JP2811881B2 - Ｗｓ７６２２ａ、ｂ、ｃおよびｄ物質、それらの誘導体、それらの製法ならびにそれらの用途 - Google Patents
Ｗｓ７６２２ａ、ｂ、ｃおよびｄ物質、それらの誘導体、それらの製法ならびにそれらの用途Info
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は新規なWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質なら
びにWS7622A物質の誘導体に関する。
びにWS7622A物質の誘導体に関する。
さらに詳細には、この発明はヒト白血球エラスターゼ
抑制作用を有する新規なWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物
質、WS7622A物質の誘導体および医薬として許容される
それらの塩類、それらの製造法、およびそれらを含有す
る医薬組成物に関する。
抑制作用を有する新規なWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物
質、WS7622A物質の誘導体および医薬として許容される
それらの塩類、それらの製造法、およびそれらを含有す
る医薬組成物に関する。
［発明の構成］ この発明のWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質はストレプ
トミセス属のWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質生産菌を栄
養培地中で培養することにより産生することができる。
トミセス属のWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質生産菌を栄
養培地中で培養することにより産生することができる。
ストレプトミセス・レシストミシフィクスNo.7622の菌
学的性質： WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質の生産に使用できる微
生物は、ストレプトミセス属に属するWS7622A、Ｂ、Ｃ
およびＤ物質生産菌株であり、なかでもストレプトミセ
ス・レシストミシフィクスNo.7622は福島県広野町で採
集された土壌から新たに分離されたものである。
学的性質： WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質の生産に使用できる微
生物は、ストレプトミセス属に属するWS7622A、Ｂ、Ｃ
およびＤ物質生産菌株であり、なかでもストレプトミセ
ス・レシストミシフィクスNo.7622は福島県広野町で採
集された土壌から新たに分離されたものである。
本菌株の凍結乾燥試料は、ブダペスト条約における国
際寄託機関である工業技術院微生物工業技術研究所（〒
305、茨城県つくば市東１−１−３）に、ストレプトミ
セスsp.No.7622の名称で、微工研条寄第2306号（FERM B
P−2306）として寄託され、その後この菌株はストレプ
トミセス・レシストミシフィクスNo.7622と命名され
た。
際寄託機関である工業技術院微生物工業技術研究所（〒
305、茨城県つくば市東１−１−３）に、ストレプトミ
セスsp.No.7622の名称で、微工研条寄第2306号（FERM B
P−2306）として寄託され、その後この菌株はストレプ
トミセス・レシストミシフィクスNo.7622と命名され
た。
WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質生産菌はＸ線照射、紫
外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン、２−アミノプリン等の変異処理によりWS7622
A、Ｂ、ＣおよびＤ物質の生産を高めることができる。
外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン、２−アミノプリン等の変異処理によりWS7622
A、Ｂ、ＣおよびＤ物質の生産を高めることができる。
ストレプトミセス・レシストミシフィクスNo.7622は
次のような形態、培養性状、生理的性質を有する。
次のような形態、培養性状、生理的性質を有する。
本菌株の形態的観察、培養性状、生理的性質を調べる
ための培地、方法は主にシャーリングとゴットリーブ
(1)、ワックスマン(2)に従った。30℃、14〜21日間培養
後それぞれの観察を行った。色名は“メシューエン・ハ
ンドブック・オブ・カラー"(3)からとった。炭素源の利
用性はプリドハム・ゴットリーブの方法に従った。生育
温度は酵母・麦芽エキス寒天培地を用い、温度勾配機
（アドバンテック東洋、TN−３）を用いた。細胞壁中の
ジアミノピメリン酸はベッカー等の方法(5)、山口の方
法(6)に従った。
ための培地、方法は主にシャーリングとゴットリーブ
(1)、ワックスマン(2)に従った。30℃、14〜21日間培養
後それぞれの観察を行った。色名は“メシューエン・ハ
ンドブック・オブ・カラー"(3)からとった。炭素源の利
用性はプリドハム・ゴットリーブの方法に従った。生育
温度は酵母・麦芽エキス寒天培地を用い、温度勾配機
（アドバンテック東洋、TN−３）を用いた。細胞壁中の
ジアミノピメリン酸はベッカー等の方法(5)、山口の方
法(6)に従った。
（１）形態的特徴 オートミール寒天、酵母エキス・麦芽エキス寒天、無
機塩・でんぷん寒天上で30℃、14日間培養後、光学及び
電子顕微鏡観察を行った。栄養菌糸はよく発達し断裂し
ない。気中菌糸は単純分枝し、らせん状及び直状曲状の
胞子鎖を形成、１本の胞子鎖には30個以上の胞子が連鎖
する。胞子は平滑な表面をもち、大きさは巾0.7−0.9、
長さ0.8−1.1μｍの卵型であった。菌核、胞子のう、遊
走子等は観察されなかった。
機塩・でんぷん寒天上で30℃、14日間培養後、光学及び
電子顕微鏡観察を行った。栄養菌糸はよく発達し断裂し
ない。気中菌糸は単純分枝し、らせん状及び直状曲状の
胞子鎖を形成、１本の胞子鎖には30個以上の胞子が連鎖
する。胞子は平滑な表面をもち、大きさは巾0.7−0.9、
長さ0.8−1.1μｍの卵型であった。菌核、胞子のう、遊
走子等は観察されなかった。
（２）培養性状 結果を表１に示す。気菌糸は青味灰色から茶味灰色を
示す。生育裏面の色は、酵母エキス・麦芽エキス寒天、
オートミール寒天上で茶色、無機塩・でんぷん寒天上で
紫味茶色、シュクロース・硝酸寒天上で灰味赤紫色を示
す。メラノイド色素、他の可溶性色素は産生しない。
示す。生育裏面の色は、酵母エキス・麦芽エキス寒天、
オートミール寒天上で茶色、無機塩・でんぷん寒天上で
紫味茶色、シュクロース・硝酸寒天上で灰味赤紫色を示
す。メラノイド色素、他の可溶性色素は産生しない。
表１ No.7622株の培養性状 培地 培養性状 酵母エキス・ 麦芽エキス寒天 G:良好 A:普通、青味灰（22E2） R:茶（6F4） S:なし オートミール寒天 G:良好 A:普通、青味灰（22D2） R:著（6F6） S:なし 無機塩・ でんぷん寒天 G:良好 A:豊富、茶味灰（7E2） R:紫味茶（11F6） S:なし グリセリン・ アスパラギン寒天 G:良好 A:豊富、茶味灰（6E2） R:灰味橙（5B5） S:なし 培地 培養性状 ペプトン・ 酵母エキス・ 鉄寒天 G:良好 A:貧弱、青緑味灰（24E2） R:暗い茶（7F8） S:なし グルコース・ アスパラギン寒天 G:普通 A:なし R:黄味白（4A2） S:なし 栄養寒天 G:貧弱 A:なし R:黄味白（4A2） S:なし ベネット寒天 G:良好 A:貧弱、青味灰（22E3） R:茶味橙（5C5） S:なし 培地 培養性状 シュクロース・ 硝酸寒天 G:良好 A:なし R:灰味赤紫（13D4） S:なし 略号 G:生育、A:気菌糸、R:生育裏面の色 S:可溶性色素 （３）細胞壁タイプ No.7622株の全菌体分解物を分析した結果、LL−ジア
ミノピメリン酸の存在が確認できた。従って細胞壁タイ
プは１型であると考えられる。
ミノピメリン酸の存在が確認できた。従って細胞壁タイ
プは１型であると考えられる。
（４）生理的性質 生理的性質と炭素源の利用性を表２、３にそれぞれ示
す。
す。
（５）同定 形態的、化学的分析の結果からNo.7622株はストレプ
トミセス属に属すると考えられる(7)。そこで、本菌株
を文献に記載されたストレプトミセス属の種と比較した
(8)-(12)ところ、ストレプトミセス・レシストミシフィ
クスと類似していることが明かとなった。そこでNo.762
2株と、ストレプトミセス・レシストミシフィクスIFO 1
2814と詳細に比較した。その結果、両株の性質は２、３
の相違を除いて殆ど同一であった。表４に両株の相違を
示す。
トミセス属に属すると考えられる(7)。そこで、本菌株
を文献に記載されたストレプトミセス属の種と比較した
(8)-(12)ところ、ストレプトミセス・レシストミシフィ
クスと類似していることが明かとなった。そこでNo.762
2株と、ストレプトミセス・レシストミシフィクスIFO 1
2814と詳細に比較した。その結果、両株の性質は２、３
の相違を除いて殆ど同一であった。表４に両株の相違を
示す。
これらの相違はNo.7622株は別種であるとみなすには
小さすぎると考えるのが妥当であり、本菌株をストレプ
トミセス・レシストミシフィクスと同定しストレプトミ
セス・レシストミシフィクス（Streptomyces resistomy
cificus）・No.7622と命名した。
小さすぎると考えるのが妥当であり、本菌株をストレプ
トミセス・レシストミシフィクスと同定しストレプトミ
セス・レシストミシフィクス（Streptomyces resistomy
cificus）・No.7622と命名した。
（１）シャーリング、イー・ビーおよびディー・ゴット
リープ：メソズ・フォー・キャラクテリゼーション・オ
ブ・ストレプトマイセス・スピーシーズ：インターナシ
ョナル・ジャーナル・オブ・システマチック・バクテリ
オロジー（Shirling,E.B and D.Gottlieb:Methods for
characterisation of Streptomyces species:Internati
onal Journal of Systematic Bacteriology）、第16巻3
13−340頁、1966年。
リープ：メソズ・フォー・キャラクテリゼーション・オ
ブ・ストレプトマイセス・スピーシーズ：インターナシ
ョナル・ジャーナル・オブ・システマチック・バクテリ
オロジー（Shirling,E.B and D.Gottlieb:Methods for
characterisation of Streptomyces species:Internati
onal Journal of Systematic Bacteriology）、第16巻3
13−340頁、1966年。
（２）ワクスマン・エス・エー；ザ・アクチノマイシー
ツ（The actinomycetes）第２巻；クラシフィケーショ
ン・アイデンティフィケーション・アンド・デスクリプ
ション・オブ・ゼネラ・アンド・スピーシーズ（Classi
fication,identification and description of genera
and species）：ザ・ウイリアムス・アンド・ウィルキ
ンス社・バルチモア（The Williams and wilkins Co.,B
altimore）1961年。
ツ（The actinomycetes）第２巻；クラシフィケーショ
ン・アイデンティフィケーション・アンド・デスクリプ
ション・オブ・ゼネラ・アンド・スピーシーズ（Classi
fication,identification and description of genera
and species）：ザ・ウイリアムス・アンド・ウィルキ
ンス社・バルチモア（The Williams and wilkins Co.,B
altimore）1961年。
（３）コーネラップ・エーおよびジェー・エイチ・ワン
シャー：メチューエン・ハンドブック・オブ・カラー、
メチューエン、ロンドン（Kornerup,A.and J.H.Wansche
r:Methuen Handbook of Colour,Methuen,London）1978
年。
シャー：メチューエン・ハンドブック・オブ・カラー、
メチューエン、ロンドン（Kornerup,A.and J.H.Wansche
r:Methuen Handbook of Colour,Methuen,London）1978
年。
（４）ベッカー・ビー、エム・ピー・レシバリエル、ア
ール・イー・ゴードンおよびエイチ・エー・レシバリエ
ル：ラピド・ディファレンシエーション・ビトウィーン
・ノカルディア・アンド・ストレプトマイセス・バイ・
ペーパークロマトグラフィー・オブ・ホールセル・ヒド
ロリゼーツ：アプライド・マイクロバイオロジー（Beck
er,B.,M.P.Lechevalier,R.E.Gordon and H.A.Lechevali
er:Rapid differentiation between Nocardia and Stre
ptomyces by paper chromatography of whole−Cell hy
drolysates:Appl.Microbiol.）第12巻、421−423頁、19
64年。
ール・イー・ゴードンおよびエイチ・エー・レシバリエ
ル：ラピド・ディファレンシエーション・ビトウィーン
・ノカルディア・アンド・ストレプトマイセス・バイ・
ペーパークロマトグラフィー・オブ・ホールセル・ヒド
ロリゼーツ：アプライド・マイクロバイオロジー（Beck
er,B.,M.P.Lechevalier,R.E.Gordon and H.A.Lechevali
er:Rapid differentiation between Nocardia and Stre
ptomyces by paper chromatography of whole−Cell hy
drolysates:Appl.Microbiol.）第12巻、421−423頁、19
64年。
（５）山口、：コンパリゾン・オブ・ザ・セル・ウォー
ル・コンポジション・オブ・モルフォロジカリー・ディ
スティンクト・アクチノマイシーツ：ジャーナル・オブ
・バクテリオロジー（Yamaguchi,:T.:Comparison of th
e cell wall composition of morphologically distinc
t actinomycetes:J.Bacteriol.）第89巻、444−453頁、
1965年。
ル・コンポジション・オブ・モルフォロジカリー・ディ
スティンクト・アクチノマイシーツ：ジャーナル・オブ
・バクテリオロジー（Yamaguchi,:T.:Comparison of th
e cell wall composition of morphologically distinc
t actinomycetes:J.Bacteriol.）第89巻、444−453頁、
1965年。
（６）プリドハム、ティー・ジーおよびディー・ゴット
リーブ：ザ・ユーティライゼーション・オブ・カーボン
・コンパウンズ・バイ・サム・アクチノマイシティリー
ズ・アズ・アン・エード・フォー・スピーシーズ・デタ
ーミネーション：ジャーナル・オブ・バクテリオロジー
（Pridham,T.G.and D.Gettlieb:The utilization of ca
rbon compounds by some Actinomycetales as an aid f
or species determination:J.Bacteriol.）第56巻、107
−114頁、1948年。
リーブ：ザ・ユーティライゼーション・オブ・カーボン
・コンパウンズ・バイ・サム・アクチノマイシティリー
ズ・アズ・アン・エード・フォー・スピーシーズ・デタ
ーミネーション：ジャーナル・オブ・バクテリオロジー
（Pridham,T.G.and D.Gettlieb:The utilization of ca
rbon compounds by some Actinomycetales as an aid f
or species determination:J.Bacteriol.）第56巻、107
−114頁、1948年。
（７）ブチャナン、アール・イー・およびエヌ・イー・
ギボンズ：バージェイズ・マニュアル・オブ・デターミ
ネイチブ・バクテリオロジー（Buchanan,R.E.and N.E.G
ibbons:Bergey's Manual of Determinative Bacteriolo
gy）第８版：ザ・ウィリアムスおよびウィルキンス社、
バルチモア（The Williams and Wilkins Co.,Baltimor
e）、1974年。
ギボンズ：バージェイズ・マニュアル・オブ・デターミ
ネイチブ・バクテリオロジー（Buchanan,R.E.and N.E.G
ibbons:Bergey's Manual of Determinative Bacteriolo
gy）第８版：ザ・ウィリアムスおよびウィルキンス社、
バルチモア（The Williams and Wilkins Co.,Baltimor
e）、1974年。
（８）シャーリング、イー・ビー・およびディー・ゴッ
トリープ：コオペレイチフリ・デスクリプション・オブ
・タイプ・カルチャー・オブ・ストレプトマイセス.2.
スピーシーズ・デスクリプションズ・フロム・ファース
ト・スタディー：インターナショナル・ジャーナル・オ
ブ・システマチック・バクテリオロジー（Shirling,E.
B.and D.Gottlieb:Cooperative・description of type
culture of Streptomyces.2.species descriptions fro
m first study:Intern.J.Syst.Bacteriol.）第18巻、69
−189頁、1968年。
トリープ：コオペレイチフリ・デスクリプション・オブ
・タイプ・カルチャー・オブ・ストレプトマイセス.2.
スピーシーズ・デスクリプションズ・フロム・ファース
ト・スタディー：インターナショナル・ジャーナル・オ
ブ・システマチック・バクテリオロジー（Shirling,E.
B.and D.Gottlieb:Cooperative・description of type
culture of Streptomyces.2.species descriptions fro
m first study:Intern.J.Syst.Bacteriol.）第18巻、69
−189頁、1968年。
（９）シャーリング、イー・ビー・およびディー・ゴッ
トリープ：コオペレイチブ・デスクリプション・オブ・
タイプ・カルチャー・オブ・ストレプトマイセス.3.ア
ディショナル・スピーシーズ・デスクリプションズ・フ
ロム・ファースト・アンド・セカンド・スタディーズ：
インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマチッ
ク・バクテリオロジー（Shirling,E.B.and D.Gottlieb:
Cooperative description of type culture of Strepto
myces.3.Additional species descriptions from first
and second studies:Intern.J.Syst.Bacteriol.）第18
巻、279−392頁、1968年。
トリープ：コオペレイチブ・デスクリプション・オブ・
タイプ・カルチャー・オブ・ストレプトマイセス.3.ア
ディショナル・スピーシーズ・デスクリプションズ・フ
ロム・ファースト・アンド・セカンド・スタディーズ：
インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマチッ
ク・バクテリオロジー（Shirling,E.B.and D.Gottlieb:
Cooperative description of type culture of Strepto
myces.3.Additional species descriptions from first
and second studies:Intern.J.Syst.Bacteriol.）第18
巻、279−392頁、1968年。
（10）シャーリング、イー・ビー・およびディー・ゴッ
トリープ：コオペレイチブ・デスクリプション・オブ・
タイプ・カルチャー・オブ・ストレプトマイセス.4.ス
ピーシーズ・デスクリプションズ・フロム・ザ・セカン
ド、サード・アンド・フォース・スタディーズ：インタ
ーナショナル・ジャーナル・オブ・システマチック・バ
クテリオロジー（Shirling,E.B.and D.Gottlieb:Cooper
ative description of type culture of Streptomyces.
4.species descriptions from the second,third and f
orth studies:Intern.J.Syst.Bacteriol.）第19巻、391
−512頁、1969年。
トリープ：コオペレイチブ・デスクリプション・オブ・
タイプ・カルチャー・オブ・ストレプトマイセス.4.ス
ピーシーズ・デスクリプションズ・フロム・ザ・セカン
ド、サード・アンド・フォース・スタディーズ：インタ
ーナショナル・ジャーナル・オブ・システマチック・バ
クテリオロジー（Shirling,E.B.and D.Gottlieb:Cooper
ative description of type culture of Streptomyces.
4.species descriptions from the second,third and f
orth studies:Intern.J.Syst.Bacteriol.）第19巻、391
−512頁、1969年。
（11）スカーマン、ヴィ・ビー・ディー；ヴィ・マック
ゴワンおよびピー・エイチ・エー・スニース：アプルー
ブド・リスト・オブ・バクテリアル・ネームズ：インタ
ーナショナル・ジャーナル・オブ・システマチックバク
テリオロジー（Skerman,V.B.D.;V.McGowan ＆ P.H.A.Sn
eath:Approved list of bacterial names:Intern.J.Sys
t.Bacteriol.）第30巻、225−420頁、1980年。
ゴワンおよびピー・エイチ・エー・スニース：アプルー
ブド・リスト・オブ・バクテリアル・ネームズ：インタ
ーナショナル・ジャーナル・オブ・システマチックバク
テリオロジー（Skerman,V.B.D.;V.McGowan ＆ P.H.A.Sn
eath:Approved list of bacterial names:Intern.J.Sys
t.Bacteriol.）第30巻、225−420頁、1980年。
（12）ムーア、ダブリュー・イー・シー・、イー・ピー
・カトーおよびエル・ヴィ・エイチ・ムーア；インデッ
クス・オブ・バクテリアル・アンド・イースト・ノーメ
ンクラチュラル・チェーンジズ・パブリッシュト・イン
・ザ・アイ・ジェイ・エス・ビー・シンス・ザ・1980・
アプルーブド・リスツ・オブ・バクテリアル・ネーム
ズ：インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマ
チック・バクテリオロジー（Moore,W.E.C.,E.P.Cato ＆
L.V.H.Moore:Index of Bacterial and Yeast Nomencla
tural changes Published in theI.J.S.B.since the 19
80 Approved Lists of Bacterial Names:Intern.I.Sys
t.Bacteriol.）第35巻、382−407頁、1985年。
・カトーおよびエル・ヴィ・エイチ・ムーア；インデッ
クス・オブ・バクテリアル・アンド・イースト・ノーメ
ンクラチュラル・チェーンジズ・パブリッシュト・イン
・ザ・アイ・ジェイ・エス・ビー・シンス・ザ・1980・
アプルーブド・リスツ・オブ・バクテリアル・ネーム
ズ：インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマ
チック・バクテリオロジー（Moore,W.E.C.,E.P.Cato ＆
L.V.H.Moore:Index of Bacterial and Yeast Nomencla
tural changes Published in theI.J.S.B.since the 19
80 Approved Lists of Bacterial Names:Intern.I.Sys
t.Bacteriol.）第35巻、382−407頁、1985年。
WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質： WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質は、ストレプトミセス
属に属するWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質産生菌株を、
利用し得る炭素源および窒素源を含む栄養培地中、例え
ば振とう培養、深部培養等の好気条件下に培養すること
により、生産することができる。培地は合成培地、半合
成培地または天然培地のいずれであってもよい。
属に属するWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質産生菌株を、
利用し得る炭素源および窒素源を含む栄養培地中、例え
ば振とう培養、深部培養等の好気条件下に培養すること
により、生産することができる。培地は合成培地、半合
成培地または天然培地のいずれであってもよい。
好ましい炭素源としてはグルコース、マンノース、グ
リセリン、糖蜜、でんぷん、でんぷん加水分解物等が挙
げられ、好ましい窒素源としては肉エキス、カゼイン加
水分解物、ペプトン、グルテン粉、トウモロコシ粉、綿
実粉、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、乾燥酵
母、燐酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素等が挙
げられる。これらに例えば燐酸水素ニナトリウム、燐酸
ニ水素カリウム、炭酸カルシウム、硫酸第一鉄、硫酸マ
グネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、塩化マ
グネシウム等の燐酸塩、塩化物およびその他の金属の塩
類のような無機塩類も組合わせて混入してもよい。醗酵
中に激しい発泡が起る場合には、例えば大豆油、あまに
油等の植物油、例えばオクタデカノール等の高級アルコ
ールのような常用の消泡剤を適量添加してもよい。
リセリン、糖蜜、でんぷん、でんぷん加水分解物等が挙
げられ、好ましい窒素源としては肉エキス、カゼイン加
水分解物、ペプトン、グルテン粉、トウモロコシ粉、綿
実粉、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、乾燥酵
母、燐酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素等が挙
げられる。これらに例えば燐酸水素ニナトリウム、燐酸
ニ水素カリウム、炭酸カルシウム、硫酸第一鉄、硫酸マ
グネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、塩化マ
グネシウム等の燐酸塩、塩化物およびその他の金属の塩
類のような無機塩類も組合わせて混入してもよい。醗酵
中に激しい発泡が起る場合には、例えば大豆油、あまに
油等の植物油、例えばオクタデカノール等の高級アルコ
ールのような常用の消泡剤を適量添加してもよい。
醗酵は30℃付近の温度で50時間ないし200時間行うの
が望ましい。
が望ましい。
培養の至適条件は使用する菌の菌株の特徴に従って上
記醗酵条件から選択される。
記醗酵条件から選択される。
このようにして生産された培養ブロス中のWS7622A、
Ｂ、ＣおよびＤ物質は主に菌体内に存在するので、培養
ブロスは先ず濾過される。得られた菌体にアセトンのよ
うな適当な溶媒を加え、得られる混合物から一般的に抗
生物質の生産に通常使用される操作法によってWS7622
A、Ｂ、ＣおよびＤ物質を分離、精製することができ
る。すなわち、例えば、減圧濃縮、凍結乾燥、溶媒抽
出、pH調整、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂、非
イオン吸着樹脂等による樹脂処理、活性炭、ケイ酸、シ
リカゲルまたはアルミナのような吸着剤処理、結晶化お
よび再結晶のような操作法を単独でまたは任意に組合わ
せて使用すればよい。
Ｂ、ＣおよびＤ物質は主に菌体内に存在するので、培養
ブロスは先ず濾過される。得られた菌体にアセトンのよ
うな適当な溶媒を加え、得られる混合物から一般的に抗
生物質の生産に通常使用される操作法によってWS7622
A、Ｂ、ＣおよびＤ物質を分離、精製することができ
る。すなわち、例えば、減圧濃縮、凍結乾燥、溶媒抽
出、pH調整、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂、非
イオン吸着樹脂等による樹脂処理、活性炭、ケイ酸、シ
リカゲルまたはアルミナのような吸着剤処理、結晶化お
よび再結晶のような操作法を単独でまたは任意に組合わ
せて使用すればよい。
また、WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤそれぞれの分離は、
例えば高速液体クロマトグラフィー（HPLC）の次のよう
なデータに基づいて行うことができる。
例えば高速液体クロマトグラフィー（HPLC）の次のよう
なデータに基づいて行うことができる。
カラム：山村化学研究所（京都）、Ａ−302（ODS 6φ
×150mm） 移動相:CH3OH−CH3CN−0.3％aq.H3PO4（10:1:10） 検出:210nm 流速:1ml/分 保持時間（分）： WS7622A: 6.93 WS7622B:10.08 WS7622C: 5.30 WS7622D: 4.38 培養ブロス中に生産されたWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ
物質はそれぞれ遊離の形、または所望に応じて医薬とし
て許容される塩の形として分離することができる。これ
らの物質を医薬として許容される塩の形として分離する
ためには、菌体抽出液から得られた所望の化合物を、例
えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金
属化合物、例えば水酸化カルシウム、水酸化マグネシウ
ム等のアルカリ土金属化合物等の無機塩基、例えばアン
モニア等の無機塩基、例えばトリエチルアミン、ジシク
ロヘキシルアミン等の有機塩基のような塩基または例え
ば塩酸、硫酸、燐酸等の無機酸または例えばギ酸、酢
酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、シュウ酸等の
有機酸のような酸によって処理すれば、これによりWS76
22A、Ｂ、ＣおよびＤ物質それぞれの対応する塩を得る
ことができる。
×150mm） 移動相:CH3OH−CH3CN−0.3％aq.H3PO4（10:1:10） 検出:210nm 流速:1ml/分 保持時間（分）： WS7622A: 6.93 WS7622B:10.08 WS7622C: 5.30 WS7622D: 4.38 培養ブロス中に生産されたWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ
物質はそれぞれ遊離の形、または所望に応じて医薬とし
て許容される塩の形として分離することができる。これ
らの物質を医薬として許容される塩の形として分離する
ためには、菌体抽出液から得られた所望の化合物を、例
えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金
属化合物、例えば水酸化カルシウム、水酸化マグネシウ
ム等のアルカリ土金属化合物等の無機塩基、例えばアン
モニア等の無機塩基、例えばトリエチルアミン、ジシク
ロヘキシルアミン等の有機塩基のような塩基または例え
ば塩酸、硫酸、燐酸等の無機酸または例えばギ酸、酢
酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、シュウ酸等の
有機酸のような酸によって処理すれば、これによりWS76
22A、Ｂ、ＣおよびＤ物質それぞれの対応する塩を得る
ことができる。
このようにして得られたWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物
質の塩は、それ自体常用の方法によってそれらの遊離の
物質に再交換することができる。
質の塩は、それ自体常用の方法によってそれらの遊離の
物質に再交換することができる。
このようにして得られたWS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物
質はそれぞれ新規化合物であり、下記物理化学的性質を
有する。
質はそれぞれ新規化合物であり、下記物理化学的性質を
有する。
WS7622A物質の物理化学的性質： 外観：無色プリズム 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールに可
溶クロロホルム、アセトン、酢酸エチルに微溶水、ｎ−
ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（5:1、v/v） Rf値0.51 アセトン−メタノール（10:1） Rf値0.62 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社製） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋36゜（Ｃ＝1.0,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C47H63N9O13 元素分析:C47H63N9O13・2H2Oとして、 計算値;C56.56,H6.77,N12.63％ 実測値;C56.65,H6.62,N12.27％ 分子量:FAB−MS m/z 984（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル（第１図）： 1H核磁気共鳴スペクトル（第２図）： （400MHz,CD3OD）δ 7.22−7.09 （3H,m） 6.88−6.77 （3H,m） 6.74 （1H,s） 6.46 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,s） 4.85 （1H,s） 4.77 （1H,m） 4.65 （1H,m） 4.50 （1H,m） 3.96 （1H,m） 3.91 （1H,d,J＝9Hz） 3.60−3.47 （2H,m） 3.03 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.86 （1H,m） 2.59−2.49 （2H,m） 2.39 （1H,m） 2.29−2.16 （2H,m） 2.00 （1H,m） 1.84 （1H,m） 1.74 （3H,d,J＝6Hz） 1.72−1.53 （4H,m） 1.44 （3H,d,J＝6Hz） 1.12 （1H,m） 1.10 （6H,d,J＝6Hz） 0.99 （3H,d,J＝6Hz） 0.94 （3H,d,J＝6Hz）．13 C核磁気共鳴スペクトル（第３図）： （100MHz,CD3OD）δ 179.7 （ｓ） 176.3 （ｓ） 174.7 （ｓ） 173.3 （ｓ） 172.4 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.3 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.2 （ｓ） 145.7 （ｓ） 145.6 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.6 （ｄ） 119.1 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.4 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.4 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.6 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 35.8 （ｄ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.8 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.7 （ｔ） 25.2 （ｔ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 20.0 （ｑ）x2 19.7 （ｑ） 19.5 （ｑ） 13.3 （ｑ） WS7622B物質の物理化学的性質 外観：無色針状晶 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールに可
溶クロロホルム、アセトンに微溶水、ｎ−ヘキサンに不
溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（5:1、v/v） Rf値0.55 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社） 融点:248−250℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋39゜（Ｃ＝1.0,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C48H65N9O13 元素分析:C48H65N9O13・3H2Oとして、 計算値;C55.96,H6.95,N12.24％ 実測値;C55.96,H7.05,N12.12％ 分子量:FAB−MS m/z 998（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル（第４図）： 1H核磁気共鳴スペクトル（第５図）： （400MHz,DMSO−d6）δ 9.48 （1H,broad s） 9.03 （1H,broad s） 8.76 （1H,broad s） 8.30 （1H,broad d,J＝6Hz） 7.77 （1H,d,J＝7Hz） 7.21 （1H,d,J＝8Hz） 7.20−7.11 （3H,m） 6.97 （1H,broad d,J＝7Hz） 6.80 （2H,d,J＝8Hz） 6.72 （1H,broad s） 6.67 （1H,s） 6.63 （1H,q,J＝7Hz） 6.37 （1H,s） 5.48 （1H,m） 5.40 （1H,m） 5.09 （1H,m） 4.77 （1H,m） 4.64 （1H,m） 4.38 （1H,m） 4.31 （1H,m） 3.87−3.80 （2H,m） 3.40−3.30 （2H,m） 2.95 （1H,m） 2.79 （3H,s） 2.65 （1H,m） 2.40−2.20 （4H,m） 2.00 （1H,m） 1.87 （1H,m） 1.73 （1H,m） 1.65 （3H,d,J＝7Hz） 1.65−1.40 （5H,m） 1.32 （3H,d,J＝6Hz） 1.27 （1H,m） 0.97 （3H,d,J＝6Hz） 0.97 （1H,m） 0.91 （3H,d,J＝6Hz） 0.88 （3H,d,J＝6Hz） 0.81 （3H,t,J＝7Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル（第６図）： （100MHz,DMSO−d6）δ 175.6 （ｓ） 174.8 （ｓ） 172.0 （ｓ） 170.9 （ｓ） 170.6 （ｓ） 170.3 （ｓ） 168.7 （ｓ） 162.5 （ｓ） 157.4 （ｓ） 144.2 （ｓ） 144.2 （ｓ） 136.5 （ｓ） 131.1 （ｓ） 130.7 （ｓ） 129.6 （ｄ）x2 128.4 （ｓ） 127.9 （ｄ）x2 127.8 （ｓ） 126.4 （ｄ） 118.9 （ｄ） 116.8 （ｄ） 74.2 （ｄ） 72.1 （ｄ） 61.0 （ｄ） 59.8 （ｄ） 55.2 （ｄ） 51.6 （ｄ） 50.8 （ｄ） 48.6 （ｄ） 40.9 （ｄ） 38.2 （ｔ） 35.0 （ｔ） 30.8 （ｑ） 29.8 （ｔ） 28.8 （ｄ） 28.4 （ｔ） 28.1 （ｔ） 27.1 （ｔ） 23.3 （ｔ） 21.2 （ｔ） 19.6 （ｑ） 19.1 （ｑ） 19.0 （ｑ） 17.7 （ｑ） 12.9 （ｑ） 11.9 （ｑ） WS7622C物質： 外観：無色針状晶 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノールに可溶クロロホルム、
アセトン、酢酸エチルに微溶水、ｎ−ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（4:1、v/v） Rf 0.56 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋36゜（Ｃ＝0.5,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C46H61N9O13 元素分析:C46H61N9O13・6H2Oとして、 計算値;C52.31,H6.97,N11.94％ 実測値;C51.95,H6.66,N11.77％ 分子量:FAB−MS m/z 970（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル（第７図）： 1H核磁気共鳴スペクトル（第８図）： （400MHz,CD3OD）δ 7.21−7.10 （3H,m） 6.86−6.77 （3H,m） 6.75 （1H,s） 6.47 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,m） 4.85 （1H,s） 4.74 （1H,m） 4.65 （1H,m） 4.51 （1H,m） 3.94 （1H,m） 3.90 （1H,d,J＝10Hz） 3.58−3.46 （2H,m） 3.02 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.86 （1H,m） 2.55 （1H,m） 2.38 （1H,dd,J＝14 and 11Hz） 2.28 （2H,q,J＝7Hz） 2.30−2.16 （2H,m） 1.99 （1H,m） 1.84 （1H,m） 1.75 （3H,d,J＝7Hz） 1.78−1.54 （4H,m） 1.44 （3H,d,J＝6.5Hz） 1.13 （3H,t,J＝7Hz） 1.12 （1H,m） 1.01 （3H,d,J＝6.5Hz） 0.97 （3H,d,J＝6.5Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル（第９図）： （100MHz,CD3OD）δ 176.7 （ｓ） 176.4 （ｓ） 174.7 （ｓ） 173.4 （ｓ） 172.5 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.4 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.4 （ｓ） 145.8 （ｓ） 145.7 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.7 （ｄ） 119.1 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.5 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.4 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.7 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.8 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.7 （ｔ） 29.7 （ｔ） 25.3 （ｔ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 19.4 （ｑ） 19.4 （ｑ） 13.3 （ｑ） 10.3 （ｑ） WS7622D物質： 外観：無色針状晶 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノールに可溶水、クロロホル
ムに微溶ｎ−ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（4:1、v/v） Rf 0.45 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］24 D▼＋35.8゜（Ｃ＝0.5,MeOH） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C45H59N9O13 元素分析:C45H59N9O13・6H2Oとして、 計算値;C51.86,H6.87,N12.10％ 実測値;C51.90,H6.26,N12.08％ 分子量:FAB−MS m/z 956（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル（第10図）： 1H核磁気共鳴スペクトル（第11図）： （400MHz,CD3OD）δ 7.20−7.10 （3H,m） 6.85−6.77 （3H,m） 6.73 （1H,s） 6.46 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,m） 4.84 （1H,s） 4.73 （1H,m） 4.64 （1H,m） 4.50 （1H,m） 3.99−3.87 （2H,m） 3.58−3.46 （2H,m） 3.01 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.87 （1H,m） 2.53 （1H,m） 2.38 （1H,dd,J＝14 and 11Hz） 2.30−2.16 （2H,m） 2.00 （1H,m） 1.99 （3H,s） 1.84 （1H,m） 1.75 （3H,d,J＝7Hz） 1.76−1.55 （4H,m） 1.43 （3H,d,J＝6.5Hz） 1.15 （1H,m） 1.00 （3H,d,J＝6.5Hz） 0.95 （3H,d,J＝6.5Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル（第12図）： （100MHz,CD3OD）δ 176.4 （ｓ） 174.6 （ｓ） 173.4 （ｓ） 173.0 （ｓ） 172.4 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.4 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.3 （ｓ） 145.9 （ｓ） 145.9 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.6 （ｄ） 119.0 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.5 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.3 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.9 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.7 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.6 （ｔ） 25.3 （ｔ） 22.4 （ｑ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 19.5 （ｑ） 19.4 （ｑ） 13.3 （ｑ） WS7622A物質の誘導体： WS7622A物質の誘導体は下記式（Ｉ）で示すことがで
きる。
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールに可
溶クロロホルム、アセトン、酢酸エチルに微溶水、ｎ−
ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（5:1、v/v） Rf値0.51 アセトン−メタノール（10:1） Rf値0.62 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社製） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋36゜（Ｃ＝1.0,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C47H63N9O13 元素分析:C47H63N9O13・2H2Oとして、 計算値;C56.56,H6.77,N12.63％ 実測値;C56.65,H6.62,N12.27％ 分子量:FAB−MS m/z 984（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル（第１図）： 1H核磁気共鳴スペクトル（第２図）： （400MHz,CD3OD）δ 7.22−7.09 （3H,m） 6.88−6.77 （3H,m） 6.74 （1H,s） 6.46 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,s） 4.85 （1H,s） 4.77 （1H,m） 4.65 （1H,m） 4.50 （1H,m） 3.96 （1H,m） 3.91 （1H,d,J＝9Hz） 3.60−3.47 （2H,m） 3.03 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.86 （1H,m） 2.59−2.49 （2H,m） 2.39 （1H,m） 2.29−2.16 （2H,m） 2.00 （1H,m） 1.84 （1H,m） 1.74 （3H,d,J＝6Hz） 1.72−1.53 （4H,m） 1.44 （3H,d,J＝6Hz） 1.12 （1H,m） 1.10 （6H,d,J＝6Hz） 0.99 （3H,d,J＝6Hz） 0.94 （3H,d,J＝6Hz）．13 C核磁気共鳴スペクトル（第３図）： （100MHz,CD3OD）δ 179.7 （ｓ） 176.3 （ｓ） 174.7 （ｓ） 173.3 （ｓ） 172.4 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.3 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.2 （ｓ） 145.7 （ｓ） 145.6 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.6 （ｄ） 119.1 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.4 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.4 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.6 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 35.8 （ｄ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.8 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.7 （ｔ） 25.2 （ｔ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 20.0 （ｑ）x2 19.7 （ｑ） 19.5 （ｑ） 13.3 （ｑ） WS7622B物質の物理化学的性質 外観：無色針状晶 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールに可
溶クロロホルム、アセトンに微溶水、ｎ−ヘキサンに不
溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（5:1、v/v） Rf値0.55 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社） 融点:248−250℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋39゜（Ｃ＝1.0,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C48H65N9O13 元素分析:C48H65N9O13・3H2Oとして、 計算値;C55.96,H6.95,N12.24％ 実測値;C55.96,H7.05,N12.12％ 分子量:FAB−MS m/z 998（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル（第４図）： 1H核磁気共鳴スペクトル（第５図）： （400MHz,DMSO−d6）δ 9.48 （1H,broad s） 9.03 （1H,broad s） 8.76 （1H,broad s） 8.30 （1H,broad d,J＝6Hz） 7.77 （1H,d,J＝7Hz） 7.21 （1H,d,J＝8Hz） 7.20−7.11 （3H,m） 6.97 （1H,broad d,J＝7Hz） 6.80 （2H,d,J＝8Hz） 6.72 （1H,broad s） 6.67 （1H,s） 6.63 （1H,q,J＝7Hz） 6.37 （1H,s） 5.48 （1H,m） 5.40 （1H,m） 5.09 （1H,m） 4.77 （1H,m） 4.64 （1H,m） 4.38 （1H,m） 4.31 （1H,m） 3.87−3.80 （2H,m） 3.40−3.30 （2H,m） 2.95 （1H,m） 2.79 （3H,s） 2.65 （1H,m） 2.40−2.20 （4H,m） 2.00 （1H,m） 1.87 （1H,m） 1.73 （1H,m） 1.65 （3H,d,J＝7Hz） 1.65−1.40 （5H,m） 1.32 （3H,d,J＝6Hz） 1.27 （1H,m） 0.97 （3H,d,J＝6Hz） 0.97 （1H,m） 0.91 （3H,d,J＝6Hz） 0.88 （3H,d,J＝6Hz） 0.81 （3H,t,J＝7Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル（第６図）： （100MHz,DMSO−d6）δ 175.6 （ｓ） 174.8 （ｓ） 172.0 （ｓ） 170.9 （ｓ） 170.6 （ｓ） 170.3 （ｓ） 168.7 （ｓ） 162.5 （ｓ） 157.4 （ｓ） 144.2 （ｓ） 144.2 （ｓ） 136.5 （ｓ） 131.1 （ｓ） 130.7 （ｓ） 129.6 （ｄ）x2 128.4 （ｓ） 127.9 （ｄ）x2 127.8 （ｓ） 126.4 （ｄ） 118.9 （ｄ） 116.8 （ｄ） 74.2 （ｄ） 72.1 （ｄ） 61.0 （ｄ） 59.8 （ｄ） 55.2 （ｄ） 51.6 （ｄ） 50.8 （ｄ） 48.6 （ｄ） 40.9 （ｄ） 38.2 （ｔ） 35.0 （ｔ） 30.8 （ｑ） 29.8 （ｔ） 28.8 （ｄ） 28.4 （ｔ） 28.1 （ｔ） 27.1 （ｔ） 23.3 （ｔ） 21.2 （ｔ） 19.6 （ｑ） 19.1 （ｑ） 19.0 （ｑ） 17.7 （ｑ） 12.9 （ｑ） 11.9 （ｑ） WS7622C物質： 外観：無色針状晶 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノールに可溶クロロホルム、
アセトン、酢酸エチルに微溶水、ｎ−ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（4:1、v/v） Rf 0.56 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋36゜（Ｃ＝0.5,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C46H61N9O13 元素分析:C46H61N9O13・6H2Oとして、 計算値;C52.31,H6.97,N11.94％ 実測値;C51.95,H6.66,N11.77％ 分子量:FAB−MS m/z 970（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル（第７図）： 1H核磁気共鳴スペクトル（第８図）： （400MHz,CD3OD）δ 7.21−7.10 （3H,m） 6.86−6.77 （3H,m） 6.75 （1H,s） 6.47 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,m） 4.85 （1H,s） 4.74 （1H,m） 4.65 （1H,m） 4.51 （1H,m） 3.94 （1H,m） 3.90 （1H,d,J＝10Hz） 3.58−3.46 （2H,m） 3.02 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.86 （1H,m） 2.55 （1H,m） 2.38 （1H,dd,J＝14 and 11Hz） 2.28 （2H,q,J＝7Hz） 2.30−2.16 （2H,m） 1.99 （1H,m） 1.84 （1H,m） 1.75 （3H,d,J＝7Hz） 1.78−1.54 （4H,m） 1.44 （3H,d,J＝6.5Hz） 1.13 （3H,t,J＝7Hz） 1.12 （1H,m） 1.01 （3H,d,J＝6.5Hz） 0.97 （3H,d,J＝6.5Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル（第９図）： （100MHz,CD3OD）δ 176.7 （ｓ） 176.4 （ｓ） 174.7 （ｓ） 173.4 （ｓ） 172.5 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.4 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.4 （ｓ） 145.8 （ｓ） 145.7 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.7 （ｄ） 119.1 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.5 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.4 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.7 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.8 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.7 （ｔ） 29.7 （ｔ） 25.3 （ｔ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 19.4 （ｑ） 19.4 （ｑ） 13.3 （ｑ） 10.3 （ｑ） WS7622D物質： 外観：無色針状晶 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノールに可溶水、クロロホル
ムに微溶ｎ−ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（4:1、v/v） Rf 0.45 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］24 D▼＋35.8゜（Ｃ＝0.5,MeOH） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C45H59N9O13 元素分析:C45H59N9O13・6H2Oとして、 計算値;C51.86,H6.87,N12.10％ 実測値;C51.90,H6.26,N12.08％ 分子量:FAB−MS m/z 956（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル（第10図）： 1H核磁気共鳴スペクトル（第11図）： （400MHz,CD3OD）δ 7.20−7.10 （3H,m） 6.85−6.77 （3H,m） 6.73 （1H,s） 6.46 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,m） 4.84 （1H,s） 4.73 （1H,m） 4.64 （1H,m） 4.50 （1H,m） 3.99−3.87 （2H,m） 3.58−3.46 （2H,m） 3.01 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.87 （1H,m） 2.53 （1H,m） 2.38 （1H,dd,J＝14 and 11Hz） 2.30−2.16 （2H,m） 2.00 （1H,m） 1.99 （3H,s） 1.84 （1H,m） 1.75 （3H,d,J＝7Hz） 1.76−1.55 （4H,m） 1.43 （3H,d,J＝6.5Hz） 1.15 （1H,m） 1.00 （3H,d,J＝6.5Hz） 0.95 （3H,d,J＝6.5Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル（第12図）： （100MHz,CD3OD）δ 176.4 （ｓ） 174.6 （ｓ） 173.4 （ｓ） 173.0 （ｓ） 172.4 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.4 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.3 （ｓ） 145.9 （ｓ） 145.9 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.6 （ｄ） 119.0 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.5 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.3 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.9 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.7 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.6 （ｔ） 25.3 （ｔ） 22.4 （ｑ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 19.5 （ｑ） 19.4 （ｑ） 13.3 （ｑ） WS7622A物質の誘導体： WS7622A物質の誘導体は下記式（Ｉ）で示すことがで
きる。
（式中、R1およびR2はそれぞれ低級アルキル基または低
級アルカノイル基を意味する）。
級アルカノイル基を意味する）。
低級アルキル基とは炭素原子１個ないし６個を有する
ものを意味し、好ましい例はメチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第三級ブチ
ル、ペンチル等の基である。
ものを意味し、好ましい例はメチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第三級ブチ
ル、ペンチル等の基である。
低級アルカノイル基とは炭素原子１個ないし６個を有
するものを意味し、好ましい例はホルミル、アセチル、
プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イ
ソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル等の基である。
するものを意味し、好ましい例はホルミル、アセチル、
プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イ
ソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル等の基である。
WS7622A物質の誘導体（Ｉ）は下記方法により製造す
ることができる。
ることができる。
（１）製造法１（WS7622A物質のアルキル化） ジアルキル化されたWS7622A物質（Ia）またはその塩
は、WS7622A物質（II）またはその塩をアルキル化剤と
反応させることにより製造することができる。
は、WS7622A物質（II）またはその塩をアルキル化剤と
反応させることにより製造することができる。
化合物（Ia）および（II）の塩の好ましい例として
は、後記WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質ならびにWS7622A
物質の誘導体の医薬として許容される塩類として例示し
たものと同じ塩類が挙げられる。
は、後記WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質ならびにWS7622A
物質の誘導体の医薬として許容される塩類として例示し
たものと同じ塩類が挙げられる。
アルキル化剤の好ましい例としては、例えばジアゾメ
タン、ジアゾエタン等のジアゾアルカン、例えば沃化メ
チル、沃化エチル等のアルキルハロゲン化物、例えば硫
酸ジメチル等の硫酸ジアルキル等が挙げられる。
タン、ジアゾエタン等のジアゾアルカン、例えば沃化メ
チル、沃化エチル等のアルキルハロゲン化物、例えば硫
酸ジメチル等の硫酸ジアルキル等が挙げられる。
この反応は例えばメタノール、エタノール、プロパノ
ール等のアルコール、クロロホルムのような反応に不活
性な溶媒またはそれらの混合物中、常温で行うのが望ま
しい。
ール等のアルコール、クロロホルムのような反応に不活
性な溶媒またはそれらの混合物中、常温で行うのが望ま
しい。
場合によっては、この反応は常用の塩基の存在下に行
うのが望ましい。
うのが望ましい。
（２）製造法２（WS7622A物質のアシル化） ジアシル化されたWS7622A物質（Ib）またはその塩
は、WS7622A物質（II）またはその塩を式:R−OH（式
中、Ｒは低級アルカノイル基を意味する）で示される化
合物またはその反応性誘導体と反応させることにより製
造することができる。
は、WS7622A物質（II）またはその塩を式:R−OH（式
中、Ｒは低級アルカノイル基を意味する）で示される化
合物またはその反応性誘導体と反応させることにより製
造することができる。
化合物（Ib）および（II）の塩の好ましい例として
は、後記WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質ならびにWS7622A
物質の誘導体の医薬として許容される塩類として例示し
たものと同じ塩類が挙げられる。
は、後記WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質ならびにWS7622A
物質の誘導体の医薬として許容される塩類として例示し
たものと同じ塩類が挙げられる。
前記反応性誘導体としては酸ハロゲン化物、酸アジ化
物、酸無水物、活性化アミド、活性化エステル等が挙げ
られる。
物、酸無水物、活性化アミド、活性化エステル等が挙げ
られる。
遊離カルボン酸（すなわち、式:R−OHの化合物）を使
用する場合には、常用の縮合剤の存在下にこの反応を行
うのが望ましい。
用する場合には、常用の縮合剤の存在下にこの反応を行
うのが望ましい。
この反応は例えばメタノール、エタノール、プロパノ
ール等のアルコールのような常用の溶媒中、氷冷下また
は常温で行うのが望ましく、この反応をピリジンのよう
な塩基の存在下に行うと多くの場合好結果が得られる。
そのような塩基も液体であれば溶媒として使用してもよ
い。
ール等のアルコールのような常用の溶媒中、氷冷下また
は常温で行うのが望ましく、この反応をピリジンのよう
な塩基の存在下に行うと多くの場合好結果が得られる。
そのような塩基も液体であれば溶媒として使用してもよ
い。
WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質ならびにWS7622A物質の
誘導体の医薬として許容される塩としては、例えばナト
リウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、例えばカル
シウム塩等のアルカリ土金属塩、アンモニウム塩、エタ
ノールアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシ
ルアミン塩等のような無機塩基との塩または有機塩基と
の塩、メタンスルホン酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、
燐酸塩等のような有機酸または無機酸との酸付加塩が挙
げられる。
誘導体の医薬として許容される塩としては、例えばナト
リウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、例えばカル
シウム塩等のアルカリ土金属塩、アンモニウム塩、エタ
ノールアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシ
ルアミン塩等のような無機塩基との塩または有機塩基と
の塩、メタンスルホン酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、
燐酸塩等のような有機酸または無機酸との酸付加塩が挙
げられる。
［発明の効果］ WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質、WS7622A物質の誘導体
ならびに医薬として許容されるそれらの塩はヒト白血球
エラスターゼ抑制作用を有し、例えば肺気腫、アテロー
ム性動脈硬化、慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾せ
ん、膵炎、成人呼吸窮迫症候群等の編成疾患治療のため
のヒト白血球エラスターゼ抑制薬として有用である。
ならびに医薬として許容されるそれらの塩はヒト白血球
エラスターゼ抑制作用を有し、例えば肺気腫、アテロー
ム性動脈硬化、慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾せ
ん、膵炎、成人呼吸窮迫症候群等の編成疾患治療のため
のヒト白血球エラスターゼ抑制薬として有用である。
WS7622A、Ｂ、ＣおよびＤ物質、WS7622A物質の誘導体
ならびに医薬として許容されるそれらの塩の有用性を示
すために、それらの薬理試験結果を以下に示す。
ならびに医薬として許容されるそれらの塩の有用性を示
すために、それらの薬理試験結果を以下に示す。
プロテアーゼ抑制検定： （１）粗製ヒト白血球エラスターゼの調製 血液50mlを健康な志願者から採取した。白血球をモノ
ーポリ溶解培地［フローラボラトリーズ（Flow Laborat
ories）、オーストラリア］を使用して血液から分離
し、遠心分離して集めた。残った赤血球を蒸留水を加え
ることにより分離して沈殿させ、3000rpmで30分間遠心
分離した。この沈殿に2M NaClO4 10mlを加え、エラスタ
ーゼを抽出した。０℃で120分間抽出後、エラスターゼ
作用を含む上澄液を遠心分離して得た。この上澄液にク
ロロホルム等容を加え、激しく振とうしてエラスターゼ
作用を含む透明上澄液を分離した。HEPES緩衝液10mlを
上澄液に加え、酵素検定に使用した。
ーポリ溶解培地［フローラボラトリーズ（Flow Laborat
ories）、オーストラリア］を使用して血液から分離
し、遠心分離して集めた。残った赤血球を蒸留水を加え
ることにより分離して沈殿させ、3000rpmで30分間遠心
分離した。この沈殿に2M NaClO4 10mlを加え、エラスタ
ーゼを抽出した。０℃で120分間抽出後、エラスターゼ
作用を含む上澄液を遠心分離して得た。この上澄液にク
ロロホルム等容を加え、激しく振とうしてエラスターゼ
作用を含む透明上澄液を分離した。HEPES緩衝液10mlを
上澄液に加え、酵素検定に使用した。
（２）方法 検定全体を通して使用した緩衝液は0.5M NaClを含む
0.1M HEPES［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン
−Ｎ′−２−エタンスルホン酸）であり、pH7.5であっ
た。2mMメトキシスクシニル−（Ala）２−Pro−Val−ｐ
−ニトロアニリド（100mMジメチルスルホキシド溶液を
緩衝液中希釈）25μおよび試料（有機溶媒中の試料10
μを緩衝液中５倍希釈）50μを96ウエルマイクロプ
レートのウエル中で混合した。波長415nmにおける混合
物の吸収をマイクロプレート・リーダー（コロナエレク
トリック社、日本国茨城県）により測定した。測定後、
６μg/mlのヒト痰エラスターゼ（HSE）25μまたはヒ
ト白血球エラスターゼ製剤25μを加え、室温で30分間
放置した。次いで、415nmにおける吸収を測定した。薬
物による抑制百分率を100X（１−阻害剤ありの場合の
「ｒ」／阻害剤なしの場合の「ｒ」）（式中、「ｒ」は
インキュベート30分後の吸収から酵素添加前の吸収を差
引いたものを意味する）により決定した。その他のプロ
テアーゼに対する阻害剤の効果を同様にして、Ｎ−スク
シニル−（Ala）３−ｐ−ニトロアニリドを使用してブ
タ膵臓エラスターゼ（IV型、終濃度５μg/ml）につい
て、Ｎ−α−ベンゾイル−Arg−ｐ−ニトロアニリドを
使用してウシ膵臓トリプシン（Ｉ型、終濃度16μg/ml）
について、メトキシスクシニル−（Ala）２−Pro−Met
−ｐ−ニトロアニリドを使用してウシ膵臓キモトリプシ
ン（II型、終濃度1.5μg/ml）およびヒト痰カテプシン
Ｇ（最終濃度10ユニット/ml）について検定した。HSEお
よびカテプシンＧはエラスチン・プロダクツカンパニー
社、USAから、そして他の全ての基質およびプロテアー
ゼはすべてシグマケミカル社から購入した。
0.1M HEPES［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン
−Ｎ′−２−エタンスルホン酸）であり、pH7.5であっ
た。2mMメトキシスクシニル−（Ala）２−Pro−Val−ｐ
−ニトロアニリド（100mMジメチルスルホキシド溶液を
緩衝液中希釈）25μおよび試料（有機溶媒中の試料10
μを緩衝液中５倍希釈）50μを96ウエルマイクロプ
レートのウエル中で混合した。波長415nmにおける混合
物の吸収をマイクロプレート・リーダー（コロナエレク
トリック社、日本国茨城県）により測定した。測定後、
６μg/mlのヒト痰エラスターゼ（HSE）25μまたはヒ
ト白血球エラスターゼ製剤25μを加え、室温で30分間
放置した。次いで、415nmにおける吸収を測定した。薬
物による抑制百分率を100X（１−阻害剤ありの場合の
「ｒ」／阻害剤なしの場合の「ｒ」）（式中、「ｒ」は
インキュベート30分後の吸収から酵素添加前の吸収を差
引いたものを意味する）により決定した。その他のプロ
テアーゼに対する阻害剤の効果を同様にして、Ｎ−スク
シニル−（Ala）３−ｐ−ニトロアニリドを使用してブ
タ膵臓エラスターゼ（IV型、終濃度５μg/ml）につい
て、Ｎ−α−ベンゾイル−Arg−ｐ−ニトロアニリドを
使用してウシ膵臓トリプシン（Ｉ型、終濃度16μg/ml）
について、メトキシスクシニル−（Ala）２−Pro−Met
−ｐ−ニトロアニリドを使用してウシ膵臓キモトリプシ
ン（II型、終濃度1.5μg/ml）およびヒト痰カテプシン
Ｇ（最終濃度10ユニット/ml）について検定した。HSEお
よびカテプシンＧはエラスチン・プロダクツカンパニー
社、USAから、そして他の全ての基質およびプロテアー
ゼはすべてシグマケミカル社から購入した。
各数値は50％阻害濃度として表わした。
この発明の医薬組成物は粉剤、微小顆粒、顆粒、錠
剤、糖衣錠、マイクロカプセル、カプセル、坐剤、溶
液、懸濁液、エマルジョン、シロップ等のような常用の
医薬の形として使用することができる。所望に応じて、
例えばシュクロース、乳糖、でんぷん、結晶性セルロー
ズ、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、合成ケイ酸
アルミニウム等の希釈剤または崩解剤、例えばセルロー
ス、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、ヒドロキシプロプルメチルセルロース、ポリプロピ
ルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アラ
ビアゴム、ポリエチレングリコール等の結合剤、着色
剤、甘味剤、例えばステアリン酸マグネシウム等の滑剤
等を前記組成物に配合してもよい。
剤、糖衣錠、マイクロカプセル、カプセル、坐剤、溶
液、懸濁液、エマルジョン、シロップ等のような常用の
医薬の形として使用することができる。所望に応じて、
例えばシュクロース、乳糖、でんぷん、結晶性セルロー
ズ、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、合成ケイ酸
アルミニウム等の希釈剤または崩解剤、例えばセルロー
ス、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、ヒドロキシプロプルメチルセルロース、ポリプロピ
ルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アラ
ビアゴム、ポリエチレングリコール等の結合剤、着色
剤、甘味剤、例えばステアリン酸マグネシウム等の滑剤
等を前記組成物に配合してもよい。
この発明の前記組成物の投与量は患者の年齢、体重等
の条件によって変化するが、一般的には目的化合物また
は医薬として許容されるその塩として１日投与量100mg
ないし10g、好ましくは同じ基準で1gないし5gを、１日
当り１回ないし３回の間隔で経口投与される。標準単位
投与量としては50mg、100mg、200mg、500mg、1g等が挙
げられるが、これらは単なる例であって、もちろんこれ
らの量に限定されるものではない。
の条件によって変化するが、一般的には目的化合物また
は医薬として許容されるその塩として１日投与量100mg
ないし10g、好ましくは同じ基準で1gないし5gを、１日
当り１回ないし３回の間隔で経口投与される。標準単位
投与量としては50mg、100mg、200mg、500mg、1g等が挙
げられるが、これらは単なる例であって、もちろんこれ
らの量に限定されるものではない。
［実施例］ 以下実施例に従ってこの発明を説明する。
実施例１（WS7622A物質の生産） 可溶性でんぷん１％、シュクロース１％、グルコース
１％、ファルマ・メディア（綿実粉、商品名）１％、ポ
リペプトン0.5％、大豆粉0.5％およびCaCO3 0.1％を含
む水性種培地（200ml）を500mlエルレンマーヤーフラス
コ12個それぞれに注ぎ、120℃、30分間滅菌する。スト
レプトミセス・レシストミシフィクスNo.7622株の成熟
斜面培養物−白金耳を各種培地に接種する。フラスコを
回転振とう器上30℃で３日間振とうする。この種培養物
を200ステンレス鋼製ジャー醗酵器中のパイン−デッ
クス（でんぷんの酸加水分解物、商品名）４％、グルテ
ン粉１％、小麦胚芽0.5％、バレイショ蛋白0.5％および
CaCO3 0.2％よりなる滅菌醗酵培地160に接種する。16
0／分の通気下および200rpmの撹拌下に25℃で５日間
醗酵を行う。
１％、ファルマ・メディア（綿実粉、商品名）１％、ポ
リペプトン0.5％、大豆粉0.5％およびCaCO3 0.1％を含
む水性種培地（200ml）を500mlエルレンマーヤーフラス
コ12個それぞれに注ぎ、120℃、30分間滅菌する。スト
レプトミセス・レシストミシフィクスNo.7622株の成熟
斜面培養物−白金耳を各種培地に接種する。フラスコを
回転振とう器上30℃で３日間振とうする。この種培養物
を200ステンレス鋼製ジャー醗酵器中のパイン−デッ
クス（でんぷんの酸加水分解物、商品名）４％、グルテ
ン粉１％、小麦胚芽0.5％、バレイショ蛋白0.5％および
CaCO3 0.2％よりなる滅菌醗酵培地160に接種する。16
0／分の通気下および200rpmの撹拌下に25℃で５日間
醗酵を行う。
醗酵ブロス中のWS7622A物質の量を管内エラスターゼ
抑制検定法により定量する。検定用試料は下記のように
調製する。等容のアセトンをブロスに激しく撹拌しなが
ら加える。混合物を室温で１時間放置して濾過する。濾
液を減圧濃縮して適量にする。エラスターゼ抑制検定は
前述のとおりである。
抑制検定法により定量する。検定用試料は下記のように
調製する。等容のアセトンをブロスに激しく撹拌しなが
ら加える。混合物を室温で１時間放置して濾過する。濾
液を減圧濃縮して適量にする。エラスターゼ抑制検定は
前述のとおりである。
培養ブロス（160）をケイ藻土を用いて濾過する。
アセトン50を菌体ケーキに撹拌下に加える。混合物を
常温で一夜放置し、次いで濾過する。濾液を減圧濃縮し
てアセトンを回収する。上記で得られるブロスからの濾
液（140）および菌体抽出液を合わせ、次いで重合体
吸着剤、ダイヤイオンHP−20（商品名、三菱化成工業
（株）製、17）のカラムを通過させる。カラムを水
（50）および50％メタノール水溶液（50）で洗浄
し、吸着物をメタノール（40）で溶出する。溶出液を
減圧濃縮して油状残渣を得る。残渣をシリカゲル（キー
ゼルゲル60、70−230メッシュ、メルク社製、1.3）を
使用するカラムクロマトグラフィーに適用する。カラム
をｎ−ヘキサン−酢酸エチル（1:1、v/v）２および酢
酸エチル４で洗浄し、有効物質をカラムからアセトン
（３）およびアセトン−メタノール（10:1、６）で
溶出する。有効画分（６）を合わせ、濃縮乾固してシ
リカゲルを使用するカラムクロマトグラフィーに付し、
クロロホルム−メタノールの混合溶媒を使用して段階的
に溶出する。有効物質はクロロホルム−メタノール（1
0:1、v/v）溶液中に溶出される。画分を濃縮し、減圧乾
燥して黄色粉末3gを得る。WS7622A物質を高速液体クロ
マトグラフィー（HPLC）によって分離する。ｓ−15逆相
シリカを充填したYMC−Ｄ−ODS−15B30×250mmのステン
レス鋼製カラム（山村化学研究所）を使用する。黄色粉
末50mgをメタノール50μに溶解し、60％メタノール水
溶液を移動相として20ml/分の流量でHPLCに適用する。W
S7622A物質の保持時間は17.6分である。クロマトグラム
を60回流し、WS7622A物質を含む画分を合わせて濃縮乾
固する。残渣を少量のメタノールで溶解し、一夜放置し
てWS7622A物質600mgを無色プリズムとして得る。
アセトン50を菌体ケーキに撹拌下に加える。混合物を
常温で一夜放置し、次いで濾過する。濾液を減圧濃縮し
てアセトンを回収する。上記で得られるブロスからの濾
液（140）および菌体抽出液を合わせ、次いで重合体
吸着剤、ダイヤイオンHP−20（商品名、三菱化成工業
（株）製、17）のカラムを通過させる。カラムを水
（50）および50％メタノール水溶液（50）で洗浄
し、吸着物をメタノール（40）で溶出する。溶出液を
減圧濃縮して油状残渣を得る。残渣をシリカゲル（キー
ゼルゲル60、70−230メッシュ、メルク社製、1.3）を
使用するカラムクロマトグラフィーに適用する。カラム
をｎ−ヘキサン−酢酸エチル（1:1、v/v）２および酢
酸エチル４で洗浄し、有効物質をカラムからアセトン
（３）およびアセトン−メタノール（10:1、６）で
溶出する。有効画分（６）を合わせ、濃縮乾固してシ
リカゲルを使用するカラムクロマトグラフィーに付し、
クロロホルム−メタノールの混合溶媒を使用して段階的
に溶出する。有効物質はクロロホルム−メタノール（1
0:1、v/v）溶液中に溶出される。画分を濃縮し、減圧乾
燥して黄色粉末3gを得る。WS7622A物質を高速液体クロ
マトグラフィー（HPLC）によって分離する。ｓ−15逆相
シリカを充填したYMC−Ｄ−ODS−15B30×250mmのステン
レス鋼製カラム（山村化学研究所）を使用する。黄色粉
末50mgをメタノール50μに溶解し、60％メタノール水
溶液を移動相として20ml/分の流量でHPLCに適用する。W
S7622A物質の保持時間は17.6分である。クロマトグラム
を60回流し、WS7622A物質を含む画分を合わせて濃縮乾
固する。残渣を少量のメタノールで溶解し、一夜放置し
てWS7622A物質600mgを無色プリズムとして得る。
実施例２（ジメチル化されたWS7622A物質の製造） （R1、R2:メチル基） WS7622A物質（1g）のクロロホロム（20ml）とメタノ
ール（20ml）との混合物溶液に、トリメチルシリルジア
ゾメタン（4ml、ヘキサン中10％重量、ペトラルヒ・シ
ステム・カンパニー社より購入）を加え、溶液を室温で
一夜放置する。溶液を蒸発乾固して残る油状物をシリカ
ゲルを使用するカラムクロマトグラフィーにより精製
し、クロロホルムとメタノールとの混液（95:5）で溶出
する。生成物を含む画分を集め、蒸発乾固する。得られ
る白色残渣をジエチルエーテルで粉砕してジメチル化さ
れたWS7622A物質0.62gを白色粉末として得る。
ール（20ml）との混合物溶液に、トリメチルシリルジア
ゾメタン（4ml、ヘキサン中10％重量、ペトラルヒ・シ
ステム・カンパニー社より購入）を加え、溶液を室温で
一夜放置する。溶液を蒸発乾固して残る油状物をシリカ
ゲルを使用するカラムクロマトグラフィーにより精製
し、クロロホルムとメタノールとの混液（95:5）で溶出
する。生成物を含む画分を集め、蒸発乾固する。得られ
る白色残渣をジエチルエーテルで粉砕してジメチル化さ
れたWS7622A物質0.62gを白色粉末として得る。
外観：白色粉末 分子式:C49H67N9O13 FAB−MS m/z:990（Ｍ＋Ｈ）＋ 薄層クロマトグラフィー（TLC）： シリカゲル板（メルク・アート5715） クロロホルム−メタノール（5:1、v/v） Rf値0.72 クロロホルム−メタノール（9:1、v/v） Rf値0.40 比旋光度：▲［α］23 D▼＋37゜［Ｃ＝1.6,クロロホル
ム−メタノール（1:1）］ 紫外部吸収スペクトル： 1H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD3OD）δ 7.20−7.11 （3H,m） 6.93 （1H,s） 6.83 （1H,q,J＝7Hz） 6.77 （2H,d,J＝8Hz） 6.59 （1H,s） 5.48 （1H,m） 5.15 （1H,m） 4.85 （1H,s） 4.76 （1H,m） 4.67 （1H,m） 4.42 （1H,m） 3.99−3.89 （2H,m） 3.82 （3H,s） 3.81 （3H,s） 3.66 （1H,m） 3.55 （1H,m） 3.02 （1H,m） 2.95 （3H,s） 2.90 （1H,m） 2.60−1.94 （6H,m） 1.82 （1H,m） 1.77 （3H,d,J＝7Hz） 1.68−1.58 （4H,m） 1.46 （3H,d,J＝7Hz） 1.13 （3H,d,J＝6Hz） 1.12 （3H,d,J＝6Hz） 1.01 （3H,d,J＝6Hz） 0.96 （3H,d,J＝6Hz） 1.00 （1H,m） 実施例３（ジアセチル化されたWS7622A物質の製造）（R
1、R2:アセチル基） WS7622A物質（1g）のピリジン（5ml）溶液に無水酢酸
（0.24ml）を加え、混合物を室温で一夜放置する。混合
物を蒸発乾固して残る油状物をシリカゲルを使用するカ
ラムクロマトグラフィーで精製し、クロロホルムとメタ
ノールとの混液（95:5）で溶出する。熱メタノール−イ
ソプロピルエーテルから結晶化させてジアセチル化され
たWS7622A物質0.73gを無色プリズムとして得る。
ム−メタノール（1:1）］ 紫外部吸収スペクトル： 1H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD3OD）δ 7.20−7.11 （3H,m） 6.93 （1H,s） 6.83 （1H,q,J＝7Hz） 6.77 （2H,d,J＝8Hz） 6.59 （1H,s） 5.48 （1H,m） 5.15 （1H,m） 4.85 （1H,s） 4.76 （1H,m） 4.67 （1H,m） 4.42 （1H,m） 3.99−3.89 （2H,m） 3.82 （3H,s） 3.81 （3H,s） 3.66 （1H,m） 3.55 （1H,m） 3.02 （1H,m） 2.95 （3H,s） 2.90 （1H,m） 2.60−1.94 （6H,m） 1.82 （1H,m） 1.77 （3H,d,J＝7Hz） 1.68−1.58 （4H,m） 1.46 （3H,d,J＝7Hz） 1.13 （3H,d,J＝6Hz） 1.12 （3H,d,J＝6Hz） 1.01 （3H,d,J＝6Hz） 0.96 （3H,d,J＝6Hz） 1.00 （1H,m） 実施例３（ジアセチル化されたWS7622A物質の製造）（R
1、R2:アセチル基） WS7622A物質（1g）のピリジン（5ml）溶液に無水酢酸
（0.24ml）を加え、混合物を室温で一夜放置する。混合
物を蒸発乾固して残る油状物をシリカゲルを使用するカ
ラムクロマトグラフィーで精製し、クロロホルムとメタ
ノールとの混液（95:5）で溶出する。熱メタノール−イ
ソプロピルエーテルから結晶化させてジアセチル化され
たWS7622A物質0.73gを無色プリズムとして得る。
外観：無色プリズム 分子式:C51H67N9O15 FAB−MS m/z:1046（Ｍ＋Ｈ）＋ 薄層クロマトグラフィー： シリカゲル板（メルク・アート5715） クロロホルム−メタノール（5:1、v/v） Rf値0.73 クロロホルム−メタノール（9:1、v/v） Rf値0.40 比旋光度：▲［α］23 D▼＋29゜［Ｃ＝1.0,クロロホル
ム−メタノール（1:1）］ 赤外吸収スペクトル： 1H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,DMSO−d6）δ 9.48 （1H,broad signal） 8.37 （1H,d,J＝8Hz） 7.76 （1H,d,J＝7Hz） 7.23−7.10 （4H,m） 7.18 （1H,s） 7.03 （1H,d,J＝9Hz） 6.93 （1H,s） 6.76 （2H,d,J＝8Hz） 6.74 （1H,br s） 6.65 （1H,q,J＝7Hz） 5.74 （1H,m） 5.42 （1H,m） 5.08 （1H,m） 4.77 （1H,d,J＝10Hz） 4.64 （1H,m） 4.57 （1H,m） 4.42 （1H,m） 3.92−3.78 （2H,m） 3.49 （1H,m） 3.34 （1H,m） 2.90 （1H,dd,J＝13 and 12Hz） 2.80 （3H,s） 2.70 （1H,m） 2.60 （1H,dd,J＝13 and 11Hz） 2.54 （1H,septet,J＝6Hz） 2.42−2.27 （2H,m） 2.27 （3H,s） 2.25 （3H,s） 2.17 （1H,m） 1.88 （1H,m） 1.70 （1H,m） 1.66 （3H,d,J＝7Hz） 1.60−1.46 （4H,m） 1.34 （3H,d,J＝6Hz） 0.99 （6H,d,J＝6Hz） 0.91 （3H,d,J＝6Hz） 0.88 （3H,d,J＝6Hz） 0.90 （1H,m） 実施例４（WS7622B物質の生産） 可溶性でんぷん１％、シュクロース１％、グルコース
１％、ファルマメディア（綿実粉、商品名）１％、ポリ
ペプトン0.5％、大豆粉0.5％およびCaCO3 0.1％を含む
水性種培地（200ml）を500mlエルレンマイヤーフラスコ
12個それぞれに注ぎ、120℃、30分間滅菌する。ストレ
プトミセス・レシストミシフィクスNo.7622株の成熟斜
面培養物−白金耳を各種培地に接種する。フラスコを回
転振とう器上30℃で３日間振とうする。この種培養物
を、200ステンレス鋼製ジャー醗酵器中パイン・デッ
クス（デンプンの酸加水分解物、商品名）４％、グルテ
ン粉１％、小麦胚芽0.5％、バレイショ蛋白0.5％および
CaCO3 0.2％よりなる滅菌醗酵培地160mlに接種する。16
0／分の通気下および200rpmの撹拌下に25℃で５日間
醗酵を行う。
ム−メタノール（1:1）］ 赤外吸収スペクトル： 1H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,DMSO−d6）δ 9.48 （1H,broad signal） 8.37 （1H,d,J＝8Hz） 7.76 （1H,d,J＝7Hz） 7.23−7.10 （4H,m） 7.18 （1H,s） 7.03 （1H,d,J＝9Hz） 6.93 （1H,s） 6.76 （2H,d,J＝8Hz） 6.74 （1H,br s） 6.65 （1H,q,J＝7Hz） 5.74 （1H,m） 5.42 （1H,m） 5.08 （1H,m） 4.77 （1H,d,J＝10Hz） 4.64 （1H,m） 4.57 （1H,m） 4.42 （1H,m） 3.92−3.78 （2H,m） 3.49 （1H,m） 3.34 （1H,m） 2.90 （1H,dd,J＝13 and 12Hz） 2.80 （3H,s） 2.70 （1H,m） 2.60 （1H,dd,J＝13 and 11Hz） 2.54 （1H,septet,J＝6Hz） 2.42−2.27 （2H,m） 2.27 （3H,s） 2.25 （3H,s） 2.17 （1H,m） 1.88 （1H,m） 1.70 （1H,m） 1.66 （3H,d,J＝7Hz） 1.60−1.46 （4H,m） 1.34 （3H,d,J＝6Hz） 0.99 （6H,d,J＝6Hz） 0.91 （3H,d,J＝6Hz） 0.88 （3H,d,J＝6Hz） 0.90 （1H,m） 実施例４（WS7622B物質の生産） 可溶性でんぷん１％、シュクロース１％、グルコース
１％、ファルマメディア（綿実粉、商品名）１％、ポリ
ペプトン0.5％、大豆粉0.5％およびCaCO3 0.1％を含む
水性種培地（200ml）を500mlエルレンマイヤーフラスコ
12個それぞれに注ぎ、120℃、30分間滅菌する。ストレ
プトミセス・レシストミシフィクスNo.7622株の成熟斜
面培養物−白金耳を各種培地に接種する。フラスコを回
転振とう器上30℃で３日間振とうする。この種培養物
を、200ステンレス鋼製ジャー醗酵器中パイン・デッ
クス（デンプンの酸加水分解物、商品名）４％、グルテ
ン粉１％、小麦胚芽0.5％、バレイショ蛋白0.5％および
CaCO3 0.2％よりなる滅菌醗酵培地160mlに接種する。16
0／分の通気下および200rpmの撹拌下に25℃で５日間
醗酵を行う。
醗酵ブロス中のWS7622B物質の量を管内エラスターゼ
抑制検定により定量する。検定用試料は下記のように調
製する。等容のアセトンをブロスに激しく撹拌しながら
加える。混合物を室温で１時間放置して濾過する。濾液
を減圧濃縮して適量にする。エラスターゼ抑制検定は前
述のとおりである。
抑制検定により定量する。検定用試料は下記のように調
製する。等容のアセトンをブロスに激しく撹拌しながら
加える。混合物を室温で１時間放置して濾過する。濾液
を減圧濃縮して適量にする。エラスターゼ抑制検定は前
述のとおりである。
培養ブロス（160）をケイ藻土を用いて濾過する。
アセトン50を菌体ケーキに撹拌下に加える。混合物を
室温で一夜放置し、次いで濾過する。濾液を減圧濃縮し
てアセトンを回収する。上記で得られるブロスからの濾
液（140）および菌体抽出液を合わせ、次いで重合体
吸着剤、ダイヤイオンHP−20（商品名、三菱化成工業
（株）製、17）のカラムを通過させる。カラムを水
（50）および50％メタノール水溶液（50）で洗浄
し、吸着物をメタノール（40）で溶出する。溶出液を
減圧濃縮して油状残渣を得る。残渣をシリカゲル（キー
ゼルゲル60、70−230メッシュ、メルク社製、1.3）を
使用するカラムクロマトグラフィーに適用する。カラム
をｎ−ヘキサン−酢酸エチル（1:1、v/v）２および酢
酸エチル４で洗浄し、有効物質をカラムからアセトン
（３）およびアセトン−メタノール（10:1、６）で
溶出する。有効画分（６）を合わせ、濃縮乾固してシ
リカゲルを使用するカラムクロマトグラフィーに対し、
クロロホルム−メタノールの混合溶媒（10:1、v/v）を
使用して段階的に溶出する。有効物質はクロロホルム−
メタノール（10:1）で溶出される。画分を濃縮し、減圧
乾燥して黄色粉末3gを得る。WS7622B物質を高速液体ク
ロマトグラフィー（HPLC）によって分離する。ｓ−15逆
相シリカを充填したYMC−Ｄ−ODS−15B30X250mmのステ
ンレス鋼製カラム（山村化学研究所）を使用する。黄色
粉末50mgをメタノール50μに溶解し、60％メタノール
水溶液を移動相として20ml/分の流量でHPLCに適用す
る。WS7622B物質の保存時間は23.0分である。クロマト
グラムを60回流し、WS7622B物質を含む画分を合わせて
濃縮し、次いでメタノールで結晶化させてWS7622B物質1
80mgを無色針状晶として得る。
アセトン50を菌体ケーキに撹拌下に加える。混合物を
室温で一夜放置し、次いで濾過する。濾液を減圧濃縮し
てアセトンを回収する。上記で得られるブロスからの濾
液（140）および菌体抽出液を合わせ、次いで重合体
吸着剤、ダイヤイオンHP−20（商品名、三菱化成工業
（株）製、17）のカラムを通過させる。カラムを水
（50）および50％メタノール水溶液（50）で洗浄
し、吸着物をメタノール（40）で溶出する。溶出液を
減圧濃縮して油状残渣を得る。残渣をシリカゲル（キー
ゼルゲル60、70−230メッシュ、メルク社製、1.3）を
使用するカラムクロマトグラフィーに適用する。カラム
をｎ−ヘキサン−酢酸エチル（1:1、v/v）２および酢
酸エチル４で洗浄し、有効物質をカラムからアセトン
（３）およびアセトン−メタノール（10:1、６）で
溶出する。有効画分（６）を合わせ、濃縮乾固してシ
リカゲルを使用するカラムクロマトグラフィーに対し、
クロロホルム−メタノールの混合溶媒（10:1、v/v）を
使用して段階的に溶出する。有効物質はクロロホルム−
メタノール（10:1）で溶出される。画分を濃縮し、減圧
乾燥して黄色粉末3gを得る。WS7622B物質を高速液体ク
ロマトグラフィー（HPLC）によって分離する。ｓ−15逆
相シリカを充填したYMC−Ｄ−ODS−15B30X250mmのステ
ンレス鋼製カラム（山村化学研究所）を使用する。黄色
粉末50mgをメタノール50μに溶解し、60％メタノール
水溶液を移動相として20ml/分の流量でHPLCに適用す
る。WS7622B物質の保存時間は23.0分である。クロマト
グラムを60回流し、WS7622B物質を含む画分を合わせて
濃縮し、次いでメタノールで結晶化させてWS7622B物質1
80mgを無色針状晶として得る。
実施例５（WS7622CおよびＤ物質の生産） ストレプトミセス・レシストミシフィクスNo.7622株
を使用して実施例１と同様に醗酵を行う。得られた醗酵
ブロス（70）にメタノール（70）を撹拌しながら加
える。混合物を室温で１時間放置したあと、濾過する。
濾液に水（140）を加えて得られる25％メタノール水
溶液（280）をダイヤイオンHP−20（商品名、三菱化
成工業（株）製、５）のカラムに通す。カラムを50％
メタノール水溶液（10）で洗浄し、メタノール（10
）で溶出する。溶出液を減圧下に濃縮し、残渣をシリ
カゲル（キーゼルゲル60、70−230メッシュ、メルク社
製、2.2）を使用するカラムクロマトグラフィーに適
用する。カラムをアセトン（10）で洗浄し、有効物質
をカラムからアセトン−メタノール（5:1）で溶出す
る。溶出液の画分は次の通りである。
を使用して実施例１と同様に醗酵を行う。得られた醗酵
ブロス（70）にメタノール（70）を撹拌しながら加
える。混合物を室温で１時間放置したあと、濾過する。
濾液に水（140）を加えて得られる25％メタノール水
溶液（280）をダイヤイオンHP−20（商品名、三菱化
成工業（株）製、５）のカラムに通す。カラムを50％
メタノール水溶液（10）で洗浄し、メタノール（10
）で溶出する。溶出液を減圧下に濃縮し、残渣をシリ
カゲル（キーゼルゲル60、70−230メッシュ、メルク社
製、2.2）を使用するカラムクロマトグラフィーに適
用する。カラムをアセトン（10）で洗浄し、有効物質
をカラムからアセトン−メタノール（5:1）で溶出す
る。溶出液の画分は次の通りである。
フラクションNo.1:1 フラクションNo.2:5.4 フラクションNo.3:3.8 フラクションNo.4:3.2 フラクションNo.3を減圧下に濃縮、乾固して黄色粉末
（1.2g）を得る。WS7622C物質を含む該黄色粉末（1g）
をクロロホルム−メタノール（10:1）（6ml）に溶解
し、クロロホルム−メタノール（10:1）で予め充填した
シリカゲルカラム（100ml）にかける。カラムをクロロ
ホルム−メタノール（10:1）（300ml）で洗浄したあ
と、有効物質をクロロホルム−メタノール（5:1）で溶
出する。溶出液のうち、最初の180mlを捨て、続く80ml
をとり、減圧下に濃縮、乾固して粉末（372mg）を得
る。該粉末をエタノール（6ml）に溶解し、４℃で１時
間放置して無色針状晶のWS7622C物質（170mg）を得る。
（1.2g）を得る。WS7622C物質を含む該黄色粉末（1g）
をクロロホルム−メタノール（10:1）（6ml）に溶解
し、クロロホルム−メタノール（10:1）で予め充填した
シリカゲルカラム（100ml）にかける。カラムをクロロ
ホルム−メタノール（10:1）（300ml）で洗浄したあ
と、有効物質をクロロホルム−メタノール（5:1）で溶
出する。溶出液のうち、最初の180mlを捨て、続く80ml
をとり、減圧下に濃縮、乾固して粉末（372mg）を得
る。該粉末をエタノール（6ml）に溶解し、４℃で１時
間放置して無色針状晶のWS7622C物質（170mg）を得る。
フラクションNo.4を濃縮、乾固して黄色粉末（3.3g）
を得る。WS7622D物質を含む該粉末（1g）をクロロホル
ム−メタノール（20:1）（6ml）に溶解し、予めクロロ
ホルムで充填したシリカゲルカラムにかける。カラムを
クロロホルム−メタノール（20:1）（300ml）およびク
ロロホルム−メタノール（10:1）（300ml）で洗浄した
あと、クロロホルム−メタノール（5:1）で有効物質の
溶出を行う。溶出液のうち、最初の200mlを捨て、続く9
0mlをとり、濃縮、乾固して粉末（127mg）を得る。該粉
末を少量のエタノールに溶解し、４℃で一夜放置して無
色針状晶のWS7622D物質（90mg）を得る。
を得る。WS7622D物質を含む該粉末（1g）をクロロホル
ム−メタノール（20:1）（6ml）に溶解し、予めクロロ
ホルムで充填したシリカゲルカラムにかける。カラムを
クロロホルム−メタノール（20:1）（300ml）およびク
ロロホルム−メタノール（10:1）（300ml）で洗浄した
あと、クロロホルム−メタノール（5:1）で有効物質の
溶出を行う。溶出液のうち、最初の200mlを捨て、続く9
0mlをとり、濃縮、乾固して粉末（127mg）を得る。該粉
末を少量のエタノールに溶解し、４℃で一夜放置して無
色針状晶のWS7622D物質（90mg）を得る。
第１図はWS7622A物質の、第４図はWS7622B物質の、第７
図はWS7622C物質の、第10図はWS7622D物質の、それぞれ
赤外部吸収スペクトルを示し、第２図はWS7622A物質
の、第５図はWS7622B物質の、第８図はWS7622C物質の、
第11図はWS7622D物質の、それぞれ1H核磁気共鳴スペク
トルを示し、第３図はWS7622A物質の、第６図はWS7622B
物質の、第９図はWS7622C物質の、第12図はWS7622D物質
の、それぞれ13C核磁気共鳴スペクトルを示す。
図はWS7622C物質の、第10図はWS7622D物質の、それぞれ
赤外部吸収スペクトルを示し、第２図はWS7622A物質
の、第５図はWS7622B物質の、第８図はWS7622C物質の、
第11図はWS7622D物質の、それぞれ1H核磁気共鳴スペク
トルを示し、第３図はWS7622A物質の、第６図はWS7622B
物質の、第９図はWS7622C物質の、第12図はWS7622D物質
の、それぞれ13C核磁気共鳴スペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 35/74 ＡＣＪ Ａ６１Ｋ 35/74 ＡＣＪ ＡＤＡ ＡＤＡ ＡＥＤ ＡＥＤＦ Ｃ０７Ｇ 17/00 Ｃ０７Ｇ 17/00 Ｃ //(Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:465） (31)優先権主張番号 ８９２２１６４．２ (32)優先日 1989年10月２日 (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−２３０６ (72)発明者 高瀬 茂弘 茨城県つくば市梅園２―15―２―205 審査官 塚中 哲雄 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 1/04
Claims (7)
- 【請求項１】それぞれ下記のような理化学的性質を有す
るWS7622A物質、WS7622B物質、WS7622C物質、WS7622D物
質および医薬として許容されるそれらの塩： WS7622A物質： 外観：無色プリズム 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールに可
溶クロロホルム、アセトン、酢酸エチルに微溶水、ｎ−
ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（5:1、v/v） Rf値0.51 アセトン−メタノール（10:1） Rf値0.62 （キーゼルゲル60 F 254シリカゲル板、メルク社） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋36゜（Ｃ＝1.0,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C47H63N9O13 元素分析:C47H63N9O13・2H2Oとして、 計算値;C56.56,H6.77,N12.63％ 実測値;C56.65,H6.62,N12.27％ 分子量:FAB−MS m/z 984（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル： 1H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD3OD）δ 7.22−7.09 （3H,m） 6.88−6.77 （3H,m） 6.74 （1H,s） 6.46 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,s） 4.85 （1H,s） 4.77 （1H,m） 4.65 （1H,m） 4.50 （1H,m） 3.96 （1H,m） 3.91 （1H,d,J＝9Hz） 3.60−3.47 （2H,m） 3.03 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.86 （1H,m） 2.59−2.49 （2H,m） 2.39 （1H,m） 2.29−2.16 （2H,m） 2.00 （1H,m） 1.84 （1H,m） 1.74 （3H,d,J＝6Hz） 1.72−1.53 （4H,m） 1.44 （3H,d,J＝6Hz） 1.12 （1H,m） 1.10 （6H,d,J＝6Hz） 0.99 （3H,d,J＝6Hz） 0.94 （3H,d,J＝6Hz）．13 C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,CD3OD）δ 179.7 （ｓ） 176.3 （ｓ） 174.7 （ｓ） 173.3 （ｓ） 172.4 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.3 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.2 （ｓ） 145.7 （ｓ） 145.6 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.6 （ｄ） 119.1 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.4 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.4 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.6 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 35.8 （ｄ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.8 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.7 （ｔ） 25.2 （ｔ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 20.0 （ｑ）x2 19.7 （ｑ） 19.5 （ｑ） 13.3 （ｑ） WS7622B物質： 外観：無色針状晶 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールに可
溶クロロホルム、アセトンに微溶水、ｎ−ヘキサンに不
溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（5:1、v/v） Rf値0.55 （キーゼルゲル60F254シリカゲル板、メルク社） 融点:248−250℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋39゜（Ｃ＝1.0,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C48H65N9O13 元素分析:C48H65N9O13・3H2Oとして、 計算値;C55.96,H6.95,N12.24％ 実測値;C55.84,H7.05,N12.12％ 分子量:FAB−MS m/z 998（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル： 1H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,DMSO−d6）δ 9.48 （1H,broad s） 9.03 （1H,broad s） 8.76 （1H,broad s） 8.30 （1H,broad d,J＝6Hz） 7.77 （1H,d,J＝7Hz） 7.21 （1H,d,J＝8Hz） 7.20−7.11 （3H,m） 6.97 （1H,broad d,J＝7Hz） 6.80 （2H,d,J＝8Hz） 6.72 （1H,broad s） 6.67 （1H,s） 6.63 （1H,q,J＝7Hz） 6.37 （1H,s） 5.48 （1H,m） 5.40 （1H,m） 5.09 （1H,m） 4.77 （1H,m） 4.64 （1H,m） 4.38 （1H,m） 4.31 （1H,m） 3.87−3.80 （2H,m） 3.40−3.30 （2H,m） 2.95 （1H,m） 2.79 （3H,s） 2.65 （1H,m） 2.40−2.20 （4H,m） 2.00 （1H,m） 1.87 （1H,m） 1.73 （1H,m） 1.65 （3H,d,J＝7Hz） 1.65−1.40 （5H,m） 1.32 （3H,d,J＝6Hz） 1.27 （1H,m） 0.97 （3H,d,J＝6Hz） 0.97 （1H,m） 0.91 （3H,d,J＝6Hz） 0.88 （3H,d,J＝6Hz） 0.81 （3H,t,J＝7Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,DMSO−d6）δ 175.6 （ｓ） 174.8 （ｓ） 172.0 （ｓ） 170.9 （ｓ） 170.6 （ｓ） 170.3 （ｓ） 168.7 （ｓ） 162.5 （ｓ） 157.4 （ｓ） 144.2 （ｓ） 144.2 （ｓ） 136.5 （ｓ） 131.1 （ｓ） 130.7 （ｓ） 129.6 （ｄ）x2 128.4 （ｓ） 127.9 （ｄ）x2 127.8 （ｓ） 126.4 （ｄ） 118.9 （ｄ） 116.8 （ｄ） 74.2 （ｄ） 72.1 （ｄ） 61.0 （ｄ） 59.8 （ｄ） 55.2 （ｄ） 51.6 （ｄ） 50.8 （ｄ） 48.6 （ｄ） 40.9 （ｄ） 38.2 （ｔ） 35.0 （ｔ） 30.8 （ｑ） 29.8 （ｔ） 28.8 （ｄ） 28.4 （ｔ） 28.1 （ｔ） 27.1 （ｔ） 23.3 （ｔ） 21.2 （ｔ） 19.6 （ｑ） 19.1 （ｑ） 19.0 （ｑ） 17.7 （ｑ） 12.9 （ｑ） 11.9 （ｑ） WS7622C物質： 外観：無色針状晶 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノールに可溶クロロホルム、
アセトン、酢酸エチルに微溶水、ｎ−ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（4:1、v/v） Rf値0.56 （キーゼルゲル60 F254シリカゲル板、メルク社） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］23 D▼＋36゜（Ｃ＝0.5,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C46H61N9O13 元素分析:C46H61N9O13・6H2Oとして、 計算値;C52.31,H6.97,N11.94％ 実測値;C51.95,H6.66,N11.77％ 分子量:FAB−MS m/z 970（Ｍ＋Na）＋ 赤外吸収スペクトル： 1H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD3OD）δ 7.21−7.10 （3H,m） 6.86−6.77 （3H,m） 6.75 （1H,s） 6.47 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,m） 4.85 （1H,s） 4.74 （1H,m） 4.65 （1H,m） 4.51 （1H,m） 3.94 （1H,m） 3.90 （1H,d,J＝10Hz） 3.58−3.46 （2H,m） 3.02 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.86 （1H,m） 2.55 （1H,m） 2.38 （1H,dd,J＝14 and 11Hz） 2.28 （1H,q,J＝7Hz） 2.30−2.16 （2H,m） 1.99 （1H,m） 1.84 （1H,m） 1.75 （3H,d,J＝7Hz） 1.78−1.54 （4H,m） 1.44 （3H,d,J＝6.5Hz） 1.13 （3H,t,J＝7Hz） 1.12 （1H,m） 1.01 （3H,d,J＝6.5Hz） 0.97 （3H,d,J＝6.5Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,CD3OD）δ 176.7 （ｓ） 176.4 （ｓ） 174.7 （ｓ） 173.4 （ｓ） 172.5 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.4 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.4 （ｓ） 145.8 （ｓ） 145.7 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.7 （ｄ） 119.1 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.5 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.4 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.7 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.8 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.7 （ｔ） 29.7 （ｔ） 25.3 （ｔ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 19.4 （ｑ） 19.4 （ｑ） 13.3 （ｑ） 10.3 （ｑ） WS7622D物質： 外観：無色針状晶 物質の性質：酸性 呈色反応：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気反応、塩化第
二鉄反応に陽性ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、
ドラーゲンドルフ反応に陰性 溶解性：メタノール、エタノールに可溶水、クロロホル
ムに微溶ｎ−ヘキサンに不溶 薄層クロマトグラフィー（TLC）： クロロホルム−メタノール（4:1、v/v） Rf 0.45 （キーゼルゲル60 F254シリカゲル板、メルク社） 融点:250−252℃（分解） 比旋光度：▲［α］24 D▼＋35.8゜（Ｃ＝0.5,メタノー
ル） 紫外部吸収スペクトル： 分子式:C45H59N9O13 元素分析:C45H59N9O13・6H2Oとして、 計算値;C51.86,H6.87,N12.10％ 実測値;C51.90,H6.26,N12.08％ 分子量:FAB−MS m/z 956（Ｍ＋Na）＋ 赤外部吸収スペクトル： 1H核磁気共鳴スペクトル： （400MHz,CD3OD）δ 7.20−7.10 （3H,m） 6.85−6.77 （3H,m） 6.73 （1H,s） 6.46 （1H,s） 5.46 （1H,m） 5.18 （1H,m） 4.84 （1H,s） 4.73 （1H,m） 4.64 （1H,m） 4.50 （1H,m） 3.99−3.87 （2H,m） 3.58−3.46 （2H,m） 3.01 （1H,m） 2.90 （3H,s） 2.87 （1H,m） 2.53 （1H,m） 2.38 （1H,dd,J＝14 AND 11Hz） 2.30−2.16 （2H,m） 2.00 （1H,m） 1.99 （3H,s） 1.84 （1H,m） 1.75 （3H,d,J＝7Hz） 1.76−1.55 （4H,m） 1.43 （3H,d,J＝6.5Hz） 1.15 （1H,m） 1.00 （3H,d,J＝6.5Hz） 0.95 （3H,d,J＝6.5Hz）13 C核磁気共鳴スペクトル： （100MHz,CD3OD）δ 176.4 （ｓ） 174.6 （ｓ） 173.4 （ｓ） 173.0 （ｓ） 172.4 （ｓ） 171.4 （ｓ） 170.4 （ｓ） 165.8 （ｓ） 160.3 （ｓ） 145.9 （ｓ） 145.9 （ｓ） 137.5 （ｓ） 134.0 （ｄ） 131.4 （ｓ） 130.6 （ｄ）x2 129.8 （ｓ） 129.1 （ｄ）x2 129.1 （ｓ） 127.6 （ｄ） 119.0 （ｄ） 118.0 （ｄ） 76.0 （ｄ） 73.5 （ｄ） 63.1 （ｄ） 61.3 （ｄ） 57.1 （ｄ） 53.9 （ｄ） 52.7 （ｄ） 50.5 （ｄ） 39.9 （ｔ） 36.1 （ｔ） 31.8 （ｑ） 31.0 （ｔ） 30.7 （ｄ） 29.9 （ｔ） 29.6 （ｔ） 25.3 （ｔ） 22.4 （ｑ） 22.3 （ｔ） 20.2 （ｑ） 19.5 （ｑ） 19.4 （ｑ） 13.3 （ｑ） - 【請求項２】WS7622A物質のジ−低級アルキル誘導体
- 【請求項３】WS7622A物質のジ−低級アルカノイル誘導
体 - 【請求項４】ストレプトマイセス属に属するWS7622A、
Ｂ、ＣおよびＤ物質産生菌株を培地中培養し、培養液か
らWS7622A、Ｂ、Ｃおよび（もしくは）Ｄ物質または医
薬として許容されるそれらの塩を分離することを特徴と
するWS7622A、Ｂ、Ｃおよび（もしくは）Ｄ物質または
医薬として許容されるそれらの塩の製造法。 - 【請求項５】WS7622A物質またはその塩にアルキル化剤
を作用させることを特徴とするWS7622A物質のジ−低級
アルキル誘導体またはその塩の製造法。 - 【請求項６】WS7622A物質またはその塩に式:R−OH（式
中、Ｒは低級アルカノイル基を意味する）で示される化
合物またはその反応性誘導体を作用させることを特徴と
するWS7622A物質のジ−低級アルカノイル誘導体または
その塩の製造法。 - 【請求項７】WS7622A物質、WS7622B物質、WS7622C物
質、WS7622D物質、WS7622A物質のジ−低級アルキル誘導
体、WS7622A物質のジ−低級アルカノイル誘導体、およ
び（または）医薬として許容されるそれらの塩を有効成
分として含有することを特徴とするヒト白血球エラスタ
ーゼ抑制剤。
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