JP3119674B2 - 新規ペプチド、その製造法及び用途 - Google Patents
新規ペプチド、その製造法及び用途Info
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- JP3119674B2 JP3119674B2 JP03108989A JP10898991A JP3119674B2 JP 3119674 B2 JP3119674 B2 JP 3119674B2 JP 03108989 A JP03108989 A JP 03108989A JP 10898991 A JP10898991 A JP 10898991A JP 3119674 B2 JP3119674 B2 JP 3119674B2
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- gln
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、下記配列で表される新
規なペプチドを提供するものであり、アンギオテンシン
変換酵素阻害剤等として有用なペプチドに関するＧｌｎ
−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ
規なペプチドを提供するものであり、アンギオテンシン
変換酵素阻害剤等として有用なペプチドに関するＧｌｎ
−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ
【０００２】
【従来の技術】アンギオテンシン変換酵素は、主として
肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテ
ンシンＩ（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−
Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用し
て、アンギオテンシンＩのＣ末端よりジペプチド（Ｈｉ
ｓ９−Ｌｅｕ１０ ）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用
を有するアンギオテンシンＩＩを生成させる酵素であ
る。また、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニ
ンを破壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関
与している。
肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテ
ンシンＩ（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−
Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用し
て、アンギオテンシンＩのＣ末端よりジペプチド（Ｈｉ
ｓ９−Ｌｅｕ１０ ）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用
を有するアンギオテンシンＩＩを生成させる酵素であ
る。また、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニ
ンを破壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関
与している。
【０００３】従来より、アンギオテンシン変換酵素の活
性を阻害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予
防、治療に有効であると考えられている。最近ではプロ
リン誘導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が
確認されて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害
物質の合成研究が盛んであり、又天然物からの取得も試
みられているところである。
性を阻害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予
防、治療に有効であると考えられている。最近ではプロ
リン誘導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が
確認されて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害
物質の合成研究が盛んであり、又天然物からの取得も試
みられているところである。
【０００４】天然物由来のアンギオテンシン変換酵素阻
害剤は食品あるいは食品原料から得られるので低毒性で
安全性の高い降圧剤となることが期待されるからであ
る。
害剤は食品あるいは食品原料から得られるので低毒性で
安全性の高い降圧剤となることが期待されるからであ
る。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、天然物
中に見出されるアンギオテンシン変換酵素阻害物質は極
めてまれで、僅かにブラジル産や日本産蛇毒より得られ
たテプロタイド（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等
や、ストレプトミセス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ
８３（特開昭５８−１７７９２０号公報）が知られてい
るに過ぎない。また、天然物を酵素処理して得られたア
ンギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイ
ンをトリプシンにより分解して得たペプチド類等が知ら
れているが（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４
４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２
６号、同６１−３６２２７号）新規な阻害物質の開発が
望まれているところである。
中に見出されるアンギオテンシン変換酵素阻害物質は極
めてまれで、僅かにブラジル産や日本産蛇毒より得られ
たテプロタイド（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等
や、ストレプトミセス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ
８３（特開昭５８−１７７９２０号公報）が知られてい
るに過ぎない。また、天然物を酵素処理して得られたア
ンギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイ
ンをトリプシンにより分解して得たペプチド類等が知ら
れているが（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４
４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２
６号、同６１−３６２２７号）新規な阻害物質の開発が
望まれているところである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる課
題を解決すべく天然物質で副作用の少ないアンギオテン
シン交換酵素阻害物質を鋭意検索した結果、蛋白質特に
鶏肉を特定の酵素で加水分解した組成物中にアンギオテ
ンシン変換酵素阻害活性を有する物質の存在をつきと
め、該物質がＧｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ
の配列で表されるペプチドであることを知見し、本発明
を完成した。
題を解決すべく天然物質で副作用の少ないアンギオテン
シン交換酵素阻害物質を鋭意検索した結果、蛋白質特に
鶏肉を特定の酵素で加水分解した組成物中にアンギオテ
ンシン変換酵素阻害活性を有する物質の存在をつきと
め、該物質がＧｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ
の配列で表されるペプチドであることを知見し、本発明
を完成した。
【０００７】本発明のＧｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ
−Ａｒｇの配列で表されるペプチドは文献未載の新規な
ペプチドであり、鶏肉等の蛋白質をサーモライシンによ
って加水分解することによって製造され、実用にあたっ
ては組成物をそのまま用いても良く、あるいは必要に応
じて精製して使用される。更にはペプチド合成の常套手
段を適用して合成することによって製造することもでき
る。上記でいうＧｌｎはグルタミン、Ｌｙｓはリジン、
Ｐｒｏはプロリン、Ａｒｇはアルギニンを意味し、かか
るアミノ酸はいずれもＬ−体である。
−Ａｒｇの配列で表されるペプチドは文献未載の新規な
ペプチドであり、鶏肉等の蛋白質をサーモライシンによ
って加水分解することによって製造され、実用にあたっ
ては組成物をそのまま用いても良く、あるいは必要に応
じて精製して使用される。更にはペプチド合成の常套手
段を適用して合成することによって製造することもでき
る。上記でいうＧｌｎはグルタミン、Ｌｙｓはリジン、
Ｐｒｏはプロリン、Ａｒｇはアルギニンを意味し、かか
るアミノ酸はいずれもＬ−体である。
【０００８】本発明のペプチドは蛋白質をサーモライシ
ンで加水分解することによっても、ペプチド合成法でも
取得できる。蛋白質をサーモライシンで加水分解するに
は、蛋白質の性状により処法は異なるが、難溶性の場合
には熱水に蛋白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズ
し、所定量のサーモライシンを加え温度１０〜６０℃、
好ましくは２０〜４０℃、ＰＨ４〜８で０．１分〜４８
時間静置又は撹拌反応を行う。
ンで加水分解することによっても、ペプチド合成法でも
取得できる。蛋白質をサーモライシンで加水分解するに
は、蛋白質の性状により処法は異なるが、難溶性の場合
には熱水に蛋白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズ
し、所定量のサーモライシンを加え温度１０〜６０℃、
好ましくは２０〜４０℃、ＰＨ４〜８で０．１分〜４８
時間静置又は撹拌反応を行う。
【０００９】蛋白質としては、鶏肉が有用である。鶏肉
は生肉でもよいし、加工されていてもよい。特に油分が
少ないささみが有効的である。加水分解液中には本発明
のペプチド以外に、他のペプチドが存在してるが、これ
らは混合物のままで各種の用途に用いられても良く、
又、本発明のペプチドのみを単離して用いても差し支え
ない。
は生肉でもよいし、加工されていてもよい。特に油分が
少ないささみが有効的である。加水分解液中には本発明
のペプチド以外に、他のペプチドが存在してるが、これ
らは混合物のままで各種の用途に用いられても良く、
又、本発明のペプチドのみを単離して用いても差し支え
ない。
【００１０】単離する場合は加水分解液を遠心分離等の
公知の操作で濾過する。その後抽出、濃縮、乾固などを
適用した後、あるいはせずしてそのまま、種々の吸着剤
に対する吸着親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あ
るいは溶解度の差、２種の混ざり合わない液相間におけ
る分配の差、分子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液
からの析出性あるいは析出速度の差などを利用する手段
を適用して目的物を単離するのが好ましい。これらの方
法は必要に応じて単独に用いられ、あるいは任意の順序
に組合せ、また反覆して適用される。
公知の操作で濾過する。その後抽出、濃縮、乾固などを
適用した後、あるいはせずしてそのまま、種々の吸着剤
に対する吸着親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あ
るいは溶解度の差、２種の混ざり合わない液相間におけ
る分配の差、分子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液
からの析出性あるいは析出速度の差などを利用する手段
を適用して目的物を単離するのが好ましい。これらの方
法は必要に応じて単独に用いられ、あるいは任意の順序
に組合せ、また反覆して適用される。
【００１１】本発明のペプチドはペプチド合成に通常用
いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合
の任意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料と
をカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を除去させることによっても製造し得る。
いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合
の任意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料と
をカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を除去させることによっても製造し得る。
【００１２】この反応工程において反応に関与すべきで
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−
ブチルオキシカルボニル、Ｐ−ビフェニルイソプロピロ
オキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成
し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカ
ルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−
ブチルオキシカルボニル、Ｐ−ビフェニルイソプロピロ
オキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成
し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカ
ルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。
【００１３】縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の
存在下にあるいはＮ一保護アミノ酸活性エステルまたは
ペプチド活性エステルを用いて実施する。縮合反応終了
後、保護基は除去されるが、固相法の場合はさらにペプ
チドのＣ末端と樹脂との結合を切断する。更に、本発明
のペプチドは通常の方法に従い精製される。例えばイオ
ン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー等が挙げられ
る。
存在下にあるいはＮ一保護アミノ酸活性エステルまたは
ペプチド活性エステルを用いて実施する。縮合反応終了
後、保護基は除去されるが、固相法の場合はさらにペプ
チドのＣ末端と樹脂との結合を切断する。更に、本発明
のペプチドは通常の方法に従い精製される。例えばイオ
ン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー等が挙げられ
る。
【００１４】本発明で使用するペプチドの投与経路とし
ては、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれでも
よいが、経口投与が好ましい。本発明のペプチドの投与
量は、化合物の種類、投与方法、患者の症状・年令等に
より異なるが、通常１回０．００１〜１０００ｍｇ、好
ましくは０．０１〜１０ｍｇを１日当たり１〜３回であ
る。本発明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調
製した製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製
剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応
しない物質が用いられる。
ては、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれでも
よいが、経口投与が好ましい。本発明のペプチドの投与
量は、化合物の種類、投与方法、患者の症状・年令等に
より異なるが、通常１回０．００１〜１０００ｍｇ、好
ましくは０．０１〜１０ｍｇを１日当たり１〜３回であ
る。本発明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調
製した製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製
剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応
しない物質が用いられる。
【００１５】具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マン
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。
【００１６】剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応
じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよ
く、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応
じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよ
く、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
【００１７】これらの製剤は、本発明のペプチドを０．
０１％以上、好ましくは０．５〜７０％の割合で含有す
ることができる。これらの製剤はまた、治療上価値ある
他の成分を含有していてもよい。
０１％以上、好ましくは０．５〜７０％の割合で含有す
ることができる。これらの製剤はまた、治療上価値ある
他の成分を含有していてもよい。
【００１８】
【作 用】本発明のペプチドは、新規なペプチドであ
り優れたアンギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血
圧降下作用、プラジキニン不活化抑制作用を示し、本態
性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の
予防、治療剤、これらの疾患の診断剤や各種の病態にお
いて用いられる血圧降下剤、狭心病発作の閾値上昇、心
筋梗塞の減少、うっ血性心不全における病態の改善剤と
して有用である。
り優れたアンギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血
圧降下作用、プラジキニン不活化抑制作用を示し、本態
性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の
予防、治療剤、これらの疾患の診断剤や各種の病態にお
いて用いられる血圧降下剤、狭心病発作の閾値上昇、心
筋梗塞の減少、うっ血性心不全における病態の改善剤と
して有用である。
【００１９】
【実施例】次に実例を挙げて本発明を更に具体的に説明
する。鶏肉１２．６ｇ（水分７０％）に水３１ｍｌを加
え充分ホモジナイズし、１００℃で１０分間煮沸後放置
した。サーモライシンを４０ｍｇ加え３７℃、ＰＨ７で
５時間加水分解反応を行った。１００℃で１０分間煮沸
後冷却し、遠心分離して濃縮した後、高速液体クロマト
グラフィー（ＯＤＳ−，ＰＨ−及びＣＮ−カラム）によ
り精製し、ペプチドを得た。
する。鶏肉１２．６ｇ（水分７０％）に水３１ｍｌを加
え充分ホモジナイズし、１００℃で１０分間煮沸後放置
した。サーモライシンを４０ｍｇ加え３７℃、ＰＨ７で
５時間加水分解反応を行った。１００℃で１０分間煮沸
後冷却し、遠心分離して濃縮した後、高速液体クロマト
グラフィー（ＯＤＳ−，ＰＨ−及びＣＮ−カラム）によ
り精製し、ペプチドを得た。
【００２０】本品を気相プロテインシーケンサー（アブ
ライド バイオシステムズ社製 ４７７ Ａ型）を用い
る自動エドマン分解法を適用してアミノ酸配列を分析
し、下記の構造を得た。 Ｈ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＯＨ
ライド バイオシステムズ社製 ４７７ Ａ型）を用い
る自動エドマン分解法を適用してアミノ酸配列を分析
し、下記の構造を得た。 Ｈ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＯＨ
【００２１】該ペプチドの物性値はつぎのとうりであ
る。 ＴＬＣ［ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝１５：３：１０：１２］ （シリカゲルプレート、ニンヒドリン発色） Ｒｆ：０．１１ 元素分析 Ｃ２８Ｈ５３Ｎ１１Ｏ７・０．９Ｈ２Ｏとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 ４９．６７ ８．１６ ２２．７６ 測定値 ４９．６０ ８．１１ ２２．７１
る。 ＴＬＣ［ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝１５：３：１０：１２］ （シリカゲルプレート、ニンヒドリン発色） Ｒｆ：０．１１ 元素分析 Ｃ２８Ｈ５３Ｎ１１Ｏ７・０．９Ｈ２Ｏとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 ４９．６７ ８．１６ ２２．７６ 測定値 ４９．６０ ８．１１ ２２．７１
【００２２】〔ペプチドの合成〕市販のＢｏｃ（ブトキ
シカルボニル）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（トシル基）−Ｏ−
Ｒｅｓｉｎ ０．７５ｇ（置換率０．４０ｍｅｑ／ｇ）
をバイオサーチ社のペプチド合成装置ＳＡＭ２の反応槽
に分取し、以下のように合成を行った。４５％トリフル
オロ酢酸、２．５％アニソールを含む塩化メチレン中、
２５分間の反応により、Ｂｏｃ基を除去したのち、塩化
メチレンによる洗浄、１０％ジイソプロピルエチルアミ
ンを含む塩化メチレンによる中和、及び塩化メチレンに
よる洗浄を行った。これと５ｍｌの０．４Ｍ Ｂｏｃ−
Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）（クロルベンジルオキシカルボニル
基）のジメチルホルムアミド溶液、５ｍｌの０．４Ｍジ
イソプロピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液とを混
合した後、反応槽に加え、室温にて２時間撹拌反応させ
た。
シカルボニル）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（トシル基）−Ｏ−
Ｒｅｓｉｎ ０．７５ｇ（置換率０．４０ｍｅｑ／ｇ）
をバイオサーチ社のペプチド合成装置ＳＡＭ２の反応槽
に分取し、以下のように合成を行った。４５％トリフル
オロ酢酸、２．５％アニソールを含む塩化メチレン中、
２５分間の反応により、Ｂｏｃ基を除去したのち、塩化
メチレンによる洗浄、１０％ジイソプロピルエチルアミ
ンを含む塩化メチレンによる中和、及び塩化メチレンに
よる洗浄を行った。これと５ｍｌの０．４Ｍ Ｂｏｃ−
Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）（クロルベンジルオキシカルボニル
基）のジメチルホルムアミド溶液、５ｍｌの０．４Ｍジ
イソプロピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液とを混
合した後、反応槽に加え、室温にて２時間撹拌反応させ
た。
【００２３】得られた樹脂をジメチルホルムアミド、塩
化メチレン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む
塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメ
チルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ
（Ｃｌ−Ｚ）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）樹脂を得た。引き続き
同様のＢｏｃ基の除去、Ｂｏｃとアミノ酸のカップリン
グを繰り返しＧｌｎ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）−Ｐｒｏ−Ｌ
ｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）樹脂を得た。
化メチレン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む
塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメ
チルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ
（Ｃｌ−Ｚ）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）樹脂を得た。引き続き
同様のＢｏｃ基の除去、Ｂｏｃとアミノ酸のカップリン
グを繰り返しＧｌｎ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）−Ｐｒｏ−Ｌ
ｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）樹脂を得た。
【００２４】該樹脂を２０ｍｌの１０％アニソールを含
むフッ化水素中で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹脂
から遊離させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３０
％酢酸で抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これ
をＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８）による
逆相クロマトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｇｌｎ−Ｌ
ｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＯＨ（収量１００ｍ
ｇ）を得た。本品を前記と同一のプロテインシーケンサ
ーにより分析した結果、上記の組成であることが判明し
た。
むフッ化水素中で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹脂
から遊離させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３０
％酢酸で抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これ
をＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８）による
逆相クロマトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｇｌｎ−Ｌ
ｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＯＨ（収量１００ｍ
ｇ）を得た。本品を前記と同一のプロテインシーケンサ
ーにより分析した結果、上記の組成であることが判明し
た。
【００２５】該ペプチドの物性値はつぎのとうりであ
る。 尚、ＴＬＣの溶媒は以下すべて前記と同一である。 Ｒｆ：０．１１ 元素分析 Ｃ２８Ｈ５３Ｎ１１Ｏ７・０．５Ｈ２Ｏとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 ５０．５９ ８．１９ ２３．１８ 測定値 ５０．６３ ８．１２ ２３．１２ 又、目的とするペプチドのアミノ酸種に応じて反応薬剤
を変更した以外は上記の合成例に準じてＨ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＯＨを合成し
た。該ペプチドの物性値はつぎのとおりである。
る。 尚、ＴＬＣの溶媒は以下すべて前記と同一である。 Ｒｆ：０．１１ 元素分析 Ｃ２８Ｈ５３Ｎ１１Ｏ７・０．５Ｈ２Ｏとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 ５０．５９ ８．１９ ２３．１８ 測定値 ５０．６３ ８．１２ ２３．１２ 又、目的とするペプチドのアミノ酸種に応じて反応薬剤
を変更した以外は上記の合成例に準じてＨ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＯＨを合成し
た。該ペプチドの物性値はつぎのとおりである。
【００２６】 ＴＬＣ Ｒｆ：０．１３ 元素分析 Ｃ３７Ｈ６２Ｎ１２Ｏ８・０．６Ｈ２Ｏとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 ５４．６１ ７．８３ ２０．６６ 測定値 ５４．５０ ７．８８ ２０．７５
【００２７】実施例１〜２ （アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定） アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定は、Ｃｈｅｕ
ｎｇとＣｕｓｈｍａｎの方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７（１９
７１）〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ
（８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）
（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液）
ｎｇとＣｕｓｈｍａｎの方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７（１９
７１）〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ
（８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）
（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液）
【００２８】上記の酵素基質を１００μｌ、酵素溶液を
１２μｌ及び本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水
で全体を２５０μｌとした後、３７℃で３０分間反応を
行った。反応は１Ｎ−ＨＣｌ ２５０μｌを用いて終了
させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れＶｏ
ｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢酸エ
チル層から１．０ｍｌをとり出して、酢酸エチルを留去
し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出
された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ２２８）
を測定した。
１２μｌ及び本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水
で全体を２５０μｌとした後、３７℃で３０分間反応を
行った。反応は１Ｎ−ＨＣｌ ２５０μｌを用いて終了
させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れＶｏ
ｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢酸エ
チル層から１．０ｍｌをとり出して、酢酸エチルを留去
し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出
された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ２２８）
を測定した。
【００２９】阻害率は阻害剤なしで反応したときのＯＤ
２２８を１００％とし、反応時間０分のときのＯＤ
２２８を０％として求め阻害率５０％の時の阻害剤（本
発明のペプチド）の濃度ＩＣ５０（μＭ）で活性を表示
した。結果を下記に示す。
２２８を１００％とし、反応時間０分のときのＯＤ
２２８を０％として求め阻害率５０％の時の阻害剤（本
発明のペプチド）の濃度ＩＣ５０（μＭ）で活性を表示
した。結果を下記に示す。
【００３０】実施例１ 阻害剤；Ｈ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ
−ＯＨ 阻害活性；ＩＣ５０＝６８μＭ 実施例２ 阻害剤；Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ
−Ａｒｇ−ＯＨ 阻害活性；ＩＣ５０＝１４μＭ （注）Ｐｈｅ；フェニルアラニン
−ＯＨ 阻害活性；ＩＣ５０＝６８μＭ 実施例２ 阻害剤；Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ
−Ａｒｇ−ＯＨ 阻害活性；ＩＣ５０＝１４μＭ （注）Ｐｈｅ；フェニルアラニン
【００３１】
【効 果】本発明ではアンギオテンシン変換酵素阻害
剤として有用な、新規なペプチドが得られる。
剤として有用な、新規なペプチドが得られる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 9/12 Ａ６１Ｋ 37/64 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 7/06 C12P 21/06 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (4)
- 【請求項１】 Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒ
ｇの配列で表される新規ペプチド - 【請求項２】 蛋白質をサーモライシンで加水分解する
ことを特徴とするＧｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａ
ｒｇの配列で表される新規ペプチドの製造方法 - 【請求項３】 蛋白質として鶏肉を使用する請求項２記
載の製造方法 - 【請求項４】 Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒ
ｇの配列で表されるペプチドを有効成分とするアンギオ
テンシン変換酵素阻害剤
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03108989A JP3119674B2 (ja) | 1991-02-15 | 1991-02-15 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03108989A JP3119674B2 (ja) | 1991-02-15 | 1991-02-15 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04264098A JPH04264098A (ja) | 1992-09-18 |
| JP3119674B2 true JP3119674B2 (ja) | 2000-12-25 |
Family
ID=14498769
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03108989A Expired - Lifetime JP3119674B2 (ja) | 1991-02-15 | 1991-02-15 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3119674B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI225070B (en) | 1999-12-01 | 2004-12-11 | Food Industry Res & Dev Inst | Novel peptides used as angiotensin converting enzyme inhibitor and preparation process thereof |
| JP5068174B2 (ja) | 2004-12-23 | 2012-11-07 | カンピナ ネーデルランド ホールディング ビー．ブイ． | Ｄｐｐ−ｉｖを阻害するペプチド中に濃縮されたタンパク質の加水分解物及びその使用 |
| TW200803751A (en) | 2005-11-30 | 2008-01-16 | Campina Nederland Holding Bv | Use of a protein hydrolysate for enhancing activity of glucagon-like peptide-1 |
| KR100823298B1 (ko) * | 2007-04-17 | 2008-04-17 | 주식회사 메디라바텍 | 집파리 구더기에서 엠알에스에이 억제효과를 갖는 수용성저분자량 펩타이드 분획의 분리방법 및 에탄올 추출물 |
| US8673862B1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-18 | Food Industry Research And Development Institute | Peptides and use thereof in the inhibition of angiotensin converting enzyme |
-
1991
- 1991-02-15 JP JP03108989A patent/JP3119674B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04264098A (ja) | 1992-09-18 |
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