JP4571783B2 - 抗微生物剤 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は抗微生物剤に関し、より詳細には、ヒドロキシ安息香酸の糖転移物、ヒドロキシケイ皮酸の糖転移物、及びそれらの誘導体、並びにそれらの塩から選ばれる１種又は２種以上を、有効成分として含有してなる抗微生物剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、清潔な生活環境が求められるようになり、抗微生物剤は、医薬品用途以外にも、食品、衣服、化粧品、日用品、建材などの多くの物品に使用されている。しかしながら、抗微生物剤は、金属化合物や有機化合物を有効成分としており、それらの多くが環境及び人体に有害な物質である危険性を秘めている。例えば、ヘキサクロロフェン、ビチオノールなどのハロゲン化フェノール類、ハロゲン化サリチルアニリド、ホウ酸、過酸化水素水、水銀化合物、ホルムアルデヒドなどは、皮膚、呼吸器などへの感作性が強いことから、現在では使用が禁止されている。特に、ホルムアルデヒドは、建材に多量に含まれ、シックハウス症候群の原因物質としてよく知られている。また、医薬品として利用される抗生物質は、大腸における有用な菌叢を破壊したり、耐性菌が発生する危険性がある。
【０００３】
安全性の高い抗微生物剤が求められる現在、植物の抽出物又はそれに含まれている成分は安全性が高いという観点から、食品や食品添加物用の抗微生物剤に利用されつつある。例えば、ヒノキチオール、孟宗竹抽出物、緑茶抽出物、藍抽出物、プロポリス抽出物などを抗微生物剤として利用することが提案されている。
しかしながら、これらの抽出物は、安全性及び抗微生物効果に優れるものの、有効成分として含まれる化合物の生体内での持続性及び水溶性が乏しいため、取り扱い性が良好ではないという問題を抱えている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
斯かる状況に鑑み、生体に安全かつ十分な抗微生物効果を有し、取り扱い性が良好な抗微生物剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記課題を解決するために、植物の抽出物中に含まれるヒドロキシフェノール化合物に着目して研究を進めたところ、ヒドロキシ安息香酸の１種である没食子酸、及び、ヒドロキシケイ皮酸の１種であるカフェ酸は、植物由来の抗微生物性化合物の中でも比較的抗微生物効果に優れ、かつ、人体への毒性の低いという有利な特徴を有しているものの、摂取した場合、生体内での持続性が著しく低いという問題点があることを見い出した。そこで、没食子酸又はカフェ酸の糖転移物を調製し、抗微生物効果並びに生体内での持続性を調べたところ、これら糖転移物は、糖転移されてない没食子酸又はカフェ酸と比較して、抗微生物効果はやや劣るものの、抗微生物剤として利用可能なレベルの活性を有し、さらに水溶性が優れた取り扱い性が良好な化合物であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、ヒドロキシ安息香酸の糖転移物、ヒドロキシケイ皮酸の糖転移物、及びそれらの誘導体、並びにそれらの塩から選ばれる１種又は２種以上を、有効成分として含有してなる抗微生物剤を提供することにより、前記課題を解決するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明でいうヒドロキシ安息香酸は、植物成分のタンニンを構成する成分であり、その糖転移物は、本発明の抗微生物剤の有効成分として用いられる。本明細書では、ヒドロキシ安息香酸の一種の没食子酸（３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、分子量約１７０）について説明するが、本発明の効果を発揮するかぎり、他のヒドロキシ安息香酸を使用することができる。本発明で使用する没食子酸の調製方法としては、没食子酸又はその誘導体を豊富に含む植物から抽出し、必要に応じて、酸、アルカリ、加熱、酵素などを用いて、加水分解して得ることができる。本発明で使用する没食子酸は、その由来、調製方法を問わず、植物体から抽出・精製する方法以外にも、化学合成法によっても得ることができ、市販品を利用することも随意である。また、本発明の効果を損ねない限り、塩の形態のものを用いることもできる。
【０００８】
本発明でいうヒドロキシケイ皮酸は、植物成分の１種であり、その糖転移物は、本発明の抗微生物剤の有効成分として用いられる。本明細書では、ヒドロキシケイ皮酸の一種のカフェ酸（３，４−ジヒドロキシケイ皮酸、分子量約１８０）について説明するが、本発明の効果を発揮するかぎり、他のヒドロキシケイ皮酸を使用することができる。本発明で使用するカフェ酸の調製方法としては、カフェ酸又はその誘導体を豊富に含む植物から抽出し、必要に応じて、酸、アルカリ、加熱、酵素などを用いて、加水分解して得ることができる。本発明で使用するカフェ酸は、その由来、調製方法を問わず、植物体から抽出・精製する方法以外にも、化学的な合成、例えば、３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドと無水酢酸及び酢酸カリウムとを反応させて合成する方法などによっても得ることができ、市販品を利用することも随意である。また、本発明の効果を損ねない限り、塩の形態のものを用いることもできる。
【０００９】
本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸の糖転移物及びその誘導体、及び、カフェ酸の糖転移物及びその誘導体とは、化学的又は酵素的な糖転移反応により没食子酸又はその誘導体、及び、カフェ酸又はその誘導体に、それらの水酸基を介して糖が転移付加されたものである。糖転移された糖がグルコースの場合、その代表的な没食子酸糖転移物としては、化学式１乃至３のものを、カフェ酸糖転移物としては、化学式４及び５のものを例示できる。なお、式中、ｍ及びｎは０以上の整数を、Ｒは水素原子又は炭化水素基を示す。化学式１乃至５においては、グルコース間の結合は１，４結合であるが、１，３結合、１，６結合であってもよい。さらに、化学式１乃至５においては、糖質と没食子酸又はカフェ酸との結合様式としてα−グルコシド結合を例示しているが、必要に応じて、β−グルコシド結合を選択することも可能である。また、本発明の効果を損ねない範囲で、カフェ酸糖転移物又は没食子酸糖転移物を、塩の形態とすることもできる。
【００１０】
【化１】
化学式１：
（式中、ｎは０以上の整数を表し、Ｒは水素原子又は炭化水素基を示す）
【００１１】
【化２】
化学式２：
（式中、ｎは０以上の整数を表し、Ｒは水素原子又は炭化水素基を示す）
【００１２】
【化３】
化学式３：
（式中、ｍ及びｎは０以上の整数を表し、Ｒは水素原子又は炭化水素基を示す）
【００１３】
【化４】
化学式４：
（式中、ｎは０以上の整数を表し、Ｒは水素原子又は炭化水素基を示す）
【００１４】
【化５】
化学式５：
（式中、ｎは０以上の整数を表し、Ｒは水素原子又は炭化水素基を示す）
【００１５】
本発明の抗微生物剤には、没食子酸の糖転移物及びカフェ酸の糖転移物の誘導体を用いることができる。なお、没食子酸及びカフェ酸への糖転移化と誘導体化の順序は問わない。没食子酸の糖転移物及びカフェ酸の糖転移物の誘導体としては、酸、アルカリ、加熱などの処理により、比較的容易に加水分解されて、没食子酸又はカフェ酸が生成され得る化合物が用いられ、それらは天然物であっても人工的な合成物であってもよい。例えば、天然に存在する没食子酸の誘導体としては、加水分解性タンニンと総称される、グルコース１分子に１乃至５分子の没食子酸がエステル結合した化合物、例えば、ガロイルグルコース、ケブリン酸、ケブラグ酸、コリラギンなどが、一方、カフェ酸の誘導体としてクロロゲン酸などが例示できる。これらの誘導体の糖転移物は、加水分解後に没食子酸の糖転移物又はカフェ酸の糖転移物を生成し、抗微生物効果を示すので、本発明の抗微生物剤の成分として使用することができる。没食子酸又はカフェ酸の誘導体に対して糖転移を行う際には、没食子酸及びカフェ酸部分に糖転移可能な水酸基を有する化合物であるのが好ましく、さらに、没食子酸又はカフェ酸部分以外に糖転移可能な水酸基を有しない化合物が好適である。そのような誘導体としては、例えば、化学式６に示すガロイルグルコースの一種であるペンタガロイルグルコース（１，２，３，４，６−ｐｅｎｔａｋｉｓ−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ）が挙げられる。
【００１６】
【化６】
化学式６：
【００１７】
さらに、没食子酸及びカフェ酸の誘導体としては、没食子酸及びカフェ酸の抗微生物効果を向上させるために、適宜の修飾を施した誘導体を利用することができる。このような誘導体としては、例えば、没食子酸及びカフェ酸のカルボキシル基に炭化水素基がエステル結合した化合物が挙げられる。エステル結合させる炭化水素基としては、鎖式炭化水素基であっても環式炭化水素基であってもよく、また、飽和炭化水素基であっても不飽和炭化水素基であってもよい。本発明における好適な炭化水素基は、鎖式炭化水素基、いわゆる脂肪族炭化水素基である。没食子酸及びカフェ酸と脂肪族炭化水素基とのエステル誘導体（以下、単にエステル誘導体ということもある。）は、脂肪族炭化水素基の炭素数に応じて抗微生物性が向上するという特徴を有しており、本発明の抗微生物剤として有利に用いられる。なお、没食子酸又はカフェ酸と脂肪族炭化水素基とのエステル誘導体は、炭化水素基の炭素数が多くなるほど水溶性に乏しくなる傾向があるものの、糖転移することにより水溶性が改善される。炭化水素基の炭素数は、本発明の抗微生物剤の使用方法、形態、対象となる微生物などに応じて適宜選択すればよく、通常、炭素数１乃至１２の範囲、好ましくは３乃至８の範囲の炭化水素基とのエステル誘導体に糖転移したものが本発明の抗微生物剤として用いられる。炭素数１２を超える炭化水素基とのエステル誘導体は、その水溶性が著しく低下しているので、糖転移によっても十分に水溶性が改善されず、本発明の抗微生物剤を生体に適用する際に好ましくない場合がある。また、没食子酸と炭素数３の脂肪族炭化水素基とのエステル誘導体である没食子酸ｎ−プロピルは、炭化水素基の炭素数が少ない割に抗微生物性が高く、その糖転移物は、本発明の抗微生物剤として特に有利に用いられる。
【００１８】
没食子酸の糖転移物、カフェ酸の糖転移物、及び、それらの誘導体（以下、単に「没食子酸の糖転移物」又は「カフェ酸の糖転移物」ということもある。）を得る方法としては、特に限定されず、化学合成法又は酵素反応法などによって製造可能である。このうち、糖転移酵素を利用した酵素反応法が簡便であることから、本発明においては有利に利用できる。例えば、没食子酸又はその誘導体、又は、カフェ酸又はその誘導体にデキストリン、サイクロデキストリン、澱粉あるいはこれらの混合物を添加し、これを、例えば、バチラス属に属する微生物が産生する糖転移酵素、例えば、バチラス・ステアロサーモフィラス由来のサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９）を作用させて糖転移し、次いで所望により、この酵素反応液にグルコアミラーゼ及び／又はβ−アミラーゼを作用させる方法が挙げられる。この方法によれば、没食子酸の糖転移物及びカフェ酸の糖転移物の糖質部分の重合度を調節することが可能である。
【００１９】
また、没食子酸の糖転移物又はカフェ酸の糖転移物を得る方法として、これらを含有する植物体の抽出物をそのまま、又は精製工程の適宜の段階で、糖転移することも可能である。この場合、没食子酸又はその誘導体、又は、カフェ酸又はその誘導体とともに、他の成分の中に糖転移物となるものがあり、それらの成分の水溶性をも向上させるので、抽出物の水溶性を大幅に改善する効果も期待できる。没食子酸又はその誘導体、又は、カフェ酸又はその誘導体を含有する植物としては、緑茶、紅茶、コーヒーなどが一般的であり、その他に、モモタマナ属に属する植物、タデ藍（ポリゴナム属）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２０】
本発明の抗微生物剤には、没食子酸の糖転移物又はカフェ酸糖転移物以外にも、製法に由来する未糖転移物である没食子酸又はその誘導体、又は、カフェ酸又はその誘導体（以下、単に「未糖転移物」ということもある。）が含まれることがある。未糖転移物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などの手法により糖転移物標品から除去可能であるが、未糖転移物を含んだまま本発明の抗微生物剤に配合することも、また必要に応じて、糖転移物とともに、それに対応する未糖転移物を本発明の抗微生物剤に配合することもできる。この場合、糖転移物の含有量は、糖転移物と未糖転移物との総和に対して、モル比で、通常１０％以上、好ましくは２０％以上、さらに好ましくは５０％以上とする。糖転移物の割合が１０％に満たない場合は、生体内での持続性及び水溶性を改善する効果が十分期待できず、好ましくない場合がある。
【００２１】
また、本発明で用いる没食子酸の糖転移物又はカフェ酸の糖転移物において、グルコース以外にも、ガラクトース、マンノース、フコースなどの単糖、グルコサミン、ガラクトサミンなどのアミノ糖なども糖転移させる糖として選択することができる。糖転移物における糖質部分の重合度は、好ましくは1乃至５、さらに好ましくは1乃至３から選択され、最も好ましくは１である。糖質部分の重合度の高い糖転移物ほど、没食子酸及びカフェ酸の生体内での持続性及び水溶性を改善する効果に優れ、遅効性の抗微生物剤とする効果が期待できるものの、即効性が低下する傾向にある。したがって、即効性を期待する場合には、重合度が５を超える糖質部分を有する糖転移物は好ましくない場合がある。
【００２２】
本発明の抗微生物剤は、没食子酸の糖転移物及び／又はカフェ酸の糖転移物を有効成分として含有し、さらには所望により没食子酸又はその誘導体、及び／又は、カフェ酸又はその誘導体を配合することできる。また、通常、注射用剤、皮膚外用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤又は経口用剤を構成するための成分の１又は複数を配合することができる。
【００２３】
本発明の抗微生物剤は、用途に応じて、例えば、液状、ペースト状又は固状の注射用剤、皮膚外用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤、経口用剤などの形態に調製して用いられ、具体的には、注射剤、点眼剤、座剤、軟膏剤、さらには、歯磨き、うがい薬などの口腔清浄剤や、歯科領域における口腔殺菌剤をはじめとする口腔用剤の形態が好ましい。したがって、本発明の抗微生物剤は、散剤、細粒剤、丸剤、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、リモナーデ剤、エリキシル剤、シロップ剤、芳香水剤、懸濁剤、乳剤、浸剤、煎剤、チンキ剤、エキス剤、流エキス剤、酒精剤、リニメント剤、ローション剤、軟膏剤、パップ剤、硬膏剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏剤、注射剤において汎用される、例えば、研磨剤、発泡剤、湿潤剤、粘結剤、香味料、甘味料、保存料、弗素化合物、酵素剤、消臭剤、さらには、賦形剤、軟膏基剤、溶解剤、矯味剤、矯臭剤、着色剤、乳化剤、噴射剤などの調製用薬などの１又は複数と組み合わせて用いることを妨げない。また、本発明の目的を逸脱しない範囲で、斯かる剤形の薬剤において汎用される、例えば、止血剤、抗炎症剤、組織賦活剤、抗微生物剤、さらには、抗生物質、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγをはじめとする１又は複数の他の薬効成分との併用も妨げない。なお、注射用剤や経粘皮用剤、経鼻腔、口腔用剤における調製用薬としては、没食子の酸糖転移物及びカフェ酸の糖転移物を安定化する性質を兼備する点で、例えば、スクロース、グルコース、マルトース、トレハロース、フルクトース、環状四糖、マンニトール、マルチトールなどの糖又は糖アルコールさらには、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、フェニルグリシン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、Ｏ−ホスホセリン、β−アラニン、α−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−（４−アミノフェニル）酪酸、アミノフェニル酪酸、アミノ安息香酸、４−アミノ馬尿酸、アミノメチル安息香酸、ε−アミノカプロン酸、７−アミノへプタン酸、β−アスパラギン酸、γ−グルタミン酸、ε−リジン、メチオニンスルホン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、ｄ−オルニチン、ｐ−ニトロ−フェニルアラニン、ヒドロキシプロリン、チオプロリンなどのアミノ酸又はこれらのアミノ酸の誘導体若しくはオリゴペプチドが好ましく、必要に応じて、これらは組み合わせて用いられる。
【００２４】
本発明の抗微生物剤の抗微生物スペクトルは比較的広く、グラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などの多くの微生物に対して抗微生物効果を示す。本発明の抗微生物剤が対象とする微生物としては、例えば、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属などに属する微生物が挙げられる。
【００２５】
本発明の抗微生物剤へ配合する没食子酸の糖転移物及び／又はカフェ酸の糖転移物の量は、その剤形、使用方法などを考慮して適宜決定すればよいが、通常、没食子酸又はカフェ酸換算で、没食子酸とカフェ酸の合計量が、０．００１乃至１００％（ｗ／ｗ）、好ましくは、０．０１乃至１００％（ｗ／ｗ）、さらに好ましくは０．１乃至１００％（ｗ／ｗ）の範囲内から選ばれる。また、投与量としては、抗微生物剤の適用対象、投与経路などにもよるけれども、通常、没食子酸又はカフェ酸換算で、没食子酸とカフェ酸の合計量が、１ｎｇ乃至１ｇ／日／成人、好ましくは、１０ｎｇ乃至１００ｍｇ／日／成人とする。
【００２６】
本発明の抗微生物剤は、斯かる用量で１日又は１週間に１回以上の頻度で注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔用剤若しくは経口経路で適用することによって、生体における多種の病原性微生物の増殖を著明に抑制することから、鼻腔、口腔や気道、さらには視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などへ侵入した病原性微生物が発症原因となる、例えば、肺炎などの呼吸器系疾患や、動脈硬化、虚血性心疾患などの循環器系疾患、結膜炎などの視覚器系疾患、直腸炎などの消化器系疾患、尿道炎などの泌尿器系疾患、副睾丸炎、卵管炎、子宮頚管炎、切迫早産、卵管の炎症、癒着、閉塞などの生殖器系疾患、食中毒の治療、予防に著効を発揮する。とりわけ、本発明の抗微生物剤は、抗生物質を有効成分とする経口用剤とは違って、耐性菌の出現を招来したり、長期連用しても大腸における有用な菌叢を破壊することがないので、食欲不振、嘔吐、下痢、便秘、膨満感を生じたり、倦怠感、発湿などの副作用を惹起することがない。
【００２７】
以上のとおり、没食子酸の糖転移物及び／又はカフェ酸の糖転移物は、生体中での持続性及び水溶性に優れるという利点を兼ね備えている。これらの特徴は、炭素数３以上の脂肪族炭化水素基を有する没食子酸エステル誘導体、カフェ酸及びカフェ酸エステル誘導体のように、水溶性に乏しい化合物を糖転移した場合にも発揮される。また、没食子酸の近接する３つの水酸基は鉄イオンと錯体を形成し、変色することが知られているところ、糖転移することによって、没食子酸の変色を防止する効果も期待できる。
【００２８】
以下、本発明による抗微生物剤の性状及び効果につき、実験例に基づいて説明する。
【００２９】
【実験例１】
＜没食子酸、没食子酸エステル誘導体及びカフェ酸の糖転移物の調製＞
１質量部の没食子酸、没食子酸メチル、没食子酸エチル、没食子酸ｎ−プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル（以上、関東化学株式会社製）又はカフェ酸（和光純薬工業株式会社製）を、それぞれ１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過した。それぞれの反応液に、没食子酸、没食子酸メチル、没食子酸エチル、没食子酸ｎ−プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル、又はカフェ酸１ｇあたり２００ｍｌの合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）を充填したカラムに負荷して吸着させ、水で洗浄後、５％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液でさらに洗浄し、各試料の疎水性に応じて、１５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した。これらを、減圧乾固した後、水に再溶解した後、同じカラムで同じ操作を繰り返し、溶出液を減圧乾固して、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸の糖転移物、没食子酸メチルの糖転移物、没食子酸エチルの糖転移物、没食子酸ｎ−プロピルの糖転移物、没食子酸オクチルの糖転移物、没食子酸ドデシルの糖転移物、カフェ酸の糖転移物を得た。これらを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析により、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、調製された糖転移物はすべてがモノグルコシドであり、それらの純度はどれもが９５％以上であった。
なお、サイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼの１Ｕは、１ｍＭ塩化カルシウムを含む２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）に加熱溶解した０．３％（ｗ／ｗ）可溶性澱粉粉溶液５ｍｌに酵素液０．２ｍｌを加え、４０℃、１０分間反応させ、この反応液０．５ｍｌを０．０２Ｎの硫酸１５ｍｌに加え反応を停止し、これに、０．１Ｎヨウ素溶液を０．２ｍｌを加えた後、６６０ｎｍの吸光度を測定する場合において、吸光度を１０％減少させる酵素量と定義されている。また、グルコアミラーゼの１Ｕは、１．０％（ｗ／ｗ）可溶性澱粉粉溶液（２０ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ４．５）５ｍｌに、酵素液０．２ｍｌを加え、４０℃、１０分間反応させ、生成した還元糖量をソモギー−ネルソン法で測定する場合において、４０℃、１分間に１μｍｏｌのグルコースに相当する還元力を遊離する酵素量と定義されている。
【００３０】
【実験例２】
＜没食子酸、没食子酸エステル誘導体及びカフェ酸の糖転移物の水溶性＞
実験例１で得られた糖転移物の３７℃の水に対する溶解度を測定し、それぞれの未糖転移物と比較した。結果を表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】
表１に示す結果から、没食子酸、没食子酸エステル誘導体及びカフェ酸の糖転移物は、それぞれの未糖転移物よりも水溶性に優れており、特に、比較的水溶性に乏しい没食子酸ｎ−プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル及びカフェ酸については、水溶性の改善効果が顕著であった。また、別途、転移した糖の重合度が１を超える糖転移物について、同様の実験を行ったところ、糖転移された糖質部分の重合度が高いものほど水溶性を改善する効果に優れていた。
【００３３】
【実験例３】
＜各種糖転移物の抗微生物効果＞
実験例１により調製した各種糖転移物、後述の実施例５で調製したターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、及び、後述の実施例６で調製したタデ藍抽出物の糖転移物の抗微生物効果を、表２に記載の微生物について、常法にしたがい、最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。また、対照として、それぞれの未糖転移物を用いた。結果を表２に示す。なお、表２における没食子酸メチル、没食子酸エチル、没食子酸ｎ−プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル及びその糖転移物のグラム数は、没食子酸換算での数値を示し、ターミナリア ベリリカ抽出物及びタデ藍抽出物、及びそれらの糖転移物は固形分のグラム数で示した。
【００３４】
【表２】
【００３５】
表２の結果から、微生物に対する最小生育阻止濃度は、糖転移の結果、同等乃至１／３２の範囲で低下するものの、抗微生物効果は保持されることが判明した。一方、ターミナリア ベリリカ抽出物及び藍抽出物の場合、有効成分としての没食子酸又はカフェ酸の糖転移物の含量が抽出物の固形分あたり約１％であることを考慮すると抗微生物効果が意外に優れており、他の成分による効果が加算されていることが想定された。また、糖転移物の糖質部分の重合度が高いもので同様の試験を行ったところ、重合度が高くなるほど、抗微生物活性が低下する傾向が認められた。
【００３６】
【実験例４】
＜生体内での持続性＞
実験例１で調製した各種糖転移物を、没食子酸又はカフェ酸換算で、０．１ｍｇ／ｍｌの水溶液に調製し、除菌ろ過した。一方、後述の実施例５で調製したターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物及び後述の実施例６で調製したタデ藍抽出物の糖転移物を、それが含有する没食子酸又はカフェ酸が０．１ｍｇ／ｍｌの水溶液となるように調製し、除菌ろ過した。これらをそれぞれ５週齢の雌性ウイスターラットの大腿部静脈に１ｍｌ（０．１ｍｇ）注射した。一定時間放置した後、ラットの尾静脈から経時的に血液を採取し、血清中の没食子酸、カフェ酸の含量を常法の液体高速クロマトグラフィー法により測定した。また、対照として、それぞれの未糖転移物を用いて同様に試験した。その結果、未糖転移物は静脈注射後約２時間で血中から検出できなくなるのに対し、糖転移物の場合は静脈注射後８時間までは血中から没食子酸、没食子酸エステル誘導体又はカフェ酸を検出できた。この結果は、糖転移物は、未糖転移物よりも生体内での持続性に優れることを物語っている。また、同時に、糖質部分の重合度が高い糖転移物で同様の試験を行ったところ、重合度が高くなるにつれて没食子酸、没食子酸エステル誘導体及びカフェ酸の生体内での持続性が向上する傾向が認められた。
【００３７】
【実験例５】
＜急性毒性試験＞
実験例１で調製した各種糖転移物を、常法にしたがって８週齢の雄性マウス各１０匹に経皮、経口あるいは腹腔内に投与した。その結果、これらのＬＤ５０は、いずれの投与経路による場合にも約１００ｍｇ／ｋｇ（マウス体重）以上であった。この結果は、没食子酸の糖転移物及びカフェ酸の糖転移物がヒトへの投与を前提とする医薬品として安全であることを物語っている。
【００３８】
以上の結果から、没食子酸の糖転移物及び／又はカフェ酸の糖転移物は、これらの未糖転移物よりも抗微生物効果に劣るものの、抗微生物剤として有用なレベル以上の抗微生物効果を有しており、さらに、生体内での持続性及び水溶性に優れていた。これらの糖転移物が有する特徴は、本発明の抗微生物剤が、生体に適用する抗微生物剤として有利であることを示している。
【００３９】
以下、本発明の実施の形態につき、実施例に基づいて説明する。
【００４０】
【実施例１】
＜没食子酸糖転移物の調製＞
【００４１】
【実施例１−１】
１質量部の没食子酸（関東化学株式会社製）を、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、１０乃至２０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸糖転移物を得た。
【００４２】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が１０％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が４％、グルコース重合度が６以上の糖質を有する没食子酸糖転移物が６％、未反応のまま残った没食子酸酸が８０％であった。
【００４３】
【実施例１−２】
実施例１−１で得られたサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ処理後の反応液に、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例１−１におけると同様に、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、２０乃至３０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸糖転移物を得た。
【００４４】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が８０％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が４％、グルコース重合度が３以上の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が１％、未反応のまま残った没食子酸が１５％であった。
【００４５】
【実施例２】
＜没食子酸ｎ−プロピル糖転移物の調製＞
【００４６】
【実施例２−１】
実施例１−１の方法に準じて、１質量部の没食子酸ｎ−プロピル（関東化学株式会社製）を、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。
その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸ｎ−プロピル糖転移物を得た。
【００４７】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が１４％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が１０％、グルコース重合度が３以上の糖質を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が９％、未反応のまま残った没食子酸ｎ−プロピルが６７％であった。
【００４８】
【実施例２−２】
実施例１−２の方法に準じて、実施例２−１で得られたサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ処理後の反応液に、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例２−１におけると同様に、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸ｎ−プロピル糖転移物を得た。
【００４９】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が７６％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が７％、グルコース重合度が３以上の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が２％、未反応のまま残った没食子酸ｎ−プロピルが１５％であった。
【００５０】
【実施例３】
＜没食子酸オクチル糖転移物の調製＞
【００５１】
【実施例３−１】
実施例１−１の方法に準じて、１質量部の没食子オクチル（関東化学株式会社製）を、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸オクチル糖転移物を得た。
【００５２】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が１４％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が５％、グルコース重合度が３以上の糖質を有する没食子酸オクチル糖転移物が７％、未反応のまま残った没食子酸オクチルが７４％であった。
【００５３】
【実施例３−２】
実施例１−２の方法に準じて、実施例３−１で得られたサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ処理後の反応液に、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例３−１におけると同様に、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸オクチル糖転移物を得た。
【００５４】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が７６％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が２％、グルコース重合度が３以上の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が１％、未反応のまま残った没食子酸オクチルが２１％であった。
【００５５】
【実施例４】
＜カフェ酸糖転移物の調製＞
【００５６】
【実施例４−１】
実施例１−１の方法に準じて、１質量部のカフェ酸（和光純薬工業株式会社製）を、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いるカフェ酸糖転移物を得た。
【００５７】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が１９％、グルコース重合度が２の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が９％、グルコース重合度が３以上の糖質を有するカフェ酸糖転移物が７％、未反応のまま残ったカフェ酸が６５％であった。
【００５８】
【実施例４−２】
実施例１−２の方法に準じて、実施例４−１で得られたサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ処理後の反応液に、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例４−１におけると同様に、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、２０乃至３０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いるカフェ酸糖転移物を得た。
【００５９】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が７８％、グルコース重合度が２の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が３％、グルコース重合度が３以上の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が１％、未反応のまま残ったカフェ酸が１８％であった。
【００６０】
【実施例５】
＜ターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物の調製＞
モモタマナ属のターミナリア ベリリカ （Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ ｂｅｌｌｉｒｉｃａ）の果実部１質量部をブレンダーにより粉砕し、１０質量部の５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液を加え、５０℃で６０分間攪拌した。ろ紙でろ過して、ろ液を採取し、遠心分離により固形成分を除去した上清を減圧乾燥して固形分を得た。この固形分１質量部を、実施例１−１の方法に準じて、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例１−２の方法に準じて、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、ろ液を採取し、減圧乾固して、本発明の抗微生物剤に用いるターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物を得た。
【００６１】
このろ液を常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法に供し、没食子酸糖転移物の含量を測定したところ、固形分当り、有効成分である没食子酸糖転移物は８ｍｇ／ｇ、没食子酸は７ｍｇ／ｇであった。また、微量ながら、ペンタガロイルグルコースの糖転移物が検出された。
【００６２】
【実施例６】
＜藍抽出物の糖転移物＞
タデ藍（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ Ｔｉｎｃｏｒｉｕｍ）の地上部１質量部をブレンダーで粉砕した後、水１．５質量部を加え、ミキサーで攪拌した。ろ紙でろ過して、ろ液を採取し、１２１℃で１０分間加熱し、遠心分離をして固形分を除去し、上清を回収した。次に、この上清を減圧乾燥して固形分を得た。これを実施例１−１の方法に準じて、藍抽出物１質量部に対し、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、ろ液を採取し、減圧乾固して、本発明の抗微生物剤に用いるタデ藍抽出物の糖転移物を得た。
【００６３】
このろ液を常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法に供し、カフェ酸糖転移物の含量を測定したところ、固形分当り、有効成分であるカフェ酸糖転移物は５ｍｇ／ｇ、カフェ酸が１２ｍｇ／ｇの濃度で含まれていた。
【００６４】
【実施例７】
＜口腔清浄剤＞
常法にしたがって、下記に示す口腔清浄剤の基本処方に対して、実施例１−１の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−１の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−１の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−１の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物をそれぞれ濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合して液状の口腔清浄剤を得た。
【００６５】
エタノール ４０質量部
グリセリン １５質量部
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 １質量部
サッカリン 適量
香料 適量
クロルヘキシジン 適量
水 ４４重量部
【００６６】
本例の口腔洗浄剤は、通常のうがい薬と同様に常用することによって、口腔内のグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物性を示す。例えば、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属及びカンディダ属の微生物の増殖を効果的に抑制し、それらが発症原因をなる各種疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００６７】
【実施例８】
＜錠剤＞
常法にしたがって、マルトース粉末に、実施例１−２の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−２の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−２の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−２の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物をそれぞれ濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合した後、打錠機により、直径１ｃｍ、厚さ３．２ｍｍに打錠し、一錠０．５ｇの錠剤を得た。
【００６８】
本例の抗微生物剤は、通常の錠剤と同様に常用することによって、生体内で速やかに溶解し、生体における微生物の増殖を抑制し、かつ、生体における持続性が優れるので長時間抗微生物効果を発揮することから、グラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物性を示す。例えば、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００６９】
【実施例９】
＜練歯磨＞
常法にしたがって、下記に示す練歯磨の基本処方に対して、実施例１−１の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−１の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−１の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−１の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物を、それぞれ濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合した後、アルミニウムラミネートチューブへ１００ｇずつ充填してペースト状の抗微生物用の練歯磨を得た。
【００７０】
第二燐酸カルシウム ４２質量部
グリセリン １８質量部
カラギーナン ０．９質量部
ラウリル硫酸ナトリウム １．１質量部
香料 適量
サッカリン 適量
水 ３８質量部
【００７１】
本例の抗微生物用の練歯磨は、通常の練歯磨と同様に常用することによって、口腔におけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００７２】
【実施例１０】
＜トローチ剤＞
常法にしたがって、下記に示すトローチ剤の基本処方に対して、実施例１−１の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−１の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−１の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−１の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物をそれぞれ濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合し、成形して固状の抗微生物用のトローチ剤を得た。
【００７３】
マルトース ３５質量部
澱粉 ３４質量部
結晶セルロース １０質量部
ヒドロキシプロピルメチルセルロース １０質量部
ステアリン酸マグネシウム １質量部
【００７４】
本例の抗微生物用のトローチ剤は、通常のトローチ剤と同様に常用することによって、口腔内で速やかに溶解し、口腔内におけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００７５】
【実施例１１】
＜液剤＞
常法にしたがって、イソロイシンを４質量％含有する注射用精製水に、実施例１−２の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−２の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−２の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−２の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物を濃度１％（ｗ／ｗ）になるように溶解させた後、精密濾過、容器に充填して液状の抗微生物効果を有する液剤を得た。
【００７６】
本例の抗微生物効果を有する液剤は、注射用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤、経口用剤などとして、気道、鼻腔、口腔、視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などにおけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００７７】
【実施例１２】
＜軟膏＞
常法にしたがって、実施例１−１の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−１の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−１の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−１の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物を濃度１％（ｗ／ｗ）になるように適量の燐酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．２）に溶解し、その水溶液１００質量部を無水結晶マルトース４９質量部と均一に配合した後、さらに４５０質量部の白色ワセリンと練り合わせて抗微生物用の軟膏を得た。
【００７８】
本例の抗微生物用の軟膏は、皮膚外用剤、経粘皮用剤などとして、皮膚、泌尿器、生殖器などにおけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００７９】
【実施例１３】
＜点眼剤＞
常法にしたがって、下記に示す点眼剤の基本処方に対して、実施例１−２の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−２の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−２の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−２の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物を濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合して液状の抗微生物用の点眼剤を得た。
【００８０】
トレハロース（２含水物） ２０質量部
塩化ナトリウム ０．０４質量部
塩化カリウム ０．０２質量部
燐酸２水素ナトリウム ０．０３質量部
硼砂 ０．０４質量部
塩化ベンザルコニウム ０．００４質量部
精製水 ８０質量部
【００８１】
本例の抗微生物用の点眼剤は、通常の点眼剤と同様に常用することによって、視覚器におけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００８２】
【発明の効果】
以上説明したとおり、本発明の抗微生物剤は、生体に対する毒性が低いうえ、水溶性に優れ生体内における持続性に優れるので、注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔若しくは経口経路など生体に適用することによって、生体にとって好ましくない微生物の増殖を著明に抑制することができる。したがって、鼻腔、口腔、食道や気道、さらには視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などへ侵入した微生物が発症原因となる、例えば、肺炎などの呼吸器系疾患や、動脈硬化、虚血性心疾患などの循環器系疾患、結膜炎などの視覚器系疾患、直腸炎などの消化器系疾患、尿道炎などの泌尿器系疾患、副睾丸炎、卵管炎、子宮頚管炎、切迫早産、卵管の炎症、癒着、閉塞などの生殖器系疾患、食中毒などの治療、予防に著効を発揮する。
とりわけ、本発明の抗微生物用口腔用剤は、抗生物質を有効成分とする経口用剤とは違って、耐性菌の出現を招来したり、長期間連用しても大腸における有用な菌叢を破壊する恐れが少ないないので、食欲不振、嘔吐、下痢、便秘、膨満感を生じたり、倦怠感、発湿などの副作用を惹起する恐れが少ない。
【発明の属する技術分野】
本発明は抗微生物剤に関し、より詳細には、ヒドロキシ安息香酸の糖転移物、ヒドロキシケイ皮酸の糖転移物、及びそれらの誘導体、並びにそれらの塩から選ばれる１種又は２種以上を、有効成分として含有してなる抗微生物剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、清潔な生活環境が求められるようになり、抗微生物剤は、医薬品用途以外にも、食品、衣服、化粧品、日用品、建材などの多くの物品に使用されている。しかしながら、抗微生物剤は、金属化合物や有機化合物を有効成分としており、それらの多くが環境及び人体に有害な物質である危険性を秘めている。例えば、ヘキサクロロフェン、ビチオノールなどのハロゲン化フェノール類、ハロゲン化サリチルアニリド、ホウ酸、過酸化水素水、水銀化合物、ホルムアルデヒドなどは、皮膚、呼吸器などへの感作性が強いことから、現在では使用が禁止されている。特に、ホルムアルデヒドは、建材に多量に含まれ、シックハウス症候群の原因物質としてよく知られている。また、医薬品として利用される抗生物質は、大腸における有用な菌叢を破壊したり、耐性菌が発生する危険性がある。
【０００３】
安全性の高い抗微生物剤が求められる現在、植物の抽出物又はそれに含まれている成分は安全性が高いという観点から、食品や食品添加物用の抗微生物剤に利用されつつある。例えば、ヒノキチオール、孟宗竹抽出物、緑茶抽出物、藍抽出物、プロポリス抽出物などを抗微生物剤として利用することが提案されている。
しかしながら、これらの抽出物は、安全性及び抗微生物効果に優れるものの、有効成分として含まれる化合物の生体内での持続性及び水溶性が乏しいため、取り扱い性が良好ではないという問題を抱えている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
斯かる状況に鑑み、生体に安全かつ十分な抗微生物効果を有し、取り扱い性が良好な抗微生物剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記課題を解決するために、植物の抽出物中に含まれるヒドロキシフェノール化合物に着目して研究を進めたところ、ヒドロキシ安息香酸の１種である没食子酸、及び、ヒドロキシケイ皮酸の１種であるカフェ酸は、植物由来の抗微生物性化合物の中でも比較的抗微生物効果に優れ、かつ、人体への毒性の低いという有利な特徴を有しているものの、摂取した場合、生体内での持続性が著しく低いという問題点があることを見い出した。そこで、没食子酸又はカフェ酸の糖転移物を調製し、抗微生物効果並びに生体内での持続性を調べたところ、これら糖転移物は、糖転移されてない没食子酸又はカフェ酸と比較して、抗微生物効果はやや劣るものの、抗微生物剤として利用可能なレベルの活性を有し、さらに水溶性が優れた取り扱い性が良好な化合物であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、ヒドロキシ安息香酸の糖転移物、ヒドロキシケイ皮酸の糖転移物、及びそれらの誘導体、並びにそれらの塩から選ばれる１種又は２種以上を、有効成分として含有してなる抗微生物剤を提供することにより、前記課題を解決するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明でいうヒドロキシ安息香酸は、植物成分のタンニンを構成する成分であり、その糖転移物は、本発明の抗微生物剤の有効成分として用いられる。本明細書では、ヒドロキシ安息香酸の一種の没食子酸（３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、分子量約１７０）について説明するが、本発明の効果を発揮するかぎり、他のヒドロキシ安息香酸を使用することができる。本発明で使用する没食子酸の調製方法としては、没食子酸又はその誘導体を豊富に含む植物から抽出し、必要に応じて、酸、アルカリ、加熱、酵素などを用いて、加水分解して得ることができる。本発明で使用する没食子酸は、その由来、調製方法を問わず、植物体から抽出・精製する方法以外にも、化学合成法によっても得ることができ、市販品を利用することも随意である。また、本発明の効果を損ねない限り、塩の形態のものを用いることもできる。
【０００８】
本発明でいうヒドロキシケイ皮酸は、植物成分の１種であり、その糖転移物は、本発明の抗微生物剤の有効成分として用いられる。本明細書では、ヒドロキシケイ皮酸の一種のカフェ酸（３，４−ジヒドロキシケイ皮酸、分子量約１８０）について説明するが、本発明の効果を発揮するかぎり、他のヒドロキシケイ皮酸を使用することができる。本発明で使用するカフェ酸の調製方法としては、カフェ酸又はその誘導体を豊富に含む植物から抽出し、必要に応じて、酸、アルカリ、加熱、酵素などを用いて、加水分解して得ることができる。本発明で使用するカフェ酸は、その由来、調製方法を問わず、植物体から抽出・精製する方法以外にも、化学的な合成、例えば、３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドと無水酢酸及び酢酸カリウムとを反応させて合成する方法などによっても得ることができ、市販品を利用することも随意である。また、本発明の効果を損ねない限り、塩の形態のものを用いることもできる。
【０００９】
本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸の糖転移物及びその誘導体、及び、カフェ酸の糖転移物及びその誘導体とは、化学的又は酵素的な糖転移反応により没食子酸又はその誘導体、及び、カフェ酸又はその誘導体に、それらの水酸基を介して糖が転移付加されたものである。糖転移された糖がグルコースの場合、その代表的な没食子酸糖転移物としては、化学式１乃至３のものを、カフェ酸糖転移物としては、化学式４及び５のものを例示できる。なお、式中、ｍ及びｎは０以上の整数を、Ｒは水素原子又は炭化水素基を示す。化学式１乃至５においては、グルコース間の結合は１，４結合であるが、１，３結合、１，６結合であってもよい。さらに、化学式１乃至５においては、糖質と没食子酸又はカフェ酸との結合様式としてα−グルコシド結合を例示しているが、必要に応じて、β−グルコシド結合を選択することも可能である。また、本発明の効果を損ねない範囲で、カフェ酸糖転移物又は没食子酸糖転移物を、塩の形態とすることもできる。
【００１０】
【化１】
化学式１：
【００１１】
【化２】
化学式２：
【００１２】
【化３】
化学式３：
【００１３】
【化４】
化学式４：
【００１４】
【化５】
化学式５：
【００１５】
本発明の抗微生物剤には、没食子酸の糖転移物及びカフェ酸の糖転移物の誘導体を用いることができる。なお、没食子酸及びカフェ酸への糖転移化と誘導体化の順序は問わない。没食子酸の糖転移物及びカフェ酸の糖転移物の誘導体としては、酸、アルカリ、加熱などの処理により、比較的容易に加水分解されて、没食子酸又はカフェ酸が生成され得る化合物が用いられ、それらは天然物であっても人工的な合成物であってもよい。例えば、天然に存在する没食子酸の誘導体としては、加水分解性タンニンと総称される、グルコース１分子に１乃至５分子の没食子酸がエステル結合した化合物、例えば、ガロイルグルコース、ケブリン酸、ケブラグ酸、コリラギンなどが、一方、カフェ酸の誘導体としてクロロゲン酸などが例示できる。これらの誘導体の糖転移物は、加水分解後に没食子酸の糖転移物又はカフェ酸の糖転移物を生成し、抗微生物効果を示すので、本発明の抗微生物剤の成分として使用することができる。没食子酸又はカフェ酸の誘導体に対して糖転移を行う際には、没食子酸及びカフェ酸部分に糖転移可能な水酸基を有する化合物であるのが好ましく、さらに、没食子酸又はカフェ酸部分以外に糖転移可能な水酸基を有しない化合物が好適である。そのような誘導体としては、例えば、化学式６に示すガロイルグルコースの一種であるペンタガロイルグルコース（１，２，３，４，６−ｐｅｎｔａｋｉｓ−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ）が挙げられる。
【００１６】
【化６】
化学式６：
さらに、没食子酸及びカフェ酸の誘導体としては、没食子酸及びカフェ酸の抗微生物効果を向上させるために、適宜の修飾を施した誘導体を利用することができる。このような誘導体としては、例えば、没食子酸及びカフェ酸のカルボキシル基に炭化水素基がエステル結合した化合物が挙げられる。エステル結合させる炭化水素基としては、鎖式炭化水素基であっても環式炭化水素基であってもよく、また、飽和炭化水素基であっても不飽和炭化水素基であってもよい。本発明における好適な炭化水素基は、鎖式炭化水素基、いわゆる脂肪族炭化水素基である。没食子酸及びカフェ酸と脂肪族炭化水素基とのエステル誘導体（以下、単にエステル誘導体ということもある。）は、脂肪族炭化水素基の炭素数に応じて抗微生物性が向上するという特徴を有しており、本発明の抗微生物剤として有利に用いられる。なお、没食子酸又はカフェ酸と脂肪族炭化水素基とのエステル誘導体は、炭化水素基の炭素数が多くなるほど水溶性に乏しくなる傾向があるものの、糖転移することにより水溶性が改善される。炭化水素基の炭素数は、本発明の抗微生物剤の使用方法、形態、対象となる微生物などに応じて適宜選択すればよく、通常、炭素数１乃至１２の範囲、好ましくは３乃至８の範囲の炭化水素基とのエステル誘導体に糖転移したものが本発明の抗微生物剤として用いられる。炭素数１２を超える炭化水素基とのエステル誘導体は、その水溶性が著しく低下しているので、糖転移によっても十分に水溶性が改善されず、本発明の抗微生物剤を生体に適用する際に好ましくない場合がある。また、没食子酸と炭素数３の脂肪族炭化水素基とのエステル誘導体である没食子酸ｎ−プロピルは、炭化水素基の炭素数が少ない割に抗微生物性が高く、その糖転移物は、本発明の抗微生物剤として特に有利に用いられる。
【００１８】
没食子酸の糖転移物、カフェ酸の糖転移物、及び、それらの誘導体（以下、単に「没食子酸の糖転移物」又は「カフェ酸の糖転移物」ということもある。）を得る方法としては、特に限定されず、化学合成法又は酵素反応法などによって製造可能である。このうち、糖転移酵素を利用した酵素反応法が簡便であることから、本発明においては有利に利用できる。例えば、没食子酸又はその誘導体、又は、カフェ酸又はその誘導体にデキストリン、サイクロデキストリン、澱粉あるいはこれらの混合物を添加し、これを、例えば、バチラス属に属する微生物が産生する糖転移酵素、例えば、バチラス・ステアロサーモフィラス由来のサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９）を作用させて糖転移し、次いで所望により、この酵素反応液にグルコアミラーゼ及び／又はβ−アミラーゼを作用させる方法が挙げられる。この方法によれば、没食子酸の糖転移物及びカフェ酸の糖転移物の糖質部分の重合度を調節することが可能である。
【００１９】
また、没食子酸の糖転移物又はカフェ酸の糖転移物を得る方法として、これらを含有する植物体の抽出物をそのまま、又は精製工程の適宜の段階で、糖転移することも可能である。この場合、没食子酸又はその誘導体、又は、カフェ酸又はその誘導体とともに、他の成分の中に糖転移物となるものがあり、それらの成分の水溶性をも向上させるので、抽出物の水溶性を大幅に改善する効果も期待できる。没食子酸又はその誘導体、又は、カフェ酸又はその誘導体を含有する植物としては、緑茶、紅茶、コーヒーなどが一般的であり、その他に、モモタマナ属に属する植物、タデ藍（ポリゴナム属）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２０】
本発明の抗微生物剤には、没食子酸の糖転移物又はカフェ酸糖転移物以外にも、製法に由来する未糖転移物である没食子酸又はその誘導体、又は、カフェ酸又はその誘導体（以下、単に「未糖転移物」ということもある。）が含まれることがある。未糖転移物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などの手法により糖転移物標品から除去可能であるが、未糖転移物を含んだまま本発明の抗微生物剤に配合することも、また必要に応じて、糖転移物とともに、それに対応する未糖転移物を本発明の抗微生物剤に配合することもできる。この場合、糖転移物の含有量は、糖転移物と未糖転移物との総和に対して、モル比で、通常１０％以上、好ましくは２０％以上、さらに好ましくは５０％以上とする。糖転移物の割合が１０％に満たない場合は、生体内での持続性及び水溶性を改善する効果が十分期待できず、好ましくない場合がある。
【００２１】
また、本発明で用いる没食子酸の糖転移物又はカフェ酸の糖転移物において、グルコース以外にも、ガラクトース、マンノース、フコースなどの単糖、グルコサミン、ガラクトサミンなどのアミノ糖なども糖転移させる糖として選択することができる。糖転移物における糖質部分の重合度は、好ましくは1乃至５、さらに好ましくは1乃至３から選択され、最も好ましくは１である。糖質部分の重合度の高い糖転移物ほど、没食子酸及びカフェ酸の生体内での持続性及び水溶性を改善する効果に優れ、遅効性の抗微生物剤とする効果が期待できるものの、即効性が低下する傾向にある。したがって、即効性を期待する場合には、重合度が５を超える糖質部分を有する糖転移物は好ましくない場合がある。
【００２２】
本発明の抗微生物剤は、没食子酸の糖転移物及び／又はカフェ酸の糖転移物を有効成分として含有し、さらには所望により没食子酸又はその誘導体、及び／又は、カフェ酸又はその誘導体を配合することできる。また、通常、注射用剤、皮膚外用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤又は経口用剤を構成するための成分の１又は複数を配合することができる。
【００２３】
本発明の抗微生物剤は、用途に応じて、例えば、液状、ペースト状又は固状の注射用剤、皮膚外用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤、経口用剤などの形態に調製して用いられ、具体的には、注射剤、点眼剤、座剤、軟膏剤、さらには、歯磨き、うがい薬などの口腔清浄剤や、歯科領域における口腔殺菌剤をはじめとする口腔用剤の形態が好ましい。したがって、本発明の抗微生物剤は、散剤、細粒剤、丸剤、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、リモナーデ剤、エリキシル剤、シロップ剤、芳香水剤、懸濁剤、乳剤、浸剤、煎剤、チンキ剤、エキス剤、流エキス剤、酒精剤、リニメント剤、ローション剤、軟膏剤、パップ剤、硬膏剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏剤、注射剤において汎用される、例えば、研磨剤、発泡剤、湿潤剤、粘結剤、香味料、甘味料、保存料、弗素化合物、酵素剤、消臭剤、さらには、賦形剤、軟膏基剤、溶解剤、矯味剤、矯臭剤、着色剤、乳化剤、噴射剤などの調製用薬などの１又は複数と組み合わせて用いることを妨げない。また、本発明の目的を逸脱しない範囲で、斯かる剤形の薬剤において汎用される、例えば、止血剤、抗炎症剤、組織賦活剤、抗微生物剤、さらには、抗生物質、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγをはじめとする１又は複数の他の薬効成分との併用も妨げない。なお、注射用剤や経粘皮用剤、経鼻腔、口腔用剤における調製用薬としては、没食子の酸糖転移物及びカフェ酸の糖転移物を安定化する性質を兼備する点で、例えば、スクロース、グルコース、マルトース、トレハロース、フルクトース、環状四糖、マンニトール、マルチトールなどの糖又は糖アルコールさらには、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、フェニルグリシン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、Ｏ−ホスホセリン、β−アラニン、α−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−（４−アミノフェニル）酪酸、アミノフェニル酪酸、アミノ安息香酸、４−アミノ馬尿酸、アミノメチル安息香酸、ε−アミノカプロン酸、７−アミノへプタン酸、β−アスパラギン酸、γ−グルタミン酸、ε−リジン、メチオニンスルホン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、ｄ−オルニチン、ｐ−ニトロ−フェニルアラニン、ヒドロキシプロリン、チオプロリンなどのアミノ酸又はこれらのアミノ酸の誘導体若しくはオリゴペプチドが好ましく、必要に応じて、これらは組み合わせて用いられる。
【００２４】
本発明の抗微生物剤の抗微生物スペクトルは比較的広く、グラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などの多くの微生物に対して抗微生物効果を示す。本発明の抗微生物剤が対象とする微生物としては、例えば、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属などに属する微生物が挙げられる。
【００２５】
本発明の抗微生物剤へ配合する没食子酸の糖転移物及び／又はカフェ酸の糖転移物の量は、その剤形、使用方法などを考慮して適宜決定すればよいが、通常、没食子酸又はカフェ酸換算で、没食子酸とカフェ酸の合計量が、０．００１乃至１００％（ｗ／ｗ）、好ましくは、０．０１乃至１００％（ｗ／ｗ）、さらに好ましくは０．１乃至１００％（ｗ／ｗ）の範囲内から選ばれる。また、投与量としては、抗微生物剤の適用対象、投与経路などにもよるけれども、通常、没食子酸又はカフェ酸換算で、没食子酸とカフェ酸の合計量が、１ｎｇ乃至１ｇ／日／成人、好ましくは、１０ｎｇ乃至１００ｍｇ／日／成人とする。
【００２６】
本発明の抗微生物剤は、斯かる用量で１日又は１週間に１回以上の頻度で注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔用剤若しくは経口経路で適用することによって、生体における多種の病原性微生物の増殖を著明に抑制することから、鼻腔、口腔や気道、さらには視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などへ侵入した病原性微生物が発症原因となる、例えば、肺炎などの呼吸器系疾患や、動脈硬化、虚血性心疾患などの循環器系疾患、結膜炎などの視覚器系疾患、直腸炎などの消化器系疾患、尿道炎などの泌尿器系疾患、副睾丸炎、卵管炎、子宮頚管炎、切迫早産、卵管の炎症、癒着、閉塞などの生殖器系疾患、食中毒の治療、予防に著効を発揮する。とりわけ、本発明の抗微生物剤は、抗生物質を有効成分とする経口用剤とは違って、耐性菌の出現を招来したり、長期連用しても大腸における有用な菌叢を破壊することがないので、食欲不振、嘔吐、下痢、便秘、膨満感を生じたり、倦怠感、発湿などの副作用を惹起することがない。
【００２７】
以上のとおり、没食子酸の糖転移物及び／又はカフェ酸の糖転移物は、生体中での持続性及び水溶性に優れるという利点を兼ね備えている。これらの特徴は、炭素数３以上の脂肪族炭化水素基を有する没食子酸エステル誘導体、カフェ酸及びカフェ酸エステル誘導体のように、水溶性に乏しい化合物を糖転移した場合にも発揮される。また、没食子酸の近接する３つの水酸基は鉄イオンと錯体を形成し、変色することが知られているところ、糖転移することによって、没食子酸の変色を防止する効果も期待できる。
【００２８】
以下、本発明による抗微生物剤の性状及び効果につき、実験例に基づいて説明する。
【００２９】
【実験例１】
＜没食子酸、没食子酸エステル誘導体及びカフェ酸の糖転移物の調製＞
１質量部の没食子酸、没食子酸メチル、没食子酸エチル、没食子酸ｎ−プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル（以上、関東化学株式会社製）又はカフェ酸（和光純薬工業株式会社製）を、それぞれ１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過した。それぞれの反応液に、没食子酸、没食子酸メチル、没食子酸エチル、没食子酸ｎ−プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル、又はカフェ酸１ｇあたり２００ｍｌの合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）を充填したカラムに負荷して吸着させ、水で洗浄後、５％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液でさらに洗浄し、各試料の疎水性に応じて、１５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した。これらを、減圧乾固した後、水に再溶解した後、同じカラムで同じ操作を繰り返し、溶出液を減圧乾固して、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸の糖転移物、没食子酸メチルの糖転移物、没食子酸エチルの糖転移物、没食子酸ｎ−プロピルの糖転移物、没食子酸オクチルの糖転移物、没食子酸ドデシルの糖転移物、カフェ酸の糖転移物を得た。これらを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析により、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、調製された糖転移物はすべてがモノグルコシドであり、それらの純度はどれもが９５％以上であった。
なお、サイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼの１Ｕは、１ｍＭ塩化カルシウムを含む２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）に加熱溶解した０．３％（ｗ／ｗ）可溶性澱粉粉溶液５ｍｌに酵素液０．２ｍｌを加え、４０℃、１０分間反応させ、この反応液０．５ｍｌを０．０２Ｎの硫酸１５ｍｌに加え反応を停止し、これに、０．１Ｎヨウ素溶液を０．２ｍｌを加えた後、６６０ｎｍの吸光度を測定する場合において、吸光度を１０％減少させる酵素量と定義されている。また、グルコアミラーゼの１Ｕは、１．０％（ｗ／ｗ）可溶性澱粉粉溶液（２０ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ４．５）５ｍｌに、酵素液０．２ｍｌを加え、４０℃、１０分間反応させ、生成した還元糖量をソモギー−ネルソン法で測定する場合において、４０℃、１分間に１μｍｏｌのグルコースに相当する還元力を遊離する酵素量と定義されている。
【００３０】
【実験例２】
＜没食子酸、没食子酸エステル誘導体及びカフェ酸の糖転移物の水溶性＞
実験例１で得られた糖転移物の３７℃の水に対する溶解度を測定し、それぞれの未糖転移物と比較した。結果を表１に示す。
【００３１】
【表１】
表１に示す結果から、没食子酸、没食子酸エステル誘導体及びカフェ酸の糖転移物は、それぞれの未糖転移物よりも水溶性に優れており、特に、比較的水溶性に乏しい没食子酸ｎ−プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル及びカフェ酸については、水溶性の改善効果が顕著であった。また、別途、転移した糖の重合度が１を超える糖転移物について、同様の実験を行ったところ、糖転移された糖質部分の重合度が高いものほど水溶性を改善する効果に優れていた。
【００３３】
【実験例３】
＜各種糖転移物の抗微生物効果＞
実験例１により調製した各種糖転移物、後述の実施例５で調製したターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、及び、後述の実施例６で調製したタデ藍抽出物の糖転移物の抗微生物効果を、表２に記載の微生物について、常法にしたがい、最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。また、対照として、それぞれの未糖転移物を用いた。結果を表２に示す。なお、表２における没食子酸メチル、没食子酸エチル、没食子酸ｎ−プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル及びその糖転移物のグラム数は、没食子酸換算での数値を示し、ターミナリア ベリリカ抽出物及びタデ藍抽出物、及びそれらの糖転移物は固形分のグラム数で示した。
【００３４】
【表２】
表２の結果から、微生物に対する最小生育阻止濃度は、糖転移の結果、同等乃至１／３２の範囲で低下するものの、抗微生物効果は保持されることが判明した。一方、ターミナリア ベリリカ抽出物及び藍抽出物の場合、有効成分としての没食子酸又はカフェ酸の糖転移物の含量が抽出物の固形分あたり約１％であることを考慮すると抗微生物効果が意外に優れており、他の成分による効果が加算されていることが想定された。また、糖転移物の糖質部分の重合度が高いもので同様の試験を行ったところ、重合度が高くなるほど、抗微生物活性が低下する傾向が認められた。
【００３６】
【実験例４】
＜生体内での持続性＞
実験例１で調製した各種糖転移物を、没食子酸又はカフェ酸換算で、０．１ｍｇ／ｍｌの水溶液に調製し、除菌ろ過した。一方、後述の実施例５で調製したターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物及び後述の実施例６で調製したタデ藍抽出物の糖転移物を、それが含有する没食子酸又はカフェ酸が０．１ｍｇ／ｍｌの水溶液となるように調製し、除菌ろ過した。これらをそれぞれ５週齢の雌性ウイスターラットの大腿部静脈に１ｍｌ（０．１ｍｇ）注射した。一定時間放置した後、ラットの尾静脈から経時的に血液を採取し、血清中の没食子酸、カフェ酸の含量を常法の液体高速クロマトグラフィー法により測定した。また、対照として、それぞれの未糖転移物を用いて同様に試験した。その結果、未糖転移物は静脈注射後約２時間で血中から検出できなくなるのに対し、糖転移物の場合は静脈注射後８時間までは血中から没食子酸、没食子酸エステル誘導体又はカフェ酸を検出できた。この結果は、糖転移物は、未糖転移物よりも生体内での持続性に優れることを物語っている。また、同時に、糖質部分の重合度が高い糖転移物で同様の試験を行ったところ、重合度が高くなるにつれて没食子酸、没食子酸エステル誘導体及びカフェ酸の生体内での持続性が向上する傾向が認められた。
【００３７】
【実験例５】
＜急性毒性試験＞
実験例１で調製した各種糖転移物を、常法にしたがって８週齢の雄性マウス各１０匹に経皮、経口あるいは腹腔内に投与した。その結果、これらのＬＤ５０は、いずれの投与経路による場合にも約１００ｍｇ／ｋｇ（マウス体重）以上であった。この結果は、没食子酸の糖転移物及びカフェ酸の糖転移物がヒトへの投与を前提とする医薬品として安全であることを物語っている。
【００３８】
以上の結果から、没食子酸の糖転移物及び／又はカフェ酸の糖転移物は、これらの未糖転移物よりも抗微生物効果に劣るものの、抗微生物剤として有用なレベル以上の抗微生物効果を有しており、さらに、生体内での持続性及び水溶性に優れていた。これらの糖転移物が有する特徴は、本発明の抗微生物剤が、生体に適用する抗微生物剤として有利であることを示している。
【００３９】
以下、本発明の実施の形態につき、実施例に基づいて説明する。
【００４０】
【実施例１】
＜没食子酸糖転移物の調製＞
【００４１】
【実施例１−１】
１質量部の没食子酸（関東化学株式会社製）を、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、１０乃至２０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸糖転移物を得た。
【００４２】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が１０％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が４％、グルコース重合度が６以上の糖質を有する没食子酸糖転移物が６％、未反応のまま残った没食子酸酸が８０％であった。
【００４３】
【実施例１−２】
実施例１−１で得られたサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ処理後の反応液に、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例１−１におけると同様に、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、２０乃至３０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸糖転移物を得た。
【００４４】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が８０％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が４％、グルコース重合度が３以上の糖質部分を有する没食子酸糖転移物が１％、未反応のまま残った没食子酸が１５％であった。
【００４５】
【実施例２】
＜没食子酸ｎ−プロピル糖転移物の調製＞
【００４６】
【実施例２−１】
実施例１−１の方法に準じて、１質量部の没食子酸ｎ−プロピル（関東化学株式会社製）を、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。
その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸ｎ−プロピル糖転移物を得た。
【００４７】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が１４％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が１０％、グルコース重合度が３以上の糖質を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が９％、未反応のまま残った没食子酸ｎ−プロピルが６７％であった。
【００４８】
【実施例２−２】
実施例１−２の方法に準じて、実施例２−１で得られたサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ処理後の反応液に、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例２−１におけると同様に、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸ｎ−プロピル糖転移物を得た。
【００４９】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が７６％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が７％、グルコース重合度が３以上の糖質部分を有する没食子酸ｎ−プロピル糖転移物が２％、未反応のまま残った没食子酸ｎ−プロピルが１５％であった。
【００５０】
【実施例３】
＜没食子酸オクチル糖転移物の調製＞
【００５１】
【実施例３−１】
実施例１−１の方法に準じて、１質量部の没食子オクチル（関東化学株式会社製）を、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸オクチル糖転移物を得た。
【００５２】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が１４％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が５％、グルコース重合度が３以上の糖質を有する没食子酸オクチル糖転移物が７％、未反応のまま残った没食子酸オクチルが７４％であった。
【００５３】
【実施例３−２】
実施例１−２の方法に準じて、実施例３−１で得られたサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ処理後の反応液に、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例３−１におけると同様に、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いる没食子酸オクチル糖転移物を得た。
【００５４】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が７６％、グルコース重合度が２の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が２％、グルコース重合度が３以上の糖質部分を有する没食子酸オクチル糖転移物が１％、未反応のまま残った没食子酸オクチルが２１％であった。
【００５５】
【実施例４】
＜カフェ酸糖転移物の調製＞
【００５６】
【実施例４−１】
実施例１−１の方法に準じて、１質量部のカフェ酸（和光純薬工業株式会社製）を、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、３５乃至５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いるカフェ酸糖転移物を得た。
【００５７】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が１９％、グルコース重合度が２の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が９％、グルコース重合度が３以上の糖質を有するカフェ酸糖転移物が７％、未反応のまま残ったカフェ酸が６５％であった。
【００５８】
【実施例４−２】
実施例１−２の方法に準じて、実施例４−１で得られたサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ処理後の反応液に、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例４−１におけると同様に、ろ紙でろ過して、さらに、合成吸着剤（商品名『ＨＰ１０』、三菱化学株式会社製）に負荷して吸着させ、水で洗浄して澱粉部分分解物を溶出させた後、２０乃至３０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液で溶出した画分を回収し、減圧乾固し、本発明の抗微生物剤に用いるカフェ酸糖転移物を得た。
【００５９】
これを常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、紫外部吸収を測定し組成比（モル比）を求めたところ、グルコース重合度が１の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が７８％、グルコース重合度が２の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が３％、グルコース重合度が３以上の糖質部分を有するカフェ酸糖転移物が１％、未反応のまま残ったカフェ酸が１８％であった。
【００６０】
【実施例５】
＜ターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物の調製＞
モモタマナ属のターミナリア ベリリカ （Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ ｂｅｌｌｉｒｉｃａ）の果実部１質量部をブレンダーにより粉砕し、１０質量部の５０％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液を加え、５０℃で６０分間攪拌した。ろ紙でろ過して、ろ液を採取し、遠心分離により固形成分を除去した上清を減圧乾燥して固形分を得た。この固形分１質量部を、実施例１−１の方法に準じて、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、実施例１−２の方法に準じて、適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ４．５に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり５０Ｕのグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセ生化学工業株式会社製）を加え、４０℃で２０時間インキュベートした。次いで、８０℃で１０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、ろ液を採取し、減圧乾固して、本発明の抗微生物剤に用いるターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物を得た。
【００６１】
このろ液を常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法に供し、没食子酸糖転移物の含量を測定したところ、固形分当り、有効成分である没食子酸糖転移物は８ｍｇ／ｇ、没食子酸は７ｍｇ／ｇであった。また、微量ながら、ペンタガロイルグルコースの糖転移物が検出された。
【００６２】
【実施例６】
＜藍抽出物の糖転移物＞
タデ藍（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ Ｔｉｎｃｏｒｉｕｍ）の地上部１質量部をブレンダーで粉砕した後、水１．５質量部を加え、ミキサーで攪拌した。ろ紙でろ過して、ろ液を採取し、１２１℃で１０分間加熱し、遠心分離をして固形分を除去し、上清を回収した。次に、この上清を減圧乾燥して固形分を得た。これを実施例１−１の方法に準じて、藍抽出物１質量部に対し、１０質量部の澱粉部分分解物（ＤＥ８、商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社製）とともに２００質量部の水に添加して加熱溶解した。適量の水酸化ナトリウムを添加してｐＨ６．０に調整した後、澱粉部分分解物１ｇあたり２００Ｕのサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を加え、４０℃で２４時間インキュベートした。その後、１００℃で２０分間インキュベートして酵素を失活させた後、ろ紙でろ過して、ろ液を採取し、減圧乾固して、本発明の抗微生物剤に用いるタデ藍抽出物の糖転移物を得た。
【００６３】
このろ液を常法の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法に供し、カフェ酸糖転移物の含量を測定したところ、固形分当り、有効成分であるカフェ酸糖転移物は５ｍｇ／ｇ、カフェ酸が１２ｍｇ／ｇの濃度で含まれていた。
【００６４】
【実施例７】
＜口腔清浄剤＞
常法にしたがって、下記に示す口腔清浄剤の基本処方に対して、実施例１−１の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−１の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−１の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−１の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物をそれぞれ濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合して液状の口腔清浄剤を得た。
【００６５】
エタノール ４０質量部
グリセリン １５質量部
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 １質量部
サッカリン 適量
香料 適量
クロルヘキシジン 適量
水 ４４重量部
【００６６】
本例の口腔洗浄剤は、通常のうがい薬と同様に常用することによって、口腔内のグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物性を示す。例えば、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属及びカンディダ属の微生物の増殖を効果的に抑制し、それらが発症原因をなる各種疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００６７】
【実施例８】
＜錠剤＞
常法にしたがって、マルトース粉末に、実施例１−２の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−２の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−２の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−２の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物をそれぞれ濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合した後、打錠機により、直径１ｃｍ、厚さ３．２ｍｍに打錠し、一錠０．５ｇの錠剤を得た。
【００６８】
本例の抗微生物剤は、通常の錠剤と同様に常用することによって、生体内で速やかに溶解し、生体における微生物の増殖を抑制し、かつ、生体における持続性が優れるので長時間抗微生物効果を発揮することから、グラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物性を示す。例えば、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００６９】
【実施例９】
＜練歯磨＞
常法にしたがって、下記に示す練歯磨の基本処方に対して、実施例１−１の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−１の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−１の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−１の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物を、それぞれ濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合した後、アルミニウムラミネートチューブへ１００ｇずつ充填してペースト状の抗微生物用の練歯磨を得た。
【００７０】
第二燐酸カルシウム ４２質量部
グリセリン １８質量部
カラギーナン ０．９質量部
ラウリル硫酸ナトリウム １．１質量部
香料 適量
サッカリン 適量
水 ３８質量部
【００７１】
本例の抗微生物用の練歯磨は、通常の練歯磨と同様に常用することによって、口腔におけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００７２】
【実施例１０】
＜トローチ剤＞
常法にしたがって、下記に示すトローチ剤の基本処方に対して、実施例１−１の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−１の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−１の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−１の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物をそれぞれ濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合し、成形して固状の抗微生物用のトローチ剤を得た。
【００７３】
マルトース ３５質量部
澱粉 ３４質量部
結晶セルロース １０質量部
ヒドロキシプロピルメチルセルロース １０質量部
ステアリン酸マグネシウム １質量部
【００７４】
本例の抗微生物用のトローチ剤は、通常のトローチ剤と同様に常用することによって、口腔内で速やかに溶解し、口腔内におけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００７５】
【実施例１１】
＜液剤＞
常法にしたがって、イソロイシンを４質量％含有する注射用精製水に、実施例１−２の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−２の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−２の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−２の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物を濃度１％（ｗ／ｗ）になるように溶解させた後、精密濾過、容器に充填して液状の抗微生物効果を有する液剤を得た。
【００７６】
本例の抗微生物効果を有する液剤は、注射用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤、経口用剤などとして、気道、鼻腔、口腔、視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などにおけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００７７】
【実施例１２】
＜軟膏＞
常法にしたがって、実施例１−１の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−１の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−１の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−１の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物を濃度１％（ｗ／ｗ）になるように適量の燐酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．２）に溶解し、その水溶液１００質量部を無水結晶マルトース４９質量部と均一に配合した後、さらに４５０質量部の白色ワセリンと練り合わせて抗微生物用の軟膏を得た。
【００７８】
本例の抗微生物用の軟膏は、皮膚外用剤、経粘皮用剤などとして、皮膚、泌尿器、生殖器などにおけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００７９】
【実施例１３】
＜点眼剤＞
常法にしたがって、下記に示す点眼剤の基本処方に対して、実施例１−２の方法により得た没食子酸糖転移物、実施例２−２の方法により得た没食子酸ｎ−プロピル糖転移物、実施例３−２の方法により得た没食子酸オクチル糖転移物、実施例４−２の方法により得たカフェ酸糖転移物、実施例５の方法により得たターミナリア ベリリカ抽出物の糖転移物、又は実施例６の方法により得たタデ藍抽出物の糖転移物を濃度１％（ｗ／ｗ）になるように配合して液状の抗微生物用の点眼剤を得た。
【００８０】
トレハロース（２含水物） ２０質量部
塩化ナトリウム ０．０４質量部
塩化カリウム ０．０２質量部
燐酸２水素ナトリウム ０．０３質量部
硼砂 ０．０４質量部
塩化ベンザルコニウム ０．００４質量部
精製水 ８０質量部
【００８１】
本例の抗微生物用の点眼剤は、通常の点眼剤と同様に常用することによって、視覚器におけるグラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌、酵母などに抗微生物効果を示す。したがって、バチラス属、ミコバクテリウム属、シュードモナス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、クレブシラ属、プロテウス属、ビブリオ属、シゲラ属、ヘリコバクター属、クラミジア属、アスペルギルス属、カンディダ属の微生物が発症原因になる疾患を効果的に治療・予防することができる。
【００８２】
【発明の効果】
以上説明したとおり、本発明の抗微生物剤は、生体に対する毒性が低いうえ、水溶性に優れ生体内における持続性に優れるので、注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔若しくは経口経路など生体に適用することによって、生体にとって好ましくない微生物の増殖を著明に抑制することができる。したがって、鼻腔、口腔、食道や気道、さらには視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などへ侵入した微生物が発症原因となる、例えば、肺炎などの呼吸器系疾患や、動脈硬化、虚血性心疾患などの循環器系疾患、結膜炎などの視覚器系疾患、直腸炎などの消化器系疾患、尿道炎などの泌尿器系疾患、副睾丸炎、卵管炎、子宮頚管炎、切迫早産、卵管の炎症、癒着、閉塞などの生殖器系疾患、食中毒などの治療、予防に著効を発揮する。
とりわけ、本発明の抗微生物用口腔用剤は、抗生物質を有効成分とする経口用剤とは違って、耐性菌の出現を招来したり、長期間連用しても大腸における有用な菌叢を破壊する恐れが少ないないので、食欲不振、嘔吐、下痢、便秘、膨満感を生じたり、倦怠感、発湿などの副作用を惹起する恐れが少ない。
Claims (1)
- カフェ酸にグルコース重合度が１乃至５の糖質がα−グルコシド結合で付加した糖転移物を有効成分として含有してなる、バチラス属、エッセリシア属、スタフィロコッカス属、ヘリコバクター属、及びカンディダ属に属する微生物を適用対象とする抗微生物剤。
Priority Applications (1)
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