JP3698696B2 - 生体試料調製方法、生体試料定量方法及び生体試料保存容器 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は臨床診断に用いる定量用試料の調製方法、該調製方法により調製された定量用試料を用いて生体試料中の定量すべき成分を定量する方法、及び定量用試料の調製に使用する容器に関する。
【０００２】
【従来の技術】
一般に、採血には、医師等一定の有資格者が注射器を用いて静脈から血液を採取する一般採血と、検査対象者本人が自分の手の指等に採血針を刺して血液を採取する自己採血とがある。
【０００３】
一般採血により採取された血液は、採取容器に密閉された状態で検査場所に搬送され、そこで遠心分離器により血球と血漿に分離された後、検査が行われていた。また、自己採血により採取された血液は、濾紙に含浸され乾燥された状態で検査場所に搬送され、濾紙の赤色部分は血球で白色部分が血漿であるので、その検査場所にて白色部分を切り取り溶剤に溶解させ、分析が行われていた。
【０００４】
臨床検査においては、医師や看護婦、臨床検査技師等の一定の有資格者または専門の技術者が採血等により生体試料を採取し、採取した生体試料から定量用試料を調製し、生体試料中の定量すべき成分を定量している。
【０００５】
定性的または半定量的な判定を行う特定の検査項目では検査対象者自ら生体試料を採取する方法も知られているが、一般の定量のための検査項目では検査対象者が医師や看護婦、臨床検査技師等の一定の有資格者または専門の技術者がいる病院や検査センター等に出向くか、医師や看護婦、臨床検査技師等の一定の有資格者または専門の技術者が検査対象者のいる居所等に出向いて検査対象者からの生体試料の採取が行われている。また、採取された生体試料から定量用試料を調製する操作も、医師や看護婦、臨床検査技師等の一定の有資格者または専門の技術者が行っている。
【０００６】
定量用試料を調製するに際しては、一定容量を正確に定量する必要があり、煩雑であることから検査対象者が生体試料を一定容量定量し定量用試料を調製することや、有資格者または技術者が採取した生体試料からその場で定量用試料を調製することは行われていない。
【０００７】
自動分析機の性能の向上に伴い検体の微量化が進み、従来のような大量の生体試料を採取する必要がなくなってきている。一定容量の生体試料を一定容量の希釈液で希釈した試料を用いて定量すべき成分を定量する方法を用いた自動分析機として、例えば、Ｂｉｏ Ｍａｊｅｓｔｙ ＪＣＡ−ＢＡ１６５０（ＪＥＯＬ社製）が知られている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
ところが、一般採血の場合、採取された血液を遠心分離した後、上澄みの血漿をスポイトで吸い取り、血漿分析機用の特殊容器に移さなければならないので、血液を血球と血漿に分離するのに手間が掛かりコスト高になり、また、特殊容器に移す際に、取り違う等の事故が起きる虞れがあった。
【０００９】
また、血液中の血球は時間の経過と共に溶血し、血液の常温放置での精度保証期間はせいぜい１日程度であるので、それ以後に検査を行った場合にはナトリウム、カリウム、クロム等の電解質物質の測定数値に悪影響を及ぼしたり、ＧＯＴ、ＧＰＴ等の酵素系の数値の測定ができなくなったりし、診療、診断等の指針となるような検査数値が期待できなくなるといった問題が生じていた。
【００１０】
また、遠心分離器により血液を分離させ、所定項目の検査を行うためには、１回に５〜１０ｍＬ程度の採血量が必要とされていた。したがって、検査対象者本人で採血することは困難であり、医師等一定の有資格者が採血することになるので、検査対象者が病院等に行くか、或いは有資格者が検査対象者の居所に出向いたりする必要があり、採血に手間が掛かっていた。
【００１１】
一方、自己採血は、血液を濾紙に含浸させ乾燥させた後に溶剤に溶解させる工程を必要とするため、斯かる工程を経ても検査数値に影響を与えるおそれのない特定の検査項目に関してのみ有効であり、これらの検査項目以外での実施は不可能であった。
【００１２】
また、これまでの臨床診断の形態では、医師や看護婦、臨床検査技師等の一定の有資格者または専門の技術者及び検査対象者の負担が大きく、生体試料の採取から実際の検査までの過程も煩雑であった。従って、医師や看護婦、臨床検査技師等の一定の有資格者または専門の技術者並びに検査対象者の負担を最小限にするような診断法の開発及び該診断法を組み入れたより簡素な臨床診断システムの構築が望まれている。
【００１３】
そこで、本発明は上記事情を鑑みて、血液検査のコスト低減化が図れ、血液の保存性がよく検査精度の向上が図れ、採血量が微量で済み、作業の簡素化が可能な血液分離器具及び血液分離方法を提供するものである。
【００１４】
また、本発明は生体試料から該生体試料中の定量すべき成分の定量に使用する定量用試料を調製する方法、生体試料中の定量すべき成分を定量する方法、容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料を定量するまで保存するために使用する容器、または容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料から定量用試料を調製するために使用する容器を提供することにある。
【００１５】
【課題を解決する手段】
本発明は上記事情を鑑みて構成されたもので、上記課題を解決するために以下の特徴を有する。すなわち本発明の血液分離器具は、採取した血液を収容する血液採取手段と、前記血液中の血球と血漿とを分離する濾過手段と、分離された血球を収容する血球採取手段と、分離された血漿を収容する血漿採取手段と、前記血液採取手段内に収容された血液を加圧する加圧手段とを備えており、前記濾過手段は、一端側が前記血液採取手段の血液排出部に連通すると共に他端側が前記血球採取手段の血球導入部に連通された細管を有し、該細管の壁面には、血漿の通過を許容し、かつ血球の通過を阻止する大きさの多数の貫通孔が形成されており、前記加圧手段による加圧動作により、前記血液採取手段内の血液が前記濾過手段内に導入され、かつ該濾過手段の前記貫通孔を介して前記血液中の血漿が前記血漿採取手段内に分離収容されるように構成されたことを特徴とする。
【００１６】
好適な態様では、採取した血液を収容する血液採取容器部と、該血液採取容器部の血液排出部に連通する血漿採取容器着脱部と、血球導入部が前記血漿容器着脱部に連通する血球採取容器着脱部とを有する本体容器と、前記血液採取容器部に嵌挿可能な押込み部を有する押込み蓋と、前記血漿採取容器着脱部に着脱可能に接続され所定量の血漿希釈溶液を有する血漿採取容器と、前記血球採取容器着脱部に着脱可能に接続され所定量の血球保護溶剤を有する血球採取容器と、前記血液中の血球と血漿とを分離する限外濾過体とを備えており、該限外濾過体は、一端側が前記血液採取容器部の血液排出部に連通すると共に他端側が前記血球採取容器の血球導入部に連通された一群の濾紙製細管を有し、該細管の壁面には血漿の通過を許容し、かつ血球の通過を阻止する大きさの多数の貫通孔が形成されており、前記押込み蓋を押込むことにより、前記血液採取容器部の血液が前記限外濾過体内に導入され、かつ該限外濾過体の前記貫通孔を介して前記血液中の血漿が前記血漿採取容器内に分離収容されるように構成されたことを特徴とする。
【００１７】
また、好ましい態様では、前記細管の貫通孔の内径は０．４〜０．６μｍの範囲にあり、また、前記血液採取容器部が底部に設けられた薄壁に封入された球状溶剤を有し、前記押込み蓋の押込み部が前記薄壁を圧壊可能な端部を有し、さらに、前記球状溶剤の外径は前記細管の貫通孔の内径より大きい。
【００１８】
さらに、好ましくは、前記血液採取容器部の容積が８０〜１２０μＬの範囲であり、また、前記血球採取容器内を空気層域と血球保護溶剤保有域とに分割し且つ摺動可能なピストンを有し、さらに、前記空気層域の圧力を１．０〜１．５気圧の範囲に設定し、さらにまた、前記血漿希釈溶液に所定量の色素が混入されている。
【００１９】
また、本発明の血液分離方法は、血液採取手段に血液を採取し、該血液を加圧手段により加圧して一端側が前記血液採取手段の血液排出部に連通された濾過手段内に導入し、前記血液中の血漿を前記濾過手段の壁面に形成された貫通孔を介して血漿採取手段内に収容し、前記血液中の血球を前記濾過手段内を流通させ該濾過手段の他端側が連通された血球採取手段の血球導入部を介して血球採取手段内に収容することを特徴とする。
【００２０】
好適な態様では、本体容器の血液採取容器部に血液を採取し、その後直ぐに、前記血液採取容器部に押込み蓋を嵌挿し、押込み、前記血液を一端側が前記血液採取手段の血液排出部に連通された限外濾過体の細管内に導入し、前記血液中の血漿を前記細管の壁面に形成された貫通孔を介して前記本体容器に気密に接続された血漿採取容器内の血漿希釈溶液に溶解させ、前記血液中の血球を前記限外濾過体内を流通させ該限外濾過体の他端側が連通された血球採取容器の血球導入部を介して前記本体容器に気密に接続された血球採取容器内の血球保護溶剤に混入させることを特徴とする。
【００２１】
また、好ましい態様では、前記押込み蓋の押込み部を最下部まで押込み、前記血液採取容器部底部の球状溶剤を封入する薄壁を圧壊し、前記球状溶剤を前記各細管内に充填させ凝固させ、さらに、前記血液を８０〜１２０μＬ採取する。
【００２２】
上記した発明によれば、前記血液は前記血液採取手段から前記濾過手段の細管内に流入し、前記血液中の血漿は前記細管の貫通孔を通り前記血漿採取手段内に収容され、前記血液中の血球は前記細管内を流通し、前記血球採取手段内に収容される。
【００２３】
また本発明は以下の（１４）〜（４１）に関する。
（１４）生体試料から該生体試料中の定量すべき成分の定量に使用する定量用試料を調製する方法において、容量を定量することなしに採取された未知容量の生体試料を一定容量の水性溶液と混合する工程を含有することを特徴とする定量用試料の調製方法。
（１５）一定容量の水性溶液が一定量の指示物質を含有するものである（１４）記載の調製方法。
（１６）一定量の指示物質を含有する一定容量の水性溶液を添加する工程を含有する（１４）記載の調製方法。
（１７）指示物質が色素または色原体である（１４）〜（１６）のいずれかに記載の調製方法。
（１８）色原体が酸化発色型色原体である（１７）記載の調製方法。
（１９）生体試料が全血、血漿または血清である（１４）〜（１８）のいずれかに記載の調製方法。
（２０）水性溶液が緩衝液である（１４）〜（１９）のいずれかに記載の調製方法。
（２１）定量すべき成分が血清中の成分である（１４）〜（２０）のいずれかに記載の調製方法。
（２２）容量を定量することなしに採取された未知容量の生体試料と一定量の指示物質を含有する一定容量の水性溶液とを混合する工程を含有する調製方法で調製された定量用試料を用いることを特徴とする生体試料中の定量すべき成分の定量方法。
（２３）容量を定量することなしに採取された未知容量の生体試料が一定容量の水性溶液に混合されたものである（２２）記載の定量方法。
（２４）定量用試料中の生体試料の希釈倍率を求める工程及び定量用試料中の定量すべき成分の濃度を定量する工程を含有する（２２）または（２３）記載の定量方法。
（２５）指示物質が色素または色原体である（２２）〜（２４）のいずれかに記載の定量方法。
（２６）色原体が酸化発色型色原体である（２５）記載の定量方法。
（２７）生体試料が全血、血漿または血清である（２２）〜（２６）のいずれかに記載の定量方法。
（２８）水性溶液が緩衝液である（２２）〜（２７）のいずれかに記載の調製方法。
（２９）定量すべき成分が血清中の成分である（２２）〜（２８）のいずれかに記載の調製方法。
（３０）一定容量の水性溶液が封入されており、かつ、生体試料の添加のための密閉可能な開閉手段を有する、容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料を定量するまで保存するために使用する生体試料保存用容器。
（３１）一定容量の水性溶液が封入されており、かつ、生体試料の添加のための密閉可能な開閉手段を有する、容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料から定量用試料を調製するために使用する定量用試料調製用の容器。
（３２）一定容量の水性溶液が一定量の指示物質を含有する溶液である（３０）または（３１）記載の容器。
（３３）指示物質が色素または色原体である（３２）記載の容器。
（３４）色原体が酸化発色型色原体である（３３）記載の容器。
（３５）生体試料が全血、血漿または血清である（３０）〜（３４）のいずれかに記載の生体試料採取容器。
（３６）定量すべき成分が血清中の成分である（３０）〜（３５）のいずれかに記載の生体試料採取容器。
（３７）下記１）〜４）の工程を含む生体試料中の定量すべき成分の定量方法。１）容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料と一定量の指示物質を含有する一定量の水性溶液とからなる定量用試料を調製する工程、
２）該一定量の指示物質を含有する一定量の水性溶液中の指示物質の濃度（Ｃ₁）と該定量用試料中の指示物質の濃度（Ｃ₂）とから該生体試料の希釈倍率（ａ）を求める工程、
３）該定量用試料中の定量すべき成分の濃度（Ｙ）を求める工程、
４）上記２）で求めた生体試料希釈倍率（ａ）と上記３）で求めた定量用試料中の定量すべき物質の該濃度（Ｙ）とから生体試料中の定量すべき成分を決定する工程。
（３８）水性溶液が緩衝液である（３７）記載の調製方法。
（３９）指示物質が色素または色原体である（３７）または（３８）記載の方法。
（４０）色原体が酸化発色型色原体である（３９）記載の方法。
（４１）Ｃ₁およびＣ₂に代えて、該一定量の指示物質を含有する一定量の水性溶液の吸光度（Ｅ₁）および該定量用試料の吸光度（Ｅ₂）をそれぞれ用いる（３９）または（４０）記載の方法。
【００２４】
【発明の実施の形態】
以下、図面を参照しつつ、本発明の１実施例について説明する。
【００２５】
図１は本発明に係る血液分離器具１を示し、該血液分離器具１は本体容器２と、該本体容器２に接続された限外濾過体３と、それぞれ前記本体容器２に着脱可能に接続された血漿採取容器４及び血球採取容器５と、前記本体容器２に嵌挿可能な押込み蓋６とから構成され、一般に、前記本体容器２、血漿採取容器４、及び血球採取容器５は合成樹脂製である。
【００２６】
図２から図４を参照すると、前記本体容器２は有天円筒状で、例えば、内径が１．５ｃｍ程度の血漿採取容器着脱部７と、該血漿採取容器着脱部７上に共に円筒状に形成された血液採取容器部８及び血球採取容器着脱部９とを有し、前記血液採取容器部８は前記血球採取容器着脱部９より口径及び高さ共に大きくなっている。前記血液採取容器部８の容積は、好ましくは、８０〜１２０μＬ（４〜５滴分）の範囲であり、さらに好ましくは１００μＬであり、例えば、内径が８ｍｍの場合、深さは２ｍｍ程度とする。前記血漿採取容器着脱部７の上板１０には血液排出用連通口１１、血球導入用連通口１１’が穿設され、前記血液採取容器部８は前記血液排出用連通口１１を介して前記血漿採取容器着脱部７と連通し、前記血球採取容器着脱部９は前記血球導入用連通口１１’を介して前記血漿採取容器着脱部７と連通している。前記血漿採取容器着脱部７の内側上部は螺刻され、前記血液採取容器部８及び前記血球採取容器着脱部９の外側はそれぞれ螺刻されている。
【００２７】
図１、図５及び図６に示されているように、前記限外濾過体３は多数本、例えば１００本の濾紙製の細管１２（例えば、それぞれ口径２ｍｍ、全長３ｃｍ）からなる濾過部１３と、該濾過部１３の両端部にそれぞれ設けられた接続部１４，１４窒ニを有し、前記各細管１２の壁面には、好ましくは、内径０．４〜０．６μｍ、好ましくは０．５μｍの多数の貫通孔１５が穿設されている。前記接合部１４，１４’はそれぞれ前記各細管１２を束ねる扁平な台座１６，１６’を有し、該台座１６，１６’は前記各細管１２を束ねた状態で内部に扁平な空間の合流部１７，１７’を形成するようになっている。また、前記各台座１６，１６’の上面中央には前記合流部１７，１７’に連通するように導入管１８，１８’が固着され、該導入管１８，１８’は外側が螺刻されている。該導入管１８，１８’は血漿採取容器着脱部７側から前記血液排出用連通口１１及び血球導入用連通口１１’にそれぞれ貫設され、前記導入管１８には前記血液採取容器部８側からナット１９が螺合すると共に前記導入管１８’には前記血球採取容器着脱部９側からナット１９’が螺合し、該ナット１９，１９’と前記台座１６，１６’とで前記血漿採取容器着脱部７の上板１０を挟持するようになっている。また、前記血液採取容器部８底部には圧壊可能な材質製、例えば、合成ゴム製の薄壁２０が水平に張着され、前記導入管１８は前記薄壁２０を気密に貫通し、該薄壁２０の下方に外径が前記細管１２の貫通孔１５の外形より大きい、好ましくは前記貫通孔１５の外形より０．２μｍ程度大きい人工的な球状溶剤２１が所定量封入されている。
【００２８】
図１及び図７〜図１０を参照すると、前記血漿採取容器４は上部に拡径部２２を有し、下部に底部２３を有する略円筒状を成し、好ましくは血漿分析機（図示せず）にそのままセットできる形状を成している。前記拡径部２２の外側は螺刻され、該拡径部２２は前記血漿容器着脱部７に螺合可能になっている。前記底部２３はすり鉢状を成し、下面には直径方向に沿って摘み部２４が突設されており、前記血漿採取容器４は、前記摘み部２４を水平回転させることにより前記血漿容器着脱部７に対し着脱可能になっている。また、前記血漿採取容器４内には血漿希釈溶液２５が封入され、さらに該血漿希釈溶液２５中にマラカイトグリーン等の色素が混入されている。
【００２９】
図１及び図１１〜図１４を参照すると、前記血球採取容器５は有天円筒状を成し、内側下部は螺刻され、前記血球採取容器着脱部９に着脱可能になっている。また、前記血球採取容器５内部には偏平な円柱形状のピストン２６が上下に摺動可能に設けられている。好ましくは、該ピストン２６の周壁に周方向に複数の小溝２７が刻設され、前記血球採取容器５内面と前記ピストン２６間の気密性を維持しつつ前記ピストン２６が摺動可能になっている。前記血球採取容器５内は前記ピストン２６により２室に分割され、該ピストン２６より上方は空気層域２８を形成し、前記ピストン２６より下方は血球保護溶剤保有域２９を形成している。該血球保護溶剤保有域２９には、血球の凝固、溶血を防ぐため、採取する血球容量の約１／７の容量の血球保護溶剤３０、例えば、ＥＤＴＡまたはクエン酸等の凝固防止剤が封入されている。また、前記空気層域２８内の圧力は外気圧より高い圧力、好ましくは、外気圧より０．２〜１．０気圧高めに保持され、初期状態において、前記ピストン２６は前記接続部１４’に当接し、前記血球保護溶剤３０が前記濾過部１３に逆流しないようになっている。
【００３０】
図１及び図１５〜図１８を参照すると、前記押込み蓋６は、有天円筒状で合成樹脂製の外周部３１と、該外周部３１の上板内面に同心に固着された円柱状で合成ゴム製の押込み部３２とを有し、前記外周部３１は外面上部に滑り止め部３３が設けられ、内周面は螺刻されている。前記外周部３１と前記押込み部３２の間には円筒状の空間３４が形成され、前記血液採取容器部８に対して、前記外周部３１は螺捜し、前記押込み部３２は嵌挿可能になっている。該押込み部３２の周壁下部には封止部材、例えば弾性材料製の複数のリング３５が設けられ、前記押込み部３２が前記血液採取容器部８に嵌挿する時の両者間の気密性を保持するようになっている。さらに、前記押込み部３２の周壁最上部には環状薄板形状のパッキン３６が固着され、前記血液採取容器部８の上端が前記パッキン３６を押圧することにより前記血液採取容器部８と前記押込み蓋６間の気密性が保持できるようになっている。また、前記押込み部３２の下端には同心に凹部３７が形成され、該凹部３７は前記ナット１９に嵌合可能になっている。
【００３１】
以下、図面を参照しつつ、本発明に係る血液分離方法を説明する。
【００３２】
検査対象者は自分の手の指等に採血針を突き刺し、図１９に示すように、前記血液採取容器部８内に、好ましくは８０〜１２０μＬ（４〜５滴）、さらに好ましくは１００μＬの血液３８を採取する。前記滑り止め部３３を把持し、図２０に示すように、前記押込み蓋６の前記押込み部３２を前記血液採取容器部８に嵌挿する。前記押込み部３２と前記血液採取容器部８との間の気密性は前記リング３５により保たれ、前記血液３８は前記押込み部３２により押圧され、前記導入管１８を通り前記限外濾過体３の前記各細管１２内に流入する。
【００３３】
前記血液３８中の血漿３９は、外径が前記細管１２の前記貫通孔１５の内径より小さいので、該貫通孔１５を通過し、前記血漿採取容器４内の前記血漿希釈溶液２５中に溶解する。該血漿希釈溶液２５中には色素が混入されているので、単位体積当りの色素量を測定することにより、溶液の希釈倍率（溶解率）を正確に算出でき、前記血漿３９の検査精度を高く維持することができる。
【００３４】
また、前記血液３８中の血球４０は、外径が前記貫通孔１５の内径より大きいので、前記各細管１２内を流通し、前記導入管１８’を通り、図２４に示すように、前記ピストン２６を持上げ、前記血球採取容器５内の前記血球保護溶剤３０中に混入する。前記ピストン２６の周壁には前記小溝２７が形成されているので、前記ピストン２６は前記血球採取容器５内周面との間の気密性を保持しつつ上方に摺動する。この時、前記血漿３９が前記貫通孔１５を通過するには一定の時間が掛かるため、前記押込み部３２を急激に押込むと、図２５に示すように、前記ピストン２６は一時的に上昇するが、それに伴い前記空気層域２８内の圧力が上昇するので、該圧力により前記ピストン２６は下方に摺動し、前記血球４０が混入した前記血球保護溶剤３０を押圧し、該押圧力により前記血漿３９の前記貫通孔１５への通過を促進させる。
【００３５】
前記血液採取容器部８内の前記血液３８が前記血液採取容器部８から完全に排出されると、図２１及び図２２に示すように、前記押込み部３２の下端は前記薄壁２０を圧壊し、前記球状溶剤２１は前記押込み部３２の前記凹部３７に流入し、前記導入管１８を通り前記各細管１２内に流入する。前記押込み蓋６の押込み部３２を最下部まで押込むと、すべての前記球状溶剤２１は前記血液採取容器部８から流出し、前記各細管１２内を充填し、凝固する。
【００３６】
したがって、それ以後、前記血漿３９の溶解した前記血漿希釈溶液２５が前記血漿採取容器４から前記各細管１２内に逆流したり、前記血球４０の混入した前記血球保護溶剤３０が前記血球採取容器５から前記各細管１２内に逆流したりすることはない。また、前記押込み部３２を最下部まで押込むと、前記血液採取容器部８の上端が前記パッキン３６を押圧し、前記押込み蓋６と前記血液採取容器部８との間の気密性は前記リング３５に加えて、前記パッキン３６により２重に保持される。
【００３７】
その後、前記血液３８を前記血漿３９と前記血球４０とに分離させたままの状態で前記血液分離器具１を検査場所まで搬送し、所定項目の検査を行う。
【００３８】
この場合、採血後直ぐにその場で血液を血漿と血球とに分離させ、血球を血球保護溶剤に混入させた状態で検査場所に搬送しているので、搬送中の溶血、血液の凝固等を防止することができる。したがって、血液の保存性がよく、検査精度の向上が図れる。また、採取した血液を１週間程度は常温で保存可能であり、搬送を迅速に行ったり、採血場所と検査場所の地域性を考慮したり等の配慮が不要となり、作業の自由度を向上させることが可能となる。さらに、血液の分離に遠心分離器を使用しないので採血量が数滴で済み、自己採血により、従来の一般採血と同程度の項目について検査することができる。
【００３９】
なお、上記実施の形態においては、前記血漿採取容器４、前記血球採取容器５、前記押込み蓋６と前記本体容器２とはそれぞれ螺合するようになっているが、着脱可能で気密性を保持可能な接続方法であれば、螺刻せずにテーパを付ける等他の接続方法であってもよい。
【００４０】
また、容器内部の突起等による血球の損壊を防止するため、前記血球採取容器５、前記血液採取容器部８等の容器内面にヘパリン等でコーティング処理を施してもよい。
【００４１】
さらに、前記本体容器２、前記血漿採取容器４、前記血球採取容器５、前記押込み蓋６、前記ピストン２６等の材質は上記した材質に限定されるものでないことは言うまでもない。
【００４２】
また、上記実施の形態においては、自己採血で実施する場合について説明したが一般採血においても実施可能であることは勿論である。
【００４３】
本発明に用いられる水性溶液としては特に制限はないが、例えば脱イオン水、蒸留水、緩衝液等があげられ、緩衝液が好ましい。緩衝液に用いる緩衝剤は緩衝能を有するものならば特に限定されないが、ｐＨ１〜１１の例えば乳酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、フタル酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、トリエタノールアミン緩衝剤、ジエタノールアミン緩衝剤、リジン緩衝剤、バルビツール緩衝剤、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝剤、イミダゾール緩衝剤、リンゴ酸緩衝剤、シュウ酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、３−モルホリノプロパン酸（ＭＯＰＳ）、１，４−ピペラジンビス（エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、２−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）等のグッド緩衝剤等が挙げられる。緩衝液の濃度は特に制限はされないが、０．１〜１０００ｍｍｏｌ／Ｌが好ましく１〜５００ｍｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
【００４４】
また、緩衝液中には必要に応じて、界面活性剤、防腐剤等が含有されてもよい。界面活性剤としては、例えば、陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、両性界面活性剤または非イオン界面活性剤が挙げられる。防腐剤としては、例えば、アジ化ナトリウムや抗生物質等が挙げられる。
【００４５】
生体試料に全血を使用する場合には、水性溶液は、赤血球等の血球の膨張や収縮による血清中の成分濃度の変化を防止する目的で、定量すべき成分の定量に影響しない塩類、糖類等、緩衝剤等により等張液に調製されたものであることが好ましい。
【００４６】
塩類としては、特に制限はないが、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム等のハロゲン化アルカリ金属塩等があげられる。糖類としては、特に制限はないが、例えば、マンニトール、ソルビトール等の糖アルコール等があげられる。緩衝剤としては、前述のものがあげられる。
【００４７】
本発明に使用する指示物質としては、生体試料中の定量すべき成分以外で実質的に生体試料に含有されない成分であれば特に制限はないが、生体試料中の定量すべき成分の定量に影響しない成分が好ましい。指示物質としては、例えば色素、色原体、蛍光物質、発光物質等があげられ、色素または色原体が好ましい。色素は比色方法により直接その濃度を定量できるので好ましい。
【００４８】
色素としては、例えば、アシッドイエロー３、アシッドイエロー２３、アシッドイエロー２５、アシッドイエロー３６、アシッドオレンジ５、アシッドオレンジ６、アシッドオレンジ７、アシッドオレンジ１０、アシッドオレンジ１９、アシッドオレンジ５２、アシッドグリーン１６、アシッドグリーン２５、アシッドバイオレット４３、アシッドブルー３、アシッドブルー９（ブリリアントブルーＦＣＦ）、アシッドブルー４０、アシッドブルー４５、アシッドブルー４７、アシッドブルー５９、アシッドブルー７４、アシッドブルー１１３、アシッドブルー１５８、アシッドレッド１、アシッドレッド２、アシッドレッド１４、アシッドレッド１８、アシッドレッド２７、アシッドレッド３７、アシッドレッド５１、アシッドレッド５２、アシッドレッド８７、アシッドレッド８８、アシッドレッド９２、アシッドレッド９４、アシッドレッド９５、アシッドレッド１１１、フードレッド１７、フードイエロー３、ベーシックイエロー１、ベーシックイエロー２、ベーシックイエロー１１、ベーシックオレンジ１、ベーシックオレンジ２２、ベーシックグリーン４（マラカイトグリーン）、ベーシックバイオレット３、ベーシックバイオレット４、ベーシックバイオレット１０、ベーシックブルー１、ベーシックブルー３、ベーシックブルー９、ベーシックブルー２４、ベーシックレッド１、ベーシックレッド２、ベーシックレッド５、ベーシックレッド９、ベーシックレッド１８などが挙げられる。
【００４９】
還元発色型色原体としては、例えば、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウム ブロミド（ＭＴＴ）、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム モノナトリウム塩（ＷＳＴ−１）、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム モノナトリウム塩（ＷＳＴ−３）などが挙げられる。
【００５０】
酸化発色型色原体としては、過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の共存下、単独で色素へ変換される色原体（以下、ロイコ型色原体とよぶ）と、二つの化合物が酸化的カップリングして色素を生成する色原体（以下、カップリング型色原体とよぶ）とがあげられる。
【００５１】
ロイコ型色原体としては、例えば、１０−Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン（ＣＣＡＰ）、１０−Ｎ−メチルカルバモイル−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン（ＭＣＤＰ）、Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン ナトリウム塩（ＤＡ−６４）、４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン、ビス［３−ビス（４−クロロフェニル）メチル−４−ジメチルアミノフェニル］アミン（ＢＣＭＡ）等が挙げられる。
【００５２】
カップリング型色原体としては、例えば、４−アミノアンチピリン（４−ＡＡ）や３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラジン等のカプラ−と、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’サクシニルエチレンジアミン（ＥＭＳＥ）、Ｎ−（３，５−ジメトキシフェニル）−Ｎ’サクシニルエチレンジアミン・ナトリウム塩（ＤＯＳＥ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリン・ナトリウム塩２水和物（ＴＯＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩（ＨＳＤＡ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン、Ｎ−スルホプロピルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピルアニリンプロピル−ｍ−アニジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−４−フルオロ−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩（Ｆ−ＤＡＯＳ）等のアニリン類との組合せや、４−ＡＡとフェノールや３−ヒドロキシ−２，４，６−トリヨウド酢酸等のフェノール類との組合せが挙げられる。
【００５３】
蛍光物質としては、ｐ−ヒドロキシフェニル酢酸、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸、クマリン等があげられる。
【００５４】
発光物質としては、例えばルミノール、イソルミノール、ルシゲニン、アクリジニウムエステル等の化合物があげられる。
【００５５】
本発明に用いうる生体試料には特に制限はなく、例えば全血、血漿、血清、髄液、唾液、尿、汗などが挙げられるが、全血、血漿、血清を用いることが好ましい。
【００５６】
また、生体試料の起源もヒトに限定されるものではなく、動物類、魚類、鳥類などであっても構わない。動物類としてはウマ、ウシ、ブタ、イノシシ、ヒツジ、ウサギ、タヌキ、キツネ、イヌ、ネコ、クマ、パンダなどが挙げられ、魚類としてはアナゴ、アユ、イワシ、イワナ、ウナギ、カツオ、キス、サケ、サバ、ハマチ、フグ、マグロなどが挙げられ、鳥類としてはニワトリ、ハトなどが挙げられる。
【００５７】
本発明において用いる定量用試料とは、一定量の指示物質を含有する一定容量の水性溶液と未知容量の生体試料とからなる溶液を指す。この定量用試料において未知容量の生体試料を溶解するための該一定量の指示物質を一定容量の水性溶液に含有した溶液を、以下、標準溶液とよぶ。
【００５８】
定量用試料は、容量を定量することなしに採取された未知容量の生体試料を一定量の指示物質を含有する一定容量の水性溶液と混合することにより調製されるか、または、未知容量の生体試料と一定容量の水性溶液とを混合した溶液に一定量の色原体を含有する一定容量の水性溶液を添加して調製される。従って、生体試料の容量を定量するための容器等を使用する必要がないので、生体試料採取現場で定量用試料が簡便に調製できる。また、定量用試料を調製するために使用する生体試料も微量で充分である。
【００５９】
標準溶液は、一定量の指示物質を一定容量の水性溶液と混合することにより調製されるか、または、一定容量の水性溶液に一定量の色原体を含有する一定容量の水性溶液を添加して調製される。
【００６０】
生体試料の取得方法は特に制限はなく、通常の方法で、例えば、血清の場合には全血をしばらく放置後、遠心分離することにより、血漿の場合には全血を膜分離等の分離操作により得ることが出来る。
【００６１】
本発明において、検査対象者自らが採血針を刺して血液を採取する等の自己採血方法等が好適に使用できる。しかも容量を定量することなく行えるので、定量用試料を調製する特別な技術を必要としないため、検査対象者自ら定量用試料を調製することができる。また、全血を直接一定容量の水性溶液に混合して調製した定量用試料は、必要に応じて遠心分離、膜分離等の分離操作により血球成分を分離した後、該定量用試料中の定量すべき成分を定量し得られる値と、下記に記載する希釈倍率算出方法で得られる希釈倍率とから、血漿または血清中の定量すべき成分の濃度を求める試料として使用することができる。
【００６２】
生体試料と一定容量の水性溶液の混合方法は特に限定はなく、上記の取得方法で得た試料を直接添加しても、あるいは、容器内に備わった分離手段を通じての間接的に添加してもよい。後者の添加方法としては、例えば、本発明の血液分離器具を用いて、全血から分離させた血漿を添加する方法が挙げられる。
【００６３】
定量用試料中の指示物質の希釈倍率は特にその範囲に制限はないが、２〜１００倍が好ましく、２〜５０倍がより好ましく、２〜２０倍が特に好ましい。
【００６４】
なお、一定容量の水性溶液が一定量の指示物質を含有していないときは、生体試料を混合した後に、一定量の指示物質を含有する一定容量の水性溶液を混合すればよい。このとき使用する水性溶液は、生体試料を混合するために使用する水性溶液と同一組成の溶液でもよいが異なった組成のものでもよい。
【００６５】
未知容量の生体試料中の定量すべき成分の定量は、標準溶液中の指示物質の濃度及び定量用試料中の指示物質の濃度を定量し生体試料の希釈倍率を求める工程並びに定量用試料中の定量すべき成分の濃度を定量する工程とを含有する。
【００６６】
生体試料中の定量すべき成分の濃度（Ｘ）は、前述の方法で調製された定量用試薬中の定量すべき成分の濃度（Ｙ）と定量用試料中の生体試料の希釈倍率（ａ）から式１により求めることができる。
【００６７】
【数１】
Ｘ＝ａＹ （式１）
本発明において、希釈倍率は下記のように求めることができる。
【００６８】
定量用試料を調製するのに使用した水性溶液容量をＶ₁、指示物質の量をＭ₁、生体試料の容量をＶ₂（但し、Ｖ₂は測定されない）とすると、該定量用試料中の指示物質の濃度Ｃ₂は、
【００６９】
【数２】
Ｃ₂＝Ｍ₁／（Ｖ₁＋Ｖ₂） （式２）
で表される。
【００７０】
一方、定量用試料を調製するのに使用した水性溶液（＝標準溶液）中の指示物質の濃度Ｃ₁は、下の式３で表される。
【００７１】
【数３】
Ｃ₁＝Ｍ₁／Ｖ₁ （式３）
なお、標準溶液は、生体試料から定量用試料を調製する方法において、生体試料を用いずに調製される溶液である。
【００７２】
未知容量の生体試料の定量用試薬中の希釈倍率（ａ）は、
【００７３】
【数４】
ａ＝（Ｖ₁＋Ｖ₂）／Ｖ₂ （式４）
であることから希釈倍率（ａ）は、Ｃ₁及びＣ₂の値から式５により求めることができる。
【００７４】
【数５】
希釈倍率（ａ）＝（Ｖ₁＋Ｖ₂）／Ｖ₂＝Ｃ₁／（Ｃ₁−Ｃ₂） （式５）
ここで、指示物質の濃度Ｃ₁とＣ₂は、指示物質が色素、色原体である場合には吸光度で、指示物質が発光物質である場合には発光強度で、指示物質が蛍光物質の場合には蛍光強度を計測することにより求められる。指示物質を吸光度により定量する場合には濃度と吸光度は比例するので、標準溶液及び定量用試料の指示物質の濃度と吸光度をそれぞれＣ₁とＥ₁、及びＣ₂とＥ₂とすると、
【００７５】
【数６】
Ｃ₂／Ｃ₁＝Ｅ₂／Ｅ₁ （式６）
が成り立つ。従って希釈倍率は、
【００７６】
【数７】
希釈倍率（ａ）＝Ｃ₁／（Ｃ₁−Ｃ₂）＝Ｅ₁／（Ｅ₁−Ｅ₂） （式７）
として求めることもできる。
【００７７】
以上のように希釈倍率は、Ｃ₁及びＣ₂値またはＥ₁及びＥ₂値により計算されうる。なおＣ₁またはＥ₁はあらかじめ既知の値に設定されていてもよいが、新たに調製した標準溶液を用いて定量することができるので、標準容液中の指示物質の量はあらかじめ既知の値に設定しなくてよい。すなわち、本発明では、生体試料と直接混合される溶液の容量、該溶液に指示物質が含有されているときはその指示物質の量もしくは濃度及び定量用試料を調製するために使用する指示物質を含有する溶液の容量、指示物質の量もしくは濃度は一定であれば既知でなくてもよく、任意のものが使用し得る。
【００７８】
指示物質の定量方法としては、指示物質の濃度が定量できる方法であれば特に限定はない。指示物質が色素の場合は、定量用試料そのものの吸光度を定量することができる。また、その他の場合には、定量用試料から一定量の試料を取り出し、その濃度を定量すべき指示物質の定量方法で定量する。定量に際し、吸光度を用いる場合には、指示物質の濃度に換算することなく直接、吸光度の値を用いることが出来る。
【００７９】
本発明において指示物質の濃度を測定する方法としては、比色法、発光法、蛍光法などが挙げられるが、比色法が特に好ましい。
【００８０】
比色法に用いる指示物質としては、例えば、前述の色素、色原体が挙げられる。色原体としては、還元発色型色原体及び酸化発色型色原体が挙げられる。還元発色型色原体を用いた場合の比色法としては、還元発色型色原体を、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ等の還元型補酵素、ジアホラーゼ及び１−メトキシー５−メチルフェナジウムメチルサルフェート等の電子キャリアーの作用により色素に変換し、生成色素の吸光度を分光光度計で測定する方法が挙げられる。酸化発色型色原体を用いた場合の比色法としては、酸化発色型色原体を過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の作用により色素に変換し、生成色素の吸光度を分光光度計で測定する方法が挙げられる。色原体を用いる場合には、酸化発色型色原体を用いる方法が好ましい。
【００８１】
色原体を指示物質として用いる場合には、色原体を次の方法により色素へ変換し、生成した色素の吸光度を測定する。還元発色型色原体を用いる場合には、還元発色型色原体がＮＡＤ（Ｐ）Ｈ等の還元型補酵素、ジアホラーゼ及び１−メトキシー５−メチルフェナジウムメチルサルフェート等の電子キャリアーにより色素へ変換され、生成した色素の吸光度が測定される。酸化発色型色原体を用いる場合には、酸化発色型色原体が過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質により色素へ変換され、生成した色素の吸光度が測定される。
【００８２】
蛍光法としては、過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質により前述の蛍光物質から生じた蛍光を蛍光光度計で測定する方法があげられる。
【００８３】
発光法としては、過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質により前述の発光物質から生じた光（フォトン）をルミノメータで測定する方法があげられる。
【００８４】
尚、酸化発色型色原体としてカップリング型色原体を用いる場合には、定量用試料中の指示物質として発色に与る２つの化合物のうちの一方の化合物が含有され、もう一方の化合物は別に保存される。
【００８５】
酸化発色型色原体を指示物質として用いる場合には、該酸化発色型色原体のモル数は過酸化水素のモル数よりも小さくすることが必要である。また、カップリング型色原体を指示物質として用いる場合には、該色原体のモル数は過酸化水素ともう一方の化合物のそれぞれのモル数よりも小さくすることが必要である。
【００８６】
酸化発色型色原体の色素への変換に使用する過酸化水素は、過酸化水素そのものであっても、物質から酵素により直接または間接的に生成するものであってもよい。過酸化水素を直接または間接的に生成するような物質と酵素の組み合わせとしては、例えば、コレステロールとコレステロールオキシダーゼ、尿酸とウリカーゼ、トリグリセライドとリポプロテインリパーゼ及びグリセロールオキシダーゼ、遊離脂肪酸とアシル−ＣｏＡシンセターゼ及びアシル−ＣｏＡオキシダーゼ、グルコースとピラノースオキシダーゼ、リン脂質とホスホリパーゼＤ及びコリンオキシダーゼ、クレアチンとクレアチナーゼ及びザルコシンオキシダーゼ、クレアチニンとクレアチニナーゼ、クレアチナーゼ及びザルコシンオキシダーゼ、乳酸とラクトースオキシダーゼ、無機リンとプリンヌクレオシドホスホリラーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、２，４−ジメトキシベンゾイルコリンとコリンエステラーゼ及びコリンオキシダーゼ、アリルアミンとモノアミンオキシダーゼ等が挙げられる。
【００８７】
定量用試料中の指示物質としての酸化発色型色原体を色素に変換するための試薬は、１試薬系または複数の試薬系での保存が可能である。複数の試薬系での保存が好ましく、２試薬系での保存がより好ましい。過酸化水素そのものを用いる場合は、過酸化水素とペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質との共存を避けるような２試薬形態が好ましい。また、過酸化水素が物質から酵素により直接または間接的に生成する場合には、物質と直接反応する酵素と該物質との共存を避けるような２試薬形態が好ましい。この酸化発色型色原体を色素に変換するための試薬の保存形態の具体例を以下に記す。しかし、保存形態はこれらの具体例に限定されるものではない。
【００８８】
定量用試料中の色原体：Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩（ＨＳＤＡ）
第１試薬：デタミナーＧＬ−Ｅ（グルコース測定用試薬：協和メデックス社製）の第１試薬からＨＳＤＡを除いた試薬＋グルコース
第２試薬：デタミナーＧＬ−Ｅの第２試薬
定量すべき成分としては、特に限定はないが、血清中の成分が好ましく挙げられる。また、定量すべき成分の定量は、定量すべき成分の定量法として確立されている一般的な方法により実施可能であり特に制限はないが、指示物質により実質的に影響されない定量方法が好ましい。
【００８９】
定量すべき成分と該成分の測定法の具体例を括弧内に記す。総タンパク（ビウレット法）、ＧＯＴ（ＪＳＣＣ法）、ＧＰＴ（ＪＳＣＣ法）、Ｌ−乳酸デヒドロゲナーゼ（ＳＳＣＣ法）、γ−ＧＴＰ（ＪＳＣＣ法）、クレアチニンキナーゼ（ＩＦＣＣ法）、コリンエステラーゼ（ｐ−ＨＢＣ法）、ＨＤＬコレステロール（酵素法）、ＬＤＬコレステロール（酵素法）、トリグリセライド（酵素法）、尿素窒素（酵素法）、クレアチニン（酵素法）、尿酸（酵素法）、グルコース（酵素法）、アルカリホスファターゼ（ＧＳＣＣ法）、アンモニア（酵素法）、シアル酸（酵素法）、セルロプラスミン（比色法）、遊離コレステロール（酵素法）、遊離脂肪酸（酵素法）、乳酸（酵素法）、リパーゼ（酵素法）、無機リン（酵素法）、モノアミンオキシダーゼ（酵素法）。
【００９０】
生体試料の採取及び保存に用いる容器または定量用試料を調製するための容器には、前述の水性溶液が正確に一定量含有している生体試料の添加のための密閉可能な開閉手段を有する容器を用いる。これにより検査対象者は医師や看護婦、臨床検査技師等の一定の有資格者または専門の技術者を煩わせることなく、自己採血等で得た生体試料を全血のまま、１つ１つ容量を定量することなく、適当な量だけ一定容量の水性溶液が封入された容器に添加し、あとは、中の溶液の蒸発及び漏洩を回避する手段を施して、然るべき場所（検査センターや病院）へ送付することにより定量してもらいたい成分の定量を依頼することができる。
【００９１】
このような容器としては、水性溶液が蒸発および漏洩を防止できる密閉可能な開閉手段を有している容器であれば特に制限はないが、例えば、スクリューキャップ式試薬ビン等が挙げられる。このような容器の具体例としては、前述の図１のものが挙げられるが、より簡便な容器として、図２７の容器が例示される。図２７は本発明に係わる生体試料保存用の容器または定量用試料調製用の容器を示し、該容器は生体試料を添加するための密閉可能な開閉手段を有する。以下、本図を参照しつつ、本発明の容器について説明する。
【００９２】
本容器は、実際に生体試料が添加される生体試料採取用容器４１、該生体試料採取用容器４１を安定に固定化するための脱着可能な生体試料採取用容器収納容器４３、該生体試料採取用容器収納容器４３を安定に固定化する内ぶた４４並びに該生体試料採取用容器４１及び該内ぶた４４を安定に固定化するための外ぶた４５からなる。該生体試料採取用容器４１内には一定容量の水性溶液４２が含有されている。また、該水性溶液４２の中には一定量の指示物質が含有されていてもよい。従って、該生体試料採取用容器４１は定量用試料調製用容器としても使用される。生体試料採取用容器４１の形状としては、特に限定はないが、直接、自動分析機のターンテーブルに装着可能な形状であることが好ましい。生体試料採取用容器収納容器４３は生体試料採取用容器４１を固定化し、該容器４１の転倒とそれによる水性溶液４２の漏洩を防止する。従って、該容器４３の形状としては容器４１を収納する部位と容器全体のすわりを良くする部位とを併せ持った形状が好ましい。内ぶた４４および外ぶた４５は該容器４１および該収納容器４３を密閉し、生体試料採取用容器４１内の水性溶液４２を封じ込める。内ぶた４４の形状としては、容器４３及び外ぶた４５のそれぞれにぴったり嵌まるような機能を有する形状が好ましい。外ぶた４５の形状としては、開閉機能を有し、内ぶた４４にぴったり嵌まる部位を有し、かつ、容器４１を密閉し、溶液４２の蒸発および漏洩を防止する部位を有する形状が好ましい。尚、容器４１に含有される水性溶液４２の容量としては、特に限定はないが、１００〜５０００μＬが好ましく、２００〜２０００μＬがより好ましい。
【００９３】
以下に、本発明の実験例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。尚、実験に使用した試薬、酵素類は下記の通りである。
【００９４】
グルコース定量試薬 デタミナーＧＬ−Ｅ（協和メデックス）、グルコース標準溶液（２００ｍｇ／ｄＬ、エイアンドティー）、生理食塩水（０．９％、自家調製）、イオン交換水（２μＳ／ｃｍ以下、オルガノ）。
【００９５】
【実施例】
実施例１ 指示物質としてＨＳＤＡを用いた場合の血清の希釈倍率算出
小試験管１１本（径：１０ｍｍ；長さ：７３ｍｍ）を用意し、それぞれの試験管に、デタミナーＧＬ−Ｅの試薬１−Ｂ（前処理剤溶解液）をイオン交換水で２倍希釈して調製したＨＳＤＡを含有する水性溶液１０００μＬを正確に分注した。ついで、試験管１〜１１にヒトプール血清（３０００ｒｐｍで遠心分離して得られた１０人分の血清をプールして保存したもの）を第１表に示したように、１０μＬ単位で正確に分注した。分注後、ミキサー（ＡＵＴＯＭＡＴＩＣ ＬＡＢＭＩＸＥＲ ＭＯＤＥＬ ＴＨ−２）で５分間攪拌した。
【００９６】
【表１】

【００９７】
ＨＳＤＡ含有する水性溶液中のＨＳＤＡ及び第１表に記載の１１サンプル中のＨＳＤをデタミナーＧＬ−Ｅを用いて色素に導きその吸光度を測定した。具体的には、ＨＳＤＡ含有する水性溶液及び第１表に記載の１１のサンプル（５μＬ）と４０ｍｇ／ｄＬグルコース水溶液（５０μＬ）を混合し３７℃で５分加温した後、デタミナーＧＬ−Ｅの試薬２−Ａ（酵素剤）を同試薬２−Ｂ（酵素剤溶解液）全量を加えて調製した試薬（５０μＬ）を添加し、さらに５分間３７℃で加温し、生成色素の吸光度を自動分析機Ｂｉｏ Ｍａｊｅｓｔｙ ＪＣＡ−ＢＡ１６５０（ＪＥＯＬ社製）にて、５９６ｎｍ主波長及び８８４ｎｍ副波長で吸光度を測定した。ＨＳＤＡ含有する水性溶液を使用した場合の吸光度Ｅ₁は０．４４８６（＝４４８６×１０^-4）であり、サンプル１〜１１の吸光度は第２表に示す通りであった。
【００９８】
Ｅ₁値及びそれぞれのＥ₂とからから希釈倍率〔＝Ｅ₁／（Ｅ₁−Ｅ₂）〕を算出し、理論希釈倍率と比較した。結果を第２表に示す。
【００９９】
【表２】

【０１００】
このように、試験管番号１の場合を除き、理論希釈倍率が６．０〜５１．０倍の範囲で理論希釈倍率と算出希釈倍率とのよい一致が見られた。
【０１０１】
実施例２ 希釈血清中の総タンパク質（ＴＰ）のビウレット法による定量。
指示物質としてアシッドブルー９（ブリリアントブルーＦＣＦ）を用いた血清の希釈倍率を算出し、該希釈血清中の総タンパク質（ＴＰ）をビウレット法により定量し、該血清中の総タンパク質（ＴＰ）を定量した。
【０１０２】
指示物質含有水性溶液としてアシッドブルー９（ブリリアントブルーＦＣＦ）を含有する０．１ｍｏｌ／Ｌ濃度のＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．７）溶液を調製した。この溶液を正確に１０００μＬずつ１０本の試験管に分注した。ついでヒト血清を第３表に示すように５０μＬ〜５００μＬまで５０μＬ単位でそれぞれ添加し、試験管番号１〜１０の定量用試料を調製した。
【０１０３】
血清を添加する前のアシッドブルー９を含有するＨＥＰＥＳ緩衝液の吸光度（Ｅ₁）及び血清を添加した定量用試料の６３０ｎｍでの吸光度（Ｅ₂）を定量した。Ｅ₁及びE₂値から希釈倍率を求めた。また、試験管番号１〜１０の定量用試料中の総タンパク（ＴＰ）をビウレット法により定量した。更に、各検体における希釈倍率値と総タンパク（ＴＰ）値とからヒト血清値を算出し、血清を用いて算出した総タンパク（ＴＰ）値との一致率を求めた。尚、Ｅ₁値（１０⁴倍した値）は８７０であり、直接血清を用いて定量した総タンパク（ＴＰ）値は６．９ｇ／ｄＬであった。結果を第３表に示す。
【０１０４】
【表３】

【０１０５】
このように、いずれの検体においてもよい一致率が観測されことから、本定量方法を用いた生体試料中の総タンパク（ＴＰ）の定量は希釈倍率３〜２１倍の範囲ではいずれの倍率でも有効であることが判明した。
【０１０６】
実施例３ 希釈血清中のＧＯＴのＪＳＣＣ法による定量
実施例２に記載の方法に従い調製した１０本の異なる希釈倍率の希釈血清検体中のＧＯＴをＪＳＣＣ法により定量した。尚、Ｅ₁値（１０⁴倍した値）は８７０であり、直接血清を用いて定量したＧＯＴは４８Ｕ／Ｌであった。結果を第４表に示す。
【０１０７】
【表４】

【０１０８】
このように、試験管番号１を除き、よい一致率が観測された。従って、本定量方法を用いた生体試料中のＧＯＴの定量は希釈倍率３〜１１倍の範囲ではいずれの倍率でも有効であることが判明した。
【０１０９】
実施例４ 希釈血清中の尿酸の酵素法による定量
実施例２に記載の方法に従い調製した１０本の異なる希釈倍率の希釈血清検体中の尿酸を酵素法、すなわち、尿酸をウリカーゼによりアラントインと過酸化水素とに変換後、生成した過酸化水素をペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリン及びＦ−ＤＡＯＳにより色素へ導き、各検体中の尿酸を定量した。尚、Ｅ₁値（１０⁴倍した値）は８７０であり、直接血清を用いて定量した尿酸値は４．８ｍｇ／ｄＬであった。結果を第５表に示す。
【０１１０】
【表５】

【０１１１】
このように、試験管番号１を除き、よい一致率が観測された。従って、本定量方法を用いた生体試料中の尿酸の定量は希釈倍率３〜１１倍の範囲ではいずれの倍率でも有効であることが判明した。
【０１１２】
実施例５ 希釈血清中の総コレステロールの酵素法による定量
実施例２に記載の方法に従い調製した１０本の異なる希釈倍率の希釈血清検体中の総コレステロールを酵素法により定量した。すなわち、エステル型コレステロールを化学修飾したコレステロールエステラーゼにより加水分解後、反応系中の遊離コレステロールをコレステロールオキシダーゼによりコレステノンと過酸化水素とに変換し、この過酸化水素をペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリン及びＤＯＳＥにより色素へ導くことにより各検体中の総コレステロールを定量した。尚、Ｅ₁値（１０⁴倍した値）は８７０であり、直接血清を用いて定量した総コレステロール値は１３７ｍｇ／ｄＬであった。結果を第６表に示す。
【０１１３】
【表６】

【０１１４】
このように、試験管番号１を除き、よい一致率が観測された。従って、本定量方法を用いた生体試料中の尿酸の定量は希釈倍率３〜１１倍の範囲ではいずれの倍率でも有効であることが判明した。
【０１１５】
実施例６
図２７に示すように、下記の組成の水溶液を１０００μＬ添加し密閉し、検査対象者が自らが採血し定量用試料を調製するための容器を製造した。
【０１１６】
溶液の組成
ＨＳＤＡ １．３ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ６．５） ０．１ｍｏｌ／Ｌ
実施例７
図２７に示すように、下記の組成の水溶液を１０００μＬ添加し密閉し、検査対象者が自らが採血し定量用試料を調製するための容器を製造した。
【０１１７】
溶液の組成
アシッドブルー９（ブリリアントブルーＦＣＦ） ０．０１８ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．７） ０．１ｍｏｌ／Ｌ
Ｂｒｉｊ−３５（３０％） ０．２９％（ｖ／ｖ）
【０１１８】
【発明の効果】
以上述べた如く本発明によれば、本発明は生体試料から該生体試料中の定量すべき成分の定量に使用する定量用試料を調製する方法、生体試料中の定量すべき成分を定量する方法、容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料を定量するまで保存するために使用する容器、または容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料から定量用試料を調製するために使用する容器が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施の形態を示す断面図である。
【図２】本発明に係る本体容器を示す断面図である。
【図３】本発明に係る本体容器を示す平面図である。
【図４】本発明に係る本体容器を示す底面図である。
【図５】本発明の限外濾過体の概略図である。
【図６】本発明に係る細管の部分斜視図である。
【図７】本発明に係る血漿採取容器の断面図である。
【図８】本発明に係る血漿採取容器の側面図である。
【図９】本発明に係る血漿採取容器の平面図である。
【図１０】本発明に係る血漿採取容器の底面図である。
【図１１】本発明に係る血球採取容器の断面図である。
【図１２】本発明に係る血球採取容器の側面図である。
【図１３】本発明に係る血球採取容器の平面図である。
【図１４】本発明に係る血球採取容器の底面図である。
【図１５】本発明に係る押込み蓋の断面図である。
【図１６】本発明に係る押込み蓋の側面図である。
【図１７】本発明に係る押込み蓋の平面図である。
【図１８】本発明に係る押込み蓋の底面図である。
【図１９】本発明において、血液採取容器部に血液を採取した状態を示す断面図である。
【図２０】本発明において、血液採取容器部に押込み蓋の押込み部を押込んでいる状態を示す断面図である。
【図２１】本発明において、血液採取容器部底部の薄壁が圧壊され、球状溶剤が流出している状態を示す断面図である。
【図２２】本発明において、押込み蓋の押込み部が最下部まで押込まれた状態を示す断面図である。
【図２３】本発明において、血球採取容器の初期状態を示す断面図である。
【図２４】本発明において、血球採取容器内に血球が流入し始めた状態を示す断面図である。
【図２５】本発明において、ピストンが一時的に上昇した状態を示す断面図である。
【図２６】本発明において、血球採取容器内に血球が流入完了した状態を示す断面図である。
【図２７】本発明の実施の形態を示す図である。
【符号の説明】
１ 血液分離器具
２ 本体容器
３ 限外濾過体
４ 血漿採取容器
５ 血球採取容器
６ 押込み蓋
７ 血漿採取容器着脱部
８ 血液採取容器部
９ 血球採取容器着脱部
１１ 血液排出用連通口
１１’ 血球導入用連通口
１２ 細管
１５ 貫通孔
２０ 薄壁
２１ 球状溶剤
２５ 血漿希釈溶液
２６ ピストン
２８ 空気層域
２９ 血球保護溶剤保有域
３０ 血球保護溶剤
３２ 押込み部
３８ 血液
３９ 血漿
４０ 血球
４１ 生体試料採取用容器
４２ 水性溶液
４３ 生体試料採取用容器収納容器
４４ 内ぶた
４５ 外ぶた

Claims (2)

1. 生体試料中の定量すべき成分の定量方法であって、
   １）容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料と前記生体試料に含有されない成分を含む一定量の指示物質を含有する一定量の水性溶液とからなる定量用試料を調製する工程、
   ２）該一定量の指示物質を含有する一定量の水性溶液中の指示物質の濃度（Ｃ₁）と該定量用試料中の指示物質の濃度（Ｃ₂）とから該生体試料の希釈倍率（ａ）を求める工程、
   ３）該定量用試料中の定量すべき成分の濃度（Ｙ）を求める工程、
   ４）上記２）で求めた生体試料希釈倍率（ａ）と上記３）で求めた定量用試料中の定量すべき物質の該濃度（Ｙ）とから生体試料中の定量すべき成分を決定する工程とを含むことを特徴とする定量方法。
2. 前記指示物質が色素、色原体、蛍光物質及び発光物質から成る群の少なくとも１つから選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。

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