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JP2024530166A - Ｃｄ３標的化抗体及びそれらの使用 - Google Patents

Ｃｄ３標的化抗体及びそれらの使用 Download PDF

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JP2024530166A
JP2024530166A JP2024506663A JP2024506663A JP2024530166A JP 2024530166 A JP2024530166 A JP 2024530166A JP 2024506663 A JP2024506663 A JP 2024506663A JP 2024506663 A JP2024506663 A JP 2024506663A JP 2024530166 A JP2024530166 A JP 2024530166A
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cancer
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ジェイムズ ルロ，
マルコ ムダ，
ショーン マーフィー，
アダム ペルゼック，
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アブプロ コーポレーション
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Abstract

本開示は、一般に、ＣＤ３タンパク質に結合することができる免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）に関する。本技術の抗体は、ＣＤ３の検出及びがんの治療を必要とする対象においてそれを行うための方法に有用である。【選択図】図５Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年８月４日に出願された、米国仮特許出願第６３／２２９，１２５号の利益及び優先権を主張するものであり、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本技術の背景の以下の説明は、単に本技術を理解する際の補助として提供され、本技術の先行技術を説明又は構成するとは認められない。
現在の標的療法に対する耐性を克服するための１つの潜在的な戦略は、二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）を用いることによって、Ｔ細胞の殺傷活性を利用してがんに打ち勝つことである。これらのＴ細胞結合抗体は、腫瘍細胞上の抗原及び共受容体ＣＤ３などのＴ細胞活性化物質に同時に結合するように設計されている。Ｔ細胞のＢｓＡｂ結合は、ＣＤ３の結合を介してＴ細胞を活性化し、細胞溶解性シナプスを形成することによって腫瘍細胞の殺傷を媒介し、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）非依存的様式で抗原発現性腫瘍細胞に向かって殺傷活性を再指向する。初期の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＣＥ）の取り組みは、患者におけるサイトカイン放出及びＴ細胞の消耗又は枯渇に対する高い効力の生物学的結果を予測することなく、インビトロ細胞ベースのアッセイに基づいて細胞傷害性活性を最大化することに主に焦点を当ててきた（Ｖａｆａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．，１０：４４６（２０２０））。これらの安全性の懸念は、ＣＤ３ ＴＣＥの安全性評価に焦点を当てた最近のＦＤＡ主催のワークショップでまとめられた（Ｃｒｉｓ Ｋａｍｐｅｒｓｃｈｒｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ １７（１）：６７－８５（２０２０））。ＴＣＥの後の世代には、半減期を延長する目的でＦｃ又は他の同様のドメインが含まれるが、有害事象及び臨床試験中断（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｈｏｌｄ）は、高い効力のＴＣＥで半減期を延長すると、神経毒性及びＣＲＳに関連する重篤な有害事象が悪化する可能性があることを示唆している（Ｖａｆａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．，１０：４４６（２０２０））。
したがって、サイトカイン放出症候群及びＴ細胞の消耗又は枯渇などの有害作用を緩和する一方で、腫瘍の阻害に有効である二重特異性Ｔ細胞結合抗体の緊急の必要性が存在する。
Ｖａｆａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．，１０：４４６（２０２０） Ｃｒｉｓ Ｋａｍｐｅｒｓｃｈｒｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ １７（１）：６７－８５（２０２０）
一態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）ＶＨは、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＫＡＤＳＶＫＤ（配列番号７）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＫＶＫＤ（配列番号８）、若しくはＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＷＤＳＶＫＤ（配列番号９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ（配列番号３）、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）、若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は（ｂ）ＶＬは、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。
一態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）ＶＨは、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＫＡＤＳＶＫＤ（配列番号７）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＫＶＫＤ（配列番号８）、若しくはＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＷＤＳＶＫＤ（配列番号９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ（配列番号３）、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）、若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は（ｂ）ＶＬは、ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。
一態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）ＶＨは、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＫＡＤＳＶＫＤ（配列番号７）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＫＶＫＤ（配列番号８）、若しくはＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＷＤＳＶＫＤ（配列番号９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ（配列番号３）、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）、若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は（ｂ）ＶＬは、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）若しくはＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号：５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。
別の態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）ＶＨは、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ（配列番号４９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は（ｂ）ＶＬは、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。
別の態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）ＶＨは、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ（配列番号４９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は（ｂ）ＶＬは、ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。
一態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）ＶＨは、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ（配列番号４９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は（ｂ）ＶＬは、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）若しくはＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。
別の態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）ＶＨは、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、若しくは配列番号４３のアミノ酸配列を含み、かつ／又は（ｂ）ＶＬは、配列番号１４、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、若しくは配列番号４７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１８及び配列番号２０、配列番号２１及び配列番号１９、配列番号２２及び配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５、配列番号１８及び配列番号２６、配列番号１８及び配列番号２７、配列番号２２及び配列番号２８、配列番号２９及び配列番号２８、配列番号３０及び配列番号２８、配列番号３１及び配列番号２８、配列番号３２及び配列番号２８、配列番号３３及び配列番号２８、配列番号２２及び配列番号３４、配列番号３５及び配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号３９及び配列番号２７、配列番号４０及び配列番号２７、配列番号４１及び配列番号２７、配列番号４２及び配列番号２７、配列番号４３及び配列番号２７、配列番号１８及び配列番号４４、配列番号１３及び配列番号４５、配列番号１５及び配列番号４５、配列番号１６及び配列番号４５、配列番号１７及び配列番号４５、配列番号１３及び配列番号４６、配列番号１５及び配列番号４６、配列番号１６及び配列番号４６、配列番号１７及び配列番号４６、配列番号１３及び配列番号４７、配列番号１５及び配列番号４７、配列番号１６及び配列番号４７、並びに配列番号１７及び配列番号４７からなる群から選択される重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含む。
一態様において、本開示は、（ａ）配列番号１４、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、若しくは配列番号４７のうちのいずれか１つの軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び／又は（ｂ）配列番号１３、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、若しくは配列番号４３のうちのいずれか１つの重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、を含む抗体を提供する。
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインを更に含み得る。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ３２２Ａからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む。追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む。特定の実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、及びＦｖからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、又は多重特異性抗体である。特定の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ３ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態において、細胞外ドメインは、アミノ酸配列ＱＤＧＮＥ（配列番号６３）を含む。
追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、本技術の抗体は、α－１，６－フコース修飾を欠く。
一態様において、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖、及び第４のポリペプチド鎖を含む多重特異性抗体を提供し、第１及び第２のポリペプチド鎖は、互いに共有結合しており、第２及び第３のポリペプチド鎖は、互いに共有結合しており、第３及び第４のポリペプチド鎖は、互いに共有結合しており、（ａ）第１のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖の各々は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｉｉ）第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと、（ｉｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）３を含むフレキシブルペプチドリンカーと、（ｉｖ）第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結されている第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、又は第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結されている第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインであって、第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインが、第２のエピトープに特異的に結合することができ、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）６を含むフレキシブルペプチドリンカーを介して一緒に連結して、単鎖可変断片を形成する、軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインと、を含み、（ｂ）第２のポリペプチド鎖及び第３のポリペプチド鎖の各々が、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｉｉ）第１の免疫グロブリンの重鎖定常ドメインと、を含み、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン若しくは第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインが、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、若しくは配列番号４３を含み、かつ／又は第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン若しくは第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインが、配列番号１４、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、若しくは配列番号４７を含む。
一態様において、本開示は、本明細書に記載の抗体又は抗原結合断片のうちのいずれかをコードする組換え核酸配列を提供する。
別の態様において、本開示は、本明細書に開示の組換え核酸配列のうちのいずれかを含む、宿主細胞又はベクターを提供する。
一態様において、本開示は、本技術の抗体又は抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物を提供し、抗体又は抗原結合断片は、任意選択的に、同位体、色素、クロマゲン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、成長因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡ、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される薬剤にコンジュゲートされている。
追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、本技術の多重特異性抗体又は抗原結合断片は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄細胞、形質細胞、又は肥満細胞に結合する。追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、多重特異性抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異的抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅｙ）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、ＧｌｏｂｏＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、ペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１～６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロンシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１～Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１に由来するペプチドを有する）、又は小分子ＤＯＴＡハプテンに結合する。小分子ＤＯＴＡハプテンは、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－Ｂｎ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ２、Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、及びＡｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２からなる群から選択され得る。
追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、本技術の抗ＣＤ３多重特異性抗体又は抗原結合断片はまた、Ｔ細胞に結合する。一態様において、本開示は、本技術の抗ＣＤ３多重特異性抗体又は抗原結合断片によってエクスビボで武装化されているＴ細胞を提供する。別の態様において、本開示は、治療用Ｔ細胞を作製するエクスビボ方法を提供し、本技術の抗ＣＤ３多重特異性抗体又は抗原結合断片によってＴ細胞をエクスビボで武装化することを含み、Ｔ細胞は、任意選択的にヒトＴ細胞であり、結合は非共有結合である。別の態様において、本開示は、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法を提供し、対象に、本技術の抗ＣＤ３多重特異性抗体又は抗原結合断片によってエクスビボで武装化されている、有効量のＴ細胞を投与することを含む。
また別の態様において、本開示は、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法を提供し、対象に、有効量の本明細書に記載の多重特異性若しくは二重特異性抗体又は抗原結合断片を投与することを含み、多重特異性若しくは二重特異性抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ３に特異的に結合する。
がんの例には、前駆体Ｔ急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫、リンパ腫様丘疹症Ａ型、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫様弛緩皮膚、セザリー病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚大細胞型Ｔ細胞リンパ腫、多形性Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症Ｂ型、続発性皮膚ＣＤ３０＋大細胞型リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫（特記されない限り）、皮下Ｔ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、及び急性混合性白血病が含まれるが、これらに限定されない。がんの他の例としては、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、がん腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）がん、耳、鼻、及び喉の（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、胃腸がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎臓がん、喉頭がん、急性及び慢性の白血病、肝臓がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、セミノーマ、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍、及びそれらの転移が挙げられるが、これらに限定されない。
追加的又は代替的に、方法のいくつかの実施形態において、多重特異性若しくは二重特異性抗体又は抗原結合断片は、対象に、追加の治療剤と、別々に、連続して、又は同時に投与される。追加の治療剤の例としては、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、細胞増殖抑制アルカロイド、細胞傷害性抗生物質、抗代謝剤、内分泌／ホルモン剤、Ｔ細胞、ビスホスホネート療法剤のうちの１つ以上が挙げられる。追加の治療剤の他の例としては、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、選択的ＣＯＸ－２阻害剤、グルココルチコイド、及び従来の疾患修飾抗リウマチ薬（ｃＤＭＡＲＤ）が挙げられる。
本明細書においてまた、本技術の少なくとも１つの免疫グロブリン関連組成物（例えば、本明細書に記載の任意の抗体又は抗原結合断片）、又はその機能的バリアント（例えば、置換バリアント）と、使用説明書と、を含む、ＣＤ３の検出及び／又はがんの治療のためのキットが開示される。特定の実施形態において、免疫グロブリン関連組成物は、１つ以上の検出可能な標識にカップリングされる。一実施形態において、１つ以上の検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、又は発色性標識を含む。
追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、キットは、本明細書に記載の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物に特異的に結合する二次抗体を更に含む。いくつかの実施形態において、二次抗体は、放射性標識、蛍光標識、又は発色性標識からなる群から選択される少なくとも１つの検出可能な標識にカップリングされる。
ヒト化ＳＰ３４重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）バリアントのアミノ酸配列を示す。ＶＨ ＣＤＲ１～３及びＶＬ ＣＤＲ１～３配列には下線が引かれている。選択置換には二重下線が引かれている。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 本技術の例示的な抗ＣＤ３クローンの結合親和性を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 本技術の抗ＣＤ３二重特異性抗体を用いたＣＤ３／ＴＣＲ ＮＦＡＴ Ｔ細胞活性化レポーターアッセイの結果を示す。Ｊｕｒｋａｔ ＣＤ３／ＴＣＲ ＮＦＡＴ Ｔ細胞活性化レポーターアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、Ｈｅｒ２－高（図３Ａ：ＳＫ－ＢＲ－３、図３Ｂ：ＨＣＣ１９５４）及びＨｅｒ２－低（図３Ｃ：ＭＣＦ－７、図３Ｄ：ＨＴ５５）標的細胞株又は標的細胞なし（図３Ｅ）とのインキュベーション後のＣＤ３／ＴＣＲ複合体のＨＥＲ２（トラスツズマブ）×ＣＤ３二重特異性抗体（０．００００４～４０ｎＭ）活性化を評価した。レポーター活性の発現を、検出し、相対発光単位（ＲＬＵ）として定量化し、７時間のインキュベーション期間後にプロットした。ＡＢＰ１００ｓ．１０．０クローンの抗ＣＤ３ ＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ、配列番号２２及び配列番号２８）は、ＳＰ３４親を表す。抗ＨＥＲ２抗原結合ドメイン（トラスツズマブ）のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列は、以下である： 抗ＨＥＲ２ ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲ配列には下線が引かれている。
同上。 同上。 同上。 同上。 ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞を有するＨｅｒ２－高及びＨｅｒ２－低の標的細胞株における、本技術の抗ＣＤ３二重特異性抗体のＴ細胞依存性細胞傷害性（ＴＤＣＣ）の結果を示す。本技術の抗ＣＤ３配列を含む二重特異性抗体を、ＣＤ３＋Ｔ細胞及び標的細胞（エフェクター：標的比５：１）と３７℃で４０時間インキュベートした。高感度ＡＴＰ定量法（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ ２．０）を使用して、Ｈｅｒ２－高の標的細胞（図４Ａ：ＳＫＢＲ－３、図４Ｂ：ＨＣＣ１９５４）及びＨｅｒ２－低の細胞株（図４Ｃ：ＭＣＦ－７、図４ＤＨＴ５５）についての［エフェクター＋標的］のみのウェルと比較して、細胞傷害性％を定量化した。 同上。 同上。 同上。 ヒトＰＢＭＣを有するＨｅｒ２－高及びＨｅｒ２－低の標的細胞株における、本技術の抗ＣＤ３二重特異性抗体のインビトロマルチプレックスサイトカイン検出アッセイの結果を示す。二重特異性抗体（範囲：３０、０．３、０．００３、０．００００３ｎＭ）を、ヒトＰＢＭＣ及び標的細胞（エフェクター（１００，０００細胞）：標的（１０，０００個の細胞）、Ｅ：Ｔ比１０：１）と３７℃で２４時間インキュベートした。ＳＫＢＲ－３（Ｈｅｒ２－高）標的細胞（図５Ａ～５Ｄ）及びＭＣＦ－７（Ｈｅｒ２－低）標的細胞（図５Ｅ～５Ｈ）におけるサイトカイン放出を、ＴＮＦ－α（図５Ａ、図５Ｅ）、ＩＬ－６（図５Ｂ、図５Ｆ）、ＩＬ－２（図５Ｃ、図５Ｇ）、ＩＦＮ－γ（図５Ｄ、図５Ｈ）のマルチプレックスビーズベースアッセイで使用するために上清を１：４希釈することによって定量化し、ここではＬｕｍｉｎｅｘ ｘＭＡＰソフトウェアによって定量化されたピコグラム／ｍＬで提示する。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 活性化Ｔ細胞及びＨｅｒ－２発現標的細胞に結合する二重特異性抗体のフローサイトメトリー分析の結果を示す。二重特異性抗体を、Ｈｅｒ２－高（図６Ａ：ＳＫＢＲ－３、図６ＢＳＫＯＶ－３）又はＨｅｒ２－低（図６Ｃ：ＭＣＦ－７、図６Ｄ：ＨＴ５５）標的細胞又は活性化Ｔ細胞（図６Ｅ）とインキュベートした。１００，０００個の細胞／ウェルを、一次二重特異性抗体とインキュベートし、続いて抗ヒトＩｇＧ ＰＥ二次抗体とインキュベートした。結果を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアにおいて単一生細胞の中央蛍光強度（ＭＦＩ）として定量化した。 同上。 同上。 同上。 同上。
本技術の実質的な理解を提供するために、本方法の特定の態様、モード、実施形態、変形、及び特徴が、様々なレベルの詳細で以下に記載されることを理解されたい。
本開示は、一般に、ＣＤ３ポリペプチドに特異的に結合することができる、免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）を提供する。本技術の免疫グロブリン関連組成物は、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法に有用である。したがって、本方法の様々な態様は、抗ＣＤ３抗体の調製、特性評価、及び操作に関する。本技術の免疫グロブリン関連組成物は、がんを治療するために単独又は追加の治療剤と組み合わせて有用である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン関連組成物は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、又は多重特異性抗体である。
本方法を実施する際に、分子生物学、タンパク質生化学、細胞生物学、免疫学、微生物学、及び組換えＤＮＡにおける多くの従来の技術が使用される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｄｓ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ、シリーズＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．（２００７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、シリーズＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）ＰＣＲ １：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ）、ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ ｅｄｓ．（１９９９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２００５）Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｇａｉｔ ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、米国特許第４，６８３，１９５号、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９８６））、Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、Ｍａｋｒｉｄｅｓ ｅｄ．（２００３）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ、Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）、及びＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ（１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照されたい。ポリペプチド遺伝子発現産物のレベル（すなわち、遺伝子翻訳レベル）を検出及び測定する方法は、当該技術分野で周知であり、抗体検出及び定量技術などのポリペプチド検出方法の使用を含む。（Ｓｔｒａｃｈａｎ ＆ Ｒｅａｄ，Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ．（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，１９９９）も参照されたい）。
本開示は、親和性（ａｖｉｄｉｔｙ）相互作用を利用して、高密度の腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２のがん組織の細胞など）の細胞に選択的に結合し、それを殺傷し、低密度の腫瘍抗原を有する細胞には結合せず、それを温存する、低減された親和性（ａｆｆｉｎｉｔｙ）を有する抗ＣＤ３二重特異性抗体を提供する。理論に拘束されることを望まないが、抗ＣＤ３二重特異性抗体におけるＣＤ３親和性を低下させることは、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン産生を低減し、臨床におけるサイトカイン放出症候群などの有害事象を低下させると考えられる。
定義
別途定義されない限り、本明細書に使用される全ての技術用語及び科学用語は、一般に、本技術が属する技術分野の当業者によって通例理解される意味と同じ意味を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、内容が明示的に別様に示さない限り、複数の指示物を含む。例えば、「細胞（ａ ｃｅｌｌ）」に対する言及は、２つ以上の細胞の組み合わせなどを含む。一般に、本明細書に使用される命名法、並びに細胞培養、分子遺伝学、有機化学、分析化学、及び核酸化学における実験手順、並びに以下に記載されるハイブリダイゼーションは、当該技術分野で周知のものであり、通例用いられる。
本明細書に使用される場合、数に関して「約」という用語は、別段の言明がない限り、又は文脈から明らかでない限り、数のいずれかの方向（より大きいか、又はより小さい）で１％、５％、又は１０％の範囲内に入る数を含むと一般に解釈される（かかる数が考えられる値の０％未満であるか、又は１００％を超える場合を除く）。
本明細書に使用される場合、対象への薬剤又は薬物の「投与」は、その意図された機能を行うために、対象に化合物を導入又は送達する任意の経路を含む。投与は、経口、鼻腔内、非経口（静脈内、筋肉内、腹腔内、又は皮下）、直腸、髄腔内、腫瘍内、又は局所を含むが、これらに限定されない任意の好適な経路によって実行することができる。投与は、自己投与及び他者による投与を含む。
本明細書に使用される場合、「抗体」という用語は、例として、限定されずに、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、それらの組み合わせ、並びに任意の脊椎動物、例えば、ヒト、ヤギ、ウサギ、及びマウスなどの哺乳動物、並びにサメ免疫グロブリンなどの非哺乳類種における免疫応答中に産生される同様の分子を含む、免疫グロブリン又は免疫グロブリン様分子を総称して指す。本明細書に使用される場合、「抗体」（インタクト免疫グロブリンを含む）及び「抗原結合断片」は、目的の分子（又は非常に類似性の高い目的の分子の群）に、他の分子との結合を実質的に除外して特異的に結合する（例えば、生体試料中の他の分子に対する結合定数よりも、少なくとも１０３Ｍ－１大きい、少なくとも１０４Ｍ－１大きい、又は少なくとも１０５Ｍ－１大きい、目的の分子に対する結合定数を有する抗体及び抗体断片）。「抗体」という用語はまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化ネズミ抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（二重特異性抗体など）などの遺伝子操作された形態も含む。Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４－１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）、Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９７も参照されたい。
より特定的には、抗体は、抗原のエピトープを特異的に認識して結合する、少なくとも軽鎖免疫グロブリン可変領域又は重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドリガンドを指す。抗体は、重鎖及び軽鎖からなり、それらの各々は、可変重（ＶＨ）領域及び可変軽（ＶＬ）領域と称される可変領域を有する。一緒に、ＶＨ領域及びＶＬ領域が、抗体によって認識される抗原に対する結合に関与する。典型的には、免疫グロブリンは、ジスルフィド結合により相互接続された重（Ｈ）鎖及び軽（Ｌ）鎖を有する。軽鎖には、ラムダ（λ）及びカッパ（κ）の２つのタイプがある。抗体分子の機能的活性を決定する５つの主要な重鎖クラス（又はアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥが存在する。各重鎖及び軽鎖は、定常領域及び可変領域（領域は、「ドメイン」としても知られている）を含む。組み合わせで、重鎖及び軽鎖可変領域は、抗原に特異的に結合する。軽鎖及び重鎖可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可変領域によって中断される「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域及びＣＤＲの範囲が定義されている（参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９１を参照されたい）。Ｋａｂａｔデータベースは、現在、オンラインで維持されている。異なる軽鎖又は重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域は、構成する軽鎖及び重鎖の組み合わされたフレームワーク領域であり、主にβシート立体構造をとり、ＣＤＲが、β－シート構造に接続し、場合によってその一部を形成するループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合相互作用によって、ＣＤＲを正しい方向で配置することを提供する足場を形成するよう機能する。
ＣＤＲは主に、抗原のエピトープとの結合に関与する。各鎖のＣＤＲは通常、Ｎ末端から開始して順次付番されてＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と称され、また通常は、特定のＣＤＲが位置する鎖によって特定される。したがって、ＶＨ ＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに位置し、一方で、ＶＬ ＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメインからのＣＤＲ１である。ＣＤ３タンパク質に結合する抗体は、特異的なＶＨ領域及びＶＬ領域配列、したがって、特異的なＣＤＲ配列を有する。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる組み合わせ部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体間で異なるのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限定された数のアミノ酸位置のみが、抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。「免疫グロブリン関連組成物」は、本明細書に使用される場合、抗体（モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体などを含む）並びに抗体断片を指す。抗体又はその抗原結合断片は、抗原に特異的に結合する。
本明細書に使用される場合、「抗体関連ポリペプチド」という用語は、単鎖抗体を含む抗原結合抗体断片を意味し、可変領域を単独で、又は抗体分子のポリペプチド要素：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインの全て又は一部と組み合わせて、含むことができる。本技術にはまた、可変領域と、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインとの任意の組み合わせが含まれる。本方法において有用な抗体関連分子、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、並びにＶＬ又はＶＨドメインのいずれかを含む断片に限定されない。例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６，１９８９）、並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、が含まれる。かかる「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、全長抗体の一部、一般に、その抗原結合領域又は可変領域を含むことができる。抗体断片又は抗原結合断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、並びに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
「二重特異性抗体」又は「ＢｓＡｂ」は、本明細書に使用される場合、異なる構造を有する２つの標的、例えば、２つの異なる標的抗原、同じ標的抗原上の２つの異なるエピトープ、又は標的抗原上のハプテン及び標的抗原若しくはエピトープに同時に結合することができる抗体を指す。様々な異なる二重特異性抗体構造が、当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体における各抗原結合部分は、ＶＨ及び／又はＶＬ領域を含み、いくつかのかかる実施形態において、ＶＨ及び／又はＶＬ領域は、特定のモノクローナル抗体に見出されるものである。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、２つの抗原結合部分を含み、各々が、異なるモノクローナル抗体からのＶＨ及び／又はＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、２つの抗原結合部分を含み、２つの抗原結合部分のうちの一方は、第１のモノクローナル抗体からのＣＤＲを含有するＶＨ及び／又はＶＬ領域を有する免疫グロブリン分子を含み、他方の抗原結合部分は、第２のモノクローナル抗体からのＣＤＲを含有するＶＨ及び／又はＶＬ領域を有する抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡＢ、ｓｃＦｖなど）を含む。
本明細書で使用される場合、「コンジュゲートされた」という用語は、当業者に既知の任意の方法による２つの分子の会合を指す。好適なタイプの会合としては、化学結合及び物理結合が挙げられる。化学結合としては、例えば、共有結合及び配位結合が挙げられる。物理結合としては、例えば、水素結合、双極子相互作用、ファンデルワールス力、静電相互作用、疎水性相互作用、及び芳香族スタッキングが挙げられる。
本明細書に使用される場合、「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片を指し、この断片は、同じポリペプチド鎖内の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨＶＬ）。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を作製させる。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）に、より完全に記載されている。
本明細書に使用される場合、「単鎖抗体」又は「単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」という用語は、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬ及びＶＨの抗体融合分子を指す。単鎖抗体分子は、いくつかの個々の分子、例えば、二量体、三量体、又は他のポリマーを有するポリマーを含み得る。更に、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を使用して、ＶＬ及びＶＨ領域が対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって結合することができる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）。Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３。かかる単鎖抗体は、組換え技法又はインタクト抗体の酵素若しくは化学的切断によって調製することができる。
上記の抗体断片のうちのいずれかが、当業者に既知の従来の技術を使用して得られ、断片が、インタクト抗体と同様な手段で、結合特異性及び中和活性についてスクリーニングされる。
本明細書に使用される場合、「抗原」は、抗体（又はその抗原結合断片）が選択的に結合することができる分子を指す。標的抗原は、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、又は他の天然に存在するか若しくは合成による化合物であり得る。いくつかの実施形態において、標的抗原は、ポリペプチド（例えば、ＣＤ３ポリペプチド）であり得る。また抗原を動物に投与して、動物における免疫応答を生じ得る。
「抗原結合断片」という用語は、抗原との結合に関与するポリペプチドの一部を有する免疫グロブリン構造全体の断片を指す。本技術に有用な抗原結合断片の例には、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦｖＦｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２が含まれるが、これらに限定されない。
「結合親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位と、その結合パートナー（例えば、抗原又は抗原性ペプチド）との間の全非共有結合相互作用の強度を意味する。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野で既知の標準的な方法によって測定することができる。低親和性複合体は、一般に、抗原から容易に解離する傾向がある抗体を含むが、高親和性複合体は、一般に、より長期間、抗原に結合し続ける傾向がある抗体を含む。
本明細書に使用される場合、「生体試料」という用語は、生細胞に由来する試料材料を意味する。生体試料は、対象から単離された組織、細胞、細胞のタンパク質又は膜抽出物、及び生物学的液体（例えば、腹水又は脳脊髄液（ＣＳＦ））、並びに対象内に存在する組織、細胞、及び液体を含み得る。本技術の生体試料には、乳房組織、腎臓組織、子宮頸部、子宮内膜、頭部又は頸部、胆嚢、耳下腺組織、前立腺、脳、下垂体、腎臓組織、筋肉、食道、胃、小腸、結腸、肝臓、脾臓、膵臓、甲状腺組織、心臓組織、肺組織、膀胱、脂肪組織、リンパ節組織、子宮、卵巣組織、副腎組織、精巣組織、扁桃腺、胸腺、血液、毛髪、頬、皮膚、血清、血漿、ＣＳＦ、精液、前立腺液、精漿、尿、糞便、汗、唾液、痰、粘膜、骨髄、リンパ、及び涙から採取される試料が含まれるが、これらに限定されない。生体試料はまた、内臓の生検又はがんから得ることができる。生体試料は、診断又は研究のために対象から得ることができるか、又は対照として若しくは基礎研究のために、非疾患個体から得ることができる。試料は、例えば、静脈穿刺及び外科的生検を含む標準的な方法によって得ることができる。特定の実施形態において、生体試料は、針生検によって得られる組織試料である。
本明細書に使用される場合、「ＣＤＲ移植抗体」という用語は、「アクセプター」抗体の少なくとも１つのＣＤＲが、所望の抗原特異性を有する「ドナー」抗体からのＣＤＲ「移植片」によって置き換えられている抗体を意味する。
本明細書に使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、１つの種からのモノクローナル抗体のＦｃ定常領域（例えば、マウスＦｃ定常領域）が、組換えＤＮＡ技術を使用して、別の種の抗体からのＦｃ定常領域（例えば、ヒトＦｃ定常領域）で置き換えられている抗体を意味する。一般に、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９、Ａｋｉｒａ ｅｔ ａｌ．，欧州特許出願第１８４，１８７号、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，欧州特許出願第１７１，４９６号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，欧州特許出願第１７３，４９４号、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ８６／０１５３３、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．米国特許第４，８１６，５６７号、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，欧州特許出願第０１２５，０２３号、Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３，１９８８、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９－３４４３，１９８７、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １３９：３５２１－３５２６，１９８７、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４－２１８，１９８７、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４７：９９９－１００５，１９８７、Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６－４４９，１８８５、及びＳｈａｗ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３－１５５９，１９８８を参照されたい。
本明細書に使用される場合、「コンセンサスＦＲ」という用語は、コンセンサス免疫グロブリン配列におけるフレームワーク（ＦＲ）抗体領域を意味する。抗体のＦＲ領域は、抗原に接触しない。
本明細書に使用される場合、「対照」は、比較目的のために実験で使用される代替試料である。対照は、「陽性」又は「陰性」であることができる。例えば、実験の目的が特定のタイプの疾患に対する治療における治療剤の有効性の相関を決定することである場合、陽性対照（所望の治療効果を示すことが知られている化合物又は組成物）及び陰性対照（治療を受けないか、又はプラセボを受ける対象若しくは試料）が典型的に用いられる。
本明細書に使用される場合、「有効量」という用語は、所望の治療的及び／又は予防的効果を達成するのに十分な量、例えば、本明細書に記載される疾患若しくは状態、又は本明細書に記載される疾患若しくは状態に関連する１つ以上の徴候若しくは症状の予防又は減少をもたらす量を指す。治療的又は予防的適用の文脈において、対象に投与される組成物の量は、組成物、疾患の程度、タイプ、及び重症度、並びに全般的な健康、年齢、性別、体重、及び薬物に対する耐性などの個体の特性に応じて異なる。当業者は、これら及び他の要因に応じて適切な投与量を決定することができるであろう。組成物はまた、１つ以上の追加の治療用化合物と組み合わせて投与することができる。本明細書に記載の方法において、治療用組成物は、本明細書に記載される疾患又は状態の１つ以上の徴候又は症状を有する対象に投与され得る。本明細書に使用される場合、「治療有効量」の組成物は、疾患又は状態の生理学的影響が改善又は排除される組成物レベルを指す。治療有効量は、１回以上の投与で与えることができる。
本明細書に使用される場合、「エフェクター細胞」という用語は、免疫応答の認識及び活性化段階とは対照的に、免疫応答のエフェクター段階に含まれる免疫細胞を意味する。例示的な免疫細胞には、骨髄又はリンパ起源の細胞、例えば、リンパ球（例えば、Ｂ細胞及び細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、多形核細胞、顆粒球、肥満細胞、及び好塩基球が含まれる。エフェクター細胞は、特異的なＦｃ受容体を発現し、特異的免疫機能を実行する。エフェクター細胞は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、例えば、ＡＤＣＣを誘導することができる好中球を誘導することができる。例えば、ＦｃαＲを発現する単球、マクロファージ、好中球、好酸球、及びリンパ球は、標的細胞の特異的殺傷に関与し、免疫系の他の構成成分に抗原を提示するか、又は抗原を提示する細胞に結合する。
本明細書に使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合することができるタンパク質決定因子を意味する。エピトープは通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、通常、特異的な三次元構造特徴、並びに特異的な電荷特徴を有する。立体構造エピトープ及び非立体構造エピトープは、変性化溶媒の存在下で前者との結合は失われるが、後者とは失われないことで、区別される。いくつかの実施形態において、ＣＤ３タンパク質の「エピトープ」は、本技術の抗ＣＤ３抗体が特異的に結合するタンパク質の領域である。いくつかの実施形態において、エピトープは、立体構造エピトープ又は非立体構造エピトープである。エピトープに結合する抗ＣＤ３抗体をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるものなど定型的な交差遮断アッセイを行うことができる。このアッセイは、抗ＣＤ３抗体が、本技術の抗ＣＤ３抗体と同じ部位又はエピトープに結合するかを決定するために使用することができる。代替的に、又は追加的に、エピトープマッピングは、当技術分野で既知の方法によって行うことができる。例えば、抗体配列は、アラニンスキャニングなどによって変異誘発して、接触残基を特定することができる。異なる方法において、ＣＤ３タンパク質の異なる領域に対応するペプチドは、試験抗体との競合アッセイ、又は試験抗体と、特徴付けられたか若しくは既知のエピトープを有する抗体との競合アッセイに使用することができる。
本明細書に使用される場合、「発現」は、遺伝子の前駆体ｍＲＮＡへの転写と、成熟ｍＲＮＡを産生する前駆体ｍＲＮＡのスプライシング及び他のプロセシングと、ｍＲＮＡ安定性と、成熟ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳（コドンの使用及びｔＲＮＡの利用能を含む）と、適切な発現及び機能が必要とされる場合、翻訳産物のグリコシル化及び／又は他の修飾と、のうちの１つ以上を含む。
本明細書に使用される場合、「遺伝子」という用語は、プロモーター、エクソン、イントロン、及び発現を制御する他の非翻訳領域を含む、ＲＮＡ産物の調節された生合成のための全ての情報を含む、ＤＮＡのセグメントを意味する。
「相同性」又は「同一性」又は「類似性」は、２つのペプチド間又は２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、比較の目的のためにアラインメントさせ得る、各配列の位置を比較することによって決定することができる。比較される配列における位置が同じ塩基又はアミノ酸で占められている場合、その分子はその位置において相同的である。配列間の相同性の程度は、配列によって共有される、一致するか又は相同な位置の数の関数である。ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド領域（又はポリペプチド又はポリペプチド領域）が、別の配列に対する特定のパーセンテージ（例えば、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％）の「配列同一性」を有することは、アラインメントしたときに、塩基（又はアミノ酸）のそのパーセンテージが、２つの配列を比較する際に同じであることを意味する。このアラインメント及び相同性又は配列同一性パーセントは、当該技術分野で既知のソフトウェアプログラムを使用して決定することができる。いくつかの実施形態において、デフォルトパラメータが、アラインメントのために使用される。１つのアラインメントプログラムはＢＬＡＳＴであり、デフォルトパラメータを使用する。特に、プログラムはＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＰであり、以下のデフォルトパラメータ：Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ＝ｓｔａｎｄａｒｄ、ｆｉｌｔｅｒ＝ｎｏｎｅ、ｓｔｒａｎｄ＝ｂｏｔｈ、ｃｕｔｏｆｆ＝６０、ｅｘｐｅｃｔ＝１０、Ｍａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２、Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ＝５０ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ、ｓｏｒｔ ｂｙ＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ、Ｄａｔａｂａｓｅｓ＝ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲを使用する。これらのプログラムの詳細は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎで見出すことができる。生物学的に等価なポリヌクレオチドは、指定された相同性パーセントを有し、同じか又は類似の生物学的活性を有するポリペプチドをコードするものである。２つの配列は、それらが互いに４０％未満の同一性、又は２５％未満の同一性を共有する場合、「無関連」又は「非相同的」とみなされる。
本明細書に使用される場合、非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）からの超可変領域残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリンである。いくつかの実施形態において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体に認められない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性などの抗体性能を更に洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はＦｖ）の実質的に全てを含み、そこにおける超可変ループの全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサスＦＲ配列のものであるが、ＦＲ領域は、結合親和性を改善する１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、典型的には、Ｈ鎖では６個以下、Ｌ鎖では３個以下である。ヒト化抗体はまた、任意選択的に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含み得る。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。例えば、Ａｈｍｅｄ ＆ Ｃｈｅｕｎｇ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８８（２）：２８８－２９７（２０１４）を参照されたい。
本明細書に使用される場合、「超可変領域」という用語は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、ＶＬにおける残基約２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７（Ｌ３）の周囲、並びにＶＨにおける約３１～３５Ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）の周囲（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））、及び／又は「超可変ループ」からのこれらの残基（例えば、ＶＬにおける残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、及び９１～９６（Ｌ３）、並びにＶＨにおける２６～３２（Ｈ１）、５２Ａ～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））を含む。
本明細書に使用される場合、「同一の」又は「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈で使用される場合、以下に記載のデフォルトパラメータを用いたＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズム、又はマニュアルアラインメント及び目視検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイト）を使用して測定された、比較幅又は指定された領域にわたる最大の対応について比較及びアラインメントされる場合、同じであるか、又は同じであるアミノ酸残基若しくはヌクレオチドの指定されたパーセント（すなわち、指定された領域（例えば、本明細書に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列又は本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列）にわたる約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれより高い同一性）を有する２つ以上の配列又はサブ配列を指す。次いで、かかる配列は、「実質的に同一」であると言われる。この用語はまた、試験配列の相補体を指すか、又はそれに適用することができる。この用語はまた、欠失及び／又は付加を有する配列、並びに置換を有する配列も含む。いくつかの実施形態において、同一性は、長さが少なくとも約２５個のアミノ酸若しくはヌクレオチド、又は長さが５０～１００個のアミノ酸若しくはヌクレオチドである領域にわたって存在する。
本明細書に使用される場合、「インタクト抗体」又は「インタクト免疫グロブリン」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖ポリペプチド及び２つの軽（Ｌ）鎖ポリペプチドを有する抗体を意味する。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に更に細分化することができる。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなり、アミノ末端からカルボキシル末端に、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的な補体系の第１の構成成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織又は因子との免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
本明細書に使用される場合、「個体」、「患者」、又は「対象」という用語は、個々の生物、脊椎動物、哺乳動物、又はヒトであることができる。いくつかの実施形態において、個体、患者、又は対象は、ヒトである。
本明細書に使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る自然に発生する可能性がある変異以外は同一である。例えば、モノクローナル抗体は、任意の真核生物、原核生物、又はファージクローンを含む、それが産生される方法ではない、単一クローンに由来する抗体であることができる。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して指向される。更に、異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。「モノクローナル」という修飾語句は、抗体の実質的に均一な集団から得られるときの抗体の特徴を示すが、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されない。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ、組換え、及びファージディスプレイ技術を含むがこれらに限定されない、当技術分野で既知の多種多様な技術を使用して調製することができる。例えば、本方法に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、又は組換えＤＮＡ法によって作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）で記載されている技術を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離され得る。
本明細書に使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与と適合性のある、任意及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌及び抗真菌化合物、等張性及び吸収遅延化化合物などを含むことが意図される。薬学的に許容される担体及びその製剤は、当業者に既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．）に記載されている。
本明細書に使用される場合、「ポリクローナル抗体」という用語は、少なくとも２つの異なる抗体産生細胞株に由来する抗体の調製を意味する。本用語の使用は、抗原の異なるエピトープ又は領域に特異的に結合する抗体を含有する、少なくとも２つの抗体の調製物を含む。
本明細書に使用される場合、「ポリヌクレオチド」又は「核酸」という用語は、任意のＲＮＡ又はＤＮＡを意味し、非修飾又は修飾されたＲＮＡ又はＤＮＡであり得る。ポリヌクレオチドには、限定されないが、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、一本鎖及び二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、並びに一本鎖若しくはより典型的には二本鎖、又は一本鎖及び二本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子が含まれる。加えて、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ、又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。「ポリヌクレオチド」という用語はまた、１つ以上の修飾塩基を含むＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡを含む。
本明細書に使用される場合、「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に使用され、ペプチド結合又は修飾ペプチド結合によって互いに結合された２つ以上のアミノ酸、すなわち、ペプチドアイソスター、を含むポリマーを意味する。ポリペプチドは、一般にペプチド、グリコペプチド、又はオリゴマーと称される短鎖、及び一般にタンパク質と称される長鎖の両方を指す。ポリペプチドは、２０個の遺伝子コードされたアミノ酸以外のアミノ酸を含み得る。ポリペプチドには、翻訳後プロセシングなどの天然プロセス、又は当該技術分野において周知である化学修飾技術のいずれかによって修飾されたアミノ酸配列が含まれる。かかる修飾は、基本的なテキスト及びより詳細なモノグラフ、並びに膨大な研究文献に十分記載されている。
本明細書に使用される場合、「組換え」という用語は、例えば、細胞、又は核酸、タンパク質、若しくはベクターに関連して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質、又はベクターが、異種核酸若しくはタンパク質の導入、又は天然核酸若しくはタンパク質の変更によって修飾されているか、あるいは材料がそのように修飾された細胞に由来することを示す。よって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）形態内には見られない遺伝子を発現するか、又はそうでなければ異常に発現されるか、過小発現されるか、若しくは全く発現されない天然遺伝子を発現する。
本明細書に使用される場合、「別個の」治療的使用という用語は、異なる経路による、同時又は実質的に同時の、少なくとも２つの活性成分の投与を指す。
本明細書に使用される場合、「連続的な」治療的使用という用語は、異なる時点での少なくとも２つの活性成分の投与を指し、投与経路は同一であるか、又は異なる。より特定的には、連続的使用は、一方の活性成分の後に他方（複数可）の投与を開始する投与全体を指す。したがって、一方の活性成分を数分、数時間、又は数日にわたって投与して、その後に他の活性成分（複数可）を投与することが可能である。この例では同時治療はない。
本明細書に使用される場合、「特異的に結合する」とは、別の分子（例えば、抗原）を認識して結合するが、他の分子を実質的に認識及び結合しない分子（例えば、抗体又はその抗原結合断片）を指す。「特異的結合」、「に特異的に結合する」、又は特定の分子（例えば、ポリペプチド、又はポリペプチド上のエピトープ）に「対して特異的である」という用語は、本明細書に使用される場合、例えば、それが結合する分子に対して、約１０－４Ｍ、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、又は１０－１２ＭのＫＤを有する分子によって示すことができる。「特異的に結合する」という用語は、分子（例えば、抗体又はその抗原結合断片）が特定のポリペプチド（例えば、ＣＤ３ポリペプチド）、又は特定のポリペプチド上のエピトープに結合し、いずれの他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープにも実質的に結合することがない結合を指し得る。
本明細書に使用される場合、「同時の」治療的使用という用語は、同じ経路による、同時、又は実質的に同時の少なくとも２つの活性成分の投与を指す。
本明細書に使用される場合、「治療剤」という用語は、有効量で存在する場合、それを必要とする対象に対して所望の治療効果を生じる化合物を意味することが意図される。
本明細書で使用される「治療すること」又は「治療」は、ヒトなどの対象における、本明細書に記載される疾患又は障害の治療を包含し、（ｉ）疾患若しくは障害を阻害すること、すなわち、その発症を阻害すること、（ｉｉ）疾患若しくは障害を緩和すること、すなわち、障害の退行を引き起こすこと、（ｉｉｉ）障害の進行を遅らせること、及び／又は（ｉｖ）疾患若しくは障害の１つ以上の症状の進行を阻害、緩和、若しくは遅延することを含む。いくつかの実施形態において、治療は、疾患に関連する症状が、例えば、緩和されるか、低減されるか、治癒されるか、又は寛解状態になることを意味する。
本明細書に記載される障害の様々な治療モードは、全治療を含むが、全治療よりも少ない「実質的な」ことを意味することが意図され、いくつかの生物学的又は医学的に関連する結果が達成されることも理解されたい。治療は、慢性疾患のための継続的な長期治療、又は急性状態の治療のための単回、若しくは数回の投与であり得る。
本明細書に記載される抗ＣＤ３抗体のアミノ酸配列修飾が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗ＣＤ３抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体核酸に適切なヌクレオチド変更を導入することによって、又はペプチド合成によって調製される。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失及び／又はそれへの挿入及び／又はその置換が含まれる。得られた抗体が所望の特性を有する限り、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが目的の抗体を得るためになされる。修飾はまた、タンパク質のグリコシル化のパターンの変化を含む。置換変異誘発について最も関心が高い部位には、超可変領域が含まれるが、ＦＲ変更もまた企図される。「保存的置換」を以下の表に示す。
置換バリアントの一タイプは、親抗体の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。かかる置換バリアントを生成するために好都合な方法は、ファージディスプレイを使用する親和性成熟を含む。具体的には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７部位）を変異させて、全ての可能なアミノ酸置換を各部位で生じさせる。このように生成された抗体バリアントは、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ生成物との融合として、繊維状ファージ粒子からの一価形式でディスプレイされる。次いで、ファージディスプレイされたバリアントを、本明細書に開示されるように、それらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。修飾について超可変領域部位候補を特定するために、アラニンスキャニング変異誘発を行い、抗原結合に著しく寄与する超可変領域残基を特定することができる。代替的に、又は追加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体と抗原との間の接触点を特定することが有益であり得る。かかる接触残基及び隣接する残基は、本明細書に詳述される技術による置換のための候補である。かかるバリアントが生成されると、バリアントのパネルは、本明細書に記載されるようにスクリーニングに供され、１つ以上の関連アッセイにおいて類似するか又は優れた特性を有する抗体が、更なる開発のために選択され得る。
本技術の免疫グロブリン関連組成物
本技術は、抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片）の生成及び使用のための方法及び組成物を記載する。本開示の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物は、がんの治療に有用であり得る。本技術の範囲内の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物には、例えば、標的ポリペプチド、ホモログ、誘導体、又はその断片に特異的に結合するモノクローナル、キメラ、ヒト化、二重特異性抗体、及びダイアボディが挙げられるが、これらに限定されない。本開示はまた、本明細書に開示される抗ＣＤ３抗体のうちのいずれかの抗原結合断片を提供し、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、及びＦｖからなる群から選択される。一態様において、本技術は、多重特異性免疫グロブリン関連組成物（例えば、二重特異性抗体剤）を含む、ＳＰ３４のキメラ及びヒト化バリアントを提供する。Ｋａｂａｔアノテーションシステムに基づく本技術のヒト化ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬのＣＤＲを以下に要約する。
本技術のヒト化ＳＰ３４バリアントの例示的な重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列が、図１に記載される。
一態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）（ｉ）ＶＨは、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＫＡＤＳＶＫＤ（配列番号７）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＫＶＫＤ（配列番号８）、若しくはＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＷＤＳＶＫＤ（配列番号９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ（配列番号３）、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）、若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含むか、又は（ｉｉ）ＶＨは、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ（配列番号４９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／あるいは（ｂ）（ｉ）ＶＬは、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含むか、又は（ｉｉ）ＶＬは、ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含むか、又は（ｉｉｉ）ＶＬは、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）若しくはＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む。
一態様において、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供し、（ａ）ＶＨは、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、若しくは配列番号４３のアミノ酸配列を含み、かつ／又はＶＬは、配列番号１４、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、若しくは配列番号４７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１８及び配列番号２０、配列番号２１及び配列番号１９、配列番号２２及び配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５、配列番号１８及び配列番号２６、配列番号１８及び配列番号２７、配列番号２２及び配列番号２８、配列番号２９及び配列番号２８、配列番号３０及び配列番号２８、配列番号３１及び配列番号２８、配列番号３２及び配列番号２８、配列番号３３及び配列番号２８、配列番号２２及び配列番号３４、配列番号３５及び配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８、配列番号３９及び配列番号２７、配列番号４０及び配列番号２７、配列番号４１及び配列番号２７、配列番号４２及び配列番号２７、配列番号４３及び配列番号２７、配列番号１８及び配列番号４４、配列番号１３及び配列番号４５、配列番号１５及び配列番号４５、配列番号１６及び配列番号４５、配列番号１７及び配列番号４５、配列番号１３及び配列番号４６、配列番号１５及び配列番号４６、配列番号１６及び配列番号４６、配列番号１７及び配列番号４６、配列番号１３及び配列番号４７、配列番号１５及び配列番号４７、配列番号１６及び配列番号４７、並びに配列番号１７及び配列番号４７からなる群から選択される重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含む。
上記の実施形態のうちのいずれかにおいて、抗体は、任意のアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、又はＩｇＭ、及びＩｇＹに限定されない、Ｆｃドメインを更に含む。定常領域配列の非限定的な例には、以下が含まれる。
ヒトＩｇＤ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８８０（配列番号５３）
ＡＰＴＫＡＰＤＶＦＰＩＩＳＧＣＲＨＰＫＤＮＳＰＶＶＬＡＣＬＩＴＧＹＨＰＴＳＶＴＶＴＷＹＭＧＴＱＳＱＰＱＲＴＦＰＥＩＱＲＲＤＳＹＹＭＴＳＳＱＬＳＴＰＬＱＱＷＲＱＧＥＹＫＣＶＶＱＨＴＡＳＫＳＫＫＥＩＦＲＷＰＥＳＰＫＡＱＡＳＳＶＰＴＡＱＰＱＡＥＧＳＬＡＫＡＴＴＡＰＡＴＴＲＮＴＧＲＧＧＥＥＫＫＫＥＫＥＫＥＥＱＥＥＲＥＴＫＴＰＥＣＰＳＨＴＱＰＬＧＶＹＬＬＴＰＡＶＱＤＬＷＬＲＤＫＡＴＦＴＣＦＶＶＧＳＤＬＫＤＡＨＬＴＷＥＶＡＧＫＶＰＴＧＧＶＥＥＧＬＬＥＲＨＳＮＧＳＱＳＱＨＳＲＬＴＬＰＲＳＬＷＮＡＧＴＳＶＴＣＴＬＮＨＰＳＬＰＰＱＲＬＭＡＬＲＥＰＡＡＱＡＰＶＫＬＳＬＮＬＬＡＳＳＤＰＰＥＡＡＳＷＬＬＣＥＶＳＧＦＳＰＰＮＩＬＬＭＷＬＥＤＱＲＥＶＮＴＳＧＦＡＰＡＲＰＰＰＱＰＧＳＴＴＦＷＡＷＳＶＬＲＶＰＡＰＰＳＰＱＰＡＴＹＴＣＶＶＳＨＥＤＳＲＴＬＬＮＡＳＲＳＬＥＶＳＹＶＴＤＨＧＰＭＫ
ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８５７（配列番号５４）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＧ２定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８５９（配列番号５５）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＧ３定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８６０（配列番号５６）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＴＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＫＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＳＧＱＰＥＮＮＹＮＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＩＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＲＦＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＭ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７１（配列番号５７）
ＧＳＡＳＡＰＴＬＦＰＬＶＳＣＥＮＳＰＳＤＴＳＳＶＡＶＧＣＬＡＱＤＦＬＰＤＳＩＴＬＳＷＫＹＫＮＮＳＤＩＳＳＴＲＧＦＰＳＶＬＲＧＧＫＹＡＡＴＳＱＶＬＬＰＳＫＤＶＭＱＧＴＤＥＨＶＶＣＫＶＱＨＰＮＧＮＫＥＫＮＶＰＬＰＶＩＡＥＬＰＰＫＶＳＶＦＶＰＰＲＤＧＦＦＧＮＰＲＫＳＫＬＩＣＱＡＴＧＦＳＰＲＱＩＱＶＳＷＬＲＥＧＫＱＶＧＳＧＶＴＴＤＱＶＱＡＥＡＫＥＳＧＰＴＴＹＫＶＴＳＴＬＴＩＫＥＳＤＷＬＧＱＳＭＦＴＣＲＶＤＨＲＧＬＴＦＱＱＮＡＳＳＭＣＶＰＤＱＤＴＡＩＲＶＦＡＩＰＰＳＦＡＳＩＦＬＴＫＳＴＫＬＴＣＬＶＴＤＬＴＴＹＤＳＶＴＩＳＷＴＲＱＮＧＥＡＶＫＴＨＴＮＩＳＥＳＨＰＮＡＴＦＳＡＶＧＥＡＳＩＣＥＤＤＷＮＳＧＥＲＦＴＣＴＶＴＨＴＤＬＰＳＰＬＫＱＴＩＳＲＰＫＧＶＡＬＨＲＰＤＶＹＬＬＰＰＡＲＥＱＬＮＬＲＥＳＡＴＩＴＣＬＶＴＧＦＳＰＡＤＶＦＶＱＷＭＱＲＧＱＰＬＳＰＥＫＹＶＴＳＡＰＭＰＥＰＱＡＰＧＲＹＦＡＨＳＩＬＴＶＳＥＥＥＷＮＴＧＥＴＹＴＣＶＡＨＥＡＬＰＮＲＶＴＥＲＴＶＤＫＳＴＧＫＰＴＬＹＮＶＳＬＶＭＳＤＴＡＧＴＣＹ
ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８６１（配列番号５８）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ヒトＩｇＡ１定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７６（配列番号５９）
ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬＣＳＴＱＰＤＧＮＶＶＩＡＣＬＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬＳＶＴＷＳＥＳＧＱＧＶＴＡＲＮＦＰＰＳＱＤＡＳＧＤＬＹＴＴＳＳＱＬＴＬＰＡＴＱＣＬＡＧＫＳＶＴＣＨＶＫＨＹＴＮＰＳＱＤＶＴＶＰＣＰＶＰＳＴＰＰＴＰＳＰＳＴＰＰＴＰＳＰＳＣＣＨＰＲＬＳＬＨＲＰＡＬＥＤＬＬＬＧＳＥＡＮＬＴＣＴＬＴＧＬＲＤＡＳＧＶＴＦＴＷＴＰＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰＰＥＲＤＬＣＧＣＹＳＶＳＳＶＬＰＧＣＡＥＰＷＮＨＧＫＴＦＴＣＴＡＡＹＰＥＳＫＴＰＬＴＡＴＬＳＫＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬＶＴＬＴＣＬＡＲＧＦＳＰＫＤＶＬＶＲＷＬＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹＬＴＷＡＳＲＱＥＰＳＱＧＴＴＴＦＡＶＴＳＩＬＲＶＡＡＥＤＷＫＫＧＤＴＦＳＣＭＶＧＨＥＡＬＰＬＡＦＴＱＫＴＩＤＲＬＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ
ヒトＩｇＡ２定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７７（配列番号６０）
ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬＤＳＴＰＱＤＧＮＶＶＶＡＣＬＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬＳＶＴＷＳＥＳＧＱＮＶＴＡＲＮＦＰＰＳＱＤＡＳＧＤＬＹＴＴＳＳＱＬＴＬＰＡＴＱＣＰＤＧＫＳＶＴＣＨＶＫＨＹＴＮＰＳＱＤＶＴＶＰＣＰＶＰＰＰＰＰＣＣＨＰＲＬＳＬＨＲＰＡＬＥＤＬＬＬＧＳＥＡＮＬＴＣＴＬＴＧＬＲＤＡＳＧＡＴＦＴＷＴＰＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰＰＥＲＤＬＣＧＣＹＳＶＳＳＶＬＰＧＣＡＱＰＷＮＨＧＥＴＦＴＣＴＡＡＨＰＥＬＫＴＰＬＴＡＮＩＴＫＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬＶＴＬＴＣＬＡＲＧＦＳＰＫＤＶＬＶＲＷＬＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹＬＴＷＡＳＲＱＥＰＳＱＧＴＴＴＦＡＶＴＳＩＬＲＶＡＡＥＤＷＫＫＧＤＴＦＳＣＭＶＧＨＥＡＬＰＬＡＦＴＱＫＴＩＤＲＭＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ
ヒトＩｇカッパ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８３４（配列番号６１）
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
いくつかの実施形態において、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号５３～６０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である重鎖定常領域を含む。追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号６１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である軽鎖定常領域を含む。
いくつかの実施形態において、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、ＣＤ３ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態において、エピトープは、立体構造エピトープ又は非立体構造エピトープである。いくつかの実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドは、配列番号６２のアミノ酸配列を有する。
ＮＣＢＩ Ｒｅｆ：ＮＰ＿０００７２４．１ Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３イプシロン鎖前駆体（配列番号６２）
ＭＱＳＧＴＨＷＲＶＬＧＬＣＬＬＳＶＧＶＷＧＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＣＥＮＣＭＥＭＤＶＭＳＶＡＴＩＶＩＶＤＩＣＩＴＧＧＬＬＬＬＶＹＹＷＳＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬＮＱＲＲＩ
追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ３ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態において、細胞外ドメインは、アミノ酸配列ＱＤＧＮＥ（配列番号６３）を含む。
いくつかの実施形態において、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列は、同じポリペプチド鎖の構成成分である。他の実施形態において、ＨＣ及びＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列は、異なるポリペプチド鎖の構成成分である。特定の実施形態において、抗体は、全長抗体である。
いくつかの実施形態において、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、少なくとも１つのＣＤ３ポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、少なくとも１つのＣＤ３ポリペプチドに、約１０－３Ｍ、１０－４Ｍ、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、又は１０－１２Ｍの解離定数（ＫＤ）で結合する。特定の実施形態において、免疫グロブリン関連組成物は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、又は多重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域を含む。
特定の実施形態において、免疫グロブリン関連組成物は、以下の特徴：（ａ）配列番号１４、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、若しくは配列番号４７の軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び／又は（ｂ）配列番号１３、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、若しくは配列番号４３のうちのいずれか１つの重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列のうちの１つ以上を含む。別の態様において、本明細書に提供される免疫グロブリン関連組成物中の１つ以上のアミノ酸残基は、別のアミノ酸で置換される。置換は、本明細書で定義される「保存的置換」であり得る。
追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、本開示の多重特異性抗体は、ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異的抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅｙ）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、ＧｌｏｂｏＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、ペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１～６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロンシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１～Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１に由来するペプチドを有する）、又は小分子ＤＯＴＡハプテンに結合する。
一態様において、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖、及び第４のポリペプチド鎖を含む多重特異性抗体を提供し、第１及び第２のポリペプチド鎖は、互いに共有結合しており、第２及び第３のポリペプチド鎖は、互いに共有結合しており、第３及び第４のポリペプチド鎖は、互いに共有結合しており、（ａ）第１のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖の各々は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｉｉ）第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと、（ｉｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）３を含むフレキシブルペプチドリンカーと、（ｉｖ）第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結されている第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、又は第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結されている第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインであって、第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインが、第２のエピトープに特異的に結合することができ、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）６を含むフレキシブルペプチドリンカーを介して一緒に連結して、単鎖可変断片を形成する、軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインと、を含み、（ｂ）第２のポリペプチド鎖及び第３のポリペプチド鎖の各々が、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｉｉ）第１の免疫グロブリンの重鎖定常ドメインと、を含み、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン若しくは第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインが、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、若しくは配列番号４３を含み、かつ／又は第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン若しくは第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインが、配列番号１４、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、若しくは配列番号４７を含む。
特定の実施形態において、免疫グロブリン関連組成物は、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ３２２Ａからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含有する。追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、免疫グロブリン関連組成物は、Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４定常領域を含有する。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物は、迅速な結合並びに細胞取り込み及び／又は緩慢な放出を促進するための構造的修飾を含有する。いくつかの態様において、本技術の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体）は、ＣＨ２定常重鎖領域に欠失を含んで、迅速な結合並びに細胞取り込み及び／又は緩慢な放出を促進し得る。いくつかの態様において、Ｆａｂ断片を使用して、迅速な結合並びに細胞取り込み及び／又は緩慢な放出を促進する。いくつかの態様において、Ｆ（ａｂ）’２断片を使用して、迅速な結合並びに細胞取り込み及び／又は緩慢な放出を促進する。
一態様において、本技術は、本明細書に記載の免疫グロブリン関連組成物のうちのいずれかをコードする核酸配列を提供する。
別の態様において、本技術は、本明細書に記載の免疫グロブリン関連組成物のうちのいずれかをコードする任意の核酸配列を発現する宿主細胞を提供する。
本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗ＣＤ３抗体）は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、又はより多い多重特異性であり得る。多重特異性抗体は、１つ以上のＣＤ３ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であることができるか、又はＣＤ３ポリペプチド並びに異種ポリペプチド又は固体支持材などの異種組成物の両方に特異的であることができる。例えば、ＷＯ９３／１７７１５、ＷＯ９２／０８８０２、ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／０５７９３、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０－６９（１９９１）、米国特許第５，５７３，９２０号、同第４，４７４，８９３号、同第５，６０１，８１９号、同第４，７１４，６８１号、同第４，９２５，６４８号、同第６，１０６，８３５号、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７－１５５３（１９９２）を参照されたい。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン関連組成物は、キメラである。特定の実施形態において、免疫グロブリン関連組成物は、ヒト化されている。
本技術の免疫グロブリン関連組成物は更に、異種ポリペプチドにＮ末端若しくはＣ末端で組換え的に融合することができるか、又はポリペプチド若しくは他の組成物に化学的にコンジュゲートすることができる（共有結合的及び非共有結合的コンジュゲーションを含む）。例えば、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、検出アッセイの標識として有用な分子、及び異種ポリペプチド、薬物、又は毒素などのエフェクター分子に組換え的に融合又はコンジュゲートすることができる。例えば、ＷＯ９２／０８４９５、ＷＯ９１／１４４３８、ＷＯ８９／１２６２４、米国特許第５，３１４，９９５号、及びＥＰ０３９６３８７を参照されたい。
本技術の免疫グロブリン関連組成物の上記実施形態のいずれかにおいて、抗体又は抗原結合断片は、任意選択的に、同位体、色素、クロマゲン、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、成長因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡ、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される薬剤にコンジュゲートされ得る。化学結合又は物理結合について、免疫グロブリン関連組成物上の官能基は、典型的には、薬剤上の官能基と会合する。あるいは、薬剤上の官能基は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基と会合する。
薬剤及び免疫グロブリン関連組成物上の官能基は、直接会合することができる。例えば、薬剤上の官能基（例えば、スルフヒドリル基）は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基（例えば、スルフヒドリル基）と会合して、ジスルフィドを形成することができる。あるいは、官能基は、架橋剤（すなわち、リンカー）を通して会合することができる。架橋剤のいくつかの例を以下に記載する。架橋剤は、薬剤又は免疫グロブリン関連組成物のいずれかに結合することができる。コンジュゲート中の薬剤又は免疫グロブリン関連組成物の数は、他方に存在する官能基の数によっても限定される。例えば、コンジュゲートに会合した薬剤の最大数は、免疫グロブリン関連組成物に存在する官能基の数に依存する。あるいは、薬剤と会合した免疫グロブリン関連組成物の最大数は、薬剤に存在する官能基の数に依存する。
更に別の実施形態において、コンジュゲートは、１つの薬剤に会合した１つの免疫グロブリン関連組成物を含む。一実施形態において、コンジュゲートは、少なくとも１つの免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合した（例えば、コンジュゲートした）少なくとも１つの薬剤を含む。薬剤は、当業者に既知の任意の方法によって免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合することができる。例えば、薬剤上の官能基は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基に直接結合し得る。好適な官能基のいくつかの例としては、例えば、アミノ、カルボキシル、スルフヒドリル、マレイミド、イソシアネート、イソチオシアネート、及びヒドロキシルが挙げられる。
薬剤はまた、ジアルデヒド、カルボジイミド、ジマレイミドなどのような、架橋剤によって免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合し得る。架橋剤は、例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌから得ることができる。Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．のウェブサイトは援助を提供することができる。追加の架橋剤としては、Ｋｒｅａｔｅｃｈ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂ．Ｖ．、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓの米国特許第５，５８０，９９０号、同第５，９８５，５６６号、及び同第６，１３３，０３８号に記載される白金架橋剤が挙げられる。
あるいは、薬剤上の官能基及び免疫グロブリン関連組成物は、同じであり得る。ホモ二官能性架橋剤は、典型的には、同一の官能基を架橋するために使用される。ホモ二官能性架橋剤の例としては、ＥＧＳ（すなわち、ビス［スクシンイミジルコハク酸］エチレングリコール）、ＤＳＳ（すなわち、スベリン酸ジスクシンイミジル）、ＤＭＡ（すなわち、アジプイミド酸ジメチル．２ＨＣｌ）、ＤＴＳＳＰ（すなわち、３，３’－ジチオビス［スルホスクシンイミジルプロピオンナート］）、ＤＰＤＰＢ（すなわち、１，４－ジ－［３’－（２’－ピリジルジチオ）－プロピオンアミド］ブタン）、及びＢＭＨ（すなわち、ビス－マレイミドヘキサン）が挙げられる。かかるホモ二官能性架橋剤はまた、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．から入手可能である。
他の場合において、薬剤を免疫グロブリン関連組成物から切断することが有益であり得る。上記のＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．のウェブサイトはまた、例えば、細胞における酵素によって切断することができる好適な架橋剤を選択することにおいて、当業者に援助を提供することができる。よって、薬剤は、免疫グロブリン関連組成物から分離することができる。切断可能なリンカーの例としては、ＳＭＰＴ（すなわち、４－スクシンイミジルオキシカルボニル－メチル－ａ－［２－ピリジルジチオ］トルエン）、スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（すなわち、スルホスクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート）、ＬＣ－ＳＰＤＰ（すなわち、スクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート）、スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（すなわち、スルホスクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート）、ＳＰＤＰ（すなわち、Ｎ－スクシンイミジル３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミドヘキサノエート）、及びＡＥＤＰ（すなわち、３－［（２－アミノエチル）ジチオ］プロピオン酸ＨＣｌ）が挙げられる。
別の実施形態において、コンジュゲートは、少なくとも１つの免疫グロブリン関連組成物と物理的に結合した少なくとも１つの薬剤を含む。当業者に既知の任意の方法は、薬剤を免疫グロブリン関連組成物と物理的に結合させるために用いることができる。例えば、免疫グロブリン関連組成物及び薬剤は、当業者に既知の任意の方法によって一緒に混合することができる。混合の順序は、重要ではない。例えば、薬剤は、当業者に既知の任意の方法によって免疫グロブリン関連組成物と物理的に混合することができる。例えば、免疫グロブリン関連組成物及び薬剤は、容器に入れ、例えば、容器を振盪することによって撹拌して、免疫グロブリン関連組成物及び薬剤を混合することができる。
免疫グロブリン関連組成物は、当業者に既知の任意の方法によって修飾することができる。例えば、免疫グロブリン関連組成物は、上記のように、架橋剤又は官能基によって修飾され得る。
本技術は、一般に、ＣＤ３タンパク質に特異的に結合する免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）の調製及びその使用に関する。特に、本技術は、ＣＤ３結合抗体の調製及びＣＤ３の検出及びがんの治療におけるそれらの使用に関する。
Ａ．本技術の抗ＣＤ３抗体を調製する方法
一般的な概要。最初に、標的ポリペプチドが選択され、それに対して本技術の抗体を上昇させる（ｒａｉｓｅ）ことができる。例えば、抗体は、全長ＣＤ３タンパク質、又はＣＤ３タンパク質の細胞外ドメインの一部分に対して上昇され得る。かかる標的ポリペプチドに向けられる抗体を生成するための技術は、当業者に周知である。かかる技術の例には、例えば、ディスプレイライブラリ、ｘｅｎｏ又はヒトマウス、ハイブリドーマなどを伴うものが含まれるが、これらに限定されない。本技術の範囲内の標的ポリペプチドには、免疫応答を誘発することができる細胞外ドメインを含有するＣＤ３タンパク質に由来する任意のポリペプチドが含まれる。特定の実施形態において、細胞外ドメインは、アミノ酸配列ＱＤＧＮＥ（配列番号６３）を含む。
ＣＤ３タンパク質及びその断片に向けられる、組換え操作された抗体及び抗体断片、例えば、抗体関連ポリペプチドは、本開示による使用に好適であることを理解されたい。
本明細書に示される技術に供することができる抗ＣＤ３抗体には、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体、並びにＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、抗体軽鎖、抗体重鎖、及び／又は抗体断片などの抗体断片が含まれる。抗体Ｆｖ含有ポリペプチド、例えば、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２抗体断片の高収率産生に有用な方法が記載されている。米国特許第５，６４８，２３７号を参照されたい。
一般に、抗体は、発端となる種から得られる。より具体的には、標的ポリペプチド抗原に対して特異性を有する発端となる種の抗体の軽鎖、重鎖、又はその両方の可変部分の核酸又はアミノ酸配列が得られる。発端となる種は、本技術の抗体又は抗体のライブラリ（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ニワトリ、サル、ヒトなど）を生成するのに有用であった任意の種である。
ファージ又はファージミドディスプレイ技術は、本技術の抗体を誘導するのに有用な技術である。モノクローナル抗体を生成及びクローニングするための技術は、当業者に周知である。本技術の抗体をコードする配列の発現は、Ｅ．ｃｏｌｉで実行することができる。
核酸コード配列の縮重性により、天然に存在するタンパク質のものと実質的に同じアミノ酸配列をコードする他の配列が、本技術の実施において使用され得る。これらには、限定されないが、上記のポリペプチドをコードする核酸配列の全部又は一部を含む核酸配列が含まれ、これらは、配列内の機能的に等価なアミノ酸残基をコードする異なるコドンの置換によって変更され、したがって、サイレント変化を生じる。本技術による免疫グロブリンのヌクレオチド配列は、標準的な方法（“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ，” Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．１２７－１４９，１９９８，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）によって計算されるときに、かかるバリアントがＣＤ３タンパク質を認識する操作的な抗体を形成する限り、最大２５％の配列相同性変動を許容することが理解されよう。例えば、ポリペプチド配列内の１つ以上のアミノ酸残基は、機能的等価物として機能する類似の極性の別のアミノ酸によって置換され、サイレント変化をもたらすことができる。配列内のアミノ酸における置換は、アミノ酸が属するクラスの他のメンバーから選択され得る。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸には、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びメチオニンが含まれる。極性中性アミノ酸には、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、及びグルタミンが含まれる。正に荷電した（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リジン、及びヒスチジンが含まれる。負に荷電した（酸性）アミノ酸には、アスパラギン酸及びグルタミン酸が含まれる。また、本技術の範囲内には、例えば、グリコシル化、タンパク質分解切断、抗体分子又は他の細胞リガンドとの結合などによって、翻訳中又は翻訳後に差次的に修飾されるタンパク質、又はその断片若しくは誘導体が含まれる。追加的に、免疫グロブリンコード核酸配列を、インビトロ若しくはインビボで変異させて、翻訳、開始、及び／若しくは終結配列を作製及び／若しくは破壊するか、あるいはコード領域に変異を作製し、かつ／若しくは新たな制限エンドヌクレアーゼ部位を形成するか、又は既存のものを破壊して、インビトロ修飾を更に促進することができる。当該技術分野で既知の変異誘発のための任意の技術を使用することができ、インビトロ部位特異的変異誘発、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：６５５１、Ｔａｂリンカー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の使用などが含まれるが、これらに限定されない。
ポリクローナル抗血清及び免疫原の調製。本技術の抗体又は抗体断片を生成する方法は、典型的には、対象（一般に、マウス又はウサギなどの非ヒト対象）を、精製されたＣＤ３タンパク質若しくはその断片で、又はＣＤ３タンパク質若しくはその断片を発現する細胞で免疫化することを含む。適切な免疫原性調製物は、例えば、組換え発現されたＣＤ３タンパク質又は化学的合成されたＣＤ３ペプチドを含むことができる。ＣＤ３タンパク質の細胞外ドメイン、又はその一部若しくは断片を免疫原として使用して、ＣＤ３タンパク質、又はその一部若しくは断片に結合する抗ＣＤ３抗体を、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の調製のための標準技術を使用して生成することができる。特定の実施形態において、細胞外ドメインは、アミノ酸配列ＱＤＧＮＥ（配列番号６３）を含む。
全長ＣＤ３タンパク質又はその断片は、免疫原として断片として有用である。いくつかの実施形態において、ＣＤ３断片は、ＣＤ３タンパク質の細胞外ドメイン、又はその一部若しくは断片（例えば、アミノ酸配列ＱＤＧＮＥ（配列番号６３）を含むＣＤ３ポリペプチド）を含み、その結果、ペプチドに対して上昇された抗体は、ＣＤ３タンパク質との特異的免疫複合体を形成する。いくつかの実施形態において、抗原性ＣＤ３ペプチドは、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、又は少なくとも１００個のアミノ酸残基を含む。より長い抗原性ペプチドが、使用に応じ、当業者に周知の方法に従い、より短い抗原性ペプチドよりも時には望ましい。所与のエピトープの多量体が、時には単量体よりも効果的である。
必要に応じて、ＣＤ３タンパク質（又はその断片）の免疫原性は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又はオバルブミン（ＯＶＡ）などの担体タンパク質との融合又はコンジュゲーションによって増加させることができる。多くのかかる担体タンパク質が、当技術分野で知られている。また、ＣＤ３タンパク質をフロイント完全又は不完全アジュバントなどの従来のアジュバントと組み合わせて、ポリペプチドに対する対象の免疫反応を増加させることができる。免疫学的応答を増加させるために使用される様々なアジュバントには、フロイント（完全及び不完全）、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、表面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニック（登録商標）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルション、ジニトロフェノールなど）、Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ及びＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍなどのヒトアジュバント、又は同様の免疫刺激化合物が含まれるが、これらに限定されない。これらの技法は、当該技術分野において標準的である。
本技術を記載する際に、免疫応答は、「一次」又は「二次」免疫応答のいずれかとして記載され得る。「保護的」免疫応答としても記載される一次免疫応答は、特定の抗原、例えば、ＣＤ３タンパク質へのいくつかの初期曝露（例えば、初期「免疫化」）の結果として、個体で生じる免疫応答を指す。いくつかの実施形態において、免疫は、個体に抗原を含有するワクチンを接種する結果として生じることができる。例えば、ワクチンは、１つ以上のＣＤ３タンパク質由来抗原を含むＣＤ３ワクチンであることができる。一次免疫応答は、時間の経過とともに弱化又は減少し、消失又は少なくともそれが検出できないほど減少さえし得る。したがって、本技術はまた、「二次」免疫応答に関するものであり、「記憶免疫応答」としても本明細書に記載される。二次免疫応答という用語は、一次免疫応答が既に生じている個体に誘発される免疫応答を指す。
したがって、二次免疫応答を誘発して、例えば、弱化若しくは減少してきている既存の免疫応答を増強するか、又は消失しているか、若しくはもはや検出できないかのいずれかの以前の免疫応答を再構築することができる。二次又は記憶免疫応答は、体液性（抗体）応答又は細胞性応答のいずれかであることができる。二次又は記憶体液性応答は、抗原の最初の提示時に生成された記憶Ｂ細胞の刺激で生じる。遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応は、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって媒介される細胞二次又は記憶免疫応答のタイプである。抗原に対する最初の曝露は、免疫系をプライミングし、追加の曝露が、ＤＴＨをもたらす。
適切な免疫後、抗ＣＤ３抗体は、対象の血清から調製することができる。所望の場合、ＣＤ３タンパク質に対して向けられた抗体分子は、哺乳動物から（例えば、血液から）単離することができ、ポリペプチドＡクロマトグラフィーなどの周知の技法によって更に精製して、ＩｇＧ画分を得ることができる。
モノクローナル抗体。本技術の一実施形態において、抗体は、抗ＣＤ３モノクローナル抗体である。例えば、いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３モノクローナル抗体は、ヒト又はマウス抗ＣＤ３モノクローナル抗体であり得る。ＣＤ３タンパク質、又はその誘導体、断片、類似体、若しくはホモログに対して向けられるモノクローナル抗体の調製のために、連続細胞株培養によって抗体分子の産生を提供する任意の技法を利用することができる。かかる技法には、ハイブリドーマ技法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５．Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７を参照されたい）、トリオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，ｅｔ ａｌ．，１９８３．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ４：７２を参照されたい）、及びヒトモノクローナル抗体を産生するＥＢＶハイブリドーマ技法（例えば、Ｃｏｌｅ，ｅｔ ａｌ．，１９８５．Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。ヒトモノクローナル抗体は、本技術の実施において利用することができ、ヒトハイブリドーマを使用することによって（例えば、Ｃｏｔｅ，ｅｔ ａｌ．，１９８３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２０２６－２０３０を参照されたい）、又はインビトロでヒトＢ細胞をエプスタイン・バーウイルスで形質転換することによって（例えば、Ｃｏｌｅ，ｅｔ ａｌ．，１９８５．Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６を参照されたい）産生することができる。例えば、抗体の領域をコードする核酸の集団を単離することができる。抗体の保存された領域をコードする配列に由来するプライマーを利用したＰＣＲを使用して、抗体の部分をコードする配列を集団から増幅させ、次いで、抗体又は可変ドメインなどのその断片をコードするＤＮＡを、増幅させた配列から再構築する。かかる増幅させた配列はまた、ファージ又は細菌での融合ポリペプチドの発現及び提示のために、他のタンパク質－例えば、バクテリオファージコート、又は細菌細胞表面タンパク質－をコードするＤＮＡに融合することができる。増幅させた配列を発現させ、更に、例えば、ＣＤ３タンパク質に存在する抗原又はエピトープに対して発現された抗体又はその断片の親和性に基づいて、選択又は単離することができる。代替的に、抗ＣＤ３モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは、対象を免疫し、次いで、定型的方法を使用して、対象の脾臓からハイブリドーマを単離することによって調製することができる。例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，（Ｇａｌｆｒｅ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８１）７３：３－４６）を参照されたい。標準的な方法を使用してハイブリドーマをスクリーニングすると、様々な特異性（すなわち、異なるエピトープに対する）及び親和性のモノクローナル抗体が生成される。所望の特性、例えば、ＣＤ３結合を有する選択されたモノクローナル抗体は、ハイブリドーマによって発現されるように使用することができ、それは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの分子に結合させてその特性を変更することができるか、又はそれをコードするｃＤＮＡを、様々な方法で単離、配列決定、及び操作することができる。合成デンドロマーツリーを反応性アミノ酸側鎖、例えばリジンに付加して、ＣＤ３タンパク質の免疫原性特性を増強することができる。また、ＣＰＧ－ジヌクレオチド技法を使用して、ＣＤ３タンパク質の免疫原性特性を増強することができる。他の操作には、保存中又は対象への投与後の抗体の不安定性に関与する特定のアミノアシル残基の置換又は欠失、及びＣＤ３タンパク質の抗体の親和性を改善する親和性成熟技法が含まれる。
ハイブリドーマ技法。いくつかの実施形態において、本技術の抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含む、ハイブリドーマによって産生された抗ＣＤ３モノクローナル抗体である。ハイブリドーマ技法は、当該技術分野で既知であり、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，３４９（１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，５６３－６８１（１９８１）に教示されている。ハイブリドーマ及びモノクローナル抗体を生成するための他の方法は、当業者に周知である。
ファージディスプレイ技法。上述したように、本技術の抗体は、組換えＤＮＡ及びファージディスプレイ技術の適用によって産生することができる。例えば、抗ＣＤ３抗体は、当技術分野で既知の様々なファージディスプレイ方法を使用して調製することができる。ファージディスプレイ方法では、機能的抗体ドメインが、それらをコードするポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上に提示される。所望の結合特性を有するファージは、典型的には、固体表面又はビーズに結合又は捕捉された抗原を用いて直接的に選択することによって、レパートリー又は組み合わせ抗体ライブラリ（例えば、ヒト又はネズミ）から選択される。これらの方法に使用されるファージは、典型的には、ファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換えによって融合されたＦａｂ、Ｆｖ、又はジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを有するｆｄ及びＭ１３を含む繊維状ファージである。加えて、方法は、Ｆａｂ発現ライブラリの構築のために適合させて（例えば、Ｈｕｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１，１９８９を参照されたい）、ＣＤ３ポリペプチド、例えば、ポリペプチド、又はその誘導体、断片、類似体、若しくはホモログに対して所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速で効果的な特定を可能にする。本技術の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ方法の他の例には、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５：５８７９－５８８３，１９８８、Ｃｈａｕｄｈａｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．，８７：１０６６－１０７０，１９９０、Ｂｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０，１９９５、Ａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６，１９９５、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２－９５８，１９９４、Ｐｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １８７：９－１８，１９９７、Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１－２８０，１９９４、ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４、ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１、ＷＯ９６／０６２１３、ＷＯ９２／０１０４７（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｅｔ ａｌ．）、ＷＯ９７／０８３２０（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）、ＷＯ９２／０１０４７（ＣＡＴ／ＭＲＣ）、ＷＯ９１／１７２７１（Ａｆｆｙｍａｘ）、並びに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、及び同第５，７３３，７４３号に開示されるものが含まれる。ジスルフィド結合を介してポリペプチドに結合することによって、バクテリオファージ粒子の表面にポリペプチドを提示するのに有用な方法は、Ｌｏｈｎｉｎｇ，米国特許第６，７５３，１３６号によって記載されている。上記の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージからの抗体コード領域を単離し、使用してヒト抗体を含む全抗体、又は任意の他の所望の抗原結合断片を生成し、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌を含む任意の所望の宿主で発現させることができる。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２断片を組換えによって産生する技法はまた、ＷＯ９２／２２３２４、Ｍｕｌｌｉｎａｘ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２：８６４－８６９，１９９２、及びＳａｗａｉ ｅｔ ａｌ．，ＡＪＲＩ ３４：２６－３４，１９９５、及びＢｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３，１９８８に開示されるものなどの当技術分野に既知の方法を使用して用いることができる。
一般に、抗体又は抗体断片は、ファージ又はファージミド粒子の表面上に存在するため、ディスプレイベクターにクローニングされるハイブリッド抗体又はハイブリッド抗体断片を適切な抗原に対して選択して、優れた結合活性を維持するバリアントを特定することができる。例えば、Ｂａｒｂａｓ ＩＩＩ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）を参照されたい。しかしながら、選択及び／又はスクリーニングのために、抗体断片ライブラリを溶解性ファージベクター（修飾Ｔ７又はラムダＺａｐ系）にクローニングするなどの、他のベクター方式をこのプロセスに使用することができる。
組換え抗ＣＤ３抗体の発現。上述したように、本技術の抗体は、組換えＤＮＡ技術の適用によって産生することができる。本技術の抗ＣＤ３抗体をコードする組換えポリヌクレオチド構築物は、典型的には、抗ＣＤ３抗体鎖のコード配列に操作可能に連結された発現制御配列を含み、天然に関連するか又は異種のプロモーター領域が含まれる。したがって、本技術の別の態様は、本技術の抗ＣＤ３抗体をコードする１つ以上の核酸配列を含有するベクターを含む。本技術のポリペプチドのうちの１つ以上の組換え発現のために、抗ＣＤ３抗体をコードするヌクレオチド配列の全て又は一部を含む核酸は、適切なクローニングベクター、又は発現ベクター（すなわち、挿入されたポリペプチドコード配列の転写及び翻訳に必要な要素を含有するベクター）に、当技術分野で周知であり、以下に詳細される組換えＤＮＡ技法によって挿入される。多様な集団のベクターを生成するための方法は、Ｌｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，米国特許第６，２９１，１６０号及び同第６，６８０，１９２号に記載されている。
一般に、組換えＤＮＡ技法で有用な発現ベクターは、多くの場合、プラスミドの形態にある。本開示において、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般に使用されている形態であるため、互換的に使用され得る。しかしながら、本技術は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）などの、技術的にプラスミドではない他の形態の発現ベクターを含むことが意図される。かかるウイルスベクターは、対象の感染及びその対象における構築物の発現を可能にする。いくつかの実施形態において、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトすることができるベクターにおける真核生物プロモーター系である。ベクターが適切な宿主に組み込まれていると、宿主は、抗ＣＤ３抗体をコードするヌクレオチド配列の高レベル発現、並びに抗ＣＤ３抗体、例えば、交差反応性抗ＣＤ３抗体の収集及び精製に好適な条件下で維持される。一般に、Ｕ．Ｓ．２００２／０１９９２１３を参照されたい。これらの発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、又は宿主染色体ＤＮＡの組み込み部分としてのいずれかで、宿主生物において複製可能である。一般に、発現ベクターは、選択マーカー、例えば、アンピシリン耐性又はヒグロマイシン耐性を含有し、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたこれらの細胞の検出を可能にする。ベクターはまた、細胞外抗体断片の分泌を指示するのに有用なシグナルペプチド、例えばペクチン酸リアーゼをコードすることができる。米国特許第５，５７６，１９５号を参照されたい。
本技術の組換え発現ベクターは、ＣＤ３結合特性を有するタンパク質をコードする核酸を、宿主細胞における核酸の発現に好適な形態で含み、これは、組換え発現ベクターが、発現される核酸配列に操作可能に連結される、発現に使用される宿主細胞に基づいて選択される１つ以上の調節配列を含むことを意味する。組換え発現ベクターにおいて、「操作可能に連結された」とは、目的のヌクレオチド配列が、（例えば、インビトロ転写／翻訳系で、又はベクターが宿主細胞に導入される場合に宿主細胞で）ヌクレオチド配列の発現を可能にする手段で調節配列に連結されることを意味することが意図される。「調節配列」という用語は、プロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。かかる調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。調節配列には、多くのタイプの宿主細胞におけるヌクレオチド配列の構成的発現を指示するもの、及び特定の宿主細胞でのみヌクレオチド配列の発現を指示するもの（例えば、組織特異的調節配列）が含まれる。当業者であれば、発現ベクターの設計が、形質転換される宿主細胞の選択、所望されるポリペプチドの発現レベルなどの因子に依存し得ることが理解されるであろう。組換えポリペプチド発現（例えば、抗ＣＤ３抗体）のプロモーターとして有用な典型的な調節配列には、例えば、３－ホスホグリセリン酸キナーゼ及び他の糖解酵素のプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。誘導性酵母プロモーターには、とりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソシトクロムＣからのプロモーター、並びにマルトース及びガラクトース利用に関与する酵素が含まれる。一実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体をコードするポリヌクレオチドは、ａｒａ Ｂプロモーターに操作可能に連結され、宿主細胞において発現可能である。米国特許第５，０２８，５３０号を参照されたい。本技術の発現ベクターを宿主細胞に導入し、それによって、本明細書に記載されるような核酸（例えば、抗ＣＤ３抗体など）によってコードされる融合ポリペプチドを含む、ポリペプチド又はペプチドを産生することができる。
本技術の別の態様は、１つ以上の抗ＣＤ３抗体をコードする核酸を含有する、抗ＣＤ３抗体発現宿主細胞に関する。本技術の組換え発現ベクターは、原核生物細胞又は真核生物細胞における抗ＣＤ３抗体の発現のために設計することができる。例えば、抗ＣＤ３抗体は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなどの細菌細胞、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを使用）、真菌細胞、例えば、酵母、酵母細胞、又は哺乳類細胞などで発現させることができる。好適な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ，ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）で更に考察されている。代替的に、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列及びＴ７ポリメラーゼを使用して、インビトロで転写及び翻訳することができる。確率的に生成されたポリヌクレオチド配列の発現を介して、所定の特性を有するポリペプチド、例えば、抗ＣＤ３抗体の調製及びスクリーニングに有用な方法が、既に記載されている。米国特許第５，７６３，１９２号、同第５，７２３，３２３号、同第５，８１４，４７６号、同第５，８１７，４８３号、同第５，８２４，５１４号、同第５，９７６，８６２号、同第６，４９２，１０７号、同第６，５６９，６４１号を参照されたい。
原核生物におけるポリペプチドの発現は、多くの場合、融合ポリペプチド又は非融合ポリペプチドのいずれかの発現を指示する構成的又は誘導性プロモーターを含むベクターを用いてＥ．ｃｏｌｉで実行される。融合ベクターは、それにコードされるポリペプチドに、通常、組換えポリペプチドのアミノ末端に、いくつかのアミノ酸を付加する。かかる融合ベクターは、典型的には、（ｉ）組換えポリペプチドの発現を増加させ、（ｉｉ）組換えポリペプチドの溶解性を増加させ、（ｉｉｉ）アフィニティー精製においてリガンドとして作用することによって組換えポリペプチドの精製を補助するという３つの目的を果たす。多くの場合、融合発現ベクターにおいて、タンパク質分解切断部位が融合部分と組換えポリペプチドとの接合部に導入され、融合ポリペプチドの精製に続いて、融合部分からの組換えポリペプチドの分離を可能にする。かかる酵素、及びそれらの同族認識配列には、第Ｘａ因子、トロンビン、及びエンテロキナーゼが含まれる。典型的な融合発現ベクターには、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合ポリペプチド、又はポリペプチドＡをそれぞれ標的組換えポリペプチドに融合させる、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ，１９８８．Ｇｅｎｅ ６７：３１－４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ ．）、及びｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が含まれる。
好適な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例には、ｐＴｒｃ（Ａｍｒａｎｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｇｅｎｅ ６９：３０１－３１５）及びｐＥＴ １１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）６０－８９）が含まれる。ポリペプチド融合を介して多官能性ポリペプチドを得る、異なる活性ペプチド又はタンパク質ドメインの標的化組み立てのための方法は、Ｐａｃｋ ｅｔ ａｌ．，米国特許第６，２９４，３５３号、同第６，６９２，９３５号に記載されている。Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えポリペプチド発現、例えば、抗ＣＤ３抗体を最大化する１つの戦略は、組換えポリペプチドをタンパク質分解的に切断する能力が損なわれた宿主細菌でポリペプチドを発現することである。例えば、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）１１９－１２８を参照されたい。別の戦略は、各アミノ酸における個々のコドンが発現宿主、例えばＥ．ｃｏｌｉで優先的に利用されるものであるように、発現ベクターに挿入される核酸の核酸配列を変更することである（例えば、Ｗａｄａ，ｅｔ ａｌ．，１９９２．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：２１１１－２１１８を参照されたい）。本技術の核酸配列のかかる変更は、標準的なＤＮＡ合成技法によって実行することができる。
別の実施形態において、抗ＣＤ３抗体発現ベクターは、酵母発現ベクターである。酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける発現のためのベクターの例には、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉ，ｅｔ ａｌ．，１９８７．ＥＭＢＯ Ｊ．６：２２９－２３４）、ｐＭＦａ（Ｋｕｒｊａｎ ａｎｄ Ｈｅｒｓｋｏｗｉｔｚ，Ｃｅｌｌ ３０：９３３－９４３，１９８２）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ５４：１１３－１２３，１９８７）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、及びｐｉｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）が含まれる。代替的に、抗ＣＤ３抗体は、バキュロウイルス発現ベクターを使用して昆虫細胞で発現させることができる。培養した昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）におけるポリペプチド、例えば、抗ＣＤ３抗体の発現に利用可能なバキュロウイルスベクターには、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２１５６－２１６５，１９８３）及びｐＶＬシリーズ（Ｌｕｃｋｌｏｗ ａｎｄ Ｓｕｍｍｅｒｓ，１９８９．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１－３９）が含まれる。
更に別の実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体をコードする核酸は、哺乳類発現ベクターを使用して哺乳類細胞で発現させる。哺乳類発現ベクターの例には、例えば、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ，Ｎａｔｕｒｅ ３２９：８４０，１９８７）及びｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．６：１８７－１９５，１９８７）が含まれるが、これらに限定されない。哺乳類細胞で使用される場合、発現ベクターの制御機能は、多くの場合、ウイルス調節要素によって提供される。例えば、一般に使用されているプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、及びシミアンウイルス４０に由来する。本技術の抗ＣＤ３抗体の発現に有用な原核生物細胞及び真核生物細胞の両方に好適な他の発現系について、例えば、Ｃｈａｐｔｅｒｓ １６ ａｎｄ １７ ｏｆ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ．２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９を参照されたい。
別の実施形態において、組換え哺乳類発現ベクターは、特定の細胞タイプで核酸の発現を指示することができる（例えば、組織特異的調節要素）。組織特異的調節要素は、当該技術分野で既知である。好適な組織特異的プロモーターの非限定的な例には、アルブミンプロモーター（肝臓特異的、Ｐｉｎｋｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１：２６８－２７７，１９８７）、リンパ特異的プロモーター（Ｃａｌａｍｅ ａｎｄ Ｅａｔｏｎ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：２３５－２７５，１９８８）、Ｔ細胞受容体（Ｗｉｎｏｔｏ ａｎｄ Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＥＭＢＯ Ｊ．８：７２９－７３３，１９８９）及び免疫グロブリンのプロモーター（Ｂａｎｅｒｊｉ，ｅｔ ａｌ．，１９８３．Ｃｅｌｌ ３３：７２９－７４０、Ｑｕｅｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｃｅｌｌ ３３：７４１－７４８，１９８３．）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、神経線維プロモーター、Ｂｙｒｎｅ ａｎｄ Ｒｕｄｄｌｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：５４７３－５４７７，１９８９）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄ，ｅｔ ａｌ．，１９８５．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：９１２－９１６）、並びに乳腺特異的プロモーター（例えば、ミルクホエープロモーター、米国特許第４，８７３，３１６号及び欧州出願公開第２６４，１６６号）が含まれる。発生的に調節されたプロモーター、例えば、ネズミｈｏｘプロモーター（Ｋｅｓｓｅｌ ａｎｄ Ｇｒｕｓｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３７４－３７９，１９９０）及びα－フェトプロテインプロモーター（Ｃａｍｐｅｓ ａｎｄ Ｔｉｌｇｈｍａｎ，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．３：５３７－５４６，１９８９）も包含される。
本方法の別の態様は、本技術の組換え発現ベクターが導入されている宿主細胞に関する。「宿主細胞」及び「組換え宿主細胞」という用語は、本明細書で互換的に使用される。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫又は潜在的子孫も指すことを理解されたい。変異又は環境影響のいずれかにより、特定の修飾が後世代で生じ得るため、かかる子孫は実際には親細胞と同一ではない場合があるが、依然として本明細書で使用される本用語の範囲内に含まれる。
宿主細胞は、任意の原核生物細胞又は真核生物細胞であることができる。例えば、抗ＣＤ３抗体は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、昆虫細胞、酵母、又は哺乳類細胞で発現させることができる。哺乳類細胞は、免疫グロブリン又はその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現するのに好適な宿主である。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ Ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。インタクト異種タンパク質を分泌することができるいくつかの好適な宿主細胞株が当該技術分野で開発されてきており、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、様々なＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、Ｌ細胞、及び骨髄腫細胞株が含まれる。いくつかの実施形態において、細胞は、非ヒトである。これらの細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサーなどの発現制御配列、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネーター配列などの必要なプロセシング情報部位を含むことができる。Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９，１９８６。例示的な発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９，１９９２。他の好適な宿主細胞が、当業者に既知である。
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換又はトランスフェクション技法によって原核生物細胞又は真核生物細胞に導入することができる。本明細書に使用される場合、「形質転換」及び「トランスフェクション」という用語は、外来核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞に導入するための様々な当該技術分野で認識されている技法を指すことが意図され、リン酸カルシウム若しくは塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、遺伝子銃、又はウイルスベースのトランスフェクションが含まれる。哺乳類細胞を形質転換するために使用される他の方法には、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーション、及びマイクロインジェクションの使用が含まれる（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇを参照されたい）。宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトするために好適な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ．２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）、及び他の検査室マニュアルに見出すことができる。目的のＤＮＡセグメントを含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて、周知の方法によって宿主細胞に移入することができる。
哺乳類細胞の安定的なトランスフェクションでは、使用される発現ベクター及びトランスフェクション技法に応じて、わずかな割合の細胞のみが、外来ＤＮＡをそれらのゲノムに組み込み得ることは既知である。これらの組み込み体を特定及び選択するために、一般に、選択可能なマーカー（例えば、抗生物質に対する抵抗性）をコードする遺伝子が、目的とする遺伝子とともに宿主細胞に導入される。様々な選択可能なマーカーには、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、及びメトトレキサートなどの薬物に対する抵抗性を付与するものが含まれる。選択可能なマーカーをコードする核酸は、抗ＣＤ３抗体をコードするものと同じベクターで宿主細胞に導入するか、又は別個のベクターで導入することができる。導入された核酸で安定的にトランスフェクトされた細胞は、薬物選択によって特定することができる（例えば、選択可能なマーカー遺伝子を組み込んだ細胞は生存するが、他の細胞は死滅する）。
培養における原核生物又は真核生物の宿主細胞などの本技術の抗ＣＤ３抗体を含む宿主細胞を使用して、組換え抗ＣＤ３抗体を産生（すなわち、発現）することができる。一実施形態において、方法は、宿主細胞（抗ＣＤ３抗体をコードする組換え発現ベクターが導入されている）を、抗ＣＤ３抗体が産生されるような、好適な培地中で培養することを含む。別の実施形態において、方法は、培地又は宿主細胞から抗ＣＤ３抗体を単離するステップを更に含む。発現されると、抗ＣＤ３抗体、例えば、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体関連ポリペプチドの集合体を、培養培地及び宿主細胞から精製する。抗ＣＤ３抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む、当該技術分野の標準的手順に従って精製することができる。一実施形態において、抗ＣＤ３抗体は、Ｂｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，８１６，３９７号の方法によって宿主生物で産生される。通常、抗ＣＤ３抗体鎖は、シグナル配列で発現され、したがって、培養培地に放出される。しかしながら、抗ＣＤ３抗体鎖が宿主細胞によって自然に分泌されない場合、抗ＣＤ３抗体鎖は、穏やかな界面活性剤を用いた処理によって放出させることができる。組換えポリペプチドの精製は、当該技術分野で周知であり、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティークロマトグラフィー精製技法、カラムクロマトグラフィー、イオン交換精製技法、ゲル電気泳動などが含まれる（一般に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，１９８２を参照されたい）。
抗ＣＤ３抗体をコードするポリヌクレオチド、例えば、抗ＣＤ３抗体コード配列は、トランスジェニック動物のゲノムへの導入及びトランスジェニック動物の乳中におけるその後の発現のために導入遺伝子に組み込むことができる。例えば、米国特許第５，７４１，９５７号、同第５，３０４，４８９号、及び同第５，８４９，９９２号を参照されたい。好適な導入遺伝子には、カゼイン又はβ－ラクトグロブリンなどの乳腺特異的遺伝子からのプロモーター及びエンハンサーと操作可能な連結にある軽鎖及び／又は重鎖のコード配列が含まれる。トランスジェニック動物の生成のために、導入遺伝子は、受精した卵母細胞にマイクロインジェクションすることができるか、又は胚性幹細胞のゲノムに組み込み、かかる細胞の核を、除核された卵母細胞に移すことができる。
単鎖抗体。一実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、単鎖抗ＣＤ３抗体である。本技術に従い、技法は、ＣＤ３タンパク質に特異的な単鎖抗体の産生に適合させることができる（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい）。本技術の単鎖Ｆｖ及び抗体を産生するために使用することができる技法の例には、米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，２５８，４９８号、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０３：４６－８８，１９９１、Ｓｈｕ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７９９５－７９９９，１９９３、並びにＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８－１０４０，１９８８に記載されるものが含まれる。
キメラ及びヒト化抗体。一実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、キメラ抗ＣＤ３抗体である。一実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、ヒト化抗ＣＤ３抗体である。本技術の一実施形態において、ドナー抗体及びアクセプター抗体は、異なる種からのモノクローナル抗体である。例えば、アクセプター抗体は、ヒト抗体（ヒトにおいてその抗原性を最小限に抑えるため）であり、その場合、得られるＣＤＲ移植抗体は、「ヒト化」抗体と称される。
ヒト部分及び非ヒト部分の両方を含む、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体などの組換え抗ＣＤ３抗体は、標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して作製することができ、本技術の範囲内である。ヒトにおける本技術の抗ＣＤ３抗体のインビボ使用、並びにインビトロ検出アッセイにおけるこれらの薬剤の使用を含むいくつかの使用では、キメラ又はヒト化抗ＣＤ３抗体を使用することが可能である。かかるキメラ及びヒト化モノクローナル抗体は、当技術分野で知られている組換えＤＮＡ技法によって産生することができる。かかる有用な方法には、例えば、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号、米国特許第５，２２５，５３９号、欧州特許第１８４１８７号、欧州特許第１７１４９６号、欧州特許第１７３４９４号、ＰＣＴ国際公開第８６／０１５３３号、米国特許第４，８１６，５６７号、同第５，２２５，５３９号、欧州特許第１２５０２３号、Ｂｅｔｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，１９８８．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３、Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，１９８７．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９－３４４３、Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，１９８７．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１－３５２６、Ｓｕｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８７．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４－２１８、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，ｅｔ ａｌ．，１９８７．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：９９９－１００５、Ｗｏｏｄ，ｅｔ ａｌ．，１９８５．Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６－４４９、Ｓｈａｗ，ｅｔ ａｌ．，１９８８．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３－１５５９、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－１２０７、Ｏｉ，ｅｔ ａｌ．（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，１９８６．Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２－５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８８．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２，１９８５、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４，１９８６、Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１２５：１９１－２０２，１９８９、米国特許第５，８０７，７１５号、及びＢｅｉｄｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，１９８８．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３－４０６０に記載される方法が含まれるが、これらに限定されない。例えば、抗体は、ＣＤＲ移植（ＥＰ０２３９４００、ＷＯ９１／０９９６７、米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，８５９，２０５号、同第６，２４８，５１６号、ＥＰ４６０１６７号）、ベニヤリング又はリサーフェイシング（ＥＰ０５９２１０６、ＥＰ０５１９５９６、Ｐａｄｌａｎ Ｅ．Ａ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８：４８９－４９８，１９９１、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５－８１４，１９９４、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３，１９９４）、及びチェインシャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）が含まれる様々な技法を使用してヒト化され得る。一実施形態において、ネズミ抗ＣＤ３モノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡは、特異的に選択された制限酵素で消化して、Ｆｃ定常領域をコードする配列を取り除き、ヒトＦｃ定常領域をコードするｃＤＮＡの等価部分に置換される（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９、Ａｋｉｒａ ｅｔ ａｌ．，欧州特許出願第１８４，１８７号、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，欧州特許出願第１７１，４９６号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，欧州特許出願第１７３，４９４号、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ８６／０１５３３、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．米国特許第４，８１６，５６７号、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，欧州特許出願第１２５，０２３号、Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９－３４４３、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３９：３５２１－３５２６、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４－２１８、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４７：９９９－１００５、Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６－４４９、及びＳｈａｗ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３－１５５９、米国特許第６，１８０，３７０号、米国特許第６，３００，０６４号、同第６，６９６，２４８号、同第６，７０６，４８４号、同第６，８２８，４２２号を参照されたい。
一実施形態において、本技術は、ヒト抗マウス抗体（以下、「ＨＡＭＡ」と称される）応答を誘導する可能性が低いものの、依然として有効な抗体エフェクター機能を有する、ヒト化抗ＣＤ３抗体の構築を提供する。本明細書に使用される場合、抗体に関して、「ヒト」及び「ヒト化」という用語は、ヒト対象において治療的に耐えられる弱い免疫原性応答を誘発することが予想される任意の抗体に関する。一実施形態において、本技術は、ヒト化抗ＣＤ３抗体、重鎖及び軽鎖免疫グロブリンを提供する。
ＣＤＲ抗体。いくつかの実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、抗ＣＤ３ ＣＤＲ抗体である。一般に、抗ＣＤ３ ＣＤＲ抗体を生成するために使用されるドナー抗体及びアクセプター抗体は、異なる種からのモノクローナル抗体であり、典型的には、アクセプター抗体は、ヒト抗体であり（ヒトにおけるその抗原性を最小限に抑えるため）、この場合、得られるＣＤＲ移植抗体は、「ヒト化」抗体と称される。移植片は、アクセプター抗体の単一のＶＨ若しくはＶＬ内の単一のＣＤＲ（又は単一のＣＤＲの一部でさえ）のものであり得るか、又はＶＨ及びＶＬの一方若しくは両方内の複数のＣＤＲ（又はその一部）のものであることができる。多くの場合、アクセプター抗体の全ての可変ドメインにおける３つの全てのＣＤＲが、対応するドナーＣＤＲで置き換えられるが、ＣＤ３タンパク質に対する得られるＣＤＲ移植抗体の十分な結合を可能にするために必要な数のみ置き換える必要がある。ＣＤＲ移植及びヒト化抗体を生成するための方法は、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、米国特許第５，６９３，７６２号、及びＷｉｎｔｅｒ Ｕ．Ｓ．５，２２５，５３９、並びにＥＰ０６８２０４０によって教示される。ＶＨ及びＶＬポリペプチドを調製するのに有用な方法は、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，８１６，３９７号、同第６，２９１，１５８号、同第６，２９１，１５９号、同第６，２９１，１６１号、同第６，５４５，１４２号、ＥＰ０３６８６８４、ＥＰ０４５１２１６、及びＥＰ０１２０６９４によって教示される。
同じファミリー及び／又は同じファミリーメンバーから好適なフレームワーク領域候補を選択した後、発端となる種からのＣＤＲをハイブリッドフレームワーク領域に移植することによって、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のいずれか又は両方が生成される。上記の態様のいずれかに関して、ハイブリッド可変鎖領域を有するハイブリッド抗体又はハイブリッド抗体断片の組み立ては、当業者に既知の従来の方法を使用して達成することができる。例えば、本明細書に記載のハイブリッド可変ドメインをコードするＤＮＡ配列（すなわち、標的種に基づくフレームワーク及び発端となる種からのＣＤＲ）は、オリゴヌクレオチド合成及び／又はＰＣＲによって生成することができる。ＣＤＲ領域をコードする核酸は、好適な制限酵素を使用して発端となる種の抗体から単離し、好適なライゲーション酵素で連結することによって標的種フレームワークに連結することもできる。代替的に、発端となる種の抗体の可変鎖のフレームワーク領域は、部位特異的変異誘発によって変更することができる。
ハイブリッドは、各フレームワーク領域に対応する複数の候補の中の選択から構築されるため、本明細書に記載される原理に従う構築に適した、配列の多くの組み合わせが存在する。したがって、個々のフレームワーク領域の異なる組み合わせによるメンバーを有して、ハイブリッドのライブラリを組み立てることができる。かかるライブラリは、配列の電子データベースコレクション又はハイブリッドの物理的コレクションであることができる。
このプロセスは、典型的には、移植されたＣＤＲに隣接するアクセプター抗体のＦＲを変更しない。しかしながら、当業者であれば、所与のＦＲの特定の残基を置き換えて、ＦＲをドナー抗体の対応するＦＲに、より類似させることによって、時には、得られる抗ＣＤ３ ＣＤＲ移植抗体の抗原結合親和性を改善することができる。置換の好適な位置には、ＣＤＲに隣接するか、又はＣＤＲと相互作用することができるアミノ酸残基が含まれる（例えば、ＵＳ５，５８５，０８９、特にカラム１２～１６を参照されたい）。又は、当業者であれば、ドナーＦＲから始めて、それを修飾して、アクセプターＦＲ又はヒトコンセンサスＦＲにより類似させることができる。これらの修飾を行うための技法は、当該技術分野で既知である。特に、得られるＦＲがその位置でヒトコンセンサスＦＲに適合する場合、又はかかるコンセンサスＦＲに少なくとも９０％以上同一である場合、それを行うことは、完全なヒトＦＲを有する同じ抗体と比較して、得られる修飾抗ＣＤ３ ＣＤＲ移植抗体の抗原性を有意に増加させ得ない。
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）。二重特異性抗体は、異なる構造を有する２つの標的、例えば、２つの異なる標的抗原、同じ標的抗原上の２つの異なるエピトープ、又は標的抗原上のハプテン及び標的抗原若しくはエピトープに同時に結合することができる抗体である。ＢｓＡｂは、例えば、同じか又は異なる抗原の異なるエピトープを認識する重鎖及び／又は軽鎖を組み合わせることによって作製することができる。いくつかの実施形態において、分子機能によって、二重特異性結合剤は、その２つの結合アームのうちの１つ（１つのＶＨ／ＶＬ対）で１つの抗原（又はエピトープ）に結合し、その第２のアーム（異なるＶＨ／ＶＬ対）で異なる抗原（又はエピトープ）に結合する。この定義によれば、二重特異性結合剤は、２つの異なる抗原結合アーム（特異性及びＣＤＲ配列の両方において）を有し、それが結合する各抗原に対して一価である。
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）及び二重特異性抗体断片（ＢｓＦａｂ）などの多重特異性抗体は、例えば、腫瘍抗原に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、第２の標的抗原に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームと、を有する。いくつかの実施形態において、第２の標的抗原は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、骨髄細胞、形質細胞、又は肥満細胞の抗原若しくはエピトープである。追加的又は代替的に、特定の実施形態において、第２の標的抗原は、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、及びＫＩＲからなる群から選択される。特定の実施形態において、ＢｓＡｂは、細胞表面に標的抗原を発現する腫瘍細胞に結合することができる。いくつかの実施形態において、ＢｓＡｂは、細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍部位に向ける（又は動員する）ことによって腫瘍細胞の殺傷を促進するように操作されている。他の例示的なＢｓＡｂには、ＣＤ３に対して特異的な第１の抗原結合部位と、小分子ハプテン（例えば、ＤＴＰ Ａ、ＩＭＰ２８８、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－Ｂｎ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、本明細書に記載される他のＤＯＴＡ－キレート、ビオチン、フルオレセイン、又はＧｏｏｄｗｉｎ，Ｄ Ａ．ｅｔ ａｌ，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５４（２２）：５９３７－５９４６に開示されるもの）に対して特異的な第２の抗原結合部位と、を有するものが含まれる。
様々な二重特異性融合タンパク質は、分子工学を使用して産生することができる。例えば、ＢｓＡｂは、全免疫グロブリンフレームワーク（例えば、ＩｇＧ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はそれらの組み合わせのいずれかを利用するように構築されている。いくつかの実施形態において、二重特異性融合タンパク質は二価であり、例えば、１つの抗原に対する単一結合部位を有するｓｃＦｖと、第２の抗原に対する単一結合部位を有するＦａｂ断片と、を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性融合タンパク質は、例えば、１つの抗原に対する単一結合部位を有するｓｃＦｖと、第２の抗原に対する単一結合部位を有する別のｓｃＦｖ断片と、を含む、二価である。他の実施形態において、二重特異性融合タンパク質は、例えば、１つの抗原に対する２つの結合部位と、第２の抗原に対する２つの同一のｓｃＦｖと、を有する免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）を含む、四価である。２つのｓｃＦｖユニットから構成されるＢｓＡｂは、臨床的に成功した二重特異性抗体形式であることが示されている。いくつかの実施形態において、ＢｓＡｂは、腫瘍抗原に結合するｓｃＦｖが、Ｔ細胞に結合する（例えば、ＣＤ３に結合することによる）ｓｃＦｖと連結されるように設計されている、２つの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をタンデムで含む。この方法では、Ｔ細胞は、それらが腫瘍細胞の細胞傷害性殺傷を媒介することができるように、腫瘍部位に動員される。例えば、Ｄｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：４３９７－４４０２（２００３）、Ｂａｒｇｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２１ ：９７４－ ９７７（２００８））を参照されたい。いくつかの実施形態において、本技術のＢｓＡｂは、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖが、小分子ＤＯＴＡハプテンに結合するｓｃＦｖと連結されるように設計されている、２つの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をタンデムで含む。
ＢｓＡｂを産生するための最近の方法には、より一般的な免疫グロブリンアイソタイプよりも強く架橋するように、追加のシステイン残基を有する操作された組換えモノクローナル抗体が含まれる。例えば、ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１０（１０）：１２２１－１２２５（１９９７）を参照されたい。別のアプローチは、組換え融合タンパク質を操作して、必要とされる二重特異性を有する２つ以上の異なる単鎖抗体又は抗体断片セグメントを連結することである。例えば、Ｃｏｌｏｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：１５９－１６３（１９９７）を参照されたい。様々な二重特異性融合タンパク質は、分子工学を使用して産生することができる。
２つ以上の異なる単鎖抗体又は抗体断片を連結する二重特異性融合タンパク質は、同様の方法で産生される。組換え方法を使用して、様々な融合タンパク質を産生することができる。いくつかの特定の実施形態において、本技術によるＢｓＡｂは、免疫グロブリンを含み、免疫グロブリンは、重鎖及び軽鎖、並びにｓｃＦｖを含む。いくつかの特定の実施形態において、ｓｃＦｖは、本明細書に開示される任意のＣＤ３免疫グロブリンの重鎖のＣ末端に連結される。いくつかの特定の実施形態において、ｓｃＦｖは、本明細書に開示される任意のＣＤ３免疫グロブリンの軽鎖のＣ末端に連結される。様々な実施形態において、ｓｃＦｖは、リンカー配列を介して重鎖又は軽鎖に連結される。重鎖ＦｄのｓｃＦｖとのフレーム内接続に必要な適切なリンカー配列は、ＰＣＲ反応によってＶＬ及びＶカッパドメインに導入される。次に、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡ断片を、ＣＨ１ドメインをコードするＤＮＡ配列を含有するステージングベクターに連結させる。得られたｓｃＦｖ－ＣＨ１構築物を切除し、ＣＤ３抗体のＶＨ領域をコードするＤＮＡ配列を含有するベクターに連結させる。得られたベクターを使用して、二重特異性融合タンパク質の発現のための哺乳類細胞などの適切な宿主細胞をトランスフェクトすることができる。
いくつかの実施形態において、リンカーは、長さが少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００個、又はそれ以上のアミノ酸である。いくつかの実施形態において、リンカーは、強固な三次元構造を採用しない傾向があり、むしろポリペプチド（例えば、第１及び／又は第２の抗原結合部位）に可撓性を提供することを特徴とする。いくつかの実施形態において、リンカーは、例えば、安定性の増加などのＢｓＡｂに付与される特定の特性に基づいて、本明細書に記載のＢｓＡｂに用いられる。いくつかの実施形態において、本技術のＢｓＡｂは、Ｇ４Ｓリンカーを含む。いくつかの特定の実施形態において、本技術のＢｓＡｂは、（Ｇ４Ｓ）ｎリンカーを含み、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１ １、１２、１３、１４、１５、又はそれ以上である。
Ｆｃ修飾。いくつかの実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、バリアントＦｃ領域を含み、当該バリアントＦｃ領域は、野生型Ｆｃ領域（又は親Ｆｃ領域）に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、それによって、当該分子は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）に対する変化した親和性を有するが、ただし、当該バリアントＦｃ領域は、Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０６：２６７－２７３（２０００）によって開示されるものなどのＦｃ－Ｆｃ受容体相互作用の結晶学的及び構造的分析に基づいて、Ｆｃ受容体と直接的な接触をする位置で置換を有さない。ＦｃγＲなどのＦｃ受容体と直接的な接触をするＦｃ領域内の位置の例としては、アミノ酸２３４～２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５～２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７～２９９（Ｃ７Ｅループ）、及びアミノ酸３２７～３３２（Ｆ／Ｇ）ループが挙げられる。
いくつかの実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、活性化及び／又は阻害性受容体に対する変化した親和性を有し、１つ以上のアミノ酸修飾を有するバリアントＦｃ領域を有して、当該１つ以上のアミノ酸修飾は、アラニンによるＮ２９７置換、又はアラニンによるＫ３２２置換である。
グリコシル化修飾。いくつかの実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、親Ｆｃ領域と比較して、バリアントグリコシル化を伴うＦｃ領域を有する。いくつかの実施形態において、バリアントグリコシル化は、フコースの不存在を含み、いくつかの実施形態において、バリアントグリコシル化は、ＧｎＴ１欠損ＣＨＯ細胞における発現から生じる。
いくつかの実施形態において、本技術の抗体は、抗体の機能性、例えば、抗原との結合活性を変更することなく、目的の抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する適切な参照抗体と比較して、修飾されたグリコシル化部位を有し得る。本明細書に使用される場合、「グリコシル化部位」は、オリゴ糖（すなわち、一緒に連結された２つ以上の単純な糖を含有する炭水化物）が特異的及び共有結合的に結合する抗体における任意の特定のアミノ酸配列を含む。
オリゴ糖側鎖は、典型的には、Ｎ結合又はＯ結合のいずれかを介して抗体の骨格に連結されている。Ｎ結合型グリコシル化とは、オリゴ糖部分とアスパラギン残基の側鎖との結合を指す。Ｏ結合型グリコシル化とは、オリゴ糖部分とヒドロキシアミノ酸、例えば、セリン、スレオニンとの結合を指す。例えば、フコース及び末端Ｎ－アセチルグルコサミンを含む特定のオリゴ糖を欠くＦｃ－グリコフォーム（ｈＣＤ３－ＩｇＧｌｎ）は、特別なＣＨＯ細胞で産生され得、増強されたＡＤＣＣエフェクター機能を示す。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される免疫グロブリン関連組成物の炭水化物含有量は、グリコシル化部位を付加又は欠失させることによって修飾される。抗体の炭水化物含有量を修飾するための方法は、当該技術分野で周知であり、本技術内に含まれ、例えば、米国特許第６，２１８，１４９号、ＥＰ０３５９０９６Ｂ１、米国特許公開第２００２／００２８４８６号、国際特許出願公開第０３／０３５８３５号、米国特許公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許第６，２１８，１４９号、米国特許第６，４７２，５１１号を参照されたく、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、抗体（又はその関連部分若しくは構成成分）の炭水化物含有量は、抗体の１つ以上の内因性炭水化物部分を欠失させることによって修飾される。いくつかの特定の実施形態において、本技術は、２９７位をアスパラギンからアラニンに修飾することによって、抗体のＦｃ領域のグリコシル化部位を欠失させることを含む。
操作されたグリコフォームは、エフェクター機能を増強させるか、又は低下させることを含むがこれらに限定されない、様々な目的のために有用であり得る。操作されたグリコフォームは、当業者に既知の任意の方法によって、例えば、操作されたか若しくはバリアント発現株を使用することによって、１つ以上の酵素、例えば、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）との共発現によって、様々な生物若しくは様々な生物からの細胞株にＦｃ領域を含む分子を発現させることによって、又はＦｃ領域を含む分子が発現された後に炭水化物を修飾することによって、生成され得る。操作されたグリコフォームを生成するための方法は、当該技術分野において既知であり、Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６－１８０、Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８－２９４、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６－３４７３、米国特許第６，６０２，６８４号、米国特許出願第１０／２７７，３７０号、米国特許出願第１０／１１３，９２９号、国際特許出願公開第００／６１７３９Ａ１号、同第０１／２９２２４６Ａ１号、同第０２／３１１１４０Ａ１号、同第０２／３０９５４Ａ１号、ＰＯＴＩＬＬＥＧＥＮＴ（商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＧＬＹＣＯＭＡＢ（商標）グリコシル化操作技術（ＧＬＹＣＡＲＴ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に記載されるものが含まれるがそれらに限定されず、それらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。例えば、国際特許出願公開第００／０６１７３９号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００４，ＪＭＢ，３３６：１２３９－４９を参照されたい。
融合タンパク質。一実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、融合タンパク質である。本技術の抗ＣＤ３抗体は、第２のタンパク質に融合されたとき、抗原タグとして使用することができる。ポリペプチドに融合させることができるドメインの例には、異種シグナル配列だけでなく、他の異種機能性領域も含まれる。融合は必ずしも直接的である必要はなく、リンカー配列を介して生じることができる。更に、本技術の融合タンパク質は、抗ＣＤ３抗体の特徴を改善するように操作することもできる。例えば、追加のアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域を抗ＣＤ３抗体のＮ末端に付加して、宿主細胞からの精製中又はその後の取り扱い及び保存の安定性及び持続性を改善することができる。また、ペプチド部分を抗ＣＤ３抗体に付加して精製を容易にすることもできる。かかる領域は、抗ＣＤ３抗体の最終調製前に除去することができる。ポリペプチドの取り扱いを容易にするペプチド部分の付加は、当技術分野ではよく知られており、定型的な技術である。本技術の抗ＣＤ３抗体は、融合したポリペプチドの精製を容易にするペプチドなどのマーカー配列に融合することができる。選択された実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、その多くは、市販されており、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，Ｃａｌｉｆ）に提供されるタグなどのヘキサ－ヒスチジンペプチドである。Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－８２４，１９８９に記載されるように、例えば、ヘキサ－ヒスチジンは、融合タンパク質の都合のよい精製を提供する。精製に有用な別のペプチドタグである「ＨＡ」タグは、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに対応する。Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ３７：７６７，１９８４。
したがって、これら上記の融合タンパク質のうちのいずれかは、本技術のポリヌクレオチド又はポリペプチドを使用して操作することができる。また、いくつかの実施形態において、本明細書に記載の融合タンパク質は、インビボで増加した半減期を示す。
ジスルフィド結合二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有する融合タンパク質は、単量体分泌タンパク質又はタンパク質断片単独と比較して、他の分子との結合及び中和においてより効率的であり得る。Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：３９５８－３９６４，１９９５。
同様に、ＥＰ－Ａ－Ｏ４６４５３３（カナダの対応する２０４５８６９）は、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部分を、別のヒトタンパク質又はその断片と一緒に含む融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク質におけるＦｃ部分は、治療及び診断に有益であり、したがって、例えば、改善された薬物動態特性をもたらすことができる。ＥＰ－Ａ０２３２２６２を参照されたい。代替的に、融合タンパク質が発現、検出、及び精製された後に、Ｆｃ部分を欠失又は修飾することが望ましいことがある。例えば、Ｆｃ部分は、融合タンパク質が免疫のための抗原として使用される場合、治療及び診断を妨げ得る。創薬において、例えば、ｈＩＬ－５などのヒトタンパク質は、ｈＩＬ－５のアンタゴニストを特定するハイスループットスクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分と融合されている。Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２－５８，１９９５、Ｊｏｈａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０：９４５９－９４７１，１９９５。
標識された抗ＣＤ３抗体。一実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、標識部分、すなわち、検出可能な基とカップリングされる。抗ＣＤ３抗体にコンジュゲートされた特定の標識又は検出可能な基は、本技術の抗ＣＤ３抗体とＣＤ３タンパク質との特異的結合を著しく干渉しない限り、本技術の重大な態様ではない。検出可能な基は、検出可能な物理的又は化学的特性を有する任意の材料であることができる。かかる検出可能な標識は、イムノアッセイ及びイメージングの分野で十分に開発されてきている。一般に、かかる方法に有用なほとんどいずれの標識も、本技術に適用することができる。したがって、標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的、又は化学的手段によって検出可能な任意の組成物である。本技術の実施において有用な標識には、磁性ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミンなど）、放射性標識（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ、１２１Ｉ、１３１Ｉ、１１２Ｉｎ、９９ｍＴｃ）、マイクロバブル（超音波イメージング用）などの他のイメージング剤、１８Ｆ、１１Ｃ、１５Ｏ、８９Ｚｒ（陽電子放射断層撮影用）、９９ｍＴＣ、１１１Ｉｎ（単一光子放射断層撮影用）、酵素（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びＥＬＩＳＡで一般的に使用される他のもの）、及び金コロイド又は着色ガラス若しくはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズなどのカロリメトリック標識が含まれる。かかる標識の使用を記載する特許には、米国特許第３，８１７，８３７号、同第３，８５０，７５２号、同第３，９３９，３５０号、同第３，９９６，３４５号、同第４，２７７，４３７号、同第４，２７５，１４９号、及び同第４，３６６，２４１号が含まれ、各々は、参照によりそれらの全体が全ての目的のために本明細書に組み込まれる。Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（６ｔｈ Ｅｄ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ ＯＲ．）も参照されたい。
標識は、当技術分野で周知の方法に従って、アッセイの所望の構成成分に直接的又は間接的にカップリングさせることができる。上述のように、必要とされる感度、化合物とのコンジュゲーションの容易さ、安定性要件、利用可能な装置、及び廃棄規定などの要因に応じた標識の選択によって、多種多様な標識を使用することができる。
非放射性標識は、しばしば間接的な手段によって結合される。一般に、リガンド分子（例えば、ビオチン）は、分子に共有結合される。次に、リガンドは、検出可能な酵素、蛍光化合物、又は化学発光化合物などのシグナルシステムに固有に検出可能又は共有結合された抗リガンド（例えば、ストレプトアビジン）分子に結合する。多くのリガンド及び抗リガンドを使用することができる。リガンドが天然の抗リガンド、例えば、ビオチン、チロキシン、及びコルチゾールを有する場合、それは、標識された、天然に存在する抗リガンドと併せて使用することができる。代替的に、任意のハプテン性又は抗原性化合物は、抗体、例えば、抗ＣＤ３抗体と組み合わせて使用することができる。
分子はまた、例えば、酵素又はフルオロフォアとのコンジュゲーションによって、直接的にシグナル発生化合物にコンジュゲートすることもできる。標識としての目的の酵素は、主に、ヒドロラーゼ、特にホスファターゼ、エステラーゼ、及びグリコシダーゼ、又はオキシドレダクターゼ、特にペルオキシダーゼである。標識部分として有用な蛍光化合物には、例えば、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどが含まれるが、これらに限定されない。標識部分として有用な化学発光化合物には、例えば、ルシフェリン、及び２，３－ジヒドロフタラジンジオン、例えば、ルミノールが含まれるが、これらに限定されない。使用することができる様々な標識又はシグナル発生システムのレビューについて、米国特許第４，３９１，９０４号を参照されたい。
標識を検出する手段は、当業者に周知である。したがって、例えば、標識が放射性標識である場合、検出手段には、シンチレーションカウンター又はオートラジオグラフィーにおけるような写真フィルムが含まれる。標識が蛍光標識である場合、適切な波長の光で蛍光色素を励起し、得られる蛍光を検出することによって検出することができる。蛍光は、写真フィルムによって、電荷カップリング素子（ＣＣＤ）又は光増倍管などの電子検出器の使用によって、視覚的に検出することができる。同様に、酵素に適切な基質を提供し、得られる反応生成物を検出することによって、酵素標識を検出することができる。最後に、単純な比色標識は、標識に関連付けられた色調を単に観察することによって検出することができる。したがって、様々なディップスティックアッセイでは、コンジュゲート化金は、しばしばピンク色を出現させるが、様々なコンジュゲート化ビーズは、ビーズの色調を出現させる。
いくつかのアッセイ形式は、標識構成成分の使用を必要としない。例えば、凝集アッセイを使用して、標的抗体、例えば、抗ＣＤ３抗体の存在を検出することができる。この場合、抗原コーティング粒子は、標的抗体を含む試料によって凝集される。この方式では、構成成分のいずれも標識する必要はなく、標的抗体の存在は、単純な目視検査によって検出される。
Ｂ．本技術の抗ＣＤ３抗体の特定及び特性評価
本技術の抗ＣＤ３抗体を特定及び／又はスクリーニングするための方法。ＣＤ３タンパク質に対する所望の特異性を有するもの（例えば、ＣＤ３タンパク質の細胞外ドメインに結合するもの、特にアミノ酸配列ＱＤＧＮＥ（配列番号６３）を含むＣＤ３細胞外ドメイン）について、ＣＤ３ポリペプチドに対する抗体を特定及びスクリーニングするのに有用な方法には、当該技術分野内で既知の任意の免疫学的に媒介される技法が含まれる。免疫応答の構成成分は、当業者に周知の様々な方法によって検出することができる。例えば、（１）細胞傷害性Ｔリンパ球を放射性標識標的細胞とインキュベートして、これらの標的細胞の溶解を放射能の放出によって検出することができる、（２）ヘルパーＴリンパ球を抗原及び抗原提示細胞とインキュベートして、サイトカインの合成及び分泌を標準的な方法によって測定することができる（Ｗｉｎｄｈａｇｅｎ Ａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２：３７３－８０，１９９５）、（３）抗原提示細胞を全タンパク質抗原とインキュベートして、ＭＨＣ上のその抗原の提示をＴリンパ球活性化アッセイ又は生物物理学的方法のいずれかによって検出することができる（Ｈａｒｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８６：４２３０－４，１９８９）、（４）肥満細胞をそれらのＦｃ－イプシロン受容体を架橋する試薬とインキュベートして、ヒスタミン放出を酵素イムノアッセイによって測定することができる（Ｓｉｒａｇａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＰＳ，４：４３２－４３７，１９８３）、及び（５）酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）。
同様に、モデル生物（例えば、マウス）又はヒト対象のいずれかにおける免疫応答の産物も、当業者に周知の様々な方法によって検出することができる。例えば、（１）ワクチン接種に応答する抗体の産生は、臨床検査室で現在使用されている標準的な方法、例えば、ＥＬＩＳＡによって容易に検出することができ、（２）炎症部位への免疫細胞の移動は、皮膚の表面をスクラッチングし、無菌容器を配置して、移動細胞をスクラッチング部位にわたって捕捉することによって検出することができ（Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，７２：１３１０－５，１９８８）、（３）マイトジェン又は混合リンパ球反応に応答する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の増殖は、３Ｈ－チミジンを使用して測定することができ、（４）ＰＢＭＣ中の顆粒球、マクロファージ、及び他の貪食細胞の貪食能力は、標識粒子とともにウェルにＰＢＭＣを配置することによって測定することができ（Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，７２：１３１０－５，１９８８）、（５）免疫系細胞の分化は、ＣＤ４及びＣＤ８などのＣＤ分子に対する抗体でＰＢＭＣを標識し、これらのマーカーを発現するＰＢＭＣの画分を測定することによって測定することができる。
一実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、複製可能な遺伝子パッケージの表面上のＣＤ３ペプチドの提示を使用して選択される。例えば、米国特許第５，５１４，５４８号、同第５，８３７，５００号、同第５，８７１，９０７号、同第５，８８５，７９３号、同第５，９６９，１０８号、同第６，２２５，４４７号、同第６，２９１，６５０号、同第６，４９２，１６０号、ＥＰ５８５２８７、ＥＰ６０５５２２、ＥＰ６１６６４０、ＥＰ１０２４１９１、ＥＰ５８９８７７、ＥＰ７７４５１１、ＥＰ８４４３０６を参照されたい。所望の特異性を有する結合分子をコードするファージミドゲノムを含有する繊維状バクテリオファージ粒子を生成／選択するのに有用な方法が記載されている。例えば、ＥＰ７７４５１１、ＵＳ５８７１９０７、ＵＳ５９６９１０８、ＵＳ６２２５４４７、ＵＳ６２９１６５０、ＵＳ６４９２１６０を参照されたい。
いくつかの実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、酵母宿主細胞の表面上のＣＤ３ペプチドのディスプレイを使用して選択される。酵母表面ディスプレイによるｓｃＦｖポリペプチドの単離に有用な方法は、Ｋｉｅｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１９９７ Ｎｏｖ；１０（１１）：１３０３－１０によって記載されている。
いくつかの実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、リボソームディスプレイを使用して選択される。リボソームディスプレイを使用してペプチドライブラリ中のリガンドを特定するのに有用な方法は、Ｍａｔｔｈｅａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９０２２－２６，１９９４、及びＨａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：４９３７－４２，１９９７によって記載されている。
特定の実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３ペプチドのｔＲＮＡディスプレイを使用して選択される。ｔＲＮＡディスプレイを使用したリガンドのインビトロ選択に有用な方法は、Ｍｅｒｒｙｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，９：７４１－４６，２００２によって記載されている。
一実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、ＲＮＡディスプレイを使用して選択される。ＲＮＡディスプレイライブラリを使用してペプチド及びタンパク質を選択するのに有用な方法は、Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１２２９７－３０２，１９９７、及びＮｅｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，４１４：４０５－８，１９９７によって記載されている。非天然ＲＮＡディスプレイライブラリを使用してペプチド及びタンパク質を選択するのに有用な方法は、Ｆｒａｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１３：５０６－１２，２００３によって記載されている。
いくつかの実施形態において、本技術の抗ＣＤ３抗体は、グラム陰性細菌の周辺質中で発現され、標識されたＣＤ３タンパク質と混合される。ＷＯ０２／３４８８６を参照されたい。ＣＤ３タンパク質に対する親和性を有する組換えポリペプチドを発現するクローンでは、抗ＣＤ３抗体に結合した標識ＣＤ３タンパク質の濃度が増加し、Ｈａｒｖｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２２：９１９３－９８ ２００４及び米国特許公開第２００４／００５８４０３号に記載されるように、細胞がライブラリの残りから単離されることが可能である。
所望の抗ＣＤ３抗体の選択後、当該抗体は、当業者に既知の任意の技術、例えば、原核生物細胞又は真核生物細胞の発現などによって、大量に産生できることが企図される。例えば、限定されないが、抗ＣＤ３ハイブリッド抗体又は断片である、抗ＣＤ３抗体は、ＣＤＲと、必要に応じて、元の種の抗体結合特異性を保持するために必要とされる可変領域フレームワークの最小部分（本明細書に記載される技術に従って操作される）とが発端となる種の抗体に由来し、抗体の残分が本明細書に記載されるように操作することができる標的種免疫グロブリンに由来する、抗体重鎖をコードする発現ベクターを構築し、それによってハイブリッド抗体重鎖の発現のためのベクターを産生する、従来の技法を使用して産生することができる。
ＣＤ３結合の測定。いくつかの実施形態において、ＣＤ３結合アッセイは、ＣＤ３タンパク質及び抗ＣＤ３抗体を、ＣＤ３タンパク質と抗ＣＤ３抗体との間を結合し、ＣＤ３タンパク質と抗ＣＤ３抗体との間の結合量を評価するのに好適な条件下で混合するアッセイ形式を指す。結合の量は、ＣＤ３タンパク質の不存在下での結合の量、非特異的免疫グロブリン組成物の存在下での結合の量、又はその両方であることができる好適な対照と比較される。結合の量は、任意の好適な方法によって評価することができる。結合アッセイ方法には、例えば、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、シンチレーション近接アッセイ、蛍光エネルギー移動アッセイ、液体クロマトグラフィー、膜濾過アッセイなどが含まれる。抗ＣＤ３抗体に結合するＣＤ３タンパク質の直接的な測定のための生物物理学的アッセイは、例えば、核磁気共鳴、蛍光、蛍光偏光、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥチップ）などである。特異的結合は、当技術分野で知られている標準的なアッセイ、例えば、放射性リガンド結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＦＲＥＴ、免疫沈降、ＳＰＲ、ＮＭＲ（２Ｄ－ＮＭＲ）、質量分析法などによって決定される。候補抗ＣＤ３抗体の特異的結合が、候補抗ＣＤ３抗体の不存在下で観察される結合よりも少なくとも１％大きい場合、候補抗ＣＤ３抗体は、本技術の抗ＣＤ３抗体として有用である。
本技術の抗ＣＤ３抗体の使用
一般。本技術の抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３タンパク質の局在化及び／又は定量化に関連する当技術分野で既知の方法（例えば、適切な生理学的試料内のＣＤ３タンパク質のレベルの測定における使用のため、診断方法における使用のため、ポリペプチドのイメージングにおける使用のためなど）において有用である。本技術の抗体は、アフィニティークロマトグラフィー又は免疫沈降などの標準的な技法によってＣＤ３タンパク質を単離するのに有用である。本技術の抗ＣＤ３抗体は、生体試料、例えば、哺乳類血清又は細胞からの天然免疫反応性ＣＤ３タンパク質、並びに宿主系において発現される組換え産生免疫反応性ＣＤ３タンパク質の精製を容易にすることができる。更に、抗ＣＤ３抗体を使用して、免疫反応性ＣＤ３タンパク質（例えば、血漿、細胞溶解物、又は細胞上清における）を検出し、免疫反応性ポリペプチドの発現の量及びパターンを評価することができる。本技術の抗ＣＤ３抗体を診断的に使用して、臨床試験手順の一部として組織中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質レベルを監視し、例えば、所与の治療レジメンの有効性を決定することができる。上述したように、検出は、本技術の抗ＣＤ３抗体を検出可能な物質にカップリング（すなわち、物理的に連結）することによって促進することができる。
ＣＤ３タンパク質の検出。生体試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質の存在又は不存在を検出するための例示的な方法は、試験対象から生体試料を得ることと、生体試料を、免疫反応性ＣＤ３タンパク質を検出することができる本技術の抗ＣＤ３抗体と接触させることと、を含み、それによって免疫反応性ＣＤ３タンパク質の存在が、生体試料中に検出される。検出は、抗体に結合した検出可能な標識の手段によって達成され得る。
抗ＣＤ３抗体に関して「標識された」という用語は、検出可能な物質を抗体にカップリングする（すなわち、物理的に連結する）ことによる抗体の直接的標識、並びに二次抗体などの直接的に標識される別の化合物との反応性による抗体の間接的標識を包含するよう意図される。間接的標識の例には、蛍光標識二次抗体を使用した一次抗体の検出、及び蛍光標識されたストレプトアビジンで検出することができるようにビオチンでＤＮＡプローブを末端標識することが含まれる。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗ＣＤ３抗体は、１つ以上の検出可能な標識にコンジュゲートされる。かかる使用のために、抗ＣＤ３抗体は、発色性、酵素、放射性同位体、同位体、蛍光、毒素、化学発光、核磁気共鳴造影剤、又は他の標識の共有結合又は非共有結合の付着によって検出可能に標識され得る。
好適な発色性標識の例には、ジアミノベンジジン及び４－ヒドロキシアゾ－ベンゼン－２－カルボン酸が含まれる。好適な酵素標識の例には、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、Δ－５－ステロイドイソメラーゼ、酵母－アルコールデヒドロゲナーゼ、α－グリセロールリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼが含まれる。
好適な放射性同位体標識の例は、３Ｈ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、１５２Ｅｕ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、２１７Ｃｉ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄなどが含まれる。１１１Ｉｎは、インビボイメージングが使用される例示的な同位体であり、それは肝臓による１２５Ｉ又は１３１Ｉ標識ＣＤ３結合抗体の脱ハロゲン化の問題を回避するためである。加えて、この同位体は、イメージングのために、より好ましいガンマ放出エネルギーを有する（Ｐｅｒｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．７０：２９６－３０１（１９８５）、Ｃａｒａｓｑｕｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２５：２８１－２８７（１９８７））。例えば、１－（Ｐ－イソチオシアナトベンジル）－ＤＰＴＡによってモノクローナル抗体とカップリングされた１１１Ｉｎは、非腫瘍性組織、特に肝臓における取り込みをほとんど示さず、腫瘍局在化の特異性を高める（Ｅｓｔｅｂａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２８：８６１－８７０（１９８７））。好適な非放射性同位体標識の例には、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、１６２Ｄｙ、５２Ｔｒ、及び５６Ｆｅが含まれる。
好適な蛍光標識の例には、１５２Ｅｕ標識、フルオレセイン標識、イソチオシアネート標識、ローダミン標識、フィコエリトリン標識、フィコシアニン標識、アロフィコシアニン標識、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）標識、ｏ－フタルデヒド標識、及びフルオレスカミン標識が含まれる。好適な毒素標識の例には、ジフテリア毒素、リシン、及びコレラ毒素が含まれる。
化学発光標識の例には、ルミノール標識、イソルミノール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識、シュウ酸エステル標識、ルシフェリン標識、ルシフェラーゼ標識、及びエクオリン標識が含まれる。核磁気共鳴造影剤の例には、Ｇｄ、Ｍｎ、及び鉄などの重金属核が含まれる。
本技術の検出方法を使用して、生体試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質をインビトロ並びにインビボで検出することができる。免疫反応性ＣＤ３タンパク質の検出のためのインビトロ技法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、ラジオイムノアッセイ、及び免疫蛍光が含まれる。更に、免疫反応性ＣＤ３タンパク質の検出のためのインビボ技法には、対象に標識された抗ＣＤ３抗体を導入することが含まれる。例えば、抗ＣＤ３抗体は、放射性マーカーで標識することができ、対象におけるその存在及び位置を標準的なイメージング技法によって検出することができる。一実施形態において、生体試料は、試験対象からのＣＤ３タンパク質分子を含有する。
イムノアッセイ及びイメージング。本技術の抗ＣＤ３抗体は、抗体ベースの技法を使用して、生体試料（例えば、ヒト血漿）中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質レベルをアッセイするために使用することができる。例えば、組織におけるタンパク質の発現は、古典的な免疫組織学的方法で試験することができる。Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６－９８５，１９８５、Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７－３０９６，１９８７。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用な他の抗体ベースの方法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などのイムノアッセイが含まれる。好適な抗体アッセイ標識は、当技術分野で既知であり、グルコースオキシダーなどの酵素標識、及び放射性同位体、又は他の放射性剤、例えば、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９ｍＴｃ）、並びに蛍光標識、例えば、フルオレセイン、ローダミン、及び緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、並びにビオチンが含まれる。
生体試料における免疫反応性ＣＤ３タンパク質レベルをアッセイすることに加えて、本技術の抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３のインビボイメージングに使用され得る。この方法に有用な抗体には、Ｘ線ラジオグラフィー、ＮＭＲ、又はＥＳＲによって検出可能なものが含まれる。Ｘ線ラジオグラフィーでは、好適な標識には、検出可能な放射線を放出するが、対象に明らかに有害ではない、バリウム又はセシウムなどの放射性同位体が含まれる。ＮＭＲ及びＥＳＲに好適なマーカーには、重水素などの検出可能な特徴的スピンを有するものが含まれ、関連するｓｃＦｖクローンにおける栄養素の標識によって抗ＣＤ３抗体に組み込むことができる。
放射性同位体（例えば、１３１Ｉ、１１２Ｉｎ、９９ｍＴｃ）、放射線不透過物質、又は核磁気共鳴によって検出可能な材料などの適切な検出可能なイメージング部分で標識されている抗ＣＤ３抗体が、対象に導入される（例えば、非経口的に、皮下に、又は腹腔内に）。対象のサイズ及び使用されるイメージングシステムが、診断画像を生じるのに必要なイメージング部分の量を決定することが当技術分野で理解されるであろう。放射性同位体部分の場合、ヒト対象について、注入される放射能の量は、通常、９９ｍＴｃの約５～２０ミリキュリーの範囲である。その後、標識された抗ＣＤ３抗体は、特定の標的ポリペプチドを含有する細胞の部位に蓄積する。例えば、本技術の標識された抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３タンパク質が局在している細胞及び組織で対象内に蓄積する。
したがって、本技術は、医学的状態の診断方法を提供し、（ａ）個体の細胞又は体液における本技術の抗ＣＤ３抗体の結合を測定することによって、免疫反応性ＣＤ３タンパク質の発現をアッセイすることと、（ｂ）試料に存在する免疫反応性ＣＤ３タンパク質の量を標準参照と比較することと、を含み、標準と比較した免疫反応性ＣＤ３タンパク質レベルの増加又は減少が、医学的状態の指標である。
アフィニティー精製。本技術の抗ＣＤ３抗体を使用して、免疫反応性ＣＤ３タンパク質を試料から精製し得る。いくつかの実施形態において、抗体は、固体支持体上に固定される。かかる固体支持体の例には、ポリカーボネートなどのプラスチック、アガロース及びセファロースなどの複合炭水化物、アクリル樹脂、並びにポリアクリルアミド及びラテックスビーズなどが含まれる。抗体をかかる固体支持体にカップリングするための技術は、当該技術分野で周知である（Ｗｅｉｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” ４ｔｈ Ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，Ｃｈａｐｔｅｒ １０（１９８６）、Ｊａｃｏｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．３４ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９７４））。
抗原を抗体支持体マトリックスに結合させる最も簡単な方法は、ビーズをカラムに集め、抗原溶液をカラムに通すことである。この方法の効率は、固定化抗体と抗原との間の接触時間に依存し、低流速を使用して延長することができる。固定化抗体は、抗原をそれが通過する際に捕捉する。代替的に、抗原は、抗原溶液を支持体（例えば、ビーズ）と混合し、スラリーを回転又は揺動させることによって抗体支持体マトリックスと接触させることができ、抗原と固定化抗体との間の最大限の接触を可能にする。結合反応が完了した後、スラリーをビーズの収集のためのカラムに渡す。ビーズを、好適な洗浄緩衝液を使用して洗浄し、次いで、純粋又は実質的に純粋な抗原を溶離させる。
目的の抗体又はポリペプチドは、ビーズなどの固体支持体にコンジュゲートすることができる。加えて、ビーズなどの第１の固体支持体はまた、必要に応じて、ポリペプチドと支持体とのコンジュゲーションのための本明細書に開示されるものを含む任意の好適な手段によって、第２のビーズ又は他の支持体であることができる、第２の固体支持体にコンジュゲートすることができる。したがって、ポリペプチドと固体支持体とのコンジュゲーションに関して本明細書に開示されるコンジュゲーション方法及び手段のうちのいずれかは、第１の支持体と第２の支持体とのコンジュゲーションに適用することもでき、第１及び第２の固体支持体は同じであるか又は異なることができる。
ポリペプチドを固体支持体にコンジュゲートするための使用に好適なリンカーには、架橋剤であることができ、支持体の表面に存在する官能基と、若しくはポリペプチドと、又はその両方と反応することができる様々な薬剤と、が含まれる。架橋剤として有用な試薬には、ホモ二官能性、特にヘテロ二官能性の試薬が含まれる。有用な二官能性架橋剤には、Ｎ－ＳＩＡＢ、ジマレイミド、ＤＴＮＢ、Ｎ－ＳＡＴＡ、Ｎ－ＳＰＤＰ、ＳＭＣＣ、及び６－ＨＹＮＩＣが含まれるが、これらに限定されない。架橋剤は、ポリペプチドと固体支持体との間の選択的に切断可能な結合を提供するように選択することができる。例えば、３－アミノ－（２－ニトロフェニル）プロピオン酸などの光不安定性架橋剤は、ポリペプチドを固体支持体から切断する手段として用いることができる。（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ，ｐｐ，４－１２（１９９５）、Ｒｏｔｈｓｃｈｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２４：３５１－６６（１９９６）、及び米国特許第５，６４３，７２２号）。他の架橋試薬が当該技術分野で周知である。（例えば、Ｗｏｎｇ（１９９１）、同上及びＨｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）、同上を参照されたい）。
抗体又はポリペプチドは、カルボキシル基官能化ビーズとポリペプチドのアミノ末端との間に形成された共有アミド結合を通して、又は逆に、アミノ基官能化ビーズとポリペプチドのカルボキシル末端との間に形成された共有アミド結合を通して、ビーズなどの固体支持体に固定化することができる。加えて、二官能性トリチルリンカーを、支持体、例えば、ワング樹脂などの樹脂上の４－ニトロフェニル活性エステルに、アミノ樹脂を介した樹脂上のアミノ基又はカルボキシル基を通して結合させることができる。二官能性トリチルアプローチを使用して、固体支持体は、ギ酸又はトリフルオロ酢酸などの揮発性酸での処理を必要とすることで、ポリペプチドが切断され、除去できることを確実にすることができる。かかる事例において、ポリペプチドは、固体支持体のウェルの底部又は固体支持体の平坦な表面上にビーズのないパッチとして堆積され得る。マトリックス溶液の添加後、ポリペプチドをＭＳに脱離することができる。
疎水性トリチルリンカーはまた、揮発性酸又は適切なマトリックス溶液、例えば、３－ＨＰＡを含有するマトリックス溶液を使用して、ポリペプチドからアミノ結合トリチル基を切断することによって、酸不安定なリンカーとして利用することができる。酸不安定度も変えることができる。例えば、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、又はトリメトキシトリチルは、ポリペプチドの適切なｐ置換又はより酸不安定なトリチルアミン誘導体に変更することができ、すなわち、トリチルエーテル及びトリチルアミン結合を、ポリペプチドに作製することができる。したがって、ポリペプチドは、疎水性リンカーから、例えば、疎水性求引を破壊することによって、又は所望であれば、３－ＨＰＡなどのマトリックスが酸として作用する典型的なＭＳ条件下を含む酸性条件下で、トリチルエーテル又はトリチルアミン結合を切断することによって、取り出すことができる。
直交的に切断可能なリンカーはまた、第１の固体支持体、例えば、ビーズを、第２の固体支持体に結合するため、又は目的のポリペプチドを固体支持体に結合するためにも有用であることができる。かかるリンカーを使用して、第１の固体支持体、例えば、ビーズを、第２の固体支持体から、ポリペプチドを支持体から切断することなく、選択的に切断することができ、次いで、ポリペプチドをビーズから後になって切断することができる。例えば、ＤＴＴなどの還元剤を使用して切断することができるジスルフィドリンカーを用いて、ビーズを第２の固体支持体に結合することができ、酸切断可能な二官能性トリチル基を使用して、ポリペプチドを支持体に固定することができる。所望される場合、ポリペプチドの固体支持体との結合は、例えば、第１の支持体と第２の支持体との間の結合をそのまま残して、最初に切断することができる。トリチルリンカーは、共有結合又は疎水性コンジュゲーションを提供することができ、コンジュゲーションの性質にかかわらず、トリチル基は、酸性条件で容易に切断される。
例えば、ビーズは、固体支持体とのビーズの高密度結合、又はビーズとのポリペプチドの高密度結合が促進されるような、長さ及び化学的性質を有するように選択することができる連結基を介して、第２の支持体に結合することができる。かかる連結基は、例えば、「ツリー様」構造を有することができ、それによって固体支持体上の付着部位毎に多様な官能基を提供する。かかる連結基の例には、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ペンタ－エリスロール、及びトリス－ヒドロキシアミノメタンが含まれる。
非共有結合。抗体又はポリペプチドは、固体支持体にコンジュゲートすることができるか、又は第１の固体支持体は、非共有結合相互作用によって、第２の固体支持体にコンジュゲートすることができる。例えば、強磁性材から作られた磁性ビーズは、磁化することができ、磁性固体支持体に引き付けられ、磁場の除去によって支持体から解放することができる。代替的に、固体支持体は、イオン性又は疎水性部分を提供することができ、それぞれ、イオン性部分又は疎水性部分と、ポリペプチド、例えば、結合したトリチル基を含有するポリペプチド、又は疎水性特性を有する第２の固体支持体との相互作用を可能にすることができる。
固体支持体はまた、特異的結合対のメンバーとともに提供することができ、したがって、相補的結合部分を含有するポリペプチド又は第２の固体支持体にコンジュゲートすることができる。例えば、アビジン又はストレプトアビジンでコーティングされたビーズは、その中に組み込まれたビオチン部分を有するポリペプチドに、又はビオチン若しくはイミノビオチンなどのビオチンの誘導体でコーティングされた第２の固体支持体に、結合することができる。
本明細書に開示されるか、さもなければ当該技術分野で既知である結合メンバーのうちのいずれかを逆転できることが認識されるべきである。したがって、ビオチンは、例えば、ポリペプチド又は固体支持体のいずれかに組み込むことができ、逆に、アビジン又は他のビオチン結合部分は、それぞれ、支持体又はポリペプチドに組み込むことができる。本明細書における使用のために企図される他の特異的結合対には、ホルモン及びそれらの受容体、酵素及びそれらの基質、ヌクレオチド配列及びその相補性配列、抗体及びそれが特異的に相互作用する抗原、並びに当業者に既知である他のかかる対が含まれるが、これらに限定されない。
Ａ．本技術の抗ＣＤ３抗体の診断的使用
一般。本技術の抗ＣＤ３抗体は、診断方法に有用である。したがって、本技術は、対象におけるＣＤ３活性の診断において抗体を使用する方法を提供する。本技術の抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３タンパク質に対する任意のレベルのエピトープ結合特異性及び非常に高い結合親和性を有するように選択され得る。一般に、抗体の結合親和性が高いほど、標的ポリペプチドを取り除くことなく非特異的に結合した物質を除去するために、より厳格な洗浄条件をイムノアッセイで行うことができる。したがって、診断アッセイに有用な本技術の抗ＣＤ３抗体は、通常、約１０８Ｍ－１、１０９Ｍ－１、１０１０Ｍ－１、１０１１Ｍ－１、又は１０１２Ｍ－１の結合親和性を有する。更に、診断試薬として使用される抗ＣＤ３抗体は、標準的な条件下で、少なくとも１２時間、少なくとも５時間、又は少なくとも１時間で平衡に達するのに十分な結合動態を有することが望ましい。
抗ＣＤ３抗体を使用して、様々な標準的なアッセイ形式で免疫反応性ＣＤ３タンパク質を検出することができる。かかる形式には、免疫沈降、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、及びイムノメトリックアッセイが含まれる。Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８）、米国特許第３，７９１，９３２号、同第３，８３９，１５３号、同第３，８５０，７５２号、同第３，８７９，２６２号、同第４，０３４，０７４号、同第３，７９１，９３２号、同第３，８１７，８３７号、同第３，８３９，１５３号、同第３，８５０，７５２号、同第３，８５０，５７８号、同第３，８５３，９８７号、同第３，８６７，５１７号、同第３，８７９，２６２号、同第３，９０１，６５４号、同第３，９３５，０７４号、同第３，９８４，５３３号、同第３，９９６，３４５号、同第４，０３４，０７４号、及び同第４，０９８，８７６号を参照されたい。生体試料は、対象の任意の組織又は体液から得ることができる。特定の実施形態において、対象は、がんの初期段階にある。一実施形態において、がんの初期段階は、対象から得られた試料中のＣＤ３タンパク質のレベル又は発現パターンによって決定される。特定の実施形態において、試料は、尿、血液、血清、血漿、唾液、羊水、脳脊髄液（ＣＳＦ）、及び生検体組織からなる群から選択される。
イムノメトリック又はサンドイッチアッセイは、本技術の診断方法における１つの方式である。米国特許第４，３７６，１１０号、同第４，４８６，５３０号、同第５，９１４，２４１号、及び同第５，９６５，３７５号を参照されたい。かかるアッセイは、１つの抗体、例えば、固相に固定化された抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体の集団、及び溶液中の別の抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体の集団を使用する。典型的には、溶液抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体の集団が標識される。抗体集団が使用される場合、集団は、標的ポリペプチド内の異なるエピトープ特異性に結合する抗体を含有することができる。したがって、同じ集団を、固相抗体及び溶液抗体の両方に使用することができる。抗ＣＤ３モノクローナル抗体が使用される場合、異なる結合特異性を有する第１及び第２のＣＤ３モノクローナル抗体が、固相及び溶液相に使用される。固相（「捕捉」とも称される）及び溶液（「検出」とも称される）抗体は、順次又は同時のいずれかで標的抗原と接触させることができる。固相抗体を最初に接触させる場合、アッセイはフォワードアッセイと称される。逆に、溶液抗体を最初に接触させる場合、アッセイはリバースアッセイと称される。標的を両方の抗体と同時に接触させる場合、アッセイは同時アッセイと称される。ＣＤ３タンパク質を抗ＣＤ３抗体と接触させた後、試料は、通常、約１０分～約２４時間で変動する期間でインキュベートされるが、通常、約１時間である。次いで、洗浄ステップを行い、診断試薬として使用される抗ＣＤ３抗体に特異的に結合していない試料の構成成分を除去する。固相及び溶液抗体を別個のステップで結合させる場合、いずれか又は両方の結合ステップの後に洗浄を行うことができる。洗浄後、結合は、典型的には、標識された溶液抗体の結合を介して固相に連結された標識を検出することによって、定量化される。通常、所与の対の抗体又は抗体の集団、及び所与の反応条件について、検量線が既知の濃度の標的抗原を含有する試料から用意される。試験する試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質の濃度は、検量線（すなわち、標準曲線）から補間することによって読み取られる。分析物は、平衡で結合している標識溶液抗体の量から、又は平衡に到達する前の一連の時点における結合した標識溶液抗体の動態測定によって、測定することができる。かかる曲線の勾配は、試料中のＣＤ３タンパク質の濃度の尺度である。
上記の方法で使用するための好適な支持体には、例えば、ニトロセルロース膜、ナイロン膜、及び誘導体化ナイロン膜、並びにアガロースなどの粒子、デキストランベースのゲル、ディップスティック、粒子、微粒子、磁性粒子、試験管、マイクロタイターウェル、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ Ｎ．Ｊ．）が含まれる。固定化は、吸収又は共有結合によることができる。任意選択的に、抗ＣＤ３抗体は、アビジンなどの表面結合リンカーとの結合のために、ビオチンなどのリンカー分子に結合させることができる。
いくつかの実施形態において、本開示は、診断剤にコンジュゲートされた本技術の抗ＣＤ３抗体を提供する。診断剤は、放射性又は非放射性標識、造影剤（磁気共鳴画像法、コンピュータ断層撮影法、又は超音波法など）を含み得、放射性標識は、ガンマ－、ベータ－、アルファ－、オージェ電子－、又は陽電子－放出同位体であることができる。診断剤は、抗体部分、すなわち、抗体若しくは抗体断片、又はサブ断片にコンジュゲートされて投与される分子であり、抗原を含有する細胞の位置を示すことによって、疾患を診断又は検出するのに有用である。
有用な診断剤には、放射性同位体、色素（ビオチン－ストレプトアビジン複合体を用いるなど）、造影剤、蛍光化合物又は分子、及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）のための増強剤（例えば、常磁性イオン）が含まれるが、これらに限定されない。米国特許第６，３３１，１７５号は、ＭＲＩ技術及びＭＲＩ増強剤にコンジュゲートされた抗体の調製を記載しており、参照によりその全体が組み込まれる。いくつかの実施形態において、診断剤は、放射性同位体、磁気共鳴画像法における使用のための増強剤、及び蛍光化合物からなる群から選択される。抗体構成成分を放射性金属又は常磁性イオンで負荷するために、それは、イオンを結合するための複数のキレート基が結合する長い尾部を有する試薬と反応させることが必要であり得る。かかる尾部は、ポリリジン、多糖などのポリマー、又は例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビスチオセミカルバゾン、ポリオキシムなどのキレート基、及びこの目的のために有用であることが知られている同様な基が結合することができるペンダント基を有する他の誘導体化又は誘導体化可能な鎖であることができる。キレートは、標準的な化学物質を使用して、本技術の抗体にカップリングされ得る。キレートは、免疫反応性の最小限の損失並びに最小限の凝集及び／又は内部架橋で、分子との結合の形成を可能にする基によって、通常、抗体に連結される。キレートを抗体にコンジュゲートするための他の方法及び試薬は、米国特許第４，８２４，６５９号に開示されている。特に有用な金属－キレートの組み合わせには、放射線画像法のための診断用同位体とともに使用される、２－ベンジル－ＤＴＰＡ並びにそのモノメチル及びシクロヘキシル類似体が含まれる。マンガン、鉄、及びガドリニウムなどの非放射性金属と複合体化されたとき、同じキレートは、本技術のＣＤ３抗体と一緒に使用される場合、ＭＲＩに有用である。
ＮＯＴＡ（１，４，７－トリアザ－シクロノナン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－三酢酸）、ＤＯＴＡ、及びＴＥＴＡ（ｐ－ブロモアセトアミド－ベンジル－テトラエチルアミン四酢酸）などの大環状キレートは、それぞれ、ガリウム、イットリウム、及び銅の放射性核種などの様々な金属及び放射性金属とともに使用される。かかる金属－キレート錯体は、環サイズを目的の金属に合わせることによって安定化させることができる。他のＤＯＴＡキレートの例には、（ｉ）ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（ｉｉ）Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、（ｉｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（ｉｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（ｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（ｖｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（ｖｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（ｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ２、（ｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、（ｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、（ｘｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、（ｘｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、（ｘｉｉｉ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ２、（ｘｉｖ）Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（ｘｖ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ２、（ｘｖｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ２、（ｘｖｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ２、（ｘｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２、及び（ｘｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ２が含まれる。
ＲＡＩＴのための２２３Ｒａなどの核種に安定して結合する目的のものである、大環状ポリエーテルなどの他の環型キレートもまた企図される。
Ｂ．本技術の抗ＣＤ３抗体の治療的使用
一態様において、本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）は、固形腫瘍又は液体腫瘍の治療に有用である。好適な固形腫瘍又は液体腫瘍の非限定的な例としては、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、がん腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体がん、耳、鼻、及び喉の（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、胃腸がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎臓がん、喉頭がん、急性及び慢性の白血病、肝臓がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、セミノーマ、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍、及びそれらの転移が挙げられる。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
本技術の組成物は、がんの治療に有用な他の治療剤と併せて用いられ得る。例えば、本技術の抗体は、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、細胞増殖抑制アルカロイド、細胞傷害性抗生物質、抗代謝剤、内分泌／ホルモン剤、Ｔ細胞、ビスホスホネート療法剤、及び標的化された生物学的療法剤（例えば、ＵＳ６３０６８３２、ＷＯ２０１２／００７１３７、ＷＯ２００５／０００８８９、ＷＯ２０１０／０９６６０３などに記載される治療用ペプチド）からなる群から選択される少なくとも１つの追加の治療剤と、別々に、連続して、又は同時に投与され得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤は、化学療法剤である。特定の化学療法剤には、シクロホスファミド、フルオロウラシル（又は５－フルオロウラシル若しくは５－ＦＵ）、メトトレキサート、エダトレキサート（１０－エチル－１０－デアザ－アミノプテリン）、チオテパ、カルボプラチン、シスプラチン、タキサン、パクリタキセル、タンパク質結合パクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン、タモキシフェン、ラロキシフェン、トレミフェン、フルベストラント、ゲムシタビン、イリノテカン、イキサベピロン、テモゾルミド、トポテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エリブリン、ムタマイシン、カペシタビン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ロイプロリド、アバレリックス、ブセレリン、ゴセレリン、酢酸メゲストロール、リセドロネート、パミドロネート、イバンドロネート、アレンドロネート、デノスマブ、ゾレドロネート、トラスツズマブ、タイケルブ、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン及びドキソルビシン）、ベバシズマブ、オキサリプラチン、メルファラン、エトポシド、メクロレタミン、ブレオマイシン、微小管毒、バンレイシ科アセトゲニン、又はそれらの組み合わせが含まれる。
追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、本技術の抗体又は抗原結合断片は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗４－１ＢＢ抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、及び抗ＬＡＧ－３抗体を含むがこれらに限定されない、少なくとも１つの追加の免疫調節／刺激抗体と、別々に、連続して、又は同時に投与され得る。
本技術の組成物は、任意選択的に、それを必要とする対象に単回ボーラスとして投与され得る。代替的に、投与レジメンは、腫瘍の出現後に様々な回数で行われる複数の投与を含み得る。
投与は、経口的、鼻腔内、非経口的（静脈内、筋肉内、腹腔内、又は皮下）、直腸、頭蓋内、腫瘍内、髄腔内、又は局所を含む、任意の好適な経路によって実行することができる。投与は、自己投与及び他者による投与を含む。記載される医学的状態の様々な治療モードは、全治療を含むが、全治療よりも少ない「実質的な」ことを意味することが意図され、いくつかの生物学的又は医学的に関連する結果が達成されることも理解されたい。
いくつかの実施形態において、本技術の抗体は、医薬製剤を構成し、それを必要とする対象に、１回以上の用量で投与され得る。投与レジメンは、所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整することができる。
典型的には、治療効果を達成するのに十分な、本技術の抗体組成物の有効量は、１日当たりキログラム体重当たり約０．０００００１ｍｇ～１日当たりキログラム体重当たり約１０，０００ｍｇの範囲である。典型的には、投与量範囲は、１日当たりキログラム体重当たり約０．０００１ｍｇ～１日当たりキログラム体重当たり約１００ｍｇである。抗ＣＤ３抗体の投与では、投与量は、毎週、２週毎、又は３週毎に、対象体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には、０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投与量は、毎週、２週毎、若しくは３週毎に１ｍｇ／ｋｇ体重、若しくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は毎週、２週毎、若しくは３週毎に１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であることができる。一実施形態において、抗体の単回投与量は、体重１ｋｇ当たり０．１～１０，０００マイクログラムの範囲である。一実施形態において、担体中の抗体濃度は、送達されるミリリットル当たり０．２～２０００マイクログラムの範囲である。例示的な治療レジームは、２週に１回、又は月に１回、又は３～６か月毎に１回の投与を伴う。抗ＣＤ３抗体は、複数の機会に投与され得る。単回投与間の間隔は、時間単位、日単位、週単位、月単位、又は年単位であることができる。間隔はまた、対象における抗体の血中レベルを測定することによって指示されるとき、不規則であることができる。いくつかの方法において、投与量は、約７５μｇ／ｍＬ～約１２５μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬ、約１２５μｇ／ｍＬ～約１７５μｇ／ｍＬ、又は約１５０μｇ／ｍＬ～約２００μｇ／ｍＬの対象における血清抗体濃度を達成するように調整される。代替的に、抗ＣＤ３抗体は、持続放出製剤として投与することができ、その場合、より頻度の少ない投与が必要とされる。投与量及び頻度は、対象における抗体の半減期に応じて変化する。投与量及び投与頻度は、治療が予防的か又は治療的であるかに応じて変化し得る。予防的適用において、比較的低い投与量は、長期間にわたって比較的低頻度の間隔で投与される。治療的適用では、疾患の進行が減少若しくは終了するまで、又は対象が疾患の症状の部分的若しくは完全な改善を示すまで、比較的高い投与量が比較的短い間隔で、時に必要とされる。その後、患者に予防的レジームを投与することができる。
別の態様において、本開示は、対象におけるがんをインビボで検出するための方法を提供し、方法は、（ａ）対象に、有効量の本技術の抗体（又はその抗原結合断片）を投与することであって、抗体が、ＣＤ３を発現するがん細胞に局在化するように構成されており、放射性同位体で標識されている、投与することと、（ｂ）参照値よりも高い抗体によって放出された放射性レベルを検出することによって、対象における腫瘍の存在を検出することと、を含む。いくつかの実施形態において、参照値は、グラム当たりの注入された用量（％ＩＤ／ｇ）として表される。参照値は、非腫瘍（正常）組織に存在する放射性レベルを測定し、非腫瘍（正常）組織±標準偏差に存在する平均放射性レベルを計算することによって算出され得る。いくつかの実施形態において、腫瘍と正常組織との間の放射性レベルの比率は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、又は１００：１である。
いくつかの実施形態において、対象は、がんを有すると診断されるか、又はがんを有することが疑われる。抗体によって放出された放射性レベルは、陽電子放射断層撮影又は単一光子放射コンピュータ断層撮影を使用して検出され得る。
追加的又は代替的に、いくつかの実施形態において、方法は、対象に、放射性核種にコンジュゲートされた本技術の抗体を含む有効量の免疫コンジュゲートを投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、放射性核種は、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、オージェ放出体、又はそれらの任意の組み合わせである。ベータ粒子放出同位体の例には、８６Ｙ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、１６５Ｄｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１７７Ｌｕ、及び６７Ｃｕが含まれる。アルファ粒子放出同位体の例には、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、２２５Ａｃ、１５２Ｄｙ、２１２Ｂｉ、２２３Ｒａ、２１９Ｒｎ、２１５Ｐｏ、２１１Ｂｉ、２２１Ｆｒ、２１７Ａｔ、及び２５５Ｆｍが含まれる。オージェ放出体の例に、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、５１Ｃｒ、５８Ｃｏ、９９ｍＴｃ、１０３ｍＲｈ、１９５ｍＰｔ、１１９Ｓｂ、１６１Ｈｏ、１８９ｍＯｓ、１９２Ｉｒ、２０１Ｔｌ、及び２０３Ｐｂが含まれる。本方法のいくつかの実施形態において、正常組織における非特異的ＦｃＲ依存性結合は、排除されるか、又は低下される（例えば、非グリコシル化をもたらす、Ｆｃ領域におけるＮ２９７Ａ変異を介して）。かかる免疫コンジュゲートの治療有効性は、曲線下面積（ＡＵＣ）腫瘍：ＡＵＣ正常組織比を計算することによって決定され得る。いくつかの実施形態において、免疫コンジュゲートは、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、又は１００：１のＡＵＣ腫瘍：ＡＵＣ正常組織比を有する。
毒性。最適には、有効量（例えば、用量）の本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体は、対象に実質的な毒性を引き起こすことなく、治療的利益を提供する。本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体の毒性は、細胞培養物又は実験動物における標準的な薬学的手順によって、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）又はＬＤ１００（集団の１００％に致死的な用量）を決定することによって、決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指標である。これらの細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータを使用して、ヒトにおける使用に毒性ではない投与量範囲を製剤化することができる。本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体の投与量は、有効用量を、ほとんど又は全く毒性を伴わずに含む、循環濃度の範囲内にある。投与量は、用いられる投与形態、及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で変更することができる。正確な製剤、投与経路、及び投与量は、対象の病態を考慮して個々の医師によって選択することができる。例えば、Ｆｉｎｇｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈ．１（１９７５）を参照されたい。
医薬組成物の製剤。本技術の方法に従い、抗ＣＤ３抗体は、投与に好適な医薬組成物に組み込むことができる。医薬組成物は、一般に、対象への投与に好適な形態で、組換え又は実質的に精製された抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む。薬学的に許容される担体は、投与される特定の組成物、並びに組成物を投与するために使用される特定の方法によって部分的に決定される。したがって、抗体組成物を投与するための医薬組成物の多種多様な好適な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １８ｔｈ ｅｄ．，１９９０を参照されたい）。医薬組成物は、一般に、無菌で実質的に等張性として、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）の全ての適正製造基準（Ｇｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ）（ＧＭＰ）の規制を完全に遵守して製剤化される。
「薬学的に許容される」、「生理学的に耐えられる」という用語、及びそれらの文法的変形は、組成物、担体、希釈剤、及び試薬を指す場合、互換的に使用され、材料が、組成物の投与を禁止するほどの望ましくない生理学的効果を生じることなく、対象へ又は対象で投与できることを表す。例えば、「薬学的に許容される賦形剤」は、一般に安全、非毒性、及び望ましい医薬組成物を調製する際に有用である賦形剤を意味し、獣医学的使用において並びにヒトの薬学的使用において許容される賦形剤を含む。かかる賦形剤は、固体、液体、半固体、又はエアロゾル組成物の場合、気体であることができる。「薬学的に許容される塩及びエステル」は、薬学的に許容され、所望の薬理学的特性を有する、塩及びエステルを意味する。かかる塩には、組成物中に存在する酸性プロトンが無機又は有機塩基と反応することができる場合に形成することができる塩が含まれる。好適な無機塩には、アルカリ金属、例えば、ナトリウム及びカリウム、マグネシウム、カルシウム、並びにアルミニウムで形成されたものが含まれる。好適な有機塩には、アミン塩基、例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ－メチルグルカミンなどの有機塩基で形成されたものが含まれる。かかる塩にはまた、無機酸（例えば、塩酸及び臭化水素酸）及び有機酸（例えば、酢酸、クエン酸、マレイン酸、並びにアルカン－及びアレーン－スルホン酸、例えばメタンスルホン酸及びベンゼンスルホン酸など）で形成された酸付加塩が含まれる。薬学的に許容されるエステルには、抗ＣＤ３抗体中に存在するカルボキシ、スルホニルオキシ、及びホスホノキシ基から形成されたエステル、例えば、Ｃ１－６アルキルエステルが含まれる。２つの酸性基が存在する場合、薬学的に許容される若しくはエステルは、一酸－一塩若しくはエステル、又は二塩若しくはエステルであることができ、同様に、２つを超える酸性基が存在する場合、かかる基のいくつか又は全ては、塩化又はエステル化することができる。本技術において命名された抗ＣＤ３抗体は、非塩化若しくは非エステル化形態、又は塩化及び／若しくはエステル化形態で存在することができ、かかる抗ＣＤ３抗体の命名は、元の（非塩化及び非エステル化）化合物及びその薬学的に許容される塩及びエステルの両方を含むことが意図される。また、本技術の特定の実施形態は、２つ以上の立体異性体形態で存在することができ、かかる抗ＣＤ３抗体の命名は、全ての単一立体異性体及びかかる立体異性体の全ての混合物（ラセミ又はそれ以外のいずれか）を含むことが意図される。当業者であれば、本技術の特定の薬物及び組成物の投与の適切な時期、順序、及び投与量を決定することは難しくないであろう。
かかる担体又は希釈剤の例には、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが含まれるが、これらに限定されない。リポソーム、及び固定油などの非水性ビヒクルも使用され得る。薬学的に活性な物質のためのかかる媒体及び化合物の使用は、当業者に周知である。いずれかの従来の媒体又は化合物が抗ＣＤ３抗体と不適合である程度又は範囲を除き、組成物におけるそれらの使用が企図される。補助的な活性化合物も、組成物中に組み込むことができる。
本技術の医薬組成物は、その意図された投与経路と適合するように製剤化される。本技術の抗ＣＤ３抗体組成物は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、鼻腔内、若しくは筋肉内の経路、又は吸入剤として投与することができる。抗ＣＤ３抗体は、任意選択的に、様々ながんの治療に少なくとも部分的に有効である他の薬剤と組み合わせて投与することができる。
非経口、皮内、又は皮下適用に使用される溶液又は懸濁液は、以下の構成成分：注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、若しくは他の合成溶媒などの無菌希釈剤、ベンジルアルコール若しくはメチルパラベンなどの抗細菌化合物、アスコルビン酸若しくは亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート化合物、アセタート、シトラート、若しくはホスファートなどの緩衝剤、及び塩化ナトリウム若しくはデキストロースなどの張度調整のための化合物を含むことができる。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調整することができる。非経口調製物は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、又は複数用量バイアルに封入することができる。
注入可能な使用に好適な医薬組成物には、無菌注入可能な溶液又は分散剤の即時調製のための無菌水溶液（水溶性の場合）又は分散剤及び無菌粉末が含まれる。静脈内投与では、好適な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、又はリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。全ての場合において、組成物は無菌でなければならず、容易なシリンジ通過性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性であるべきである。製造及び保存の条件下で安定でなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒であることができる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌化合物及び抗真菌化合物、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合、組成物中に、等張性化合物、例えば、糖、マンニトールなどの多価アルコール、ソルビトール、塩化ナトリウムを含めることが望ましいであろう。注入可能な組成物の長期吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる化合物、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含むことによってもたらすことができる。
無菌注入可能な溶液は、必要な量の本技術の抗ＣＤ３抗体を、上記に列挙される成分のうちの１つ又は組み合わせとともに適切な溶媒に組み込むことによって調製することができ、必要に応じて、濾過滅菌が続けられる。一般に、分散剤は、抗ＣＤ３抗体を、塩基性分散媒及び上に列挙されるものからの必要な他の成分を含有する無菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注入可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合、調製方法は、活性成分及び既に無菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末を生じる真空乾燥及び凍結乾燥である。本技術の抗体は、活性成分の持続的又は脈動的放出を可能にするような手段で製剤化することができるデポー注入又はインプラント調製物の形態で投与することができる。
経口組成物は一般に、不活性希釈剤又は食用担体を含む。それらは、ゼラチンカプセルに封入するか、又は錠剤に圧縮することができる。経口治療投与の目的のため、抗ＣＤ３抗体は、賦形剤とともに組み込まれ、錠剤、トローチ、又はカプセルの形態で使用することができる。経口組成物はまた、洗口剤としての使用のための流体担体を使用して調製することができ、流体担体中の化合物は、口腔に適用され、漱いで、吐き出されるか、又は飲み込まれる。薬学的に適合する結合化合物及び／又はアジュバント材料を、組成物の一部として含むことができる。錠剤、ピル、カプセル、トローチなどは、結晶セルロース、トラガカントゴム、若しくはゼラチンなどの結合剤、デンプン若しくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル、若しくはコーンスターチなどの崩壊性化合物、ステアリン酸マグネシウム若しくはステロート（Ｓｔｅｒｏｔｅ）などの滑剤、コロイド状二酸化ケイ素などの滑沢剤、スクロース若しくはサッカリンなどの甘味性化合物、又はペパーミント、サリチル酸メチル、若しくはオレンジ香料などの香料化合物の成分、又は同様な性質の成分のうちのいずれかを含むことができる。
吸入による投与では、抗ＣＤ３抗体は、好適な推進剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器若しくはディスペンサー、又はネブライザーからのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
全身投与はまた、経粘膜又は経皮手段によることができる。経粘膜又は経皮投与では、浸透させる障壁に適した浸透剤が製剤に使用される。かかる浸透剤は、当該技術分野で一般に知られており、例えば、経粘膜投与では、界面活性剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、鼻腔スプレー又は坐剤の使用を通して達成することができる。経皮投与では、抗ＣＤ３抗体は、当該技術分野で一般に知られている軟膏、膏薬、ゲル、又はクリームに製剤化される。
抗ＣＤ３抗体はまた、直腸送達のための坐剤（例えば、カカオバター及び他のグリセリドなどの従来の坐剤ベースを有する）又は停留浣腸の形態で医薬組成物として調製することができる。
一実施形態において、抗ＣＤ３抗体は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤などの、体からの迅速な排除に対して抗ＣＤ３抗体を保護する担体とともに調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生体分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤の調製方法は、当業者に明らかであろう。材料はまた、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手することができる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染した細胞を標的とするリポソームを含む）はまた、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるように、当業者に既知の方法に従って調製することができる。
本明細書に開示されるＣＤ３多重特異性結合分子に結合したＴ細胞。いかなる理論にも拘束されることなく、本明細書に提供される抗ＣＤ３多重特異性結合分子（ＣＤ３×腫瘍抗原）が、例えば、本明細書に記載されるような手順によってＴ細胞に結合されるとき、多重特異性結合分子の抗ＣＤ３ ｓｃＦｖがＴ細胞の表面でＣＤ３に結合すると考えられる。いかなる理論にも拘束されることなく、Ｔ細胞との多重特異性結合分子の結合（すなわち、Ｔ細胞で発現されたＣＤ３との抗ＣＤ３ ｓｃＦｖの結合）がＴ細胞を活性化し、結果として、ＭＨＣ制限を回避して、Ｔ細胞受容体ベースの細胞傷害性が所望の腫瘍標的に再指向されることを可能にすると考えられる。
したがって、本開示はまた、本技術の多重特異性結合分子に結合されたＴ細胞を提供する。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、多重特異性結合分子に非共有結合的に結合される。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、Ｔ細胞が投与される対象に対して自家である。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、Ｔ細胞が投与される対象に対して同種異系である。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。
具体的な実施形態において、本発明の多重特異性結合分子に結合するＴ細胞は、本明細書に記載される治療方法に従って使用される。具体的な実施形態において、本開示の多重特異性結合分子に結合されるＴ細胞は、以下に記載されるような併用療法の一部として使用される。
Ｔ細胞の注入との併用療法を伴う具体的な実施形態において、（ａ）本明細書に記載の多重特異性結合分子、（ｂ）Ｔ細胞、及び／又は（ｃ）薬学的に有効な担体を含む、医薬組成物が本明細書に提供される。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、Ｔ細胞が投与される対象に対して自家である。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、Ｔ細胞が投与される対象に対して同種異系である。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、多重特異性結合分子に結合されているか、又は結合されていない、いずれかである。具体的な実施形態において、多重特異性結合分子とのＴ細胞の結合は、非共有結合である。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。多重特異性結合分子をＴ細胞に結合させるために使用することができる方法は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，１９：９２５－３３、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｖａｉｓｈａｍｐａｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ，２０１５：２８５１９３、及びＳｔｒｏｍｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２５７（１）：１４５－１６４を参照されたい。
具体的な実施形態において、本明細書に提供される多重特異性結合分子、多重特異性結合分子をコードするポリヌクレオチド、ベクター、若しくは細胞、又は多重特異性結合分子を含む医薬組成物の投与は、患者をＴ細胞注入で治療した後に行われる。具体的な実施形態において、Ｔ細胞注入は、Ｔ細胞が投与される対象に対して自家であるＴ細胞を用いて行われる。具体的な実施形態において、Ｔ細胞注入は、Ｔ細胞が投与される対象に対して同種異系であるＴ細胞を用いて行われる。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、本明細書に記載の多重特異性結合分子と同一の分子に結合することができる。具体的な実施形態において、多重特異性結合分子と同一の分子とのＴ細胞の結合は、非共有結合である。具体的な実施形態において、Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。
Ｃ．キット
本技術は、本技術の少なくとも１つの免疫グロブリン関連組成物（例えば、本明細書に記載の任意の抗体又は抗原結合断片）、又はその機能的バリアント（例えば、置換バリアント）を含む、ＣＤ３の検出及び／又はがんの治療のためのキットを提供する。任意選択的に、本技術のキットの上述の構成成分は、好適な容器にパッケージングされ、がんの治療について表示される。上記の構成成分は、水性の、好ましくは無菌の溶液として、又は再構成のための凍結乾燥された、好ましくは無菌の製剤として、単位又は複数用量の容器、例えば、密封したアンプル、バイアル、ボトル、シリンジ、及び試験管に保存され得る。キットは、医薬組成物をより大きい体積に希釈するのに好適な希釈剤を保持する第２の容器を更に含み得る。好適な希釈剤には、医薬組成物の薬学的に許容される賦形剤及び生理食塩水が含まれるが、これらに限定されない。更に、キットは、医薬組成物を希釈するための説明書、及び／又は希釈されるかどうかにかかわらず、医薬組成物を投与するための説明書を含み得る。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって穿刺され得るストッパーを有するバイアルであり得る）。キットは、リン酸緩衝化食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む、より多くの容器を更に含み得る。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、好適な宿主のうちの１つ以上のための培地を含む、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料を更に含み得る。キットは、任意選択的に、例えば、かかる治療用製品又は診断用製品の適応症、使用法、投与量、製造、投与、禁忌、及び／又はその使用に関する警告についての情報を含む、治療用製品又は診断用製品の商用パッケージに通例含まれる説明書を含み得る。
キットは、例えば血清、血漿、リンパ、嚢胞液、尿、糞便、脳脊髄液、腹水、又は血液、体組織からの生検試料を含むが、これらに限定されない生体試料における免疫反応性ＣＤ３タンパク質の存在の検出するために有用である。例えば、キットは、生体試料中のＣＤ３タンパク質に結合することができる本技術の１つ以上のヒト化、キメラ、又は二重特異性抗ＣＤ３抗体（又はその抗原結合断片）と、試料中のＣＤ３タンパク質の量を決定するための手段と、試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質の量を標準と比較するための手段と、を含むことができる。抗ＣＤ３抗体のうちの１つ以上が、標識され得る。キット構成成分（例えば、試薬）は、好適な容器にパッケージングすることができる。キットは、キットを使用して免疫反応性ＣＤ３タンパク質を検出するための説明書を更に含むことができる。
抗体ベースのキットでは、キットは、例えば、１）ＣＤ３タンパク質に結合する固体支持体に結合した、本技術の第１の抗体、例えば、ヒト化、キメラ、又は二重特異性ＣＤ３抗体（又はその抗原結合断片）と、任意選択的に、２）ＣＤ３タンパク質又は第１の抗体のいずれかに結合し、検出可能な標識にコンジュゲートされている第２の異なる抗体と、を含むことができる。
キットはまた、例えば、緩衝剤、保存剤、又はタンパク質安定化剤を含むことができる。キットは、検出可能な標識、例えば、酵素又は基質を検出するために必要な構成成分を更に含むことができる。キットはまた、アッセイして、試験試料と比較することができる、対照試料又は一連の対照試料を含むことができる。キットの各構成成分は、個々の容器内に封入することができ、様々な容器の全ては、キットを使用して行われるアッセイの結果を解釈するための説明書とともに、単一のパッケージ内にあることができる。本技術のキットは、キット容器の上、又は中に記載物を含み得る。記載物は、例えば、インビトロ若しくはインビボでのＣＤ３タンパク質の検出のために、又はがんの治療を必要とする対象におけるがんの治療のために、キットに含まれる試薬を使用する方法を説明する。特定の実施形態において、試薬の使用は、本技術の方法に従うことができる。
本技術は、以下の実施例によって更に例示されるが、これは、決して限定するものとして解釈されるべきではない。以下の実施例は、本技術の例示的な抗ＣＤ３抗体の調製、特性評価、及び使用を示す。以下の実施例は、本技術のキメラ、ヒト化、及び二重特異性抗体の産生、並びにそれらの結合特異性及びインビトロ及びインビボ生物学的活性の特性評価を実証する。
実施例１：マウスＳＰ３４のヒト化
ネズミ抗ＣＤ３抗体であるＳＰ３４の相補性決定領域（ＣＤＲ）、超可変ループ、及びフレームワーク領域（ＦＲ）を、可変配列内で分析し、Ｋａｂａｔ描写システムにより特定した。ネズミ抗体のＣＤＲを、ネズミ対応物（例えば、ＩＧＨＶ３－７３＊０１及びＩＧＬＶ７－４３＊０１）と最も高い配列同一性を共有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を使用して、ヒトアクセプターフレームワークに直接移植した。次いで、相同性モデリングを行い、マウス抗体のモデル化された構造を取得し、フレームワーク残基の溶媒アクセス可能な表面積を計算して、埋められたフレームワーク残基を特定した。次いで、移植抗体フレームワーク配列及びマウス抗体フレームワーク配列において異なるＶＨ及びＶＬドメイン配列における重要な残基を特定し、逆変異させた。最後に、移植された配列を、Ｎ－グリコシル化部位、翻訳後修飾、及び移植抗体の結合活性に影響を及ぼし得る対合していないシステイン残基などの潜在的な傾向について検査した。
最初に、抗ＣＤ３クローンの親和性測定は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサー、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して決定した。平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋａに対するｋｄの比から計算した。特定の残基の抗体親和性及び発現への寄与を決定するために、パラトープマッピングを、ＮＮＫライブラリのスクリーニングによって行った。簡潔に述べると、親抗体のＶＨ及びＶＬは、ＮＣＢＩ Ｉｇ－Ｂｌａｓｔ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｊｅｃｔｓ／ｉｇｂｌａｓｔ／）を使用して検索され、ＣＤＲは、ＫＡＢＡＴ描写システムによって定義された。ＣＤＲ内の全ての残基を定義し、ＮＮＫ法によって変異させた。各個々のＮＮＫライブラリを、２０の理論的多様性を有するＦＡＳＥＢＡプラットフォームに基づいて残基毎に生成した。重鎖及び軽鎖の両方をコードするＤＮＡを哺乳類発現ベクターに挿入し、ＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクトし、最高発現の安定したクローンを選択した。上清をシェーカーフラスコから収集し、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーで精製した。
９６ディープウェルプレートにおけるＥ．ｃｏｌｉでの発現のために、４８を超えるクローンを各ＮＮＫライブラリからランダムに選択した。次いで、全てのクローンを配列決定し、固有のクローンを選択した。発現及び結合特異性の評価のために、培地中で分泌される粗製の選択されたタンパク質を、それぞれ、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及びヒト及びカニクイザル抗原タンパク質に対するＥＬＩＳＡによって分析した。抗体発現を損なうことなく、抗体親和性を減少させる「有益な変異体」は、スクリーニング及び親和性順位付けを介して、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔの発現レベル、生物物理学的特性、及び親和性のための迅速なスクリーニング（Ｆａｓｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｏｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ， Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， ａｎｄ Ａｆｆｉｎｉｔｉｅｓ）（ＦＡＳＥＢＡ）プラットフォームによって確認された。
本技術のヒト化ＳＰ３４バリアントの例示的な重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列が、図１に記載される。ＡＢＰ１００ｓ．１０．０の抗ＣＤ３ ＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ、配列番号２２及び配列番号２８）は、親ＳＰ３４クローンを表す。
実施例２：本開示の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物の生化学的及び機能的特徴付け
熱安定性。有益な変異体を選択し、発現上清を４２℃で２４時間インキュベートすることによって、熱安定性について評価した。インキュベーション後、上清を４５００ｒｐｍで遠心分離し、未溶解物質を廃棄した。熱処理され、精製された全長二重特異性抗体をその濃度について再評価し、ヒト及びカニクイザルＣＤ３に対する熱処理による試料の親和性順位付けを行った。表２を参照されたい。
親和性順位付け。親及び親和性調整二重特異性抗体とヒト及びカニクイザル標的タンパク質（ＨＥＲ２及びＣＤ３）との間の結合をＥＬＩＳＡによって検証し、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋを使用して、抗原と二重特異性抗体との間の相互作用の動態を研究した。表２及び図２を参照されたい
実施例３：がんを治療するための本開示の免疫グロブリン関連組成物の使用
腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２）／ＣＤ３結合、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞媒介性殺傷、及びサイトカイン産生に対する、試験した各二重特異性抗体クローン（例えば、抗ＨＥＲ２×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）の様々なＣＤ３親和性の影響を、様々なレベルの腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２）を発現する腫瘍細胞株の存在下又は不存在下で調べた。ＳＫＢＲ３及びＨＣＣ１９５４は、高密度Ｈｅｒ－２発現細胞株を表すが（Ｒａｍ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．２０１４６（５）：１２１１－１２１９）、ＭＣＦ－７及びＨＴ５５は、Ｈｅｒ２を発現する内因性非がん細胞と同様の発現レベルを有する低密度Ｈｅｒ２発現細胞を表す。ＮＦＡＴ Ｔ細胞受容体活性化アッセイ、細胞傷害性アッセイ、及びサイトカインアッセイについての以下のデータからの全てのｐ値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．４．０上で実行したＴｕｋｅｙの多重比較法を用いた二元配置ＡＮＯＶＡから導かれた。ＡＢＰ１００ｓ．１０．０の抗ＣＤ３ ＶＨ及びＶＬ配列（それぞれ、配列番号２２及び配列番号２８）を含む抗ＨＥＲ２×ＣＤ３ ＢｓＡｂは、親クローンを表し、本明細書では１０．０と略される。ＡＢＰ１００ｓ．１０．５．１及びＡＢＰ１００ｓ．１０．６．１（ＣＤ３に対する親和性が低減されている）のＶＨ及びＶＬ配列を含む抗ＨＥＲ２×ＣＤ３ ＢｓＡｂは、それぞれ、１０．５．１及び１０．６．１と略される。
ＣＤ３／ＴＣＲ ＮＦＡＴ Ｔ細胞活性化レポーターアッセイ：本技術の抗ＣＤ３二重特異性抗体によるＴ細胞活性化を評価するために、Ｔ細胞活性化バイオアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｊ１６２１／Ｊ１６２５）を、ＴＣＲ／ＣＤ３ Ｊｕｒｋａｔエフェクター細胞（ＮＦＡＴレポーター）とともに使用し、Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ７９４１）を使用して検出した。簡潔に述べると、白色底／チムニー（白色）ＴＣ処理プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３９１７）を使用して、４０，０００個の標的細胞（Ｈｅｒ２－高：ＳＫ－ＢＲ－３、ＨＣＣ１９５４；Ｈｅｒ２－低：ＭＣＦ－７、ＨＴ５５）を１００μＬ培地中で一晩プレーティングし、標的細胞を含まない条件でも使用した。次いで、アッセイを、アッセイキットとともに提供される詳細な指示に従って行い、７時間のインキュベーション、続いて発光読み出しを行った。
一般に、より高い量のＨｅｒ２を発現する標的細胞では、より高いＴ細胞活性化が見られた（図３Ａ～３Ｂ）。特に、１０．５．１及び１０．６．１クローン（ＣＤ３への低減された結合親和性を示す）は、Ｈｅｒ２－高標的（ＳＫ－ＢＲ－３、ＨＣＣ１９５４）で親構築物（１０．０クローン）からわずかに減少したのみで、全てのクローンの全ての活性化読み出しは、調べた最高用量（４０ｎＭ）で３００，０００～６００，０００ＲＬＵ以内であった（図３Ａ～３Ｂ）。Ｈｅｒ２－低標的細胞では、１０．０構築物は、わずかに低い活性化の場合でも同様の活性化を示した（ＭＣＦ－７及びＨＴ－５５細胞株の両方で４０ｎＭで約３００，０００ＲＬＵ）。対照的に、１０．５．１及び１０．６．１構築物は、Ｈｅｒ２－低標的細胞（ＨＴ５５、ＭＣＦ－７ ；図３Ｃ～３Ｄ）上で４０ｎＭ（約１００，０００ＲＬＵ）（１０．５．１対１０．０及び１０．６．１対１０．０の両方の比較でｐ＜０．０００１）で有意に低い活性化を示し、アイソタイプ対照と統計的に異ならず、標的細胞の不存在下で見られるバックグラウンド活性化と同様であった（図３Ｅ）。まとめると、これらのデータは、低Ｈｅｒ２発現細胞における１０．５．１及び１０．６．１誘導Ｔ細胞活性化の欠如と一致する。
Ｔ細胞依存性細胞傷害性（ＴＤＣＣ）：Ｈｅｒ２発現標的細胞のＴ細胞媒介性殺傷を媒介する抗ＨＥＲ２×ＣＤ３二重特異性抗体のインビトロ機能的能力を評価するために、ＣＤ３＋Ｔ細胞でＴ細胞依存性細胞傷害性（ＴＤＣＣ）アッセイを行った。標的細胞を、１００μＬ培地中１０，０００個の細胞／ウェルで白色底／チムニー組織培養処理プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３９１７）にプレーティングし、一晩インキュベートした（Ｈｅｒ２－高：ＳＫ－ＢＲ－３、ＨＣＣ１９５４；Ｈｅｒ２－低：ＭＣＦ－７、ＨＴ５５）。二重特異性抗体を、ＲＰＭＩ１６４０／１０％熱不活性化ＦＢＳ中で希釈した（範囲：３０、０．３、０．００３、０．００００３ｎＭの最終濃度）。培養培地を標的細胞から除去し、二重特異性抗体を１００μＬで添加し、続いて５対１のエフェクター：標的比（Ｔ細胞：標的細胞）で精製されたヒト凍結保存Ｔ細胞（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ７００２４）を添加した。検出は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉＤ３プレートリーダー上で、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ２．０（Ｐｒｏｍｅｇａ）及び発光検出を用いて４０時間で行った。示される図中の結果は、３つの異なるドナーＣＤ３＋Ｔ細胞試料を用いて行われた実験を表す。
ＳＫ－ＢＲ－３標的細胞では、１０．５．１及び１０．６．１は、４０ｎＭでの親構築物（１０．０）と比較して、殺傷におけるわずかであるが有意な（１０．０対１０．５．１：ｐ＝０．００４２；１０．０対１０．６．１：ｐ＝０．０００２）減少を示したのみであり（図４Ａ）、１０．５．１及び１０．６．１クローンによる高Ｈｅｒ２発現細胞の意図された標的化と一致していた。４０ｎＭのＨｅｒ２－低（ＨＴ５５、ＭＣＦ－７）標的細胞では、アイソタイプ対照殺傷レベルと１０．５．１及び１０．６．１の殺傷レベルとの間に有意差はなかった（図４Ｃ～４Ｄ）。対照的に、ＭＣＦ－７及びＨＴ－５５細胞株の両方で同じ用量で、これらのクローンの両方が、親の１０．０クローンと比較して有意に低減された殺傷を示し（ｐ＜０．０００１：１０．０対１０．５．１及び１０．０対１０．６．１について）（図４Ｃ～４Ｄ）、ＣＤ３変異クローンによる低Ｈｅｒ２発現細胞株の殺傷がほとんど又は全くなかったことを示す。
ヒトＰＢＭＣでのＨｅｒ２－高及びＨｅｒ２－低の標的細胞株におけるマルチプレックスサイトカイン検出アッセイ及び関連する細胞傷害性。抗ＨＥＲ２×ＣＤ３二重特異性抗体構築物によって媒介されるサイトカイン放出を分析するために、ヒトＰＢＭＣを、ＳＫＢＲ－３（Ｈｅｒ２－高）及びＭＣＦ－７（Ｈｅｒ２－低）、並びに「標的細胞なし」条件で可溶性抗体と接触させた。モノクローナル抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体は、対照として機能した。簡潔に述べると、ＳＫＢＲ－３（Ｈｅｒ２－高）及びＭＣＦ－７（Ｈｅｒ２－低）標的細胞株を、アッセイの前夜にプレーティングした。二重特異性抗体を、ＲＰＭＩ１６４０／１０％熱不活性化ＦＢＳ中で希釈した（範囲：３０、０．３、０．００３、０．００００３ｎＭの最終濃度）。培養培地を標的細胞から除去し、二重特異性抗体を１００μＬで添加し、続いてＲＰＭＩ／１０％ＨＩ ＦＢＳ中の白色－チムニー／底プレートにヒトＰＢＭＣ（１ドナー、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＰＢＭＣ約５×１０７個の細胞／バイアル）（１０：１ Ｅ：Ｔ比；１００，０００ＰＢＭＣ：１０，０００個の標的細胞）を添加した。培養上清を、Ｍａｇｐｉｘ（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を使用したシグナル検出、及びＬｕｍｉｎｅｘ ｘＭＡＰソフトウェアを使用した標準ウェルと比較したピコグラム／ｍＬのサイトカインの定量化と併せて、マルチプレックスビーズベースのサイトカイン放出アッセイ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｈｕｍａｎ Ｈｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｂａｓｅ Ｋｉｔ Ｂ：ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ）のために、２４時間で採取し、－８０℃で凍結させた。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ２．０（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉＤ３プレートリーダー上での発光検出を用いたＴＤＣＣ細胞傷害性％評価のためのアッセイを開発した。示される図中の結果は、３つの異なるドナーＰＢＭＣ試料を用いて行われた実験を表す。細胞傷害性及びサイトカイン放出結果をＥｘｃｅｌにまとめ、ＧｒａｐｈＰＡＤ ＰＲＩＳＭにおいてグラフ化した。
Ｔ細胞エンゲージャー投与に関連する過剰なサイトカイン産生は、Ｔ細胞エンゲージャー、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の一次毒性をもたらす可能性があるため、高（ＳＫＢＲ３）又は低（ＭＣＦ－７）Ｈｅｒ２レベルを発現する腫瘍細胞株及びヒトＰＢＭＣの存在下で、サイトカイン産生に対するＣＤ３の弱化した親和性の影響を調べた。
親１０．０クローン、ＣＤ３弱化親和性１０．５．１及び１０．６．１クローンは全て、ＨＥＲ２－高ＳＫＢＲ３細胞の存在下でアイソタイプ対照（バックグラウンドサイトカイン産生を表す対照）よりも有意に高かったサイトカイン産生を刺激した（図５Ａ～５Ｄ）。しかしながら、ＨＥＲ２－低ＭＣＦ－７細胞の存在下では、１０．０クローンのみが、アイソタイプ対照と比較して有意にサイトカイン産生の増加を示し、本技術のＣＤ３弱化クローン（例えば、１０．５．１及び１０．６．１クローン）のサイトカイン産生を刺激する能力の低減を示した（図５Ｅ～５Ｈ）。
３０ｎＭでは、全てのＣＤ３親和性弱化クローンは、ＭＣＦ－７細胞の存在下で、有意に低減されたＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－αの産生を示した（ｐ＜０．０００１：１０．０対１０．５．１及び１０．０対１０．６．１について）。重要なことに、免疫調節剤に関連するＣＲＳの重要な媒介物であるサイトカインであるＩＬ－６の産生（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０２２；２２（２）：８５－９６）は、ＭＣＦ－７細胞の存在下で１０．０と比較して、ＣＤ３親和性弱化クローン１０．５．１及び１０．６．１で有意に低減された（それぞれ、ｐ＝０．０４３２及びｐ＝０．０２９）（図５Ｆ）。「標的細胞なし」条件は、二重特異性抗体を有するＰＢＭＣが単独でサイトカイン放出を促進しないことを示した。ＳＫＢＲ－３（Ｈｅｒ２－高）標的細胞について、細胞傷害性は、親構築物（１０．０）と比較して、１０．５．１及び１０．６．１で同等であった。本技術のＣＤ３親和性弱化配列が、他の腫瘍抗原（例えば、ＣＬＤＮ１８．２、ＧＰＣ－３など）とともに二重特異性抗体フォーマットに組み込まれるとき、同様の結果が期待される。
これらの結果は、これらの薬剤が、内因性、非がん組織レベルの腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２）を有する低腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２）発現組織を温存しながら、高腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２）発現細胞に応答して選択的にサイトカインを殺傷及び産生し、したがって、臨床におけるオンターゲット、正常組織に対する毒性（ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ）を低減することによって、高腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２）発現がんを有する患者を治療する場合にＣＲＳの発生率を低減するのに有用であることを実証する。
活性化Ｔ細胞及びＨｅｒ－２発現標的細胞に結合する二重特異性抗体のフローサイトメトリー分析。二重特異性抗体の活性化Ｔ細胞へのフローサイトメトリー結合を評価するために、ヒトＰＢＭＣ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ７００２５．２）を、１２日間にわたってＯＫＴ３／ＩＬ－２刺激プロトコルを用いて刺激した。簡潔に述べると、ＰＢＭＣを、１００ＩＵ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－２（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号７８１４５．１）及び２０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、マウスＩｇＧ２ａ、カタログ番号３１７３２６）で、可溶性フォーマットで３日間活性化し、その後、ＲＰＭＩ１６４０／１０％ＦＢＳ中で細胞を１×１０６個の細胞／ｍＬに正規化することによって、新鮮な培地及びＩＬ－２のみを使用することによって拡大／維持した。活性化Ｔ細胞を凍結保存し、液体窒素冷凍庫に保存した。アッセイの日に、Ｔ細胞を解凍し、洗浄し、続いて、希釈した二重特異性抗体で染色した（最初の作業ストックは、１２０ｎＭの最終濃度で２４０ｎＭ（２倍）であり、ＦＡＣＳ緩衝液中で１：１０で連続希釈し、合計７回の連続希釈を行った）。細胞を、一次抗体で、冷ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中で４℃で３０分間染色し、続いて、洗浄し、冷ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中で、４℃で３０分間、１：２５０の二次抗体（抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を添加した。洗浄ステップの後、細胞を１５０μＬのＰＢＳ／１％ＢＳＡ中に再懸濁し、９６ウェルのＶ底プレートを備えるＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａ ＨＴＳシステム上でＰＥシグナルを検出する。アッセイの前に、生／死をＢＶ４２１チャネル（Ｚｏｍｂｉｅ ｖｉｏｌｅｔ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）又はＴｒｙｐａｎ Ｂｌｕｅを使用して評価した
Ｈｅｒ２－高（ＳＫＢＲ－３、ＳＫＯＶ－３）及びＨｅｒ２－低（ＭＣＦ－７、ＨＴ５５）を含む細胞株への二重特異性抗体のフローサイトメトリー結合を評価するために、ＡＴＣＣプロトコルに従って、細胞をそれぞれの培養培地中で７０～８０％コンフルエンスまで成長させた。細胞株をＡｃｃｕｔａｓｅで処理して、フローサイトメトリーのために細胞表面エピトープを保存した。細胞を５ｍＬのＰＢＳ（ＢＳＡなし）中に再懸濁し、１：１０００希釈のＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ｚｏｍｂｉｅ色素（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で、室温で２０分間染色した。次いで、細胞を洗浄し、正規化して、９６ウェルのＶ底プレート上に１００，０００個の細胞／ウェルを添加し、一次抗体で、冷ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中で４℃で３０分間染色した。これに続いて、洗浄し、１：２５０の二次抗体（抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、冷ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中で４℃で３０分間添加した。洗浄ステップの後、細胞を１５０μＬのＰＢＳ／１％ＢＳＡ中に再懸濁し、９６ウェルのＶ底プレートを備えるＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａ ＨＴＳシステム上でＰＥシグナルを検出する。アッセイの前に、生／死をＢＶ４２１チャネル（Ｚｏｍｂｉｅ ｖｉｏｌｅｔ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）又はＴｒｙｐａｎ Ｂｌｕｅを使用して評価した分析をＦｌｏｗＪｏソフトウェアで行い、ＰＥ（抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ）中央値（ＭＦＩ）の値を得た後、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ及びＧｒａｐｈＰＡＤ Ｐｒｉｓｍ ｓｏｆｔｗａｒｅのＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭソフトウェアでデータを整理し、プロットした。
結果：活性化Ｔ細胞結合は、親構築物（１０．０クローン）と比較して、１０．５．１及び１０．６．１について低減された（図６Ｅ）。１０．５．１及び１０．６．１で観察されるＴ細胞結合の低減は、親和性の低減を示すＣＤ３アームを有することに少なくとも部分的に起因し得る。
Ｈｅｒ２－高（ＳＫ－ＢＲ－３、ＳＫ－ＯＶ－３）細胞株に結合する標的細胞株は、親構築物（１０．０）と比較して、１０．５．１及び１０．６．１構築物でわずかに低減した（約１００ｎＭの濃度で１０．０と比較して、両方のクローンについてＭＦＩが約３３％低減した）（図６Ａ～６Ｂ）。Ｈｅｒ２－低（ＭＣＦ－７、ＨＴ５５）標的細胞株に結合する標的細胞株は、親構築物（１０．０）と比較して、１０．５．１及び１０．６．１構築物で大幅に低減した（約１００ｎＭの濃度で１０．０と比較して、両方のクローンについてＭＦＩが約８４％低減した）（図６Ｃ～６Ｄ）。これらの結果は、ＣＤ３親和性弱化ＨＥＲ２×ＣＤ３構築物（１０．５．１、１０．６．１）が、Ｈｅｒ２－高標的細胞株についての選択性に寄与し、細胞傷害性を増強するためにＣＤ３＋Ｔ細胞に結合する能力を維持する特性を有することを実証する。親和性弱化構築物１０．５．１及び１０．６．１は、親構築物と比較した場合、Ｈｅｒ２－低標的細胞上での低減された細胞傷害性及びサイトカイン放出を示す。
まとめると、１０．５．１及び１０．６．１と同等の親和性を有する、図２に記載のＣＤ３低減親和性二重特異性抗体配列は、ＮＦＡＴ活性化、ＴＤＣＣ、及び／又はＦＡＣＳのうちの少なくとも１つにおいて、１０．５．１及び１０．６．１クローンと同様の挙動を示すと予想される。
実施例４：本技術のＨＥＲ２親和性調整二重特異性抗体のインビボ有効性
インビボ有効性は、ヒトＰＢＭＣ又は単離されたＴ細胞をエフェクター細胞として使用し、様々な程度のＨＥＲ２発現を有するＨＥＲ２発現腫瘍細胞株を使用して二重特異性活性をモデル化する二重異種移植片モデルにおいて試験される。ＫＰＬ－４及び／又はＨＣＣ１９５４腫瘍細胞は、高ＨＥＲ２発現細胞として使用され、ＭＣＦ７又はＨＴ５５細胞は、ＨＥＲ２の低発現又は内因性発現を有する細胞の殺傷を温存しながら、高ＨＥＲ２発現細胞の選択的殺傷があることを予想して、低レベル又は内因性レベルの発現細胞として使用される。１～５００万個の腫瘍が皮下に移植され、エフェクター細胞は、皮下移植の前に腫瘍細胞と予め混合されるか、又は静脈内に養子移植され、腫瘍のみが皮下に移植されるかのいずれかである（１：２又は１：３のＰＢＭＣ：腫瘍（Ｅ：Ｔ）比）。腫瘍細胞及びＰＢＭＣの移植後、ＣＤ３親和性弱化クローンを含む様々なＨｅｒ２ ＢｓＡｂの異なる用量レベル（少なくとも５ｍｇ／ｋｇ～０．００５ｍｇ／ｋｇを含む範囲）をマウスに投与する。用量は、週に１回以上、１週間以上、非経口（例えば、ｉ．ｖ．又はｉ．ｐ．）で投与される。腫瘍体積は、研究の期間にわたって測定される。一次データ読み出しは、キャリパーによって測定されるように、経時的な腫瘍体積の成長の阻害である。並行して、キメラ同系モデルを使用して活性を確認する。このモデルは、ヒトＨＥＲ２をトランスジェニックに発現するマウス胃腫瘍細胞株（ＭＣ３８）と、ヒトＣＤ３εのみ又はヒトＣＤ３ε、ＣＤ３δ、及びＣＤ３γのいずれかでヒトＣＤ３を発現するマウスとの使用を伴い、二重特異性が、ヒトＣＤ３のマウスＴ細胞発現を介してマウスＴ細胞に直接結合することを可能にする。
親１０．０クローンは、本技術のＣＤ３低減親和性構築物を含む抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂが高Ｈｅｒ２腫瘍の成長を選択的に阻害するが、低Ｈｅｒ２発現腫瘍に対する成長阻害活性がほとんど又は全くない用量で、高Ｈｅｒ２発現腫瘍細胞及び低Ｈｅｒ２発現腫瘍細胞の両方の成長を非選択的に阻害することが予想される。また、親１０．０クローンと比較して、本技術のＣＤ３低減親和性構築物を含む抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂを投与された動物において、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－αなどのサイトカインのレベルが低減することが予想される。
これらの結果は、本技術の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物を使用してがんを治療することができることを実証する。
等価物
本技術は、本出願に記載される特定の実施形態に関して限定されるべきではなく、本出願は、本技術の個々の態様の１つの例示として意図される。本技術の多くの修正及び変化は、当業者に明らかであるように、その趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる。本明細書に列挙されるものに加えて、本技術の範囲内の機能的に等価な方法及び装置は、前述の説明から当業者に明らかであろう。かかる修正及び変化は、本技術の範囲内であることが意図される。本技術は、勿論、変化し得る特定の方法、試薬、化合物組成物、又は生物系に限定されるものではないことを理解されたい。本明細書に使用される用語が、単に特定の実施形態を記載する目的のためであり、制限することが意図されないことも理解されたい。
加えて、本開示の特徴又は態様がマーカッシュ群の観点から記載される場合、当業者であれば、本開示が、それによって、マーカッシュ群の任意の個々の構成要素又は構成要素のサブグループの観点からも記載されることを認識するであろう。
当業者によって理解されるように、任意及び全ての目的のために、特に書面による説明を提供するという点で、本明細書に開示される全ての範囲はまた、任意及び全ての可能なサブ範囲及びそのサブ範囲の組み合わせも包含する。任意の列挙された範囲は、同じ範囲が少なくとも等しい２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに分類されることを十分に示し、可能にするものとして、容易に認識することができる。非限定的な例として、本明細書で考察される各範囲は、容易に、下側の３分の１、中間の３分の１、及び上側の３分の１などに分類することができる。また、当業者によって理解されるように、「最大」、「少なくとも」、「より大きい」、「より少ない」などの全ての言語は、列挙される数を含み、続いて、上述のようにサブ範囲に分類され得る範囲を指す。最後に、当業者に理解されるように、範囲は各個別の数を含む。したがって、例えば、１～３個の細胞を有する群は、１、２、又は３個の細胞を有する群を指す。同様に、１～５個の細胞を有する群は、１個、２個、３個、４個、又は５個などの細胞を有する群を指す、などなど。
本明細書に言及又は引用される全ての特許、特許出願、仮出願、及び刊行物は、本明細書の明示的な教示と矛盾しない限り、全ての図及び表を含む、それらの全体が参照により組み込まれる。

Claims (40)

  1. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）前記ＶＨが、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＫＡＤＳＶＫＤ（配列番号７）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＫＶＫＤ（配列番号８）、若しくはＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＷＤＳＶＫＤ（配列番号９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ（配列番号３）、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）、若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は
    （ｂ）前記ＶＬが、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  2. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）前記ＶＨが、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＫＡＤＳＶＫＤ（配列番号７）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＫＶＫＤ（配列番号８）、若しくはＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＷＤＳＶＫＤ（配列番号９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ（配列番号３）、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）、若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は
    （ｂ）前記ＶＬが、ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  3. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）前記ＶＨが、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＫＡＤＳＶＫＤ（配列番号７）、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＫＶＫＤ（配列番号８）、若しくはＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＷＤＳＶＫＤ（配列番号９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ（配列番号３）、ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）、若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は
    （ｂ）前記ＶＬが、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）若しくはＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列及びＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  4. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）前記ＶＨが、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ（配列番号４９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は
    （ｂ）前記ＶＬが、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  5. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）前記ＶＨが、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ（配列番号４９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は
    （ｂ）前記ＶＬが、ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列、及びＡＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号６）、ＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）、若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  6. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）前記ＶＨが、ＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮ（配列番号１）のＶＨ－ＣＤＲ１配列、ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ（配列番号４９）のＶＨ－ＣＤＲ２配列、及びＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＧＹ（配列番号１０）若しくはＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＭＹ（配列番号１１）のＶＨ－ＣＤＲ３配列を含み、かつ／又は
    （ｂ）前記ＶＬが、ＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）若しくはＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号５０）のＶＬ－ＣＤＲ１配列、ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）、ＧＴＮＫＫＡＳ（配列番号５１）、若しくはＧＴＮＫＲＡＳ（配列番号５２）のＶＬ－ＣＤＲ２配列及びＭＬＷＹＳＮＬＷＶ（配列番号１２）若しくはＡＬＹＹＳＮＬＷＶ（配列番号４８）のＶＬ－ＣＤＲ３配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  7. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）前記ＶＨが、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、若しくは配列番号４３のアミノ酸配列を含み、かつ／又は
    （ｂ）前記ＶＬが、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、若しくは配列番号４７のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  8. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含む抗体又はその抗原結合断片であって、それぞれ、
    配列番号１８及び配列番号２０、
    配列番号２１及び配列番号１９、
    配列番号２２及び配列番号２３、
    配列番号２４及び配列番号２５、
    配列番号１８及び配列番号２６、
    配列番号１８及び配列番号２７、
    配列番号２２及び配列番号２８、
    配列番号２９及び配列番号２８、
    配列番号３０及び配列番号２８、
    配列番号３１及び配列番号２８、
    配列番号３２及び配列番号２８、
    配列番号３３及び配列番号２８、
    配列番号２２及び配列番号３４、
    配列番号３５及び配列番号３６、
    配列番号３７及び配列番号３８、
    配列番号３９及び配列番号２７、
    配列番号４０及び配列番号２７、
    配列番号４１及び配列番号２７、
    配列番号４２及び配列番号２７、
    配列番号４３及び配列番号２７、
    配列番号１８及び配列番号４４、
    配列番号１３及び配列番号４５、
    配列番号１５及び配列番号４５、
    配列番号１６及び配列番号４５、
    配列番号１７及び配列番号４５、
    配列番号１３及び配列番号４６、
    配列番号１５及び配列番号４６、
    配列番号１６及び配列番号４６、
    配列番号１７及び配列番号４６、
    配列番号１３及び配列番号４７、
    配列番号１５及び配列番号４７、
    配列番号１６及び配列番号４７、並びに
    配列番号１７及び配列番号４７、からなる群から選択される、抗体又はその抗原結合断片。
  9. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインを更に含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  10. Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ３２２Ａからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む、請求項９に記載の抗体。
  11. Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む、請求項９に記載の抗体。
  12. 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、及びＦｖからなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗原結合断片。
  13. 前記抗体又は抗原結合断片が、アミノ酸配列ＱＤＧＮＥ（配列番号６３）を含むＣＤ３εサブユニットに結合する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  14. 前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、又は多重特異性抗体である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  15. 前記抗体が、α－１，６－フコース修飾を欠く、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体。
  16. 第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖、及び第４のポリペプチド鎖を含む多重特異性抗体であって、前記第１及び第２のポリペプチド鎖が、互いに共有結合しており、前記第２及び第３のポリペプチド鎖が、互いに共有結合しており、前記第３及び第４のポリペプチド鎖が、互いに共有結合しており、
    （ａ）前記第１のポリペプチド鎖及び前記第４のポリペプチド鎖の各々が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
    （ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、
    （ｉｉ）前記第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと、
    （ｉｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）３を含むフレキシブルペプチドリンカーと、
    （ｉｖ）第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結されている前記第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、又は第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結されている前記第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインであって、前記第２の免疫グロブリンの前記軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインが、第２のエピトープに特異的に結合することができ、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）６を含むフレキシブルペプチドリンカーを介して一緒に連結して、単鎖可変断片を形成する、軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインと、を含み、
    （ｂ）前記第２のポリペプチド鎖及び前記第３のポリペプチド鎖の各々が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
    （ｉ）前記第１のエピトープに特異的に結合することができる前記第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、
    （ｉｉ）前記第１の免疫グロブリンの重鎖定常ドメインと、を含み、
    前記第１の免疫グロブリンの前記重鎖可変ドメイン若しくは前記第２の免疫グロブリンの前記重鎖可変ドメインが、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、若しくは配列番号４３を含み、かつ／又は前記第１の免疫グロブリンの前記軽鎖可変ドメイン若しくは前記第２の免疫グロブリンの前記軽鎖可変ドメインが、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、若しくは配列番号４７を含む、多重特異性抗体。
  17. 前記多重特異性抗体又は抗原結合断片が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄細胞、形質細胞、又は肥満細胞に結合する、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
  18. 前記多重特異性抗体又は抗原結合断片が、ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異的抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅｙ）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、ＧｌｏｂｏＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、ペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１～６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロンシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１～Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１に由来するペプチドを有する）、又は小分子ＤＯＴＡハプテンに結合する、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の多重特異性抗体又は抗原結合断片。
  19. 請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片をコードする、組換え核酸配列。
  20. 請求項１９に記載の組換え核酸配列を含む、宿主細胞又はベクター。
  21. 請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む組成物であって、前記抗体又は抗原結合断片が、任意選択的に、同位体、色素、クロマゲン、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、成長因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡ、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される薬剤にコンジュゲートされている、組成物。
  22. がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１４～１８のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片又は請求項２１に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  23. 前記がんが、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、がん腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体（ｃｏｒｐｕｓ ｕｔｅｒｉｎｅ）がん、耳、鼻、及び喉の（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、胃腸がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎臓がん、喉頭がん、急性及び慢性の白血病、肝臓がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、セミノーマ、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍、及びそれらの転移からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記抗体又は抗原結合断片が、前記対象に、追加の治療剤と、別々に、連続して、又は同時に投与される、請求項２２又は２３に記載の方法。
  25. 前記追加の治療剤が、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、細胞増殖抑制アルカロイド、細胞傷害性抗生物質、抗代謝剤、内分泌／ホルモン剤、Ｔ細胞、及びビスホスホネート療法剤のうちの１つ以上である、請求項２４に記載の方法。
  26. 対象におけるがんをインビボで検出するための方法であって、
    （ａ）前記対象に、有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片を投与することであって、前記抗体又は抗原結合断片が、ＣＤ３を発現するがん細胞に局在化するように構成されており、放射性同位体で標識されている、投与することと、
    （ｂ）参照値よりも高い前記抗体又は抗原結合断片によって放出された放射性レベルを検出することによって、前記対象における腫瘍の存在を検出することと、を含む、方法。
  27. 前記対象が、がんと診断されているか、又はがんを有することが疑われる、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記抗体又は抗原結合断片によって放出された前記放射性レベルが、陽電子放射断層撮影又は単一光子放射コンピュータ断層撮影を使用して検出される、請求項２６又は２７に記載の方法。
  29. 前記対象に、放射性核種にコンジュゲートされた請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片を含む、有効量の免疫コンジュゲートを投与することを更に含む、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記放射性核種が、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、オージェ放出体、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記β粒子放出同位体が、８６Ｙ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、１６５Ｄｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１７７Ｌｕ、及び６７Ｃｕからなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
  32. 請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と、使用説明書と、を含む、キット。
  33. 前記抗体又は抗原カップリング断片が、放射性標識、蛍光標識、及び発色性標識からなる群から選択される少なくとも１つの検出可能な標識にカップリングされている、請求項３２に記載のキット。
  34. 請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片に特異的に結合する二次抗体を更に含む、請求項３２又は３３に記載のキット。
  35. 生体試料におけるＣＤ３タンパク質発現レベルを検出するための方法であって、前記生体試料を、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と接触させることと、前記生体試料におけるＣＤ３タンパク質との結合を検出することと、を含む、方法。
  36. 前記多重特異性抗体又は抗原結合断片が、Ｔ細胞及び腫瘍抗原に結合する、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の多重特異性抗体又は抗原結合断片。
  37. 請求項３６に記載の多重特異性抗体又は抗原結合断片によってエクスビボで武装化されている、Ｔ細胞。
  38. 治療用Ｔ細胞を作製するエクスビボ方法であって、請求項３６に記載の多重特異性抗体又は抗原結合断片をＴ細胞に結合することを含む、エクスビボ方法。
  39. 前記Ｔ細胞がヒトＴ細胞であり、かつ／又は前記結合が非共有結合である、請求項３８に記載の方法。
  40. がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項３７に記載のＴ細胞を投与することを含む、方法。
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