[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

JP2024537772A - Ｂａｆｆ－ｒを標的化する抗体及びその使用 - Google Patents

Ｂａｆｆ－ｒを標的化する抗体及びその使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2024537772A
JP2024537772A JP2024519268A JP2024519268A JP2024537772A JP 2024537772 A JP2024537772 A JP 2024537772A JP 2024519268 A JP2024519268 A JP 2024519268A JP 2024519268 A JP2024519268 A JP 2024519268A JP 2024537772 A JP2024537772 A JP 2024537772A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acid
seq
antigen
binding site
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2024519268A
Other languages
English (en)
Inventor
フィッシャー，ベンジャミン
ピー ハイン，ピャエ
イワノフ，アレクサンダー
リィ，シンビ
シュナイダー，マシュー
Original Assignee
ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド filed Critical ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド
Publication of JP2024537772A publication Critical patent/JP2024537772A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4613—Natural-killer cells [NK or NK-T]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4633—Antibodies or T cell engagers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5406—IL-4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5428—IL-10
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5434—IL-12
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5443—IL-15
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/55—IL-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/56—IFN-alpha
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

細胞上のＢＡＦＦ－Ｒを標的とする抗原結合部位を形成するように対合され得る抗体重鎖及び軽鎖可変ドメインを有するタンパク質、このようなタンパク質を含む医薬組成物、並びに癌又は自己免疫疾患の治療などのために、このようなタンパク質及び医薬組成物を使用する治療方法が、開示される。

Description

相互参照
本出願は、２０２１年９月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／２５０，０９２号明細書に対する優先権を主張するものであり、その全開示はその全体が参照により本明細書に援用される。
配列表
本出願は、パテントセンターを介してＸＭＬファイル形式で提出されているコンピュータ可読の配列表の全体を含み、その内容はその全体が参照により本明細書に援用される。パテントセンターを介して提出された配列表のＸＭＬファイルは、「１４２４７－６９９－２２８＿ｓｅｑｌｉｓｔ．ｘｍｌ」と題され、２０２２年９月１６日に作成され、１１４，４５６バイトのサイズである。
本発明は、細胞上のＢＡＦＦ－Ｒを標的とする抗原結合部位を形成するように対合され得る抗体重鎖及び軽鎖可変ドメインを有するタンパク質、このようなタンパク質を含む医薬組成物、並びに癌又は自己免疫疾患の治療などのために、このようなタンパク質及び医薬組成物を使用する治療方法を提供する。
癌は、この疾患の治療について文献に報告されるかなりの研究努力及び科学の進歩にもかかわらず、重大な健康問題であり続けている。成人において最も高い頻度で診断される癌のいくつかとしては、前立腺癌、乳癌、及び肺癌が挙げられる。血液悪性腫瘍は、固形癌より頻度が低いが、低い生存率を有する。これらの癌のための現在の治療選択肢は、全ての患者に有効であるわけではなく、及び／又はかなりの有害な副作用を有し得る。他のタイプの癌も、既存の治療選択肢を用いて治療するには依然として難しい。
ＢＡＦＦ受容体とも呼ばれるＢＡＦＦ－Ｒ、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＣＤ２６８、又はＢＲ３は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのＩＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＢＡＦＦ－Ｒは、後期移行（Ｔ２）Ｂ細胞段階で、且つ全ての成熟Ｂ細胞上で発現され、胚中心Ｂ細胞上で下方制御され、メモリー細胞上で再発現され、そして形質細胞上には存在しない（非特許文献１）。ＢＡＦＦ－Ｒは、Ｂ細胞生存因子である、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）に対する受容体である。ＢＡＦＦは、３つの受容体：ＢＡＦＦ－Ｒ、膜貫通アクチベーター及びＣＡＭＬ相互作用物質（ＴＡＣＩ）、並びにＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に会合し得る。これら３つの受容体の中で、ＢＡＦＦ－Ｒは、濾胞及び辺縁帯脾臓Ｂ細胞の発現に関与する主要な受容体である（非特許文献２）。
ＢＡＦＦ／ＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達軸は、Ｂ細胞過形成における役割を果たし得る。ＢＡＦＦ－Ｒの発現増加、及びＢＡＦＦの血清レベル上昇が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）患者において認められている（非特許文献３）。ＢＡＦＦ－Ｒにおける特定の一塩基多型（ＳＮＰ）は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）のリスク増加に関連する（非特許文献４）。ＢＡＦＦ／ＢＡＦＦ－Ｒ軸は、自己免疫性炎症性疾患にも関与する（非特許文献５）。一部の全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者では、血清中のＢＡＦＦのレベルが増加しており（非特許文献６）、ＢＡＦＦ－Ｒは、ＳＬＥにおける血液Ｂ細胞上で一貫して占有される（非特許文献７）。自己反応性Ｂ細胞がその生存のために保護的Ｂ細胞と比較してＢＡＦＦにより大きく依存するという観察を考慮すれば（非特許文献８）、異常に高レベルのＢＡＦＦが、自己反応性Ｂ細胞の生存を増強することによって、自己免疫疾患の病態形成に寄与し得ることが提起されている。
Ｄａｖｉｄｓｏｎ（２０１２）Ｃｕｒｒ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｒｅｐ．，１４（４）：２９５－３０２ Ｓｃｈｉｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３：２１１１－１４ Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ａｄｖ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２５（５）：８３７－４４ Ｊｅｓｅｋ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｔｕｍｏｕｒ Ｂｉｏｌ．，３７（１０）：１３６１７－２６ Ｍａｃｋａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９０：１６９７－１７１０ Ｃｈｅｅｍａ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，４４：１３１３－１９ Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，５２：３９４３－５４ Ｌｅｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０：４４１－５３
したがって、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する新しい有用な抗体、特にＢＡＦＦ－Ｒに結合し、且つそのＢＡＦＦとの相互作用を阻害する抗体についての分野における必要性が残っている。
本発明は、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位を提供する。このような抗原結合部位を含有するタンパク質及びタンパク質コンジュゲート、例えば、抗体、抗体－薬物コンジュゲート、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、及び免疫サイトカイン、並びにこのような抗原結合部位（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））を含有するタンパク質を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、癌及び自己免疫疾患などのＢＡＦＦ－Ｒ関連疾患を治療するのに有用である。
したがって、一態様において、本発明は、ＢＡＦＦ－Ｒに結合するか又は結合する能力がある抗原結合部位であって、
配列番号５０のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）配列、配列番号５１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）配列、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；並びに
配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１配列、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、抗原結合部位を提供する。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、ＢＡＦＦ－Ｒに結合するか又は結合する能力がある抗原結合部位であって、
（ａ）ＶＨは、それぞれ配列番号４６、４７、及び４８のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び４９のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；
（ｂ）ＶＨは、それぞれ配列番号１、２、及び１６のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列と同一である配列を含み；
（ｃ）ＶＨは、それぞれ配列番号２１、２、及び２２のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；
（ｄ）ＶＨは、それぞれ配列番号２０、２３、及び２６のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；又は
（ｅ）ＶＨは、それぞれ配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び４９のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
ある実施形態において、抗原結合部位は、それぞれ配列番号４６、４７、及び４８のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むＶＨ；並びにそれぞれ配列番号４、５、及び４９のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むＶＬを含む。
ある実施形態において、抗原結合部位は、それぞれ配列番号１、２３、及び３８のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むＶＨ；並びにそれぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むＶＬを含む。
ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４０と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４０と比較してＧ４４Ｃ置換を含むＶＨを含む。ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４１と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある実施形態において、ＶＬは、配列番号４１と比較してＧ１００Ｃ置換を含む。ある実施形態において、ＶＬは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬ、又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗原結合部位である。ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
ある実施形態において、抗原結合部位は、一本鎖断片可変（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、又はモノクローナル抗体として存在する。
ある実施形態において、抗原結合部位は、一本鎖断片可変（ｓｃＦｖ）として存在する。
ある実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４４又は配列番号４５の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖとして存在する。ある実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号４４又は配列番号４５のアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号４４のアミノ酸配列からなる。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の実施形態のいずれかの抗原結合部位とＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について競合する抗原結合部位である。
ある実施形態において、抗原結合部位は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される際、５ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＢＡＦＦ－Ｒに結合する。
ある実施形態において、抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－ＲのＢＡＦＦへの結合を、（例えば、競合結合アッセイにおいて測定される際、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）阻害（例えば、遮断）する。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の実施形態のいずれか１つの抗原結合部位を含むタンパク質である。
ある実施形態において、タンパク質は、抗体重鎖定常領域をさらに含む。ある実施形態において、抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域である。ある実施形態において、抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域である。ある実施形態において、抗体重鎖定常領域の各ポリペプチド鎖は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、抗体重鎖定常領域の少なくとも１つのポリペプチド鎖は、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、及びＫ４３９から選択される１つ以上の位置で、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対する１つ以上の突然変異を含む。
ある実施形態において、抗体重鎖定常領域の少なくとも１つのポリペプチド鎖は、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９Ｄ、及びＫ４３９Ｅから選択される、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対する１つ以上の突然変異を含む。
ある実施形態において、抗体重鎖定常領域の１つのポリペプチド鎖は、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１及びＫ４３９から選択される１つ以上の位置で、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対する１つ以上の突然変異を含み；抗体重鎖定常領域の他のポリペプチド鎖は、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされたＱ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、及びＫ４３９から選択される１つ以上の位置で、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対する１つ以上の突然変異を含む。
ある実施形態において、抗体重鎖定常領域の１つのポリペプチド鎖は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対するＫ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗ置換を含み；抗体重鎖定常領域の他のポリペプチド鎖は、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対するＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ及びＦ４０５Ｔ置換を含む。
ある実施形態において、抗体重鎖定常領域の１つのポリペプチド鎖は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対するＹ３４９Ｃ置換を含み；抗体重鎖定常領域の他のポリペプチド鎖は、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対するＳ３５４Ｃ置換を含む。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の実施形態のいずれか１つのタンパク質及び薬物部分を含む抗体－薬物コンジュゲートである。ある実施形態において、薬物部分は、アウリスタチン、Ｎ－アセチル－γカリケアマイシン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、及びＳＮ－３８からなる群から選択される。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の実施形態のいずれか１つの抗原結合部位及びサイトカインを含む免疫サイトカインである。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＮＦ、及びＩＦＮαからなる群から選択される。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の実施形態のいずれか１つの抗原結合部位及びＣＤ３に結合する抗原結合部位を含む二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーである。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、
（ａ）本発明の抗原結合部位；
（ｂ）膜貫通ドメイン；及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。
ある実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、及びＣＤ１５４の膜貫通領域から選択される。
ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２の機能的シグナル伝達ドメインを含む一次シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激性受容体の機能的シグナル伝達ドメインを含む共刺激性シグナル伝達ドメインをさらに含む。ある実施形態において、共刺激性受容体は、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に結合するリガンド、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の実施形態のいずれか１つのＣＡＲをコードする単離核酸である。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の態様の単離核酸を含む発現ベクターである。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の態様の核酸又は発現ベクターを含む免疫エフェクター細胞である。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の態様のいずれか１つのＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞である。ある実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。ある実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はＮＫＴ細胞である。ある実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞である。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、上の態様又は実施形態のいずれかのタンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、又は免疫エフェクター細胞；及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、上の態様又は実施形態のいずれかのタンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、免疫エフェクター細胞、又は医薬組成物を投与することを含む、方法である。ある実施形態において、癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ－ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、及び急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）である。ある実施形態において、癌は、ＢＡＦＦ－Ｒを発現する。
別の態様において、本明細書に提供されるのは、自己免疫性炎症性疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、上の態様又は実施形態のいずれかのタンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、免疫エフェクター細胞、又は医薬組成物を投与することを含む、方法である。
ある実施形態において、上の態様又は実施形態のいずれかのタンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、又は二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、精製された抗原結合部位、タンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、又は二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーである。
ある実施形態において、上の態様又は実施形態のいずれかのタンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、又は二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、遠心分離、深層ろ過、細胞溶解、均質化、凍結融解、親和性精製、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用交換クロマトグラフィー、及びミックスモードクロマトグラフィーからなる群から選択される方法によって精製される。
本発明のこれらの及び他の態様及び利点は、以下の図、詳細な説明及び特許請求の範囲によって示される。
本発明は、以下の図面を参照してより完全に理解され得る。
図１は、ＢＡＦＦ－ビオチンのＣＨＯ細胞上で発現されたヒトＢＡＦＦ－Ｒへの結合の指定抗体による遮断を示す、結合アッセイからの蛍光出力を示すグラフである。
図２は、ＢＡＦＦ－ビオチンのＣＨＯ細胞上で発現されたヒトＢＡＦＦ－Ｒへの結合の指定抗体による遮断を示す、遮断アッセイからの蛍光出力を示すグラフである。
図３Ａ－３Ｄは、指定抗体のＢＡＦＦ－Ｒへの結合を示す、ＣＨＯ細胞上での結合アッセイからの蛍光出力（図３Ａ、図３Ｂ）又はＢＡＦＦ－ビオチンのＢＡＦＦ－Ｒへの結合の指定抗体による遮断アッセイからの蛍光出力（図３Ｃ、図３Ｄ）のグラフである。 同上。
図４Ａ－４Ｅは、酵母上で発現されたＡＢ０３６９ｓｃＦｖの非抗原対照（図４Ａ）、ｈ－ＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ（図４Ｂ）、無関係ｈＦｃ（図４Ｃ）、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ＧＳＴ（図４Ｄ）、又は無関係ＧＳＴ（図４Ｅ）への結合を示すフローサイトメトリープロットである。垂直軸は、Ｆｌａｇエピトープタグの検出によって測定される際のｓｃＦｖの発現を示し；水平軸は、ストレプトアビジン－ＰＥの検出によって測定される際のＢＡＦＦ－Ｒ構築物のビオチン化対照のｓｃＦｖへの結合を示す。 同上。
図５Ａ－５Ｂは、ＡＢ０３６９又は指定対照のヒト（図５Ａ）又はカニクイザル（図５Ｂ）ＢＡＦＦ－Ｒへの結合を示すグラフである。
図６Ａ－６Ｂは、ＡＢ０３６９に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質の多特異性アッセイを詳細に示す。図６Ａは、アッセイの模式図である。図６Ｂは、多特異性試薬（ＰＳＲ）の非存在下（上パネル）又は存在下（下パネル）でのＡＢ０３６９のグラフ（左パネル）、トラスツズマブ陰性対照のグラフ（中パネル）、又はイキセキズマブ陽性対照のグラフ（右パネル）を示す。 同上。
図７は、ＡＢ０３６９に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質によって誘導される際のＲａｍｏｓ細胞のＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａＶ細胞傷害性アッセイを示すグラフである。
図８は、ＢＡＦＦ－ビオチンのＣＨＯ細胞上で発現されたヒトＢＡＦＦ－Ｒへの結合のＡＢ０３６９又は指定抗体による妨害を示す結合アッセイからの蛍光出力を示すグラフである。
図９Ａ－９Ｄは、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓの親ＡＢ０３６９ｓｃＦｖ又は選択の連続ラウンド後、酵母上で発現され、親和性成熟によって生成されたライブラリーから選択されたクローンへの結合を示すフローサイトメトリープロットである。図９Ａは、親ＡＢ０３６９ｓｃＦｖへの結合を示し；図９Ｂは、クローン選択の第１ラウンドからのサンプルへの結合を示し；図９Ｃは、クローン選択の第２ラウンドからのサンプルへの結合を示し；図９Ｄは、クローン選択の第２ラウンドからの出力への結合を示す。 同上。
図１０Ａ－１０Ｅは、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－ＨｉｓのＡＢ０３６９及び酵母上で発現された親和性成熟ｓｃＦｖクローンへの結合を示すフローサイトメトリープロットである。図１０Ａは、親ＡＢ０３６９への結合を示し；図１０Ｂは、ＡＢ０６０５への結合を示し；図１０Ｃは、ＡＢ０６２２への結合を示し；図１０Ｄは、ＡＢ０６２２への結合を示し；図１０Ｅは、イアナルマブベースのｓｃＦｖへの結合を示す。 同上。
図１１Ａ－１１Ｃは、ＡＢ０３６９の親和性成熟から発現された多特異的結合タンパク質のＢＡＦＦ－Ｒ結合及び細胞傷害性を示すグラフである。図１１Ａは、指定クローンに由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質のＣＨＯ細胞上で発現されたヒトＢＡＦＦ－Ｒへの結合を示すグラフである。図１１Ｂは、指定クローンに由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質によって誘導される際の、Ｒａｍｏｓ細胞のＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａＶ細胞傷害性アッセイを示すグラフである。図１１Ｃは、ＡＢ０６２２に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質によって誘導される際の、Ｒａｍｏｓ細胞のＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａＶ細胞傷害性アッセイを示すグラフである。
図１２Ａ－１２Ｂは、ＡＢ００６０５及びＡＢ０６０６に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質の多特異性アッセイを詳細に示す。図１２Ａは、アッセイの模式図である。図１２Ｂは、多特異性試薬（ＰＳＲ）の非存在下（上パネル）又は存在下（下パネル）でのＡＢ０６０５のグラフ（左パネル）又はＡＢ０６０６のグラフ（右パネル）を示す。
図１３Ａ－１３Ｃは、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓの、親ＡＢ０３６９ｓｃＦｖ又は選択の連続ラウンド後、酵母上で発現され、親和性成熟によって生成されたライブラリーから選択されたクローンへの結合を示すフローサイトメトリープロットである。図１３Ａは、親ＡＢ０３６９ｓｃＦｖへの結合を示し；図１３Ｂは、クローン選択の第１ラウンドからのサンプルへの結合を示し；図１３Ｃは、クローン選択の第２ラウンドからのサンプルへの結合を示す。
図１４Ａ－１４Ｅは、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓの、ＡＢ０３６９及び酵母上で発現された親和性成熟ｓｃＦｖクローンへの結合を示すフローサイトメトリープロットである。図１４Ａは、親ＡＢ０３６９への結合を示し；図１４Ｂは、ＡＢ０６７９への結合を示し；図１４Ｃは、ＡＢ０６８１への結合を示し；図１４Ｄは、ＡＢ０６８２への結合を示し；図１４Ｅは、イアナルマブベースのｓｃＦｖへの結合を示す。 同上。
図１５Ａ－１５Ｃは、ＢＡＦＦ－Ｒの、ＡＢ０３６９の親和性成熟から発現された多特異的結合タンパク質への結合を示すグラフである。図１５Ａは、指定クローンに由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質のＣＨＯ細胞上で発現されたヒトＢＡＦＦ－Ｒへの結合を示すグラフである。図１５Ｂは、指定クローンに由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質の、ＣＨＯ細胞上で発現されたカニクイザルＢＡＦＦ－Ｒへの結合を示すグラフである。図１５Ｃは、ＢＡＦＦ－ビオチンの、ＣＨＯ細胞上で発現されたＢＡＦＦ－Ｒへの結合の指定抗体による妨害を示す、結合アッセイからの蛍光出力を示すグラフである。
図１６は、ＡＢ０６７９、ＡＢ０５６８、又はツール－Ｆ３の陽性対照に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質によって誘導される際の、ＢＪＡＢ細胞のＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａＶ細胞傷害性アッセイを示すグラフである。
図１７Ａ－１７Ｄは、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓの、選択の連続ラウンド後、酵母上で発現され、親和性成熟によって生成されたライブラリーから選択された親ＡＢ０３６９ｓｃＦｖクローンへの結合を示すフローサイトメトリープロットである。図１７Ａは、親ＡＢ０３６９ｓｃＦｖへの結合を示し；図１７Ｂは、クローン選択の第１ラウンドからのサンプルへの結合を示し；図１７Ｃは、クローン選択の第２ラウンドからのサンプルへの結合を示し；図１７Ｄは、クローン選択の第３ラウンドからのサンプルへの結合を示す。
図１８Ａ－１８Ｆは、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓの、ＡＢ０３６９及び酵母上で発現された親和性成熟ｓｃＦｖクローンへの結合を示すフローサイトメトリープロットである。図１８Ａは、親ＡＢ０３６９への結合を示し；図１８Ｂは、ＡＢ０６８２への結合を示し；図１８Ｃは、ＡＢ０８９８への結合を示し；図１８Ｄは、ＡＢ０８９９への結合を示し；図１８Ｅは、ＡＢ０９００への結合を示し；図１８Ｆは、イアナルマブベースのｓｃＦｖへの結合を示す。 同上。 同上。
図１９は、ＡＢ０８９８、ＡＢ０８９９、又はＡＢ０９００に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質によって誘導される際の、ＢＪＡＢ細胞のＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａＶ細胞傷害性アッセイを示すグラフである。
図２０は、ＡＢ０８９８（上パネル）、ＡＢ０８９９（中央パネル）、及びＡＢ０９００（下パネル）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルのグラフを示す。
図２１は、１ｍＭの非ビオチン化ｈＢＡＦＦＲ－Ｆｃとのインキュベーションによる負荷前（左）及び負荷後（右）の、酵母上で発現されたｓｃＦｖクローンのビオチン化ｈＢＡＦＦＲ－Ｆｃへの結合のフローサイトメトリープロットを示す。
図２２は、１ｍＭの非ビオチン化ｈＢＡＦＦＲ－Ｆｃとのインキュベーションによる負荷前（上）及び負荷後（下）の、酵母上で発現されたｓｃＦｖクローンのビオチン化ｈＢＡＦＦＲ－Ｆｃへの結合のフローサイトメトリープロットを示す。試験したクローンは、（左から右へ）ＡＢ１０８０、ＡＢ１０８１、ＡＢ１０８４、ＡＢ１０８５、及びイアナルマブベースのｓｃＦｖである。 同上。 同上。 同上。
図２３Ａ－２３Ｂは、指定抗体クローンのヒト（図２３Ａ）又はカニクイザル（図２３Ｂ）ＢＡＦＦ－Ｒへの結合を示すグラフである。
図２４Ａ－２４Ｂは、ＡＢ１０８０又はＡＢ１０８１に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質の多特異性アッセイを詳細に示す。図２４Ａは、アッセイの模式図である。図２４Ｂは、多特異性試薬（ＰＳＲ）の非存在下（上パネル）又は存在下（下パネル）でのＡＢ１０８０（左パネル）、ＡＢ１０８１（中央左パネル）、トラスツズマブ陰性対照（中央右パネル）、又はイキセキズマブ陽性対照（右パネル）のグラフを示す。 同上。
図２５Ａ－２５Ｂは、ツール陽性対照と比較して、ＡＢ１０８０（図２５Ａ）又はＡＢ１０８５（図２５Ｂ）に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質によって誘導される際の、ＢＪＡＢ細胞のＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａＶ細胞傷害性アッセイのグラフを示す。
図２６は、ＢＡＦＦ－ビオチンの、ＣＨＯ細胞上で発現されたヒトＢＡＦＦ－Ｒへの結合の指定抗体クローンによる妨害を示す、結合アッセイからの蛍光出力を示すグラフである。
図２７は、ＡＢ１０８０（左パネル）、ＡＢ１０８１（中央左パネル）、ＡＢ１０８４（中央右パネル）、及びＡＢ１０８５（右パネル）に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質のナノ二重走査蛍光定量（ｎａｎｏＤＳＦ）分析のグラフを示す。
図２８は、指定抗体に由来するＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を有する多特異的結合タンパク質の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）分析のグラフを示す。
図２９は、指定の基準生物製剤と比較したＡＢ１６１２のＨＩＣ分析のグラフを示す。
図３０Ａ－３０Ｂは、指定抗体クローンのヒト（図３０Ａ）又はカニクイザル（図３０Ｂ）ＢＡＦＦ－Ｒへの結合を示すグラフである。
本発明は、ヒトＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位を提供する。このような抗原結合部位を含有するタンパク質及びタンパク質コンジュゲート、例えば、抗体、抗体－薬物コンジュゲート、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、及び免疫サイトカイン、並びにこのような抗原結合部位（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））を含有するタンパク質を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、癌及び自己免疫疾患などのＢＡＦＦ－Ｒ関連疾患を治療するのに有用である。発明の様々な態様は、以下のセクションに記載されるが；１つの特定セクションに記載される発明の態様は、任意の特定セクションに限定されない。
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語及び語句が、以下に定義される。
本明細書において使用される際の「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」という用語は、「１つ以上」を意味し、文脈上不適切でない限り、複数を含む。
本明細書において使用される際、「抗原結合部位」という用語は、抗原結合に関与する又は抗原結合する能力がある免疫グロブリン分子の一部を指す。ヒト抗体において、抗原結合部位は、重（「Ｈ」）及び軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。重鎖及び軽鎖のＶ領域内の３つの高度に異なる区画は、「超可変領域」と呼ばれ、これは、「フレームワーク領域」、又は「ＦＲ」として知られているより保存的な隣接区画の間に介在する。したがって、「ＦＲ」という用語は、免疫グロブリンにおける超可変領域の間及び超可変領域に隣接して天然に見られるアミノ酸配列を指す。ヒト抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の３つの超可変領域は、３次元空間において互いに対して配置されて、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合した抗原の３次元表面に対して相補的であり、重鎖及び軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」、又は「ＣＤＲ」と呼ばれる。ラクダ及び軟骨魚類などの特定の動物において、抗原結合部位は、「単一ドメイン抗体」を提供する単一抗体鎖によって形成される。抗原結合部位は、インタクトな抗体中、抗原結合表面を保持する抗体の抗原結合フラグメント中、又はｓｃＦｖなどの組み換えポリペプチド中に存在し得、ペプチドリンカーを用いて、単一ポリペプチド中で、重鎖可変ドメインを軽鎖可変ドメインに結合する。本明細書に開示される重鎖又は軽鎖可変領域における全てのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けにしたがって番号付けされる。
抗原結合部位のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９－６６１６（１９７７）及びＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、及びＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）に記載される方法によって決定され得る。これらの定義下で決定されるＣＤＲは、典型的に、互いに対して比較したとき、アミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。特定の実施形態において、「ＣＤＲ」という用語は、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）及びＭａｒｔｉｎ Ａ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）によって定義されるようなＣＤＲである。特定の実施形態において、「ＣＤＲ」という用語は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９－６６１６（１９７７）及びＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって定義されるようなＣＤＲである。特定の実施形態において、抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲは、様々な慣例を用いて定義される。例えば、特定の実施形態において、重鎖ＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（上記を参照）にしたがって定義され、軽ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ（上記を参照）にしたがって定義される。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は、重鎖ＣＤＲを示し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、軽鎖ＣＤＲを示す。
本明細書において使用される際、「対象」及び「患者」という用語は、本明細書に記載される方法及び組成物によって治療される生物を指す。このような生物としては、好ましくは、限定はされないが、哺乳動物（例えば、マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）が挙げられ、より好ましくは、ヒトが挙げられる。
本明細書において使用される際、「有効量」という用語は、有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な化合物（例えば、本発明の化合物）の量を指す。有効量は、１回以上の投与、適用又は投薬で投与され得、特定の製剤又は投与経路に限定されることは意図されていない。本明細書において使用される際、「治療すること」という用語は、任意の効果、例えば、病態、疾患、障害などを減少させ、低減し、調節し、改善し、又はなくすことを含み、これは、それらの症状の改善、又は改善することをもたらす。
本明細書において使用される際、「医薬組成物」という用語は、組成物を、インビボ又はエクスビボでの診断又は治療的使用に特に適したものにする、不活性又は活性担体との活性薬剤と組合せを指す。
本明細書において使用される際、「薬学的に許容される担体」という用語は、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルジョン（例えば、水中油滴型又は油中水型エマルジョンなど）、及び様々なタイプの湿潤剤などの標準的な医薬担体のいずれかを指す。組成物は、安定剤及び防腐剤も含み得る。担体、安定剤及び補助剤の例については、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ［１９７５］を参照されたい。
本明細書において使用される際、「薬学的に許容される塩」という用語は、対象に投与すると、本発明の化合物を提供することが可能である、本発明の化合物の任意の薬学的に許容される塩（例えば、酸又は塩基）、又はその活性代謝産物若しくは残基を指す。当業者に公知であるように、本発明の化合物の「塩」は、無機又は有機酸及び塩基から誘導され得る。例示的な酸としては、限定はされないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられる。それ自体で薬学的に許容されないシュウ酸などの他の酸が、本発明の化合物及びそれらの薬学的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に用いられ得る。
例示的な塩基としては、限定はされないが、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）水酸化物、アンモニア、及び式ＮＷ４ ＋の化合物（式中、Ｗが、Ｃ１～４アルキルである）などが挙げられる。
例示的な塩としては、限定はされないが：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタノエート（ｆｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアネート、トシル酸塩、ウンデカン酸塩などが挙げられる。塩の他の例としては、Ｎａ＋、ＮＨ４ ＋、及びＮＷ４ ＋（式中、Ｗが、Ｃ１～４アルキル基である）などの好適なカチオンと配合された本発明の化合物のアニオンなどが挙げられる。
治療的使用のために、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容されると考えられる。しかしながら、薬学的に許容されない酸及び塩基の塩も、例えば、薬学的に許容される化合物の調製又は精製において利用され得る。
本明細書において使用される際、ＢＡＦＦ－Ｒ（ＢＡＦＦ受容体、Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＲ３、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ、ＣＤ２６８、及びＢＬｙＳ受容体３としても知られている）は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ９６ＲＪ３のタンパク質並びに関連するアイソフォーム及びオルソログを指す。
本明細書全体を通して、組成物が、特定の成分を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、若しくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載される場合、又はプロセス及び方法が、特定の工程を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、若しくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載される場合、さらに、記載される成分から本質的になる、又はそれからなる、本発明の組成物があること、並びに記載される処理工程から本質的になる、又はそれからなる本発明のプロセス及び方法があることが考えられる。
一般的な事項として、パーセンテージを規定している組成物は、特に規定されない限り、重量基準である。さらに、変数に、定義が伴わない場合、変数についての前の定義が適用される。
本発明の様々な特徴及び態様が、以下により詳細に説明される。
Ｉ．抗原結合部位
一態様において、本発明は、ヒトＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位を提供する。例示的な抗原結合部位のＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ、及びｓｃＦｖ配列が、表１に列挙される。ＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームにしたがって識別される。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、表１に開示される抗体のＶＨと少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）と同一であるアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び表１に開示される同じ抗体のＶＨと少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａを参照）、Ｃｈｏｔｈｉａ（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ＆ Ｌｅｓｋ Ａ Ｍ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７を参照）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（ＭａｃＣａｌｌｕｍ Ｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２：７３２－７４５を参照）、又は、表１に開示される抗体のＶＨ及びＶＬ配列の、当該技術分野において公知の任意の他のＣＤＲ決定方法で決定される、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、表１に開示される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、それぞれ配列番号５０、配列番号５１、及び配列番号５２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、それぞれ配列番号４、配列番号５、及び配列番号４９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号５０、５１、及び５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０３６９に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号７７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、１２０３＿Ａ０１に由来する。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１、２、及び７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号８、９、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号８、９、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、１２０３＿Ａ０２に由来する。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１０、２、及び１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１０、２、及び１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号１６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、それぞれ配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０６０５ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号６４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１、２、及び１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０６０６ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号６５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１、２、及び１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０６２２ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号６６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１、２、及び１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号２１、配列番号２、及び配列番号２２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、それぞれ配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号２１、２、及び２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０６７９ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１７、２、及び１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１７、２、及び１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０６８１ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号６８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１８、２、及び１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１８、２、及び１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０６８２ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号６９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号２０、２、及び１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号２０、２、及び１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号２０、配列番号２３、及び配列番号２６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、それぞれ配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号２０、２３、及び２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０８９８に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号７０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号２０、２３、及び３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号２０、２３、及び３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０８９９に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号７１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号２０、２３、及び２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号２０、２３、及び２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号２０、２３、及び２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ０９００に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号７２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号２０、２３、及び２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号２０、２３、及び２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号３５、配列番号３６、及び配列番号３７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、それぞれ配列番号４、配列番号５、及び配列番号４９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ１０８０ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号７３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号４３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１、２３、及び２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１、２３、及び２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ１０８１ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号４３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号２８、２９、及び３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号２８、２９、及び３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ１０８４ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号４３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号３１、２３、及び３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号３１、２３、及び３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ１０８５ｓｃＦｖに由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号６３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号３３、２、及び３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号３３、２、及び３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号４６、配列番号４７、及び配列番号４８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、それぞれ配列番号４、配列番号５、及び配列番号４９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号４６、４７、及び４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＡＢ１４２４又はＡＢ１６１２に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号４１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号４３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号１、２３、及び３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号１、２３、及び３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、ｓｃＦｖとして存在し、ｓｃＦｖは、配列番号４４又は４５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、３Ａ１に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号５５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号８０、８１、及び８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号８３、８４、及び８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号８０、８１、及び８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号８３、８４、及び８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、７Ｇ４に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号５７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号８０、８６、及び８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号８３、８４、及び８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号８０、８６、及び８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号８３、８４、及び８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、１Ｂ３－Ａ７に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号５８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号８８、８９、及び９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号９１、９２、及び９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号８８、８９、及び９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号９１、９２、及び９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、１０Ｈ７－Ｃ５に由来する。例えば、特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、配列番号６０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号７９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＶＨは、それぞれ配列番号９４、９５、及び９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、それぞれ配列番号９７、９２、及び５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、（ａ）それぞれ配列番号９４、９５、及び９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに（ｂ）それぞれ配列番号９７、９２、及び５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
上記の実施形態のそれぞれにおいて、一緒にＢＡＦＦ－Ｒに結合するＶＨ及び／又はＶＬ配列が、ＢＡＦＦ－Ｒに結合するそれらの能力にあまり影響を与えずに、ＶＨ及び／又はＶＬのフレームワーク領域内にアミノ酸改変（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、若しくは１０のアミノ酸置換、欠失、又は付加）を含み得ることが、本明細書において考えられる。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される際（例えば、以下の実施例１に記載される方法を用いて）又はバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって、１ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、若しくは２０ｎＭ以下のＫＤ（すなわち、解離定数）でヒトＢＡＦＦ－Ｒに結合し、及び／又は対象の体液、組織、及び／若しくは細胞に由来するＢＡＦＦ－Ｒに結合する。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＳＰＲによって測定される際（例えば、以下の実施例１に記載される方法を用いて）又はＢＬＩによって、１×１０－５、１×１０－４、１×１０－３、５×１０－３、０．０１、０．０２、又は０．０５ １／ｓ以下のＫｄ（すなわち、Ｋｏｆｆとも呼ばれるオフレート）を有する。
特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される際（例えば、以下の実施例１に記載される方法を用いて）又はバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、若しくは３０ｎＭ以下のＫＤ（すなわち、解離定数）でカニクイザルＢＡＦＦ－Ｒに結合し、及び／又は対象の体液、組織、及び／若しくは細胞に由来するＢＡＦＦ－Ｒに結合する。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＳＰＲによって測定される際（例えば、以下の実施例１に記載される方法を用いて）又はＢＬＩによって、１×１０－３、５×１０－３、０．０１、０．０２、又は０．０３ １／ｓ以下のＫｄ（すなわち、Ｋｏｆｆとも呼ばれるオフレート）を有する。
別の態様において、本発明は、ＢＡＦＦ－Ｒ（例えば、ヒトＢＡＦＦ－Ｒ）に対する結合について、上記の抗原結合部位と競合する抗原結合部位を提供する。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、上に開示されるＡＢ１４２４に由来する抗原結合部位と競合する。一実施形態において、抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、ＡＢ１４２４と競合する。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、上に開示されるヒト化ＡＢ１４２３に由来する抗原結合部位と競合する。一実施形態において、抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、ヒト化ＡＢ１４２４と競合する。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、上に開示されるＡＢ１６１２に由来する抗原結合部位と競合する。一実施形態において、抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、ＡＢ１６１２と競合する。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、上に開示されるヒト化ＡＢ１６１２に由来する抗原結合部位と競合する。一実施形態において、抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、ヒト化ＡＢ１６１２と競合する。特定の実施形態において、本発明の抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、上に開示されるＡＢ０３６９、１２０３＿Ａ０１、１２０３＿Ａ０２、ＡＢ０６０５、ＡＢ０６０６、ＡＢ０６２２、ＡＢ０６７９、ＡＢ０６８１、ＡＢ０６８２、ＡＢ０８９８、ＡＢ０８９９、ＡＢ０９００、ＡＢ１０８０、ＡＢ１０８１、ＡＢ１０８４、ＡＢ１０８５、３Ａ１、７Ｇ４、１Ｂ３－Ａ７、又は１０Ｈ７－Ｃ５に由来する抗原結合部位と競合する。ある実施形態において、抗原結合部位は、ＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について、ＡＢ０３６９、１２０３＿Ａ０１、１２０３＿Ａ０２、ＡＢ０６０５、ＡＢ０６０６、ＡＢ０６２２、ＡＢ０６７９、ＡＢ０６８１、ＡＢ０６８２、ＡＢ０８９８、ＡＢ０８９９、ＡＢ０９００、ＡＢ１０８０、ＡＢ１０８１、ＡＢ１０８４、ＡＢ１０８５、３Ａ１、７Ｇ４、１Ｂ３－Ａ７、又は１０Ｈ７－Ｃ５と競合する。
抗原結合部位を有するタンパク質
本明細書に開示される抗原結合部位は、抗体又はその抗原結合フラグメント中に存在し得る。抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ダイアボディ、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、又はＦ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖ、二重特異性抗体、二重特異性Ｆａｂ２、二重特異性（ｍａｂ）２、ヒト化抗体、人工的に生成されたヒト抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、一本鎖抗体（例えば、一本鎖Ｆｖフラグメント若しくはｓｃＦｖ）、トリオマブ（ｔｒｉｏｍａｂ）、共通の軽鎖を有するノブイントゥーホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）（ｋｉｈ）ＩｇＧ、クロスマブ、オルト－ＦａｂＩｇＧ、ＤＶＤ－Ｉｇ、２イン１－ＩｇＧ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ２－Ｆｃ、ビ－ナノボディ、ｔａｎｄＡｂ、二重親和性再標的化抗体（ＤＡＲＴ）、ＤＡＲＴ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ（ここで、ＨＳＡ＝ヒト血清アルブミンである）、又はドックアンドロック（ｄｏｃｋ－ａｎｄ－ｌｏｃｋ）（ＤＮＬ）－Ｆａｂ３であり得る。特定の実施形態において、本開示の抗体は、ｓｃＦｖである。特定の実施形態において、ｓｃＦｖは、ＶＨ－ＶＬ形式である。
ある実施形態において、上記の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。ある実施形態において、ｓｃＦｖの安定性を増強するために、重鎖可変ドメインは、軽鎖可変ドメインとジスルフィド架橋を形成する。例えば、ジスルフィド架橋は、重鎖可変ドメインのＣ４４残基と軽鎖可変ドメインのＣ１００残基との間で形成可能であり、アミノ酸位置はＫａｂａｔ下で付番可能である。ある実施形態において、重鎖可変ドメインは、フレキシブルリンカーを介して軽鎖可変ドメインに連結される。任意の好適なリンカーとしては、例えば、（Ｇ４Ｓ）４リンカー（（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）４（配列番号９８）を使用することができる。ｓｃＦｖのある実施形態において、重鎖可変ドメインは、軽鎖可変ドメインのＮ末端に位置づけられる。ｓｃＦｖのある実施形態において、重鎖可変ドメインは、軽鎖可変ドメインのＣ末端に位置づけられる。
ｓｃＦｖにおいて、ＶＨ及びＶＬがリンカー、例えば（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）４、すなわち（Ｇ４Ｓ）４リンカー（配列番号９８）によって接続され得ることが企図される。当業者であれば、その他の開示されるリンカー（例えば、表２を参照されたい）のいずれかを、本明細書（例えば、表１）で開示されるＶＨ及びＶＬ配列を有するｓｃＦｖにおいて使用できることを理解するであろう。
リンカー（例えば、フレキシブルリンカー）の長さは、「短い」、例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２のアミノ酸残基、又は「長い」、例えば、少なくとも１３のアミノ酸残基であり得る。特定の実施形態において、リンカーは、長さが１０～５０、１０～４０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１５～５０、１５～４０、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～５０、２０～４０、２０～３０、又は２０～２５アミノ酸残基である。
特定の実施形態において、リンカーは、（ＧＳ）ｎ（配列番号１０９）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号１１０）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１１１）、（ＧＧＳＧ）ｎ（配列番号１１２）、（ＧＧＳＧＧ）ｎ（配列番号１１３）、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１１４）配列（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０である）を含むか又はそれらからなる。特定の実施形態において、リンカーは、表２に列記されるとおり、配列番号９８～１０８から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれらからなる。
特定の実施形態において、本明細書に開示される抗原結合部位は、抗体定常領域、例えば、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される；ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥの重鎖定常領域と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列に連結される。別の実施形態において、本明細書に開示される抗原結合部位は、例えば、κ又はλの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域に連結され得る。定常領域は、抗体の特性を変更するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、及び／若しくは補体機能の１つ以上を増加又は減少させるために）改変、例えば、突然変異され得る。一実施形態において、抗体は、エフェクター機能を有し、補体を結合し得る。他の実施形態において、抗体は、エフェクター細胞を動員せず、又は補体を結合しない。別の実施形態において、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する減少した能力を有するか又はそのような能力を有さない。例えば、それは、Ｆｃ受容体に対する結合を補助しない、アイソタイプ又はサブタイプ、フラグメント又は他の突然変異体であり、例えば、それは、突然変異又は欠失したＦｃ受容体結合領域を有する。
特定の実施形態において、抗原結合部位は、ＣＨ１ドメインとともに又はＣＨ１ドメインを伴わずに、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むＩｇＧ定常領域に連結される。ある実施形態において、定常領域のアミノ酸配列は、ヒト抗体定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域、ヒトＩｇＧ２定常領域、ヒトＩｇＧ３定常領域、又はヒトＩｇＧ４定常領域と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一である。一実施形態において、ＣＤ１６に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメイン又はその部分は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ配列
と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある他の実施形態において、定常領域のアミノ酸配列は、別の哺乳動物、例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、マウス、又はウマに由来する抗体定常領域と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である。例えば、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１及び／又はＫ４３９において、ヒトＩｇＧ１定常領域と比較して、１つ以上の突然変異が、定常領域に組み込まれ得る。例示的な置換としては、例えば、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｔ３９４Ｗ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９Ｄ、及びＫ４３９Ｅが挙げられる。
特定の実施形態において、抗原結合部位は、ＣＤ１６に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインの部分に連結される。Ｆｃドメイン内で、ＣＤ１６結合が、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメインによって媒介される。例えば、ヒトＩｇＧ１内で、ＣＤ１６との相互作用が、主に、ＣＨ２ドメイン中のアミノ酸残基Ａｓｐ ２６５－Ｇｌｕ ２６９、Ａｓｎ ２９７－Ｔｈｒ ２９９、Ａｌａ ３２７－Ｉｌｅ ３３２、Ｌｅｕ ２３４－Ｓｅｒ ２３９、及び炭水化物残基Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンに集中している（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０６（６７９３）：２６７－２７３を参照）。公知のドメインに基づいて、突然変異が、ファージディスプレイライブラリー若しくは酵母表面ディスプレイｃＤＮＡライブラリーを用いることなどによって、ＣＤ１６に対する結合親和性を促進するか又は低下させるように選択され得、又は相互作用の公知の３次元構造に基づいて設計され得る。
特定の実施形態において、ヒトＩｇＧ１定常領域のＣＨ１に組み込まれ得る突然変異は、アミノ酸Ｖ１２５、Ｆ１２６、Ｐ１２７、Ｔ１３５、Ｔ１３９、Ａ１４０、Ｆ１７０、Ｐ１７１、及び／又はＶ１７３において起こり得る。特定の実施形態において、ヒトＩｇＧ１定常領域のＣκに組み込まれ得る突然変異は、アミノ酸Ｅ１２３、Ｆ１１６、Ｓ１７６、Ｖ１６３、Ｓ１７４、及び／又はＴ１６４において起こり得る。
ある実施形態において、抗体定常ドメインは、ＩｇＧ抗体、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。ある実施形態において、突然変異は、別の抗体定常ドメインによるヘテロ二量体化を可能にするために、抗体定常ドメインに導入される。例えば、抗体定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１の定常ドメインに由来する場合、抗体定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１抗体のアミノ酸２３４～３３２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含み得、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、及びＫ４３９からなる群から選択される１つ以上の位置において異なる。本明細書に開示されるＦｃドメイン又はヒンジ領域における全てのアミノ酸位置は、ＥＵ番号付けにしたがって番号付けされる。
非対称タンパク質の形成を促進するために、Ｆｃドメインヘテロ二量体化が想定される。ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメインにおける突然変異（例えば、アミノ酸置換）は、例えば、国際出願公開番号国際公開第２０１９１５７３６６号パンフレットに記載され、これは、参照により本明細書に援用されない。
上述されるタンパク質は、当業者に周知の組み換えＤＮＡ技術を用いて作製され得る。例えば、第１の免疫グロブリン重鎖をコードする第１の核酸配列が、第１の発現ベクターへとクローニングされ得；第２の免疫グロブリン重鎖をコードする第２の核酸配列が、第２の発現ベクターへとクローニングされ得；第１の免疫グロブリン軽鎖をコードする第３の核酸配列が、第３の発現ベクターへとクローニングされ得；第２の免疫グロブリン軽鎖をコードする第４の核酸配列が、第４の発現ベクターへとクローニングされ得；第１、第２、第３及び第４の発現ベクターが、宿主細胞内に一緒に安定的にトランスフェクトされて、多量体タンパク質を生成し得る。
タンパク質の最高の収率を達成するために、第１、第２、第３及び第４の発現ベクターの様々な比率が、宿主細胞内へのトランスフェクションのための最適な比率を決定するために調査され得る。トランスフェクションの後、単一のクローンが、限界希釈法、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、顕微鏡法、又はＣｌｏｎｅｐｉｘなどの、当該技術分野において公知の方法を用いて、細胞バンク作成のために単離され得る。
クローンが、バイオリアクタースケールアップに好適な条件下で培養され、本明細書に開示される抗原結合部位を含むタンパク質の発現のために維持され得る。タンパク質は、遠心分離、深層ろ過、細胞溶解、均質化、凍結融解、親和性精製、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用交換クロマトグラフィー、及びミックスモードクロマトグラフィーを含む、当該技術分野において公知の方法を用いて単離及び精製され得る。
したがって、別の態様において、本発明は、上記の抗体のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖及び／又は免疫グロブリン軽鎖可変領域をコードする配列を含む１つ以上の単離核酸を提供する。本発明は、上記の抗体のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖及び／又は免疫グロブリン軽鎖可変領域を発現する１つ以上の発現ベクターを提供する。同様に、本発明は、上記の発現ベクター及び／又は単離核酸の１つ以上を含む宿主細胞を提供する。
特定の実施形態において、抗体は、標準的な結合アッセイ、例えば、表面プラズモン共鳴又はバイオレイヤー干渉法を用いて測定される際、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ又はそれ以下のＫＤで、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する。特定の実施形態において、本明細書で開示される抗体は、ＢＡＦＦ－Ｒに５ｎＭ未満のＫＤで結合する。特定の実施形態において、抗体は、対象の体液、組織及び／又は細胞からのＢＡＦＦ－Ｒに結合する。特定の実施形態において、本明細書で開示される抗体は、ＢＡＦＦ－ＲのＢＡＦＦへの結合を（例えば、競合結合アッセイにおいて測定される際、少なくとも５０％、７５％、９０％、９５％又は９９％）阻害（例えば、遮断）する。
抗体が、開示される抗体と同じエピトープに結合するかどうか、又は開示される抗体との結合について競合するかどうかを決定するための競合アッセイが、当該技術分野において公知である。例示的な競合アッセイとしては、免疫測定法（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＲＩＡアッセイ）、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ分析）、バイオレイヤー干渉法、及びフローサイトメトリーが挙げられる。
典型的に、競合アッセイは、固体表面に結合されるか又は細胞表面上で発現される抗原（例えば、ヒトＢＡＦＦ－Ｒタンパク質又はそのフラグメント）、試験ＢＡＦＦ－Ｒ結合抗体及び参照抗体の使用を含む。参照抗体は、標識され、試験抗体は、標識されない。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面又は細胞に結合された標識された参照抗体の量を決定することによって測定される。通常、試験抗体は、過剰に存在する（例えば、１倍、５倍、１０倍、２０倍又は１００倍）。競合アッセイによって識別される抗体（例えば、競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープ、又は同様の（例えば、重複する）エピトープに結合する抗体、及び立体障害が起こるように参照抗体によって結合されたエピトープに十分近位である隣接するエピトープに結合する抗体を含む。
競合アッセイは、標識の存在が、結合を妨げない又は阻害しないことを確実にする両方の方向で行われ得る。例えば、第１の方向において、参照抗体は、標識され、試験抗体は、標識されず、第２の方向において、試験抗体は、標識され、参照抗体は、標識されない。
過剰な１つの抗体（例えば、１倍、５倍、１０倍、２０倍又は１００倍）が、例えば、競合結合アッセイにおいて測定される際、少なくとも５０％、７５％、９０％、９５％又は９９％だけ他の抗体の結合を阻害する場合、試験抗体は、抗原に対する特異的な結合について参照抗体と競合する。
１つの抗体の結合を減少させるか又はなくす抗原における実質的に全てのアミノ酸突然変異が、他の結合を減少させるか又はなくす場合、２つの抗体が、同じエピトープに結合することが決定され得る。１つの抗体の結合を減少させるか又はなくすアミノ酸突然変異のサブセットのみが、他の結合を減少させるか又はなくす場合、２つの抗体が、重複するエピトープに結合することが決定され得る。
本明細書に開示される抗体は、親和性及び／若しくは特異性を含む生化学的特性を改善し、凝集、安定性、沈殿及び／若しくは非特異的相互作用を含む生物物理学的特性を改善し、及び／又は免疫原性を低下させるように、さらに最適化され得る（例えば、親和性成熟される）。親和性－成熟手順は、当業者の技能の範囲内である。例えば、多様性が、ＤＮＡシャッフリング、チェーンシャッフリング、ＣＤＲシャッフリング、ランダム突然変異誘発及び／又は部位特異的突然変異によって、免疫グロブリン重鎖及び／又は免疫グロブリン軽鎖に導入され得る。
特定の実施形態において、単離されたヒト抗体は、１つ以上の体細胞突然変異を含む。これらの場合、抗体は、（例えば、生殖細胞系列形成（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）と呼ばれるプロセスによって）抗体を最適化するように、ヒト生殖細胞系列配列へと修飾され得る。
一般に、最適化された抗体は、それが由来する非最適化（又は親）抗体と、少なくとも同じ、又は実質的に同じ、抗原に対する親和性を有する。好ましくは、最適化された抗体は、親抗体と比較したとき、抗原に対するより高い親和性を有する。
抗体が、治療薬として使用するためのものである場合、それは、標準的なインビトロ共役化学を用いて、小分子毒素又は放射性核種などのエフェクター剤に共役され得る。エフェクター剤が、ポリペプチドである場合、抗体は、エフェクターに化学的に共役されるか、又は融合タンパク質としてエフェクターに結合され得る。融合タンパク質の構築は、当業者の技能の範囲内である。
抗体は、標準的なインビトロ共役化学を用いて、小分子毒素又は放射性核種などのエフェクター部分に共役され得る。エフェクター部分が、ポリペプチドである場合、抗体は、エフェクターに化学的に共役されるか、又は融合タンパク質としてエフェクターに結合され得る。融合タンパク質の構築は、当業者の技能の範囲内である。
ＣＡＲ Ｔ細胞、ＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、免疫サイトカイン、抗体－薬物コンジュゲート、及び免疫毒素
本発明の別の態様は、本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位を含む分子又は複合体を提供する。例示的な分子又は複合体としては、限定はされないが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞エンゲージャー（例えば、ＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）、免疫サイトカイン、抗体－薬物コンジュゲート、及び免疫毒素が挙げられる。
本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する任意の抗原結合部位が、使用され得る。特定の実施形態において、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位のＶＨ、ＶＬ、及び／又はＣＤＲ配列は、表１に示される。特定の実施形態において、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位は、ｓｃＦｖである。特定の実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号４４及び４５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号４４及び４５から選択されるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態において、分子又は複合体におけるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位（例えば、ＣＡＲ、Ｔ細胞エンゲージャー、免疫サイトカイン、抗体－薬物コンジュゲート、又は免疫毒素）は、それぞれ配列番号１、２３、及び３８のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；並びにそれぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４０又は４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン；及び配列番号４１又は４３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４４又は配列番号４５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
特定の実施形態において、本発明は、本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位（例えば、表１を参照）を含むＢＡＦＦ－Ｒ標的化ＣＡＲを提供する。ＢＡＦＦ－Ｒ標的化ＣＡＲは、Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦｖを含み得る。
「キメラ抗原受容体」或いは「ＣＡＲ」という用語は、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激性分子に由来する機能的シグナル伝達ドメイン（本明細書において「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む組み換えポリペプチド構築物を指す。
したがって、特定の実施形態において、ＣＡＲは、本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する細胞外抗原結合部位、膜貫通ドメイン、及び一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態において、ＣＡＲは、少なくとも１つの共刺激性分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメイン（本明細書において「共刺激性シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）をさらに含む。
特定の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとしての本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位（例えば、ＢＡＦＦ－Ｒ結合ｓｃＦｖ）、膜貫通ドメイン、及び一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。特定の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとしての本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位（例えば、ＢＡＦＦ－Ｒ結合ｓｃＦｖ）、膜貫通ドメイン、並びに共刺激性シグナル伝達ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。特定の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとしての本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位（例えば、ＢＡＦＦ－Ｒ結合ｓｃＦｖ）、膜貫通ドメイン、並びに２つの共刺激性シグナル伝達ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。特定の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとしての本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位（例えば、ＢＡＦＦ－Ｒ結合ｓｃＦｖ）、膜貫通ドメイン、並びに少なくとも２つの共刺激性シグナル伝達ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。
例えば、特定の実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１、２３、及び３８のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；並びにそれぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４０又は４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン；及び配列番号４１又は４３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４４又は配列番号４５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。特定の実施形態において、抗原結合部位は、配列番号４４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。
膜貫通ドメインに関して、様々な実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合される膜貫通ドメインを含むように設計される。一実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ中のドメインの１つと天然に結合されるものである。ある場合には、膜貫通ドメインは、このようなドメインの、同じか又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに対する結合を避けて、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるために、アミノ酸置換によって選択又は修飾され得る。別の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ Ｔ細胞表面上の別のＣＡＲとともにホモ二量体化することが可能である。別の実施形態において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ Ｔ細胞中に存在する天然の結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小限に抑えるように、修飾又は置換され得る。
膜貫通ドメインは、任意の天然の膜結合又は膜貫通タンパクに由来し得る。一実施形態において、膜貫通領域は、ＣＡＲが標的に結合されたときはいつでも、細胞内ドメインにシグナルを伝達することが可能である。ある実施形態において、膜貫通ドメインは、ＴＣＲ α鎖、ＴＣＲ β鎖、ＴＣＲ ζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択される１つ以上のタンパク質の膜貫通領域を含む。ある実施形態において、膜貫通ドメインは、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、及びＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される１つ以上のタンパク質の膜貫通領域を含む。
細胞外ＢＡＦＦ－Ｒ結合ドメイン（例えば、ＢＡＦＦ－Ｒ結合ｓｃＦｖドメイン）ドメインは、ヒンジ領域によって膜貫通ドメインに結合され得る。限定はされないが、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ）、Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー、ａ（Ｇ４Ｓ）４リンカー、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ、及びＣＤ８αヒンジを含む様々なヒンジが用いられ得る。
本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが設置された免疫細胞の特殊な機能（例えば、Ｔ細胞の、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性又はヘルパー活性）の少なくとも１つに関与する。したがって、本明細書において使用される際、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、特殊な機能を行うように細胞を指向する、タンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体が、用いられ得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される程度まで、このような切断部分は、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりに使用され得る。したがって、細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことが意図される。
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（すなわち、刺激性分子に由来する機能的シグナル伝達ドメイン）及び１つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメイン（すなわち、少なくとも１つの共刺激性分子に由来する機能的シグナル伝達ドメイン）を含む。
本明細書において使用される際、「刺激性分子」という用語は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様のための刺激性の方法において免疫細胞の活性化を調節する細胞質シグナル伝達配列を提供する、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、又はＢ細胞によって発現される分子を指す。一実施形態において、シグナルは、例えば、ペプチドが充填されたＭＨＣ分子によるＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合によって開始され、限定はされないが、増殖、活性化、分化などを含む、Ｔ細胞応答の媒介をもたらす一次シグナルである。
刺激性の方法で作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含有し得る。本発明における特定の使用のためのものである細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。一実施形態において、本発明のいずれか１つ以上のＣＡＲにおける一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ζに由来する細胞質シグナル伝達配列を含む。
ある実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、４－１ＢＢ、及び／又はＣＤ３－ζの機能的シグナル伝達ドメインである。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、及び／又はＤＡＰ１２の機能的シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体複合体と結合されたζ鎖の機能的シグナル伝達ドメインである。
本明細書において使用される際、「共刺激性分子」という用語は、共刺激性リガンドと特異的に結合し、それによって、限定はされないが、増殖などの、Ｔ細胞による共刺激性応答を媒介するＴ細胞における同種結合パートナーを指す。共刺激性分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要な抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。このような共刺激性分子のさらなる例としては、ＣＤ５、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒ β、ＩＬ２Ｒ γ、ＩＬ７Ｒ α、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが挙げられる。ある実施形態において、ＣＡＲの共刺激性シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載される共刺激性分子、例えば、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に結合するリガンド、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、又はそれらの任意の組合せの機能的シグナル伝達ドメインである。
本明細書において使用される際、「シグナル伝達ドメイン」という用語は、細胞内に情報を伝達して、第２のメッセンジャーを生成することによって、又はこのようなメッセンジャーに応答することによってエフェクターとして機能することによって定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節することによって作用するタンパク質の機能的部分を指す。
本発明のＣＡＲの細胞質シグナル伝達部分内の細胞質シグナル伝達配列は、ランダムな又は規定の順序で互いに連結され得る。任意に、例えば、２～１０アミノ酸長の短いオリゴ－又はポリペプチドリンカーが、連結を形成し得る。
本発明の別の態様は、本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒ標的化ＣＡＲをコードする核酸を提供する。核酸は、核酸を細胞に導入することによって、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）内でＣＡＲを発現するのに有用である。
例えば、コドン縮退表にしたがってコドンの１つ以上を変化させることによって、本発明の同等の又は改善された変異体を生成するために、修飾が、配列内で行われ得る。ＤＮＡコドン縮退表は、表３に示される。
特定の実施形態において、核酸は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ分子）である。特定の実施形態において、核酸は、ＣＡＲコード配列に動作可能に連結された発現制御配列（例えば、プロモーター及び／又はエンハンサー）をさらに含む。特定の実施形態において、本発明は、核酸を含むベクターを提供する。ベクターは、ウイルスベクター（例えば、ＡＡＶベクター、レンチウイルスベクター、又はアデノウイルスベクター）又は非ウイルスベクター（例えば、プラスミド）であり得る。
特定の実施形態において、核酸は、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）である。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡを生成するための方法が、特別に設計されたプライマーによる鋳型のインビトロ転写、続いて、ポリＡ付加により、３’及び５’非翻訳配列、５’キャップ及び／又は内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、発現される核酸、及び典型的に５０～２０００塩基長のポリＡテールを含有するＲＮＡ構築物を生成することを含み得る。例えば、米国特許第８，２７８，０３６号明細書；同第８，８８３，５０６号明細書、及び同第８，７１６，４６５号明細書に開示されるように、ＲＮＡ分子は、翻訳効率及び／又は安定性を増加させるためにさらに修飾され得る。このように生成されたＲＮＡ分子は、様々な種類の細胞を効率的にトランスフェクトし得る。
一実施形態において、核酸は、ＣＡＲのアミノ末端においてシグナルペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。このようなシグナルペプチドは、それがエフェクター細胞内で発現されるとき、ＣＡＲの細胞表面局在化を促進し得、細胞プロセシング中にＣＡＲから切断される。一実施形態において、核酸は、細胞外ＢＡＦＦ－Ｒ結合ドメイン（例えば、ＢＡＦＦ－Ｒ結合ｓｃＦｖドメイン）のＮ末端においてシグナルペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。
ＲＮＡ又はＤＮＡは、いくつかの様々な方法のいずれか、例えば、限定はされないが、エレクトロポレーション、リポフェクションを用いたカチオン性リポソーム媒介性トランスフェクション、ポリマー封入、ペプチド媒介性トランスフェクション、又は「遺伝子銃」などのバイオリスティック粒子送達システムを含む商業用の方法を用いて、標的細胞内に導入され得る（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，１２（８）：８６１－７０（２００１）を参照）。
本発明の別の態様は、ＢＡＦＦ－Ｒ標的化ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を提供する。ＢＡＦＦ－Ｒ標的化ＣＡＲをコードする核酸を含む免疫エフェクター細胞も提供される。免疫エフェクター細胞としては、限定はされないが、Ｔ細胞及びＮＫ細胞が挙げられる。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、及びＮＫＴ細胞から選択される。Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、初代細胞又は細胞株であり得る。
免疫エフェクター細胞は、当該技術分野において公知の方法によって、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍を含むいくつかの供給源から得られる。免疫エフェクター細胞はまた、多能性又は多分化能細胞（例えば、造血幹細胞）からインビトロで分化され得る。ある実施形態において、本発明は、ＢＡＦＦ－Ｒ標的化ＣＡＲを発現する（例えば、細胞膜上でＣＡＲを発現する）又は本明細書に開示される核酸を含む多能性若しくは多分化能細胞（例えば、造血幹細胞）を提供する。
特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、単離及び／又は精製される。例えば、制御性Ｔ細胞は、ＣＤ２５結合リガンドを用いてＴ細胞集団から除去され得る。チェックポイントタンパク質（例えば、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、又はＴＩＭ－３）を発現するエフェクター細胞は、同様の方法によって除去され得る。特定の実施形態において、エフェクター細胞は、正の選択工程によって単離される。例えば、Ｔ細胞の集団は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８共役ビーズを用いたインキュベーションによって単離され得る。ＩＦＮ－７、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、グランザイムＢ、及びパーフォリンなどの他の細胞表面マーカーも、正の選択に使用され得る。
免疫エフェクター細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１；並びに米国特許出願公開第２００６／０１２１００５号明細書及び同第２０１６／０３４０４０６号明細書に記載されるように、一般に、当該技術分野において公知の方法を用いて、活性化及び増殖され得る。例えば、特定の実施形態において、Ｔ細胞は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体との接触によって、増殖及び／又は活性化され得る。細胞は、数時間（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、１８、２１数時間）から約１４日間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４日間）の期間にわたって培養液中で増殖され得る。一実施形態において、細胞は、４～９日間の期間にわたって増殖される。複数サイクルの刺激が、長期の細胞培養（例えば、６０日間以上の期間にわたる培養）に望ましい場合がある。特定の実施形態において、細胞培養物は、血清（例えば、ウシ胎児又はヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ、ＴＮＦ－α、又はそれらの組合せを含む。当業者に公知の、細胞の増殖のための他の添加剤、例えば、界面活性剤、プラスマネート（ｐｌａｓｍａｎａｔｅ）、並びにＮ－アセチル－システイン及び２－メルカプトエタノールなどの還元剤も、細胞培養物に含まれ得る。特定の実施形態において、本発明の免疫エフェクター細胞は、インビトロ増殖から得られる細胞である。
ＢＡＦＦ－Ｒ標的化ＣＡＲ（例えば、調節可能なＣＡＲ）、ＣＡＲをコードする核酸、及びＣＡＲを発現するか又は核酸を含むエフェクター細胞のさらなる実施形態が、米国特許第７，４４６，１９０号明細書及び同第９，１８１，５２７号明細書、米国特許出願公開第２０１６／０３４０４０６号明細書及び同第２０１７／００４９８１９号明細書、並びに国際特許出願公開番号国際公開第２０１８／１４０７２５号パンフレットに示される。
ＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー
特定の実施形態において、本発明は、本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位を含むＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを提供する。特定の実施形態において、ＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、配列番号４４及び４５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、サイトカインは、直接又はリンカーを介してＦｃドメインに結合される。
特定の実施形態において、ＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ３に結合する抗原結合部位をさらに含む。ＣＤ３に結合する例示的な抗原結合部位が、国際特許出願公開番号国際公開第２０１４／０５１４３３号パンフレット及び国際公開第２０１７／０９７７２３号パンフレットに開示される。
本発明の別の態様は、ＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸を提供し、ここで、ポリペプチドは、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位を含む。特定の実施形態において、核酸は、発現されるとき、ＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーのポリペプチドの１つ以上のＮ末端にある、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む。核酸、核酸又はベクターを含む産生細胞、及びＢＡＦＦ－Ｒ／ＣＤ３指向性二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを発現する産生細胞を含むベクター（例えば、ウイルスベクター）も提供される。
免疫サイトカイン
特定の実施形態において、本発明は、本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位及びサイトカインを含む免疫サイトカインを提供する。限定はされないが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＮＦ、ＩＦＮα、ＩＦＮγ、及びＧＭ－ＣＳＦを含む、当該技術分野において公知の任意のサイトカイン（例えば、炎症性サイトカイン）が使用され得る。さらなる例示的なサイトカインが、米国特許第９，５６７，３９９号明細書に開示される。特定の実施形態において、抗原結合部位は、化学的結合（例えば、共有又は非共有化学的結合）によってサイトカインに結合される。特定の実施形態において、抗原結合部位は、ポリペプチドの融合によってサイトカインに結合される。免疫サイトカインは、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位に結合されるＦｃドメインをさらに含み得る。特定の実施形態において、免疫サイトカインは、配列番号４４及び４５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、サイトカインは、直接又はリンカーを介してＦｃドメインに結合される。
本発明の別の態様は、免疫サイトカインの少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸を提供し、ここで、ポリペプチドは、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位を含む。特定の実施形態において、核酸は、発現されるとき、免疫サイトカインのポリペプチドの１つ以上のＮ末端にある、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む。核酸、核酸又はベクターを含む産生細胞、及び免疫サイトカインを発現する産生細胞を含むベクター（例えば、ウイルスベクター）も提供される。
抗体－薬物コンジュゲート
特定の実施形態において、本発明は、本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位及び細胞傷害性薬物部分を含む抗体－薬物コンジュゲートを提供する。例示的な細胞傷害性薬物部分は、国際特許出願公開番号国際公開第２０１４／１６０１６０号パンフレット及び国際公開第２０１５／１４３３８２号パンフレットに開示される。特定の実施形態において、細胞傷害性薬物部分は、アウリスタチン、Ｎ－アセチル－γカリケアミシン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、及びＳＮ－３８から選択される。抗原結合部位は、化学的結合（例えば、共有又は非共有化学的結合）によって細胞傷害性薬物部分に結合され得る。特定の実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位に結合されるＦｃドメインをさらに含む。特定の実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号４４及び４５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、細胞傷害性薬物部分は、直接又はリンカーを介してＦｃドメインに結合される。
免疫毒素
特定の実施形態において、本発明は、本明細書に開示されるＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位及び細胞傷害性ペプチド部分を含む免疫毒素を提供する。限定はされないが、リシン、ジフテリア（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）毒素、及びシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素Ａを含む、当該技術分野において公知の任意の細胞傷害性ペプチド部分が使用され得る。さらなる例示的な細胞傷害性ペプチドが、国際特許出願公開番号国際公開第２０１２／１５４５３０号パンフレット及び国際公開第２０１４／１６４６８０号パンフレットに開示される。特定の実施形態において、細胞傷害性ペプチド部分は、化学的結合（例えば、共有又は非共有化学的結合）によってタンパク質に結合される。特定の実施形態において、細胞傷害性ペプチド部分は、ポリペプチドの融合によってタンパク質に結合される。免疫毒素は、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位に結合されるＦｃドメインをさらに含み得る。特定の実施形態において、免疫毒素は、配列番号４４及び４５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、細胞傷害性ペプチド部分は、直接又はリンカーを介してＦｃドメインに結合される。
本発明の別の態様は、免疫毒素の少なくとも１つのポリペプチドをコードする核酸を提供し、ここで、ポリペプチドは、ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位を含む。特定の実施形態において、核酸は、発現されるとき、免疫毒素のポリペプチドの１つ以上のＮ末端にある、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む。核酸を含むベクター（例えば、ウイルスベクター）、核酸又はベクターを含む産生細胞、及び免疫毒素を発現する産生細胞も提供される。
ＩＩ．治療用組成物及びそれらの使用
本発明は、本明細書に開示される抗原結合部位を含むタンパク質、コンジュゲート、若しくは細胞及び／又は本明細書に記載される医薬組成物を用いて癌又は自己免疫疾患を治療するための方法を提供する。本方法は、それを必要とする患者に、治療有効量の、本明細書に開示される抗原結合部位を含むタンパク質、コンジュゲート、又は細胞を投与することによって、ＢＡＦＦ－Ｒを発現する様々な癌を治療するのに使用され得る。
治療方法は、治療対象の癌に応じて特徴づけることができる。治療対象の癌は、癌細胞の表面上に発現される特定抗原、例えばＢＡＦＦ－Ｒの存在に応じて特徴づけることができる。
ＢＡＦＦ－Ｒの発現によって特徴づけられる癌は、限定はされないが、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ－ＮＨＬ）、例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）；及び自己免疫性炎症性疾患を含む。
本開示において記載されるタンパク質、コンジュゲート、細胞、及び／又は医薬組成物を使用して、癌細胞又は癌微小環境内の細胞がＢＡＦＦ－Ｒを発現する場合の癌に限定されない、種々の癌を治療できることが企図される。
特定の実施形態において、癌は、固形腫瘍である。特定の他の実施形態において、癌は、脳腫瘍、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、白血病、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、腎臓癌、胃癌、精巣癌、又は子宮癌である。さらに他の実施形態において、癌は、血管新生腫瘍、扁平上皮細胞癌、腺癌、小細胞癌、黒色腫、神経膠腫、神経芽細胞腫、肉腫（例えば、血管肉腫又は軟骨肉腫）、喉頭癌、耳下腺癌、胆道癌、甲状腺癌、末端性黒子性黒色腫、日光角化症、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、腺様嚢胞癌、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮癌、肛門管癌、肛門癌、肛門直腸癌、星細胞系腫瘍、バルトリン腺癌、基底細胞癌、胆道癌、骨肉腫、骨髄癌、気管支癌、気管支腺癌、カルチノイド、胆管癌、軟骨肉腫、脈絡叢乳頭腫／癌腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、明細胞癌、結合組織癌、嚢胞腺腫、消化器系癌、十二指腸癌、内分泌系癌、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜増殖症、子宮内膜間質肉腫、類内膜腺癌、内皮細胞癌、上衣癌、上皮細胞癌、ユーイング肉腫、眼及び眼窩の癌、女性生殖器癌、限局性結節性過形成、胆嚢癌、胃前庭部癌、胃底部癌、ガストリノーマ、膠芽細胞腫、グルカゴノーマ、心臓癌、血管芽腫、血管内皮腫、血管腫、肝腺腫、肝腺腫症、肝胆道癌、肝細胞癌、ホジキン病、回腸癌、インスリノーマ、上皮内新生物、上皮間（ｉｎｔｅｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ）扁平上皮新生物、肝内胆管癌、浸潤性扁平上皮細胞癌、空腸癌、関節癌、カポジ肉腫、骨盤癌、大細胞癌、大腸癌、平滑筋肉腫、悪性黒子黒色腫、リンパ腫、男性生殖器癌、悪性黒色腫、悪性中皮腫、髄芽腫、髄様上皮腫、髄膜癌、中皮癌、転移性癌、口腔（ｍｏｕｔｈ）癌、粘表皮癌、多発性骨髄腫、筋肉癌、鼻道癌、神経系癌、神経上皮腺癌、結節型黒色腫、非上皮皮膚癌、非ホジキンリンパ腫、燕麦細胞癌、乏突起膠癌、口腔（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ）癌、骨肉腫、乳頭状漿液性腺癌、陰茎癌、咽頭癌、下垂体部腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、肺芽腫、直腸癌、腎細胞癌、呼吸器系癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性癌、副鼻腔癌、皮膚癌、小細胞癌、小腸癌、平滑筋癌、軟組織癌、ソマトスタチン分泌腫瘍、脊椎癌、扁平上皮細胞癌、横紋筋癌、中皮下（ｓｕｂｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌ）癌、表在拡大型黒色腫、Ｔ細胞白血病、舌癌、未分化癌、尿管癌、尿道癌、膀胱癌、泌尿器系癌、子宮頸部癌、子宮体癌、ブドウ膜黒色腫、膣癌、疣贅性癌、ビポーマ、外陰癌、高分化癌、又はウィルムス腫瘍である。
特定の実施形態において、癌は、血液悪性腫瘍である。特定の実施形態において、血液悪性腫瘍は、白血病である。特定の実施形態において、白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、骨髄形成異常、骨髄異形成症候群、急性Ｔリンパ芽球性白血病、又は急性前骨髄球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、又は慢性骨髄性白血病の骨髄芽球危機からなる群から選択される。
ある実施形態において、本出願は、本明細書に記載のタンパク質及び／又は本明細書に記載の医薬組成物を使用して自己免疫性炎症性疾患を治療するための方法を提供する。本方法を使用して、限定はされないが、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、橋本甲状腺炎、関節リウマチ、炎症性腸疾患、Ｉ型糖尿病、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、乾癬、重症筋無力症、及び血管炎を含む、種々のＢＡＦＦ－Ｒを発現するＢ細胞に関連する自己免疫性炎症性疾患を治療することができる。
ＩＩＩ．医薬組成物
本出願の別の態様は、組み合わせ療法を提供する。本明細書に記載のタンパク質を追加治療薬と組み合わせて使用して、自己免疫疾患を治療するか又は癌を治療することができる。
自己免疫性炎症性疾患の治療における組み合わせ療法の一部として使用することができる例示的な治療薬は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，８：４６０に記載されており、例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、シクロオキシゲナーゼ－２阻害剤）、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾン／プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、並びにデキサメタゾン及びベタメタゾンなどのフッ素化グルココルチコイド）、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）（例えば、メトトレキサート、レフルノミド、金化合物、スルファサラジン、アザチオプリン、シクロホスファミド、抗マラリア剤、Ｄ－ペニシラミン、及びシクロスポリン）、抗ＴＮＦ生物製剤（例えば、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブペゴル、及びそれらのバイオシミラー）、並びにＣＴＬＡ－４を標的化する他の生物製剤（例えば、アバタセプト）、ＩＬ－６受容体（例えば、トシリズマブ）、ＩＬ－１（例えば、アナキンラ）、Ｔｈ１免疫応答（ＩＬ－１２／ＩＬ－２３）（例えば、ウステキヌマブ）、Ｔｈ１７免疫応答（ＩＬ－１７）（例えば、セクキヌマブ）及びＣＤ２０（例えば、リツキシマブ）を含む。
癌を治療する際に組合せ療法の一環として使用され得る例示的な治療剤としては、例えば、放射線、マイトマイシン、トレチノイン、リボムスチン、ゲムシタビン、ビンクリスチン、エトポシド、クラドリビン、ミトブロニトール、メトトレキサート、ドキソルビシン、カルボクオン、ペントスタチン、ニトラクリン、ジノスタチン、セトロレリクス、レトロゾール、ラルチトレキセド、ダウノルビシン、ファドロゾール、フォテムスチン、チマルファシン、ソブゾキサン、ネダプラチン、シタラビン、ビカルタミド、ビノレルビン、ベスナリノン、アミノグルテチミド、アムサクリン、プログルミド、エリプチニウム酢酸塩、ケタンセリン、ドキシフルリジン、エトレチナート、イソトレチノイン、ストレプトゾシン、ニムスチン、ビンデシン、フルタミド、ドロゲニル、ブトシン、カルモフール、ラゾキサン、シゾフィラン、カルボプラチン、ミトラクトール、テガフール、イホスファミド、プレドニムスチン、ピシバニール、レバミゾール、テニポシド、インプロスルファン、エノシタビン、リスリド、オキシメトロン、タモキシフェン、プロゲステロン、メピチオスタン、エピチオスタノール、ホルメスタン、インターフェロン－α、インターフェロン－２α、インターフェロン－β、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、コロニー刺激因子－１、コロニー刺激因子－２、デニロイキンジフチトクス、インターロイキン－２、黄体形成ホルモン放出因子、並びにその同種受容体に対する異なる結合、又は増加若しくは減少した血清半減期を示し得る上記の薬剤の変形が挙げられる。
癌を治療する際に組合せ療法の一環として使用され得るさらなるクラスの薬剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、（ｉ）細胞傷害性Ｔ－リンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）、（ｉｉ）プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、（ｉｉｉ）ＰＤＬ１、（ｉｖ）ＬＡＧ３、（ｖ）Ｂ７－Ｈ３、（ｖｉ）Ｂ７－Ｈ４、及び（ｖｉｉ）ＴＩＭ３のうちの１つ以上を阻害する薬剤が挙げられる。ＣＴＬＡ４阻害剤イピリムマブは、黒色腫の治療について米国食品医薬品局（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認されている。
癌を治療する際に組合せ療法の一環として使用され得るさらに他の薬剤は、非チェックポイント標的を標的とするモノクローナル抗体薬剤（例えば、ハーセプチン）及び非細胞傷害性薬（例えば、チロシン－キナーゼ阻害剤）である。
抗癌剤のさらに他のカテゴリーは、例えば：（ｉ）ＡＬＫ阻害剤、ＡＴＲ阻害剤、Ａ２Ａアンタゴニスト、塩基除去修復阻害剤、Ｂｃｒ－Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤、ＣＤＣ７阻害剤、ＣＨＫ１阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤、ＤＮＡ－ＰＫ及びｍＴＯＲの両方の阻害剤、ＤＮＭＴ１阻害剤、ＤＮＭＴ１阻害剤プラス２－クロロ－デオキシアデノシン、ＨＤＡＣ阻害剤、ヘッジホッグシグナル伝達経路阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＭＥＬＫ阻害剤、ＭＴＨ１阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ホスホイノシタイド３－キナーゼ阻害剤、ＰＡＲＰ１及びＤＨＯＤＨの両方の阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ－ＩＩ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、及びＷＥＥ１阻害剤から選択される阻害剤；（ｉｉ）ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＴＮＦＲＳＦ２５、又はＩＣＯＳのアゴニスト；並びに（ｉｉｉ）ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＧ－ＣＳＦから選択されるサイトカインを含む。
本開示のタンパク質はまた、原発病変の外科的除去の補助として使用され得る。
タンパク質及びさらなる治療剤の量並びに投与の相対的タイミングは、所望の組合せ治療効果を達成するために選択され得る。例えば、組合せ療法を、このような投与を必要とする患者に投与する場合、組合せにおける治療剤、又は治療剤を含む１つ若しくは複数の医薬組成物が、例えば、連続して、並行して、一緒に、同時になど、任意の順序で投与され得る。さらに、例えば、タンパク質は、さらなる治療剤が、その予防又は治療効果を及ぼすときに投与され得、又は逆もまた同様である。
ＩＶ．医薬組成物
本開示はまた、治療有効量の、本明細書に記載されるタンパク質を含有する医薬組成物を特徴とする。組成物は、様々な薬物送達システムにおいて使用するために製剤化され得る。１つ以上の生理学的に許容される賦形剤又は担体も、適切な製剤のために組成物に含まれ得る。本開示に使用するのに好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，１７ｔｈ ｅｄ．，１９８５に見出される。薬物送達のための方法の簡潔な概説については、例えば、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３，１９９０）を参照されたい。
一態様において、本開示は、本明細書に記載されるＢＡＦＦ－Ｒ結合部位を含有するタンパク質、及び薬学的に許容される担体の製剤を提供する。
特定の実施形態において、医薬組成物は、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。特定の実施形態において、製剤は、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、及び配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する抗原結合部位を含むタンパク質を含む。
組成物は、様々な薬物送達システムにおいて使用するために製剤化され得る。１つ以上の生理学的に許容される賦形剤又は担体は、適切な製剤のために組成物に含まれ得る。本開示に使用するのに好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，１７ｔｈ ｅｄ．，１９８５に見出される。薬物送達のための方法の簡潔な概説については、例えば、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３，１９９０）を参照されたい。
例えば、本開示は、製剤を形成する緩衝液中に治療有効量のタンパク質を含む水性医薬製剤において存在し得る。水性担体は、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩溶液、リンゲル液又はデキストロース溶液を含み得る。特定の実施形態において、ｐＨ緩衝液中に本明細書に開示されるタンパク質を含む水性製剤が調製される。製剤のｐＨは、典型的に、３～１１、より好ましくは、５～９又は６～８、最も好ましくは、７～８、例えば、７～７．５であろう。上に記載されるｐＨの中間の範囲も、本開示の一部であることが意図される。例えば、上限及び／又は下限として上に記載される値のいずれかの組合せを用いた値の範囲が、含まれることが意図される。ｐＨをこの範囲内に制御する緩衝液の例としては、アセテート（例えば、酢酸ナトリウム）、スクシネート（コハク酸ナトリウムなど）、グルコネート、ヒスチジン、シトレート及び他の有機酸緩衝液が挙げられる。特定の実施形態において、緩衝系は、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、及び／又はリン酸二水素ナトリウム二水和物を含む。特定の実施形態において、緩衝系は、約１．３ｍｇ／ｍＬのクエン酸（例えば、１．３０５ｍｇ／ｍＬ）、約０．３ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム（例えば、０．３０５ｍｇ／ｍＬ）、約１．５ｍｇ／ｍＬのリン酸二ナトリウム二水和物（例えば１．５３ｍｇ／ｍＬ）、約０．９ｍｇ／ｍＬのリン酸二水素ナトリウム二水和物（例えば、０．８６）、及び約６．２ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム（例えば、６．１６５ｍｇ／ｍＬ）を含む。特定の実施形態において、緩衝系は、１～１．５ｍｇ／ｍＬのクエン酸、０．２５～０．５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム、１．２５～１．７５ｍｇ／ｍｌのリン酸二ナトリウム二水和物、０．７～１．１ｍｇ／ｍＬのリン酸二水素ナトリウム二水和物、及び６．０～６．４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを含む。液体製剤のｐＨは、薬学的に許容される酸及び／又は塩基の添加によって設定され得る。特定の実施形態において、薬学的に許容される酸は、塩酸であり得る。特定の実施形態において、塩基は、水酸化ナトリウムであり得る。
ある実施形態において、製剤は、薬学的に許容され（ヒトへの投与のために安全及び非毒性である）、液体製剤の調製のために有用である水性担体を含む。例示的な担体としては、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩溶液、リンゲル液又はデキストロース溶液が挙げられる。
等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）として作用し、抗体を安定させ得るポリオールも、製剤に含まれ得る。ポリオールは、製剤の所望の等張性に関して変化し得る量で製剤に加えられる。特定の実施形態において、水性製剤は、等張であり得る。加えられるポリオールの量も、ポリオールの分子量に関して改変され得る。例えば、二糖（トレハロースなど）と比較してより少ない量の単糖（例えば、マンニトール）が加えられ得る。特定の実施形態において、等張化剤として製剤において使用され得るポリオールは、マンニトールである。特定の実施形態において、マンニトール濃度は、約５～約２０ｍｇ／ｍＬであり得る。特定の実施形態において、マンニトールの濃度は、約７．５～約１５ｍｇ／ｍＬであり得る。特定の実施形態において、マンニトールの濃度は、約１０～約１４ｍｇ／ｍＬであり得る。特定の実施形態において、マンニトールの濃度は、約１２ｍｇ／ｍＬであり得る。特定の実施形態において、ポリオールソルビトールが、製剤に含まれ得る。
洗浄剤又は界面活性剤も、製剤に加えられ得る。例示的な洗浄剤としては、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、８０など）又はポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）などの非イオン性洗浄剤が挙げられる。加えられる洗浄剤の量は、それが、製剤化される抗体の凝集を減少させ、及び／又は製剤中の粒子状物質の形成を最小限に抑え、及び／又は吸着を減少させるような量である。特定の実施形態において、製剤は、ポリソルベートである界面活性剤を含み得る。特定の実施形態において、製剤は、洗浄剤ポリソルベート８０又はＴｗｅｅｎ ８０を含有し得る。Ｔｗｅｅｎ ８０は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートを表すのに使用される用語である（Ｆｉｅｄｌｅｒ，Ｌｅｘｉｋｏｎ ｄｅｒ Ｈｉｆｓｓｔｏｆｆｅ，Ｅｄｉｔｉｏ Ｃａｎｔｏｒ Ｖｅｒｌａｇ Ａｕｌｅｎｄｏｒｆ，４ｔｈ ｅｄｉ．，１９９６を参照）。特定の実施形態において、製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、又は約０．５ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬを含有し得る。特定の実施形態において、約０．１％のポリソルベート８０が、製剤に加えられ得る。
特定の実施形態において、本開示の液体製剤は、安定させるレベルで糖と組み合わせて１０ｍｇ／ｍＬの濃度の溶液として調製され得る。特定の実施形態において、液体製剤は、水性担体中で調製され得る。特定の実施形態において、安定剤が、静脈内投与に望ましくない又は適していない粘度をもたらし得る量以下の量で加えられ得る。特定の実施形態において、糖は、二糖、例えば、スクロースであり得る。特定の実施形態において、液体製剤は、緩衝剤、界面活性剤、及び細菌作用を低下させるために本明細書において製剤に加えられる防腐剤のうちの１つ以上も含み得る。防腐剤の添加は、例えば、複数回使用（複数回投与）製剤の製造を促進し得る。
ある実施形態において、本開示は、マンニトール、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、水、及び水酸化ナトリウムと組み合わせて、本開示のタンパク質を含む、長期の貯蔵寿命を有する製剤を提供する。
脱アミド化は、発酵、収集／細胞清澄化、精製、製剤原料／薬物製品貯蔵中、及び試料分析中に生じ得るペプチド及びタンパク質の一般的な生成物変異である。脱アミド化は、加水分解を起こし得るスクシンイミド中間体を形成するタンパク質からのＮＨ３の喪失である。スクシンイミド中間体は、親ペプチドの１７ダルトン質量減少をもたらす。その後の加水分解は、１８ダルトン質量増加をもたらす。スクシンイミド中間体の単離は、水性条件下での不安定性のため難しい。したがって、脱アミド化は、典型的に、１ダルトン質量増加として検出可能である。アスパラギンの脱アミド化は、アスパラギン酸又はイソアスパラギン酸のいずれかをもたらす。脱アミド化の速度に影響を与えるパラメータは、ｐＨ、温度、溶媒誘電率、イオン強度、一次配列、局所的なポリペプチド構造及び三次構造を含む。ペプチド鎖中のＡｓｎに隣接するアミノ酸残基は、脱アミド化速度に影響を与える。タンパク質配列中のＡｓｎの後のＧｌｙ及びＳｅｒは、脱アミド化に対するより高い感受性をもたらす。特定の実施形態において、本開示の液体製剤は、タンパク質産物の脱アミノ化を防ぐｐＨ及び湿度の条件下で保存され得る。
ある実施形態において、製剤は、凍結乾燥製剤である。特定の実施形態において、製剤は、フリーズドライ（凍結乾燥）され、約１２～６０個のバイアルに含まれる。特定の実施形態において、製剤は、凍結乾燥され、４５ｍｇのフリーズドライ製剤が、１つのバイアルに含まれ得る。特定の実施形態において、約４０ｍｇ～約１００ｍｇのフリーズドライ製剤が、１つのバイアルに含まれる。特定の実施形態において、１２、２７、又は４５個のバイアルフリーズドライ製剤が組み合わされて、静脈内薬物製剤中の治療用量のタンパク質が得られる。製剤は、液体製剤であり得る。ある実施形態において、液体製剤は、約２５０ｍｇ／バイアルから約１０００ｍｇ／バイアルとして貯蔵される。特定の実施形態において、液体製剤は、約６００ｍｇ／バイアルとして貯蔵される。特定の実施形態において、液体製剤は、約２５０ｍｇ／バイアルとして貯蔵される。
ある実施形態において、凍結乾燥製剤は、本明細書に記載されるタンパク質及び凍結乾燥保護剤を含む。凍結乾燥保護剤は、糖、例えば、二糖であり得る。特定の実施形態において、凍結乾燥保護剤は、スクロース又はマルトースであり得る。凍結乾燥製剤は、緩衝剤、界面活性剤、増量剤、及び／又は防腐剤のうちの１つ以上も含み得る。凍結乾燥薬物製品の安定化に有用なスクロース又はマルトースの量は、少なくとも１：２のタンパク質対スクロース又はマルトースの重量比であり得る。特定の実施形態において、タンパク質対スクロース又はマルトースの重量比は、１：２～１：５であり得る。
特定の実施形態において、製剤のｐＨは、凍結乾燥の前に、薬学的に許容される酸及び／又は塩基の添加によって設定され得る。特定の実施形態において、薬学的に許容される酸は、塩酸であり得る。特定の実施形態において、薬学的に許容される塩基は、水酸化ナトリウムであり得る。凍結乾燥の前に、本開示のタンパク質を含有する溶液のｐＨは、６～８で調整され得る。特定の実施形態において、凍結乾燥薬物製品のｐＨ範囲は、７～８であり得る。
特定の実施形態において、「増量剤」が、加えられ得る。「増量剤」は、凍結乾燥混合物に質量を追加し、凍結乾燥ケーキの物理的構造に寄与する（例えば、開放孔構造を維持する実質的に均一な凍結乾燥ケーキの生成を促進する）化合物である。例示的な増量剤としては、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコール及びソルビトールが挙げられる。本開示の凍結乾燥製剤は、このような増量剤を含有し得る。
特定の実施形態において、凍結乾燥タンパク質製品は、水性担体とともに構成される。本明細書における対象とする水性担体は、薬学的に許容され（例えば、ヒトへの投与のために安全及び非毒性である）、凍結乾燥の後、液体製剤の調製に有用であるものである。例示的な希釈剤としては、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩溶液、リンゲル液又はデキストロース溶液が挙げられる。特定の実施形態において、本開示の凍結乾燥薬物製品は、注射用滅菌水、ＵＳＰ（ＳＷＦＩ）又は０．９％の塩化ナトリウム注射液、ＵＳＰのいずれかで再構成される。再構成中、凍結乾燥粉末は、溶液へと溶解する。特定の実施形態において、本開示の凍結乾燥タンパク質製品は、約４．５ｍＬの注射用水へと構成され、０．９％の生理食塩溶液（塩化ナトリウム溶液）で希釈される。
タンパク質組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌され得、又は滅菌ろ過され得る。得られた水溶液は、そのまま、又は凍結乾燥されて、使用のために包装され得、凍結乾燥製剤は、投与の前に、滅菌水性担体と組み合わされる。固体形態の得られた組成物は、複数の単回用量ユニット中に包装され得、それぞれ、一定量の上記の１つ又は複数の薬剤を含有する。固体形態の組成物はまた、フレキシブルな量のために容器中に包装され得る。
本開示の医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者に毒性であることなく、特定の患者、組成、及び投与方法のための所望の治療反応を達成するのに有効な有効成分の量を得るように変化され得る。
特定の用量は、各患者について均一な用量、例えば、５０～５０００ｍｇのタンパク質であり得る。或いは、患者の用量は、患者のおよその体重又は表面積に合わせて調整され得る。適切な投与量を決定する際の他の要因は、治療若しくは予防される疾患若しくは病態、疾患の重症度、投与経路、並びに患者の年齢、性別及び医学的状態を含み得る。治療のための適切な投与量を決定するのに必要な計算のさらなる精密化は、特に、本明細書に開示される投与量情報及びアッセイを考慮して、当業者によって日常的に行われる。投与量はまた、適切な用量反応データとともに使用される投与量を決定するための公知のアッセイの使用によって決定され得る。個々の患者の投与量は、疾患の経過が監視されるにつれて調整され得る。患者における標的化可能な構築物又は複合体の血中濃度は、投与量が有効濃度に到達するか又はそれを維持するように調整される必要があるかどうかを調べるために測定され得る。薬理ゲノミクスを用いて、どの標的化可能な構築物及び／又は複合体、並びにその投与量が、所与の個体にとって有効である可能性が最も高いかを決定し得る（Ｓｃｈｍｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａ．Ｃｈｉｍｉｃａ．Ａｃｔａ．３０８：４３－５３，２００１；Ｓｔｅｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａ．Ｃｈｉｍｉｃａ．Ａｃｔａ．３０８：３３－４１，２００１）。
一般に、体重に基づく投与量は、約０．０１μｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約０．０１μｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１μｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１μｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１μｇ～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１μｇ～約１００μｇ／ｋｇ体重、約０．０１μｇ～約５０μｇ／ｋｇ体重、約０．０１μｇ～約１０μｇ／ｋｇ体重、約０．０１μｇ～約１μｇ／ｋｇ体重、約０．０１μｇ～約０．１μｇ／ｋｇ体重、約０．１μｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１μｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１μｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１μｇ～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１μｇ～約１００μｇ／ｋｇ体重、約０．１μｇ～約１０μｇ／ｋｇ体重、約０．１μｇ～約１μｇ／ｋｇ体重、約１μｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１μｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約１μｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１μｇ～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１μｇ～約１００μｇ／ｋｇ体重、約１μｇ～約５０μｇ／ｋｇ体重、約１μｇ～約１０μｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ～約１００μｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ～約５０μｇ／ｋｇ体重、約５０μｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約５０μｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約５０μｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約５０μｇ～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約５０μｇ～約１００μｇ／ｋｇ体重、約１００μｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１００μｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００μｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００μｇ～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約５０ｍｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。用量は、１日に、週に、月に又は年に１回以上、或いは２～２０年に１回与えられ得る。当業者は、体液又は組織中の標的化可能な構築物又は複合体の測定された滞留時間及び濃度に基づいて、投与の反復率を容易に推定することができる。本開示の投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、髄腔内、腔内、カテーテルを通したかん流によって又は直接病巣内注射によって行われ得る。これは、１日１回以上、週に１回以上、月に１回以上、及び年に１回以上投与され得る。
上記の説明は、本開示の複数の態様及び実施形態を説明する。本出願は、態様及び実施形態の全ての組合せ及び置換を特に想定している。
本明細書全体を通して、組成物が、特定の成分を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、若しくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載される場合、又はプロセス及び方法が、特定の工程を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、若しくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載される場合、さらに、記載される成分から本質的になる、又はそれからなる、本開示の組成物があること、並びに記載される処理工程から本質的になる、又はそれからなる本開示に係るプロセス及び方法があることが考えられる。
本出願において、要素又は成分が、含まれるか、及び／又は記載される要素若しくは成分のリストから選択されると記載される場合、要素又は成分は、記載される要素若しくは成分のいずれか１つであり得るか、又は要素又は成分は、記載される要素又は成分の２つ以上からなる群から選択され得ることが理解されるべきである。
さらに、本明細書に記載される組成物又は方法の要素及び／又は特徴が、本明細書において明示されているか又は黙示されているかにかかわらず、本開示の趣旨及び範囲から逸脱せずに、様々な方法で組み合わされ得ることが理解されるべきである。例えば、特定の化合物が言及される場合、その化合物は、文脈から他の形で理解されない限り、本開示の組成物の様々な実施形態において、及び／又は本開示の方法において使用され得る。言い換えると、本出願内で、実施形態は、明白な及び簡潔な出願が記載され、描かれるのを可能にするように記載され、示されているが、その実施形態が、本発明の教示及び開示から逸脱せずに、様々に組み合わされるか又は分離され得ることが意図され、理解されるであろう。例えば、本明細書に記載され、示される全ての特徴が、本明細書に記載され、示される本開示の全ての態様に適用可能であり得ることが理解されるであろう。
「の少なくとも１つ」という表現が、文脈及び使用から他の形で理解されない限り、その表現の後の記載される対象物のそれぞれを個々に、及び記載される対象物の２つ以上の様々な組合せを含むことが理解されるべきである。３つ以上の記載される対象物に関連する「及び／又は」という表現は、文脈から他の形で理解されない限り、同じ意味を有することが理解されるべきである。
「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という用語（それらの文法的な同等語を含む）の使用は、特に記載されない限り、又は文脈から他の形で理解されない限り、一般に、オープンエンドであり、非限定的であり、例えば、記載されていないさらなる要素又は工程を除外しないことが理解されるべきである。
「約」という用語の使用が、定量的な値の前にある場合、本開示は、特に記載されない限り、特定の定量的な値自体も含む。本明細書において使用される際、「約」という用語は、特に示されるか又は示唆されない限り、公称値からの±１０％の変動を指す。
本開示が動作可能なままである限り、工程の順序又は特定の動作を行う順序は、重要でないことが理解されるべきである。さらに、２つ以上の工程又は動作が、同時に行われ得る。
例えば「など」又は「を含む」のありとあらゆる例、又は本明細書中の例示的用語の使用は、あくまで本開示をより十分に例示することが意図され、主張されない限り、本開示の範囲に対する制限を設けない。本明細書中の用語のいずれも、本開示の実施に必須なものとして任意の主張されない要素を示すように解釈されるべきでない。
ここで一般に説明されている本開示は、あくまで本開示の特定の態様及び実施形態の例示を目的として含まれ、本開示の範囲を限定することが決して意図されない、以下の実施例を参照することによって、より容易に理解されるであろう。
実施例１．ＢＡＦＦ－Ｒ結合ｍＡｂの作製及び特徴づけ
本実施例は、ＢＡＦＦ－Ｒのバインダーを同定するために実施された２つの抗体の発見キャンペーンについて記載する。酵母ディスプレイ技術、複数ラウンドの親和性成熟（注目のＣＤＲＨ３、及び注目のＣＤＲＨ１／ＣＤＲＨ２）、配列易障害性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉａｂｉｌｉｔｙ）の補正、オフレート圧力最適化及び部位特異的突然変異誘発を用いて、さらなる発現のために１つのバインダーを選択し、生物学的特性を改善した。これらの試験では、バインダーＡＢ１６１２／ＡＢ１４２４を、生物製剤候補にとって適切な特性を示し、さらに重要なことに、ＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ相互作用を阻害する能力を示すバインダーとして同定した（図１に示す）。
組換えタンパク質の免疫方法
ＢＡＦＦ－Ｒに特異的な抗体を、マウスの４つの異なる株（Ｈ２Ｌ２、ＮＺＢＷ、ＢＡＬＢ－Ｃ、及びＳＪＬ／Ｊ）をｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓ融合タンパク質で免疫することによって作製した。ハイブリドーマ融合のために、抗血清力価に基づき、４つの異なる株を通じて全部で７匹のマウスを選択した。免疫ライブラリー作成のために、各免疫アームからのマウスのサブセットからの脾細胞を貯蔵したが；酵母ディスプレイｍＡｂ発見のために、Ｈ２Ｌ２マウスからの脾細胞のみを使用した。
５つのマウス融合体（マウス２匹からの脾細胞をＨ２Ｌ２融合のためにプールし、マウス２匹からの脾細胞をＳＪＬ／Ｊ融合のためにプールした）から、ハイブリドーマ融合体につき１６の９６ウェルプレートを、特異性ＥＬＩＳＡによって分析し、ここでヒト及びカニクイザルＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓへの結合と無関係ｈＦｃ－Ｈｉｓタンパク質への結合とを比較した。さらなる分析のために、３３のＢＡＦＦ－Ｒ陽性の特異的なハイブリドーマからの上清を選択した。上清をＢＡＦＦ－Ｒ＋同質遺伝子ＣＨＯ細胞に対する結合について試験し、１６の陽性ハイブリドーマをさらにサブクローニングした。サブクローンからの上清を、上記のような特異性ＥＬＩＳＡによって分析し、２０のＢＡＦＦ－Ｒ陽性の特異的なサブクローンを、ＢＡＦＦ－Ｒ＋細胞に対する結合について試験した。９つのサブクローンｍＡｂは、ＢＡＦＦ－Ｒ＋細胞に対する強力な結合を示し、配列決定した。６つの特有の配列を得て、対応するｍＡｂを、それらのＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ相互作用を遮断する能力について、細胞ベースのアッセイにおいてさらに分析した。
ビオチン化ＢＡＦＦのＢＡＦＦ－Ｒ＋ＣＨＯ細胞への結合を、６つのＢＡＦＦ－Ｒに特異的なｍＡｂ又はアイソタイプ対照ｍＡｂの非存在下又は存在下で試験した。抗体の存在下での平均蛍光強度（ＭＦＩ）の低下は、ｍＡｂがＢＡＦＦのＢＡＦＦ－Ｒへの結合の会合を阻害する（それ故、遮断抗体と名付けた）ことを示唆した。試験した全てのクローンは、ＢＡＦＦのＢＡＦＦ－Ｒ＋細胞への結合を阻害せず、故に６つ全てを非遮断抗体と名付けた（図２）。
ＤＮＡ免疫方法
ＳＷＲ／Ｊマウスの２群のＤＮＡ免疫をそれぞれ実施した。一方の群を全長ヒトＢＡＦＦ－Ｒ ｃＤＮＡ構築物で免疫し、他方を全長ヒトＢＡＦＦ－Ｒ ｃＤＮＡ構築物とヒトＢＡＦＦ－Ｒ細胞外ドメインｃＤＮＡ構築物との混合物で免疫した。抗血清力価に基づき、マウスをプールし、その後、単一Ｂ細胞選別のために選択し、別のプールをハイブリドーマ融合のために使用した。
単一Ｂ細胞選別に注力したことで、４４のヒト及びカニクイザルの交差反応性クローンが得られた。これらのクローンを配列決定し、２９３細胞内で一過性発現させ、精製ｍＡｂの特異性を、ｈＢＡＦＦ－Ｒ＋、ｃｙｎｏＢＡＦＦ－Ｒ＋同質遺伝子ＣＨＯ細胞への結合と親細胞株への結合とを比較するフローサイトメトリーによって分析した。８つのバインダーを精製し、ＢＡＦＦ－Ｒに結合し、且つＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ相互作用を遮断するそれらの能力についてさらに分析した。８つ全てのクローンが、遮断しないことが判定され、ｈＢＡＦＦ－Ｒ＋癌細胞に対する弱い親和性が実証された。
伝統的なハイブリドーマ手法によって得られたクローンの特異性を、フローサイトメトリーによって分析した。以下の評価を実施した：ａ）全長ヒトＢＡＦＦ－Ｒ又はヒトＢＡＦＦ－Ｒ細胞外ドメインのいずれかを発現する細胞への結合を、非トランスフェクト親細胞への結合と比較した；ｂ）ｈＢＡＦＦ－Ｒ＋及びｃｙｎｏＢＡＦＦ－Ｒ＋同質遺伝子細胞への結合を、親細胞への結合と比較した；ｃ）ｈＢＡＦＦ－Ｒ＋癌細胞への結合。２５の陽性ハイブリドーマ融合体を同定し、結合強度に基づき、１４のハイブリドーマ融合体を配列決定した。５つの特有の配列を得て、ＢＡＦＦ－Ｒ＋細胞に結合し、且つＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ相互作用を遮断するそれらの能力について分析した。５つ全部のクローンが非遮断性のクローンであることが判定されたが（図３Ａ～３Ｄ）、５つのクローンの内の４つ（クローン３Ａ１、１Ｂ３－Ａ７、７Ｇ４及び１０Ｈ７－Ｃ５）がｈＢＡＦＦ－Ｒに対する良好な親和性を示した。
酵母ライブラリーから発見されたＢＡＦＦ－Ｒに特異的なｓｃＦｖ
酵母ディスプレイを使用して、上記のとおり、組換えヒトｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓタンパク質で免疫したヒト化Ｈ２Ｌ２マウスから得られた脾細胞からｓｃＦｖライブラリーを構築した。選択の３ラウンドを、５ｎＭのビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓを用いて実施した。個別の酵母コロニーを採取し、配列決定し、配列を分析した。ネガティブ選択を実施して、非特異的なバインダーを除去した。配列収束は、選択プロセスがバインダーの濃縮に成功し、それ故、完了することを示した。さらなる特徴づけのために、特有の配列を選択した。３つのＢＡＦＦ－Ｒに特異的なｓｃＦｖを１つのライブラリーから発見した（表４）。しかし、これらの配列は、互いに酷似し、それ故、さらなる試験のために、配列１１２９＿Ａ０１（ＡＢ０３６９ｓｃＦｖとも称される）のみを選択した。
フローサイトメトリーを使用して、ＡＢ０３６９ｓｃＦｖの、ｈＦｃタグ又はＧＳＴタグを有する一方で酵母上に提示される、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓ、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ＧＳＴ－Ｈｉｓ、並びに陰性対照タンパク質への結合の特異性を評価した。ＡＢ０３６９ｓｃＦｖは、ｈＢＡＦＦ－Ｒに対して中程度の～弱い親和性を示したが；陰性対照に対する結合を示さなかったことから、ＢＡＦＦ－Ｒに対する高い特異性が示唆された（図４Ａ～４Ｅ）。
１１２９＿Ａ０１（ＡＢ０３６９ｓｃＦｖ）を、ｓｃＦｖ、及び２つの非ＢＡＦＦ－Ｒバインダーを含む多特異的結合タンパク質に転化し、ＡＢ０３６９を得た。ＡＢ０３６９を、ヒト（ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ＣＨＯ）ＢＡＦＦ－Ｒ＋細胞（図５Ａ）及びカニクイザル（ｃＢＡＦＦ－Ｒ－ＣＨＯ）ＢＡＦＦ－Ｒ＋細胞（図５Ｂ）に結合し、多特異性試薬（ＰＳＲ）アッセイによると非特異的相互作用を欠き（図６Ａ、図６Ｂ）、ＢＡＦＦ－Ｒ＋Ｒａｍｏｓ癌細胞を溶解し（図７及び表５）、ＢＡＦＦ－ＢＡＦＦ－Ｒ相互作用を遮断する（図８）その能力についてさらに分析した。ＡＢ０３６９は、同質遺伝子ＣＨＯ細胞の表面上のヒト及びカニクイザルＢＡＦＦ－Ｒの両方に結合し、ＢＡＦＦ－Ｒの結合において、ＥＣ５０は約１０ｎＭであり、そのことがさらなる発現にとっての良好な選択になった。
ＡＢ０３６９のＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ相互作用を遮断する能力を、細胞ベースの遮断アッセイにおいて試験した。つまり、ヒトＢＡＦＦ－Ｒを発現するＣＨＯ細胞を収集し、冷却ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１００，０００細胞／ウェルの密度で播種した。被験物質をＦＡＣＳ緩衝液で希釈し、５０μＬの希釈された多特異的結合タンパク質又はｍＡｂを細胞に添加し、氷上で６０分間インキュベートし、次にＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。１２ｎＭのＢＡＦＦ－ビオチンをＦＡＣＳ緩衝液に希釈し、１ウェル当たり１００μＬを添加し、氷上で６０分間インキュベートし、次にＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で希釈した１００μＬの１：２００のストレプトアビジン－ＰＥとともにインキュベートし、氷上で３０分間インキュベートし、次にＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。次に、細胞をＰＢＳ中の１：１，０００希釈の生／死色素１００μＬ中で１５分間インキュベートし、次にＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、固定した。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリーによる分析に備えた。各サンプル及び二次単独対照の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を計算した。最大ＭＦＩをＢＡＦＦ－ビオチン単独として計算し、最小ＭＦＩをストレプトアビジン－フィコエリトリン単独として計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、データを４パラメータ非線形回帰曲線に適合させた。
これらの試験により、ＡＢ０３６９がＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ相互作用を部分的に遮断可能であることが示された。しかし、遮断は、おそらくはＡＢ０３６９の低親和性に起因し、親抗体と異なる抗体依存性細胞傷害性を増強する突然変異を含まない、イアナルマブベースの基準対照ほどには有意に強力でなかった（図８及び表６）。ＡＢ０３６９ ｓｃＦｖは、上記のあらゆる発見努力から同定された唯一の遮断抗体であったことから、それはＣＤＲＨ３及びＣＤＲＨ１／ＣＤＲＨ２の親和性成熟によるさらなる発現、並びにタンパク質の生成及び安定性を促進するためのさらなるアミノ酸変化を経た。
ＡＢ０３６９の親和性成熟
注目のＣＤＲＨ３の無作為化親和性成熟
上記のとおり、ＡＢ０３６９は、ＢＡＦＦ－Ｒ発現細胞に対する特異的結合が示された。改善された結合親和性を有する変異体について探索するために、酵母ディスプレイ・親和性成熟ライブラリーを、ＡＢ０３６９のＣＤＲＨ３残基（ＲＦＴＭＬＲＧＬＩＩＥＤＹＧＭＤＶ（配列番号３）を変異させることによって作成した。ｈＢＡＦＦ－Ｒに対してより高い親和性を有するｓｃＦｖを濃縮するために、ビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓを１ｎＭで用いて、選択の２ラウンドを実施した（図９Ａ～９Ｄ）。親クローンＡＢ０３６９と代表的な個別のライブラリークローンとの間の親和性を比較した。ＦＡＣＳ選別の３ラウンドにより、親クローン
と比較して１つ又は２つのアミノ酸差異を含み、ｈＢＡＦＦ－Ｒに対して親クローン及び親由来ｓｃＦｖ（基準対照として使用されるイアナルマブベースのｓｃＦｖを用いる）より高い結合親和性を示す９つのクローンが得られた（図１０Ａ～１０Ｅ）。
最高のｈＢＡＦＦ－Ｒ結合親和性を有するｓｃＦｖを、Ｅｘｐｉ２９３細胞内で発現された、ｓｃＦｖ、及び２つの非ＢＡＦＦ－Ｒバインダーを含む多特異的結合タンパク質に転化し、それらのＢＡＦＦ－Ｒ発現細胞に結合する能力（図１１Ａ）及びＢＡＦＦ－Ｒを発現するＲａｍｏｓ癌細胞を溶解する能力（図１１Ｂ、図１１Ｃ）についてさらに分析した。全ての多特異的結合タンパク質は、多特異性アッセイにおけるスコアが負であり、結合親和性の改善がＢＡＦＦ－Ｒに特異的であることが示唆された（図１２Ａ～１２Ｂ）。さらなる試験において、ＢＡＦＦ－Ｒの結合において３倍を上回る改善が示され、ＥＣ５０によって測定される際、それは効力における６～１０倍の改善と解釈された（表７）。最大溶解は不変のままであり、ＢＡＦＦ－Ｒの結合親和性の改善が効力におけるこの改善の主要なドライバーであることが示唆された。
注目のＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２を組み合わせた親和性成熟
注目のＣＤＲＨ３の親和性成熟試験からの結果において、親和性の改善が実証され、さらなる改善が高度に望ましかった。したがって、ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２配列を、成熟したＣＤＲＨ３骨格を用いる親和性成熟のために選択した（ＣＤＲＨ１：ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号１）及びＣＤＲＨ２：ＷＹＤＧＳＮ（配列番号２））。目標は、親クローン（ＡＢ０３６９ｓｃＦｖ）又は上記のＣＤＲＨ３の最適化変異体よりも親和性が改善されたバインダーを設計し、選択することであった。これにより、無作為化されたＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２を有するライブラリーが作成された一方、最適化されたＣＤＲＨ３が保持された。ＦＡＣＳの２ラウンドを実施して、高親和性バインダーを濃縮した（図１３Ａ～１３Ｃ）．
ＦＡＣＳ後、２４のクローンを同定した。最適化されたＣＤＲＨ３骨格に対するＣＤＲＨ１（ＲＦＴＭＬＲＧＷＹＩＥＤＹＧＭＤＶ（配列番号１４）；ＲＦＴＭＬＲＧＱＹＩＥＤＹＧＭＤＶ（配列番号１３）；ＲＦＴＭＬＲＧＷＩＩＥＤＹＧＭＤＶ（配列番号１５））の変化を有するいくつかのクローンが、親ＡＢ０３６９ｓｃＦｖ（１１２９＿Ａ０１）（図１４Ａ～１４Ｄ）又はイアナルマブベースのｓｃＦｖ基準対照（図１４Ｅ）と比較して、ｈＢＡＦＦ－Ｒの親和性における有意な改善を示すことが認められた。
最高のｈＢＡＦＦ－Ｒ結合親和性を有するｓｃＦｖを、Ｅｘｐｉ２９３細胞内で発現された、ｓｃＦｖ、及び２つの非ＢＡＦＦ－Ｒバインダーを含む多特異的結合タンパク質に転化し、それらのヒトＢＡＦＦ－Ｒ発現細胞に結合する能力（図１５Ａ）、カニクイザルＢＡＦＦ－Ｒ＋細胞に結合する能力（図１５Ｂ）、及びＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ相互作用を阻害する能力（図１５Ｃ及び表８）についてさらに分析した。多特異的結合タンパク質の試験において、これらの基準の３つ全部の改善が示され、ＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａ媒介性細胞傷害性アッセイにおけるＢＡＦＦ－Ｒ＋ＢＪＡＢ細胞の効率的殺傷が示された（図１６、表９）。
潜在的な配列易障害性の修正
親和性成熟クローンが、それらのＣＤＲ中に、タンパク質発現、安定性、又は免疫原性に負に影響しうるアミノ酸を有したことから、これらのアミノ酸を有しないクローンを選択するための、追加的なライブラリーを構築した。高親和性バインダーの濃縮を引き起こすように、１ｎＭのビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓタンパク質を用いて、選択の３ラウンドを実施した（図１７Ａ～１７Ｄ）。全体で２３のバインダーを同定し、その内の１２は、望ましくないアミノ酸を有しない（「易障害性が修正された」）ことが予測された。
これらのライブラリーからの潜在的な配列易障害性を欠いている好ましいクローンは、ＡＢ０８９８、（上記のＡＢ０６８２の易障害性の修正バージョン）、ＡＢ０８９９、及びＡＢ０９００を含み、それらを巧みに同定し、一方で酵母上に提示されたｈＢＡＦＦ－Ｒへのそれらの結合について試験した。全てのクローンは、ｈＢＡＦＦ－Ｒに対して、親のＡＢ０３６９ｓｃＦｖより高い親和性を示した（図１８Ａ～１８Ｆ）。
易障害性が修正された多特異的結合タンパク質の特徴づけ
易障害性が修正されたクローンの３つを、Ｅｘｐｉ２９３細胞内で発現された、ｓｃＦｖ、及び２つの非ＢＡＦＦ－Ｒバインダーを含む多特異的結合タンパク質に転化し、２ステップ精製プロセスによって精製し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、ＢＡＦＦ－Ｒ発現細胞への結合、及びＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａＶ媒介性細胞傷害性アッセイにおけるＢＪＡＢ細胞を溶解する能力によって特徴づけた。これらのクローンの特徴づけは、表１０に要約されるが、易障害性の修正が奏功したことを示す。細胞結合に対する陰性効果は認められず、３つ全部のクローンがＢＡＦＦ－Ｒを発現する腫瘍細胞の強力な殺傷を示した（図１９）。しかし、分子の熱安定性は、図２０に示すとおり、Ｔｍ１＞６５℃であった。
上記のとおり、潜在的な配列易障害性残基のＣＤＲ中の特定アミノ酸での置換は、結合親和性に対する最小効果を有したが、ＢＡＦＦ－Ｒ発現細胞の結合及び熱安定性データは、さらなる改善が望ましいことを示唆した。したがって、ＣＤＲＨ１配列及びＣＤＲＨ２配列（ＣＤＲＨ１：ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号１）及びＣＤＲＨ２：ＷＹＤＧＳＮ（配列番号２））を易障害性が修正されたＣＤＲＨ３骨格に親和性成熟させ、オフレート圧力を適用して、高親和性クローンを選択した。つまり、クローンを、１００ｐＭの濃度でビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓとともにプレインキュベートし、次に１μＭの非ビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓを２時間かけて負荷した。ビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓに結合したままの酵母ディスプレイ抗ＢＡＦＦ－Ｒ ｓｃＦｖを選別し、プロセスを３回反復し、より遅いオフレートで高親和性バインダーを濃縮した。図２１に示すとおり、クローンは、オフレート圧力の負荷後であっても、ビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓに結合したままであった一方、イアナルマブベースのｓｃＦｖ基準対照は、これらの条件下で、ビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓへの結合を失い、より遅い解離速度が示唆された。
個別クローンの分析において、ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓに対する高い親和性が示され（図２２）、重要なことに、クローンは、ビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓに結合したままであった。特に、イアナルマブベースの基準ｓｃＦｖは、負荷後にビオチン化ｈＢＡＦＦ－Ｒ－ｈＦｃ－Ｈｉｓへの結合低下を示した（図２２）。さらなる考察から、クローンのいくつかは、さらなる望ましくないアミノ酸又は特性を含んだことから、除去された。上の試験からの選択されたクローンの配列を表１１に示す。
上記のオフレート負荷試験からの選択されたクローンを、Ｅｘｐｉ２９３細胞内で発現された、個別のバインダーのｓｃＦｖ、及び２つの非ＢＡＦＦ－Ｒバインダーを含む多特異的結合タンパク質として生成し、ｈＢＡＦＦ－Ｒ発現細胞及びカニクイザルＢＡＦＦ－Ｒ発現細胞への結合、ＫＨＹＧ－１－ＣＤ１６ａＶ媒介性細胞傷害性アッセイにおけるＢＡＦＦ－Ｒを発現する癌細胞を溶解する能力、ＢＡＦＦ－ＢＡＦＦ－Ｒ相互作用を遮断する能力、熱安定性（示差走査蛍光測定、ＤＳＦ）及び疎水性（ＨＩＣ）によって特徴づけた（結果を表１２に要約する）。ＡＢ１０８０、ＡＢ１０８１、及びＡＢ１０８５のＢＡＦＦ－Ｒ＋細胞に対する結合親和性が、親クローンと比較して改善された（表１２と比較した図２３Ａ～２３Ｂ）。加えて、ｃｙｎｏＢＡＦＦ－Ｒに対する結合親和性は、ｈＢＡＦＦ－Ｒに対する結合親和性と類似した（図２３Ａ～２３Ｂ）。多特異性の欠如がＰＳＲアッセイによって確認された（図２４Ａ～２４Ｂ）。ＡＢ１０８４は、ＨＩＣ時の長い保持時間及びその後のより高い凝集傾向の可能性が理由で、さらなる試験から除外した。改善された多特異的結合タンパク質において、イアナルマブ配列に基づく多特異的結合タンパク質より非常に高い効力が示された（図２５Ａ～２５Ｂ）。さらに、効力において、元のＡＢ０３６９多特異的結合タンパク質と比較して、１０倍より大きい改善が認められた。重要なことに、ＢＡＦＦ－ＢＡＦＦ－Ｒ結合を遮断する能力は、親ＡＢ０３６９多特異的結合タンパク質と比較して有意に改善された（図２６）。
これらの多特異的結合タンパク質は、対照のアダリムマブ（ヒュミラ）及びペンブロリズマブ（キイトルーダ）と比較して、許容される熱安定性の基準を満足した（図２７）。ＨＩＣクロマトグラムにおいて、ＡＢ１０８０及びＡＢ１０８１がそれぞれ１１．４分及び１１．５分の保持時間を有することが示された。ＡＢ１０８５は、承認された後期治療用抗体の中で下限である９．５分の保持時間を示し、非常に好ましい疎水性挙動が示された（図２７）。
ＡＢ１０８０及びＡＢ１０８１は、改善されたＢＡＦＦ－Ｒへの結合を示し、ＣＤＲ配列内に配列易障害性を全く含有しなかったが、それらの疎水性は、基準の治療用抗体のパネルと比較して高かった。ＡＢ１０８５は、所望の疎水性及び親和性を示したが、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列内に潜在的な配列易障害性を含んだ（図２８）。ＡＢ１０８０、ＡＢ１０８１及びＡＢ１０８５の配列を比較し、ＡＢ１０８０配列を分析し、さらに補正し、疎水性により生成されるＷからＱへ（ＣＤＲＨ３：
から
へ）の変異が減少した。得られたＡＢ１４２４／ＡＢ１６１２多特異的結合タンパク質は、正常に機能する生物製剤の範囲内に含まれる好ましい低い疎水性を示した（図２９）一方、ＢＡＦＦ－Ｒに対して同じく高い親和性（表１３、図３０Ａ～３０Ｂ）、強力なＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ結合の遮断（図１）を維持し、親ＡＢ１０８０にとって特徴的である易障害性を含まない配列を含んだ（表１４）。
結論として、組換えタンパク質及びＤＮＡの免疫を利用する、２つの抗体の発見キャンペーンを実施した。第１のキャンペーンにおいて、４つの中程度の親和性のＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ非遮断抗体を同定した。単一バインダーである、第２のキャンペーンから発見されたＡＢ０３６９ｓｃＦｖは、ＢＡＦＦ－Ｒ－ＢＡＦＦ相互作用を遮断する能力を提示した。親和性成熟の複数ラウンド、易障害性の修正、及び合理的配列設計によるＡＢ０３９６ｓｃＦｖの広範な発現から、バインダーＡＢ１６１２／ＡＢ１４２４が得られ、それらは治療候補としての望ましい特性を示した。
参照による援用
矛盾する記載がない限り、本明細書において言及される特許文献及び科学論文のそれぞれの全開示内容が、あらゆる目的のために参照により援用される。
均等物
本開示は、その趣旨又は本質的特徴から逸脱せずに、他の特定の形態で実施され得る。したがって、上記の実施形態は、あらゆる点で、本明細書に記載される本開示を限定するのではなく例示であると見なされるべきである。異なる実施形態の様々な構成要素及び様々な開示される方法ステップは、様々な組み合わせ及び並べ替えで利用してもよく、全てのこのような変形は、本開示の形態と考えられるべきである。したがって、本開示の範囲は、前述の説明よりはむしろ、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の同等性の意味及び範囲に含まれる全ての変更は、その中に包含されることが意図される。

Claims (55)

  1. ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位であって、
    配列番号５０のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）配列、配列番号５１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）配列、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；並びに
    配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１配列、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
    を含む、抗原結合部位。
  2. ＢＡＦＦ－Ｒに結合する抗原結合部位であって、
    （ａ）ＶＨは、それぞれ配列番号４６、４７、及び４８のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び４９のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む；
    （ｂ）ＶＨは、それぞれ配列番号１、２、及び１６のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列と同一である配列を含む；
    （ｃ）ＶＨは、それぞれ配列番号２１、２、及び２２のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む；
    （ｄ）ＶＨは、それぞれ配列番号２０、２３、及び２６のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む；又は
    （ｅ）ＶＨは、それぞれ配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び４９のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む、
    抗原結合部位。
  3. 前記ＶＨは、それぞれ配列番号４６、４７、及び４８のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つ前記ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び４９のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む、請求項１又は２に記載の抗原結合部位。
  4. 前記ＶＨは、それぞれ配列番号１、２３、及び３８のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み；且つ前記ＶＬは、それぞれ配列番号４、５、及び３９のアミノ酸配列と同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む、請求項１又は２に記載の抗原結合部位。
  5. 前記ＶＨは、配列番号４０と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗原結合部位。
  6. 前記ＶＨは、配列番号４０と比較してＧ４４Ｃ置換を含む、請求項５に記載の抗原結合部位。
  7. 前記ＶＨは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗原結合部位。
  8. 前記ＶＨは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、請求項５又は６に記載の抗原結合部位。
  9. 前記ＶＬは、配列番号４１と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４～８のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  10. 前記ＶＬは、配列番号４１と比較してＧ１００Ｃ置換を含む、請求項９に記載の抗原結合部位。
  11. 前記ＶＬは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、請求項４～９のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  12. 前記ＶＬは、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、請求項４～１０のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  13. 配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬ、又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗原結合部位。
  14. 一本鎖断片可変（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、又はモノクローナル抗体として存在する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  15. 一本鎖断片可変（ｓｃＦｖ）として存在する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  16. 配列番号４４又は配列番号４５の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖとして存在する、請求項１～５、又は９のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  17. 前記ｓｃＦｖは、配列番号４４又は配列番号４５の配列と同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  18. 前記ｓｃＦｖは、配列番号４４の配列と同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  19. 請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗原結合部位とＢＡＦＦ－Ｒに対する結合について競合する抗原結合部位。
  20. 前記抗原結合部位が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される際、５ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＢＡＦＦ－Ｒに結合する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  21. ＢＡＦＦ－ＲのＢＡＦＦへの結合を阻害する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗原結合部位。
  22. 請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗原結合部位を含むタンパク質。
  23. 抗体重鎖定常領域をさらに含む、請求項２２に記載のタンパク質。
  24. 前記抗体重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域である、請求項２３に記載のタンパク質。
  25. 前記抗体重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域である、請求項２４に記載のタンパク質。
  26. 前記抗体重鎖定常領域の各ポリペプチド鎖は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２４又は２５に記載のタンパク質。
  27. 前記抗体重鎖定常領域の少なくとも１つのポリペプチド鎖が、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、及びＫ４３９から選択される１つ以上の位置で、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対する１つ以上の突然変異を含む、請求項２４～２６のいずれか一項に記載のタンパク質。
  28. 前記抗体重鎖定常領域の少なくとも１つのポリペプチド鎖が、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９Ｄ、及びＫ４３９Ｅから選択される、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対する１つ以上の突然変異を含む、請求項２４～２７のいずれか一項に記載のタンパク質。
  29. 前記抗体重鎖定常領域の１つのポリペプチド鎖が、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１及びＫ４３９から選択される１つ以上の位置で、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対する１つ以上の突然変異を含み；前記抗体重鎖定常領域の他のポリペプチド鎖が、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、及びＫ４３９から選択される１つ以上の位置で、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対する１つ以上の突然変異を含む、請求項２４～２８のいずれか一項に記載のタンパク質。
  30. 前記抗体重鎖定常領域の１つのポリペプチド鎖が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対するＫ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗ置換を含み；前記抗体重鎖定常領域の他のポリペプチド鎖が、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対するＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ及びＦ４０５Ｔ置換を含む、請求項２９に記載のタンパク質。
  31. 前記抗体重鎖定常領域の１つのポリペプチド鎖が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対するＹ３４９Ｃ置換を含み；前記抗体重鎖定常領域の他のポリペプチド鎖が、ＥＵ番号付けシステムにしたがって番号付けされた、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列に対するＳ３５４Ｃ置換を含む、請求項２９又は３０に記載のタンパク質。
  32. 請求項２２～３１のいずれか一項に記載のタンパク質及び薬物部分を含む抗体－薬物コンジュゲート。
  33. 前記薬物部分が、アウリスタチン、Ｎ－アセチル－γカリケアミシン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、及びＳＮ－３８からなる群から選択される、請求項３２に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
  34. 請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗原結合部位及びサイトカインを含む免疫サイトカイン。
  35. 前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＮＦ、及びＩＦＮαからなる群から選択される、請求項３４に記載の免疫サイトカイン。
  36. 請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗原結合部位及びＣＤ３に結合する抗原結合部位を含む二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー。
  37. （ａ）請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗原結合部位；
    （ｂ）膜貫通ドメイン；及び
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
    を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  38. 前記膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、及びＣＤ１５４の膜貫通領域から選択される、請求項３７に記載のＣＡＲ。
  39. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２の機能的シグナル伝達ドメインを含む一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項３７又は３８に記載のＣＡＲ。
  40. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激性受容体の機能的シグナル伝達ドメインを含む共刺激性シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項３７～３９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  41. 前記共刺激性受容体が、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に結合するリガンド、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項４０に記載のＣＡＲ。
  42. 請求項３７～４１のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする単離核酸。
  43. 請求項４２に記載の単離核酸を含む発現ベクター。
  44. 請求項４２に記載の核酸又は請求項４３に記載の発現ベクターを含む免疫エフェクター細胞。
  45. 請求項３７～４１のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞。
  46. 前記免疫エフェクター細胞が、Ｔ細胞である、請求項４４又は４５に記載の免疫エフェクター細胞。
  47. 前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、又はＮＫＴ細胞である、請求項４６に記載の免疫エフェクター細胞。
  48. 前記免疫エフェクター細胞が、ＮＫ細胞である、請求項４４又は４５に記載の免疫エフェクター細胞。
  49. 請求項２２～３１のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項３２又は３３に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項３４又は３５に記載の免疫サイトカイン、請求項３６に記載の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、又は請求項４４～４８のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞；及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  50. 癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、請求項２２～３１のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項３２又は３３に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項３４又は３５に記載の免疫サイトカイン、請求項３６に記載の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、請求項４４～４８のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞、又は請求項４９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  51. 前記癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ－ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、及び急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）である、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記癌は、ＢＡＦＦ－Ｒを発現する、請求項５０又は５１に記載の方法。
  53. 自己免疫性炎症性疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、請求項２２～３１のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項３２若しくは３３に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項３４若しくは３５に記載の免疫サイトカイン、請求項３６に記載の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、請求項４４～４８のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞、又は請求項４９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  54. 精製された抗原結合部位、タンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、又は二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗原結合部位、請求項２２～３１のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項３２若しくは３３に記載の抗体－薬物コンジュゲート、請求項３４若しくは３５に記載の免疫サイトカイン、又は請求項３６に記載の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー。
  55. 遠心分離、深層ろ過、細胞溶解、均質化、凍結融解、親和性精製、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用交換クロマトグラフィー、及びミックスモードクロマトグラフィーからなる群から選択される方法によって精製される、請求項５４に記載の抗原結合部位、タンパク質、抗体－薬物コンジュゲート、免疫サイトカイン、又は二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー。
JP2024519268A 2021-09-29 2022-09-27 Ｂａｆｆ－ｒを標的化する抗体及びその使用 Pending JP2024537772A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163250092P 2021-09-29 2021-09-29
US63/250,092 2021-09-29
PCT/US2022/077068 WO2023056243A1 (en) 2021-09-29 2022-09-27 Antibodies targeting baff-r and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024537772A true JP2024537772A (ja) 2024-10-16

Family

ID=85780903

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2024519268A Pending JP2024537772A (ja) 2021-09-29 2022-09-27 Ｂａｆｆ－ｒを標的化する抗体及びその使用

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20240228645A1 (ja)
EP (1) EP4408891A1 (ja)
JP (1) JP2024537772A (ja)
KR (1) KR20240069787A (ja)
CN (1) CN118317975A (ja)
AR (1) AR127163A1 (ja)
AU (1) AU2022354054A1 (ja)
CA (1) CA3233246A1 (ja)
IL (1) IL311600A (ja)
MX (1) MX2024003913A (ja)
TW (1) TW202330604A (ja)
WO (1) WO2023056243A1 (ja)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2009228158B2 (en) * 2008-03-27 2014-02-27 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for inhibiting PDGFRbeta and VEGF-A
JP2012513195A (ja) * 2008-12-23 2012-06-14 アストラゼネカ アクチボラグ α５β１に向けられた標的化結合剤およびその使用
US9216219B2 (en) * 2012-06-12 2015-12-22 Novartis Ag Anti-BAFFR antibody formulation
CN109641957B (zh) * 2016-06-06 2022-10-04 希望之城 Baff-r抗体及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023056243A1 (en) 2023-04-06
TW202330604A (zh) 2023-08-01
KR20240069787A (ko) 2024-05-20
IL311600A (en) 2024-05-01
CN118317975A (zh) 2024-07-09
CA3233246A1 (en) 2023-04-06
MX2024003913A (es) 2024-04-26
US20240228645A1 (en) 2024-07-11
AR127163A1 (es) 2023-12-27
EP4408891A1 (en) 2024-08-07
AU2022354054A1 (en) 2024-03-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7539840B2 (ja) Ｃｄ３３を標的とする抗体可変ドメイン及びその使用
US20220380459A1 (en) Multi-specific binding proteins that bind cd33, nkg2d, and cd16, and methods of use
US20220025037A1 (en) Antibody variable domains targeting dll3, and use thereof
US20240132598A1 (en) Antibodies targeting flt3 and use thereof
US20230220084A1 (en) Antibodies Targeting CLEC12A and Use Thereof
JP2023536627A (ja) Ｅｇｆｒを標的とする抗体およびその使用
JP2024537772A (ja) Ｂａｆｆ－ｒを標的化する抗体及びその使用

Legal Events

Date Code Title Description
RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20240502