JP3083369B2 - テイコプラニン回収方法 - Google Patents
テイコプラニン回収方法Info
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07K—PEPTIDES
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- C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin
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Description
【０００１】本発明は、アルカリ性培地中の菌糸の濾過
及び有機溶媒若しくはそれらの混合物による濾過された
発酵ブロスの抽出または適切なマトリックス上への吸着
による回収によって全培養発酵ブロスからテイコプラニ
ン（ｔｅｉｃｏｐｌａｎｉｎ）Ａ2を抽出するための方
法に関する。
及び有機溶媒若しくはそれらの混合物による濾過された
発酵ブロスの抽出または適切なマトリックス上への吸着
による回収によって全培養発酵ブロスからテイコプラニ
ン（ｔｅｉｃｏｐｌａｎｉｎ）Ａ2を抽出するための方
法に関する。
【０００２】テイコプラニンは、炭素、窒素及び無機塩
の同化できるソースを含む培地中で菌株、アクチノプラ
ネース テイコミセチクス（ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｅｔｉ
ｃｕｓ）ＡＴＣＣ ｎｏｖ．ｓｐ．３１１２１を培養す
ることによって製造される抗生物質である。
の同化できるソースを含む培地中で菌株、アクチノプラ
ネース テイコミセチクス（ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｅｔｉ
ｃｕｓ）ＡＴＣＣ ｎｏｖ．ｓｐ．３１１２１を培養す
ることによって製造される抗生物質である。
【０００３】上で述べた菌株から生じる主な生成物は、
元来テイコマイシン（ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｉｎ）と呼ば
れる三つの主な因子（ｆａｃｔｏｒｓ）（Ａ1、Ａ2及び
Ａ3）の混合物である（米国特許４，２３９，７５
１）。
元来テイコマイシン（ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｉｎ）と呼ば
れる三つの主な因子（ｆａｃｔｏｒｓ）（Ａ1、Ａ2及び
Ａ3）の混合物である（米国特許４，２３９，７５
１）。
【０００４】発酵ブロスから回収された生成物の精製に
よって得られそしてグラム陽性生体（ｏｒｇａｎｉｓｍ
ｓ）によって引き起こされる感染の治療における化学療
法の使用に適した最も最近のテイコプラニンの製造方法
（Ａ．Ｈ．ウイリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）ら：ジャ
ーナル オブ ホスピタル インフェクション（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏ
ｎ）（１９８６）；７、増補、Ａ、１０１〜１０３及び
Ｄ．グリーンウッド（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ）：ジャーナ
ル オブ アンチマイクロバイアル ケモセラピー（Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）（１９８８）；２１、増補、
Ａ、１〜１３）は、元来、概して、テイコマイシン因子
Ａ2と呼ばれてきた５つの構造的に類似の物質の複合体
を含む。上で述べた５つの密接に関係した成分は、成功
裏に単離されそして複合体の個別の成分として特徴付け
られてきた。この複合体は、現在は、科学論文及び特許
文献中で“テイコプラニンＡ2”または“テイコプラニ
ン複合体”と命名されそして呼ばれている。
よって得られそしてグラム陽性生体（ｏｒｇａｎｉｓｍ
ｓ）によって引き起こされる感染の治療における化学療
法の使用に適した最も最近のテイコプラニンの製造方法
（Ａ．Ｈ．ウイリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）ら：ジャ
ーナル オブ ホスピタル インフェクション（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏ
ｎ）（１９８６）；７、増補、Ａ、１０１〜１０３及び
Ｄ．グリーンウッド（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ）：ジャーナ
ル オブ アンチマイクロバイアル ケモセラピー（Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）（１９８８）；２１、増補、
Ａ、１〜１３）は、元来、概して、テイコマイシン因子
Ａ2と呼ばれてきた５つの構造的に類似の物質の複合体
を含む。上で述べた５つの密接に関係した成分は、成功
裏に単離されそして複合体の個別の成分として特徴付け
られてきた。この複合体は、現在は、科学論文及び特許
文献中で“テイコプラニンＡ2”または“テイコプラニ
ン複合体”と命名されそして呼ばれている。
【０００５】テイコプラニン複合体中の上で述べた５つ
の関係した物質の比は、ヨーロッパ特許出願公開Ｎｏ．
２０４１７９中に述べられたように発酵条件及び発酵培
地に添加される前駆体に従って変化し得る。
の関係した物質の比は、ヨーロッパ特許出願公開Ｎｏ．
２０４１７９中に述べられたように発酵条件及び発酵培
地に添加される前駆体に従って変化し得る。
【０００６】本発明の方法は、テイコプラニン複合体ま
たはその成分のいずれかを製造するために使用される任
意の工業的規模の発酵方法に有利に適用することができ
る。それから抗生物質活性体を含む水溶液が得られる発
酵ブロスまたはプロセス流れは、標準的なパイロットま
たは工業的規模の方法に従って製造され、そしてまたグ
リコペプチドの抗生物質複合体の個別の主な成分の比を
選択的に増加させるために発酵プロセスの間に適切な前
駆体の異なる添加が為される場合をも含み得る。例えば
既に引用したヨーロッパ特許出願公開Ｎｏ．２０４１７
９を参照せよ。
たはその成分のいずれかを製造するために使用される任
意の工業的規模の発酵方法に有利に適用することができ
る。それから抗生物質活性体を含む水溶液が得られる発
酵ブロスまたはプロセス流れは、標準的なパイロットま
たは工業的規模の方法に従って製造され、そしてまたグ
リコペプチドの抗生物質複合体の個別の主な成分の比を
選択的に増加させるために発酵プロセスの間に適切な前
駆体の異なる添加が為される場合をも含み得る。例えば
既に引用したヨーロッパ特許出願公開Ｎｏ．２０４１７
９を参照せよ。
【０００７】米国特許４，２３９，７５１は、発酵ブロ
スからテイコプラニン複合体を回収しそして抗生物質因
子を単離する方法を教示している。
スからテイコプラニン複合体を回収しそして抗生物質因
子を単離する方法を教示している。
【０００８】米国特許４，２３９，７５１中で述べられ
た方法においては、菌糸の細胞ケーキ（ｃａｋｅ）を残
して菌糸の本体（ｍａｓｓ）を除去するために発酵ブロ
スをｐＨ３．５で濾過する。次に濾過された発酵ブロス
を、その中で抗生物質混合物が可溶性である、水と混和
しない有機溶媒、例えば、ハロゲン化Ｃ1〜Ｃ4炭化水素
またはＣ4〜Ｃ6アルカノールと混合する。次に水と混和
しない有機溶媒を、高速遠心分離によって濾過された発
酵ブロスから分離し、その元の容量の約１／１０〜１／
２０に濃縮し、冷却し、そして沈殿（抗生物質）が生成
するまで放置せしめ、これを濾過によって回収する。
た方法においては、菌糸の細胞ケーキ（ｃａｋｅ）を残
して菌糸の本体（ｍａｓｓ）を除去するために発酵ブロ
スをｐＨ３．５で濾過する。次に濾過された発酵ブロス
を、その中で抗生物質混合物が可溶性である、水と混和
しない有機溶媒、例えば、ハロゲン化Ｃ1〜Ｃ4炭化水素
またはＣ4〜Ｃ6アルカノールと混合する。次に水と混和
しない有機溶媒を、高速遠心分離によって濾過された発
酵ブロスから分離し、その元の容量の約１／１０〜１／
２０に濃縮し、冷却し、そして沈殿（抗生物質）が生成
するまで放置せしめ、これを濾過によって回収する。
【０００９】しかしながら、アクチノプラネース テイ
コミセチクス ＡＴＣＣ ３１１２１の発酵によって製
造されたテイコプラニンの一部は菌糸と結合されている
ことが知られている。それ故、上で述べたＵＳ特許によ
れば、追加の生成物を回収するために水性アセトンによ
って菌糸のケーキをさらに抽出するステップを実施する
ことが必要である。アセトンの蒸留の後で、水相を、濾
過された発酵ブロスに関して上で述べたのと同じ処理に
かける。
コミセチクス ＡＴＣＣ ３１１２１の発酵によって製
造されたテイコプラニンの一部は菌糸と結合されている
ことが知られている。それ故、上で述べたＵＳ特許によ
れば、追加の生成物を回収するために水性アセトンによ
って菌糸のケーキをさらに抽出するステップを実施する
ことが必要である。アセトンの蒸留の後で、水相を、濾
過された発酵ブロスに関して上で述べたのと同じ処理に
かける。
【００１０】かくして、結論としては、米国特許４，２
３９，７５１中で述べられた方法は、生成物を単離する
ために二つの収穫物、即ち、ブタノールによる濾過され
たブロス抽出物から回収された一つの収穫物及び半分消
耗した（ｓｅｍｉ−ｅｘｈａｕｓｔｅｄ）菌糸から来る
もう一つ収穫物（アセトン／水による抽出とそれに続く
蒸発及び抽出）の獲得を要求する。
３９，７５１中で述べられた方法は、生成物を単離する
ために二つの収穫物、即ち、ブタノールによる濾過され
たブロス抽出物から回収された一つの収穫物及び半分消
耗した（ｓｅｍｉ−ｅｘｈａｕｓｔｅｄ）菌糸から来る
もう一つ収穫物（アセトン／水による抽出とそれに続く
蒸発及び抽出）の獲得を要求する。
【００１１】米国特許４，６９６，８１７においては、
上で概略説明した米国特許４，２３９，７５１の二つの
ステップの方法を回避するために、代わりの単一の方法
が提案された。
上で概略説明した米国特許４，２３９，７５１の二つの
ステップの方法を回避するために、代わりの単一の方法
が提案された。
【００１２】特に、上記の単一の方法は、本質的に、菌
糸の本体を含む全培養発酵ブロスを効果的な量の水混和
性溶媒と混合し、菌糸の本体から抗生物質活性体を含む
ブロス／溶媒液体を分離し、そしてブロス／溶媒溶液か
らテイコプラニン生成物を沈殿させることによって全培
養発酵ブロスからテイコプラニンＡ2を抽出するための
方法に関していた。
糸の本体を含む全培養発酵ブロスを効果的な量の水混和
性溶媒と混合し、菌糸の本体から抗生物質活性体を含む
ブロス／溶媒液体を分離し、そしてブロス／溶媒溶液か
らテイコプラニン生成物を沈殿させることによって全培
養発酵ブロスからテイコプラニンＡ2を抽出するための
方法に関していた。
【００１３】不幸なことに、米国特許４，６９６，８１
７の方法は、テイコプラニン抽出を潜在的に不安全にす
る多量の危険な毒性の水混和性溶媒（例えばアセトニト
リル）を必然的に用いること、溶媒の貯蔵の問題を提起
すること、そして溶媒の消耗した混合物の必要な回収及
び分離のためにコストを増加させることの由々しい欠点
（特に、抽出を工業的レベルにスケールアップされた発
酵手順を使用して実施する時に）を有する。
７の方法は、テイコプラニン抽出を潜在的に不安全にす
る多量の危険な毒性の水混和性溶媒（例えばアセトニト
リル）を必然的に用いること、溶媒の貯蔵の問題を提起
すること、そして溶媒の消耗した混合物の必要な回収及
び分離のためにコストを増加させることの由々しい欠点
（特に、抽出を工業的レベルにスケールアップされた発
酵手順を使用して実施する時に）を有する。
【００１４】驚くべきことに、本発明者らは、本発明の
方法によって、二つの平行した方法（即ち、濾過された
ブロスに関する一つの方法及び菌糸のケーキに関するも
う一つ方法）を実施することなくそして同時に多量の水
混和性溶媒望ましくない使用を回避しながら、上で引用
した最も関係深い技術に関してよりも高い収率でテイコ
プラニンＡ2を回収することが可能であることを見い出
した。
方法によって、二つの平行した方法（即ち、濾過された
ブロスに関する一つの方法及び菌糸のケーキに関するも
う一つ方法）を実施することなくそして同時に多量の水
混和性溶媒望ましくない使用を回避しながら、上で引用
した最も関係深い技術に関してよりも高い収率でテイコ
プラニンＡ2を回収することが可能であることを見い出
した。
【００１５】事実、少なくとも１０より高いｐＨ値での
菌糸の分離は、抗生物質の全活性体の少なくとも９０％
を溶解させることが見い出された。
菌糸の分離は、抗生物質の全活性体の少なくとも９０％
を溶解させることが見い出された。
【００１６】かくして、純粋なテイコプラニンを製造す
る方法の全体の収率を、結果として、濾過されたブロス
だけに関して作業して少なくとも５０％だけ増加させる
ことができた。
る方法の全体の収率を、結果として、濾過されたブロス
だけに関して作業して少なくとも５０％だけ増加させる
ことができた。
【００１７】勿論、第一の抽出と同じｐＨ値での菌糸の
第二の抽出は、全抗生物質活性体の９５％より多くを抽
出することを可能にするであろう。
第二の抽出は、全抗生物質活性体の９５％より多くを抽
出することを可能にするであろう。
【００１８】それ故、本発明の目的は、 ａ）濾過の間はｐＨを少なくとも１０より高い値でそし
てテイコプラニンのエピマー化を本質的に回避する温度
で一定に維持しながらブロスからの濾過によって菌糸を
分離すること、及び ｂ）濾過されたブロスからテイコプラニンＡ2を分離す
ることよりなる、全培養発酵ブロスからテイコプラニン
Ａ2を抽出するための方法である。
てテイコプラニンのエピマー化を本質的に回避する温度
で一定に維持しながらブロスからの濾過によって菌糸を
分離すること、及び ｂ）濾過されたブロスからテイコプラニンＡ2を分離す
ることよりなる、全培養発酵ブロスからテイコプラニン
Ａ2を抽出するための方法である。
【００１９】本発明の方法に関して操作する時に克服す
べき主な問題は、通常はアルカリ性媒体中で起きそして
実際的に不活性な物質を生成させる、テイコプラニン分
子のエピマー化である。
べき主な問題は、通常はアルカリ性媒体中で起きそして
実際的に不活性な物質を生成させる、テイコプラニン分
子のエピマー化である。
【００２０】事実、塩基性媒体（ｐＨ＞１０）中のテイ
コプラニンまたはその酸性加水分解生成物は、ほとんど
抗生物質活性体を留めないエピマーの種をもたらすこと
がよく知られている。テイコプラニンに関して実施され
たエピマーの構造及び塩基性加水分解の検討について
は、例えば“ザ ジャーナル オブ アンテバイオティ
クス（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）”３７巻；Ｎｏ．１
０、１２０４〜１２０８頁中のＪ．Ｃ．Ｊ．バルナ（Ｂ
ａｒｎａ）らを参照せよ。
コプラニンまたはその酸性加水分解生成物は、ほとんど
抗生物質活性体を留めないエピマーの種をもたらすこと
がよく知られている。テイコプラニンに関して実施され
たエピマーの構造及び塩基性加水分解の検討について
は、例えば“ザ ジャーナル オブ アンテバイオティ
クス（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）”３７巻；Ｎｏ．１
０、１２０４〜１２０８頁中のＪ．Ｃ．Ｊ．バルナ（Ｂ
ａｒｎａ）らを参照せよ。
【００２１】予期されなかったことであるが、本発明者
らは、１１のｐＨ値で実施されたテイコプラニン水溶液
の安定性の評価が、エピマー化が溶液の温度に依存しそ
して溶液の凝固点から室温まででは実際的に無視でき、
また長い時間の間、ｐＨ１１で溶液を放置することを可
能にすることを示すことを見い出した。
らは、１１のｐＨ値で実施されたテイコプラニン水溶液
の安定性の評価が、エピマー化が溶液の温度に依存しそ
して溶液の凝固点から室温まででは実際的に無視でき、
また長い時間の間、ｐＨ１１で溶液を放置することを可
能にすることを示すことを見い出した。
【００２２】特に、抗生物質の全量に関するエピマーの
増加は、５℃の温度で７２時間そして室温で２４時間、
テイコプラニン溶液をｐＨ１１で維持すると極端に低い
ことが見い出され、一方温度を４０℃に増加させること
によって、エピ物質のパーセントは、１５時間後にＨＰ
ＬＣによって計算して約３０％であった。
増加は、５℃の温度で７２時間そして室温で２４時間、
テイコプラニン溶液をｐＨ１１で維持すると極端に低い
ことが見い出され、一方温度を４０℃に増加させること
によって、エピ物質のパーセントは、１５時間後にＨＰ
ＬＣによって計算して約３０％であった。
【００２３】それ故、特許請求の範囲を含む本明細書中
での“テイコプラニンのエピマー化を本質的に回避する
温度”という参照事項は、溶液の凝固点（含まない）〜
室温に含まれる温度、そして好ましくは５℃〜１０℃に
含まれる温度を意味する。
での“テイコプラニンのエピマー化を本質的に回避する
温度”という参照事項は、溶液の凝固点（含まない）〜
室温に含まれる温度、そして好ましくは５℃〜１０℃に
含まれる温度を意味する。
【００２４】濾過されたブロス中に存在するエピ物質の
レベルをチェックするための効果的な方法は、ＨＰＬＣ
による濾過に従うことである。
レベルをチェックするための効果的な方法は、ＨＰＬＣ
による濾過に従うことである。
【００２５】適切な濾過されたブロスを持つためには、
エピ物質はＨＰＬＣによって計算して５％未満でなけれ
ばならない。
エピ物質はＨＰＬＣによって計算して５％未満でなけれ
ばならない。
【００２６】すべてのＨＰＬＣ対照は、ＵＶ（２５４ｍ
μ）検出器及び逆相Ｃ１８再充填されたカラム（エルバ
シル（Ｅｒｂａｓｉｌ）５、２５０ｘ４ｍｍ）を備えた
ヒューレット パッカード装置モデル１０８４を使用す
ることによって実施した。
μ）検出器及び逆相Ｃ１８再充填されたカラム（エルバ
シル（Ｅｒｂａｓｉｌ）５、２５０ｘ４ｍｍ）を備えた
ヒューレット パッカード装置モデル１０８４を使用す
ることによって実施した。
【００２７】移動相は、（Ａ）０．０２Ｍの水性ＮａＨ
2ＰＯ4／ＣＨ3ＣＮ ９５：５（ｖ／ｖ）、（Ｂ）０．
０２Ｍの水性ＮａＨ2ＰＯ4／ＣＨ3ＣＮ ２５：７５
（ｖ／ｖ）であった。勾配溶離は、４０分で８％のＢか
ら５５％のＢへであった。流量は１．５ｍｌ／ｍｉｎで
あった。
2ＰＯ4／ＣＨ3ＣＮ ９５：５（ｖ／ｖ）、（Ｂ）０．
０２Ｍの水性ＮａＨ2ＰＯ4／ＣＨ3ＣＮ ２５：７５
（ｖ／ｖ）であった。勾配溶離は、４０分で８％のＢか
ら５５％のＢへであった。流量は１．５ｍｌ／ｍｉｎで
あった。
【００２８】菌糸の濾過は、当該技術において使用され
るよく知られている方法に従って実施することができ
る。
るよく知られている方法に従って実施することができ
る。
【００２９】特に、濾過は、濾過助剤、例えばけいそう
土不活性物質（クラーセル（Ｃｌａｒｃｅｌ）ＦＬＯ／
ＭＡまたはヒフロ（Ｈｙｆｌｏ）パネル）によって覆わ
れた回転真空ドラムで実施することができる。
土不活性物質（クラーセル（Ｃｌａｒｃｅｌ）ＦＬＯ／
ＭＡまたはヒフロ（Ｈｙｆｌｏ）パネル）によって覆わ
れた回転真空ドラムで実施することができる。
【００３０】濾過が行われるｐＨ値は、本発明の方法に
よれば特に限界的である。発酵ブロス中の抗生物質活性
体の濃度は、ｐＨ値を増加させることによって増加する
ことが認められた。
よれば特に限界的である。発酵ブロス中の抗生物質活性
体の濃度は、ｐＨ値を増加させることによって増加する
ことが認められた。
【００３１】より高い収率を持つためには、ｐＨ値は１
０未満ではならずそして好ましくは１０．５〜１１．５
に含まれなければならず、さらに好ましくは１１でなけ
ればならないことが見い出された。１２のｐＨ値では、
エピマー化があまりにも増加し過ぎる可能性があった。
０未満ではならずそして好ましくは１０．５〜１１．５
に含まれなければならず、さらに好ましくは１１でなけ
ればならないことが見い出された。１２のｐＨ値では、
エピマー化があまりにも増加し過ぎる可能性があった。
【００３２】さらにまた、種々のテイコプラニンブロス
に関して、ｐＨは、出発の値とは関係無く、時間と共に
減少する傾向があることが着目された。１０未満のｐＨ
での濾過は菌糸から抽出される活性体の量を減少させる
ので、適当な希釈されたアルカリ性溶液を添加すること
によって濾過の間、一定に保持しなければならない。
に関して、ｐＨは、出発の値とは関係無く、時間と共に
減少する傾向があることが着目された。１０未満のｐＨ
での濾過は菌糸から抽出される活性体の量を減少させる
ので、適当な希釈されたアルカリ性溶液を添加すること
によって濾過の間、一定に保持しなければならない。
【００３３】この適当な希釈されたアルカリ性溶液は、
例えば希釈された苛性溶液例えば水性ＮａＯＨまたは水
性ＫＯＨ溶液の中から選択してよい。苛性溶液のタイプ
及び濃度は、本発明の重要なパラメーターではない。濃
度は、例えば５％〜１５％に含まれてよい。テイコプラ
ニンは高いアルカリ性ｐＨに非常に敏感であるので、上
記の希釈されたアルカリ性溶液の添加は、局部的な高い
濃度を回避するために良好な撹拌条件下で好ましくは実
施しなければならない。
例えば希釈された苛性溶液例えば水性ＮａＯＨまたは水
性ＫＯＨ溶液の中から選択してよい。苛性溶液のタイプ
及び濃度は、本発明の重要なパラメーターではない。濃
度は、例えば５％〜１５％に含まれてよい。テイコプラ
ニンは高いアルカリ性ｐＨに非常に敏感であるので、上
記の希釈されたアルカリ性溶液の添加は、局部的な高い
濃度を回避するために良好な撹拌条件下で好ましくは実
施しなければならない。
【００３４】濾過を実施する前に、ｐＨ１１でブロスが
平衡濃度に到達するのにどれくらい時間がかかるかを決
定するために試みが為された。数分で実際的には十分で
あることが分かった。
平衡濃度に到達するのにどれくらい時間がかかるかを決
定するために試みが為された。数分で実際的には十分で
あることが分かった。
【００３５】濾過されたブロスからのテイコプラニンの
分離は、当該技術において知られている任意の方法に従
って実施することができる。
分離は、当該技術において知られている任意の方法に従
って実施することができる。
【００３６】特に適当な方法は、ヨーロッパ特許出願公
開Ｎｏ．２４１７５８中に述べられている。それは、濾
過された溶液をテイコプラニン活性体を吸着することが
できるポリアミドカラムクロマトグラフィー樹脂と接触
させること、この水溶液から樹脂を分離すること、そし
て水と、低級アルコール、アセトン、メチルエチルケト
ン、テトラヒドロフラン、ジオキサン等から選ばれた一
またはそれより多い混合可能な有機溶媒との溶媒混合物
による溶離を行うことを有して成る。
開Ｎｏ．２４１７５８中に述べられている。それは、濾
過された溶液をテイコプラニン活性体を吸着することが
できるポリアミドカラムクロマトグラフィー樹脂と接触
させること、この水溶液から樹脂を分離すること、そし
て水と、低級アルコール、アセトン、メチルエチルケト
ン、テトラヒドロフラン、ジオキサン等から選ばれた一
またはそれより多い混合可能な有機溶媒との溶媒混合物
による溶離を行うことを有して成る。
【００３７】濾過されたブロスからのテイコプラニンの
吸着は、好ましくは、５〜８から成るｐＨ値で実施さ
れ、その結果濾液から生じる溶液を酸性化することが必
要である。
吸着は、好ましくは、５〜８から成るｐＨ値で実施さ
れ、その結果濾液から生じる溶液を酸性化することが必
要である。
【００３８】ポリアミド樹脂による吸着の適切なｐＨ値
を達成するためには、任意の鉱酸または有機酸を使用す
ることができる。
を達成するためには、任意の鉱酸または有機酸を使用す
ることができる。
【００３９】ヨーロッパ特許出願公開Ｎｏ．２４１７５
８による適当なポリアミド樹脂は、ポリカプロラクタ
ム、ナイロン６／６、ナイロン６／９、ナイロン６／１
０、ナイロン６／１２及び橋かけされたポリビニルピロ
リドンから選ぶことができる。
８による適当なポリアミド樹脂は、ポリカプロラクタ
ム、ナイロン６／６、ナイロン６／９、ナイロン６／１
０、ナイロン６／１２及び橋かけされたポリビニルピロ
リドンから選ぶことができる。
【００４０】
【実施例】以下の実施例は、何ら限定する目的を有する
こと無く、本発明を一層理解し得るものにするであろ
う。
こと無く、本発明を一層理解し得るものにするであろ
う。
【００４１】実施例１ アクチノプラネース テイコミセチクス ＡＴＣＣ ３
１１２１の異なる全培養発酵ブロスのパイロットプラン
トから生じたサンプルを、撹拌下で１０％ＮａＯＨによ
ってｐＨ１１にしそして５℃でクラーセルＦｌｏ／Ｍａ
濾過助剤のケーキを通して濾過した。
１１２１の異なる全培養発酵ブロスのパイロットプラン
トから生じたサンプルを、撹拌下で１０％ＮａＯＨによ
ってｐＨ１１にしそして５℃でクラーセルＦｌｏ／Ｍａ
濾過助剤のケーキを通して濾過した。
【００４２】比較のために、同じ全培養発酵ブロスから
の他のサンプルを、上で概説した方法に従ってｐＨ６．
７〜８で濾過した。
の他のサンプルを、上で概説した方法に従ってｐＨ６．
７〜８で濾過した。
【００４３】濾過されたブロス中の抗生物質濃度をＨＰ
ＬＣによって評価した。ＨＰＬＣの条件に関しては、上
記の明細を参照せよ。
ＬＣによって評価した。ＨＰＬＣの条件に関しては、上
記の明細を参照せよ。
【００４４】結果を以下の表１中に要約する。
【００４５】
【表１】 実施例２ ７００ＭｌのテイコプラニンＡ2発酵ブロスを、実質的
に実施例１と同じ方法に従って、撹拌下で１０％水性Ｎ
ａＯＨによってｐＨ１１にしそして１０分後に濾過し
た。
に実施例１と同じ方法に従って、撹拌下で１０％水性Ｎ
ａＯＨによってｐＨ１１にしそして１０分後に濾過し
た。
【００４６】濾過の後で、６００ｍｌの濾過されたブロ
スを、出発の抗生物質活性体の８５．７％の収率で回収
した。
スを、出発の抗生物質活性体の８５．７％の収率で回収
した。
【００４７】実施例３（比較実験）先行技術の方法（Ｕ
ＳＰ４，２３９，７５１の欄５の１〜４８行） ａ）前の実施例において使用されたのと同じ発酵ブロス
の同じ量から出発することによって、従来の方法（ｐＨ
８）による濾過を実施した。濾過された媒体をＨＣｌ
８％の添加によってｐＨ３．５に調節しそして次にブタ
ノール（１８０ｍｌ）で二回抽出した。二つの有機抽出
物を合わせそして抽出されたテイコプラニンＡ2の濃度
をＨＰＬＣによって測定した。このステップの抗生物質
活性体の収率は約２６．１％であった。
ＳＰ４，２３９，７５１の欄５の１〜４８行） ａ）前の実施例において使用されたのと同じ発酵ブロス
の同じ量から出発することによって、従来の方法（ｐＨ
８）による濾過を実施した。濾過された媒体をＨＣｌ
８％の添加によってｐＨ３．５に調節しそして次にブタ
ノール（１８０ｍｌ）で二回抽出した。二つの有機抽出
物を合わせそして抽出されたテイコプラニンＡ2の濃度
をＨＰＬＣによって測定した。このステップの抗生物質
活性体の収率は約２６．１％であった。
【００４８】ｂ）上で述べた濾過によって得られた菌糸
のケーキを、ｐＨ３．５で水によって洗浄し、真空下で
乾燥し、そして次に混合水 - アセトン６０／４０によ
って二回抽出すると、３８．７％の全収率の抗生物質活
性体に対応する全部で８００ｍｌの濾過された溶液が生
成した。
のケーキを、ｐＨ３．５で水によって洗浄し、真空下で
乾燥し、そして次に混合水 - アセトン６０／４０によ
って二回抽出すると、３８．７％の全収率の抗生物質活
性体に対応する全部で８００ｍｌの濾過された溶液が生
成した。
【００４９】それ故、上で述べた込み入った方法（ａ＋
ｂ）を用いることによって、全量で６４．８％のテイコ
プラニンＡ2が、最後の回収のために後処理されるべき
二つの溶液として元のブロスから抽出される。
ｂ）を用いることによって、全量で６４．８％のテイコ
プラニンＡ2が、最後の回収のために後処理されるべき
二つの溶液として元のブロスから抽出される。
【００５０】実施例４（比較実験）先行技術の方法（Ｕ
ＳＰ４，６９６，８１７） 前の実施例において使用されたのと同じブロスの同じ量
を、異なる容量の溶媒（以下の表２参照）と混合して、
ブロス中の溶媒の全混合物の２０〜６０容量％を生成さ
せた。連続的な撹拌による５分の混合時間の後で、サン
プルを遠心分離し、消耗した菌糸を排出し、そして上澄
み液（最後の回収のためにさらに後処理することができ
る）を、標準的なＨＰＬＣ方法に従ってテイコプラニン
Ａ2含量に関して評価した。
ＳＰ４，６９６，８１７） 前の実施例において使用されたのと同じブロスの同じ量
を、異なる容量の溶媒（以下の表２参照）と混合して、
ブロス中の溶媒の全混合物の２０〜６０容量％を生成さ
せた。連続的な撹拌による５分の混合時間の後で、サン
プルを遠心分離し、消耗した菌糸を排出し、そして上澄
み液（最後の回収のためにさらに後処理することができ
る）を、標準的なＨＰＬＣ方法に従ってテイコプラニン
Ａ2含量に関して評価した。
【００５１】結果を以下の表２中に要約する：
【００５２】
【表２】 上の表２中に報告されたデータ及び実施例２のデータの
比較から注目することができるように、本発明の方法の
抗生物質活性体の全収率は、本方法に関しては望ましく
ない溶媒の混合物を使用しないにも拘わらず、米国特許
４，６９６，８１７中に述べられた方法の収率に匹敵し
（そして多くの場合にはより高い）。
比較から注目することができるように、本発明の方法の
抗生物質活性体の全収率は、本方法に関しては望ましく
ない溶媒の混合物を使用しないにも拘わらず、米国特許
４，６９６，８１７中に述べられた方法の収率に匹敵し
（そして多くの場合にはより高い）。
【００５３】実施例５ ７００ＭｌのテイコプラニンＡ2発酵ブロスを、撹拌下
で１０％水性ＮａＯＨによってｐＨ１１にしそして１０
分後に濾過した。次に濾過された溶液を、１０％水性Ｈ
ＣｌによってｐＨ８に戻しそして次に２５０ｍｌのポリ
アミド樹脂（カラムクロマトグラフィーのためのポリア
ミド−ＣＣ ６、粒径 ５０〜１６０μ、見かけの密度
０．２０ｇ／ｍｌ、マチェリー ナーゲル（Ｍａｃｈ
ｅｒｅｙＮａｇｅｌ）、西ドイツ）を充填した２．５ｘ
５０ｃｍのガラスカラムを通過させそして底からの吸引
によって真空下に保持した。平均流速は１００ｍｌ／ｃ
ｍ2ｈであった。消耗したブロス（７００ｍｌ）は、約
７％の出発のテイコプラニン活性体及び８０％より多い
すべてのもっと極性のブロスの成分（望ましくない固体
及び着色した有機物質）を含んでいた。２床容量の脱イ
オン水で洗浄した後で、０．３〜１．０ｇ／ｌの炭酸ナ
トリウムの勾配を含む９／１のメタノール／水（ｖ／
ｖ）の混合物の５ｌによって樹脂溶離を実施した。
で１０％水性ＮａＯＨによってｐＨ１１にしそして１０
分後に濾過した。次に濾過された溶液を、１０％水性Ｈ
ＣｌによってｐＨ８に戻しそして次に２５０ｍｌのポリ
アミド樹脂（カラムクロマトグラフィーのためのポリア
ミド−ＣＣ ６、粒径 ５０〜１６０μ、見かけの密度
０．２０ｇ／ｍｌ、マチェリー ナーゲル（Ｍａｃｈ
ｅｒｅｙＮａｇｅｌ）、西ドイツ）を充填した２．５ｘ
５０ｃｍのガラスカラムを通過させそして底からの吸引
によって真空下に保持した。平均流速は１００ｍｌ／ｃ
ｍ2ｈであった。消耗したブロス（７００ｍｌ）は、約
７％の出発のテイコプラニン活性体及び８０％より多い
すべてのもっと極性のブロスの成分（望ましくない固体
及び着色した有機物質）を含んでいた。２床容量の脱イ
オン水で洗浄した後で、０．３〜１．０ｇ／ｌの炭酸ナ
トリウムの勾配を含む９／１のメタノール／水（ｖ／
ｖ）の混合物の５ｌによって樹脂溶離を実施した。
【００５４】溶離液は、各々７００ｍｌの７つの留分と
して集められた。各々の留分を水性鉱酸によってｐＨ７
に中和しそして次にＨＰＬＣ分析によって分析した。溶
離液の５つの留分だけ（３．５リットル）を合わせそし
て生成した溶液（溶離した活性体の９０％より多くを含
む）を、４０〜５０℃で減圧下で濃縮して０．６リット
ルの水性残留懸濁液にした。
して集められた。各々の留分を水性鉱酸によってｐＨ７
に中和しそして次にＨＰＬＣ分析によって分析した。溶
離液の５つの留分だけ（３．５リットル）を合わせそし
て生成した溶液（溶離した活性体の９０％より多くを含
む）を、４０〜５０℃で減圧下で濃縮して０．６リット
ルの水性残留懸濁液にした。
【００５５】上記の濃縮されたテイコプラニン懸濁液に
撹拌下で１０．０リットルのアセトンを添加した。
撹拌下で１０．０リットルのアセトンを添加した。
【００５６】沈殿を室温で３時間放置せしめそして透明
な上澄みアセトンを傾斜分離した。固体を濾過によって
分離し、そしてケーキを室温でアセトンで洗浄した。
な上澄みアセトンを傾斜分離した。固体を濾過によって
分離し、そしてケーキを室温でアセトンで洗浄した。
【００５７】生成物を室温で真空下で一晩乾燥した。
【００５８】ＨＰＬＣによる８５％純度のテイコプラニ
ンが、発酵ブロス（水及び溶媒含量：１０．６重量％；
無機残渣：２．８重量％）中に含まれていた出発の微生
物学的な活性体を基にして７４．３％の回収収率で得ら
れた。
ンが、発酵ブロス（水及び溶媒含量：１０．６重量％；
無機残渣：２．８重量％）中に含まれていた出発の微生
物学的な活性体を基にして７４．３％の回収収率で得ら
れた。
【００５９】この１２ｌの母液は、約１０％の出発のテ
イコプラニンを含んでいた。
イコプラニンを含んでいた。
【００６０】本発明の主なる特徴及び態様は以下の通り
である。
である。
【００６１】１）ａ）濾過の間はｐＨを少なくとも１０
より高い値でそしてテイコプラニンのエピマー化を本質
的に回避する温度で一定に維持しながらブロスからの濾
過によって菌糸を分離すること、及び ｂ）濾過されたブロスからテイコプラニンＡ2を分離す
ることよりなる、全培養発酵ブロスからテイコプラニン
Ａ2を抽出するための方法。
より高い値でそしてテイコプラニンのエピマー化を本質
的に回避する温度で一定に維持しながらブロスからの濾
過によって菌糸を分離すること、及び ｂ）濾過されたブロスからテイコプラニンＡ2を分離す
ることよりなる、全培養発酵ブロスからテイコプラニン
Ａ2を抽出するための方法。
【００６２】２）該濾過を１０．５〜１１．５に含まれ
るｐＨ値で、好ましくはｐＨ１１で実施する、上記１に
記載の方法。
るｐＨ値で、好ましくはｐＨ１１で実施する、上記１に
記載の方法。
【００６３】３）該濾過を実施する温度が溶液の凝固点
〜室温、好ましくは５℃〜１０℃に含まれる、上記１及
び２のいずれかに記載の方法。
〜室温、好ましくは５℃〜１０℃に含まれる、上記１及
び２のいずれかに記載の方法。
【００６４】４）濾過されたブロスからのテイコプラニ
ンＡ2の分離を、濾過された溶液をテイコプラニン活性
体を吸着することができるポリアミドカラムクロマトグ
ラフィー樹脂と接触させ、水性溶液から樹脂を分離しそ
して水及び一またはそれより多い混合可能な有機溶媒の
溶媒混合物によって溶離して実施することをさらに特徴
とする、上記１から３のいずれかに記載の方法。
ンＡ2の分離を、濾過された溶液をテイコプラニン活性
体を吸着することができるポリアミドカラムクロマトグ
ラフィー樹脂と接触させ、水性溶液から樹脂を分離しそ
して水及び一またはそれより多い混合可能な有機溶媒の
溶媒混合物によって溶離して実施することをさらに特徴
とする、上記１から３のいずれかに記載の方法。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 7/00 C07K 1/00 C12P 1/00 ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】 ａ）濾過の間のｐＨを１０〜１１.５の
範囲内の値で且つ溶液の凝固点ないし室温間に含まれる
温度で一定に維持しながらブロスからの濾過によって菌
糸を分離し、そして ｂ）濾過されたブロスからテイコプラニンＡ2を分離す
ることを特徴とする全培養発酵ブロスからのテイコプラ
ニンＡ2 の抽出方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP90118778 | 1990-10-01 | ||
| GB90118778.1 | 1990-10-01 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04264099A JPH04264099A (ja) | 1992-09-18 |
| JP3083369B2 true JP3083369B2 (ja) | 2000-09-04 |
Family
ID=8204557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03275002A Expired - Lifetime JP3083369B2 (ja) | 1990-10-01 | 1991-09-27 | テイコプラニン回収方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5486465A (ja) |
| EP (1) | EP0479086B1 (ja) |
| JP (1) | JP3083369B2 (ja) |
| KR (1) | KR0184644B1 (ja) |
| AT (1) | ATE127477T1 (ja) |
| CA (1) | CA2052455C (ja) |
| DE (1) | DE69112750T2 (ja) |
| DK (1) | DK0479086T3 (ja) |
| ES (1) | ES2076436T3 (ja) |
| GR (1) | GR3018019T3 (ja) |
| IE (1) | IE71672B1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8621912D0 (en) * | 1986-09-11 | 1986-10-15 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of anti-biotic complex |
| KR20000010589A (ko) | 1996-04-23 | 2000-02-15 | 클라우디오 쿼르타 | 항생제a40926의아미드유도체의개선된화학적제조방법 |
| KR100321304B1 (ko) * | 1999-04-16 | 2002-03-18 | 박호군 | 테이코플라닌의 정제방법 |
| KR100434109B1 (ko) * | 2001-10-29 | 2004-06-04 | 씨제이 주식회사 | 테이코플라닌의 정제방법 |
| KR100459289B1 (ko) * | 2002-05-30 | 2004-12-03 | 이연제약주식회사 | 발효액으로부터 테이코플라닌ａ₂의 회수방법 |
| KR100476818B1 (ko) | 2002-07-19 | 2005-03-17 | 종근당바이오 주식회사 | 테이코플라닌 에이 투 정제 방법 |
| KR100474653B1 (ko) | 2004-04-16 | 2005-03-14 | 동국제약 주식회사 | 타이코플라닌의 고순도 생산방법 |
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| EP2592089A1 (en) | 2011-11-11 | 2013-05-15 | LEK Pharmaceuticals d.d. | Process of purification of teicoplanin |
| EP2592090A1 (en) | 2011-11-11 | 2013-05-15 | LEK Pharmaceuticals d.d. | Process of purification of teicoplanin |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1496386A (en) * | 1975-03-05 | 1977-12-30 | Lepetit Spa | Antibiotics |
| US4696817A (en) * | 1983-10-11 | 1987-09-29 | The Dow Chemical Company | Extraction of teichomycin A2 from whole culture fermentation broth |
| GB8608798D0 (en) * | 1986-04-11 | 1986-05-14 | Lepetit Spa | Recovery of glycopeptide antibiotics from aqueous solutions |
| US4742045A (en) * | 1986-07-30 | 1988-05-03 | Smithkline Beckman Corporation | Glycopeptide antibiotics |
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1991
- 1991-09-23 AT AT91116126T patent/ATE127477T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-09-23 DK DK91116126.3T patent/DK0479086T3/da active
- 1991-09-23 DE DE69112750T patent/DE69112750T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-23 EP EP91116126A patent/EP0479086B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-23 ES ES91116126T patent/ES2076436T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-27 JP JP03275002A patent/JP3083369B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-30 IE IE343291A patent/IE71672B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-09-30 CA CA002052455A patent/CA2052455C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-09-30 KR KR1019910017055A patent/KR0184644B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-03-29 US US08/413,971 patent/US5486465A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-11-08 GR GR950403132T patent/GR3018019T3/el unknown
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| ATE127477T1 (de) | 1995-09-15 |
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| EP0479086A3 (en) | 1992-10-21 |
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