JP2024507362A - 抗血小板誘発性凝固障害を治療するためのフリーズドライ血小板誘導体組成物 - Google Patents

Abstract

対象における凝固障害を治療するための方法及び組成物が本明細書に提供される。そのような方法は、例えば、その必要がある対象が抗凝固剤を投与されたことがあるという理由で、血小板を含むか又は例示的実施形態では血小板誘導体及び更なる例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物の有効量を前記対象に投与することを含み得る。そのような方法及びそこで使用される血小板誘導体の例示的実施形態、並びに多数の追加の態様及び実施形態についての様々な特性が本明細書に提供される。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年２月１７日に出願された米国仮出願第６３／１５０，３３８号、２０２１年１１月４日に出願された米国仮出願第６３／２７５，９３７号、２０２１年１１月５日に出願された米国仮出願第６３／２７６，４２０号、２０２１年１１月１７日に出願された米国仮出願第６３／２６４，２２７号、及び２０２２年２月１６日に出願された米国出願第１７／６７３，７７３号（これは２０２０年８月１４日に出願された米国出願第１６／９９４，３７７号及び２０２０年８月１４日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０４６５２５の一部継続出願である）の優先権を主張する。２０２０年８月１４日に出願された米国出願第１６／９９４，３７７号は、２０１９年８月１６日に出願された米国仮出願第６２，８８７，９２３号及び２０２０年８月１３日に出願された米国仮出願第６３，０６５，３３７号の優先権を主張する。２０２０年８月１４日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０４６５２５号は、２０１９年８月１６日に出願された米国仮出願第６２，８８７，９２３号及び２０２０年８月１３日に出願された米国仮出願第６３，０６５，３３７号の優先権を主張する。この段落に列挙される出願の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

発明の分野
本開示は、抗血栓剤誘発性凝固障害の治療法としての血小板誘導体の使用に関する。抗血小板剤の使用は、出血の可能性を増加させ得る。

背景
抗血小板薬（本明細書では抗血小板剤とも称される）は、米国成人集団において一般的であり、血小板作用を阻害する複数の機序を用いる。抗血小板薬は、多数の脳血管疾患及び心臓血管疾患を治療及び／又は予防するために使用される。

しかしながら、抗血小板薬は、多数の薬物関連有害事象（ＡＤＥ）に関与している。これらの薬物に関連する過剰摂取及び有害事象は、患者集団に深刻な出血及び関連する合併症のリスクをもたらす。加えて、抗血小板薬によって治療されている対象は、療法の停止が対象を心臓発作、脳卒中、又は死亡のリスクの増加に曝す可能性があるが、手術の前に薬物を減らされる必要がある場合があるため、手術において追加の合併症に直面している。

したがって、抗血小板剤誘発性凝固障害などの凝固障害の治療に対するニーズ、並びに抗血小板薬を服用する対象を手術のために準備させるための解決策に対するニーズが当該技術分野において存在する。

したがって、抗血栓剤（すなわち、抗血小板剤及び／又は抗凝固剤）の使用は、対象の出血の可能性を増加させ得る。ここで、血小板誘導体が、この阻害を回避又は克服して止血を回復させ得ることを実証する。したがって、例示的実施形態では、フリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）及びそれを含む組成物が提供され、これは、対象のこの増加した出血の可能性を低減し得、特定の例示的実施形態では、そのような抗血栓剤による血小板のこの阻害を回避又は克服して止血を回復させ得る。

対象における凝固障害を治療するための方法及び組成物が本明細書に提供される。そのような方法は、例えば、その必要がある対象が抗凝固剤を投与されたことがあるという理由で、血小板を含むか又は例示的実施形態では血小板誘導体及び更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む組成物の有効量を前記対象に投与することを含み得る。そのようなＦＤＰＤ及び方法の例示的実施形態、並びに多数の追加の態様及び実施形態についての様々な特性が本明細書に提供される。

本開示の態様及び実施形態に関する更なる詳細は、本特許出願を通して提供される。この発明の概要のセクションの前述の段落は、本明細書に開示される態様及び実施形態の網羅的なリストではない。セクション及びセクションの見出しは、読みやすさを目的とし、セクションにわたって方法、組成物、及びキット又はその機能要素などの開示の組み合わせを制限することを意図するものではない。

増加濃度のカングレロールによる、又はよらない、１０μＭのアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）活性化によって誘発された、積分凝集曲線として表される、多血小板血漿におけるカングレロール（「Ｃａｎｇ」）の光透過凝集測定を示す。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した血小板閉塞に対するカングレロール、ＡＤＰ、又はそれらの組み合わせの効果を示す。 図２からのデータセットについての曲線下面積（ＡＵＣ）の棒グラフである。図２からの複製データセットを平均として提示する。 図２からのデータセットについての閉塞時間の棒グラフである。図２からの複製データセットを平均として提示する。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した血小板閉塞に対する再水和の６０、９０、又は１１５分後のＡＤＰ及びカングレロールの存在下及び不在下での多血小板血漿に補充されたＦＤＰＤ（「ｔｈｒｏｍｂ」；３００，０００／μＬ）の効果を示す。 図５からのデータセットについてのＡＵＣの棒グラフである。図５からの複製データセットを平均として示す。 図５からのデータセットにういての閉塞時間の棒グラフである。図５からの複製データセットを平均として示す。 コラーゲン（１０μｇ／ｍＬ）及び様々な濃度のエプチフィバチド（「Ｅｐｔｉ」）で処理された血小板（１μＬ当たり２５０，０００個の血小板の濃度）の凝集実験からのＡＵＣの棒グラフである。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した全血に対する様々な濃度でのエプチフィバチドの効果を示す。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した様々な濃度のエプチフィバチドを含む、及び含まない、全血に対するＦＤＰＤ（「Ｔｓｏｍｅ」）補充（約２００，０００／μＬ）の効果を示す。 図１０からのデータセットについての閉塞時間の棒グラフである。 図１０からのデータセットについてのＡＵＣの棒グラフである。 ＦＤＰＤ（様々なロット）が乏血小板血漿（ＰＰＰ）中のエプチフィバチドの存在下で閉塞することを示す。 図１３からのデータセットについてのＡＵＣの棒グラフである。図１３からの複製データセットを平均として示す。 図１３からのデータセットについての閉塞時間の棒グラフである。図１３からの複製データセットを平均として示す。 様々な濃度のアスピリン（「ＡＳＡ」）を含む、及び含まない、コラーゲン（１０μｇ／ｍＬ）又はアラキドン酸（「ＡＡ」；５００μｇ／ｍＬ）で処理された血小板の凝集実験からのＡＵＣの棒グラフである。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した剪断下でのコラーゲンでコーティングされたプラスチックに対する応答によって測定した、全血、様々な濃度のアスピリン（ＡＳＡ）で処理された全血、及び様々な濃度のアスピリンで処理され、ＦＤＰＤ（約２００，０００～４００，０００／μＬ）を補充された全血についての閉塞時間の棒グラフである。 トロンボプラスチン及びコラーゲンでコーティングされたＴ－ＴＡＳ ＡＲチップにおける閉塞時間によって測定した、ＡＳＡ（２００マイクロモル）、カングレロール（１マイクロモル）、ＡＰ２ ６Ｆ１（４０マイクログラム）の存在下で全血中のＦＤＰＤによって促進される血栓形成の回復を示す。 閉塞（圧力）超過時間によって測定した、ＡＳＡ（２００マイクロモル）、カングレロール（１マイクロモル）、及び６Ｆ１（４０マイクログラム／ｍＬ）の存在下で全血中のＦＤＰＤによって促進される血栓形成の回復を示す。 ＡＵＣによって測定した、高剪断下でのプラスチック固定化ブタコラーゲンとの相互作用に対するアスピリン（ＡＳＡ）阻害化全血（５００マイクロモル）へのＦＤＰＤ補充の効果を示す。 経時的な閉塞（圧力）によって測定した、高剪断下でのプラスチック固定化ブタコラーゲンとの相互作用に対するアスピリン（ＡＳＡ）阻害化全血（５００マイクロモル）へのＦＤＰＤ補充の効果を示す。 ＡＵＣによって測定した、高剪断下でのプラスチック固定化ブタコラーゲンとの相互作用に対するアスピリン（ＡＳＡ）阻害化全血（１００マイクロモル）へのＦＤＰＤ補充の効果を示す。 経時的な閉塞（圧力）によって測定した、高剪断下でのプラスチック固定化ブタコラーゲンとの相互作用に対するアスピリン（ＡＳＡ）阻害化全血（１００マイクロモル）へのＦＤＰＤ補充の効果を示す。 正常及びアスピリン阻害化血漿へのＦＤＰＤ補充のピークトロンビンに対する効果を示す。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した血小板閉塞に対するカングレロール単独又はカングレロール＋ＦＤＰＤの効果を示す。 図２５Ａからのデータセットについての閉塞時間の棒グラフである。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した血小板閉塞に対するチロフィバン単独、又はチロフィバンとランダムドナー血小板（ＲＤＰ）若しくはＦＤＰＤとの効果を示す。 図２６Ａからのデータセットについての閉塞時間の棒グラフである。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した血小板閉塞に対するエプチフィバチド単独、又はエプチフィバチドとＲＤＰ若しくはＦＤＰＤとの効果を示す。 図２７Ａからのデータセットについての閉塞時間の棒グラフである。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用した血小板閉塞に対するＡＰ２単独、又はＡＰ２とＲＤＰ若しくはＦＤＰＤとの効果を示す。 図２８Ａからのデータセットについての閉塞時間の棒グラフである。 Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用したアスピリン療法の対象から採取されたＰＲＰに対するＦＤＰＤの効果を示す。 図２９Ａからのデータセットについての閉塞時間の棒グラフである。 トロンビン生成に対するアスピリン療法の対象から採取されたＰＲＰに対するＦＤＰＤの効果を示す。 ＦＤＰＤを添加したか、又は添加していないアスピリン療法の対象から採取されたＰＲＰについてのトロンビン生成パラメータの棒グラフである。 緩衝液、アラキドン酸、又はコラーゲンを添加したイブプロフェン療法の対象から採取されたＰＲＰの凝集測定を示す。 ＦＤＰＤを含むか、又は含まないイブプロフェン療法の対象から採取されたＰＲＰに対するＡＤＰの効果を示す。 超薬理学的用量のクロピドグレルによって処置されたマウスの出血時間に対するＦＤＰＤの投薬の効果を示す。 ＦＤＰＤを含むか、又は含まない多血小板血漿（ＰＲＰ）の閉塞時間に対するカングレロール及びチカグレロールの効果を示す。 ＦＤＰＤを含むか、又は含まない多血小板血漿（ＰＲＰ）の閉塞時間に対するカングレロール及びチカグレロールの効果を示す。 超薬理学的クロピドグレルによって処置されたＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスにおける出血時間を回復させるＦＤＰＤの能力を示すための尻尾切断試験を示す。 超薬理クロピドグレルによって処置されたニュージーランド白ウサギにおける出血時間を回復させるＦＤＰＤの能力を示す。各線は、同一条件下で同じ用量で投与された異なるウサギを表す。 ＦＤＰＤが２５ｎｇ／ｍｌのリバロキサバンの存在下でトロンビン生成を触媒することができることを示す。 ＦＤＰＤが２５ｎｇ／ｍｌのリバロキサバンの存在下で内因性トロンビン産生能を部分的に回復させることができることを示す。 リバロキサバンで処理された全血中にＦＤＰＤを添加することで閉塞時間が部分的に回復したことを示す。 リバロキサバン処理オクタプラスにおけるＦＤＰＤによる活性化因子トロンビン産生能を示す。 リバロキサバン処理オクタプラスにおけるＦＤＰＤによる最大トロンビン濃度を示す。 リバロキサバン処理オクタプラスにおけるＦＤＰＤによるＡＴＧラグタイムを示す。 リバロキサバン処理された新鮮な多血小板血漿（ＰＲＰ）におけるＦＤＰＤによる活性化因子トロンビン産生能を示す。 リバロキサバン処理された新鮮な多血小板血漿（ＰＲＰ）におけるＦＤＰＤによる最大トロンビン濃度を示す。 リバロキサバン処理された多血小板血漿（ＰＲＰ）におけるＦＤＰＤによるＡＴＧラグタイムを示す。 ＡＣＴ試験を使用した抗凝固剤の存在下で凝血する時間に対するＦＤＰＤの効果を示す。 １μＬ当たり５Ｋ及び５０Ｋの血小板でのＦＤＰＤによるアフェレーシス単位（ＡＰＵ）を比較した、プールされた正常血漿中のトロンビン生成に対する０．１Ｕヘパリンの効果を示す。 １μＬ当たり１０Ｋ及び５０Ｋの血小板でのＦＤＰＤによる、４μｇ／ｍｌのプロタミン（推奨される拮抗用量の１／２）によって拮抗された０．８Ｕ／ｍＬのヘパリンの影響を示す。 ｘ軸に記載されるように、ヘパリン及びプロタミンで処理された試料のトロンビン生成のピーク高さを示す。 ＰＲＰ単独に対するＦＤＰＤの存在下でのアスピリン処理による閉塞時間を示す。 ＰＲＰ単独に対するＦＤＰＤの存在下でのチカグレロール及びアスピリンの両方による閉塞時間を示す。 アゴニストの存在下ではあるが、新鮮な血小板の不在下でのＦＤＰＤの凝集応答を示す。 アゴニストの存在下ではあるが、新鮮な血小板の不在下での多血小板血漿（ＰＲＰ）の凝集応答を示す。 ２０μＭのＡＤＰの存在下でのＦＤＰＤ及びＰＲＰの凝集の比較を示す。 １０μｇ／ｍｌのコラーゲンの存在下でのＦＤＰＤ及びＰＲＰの凝集の比較を示す。 ３００μＭのエピネフリンの存在下でのＦＤＰＤ及びＰＲＰの凝集の比較を示す。 １ｍｇ／ｍｌのリストセチンの存在下でのＦＤＰＤ及びＰＲＰの凝集の比較を示す。 １０μＭのＴＲＡＰ－６の存在下でのＦＤＰＤ及びＰＲＰの凝集の比較を示す。 ５ｍｇ／ｍｌのアラキドン酸の存在下でのＦＤＰＤ及びＰＲＰの凝集の比較を示す。 アフェレーシス血小板上のＣＤ６２Ｐの発現を観察することにより、ＴＲＡＰ－６ペプチドが血小板活性化を促進することができることを示す。 ＴＲＡＰ－６ペプチドがＦＤＰＤ上のＣＤ６２Ｐの発現を増加させることができないことを示す。 休止した新鮮な血小板、活性化された新鮮な血小板、及び異なるロットのＦＤＰＤにおける平均蛍光強度（ＭＦＩ）の観点からのフローサイトメトリーによるトロンボスポンジン（ＴＳＰ－１）の測定を示す。 休止した新鮮な血小板、活性化された新鮮な血小板、及び異なるロットのＦＤＰＤにおける平均蛍光強度（ＭＦＩ）の観点からのフローサイトメトリーによるフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の測定を示す。 アフェレーシス血小板及びＦＤＰＤのフローサイトメトリーにより測定される前方散乱（ＦＳＣ）を示す。 抗ＣＤ－４１抗体で染色されていない（暗いデータ点）又は染色（明るいデータ点）されたＦＤＰＤの例示的なフローサイトメトリーデータを示す。 カルシウムあり（明るいデータ点）及びなし（暗いデータ点）でアネキシンＶとインキュベートされたＦＤＰＤの例示的なヒストグラムを示す。 抗ＣＤ６２抗体（明るいデータ点）又はアイソタイプ対照（暗いデータ点）とインキュベートされたＦＤＰＤの例示的なヒストグラムを示す。 組織因子及びリン脂質（実線及び長い破線）並びに対照セファリン（ドット）を含有するＰＲＰ試薬の存在下でのＦＤＰＤのトロンビンピーク高さのプロットを示す。 動的光散乱（ＤＬＳ）によって決定される、ヒトの期限内保存血小板（バッチＪ）及びそれから誘導される血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有率のプロットである。 ＤＬＳによって決定される、ヒトの期限内保存血小板（バッチＫ）及びそれから誘導される血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有率のプロットである。 ＤＬＳによって決定される、ヒトの期限内保存血小板（バッチＬ）及びそれから誘導される血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有率のプロットである。 ＤＬＳによって決定される、ヒトの期限内保存血小板（バッチＤ）及びそれから誘導される血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有率のプロットである。 ＤＬＳによって決定される、ヒトの期限内保存血小板（バッチＥ）及びそれから誘導される血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有率のプロットである。 ＤＬＳによって決定される、ヒトの期限内保存血小板（バッチＦ）及びそれから誘導される血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有率のプロットである。 染色されていない（黒色）、又はアイソタイプ対照抗体で染色された（濃い灰色）、又はＦＩＴＣ標識９Ｆ９抗体で染色された（薄い灰色）低血漿ＦＤＰＤの例示的なヒストグラムの比較、及び２回の反復の平均蛍光強度を示す表を示す。 染色されていない（黒色）、又は抗ＰＡＣ－１抗体で染色された（薄い灰色）低血漿ＦＤＰＤの例示的なヒストグラムの比較、及び２回の反復の平均蛍光強度を示す表を示す。

詳細な説明
本発明の実施形態を詳細に記載する前に、本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を記載する目的のためのものであり、限定することを意図するものではないことを理解されたい。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、その用語が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載の方法及び材料と同様又は同等である任意の方法及び材料が本発明の実践に使用され得るが、ここでは、好ましい方法及び材料を記載する。本明細書で言及される全ての刊行物は、引用された刊行物に関連する方法及び／又は材料を開示及び説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。本開示は、あらゆる組み込まれた刊行物との矛盾を制御する。

本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上明白に別途指示されない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「糖」への言及は、１つ以上の糖、及び当業者に既知のそれらの同等物への言及を含む。更に、同等の用語を使用して記載され得る用語の使用は、それらの同等の用語の使用を含む。したがって、例えば、「対象」という用語の使用は、「患者」、「人」、「動物」、「ヒト」、及び医学的処置を受ける対象を示すために当該技術分野で使用される他の用語を含むことを理解されたい。単一の概念を包含するために複数の用語を使用することは、使用されるそれらの用語のみに概念を限定するものとして解釈されるべきではない。

本明細書で使用される用語が、単に特定の実施形態を記載する目的のためのものであり、限定することを意図するものではないことを理解されたい。更に、値の範囲が開示される場合、当業者は、開示される範囲内の他の全ての特定の値が、本明細書で各特定の値又は範囲を開示する必要なしに、これらの値及びそれらが表す範囲によって本質的に開示されることを理解するであろう。例えば、開示される１～１０の範囲は、１～９、１～５、２～１０、３．１～６、１、２、３、４、５などを含む。更に、開示される範囲の各々は、範囲のより低い値については最大５％低いこと、及び範囲のより高い値については最大５％高いことを含む。例えば、開示される４～１０の範囲は、３．８～１０．５を含む。この概念は、本書では「約」という用語によって捉えられている。

明確にするために、別個の実施形態の文脈で記載される本発明の特定の特徴はまた、組み合わせられて単一の実施形態で提供され得ることが理解される。逆に、簡潔性のために単一の実施形態の文脈において記載されている本発明の様々な特徴は、別個に又は任意の好適な部分的組み合わせで提供されてもよい。本発明に関する実施形態の全ての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、各々及び全ての組み合わせが個別かつ明示的に開示されたかのように、本明細書に開示される。更に、様々な実施形態及びその要素の全ての部分的組み合わせもまた、本開示によって具体的に包含され、各々及び全てのそのような部分的組み合わせが個別かつ明示的に本明細書に開示されたかのように、本明細書に開示される。

本明細書で使用される場合、「凝固障害」という用語は、過剰な出血又は凝血のいずれかをもたらす止血の任意の異常を意味する。対象に抗血小板剤又は抗凝固剤を投与することによって引き起こされる凝固障害は、典型的には、出血の可能性の増加を含む。したがって、例示的な実施形態における凝固障害を治療するための本明細書の方法は、対象の出血の可能性を減少させるための方法である。

本明細書で使用される場合、「血小板」という用語は、全血小板、断片化された血小板、血小板誘導体、又はＦＤＰＤを含み得る。上記の定義内の「血小板」は、例えば、全血中の血小板、血漿中の血小板、選択された血漿タンパク質で任意選択的に補充された緩衝液中の血小板、低温貯蔵された血小板、乾燥された血小板、凍結保存された（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ）血小板、解凍された凍結保存された（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ）血小板、再水和された乾燥された血小板、再水和された凍結保存された（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ）血小板、凍結保存された（ｌｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ）血小板、解凍された凍結保存された（ｌｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ）血小板、又は再水和された凍結保存された（ｌｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ）血小板を含み得る。「血小板」は、ヒトなどの哺乳動物の「血小板」であり得るか、又は非ヒト哺乳動物などの「血小板」であり得る。本明細書で使用される場合、「調製剤」は、任意の適切な成分を含み得る。いくつかの実施形態では、調製剤は、液体培地を含み得る。いくつかの実施形態では、調製剤は、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及び血液若しくは血液製剤中に見出され得るか、又は血小板を乾燥させるのに有用であることが既知である任意の他の塩、あるいはこれらのうちの２つ以上の任意の組み合わせから選択される１つ以上の塩を含み得る。いくつかの実施形態では、調製剤は、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及び血液又は血液製剤中に見出され得る任意の他の塩などの１つ以上の塩を含む。例示的な塩としては、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、調製剤は、約０．５ｍＭ～約１００ｍＭの１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態では、調製剤は、約０．５ｍＭ～約１００ｍＭ（例えば、約０．５～約２ｍＭ、約２ｍＭ～約９０ｍＭ、約２ｍＭ～約６ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０～約８５ｍＭ）の１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態では、調製剤は、約５ｍＭ、約７５ｍＭ、又は約８０ｍＭの１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態では、調製剤は、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びその２つの組み合わせから選択される１つ以上の塩を、約０．５ｍＭ～約２ｍＭの濃度で含む。

本明細書で使用される場合、「トロンボソーム」（本明細書では、特に実施例及び図では、「Ｔｓｏｍｅ」又は「Ｔ」とも称される場合がある）は、インキュベーション物質（例えば、本明細書に記載のインキュベーション物質のうちのいずれか）で処理され、凍結保存（すなわち、フリーズドライ）されている、血小板誘導体である。したがって、トロンボソームは、フリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）である。いくつかの場合では、ＦＤＰＤは、プールされた血小板から調製され得る。ＦＤＰＤは、周囲温度で、乾燥形態で２～３年の貯蔵寿命を有し得、直ちに注入するために数分以内に滅菌水で再水和され得る。ＦＤＰＤの１つの例は、血小板減少性患者における急性出血の治療のための臨床試験にあり、またＣｅｌｌｐｈｉｒｅ，Ｉｎｃ．の製品であるＴＨＲＯＭＢＯＳＯＭＥＳ（登録商標）である。非限定的な例示的実施形態では、本明細書のＦＤＰＤ組成物、又は例示的なフリーズドライ血小板誘導体（すなわち「ＦＤＰＤ」）組成物、例えば、本明細書の実施例１５に従って調製される組成物は、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で血小板誘導体の集団中の血小板誘導体の１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向がある血小板誘導体の集団を含み、血小板誘導体は、１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力を有する。非限定的な例示的実施形態では、ＦＤＰＤ組成物、又は本明細書における例示的ＦＤＰＤ組成物、例えば、本明細書の実施例１５に従って調製される組成物は、血小板誘導体を含む組成物であり、血小板誘導体の少なくとも５０％は、ＣＤ４１陽性血小板誘導体であり、ＣＤ４１陽性血小板誘導体の１５％未満、１０％未満、又は更に非限定的な例示的実施形態では５％未満は、０．５μｍ未満の直径を有する微粒子であり、血小板誘導体は、１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも０．５、１．０、更に非限定的な例示的実施形態では１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）である。前段の例示的実施形態の非限定的な例を含む特定の例示的実施形態では、血小板誘導体は、直径が０．５～２．５ｕｍである。

本明細書で使用される場合、「抗凝固剤」は、抗血小板剤を含まない抗血栓剤である。典型的には、第ＩＩａ因子、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、第Ｘａ因子、第ＸＩ因子、組織因子、若しくは凝血因子（例えば、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、又は第Ｘ因子）のビタミンＫ依存性合成を阻害する薬剤、又は抗トロンビン（例えば、抗トロンビンＩＩＩ）を活性化する薬剤は、抗凝固剤であるとみなされる。抗凝固剤の他の機序は、既知である。抗凝固剤としては、ダビガトラン、アルガトロバン、ヒルジン、リバロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、フォンダパリヌクス、ワルファリン、ヘパリン、及び低分子量ヘパリンが挙げられる。

本明細書で使用される場合、「抗血小板剤」は、抗血栓剤であり、かつ抗凝固剤を含まない。典型的には、Ｐ２Ｙ受容体（例えば、Ｐ２Ｙ１２）、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ（すなわち、ＣＤ４１）を阻害する薬剤、又はトロンボキサンシンターゼ若しくはトロンボキサン受容体に拮抗する薬剤は、抗血小板剤であるとみなされる。抗血小板剤の他の機序は、既知である。本明細書で使用される場合、アスピリンは、抗血小板剤であるが、抗凝固剤ではないとみなされる。抗血小板剤の例としては、アスピリン（アセチルサリチル酸又はＡＳＡとも称される）、カングレロール（例えば、ＫＥＮＧＲＥＡＬ（登録商標））、チカグレロール（例えば、ＢＲＩＬＩＮＴＡ（登録商標））、クロピドグレル（例えば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標））、プラスグレル（例えば、ＥＦＦＩＥＮＴ（登録商標））、エプチフィバチド（例えば、ＩＮＴＥＧＲＩＬＩＮ（登録商標））、チロフィバン（例えば、ＡＧＧＲＡＳＴＡＴ（登録商標））、及びアブシキシマブ（例えば、ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））が挙げられる。本開示の目的のために、抗血小板剤は、Ｐ２Ｙ受容体（例えば、Ｐ２Ｙ_１２）、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａを阻害する薬剤、又はトロンボキサンシンターゼ若しくはトロンボキサン受容体に拮抗する薬剤を含む。トロンボキサンＡ_２アンタゴニストの非限定的な例は、アスピリン、テルトロバン、及びピコタミドである。Ｐ２Ｙ受容体アンタゴニストの非限定的な例としては、カングレロール、チカグレロール、エリノグレル、クロピドグレル、プラスグレル、及びチクロピジンが挙げられる。糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａの非限定的な例としては、アブシキシマブ、エプチフィバチド、及びチロフィバンが挙げられる。ＮＳＡＩＤＳ（例えば、イブプロフェン）もまた、本開示の目的のための抗血小板剤であるとみなされる。抗血小板剤の他の機序は、既知である。抗血小板剤としては、ＰＡＲ１アンタゴニスト、ＰＡＲ４アンタゴニスト、ＧＰＶＩアンタゴニスト、及びα２β１コラーゲン受容体アンタゴニストも挙げられる。ＰＡＲ－１アンタゴニストの非限定的な例としては、ボラパキサール及びアトパキサールが挙げられる。本明細書で使用される場合、アスピリンは、抗血小板剤であるが、抗凝固剤ではないとみなされる。抗血小板剤の更なる非限定的な例としては、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートが挙げられる。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、サルポグレラート、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、本明細書に記載の抗血小板剤のうちのいずれか２つ（又はそれ以上）などの、複数の抗血小板剤を含み得る。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリン及びクロピドグレルであり得る。

カングレロールは、クロピドグレル、チカグレロール、及びプラスグレルと同様に、血小板上のＰ２Ｙ_１２（ＡＤＰ）受容体を遮断する。カングレロールは、いくつかの場合では、このクラスの薬物の代表として使用され得る。カングレロールは、クロピドグレル及びプラスグレルとは異なり、生物学的に活性となるために肝代謝を必要としない。

エプチフィバチドは、血小板上のＧＰＩＩｂ－ＩＩＩａ受容体のフィブリン結合の役割を遮断するペプチド治療薬である。薬物を、典型的には、１８０μｇ／ｋｇボーラスとしてＩＶを介して投与し、続いて２μｇ／ｋｇ／分の連続注入を行う。エプチフィバチドの血中濃度は、典型的には、約１～２μＭである。出血時間は、一般に、薬物停止から約１時間以内に正常に戻る。

アスピリンは、不可逆的なシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害剤である。血小板中のＣＯＸ酵素は、トロンボキサンＡ２、プロスタグランジンＥ２、及びプロスタシクリン（ＰＧＩ２）の合成に関与する。アスピリンは、血小板内のＣＯＸ酵素を永久的に不活性化し、かつ血小板は、新たな酵素を合成するための核物質を有しないため、アスピリン効果を克服するためには、新たな血小板を生成しなければならない。トロンボキサンＡ２、プロスタグランジンＥ２、及びプロスタシクリン（ＰＧＩ２）なしでは、血小板は、その凝集促進活性が制限される。多くの人は、望ましくない凝血事象を防止するために、低用量のアスピリンを維持される。アスピリンのバイオアベイラビリティは、投与経路によって大きく異なり、５００μＭのピークで単回５００ｍｇ用量のＩＶ、及び４４μＭで経口で同じ用量である。

抗血小板クラスの薬物は、心不全、脳卒中などをもたらす望ましくない凝血エピソードを防止するために広く使用されている。多くの場合において、抗血小板薬が拮抗若しくは停止される必要があり得るか、又は出血の可能性が、血流中に抗血小板薬を有する対象においていくつかの他の方法で低減される必要があり、したがって対象の出血の可能性が増加される。事前に計画された手術の状況のように、事前に通知されている場合には、抗血小板薬の用量が手術の前に停止され、手術中の望ましくない出血を防止し得る場合がある。抗血小板剤が迅速に拮抗する必要がある場合には、拮抗物質は、典型的には、容易には入手できないか、高価であるか、又は患者に重大なリスクをもたらす。迅速な抗血小板拮抗が必要である場合には、血小板輸血が典型的には投与されるが、これに対する応答は、多くの場合、部分的な拮抗のみである。この拮抗過程の注意点は、新たに注入された血小板自体が循環薬物抗血小板活性に対して感受性であるのに対し、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ＦＤＰＤを含む）はそうではないことである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ＦＤＰＤを含む）は、活性拮抗物質である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ＦＤＰＤを含む）の止血活性は、抗血小板薬に屈しない。

いくつかの例示的な抗血小板剤及び潜在的な拮抗方法を以下に記載する。

アセチルサリチル酸（ＡＳＡ；アスピリン）－アスピリンは、血小板においてＣＯＸ－１遮断剤として機能し、これは、血小板由来のトロンボキサン形成を不可逆的に阻害することによって、血小板を不活性にする。臨床的には、アスピリンは、緊急事態における血小板輸血によって、又は今後手術が予定されている治療を停止することによって拮抗する場合がある。

クロピドグレル（例えば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標））－クロピドグレルは、ＡＤＰが血小板上でその受容体に結合することを防止するように作用する。ＡＤＰ結合は、血小板形状の変化及び凝集をもたらす。クロピドグレルは、不可逆的である。臨床的には、クロピドグレルは、緊急事態における血小板輸血によって、又は今後手術が予定されている治療を停止することによって拮抗する場合がある。

カングレロール（例えば、ＫＥＮＧＲＥＡＬ（登録商標））－カングレロールは、ＡＤＰが血小板上でその受容体に結合することを防止するように作用する。ＡＤＰ結合は、血小板形状の変化及び凝集をもたらす。クロピドグレルは、可逆的であり、血小板機能は、注入を停止してから約１時間後に戻る。臨床的には、これは、一般に、拮抗が手順の後に必要とされる場合に好ましい。

チカグレロール（例えば、ＢＲＩＬＩＮＴＡ（登録商標））－チカグレロールは、ＡＤＰがその受容体に結合することを防止し、かつ逆アゴニストとして作用する。チカグレロールは、可逆的であり、血小板機能は、最後の投与量の約７２時間後に戻り得る。チカグレロールの作用の拮抗は、最後の用量後の時間によって影響を受け得る。最後の用量が２４時間よりも前であった場合、血小板輸血は、結果に拮抗するための治療薬であり得る場合がある。

エフィエント（例えば、ＰＲＡＳＵＧＲＥＬ（登録商標））－エフィエントは、ＡＤＰがその受容体に結合することを防止するように作用し、かつ不可逆的アンタゴニストとして作用する。不可逆的なアンタゴニストであるため、その効果を克服するためには、新しい血小板を形成しなければならない。臨床的には、エフィエントは、緊急事態における血小板輸血によって、又は今後手術が予定されている治療を停止することによって拮抗する。

エプチフィバチド（インテグリリン）－エプチフィバチドは、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａを遮断するように作用し、かつ可逆的なアンタゴニストとして作用する。臨床的には、インテグリリンは、緊急事態における血小板輸血によって、又は今後手術が予定されている治療を停止することによって拮抗する。

血小板注入は、抗血小板薬の治療法として現在使用されているが、血小板注入は、これらの薬物の効果を弱めるためにのみ作用する。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤは、これらの薬物に対して反応性ではなく、凝血を助けるそれらの能力を維持する。これにより、ＦＤＰＤを介した治療は完全に独自のものとなり、製品に新たな用途が導入される。

血小板由来の製品は、抗血栓剤（すなわち、抗凝固剤又は抗血小板薬）の活性を相殺するための治療法としては現在使用されておらず、そのような効果は、例えば、外科的処置中に、又は外傷性事象の結果として、対象に有害な結果をもたらすか、又は対象に許容できないリスクを引き起こす可能性がある。それ以外で対象の出血の可能性を低減する、又は抗凝固剤及び／若しくは抗血小板剤での治療後に止血を回復させる抗血小板剤のための現在承認されている拮抗物質は存在しない。したがって、緊急治療（手術前、外傷など）は、典型的には、出血を回避又は緩和するための包括的な予防策を必要とする。非限定的な例としては、血漿、赤血球、及び抗線溶剤の注入が挙げられる。血小板誘導体、例示的な実施形態では本明細書に提供されるフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）は、この長年の必要性を克服し、これらの一般的な治療又はリスク軽減戦略に対する有効な代替策又は補完である。

本明細書の実施例セクションの多数の実施例で提供される結果は、抗血小板薬を服用している対象のインビトロモデルにおけるＦＤＰＤ生成物を含む組成物の影響を実証している。ＦＤＰＤ組成物及び他の凍結乾燥血小板製品は、外傷又は止血不全の診断の後に対象の血流に注入されるように設計されている。これらの抗血小板薬は、いくつかを挙げると、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）、アラキドン酸、フィブリノゲン、及びフォン・ウィルブランド因子結合に対する血小板応答を阻害する複数の形態の血小板阻害機序を利用する。これらには、アスピリン、クロピドグレル、チカグレロール、エフィエント、カングレロール、及びエプチフィバチドのような薬物が含まれる。機序にかかわらず、本明細書に提供されるＦＤＰＤは、そのような抗血小板剤を服用している対象の出血の可能性を低下させ、いくつかの実施形態では、対象の正常な止血を回復させることができる。

いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、ある特定の血小板誘導体、例示的実施形態では本明細書に提供されるＦＤＰＤは、抗凝固剤によって抑制されるものを超えてトロンビン生成を増強するために凝固促進性負荷電表面を提供することによって、少なくとも部分的に作用し得ると考えられる。同様に、いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、ある特定の血小板誘導体、例示的実施形態では本明細書に提供されるＦＤＰＤは、循環血小板に結合し、かつそれと共凝集することによって、少なくとも部分的に作用し得ると考えられる。したがって、そのようなＦＤＰＤは、凝集能力が低下しているにもかかわらず、また、全てではなくとも少なくとも一部の抗血小板剤によってターゲティングされる表面マーカーの全てではなくとも少なくともいくつかを保持しているにもかかわらず、抗血栓剤（すなわち、抗凝固剤又は抗血小板剤）を服用している対象の出血の可能性を低減することができるという驚くべき特性を提供する。

出血を制御し、治癒を改善するための製品及び方法が本明細書に記載される。本明細書に記載の組成物、生成物及び方法はまた、本明細書に開示される抗血小板剤（例えば、非限定的な例として、アスピリン（アセチルサリチル酸又はＡＳＡとも称される）、カングレロール（例えば、ＫＥＮＧＲＥＡＬ（登録商標））、チカグレロール（例えば、ＢＲＩＬＩＮＴＡ（登録商標））、クロピドグレル（例えば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標））、プラスグレル（例えば、ＥＦＦＩＥＮＴ（登録商標））、エプチフィバチド（例えば、ＩＮＴＥＧＲＩＬＩＮ（登録商標））、チロフィバン（例えば、ＡＧＧＲＡＳＴＡＴ（登録商標））、又はアブシキシマブ（例えば、ＲＥＯＰＲＯ（登録商標）））のいずれかの活性に対抗するために使用され得る。本明細書に開示される生成物及び方法は、ある特定の実施形態では、創傷の閉鎖及び治癒を助け得る実施形態を対象とする。

本明細書に提供されるある特定の態様では、血小板を含む組成物、又は例示的実施形態では血小板誘導体を含む組成物、更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである血小板誘導体を含む組成物は、患者の表面上又は患者の内部の創傷に送達され得る。様々な実施形態では、血小板を含む組成物、又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物、又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物は、接着包帯、圧縮包帯、液体溶液、エアロゾル、マトリックス組成物、及びコーティングされた縫合、又は他の医療的閉鎖を含むがこれらに限定されない、選択された形態で適用され得る。実施形態では、血小板を含む組成物、又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物は、患者の表面上の罹患領域の全部又は一部のみに投与され得る。他の実施形態では、血小板を含む組成物、又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物は、例えば血流を介して、全身的に投与され得る。実施形態では、血小板誘導体の適用は、２日間又は３日間、好ましくは５～１０日間、又は最も好ましくは最大１４日間、止血効果をもたらし得る。

いくつかの態様は、対象における凝固障害を治療する方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に、血小板を含む組成物又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的な実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物の有効量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、追加の成分、例えばそのようなＦＤＰＤがフリーズドライされたときに存在した成分を更に含む。そのような追加の成分は、１つ以上の塩、緩衝液、並びにある特定の実施形態では凍結保護剤（凍結乾燥剤とも呼ばれる）及び／又は有機溶媒を含むインキュベーション物質の成分を含み得る。例えば、そのような組成物は、本明細書で更に提供されるように、１つ以上の糖を含み得、これは例示的実施形態ではトレハロースを含み、更なる例示的実施形態ではポリスクロースを含む。

いくつかの態様は、対象における凝固障害を治療する方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、凝固障害は、対象の血液中の抗血小板剤の存在の結果である。

いくつかの態様は、抗血小板剤によって治療されていたか、又は治療されている対象における凝固障害を治療する方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に、血小板を含む組成物又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物の有効量を投与することを含み、組成物は、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質を含む。

いくつかの態様は、抗血小板剤によって治療されていたか、又は治療されている対象における凝固障害を治療する方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの態様は、対象における正常な止血を回復させる方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に、血小板を含む組成物又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的な実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物の有効量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、追加の成分、例えばそのようなＦＤＰＤがフリーズドライされたときに存在した成分を更に含む。そのような追加の成分は、１つ以上の塩、緩衝液、並びにある特定の実施形態では凍結保護剤（凍結乾燥剤とも呼ばれる）及び／又は有機溶媒を含むインキュベーション物質の成分を含み得る。例えば、そのような組成物は、本明細書で更に提供されるように、１つ以上の糖を含み得、これは例示的実施形態ではトレハロースを含み、更なる例示的実施形態ではポリスクロースを含む。

いくつかの態様は、対象における正常な止血を回復させる方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの態様は、対象における正常な止血を回復させる方法を提供し、対象は、抗血小板剤で処置されたか、又は処置されており、方法は、その必要がある対象に、血小板を含む組成物又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的な実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物の有効量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、追加の成分、例えばそのようなＦＤＰＤがフリーズドライされたときに存在した成分を更に含む。そのような追加の成分は、１つ以上の塩、緩衝液、並びにある特定の実施形態では凍結保護剤（凍結乾燥剤とも呼ばれる）及び／又は有機溶媒を含むインキュベーション物質の成分を含み得る。例えば、そのような組成物は、本明細書で更に提供されるように、１つ以上の糖を含み得、これは例示的実施形態ではトレハロースを含み、更なる例示的実施形態ではポリスクロースを含む。

いくつかの実施形態は、抗血小板剤によって治療されていたか、又は治療されている対象における正常な止血を回復させる方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

本明細書に記載の組成物はまた、いくつかの場合では、対象を手術のために準備させるために投与され得る。抗血小板剤を服用している一部の患者にとって、手術の前に抗血小板剤の投与量を低減させることは困難又は不可能であり得る（例えば、外傷又は他の緊急手術の場合）。抗血小板剤を服用している一部の患者にとって、手術の前に抗血小板剤の投与量を低減させることは不得策である場合がある（例えば、抗血小板剤の投与量が経時的に低減された場合に、患者が血栓性事象（例えば、深部静脈血栓症、肺塞栓症、又は脳卒中）のリスクに曝されるであろう場合）。

したがって、いくつかの実施形態は、対象を手術のために準備させる方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に、血小板を含む組成物又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的な実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物の有効量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、追加の成分、例えばそのようなＦＤＰＤがフリーズドライされたときに存在した成分を更に含む。そのような追加の成分は、１つ以上の塩、緩衝液、並びにある特定の実施形態では凍結保護剤（凍結乾燥剤とも呼ばれる）及び／又は有機溶媒を含むインキュベーション物質の成分を含み得る。例えば、そのような組成物は、本明細書で更に提供されるように、１つ以上の糖を含み得、これは例示的実施形態ではトレハロースを含み、更なる例示的実施形態ではポリスクロースを含む。

いくつかの実施形態は、対象の手術の準備を整える方法を提供し、この方法は、その準備を必要とする対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの実施形態は、対象の手術の準備を整える方法を提供し、対象は、抗血小板剤で処置されたか、又は処置されており、方法は、その必要がある対象に、血小板を含む組成物又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的な実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物の有効量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、追加の成分、例えばそのようなＦＤＰＤがフリーズドライされたときに存在した成分を更に含む。そのような追加の成分は、１つ以上の塩、緩衝液、並びにある特定の実施形態では凍結保護剤（凍結乾燥剤とも呼ばれる）及び／又は有機溶媒を含むインキュベーション物質の成分を含み得る。例えば、そのような組成物は、本明細書で更に提供されるように、１つ以上の糖を含み得、これは例示的実施形態ではトレハロースを含み、更なる例示的実施形態ではポリスクロースを含む。

いくつかの実施形態は、対象の手術の準備を整える方法を提供し、対象は、抗血小板剤で処置されたか、又は処置されており、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの実施形態では、手術は、緊急手術（例えば、外傷の場合）又は予定された手術であり得る。

いくつかの実施形態では、抗凝固剤による治療は、例示的実施形態では血小板誘導体を含む組成物が対象に投与される前に（例えば、手術の準備において）停止され得る。いくつかの実施形態では、抗凝固剤による治療は、例示的実施形態では血小板誘導体を含む組成物が対象に投与された後一定期間継続し得る。そのような期間は、１、２、３、４、５、６、若しくは７日、又は１、２、３、若しくは４週間、又は１、２、若しくは３ヶ月以上を含み得る。

いくつかの実施形態は、対象における抗血小板剤の効果を改善する方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を、例示的実施形態では有効量の血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物を投与することを含み、この組成物は、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質を含む。

いくつかの態様は、対象における抗血小板剤の効果を改善する方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤の投与量が不正確であるため、抗血小板剤の効果を改善する必要があり得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗血小板剤の効果は、抗血小板剤の過剰摂取後に改善され得る。いくつかの実施形態では、別の薬物（例えば、第２の抗血小板剤）との相互作用の可能性のため、抗血小板剤の効果を改善する必要があり得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗血小板剤の効果は、そのうちの少なくとも１つが抗血小板剤である、２つ以上の薬物の誤った投薬後に改善され得る。

本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、抗線溶剤などの活性剤を更に含み得る。抗線溶剤の非限定的な例としては、ε－アミノカプロン酸（ＥＡＣＡ）、トラネキサム酸、アプロチニン、アミノメチル安息香酸、及びフィブリノゲンが挙げられる。いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体に、抗線溶剤などの活性剤が充填され得る。

本明細書におけるＦＤＰＤを含む組成物は、ある特定の実施形態では、出血の可能性を低減することができ、例示的実施形態では、ＦＤＰＤの投与後に、対象の出血の可能性についての臨床検査が陰性であるか陽性であるかにかかわらず、血液の出血の可能性が上昇した対象における止血を回復させるという驚くべき特性を有する。例示的実施形態におけるそのような出血の可能性の上昇は、典型的には、有効量の抗血小板剤が対象に送達され、対象の血液中にあるためである。したがって、本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、実施された場合の出血の可能性の投与後評価が正常又は異常な結果をもたらすかどうかとは無関係に、対象の出血の可能性を低減することができるという特性を有する。いくつかの実施形態では、そのような投与後評価は、ＦＤＰＤを含む組成物を対象に投与してからある期間後に、例えば、１～４時間後、又は１～３時間後、又は１～２時間後に採取又は収集された試料に対して行われるインビトロ臨床検査を含む。本明細書の態様のいずれかの他の実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、出血の可能性の投与後評価が正常又は異常な結果をもたらすかどうかとは無関係に、出血の可能性が増加した対象において正常な止血が回復されるように、対象の出血の可能性を低減することができるという特性を有する。いくつかの実施形態では、そのような投与後評価は、実施された場合にＦＤＰＤを含む組成物を対象に投与してからある期間後に、例えば、１～４時間後、又は１～３時間後、又は１～２時間後に採取又は収集された試料に対して行われるインビトロ臨床検査を含む。期間は、例えば、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物を対象に投与した後０分～７２時間以内、又は１０分～７２時間以内、又は１０分～４８時間以内、又は１０分～２４時間以内、又は１０分～４時間以内、又は１０分～１時間以内、又は１０分～３０分以内、又は３０分～２４時間以内、又は３０分～４時間以内、又は３０分～１時間以内であり得る。ある特定の実施形態における臨床検査は、本明細書に開示される出血パラメータのうちの１つ以上、又は２つ以上、又は３つ以上である。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物は、出血の可能性が上昇した対象の出血の可能性を低減することができるという特性を有する。更に、ＦＤＰＤを含む組成物は、典型的には、例えば対象の出血の可能性を低減するために対象に有効量で投与された後、対象が、１つ以上のインビトロ臨床検査、例えば、ＦＤＰＤを含む組成物を投与してから１５分～４時間後、３０分～４時間後、１時間～４時間後に採取された、又は１５分～２時間、３０分～２時間後、又は１時間～２時間後に採取された、又は１５分～１時間後、又は３０分～１時間後に採取された血液試料を使用して行われる投与後評価、又はそれらの血液試料に対して行われるインビトロ臨床検査における１つ以上の凝血パラメータの異常値を有し得るという追加の驚くべき特性を有している。本実施形態のいくつかの下位実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、抗血小板剤を服用していない場合に、対象の出血の可能性を、対象のほぼ正常若しくは正常な止血に、又はほぼ止血レベル若しくは止血レベルに低減することができるという特性を有する。しかしながら、これらの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、有効量で対象に投与された後、そのような特性が、出血の可能性についての投与後臨床検査から独立しているという追加の驚くべき特性を保持する。したがって、いくつかの実施形態では、対象は、ＦＤＰＤを含む組成物を投与してから１～４時間後、又はすぐ上で列挙された時間範囲のいずれかに採取された血液試料を使用して行われる投与後評価、又はそれらの血液試料に対して行われるインビトロ臨床検査において、１つ以上の凝血パラメータの異常値を有するであろう。そのような特性、又は評価若しくは試験を含む任意の特性を有するＦＤＰＤを含む組成物を含む方法では、そのような試験工程が実際に方法の工程として列挙されない限り、そのような方法を実践するために実際に試験を実施する必要はないことが理解されよう。

血小板誘導体、特に本明細書に提供されるＦＤＰＤは、例えば、本明細書に提供される方法を使用して生成され、ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるようないくつかの特定された特性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤは、抗血小板拮抗物質によってターゲティングされる（検出可能な量の）生体分子（例えば、受容体）を含む。例えば、ＦＤＰＤは、ＦＤＰＤを含む組成物が投与される同じ対象に投与されるか又は投与されている１つ以上の抗血小板拮抗物質によってターゲティングされる１つ以上の生体分子を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤ上に存在する受容体は、Ｐ２Ｙ受容体（例えば、Ｐ２Ｙ１２受容体）、糖タンパク質ＩＩｂ（すなわち、ＣＤ４１）／ＩＩＩａ（すなわち、ＣＤ６１）、トロンボキサンシンターゼ若しくはトロンボキサン受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ４、ＶＰＶＩ、又はコラーゲン受容体（例えば、α２β１コラーゲン受容体）から選択される。ある特定の実施形態では、血小板誘導体、例示的実施形態ではＦＤＰＤの少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％が、対象に投与される抗血小板剤によってターゲティングされる生体分子に対して陽性である（すなわち、検出可能なレベルを有する）、及び／又は対象の血液中で検出可能である。いくつかの注目すべき非限定的な例として、ＦＤＰＤ上に存在するバイオマーカーは、ＣＤ４１であり得るか、又はＣＤ４１／ＣＤ６１複合体であり得る。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤ上のＣＤ４１／ＣＤ６１複合体は、フィブリノゲン（因子１）によって結合される。

ある特定の実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で集団中のＦＤＰＤの２％、３％、４％、５％、７．５％、１０％、１２．５％、１５％、１７．５％、２０％、２２．５％、又は２５％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を含む。ある特定の実施形態では、ＦＤＰＤは、１０^６個の粒子当たり少なくとも１．２（例えば、少なくとも１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、又は２．５）トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）を有する。

ある特定の実施形態では、ＦＤＰＤは、超活性化された血小板の１つ以上の特徴を有する。そのような特徴は、以下：
Ａ）休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、ＦＤＰＤの表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）の存在、
Ｂ）休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、ＦＤＰＤの表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在、及び
Ｃ）アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較してアゴニストの存在下での血小板活性化マーカーの発現を増加させることができないこと
のうちの１つ以上を含み得る。

いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤ、例示的実施形態ではＣＤ４１陽性ＦＤＰＤの集団の５％未満が、０．５μｍ未満の直径を有する微粒子である。本明細書における血小板誘導体は、本明細書において更に詳細に開示されるように、多数の驚くべき特性を有することが観察されている。本明細書に提供される実施例で示されるように、いくつかの態様及び実施形態では、血小板誘導体は、粉末形態などの固体であるが、そのような血小板誘導体を含む組成物が液体形態である場合も、そのような血小板誘導体の特性が特定、確認、及び／又は測定され得ることが理解されるであろう。

いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、少なくとも約０．５μｍ（例えば、少なくとも約少なくとも約０．６μｍ、少なくとも約０．７μｍ、少なくとも約０．８μｍ、少なくとも約０．９μｍ、少なくとも約１．０μｍ、少なくとも約１．２μｍ、少なくとも約１．５μｍ、少なくとも約２．０μｍ、少なくとも約２．５μｍ、又は少なくとも約５．０μｍ）の粒径（例えば、直径、最大寸法）を有する。いくつかの実施形態では、粒径は、約５．０μｍ未満（例えば、約２．５μｍ未満、約２．０μｍ未満、約１．５μｍ未満、約１．０μｍ未満、約０．９μｍ未満、約０．８μｍ未満、約０．７μｍ未満、約０．６μｍ未満、約０．５μｍ未満、約０．４μｍ未満、又は約０．３μｍ未満）である。いくつかの実施形態では、粒径は、約０．５μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．５μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）である。

いくつかの実施形態では、少なくとも５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％）の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、約０．５μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．５μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲の粒径を有する。いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）の最大９９％（例えば、最大約９５％、最大約８０％、最大約７５％、最大約７０％、最大約６５％、最大約６０％、最大約５５％、又は最大約５０％）は、約０．５μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．５μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲にある。いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）の約５０％～約９９％（例えば、約５５％～約９５％、約６０％～約９０％、約６５％～約８５％、約７０％～約８０％）は、約０．５μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．５μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲にある。

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、細胞表面マーカーを有し得る。細胞表面マーカーの存在は、任意の適切な方法を使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、細胞表面マーカーの存在は、１つ以上の細胞表面マーカーに特異的な結合タンパク質（例えば、抗体）及びフローサイトメトリーを使用して（例えば、陽性率として、例えば、約２．７×１０^５ＦＤＰＤ／μＬ；及び約４．８μＬの抗ＣＤ４１抗体、約３．３μＬの抗ＣＤ４２抗体、約１．３μＬのアネキシンＶ、又は約２．４μＬの抗ＣＤ６２抗体を使用して）決定され得る。細胞表面マーカーの非限定的な例としては、ＣＤ４１（例えば、抗ＣＤ４１抗体を使用してアッセイされ得る糖タンパク質ＩＩｂ又はＧＰＩＩｂとも呼ばれる）、ＣＤ４２（例えば、抗ＣＤ４２抗体を使用してアッセイされ得る）、ＣＤ６２（例えば、抗ＣＤ６２抗体を使用してアッセイされ得るＣＤ６２Ｐ又はＰ－セレクチンとも呼ばれる）、ホスファチジルセリン（例えば、アネキシンＶ（ＡＶ）を使用してアッセイされ得る）、及びＣＤ４７（自己認識で使用される；このマーカーの不在は、場合によっては食作用をもたらし得る）が挙げられる。任意の細胞表面マーカーの陽性率は、任意の適切な陽性率であり得る。例えば、本明細書に記載の方法によって調製され、本明細書の組成物に含まれるものなどの血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）の集団は、少なくとも５５％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも６７％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％）の平均ＣＤ４１陽性率を有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ４１に対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の血小板誘導体は、０．５～２．５μｍの範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４１に対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．４～２．８μｍの範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４１に対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．３～３μｍの範囲のサイズを有する。

別の例として、本明細書に記載のものなどの血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、少なくとも６５％（例えば、少なくとも６７％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％）の平均ＣＤ４２陽性率を有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ４２に対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．５～２．５μｍの範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４２に対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．４～２．８μｍの範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４２に対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．３～３μｍの範囲のサイズを有する。

別の例として、本明細書に記載の方法により調製されるものなどの血小板又は血小板誘導体（例えばＦＤＰＤ）は、少なくとも１０％（例えば少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％）の平均ＣＤ６２陽性率を有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ６２に対して陽性である少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．５～２．５μｍの範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６２に対して陽性である少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．４～２．８μｍの範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６２に対して陽性である少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．３～３μｍの範囲のサイズを有する。

更に別の例として、本明細書に記載の方法により調製されるものなどの血小板又は血小板誘導体（例えばＦＤＰＤ）は、少なくとも２５％（例えば少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％）の平均アネキシンＶ陽性率を有し得る。いくつかの実施形態では、アネキシンＶに対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の血小板誘導体は、０．５～２．５μｍの範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態では、アネキシンＶに対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．４～２．８μｍの範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態では、アネキシンＶに対して陽性である少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の血小板誘導体は、０．３～３μｍの範囲のサイズを有する。

別の例として、本明細書に記載の方法によって調製されるものなどの血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、少なくとも約８％（例えば、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、又は５５％）の平均ＣＤ４７陽性率を有し得る。

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、例えば、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下でトロンビンを生成し得る。例えば、いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）（例えば、約４．８×１０^３個の粒子／μＬの濃度で）は、組織因子を含有する試薬（例えば、０．２５ｐＭ、０．５ｐＭ、１ｐＭ、２ｐＭ、５ｐＭ、又は１０ｐＭで）、及び任意選択的にリン脂質の存在下で、少なくとも２５ｎＭ（例えば、少なくとも３０ｎＭ、３５ｎＭ、４０ｎＭ、４５ｎＭ、５０ｎＭ、５２ｎＭ、５４ｎＭ、５５ｎＭ、５６ｎＭ、５８ｎＭ、６０ｎＭ、６５ｎＭ、７０ｎＭ、７５ｎＭ、又は８０ｎＭ）のトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）を生成し得る。例えば、いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）（例えば、約４．８×１０^３個の粒子／μＬの濃度で）は、組織因子を含有する試薬（例えば、０．２５ｐＭ、０．５ｐＭ、１ｐＭ、２ｐＭ、５ｐＭ又は１０ｐＭで）及び任意選択的にリン脂質の存在下で、約２５ｎＭ～約１００ｎＭ（例えば、約２５ｎＭ～約５０ｎＭ、約２５～約７５ｎＭ、約５０～約１００ｎＭ、約７５～約１００ｎＭ、約３５ｎＭ～約９５ｎＭ、約４５～約８５ｎＭ、約５５～約７５ｎＭ、又は約６０～約７０ｎＭ）のＴＰＨを生成し得る。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）（例えば、約４．８×１０^３個の粒子／μＬの濃度で）は、例えば、２０μＬのＰＲＰ試薬と、約４．８×１０^３個の粒子／μＬの血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む８０μＬの組成物とを含む条件を使用して、ＰＲＰ試薬（Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅからのカタログ番号ＴＳ３０．００）の存在下で、例少なくとも２５ｎＭ（例えば、少なくとも３０ｎＭ、３５ｎＭ、４０ｎＭ、４５ｎＭ、５０ｎＭ、５２ｎＭ、５４ｎＭ、５５ｎＭ、５６ｎＭ、５８ｎＭ、６０ｎＭ、６５ｎＭ、７０ｎＭ、７５ｎＭ、又は８０ｎＭ）のＴＰＨを生成し得る。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）（例えば、約４．８×１０^３個の粒子／μＬの濃度で）は、例えば、２０μＬのＰＲＰ試薬と、約４．８×１０^３個の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む８０μＬの組成物とを含む条件を使用して、ＰＲＰ試薬（Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅからのカタログ番号ＴＳ３０．００）の存在下で、約２５ｎＭ～約１００ｎＭ（例えば、約２５ｎＭ～約５０ｎＭ、約２５～約７５ｎＭ、約５０～約１００ｎＭ、約７５～約１００ｎＭ、約３５ｎＭ～約９５ｎＭ、約４５～約８５ｎＭ、約５５～約７５ｎＭ、又は約６０～約７０ｎＭ）のＴＰＨを生成し得る。

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、例えば、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下でトロンビンを生成し得る。例えば、いくつかの場合では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、１０^６個の粒子当たり少なくとも１．２（例えば、少なくとも１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、又は２．５）トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）を有し得る。例えば、いくつかの場合では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、１０^６個の粒子当たり１．２～２．５ＴＰＧＵ（例えば、１０^６個の粒子当たり１．２～２．０、１．３～１．５、１．５～２．２５、１．５～２．０、１．５～１．７５、１．７５～２．５、２．０～２．５、又は２．２５～２．５ＴＰＧＵ）の効力を有し得る。ＴＰＧＵは、以下のように計算され得る：ＴＧＰＵ／１，０００，０００個の粒子＝［ｎＭでのＴＰＨ］＊［ＩＵでの効力係数／（ｎＭ）］／［ウェル中の５７６，０００個の粒子］。同様に、トロンビンの試料の効力係数は、以下のように計算され得る：効力係数＝計算されたキャリブレータ活性（ＩＵ）／有効キャリブレータ活性（ｎＭ）。いくつかの場合では、キャリブレータ活性は、ＷＨＯ国際トロンビン標準に基づき得る。

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、例えば、総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ（登録商標））を使用することによって決定されるように、凝血させることが可能であり得る。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体は、少なくとも７０×１０^３個の粒子／μＬ（例えば、少なくとも７３×１０^３個、１００×１０^３個、１５０×１０^３個、１７３×１０^３個、２００×１０^３個、２５０×１０^３個、又は２５５×１０^３個の粒子／μＬ）の濃度で、例えば、血小板が低減されたクエン酸処理全血中で、１４分未満（例えば、１３．５、１３、１２．５、１２、１１．５、又は１１分未満）のＴ－ＴＡＳ閉塞時間（例えば、８０のｋＰａに達する時間）をもたらし得る。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体は、少なくとも７０×１０^３個の粒子／μＬ（例えば、少なくとも７３×１０^３個、１００×１０^３個、１５０×１０^３個、１７３×１０^３個、２００×１０^３個、２５０×１０^３個、又は２５５×１０^３個の粒子／μＬ）の濃度で、例えば、血小板が低減されたクエン酸処理全血中で、少なくとも１３００（例えば、少なくとも１３８０、１４００、１５００、１６００、又は１７００）の曲線下面積（ＡＵＣ）をもたらし得る。

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、トロンビンの存在下でトロンビン誘発性捕捉が可能であり得る。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、トロンビンの存在下で少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、６７％、７０％、７５％、８５％、９０％、又は９９％）のトロンビン誘発性捕捉を有し得る。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、トロンビンの存在下で約２５％～約１００％（例えば、約２５％～約５０％、約２５％～約７５％、約５０％～約１００％、約７５％～約１００％、約４０％～約９５％、約５５％～約８０％、又は約６５％～約７５％）のトロンビン誘発性捕捉パーセントを有し得る。トロンビン誘発性捕捉は、任意の適切な方法、例えば、光透過凝集測定によって決定され得る。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、トロンビン誘発性捕捉は、血小板誘導体の表面に存在するフィブリノゲンとトロンビンとの相互作用の結果であると考えられている。

本明細書に記載の血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、例えば、凝集アゴニスト、及び新鮮な血小板の存在下で共凝集させることが可能であり得る。凝集アゴニストの非限定的な例としては、コラーゲン、エピネフリン、リストセチン、アラキドン酸、アデノシン二リン酸、及びトロンビン受容体関連タンパク質（ＴＲＡＰ）が挙げられる。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、凝集アゴニスト及び新鮮な血小板の存在下で少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、６７％、７０％、７５％、８５％、９０％、又は９９％）のパーセント共凝集を有し得る。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、凝集アゴニストの存在下で約２５％～約１００％（例えば、約２５％～約５０％、約２５％～約７５％、約５０％～約１００％、約７５％～約１００％、約４０％～約９５％、約５５％～約８０％、又は約６５％～約７５％）のパーセント共凝集を有し得る。パーセント共凝集は、任意の適切な方法、例えば、光透過凝集測定によって決定され得る。

本明細書の特定の例示的実施形態ではＦＤＰＤ組成物である血小板誘導体組成物は、新鮮な血小板の傾向と比較して、アゴニストを含むが新鮮な血小板を含まない凝集条件下で凝集する傾向が低下した血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）の集団を含み、かつ／又はこれらの条件下で凝集するように活性化される。例示的実施形態で本明細書に記載される血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、アゴニストを含むが新鮮な血小板を含まない凝集条件下で凝集する傾向が、これらの条件下で凝集する新鮮な血小板及び／又は活性化された血小板の傾向と比較して低下していることを示す。驚くべきことに、そのようなＦＤＰＤは、インビトロ及びインビボアッセイにおいて、抗凝固剤及び抗血小板剤などの抗血栓剤の存在下で、そのような抗血栓剤が凝血及び／又は凝集を低減する条件下で（そのような薬剤のうちの２つの存在下を含む）、血小板の凝血及び凝集を増加させる能力を有する。血小板誘導体の凝集は、凝集条件が典型的には新鮮な血小板を含まないのに対し、共凝集条件が新鮮な血小板を含むという点で、共凝集と異なることは注目に値する。例示的な凝集及び共凝集条件は、本明細書の実施例に提供される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の血小板誘導体は、新鮮な血小板及びアゴニストの存在下での共凝集傾向が高く、一方、新鮮な血小板及びアゴニストの存在下で、これらの条件下での新鮮な血小板の凝集傾向と比較して、新鮮な血小板及びアゴニストの不在下での凝集傾向が低下している。いくつかの実施形態では、血小板誘導体組成物は、凝集する傾向が低下した血小板誘導体の集団を含み、アゴニストを含むが血小板を含まない、例示的実施形態では新鮮な血小板を含まない凝集条件下で、集団中の血小板誘導体の２％、３％、４％、５％、７．５％、１０％、１２．５％、１５％、１７．５％、２０％、２２．５％、又は２５％以下が凝集する。いくつかの実施形態では、血小板誘導体の集団は、アゴニストを含むが血小板を含まない、例示的実施形態では新鮮な血小板を含まない凝集条件下で、血小板誘導体の２～３０％、５～２５％、１０～３０％、１０～２５％、又は１２．５～２５％の範囲で凝集する。

本明細書の実施例に提供されるように、例示的な凝集条件及び関連方法は、室温で、２０μＭのＡＤＰ、０．５ｍｇ／ｍＬのアラキドン酸、１０μｇ／ｍＬのコラーゲン、２００μＭのエピネフリン、１ｍｇ／ｍＬのリストセチン、及び１０μＭのＴＲＡＰ－６の最終アゴニスト濃度のアゴニストを用いてＦＤＰＤ試料調製物を処理し、例えば、ＦＤＰＤ試料にアゴニストを添加した５分後にＬＴＡによって測定することを含み、これは、アゴニスト添加前の試料のＬＴＡ測定値と比較することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の血小板誘導体は、アゴニストの存在下で血小板誘導体がアゴニストでの曝露の前に存在した血小板活性化マーカーのレベルと比較してそれらの上の血小板活性化マーカーの増加を示すことができないように、最大限に活性化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の血小板誘導体は、アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較して、アゴニストの存在下での血小板活性化マーカーの発現を増加させることができないことを示す。いくつかの実施形態では、アゴニストは、コラーゲン、エピネフリン、リストセチン、アラキドン酸、アデノシン二リン酸、及びトロンビン受容体関連タンパク質（ＴＲＡＰ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、血小板活性化マーカーは、アネキシンＶ及びＣＤ６２からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の血小板誘導体は、ＴＲＡＰの存在下でアネキシンＶの発現を増加させることができないことを示す。血小板上の血小板活性化マーカーの量の増加は、血小板の活性化の状態を示す。しかしながら、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の血小板誘導体は、アゴニストの存在下でさえ、それらの上の血小板活性化マーカーの量を増加させることができない。この特性は、本明細書に記載の血小板誘導体が最大限に活性化されることを示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の血小板誘導体は、アゴニストの不在下で最大活性化の状態を示すことができるため、特性は、血小板の最大活性化が必要とされる場合に有益であり得る。

トロンボスポンジンは、活性化時に血小板のα顆粒から分泌される糖タンパク質である。二価カチオンの存在下では、分泌タンパク質は、活性化された血小板の表面に結合し、活性化された血小板に関連する内因性レクチン様活性に関与する。いくつかの実施形態では、血小板誘導体は、休止血小板、活性化血小板、又は凍結乾燥固定血小板の表面上の存在よりも高いレベルで、それらの表面上にトロンボスポンジン（ＴＳＰ－１）の存在を有する。いくつかの実施形態では、血小板誘導体は、休止血小板又は凍結乾燥固定血小板の表面上よりも少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％高いレベルで、それらの表面上にトロンボスポンジン（ＴＳＰ－１）の存在を有する。いくつかの実施形態では、血小板誘導体は、休止血小板又は凍結乾燥固定血小板の表面上よりも１００％以上高いレベルで、それらの表面上にトロンボスポンジン（ＴＳＰ－１）の存在を有する。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用して抗トロンボスポンジン（ＴＳＰ）抗体の血小板誘導体への結合について分析した場合、血小板誘導体は、アゴニストの不在下で、休止血小板への抗ＴＳＰ抗体の結合のＭＦＩと比較して、少なくとも２倍、５倍、７倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用して抗トロンボスポンジン（ＴＳＰ）抗体の血小板誘導体への結合について分析した場合、血小板誘導体は、アゴニストの不在下で、凍結乾燥固定血小板への抗ＴＳＰ抗体の結合のＭＦＩと比較して、少なくとも２倍、５倍、７倍、１０倍、２０倍、３０倍、又は４０倍高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用して抗トロンボスポンジン（ＴＳＰ）抗体の血小板誘導体への結合について分析した場合、血小板誘導体は、アゴニストの不在下で、休止血小板への抗ＴＳＰ抗体の結合のＭＦＩと比較して、１０～８００倍、２０～８００倍、１００～７００倍、１５０～７００倍、２００～７００倍、又は２５０～５００倍高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用して抗トロンボスポンジン（ＴＳＰ）抗体の血小板誘導体への結合について分析した場合、血小板誘導体は、アゴニストの不在下で、活性血小板への抗ＴＳＰ抗体の結合のＭＦＩと比較して、少なくとも２倍、５倍、７倍、１０倍、２０倍、３０倍、又は４０倍高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用して抗トロンボスポンジン（ＴＳＰ）抗体の血小板誘導体への結合について分析した場合、血小板誘導体は、アゴニストの不在下で、活性血小板への抗ＴＳＰ抗体の結合のＭＦＩと比較して、２～４０倍、５～４０倍、５～３５倍、１０～３５倍、又は１０～３０倍高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。

フォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）Ｐは、血液凝固において主要な役割を果たす多量体糖タンパク質である。ｖＷＦは、内皮下及び他の血小板への血小板結合を促進し、それにより血小板の付着及び凝集を促進する架橋分子として機能する。ｖＷＦはまた、コラーゲンに結合して、損傷部位での凝血魂形成を促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の血小板誘導体は、休止血小板、活性化血小板、又は凍結乾燥固定血小板の表面上のレベルよりも高いレベルで、それらの表面上にフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在を有する。いくつかの実施形態では、血小板誘導体は、休止血小板又は凍結乾燥固定血小板の表面上よりも少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％高いレベルで、それらの表面上にフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在を有する。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用して血小板誘導体への抗フォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）抗体の結合について分析した場合、血小板誘導体は、アゴニストの不在下で、休止血小板又は凍結乾燥固定血小板への抗ｖＷＦ抗体の結合のＭＦＩと比較して、少なくとも１．５倍、２倍、又は３倍、又は４倍高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用して血小板誘導体への抗フォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）抗体の結合について分析した場合、血小板誘導体は、アゴニストの不在下で、休止血小板又は凍結乾燥固定血小板への抗ｖＷＦ抗体の結合のＭＦＩと比較して２～４倍、又は２．５～３．５倍高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。

血小板誘導体、例示的実施形態ではＦＤＰＤは、本明細書の更なる例示的態様及び実施形態において、損なわれた形質膜に囲まれる。これらの更なる例示的態様及び実施形態では、血小板誘導体は、それらの周りに統合された膜を欠いている。代わりに、そのような血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を囲む膜は、生細胞で観察される孔よりも大きい孔を含む。理論に限定されるものではないが、血小板誘導体が損なわれた膜を有する実施形態では、そのような血小板誘導体は、外部環境からのシグナルを、典型的には生体血小板内で変換される粒子内の応答に変換する能力が低下しているか、又は変換することができないと考えられている。更に、そのような血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、ミトコンドリア活性化又は解糖が可能であるとは考えられていない。

損なわれた膜は、新鮮な血小板、又は冷蔵保存された血小板、又は凍結保存された血小板と比較して、血小板誘導体が乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の５０％超を保持することができないことによって特定され得る。いくつかの実施形態では、血小板誘導体は、新鮮な血小板、又は低温保存された血小板、又は凍結保存された血小板に保持された乳酸デヒドロゲナーゼと比較して、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、又は７５％を超える乳酸デヒドロゲナーゼを保持することができない。いくつかの実施形態では、血小板誘導体は、抗体に対する増加した透過性を示す。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体であり得る。増加した透過性は、安定な細胞内抗原に対するＩｇＧ抗体のターゲティングによって特定され得る。安定な細胞内抗原の１つの非限定的な種類は、βチューブリンである。血小板誘導体の損なわれた膜はまた、フローサイトメトリー研究によって決定され得る。

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、例えば、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性によって証明されるように、いくらかの代謝活性を保持し得る。いくつかの場合では、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、ドナーアフェレーシス血小板のＬＤＨ活性の少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約１２％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、又は４５％）を保持し得る。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、増加量のポリスクロースの添加は、残存するＬＤＨ活性の量を増加させると考えられている（例えば、８％ポリスクロースを有する調製剤の生成物は、４％ポリスクロースを有する調製剤の生成物よりも多くの保持ＬＤＨ活性を有する）。同様にいかなる特定の理論にも拘束されることなく、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む凍結乾燥組成物の熱処理は、保持されるＬＤＨ活性の量を増加させると考えられる。別の例として、代謝活性は、カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＤＡＳＥ）上の酢酸基を切断してフルオロフォアをアンマスクする細胞の能力などの、保持されたエステラーゼ活性によって証明され得る。

血液（例えば、対象の血液）の凝血パラメータは、本明細書に記載の方法の間の任意の適切な時点で評価され得る。例えば、血液の１つ以上の凝血パラメータは、例えば、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体を含む組成物の投与の必要性を決定するために、血小板を含む組成物、又は例示的実施形態では血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態では本明細書に記載のＦＤＰＤである）を含む組成物の投与の前に評価され得る。例えば、そのような凝血パラメータは、インビトロ臨床検査などの投与前評価又は試験を使用して評価され得る。そのような試験は、対象に血小板誘導体を含む組成物を投与する前の７、５、３、２、若しくは１日以内に、又は１２、８、６、４、２、若しくは１時間以内に採取された液体試料、例えば血液試料に対して実施され得る。別の例として、血液の１つ以上の凝血パラメータは、例えば、投与される組成物の有効性を決定するために、組成物の追加の投与が正当であるかどうかを決定するために、又は外科的処置を実施することが安全であるかどうかを決定するために、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体を含む組成物の投与の後に評価され得る。そのような投与後評価又は試験は、対象に血小板誘導体を含む組成物を投与した後の７、５、３、２、若しくは１日以内に、又は１２、８、６、４、２、若しくは１時間以内に採取された液体試料、例えば血液試料に対して実施され得る。

したがって、本明細書に記載の方法のうちのいずれかは、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体を含む組成物の投与の前に、血液の１つ以上の凝血パラメータを評価する工程、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体を含む組成物の投与の後に、血液の１つ以上の凝血パラメータを評価する工程、又はその両方を含み得る。

任意の適切な方法を使用して、血液の凝血パラメータを見積もる（評価する）ことができる。方法の非限定的な例としては、世界保健機関（ＷＨＯ）の出血スケール、プロトロンビン時間（ＰＴ）アッセイ、トロンビン生成（ＴＧＡ；例えば、ピークトロンビン、内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）、及びラグタイムなどのパラメータを生成するために使用され得る）、トロンボエラストグラフィー（ＴＥＧ）、多重電極凝集測定、光透過凝集測定（ＬＴＡ）、活性化凝血時間（ＡＣＴ）、Ｐ２Ｙ１２反応単位（ＰＲＵ）又はアスピリン反応単位（ＡＲＵ）試験、及び部分的トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ又はａＰＴＴ）が挙げられる。

ＷＨＯ出血スケールは、特にがん治療における毒性報告の文脈において、臨床医及び研究者が出血を見積もるのを助けるために開発されたが、これは他の文脈でも使用される。

プロトロンビン時間（ＰＴ）は、典型的には組織因子の存在下で、血液が凝血するのにかかる時間の尺度である。いくつかの場合では、ＰＴは、実験室用試薬の影響を受ける可能性があるため、正規化比（ＩＮＲ）がより頻繁に使用される。

活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）は、典型的には、シリカ、セライト、カオリン、又はエラグ酸などの活性化因子の存在下で血液が凝血するのにかかる時間の尺度である。いくつかの場合では、ａＰＴＴは、実験室試薬の影響を受ける可能性があるため、ＩＮＲがａＰＴＴの代わりに、又はａＰＴＴに加えて使用されることがある。

トロンビン生成アッセイは、蛍光ペプチドのトロンビン酵素切断及び蛍光分子の放出の結果として生じる凝固促進剤を介した試料活性化後のトロンビンの産生を測定した。ピークトロンビンは、産生される最大トロンビンの尺度、ラグタイムは、トロンビン産生の開始までの時間、及びＥＴＰは、潜在的に産生される総トロンビンである。

いくつかの実施形態では、患者は、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体を含む組成物の投与の前に、約６０ｎＭ～約１７０ｎＭ、例えば、約６５ｎＭ～約１７０ｎＭ、例えば、約６５ｎＭ～約１２０ｎＭ、例えば、約８０ｎＭのピークトロンビンを有し得る。

トロンビン凝血時間（ＴＣＴ）は、過剰なトロンビンが添加された後、血液が凝血するのにかかる時間の尺度である。

ＴＥＧは、経時的な凝血塊強度のプロットを介して内因性止血を評価する。塩化カルシウム（ＣａＣｌ_２）は、典型的には、開始試薬として使用される。ＴＥＧ波形（例えば、図１６を参照）は、凝血についての情報を提供し得る複数のパラメータを有する。
Ｒ時間＝反応時間－試験の開始から初期フィブリン形成までの待ち時間。
Ｋ＝動態－初期フィブリン形成の速度、ある特定のレベルの凝血塊強度（例えば、２０ｍｍの振幅）を達成するのにかかる時間
アルファ角＝ＲとＫとの間の線の傾き－凝血魂形成の速度を測定する。
ＭＡ＝最大振幅（ｍｍ）－フィブリン凝血塊の最終的な強度を表す。
Ａ_３０＝最大振幅に到達した３０分後の振幅－溶解相の速度を表す。

凝固性低下状態の血液では、Ｒ時間は増加し、ＭＡは減少する。Ｒ時間は、典型的には、ＭＡよりも広い応答範囲を提供する。

多重電極凝集測定（ＭＥＡ）を使用して、血液の凝血パラメータを評価することができる。ＭＥＡは、血小板が金属電極上に凝集するときの電気インピーダンスの変化を測定する。典型的には、ＡＤＰ、エピネフリン、コラーゲン、又はリストセチンなどの凝集アゴニストが、凝集を開始させるために使用される。

光透過集計法（ＬＴＡ）は、血液の凝血パラメータを評価するために使用されることがあり、未凝集の血液は、ほとんど光を通過させないが、凝集（典型的には、アゴニストによって開始される）は、凝集の増加をもたらす。

総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）、ＦＵＪＩＭＯＲＩ ＫＯＧＹＯ ＣＯ．，ＬＴＤ）では、試料は、鉱油を使用して、コラーゲンでコーティングされたマイクロチャネルを通される。圧力の変化は、血栓形成を見積もるために使用される。閉塞開始時間は、１０ｋＰａに到達するのにかかる時間であり、閉塞時間は、ＡＲチップ（例えば、Ｚａｃｒｏｓ品目番号、ＴＣ０１０１）を使用して各Δ８０ｋＰａに到達するのにかかる時間である。メーカーによれば、ＡＲチップは、主にフィブリン及び活性化された血小板からなる混合された白色血栓の形成を分析するために使用され得る。これは、コラーゲン及び組織因子でコーティングされた流路（幅３００μｍ×高さ５０μｍ）を有し、凝血機能及び血小板機能を分析するために使用され得る。比較して、ＰＬチップは、主に活性化された血小板からなる血小板血栓の形成を分析するために使用され得る。ＰＬチップは、コラーゲンのみでコーティングされた流路を有し、血小板機能を分析するために使用され得る。

ＡＣＴアッセイは、凝血時間（ｔ_ＡＣＴ）を測定するための最も基本的であるが、おそらく最も確かな方法であり、その周囲に凝血塊が形成されるときの磁石の重力に対する抵抗によって決定される。典型的なドナーの血液は、ＣａＣｌ_２のみを使用して、約２００～３００秒のｔ_ＡＣＴを有する。

ＶｅｒｉｆｙＮｏｗは、Ｐ２Ｙ１２阻害剤（ＰＲＵ）の存在下でＰＲＵ単位（Ｐ２Ｙ１２反応単位）で血小板凝集を測定するか、アスピリンの存在下でＡＲＵ単位（アスピリン反応単位）で血小板機能障害を測定する。ＶｅｒｉｆｙＮｏｗシステムは、Ｗｅｒｆｒｅｎ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｗｅｒｆｅｎ．ｃｏｍ）から入手可能な光透過率の増加として血小板誘発性凝集を測定するマイクロビーズを利用した比濁法ベースの光学検出システムである。

ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ－Ｐ２Ｙ１２ Ａｓｓａｙ／ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ ＰＲＵ Ｔｅｓｔは、ＰＧＥ１［プロスタグランジンＥ１］の存在下でＡＤＰを使用して血小板を刺激し、第２のＡＤＰ受容体Ｐ２Ｙ１の下流での活性化を阻害する高速試験であり、アッセイを、Ｐ２Ｙ１２受容体及びＰ２Ｙ１２受容体に結合する薬物の活性に対してより高感度で特異的にする。アッセイシステム試薬は、Ｐ２Ｙ１２媒介性血小板凝集を特異的に測定するように設計されている。

ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ Ａｓｐｉｒｉｎ Ａｓｓａｙの方法論は、アスピリンに対する血小板の応答を測定するためにアラキドン酸が組み込まれているＶｅｒｉｆｙＮｏｗ－Ｐ２Ｙ１２ Ａｓｓａｙ／ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ ＰＲＵ Ｔｅｓｔと非常によく似ている。アスピリンを服用している個体において、アスピリンは、アラキドン酸をトロンボキサンＡ［ＴｘＡ２］に変換し、血小板凝集に関与するＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体を最終的に活性化する酵素であるＣＯＸ－１を不可逆的に阻害する。アスピリンの存在下では、凝集は生じない。

これらの凝血パラメータのいくつかの例示的な正常範囲を以下の表Ｅ１に示す。典型的には、以下に示される範囲外の値は、異常であるとみなされる。

（表Ｅ１）

いくつかの実施形態は、対象におけるトロンビン生成を増加させる方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を、例示的実施形態では有効量の血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物を投与することを含み、この組成物は、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質を含む。

いくつかの実施形態は、対象におけるトロンビン生成を増加させる方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの実施形態は、対象におけるピークトロンビンを増加させる方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を、例示的実施形態では有効量の血小板誘導体（これは更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤである）を含む組成物を投与することを含み、この組成物は、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質を含む。

いくつかの実施形態は、対象におけるピークトロンビンを増加させる方法を提供し、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの実施形態では、投与の前に、対象のピークトロンビンは、６６ｎＭ未満（例えば、６４ｎＭ、６２ｎＭ、６０ｎＭ、５５ｎＭ、５０ｎＭ、４５ｎＭ、４０ｎＭ、３５ｎＭ、３０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、又は５ｎＭ未満）であった。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象のピークトロンビンは、６６ｎＭ超（例えば、６８ｎＭ、７０ｎＭ、７５ｎＭ、８０ｎＭ、８５ｎＭ、９０ｎＭ、９５ｎＭ、１００ｎＭ、１１０ｎＭ、１２０ｎＭ、１３０ｎＭ、１４０ｎＭ、又は１５０ｎＭ超）である。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象のピークトロンビンは、６６～１６６ｎＭである。ピークトロンビンは、任意の適切な方法によって測定され得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組成物、又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物は、１つ以上の凝血パラメータの評価における異常な結果、例えば、対象が低凝固状態にあることを示すために、対象に投与され得る。

いくつかの実施形態は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、（ａ）１つ以上の凝血パラメータの評価について異常な結果を対象が有すると決定することと、（ｂ）（ａ）の後に、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、（ａ）１つ以上の凝血パラメータの評価について異常な結果を対象が有すると決定することと、（ｂ）（ａ）の後に、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベーションすることを含むプロセスにより調製されている。

いくつかの実施形態は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、投与の前、例えば投与前の瞬間又は投与の直前に、対象は、１つ以上の凝血パラメータの評価について異常な結果を有することが決定されている。

いくつかの実施形態は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されており、投与の前、例えば投与前の瞬間又は投与の直前に、対象は、１つ以上の凝血パラメータの評価について異常な結果を有することが決定されている。

本明細書の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、抗血小板剤を投与されたことがあるか、又は任意の適切な時間枠で抗血小板剤を投与されている。例えば、いくつかの場合では、対象は、例示的実施形態において、抗血小板剤の事前の用量の効果が消失する前に、抗血小板剤、及び／又は血小板誘導体を含む、例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む組成物を投与されたことがある。例えば、いくつかの場合では、対象は、抗血小板剤を投与されており、抗血小板剤の効果は消失していない。別の例として、いくつかの場合では、対象は、約１週間以内、約５日以内、約３日以内、約３６時間以内、約２４時間以内、約１８時間以内、約１２時間以内、約８時間以内、約６時間以内、約４時間以内、約２時間以内、又は約１時間以内に、抗血小板剤（例えば、最も最近の用量）を投与されたことがある。別の例として、いくつかの場合では、対象は、抗血小板剤を投与されており、最後の用量（例えば、医療専門家によって処方されるか、又は対象によって自己投与される最新の用量）は、約１週間以内、約５日以内、約３日以内、約３６時間以内、約２４時間以内、約１８時間以内、約１２時間以内、約８時間以内、約６時間以内、約４時間以内、約２時間以内、又は約１時間以内であった。

本明細書の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの評価についての異常な結果の決定は、任意の適切な時点であってもよい。例えば、１つ以上の凝血パラメータの評価についての異常な結果の決定は、異常な結果が正常な結果に戻る前であり得る。別の例として、１つ以上の凝血パラメータの評価についての異常な結果の決定は、投与の約１週間、約５日、約３日、約３６時間、約２４時間、約１８時間、約１２時間、約８時間、約６時間、約４時間、約２時間、又は約１時間以内であり得る。

いくつかの実施形態では、方法は、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価の結果を決定することを更に含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価は、１つ以上の凝血パラメータのうちの少なくとも１つについて正常な結果を示す。いくつかの実施形態では、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価の結果は、投与前の１つ以上のパラメータの評価の結果から改善される。

いくつかの場合では、対象は抗血小板剤を投与され得るが、それらは、例えば、対象が混乱している場合、又は医療ミスが発生した場合には、投与されるべきではなかった。いくつかのそのような場合では、対象は、本明細書に提供される組成物のうちのいずれか、又は本明細書に記載の方法のうちのいずれかによって生成される組成物を投与され得る。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、（ａ）医学的指示に反して対象に抗血小板剤が投与されたと決定することと、（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、（ａ）医学的指示に反して対象に抗血小板剤が投与されたと決定することと、（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されている。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象は、医学的指示に反して抗血小板剤を投与されたことがあると決定される。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されており、対象は、医学的指示に反して抗血小板剤を投与されたことがあると決定される。

いくつかの実施形態は、対象における正常な止血を回復させる方法を含み、この方法は、（ａ）医学的指示に反して対象に抗血小板剤が投与されたと決定することと、（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態は、対象における正常な止血を回復させる方法を含み、この方法は、（ａ）医学的指示に反して対象に抗血小板剤が投与されたと決定することと、（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されている。

いくつかの実施形態は、対象における正常な止血を回復させる方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象は、医学的指示に反して抗血小板剤を投与されたことがあると決定される。

いくつかの実施形態は、対象における正常な止血を回復させる方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されており、対象は、医学的指示に反して抗血小板剤を投与されたことがあると決定される。

本明細書の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、抗血小板剤を医学的指示に反して対象が投与されたことがあると決定することは、任意の適切な時点であり得る。例えば、抗血小板剤を医学的指示に反して対象が投与されたことがあると決定することは、抗血小板剤が消失する前であり得る。別の例として、抗血小板剤を医学的指示に反して対象が投与されたことがあると決定することは、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与してから約１週間以内、約５日以内、約３日以内、約３６時間以内、約２４時間以内、約１８時間以内、約１２時間以内、約８時間以内、約６時間以内、約４時間以内、約２時間以内、又は約１時間以内であり得る。

抗血小板剤の投与は、対象による自己投与又は医療専門家による投与を含む、任意の適切な方法を含み得る。

医学的指示は、口頭指示、書面による指示、又は口頭及び書面による指示の両方を含む任意の適切な方法であり得る。

いくつかの場合では、対象は、血小板機能に影響を及ぼす（例えば、減少させる）第２の薬剤を投与されたことがあってもよいか、又は投与されている。例えば、そのような投与は、対象を高凝固状態にし得る。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、（ａ）抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することと、（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、（ａ）抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することと、（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されている。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与されたことがあると決定される。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害を治療する方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されており、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与されたことがあると決定される。

いくつかの実施形態は、対象における正常な止血を回復させる方法を含み、この方法は、（ａ）抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することと、（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態は、対象における正常な止血を回復させる方法を含み、この方法は、（ａ）抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することと、（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されている。

いくつかの実施形態は、対象における正常な止血を回復させる方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与されたことがあると特定される。

いくつかの実施形態は、対象における正常な止血を回復させる方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されており、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与されたことがあると特定される。

いくつかの実施形態では、第２の薬剤の投与は停止される（例えば、第２の薬剤を停止する利点が、第２の薬剤を停止するコストを上回る場合）。いくつかの実施形態では、第２の薬剤の投与は、継続される（例えば、第２の薬剤の除去が、抗うつ剤などのある特定の医薬の場合にあり得るように、対象に有害である場合）。

第２の薬剤は、血小板機能に影響を及ぼす（例えば、減少させる）任意の適切な第２の薬剤であり得る。例えば、第２の薬剤は、降圧剤、プロトンポンプ阻害剤、又はそれらの組み合わせを含み得る（又はそれらからなる群から選択され得る）。別の例として、第２の薬剤は、化学療法剤、抗生物質、心血管剤、Ｈ２アンタゴニスト、神経精神剤、又はそれらの組み合わせを含み得る（又はそれらからなる群から選択され得る）。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、抗うつ剤（例えば、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、セロトニンアンタゴニスト及び再取り込み阻害剤（ＳＡＲＩ）、セロトニン及びノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）、又はそれらの組み合わせ）を含み得る（又はそれらであり得る）。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、抗凝固剤ではない。

本明細書に提供される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、抗血小板剤の投与は停止される。本明細書に提供される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、抗血小板剤の投与は継続される。

ある特定の緊急事態などの場合では、対象が抗血小板剤を投与されているかどうかをタイムリーに決定することは不可能であり得る。いくつかのそのような場合では、本明細書に提供される組成物又は本明細書に提供される方法によって生成される組成物は、凝固障害を予防するために対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組成物又は本明細書に提供される方法によって生成される組成物は、対象に投与されて、対象における凝固障害の可能性を軽減し得る。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法を含み、この方法は、（ａ）対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定することと、（ｂ）対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法を含み、この方法は、（ａ）対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定することと、（ｂ）対象に有効量の組成物を投与することと、を含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されている。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定された対象であることが決定されている。

いくつかの実施形態は、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法を含み、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されており、対象は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定された対象であることが決定されている。

本明細書の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定することは、任意の適切な時点であり得る。例えば、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定することは、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与してから約１週間以内、約５日以内、約３日以内、約３６時間以内、約２４時間以内、約１８時間以内、約１２時間以内、約８時間以内、約６時間以内、約４時間以内、約２時間以内、又は約１時間以内であり得る。

対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないいくつかの理由がある。例えば、理由は、対象が特定できないこと、対象の病歴が利用できないこと、対象が緊急治療を必要としていること、対象が緊急手術を必要としていること、対象が緊急手術を受けていること、又はそれらの組み合わせを含み得る。

本明細書に提供される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、凝血パラメータの１つ以上の評価について異常な結果を対象が有すると決定することを更に含み得る。本明細書に提供される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、凝血パラメータの１つ以上の評価について異常な結果を有すると決定されている。

いくつかの場合では、異常な結果が決定される前に、対象は、１つ以上の凝血パラメータのうちの少なくとも１つについて正常な結果を有すると以前に特定された。

本明細書に提供される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、本明細書に提供される組成物又は本明細書に提供される方法によって生成される組成物の投与後に、１つ以上の凝血パラメータの評価の結果を決定することを更に含み得る。いくつかのそのような場合では、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価は、１つ以上の凝血パラメータのうちの少なくとも１つについて表Ｅ１で定義されるような正常な結果を示す。いくつかの実施形態では、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価の結果は、投与前の１つ以上のパラメータの評価の結果から改善される。

いくつかの実施形態では、対象は、手術（例えば、緊急手術又は予定された手術）中の凝血パラメータの１つ以上の評価について異常な結果を有すると特定される。

１つ以上の凝血パラメータの評価は、本明細書に提供される凝血パラメータの評価のいずれかなど、凝血パラメータの任意の適切な評価であり得る。いくつかの実施形態では、凝血パラメータの評価は、世界保健機関（ＷＨＯ）の出血スケール、プロトロンビン時間（ＰＴ）アッセイ、国際標準化比（ＩＮＲ）、トロンビン生成（ＴＧＡ）、血小板弾性率（ＴＥＧ）、多重電極凝集測定（ＭＥＡ）、光透過凝集測定（ＬＴＡ）、活性化凝血時間（ＡＣＴ）、ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ、及び部分的トロンボプラスチン時間（例えば、ＰＴＴ又はａＰＴＴ）、それらのサブパラメータ、及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択され得る。

いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータは、出血の評価を含む（例えば、世界保健機関（ＷＨＯ）出血スケールに基づいて行われる）。いくつかの実施形態では、投与の前に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいてグレード２、３、又は４の出血を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいてグレード０又は１の出血を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも１グレード低い出血を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも２グレード低い出血を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも３グレード低い出血を有する。

いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータは、プロトロンビン時間（ＰＴ）の評価を含む。いくつかの実施形態では、ＰＴの異常な結果は、約１４秒超（例えば、約１５秒超、１８秒超、２０秒超、２５秒超、又はそれ以上）のＰＴを含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも１秒（例えば、少なくとも２秒、３秒、４秒、５秒、６秒、７秒、８秒、９秒、１０秒、又はそれ以上）のＰＴの減少を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、表Ｅ１で定義されるような正常なＰＴを有する。

いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータは、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）の評価を含む。いくつかの実施形態では、ａＰＴＴの異常な結果は、約４０秒超（例えば、約４３秒超、４５秒超、５０秒超、５５秒超、６０秒超、６５秒超、７０秒超、又はそれ以上）のａＰＴＴを含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも５秒（例えば、少なくとも１０秒、１５秒、２０秒、２５秒、３０秒、又はそれ以上）のａＰＴＴの減少を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、表Ｅ１で定義されるような正常なａＰＴＴを有する。

いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータは、トロンビン凝血時間（ＴＣＴ）の評価を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＴの異常な結果は、約３５秒超（例えば、約３８秒超、４０秒超、４５秒超、５０秒超、５５秒超、６０秒超、又はそれ以上）のＴＣＴを含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも５秒（例えば、少なくとも１０秒、１５秒、２０秒、２５秒、３０秒、又はそれ以上）のＴＣＴの減少を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、表Ｅ１で定義されるような正常なＴＣＴを有する。

いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの評価は、トロンボエラストグラフィー（ＴＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＥＧの異常な結果は、約５０ｍｍ未満（例えば、約４８ｍｍ未満、４５ｍｍ未満、４０ｍｍ未満、３５ｍｍ未満、又はそれ以下）の最大振幅（ＭＡ）を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも５ｍｍ（例えば、少なくとも１０ｍｍ、１５ｍｍ、２０ｍｍ、２５ｍｍ、３０ｍｍ、又はそれ以上）のＭＡの増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、表Ｅ１で定義されるような正常なＭＡを有する。いくつかの実施形態では、ＴＥＧの異常な結果は、約８５％未満（例えば、約８３％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、又はそれ以下）のパーセント凝集を含む（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント（例えば、少なくとも３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、１５パーセントポイント、１８パーセントポイント、２０パーセントポイント、又はそれ以上）のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）表Ｅ１で定義されるような正常なパーセント凝集を有する。いくつかの実施形態では、ＴＥＧは、アデノシン二リン酸誘発性血小板－フィブリン凝血強度を評価するために使用される。いくつかの実施形態では、ＴＥＧは、アラキドン酸誘発性血小板－フィブリン凝血強度を評価するために使用される。

いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの評価は、ＶｅｒｉｆｙＮｏｗを含む。いくつかの実施形態では、ＶｅｒｉｆｙＮｏｗの異常な結果は、約１９５未満（例えば、約１９０未満、１８５未満、１８０未満、１７０未満、１６５未満、１６０未満、１５５未満又はそれ以下）のＰ２Ｙ１２反応単位（ＰＲＵ）を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも２５（例えば、少なくとも３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、又はそれ以上）のＰＲＵの増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、表Ｅ１で定義されるような正常なＰＲＵを有する。いくつかの実施形態では、ＶｅｒｉｆｙＮｏｗの異常な結果は、約５５０未満（例えば、約５４０未満、５３０未満、５２０未満、５１０未満、５００未満、４９０未満、４８０未満、４７０未満、又はそれ以下）のアスピリン反応単位（ＡＲＵ）を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも２５（例えば、少なくとも３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、又はそれ以上）のＡＲＵの増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、表Ｅ１で定義されるような正常なＡＲＵを有する。

いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの評価は、多重電極凝集測定（ＭＥＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＡの異常な結果は、ＡＤＰ誘発性血小板活性の異常な結果を含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＡの異常な結果は、ＡＤＰ誘発性血小板活性の約５０単位（Ｕ）未満（例えば、約４８Ｕ未満、４５Ｕ未満、４０Ｕ未満、３５Ｕ未満、又はそれ以下）の結果を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも５Ｕ（例えば、少なくとも８Ｕ、１０Ｕ、１５Ｕ、２０Ｕ、又はそれ以上）のＡＤＰ誘発性血小板活性の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、表Ｅ１で定義されるような、ＡＤＰ誘発性血小板活性の正常な値を有する。いくつかの実施形態では、ＭＥＡの異常な結果は、アラキドン酸誘発性血小板活性の異常な結果を含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＡの異常な結果は、アラキドン酸誘発性血小板活性の約７０単位（Ｕ）未満（例えば、約６８Ｕ未満、６５Ｕ未満、６０Ｕ未満、５５Ｕ未満、５０Ｕ未満、４５Ｕ未満、又はそれ以下）の結果を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも５単位（例えば、少なくとも８単位、１０単位、１５単位、２０単位、又はそれ以上）のアラキドン酸誘発性血小板活性の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、表Ｅ１で定義されるような、アラキドン酸誘発性血小板活性の正常な値を有する。

いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの評価は、光透過凝集測定（ＬＴＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＡの異常な結果は、５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下で、約６０％未満（例えば、約５８％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、又はそれ以下）のパーセント凝集を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＡの異常な結果は、２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下で、約６５％未満（例えば、約６３％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、又はそれ以下）のパーセント凝集を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＡの異常な結果は、１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で、約６５％未満（例えば、約６３％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、又はそれ以下）のパーセント凝集を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＡの異常な結果は、２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で、約６９％未満（例えば、約６７％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、又はそれ以下）のパーセント凝集を含む。いくつかの実施形態では、ＬＴＡの異常な結果は、５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で、約７３％未満（例えば、約７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、又はそれ以下）のパーセント凝集を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント（例えば、少なくとも３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上）のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下で）表Ｅ１で定義されるような正常なパーセント凝集を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下で）少なくとも２パーセントポイント（例えば、少なくとも３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上）のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下で）表Ｅ１で定義されるような正常なパーセント凝集を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント（例えば、少なくとも３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上）のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）表Ｅ１で定義されるような正常なパーセント凝集を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント（例えば、少なくとも３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上）のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）表Ｅ１で定義されるような正常なパーセント凝集を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント（例えば、少なくとも３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上）のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）表Ｅ１で定義されるような正常なパーセント凝集を有する。

いくつかの実施形態では、追加の抗血小板剤拮抗物質は、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物に加えて、対象に投与され得る。追加の抗血小板剤拮抗物質は、本明細書に提供される組成物又は本明細書に提供される方法によって生成される組成物とともに任意の順序で投与され得る。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与と同時に行われる。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与後に行われる。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与の前に行われる。

本明細書の実施形態のいずれかの一態様では、対象は、がんを有しない。

本明細書で使用される場合、「有効量」は、対象を治療するのに有効な、血小板、典型的には血小板誘導体（これは例示的実施形態ではＦＤＰＤである）の量を含む、組成物の量である。そのような治療は、例えば、本明細書における対象の凝固障害を治療するための方法又は抗血栓剤（すなわち、抗血小板剤又は抗凝固剤）の効果を相殺するための方法に関して、対象の出血の可能性を低減する。いくつかの実施形態では、出血の可能性は、少なくともある期間、対象の正常な止血が回復するような程度まで、例えば、体内に抗血小板剤を含まない対象のレベルまで、低減され得る。したがって、いくつかの実施形態では、血小板誘導体、例えばＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、任意の期間にわたって、対象の出血の可能性の低減をもたらす、いくつかの実施形態では正常な止血をもたらす量である。いくつかの実施形態では、有効量の血小板誘導体、例えばＦＤＰＤ、又は第２、第３、第４、第５、若しくは第６の用量の血小板誘導体を含む組成物の用量を投与された後、出血の可能性は、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０又は６０分間低減され、それらの用量は、各々、又は２つ以上、又は全てが累積して有効用量となる。

そのような量の血小板、又は典型的には血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、任意の適切な投薬量の、対象に投与され得る本明細書に記載の血小板誘導体を含む組成物を含み、これは、例示的実施形態では対象の出血の可能性の低減をもたらす。例えば、いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物の用量は、約又は厳密に１．０×１０^７～１．０×１０^１１粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．０×１０^７～１．０×１０^１０粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．６×１０^７～１．０×１０^１０粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．６×１０^７～５．１×１０^９粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．６×１０^７～３．０×１０^９粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．６×１０^７～１．０×１０^９粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．６×１０^７～５．０×１０^８粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．６×１０^７～１．０×１０^８粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．６×１０^７～５．０×１０^７粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、５．０×１０^７～１．０×１０^８粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．０×１０^８～５．０×１０^８粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、５．０×１０^８～１．０×１０^９粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、１．０×１０^９～５．０×１０^９粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ、又は５．０×１０^９～１．０×１０^１０粒子（例えば、ＦＤＰＤ）／対象ｋｇ）を含み得る。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、対象１ｋｇ当たり２５０～５０００ＴＧＰＵの効力を有する活性ベースの量である。そのような活性ベースの量は、この段落の粒子数範囲／ｋｇのいずれかと組み合わせることができる。

ある特定の実施形態では、上記で提供される用量範囲のうちのいずれか、例示的実施形態では１×１０^１１粒子／ｋｇ未満を含む用量範囲は、対象に２回以上投与され得る。例えば、１．０×１０^７個の粒子～約１．０×１０^１０個の粒子の用量範囲は、第１の用量から１、２、３、４、５、又は７日以内の時間枠で２～１０回、又は２～８回、又は２～６回、又は３～８回、又は３～６回、又は４～６回投与され得る。

本明細書の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、局所投与される。いくつかの実施形態では、局所投与は、溶液、クリーム、ゲル、懸濁液、パテ、粒子、又は粉末を介した投与を含み得る。いくつかの実施形態では、米国特許出願第１５／７７６，２５５号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に対応するＰＣＴ公開第２０１７／０４０２３８号（例えば、段落［０１３］～［０６９］）に記載のように、局所投与は、包帯（例えば、接着包帯又は圧縮包帯）又は医療的閉鎖（例えば、縫合、ステープル）を介した投与を含み得、例えば、血小板誘導体（例えば凍結保存された血小板（例えば、ＦＤＰＤ））は、その中に埋め込まれ得るか、又はそれにコーティングされ得る。

本明細書の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、非経口投与される。本明細書の方法のいくつかの例示的実施形態では、組成物は、静脈内投与される。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、筋肉内投与される。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、髄腔内投与される。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、皮下投与される。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、腹腔内投与される。

本明細書の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、投与工程の前に乾燥される。本明細書の方法の例示的実施形態では、組成物は、投与工程の前にフリーズドライされる。例示的実施形態におけるそのようなＦＤＰＤ組成物は、本明細書の実施例で提供される方法に従って調製される。本明細書の方法の例示的実施形態では、組成物は、乾燥又はフリーズドライ工程の後、例えば、対象に投与される前の２４、１２、８、６、４、３、２、若しくは１時間以内、又は３０、２０、１５、１０、又は５分以内に再水和される。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリン（アセチルサリチル酸又はＡＳＡとも称される）；カングレロール（例えば、ＫＥＮＧＲＥＡＬ（登録商標））、チカグレロール（例えば、ＢＲＩＬＩＮＴＡ（登録商標））、クロピドグレル（例えば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標））、又はプラスグレル（例えば、ＥＦＦＩＥＮＴ（登録商標））などのＰ２Ｙ１２阻害剤；エプチフィバチド（例えば、ＩＮＴＥＧＲＩＬＩＮ（登録商標））、チロフィバン（例えば、ＡＧＧＲＡＳＴＡＴ（登録商標））、又はアブシキシマブ（例えば、ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））などの糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤；並びにハーブサプリメントなどのサプリメント；又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。サプリメントの例としては、生姜、チョウセンニンジン、イチョウ、緑茶、キャバ、ノコギリヤシ、ボルド（Ｐｅｕｍｕｓ ｂｏｌｄｕｓ）、タンジン（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）、ドンクアイ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、パパイヤ（Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａ）、魚油、及びビタミンＥが挙げられる。ハーブサプリメントの例としては、生姜、チョウセンニンジン、及びイチョウが挙げられる。
本明細書に提供されるＦＤＡ承認抗凝固剤の各々の処方情報は、参照によりその全体が組み込まれる。そのような処方情報は、例えば、以下を含む。

ＤＵＲＬＡＺＡ（登録商標）（アスピリン）の処方情報のハイライト、２０１９年１２月改訂。

ＫＥＮＧＲＥＡＬ（登録商標）（カングレロール）の処方情報のハイライト、６／２０１５。

ＢＲＩＬＩＮＴＡ（登録商標）（チカグレロール）の処方情報のハイライト、０９／２０１６。

ＰＬＡＶＩＸ（登録商標）（重硫酸クロピドグレル）の処方情報のハイライト、２０１０年８月改訂。

ＥＦＦＩＥＮＴ（登録商標）（プラスグレル）の処方情報のハイライト、２０１１年９月改訂。

ＩＮＴＥＧＲＩＬＩＮ（登録商標）（エプチフィバチド）の処方情報のハイライト、２０１３年３月改訂。

ＡＧＧＲＡＳＴＡＴ（登録商標）（チロフィバン）の処方情報のハイライト、２０１６年８月改訂。

ＲＥＯＰＲＯ（登録商標）（アブシキシマブ）の処方情報、改訂日：１１／１９９７。

ＴＩＣＬＩＤ（登録商標）（塩酸チクロピジン）の承認パッケージ、２００１年３月改訂。

説明－ＭＯＴＲＩＮ（登録商標）（イブプロフェン）、発効日２００７年１月。

ＺＯＮＴＩＶＩＴＹ（商標）（ボラパキサール）の処方情報のハイライト、２０１４年５月改訂。

ＰＬＥＴＡＬ（登録商標）（シロスタゾール）の処方情報のハイライト、２０１７年５月改訂。

ＶＥＬＥＴＲＩ（登録商標）（エポプロステノール）の処方情報のハイライト、２０１２年６月改訂。

ＰＥＲＳＡＮＴＩＮＥ（登録商標）（ジピリダモール）の処方情報、２０１９年１２月改訂。

ＲＥＭＯＤＵＬＩＮ（登録商標）（アセノクマロール）の処方情報のハイライト、２０１４年１２月。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリンである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、カングレロール（例えば、ＫＥＮＧＲＥＡＬ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チカグレロール（例えば、ＢＲＩＬＩＮＴＡ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、クロピドグレル（例えば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プラスグレル（例えば、ＥＦＦＩＥＮＴ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、エプチフィバチド（例えば、ＩＮＴＥＧＲＩＬＩＮ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チロフィバン（例えば、ＡＧＧＲＡＳＴＡＴ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アブシキシマブ（例えば、ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、テルトロバンである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、ピコタミドである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、エリノグレルである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チクロピジンである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、イブプロフェンである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、ボラパキサールである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アトパキサールである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、シロスタゾールである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プロスタグランジンＥ１である。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、エポプロステノールである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、ジピリダモールである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、トレプロスチニルナトリウムである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、サルポグレラートである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、サプリメントである。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、ハーブサプリメントである。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、対象の血液が、例示的な実施形態では、検出可能な量の抗血小板剤を含むように、血小板誘導体を含む組成物が対象に投与される時間に対する投薬量及び時点で最後に投与された。典型的には、そのような薬剤は、対象に血小板誘導体を含む組成物を含む組成物の用量が投与される時点で対象の血液中に存在し、対象の出血の可能性を増加させるのに十分な量で対象の血液中に存在する。例えば、抗血小板剤は、例えばインビトロ試験で、１つ以上の凝血パラメータの異常な値を生じるのに十分な濃度で存在する。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、ＦＤＰＤを含む組成物が、対象の出血の可能性を増加させるレベルで投与される時点で、対象において存在する。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、ＦＤＰＤを含む組成物が投与された時点又はＦＤＰＤを含む組成物の最初若しくは最後の用量が投与された時点後１５、３０、若しくは４５分以内又は１、２、３、４、６、若しくは８時間以内において、Ｃｍａｘで存在する。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日１回、２回、３回、又は４回の、約８０ｍｇ～約７００ｍｇ（例えば、８０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、又は７００ｍｇ）の投薬量でアスピリンを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリンを含み、対象は、約３～約２５ｍｇ／ＬのＣ_ｍａｘ（例えば、約１００ｍｇの用量で約３～約５ｍｇ／Ｌ、約３００ｍｇの用量で約１０～約１５ｍｇ／Ｌ、又は約５００ｍｇの用量で約２０～約２５ｍｇ／Ｌ）を達成した。例えば、Ｎａｇｅｌｓｃｈｍｉｔｚ，Ｊ ｅｔ ａｌ．“Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ａｎｄ ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．”Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ａｄｖａｎｃｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｖｏｌ．６ ５１－９．１９ Ｍａｒ．２０１４，ｄｏｉ：１０．２１４７／ＣＰＡＡ．Ｓ４７８９５も参照されたい。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリンを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約３５０～約５４９ＡＲＵ（例えば、約４００～約５００ＡＲＵ）のＡＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリンを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、約５５０～約７００ＡＲＵ（例えば、約６００～約７００ＡＲＵ）のＡＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリンを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約３０単位超（例えば、約３３単位超、３５単位超、４０単位超、４５単位超、５０単位超、又はそれ以上）のＭＥＡを使用して、高い治療中血小板反応性（ＨＰＲ）を有した。例えば、Ｋｒｕｇｅｒ，Ｊａｎ－Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ，ｅｔ ａｌ．“Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ＡＳＡ ａｎｄ Ｐ２Ｙ１２－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ－ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ（ｓｉｎｇｌｅ）ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｒｙ．”Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ７４．７（２０１４）：５６８－５７４。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約２５～約３５μｇ／対象のｋｇ体重の初期投薬量（例えば、約３０μｇ／対象のｋｇ体重）又は約３～約５μｇ／対象のｋｇ／分（例えば、約４μｇ／対象のｋｇ体重／分）の次の投薬量でカングレロールを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、カングレロールを含み、対象は、約４００～約５００ｎｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを達成した。例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ．ｃｈｉｅｓｉｕｓａ．ｃｏｍ／Ｋｅｎｇｒｅａｌ／ＫＥＮＧＲＥＡＬ＿Ｄｏｓｉｎｇ＿ａｎｄ＿Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ＿Ｆａｃｔ＿Ｓｈｅｅｔ．ｐｄｆにあるＫＥＮＧＲＥＡＬ（登録商標）の製造元のファクトシートを参照されたい。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、カングレロールを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約５０ｍｍ未満（例えば、約４８ｍｍ未満、４５ｍｍ未満、４０ｍｍ未満、又はそれ以下）の最大振幅（ＴＥＧ－ＡＤＰ）を有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、カングレロールを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、少なくとも約５０ｍｍ（例えば、少なくとも５３ｍｍ、５５ｍｍ、５０ｍｍ、６０ｍｍ、６５ｍｍ、７０ｍｍ、又はそれ以上）の最大振幅（ＴＥＧ－ＡＤＰ）を有した。例えば、Ｃｏｒｌｉｓｓ ＢＭ，Ｐｏｌｉｆｋａ ＡＪ，Ｈａｒｒｉｓ ＮＳ，Ｈｏｈ ＢＬ，Ｆｏｘ ＷＣ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ：ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ Ｐ２Ｙ１２ ａｓｓａｙ ｔｏ ｔｈｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｍａｐｐｉｎｇ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．２０１８ Ｎｏｖ １；１２９（５）：１１６０－１１６５．ｄｏｉ：１０．３１７１／２０１７．６．ＪＮＳ１７５３５．ＰＭＩＤ：２９２７１７１７。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約１７０～約１９０ｍｇ（例えば、約１８０ｍｇ）の初回投薬量で、又は１日２回の約８０～約１００ｍｇ（例えば、約９０ｍｇ）の治療１年目での次の投薬量で、又は１日２回の約５０～約７０ｍｇの治療２年目での次の投薬量で（例えば、約６０ｍｇ）、任意選択的にアスピリンと組み合わせてチカグレロールを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チカグレロールを含み、対象は、約５５０～約６５０ｎｇ／ｍＬ（例えば、約６００ｍｇ／Ｌ）のＣ_ｍａｘを達成した。例えば、Ｔｅｎｇ Ｒ，Ｍｕｌｄｏｗｎｅｙ Ｓ，Ｚｈａｏ Ｙ，Ｂｅｒｇ ＪＫ，Ｌｕ Ｊ，Ｋｈａｎ ＮＤ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｔｉｃａｇｒｅｌｏｒ ｉｎ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｏｎ ｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｒｅｎａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１８ Ｓｅｐ；７４（９）：１１４１－１１４８．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２２８－０１８－２４８４－７．Ｅｐｕｂ ２０１８ Ｍａｙ ３０．ＰＭＩＤ：２９８５０９３７；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ６０９６７０９．いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チカグレロールを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約１８０未満（例えば、約１７５未満、１７０未満、１６５未満、１６０未満、１５５未満、１５０未満、又はそれ以下）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チカグレロールを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、少なくとも１８０（例えば、少なくとも１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、又はそれ以上）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チカグレロールを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、約１８０～約３７６ＰＲＵ（例えば、約２００～約３００ＰＲＵ）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チカグレロールを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約５０ｍｍ未満（例えば、約４８ｍｍ未満、４５ｍｍ未満、４０ｍｍ未満、又はそれ以下）の最大振幅（ＴＥＧ－ＡＤＰ）を有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、チカグレロールを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、少なくとも約５０ｍｍ（例えば、少なくとも５３ｍｍ、５５ｍｍ、５０ｍｍ、６０ｍｍ、６５ｍｍ、７０ｍｍ、又はそれ以上）の最大振幅（ＴＥＧ－ＡＤＰ）を有した。例えば、Ｃｏｒｌｉｓｓ ＢＭ，Ｐｏｌｉｆｋａ ＡＪ，Ｈａｒｒｉｓ ＮＳ，Ｈｏｈ ＢＬ，Ｆｏｘ ＷＣ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ：ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ Ｐ２Ｙ１２ ａｓｓａｙ ｔｏ ｔｈｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｍａｐｐｉｎｇ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．２０１８ Ｎｏｖ １；１２９（５）：１１６０－１１６５．ｄｏｉ：１０．３１７１／２０１７．６．ＪＮＳ１７５３５．ＰＭＩＤ：２９２７１７１７。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約２７５～約３２５ｍｇ（例えば、約３００ｍｇ）の初回投薬量で、又は１日１回の約７０～約８０ｍｇ（例えば、約７５ｍｇ）の次の投薬量で、任意選択的にアスピリンと組み合わせてクロピドグレルを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、クロピドグレルを含み、対象は、約１～約４０ｍｇ／ＬのＣ_ｍａｘ（例えば、約７５ｍｇの用量で約１～約１５ｎｇ／ｍＬ、又は約３００ｍｇの用量で約１～約４０ｎｇ／ｍＬ）を達成した。例えば、Ｋａｒａｚｎｉｅｗｉｃｚ－Ｌａｄａ，Ｍａｒｔａ ｅｔ ａｌ．“Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ．”Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｖｏｌ．５３，２（２０１４）：１５５－６４．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ４０２６２－０１３－０１０５－２を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、クロピドグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約１８０未満（例えば、約１７５未満、１７０未満、１６５未満、１６０未満、１５５未満、１５０未満、又はそれ以下）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、クロピドグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、少なくとも１８０（例えば、少なくとも１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、又はそれ以上）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、クロピドグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、約１８０～約３７６ＰＲＵ（例えば、約２００～約３００ＰＲＵ）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、クロピドグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約４７単位超（例えば、約４８単位超、５０単位超、５５単位超、又はそれ以上）のＭＥＡを使用して、高い治療中血小板反応性（ＨＰＲ）を有した。例えば、Ｋｒｕｇｅｒ，Ｊａｎ－Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ，ｅｔ ａｌ．“Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ＡＳＡ ａｎｄ Ｐ２Ｙ１２－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ－ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ（ｓｉｎｇｌｅ）ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｒｙ．”Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ７４．７（２０１４）：５６８－５７４．いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、クロピドグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約５０ｍｍ未満（例えば、約４８ｍｍ未満、４５ｍｍ未満、４０ｍｍ未満、又はそれ以下）の最大振幅（ＴＥＧ－ＡＤＰ）を有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、クロピドグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、少なくとも約５０ｍｍ（例えば、少なくとも５３ｍｍ、５５ｍｍ、５０ｍｍ、６０ｍｍ、６５ｍｍ、７０ｍｍ、又はそれ以上）の最大振幅（ＴＥＧ－ＡＤＰ）を有した。例えば、Ｃｏｒｌｉｓｓ ＢＭ，Ｐｏｌｉｆｋａ ＡＪ，Ｈａｒｒｉｓ ＮＳ，Ｈｏｈ ＢＬ，Ｆｏｘ ＷＣ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ：ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ Ｐ２Ｙ１２ ａｓｓａｙ ｔｏ ｔｈｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｍａｐｐｉｎｇ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．２０１８ Ｎｏｖ １；１２９（５）：１１６０－１１６５．ｄｏｉ：１０．３１７１／２０１７．６．ＪＮＳ１７５３５．ＰＭＩＤ：２９２７１７１７。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約５０～約７０ｍｇ（例えば、約６０ｍｇ）の初回投薬量で、又は１日１回の約３～約１２ｍｇ（例えば、約５ｍｇ又は約１０ｍｇ）の次の投薬量で、任意選択的にアスピリンと組み合わせてプラスグレルを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プラスグレルを含み、対象は、約２００～約５２５ｎｇ／ｍＬ（例えば、約２０ｍｇの用量で約３３０～約３５０ｎｇ／ｍＬ）のＣ_ｍａｘを達成した。例えば、Ｕｍｅｍｕｒａ，Ｋａｚｕｏ，ａｎｄ Ｔａｋａｙｕｋｉ Ｉｗａｋｉ．“Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ Ｐｒａｓｕｇｒｅｌ ａｎｄ Ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈｙ Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．”Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｖｏｌ．５，６（２０１６）：４８０－４８７．ｄｏｉ：１０．１００２／ｃｐｄｄ．２５９を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プラスグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約１８０未満（例えば、約１７５未満、１７０未満、１６５未満、１６０未満、１５５未満、１５０未満、又はそれ以下）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プラスグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、少なくとも１８０（例えば、少なくとも１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、又はそれ以上）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プラスグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、約１８０～約３７６ＰＲＵ（例えば、約２００～約３００ＰＲＵ）のＰＲＵを有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プラスグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約５０ｍｍ未満（例えば、約４８ｍｍ未満、４５ｍｍ未満、４０ｍｍ未満、又はそれ以下）の最大振幅（ＴＥＧ－ＡＤＰ）を有した。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プラスグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物を投与した後に、対象は、少なくとも約５０ｍｍ（例えば、少なくとも５３ｍｍ、５５ｍｍ、５０ｍｍ、６０ｍｍ、６５ｍｍ、７０ｍｍ、又はそれ以上）の最大振幅（ＴＥＧ－ＡＤＰ）を有した。例えば、Ｃｏｒｌｉｓｓ ＢＭ，Ｐｏｌｉｆｋａ ＡＪ，Ｈａｒｒｉｓ ＮＳ，Ｈｏｈ ＢＬ，Ｆｏｘ ＷＣ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ：ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＶｅｒｉｆｙＮｏｗ Ｐ２Ｙ１２ ａｓｓａｙ ｔｏ ｔｈｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｍａｐｐｉｎｇ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．２０１８ Ｎｏｖ １；１２９（５）：１１６０－１１６５．ｄｏｉ：１０．３１７１／２０１７．６．ＪＮＳ１７５３５．ＰＭＩＤ：２９２７１７１７．いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、プラスグレルを含み、本明細書に提供される組成物又は本明細書に記載の方法によって生成される組成物の投与の前に、対象は、約４７単位超（例えば、約４８単位超、５０単位超、５５単位超、又はそれ以上）のＭＥＡを使用して、高い治療中血小板反応性（ＨＰＲ）を有した。例えば、Ｋｒｕｇｅｒ，Ｊａｎ－Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ，ｅｔ ａｌ．“Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ＡＳＡ ａｎｄ Ｐ２Ｙ１２－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ－ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ（ｓｉｎｇｌｅ）ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｒｙ．”Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ７４．７（２０１４）：５６８－５７４。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約１７０～約１９０ｍｃｇ／対象のｋｇ体重（例えば、約１８０ｍｃｇ／対象のｋｇ体重）の初期投薬量で、任意選択的に約１７０～約１９０ｍｃｇ／対象のｋｇ体重（例えば、約１８０ｍｃｇ／対象のｋｇ体重）の第２の初期投薬量で、又は約１～約２ｍｃｇ／対象のｋｇ体重／分（例えば、約１．５ｍｃｇ／対象のｋｇ体重／分）の次の用量でエプチフィバチドを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約３０分間の約０．３～約０．５μｇ／対象のｋｇ体重／分（例えば、約０．５μｇ／対象のｋｇ体重／分）の初回投薬量で、又は約０．１μｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量でチロフィバンを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約０．２～約０．３ｍｇ／対象のｋｇ体重（例えば、約０．２５ｍｇ／対象のｋｇ体重）の初期投薬量で、又は約０．１０～約０．１５μｇ／対象のｋｇ体重／分（例えば、約０．１２５μｇ／対象のｋｇ体重／分）の次の投薬量でアブシキシマブを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約０．２～約０．３ｍｇ／対象のｋｇ体重の初期投薬量（例えば、約０．２５ｍｇ／対象のｋｇ体重）、又は約８～約１０μｇ／分（例えば、約９μｇ／分）の次の投薬量でアブシキシマブを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日２回の約２４０～約２６０ｍｇ（例えば、約２５０ｍｇ）の投薬量でチクロピジンを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日１回、２回、３回、又は４回の約１００～約６００ｍｇ（例えば、約１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、又は６００ｍｇ）の投薬量でイブプロフェンを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日１回の約２～約３ｍｇ（例えば、約２．５ｍｇ）の用量で、任意選択的にアスピリン又はクロピドグレルとともにボラパキサールを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日２回の約４０～約１１０ｍｇ（例えば、約５０ｍｇ、７５ｍｇ、又は１００ｍｇ）の投薬量でシロスタゾールを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約２ｎｇ／対象のｋｇ体重／分の初回投薬量で、又は約４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、又は２０ｎｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量でエポプロステノールを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日４回の約６０～約１１０ｍｇ（例えば、約７５ｍｇ又は１００ｍｇ）の投薬量でジピリダモールを含む。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約０．５～約３．０ｎｇ／対象のｋｇ体重／分（例えば、約０．６２５ｎｇ／対象のｋｇ体重／分、約１．２５ｎｇ／対象のｋｇ体重／分、又は約２．５ｎｇ／対象のｋｇ体重／分）の投薬量でトレプロスチニルナトリウムを含む。

いくつかの実施形態では、血小板誘導体を含む組成物を再水和することは、血小板誘導体（例えばＦＤＰＤ）に水性液体を添加することを含む。いくつかの実施形態では、水性液体は、水である。いくつかの実施形態では、水性液体は、水溶液（例えば、緩衝液）である。いくつかの実施形態では、水性液体は、生理食塩水である。いくつかの実施形態では、水性液体は、懸濁液である。

いくつかの実施形態では、再水和された血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、４０国際単位（ＩＵ）以上での凝血に関連する全ての個々の因子（例えば、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、及び第ＩＸ因子）を示す凝固因子レベルを有する。

いくつかの実施形態では、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、約１０％未満、例えば、約８％未満、例えば、約６％未満、例えば、約４％未満、例えば、約２％未満、例えば、約０．５％未満の血小板膜の架橋を、膜上に存在するタンパク質及び／又は脂質を介して有する。いくつかの実施形態では、再水和された血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、約１０％未満、例えば、約８％未満、例えば、約６％未満、例えば、約４％未満、例えば、約２％未満、例えば、約０．５％未満の血小板膜の架橋を、膜上に存在するタンパク質及び／又は脂質を介して有する。

いくつかの実施形態では、血小板、典型的には血小板誘導体、例示的実施形態ではＦＤＰＤは、少なくとも約０．２μｍ（例えば、少なくとも約０．３μｍ、少なくとも約０．４μｍ、少なくとも約０．５μｍ、少なくとも約０．６μｍ、少なくとも約０．７μｍ、少なくとも約０．８μｍ、少なくとも約０．９μｍ、少なくとも約１．０μｍ、少なくとも約１．２μｍ、少なくとも約１．５μｍ、少なくとも約２．０μｍ、少なくとも約２．５μｍ、又は少なくとも約５．０μｍ）の粒径（例えば、直径、最大寸法）を有する。いくつかの実施形態では、粒径は、約５．０μｍ未満（例えば、約２．５μｍ未満、約２．０μｍ未満、約１．５μｍ未満、約１．０μｍ未満、約０．９μｍ未満、約０．８μｍ未満、約０．７μｍ未満、約０．６μｍ未満、約０．５μｍ未満、約０．４μｍ未満、又は約０．３μｍ未満）である。いくつかの実施形態では、粒径は、約０．３μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．４μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）である。

いくつかの実施形態では、少なくとも５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％）の血小板、又は例示的実施形態では血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、約０．３μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．４μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲の粒径を有する。いくつかの実施形態では、血小板、又は例示的実施形態では血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）の最大９９％（例えば、最大約９５％、最大約８０％、最大約７５％、最大約７０％、最大約６５％、最大約６０％、最大約５５％、又は最大約５０％）は、約０．３μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．４μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲にある。いくつかの実施形態では、血小板、又は例示的実施形態では血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）の約５０％～約９９％（例えば、約５５％～約９５％、約６０％～約９０％、約６５％～約８５％、約７０％～約８０％）は、約０．３μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．４μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲にある。

いくつかの例示的実施形態では、微粒子は、約０．５μｍ未満（約０．４５μｍ未満又は０．４μｍ未満）の粒径（例えば、直径、最大寸法）を有する粒子であり得る。いくつかの場合では、微粒子は、約０．０１μｍ～約０．５μｍ（例えば、約０．０２μｍ～約０．５μｍ）の粒径を有する粒子であり得る。

本明細書に記載の方法に従って調製されるものなどの血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物は、組成物中の約１ｎｍ～約６０，０００ｎｍの全粒子の全散乱強度の約５．０％未満（例えば、約４．５％未満、４．０％未満、３．５％未満、３．０％未満、２．５％未満、２．０％未満、１．５％未満、１．０％未満、又は０．５％未満）に寄与する微粒子含有量を有し得る。いくつかの実施形態では、血小板誘導体組成物は、ＣＤ４１陽性血小板誘導体を含む血小板誘導体の集団を含み、ＣＤ４１陽性血小板誘導体の１５％未満、１０％未満、７．５％未満、５％未満、４．５％未満、４％未満、３．５％未満、３％未満、２．５％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．５％未満、又は０．１％未満は、１μｍ未満、０．９μｍ未満、０．８μｍ未満、０．７μｍ未満、０．６μｍ未満、０．５μｍ未満、０．４μｍ未満、０．３μｍ未満、０．２μｍ未満、又は０．１μｍ未満の直径を有する微粒子であり、特定の例示的実施形態では、０．５μｍ未満である。いくつかの実施形態では、血小板誘導体組成物は、ＣＤ４２陽性血小板誘導体を含む血小板誘導体の集団を含み、ＣＤ４２陽性血小板誘導体の１５％未満、１０％未満、７．５％未満、５％未満、４．５％未満、４％未満、３．５％未満、３％未満、２．５％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．５％未満、又は０．１％未満は、１μｍ未満、０．９μｍ未満、０．８μｍ未満、０．７μｍ未満、０．６μｍ未満、０．５μｍ未満、０．４μｍ未満、０．３μｍ未満、０．２μｍ未満、又は０．１μｍ未満の直径を有する微粒子であり、特定の例示的実施形態では、０．５μｍ未満である。いくつかの実施形態では、血小板誘導体組成物は、ＣＤ６１陽性血小板誘導体を含む血小板誘導体の集団を含み、ＣＤ６１陽性血小板誘導体の１５％未満、１０％未満、７．５未満、５％未満、４．５％未満、４％未満、３．５％未満、３％未満、２．５％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．５％未満、又は０．１％未満は、１μｍ未満、０．９μｍ未満、０．８μｍ未満、０．７μｍ未満、０．６μｍ未満、０．５μｍ未満、０．４μｍ未満、０．３μｍ未満、０．２μｍ未満、又は０．１μｍ未満の直径を有する微粒子であり、特定の例示的実施形態では、０．５μｍ未満である。いくつかの例示的実施形態では、微粒子は、０．５μｍ未満の直径を有する。粉末形態の血小板誘導体組成物を含む本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、微粒子の直径は、血小板誘導体組成物を適切な溶液で再水和させた後に決定される。いくつかの実施形態では、血小板誘導体組成物を再水和するための溶液の量は、フリーズドライの工程に存在する緩衝液又は調製剤の量と等しい。本明細書で使用される場合、「散乱強度による」微粒子の含有量は、組成物中の半径約１ｎｍ～約６０，０００ｎｍの全ての粒子の散乱強度に基づく微粒子含有量を指す。微粒子含有量は、任意の適切な方法、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定され得る。いくつかの場合では、これは、ＤＬＳに使用される試料の粘度は、血漿のおおよその粘度であるため、約１．０６０ｃＰであり得る（又はそのように調整され得る）。いくつかの実施形態では、任意の態様又は実施形態による血小板誘導体組成物は、血小板誘導体の集団、及び微粒子を含み、微粒子に対する血小板誘導体の数値比は、少なくとも９０：１、９１：１、９２：１、９３：１、９４：１、９５：１、９６：１、９７：１、９８：１、又は９９：１である。いくつかの実施形態では、血小板誘導体は、０．５～２．５μｍの範囲の直径を有し、微粒子は、０．５μｍ未満の直径を有する。

いくつかの実施形態では、血小板は、例えば、液体培地中で、例えば、血小板誘導体を形成する処理の前に、又は対象に直接投与する前に単離される。

いくつかの実施形態では、血小板は、ドナー由来の血小板である。いくつかの実施形態では、血小板は、アフェレーシス工程を含むプロセスによって得られる。いくつかの実施形態では、血小板は、プールされた血小板である。

いくつかの実施形態では、血小板は、複数のドナーからプールされる。複数のドナーからプールされたそのような血小板は、本明細書では、プールされた血小板とも称され得る。いくつかの実施形態では、ドナーは、５人より多い、例えば、１０人より多い、例えば、２０人より多い、例えば、５０人より多い、例えば、最大約１００人のドナーである。いくつかの実施形態では、ドナーは、約５～約１００人、例えば、約１０～約５０人、例えば、約２０～約４０人、例えば、約２５～約３５人である。プールされた血小板は、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかを作製するために使用され得る。

いくつかの実施形態では、血小板は、インビトロで誘導される。いくつかの実施形態では、血小板は、培養物中で誘導されるか、又は調製される。いくつかの実施形態では、血小板の調製は、巨核球の培養物から血小板を誘導又は増殖することを含む。いくつかの実施形態では、血小板の調製は、胚性幹細胞（ＥＳＣ）及び／又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む、ヒト多能性幹細胞（ＰＣＳ）の培養物から血小板（又は巨核球）を誘導又は増殖することを含む。

したがって、いくつかの実施形態では、血小板は、本明細書に記載の対象を治療する前に調製される。いくつかの実施形態では、血小板は、凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、血小板は、凍結保存される。

いくつかの実施形態では、血小板又はプールされた血小板は、インキュベーション物質とのインキュベーションの前に、約６．０～約７．４のｐＨに酸性化され得る。いくつかの実施形態では、本方法は、血小板を約６．５～約６．９のｐＨに酸性化することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、血小板を約６．６～約６．８のｐＨに酸性化することを含む。いくつかの実施形態では、酸性化は、プールされた血小板にクエン酸デキストロース（ＡＣＤ）を含む溶液を添加することを含む。

いくつかの実施形態では、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）は、本明細書の態様で使用するための血小板誘導体、例示的実施形態ではＦＤＰＤを作製するための血小板の処理に使用される。例えば、ＴＦＦは、例えば、組成物が乾燥されて血小板誘導体を形成する前に、又は例示的な実施形態では血小板組成物がフリーズドライされてＦＤＰＤを形成する前に、血小板が適切な媒体、例えば、インキュベーション物質及び／若しくは凍結乾燥剤、又は凍結乾燥剤であるか若しくは凍結乾燥剤を含むインキュベーション物質中に適切な濃度範囲で懸濁されるように、濃縮及び／又は緩衝液若しくは他の溶液交換のために使用され得る。

いくつかの実施形態では、方法は、初期希釈工程を含み得、例えば、出発材料（例えば、未処理の血液生成物（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））を調製剤（例えば、本明細書に記載の調製剤のうちのいずれか）で希釈して、希釈出発材料を形成し得る。いくつかの場合では、初期希釈工程は、出発材料の質量の少なくとも約１０％（例えば、出発材料の質量の少なくとも約１５％、２５％、５０％、７５％、１００％、１５０％、又は２００％）に等しい調製剤の質量で調製剤で希釈することを含み得る。いくつかの実施形態では、初期希釈工程は、ＴＦＦ装置を使用して行われ得る。

いくつかの実施形態では、本方法は、濃縮（例えば、血小板を濃縮と）（例えば、出発材料又は希釈出発材料を濃縮）して、濃縮血小板組成物を形成することを含み得る。例えば、濃縮は、約１０００×１０^３～約４０００×１０^３個の血小板／μＬ（例えば、約１０００×１０^３～約２０００×１０^３個、約２０００×１０^３個～約３０００×１０^３個、又は約４０００×１０^３個の血小板／μＬ）に濃縮することを含み得る。いくつかの実施形態では、濃縮工程は、ＴＦＦ装置を使用して行われ得る。

血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）の濃度は、任意の適切な方法によって決定され得る。例えば、カウンターを使用して、インピーダンスを用いて懸濁液中の血液細胞の濃度を定量化することができる（例えば、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＡｃＴ １０又はＡｃＴ ｄｉｆｆ ２）。

いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、出発材料、希釈出発材料、濃縮血小板組成物、又はそれらの組み合わせの透析濾過（「洗浄」と呼ばれることもある）を含み得る。いくつかの実施形態では、透析濾過は、少なくとも２つ（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上）の透析濾過用量で洗浄することを含み得る。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、緩衝液交換を含み得る。いくつかの実施形態では、緩衝液がＴＦＦで使用され得る。緩衝液は、任意の適切な緩衝液であり得る。いくつかの実施形態では、緩衝液は、調製剤（例えば、本明細書に記載の調製剤のうちのいずれか）であり得る。いくつかの実施形態では、緩衝液は、希釈に使用されたものと同じ調製剤であり得る。いくつかの実施形態では、緩衝液は、希釈に使用されたものとは異なる調製物であり得る。いくつかの実施形態では、緩衝液は、緩衝剤、塩基、充填剤、任意選択的に塩、及び任意選択的に少なくとも１種の有機溶媒、例えばエタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される有機溶媒を含む凍結乾燥剤を含み得る。緩衝液は、任意の適切な緩衝剤であり得る。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ（（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）であり得る。塩基は、任意の適切な塩基であり得る。いくつかの実施形態では、塩基は、重炭酸ナトリウムであり得る。いくつかの実施形態では、糖は、単糖であり得る。いくつかの実施形態では、充填剤は、糖であり得る。いくつかの実施形態では、糖は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース（例えば、デキストロース）、マンノース、又はキシロースを含み得る。いくつかの実施形態では、単糖は、トレハロースであり得る。いくつかの実施形態では、充填剤は、ポリスクロースを含み得る。塩は、任意の適切な塩であり得る。いくつかの実施形態では、塩は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、又はそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。

いくつかの実施形態では、約０．１μｍ～約１μｍ（例えば、約０．１μｍ～約１μｍ、約０．１μｍ～約０．５μｍ、約０．２～約０．４５μｍ、約０．４５～約１μｍ、約０．１μｍ、約０．２μｍ、約０．４５μｍ、約０．６５μｍ、又は約１μｍ）の孔径を有する膜をＴＦＦに使用することができる。膜は、任意の適切な材料から作製され得る。いくつかの場合では、膜は、親水性膜であり得る。いくつかの実施形態では、膜は、疎水性膜であり得る。いくつかの実施形態では、少なくとも約１００ｋＤａ（例えば、少なくとも約２００、３００ｋＤａ、５００ｋＤａ、又は１０００ｋＤａ）の公称分子量カットオフ（ＮＭＷＣＯ）を有する膜がＴＦＦに使用され得る。ＴＦＦは、組成物中の微粒子含有量を低減し、組成物中の血小板誘導体の含有量を増加させることを目的として、０．１μｍ～１．０μｍの範囲内の任意の適切な孔径で行われ得る。当業者は、血小板誘導体を保持し、微粒子が膜を通過することを可能にするための、孔径の必要な最適化を認識し得る。例示的実施形態における孔径は、微粒子が膜を通過し、ＴＦＦ処理された組成物が５％未満の微粒子を有することを可能にするようなものである。例示的な実施形態における孔径は、ＴＦＦ処理組成物が１００×１０^３～２０，０００×１０^３の範囲の血小板誘導体の濃度を有することを可能にするプロセスにおいて最大量の血小板誘導体が保持されるような孔径である。ＴＦＦプロセス中の孔径は、必要がある対象に血小板誘導体を投与する人がより少ないバイアルを再水和／再構成しなければならないように、血小板誘導体組成物中のより高い濃度の血小板誘導体を得るために利用することができ、したがって、そのような血小板誘導体を下流の手順、例えば、本明細書に提供される治療方法のために調製するプロセス中の時間及び労力に関して効率的である。ＴＦＦは、任意の適切な温度で行われ得る。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、約２０℃～約３７℃（例えば、約２０℃～約２５℃、約２０℃～約３０℃、約２５℃～約３０℃、約３０℃～約３５℃、約３０℃～約３７℃、約２５℃～約３５℃、又は約２５℃～約３７℃）の温度で行われ得る。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、約１００ｍＬ／分～約８００ｍＬ／分（例えば、約１００～約２００ｍＬ／分、約１００～約４００ｍＬ／分、約１００～約６００ｍＬ／分、約２００～約４００ｍＬ／分、約２００～約６００ｍＬ／分、約２００～約８００ｍＬ／分、約４００～約６００ｍＬ／分、約４００～約８００ｍＬ／分、約６００～約８００ｍＬ／分、約１００ｍＬ／分、約２００ｍＬ／分、約３００ｍＬ／分、約４００ｍＬ／分、約５００ｍＬ／分、約６００ｍＬ／分、約７００ｍＬ／分、又は約８００ｍＬ／分）の流速（例えば、循環流速）で行われ得る。

いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、特定のエンドポイントに到達するまで実行されて、ＴＦＦ処置組成物を形成し得る。エンドポイントは、任意の適切なエンドポイントであり得る。いくつかの実施形態では、エンドポイントは、残留血漿のパーセンテージ（例えば、約５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、又は０．１％以下の残留血漿）であり得る。いくつかの実施形態では、エンドポイントは、２８０ｎｍでの相対吸光度（Ａ２８０）であり得る。例えば、エンドポイントは、ＴＦＦ（例えば、出発材料又は希釈出発材料）の前の（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用した）Ａ２８０の約５０％以下（例えば、約４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、又は０．１％以下）の（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用した）Ａ２８０であり得る。いくつかの実施形態では、Ａ２８０は、７．５％の血漿＝１．６６ＡＵを測定するシステムに相対的であり得る。いくつかの実施形態では、Ａ２８０を測定するための器具は、以下のように構成され得る：０．５ｃｍギャップフローセルが、ＴＦＦシステムの濾液ラインに取り付けられ得る。フローセルは、フローセルの各側面に取り付けられた光ファイバーケーブル（光源ケーブル及び光検出器ケーブル）を用いて光度計に接続され得る。フローセルは、光ファイバーケーブルの両側にシリカガラスレンズで作製され得る。水性培地中のタンパク質の相対タンパク質濃度とは別に、水性培地中のタンパク質濃度は、絶対単位で測定することもできる。いくつかの実施形態では、水性媒体中のタンパク質濃度は、１５％以下、又は１４％以下、又は１３％以下、又は１２％以下、又は１１％以下、又は１０％以下、又は９％以下、又は８％以下、又は７％以下、又は６％以下、又は５％以下、又は４％以下、又は３％以下、又は２％以下、又は１％以下、又は０．１％以下、又は０．０１％以下である。いくつかの例示的実施形態では、タンパク質濃度は、３％未満又は４％未満である。いくつかの実施形態では、タンパク質濃度は、ＴＦＦ処理組成物中で、０．０１～１５％、又は０．１～１５％、又は１～１５％、又は１～１０％、又は０．０１～１０％、又は３～１２％、又は５～１０％の範囲である。いくつかの実施形態では、エンドポイントは、絶対Ａ２８０であり得る（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用して）。例えば、エンドポイントは、２．５０ＡＵ以下、２．４０ＡＵ以下、２．３０ＡＵ以下、２．２０ＡＵ以下、２．１０ＡＵ以下、２．０ＡＵ以下、１．９０ＡＵ以下、１．８０ＡＵ以下、又は１．７０ＡＵ以下の（例えば、１．６６ＡＵ以下、１．６ＡＵ以下、１．５ＡＵ以下、１．４ＡＵ以下、１．３ＡＵ以下、１．２ＡＵ以下、１．１ＡＵ以下、１．０ＡＵ以下、０．９ＡＵ以下、０．８ＡＵ以下、０．７ＡＵ以下、０．６ＡＵ以下、０．５ＡＵ以下、０．４ＡＵ以下、０．３ＡＵ以下、０．２ＡＵ以下、又は０．１ＡＵ以下）（例えば、０．５ｃｍの経路長さを使用して）Ａ２８０であり得る。いくつかの実施形態では、残留血漿のパーセンテージ、相対Ａ２８０、又はＡ２８０は、血小板及び水性培地を含む組成物の水性培地に基づいて決定され得る。いくつかの実施形態では、残留血漿のパーセンテージは、Ａ２８０に対する既知の相関に基づいて決定され得る。いくつかの実施形態では、ＴＦＦは、（例えば、調製剤を使用して）試料の濃度又は希釈を含むことができるため、エンドポイントは、血小板濃度であり得る。例えば、エンドポイントは、少なくとも約２０００×１０^３個の血小板／μＬ（例えば、少なくとも約２０５０×１０^３、２１００×１０^３、２１５０×１０^３、２２００×１０^３、２２５０×１０^３、２３００×１０^３、２３５０×１０^３、２４００×１０^３、２４５０×１０^３、又は２５００×１０^３個の血小板／μＬ）の血小板濃度であり得る。別の例として、エンドポイントは、約１０００×１０^３～約２５００個の血小板／μＬ（例えば、約１０００×１０^３～約２０００×１０^３、約１５００×１０^３～約２３００×１０^３、又は約１７００×１０^３～約２３００×１０^３個の血小板／μＬ）の血小板濃度であり得る。いくつかの実施形態では、エンドポイントは、ＴＦＦ処理組成物中の血小板の濃度が、少なくとも１００×１０^３個の血小板／μＬ、２００×１０^３個の血小板／μＬ、４００×１０^３個の血小板／μＬ、１０００×１０^３個の血小板／μＬ、１２５０×１０^３個の血小板／μＬ、１５００×１０^３個の血小板／μＬ、１７５０×１０^３個の血小板／μＬ、２０００×１０^３個の血小板／μＬ、２２５０×１０^３個の血小板／μＬ、２５００×１０^３個の血小板／μＬ、２７５０×１０^３個の血小板／μＬ、３０００×１０^３個の血小板／μＬ、３２５０×１０^３個の血小板／μＬ、３５００×１０^３個の血小板／μＬ、３７５０×１０^３個の血小板／μＬ、４０００×１０^３個の血小板／μＬ、４２５０×１０^３個の血小板／μＬ、４５００×１０^３個の血小板／μＬ、４７５０×１０^３個の血小板／μＬ、５０００×１０^３個の血小板／μＬ、５２５０×１０^３個の血小板／μＬ、５５００×１０^３個の血小板／μＬ、５７５０×１０^３個の血小板／μＬ、６０００×１０^３個の血小板／μＬ、７０００×１０^３個の血小板／μＬ、８０００×１０^３個の血小板／μＬ、９０００×１０^３個の血小板／μＬ、１０，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１１，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１２，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１３，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１４，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１５，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１６，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１７，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１８，０００×１０^３個の血小板／μＬ、１９，０００×１０^３個の血小板／μＬ、２０，０００×１０^３個の血小板／μＬであることであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＦＦ処理組成物中の血小板又は血小板誘導体は、１００×１０^３～２０，０００×１０^３個の血小板／μＬ、又は１０００×１０^３～２０，０００×１０^３個の血小板／μＬ、又は１０００×１０^３～１０，０００×１０^３個の血小板／μＬ、又は５００×１０^３～５，０００×１０^３個の血小板／μＬ、又は１０００×１０^３～５，０００×１０^３個の血小板／μＬ、又は２０００×１０^３～８，０００×１０^３個の血小板／μＬ、又は１０，０００×１０^３～２０，０００×１０^３個の血小板／μＬ、又は１５，０００×１０^３～２０，０００×１０^３個の血小板／μＬの範囲である。

いくつかの実施形態では、エンドポイントは、２つ以上の基準（例えば、残留血漿及び血小板濃度のパーセンテージ、相対Ａ２８０及び血小板濃度、又は絶対Ａ２８０及び血小板濃度）を含み得る。

典型的には、ＴＦＦ処理された組成物は、その後、任意選択的に熱処理工程で凍結乾燥されて、最終的な血液生成物（例えば、血小板、凍結保存された血小板、ＦＤＰＤ）を形成する。しかしながら、いくつかの場合では、ＴＦＦ処理された組成物は、最終的な血液生成物であるとみなされ得る。

いくつかの実施形態では、血液生成物は、血液生成物（例えば、未処理の血液生成物（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））、又は部分的に処理された血液生成物（例えば、ＴＦＦを受けた血液生成物））の遠心分離を使用して調製され得る。いくつかの実施形態では、血液生成物は、血液生成物（例えば、未処理の血液生成物（例えば、ドナーアフェレーシス材料）、又は部分的に処理された血液生成物（例えば、ＴＦＦを受けた血液生成物））を遠心分離することなく調製され得る。遠心分離は、任意の適切な工程を含み得る。いくつかの実施形態では、遠心分離は、低速加速、低速減速、又はそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、遠心分離は、約１４００×ｇ～約１５５０×ｇ（例えば、約１４００～約１４５０×ｇ、約１４５０～約１５００×ｇ、又は１５００～約１５５０×ｇ、約１４００×ｇ、約１４１０×ｇ、約１４３０×ｇ、約１４５０×ｇ、約１４７０×ｇ、約１４９０×ｇ、約１５００×ｇ、約１５１０×ｇ、約１５３０×ｇ、又は約１５５０×ｇ）での遠心分離を含み得る。いくつかの実施形態では、遠心分離の持続時間は、約１０分～約３０分（例えば、約１０～約２０分、約２０～約３０分、約１０分、約２０分、又は約３０分）であり得る。

いくつかの実施形態では、最終血液生成物は、ＴＦＦ及び遠心分離（例えば、ＴＦＦに続く遠心分離、又は遠心分離に続くＴＦＦ）の両方を使用して調製され得る。

本明細書に記載の方法のいずれかによって調製される組成物もまた、本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、処理中に複数の点で分析され得る。いくつかの実施形態では、出発材料（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））は、抗体含有量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含有量）について分析され得る。いくつかの実施形態では、出発材料（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））は、タンパク質濃度について分析され得る（例えば、２８０ｎｍでの吸光度によって（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用して））。いくつかの実施形態では、処理の中間工程における組成物（例えば、タンパク質濃度が、未処理の血液生成物のタンパク質濃度の７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）に減少した場合）は、抗体含有量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含有量）について分析され得る。いくつかの実施形態では、処理の中間工程における血液生成物の抗体含有量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含有量）は、出発材料の抗体含有量と比較して、少なくとも５％低減され得る（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減され得る）。いくつかの実施形態では、最終血液生成物（例えば、血小板（例えば、凍結保存された血小板、ＦＤＰＤ））は、抗体含有量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含有量）について分析され得る。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、最終血液生成物は、血小板及び水性培地を含む組成物であり得る。いくつかの実施形態では、最終血液生成物（例えば、血小板（例えば、凍結保存された血小板、ＦＤＰＤ））の抗体含有量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含有量）は、出発材料の抗体含有量と比較して、少なくとも５％低減され得る（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減され得る）。いくつかの実施形態では、最終血液生成物は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群から選択される抗体の検出可能なレベルを有し得ない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物の水性媒体は、本明細書に記載のように分析され得る。

いくつかの実施形態では、血小板は、インキュベーション物質及び／又は凍結乾燥剤とのインキュベーションの前に単離される。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、本明細書でより詳細に開示される凍結乾燥剤であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、遠心分離を使用することによって血小板を単離することを更に含む。いくつかの実施形態では、遠心分離は、約１０００×ｇ～約２０００×ｇの相対的遠心力（ＲＣＦ）で行われる。いくつかの実施形態では、遠心分離は、約１３００×ｇ～約１８００×ｇの相対遠心力（ＲＣＦ）で行われる。いくつかの実施形態では、遠心分離は、約１５００×ｇの相対遠心力（ＲＣＦ）で行われる。いくつかの実施形態では、遠心分離は、約１分～約６０分間行われる。いくつかの実施形態では、遠心分離は、約１０分～約３０分間行われる。いくつかの実施形態では、遠心分離は、約３０分間行われる。

インキュベーション物質は、任意の適切な成分を含み得る。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、液体培地を含み得る。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及び血液若しくは血液製剤中に見出され得るか、又は血小板を乾燥させるのに有用であることが既知である任意の他の塩、あるいはこれらのうちの２つ以上の任意の組み合わせから選択される１つ以上の塩を含み得る。

いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及び血液又は血液製剤中に見出され得る任意の他の塩などの１つ以上の塩を含む。例示的な塩としては、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、約０．５ｍＭ～約１００ｍＭの１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、約０．５ｍＭ～約１００ｍＭ（例えば、約０．５～約２ｍＭ、約２ｍＭ～約９０ｍＭ、約２ｍＭ～約６ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０～約８５ｍＭ）の１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、約５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、又は約８０ｍＭの１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びその２つの組み合わせから選択される１つ以上の塩を、約０．５ｍＭ～約２ｍＭの濃度で含む。

好ましくは、これらの塩は、全血中に見出されるのとほぼ同じ量で、フリーズドライされた血小板などの血小板又は血小板誘導体を含む組成物中に存在する。

いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、担体タンパク質を更に含む。いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、約０．０５％～約１．０％（ｗ／ｖ）の量で存在する。

インキュベーション物質は、血小板に対して非毒性であり、かつ本明細書に提供されるプロセス中に溶液が曝露される温度で溶液に適切な緩衝能力を提供する、任意の緩衝液であり得る。したがって、緩衝液は、市販の既知の生体適合性緩衝液、例えば、リン酸緩衝液、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、重炭酸塩／炭酸緩衝液、例えば、重炭酸ナトリウム緩衝液、Ｎ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、及びトリス系緩衝液、例えば、トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）のうちのいずれかを含み得る。同様に、これは、以下の緩衝液：プロパン－１，２，３－トリカルボン酸（トリカルバリル酸）、ベンゼンペンタカルボン酸、マレイン酸、２，２－ジメチルコハク酸、ＥＤＴＡ、３，３－ジメチルグルタル酸、ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノ－トリス（ヒドロキシメチル）－メタン（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）、ベンゼンヘキサカルボン酸（メリト酸）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ－二酢酸（ＡＤＡ）、ブタン－１，２，３，４－テトラカルボン酸、ピロリン酸、１，１－シクロペンタン二酢酸（３，３－テトラメチレン－グルタル酸）、ピペラジン－１，４－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、１，１－シクロヘキサン二酢酸、３，６－エンドメチレン－１，２，３，６－テトラヒドロフタル酸（ＥＭＴＡ、ＥＮＤＣＡ）、イミダゾール、２－（アミノエチル）トリメチルアンモニウムクロリド（ＣＨＯＬＡＭＩＮＥ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、２－メチルプロパン－１，２，３－トリスカルボン酸（ベータ－メチルトリカルバリル酸）、２－（Ｎ－モルホリノ）プロパン－スルホン酸（ＭＯＰＳ）、リン酸、及びＮ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）のうちの１つ以上を含み得る。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、１つ以上の緩衝液、例えば、Ｎ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、又は重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、約５～約１００ｍＭの１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、１つ以上の緩衝液の約５～約５０ｍＭ（例えば、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約８ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ）を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、又は約３０ｍＭの１つ以上の緩衝液を含む。

いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、デキストロース、及びキシロースを含む、単糖及び二糖などの１つ以上の糖を含む。いくつかの実施形態では、糖は、単糖である。いくつかの実施形態では、糖は、二糖である。いくつかの実施形態では、糖は、単糖、二糖、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、糖は、非還元性二糖である。いくつかの実施形態では、糖は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース（例えば、デキストロース）、マンノース、又はキシロースを含む。いくつかの実施形態では、糖は、トレハロースを含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、デンプンを含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、スクロース及びエピクロロヒドリンのポリマーであるポリスクロースを含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、約１０ｍＭ～約１，０００ｍＭの１つ以上の糖を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、約５０～約５００ｍＭの１つ以上の糖を含む。実施形態では、１つ以上の糖は、１０ｍＭ１０～５００ｍＭの量で存在する。いくつかの実施形態では、１つ以上の糖は、５０ｍＭ～２００ｍＭの量で存在する。実施形態では、１つ以上の糖は、１００ｍＭ～１５０ｍＭの量で存在する。いくつかの実施形態では、１つ以上の糖は、凍結乾燥剤であり、例えば、いくつかの実施形態では、凍結乾燥剤は、トレハロース、ポリスクロース、又はそれらの組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物は、水又は生理食塩水のうちの１つ以上を含み得る。いくつかの実施形態では、フリーズドライされた血小板などの血小板又は血小板誘導体を含む組成物は、ＤＭＳＯを含み得る。

いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、アルコール（例えば、エタノール）などの有機溶媒を含む。そのようなインキュベーション物質において、溶媒の量は、０．１％～５．０％（ｖ／ｖ）の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、有機溶媒は、約０．１％（ｖ／ｖ）～約５．０％（ｖ／ｖ）、例えば、約０．３％（ｖ／ｖ）～約３．０％（ｖ／ｖ）、又は約０．５％（ｖ／ｖ）～約２％（ｖ／ｖ）の範囲であり得る。

いくつかの実施形態では、好適な有機溶媒としては、アルコール、エステル、ケトン、エーテル、ハロゲン化溶媒、炭化水素、ニトリル、グリコール、硝酸アルキル、水、又はそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、好適な有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、酢酸、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、イソプロピルエーテル（ＩＰＥ）、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、ジオキサン（例えば、１，４－ジオキサン）、アセトニトリル、プロピオニトリル、塩化メチレン、クロロホルム、トルエン、アニソール、シクロヘキサン、ヘキサン、ヘプタン、エチレングリコール、ニトロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアミド、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、有機溶媒は、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、有機溶媒は、エタノール、ＤＭＳＯ、又はそれらの組み合わせを含む。エタノールなどの有機溶媒の存在は、血小板、血小板誘導体、又はＦＤＰＤ（例えば、フリーズドライ血小板誘導体）の処理において有益であり得る。

いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、水性培地の存在下で血小板にインキュベートされる。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、ＤＭＳＯを含む培地の存在下でインキュベートされる。

いくつかの実施形態では、１つ以上の他の成分は、血小板内でインキュベートされ得る。例示的な成分は、インキュベーションプロセス中の血小板凝集及び活性化を防止するために、プロスタグランジンＥ１若しくはプロスタシクリン、及び／又はＥＤＴＡ／ＥＧＴＡを含み得る。

使用され得るインキュベーション物質組成物の非限定的な例を表１～５に示す。

（表１）

（表２）

（表３）

（表４）

表４は、別の例示的なインキュベーション物質である。ｐＨは、ＮａＯＨで７．４に調節され得る。アルブミンは、緩衝液Ｂの任意選択的な成分である。

（表５）

表５は、別の例示的なインキュベーション物質である。

いくつかの実施形態では、血小板（例えば、アフェレーシス血小板、全血から単離された血小板、プールされた血小板、又はそれらの組み合わせ）は、１５～４５℃の異なる温度、又は約３７℃で、異なる持続時間、インキュベーション物質とともにインキュベートされる。

いくつかの実施形態では、血小板（例えば、アフェレーシス血小板、全血から単離された血小板、プールされた血小板、又はそれらの組み合わせ）は、１０，０００血小板／μＬ～１０，０００，０００血小板／μＬ、例えば、５０，０００血小板／μＬ～２，０００，０００血小板／μＬ、例えば、１００，０００血小板／μＬ～５００，０００血小板／μＬ、例えば、１５０，０００血小板／μＬ～３００，０００血小板／μＬ、例えば、２００，０００血小板／μＬの濃度で液体培地を含む、インキュベーション物質及び／若しくは凍結乾燥剤、又は凍結乾燥剤を含むインキュベーション物質において懸濁液を形成する。

血小板（例えば、アフェレーシス血小板、全血から単離された血小板、プールされた血小板、又はそれらの組み合わせ）は、例えば、少なくとも約５分間（例えば、少なくとも約２０分間、約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１６時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、又は少なくとも約４８時間）などの異なる持続時間、例えば凍結乾燥剤である、又はそれを含むインキュベーション物質とともにインキュベートされ得る。いくつかの実施形態では、血小板は、約４８時間以内（例えば、約２０分間以内、約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１６時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、又は約４２時間以内）、インキュベーション物質とともにインキュベートされ得る。いくつかの実施形態では、血小板は、約１０分間～約４８時間（例えば、約２０分間～約３６時間、約３０分間～約２４時間、約１時間～約２０時間、約２時間～約１６時間、約１０分間～約２４時間、約２０分間～約１２時間、約３０分間～約１０時間、又は約１時間～約６時間）、インキュベーション物質とともにインキュベートされ得る。いくつかの実施形態では、血小板、血小板誘導体、又はＦＤＰＤは、５分間～４８時間、例えば、１０分間～２４時間、例えば、２０分間～１２時間、例えば、３０分間～６時間、例えば、１時間～３時間、例えば、約２時間という期間、インキュベーション物質とともにインキュベートされる。

いくつかの実施形態では、血小板（例えば、アフェレーシス血小板、全血から単離された血小板、プールされた血小板、又はそれらの組み合わせ）は、異なる温度で、インキュベーション物質とともにインキュベートされる。実施形態では、インキュベーションは、３７℃で実行される。ある特定の実施形態では、インキュベーションは、４℃～４５℃、例えば１５℃～４２℃で実行される。例えば、実施形態では、インキュベーションは、１１０～１３０（例えば、１２０）分間、及び長くて２４～４８時間もの間、３５℃～４０℃（例えば、３７℃）で実行される。いくつかの実施形態では、血小板は、本明細書に開示されるような異なる持続時間、かつ１５～４５℃、又は約３７℃の温度で、インキュベーション物質とともにインキュベートされる。

いくつかの実施形態では、血小板（例えば、アフェレーシス血小板、全血から単離された血小板、プールされた血小板、又はそれらの組み合わせ）に、１つ以上の活性剤が充填される。いくつかの実施形態では、血小板に、抗線溶剤が充填され得る。抗線溶剤の非限定的な例としては、ε－アミノカプロン酸（ＥＡＣＡ）、トラネキサム酸、アプロチニン、アミノメチル安息香酸、及びフィブリノゲンが挙げられる。

血小板（例えば、アフェレーシス血小板、全血から単離された血小板、プールされた血小板、又はそれらの組み合わせ）に活性剤（例えば、抗線溶剤）を充填することは、任意の適切な方法によって実施され得る。例えば、ＰＣＴ公開第２０２０／１１３０９０Ａ１号、同第２０２０／１１３１０１Ａ１号、同第２０２０／１１３０３５Ａ１号、及び同第２０２０／１１２９６３Ａ１号を参照されたい。一般に、充填は、血小板を抗線溶剤と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、充填は、活性剤をインキュベーション物質と組み合わせることによって実施され得る。いくつかの実施形態では、充填は、インキュベーション工程とは別個の工程で実施され得る。例えば、充填は、インキュベーション工程の前の工程で実施され得る。いくつかのそのような実施形態では、活性剤は、本明細書に記載のインキュベーション物質のうちのいずれかにおいて溶液又は懸濁液として血小板に供給され得、これは、インキュベーション工程に使用されるインキュベーション物質と同一であり得るか、又は異なり得る。いくつかの実施形態では、充填工程は、インキュベーション工程中に実施され得る。いくつかのそのような実施形態では、活性剤は、（例えば、インキュベーション中に、固体として、又は溶液若しくは懸濁液において）インキュベーション物質に添加され得る。いくつかの実施形態では、充填工程は、インキュベーション工程の後の工程において実施され得る。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載のインキュベーション物質のうちのいずれかにおいて溶液又は懸濁液として血小板に供給され得、これは、インキュベーション工程に使用されるインキュベーション物質と同一であり得るか、又は異なり得る。

活性剤は、任意の適切な濃度で血小板に適用され得る。いくつかの実施形態では、活性剤は、約１μＭ～約１００ｍＭ（例えば、約１μＭ～約１０μｍ、約１μＭ～約５０μＭ、約１μＭ～約１００μＭ、約１μＭ～約５００μＭ、約１μＭ～約１ｍＭ、約１μＭ～約１０ｍＭ、約１μＭ～約２５ｍＭ、約１μＭ～約５０ｍＭ、約１μＭ～約７５ｍＭ、約１０μＭ～約１００ｍＭ、約５０μＭ～約１００ｍＭ、約１００μＭ～約１００ｍＭ、約５００μＭ～約１００ｍＭ、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７５ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０μＭ～約１００ｍＭ、約２００μＭ～約１ｍＭ、約８００μＭ～約９００μＭ、約４００μＭ～約８００μＭ、約５００μＭ～約７００μＭ、約６００μＭ、約５ｍＭ～約８５ｍＭ、約２０ｍＭ～約９０ｍＭ、約２５ｍＭ～約７５ｍＭ、約３０ｍＭ～約９０ｍＭ、約３５ｍＭ～約６５ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４５ｍＭ～約５５ｍＭ、又は約５０ｍＭ）の濃度で（インキュベーション物質又は別の溶液若しくは懸濁液の一部として）血小板に適用され得る。

いくつかの実施形態では、本方法は、血小板を乾燥させることを更に含む。いくつかの実施形態では、乾燥工程は、血小板を凍結乾燥することを含む。いくつかの実施形態では、乾燥工程は、血小板をフリーズドライすることを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、乾燥工程から得られた血小板を再水和することを更に含む。

いくつかの実施形態では、血小板は、療法又は機能アッセイに使用する前に、（例えば、ＦＤＰＤを生成するために）低温貯蔵されるか、凍結保存されるか、又は凍結乾燥される。

５％未満の最終残留水分含有量を達成し得る限り、血小板を乾燥させるための任意の既知の技術が、本開示に従って使用され得る。好ましくは、本技術は、２％未満、例えば、１％、０．５％、又は０．１％の最終残留水分含有量を達成する。好適な技術の非限定的な例は、フリーズドライ（凍結乾燥）及び噴霧乾燥である。好適な凍結乾燥法を、表Ａに提示する。追加の例示的な凍結乾燥法は、米国特許第７，８１１，５５８号、米国特許第８，４８６，６１７号、及び米国特許第８，０９７，４０３号に見出され得る。例示的な噴霧乾燥法は、窒素を乾燥ガスとして、本開示によるインキュベーション物質と組み合わせること、次いで、二流体ノズル構成を有するＧＥＡ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｌｕｍｂｉａ ＭＤ，ＵＳＡ）製のＧＥＡ Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ噴霧乾燥機に混合物を導入すること、混合物を１５０℃～１９０℃の範囲の入口温度、６５℃～１００℃の範囲の出口温度、０．５～２．０バールの範囲の原子速度、５～１３ｋｇ／時の範囲の原子速度、６０～１００ｋｇ／時の範囲の窒素使用、及びｌ０～３５分間の実行時間で噴霧することを含む。噴霧乾燥における最終工程は、乾燥混合物を優先的に回収することである。いくつかの実施形態における乾燥組成物は、－２０℃以下～９０℃以上の範囲である温度で、少なくとも６ヶ月間安定である。

（表Ａ）例示的な凍結乾燥プロトコル

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるように得られる血小板を乾燥させて、本明細書の態様又は実施形態のいずれかにおける使用のための血小板誘導体を生成する工程、例えば、本明細書に開示されるように得られる血小板をフリーズドライさせて、本明細書の態様又は実施形態のいずれかにおける使用のためのＦＤＰＤを生成する工程は、血小板を凍結乾燥剤（例えば、非還元性二糖）とともにインキュベートすることを含む。したがって、いくつかの実施形態では、血小板を調製するための方法は、血小板を凍結乾燥剤とともにインキュベートすることを更に含む。いくつかの実施形態では、凍結乾燥剤は、糖である。いくつかの実施形態では、糖は、非還元性二糖などの二糖である。

いくつかの実施形態では、血小板は、血小板を凍結乾燥剤とともにインキュベートするのに十分な時間、かつ好適な温度で、凍結乾燥剤とともにインキュベートされる。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、凍結乾燥剤である。好適な凍結乾燥剤の非限定的な例は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース（例えば、デキストロース）、マンノース、及びキシロースを含む、単糖及び二糖などの糖である。いくつかの実施形態では、凍結乾燥剤の非限定的な例としては、血清アルブミン、デキストラン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、デンプン、及びヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、例示的な凍結乾燥剤としては、高分子量ポリマーが挙げられ得る。「高分子量」とは、約７０ｋＤａ以上かつ最大１，０００，０００ｋＤａの平均分子量を有するポリマーを意味する。非限定的な例は、スクロース及びエピクロロヒドリンのポリマー（例えば、ポリスクロース）である。いくつかの実施形態では、凍結乾燥剤は、ポリスクロースである。任意の量の高分子量ポリマーが凍結乾燥剤として使用され得るが、約３％～１０％（ｗ／ｖ）、例えば、３～７％、例えば、６％の最終濃度を達成する量が使用されることが好ましい。

本明細書に開示される組成物に使用するための例示的な糖は、トレハロースである。糖の同一性にかかわらず、糖は、任意の好適な量で、血小板誘導体を形成するために乾燥されるか、又はフリーズドライさせてＦＤＰＤを形成する組成物中、並びにそのような乾燥血小板誘導体及びＦＤＰＤの再水和組成物中に存在し得る。例えば、糖は、１ｍＭ～１Ｍの量で存在し得る。実施形態では、糖は、１０ｍＭ１０～５００ｍＭの量で存在する。いくつかの実施形態では、糖は、２０ｍＭ～２００ｍＭの量で存在する。実施形態では、糖は、４０ｍＭ～１００ｍＭの量で存在する。様々な実施形態では、糖は、上に列挙された範囲内の異なる特定の濃度で存在し、当業者は、本明細書で各々を具体的に列挙する必要なしに、様々な濃度を即座に理解することができる。複数の糖が組成物中に存在する場合、各糖は、上に列挙された範囲及び特定の濃度に応じた量で存在し得る。

本明細書に提供される組成物を作製するための本明細書に提供されるプロセス内で、凍結乾燥剤の添加は、乾燥の前の最後の工程であり得る。しかしながら、いくつかの実施形態では、凍結乾燥剤は、塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、又は他の成分などの組成物の他の成分と同時に、又はその前に添加される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥剤は、インキュベーション物質に添加され、完全に混合されて乾燥溶液を形成し、乾燥容器（例えば、ガラス又はプラスチックの血清バイアル、凍結乾燥バッグ）中に分配され、溶液を乾燥させて乾燥組成物を形成することを可能にする条件に供される。

血小板を凍結保護剤とともにインキュベートする工程は、温度と併せて、凍結保護剤が血小板に接触するのに十分な、好ましくは、少なくともある程度まで血小板に組み込まれるのに十分な時間と同程度の長さである、充填に好適な時間、血小板をインキュベートすることを含み得る。実施形態では、インキュベーションは、約１分間～約１８０分間以上行われる。

血小板を凍結保護剤とともにインキュベートする工程は、割り当てられた時間の量と併せて選択される場合、インキュベートに好適な温度で、血小板及び凍結保護剤をインキュベートすることを含み得る。一般に、組成物は、凍結を上回る温度で、凍結保護剤が血小板に接触するのに少なくとも十分な時間、インキュベートされる。実施形態では、インキュベーションは、３７℃で実行される。ある特定の実施形態では、インキュベーションは、２０℃～４２℃で実行される。例えば、実施形態では、インキュベーションは、１１０～１３０（例えば、１２０）分間、３５℃～４０℃（例えば、３７℃）で実行される。

様々な実施形態では、凍結乾燥バッグは、ガスが、処理中にバッグの少なくとも一部又は全部を通過することを可能にするように構成された、ガス透過性バッグである。ガス透過性バッグは、バッグの内部内のガスを、周囲環境に存在する大気ガスと交換することを可能にし得る。ガス透過性バッグは、酸素、窒素、水、空気、水素、及び二酸化炭素などのガスに対して透過性であり得、本明細書に提供される組成物においてガス交換が生じることを可能にする。いくつかの実施形態では、ガス透過性バッグは、二酸化炭素がバッグの壁を通って透過することを可能にすることによって、バッグの内部内に存在する二酸化炭素の一部の除去を可能にする。いくつかの実施形態では、バッグからの二酸化炭素の放出は、バッグ内に収容される組成物の所望のｐＨレベルを維持するのに有利であり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書におけるプロセスの容器は、閉鎖又は密封されたガス透過性容器である。いくつかの実施形態では、容器は、閉鎖又は密封され、かつその一部がガス透過性である、容器である。いくつかの実施形態では、容器に収容される製品の体積に対する、閉鎖又は密封された容器（例えば、バッグ）のガス透過性部分の表面積（以下、「ＳＡ／Ｖ比」と称される）は、本明細書に提供される組成物のｐＨ維持を改善するように調整され得る。例えば、いくつかの実施形態では、容器のＳＡ／Ｖ比は、少なくとも約２．０ｃｍ^２／ｍＬ（例えば、少なくとも約２．１ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．２ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．３ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．４ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．５ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．６ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．７ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．８ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．９ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．０ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．１ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．２ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．３ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．４ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．５ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．６ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．７ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．８ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．９ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．０ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．１ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．２ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．３ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．４ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．５ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．６ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．７ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．８ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．９ｃｍ^２／ｍＬ、又は少なくとも約５．０ｃｍ^２／ｍＬであり得る。いくつかの実施形態では、容器のＳＡ／Ｖ比は、最大約１０．０ｃｍ^２／ｍＬ（例えば、最大約９．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．０ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．６、ｃｍ^２／ｍＬ 最大約８．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．０ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．０ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．０ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．^ｃｍ２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．１ｃｍ^２／ｍＬ、又は最大約４．０ｃｍ^２／ｍＬであり得る。いくつかの実施形態では、容器のＳＡ／Ｖ比は、約２．０～約１０．０ｃｍ^２／ｍＬ（例えば、約２．１ｃｍ^２／ｍＬ～約９．９ｃｍ^２／ｍＬ、約２．２ｃｍ^２／ｍＬ～約９．８ｃｍ^２／ｍＬ、約２．３ｃｍ^２／ｍＬ～約９．７ｃｍ^２／ｍＬ、約２．４ｃｍ^２／ｍＬ～約９．６ｃｍ^２／ｍＬ、約２．５ｃｍ^２／ｍＬ～約９．５ｃｍ^２／ｍＬ、約２．６ｃｍ^２／ｍＬ～約９．４ｃｍ^２／ｍＬ、約２．７ｃｍ^２／ｍＬ～約９．３ｃｍ^２／ｍＬ、約２．８ｃｍ^２／ｍＬ～約９．２ｃｍ^２／ｍＬ、約２．９ｃｍ^２／ｍＬ～約９．１ｃｍ^２／ｍＬ、約３．０ｃｍ^２／ｍＬ～約９．０ｃｍ^２／ｍＬ、約３．１ｃｍ^２／ｍＬ～約８．９ｃｍ^２／ｍＬ、約３．２ｃｍ^２／ｍＬ～約８．８ｃｍ^２／ｍＬ、約３．３ｃｍ^２／ｍＬ～約８．７ｃｍ^２／ｍＬ、約３．４ｃｍ^２／ｍＬ～約８．６ｃｍ^２／ｍＬ、約３．５ｃｍ^２／ｍＬ～約８．５ｃｍ^２／ｍＬ、約３．６ｃｍ^２／ｍＬ～約８．４ｃｍ^２／ｍＬ、約３．７ｃｍ^２／ｍＬ～約８．３ｃｍ^２／ｍＬ、約３．８ｃｍ^２／ｍＬ～約８．２ｃｍ^２／ｍＬ、約３．９ｃｍ^２／ｍＬ～約８．１ｃｍ^２／ｍＬ、約４．０ｃｍ^２／ｍＬ～約８．０ｃｍ^２／ｍＬ、約４．１ｃｍ^２／ｍＬ～約７．９ｃｍ^２／ｍＬ、約４．２ｃｍ^２／ｍＬ～約７．８ｃｍ^２／ｍＬ、約４．３ｃｍ^２／ｍＬ～約７．７ｃｍ^２／ｍＬ、約４．４ｃｍ^２／ｍＬ～約７．６ｃｍ^２／ｍＬ、約４．５ｃｍ^２／ｍＬ～約７．５ｃｍ^２／ｍＬ、約４．６ｃｍ^２／ｍＬ～約７．４ｃｍ^２／ｍＬ、約４．７ｃｍ^２／ｍＬ～約７．３ｃｍ^２／ｍＬ、約４．８ｃｍ^２／ｍＬ～約７．２ｃｍ^２／ｍＬ、約４．９ｃｍ^２／ｍＬ～約７．１ｃｍ^２／ｍＬ、約５．０ｃｍ^２／ｍＬ～約６．９ｃｍ^２／ｍＬ、約５．１ｃｍ^２／ｍＬ～約６．８ｃｍ^２／ｍＬ、約５．２ｃｍ^２／ｍＬ～約６．７ｃｍ^２／ｍＬ、約５．３ｃｍ^２／ｍＬ～約６．６ｃｍ^２／ｍＬ、約５．４ｃｍ^２／ｍＬ～約６．５ｃｍ^２／ｍＬ、約５．５ｃｍ^２／ｍＬ～約６．４ｃｍ^２／ｍＬ、約５．６ｃｍ^２／ｍＬ～約６．３ｃｍ^２／ｍＬ、約５．７ｃｍ^２／ｍＬ～約６．２ｃｍ^２／ｍＬ、又は約５．８ｃｍ^２／ｍＬ～約６．１ｃｍ^２／ｍＬの範囲であり得る。

ガス透過性の閉鎖された容器（例えば、バッグ）又はその一部は、１つ以上の様々なガス透過性材料で作製され得る。いくつかの実施形態では、ガス透過性バッグは、フルオロポリマー（ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）及びペルフルオロアルコキシ（ＰＦＡ）ポリマーなど）、ポリオレフィン（低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）など）、フッ素化エチレンプロピレン（ＦＥＰ）、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、シリコーン、及びそれらの任意の組み合わせを含む、１つ以上のポリマーから作製され得る。

いくつかの実施形態では、乾燥された血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、熱処理を受け得る。加熱は、約２５℃超（例えば、約４０℃超、５０℃超、６０℃超、７０℃超、８０℃超、又はそれ以上）の温度で行われ得る。いくつかの実施形態では、加熱は、約７０℃～約８５℃（例えば、約７５℃～約８５℃、又は約７５℃若しくは８０℃）で実行される。加熱の温度は、加熱が実施される時間の長さと併せて選択され得る。任意の好適な時間が使用され得るが、典型的には、凍結乾燥血小板は、少なくとも１時間、ただし３６時間以下、加熱される。したがって、実施形態では、加熱は、少なくとも２時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、又は少なくとも３０時間実施される。例えば、凍結乾燥血小板は、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２５時間、２６時間、２７時間、２８時間、２９時間、又は３０時間加熱され得る。非限定的な例示的な組み合わせとしては、乾燥された血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を３０℃超の温度で少なくとも３０分間加熱すること、乾燥された血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を５０℃超の温度で少なくとも１０時間加熱すること、乾燥された血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を７５℃超の温度で少なくとも１８時間加熱すること、及び乾燥された血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を８０℃で２４時間加熱することが挙げられる。いくつかの実施形態では、加熱は、キャップ付きバイアルなどの密封された容器内で行われ得る。いくつかの実施形態では、密封された容器は、加熱の前に真空に供される。特にアルブミン又はポリスクロースなどの凍結保護剤の存在下での熱処理工程は、フリーズドライされた血小板の安定性及び貯蔵寿命を改善させることが見出されている。実際に、熱処理工程なしの凍結保護剤と比較して、血清アルブミン又はポリスクロースと、凍結乾燥後の熱処理工程との特定の組み合わせで、有利な結果が得られている。凍結保護剤（例えば、スクロース）は、任意の適切な量（例えば、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）の質量又は体積で約３％～約１０％）で存在し得る。

いくつかの実施形態では、インキュベーション物質とのインキュベーションを含むプロセスによって本明細書に開示されるように調製された血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、インキュベーションの前に血小板の貯蔵安定性と少なくともほぼ等しい貯蔵安定性を有する。

いくつかの実施形態では、本方法は、血小板又は血小板誘導体を投与する前に、血小板又は血小板誘導体を（例えば、インキュベーション物質、例えば、本明細書に記載のインキュベーション物質で）凍結保存することを更に含む。

いくつかの実施形態では、本方法は、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を投与する前に、血小板又は血小板誘導体を含む組成物を（例えば、インキュベーション物質、例えば、本明細書に記載のインキュベーション物質で）乾燥させることを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、乾燥工程の後に組成物を加熱することを更に含み得る。いくつかの実施形態では、本方法は、フリーズドライ工程又は加熱工程の後に組成物を再水和することを更に含み得る。

いくつかの実施形態では、本方法は、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を投与する前に、血小板又は血小板誘導体を含む組成物を（例えば、インキュベーション物質、例えば、本明細書に記載のインキュベーション物質で）フリーズドライさせることを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、フリーズドライ工程の後に組成物を加熱することを更に含み得る。いくつかの実施形態では、本方法は、フリーズドライ工程又は加熱工程の後に組成物を再水和することを更に含み得る。

いくつかの実施形態では、本方法は、血小板、血小板誘導体、又はＦＤＰＤを投与する前に、血小板、血小板誘導体又はＦＤＰＤを（例えば、インキュベーション物質、例えば、本明細書に記載のインキュベーション物質で）低温貯蔵することを更に含む。

貯蔵条件は、例えば、標準的な室温貯蔵（例えば、約２０～約３０℃の範囲の温度での貯蔵）又は低温貯蔵（例えば、約１～約１０℃の範囲の温度での貯蔵）を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を投与する前に、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物を（例えば、インキュベーション物質、例えば、本明細書に記載のインキュベーション物質で）凍結保存すること、フリーズドライさせること、解凍すること、再水和すること、及びそれらの組み合わせを更に含む。例えば、いくつかの実施形態では、本方法は、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を投与する前に、血小板又は血小板誘導体を含む組成物を（例えば、インキュベーション物質、例えば、本明細書に記載のインキュベーション物質で）（例えば、ＦＤＰＤを形成するために）乾燥させる（例えば、フリーズドライさせる）ことを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、乾燥工程から得られた組成物を再水和することを更に含み得る。

いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体（例えばＦＤＰＤ）、ポリスクロース、及びトレハロースを含む組成物が本明細書に提供され、この組成物は、新鮮な血小板を得るプロセス、任意選択的に血小板をＤＭＳＯ中でインキュベートするプロセス、遠心分離によって血小板を単離するプロセス、血小板をトレハロース及びエタノールを含むインキュベーション物質中に再懸濁させ、それにより第１の混合物を形成するプロセス、第１の混合物をインキュベートするプロセス、ポリスクロースを第１の混合物と混合し、それにより第２の混合物を形成するプロセス、並びに第２の混合物を凍結乾燥して、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）、ポリスクロース、及びトレハロースを含むフリーズドライされた組成物を形成するプロセスによって作製されている。

いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）、ポリスクロース、及びトレハロースを含む、フリーズドライされた血小板組成物を作製する方法が本明細書に提供され、この方法は、新鮮な血小板を得ることと、任意選択的に血小板をＤＭＳＯ中でインキュベートすることと、遠心分離によって血小板を単離することと、血小板をトレハロース及びエタノールを含むインキュベーション物質中に再懸濁させ、それにより第１の混合物を形成することと、第１の混合物をインキュベートすることと、ポリスクロースを第１の混合物と混合することと、それにより第２の混合物を形成することと、第２の混合物を凍結乾燥して、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）、ポリスクロース、及びトレハロースを含むフリーズドライされた組成物を形成することと、を含む。

いくつかの実施形態では、フリーズドライされた血小板を作製するためのプロセスが本明細書に提供され、このプロセスは、単離された血小板を、少なくとも１つの糖の存在下で、以下の条件：２０℃～４２℃の温度下で、約１０分間～約１８０分間インキュベートすることと、血小板に少なくとも１つの凍結保護剤を添加することと、血小板を凍結乾燥することと、を含み、このプロセスは、任意選択的に、インキュベーション工程と添加工程との間に血小板を単離することを含まず、任意選択的に、このプロセスは、血小板を血小板活性化阻害剤に曝露することを含まない。凍結保護剤は、多糖（例えば、ポリスクロース）であり得る。このプロセスは、凍結乾燥血小板を、７０℃～８０℃の温度で８～２４時間加熱することを更に含み得る。血小板に少なくとも１つの凍結保護剤を添加する工程は、血小板をエタノールに曝露することを更に含み得る。少なくとも１つの糖の存在下で単離された血小板をインキュベートする工程は、少なくとも１つの糖の存在下でインキュベートすることを含み得る。少なくとも１つの糖の存在下で単離された血小板をインキュベートする工程は、少なくとも１つの糖の存在下でインキュベートすることを含み得る。インキュベートするための条件は、約１００分間～約１５０分間インキュベートすることを含み得る。インキュベートするための条件は、約１１０分間～約１３０分間インキュベートすることを含み得る。インキュベートするための条件は、約１２０分間インキュベートすることを含み得る。インキュベートするための条件は、３５℃～４０℃インキュベートすることを含み得る。インキュベートのための条件は、３７℃でインキュベートすることを含み得る。インキュベートのための条件は、３５℃～４０℃で１１０分間～１３０分間インキュベートすることを含み得る。インキュベートするための条件は、３７℃で１２０分間インキュベートすることを含み得る。少なくとも１つの糖は、トレハロース、スクロース、又はトレハロースとスクロースの両方であり得る。少なくとも１つの糖は、トレハロースであり得る。少なくとも１つの糖は、スクロースであり得る。

いくつかの実施形態では、フリーズドライ血小板を調製する方法が本明細書に提供され、この方法は、血小板を提供することと、約１００ｍＭのトレハロース及び約１％（ｖ／ｖ）のエタノールを含む塩緩衝液中に血小板を懸濁させて、第１の組成物を作製することと、第１の組成物を約３７℃で約２時間インキュベートすることと、ポリスクロース（例えば、ポリスクロース４００）を約６％（ｗ／ｖ）の最終濃縮物に添加して、第２の組成物を作製することと、第２の組成物を凍結乾燥して、フリーズドライ血小板を作製することと、フリーズドライ血小板を８０℃で２４時間加熱することと、を含む。

本明細書に開示される特定の実施形態は、「～からなる」又は「～から本質的になる」という言語を使用して、特許請求の範囲に更に限定され得る。

例示的な実施形態
この例示的な実施形態のセクションでは、非限定的な例示的態様及び実施形態が本明細書に提供され、本明細書全体を通して更に考察される。簡潔さ及び利便性のために、本明細書に開示される態様及び実施形態の全て、並びに開示される態様及び実施形態の可能な組み合わせの全ては、このセクションに列挙されない。追加の実施形態及び態様は、本明細書の他のセクションで提供される。更に、例えば、本開示全体で考察されるように、多くの態様のための特定の実施形態であり、任意の他の実施形態と組み合わせることができる実施形態が提供されることが理解されよう。本明細書の完全な開示を考慮すると、以下に記載されている、又はこの完全な開示に記載されている任意の個々の実施形態は、以下に記載されている、又はこの完全な開示に記載されている任意の態様と組み合わせることができ、これは、ある態様に追加され得る追加の要素であるか、又はある態様に既に存在する要素についてのより狭い要素であるためであることが意図される。そのような組み合わせは、非限定的な例示的組み合わせとして提供されることがあり、及び／又はこの詳細な説明の他のセクションでより具体的に考察される。

一態様では、対象における凝固障害を治療する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に、血小板を含むか又は例示的実施形態では血小板誘導体及び更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。

一態様では、対象における凝固障害を治療する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することであって、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートし、かつ例示的実施形態ではインキュベートされた血小板をフリーズドライして、組成物を形成することを含む、プロセスによって組成物が、調製されており、組成物が、血小板誘導体、及び例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む、投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。

一態様では、対象における正常な止血を回復させる方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に、血小板を含む又は例示的実施形態では血小板誘導体及び更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。

一態様では、対象における正常な止血を回復させる方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することであって、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートし、かつ例示的実施形態ではインキュベートされた血小板をフリーズドライして、組成物を形成することを含む、プロセスによって組成物が、調製されており、組成物が、血小板誘導体、更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む、投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。

一態様では、対象の手術の準備を整える方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に、血小板を含む又は例示的実施形態では血小板誘導体及び更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することを含む。そのようなＦＤＰＤの例示的な実施形態の様々な特性が本明細書に提供され、それによって凝固障害が治療される。例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。実装形態は、以下の特徴のうちの１つ以上を含み得る。手術は、緊急手術であり得る。手術は、予定された手術であり得る。

一態様では、対象の手術の準備を整える方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することであって、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートし、かつ例示的実施形態ではインキュベートされた血小板をフリーズドライして、組成物を形成することを含む、プロセスによって組成物が、調製されており、組成物が、血小板誘導体、更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む、投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。そのようなＦＤＰＤの例示的な実施形態の様々な特性が本明細書に提供される。実装形態は、以下の特徴のうちの１つ以上を含み得る。手術は、緊急手術であり得る。手術は、予定された手術であり得る。

一態様では、対象における抗血小板剤の効果を改善する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に、有効量の組成物血小板、又は例示的実施形態では血小板誘導体、更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤを投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。

一態様では、対象における抗血小板剤の効果を改善する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することであって、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして組成物を形成することを含むプロセスによって組成物が、調製されており、組成物が、血小板誘導体、更なる例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む、投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象の凝固障害を治療するか、又は対象の止血を回復させるか、又は出血の可能性を低減する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に、血小板誘導体を含む有効量の組成物を投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。例示的な実施形態では、血小板誘導体は、フリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）である。更なる例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。

別の態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療するか、又は対象の止血を回復させるか、又は対象の出血の可能性を低減する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することであって、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下でＦＤＰＤの集団中のＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を、ＦＤＰＤを含む組成物が含む、投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。更なる例示的実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。

別の態様では、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法が本明細書に提供され、この方法は、（ａ）対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定することと、（ｂ）対象に有効量のフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を投与することと、を含む。そのような方法のいくつかの実施形態では、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報は、対象を特定することができないことを含む理由で利用できない。方法のいくつかの実施形態では、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報は、対象の病歴が利用できないことを含む理由で利用できない。更なる実施形態では、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報は、対象が緊急治療を必要としていることを含む理由で利用できない。

別の態様では、対象における凝固障害を治療する方法、又は対象における出血の可能性を低減する方法、又は対象の止血を回復させる方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に、血小板誘導体を含む、例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することであって、対象が、血小板誘導体を含む組成物の投与の前に、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与された、投与することを含み、それによって凝固障害を治療する。更なる例示的実施形態では、血小板誘導体を含む組成物は、対象の出血の可能性が低減されるように投与され、例示的実施形態では、対象において正常な止血が回復するように投与される。例示的実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物の投与の前に、対象は、抗血小板剤及び第２の薬剤の投与に起因する又はその結果としての出血のリスクの増加が理由で、その必要があった。

別の態様では、対象における凝固障害を治療するためのフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物が本明細書に提供され、治療は、以下：
その必要がある対象に、対象の出血の可能性又は出血のリスクが低減されるように、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することであって、
抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を、対象が投与された、かつ、
抗血小板剤及び第２の薬剤の投与に起因する又はその結果としての出血の可能性又は出血のリスクの増加が理由で、対象にはその必要がある、
投与すること
を含み、
それによって凝固障害を治療する。

別の態様では、抗凝固剤を投与されているか又は投与されたことがあることの結果として出血の可能性又はリスクが増加した対象における凝固障害を治療するためのフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物が本明細書に提供され、治療は、
出血の可能性又はリスクが増加した対象に、対象の出血の可能性又はリスクが低減されるように、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することであって、
アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下でＦＤＰＤの集団中のＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を、ＦＤＰＤを含む組成物が含む、投与すること
を含み、
それによって凝固障害を治療する。

いくつかの実施形態では、例えば、対象が抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与された態様では、そのような方法は、ＦＤＰＤを含む組成物の投与の前に、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、第１の抗血小板剤であり、第２の薬剤は、第２の抗血小板剤である。いくつかの実施形態では、第１の抗血小板剤及び第２の抗血小板剤は、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートから選択される各々異なる抗血小板剤である。いくつかの実施形態では、第１の抗血小板剤及び第２の抗血小板剤は、異なる作用機序を有する。いくつかの実施形態では、第１の抗血小板剤及び第２の抗血小板剤は、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートから選択される各々異なる抗血小板剤である。

本明細書における態様のいずれかのいくつかの実施形態では、血小板誘導体、例えば、ＦＤＰＤを含む組成物の投与の前、その直前、その前の瞬間、その瞬間、及び／又はその初期の時点で、対象は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがあることに起因して出血のリスクが増加していたか、又は増加している。更に、対象は、血小板誘導体を含む組成物の投与の７日、６日、５日、４日、３日、２日若しくは１日、１２時間、８時間、４時間、２時間、１時間、又は４５分、３０分、１５分、１０分、５分、４分、３分、２分、若しくは１分前に出血のリスクが増加し得る。いくつかの任意選択的な実施形態では、これは、臨床検査によって確認される。しかしながら、いくつかの実施形態では、出血リスク又は任意の凝血パラメータの臨床検査は、血小板誘導体を含む組成物の投与の前及び／又は後、７日、６日、５日、４日、３日、２日、又は１日又はより早くに行われない。出血リスクは、典型的には、例示的実施形態では、血小板誘導体、例示的実施形態ではＦＤＰＤを含む有効用量の組成物の投与後に減少する。更に、対象は、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物を投与した後でも、例えば、投与後１分間、２分間、３分間、４分間、５分間、１０分間、１５分間、２０分間、３０分間、若しくは４５分間、又は１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、若しくは８時間、又はそれよりも長い時間、ＦＤＰＤが投与された後に対象のリスクを低下させるのにかかる時間に応じて、出血のリスクの増加を維持し得る。更に、いくつかの実施形態では、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物の投与は減少するが、対象における出血のリスクの増加を完全には解消しない。

いくつかの実施形態では、例えば、対象が抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与された態様では、第２の薬剤の投与は、例えば、血小板誘導体を含む組成物を投与する前に停止される。そのような態様の他の実施形態では、第２の薬剤の投与は、例えば、血小板誘導体を含む組成物を投与した後に継続される。

本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、方法は、血小板誘導体を含む組成物を投与する前に、投与前評価において、１つ以上の凝血パラメータについて異常値を対象が有すると決定することを更に含む。例示的実施形態では、投与前評価は、インビトロ臨床検査である。

本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、抗血小板剤は、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートから選択される。他の実施形態では、抗血小板剤は、カングレロール、チカグレロール、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートから選択される。

本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、ＦＤＰＤは、対象に投与されたか又は投与されている抗血小板拮抗物質によってターゲティングされた（検出可能な量の）生体分子（例えば、受容体）を含む。いくつかの実施形態では、受容体は、Ｐ２Ｙ受容体（例えば、Ｐ２Ｙ１２受容体）、糖タンパク質ＩＩｂ（すなわち、ＣＤ４１）、糖タンパク質ＩＩＩａ（ＣＤ６１）、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体、トロンボキサンシンターゼ若しくはトロンボキサン受容体、ＰＡＲ１、ＰＡＲ４、ＶＰＶＩ、又はコラーゲン受容体（例えば、α２β１コラーゲン受容体）から選択される。これらの特定の生体分子を標的とする抗血小板剤の例は、本明細書の他のセクションで提供される。ある特定の実施形態では、血小板誘導体、例示的実施形態ではＦＤＰＤの少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％が、対象に投与される抗血小板剤によってターゲティングされる生体分子に対して陽性である（すなわち、検出可能なレベルを有する）、及び／又は対象の血液中で検出可能である。注目すべき非限定的な例として、抗血小板剤は、糖タンパク質ＣＤＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体を阻害し、血小板誘導体、例示的実施形態ではＦＤＰＤの少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％が、ＣＤ４１陽性（すなわち、検出可能なＣＤ４１を含む）であり、及び／又はＣＤＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体に対して陽性である。

本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下でＦＤＰＤの集団中のＦＤＰＤの２％、３％、４％、５％、７．５％、１０％、１２．５％、１５％、１７．５％、２０％、２２．５％、又は２５％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を含む。本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、例えば、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下でＦＤＰＤの集団中のＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を、ＦＤＰＤを含む組成物が含む、実施形態を含む、本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、ＦＤＰＤは、１０^６個の粒子当たり少なくとも１．２（例えば、少なくとも１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、又は２．５）のトロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力を有する。例えば、いくつかの場合では、血小板又は血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、１０^６個の粒子当たり１．２～２．５ＴＰＧＵ（例えば、１０^６個の粒子当たり１．２～２．０、１．３～１．５、１．５～２．２５、１．５～２．０、１．５～１．７５、１．７５～２．５、２．０～２．５、又は２．２５～２．５ＴＰＧＵ）の効力を有し得る。

例えば、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で集団中のＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を、ＦＤＰＤを含む組成物が含む、実施形態を含む、本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、ＦＤＰＤは、超活性化血小板の１つ以上の特徴を有し、前記特徴が、
Ａ）休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、ＦＤＰＤの表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）の存在、
Ｂ）休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、ＦＤＰＤの表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在、及び
Ｃ）アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較してアゴニストの存在下での血小板活性化マーカーの発現を増加させることができないこと
から選択される。

ＣＤ４１陽性の血小板誘導体を含むＦＤＰＤの集団を、ＦＤＰＤを含む組成物が含む、本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、例えば、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で集団中のＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤを、ＦＤＰＤの集団が含む、非限定的な実施形態では、ＦＤＰＤは、アゴニストの存在下での血小板活性化マーカーの発現を、アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較して増加させることができない。そのような方法のいくつかの実施形態では、ＦＤＰＤは、１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力を有する。そのような方法のいくつかの実施形態では、ＣＤ４１陽性ＦＤＰＤの５％未満は、０．５μｍ未満の直径を有する微粒子である。

本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、例えば、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で集団中のＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤを、集団が含む、非限定的な実施形態では、ＦＤＰＤは、休止血小板の表面上よりも高いレベルでのそれらの表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）の存在、及び休止血小板の表面上よりも高いレベルでのそれらの表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在のうちの１つ又は両方を更に有する。

本明細書に提供される態様のいずれかのある特定の実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、
ＣＤ４１陽性血小板誘導体であって、ＣＤ４１陽性血小板誘導体の５％未満が、０．５μｍ未満の直径を有する微粒子である、ＣＤ４１陽性血小板誘導体と、
以下の特徴：
アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で集団中の血小板誘導体の１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向、
アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較してアゴニストの存在下での血小板活性化マーカーの発現を増加させることができないこと、
休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、血小板誘導体の表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）の存在、
休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、血小板誘導体の表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在、及び
１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力
のうちの１つ以上又は例示的実施形態ではその全てを有する血小板誘導体と
を含む、血小板誘導体の集団
を含む、ＦＤＰＤの集団を含む。

本明細書の任意の態様のいくつかの実施形態では、血小板誘導体、及び例示的実施形態ではＦＤＰＤは、損なわれた形質膜に囲まれる。そのような実施形態では、血小板誘導体は、それらの周りに統合された膜を欠いている。そのような実施形態では、血小板誘導体は、統合された膜によって囲まれていない。代わりに、膜は、生細胞で観察される孔よりも大きい孔を含む。したがって、そのような血小板誘導体は、外部環境からのシグナルを、典型的には生体血小板内で変換される粒子内の応答に変換する能力が低下しているか、又は変換することができない。更に、そのような血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）は、ミトコンドリア活性化又は解糖が可能であるとは考えられていない。

本明細書の任意の態様のいくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、１．０×１０^７～１．０×１０^１１個の粒子又はＦＤＰＤ／対象ｋｇである。本明細書の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、１．６×１０^７～５．１×１０^９個の粒子又はＦＤＰＤ／対象ｋｇである。粒子又はＦＤＰＤ／ｋｇの範囲を有する上記の実施形態のいずれかと組み合わせることができる、本明細書の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、対象１ｋｇ当たり２５０～５０００ＴＧＰＵの効力を有する量である。有効量の更なる例は、本明細書の別のセクションで提供される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象の凝固障害を治療するか、又は対象の止血を回復させるか、又は出血の可能性を低減する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に、有効量の血小板誘導体を含む組成物を投与することを含み、それによって凝固障害を治療し、ＦＤＰＤを含む組成物は、実施された場合の出血の可能性の投与後評価が正常な結果をもたらすか異常な結果をもたらすかどうかにかかわらず、対象の出血の可能性を低減することができる特性を有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、実施された場合の出血の可能性の投与後評価が正常又は異常な結果をもたらすかどうかとは無関係に、対象の出血の可能性を低減することができるという特性を有する。いくつかの実施形態では行われ、いくつかの実施形態では行われないいくつかの任意選択的な実施形態では、そのような投与後評価は、ＦＤＰＤを含む組成物を対象に投与した後にある期間で採取又は収集された試料に対して行われるインビトロ臨床検査を含む。本明細書の態様のいずれかの他の実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、実施された場合の出血の可能性の投与後評価が正常又は異常な結果をもたらすかどうかとは無関係に、正常な止血が対象において回復するように、インビトロ臨床検査において、出血の可能性の増加を有しかついくつかの実施形態では１つ以上の凝血パラメータについて異常値を有する対象の出血の可能性を低減することができるという特性を有する。いくつかの実施形態では、そのような投与後評価は、ＦＤＰＤを含む組成物を対象に投与した後にある期間で採取又は収集された試料に対して行われるインビトロ臨床検査を含む。期間は、例えば、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物を対象に投与した後０分～７２時間以内、又は１０分～７２時間以内、又は１０分～４８時間以内、又は１０分～２４時間以内、又は１０分～４時間以内、又は１０分～１時間以内、又は１０分～３０分以内、又は３０分～２４時間以内、又は３０分～４時間以内、又は３０分～１時間以内であり得る。例えば、ある特定の実施形態における期間は、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物を投与した後１～４時間である。本明細書の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、血小板誘導体を含む組成物の投与前又は投与後は、例えば、上記の期間中に行われない。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物は、出血の可能性が増加又は上昇した対象の出血の可能性を低減することができるという特性を有する。いくつかの実施形態では、そのような出血の可能性の増加又は上昇は、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物を投与する前の０分～７２時間、又は１０分～７２時間、又は１０分～４８時間、又は１０分～２４時間、又は１０分～４時間、又は１０分～１時間、又は１０分～３０分、又は３０分～２４時間、又は３０分～４時間、又は３０分～１時間以内に採取された試料に対して行われるインビトロ臨床検査における１つ以上の凝血パラメータの異常な値によって決定され得る。更に、ＦＤＰＤを含む組成物は、典型的には、例えば対象の出血の可能性を低減するために対象に有効量で投与された後、対象が、１つ以上のインビトロ臨床検査、例えば、ＦＤＰＤを含む組成物を投与してから１５分～４時間後、３０分～４時間後、１時間～４時間後に採取された、又は１５分～２時間、３０分～２時間後、又は１時間～２時間後に採取された、又は１５分～１時間後、又は３０分～１時間後に採取された血液試料を使用して行われる投与後評価、又はそれらの血液試料に対して行われるインビトロ臨床検査における１つ以上の凝血パラメータの異常値を有するという追加の驚くべき特性を有している。本実施形態のいくつかの下位実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、抗血小板剤を服用していない場合に、対象の出血の可能性を、対象のほぼ正常若しくは正常な止血に、又はほぼ止血レベル若しくは止血レベルに低減することができるという特性を有する。しかしながら、これらの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物は、有効量で対象に投与された後、そのような特性が、出血の可能性についての投与後臨床検査から独立しているという追加の驚くべき特性を保持する。したがって、いくつかの実施形態では、対象は、ＦＤＰＤを含む組成物を投与してから１～４時間後、又はすぐ上で列挙された時間範囲のいずれかに採取された血液試料を使用して行われる投与後評価、又はそれらの血液試料に対して行われるインビトロ臨床検査において、１つ以上の凝血パラメータの異常値を有するであろう。そのような特性、又は評価若しくは試験を含む任意の特性を有するＦＤＰＤを含む組成物を含む方法では、そのような試験工程が実際に方法工程として列挙されない限り、そのような方法を実践するために実際に試験を実施する必要はないことが理解されよう。

本明細書の態様のいずれかにおいて、例示的実施形態では、血小板誘導体又はＦＤＰＤを含む組成物は、そのような血小板誘導体が乾燥されたとき、又はＦＤＰＤがフリーズドライされたときに存在した成分などの追加の成分を更に含む。そのような追加の成分は、１つ以上の塩、緩衝液、並びにある特定の実施形態では凍結保護剤（凍結乾燥剤とも呼ばれる）及び／又は有機溶媒を含むインキュベーション物質の成分を含み得る。例えば、そのような組成物は、本明細書で更に提供されるように、１つ以上の糖を含み得、これは例示的実施形態ではトレハロースを含み、更なる例示的実施形態ではポリスクロースを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤは、遠心分離を使用して調製される。いくつかの例示的実施形態では、ＦＤＰＤは、更なる例示的実施形態ではプロセス中に遠心分離によって血小板を単離することなく、ＴＦＦを使用して調製される。

本明細書の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、投与後評価において１つ以上の凝血パラメータの値を決定することを更に含み、投与後評価は、投与の後に行われる。いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの投与後の評価は、１つ以上の凝血パラメータのうちの少なくとも１つについて正常な値を示す。方法の更なる実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの投与後評価の結果は、投与前の１つ以上のパラメータの評価の結果から改善される。

方法の更なる実施形態では、抗血小板剤を医学的指示に反して投与することは、対象によって自己投与されるか、別のものによって投与されるか、又は医療専門家によって投与される。

第２の薬剤、典型的には、血小板機能を低下させる第２の薬剤を含む本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の薬剤は、降圧剤、プロトンポンプ阻害剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、化学療法剤、抗生物質、心血管剤、Ｈ２アンタゴニスト、神経精神剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、抗うつ剤を含む。更なる実施形態では、抗うつ剤は、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、セロトニンアンタゴニスト及び再取り込み阻害剤（ＳＡＲＩ）、セロトニン及びノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、抗凝固剤ではない。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤の投与は、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物が対象に投与される前に、又はそのときに停止される。方法のいくつかの態様では、抗血小板剤の投与は、血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物が対象に投与された後も継続される。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、投与前評価において、１つ以上の凝血パラメータについて異常な値を対象が有すると決定することを更に含む。方法のいくつかの態様では、方法は、投与後評価において１つ以上の凝血パラメータの値を決定することを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの投与後の評価は、１つ以上の凝血パラメータのうちの少なくとも１つについて正常な結果を示す。いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの投与後評価の結果は、投与前の１つ以上のパラメータの評価の結果から改善される。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、対象は、手術中の凝血パラメータの１つ以上の投与前評価の異常な結果を有すると特定される。いくつかの実施形態では、手術は、緊急手術である。いくつかの実施形態では、手術は、予定された手術である。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、凝血パラメータは、出血の評価を含む。いくつかの実施形態では、出血の評価は、世界保健機関（ＷＨＯ）の出血スケールに基づいて行われる。方法のいくつかの実施形態では、投与の前に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいてグレード２、３、又は４の出血を有する。方法のいくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいてグレード０又は１の出血を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも１グレード低い出血を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも２グレード低い出血を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも３グレード低い出血を有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、凝血パラメータの評価は、プロトロンビン時間（ＰＴ）の評価を含む。いくつかの実施形態では、ＰＴの異常な結果は、約１４秒超のＰＴを含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも１秒、２秒、３秒、４秒、５秒、又はそれ以上のＰＴの減少を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、正常なＰＴを有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータは、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）の評価を含む。いくつかの実施形態では、ａＰＴＴの異常な結果は、約４０秒超のａＰＴＴを含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも５秒、１０秒、１５秒、２０秒、又はそれ以上のａＰＴＴの減少を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、正常なａＰＴＴを有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータは、トロンビン凝血時間（ＴＣＴ）の評価を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＴの異常な結果は、約３５秒超のＴＣＴを含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも５秒、１０秒、１５秒、２０秒、又はそれ以上のＴＣＴの減少を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、正常なＴＣＴを有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの評価は、トロンボエラストグラフィー（ＴＥＧ）を使用して測定される。いくつかの実施形態では、ＴＥＧの異常な結果は、約５０ｍｍ未満の最大振幅（ＭＡ）を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも５ｍｍ、１０ｍｍ、１５ｍｍ、２０ｍｍ、又はそれ以上のＭＡの増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、正常なＭＡを有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、ＴＥＧの異常な結果は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）約８５％未満のパーセント凝集を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する。いくつかの実施形態では、ＴＥＧは、アデノシン二リン酸誘発性血小板－フィブリン凝血強度を評価するために使用される。方法のいくつかの態様では、ＴＥＧは、アラキドン酸誘発性血小板－フィブリン凝血強度を評価するために使用される。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータの評価は、Ｐ２Ｙ１２反応単位（ＰＲＵ）又はアスピリン反応単位（ＡＲＵ）試験方法を使用して測定される。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、Ｐ２Ｙ１２反応単位試験方法の異常な結果は、約１９５未満、又は約１８０未満のＰＲＵを含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも２５、５０、７５、１００、又はそれ以上のＰＲＵの増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、正常なＰＲＵを有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、アスピリン反応単位試験方法の異常な結果は、約５５０未満、又は約５００未満のＡＲＵを含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、少なくとも２５、５０、７５、１００、又はそれ以上のＡＲＵの増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、正常なＡＲＵを有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータは、多重電極凝集測定（ＭＥＡ）を使用して測定される。いくつかの実施形態では、ＭＥＡを使用した異常な結果は、ＡＤＰ誘発性血小板活性の異常な結果を含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＡの異常な結果は、ＡＤＰ誘発性血小板活性の約５０単位（Ｕ）未満の結果を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、５単位、１０単位、１５単位、２０単位、又はそれ以上のＡＤＰ誘発性血小板活性の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、ＡＤＰ誘発性の血小板活性の正常な値を有する。いくつかの実施形態では、ＭＥＡの異常な結果は、アラキドン酸誘発性血小板活性の異常な結果を含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＡの異常な結果は、アラキドン酸誘発性血小板活性の約７０単位（Ｕ）未満の結果を含む。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、５単位、１０単位、１５単位、２０単位、又はそれ以上のアラキドン酸誘発性血小板活性の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、アラキドン酸誘発性血小板活性の正常な値を有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、１つ以上の凝血パラメータは、光透過凝集測定（ＬＴＡ）を使用して測定される。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、ＬＴＡの異常な結果は、（ａ）５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下での約６０％未満のパーセント凝集、（ｂ）２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下での約６５％未満のパーセント凝集、（ｃ）１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下での約６５％未満のパーセント凝集、（ｄ）２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下での約６９％未満のパーセント凝集、又は（ｅ）５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下での約７３％未満のパーセント凝集のうちの１つ以上を含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下で）正常なパーセント凝集を有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、
投与の後に、対象は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する。いくつかの実施形態では、投与の後に、対象は、（５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、方法は、対象に追加の抗血小板剤拮抗物質を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与と同時に行われる。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与後に行われる。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与の前に行われる。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、組成物は、抗線溶剤を更に含む。いくつかの実施形態では、抗線溶剤は、ε－アミノカプロン酸（ＥＡＣＡ）、トラネキサム酸、アプロチニン、アミノメチル安息香酸、フィブリノゲン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、血小板又は血小板誘導体に、抗線溶剤が充填される。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、投与は、局所投与、非経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、髄腔内投与、皮下投与、腹腔内投与、又はそれらの組み合わせを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、組成物は、投与工程の前に乾燥される。いくつかの実施形態では、組成物は、乾燥工程の後に再水和される。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、組成物は、投与工程の前にフリーズドライされる。いくつかの実施形態では、組成物は、フリーズドライ工程の後に再水和される。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びそれらのうちの２つ以上の組み合わせから選択される１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、担体タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、インキュベーション物質は、ＨＥＰＥＳ、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）、又はそれらの組み合わせを含む緩衝液を含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の糖を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の糖は、トレハロースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の糖は、ポリスクロースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の糖は、デキストロースを含む。

本方法のいくつかの態様では、組成物は、有機溶媒を含む。

本明細書の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗血小板剤は、ＦＤＰＤを含む組成物が、対象の出血の可能性を増加させるレベルで投与される時点で、対象において存在する。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、ＦＤＰＤを含む組成物が投与された時点後又はＦＤＰＤを含む組成物の最初若しくは最後の用量が投与された時点後１５、３０、若しくは４５分以内又は１、２、３、４、６、若しくは８時間以内において、Ｃｍａｘで存在する。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日１回、２回、３回、又は４回の、約８０ｍｇ～約７００ｍｇの用量で投与されたことがあるか又は投与されているアスピリンを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、対象が約３～約２５ｍｇ／ＬのＣ_ｍａｘを達成するように対象に投与されたことがあるか又は投与されているアスピリンを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約２５～約３０μｇ／対象のｋｇ体重の初回投薬量で、又は約３～約５μｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているカングレロールを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、対象が約４００～約５００ｎｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを達成するように対象に投与されたことがあるか又は投与されているカングレロールを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約１７０～約１９０ｍｇの初回投薬量で、又は１日２回の約８０～約１００ｍｇの治療１年目での次の投薬量で、又は１日２回の約５０～約７０ｍｇの治療２年目での次の投薬量で、任意選択的にアスピリンと組み合わせて対象に投与されたことがあるか又は投与されているチカグレロールを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、対象が約５５０～約６５０ｎｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを達成するように対象に投与されたことがあるか又は投与されているチカグレロールを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約２７５～約３２５ｍｇの初回投薬量で、又は１日１回の約７０～約８０ｍｇの次の投薬量で、任意選択的にアスピリンと組み合わせて対象に投与されたことがあるか又は投与されているクロピドグレルを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、対象が約６～約２０ｎｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを達成するように対象に投与されたことがあるか又は投与されているクロピドグレルを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約５０～約７０ｍｇの初回投薬量で、又は１日１回の約３～約１２の次の投薬量で、任意選択的にアスピリンと組み合わせて対象に投与されたことがあるか又は投与されているプラスグレルを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、対象が約２００～約５２５ｎｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを達成するように対象に投与されたことがあるか又は投与されているプラスグレルを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約１７０～約１９０ｍｃｇ／対象のｋｇ体重の初回投薬量で、任意選択的に約１７０～約１９０ｍｃｇ／対象のｋｇ体重の第２の初回投薬量で、又は約１～約２ｍｃｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているエプチフィバチドを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約０．３～約０．５μｇ／対象のｋｇ体重／分の初回投薬量で約３０分間、又は約０．１μｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているチロフィバンを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約０．２～約０．３ｍｇ／対象のｋｇ体重の初回投薬量で、又は約０．１０～約０．１５μｇ／対象のｋｇ体重の次の投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているアブシキシマブを含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約０．２～約０．３ｍｇ／対象のｋｇ体重の初回投薬量で、又は約８～約１０μｇ／分の次の投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているアブシキシマブを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日２回の約２４０～約２６０ｍｇの投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているチクロピジンを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日１回、２回、３回、又は４回の約１００～約６００ｍｇの投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているイブプロフェンを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日１回の約２～約３ｍｇの投薬量で、任意選択的にアスピリン又はクロピドグレルとともに対象に投与されたことがある又は投与されているボラパキサールを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日２回の約４０～約１１０ｍｇの投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているシロスタゾールを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約２ｎｇ／対象のｋｇ体重／分の初回投薬量、又は約４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、又は２０ｎｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量で対象に投与されたことがある又は投与されているエポプロステノールを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、１日４回の約６０～約１１０ｍｇの投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているジピリダモールを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、約０．５～約１．３ｎｇ／対象のｋｇ体重／分の投薬量で対象に投与されたことがあるか又は投与されているトレプロスチニルナトリウムを含む。

本明細書の態様のいずれかにおいて、方法のいくつかの実施形態、いくつかの態様では、対象は、がんを有しない。

本明細書の方法の態様のいずれかは、本明細書に提供される血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物のための使用、又はそのような組成物を含むキットのための使用であってもよく、そのような「使用」の言語を含む以下の態様に記載されるとおりである。そのような態様がＦＤＰＤを指す場合、それらは代わりに血小板誘導体を指し得ることが理解されるであろう。そのような態様は、方法の態様に関して本明細書に提供される要素のうちのいずれか、及び本明細書に提供される実施形態のうちのいずれかを含み得ることが更に理解されるであろう。例えば、有効量の血小板誘導体（例えば、ＦＤＰＤ）を含む組成物を投与することは、対象の出血の可能性が低減されるように、例示的実施形態では正常な止血が回復するように投与することであり得る。そのような態様が障害を指す場合、例示的実施形態における障害は、出血性障害である。そのような障害は、例えば、そのような障害を有する対象からの試料が１つ以上の凝血パラメータについて異常な値をもたらすため、特定され得る。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療するためのキットの製造における、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物の使用が本明細書に提供され、このキットの使用は、（ａ）投与前評価において、１つ以上の凝血パラメータについて異常値を対象が有すると決定することと、（ｂ）（ａ）の後に、その必要がある対象に有効量のフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、使用は、投与の前に、対象に抗血小板剤が投与されたと決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、使用は、投与の前に、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、使用は、フリーズドライ血小板誘導体を含む組成物を投与する前の投与前評価において、１つ以上の凝血パラメータについて異常値を対象が有すると決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、第１の抗血小板剤であり、第２の薬剤は、第２の抗血小板剤である。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療するためのキットの製造における、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物の使用が本明細書に提供され、このキットの使用は、その必要がある対象に有効量のＦＤＰＤを投与することを含み、ＦＤＰＤを含む組成物は、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で集団中のＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を含む。

一態様では、対象における凝固障害を治療するためのキットの製造における、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物の使用が本明細書に提供され、このキットの使用は、その必要がある対象に有効量のフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を投与することを含み、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与された。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療するためのキットの製造における、本明細書に提供される任意の態様の血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物の使用が本明細書に提供される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害の治療に使用するための医薬の調製における、本明細書に提供される任意の態様の血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物の使用が本明細書に提供される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療するためのキットの製造に使用するための、本明細書に提供される任意の態様の血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物が本明細書に提供される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療するための医薬として使用するための、本明細書に提供される任意の態様の血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物が本明細書に提供される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害の治療に使用するための、本明細書に提供される任意の態様の血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物が本明細書に提供される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における障害を治療するためのキットの製造に使用するための、本明細書に提供される任意の態様の血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物が本明細書に提供される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における障害を治療するための医薬として使用するための、本明細書に提供される任意の態様の血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物が本明細書に提供される。

一態様では、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における障害の治療に使用するための、本明細書に提供される任意の態様の血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物が本明細書に提供される。

障害の治療に、又はキットの製造に、又は薬剤として使用するための、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を含む本明細書に提供される態様のいずれかでは、障害は、円形脱毛症、フォン・ウィルブランド疾患、血友病、血小板無力症、血小板減少症、血小板減少性紫斑病、外傷、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。

凝固障害若しくは障害の治療に、又はキットの製造に、又は医薬として使用するための、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を含む本明細書に提供される態様のいずれかでは、抗血小板剤は、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、サルポグレラート、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

凝固障害若しくは障害の治療に、又はキットの製造に、又は医薬として使用するための、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を含む本明細書に提供される態様のいずれかでは、治療、又はキットの使用、又は医薬は、その必要がある対象に有効量のＦＤＰＤを投与することを含み、ＦＤＰＤを含む組成物は、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で集団中のＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を含む。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤは、１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力を有する。

凝固障害若しくは障害の治療に、又はキットの製造に、又は医薬として使用するための、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を含む本明細書に提供される態様のいずれかでは、ＦＤＰＤの少なくとも５０％は、ＣＤ４１陽性血小板誘導体であり、ＣＤ４１陽性ＦＤＰＤの５％未満は、０．５μｍ未満の直径を有する微粒子であり、ＦＤＰＤは、１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力を有する。

凝固障害若しくは障害の治療に、又はキットの製造に、又は医薬として使用するための、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を含む本明細書に提供される態様のいずれかでは、ＦＤＰＤは、Ａ）休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、ＦＤＰＤの表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）の存在、Ｂ）休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、ＦＤＰＤの表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在、及びＣ）アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較してアゴニストの存在下での血小板活性化マーカーの発現を増加させることができないこと、から選択される、超活性化された血小板の１つ以上の特徴を有する。

凝固障害若しくは障害の治療に、又はキットの製造に、又は医薬として使用するための、血小板誘導体、例示的実施形態ではフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物を含む本明細書に提供される態様のいずれかでは、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、１．０×１０^７～１．０×１０^１１／対象ｋｇである。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、１．６×１０^７～５．１×１０^９／対象ｋｇである。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、対象１ｋｇ当たり２５０～５０００ＴＧＰＵの効力を有する量である。いくつかの実施形態では、ＦＤＰＤを含む組成物の有効量は、１ｋｇ当たり３００～３８００ＴＧＰＵの効力を有する量である。

更なる例示的態様及び実施形態は、以下のとおり提供される。

いくつかの実施形態では、対象における凝固障害を治療する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態では、対象における凝固障害を治療する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの実施形態では、対象における正常な止血を回復させる方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態では、対象における正常な止血を回復させる方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの実施形態では、対象を手術のために準備させる方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。実装形態は、以下の特徴のうちの１つ以上を含み得る。手術は、緊急手術であり得る。手術は、予定された手術であり得る。

いくつかの実施形態では、対象を手術のために準備させる方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。実装形態は、以下の特徴のうちの１つ以上を含み得る。手術は、緊急手術であり得る。手術は、予定された手術であり得る。

上記の方法のいくつかの実施形態では、対象は、抗血小板剤によって治療されていたか、又は治療されている。いくつかの実施形態では、抗血小板剤による治療は、停止され得る。いくつかの実施形態では、抗血小板剤による治療は、継続され得る。

いくつかの実施形態では、対象における抗血小板剤の効果を改善する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む。

いくつかの実施形態では、対象における抗血小板剤の効果を改善する方法が本明細書に提供され、この方法は、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤の効果は、抗血小板剤の過剰摂取の結果であり得る。

いくつかの実施形態では、抗血小板剤は、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、及びサプリメントからなる群から選択され得る。

本明細書の方法のいずれかのいくつかの実施形態は、以下の特徴のうちの１つ以上を含み得る。投与は、局所投与を含み得る。投与は、非経口投与を含み得る。投与は、静脈内投与を含み得る。投与は、筋肉内投与を含み得る。投与は、髄腔内投与を含み得る。投与は、皮下投与を含み得る。投与は、腹腔内投与を含み得る。組成物は、投与工程の前に乾燥され得る。組成物は、乾燥工程の後に再水和され得る。組成物は、投与工程の前にフリーズドライされ得る。組成物は、フリーズドライ工程の後に再水和され得る。インキュベーション物質は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びそれらのうちの２つ以上の組み合わせから選択される１つ以上の塩を含み得る。インキュベーション物質は、担体タンパク質を含み得る。緩衝液は、ＨＥＰＥＳ、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、又はそれらの組み合わせを含み得る。組成物は、１つ以上の糖を含み得る。１つ以上の糖は、トレハロースを含み得る。１つ以上の糖は、ポリスクロースを含み得る。１つ以上の糖は、デキストロースを含み得る。組成物は、有機溶媒を含み得る。血小板又は血小板誘導体は、ＦＤＰＤを含み得る。

更なる非限定的な例としての実施形態は、以下のように番号付きの形態で提供される。

実施形態１は、対象における凝固障害を治療する方法であって、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む、方法である。

実施形態２は、対象における凝固障害を治療する方法であって、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態３は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む、方法である。

実施形態４は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態５は、対象を手術のために準備させる方法であって、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む、方法である。

実施形態６は、対象を手術のために準備させる方法であって、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態７は、手術が、緊急手術である、実施形態５又は６に記載の方法である。

実施形態８は、手術が、予定された手術である、実施形態５又は６に記載の方法である。

実施形態９は、対象が、抗血小板剤によって治療されていたか、又は治療されている、実施形態１～８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１０は、抗血小板剤による治療が、停止される、実施形態９に記載の方法である。

実施形態１１は、抗血小板剤による治療が、継続される、実施形態９に記載の方法である。

実施形態１２は、対象における抗血小板剤の効果を改善する方法であって、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む、方法である。

実施形態１３は、対象における抗血小板剤の効果を改善する方法であって、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態１４は、抗血小板剤の効果が、抗血小板剤の過剰摂取の結果である、実施形態１２又は実施形態１３に記載の方法である。

実施形態１５は、組成物が、抗線溶剤を更に含む、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６は、抗線溶剤が、ε－アミノカプロン酸（ＥＡＣＡ）、トラネキサム酸、アプロチニン、アミノメチル安息香酸、フィブリノゲン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態１５に記載の方法である。

実施形態１７は、血小板又は血小板誘導体に、抗線溶剤が充填される、実施形態１５又は実施形態１６に記載の方法である。

実施形態１８は、抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、サプリメント、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態９～１６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９は、抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態９～１６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２０は、抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、サルポグレラート、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態９～１６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２１は、投与が、局所投与を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２２は、投与が、非経口投与を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２３は、投与が、静脈内投与を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２４は、投与が、筋肉内投与を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２５は、投与が、髄腔内投与を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２６は、投与が、皮下投与を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２７は、投与が、腹腔内投与を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２８は、組成物が、投与工程の前に乾燥される、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２９は、組成物が、乾燥工程の後に再水和される、実施形態２８に記載の方法である。

実施形態３０は、組成物が、投与工程の前にフリーズドライされる、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態３１は、組成物が、フリーズドライ工程の後に再水和される、実施形態３０に記載の方法である。

実施形態３２は、インキュベーション物質が、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びそれらのうちの２つ以上の組み合わせから選択される１つ以上の塩を含む、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態３３は、インキュベーション物質が、担体タンパク質を含む、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態３４は、緩衝液が、ＨＥＰＥＳ、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態３５は、組成物が、１つ以上の糖を含む、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態３６は、１つ以上の糖が、トレハロースを含む、実施形態３５に記載の方法である。

実施形態３７は、１つ以上の糖が、ポリスクロースを含む、実施形態３５又は実施形態３６に記載の方法である。

実施形態３８は、１つ以上の糖が、デキストロースを含む、実施形態３５～３７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態３９は、組成物が、有機溶媒を含む、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態４０は、血小板又は血小板誘導体が、ＦＤＰＤを含む、実施形態１～３９のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態４１は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療する方法であって、
（ａ）対象が、１つ以上の凝血パラメータの評価について異常な結果を有すると決定することと、
（ｂ）（ａ）の後に、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と
を含む、方法である。

実施形態４２は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療する方法であって、
（ａ）対象が、１つ以上の凝血パラメータの評価について異常な結果を有すると決定することと、
（ｂ）（ａ）の後に、その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態４３は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療する方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、投与の前に、対象が、１つ以上の凝血パラメータの評価について異常な結果を有することが決定されている、方法である。

実施形態４４は、抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療する方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されており、投与の前に、対象が、１つ以上の凝血パラメータの評価について異常な結果を有することが決定されている、方法である。

実施形態４５は、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価の結果を決定することを更に含む、実施形態４１～４４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態４６は、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価が、１つ以上の凝血パラメータのうちの少なくとも１つについて正常な結果を示す、実施形態４５に記載の方法である。

実施形態４７は、投与の後の１つ以上の凝血パラメータの評価の結果が、投与前の１つ以上のパラメータの評価の結果から改善される、実施形態４５に記載の方法である。

実施形態４８は、対象における凝固障害を治療する方法であって、
（ａ）医学的指示に反して対象に抗血小板剤が投与されたと決定することと、
（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と
を含む、方法である。

実施形態４９は、対象における凝固障害を治療する方法であって、
（ａ）医学的指示に反して対象に抗血小板剤が投与されたと決定することと、
（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態５０は、対象における凝固障害を治療する方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象が、医学的指示に反して抗血小板剤を投与されたことがあると決定される、方法である。

実施形態５１は、対象における凝固障害を治療する方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されており、対象が、医学的指示に反して抗血小板剤を投与されたことがあると決定される、方法である。

実施形態５２は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、
（ａ）医学的指示に反して対象に抗血小板剤が投与されたと決定することと、
（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む、方法である。

実施形態５３は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、
（ａ）医学的指示に反して対象に抗血小板剤が投与されたと決定することと、
（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態５４は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象が、医学的指示に反して抗血小板剤を投与されたことがあると決定される、方法である。

実施形態５５は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されており、対象が、医学的指示に反して抗血小板剤を投与されたことがあると決定される、方法である。

実施形態５６は、医学的指示に反して抗血小板剤を投与することが、対象によって自己投与される、実施形態４８～５５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態５７は、医学的指示に反して抗血小板剤を投与することが、医療専門家によって投与される、実施形態４８～５５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態５８は、医学的指示が、医療専門家による口頭指示である、実施形態４８～５７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態５９は、医学的指示が、書面による指示である、実施形態４８～５７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態６０は、対象における凝固障害を治療する方法であって、
（ａ）抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することと、
（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む、方法である。

実施形態６１は、対象における凝固障害を治療する方法であって、
（ａ）抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することと、
（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態６２は、対象における凝固障害を治療する方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与されたことがあると決定される、方法である。

実施形態６３は、対象における凝固障害を治療する方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されており、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与されたことがあると決定される、方法である。

実施形態６４は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、
（ａ）抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することと、
（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む、方法である。

実施形態６５は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、
（ａ）抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤が対象に投与されたと決定することと、
（ｂ）その必要がある対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態６６は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与されたことがあると特定される、方法である。

実施形態６７は、対象における正常な止血を回復させる方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されており、対象は、抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を投与されたことがあると特定される、方法である。

実施形態６８は、第２の薬剤の投与が停止される、実施形態６０～６７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態６９は、第２の薬剤の投与が継続される、実施形態６０～６７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７０は、第２の薬剤が、降圧剤、プロトンポンプ阻害剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態６０～６９のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７１は、第２の薬剤が、化学療法剤、抗生物質、心血管剤、Ｈ２アンタゴニスト、神経精神剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態６０～６９のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７２は、第２の薬剤が、抗うつ剤を含む、実施形態６０～６９のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７３は、抗うつ剤が、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、セロトニンアンタゴニスト及び再取り込み阻害剤（ＳＡＲＩ）、セロトニン及びノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態７２に記載の方法である。

実施形態７４は、第２の薬剤が、抗凝固剤ではない、実施形態６０～７３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７５は、抗血小板剤の投与が停止される、実施形態４１～７４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７６は、抗血小板剤の投与が継続される、実施形態４１～７４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７７は、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法であって、
（ａ）対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定することと、
（ｂ）対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含む、方法である。

実施形態７８は、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法であって、
（ａ）対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定することと、
（ｂ）対象に有効量の組成物を投与することと
を含み、組成物が、血小板を１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とともにインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスによって調製されている、方法である。

実施形態７９は、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板又は血小板誘導体と、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質と、を含み、対象は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定された対象であることが決定されている、方法である。

実施形態８０は、対象における凝固障害の可能性を予防又は軽減する方法であって、
その必要がある対象に有効量の組成物を投与することを含み、この組成物は、血小板を、１つ以上の塩、緩衝液、任意選択的に凍結保護剤、及び任意選択的に有機溶媒を含むインキュベーション物質とインキュベートして、組成物を形成することを含むプロセスにより調製されており、対象は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が利用できないと決定された対象であることが決定されている、方法である。

実施形態８１は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が、対象を特定することができないことを含む理由で利用できない、実施形態７７～８０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８２は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が、対象の病歴が利用できないことを含む理由で利用できない、実施形態７７～８１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８３は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が、対象が緊急治療を必要としていることを含む理由で利用できない、実施形態７７～８２のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８４は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が、対象が緊急手術を必要としていることを含む理由で利用できない、実施形態７７～８３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８５は、対象が抗血小板剤を投与されたかどうかに関する情報が、対象が緊急手術を受けていることを含む理由で利用できない、実施形態７７～８４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８６は、凝血パラメータの１つ以上の評価について異常な結果を対象が有すると決定することを更に含む、実施形態４８～８５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８７は、対象が凝血パラメータの１つ以上の評価について異常な結果を有すると決定された、実施形態４８～８６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８８は、対象が、１つ以上の凝血パラメータのうちの少なくとも１つについて正常な結果を有すると以前に特定された、実施形態８４～８７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８９は、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価の結果を決定することを更に含む、実施形態８４～８８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態９０は、投与後の１つ以上の凝血パラメータの評価が、１つ以上の凝血パラメータのうちの少なくとも１つについて正常な結果を示す、実施形態８９に記載の方法である。

実施形態９１は、投与の後の１つ以上の凝血パラメータの評価の結果が、投与前の１つ以上のパラメータの評価の結果から改善される、実施形態８９に記載の方法である。

実施形態９２は、対象が手術中の凝血パラメータの１つ以上の評価について異常な結果を有すると特定される、実施形態４１～４７又は８６～９１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態９３は、手術が、緊急手術である、実施形態９２に記載の方法である。

実施形態９４は、手術が、予定された手術である、実施形態９２に記載の方法である。

実施形態９５は、１つ以上の凝血パラメータが、出血の評価を含む、実施形態４１～４７又は８６～９４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態９６は、世界保健機関（ＷＨＯ）出血スケールに基づいて出血の評価が行われる、実施形態９５に記載の方法である。

実施形態９７は、投与の前に、対象が、ＷＨＯ出血スケールに基づいてグレード２、３、又は４の出血を有する、実施形態９６に記載の方法である。

実施形態９８は、投与の後に、対象が、ＷＨＯ出血スケールに基づいてグレード０又は１の出血を有する、実施形態９７に記載の方法である。

実施形態９９は、投与の後に、対象が、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも１グレード低い出血を有する、実施形態９６に記載の方法である。

実施形態１００は、投与の後に、対象が、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも２グレード低い出血を有する、実施形態９６に記載の方法である。

実施形態１０１は、投与の後に、対象が、ＷＨＯ出血スケールに基づいて、投与の前よりも３グレード低い出血を有する、実施形態９６に記載の方法である。

実施形態１０２は、１つ以上の凝血パラメータが、プロトロンビン時間（ＰＴ）の評価を含む、実施形態４１～４７又は８６～１０１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１０３は、ＰＴの異常な結果が、約１４秒超のＰＴを含む、実施形態１０２に記載の方法である。

実施形態１０４は、投与の後に、対象が、少なくとも１秒、２秒、３秒、４秒、５秒、又はそれ以上のＰＴの減少を有する、実施形態１０２又は実施形態１０３に記載の方法である。

実施形態１０５は、投与の後に、対象が、正常なＰＴを有する、実施形態１０２～１０４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１０６は、１つ以上の凝血パラメータが、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）の評価を含む、実施形態４１～４７又は８６～１０５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１０７は、ａＰＴＴの異常な結果が、約４０秒超のａＰＴＴを含む、実施形態１０６に記載の方法である。

実施形態１０８は、投与の後に、対象が、少なくとも５秒、１０秒、１５秒、２０秒、又はそれ以上のａＰＴＴの減少を有する、実施形態１０６又は実施形態１０７に記載の方法である。

実施形態１０９は、投与の後に、対象が、正常なａＰＴＴを有する、実施形態１０６～１０８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１１０は、１つ以上の凝血パラメータが、トロンビン凝血時間（ＴＣＴ）の評価を含む、実施形態４１～４７又は８６～１０９のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１１１は、ＴＣＴの異常な結果が、約３５秒超のＴＣＴを含む、実施形態１１０に記載の方法である。

実施形態１１２は、投与の後に、対象が、少なくとも５秒、１０秒、１５秒、２０秒、又はそれ以上のＴＣＴの減少を有する、実施形態１１０又は実施形態１１１に記載の方法である。

実施形態１１３は、投与の後に、対象が、正常なＴＣＴを有する、実施形態１１０～１１１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１１４は、１つ以上の凝血パラメータの評価が、トロンボエラストグラフィー（ＴＥＧ）を含む、実施形態４１～４７又は８６～１１３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１１５は、ＴＥＧの異常な結果が、約５０ｍｍ未満の最大振幅（ＭＡ）を含む、実施形態１１４に記載の方法である。

実施形態１１６は、投与の後に、対象が、少なくとも５ｍｍ、１０ｍｍ、１５ｍｍ、２０ｍｍ、又はそれ以上のＭＡの増加を有する、実施形態１１４又は実施形態１１５に記載の方法である。

実施形態１１７は、投与の後に、対象が、正常なＭＡを有する、実施形態１１４～１１６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１１８は、ＴＥＧの異常な結果が、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）約８５％未満のパーセント凝集を含む、実施形態１１４～１１７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１１９は、投与の後に、対象が、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する、実施形態１１８に記載の方法である。

実施形態１２０は、投与の後に、対象が、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する、実施形態１１８又は実施形態１１９に記載の方法である。

実施形態１２１は、ＴＥＧが、アデノシン二リン酸誘発性血小板－フィブリン凝血強度を評価するために使用される、実施形態１０５～１２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１２２は、ＴＥＧが、アラキドン酸誘発性血小板－フィブリン凝血強度を評価するために使用される、実施形態１０５～１２０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１２３は、１つ以上の凝血パラメータの評価が、ＶｅｒｉｆｙＮｏｗを含む、実施形態４１～４７又は８６～１２２のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１２４は、ＶｅｒｉｆｙＮｏｗの異常な結果が、約１９５未満又は約１８０未満のＰ２Ｙ１２反応単位（ＰＲＵ）を含む、実施形態１２３に記載の方法である。

実施形態１２５は、投与の後に、対象が、少なくとも２５、５０、７５、１００、又はそれ以上のＰＲＵの増加を有する、実施形態１２３又は実施形態１２４に記載の方法である。

実施形態１２６は、投与の後に、対象が、正常なＰＲＵを有する、実施形態１２３～１２５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１２７は、ＶｅｒｉｆｙＮｏｗの異常な結果が、約５５０未満又は約５００未満のアスピリン反応単位（ＡＲＵ）を含む、実施形態１２３～１２６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１２８は、投与の後に、対象が、少なくとも２５、５０、７５、１００、又はそれ以上のＡＲＵの増加を有する、実施形態１２６又は実施形態１２７に記載の方法である。

実施形態１２９は、投与の後に、対象が、正常なＡＲＵを有する、実施形態１２６～１２８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１３０は、１つ以上の凝血パラメータが、多重電極凝集測定（ＭＥＡ）を含む、実施形態４１～４７又は８６～１２９のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１３１は、ＭＥＡの異常な結果が、ＡＤＰ誘発性血小板活性の異常な結果を含む、実施形態１３０に記載の方法である。

実施形態１３２は、ＭＥＡの異常な結果が、ＡＤＰ誘導血小板活性の約５０単位（Ｕ）未満の結果を含む、実施形態１３１に記載の方法である。

実施形態１３３は、投与の後に、対象が、５単位、１０単位、１５単位、２０単位、又はそれ以上のＡＤＰ誘発性血小板活性の増加を有する、実施形態１３１又は実施形態１３２に記載の方法である。

実施形態１３４は、投与の後に、対象が、ＡＤＰ誘発性血小板活性の正常な値を有する、実施形態１３１～１３３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１３５は、ＭＥＡの異常な結果が、アラキドン酸誘発性血小板活性の異常な結果を含む、実施形態１３１～１３４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１３６は、ＭＥＡの異常な結果が、アラキドン酸誘発性血小板活性の約７０単位（Ｕ）未満の結果を含む、実施形態１３５に記載の方法である。

実施形態１３７は、投与の後に、対象が、５単位、１０単位、１５単位、２０単位、又はそれ以上のアラキドン酸誘発性血小板活性の増加を有する、実施形態１３５又は実施形態１３６に記載の方法である。

実施形態１３８は、投与後、対象が、アラキドン酸誘発性血小板活性の正常な値を有する、実施形態１３５～１３７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１３９は、１つ以上の凝血パラメータが、光透過凝集測定（ＬＴＡ）を含む、実施形態４１～４７又は８６～１３８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１４０は、ＬＴＡの異常な結果が、
（ａ）５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下での約６０％未満のパーセント凝集、
（ｂ）２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下での約６５％未満のパーセント凝集、
（ｃ）１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下での約６５％未満のパーセント凝集、
（ｄ）２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下での約６９％未満のパーセント凝集、又は
（ｅ）５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下での約７３％未満のパーセント凝集のうちの１つ以上を含む、実施形態１３９に記載の方法である。

実施形態１４１は、投与の後に、対象が、（５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する、実施形態１４０に記載の方法である。

実施形態１４２は、投与の後に、対象が、（５μｍｏｌ／Ｌのアデノシン二リン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する、実施形態１４０又は実施形態１４１に記載の方法である。

実施形態１４３は、投与の後に、対象が、（２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する、実施形態１４０に記載の方法である。

実施形態１４４は、投与の後に、対象が、（２μｇ／ｍＬのコラーゲンの存在下で）正常なパーセント凝集を有する、実施形態１４０又は実施形態１４３に記載の方法である。

実施形態１４５は、投与の後に、対象が、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する、実施形態１４０に記載の方法である。

実施形態１４６は、投与の後に、対象が、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する、実施形態１４０又は実施形態１４５に記載の方法である。

実施形態１４７は、投与の後に、対象が、（２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する、実施形態１４０に記載の方法である。

実施形態１４８は、投与の後に、対象が、（２ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する、実施形態１４０又は実施形態１４７に記載の方法である。

実施形態１４９は、投与の後に、対象が、（５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する、実施形態１４０に記載の方法である。

実施形態１５０は、投与の後に、対象が、（５ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する、実施形態１４０又は実施形態１４９に記載の方法である。

実施形態１５１は、対象に、追加の抗血小板剤拮抗物質を投与することを更に含む、実施形態４１～１５０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１５２は、組成物の投与が、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与と同時に行われる、実施形態１５１に記載の方法である。

実施形態１５３は、組成物の投与が、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与後に行われる、実施形態１５１に記載の方法である。

実施形態１５４は、組成物の投与が、追加の抗血小板剤拮抗物質の投与前に行われる、実施形態１５１に記載の方法である。

実施形態１５５は、組成物が、抗線溶剤を更に含む、実施形態４１～１５４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１５６は、抗線溶剤が、ε－アミノカプロン酸（ＥＡＣＡ）、トラネキサム酸、アプロチニン、アミノメチル安息香酸、フィブリノゲン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態１５５に記載の方法である。

実施形態１５７は、血小板又は血小板誘導体に、抗線溶剤が充填される、実施形態１５５又は実施形態１５６に記載の方法である。

実施形態１５８は、抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、サプリメント、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態４１～１５７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１５９は、抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態４１～１５７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６０は、抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、サルポグレラート、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態４１～１５７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６１は、投与が、局所投与、非経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、髄腔内投与、皮下投与、腹腔内投与、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態４１～１６０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６２は、組成物が、投与工程の前に乾燥される、実施形態４１～１６１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６３は、組成物が、乾燥工程の後に再水和される、実施形態１６２に記載の方法である。

実施形態１６４は、組成物が、投与工程の前にフリーズドライされる。実施形態４１～１６１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６５は、組成物が、フリーズドライ工程の後に再水和される、実施形態１６４に記載の方法である。

実施形態１６６は、インキュベーション物質が、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びそれらのうちの２つ以上の組み合わせから選択される１つ以上の塩を含む、実施形態４１～１６５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６７は、インキュベーション物質が、担体タンパク質を含む、実施形態４１～１６６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６８は、緩衝液が、ＨＥＰＥＳ、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態４１～１６７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１６９は、組成物が、１つ以上の糖を含む、実施形態４１～１６８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１７０は、１つ以上の糖が、トレハロースを含む、実施形態１６９に記載の方法である。

実施形態１７１は、１つ以上の糖が、ポリスクロースを含む、実施形態１６９又は実施形態１７０に記載の方法である。

実施形態１７２は、１つ以上の糖が、デキストロースを含む、実施形態１６９～１７１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１７３は、組成物が、有機溶媒を含む、実施形態４１～１７２のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１７４は、血小板又は血小板誘導体が、ＦＤＰＤを含む、実施形態４１～１７３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１７５は、抗血小板剤が、１日１回、２回、３回、又は４回の、約８０ｍｇ～約７００ｍｇの投薬量でアスピリンを含む、実施形態４１～１７４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１７６は、抗血小板剤が、アスピリンを含み、対象が、約３～約２５ｍｇ／ＬのＣｍａｘを達成した、実施形態４１～１７５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１３７は、抗血小板剤が、約２５～約３０μｇ／対象のｋｇ体重の初回投薬量で、又は約３～約５μｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量で１７７を含む、実施形態４１～１７６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１７８は、抗血小板剤が、カングレロールを含み、対象が、約４００～約５００ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを達成した、実施形態４１～１７７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１７９は、抗血小板剤が、約１７０～約１９０ｍｇの初回投薬量で、又は１日２回の約８０～約１００ｍｇの治療１年目での次の投薬量で、又は１日２回の約５０～約７０ｍｇの治療２年目での次の投薬量で、任意選択的にアスピリンと組み合わせてチカグレロールを含む、実施形態４１～１７８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８０は、抗血小板剤が、チカグレロールを含み、対象が、約５５０～約６５０ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを達成した、実施形態４１～１７９のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８１は、抗血小板剤が、約２７５～約３２５ｍｇの初回投薬量で、又は１日１回の約７０～約８０ｍｇの次の投薬量で、任意選択的にアスピリンと組み合わせてクロピドグレルを含む、実施形態４１～１８０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８２は、抗血小板剤が、クロピドグレルを含み、対象が、約６～約２０ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを達成した、実施形態４１～１８１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８３は、抗血小板剤が、約５０～約７０ｍｇの初回投薬量で、又は１日１回の約３～約１２の次の投薬量で、任意選択的にアスピリンと組み合わせてプラスグレルを含む、実施形態４１～１８２のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８４は、抗血小板剤が、プラスグレルを含み、対象が、約２００～約５２５ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを達成した、実施形態４１～１８３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８５は、抗血小板剤が、約１７０～約１９０ｍｃｇ／対象のｋｇ体重の初回投薬量で、任意選択的に約１７０～約１９０ｍｃｇ／対象のｋｇ体重の第２の初回投薬量で、又は約１～約２ｍｃｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量でエプチフィバチドを含む、実施形態４１～１８４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８６は、抗血小板剤が、約３０分間の約０．３～約０．５μｇ／対象のｋｇ体重／分の初回投薬量で、又は約０．１μｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量でチロフィバンを含む、実施形態４１～１８５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８７は、抗血小板剤が、約０．２～約０．３ｍｇ／対象のｋｇ体重の初回投薬量で、又は約０．１０～約０．１５μｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量でアブシキシマブを含む、実施形態４１～１８６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８８は、抗血小板剤が、約０．２～約０．３ｍｇ／対象のｋｇ体重の初回投薬量で、又は約８～約１０μｇ／分の次の投薬量でアブシキシマブを含む、実施形態４１～１８７のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８９は、抗血小板剤が、１日２回の約２４０～約２６０ｍｇの投薬量でチクロピジンを含む、実施形態４１～１８８のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９０は、抗血小板剤が、１日１回、２回、３回、又は４回の、約１００～約６００ｍｇの投薬量でイブプロフェンを含む、実施形態４１～１８９のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９１は、抗血小板剤が、１日１回の約２～約３ｍｇの投薬量で、任意選択的にアスピリン又はクロピドグレルとともにボラパキサールを含む、実施形態４１～１９０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９２は、抗血小板剤が、１日２回の約４０～約１１０ｍｇの投薬量でシロスタゾールを含む、実施形態４１～１９１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９３は、抗血小板剤が、約２ｎｇ／対象のｋｇ体重／分の初回投薬量で、又は約４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、又は２０ｎｇ／対象のｋｇ体重／分の次の投薬量でエポプロステノールを含む、実施形態４１～１９２のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９４は、抗血小板剤が、１日４回の約６０～約１１０ｍｇの投薬量でジピリダモールを含む、実施形態４１～１９３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９５は、抗血小板剤が、約０．５～約１．３ｎｇ／対象のｋｇ体重／分の投薬量でトレプロスチニルナトリウムを含む、実施形態４１～１９４のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９６は、対象ががんを有しない、請求項１～１９５のいずれか１つに記載の方法である。

実施例１－Ｐ２Ｙ_１２阻害剤
カングレロールは、クロピドグレル、チカグレロール、及びプラスグレルと同様に、血小板上のＰ２Ｙ_１２（ＡＤＰ）受容体を遮断する。カングレロールを、このクラスの薬物の代表として本実施例で使用する。

ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。光透過凝集測定及びＴ－ＴＡＳ（登録商標）実験を、実施例４に従って行った。

多血小板血漿（ＰＲＰ；全血としてヒトから採取し、白血球（ＷＢＣ）又は赤血球（ｒｂｃ）を含まない血漿中の血小板を単離するように処理した）中の血小板の凝集に対するカングレロールの効果を、透過光凝集測定によって評価した。アゴニスト誘発性活性化に応答する血小板（多血小板血漿）の凝集は、０．５μＭ～３．５μＭの治療濃度でのカングレロールによる、１０μＭのアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）誘発性凝集の完全な阻害を示した（図１）。調査した全ての用量のカングレロールは、ＰＲＰにおいてＡＤＰ誘発性血小板凝集を完全に排除した。

剪断下での血小板閉塞に対するカングレロールの効果を、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）によって評価した。１０μＭのＡＤＰによってインビトロで刺激された新鮮な多血小板血漿（血小板濃度２７８，０００／μＬ；ＰＲＰは、概して、約２００，０００／μＬ～約３００，０００／μＬの血小板濃度を有する）は、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術を使用してＡＲチップ（コラーゲン及び組織トロンボプラスチン）によって決定されるように、高剪断下で非刺激血小板（ＰＲＰ）よりも早く閉塞された（図２）。カングレロール単独（１μＭ）は、閉塞に対する阻害を示さなかったが、ＡＤＰ（１０μＭ）と組み合わせた場合、血小板の接着及び閉塞を本質的に排除した。これらの結果を、図３及び図４に更に例示する。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、このパターンが観察されるのは、血小板が、ＡＤＰに応答し、かつＡＤＰ受容体Ｐ２Ｙ１２の遮断がコラーゲン結合を阻害する形状変化及び凝集を引き起こすカングレロールによって遮断されない他のＡＤＰ受容体を有し、したがって、血小板が、ＡＤＰ刺激に起因して互いに結合し得るが、コーティングされたチップ上のコラーゲン結合を防止し得るからであると考えられている。

図３では、曲線下面積（ＡＵＣ）値（図２のデータに由来；複製は平均化され、１回プロットされる）は、血栓が時間的にどのくらい早く発生し、血栓が発生する場合、それがどのくらい実質的なものであるかの組み合わせた値を示す。ＰＲＰ ＡＵＣは、ＡＤＰ刺激によって増加した。カングレロールは、ＡＵＣ値に対してほとんど効果を有しなかったが、ＡＤＰ刺激と組み合わせた場合、ＡＵＣは、ほぼゼロにまで低下した。

図４では、薬物処理を伴うＡＲ Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）チップの閉塞までの時間を評価した。ＰＲＰは、約２０分でチップチャネルを閉塞し、その時間、ＡＤＰによる血小板の刺激は低下した。カングレロールは、閉塞時間に対してほとんど効果を有しなかったが、ＰＲＰ試料へのＡＤＰ刺激の添加により、本質的に完全に閉塞を阻害した。

血小板の阻害であることが示されている濃度でのＡＤＰ刺激を有するカングレロールの存在下では、トロンボソーム又はＦＤＰＤ（図５～図７の「ｔｈｒｏｍｂ」）は阻害されず、治療レベルでのカングレロールの存在下であっても、ＦＤＰＤが凝血形成を助け得ることを示す。

剪断下でのＦＤＰＤに対するカングレロールの効果を、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）によって評価した。図５は、ＦＤＰＤが（示されるように、６０、９０、又は１１５分間の再水和後に）、ＡＤＰ（１０ｕＭ）が存在する状態で、カングレロール（１ｕＭ）の不在下又は存在下で、止血機能を保持することを示す。血小板とは異なり、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップのトロンボソームの閉塞は、カングレロール＋ＡＤＰの抗血小板効果によって影響を受けない。これは、カングレロール及び同様の薬剤を投与されている患者に注入した場合、ＦＤＰＤが期待される機能を維持するであろうことを示唆する。これらの結果を、図６及び図７に更に例示する。

図６では、ＡＵＣ値（図５のデータに由来）は、血栓形成を示す。血漿中のＴ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップのトロンボソーム接着及び閉塞に対するカングレロール及びＡＤＰの効果はなく、ＦＤＰＤは、カングレロール及びＡＤＰにかかわらず、血栓形成を引き起こした。同じ用量のカングレロール及びＡＤＰは、新たに採取された血小板を完全に阻害した。

図７では、薬物処理を伴うＡＲ Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）チップに対するＦＤＰＤの閉塞までの時間（図５のデータに由来）を評価した。血漿中のＴ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップを使用したトロンボソームの閉塞までの時間に対するカングレロール＋ＡＤＰからの効果はなかった。同じ用量のカングレロール及びＡＤＰは、新たに採取された血小板を完全に阻害した。

実施例２．ＧＰＩＩｂ－ＩＩＩａ阻害剤
以下の結果は、ＧＰＩＩｂ－ＩＩＩａ阻害剤を服用している患者のインビトロモデルにおけるＦＤＰＤの影響を実証している。一般的な抗血小板薬であるエプチフィバチドは、フィブリノゲン及びフォン・ウィルブランド因子と相互作用する血小板上のＧＰＩＩｂ－ＩＩＩａ受容体を競合的に阻害する。

エプチフィバチドは、血小板上のＧＰＩＩｂ－ＩＩＩａ受容体のフィブリン結合の役割を遮断するペプチド治療薬である。薬物を、典型的には、１８０μｇ／ｋｇボーラスとしてＩＶを介して投与し、続いて２μｇ／ｋｇ／分の連続注入を行う。エプチフィバチドの血中濃度は、典型的には、約１～２μＭである。出血時間は、一般に、薬物停止から約１時間以内に正常に戻る。

ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。光透過凝集測定及びＴ－ＴＡＳ（登録商標）実験を、実施例４に従って行った。

（多血小板血漿中の）血小板の凝集を、透過光凝集測定を使用して評価した。エプチフィバチドは、ＰＲＰにおける光透過凝集測定によって検出されるように、試験した全ての濃度で、ＰＲＰにおけるコラーゲン誘発性（１０μｇ／ｍＬ）血小板凝集を完全に阻害した。（図８）。

エプチフィバチドの存在下での凝血時間の短縮に対するＦＤＰＤの効果も研究した。閉塞時間を回復させるＦＤＰＤの能力を、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）システム上で研究した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）システムは、コラーゲン及びトロンボプラスチン刺激による剪断力下での閉塞時間を測定する。ＡＲ Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）チップ上の閉塞及びＡＵＣの全血プロファイルは、それぞれエプチフィバチドによって延長及び減少した。エプチフィバチドは、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップ上の全血の閉塞時間を、用量依存的様式で延長した。この実験では、全血は８分で閉塞し、６μＭのエプチフィバチドによって、閉塞時間が１６分に延長した（図９）。ＦＤＰＤは、血栓形成に対するエプチフィバチドの阻害作用に拮抗した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップ上の全血閉塞のエプチフィバチド阻害は、約２００，０００／μＬ（Ｎ＝３）のＦＤＰＤの添加によって拮抗した。エプチフィバチドによって阻害された全血の試料にＦＤＰＤ（約２００ｋ／μＬ）を添加した場合、閉塞までの時間は、９分で「正常」に減少した（図１０）。

トロンボソーム処理での曲線下面積値もまた、正常な全血試料の値と比較して、ＦＤＰＤによって増加した。図１１は、薬物処理を伴うＡＲ Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）チップ上のＦＤＰＤの閉塞までの時間を実証し、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップ閉塞のエプチフィバチド阻害は、ＦＤＰＤ（２００，０００／μＬ；Ｎ＝３）の添加によってほぼ完全に拮抗した。図１２では、曲線下面積値は、ＦＤＰＤがエプチフィバチドによる阻害を正常レベルに戻した血栓形成を示し、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップへの血小板接着及び閉塞のエプチフィバチド阻害は、ＦＤＰＤ（２００，０００／μＬ；Ｎ＝３）の添加によって克服される。

血小板とは異なり、ＦＤＰＤは、エプチフィバチドの存在下で、剪断下で閉塞するその能力において阻害されない（図１３）。図１３は、ＡＲ Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）システム上の様々なロットのトロンボソームの血栓形成のプロファイルが、エプチフィバチド処理によって変化しなかったことを示す。乏血小板血漿（ＰＰＰ）中のＦＤＰＤを、６ｕＭのエプチフィバチドあり及びなしで、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップを通して流した。トロンボソームの接着及び閉塞に対するエプチフィバチドの効果はなかった。全てのトロンボソーム濃度は、約３００，０００／μＬであった。

血漿中のＦＤＰＤ（約３００，０００／μＬ）についてのＴ－ＴＡＳによるＡＵＣ及び閉塞値は、エプチフィバチドの有無にかかわらず同じであった（図１４～図１５）。図１４は、曲線下面積値が、血栓形成を示し、乏血小板血漿中のエプチフィバチドによる変化は観察されなかったことを示す。ＦＤＰＤ Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップの閉塞のＡＵＣに対する６ｕＭのエプチフィバチドの効果はなかった。図１５は、ＡＲ Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）チップ上のＦＤＰＤの閉塞までの時間が、エプチフィバチドによって変化しなかったことを示す。乏血小板血漿中のＴ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップのＦＤＰＤ閉塞時間に対する６μＭのエプチフィバチドからの有意な影響はなかった。

実施例３．ＣＯＸ阻害剤
以下の結果は、ＣＯＸ阻害剤を服用している患者のインビトロモデルにおけるＦＤＰＤの影響を実証している。一般的な抗血小板薬であるアスピリンは、血小板中のＣＯＸ１酵素を遮断する。ＣＯＸ１は、アラキドン酸のプロスタグランジンへの変換に関与する。

アスピリンは、不可逆的なシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害剤である。血小板中のＣＯＸ酵素は、トロンボキサンＡ２、プロスタグランジンＥ２、及びプロスタシクリン（ＰＧＩ２）の合成に関与する。アスピリンは、血小板内のＣＯＸ酵素を永久的に不活性化し、かつ血小板は、新たな酵素を合成するための核物質を有しないため、アスピリン効果を克服するためには、新たな血小板を生成しなければならない。トロンボキサンＡ２、プロスタグランジンＥ２、及びプロスタシクリン（ＰＧＩ２）なしでは、血小板は、その凝集促進活性が制限される。多くの人は、望ましくない凝血事象を防止するために、低用量のアスピリンを維持される。アスピリンのバイオアベイラビリティは、投与経路によって大きく異なり、５００μＭのピークで単回５００ｍｇ用量のＩＶ、及び４４μＭで経口で同じ用量である。

ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。光透過凝集測定及びＴ－ＴＡＳ（登録商標）実験を、実施例４に従って行った。

血小板は、コラーゲン及びアラキドン酸刺激によって凝集する。アラキドン酸による刺激は、完全に阻害され得るが、コラーゲンによる刺激の凝集は、１００～４００μＭのアスピリンの濃度で部分的にのみ阻害され得る（図１６）。図１６は、血小板凝集を誘発した、コラーゲン（１０ｕｇ／ｍＬ）及びアラキドン酸（ＡＡ；５００ｕｇ／ｍＬ）を含むＰＲＰにおける光透過凝集測定を示し、この凝集は、試験した全ての用量のアスピリン（ＡＳＡ）によって阻害された。アスピリンは、アラキドン酸誘発性血小板凝集を完全に排除した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）上のＰＬチップシステムを使用して、剪断条件下での脈管構造中のコラーゲンの曝露によるインビトロでの血小板結合及び凝集を模倣した。血小板のこの作用は、１００及び５００μＭのアスピリンの存在下で大きく制限されたが、ＦＤＰＤの存在下では、少なくとも部分的に戻り得る（約２００，０００～４００，０００／μＬ、図１７）。図１７は、全血の曲線下面積測定を示し、ＰＬ Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）チップ上の血栓形成がアスピリンによって阻害され、ＦＤＰＤにより血栓形成が部分的に戻ったことを示す。

実施例４．プロトコル
ＦＤＰＤの生成。ＦＤＰＤを、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，４８６，６１７号（例えば、実施例１～５など）及び同第８，０９７，４０３号（例えば、実施例１～３など）に記載の手順と一致して調製した。

光透過凝集測定
血小板若しくはＦＤＰＤ又はその両方の組み合わせを含む血漿試料をキュベットに充填し、凝集測定チャンバに配置する。チャンバは、試料を加温し、一定の攪拌を提供する。凝集の開始は、トロンビン、ＡＤＰ、コラーゲン、及び血小板凝集を刺激することが知られている任意の薬剤に限定されない複数の種類の阻害剤によって行い得る。試料はまた、エクスビボとして採取されているか、又はインビトロで阻害剤を補充されている場合がある。機器は、２分間の刺激に先立って、最初に光透過を記録することによって、アッセイを開始する。次いで、目的の刺激剤を技術者により導入し、光透過における変化を経時的に記録する。光透過における増加は、血小板凝集における増加に対応する。

ＡＲチップを使用したＴ－ＴＡＳ（登録商標）による評価。ＡＲチップは、コラーゲン及び組織因子を含有する単一のチャネルを特徴とし、それらを使用して、凝血及び血小板機能を分析し得る。

Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）機器は、製造業者の指示に従って使用するために準備した。ＡＲチップ（Ｄｉａｐｈａｒｍａカタログ番号ＴＣ０１０１）及びＡＲチップカルシウムトウモロコシトリプシン阻害剤（ＣａＣＴＩ、Ｄｉａｐｈａｒｍａカタログ番号ＴＲ０１０１）を、室温に加温した。３００ｕＬの再水和されたＦＤＰＤを、１．７ｍＬの微量遠心管に移し、３９００ｇ×１０分間でペレットに遠心分離した。ＦＤＰＤペレットを、Ｇｅｏｒｇｅ Ｋｉｎｇ（ＧＫ）プールされた正常なヒト血漿、又は自己血小板を含むか若しくは含まない自己血漿中に、ＡｃＴ数（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＡｃＴ Ｄｉｆｆ ２ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｅｒ）によって決定される約１００，０００～４５０，０００／ｕＬの濃度に再懸濁させた。２０ｕＬのＣａＣＴＩを、ＧＫ血漿中の４８０ｕＬのＦＤＰＤ試料と、ピペットで穏やかに混合した。試料を充填し、製造業者の指示に従ってＴ－ＴＡＳ（登録商標）上で実行した。

ＰＬチップを使用したＴ－ＴＡＳ（登録商標）による評価
ＰＬチップは、ＡＲチップと同様に実行されるが、このチップは、コラーゲン単独でコーティングされている。

トロンビン生成
試薬の調製。トロンビン生成のために、以下のとおり、製造業者からの以下の材料を使用した：ＦｌｕＣａキット（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ、カタログ番号８６１９７）、トロンビンキャリブレータ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ、カタログ番号８６１９７）、ＰＲＰ試薬（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ、カタログ番号８６１９６）、ＯＣＴＯＰＬＡＳ（登録商標）、溶媒洗剤で処理されたヒトのプールされた血漿（Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ、カタログ番号８－６８２０９－９５２－０４）。全ての凍結試薬を、使用前に３７℃の水浴で解凍した。全ての試薬を、試薬ラベル上に印刷された体積を使用して、滅菌水で再水和した。再水和の約２分後、試薬を、バイアルを５回反転することによって混合し、そのため塊又は粉末は残っておらず、ボルテックスは使用しなかった。この手順を、再水和の約１０分後に繰り返した。全ての試薬を、室温で更に約１０分間インキュベートした（再水和後、合計約２０分間）。３０％のＯＣＴＯＰＬＡＳ（登録商標）溶液を、４．６６ｍｌのＦＤＰＤ対照緩衝液（表Ｂ）を２ｍｌのＯＣＴＯＰＬＡＳ（登録商標）と混合することによって調製した。

（表Ｂ）ＦＤＰＤ対照緩衝液

試料分析－プレートの調製及び試験。ＦＤＰＤを含有する実験のために、実験用ＦＤＰＤ及び参照ＦＤＰＤの各々について、ＦＤＰＤ希釈シリーズを生成した（典型的には、１μＬ当たり１９４．４Ｋ、６４．８Ｋ、２１．６Ｋ、及び７．２Ｋの希釈液を使用した；細胞数を、フローサイトメトリーによって決定する）。別途示されない限り、ＦＤＰＤを再水和した。最高濃度の希釈液（例えば、１９４．４ｋＦＤＰＤ）を、ＦＤＰＤ、ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）、及びＦＤＰＤ対照緩衝液を組み合わせることによって調製した。残りの希釈液シリーズを、ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）の連続１：３希釈によって調製した。各試験試料について、２０ｕＬのＰＲＰ試薬を、各試料ウェル（Ｉｍｍｕｌｏｎ ２ＨＢ Ｃｌｅａｒ、丸底９６ウェルプレート（ＶＷＲ、カタログ番号６２４０２－９５４））に添加し、２０ｕＬのトロンビンキャリブレータを、各キャリブレータウェルに添加した。各試料ウェル及びキャリブレータウェルに、ＦＤＰＤ希釈液シリーズの各々８０ｕＬを添加した。最後の希釈液まで継続する。次いで、プレートを、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ９６ウェル蛍光プレートリーダー（Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）内で１０分間インキュベートした。このインキュベーション段階中、４０μＬのＦｌｕＣａ基質を、１．６ｍｌの解凍されたＦｌｕｏ－Ｂｕｆｆｅｒに添加し、ボルテックスし、かつ溶液を水浴に戻すことにより、ＦｌｕＣａ溶液を調製した。培養が完了したら、製造業者の指示に従って、ＦｌｕＣａ溶液をＦｌｕｒｏｓｋａｎ機器に添加した。プレートの蛍光を、２０秒間隔で、かつ４０～４１℃の温度で、７５分間モニタリングした。

実施例５．
追加の実験を、カングレロール及びアスピリンを用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。光透過凝集測定、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）、及びトロンビン生成実験を、実施例４に従って行った。

血栓形成の回復に対するＦＤＰＤの効果を、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術及びＡＲチップを使用して評価した。図１８は、ＦＤＰＤ（１μＬ当たり２５０，０００個のＦＤＰＤの濃度で）、アスピリン（２００μＭ）、カングレロール（１μＭ）、抗インテグリンアルファ－２（ＣＤ４９Ｂ）抗体６Ｆ１（４０μｇ；製品／製造業者情報については、ｄｓｈｂ．ｂｉｏｌｏｇｙ．ｕｉｏｗａ．ｅｄｕ／ｉｎｔｅｇｒｉｎ－ａｌｐｈａ－２－ａｌｐｈａ２ｂｅｔａ１？ｓｃ＝７＆ｃａｔｅｇｏｒｙ＝－１０７を参照されたい）、及び抗ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体抗体ＡＰ２（２０ｕｇ／ｍＬ；製品／製造業者情報については、ｋｅｒａｆａｓｔ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔ／２０１０／ａｎｔｉ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－ｇｐｉｉｉａｇｐｉｉｂ－ｃｏｍｐｌｅｘ－ａｐ－２－ａｎｔｉｂｏｄｙを参照されたい）の様々な組み合わせで処理された全血の閉塞時間を示す。図１９は、未処理全血、及びＦＤＰＤ（１μＬ当たり２５０，０００個のＦＤＰＤの濃度で）、６Ｆ１（４０ｕｇ／ｍＬ、抗ＣＤ４９ｂ）、ＡＳＡ（アスピリン、２００ｕＭ）、及びカングレロール（１ｕＭ）を含有する混合物、又はそれらの組み合わせで処理された全血の経時的な閉塞を示す。

血栓形成の回復に対するＦＤＰＤの効果も、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）技術及びＰＬチップを使用して評価した。図２０は、緩衝液、アスピリン（５００μＭ）、又はアスピリン（５００μＭ）及びＦＤＰＤ（１μＬ当たり２５０，０００個のＦＤＰＤの濃度で）でのみ処理された全血の閉塞時間を示す。図２１は、全血、アスピリン（５００μＭ）で処理された全血、又はアスピリン（５００μＭ）及びＦＤＰＤ（２５０，０００／μＬ）の経時的な閉塞を示す。図２２及び図２３は、５００μＭのアスピリンの代わりに１００μＭのアスピリンを使用した同様の実験データを示す。

トロンビン生成に対するアスピリン処理（濃度）の効果を測定した。ＦＤＰＤを、ベビーアスピリンを毎日服用している患者からのＰＰＰ及び標準血漿（ＩＮＲ＝１）の濃度１４５０、１１５０、８５０、６５０、４５０、１５０、５０、及び０ｋ／ｕＬで評価した。図２４は、ＦＤＰＤの不在下でのアスピリン血漿のピークトロンビン値が、正常範囲（約４５ｎＭ、正常範囲は約６６～１６６ｎＭである）を下回ったが、ＦＤＰＤの添加により、使用された最も低いＦＤＰＤ濃度（５０ｋ／μＬ）であっても、正常範囲内に戻ったことを示す。値を、約８００ｋのＦＤＰＤで再び飽和させ、ＦＤＰＤの不在下で、この血漿の値の５倍の２２０ｎＭまで上昇（４５～２２０ｎＭに増加）させた。

実施例６．ＦＤＰＤは、カングレロールによって誘発される長期ＰＲＰ閉塞時間に拮抗した
追加の実験を、カングレロールを用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）を、実施例４に従って行った。

図２５Ａ及び図２５Ｂは、１００ｎｇ／ｍＬのカングレロール及びＡＤＰで処理された多血小板血漿が、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）フローシステム（コラーゲン及び組織因子でコーティングされたチャネル）上で、閉塞時間を１９分から２６分に延長したことを示す。１５０ｋ／μＬのＦＤＰＤの添加により、時間が減少して１５．３分に戻った。

実施例７．ランダムドナーの血小板（ＲＤＰ）ではないＦＤＰＤは、ＰＲＰにおいてチロフィバンによって誘発される延長閉塞時間に拮抗した
追加の実験を、チロフィバンを用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）を、実施例４に従って行った。ランダムドナーの血小板を、全血から調製した。

図２６Ａ及び図２６Ｂは、１００ｎｇ／ｍＬのチロフィバンで処理された多血小板血漿が、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）フローシステム（コラーゲン及び組織因子でコーティングされたチャネル）上で、閉塞時間を１８．４３分から閉塞なしに延長したことを示す。１５０ｋ／μＬのＦＤＰＤの添加により、時間が減少して１２．９４分に戻ったが、ＲＤＰは、同数では部分的にのみしか回復しなかった。

実施例８．ランダムドナーの血小板ではないＦＤＰＤは、ＰＲＰにおいてエプチフィバチドによって誘発される延長閉塞時間に拮抗した
追加の実験を、エプチフィバチドを用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）を、実施例４に従って行った。ランダムドナーの血小板を、全血から調製した。

図２７Ａ及び図２７Ｂは、９μＭのエプチフィバチドで処理された多血小板血漿が、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）フローシステム（コラーゲン及び組織因子でコーティングされたチャネル）上で、閉塞時間を１８．４３分から３０分超に延長したことを示す。１５０ｋ／μＬのＦＤＰＤの添加により、時間が減少して１１．５６分に戻ったが、閉塞は、同数のＲＤＰでは見られなかった。

実施例９．ＦＤＰＤは、ＰＲＰにおいてＡＰ２（抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ）によって誘発される延長閉塞時間に拮抗した
追加の実験を、ＡＰ２を用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）を、実施例４に従って行った。ランダムドナーの血小板を、全血から調製した。

図２８Ａ及び図２８Ｂは、１０μｇ／ｍＬのＡＰ－２で処理された多血小板血漿が、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）フローシステム（コラーゲン及び組織因子でコーティングされたチャネル）上で、閉塞時間を１８．４３分から３０分超に延長したことを示す。１５０ｋ／μＬのＦＤＰＤの添加により、時間が減少して１３．１４分に戻り、閉塞は、同数のＲＤＰでは１７．４３分で見られた。

実施例１０．ＦＤＰＤは、アスピリン療法の対象からのＰＲＰにおいて長期閉塞に拮抗した
追加の実験を、アスピリンを用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）を、実施例４に従って行った。ランダムドナーの血小板を、全血から調製した。対象は、標準用量の８１ｍｇ／日のアスピリンを服用していた。

図２９Ａ及び図２９Ｂは、アスピリン患者から採取した多血小板血漿が、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）フローシステム（コラーゲン及び組織因子でコーティングされたチャネル）上で、閉塞に失敗したことを示す。２００ｋ／μＬのＦＤＰＤの添加により、正常な閉塞時間～１６分に戻った。

実施例１１．ＦＤＰＤは、エクスビボのアスピリン多血小板血漿中のトロンビン生成を回復させる
追加の実験を、アスピリンを用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。トロンビン生成を、実施例４に従って行った。

図３０Ａは、ＰＲＰ試薬で刺激された正常なものに対するアスピリン患者からの多血小板血漿のトロンビン生成が、５０ｋ／μＬのＦＤＰＤで拮抗したことを示す。図３０Ｂは、ＦＤＰＤ（５０ｋ／μＬ）を含む３つの反復アスピリンエクスビボサンプリングにおける、正常なトロンビン産生からの変化及び戻り、ピーク産生までの時間、並びにラグタイムを示す。（ｎ＝３ トロンボソームロット、ｎ＝２ 個体）。

実施例１２．ＦＤＰＤは、ＮＳＡＩＤイブプロフェン療法の対象からのＰＲＰにおいて止血を回復させる
追加の実験を、イブプロフェンであるＮＳＡＩＤを用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。凝集測定及びＴ－ＴＡＳ（登録商標）を、実施例４に従って行った。

多血小板血漿を、８００ｍｇのイブプロフェンを服用している対象から採取した。図３１Ａは、アラキドン酸に対する応答における凝集の欠如が、ＰＲＰにおけるＮＳＡＩＤの存在を確認することを示す。図３１Ｂは、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）フローシステム（コラーゲン及び組織因子コーティングチャネル）上の閉塞を示し、イブプロフェン患者からのＰＲＰは閉塞を実証し、一方、ＡＤＰの添加は閉塞を消滅させた。１５０ｋ／μＬのトロンボソームの添加により、閉塞が回復した。

実施例１３．ＦＤＰＤ（登録商標）は、超薬理学的クロピドグレルによって処置されたＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスにおける出血時間を回復させる
追加の実験を、クロピドグレルを用いて行った。ＦＤＰＤを、実施例４の手順と一致して調製した。

マウスを、クロピドグレルにより５日間処置した。マウスに麻酔をかけ、尾の先端を切断した後、ＦＤＰＤを直ちに投与した。断尾から尾の出血が止まるまでの時間を、目視検査により記録した。

ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを、臨床用量の約３倍のクロピドグレルにより５日間処置し、次いで、断尾出血モデルにおいて評価した。出血時間（分）を、未処置９分に対し、クロピドグレル処置では１７．８分に延長した（データ図示せず）。８μＬ／グラムのＦＤＰＤ（２００μＬで１．８×１０＾９粒子／ｍＬ）による処置により、出血が１２．３１分に減少した（図３２）。

実施例１４．閉塞のチカグレロール及びカングレロール阻害のＦＤＰＤ拮抗の再現性
凍結乾燥ヒト血小板（ＬＨＰ）とも呼ばれるヒトフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を、実施例１５の手順に従って調製した。閉塞時間を測定するために、ＡＲチップを使用してＴ－ＴＡＳ（登録商標）実験を実施例４に従って行った。

ＦＤＰＤを含むか、又は含まない多血小板血漿（ＰＲＰ）の閉塞時間に対するカングレロール及びチカグレロールの効果を、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）アッセイを使用して評価した。薬剤の濃度は、以下のとおりであった：１μＭのカングレロール、５００ｎｇ／ｍＬのチカグレロール、１５０ｋ／μＬのＦＤＰＤ、及び２μＭのＡＤＰ。結果を図３３Ａ及び図３３Ｂに示す。アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）刺激ＰＲＰ試料は、１９．５±１．５分（ｎ＝４）で閉塞を示し、これは、カングレロール（ｎ＝４）で２８．０±３．０分、又はチカグレロール（ｎ＝５）処理で２８．０±３．０分に増加した（図３３Ａ～図３３Ｂ）。Ｐ２Ｙ１２阻害ＰＲＰへの１５０ｋ／μＬの凍結乾燥ヒト血小板の添加により、血栓形成までの時間がＰＲＰ単独よりも短縮され、カングレロール（ｎ＝３）の存在下では１５．５±０．５分であったのに対し、チカグレロール（ｎ＝５）の存在下では１７．５±１．５分であった（図３３）。各アッセイ当たりの試験数は、「（ｎ＝＿）」値として列挙されている。

これらの結果は、ヒトＦＤＰＤの存在下でのＴ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップ上の血小板の閉塞が、カングレロール及びチカグレロールの抗血小板効果の影響を受けないことを実証している。これらの結果は、カングレロール、チカグレロール、及び／又は同様の薬剤が与えられている患者に注入した場合、ヒトＦＤＰＤＳが期待される機能を維持するであろうことを示唆している。

実施例１５．血小板誘導体調製のタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）法
アフェレーシス血小板は、血小板希釈、血小板濃縮、及び血小板洗浄のプロセス工程を含む、標準的な操作手順に従ってタンジェンシャルフロー濾過を受けた。

血小板ドナー単位を最初に共通の血管にプールした。血小板は、処理中の血小板活性化を低減するために、酸化洗浄緩衝液（例えば、対照緩衝液）で最初に希釈され得るか、又は希釈されなくてもよい。血小板は、２つの処理経路を経ることができ、１）最終生成物濃度に濃縮される前に、所望の残留成分に到達するまで、対照緩衝液（例えば、ドナー血漿）で洗浄されるか、又は２）所望の残留成分に到達するまで、対照緩衝液で洗浄される前に、血小板を最終生成物濃度に濃縮されるか（例えば、ドナー血漿）のいずれかである。次いで、ＴＦＦ処理された血小板をバイアルに充填し、凍結乾燥し、熱処理する。

１つの特定のプロトコルは、以下のとおりである。

この実施例におけるＴＦＦプロセスの全ての工程について、緩衝液Ｆを使用した。このプロセスを、１８～２４℃の温度で行った。

緩衝液Ｆ

血小板を、Ｒｅｐｌｉｇｅｎ ＴＦＦカセット（ＸＰＭ４５Ｌ０１Ｅ）を用いて調製したＴＦＦ（ＰｅｎｄｏＴＥＣＨコントローラシステム（ＰｅｎｄｏＴＥＣＨ（登録商標）Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐｅｎｄｏｔｅｃｈ．ｃｏｍ）に装填した。ＴＦＦプロセスを、０．４５μｍの孔径を有する膜を使用して行った。血小板を等重量（±１０％）の緩衝液Ｆで希釈した。血小板を約２２５０×１０^３細胞／μＬ（±２５０×１０^３）に濃縮し、次いで約２透析濾過用量（ＤＶ）の緩衝液Ｆで洗浄した。標的血漿パーセンテージは、典型的には、１５％未満の相対血漿であった（血漿タンパク質含有量によって決定される）。血漿タンパク質の除去を、既知の相関に対して２８０ｎｍのＵＶ吸光度によりモニタリングした。

いくつかの場合では、試料は、約５１％の相対血漿体積、約８．１％の相対血漿体積、約６．０％の相対血漿体積、及び約１．３％の相対血漿体積に相関するＵＶ吸光度で収集された。低体積アリコートを、約６．０％以下の試料を用いて、各処理工程を通してサンプリングした。

洗浄後、細胞の濃度が２０００×１０^３細胞／μＬ（±３００×１０^３）でない場合、細胞を緩衝液Ｆで希釈するか、又はこの範囲内に入るように濃縮した。細胞を緩衝液Ｆと接触させる場合はいつでも、全ての状況下において、１８～２４℃の範囲の温度で行った。より明確にするために、細胞に緩衝液Ｆの試薬を１８～２４℃の範囲の温度で与えた。次いで、細胞を典型的にはフリーズドライ（すなわち、凍結乾燥）し、続いて、８０℃で２４時間加熱（熱処理）し、それにより、フリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を形成し、これは、Ｃｅｌｌｐｈｉｒｅ，Ｉｎｃ．によって調製された場合、臨床的使用又は商業的使用のために、ＴＨＲＯＭＢＯＳＯＭＥＳ（登録商標）とも呼ばれる。

ヒトＦＤＰＤを調製するために使用される凍結乾燥手順を、表ＬＡ２に提示する。

（表ＬＡ２）

トロンビン生成研究（ＴＧＰＵ）及び凝集研究などの研究を行うために、ＦＤＰＤを、典型的には、室温で１０分間にわたって水で再水和した。一般に、再水和体積は、乾燥の前に各バイアルを細胞で満たすために使用される体積に等しい。凍結乾燥後に加熱された（熱処理された）血小板誘導体は、焼成ＦＤＰＤとも称される。一方、凍結乾燥後に加熱（熱処理）されなかったＦＤＰＤは、非焼成ＦＤＰＤと称される。

粉末の形態で凍結乾燥後に得られるヒトＦＤＰＤは、例えば、適切な量の液体でバイアルを再水和することができる医師に、バイアル中の乾燥形態のヒトＦＤＰＤ（例えば、ＴＨＲＯＭＢＯＳＯＭＥＳ（登録商標））を提供するなど、商業用途に使用され得る。

実施例１６．ＦＤＰＤＳは、超薬理学的クロピドグレルによって処置されたＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスにおける出血時間を回復させる
ヒトＦＤＰＤを、実施例１５の手順と一致して調製した。

マウスを、５ｍｇ／ｋｇのクロピドグレルにより３日間処置した。マウスに麻酔をかけ、尾の先端を直径１ｍｍで切断し、暖かい生理食塩水に浸し、凝血する時間を記録した。動物の静脈又は動脈に、生理食塩水又は１．６×１０^９／ｋｇのＦＤＰＤを注射器で注射し、同時に尾を切断し、断尾試験を開始した。断尾から尾の出血が止まるまでの時間を、失血の停止の目視検査により記録した。

この実験の結果を図３４に示す。出血時間（秒）を、クロピドグレル処置では１６６１＋／－２５７．９秒に、未処置では７５８．６＋／－６２３．４秒に延長した。１．６×１０^９／ｋｇのＦＤＰＤＳでの処置により、出血が４１７．９＋／－１６６．６秒に減少した。一方向ＡＮＯＶＡソフトウェアを使用して、データを分析した。

これらの結果は、ヒトＦＤＰＤがクロピドグレル効果に耐性があり、マウス断尾モデルにおいて止血を回復させることを実証している。ヒトＦＤＰＤは、クロピドグレルで処置されている患者集団における出血を止めるための効果的な臨床ツールとなる可能性を有する。

実施例１７．ＦＤＰＤは、超薬理学的クロピドグレルによって処置されたニュージーランド白ウサギにおける出血時間を回復させる
追加の実験を、クロピドグレルで処置されたニュージーランド白ウサギを用いて行った。ヒトＦＤＰＤを、実施例１５の手順と一致して調製した。

ウサギを、２３ｍｇ／ｋｇのクロピドグレルにより５日間処置した。ウサギを麻酔し、耳を出血させ、凝固する時間を記録した。動物を処置し、静脈又は動脈に生理食塩水又は１．６×１０^９／ｋｇのヒトＦＤＰＤを注射し、同時に耳を出血させ、耳出血試験を開始した。耳の出血から出血が止まるまでの時間を、目視検査により記録した。

この実験の結果を図３５に示す。出血時間（秒）を、クロピドグレル処置では２０６．８＋／－１０４．２秒に、未処置では８７．１＋／－１８．２秒に延長した。１．６×１０^９／ｋｇのＦＤＰＤＳでの処置により、出血が４１７．９＋／－１６６．６秒に減少した（図３５）。一方向ＡＮＯＶＡを使用して、データを分析した。

これらの結果は、ヒトＦＤＰＤがクロピドグレル効果に耐性があり、ウサギ耳出血モデルにおいて止血を回復させることを実証している。凍結乾燥ヒト血小板は、クロピドグレルで処置されている患者集団における出血を止めるための有効な臨床ツールとなる可能性を有する。

実施例１８．２５ｎｇ／ｍＬのリバロキサバン処理ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）ＰＲＰ試薬の存在下でのトロンビン生成へのＦＤＰＤの寄与
ヒトＦＤＰＤを、実施例１５に記載の方法に従って調製した。この実施例で使用されるＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）血漿は、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．、１１７ Ｗ．Ｃｅｎｔｕｒｙ Ｒｏａｄ Ｐａｒａｍｕｓ，ＮＪ ０７６５２、ｗｗｗ．ｏｃｔａｐｈａｒｍａｕｓａ．ｃｏｍから入手可能な溶媒／洗剤処理されたプールされたヒト血漿である。

トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）を行って、（１）ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）中のトロンビン生成及び内因性トロンビン産生能を、血小板に富む血漿（ＰＲＰ）を用い、ＦＤＰＤ濃度（０、１０、２０、４０、８０、１６０）×１０^３／μＬを漸増的に増加させて、並びに（２）ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）中のトロンビン生成及び内因性トロンビン産生能を、血小板に富む血漿試薬（ＰＲＰ）、２５ｎｇ／ｍＬのリバロキサバンを用い、ＦＤＰＤ濃度（０、１０、２０、４０、８０、１６０）×１０^３／μＬを漸増的に増加させて検出した。リバロキサバンの２５ｎｇ／ｍＬの用量は、生理学的用量範囲内であり、トロンビン生成を阻害する有効用量である。

この実験の結果を、図３６Ａ及び図３６Ｂに示す。これらの結果は、ＦＤＰＤが低用量であっても、ＰＲＰ試薬を用いたＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）中の２５ｎｇ／ｍＬの用量のリバロキサバンの存在下で、ある程度のトロンビン生成を触媒し（図３６Ａ）、内因性トロンビン産生能を部分的に回復する（図３６Ｂ）ことができることを実証した。

実施例１９．ＦＤＰＤの添加は、２５ｎｇ／ｍＬのリバロキサバン処理全血（ＷＢ）の閉塞時間の部分的回復を示す
ＡＲチップ（コラーゲン及び組織因子Ｆ刺激剤）を使用して、総トロンビン形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ（登録商標））０１で閉塞時間を測定した。Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）０１（Ｄｉａｐｈａｒｍａ（登録商標）、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｉａｐｈａｒｍａ．ｃｏｍ）機器は、製造業者の指示に従って使用するために準備した。ＡＲチップ（Ｄｉａｐｈａｒｍａ番号１９００１）及びカルシウムトウモロコシトリプシン阻害剤（ＣａＣＴＩ、Ｄｉａｐｈａｒｍａカタログ番号ＴＲ０１０１）を、それぞれ３７℃又は室温に加温した。全血を、アッセイの開始の３０分前にクエン酸ナトリウムの管内に回収した。ＦＤＰＤＳを再水和させ、計数し（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＡｃＴ Ｄｉｆｆ ２ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｅｒ）、示される最終濃度で全血に添加した。リバロキサバン（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌカタログ番号１６０４３）を１００％ＤＭＳＯに溶解させて、１０ｕｇ／ｍＬの原液を作製し、示された最終濃度で試料に添加し、最終ＤＭＳＯ含有量を０．２５％にした。４８０ｕＬの試料を２０ｕＬのカルシウムＣＴＩ試薬と混合し、Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）０１上のＡＲチップ上で実行した。

ＦＤＰＤを、実施例１５の手順に従って調製した。ＡＲチップの一般的な方法及びＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）血漿を使用するＴＡＳ（登録商標）０１アッセイは、上記の実施例１８に記載されている。ＴＡＳ（登録商標）０１アッセイは、リバロキサバンなし、２５ｎｇ／ｍＬのリバロキサバン、並びに２５ｎｇ／ｍＬのリバロキサバン及び２０ｋ／μＬのＦＤＰＤを用いて実行した。

経時的な圧力を図３７に示すが、圧力の増加は閉塞を示す。結果は、リバロキサバン処理全血にＦＤＰＤを添加することによって、閉塞時間が部分的に回復したことを示す。

実施例２０．リバロキサバン処理ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）又はリバロキサバン処理新鮮ＰＲＰへのＦＤＰＤの添加は、Ｔｈｒｏｍｂｏｄｙｎａｍｉｃｓアナライザシステム（Ｔ２Ｔ）を使用したフィブリン及びトロンビン生成の回復を示す
Ｔｈｒｏｍｂｏｄｙｎａｍｉｃｓ（登録商標）アナライザシステム（Ｔ２Ｔ）（Ｄｉａｐｈａｒｍａ（登録商標）、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｉａｐｈａｒｍａ．ｃｏｍ）を使用して、トロンビン生成及びフィブリン形成を検出した。ヒトＦＤＰＤを、実施例１５の手順に従って調製した。

Ｔｈｒｏｍｂｏｄｙｎａｍｉｃｓの設定及び試料調製は、リン脂質試薬を添加しなかったことを除き、製造業者の推奨に従って行った。実験は、ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）又は新鮮ＰＲＰのいずれかを用いて行った。ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）及びＰＲＰを各々３００ｎｇ／ｍＬのリバロキサバンで２分間インキュベートし、ＦＤＰＤＳを試料に添加し、次いで試料を試薬１（Ｔ２Ｔアッセイの接触経路阻害剤及びトロンビン蛍光基質）に添加した。ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）の実行については２０ｋ／μＬのＦＤＰＤＳを添加し、ＰＲＰの実行については２ｋ／μＬのＦＤＰＤＳを添加した。試料を、機器プロトコルに従って、３７℃で３分間（ＰＲＰ）又は１５分間（ＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標））インキュベートした。インキュベーション後、試料を、ＴＦコーティングされたプラスチックインサートを含むキュベットに添加し、実行を開始した。洗剤処理血漿であるＯＣＴＡＰＬＡＳ（登録商標）に対して、新鮮な血小板を使用した場合の動的応答を観察するためには、新鮮ＰＲＰ実行における成分の濃度を低下させる。

この実験の結果は、リバロキサバン処理オクタプラス中のＦＤＰＤによるフィブリン及びトロンビン生成の回復を示した（図３８Ａ～図３８Ｃ）。結果はまた、内因性血小板の生理学的比率で、リバロキサバン処理新鮮ＰＲＰ試料（図３９Ａ～図３９Ｃ）中のフィブリン及びトロンビン生成の部分的回復を示した：臨床的に使用する場合に予想されるＦＤＰＤ ＦＤＰＤＳ ＦＤＰＤＳ。

実施例２１ ＦＤＰＤＳの添加は、臨床的に推奨される用量未満のプロタミンでヘパリン処理試料の凝血形成能力をレスキューする
この実験は、ヘパリン及びプロタミンの臨床的割合がＦＤＰＤ機能にどのように影響するかを評価した。ＦＤＰＤを、実施例１５の手順に従って調製した。凝固するまでの時間を測定するために活性化凝固時間（ＡＣＴ）アッセイを行い、トロンビン生成を測定するためにＴＧＡを行った。ＡＣＴを使用して最初のヘパリン滴定の実行を行い、異常な凝血時間に達するために必要な最小ヘパリン用量を見出した。結果は、異常な凝血形成に到達するために最低０．８Ｕ／ｍＬのヘパリンが必要であることを示した。

図４０は、ＡＣＴ試験を使用した抗凝固剤の存在下で凝固する時間に対するＦＤＰＤの効果を示す。活性化凝血時間は、ｘ軸に標識されたように、ヘパリン（Ｈ）及びプロタミン（Ｐ）を有するプールされた正常血漿を使用して測定した。１／２Ｐ、Ｐ、及び３／２Ｐは、それぞれ４、８、及び１２μｇ／ｍｌのプロタミン用量を表す。ＦＤＰＤ（図４０では「Ｔｓｏｍｅ」と称される）を、１０、２５、又は５０Ｋ／μｌで添加した。「０」Ｔｓｏｍｅと標識された試料は、プールされた正常血漿に添加された等体積の対照緩衝液を有していた。凡例中の「Ｋ」は、１０^３ＦＤＰＤＳを表す。全ての試料は重複して実行された。Ｎ＝２。統計的関連性を改善するために、実験を別の日に繰り返した。

図４１Ａ～図４１Ｃは、ＴＧＡを使用して、ＦＤＰＤがヘパリン及びプロタミンの存在下でトロンビン生成ピークを保持することを示す。図４１Ａは、１μＬ当たり５Ｋ及び５０Ｋの血小板でのＦＤＰＤによるアフェレーシス単位（ＡＰＵ）を比較した、プールされた正常血漿中のトロンビン生成に対する０．１Ｕヘパリンの効果を示す。図４１Ｂは、１μＬ当たり１０Ｋ及び５０Ｋの血小板でのＦＤＰＤで、４μｇ／ｍｌのプロタミン（推奨される拮抗用量の１／２）によって拮抗された０．８Ｕ／ｍＬのヘパリンの影響を示す。図４１Ａ及び図４１ＢのＴＧＡは、リン脂質及び組織因子の混合物を含有するＰＲＰ試薬によって開始される。図４１Ａ及び図４１Ｂの破線は、このアッセイで観察される典型的なトロンビンピークを示す。図４１Ｃは、ｘ軸に記載されるように、ヘパリン及びプロタミンで処理された試料のトロンビン生成のピーク高さを示す。空の（白色の塗りつぶし）バーは、対照緩衝液で希釈した試料を表し、塗りつぶされたバーは、ＦＤＰＤで処理された試料を表す。全ての試料は３連で実行された。統計的関連性を改善するために、実験を別の日に繰り返した。

この実験の結果は、ヘパリン処理試料中に臨床用量未満のプロタミンが存在する場合、ＦＤＰＤは、凝血するまでの時間（ＡＣＴ）の用量依存的な減少及びトロンビンピーク高さ（ＴＧＡ）の増加を課すことを実証している。

実施例２２．閉塞のアスピリン（ＡＳＡ）阻害のＦＤＰＤ拮抗の再現性
ヒトフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を、実施例１５の手順に従って調製した。ＡＲチップを使用してＴ－ＴＡＳ（登録商標）実験を実施例４に従って行った。

ＦＤＰＤを含むか、又は含まないＰＲＰの閉塞時間に対するアスピリンの効果を、Ｔ－ＴＡＳアッセイを使用して評価した。薬剤の濃度は、以下のとおりである：３０Ｋ／μＬのＰＲＰ、５００μＭのアスピリン、及び２０ｋ／μＬのＦＤＰＤ。結果を図４２に示す。ＰＲＰ試料は、２５：５６分のＰＲＰ単独時間に対して、アスピリン処置で３０分超の閉塞を示し、Ｐ２Ｙ１２阻害ＰＲＰへの２０ｋ／μＬのＦＤＰＤの添加は、ＰＲＰ単独よりも低い血栓形成までの時間を短縮し、アスピリンの存在下で２３：２９分であった（図４２）。

これらの結果は、ヒトＦＤＰＤの存在下でのＴ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップ上の血小板の閉塞が、アスピリンの抗血小板効果によって影響を受けないことを実証している。これは、アスピリン及び／又は同様の薬剤が与えられている患者に注入した場合、ヒトＦＤＰＤＳが期待される機能を維持するであろうことを示唆している。

実施例２３．閉塞のチカグレロール及びアスピリン（ＡＳＡ）併用阻害のＦＤＰＤ拮抗の再現性
ヒトフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を、実施例１５の手順に従って調製した。ＡＲチップを使用してＴ－ＴＡＳ（登録商標）実験を実施例４に従って行った。

ＦＤＰＤを含むか、又は含まないＰＲＰの閉塞時間に対するチカグレロール及びアスピリンを合わせた効果を、Ｔ－ＴＡＳアッセイを使用して評価した。薬剤の濃度は、以下のとおりである：５０Ｋ／μＬのＰＲＰ、１．５μｇ／ｍＬのチカグレロール、５００μＭのアスピリン、及び５０ｋ／μＬのＦＤＰＤ。結果を図４３に示す。併用チカグレロール及びアスピリン処理ＰＲＰへの２０ｋ／μＬのＦＤＰＤの添加は、併用チカグレロール及びアスピリン単独の存在下での３０分超の閉塞時間と比較して、血栓形成までの時間を１９：３６分に短縮した。

これらの結果は、ヒトＦＤＰＤの存在下でのＴ－ＴＡＳ（登録商標）ＡＲチップ上の血小板の閉塞効果が、チカグレロール及びアスピリンの組み合わされた抗血小板効果によって影響を受けないことを実証している。これは、併用チカグレロール及びアスピリン処理を受けている患者に注入した場合、ヒトＦＤＰＤＳが期待される機能を維持するであろうことを示唆している。

実施例２４．アゴニストの存在下及び新鮮な血小板の不在下ではＦＤＰＤは凝集することができない
既知の血小板凝集アゴニストの存在下でＦＤＰＤ凝集を観察するために、光透過凝集測定（ＬＴＡ）を使用した。ＦＤＰＤ凝集データを、新鮮な血小板の凝集データと比較した。

「ＴＦＦ－ＦＤＰＤ」とも称されるＦＤＰＤを、実施例１５に記載のＴＦＦ方法によって生成した。多血小板血漿（ＰＲＰ）中の新鮮な血小板を、クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）回収管（ＢＤ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ ＡＣＤ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ａ Ｂｌｏｏｄ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｔｕｂｅｓ参照番号３６４６０６）に回収した全血から調製した。Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ａｖａｎｔｉ Ｊ－１５Ｒ遠心分離機を使用して、ＡＣＤ－全血を１８０ｇで１５分間２２℃で遠心分離することによって多血小板血漿（ＰＲＰ）を調製した。ＡＣＤ－全血を２０００ｇで２０分間２２℃で遠心分離することによって、乏血小板血漿（ＰＰＰ）を調製した。

凝集測定研究のための試料調製のために、ＰＲＰをＰＰＰで２５０，０００ｐｌｔ／ｕＬの血小板濃度（ｐｌｔ数）に希釈した。Ｃｏｕｌｔｅｒ Ａｃ・Ｔ ｄｉｆｆ２血液分析装置を使用して、血小板数を測定した。実施例１５に記載のように、タンジェンシャルフロー濾過を使用して、凍結乾燥及び熱処理されたＴＦＦ ＦＤＰＤを調製した。３０ｍＬの細胞培養グレードの水（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号２５－０５５－ＣＩ）を使用して、ＦＤＰＤの３０ｍＬバイアルを再水和した。バイアルを、室温で合計１０分間インキュベートした。１０分間の再水和期間中、バイアルを０、５、及び１０分でゆっくりと回転させて、凍結乾燥物の溶解を促進した。本実施例による凝集測定研究を、新鮮な血小板の不在下で行った。したがって、凝集測定研究は、ＦＤＰＤの凝集能力のみを裏付けたが、共凝集能力は裏付けなかった。凝集測定研究用の試料調製のために、再水和したＦＤＰＤを緩衝液中で２５０，０００／μＬの血小板数まで希釈した。リストセチン凝集研究に使用したＦＤＰＤ試料調製物は、２０％クエン酸化血漿（Ｇｅｏｒｇｅ Ｋｉｎｇ Ｂｉｏ－Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．Ｐｏｏｌｅｄ Ｎｏｒｍａｌ Ｐｌａｓｍａ製品番号００１０－１）及び緩衝液で構成された。３７℃での光透過凝集測定（ＬＴＡ）（Ｂｉｏ／Ｄａｔａ ＰＡＰ－８Ｅ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｅｒカタログ番号１０６０７５）を使用して、２０μＭのＡＤＰ、１０μｇ／ｍＬのコラーゲン、２００μＭのエピネフリン（Ｈｅｌｅｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔカタログ番号５３６９からのＡＤＰ、コラーゲン、及びエピネフリン試薬）、０．５ｍｇ／ｍＬのアラキドン酸（Ｈｅｌｅｎａ Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅａｇｅｎｔカタログ）、１ｍｇ／ｍＬのリストセチン（Ｈｅｌｅｎａ Ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ ｆｏｒ Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙｓカタログ）、及び１０μＭのトロンビン受容体活性化因子ペプチド６（ＴＲＡＰ－６）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｔ１５７３－５ＭＧ）の最終濃度からのＦＤＰＤ（図４４Ａ）及びＰＲＰ試料（図４４Ｂ）の凝集応答を観察した。ＰＰＰ、緩衝液、又は２０％クエン酸化血漿試料を有する緩衝液を、それぞれ２０％クエン酸化血漿試料を有するＰＲＰ、ＦＤＰＤ、及びＦＤＰＤのブランクとして使用した。アゴニスト処置の前に、２２５μＬのＦＤＰＤ又はＰＲＰ試料を、攪拌棒を含む試験管内に逆ピペットした。次いで、試験管を、凝集計の非攪拌インキュベーションウェルに１分間配置した。次いで、試料を１分間攪拌インキュベーションウェルに配置した。次いで、試料を攪拌試験ウェルに配置し、凝集試験を開始した。ベースライン観察の１分後、試料をアゴニストで処理し、凝集応答を記録した。試験実行と同じ手順を使用して、２５μＬ緩衝液の陰性対照を全ての実行と同時に含めて、全ての試料群の自発的ベースライン凝集応答を決定した。

１．７ｍＬの微量遠心管内のＦＤＰＤ試料調製物を、室温で、２０μＭのＡＤＰ、０．５ｍｇ／ｍＬのアラキドン酸、１０μｇ／ｍＬのコラーゲン、２００μＭのエピネフリン、１ｍｇ／ｍＬのリストセチン、及び１０μＭのＴＲＡＰ－６又は２５μＬの緩衝液の最終アゴニスト濃度でアゴニストで処理した。ＦＤＰＤ数は、アゴニスト処理の前及び５分後に決定した。ＬＴＡによって測定した場合、ＡＤＰ（図４４Ｃ）、コラーゲン（図４４Ｄ）、エピネフリン（図４４Ｅ）、リストセチン（図４４Ｆ）、及びＴＲＡＰ－６（図４４Ｇ）は、ＴＦＦ ＦＤＰＤにおいて凝集応答を引き起こさなかった。前述のアゴニストからのＴＦＦ ＦＤＰＤの応答は、アゴニストなし又は緩衝液の陰性対照から得られるベースライン凝集値と同等であった。ＴＦＦ ＦＤＰＤをアラキドン酸（ＡＡ）で処理し、ＬＴＡによって観察した場合（図４４Ｈ）、見かけの凝集応答があったが、凝集測定キュベットの目視検査後、溶液が視覚的に透明になったことが観察され、凝集が観察されず、見かけの凝集応答がＦＤＰＤの溶解からであり、ＡＡ誘発性凝集ではなかったことを示した。ＴＦＦ ＦＤＰＤの細胞数による凝集の決定は、全てのアゴニストのＬＴＡ結果と同様の結果をもたらした。アゴニストの機能性は、新鮮なＰＲＰに対してＬＴＡを行うことによって確認された（図４４Ｂ）。ＡＤＰ、アラキドン酸、コラーゲン、エピネフリン、リストセチン、及びＴＲＡＰ－６は、ＰＲＰにおける強力な凝集応答を表す正常な凝集プロファイル及び大きさをもたらした。ＰＲＰにおけるエピネフリンからの凝集応答は低減されたが、エピネフリンは依然としてベースライン凝集を上回る凝集応答を誘引することができた。ＰＲＰにおける緩衝液の陰性対照は、アゴニストの添加の前にＰＲＰが活性化されなかったことを示した。凝集試験後のＰＲＰ試料の目視検査は、細胞溶解が起こらなかったこと、及び全てのアゴニストについて凝集キュベットにおいて血小板凝集が視覚的に観察されたことを示し、全ての凝集応答が血小板凝集からのものであったことを示した。前述のアゴニストの存在下で観察されたＦＤＰＤ及び新鮮なＰＲＰの凝集パーセンテージは、表６に記録されている。

（表６）

実施例２５．ＦＤＰＤは最大限に活性化される－ＴＲＡＰの存在下でのＦＤＰＤへのアネキシンＶの結合
ＴＦＦプロセスを使用して調製され、ＴＲＡＰ－６で処理されたＦＤＰＤを、ＦＤＰＤの表面上の活性化された血小板を示すホスファチジルセリン（ＰＳ）の存在について試験した。ＰＳの存在は、ＦＤＰＤに結合するアネキシンＶ（ＡＶ）の分析によって評価した。

実施例１５に記載のＴＦＦプロセスを使用して調製されたＦＤＰＤの１つの３０ｍＬバイアルを、３０ｍＬの細胞培養グレードの水（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号２５－０５５－ＣＩ）を使用して再水和した。水をバイアルに添加した後、バイアルを室温で１０分間インキュベートした。ケーキの完全な溶解を促進するために、バイアルの穏やかな回転を１０分間にわたって２分毎に行った。ＦＤＰＤが完全に再水和されたら、２つの４７５μＬのアリコートを、２つの別個の１．７ｍＬ微量遠心管に移した。第１の管内の試料に２５マイクロリットルのＨＥＰＥＳ修飾Ｔｒｙｏｄｅアルブミン緩衝液（ＨＭＴＡ）（Ｃｅｌｌｐｈｉｒｅ ＲＧＴ－００４）を添加して、ＴＲＡＰ－６なしでＦＤＰＤを生成した。２５マイクロリットルの４００μＭのトロンビン受容体活性化ペプチド６（ＴＲＡＰ－６）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ カタログ番号Ｔ１５７３－５ＭＧ）を第２の管に添加して、ＴＲＡＰ－６でＦＤＰＤを生成した。インキュベーション中のＴＲＡＰ－６の最終濃度は、２０μＭであった。両方のチューブを５回反転させて混合し、室温で１０分間インキュベートした。

ＨＭＴＡ緩衝液又はＴＲＡＰ－６とともにインキュベーションした後、１０μＬのＦＤＰＤ試料を１９０μＬのＨＭＴＡに添加することによって、試料を更に１：２０に希釈した。ＨＭＴＡとともにインキュベートされたＦＤＰＤ及びＴＲＡＰ－６とともにインキュベートされたＦＤＰＤのこれらの希釈された試料を、以下のように１．７ｍＬの微量遠心管内で染色した：未染色対照試料を、１０μＬのＦＤＰＤ及び２０μＬのＨＭＴＡを組み合わせることによって生成した。カルシウム不含対照試料を、１０μＬのＦＤＰＤ、５μＬのアネキシンＶ－ＡＣＰ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎカタログ番号５５０４７５）、及び１５μＬのＨＭＴＡを組み合わせることによって生成した。アネキシンＶ（ＡＶ）染色された試験試料を、１０μＬのＦＤＰＤ、５μＬのＡＶ－ＡＣＰ、及び９ｍＭのＣａＣｌ_２を補充した１５μＬのＨＭＴＡを組み合わせることによって生成した（Ｃｅｌｌｐｈｉｒｅ ＲＧＴ－０１２ロット番号ＬＡＢ－００４７－２１）。ＡＶ染色された試験試料中のＣａＣｌ_２の最終濃度は、３ｍＭであった。ＨＭＴＡとともにインキュベートされたＦＤＰＤ及びＴＲＡＰ－６とともにインキュベートされたＦＤＰＤの両方についての全ての染色試料を３連で生成した。試料を、光から保護された室温で２０分間インキュベートした。

インキュベーション後、５００μＬのＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）（Ｃｅｌｌｐｈｉｒｅ ＲＧＴ－０１７）を、全ての未染色対照及びカルシウム不含対照試料に添加した。３ｍＭのＣａＣｌ_２を添加した５００マイクロリットルのＨＢＳを、ＡＶ染色した試験試料に添加した。各試料から１００マイクロリットルを９６ウェルプレート内の個々のウェルに移し、試料をＡｇｉｌｅｎｔ Ｑｕａｎｔｅｏｎフローサイトメーターを使用して分析した。

ＴＲＡＰ－６への曝露あり、及びなしで、ヒトアフェレーシス血小板におけるＣＤ６２Ｐの発現を測定することによって、ＴＲＡＰ－６の活性を確認した。２つの４７５μＬアリコートのアフェレーシス血小板を、２つの別個の１．７ｍＬ微量遠心管に移した。第１の管内の試料に２５マイクロリットルのＨＭＴＡ緩衝液を添加して、ＴＲＡＰ－６なしでアフェレーシス血小板を生成した。２５マイクロリットルの４００μＭのＴＲＡＰ－６を第２の管に添加して、ＴＲＡＰ－６を用いてＦＤＰＤを生成した。インキュベーション中のＴＲＡＰ－６の最終濃度は、２０μＭであった。両方のチューブを５回反転させて混合し、室温で１０分間インキュベートした。

ＨＭＴＡ緩衝液又はＴＲＡＰ－６とともにインキュベーションした後、１０μＬのアフェレーシス血小板を１９０μＬのＨＭＴＡに添加することによって、試料を更に１：２０に希釈した。ＨＭＴＡとともにインキュベートされたアフェレーシス血小板及びＴＲＡＰ－６とともにインキュベートされたアフェレーシス血小板のこれらの希釈された試料を、以下のように１．７ｍＬの微量遠心管内で染色した：未染色対照試料を、１０μＬのアフェレーシス血小板及び２０μＬのＨＭＴＡを組み合わせることによって生成した。抗ＣＤ６２Ｐ染色された試験試料を、１０μＬのアフェレーシス血小板、５μＬの抗ＣＤ６２Ｐ－ＰＥ抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎカタログ番号５５０５６１、ロット番号６３２２９７６）、及び１５μＬのＨＭＴＡを組み合わせることによって生成した。ＨＭＴＡとともにインキュベートされたアフェレーシス血小板及びＴＲＡＰ－６とともにインキュベートされたアフェレーシス血小板の両方についての全ての染色試料を３連で生成した。試料を、光から保護された室温で２０分間インキュベートした。

インキュベーション後、５００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｃｏｒｎｉｎｇ カタログ番号２１－０４０－ＣＶ１）を全ての試料に添加した。各試料から１００マイクロリットルを９６ウェルプレート内の個々のウェルに移し、試料をＡｇｉｌｅｎｔ Ｑｕａｎｔｅｏｎフローサイトメーターを使用して分析した。

ＴＦＦプロセスを使用して製造されたＦＤＰＤを、ＴＲＡＰ－６又は緩衝液のいずれかとともにインキュベートし、アネキシンＶ（ＡＶ）で染色して、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の相対的存在を決定した。アフェレーシス血小板を使用して、ＴＲＡＰ－６活性を確認し（図４５Ａ及び表７）、ＴＲＡＰ－６への曝露後のＣＤ６２Ｐの発現の増加は、ＴＲＡＰ－６が血小板発現を促進することができることを裏付けていた。外膜リーフレット上のＰＳ発現は、血小板活性化の特徴であり、ＰＳの膜発現の増加は、より多くの量のＡＶ結合をもたらす。陰性対照として、未染色試料及びＡＶで染色したがカルシウムを添加しなかった試料をフローサイトメーターで分析した。未染色試料は蛍光シグナルをほとんど又は全く生成せず、ＦＤＰＤがＡＶを測定するために選択された波長で自己蛍光性ではないことを示していた（図４５Ｂ）。カルシウム不含対照試料もまた、蛍光シグナルをほとんど又は全く生成しなかった。ＰＳへのＡＶ結合はカルシウムイオンの存在に依存するため、カルシウム不含対照試料からのシグナルの欠如は、ＡＶ－ＡＣＰコンジュゲートが非特異的な様式でＦＤＰＤ膜と会合していなかったことを実証している。カルシウムの存在下でＡＶで染色した全ての試料は、未染色対照よりも平均して約６９５倍明るい強力な蛍光シグナルを提供した。この結果は、全てのＦＤＰＤ試料がＰＳを発現していた、又はＰＳを含んでいたことを示している。ＦＤＰＤをＴＲＡＰ－６とともにインキュベートしても、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定した場合、ＡＶ結合の顕著な増加は生じなかった（図４５Ｂ）。緩衝液とともにインキュベートしたＦＤＰＤ及びＴＲＡＰ－６とともにインキュベートしたＦＤＰＤの平均ＭＦＩ値は、それぞれ、６８，１７９及び６８，７８３であった（表８）。

（表７）

（表８）

ＴＦＦプロセスを使用して製造されたＦＤＰＤは、アネキシンＶ（ＡＶ）のＦＤＰＤへの結合によって明らかなように、膜上にホスファチジルセリン（ＰＳ）を含有することが示された。活性化された血小板へのＡＶの結合は、カルシウム依存性結合であり、したがって、再水和されたＦＤＰＤへのＡＶ結合のカルシウムイオン依存性は、ＡＶコンジュゲートが非特異的な様式でＦＤＰＤの膜と会合していなかったことを更に裏付けている。

ＴＲＡＰ－６は、ＣＤ６２Ｐ発現の増加によって明らかなように、アフェレーシス血小板を活性化することが示され、活性化された血小板へのＡＶの結合を増加させたが、ＦＤＰＤについてはそうではなかった。ＴＲＡＰ－６インキュベーションあり、又はなしでのＦＤＰＤは、同じ高レベルのＡＶ結合を示し、おそらくは、ＦＤＰＤが凍結乾燥及び／又は再水和プロセス中に最大限に活性化され、更なる刺激／活性化が不可能であるために、ＴＲＡＰ－６が、ＦＤＰＤについてのＰＳの更なる表面発現を促進しないことを示す。

実施例２６．ＦＤＰＤの表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ１）の存在
トロンボスポンジン（ＴＳＰ１）は、活性化された血小板の外膜を被覆することが典型的に見出される糖タンパク質であり、活性化することなくＦＤＰＤを被覆することが見出された。ＴＳＰ１の存在は、抗トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）抗体の蛍光によって検出した。

クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）中に回収された全血を１８０ｇで１０分間遠心分離することによって、新鮮な多血小板血漿（ＰＲＰ）を単離した。単離されたＰＲＰを、更に８２３ｇで１０分間再び遠心分離した。次いで、血漿を除去して廃棄し、血小板ペレットをＨＥＰＥＳ修飾Ｔｙｒｏｄｅアルブミン（ＨＭＴＡ）緩衝液中に再懸濁した。得られた洗浄後の血小板試料のアリコートを、２ｍＭのＧＰＲＰペプチド（ＢａＣｈｅｍカタログ番号Ｈ－１９９８．００２５）、２ｍＭのＣａＣｌ_２、０．５Ｕ／ｍＬのトロンビン（ＥＤＭ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号６０５１９０－１０００Ｕ）、及び０．５μｇ／ｍＬのコラーゲン（ＣｈｒｏｎｏＰａｒカタログ番号３８５）の存在下で、室温で１０分間血小板をインキュベートすることによって活性化した。洗浄後の血小板の別個のアリコートを、休止陰性対照として使用するために確保した。

ＦＤＰＤの全ての試料を、実施例１５に記載のＴＦＦプロセスを使用して製造した。この実施例で研究されたＦＤＰＤは、８０℃で２４時間凍結乾燥した後に加熱された焼成ＦＤＰＤであった。全てのバイアルを、適切な量の細胞培養グレードの水を使用して再水和した。水を添加した後、バイアルを室温で１０分間インキュベートした。ケーキの完全な溶解を促進するために、バイアルの穏やかな回転を１０分間にわたって２分毎に行った。再水和したら、各バイアルからのＦＤＰＤの試料を、休止及び活性化された新鮮な洗浄後の血小板アリコートの両方からの試料とともに、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号２１－０４０－ＣＶ）を使用して１：５００に３連で希釈した。希釈した試料をＱｕａｎｔｅｏｎフローサイトメーターで分析し、血小板及びＦＤＰＤの濃度を決定した。これらの濃度に基づいて、各ＦＤＰＤ又は新鮮な血小板試料のアリコートを、１マイクロリットル当たり１００，０００ＦＤＰＤの濃度に希釈した。

４μｇ／ｍＬの抗トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈカタログ番号ｓｃ－５９８８７ ＡＦ５９４）を含有する２０μＬのＨＭＴＡに、１０μＬの希釈ＦＤＰＤ又は血小板を添加することによって、ＦＤＰＤの各バイアル、並びに休止及び活性化された新鮮な血小板から染色された試料を生成した。２０μＬのＨＭＴＡに１０μＬの希釈ＦＤＰＤ又は血小板を添加することによって、未染色対照試料を生成した。全ての試料を、光から保護された室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、５００μＬのＰＢＳを全ての試料に添加した。各試料から１００マイクロリットルを９６ウェルプレート内の個々のウェルに移し、試料をＡｇｉｌｅｎｔ Ｑｕａｎｔｅｏｎフローサイトメーターを使用して分析した。

新鮮な血小板及びＦＤＰＤの未染色試料は、ほとんど又は全く蛍光シグナルを生成せず、試料がＴＳＰ－１の発現又は存在を測定するために選択された波長で自己蛍光性ではないことを示していた。フローサイトメトリーを使用して分析した場合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加によって示されるように、新鮮な血小板への抗ＴＳＰ－１抗体の結合は、コラーゲン及びトロンビンによる活性化後にわずかに増加した（１，２２３対３，３０６）。ＦＤＰＤ試料におけるＴＳＰ－１の発現又は存在は、ロット毎に変化し、平均ＭＦＩ値は９１，４４８であった（図４６）。試験された全てのＦＤＰＤ試料について、蛍光シグナルは、休止又は新鮮な血小板のいずれかによって生成されたシグナルよりも有意に高く、大量のＴＳＰ－１が再水和ＦＤＰＤの表面に結合され得ることを示していた。このデータは、活性化工程を必要としないＦＤＰＤが、ある特定の実施形態及び用途において活性化された血小板特性よりも優れている特性を示すことを示唆している。

実施例２７．ＦＤＰＤの表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在
クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）中に回収された全血を１８０ｇで１０分間遠心分離することによって、新鮮な多血小板血漿（ＰＲＰ）を単離した。単離されたＰＲＰを、更に８２３ｇで１０分間再び遠心分離した。次いで、血漿を除去して廃棄し、血小板ペレットをＨＥＰＥＳ修飾Ｔｙｒｏｄｅアルブミン（ＨＭＴＡ）緩衝液中に再懸濁した。得られた洗浄後の血小板試料のアリコートを、２ｍＭのＧＰＲＰペプチド（ＢａＣｈｅｍカタログ番号Ｈ－１９９８．００２５）、２ｍＭのＣａＣｌ_２、０．５Ｕ／ｍＬのトロンビン（ＥＤＭ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号６０５１９０－１０００Ｕ）、及び０．５μｇ／ｍＬのコラーゲン（ＣｈｒｏｎｏＰａｒカタログ番号３８５）の存在下で、室温で１０分間血小板をインキュベートすることによって活性化した。洗浄後の血小板の別個のアリコートを、休止陰性対照として使用するために確保した。ＦＤＰＤの全ての試料を、実施例１５に記載のＴＦＦプロセスを使用して調製した。この実施例で研究されたＦＤＰＤは、８０℃で２４時間凍結乾燥した後に加熱された焼成ＦＤＰＤであった。全てのバイアルを、適切な量の細胞培養グレードの水（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号２５－０５５－ＣＩ）を使用して再水和した。水を添加した後、バイアルを室温で１０分間インキュベートした。ケーキの完全な溶解を促進するために、バイアルの穏やかな回転を１０分間にわたって２分毎に行った。再水和したら、各バイアルからのＦＤＰＤの試料を、休止及び活性化された新鮮な洗浄後の血小板アリコートの両方からの試料とともに、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を使用して１：５００に３連で希釈した。希釈した試料をＱｕａｎｔｅｏｎフローサイトメーターで分析し、濃度を決定した。これらの濃度に基づいて、各ＦＤＰＤ又は新鮮な血小板試料のアリコートを、１マイクロリットル当たり１００，０００ＦＤＰＤの濃度に希釈した。

染色前に、抗フォン・ウィルブランド因子抗体（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓカタログ番号ＮＢＰ２－５４３７９ＰＥ）を１０倍に希釈した。１０μＬの希釈ＦＤＰＤ又は血小板を、１０μＬの希釈抗体及び１０μＬのＨＭＴＡに添加することによって、ＦＤＰＤの各バイアル、並びに休止及び活性化された新鮮な血小板から染色された試料を生成した。２０μＬのＨＭＴＡに１０μＬの希釈ＦＤＰＤ又は血小板を添加することによって、未染色対照試料を生成した。全ての試料を、光から保護された室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、５００μＬのＰＢＳを全ての試料に添加した。各試料から１００マイクロリットルを９６ウェルプレート内の個々のウェルに移し、試料をＡｇｉｌｅｎｔ Ｑｕａｎｔｅｏｎフローサイトメーターを使用して分析した。

新鮮な血小板及びＦＤＰＤの未染色試料は、ほとんど又は全く蛍光シグナルを生成せず、試料がｖＷＦの発現又は存在を測定するために選択された波長で自己蛍光性ではないことを示していた。フローサイトメトリーを使用して分析した場合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加によって示されるように、新鮮な血小板への抗ｖＷＦ抗体の結合は、コラーゲン及びトロンビンによる活性化後に増加した（４，７７１対１９，７１７）。ＦＤＰＤ試料におけるｖＷＦの発現又は存在は、ロット毎に変化し、平均ＭＦＩ値は１３，９９１であった（図４７）。試験された全てのＦＤＰＤ試料について、蛍光シグナルは、休止及び活性化された血小板によって生成されたシグナルの間であった。これは、ｖＷＦが再水和されたＦＤＰＤの表面に存在し、存在するｖＷＦの量が休止血小板に見られる量よりも多いことを示唆している。データは、活性化がない場合でも、ＦＤＰＤは、休止血小板よりも優れており、活性化された血小板と同様の特性を示すことを示唆している。

実施例２８．ＦＤＰＤ－損なわれた膜
凍結乾燥後、８０℃で２４時間加熱した（焼成ＦＤＰＤ）、又は加熱しなかった（非焼成ＦＤＰＤ）ＦＤＰＤの膜完全性を試験した。標準製剤の焼成及び非焼成ＦＤＰＤを、凍結乾燥前材料に対する前方散乱、及び安定した細胞内抗原、β－チューブリンに対する抗体の使用によって分析して、ＦＤＰＤがＩｇＧ（１５０ｋＤａ）に対して透過性であるかどうかを決定した。前方散乱は、レーザーの経路に沿ったレーザー散乱のフローサイトメトリー測定である。より大きな細胞はより多くの散乱光を生成するため、前方散乱（ＦＳＣ）は、細胞サイズの指標として一般的に使用される。しかしながら、前方散乱はまた、光学密度（すなわち、光透過）を介した試料の膜の完全性を示すことができ、同じサイズであるにもかかわらず、より少ない細胞質材料及び多孔質膜を有する細胞は、無傷である場合の同じ細胞よりも多くの光を透過する（より低いＦＳＣを有する）であろう。

安定した細胞内抗原、β－チューブリンに対する抗体の使用によって、ＦＤＰＤがＩｇＧ（１５０ｋＤａ）に対して透過性であるかどうかを決定するために、実施例１５のＦＤＰＤを研究した。新鮮な血小板、非焼成ＦＤＰＤ、及び焼成ＦＤＰＤを固定し、細胞透過化あり、及びなしで抗βチューブリンＩｇＧで染色した。新鮮な血小板は、透過化によるＩｇＧ結合の劇的な増加を示したが、焼成ＦＤＰＤ及び非焼成ＦＤＰＤの両方は、透過化に応答して変化を示さなかった（表９）。固定し、次いで０．２％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ１００で透過化したか、又は透過化せず、次いでフルオロフォアＡＦ５９４にコンジュゲートした抗βチューブリンＩｇＧで染色した新鮮な血小板及びＦＤＰＤからの結果。バックグラウンド蛍光のために未染色試料が含まれている。

（表９）

ＩｇＧ結合研究は、大きな分子が細胞膜を通過することができるように、ＦＤＰＤの膜の完全性が著しく損なわれていることを示唆している。更に注目すべきは、透過化が前方散乱値の減少を誘発し、同じサイズの粒子について、膜の完全性と光学密度との間の提案された関係を裏付けていることである。

更に、実施例１５に記載のＴＦＦ法によって調製されたＦＤＰＤの前方光散乱の平均強度を、期限内のヒト血小板アフェレーシス単位と比較した。方法は、以下に記載のとおりである。

ＦＤＰＤの全ての試料を、ＴＦＦプロセスを使用して製造した。全てのバイアルを、適切な量の細胞培養グレードの水（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号２５－０５５－ＣＩ）を使用して再水和した。水を添加した後、バイアルを室温で１０分間インキュベートした。ケーキの完全な溶解を促進するために、バイアルの穏やかな回転を１０分間にわたって２分毎に行った。再水和したら、各バイアルからのＦＤＰＤの試料を、期限内ヒト血小板アフェレーシス単休の両方からの試料とともに、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号２１－０４０－ＣＶ）を使用して１：５００に３連で希釈した。希釈した試料をＱｕａｎｔｅｏｎフローサイトメーターで取得し、濃度を決定した。これらの濃度に基づいて、各ＦＤＰＤ又はアフェレーシス血小板試料のアリコートを、ＨＥＰＥＳ修飾Ｔｙｒｏｄｅアルブミン（ＨＭＴＡ）緩衝液（Ｃｅｌｌｐｈｉｒｅ ＲＧＴ－００４）中で１マイクロリットル当たり１００，０００ＦＤＰＤの濃度に希釈した。

ＨＭＴＡ中の１０^６個の全細胞を含有するＦＤＰＤ及びヒトアフェレーシス血小板の未染色試料を、５００μＬのＰＢで希釈した。各試料から１００マイクロリットルを９６ウェルプレート内の個々のウェルに移し、試料をＡｇｉｌｅｎｔ Ｑｕａｎｔｅｏｎフローサイトメーターを使用して分析した。

平均強度を図４８に示す。フローサイトメトリーで測定された前方光散乱の平均強度は、アフェレーシス血漿と比較して、ＦＤＰＤでは明らかに低い（約５０％）ことが観察され得る。したがって、同じサイズであるにもかかわらず、より少ない細胞質材料及び多孔質膜を有する細胞は、無傷である場合の同じ細胞よりも多くの光を透過する（より低いＦＳＣを有する）であろうことを、表９の以前の結果とともに裏付けている。

全体的な結果は、膜の完全性がＦＤＰＤにおいて実質的に劣化することを示唆しており、血小板細胞内含有物が放出され（例えば、ＬＤＨ）、大きな分子が細胞性細胞質に入ることができる（例えば、抗β－チューブリンＩｇＧ）。ＦＤＰＤの形質膜は、凍結保存された血小板での凍結が重度の膜機能障害を誘発するには不十分であると思われるため、乾燥（昇華）又は再水和プロセスによって損傷を受ける可能性が高い。これらの結果はまた、ＦＤＰＤにおいて細胞の外部からのシグナル伝達が不可能であることを暗に意味し、これは（実施例２４で観察されるように）凝集応答の欠如によって裏付けられる。焼成は、光学密度の増加をもたらしたが、膜の完全性を有意に改善するとは思われなかった（例えば、ＩｇＧ β－チューブリン結合）。したがって、本実施例で考察される結果は、本明細書に開示される血小板誘導体が、損なわれた形質膜を有することを示している。

実施例２９．表面マーカー及びトロンビン生成
ＦＤＰＤバッチを、実施例１５に記載のＴＦＦ法によって生成し、フローサイトメトリーを使用して、細胞表面マーカーの発現、又は存在若しくは不在についてアッセイした。

フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ４１、ＣＤ６２、及びホスファチジルセリン（ＰＳ）の発現、又は存在若しくは存在についてＦＤＰＤを評価した。試料は、染色中に約２７０，０００／μＬのＦＤＰＤを含み、試料をサイトメーターで分析する前に、約１：３４に希釈した。ＦＤＰＤ試料を再水和させ、脱イオン水中で１：２に希釈した。抗ＣＤ４１の原液を、５２．４μＬのＨＭＴＡに４７．６μＬの抗体を添加することによって希釈した。１０μＬの希釈ＦＤＰＤを１０μＬのＨＭＴＡ及び１０μＬの希釈ＣＤ４１抗体に添加することによって、抗ＣＤ４１で染色した試料を作製した。１２μＬの抗ＣＤ６２を２３．８μＬの抗ＣＤ４１及び６４．２μＬのＨＭＴＡと組み合わせることによって、抗ＣＤ６２マスター混合物を調製した。アイソタイプ対照混合物を同じ様式で作製した。１０μＬの希釈ＦＤＰＤを２０μＬの抗ＣＤ６２マスターに添加することによって、抗ＣＤ６２で染色した試料を作製した。アイソタイプマスター混合物を使用して、同じ様式でアイソタイプ対照試料を作製した。１１．７μＬのＡＶを８３．３μＬの抗ＣＤ４１及び８０μＬのＨＭＴＡと組み合わせることによって、アネキシンＶ（ＡＶ）マスター混合物を調製した。５０ｍＭのＧＰＲＰを含有する２０μＬの希釈ＦＤＰＤを、１５ｍＭのＣａＣｌ_２及び２０μＬのＡＶマスター混合物を含有する２０μＬのＨＭＴＡに添加することによって、ＡＶで染色した試料を作製した。ＰＳへのＡＶ結合を防止するために、カルシウムを含まないＨＭＴＡを使用して、陰性ゲーティング対照試料を同じ様式で作製した。全ての試料を、室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、１ｍＬのＨＢＳを全ての試料に添加した。ＡＶ試験試料を希釈するために使用されるＨＢＳは、５ｍＭのＣａＣｌ_２を含有した。抗ＣＤ４１結合を使用して、目的の集団を特定した。ＣＤ６２及びＰＳの発現又は存在を、ＣＤ４１陽性集団内の抗ＣＤ６２及びＡＶ結合によって評価した。

糖タンパク質ＩＩｂ（ＧＰＩＩｂ、抗原ＣＤ４１としても知られる）の発現又は存在を、抗ＣＤ４１抗体（４．８μＬ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ部品番号ＩＭ１４１６Ｕ）を使用してアッセイした。アッセイしたＦＤＰＤは、ＣＤ４１陽性を示した（表１０、図４９）。

（表１０）

ホスファチジルセリン（ＰＳ）の発現又は存在を、アネキシンＶ（ＡＶ）（１．３μＬ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５５０４７５）を使用してアッセイした。ＡＶは、カルシウム依存性リン脂質結合タンパク質である。アッセイされたＦＤＰＤは、ＡＶ陽性を示した（表１１、図５０）。

（表１１）

Ｐ－セレクチン（ＣＤ６２Ｐとも称される）の発現又は存在を、抗ＣＤ６２Ｐ抗体（２．４μＬ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５５０８８８）を使用してアッセイした。アッセイしたＦＤＰＤは、ＣＤ６２陽性を示した（表１２、図５１）。

（表１２）

以下のプロトコルを使用して、組織因子及びリン脂質を含有するＰＲＰ試薬の存在下、４．８×１０^３ＦＤＰＤ／μｌでトロンビン生成を測定した。平均して、ＦＤＰＤ試料のトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）は、６０．３ｎＭであった。セファリンを陽性対照として使用した。（表１３、図５２）

試験した各バイアルについて、ＦＤＰＤの再水和試料を、対照緩衝液中のオクタプラスの３０％溶液を使用して、フローサイトメトリー粒子数に基づいて、１μＬ当たり７，２００個の粒子に希釈した。９６ウェルプレートにおいて、２０μＬのＰＲＰ試薬（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏカタログ番号８６１９６）及び８０μＬの希釈ＦＤＰＤを添加することによって、試料ウェルを生成した。２０μＬのトロンビンキャリブレータ試薬（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏカタログ番号８６１９７）を８０μＬの希釈ＦＤＰＤに添加することによって、キャリブレータウェルを生成した。プレートをプレートリーダーに装填し、暗所で４０℃で１０分間インキュベートした。試料のインキュベーション中、４０μＬのＦｌｕＣａ基質（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏカタログ番号８６１９７）を、１．６ｍＬのＦｌｕｏ－Ｂｕｆｆｅｒ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏカタログ番号８６１９７）に添加し、３７℃に温め、ボルテックスして混合することにより、ＦｌｕＣａ溶液を調製した。ＦｌｕＣａ溶液を分注シリンジに吸引し、２０μＬを各反応ウェルに機械的に分配し、各ウェルにおける最終ＦＤＰＤ濃度を１μＬ当たり４，８００個の粒子にし、トロンビン生成反応を開始した。トロンビン生成を、７５分間にわたり各ウェルで蛍光により測定した。

例示的な段階的プロトコルは、以下のとおりである。

ＣＡＴソフトウェアを開き、機器をセットアップし、ＰＲＰ試薬（組織因子及びいくつかのリン脂質を含む）、キャリブレータ、及びフルオロ緩衝液（ｆｌｕｏ－ｂｕｆｆｅｒ）及びフルオロ基質（ｆｌｕｏ－ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を製造業者のガイドラインに従って調製する。

オクタプラス及びＴＧＡ希釈緩衝液を、３７℃の水浴中で１０分間解凍する。

解凍したオクタプラスをＴＧＡ希釈緩衝液に添加し、３０％オクタプラスを含む緩衝液を作製する。

３０％オクタプラスミックスを使用して、再構成されたセファリンを１：５０に希釈し、陽性対照として使用する。

ＦＤＰＤを細胞培養グレードの水で１０分間再水和し、次いで３０％オクタプラスで希釈して７，２００ＦＤＰＤ／μＬにする。

マルチチャネルピペットを使用して、２０μＬのＰＲＰ試薬を各試験ウェルに添加する。２０μＬのキャリブレータを、各較正ウェルに添加する。

８０μＬの試料を、各試験及び較正ウェルに添加する。８０μＬの３０％オクタプラスを陰性対照ウェルに添加し、１：５０のセファリンを陽性対照ウェルに添加する。

プレートをトレイに挿入し、４０℃で１０分間インキュベートする。インキュベーション後、フルオロ緩衝液及びフルオロ基質混合物（トロンビンにより切断されると、蛍光シグナルを生成する、蛍光標識ペプチドを含む）を活性ウェルに分配する。

プレートを、２０秒間隔で７５分間読み取り、完全なトロンビン生成プロファイルをキャプチャする。

（表１３）

これらのアッセイからのデータを、表１４に要約する。

（表１４）

^１フローサイトメトリー前方散乱上のサイジングビートを使用して評価した粒子径。

実施例３０．微粒子含有量の低減
動的光散乱を使用して、実施例１５に従って調製されたＦＤＰＤ（凍結乾燥されていない）と比較したヒト期限内保存血小板（ｈＩＤＳＰ）の微粒子含有量を比較した。結果を、図５３Ａ～図５３Ｃ及び表１５に示す。図５３Ａ～図５３Ｃは、各データ点の強度の合計が１．０に等しくなるように、相対強度に正規化されたヒストグラムである。例えば、特定のデータ点が０．１のｙ軸値を有する場合、データ点は、典型的には、試料の散乱強度の１０％を構成すると解釈され得る。

ＦＤＰＤのバッチを製造するために使用されるアフェレーシス単位のプールを分析のために作製した。この試料の種類は、「ｈＩＤＳＰ」として示される。動的光散乱（ＤＬＳ、Ｔｈｒｏｍｂｏｌｕｘ－Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｔｅｇｒａ）分析のために、このｈＩＤＳＰ（ヒト期限内保存血小板）プールの１ｍＬのアリコートを採取した。次いで、このアリコートからの試料を毛細管に収集し、ＤＬＳ機器に挿入した。毛細管は、温度及び動きを平衡化させるために、機器内に１分間静置された。機械の内部温度は３７℃である。１分間の平衡化後、試料の粘度設定を選択した。ＤＬＳ装置には、アフェレーシス単位など、血漿中の試料の粘度設定が組み込まれている。この粘度設定は、ｈＩＤＳＰ試料に使用された。この設定の粘度は、１．０６０ｃＰ（センチポワズ）である。血漿粘度設定を選択した後、試料を分析した。同じｈＩＤＳＰアリコートから、２番目及び３番目の試料を毛細管に収集し、このｈＩＤＳＰプロトコルを用いて分析し、３連分析を行った。次いで、微粒子パーセンテージをデータから決定した。「Ｐｒｅ－Ｌｙｏ」試料は、ＦＤＰＤ製造プロセスからのプロセス中の試料である。この試料の種類は、凍結乾燥の直前に採取された材料である。ＤＬＳでこれらの試料を分析するために、試料の粘度測定を行った。粘度計（Ｒｈｅｏｓｅｎｓｅ μＶＩＳＣ）には、試料をＤＬＳ機器の温度（３７℃）にするために使用されるオーブンが組み込まれている。試料の粘度分析の前に、オーブンを３７℃に加熱しなければならない。ｐｒｅ－ｌｙｏ試料の粘度を決定するために、４００～３５０μＬの試料をシリンジに収集し、粘度計に挿入した。試料を粘度計に挿入した後、機器の温度は再び３７℃に達する必要がある。オーブンが３７℃に達した後、４００μＬに設定された「測定量」を除いて、全ての設定をＡＵＴＯにして試料を分析した。この粘度は、同じ試料のＤＬＳ測定に使用した。動的光散乱（ＤＬＳ、Ｔｈｒｏｍｂｏｌｕｘ－ＬｉｇｈｔＩｎｔｅｇｒａ）分析のために、このｐｒｅ－ｌｙｏ試料の１ｍＬのアリコートを採取した。次いで、このアリコートからの試料を毛細管に収集し、ＤＬＳ機器に挿入した。毛細管は、温度及び動きを平衡化させるために、機器内に１分間静置された。機械の内部温度は３７℃である。１分間の平衡化後、以前に測定した粘度をＤＬＳ機器の粘度設定に入力した。粘度を入力した後、試料を分析した。同じｐｒｅ－ｌｙｏアリコートから、２番目及び３番目の試料を毛細管に収集し、このＰｒｅ－Ｌｙｏプロトコルを用いて分析し、３連分析を行った。次いで、微粒子パーセンテージをデータから決定した。

ＦＤＰＤを標準プロトコルに従って再水和させ、ＳｅｒａＳｕｂ（ＣＳＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）及びＡＣＤの混合物中で１：５に希釈した。ＳｅｒａＳｕｂ／ＡＣＤ希釈液は、ＳｅｒａＳｕｂ中のＡＣＤの１：９の希釈液からなる。ＦＤＰＤの１：５希釈液の１ｍＬを、ＤＬＳによる分析のために調製した。ＦＤＰＤ希釈液の試料を毛細管に収集し、ＤＬＳ機器に挿入した。毛細管は、温度及び動きを平衡化させるために、機器内に１分間静置された。機械の内部温度は３７℃である。１分間の平衡化後、試料の粘度設定を選択した。試料に使用した粘度は、１．２００ｃＰであった。粘度を入力した後、試料を分析した。２番目、３番目、及び４番目の試料を毛細管に収集し、このＦＤＰＤプロトコルを用いて分析し、４連分析を行った。次いで、微粒子パーセンテージをデータ（及び該当する場合は血小板半径）から決定した。

（表１５）

追加の実験では、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、実施例１５に従って調製された再水和ＦＤＰＤと比較したヒト期限内保存血小板（ｈＩＤＳＰ）の微粒子含有量を比較した。結果を、図５４Ａ～図５４Ｃ及び表１６に示す。

（表１６）

実施例３１．９Ｆ９及びＰＡＣ－１結合
活性化された血小板の凝集は、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体の形成によって媒介され、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体は、フィブリノゲン（第１因子とも称される）に結合し、凝血を形成し得る。ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａは、ＣＤ４１／ＣＤ６１複合体としても知られる血小板フィブリノゲン受容体である。このプロセスでは、ＡＤＰは、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体の活性型を促進する。抗体９Ｆ９は、細胞膜に関連するフィブリノゲンに結合する。したがって、細胞膜上のフィブリノゲンの存在は、凝血を形成することができるＦＤＰＤを示す。

実施例１５に従って調製されたＦＤＰＤのバイアルを、１０ｍＬの脱イオン水を使用して再水和した。ＦＤＰＤのアリコートを、ＨＭＴＡ（ＨＥＰＥＳ修飾Ｔｙｒｏｄｅアルブミン）を使用して、１×１０^５粒子／μＬの最終濃度に希釈した。試料を、表１７に示すように調製した。２０μＬのＨＭＴＡに１０μＬの希釈ＦＤＰＤを添加することによって、未染色試料を調製した。１０μＬの希釈ＦＤＰＤを１０μＬのアイソタイプ対照抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５５５７４８）及び１０μＬのＨＭＴＡに添加することによって、ＦＩＴＣアイソタイプ対照試料を調製した。１０μＬの希釈ＦＤＰＤを１０μＬの９Ｆ９抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号３４０５０７及び１０μＬのＨＭＴＡに添加することによって、９Ｆ９で染色した試料を調製した。１０μＬの希釈ＦＤＰＤを５μＬのアイソタイプ対照抗体及び１５μＬのＨＭＴＡに添加することによって、ＰＡＣ－１で染色した試料を調製した。全ての試料を、反応混合物当たり合計１×１０^６個の粒子を使用して２連で調製した。試料を、開放光から離して２０分間室温でインキュベートした。インキュベーション後、全ての試料を１ｍＬのＨＢＳで希釈し、ＡＣＥＡ ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーターを使用して分析した。ＰＡＣ－１によって生成された蛍光シグナルを使用して、結合したフィブリノゲンなしで活性化ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体の発現又は存在を決定した。９Ｆ９からの蛍光シグナルを使用して、ＦＤＰＤ上の表面受容体へのフィブリノゲンの結合を決定した。

ＨＴＭＡ（ＨＥＰＥＳ修飾Ｔｙｒｏｄｅアルブミン）

（表１７）

試料をフローサイトメトリーによってアッセイし、再水和後に表面結合フィブリノゲンが存在することを実証した（図５５）が、抗ＰＡＣ－１抗体は有意な結合を示さない（図５６）。これは、ＰＡＣ－１が同じ複合体に結合するため、ＴＦＦによって調製されたＦＤＰＤが、ＧＰＩＩｂ／ＧＰＩＩＩａの活性型に結合したフィブリノゲンを含むという更なる証拠である。

前述の説明は、本発明の好ましい実施形態を対象とするが、他の変形及び修正が、当業者には明らかであり、かつ本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく行われ得ることに留意されたい。更に、本発明の１つの実施形態に関連して記載される特徴は、上記に明示的に記載されていない場合であっても、他の実施形態と併せて使用され得る。更に、当業者は、上記で考察されるような発明が、異なる順序の工程で、及び／又は開示されるものとは異なる構成のハードウェア要素を用いて実践され得ることを容易に理解するであろう。したがって、本発明はこれらの好ましい実施形態に基づいて記載されているが、ある特定の修正、変形、及び代替的な構成が、本発明の趣旨及び範囲内に留まる一方で、明らかであることは、当業者には明らかであろう。そのように特許請求される本発明の実施形態は、本明細書に本質的に又は明示的に記載され、有効である。したがって、本発明の範囲及び境界を決定するために、添付の特許請求の範囲を参照すべきである。

Claims (72)

1. 抗血小板剤を投与されているか又は投与されたことがある対象における凝固障害を治療するためのフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物であって、
   前記治療が、
   （ａ）投与前評価において、１つ以上の凝血パラメータについて異常値を前記対象が有すると決定することと、
   （ｂ）（ａ）の後に、その必要がある対象に、前記対象の出血の可能性が低減されるように、前記ＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することと
   を含み、
   それによって前記凝固障害を治療する、
   前記組成物。
2. 抗凝固剤を投与されているか又は投与されたことがあることの結果として出血の可能性が増加した対象における凝固障害を治療するためのフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物であって、
   前記治療が、
   出血の可能性が増加した前記対象に、前記対象の前記出血の可能性が低減されるように、前記ＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することであって、
   アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下でＦＤＰＤの集団中の前記ＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を、前記ＦＤＰＤを含む前記組成物が含む、前記投与すること
   を含み、
   それによって前記凝固障害を治療する、
   前記組成物。
3. 前記治療が、前記投与の前に、前記対象に抗血小板剤が投与されたと決定することを更に含む、請求項２に記載の組成物。
4. 対象における凝固障害を治療するためのフリーズドライ血小板誘導体（ＦＤＰＤ）を含む組成物であって、
   前記治療が、以下：
   その必要がある対象に、前記対象の出血の可能性が低減されるように、前記ＦＤＰＤを含む組成物の有効量を投与することであって、
   抗血小板剤及び血小板機能を低下させる第２の薬剤を、前記対象が投与された、かつ
   前記抗血小板剤及び前記第２の薬剤の投与の結果としての出血の可能性の増加が理由で、前記対象にはその必要がある、
   前記投与すること
   を含み、
   それによって前記凝固障害を治療する、
   前記組成物。
5. 前記治療が、前記ＦＤＰＤを含む組成物の前記投与の前に、前記抗血小板剤及び血小板機能を低下させる前記第２の薬剤が前記対象に投与されたと決定することを更に含む、請求項４に記載の組成物。
6. 前記治療が、前記フリーズドライ血小板誘導体を含む組成物の前記投与の前の投与前評価において、１つ以上の凝血パラメータについて異常値を前記対象が有すると決定することを更に含む、請求項２～５のいずれか一項に記載の組成物。
7. 前記抗血小板剤が、第１の抗血小板剤であり、前記第２の薬剤が、第２の抗血小板剤である、請求項４に記載の組成物。
8. 前記第１の抗血小板剤及び前記第２の抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートから選択される各々異なる抗血小板剤である、請求項７に記載の組成物。
9. 前記第１の抗血小板剤及び前記第２の抗血小板剤が、異なる作用機序を有する、請求項７に記載の組成物。
10. 前記第１の抗血小板剤及び前記第２の抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートから選択される各々異なる抗血小板剤である、請求項９に記載の組成物。
11. 前記抗血小板剤が、アスピリン、カングレロール、チカグレロール、クロピドグレル、プラスグレル、エプチフィバチド、チロフィバン、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、チクロピジン、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートから選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
12. 前記抗血小板剤が、カングレロール、チカグレロール、アブシキシマブ、テルトロバン、ピコタミド、エリノグレル、イブプロフェン、ボラパキサール、アトパキサール、シロスタゾール、プロスタグランジンＥ１、エポプロステノール、ジピリダモール、トレプロスチニルナトリウム、及びサルポグレラートから選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
13. アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下でＦＤＰＤの集団中の前記ＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤの集団を、前記ＦＤＰＤを含む組成物が含む、請求項１及び３～５のいずれか一項に記載の組成物。
14. 前記ＦＤＰＤが、１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
15. 前記ＦＤＰＤの少なくとも５０％が、ＣＤ４１陽性ＦＤＰＤであり、前記ＣＤ４１陽性ＦＤＰＤの５％未満が、０．５μｍ未満の直径を有する微粒子であり、前記ＦＤＰＤが、１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
16. 前記抗血小板剤が、ＣＤ４１／ＣＤ６１複合体を標的とする、請求項１５に記載の組成物。
17. 前記ＦＤＰＤの少なくとも７５％が、ＣＤ４１陽性ＦＤＰＤである、請求項１６に記載の組成物。
18. 前記抗血小板剤が、アブシキシマブ、エプチフィバチド、及びチロフィバンのうちの１つ以上から選択される、請求項１６に記載の組成物。
19. アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下でＦＤＰＤの集団中の前記血小板誘導体の１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があり、かつ
    超活性化血小板の１つ以上の特徴を有する、
    ＦＤＰＤの集団を、前記ＦＤＰＤを含む組成物が含み、前記特徴が、
    Ａ）休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、前記ＦＤＰＤの表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）の存在、
    Ｂ）休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、前記ＦＤＰＤの表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在、及び
    Ｃ）アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較してアゴニストの存在下での前記血小板活性化マーカーの前記発現を増加させることができないこと
    から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
20. 前記ＦＤＰＤを含む組成物が、ＣＤ４１陽性血小板誘導体を含むＦＤＰＤの集団を含み、
    前記集団が、アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で前記集団中の前記ＦＤＰＤの１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があるＦＤＰＤを含み、
    前記ＦＤＰＤが、アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較して前記アゴニストの存在下での前記血小板活性化マーカーの前記発現を増加させることができず、
    前記ＦＤＰＤが、１０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力を有し、かつ
    ＣＤ４１陽性ＦＤＰＤの５％未満が、０．５μｍ未満の直径を有する微粒子である、
    請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
21. アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下でＦＤＰＤの集団中の前記血小板誘導体の１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向があり、かつ
    休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、前記ＦＤＰＤの表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）の存在、及び
    休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、前記ＦＤＰＤの表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在
    のうちの１つ又は両方を更に有する
    ＦＤＰＤの集団を、前記ＦＤＰＤを含む組成物が含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
22. 前記ＦＤＰＤを含む組成物がＦＤＰＤの集団を含み、前記ＦＤＰＤの集団が、以下：
    ＣＤ４１陽性血小板誘導体であって、前記ＣＤ４１陽性血小板誘導体の５％未満が、０．５μｍ未満の直径を有する微粒子である、前記ＣＤ４１陽性血小板誘導体と、
    アゴニストを含むが血小板を含まない凝集条件下で前記集団中の前記血小板誘導体の１０％以下が凝集するような低減された凝集する傾向、
    アゴニストの不在下での血小板活性化マーカーの発現と比較して前記アゴニストの存在下での前記血小板活性化マーカーの前記発現を増加させることができないこと、
    休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、前記血小板誘導体の表面上のトロンボスポンジン（ＴＳＰ）の存在、
    休止血小板の表面上よりも高いレベルでの、前記血小板誘導体の表面上のフォン・ウィルブランド因子（ｖＷＦ）の存在、及び
    １０^６個の血小板誘導体当たり少なくとも１．５トロンビン生成効力単位（ＴＧＰＵ）の効力
    を有する血小板誘導体と
    を含む、血小板誘導体の集団
    を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
23. 前記ＦＤＰＤが、前記対象に投与されたか又は投与されている抗血小板拮抗物質によってターゲティングされた受容体を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
24. 前記ＦＤＰＤを含む組成物の前記有効量が、１．０×１０^７～１．０×１０^１１／前記対象ｋｇである、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
25. 前記ＦＤＰＤを含む組成物の前記有効量が、１．６×１０^７～５．１×１０^９／前記対象ｋｇである、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
26. 前記ＦＤＰＤを含む組成物の前記有効量が、前記対象１ｋｇ当たり２５０～５０００ＴＧＰＵの効力を有する量である、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
27. 前記凝固障害を治療することが、前記対象において正常な止血が回復するように、前記対象の前記出血の可能性を低下させる、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
28. 実施された場合の出血の可能性の投与後評価が正常又は異常な結果をもたらすかどうかとは無関係に、前記ＦＤＰＤを含む組成物が、前記対象の前記出血の可能性を低減することができるという特性を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
29. 実施された場合の出血の可能性の投与後評価が正常又は異常な結果をもたらすかどうかとは無関係に、正常な止血が前記対象において回復するように、前記ＦＤＰＤを含む組成物が、インビトロ臨床検査において、１つ以上の凝血パラメータについて異常値を有する対象の出血の可能性を低減することができるという特性を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
30. 前記第２の薬剤が、抗凝固剤ではない、請求項４又は５又は７～１０のいずれか一項に記載の組成物。
31. 前記抗血小板剤の投与が、前記組成物の投与時に停止される、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
32. 前記抗血小板剤の投与が、前記組成物の投与後少なくとも１日にわたって継続される、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
33. 前記対象が、手術中の凝血パラメータの１つ以上の投与前評価について異常な結果を有すると特定される、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
34. 前記手術が、緊急手術である、請求項３３に記載の組成物。
35. 前記手術が、予定された手術である、請求項３３に記載の組成物。
36. 前記１つ以上の凝血パラメータが、出血の評価を含む、請求項６に記載の組成物。
37. 前記出血の評価が、世界保健機関（ＷＨＯ）出血スケールに基づいて行われる、請求項３６に記載の組成物。
38. 前記投与の前に、前記対象が、前記ＷＨＯ出血スケールに基づいてグレード２、３、又は４の出血を有する、請求項３７に記載の組成物。
39. 前記投与の後に、前記対象が、前記ＷＨＯ出血スケールに基づいてグレード０又は１の出血を有する、請求項３８に記載の組成物。
40. 前記投与の後に、前記対象が、前記ＷＨＯ出血スケールに基づいて、前記投与の前よりも１グレード低い出血を有する、請求項３７に記載の組成物。
41. 前記投与の後に、前記対象が、前記ＷＨＯ出血スケールに基づいて、前記投与の前よりも２グレード低い出血を有する、請求項３７に記載の組成物。
42. 前記投与の後に、前記対象が、前記ＷＨＯ出血スケールに基づいて、前記投与の前よりも３グレード低い出血を有する、請求項３７に記載の組成物。
43. 前記１つ以上の凝血パラメータの前記評価が、トロンボエラストグラフィー（ＴＥＧ）を含み、ＴＥＧの異常な結果が得られる、請求項６に記載の組成物。
44. 前記ＴＥＧの異常な結果が、約５０ｍｍ未満の最大振幅（ＭＡ）を含む、請求項４３に記載の組成物。
45. 前記投与の後に、前記対象が、少なくとも５ｍｍ、１０ｍｍ、１５ｍｍ、２０ｍｍ、又はそれ以上のＭＡの増加を有する、請求項４４に記載の組成物。
46. 前記投与の後に、前記対象が、正常なＭＡを有する、請求項４４に記載の組成物。
47. 前記ＴＥＧの異常な結果が、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）約８５％未満のパーセント凝集を含む、請求項４３に記載の組成物。
48. 前記投与の後に、前記対象が、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）少なくとも２パーセントポイント、３パーセントポイント、５パーセントポイント、８パーセントポイント、１０パーセントポイント、１２パーセントポイント、又はそれ以上のパーセント凝集の増加を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
49. 前記投与の後に、前記対象が、（１ｍｍｏｌ／Ｌのアラキドン酸の存在下で）正常なパーセント凝集を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
50. 前記ＴＥＧが、アデノシン二リン酸誘発性血小板－フィブリン凝血強度を評価するために使用される、請求項４３に記載の組成物。
51. 前記ＴＥＧが、アラキドン酸誘発性血小板－フィブリン凝血強度を評価するために使用される、請求項４３に記載の組成物。
52. １つ以上の凝血パラメータの前記評価が、Ｐ２Ｙ１２反応単位（ＰＲＵ）及び／又はアスピリン反応単位（ＡＲＵ）試験を使用して測定され、異常なＰＲＵ及び／又は異常なＡＲＵが得られる、請求項６に記載の組成物。
53. 前記Ｐ２Ｙ１２反応単位試験の異常な結果が、約１９５未満又は約１８０未満のＰＲＵである、請求項５２に記載の組成物。
54. 前記投与の後に、前記対象が、少なくとも２５、５０、７５、１００、又はそれ以上のＰＲＵの増加を有する、請求項５３に記載の組成物。
55. 前記投与の後に、前記対象が、正常なＰＲＵを有する、請求項５３に記載の組成物。
56. 前記アスピリン反応単位試験の異常な結果が、約５５０未満又は約５００未満のＡＲＵである、請求項５２に記載の組成物。
57. 前記投与の後に、前記対象が、少なくとも２５、５０、７５、１００、又はそれ以上のＡＲＵの増加を有する、請求項５６に記載の組成物。
58. 前記投与の後に、前記対象が、正常なＡＲＵを有する、請求項５６に記載の組成物。
59. 前記１つ以上の凝血パラメータが、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）を使用して測定されるトロンビン生成であり、異常なＴＧＡ結果が得られる、請求項６に記載の組成物。
60. 前記１つ以上の凝血パラメータが、全血栓形成の分析である、請求項６に記載の組成物。
61. 前記使用が、前記対象に追加の抗血小板剤拮抗物質を投与することを更に含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
62. 抗線溶剤を更に含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
63. 前記抗線溶剤が、ε－アミノカプロン酸（ＥＡＣＡ）、トラネキサム酸、アプロチニン、アミノメチル安息香酸、フィブリノゲン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６２に記載の組成物。
64. 投与が、静脈内投与を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
65. トレハロースを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
66. １つ以上の塩と、緩衝液とを含むインキュベーション物質を更に含む、請求項６５に記載の組成物。
67. 前記インキュベーション物質が、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びそれらのうちの２つ以上の組み合わせから選択される１つ以上の塩を含み、前記緩衝液が、ＨＥＰＥＳ、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）、又はそれらの組み合わせを含み、前記組成物が、１つ以上の追加の糖を含む、請求項６６に記載の組成物。
68. ポリスクロースを更に含む、請求項６７に記載の組成物。
69. 有機溶媒を含む、請求項６７に記載の組成物。
70. 前記ＦＤＰＤを含む組成物が、前記対象の前記出血の可能性を増加させるレベルで投与される時点で、前記抗血小板剤が、前記対象において存在する、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
71. 前記ＦＤＰＤを含む組成物が前記対象に投与された時点後１時間以内において、前記抗血小板剤がＣ_ｍａｘで存在する、請求項７０に記載の組成物。
72. 前記ＦＤＰＤが、損なわれた形質膜によって囲まれている、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

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