JP3124373B2 - 免疫抑制物質 - Google Patents
免疫抑制物質Info
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- JP3124373B2 JP3124373B2 JP04136241A JP13624192A JP3124373B2 JP 3124373 B2 JP3124373 B2 JP 3124373B2 JP 04136241 A JP04136241 A JP 04136241A JP 13624192 A JP13624192 A JP 13624192A JP 3124373 B2 JP3124373 B2 JP 3124373B2
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- Japan
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/32—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61P31/10—Antimycotics
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、式Ｉ：
【化２】 で示される化合物、該化合物を産生する微生物、該化合
物の製造法に関する。また、本発明は該化合物を有効成
分として含有する免疫抑制剤、抗腫瘍剤、および抗真菌
剤を提供する。
物の製造法に関する。また、本発明は該化合物を有効成
分として含有する免疫抑制剤、抗腫瘍剤、および抗真菌
剤を提供する。
【０００２】
【従来の技術】免疫抑制剤は、臓器あるいは組織の移植
に対する拒絶反応、骨髄移植によっておこる移植片宿主
反応の予防、慢性関節リウマチなどの数々の自己免疫疾
患の治療には欠かせないものである。現在、種々の免疫
抑制剤が開発・実用化されているが、効力や副作用など
の点で必ずしも満足できるものではなく、新しい免疫抑
制剤の創出が望まれている。現在までに、種々の抗腫瘍
剤が開発され、実用化されているが、これらの抗腫瘍剤
は毒性（副作用）を持つことから、その使用量が非常に
限られているため、治療成績も満足できる状態ではな
い。本発明の化合物と構造が類似した抗腫瘍剤として、
特開昭63-165323に記載されているものがある。真菌症
はカビや酵母に起因する病気で、年々増加の傾向にあ
り、近年、エイズ患者の発生で、特に深在性真菌症の患
者が増加している。従来、深在性真菌症の治療剤として
は、ナイスタチン、アンホテリシンＢ、ミコナゾ−ル、
５−フルオロサイトシン等が知られているが、抗真菌剤
の開発は抗生物質の開発に比べ遅れているのが現状であ
る。
に対する拒絶反応、骨髄移植によっておこる移植片宿主
反応の予防、慢性関節リウマチなどの数々の自己免疫疾
患の治療には欠かせないものである。現在、種々の免疫
抑制剤が開発・実用化されているが、効力や副作用など
の点で必ずしも満足できるものではなく、新しい免疫抑
制剤の創出が望まれている。現在までに、種々の抗腫瘍
剤が開発され、実用化されているが、これらの抗腫瘍剤
は毒性（副作用）を持つことから、その使用量が非常に
限られているため、治療成績も満足できる状態ではな
い。本発明の化合物と構造が類似した抗腫瘍剤として、
特開昭63-165323に記載されているものがある。真菌症
はカビや酵母に起因する病気で、年々増加の傾向にあ
り、近年、エイズ患者の発生で、特に深在性真菌症の患
者が増加している。従来、深在性真菌症の治療剤として
は、ナイスタチン、アンホテリシンＢ、ミコナゾ−ル、
５−フルオロサイトシン等が知られているが、抗真菌剤
の開発は抗生物質の開発に比べ遅れているのが現状であ
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、免疫
抑制作用、抗腫瘍細胞増殖作用、および抗真菌作用を有
する新規な化合物を提供することにある。
抑制作用、抗腫瘍細胞増殖作用、および抗真菌作用を有
する新規な化合物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、以上の事
柄を鑑み鋭意研究を重ねた結果、放線菌ストレプトミセ
ス プルニカラ− ＰＡ−４８１５３株（Streptomyces
prunicolor PA-48153）の培養液中に抗腫瘍細胞増殖作
用、免疫抑制作用、および抗真菌作用を合わせ持つ新規
な化合物を見出し、発酵、抽出、分離精製を行ない本発
明を完成するに至った。すなわち本発明は、式Ｉ：
柄を鑑み鋭意研究を重ねた結果、放線菌ストレプトミセ
ス プルニカラ− ＰＡ−４８１５３株（Streptomyces
prunicolor PA-48153）の培養液中に抗腫瘍細胞増殖作
用、免疫抑制作用、および抗真菌作用を合わせ持つ新規
な化合物を見出し、発酵、抽出、分離精製を行ない本発
明を完成するに至った。すなわち本発明は、式Ｉ：
【化３】 で示される化合物に関する。本発明化合物の立体構造
は、Ｘ線結晶解析などから、(5R*,6R*)-5-エチル-5,6-
ジヒドロ-6-[(E)-(2R*,3S*,4R*,5S*)-2-ヒドロキシ-4-
メトキシ-3,5-ジメチル-7-ノネニル]-2H-ピラン-2-オン
であると確認された。本発明化合物は、側鎖ノネニル基
の２位ヒドロキシル基がカルボン酸やリン酸のなどの酸
とエステルを形成していてもよく、さらにはエ−テルを
形成していてもよい。
は、Ｘ線結晶解析などから、(5R*,6R*)-5-エチル-5,6-
ジヒドロ-6-[(E)-(2R*,3S*,4R*,5S*)-2-ヒドロキシ-4-
メトキシ-3,5-ジメチル-7-ノネニル]-2H-ピラン-2-オン
であると確認された。本発明化合物は、側鎖ノネニル基
の２位ヒドロキシル基がカルボン酸やリン酸のなどの酸
とエステルを形成していてもよく、さらにはエ−テルを
形成していてもよい。
【０００５】また本発明は、ストレプトミセス プルニ
カラ−（Streptomyces prunicolor）種に属し本発明化
合物を産生する微生物を提供する。本発明のストレプト
ミセス プルニカラ−（Streptomyces prunicolor）種
に属するＰＡ−４８１５３株は以下のような性状を有し
ていた。
カラ−（Streptomyces prunicolor）種に属し本発明化
合物を産生する微生物を提供する。本発明のストレプト
ミセス プルニカラ−（Streptomyces prunicolor）種
に属するＰＡ−４８１５３株は以下のような性状を有し
ていた。
【０００６】(1) 形態学的性状: 本菌株はイ−スト・麦
芽寒天、チロシン寒天、ベンネット寒天培地などで良好
な成育を示す。またこれらの培地上で気中菌糸を豊富に
形成し、胞子着生も良好である。分枝は単純分枝で輪生
分枝は認められない。胞子鎖は比較的長く、一胞子鎖当
りの胞子数は５０個以上である。電子顕微鏡による観察
の結果、胞子は長円筒形で、幅０.４〜０.５μｍ、長さ
１.２〜１.４μｍであり、その表面は平滑である。胞子
のう、鞭毛胞子、菌核はいずれも認められない。
芽寒天、チロシン寒天、ベンネット寒天培地などで良好
な成育を示す。またこれらの培地上で気中菌糸を豊富に
形成し、胞子着生も良好である。分枝は単純分枝で輪生
分枝は認められない。胞子鎖は比較的長く、一胞子鎖当
りの胞子数は５０個以上である。電子顕微鏡による観察
の結果、胞子は長円筒形で、幅０.４〜０.５μｍ、長さ
１.２〜１.４μｍであり、その表面は平滑である。胞子
のう、鞭毛胞子、菌核はいずれも認められない。
【０００７】(2) 培養上の諸性状（２８℃，１４日間培
養）:色名の表示は「色の標準」日本色彩研究所版によ
る。
養）:色名の表示は「色の標準」日本色彩研究所版によ
る。
【表１】 (W)、(R)は ISP カラ−シリ−ズのwhite series，red s
eriesを表す。 成育温度: 本菌株は１４〜３５℃で成育し、至適成育温
度は２４〜２８℃である。
eriesを表す。 成育温度: 本菌株は１４〜３５℃で成育し、至適成育温
度は２４〜２８℃である。
【０００８】(3) 生理学的性状: メラノイド色素産生能 陰性 チロシナ−ゼ反応 陰性 ミルクの凝固 陰性 ミルクのペプトン化 陽性 澱粉水解能 陽性
【０００９】 (4) 糖の利用能（対照区 −）: Ｌ−アラビノ−ス Ｄ−キシロ−ス Ｄ−グルコ−ス ＋＋ ＋＋ ＋＋ Ｄ−フラクト−ス シュ−クロ−ス イノシト−ル ＋＋ ＋＋ ＋＋ Ｌ−ラムノ−ス ラフィノ−ス Ｄ−マニト−ル ＋＋ ＋＋ ＋＋
【００１０】(5) 細胞壁組成: 細胞壁組成成分のジアミ
ノピメリン酸を分析した結果、ＬＬ−型であった。
ノピメリン酸を分析した結果、ＬＬ−型であった。
【００１１】以上の諸性状から本菌株はストレプトミセ
ス（Streptomyces）属に属する株であると判断できる。
ワックスマン著、ジアクチノミセテス（The Actinomyce
tes）第2巻（1961年）、シャ−リング及びゴットリ−プ
のISP（International Streptomyces Project）報告
［インタ−ナショナル ジャ−ナル オブ バクテリオ
ロジ−（International Journal of Systematic Bacter
iology）第18巻 69〜189 ペ−ジ、279〜392 ペ−ジ（19
68年）、同第19巻 391〜512 ペ−ジ（1969年）、同第22
巻 265〜394 ペ−ジ（1972年）］、バ−ジ−ズ マニュ
アル オブ ディタ−ミネイティブバクテリオロジ−
（Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology）
第8版（1974年）及びバ−ジ−ズ マニュアル オブ
システマティック バクテリオロジ−（Bergey’s Manu
al of Systematic Bacteriology Vol.4）第4巻（1989年
）、その他の放線菌関連の文献から本菌株の近縁種を
検索した結果、Streptomyces prunicolor Ryabova and
Preobrazhenskayaに最も類似することがわかった。そこ
で本菌株とStreptomyces prunicolor ATCC 25487と同時
比較実験を行った結果、成育、胞子形成の良否、シュク
ロ−スの利用能に相違が認められたが、その他の主要な
諸性状はよく一致したので本菌株をStreptomyces pruni
colorと同種 と同定し、ストレプトミセス プルニカラ
− ＰＡ−４８１５３（Streptomyces prunicolor PA-4
8153）と命名した。
ス（Streptomyces）属に属する株であると判断できる。
ワックスマン著、ジアクチノミセテス（The Actinomyce
tes）第2巻（1961年）、シャ−リング及びゴットリ−プ
のISP（International Streptomyces Project）報告
［インタ−ナショナル ジャ−ナル オブ バクテリオ
ロジ−（International Journal of Systematic Bacter
iology）第18巻 69〜189 ペ−ジ、279〜392 ペ−ジ（19
68年）、同第19巻 391〜512 ペ−ジ（1969年）、同第22
巻 265〜394 ペ−ジ（1972年）］、バ−ジ−ズ マニュ
アル オブ ディタ−ミネイティブバクテリオロジ−
（Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology）
第8版（1974年）及びバ−ジ−ズ マニュアル オブ
システマティック バクテリオロジ−（Bergey’s Manu
al of Systematic Bacteriology Vol.4）第4巻（1989年
）、その他の放線菌関連の文献から本菌株の近縁種を
検索した結果、Streptomyces prunicolor Ryabova and
Preobrazhenskayaに最も類似することがわかった。そこ
で本菌株とStreptomyces prunicolor ATCC 25487と同時
比較実験を行った結果、成育、胞子形成の良否、シュク
ロ−スの利用能に相違が認められたが、その他の主要な
諸性状はよく一致したので本菌株をStreptomyces pruni
colorと同種 と同定し、ストレプトミセス プルニカラ
− ＰＡ−４８１５３（Streptomyces prunicolor PA-4
8153）と命名した。
【００１２】なお、本菌株は、茨城県つくば市東１−１
−３（郵便番号３０５）にある工業技術院微生物工業技
術研究所に、平成４年（１９９２年）２月２０日よりブ
ダペスト条約に基づき「Streptomyces prunicolor PA-4
8153」微工研条寄第３７５４号（FERM BP-3754）として
寄託されている。
−３（郵便番号３０５）にある工業技術院微生物工業技
術研究所に、平成４年（１９９２年）２月２０日よりブ
ダペスト条約に基づき「Streptomyces prunicolor PA-4
8153」微工研条寄第３７５４号（FERM BP-3754）として
寄託されている。
【００１３】さらに本発明は、ストレプトミセス（Stre
ptomyces）属に属し本発明化合物を産生する微生物を培
養し、該培養培地から該化合物を採取することを特徴と
する該化合物の製造法を提供する。以下に、本発明化合
物の一般的製造法を記載する。ストレプトミセス（Stre
ptomyces）属に属する菌株、例えば上記のStreptomyces
prunicolor PA-48153を、通常の発酵生産に用いる培地
組成、培地条件で培養する。培地は原則として、炭素
源、窒素源、無機塩などを含む。必要に応じて、ビタミ
ン類、先駆物質などを加えてもよい。炭素源としては、
例えば、グルコ−ス、可溶性澱粉、デキストリン、グリ
セリン、糖類、有機酸などが単独または混合物として用
いられる。窒素源としては、例えば、大豆粉、コ−ンス
チ−プリカ−、肉エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプト
ン、小麦麦芽、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムな
どが単独または混合物として用いられる。無機塩として
は、例えば、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、塩化マンガン、硫
酸亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩などが挙げられ、
必要に応じて培地に添加する。
ptomyces）属に属し本発明化合物を産生する微生物を培
養し、該培養培地から該化合物を採取することを特徴と
する該化合物の製造法を提供する。以下に、本発明化合
物の一般的製造法を記載する。ストレプトミセス（Stre
ptomyces）属に属する菌株、例えば上記のStreptomyces
prunicolor PA-48153を、通常の発酵生産に用いる培地
組成、培地条件で培養する。培地は原則として、炭素
源、窒素源、無機塩などを含む。必要に応じて、ビタミ
ン類、先駆物質などを加えてもよい。炭素源としては、
例えば、グルコ−ス、可溶性澱粉、デキストリン、グリ
セリン、糖類、有機酸などが単独または混合物として用
いられる。窒素源としては、例えば、大豆粉、コ−ンス
チ−プリカ−、肉エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプト
ン、小麦麦芽、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムな
どが単独または混合物として用いられる。無機塩として
は、例えば、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、塩化マンガン、硫
酸亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩などが挙げられ、
必要に応じて培地に添加する。
【００１４】培養温度は約１４〜３５℃で行なうと良
く、特に２０〜２８℃が好ましい。培養時間は発酵の規
模に大きく左右されるが、約３〜５日が大量生産を行な
う場合に要する培養時間である。培養中に激しい発泡が
起こる場合には、培養前または培養中に例えば、植物
油、ラ−ド、ポリプロピレングリコ−ルなどの消泡剤を
適宜添加するとよい。培養終了後、培養物から本発明化
合物を分離採取するには、通常の発酵生産物を分離採取
する方法を適宜用いる。例えば、濾過、遠心分離、各種
イオン交換樹脂やその他の活性吸着剤による吸脱着やク
ロマトグラフィ−、各種有機溶媒による抽出などを適当
に組み合わせるとよい。
く、特に２０〜２８℃が好ましい。培養時間は発酵の規
模に大きく左右されるが、約３〜５日が大量生産を行な
う場合に要する培養時間である。培養中に激しい発泡が
起こる場合には、培養前または培養中に例えば、植物
油、ラ−ド、ポリプロピレングリコ−ルなどの消泡剤を
適宜添加するとよい。培養終了後、培養物から本発明化
合物を分離採取するには、通常の発酵生産物を分離採取
する方法を適宜用いる。例えば、濾過、遠心分離、各種
イオン交換樹脂やその他の活性吸着剤による吸脱着やク
ロマトグラフィ−、各種有機溶媒による抽出などを適当
に組み合わせるとよい。
【００１５】以下に上記製造法で得られた化合物ＰＡ−
４８１５３Ｃの物理化学的特性および構造式を示す。 1)溶解性：可溶；ｎ−ヘキサン，酢酸エチル，クロロホ
ルム，メタノ−ル 不溶；水 2)性状：無色の針状結晶 3)融点：７８〜７９℃ 4)分子式：C19H32O4（分子量３２４） 5)ＳＩＭＳ：m/z 325 (M+H)+ 6)元素分析：C19H32O4として 理論値；C：70.33，H：9.94 実測値；C：70.08 %，H：9.86 % 7) [α]D 23.5：−148.7±3.7゜ (C=0.5, CHCl3) 8) ＵＶ：λmax MeOH nm：末端吸収（end absorption） 9) ＩＲ：νmax KBr cm-1：3505, 1728, 1620, 1460, 13
85, 1319, 1286, 1269,1142, 1095, 1075, 1030, 987,
964, 938, 843, 818 10a) 1Ｈ ＮＭＲ in CDCl3 ppm (J=Hz)：7.01 (1H, dd,
J=6.0, J=9.8), 6.03(1H, dd, J=1.0, J=9.6), 5.54〜
5.29 (2H, m), 4.78〜4.70 (1H, m), 4.25〜4.16 (1H,
m), 3.48 (3H, s), 3.45 (1H, d, J=2.6), 2.99 (1H, d
d, J=4.4, J=6.2), 2.35〜2.23 (1H, m), 2.15〜2.03
(1H, m), 1.95〜1.38 (10H, m), 1.02〜0.93 (9H, m). 10b) 1Ｈ ＮＭＲ in C6D6 ppm (J=Hz)：6.14 (1H, dd,
J=5.8, J=9.8), 5.80 (1H, dd, J=1, J=9.8), 5.52〜5.
27 (2H, m), 4.68〜4.60 (1H, m), 4.44〜4.36(1H, m),
3.17 (1H, d, J=2.6), 3.11 (3H, s), 2.76 (1H, dd,
J=4.4, J=6.4),2.10〜1.98 (1H, m), 1.90〜1.74 (2H,
m), 1.74〜1.55 (7H, m), 1.34〜1.07(2H, m), 0.96 (3
H, t, J=4.4), 0.92 (3H, t, J=4), 0.60(3H, t, J=7.
4) 11) 13Ｃ ＮＭＲ in CDCl3 ppm：165.22, 151.21, 129.
18, 127.38, 121.24, 91.53, 78.11, 67.81, 62.06, 3
9.53, 39.35, 37.70, 37.15, 36.56, 21.23, 18.45, 1
5.69, 12.65, 11.47 12)ＴＬＣ*：Ｒｆ＝0.51 13)ＨＰＬＣ**：保持時間＝11.6分 *TLC：Merck KGF，検出；ＵＶ (弱い)，ヨウ素，硫酸/
加熱，溶媒；クロロホルム／メタノ−ル(97:3) Ｒｆ＝
0.51,またはｎ−ヘキサン／エタノ−ル(1:1)Ｒｆ＝0.25 **HPLC：カラム；COSMOSIL 5C18-AR 4.6φ×150mm，検
出；ＵＶ (220nm)，溶媒；50% アセトニトリル／1% ト
リフロロ酢酸，溶出速度；１ml/min.
４８１５３Ｃの物理化学的特性および構造式を示す。 1)溶解性：可溶；ｎ−ヘキサン，酢酸エチル，クロロホ
ルム，メタノ−ル 不溶；水 2)性状：無色の針状結晶 3)融点：７８〜７９℃ 4)分子式：C19H32O4（分子量３２４） 5)ＳＩＭＳ：m/z 325 (M+H)+ 6)元素分析：C19H32O4として 理論値；C：70.33，H：9.94 実測値；C：70.08 %，H：9.86 % 7) [α]D 23.5：−148.7±3.7゜ (C=0.5, CHCl3) 8) ＵＶ：λmax MeOH nm：末端吸収（end absorption） 9) ＩＲ：νmax KBr cm-1：3505, 1728, 1620, 1460, 13
85, 1319, 1286, 1269,1142, 1095, 1075, 1030, 987,
964, 938, 843, 818 10a) 1Ｈ ＮＭＲ in CDCl3 ppm (J=Hz)：7.01 (1H, dd,
J=6.0, J=9.8), 6.03(1H, dd, J=1.0, J=9.6), 5.54〜
5.29 (2H, m), 4.78〜4.70 (1H, m), 4.25〜4.16 (1H,
m), 3.48 (3H, s), 3.45 (1H, d, J=2.6), 2.99 (1H, d
d, J=4.4, J=6.2), 2.35〜2.23 (1H, m), 2.15〜2.03
(1H, m), 1.95〜1.38 (10H, m), 1.02〜0.93 (9H, m). 10b) 1Ｈ ＮＭＲ in C6D6 ppm (J=Hz)：6.14 (1H, dd,
J=5.8, J=9.8), 5.80 (1H, dd, J=1, J=9.8), 5.52〜5.
27 (2H, m), 4.68〜4.60 (1H, m), 4.44〜4.36(1H, m),
3.17 (1H, d, J=2.6), 3.11 (3H, s), 2.76 (1H, dd,
J=4.4, J=6.4),2.10〜1.98 (1H, m), 1.90〜1.74 (2H,
m), 1.74〜1.55 (7H, m), 1.34〜1.07(2H, m), 0.96 (3
H, t, J=4.4), 0.92 (3H, t, J=4), 0.60(3H, t, J=7.
4) 11) 13Ｃ ＮＭＲ in CDCl3 ppm：165.22, 151.21, 129.
18, 127.38, 121.24, 91.53, 78.11, 67.81, 62.06, 3
9.53, 39.35, 37.70, 37.15, 36.56, 21.23, 18.45, 1
5.69, 12.65, 11.47 12)ＴＬＣ*：Ｒｆ＝0.51 13)ＨＰＬＣ**：保持時間＝11.6分 *TLC：Merck KGF，検出；ＵＶ (弱い)，ヨウ素，硫酸/
加熱，溶媒；クロロホルム／メタノ−ル(97:3) Ｒｆ＝
0.51,またはｎ−ヘキサン／エタノ−ル(1:1)Ｒｆ＝0.25 **HPLC：カラム；COSMOSIL 5C18-AR 4.6φ×150mm，検
出；ＵＶ (220nm)，溶媒；50% アセトニトリル／1% ト
リフロロ酢酸，溶出速度；１ml/min.
【００１６】本発明はさらに、本発明化合物を有効成分
として含有する抗腫瘍剤、免疫抑制剤、および抗真菌剤
を提供する。本発明の抗腫瘍剤、免疫抑制剤、および抗
真菌剤は、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シ
ロップ剤などによる経口投与、注射剤による静脈注射、
筋肉注射、皮下注射のような投与方法、あるいは軟膏剤
などによる経皮投与の方法で投与することができる。
として含有する抗腫瘍剤、免疫抑制剤、および抗真菌剤
を提供する。本発明の抗腫瘍剤、免疫抑制剤、および抗
真菌剤は、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シ
ロップ剤などによる経口投与、注射剤による静脈注射、
筋肉注射、皮下注射のような投与方法、あるいは軟膏剤
などによる経皮投与の方法で投与することができる。
【００１７】錠剤の場合は活性成分の外に補助成分と一
緒に圧縮成型して作られる。この補助成分としては薬学
的に許容される賦形剤、例えば結合剤（例：トウモロコ
シでん粉）、充填剤（例：ラクトース、微結晶性セルロ
ース）、崩壊剤（例：でん粉グリコール酸ナトリウム）
または滑沢剤（例：ステアリン酸マグネシウム）を用い
ることができる。また、錠剤をコーティングしてもよ
い。シロップ剤、液剤、懸濁剤などの液体製剤の場合、
例えば懸濁化剤（例：メチルセルロース）、乳化剤
（例：レシチン）、保存剤などを用いて慣用の方法によ
り調製することができる。注射用に調製する場合、溶
液、懸濁液、油性または水性乳濁液の形態でもよく、懸
濁液安定剤または分散剤などを含有してもよい。
緒に圧縮成型して作られる。この補助成分としては薬学
的に許容される賦形剤、例えば結合剤（例：トウモロコ
シでん粉）、充填剤（例：ラクトース、微結晶性セルロ
ース）、崩壊剤（例：でん粉グリコール酸ナトリウム）
または滑沢剤（例：ステアリン酸マグネシウム）を用い
ることができる。また、錠剤をコーティングしてもよ
い。シロップ剤、液剤、懸濁剤などの液体製剤の場合、
例えば懸濁化剤（例：メチルセルロース）、乳化剤
（例：レシチン）、保存剤などを用いて慣用の方法によ
り調製することができる。注射用に調製する場合、溶
液、懸濁液、油性または水性乳濁液の形態でもよく、懸
濁液安定剤または分散剤などを含有してもよい。
【００１８】有効成分の投与量は、投与形態、患者の症
状、年齢、体重、性別により異なるが、抗腫瘍剤として
用いる場合、体重１ｋｇあたり、１日０.０１〜５０ｍ
ｇ、好ましくは０.１〜１０ｍｇを投与する。免疫抑制
剤として用いる場合は、０.１〜５０ｍｇ、好ましくは
２〜２５ｍｇ、抗真菌剤として用いる場合は、１０〜１
００ｍｇを投与する。ただし、これら投与量は範囲に限
定されるものではない。
状、年齢、体重、性別により異なるが、抗腫瘍剤として
用いる場合、体重１ｋｇあたり、１日０.０１〜５０ｍ
ｇ、好ましくは０.１〜１０ｍｇを投与する。免疫抑制
剤として用いる場合は、０.１〜５０ｍｇ、好ましくは
２〜２５ｍｇ、抗真菌剤として用いる場合は、１０〜１
００ｍｇを投与する。ただし、これら投与量は範囲に限
定されるものではない。
【００１９】以下に実施例で本発明を詳細に説明する。
１．発酵 可溶性澱粉０.５％、グルコ−ス０.５％、ポリペプトン
（日本製薬製）０.５％、牛肉エキス（ディフコ製）０.
２５％、酵母エキス（ディフコ製）０.５％、食塩０.２
５％、および水道水よりなる培地８００ｍｌ（２Ｎ 水
酸化ナトリウムでｐＨ７に調整）を含む２Ｌ容三角フラ
スコにStreptomyces prunicolor PA-48153の種培養スラ
ントから接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２
８℃、４８時間振盪培養を行なった。この培養液８００
ｍｌずつを、上記と同一組成を有する培地１６Ｌを入れ
た３０Ｌ容ジャ−ファメンタ−に植菌し、通気量１２.
８Ｌ／ｍｉｎ．、内圧０.３５ｋｇ／ｃｍ2、撹拌回転数
２００ｒｐｍで、２８℃、２４時間培養した。次いでこ
の培養液８Ｌを、グルコ−ス２.０％、馬鈴薯澱粉２.０
％、脱脂大豆粉２.０％、酵母エキス（ディフコ製）０.
５％、食塩０.２５％、硫酸亜鉛７水和物０.０００５
％、塩化マンガン４水和物０.０００５％、硫酸銅５水
和物０.０００５％、炭酸カルシウム０.３５％、消泡剤
P-2000（大日本インキ製）０.００３％、および水道水
よりなる培地１５０Ｌ（２Ｎ 水酸化ナトリウムでｐＨ
７.０に調整)を含む２５０Ｌ容タンクに植菌し、通気量
１２０Ｌ／ｍｉｎ．、内圧０.３５ｋｇ／ｃｍ2、撹拌回
転数２８０ｒｐｍで、２８℃、９０時間培養した。
（日本製薬製）０.５％、牛肉エキス（ディフコ製）０.
２５％、酵母エキス（ディフコ製）０.５％、食塩０.２
５％、および水道水よりなる培地８００ｍｌ（２Ｎ 水
酸化ナトリウムでｐＨ７に調整）を含む２Ｌ容三角フラ
スコにStreptomyces prunicolor PA-48153の種培養スラ
ントから接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２
８℃、４８時間振盪培養を行なった。この培養液８００
ｍｌずつを、上記と同一組成を有する培地１６Ｌを入れ
た３０Ｌ容ジャ−ファメンタ−に植菌し、通気量１２.
８Ｌ／ｍｉｎ．、内圧０.３５ｋｇ／ｃｍ2、撹拌回転数
２００ｒｐｍで、２８℃、２４時間培養した。次いでこ
の培養液８Ｌを、グルコ−ス２.０％、馬鈴薯澱粉２.０
％、脱脂大豆粉２.０％、酵母エキス（ディフコ製）０.
５％、食塩０.２５％、硫酸亜鉛７水和物０.０００５
％、塩化マンガン４水和物０.０００５％、硫酸銅５水
和物０.０００５％、炭酸カルシウム０.３５％、消泡剤
P-2000（大日本インキ製）０.００３％、および水道水
よりなる培地１５０Ｌ（２Ｎ 水酸化ナトリウムでｐＨ
７.０に調整)を含む２５０Ｌ容タンクに植菌し、通気量
１２０Ｌ／ｍｉｎ．、内圧０.３５ｋｇ／ｃｍ2、撹拌回
転数２８０ｒｐｍで、２８℃、９０時間培養した。
【００２０】２．分離精製 (1)分離 (a)上記工程で得られた培養液９８Ｌから、Ｓ型超遠心
分離機（No.6-P 関西遠心分離機製作所株式会社）（１
５０００ｒｐｍ）によって上清液８３Ｌを得た。この上
清液を、２Ｎ塩酸でｐＨ７.０に調整し、酢酸エチル４
６Ｌで抽出した。抽出液４０Ｌを減圧濃縮し、粗物質
（crude-1）１８.９１ｇを得た。一方、上記遠心で沈殿
として得られた湿菌体８ｋｇは、アセトン２８Ｌで抽出
した。溶媒を減圧留去して、水層６Ｌを得た。２Ｎ塩酸
でｐＨ７.０に調整し、酢酸エチル１３Ｌで抽出した。
抽出液１２Ｌを減圧濃縮し、粗物質（crude-2）２２.８
６ｇを得た。
分離機（No.6-P 関西遠心分離機製作所株式会社）（１
５０００ｒｐｍ）によって上清液８３Ｌを得た。この上
清液を、２Ｎ塩酸でｐＨ７.０に調整し、酢酸エチル４
６Ｌで抽出した。抽出液４０Ｌを減圧濃縮し、粗物質
（crude-1）１８.９１ｇを得た。一方、上記遠心で沈殿
として得られた湿菌体８ｋｇは、アセトン２８Ｌで抽出
した。溶媒を減圧留去して、水層６Ｌを得た。２Ｎ塩酸
でｐＨ７.０に調整し、酢酸エチル１３Ｌで抽出した。
抽出液１２Ｌを減圧濃縮し、粗物質（crude-2）２２.８
６ｇを得た。
【００２１】(b)濾液抽出エキスである粗物質（crude-
1）（１８.９１ｇ）をｎ−ヘキサン３００ｍｌで洗浄し
た。洗浄後のヘキサンを減圧留去し、残渣（residue-
1）５.１ｇを得た。一方、ヘキサンで洗浄された粗物質
（residue-2）を酢酸エチル２０ｍｌで懸濁し、ヘキサ
ン３００ｍｌで抽出した。ヘキサン層は減圧留去し残渣
（residue-3）３.１ｇを得た。ヘキサン層を除去した残
りの沈殿物（residue-4）は粗物質（residue-2）と同様
に処理し、ヘキサン層からの残渣（residue-5）と沈殿
物（residue-6）を得た。
1）（１８.９１ｇ）をｎ−ヘキサン３００ｍｌで洗浄し
た。洗浄後のヘキサンを減圧留去し、残渣（residue-
1）５.１ｇを得た。一方、ヘキサンで洗浄された粗物質
（residue-2）を酢酸エチル２０ｍｌで懸濁し、ヘキサ
ン３００ｍｌで抽出した。ヘキサン層は減圧留去し残渣
（residue-3）３.１ｇを得た。ヘキサン層を除去した残
りの沈殿物（residue-4）は粗物質（residue-2）と同様
に処理し、ヘキサン層からの残渣（residue-5）と沈殿
物（residue-6）を得た。
【００２２】(c)菌体抽出エキスである粗物質（crude-
2）（２２.８６ｇ）をｎ−ヘキサン３００ｍｌで洗浄し
た。洗浄後のヘキサンを減圧留去し残渣（residue-11）
１８.２ｇを得た。一方、ヘキサンで洗浄された粗物質
（residue-12）を酢酸エチル２０ｍｌで懸濁した後ヘキ
サン３００ｍｌで抽出し、ヘキサン層からの残渣（resi
due-13）０.６５ｇと沈殿物（residue-14）２.１ｇを得
た。
2）（２２.８６ｇ）をｎ−ヘキサン３００ｍｌで洗浄し
た。洗浄後のヘキサンを減圧留去し残渣（residue-11）
１８.２ｇを得た。一方、ヘキサンで洗浄された粗物質
（residue-12）を酢酸エチル２０ｍｌで懸濁した後ヘキ
サン３００ｍｌで抽出し、ヘキサン層からの残渣（resi
due-13）０.６５ｇと沈殿物（residue-14）２.１ｇを得
た。
【００２３】（２）精製 （ａ）粗物質（crude-1）から分離したＰＡ−４８１５
３Ｃ含有分画（residue-1, 3, 5（計10.4g））をカラム
クロマトグラフィー（カラム；SiO2，120ml（メルク社
製）， 溶媒；クロロホルム， １分画；２０ｇ）で精製
し、９〜１７番目の分画からＰＡ−４８１５３Ｃの粗精
製物４．２ｇを得た。これをカラムクロマトグラフィー
（カラム；Lobar SiO2 60 B size（メルク社製），溶
媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１，１分画；１０
ｇ）にかけ、３８〜９０番目の分画から得られたＰＡ−
４８１５３Ｃの精製物１．６ｇをさらにカラムクロマト
グラフィー（カラム；Lobar SiO2 60 B size（メルク社
製），溶媒；クロロホルム：メタノール＝９８：２，１
分画；１０ｇ）で精製して１５〜２１番目の分画からＰ
Ａ−４８１５３Ｃの精製物１．３９ｇを得た。これをｎ
−ヘキサン４ｍｌで再結晶し、ＰＡ−４８１５３Ｃの結
晶９６５ｍｇを得た。ＨＰＬＣにおける純度は９８％で
あった。
３Ｃ含有分画（residue-1, 3, 5（計10.4g））をカラム
クロマトグラフィー（カラム；SiO2，120ml（メルク社
製）， 溶媒；クロロホルム， １分画；２０ｇ）で精製
し、９〜１７番目の分画からＰＡ−４８１５３Ｃの粗精
製物４．２ｇを得た。これをカラムクロマトグラフィー
（カラム；Lobar SiO2 60 B size（メルク社製），溶
媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１，１分画；１０
ｇ）にかけ、３８〜９０番目の分画から得られたＰＡ−
４８１５３Ｃの精製物１．６ｇをさらにカラムクロマト
グラフィー（カラム；Lobar SiO2 60 B size（メルク社
製），溶媒；クロロホルム：メタノール＝９８：２，１
分画；１０ｇ）で精製して１５〜２１番目の分画からＰ
Ａ−４８１５３Ｃの精製物１．３９ｇを得た。これをｎ
−ヘキサン４ｍｌで再結晶し、ＰＡ−４８１５３Ｃの結
晶９６５ｍｇを得た。ＨＰＬＣにおける純度は９８％で
あった。
【００２４】(b)粗物質（crude-2）から分離したＰＡ−
４８１５３Ｃ含有分画（residue-11, 13 (計18.8g)）を
カラムクロマトグラフィ−（カラム；SiO2, 150ml (メ
ルク社製)，溶媒；クロロホルム，１分画；２０ｇ）で
精製し、１５〜５７番目の分画からＰＡ−４８１５３Ｃ
の粗精製物４.１４ｇを得た。これをカラムクロマトグ
ラフィ−（カラム；Lobar SiO2 60 B size (メルク社
製)，溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝３：１，１分画；
１０ｇ）にかけ、３３〜５７番目の分画から得られたＰ
Ａ−４８１５３Ｃの精製物９２０ｍｇをさらにカラムク
ロマトグラフィ−（カラム；Lobar SiO2 60 B size
（メルク社製），溶媒；クロロホルム：メタノ−ル＝９
８：２，１分画；１５ｇ）で精製して９〜１１番目の分
画からＰＡ−４８１５３Ｃの精製物７５０ｍｇを得た。
これをヘキサンで再結晶し、ＰＡ−４８１５３Ｃの結晶
５３０ｍｇを得た。ＨＰＬＣにおける純度は９８％であ
った。以上の工程より、合計１４９５ｍｇのＰＡ−４８
１５３Ｃ結晶が得られた。
４８１５３Ｃ含有分画（residue-11, 13 (計18.8g)）を
カラムクロマトグラフィ−（カラム；SiO2, 150ml (メ
ルク社製)，溶媒；クロロホルム，１分画；２０ｇ）で
精製し、１５〜５７番目の分画からＰＡ−４８１５３Ｃ
の粗精製物４.１４ｇを得た。これをカラムクロマトグ
ラフィ−（カラム；Lobar SiO2 60 B size (メルク社
製)，溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝３：１，１分画；
１０ｇ）にかけ、３３〜５７番目の分画から得られたＰ
Ａ−４８１５３Ｃの精製物９２０ｍｇをさらにカラムク
ロマトグラフィ−（カラム；Lobar SiO2 60 B size
（メルク社製），溶媒；クロロホルム：メタノ−ル＝９
８：２，１分画；１５ｇ）で精製して９〜１１番目の分
画からＰＡ−４８１５３Ｃの精製物７５０ｍｇを得た。
これをヘキサンで再結晶し、ＰＡ−４８１５３Ｃの結晶
５３０ｍｇを得た。ＨＰＬＣにおける純度は９８％であ
った。以上の工程より、合計１４９５ｍｇのＰＡ−４８
１５３Ｃ結晶が得られた。
【００２５】(参考)小量培養の時は，培養濾液からの酢
酸エチルエステル抽出残渣をＴＬＣで分離精製し再結晶
した。すなわち、培養液６Ｌを濾過し、その濾液４.８
Ｌを酢酸エチル２Ｌ（ｐＨ７.０）で抽出して残渣４３
７ｍｇを得た。それをＴＬＣ（ＫＧＦ(メルク社製)，溶
媒；３％メタノ−ル／クロロホルム）で分離精製してＰ
Ａ−４８１５３Ｃの精製物５７ｍｇを得た。これをｎ−
ヘキサンで再結晶してＰＡ−４８１５３Ｃの結晶４５ｍ
ｇを得た。
酸エチルエステル抽出残渣をＴＬＣで分離精製し再結晶
した。すなわち、培養液６Ｌを濾過し、その濾液４.８
Ｌを酢酸エチル２Ｌ（ｐＨ７.０）で抽出して残渣４３
７ｍｇを得た。それをＴＬＣ（ＫＧＦ(メルク社製)，溶
媒；３％メタノ−ル／クロロホルム）で分離精製してＰ
Ａ−４８１５３Ｃの精製物５７ｍｇを得た。これをｎ−
ヘキサンで再結晶してＰＡ−４８１５３Ｃの結晶４５ｍ
ｇを得た。
【００２６】３．生物学的活性 本発明の ＰＡ−４８１５３Ｃは、以下の実験例に記載
した試験で明らかにされる生物学的活性、即ち、免疫抑
制作用、抗腫瘍細胞増殖作用、並びに抗真菌作用等の生
物学的活性を有していた。従って、この物質は、臓器あ
るいは、組織の移植に対する拒絶反応、骨髄移植により
起こる移植片対宿主反応、各種自己免疫病、血液系腫
瘍、固形癌等の腫瘍疾病、真菌感染症等の治療及び予防
に有用である。以下に実験例を示す。
した試験で明らかにされる生物学的活性、即ち、免疫抑
制作用、抗腫瘍細胞増殖作用、並びに抗真菌作用等の生
物学的活性を有していた。従って、この物質は、臓器あ
るいは、組織の移植に対する拒絶反応、骨髄移植により
起こる移植片対宿主反応、各種自己免疫病、血液系腫
瘍、固形癌等の腫瘍疾病、真菌感染症等の治療及び予防
に有用である。以下に実験例を示す。
【００２７】1)マウス脾細胞の試験管内マイトジェン反
応におけるＰＡ−４８１５３Ｃの抑制効果 ９６ウェルマイクロタイタ−プレ−トの各ウェルにC3H/
HeNマウス脾細胞５×１０5個を０.１ｍｌの１０％牛胎
仔血清加ＲＰＭＩ １６４０培地（炭酸水素ナトリウム
２ｍＭ，ペニシリン５０単位／ｍｌ，ストレプトマイシ
ン５０μｇ／ｍｌ，及び２−メルカプトエタノ−ル５×
１０-5Ｍを添加)に浮遊したものを加え、その各ウェル
にマイトジェンとしてコンカナバリンＡ（ConA）５μｇ
／ｍｌと、ＰＡ−４８１５３Ｃを種々の濃度で加え、各
ウェルの最終容量を０.２ｍｌとした。ＰＡ−４８１５
３Ｃはジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解し，上記Ｒ
ＰＭＩ １６４０培地にて希釈し最終濃度１００ｎｇ／
ｍｌ以下になるように添加した。９６ウェルマイクロタ
イタ−プレ−トは、湿度１００％、二酸化炭素５％、空
気９５％に保持された培養器内で３７℃、７２時間培養
し、ハ−ベストする１８時間前に3H-チミジン（０.５μ
Ｃｉ／ウェル）でパルスラベルし、培養終了後、セルハ
−ベスタ−にて細胞を回収し細胞に取り込まれた放射能
の量を測定した。結果を表２に示す。
応におけるＰＡ−４８１５３Ｃの抑制効果 ９６ウェルマイクロタイタ−プレ−トの各ウェルにC3H/
HeNマウス脾細胞５×１０5個を０.１ｍｌの１０％牛胎
仔血清加ＲＰＭＩ １６４０培地（炭酸水素ナトリウム
２ｍＭ，ペニシリン５０単位／ｍｌ，ストレプトマイシ
ン５０μｇ／ｍｌ，及び２−メルカプトエタノ−ル５×
１０-5Ｍを添加)に浮遊したものを加え、その各ウェル
にマイトジェンとしてコンカナバリンＡ（ConA）５μｇ
／ｍｌと、ＰＡ−４８１５３Ｃを種々の濃度で加え、各
ウェルの最終容量を０.２ｍｌとした。ＰＡ−４８１５
３Ｃはジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解し，上記Ｒ
ＰＭＩ １６４０培地にて希釈し最終濃度１００ｎｇ／
ｍｌ以下になるように添加した。９６ウェルマイクロタ
イタ−プレ−トは、湿度１００％、二酸化炭素５％、空
気９５％に保持された培養器内で３７℃、７２時間培養
し、ハ−ベストする１８時間前に3H-チミジン（０.５μ
Ｃｉ／ウェル）でパルスラベルし、培養終了後、セルハ
−ベスタ−にて細胞を回収し細胞に取り込まれた放射能
の量を測定した。結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】 表２：ＰＡ−４８１５３Ｃのマウス脾細胞のコンカナバ
リンＡ反応に対する効果 表２に示すように、ＰＡ−４８１５３Ｃはマウス脾細胞
のＣｏｎＡ反応を抑制した。
リンＡ反応に対する効果 表２に示すように、ＰＡ−４８１５３Ｃはマウス脾細胞
のＣｏｎＡ反応を抑制した。
【００２９】２）試験管内アロ混合リンパ球反応（アロ
ＭＬＲ）におけるＰＡ−４８１５３Ｃの抑制効果 ９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに、C3
H/HeNマウス脾細胞（H-2k，応答細胞）５×１０5個と、
マイトマイシンＣ処理（５０μｇ／ｍｌ，３７℃，３０
分処理後、ＲＰＭＩ１６４０培地（上記１）と同様）で
３回洗浄する）したC57BL/6マウス脾細胞（H-2 b ，刺激
細胞）５×１０5個を０．２ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培
地に浮遊したものを加えた。更に、ＰＡ−４８１５３Ｃ
を１００ｎｇ／ｍｌ以下になるように添加した。９６ウ
ェルマイクロタイタープレートは、上記１）と同じ条件
下の培養器内で６日間培養し、ハーベストする１８時間
前に3H-チミジン（０．５μＣｉ／ウェル）でパルスラ
ベルした。培養終了後、セルハーベスターにて細胞を回
収し細胞に取り囲まれた放射線の量を測定した。その結
果、ＰＡ−４８１５３ＣのＩＣ50値は３．１ｎｇ／ｍｌ
で、アロ ＭＬＲに対する抑制効果を示した。
ＭＬＲ）におけるＰＡ−４８１５３Ｃの抑制効果 ９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに、C3
H/HeNマウス脾細胞（H-2k，応答細胞）５×１０5個と、
マイトマイシンＣ処理（５０μｇ／ｍｌ，３７℃，３０
分処理後、ＲＰＭＩ１６４０培地（上記１）と同様）で
３回洗浄する）したC57BL/6マウス脾細胞（H-2 b ，刺激
細胞）５×１０5個を０．２ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培
地に浮遊したものを加えた。更に、ＰＡ−４８１５３Ｃ
を１００ｎｇ／ｍｌ以下になるように添加した。９６ウ
ェルマイクロタイタープレートは、上記１）と同じ条件
下の培養器内で６日間培養し、ハーベストする１８時間
前に3H-チミジン（０．５μＣｉ／ウェル）でパルスラ
ベルした。培養終了後、セルハーベスターにて細胞を回
収し細胞に取り囲まれた放射線の量を測定した。その結
果、ＰＡ−４８１５３ＣのＩＣ50値は３．１ｎｇ／ｍｌ
で、アロ ＭＬＲに対する抑制効果を示した。
【００３０】3)ＰＡ−４８１５３Ｃの抗細胞増殖効果 ９６ウェルマイクロタイタ−プレ−トの各ウェルに下記
の表３で示した各細胞の細胞数を０.１ｍｌのスケ−ル
で加え、上記1)と同じ培養条件下で１日前培養し、０〜
５０００ｎｇ／ｍｌとなるようにＰＡ−４８１５３Ｃを
０.１ｍｌ添加した。そして３〜４日間培養を続け、培
養終了後、６ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ［3-(4,5-ジメチルチ
アゾ−ル-2イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマ
イド］（シグマ製）溶液２５μｌを各ウェルに加え、３
７℃にて４時間同一条件下で培養した。培養終了後、生
成したホルマザンを、２０％ドデシルナトリウムスルホ
ン酸（ＳＤＳ）の０.０２Ｎ塩酸溶液を５０μｌ加え３
７℃で２４時間放置して溶解させた。生細胞数に比例し
て生成したホルマザンを５７０ｎｍのフィルタ−を装着
したイムノリ−ダ−（三光純薬）で吸光強度（ＯＤ）を
測定した。(ザ．ジャ−ナル．オブ．イムノロジカル．
メソッド，vol 65, p 55〜63 (1983) 参照）。そして、
ＰＡ−４８１５３Ｃの濃度と吸光強度との相関より５０
％の細胞増殖阻止濃度（ＩＣ50）を算出した。結果を表
３に示す。
の表３で示した各細胞の細胞数を０.１ｍｌのスケ−ル
で加え、上記1)と同じ培養条件下で１日前培養し、０〜
５０００ｎｇ／ｍｌとなるようにＰＡ−４８１５３Ｃを
０.１ｍｌ添加した。そして３〜４日間培養を続け、培
養終了後、６ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ［3-(4,5-ジメチルチ
アゾ−ル-2イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマ
イド］（シグマ製）溶液２５μｌを各ウェルに加え、３
７℃にて４時間同一条件下で培養した。培養終了後、生
成したホルマザンを、２０％ドデシルナトリウムスルホ
ン酸（ＳＤＳ）の０.０２Ｎ塩酸溶液を５０μｌ加え３
７℃で２４時間放置して溶解させた。生細胞数に比例し
て生成したホルマザンを５７０ｎｍのフィルタ−を装着
したイムノリ−ダ−（三光純薬）で吸光強度（ＯＤ）を
測定した。(ザ．ジャ−ナル．オブ．イムノロジカル．
メソッド，vol 65, p 55〜63 (1983) 参照）。そして、
ＰＡ−４８１５３Ｃの濃度と吸光強度との相関より５０
％の細胞増殖阻止濃度（ＩＣ50）を算出した。結果を表
３に示す。
【００３１】
【表３】 培地1)：MEMはイ−グル MEMに１０％牛胎仔血清を加え
た培地であり、RPMI 1640は、実験例１で示した培地で
あるが、ヒト由来の細胞には２−メルカプトエタノ−ル
は含まれていない。上記デ−タより、(1)ＰＡ−４８１
５３Ｃは、腫瘍細胞に対して強い細胞増殖抑制効果を示
した。(2)ＰＡ−４８１５３Ｃは、正常肺細胞CCD-19Lu
に対するIC50値と大細胞肺癌Lu99細胞に対するIC50値と
の間に約２５００0倍以上の差を示した。(3)多剤耐性腫
瘍株P388/ADM細胞にも強い細胞増殖抑制効果がみられ
た。等のことが特徴づけられる。
た培地であり、RPMI 1640は、実験例１で示した培地で
あるが、ヒト由来の細胞には２−メルカプトエタノ−ル
は含まれていない。上記デ−タより、(1)ＰＡ−４８１
５３Ｃは、腫瘍細胞に対して強い細胞増殖抑制効果を示
した。(2)ＰＡ−４８１５３Ｃは、正常肺細胞CCD-19Lu
に対するIC50値と大細胞肺癌Lu99細胞に対するIC50値と
の間に約２５００0倍以上の差を示した。(3)多剤耐性腫
瘍株P388/ADM細胞にも強い細胞増殖抑制効果がみられ
た。等のことが特徴づけられる。
【００３２】4)ＰＡ−４８１５３Ｃの抗真菌活性 ＰＡ−４８１５３Ｃの抗真菌活性は、サブロ−又はＹＮ
Ｂ液体培地を用いた液体倍々希釈法により測定した。３
７℃、２４時間又は４８時間培養後、最小生育阻止濃度
（ＭＩＣ，μg/ml）を求めた。ＰＡ−４８１５３Ｃは、
真菌、例えばアスペルギルス・フミガ−タス IFO 8866
株、カンジダ・アルビカンスKE-2株に対して下記の表４
に示したような抗真菌活性を有していた。
Ｂ液体培地を用いた液体倍々希釈法により測定した。３
７℃、２４時間又は４８時間培養後、最小生育阻止濃度
（ＭＩＣ，μg/ml）を求めた。ＰＡ−４８１５３Ｃは、
真菌、例えばアスペルギルス・フミガ−タス IFO 8866
株、カンジダ・アルビカンスKE-2株に対して下記の表４
に示したような抗真菌活性を有していた。
【００３３】
【表４】
【００３４】
【発明の効果】本発明化合物は免疫抑制作用、抗腫瘍細
胞増殖作用、並びに抗真菌作用等の生物学的活性を有し
ていることから、臓器あるいは組織の移植に対する拒絶
反応、骨髄移植により起こる移植片対宿主反応、各種自
己免疫病、血液系腫瘍、固形癌等の腫瘍疾病、真菌感染
症等の治療および予防に有用である。
胞増殖作用、並びに抗真菌作用等の生物学的活性を有し
ていることから、臓器あるいは組織の移植に対する拒絶
反応、骨髄移植により起こる移植片対宿主反応、各種自
己免疫病、血液系腫瘍、固形癌等の腫瘍疾病、真菌感染
症等の治療および予防に有用である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｐ 17/06 // Ｃ０７Ｄ 309/32 Ｃ０７Ｄ 309/32 (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 板崎 弘 兵庫県宝塚市清荒神３−９−４ (56)参考文献 特開 平５−25189（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 1/20 C12P 17/00 - 17/18 C07D 309/32 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (8)
- 【請求項１】 ストレプトミセス プルニカラー（Stre
ptomyces prunicolor）種に属し、式Ｉ： 【化１】 で示される化合物を産生する微生物。 - 【請求項２】式Ｉで示される化合物が（５Ｒ*，６Ｒ*）
−５−エチル−５，６−ジヒドロ−６−［（Ｅ）−（２
Ｒ*，３Ｓ*，４Ｒ*，５Ｓ*）−２−ヒドロキシ−４−メ
トキシ−３，５−ジメチル−７−ノネニル］−２Ｈ−ピ
ラン−２−オンである請求項１記載の微生物。 - 【請求項３】 ストレプトミセス プルニカラー ＰＡ
−４８１５３（Streptomyces prunicolor PA-48153）
（FERM BP-3754）である請求項１記載の微生物。 - 【請求項４】 ストレプトミセス プルニカラー（Stre
ptomyces prunicolor）種に属し、請求項１に記載の式
Ｉで示される化合物を産生する微生物を培養し、該培養
培地から該化合物を採取することを特徴とする該化合物
の製造法。 - 【請求項５】 式Ｉ： 【化２】 で示される化合物を有効成分として含有する免疫抑制
剤。 - 【請求項６】 請求項５に記載の式Ｉで示される化合物
を有効成分として含有する抗腫瘍剤。 - 【請求項７】 請求項５に記載の式Ｉで示される化合物
を有効成分として含有する抗アスペルギルス剤。 - 【請求項８】 請求項５に記載の式Ｉで示される化合物
を有効成分として含有する抗カンジダ剤。
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|---|---|---|---|
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| EP93104086A EP0560389A1 (en) | 1992-03-13 | 1993-03-12 | Lactone with immunosuppressive activity |
| US08/030,884 US5314911A (en) | 1992-03-13 | 1993-03-12 | Immunosuppressive agent |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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| JP8951292 | 1992-03-13 | ||
| JP04136241A JP3124373B2 (ja) | 1992-03-13 | 1992-04-28 | 免疫抑制物質 |
Publications (2)
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|---|---|
| JPH05310726A JPH05310726A (ja) | 1993-11-22 |
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ID=26430930
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| JP04136241A Expired - Fee Related JP3124373B2 (ja) | 1992-03-13 | 1992-04-28 | 免疫抑制物質 |
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|---|---|
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| EP (1) | EP0560389A1 (ja) |
| JP (1) | JP3124373B2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US5028537A (en) * | 1984-03-26 | 1991-07-02 | Merck & Co. Inc. | Novel antifungal substances and process for their production |
| ES2080068T3 (es) * | 1988-02-13 | 1996-02-01 | Suntory Ltd | Derivados de 2-piranona y su procedimiento de preparacion. |
-
1992
- 1992-04-28 JP JP04136241A patent/JP3124373B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-03-12 US US08/030,884 patent/US5314911A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-12 EP EP93104086A patent/EP0560389A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5314911A (en) | 1994-05-24 |
| JPH05310726A (ja) | 1993-11-22 |
| EP0560389A1 (en) | 1993-09-15 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |