[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

JP3530526B2 - ＨＳＶ糖蛋白質ｇＤおよび３脱アシル化モノホスホリルリピッドＡからなる単純ヘルペスワクチン - Google Patents

ＨＳＶ糖蛋白質ｇＤおよび３脱アシル化モノホスホリルリピッドＡからなる単純ヘルペスワクチン

Info

Publication number
JP3530526B2
JP3530526B2 JP50598492A JP50598492A JP3530526B2 JP 3530526 B2 JP3530526 B2 JP 3530526B2 JP 50598492 A JP50598492 A JP 50598492A JP 50598492 A JP50598492 A JP 50598492A JP 3530526 B2 JP3530526 B2 JP 3530526B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
rgd
micrograms
mpl
hsv
alum
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP50598492A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH06505727A (ja
Inventor
フランコット、ミリアン
プリエール、ジャン−ポール
スラウィ、モンセフ
ギャルコン−ジョンソン、ナタリー・マリー−ジョセフ・クロード
Original Assignee
スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム）
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10691946&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JP3530526(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） filed Critical スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム）
Publication of JPH06505727A publication Critical patent/JPH06505727A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3530526B2 publication Critical patent/JP3530526B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
    • C12N2710/16634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規ワクチン製剤、その調製法および治療に
おけるその使用に関する。特に、本発明は、単純ヘルペ
スウイルス感染症、より詳細には、単純ヘルペス２型ウ
イルス（HSV−２）感染症の治療のための新規処方物に
関する。
HSV−２は、陰部疱疹の主な病因物質であり、HSV−１
（口唇ヘルペスの原因物質）と共にその両方の急性疾患
を誘発し、主に神経節細胞において潜伏感染を確立する
能力を特徴とする。
陰部ヘルペスはアメリカ合衆国だけでも約500万人が
かかっていると推定されており、毎年50万の臨床例が記
録されている（一次および再感染）。一次感染は典型的
には思春期以降に起こり、痛みを伴う皮膚病巣が局所的
に見られることを特徴とし、これは２から３週間続く。
一次感染の後６ヵ月以内で50％の患者が病気が再発する
であろう。患者の約25％で毎年10から15回再発するかも
しれない。免疫抵抗性減弱の患者においては、通常の患
者におけるより統計的に高頻度の再発の発生率が高い。
HSV−１およびHSV−２の両方のウイルスはウイルス表
面に位置する多くの糖蛋白質成分を有する。これらはg
A、gB、gC、gDおよびgEなどである。
糖蛋白質Ｄはウイルス膜上に位置し、さらに感染細胞
の細胞質にも見られる（アイゼンバーグ・アール・ジェ
イ（Eisenberg R.J.）ら、ジャーナル・オブ・ウイロロ
ジー（J of Virol）1980 35 428−435）。これはシグナ
ルペプチドを含む393個のアミノ酸からなり、分子量が
約60kDである。全HSVエンベロープ糖蛋白質のうち、こ
れはおそらく最もよく形質化されているものである（コ
ーエン（Cohen）ら、ジャーナル・オブ・ウイロロジー
（J.virology）60 157−166）。in vivoではウイルスの
細胞膜への付着において中心的役割を果たすことが知ら
れている。さらには、糖蛋白質Ｄはin vivoで中和抗体
を惹起しうると示されている（アイング（Eing）ら、ジ
ャーナル・オブ・メディカル・ウイロロジー（J.Med.Vi
rology）127:59−65）。しかし、患者血清中において中
和抗体価が高くても、潜在的HSV−２ウイルスはなお再
活性化され得、病気の再発を誘発しうる。中和抗体のみ
を誘起する能力ではこの病気を適切に制御するには不十
分である。病気の再発を予防するためには中和抗体だけ
でなくＴ細胞により媒介される細胞性免疫もまた刺激す
るためのワクチンが必要である。本発明はこれらの目的
を達成するものである。
本発明は３−ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピッド
Ａ（3D−MPL）（モノホスホリルリピッドＡの脱アシル
化誘導体）と結合したHSV糖蛋白質Ｄまたはその免疫学
的成分、および適切な担体を含むワクチンを提供する。
典型的には、糖蛋白質ＤはHSV−２由来のものである。
担体は水中油型エマルジョン、またはミュウバン（Alu
m）であってもよく、3D−MPLが用量当たり10マイクログ
ラムから100マイクログラム、好ましくは25から50マイ
クログラムの範囲で存在し、抗原は単位用量典型的には
２から50マイクログラムの範囲で存在する。
3D−MPLはイギリス特許第2220211号（RIBI）に記載さ
れた方法にしたがって得ることができる。
本発明の具体例は１〜306個の天然の糖蛋白質に膜ア
ンカー領域を欠く截形蛋白質のＣ末端にアスパラギンお
よびグルタミンを添加したアミノ酸を含む308個のアミ
ノ酸の截形HSV−２糖蛋白質Ｄである。蛋白質のこの形
態はシグナルペプチドを含み、これは開裂して283個の
成熟アミノ酸蛋白質が得られる。チャイニーズハムスタ
ー卵巣細胞におけるこのような蛋白質の産出はジェネン
ティック（Genetech）のヨーロッパ特許EP−Ｂ−139417
号に記載されている。
成熟截形蛋白質は、好ましくは、本発明のワクチン製
剤において用いられ、rgD2tで示される。
HSV抗原は化学的に、あるいは別の方法で粒状担体に
結合していてもよい。特に好ましい方法はＢ型肝炎表面
抗原の表面に位置する遊離スルフィドリル基を介して粒
状Ｂ型肝炎表面抗原に化学的に結合するものである。係
属しているイギリス特許出願第9027623.9号参照。
本発明の処方物は抗原量が非常に低くても（例えば、
rgD2t ５マイクログラムのように低くても）、防御免
疫を誘起するのに非常に有効である。
該処方物は一次感染に対して優れた防御を提供し、特
異的体液性（中和抗体）およびエフェクター細胞性（DT
H）免疫応答の両方が有利に刺激される。
非毒性水中油型エマルジョンは、好ましくは、水性担
体中、例えばスクアランまたはスクアレンなどの非毒性
油、ツィーン80（Tween 80）などの乳化剤を含有する。
水性担体は、例えば、リン酸緩衝生理食塩水であっても
よい。
本発明は、さらなる態様において、本明細書中に記載
するような医学的治療、特に単純ヘルペスウイルス感染
症の治療または予防に用いるワクチン製剤を提供する。
本発明のワクチンは、免疫防御量のHSV gDまたはその
免疫学的フラグメントを含有し、これは常套手段により
調製される。
ワクチン調製物は、一般に、「ワクチンの新傾向と開
発（New Trends and Developments in Vaccines）」、
ボラー（Voller）ら編、ユニバーシティー・パーク・プ
レス（University Park Press），ボルチモア，メリー
ランド州,U.S.A.1978に記載されている。リポソーム中
への封入は、例えば、フラートン（Fullerton）、アメ
リカ合衆国特許第4,235,877号に記載されている。蛋白
質の巨大分子との結合は、例えば、リックハイト（Likh
ite）、アメリカ合衆国特許第4,372,945号およびアーマ
ー（Armor）ら、アメリカ合衆国特許第4,474,757号に記
載されている。
各ワクチン用量中の蛋白質の量は、典型的ワクチンに
おいて著しい副作用を起こすことなく免疫防御応答を誘
起する量として選択される。このような量は、用いる特
異免疫原に依存する。一般に、各用量は、１〜1000マイ
クログラム、好ましくは２〜100マイクログラム、最も
好ましくは４〜40マイクログラムの蛋白質を含むと考え
られる。特定のワクチンに対する最適量は抗体価および
対象における他の応答の観察を含めた標準的研究により
確かめることができる。初回接種の後、約４週間内に対
象は追加免疫を受けてもよい。
HSV感染症にかかりやすい個人の予防接種に加え、本
発明の医薬組成物はHSV感染症にかかっている患者の免
疫療法に用いることができる。
本発明のさらなる態様において、本明細書に述べるよ
うな製造法が提供され、この方法は、HSV−２糖蛋白質
Ｄまたは免疫学的フラグメントを担体、例えば水中油型
エマルジョンまたはミョウバン、および3D−MPLと混合
することからなる。
組み換え単純ヘルペスウイルス糖蛋白質Ｄサブユニット
ワクチンのアジュバント効力の比較 この研究において、単純ヘルペスウイルス（HSV）２
型由来の組み換え糖蛋白質Ｄ（rgD2t）の防御免疫を向
上させる数種のアジュバントの能力をモルモットモデル
において評価した。試験したアジュバントは水酸化アル
ミニウム、３デアシル−モノホスホリルリピッドＡと結
合した水酸化アルミニウム、および水中油型エマルジョ
ン中にデリバーされた３デアシル−モノホスホリルリピ
ッドＡである。
1.抗原の記載 HSV rgD2tは、トランスフェクションしたチャイニー
ズハムスター卵巣（CHO）細胞中で産生した遺伝子操作
した組み換え体截形蛋白質である（ヨーロッパ特許第01
39417号）。
2.抗原−アジュバント調製物および免疫化スケジュール モルモットモデルにおいて数種のrgD2t処方物の防御
免疫を評価するために２種の別の実験を行った。第一の
実験において、モルモットの群を以下に記載するように
して調製した４種のアジュバント処方物中少量の抗原
（rgD2t ５マイクログラム）で３回免疫化した。最後
の免疫化の２週間後、HSV2型を用いて膣内に抗原投与し
て一次および再発性HSV2症の発生をモニターした。第二
の実験においては、これらの処方物をもっと大きな動物
群においてさらに評価した。抗原量およびアジュバント
組成物などのこれらの処方物の効力に影響する因子も試
験した。
2.1.抗原−アジュバント調製物 第一の実験において、以下のアジュバント調製物を用
いてモルモットを免疫化した。各投与量（５マイクログ
ラム）を0.25mlの用量で投与した。
2.1.1.rgD2t/ミョウバン（水酸化アルミニウム） ミョウバンはSuperfos（Alhydrogel,（Boehimte）Sup
erfos、Denmark）から入手した。５マイクログラムの精
製rgD2tを４℃にて0.25mlの150mM NaCl 10mMリン酸緩衝
液（pH6.8）中0.25mg当量のAl3+に対応する水酸化アル
ミニウム（ミョウバン）上に一夜吸着させた。
2.1.2.rgD2t/水酸化アルミニウム＋3D−MPL 3D−MPLはRibi Immunochem Research,Inc.から入手し
た。2.1.1に記載したように５マイクログラムのgD2tを
ミョウバン上に一夜吸着させた後、アジュバント調製物
を遠心分離して、その上清を除去した。ついで100マイ
クログラムの3D−MPLを含有する等容量の吸着緩衝液を
ミョウバン結合のrgD2tに添加した。
両方のrgD2t/Alum調製物に関して、98％以上のrgD2t
が水酸化アルミニウムアジュバント中に取り込まれてい
るのが判明した。
2.1.3.rgD2t/水中油型エマルジョン（Ｒ）中の3D−MPL スクアレン油および0.08％Tween80に添加した12％w/v
レシチンを用いて水中油型エマルジョンを調製した。3D
−MPLを最終の望ましい濃度より100倍高い濃度で添加し
た。ついで、１％のこの調製物を、水性相中、５マイク
ログラムのrgD2tと0.25ml容量中で混合して100マイクロ
グラムの3D−MPLを含有する１％水中油型エマルジョン
を得た。
上記のようにして調製した同様のアジュバント調製物
で異なる量のrgD2tおよび／または免疫促進物質を含有
するものを第二の実験において用いた。これを合計量0.
5ml投与した。これらの処方物を以下に記載する。
rgD2t/Alum:投与量0.5mlあたり５または20マイクログ
ラムのrgD2t;0.5mg当量のAl3+ rgD2t/Alum＋3D−MPL:投与量0.5ml当たり５または20
マイクログラムのrgD2t;0.5mg当量のAl3+;50マイクログ
ラムの3D−MPL rgD2t/o/w型エマルジョン（Ｒ）中の3D−MPL:5または
20マイクログラムのrgD2tを前記（2.1.3）のようにして
１％o/w型エマルジョン中で配合する。投与量0.5mlは１
％/o/w型乳剤中、５マイクログラムまたは20マイクログ
ラムのrgD2t、50マイクログラムの3D−MPLを含有する。
rgD2t/o/w型エマルジョン（Ｓ）中の3D−MPL:以下の
ようにしてビヒクルを調製する:0.4％（v/v）Tween80を
含有するリン酸緩衝生理食塩水（PBS）に５％（v/v）Pl
uronic L121および10％スクアランを添加し、得られた
混合物をマイクロフルイダイザー（M/110型、Microflui
dics Corp.）で10回流動化して、得られた混合物がミク
ロン以下の粒子のみを含むようにする。50マイクログラ
ムの3D−MPLを次にエマルジョンに添加する。3D−MPLを
含有する１容量のこのエマルジョンを当容積の２倍に濃
縮した抗原と混合し、簡単に撹拌して成分が完全に混合
されるようにする。最終調製物は投与量0.5ml当たり0.2
％ Tween80、2.5％Pluronic L121、５％スクアラン、50
マイクログラムの3D−MPLおよび５マイクログラムまた
は20マイクログラムのrgD2tを含有する。
2.2.免疫スケジュール 雌のハートレーモルモット群（200〜250グラム）を４
種の異なるアジュバント処方物中に配合した５マイクロ
グラムのrgD2tを用いて０、28および95日目の３回免疫
化した。
免疫化は0.25mlの用量を皮下注射することにより行っ
た。対照動物は同様の方法でアジュバントのみを用いて
注射するかまたは処理しなかった。
種々の群を以下のようにして免疫化した： 第１群（４匹）:5マイクログラムのrgD2t/o/w型エマ
ルジョン（Ｒ）中の3D−MPL（100マイクログラム） 第２群（４匹）:5マイクログラムのrgD2t/Alum＋3D−
MPL（100マイクログラム） 第３群（４匹）:5マイクログラムのrgD2t/Alum 第４群（５匹）:Alumのみ 第５群（５匹）:3D−MPL（100マイクログラム）のみ 第６群（８匹）：処理せず 以下に記載するようなELISAおよび中和検定による抗
体決定のために被験動物を２週間ごとに採血した。
異なる処方物も遅延型過敏性応答の誘起により測定さ
れるＴ細胞性免疫を誘起する能力に関して試験した。異
なるrgD2t処方物により誘起される体液性および細胞性
免疫応答の評価に用いたリードアウトを以下に記載す
る。
rgD2t処方物により誘起される防御免疫を比較するた
めに、全てのモルモットを105プラーク形成単位（pfu）
のHSV2、MS株を最終免疫化の２週間後に膣内投与した。
被験動物を毎日急性感染症の徴候および再発性ヘルペス
の形跡に関して観察した。膣スワブサンプルをウイルス
投与の５日後に回収し、感染性ウイルスに関して滴定し
た。
モルモットの膣内モデルの詳細を以下に記載する。
第二の実験において、以下のrgD2t処方物の免疫原性
を、もっと大きな動物群で評価した。２種の抗原量を比
較し（５および20マイクログラム）、異なったアジュバ
ント組成物を試験した。50マイクログラムの3DMPLを用
いて、その効果を予め用いた100マイクログラムの用量
と比較した。
雌のハートレーモルモットの群を以下のように、１、
28および84日目で３回免疫化した： 第Ｉ群（８匹）:20マイクログラムのrgD2t/3D−MPL
（50マイクログラム）o/w型エマルジョン（Ｒ） 第II群（８匹）:5マイクログラムのrgD2t/3D−MPL（5
0マイクログラム）o/w型エマルジョン（Ｒ） 第III群（10匹）:20マイクログラムのrgD2t/3D−MPL
（50マイクログラム）o/w型エマルジョン（Ｓ） 第IV群（10匹）:5マイクログラムのrgD2t/3D−MPL（5
0マイクログラム）o/w型エマルジョン（Ｓ） 第Ｖ群（10匹）:20マイクログラムのrgD2t/Alum＋3DM
PL（50マイクログラム） 第VI群（10匹）:5マイクログラムのrgD2t/Alum＋3DMP
L（50マイクログラム） 第VII群（４匹）:Alum＋3D−MPL（50マイクログラ
ム）のみ 第VIII群（４匹）:3D−MPL（50マイクログラム）o/w
型エマルジョン（Ｒ）のみ 第IX群（８匹）：処理せず 0.5mlの用量で免疫化した。対照群は同様の方法で、
アジュバントのみを用いて免疫化するか（第VII群およ
び第VIII群）または処理しなかった（第IX群）。
最終群（第Ｘ群）を0.25mlの用量中100マイクログラ
ムの3D−MPLを含有するrgD2t Alum＋3D−MPL処方物を用
いて最初の予防実験において記載した方法にしたがって
免疫化した。
第Ｘ群（10匹）:5マイクログラムのrgD2t/Alum＋3DMP
L（100mg） 以下に記載するようなELISAおよび中和検定による抗
体決定のために被験動物を２週間ごとに採血した。２回
目の免疫化の後、膣内洗浄物を集め、gD2t特異性全体的
抗体（IgGクラスの抗gD2t抗体）の存在に関して検定し
た。モルモットに105pfuのHSV2（MS株）を最終免疫化の
２週間後に膣内投与した。抗原投与後、被験動物を毎日
急性感染症の徴候（抗原投与の４〜12日後）および再発
性ヘルペス症の形跡（抗原投与の13〜39日後）に関して
モニターした。
3.リードアウト rgD2t処方物の接種により誘起される特異抗体および
細胞性応答を評価するために数種のリードアウトを設定
した。これらの処方物の防御値をモルモット膣内モデル
において評価した。
3.1.ELISA ELISAは、モルモット血清および膣洗浄物においてコ
ーティング抗体としてrgD2tを用いてgD−特異性抗体を
検出し、定量することを目的とする。
3.1.1.血清中のrgD2t特異性IgD抗体の検出 抗原および抗体溶液を各ウェルにつき50マイクロリッ
トル用いた。抗原をPBS中最終濃度１マイクログラム/ml
に希釈し、96ウェルマイクロタイタープレート（Maxiso
rp Immuno−Plate、Nunc、Denmark）のウェルに４℃に
て一夜吸着させた。ウェルを次にPBS Tween 0.1％（洗
浄緩衝液）を用いて５回洗浄し、１％牛血清アルブミ
ン、４％新生仔ウシ血清および0.1％Tween（飽和緩衝
液）を含有するPBSを用いて37℃にて１時間培養した。
飽和緩衝液中３倍希釈の血清（1/100希釈から始める）
をrgD2tをコートしたウェルに添加し、室温にて２時間
培養した。プレートを前記のようにして洗浄し、飽和緩
衝液中1/3000に希釈したビオチン複合ヒツジ抗モルモッ
トIgG（IgG1およびIgG2特異性、Serotec、Sopar、Bioch
em、Belgium）を各ウェルに添加し、１時間30分37℃に
て培養した。洗浄段階の後、飽和緩衝液中1/1000に希釈
したストレプタビジン−ビオチニル化ペルオキシダーゼ
複合体（Amersham、イギリス）を添加し、37℃にて30分
間培養した。プレートを前記のようにして洗浄し、ｏ−
フェニレンジアミン（Sigma）0.04％H2O20.03％の0.1M
クエン酸緩衝液（pH4.5）中溶液とともに培養した。
H2SO42Mを添加することにより15分後に着色反応を停
止させ、吸光度は492nmで読み取る。
ELISA価を吸光度（最大吸光度の50％に等しい492nmで
測定した光学密度（中点力価））を与える血清希釈度の
逆数と定義する。
ELISA価をコンピュータープログラムを用いた４変数
直線回帰分析により計算する。
3.1.2.膣洗浄物におけるrgD2t特異性IgG抗体の検出 膣洗浄物を以下のようにしてELISAによりまずその総I
gG含量に関して校正する。Maxisorp Immunoプレートを
一夜４℃にて１マイクログラム/ml（50マイクロリット
ル／ウェル）のPBS中に希釈した精製ヤギ抗モルモットI
gG（Sigma、Belgium）でコートする。プレートを洗浄
し、前記のように飽和緩衝液と共に培養する。膣洗浄液
を飽和緩衝液中２倍希釈液（1/100希釈度で始める）で
連続希釈し、プレートに添加する。精製モルモットIgG
の標準曲線は各プレート中に包含される（２倍希釈100n
g/ml濃度から始める）。
室温で２時間インキュベーションした後、プレートを
前記のようにして洗浄し、飽和緩衝液中1/1000に希釈し
たモルモットIgG1およびIgG2（Serotec、Sopar、Bioche
m、Belgium）に関して特異的なビオチン複合ヒツジ抗体
を各ウェルに添加し、37℃にて１時間30分インキュベー
ションする。次の工程（ストレプタビジン−ビオチニル
化ペルオキシダーゼ複合体の添加および発色）は前記
（3.1.1.）のとおりである。
膣洗浄物中に存在する総IgG濃度をIgG標準曲線から、
コンピュータープログラムを用いた４変数単一直線回帰
分析により求める。
総IgG含量の校正の後、抗gD抗体血清定量に関して記
載したのと同じELISAを用いてrgD2tに関して特異的なIg
G抗体の存在に関して膣洗浄物を試験する。結果を、0.5
マイクログラム/ml総IgG当たりの492nmで測定した光学
密度で表わす。
3.2.中和検定 96ウェル型中和検定は以下のようにして行う。
試験するサンプルの連続２倍希釈物を96ウェルプレー
ト（各ウェルにつき25ulの各血清希釈物、二重反復試
験）中にて直接調製する。4000pfuのウイルスHG52およ
び補体（ウェル中最終希釈度1/100）を含有する混合物5
0マイクロリットルを各ウェルに添加する。プレートを3
7℃にて１時間インキュベーションする。４×105細胞/m
lの100マイクロリットルのBKH21細胞懸濁液を次に各ウ
ェルに添加する（４×104細胞/ml）。プレートを1000rp
mで５分間遠心分離し、７％CO2の存在下で37℃にて５日
間インキュベーションする。
この後、培養物を静かに除去し、100マイクロリット
ルのクリスタルバイオレット溶液（10％メタノール、90
％H2O、0.3％クリスタルバイオレット）を各ウェルに添
加し、室温にて20分間インキュベーションする。次にプ
レートを水道水でよく洗浄する。プラークの存在は、顕
微鏡により容易に観察できる。
中和価はウイルスプラークが観察されないような（10
0％細胞変性効果の防止）最高血清希釈度で測定する。
この時点で完全な細胞変性効果（100％の細胞単層溶
解）が対照ウェルで観察されることに留意することが重
要である。
3.3.遅延型過敏性（DTH） 異なるrgD2t処方物もその遅延型過敏性応答の誘起と
して測定されるＴ細胞特異性免疫応答を誘起する能力に
ついて試験した。
第一の実験用に処方したアジュバント処方物をこの研
究において用いた。この調製物は0.25mlあたり５マイク
ログラムのrgD2tを含有する。免疫化スケジュールは以
下のとおりである：一次免疫化:0.25mlのワクチン製剤
を筋肉内投与；追加免疫:0.25mlのワクチン製剤を21日
後に筋肉内投与；皮膚試験:5マイクログラムのrgD2tを
８日後に皮内投与（食塩水中）。モルモットはすべて対
照として食塩水で皮膚試験した。
加えて、対照モルモット（非免疫化動物）をrgD2tで
皮膚試験した。皮内注射した部位の紅斑および硬結を24
および48時間後にモニターした。
3.4.モルモット膣内モデル HSV生殖器感染症に関するモルモットモデルはエル・
アール・スタンバリー（LR Stanberry）ら（J.of Infec
tious Diseases 1982,146:397−403;Intervirology 198
5,24:226−231）により記載されている。
簡単には、最終免疫化の２週間後、モルモットに105p
fuのHSV2 MS株を膣内点滴注射して投与する。一次感染
の臨床的過程を抗原投与後12日間外生殖器皮膚病巣の発
生率および程度を毎日観察することによりモニターす
る。
膣スワブをウイルス投与の５日後に回収し、以下に記
載するようにプラーク検定により感染性HSV2を滴定す
る。ついで、動物を13から60日まで毎日再発性ヘルペス
病巣の形跡について調べる。外生殖器皮膚のヘルペス病
巣を、０から４までの病巣評点スケールを用いて定量化
する（０＝病巣または赤みがない;0.5＝赤くなってい
る;1＝水疱;1.5＝４個以上の水疱;2＝大きな水疱;2.5＝
２の水疱の癒合によって出来た数個の大きな水疱;3＝水
疱の大きさおよび数が増加;3.5＝生殖器皮膚の表面が全
部病巣で覆われる;4＝浸軟を伴う潰瘍化病巣）。
異なるrgD2tワクチンにより得られる防御の程度を以
下に定義する基準にしたがって評価する。
原発病に対する防御（０〜12日） 次のような病巣が見られたら動物は防御されなかった
と見做す： −あらゆる時点で１以上の赤い部分がある場合； −少なくとも連続して３日間同じ部分に１個の赤い部分
が存在する場合（病巣評点0.5）； −１個又は数個の水疱（病巣評点≧１）。
再発病に対する防御（13〜60日） 連続して少なくとも２日間病巣評点が0.5点を記録す
るかまたは１日でも病巣評点が≧１の場合、動物は再発
病に関して陽性と評価した。再発病のエピソードの前後
は病巣又は赤みはない。
動物に関して病巣の程度を一次感染の期間（１〜12
日）中測定された評点の合計として計算する。病巣の発
生は、観察期間（１〜12日（原発病）または13〜60日
（再発病））中、１以上の病巣を示す動物の数を示す。
3.5.膣スワブにおけるウイルス滴定 膣スワブをウイルス投与の５日後に回収する。膣円蓋
を予め２％牛胎仔血清、2mM Lグルタミン、100U/mlペニ
シリン、100マイクログラム/mlストレプトマイシン、10
0マイクログラム/mlゲンタマイシンおよび１マイクログ
ラム/mlアムホテリシンＢを追加したBasal Eagle培地
（スワブ培地）で予め湿らせたアルギン酸カルシウムを
付けたスワブでふく。
各スワブをほぐし、1mlのスワブ培地を含む滅菌12×7
5mm 5mlポリアロマー試験管中にいれる。試験管を次に
撹拌してウイルスを取りだし、使用前まで凍結させる。
滴定の為に、５×105細胞／ウェルを入れた６ウェルの
培養プレートを一夜37℃にてインキュベーションする。
試験管を解凍してスワブ培地中連続希釈のサンプルを調
製する。６ウェル中の培地を除去した後、各サンプル希
釈液200マイクロリットルを細胞単層上二重反復試験物
に移し、１時間37℃に保つ。1.5％カルボキシメチルセ
ルロースを含有する培地4mlを各ウェルに添加する。次
にプレートを37℃にて２日間インキュベーションする。
このインキュベーション期間の後、培地を静かに除去
し、クリスタルバイオレットの溶液（10％メタノール、
90％H2O、0.3％クリスタルバイオレット）1mlを各ウェ
ルに15分間で添加する。プレートを次によくすすぎ、プ
ラークを計測する。HSV2価をpfu/mlで表わす。
4.結果 最初の実験においては、モルモットのグループを４種
類の異なる処方物中に配合した低用量の抗原（５マイク
ログラムのrgD2t）で免疫化した。この準最適抗原量を
選択して、膣内HSV2接種（予防試験）の前にモルモット
に投与した場合、原発および再発性HSV病に対して防御
を与えるより有効なrgD2tアジュバントの組み合わせを
選択する。
4.1.体液性免疫の誘起 第１表に示すように、rgD2t/Alumワクチンで免疫化し
た群に比べて免疫促進物質として3D−MPLを含有するrgD
2t処方物で予防接種した群は血清中でより高いELISAお
よび中和価を示した。良好な平均中和価は、rgD2t 3D−
MPLo/w（Ｒ）またはrgD2t Alum 3D−MPLで３回免疫化し
た後に誘発される。
4.2.エフェクターＴ細胞応答（DTH）誘起 皮膚試験の結果（第２表）から、3D−MPL o/w型エマ
ルジョン中に配合したrgD2tが最も強いDTH応答を誘起す
ることがわかる。特異的DTH応答もrgD2t Alum 3D−MPL
により誘起される。マウスにおいて行った同様の実験か
らも、Alum＋3D−MPLと組み合わせたrgD2tが、rgD2t Al
um処方物と対照的に、in vivoエフェクターＴ細胞応答
を誘起するのに非常に有効であることが判明した。
4.3.HSV原発病に関する予防接種の効果 三回目の免疫化の２週間後、モルモットにHSV2を膣内
投与する。一次HSV2感染症の臨床的およびウイルス学的
経路に関する予防接種の効果を第１図に示し、第３表に
要約する。感染し、急性原発病にかかった対照群（第４
〜６群）に比べて、rgD2t 3D−MPL o/w処方物で予防接
種した動物はすべ皮膚病巣の発生および程度によりモニ
ターされるヘルペス病を示さなかった。さらには、これ
らの動物は抗原投与の５日後での膣のウイルス力価によ
り測定される膣管中でウイルスの複製を示さなかった。
rgD2t/Alum 3D−MPLで予防接種した群において非常によ
く似た結果が得られた。この群は観察期間中ヘルペス水
疱が見られなかった（病巣評点＜１）。さらには、採集
した膣スワブ中でウイルスの複製はほとんど検出されな
かった。対照的にalum上に吸着されたrgD2t動物は余り
防御されなかった（皮膚病巣発生率75％）。
4.4.HSV再発症に関する予防接種の効果 結果を第１図に示し、第４表に要約する。
3D−MPLを含有するrgD2t処方物を用いた予防接種（第
１および２群）により再発性ヘルペス病の発生は明らか
に変化した。２つの群の再発エピソードおよび再発日数
は対照またはrgD2t Alum処理群に比べて著しく少ない。
3D−MPLを含有する予防的rgD2tワクチンの効力に影響
するファクターをさらに評価するために、さらに多数の
モルモットについて第２の実験を行った。
２種の抗原量（５および20マイクログラム）を比較
し、異なるアジュバント組成物を試験した。３種の免疫
化を０、28および84日に行った。動物は、ELISAおよび
中和検定による各抗体測定のために２週間毎に採血し
た。膣洗浄物を二回目の免疫化の後に採集し、rgD2tに
関して特異的な全身性抗体の存在について試験した。
体液性免疫の誘起 結果（第５表）から3D−MPLを含有するrgD2t処方物は
すべてモルモットの血清において高いELISAおよび中和
価を刺激できることが判明した。
３回の免疫化の後に誘起されるELISAおよび中和価の
平均は、５マイクログラムまたは20マイクログラムのgD
2tを含有するrgD2t処方物で予防接種した群の血清にお
けるものと非常に似ている。50マイクログラムの3D−MP
L（第VI群）または100mgの3D−MPL（第Ｘ群）を含有す
るrgD2t Alumで免疫化した群（第Ｘ群）において測定さ
れる体液性応答において著しい差はなかった。
全身性抗rgD2t抗体（IgGクラス）がすべての予防接種
した群の膣洗浄物中において検出できたことに留意する
ことは重要である。この粘膜に存在する抗rgD2t抗体応
答は、一次感染中、生殖路における感性ウイルスの負荷
を減少させることにより重要な防御の働きをする。
HSV原発病に関する予防接種の効果 三回目の免疫化の２週間後、モルモットにHSV2を膣内
投与する。HSV2感染症の臨床およびウイルス学的経路に
関するワクチン投与の効果を第６表に要約する。対照群
に比べて、50マイクログラムまたは100マイクログラム
のいずれかの3D−MPLを含有する５マイクログラムのrgD
2t Alum 3D−MPL処方物で予防接種した動物（第VIおよ
びＸ群）は皮膚病巣の程度および発生率が著しく低かっ
た（ｐ＜0.05）。
５マイクログラムの3D−MPL o/w型エマルジョン中のr
gD2tで予防接種した群において非常によく似た結果が得
られた（第III群）。予防接種した３つの群において抗
原投与の５日後に採集した膣のスワブ中でウイルスの複
製はほとんど検出されなかった。
HSV再発症に関するワクチン投与の効果 結果を第６表に示す。対照群に比べて３つの予防接種
群において皮膚病の発生率および再発日数は著しく減少
した（ｐ＞0.05）。これらの群は対照群よりも再発エピ
ソードも少なかった。
5.結論 モルモットにおいて得られた結果から明らかに水中油
型エマルジョン中に添加された3D−MPLを含有するかま
たは水酸化アルミニウムと結合したrgD2t処方物を用い
た予防接種はHSV2接種の前にモルモットに投与した場
合、原発および再発性HSV2病に対しての防御を得るのに
非常に有効であることがわかる。このようなrgD2t3D−M
PL処方物は特異的体液性（中和抗体）およびエフェクタ
ー細胞性（DTH）免疫応答を向上させることができる。
これらの結果は少量（５マイクログラム）のrgD2tを用
いて得られる。
6.霊長類におけるrgD2t処方物の免疫原性の比較 6.1.rgD2t/AlumおよびrgD2t/Alum 3D−MPL処方物の免疫
原性の比較 rgD2t/AlumおよびrgD2t/Alum 3D−MPLワクチンの免疫
原性をオナガザル（アフリカミドリザル、AGM）におい
て評価した。３回の免疫化を０、１および３カ月目に行
った。特異的体液性（ELISAおよび中和力価）およびエ
フェクター細胞性（DTH）免疫応答を測定した。
6.1.1.実験法 各処方物は用量当たり20mgのrgD2tおよび0.5mg当量の
AL3+を含有する。50マイクログラムの3D−MPLを用い
た。オナガザル（AGM）の群を３回０、28および84日目
に免疫化した。免疫化は0.5ml（20rgD2t）を筋肉内投与
して行った。ELISAおよび中和検定による抗体測定のた
めに動物は±２週間ごとに採血した。２種の処方物も遅
延型過敏性（DTH）応答の誘起により測定されるそのＴ
細胞性免疫を誘起する能力について試験した。サルの腹
に異なる量のrgD2t（20、５および１マイクログラム）
の生理食塩水中溶液を２回目の免疫化の13日後に皮内投
与した。動物は対照として生理食塩水のみでも皮膚試験
した。皮内注射部位の紅斑および硬結を24時間後および
48時間後にモニターした。
6.1.2.結果 ａ） 体液性免疫の誘起 予防接種以前は、サル血清はいずれも抗HSV2抗体活性
を示さなかった（データは示さない）。第７表に示すよ
うに、２回目の免疫化の後、両方のワクチンにより良好
なELISAおよび中和価が誘起された。この抗体応答後、r
gD2t/Alumで予防接種したサルにおいて３回目の追加免
疫はしなかった。対照的に、rgD2t/Alum 3D−MPLで３回
目の免疫化を行ったサルではELISAおよび中和抗体応答
が増加した（平均ELISA価:10056;平均中和価:950）。
ｂ） エフェクターＴ細胞応答（DTH）の誘起 皮膚試験の結果（第８表）からrgD2t Alum処方物と異
なりAlum＋3D−MPLと結合したrgD2tはin vivoにてエフ
ェクターＴ細胞応答の誘起において非常に有効であるこ
とが判明した。20mgのrgD2tで皮膚試験した全てのrgD2t
Alum 3D−MPLで予防接種した動物において強いDTH応答
が観察された。特異的DTH応答も低濃度のgD2t（５およ
び１マイクログラム）でサルの大部分において測定され
た（５マイクログラムでは3/4、１マイクログラムでは2
/4）。これらのrgD2t量は20mgのrgD2t濃度よりも弱い皮
膚試験応答を誘起した。
6.2.リーサスサル（rhesus monkey）におけるrgD2t/Alu
m 3D−MPLの免疫原性 異なる量のrgD2t（100マイクログラム、10マイクログ
ラム、または５マイクログラム）を含有するrgD2t/Alum
3D−MPLワクチンの免疫原性をリーサスサルにおいて比
較した。
6.2.1.実験法 各処方物は各用量中0.5マイクログラム当量のAl3+お
よび50マイクログラムの3D−MPLを含有する。３つのリ
ーサスサルの群（１群につきサル４匹）を以下のように
して３回、０、28および77日目に免疫化した： 第１群:100マイクログラムのrgD2t Alum＋3D−MPL（5
0マイクログラム） 第２群:20マイクログラムのrgD2t Alum＋3D−MPL（50
マイクログラム） 第３群:5マイクログラムのrgD2t Alum＋3D−MPL（50
マイクログラム） 免疫化は1mlの用量を筋肉内投与した。ELISAおよび中
和検定による抗体測定のために動物は±２週間ごとに採
血した。
6.2.2.体液性免疫の誘起 予防接種以前は、サル血清はいずれも抗HSV2抗体活性
を示さなかった。100、20および5mgのgD2t Alum＋3D−M
PLを接種した３つの予防接種群において良好なELISAお
よび中和価が観察された（データは示さない）。
6.3.結論 オナガザルにおいて得られた結果から明らかにAlumお
よび3D−MPLの組み合わせを含有するrgD2tワクチンによ
り体液性（中和抗体）およびエフェクター細胞性（DT
H）免疫応答が向上することがわかる。このワクチンと
比べて、rgD2t Alum処方物は中和抗体を誘起するのに有
効でなく、in vivoでのDTH応答を誘起することが出来な
い。
リーサスサルにおいて得られた結果からも、rgD2t Al
um＋3D−MPL処方物は少量の抗原量（rgD2t 50マイクロ
グラムまたは20マイクログラム）であっても特異的体液
性免疫を誘起するのに非常に有効であることがわかる。
7.総結論 モルモットにおいて得られた結果から明らかに水中油
乳剤中に添加されたかまたは水酸化アルミニウムと結合
した3D−MPLを含有するアジュバント処方物は膣内モル
モット抗原投与動物モデルにおいて少量の抗原量（rgD2
t 5マイクログラム）であっても組み換えHSV糖蛋白質ワ
クチンに関する防御免疫応答を誘起するのに非常に有効
であることがわかる。防御値からも、これらのrgD2t3D
−MPL処方物は防御を得るのにより有効であることがわ
かる。このような3D−MPL処方物は特異的体液性（中和
抗体）およびエフェクター細胞性（DTH）免疫応答を向
上させることができる。
さらには、rgD2t Alum 3D−MPL処方物は抗体レベルで
霊長類において免疫原性を向上させ、エフェクターＴ細
胞応答を誘起し、このことから、このアジュバント効果
は小動物に限定されるのではないことがわかる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 プリエール、ジャン−ポール ベルギー国、ベー−1330リクセンザル ト、リュ・ドュ・ランスティテュート89 番 (72)発明者 スラウィ、モンセフ ベルギー国、ベー−1330リクセンザル ト、リュ・ドュ・ランスティテュート89 番 (72)発明者 ギャルコン−ジョンソン、ナタリー・マ リー−ジョセフ・クロード ベルギー国、ベー−1330リクセンザル ト、リュ・ドュ・ランスティテュート89 番 (56)参考文献 特表 平１−500999（ＪＰ，Ａ) 英国特許出願公開2220211（ＧＢ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 39/245 A61K 39/385 A61K 47/24 A61P 31/22 ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ) ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ)

Claims (10)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】３脱アシル化モノホスホルリピッドＡと結
    合したHSV糖蛋白質Ｄまたはその免疫フラグメントおよ
    び適切な担体を含有するワクチン製剤であって、その担
    体がミョウバンであるところの、ワクチン製剤。
  2. 【請求項２】担体が水中油型エマルジョンである請求項
    １記載のワクチン製剤。
  3. 【請求項３】糖蛋白質ＤがHSV−２糖蛋白質Ｄまたはそ
    の免疫フラグメントである請求項１または２記載のいず
    れか１つのワクチン製剤。
  4. 【請求項４】糖蛋白質Ｄが截形蛋白質である請求項１〜
    ３記載のいずれか１つのワクチン製剤。
  5. 【請求項５】截形蛋白質がHSVgD2であって、Ｃ末端アン
    カー領域を欠く請求項４記載のワクチン製剤。
  6. 【請求項６】糖蛋白質Ｄが粒状担体と結合している請求
    項１〜５のいずれか１つに記載のワクチン製剤。
  7. 【請求項７】３脱アシル化モノホスホルリピッドＡが用
    量あたり10マイクログラム〜100マイクログラムの範囲
    で存在する請求項１〜６のいずれか１つに記載のワクチ
    ン製剤。
  8. 【請求項８】医薬に用いる請求項１〜７のいずれか１つ
    に記載のワクチン製剤。
  9. 【請求項９】HSV感染症の予防または治療用医薬の製造
    において３脱アシル化モノホスホルリピッドＡと結合し
    たHSV糖蛋白質gDまたはその免疫フラグメントを使用す
    る方法。
  10. 【請求項１０】HSV糖蛋白質Ｄまたはその免疫フラグメ
    ントを担体および３脱アシル化モノホスホルリピッドＡ
    と混合することからなる請求項１〜７に記載のワクチン
    の製造法。
JP50598492A 1991-03-21 1992-03-17 ＨＳＶ糖蛋白質ｇＤおよび３脱アシル化モノホスホリルリピッドＡからなる単純ヘルペスワクチン Expired - Lifetime JP3530526B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9105992A GB9105992D0 (en) 1991-03-21 1991-03-21 Vaccine
GB9105992.3 1991-03-21
PCT/EP1992/000592 WO1992016231A1 (en) 1991-03-21 1992-03-17 HERPES SIMPLEX VACCINE COMPRISING HSV GLYCOPROTEIN gD AND 3 dEACYLATED MONOPHOSPHORYL LIPID A

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH06505727A JPH06505727A (ja) 1994-06-30
JP3530526B2 true JP3530526B2 (ja) 2004-05-24

Family

ID=10691946

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP50598492A Expired - Lifetime JP3530526B2 (ja) 1991-03-21 1992-03-17 ＨＳＶ糖蛋白質ｇＤおよび３脱アシル化モノホスホリルリピッドＡからなる単純ヘルペスワクチン

Country Status (34)

Country Link
US (1) US6027730A (ja)
EP (1) EP0576478B2 (ja)
JP (1) JP3530526B2 (ja)
KR (1) KR100224329B1 (ja)
CN (2) CN1058191C (ja)
AP (1) AP298A (ja)
AT (1) ATE129160T1 (ja)
AU (1) AU650521B2 (ja)
BR (1) BR9205745A (ja)
CA (1) CA2106492C (ja)
CY (1) CY1936A (ja)
CZ (1) CZ280505B6 (ja)
DE (1) DE69205566T3 (ja)
DK (1) DK0576478T4 (ja)
ES (1) ES2081102T5 (ja)
FI (1) FI107881B (ja)
GB (1) GB9105992D0 (ja)
GR (1) GR3017884T3 (ja)
HK (1) HK1004525A1 (ja)
HU (1) HU218025B (ja)
IE (1) IE69560B1 (ja)
IL (1) IL101290A (ja)
MA (1) MA22471A1 (ja)
MX (1) MX9201245A (ja)
MY (1) MY110086A (ja)
NO (1) NO307499B1 (ja)
NZ (1) NZ242057A (ja)
PL (1) PL170059B1 (ja)
PT (1) PT100262B (ja)
SA (1) SA92120459B1 (ja)
SK (1) SK279190B6 (ja)
WO (1) WO1992016231A1 (ja)
YU (1) YU28392A (ja)
ZA (1) ZA922011B (ja)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9105992D0 (en) * 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US6197311B1 (en) 1991-07-25 2001-03-06 Idec Pharmaceuticals Corporation Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses
GB9202933D0 (en) * 1992-02-12 1992-03-25 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US6620414B2 (en) 1992-03-27 2003-09-16 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Hepatitis vaccines containing 3-0-deacylated monophoshoryl lipid A
WO1994019013A1 (en) * 1993-02-19 1994-09-01 Smithkline Beecham Corporation Influenza vaccine compositions containing 3-o-deacylated monophosphoryl lipid a
CZ289476B6 (cs) * 1993-03-23 2002-01-16 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Očkovací přípravek a způsob jeho výroby
CA2163550A1 (en) * 1993-05-25 1994-12-08 Gerald E. Hancock Adjuvants for vaccines against respiratory syncytial virus
GB9326253D0 (en) * 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
ES2196098T3 (es) 1994-12-28 2003-12-16 Univ Kentucky Res Found Secuencias anticuerpos anti-idiotipo 3h1 monoclonales relacionadas con el antigeno carcinoembrionico humano.
US6949244B1 (en) 1995-12-20 2005-09-27 The Board Of Trustees Of The University Of Kentucky Murine monoclonal anti-idiotype antibody 11D10 and methods of use thereof
US6235280B1 (en) 1996-04-12 2001-05-22 Malaya Chatterjee Methods of delaying development of CEA-associated tumors using anti-idiotype antibody 3H1
US20020041872A1 (en) 1996-04-12 2002-04-11 Malaya Chatterjee Methods of delaying development of CEA-associated tumors using anti-idiotype antibody 3H1
US6468782B1 (en) 1996-12-05 2002-10-22 Quadrant Healthcare (Uk) Limited Methods of preserving prokaryotic cells and compositions obtained thereby
US6274143B1 (en) 1997-06-13 2001-08-14 Malaya Chatterjee Methods of delaying development of HMFG-associated tumors using anti-idiotype antibody 11D10
US6355244B1 (en) 1997-11-17 2002-03-12 University Of Kentucky Research Foundation Methods and compositions for the treatment of psoriasis
GB9819898D0 (en) * 1998-09-11 1998-11-04 Smithkline Beecham Plc New vaccine and method of use
US6692752B1 (en) 1999-09-08 2004-02-17 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Methods of treating human females susceptible to HSV infection
SI1126876T1 (sl) 1998-10-16 2007-08-31 Glaxosmithkline Biolog Sa Adjuvantni sistemi in vakcine
US7026155B2 (en) 1999-02-02 2006-04-11 Regents Of The University Of California Method of reducing bacterial proliferation
EP1104767A1 (en) 1999-11-30 2001-06-06 Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek Mono- and disaccharide derivatives containing both fatty acid ester and sulfate ester groups
US9273326B2 (en) 2004-04-30 2016-03-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Tetracycline-regulated gene expression in HSV-1 vectors
CA2584290A1 (en) 2004-09-22 2006-03-30 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Staphylococcal immunogenic compositions
US20080171063A1 (en) 2005-03-23 2008-07-17 Glaxosmith Kline Biologicals S.A., A Corporation Novel Composition
EP1962899B1 (en) 2005-12-22 2011-08-17 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Pneumococcal polysaccharide conjugate vaccine
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
WO2007113222A2 (en) 2006-03-30 2007-10-11 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition
MX2009000660A (es) 2006-07-17 2009-04-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacuna de influenza.
ES2822058T3 (es) 2006-09-26 2021-04-28 Infectious Disease Res Inst Composición de vacuna que contiene un adyuvante sintético
US20090181078A1 (en) * 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
TW200908994A (en) 2007-04-20 2009-03-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
CN101784282B (zh) 2007-06-26 2015-07-08 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 包含肺炎链球菌荚膜多糖缀合物的疫苗
NZ597182A (en) * 2009-05-22 2014-07-25 Genocea Biosciences Inc Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
LT2437753T (lt) 2009-06-05 2016-12-12 Infectious Disease Research Institute Sintetiniai gliukopiranozillipidų adjuvantai ir juos turinčios vakcinų kompozicijos
GB0913681D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB0913680D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
PT2516629T (pt) 2009-12-21 2016-07-07 The Brigham And Women`S Hospital Inc Vacinas de vírus herpes simplex
EP2643014A4 (en) 2010-11-24 2015-11-11 Genocea Biosciences Inc HERPES SIMPLEX TYPE 2 VIRUS VACCINES: COMPOSITIONS AND METHODS FOR STIMULATING AN IMMUNE RESPONSE
CA2829607A1 (en) * 2011-03-11 2012-09-20 Mcmaster University A method of vaccination comprising a histone deacetylase inhibitor
CA2832307A1 (en) 2011-04-08 2012-10-18 Immune Design Corp. Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses
US10206996B2 (en) 2011-08-22 2019-02-19 Nanobio Corporation Herpes simplex virus nanoemulsion vaccine
AU2012340712B2 (en) 2011-11-23 2017-09-14 Genocea Biosciences, Inc. Nucleic acid vaccines against Herpes Simplex Virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
LT2850431T (lt) 2012-05-16 2018-06-25 Immune Design Corp. Vakcinos, skirtos hsv-2
ES2847930T3 (es) 2013-01-07 2021-08-04 Mucosal Vaccine Tech Llc Vacunas terapéuticas para el tratamiento de las infecciones por el virus del herpes simple de tipo 2
AU2014253791B2 (en) 2013-04-18 2019-05-02 Immune Design Corp. GLA monotherapy for use in cancer treatment
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
EP3519427A4 (en) 2016-09-28 2020-03-11 Genocea Biosciences Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF HERPES
WO2019152821A1 (en) 2018-02-05 2019-08-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Recombinant herpes simplex virus-2 expressing glycoprotein b and d antigens
US20220226465A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 ConserV Bioscience Coronavirus Immunogenic Compositions, Methods and Uses Thereof

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4372945A (en) * 1979-11-13 1983-02-08 Likhite Vilas V Antigen compounds
IL61904A (en) * 1981-01-13 1985-07-31 Yeda Res & Dev Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same
US5110587A (en) * 1981-12-24 1992-05-05 Health Research, Incorporated Immunogenic composition comprising synthetically modified vaccinia virus
US5149660A (en) * 1982-02-18 1992-09-22 University Patents, Inc. Diagnostic reagents relating to herpes simplex virus
US4762708A (en) * 1982-02-18 1988-08-09 University Patents, Inc. Materials and methods for herpes simplex virus vaccination
NZ209308A (en) * 1983-08-30 1991-08-27 Genentech Inc Vaccine against hsv involving a truncated membrane-free derivative of a membrane-bound protein
US5244792A (en) * 1984-04-06 1993-09-14 Chiron Corporation Expression of recombinant glyoprotein B from herpes simplex virus
US5171568A (en) * 1984-04-06 1992-12-15 Chiron Corporation Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine
US4877611A (en) * 1986-04-15 1989-10-31 Ribi Immunochem Research Inc. Vaccine containing tumor antigens and adjuvants
US5554372A (en) * 1986-09-22 1996-09-10 Emory University Methods and vaccines comprising surface-active copolymers
EP0289550B1 (en) * 1986-10-20 1996-04-10 Chiron Corporation Vaccine for use in the therapeutic treatment of hsv
US5149529A (en) * 1988-04-08 1992-09-22 Board Of Trustees Of Leland Chiron Corporation Compositions and treatment for herpes simplex
US4912094B1 (en) * 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
NZ230424A (en) * 1988-08-25 1992-05-26 Liposome Co Inc Liposomal composition comprising an externally disposed antigen
EP0440742B1 (en) * 1988-10-27 1997-01-15 The Regents Of The University Of Minnesota Liposome immunoadjuvants containing il-2
US5597573A (en) * 1989-05-04 1997-01-28 Igen, Inc. Lipid-A analogs: new monosaccharide and disaccharide intermediates for eliciting therapeutic antibodies and for antitumor and antiviral activities
US5158939A (en) * 1989-07-21 1992-10-27 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of stimulating the immune systems of animals and compositions useful therefor
JPH04506662A (ja) * 1989-07-14 1992-11-19 アメリカン・サイアナミド・カンパニー 接合体ワクチンのためのサイトカイニンおよびホルモンのキヤリヤー
CA2088246A1 (en) * 1990-08-01 1992-02-02 Dennis J. O'callaghan Gene encoding equine herpesvirus type i glycoprotein d, its gene product, antibodies and their uses
JP3005292B2 (ja) * 1990-08-02 2000-01-31 カイロン コーポレイション 単純ヘルペスウィルスのｖｐ１６のワクチン
GB9106048D0 (en) * 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US5166173A (en) * 1991-01-29 1992-11-24 Genelabs Incorporated Method of treating herpes simplex virus infection
US5196452A (en) * 1991-01-29 1993-03-23 Genelabs Incorporated Macrocyclic anti-viral compound and method
GB9105992D0 (en) * 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
MY111880A (en) * 1992-03-27 2001-02-28 Smithkline Beecham Biologicals S A Hepatitis vaccines containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
NZ253137A (en) * 1992-06-25 1996-08-27 Smithkline Beecham Biolog Vaccine comprising antigen and/or antigenic composition, qs21 (quillaja saponaria molina extract) and 3 de-o-acylated monophosphoryl lipid a.
WO1994019013A1 (en) * 1993-02-19 1994-09-01 Smithkline Beecham Corporation Influenza vaccine compositions containing 3-o-deacylated monophosphoryl lipid a
CZ289476B6 (cs) * 1993-03-23 2002-01-16 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Očkovací přípravek a způsob jeho výroby
CA2163550A1 (en) * 1993-05-25 1994-12-08 Gerald E. Hancock Adjuvants for vaccines against respiratory syncytial virus

Also Published As

Publication number Publication date
YU28392A (sh) 1994-11-15
NO307499B1 (no) 2000-04-17
SA92120459B1 (ar) 2005-06-14
ES2081102T3 (es) 1996-02-16
GR3017884T3 (en) 1996-01-31
PL170059B1 (pl) 1996-10-31
BR9205745A (pt) 1994-10-18
PT100262B (pt) 2001-05-31
CZ280505B6 (cs) 1996-02-14
CZ195893A3 (en) 1994-07-13
EP0576478B1 (en) 1995-10-18
CA2106492A1 (en) 1992-09-22
DE69205566D1 (en) 1995-11-23
DE69205566T2 (de) 1996-04-18
SK94693A3 (en) 1994-05-11
CN1058191C (zh) 2000-11-08
AP298A (en) 1994-01-14
FI107881B (fi) 2001-10-31
KR100224329B1 (ko) 1999-10-15
JPH06505727A (ja) 1994-06-30
PT100262A (pt) 1993-06-30
IE69560B1 (en) 1996-10-02
NZ242057A (en) 1993-12-23
US6027730A (en) 2000-02-22
NO933343D0 (no) 1993-09-20
DK0576478T4 (da) 2001-07-23
HU218025B (hu) 2000-05-28
WO1992016231A1 (en) 1992-10-01
NO933343L (no) 1993-09-20
ES2081102T5 (es) 2001-09-01
FI934134A0 (fi) 1993-09-21
MY110086A (en) 1997-12-31
CN1201692A (zh) 1998-12-16
CN1065997A (zh) 1992-11-11
DE69205566T3 (de) 2002-09-05
FI934134A (fi) 1993-09-21
AP9200368A0 (en) 1992-04-30
IL101290A (en) 1996-07-23
IE920881A1 (en) 1992-09-23
ZA922011B (en) 1993-01-27
CY1936A (en) 1992-03-17
EP0576478A1 (en) 1994-01-05
MA22471A1 (fr) 1992-10-01
IL101290A0 (en) 1992-11-15
HUT67052A (en) 1995-01-30
AU1365792A (en) 1992-10-21
CA2106492C (en) 2003-12-09
MX9201245A (es) 1992-10-01
CN1101226C (zh) 2003-02-12
HU9302645D0 (en) 1994-01-28
SK279190B6 (sk) 1998-07-08
DK0576478T3 (da) 1995-12-04
GB9105992D0 (en) 1991-05-08
EP0576478B2 (en) 2001-04-18
ATE129160T1 (de) 1995-11-15
HK1004525A1 (en) 1998-11-27
AU650521B2 (en) 1994-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3530526B2 (ja) ＨＳＶ糖蛋白質ｇＤおよび３脱アシル化モノホスホリルリピッドＡからなる単純ヘルペスワクチン
US10653771B2 (en) Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
JP4510283B2 (ja) 併合ワクチン組成物
JP4028593B2 (ja) ３−ｏ脱アシル化モノホスホリルリピドａ含有ワクチン組成物
JP3901731B2 (ja) サポニンおよびステロールを含有するワクチン
PL201767B1 (pl) Kompozycja szczepionki przeciwko ludzkim papillomawirusom i wirusowi opryszczki
JP2001501640A (ja) ワクチン
US9782474B2 (en) Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
EP2782597B1 (en) Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
Manservigi et al. Immunotherapeutic activity of a recombinant combined gB–gD–gE vaccine against recurrent HSV-2 infections in a guinea pig model

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20031105

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20040210

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20040301

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080305

Year of fee payment: 4

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090305

Year of fee payment: 5

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100305

Year of fee payment: 6

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100305

Year of fee payment: 6

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110305

Year of fee payment: 7

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110305

Year of fee payment: 7

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120305

Year of fee payment: 8

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130305

Year of fee payment: 9

EXPY Cancellation because of completion of term
FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130305

Year of fee payment: 9