JP4264353B2

JP4264353B2 - Ｎ−メチル−ホモシステイン、その使用及びその製造法

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Publication number: JP4264353B2
Application number: JP2003544000A
Authority: JP
Inventors: ヴィルウーンマルク; プラツェクヨハネス; オットーエックハルト; ペトロフオーリン; ボルムクラウディア; ヒンツディルク; マングレゴール; リスター−ジェームズジョン; エムウィルソンデイビット
Original assignee: CIS Bio International SA
Current assignee: CIS Bio International SA
Priority date: 2001-11-15
Filing date: 2002-10-22
Publication date: 2009-05-13
Anticipated expiration: 2022-10-22
Also published as: EP1444194A1; JP2005509023A; HK1074833A1; CN1304363C; IL161974A0; PL369244A1; ATE451347T1; US20030120032A1; DE50214080D1; MXPA04004526A; RU2305678C2; AU2002348998B9; AU2002348998B2; EP1444194B1; WO2003042163A1; ZA200404713B; DE10215336A1; NO20042469L; BR0214103A; CN1589257A

Description

本発明は、請求項に示された対象、即ち、一般式Ｉ及びＩＩのＮ−メチル−ホモシステイン、その使用及びその製造法に関する。

Ｎ−メチル−アミノ酸は、合成化学における有用な中間生成物である。とりわけ製薬化学ではこの種の構成要素が極めて頻繁に使用され、それというのも、効力が高く、選択的な多くの医薬品はＮ−メチル−アミノ酸を含有しているからである。

光学活性Ｎ−メチル−アミノ酸は、単一化合物として天然に存在するが（例えばＮ−メチル−トリプトファン：Liebigs Ann. Chem. 1935, 520, 31-34）、しかしながら生物活性を有する一連の天然物質、例えばドラスタチン(G. R. Pettit et al., J. Org. Chem. 1990, 55, 2989-2990; Tetrahedron 1993, 41, 9151-9170)又はダイデムニン(K. L. Rinehart et al., J. Nat. Prod. 1988, 51, 1-21; J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 6846-6848; J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 3734-3748)中の構成要素としても存在する。他の例は、ジャスプラキノリド(Jasplakinolid)(J. Org. Chem. 1991, 56, 5196-5202)及び他の細胞毒性ペプチド(J. Org. Chem. 1989, 54, 617-627; Tetrahedron 1995, 51, 10653-10662; J. Org. Chem. 1989, 54, 736-738)である。免疫抑制作用を有するシクロスポリンもＮ−メチル−アミノ酸を含有する（例えばR. M. Wenger, Helv. Chim. Acta 1983, 66, 2672-2702; S. L. Schreiber et al., Tetrahedron Lett. 1988, 29, 6577-6580を参照のこと）。Ｎ−メチル−アミノ酸は、神経薬理活性をも有する(J. C. Watkins, J. Med. Pharm. Chem. 1962, 5, 1187-1199)。

生物活性ペプチドへのＮ−メチル−アミノ酸の導入は、一方では製薬学的研究において立体配座及び生物活性を解析するためにしばしば使用される（例えばJ. Org. Chem. 1981, 46, 3436-3440; Int. J. Pept. Protein Res. 1995, 46, 47-55; Int. J. Pept. Protein Res. 1986, 27, 617-632を参照のこと）。ペプチドの立体配座解析に関する概括、及び生物活性との関連性は、H. Kessler, Angew. Chem. 1982, 94, 509-520 及びG. R. Marshall et al., Ann. Rep. Med. Chem. 1978, 13, 227-238に示されている。

他方で、相応するＮ−メチル−化合物によるペプチド中でのアミノ酸の置換は、ペプチドリガンドの有効性又は選択性を高めるために使用される（例えばJ. Med. Chem. 1994, 37, 769-780; Int. J. Pept. Protein Res. 1995, 46,47-55を参照のこと）。Ｎ−メチル−ペプチド結合は、しばしばタンパク質分解に対して非メチル化のものよりも高い安定性を示し、これにより、高められた経口利用性及び延長された有効性がもたらされ得る(R. H. Mazur et al., J. Med. Chem. 1980, 23, 758-763)。Ｎ−メチルアミノ酸の導入による、及び他の変性によるペプチドの設計に関しては、W. F. Degrado, Adv. Protein Chem. 1988, 39, 51-124 及び J. Rizo, L. M. Gierasch, Annu. Rev. Biochem. 1993, 61, 387-418.を参照のこと。ペプチド擬態の概括に関しては、A. Giannis et al., Angew. Chem. 1993, 105, 1303-1326 及びJ. Gante, Angew. Chem. 1994, 106, 1780-1802を参照のこと。

ＷＯ０１／４４１７７には、環状六量体部分配列中にＮ−メチル−ホモシステインを含有するペプチドが記載されている。ホモシステインの硫黄原子を介して、金属イオンが結合した配列の結合が行われる。放射性核種、例えば^９９ｍＴｃ又は^１８８Ｒｅのキレート化により、癌腫症の診断又は治療における放射線診断剤又は放射線治療剤としての使用が可能である（ＵＳ６，０５６，９４０；ＵＳ６，０２２，８５７；ＵＳ６，０１７，５０９も参照のこと）。

ペプチドの合成は、ＷＯ０１／４４１７７では、段階的な合成の進行におけるＮ−メチル化により行われる（例えばJ. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 2301-2302を参照のこと）。固相にＣ−末端基が結合している四量体ペプチドは、メチオニンから３つの工程で入手可能である(J. Med. Chem. 1996, 39, 1361-1371)アミノ酸Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｓ−トリチルホモシステイン（Ｆｍｏｃ＝９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル）と反応し、五量体ペプチドに変換される。保護基の分解後、ホモシステインの末端アミノ基は２−塩化ニトロベンゼンスルホン酸と反応し、スルホンアミドに変換される。その後、ＭＴＢＤ（１，３，４，６，７，８−ヘキサヒドロ−１−メチル−２Ｈ−ピリミド［１，２−ａ］ピリミジン）を用いたメチル化が行われ、引き続き、２−メルカプトエタノールを用いたスルホニル基の分解が行われる。その後、ペプチド配列が更に合成される。しかしながらこの合成は、反応が不完全であり、ペプチドの付加的な精製を必要とするという欠点を有する。

Ｎ−メチル−アミノ酸を含有するペプチド配列の合成は、通常、Ｆｍｏｃ−保護されたＮ−メチル−アミノ酸と部分配列との反応により行われる（例えば、J. Med. Chem. 1996, 39, 1361-1371を参照のこと）。しかしながら、ＷＯ０１／４４１７７におけるペプチド配列のために必要とされているアミノ酸であるＮ−Ｆｍｏｃ−Ｎ−メチル−Ｓ−トリチルホモシステインは従来製造することができなかった。

刊行物には、通常、キラルな天然物質として大量に市販されている相応する非メチル化アミノ酸に由来するＮ−メチル−アミノ酸の一連の製造法が記載されている。

非ラセミ体Ｎ−メチル−アミノ酸の第一の合成は、E.Fischerに由来する。この場合、アミノ酸のＮ−トシル誘導体は、苛性ソーダ及びヨウ化メチルとの反応によりメチル化される。これに引き続き、沸騰塩酸を用いたトシル基の分解が行われる（Ann. Chem. 1913, 398, 96-125; Ber. dt. chem. Ges. 1915, 48, 360-378）。この方法の場合、部分的なラセミ化が生じることが記載されている（A. H. Cook et al., J. chem. Soc. 1949, 1022-1028）。

Fischerのもう１つの方法は、２−ブロモカルボン酸とメチルアミンとの反応である（Ber. dt. chem. Ges. 1916, 49, 1355-1366; 適用に関してはA. H. Cook et al., J. chem. Soc. 1949, 1022-1028も参照のこと）。この場合にも、部分的なラセミ化生成物が生じる（P. Quitt et al., Helv. Chim. Acta 1963, 46, 327-333を参照のこと）。我々は、２−ブロモ−４−メチルスルファニル−ブタン酸とメチルアミンとの反応の際にもこれを認めることができた。刊行物には、Ｄ−メチオニンのジアゾ化、及び引き続く保持下での臭化物による置換、後続の転化下でのメチルアミンによる置換による、Ｎ−メチル−Ｌ−メチオニンの製造が記載されている（N. Izumiya, A. Nagamatsu, Kyushu. Mem. Med. Sci. 1953, 4,1-16）。生成物の鏡像異性体純度は測定されていない。我々は、穏和であると記載されているEllmanのジアゾ化法（Synthesis 1999, 583-585）を用いても、７５％の鏡像異性体過剰でしか反応シーケンスが進行しないことを示すことができた。従ってこの方法は、鏡像異性体的に純粋なＮ−メチル−ホモシステインの製造には不適当である。

極めて頻繁に使用される方法の１つに、ＴＨＦ又はＤＭＦ中の水素化ナトリウム及びヨウ化メチルを用いたBenoitonによる直接アルキル化がある(Can. J. Chem. 1973, 51, 1915-1919; Can. J. Chem. 1977, 55, 906-910)。この方法は、Ｚ−及びＢｏｃ−保護されたＮ−メチル−アミノ酸の製造に標準的に使用される（例えばTetrahedron 1995, 51, 10653-10662; D. L. Boger et al., J. Am. Chem. Soc. 1999. 121, 6197-6205; H. Waldmann et al., Chem. Eur. J. 1999, 5, 227-236を参照のこと）。Ｂｏｃ−保護されたメチオニンアミドとメチル化剤、例えばヨウ化メチルとの反応により、我々の場合には、スルホニウムイオンの形成下に硫黄原子のメチル化が生じる（S. J. F. Macdonald et al., J. Med. Chem. 1999, 64, 5166-5175も参照のこと）。従ってこの方法はＮ−メチル−ホモシステインの製造には適用不可能である。

アミノ酸エステルに由来するＮ−メチル−アミノ酸の製造法は多数存在する。これには、ボランを用いたＮ−ホルミルアミノ酸エステルの選択的還元(Tetrahedron Lett. 1982, 23, 3315-3318; J. Org. Chem. 1991, 56. 5196-5202)、及び、アミノ酸エステルのシッフ塩基と硫酸ジメチル又はメチルトリフラートとの反応、及び引き続く加水分解(M. J. O'Donnell et al., Tetrahedron Lett. 1984, 25, 3651-3654)が含まれる。しかしながら、アミノ酸エステルからアミノ酸への鹸化の際に、部分的にラセミ化が生じる(S. T. Cheung, N. L. Benoiton, Can. J. Chem. 1977, 55, 906-910)。従って、この方法も同様に不適当である。

アミノ酸は同様に、還元アルキル化においてアルデヒドと反応することができる。中間的に形成されたシッフ塩基は、現場で、水素及び触媒の存在で(R. E. Bowman et al. J. Chem. Soc. 1950, 1342-1345 及び 1346-1349)、又は、水素化ホウ素ナトリウムを用いて (K. A. Schellenberg, J. Org. Chem. 1963, 28, 3259-3261)還元される。この方法は溶液中でも（例えばJ. Org. Chem. 1996, 61, 3849-3862; J. Org. Chem. 1995, 60, 6776-6784を参照のこと）、固相上でも（例えばJ. Org. Chem. 1996, 61, 6720-6722; Tetrahedron Lett. 1997, 38, 4943-4946; Bioorg. Med. Chem. Lett. 1995, 5, 47-50を参照のこと）実施される。この方法に従って、Bowmanにより、ジ−及びトリペプチドも過メチル化されている(J. Chem. Soc. 1950, 1349-1351)。ホルムアルデヒドを用いた選択的なモノメチル化は、この方法では不可能であり、非メチル化、モノメチル化及びジメチル化アミノ酸からなる混合物が生じ、これらは分離不可能である(Quitt et al., Helv. Chim. Acta 1963, 46, 327-333;R. E. Bowman, H. H. Stroud. J. Chem. Soc. 1950.1342-1345も参照のこと)。

Ｆｍｏｃ−保護されたＮ−メチル−アミノ酸の合成に関しては、Freidingerの方法が極めて一般的である(J. Org. Chem. 1983, 48, 77-81)。この方法は２つの工程から成る：第一の工程では、アミノ酸とホルムアルデヒドとの反応によりオキサゾリジノンが形成され、これは第二の工程において、トリエチルシランを用いて酸性条件下に還元されてＮ−メチル化合物に変換される。Freidingerにより、Ｆｍｏｃ−Ｌ−メチオニンとホルムアルデヒドとの反応によるオキサゾリジノンへの変換は、収率が８８％であると記載されているが、しかしながら、トリエチルシランを用いた還元によるＦｍｏｃ−Ｎ−メチル−Ｌ−メチオニンへの変換は、５日後であってもまだ完了せず、わずか２２％の収率をもたらすにすぎない(J. Org. Chem. 1983. 48, 77-81)。

従って本発明の課題は、Ｎ−メチル化ホモシステインを含有するペプチド配列を合成するために役立ち、かつ固相上でのＮ−メチル化を回避する化合物を見い出すこと、及びその製造法であった。

本発明の課題は、一般式Ｉ

［式中、Ｘ１は硫黄−保護基を表し、かつＸ２は水素又は窒素−保護基を表す］のＮ−メチル−ホモシステイン（これは、鏡像異性体的に純粋であってもよいし、ラセミ体であってもよい。）により達成される。有利に、Ｘ１は、ベンジル（Ｂｎ）、４−メトキシベンジル（Ｍｏｂ）、ジフェニルメチル、ビス（４−メトキシフェニル）メチル、４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴ）、トリフェニルメチル（トリチル）、メトキシメチル（ＭＯＭ）、９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル又はｔ−ブチルスルフィドを表し(T. W. Greene, P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2^ｎｄ edition, J. Wiley & Sons, New York 1991)、有利に、ベンジル（Ｂｎ）、４−メトキシベンジル（Ｍｏｂ）、ジフェニルメチル、ビス（４−メトキシフェニル）メチル、４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴ）又はトリフェニルメチル（トリチル）を表し、殊に有利に、トリフェニルメチル（トリチル）を表し、Ｘ２は、保護基の場合、有利に、９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、２，７−ジブロム−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚｏ．Ｚ）、トリフルオロアセチル、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルオキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）又は２−トリメチルシリルエチルスルホニル(T. W. Greene, P. G. M. Wuts,上記参照のこと)を表し、有利に、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚｏ．Ｚ）又は９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を表し、殊に有利に、９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を表す。

本発明による一般式Ｉの化合物の製造は、刊行物記載の方法(Ben-Ishai, J. Am. Chem. Soc. 1957, 79, 5736-5738; M. A. Blaskovich, M. Kahn, Synthesis 1998, 379-380; G. V. Reddy et al., Synth. Commun. 1999, 29, 4071-4077)によりメチオニンから製造される（実施例１参照のこと）式ＩＩ

のオキサゾリジノンを、還元剤を用いて酸の存在で開環して、式ＩＩＩ

のＮ−メチルメチオニンに変換し、引き続き自体公知の方法で(T. W. Greene, P. G. M. Wutsを参照のこと)硫黄−保護基及び場合により窒素−保護基を導入することにより行われる。有利に、還元剤としてアルキルシラン、有利にトリエチルシランを使用する。有利に、酸として、トリフルオロ酢酸、ペンタフルオロプロピオン酸、トリフルオロメタンスルホン酸又はメタンスルホン酸、有利にトリフルオロ酢酸を使用する。有利に、反応を塩素化溶剤、ジオキサン、ＴＨＦ、ジメトキシエタン中で、有利にジクロロメタン又はクロロホルム中で実施する。反応を−２０℃〜＋１００℃、有利に０〜４０℃の温度で実施する。反応時間は５分〜１０時間、有利に０．５〜２時間である。Ｎ−メチルメチオニンは収率７０〜９５％で得られる。

一般式Ｉの化合物は当業者に公知の方法(M. Gooodman (Hrsg.), Houben-Weyl, Vol. E22, Synthesis of Peptids and Peptidomimetics, Thieme, 2001を参照のこと)により、Ｎ−メチル−ホモシステインを含有するペプチド及びペプチド中間体の合成のために、有利に、Ｆｍｏｃ−（Ｎ−ＣＨ_３）Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、シクロ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−（Ｎ−ＣＨ _３）Ｈｃｙ及びシクロ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−（Ｎ−ＣＨ _３）Ｈｃｙ（ＣＨ_２ＣＯ−β−Ｄａｐ−Ｐｈｅ（４−ＮＨ_２）−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ）の製造のために使用される。

実施例１
ａ）ｔ−ブチル−（Ｓ）−４−［２−（メチルスルファニル）エチル）］−５−オキソオキサゾリジノン−３−カルボキシレート
トルエン１ｌ中の、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−メチオニン１００ｇ（０．４モル）、パラ−ホルムアルデヒド１００ｇ（３．３モル）、乾燥硫酸マグネシウム２００ｇ（１．７モル）及びパラトルエンスルホン酸４ｇ（０．０２モル）の混合物を、３時間、９０℃に加熱する。これを２０℃に冷却し、氷冷下に飽和炭酸水素ナトリウム溶液８００ｍｌをこれに添加する。これを濾別し、残留物をエチルアセテート４００ｍｌで洗浄する。有機相を水３００ｍｌで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空中で乾燥濃縮する。粗生成物をヘキサン／エチルアセテート１：３１５０ｍｌ中に溶解させ、シリカゲル上で濾過し、シリカゲルをヘキサン／エチルアセテート１：３５００ｍｌで後洗浄する。これを真空中で乾燥濃縮し、黄色油状物８５．３ｇ（０．３３ミリモル、理論値の８３％）が得られる。

ｂ）Ｎ−メチル−Ｌ−メチオニン
ジクロロメタン６５ｍｌ中のｔ−ブチル−（Ｓ）−４−［２−（メチルスルファニル）エチル）］−５−オキソオキサゾリジノン−３−カルボキシレート１９．４ｇ（０．０７４モル）の溶液に、０℃で、トリフルオロ酢酸４５ｍｌ及びトリエチルシラン４０ｍｌ（０．２５モル）を滴加する。これを氷冷下に１時間撹拌し、更に２０℃で１時間撹拌する。引き続き、反応溶液を真空中で乾燥濃縮する。残留物をジクロロメタン１００ｍｌで３回取り出し、再度乾燥濃縮させる。その後、残留物を水１００ｍｌ中に取り出し、ＭＴＢＥ５０ｍｌで３回抽出する。水相を真空中で乾燥濃縮させる。残留物をエタノール５０ｍｌで３回再度取り出し、再度乾燥濃縮させる。残留物をＭＴＢＥ１５０ｍｌと混合し、２０℃で２時間撹拌する。これを濾別し、ＭＴＢＥ５０ｍｌで後洗浄する。乾燥後、無色の固形物９．６ｇ（０．０５９モル、理論値の８０％）が得られる。

ｃ）Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｌ−ホモシステイン
Ｎ−メチル−Ｌ−メチオニン７．５ｇ（０．０４６モル）を装入し、ＭｅＯＨ／ドライアイス−冷却下に、アンモニア２００ｍｌを濃縮する。−３５℃で、少量ずつ、１時間にわたり、ナトリウム５．２ｇ（０．２３モル）を添加し、更に２時間撹拌する。その後、少量ずつ塩化アンモニウム９．７ｇ（０．１８モル）を添加し、冷却をやめ、一晩窒素でアンモニアを放出させる。トリフェニルメタノール１４．０ｇ（０．０５４モル）を添加する。その後、氷冷下に、ジクロロメタン５０ｍｌ及びトリフルオロ酢酸９０ｍｌを添加する。室温で１時間撹拌し、乾燥濃縮する。残留物を水２００ｍｌ中に懸濁させ、苛性ソーダでｐＨを１３にする。更に１時間撹拌した後、吸引濾過し、固形物を水５００ｍｌ中に懸濁させる。クエン酸を添加することにより、ｐＨを４に調節する。ＭＴＢＥ６００ｍｌを添加し、３０分間撹拌する。吸引濾過し、ＭＴＢＥ各１００ｍｌで２回洗浄する。残留物をジクロロメタン１００ｍｌと混合し、エタノール２０ｍｌを添加し、引き続きＭＴＢＥ５００ｍｌを滴加する。更に１時間撹拌した後、吸引濾過し、ＭＴＢＥで洗浄する。乾燥後、無色の固形物１２．６ｇ（０．０３２モル、理論値の７０％）が得られる。

ｄ）Ｎ−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｌ−ホモシステイン
Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｌ−ホモシステイン１６．６ｇ（０．０４２モル）を水９０ｍｌ及びＴＨＦ１００ｍｌ中に懸濁させ、炭酸ナトリウム１２．５８ｇ（０．１２モル）を添加する。１０℃で、ＴＨＦ５０ｍｌ中のフルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート１４．８８ｇ（０．０４４モル）を添加し、更に３時間撹拌する。その後、水８０ｍｌ及びエチルアセテート１３０ｍｌと混合し、１０分間撹拌し、クエン酸を用いてｐＨを４にする。有機相を水各１００ｍｌで２回洗浄し、食塩溶液１００ｍｌで１回洗浄する。水相をエチルアセテート１００ｍｌで１回後抽出する。合液した有機相をロータリーエバポレータで蒸発させ、エチルアセテート２６０ｍｌと混合し、ロータリーエバポレータで蒸発させて泡状物２９．２ｇにし、これをジクロロメタン／アセトン６：４を用いてクロマトグラフィーにかける。生成物２２．４ｇ（０．０３６モル、理論値の８６％）が得られる。

実施例２
上記の通り、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−メチオニンの代わりにＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−メチオニンを使用することにより、実施例１ｄの標題の化合物に対する鏡像異性体化合物を、同様に得ることができる。

ａ）ｔ−ブチル（Ｒ）−４−［２−（メチルスルファニル）エチル）］−５−オキソオキサゾリジノン−３−カルボキシレート

ｂ）Ｎ−メチル−Ｄ−メチオニン

ｃ）Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｄ−ホモシステイン

ｄ）Ｎ−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｄ−ホモシステイン

実施例３
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｌ−ホモシステイン
Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｌ−ホモシステイン（実施例１ｃの標題の化合物）１６．６ｇ（０．０４２モル）を水９０ｍｌ及びＴＨＦ１００ｍｌ中に懸濁させ、炭酸ナトリウム１２．５８ｇ（０．１２モル）を添加する。１０℃で、ＴＨＦ５０ｍｌ中に溶解させたＮ−ベンジルオキシカルボニルオキシスクシンイミド１０．９７ｇ（０．０４４モル）を滴加し、１０℃で更に３時間撹拌する。その後、水８０ｍｌ及びエチルアセテート１３０ｍｌと混合し、室温で１０分間撹拌し、クエン酸を用いてｐＨを４にする。有機相を水各１００ｍｌで２回洗浄し、食塩溶液１００ｍｌで１回洗浄する。水相をエチルアセテート１００ｍｌで更に１回抽出する。合液した有機相を真空中で乾燥蒸発させ；残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィーにかける（溶離剤：ジクロロメタン／アセトン６：４）。生成物２２．０８ｇ（理論値の８７％）が固形の無色の泡状物として得られる。

実施例４
Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｌ−ホモシステイン
Ｎ−メチル−Ｓ−トリチル−Ｌ−ホモシステイン（実施例１ｃの標題の化合物）１６．６ｇ（０．０４２モル）を水９０ｍｌ及びＴＨＦ１００ｍｌ中に懸濁させ、炭酸ナトリウム１２．５８ｇ（０．１２モル）を添加する。１０℃で、ＴＨＦ５０ｍｌ中に溶解させたジ−ｔ−ブチルジカーボネート９．６０ｇ（０．０４４モル）を滴加し、１０℃で更に３時間撹拌する。その後、水８０ｍｌ及びエチルアセテート１３０ｍｌと混合し、室温で１０分間撹拌し、クエン酸を用いてｐＨを４にする。有機相を水各１００ｍｌで２回洗浄し、食塩溶液１００ｍｌで１回洗浄する。更に、水相をエチルアセテート１００ｍｌで１回抽出する。合液した有機相を真空中で乾燥蒸発させ；残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィーにかける（溶離剤：ジクロロメタン／アセトン６：４）。生成物１７．１４ｇ（理論値の８３％）が固形の無色の泡状物として得られる。

実施例５
ａ）Ｎ−メチル−Ｓ−（４，４’−ジメトキシ−トリチル）−Ｌ−ホモシステイン
Ｎ−メチル−Ｌ−メチオニン（実施例１ｂの標題の化合物）７．５ｇ（０．０４６モル）を装入し、ＭｅＯＨ／ドライアイス−冷却下に、アンモニア２００ｍｌを濃縮する。−３５℃で、少量ずつ、１時間にわたり、ナトリウム５．２ｇ（０．２３モル）を添加し、更に２時間撹拌する。その後、少量ずつ塩化アンモニウム９．７ｇ（０．１８モル）を添加し、冷却をやめ、一晩窒素でアンモニアを放出させる。ビス（４−メトキシフェニル）−フェニル−メタノール（ＤＭＴ）１７．３ｇ（０．０５４モル）を添加する。その後、氷冷下に、ジクロロメタン５０ｍｌ及びトリフルオロ酢酸９０ｍｌを添加する。室温で１時間撹拌し、乾燥濃縮する。残留物を水２００ｍｌ中に懸濁させ、苛性ソーダでｐＨを１３にする。更に１時間撹拌した後、吸引濾過し、固形物を水５００ｍｌ中に懸濁させる。クエン酸を添加した後、ｐＨを４に調節する。ＭＴＢＥ６００ｍｌを添加し、３０分間撹拌する。吸引濾過し、ＭＴＢＥ各１００ｍｌで２回洗浄する。残留物をジクロロメタン１００ｍｌと混合し、エタノール２０ｍｌを添加し、引き続きＭＴＢＥ５００ｍｌを滴加する。更に１時間撹拌した後、吸引濾過し、ＭＴＢＥで洗浄する。乾燥後、無色の固形物１３．９２ｇ（理論値の６７％）が得られる。

ｂ）Ｎ−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｓ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｌ−ホモシステイン
Ｎ−メチル−Ｓ−４，４’−ジメトキシトリチル−Ｌ−ホモシステイン（実施例５ａの標題の化合物）１８．９７ｇ（０．０４２モル）を水９０ｍｌ及びＴＨＦ１００ｍｌ中に懸濁させ、炭酸ナトリウム１２．５８ｇ（０．１２モル）を添加する。１０℃で、ＴＨＦ５０ｍｌ中に溶解させたフルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート１４．８８ｇ（０．０４４モル）を滴加し、更に、１０℃で３時間撹拌する。その後、水８０ｍｌ及びエチルアセテート１３０ｍｌと混合し、室温で１０分間撹拌し、クエン酸を用いてｐＨを４にする。有機相を水各１００ｍｌで２回洗浄し、食塩溶液１００ｍｌで１回洗浄する。更に、水相をエチルアセテート１００ｍｌで１回抽出する。合液した有機相を真空中で乾燥蒸発させ；残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィーにかける（溶離剤：ジクロロメタン／アセトン６：４）。生成物２２．９２ｇ（理論値の８１％）が固形の無色の泡状物として得られる。

実施例６
Ｆｍｏｃ−（Ｎ−ＣＨ_３）Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＣｌＴｒｔ−固相
ＷＯ０１／４４１７７（実施例１、工程１〜３）に記載されているように製造された、固相に担持されたペプチドＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＣｌＴｒｔ−固相を、１：１ＮＭＰ／ＤＣＭ（７５ｍＬ）中の５％ピペリジンで１０分間処理し、その後、ＮＭＰ（７５ｍＬ）中の２０％ピペリジンと１５分間反応させた。固相を順にＮＭＰ（３×７５ｍＬ×１分）及びＤＣＭ（３×７５ｍＬ×１分）で洗浄した。固相の小さなサンプル上で実施したニンヒドリン−分析は反応の終了を示し、固相をＮＭＰ（７５ｍＬ）で洗浄した。担持物質樹脂の小片をＨＦＩＰＡで処理し、ＨＰＬＣで分析した（DiatideのＨＰＬＣ法１を参照のこと）。Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨのピークは２１．７分では検出されなかったが、１２．７分に、Ｈ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨのピークが検出された。別個の容器中に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−メチル−Ｓ−トリチル−ホモシステイン（９．２０ｇ、１５ミリモル）、ＨＡＴＵ−試薬（５．７０ｇ、１５ミリモル）、ｉｎｄＨＯＡｔ（２．０４ｇ、１５ミリモル）をＮＭＰ５０ｍＬ中に溶解させた。ＤＩＥＡ（６．９６ｍＬ、４０ミリモル）を保護されたＮ−メチルホモシステインの溶液に添加した。これを１分間撹拌し、混合物を固相−バッチに施与した。わずかなアルゴン流下で４時間振盪させて反応させた。溶液を分離し、固相を順にＮＭＰ（３×７５ｍＬ×１分）及びＤＣＭ（３×７５ｍＬ×１分）で洗浄した。固相の小さなサンプル上で実施したニンヒドリン−分析は反応の終了を示した。担持物質樹脂の小片をＨＦＩＰＡで処理し、ＨＰＬＣで分析した（DiatideのＨＰＬＣ法１を参照のこと）。Ｈ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨのピークは１２．７分には検出されなかったが、２６．７分で、Ｆｍｏｃ−（Ｎ−ＣＨ_３）Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨのピークが検出された。

Claims

一般式Ｉ

［式中、
Ｘ１は硫黄−保護基を表し、かつ
Ｘ２は９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、２，７−ジブロム−９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚｏ．Ｚ）、トリフルオロアセチル、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルオキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）又は２−トリメチルシリルエチルスルホニルを表す］の化合物。
Ｘ１が、ベンジル（Ｂｎ）、４−メトキシベンジル（Ｍｏｂ）、ジフェニルメチル、ビス（４−メトキシフェニル）メチル、４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴ）、トリフェニルメチル（トリチル）、メトキシメチル（ＭＯＭ）、９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル又はｔ−ブチルスルフィドを表す、請求項１記載の化合物。
請求項１記載の一般式Ｉの化合物の製造法において、式ＩＩ

のオキサゾリジノンを、還元剤を用いて酸の存在で開環して、式ＩＩＩ

のＮ−メチルメチオニンに変換し、引き続き自体公知の方法で硫黄−保護基及び場合により窒素−保護基を導入することを特徴とする、請求項１記載の一般式Ｉの化合物の製造法。
還元剤としてアルキルシランを使用する、請求項３記載の方法。
酸として、トリフルオロ酢酸、ペンタフルオロプロピオン酸、トリフルオロメチルスルホン酸又はメタンスルホン酸を使用する、請求項３記載の方法。
Ｎ−メチル−ホモシステインを含有するペプチド及びペプチド中間体を合成するための、請求項１記載の一般式Ｉの化合物の使用。
Ｆｍｏｃ−（Ｎ−ＣＨ_３）Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを製造するための、請求項１記載の一般式Ｉの化合物の使用。
シクロ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−（Ｎ−ＣＨ_３）Ｈｃｙを製造するための、請求項１記載の一般式Ｉの化合物の使用。
シクロ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−（Ｎ−ＣＨ_３）Ｈｃｙ（ＣＨ_２ＣＯ−β−Ｄａｐ−Ｐｈｅ（４−ＮＨ_２）−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ）を製造するための、請求項１記載の一般式Ｉの化合物の使用。