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JP2024512074A - 免疫調節剤 - Google Patents

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JP2024512074A
JP2024512074A JP2023558898A JP2023558898A JP2024512074A JP 2024512074 A JP2024512074 A JP 2024512074A JP 2023558898 A JP2023558898 A JP 2023558898A JP 2023558898 A JP2023558898 A JP 2023558898A JP 2024512074 A JP2024512074 A JP 2024512074A
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alkyl
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エックス チャオ，ジェニファー
マイケル エイ ポス，
チャン，ユンフイ
パトリック アレン，マーティン
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Bristol Myers Squibb Co
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Abstract

本開示は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１／ＣＤ８０のタンパク質／タンパク質相互作用を阻害し、したがって、がんおよび感染症を含む様々な疾患の改善に有用である、新規な大環状ペプチドを提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月２４日に出願された米国仮出願第６３／１６５，４５５号に対する優先権を主張し、その全体が参照により組み込まれる。
電子提出された配列表への参照
本出願とともにファイルされ、電子的に提出されたＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：３３３８＿２８１ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５；サイズ：５，９２３バイト；作成日：２０２２年３月２３日）の配列表の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
技術分野
本開示は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１およびＣＤ８０との相互作用を阻害することができる大環状化合物を提供する。これらの大環状化合物は、インビトロで免疫調節効果を示すため、がんや感染症を含むさまざまな疾患を治療するための治療薬候補となる。
タンパク質プログラム細胞死（Ｐｒｏｇｒａｍｅｄ Ｄｅａｔｈ １）（ＰＤ－１）は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡを含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ－１は、活性化したＢ細胞、Ｔ細胞、および骨髄細胞で発現される。
ＰＤ－１タンパク質は、Ｉｇ遺伝子スーパーファミリーの一部である５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である。ＰＤ－１には、膜近位免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）と膜遠位チロシンベーススイッチモチーフが含まれている。ＰＤ－１は、構造的にＣＴＬＡ－４と類似しているが、ＣＤ８０ ＣＤ８６（Ｂ７－２）結合に重要なＭＹＰＰＹモチーフを欠いている。ＰＤ－１の２つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）およびＰＤ－Ｌ２（ｂ７－ＤＣ）が同定されている。ＰＤ－１を発現するＴ細胞の活性化は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２を発現する細胞との相互作用によりダウンレギュレーションされることが示されている。ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２は両方とも、ＰＤ－１に結合するＢ７タンパク質ファミリーのメンバーであるが、他のＣＤ２８ファミリーのメンバーには結合しない。ＰＤ－Ｌ１リガンドは、さまざまなヒトのがんに豊富に含まれている。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の間の相互作用は、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介性増殖の減少、および癌細胞による免疫回避をもたらす。免疫抑制は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の局所的相互作用を阻害することで反転でき、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２の相互作用もブロックされると、その効果は相加的になる。
ＰＤ－Ｌ１は、ＣＤ８０と相互作用することも示されている。発現する免疫細胞に対するＰＤ－Ｌ１／ＣＤ８０の相互作用は、阻害性であることが示されている。この相互作用を遮断すると、この阻害性相互作用がなくなることが示されている。
ＰＤ－１を発現するＴ細胞がそのリガンドを発現する細胞と接触すると、増殖、サイトカイン分泌、および細胞傷害を含む、抗原性刺激への応答における機能的活性が低下する。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の相互作用は、感染症や腫瘍の治癒中、またはそれ自体の発症中に免疫応答をダウンレギュレートする。腫瘍疾患や慢性感染症において生じるものなどの慢性抗原刺激により、Ｔ細胞は、ＰＤ－１発現レベルが上昇し、慢性抗原に対する活性が機能不全になる。これは「Ｔ細胞の疲弊」（Ｔ ｃｅｌｌ ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ）と称される。Ｂ細胞も、ＰＤ－１／ＰＤリガンドの抑制と「疲弊」（ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ）を示す。
ＰＤ－Ｌ１に対する抗体を使用したＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ライゲーションの遮断は、多くの系においてＴ細胞活性化を回復および増強することが示されている。進行がん患者は、ＰＤ－Ｌ１に対するモノクローナル抗体による治療から恩恵を受ける。腫瘍および慢性感染症の前臨床動物モデルでは、モノクローナル抗体によるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の遮断により免疫応答が強化され、腫瘍の拒絶反応または感染の制御がもたらされることが示されている。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断による抗腫瘍免疫療法は、組織学的に異なる多数の腫瘍に対する治療免疫応答を増強することができる。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の干渉は、慢性感染を伴う系においてＴ細胞活性の増強を引き起こす。ＰＤ－Ｌ１を遮断すると、色素性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス感染マウスのウイルスクリアランスが改善され、免疫力が回復した。ＨＩＶ－１に感染したヒト化マウスは、ＣＤ４＋Ｔ細胞のウイルス枯渇およびウイルス血症に対する防御の強化を示す。ＰＤ－Ｌ１に対するモノクローナル抗体を介してＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を遮断すると、ＨＩＶ患者のＴ細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗原特異的機能を回復させることができる。
ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ８０相互作用の遮断も免疫を刺激することが示されている。ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ８０相互作用の遮断によって生じる免疫刺激は、さらなるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２の相互作用の遮断と組み合わせることで強化されることが示されている。
免疫細胞表現型の変化は、敗血症性ショックにおける重要な因子であると仮説が立てられている。これらには、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１のレベルの増加が含まれる。ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１のレベルが増加した敗血症性ショック患者の細胞は、Ｔ細胞のアポトーシスのレベルの増加を示す。ＰＤ－Ｌ１に対する抗体は、免疫細胞のアポトーシスのレベルを低下させることができる。さらに、ＰＤ－１発現が欠如しているマウスは、野生型マウスよりも敗血症性ショック症状に対して耐性がある。研究により、抗体を使用してＰＤ－Ｌ１の相互作用を遮断すると、不適切な免疫応答が抑制され、疾患の兆候が改善されることが明らかになっている。
慢性抗原に対する免疫応答を増強することに加えて、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の遮断は、慢性感染症における治療ワクチン接種を含むワクチン接種に対する応答を増強することも示されている。
ＰＤ－１経路は、慢性感染症および腫瘍疾患の慢性抗原刺激から生じるＴ細胞の疲弊における重要な阻害性分子である。ＰＤ－Ｌ１タンパク質の標的化によるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の遮断は、腫瘍または慢性感染症におけるワクチン接種に対する応答の強化を含め、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの抗原特異的Ｔ細胞免疫機能を回復することが示されている。したがって、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１またはＣＤ８０との相互作用を遮断する薬剤が望まれている。
本開示は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＣＤ８０／ＰＤ－Ｌ１、タンパク質／タンパク質相互作用を阻害し、それにより、がんおよび感染症を含む様々な疾患の改善に有用である大環状化合物を提供する。
第１の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）
Figure 2024512074000001
 （Ｉ）

［式中、
Ａは、
Figure 2024512074000002
 から選択され；
ここで、
Figure 2024512074000003
 は、カルボニル基への結合点を示し、
Figure 2024512074000004
 は、窒素原子への結合点を示し；
ｎは、０または１であり；
ｍは、１または２であり；
ｕは、０または１であり；
ｗは、０、１、または２であり；
Ｒｘは、水素、アミノ、ヒドロキシ、およびメチルから選択され；
Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素およびメチルから選択され；
Ｒ１６ａは、水素およびＣ１－Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１６は、
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）２）２－Ｘ－Ｒ３０、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））０－２－Ｘ’－Ｒ３０、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｘ’－Ｒ３０、
－Ｃ（Ｒ１７ａ）２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））１－２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、
－Ｃ（Ｒ１７ａ）２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２］ｗ’－Ｘ－Ｒ３１、－Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２］ｗ’－Ｘ’－Ｒ３１、
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｎ’－Ｈ、；および、
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈ
から選択され；
ここで、ＰＥＧｑ’スペーサーは、Ｒ１６の任意の部分に挿入されてもよく（ｑ’は、ＰＥＧスペーサー内の－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－ユニットの数である）、
ここで、ｗ’は、２または３であり；
ｎ’は、１～６であり；
ｍ’は、０～５であり；
ｑ’は、１～２０であり；
Ｘは、１～１７２個の原子の鎖であり、その原子は、窒素、炭素および酸素から選択され、該鎖は、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－から選択される、１、２、３または４個の基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－（ＣＨ２）１－２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１～６個の基で任意に置換されていてもよく；
Ｘ’は、１～１７２個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－から選択される、１、２、３または４個の基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－（ＣＨ２）１－２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１～６個の基で任意に置換されていてもよく、ただし、Ｘ’は、非置換のＰＥＧ以外であり；
Ｒ３０は、－ＳＯ３Ｈ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
Ｒ３１は、－Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
各Ｒ１７ａは、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、－（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈから独立して選択され；
各Ｒ１７は、水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、－（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、および－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５から独立して選択され、ここで、ｚは、１～６であり、Ｒ３５は、－ＳＯ３Ｈ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；ただし、少なくとも１つのＲ１７は、水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外であり；
ただし、Ｒ３０、Ｒ３１、またはＲ３５の少なくとも１つは存在し；
Ｒａ、Ｒｅ、Ｒｊ、およびＲｋは、それぞれ独立して、水素およびメチルから選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖から独立して選択されるか、または、以下に説明するように対応する隣接するＲ基と環を形成し；
Ｒｂは、メチルであるか、または、ＲｂとＲ２は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒｄは、水素またはメチルであるか、または、ＲｄとＲ４は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成してもよく；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシ、およびフェニルから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく；
Ｒｇは、水素またはメチルであるか、または、ＲｇとＲ７は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成してもよく、ここで、各環は、アミノ、任意にハロ基で置換されていてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、任意にメトキシ基で置換されていてもよいイソキノリニルオキシ、任意にハロ基で置換されていてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリル、から独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく；ここで。ピロリジンおよびピペリジン環は、シクロヘキシル、フェニル、または、インドール基に任意に縮合されていてもよく；および、
Ｒｌは、メチルであるか、または、ＲｌとＲ１２は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジンおよびピロリジンから選択される環を形成し、ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよい。］
で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、を提供する。
第１の実施形態の第１の態様において、本開示は、
Ａが、
Figure 2024512074000005
 である、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
第１の実施形態の第２の態様において、
ｍは１であり、ｗは０であり；および、
Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａは、それぞれ水素である。
第１の実施形態の第３の態様において、
Ｒ１６は、－（Ｃ（Ｒ１７ａ）２）２－Ｘ－Ｒ３０、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））０－２－Ｘ’－Ｒ３０、および－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’ －Ｘ’－Ｒ３０から選択される。
第１の実施形態の第４の態様において、
各Ｒ１７ａは、水素、－ＣＯ２Ｈ、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから選択され；
Ｘは、８～４６個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－、Ｃ（Ｏ）ＮＨ基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；および、
Ｒ３０は、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される。
第１の実施形態の第５の態様において、本開示は、
Ａは、
Figure 2024512074000006
 であり；
ｍおよびｗは、１であり；
Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａは、それぞれ水素であり；および、
Ｒ１６は、－Ｃ（Ｒ１７ａ）２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、および－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））１－２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１から選択される、
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
第１の実施形態の第６の態様において、
各Ｒ１７ａは、水素、－ＣＯ２Ｈ、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから選択され；
Ｘ’は、８～４８個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；ただし、Ｘ’は、非置換ＰＥＧ以外であり、および、
Ｒ３０は、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される。
第１の実施形態の第７の態様において、本開示は、
Ａは、
Figure 2024512074000007
 であり；
ｍは１であり、ｗは０であり；
Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａは、それぞれ水素であり；および、
Ｒ１６は、－Ｃ（Ｒ１７ａ）２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２］ｗ’－Ｘ－Ｒ３１、および－Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２］ｗ’－Ｘ’－Ｒ３１から選択される、
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
第１の実施形態の第８の態様において、
各Ｒ１７ａは、水素、－ＣＯ２Ｈ、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから選択され；
Ｘは、８～４８個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；および、
Ｒ３１は、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される。
第１の実施形態の第９の態様において、本開示は、
Ａは、
Figure 2024512074000008
 であり；
ｍは１であり、ｗは０であり；
Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａは、それぞれ水素であり、および、
Ｒ１６は、－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｎ’－Ｈである、
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
第１の実施形態の第１０の態様において、
各Ｒ１７ａは、水素であり；
各Ｒ１７は、水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、
－（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、および－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５から選択され；ただし、少なくとも１つのＲ１７は、水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外であり、ただし、少なくとも１つのＲ３１またはＲ３５は、存在し；
ｚは、１～４であり；
Ｒ３１は、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
Ｘは、７～１５５個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；および、
Ｒ３５は、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される。
第１の実施形態の第１１の態様において、本開示は、
Ａは、
Figure 2024512074000009
 であり；
ｍは１であり、ｗは０であり；
Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａは、それぞれ水素であり；
Ｒ１６は、－（ＣＲ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈである、
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

第１の実施形態の第１２の態様において、
ｍ’は、０～３であり；
各Ｒ１７ａは、水素であり；
各Ｒ１７は、水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、
－（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、および－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５から選択され；ただし、少なくとも１つのＲ１７は、水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外であり；ただし、少なくとも１つのＲ３１またはＲ３５は、存在し；
ｚは、１～４であり；
Ｒ３１は、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
Ｘは、１０～６０個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく、および、
Ｒ３５は、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される。
第１の実施形態の第１３の態様において、本開示は、
Ｒ１は、フェニルＣ１－Ｃ３アルキルであり、ここで、フェニル部分は、ヒドロキシル、ハロ、またはメトキシで任意に置換されていてもよく；Ｒ２は、Ｃ１－Ｃ７アルキルであるか、または、Ｒ２とＲｂは、それらが結合している原子と一緒になってピペリジン環を形成し；Ｒ３は、ＮＲｘＲｙ（Ｃ１－Ｃ７アルキル）、ＮＲｕＲｖカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、またはカルボキシＣ１－Ｃ３アルキルであり；Ｒ４とＲｄは、それらが結合している原子と一緒になってピロリジン環を形成し；Ｒ５は、ヒドロキシＣ１－Ｃ３アルキル、イミダゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、またはＮＲｘＲｙ（Ｃ１－Ｃ７アルキル）であり；Ｒ６は、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、ＮＲｕＲｖカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、ＮＲｘＲｙ（Ｃ１－Ｃ７アルキル）、またはＣ１－Ｃ７アルキルであり；Ｒ７とＲｇは、それらが結合している原子と一緒になって、任意にヒドロキシで置換されていてもよいピロリジン環を形成し；Ｒ８およびＲ１０は、ベンゾチエニルまたはインドリルＣ１－Ｃ３アルキルであり、これは、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキルで任意に置換されていてもよく；Ｒ９は、ヒドロキシＣ１－Ｃ３アルキル、アミノＣ１－Ｃ４アルキル、または、Ｃ１－Ｃ７アルキルであり；Ｒ１１は、Ｃ１－Ｃ３アルコキシＣ１－Ｃ３アルキル、またはＣ１－Ｃ７アルキルであり；Ｒ１２は、Ｃ１－Ｃ７アルキル、またはヒドロキシＣ１－Ｃ３アルキルであり；および、Ｒ１３は、Ｃ１－Ｃ７アルキル、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、または－（ＣＨ２）３ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２である、
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
第１の実施形態の第１４の態様において、本開示は、
Ａは、
Figure 2024512074000010
 であり；
ｍは１であり、ｗは０であり；
Ｒ１４およびＲ１５は、それぞれ水素であり；
Ｒ１６ａは、水素またはメチルであり；
Ｒｄは、メチルであるか、または、ＲｄとＲ４は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシ、およびフェニルから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；および、
Ｒｇは、メチルであるか、または、ＲｇとＲ７は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、任意にハロ基で置換されていてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、任意にメトキシ基で置換されていてもよいイソキノリニルオキシ、任意にハロ基で置換されていてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリルから独立して選択される１または２個の基で置換されていてもよく；ここで、ピロリジン環およびピペリジン環は、任意にシクロヘキシル、フェニル、またはインドール基に縮合されていてもよい、
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
第２の実施形態において、本開示は、式（ＩＩ）
Figure 2024512074000011
 （ＩＩ）

［式中、
Ａは、
Figure 2024512074000012
 から選択され；
ここで、
ｎは、０または、１である。
Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素およびメチルから選択され；
Ｒ１６ａは、水素およびＣ１－Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１６は、
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）２）２－Ｘ－Ｒ３０、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））０－２－Ｘ’－Ｒ３０、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｘ’－Ｒ３０、
－Ｃ（Ｒ１７ａ）２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））１－２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、
－Ｃ（Ｒ１７ａ）２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２］ｗ’－Ｘ－Ｒ３１、－Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２］ｗ’－Ｘ’－Ｒ３１、
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｎ’－Ｈ；および、
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈ
から選択され；
ここで、ＰＥＧｑ’スペーサーは、Ｒ１６の任意の部分に挿入されてもよく（ｑ’は、ＰＥＧスペーサー内の－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－ユニットの数である）、
ここで、ｗ’は、２または３であり；
ｎ’は、１～６であり；
ｍ’は、０～５であり；
ｑ’は、１～２０であり；
Ｘは、１～１７２個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨから選択される、１、２、３、または４個の基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１～６個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｘ’は、１～１７２個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨから選択される、１、２、３または４個の基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１～６個の基で任意に置換されていてもよく、ただし、Ｘ’は、非置換のＰＥＧ以外であり；
Ｒ３０は、－ＳＯ３Ｈ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
Ｒ３１は、－ＳＯ３Ｈ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、そして、－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２であり；
各Ｒ１７ａは、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、－（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈから独立して選択され；
各Ｒ１７は、水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、－（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、および－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５から選択され、ここで、ｚは、１～６であり、Ｒ３５は、－Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；ただし、少なくとも１つのＲ１７は、水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外であり；
ただし、Ｒ３０、Ｒ３１、またはＲ３５の少なくとも１つは、存在し；Ｒａ、Ｒｆ、Ｒｊ、Ｒｋ、Ｒｌ、およびＲｍは、水素であり；
ＲｂおよびＲｃは、メチルであり；
Ｒｇは、水素およびメチルから選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖から独立して選択されるか、または、以下に説明するように対応する隣接するＲ基と環を形成し；
Ｒｄは、水素およびメチルから選択されるか、または、ＲｄとＲ４は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ハロメチル、およびヒドロキシから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく；
Ｒｅは、水素およびメチルから選択されるか、または、ＲｅとＲ５は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ハロメチル、およびヒドロキシから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく；
Ｒｈは、水素およびメチルから選択されるか、または、ＲｈとＲ８は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ハロメチル、およびヒドロキシから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく、および、
Ｒｉは、水素およびメチルから選択されるか、または、ＲｉとＲ９は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ハロメチル、およびヒドロキシから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよい。］
で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
第２の実施形態の第１の態様において、本開示は、
Ａは、
Figure 2024512074000013
 であり；
ｎは、０であり；
Ｒ１６は、－（ＣＲ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈであり；
各Ｒ１６ａは、水素であり；
ｍ’は、２、３、または４であり；
各Ｒ１７ａは、水素であり；
各Ｒ１７は、水素、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、および－ＣＨ２Ｃ≡ＣＨから独立して選択され；
ｚは、４であり；
Ｘは、２６～１５５個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく、および、
Ｒ３１は、－Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、そして、－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２である、
式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
第３の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における免疫応答を増強、刺激、および／または増加させる方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第３の実施形態の第１の態様において、前記方法は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の前、後、またはそれと同時に追加の薬剤を投与することをさらに含む。第２の態様において、追加の薬剤は、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性物質、および／または免疫応答修飾物質である。
第４の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象におけるがん細胞の成長、増殖、または転移を阻害する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第４の実施形態の第１の態様において、がんは、黒色腫、腎細胞癌、扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌、去勢抵抗性前立腺癌、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、膵臓癌、頭頸部の扁平上皮癌、食道癌、消化管癌、乳癌、および血液悪性腫瘍から選択される。
第５の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における感染症を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第５の実施形態の第１の態様において、感染症は、ウイルスによって引き起こされる。第２の態様において、ウイルスは、ＨＩＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヘルペスウイルス、およびインフルエンザから選択される。
第６の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における敗血症性ショックを治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。
第７の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における免疫応答を増強、刺激、および／または増加させる方法であって、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第７の実施形態の第１の態様において、前記方法は、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の前、後、またはそれと同時に追加の薬剤を投与することをさらに含む。第２の態様において、追加の薬剤は、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性物質、および／または免疫応答修飾物質である。第３の態様において、追加の薬剤は、ＨＤＡＣ阻害剤である。第４の形態において、追加の薬剤は、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニストである。別の形態において、追加の薬剤は、ＳＴＩＮＧ、ＮＬＲＰ３、またはＤＧＫ剤である。
第８の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象におけるがん細胞の成長、増殖、または転移を阻害する方法であって、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第８の実施形態の第１の態様において、がんは、黒色腫、腎細胞癌、扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌、去勢抵抗性前立腺癌、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、膵臓癌、頭頸部の扁平上皮癌、食道癌、消化管癌、乳癌、および血液悪性腫瘍から選択される。
第９の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における感染症を治療する方法であって、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第９の実施形態の第１の態様において、感染症は、ウイルスによって引き起こされる。第２の態様において、ウイルスは、ＨＩＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヘルペスウイルス、およびインフルエンザから選択される。
第１０の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における敗血症性ショックを治療する方法であって、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ側鎖が、メチルで置換された環の一部である場合、メチル基は、大環状親構造の一部である炭素を含む、環内の任意の置換可能な炭素原子上にあってもよいことが理解される。
以下の基が各Ｒ位置で好ましい。アミノ酸は、Ｄ－またはＬ－の立体化学のいずれであってもよく、本開示の他の箇所に記載されているように置換されていてもよい。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ１は、フェニルアラニン、チロシン、３－チエン－２－イル、４－メチルフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、３－メトキシフェニルアラニン、イソトリプトファン、３－メチルフェニルアラニン、１－ナフチルアラニン、３，４－ジフルオロフェニルアラニン、４－フルオロフェニルアラニン、３，４－ジメトキシフェニルアラニン、３，４－ジクロロフェニルアラニン、４－ジフルオロメチルフェニルアラニン、２－メチルフェニルアラニン、２－ナフチルアラニン、トリプトファン、４－ピリジニル、４－ブロモフェニルラニン、３－ピリジニル、４－トリフルオロメチルフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、４－メトキシフェニルアラニン、ビフェニルアラニン、および３－クロロフェニルアラニン；および２，４－ジアミノブタン、の側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ２が環の一部ではない場合、好ましいＲ２は、アラニン、セリン、およびグリシンの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ３は、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、セリン、オルニチン（Ｏｒｎ）、リジン、ヒスチジン、トレオニン、ロイシン、アラニン、Ｄａｐ、およびＤａｂの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ４が環の一部ではない場合、好ましいＲ４は、バリン、アラニン、イソロイシン、およびグリシンの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ５は、ヒスチジン、アスパラギン、Ｄａｐ、Ｄａｐ（ＣＯＣＨ３）、セリン、グリシン、Ｄａｂ、Ｄａｂ（ＣＯＣＨ３）、アラニン、リジン、アスパラギン酸、アラニン、および３－チアゾリルアラニンの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ６は、ロイシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、リジン、３－シクロヘキサン、トレオニン、オルニチン、Ｄａｂ、アラニン、アルギニン、およびＯｒｎ（ＣＯＣＨ３）の側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ７が環の一部ではない場合、好ましいＲ７は、グリシン、Ｄａｂ、セリン、リジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン、アスパラギン、グルタミン、アラニン、およびＤａｂ（Ｃ（Ｏ）シクロブタン）の側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ８は、トリプトファン、および１，２－ベンズイソチアゾリニルアラニンの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ９は、セリン、ヒスチジン、リジン、オルニチン、Ｄａｂ、トレオニン、リジン、グリシン、グルタミン酸、バリン、Ｄａｐ、アルギニン、アスパラギン酸、およびチロシンの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ１０は、任意に置換されていてもよいトリプトファン、ベンズイソチアゾリルアラニン、１－ナフチルアラニン、メチオニンの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ１１は、ノルロイシン、ロイシン、アスパラギン、フェニルアラニン、メチオニン、エトキシメタン、アラニン、トリプトファン、イソロイシン、フェニルプロパン、グルタミン酸、ヘキサン、およびヘプタンの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１２が環の一部ではない場合、好ましいＲ１２は、ノルロイシン、アラニン、エトキシメタン、メチオニン、セリン、フェニルアラニン、メトキシエタン、ロイシン、トリプトファン、イソロイシン、グルタミン酸、ヘキサン、ヘプタン、およびグリシンの側鎖から選択される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ１３は、アルギニン、オルニチン、アラニン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、ロイシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、リジン、トレオニン、シクロプロピルメタン、グリシン、バリン、イソロイシン、ヒスチジン、および２－アミノブタンの側鎖から選択される。
別の実施形態において、本開示は、第１の態様の範囲内の例示された例から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体または立体異性体を提供する。
別の実施形態において、第１の態様の範囲内の化合物の任意のサブセットリストから選択される化合物が提供される。
別の実施形態において、下記：
Figure 2024512074000014
 １００１

Figure 2024512074000015
 １００２

Figure 2024512074000016
 １００３

Figure 2024512074000017
 １００４

Figure 2024512074000018
 １００５

Figure 2024512074000019
 １００６

Figure 2024512074000020
 １００７

Figure 2024512074000021
 １００８

Figure 2024512074000022
 １００９

または
Figure 2024512074000023
 １０１０

で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、が提供される。
別の態様において、本開示は、それを必要とする対象における免疫応答を増強、刺激、および／または増加させる方法であって、治療有効量の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。
別の態様において、本開示は、対象においてＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１および／またはＣＤ８０との相互作用を遮断する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。
別の態様において、本開示は、それを必要とする対象における免疫応答を増強、刺激、および／または増加させる方法であって、治療有効量の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第２の態様の第１の実施形態において、前記方法は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容されるその塩の、前に、後に、または同時に、追加の薬剤を投与することをさらに含む。第２の実施形態において、追加の薬剤は、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性剤、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＨＤＡＣ阻害剤、ＳＴＩＮＧ、ＮＬＲＰ３またはＤＧＫ剤、および免疫応答修飾剤から選択される。
別の態様において、本開示は、それを必要とする対象におけるがん細胞の成長、増殖、または転移を阻害する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第３の態様の第１の実施形態において、がんは、黒色腫、腎細胞癌、扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌、去勢抵抗性前立腺癌、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、膵臓癌、頭頸部の扁平上皮癌、食道癌、消化管癌、乳癌、および血液悪性腫瘍から選択される。
別の態様において、本開示は、それを必要とする対象における感染症を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。第４の態様の第１の実施形態において、感染症は、ウイルスによって引き起こされる。第２の実施形態において、ウイルスは、ＨＩＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヘルペスウイルス、およびインフルエンザから選択される。
別の態様において、本開示は、それを必要とする対象における敗血症性ショックを治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。
別の態様において、本開示は、対象においてＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１および／またはＣＤ８０との相互作用を遮断する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む方法を提供する。
特に断りのない限り、満たされていない原子価を有する原子は、その原子価を満たすのに十分な水素原子を有するものとみなされる。
単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上別の指示がない限り、複数の指示対象を含む。
本明細書で使用される「または」という用語は、論理的論理和（すなわち、および／または）であり、「いずれか」、「そうでない場合」、「代替的に」との用語、および同様の効果を持つ文言などで明示的に示されない限り、排他的論理和を示すものではない。
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、例えば、１～１２個の炭素原子、１～６個の炭素原子、および１～４個の炭素原子を含む、分枝鎖および直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基を意味する。アルキル基の例としては、これに限定されるものではないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（例えば、ｎ－プロピルおよびｉ－プロピル）、ブチル（例えば、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、およびｔ－ブチル）、ペンチル（例えば、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）、ｎ－ヘキシル、２メチルペンチル、２－エチルブチル、３－メチルペンチル、および４－メチルペンチルが挙げられる。記号「Ｃ」の後の下付き文字に数字が表示される場合、その下付き文字は特定の基に含まれ得る炭素原子の数をより具体的に定義する。例えば、「Ｃ１－４アルキル」は、１～４個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖のアルキル基を表す。
本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、飽和環炭素原子から１個の水素原子を除去することによって非芳香族単環式または多環式炭化水素分子から誘導される基を意味する。シクロアルキル基の代表的な例としては、これに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。記号「Ｃ」の後の下付き文字に数字が表示される場合、その下付き文字は、特定のシクロアルキル基に含まれ得る炭素原子の数をより具体的に定義する。例えば、「Ｃ３－６シクロアルキル」は、３～６個の炭素原子を有するシクロアルキル基を表す。
「ヒドロキシアルキル」という用語には、１つ以上のヒドロキシル基で置換された分枝鎖および直鎖の両方の飽和アルキル基が含まれる。例えば、「ヒドロキシアルキル」として、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＣ１－４ヒドロキシアルキルが挙げられる。
本明細書で使用される「アリール」という用語は、芳香族環を含む分子から、芳香族環に結合している１つの水素を除去することによって誘導される原子団の基を意味する。アリール基の代表的な例としては、これに限定されるものではないが、フェニルおよびナフチルが挙げられる。アリール環は、非置換であってもよく、あるいは原子価が許す限り１つ以上の置換基を含んでいてもよい。
本明細書で使用される「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。
本発明における芳香族環は、－Ｎ－、－Ｓ－、および－Ｏ－から選択される０～３個のヘテロ原子を含み得る。これらには、以下で定義されるヘテロアリール基も含まれる。
「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１つの環に少なくとも１つのヘテロ原子（Ｏ、ＳまたはＮ）を有する、置換および非置換の芳香族の５員または６員単環式基および９員または１０員二環式基を意味し、前記ヘテロ原子含有環は、好ましくは、Ｏ、Ｓおよび／またはＮから独立して選択される１、２、または３個のヘテロ原子を有する。ヘテロ原子を含むヘテロアリール基の各環は、１または２個の酸素または硫黄原子および／または１～４個の窒素原子を含むことができ、ただし、各環のヘテロ原子の総数は４個以下であり、各環は少なくとも１つの炭素原子を有する。二環式基を作る縮合環が芳香族であり、炭素原子のみを含む環の場合がある。窒素原子および硫黄原子は任意に酸化されてもよく、窒素原子は任意に四級化されてもよい。二環式ヘテロアリール基には芳香族環のみが含まれていなければならない。ヘテロアリール基は、任意の環の任意の利用可能な窒素または炭素原子において結合することができる。ヘテロアリール環系は、非置換であってもよく、または１つ以上の置換基を含んでいてもよい。
単環式ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾリニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、フラニル、チオフェニル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、およびトリアジニルが挙げられる。
二環式ヘテロアリール基の例としては、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチエニル、キノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾピラニル、インドリジニル、ベンゾフラニル、クロモニル、クマリニル、ベンゾピラニル、シンノリニル、キノキサリニル、インダゾリル、およびピロロピリジルが挙げられる。
本明細書で使用される「またはその薬学的に許容される塩」という語句は、少なくとも１つの化合物、または少なくとも１つのその化合物の塩、またはそれらの組み合わせを意味する。例えば、「式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩」には、これに限定されるものではないが、式（Ｉ）の化合物、２つの式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物の１つ以上の薬学的に許容される塩、ならびに、式（Ｉ）の化合物の２つ以上の薬学的に許容される塩、が含まれる。
本明細書で使用される「有害事象」または「ＡＥ」は、医療処置の使用に関連する、任意の好ましくない、一般に意図されていない、さらには望ましくない兆候（検査所見の異常を含む）、症状、または疾患である。例えば、有害事象は、治療に応じた免疫系の活性化または免疫系細胞（例えば、Ｔ細胞）の増殖に関連している可能性がある。医療処置には１つ以上のＡＥが関連する可能性があり、各ＡＥの重症度レベルは同じであるか異なり得る。「有害事象を変える」ことができる方法への言及は、異なる治療計画の使用に関連する１つ以上のＡＥの発生率および／または重症度を減少させる治療計画を意味する。
本明細書で使用される「過剰増殖性疾患」とは、細胞増殖が正常レベルを超えて増加している状態を意味する。例えば、過剰増殖性疾患または障害には、悪性疾患（例えば、食道癌、結腸癌、胆道癌）および非悪性疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、良性過形成、および良性前立腺肥大）が含まれる。
「免疫応答」という用語は、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および可溶性高分子の作用であって、侵入病原体、病原体に感染した細胞または組織、癌性細胞、あるいは、自己免疫または病的炎症の場合においては正常なヒトの細胞または組織に対する、選択的損傷、破壊、または人体からの排除をもたらす作用を意味する。
「プログラム死リガンド１」、「プログラム細胞死リガンド１」、「ＰＤ－Ｌ１」、「ＰＤＬ１」、「ｈＰＤ－Ｌ１」、「ｈＰＤ－ＬＩ」、および「Ｂ７－Ｈ１」という用語は、交換可能に使用され、ヒトＰＤ－Ｌ１の変異体、アイソフォーム、種相同体、およびＰＤ－Ｌ１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体が含まれる。完全なＰＤ－Ｌ１配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＰ＿０５４８６２において確認することができる。
「プログラム死１」、「プログラム細胞死１」、「タンパク質ＰＤ－１」、「ＰＤ－１」、「ＰＤ１」、「ｈＰＤ－１」、および「ｈＰＤ－１」という用語は、交換可能に使用され、ヒトＰＤ－１の変異体、アイソフォーム、種相同体、および、ＰＤ－１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体が含まれる。完全なＰＤ－１配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｕ６４８６３において確認することができる。
「治療する」という用語は、疾患、障害、または病気を阻害すること、すなわち、その発症を阻止すること；および、（ｉｉｉ）疾患、障害、または病気を緩和すること、すなわち、疾患、障害、および／または病気の、および／または、疾患、障害、および／または病気に関連する症状の、退行を引き起こすこと、を意味する。
本開示は、本化合物中に存在する原子のすべての同位体を含むことを意図する。同位体には、同じ原子番号を有するが質量数が異なる原子が含まれる。一般的な例として、これに限定されるものではないが、水素の同位体としては、重水素および三重水素が挙げられる。炭素の同位体には、１３Ｃおよび１４Ｃが含まれる。本開示の同位体標識化合物は、一般に、当業者に知られている従来の技術によって、または本明細書に記載のものと類似のプロセスによって、他の方法で使用される非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して、調製することができる。このような化合物は、例えば生物学的活性を測定する際の標準物質や試薬など、さまざまな用途に使用できる可能性がある。安定同位体の場合、そのような化合物は、生物学的、薬理学的、または薬物動態学的な特性を有利に改変する可能性がある。
本明細書に記載される主題の追加の態様は、リガンド結合アッセイの開発のため、あるいは、インビボでの吸着、代謝、分布、受容体結合または占有、もしくは化合物配置のモニタリングのための、放射性標識リガンドとしての開示された化合物の使用である。例えば、本明細書に記載の大環状化合物は、放射性同位体を使用して調製することができ、得られた放射性標識化合物を、結合アッセイの開発または代謝研究に使用することができる。あるいは、同様の目的のために、本明細書に記載の大環状化合物は、当業者に知られている方法を使用する触媒トリチウム化によって放射性標識形態に変換することができる。
本開示の大環状化合物は、当業者に知られている方法を使用して、放射性トレーサーを添加することによって、ＰＥＴ造影剤として使用することもできる。
当業者であれば、アミノ酸には、次の一般構造：
Figure 2024512074000024
 によって表される化合物が含まれることを知っており、ここで、ＲおよびＲ’は本明細書で論じた通りである。特に断りのない限り、本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、単独でまたは別の基の一部として、限定されるものではないが、「α」炭素と呼ばれる同じ炭素に結合したアミノ基およびカルボキシル基を含み、Ｒおよび／またはＲ’は、水素を含む天然または非天然の側鎖であり得る。「α」炭素における絶対的な「Ｓ」配置は、一般に「Ｌ」または「天然」配置と呼ばれる。「Ｒ」と「Ｒ’」（プライム）の置換基の両方が水素である場合、アミノ酸はグリシンであり、キラルではない。
特に指定しない限り、本明細書に記載されるアミノ酸は、Ｄ－またはＬ－立体化学であり得、本開示の他の箇所に記載されるように置換され得る。立体化学が特定されていない場合、本開示は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１および／またはＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の間の相互作用を阻害する能力を有するすべての立体化学異性体形態またはその混合物を包含することが理解されるべきである。化合物の個々の立体異性体は、キラル中心を含む商業的に入手可能な出発物質から合成的に行うこと、または、エナンチオマー生成物の混合物を調製し、その後にジアステレオマー混合物へ変換し、その後に分離または再結晶、クロマトグラフィー技術などで分離すること、またはキラルクロマトグラフィーカラムでのエナンチオマーを直接分離することによって、調製することができる。特定の立体化学の出発化合物は商業的に入手可能であるか、または当技術分野で知られている技術によって製造および分取することができる。
本開示の特定の化合物は、分離可能であり得る異なる安定な立体配座形態で存在することができる。例えば立体障害や環のひずみなどにより、非対称な単結合の周りの回転が制限されることによるねじれの非対称性により、異なる配座異性体の分離が可能になる可能性がある。本開示には、これらの化合物の各立体配座異性体およびそれらの混合物が含まれる。
本開示の特定の化合物は、分子のプロトンがその分子内の異なる原子に移動する現象によって生成される化合物である互変異性体として存在することができる。「互変異性体」という用語はまた、平衡状態で存在し、ある異性体から別の異性体に容易に変換される２つ以上の構造異性体のものを意味する。本明細書に記載される化合物のすべての互変異性体は、本開示内に含まれる。
本開示の医薬化合物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含むことができる。「薬学的に許容される塩」とは、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒性作用を与えない塩を意味する（例えば、Berge, S.M. et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19 (1977)を参照）。塩は、本明細書に記載の化合物の最終的な単離および精製中に得ることができ、あるいは、化合物の遊離塩基官能基を適切な酸と個別に反応させることによって、または化合物の酸性基を適切な塩基と反応させることによって得ることができる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの非毒性の無機酸に由来するもの、ならびに、脂肪族モノカルボン酸およびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性の有機酸に由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属に由来するもの、ならびに、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性有機アミンに由来するものが挙げられる。
本明細書に記載の治療剤の投与には、これに限定されるものではないが、治療有効量の治療剤の投与が含まれる。本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、これに限定されるものではないが、本明細書に記載のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合阻害剤を含む組成物の投与によって治療可能な症状を治療するための治療剤の量を意味する。その量は、検出可能な治療効果または改善効果を示すのに十分な量である。効果には、これに限定されるものではないが、例えば、本明細書に列挙される症状の治療が含まれ得る。対象に対する正確な有効量は、対象の大きさおよび健康状態、治療される病気の性質および範囲、治療する医師の推奨、および投与のために選択される治療薬または治療薬の組み合わせに依存する。したがって、正確な有効量を事前に指定することは有用ではない。
別の態様において、本開示は、本開示の大環状化合物を使用して対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法に関する。本明細書で実証されるように、本開示の化合物は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができ、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との間の相互作用を破壊し、ＰＤ－Ｌ１と既知の抗ＰＤ－１モノクローナル抗体との結合と競合して、ＰＤ－１との相互作用を遮断し、ＣＭＶ特異的Ｔ細胞のＩＦＮγ分泌を促進し、ＨＩＶ特異的Ｔ細胞のＩＦＮγ分泌を促進することができる。結果として、本開示の化合物は、免疫応答を改変すること、がんまたは感染症などの疾患を治療すること、防御的自己免疫応答を刺激すること、または抗原特異的免疫応答を刺激すること（例えば、目的の抗原とともにするＰＤ－Ｌ１阻害化合物の同時投与により）に有用である。
医薬組成物
別の態様において、本開示は、組成物、例えば、薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された、本開示内に記載される化合物の１つまたは組み合わせを含む、医薬組成物、を提供する。本開示の医薬組成物は、併用療法で、すなわち、他の薬剤と組み合わせて投与することもできる。例えば、併用療法には、少なくとも１つの他の抗炎症剤または免疫抑制剤と組み合わせた大環状化合物が含まれ得る。併用療法で使用できる治療薬の例は、以下の本開示の化合物の使用に関する欄でより詳細に説明される。
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に適合するあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。いくつかの実施形態において、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮の投与（例えば、注射または注入による）に適している。投与経路に応じて、活性化合物を物質でコーティングして、化合物を不活性化する可能性のある酸の作用やその他の自然条件から化合物を保護することができる。
本開示の医薬組成物はまた、薬学的に許容される抗酸化剤を含むことができる。薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロールなど；および、（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など、が挙げられる。
本開示の医薬組成物は、当技術分野で知られている様々な方法のうちの１つ以上を用いて、１つ以上の投与経路を介して投与することができる。当業者に理解されるように、投与経路および／または投与様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。いくつかの実施形態において、本開示の大環状化合物の投与経路として、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路、例えば注射または注入によるもの、が挙げられる。本明細書で使用される「非経口投与」という語句は、通常は注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、これに限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内（intrasternal）の注射および注入が挙げられる。
滅菌注射液は、必要に応じて、上に列挙した成分の１つまたは組み合わせとともに、必要な量の活性化合物を適切な溶媒に配合し、続いて滅菌精密濾過することによって、調製することができる。一般に、分散液は、塩基性分散媒および上に列挙したものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに活性化合物を配合することによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合、いくつかの調製方法は、活性成分に、事前に滅菌濾過されたその溶液からの任意の追加の所望の成分を加えた粉末を得る真空乾燥および凍結乾燥（フリーズドライ）である。
本開示の医薬組成物に使用され得る適切な水性および非水性の担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、オリーブ油などの植物油、オレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステル、が挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などの補助剤を含有することもできる。微生物の存在の防止は、上記の滅菌手順と、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの様々な抗菌剤および抗真菌剤の添加の両方によって確実に行うことができる。また、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含ませることも望ましい場合がある。さらに、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤を含ませることによって、注射可能な医薬形態の吸収を延長させることができる。
薬学的に許容される担体として、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射用溶液または分散液を即時調製するための滅菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で知られている。従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除き、本開示の医薬組成物においてそれらの使用が企図される。補助的な活性化合物を組成物に配合することもできる。
治療用組成物は、典型的には、製造および保管の条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高薬物濃度に適した他の規則構造として、製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含む、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用、分散の場合には必要な粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを含ませることが望ましいであろう。注射可能な組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含ませることによってもたらすことができる。
あるいは、本開示の化合物は、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸、舌下または局所などの非経口以外の経路（non-parenteral route）を介して投与することができる。
本明細書で企図される任意の医薬組成物は、例えば、許容される適切な経口製剤を介して経口的に送達され得る。経口製剤の例としては、これに限定されるものではないが、例えば、錠剤、トローチ、飴（ｌｏｚｅｎｇｅ）、水性および油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルション、ハードカプセルおよびソフトカプセル、液体カプセル、シロップ、およびエリキシル剤が挙げられる。経口投与を目的とした医薬組成物は、経口投与を目的とした医薬組成物を製造するための当該技術分野で知られている任意の方法に従って製造することができる。薬学的に口当たりのよい製剤を提供するために、本開示に係る医薬組成物は、甘味剤、香味料、着色剤、粘滑剤、抗酸化剤、および保存剤から選択される少なくとも１つの薬剤を含むことができる。
錠剤は、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および／または少なくとも１つのその薬学的に許容される塩を、錠剤の製造に適した少なくとも１つの非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合することによって、製造することができる。賦形剤の例としては、これに限定されるものではないが、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、およびリン酸ナトリウムなど；造粒剤および崩壊剤、例えば、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、コーンスターチ、およびアルギン酸など；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、およびアカシアなど；および、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、およびタルクなど、が挙げられる。さらに、錠剤は、コーティングしなくてもよく、あるいは、不快な味の薬剤の不快な味をマスキングするため、または、胃腸管内での有効成分の崩壊と吸収を遅らせて、有効成分の効果をより長い時間、持続させるために、既知の技術によってコーティングすることもできる。水溶性味マスキング材料の例としては、これに限定されるものではないが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。時間遅延材料の例としては、これに限定されるものではないが、エチルセルロース、およびセルロースアセテートブチレートが挙げられる。
ハードゼラチンカプセルは、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および／または少なくとも１つのその塩を、例えば、炭酸カルシウム；リン酸カルシウム；およびカオリンなどの少なくとも１つの不活性固体希釈剤と混合することによって、製造することができる。
ソフトゼラチンカプセルは、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および／または少なくとも１つのその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの水溶性担体、例えば、ポリエチレングリコールなど；および、少なくとも１つの油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィン、およびオリーブ油など、と混合することによって、製造することができる。
水性懸濁液は、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および／または少なくとも１つのその薬学的に許容される塩を、水性懸濁液の製造に適した少なくとも１つの賦形剤と混合することによって、製造することができ、これには、これに限定されるものではないが、例えば、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアカシアガムなど；分散剤または湿潤剤、例えば、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチンなど；アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンステアレート；エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカチレンオキシセタノールなど；エチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなど；エチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレートなどが挙げられる。水性懸濁液は、少なくとも１つの保存剤、例えば、ｐ－ヒドロキシ安息香酸エチルおよびｐ－ヒドロキシ安息香酸ｎ－プロピルなど；少なくとも１つの着色剤；少なくとも１つの香味剤；および／または少なくとも１つの甘味料、これに限定されるものではないが、例えば、スクロース、サッカリン、およびアスパルテーム、を含有することもできる
油性懸濁液は、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および／または少なくとも１つのその薬学的に許容される塩を、例えば、ラッカセイ油、ゴマ油、ココナッツオイルなどの植物油で、または、例えば、流動パラフィンなどの鉱油で、懸濁することによって、製造することができる。油性懸濁液は、例えば、蜜蝋、硬質パラフィン、およびセチルアルコールなどの少なくとも１つの増粘剤を含有することもできる。口当たりのよい油性懸濁液を提供するために、本明細書においてすでに上記に記載した少なくとも１つの甘味剤および／または少なくとも１つの香味剤を油性懸濁液に添加することができる。油性懸濁液は、これに限定されるものではないが、例えば、ブチル化ヒドロキシアニソールおよびα－トコフェロールなどの抗酸化剤を含めた、少なくとも１つの保存剤をさらに含むことができる。
分散性粉末および顆粒は、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および／または少なくとも１つのその薬学的に許容される塩を、少なくとも１つの分散剤および／または湿潤剤、少なくとも１つの懸濁剤、および／または少なくとも１つの保存剤と混合することによって、製造することができる。適切な分散剤、湿潤剤、および懸濁剤はすでに上記に記載されている。保存剤の例としては、これに限定されるものではないが、例えば、アスコルビン酸などの抗酸化剤が挙げられる。さらに、分散性の粉末および顆粒は、これに限定されるものではないが、例えば、甘味剤、香味剤、および着色剤を含めた少なくとも１つの賦形剤を含むこともできる。
少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および／または少なくとも１つのその薬学的に許容される塩のエマルションは、例えば、水中油型エマルションとして、製造することができる。式（Ｉ）の化合物を含むエマルションの油相は、既知の成分から既知の方法で構成することができる。油相は、これに限定されるものではないが、例えばオリーブ油およびラッカセイ油などの植物油；例えば流動パラフィンなどの鉱物油；およびそれらの混合物、によって提供され得る。この相は乳化剤のみを含むことができるが、一方、少なくとも乳化剤を含まない、脂肪もしくは油、または脂肪と油の両方との混合物を含むことができる。適切な乳化剤としては、これに限定されるものではないが、例えば、大豆レシチンなどの天然リン脂質、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されるエステルまたは部分エステル、例えば、モノレイン酸ソルビタン、および、部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなど、が挙げられる。いくつかの実施形態において、親水性乳化剤は、安定剤として作用する親油性乳化剤と一緒に含まれる。油と脂肪の両方を含むことが望ましい場合もある。乳化剤は、安定剤の有無にかかわらず、いわゆる乳化ワックスを構成し、ワックスは、油および脂肪とともに、クリーム製剤の油性分散相を形成するいわゆる乳化軟膏基剤を構成する。エマルションはまた、甘味剤、香味剤、保存剤、および／または酸化防止剤を含有することもできる。本開示の製剤に使用するのに適した乳化剤および乳化安定剤として、ツイーン６０、スパン８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラウリル硫酸ナトリウム、ジステアリン酸グリセリルの単独またはワックスとの併用、または当技術分野でよく知られている他の材料が挙げられる。
活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムを含む放出制御製剤など、化合物を急速な放出から保護する担体を用いて、製造することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性のポリマーを使用することができる。このような製剤を製造するための多くの方法は、特許がなされているか、または当業者に一般的に知られている。例えば、Robinson, J.R., ed., Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, Marcel Dekker, Inc., New York (1978) を参照されたい。
治療組成物は、当技術分野で知られている医療装置を用いて投与することができる。例えば、一実施形態において、本開示の治療組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、または第４，５９６，５５６号に開示される装置などの無針皮下注射装置（needleless hypodermic injection device）を用いて投与することができる。本開示において有用なよく知られたインプラントおよびモジュールの例としては、以下が挙げられる：米国特許第４，４８７，６０３号、これは、制御された速度で薬剤を分配するための埋め込み型マイクロ注入ポンプを開示し；米国特許第４，４８６，１９４号、これは、皮膚を通して薬剤を投与するための治療装置を開示し；米国特許第４，４４７，２３３号、これは、正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示し；米国特許第４，４４７，２２４号、これは、継続的な薬物送達のための可変流量の埋め込み型注入装置を開示し；米国特許第４，４３９，１９６号、これは、複数のチャンバー区画を有する浸透圧薬物送達システムを開示し；米国特許第４，４７５，１９６号、これは、浸透圧薬物送達システムを開示している。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。他の多くのそのようなインプラント、送達システム、およびモジュールは、当業者に知られている。
特定の実施形態において、本開示の化合物は、インビボで適切な分布を確保するように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの親水性の高い化合物を排除する。本開示の治療用化合物は、（所望する場合）ＢＢＢを通過することを確実にするために、例えばリポソームで製剤化され得る。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、第５，３７４，５４８号、および第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または器官に選択的に輸送する１つ以上の部分を含むことができ、それにより標的薬物送達を増強することができる（例えば、Ranade, V.V., J. Clin. Pharmacol., 29:685 (1989)を参照）。標的化部分の例として、葉酸またはビオチン（例えば、Lowら、米国特許第５，４１６，０１６号を参照）；マンノシド（Umezawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 153:1038 (1988)）；大環状化合物（Bloeman, P.G. et al., FEBS Lett., 357:140 (1995); Owais, M. et al., Antimicrob. Agents Chemother., 39:180 (1995)）；界面活性プロテインＡ受容体（Briscoe et al., Am. J. Physiol., 1233:134 (1995)); p120 (Schreier et al., J. Biol. Chem., 269:9090 (1994)); Keinanen, K. et al., FEBS Lett., 346:123 (1994); Killion, J.J. et al., Immunomethods 4:273 (1994)も参照）、が挙げられる
１．ペプチド合成
本開示の大環状ペプチドは、当技術分野で知られている方法によって製造することができ、例えば、化学的に、無細胞系における組換えで、または細胞内における組換えで合成することができ、または、生物源から単離することができる。本開示の大環状ペプチドの化学合成は、段階的固相合成、ペプチド断片の立体配座補助再ライゲーションによる半合成、クローン化ペプチドまたは合成ペプチドセグメントの酵素的ライゲーション、およびケミカルライゲーションを含む、当技術分野で認識されている様々な方法を用いて、行うことができる。本明細書に記載の大環状ペプチドおよびその類似体を合成する好ましい方法は、様々な固相技術を用いた化学合成であり、例えば、Chan, W.C. et al, eds., Fmoc Solid Phase Synthesis, Oxford University Press, Oxford (2000); Barany, G. et al, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 2 : "Special Methods in Peptide Synthesis, Part A", pp. 3-284, Gross, E. et al, eds., Academic Press, New York (1980); Atherton, E., Sheppard, R. C. Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press, Oxford, England (1989); および Stewart, J. M. Young, J. D. Solid-Phase Peptide Synthesis, 2nd Edition, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984) に記載されている。好ましい戦略は、α－アミノ基を一時的に保護するための９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）に基づいたものであって、アミノ酸側鎖を一時的に保護するためのｔｅｒｔ－ブチル基（ｔＢｕ）と組み合わせたものである（例えば、Atherton, E. et al, "The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group", in The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 9 : "Special Methods in Peptide Synthesis, Part C", pp. 1-38, Undenfriend, S. et al, eds., Academic Press, San Diego (1987)を参照）。
ペプチドは、ペプチドのＣ末端から開始して、不溶性ポリマー支持体（「樹脂」とも称される）上で段階的に合成することができる。合成は、アミドまたはエステル結合の形成を通じてペプチドのＣ末端アミノ酸を樹脂に付加することによって開始される。これにより、結果として得られるペプチドがそれぞれＣ末端アミドまたはカルボン酸として最終的に放出するのが可能になる。
合成に使用されるＣ末端アミノ酸および他のすべてのアミノ酸は、α－アミノ保護基が合成中に選択的に除去され得るように、それらのα－アミノ基および側鎖官能基（存在する場合）が異なる保護性で保護されていることを要する。アミノ酸のカップリングは、そのカルボキシル基を活性エステルとして活性化し、樹脂に付加されたＮ末端アミノ酸のブロックされていないα－アミノ基と反応させることによって行われる。α－アミノ基の脱保護とカップリングの一連の操作は、ペプチド配列全体が組み立てられるまで繰り返される。その後、通常は副反応を制限する適切なスカベンジャーの存在下で、側鎖官能基の脱保護とともに同時にペプチドを樹脂から放出する。得られたペプチドは最終的に逆相ＨＰＬＣによって精製される。
最終ペプチドの前駆体として求められるペプチジル樹脂の合成には、商業的に入手可能な架橋ポリスチレンポリマー樹脂（Novabiochem, San Diego, CA; Applied Biosystems, Foster City, CA）が使用される。好ましい固体支持体は以下の通りである：４－（２’，４’－ジメトキシフェニル－Ｆｍｏｃ－アミノメチル）－フェノキシアセチル－ｐ－メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂）；９－Ｆｍｏｃ－アミノ－キサンテン－３－イルオキシ－メリフィールド樹脂（シーバーアミド樹脂）；４－（９－Ｆｍｏｃ）アミノメチル－３，５－ジメトキシフェノキシ）バレリルアミノメチル－メリフィールド樹脂（ＰＡＬ樹脂）、Ｃ末端カルボキサミド用、が挙げられる。最初のおよびそれに続くアミノ酸のカップリングは、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰから、または、ＤＩＣ／６－Ｃｌ－ＨＯＢｔ、ＨＣＴＵ、ＤＩＣ／ＨＯＡｔまたはＨＡＴＵから、それぞれ生成される、ＨＯＢｔ、６－Ｃｌ－ＨＯＢｔ、またはＨＯＡｔ活性エステルを使用して行うことができる。好ましい固体支持体は、保護されたペプチドフラグメントのための、２－クロロトリチルクロリド樹脂、および９－Ｆｍｏｃ－アミノ－キサンテン－３－イルオキシ－メリフィールド樹脂（シーバーアミド樹脂）である。最初のアミノ酸を２－クロロトリチルクロリド樹脂にロードするには、ジクロロメタンおよびＤＩＥＡ中でＦｍｏｃ保護アミノ酸を樹脂と反応させるのが最も効果的である。必要に応じて、アミノ酸を可溶化するために少量のＤＭＦを添加してもよい。
本明細書に記載されるペプチド類似体の合成は、ＣＥＭ Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、または、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ． Ｐｒｅｌｕｄｅ（６チャンネル）、または、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ（１２チャンネル）、または、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ（２４チャンネル） ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒなどの、シングルまたはマルチチャンネルのペプチド合成装置を用いて行うことができる。
有用なＦｍｏｃアミノ酸誘導体を以下に示す。

固相合成で使用される直交保護アミノ酸（Orthogonally Protected Amino Acid）の例
Figure 2024512074000025
それぞれのペプチドのペプチジル樹脂前駆体は、任意の標準の手順を用いて切断および脱保護することができる（例えば、King, D.S. et al, Int. J. Peptide Protein Res., 36:255-266 (1990)を参照）。望ましい方法では、スカベンジャーとしてＴＩＳ、およびジスルフィド還元剤としてＤＴＴまたはＴＣＥＰの存在下において、ＴＦＡを使用する。典型的には、ペプチジル樹脂を、ＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ（９５：５：１～９７：３：１）（ｖ：ｖ：ｗ）（１～３ｍＬ／１００ｍｇのペプチジル樹脂）中で、室温で１．５～３時間、撹拌する。次いで、使用した樹脂を濾過し、ＴＦＡ溶液を冷却し、Ｅｔ２Ｏ溶液を加える。遠心分離し、エーテル層をデカントすること（３回）によって沈殿物を収集する。得られた粗ペプチドは、分取ＨＰＬＣによる精製のために、ＤＭＦ、またはＤＭＳＯ、またはＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏに直接再溶解されるか、次のステップに直接使用される。
所望の純度を有するペプチドは、例えば、Ｗａｔｅｒｓ Ｍｏｄｅｌ ４０００、またはＳｈｉｍａｄｚｕ Ｍｏｄｅｌ ＬＣ－８Ａ液体クロマトグラフィーによる、分取ＨＰＬＣを用いた精製によって得ることができる。粗ペプチドの溶液を、ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（２０×１００ｍｍ）カラムに注入し、どちらも０．１％ＴＦＡで緩衝したＭｅＣＮを含む水の溶出液を用いて、流速１４～２０ｍＬ／ｍｉｎによってリニアグラジエントで溶出し、２１７または２２０ｎｍのＵＶ吸収によってモニタリングする。精製されたペプチドの構造は、エレクトロスプレーＭＳ分析によって確認することができる。
本明細書で参照される非天然アミノ酸のリストを以下に提供する。
Figure 2024512074000026
Figure 2024512074000027
以下の略語は、実施例および本明細書の他の箇所で使用される。
Figure 2024512074000028
Figure 2024512074000029
実施例０００１－固相ペプチド合成とペプチドの環化
本実施例に記載の手順、記載されている全体または一部を使用して、表１（後述）に示す大環状ペプチドを合成した。
スキーム１：チオエーテル大環状ペプチドに使用される一般的な合成方法
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）および大環状化の一般的なプロトコル
Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、アリゾナ州ツーソン）、Ｐｒｅｌｕｄｅペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、アリゾナ州ツーソン）、またはＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｘペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、アリゾナ州ツーソン）において、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨ（０．１００ｍｍｏｌ）を予めロードしたクロロトリチル樹脂を、ＣＨ２Ｃｌ２、次いでＤＭＦで、穏やかにＮ２の流下で混合しながら膨潤させた。溶媒を排出し、次の方法を用いて最初のアミノ酸をカップリングした。３０秒ごとに穏やかにＮ２流で撹拌しながら、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液で樹脂を２回洗浄することによって、樹脂で支持されたビルディングブロックからＦｍｏｃ基を除去した。樹脂をＤＭＦで５～６回洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（０．２ＭのＤＭＦ溶液）を加え、続いてカップリング活性化剤（すなわち、ＨＡＴＵ（Ｃｈｅｍ－Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔ’ｌ、０．４ＭのＤＭＦ溶液））および塩基（すなわち、Ｎ－メチルモルホリン（Ａｌｄｒｉｃｈ、０．８ＭのＤＭＦ液）を加えた。反応混合物を穏やかな窒素流で１～２時間撹拌した。試薬を反応容器から排出し、樹脂をＤＭＦで５～６回洗浄した。次いで、得られた樹脂に支持されたＦｍｏｃ保護ジペプチドを順次に脱保護し、３番目のアミノ酸などとのカップリングを繰り返して、目的の樹脂支持生成物を得た。
緩やかな窒素流下、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液で樹脂を２回洗浄することにより、Ｎ末端からＦｍｏｃ基を除去した。樹脂をＤＭＦで洗浄した（５～６回）。ペプチド－樹脂を、無水クロロ酢酸（０．２ＭのＤＭＦ液）で処理し、続いてＮＭＭ（０．８ＭのＤＭＦ液）で処理した。この反応を繰り返した。すべての試薬および溶媒を排出した後、樹脂をＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄し、乾燥させた。
ＬＣＭＳ分析を、樹脂から切り出したペプチドのアリコートに対して実施した（分析量を室温で少量のＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ（９６：４：１）溶液で処理して、目的の直鎖の配列の形成を確認した）。
ペプチドは、ＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ（９６：４：１）溶液で１．５時間処理すると全体的に脱保護され、樹脂から切断された。樹脂を濾過により除去し、少量の切断カクテルで洗浄し、合わせた濾液を冷却したＥｔ２Ｏに加えた。溶液を０℃に冷却して、ペプチドを溶液から沈殿させた。スラリーを遠心分離して固体をペレット化し、上清をデカントした。新しいＥｔ２Ｏを加え、このプロセスを３回繰り返して固体を洗浄した。風乾した固体に、ＤＩＥＡ／ＤＭＦ（ＤＭＦ４０～４５ｍＬ中にＤＩＥＡ１～３ｍＬ）の溶液、または０．１ＭのＮＨ４ＨＣＯ３／アセトニトリル（１／１～３／１（ｖ／ｖ））の溶液を加えて、溶液のｐＨを８よりも大きくした。溶液を１６～７２時間撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。反応溶液を分取逆相ＨＰＬＣで精製し、目的の生成物を得た。
一般的な分析プロトコルおよび合成方法
分析データ
質量分析：「ＥＳＩ－ＭＳ（＋）」は、正イオンモードで実施されるエレクトロスプレーイオン化質量分析を意味し、「ＥＳＩ－ＭＳ（－）」は、負イオンモードで実施されるエレクトロスプレーイオン化質量分析を意味し、「ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋）」は、正イオンモードで実施される高分解能エレクトロスプレーイオン化質量分析を意味し、「ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（－）」は、負イオンモードで実施される高分解能エレクトロスプレーイオン化質量分析を意味する。検出された質量は、「ｍ／ｚ」単位指定に従って報告される。正確な質量が１０００を超える化合物は、多くの場合、２価または３価のイオンとして検出される。
粗物質を分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ａ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；温度：５０℃；グラジエント：３分間で０～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．７５分間保持；流速：１．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｂ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．１％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．１％トリフルオロ酢酸含有；温度：５０℃；グラジエント：３分間で０～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．７５分間保持；流速：１．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｃ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；温度：７０℃；グラジエント：３分間で０～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで２．０分間保持；流速：０．７５ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｄ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．１％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．１％トリフルオロ酢酸含有；温度：７０℃；グラジエント：３分間で０～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで２．０分間保持；流速：０．７５ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｅ
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ ＸＢ Ｃ１８、３．０×７５ｍｍ、２．６μｍ粒子；移動相Ａ：１０ｍＭギ酸アンモニウムの水：アセトニトリル（９８：２）；移動相Ｂ：１０ｍＭギ酸アンモニウムの水：アセトニトリル（０２：９８）；グラジエント：４分間で２０～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．６分間保持；流速：１．０ｍＬ／分；検出：２５４ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｆ
カラム：Ａｓｃｅｎｔｉｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、２．７μｍ粒子；移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウムの水：アセトニトリル（９５：５）；移動相Ｂ：１０ｍＭ酢酸アンモニウムの水：アセトニトリル（０５：９５）；温度：５０℃；グラジエント：３分間で０～１００％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｇ
カラム：Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水；移動相Ｂ：アセトニトリル、温度：３５℃；グラジエント：４分間で５～９５％Ｂ；流速：４．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｈ
カラム：Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：１０ｍＭのＮＨ４ＯＡｃ；移動相Ｂ：メタノール、温度：３５℃；グラジエント：４分間で５～９５％Ｂ；流速：４．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｉ
カラム：Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：１０ｍＭのＮＨ４ＯＡｃ；移動相Ｂ：アセトニトリル、温度：３５℃；グラジエント：４分間で５～９５％Ｂ；流速：４．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｊ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；温度：７０℃；グラジエント：１．５分間で０～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで２．０分間保持；流速：０．７５ｍＬ／分；検出：２５４ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｋ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：１００％水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：１００％アセトニトリル、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；温度：５０℃；グラジエント：１．０分間で２～９８％Ｂ、その後９８％Ｂで１．０～１．５分間保持；流速：０．８０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｌ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；緩衝液：１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ａ：緩衝液とＣＨ３ＣＮ（９５／５）；移動相Ｂ：緩衝液：ＡＣＮ（５：９５）；温度：５０℃；グラジエント：２．０分間で２０～９８％Ｂ、その後１００％Ｂで０．２分間保持；流速：０．７０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｍ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、３．０×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：９５％水および０．１％トリフルオロ酢酸含有の５％水；移動相Ｂ：９５％アセトニトリルおよび０．１％トリフルオロ酢酸含有の５％水；温度：５０℃；グラジエント：２．０分間で２０～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで２．０～２．３分間保持；流速：０．７ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｎ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：１００％水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：１００％アセトニトリル、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；温度：５０℃；グラジエント：５．０分間で２～９８％Ｂ、その後９８％Ｂで５．０～５．５分間保持；流速：０．８０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｏ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；温度：５０℃；グラジエント：２分間で２％～９８％Ｂ、その後９８％Ｂで０．５分間保持；流速：０．８ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｐ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；温度：５０℃；グラジエント：３分間で０％～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．５分間保持；流速：１．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｑ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；温度：５０℃；グラジエント：１分間で０％～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．５分間保持；流速：１．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｒ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；緩衝液：１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ａ：緩衝液とＣＨ３ＣＮ（９５／５）；移動相Ｂ：緩衝液：ＡＣＮ（５：９５）；温度：５０℃；グラジエント：１分間で０％～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．５分間保持；流速：１．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｓ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：１００％水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：１００％アセトニトリル、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１．６分間で２～９８％Ｂ、その後９８％Ｂで０．２分間保持；流速：０．８０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｔ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２．６分間で２％～９８％Ｂ、その後９８％Ｂで０．４分間保持；流速：０．８ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
ＬＣ／ＭＳ分析条件Ｕ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；グラジエント：３分間で３０～１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．７５分間保持；流速：１．０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍのＵＶ。
一般的な手順
Ｐｒｅｌｕｄｅ（プレリュード）法
全ての操作は、Ｐｒｅｌｕｄｅペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて自動化して実施した。特に断りのない限り、すべての手順は底部にフリットを備えた４５ｍＬポリプロピレン反応容器で実施した。反応容器は、容器の底部と上部の両方を介してＰｒｅｌｕｄｅペプチド合成装置に接続されている。ＤＭＦおよびＤＣＭは容器の上部から加えることができ、これは容器の側面を均等に洗い流す。残りの試薬は反応容器の底部から加えられ、フリットを通過して樹脂と接触する。すべての溶液は反応容器の底部から除去される。「定期的な撹拌」とは、底部フリットを通過するＮ２ガスの短いパルスを意味し、パルスは約５秒続き、３０秒ごとに発生する。アミノ酸溶液は、通常、調製から２週間を超えて使用しない。ＨＡＴＵ溶液は、調製後７～１４日以内に使用した。
シーバーアミド樹脂＝９－Ｆｍｏｃ－アミノキサンテン－３－イルオキシ－ポリスチレン樹脂、ここで、「３－イルオキシ」は、ポリスチレン樹脂への結合の位置およびタイプを表す。使用される樹脂は、シーバー（Ｓｉｅｂｅｒ）リンカー（窒素においてＦｍｏｃ保護）を有するポリスチレンであり、１００－２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．７１ｍｍｏｌ／ｇローディングである。
Ｒｉｎｋ＝（２，４－ジメトキシフェニル）（４－アルコキシフェニル）メタンアミン、ここで、「４－アルコキシ」は、ポリスチレン樹脂への結合の位置およびタイプを表す。使用される樹脂は、リンク（Ｒｉｎｋ）リンカー（窒素においてＦｍｏｃ保護）を有するメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）ポリマー（ポリスチレン）であり、１００－２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．５６ｍｍｏｌ／ｇローディングである。
２－クロロトリチルクロリド樹脂（２－クロロトリフェニルメチルクロリド樹脂）、５０－１５０メッシュ、１％ＤＶＢ、１．５４ｍｍｏｌ／ｇローディング。Ｆｍｏｃ－グリシン－２－クロロトリチルクロリド樹脂、２００－４００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．６３ｍｍｏｌ／ｇローディング。
ＰＬ－ＦＭＰ樹脂：（４－ホルミル－３－メトキシフェノキシメチル）ポリスチレン。
使用される一般的なアミノ酸を以下に列挙し、括弧内に側鎖保護基を示す：
Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｂｉｐ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｈｙｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｎｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－［Ｎ－Ｍｅ］Ａｌａ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－［Ｎ－Ｍｅ］Ｎｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）－ＯＨ，Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓａｒ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、およびそれらに対応するＤ－アミノ酸。
「Ｐｒｅｌｕｄｅ法」の手順は、０．１００ｍｍｏｌスケールで実施される実験を表しており、ここで、スケールは、ＳｉｅｂｅｒまたはＲｉｎｋまたは２－クロロトリチルまたはＰＬ－ＦＭＰ樹脂の量によって決定される。このスケールは、上記のシーバーアミド樹脂の約１４０ｍｇに相当する。すべての手順は、記載されている量をスケールの倍数で調整することで、０．１００ｍｍｏｌスケールからスケールダウンまたはスケールアップできる。アミノ酸カップリングの前に、すべてのペプチド合成シーケンスは、以下で「樹脂膨潤手順」として説明する樹脂膨潤手順から開始した。アミノ酸の第一級アミンＮ末端へのカップリングには、以下に説明する「シングルカップリング手順」を使用した。第二級アミンのＮ末端、またはＡｒｇ（Ｐｂｆ）－およびＤ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－のＮ末端へのアミノ酸のカップリングには、下記の「ダブルカップリング手順」を使用した。
樹脂膨潤手順
４５ｍＬのポリプロピレン固相反応容器に、シーバーアミド樹脂（１４０ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）を加えた。樹脂を次のように２回洗浄（膨潤）した。反応容器に、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え「ＤＭＦトップ洗浄」し、混合物を１０分間定期的に撹拌した後、フリットを通して溶媒を排出した。
シングルカップリング手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（６．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１．０分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、５．０ｍＬ、１０当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．５ｍＬ、１０当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、２．５ｍＬ、２０当量）を加えた。混合物を６０～１２０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して４回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１．０分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
ダブルカップリング手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（６．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１．０分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、５．０ｍＬ、１０当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．５ｍＬ、１０当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、２．５ｍＬ、２０当量）を加えた。混合物を１～１．５時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して２回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１．０分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、５．０ｍＬ、１０当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．５ｍＬ、１０当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、２．５ｍＬ、２０当量）を加えた。混合物を１～１．５時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して４回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１．０分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
シングルカップリングの手動添加手順Ａ
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応を一時停止した。反応容器を開け、ＤＭＦ（１～２ｍＬ）液の非天然アミノ酸（２～４当量）を、容器の底を機器に取り付けたまま、容器の上部からピペットを使用して手動で加え、次いで、容器を閉じた。自動プログラムを再開し、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．３ｍＬ、４当量）、およびＮＭＭ（ＤＭＦ中１．３Ｍ、１．０ｍＬ、８当量）を順次加えた。混合物を２～３時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
シングルカップリングの手動添加手順Ｂ
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応を一時停止した。反応容器を開け、ＤＭＦ（１～１．５ｍＬ）液の非天然アミノ酸（２～４当量）を、容器の底を機器に取り付けたまま、容器の上部からピペットを使用して手動で加え、続いて、ＨＡＴＵ（２～４当量、非天然アミノ酸と同じ当量）を手動で加え、次いで、容器を閉じた。自動プログラムを再開し、ＮＭＭ（ＤＭＦ中１．３Ｍ、１．０ｍＬ、８当量）を順次加えた。混合物を２～３時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
ペプトイドのインストール（５０μｍｏｌ）手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に６０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にブロモ酢酸（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．０ｍＬ、１６当量）、次いで、ＤＩＣ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にアミン（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
無水クロロ酢酸カップリング
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（６．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に無水クロロ酢酸溶液（ＤＭＦ中０．４Ｍ、５．０ｍＬ、２０当量）、次いで、Ｎ－メチルモルホリン（ＤＭＦ中０．８Ｍ、５．０ｍＬ、４０当量）を加えた。混合物を１５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように２回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（６．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に無水クロロ酢酸溶液（ＤＭＦ中０．４Ｍ、５．０ｍＬ、２０当量）、次いで、Ｎ－メチルモルホリン（ＤＭＦ中０．８Ｍ、５．０ｍＬ、４０当量）を加えた。混合物を１５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（６．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して４回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＣＭ（６．０ｍＬ）を容器の上部から加え、得られた混合物を定期的に１分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。次いで、樹脂を窒素流で１０分間乾燥させた。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ（シンフォニー）法
全ての操作は、１２チャンネルのＳｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて自動化して実施した。特に断りのない限り、すべての手順は底部にフリットを備えた２５ｍＬポリプロピレン反応容器内で実施した。反応容器は、容器の底部と上部の両方を介してＳｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置に接続されている。ＤＭＦおよびＤＣＭは容器の上部から加えることができ、容器の側面を均等に洗い流す。残りの試薬は反応容器の底部から加えられ、フリットを通過して樹脂と接触する。すべての溶液は反応容器の底部から除去される。「定期的な撹拌」とは、底部フリットを通過するＮ２ガスの短いパルスを意味し、パルスは約５秒続き、３０秒ごとに発生する。アミノ酸溶液は、通常、調製から２週間を超えて使用しない。ＨＡＴＵ溶液は、調製後７～１４日以内に使用した。
シーバーアミド樹脂＝９－Ｆｍｏｃ－アミノキサンテン－３－イルオキシ－ポリスチレン樹脂、ここで、「３－イルオキシ」は、ポリスチレン樹脂への結合の位置およびタイプを表す。使用される樹脂は、シーバー（Ｓｉｅｂｅｒ）リンカー（窒素においてＦｍｏｃ保護）を有するポリスチレンであり、１００－２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．７１ｍｍｏｌ／ｇローディングである。
Ｒｉｎｋ＝（２，４－ジメトキシフェニル）（４－アルコキシフェニル）メタンアミン、ここで、「４－アルコキシ」は、ポリスチレン樹脂への結合の位置およびタイプを表す。使用される樹脂は、リンク（Ｒｉｎｋ）リンカー（窒素においてＦｍｏｃ保護）を有するメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）ポリマー（ポリスチレン）であり、１００－２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．５６ｍｍｏｌ／ｇローディングである。
２－クロロトリチルクロリド樹脂（２－クロロトリフェニルメチルクロリド樹脂）、５０－１５０メッシュ、１％ＤＶＢ、１．５４ｍｍｏｌ／ｇローディング。
ＰＬ－ＦＭＰ樹脂：（４－ホルミル－３－メトキシフェノキシメチル）ポリスチレン。
Ｆｍｏｃ－グリシン－２－クロロトリチルクロリド樹脂、２００－４００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．６３ｍｍｏｌ／ｇローディング。
使用される一般的なアミノ酸を以下に列挙し、括弧内に側鎖保護基を示す：
Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｂｉｐ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｈｙｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｎｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－［Ｎ－Ｍｅ］Ａｌａ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－［Ｎ－Ｍｅ］Ｎｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）－ＯＨ，Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓａｒ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、およびそれらに対応するＤ－アミノ酸。
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ法」の手順は、０．０５ｍｍｏｌスケールで実施される実験を表しており、ここで、スケールは、樹脂に結合したＳｉｅｂｅｒまたはＲｉｎｋまたはクロロトリチルリンカーまたはＰＬ－ＦＭＰの量によって決定される。このスケールは、上記のＳｉｅｂｅｒ樹脂の約７０ｍｇに相当する。すべての手順は、記載されている量をスケールの倍数で調整することで、０．０５ｍｍｏｌスケールからスケールアップできる。
アミノ酸カップリングの前に、すべてのペプチド合成シーケンスは、以下で「樹脂膨潤手順」として説明する樹脂膨潤手順から開始した。アミノ酸の第一級アミンＮ末端へのカップリングには、以下に説明する「シングルカップリング手順」を使用した。第二級アミンのＮ末端、またはＡｒｇ（Ｐｂｆ）－およびＤ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－のＮ末端へのアミノ酸のカップリングには、下記の「ダブルカップリング手順」を使用した。
樹脂膨潤手順
２５ｍＬのポリプロピレン固相反応容器に、樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。樹脂を次のように洗浄（膨潤）した。反応容器にＤＭＦ（２．０～３．０ｍＬ、１～２回）を加え、混合物を１０分間定期的に撹拌した後、フリットを通して溶媒を排出した。場合によっては、樹脂を次のように洗浄（膨潤）した。反応容器にＣＨ２Ｃｌ２（３～５ｍＬ、２回）を加え、混合物を３０分間定期的に撹拌し、フリットを通して溶媒を排出した。次いで、ＤＭＦ（２．０～３．０ｍＬ、１～６回）を加え、混合物を２～１０分間定期的に撹拌した後、フリットを通して溶媒を排出した。
シングルカップリング手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ＤＭＦ（２．５～３．７５ｍＬ）を３回加え、その際、混合物を３０秒間撹拌した後、各回フリットを通して溶媒を排出した。樹脂にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０～３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０～３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。場合によっては、脱保護ステップが３回実施された。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（２．５～３．７５ｍＬ）を容器に加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、２．０～２．５ｍＬ、８～１０当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０～１．２５ｍＬ、８～１０当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０～１．２５ｍＬ、２０当量）を加えた。混合物を３０～１２０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（２．５～３．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
シングルカップリングの手動添加手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ＤＭＦ（３．０～３．７５ｍＬ）を３回加え、その際、混合物を３０秒間撹拌した後、各回フリットを通して溶媒を排出した。樹脂にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０～３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０～３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。混合物を５．０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（３．０～３．７５ｍＬ）を容器に加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、予め混合したアミノ酸（２．０～５．０当量）およびＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．０～５．０当量）、次いで、ＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、４．０～１０．０当量）を、アミノ酸、ＨＡＴＵおよびＮＭＭのモル比、１：１：２で、加えた。混合物を２～６時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して４回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（３．７５ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
ダブルカップリング手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ＤＭＦ（２．５～３．７５ｍＬ）を３回加え、その際、混合物を３０秒間撹拌した後、各回フリットを通して溶媒を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０～３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０～３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（３．０～３．７５ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、２．０～２．５ｍＬ、８～１０当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０～１．２５ｍＬ、１０当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０～１．２５ｍＬ、１６～２０当量）を加えた。混合物を１時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂をＤＭＦ（３．０～３．７５ｍＬ）で２回洗浄し、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、各回フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、２．０～２．５ｍＬ、８～１０当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０～１．２５ｍＬ、８～１０当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０～１．２５ｍＬ、１６～２０当量）を加えた。混合物を１～２時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（３．０～３．７５ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
ペプトイドのインストール（５０μｍｏｌ）手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（３．７５ｍＬ）を容器に加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にブロモ酢酸（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．５ｍＬ、１０当量）、次いで、ＤＩＣ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．５ｍＬ、１０当量）を加えた。混合物を６０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して２回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（３．７５ｍＬ）を容器に加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にアミン（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．５ｍＬ、１０当量）を加え、混合物を６０分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（３．７５ｍＬ）を容器に加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
無水クロロ酢酸カップリング
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ＤＭＦ（３．０～３．７５ｍＬ）を３回加え、その際、混合物を３０秒間撹拌した後、各回フリットを通して溶媒を排出した。前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０～３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０～３．７５ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＭＦ（３．０～３．７５ｍＬ）を容器の上部から加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に無水クロロ酢酸溶液（ＤＭＦ中０．４Ｍ、３．０～３．７５ｍＬ、３０当量）、次いで、ＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、２．５ｍＬ、４０当量）を加えた。混合物を１５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように１回洗浄した。ＤＭＦ（５．０～６．２５ｍＬ）を容器の上部から加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に無水クロロ酢酸溶液（ＤＭＦ中０．４Ｍ、３．７５ｍＬ、３０当量）、次いで、ＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、２．５ｍＬ、４０当量）を加えた。混合物を１５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（２．５ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して４回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＣＭ（２．５ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を、窒素流を使用して１０分間乾燥させた後、次のステップで直接使用した。
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ（シンフォニーＸ）法
全ての操作は、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて自動化して実施した。特に断りのない限り、すべての手順は底部にフリットを備えた４５ｍＬポリプロピレン反応容器で実施した。反応容器は、容器の底部と上部の両方を介してＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｘペプチド合成装置に接続されている。ＤＭＦおよびＤＣＭは容器の上部から加えることができ、容器の側面を均等に洗い流す。残りの試薬は反応容器の底部から加えられ、フリットを通過して樹脂と接触する。すべての溶液は反応容器の底部から除去される。「定期的な撹拌」とは、底部フリットを通過するＮ２ガスの短いパルスを意味し、パルスは約５秒続き、３０秒ごとに発生する。「シングルショット」添加モードとは、シングルショットファルコンチューブに含まれるすべての溶液（通常は５ｍＬ未満の任意の体積）を添加することを意味する。アミノ酸溶液は、通常、調製から２週間を超えて使用しない。ＨＡＴＵ溶液は、調製後１４日以内に使用した。
シーバーアミド樹脂＝９－Ｆｍｏｃ－アミノキサンテン－３－イルオキシ－ポリスチレン樹脂、ここで、「３－イルオキシ」は、ポリスチレン樹脂への結合の位置およびタイプを表す。使用される樹脂は、シーバー（Ｓｉｅｂｅｒ）リンカー（窒素においてＦｍｏｃ保護）を有するポリスチレンであり、１００－２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．７１ｍｍｏｌ／ｇローディングである。
Ｒｉｎｋ＝（２，４－ジメトキシフェニル）（４－アルコキシフェニル）メタンアミン、ここで、「４－アルコキシ」は、ポリスチレン樹脂への結合の位置およびタイプを表す。使用される樹脂は、リンク（Ｒｉｎｋ）リンカー（窒素においてＦｍｏｃ保護）を有するメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）ポリマー（ポリスチレン）であり、１００－２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．５６ｍｍｏｌ／ｇローディングである。
２－クロロトリチルクロリド樹脂（２－クロロトリフェニルメチルクロリド樹脂）、５０－１５０メッシュ、１％ＤＶＢ、１．５４ｍｍｏｌ／ｇローディング。Ｆｍｏｃ－グリシン－２－クロロトリチルクロリド樹脂、２００－４００メッシュ、１％ＤＶＢ、０．６３ｍｍｏｌ／ｇローディング。
ＰＬ－ＦＭＰ樹脂：（４－ホルミル－３－メトキシフェノキシメチル）ポリスチレン。
使用される一般的なアミノ酸を以下に列挙し、括弧内に側鎖保護基を示す：
Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｂｉｐ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｈｙｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｎｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－［Ｎ－Ｍｅ］Ａｌａ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－［Ｎ－Ｍｅ］Ｎｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）－ＯＨ，Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓａｒ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、およびそれらに対応するＤ－アミノ酸。
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ法」の手順は、０．０５０ｍｍｏｌスケールで実施される実験を表しており、このスケールは、樹脂に結合したＳｉｅｂｅｒまたはＲｉｎｋまたは２－クロロトリチルまたはＰＬ－ＦＭＰの量によって決定される。このスケールは、上記のＳｉｅｂｅｒアミド樹脂の約７０ｍｇに相当する。すべての手順は、記載されている量をスケールの倍数で調整することで、０．０５０ｍｍｏｌを超えたり下回ったりするスケールにすることができる。アミノ酸カップリングの前に、すべてのペプチド合成シーケンスは、以下で「樹脂膨潤手順」として説明する樹脂膨潤手順から開始した。アミノ酸の第一級アミンＮ末端へのカップリングには、以下に説明する「シングルカップリング手順」を使用した。第二級アミンのＮ末端、またはＡｒｇ（Ｐｂｆ）－およびＤ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－またはＤ－ＬｅｕのＮ末端へのアミノ酸のカップリングには、以下に説明する「ダブルカップリング手順」または「シングルカップリング２時間手順」を使用した。特に断りのない限り、自動合成の最後のステップは、「クロロアセチル無水物のインストール」と呼ばれるアセチル基のインストールである。すべての合成は、「標準的な最終すすぎおよび乾燥の手順」として説明されている、最終のすすぎおよび乾燥のステップで終了する。
樹脂膨潤手順
４５ｍＬのポリプロピレン固相反応容器に、シーバーアミド樹脂（７０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を加えた。樹脂を次のように３回洗浄（膨潤）した。反応容器に、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え「ＤＭＦトップ洗浄」し、混合物を３分間定期的に撹拌した後、フリットを通して溶媒を排出した。
シングルカップリング手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、２．０ｍＬ、８当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０ｍＬ、８当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１～２時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
シングルカップリング４当量手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、１．０ｍＬ、４当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．２Ｍ、１．０ｍＬ、４当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１～２時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
ダブルカップリング手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、２．０ｍＬ、８当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０ｍＬ、８当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して２回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、２．０ｍＬ、８当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０ｍＬ、８当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１～２時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
ダブルカップリング４当量手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、１．０ｍＬ、４当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．２Ｍ、１．０ｍＬ、４当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して２回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に、アミノ酸（ＤＭＦ中０．２Ｍ、１．０ｍＬ、４当量）、次いで、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．２Ｍ、１．０ｍＬ、４当量）、最後にＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１～２時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
シングルカップリングの手動添加手順Ａ
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応を一時停止した。反応容器を開け、ＤＭＦ（１～１．５ｍＬ）液の非天然アミノ酸（２～４当量）を、容器の底を機器に取り付けたまま、容器の上部からピペットを使用して手動で加え、次いで、容器を閉じた。自動プログラムを再開し、ＨＡＴＵ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０ｍＬ、８当量）、およびＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０ｍＬ、１６当量）を順次加えた。混合物を２～３時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
シングルカップリングの手動添加手順Ｂ
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応を一時停止した。反応容器を開け、ＤＭＦ（１～１．５ｍＬ）液の非天然アミノ酸（２～４当量）を、容器の底を機器に取り付けたまま、容器の上部からピペットを使用して手動で加え、続いて、ＨＡＴＵ（２～４当量、非天然アミノ酸と同じ当量）を手動で加え、次いで、容器を閉じた。自動プログラムを再開し、ＮＭＭ（ＤＭＦ中０．８Ｍ、１．０ｍＬ、１６当量）を順次加えた。混合物を２～３時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
シングルカップリングの手動添加手順Ｃ
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応を一時停止した。反応容器を開け、ＨＡＴＵ（非天然アミノ酸に対して等モル量）およびＮＭＭ（４～８当量）を含むＤＭＦ（１～１．５ｍＬ）液の非天然アミノ酸（２～４当量）を、容器の底を機器に取り付けたまま、容器の上部からピペットを使用して手動で加えた。自動プログラムを再開し、混合物を２～３時間定期的に撹拌し、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
シングルカップリングの手動添加手順Ｄ
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応を一時停止した。反応容器を開け、ＤＩＣ（非天然アミノ酸に対して等モル量）含むＤＭＦ（１×１．５ｍＬ）液の非天然アミノ酸（２～４当量）、およびＨＯＡｔ（非天然アミノ酸に対して等モル量）を、容器の底部を機器に取り付けたまま、容器の上部からピペットを使用して手動で加えた。自動プログラムを再開し、混合物を２～３時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
ペプトイドのインストール（５０μｍｏｌ）手順
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（３．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にブロモ酢酸（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０ｍＬ、８当量）、次いで、ＤＩＣ（ＤＭＦ中０．４Ｍ、１．０ｍＬ、８当量）を加えた。混合物を１時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して２回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（４．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にアミン（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．０ｍＬ、１６当量）を加えた。混合物を１時間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（３．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
無水クロロ酢酸カップリング
前のステップからの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０ｍＬ）を加えた。混合物を３．５分間または５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、３．０ｍＬ）を加えた。混合物を５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（３．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に無水クロロ酢酸溶液（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．５ｍＬ、２０当量）、次いで、Ｎ－メチルモルホリン（ＤＭＦ中０．８Ｍ、２．０ｍＬ、３２当量）を加えた。混合物を１５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように２回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（３．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１．０分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。反応容器に無水クロロ酢酸溶液（ＤＭＦ中０．４Ｍ、２．５ｍＬ、２０当量）、次いで、Ｎ－メチルモルホリン（ＤＭＦ中０．８Ｍ、２．０ｍＬ、３２当量）を加えた。混合物を１５分間定期的に撹拌し、次いで、フリットを通して反応溶液を排出した。樹脂を次のように連続して５回洗浄した。洗浄ごとに、容器の上部からＤＭＦ（３．０ｍＬ）を加え、得られた混合物を定期的に１．０分間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
最終のすすぎと乾燥の手順
前のステップからの樹脂を次のように連続して６回洗浄した。洗浄ごとに、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）を容器の上部から加え、得られた混合物を定期的に３０秒間撹拌した後、フリットを通して溶液を排出した。次いで、窒素流を使用して樹脂を１０分間乾燥させた。得られた樹脂を次のステップで直接使用した。
一般的な脱保護、環化、Ｎ－メチル化、クリック、スズキの手順
全体的脱保護法Ａ
特に断りのない限り、すべての操作は手動で行われた。「全体的脱保護法」（Global Deprotection Method）の手順では、０．０５０ｍｍｏｌスケールで実施される実験について説明する。ここで、スケールは、Ｓｉｅｂｅｒ、Ｒｉｎｋ、Ｗａｎｇ、クロロトリチルの樹脂、またはＰＬ－ＦＭＰ樹脂の量によって決まる。この手順は、記載されている量をスケールの倍数で調整することにより、０．０５ｍｍｏｌスケールを超えるスケールにすることができる。５０ｍＬのＦａｌｃｏｎチューブに、樹脂および２．０×５．０ｍＬの切断カクテル（ＴＦＡ：ＴＩＳ：ＤＴＴ、ｖ／ｖ／ｗ＝９５：５：１）を加えた。個々の直鎖ペプチドごとに使用される切断カクテルの量は変化する。一般に、ペプチドの側鎖に存在する保護基の数が多いほど、より多くの量の切断カクテルが必要になる。混合物を室温で１～２時間、通常は約１．５時間、振盪した。懸濁液に３５～５０ｍＬの冷えたジエチルエーテルを加えた。混合物を激しく混合すると、かなりの量の白色固体が沈殿した。混合物を３～５分間遠心分離し、次いで、溶液をデカントして固体から除き、廃棄した。固体をＥｔ２Ｏ（３０×４０ｍＬ）に懸濁し、次いで、混合物を３～５分間遠心分離し、次いで、溶液をデカントして固体から除き、廃棄した。最後に、固体をＥｔ２Ｏ（３０～４０ｍＬ）に懸濁し、混合物を３～５分間遠心分離し、溶液をデカントして固体から除き、廃棄して、窒素流下および／またはハウスバキューム下で乾燥させた後、切断された樹脂とともに白色からオフホワイトの固体として、粗ペプチドを得た。粗製物を同日に環化ステップに使用した。
全体的脱保護法Ｂ
特に断りのない限り、すべての操作は手動で行われた。「全体的脱保護法」（Global Deprotection Method）の手順では、０．０５０ｍｍｏｌスケールで実施される実験について説明する。ここで、スケールは、Ｓｉｅｂｅｒ、Ｒｉｎｋ、Ｗａｎｇ、クロロトリチルの樹脂、またはＰＬ－ＦＭＰ樹脂の量によって決まる。この手順は、記載されている量をスケールの倍数で調整することにより、０．０５ｍｍｏｌスケールを超えるスケールにすることができる。３０ｍｌのｂｉｏ－ｒａｄポリプレップクロマトグラフィーカラムに、樹脂および２．０～５．０ｍＬの切断カクテル（ＴＦＡ：ＴＩＳ：Ｈ２Ｏ：ＤＴＴ、ｖ／ｖ／ｗ＝９４：３：３：１）を加えた。個々の直鎖ペプチドごとに使用される切断カクテルの量は変化する。一般に、ペプチドの側鎖に存在する保護基の数が多いほど、より多くの量の切断カクテルが必要になる。混合物を室温で１～２時間、通常は約１．５時間、振盪した。該酸性溶液を４０ｍＬの冷えたジエチルエーテル中に排出し、樹脂を０．５ｍＬのＴＦＡ溶液で２回洗浄した。混合物を３～５分間遠心分離し、溶液をデカントして固体から除き、廃棄した。固体をＥｔ２Ｏ（３５ｍＬ）に懸濁し、次いで、混合物を３～５分間遠心分離し、溶液をデカントして固体から除き、廃棄した。最後に、固体をＥｔ２Ｏ（３５ｍＬ）に懸濁し、混合物を３～５分間遠心分離し、そして、溶液をデカントして固体から除き、廃棄して、窒素流下および／またはハウスバキューム下で乾燥させた後、白色からオフホワイトの固体として、粗ペプチドを得た。粗製物を同日に環化ステップに使用した。
環化法Ａ
特に断りのない限り、すべての操作は手動で行われた。「環化法Ａ」の手順では、０．０５ｍｍｏｌスケールで実施される実験について説明する。ここで、スケールは、ペプチドの生成に使用された、Ｓｉｅｂｅｒ、Ｒｉｎｋ、クロロトリチル、Ｗａｎｇ、またはＰＬ－ＦＭＰの樹脂の量によって決まる。このスケールは、この手順で使用されるペプチドの量の直接の決定に基づくものではない。この手順は、記載されている量をスケールの倍数で調整することにより、０．０５ｍｍｏｌスケールを超えるスケールにすることができる。全体的な脱保護からの粗ペプチド固体を室温で５０ｍＬ遠心分離管内のＤＭＦ（３０～４５ｍＬ）に溶解し、その溶液にＤＩＥＡ（１．０～２．０ｍＬ）を加え、反応混合物のｐＨ値を８かそれ以上にした。次いで、溶液を室温で、数時間、一晩、または２～３日間振盪させた。反応溶液をｓｐｅｅｄｖａｃまたはｇｅｎｅｖａｃ ＥＺ－２で濃縮乾燥し、次いで、粗残渣をＤＭＦまたはＤＭＦ／ＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解した。濾過後、この溶液を単一化合物の逆相ＨＰＬＣ精製に供して、目的の環状ペプチドを得た。
環化法Ｂ
特に断りのない限り、すべての操作は手動で行われた。「環化法Ｂ」の手順では、０．０５ｍｍｏｌスケールで実施される実験について説明する。ここで、スケールは、ペプチドの生成に使用された、Ｓｉｅｂｅｒ、Ｒｉｎｋ、クロロトリチル、Ｗａｎｇ、またはＰＬ－ＦＭＰの樹脂の量によって決まる。このスケールは、この手順で使用されるペプチドの量の直接の決定に基づくものではない。この手順は、記載されている量をスケールの倍数で調整することにより、０．０５ｍｍｏｌスケールを超えるスケールにすることができる。５０ｍＬ遠心分離管内の粗ペプチド固体を、ＣＨ３ＣＮ／０．１Ｍ重炭酸アンモニウム水溶液（１：１、ｖ／ｖ、３０～４５ｍＬ）に溶解した。次いで、溶液を室温で数時間振盪させた。反応溶液をｐＨ試験紙とＬＣＭＳでチェックし、０．１Ｍ重炭酸アンモニウム水溶液（５～１０ｍＬ）を加えるとｐＨを８以上に調整することができた。ＬＣＭＳにおける線状ペプチドの消失に基づいて反応が完了した後、反応物をｓｐｅｅｄｖａｃまたはｇｅｎｅｖａｃ ＥＺ－２で濃縮乾燥した。得られた残渣にＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ（２：３、ｖ／ｖ、３０ｍＬ）を加え、ｓｐｅｅｄｖａｃまたはｇｅｎｅｖａｃ ＥＺ－２で濃縮乾燥した。この手順を繰り返した（通常は２回）。次いで、得られた粗固体をＤＭＦまたはＤＭＦ／ＤＭＳＯまたはＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／ギ酸に溶解した。濾過後、溶液を単一化合物の逆相ＨＰＬＣ精製に供して、目的の環状ペプチドを得た。
樹脂上のＮ－メチル化の方法Ａ
Ｂｉｏ－Ｒａｄチューブ内の樹脂（５０μｍｏｌ）にＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）を加え、室温で５分間振盪した。２－ニトロベンゼン－１－スルホニルクロリド（４４．３ｍｇ、２００μｍｏｌ、４当量）を加え、続いて、２，４，６－トリメチルピリジン（０．０４０ｍＬ、３００μｍｏｌ、６当量）を加えた。反応物を室温で２時間振盪した。溶媒を排出し、樹脂をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ×３）、ＤＭＦ（５ｍＬ×３）、次いでＴＨＦ（５ｍＬ×３）ですすいだ。樹脂にＴＨＦ（１ｍＬ）を加えた。トリフェニルホスフィン（６５．６ｍｇ、２５０μｍｏｌ、５当量）、メタノール（０．０２０ｍＬ、５００μｍｏｌ、１０当量）、およびアゾジカルボン酸ジエチルまたはＤＩＡＤ（０．０４０ｍＬ、２５０μｍｏｌ、５当量）を加えた。混合物を室温で２～１６時間振盪した。反応を繰り返した。トリフェニルホスフィン（６５．６ｍｇ、２５０μｍｏｌ、５当量）、メタノール（０．０２０ｍＬ、５００μｍｏｌ、１０当量）、およびアゾジカルボン酸ジエチルまたはＤＩＡＤ（０．０４０ｍＬ、２５０μｍｏｌ、５当量）を加えた。混合物を室温で１～１６時間振盪した。溶媒を排出し、樹脂をＴＨＦ（５ｍＬ×３）およびＣＨＣｌ３（５ｍＬ×３）で洗浄した。樹脂を風乾し、次のステップで直接使用した。樹脂をＤＭＦ（２ｍＬ）中で振盪した。２－メルカプトエタノール（３９．１ｍｇ、５００μｍｏｌ）を加え、続いて、ＤＢＵ（０．０３８ｍＬ、２５０μｍｏｌ、５当量）を加えた。反応物を１．５時間振盪した。溶媒を排出した。樹脂をＤＭＦで洗浄した（４回）。風乾し、次のステップで直接使用した。
樹脂上のＮ－メチル化の方法Ｂ（Turner, R.A. et al, Org. Lett., 15(19):5012-5015 (2013)）
特に断りのない限り、すべての操作は手動で行われた。「樹脂上のＮ－メチル化の方法Ａ」の手順では、０．１００ｍｍｏｌスケールで実施される実験について説明する。ここで、スケールは、ペプチドの生成に使用された樹脂に結合した、ＳｉｅｂｅｒまたはＲｉｎｋリンカーの量によって決まる。このスケールは、この手順で使用されるペプチドの量の直接の決定に基づくものではない。この手順は、記載されている量をスケールの倍数で調整することにより、０．１０ｍｍｏｌスケールを超えるスケールにすることができる。樹脂を２５ｍＬのフリットシリンジに移した。樹脂にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、５．０ｍＬ）を加えた。混合物を３分間振盪し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂をＤＭＦ（４．０ｍＬ）で３回洗浄した。反応容器にピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０、ｖ／ｖ、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を３分間振盪し、次いで、フリットを通して溶液を排出した。樹脂をＤＭＦ（４．０ｍＬ）で３回、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）で３回、順次洗浄した。樹脂をＤＭＦ（２．０ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸エチル（０．１１９ｍｌ、１．００ｍｍｏｌ）、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（０．１８１ｍｌ、１．２０ｍｍｏｌ）に懸濁した。混合物をシェーカー上に６０分間置いた。フリットを通して溶液を排出した。樹脂をＤＭＦ（４．０ｍＬ）で３回、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）で３回、順次洗浄した。樹脂を乾燥ＴＨＦ（２．０ｍＬ）で３回洗浄して、残留水を除去した。オーブンで乾燥させた４．０ｍＬバイアルに、ＴＨＦ（１．０ｍＬ）およびトリフェニルホスフィン（１３１ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（２０ｍｇ）を加えた。溶液を樹脂に移し、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（０．０９７ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。樹脂を１５分間撹拌した。フリットを通して溶液を排出し、樹脂を乾燥ＴＨＦ（２．０ｍＬ）で３回洗浄して、残留水を除去した。オーブンで乾燥させた４．０ｍＬバイアルに、ＴＨＦ（１．０ｍＬ）、トリフェニルホスフィン（１３１ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）および乾燥４Åモレキュラーシーブ（２０ｍｇ）を加えた。溶液を樹脂に移し、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（０．０９７ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。樹脂を１５分間撹拌した。フリットを通して溶液を排出した。樹脂をＤＭＦ（４．０ｍＬ）で３回、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）で３回、順次洗浄した。樹脂をエタノール（１．０ｍＬ）およびＴＨＦ（１．０ｍＬ）に懸濁し、水素化ホウ素ナトリウム（３７．８ｍｇ、１．０００ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、排出した。樹脂をＤＭＦ（４．０ｍＬ）で３回、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）で３回、順次洗浄した。
樹脂上のＮ－アルキル化の手順の方法Ａ
アルキル化の基に対応するアルコール（０．０４６ｇ、１．０００ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（０．１３１ｇ、０．５００ｍｍｏｌ）、およびＤＩＡＤ（０．０９７ｍＬ、０．５００ｍｍｏｌ）を含んだ３ｍＬのＴＨＦ溶液を、ノシル化樹脂（nosylated resin）（０．１８６ｇ、０．１００ｍｍｏｌ）に加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。樹脂をＴＨＦ（５ｍＬ）で３回洗浄し、上記の手順を１～３回繰り返した。反応の進行は、５０μＬのＴＩＳを含んだ１ｍＬのＴＦＡ溶液で１．５時間処理した少量の樹脂サンプルのＴＦＡ微小切断によってモニタリングした。
樹脂上のＮ－アルキル化の手順の方法Ｂ
ノシル化樹脂（０．１００ｍｍｏｌ）をＮ－メチルピロリドン（ＮＭＰ）（３ｍＬ）で３回洗浄した。ＮＭＰ（３ｍＬ）、臭化アルキル（２０当量、２．０００ｍｍｏｌ）、およびＤＢＵ（２０当量、０．３０１ｍＬ、２．０００ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。樹脂をＮＭＰ（３ｍＬ）で洗浄し、上記の手順をもう一度繰り返した。反応の進行は、５０μＬのＴＩＳを含んだ１ｍＬのＴＦＡ溶液で１．５時間処理した少量の樹脂サンプルのＴＦＡ微小切断によってモニタリングした。
Ｎ－ノシレート形成手順
コリジン（１０当量）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液を樹脂に加え、続いて、Ｎｏｓ－Ｃｌ（８当量）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。樹脂をＤＣＭ（４ｍＬ）で３回、ＤＭＦ（４ｍＬ）で３回洗浄した。ＤＣＭとＤＭＦの交互洗浄を３回繰り返し、続いて、４回のＤＣＭ洗浄（４ｍＬ）を最終１セット行った。
Ｎ－ノシレート除去手順
樹脂（０．１００ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（３ｍＬ）の３回洗浄、およびＮＭＰ（３ｍＬ）の３回洗浄で、膨潤させた。ＮＭＰ（３ｍＬ）、ＤＢＵ（０．０７５ｍＬ、０．５００ｍｍｏｌ）、および２－メルカプトエタノール（０．０７１ｍＬ、１．０００ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に加え、反応混合物を室温で５分間撹拌した。濾過し、ＮＭＰ（３ｍＬ）で洗浄した後、樹脂を、ＮＭＰ（３ｍＬ）、ＤＢＵ（０．０７５ｍＬ、０．５００ｍｍｏｌ）、および２－メルカプトエタノール（０．０７１ｍＬ、１．０００ｍｍｏｌ）の溶液で、室温で５分間、再処理した。樹脂を、ＮＭＰ（３ｍＬ）で３回、ＤＭＦ（４ｍＬ）で４回、ＤＣＭ（４ｍＬ）で４回洗浄し、Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置での配列アセンブリの完了のため、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ反応容器に戻した。
ＰＬ－ＦＭＰ樹脂上にアミンをプレロードするための一般的手順
ＰＬ－ＦＭＰ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、１．００ｍｍｏｌ／ｇ置換）を室温でＤＭＦ（２０ｍＬ／ｍｍｏｌ）によって膨潤させた。溶媒を排出し、１０ｍｌのＤＭＦを加え、続いて、アミン（２．５ｍｍｏｌ）および酢酸（０．３ｍＬ）を反応容器に加えた。１０分間撹拌した後、トリアセトキシヒドロホウ酸ナトリウム（２．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を一晩撹拌した。樹脂を、ＤＭＦ（１回）、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ／ＡｃＯＨ（６：３：１）（２回）、ＤＭＦ（２回）、ＤＣＭ（３回）で洗浄し、乾燥させた。得られたアミンがプレロードされたＰＬ－ＦＭＰ樹脂は、次の方法で確認することができる。上記の樹脂１００ｍｇを取り、ＤＣＭ（２ｍＬ）中で塩化ベンゾイル（５当量）およびＤＩＥＡ（１０当量）と室温で０．５時間反応させた。樹脂をＤＭＦ（２回）、ＭｅＯＨ（１回）、およびＤＣＭ（３回）で洗浄した。次いで、サンプルを４０％ＴＦＡ／ＤＣＭ（１時間）で切断した。生成物を収集し、ＨＰＬＣおよびＭＳによって分析した。収集したサンプルを乾燥させ、重量を測定して樹脂ローディング（担持）を計算した。
Ｃｌ－トリチル樹脂上にＦｍｏｃ－アミノ酸をプレロードするための一般手順
フリットを備えたガラス反応容器に、２－クロロ－クロロトリチル樹脂メッシュ５０－１５０（１．５４ミリ当量（meq）／グラム、１．９４グラム、３．０ｍｍｏｌ）を加え、ＤＣＭ（５ｍＬ）中で５分間膨潤させた。酸（３．００ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液を樹脂に加え、続いて、ＤＩＥＡ（２．６１ｍｌ、１５．００ｍｍｏｌ、５．０当量）を加えた。反応物を室温で６０分間振盪した。ＤＩＥＡ（０．５ｍＬ）およびメタノール（３ｍＬ）を加え、反応物をさらに１５分間振盪した。フリットを通して反応溶液を濾過し、樹脂を、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ジエチルエーテル（４×５ｍＬ）ですすぎ、窒素流を使用して乾燥させた。樹脂ローディング量は以下のようにして決定できる。
樹脂のサンプル（１３．１ｍｇ）を２０％ピペリジン／ＤＭＦ（ｖ／ｖ、２．０ｍＬ）で、振盪しながら１０分間処理した。この溶液１ｍＬを２５．０ｍＬメスフラスコに移し、メタノールで総量２５．０ｍＬに希釈した。２０％ピペリジン／ＤＭＦのブランク溶液（ｖ／ｖ、１．０ｍＬ）をメスフラスコでメタノールにより２５．０ｍＬに希釈した。ＵＶを３０１ｎｍに設定した。ブランク溶液で吸光度をゼロにし、その後、サンプル溶液を読み取ると、吸光度は１．９４１１であった。樹脂のローディング量は、０．６７３６ｍｍｏｌ／ｇ（（１．９４１１／２０ｍｇ）×６．９４＝０．６７３６）と測定された。
樹脂上のクリック反応の方法Ａ
この手順は、０．０５０ｍｍｏｌスケールで実施される実験について説明する。記載されている量をスケールの倍数で調整することにより、０．０５０ｍｍｏｌスケールを超えたり、下回ったりするスケールにすることができる。アルキン含有樹脂（各５０μｍｏｌ）をＢｉｏ－Ｒａｄチューブに移し、ＤＣＭ（２×５ｍＬ×５分）、次いで、ＤＭＦ（２×５ｍＬ×５分）で膨潤させた。２００ｍｌのボトルに、以下のものを３０倍量入れた：アスコルビン酸（ビタミンＣ、０．０２６ｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）、ビス（２，２，６，６－テトラメチル－３，５－ヘプタンジオナト）銅（ＩＩ）（１０．７５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）、２，６－ルチジン（０．０５８ｍＬ、０．５０ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１．５ｍＬ）、続いて、ＤＩＥＡ（０．０８７ｍｌ、０．５０ｍｍｏｌ）、および、実施例で使用される対応するアジド（１．０～２．０当量）。すべてが溶液になるまで混合物を撹拌した。上記のＢｉｏ－Ｒａｄチューブ内のＤＭＦを排出し、上記のクリック溶液（各３ｍＬ）を各Ｂｉｏ－Ｒａｄチューブに加えた。チューブをオービタルシェーカー上で一晩振盪した。フリットを通して溶液を排出した。樹脂をＤＭＦ（３×２ｍＬ）およびＤＣＭ（３×２ｍＬ）で洗浄した。
樹脂上のクリック反応の方法Ｂ
この手順は、０．０５０ｍｍｏｌスケールで実施される実験について説明する。記載されている量をスケールの倍数で調整することにより、０．０５０ｍｍｏｌスケールを超えたり、下回ったりするスケールにすることができる。アルキン含有樹脂（各５０μｍｏｌ）をＢｉｏ－Ｒａｄチューブに移し、ＤＣＭ（２×５ｍＬ×５分）、次いで、ＤＭＦ（２×５ｍＬ×５分）で膨潤させた。別のボトルで、４．０ｍＬのＤＭＳＯに窒素を１５分間バブリングした。ＤＭＳＯにヨウ化銅（９．５２ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ、１．０当量）（超音波処理）、ルチジン（５８μＬ、０．５００ｍｍｏｌ、１０．０当量）およびＤＩＥＡ（８７ｕＬ、０．０５０ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。溶液を再度窒素でパージした。フリットを通してＤＣＭを排出した。別のバイアル中で、アスコルビン酸（８．８ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ、１．０当量）を水（６００μＬ）に溶解した。溶液中に窒素を１０分間バブリングした。カップリングパートナーをチューブ内に分配し（０．０５０ｍｍｏｌ～０．１０ｍｍｏｌ、１．０～２．０当量）、続いて、ＤＭＳＯ銅および塩基溶液、最後にアスコルビン酸水溶液を分配した。溶液を窒素ブランケットで覆い、蓋をした。チューブをロータリーミキサー上に１６時間置いた。フリットを通して溶液を排出した。樹脂をＤＭＦ（３×２ｍＬ）およびＤＣＭ（３×２ｍＬ）で洗浄した。
樹脂上のスズキ反応の手順
Ｂｉｏ－Ｒａｄチューブに、４－ブロモ－フェニルアラニン側鎖を含むＮ末端Ｆｍｏｃ保護直鎖状ポリペプチドの乾燥Ｒｉｎｋ樹脂５０μｍｏｌを入れた。樹脂をＤＭＦ（２×５ｍＬ）で膨潤させた。これに、ｐ－トリルボロン酸（０．０１７ｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（０．２ｍＬ、０．４００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２ｍＬ）を加え、続いて、触媒［１，１’－ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）］フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）［ＰｄＣｌ２（ｄｔｂｐｆ）］（３．２６ｍｇ、５．００μｍｏｌ）を加えた。チューブを室温で一晩振盪した。溶液を排出し、樹脂を、ＤＭＦ（５×３ｍＬ）で洗浄し、続いて、ＤＣＭ（２×３ｍＬ）、次にＤＭＦ（２×３ｍＬ）、次いでＤＣＭ（５×３ｍＬ）で交互に洗浄した。少量の樹脂サンプルを、２３５μＬのＴＩＳを含む１ｍｌのＴＦＡ液を使用して、室温で１時間マイクロ切断した。樹脂の残りは、ペプチドカップリングまたはＮ末端のクロロ酢酸キャッピングの次のステップで使用した。
液相クリック反応の方法Ａ
２０ｍｌのシンチレーションバイアルに、必要な量の１００倍のアスコルビン酸ナトリウム（ナトリウム（Ｒ）－２－（（Ｓ）－１，２－ジヒドロキシエチル）－４－ヒドロキシ－５－オキソ－２，５－ジヒドロフラン－３－オレート）、および硫酸銅（ＩＩ）五水和物（ＣｕＳＯ４：アスコルビン酸ナトリウムのモル比：１：３～１：５）を加えた。反応物を水で希釈した。この溶液を室温で１～１０分間振盪した。得られた黄色がかったスラリーをそれぞれの反応物に加えた。
アルキンおよびアジド（１．０～２．０当量）を含むバイアルに、必要な量の上記銅溶液（ＣｕＳＯ４：アルキンの０．３～１．０当量）を加えた。混合物を室温で１～３時間振盪し、ＬＣ／ＭＳによって進行をモニタリングした。必要に応じて、追加量のアジドまたは銅溶液を加えて、トリアゾールの形成を促進することができる。完了後、混合物をＣＨ３ＣＮ：ＮＨ４ＣＯ３水溶液（ｖ／ｖ、１：１）で希釈し、濾過し、同日に逆相ＨＰＬＣ精製により精製した。
液相クリック反応の方法Ｂ
ＣｕＳＯ４およびアスコルビン酸ナトリウムのストック溶液を、乾燥した１：２～１：３モル比の硫酸銅（ＩＩ）五水和物およびアスコルビン酸ナトリウムを、硫酸銅五水和物に関して０．１～０．３Ｍの濃度に希釈することによって、調製した。ペプチドアルキンのＤＭＦ溶液（０．０５～０．１Ｍ）に、実施例で使用される対応するアジド（１．０～２．０当量）を加え、続いて、上記の新たに調製した銅溶液（０．０３～１．０当量）を加えた。混合物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳでモニタリングした。必要に応じて、追加量のアジドまたは銅溶液を加えて、トリアゾールの形成を促進することができる。完全に変換した後、混合物を希釈し、濾過し、同日に逆相ＨＰＬＣにより精製した。
一般的な精製手順
粗製物質を、以下の条件を使用して分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：特定の割合のＢで０分間保持し、その後２０～３０分間かけてＢを前記割合からより高い割合に直線的に増加させ、その後１００％Ｂで０分間保持する；流量：２０～４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳおよびＵＶシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、エバポレーションにより乾燥させた。直交（orthogonal）分析データに基づいて材料が純粋でない場合は、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：特定の割合のＢで０分間保持し、その後２０～３０分間かけてＢを開始割合から直線的に増加させ、その後１００％Ｂで０分間保持する；流量：２０～４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収率と純度を測定した。
あるいは、初期分析データに基づいて、以下の条件を使用して分取ＬＣ／ＭＳによって粗製物質を精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有：移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：特定の割合のＢで０分間保持し、その後２０分間かけてＢを開始割合から直線的に増加させ、その後１００％Ｂで０分間保持する；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、エバポレーションにより乾燥させた。直交分析データに基づいて材料が純粋でない場合は、以下の条件を使用して分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：特定の割合のＢで０分間保持し、その後２０分間かけてＢを前記割合からより高い割合に直線的に増加させ、その後１００％Ｂで０分間保持する；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳおよびＵＶシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収率と純度を測定した。
非天然アミノ酸の合成
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）－３－（１－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸の製造
スキーム
Figure 2024512074000031
ステップ１
０℃の、（Ｓ）－ベンジル ２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１Ｈ－インドール－３－イル）プロパノエート（２５．０ｇ、５８．３ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（２０．９ｇ、６４．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液に、２－ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（９．３６ｍＬ、６４．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１８時間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。反応混合物を氷水：１ＮのＨＣｌ（１：１）水溶液に注ぎ、次いで、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、収集し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、真空下で濃縮した。得られた固体をフラッシュクロマトグラフィー（３３０ｇのカラム、２０カラム容量にわたる０～５０％ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ）に付して、（Ｓ）－ベンジル ２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパノエートを白色固体として得た（２９．６ｇ、９３％）。
ステップ２
（Ｓ）－ベンジル ２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパノエート（２９．６ｇ、５４．５ｍｍｏｌ）、およびＰｄ－Ｃ（１．４５ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）液の混合物に、室温で１０分間、Ｈ２をバブリングした。次いで、変換をＬＣＭＳによってモニタリングしながら、混合物をＨ２の加圧下で撹拌した。４８時間後、反応混合物を珪藻土で濾過し、蒸発処理により、粗製の（Ｓ）－２－アミノ－３－（１－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（１７．０ｇ）を得て、これをさらに精製することなくステップ３に用いた。
ステップ３
（Ｓ）－２－アミノ－３－（１－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（５．１７ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）、および重炭酸ナトリウム（６．８ｇ、８１ｍｍｏｌ）のアセトン：水（５０．０ｍＬ：１００ｍＬ）溶液に、（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）カーボネート（５．４８ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩撹拌すると、ＬＣＭＳ分析により完全な変換が示された。激しく撹拌した混合物を、１ＮのＨＣｌ水溶液をゆっくり加えることにより酸性化した。酸性化のあと、混合物をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、次いで、単離した有機相を、水、続いてブラインで洗浄した。有機層を収集し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して、粗生成物を得た。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（３３０ｇカラム、２０～８０％のＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ、２０カラム、２５容量）で精製して、（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（ｔｅｒｔブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸を白色泡状物として得た（７．２６ｇ、８３％）。
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) δ 7.80 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.39 (t, J=7.5 Hz, 2H), 7.32 - 7.22 (m, 3H), 7.18 (td, J=7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.08 (td, J=7.5, 0.9 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.54 (dd, J=8.4, 4.9 Hz, 1H), 4.36 - 4.23 (m, 2H), 4.23 - 4.14 (m, 1H), 30 3.43 - 3.35 (m, 2H), 3.25 - 3.09 (m, 1H), 1.55 - 1.38 (m, 9H). ESI-MS(+) m/z = 541.3 (M + H).
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（４－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエトキシ）フェニル）プロパン酸の製造
スキーム
Figure 2024512074000032
ステップ１
（Ｓ）－ベンジル ２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（４－ヒドロキシフェニル）プロパノエート（７０ｇ、１７３ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（３５．８ｇ、２５９ｍｍｏｌ）の冷却したＤＭＦ（３５０ｍＬ）撹拌溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル－２－ブロモアセテート（３０．６ｍＬ、２０７ｍｍｏｌ）を滴下して加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を１０％ブライン溶液（１０００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、水（５００ｍＬ）、飽和ブライン溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、無色のガム状物を得た。粗化合物を、溶離剤として２０％酢酸エチルを含む石油エーテルを使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体（７８ｇ、８５％）を得た。
ステップ２
（Ｓ）－ベンジル ２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（４－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエトキシ）フェニル）プロパノエート（７３ｇ、１４０ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（３０００ｍＬ）に溶解し、窒素で５分間パージした。上記のパージした混合物に、Ｐｄ／Ｃ（１８ｇ、１６．９１ｍｍｏｌ）を加え、３ｋｇの水素圧下で１５時間撹拌した。反応混合物を珪藻土床（セライト（登録商標））を通して濾過し、メタノール（１０００ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、白色固体（３６ｇ、８７％）を得た。
ステップ３
（Ｓ）－２－アミノ－３－（４－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエトキシ）フェニル）プロパン酸（３８ｇ、１２９ｍｍｏｌ）、および重炭酸ナトリウム（４３．２ｇ、５１５ｍｍｏｌ）の水（４４０ｍＬ）撹拌溶液に、ジオキサン（４４０ｍＬ）に溶解したＦｍｏｃ－ＯＳｕ（４３．４ｇ、１２９ｍｍｏｌ）を滴下して加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を１．５ＮのＨＣｌ（２００ｍＬ）および水（５００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、水（２５０ｍＬ）、飽和ブライン溶液（２５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、淡黄色ガム状物を得た。粗化合物を、溶離剤として６％ＭｅＯＨを含むクロロホルム液を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、淡緑色のガム状物を得た。このガム状物をさらに石油エーテルでトリチュレーションして、オフホワイトの固体を得た（４５ｇ、６７％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.86 - 12.58 (m, 1H), 7.88 (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.73 - 7.61 (m, 3H), 7.58 - 7.47 (m, 1H), 7.44 - 7.27 (m, 4H), 7.18 (d, J=8.5 Hz, 2H), 6.79 (d, J=8.5 Hz, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.25 - 4.10 (m, 4H), 3.34 (br s, 3H), 3.02 (dd, J=13.8, 4.3 Hz, 1H), 2.81 (dd, J=14.1, 10.5 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H).
リンカー／テール合成
（２Ｓ）－４－［（３５－アジド－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－ウンデカオキサペンタトリアコンタン－１－イル）カルバモイル］－２－（１６－スルホヘキサデカンアミド）ブタン酸の製造 （ＩＵＰＡＣ）
（４， Ｎ３－ＰＥＧ１１－γＧｌｕ－ＦＳＡ１６）
スキーム

ステップ１
１６－メルカプトヘキサデカン酸（５．３ｇ、１８．３７ｍｍｏｌ）を、撹拌子を備えた５００ｍｌ丸底フラスコに加えた。ギ酸（１７２ｍｌ、４４８５ｍｍｏｌ）を加え、続いて、過酸化水素（１２．３ｍｌ、１２０ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。混合懸濁液を空気に開放して６時間撹拌した。サンプル上に窒素を一晩かけて穏やかに流した。１６時間後、生成物はきれいな白色の粉末となった。６時間ポンプを作動させた後、そのまま使用した。６．１８ｇの化合物１を単離した。ＬＣＭＳ分析条件Ｏ：保持時間＝１．３０分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ３３７．０（Ｍ＋１）
還元的後処理を伴う精緻なチオール酸化工程：１６－メルカプトヘキサデカン酸（５．０７ｇ、１７．５７ｍｍｏｌ）を含んだギ酸（１７６ｍｌ）の撹拌スラリーに、過酸化水素（１１．７６ｍｌ、１１５ｍｍｏｌ）を、添加漏斗（約５～１０分以上）によって滴下して加えた。これを室温で６時間撹拌した。過酸化物テストストリップは、反応物表面上で陽性反応を示すが、濃い青色である。これは反応溶液に浸すと、黄色に変わった（カラースケールには記載されていない）。ＬＣＭＳは、目的の生成物が存在し、検出可能な量の出発物質がないことを示す（プログラムされたＭＷ値、ＵＶシグナルなし、ＡＡは＋／－イオンモード）。反応液を氷浴で冷却し、マニホールドに２方向窒素導入アダプターを取り付けた。ストッパーを取り付け、シリンジを介してストッパーを通してジメチルスルフィド（３．９０ｍｌ、５２．７ｍｍｏｌ）を滴下し始めた（約１ｍＬ／分）。ストリップでテストし、表面上が陽性、表面下が黄色である。残りのジメチルスルフィド（０．７１５ｍｌ、９．６７ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え始め、テストストリップでモニタリングした。全ての添加が近づくと、テストストリップは反応溶液の上に何も表示されなくなり、浸すと陽性反応が得られた。硫化物が約０．１ｍＬ残ると、ストリップは色を示さなくなり、色が変化しなくなった。氷浴を取り外し、１時間撹拌した。週末にかけて強い窒素気流下で濃縮した。高真空で４８時間真空濃縮し、７．６３ｇを単離した。生成物の構造と一致するＮＭＲは、残留溶媒（主にＤＭＳＯおよび水、微量のジメチルスルフィド）を示した。残留溶媒を考慮して、名目上ｗ％を７５％で使用した。
ステップ２
Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（１．６４０ｇ、３．８６ｍｍｏｌ）、およびＰＦＴＵ（１．６５１ｇ、３．８６ｍｍｏｌ）の乾燥混合物をＤＭＦ（１５ｍｌ）で希釈した。窒素下で撹拌しながら、ＤＩＥＡ（１．３４７ｍｌ、７．７１ｍｍｏｌ）をシリンジによりゆっくり加えた。１時間撹拌した後、定量化して移動するため最小限のＤＭＦを使用して、３５－アジド－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－ウンデカオキサペンタトリアコンタン－１－アミン（２．０ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１．５時間撹拌した後、反応物を１０％ＬｉＣｌでクエンチし、ＥｔＯＡｃで１回抽出した。得られた濃縮物を、９０／１０のＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出する順相ＩＳＣＯによって精製した。得られた油を１０ｍｌのＤＣＭで希釈し、次いで、１５ｍｌのＴＦＡで処理した。３／４時間後、反応物を濃縮乾燥し、８５／１５のＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出するＩＳＣＯクロマトグラフィーによって精製した。３．２０ｇの生成物を化合物２として単離した。ＬＣＭＳ分析条件Ｏ：保持時間＝１．４０分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ９２３．０８（Ｍ＋１）
ステップ３
クロロトリチル樹脂（４３３４ｍｇ、１３．８８ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭで５回洗浄し、次いで、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈した。次いで、この溶液に前記２（３２００ｍｇ、３．４７ｍｍｏｌ）を加え、続いて、ＤＩＥＡ（４．８５ｍＬ、２７．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物はすぐにブドウ色になり、１．５時間振盪させた。次いで、樹脂を２０ｍｌの９：１のメタノール／ヒューニッヒ塩基溶液で希釈し、素早く濾過し、３回のＤＣＭおよび３回のＤＭＦで洗浄した。次いで、得られた茶紫色の樹脂を２０％ピペリジン／ＤＭＦで２回処理してＦｍｏｃ基を脱保護し、ＤＭＦで５回洗浄し、そのまま使用した。樹脂は黄色になった。２０％ＨＦＩＰＡ／ＤＣＭで樹脂のアリコートを切断した。ＬＣＭＳは、目的の生成物を載せた樹脂３を示す。ＬＣＭＳ分析条件Ｏ：保持時間＝０．８３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ７００．０８（Ｍ＋１）
ステップ４
樹脂３（５．７４ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦで５回洗浄し、次いで、ＤＭＦ（４０ｍＬ）で希釈した。次いで、この溶液に、前記１（１．６４２ｇ、４．８８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１．８５５ｇ、４．８８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液を加え、続いて、Ｎ－メチルモルホリン（２．５２ｍＬ、２２．９６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１６時間振とうし、次いで、５回のＤＭＦおよび５回のＤＣＭで洗浄した。２０％ＨＦＩＰＡ／ＤＣＭの３０分間の処理により、生成物を樹脂から切断した。排液し、濃縮して、２．９２ｇの生成物４を得た。
ＬＣＭＳ分析条件Ｏ：保持時間＝１．３０分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １０１９．０８ （Ｍ＋１）。
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.25 (s, 22H), 1.50 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.90 (m, 2H), 2.10 (m, 5H), 2.38 (m, 2H), 3.20 (m, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.50 (m, 40H), 3.60 (m, 2H), 4.20 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 8.10 (s, 1H), 12.50 (m, 1H).
収率（４ステップ）：９６％。
（Ｓ）－１－アジド－３７－オキソ－４０－（１１－スルホウンデカンアミド）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－ウンデカオキサ－３６－アザヘンテトラコンタン－４１－酸 （６） の製造
ステップ１
１１－メルカプトウンデカン酸（５．０ｇ、２２．９０ｍｍｏｌ）を、撹拌子を備えた５００ｍｌ丸底フラスコに加えた。ギ酸（２１４ｍＬ、５５８７ｍｍｏｌ）を加え、続いて、過酸化水素（１５．３２ｍＬ、１５０ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。混合懸濁液を空気に開放して６時間撹拌した。反応混合物上に窒素を穏やかに吹き込んだ。１６時間後、生成物はきれいな白色粉末となった。６時間ポンプを作動させた後、そのまま使用した。６．１０ｇの化合物５を単離した。ＬＣＭＳ分析条件Ｐ：保持時間＝１．０３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ２６７．０（Ｍ＋１）
ステップ２
樹脂３（４．００ｇ、２．００ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦで５回洗浄し、次いで、ＤＭＦ（４０ｍＬ）で希釈した。次いで、この溶液に、前記５（０．９０６ｇ、３．４０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１．２９３ｇ、３．４０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液を加え、続いて、Ｎ－メチルモルホリン（１．７５９ｍＬ、１６．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１６時間振とうし、次いで、５回のＤＭＦおよび５回のＤＣＭで洗浄した。２０％ＨＦＩＰＡ／ＤＣＭで３０分間処理して、生成物を樹脂から切り離した。溶液を排出し、濃縮して、３．１２ｇの生成物６を得た。ＬＣＭＳ分析条件Ｐ：保持時間＝１．２９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ９４９．０（Ｍ＋１）。収率（４ステップ）：９６％。
１４－メルカプトテトラデカン酸の製造
スキーム

ステップ１
ＤＭＦ（３４．１ｍｌ）に溶解したＰＤＣ（１０．２６ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）を、１４－ブロモテトラデカン－１－オール（２．０ｇ、６．８２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３４．１ｍｌ）液に加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌すると、出発アルコールの大部分が消費された。水を加え、得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、粗製の１４－ブロモテトラデカン酸を得て、それをそのまま次のステップに用いた。
1H NMR (499 MHz, CHLOROFORM-d) δ 3.55 - 3.27 (m, 2H), 2.49 - 2.17 (m, 2H), 1.97 - 1.77 (m, 2H), 1.71 - 1.56 (m, 2H), 1.49 - 1.11 (m, 18H).
ステップ２
１４－ブロモテトラデカン酸（２．０９６ｇ、６．８２ｍｍｏｌ）、およびチオウレア（０．８８０ｇ、１１．５６ｍｍｏｌ）のエタノール（４２．６ｍｌ）液混合物を、窒素雰囲気下で１日還流した。混合物を室温まで冷却し、減圧下で溶媒を蒸発させた。残渣をＮａＯＨ（２０ｍＬ、７．５ｍｏｌ／Ｌ）とともにさらに６時間加熱した。混合物をＨＣｌ（１ｍｏｌ／Ｌ）で注意深く酸性化した。有機層を分離した。水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、１４－メルカプトテトラデカン酸を得て、これをそのまま次のステップに用いた。
1H NMR (499 MHz, CHLOROFORM-d) δ 2.76 - 2.66 (m, 1H), 2.58 - 2.50 (m, 1H), 2.41 - 2.34 (m, 2H), 1.72 - 1.60 (m, 4H), 1.42 - 1.23 (m, 18H).
下記の化合物を、前述と同じ手順に従って製造した。
Figure 2024512074000036
Figure 2024512074000037
Figure 2024512074000038
Figure 2024512074000039
Figure 2024512074000040
Figure 2024512074000041
Figure 2024512074000042
ＦＰＡ１６テールの合成
（Ｓ）－１－アジド－３７－オキソ－４０－（１６－ホスホノヘキサデカンアミド）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－ウンデカオキサ－３６－アザヘンテトラコンタン－４１－酸の製造
（３， Ｎ３－ＰＥＧ１１－γＧｌｕ－ＦＰＡ１６、Ａ２３２３－４５６，４５７，４５９）

ステップ１
Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（２．０ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）、およびＰＦＴＵ（２．２１４ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）の乾燥混合物をＤＭＦ（１５ｍｌ）で希釈した。窒素下で撹拌しながら、ＤＩＥＡ（１．８０６ｍｌ、１０．３４ｍｍｏｌ）をシリンジによりゆっくり加えた。室温で１時間撹拌した後、定量化して移動するために最小限のＤＭＦを使用して、３５－アジド－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－ウンデカオキサペンタトリアコンタン－１－アミン（２．６８ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）を加えた。
室温で１６時間撹拌した後、反応を１０％ＬｉＣｌでクエンチし、ＥｔＯＡｃで１回抽出した。得られた濃縮物を、９０／１０のＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出する順相ＩＳＣＯにより精製した。得られた油を１０ｍＬのＤＣＭで希釈し、次いで、１５ｍＬのＴＦＡで処理した。３／４時間後、反応物を濃縮乾燥し、９０／１０のＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出するＩＳＣＯクロマトグラフィーにより精製して、３．９ｇの化合物１の生成物を得た。分析条件Ｐ：保持時間＝１．７９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ９２２．３（Ｍ＋１）。
ステップ２
クロロトリチル樹脂（５２８２ｍｇ、１６．９２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭで５回洗浄し、次いで、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈した。次いで、この溶液に前記１（３９００ｍｇ、４．２３ｍｍｏｌ）を加え、続いて、ＤＩＥＡ（５．９１ｍＬ、３３．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物はすぐにブドウ色になり、１．５時間振盪させた。次いで、樹脂を２０ｍＬの９：１のメタノール／ヒューニッヒ塩基溶液で希釈し、素早く濾過し、３回のＤＣＭおよび３回のＤＭＦで洗浄した。次いで、得られた茶紫色の樹脂を２０％ピペリジン／ＤＭＦで２回処理してＦｍｏｃ基を脱保護し、ＤＭＦで５回洗浄し、そのまま使用した。樹脂は黄色になった。２０％ＨＦＩＰＡ／ＤＣＭで樹脂のアリコートを切断した。ＬＣＭＳは、目的の生成物を載せた樹脂２を示す。分析条件Ｐ：保持時間＝１．１６分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ７００．３（Ｍ＋１）。
ステップ３
樹脂２（１．０ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦで５回洗浄し、次いで、ＤＭＦ（４０ｍＬ）で希釈した。次いで、この溶液に、１６－ホスホノヘキサデカン酸（０．３３６ｇ、１．０００ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（０．３８０ｇ、１．０００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液を加え、続いて、Ｎ－メチルモルホリン（０．４４０ｍＬ、４．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１６時間振とうし、次いで、５回のＤＭＦおよび５回のＤＣＭで洗浄した。２０％ＨＦＩＰＡ／ＤＣＭで３０分間の処理により、生成物を樹脂から切り離した。それを排液し、濃縮して、０．５０ｇの生成物３を得た。分析条件Ｐ：保持時間＝１．７３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １０１８．４（Ｍ＋１）。収率（３ステップ）：８４％。
１５－スルホペンタデカン酸の製造
Figure 2024512074000044
ステップ１
脱炭酸ハロゲン化：４０ｍＬの耐圧バイアルに、１６－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１６－オキソヘキサデカン酸（５１２ｍｇ、１．４９５ｍｍｏｌ）、ジメチル２－ブロモマロネート（０．５５５ｍＬ、３．７４ｍｍｏｌ）、［Ｉｒ（ｄＦ（ＣＦ３）ｐｐｙ）２（ｄｔｂｂｐｙ）］ＰＦ６（３３．５ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（４８７ｍｇ、１．４９５ｍｍｏｌ）を加えた。撹拌子を加え、混合物をクロロベンゼン（２９．９ｍＬ）で希釈し、蓋をし、窒素を１０分間バブリングした。容器をパラフィルムで密封し、一晩撹拌しながら青色ＬＥＤストリップライト（最大λ約４５０、ライトから約１～２ｃｍ、ファンあり）を照射した。バイアルを遠心分離し、半透明の溶液をデカントした。反応混合物を真空下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（０～１０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、１５～２０分間）により精製した。画分を、ＫＭｎＯ４染色によるＴＬＣ染色によってモニタリングし、生成物を含む画分を収集し、濃縮して、３２４．４ｍｇの１５－ブロモペンタデカン酸ｔｅｒｔ－ブチルを得た。
1H NMR (499 MHz, CHLOROFORM-d) δ 3.41 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.21 (t, J=7.6 Hz, 2H), 1.86 (dt, J=14.6, 7.1 Hz, 2H), 1.59 (br d, J=7.4 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.44 - 1.39 (m, 2H), 1.36 - 1.20 (m, 18H).
ステップ２
チオールの形成および酸化：上記の１５－ブロモペンタデカン酸ｔｅｒｔ－ブチルの物質（２９２ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ）を、１４－メルカプトテトラデカン酸の製造のためのチオール化手順（ステップ１）に従って処理して、２１９ｍｇの生成物（ｔＢｕエステルと遊離カルボン酸の混合物として）を得た。次いで、粗混合物を１６－スルホペンタデカン酸の製造手順に従って酸化して、２４１ｍｇの１５－スルホペンタデカン酸の生成物を得た。
1H NMR (499 MHz, METHANOL-d4) δ 4.93 (s, 5H), 2.88 - 2.79 (m, 2H), 2.35 - 2.24 (m, 2H), 1.83 - 1.74 (m, 2H), 1.64 - 1.56 (m, 2H), 1.47 - 1.39 (m, 2H), 1.37 - 1.27 (m, 18H).
アルキン中間体の合成
以下は、液相合成で使用されるＰｒａ中間体の詳細な例である。
ＩＮＴ－１００１の製造
Figure 2024512074000045
 ＩＮＴ－１００１は、実施例０００１の製造について記載した、以下の一般手順から構成される一般的な合成手順に従って製造した。４５ｍＬのポリプロピレン固相反応容器に、１００μｍｏｌスケールでＦｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードした２－クロロトリチル樹脂を加え、反応容器をＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｘペプチド合成装置に置いた。次いで、以下の手順を順番に実施した。
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ 樹脂膨潤手順」に従った；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－Ｎｌｅ－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ ダブルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－Ｎｌｅ－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ ダブルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（１－ＣＨ２ＣＯＯｔＢｕ）－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｈｙｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ ダブルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ シングルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－Ａｌａ－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ ダブルカップリング手順」に従い、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）－ＯＨを使用した；
「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ 無水クロロ酢酸カップリング手順」に従った。
あるいは、「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ ４当量シングルカップリング手順」または「Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ ４当量ダブルカップリング手順」をペプチド伸長の各ステップに使用した。
あるいは、上記の線形配列は、以下の一般的な手順から構成されるＰｒｅｌｕｄｅ合成装置でアセンブルされた：「Ｐｒｅｌｕｄｅ樹脂膨潤手順」、「Ｐｒｅｌｕｄｅシングルカップリング手順」または「Ｐｒｅｌｕｄｅダブルカップリング手順」（ここで、各カップリング反応には、４～５当量のアミノ酸および９０～１２０分のカップリング時間を使用した）、および「Ｐｒｅｌｕｄｅ無水クロロ酢酸カップリング手順」。
「全体的脱保護法Ａ」に従い；
「環化法Ａ」に従った。
粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２０％Ｂで０分間保持、２５分間かけて２０～６０％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１７％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１７～５７％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２５．４ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５８分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］１＋：１９２６．２５。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．６９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：９６３．９８。
ＩＮＴ－１００１に記載したのと同様の手順および上記の一般的な手順に従って、下記のアルキン化合物を合成した。
ＩＮＴ－１００２の製造
Figure 2024512074000046
ＩＮＴ－１００２は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１４％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１４～５４％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１６％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１６～５６％Ｂ、その後１００％Ｂで４分間保持；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は３．１ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０２１．２。
ＩＮＴ－１００３の製造
Figure 2024512074000047
ＩＮＴ－１００３は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２５～６５％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：３０％Ｂで０分間保持、２０分間かけて３０～７０％Ｂ、その後１００％Ｂで２分間保持；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１１．６ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９７％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．９９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０６９．４。
ＩＮＴ－１００４の製造
Figure 2024512074000048
ＩＮＴ－１００４は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２６％Ｂで０分間保持、２５分間かけて２６～６６％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１１．２ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９２．８％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．８１、２．０２分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０７７。
ＩＮＴ－１００５の製造
Figure 2024512074000049
ＩＮＴ－１００５は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２５～６５％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２２．４ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．８７分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０８４．４。
ＩＮＴ－１００６の製造
Figure 2024512074000050
ＩＮＴ－１００６は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２５～６５％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１８．９ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．７１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０８４。
ＩＮＴ－１００７の製造
Figure 2024512074000051
ＩＮＴ－１００７は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２３％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２３～６３％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２６．８ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９９％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝２．２３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０７７．２。
ＩＮＴ－１００８の製造
Figure 2024512074000052
ＩＮＴ－１００８は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２３％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２３～６３％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２４．９ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９６．９％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝２．２５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０７７．４。
ＩＮＴ－１００９の製造
Figure 2024512074000053
ＩＮＴ－１００９は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：３８％Ｂで０分間保持、２０分間かけて３８～７８％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は３６．５ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝２．２１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０５５．４。
ＩＮＴ－１０１０の製造
Figure 2024512074000054
ＩＮＴ－１０１０は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２６％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２６～６６％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２６．３ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．９２分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０５５．３。
ＩＮＴ－１０１１の製造
Figure 2024512074000055
ＩＮＴ－１０１１は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２４％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２４～６４％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１７．７ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９６．９％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝２．１３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０５５．８。
ＩＮＴ－１０１２の製造
Figure 2024512074000056
ＩＮＴ－１０１２は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：３８％Ｂで０分間保持、２５分間かけて３８～７８％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１６．１ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９８．９％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝２．１８分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０２０．１。
ＩＮＴ－１０１３の製造
Figure 2024512074000057
ＩＮＴ－１０１３は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１９％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１９～５９％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２０．２ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９６．３％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１００６．２。
ＩＮＴ－１０１４の製造
Figure 2024512074000058
ＩＮＴ－１０１４は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１４％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１４～５４％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。
この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによりさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１４％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１４～５４％Ｂ、その後１００％Ｂで２分間保持；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１０．７ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０１４。
ＩＮＴ－１０１５の製造
Figure 2024512074000059
ＩＮＴ－１０１５は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１４％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１４～５４％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１６％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１６～５６％Ｂ、その後１００％Ｂで２分間保持；流量：３５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は９．１ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０２１．１。
ＩＮＴ－１０１６の製造
Figure 2024512074000060
ＩＮＴ－１０１６は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１９％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１９～５９％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は３８．６ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９３％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０２８．４。
ＩＮＴ－１０１７の製造
Figure 2024512074000061
ＩＮＴ－１０１７は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１９％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１９～５９％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は３８．３ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９０％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５２分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０２８。
ＩＮＴ－１０１８の製造
Figure 2024512074000062
ＩＮＴ－１０１８は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１９％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１９～５９％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２２．７ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９２．６％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．４３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１０２１．４。
ＩＮＴ－１０１９の製造
Figure 2024512074000063
ＩＮＴ－１０１９は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２０％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２０～６０％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２３．６ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９１．２％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．５９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋３Ｈ］３＋：６８１。
ＩＮＴ－１０２０の製造
Figure 2024512074000064
ＩＮＴ－１０２０は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２１％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２１～６１％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は３１．１ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９８．１％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．６３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋：１９９７．３。
ＩＮＴ－１０２１の製造
Figure 2024512074000065
ＩＮＴ－１０２１は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２０％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２０～６０％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１５～５５％Ｂ、その後１００％Ｂで２分間保持；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１２ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．６２分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：９９９．３。
ＩＮＴ－１０２２の製造
Figure 2024512074000066
ＩＮＴ－１０２２は、ＩＮＴ－１００１の製造について記載した一般的な合成手順に従って、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を５０μｍｏｌスケールで使用して製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２１％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２１～６１％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１８％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１８～５８％Ｂ、その後１００％Ｂで２分間保持；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１１ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９８．３％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋：１９９６．９。
ＩＮＴ－１０２３の製造
Figure 2024512074000067
ＩＮＴ－１０２３の線形配列を、Ｆｍｏｃ－Ｐｒａ－ＯＨを予めロードしたクロロトリチル樹脂を使用して、前述の合成手順に従って製造した（スキーム１を参照）。スキーム１の線形配列樹脂Ａを切断し、「全体的脱保護法Ａ」を使用して全体的に脱保護し、続いて「環化法Ａ」を使用して環化した。粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物の収量は３０．４ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９５．１％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋：１９８３．８。
最終化合物の合成
以下は、液相クリック反応によって合成される最終の化合物に関する詳細な例である。
実施例１００１
Figure 2024512074000068
化合物は、一般手順「液相クリックの方法Ａ」に従って合成した。２０ｍｌシンチレーションバイアルに、１００倍量の必要な量のナトリウム（Ｒ）－２－（（Ｓ）－１，２－ジヒドロキシエチル）－４－ヒドロキシ－５－オキソ－２，５－ジヒドロフラン－３－オレート（０．９８７ｍｇ、４．８９μｍｏｌ）、および硫酸銅（ＩＩ）五水和物（０．６２２ｍｇ、２．４９２μｍｏｌ）を加えた。反応物を水（１０ｍＬ）で希釈した。この溶液を室温で１～１０分間振盪した。得られた黄色がかったスラリーを反応物に加えた。
ＩＮＴ－１００１（２４ｍｇ、１２．０μｍｏｌ）を含むバイアルに、ｔＢｕＯＨ／水（ｖ／ｖ、１：１、１ｍＬ）、および（Ｓ）－１－アジド－３７－オキソ－４０－（１６）－スルホヘキサデカンアミド）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－ウンデカオキサ－３６－アザヘンテトラコンタン－４１－酸（Ｎ３－Ｐｅｇ１１－γＧｌｕ－ＦＳＡ１６、１６．４９ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を加え、続いて、上記の銅溶液１００μＬを加えた。混合物を室温で１時間振盪し、ＬＣ／ＭＳによって進行をモニタリングした。完了後、混合物をＣＨ３ＣＮ：重炭酸アンモニウム水溶液（ｖ／ｖ、１：１）で希釈し、濾過し、単一化合物の精製に供した。
粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２６％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２６～６６％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は８．８ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９９％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．５５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋３Ｈ］３＋：９８２．１０。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．８７分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋３Ｈ］３＋：９８１．９８。
実施例１００１と同様の手順に従って、下記の実施例１００２～１００６および１００９の化合物を得た。
実施例１００２の製造
Figure 2024512074000069
実施例１００２は、１２μｍｏｌスケールで製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２５～６５％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は５．６ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９７．８％であった。
分析条件２：保持時間＝１．６分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ２＋：１００６．２。
実施例１００３の製造
Figure 2024512074000070
実施例１００３は、１０．３μｍｏｌスケールで製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２２％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２２～６２％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は７ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９１．１％であった。
分析条件１：保持時間＝１．５４分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ２＋：１５３０．１。
実施例１００４の製造
Figure 2024512074000071
実施例１００４は、９．９μｍｏｌスケールで製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１６％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１６～５６％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は３．７ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９１．８％であった。
分析条件２：保持時間＝１．７６分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ２＋：１０１５．３。
実施例１００５の製造
Figure 2024512074000072
実施例１００５は、８μｍｏｌスケールで製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２５～６５％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は６．７ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９８．９％であった。
分析条件１：保持時間＝１．５４分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ２＋：１５１５．１。
実施例１００６の製造
Figure 2024512074000073
実施例１００６は、１０．６ｍｍｏｌスケールで製造した。粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２５～６５％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせ、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１．５ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９１％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．４９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋：１３６７．３。
実施例１００７の製造
Figure 2024512074000074
 ＩＮＴ－１０２３の線形アルキン中間体物質（２９９ｍｇ、１００μｍｏｌ）を、Ｎ３－Ｐｅｇ１１－γＧｌｕ－ＦＰＡ１６を用いた「樹脂上のクリック反応の方法Ａ」に供し、続いて、「全体的脱保護法Ａ」および「環化法Ａ」を行った。
粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２５～６５％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１５％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１５～５５％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は２．８ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は１００％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１．７５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋３Ｈ］３＋：１００１．３。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．８２分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋３Ｈ］３＋：１００１．３。
実施例１００８の製造
Figure 2024512074000075
実施例１００８は、１００μｍｏｌスケールで、実施例１００７と同様の手順に従って、ＩＮＴ－１０２３の線形配列から出発して、Ｎ３－Ｐｅｇ１１－γＧｌｕ－ＦＳＡ１６を用いた「樹脂上のクリック反応の方法Ａ」を行い、続いて、「全体的脱保護法Ａ」および「環化法Ａ」を行って、製造した。
粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２４％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２４～６４％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：２０％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２０～６０％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：４５ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は３ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９８．２％であった。
分析条件Ｂ：保持時間＝１．８３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋３Ｈ］３＋：１００１．０８。
実施例１００９の製造
Figure 2024512074000076
実施例１００９は、５０μｍｏｌスケールで、実施例１００７に記載の手順に従って、ＩＮＴ－１０２３の線形配列から出発して、（Ｓ）－４－アジド－２－（１４－スルホテトラデカンアミド）ブタン酸を用いた「樹脂上のクリック反応の方法Ａ」を行い、続いて「全体的脱保護法Ａ」および「環化法Ａ」を行って、製造した。
クリックケミストリーは、樹脂結合キャップされた線状ペプチドＡに対して０．０５ｍｍｏｌスケールで実施した。Ｂｉｏ Ｒａｄチューブ内の樹脂ＡをＤＣＭ（３×５ｍＬ）で洗浄し、次いで、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）で洗浄した。樹脂に、ビス（２，２，６，６－テトラメチル－３，５－ヘプタンジオナト）銅（ＩＩ）（１０．７５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、ビタミンＣ（０．０２６ｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）、２，６－ルチジン（０．０５８ｍｌ、０．５００ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．０８７ｍｌ、０．５００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１．５００ｍＬ）、およびＤＭＦ（１．５ｍＬ）を含む溶液を加えた。上記溶液を、（Ｓ）－４－アジド－２－（１４－スルホテトラデカンアミド）ブタン酸（０．０３７ｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）を入れた秤量したバイアルに加えた。得られた溶液を樹脂に加えた。チューブに蓋をし、シェーカーテーブル上で一晩振盪した。溶液を排出し、樹脂をＤＭＦ（６×５ｍｌ）、次いで、ＤＣＭ（３×５ｍＬ）で洗浄した。樹脂を９５％ＴＦＡ、２．５％ＴＩＳおよび２．５％ＤＴＴ（５ｍＬ）で処理し、室温で１時間振盪した。溶液を、冷却した３５ｍＬのＥｔ２Ｏを含む５０ｍＬのＦａｌｃｏｎチューブに排出した。得られた白色沈殿物を遠心分離機（３×４分×３００ＲＰＭ）により収集し、エーテル層を廃棄した。ペレットを室温で１時間風乾した。これをＤＭＦ（３０ｍｌ）に溶解し、ＤＩＥＡ（１ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で６時間振盪した。反応物をＧｅｎｅｖａｃで濃縮した。得られたサンプルを２ｍｌのＤＭＦに溶解し、精製に供した。
粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：１８％Ｂで０分間保持、２５分間かけて１８～６０％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は４．２ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は８９％であった。ＬＣ／ＭＳ分析を使用して最終純度を決定した。インジェクション１の条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２．１ｍｍ×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；温度：５０℃；グラジエント：３分間かけて０％Ｂから１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．５０分間保持；流量：１ｍＬ／分。検出：ＭＳおよびＵＶ（２２０ｎｍ）。インジェクション１の結果（分析条件Ａ）：純度：８８．８％；測定質量：ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ １２１０．１０；保持時間：１．５分。インジェクション２の条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２．１ｍｍ×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．１％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．１％トリフルオロ酢酸含有；温度：５０℃；グラジエント：３分間で０％Ｂから１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．５０分間保持；流量：１ｍＬ／分。検出：ＭＳおよびＵＶ（２２０ｎｍ）。インジェクション２の結果（分析条件Ｂ）：純度：９８．１％。測定質量：ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ １２０９．８０；保持時間：１．７４分。
実施例１０１０の製造
Figure 2024512074000077
実施例１０１０は、４４μｍｏｌスケールで、実施例１００１の手順に従って、「樹脂上のクリック反応の方法Ａ」を用いて、ＩＮＴ－１０２３とＮ３－Ｐｅｇ３－γＧｌｕ－ＦＳＡ１２とを反応させて製造した。
粗物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．０５％トリフルオロ酢酸含有；グラジエント：２０％Ｂで０分間保持、２０分間かけて２０～６０％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。この物質を、以下の条件で分取ＬＣ／ＭＳによってさらに精製した。カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２００ｍｍ×１９ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、酢酸アンモニウム含有；グラジエント：１３％Ｂで０分間保持、２０分間かけて１３～５３％Ｂ、その後１００％Ｂで０分間保持；流量：２０ｍＬ／分；カラム温度：２５℃。画分の収集はＭＳシグナルによって開始された。目的の生成物を含む画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は１７．０ｍｇで、ＬＣＭＳ分析による推定純度は９８％であった。ＬＣ／ＭＳ分析を使用して最終純度を決定した。インジェクション１の条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２．１ｍｍ×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム含有；温度：５０℃；グラジエント：３分間で０％Ｂから１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．５０分間保持；流量：１ｍＬ／分。検出：ＭＳおよびＵＶ（２２０ｎｍ）。
インジェクション１（分析条件Ａ）の結果：純度：９９．２％；測定質量：８６５．８０；保持時間：１．４６分。インジェクション２の条件：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２．１ｍｍ×５０ｍｍ、１．７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５のアセトニトリル：水、０．１％トリフルオロ酢酸含有；移動相Ｂ：９５：５のアセトニトリル：水、０．１％トリフルオロ酢酸含有；温度：５０℃；グラジエント：３分間で０％Ｂから１００％Ｂ、その後１００％Ｂで０．５０分間保持；流量：１ｍＬ／分。検出：ＭＳおよびＵＶ（２２０ｎｍ）。インジェクション２（分析条件Ｂ）の結果：純度：９７．７％。測定質量：１２９７．６０；保持時間：１．６６分。
ホモジニアス時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）結合アッセイを用い、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合に対して大環状ペプチドが競合する能力を試験する方法
本開示の大環状ペプチドがＰＤ－Ｌ１に結合する能力を、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ホモジニアス時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）結合アッセイを用いて調べた。
方法
可溶性ＰＤ－Ｌ１への可溶性ＰＤ－１の結合についてのホモジニアス時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイによる。可溶性ＰＤ－１および可溶性ＰＤ－Ｌ１は、膜貫通領域を除去し、異種配列、具体的には、ヘキサヒスチジンエピトープタグ（Ｈｉｓ）またはヒト免疫グロブリンＧ配列（Ｉｇ）のＦｃ部分、に融合する、カルボキシル末端切断（トランケーション）を有するタンパク質を表す。すべての結合試験は、０．１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンおよび０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０を添加したｄＰＢＳからなるＨＴＲＦアッセイバッファー中で実施した。ＰＤ－１－Ｉｇ／ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ結合アッセイのため、阻害剤を、ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ（最終１０ｎＭ）とともに４μｌのアッセイバッファー中で１５分間プレインキュベートし、続いて、ＰＤ－１－Ｉｇ（最終２０ｎＭ）の１μｌのアッセイバッファーを加え、さらに１５分間インキュベートした。ヒト、カニクイザル、マウス、またはその他の種に由来するＰＤ－Ｌ１融合タンパク質を使用した。ＨＴＲＦ検出は、ユーロピウムクリプテート標識抗Ｉｇモノクローナル抗体（最終１ｎＭ）およびアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識抗Ｈｉｓモノクローナル抗体（最終２０ｎＭ）を使用して行った。抗体をＨＴＲＦ検出バッファーで希釈し、５μｌを結合反応液の上に分注した。反応物を３０分間平衡化させ、ＥｎＶｉｓｉｏｎ蛍光光度計を使用してシグナル（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ比）を測定した。ＰＤ－１－Ｉｇ／ＰＤ－Ｌ２－Ｈｉｓ（それぞれ２０ｎＭおよび５ｎＭ）、ＣＤ８０－Ｈｉｓ／ＰＤ－Ｌ１－Ｉｇ（それぞれ１００ｎＭおよび１０ｎＭ）、および、ＣＤ８０－Ｈｉｓ／ＣＴＬＡ４－Ｉｇ（それぞれ１０ｎＭおよび５ｎＭ）間の追加の結合アッセイが確立された。
ビオチン化化合物Ｎｏ．７１（構造についてはＷＯ２０１４／１５１６３４の２１２ページのＥｘａｍｐｌｅ ７２を参照）とヒトＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓとの間の結合／競合の試験を以下のように実施した。大環状ペプチド阻害剤を、４μｌのアッセイバッファー中でＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ（最終１０ｎＭ）とともに６０分間プレインキュベートし、続いて、ビオチン化化合物Ｎｏ．７１（最終０．５ｎＭ）を含む１μｌのアッセイバッファーを加えた。結合を３０分間平衡化させた後、ユウロピウムクリプテート標識ストレプトアビジン（最終２．５ｐＭ）およびＡＰＣ標識抗Ｈｉｓ（最終２０ｎＭ）を含む５μｌのＨＴＲＦバッファーを加えた。反応物を３０分間平衡化し、ＥｎＶｉｓｉｏｎ蛍光光度計を使用してシグナル（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ比）を測定した。
組換えタンパク質。Ｃ末端ヒトＩｇエピトープタグ［ｈＰＤ－１（２５－１６７）－３Ｓ－ＩＧ］を有するカルボキシル切断型ヒトＰＤ－１（アミノ酸２５～１６７）、および、Ｃ末端Ｈｉｓエピトープタグ［ｈＰＤ－Ｌ１（１９－２３９）－タバコ静脈斑点ウイルス（tobacco vein mottling virus）プロテアーゼ切断部位（ＴＶＭＶ）－Ｈｉｓ］を有するヒトＰＤ－Ｌ１（アミノ酸１８～２３９）を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞で発現させ、組換えタンパク質Ａアフィニティークロマトグラフィー、およびサイズ排除クロマトグラフィーによって、連続的に精製した。ヒトＰＤ－Ｌ２－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、ＣＤ８０－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ（ＲｎＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ）はすべて商業的供給源から入手した。
組換えヒトＰＤ－１－Ｉｇの配列
（配列番号：１）
組換えヒトＰＤ－Ｌ１－ＴＶＭＶ－Ｈｉｓ（ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ）の配列
（配列番号：２）
２９３Ｔ－ｈＰＤ－Ｌ１細胞結合ハイコンテントスクリーニングアッセイ（ＣＢＡ）
フィコエリトリン（ＰＥ）を、ヒトＰＤ－１－ＩｇのＩｇエピトープタグに共有結合させ、蛍光標識されたＰＤ－１－Ｉｇを、ヒトＰＤ－Ｌ１を安定的に過剰発現するヒト胎児腎臓細胞株（２９３Ｔ）（すなわち２９３Ｔ－ｈＰＤ－Ｌ１）との結合試験に使用した。簡単に説明すると、２×１０３個の２９３Ｔ－ｈＰＤ－Ｌ１細胞を、１０％ウシ胎児血清を添加した２０μｌのＤＭＥＭの３８４ウェルプレートに播種し、一晩培養した。１２５ｎｌの化合物を細胞に加え、続いて、５μｌのＰＥ標識ＰＤ－１－Ｉｇ（最終０．５ｎＭ）を加え、１０％ウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭで希釈し、その後、３７℃で１時間インキュベートした。細胞を１００μｌのｄＰＢＳで３回洗浄し、続いて、１０μｇ／ｍｌのＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２を含むｄＰＢＳ液の４％パラホルムアルデヒド３０μｌによって、室温で３０分間固定した。細胞を１００μｌのｄＰＢＳで３回洗浄し、最後に１５μｌのｄＰＢＳを加えた。データを、Ｃｅｌｌ Ｉｎｓｉｇｈｔ ＮＸＴ Ｈｉｇｈ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｉｍａｇｅｒおよび関連ソフトウェアを使用して収集および処理した。
表１に、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ホモジニアス時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）結合アッセイ、および２９３Ｔ－ｈＰＤ－Ｌ１細胞結合ハイコンテントスクリーニングアッセイで測定された本開示の代表的な実施例のＩＣ５０値を記載する。
Figure 2024512074000080
本開示は、前述した例示的な実施例に限定されるものではなく、その本質的な特質から逸脱することなく他の特定の形態で具体化できることは、当業者には明らかであろう。したがって、実施例はあらゆる点で例示的であり限定的ではないとみなされ、前述の実施例ではなく添付の特許請求の範囲を参照することが望ましく、したがって、特許請求の範囲の均等の意味および範囲内に入るすべての変更は、特許請求の範囲に包含されることを意図している。
式（Ｉ）の化合物は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害剤としての活性を有し、したがって、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用に関連する疾患または欠損症の治療に使用することができる。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害を介して、本開示の化合物は、感染症、例えば、ＨＩＶ、敗血症性ショック、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、またはＤ型肝炎、および、がんなどを治療するために使用することができる。
要約および概要の欄ではなく、詳細な説明の欄が特許請求の範囲を解釈するために使用されることを意図していることを理解されたい。要約および概要の欄は、発明者によって企図された本開示のすべてではないが、１つまたは複数の例示的な実施形態を説明することができ、したがって、いかなる方法でも本開示および添付の特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。
本開示は、特定の機能の実施およびそれらの関係を示す機能構成要素（ブロック）を利用して上記で説明されている。これらの機能構成要素の境界は、説明の便宜のために、本明細書では任意に定義されている。指定された機能とその関係が適切に実施される限り、代替の境界を定義することができる。
特定の実施形態の前述の説明は、本開示の一般的な性質を十分に明らかにするものであり、他者は、当業者の知識を適用することによって、本開示の一般的な概念から逸脱することなく、過度の実験を行うことなく、そのような特定の実施形態を様々な適用に容易に改変および／または適合させることができる。したがって、そのような適合および改変は、本明細書に提示された教示および指針に基づいて、開示された実施形態の均等物の意味および範囲内にあることが意図される。ここに記載の用語または表現は説明を目的とするものであり、限定を目的とするものではないため、本明細書の用語または表現は、教示および指針に照らして、当業者によって解釈されるべきであることを理解されたい。
本開示の範囲および幅は、上述の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、添付の特許請求の範囲およびその均等範囲に従ってのみ定義されるべきである。

Claims (19)

  1. 式（Ｉ）
    Figure 2024512074000081
     （Ｉ）

    ［式中、
    Ａは、
    Figure 2024512074000082
     から選択され；
    ここで、
    Figure 2024512074000083
     は、カルボニル基への結合点を示し、
    Figure 2024512074000084
     は、窒素原子への結合点を示し；
    ｎは、０または１であり；
    ｍは、１または２であり；
    ｕは、０または１であり；
    ｗは、０、１、または２であり；
    Ｒｘは、水素、アミノ、ヒドロキシ、およびメチルから選択され；
    Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素およびメチルから選択され；
    Ｒ１６ａは、水素およびＣ１－Ｃ６アルキルから選択され；
    Ｒ１６は、
    －（Ｃ（Ｒ１７ａ）２）２－Ｘ－Ｒ３０、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））０－２－Ｘ’－Ｒ３０、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｘ’－Ｒ３０、
    －Ｃ（Ｒ１７ａ）２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））１－２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、
    －Ｃ（Ｒ１７ａ）２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２］ｗ’－Ｘ－Ｒ３１、－Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２］ｗ’－Ｘ’－Ｒ３１、
    －（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｎ’－Ｈ、；および、
    －（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈ
    から選択され；
    ここで、ＰＥＧｑ’スペーサーは、Ｒ１６の任意の部分に挿入されてもよく（ｑ’は、ＰＥＧスペーサー内の－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－ユニットの数である）、
    ここで、ｗ’は、２または３であり；
    ｎ’は、１～６であり；
    ｍ’は、０～５であり；
    ｑ’は、１～２０であり；
    Ｘは、１～１７２個の原子の鎖であり、その原子は、ｎ：
    炭素および酸素から選択され、該鎖は、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－から選択される、１、２、３または４個の基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－（ＣＨ２）１－２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１～６個の基で任意に置換されていてもよく；
    Ｘ’は、１～１７２個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－から選択される、１、２、３または４個の基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－（ＣＨ２）１－２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１～６個の基で任意に置換されていてもよく、ただし、Ｘ’は、非置換のＰＥＧ以外であり；
    Ｒ３０は、－ＳＯ３Ｈ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
    Ｒ３１は、－Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
    各Ｒ１７ａは、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、－（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈから独立して選択され；
    各Ｒ１７は、水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、－（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、および－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５から独立して選択され、ここで、ｚは、１～６であり、Ｒ３５は、－ＳＯ３Ｈ、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；ただし、少なくとも１つのＲ１７は、水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外であり；
    ただし、Ｒ３０、Ｒ３１、またはＲ３５の少なくとも１つは存在し；
    Ｒａ、Ｒｅ、Ｒｊ、およびＲｋは、それぞれ独立して、水素およびメチルから選択され；
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖から独立して選択されるか、または、以下に説明するように対応する隣接するＲ基と環を形成し；
    Ｒｂは、メチルであるか、または、ＲｂとＲ２は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく；
    Ｒｄは、水素またはメチルであるか、または、ＲｄとＲ４は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成してもよく；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシ、およびフェニルから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく；
    Ｒｇは、水素またはメチルであるか、または、ＲｇとＲ７は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成してもよく；ここで、各環は、アミノ、任意にハロ基で置換されていてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、任意にメトキシ基で置換されていてもよいイソキノリニルオキシ、任意にハロ基で置換されていてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリル、から独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよく；ここで、ピロリジンおよびピペリジン環は、シクロヘキシル、フェニル、または、インドール基に任意に縮合されていてもよく；および、
    Ｒｌは、メチルであるか、または、ＲｌとＲ１２は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジンおよびピロリジンから選択される環を形成し、ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシから独立して選択される１～４個の基で任意に置換されていてもよい。］
    で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  2. Ａが、
    Figure 2024512074000085
     であり；
    ｍが１であり、ｗが０であり；および、
    Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａが、それぞれ水素である、
    請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  3. Ｒ１６が、－（Ｃ（Ｒ１７ａ）２）２－Ｘ－Ｒ３０、－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））０－２－Ｘ’－Ｒ３０、および－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’ －Ｘ’－Ｒ３０から選択され；
    各Ｒ１７ａが、水素、－ＣＯ２Ｈ、および－（ＣＨ２）１－２ＣＯ２Ｈから選択され；
    Ｘが、８～４６個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－、Ｃ（Ｏ）ＮＨ基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；および、
    Ｒ３０が、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される、
    請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  4. Ａが、
    Figure 2024512074000086
     であり；
    ｍが１であり、ｗが０であり；
    Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａが、それぞれ水素であり；
    Ｒ１６が、－Ｃ（Ｒ１７ａ）２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、および－（Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７））１－２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１から選択され；
    各Ｒ１７ａが、水素、－ＣＯ２Ｈ、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから選択され；
    Ｘ’が、８～４８個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；ただし、Ｘ’は、非置換ＰＥＧ以外であり；および、
    Ｒ３０は、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される、
    請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  5. Ａが、
    Figure 2024512074000087
     であり；
    ｍが１であり、ｗが０であり；
    Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａが、それぞれ水素であり；
    Ｒ１６が、－Ｃ（Ｒ１７ａ）２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２］ｗ’－Ｘ－Ｒ３１、および－Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａＲ１７）１－２］ｗ’－Ｘ’－Ｒ３１から選択され；
    各Ｒ１７ａが、水素、－ＣＯ２Ｈ、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから選択され；
    Ｘが、８～４８個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；および、
    Ｒ３１が、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される、
    請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  6. Ａが、
    Figure 2024512074000088
     であり；
    ｍが１であり、ｗが０であり；
    Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａが、それぞれ水素であり；
    Ｒ１６が、－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｎ’－Ｈであり；
    各Ｒ１７ａが、水素であり；
    各Ｒ１７が、水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、
    －（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、および－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５から選択され；ただし、少なくとも１つのＲ１７は、水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外であり、ただし、少なくとも１つのＲ３１またはＲ３５は、存在し；
    ｚが、１～４であり；
    Ｒ３１が、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
    Ｘが、７～１５５個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；および、
    Ｒ３５が、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される、
    請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  7. Ａが、
    Figure 2024512074000089
     であり；
    ｍが１であり、ｗが０であり；
    Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６ａが、それぞれ水素であり；
    Ｒ１６が、－（ＣＲ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈであり；
    ｍ’が、０～３であり；
    各Ｒ１７ａが、水素であり；
    各Ｒ１７が、水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、
    －（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５；および
    Figure 2024512074000090
     から選択され；
    ただし、少なくとも１つのＲ１７は、水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外であり、ただし、少なくとも１つのＲ３１またはＲ３５は、存在し；
    ｚが、１～４であり；
    Ｒ３１が、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
    Ｘが、１０～６０個の原子の鎖であり、その原子は、炭素および酸素から選択され、該鎖は、１、２、または３個の－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基をその中に埋め込まれて含んでいてもよく；該鎖は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；および、
    Ｒ３５が、－ＳＯ３Ｈ、および－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から選択される、
    請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  8. Ｒ１が、フェニルＣ１－Ｃ３アルキルであり、ここで、フェニル部分は、ヒドロキシル、ハロ、またはメトキシで任意に置換されていてもよく；
    Ｒ２が、Ｃ１－Ｃ７アルキルであるか、または、Ｒ２とＲｂは、それらが結合している原子と一緒になってピペリジン環を形成し；
    Ｒ３が、ＮＲｘＲｙ（Ｃ１－Ｃ７アルキル）、ＮＲｕＲｖカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、またはカルボキシＣ１－Ｃ３アルキルであり；
    Ｒ４とＲｄは、それらが結合している原子と一緒になってピロリジン環を形成し；
    Ｒ５が、ヒドロキシＣ１－Ｃ３アルキル、イミダゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、またはＮＲｘＲｙ（Ｃ１－Ｃ７アルキル）であり、
    Ｒ６が、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、ＮＲｕＲｖカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、ＮＲｘＲｙ（Ｃ１－Ｃ７アルキル）、またはＣ１－Ｃ７アルキルであり；
    Ｒ７とＲｇは、それらが結合している原子と一緒になって、任意にヒドロキシで置換されていてもよいピロリジン環を形成し；
    Ｒ８およびＲ１０は、ベンゾチエニルまたはインドリルＣ１－Ｃ３アルキルであり、これはカルボキシＣ１－Ｃ３アルキルで任意に置換されていてもよく；
    Ｒ９が、ヒドロキシＣ１－Ｃ３アルキル、アミノＣ１－Ｃ４アルキル、またはＣ１－Ｃ７アルキルであり；
    Ｒ１１が、Ｃ１－Ｃ３アルコキシＣ１－Ｃ３アルキル、またはＣ１－Ｃ７アルキルであり；
    Ｒ１２が、Ｃ１－Ｃ７アルキル、またはヒドロキシＣ１－Ｃ３アルキルであり；および、
    Ｒ１３が、Ｃ１－Ｃ７アルキル、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、または－（ＣＨ２）３ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２である、
    請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  9. Ａが、
    Figure 2024512074000091
     であり；
    ｍが１であり、ｗが０であり；
    Ｒ１４およびＲ１５が、それぞれ水素であり；
    Ｒ１６ａが、水素またはメチルであり；
    Ｒｄが、メチルであるか、または、ＲｄとＲ４は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシ、およびフェニルから独立して選択される１または２個の基で任意に置換されていてもよく；
    Ｒｇが、メチルであるか、または、ＲｇとＲ７は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成し；ここで、各環は、アミノ、任意にハロ基で置換されていてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、任意にメトキシ基で置換されていてもよいイソキノリニルオキシ、任意にハロ基で置換されていてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリルから独立して選択される１または２個の基で置換されていてもよく；ここで、ピロリジン環およびピペリジン環は、任意にシクロヘキシル、フェニル、またはインドール基に縮合されていてもよく；そして、ピロリジンでもよい、
    請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  10. 下記：
    Figure 2024512074000092
     １００１

    Figure 2024512074000093
     １００２

    Figure 2024512074000094
     １００３

    Figure 2024512074000095
     １００４

    Figure 2024512074000096
     １００５

    Figure 2024512074000097
     １００６

    Figure 2024512074000098
     １００７

    Figure 2024512074000099
     １００８

    Figure 2024512074000100
     １００９

    または
    Figure 2024512074000101
    で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  11. 請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、を含む、医薬組成物。
  12. 請求項１０に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を、含む、医薬組成物。
  13. 必要とする対象における免疫応答を増強、刺激、および／または増加させる方法であって、治療有効量の請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法。
  14. 必要とする対象におけるがん細胞の成長、増殖、または転移を阻害する方法であって、治療有効量の請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法。
  15. がんが、黒色腫、腎細胞癌、扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌、去勢抵抗性前立腺癌、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、膵臓癌、頭頸部の扁平上皮癌、食道癌、消化管癌、乳癌、および血液悪性腫瘍、から選択される、請求項１４に記載の方法。
  16. 必要とする対象における感染症を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法。
  17. 感染症が、ウイルスによって引き起こされる、請求項１６に記載の方法。
  18. 必要とする対象における敗血症性ショックを治療する方法であって、治療有効量の請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法。
  19. 対象においてＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１および／またはＣＤ８０との相互作用を遮断する方法であって、治療有効量の請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法。
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