the anti-aging agent of the present invention, the skin can be passed through at least one of excellent skin fibroblast proliferation action, type IV collagen production promotion action, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibition action, and estrogen-like action. It is possible to prevent or improve wrinkles and skin elasticity reduction.
According to the anti-inflammatory agent of the present invention, inflammatory diseases are prevented through at least one of an excellent histamine release inhibitory action, nitric oxide (NO) production inhibitory action, and cyclooxidase-2 (COX-2) activity inhibitory action. Thorough improvement.
Further, the antioxidant, anti-aging agent, and anti-inflammatory agent of the present invention are natural extracts that are excellent in safety and do not adversely affect the quality of the addition target in terms of taste, smell, feeling of use, etc. Therefore, it is suitable for blending in skin cosmetics or adding to cosmetic foods and drinks.

(抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤)
本発明の抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤は、白眉草の抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
(Antioxidants, anti-aging agents, and anti-inflammatory agents)
The antioxidant, anti-aging agent, and anti-inflammatory agent of the present invention contain an extract of white eyebrow grass, and further contain other components as necessary.

前記抗酸化剤は、抗酸化作用として、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、過酸化水素消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗老化剤は、抗老化作用として、皮膚線維芽細胞増殖作用、IV型コラーゲン産生促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗炎症剤は、抗炎症作用として、ヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、及びシクロオキシダーゼ−2(COX−2)活性阻害作用の少なくともいずれかを有している。
前記白眉草の抽出物における抗酸化作用、抗老化作用、及び抗炎症作用の少なくともいずれかを有する物質の詳細については不明であるが、該白眉草の抽出物がこれらの優れた作用を有し、抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤として有用であることは現在までのところ全く知られておらず、これらのことは、本発明者らの鋭意研究による新知見である。
The antioxidant has at least one of a superoxide scavenging action, a radical scavenging action, a hydrogen peroxide scavenging action, and a glutathione production promoting action as an antioxidant action.
The anti-aging agent has at least one of dermal fibroblast proliferation action, type IV collagen production promotion action, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibition action, and estrogen-like action as an anti-aging action. ing.
The anti-inflammatory agent has at least one of histamine release inhibitory action, nitric oxide (NO) production inhibitory action, and cyclooxidase-2 (COX-2) activity inhibitory action as an anti-inflammatory action.
The details of the substance having at least one of antioxidative action, anti-aging action, and anti-inflammatory action in the white brow grass extract are unknown, but the white brow grass extract has these excellent actions. So far, it has not been known at all to be useful as an antioxidant, an anti-aging agent, and an anti-inflammatory agent, and these are new findings by the inventors' diligent research.

前記白眉草(ハクビソウ)は、キク科の植物であり、学名はGerberia piloselloides Gerberaであり、毛大丁草(モウダイテイソウ)、満地香(マンチコウ)とも呼ばれる、多年生の草本であって、根茎は太くて厚く、綿毛がある。葉は基部から出て、多少柄があり、略円形乃至卵形、長さは5cm〜8cm、花茎は長さ15cm〜30cmで時には40cmに達することもある。
前記白眉草は、中国の江蘇省、浙江省、四川省、広西壮族自治区、広東省、雲南省等の日の当たる所、山の斜面、道端、田んぼの周辺に野生しており、これらの地域から容易に入手可能である。
前記白眉草には、例えば止咳、発汗、利尿、滋養強壮等の効能が知られている。
The white eyebrow is a plant belonging to the family Asteraceae, scientific name is Gerberia piloselloides Gerbera , and it is a perennial herb that is also called Mao Dycho and Michiko. The rhizome is thick and thick. There is fluff. The leaves come out from the base and have a slight pattern, approximately circular to oval, 5 cm to 8 cm in length, and 15 to 30 cm in length and sometimes 40 cm in length.
The white eyebrows are wild around the sun, mountain slopes, roadsides, and rice fields in Jiangsu, Zhejiang, Sichuan, Guangxi, Yunnan, etc. Is readily available from
The white eyebrows are known to have such effects as coughing, sweating, diuresis, and nutritional tonic.

前記白眉草の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。なお、前記白眉草の抽出物には、白眉草の抽出液、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。   The white eyebrow extract can be easily obtained by a method generally used for plant extraction. The white eyebrow extract includes a white eyebrow extract, a dried product obtained by drying a diluted solution of the extract, and a crude product or a purified product thereof.

前記白眉草の抽出原料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、白眉草の葉部、花(蕾)部、枝部、種子、樹皮(これらを地上部という)、根部などを用いることができる。これらの中でも、葉部等の地上部が特に好ましい。   There is no restriction | limiting in particular as an extraction raw material of the said white eyebrow grass, According to the objective, it can select suitably, For example, the leaf part of a white eyed grass, a flower (bud) part, a branch part, a seed, a bark (these are above-ground parts) Can be used). Among these, a ground part such as a leaf part is particularly preferable.

前記抽出原料である白眉草は、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記白眉草は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。なお、脱脂等の前処理を行うことにより、白眉草の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。   The white eyebrow that is the raw material for extraction can be obtained by drying or pulverizing the raw material as it is or using a crusher and subjecting it to solvent extraction. Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer. In addition, you may use the said white eyebrows as an extraction raw material, after giving pretreatments, such as a degreasing | defatting, by nonpolar solvents, such as hexane and benzene. In addition, by performing pretreatments such as degreasing, extraction processing of white eyebrow grass with a polar solvent can be performed efficiently.

前記抽出に用いる溶媒としては、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒を室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
As the solvent used for the extraction, it is preferable to use water, a hydrophilic organic solvent, or a mixed solvent thereof at a temperature from room temperature to the boiling point of the solvent.
Examples of water that can be used as the extraction solvent include pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, as well as water that has been subjected to various treatments. Examples of the treatment applied to water include purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, adjustment of osmotic pressure, buffering, and the like. The water that can be used as the extraction solvent includes purified water, hot water, ion exchange water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.

前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数1〜5の低級アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン;1,3−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数2〜5の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水10質量部に対して1質量部〜90質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水10質量部に対して1質量部〜40質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水10質量部に対して1質量部〜90質量部添加することが好ましい。
Examples of the hydrophilic organic solvent include lower alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene glycol, propylene glycol, Examples thereof include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as glycerin, and a mixed solvent of these hydrophilic organic solvents and water can be used.
In addition, when using the mixed solvent of the said water and a hydrophilic organic solvent, in the case of a lower alcohol, 1 mass part-90 mass parts with respect to 10 mass parts of water, and in the case of a lower aliphatic ketone, 10 masses of water. It is preferable to add 1 to 40 parts by mass with respect to parts. In the case of polyhydric alcohol, it is preferable to add 1 part by mass to 90 parts by mass with respect to 10 parts by mass of water.

本発明において、抽出原料である白眉草から、抗酸化作用、抗老化作用、及び抗炎症作用の少なくともいずれかを有する物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。   In the present invention, it is not necessary to employ a special extraction method for extracting a substance having at least one of an antioxidative action, an anti-aging action, and an anti-inflammatory action from white eyebrows which is an extraction raw material, and it is room temperature or reflux heating. Below, it can be extracted using any extraction device.

具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、抽出原料としての白眉草の地上部を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、30分間〜2時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の5〜15倍量(質量比)である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常50℃〜95℃にて1〜4時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常40℃〜80℃にて30分間〜4時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤として用いることができる。   Specifically, in the treatment tank filled with the extraction solvent, the above-ground part of white eyebrow grass as an extraction raw material is added, and further allowed to stand for 30 minutes to 2 hours with occasional stirring as necessary. After elution, the solid matter is removed by filtration, and the extract is obtained by evaporating the extraction solvent from the resulting extract and drying. The amount of the extraction solvent is usually 5 to 15 times (mass ratio) of the extraction raw material. The extraction conditions are usually about 1 to 4 hours at 50 to 95 ° C. when water is used as the extraction solvent. Moreover, when the mixed solvent of water and ethanol is used as an extraction solvent, it is normally 30 minutes-about 4 hours at 40 to 80 degreeC. In addition, the extract obtained by extracting with a solvent can be used as it is as the antioxidant, anti-aging agent, and anti-inflammatory agent of the present invention as long as the extraction solvent is highly safe.

得られる白眉草の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。   In order to obtain a dilute or concentrated solution of the extract, a dried product of the extract, or a crude purified product or a purified product thereof, the obtained white birch grass extract is diluted, concentrated, dried, purified, etc. according to a conventional method. You may perform the process of.

なお、得られる白眉草の抽出液は、そのままでも抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、前記白眉草の抽出物は、特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料及び美容用飲食品に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製としては、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。   In addition, although the extract of white eyebrows obtained can be used as it is as an antioxidant, anti-aging agent, and anti-inflammatory agent, a concentrated solution or a dried product thereof is easier to use. In obtaining a dried extract, a carrier such as dextrin or cyclodextrin may be added to improve hygroscopicity. In addition, since the extract of white eyebrows has a characteristic odor, it can be purified for the purpose of decolorization, deodorization, etc. within a range that does not cause a decrease in its physiological activity. Since it is not used in large quantities when it is added to food and cosmetic foods and drinks, there is no practical problem even if it is not purified. The purification can be performed by, for example, activated carbon treatment, adsorption resin treatment, ion exchange resin treatment, or the like.

以上のようにして得られる白眉草の抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、グルタチオン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖作用、IV型コラーゲン産生促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用、エストロゲン様作用、ヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、及びシクロオキシダーゼ−2(COX−2)活性阻害作用の少なくともいずれかを有しており、これらの作用に基づいて、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤として使用することができる。   The white eyebrows extract obtained as described above has a superoxide scavenging action, hydrogen peroxide scavenging action, radical scavenging action, glutathione production promoting action, skin fibroblast proliferation action, type IV collagen production promoting action, matrix metallo Protease-1 (MMP-1) activity inhibitory action, estrogen-like action, histamine release inhibitory action, nitric oxide (NO) production inhibitory action, and cyclooxidase-2 (COX-2) activity inhibitory action Therefore, based on these actions, it can be used as an antioxidant, an anti-aging agent, and an anti-inflammatory agent of the present invention.

本発明の抗酸化剤における抗酸化作用は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、皮膚線維芽細胞増殖作用、IV型コラーゲン産生促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、ヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、及びシクロオキシダーゼ−2(COX−2)活性阻害作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の白眉草の抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、及び抗炎症作用の少なくともいずれかを有すると共に、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、特に、以下に説明する本発明の皮膚化粧料に配合するのに好適である。
また、本発明の白眉草の抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、及び抗炎症作用の少なくともいずれかを有すると共に、消化管で消化されるものではないことが確認されているので、特に、以下に説明する本発明の美容用飲食品に配合するのに好適である。
The antioxidant action of the antioxidant of the present invention is exhibited based on at least one of a superoxide scavenging action, a hydrogen peroxide scavenging action, a radical scavenging action, and a glutathione production promoting action.
The anti-aging action of the anti-aging agent of the present invention is based on at least one of a dermal fibroblast proliferation action, a type IV collagen production promoting action, a matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibiting action, and an estrogen-like action. It is demonstrated.
The anti-inflammatory action of the anti-inflammatory agent of the present invention is exhibited based on at least one of histamine release inhibitory action, nitric oxide (NO) production inhibitory action, and cyclooxidase-2 (COX-2) activity inhibitory action. .
Since the extract of white eyebrows of the present invention has at least one of an excellent antioxidative action, anti-aging action, and anti-inflammatory action, and is excellent in the feeling of use and safety when applied to the skin, It is suitable for blending into the skin cosmetic of the present invention described below.
In addition, it has been confirmed that the extract of white eyebrows of the present invention has at least one of an excellent antioxidant action, anti-aging action, and anti-inflammatory action and is not digested in the digestive tract. In particular, it is suitable for blending into the cosmetic food and drink of the present invention described below.

(皮膚化粧料)
本発明の皮膚化粧料は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、及び前記抗炎症剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
(Skin cosmetic)
The skin cosmetic of the present invention contains at least one of the antioxidant, the anti-aging agent, and the anti-inflammatory agent of the present invention as an active ingredient, and further other components appropriately selected as necessary. It contains.

ここで、前記皮膚化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、などが挙げられる。   Here, the use of the skin cosmetic is not particularly limited and can be appropriately selected from various uses. For example, ointment, cream, emulsion, lotion, pack, jelly, lip balm, lipstick, bath additive, astringent , Etc.

前記抗酸化剤、前記抗老化剤、又は前記抗炎症剤の前記皮膚化粧料全体に対する配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記白眉草の抽出物に換算して0.0001質量%〜10質量%が好ましく、0.001質量%〜1質量%がより好ましい。   The blending amount of the antioxidant, the anti-aging agent, or the anti-inflammatory agent with respect to the entire skin cosmetic can be adjusted as appropriate depending on the type of skin cosmetic, physiological activity of the extract, etc. It is preferably 0.0001% by mass to 10% by mass, and more preferably 0.001% by mass to 1% by mass in terms of the extract.

前記皮膚化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、その皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、本発明の前記抗酸化作用、抗老化作用、及び抗炎症作用の妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。これらの成分は、前記白眉草の抽出物と共に併用した場合、相乗的に作用して、通常期待される以上の優れた作用効果をもたらすことがある。
The skin cosmetics can be added with various main ingredients and auxiliaries usually used in the production of the skin cosmetics and other components as long as they do not impair the objects and effects of the present invention. .
The other components are not particularly limited as long as they do not interfere with the antioxidant, anti-aging, and anti-inflammatory effects of the present invention, and may include components appropriately selected according to the purpose. , Bactericides, antibacterial agents, ultraviolet absorbers, humectants, cell activators, fats and oils, waxes, hydrocarbons, fatty acids, alcohols, esters, surfactants, fragrances, and the like. These components may act synergistically when used in combination with the white blossom extract, resulting in superior effects than expected.

本発明の皮膚化粧料は、皮膚に使用した場合に高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、グルタチオン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖作用、IV型コラーゲン産生促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用、エストロゲン様作用、ヒスタミン遊離抑制作用、一酸化窒素(NO)産生抑制作用、及びシクロオキシダーゼ−2(COX−2)活性阻害作用の少なくともいずれかを効果的に発揮して、生体内の酸化防止、老化防止、炎症性疾患の予防乃至治療に有用である。   The skin cosmetic of the present invention has high safety when used on the skin, and has an excellent superoxide scavenging action, hydrogen peroxide scavenging action, radical scavenging action, glutathione production promoting action, skin fibroblast proliferation action, Type IV collagen production promoting action, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibiting action, estrogen-like action, histamine release inhibiting action, nitric oxide (NO) production inhibiting action, and cyclooxidase-2 (COX-2) It effectively exhibits at least one of its activity-inhibiting action, and is useful for in vivo oxidation prevention, aging prevention, and prevention or treatment of inflammatory diseases.

(美容用飲食品)
本発明の美容用飲食品は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、及び前記抗炎症剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
ここで、前記美容用飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品、などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
(Beauty food and drink)
The cosmetic food / beverage product of the present invention contains at least one of the antioxidant, the anti-aging agent, and the anti-inflammatory agent of the present invention as an active ingredient. Contains ingredients.
Here, the above-mentioned beauty foods and drinks are those that are less likely to harm human health and are taken orally or by digestive tract administration in normal social life. It is not limited to categories such as quasi-drugs, and includes, for example, foods that include a wide range of foods that are taken orally, such as general foods, health foods, health functional foods, quasi-drugs, and pharmaceuticals.

本発明の前記美容用飲食物は、白眉草の抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、白眉草の抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。   The cosmetic food or drink of the present invention may be a white brow grass extract blended with any food or drink so as not to impede its activity, or a nutrient mainly composed of white brow grass extract. It may be a supplement.

前記美容用飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料;アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓;そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類;飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類;カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物;かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品;加工乳、発酵乳等の乳製品;サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品;ソース、たれ等の調味料;カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品;種々の形態の健康食品や栄養補助食品;錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。   There is no restriction | limiting in particular as said beauty food-drinks, Although it can select suitably according to the objective, For example, drinks, such as a soft drink, a carbonated drink, a nutrition drink, a fruit drink, a lactic acid drink; Ice cream, ice sherbet , Shaved ice and other frozen desserts; noodles such as buckwheat, udon, harsame, gyoza skin, sushi mai, Chinese noodles, instant noodles; rice cakes, candy, gum, chocolate, tablet confectionery, snacks, biscuits, jelly, jam, cream, Sweets such as baked goods and bread; crab, salmon, clams, tuna, sardines, shrimp, skipjack, mackerel, whale, oysters, saury, squid, red sea bream, scallop, abalone, sea urchin, sea bream, tocobushi, etc .; Processed fishery and livestock products such as ham and sausage; Dairy products such as processed milk and fermented milk; salad oil, tempura oil, margarine, mayonnaise, Fats and processed foods such as yotoning, whipped cream, dressing, etc .; seasonings such as sauces, sauces; curry, stew, oyakodon, rice cake, miscellaneous cooking, Chinese rice cakes, tempura, eel rice cake, hayashi rice, oden, marbodorf, Retort pouch foods such as beef bowl, meat sauce, egg soup, omelet rice, dumplings, shumai, hamburger, meatballs; various forms of health foods and nutritional supplements; pharmaceuticals such as tablets, capsules, drinks, troches, etc. Examples include foreign products.

前記その他の成分としては、前記美容用飲食品を製造するに当たって通常用いられる補助的原料又は添加物、などが挙げられる。
前記原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、L−アスコルビン酸、dl−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンB類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤、などが挙げられる。
As said other component, the auxiliary | assistant raw material or additive normally used in manufacturing the said cosmetics food / beverage products is mentioned.
The raw material or additive is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose.For example, glucose, fructose, sucrose, maltose, sorbitol, stevioside, rubusoside, corn syrup, lactose, citric acid, Tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid, L-ascorbic acid, dl-α-tocopherol, sodium erythorbate, glycerin, propylene glycol, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, gum arabic , Carrageenan, casein, gelatin, pectin, agar, vitamin Bs, nicotinamide, calcium pantothenate, amino acids, calcium salts, pigments, fragrances, preservatives, and the like.

前記美容用飲食品における本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、又は前記抗炎症剤の添加量は、対象となる美容用飲食品の種類に応じて異なり一概には規定することができないが、美容用飲食品本来の味を損なわない範囲で添加すればよく、各種対象美容用飲食品に対し、0.001質量%〜50質量%が好ましく、0.01質量%〜20質量%がより好ましい。また、顆粒、錠剤又はカプセル形態の美容用飲食品の場合には、0.01質量%〜100質量%が好ましく、5質量%〜100質量%がより好ましい。   The addition amount of the antioxidant, the anti-aging agent, or the anti-inflammatory agent of the present invention in the beauty food or drink varies depending on the type of the beauty food or drink to be used and cannot be specified unconditionally. However, what is necessary is just to add in the range which does not impair the original taste of beauty food / beverage products, 0.001 mass%-50 mass% are preferable with respect to various object cosmetic food / beverage products, 0.01 mass%-20 mass% are preferable. More preferred. Further, in the case of a cosmetic food or drink in the form of granules, tablets or capsules, 0.01% by mass to 100% by mass is preferable, and 5% by mass to 100% by mass is more preferable.

本発明の美容用飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分である白眉草の抽出物の働きによって、抗酸化作用、抗老化作用、及び抗炎症作用の少なくともいずれかを極めて効果的に発揮させることができる。   The cosmetic food and drink according to the present invention can be taken orally on a daily basis, and has at least one of an antioxidative action, an anti-aging action, and an anti-inflammatory action depending on the action of an extract of white eyebrow which is an active ingredient. Can be exhibited extremely effectively.

なお、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、皮膚化粧料、及び美容用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。   In addition, although the antioxidant, anti-aging agent, anti-inflammatory agent, skin cosmetics, and cosmetics for food and beverage of the present invention are suitably applied to humans, their respective effects are exhibited. As long as it is applicable to animals other than humans.

以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。   Examples of the present invention will be described below, but the present invention is not limited to these examples.

(製造例1)
−白眉草の水抽出物の製造−
抽出原料として白眉草の地上部の粉砕物100gを、水1,000mLに投入し、穏やかに攪拌しながら2時間、80℃に保った後、ろ過した。ろ液を40℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物(粉末状)を得た。得られた抽出物の収率を表1に示す。
(Production Example 1)
-Production of water extract of white eyebrows-
As a raw material for extraction, 100 g of ground product of white eyebrow grass was put into 1,000 mL of water, kept at 80 ° C. for 2 hours with gentle stirring, and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure at 40 ° C. and further dried with a vacuum dryer to obtain an extract (powder). The yield of the obtained extract is shown in Table 1.

(製造例2)
−白眉草の50質量%エタノール抽出物の製造−
抽出原料として白眉草の地上部の粉砕物100gを、50質量%エタノール(水とエタノールとの質量比1:1)1,000mLに投入し、穏やかに攪拌しながら2時間、80℃に保った後、ろ過した。ろ液を40℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物(粉末状)を得た。得られた抽出物の収率を表1に示す。
(Production Example 2)
-Production of 50% by weight ethanol extract of white eyebrows-
As a raw material for extraction, 100 g of ground material of white eyebrow grass was added to 1,000 mL of 50 mass% ethanol (mass ratio of water to ethanol of 1: 1) and kept at 80 ° C. for 2 hours with gentle stirring. Then, it filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure at 40 ° C. and further dried with a vacuum dryer to obtain an extract (powder). The yield of the obtained extract is shown in Table 1.

(製造例3)
−白眉草のエタノール抽出物の製造−
抽出原料として白眉草の地上部の粉砕物100gを、エタノール1,000mLに投入し、穏やかに攪拌しながら2時間、80℃に保った後、ろ過した。ろ液を40℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物(粉末状)を得た。得られた抽出物の収率を表1に示す。
(Production Example 3)
-Production of ethanol extract of white eyebrows-
As a raw material for extraction, 100 g of ground product of white eyebrow grass was put into 1,000 mL of ethanol, kept at 80 ° C. for 2 hours with gentle stirring, and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure at 40 ° C. and further dried with a vacuum dryer to obtain an extract (powder). The yield of the obtained extract is shown in Table 1.

Figure 0005085198
Figure 0005085198

(実施例1)
−スーパーオキサイド消去試験(NBT法)−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
3mmol/Lのキサンチン、3mmol/LのEDTA、1.5mg/mLの牛血清アルブミン(BSA)溶液、0.75mmol/Lのニトロブルーテトラゾリウム(NBT)0.1mL、及び0.05mol/LのNaCO緩衝液(pH10.2)2.4mLを試験管にとり、これに各試料溶液0.1mLを添加し、25℃で10分間放置した。次いで、キサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、25℃で20分間静置した。その後、6mmol/Lの塩化銅0.1mLを加えて反応を停止させ、波長560nmにおける吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」とした。
また、同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」とした。
また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度」とした。
また、酵素溶液を添加せず、更に試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」とした。
そして、測定結果から、下記数式1によりスーパーオキサイド消去率を求めた。
<数式1>
スーパーオキサイド消去率(%)={1−(A−B)/(C−D)}×100
ただし、前記数式1中、Aは試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度、Bは試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度、Cは試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度、Dは試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度をそれぞれ表す。
Example 1
-Superoxide elimination test (NBT method)-
Each extract of Production Examples 1 to 3 was used as a sample, and the superoxide scavenging action was tested by the following test method.
3 mmol / L xanthine, 3 mmol / L EDTA, 1.5 mg / mL bovine serum albumin (BSA) solution, 0.75 mmol / L nitroblue tetrazolium (NBT) 0.1 mL, and 0.05 mol / L Na 2.4 mL of 2 CO 3 buffer (pH 10.2) was placed in a test tube, 0.1 mL of each sample solution was added thereto, and the mixture was allowed to stand at 25 ° C. for 10 minutes. Subsequently, the xanthine oxidase solution was added, it stirred rapidly, and it left still at 25 degreeC for 20 minutes. Thereafter, 0.1 mL of 6 mmol / L copper chloride was added to stop the reaction, and the absorbance at a wavelength of 560 nm was measured. The absorbance measured at this time was defined as “absorbance upon addition of sample solution and enzyme solution”.
The same operation and measurement of absorbance were performed without adding the enzyme solution. The absorbance measured at this time was defined as “absorbance when the sample solution was added and no enzyme solution was added”.
The same measurement was performed when distilled water was added without adding the sample solution. The absorbance measured at this time was defined as “absorbance when no sample solution was added and enzyme solution was added”.
Moreover, the same measurement was performed when distilled water was added without adding the enzyme solution and without adding the sample solution. The absorbance measured at this time was defined as “absorbance when no sample solution was added and no enzyme solution was added”.
And the superoxide elimination rate was calculated | required by following Numerical formula 1 from the measurement result.
<Formula 1>
Superoxide erasure rate (%) = {1- (AB) / (CD)} × 100
Where A is the absorbance when the sample solution is added and the enzyme solution is added, B is the absorbance when the sample solution is added and the enzyme solution is not added, C is the absorbance when the sample solution is not added and the enzyme solution is added, and D is The absorbance when no sample solution is added and when no enzyme solution is added is shown.

次に、試料濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が50%になる試料濃度(μg/mL)を内挿法により求めた。結果を表2に示す。   Next, the sample concentration was decreased stepwise to measure the superoxide erasure rate, and the sample concentration (μg / mL) at which the superoxide erasure rate was 50% was determined by interpolation. The results are shown in Table 2.

Figure 0005085198
表2の結果から、製造例1〜3の白眉草抽出物が、高いスーパーオキサイド消去作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results in Table 2, it was confirmed that the white eyebrow extract of Production Examples 1 to 3 had a high superoxide scavenging action.

(実施例2)
−過酸化水素消去試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により過酸化水素消去作用を試験した。
過酸化水素の標準溶液(濃度1.5mmol/L)10μLに、各試料溶液10μLを加え、37℃で20分間インキュベーションした後、発色試薬〔DA−64(和光純薬株式会社製)を10mmol/L、トライトンX−100を0.5質量%含む0.1mol/LのPIPES緩衝液(pH7.0)にペルオキシダーゼ溶液(100unit/mL、和光純薬株式会社製)1mLを加え、全量を100mLに調整したもの〕2.98mLを添加し、37℃で5分間インキュベーションした後、波長727nmにおける吸光度を測定した。
上記同様の操作と吸光度測定を、過酸化水素の標準溶液を添加せずに行った。また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても上記同様の測定を行った。
そして、得られた測定結果から、下記数式2により過酸化水素の消去率を求めた。
<数式2>
過酸化水素消去率(%)={1−(A−B)/(C−D)}×100
ただし、前記数式2中、Aは過酸化水素標準溶液添加,試料溶液添加時の吸光度、Bは過酸化水素標準溶液無添加,試料溶液添加時の吸光度、Cは過酸化水素標準溶液添加,試料溶液無添加時の吸光度、Dは過酸化水素標準溶液無添加,試料溶液無添加時の吸光度を表す。
(Example 2)
-Hydrogen peroxide elimination test-
Using each extract of Production Examples 1 to 3 as a sample, the hydrogen peroxide scavenging action was tested by the following test method.
After adding 10 μL of each sample solution to 10 μL of a standard solution of hydrogen peroxide (concentration 1.5 mmol / L) and incubating at 37 ° C. for 20 minutes, a coloring reagent [DA-64 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added at 10 mmol / L, 1 mL of peroxidase solution (100 units / mL, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is added to 0.1 mol / L PIPES buffer (pH 7.0) containing 0.5% by mass of Triton X-100, and the total amount is adjusted to 100 mL. Adjusted] After 2.98 mL was added and incubated at 37 ° C. for 5 minutes, the absorbance at a wavelength of 727 nm was measured.
The same operation and absorbance measurement as described above were performed without adding a standard solution of hydrogen peroxide. Further, the same measurement as described above was performed when distilled water was added without adding the sample solution.
And the elimination rate of hydrogen peroxide was calculated | required by following Numerical formula 2 from the obtained measurement result.
<Formula 2>
Hydrogen peroxide elimination rate (%) = {1− (A−B) / (C−D)} × 100
Where A is the absorbance when hydrogen peroxide standard solution is added and sample solution is added, B is the absorbance when hydrogen peroxide standard solution is not added and sample solution is added, and C is the hydrogen peroxide standard solution added and sample. Absorbance when no solution is added, and D indicates absorbance when no hydrogen peroxide standard solution is added and when no sample solution is added.

次に、試料濃度を段階的に減少させて上記過酸化水素消去率の測定を行い、該過酸化水素消去率が50%になる試料濃度(μg/mL)を内挿法により求めた。結果を表3に示す。   Next, the hydrogen peroxide erasure rate was measured by gradually reducing the sample concentration, and the sample concentration (μg / mL) at which the hydrogen peroxide erasure rate was 50% was determined by interpolation. The results are shown in Table 3.

Figure 0005085198
表3の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、高い過酸化水素消去作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results in Table 3, it was confirmed that the white eyebrow extract of Production Examples 1 to 3 had a high hydrogen peroxide scavenging action.

(実施例3)
−DPPHに対するラジカル消去試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により非常に安定なラジカルである1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical(DPPH)を使用してラジカル消去作用を試験した。
1.5×10−4mol/LのDPPHエタノール溶液3mLに各試料溶液3mLを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、30分間静置した後、波長520nmの吸光を測定した。
コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて同様に操作し、波長520nmの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液3mLを加えた後、直ちに波長520nmの吸光度を測定した。
そして、測定結果から、下記数式3によりラジカル消去率(%)を算出した。
<数式3>
ラジカル消去率(%)={1−(B−C)/A}×100
ただし、前記数式3中、Aはコントロールの吸光度、Bは試料溶液を添加した場合の吸光度、Cはブランクの吸光度をそれぞれ表す。
(Example 3)
-Radical scavenging test for DPPH-
Using each extract of Production Examples 1 to 3 as a sample, radical scavenging action was tested using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical (DPPH), which is a very stable radical, by the following test method.
3 mL of each sample solution was added to 3 mL of a 1.5 × 10 −4 mol / L DPPH ethanol solution, and the container was immediately sealed, shaken and allowed to stand for 30 minutes, and then the absorbance at a wavelength of 520 nm was measured.
As a control, the same operation was performed using a solvent in which the sample solution was dissolved instead of the sample solution, and the absorbance at a wavelength of 520 nm was measured. Further, as a blank, after adding 3 mL of the sample solution to ethanol, the absorbance at a wavelength of 520 nm was measured immediately.
And the radical elimination rate (%) was computed from the measurement result by following Numerical formula 3.
<Formula 3>
Radical scavenging rate (%) = {1− (BC) / A} × 100
In Formula 3, A represents the absorbance of the control, B represents the absorbance when the sample solution was added, and C represents the absorbance of the blank.

次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ラジカル消去率の測定を行い、DPPHラジカルの消去率が50%になる試料濃度(μg/mL)を内挿法により求めた。結果を表4に示す。   Next, the sample concentration was decreased stepwise to measure the radical scavenging rate, and the sample concentration (μg / mL) at which the DPPH radical scavenging rate was 50% was determined by interpolation. The results are shown in Table 4.

Figure 0005085198
表4の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、高いDPPHに対するラジカル消去作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results of Table 4, it was confirmed that the white eyebrow extract of Production Examples 1 to 3 has a high radical scavenging action on DPPH.

(実施例4)
−グルタチオン産生促進作用試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりグルタチオン産生促進作用を試験した。
ヒト正常皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を10質量%の牛胎児血清(FBS)含有−αMEMを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.0×10cells/mL濃度に10質量%のFBS含有α−MEMで希釈した後、48穴マイクロプレートに1穴当たり200μLずつ播種し、一晩培養した。培養後、1質量%のFBS含有D−MEMで溶解した各試料溶液を各穴に200μL添加し、24時間培養した。培養終了後、各穴から培地を抜き、400μLのPBS(−)にて洗浄後、150μLのM−PER(登録商標)(PIERCE社製)を用いて細胞を溶解した。このうちの100μLを用いて総グルタチオンの定量を行った。具体的には、96穴マイクロプレートに溶解した細胞抽出液100μL、0.1mol/Lのリン酸緩衝液50μL、2mmol/LのNADPHを25μL、及びグルタチオンレダクターゼ25μL(終濃度17.5unit/mL)を加え、37℃で10分間加温した後、10mmol/Lの5,5’−dithiobis(2−nitrobenzoic acid)25μLを加え、5分間後までの波長412nmにおける吸光度を測定し、吸光度/minを求めた。総グルタチオン濃度は酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線に基づいて算出した。得られた値は総タンパク質量当たりのグルタチオン量に補正した。
そして、得られたグルタチオン量から、下記数式4によりグルタチオン産生促進率を算出した。試料濃度200μg/Lでのグルタチオン産生促進率を表5に示す。
<数式4>
グルタチオン産生促進率(%)=(B/A)×100
ただし、前記数式4中、Aは、試料溶液を添加しない細胞中におけるタンパク質量当りのグルタチオン量(対照)、Bは、試料溶液を添加した細胞中におけるタンパク質量当りのグルタチオン量を表す。
Example 4
-Test for promoting glutathione production-
Each extract of Production Examples 1 to 3 was used as a sample, and the glutathione production promoting action was tested by the following test method.
Human normal skin fibroblasts (NB1RGB) were cultured using 10% by mass fetal bovine serum (FBS) -containing αMEM, and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted to 2.0 × 10 5 cells / mL with α-MEM containing 10% by mass of FBS, seeded in a 48-well microplate at 200 μL per well, and cultured overnight. After culturing, 200 μL of each sample solution dissolved in D-MEM containing 1% by mass of FBS was added to each well and cultured for 24 hours. After completion of the culture, the medium was removed from each well, washed with 400 μL of PBS (−), and cells were lysed using 150 μL of M-PER (registered trademark) (manufactured by PIERCE). The total glutathione was quantified using 100 μL of this. Specifically, 100 μL of cell extract dissolved in a 96-well microplate, 50 μL of 0.1 mol / L phosphate buffer, 25 μL of 2 mmol / L NADPH, and 25 μL of glutathione reductase (final concentration 17.5 units / mL) Was added and heated at 37 ° C. for 10 minutes, 25 μL of 10 mmol / L 5,5′-dithiobis (2-nitrobenzoic acid) was added, and the absorbance at a wavelength of 412 nm until 5 minutes later was measured. Asked. The total glutathione concentration was calculated based on a calibration curve prepared using oxidized glutathione. The obtained value was corrected to the amount of glutathione per total protein.
And the glutathione production promotion rate was computed from following formula 4 from the obtained amount of glutathione. Table 5 shows the glutathione production promotion rate at a sample concentration of 200 μg / L.
<Formula 4>
Glutathione production promotion rate (%) = (B / A) × 100
In Formula 4, A represents the amount of glutathione per protein amount (control) in cells not added with the sample solution, and B represents the amount of glutathione per protein amount in cells added with the sample solution.

Figure 0005085198
表5の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、グルタチオン産生促進作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results of Table 5, it was confirmed that the white eyebrow extract of Production Examples 1 to 3 has a glutathione production promoting action.

参考例5)
−皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
ヒト正常皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を、10質量%の牛胎児血清(FBS)含有α−MEMを用いて培養した後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を5質量%のFBS含有α−MEMで7.0×10cells/mLの濃度に希釈した後、96穴マイクロプレートに1穴当たり100μL播種し、一晩培養した。
培養終了後、5質量%FBS含有α−MEMに溶解した試料溶液(濃度:400ppm)を各穴に100μL添加し、3日間培養した。
次いで、皮膚線維芽細胞増殖作用は、MTTアッセイ法を用いて測定した。具体的には、各穴から100μLずつ培地を抜き、終濃度5mg/mLでPBS(−)に溶解したMTT〔3−(4,5−Dimethyl−2−thiazolyl)−2,5−diphenyl−2H−tetrazolium Bromide〕を各穴に20μLずつ添加した。4.5時間培養した後、10質量%のSDSを溶解した0.01mol/Lの塩酸溶液を各穴に100μL添加し、一晩培養した後、波長570nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長650nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式5により試料濃度200μg/mLの線維芽細胞増殖促進率を算出した。結果を表6に示す。
<数式5>
線維芽細胞増殖促進率(%)=(St−Sb)/(Ct−Cb)×100
ただし、前記数式5中、Stは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Sbは試料溶液を添加した空試験の吸光度、Ctは試料溶液を添加しない細胞での吸光度、Cbは試料溶液を添加しない空試験の吸光度、をそれぞれ表す。
( Reference Example 5)
-Skin fibroblast proliferation promoting effect test-
Using each extract of Production Examples 1 to 3 as a sample, the skin fibroblast proliferation promoting action was tested by the following test method.
Human normal skin fibroblasts (NB1RGB) were cultured using α-MEM containing 10% by mass of fetal bovine serum (FBS), and then collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with α-MEM containing 5% by mass of FBS to a concentration of 7.0 × 10 4 cells / mL, then seeded at 100 μL per well in a 96-well microplate, and cultured overnight.
After completion of the culture, 100 μL of a sample solution (concentration: 400 ppm) dissolved in 5 mass% FBS-containing α-MEM was added to each well and cultured for 3 days.
The skin fibroblast proliferation effect was then measured using the MTT assay. Specifically, 100 μL of the medium was removed from each well, and MTT [3- (4,5-Dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H dissolved in PBS (−) at a final concentration of 5 mg / mL. -Tetrazole bromide] was added to each well in an amount of 20 μL. After culturing for 4.5 hours, 100 μL of a 0.01 mol / L hydrochloric acid solution in which 10% by mass of SDS was dissolved was added to each well, and after culturing overnight, the absorbance at a wavelength of 570 nm was measured. At the same time, the absorbance at a wavelength of 650 nm was measured as turbidity, and the difference between the two was used as the amount of blue formazan produced. In addition, a blank test was performed and corrected in the same manner.
Then, from the obtained measurement results, the fibroblast proliferation promotion rate at a sample concentration of 200 μg / mL was calculated by the following formula 5. The results are shown in Table 6.
<Formula 5>
Fibroblast growth rate (%) = (St−Sb) / (Ct−Cb) × 100
In Formula 5, St is the absorbance in the cells to which the sample solution is added, Sb is the absorbance in the blank test to which the sample solution is added, Ct is the absorbance in the cells to which no sample solution is added, and Cb is not added to the sample solution. The absorbance of the blank test is shown respectively.

Figure 0005085198
表6の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、皮膚線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results shown in Table 6, it was confirmed that the extract of white eyebrows of Production Examples 1 to 3 had a skin fibroblast proliferation promoting action.

参考例6)
−IV型コラーゲン産生促進作用試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、以下のようにしてIV型コラーゲン産生促進作用を試験した。
ヒト正常線維芽細胞(NB1RGB)を、10質量%の牛胎児血清(FBS)含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1.6×10cells/mLの細胞密度になるようにダルベッコMEM培地を用いて希釈した後、96穴マイクロプレートに1穴あたり100μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、0.25質量%のFBS含有ダルベッコMEM培地に溶解した各試料溶液(試料濃度:100μg/mL)を各穴に150μLずつ添加し、3日間培養した。培養終了後、各穴の培地中のIV型コラーゲン量をELISA法により測定した。
そして、得られた測定結果から、下記数式6によりIV型コラーゲン産生促進率(%)を算出した。試料濃度100μg/mLでのIV型コラーゲン産生促進率の結果を表7に示す。
<数式6>
IV型コラーゲン産生促進率(%)=(A/B)×100
ただし、前記数式6中、Aは試料溶液添加時のIV型コラーゲン量を表し、Bは試料溶液無添加時のIV型コラーゲン量を表す。
( Reference Example 6)
-Type IV collagen production promoting action test-
Using each extract of Production Examples 1 to 3 as a sample, the type IV collagen production promoting effect was tested as follows.
Human normal fibroblasts (NB1RGB) were cultured using Dulbecco's MEM medium containing 10% by mass fetal bovine serum (FBS), and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with Dulbecco's MEM medium to a cell density of 1.6 × 10 5 cells / mL, then seeded at 100 μL per well in a 96-well microplate, and cultured overnight. After completion of the culture, the medium was removed, 150 μL of each sample solution (sample concentration: 100 μg / mL) dissolved in 0.25% by mass of FBS-containing Dulbecco MEM medium was added to each well, and cultured for 3 days. After completion of the culture, the amount of type IV collagen in the medium in each well was measured by ELISA.
And from the obtained measurement result, the IV type collagen production promotion rate (%) was computed by following Numerical formula 6. Table 7 shows the results of the type IV collagen production promotion rate at the sample concentration of 100 μg / mL.
<Formula 6>
Type IV collagen production promotion rate (%) = (A / B) × 100
In Formula 6, A represents the amount of type IV collagen when the sample solution was added, and B represents the amount of type IV collagen when no sample solution was added.

Figure 0005085198
表7の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、IV型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results in Table 7, it was confirmed that the white eyebrow extract of Production Examples 1 to 3 had a type IV collagen production promoting effect.

参考例6)
−マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、以下のようにしてマトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Wunsch and Heidrich法を一部改変したものである。
蓋付試験管にて、20mmol/mLの塩化カルシウム含有0.1mol/LのTris−HCl緩衝液(pH7.1)に溶解した各試料溶液50μL、MMP−1溶液50μL、及び基質溶液400μLを混合し、37℃にて30分間インキュベーションした。次いで、25mmol/Lのクエン酸溶液1mLを加え反応を停止し、酢酸エチル5mLを加え、激しく振とうした。これを遠心分離(1600×g、10分間)し、酢酸エチル層の波長320nmにおける吸光度を測定した。上記と同様の酵素反応と吸光度測定を試料溶液の代わりに試料溶液と等量の緩衝液を添加して行った。更に、それぞれの場合について、MMP−1溶液の代わりにTris−HCl緩衝液を添加して同じ操作と測定を行った。
なお、MMP−1溶液としては、コラゲナーゼ TypeIV(シグマ社製)を緩衝液に溶解させ、0.1mg/mLとなるように希釈したものを使用した。
基質溶液としては、20nmol/Lの塩化カルシウムを含有する0.1mol/Lのトリス塩酸緩衝液にPz−ペプチド(BACHEM Fenichemikalien AG社製)を濃度が0.5mol/Lになるように溶解して使用した。
そして、得られた測定結果から、下記数式7によりMMP−1活性阻害率を算出した。
<数式7>
MMP−1活性阻害率(%)={1−(C−D)/(A−B)}×100
ただし、前記数式7中、Aは、試料溶液無添加、酵素添加での波長320nmにおける吸光度、Bは、試料溶液無添加、酵素無添加での波長320nmにおける吸光度、Cは、試料溶液添加、酵素添加での波長320nmにおける吸光度、Dは、試料溶液添加、酵素無添加での波長320nmにおける吸光度、をそれぞれ表す。
( Reference Example 6)
-Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibition test-
Using the extracts of Production Examples 1 to 3 as samples, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibitory action was tested as follows. This test method is a partial modification of the Wunsch and Heidrich method.
In a test tube with a lid, 50 μL of each sample solution dissolved in 0.1 mol / L Tris-HCl buffer (pH 7.1) containing 20 mmol / mL calcium chloride, 50 μL of MMP-1 solution, and 400 μL of the substrate solution were mixed. And incubated at 37 ° C. for 30 minutes. Next, 1 mL of a 25 mmol / L citric acid solution was added to stop the reaction, 5 mL of ethyl acetate was added, and the mixture was shaken vigorously. This was centrifuged (1600 × g, 10 minutes), and the absorbance of the ethyl acetate layer at a wavelength of 320 nm was measured. The same enzyme reaction and absorbance measurement as described above were performed by adding an equal amount of buffer solution to the sample solution instead of the sample solution. Furthermore, in each case, Tris-HCl buffer was added instead of the MMP-1 solution, and the same operation and measurement were performed.
In addition, as the MMP-1 solution, collagenase Type IV (manufactured by Sigma) was dissolved in a buffer and diluted to 0.1 mg / mL.
As a substrate solution, Pz-peptide (manufactured by BACHEM Fenchemikaline AG) was dissolved in 0.1 mol / L Tris-HCl buffer containing 20 nmol / L calcium chloride so as to have a concentration of 0.5 mol / L. used.
And from the obtained measurement result, MMP-1 activity inhibition rate was computed by following formula 7.
<Formula 7>
MMP-1 activity inhibition rate (%) = {1− (C−D) / (A−B)} × 100
In Formula 7, A is the absorbance at a wavelength of 320 nm when the sample solution is not added and the enzyme is added, B is the absorbance at a wavelength of 320 nm when the sample solution is not added and the enzyme is not added, and C is the sample solution added and the enzyme Absorbance at a wavelength of 320 nm with addition, D represents the absorbance at a wavelength of 320 nm with addition of a sample solution and without addition of an enzyme, respectively.

次に、試料濃度を段階的に減少させて上記MMP−1活性阻害率の測定を行い、MMP−1活性を50%阻害する試料濃度(μg/mL)を内挿法により求めた。結果を表8に示す。   Next, the MMP-1 activity inhibition rate was measured by gradually reducing the sample concentration, and the sample concentration (μg / mL) that inhibits MMP-1 activity by 50% was determined by interpolation. The results are shown in Table 8.

Figure 0005085198
表8の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、マトリックスメタロプロテアーゼ−1(MMP−1)活性阻害作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results shown in Table 8, it was confirmed that the extracts of white eyebrows of Production Examples 1 to 3 had a matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibitory action.

参考例8)
−エストロゲン様作用試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりエストロゲン様作用を試験した。
ヒト乳癌由来細胞(MCF−7)を10質量%の牛胎児血清(FBS)、1質量%のNEAA、及び1mmol/Lのピルビン酸ナトリウムを含有するMEMを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を活性炭処理した10質量%のFBS、1質量%のNEAA、及び1mmol/Lのピルビン酸ナトリウムを含有するフェノールレッド不含MEM(T−MEM)を用いて3.0×10cells/mLの濃度に希釈した後、48穴マイクロプレートに1穴あたり450μLずつ播種し、細胞を定着させるため培養した。6時間後(0日目)にT−MEMで終濃度の10倍に調製した各試料溶液を各穴に50μLずつ添加し、培養を続けた。3日目に培地を抜き、T−MEMで終濃度に調製した試料溶液を各穴に500μL添加し、更に培養を続けた。
エストロゲン様作用は、MTTアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、1質量%のNEAA、1mmol/Lのピルビン酸ナトリウムを含有するMEMに終濃度0.4mg/mLで溶解したMTT〔3−(4,5−Dimethyl−2−thiazolyl)−2,5−diphenyl−2H−tetrazolium Bromide〕を各穴に200μLずつ添加した。2時間培養した後、細胞内に生成したブルーホルマザンを2−プロパノール200μLで抽出した。抽出後、波長570nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長650nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。ポジティブコントロールとして、10−9mol/Lのエストラジオールを使用した。
そして、得られた測定結果から、エストロゲン様作用(エストロゲン依存性増殖作用)を下記数式8から算出した。試料濃度50μg/mLでのエストロゲン様作用率の結果を表9に示す。
( Reference Example 8)
-Estrogen-like action test-
Using the extracts of Production Examples 1 to 3 as samples, estrogen-like action was tested by the following test method.
Human breast cancer-derived cells (MCF-7) were cultured using MEM containing 10% by mass fetal bovine serum (FBS), 1% by mass NEAA, and 1 mmol / L sodium pyruvate, and then treated with trypsin. Was recovered. 3.0 × 10 4 cells using phenol red-free MEM (T-MEM) containing 10% by mass of FBS, 1% by mass of NEAA, and 1 mmol / L sodium pyruvate treated with activated carbon. After dilution to a concentration of / mL, the cells were seeded at 450 μL per well in a 48-well microplate and cultured to establish the cells. Six hours later (day 0), 50 μL of each sample solution prepared to 10 times the final concentration with T-MEM was added to each well, and the culture was continued. On the third day, the medium was removed, 500 μL of the sample solution prepared to the final concentration with T-MEM was added to each well, and the culture was further continued.
Estrogen-like effects were measured using the MTT assay. After completion of the culture, the medium was removed, and MTT [3- (4,5-Dimethyl-2-thiazolyl) dissolved in MEM containing 1% by mass of NEAA and 1 mmol / L sodium pyruvate at a final concentration of 0.4 mg / mL. ) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide] was added to each well in an amount of 200 μL. After culturing for 2 hours, blue formazan produced in the cells was extracted with 200 μL of 2-propanol. After extraction, the absorbance at a wavelength of 570 nm was measured. At the same time, the absorbance at a wavelength of 650 nm was measured as turbidity, and the difference between the two was used as the amount of blue formazan produced. As a positive control, 10 −9 mol / L estradiol was used.
Then, from the obtained measurement results, an estrogen-like action (estrogen-dependent proliferation action) was calculated from Equation 8 below. Table 9 shows the results of estrogen-like effects at a sample concentration of 50 μg / mL.

<数式8>
エストロゲン様作用率(%)=(A/B)×100
ただし、前記数式8において、Aは、試料溶液添加の場合の吸光度を表す。Bは、試料溶液無添加の場合の吸光度を表す。
<Formula 8>
Estrogen-like action rate (%) = (A / B) × 100
In Equation 8, A represents the absorbance when the sample solution is added. B represents the absorbance when no sample solution is added.

Figure 0005085198
表9の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、エストロゲン様作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results of Table 9, it was confirmed that the white eyebrow extract of Production Examples 1 to 3 had an estrogenic action.

参考例9)
−ヒスタミン遊離抑制(ヘキソサミニダーゼ遊離抑制)作用試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりヒスタミン遊離抑制作用を試験した。なお、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。
25mLの培養フラスコ内に入れた培地(15質量%の牛胎児血清(FBS)添加S−MEM培地;以下同じ)にラット好塩基球白血病細胞(RBL−2H3細胞)1.0×10個を播種し、37℃、5%CO−95%airの下で4日間培養した。次いで、トリプシン処理し、遠心分離(800rpm、4分間)して細胞を集めた。得られた細胞を4.0×10cell/mLで培地に懸濁し、そこに、マウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基IgE(DNP−Specific IgE)を0.5μg/mLの濃度で添加した。この細胞浮遊液を96穴マイクロプレートの1穴に付き100μLずつ播種し、37℃、5%CO−95%airの下で24時間培養した。培養終了後、各穴中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で2回洗浄した。
次に、上記緩衝液30μL、及び各試料溶液10μLを加え、37℃で10分間インキュベーションした。次いで、ジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン(DNP−BSA)10μLを加え、37℃で15分間インキュベーションした。その後、氷冷下で上清10μLを新たな96穴マイクロプレートに移し替え、これに1mmol/Lのp−ニトロフェニル−N−アセチル−β−D−グルコサミド溶液10μLを加え、37℃で1時間インキュベーションした。反応終了後、0.1mol/LのNaCO−NaHCO溶液250μLを加え、マイクロプレートリーダーにて650nmを対照に415nmにおける吸光度Aを測定した。試料溶液の代りにシラガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度測定を行った(このとき測定された吸光度をBとした)。また、細胞上清と0.1mol/LのNaCO−NaHCO溶液を同様の処理で反応させたものについても、吸光度測定を行った(このとき測定された吸光度をCとした)。同様の操作をDNP−BSAのかわりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても行った(このとき測定された吸光度をDとした)。
そして、得られた測定結果から、下記数式9によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制(ヒスタミン遊離抑制)率を算出した。
( Reference Example 9)
-Histamine release inhibition (hexosaminidase release inhibition) action test-
Each extract of Production Examples 1 to 3 was used as a sample, and the histamine release inhibitory action was tested by the following test method. Since intracellular histamine is released and hexosaminidase is released at the same time, the histamine release inhibitory action can be evaluated using hexosaminidase release as an index.
1.0 × 10 6 rat basophil leukemia cells (RBL-2H3 cells) were added to a medium (15% by mass fetal bovine serum (FBS) -added S-MEM medium; the same applies hereinafter) placed in a 25 mL culture flask. Seeded and cultured for 4 days at 37 ° C., 5% CO 2 -95% air. Cells were then collected by trypsinization and centrifugation (800 rpm, 4 minutes). The obtained cells were suspended in the medium at 4.0 × 10 5 cells / mL, and mouse monoclonal anti-dinitrophenyl group IgE (DNP-Specific IgE) was added thereto at a concentration of 0.5 μg / mL. This cell suspension was seeded in 100 μL per well of a 96-well microplate and cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 -95% air for 24 hours. After completion of the culture, the medium in each well was removed and washed twice with Silaganian buffer.
Next, 30 μL of the buffer solution and 10 μL of each sample solution were added and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Subsequently, 10 μL of dinitrophenylated bovine serum albumin (DNP-BSA) was added and incubated at 37 ° C. for 15 minutes. Thereafter, 10 μL of the supernatant was transferred to a new 96-well microplate under ice cooling, and 10 μL of 1 mmol / L p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosamide solution was added thereto, and the mixture was incubated at 37 ° C. for 1 hour. Incubated. After completion of the reaction, 250 μL of a 0.1 mol / L Na 2 CO 3 —NaHCO 3 solution was added, and the absorbance A at 415 nm was measured with a microplate reader at 650 nm as a control. The same treatment and absorbance measurement were performed for the cell supernatant to which the Siraganian buffer was added instead of the sample solution (the absorbance measured at this time was designated as B). Absorbance measurement was also performed on the cell supernatant and 0.1 mol / L Na 2 CO 3 —NaHCO 3 solution reacted in the same manner (the absorbance measured at this time was C). The same operation was performed for the sample in which a Siraganian buffer was added instead of DNP-BSA (the absorbance measured at this time was designated as D).
And the hexosaminidase release suppression (histamine release suppression) rate was computed from the obtained measurement result by the following numerical formula 9.

<数式9>
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率(%)=
〔1−{(A−C−D)/(B−D)}〕×100
ただし、前記数式9中、A〜Dは、上記試験方法中の記載と同じ意味を表す。
<Formula 9>
Inhibition rate of hexosaminidase release (%) =
[1-{(ACD) / (BD)}] × 100
However, in the said Numerical formula 9, AD represents the same meaning as the description in the said test method.

次に、各試料濃度を段階的に減少させて上記ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率の測定を行い、ヘキソサミニダーゼの遊離を50%阻害する試料濃度(μg/mL)を内挿法により求めた。結果を表10に示す。   Next, the concentration of each hexosaminidase release is measured by decreasing each sample concentration step by step, and the sample concentration (μg / mL) that inhibits hexosaminidase release by 50% is determined by interpolation. It was. The results are shown in Table 10.

Figure 0005085198
表10の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、ヒスタミン遊離抑制(ヘキソサミニダーゼ遊離抑制)作用を有することが確認できた。
Figure 0005085198
From the results of Table 10, it was confirmed that the extracts of white eyebrows of Production Examples 1 to 3 have histamine release inhibition (hexosaminidase release inhibition) action.

参考例10)
−一酸化窒素(NO)産生抑制作用試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素(NO)産生抑制作用を試験した。
マウスマクロファージ細胞(RAW264.7)を10質量%の牛胎児血清(FBS)含有ダルベッコMEMを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を3.0×10cells/mLの濃度になるように10質量%のFBS含有フェノールレッド不含ダルベッコMEMで希釈した後、96穴マイクロプレートに1穴当たり100μLずつ播種し、4時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度2質量%のDMSOを含む10質量%のFBS含有フェノールレッド不含ダルベッコMEMで溶解した各試料溶液を各穴に100μL添加し、終濃度1μg/mLで10質量%のFBS含有フェノールレッド不含ダルベッコMEMに溶解したリポポリサッカライド(LPS、E.coli 0111;B4、DIFCO社製)を50μL加え、48時間培養した。NO産生量は亜硝酸イオン(NO2−)量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬(1質量%のスルファニルアミド、0.1質量%のN−1−naphthyl ethylendiamine dihydrochlpride in 5質量%のリン酸溶液)を添加し、10分間室温にて反応した。反応後、波長540nmにおける吸光度を測定した。コントロールの一酸化窒素(NO)産生量を基にして、下記数式10からNO産生抑制率を算出した。
( Reference Example 10)
-Nitric oxide (NO) production inhibitory action test-
Each extract of Production Examples 1 to 3 was used as a sample, and the nitric oxide (NO) production inhibitory action was tested by the following test method.
Mouse macrophage cells (RAW264.7) were cultured using Dulbecco's MEM containing 10% by mass fetal bovine serum (FBS), and then the cells were collected with a cell scraper. The collected cells were diluted with 10% by mass of FBS-containing phenol red-free Dulbecco MEM to a concentration of 3.0 × 10 6 cells / mL, and then seeded at 100 μL per well in a 96-well microplate. Incubate for hours. After completion of the culture, the medium was removed, 100 μL of each sample solution dissolved in 10% by mass of FBS-containing phenol red-free Dulbecco MEM containing DMSO having a final concentration of 2% by mass was added to each well, and the final concentration was 1 μg / mL. 50 μL of lipopolysaccharide (LPS, E. coli 0111; B4, manufactured by DIFCO) dissolved in mass% FBS-containing phenol red-free Dulbecco MEM was added and cultured for 48 hours. The amount of NO production was measured using the amount of nitrite ion (NO 2− ) as an index. After completion of the culture, the same amount of grease reagent (1% by mass of sulfanilamide, 0.1% by mass of N-1-naphthyl ethylenedihydride in 5% by mass of phosphoric acid solution) was added to the culture solution in each well, Reacted for 10 minutes at room temperature. After the reaction, absorbance at a wavelength of 540 nm was measured. Based on the amount of nitric oxide (NO) produced by the control, the NO production inhibition rate was calculated from the following formula 10.

<数式10>
NO産生抑制率(%)={1−(A−B)/(C−D)}×100
ただし、前記数式10中、Aは試料添加、LPS刺激時の波長540nmにおける吸光度、Bは試料添加、LPS無刺激時の波長540nmにおける吸光度、CはコントロールのLPS刺激時の波長540nmにおける吸光度、DはコントロールのLPS無刺激時の波長540nmにおける吸光度、をそれぞれ表す。
<Formula 10>
NO production inhibition rate (%) = {1− (A−B) / (C−D)} × 100
In Formula 10, A is the absorbance at a wavelength of 540 nm when a sample is added and stimulated with LPS, B is the absorbance at a wavelength of 540 nm when the sample is added and LPS is not stimulated, C is the absorbance at a wavelength of 540 nm when LPS is stimulated for control, and D Represents the absorbance at a wavelength of 540 nm when LPS was not stimulated as a control.

次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記NO産生抑制率を測定し、NO産生抑制率が50%になる濃度IC50を内挿法により求めた(このIC50値が小さいほどNO産生抑制作用が強い)。結果を表11に示す。 Next, the concentration of each sample solution was decreased stepwise to measure the NO production inhibition rate, and the concentration IC 50 at which the NO production inhibition rate was 50% was determined by interpolation (this IC 50 value is small). NO production suppression effect is so strong). The results are shown in Table 11.

Figure 0005085198
表11の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、高い一酸化窒素(NO)産生抑制作用を有することが認められた。
Figure 0005085198
From the result of Table 11, it was recognized that the extract of the white eyebrows of manufacture examples 1-3 has a high nitric oxide (NO) production inhibitory effect.

参考例10)
−シクロオキシゲナーゼ(COX−2)を介したPGE産生抑制作用試験−
製造例1〜3の各抽出物を試料として用い、下記の試験方法によりシクロオキシゲナーゼ(COX−2)活性阻害作用を試験した。この試験は、Hwang,B.−Y.らの方法(Planta Medica 67(2001)、406−410)に一部修正を加えて行った。
まず、マウス由来マクロファージ様細胞(RAW264.7)を前培養後、細胞を集め、2×10個/mLに調製して、96穴マイクロプレートに100μLずつ播種し、37℃、5%COで18時間培養した。培養終了後、既に存在するCOX−1及び少量発現しているCOX−2をアセチル化し失活させるため、500μmol/Lのアスピリン含有培地に交換して4時間培養した。細胞をPBS(−)で3回洗浄し、1μg/mLのリポポリサッカライド(LPS)を含む培地で溶解した各試料溶液200μLを添加し、18時間培養した。培養終了後、上清中のPGEをPGE EIA Kit(Cayman,Chemical,Ann Arbor,MI,米国)を用いて定量し、各試料溶液を無添加時の値を100%として、PGE産生抑制率を算出した。
( Reference Example 10)
-PGE 2 production inhibitory action test via cyclooxygenase (COX-2)-
Using each extract of Production Examples 1 to 3 as a sample, cyclooxygenase (COX-2) activity inhibitory action was tested by the following test method. This test is described in Hwang, B .; -Y. The method (Planta Medica 67 (2001), 406-410) was modified with some modifications.
First, after pre-culturing mouse-derived macrophage-like cells (RAW264.7), the cells were collected, prepared to 2 × 10 5 cells / mL, and seeded at 100 μL each in a 96-well microplate, at 37 ° C., 5% CO 2. For 18 hours. After culturing, in order to acetylate and inactivate COX-1 already present and COX-2 expressed in a small amount, the culture medium was replaced with 500 μmol / L aspirin-containing medium and cultured for 4 hours. The cells were washed three times with PBS (−), 200 μL of each sample solution dissolved in a medium containing 1 μg / mL lipopolysaccharide (LPS) was added, and cultured for 18 hours. After completion of the culture, PGE 2 in the supernatant was quantified using PGE 2 EIA Kit (Cayman, Chemical, Ann Arbor, MI, USA), and each sample solution was taken as 100% to give PGE 2 production. The inhibition rate was calculated.

次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記COX−2を介したPGE産生抑制率を測定し、COX−2を介したPGE産生抑制率が50%になる濃度IC50を内挿法により求めた(このIC50値が小さいほどCOX−2を介したPGE産生抑制作用が強い)。結果を表12に示す。 Next, the concentration IC 50 for each sample the concentration of the solution stepwise reduced measuring PGE 2 production inhibition rate through the COX-2, PGE 2 production inhibition rate through the COX-2 is 50% Was determined by interpolation (the smaller the IC 50 value, the stronger the inhibition of PGE 2 production via COX-2). The results are shown in Table 12.

Figure 0005085198
表12の結果から、製造例1〜3の白眉草の抽出物が、COX−2を介したPGE産生抑制作用を有することが認められた。
Figure 0005085198
From the results of Table 12, it was confirmed that the white eyebrow extract of Production Examples 1 to 3 has a PGE 2 production inhibitory action via COX-2.

(配合実施例1)
−乳液−
下記組成から乳液を常法により製造した。
・製造例1の白眉草の水抽出物・・・0.10g
・ホホバオイル・・・4.00g
・1,3−ブチレングリコール・・・3.00g
・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.)・・・2.50g
・オリーブオイル・・・2.00g
・スクワラン・・・2.00g
・セタノール・・・2.00g
・モノステアリン酸グリセリル・・・2.00g
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.)・・・2.00g
・パラオキシ安息香酸メチル・・・0.15g
・黄杞エキス・・・0.10g
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・0.10g
・イチョウ葉エキス・・・0.10g
・コンキオリン・・・0.10g
・オウバクエキス・・・0.10g
・カツミレエキス・・・0.10g
・香料・・・0.05g
・精製水・・・残部(合計100.00g)
(Formulation Example 1)
-Emulsion-
An emulsion was prepared from the following composition by a conventional method.
-Water extract of white eyebrow grass of production example 1 ... 0.10 g
・ Jojoba oil: 4.00 g
・ 1,3-Butylene glycol ・ ・ ・ 3.00g
・ Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.) ... 2.50 g
・ Olive oil ... 2.00g
・ Squalane ... 2.00g
・ Cetanol ... 2.00g
・ Glyceryl monostearate ... 2.00g
・ Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O.) ... 2.00g
・ Methyl paraoxybenzoate 0.15 g
・ Twilight extract ... 0.10g
・ Dipotassium glycyrrhizinate ... 0.10g
・ Ginkgo biloba extract ... 0.10g
・ Conchiolin ... 0.10g
・ Oat extract ... 0.10g
・ Chicken extract ... 0.10g
・ Fragrance ... 0.05g
・ Purified water: remainder (total 100.00 g)

(配合実施例2)
−化粧水−
下記組成から化粧水を常法により製造した。
・製造例2の白眉草の50質量%エタノール抽出物・・・0.10g
・グリセリン・・・3.00g
・1,3−ブチレングリコール・・・3.00g
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.)・・・2.00g
・パラオキシ安息香酸メチル・・・0.15g
・クエン酸・・・0.10g
・クエン酸ソーダ・・・0.10g
・油溶性甘草エキス・・・0.10g
・海藻エキス・・・0.10g
・クジンエキス・・・0.10g
・キシロビオースミクスチャー・・・0.05g
・香料・・・0.05g
・精製水・・・残部(合計:100.00g)
(Formulation Example 2)
-Lotion-
A lotion was produced from the following composition by a conventional method.
-50% by weight ethanol extract of white eyebrow grass of Production Example 2 ... 0.10 g
・ Glycerin ... 3.00g
・ 1,3-Butylene glycol ・ ・ ・ 3.00g
・ Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O.) ... 2.00g
・ Methyl paraoxybenzoate 0.15 g
・ Citric acid ... 0.10g
・ Sodium citrate: 0.10 g
・ Oil-soluble licorice extract ... 0.10g
・ Seaweed extract ... 0.10g
・ Cudin extract ... 0.10g
・ Xylobiose Mixture ... 0.05g
・ Fragrance ... 0.05g
・ Purified water: remainder (total: 100.00 g)

(配合実施例3)
−クリーム−
下記組成からクリームを常法により製造した。
・製造例3の白眉草のエタノール抽出物・・・0.10g
・スクワラン・・・10.00g
・1,3−ブチレングリコール・・・6.00g
・流動パラフィン・・・5.00g
・サラシミツロウ・・・4.00g
・セタノール・・・3.00g
・モノステアリン酸グリセリル・・・3.00g
・ラノリン・・・2.00g
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.)・・・1.50g
・パラオキシ安息香酸メチル・・・1.50g
・ステアリン酸・・・1.00g
・酵母抽出液・・・0.10g
・シソ抽出液・・・0.10g
・シナノキ抽出液・・・0.10g
・ジユ抽出液・・・0.10g
・香料・・・0.10g
・精製水・・・残部(合計:100.00g)
(Formulation Example 3)
-Cream-
A cream was produced from the following composition by a conventional method.
-Ethanol extract of white eyebrows in Production Example 3 ... 0.10 g
・ Squalane ... 10.00g
・ 1,3-butylene glycol ... 6.00g
・ Liquid paraffin ・ ・ ・ 5.00g
・ Salah beeswax 4.00 g
・ Cetanol ... 3.00g
・ Glyceryl monostearate ... 3.00 g
・ Lanoline ... 2.00g
・ Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O.) ... 1.50 g
・ Methyl paraoxybenzoate ... 1.50g
・ Stearic acid: 1.00 g
・ Yeast extract ... 0.10g
・ Perilla extract ... 0.10g
-Linden extract ... 0.10g
・ Jiuyu extract ... 0.10g
・ Fragrance ... 0.10g
・ Purified water: remainder (total: 100.00 g)

(配合実施例4)
−パック−
下記組成からパックを常法により製造した。
・製造例1の白眉草の水抽出物・・・0.20g
・ポリビニルアルコール・・・15.00g
・エタノール・・・10.00g
・プロピレングリコール・・・7.00g
・ポリエチレングリコール・・・3.00g
・セージ抽出液・・・0.10g
・トウキ抽出液・・・0.10g
・ニンジン抽出液・・・0.10g
・パラオキシ安息香酸エチル・・・0.05g
・香料・・・0.05g
・精製水・・・残部(合計:100.00g)
(Formulation Example 4)
−Pack−
A pack was produced from the following composition by a conventional method.
-Water extract of white eyebrow grass of Production Example 1 0.20 g
・ Polyvinyl alcohol: 15.00g
・ Ethanol ... 10.00g
・ Propylene glycol: 7.00 g
・ Polyethylene glycol ... 3.00g
・ Sage extract ... 0.10g
・ Toki extract ... 0.10g
・ Carrot extract ... 0.10g
・ Ethyl paraoxybenzoate 0.05g
・ Fragrance ... 0.05g
・ Purified water: remainder (total: 100.00 g)

(配合参考例5)
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・製造例1の白眉草の水抽出物・・・30g
・粉糖(ショ糖)・・・178g
・ソルビット・・・10g
・グリセリン脂肪酸エステル・・・12g
(Formulation Reference Example 5)
-Tablet dietary supplements-
The following mixture was tableted to produce a tablet-shaped dietary supplement.
・ Water extract of white eyebrow grass of Production Example 1 30g
・ Powdered sugar (sucrose) 178g
・ Sorbit ・ ・ ・ 10g
・ Glycerin fatty acid ester: 12g

(配合参考例6)
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例2の白眉草の50質量%エタノール抽出物・・・20g
・ビートオリゴ糖・・・1000g
・ビタミンC・・・167g
・ステビア抽出物・・・10g
(Formulation Reference Example 6)
-Granular dietary supplement-
The following mixture was formed into granules to produce a dietary supplement.
-50% by weight ethanol extract of white eyebrow grass of Production Example 2 20 g
・ Beat oligosaccharide ... 1000g
・ Vitamin C ... 167g
・ Stevia extract ... 10g

(配合参考例7)
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例3の白眉草のエタノール抽出物・・・20g
・ビートオリゴ糖・・・1000g
・ビタミンC・・・167g
・ステビア抽出物・・・10g
(Formulation Reference Example 7)
-Granular dietary supplement-
The following mixture was formed into granules to produce a dietary supplement.
-Ethanol extract of white eyebrow grass of production example 3 ... 20 g
・ Beat oligosaccharide ... 1000g
・ Vitamin C ... 167g
・ Stevia extract ... 10g

本発明の抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤の少なくともいずれかを配合した皮膚化粧料は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、及び抗炎症作用の少なくともいずれかを有し、生体内の酸化防止、皮膚のシワや皮膚の弾力低下の防止及び改善、肌荒れの予防、肌荒れの防止に有効であり、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼントなどに幅広く用いられる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、及び抗炎症剤の少なくともいずれかを添加した美容用飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用、抗老化作用、及び抗炎症作用の少なくともいずれかを有し、安全性にも優れているので、例えば、健康食品、栄養補助食品などに幅広く用いられる。
A skin cosmetic containing at least one of the antioxidant, anti-aging agent, and anti-inflammatory agent of the present invention has at least one of an excellent antioxidant effect, anti-aging effect, and anti-inflammatory effect, Effective in preventing oxidation in the body, preventing and improving skin wrinkles and skin elasticity, preventing rough skin, and preventing rough skin, such as ointments, creams, emulsions, lotions, packs, jellies, lip balms, lipsticks, bathing Widely used in agents, astringents, etc.
In addition, the cosmetic food and drink to which at least one of the antioxidant, the anti-aging agent, and the anti-inflammatory agent of the present invention is added has at least one of an anti-oxidation action, an anti-aging action, and an anti-inflammatory action that are excellent even when taken orally. Since it has any of them and is excellent in safety, it is widely used, for example, in health foods and nutritional supplements.

Claims (2)

白眉草の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。   An antioxidant comprising an extract of white eyebrows. スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、過酸化水素消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有する請求項1に記載の抗酸化剤。   The antioxidant according to claim 1, which has at least one of a superoxide scavenging action, a radical scavenging action, a hydrogen peroxide scavenging action, and a glutathione production promoting action.
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