JP3493105B2 - ＴＧＦ−β系統群の蛋白質 - Google Patents
ＴＧＦ−β系統群の蛋白質Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＴＧＦ−β系統群
の蛋白質に関する。
の蛋白質に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＢＭＰ、ＴＧＦおよびインヒビンに関連
した蛋白質を有する増殖因子のＴＧＦ−β系統群（Robe
rts and Sporn, Handbook of Experimental Pharmacolo
gy 95(1990), 419-472）は、治療および適用の広い範囲
内で特に適切なものを示す。これらの因子は、傷病の治
癒および組織の治療に関連する処置に有用である。更
に、ＴＧＦ−β系統群の幾つかのメンバーは、組織誘発
的、殊に骨誘発的であり、必然的に軟骨および骨の開発
を導くのに決定的な役割を演じる。
した蛋白質を有する増殖因子のＴＧＦ−β系統群（Robe
rts and Sporn, Handbook of Experimental Pharmacolo
gy 95(1990), 419-472）は、治療および適用の広い範囲
内で特に適切なものを示す。これらの因子は、傷病の治
癒および組織の治療に関連する処置に有用である。更
に、ＴＧＦ−β系統群の幾つかのメンバーは、組織誘発
的、殊に骨誘発的であり、必然的に軟骨および骨の開発
を導くのに決定的な役割を演じる。
【０００３】ウォズニイ（Wozney）,Progress in Growt
h Factor Research 1 (1989), 267-287およびベイル（V
ale）他,Handbook of Experimental Pharmacology 95
(1990), 211-248には、異なる増殖因子、例えばＢＭＰ
（骨形態形成蛋白質）に関連するものおよびインヒビン
群が記載されている。これらの群のメンバーは、重要な
構造的類似性を共有している。蛋白質の前駆物質は、ア
ミノ末端シグナル配列、プロペプチドおよび事後に前駆
物質から切断されかつ成熟蛋白質を表わす約１１０個の
アミノ酸のカルボキシ末端配列から構成されている。更
に、これらのメンバーは、アミノ酸配列の同族性により
定義される。成熟蛋白質は、最も保守された配列、殊に
系統群のメンバーの中で保守されている７個のシステイ
ン残基を含有する。ＴＧＦ−β様蛋白質は、多官能性の
ホルモン的に活性の増殖因子である。また、これらのＴ
ＧＦ−β様蛋白質は、関連した生物活性、例えば細胞の
走化性誘引、細胞分化の促進および細胞の組織誘発能
力、例えば軟骨誘引能力および骨誘引能力を共有してい
る。米国特許第５０１３６４９号明細書には、ＢＭＰ−
２蛋白質（骨形態形成蛋白質）を末端に有した骨誘発蛋
白質をコード化するＤＮＡ配列が開示されており、かつ
米国特許第１７９１０１号明細書および同第１７９１９
７号明細書には、ＢＭＰ蛋白質ＢＭＰ−１およびＢＭＰ
−３が開示されている。更に、数多くの細胞型は、ＴＧ
Ｆ−β様蛋白質を合成させることができ、実質的に全て
の細胞は、ＴＧＦ−β受容体を有する。
h Factor Research 1 (1989), 267-287およびベイル（V
ale）他,Handbook of Experimental Pharmacology 95
(1990), 211-248には、異なる増殖因子、例えばＢＭＰ
（骨形態形成蛋白質）に関連するものおよびインヒビン
群が記載されている。これらの群のメンバーは、重要な
構造的類似性を共有している。蛋白質の前駆物質は、ア
ミノ末端シグナル配列、プロペプチドおよび事後に前駆
物質から切断されかつ成熟蛋白質を表わす約１１０個の
アミノ酸のカルボキシ末端配列から構成されている。更
に、これらのメンバーは、アミノ酸配列の同族性により
定義される。成熟蛋白質は、最も保守された配列、殊に
系統群のメンバーの中で保守されている７個のシステイ
ン残基を含有する。ＴＧＦ−β様蛋白質は、多官能性の
ホルモン的に活性の増殖因子である。また、これらのＴ
ＧＦ−β様蛋白質は、関連した生物活性、例えば細胞の
走化性誘引、細胞分化の促進および細胞の組織誘発能
力、例えば軟骨誘引能力および骨誘引能力を共有してい
る。米国特許第５０１３６４９号明細書には、ＢＭＰ−
２蛋白質（骨形態形成蛋白質）を末端に有した骨誘発蛋
白質をコード化するＤＮＡ配列が開示されており、かつ
米国特許第１７９１０１号明細書および同第１７９１９
７号明細書には、ＢＭＰ蛋白質ＢＭＰ−１およびＢＭＰ
−３が開示されている。更に、数多くの細胞型は、ＴＧ
Ｆ−β様蛋白質を合成させることができ、実質的に全て
の細胞は、ＴＧＦ−β受容体を有する。
【０００４】ひとまとめにして考えると、前記蛋白質
は、構造の点で差を示し、詳細な生物学的機能の点で著
しい変形を導く。更に、前記蛋白質は、種々の種類の異
なる組織および開発段階で見い出されている。従って、
前記蛋白質は、機能、詳細には例えば必要とされる細胞
の生理的環境、寿命、ターゲット、アクセサリー因子に
対する要件および耐崩壊性に関する差を有する。従っ
て、組織の誘発、殊に骨の誘発電位を示す数多くの蛋白
質が記載されているけれども、蛋白質の微生物における
天然の役割、より重要なことに蛋白質の医学的関連は、
なお詳細に説明しなければならない。骨形成または他の
組織の分化／誘発に関連したＴＧＦ−β系統群のまだよ
く知られていないメンバーの発生は、著しく疑わしいも
のである。しかし、この新規のＴＧＦ−β様蛋白質の分
離における主な問題は、この蛋白質の機能を識別による
生物検定の設計にとって未だ十分正確に記載することが
できないことにある。他面、前記系統群の公知のメンバ
ーに対して予想されたヌクレオチド配列の相同性は、古
典的な核酸ハイブリッド化技術によってスクリーニング
させるためには低すぎるであろう。それにも拘わらず、
さらに新規のＴＧＦ−β様蛋白質の分離および特性決定
は、所望の全ての医学的要件に適合する蛋白質を誘発さ
せかつ分化させる全ての組み合わせを把握するために、
緊急に必要とされるものである。これらの因子は、骨お
よび／または例えば腎臓および肝臓のような他の組織の
退化性疾患の欠点のある治癒および治療の際に有用な医
学的用途を生じるかもしれない。
は、構造の点で差を示し、詳細な生物学的機能の点で著
しい変形を導く。更に、前記蛋白質は、種々の種類の異
なる組織および開発段階で見い出されている。従って、
前記蛋白質は、機能、詳細には例えば必要とされる細胞
の生理的環境、寿命、ターゲット、アクセサリー因子に
対する要件および耐崩壊性に関する差を有する。従っ
て、組織の誘発、殊に骨の誘発電位を示す数多くの蛋白
質が記載されているけれども、蛋白質の微生物における
天然の役割、より重要なことに蛋白質の医学的関連は、
なお詳細に説明しなければならない。骨形成または他の
組織の分化／誘発に関連したＴＧＦ−β系統群のまだよ
く知られていないメンバーの発生は、著しく疑わしいも
のである。しかし、この新規のＴＧＦ−β様蛋白質の分
離における主な問題は、この蛋白質の機能を識別による
生物検定の設計にとって未だ十分正確に記載することが
できないことにある。他面、前記系統群の公知のメンバ
ーに対して予想されたヌクレオチド配列の相同性は、古
典的な核酸ハイブリッド化技術によってスクリーニング
させるためには低すぎるであろう。それにも拘わらず、
さらに新規のＴＧＦ−β様蛋白質の分離および特性決定
は、所望の全ての医学的要件に適合する蛋白質を誘発さ
せかつ分化させる全ての組み合わせを把握するために、
緊急に必要とされるものである。これらの因子は、骨お
よび／または例えば腎臓および肝臓のような他の組織の
退化性疾患の欠点のある治癒および治療の際に有用な医
学的用途を生じるかもしれない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の基礎
となる技術的な問題は、本質的にＤＮＡ配列によってコ
ード化される、分裂促進因子および／または分化誘発、
例えば骨誘発電位を有するＴＧＦ−β蛋白質系統群の蛋
白質を提供することである。
となる技術的な問題は、本質的にＤＮＡ配列によってコ
ード化される、分裂促進因子および／または分化誘発、
例えば骨誘発電位を有するＴＧＦ−β蛋白質系統群の蛋
白質を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記の技術的問題の解決
は、請求項１に特徴付けられたＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１
に示したようなヌクレオチドを有するＤＮＡ 配列にス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズしかつ軟骨お
よび骨の誘発効果を有しならびにＴＧＦ−β系統群の蛋
白質活性を有するＴＧＦ−β系統群の蛋白質をコード化
するＤＮＡ配列によってコード化された軟骨および骨の
誘発効果を有するＴＧＦ−β系統群の蛋白質によって達
成される。また、上記の技術的問題の解決は、請求項２
に特徴付けられた実施態様を提供することによって達成
される。更に、本発明の他の特徴および利点は、ＭＰ−
５２：
は、請求項１に特徴付けられたＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１
に示したようなヌクレオチドを有するＤＮＡ 配列にス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズしかつ軟骨お
よび骨の誘発効果を有しならびにＴＧＦ−β系統群の蛋
白質活性を有するＴＧＦ−β系統群の蛋白質をコード化
するＤＮＡ配列によってコード化された軟骨および骨の
誘発効果を有するＴＧＦ−β系統群の蛋白質によって達
成される。また、上記の技術的問題の解決は、請求項２
に特徴付けられた実施態様を提供することによって達成
される。更に、本発明の他の特徴および利点は、ＭＰ−
５２：
【化３】
で示されるアミノ酸配列からなる蛋白質ならびに図面の
記載から明らかである。
記載から明らかである。
【０００７】
【発明の実施の形態】次に、配列表および図面について
簡単に記載する。
簡単に記載する。
【０００８】ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１は、ＭＰ−５２の
ヌクレオチド配列、即ち成熟ペプチドに相当する胎児に
由来する配列およびＭＰ−５２のペプチドをコード化す
る大部分の配列を示す。
ヌクレオチド配列、即ち成熟ペプチドに相当する胎児に
由来する配列およびＭＰ−５２のペプチドをコード化す
る大部分の配列を示す。
【０００９】ＭＰ−５２の５´末端の幾つかのペプチド
配列は、もはや特性決定することができなかった。
配列は、もはや特性決定することができなかった。
【００１０】ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２は、肝臓に由来す
る配列ＭＰ−１２１の著しく特性決定されたヌクレオチ
ド配列を示す。
る配列ＭＰ−１２１の著しく特性決定されたヌクレオチ
ド配列を示す。
【００１１】ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ．１から推論されるようなＭＰ−５２のアミノ酸
配列を示す。
ＮＯ．１から推論されるようなＭＰ−５２のアミノ酸
配列を示す。
【００１２】図１及び図２は、幾つかの関連した蛋白質
を有するＭＰ−５２およびＭＰ−１２１のアミノ酸配列
を示す。図１は、７個の保存されたシステインの最初の
システインから出発するＢＭＰ蛋白質系統群の幾つかの
メンバーを有するＭＰ−５２の配列を示し；図２は、イ
ンヒビン蛋白質系統群の幾つかのメンバーを有するＭＰ
−１２１の配列を示す。＊は、アミノ酸が比較された全
ての蛋白質において同じものであることを示し；＋は、
アミノ酸がＭＰ−５２（図１）またはＭＰ−１２１（図
２）と比較した蛋白質の少なくとも１つと同じものであ
る。
を有するＭＰ−５２およびＭＰ−１２１のアミノ酸配列
を示す。図１は、７個の保存されたシステインの最初の
システインから出発するＢＭＰ蛋白質系統群の幾つかの
メンバーを有するＭＰ−５２の配列を示し；図２は、イ
ンヒビン蛋白質系統群の幾つかのメンバーを有するＭＰ
−１２１の配列を示す。＊は、アミノ酸が比較された全
ての蛋白質において同じものであることを示し；＋は、
アミノ酸がＭＰ−５２（図１）またはＭＰ−１２１（図
２）と比較した蛋白質の少なくとも１つと同じものであ
る。
【００１３】図３は、本発明で使用されたようなオリゴ
ヌクレオチドプライマーのヌクレオチド配列およびＴＧ
Ｆ−β系統群の公知のメンバーを有する前記配列を示
す。ＭはＡまたはＣを意味し；ＳはＣまたはＧを意味
し；ＲはＡまたはＧを意味し；かつＫはＧまたはＴを意
味する。３ａは、プライマーＯＤの配列を示し；３ｂ
は、プライマーＯＩＤの配列を示す。
ヌクレオチドプライマーのヌクレオチド配列およびＴＧ
Ｆ−β系統群の公知のメンバーを有する前記配列を示
す。ＭはＡまたはＣを意味し；ＳはＣまたはＧを意味
し；ＲはＡまたはＧを意味し；かつＫはＧまたはＴを意
味する。３ａは、プライマーＯＤの配列を示し；３ｂ
は、プライマーＯＩＤの配列を示す。
【００１４】本発明によれば、ＴＧＦ−β様蛋白質に関
連し、かつ相応する遺伝子中に含まれるＤＮＡ配列を提
供する。このような配列は、配列：ＡＴＧＡＡＣＴＣＣ
ＡＴＧＧＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＣＡＣＡおよびＣＴＴＣ
ＴＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＣＡＣ
Ｃ、殊にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１および２に記載された
ような配列、この配列の対立遺伝子誘導体およびこの配
列の遺伝子コードの結果として退化したＤＮＡ配列を有
するヌクレオチド配列を包含する。また、この配列は、
緊縮条件下で上記のＤＮＡ配列でハイブリッド化されか
つ次のアミノ酸配列：Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ
−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−ＴｈｒまたはＬｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ａｌａ
−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒを有するＤＮＡ配列を包含す
る。
連し、かつ相応する遺伝子中に含まれるＤＮＡ配列を提
供する。このような配列は、配列：ＡＴＧＡＡＣＴＣＣ
ＡＴＧＧＡＣＣＣＣＧＡＧＴＣＣＡＣＡおよびＣＴＴＣ
ＴＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＣＡＣ
Ｃ、殊にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１および２に記載された
ような配列、この配列の対立遺伝子誘導体およびこの配
列の遺伝子コードの結果として退化したＤＮＡ配列を有
するヌクレオチド配列を包含する。また、この配列は、
緊縮条件下で上記のＤＮＡ配列でハイブリッド化されか
つ次のアミノ酸配列：Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ
−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−ＴｈｒまたはＬｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ａｌａ
−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒを有するＤＮＡ配列を包含す
る。
【００１５】この対立遺伝子の退化されかつハイブリッ
ド化される配列は、天然に生じる突然変異、例えば小さ
な削除または置換に基づく構造的相違を有することがで
きるのだけれども、この配列は、通常なお本質的に同じ
く有用な性質を示し、基本的に同じ医学的用途に使用さ
れる。
ド化される配列は、天然に生じる突然変異、例えば小さ
な削除または置換に基づく構造的相違を有することがで
きるのだけれども、この配列は、通常なお本質的に同じ
く有用な性質を示し、基本的に同じ医学的用途に使用さ
れる。
【００１６】本発明によれば、“ハイブリッド化”の用
語は、常用のハイブリッド化条件、有利に６２℃〜６６
℃で６回のＳＳＣの塩濃度、引き続く６２℃〜６６℃で
ＳＤＳ ０．１％、０．６回のＳＳＣで１時間の洗浄の
条件を意味する。“ハイブリッド化”の用語は、有利に
６２℃〜６６℃で４回のＳＳＣの塩濃度、引き続く６２
℃〜６６℃でＳＤＳ ０．１％、０．１回のＳＳＣで１
時間の洗浄の緊縮ハイブリッド化条件に帰因する。
語は、常用のハイブリッド化条件、有利に６２℃〜６６
℃で６回のＳＳＣの塩濃度、引き続く６２℃〜６６℃で
ＳＤＳ ０．１％、０．６回のＳＳＣで１時間の洗浄の
条件を意味する。“ハイブリッド化”の用語は、有利に
６２℃〜６６℃で４回のＳＳＣの塩濃度、引き続く６２
℃〜６６℃でＳＤＳ ０．１％、０．１回のＳＳＣで１
時間の洗浄の緊縮ハイブリッド化条件に帰因する。
【００１７】コード化蛋白質の重要な生物学的活性は、
分裂促進および骨誘発性電位を有し、かつロバーツ（Ro
berts）他、ＰＮＡＳ ７８（１９８１）、５３３９〜
５３４３、セイジン（Seyedin）他、ＰＮＡＳ ８２
（１９８５）、２２６７〜２２７１またはサンパス（Sa
mpath）およびレッジ（Reddi）、ＰＮＡＳ ７８（１９
８１）、７５９９〜７６０３による検定法で測定するこ
とができる。
分裂促進および骨誘発性電位を有し、かつロバーツ（Ro
berts）他、ＰＮＡＳ ７８（１９８１）、５３３９〜
５３４３、セイジン（Seyedin）他、ＰＮＡＳ ８２
（１９８５）、２２６７〜２２７１またはサンパス（Sa
mpath）およびレッジ（Reddi）、ＰＮＡＳ ７８（１９
８１）、７５９９〜７６０３による検定法で測定するこ
とができる。
【００１８】本発明によれば、上記したようなＤＮＡ配
列に関連し、これは、脊椎動物、有利に哺乳類、例えば
豚または牛および齧歯動物、例えばラットまたはマウ
ス、および殊に霊長類、例えばヒトから得ることができ
る。
列に関連し、これは、脊椎動物、有利に哺乳類、例えば
豚または牛および齧歯動物、例えばラットまたはマウ
ス、および殊に霊長類、例えばヒトから得ることができ
る。
【００１９】本発明によれば、ＤＮＡ配列は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ．１および２に示されているようにＭＰ−５
２およびＭＰ−１２１を末端に有するＤＮＡ配列であ
る。ＭＰ−５２の相応する転写は、胎児形成組織および
ＢＭＰ様蛋白質の成熟部分に対して著しくアミノ酸相同
性を示す１つの蛋白質のコードから得られた（図１、参
照）。ＢＭＰ２（＝ＢＭＰ２Ａ）およびＢＭＰ４（＝Ｂ
ＭＰ２Ｂ）の蛋白質配列は、ウォズニイ（Wozney）他、
Science 第２４２巻、第１５２８〜１５３４頁（１９８
８）に記載されている。ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭ
Ｐ７のそれぞれの配列は、セレステ（Celeste）他、Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA 第８７巻、第９８４３〜９８
４７頁（１９９０）に記載されている。また、公知のＢ
ＭＰ配列のみに対して特異的である幾つかの典型的な配
列の相同性は、ＭＰ−５２のプロペプチド部分に見い出
され、これに対してＭＰ−５２の前駆物質部分の他の部
分は、ＢＭＰ前駆物質に対して著しい相違を示す。ＭＰ
−１２１のｍＲＮＡは、肝臓組織内に検出され、その相
応するアミノ酸配列は、インヒビン蛋白質鎖のアミノ酸
配列に対して相同性を示す（図２、参照）。ＴＧＦ−β
様蛋白質をコード化するｃＤＮＡ配列は、恐らくこの組
織中の僅かに余るＴＧＦ−β特異的転写のために肝臓組
織から未だなお分離されなかった。しかし、胎児形成性
組織の場合には、公知のＴＧＦ−β様蛋白質をコード化
する配列は、比較的豊富に見い出すことができる。本発
明者等は、最近、肝臓中で捕集されたＴＧＦ−β様蛋白
質の存在が十分であることを検出した。この群の公知の
因子に関連したクローンの高い背景レベルにより、前記
の組織および恐らく他の組織から新規のＴＧＦ−βに関
連した配列を確立する場合には、大きな困難が存在す
る。本発明の場合には、クローン化は、下記に記載した
方法により実施された。ＤＮＡ配列が１回クローン化さ
れた場合には、ＴＧＦ−β様蛋白質を生産することがで
きる宿主細胞の製造およびこの蛋白質の生産は、蛋白質
をコード化する発現プラスミドを構成させかつ宿主細胞
を発現プラスミドで形質転換し、形質転換体を適当な培
地中で培養し、かつＴＧＦ−β様活性を有する生産物を
回収することからなる公知の組換えＤＮＡ技術を使用す
ることにより容易に達成することができる。
ＩＤ ＮＯ．１および２に示されているようにＭＰ−５
２およびＭＰ−１２１を末端に有するＤＮＡ配列であ
る。ＭＰ−５２の相応する転写は、胎児形成組織および
ＢＭＰ様蛋白質の成熟部分に対して著しくアミノ酸相同
性を示す１つの蛋白質のコードから得られた（図１、参
照）。ＢＭＰ２（＝ＢＭＰ２Ａ）およびＢＭＰ４（＝Ｂ
ＭＰ２Ｂ）の蛋白質配列は、ウォズニイ（Wozney）他、
Science 第２４２巻、第１５２８〜１５３４頁（１９８
８）に記載されている。ＢＭＰ５、ＢＭＰ６およびＢＭ
Ｐ７のそれぞれの配列は、セレステ（Celeste）他、Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA 第８７巻、第９８４３〜９８
４７頁（１９９０）に記載されている。また、公知のＢ
ＭＰ配列のみに対して特異的である幾つかの典型的な配
列の相同性は、ＭＰ−５２のプロペプチド部分に見い出
され、これに対してＭＰ−５２の前駆物質部分の他の部
分は、ＢＭＰ前駆物質に対して著しい相違を示す。ＭＰ
−１２１のｍＲＮＡは、肝臓組織内に検出され、その相
応するアミノ酸配列は、インヒビン蛋白質鎖のアミノ酸
配列に対して相同性を示す（図２、参照）。ＴＧＦ−β
様蛋白質をコード化するｃＤＮＡ配列は、恐らくこの組
織中の僅かに余るＴＧＦ−β特異的転写のために肝臓組
織から未だなお分離されなかった。しかし、胎児形成性
組織の場合には、公知のＴＧＦ−β様蛋白質をコード化
する配列は、比較的豊富に見い出すことができる。本発
明者等は、最近、肝臓中で捕集されたＴＧＦ−β様蛋白
質の存在が十分であることを検出した。この群の公知の
因子に関連したクローンの高い背景レベルにより、前記
の組織および恐らく他の組織から新規のＴＧＦ−βに関
連した配列を確立する場合には、大きな困難が存在す
る。本発明の場合には、クローン化は、下記に記載した
方法により実施された。ＤＮＡ配列が１回クローン化さ
れた場合には、ＴＧＦ−β様蛋白質を生産することがで
きる宿主細胞の製造およびこの蛋白質の生産は、蛋白質
をコード化する発現プラスミドを構成させかつ宿主細胞
を発現プラスミドで形質転換し、形質転換体を適当な培
地中で培養し、かつＴＧＦ−β様活性を有する生産物を
回収することからなる公知の組換えＤＮＡ技術を使用す
ることにより容易に達成することができる。
【００２０】従って、本発明によれば、場合によっては
発現対照配列に結合した、上記したようなＤＮＡ配列を
有する組換え分子に関連する。このようなベクターは、
安定的または過渡的に形質転換された細胞の場合にＴＧ
Ｆ−β様蛋白質を生産するのに有用であることができ
る。幾つかの動物系、植物系、真菌類系および細菌類系
は、形質転換およびその後の培養の方法に使用すること
ができる。有利には、本発明に使用することができる発
現ベクターは、宿主細胞の場合の複製に必要とされる配
列を有し、かつ自己複製可能である。また、形質転換さ
れた細胞を容易に選択することができる選択可能な標識
遺伝子を含有するベクターを使用することは、有利であ
る。必要な操作は、当業者によく知られている。
発現対照配列に結合した、上記したようなＤＮＡ配列を
有する組換え分子に関連する。このようなベクターは、
安定的または過渡的に形質転換された細胞の場合にＴＧ
Ｆ−β様蛋白質を生産するのに有用であることができ
る。幾つかの動物系、植物系、真菌類系および細菌類系
は、形質転換およびその後の培養の方法に使用すること
ができる。有利には、本発明に使用することができる発
現ベクターは、宿主細胞の場合の複製に必要とされる配
列を有し、かつ自己複製可能である。また、形質転換さ
れた細胞を容易に選択することができる選択可能な標識
遺伝子を含有するベクターを使用することは、有利であ
る。必要な操作は、当業者によく知られている。
【００２１】本発明によれば、発現プラスミドによって
形質転換されかつＴＧＦ−β系統群の蛋白質を生産する
ことができる宿主細胞が得られる。適当な宿主細胞の例
は、種々の真核細胞および原核細胞、例えばＥ．コリ、
昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞および真菌類、例えば
イースト菌を包含する。
形質転換されかつＴＧＦ−β系統群の蛋白質を生産する
ことができる宿主細胞が得られる。適当な宿主細胞の例
は、種々の真核細胞および原核細胞、例えばＥ．コリ、
昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞および真菌類、例えば
イースト菌を包含する。
【００２２】本発明によれば、上記のＤＮＡ配列によっ
てコード化されかつ生物学的特徴、例えば治療的処置に
関連しうる組織誘発性能力、殊に骨誘発性能力および／
または分裂促進能力を示すＴＧＦ−β系統群の蛋白質が
得られる。蛋白質の上記特徴は、ホモ２量体またはヘテ
ロダイマーの形成に依存して変化することができる。こ
のような構造は、臨床的用途に十分に有用であることを
証明することができる。ＴＧＦ−β系統群（ＭＰ−５
２）の特に好ましいアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ．３に示されている。
てコード化されかつ生物学的特徴、例えば治療的処置に
関連しうる組織誘発性能力、殊に骨誘発性能力および／
または分裂促進能力を示すＴＧＦ−β系統群の蛋白質が
得られる。蛋白質の上記特徴は、ホモ２量体またはヘテ
ロダイマーの形成に依存して変化することができる。こ
のような構造は、臨床的用途に十分に有用であることを
証明することができる。ＴＧＦ−β系統群（ＭＰ−５
２）の特に好ましいアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ．３に示されている。
【００２３】本発明によれば、ＴＧＦ−β様蛋白質を生
産する方法に関連する。このような方法は、前記ＤＮＡ
配列で形質転換された宿主細胞を適当な培地中で培養し
かつ生産されたＴＧＦ−β様蛋白質を精製することにあ
る。従って、この方法は、医学的治療またはその実施に
増殖因子を必要とする細胞培養技術を使用する用途への
使用に十分な量の所望の蛋白質を生産することができ
る。宿主細胞は、細菌類、例えばバシラス（Bacillus）
またはエシェリキア コリ（Escherichia coli）、真菌
類、例えばイースト菌、植物類、例えばタバコ、ジャガ
イモまたはアラビドプシス（Arabidopsis）および動物
類、殊に脊椎動物細胞系列、例えばＭｏ−、ＣＯＳ−ま
たはＣＨＯ細胞系列から得ることができる。
産する方法に関連する。このような方法は、前記ＤＮＡ
配列で形質転換された宿主細胞を適当な培地中で培養し
かつ生産されたＴＧＦ−β様蛋白質を精製することにあ
る。従って、この方法は、医学的治療またはその実施に
増殖因子を必要とする細胞培養技術を使用する用途への
使用に十分な量の所望の蛋白質を生産することができ
る。宿主細胞は、細菌類、例えばバシラス（Bacillus）
またはエシェリキア コリ（Escherichia coli）、真菌
類、例えばイースト菌、植物類、例えばタバコ、ジャガ
イモまたはアラビドプシス（Arabidopsis）および動物
類、殊に脊椎動物細胞系列、例えばＭｏ−、ＣＯＳ−ま
たはＣＨＯ細胞系列から得ることができる。
【００２４】本発明によれば、重要な組織中の余り豊富
でないｍＲＮＡに相応するＤＮＡ配列を分離するための
特に敏感な方法に関連する。この方法は、４つの異なる
工程の組み合わせを有する。第１に、ｍＲＮＡは、オリ
ゴヌクレオチドプライマーを使用する増幅反応で分離さ
れなければならずかつ使用されなければならない。オリ
ゴヌクレオチドプライマーの配列は、重要な遺伝子に関
連した蛋白質のアミノ酸配列に由来する退化したＤＮＡ
配列を有する。この工程は、重要な遺伝子系統群の既に
知られているメンバーの増幅を導くことができ、したが
ってこの望ましくない配列は、除去されなければならな
い。この目的は、遺伝子系統群の既に分析されたメンバ
ーを消化することが知られている制限エンドヌクレーゼ
を使用することによって達成される。増幅されたＤＮＡ
集団を制限エンドヌクレアーゼで処理した後に、残存す
る所望のＤＮＡ配列は、ゲル電気泳動によって分離さ
れ、かつ第３の工程で増幅反応によって再増幅され、第
４の工程でこの配列は、配列決定によって適当なベクタ
ー中にクローン化される。感度および効率を増大させる
ために、工程は２、３回繰り返して実施され、少なくと
も２回はこの方法の１つの実施態様で実施される。
でないｍＲＮＡに相応するＤＮＡ配列を分離するための
特に敏感な方法に関連する。この方法は、４つの異なる
工程の組み合わせを有する。第１に、ｍＲＮＡは、オリ
ゴヌクレオチドプライマーを使用する増幅反応で分離さ
れなければならずかつ使用されなければならない。オリ
ゴヌクレオチドプライマーの配列は、重要な遺伝子に関
連した蛋白質のアミノ酸配列に由来する退化したＤＮＡ
配列を有する。この工程は、重要な遺伝子系統群の既に
知られているメンバーの増幅を導くことができ、したが
ってこの望ましくない配列は、除去されなければならな
い。この目的は、遺伝子系統群の既に分析されたメンバ
ーを消化することが知られている制限エンドヌクレーゼ
を使用することによって達成される。増幅されたＤＮＡ
集団を制限エンドヌクレアーゼで処理した後に、残存す
る所望のＤＮＡ配列は、ゲル電気泳動によって分離さ
れ、かつ第３の工程で増幅反応によって再増幅され、第
４の工程でこの配列は、配列決定によって適当なベクタ
ー中にクローン化される。感度および効率を増大させる
ために、工程は２、３回繰り返して実施され、少なくと
も２回はこの方法の１つの実施態様で実施される。
【００２５】上記の分離方法は、肝臓組織からのＤＮＡ
配列の分離に使用される。上記方法の１つの場合には、
ＰＣＲ実験に使用される１つのプライマーは、ｍＲＮＡ
のポリＡの尾と相同のものである。この方法の異なる工
程を実施する場合に使用される技術（例えば、増幅反応
または配列決定技術）は、当業者には知られており、か
つ例えばサムブルック（Sambrook）他、1989,“Molecul
ar Cloning: A laboratory manual”, Cold Spring Har
bor Laboratory Pressに記載されている。
配列の分離に使用される。上記方法の１つの場合には、
ＰＣＲ実験に使用される１つのプライマーは、ｍＲＮＡ
のポリＡの尾と相同のものである。この方法の異なる工
程を実施する場合に使用される技術（例えば、増幅反応
または配列決定技術）は、当業者には知られており、か
つ例えばサムブルック（Sambrook）他、1989,“Molecul
ar Cloning: A laboratory manual”, Cold Spring Har
bor Laboratory Pressに記載されている。
【００２６】本発明によれば、本発明によるＴＧＦ−β
系統群の治療的有効量の蛋白質を含有する製薬学的組成
物に関連する。場合によっては、このような組成物は、
製薬学的に認容性の担持剤を含有する。このような治療
的組成物は、傷の治療および組織の回復ならびに骨、軟
骨もしくは歯の欠損の治療に単独でかまたは適当な担持
剤との組合せ物で、可能な場合には他の関連した蛋白質
または増殖因子と一緒に使用することができる。従っ
て、この治療的組成物は、ＭＰ−１２１をコード化する
蛋白質と結合したＭＰ−５２をコード化する蛋白質を、
場合によっては他の公知の生物学的活性物質、例えばＥ
ＧＦ（表皮増殖因子）またはＰＤＧＦ（血小板由来増殖
因子）と一緒に含有することができるが、しかし、これ
に限定されるものではない。ＴＧＦ−β様蛋白質の別の
可能な臨床的適用は、免疫応答のサプレッサーとしての
使用にあり、このことにより、臓器移植の拒絶は回避さ
れる。また、本発明によれば、蛋白質を有する製薬学的
組成物は、予防的に使用することもできるし、化粧術の
プラスチック外科手術に使用することもできる。更に、
この組成物の適用は、ヒトに限定されるのではなく、動
物、殊に家畜類も同様に包含することができる。
系統群の治療的有効量の蛋白質を含有する製薬学的組成
物に関連する。場合によっては、このような組成物は、
製薬学的に認容性の担持剤を含有する。このような治療
的組成物は、傷の治療および組織の回復ならびに骨、軟
骨もしくは歯の欠損の治療に単独でかまたは適当な担持
剤との組合せ物で、可能な場合には他の関連した蛋白質
または増殖因子と一緒に使用することができる。従っ
て、この治療的組成物は、ＭＰ−１２１をコード化する
蛋白質と結合したＭＰ−５２をコード化する蛋白質を、
場合によっては他の公知の生物学的活性物質、例えばＥ
ＧＦ（表皮増殖因子）またはＰＤＧＦ（血小板由来増殖
因子）と一緒に含有することができるが、しかし、これ
に限定されるものではない。ＴＧＦ−β様蛋白質の別の
可能な臨床的適用は、免疫応答のサプレッサーとしての
使用にあり、このことにより、臓器移植の拒絶は回避さ
れる。また、本発明によれば、蛋白質を有する製薬学的
組成物は、予防的に使用することもできるし、化粧術の
プラスチック外科手術に使用することもできる。更に、
この組成物の適用は、ヒトに限定されるのではなく、動
物、殊に家畜類も同様に包含することができる。
【００２７】本発明の目的は、前記蛋白質に特異的に結
合することができる抗体または抗体断片にある。このよ
うな特異的抗体を増殖させる方法は、一般に公知であ
る。有利に、このような抗体は、モノクロナール抗体で
ある。このような抗体または抗体断片は、診断的方法に
有用である。
合することができる抗体または抗体断片にある。このよ
うな特異的抗体を増殖させる方法は、一般に公知であ
る。有利に、このような抗体は、モノクロナール抗体で
ある。このような抗体または抗体断片は、診断的方法に
有用である。
【００２８】
例１
ＭＰ−１２１の分離
１．１ 全ＲＮＡをチアウィン（Chirgwin）他、Bioche
mistry 18 (1979),5294〜5299の方法によってヒト肝臓
組織（４０歳の男性）から分離した。ポリＡ＋ＲＮＡを
製造者の教示に従いオリゴ（ｄＴ）クロマトグラフィー
によって全ＲＮＡから分離した（層状遺伝子（Stratage
ne）ポリ（Ａ） クウィックカラム（Quick colum
n））。
mistry 18 (1979),5294〜5299の方法によってヒト肝臓
組織（４０歳の男性）から分離した。ポリＡ＋ＲＮＡを
製造者の教示に従いオリゴ（ｄＴ）クロマトグラフィー
によって全ＲＮＡから分離した（層状遺伝子（Stratage
ne）ポリ（Ａ） クウィックカラム（Quick colum
n））。
【００２９】１．２ 逆転写反応のために、肝臓組織に
由来するポリＡ＋ ＲＮＡ（１〜２．５μｇ）を５分間
６５℃に加熱し、かつ迅速に氷上で冷却した。ポリ（Ａ
＋）ＲＮＡ １μｇ当たりＲＮＡガード２７Ｕ（Pharma
cia）、オリゴｄ（Ｔ）12 〜 18２．５μｇ、緩衝液５回
（トリス／ＨＣｌ ２５０ｍＭ ｐＨ８．５；ＭｇＣｌ
2５０ｍＭ；ＤＴＴ５０ｍＭ；それぞれｄＮＴＰ５ｍ
Ｍ；ＫＣｌ ６００ｍＭ）および鳥類の骨髄芽球ウィル
ス逆転写酵素２０単位（AMV，Boehringer Mannheim）を
含有する逆転写試薬を添加した。この反応混合物（２５
μｌ）を４２℃で２時間インキュベートした。肝臓ｃＤ
ＮＡプールを−２０℃で貯蔵した。
由来するポリＡ＋ ＲＮＡ（１〜２．５μｇ）を５分間
６５℃に加熱し、かつ迅速に氷上で冷却した。ポリ（Ａ
＋）ＲＮＡ １μｇ当たりＲＮＡガード２７Ｕ（Pharma
cia）、オリゴｄ（Ｔ）12 〜 18２．５μｇ、緩衝液５回
（トリス／ＨＣｌ ２５０ｍＭ ｐＨ８．５；ＭｇＣｌ
2５０ｍＭ；ＤＴＴ５０ｍＭ；それぞれｄＮＴＰ５ｍ
Ｍ；ＫＣｌ ６００ｍＭ）および鳥類の骨髄芽球ウィル
ス逆転写酵素２０単位（AMV，Boehringer Mannheim）を
含有する逆転写試薬を添加した。この反応混合物（２５
μｌ）を４２℃で２時間インキュベートした。肝臓ｃＤ
ＮＡプールを−２０℃で貯蔵した。
【００３０】１．３ 増幅反応を準備するために設計し
たデオキシヌクレオチドプライマーＯＤおよびＯＩＤ
（図３）を自動ＤＮＡ合成装置で発生させた（バイオサ
ーチ）。変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動および等
速電気泳動によるゲルからの主要バンドの分離によって
精製を行なった。オリゴヌクレオチドを、ＴＧＦ−β系
統群の幾つかの公知のメンバーの核酸配列を配列させか
つ最も高度の保存領域を選択することによって設計し
た。この領域の配列は、図３に示されている。クローン
化を簡易化するために、双方のオリゴヌクレオチドは、
ＥｃｏＲ Ｉ制限部位を含有し、かつＯＤは、付加的に
５´末端でＮｃｏ Ｉ制限部位を含有していた。
たデオキシヌクレオチドプライマーＯＤおよびＯＩＤ
（図３）を自動ＤＮＡ合成装置で発生させた（バイオサ
ーチ）。変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動および等
速電気泳動によるゲルからの主要バンドの分離によって
精製を行なった。オリゴヌクレオチドを、ＴＧＦ−β系
統群の幾つかの公知のメンバーの核酸配列を配列させか
つ最も高度の保存領域を選択することによって設計し
た。この領域の配列は、図３に示されている。クローン
化を簡易化するために、双方のオリゴヌクレオチドは、
ＥｃｏＲ Ｉ制限部位を含有し、かつＯＤは、付加的に
５´末端でＮｃｏ Ｉ制限部位を含有していた。
【００３１】１．４ ポリメラーゼ鎖反応の場合には、
肝臓に由来するｃＤＮＡプールを反応混合物５０μｌ中
の鋳型として使用した。増幅をＰＣＲ緩衝液１回（（Ｎ
Ｈ4）2ＳＯ4 １６．６ｍＭ；トリス／ＨＣｌ ６７ｍ
Ｍ、ｐＨ８．８；ＭｇＣｌ2２ｍＭ；ＥＤＴＡ６．７ｍ
Ｍ；β−メルカプトエタノール１０ｍＭ；ＢＳＡ１７０
μｇ／ｍｌ（Gibco））、それぞれｄＮＴＰ２００μＭ
（Pharmacia）、それぞれオリゴヌクレオチド３０ｐｍ
ｏｌ（ＯＤおよびＯＩＤ）およびＴａｑポリメラーゼ
１．５単位（AmpliTaq, Perkin Elmer Cetus）中で実施
した。ＰＣＲ反応は、出発物質としてのポリ（Ａ+）Ｒ
ＮＡ３０ｎｇに相当するｃＤＮＡを包含した。この反応
混合物をパラフィンで被覆し、ＰＣＲの４０の作業周期
（作業周期１：９３℃ ８０秒／５２℃ ４０秒／７２
℃ ４０秒；作業周期２〜９：９３℃ ６０秒／５２℃
４０秒／７２℃ ４０秒；作業周期１０〜２９：９３
℃ ６０秒／５２℃ ４０秒／７２℃ ６０秒；作業周
期３０〜３１：９３℃ ６０秒／５２℃ ４０秒／７２
℃ ９０秒；作業周期４０：９３℃ ６０秒／５２℃
４０秒／７２℃ ４２０秒）を実施した。６つのＰＣＲ
反応混合物をプールし、等量のフェノール、フェノール
／クロロホルム（１：１（ｖ／ｖ））およびクロロホル
ム／イソアミルアルコール（２４：１（ｖ／ｖ））を用
いてのその後の抽出によって精製し、かつエタノール沈
殿によって濃縮した。
肝臓に由来するｃＤＮＡプールを反応混合物５０μｌ中
の鋳型として使用した。増幅をＰＣＲ緩衝液１回（（Ｎ
Ｈ4）2ＳＯ4 １６．６ｍＭ；トリス／ＨＣｌ ６７ｍ
Ｍ、ｐＨ８．８；ＭｇＣｌ2２ｍＭ；ＥＤＴＡ６．７ｍ
Ｍ；β−メルカプトエタノール１０ｍＭ；ＢＳＡ１７０
μｇ／ｍｌ（Gibco））、それぞれｄＮＴＰ２００μＭ
（Pharmacia）、それぞれオリゴヌクレオチド３０ｐｍ
ｏｌ（ＯＤおよびＯＩＤ）およびＴａｑポリメラーゼ
１．５単位（AmpliTaq, Perkin Elmer Cetus）中で実施
した。ＰＣＲ反応は、出発物質としてのポリ（Ａ+）Ｒ
ＮＡ３０ｎｇに相当するｃＤＮＡを包含した。この反応
混合物をパラフィンで被覆し、ＰＣＲの４０の作業周期
（作業周期１：９３℃ ８０秒／５２℃ ４０秒／７２
℃ ４０秒；作業周期２〜９：９３℃ ６０秒／５２℃
４０秒／７２℃ ４０秒；作業周期１０〜２９：９３
℃ ６０秒／５２℃ ４０秒／７２℃ ６０秒；作業周
期３０〜３１：９３℃ ６０秒／５２℃ ４０秒／７２
℃ ９０秒；作業周期４０：９３℃ ６０秒／５２℃
４０秒／７２℃ ４２０秒）を実施した。６つのＰＣＲ
反応混合物をプールし、等量のフェノール、フェノール
／クロロホルム（１：１（ｖ／ｖ））およびクロロホル
ム／イソアミルアルコール（２４：１（ｖ／ｖ））を用
いてのその後の抽出によって精製し、かつエタノール沈
殿によって濃縮した。
【００３２】１．５ 得られたＰＣＲプールの最初の半
分は、制限酵素Ｓｐｈ Ｉ（Pharmacia）およびＡｌｗ
Ｎ Ｉ（Biolabs）を用いる消化にとって十分なもので
あった。このＰＣＲプールの第２の半分を制限酵素Ａｖ
ａ Ｉ（ＢＲＬ）、ＡｌｗＮ Ｉ（Biolabs）およびＴ
ｆｉ Ｉ（Biolabs）によって一連の反応で消化させ
た。制限エンドヌクレアーゼの消化を、製造者によって
推奨された緩衝液中で２〜１２時間の反応でそれぞれの
酵素８単位を使用することにより、３７℃（６５℃での
Ｔｆｉ Ｉを除く）で１００μｌで実施した。
分は、制限酵素Ｓｐｈ Ｉ（Pharmacia）およびＡｌｗ
Ｎ Ｉ（Biolabs）を用いる消化にとって十分なもので
あった。このＰＣＲプールの第２の半分を制限酵素Ａｖ
ａ Ｉ（ＢＲＬ）、ＡｌｗＮ Ｉ（Biolabs）およびＴ
ｆｉ Ｉ（Biolabs）によって一連の反応で消化させ
た。制限エンドヌクレアーゼの消化を、製造者によって
推奨された緩衝液中で２〜１２時間の反応でそれぞれの
酵素８単位を使用することにより、３７℃（６５℃での
Ｔｆｉ Ｉを除く）で１００μｌで実施した。
【００３３】１．６ それぞれＤＮＡ試料を、トリス硼
酸塩緩衝液（トリス塩基８９ｍＭ、硼酸８９ｍＭ、ＥＤ
ＴＡ２ｍＭ、ｐＨ８）中のアガロースゲル４％（ＦＭＣ
Nusieveアガロース３％、Biozymおよびアガロース１
％、BRL）を使用することにより電気泳動によって分別
した。その後に、切断されていない増幅生成物を染色す
るエチジウムブロミド（約２００ｂｐ；サイズ標識を同
時に流した）をゲルから除去し、かつフェノール抽出に
よって分離した：等量のフェノールを除去したアガロー
スに添加し、これを小片に切断し、１０分間凍結させ、
渦動させ、かつ遠心分離した。水相を捕集し、中間相を
等量のＴＥ緩衝液で再抽出し、遠心分離し、双方の水相
を合わせた。更に、ＤＮＡを２回フェノール／クロロホ
ルムで抽出することによって精製し、かつ１回クロロホ
ルム／イソアミルアルコールで抽出することによって精
製した。
酸塩緩衝液（トリス塩基８９ｍＭ、硼酸８９ｍＭ、ＥＤ
ＴＡ２ｍＭ、ｐＨ８）中のアガロースゲル４％（ＦＭＣ
Nusieveアガロース３％、Biozymおよびアガロース１
％、BRL）を使用することにより電気泳動によって分別
した。その後に、切断されていない増幅生成物を染色す
るエチジウムブロミド（約２００ｂｐ；サイズ標識を同
時に流した）をゲルから除去し、かつフェノール抽出に
よって分離した：等量のフェノールを除去したアガロー
スに添加し、これを小片に切断し、１０分間凍結させ、
渦動させ、かつ遠心分離した。水相を捕集し、中間相を
等量のＴＥ緩衝液で再抽出し、遠心分離し、双方の水相
を合わせた。更に、ＤＮＡを２回フェノール／クロロホ
ルムで抽出することによって精製し、かつ１回クロロホ
ルム／イソアミルアルコールで抽出することによって精
製した。
【００３４】１．７ エタノールの沈殿の後、分離した
ＤＮＡの４分の１または５分の１を、１３までの作業周
期の数に減少させることを除いて最初の増幅に使用した
のと同じ条件を使用して再増幅させた（作業周期１：９
３℃ ８０秒／５２℃ ４０秒／７２℃ ４０秒；作業
周期２〜１２：９３℃ ６０秒／５２℃ ４０秒／７２
℃ ６０秒；作業周期１３：９３℃ ６０秒／５２℃
４０秒／７２℃ ４２０秒）。再増幅した生成物を精製
し、上記と同じ酵素で制限させ、切断されていない生成
物を増幅生成物について上記したようにアガロースゲル
から分離した。再増幅。引き続く制限およびゲル分離を
１回繰り返した。
ＤＮＡの４分の１または５分の１を、１３までの作業周
期の数に減少させることを除いて最初の増幅に使用した
のと同じ条件を使用して再増幅させた（作業周期１：９
３℃ ８０秒／５２℃ ４０秒／７２℃ ４０秒；作業
周期２〜１２：９３℃ ６０秒／５２℃ ４０秒／７２
℃ ６０秒；作業周期１３：９３℃ ６０秒／５２℃
４０秒／７２℃ ４２０秒）。再増幅した生成物を精製
し、上記と同じ酵素で制限させ、切断されていない生成
物を増幅生成物について上記したようにアガロースゲル
から分離した。再増幅。引き続く制限およびゲル分離を
１回繰り返した。
【００３５】１．８ ゲルからの前記分離の後、増幅生
成物を製造者によって推奨される緩衝液を使用すること
により３７℃で２時間ＥｃｏＲ Ｉ ４単位（Pharmaci
a）によって消化した。制限混合物の４分の１を、同様
にＥｃｏＲ Ｉによって消化されたベクターｐブルース
クリプトＩＩ ＳＫ＋（層状遺伝子（Stratagene））に
結合させた。結合後、それぞれの酵素組合せ物からのク
ローン２４個をさらに配列分析によって分析した。Ａｌ
ｗＮ ＩおよびＳｐｈ Ｉによって制限された試料は、
新規の配列を含有しておらず、ＢＭＰ６およびインヒビ
ンβＡ 配列のみを含有していた。ＭＰ−１２１と名付
けられた１９個の同一の新規配列は、Ａｖａ Ｉ、Ａｌ
ｗＮ ＩおよびＴｆｉ Ｉ制限試料によって見い出され
た。１つの配列は、２個のヌクレオチド交換によって前
記の主として見い出された配列とは異なるものであっ
た。Ｅ．コリ ＨＢ１０１の場合の結合反応および形質
転換を、サムブルック（Sambrook）他、Molecular clon
ig: A Laboratory manual (1989)の記載と同様に実施し
た。形質転換体をアンピシリン耐性によって選択し、プ
ラスミドＤＮＡを標準プロトコル（Sambrook他(1989)）
に従い分離した。分析は配列決定キット“Sequenase Ve
rsion 2.0”（United States Biochemical Corporatio
n）を用いて“ジデオキシリボヌクレオチド鎖末端配列
決定”によって二重鎖プラスミドを配列決定することに
よって行なわれた。
成物を製造者によって推奨される緩衝液を使用すること
により３７℃で２時間ＥｃｏＲ Ｉ ４単位（Pharmaci
a）によって消化した。制限混合物の４分の１を、同様
にＥｃｏＲ Ｉによって消化されたベクターｐブルース
クリプトＩＩ ＳＫ＋（層状遺伝子（Stratagene））に
結合させた。結合後、それぞれの酵素組合せ物からのク
ローン２４個をさらに配列分析によって分析した。Ａｌ
ｗＮ ＩおよびＳｐｈ Ｉによって制限された試料は、
新規の配列を含有しておらず、ＢＭＰ６およびインヒビ
ンβＡ 配列のみを含有していた。ＭＰ−１２１と名付
けられた１９個の同一の新規配列は、Ａｖａ Ｉ、Ａｌ
ｗＮ ＩおよびＴｆｉ Ｉ制限試料によって見い出され
た。１つの配列は、２個のヌクレオチド交換によって前
記の主として見い出された配列とは異なるものであっ
た。Ｅ．コリ ＨＢ１０１の場合の結合反応および形質
転換を、サムブルック（Sambrook）他、Molecular clon
ig: A Laboratory manual (1989)の記載と同様に実施し
た。形質転換体をアンピシリン耐性によって選択し、プ
ラスミドＤＮＡを標準プロトコル（Sambrook他(1989)）
に従い分離した。分析は配列決定キット“Sequenase Ve
rsion 2.0”（United States Biochemical Corporatio
n）を用いて“ジデオキシリボヌクレオチド鎖末端配列
決定”によって二重鎖プラスミドを配列決定することに
よって行なわれた。
【００３６】クローンをフローマン（Frohman）（Ampli
fications, Perkin-Elmer社刊、第５版（１９９０）、
第１１〜１５頁）によって詳細に記載された方法によっ
てｃ−ＤＮＡの３´−末端の完全形にした。ＭＰ−１２
１の第１の断片の分離に使用された同じ肝臓ｍＲＮＡ
を、アダプタープライマー（ＡＧＡＡＴＴＣＧＣＡＴＧ
ＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧＡＡＧＣ（Ｔ）16）に結合し
たオリゴｄＴ（１６個の残基）からなるプライマーを使
用することによって逆転写した。増幅をＭＰ−１２１の
アダプタープライマー（ＡＧＡＡＴＴＣＧＣＡＴＧＣＣ
ＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧ）および内部プライマー（ＧＧＣ
ＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＣＡＴＡ）を使用
することにより実施した。増幅生成物をＭＰ−１２１の
巣を形成した（nested）内部プライマー（ＡＣＡＴＡＧ
ＣＡＧＧＣＡＴＧＣＣＴＧＧＴＡＴＴＧ）およびアダプ
タープライマーを使用することにより再増幅した。再増
幅された生成物を同様に制限されたベクターｐＴ７／Ｔ
３（Pharmacia社）の場合にＳｐｈ Ｉを用いて制限後
にクローン化し、かつ配列決定キット“Sequenase Vers
ion 2.0”（United States Biochemical Corporation
社）を用いて配列決定した。クローンは、公知のＭＰ−
１２１配列の３´末端への配列の重なりによって特徴付
けられた。
fications, Perkin-Elmer社刊、第５版（１９９０）、
第１１〜１５頁）によって詳細に記載された方法によっ
てｃ−ＤＮＡの３´−末端の完全形にした。ＭＰ−１２
１の第１の断片の分離に使用された同じ肝臓ｍＲＮＡ
を、アダプタープライマー（ＡＧＡＡＴＴＣＧＣＡＴＧ
ＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧＡＡＧＣ（Ｔ）16）に結合し
たオリゴｄＴ（１６個の残基）からなるプライマーを使
用することによって逆転写した。増幅をＭＰ−１２１の
アダプタープライマー（ＡＧＡＡＴＴＣＧＣＡＴＧＣＣ
ＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧ）および内部プライマー（ＧＧＣ
ＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＣＡＴＡ）を使用
することにより実施した。増幅生成物をＭＰ−１２１の
巣を形成した（nested）内部プライマー（ＡＣＡＴＡＧ
ＣＡＧＧＣＡＴＧＣＣＴＧＧＴＡＴＴＧ）およびアダプ
タープライマーを使用することにより再増幅した。再増
幅された生成物を同様に制限されたベクターｐＴ７／Ｔ
３（Pharmacia社）の場合にＳｐｈ Ｉを用いて制限後
にクローン化し、かつ配列決定キット“Sequenase Vers
ion 2.0”（United States Biochemical Corporation
社）を用いて配列決定した。クローンは、公知のＭＰ−
１２１配列の３´末端への配列の重なりによって特徴付
けられた。
【００３７】例２
ＭＰ−５２の分離
他のｃＤＮＡ配列、ＭＰ−５２を、上記方法（例１）に
従いヒトの胎児（生後８〜９週間）の組織からのＲＮＡ
を使用することによって分離した。ＰＣＲ反応は、出発
物質としてのポリ（Ａ+）ＲＮＡ２０ｎｇに相当するｃ
ＤＮＡを包含していた。再増幅工程を双方の酵素組合せ
物に対して２回繰り返した。結合後、それぞれの酵素組
合せ物からのクローン２４個をさらに配列分析によって
分析した。ＡｌｗＮ ＩおよびＳｐｈ Ｉによって制限
された試料は、ＭＰ−５２と名付けられた新規の配列を
生じた。Ａｖａ Ｉ、ＡｌｗＮ ＩおよびＴｆｉ Ｉに
よって制限された試料は、新規の配列を含有せずに、主
としてＢＭＰ７および若干のインヒビンβＡ配列から構
成されていた。
従いヒトの胎児（生後８〜９週間）の組織からのＲＮＡ
を使用することによって分離した。ＰＣＲ反応は、出発
物質としてのポリ（Ａ+）ＲＮＡ２０ｎｇに相当するｃ
ＤＮＡを包含していた。再増幅工程を双方の酵素組合せ
物に対して２回繰り返した。結合後、それぞれの酵素組
合せ物からのクローン２４個をさらに配列分析によって
分析した。ＡｌｗＮ ＩおよびＳｐｈ Ｉによって制限
された試料は、ＭＰ−５２と名付けられた新規の配列を
生じた。Ａｖａ Ｉ、ＡｌｗＮ ＩおよびＴｆｉ Ｉに
よって制限された試料は、新規の配列を含有せずに、主
としてＢＭＰ７および若干のインヒビンβＡ配列から構
成されていた。
【００３８】クローンを上記方法（例１）に従い３´−
末端の完全形にした。ＭＰ−１２１の第１の断片の分離
に使用された同じ胎児ｍＲＮＡを例１の記載と同様に逆
転写した。増幅を、アダプタープライマー（ＡＧＡＡＴ
ＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧ）および内部
プライマー（ＣＴＴＧＡＧＴＡＣＧＡＧＧＣＴＴＴＣＣ
ＡＣＴＧ）を使用することにより実施した。増幅生成物
を巣を形成した（nested）アダプタープライマー（ＡＴ
ＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧＡＡＧ）およ
び巣を形成した（nested）内部プライマー（ＧＧＡＧＣ
ＣＣＡＣＧＡＡＴＣＡＴＧＣＡＧＴＣＡ）を使用するこ
とにより再増幅した。再増幅した生成物を同様に制限ベ
クター（独特のＮｃｏ Ｉ制限部位を有する変化した多
重クローン化部位を有するｐＵＣ１９（Pharmacia No.2
7-4951-01））で制限した後にクローン化し、かつ配列
決定した。クローンは、公知のＭＰ−５２配列の３´末
端への配列の重なりによって特性決定された。これらの
クローンの幾つかは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示され
た配列の３´末端の最後の１４３番目の対塩基および
０．５６ｋｂの３´非翻訳領域（図示されていない配
列）を有する。これらのクローンの１つを、アウスユー
ベル（Ausubel）他（Current Protocols in Molecular
Biology, Green publishing Associates and Wiley-Int
erscience 刊(1989)）によって詳細に記載された一般的
方法によりヒトのゲノムライブラリー（層状遺伝子（St
ratagene）Ｎｏ．９４６２０３）をスクリーニングする
ための試料として使用した。λファージ８×１０5か
ら、約２０ｋｂの挿入断片を有することが証明された１
つのファージ（λ２．７．４）を分離し、かつＤＳＭ
（Ｎｏ．７３８７）に寄託した。このクローンは、ｍＲ
ＮＡから分離された配列以外に記載された増幅方法によ
ってさらに５´末端に対する配列形成を有する。配列の
分析のために、約７．５ｋｂのＨｉｎｄ ＩＩＩ断片を
同様に制限ベクター（Bluescript SK, 層状遺伝子（Str
atagene）Ｎｏ．２１２２０６）中でサブクローン化し
た。また、ＳＫＬ ５２（Ｈ３）ＭＰ１２と呼ばれる前
記プラスミドをＤＳＭ（Ｎｏ．７３５３）に寄託した。
このクローンに由来する配列形成は、ＳＥＱＩＤ Ｎ
Ｏ：１に示されている。ヌクレオチドＮｏ．１０５０に
ついて、測定されたｃＤＮＡおよびそれぞれのゲノム配
列は、１つの対塩基によって区別される（ｃＤＮＡ：
Ｇ；ゲノムＤＮＡ：Ａ）。ｍＲＮＡ調製に使用された胎
児組織からの増幅されたゲノムＤＮＡの配列決定によっ
て確認されるように、ゲノム配列は正確であると思われ
る。ゲノムＤＮＡは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の対塩基
３３２と３３３との間に約３ｋｂのイントロンを有す
る。イントロンの配列は、図示されていない。正確なエ
クソン／エクソン結合は、この領域を有するｃＤＮＡに
由来する増幅生成物を配列決定することによって確認さ
れた。この配列情報は、フローマン（Frohman）（Ampli
fications, Perkin-Elmer社刊、第５版（１９９０）、
第１１〜１５頁）によって詳細に記載された僅かに変え
られた方法により得ることができる。ＭＰ−５２の３´
末端の分離に使用された同じ胎児ＲＮＡを、５´方向
（ＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＡＣＴ）
に方向を定めたＭＰ−５２配列の内部プライマーを使用
することにより逆転写した。ポリＡの尾を、末端トラン
スフェラーゼを使用することによって第１の鎖ｃＤＮＡ
の５´に追加した。２つの工程の増幅を第１にオリゴｄ
Ｔからなるプライマーおよびアダプタープライマー（Ａ
ＧＡＡＴＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧＡＡ
ＧＣ（Ｔ16））を適用し、かつ第２にＭＰ−５２のアダ
プタープライマー（ＡＧＡＡＴＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡＴ
ＧＧＴＣＧＡＣＧ）および内部プライマー（ＣＣＡＧＣ
ＡＧＣＣＣＡＴＣＣＴＴＣＴＣＣ）を適用することによ
って実施することができる。増幅生成物を同じアダプタ
ープライマーおよびＭＰ−５２配列の巣を形成した（ne
sted）内部プライマー（ＴＣＣＡＧＧＧＣＡＣＴＡＡＴ
ＧＴＣＡＡＡＣＡＣＧ）を使用することにより再増幅さ
せた。従って、再増幅生成物を、巣を形成した（neste
d）アダプタープライマー（ＡＴＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡ
ＴＧＧＴＣＧＡＣＧＡＡＧ）およびＭＰ−５２配列の巣
を形成した（nested）内部プライマー（ＡＣＴＡＡＴＧ
ＴＣＡＡＡＣＡＣＧＴＡＣＣＴＣＴＧ）を使用すること
により再び再増幅させた。最終的に再増幅された生成物
は、ＥｃｏＲＶで制限されたベクター（ブルースクリプ
ト ＳＫ、層状遺伝子（Stratagene）Ｎｏ．２１２２０
６）中でクローン化された平滑断片であった。クローン
は、λ２．７．４のＤＮＡに対する配列の重なりによっ
て特性決定された。
末端の完全形にした。ＭＰ−１２１の第１の断片の分離
に使用された同じ胎児ｍＲＮＡを例１の記載と同様に逆
転写した。増幅を、アダプタープライマー（ＡＧＡＡＴ
ＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧ）および内部
プライマー（ＣＴＴＧＡＧＴＡＣＧＡＧＧＣＴＴＴＣＣ
ＡＣＴＧ）を使用することにより実施した。増幅生成物
を巣を形成した（nested）アダプタープライマー（ＡＴ
ＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧＡＡＧ）およ
び巣を形成した（nested）内部プライマー（ＧＧＡＧＣ
ＣＣＡＣＧＡＡＴＣＡＴＧＣＡＧＴＣＡ）を使用するこ
とにより再増幅した。再増幅した生成物を同様に制限ベ
クター（独特のＮｃｏ Ｉ制限部位を有する変化した多
重クローン化部位を有するｐＵＣ１９（Pharmacia No.2
7-4951-01））で制限した後にクローン化し、かつ配列
決定した。クローンは、公知のＭＰ−５２配列の３´末
端への配列の重なりによって特性決定された。これらの
クローンの幾つかは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示され
た配列の３´末端の最後の１４３番目の対塩基および
０．５６ｋｂの３´非翻訳領域（図示されていない配
列）を有する。これらのクローンの１つを、アウスユー
ベル（Ausubel）他（Current Protocols in Molecular
Biology, Green publishing Associates and Wiley-Int
erscience 刊(1989)）によって詳細に記載された一般的
方法によりヒトのゲノムライブラリー（層状遺伝子（St
ratagene）Ｎｏ．９４６２０３）をスクリーニングする
ための試料として使用した。λファージ８×１０5か
ら、約２０ｋｂの挿入断片を有することが証明された１
つのファージ（λ２．７．４）を分離し、かつＤＳＭ
（Ｎｏ．７３８７）に寄託した。このクローンは、ｍＲ
ＮＡから分離された配列以外に記載された増幅方法によ
ってさらに５´末端に対する配列形成を有する。配列の
分析のために、約７．５ｋｂのＨｉｎｄ ＩＩＩ断片を
同様に制限ベクター（Bluescript SK, 層状遺伝子（Str
atagene）Ｎｏ．２１２２０６）中でサブクローン化し
た。また、ＳＫＬ ５２（Ｈ３）ＭＰ１２と呼ばれる前
記プラスミドをＤＳＭ（Ｎｏ．７３５３）に寄託した。
このクローンに由来する配列形成は、ＳＥＱＩＤ Ｎ
Ｏ：１に示されている。ヌクレオチドＮｏ．１０５０に
ついて、測定されたｃＤＮＡおよびそれぞれのゲノム配
列は、１つの対塩基によって区別される（ｃＤＮＡ：
Ｇ；ゲノムＤＮＡ：Ａ）。ｍＲＮＡ調製に使用された胎
児組織からの増幅されたゲノムＤＮＡの配列決定によっ
て確認されるように、ゲノム配列は正確であると思われ
る。ゲノムＤＮＡは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の対塩基
３３２と３３３との間に約３ｋｂのイントロンを有す
る。イントロンの配列は、図示されていない。正確なエ
クソン／エクソン結合は、この領域を有するｃＤＮＡに
由来する増幅生成物を配列決定することによって確認さ
れた。この配列情報は、フローマン（Frohman）（Ampli
fications, Perkin-Elmer社刊、第５版（１９９０）、
第１１〜１５頁）によって詳細に記載された僅かに変え
られた方法により得ることができる。ＭＰ−５２の３´
末端の分離に使用された同じ胎児ＲＮＡを、５´方向
（ＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＡＣＴ）
に方向を定めたＭＰ−５２配列の内部プライマーを使用
することにより逆転写した。ポリＡの尾を、末端トラン
スフェラーゼを使用することによって第１の鎖ｃＤＮＡ
の５´に追加した。２つの工程の増幅を第１にオリゴｄ
Ｔからなるプライマーおよびアダプタープライマー（Ａ
ＧＡＡＴＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＣＧＡＡ
ＧＣ（Ｔ16））を適用し、かつ第２にＭＰ−５２のアダ
プタープライマー（ＡＧＡＡＴＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡＴ
ＧＧＴＣＧＡＣＧ）および内部プライマー（ＣＣＡＧＣ
ＡＧＣＣＣＡＴＣＣＴＴＣＴＣＣ）を適用することによ
って実施することができる。増幅生成物を同じアダプタ
ープライマーおよびＭＰ−５２配列の巣を形成した（ne
sted）内部プライマー（ＴＣＣＡＧＧＧＣＡＣＴＡＡＴ
ＧＴＣＡＡＡＣＡＣＧ）を使用することにより再増幅さ
せた。従って、再増幅生成物を、巣を形成した（neste
d）アダプタープライマー（ＡＴＴＣＧＣＡＴＧＣＣＡ
ＴＧＧＴＣＧＡＣＧＡＡＧ）およびＭＰ−５２配列の巣
を形成した（nested）内部プライマー（ＡＣＴＡＡＴＧ
ＴＣＡＡＡＣＡＣＧＴＡＣＣＴＣＴＧ）を使用すること
により再び再増幅させた。最終的に再増幅された生成物
は、ＥｃｏＲＶで制限されたベクター（ブルースクリプ
ト ＳＫ、層状遺伝子（Stratagene）Ｎｏ．２１２２０
６）中でクローン化された平滑断片であった。クローン
は、λ２．７．４のＤＮＡに対する配列の重なりによっ
て特性決定された。
【００３９】プラスミド ＳＫＬ ５２（Ｈ３）ＭＰ１
２は、１９９２年１２月１０日付けで番号７３５３でＤ
ＳＭ（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Ze
llkulturen）,3300 Braunschweig, Mascheroder Weg 1b
に寄託された。
２は、１９９２年１２月１０日付けで番号７３５３でＤ
ＳＭ（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Ze
llkulturen）,3300 Braunschweig, Mascheroder Weg 1b
に寄託された。
【００４０】ファージλ２．７．４は、１９９３年１月
１３日付けで番号７３８７でＤＳＭに寄託された。
１３日付けで番号７３８７でＤＳＭに寄託された。
【００４１】
【外１】
【００４２】
【外２】
【００４３】
【外３】
【図１】ＴＧＦ−β系統群のメンバーである蛋白質ＭＰ
５２および複数のＢＭＰ蛋白質のアミノ酸配列図。
５２および複数のＢＭＰ蛋白質のアミノ酸配列図。
【図２】ＴＧＦ−β系統群のメンバーである蛋白質ＭＰ
１２１および複数のＢＭＰ蛋白質のアミノ酸配列図。
１２１および複数のＢＭＰ蛋白質のアミノ酸配列図。
【図３】ＴＧＦ−β類似の蛋白質をコード化する遺伝子
を得るためのプライマーを示す配列図。
を得るためのプライマーを示す配列図。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 ゲルトルート ヘッテン
ドイツ連邦共和国 Ｄ−6919 バンメン
タール ヴァイヴィーゼンヴェーク 17
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07K 14/00
C12N 15/00
ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
ＰｕｂＭｅｄ
ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳ
ｅｑ
ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ
ｅｎｅＳｅｑ
Claims (3)
- 【請求項１】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１に示したような
ヌクレオチドを有するＤＮＡ 配列にストリンジェント
な条件下でハイブリダイズしかつ軟骨および骨の誘発効
果を有しならびにＴＧＦ−β系統群の蛋白質活性を有す
るＴＧＦ−β系統群の蛋白質をコード化するＤＮＡ配列
によってコード化された軟骨および骨の誘発効果を有す
るＴＧＦ−β系統群の蛋白質。 - 【請求項２】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３ 【化１】 のアミノ酸配列を有する、請求項１記載の蛋白質。
- 【請求項３】 ＭＰ−５２： 【化２】 で示されるアミノ酸配列からなる蛋白質。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP92102324 | 1992-02-12 | ||
| DE92102324.8 | 1992-02-12 |
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|---|---|---|---|
| JP51379393A Division JP3193050B2 (ja) | 1992-02-12 | 1993-02-12 | 新規の増殖／分化因子をコード化するｄｎａ配列 |
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|---|---|
| JPH09182593A JPH09182593A (ja) | 1997-07-15 |
| JP3493105B2 true JP3493105B2 (ja) | 2004-02-03 |
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ID=8209321
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51379393A Expired - Lifetime JP3193050B2 (ja) | 1992-02-12 | 1993-02-12 | 新規の増殖／分化因子をコード化するｄｎａ配列 |
| JP28876696A Expired - Fee Related JP3493105B2 (ja) | 1992-02-12 | 1996-10-30 | ＴＧＦ−β系統群の蛋白質 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51379393A Expired - Lifetime JP3193050B2 (ja) | 1992-02-12 | 1993-02-12 | 新規の増殖／分化因子をコード化するｄｎａ配列 |
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| Country | Link |
|---|---|
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| JP (2) | JP3193050B2 (ja) |
| KR (1) | KR0172186B1 (ja) |
| AT (1) | ATE188996T1 (ja) |
| CA (1) | CA2129820C (ja) |
| CZ (2) | CZ287715B6 (ja) |
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| DK (1) | DK0625989T3 (ja) |
| ES (1) | ES2141761T3 (ja) |
| GR (1) | GR3032482T3 (ja) |
| HU (1) | HU218845B (ja) |
| NZ (1) | NZ249113A (ja) |
| PT (1) | PT625989E (ja) |
| RU (1) | RU2208638C2 (ja) |
| UA (1) | UA48105C2 (ja) |
| WO (1) | WO1993016099A2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US7025959B1 (en) | 1992-02-12 | 2006-04-11 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka Mbh | MP121, a growth/differentiation factor of the TGF-β family |
| DE19525416A1 (de) | 1995-07-12 | 1997-01-16 | Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh | Verwendung von MP52 zur Behandlung und Prävention von Erkrankungen des Nervensystems |
| US5807713A (en) * | 1992-02-12 | 1998-09-15 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung | DNA encoding growth/differentiation factor |
| US6171584B1 (en) | 1992-02-12 | 2001-01-09 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka Mbh | Method of treatment with growth/differentiation factors of the TGF-β family |
| US6120760A (en) * | 1992-02-12 | 2000-09-19 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung | Growth/differentiation factors of the TGF-β family |
| US7067637B1 (en) | 1992-02-12 | 2006-06-27 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka Mbh | Antibody or antibody fragments specific for a protein of the TGF-β family |
| JP3645258B2 (ja) | 1993-01-12 | 2005-05-11 | ジョーンズ ホプキンス ユニバーシティー スクール オブ メディシン | 増殖分化因子−５ |
| CA2165778A1 (en) | 1993-07-09 | 1995-01-19 | Se-Jin Lee | Growth differentiation factor-7 |
| US5770444A (en) * | 1993-07-09 | 1998-06-23 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-6 |
| IL110589A0 (en) * | 1993-08-10 | 1994-11-11 | Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh | Growth/differentiation factor of the TGF- beta family |
| US6764994B1 (en) | 1993-08-10 | 2004-07-20 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka Mbh | Growth/differential factor of the TGF-B family |
| US6027919A (en) | 1993-12-07 | 2000-02-22 | Genetics Institute, Inc. | BMP-12 and BMP-13 proteins and DNA encoding them |
| ES2255059T3 (es) * | 1993-12-07 | 2006-06-16 | Genetics Institute, Llc | Bmp-12, bmp-13 y composiciones suyas inductoras de tendon. |
| IL114397A0 (en) * | 1994-07-01 | 1995-10-31 | Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh | Growth/differentiation factor of the TGF-beta-family |
| WO1996002559A1 (en) * | 1994-07-13 | 1996-02-01 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-12 |
| AU1120295A (en) | 1994-11-07 | 1996-05-31 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Cartilage-derived morphogenetic proteins |
| US5846770A (en) * | 1994-11-22 | 1998-12-08 | Genetics Institute, Inc. | DNA molecules encoding human chordin |
| ATE325131T1 (de) * | 1995-04-19 | 2006-06-15 | Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh | Neues protein und verfahren zu dessen herstellung |
| AP856A (en) * | 1995-04-19 | 2000-07-12 | Biopharm Gmbh | A novel homodimer protein used in pharmaceutical preparation for treating cartlage and bone diseases. |
| US5635372A (en) * | 1995-05-18 | 1997-06-03 | Genetics Institute, Inc. | BMP-15 compositions |
| ES2203701T3 (es) | 1995-06-05 | 2004-04-16 | Genetics Institute, Llc | Uso de proteinas morfogenicas de hueso para sanar y reparar uniones de tejido conjuntivo. |
| US5902785A (en) * | 1995-06-06 | 1999-05-11 | Genetics Institute, Inc. | Cartilage induction by bone morphogenetic proteins |
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| JPH1080273A (ja) * | 1996-05-13 | 1998-03-31 | Hoechst Yakuhin Kogyo Kk | Ｍｐ５２に対するモノクローナル抗体 |
| US5965403A (en) | 1996-09-18 | 1999-10-12 | Genetics Institute, Inc. | Nucleic acids encoding bone morphogenic protein-16 (BMP-16) |
| CA2278546C (en) * | 1997-01-30 | 2008-04-01 | Hoechst Marion Roussel Ltd. | Freeze-dried composition of bone morphogenetic protein human mp52 |
| US7041641B2 (en) | 1997-03-20 | 2006-05-09 | Stryker Corporation | Osteogenic devices and methods of use thereof for repair of endochondral bone and osteochondral defects |
| US20010016646A1 (en) | 1998-03-20 | 2001-08-23 | David C. Rueger | Osteogenic devices and methods of use thereof for repair of endochondral bone, osteochondral and chondral defects |
| WO1998054572A1 (en) | 1997-05-30 | 1998-12-03 | Creative Biomolecules, Inc. | Methods for evaluating tissue morphogenesis and activity |
| US20020052026A1 (en) | 1997-10-08 | 2002-05-02 | Steven M. Vicik | Methods of refolding proteins |
| US6027917A (en) | 1997-12-10 | 2000-02-22 | Genetics Institute, Inc. | Bone morphogenetic protein (BMP)-17 and BMP-18 compositions |
| US7147839B2 (en) | 1998-05-29 | 2006-12-12 | Curis, Inc. | Methods for evaluating tissue morphogenesis and activity |
| US6727224B1 (en) | 1999-02-01 | 2004-04-27 | Genetics Institute, Llc. | Methods and compositions for healing and repair of articular cartilage |
| DE19906096A1 (de) | 1999-02-13 | 2000-08-17 | Walter Sebald | Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop |
| TWI267378B (en) | 2001-06-08 | 2006-12-01 | Wyeth Corp | Calcium phosphate delivery vehicles for osteoinductive proteins |
| US8546334B2 (en) | 2001-11-19 | 2013-10-01 | Scil Technology Gmbh | Device having osteoinductive and osteoconductive properties |
| WO2004024199A1 (en) | 2002-09-10 | 2004-03-25 | Scil Technology Gmbh | Metal implant coated under reduced oxygen concentration with osteoinductive protein |
| US7429378B2 (en) | 2003-05-13 | 2008-09-30 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of high affinity anti-MMP inhibitors |
| US7553827B2 (en) | 2003-08-13 | 2009-06-30 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of cycline compounds |
| US8273347B2 (en) | 2003-05-13 | 2012-09-25 | Depuy Spine, Inc. | Autologous treatment of degenerated disc with cells |
| US7344716B2 (en) | 2003-05-13 | 2008-03-18 | Depuy Spine, Inc. | Transdiscal administration of specific inhibitors of pro-inflammatory cytokines |
| US8361467B2 (en) | 2003-07-30 | 2013-01-29 | Depuy Spine, Inc. | Trans-capsular administration of high specificity cytokine inhibitors into orthopedic joints |
| NZ546438A (en) | 2003-09-12 | 2010-07-30 | Wyeth Corp | Injectable calcium phosphate solid rods and pastes for delivery of osteogenic proteins |
| US8895540B2 (en) | 2003-11-26 | 2014-11-25 | DePuy Synthes Products, LLC | Local intraosseous administration of bone forming agents and anti-resorptive agents, and devices therefor |
| CA2558395C (en) | 2004-03-10 | 2011-11-29 | Scil Technology Gmbh | Coated implants, their manufacturing and use thereof |
| AU2005247871A1 (en) | 2004-04-27 | 2005-12-08 | Research Development Foundation | Antagonism of TGF-beta superfamily receptor signaling |
| JP5201987B2 (ja) | 2004-05-25 | 2013-06-05 | ストライカー コーポレイション | 軟骨欠損を処置するための、形態形成タンパク質の使用 |
| US20060069008A1 (en) | 2004-09-28 | 2006-03-30 | Sanjay Mistry | Treatment of neurological deficits in the striatum or substanta nigra pars compacta |
| US7473678B2 (en) | 2004-10-14 | 2009-01-06 | Biomimetic Therapeutics, Inc. | Platelet-derived growth factor compositions and methods of use thereof |
| US8147860B2 (en) | 2005-12-06 | 2012-04-03 | Etex Corporation | Porous calcium phosphate bone material |
| WO2007092622A2 (en) | 2006-02-09 | 2007-08-16 | Biomimetic Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treating bone |
| JP5362554B2 (ja) | 2006-05-17 | 2013-12-11 | ストライカー コーポレイション | 軟骨の欠損を処置するための可溶性形態形成タンパク質の使用 |
| US9161967B2 (en) | 2006-06-30 | 2015-10-20 | Biomimetic Therapeutics, Llc | Compositions and methods for treating the vertebral column |
| EP2049145B1 (en) | 2006-06-30 | 2018-03-14 | BioMimetic Therapeutics, LLC | Pdgf-biomatrix compositions and methods for treating rotator cuff injuries |
| US8524265B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-09-03 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Medical implant sheets useful for tissue regeneration |
| AU2007234612B2 (en) | 2006-12-14 | 2013-06-27 | Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc | Protein stabilization formulations |
| WO2008082563A2 (en) | 2006-12-21 | 2008-07-10 | Stryker Corporation | Sustained-release formulations comprising crystals, macromolecular gels, and particulate suspensions of biologic agents |
| AU2008209069B2 (en) * | 2007-01-25 | 2014-03-06 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka Mbh | Use of GDF-5 for the improvement or maintenance of dermal appearance |
| US7678764B2 (en) | 2007-06-29 | 2010-03-16 | Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc | Protein formulations for use at elevated temperatures |
| CN101801405A (zh) | 2007-08-07 | 2010-08-11 | 先进科技及再生医学有限责任公司 | 包含于酸性水溶液中的gdf-5的蛋白质配方 |
| US8986696B2 (en) | 2007-12-21 | 2015-03-24 | Depuy Mitek, Inc. | Trans-capsular administration of p38 map kinase inhibitors into orthopedic joints |
| JP2011514331A (ja) | 2008-02-13 | 2011-05-06 | キース フルスカ， | 血管硬化症の治療における使用のためのｂｍｐ−７ |
| US7947649B2 (en) | 2008-04-14 | 2011-05-24 | Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc | Liquid buffered GDF-5 formulations |
| WO2010030714A2 (en) | 2008-09-09 | 2010-03-18 | Biomimetic Therapeutics, Inc. | Platelet-derived growth factor compositions and methods for the treatment of tendon and ligament injuries |
| EP2396025A2 (en) | 2009-02-12 | 2011-12-21 | Stryker Corporation | Peripheral administration of proteins including tgf-beta superfamily members for systemic treatment of disorders and disease |
| EP2396026A2 (en) | 2009-02-12 | 2011-12-21 | Stryker Corporation | Compositions and methods for minimally-invasive systemic delivery of proteins including tgf- superfamily members |
| US20120148539A1 (en) | 2009-03-24 | 2012-06-14 | Moulay Hicham Alaoui-Ismaili | Methods and Compositions for Tissue Engineering |
| US8609127B2 (en) | 2009-04-03 | 2013-12-17 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Medical implant with bioactive material and method of making the medical implant |
| WO2010144696A1 (en) | 2009-06-11 | 2010-12-16 | Burnham Institute For Medical Research | Directed differentiation of stem cells |
| US20110224138A1 (en) | 2009-09-09 | 2011-09-15 | Julie Krop | Methods for treating pain induced by injuries and diseases of an articular joint |
| WO2011035094A1 (en) | 2009-09-17 | 2011-03-24 | Stryker Corporation | Buffers for controlling the ph of bone morphogenetic proteins |
| AU2010341565A1 (en) | 2009-12-22 | 2012-07-12 | Stryker Corporation | BMP-7 variants with reduced immunogenicity |
| BR112012020566B1 (pt) | 2010-02-22 | 2021-09-21 | Biomimetic Therapeutics, Llc | Composição de fator de crescimento derivado de plaqueta |
| CA2806143A1 (en) | 2010-07-30 | 2012-02-02 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka Mb H | Drug delivery devices and growth factor formulations for accelerated wound healing |
| EP2537538A1 (en) | 2011-06-22 | 2012-12-26 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka mbH | Bioresorbable Wound Dressing |
| US10034945B2 (en) | 2012-07-13 | 2018-07-31 | Trustees Of Tufts College | Silk powder compaction for production of constructs with high mechanical strength and stiffness |
| US10780171B2 (en) | 2015-10-26 | 2020-09-22 | President And Fellows Of Harvard College | Reduced and oxidized polysaccharides and methods of use thereof |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL83003A (en) * | 1986-07-01 | 1995-07-31 | Genetics Inst | Factors that soak bone formation |
| AU1539188A (en) * | 1987-05-04 | 1988-11-10 | Bristol-Myers Squibb Company | TGF-B2 and novel compositions having anti-neoplastic activity |
| US5221620A (en) * | 1987-10-06 | 1993-06-22 | Oncogen | Cloning and expression of transforming growth factor β2 |
| JPH04505325A (ja) * | 1989-05-17 | 1992-09-17 | オンコジーン・サイエンス・インコーポレーテツド | 組織誘導性腫瘍増殖阻止剤及びその調製方法と使用法 |
| FI95398C (fi) * | 1989-06-24 | 1996-01-25 | Boehringer Ingelheim Int | Menetelmä ihmisen nuhaviruksen serotyypittämiseksi |
| DE69027961T2 (de) * | 1989-09-06 | 1997-01-09 | Chichibu Onoda Cement Corp | Protein, DNA und ihre Verwendung |
| EP0448704B1 (en) * | 1989-10-17 | 1998-06-17 | Stryker Corporation | Osteogenic devices |
| JPH03147787A (ja) * | 1989-10-31 | 1991-06-24 | Takara Shuzo Co Ltd | 新しいｄｎａクローニング方法 |
-
1993
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