JP2024541559A

JP2024541559A - Ｂ型肝炎ウイルス（ｈｂｖ）タンパク質の発現を阻害するための組成物および方法

Info

Publication number: JP2024541559A
Application number: JP2024531569A
Authority: JP
Inventors: シュ，ドンシュ; パトリックシャオ，ペンチェン
Original assignee: シャンハイアルゴバイオファーマシューティカルカンパニー，リミテッド
Priority date: 2021-11-29
Filing date: 2022-11-29
Publication date: 2024-11-08
Also published as: CA3235672A1; KR20240111795A; AU2022395876A1; CN117043338A; EP4442827A1; MX2024006348A; US20240271141A1; IL312704A; TW202329987A; WO2023093896A1

Abstract

１つ以上のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）遺伝子の発現を減少させ、ＨＢＶ関連疾患およびＨＢＶ関連病態を治療するのに有用な組成物および方法が提供される。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ならびに細胞および対象内のＨＢＶの発現を減少させるために使用され得るＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含む組成物が提供される。
【選択図】図１

Description

本発明は、部分的に、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質発現を阻害するために使用され得る組成物および方法に関する。

慢性Ｂ型肝炎感染（ＣＨＢ）は、世界中で３億５０００万人を超える人々に発症しており、肝臓関連疾患および肝細胞癌（ＨＣＣ）による死亡の主な原因の１つであると推定されている（ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｈｅｐａｔｉｔｉｓ／ｈｂｖ／ｐｄｆｓ／ｈｅｐｂａｔｒｉｓｋ．ｐｄｆ）。Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ワクチンは、ＨＢＶ感染の新たな症例を予防する有効な方法を提供するが、既存のＨＢＶ感染ならびにＨＢＶ関連疾患およびＨＢＶ関連病態を治療するための治療薬および方法に対する大きな満たされていない医学的必要性が存在する。

ＨＢＶビリオンは、７～９塩基の末端重複を有する部分的に二本鎖の弛緩型環状（ｒｃＤＮＡ）として存在するコンパクトな３．２キロベース（ｋｂ）ゲノムを含有し、部分的に二本鎖の弛緩型環状は、肝細胞の核内で共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）に変換され、それによって、ＨＢＶ転写のためのミニ染色体として機能する（ＢｏｃｋＣＴ，ｅｔａｌ．，ＪＭｏｌＢｉｏｌ．２００１；３０７：１８３－１９６）。宿主ＲＮＡポリメラーゼＩＩは、ｃｃｃＤＮＡ上でＨＢＶ遺伝子を転写して、５つのウイルスＲＮＡ、すなわち、（１）プレコア（ＨＢｅＡｇ）をコードする転写物、（２）構造カプシドタンパク質（コア）とポリメラーゼとをコードし、逆転写されてｒｃＤＮＡを生成するプレゲノムＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）、（３）大型Ｓ表面タンパク質をコードするプレＳ１転写物、（４）プレＳ２およびＳ表面タンパク質（中型および小型Ｓ）をコードする別の転写物、ならびに（５）Ｘ遺伝子ｍＲＮＡを生成する。３つの表面タンパク質は、集合的にＨＢｓＡｇを含む。ＨＢＶ転写物はいずれも、重複するリーディングフレーム内でコードされ、共通の３’末端を有し、同じポリアデニル化シグナル（ＰＡＳ）を利用する。ＨＢｓＡｇは、脂質二重層内で、各コア（カプシド形成された部分的に二本鎖のＨＢＶゲノム）の周りにエンベロープを形成する。

慢性ＨＢＶ感染の自然発生には、４つの連続した段階が含まれる：（１）高レベルのウイルス複製と最小の肝臓炎とを含む早期「免疫学的寛容」段階；（２）顕著な肝臓炎と血清アミノトランスフェラーゼの上昇とを含む免疫反応段階；（３）一部の患者は、抗ＨＢｅＡｇへのセロコンバージョンと、検出不能または低レベルのウイルス血症（ＰＣＲに基づくアッセイで２０００ＩＵ／ｍｌ未満）と、肝臓炎の消散とを含む「非複製」段階に進行する；および（４）ＨＢｅＡｇの生成を防ぐがウイルス複製を妨げない、特異的ウイルス変異の出現によるＨＢｅＡｇ陰性慢性Ｂ型肝炎。第４段階は、ＨＢｅＡｇ陽性ＣＨＢまたはＨＢｅＡｇ陰性ＣＨＢとして存在し得る慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）の一形態であり、血清ＨＢＶＤＮＡおよび血清アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴおよびＡＳＴ）レベルの変動、ならびに進行性肝疾患を特徴とする。

ｃｃｃＤＮＡはＨＢＶの転写および複製の促進因子と考えられているが、ＨＢＶＤＮＡは宿主ゲノムに組み込まれ得る。ｃｃｃＤＮＡのレベルはＨＢｅＡｇ陽性患者の方がＨＢｅＡｇ陰性患者よりも高いが、組み込まれたＨＢＶのレベルはＨＢｅＡｇ陰性患者の方が高い。ｃｃｃＤＮＡに加えて、試験では、組み込まれたＨＢＶＤＮＡがＨＢｓＡｇの供給源となり得ることが示されている（Ｗｏｏｄｄｅｌｌｅｔａｌ．，ＳｃｉＴｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２０１７Ｓｅｐ２７；９（４０９）：ｅａａｎ０２４１．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．ａａｎ０２４１）。ＨＢｅＡｇおよびＨＢｓＡｇは、慢性感染に重要な役割を果たし、Ｔ細胞の寛容および疲弊を引き起こすと考えられている（Ｋａｋｉｍｉｅｔｅｌ．，ＪＶｉｒｏｌ．２００２；７６：８６０９－８６２０）。ＨＢｓＡｇの喪失は、ＨＢＶの効果的な免疫制御の顕著な特徴と考えられている。ＣＨＢ患者では、ＨＢｓＡｇのセロクリアランスが、長期予後が改善される望ましい治療エンドポイント（「機能的治癒」）である。

現在利用可能な治療法によって達成可能な機能的治癒の速度は、比較的遅い。ヌクレオチド（ヌクレオシド）類似体（ＮＵＣ）およびペグ化インターフェロン（ＰＥＧ－ＩＦＮ）が、ＣＨＢの現在利用可能な２つの治療選択肢である。ＮＵＣの投与は、ウイルス複製を制御するのに有効であり得、有害な転帰の減少に関連するが、ウイルス抗原の生成または分泌を妨げない。ＮＵＣ療法では、ＣＨＢの「機能的治癒」を達成することはまれである。ＰＥＧ－ＩＦＮ治療は、長期の免疫学的制御を誘導し得るが、「機能的治癒」を達成することに関して有効性が極めて低い。Ｌａｕｅｔａｌ．は、４８週間のＰＥＧ－ＩＦＮ単剤療法後、ＨＢｓＡｇセロクリアランスを達成したのは治療個体の３％のみであったことを示している（Ｌａｕｅｔａｌ．，ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．２００５；３５２（２６）：２６８２－９５．）。慢性Ｂ型肝炎ならびに他のＨＢＶ関連疾患およびＨＢＶ関連病態は、依然として世界的に重大な健康問題であり、効果的な治療手法が必要とされている。

ＢｏｃｋＣＴ，ｅｔａｌ．，ＪＭｏｌＢｉｏｌ．２００１；３０７：１８３－１９６Ｗｏｏｄｄｅｌｌｅｔａｌ．，ＳｃｉＴｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２０１７Ｓｅｐ２７；９（４０９）：ｅａａｎ０２４１．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．ａａｎ０２４１Ｋａｋｉｍｉｅｔｅｌ．，ＪＶｉｒｏｌ．２００２；７６：８６０９－８６２０Ｌａｕｅｔａｌ．，ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．２００５；３５２（２６）：２６８２－９５．

本発明の一態様によれば、細胞内のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤が、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖のヌクレオチド位置２～１８が、ＨＢＶＲＮＡ転写物に対する相補性領域であって、表１～表４のうちの１つに列挙されるアンチセンス配列のうちの１つから０、１、２または３ヌクレオチドだけ異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む相補性領域を含み、任意に標的化リガンドを含む、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤が提供される。いくつかの実施形態では、ＨＢＶＲＮＡ転写物に対する相補性領域は、表１～表４のうちの１つに列挙されるアンチセンス配列のうちの１つから３ヌクレオチド以下だけ異なる少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個の連続するヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号６７３の標的領域のいずれか１つに少なくとも実質的に相補的であり、表１～表４のいずれか１つにおいて提供される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号６７３の標的領域のいずれか１つに完全に相補的であり、表１～表４のいずれか１つにおいて提供される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４のいずれか１つに記載のセンス鎖配列を含み、センス鎖配列は、ｄｓＲＮＡ剤中のアンチセンス鎖配列に少なくとも実質的に相補的である。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４のいずれか１つに記載のセンス鎖配列を含み、センス鎖配列は、ｄｓＲＮＡ剤中のアンチセンス鎖配列に完全に相補的である。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４のいずれか１つに記載のアンチセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４のいずれかに二重鎖配列として記載される配列を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＩＩ：５’－ｚ_１ｕｕｇｕｃａａｃａａｇａａａａａｚ_２－３’からなり、ｚ_１は、ｃ、ｇ、ａまたはｕから選択され、ｚ_２はヌクレオチド配列ＩＶである。特定の実施形態では、ｚ_１はｕである。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＶは０～１５ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＶは、ｃ、ｃｕ、ｃａ、ｃｃ、ｃｇ、ｃｃｕ、ｃｃａ、ｃｃｃ、ｃｃｇ、ｃｃｃｃ、ｃｃｃｕ、ｃｃｃａ、ｃｃｃｇ、ｃｃｃｃｇ、ｃｃｃｃｇｃ、ｃｃｃｃｇｃｃ、ｃｃｃｃｇｃｃｕ、ｃｃｃｃｇｃｃｕｇ、ｃｃｃｃｇｃｃｕｇｕａａｃａｃ、ｃｃｃｇｕｕまたはｃｃｃｇｇａから選択される。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＶは１、２、３または４ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＶは、ｃ、ｃｕ、ｃａ、ｃｃ、ｃｇ、ｃｃｕ、ｃｃａ、ｃｃｃ、ｃｃｇ、ｃｃｃｃ、ｃｃｃｕ、ｃｃｃａまたはｃｃｃｇから選択される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＩＩＩ：５’－ｚ_３ｕｕｕｕｕｃｕｕｇｕｕｇａｃａａｚ_４－３’からなり、ｚ_３はヌクレオチド配列Ｖであり、ｚ_４は、ｃ、ｇ、ａまたはｕから選択される。特定の実施形態では、ｚ_４はａである。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列Ｖは０～１５ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列Ｖは、ｇ、ａｇ、ｕｇ、ｇｇ、ｃｇ、ａｇｇ、ｕｇｇ、ｇｇｇ、ｃｇｇ、ｇｇｇｇ、ａｇｇｇ、ｕｇｇｇ、ｃｇｇｇ、ｃｇｇｇｇ、ｇｃｇｇｇｇ、ｇｇｃｇｇｇｇ、ａｇｇｃｇｇｇｇ、ｃａｇｇｃｇｇｇｇまたはｇｕｇｕｕａｃａｇｇｃｇｇｇｇから選択される。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列Ｖは１、２、３または４ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列Ｖは、ｇ、ａｇ、ｕｇ、ｇｇ、ｃｇ、ａｇｇ、ｕｇｇ、ｇｇｇ、ｃｇｇ、ｇｇｇｇ、ａｇｇｇ、ｕｇｇｇまたはｃｇｇｇから選択される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＶＩ：５’－ｚ_５ｕｇｕｃａａｃａａｇａａａａａｃｚ_６－３’からなり、ｚ_５は、ｃ、ｇ、ａまたはｕから選択され、ｚ_６はヌクレオチド配列ＶＩＩＩである。特定の実施形態では、ｚ_５はａである。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＶＩＩＩは０～１５ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＶＩＩＩは、ｃ、ｃｃ、ｃｃｕ、ｃｃａ、ｃｃｃ、ｃｃｇ、ｃｃｃｕ、ｃｃｃａ、ｃｃｃｃ、ｃｃｃｇ、ｃｃｕｇ、ｃｃｃｕｃ、ｃｃｃｕｕ、ｃｃｃｕａ、ｃｃｃｇｃ、ｃｃｃｇｃｃ、ｃｃｕｇｕｕ、ｃｃｕｇｇａ、ｃｃｃｇｃｃｕ、ｃｃｃｇｃｃｕｇ、ｃｃｃｇｃｃｕｇｕ、ｃｃｃｇｃｃｕｇｕａａｃａｃｇから選択される。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＶＩＩＩは１、２、３または４ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＶＩＩＩは、ｃ、ｃｃ、ｃｃｕ、ｃｃａ、ｃｃｃ、ｃｃｇ、ｃｃｃｕ、ｃｃｃａ、ｃｃｃｃ、ｃｃｃｇまたはｃｃｕｇから選択される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＶＩＩ：５’－ｚ_７ｇｕｕｕｕｕｃｕｕｇｕｕｇａｃａｚ_８－３’からなり、ｚ_７はヌクレオチド配列ＩＸであり、ｚ_８は、ｃ、ｇ、ａまたはｕから選択される。特定の実施形態では、ｚ_８はｕである。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＸは０～１５ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＸは、ｇ、ａｇ、ｕｇ、ｇｇ、ｃｇ、ａｇｇ、ｕｇｇ、ｇｇｇ、ｃｇｇ、ｇｇａｇ、ａａｇｇ、ｕａｇｇ、ｃａｇｇ、ｇｃｇｇｇ、ｇｇｃｇｇｇ、ａｇｇｃｇｇｇ、ｃａｇｇｃｇｇｇ、ａｃａｇｇｃｇｇｇまたはｃｇｕｇｕｕａｃａｇｇｃｇｇｇから選択される。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＸは１、２、３または４ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＸは、ｇ、ａｇ、ｕｇ、ｇｇ、ｃｇ、ａｇｇ、ｕｇｇ、ｇｇｇ、ｃｇｇ、ｇｇａｇ、ａａｇｇ、ｕａｇｇまたはｃａｇｇから選択される。いくつかの実施形態では、ｚ_１は、ｚ_４に相補的なヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ｚ_２は、ｚ_３に相補的なヌクレオチド配列である。いくつかの実施形態では、ｚ_５は、ｚ_８に相補的なヌクレオチド配列である。いくつかの実施形態では、ｚ_６は、ｚ_７に相補的なヌクレオチド配列である。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、上記のヌクレオチド配列ＩＩまたはＶＩからなり、センス鎖は、少なくとも１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖に対する相補性領域を含む３０ヌクレオチド長以下である。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＩＩＩからなり、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＩＩからなり、ヌクレオチド配列ＩＩおよびＩＩＩは、上記の通りである。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＶＩＩからなり、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＶＩからなり、ヌクレオチド配列ＶＩおよびＶＩＩは、上記の通りである。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＩは、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＩは、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＩＩの該３’オーバーハングは、ｕｕまたはｇａから選択される。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列ＶＩは、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列ＶＩは、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列ＶＩの該３’オーバーハングは、ｕｕまたはｇａから選択される。

いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列のいずれか１つから０、１、２または３ヌクレオチドだけ異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む相補性領域を含む。
５’－ｕｕｕｇｕｃａａｃａａｇａａａａａｃｃｃｃ－３’（配列番号１４３）
５’－ｕａｃａａａａｇａａａａｕｕｇｇｕａａｃａ－３’（配列番号１５２）
５’－ｕｕｇｕｃａａｃａａｇａａａａａｃｃｃｃｇ－３’（配列番号１６２）
５’－ｕｇａａｃａａａｕｇｇｃａｃｕａｇｕａａａ－３’（配列番号１６６）

特定の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列のいずれか１つから０、１、２または３ヌクレオチドだけ異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含む。
５’－ｇｇｇｇｕｕｕｕｕｃｕｕｇｕｕｇａｃａａａ－３’（配列番号５）
５’－ｕｕｕｇｕｃａａｃａａｇａａａａａｃｃｃｃ－３’（配列番号１４３）
５’－ｕｇｕｕａｃｃａａｕｕｕｕｃｕｕｕｕｇｕａ－３’（配列番号１４）
５’－ｕａｃａａａａｇａａａａｕｕｇｇｕａａｃａ－３’（配列番号１５２）
５’－ｃｇｇｇｇｕｕｕｕｕｃｕｕｇｕｕｇａｃａａ－３’（配列番号２４）
５’－ｕｕｇｕｃａａｃａａｇａａａａａｃｃｃｃｇ－３’（配列番号１６２）
５’－ｕｕｕａｃｕａｇｕｇｃｃａｕｕｕｇｕｕｃａ－３’（配列番号２８）
５’－ｕｇａａｃａａａｕｇｇｃａｃｕａｇｕａａａ－３’（配列番号１６６）

特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖のヌクレオチドの全部または実質的に全部は修飾ヌクレオチドである。特定の実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’３’－セコヌクレオチド模倣物、ロックドヌクレオチド、非ロックド核酸ヌクレオチド（ＵＮＡ）、グリコール核酸ヌクレオチド（ＧＮＡ）、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、２’－メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、反転ヌクレオチド、反転脱塩基ヌクレオチド、反転２’－ＯＭｅヌクレオチド、反転２’－デオキシヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、および３’－ＯＭｅヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、もしくはコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、ホスホルアミデート、または非天然塩基含有ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の５’末端にＥ－ビニルホスホネートヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１、２、３、４、５または６個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１、２、３、４、５または６個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖のヌクレオチドの全部または実質的に全部は修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２’－Ｏ－メチルヌクレオチドおよび２’－フルオロヌクレオチドから独立して選択される１５個以上の修飾ヌクレオチドを含み、６個未満の修飾ヌクレオチドは２’－フルオロヌクレオチドである。特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、３または５個の２’－フルオロヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２’－Ｏ－メチルヌクレオチドおよび２’－フルオロヌクレオチドから独立して選択される１５個以上の修飾ヌクレオチドを含み、少なくとも１４、１５または１６個の修飾ヌクレオチドは２’－Ｏ－メチルヌクレオチドであり、アンチセンス鎖の５’末端から位置２、７、１２、１４および／または１６にあるヌクレオチドは２’－フルオロヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、標的遺伝子に対応するｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的であり、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、式（Ｃ）として示されるヌクレオチド配列を含み、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、式（Ｄ）として示されるヌクレオチド配列を含み、
３’－（Ｎ_Ｌ）_ｎＮ_Ｍ１Ｎ_ＬＮ_Ｍ２Ｎ_ＬＮ_ＦＮ_ＬＮ_Ｍ３Ｎ_ＬＮ_Ｍ４Ｎ_ＬＮ_Ｍ５Ｎ_Ｍ６Ｎ_ＬＮ_Ｍ７Ｎ_Ｍ８Ｎ_ＬＮ_ＦＮ_Ｌ－５’ 式（Ｃ）
５’－（Ｎ’_Ｌ）_ｎ’ Ｎ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_Ｎ１Ｎ’_Ｎ２Ｎ’_Ｎ３Ｎ’_Ｎ４Ｎ’_ＦＮ’_ＬＮ’_Ｎ５Ｎ’_Ｎ６Ｎ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_Ｌ－３’ 式（Ｄ）
式中、各Ｎ_ＦまたはＮ’_Ｆは、２’－フルオロ修飾ヌクレオチドを表し、Ｎ_Ｍ１、Ｎ_Ｍ２、Ｎ_Ｍ３、Ｎ_Ｍ４、Ｎ_Ｍ５、Ｎ_Ｍ６、Ｎ_Ｍ７、Ｎ_Ｍ８、Ｎ’_Ｎ１、Ｎ’_Ｎ２、Ｎ’_Ｎ３、Ｎ’_Ｎ４、Ｎ’_Ｎ５およびＮ’_Ｎ６の各々は、独立して、修飾または非修飾ヌクレオチドを表し、Ｎ_Ｍ４、Ｎ_Ｍ５、Ｎ_Ｍ７およびＮ_Ｍ８は２’－フルオロ修飾ヌクレオチドではなく、各Ｎ_ＬまたはＮ’_Ｌは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオチドを表すが、２’－フルオロ修飾ヌクレオチドを表さず、ｎおよびｎ’は、０～７の整数であり得る。

いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列のいずれか１つから０、１、２または３ヌクレオチドだけ異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む相補性領域を含む。
５’－ｕ＊Ｕ＊ｕｇｕｃＡａｃａａＧａＡａＡａｃｃ＊ｃ＊ｃ－３’（配列番号５８２）
５’－ｕ＊Ａ＊ｃｕｕｕＣｃａａｕＣａＡｕＡｇｇｃ＊ｃ＊ｕ－３’（配列番号５８５）
５’－ｕ＊Ｇ＊ｕａａａＧａｇａｇＧｕＧｃＧｃｃｃ＊ｃ＊ｇ－３’（配列番号５８８）
５’－ｕ＊Ａ＊ｃａａａＡｇａａａＡｕＵｇＧｕａａ＊ｃ＊ａ－３’（配列番号５９２）
５’－ｕ＊Ｃ＊ａａａａＧａａａａＵｕＧｇＵａａｃ＊ａ＊ｇ－３’（配列番号５９４）
５’－ｕ＊Ｕ＊ｇｕｃａＡｃａａｇＡａＡａＡｃｃｃ＊ｃ＊ｇ－３’（配列番号５９６）
５’－ｕ＊Ｇ＊ａａｃａＡａｕｇｇＣａＣｕＡｇｕａ＊ａ＊ａ－３’（配列番号５９７）
５’－ｕ＊Ａ＊ｇａｃａＡａａｇａＡａＡｕＵｇｇｕ＊ａ＊ａ－３’（配列番号５９８）
５’－ａ＊Ｕ＊ｇｕｃａＡｃａａｇＡａＡａＡｃｃｃ＊ｕ＊ｇ－３’（配列番号６６６）

いくつかの実施形態では、修飾センス鎖は、表２～表４のうちの１つに記載の修飾センス鎖配列である。特定の実施形態では、修飾アンチセンス鎖は、表２～表４のうちの１つに記載の修飾アンチセンス鎖配列である。特定の実施形態では、センス鎖は、アンチセンス鎖に相補的または実質的に相補的であり、相補性領域は１６～２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、相補性領域は１９～２１ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、相補性領域は、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、各鎖は４０ヌクレオチド長以下である。いくつかの実施形態では、各鎖は３０ヌクレオチド長以下である。特定の実施形態では、各鎖は２７ヌクレオチド長以下である。特定の実施形態では、各鎖は２５ヌクレオチド長以下である。特定の実施形態では、各鎖は２３ヌクレオチド長以下である。いくつかの実施形態では、各鎖は２１ヌクレオチド長以下である。特定の実施形態では、各鎖は１９～３２ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、各鎖は、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、３２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、１つ以上の標的化基または連結基をさらに含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の標的化基または連結基は、センス鎖にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化基または連結基は、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む。特定の実施形態では、標的化基は、以下の構造を有する：

いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされた標的化基を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の３’末端にコンジュゲートされた標的化基を含む。特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、３’末端に１つの反転脱塩基残基を含む。特定の実施形態では、センス鎖は、３’末端および／または５’末端に１つまたは２つの反転脱塩基残基を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、２つの平滑末端を有する。特定の実施形態では、少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号２８１、２９０、２９５、３００、３０４、３０６、３０７、３３１、５５７、５６７、５６９、５７１、５７２、５７３、５６０、５６３、６０７、６２８～６３７、または９１８～９２１のうちの１つを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号４１９、４２８、４３３、４３８、４４２、４４４、４４５、４６９、５８２、５９２、５９４、５９６、５９７、５９８、５８５、５８８、６４２、６６３～６７２、または９２２～９２５のうちの１つを含む。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、配列番号２８１および配列番号４１９；配列番号２９０および配列番号４２８；配列番号２９５および配列番号４３３；配列番号３００および配列番号４３８；配列番号３０４および配列番号４４２；配列番号３０６および配列番号４４４；配列番号３０７および配列番号４４５；配列番号３３１および配列番号４６９；配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号５６７および配列番号５９２；配列番号５６９および配列番号５９４；配列番号５７１および配列番号５９６；配列番号５７２および配列番号５９７；配列番号５７３および配列番号５９８；配列番号５６０および配列番号５８５；配列番号５６３および配列番号５８８；配列番号６０７および配列番号６４２；配列番号６２８および配列番号６６３；配列番号６２９および配列番号６６４；配列番号６３０および配列番号６６５；配列番号６３１および配列番号６６６；配列番号６３２および配列番号６６７；配列番号６３３および配列番号６６８；配列番号６３４および配列番号６６９；配列番号６３５および配列番号６７０；配列番号６３６および配列番号６７１；配列番号６３７および配列番号６７２；配列番号９１８および配列番号９２２；配列番号９１９および配列番号９２３；配列番号９２０および配列番号９２４；または配列番号９２１および配列番号９２５を含む。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ＡＤ００１７０、ＡＤ００３７８、ＡＤ００１７０－１、ＡＤ００２６３、ＡＤ００２６５、ＡＤ００２６７、ＡＤ００２６８、ＡＤ００２６９、ＡＤ００１７３、ＡＤ００１７６、ＡＤ００３８３、ＡＤ００３８４、ＡＤ００３７８－１、ＡＤ００１７０－２、ＡＤ００２６８－２、およびＡＤ００２６３－２からなる群から選択される二重鎖を含む。

本発明の別の態様によれば、前述のｄｓＲＮＡ剤のいずれかの任意の実施形態の１、２、３個またはそれ以上のｄｓＲＮＡ剤を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体も含む。特定の実施形態では、組成物はまた、１つ以上の追加の治療剤を含む。特定の実施形態では、組成物は、キット、容器、パック、ディスペンサー、プレフィルドシリンジまたはバイアルに包装される。いくつかの実施形態では、組成物は、皮下投与用に製剤化されるか、または静脈内（ＩＶ）投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のうちの少なくとも１つのセンス鎖は、配列番号２８１、２９０、２９５、３００、３０４、３０６、３０７、３３１、５５７、５６７、５６９、５７１、５７２、５７３、５６０、５６３、６０７、６２８～６３７、または９１８～９２１のうちの１つを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のうちの少なくとも１つのアンチセンス鎖は、配列番号４１９、４２８、４３３、４３８、４４２、４４４、４４５、４６９、５８２、５９２、５９４、５９６、５９７、５９８、５８５、５８８、６４２、６６３～６７２、または９２２～９２５のうちの１つを含む。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、配列番号２８１および配列番号４１９；配列番号２９０および配列番号４２８；配列番号２９５および配列番号４３３；配列番号３００および配列番号４３８；配列番号３０４および配列番号４４２；配列番号３０６および配列番号４４４；配列番号３０７および配列番号４４５；配列番号３３１および配列番号４６９；配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号５６７および配列番号５９２；配列番号５６９および配列番号５９４；配列番号５７１および配列番号５９６；配列番号５７２および配列番号５９７；配列番号５７３および配列番号５９８；配列番号５６０および配列番号５８５；配列番号５６３および配列番号５８８；配列番号６０７および配列番号６４２；配列番号６２８および配列番号６６３；配列番号６２９および配列番号６６４；配列番号６３０および配列番号６６５；配列番号６３１および配列番号６６６；配列番号６３２および配列番号６６７；配列番号６３３および配列番号６６８；配列番号６３４および配列番号６６９；配列番号６３５および配列番号６７０；配列番号６３６および配列番号６７１；配列番号６３７および配列番号６７２；配列番号９１８および配列番号９２２；配列番号９１９および配列番号９２３；配列番号９２０および配列番号９２４；または配列番号９２１および配列番号９２５を含む。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ＡＤ００１７０、ＡＤ００３７８、ＡＤ００１７０－１、ＡＤ００２６３、ＡＤ００２６５、ＡＤ００２６７、ＡＤ００２６８、ＡＤ００２６９、ＡＤ００１７３、ＡＤ００３８３、ＡＤ００３８４、ＡＤ００３７８－１、ＡＤ００１７０－２、ＡＤ００２６８－２、ＡＤ００２６３－２、およびＡＤ００１７６からなる群から選択される二重鎖を含む。

本発明の別の態様によれば、本発明の前述の態様の任意の実施形態のｄｓＲＮＡ剤を含む細胞が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞、任意にヒト細胞である。

本発明の別の態様によれば、細胞内のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）遺伝子の発現を阻害する方法であって、（ｉ）本発明の前述のｄｓＲＮＡ剤態様の任意の実施形態の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または本発明の任意の前述の態様の組成物の任意の実施形態の有効量を含む細胞を調製することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法はまた、（ｉｉ）ＨＢＶ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間にわたって、調製された細胞を維持し、それによって、細胞内のＨＢＶ遺伝子の発現を阻害し、細胞内でＨＢＶの複製を阻害し、細胞内のＨＢＶ抗原のレベルを低下させることを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＨＢＶ抗原は、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇである。特定の実施形態では、細胞は対象内にあり、ｄｓＲＮＡ剤は対象に皮下投与される。いくつかの実施形態では、細胞は対象内にあり、ｄｓＲＮＡ剤はＩＶ投与によって対象に投与される。いくつかの実施形態では、細胞は対象内にある。いくつかの実施形態では、２、３、４個またはそれ以上のｄｓＲＮＡ剤が対象に投与される。特定の実施形態では、方法はまた、対象へのｄｓＲＮＡ剤の投与後に、ＨＢＶ遺伝子の阻害を評価することを含み、評価のための手段は、（ｉ）対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の１つ以上の生理学的特性を決定すること、ならびに（ｉｉ）決定された生理学的特性と、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性とを比較することを含み、比較は、対象におけるＨＢＶ遺伝子の発現の阻害の存在または非存在のうちの１つ以上を示す。いくつかの実施形態では、対照生理学的特性は、ＨＢＶに感染し、ｄｓＲＮＡ剤を投与されていない対象における生理学的特性である。いくつかの実施形態では、対象における決定された生理学的特性は、対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；対象におけるＨＢＶウイルス量；対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベルのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、生理学的特性は、対象から得られた生体試料において決定される。特定の実施形態では、生体試料は、血清試料、組織試料、細胞試料および肝臓試料のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、対象における決定された生理学的特性は、生理学的特性の対照レベルと比較して異常である。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性と比較して統計的に有意に高いと決定された、対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上；ならびに１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体のうちの１つ以上のレベルは、対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の状態を示す。特定の実施形態では、対照生理学的特性は、ＨＢＶに感染し、ｄｓＲＮＡ剤を投与されていない対象における生理学的特性である。特定の実施形態では、対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ；ＨＢｓＡｇ；およびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上の減少は、対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性と比較した、対象における抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の増加は、対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態は、以下のうちの１つ以上である：疾患または病態は、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）、肝損傷、肝硬変、急性Ｂ型肝炎、急性劇症肝炎、および肝線維症、肝臓炎、および肝細胞癌のうちの１つ以上である。特定の実施形態では、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態は、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）および急性Ｂ型肝炎のうちの１つ以上である。

本発明の別の態様によれば、対象におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害する方法であって、本発明の前述のｄｓＲＮＡ剤態様の任意の実施形態の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または本発明の前述の組成物の任意の実施形態の有効量を対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のうちの２、３、４個またはそれ以上が対象に投与される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、対象に皮下投与される。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、ＩＶ投与によって対象に投与される。いくつかの実施形態では、方法はまた、１つ以上のｄｓＲＮＡ剤の投与後に、ＨＢＶ遺伝子の阻害を評価することを含み、評価のための手段は、（ｉ）対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の１つ以上の生理学的特性を決定すること、ならびに（ｉｉ）決定された生理学的特性と、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性とを比較することを含み、比較は、対象におけるＨＢＶ遺伝子の発現の阻害の存在または非存在のうちの１つ以上を示す。いくつかの実施形態では、対象における決定された生理学的特性は、対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；対象におけるＨＢＶウイルス量；対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベルのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、生理学的特性は、対象から得られた生体試料において決定される。特定の実施形態では、生体試料は、血清試料、細胞試料、組織試料および肝臓試料のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、対象における決定された生理学的特性は、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性と比較してより異常である。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性と比較して統計的に有意に高い、低い、または変化していないと決定された、対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上；ならびに１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体のうちの１つ以上のレベルは、対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の状態を示す。特定の実施形態では、対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ；ＨＢｓＡｇ；およびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上の減少は、対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性と比較した、対象における抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の増加は、対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す。特定の実施形態では、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態は、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、急性Ｂ型肝炎、肝細胞癌、末期肝疾患、肝線維症、肝臓炎、肝損傷、肝硬変およびＤ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）のうちの１つ以上である。特定の実施形態では、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態は、以下のうちの１つ以上である：疾患または病態は、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）および急性Ｂ型肝炎のうちの１つ以上である。

本発明の別の態様によれば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質の存在に関連する疾患または病態を治療する方法であって、ＨＢＶタンパク質をコードするＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するために、本発明のｄｓＲＮＡ剤の前述の態様の任意の実施形態の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または本発明の前述の組成物の任意の実施形態の有効量を対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、２、３、４個またはそれ以上のｄｓＲＮＡ剤を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、疾患または病態は、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）、肝損傷、肝硬変、急性Ｂ型肝炎、急性劇症肝炎、肝臓炎、肝線維症および肝細胞癌のうちの１つ以上である。特定の実施形態では、方法はまた、追加の治療レジメンを対象に投与することを含む。特定の実施形態では、追加の治療レジメンは、１つ以上のＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド、追加のＨＢＶｄｓＲＮＡ治療剤、非ＨＢＶｄｓＲＮＡ治療剤、ＨＢＶ非ｄｓＲＮＡ治療剤および行動変容を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、非ＨＢＶｄｓＲＮＡ治療剤は、抗ウイルス剤、抗ウイルスヌクレオシドまたはヌクレオチド類似体（ＮＵＣ）、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、免疫刺激薬、治療用ワクチン、ウイルス侵入阻害剤、ＨＢｓＡｇの分泌または放出を阻害するオリゴヌクレオチド、カプシド阻害剤、共有結合閉環状（ｃｃｃ）ＨＢＶＤＮＡ阻害剤のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、ＮＵＣは、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）、テノホビルアラフェナミド、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、エンテカビル（ＥＴＶ）またはテルビブジンである。いくつかの実施形態では、免疫刺激薬は、ペグ化インターフェロンアルファ２ａ（ＰＥＧ－ＩＦＮ－ａ２ａ）、インターフェロンアルファ－２ｂ、組換えヒトインターロイキン－７、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニストまたはチェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ１阻害剤）である。特定の実施形態では、１つ以上のｄｓＲＮＡ剤は、対象に皮下投与される。特定の実施形態では、１つ以上のｄｓＲＮＡ剤は、ＩＶ投与によって対象に投与される。いくつかの実施形態では、方法はまた、対象における投与された１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の有効性を決定することを含む。特定の実施形態では、対象における治療の有効性を決定する手段は、（ｉ）対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の１つ以上の生理学的特性を決定すること、および（ｉｉ）決定された生理学的特性と、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性とを比較することを含み、比較は、対象への二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の投与の有効性の存在、非存在およびレベルのうちの１つ以上を示す。いくつかの実施形態では、対象における決定された生理学的特性は、対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；対象におけるＨＢＶウイルス量；対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベルのうちの１つ以上である。特定の実施形態では、生理学的特性は、対象から得られた生体試料において決定される。いくつかの実施形態では、生体試料は、血清試料、細胞試料、組織試料および肝臓試料のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、対象における決定された生理学的特性は、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性と、または生理学的特性の対照レベルと比較して異なる。特定の実施形態では、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性と比較して統計的に有意に低いと決定された、対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のうちの１つ以上のレベルは、対象における減少したＨＢＶ遺伝子発現の状態を示す。いくつかの実施形態では、ベースライン治療前抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体、または抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の対照レベルと比較した、対象における抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の増加は、対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態は、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、急性Ｂ型肝炎、肝細胞癌、末期肝疾患、急性劇症肝炎、肝臓炎、肝損傷、肝硬変、肝線維症およびＤ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）のうちの１つ以上である。

本発明の別の態様によれば、対象におけるＨＢＶタンパク質のベースライン治療前レベルと比較して、対象におけるＨＢＶタンパク質のレベルを低下させる方法であって、ＨＢＶ遺伝子発現のレベルを低下させるために、本発明のｄｓＲＮＡ剤の前述の態様の任意の実施形態の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または本発明の前述の組成物の任意の実施形態の有効量を対象に投与することを含む方法が提供される。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、対象に皮下投与されるか、またはＩＶ投与によって対象に投与される。

本発明の別の態様によれば、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性と比較して、対象のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）関連疾患またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）関連病態の生理学的特性を変化させる方法であって、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の生理学的特性を変化させるために、本発明のｄｓＲＮＡ剤の前述の態様の任意の実施形態の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または本発明の前述の組成物の任意の実施形態の有効量を対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上のｄｓＲＮＡ剤は、対象に皮下投与されるか、またはＩＶ投与によって対象に投与される。特定の実施形態では、対象における決定された生理学的特性のうちの１つ以上は、対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；対象におけるＨＢＶウイルス量；対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベルのうちの１つ以上である。

本発明の別の態様によれば、ＨＢＶ遺伝子発現に関連する疾患または病態を治療する方法に使用するための前述のｄｓＲＮＡ剤が提供される。いくつかの実施形態では、疾患または病態は、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）、肝損傷、肝硬変、急性Ｂ型肝炎、急性劇症肝炎、および肝線維症、肝臓炎、および肝細胞癌のうちの１つ以上である。

本発明の任意の前述の方法の特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖は、配列番号２８１、２９０、２９５、３００、３０４、３０６、３０７、３３１、５５７、５６７、５６９、５７１、５７２、５７３、５６０、５６３、６０７、６２８～６３７、または９１８～９２１のうちの１つを含む。本発明の任意の前述の方法のいくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、配列番号４１９、４２８、４３３、４３８、４４２、４４４、４４５、４６９、５８２、５９２、５９４、５９６、５９７、５９８、５８５、５８８、６４２、６６３～６７２、または９２２～９２５のうちの１つを含む。本発明の任意の前述の方法の特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、配列番号２８１および配列番号４１９；配列番号２９０および配列番号４２８；配列番号２９５および配列番号４３３；配列番号３００および配列番号４３８；配列番号３０４および配列番号４４２；配列番号３０６および配列番号４４４；配列番号３０７および配列番号４４５；配列番号３３１および配列番号４６９；配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号５６７および配列番号５９２；配列番号５６９および配列番号５９４；配列番号５７１および配列番号５９６；配列番号５７２および配列番号５９７；配列番号５７３および配列番号５９８；配列番号５６０および配列番号５８５；配列番号５６３および配列番号５８８；配列番号６０７および配列番号６４２；配列番号６２８および配列番号６６３；配列番号６２９および配列番号６６４；配列番号６３０および配列番号６６５；配列番号６３１および配列番号６６６；配列番号６３２および配列番号６６７；配列番号６３３および配列番号６６８；配列番号６３４および配列番号６６９；配列番号６３５および配列番号６７０；配列番号６３６および配列番号６７１；配列番号６３７および配列番号６７２；配列番号９１８および配列番号９２２；配列番号９１９および配列番号９２３；配列番号９２０および配列番号９２４；または配列番号９２１および配列番号９２５を含む。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ＡＤ００１７０、ＡＤ００３７８、ＡＤ００１７０－１、ＡＤ００２６３、ＡＤ００２６５、ＡＤ００２６７、ＡＤ００２６８、ＡＤ００２６９、ＡＤ００１７３、ＡＤ００３８３、ＡＤ００３８４、ＡＤ００３７８－１、ＡＤ００１７０－２、ＡＤ００２６８－２、ＡＤ００２６３－２、およびＡＤ００１７６からなる群から選択される二重鎖を含む。

［配列の簡単な説明］
配列番号１～１３８、６７４～７３４は、表１に示されており、センス鎖配列である。

配列番号１３９～２７６、７３５～７９５は、表１に示されており、アンチセンス鎖配列である。

配列番号２７７～４１４、７９６～８５６はセンス鎖配列であり、配列番号４１５～５５２、８５７～９１７はアンチセンス鎖配列であり、表２に示されており、化学修飾は、大文字：２’－フルオロ（２’－Ｆｌｕｏｒｏ）；小文字：２’－ＯＭｅ；およびチオホスフェート：＊によって示されている。

配列番号５５３～５７７はセンス鎖配列であり、配列番号５７８～６０２はアンチセンス鎖配列であり、表３に示されている。送達分子は、各センス鎖の３’末端に「ＧＬＯ－０」として示されている。化学修飾は以下のように示されている：大文字：２’－フルオロ（２’－Ｆｌｕｏｒｏ）；小文字：２’－ＯＭｅ；およびチオホスフェート：＊。

配列番号６０３～６３７、９１８～９２１はセンス鎖配列であり、６３８～６７２、９２２～９２５はアンチセンス鎖配列であり、表４に示されている。化学修飾は以下のように示されている：大文字：２’－フルオロ（２’－Ｆｌｕｏｒｏ）；小文字：２’－ＯＭｅ；チオホスフェート：＊；およびＩｎｖａｂ＝反転脱塩基。

配列番号６７３は、ヒト（Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ）Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ｍＲＮＡ配列［ＮＣＢＩ参照配列：ＡＭ２８２９８６］である：
ｔｔｃｃａｃｔｇｃｃｔｔｃｃａｃｃａａｇｃｔｃｔｇｃａｇｇａｔｃｃｃａａａｇｔｃａｇｇｇｇｔｃｔｇｔａｔｔｔｔｃｃｔｇｃｔｇｇｔｇｇｃｔｃｃａｇｔｔｃａｇｇａａｃａｇｔａａａｃｃｃｔｇｃｔｃｃｇａａｔａｔｔｇｃｃｔｃｔｃａｃａｔｃｔｃｇｔｃａａｔｃｔｃｃｇｃｇａｇｇａｃｔｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｔｇａｃｇａａｔａｔｇｇａｇａａｃａｔｃａｃａｔｃａｇｇａｔｔｃｃｔａｇｇａｃｃｃｃｔｇｃｔｃｇｔｇｔｔａｃａｇｇｃｇｇｇｇｔｔｔｔｔｃｔｔｇｔｔｇａｃａａｇａａｔｃｃｔｃａｃａａｔａｃｃｇｃａｇａｇｔｃｔａｇａｃｔｃｇｔｇｇｔｇｇａｃｔｔｃｔｃｔｃａａｔｔｔｔｃｔａｇｇｇｇｇａｔｃａｃｃｃｇｔｇｔｇｔｃｔｔｇｇｃｃａａａａｔｔｃｇｃａｇｔｃｃｃｃａａｃｃｔｃｃａａｔｃａｃｔｃａｃｃａａｃｃｔｃｃｔｇｔｃｃｔｃｃａａｔｔｔｇｔｃｃｔｇｇｔｔａｔｃｇｃｔｇｇａｔｇｔｇｔｃｔｇｃｇｇｃｇｔｔｔｔａｔｃａｔａｔｔｃｃｔｃｔｔｃａｔｃｃｔｇｃｔｇｃｔａｔｇｃｃｔｃａｔｃｔｔｃｔｔｇｔｔｇｇｔｔｃｔｔｃｔｇｇａｔｔａｔｃａａｇｇｔａｔｇｔｔｇｃｃｃｇｔｔｔｇｔｃｃｔｃｔａａｔｔｃｃａｇｇａａｃａａｃａａｃａａｃｃａｇｔａｃｇｇｇａｃｃａｔｇｃａａａａｃｃｔｇｃａｃｇａｃｔｃｃｔｇｃｔｃａａｇｇｃａａｃｔｃｔａｔｇｔｔｔｃｃｃｔｃａｔｇｔｔｇｃｔｇｔａｃａａａａｃｃｔｔｃｇｇａｔｇｇａａａｔｔｇｃａｃｃｔｇｔａｔｔｃｃｃａｔｃｃｃａｔｃｇｔｃｔｔｇｇｇｃｔｔｔｃｇｃａａａａｔａｃｃｔａｔｇｇｇａｇｔｇｇｇｃｃｔｃａｇｔｃｃｇｔｔｔｃｔｃｔｔｇｇｃｔｃａｇｔｔｔａｃｔａｇｔｇｃｃａｔｔｔｇｔｔｃａｇｔｇｇｔｔｃｇｔａｇｇｇｃｔｔｔｃｃｃｃｃａｃｔｇｔｔｔｇｇｃｔｔｔｃａｇｃｔａｔａｔｇｇａｔｇａｔｇｔｇｇｔａｔｔｇｇｇｇｇｃｃａａｇｔｃｔｇｔａｃａｇｃａｔｃｇｔｇａｇｔｃｃｃｔｔｔａｔａｃｃｇｃｔｇｔｔａｃｃａａｔｔｔｔｃｔｔｔｔｇｔｃｔｃｔｇｇｇｔａｔａｃａｔｔｔａａａｃｃｃｔａａｃａａａａｃａａａａａｇａｔｇｇｇｇｔｔａｔｔｃｃｃｔａａａｃｔｔｃａｔｇｇｇｔｔａｃａｔａａｔｔｇｇａａｇｔｔｇｇｇｇａａｃｇｔｔｇｃｃａｃａｇｇａｔｃａｔａｔｔｇｔａｃａａａａｇａｔｃａａａｃａｃｔｇｔｔｔｔａｇａａａａｃｔｔｃｃｔｇｔｔａａｃａｇｇｃｃｔａｔｔｇａｔｔｇｇａａａｇｔａｔｇｔｃａａａｇａａｔｔｇｔｇｇｇｔｃｔｔｔｔｇｇｇｃｔｔｔｇｃｔｇｃｔｃｃａｔｔｔａｃａｃａａｔｇｔｇｇａｔａｔｃｃｔｇｃｃｔｔａａｔｇｃｃｔｔｔｇｔａｔｇｃｃｔｇｔａｔａｃａａｇｃｔａａａｃａｇｇｃｔｔｔｃａｃｔｔｔｃｔｃｇｃｃａａｃｔｔａｃａａｇｇｃｃｔｔｔｃｔａａｇｔａａａｃａｇｔａｃａｔｇａａｃｃｔｔｔａｃｃｃｃｇｔｔｇｃｔｃｇｇｃａａｃｇｇｃｃｔｇｇｔｃｔｇｔｇｃｃａａｇｔｇｔｔｔｇｃｔｇａｃｇｃａａｃｃｃｃｃａｃｔｇｇｃｔｇｇｇｇｃｔｔｇｇｃｃａｔａｇｇｃｃａｔｃａｇｃｇｃａｔｇｃｇｔｇｇａａｃｃｔｔｔｇｔｇｇｃｔｃｃｔｃｔｇｃｃｇａｔｃｃａｔａｃｔｇｃｇｇａａｃｔｃｃｔａｇｃｃｇｃｔｔｇｔｔｔｔｇｃｔｃｇｃａｇｃｃｇｇｔｃｔｇｇｇｇｃａａａｇｃｔｃａｔｃｇｇａａｃｔｇａｃａａｔｔｃｔｇｔｃｇｔｃｃｔｃｔｃｇｃｇｇａａａｔａｔａｃａｔｃｇｔｔｔｃｃａｔｇｇｃｔｇｃｔａｇｇｔｔｇｔａｃｔｇｃｃａａｃｔｇｇａｔｃｃｔｔｃｇｃｇｇｇａｃｇｔｃｃｔｔｔｇｔｔｔａｃｇｔｃｃｃｇｔｃｇｇｃｇｃｔｇａａｔｃｃｃｇｃｇｇａｃｇａｃｃｃｃｔｃｔｃｇｇｇｇｃｃｇｃｔｔｇｇｇａｃｔｃｔｃｔｃｇｔｃｃｃｃｔｔｃｔｃｃｇｔｃｔｇｃｃｇｔｔｃｃａｇｃｃｇａｃｃａｃｇｇｇｇｃｇｃａｃｃｔｃｔｃｔｔｔａｃｇｃｇｇｔｃｔｃｃｃｃｇｔｃｔｇｔｇｃｃｔｔｃｔｃａｔｃｔｇｃｃｇｇｔｃｃｇｔｇｔｇｃａｃｔｔｃｇｃｔｔｃａｃｃｔｃｔｇｃａｃｇｔｔｇｃａｔｇｇａｇａｃｃａｃｃｇｔｇａａｃｇｃｃｃａｔｃａｇａｔｃｃｔｇｃｃｃａａｇｇｔｃｔｔａｃａｔａａｇａｇｇａｃｔｃｔｔｇｇａｃｔｃｃｃａｇｃａａｔｇｔｃａａｃｇａｃｃｇａｃｃｔｔｇａｇｇｃｃｔａｃｔｔｃａａａｇａｃｔｇｔｇｔｇｔｔｔａａｇｇａｃｔｇｇｇａｇｇａｇｃｔｇｇｇｇｇａｇｇａｇａｔｔａｇｇｔｔａａａｇｇｔｃｔｔｔｇｔａｔｔａｇｇａｇｇｃｔｇｔａｇｇｃａｔａａａｔｔｇｇｔｃｔｇｃｇｃａｃｃａｇｃａｃｃａｔｇｃａａｃｔｔｔｔｔｃａｃｃｔｃｔｇｃｃｔａａｔｃａｔｃｔｃｔｔｇｔａｃａｔｇｔｃｃｃａｃｔｇｔｔｃａａｇｃｃｔｃｃａａｇｃｔｇｔｇｃｃｔｔｇｇｇｔｇｇｃｔｔｔｇｇｇｇｃａｔｇｇａｃａｔｔｇａｃｃｃｔｔａｔａａａｇａａｔｔｔｇｇａｇｃｔａｃｔｇｔｇｇａｇｔｔａｃｔｃｔｃｇｔｔｔｔｔｇｃｃｔｔｃｔｇａｃｔｔｔｔｔｔｃｃｔｔｃｃｇｔｃａｇａｇａｔｃｔｃｃｔａｇａｃａｃｃｇｃｃｔｃａｇｃｔｃｔｇｔａｔｃｇｇｇａａｇｃｃｔｔａｇａｇｔｃｔｃｃｔｇａｇｃａｔｔｇｃｔｃａｃｃｔｃａｃｃａｔａｃｔｇｃａｃｔｃａｇｇｃａａｇｃａａｔｔｃｔｃｔｇｃｔｇｇｇｇｇｇａａｔｔｇａｔｇａｃｔｃｔａｇｃｔａｃｃｔｇｇｇｔｇｇｇｔａａｔａａｔｔｔｇｇａａｇａｔｃｃａｇｃａｔｃｃａｇｇｇａｔｃｔａｇｔａｇｔｃａａｔｔａｔｇｔｔａａｔａｃｔａａｃａｔｇｇｇｔｔｔａａａｇａｔｃａｇｇｃａａｃｔａｔｔｇｔｇｇｔｔｔｃａｔａｔａｔｃｔｔｇｃｃｔｔａｃｔｔｔｔｇｇａａｇａｇａｇａｃｔｇｔａｃｔｔｇａａｔａｔｔｔｇｇｔｃｔｃｔｔｔｃｇｇａｇｔｇｔｇｇａｔｔｃｇｃａｃｔｃｃｔｃｃａｇｃｃｔａｔａｇａｃｃａｃｃａａａｔｇｃｃｃｃｔａｔｃｔｔａｔｃａａｃａｃｔｔｃｃｇｇａａａｃｔａｃｔｇｔｔｇｔｔａｇａｃｇａｃｇｇｇａｃｃｇａｇｇｃａｇｇｔｃｃｃｃｔａｇａａｇａａｇａａｃｔｃｃｃｔｃｇｃｃｔｃｇｃａｇａｃｇｃａｇａｔｃｔｃａａｔｃｇｃｃｇｃｇｔｃｇｃａｇａａｇａｔｃｔｃａａｔｃｔｃｇｇｇａａｔｃｔｃａａｔｇｔｔａｇｔａｔｔｃｃｔｔｇｇａｃｔｃａｔａａｇｇｔｇｇｇａａａｃｔｔｔａｃｔｇｇｇｃｔｔｔａｔｔｃｃｔｃｔａｃａｇｔａｃｃｔａｔｃｔｔｔａａｔｃｃｔｇａａｔｇｇｃａａａｃｔｃｃｔｔｃｃｔｔｔｃｃｔａａｇａｔｔｃａｔｔｔａｃａａｇａｇｇａｃａｔｔａｔｔａａｔａｇｇｔｇｔｃａａｃａａｔｔｔｇｔｇｇｇｃｃｃｔｃｔｃａｃｔｇｔａａａｔｇａａａａｇａｇａａｇａｔｔｇａａａｔｔａａｔｔａｔｇｃｃｔｇｃｔａｇａｔｔｃｔａｔｃｃｔａｃｃｃａｃａｃｔａａａｔａｔｔｔｇｃｃｃｔｔａｇａｃａａａｇｇａａｔｔａａａｃｃｔｔａｔｔａｔｃｃａｇａｔｃａｇｇｔａｇｔｔａａｔｃａｔｔａｃｔｔｃａａａａｃｃａｇａｃａｔｔａｔｔｔａｃａｔａｃｔｃｔｔｔｇｇａａｇｇｃｔｇｇｔａｔｔｃｔａｔａｔａａｇａｇｇｇａａａｃｃａｃａｃｇｔａｇｃｇｃａｔｃａｔｔｔｔｇｃｇｇｇｔｃａｃｃａｔａｔｔｃｔｔｇｇｇａａｃａａｇａｇｃｔａｃａｇｃａｔｇｇｇａｇｇｔｔｇｇｔｃａｔｃｇａａａｃｃｔｃｇｃａａａｇｇｃａｔｇｇｇｇａｃｇａａｔｃｔｔｔｃｔｇｔｔｃｃｃａａｃｃｃｔｃｔｇｇｇａｔｔｃｔｔｔｃｃｃｇａｔｃａｔｃａｇｔｔｇｇａｃｃｃｔｇｃａｔｔｃｇｇａｇｃｃａａｃｔｃａａａｃａａｔｃｃａｇａｔｔｇｇｇａｃｔｔｃａａｃｃｃｃａｔｃａａｇｇａｃｃａｃｔｇｇｃｃａｇｃａｇｃｃａａｃｃａｇｇｔａｇｇａｇｔｇｇｇａｇｃａｔｔｃｇｇｇｃｃａｇｇｇｔｔｃａｃｃｃｃｔｃｃａｃａｃｇｇｃｇｇｔｇｔｔｔｔｇｇｇｇｔｇｇａｇｃｃｃｔｃａｇｇｃｔｃａｇｇｇｃａｔａｔｔｇａｃｃａｃａｇｔｇｔｃａａｃａａｔｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃｃｔｃｃａｃｃａａｔｃｇｇｃａｇｔｃａｇｇａａｇｇｃａｇｃｃｔａｃｔｃｃｃａｔｃｔｃｔｃｃａｃｃｔｃｔａａｇａｇａｃａｇｔｃａｔｃｃｔｃａｇｇｃｃａｔｇｃａｇｔｇｇａａ。

図１は、３ｍｇ／ｋｇのｓｉＲＮＡ化合物の単回皮下投与後のＡＡＶ－ＨＢＶマウス血清中のＨＢｓＡｇレベルを示すグラフである。図２は、３ｍｇ／ｋｇのｓｉＲＮＡ化合物の単回皮下投与後のＡＡＶ－ＨＢＶマウス血清中のＨＢＶＤＮＡレベルを示すグラフである。

本発明は、部分的には、ＲＮＡｉ剤、例えば、限定するものではないが、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）遺伝子発現を阻害することができる二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡｉ剤を含む。本発明の抗ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、５つ全部のＨＢＶ転写物を標的とし、あらゆるＨＢＶウイルスタンパク質の抑制をもたらすことができる。本発明の化合物、組成物および方法は、慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）ならびに／または他のＨＢＶ関連疾患およびＨＢＶ関連病態のための抗ＨＢＶＲＮＡｉ治療剤および治療を提供する。本発明の方法を使用して細胞に送達される抗ＨＢＶＲＮＡｉ剤および化合物は、ＨＢＶ遺伝子発現を阻害し、それによって、該遺伝子のＨＢＶタンパク質産物の細胞内の活性を低下させることができる。本発明の抗ＨＢＶｄｓＲＮＡｉ剤は、対象のＨＢＶ関連疾患および／またはＨＢＶ関連病態を治療するために対象に投与され得る。

本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶ関連疾患および／またはＨＢＶ関連病態の「機能的治癒」を達成するために、本発明の薬剤、化合物、組成物および方法が使用される。ＨＢＶ感染および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の機能的治癒は、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）のセロクリアランスによって示され得る。本明細書で使用される用語「セロクリアランス」は、対象における検出可能な血清ＨＢｓＡｇの対象のレベルの低下、および／または対象の血清中の検出可能なＨＢｓＡｇの完全な排除を意味する。セロクリアランスは、Ｂ型肝炎表面抗体（抗ＨＢｓ）へのセロコンバージョンの有無にかかわらず、対象に起こり得ることが理解される。

本明細書に記載のＨＢＶＲＮＡｉは、ＨＢＶタンパク質の発現を阻害することができる。本発明のいくつかの実施形態では、細胞または対象におけるＨＢＶの発現を減少させることにより、細胞または対象におけるＨＢＶの発現に関連する疾患または病態がそれぞれ治療される。ＨＢＶ活性を低下させることによって治療され得る疾患および病態の非限定的な例には、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、急性Ｂ型肝炎、肝細胞癌、末期肝疾患、肝臓炎、肝線維症、肝損傷、肝硬変、急性劇症肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）、またはＨＢＶタンパク質のレベルおよび活性を低下させることが対象にとって医学的に有益である他の疾患がある。

本発明は、部分的には、抗ＨＢＶＲＮＡｉ剤を含む組成物、およびそのような組成物の使用方法を含む。本発明のいくつかの態様は、１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を含む。特定の実施形態では、本発明の抗ＨＢＶＲＮＡｉ剤は、限定するものではないが、肝細胞を含む細胞にＲＮＡｉ剤を送達することができる送達化合物に結合される。いくつかの実施形態では、送達化合物は、ＧａｌＮＡｃ含有送達化合物である。本発明の特定の医薬組成物は、１、２、３個またはそれ以上の独立して選択された抗ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含み、１つ以上の独立して選択された送達化合物も含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＢＶｍＲＮＡの１、２、３、４個またはそれ以上の異なる位置／領域をそれぞれ標的とすることができる２、３、４個またはそれ以上の抗ＨＢＶｄｓＲＮＡが、細胞および／または対象に投与される。

以下では、ＨＢＶ遺伝子発現を阻害することができる抗ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤（二重鎖）を含む組成物を作製および使用する方法、ならびにＨＢＶ遺伝子発現によって引き起こされるおよび／または調節される疾患および病態を治療するための組成物および方法が説明される。本明細書で使用される場合、ＨＢＶ遺伝子発現の存在および／またはレベルによって引き起こされるまたは調節される疾患および／または病態は、「ＨＢＶ関連疾患および／またはＨＢＶ関連病態」と呼ばれる。

本明細書で使用される場合、用語「ＲＮＡｉ」は、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介してＲＮＡ転写物の標的化切断を媒介することができる、ＲＮＡを含む薬剤を指す。用語「ＲＮＡｉ」および「ＲＮＡｉ剤」は、本明細書では、用語「抗ＨＢＶＲＮＡｉ」および「抗ＨＢＶＲＮＡｉ剤」；「ＨＢＶＲＮＡｉ」および「ＨＢＶＲＮＡｉ剤」；「ｄｓＲＮＡ」および「ｄｓＲＮＡ剤」；「ＨＢＶｄｓＲＮＡ」および「ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤」；ならびに「抗ＨＢＶｄｓＲＮＡ」および「抗ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤」とそれぞれ区別なく使用され得る。当技術分野で知られているように、ＲＮＡｉ標的領域とは、一次転写産物のＲＮＡプロセシングの産物であるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む、遺伝子の転写中に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の連続する部分を指す。ｍＲＮＡ分子の標的部分（本明細書では「標的配列」とも呼ばれる）は、少なくとも、その部分で、またはその部分の付近でＲＮＡｉ指向性切断のための基質として機能するのに十分な長さである。標的配列は、８～３０ヌクレオチド長（両端の値を含む）、１０～３０ヌクレオチド長（両端の値を含む）、１２～２５ヌクレオチド長（両端の値を含む）、１５～２３ヌクレオチド長（両端の値を含む）、１６～２３ヌクレオチド長（両端の値を含む）、または１８～２３ヌクレオチド長（両端の値を含む）であり得、これには、それぞれ述べられた範囲内のあらゆるさらに短い長さが含まれる。特定の実施形態では、標的配列は、９～２６ヌクレオチド長（両端の値を含む）であり、これには、その間のあらゆる部分範囲および整数が含まれる。例えば、限定することを意図するものではないが、本発明の特定の実施形態では、標的配列は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチド長のうちの１つであり、該配列は、ＨＢＶ遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一部に完全にまたは少なくとも実質的に相補的である。

本明細書で使用される場合、「ｄｓＲＮＡ剤」は、標的ｍＲＮＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物の翻訳を配列特異的に分解または阻害することができるＲＮＡまたはＲＮＡ様（例えば、化学修飾ＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含有する組成物を意味する。特定の理論に限定されることを望むものではないが、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、ＲＮＡ干渉機構［すなわち、哺乳動物細胞のＲＮＡ干渉経路機構（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体またはＲＩＳＣ）との相互作用を介してＲＮＡ干渉を誘導する］によって、または任意の代替的な機構もしくは経路によって作用し得る。植物細胞、無脊椎動物細胞および脊椎動物細胞内で遺伝子をサイレンシングする方法は、当技術分野で周知である［例えば、各々の開示全体が参照により本明細書に組み込まれる（Ｓｈａｒｐｅｔａｌ．，ＧｅｎｅｓＤｅｖ．２００１，１５：４８５；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，ｅｔａｌ．，（２００１）Ｎａｔｕｒｅ４０９：３６３；Ｎｙｋａｎｅｎ，ｅｔａｌ．，（２００１）Ｃｅｌｌ１０７：３０９；およびＥｌｂａｓｈｉｒ，ｅｔａｌ．，（２００１）ＧｅｎｅｓＤｅｖ．１５：１８８）］を参照。］。ＨＢＶの発現を阻害するために、本明細書に提供される開示と併せて、当技術分野で公知の遺伝子サイレンシング手順を使用することができる。

本明細書に開示されるｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖から構成され、限定するものではないが、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＲＮＡｉ剤、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）およびダイサー基質を含む。本明細書に記載のｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、標的とされるｍＲＮＡに少なくとも部分的に相補的である。様々な長さのｄｓＲＮＡ二重鎖構造を使用して標的遺伝子発現を阻害することができることが当技術分野で理解されている。例えば、１９、２０、２１、２２および２３塩基対の二重鎖構造を有するｄｓＲＮＡは、ＲＮＡ干渉を誘導するのに有効であることが知られており（Ｅｌｂａｓｈｉｒｅｔａｌ．，ＥＭＢＯ２００１，２０：６８７７－６８８８）、さらに短いまたはさらに長いＲＮＡ二重鎖構造もまた、ＲＮＡ干渉を誘導することができることが当技術分野で知られている。ＨＢＶｄｓＲＮＡは、本発明の特定の実施形態では、最小で２１ｎｔの長さの少なくとも１つの鎖を含むことができるか、またはさらに短い二重鎖を有し得る。特定の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４のいずれかに開示される二重鎖である。いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４に開示される二重鎖であるが、二重鎖の一方または両方の末端ではマイナス１、２、３または４ヌクレオチドであり、ＨＢＶの発現を減少させることもできる。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４の１つ以上の配列からの少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上の連続するヌクレオチドの部分配列を有し得、完全な配列を含むｄｓＲＮＡから生じる阻害レベルと５％、１０％、１５％、２０％、２５％または３０％以下だけＨＢＶ遺伝子の発現を阻害する能力が異なり得る。表１～表４に開示されるセンス配列、アンチセンス配列および二重鎖は、本明細書では「親」配列と呼ばれ得、これは、表１～表４に開示される配列が、本明細書に記載されるように修飾、短縮、延長され得、置換などを含み得、得られた配列が、本発明の方法および組成物におけるそれらの親配列の有効性の全部または少なくとも一部を保持することを意味する。本発明のｄｓＲＮＡに含まれるセンス鎖およびアンチセンス鎖は、独立して選択される。本明細書で使用される場合、用語「独立して選択される」は、２つ以上の同様のエレメントの各々が、他のエレメントの選択とは無関係に選択され得ることを意味する。例えば、限定することを意図するものではないが、本発明のｄｓＲＮＡを調製する際に、二重鎖に含める２つの鎖の「エレメント」を選択してもよい。一方の選択されたエレメントであるセンス配列は配列番号５５３（表３に示す）であり得、他方の選択されたエレメントであるアンチセンス配列は配列番号５７８であり得るか、またはその親配列である配列番号５７８と比較して修飾、短縮、延長され、および／もしくは１、２もしくは３個の置換を含む配列番号５７８であり得る。本発明の二重鎖は、表１～表４の二重鎖では対として示されているセンス配列およびアンチセンス配列の両方を含む必要はないことが理解される。

表１～表４は、特定のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤アンチセンス鎖およびセンス鎖コアストレッチ塩基配列を示す。用語「塩基配列」は、化学修飾または送達化合物を伴わず、ポリヌクレオチド配列を参照して本明細書で使用される。例えば、表１に示すセンス鎖ａｃｕｕｃｕｃｕｃａａｕｕｕｕｃｕａｇｇａ（配列番号２）は、表２の配列番号２７８の塩基配列であり、配列番号２７８はそれらの化学修飾とともに示されている。本明細書に開示される配列には、識別子が割り当てられ得る。例えば、一本鎖センス配列は、「センス鎖ＳＳ＃」を用いて識別され得る。一本鎖アンチセンス配列は、「アンチセンス鎖ＡＳ＃」を用いて識別され得、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二重鎖は、「二重鎖ＡＶ＃」または「二重鎖ＡＤ＃」を用いて識別され得る。

表１は、センス鎖配列およびアンチセンス鎖配列を開示し、表１の同じ行のセンス鎖およびアンチセンス鎖から形成される二重鎖の識別番号を提供する。本明細書で使用される場合、センス鎖およびアンチセンス鎖内の「マッチする位置」という用語は、２つの鎖が二重鎖である場合に「対合する」各鎖内の位置である。例えば、２１核酸塩基センス鎖および２１核酸塩基アンチセンス鎖では、センス鎖の位置１の核酸塩基と、アンチセンス鎖の位置２１の核酸塩基とは、「マッチする位置」にある。さらに別の非限定的な例において、２３核酸塩基センス鎖および２３核酸塩基アンチセンス鎖では、センス鎖の核酸塩基２と、アンチセンス鎖の位置２２の核酸塩基とは、マッチする位置にある。別の非限定的な例において、１８核酸塩基センス鎖および１８核酸塩基アンチセンス鎖では、センス鎖の位置１の核酸塩基とアンチセンス鎖の位置１８の核酸塩基とはマッチする位置にあり、センス鎖の位置４位の核酸塩基とアンチセンス鎖の位置１５の核酸塩基とはマッチする位置にある。当業者であれば、二重鎖および対合鎖であるかまたは二重鎖および対合鎖となるセンス鎖およびアンチセンス鎖内のマッチする位置を同定する方法を理解するであろう。

表１の１列目は、同じ表の行のセンス配列およびアンチセンス配列を含む二重鎖に関する二重鎖ＡＶ＃を示す。例えば、表１は、センス鎖配列番号１およびアンチセンス鎖配列番号１３９を含む二重鎖割当て二重鎖ＡＶ＃ＡＶ０００５３を開示している。したがって、表１の各行は、各々が同じ行に示されるセンス配列およびアンチセンス配列を含む、本発明の二重鎖を開示している。

本発明の方法のいくつかの実施形態では、表１に開示される二本鎖配列を含むＲＮＡｉ剤が対象に投与される。本発明のいくつかの実施形態では、対象に投与されるＲＮＡｉ剤は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４個の配列修飾を含む、表１に記載の鎖配列のうちの少なくとも１つを含む二重鎖を含む。本発明の方法のいくつかの実施形態では、表１に示されるｄｓＲＮＡポリヌクレオチド配列を含むＲＮＡｉ剤が、本明細書では送達化合物とも呼ばれる送達分子に結合される。送達化合物の非限定的な例には、ＧａｌＮＡｃ化合物を含む送達化合物がある。

表１：非修飾ＨＢＶＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖配列５’から３’方向に示されているすべての配列。二重鎖ＡＶ＃は、表の同じ行の２つの鎖の二重鎖に割り当てられた番号である。

表２は、本発明の特定の化学修飾ＨＢＶＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖配列を示す。本発明の方法のいくつかの実施形態では、表２に示されるポリヌクレオチド配列を有するＲＮＡｉ剤が、細胞および／または対象に投与される。本発明のいくつかの実施形態では、対象に投与されるＲＮＡｉ剤は、表２の１列目の行で識別される二重鎖を含み、表２の４および７列目の同じ行のセンス鎖配列およびアンチセンス鎖配列にそれぞれ示される配列修飾を含む。本発明の方法のいくつかの実施形態では、表２に示される配列は、ＲＮＡｉ剤を対象の細胞および／または組織に送達することができる化合物に結合され得る（本明細書では「コンジュゲートされる」とも呼ばれる）。本発明の特定の実施形態で使用され得る送達化合物の非限定的な例には、ＧａｌＮＡｃ含有化合物がある。表２では、１列目は、表１に示される塩基配列の二重鎖ＡＶ＃を示す。表２は、二重鎖ＡＶ＃を開示し、二重鎖のセンス配列およびアンチセンス配列に含まれる化学修飾も示す。例えば、表１は、塩基一本鎖配列、配列番号１（センス）および配列番号１３９（アンチセンス）を示し、これらはともに、二重鎖ＡＶ＃ＡＶ０００５３として識別される二本鎖二重鎖である。表２は、二重鎖ＡＶ＃ＡＶ０００５３を列挙しており、配列番号２７７および配列番号４１５の二重鎖が、それぞれ配列番号１および配列番号１３９の塩基配列を含むが、それぞれ４および７列目に示されるセンス配列およびアンチセンス配列に示される化学修飾を有することを示す。表２の２列目の「センス鎖ＳＳ＃」は、同じ行の４列目に示されるセンス配列（修飾を含む）に対する割り当てられた識別子である。表２の５列目の「アンチセンス鎖ＡＳ＃」は、７列目に示されるアンチセンス配列（修飾を含む）に対する割り当てられた識別子である。

表２：化学修飾ＨＢＶＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖配列を提供する。５’から３’に示されているすべての配列。本明細書に記載されている特定のインビトロ検査試験では、これらの配列を使用した。化学修飾は以下によって示されている：大文字：２’－フルオロ（２’－Ｆｌｕｏｒｏ）；小文字：２’－ＯＭｅ；チオホスフェート：＊

表３は、本発明の特定の化学修飾ＨＢＶＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖およびセンス鎖配列ならびにｄｓＲＮＡを開示する。本発明の方法のいくつかの実施形態では、表３に示されるＲＮＡｉ剤が、細胞および／または対象に投与される。本発明の方法のいくつかの実施形態では、表３に示されるポリヌクレオチド配列を含むＲＮＡｉ剤が対象に投与される。本発明のいくつかの実施形態では、対象に投与されるＲＮＡｉ剤は、表３の１列目で識別される二重鎖を含み、二重鎖は、表３の同じ行の４および７列目のセンス鎖配列およびアンチセンス鎖配列にそれぞれ示される配列修飾および／または送達化合物を含む。本明細書の他の箇所に記載されている特定のインビボ検査試験では、これらの配列を使用した。表３に示される配列は、いくつかの実施形態では、送達のための化合物に結合され得（本明細書では「コンジュゲートされる」とも呼ばれる）、その非限定的な例にはＧａｌＮＡｃ含有化合物がある。送達化合物の特定の実施形態は、表３では、４列目のセンス鎖上の「ＧＬＸ－０」として識別されている。本明細書で使用され、表３に示される「ＧＬＸ－０」は、ＧａｌＮＡｃ含有化合物を示す。別のＧＬＯ－ｎ化合物またはＧＬＳ－ｎ化合物が、ＧＬＯ－０として示される化合物の代わりに使用され得、得られた化合物が、本発明の方法および／または組成物の実施形態に含まれることが理解される。本発明のいくつかの実施形態では、ＧＬＸ－０として表３に示される送達化合物は、化合物ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５、およびＧＬＯ－１６のいずれか１つによって置換され、各々の構造は、本明細書の他の箇所に提供される。当業者であれば、結合された送達化合物がＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５、およびＧＬＯ－１６のうちの１つである、本発明のｄｓＲＮＡ化合物を調製および使用することができるであろう。表３の各行は、表のその行のセンス配列およびアンチセンス配列の二重鎖に割り当てられた二重鎖ＡＤ＃を提供する。例えば、二重鎖ＡＤ＃ＡＤ００１６６は、センス鎖配列番号５５３とアンチセンス鎖配列番号５７８とを含む二重鎖である。表３の各行は、センス鎖およびアンチセンス鎖を提供し、示されているセンス鎖およびアンチセンス鎖の二重鎖を開示している。表３の２列目の「センス鎖ＳＳ＃」は、同じ行の４列目に示されるセンス配列（修飾を含む）に対する割り当てられた識別子である。表３の５列目の「アンチセンス鎖ＡＳ＃」は、７列目に示されるアンチセンス配列（修飾を含む）に対する割り当てられた識別子である。特定の結合されたＧａｌＮＡｃ含有ＧＬＯ化合物またはＧａｌＮＡｃ含有ＧＬＳ化合物の識別子は、ＧＬＸ－０として示されており、別のＧＬＯ化合物またはＧＬＳ化合物が、ＧＬＸ－０として示されている化合物を置き換えてもよく、得られた化合物が、本発明の方法および／または組成物の実施形態に含まれることが理解される。

表３は、化学修飾ＨＢＶＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖配列を提供する。配列はいずれも、５’から３’に示されている。本明細書に記載されている特定のインビボ検査試験では、これらの配列を使用した。インビボ試験で使用した送達分子は、各センス鎖の３’末端に「ＧＬＸ－０」として示されている。化学修飾は以下のように示されている：大文字：２’－フルオロ（２’－Ｆｌｕｏｒｏ）；小文字：２’－ＯＭｅ；チオホスフェート：＊

表４は、本発明の特定の化学修飾ＨＢＶＲＮＡｉ剤センス鎖配列およびアンチセンス鎖配列を示し、センスおよびアンチセンスを含む二重鎖を識別する。本発明の方法のいくつかの実施形態では、表４に示されるポリヌクレオチド配列を有するＲＮＡｉ剤が対象に投与される。本発明のいくつかの実施形態では、対象に投与されるＲＮＡｉ剤は、表４の１列目の行で識別される二重鎖を含み、表４の４および７列目の同じ行のセンス鎖配列およびアンチセンス鎖配列にそれぞれ示される配列修飾および／または送達化合物を含む。いくつかの実施形態では、表４に示される配列は、ｄｓＲＮＡ剤を対象の細胞および／または組織に送達することができる化合物に結合され得る。本発明の特定の実施形態で使用され得る送達化合物の非限定的な例には、ＧａｌＮＡｃ含有化合物がある。表４では、用語「ＧＬＳ－５」は、示されるようなセンス鎖におけるＧａｌＮＡｃ含有化合物を示す。本発明の化合物、組成物および方法の特定の実施形態では、ＧＬＳ－５は、化合物ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５、およびＧＬＯ－１６のいずれか１つによって置換されることが理解されるであろう。その各々の構造は、本明細書の他の箇所に提供される。表４の１列目は、その行に開示されている二重鎖の二重鎖識別番号を示す。

表４：化学修飾ＨＢＶＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖配列本明細書の他の箇所に記載されている特定のインビボ試験に配列を使用した。配列はいずれも、５’から３’に示されている。化学修飾は以下のように示されている：大文字：２’－フルオロ（２’－Ｆｌｕｏｒｏ）；小文字：２’－ＯＭｅ；チオホスフェート：＊；Ｉｎｖａｂ＝反転脱塩基。

本発明の方法および組成物のいくつかの実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖は、配列番号２８１、２９０、２９５、３００、３０４、３０６、３０７、３３１、５５７、５６７、５６９、５７１、５７２、５７３、５６０、５６３、６０７、６２８～６３７、または９１８～９２１のうちの１つを含む。本発明の方法および組成物の特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、配列番号４１９、４２８、４３３、４３８、４４２、４４４、４４５、４６９、５８２、５９２、５９４、５９６、５９７、５９８、５８５、５８８、６４２、６６３～６７２、または９２２～９２５のうちの１つを含む。本発明の方法および組成物のいくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、配列番号２８１および配列番号４１９；配列番号２９０および配列番号４２８；配列番号２９５および配列番号４３３；配列番号３００および配列番号４３８；配列番号３０４および配列番号４４２；配列番号３０６および配列番号４４４；配列番号３０７および配列番号４４５；配列番号３３１および配列番号４６９；配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号５６７および配列番号５９２；配列番号５６９および配列番号５９４；配列番号５７１および配列番号５９６；配列番号５７２および配列番号５９７；配列番号５７３および配列番号５９８；配列番号５６０および配列番号５８５；配列番号５６３および配列番号５８８；配列番号６０７および配列番号６４２；配列番号６２８および配列番号６６３；配列番号６２９および配列番号６６４；配列番号６３０および配列番号６６５；配列番号６３１および配列番号６６６；配列番号６３２および配列番号６６７；配列番号６３３および配列番号６６８；配列番号６３４および配列番号６６９；配列番号６３５および配列番号６７０；配列番号６３６および配列番号６７１；配列番号６３７および配列番号６７２；配列番号９１８および配列番号９２２；配列番号９１９および配列番号９２３；配列番号９２０および配列番号９２４；または配列番号９２１および配列番号９２５を含む。

本発明の特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡ（本明細書では「二重鎖」とも呼ばれる）は、表１～表４のうちの１つに開示されているものである。表１～表４の各行は、その表の行のセンス鎖の配列とアンチセンス鎖の配列とを含む二重鎖を開示している。表１～表４に開示される二重鎖に加えて、いくつかの実施形態では、本発明の二重鎖は、表１～表４に示される配列に示される０、１、２または３ヌクレオチドだけ異なる、表１～表４に示されるセンス配列およびアンチセンス配列を含み得ることが理解される。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の二重鎖内のアンチセンス鎖は、配列番号１３９のものとは０、１、２または３ヌクレオチド異なる配列番号１３９であり得る。

本発明の二重鎖内のセンス鎖の配列とアンチセンス鎖の配列とは、独立して選択され得ることが理解される。したがって、本発明のｄｓＲＮＡは、表１～表４の行に開示されている二重鎖のセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み得る。あるいは、本発明のｄｓＲＮＡでは、ｄｓＲＮＡ内の選択されたセンス鎖およびアンチセンス鎖の一方または両方は、表１～表４に示される配列を含み得るが、センス配列およびアンチセンス配列の一方または両方は、親配列からの１、２、３個またはそれ以上の核酸塩基置換を含む。選択された配列は、いくつかの実施形態では、それらの親配列よりも長くても短くてもよい。したがって、本発明に含まれるｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４に二重鎖として開示されているセンス対およびアンチセンス対の正確な配列を含むことができるが、含む必要はない。

いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖のヌクレオチド位置２～１８は、ＨＢＶＲＮＡ転写物に対する相補性領域であって、表１～表４のうちの１つに列挙されるアンチセンス配列のうちの１つから０、１、２または３ヌクレオチドだけ異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む相補性領域を含み、任意に標的化リガンドを含む。いくつかの例では、ＨＢＶＲＮＡ転写物に対する相補性領域は、表１～表４のうちの１つに列挙されるアンチセンス配列のうちの１つから３ヌクレオチド以下だけ異なる少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個の連続するヌクレオチドを含む。本発明のｄｓＲＮＡ剤のいくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号６７３の標的領域のいずれか１つに少なくとも実質的に相補的であり、表１～表４のいずれか１つにおいて提供される。いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、配列番号６７３の標的領域のいずれか１つに完全に相補的であり、表１～表４のいずれか１つにおいて提供される。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４のいずれか１つに記載のセンス鎖配列を含み、センス鎖配列は、ｄｓＲＮＡ剤中のアンチセンス鎖配列に少なくとも実質的に相補的である。他の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４のいずれか１つに記載のセンス鎖配列を含み、センス鎖配列は、ｄｓＲＮＡ剤中のアンチセンス鎖配列に完全に相補的である。いくつかの例では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、表１～表４のいずれか１つに記載のアンチセンス鎖配列を含む。本発明のｄｓＲＮＡ剤のいくつかの実施形態は、表１～表４のいずれかに二重鎖として開示されているセンス配列およびアンチセンス配列を含む。本明細書に記載されるように、本発明の二重鎖内のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、独立して選択され得ることが理解される。

ミスマッチ
ミスマッチは、特にミスマッチがｄｓＲＮＡの末端領域内にある場合、ｄｓＲＮＡでは有効性について許容されることが当業者に知られている。特定のミスマッチは、ｄｓＲＮＡでは良好に許容され、例えば、ゆらぎ塩基対Ｇ：ＵおよびＡ：Ｃとのミスマッチは、有効性について良好に許容される（Ｄｕｅｔｅｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２００５Ｍａｒ２１；３３（５）：１６７１－７）。本発明の方法および化合物のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＨＢＶ標的配列に対する１つ以上のミスマッチを含有し得る。いくつかの実施形態では、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ミスマッチを含まない。特定の実施形態では、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＨＢＶ標的配列に対する１以下、２以下または３以下のミスマッチを含む。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、相補性領域の中心に位置しない、ＨＢＶ標的配列に対するミスマッチを含有する。いくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、相補性領域の５’末端および３’末端の一方または両方から最後の５、４、３、２または１ヌクレオチド以内の１、２、３、４個またはそれ以上のミスマッチを含む。本明細書に記載の方法および／または当技術分野で公知の方法を使用して、ＨＢＶ標的配列に対するミスマッチを含有するＨＢＶｄｓＲＮＡ剤がＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するのに有効であるかどうかを決定することができる。

相補性
本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、用語「相補的」は、第２のヌクレオチド配列（例えば、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤アンチセンス鎖）に関して第１のヌクレオチド配列（例えば、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤センス鎖）を説明するために使用される場合、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが、ハイブリダイズし［哺乳動物の生理学的条件（またはインビトロの同様の条件）下で塩基対水素結合を形成し］、特定の条件下で第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと二重鎖または二重らせん構造を形成する能力を意味する。生物の内部で遭遇し得る生理学的に関連する条件などの他の条件が適用され得る。当業者であれば、ハイブリダイズしたヌクレオチドの最終的な用途に従って、２つの配列の相補性の試験に最も適した一連の条件を決定することができるであろう。相補的配列は、少なくとも上記のハイブリダイゼーション要件が満たされる限り、ワトソン－クリック塩基対または非ワトソン－クリック塩基対を含み、天然もしくは修飾ヌクレオチドまたはヌクレオチド模倣物を含む。配列同一性または相補性は、修飾とは無関係である。

例えば、本明細書に記載のＨＢＶｄｓＲＮＡ内の相補的配列は、一方または両方のヌクレオチド配列の全長にわたって、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとの塩基対合を含む。そのような配列は、本明細書では互いに「完全に相補的」と呼ばれ得る。２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーション時に１つ以上の一本鎖オーバーハングを形成するように設計されている実施形態では、そのようなオーバーハングは、本明細書では相補性の決定に関してミスマッチと見なされないことが理解される。例えば、１つの１９ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドと別の２０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドとを含むＨＢＶｄｓＲＮＡ剤であって、長い方のオリゴヌクレオチドが、短い方のオリゴヌクレオチドに完全に相補的な１９ヌクレオチドの配列を含むＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、本明細書に記載の目的のために「完全に相補的」と呼ばれ得る。したがって、本明細書で使用される場合、「完全に相補的」は、第１のポリヌクレオチドの連続する配列内の塩基の全部（１００％）が、第２のポリヌクレオチドの連続する配列内の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続する配列は、第１または第２のヌクレオチド配列の全部または一部を含み得る。

本明細書で使用される用語「実質的に相補的」は、核酸塩基配列のハイブリダイズした対では、第１のポリヌクレオチドの連続する配列内の塩基の全部ではなく少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％が、第２のポリヌクレオチドの連続する配列内の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。用語「実質的に相補的」は、それらの最終的な用途、例えば、ＲＩＳＣ経路を介したＨＢＶ遺伝子発現の阻害にとって最も適切な条件下でハイブリダイズする能力を保持しながら、２つの配列が、最大１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０塩基対（ｂｐ）の二重鎖に対するハイブリダイゼーション時に１つ以上、例えば、少なくとも１、２、３、４または５個のミスマッチ塩基対を含む場合、第２の配列に関して第１の配列を参照して使用され得る。

用語「部分的に相補的」は、第１のポリヌクレオチドの連続する配列内の塩基の全部ではなく少なくとも７５％が、第２のポリヌクレオチドの連続する配列内の同じ数の塩基とハイブリダイズする、核酸塩基配列のハイブリダイズした対を参照して本明細書で使用され得る。いくつかの実施形態では、「部分的に相補的」は、第１のポリヌクレオチドの連続する配列内の塩基の少なくとも７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％が、第２のポリヌクレオチドの連続する配列内の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。

用語「相補的」、「完全に相補的」、「実質的に相補的」および「部分的に相補的」は、本明細書では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはＨＢＶｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖と標的ＨＢＶｍＲＮＡの配列との間の塩基マッチングを参照して使用される。用語「ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖」は、「ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤」の同じ配列を指し得ることが理解される。

本明細書で使用される場合、核酸配列を参照して使用される用語「実質的に同一」または「実質的な同一性」は、参照配列と比較して、少なくとも約８５％以上、好ましくは少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を意味する。配列同一性の割合は、比較ウィンドウにわたって２つの最適にアライメントされた配列を比較することによって決定される。同一の核酸塩基が両配列で生じる位置の数を決定してマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で割り、結果に１００を掛けて配列同一性の割合を得ることによって、割合を計算する。本明細書に開示される発明は、本明細書に、例えば、表１～表４に開示されるものと実質的に同一のヌクレオチド配列を包含する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される配列は、本明細書に、例えば、表１～表４に開示される配列と全く同一であるか、または少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％パーセント同一である。

本明細書で使用される場合、用語「配列を含む鎖」は、標準的なヌクレオチド命名法を使用して言及される配列によって表される、ヌクレオチドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを意味する。本明細書で使用される用語「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」は、標的ＨＢＶＲＮＡに関して「センス」および「アンチセンス」配向を有すると呼ばれる、２つの逆平行かつ実質的または完全に相補的な核酸鎖を含むハイブリダイズした二重鎖領域を有するＲＮＡ分子、または分子の複合体を含むＲＮＡｉを指す。二重鎖領域は、ＲＩＳＣ経路を介した所望の標的ＨＢＶＲＮＡの特異的分解を可能にする任意の長さであり得るが、典型的には、９～３０塩基対長、例えば、１５～３０塩基対長の範囲である。９～３０塩基対の二重鎖を考慮すると、二重鎖は、この範囲内の任意の長さ、例えば、限定するものではないが、１５～３０塩基対、１５～２６塩基対、１５～２３塩基対、１５～２２塩基対、１５～２１塩基対、１５～２０塩基対、１５～１９塩基対、１５～１８塩基対、１５～１７塩基対、１８～３０塩基対、１８～２６塩基対、１８～２３塩基対、１８～２２塩基対、１８～２１塩基対、１８～２０塩基対、１９～３０塩基対、１９～２６塩基対、１９～２３塩基対、１９～２２塩基対、１９～２１塩基対、１９～２０塩基対、２０～３０塩基対、２０～２６塩基対、２０～２５塩基対、２０～２４塩基対、２０～２３塩基対、２０～２２塩基対、２０～２１塩基対、２１～３０塩基対、２１～２６塩基対、２１～２５塩基対、２１～２４塩基対、２１～２３塩基対または２１～２２塩基対を含む、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０、およびこれらの間の任意の部分範囲であり得る。

ダイサーおよび類似の酵素によるプロセシングによって細胞内で生成されるＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、一般に、１９～２２塩基対長の範囲である。ＨＢＶｄｓＤＮＡ剤の二重鎖領域の一方の鎖は、標的ＨＢＶＲＮＡの領域に実質的に相補的な配列を含む。二重鎖構造を形成する２つの鎖は、少なくとも１つの自己相補的領域を有する単一のＲＮＡ分子に由来し得るか、または２つ以上の別個のＲＮＡ分子から形成され得る。二重鎖領域が単一分子の２つの鎖から形成される場合、分子は、二重鎖構造を形成する一方の鎖の３’末端とそれぞれの他方の鎖の５’末端との間にヌクレオチドの一本鎖（本明細書では「ヘアピンループ」と呼ばれる）によって分離された二重鎖領域を有することができる。本発明のいくつかの実施形態では、ヘアピン型外観は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上の不対ヌクレオチドを含む。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の２つの実質的に相補的な鎖が別個のＲＮＡ分子によって構成される場合、それらの分子は、必ずしも必要ではないが、共有結合することができる。２つの鎖がヘアピンループ以外の手段によって共有結合している場合、結合構造は「リンカー」と呼ばれる。また、用語「ｓｉＲＮＡ」は、本明細書では、本明細書に記載のｄｓＲＮＡ剤を指すために使用される。

本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ｄｓＲＮＡ剤の一方または両方の末端に不対ヌクレオチドまたは不対ヌクレオチド類似体を有しないセンス配列およびアンチセンス配列を含み得る。不対ヌクレオチドを有しない末端は、「平滑末端」と呼ばれ、ヌクレオチドオーバーハングを有しない。ｄｓＲＮＡ剤の両末端が平滑である場合、ｄｓＲＮＡは「平滑末端」と呼ばれる。本発明のいくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤の第１の末端のみが平滑であり、いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤の第２の末端のみが平滑であり、本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の両末端が平滑である。

本発明のｄｓＲＮＡ剤のいくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、１つまたは２つの平滑末端を有しない。そのような場合、ｄｓＲＮＡ剤の鎖の末端に少なくとも１つの不対ヌクレオチドが存在する。例えば、ｄｓＲＮＡの一方の鎖の３’末端が他方の鎖の５’末端を超えて伸長する場合、またはその逆の場合、ヌクレオチドオーバーハングが存在する。ｄｓＲＮＡは、少なくとも１、２、３、４、５、６個またはそれ以上のヌクレオチドのオーバーハングを含むことができる。ヌクレオチドオーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドを含むヌクレオチド／ヌクレオシド類似体を含むことができるか、またはそれからなることができる。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドオーバーハングは、ｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖上、ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖上、またはｄｓＲＮＡ剤の両末端にあり、オーバーハングのヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖またはセンス鎖のいずれかの５’末端、３’末端または両末端に存在することができることが理解される。本発明の特定の実施形態では、オーバーハング内のヌクレオチドのうちの１つ以上が、ヌクレオシドチオホスフェートによって置換される。

本明細書で使用される場合、用語「アンチセンス鎖」または「ガイド鎖」は、ＨＢＶ標的配列に少なくとも実質的に相補的な領域を含む、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の鎖を指す。本明細書で使用される場合、用語「センス鎖」または「パッセンジャー鎖」は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の領域に少なくとも実質的に相補的な領域を含む、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の鎖を指す。

修飾
本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶＲＮＡｉ剤のＲＮＡは、安定性および／または１つ以上の他の有益な特性を増強するために化学修飾される。核酸は、本発明の特定の実施形態では、当技術分野で十分に確立された方法、例えば、参照により本明細書に組み込まれる「ＣｕｒｒｅｎｔｐｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，」Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ｅｔａｌ．（Ｅｄｓ．），ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡに記載されているものによって合成および／または修飾され得る。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の特定の実施形態に存在し得る修飾には、例えば、（ａ）末端修飾、例えば、５’末端修飾（リン酸化、コンジュゲーション、反転連結（ｉｎｖｅｒｔｅｄｌｉｎｋａｇｅ）など）３’末端修飾（コンジュゲーション、ＤＮＡヌクレオチド、反転連結など）、（ｂ）塩基修飾、例えば、安定化塩基、不安定化塩基、または広範囲なレパートリーのパートナーと塩基対合する塩基による置換、塩基の除去（脱塩基ヌクレオチド）、またはコンジュゲート塩基、（ｃ）糖修飾（例えば、２’位置または４’位置で）、または糖の置換、および（ｄ）ホスホジエステル連結の修飾または置換を含む骨格修飾が含まれる。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよびＨＢＶセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態に有用なＲＮＡ化合物の特定の例には、限定するものではないが、修飾された骨格を含むかまたは天然のヌクレオシド間連結を含まないＲＮＡが含まれる。非限定的な例として、修飾された骨格を有するＲＮＡは、骨格内にリン原子を有しなくてもよい。ヌクレオシド間骨格にリン原子を有しないＲＮＡは、オリゴヌクレオシドと呼ばれ得る。本発明の特定の実施形態では、修飾ＲＮＡは、そのヌクレオシド間骨格にリン原子を有する。

用語「ＲＮＡ分子」または「ＲＮＡ」または「リボ核酸分子」は、天然に発現または見出されるＲＮＡ分子だけでなく、本明細書に記載されるまたは当技術分野で公知の１つ以上のリボヌクレオチド／リボヌクレオシド類似体または誘導体を含む、ＲＮＡの類似体および誘導体も包含することが理解される。用語「リボヌクレオシド」および「リボヌクレオチド」は、本明細書では区別なく使用され得る。ＲＮＡ分子は、例えば、本明細書中下記に記載されるように、核酸塩基構造内またはリボース－リン酸骨格構造内で修飾され得、リボヌクレオシド類似体またはリボヌクレオシド誘導体を含む分子は、二重鎖を形成する能力を保持しなければならない。非限定的な例として、ＲＮＡ分子はまた、限定するものではないが、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、５’ホスホロチオエート基を含むヌクレオシド、コレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオシド、ロックドヌクレオシド、脱塩基ヌクレオシド、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾ヌクレオシド、２’－アミノ修飾ヌクレオシド、２’－アルキル修飾ヌクレオシド、モルホリノヌクレオシド、ホスホルアミデート、もしくはヌクレオシドを含む非天然塩基、またはそれらの任意の組合せを含む少なくとも１つの修飾リボヌクレオシドを含むことができる。本発明のいくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、修飾リボヌクレオシドである、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤分子のリボヌクレオシド、または修飾リボヌクレオシドである、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤分子のリボヌクレオシドの全長までを含む。修飾は、ＲＮＡ分子内のそのような複数の修飾リボヌクレオシドの各々について同じである必要はない。

本発明のｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、１つ以上の独立して選択された修飾ヌクレオチド、および／または１つ以上の独立して選択された非ホスホジエステル連結を含み得る。本明細書で使用される場合、選択されたエレメント、例えば、本発明の修飾ヌクレオチド、非ホスホジエステル連結、標的化剤、ｄｓＲＮＡ剤、二重鎖などを参照して使用される用語「独立して選択された」は、２つ以上の選択されたエレメントが互いに同じであり得るが、同じである必要はないことを意味する。

本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド塩基」、「ヌクレオチド」または「核酸塩基」は、あらゆる核酸の標準的な構成要素である複素環ピリミジンまたはプリン化合物であり、ヌクレオチドアデニン（ａ）、グアニン（ｇ）、シトシン（ｃ）、チミン（ｔ）およびウラシル（ｕ）を形成する塩基を含む。核酸塩基は、限定することを意図するものではないが、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、広域塩基（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓｂａｓｅ）、サイズ拡張塩基（ｓｉｚｅ－ｅｘｐａｎｄｅｄｂａｓｅ）およびフッ素化塩基を含むようにさらに修飾され得る。用語「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」は、本明細書では、非修飾ヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたは代用置換部分を指すために使用され得る。当業者であれば、グアニン、シトシン、アデニンおよびウラシルが、このような置換部分を有するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対合特性を実質的に変化させることなく、他の部分によって置換され得ることを認識するであろう。

一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物に使用するために企図される修飾ＲＮＡは、必要とされる二重鎖構造を形成する能力を有し、ＲＩＳＣ経路を介した標的ＲＮＡの特異的分解を可能にするかまたは媒介するペプチド核酸（ＰＮＡ）である。本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶＲＮＡ干渉剤は、標的ＨＢＶＲＮＡ配列と相互作用して標的ＨＢＶＲＮＡの切断を導く一本鎖ＲＮＡを含む。

修飾ＲＮＡ骨格には、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルホスホネート、および３’－アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含む他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデートを含むホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、および通常の３’－５’連結を有するボラノホスフェート、これらの２’－５’連結類似体、ならびにヌクレオシド単位の隣接する対が３’－５’から５’－３’または２’－５’から５’－２’に連結されている反転極性を有するもの）が含まれ得る。様々な塩、混合塩および遊離酸形態も含まれる。リン含有連結を調製する手段は、当技術分野で常用的に実施されており、そのような方法は、本発明の特定の修飾ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、特定の修飾ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド、および／または特定の修飾ＨＢＶセンスポリヌクレオチドを調製するために使用され得る。

リン原子を含まない修飾ＲＮＡ骨格は、短鎖アルキルヌクレオシド間連結もしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、混合ヘテロ原子、およびアルキルヌクレオシド間連結もしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子ヌクレオシド間連結もしくは複素環式ヌクレオシド間連結によって形成される骨格を有する。これらには、（部分的には、ヌクレオシドの糖部分から形成される）モルホリノ連結を有するもの；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホネートおよびスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびに混合Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ_２構成要素部分を有する他のものが含まれる。リン原子を含まない修飾ＲＮＡ骨格を調製する手段は、当技術分野で常用的に実施されており、そのような方法は、本発明の特定の修飾ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、特定の修飾ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド、および／または特定の修飾ＨＢＶセンスポリヌクレオチドを調製するために使用され得る。

本発明の特定の実施形態では、ＲＮＡ模倣物は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチド、例えば、限定するものではないが、新規な基による糖およびヌクレオシド間連結、すなわち、ヌクレオチド単位の骨格の置換に含まれる。そのような実施形態では、塩基単位は、適切なＨＢＶ核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。そのようなオリゴマー化合物の１つである、優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されているＲＮＡ模倣物は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物では、ＲＮＡの糖骨格は、アミド含有骨格、特にアミノエチルグリシン骨格によって置換されている。核酸塩基は保持され、骨格のアミド部分のアザ窒素原子に直接的または間接的に結合している。ＲＮＡ模倣物を調製する手段は、当技術分野で常用的に実施されており、そのような方法を使用して、本発明の特定の修飾ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を調製することができる。

本発明のいくつかの実施形態は、ホスホロチオエート骨格を有するＲＮＡ、およびヘテロ原子骨格を有するオリゴヌクレオシド、特に－－ＣＨ_２－－ＮＨ－－ＣＨ_２－、－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_３）－－Ｏ－－ＣＨ_２－－［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として知られている］、－－ＣＨ_２－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－、－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_３）－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－、および－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－－－［天然のホスホジエステル骨格は、－－Ｏ－－Ｐ－－Ｏ－－ＣＨ_２－－として表される］を含む。ホスホロチオエート骨格を有するＲＮＡ、およびヘテロ原子骨格を有するオリゴヌクレオシドを調製する手段は、当技術分野で常用的に実施されており、そのような方法は、本発明の特定の修飾ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、特定のＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド、および／または特定のＨＢＶセンスポリヌクレオチドを調製するために使用され得る。

修飾ＲＮＡはまた、１つ以上の置換された糖部分を含有することができる。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドは、ＯＨ；Ｆ；Ｏ－－、Ｓ－－もしくはＮ－アルキル；Ｏ－－、Ｓ－－もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルのうちの１つを２’位置に含み得、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換または非置換のＣ_１～Ｃ_１０アルキル、またはＣ_２～Ｃ_１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。例示的な好適な修飾には、Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＨ_２、およびＯ（ＣＨ_２）_ｎＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３）］_２が含まれ、式中、ｎおよびｍは１～約１０である。他の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、Ｃ_１～Ｃ_１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリール、アラルキル、Ｏ－アルカリールもしくはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ_３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＳＯＣＨ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＯＮＯ_２、ＮＯ_２、Ｎ_３、ＮＨ_２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の薬物動態特性を改善するための基、またはＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／もしくはＨＢＶセンスポリヌクレオチドの薬力学的特性を改善するための基、ならびに同様の特性を有する他の置換基のうちの１つを２’位置に含む。いくつかの実施形態では、修飾には、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）、または２’－ＭＯＥとしても知られる２’－Ｏ－－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３）（Ｍａｒｔｉｎｅｔａｌ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８：４８６－５０４）、すなわち、アルコキシ－アルコキシ基が含まれる。別の例示的な修飾は、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、本明細書中以下の実施例に記載されるような、２’－ＤＭＡＯＥとしても知られるＯ（ＣＨ_２）_２ＯＮ（ＣＨ_３）_２基、および２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（当技術分野では２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチル、または２’－ＤＭＡＥＯＥとしても知られる）、すなわち、２’－Ｏ－－ＣＨ_２－Ｏ－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_２）_２である。記載されているような修飾ＲＮＡを調製する手段は、当技術分野で常用的に実施されており、そのような方法を使用して、本発明の特定の修飾ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を調製することができる。

他の修飾には、２’－メトキシ（２’－ＯＣＨ_３）、２’－アミノプロポキシ（２’－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２）、および２’－フルオロ（２’－Ｆ）が含まれる。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドのＲＮＡ上の他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上または２’－５’連結ＨＢＶｄｓＲＮＡ、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドもしくはＨＢＶセンスポリヌクレオチド内の糖の３’位置、および５’末端ヌクレオチドの５’位置で同様の修飾を行うこともできる。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドはまた、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分などの糖模倣物を有してもよい。記載されるような修飾ＲＮＡを調製する手段は、当技術分野で常用的に実施されており、そのような方法は、本発明の特定の修飾ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドを調製するために使用され得る。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、核酸塩基（当技術分野では単に「塩基」と呼ばれることが多い）の修飾または置換を含み得る。本明細書で使用される場合、「非修飾」または「天然」核酸塩基には、プリン塩基アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）が含まれる。修飾核酸塩基には、他の合成核酸塩基および天然核酸塩基、例えば、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミンおよび２－チオシトシン、５－ハロウラシルおよびシトシン、５－プロピニルウラシルおよびシトシン、６－アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルおよび他の８－置換アデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチルおよび他の５－置換ウラシルおよびシトシン、７－メチルグアニンおよび７－メチルアデニン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、７－デアザグアニンおよび７－ダアザアデニン（ｄａａｚａａｄｅｎｉｎｅ）ならびに３－デアザグアニンおよび３－デアザアデニンが含まれる。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の特定の実施形態に含まれ得る追加の核酸塩基は当技術分野で公知であり、例えば、ＭｏｄｉｆｉｅｄＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．Ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８；ＴｈｅＣｏｎｃｉｓｅＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａＯｆＰｏｌｙｍｅｒＳｃｉｅｎｃｅＡｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ８５８－８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｌ，Ｅｄ．ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９０，Ｅｎｇｌｉｓｈｅｔａｌ．，ＡｎｇｅｗａｎｄｔｅＣｈｅｍｉｅ，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３，Ｓａｎｇｈｖｉ，ＹＳ．，Ｃｈａｐｔｅｒ１５，ｄｓＲＮＡＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ２８９－３０２，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄＬｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄ．，ＣＲＣＰｒｅｓｓ，１９９３を参照されたい。核酸塩基の修飾および／または置換を含むｄｓＲＮＡ、ＨＢＶアンチセンス鎖ポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンス鎖ポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載されるものを調製する手段は、当技術分野で常用的に実施されており、そのような方法は、本発明の特定の修飾ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドを調製するために使用され得る。

本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態は、１つ以上のロックド核酸（ＬＮＡ）を含むように修飾されたＲＮＡを含む。ロックド核酸は、２’および４’炭素を接続する余分な架橋を含む修飾リボース部分を有するヌクレオチドである。この構造は、３’－ｅｎｄｏ構造的配座にリボースを効果的に「ロック」する。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドにロックド核酸を加えると、血清中の安定性が増加し、オフターゲット効果が減少し得る（Ｅｌｍｅｎ，Ｊ．ｅｔａｌ．，（２００５）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ３３（１）：４３９－４４７；Ｍｏｏｋ，ＯＲ．ｅｔａｌ．，（２００７）ＭｏｌＣａｎｃＴｈｅｒ６（３）：８３３－８４３；Ｇｒｕｎｗｅｌｌｅｒ，Ａ．ｅｔａｌ．，（２００３）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ３１（１２）：３１８５－３１９３）。ロックド核酸を含むｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドを調製する手段は、当技術分野で常用的に実施されており、そのような方法は、本発明の特定の修飾ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を調製するために使用され得る。

本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ化合物、センスポリヌクレオチドおよび／またはアンチセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’３’－セコヌクレオチド模倣物、ロックドヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、２’－メトキシエチルヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、および３’－ＯＭｅヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、もしくはコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、ホスホルアミデート、または非天然塩基含有ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ化合物は、本明細書ではガイド鎖とも呼ばれるアンチセンス鎖の５’末端にＥ－ビニルホスホネートヌクレオチドを含む。

本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ化合物、センスポリヌクレオチドの３’および５’末端、ならびに／またはアンチセンスポリヌクレオチドの３’末端の特定の実施形態は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、反転ヌクレオチド、反転脱塩基ヌクレオチド、反転２’－ＯＭｅヌクレオチド、反転２’－デオキシヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドの末端に脱塩基ヌクレオチドまたは反転脱塩基ヌクレオチドを含めると安定性が増強することが当業者に知られている（Ｃｚａｕｄｅｒｎａｅｔａｌ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２００３；３１（１１）：２７０５－２７１６．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｇ３９３）。

本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ化合物、アンチセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、非ロックド核酸ヌクレオチド（ＵＮＡ）または／およびグリコール核酸ヌクレオチド（ＧＮＡ）を含む。ＵＮＡおよびＧＮＡは熱不安定性化学修飾であり、ｓｉＲＮＡ化合物のオフターゲットプロファイルを顕著に改善することができることが当業者に知られている（Ｊａｎａｓ，ｅｔａｌ．，ＮａｔＣｏｍｍｕｎ．２０１８；９（１）：７２３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１４６７－０１８－０２９８９－４；Ｌａｕｒｓｅｎｅｔａｌ．，ＭｏｌＢｉｏＳｙｓｔ．２０１０；６：８６２－７０）。

本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態のＲＮＡに含まれ得る別の修飾は、それぞれＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドの１つ以上の特性を増強する１つ以上のリガンド、部分またはコンジュゲートをＲＮＡに化学的に連結することを含む。増強され得る特性の非限定的な例には、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドの活性、細胞分布、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の送達、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の薬物動態特性、ならびにＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の細胞取込みがある。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の特定の実施形態ではセンス鎖にコンジュゲートされる１つ以上の標的化基または連結基を含む。標的化基の非限定的な例には、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む化合物がある。用語「標的化基」、「標的化剤」、「連結剤」、「標的化化合物」および「標的化リガンド」は、本明細書では区別なく使用され得る。本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされた標的化化合物を含む。本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の３’末端にコンジュゲートされた標的化化合物を含む。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＧａｌＮＡｃを含む標的化基を含む。本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の３’末端および５’末端の一方または両方にコンジュゲートされた標的化化合物を含まない。本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端および３’末端の一方または両方にコンジュゲートされたＧａｌＮＡｃ含有標的化化合物を含まない。

追加の標的化剤および連結剤は当技術分野で周知であり、例えば、本発明の特定の実施形態で使用され得る標的化剤および連結剤には、限定するものではないが、脂質部分、例えば、コレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃｉｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６：６５５３－６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９４，４：１０５３－１０６０）、チオエーテル、例えば、ベリル－Ｓ－トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０：３０６－３０９；Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３：２７６５－２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１９９２，２０：５３３－５３８）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオール残基もしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ－Ｂｅｈｍｏａｒａｓｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ，１９９１，１０：１１１１－１１１８；Ｋａｂａｎｏｖｅｔａｌ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔ．，１９９０，２５９：３２７－３３０；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５：４９－５４）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロール、もしくはトリエチル－アンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１－３６５４；Ｓｈｅａｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１９９０，１８：３７７７－３７８３）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４：９６９－９７３）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１－３６５４）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４：２２９－２３７）、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニルオキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７：９２３－９３７）が含まれる。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドおよび／またはＨＢＶセンスポリヌクレオチドを含む組成物の特定の実施形態は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の分布、標的化などを変化させるリガンドを含み得る。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含む組成物のいくつかの実施形態では、リガンドは、例えば、そのようなリガンドを欠く種と比較して、選択された標的、例えば、分子、細胞もしくは細胞型、区画、例えば、細胞区画もしくは器官区画、組織、器官、または身体の領域に対する親和性を増加させる。本発明の組成物および／または方法に有用なリガンドは、天然に存在する物質、例えば、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）またはグロブリン）；炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリンまたはヒアルロン酸）；または脂質であり得る。リガンドはまた、合成ポリマー、例えば、合成ポリアミノ酸または合成ポリアミンなどの組換え分子または合成分子であってよい。ポリアミノ酸の例には、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ－アスパラギン酸、ポリＬ－グルタミン酸、スチレン－無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）コポリマー、ジビニルエーテル－無水マレイン酸コポリマー、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２－エチルアクリル酸）、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドポリマー、またはポリホスファジンがある。ポリアミンの例には、ポリエチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、偽ペプチド－ポリアミン、ペプチド模倣ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの四級塩、またはアルファヘリカルペプチドが挙げられる。

本発明の組成物および／または方法に含まれるリガンドは、標的化基を含み得、その非限定的な例には、細胞標的化剤または組織標的化剤、例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質またはタンパク質、例えば、腎細胞または肝細胞などの特定の細胞型に結合する抗体がある。標的化基は、チロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、界面活性剤プロテインＡ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタメート、ポリアスパルテート、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、フォレート、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、ビオチン、またはＲＧＤペプチドもしくはＲＧＤペプチド模倣物であり得る。

リガンドの他の例には、色素、インターカレート剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サッフィリン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子、例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸（ｃｈｏｌｅｎｉｃａｃｉｄ）、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジン）およびペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、ホスフェート、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］_２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識されたマーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾールコンジュゲート、テトラアザマクロ環のＥｕ３＋複合体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰまたはＡＰが挙げられる。

本発明の組成物および／または方法に含まれるリガンドは、タンパク質、例えば、糖タンパク質もしくはペプチド、例えば、コリガンドに対する特異的親和性を有する分子、または抗体、例えば、限定するものではないが、肝細胞などの特定の細胞型に結合する抗体であり得る。本発明の組成物および／または方法の実施形態に有用なリガンドは、ホルモンまたはホルモン受容体であり得る。本発明の組成物および／または方法の実施形態に有用なリガンドは、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノース、または多価フコースであり得る。本発明の組成物および／または方法の実施形態に有用なリガンドは、例えば、細胞の細胞骨格を破壊することによって、例えば、細胞の微小管、微小線維および／または中間径線維を破壊することによって、細胞へのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の取込みを増加させることができる物質であり得る。このタイプの薬剤の非限定的な例には、タキソン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャプラキノリド〔japlakinolide〕、ラトランクリンＡ、ファロイジン、スウィンホリドＡ、インダノシンおよびミオセルビンがある。

いくつかの実施形態では、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤に結合したリガンドは、薬物動態（ＰＫ）モジュレーターとして機能する。本発明の組成物および方法に使用され得るＰＫモジュレーターの例には、限定するものではないが、親油性物質、胆汁酸、ステロイド、リン脂質類似体、ペプチド、タンパク質結合剤、ＰＥＧ、ビタミン、コレステロール、脂肪酸、コール酸、リトコール酸、ジアルキルグリセリド、ジアシルグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、ナプロキセン、イブプロフェン、ビタミンＥ、ビオチン、血清タンパク質に結合するアプタマーなどが挙げられる。多数のホスホロチオエート連結を含むオリゴヌクレオチドはまた、血清タンパク質に結合することが知られており、したがって、骨格内に複数のホスホロチオエート連結を含む短いオリゴヌクレオチド、例えば、約５塩基、１０塩基、１５塩基または２０塩基のオリゴヌクレオチドも、リガンドとして本発明の組成物および／または方法に使用され得る。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤組成物
本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は組成物中にある。本発明の組成物は、１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と、任意に、薬学的に許容される担体、送達剤、標的化剤、検出可能な標識などのうちの１つ以上とを含み得る。本発明の方法のいくつかの実施形態に従って有用であり得る標的化剤の非限定的な例には、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を治療される細胞におよび／または治療される細胞内に導く薬剤がある。選択される標的化剤は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の性質のような要素、および標的とされる細胞型に依存する。非限定的な例において、本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を肝細胞におよび／または肝細胞内に標的化することが望ましい場合がある。本発明の方法のいくつかの実施形態では、治療剤は、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む送達剤などの送達剤のみを有し、追加の結合したエレメントを有しないＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含むことが理解される。例えば、本発明のいくつかの態様では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＧａｌＮＡｃを含み、薬学的に許容される担体を含む組成物に含まれる送達化合物に結合され、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤に結合した検出可能な標識または標的化剤などを伴わず、細胞または対象に投与され得る。

本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤が、１つ以上の送達剤、標的化剤、標識剤などとともに投与され、および／または１つ以上の送達剤、標的化剤、標識剤などに結合される場合、当業者であれば、本発明の方法に使用するのに適した薬剤を認識し、選択および使用することができるであろう。標識剤は、細胞および組織内のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の位置を決定するために本発明の特定の方法で使用されてもよく、本発明の方法で投与されたＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含む治療組成物の細胞、組織または器官の位置を決定するために使用されてもよい。酵素標識、色素、放射性標識などの標識剤を結合および利用するための手順は、当技術分野で周知である。本発明の組成物および方法のいくつかの実施形態では、標識剤は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤に含まれるセンスポリヌクレオチドおよびアンチセンスポリヌクレオチドの一方または両方に結合していることが理解される。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の送達
本発明の方法の特定の実施形態は、細胞内へのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の送達を含む。本明細書で使用される場合、用語「送達」は、細胞内への取込みまたは吸収を促進または達成することを意味する。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の吸収または取込みは、援助されない拡散細胞プロセスもしくは活性な細胞プロセスによって、または本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤に関連し得る送達剤、標的化剤などの使用によって起こり得る。本発明の方法に使用するのに適した送達手段には、限定するものではないが、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤が組織部位内に注射されるかまたは全身投与されるインビボ送達が含まれる。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、送達剤に結合される。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を細胞、組織および／または対象に送達するために使用され得る方法の非限定的な例には、ＨＢＶｄｓＲＮＡ－ＧａｌＮＡｃコンジュゲート、ＳＡＭｉＲＮＡ技術、ＬＮＰに基づく送達方法、および裸のＲＮＡ送達が含まれる。これらおよび他の送達方法は、限定するものではないが、肝疾患、急性間欠性ポルフィリン症（ＡＩＰ）、血友病、肺線維症などの様々な疾患および病態を治療するための治療用ＲＮＡｉ剤を送達するために当技術分野で首尾よく使用されている。様々な送達手段の詳細は、その各々の内容が参照により本明細書に組み込まれるＮｉｋａｍ，Ｒ．Ｒ．＆Ｋ．Ｒ．Ｇｏｒｅ（２０１８）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＴｈｅｒ，２８（４），２０９－２２４Ａｕｇ２０１８；ＳｐｒｉｎｇｅｒＡ．Ｄ．＆Ｓ．Ｆ．Ｄｏｗｄｙ（２０１８）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＴｈｅｒ．Ｊｕｎ１；２８（３）：１０９－１１８；Ｌｅｅ，Ｋ．ｅｔａｌ．，（２０１８）ＡｒｃｈＰｈａｒｍＲｅｓ，４１（９），８６７－８７４；およびＮａｉｒ，Ｊ．Ｋ．ｅｔａｌ．，（２０１４）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３６：１６９５８－１６９６１などの刊行物に見出される。

本発明のいくつかの実施形態は、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を細胞、組織、および／または対象に送達するための脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の使用を含む。ＬＮＰは、治療用ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含むＨＢＶｄｓＲＮＡ剤のインビボ送達に常用的に使用されている。ＬＮＰまたは他の送達剤を使用することの１つの利点には、ＬＮＰまたは他の送達剤を使用して対象に送達される場合のＨＢＶＲＮＡ剤の安定性の増加がある。本発明のいくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本発明の１つ以上のＨＢＶＲＮＡｉ分子が添加されたカチオン性ＬＮＰを含む。ＨＢＶＲＮＡｉ分子を含むＬＮＰは対象に投与され、ＬＮＰおよびそれらの結合したＨＢＶＲＮＡｉ分子はエンドサイトーシスを介して細胞に取り込まれ、それらの存在はＲＮＡｉトリガー分子の放出をもたらし、これにより、ＲＮＡｉが媒介される。

本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を細胞、組織および／または対象に送達するために本発明の実施形態で使用され得る送達剤の別の非限定的な例には、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤に結合し、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を細胞、組織および／または対象に送達する、ＧａｌＮＡｃを含む薬剤がある。本発明の方法および組成物の特定の実施形態に使用され得る、ＧａｌＮＡｃを含む特定の追加の送達剤の例は、ＰＣＴ出願：国際公開第２０２０１９１１８３号に開示されている。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を細胞に送達するために本発明の組成物および方法で使用され得るＧａｌＮＡｃ標的化リガンドの非限定的な例には、標的化リガンドクラスターがある。本明細書に提示される標的化リガンドクラスターの例は、ホスホジエステル連結を有するＧａｌＮＡｃリガンド（ＧＬＯ）、およびホスホロチオエート連結を有するＧａｌＮＡｃリガンド（ＧＬＳ）と呼ばれる。用語「ＧＬＸ－０」は、本明細書では、結合したＧａｌＮＡＣ含有化合物が、以下に各々の構造を示す化合物ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５、およびＧＬＯ－１６のいずれか１つであることを示すために使用され得、以下では、本発明のＲＮＡｉ剤へのＧａｌＮＡｃ標的化リガンドの結合位置は各々の右端にある（「
」によって示す）。本発明の任意のＲＮＡｉおよびｄｓＲＮＡ分子は、ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５、およびＧＬＯ－１６に結合され得ることが理解される。ＧＬＯ－１からＧＬＯ－１６、およびＧＬＳ－１からＧＬＳ－１６の構造を以下に示す。

本発明のいくつかの実施形態では、インビボ送達はまた、ベータ－グルカン送達系、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，０３２，４０１号明細書および米国特許第５，６０７，６７７号明細書ならびに米国特許公開第２００５／０２８１７８１号明細書に記載されているものによるものであり得る。細胞へのＨＢＶＲＮＡｉ剤のインビトロ導入は、当技術分野で公知の方法、例えば、エレクトロポレーションおよびリポフェクションを使用して行われてもよい。本発明の方法の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡは、標的化剤を用いず送達される。これらのＲＮＡは、「裸の」ＲＮＡ分子として送達され得る。非限定的な例として、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡは、ＲＮＡｉ剤を含むが、ＧａｌＮＡｃ標的化化合物などの標的化剤を含まない医薬組成物中で、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態、例えば、肝疾患を治療するために対象に投与されてもよい。

本明細書に記載の特定の送達手段に加えて、ＲＮＡｉ送達手段、例えば、限定するものではないが、本明細書に記載のもの、および当技術分野で使用されるものが、本明細書に記載のＨＢＶＲＮＡｉ剤および治療方法の実施形態と組み合わせて使用され得ることが理解される。

本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、細胞および／または対象におけるＨＢＶポリペプチドのレベルおよび活性を低下させるのに有効な量および様式で対象に投与され得る。本発明の方法のいくつかの実施形態では、ＨＢＶの発現および活性に関連する疾患または病態を治療するために、１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤が細胞および／または対象に投与される。本発明の方法は、いくつかの実施形態では、対象におけるＨＢＶの発現に関連する疾患または病態を低減するために、そのような治療を必要とする対象に１つ以上の独立して選択されたＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を投与することを含む。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤は、もう１つのインビトロ細胞、エクスビボ細胞およびインビボ細胞内でＨＢＶの発現および／または活性を低下させるために投与され得る。

本発明のいくつかの実施形態では、細胞内のＨＢＶポリペプチドのレベル、ひいては活性、ひいてはウイルスの機能は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を細胞内に送達する（例えば、導入する）ことによって低下させられる。標的化剤および方法は、対象内の特定の細胞型、細胞サブタイプ、器官、空間領域に、および／または細胞内の亜細胞領域にＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を送達するのを助けるために使用され得る。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、本発明の特定の方法では、単独で、または１つ以上の追加のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態では、２、３、４個またはそれ以上の独立して選択されたＨＢＶｄｓＲＮＡ剤が対象に投与される。本発明の組成物および方法のいくつかの実施形態では、２、３個またはそれ以上の独立して選択された治療用分子を含む。本発明の方法のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｍＲＮＡの１、２個またはそれ以上の異なる位置／領域を標的とする２、３、４個またはそれ以上のＨＢＶｓｉＲＮＡが、細胞および／または対象に投与される。そのような場合、本発明の組成物は、独立して選択された送達化合物にそれぞれがコンジュゲートされた２、３、４個またはそれ以上の独立して選択されたＨＢＶｓｉＲＮＡを含み得る。本発明の薬剤および／または組成物の特定の実施形態は、同じ送達化合物にいずれもコンジュゲートされた２つの独立して選択されたＨＢＶｓｉＲＮＡを含む二価ｓｉＲＮＡ化合物（本明細書では連結ｓｉＲＮＡ化合物とも呼ばれる）を含む。

本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するための１つ以上の追加の治療レジメンと組み合わせて、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するために対象に投与される。そのような組合せは、相乗効果をもたらし得る。追加の治療レジメンの非限定的な例には、本発明の１つ以上のＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチドを投与すること、非ＨＢＶｄｓＲＮＡ治療剤を投与すること、および行動変容がある。追加の治療レジメンは、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与前、投与と同時、および投与後のうちの１つ以上である時点で投与され得る。本明細書で使用される場合、と同時、時間０の５分以内、時間０の１０分以内、時間０の３０分以内、時間０の４５分以内、および時間０の６０分以内、「時間０」、対象への本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与時間、ことが理解される。

非限定的な例において、本発明のいくつかの実施形態では、対象に投与される追加の治療レジメンは、１つ以上のＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド、１つ以上の追加のＨＢＶｄｓＲＮＡ治療剤、１つ以上の非ＨＢＶｄｓＲＮＡおよび／またはｓｉＲＮＡ治療剤、ならびに行動変容のうちの１つ以上を含む。非ＨＢＶｄｓＲＮＡ治療レジメンの非限定的な例は、抗ウイルス剤；抗ウイルスヌクレオシドまたはヌクレオチド類似体（ＮＵＣ）（その非限定的な例には、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）、テノホビルアラフェナミド、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、エンテカビル（ＥＴＶ）およびテルビブジンがある）；ウイルスポリメラーゼ阻害剤；逆転写酵素阻害剤；免疫刺激薬；治療用ワクチン；ウイルス侵入阻害剤；ＨＢｓＡｇの分泌または放出を阻害するオリゴヌクレオチド；カプシド阻害剤；共有結合閉環状（ｃｃｃ）ＨＢＶＤＮＡ阻害剤、ならびに他の治療剤、および／または限定するものではないが、肝移植および化学療法などの手順のうちの１つ以上を対象に投与することを含む。本発明の方法に使用され得る免疫刺激薬の非限定的な例には、ペグ化インターフェロンアルファ２ａ（ＰＥＧ－ＩＦＮ－ａ２ａ）、インターフェロンアルファ－２ｂ、組換えヒトインターロイキン－７、およびＴｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニスト、およびチェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ１阻害剤）がある。

行動変容の非限定的な例には、食事療法レジメン、休息レジメン、隔離レジメンおよびカウンセリングがある。これらおよび他の治療剤ならびに行動変容は、当技術分野で公知であり、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するために使用され、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するために本発明の１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与と組み合わせて対象に投与され得る。ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するために細胞または対象に投与される、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、１つ以上の他の治療剤もしくは活性と相乗的に作用し得、１つ以上の治療剤もしくは活性の有効性を増加させ得、および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態を治療する際のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効性を増加させ得る。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与を含む、本発明の治療方法は、ＨＢＶに感染した無症候性対象に対して、ならびに／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の初期、中期および後期、およびこれらの段階のいずれかの前および後のあらゆる時点を含む、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の１つ以上の症状が存在する場合に使用され得る。本発明の方法はまた、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の治療時に成功しなかった、成功が最小限であった、および／またはもはや成功していない１つ以上の他の治療剤および／または治療活動によってＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態のために以前に治療されたことがある対象を治療することであり得る。

ベクターによってコードされるｄｓＲＮＡ
本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ベクターを使用して細胞内に送達され得る。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤転写単位が、ＤＮＡベクターまたはＲＮＡベクターに含まれ得る。配列を細胞およびまたは対象内に送達するための導入遺伝子をコードするそのようなベクターの調製および使用は、当技術分野で周知である。例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０時間またはそれ以上、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週間またはそれ以上にわたって、ＨＢＶｄｓＲＮＡの一過性発現をもたらすベクターを本発明の方法に使用することができる。一過性発現の長さは、限定するものではないが、選択された特定のベクター構築物ならびに標的細胞および／または組織などの要素に基づく常用的な方法を使用して決定され得る。そのような導入遺伝子は、線状構築物、環状プラスミド、または組込み型もしくは非組込み型ベクターであり得るウイルスベクターとして導入され得る。導入遺伝子はまた、それが染色体外プラスミドとして遺伝することを可能にするように構築され得る（Ｇａｓｓｍａｎｎ，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９５）９２：１２９２）。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の個々の鎖または複数の鎖は、発現ベクター上のプロモーターから転写され得る。例えば、ｄｓＲＮＡを生成するために２つの別個の鎖を発現させる場合、トランスフェクションまたは感染などの手段を使用して２つの別個の発現ベクターを細胞に同時導入することができる。特定の実施形態では、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の各個々の鎖は、同じ発現ベクターにいずれも含まれるプロモーターによって転写され得る。本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤がステムループ構造を有するように、リンカーポリヌクレオチド配列によって結合された逆方向反復ポリヌクレオチドとして発現される。

ＲＮＡ発現ベクターの非限定的な例には、ＤＮＡプラスミドまたはウイルスベクターがある。本発明の実施形態に有用な発現ベクターは、真核細胞と適合性であり得る。真核細胞発現ベクターは、当技術分野で常用的に使用されており、いくつかの商業的供給源から入手可能である。ＨＢＶｄｓＲＮＡ発現ベクターの送達は全身的であり得、例えば、静脈内もしくは筋肉内投与による、対象から移植された標的細胞への投与と、それに続く対象内への再導入による、または所望の標的細胞内への導入を可能にする任意の他の手段によるものであり得る。

方法の一実施形態に含まれ得るウイルスベクター系には、限定するものではないが、（ａ）アデノウイルスベクター；（ｂ）限定するものではないが、レンチウイルスベクター、モロニーマウス白血病ウイルスなどを含むレトロウイルスベクター；（ｃ）アデノ随伴ウイルスベクター；（ｄ）単純ヘルペスウイルスベクター；（ｅ）ＳＶ４０ベクター；（ｆ）ポリオーマウイルスベクター；（ｇ）パピローマウイルスベクター；（ｈ）ピコルナウイルスベクター；（ｉ）オルソポックスなどのポックスウイルスベクター、例えば、ワクシニアウイルスベクター、またはアビポックス（ａｖｉｐｏｘ）、例えば、カナリア痘または鶏痘；および（ｊ）ヘルパー依存性アデノウイルスまたはガットレス（ｇｕｔｌｅｓｓ）アデノウイルスが含まれる。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の組換え発現のための構築物は、構成的発現または調節／誘導性発現を提供するように選択され得るプロモーター、エンハンサーなどの調節エレメントを含み得る。ウイルスベクター系、ならびにプロモーターおよびエンハンサーなどの使用は、当技術分野では常用的であり、本明細書に記載の方法および組成物とともに使用され得る。

本発明の特定の実施形態は、細胞内へのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の送達のためのウイルスベクターの使用を含む。多数のアデノウイルス系送達系が、例えば、肺、肝臓、中枢神経系、内皮細胞および筋肉への送達のために当技術分野で常用的に使用されている。本発明の方法に使用され得るウイルスベクターの非限定的な例には、ＡＡＶベクター、ワクシニアウイルスなどのポックスウイルス、改変ウイルスアンカラ（ＭＶＡ）、ＮＹＶＡＣ、鶏痘またはカナリア痘などのアビポックスがある。

本発明の特定の実施形態は、ベクターを使用してＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を細胞内に送達する方法を含み、そのようなベクターは、遺伝子送達ビヒクルが埋め込まれた徐放性マトリックスを含み得るが、含まなくてもよい薬学的に許容される担体内にあり得る。いくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡを送達するためのベクターを組換え細胞から産生することができ、本発明の医薬組成物は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ送達系を産生した１つ以上の細胞を含み得る。

ＨＢＶｄｓＲＮＡを含有する医薬組成物
本発明の特定の実施形態は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と、薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物の使用を含む。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含有する医薬組成物は、細胞内でのＨＢＶ遺伝子発現およびＨＢＶ活性を低下させるために本発明の方法に使用され得、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するのに有用である。そのような医薬組成物は、送達様式に基づいて製剤化され得る。送達様式のための製剤の非限定的な例には、皮下送達のために製剤化された組成物、非経口送達による全身投与のために製剤化された組成物、静脈内（ＩＶ）送達のために製剤化された組成物、髄腔内送達のために製剤化された組成物、脳内への直接送達のために製剤化された組成物などがある。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を細胞内に送達するための本発明の調剤学的組成物の投与は、局所（例えば、経皮パッチによって）、肺などの１つ以上の手段を使用して、例えば、ネブライザー、気管内、鼻腔内、表皮および経皮、経口または非経口によるものを含む、粉末またはエアロゾルの吸入または吹送によって行われてもよい。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内もしくは筋肉内注射もしくは注入、真皮下、例えば、埋め込まれた装置による、または頭蓋内、例えば、実質内、髄腔内もしくは脳室内投与によるものが含まれる。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤はまた、標的組織に直接（例えば、肝臓内に直接、腎臓に直接など）送達され得る。細胞内に「ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を送達する」は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤をそれぞれ直接送達すること、および細胞内に送達されるコードベクターから、またはＨＢＶｄｓＲＮＡが細胞内に存在するようになる任意の好適な手段によって、細胞内でＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を発現させることを包含することが理解される。阻害性ＲＮＡを送達するための製剤の調製および使用ならびに手段は周知であり、当技術分野で常用的に使用されている。

本明細書で使用される場合、「医薬組成物」は、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の薬理学的有効量と、薬学的に許容される担体とを含む。用語「薬学的に許容される担体」は、治療剤を投与するための担体を指す。そのような担体には、限定するものではないが、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノールおよびそれらの組合せが含まれる。該用語は、細胞培養培地を特に除外する。経口投与される薬物の場合、薬学的に許容される担体には、限定するものではないが、薬学的に許容される賦形剤、例えば、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤が含まれる。好適な不活性希釈剤には、炭酸ナトリウムおよび炭酸カルシウム、リン酸ナトリウムおよびリン酸カルシウム、ならびにラクトースが含まれ、コーンスターチおよびアルギン酸が好適な崩壊剤である。結合剤は、デンプンおよびゼラチンを含み得るが、潤滑剤は、存在する場合、一般に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。所望であれば、消化管内での吸収を遅延させるために、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの材料によって錠剤をコーティングしてもよい。製剤に含まれる薬剤については、本明細書中以下にさらに記載される。

本明細書で使用される場合、「薬理学的有効量」、「治療有効量」および「有効量」などの用語は、意図された薬理学的、治療的または予防的結果をもたらすための本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の量を指す。例えば、所与の臨床治療が、疾患または障害に関連する測定可能なパラメータの少なくとも１０％の減少がある場合に有効であると考えられる場合、その疾患または障害の治療のための薬物の治療有効量は、そのパラメータの少なくとも１０％の減少をもたらすのに必要な量である。例えば、治療有効量のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＨＢＶポリペプチドレベルを少なくとも１０％低下させることができる。

有効量
本発明の方法は、いくつかの態様では、接触した細胞内のＨＢＶ遺伝子発現を減少させるのに有効な量のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と細胞を接触させることを含む。本発明の方法の特定の実施形態は、ＨＢＶ遺伝子発現を減少させ、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するのに有効な量で、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を対象に投与することを含む。ＨＢＶの発現を減少させることに関して、および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態を治療することについて使用される「有効量」は、所望の生物学的効果を実現するのに必要または十分な量である。例えば、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するためのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効量は、（ｉ）疾患もしくは状態の進行を遅らせるかもしくは停止させる、または（ｉｉ）疾患もしくは状態の１つ以上の症状を逆転させるか、減少させるか、もしくは排除するのに必要な量であり得る。本発明のいくつかの態様では、有効量は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の治療を必要とする対象に投与された場合に、疾患または病態を予防および／または治療する治療応答をもたらす、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の量である。本発明のいくつかの態様によれば、有効量は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態のための別の治療的処置と組み合わせたまたは同時投与した場合に、疾患または病態を予防および／または治療する治療応答をもたらす、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の量である。本発明のいくつかの実施形態では、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を用いて対象を治療する生物学的効果は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態に起因する症状の改善およびまたは絶対的排除であり得る。本発明のいくつかの実施形態では、生物学的効果は、例えば、対象がＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を有しないことを示す診断検査によって証明されるように、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の完全な抑止である。ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の状態を評価する当技術分野で公知の追加の手段を使用して、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態に対する本発明の薬剤および／または方法の効果を決定することができる。

典型的には、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するレベルまでＨＢＶポリペプチド活性を低下させるためのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効量が臨床試験で決定され、盲検試験では、対照集団と対比した試験集団の有効用量が確立される。いくつかの実施形態では、有効量は、所望の応答をもたらす量、例えば、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を有する細胞、組織および／または対象においてＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を低減する量である。したがって、ＨＢＶポリペプチド活性を低下させることによって治療され得るＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するためのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効量は、投与された場合に、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与しない細胞、組織および／または対象に存在するであろう量よりも少ない量まで対象におけるＨＢＶポリペプチド活性の量を減少させる量であり得る。本発明の特定の態様では、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と接触していないかまたは本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を投与されていない細胞、組織および／または対象に存在するＨＢＶポリペプチド活性および／またはＨＢＶ遺伝子発現のレベルは、「対照」量と呼ばれる。本発明の方法のいくつかの実施形態では、対象の対照量は、対象の治療前量であり、言い換えれば、ＨＢＶ剤の投与前の対象におけるレベルは、その対象の対照レベルであり得、対象に投与されたｓｉＲＮＡ後の対象におけるＨＢＶポリペプチド活性および／またはＨＢＶ遺伝子発現のレベルと比較され得る。ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療する場合、所望の応答は、細胞、組織および／または対象における疾患または病態の１つ以上の症状を低減または排除することであり得る。低減または排除は、一時的であり得るか、または恒久的であり得る。ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の状態は、ＨＢＶポリペプチド活性、ＨＢＶ遺伝子発現、症状評価、臨床検査などを決定する方法を使用してモニタリングされ得ることが理解される。本発明のいくつかの態様では、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の治療に対する所望の応答は、疾患もしくは病態の発症を遅延させるか、またはさらには疾患もしくは病態の発症を予防することである。

ＨＢＶポリペプチド活性を低下させる化合物の有効量はまた、細胞または対象へのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与の生理学的効果、例えば、投与後のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の低減を評価することによって決定され得る。対象のアッセイおよび／または症候的モニタリングを使用して、本発明の医薬化合物中の投与され得る本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効性を決定し、治療に対する応答の有無を決定することができる。非限定的な例には、血清プロファイルの当技術分野で公知の１つ以上の検査がある。別の非限定的な例には、肝機能の当技術分野で公知の１つ以上の検査を使用して、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤による対象の治療前および後の対象のＨＢＶ関連肝疾患またはＨＢＶ関連肝病態の状態を決定することができることがある。別の非限定的な例では、ＨＢＶウイルス量レベルの当技術分野で公知の１つ以上の検査を使用して、対象のＨＢＶ関連疾患の状態を決定する。この例では、疾患は、あるレベルのＨＢＶウイルス量を含み、検査は、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤による対象の治療前および後に対象のＨＢＶウイルス量レベルを決定するために使用される。

本発明のいくつかの実施形態は、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の１つ以上の「生理学的特性」を評価および／またはモニタリングすることによって、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するために対象に投与された本発明のｄｓＲＮＡ剤の有効性を決定する方法を含む。ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の生理学的特性の非限定的な例には、対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；対象におけるＨＢＶウイルス量；対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベル、ならびに１つ以上の身体的症状、例えば、限定するものではないが、疼痛、発熱などがある。そのような生理学的特性を決定するための常用的な手段は、当技術分野で公知であり、限定するものではないが、血液検査、血清分析、組織生検、イメージング試験、身体検査などを含む。

対象に投与されるＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の量は、少なくとも部分的に、対象について決定された疾患および／もしくは病態の状態、ならびに／または生理学的特性のそのような決定に基づいて改変され得ることが理解される。治療の量は、例えば、ＨＢＶ－ｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤の量を増加または減少させることによって、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤がそれぞれ投与される組成物を変更することによって、投与経路を変更することによって、投与タイミングを変更することなどによって変動させてもよい。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効量は、治療されている特定の病態、治療されている対象の年齢および身体状態；病態の重症度、治療期間、併用療法（存在する場合）の性質、特定の投与経路、ならびに医療従事者の知識および専門的技術内の追加の要因によって変動する。例えば、有効量は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するのに有効なＨＢＶポリペプチド活性およびまたはＨＢＶ遺伝子発現の所望のレベルに依存し得る。当業者であれば、過度の実験を必要とすることなく、本発明の方法に使用するための本発明の特定のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効量を経験的に決定することができる。本明細書で提供される教示と組み合わせて、本発明の様々なＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤の中から選択し、効力、相対バイオアベイラビリティ、患者の体重、有害な副作用の重症度、および好ましい投与様式などの要因を考慮することによって、特定の対象を治療するのに有効な、有効な予防的または治療的処置レジメンを計画することができる。本発明の実施形態で使用される場合、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効量は、細胞と接触した際に細胞内で所望の生物学的効果をもたらす量であり得る。

ＨＢＶ遺伝子サイレンシングは、ＨＢＶを発現する任意の細胞において、構成的に、またはゲノム工学によって、および任意の適切なアッセイによって決定され得ることが認識される。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現は、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与によって、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％減少する。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現は、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与によって、５％～１０％、５％～２５％、１０％～５０％、１０％～７５％、２５％～７５％、２５％～１００％、または５０％～１００％減少する。

投与
ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤およびＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤は、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するのに十分な投与量で医薬組成物中で送達される。本発明の特定の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の用量は、１日当たりレシピエントの体重１キログラム当たり０．０１～２００．０ミリグラムの範囲、一般に、１日当たり体重１キログラム当たり１～５０ｍｇ、５～４０ｍｇ／ｋｇ体重、１０～３０ｍｇ／ｋｇ体重、１～２０ｍｇ／ｋｇ体重、１～１０ｍｇ／ｋｇ体重、４～１５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲（両端の値を含む）である。例えば、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．７ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．２ｍｇ／ｋｇ、２．３ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、２．６ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、２．８ｍｇ／ｋｇ、２．９ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．１ｍｇ／ｋｇ、３．２ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．４ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．７ｍｇ／ｋｇ、３．８ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．１ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．３ｍｇ／ｋｇ、４．４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．６ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、４．９ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．２ｍｇ／ｋｇ、５．３ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、５．６ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ、５．８ｍｇ／ｋｇ、５．９ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、６．１ｍｇ／ｋｇ、６．２ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、６．４ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３１ｍｇ／ｋｇ、３２ｍｇ／ｋｇ、３３ｍｇ／ｋｇ、３４ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、３６ｍｇ／ｋｇ、３７ｍｇ／ｋｇ、３８ｍｇ／ｋｇ、３９ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４１ｍｇ／ｋｇ、４２ｍｇ／ｋｇ、４３ｍｇ／ｋｇ、４４ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、４６ｍｇ／ｋｇ、４７ｍｇ／ｋｇ、４８ｍｇ／ｋｇ、４９ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ身体／単回投与の量で投与され得る。

様々な要因が、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与量と送達のタイミングとを決定する際に考慮され得る。送達されるＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の絶対量は、同時治療、用量の数、ならびに年齢、身体状態、サイズおよび体重を含む個々の対象パラメータを含む様々な要因に依存する。これらは、当業者に周知の要因であり、常用的な実験のみを用いて対処され得る。いくつかの実施形態では、最大用量、すなわち、妥当な医学的判断による最高安全用量を使用することができる。

本発明の方法は、いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の用量のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を対象に投与することを含み得る。いくつかの例では、医薬化合物（例えば、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含むか、またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を含む）は、少なくとも連日、１日おき、毎週、隔週、毎月などで対象に投与され得る。用量は、１日１回、または１日１回を超えて、例えば、２４時間のうちに２回、３回、４回、５回またはそれ以上投与され得る。本発明の医薬組成物は、１日１回投与されてもよいか、またはＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、１日を通して適切な間隔で２、３もしくはそれ以上のサブ用量として投与されてもよいか、またはさらには制御放出製剤による連続注入もしくは送達を使用して投与されてもよい。本発明の方法のいくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、１日に１回以上、１週間に１回以上、１ヶ月に１回以上、または１年に１回以上対象に投与される。

本発明の方法は、いくつかの態様では、単独で、１つ以上の他のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤もしくはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤と組み合わせて、および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態を有する対象に投与される他の薬物療法もしくは治療活動もしくはレジメンと組み合わせて、医薬化合物を投与することを含む。医薬化合物は、医薬組成物で投与され得る。本発明の方法に使用される医薬組成物は、無菌であり得、対象への投与に適した重量または体積の単位で所望の応答をもたらすのに十分なレベルまでＨＢＶポリペプチドの活性を低下させる量のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含有し得る。ＨＢＶタンパク質活性を低下させるためのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含む医薬組成物の、対象に投与される用量は、様々なパラメータに従って、特に使用される投与様式および対象の状態に従って選択され得る。他の要因には、所望の治療期間が含まれる。対象の応答が適用された初期用量で不十分である場合、患者の寛容性が許容する程度まで、さらに高い用量（または異なるさらに局所的な送達経路による効果的にさらに高い用量）を使用してもよい。

治療
ＨＢＶポリペプチドのレベルおよび／または活性の低下がＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するのに有効であるＨＢＶ関連疾患およびＨＢＶ関連病態は、ＨＢＶの発現を阻害するための本発明の方法およびＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を使用して治療され得る。本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、および本発明の治療方法によって治療され得る疾患および病態の例には、限定するものではないが、Ｂ型肝炎、ＨＢＶ感染、慢性Ｂ型肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）、肝損傷、肝硬変、急性Ｂ型肝炎、急性劇症肝炎、肝臓炎、肝線維症および肝細胞癌が挙げられる。そのような疾患および病態は、本明細書では「ＨＢＶ関連疾患およびＨＢＶ関連病態」ならびに「ＨＢＶによって引き起こされるおよび／または調節される疾患および病態」と呼ばれ得る。対象におけるＤ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）感染は、それ自体では患者に感染しないが、ＨＤＶはＨＢＶに感染している対象に共感染する可能性があるため、ＨＢＶ関連疾患であることが理解される。

本発明の特定の態様では、対象には、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の診断の前または後のうちの１つ以上である時点で、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤が投与され得る。本発明のいくつかの態様では、対象は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を有するかまたは発症するリスクがある。ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を発症するリスクがある対象は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を発症する対照リスクと比較して、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を発症する確率が高い対象である。本発明のいくつかの実施形態では、リスクのレベルは、リスクの対照レベルと比較して統計的に有意であり得る。リスクのある対象には、例えば、（１）ＨＢＶを保有する対象と密接に接触していた、および／または密接に接触するリスクのある対象、（２）ＨＢＶに感染している対象の血液、精液および／または膣液と接触していた、および／または接触するリスクのある対象、（３）既存の疾患および／または異常、例えば、限定するものではないが、既存の疾患または異常のない対照対象よりも対象をＨＢＶ感染および結果として生じるＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態に罹患しやすくする免疫不全を有する対象；（４）ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の個人的病歴を有する対象；（５）ならびにＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態のために以前に治療されている対象が含まれ得る。対象をＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態に罹患しやすくする既存の疾患および／または異常は、存在する場合、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を発症する可能性が高くなっていることと相関関係があると以前に同定されている疾患または異常であり得ることが理解される。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、個々の対象の医学的状態に基づいて対象に投与され得ることが理解される。例えば、対象に提供されるヘルスケアにより、対象から得られた試料中で測定されたＡＬＴレベルが評価され、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与によって対象のＡＬＴレベルを低下させることが望ましいと決定され得る。この例では、ＡＬＴレベルは、対象が本明細書に開示されるようなＨＢＶ関連疾患を有すると診断されていなくても、ＨＢＶ関連病態の生理学的特性であると考えられ得る。医療提供者は、本発明の投与されたＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効性の尺度として、対象のＡＬＴレベルの変化をモニタリングしてもよい。非限定的な例では、血液または血清試料などの生体試料が対象から得られ、対象のＨＢＶウイルス量が試料において決定される。対象のＨＢＶウイルス量の存在が見出されると、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤が対象に投与され、投与後に対象からその後の血液または血清試料が得られ、その後の試料を使用してＨＢＶウイルス量が決定され、結果は対象の投与前（前）試料において決定された結果と比較される。投与前レベルと比較した、後の試料中の対象のＨＢＶウイルス量レベルの低下は、対象のＨＢＶウイルス量レベルを低下させる際の投与されたＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効性を示す。

本発明の方法の特定の実施形態は、治療から生じる、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の対象の生理学的特性のうちの１つ以上の変化の評価に少なくとも部分的に基づいて、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を対象に投与することを含む治療を調整することを含む。例えば、本発明のいくつかの実施形態では、本発明の投与されたｄｓＲＮＡ剤の効果が対象について決定され、対象に続いて投与される本発明のｄｓＲＮＡ剤の量を調整するのを助けるために使用され得る。非限定的な例では、対象には本発明のｄｓＲＮＡ剤が投与され、１つ以上のＨＢＶウイルス抗原の存在および／またはレベルが、投与後に対象から得られた生体試料において決定され、決定されたレベルに少なくとも部分的に基づいて、投与された薬剤の生理学的効果を増加させるために、例えば、対象の１つ以上のＨＢＶウイルス抗原の存在および／またはレベルを低下させるかまたはさらに低下させるために、さらに多量のｄｓＲＮＡ剤が望ましいと決定される。別の非限定的な例では、対象には本発明のｄｓＲＮＡ剤が投与され、対象のＨＢＶウイルス量が投与後に決定され、決定されたＨＢＶウイルス量に少なくとも部分的に基づいて、さらに少ない量、さらに多い量、または同じ量のｄｓＲＮＡ剤を対象に投与することが望ましい。

したがって、本発明のいくつかの実施形態は、対象に続いて投与される本発明のｄｓＲＮＡ剤の量を調整するために、対象の以前の治療から生じる１つ以上の生理学的特性の変化を評価することを含む。本発明の方法のいくつかの実施形態は、本発明の投与されたＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効性の評価、および／またはモニタリングを行うための、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の生理学的特性の１、２、３、４、５、６またはそれ以上の決定と、任意に、決定を使用して、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するために、本発明のｄｓＲＮＡ剤の用量、投与レジメンおよびまたは投与頻度のうちの１つ以上を調整することとを含む。本発明の方法のいくつかの実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤の有効量を対象に投与することの所望の結果は、対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ；ＨＢｓＡｇ；およびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上の減少である。本発明の方法の特定の実施形態では、本発明のＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効量を対象に投与することの所望の結果は、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／またはＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性と比較した、対象における抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の増加である。

本明細書で使用される場合、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態に関して使用される場合の用語「治療する」、「治療された」または「治療することは、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を発症する対象の可能性を低下させる予防的治療を指し得るほか、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のレベルを排除するかもしくは低下させるため、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態がさらに進行する（例えば、さらに重度）のを予防するため、および／またはＨＢＶポリペプチドの対象における活性を低下させるための治療が存在しない対象と比較して、対象のＨＢＶ関連疾患もしくＨＢＶ関連病態の進行を遅延させるための、対象がＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を発症した後の治療を指し得る。

本発明の薬剤、組成物および方法の特定の実施形態は、ＨＢＶ遺伝子発現を阻害するために使用され得る。ＨＢＶ遺伝子の発現を参照して本明細書で使用される場合、用語「阻害する」、「サイレンス」、「低減する」、「ダウンレギュレートする」および「ノックダウン」は、ＨＢＶ遺伝子が転写され、細胞、細胞群、組織、器官または対象が本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と接触した（例えば、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤によって治療された）場合、ＨＢＶ遺伝子から転写されたＲＮＡの対照レベル、発現されたＨＢＶの活性のレベル、またはｍＲＮＡから翻訳されたＨＢＶのレベルとそれぞれ比較して低減される、細胞、細胞群、組織、器官または対象における遺伝子から転写されたＲＮＡのレベル、発現されたＨＢＶの活性のレベル、およびｍＲＮＡから翻訳されたＨＢＶポリペプチド、タンパク質またはタンパク質サブユニットのレベルのうちの１つ以上によって測定される、ＨＢＶ遺伝子の発現を意味する。いくつかの実施形態では、対照レベルは、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤と接触していない（例えば、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤によって治療されていない）細胞、組織、器官または対象におけるレベルである。

投与方法
ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤のための様々な投与経路が、本発明の方法に使用するために利用可能である。選択される特定の送達様式は、治療される特定の病態と、治療有効性に必要な投与量とに少なくとも部分的に依存する。本発明の方法は、一般的に言えば、医学的に許容される任意の投与様式を使用して実施され得、これは臨床的に許容できない有害作用を引き起こすことなくＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の有効レベルの治療をもたらす任意の様式を意味する。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、経口、経腸、粘膜、皮下および／または非経口経路を介して投与され得る。用語「非経口」は、皮下、静脈内、髄腔内、筋肉内、腹腔内および胸骨内の注射技術または注入技術を含む。他の経路には、限定するものではないが、経鼻（例えば、胃－鼻チューブを介して）、真皮、経膣、直腸、舌下および吸入が含まれる。本発明の送達経路は、髄腔内、脳室内または頭蓋内を含み得る。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、徐放性マトリックス内に配置され、対象にマトリックスを配置することによって投与されてもよい。本発明のいくつかの態様では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、特定の細胞または細胞小器官を標的とする送達剤によってコーティングされたナノ粒子を使用して対象細胞に送達され得る。様々な送達手段、方法、薬剤が当技術分野で公知である。送達方法および送達剤の非限定的な例は、本明細書の他の箇所にさらに提供される。本発明のいくつかの態様では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を参照して、用語「送達する」は、１つ以上の「裸の」ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤配列の細胞または対象への投与を意味し得、本発明の特定の態様では、「送達する」は、トランスフェクション手段を介した細胞または対象への投与、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を含む細胞を対象に送達すること、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤をコードするベクターを細胞および／または対象内に送達することなどを意味する。トランスフェクション手段を使用したＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の送達は、細胞および／または対象へのベクターの投与を含み得る。

本発明のいくつかの方法では、１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤は、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性担体、アジュバントおよび任意に他の治療成分を常用的に含有し得る薬学的に許容される溶液で投与され得る製剤で投与され得る。本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、同時投与のための別の治療剤とともに製剤化され得る。本発明の方法によれば、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、医薬組成物で投与され得る。一般に、医薬組成物は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と、任意に、薬学的に許容される担体とを含む。薬学的に許容される担体は当業者に周知である。本明細書で使用される場合、薬学的に許容される担体とは、活性成分の生物学的活性の有効性、例えば、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤が細胞または対象内のＨＢＶ遺伝子発現を阻害する能力を妨げない非毒性材料を意味する。治療用途のためにｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与および送達する多数の方法が当技術分野で公知であり、本発明の方法に利用され得る。

薬学的に許容される担体には、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、および当技術分野で周知の他の材料が含まれる。例示的な薬学的に許容される担体は米国特許第５，２１１，６５７号明細書に記載されており、他のものは当業者に公知である。そのような調製物は、塩、緩衝剤、保存剤、適合性担体および任意に他の治療剤を常用的に含有し得る。医薬品に使用される場合、塩は薬学的に許容されるべきであるが、薬学的に許容されない塩は、その薬学的に許容される塩を調製するために都合よく使用されてもよく、本発明の範囲から除外されない。そのような薬理学的および薬学的に許容される塩には、限定するものではないが、以下の酸、すなわち、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから調製されるものが含まれる。また、薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩として調製され得る。

本発明の方法のいくつかの実施形態は、１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を組織に直接投与することを含む。いくつかの実施形態では、化合物が投与される組織は、ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態が存在するかまたは生じる可能性が高い組織であり、その非限定的な例は肝臓または腎臓である。直接組織投与は、直接注射または他の手段によって達成され得る。多くの経口送達化合物は、肝臓および腎臓に自然に移動し、肝臓および腎臓を自然に通過し、本発明の治療方法のいくつかの実施形態は、対象への１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の経口投与を含む。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤は、単独で、または他の治療剤と組み合わせて、１回投与されてもよいか、または複数回投与で投与されてもよい。複数回投与される場合、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、様々な経路を介して投与され得る。例えば、限定することを意図するものではないが、最初の（または最初の数回の）投与は皮下手段を介して行われ得、１回以上の追加の投与は経口および／または全身投与であり得る。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を全身投与することが望ましい本発明の実施形態では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、注射による、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために製剤化されてもよい。注射用製剤は、保存剤を加えてまたは加えずに、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数回投与容器で提供され得る。ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤製剤（医薬組成物とも呼ばれる）は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとってもよく、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの処方剤を含有してもよい。

非経口投与用の調製物には、滅菌水溶液または非水溶液、懸濁液およびエマルジョンが含まれる。非水性溶媒の例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルがある。水性担体には、生理食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール性／水溶液、エマルジョンまたは懸濁液が含まれる。非経口ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液または固定油が含まれる。静脈内ビヒクルには、流体および栄養補液、電解質補液（リンゲルデキストロースに基づくものなど）などが含まれる。保存剤および他の添加剤、例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤および不活性ガスなども存在し得る。静脈内投与などの他の形態の投与では、用量が低下する。対象の応答が適用された初期用量で不十分である場合、患者の寛容性が許容する程度まで、さらに高い用量（または異なるさらに局所的な送達経路による効果的にさらに高い用量）を使用してもよい。１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤の適切な全身レベルまたは局所レベルを達成し、ＨＢＶタンパク質活性の適切な低下を達成するために、必要に応じて１日当たり複数回の投与が使用され得る。

さらに他の実施形態では、本発明の方法は、レシピエント、例えば、対象への移植に適した生体適合性のミクロ粒子、ナノ粒子またはインプラントなどの送達ビヒクルの使用を含む。この方法に従って有用であり得る例示的な生体侵食性インプラントは、生物学的巨大分子を含有するための生体適合性生分解性ポリマーマトリックスを記載しているＰＣＴ公開番号国際公開第９５／２４９２９号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を対象に送達するために、非生分解性および生分解性ポリマーマトリックスの両方を本発明の方法に使用することができる。いくつかの実施形態では、マトリックスは生分解性であり得る。マトリックスポリマーは、天然または合成ポリマーであり得る。ポリマーは、一般に約数時間から１年以上の、放出が望まれる期間に基づいて選択され得る。典型的には、数時間から３～１２ヶ月の範囲の期間にわたる放出を使用することができる。ポリマーは、任意に、その重量の約９０％までを水中に吸収することができるヒドロゲルの形態であり、さらに、任意に、多価イオンまたは他のポリマーと架橋されている。

一般に、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤は、本発明のいくつかの実施形態では、生体侵食性インプラントを使用して、拡散によって、またはポリマーマトリックスの分解によって送達され得る。そのような使用のための例示的な合成ポリマーは当技術分野で周知である。当技術分野で公知の方法を使用して、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤の送達に生分解性ポリマーおよび非生分解性ポリマーを使用することができる。生体侵食性ヒドロゲル（参照によりその教示が本明細書に組み込まれるＨ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．ＰａｔｈａｋａｎｄＪ．Ａ．ＨｕｂｅｌｌｉｎＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９３，２６，５８１－５８７を参照）などの生体接着性ポリマーを使用して、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するためのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を送達してもよい。追加の好適な送達系は、時間放出、遅延放出または持続放出送達系を含むことができる。そのような系により、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤の反復投与を回避し、対象および医療ケア専門家にとって利便性を高めることができる。多くの種類の放出送達系が利用可能であり、当業者に公知である。（例えば、米国特許第５，０７５，１０９号明細書、米国特許第４，４５２，７７５号明細書、米国特許第４，６７５，１８９号明細書、米国特許第５，７３６，１５２号明細書、米国特許第３，８５４，４８０号明細書、米国特許第５，１３３，９７４号明細書および米国特許第５，４０７，６８６号明細書（参照により各々の教示が本明細書に組み込まれる）を参照）。さらに、ポンプに基づくハードウェア送達系を使用することができ、そのうちのいくつかは移植に適合している。

長期持続放出インプラントの使用は、対象の予防的治療に、および再発性のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を発症するリスクがある対象に好適であり得る。本明細書で使用される場合、長期放出とは、インプラントが、少なくとも最大１０日間、２０日間、３０日間、６０日間、９０日間、６ヶ月間、１年間またはそれ以上にわたって治療レベルのＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を送達するように構築および配置されることを意味する。長期持続放出インプラントは当業者に周知であり、上記の放出系のいくつかを含む。

ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤またはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤の治療用製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の純度を有する分子または化合物を任意の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することによって、保存のために調製され得る［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ２１^ｓｔｅｄｉｔｉｏｎ，（２００６）］。許容される担体、賦形剤または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、緩衝剤、例えば、ホスフェート、シトレートおよび他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；単糖、二糖、およびグルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。

細胞、対象および対照
本発明の方法は、細胞、組織、器官および／または対象とともに使用され得る。本発明のいくつかの態様では、対象は、ヒト、または限定するものではないが、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギ、マウス、ラットおよび霊長類、例えば、サルを含む脊椎動物哺乳動物である。したがって、本発明は、ヒトおよび非ヒト対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するために使用され得る。本発明のいくつかの態様では、対象は、家畜、動物園動物、飼育動物または非飼育動物であり得、本発明の方法は、獣医学的な予防および治療レジメンで使用され得る。本発明のいくつかの実施形態では、対象はヒトであり、本発明の方法はヒトの予防および治療レジメンで使用され得る。

本発明を適用することができる対象の非限定的な例には、「ＨＢＶの発現レベルの上昇」とも呼ばれる、望ましいＨＢＶの発現および／または活性よりも高いことに関連する疾患または病態を有すると診断されたか、有すると疑われるか、または有するリスクがある対象がある。ＨＢＶの発現および／または活性の望ましいレベルよりも高いことに関連する疾患および病態の非限定的な例は、本明細書の他の箇所に記載されている。本発明の方法は、治療時に、望ましいＨＢＶの発現および／もしくは活性よりも高いことに関連する疾患もしくは病態を有すると診断された対象、または望ましいＨＢＶの発現および／もしくは活性よりも高いことに関連する疾患もしくは病態を有するかもしくは発症するリスクがあると考えられる対象に適用され得る。本発明のいくつかの態様では、望ましいＨＢＶレベルの発現および／または活性よりも高いことに関連する疾患または病態は、急性の疾患または病態であり、本発明の特定の態様では、望ましいＨＢＶレベルの発現および／または活性よりも高いことに関連する疾患または病態は、慢性の疾患または病態である。

非限定的な例では、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＨＢＶの発現を減少させることが望ましい疾患である急性Ｂ型肝炎と診断されたか、それを有すると疑われるか、または有するリスクがある対象に投与される。本発明の方法は、治療時に疾患もしくは病態を有すると診断された対象、または疾患もしくは病態を有するかもしくは発症するリスクがあると考えられる対象に適用され得る。

別の非限定的な例では、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤は、ＨＢＶの発現を減少させることが望ましい疾患であるＤ型肝炎（ＨＤＶ）と診断されたか、それを有すると疑われるか、または有するリスクがある対象に投与される。本発明の方法は、治療時に疾患もしくは病態を有すると診断された対象、または疾患もしくは病態を有するかもしくは発症するリスクがあると考えられる対象に適用され得る。

本発明の方法が適用され得る細胞には、インビトロ細胞、インビボ細胞、エクスビボ細胞である細胞が含まれる。細胞は、対象内、培養中および／もしくは懸濁液中、または任意の他の好適な状態もしくは条件にあり得る。本発明の方法が適用され得る細胞は、肝臓細胞〔liver cell〕、肝細胞〔hepatocyte〕、心細胞、膵臓細胞、心血管細胞、腎細胞、またはヒト細胞および非ヒト哺乳動物細胞を含む他の種類の脊椎動物細胞であり得る。本発明の特定の態様では、本発明の方法が適用され得る細胞は、疾患細胞であることが分かっていない健康な正常細胞である。本発明の特定の実施形態では、本発明の方法および組成物が適用される細胞は、肝臓細胞、肝細胞、心細胞、膵臓細胞、心血管細胞および／または腎細胞である。本発明の特定の態様では、対照細胞は正常細胞であるが、疾患または病態を有する細胞が、例えば、疾患または病態を有する治療細胞と疾患または病態を有する未治療細胞との結果を比較するためなど、特定の状況では対照細胞としても機能し得ることが理解される。本発明の実施形態を使用した治療に適した細胞は、ＨＢＶに感染した細胞を含む、ＨＢＶ遺伝子を発現する細胞、またはＨＢＶゲノム、もしくはＨＢＶ遺伝子の一部を含む発現ベクターを含む細胞であり得る。

ＨＢＶポリペプチド活性のレベルは、本発明の方法に従って決定され、ＨＢＶポリペプチド活性の対照レベルと比較され得る。対照は、様々な形態をとることができる所定の値であってよい。対照は、中央値または平均値などの単一のカットオフ値であり得る。対照は、比較群に基づいて、例えば、ＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶポリペプチド活性のレベルが低い群、ならびにＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶポリペプチド活性のレベルが増加した群において確立され得る。比較群の別の非限定的な例には、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の１つ以上の症状または診断を有する群；疾患または病態の１つ以上の症状または診断を有しない群；本発明のｓｉＲＮＡ治療が投与された対象の群；本発明のｓｉＲＮＡ治療が投与されていない対象の群があり得る。典型的には、対照は、適切な年齢層の見かけ上健康な正常個体、または見かけ上健康な細胞に基づいてもよい。本発明による対照は、所定の値に加えて、実験材料と並行して試験された材料の試料であってよいことが理解される。例には、対照集団由来の試料、または実験試料と並行して試験される、製造によって生成された対照試料が挙げられる。本発明のいくつかの実施形態では、対照は、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と接触していないかまたは本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤によって治療されていない細胞または対象を含んでもよく、そのような場合、ＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶポリペプチド活性の対照レベルは、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と接触した細胞または対象におけるＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶポリペプチド活性のレベルと比較され得る。

本発明のいくつかの実施形態では、対象について決定されるＨＢＶポリペプチドのレベルは、異なる時点で同じ対象について決定されたＨＢＶポリペプチドのレベルが比較される対照レベルであり得る。非限定的な例では、ＨＢＶのレベルは、本発明のＨＢＶ治療を投与されていない対象から得られた生体試料において決定される。いくつかの実施形態では、生体試料は、血清試料または組織試料である。対象から得られた試料において決定されたＨＢＶポリペプチドのレベルは、対象のベースラインまたは対照値として機能し得る。本発明の治療方法では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を対象に１回以上投与した後、１つ以上の追加の血清試料を対象から得ることができ、後続の単数または複数の試料中のＨＢＶポリペプチドのレベルを対象の対照／ベースラインレベルと比較することができる。そのような比較は、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の発症、進行または後退を評価するために使用され得る。例えば、対象から得られたベースライン試料中のＨＢＶポリペプチドのレベルまたはＨＢＶウイルス量のレベルが、対象に本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を投与した後に同じ対象から得られたレベルよりも高いことは、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の後退を示し、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の治療のための本発明の投与されたＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効性を示す。いくつかの実施形態では、対象から以前に得られた試料において決定されたレベルと比較して、対象由来の試料中のＨＢＶポリペプチドのレベルの統計的に有意な低下は、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の後退を示す。

本発明のいくつかの態様では、対象について決定されたＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶポリペプチド活性のレベルのうちの１つ以上の値は、同じ対象におけるＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶ活性のレベルの後の比較のための対照値として機能し、したがって、対象における「ベースライン」ＨＢＶポリペプチド活性からの変化の評価を可能にし得る。したがって、初期ＨＢＶポリペプチドレベルおよび／または初期ＨＢＶポリペプチド活性レベルが、対象に存在してもよく、および／または対象において決定されてもよく、本発明の方法および化合物を使用して、対象におけるＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶポリペプチド活性のレベルを低下させてもよく、初期レベルは、その対象の対照レベルとして機能する。

本発明の方法を使用して、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を対象に投与してもよい。本発明の投与および治療の有効性は、対象から得られた血清試料および／または組織試料中のＨＢＶポリペプチドまたはＨＢＶウイルス量のレベルが、以前の時点で対象から得られた血清試料および／もしくは組織試料中のＨＢＶポリペプチドもしくはＨＢＶウイルス量の投与前レベルと比較して、または非接触対照レベル、例えば、対照血清試料中のＨＢＶポリペプチドもしくはＨＢＶウイルス量のレベルと比較して、少なくとも０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％低下している場合に評価され得る。ＨＢＶポリペプチドのレベル、ＨＢＶウイルス量、１つ以上のＨＢＶ抗原の存在、ＨＢＶポリペプチド活性のレベル、および本明細書に記載の他の生理学的特性は、ＨＢＶ遺伝子発現のレベルと相関することが理解される。本発明の方法の特定の実施形態は、ＨＢＶ遺伝子発現を阻害し、それによって、ＨＢＶポリペプチドのレベルを低下させ、対象のＨＢＶポリペプチド活性のレベルを低下させるのに有効な量で、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡを対象に投与することを含む。

本発明のいくつかの実施形態は、１例以上の対象から得られた１つ以上の生体試料中のＨＢＶポリペプチドの存在、非存在および／または量（本明細書ではレベルとも呼ばれる）を決定することを含む。この決定は、本発明の治療方法の有効性を評価するために使用することができる。例えば、本発明の方法および組成物を使用して、本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の投与によって以前に治療された対象から得られた生体試料中のＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶウイルス量のレベルを決定することができる。治療された対象から得られた生体試料において決定されたＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶウイルス量のレベルが、対象について決定されたＨＢＶポリペプチドもしくはＨＢＶウイルス量の治療前レベルとそれぞれ比較して、または非接触対照生体試料レベルと比較して、少なくとも０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、９９．９９％またはそれ以上低いことは、対象に投与された治療の有効性のレベルを示す。本発明の方法のいくつかの実施形態では、細胞と本発明のｓｉＲＮＡ剤との接触（本明細書では治療とも呼ばれる）は、少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％だけ、例えば、アッセイの検出レベルを下回るまで、細胞内のＨＢＶ遺伝子発現の阻害をもたらす。

本発明のいくつかの実施形態では、対象について決定される、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の生理学的特性は、異なる時点での同じ対象における生理学的特性の決定が比較される対照決定であり得る。非限定的な例では、ＡＬＴレベル、ＡＳＴレベルおよび／またはウイルス量レベルなどの生理学的特性は、本発明のＨＢＶ治療を投与されていない対象から得られた生体試料において決定される。対象から得られた試料において決定されたＡＬＴレベル、ＡＳＴレベルおよび／またはウイルス量レベル（および／またはＨＢＶ疾患もしくはＨＢＶ病態の他の生理学的特性）は、対象のベースラインまたは対照値として機能し得る。本発明の治療方法では、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を対象に１回以上投与した後、１つ以上の追加の生体試料を対象から得ることができ、後続の単数または複数の試料中のＡＬＴレベル、ＡＳＴレベルおよび／またはウイルス量レベルを対象の対照／ベースラインレベルおよび／または比とそれぞれ比較する。そのような比較は、対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の発症、進行または後退を評価するために使用され得る。例えば、対象から得られたベースライン試料中のＡＬＴレベル、ＡＳＴレベルおよび／またはウイルス量レベルが、対象に本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を投与した後に同じ対象から得られた試料において決定されたＡＬＴレベル、ＡＳＴレベルおよび／またはウイルス量レベルよりも高いことは、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の後退を示し、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の治療のための本発明の投与されたＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の有効性を示す。

本発明のいくつかの態様では、対象について決定された、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の生理学的特性のうちの１つ以上の値は、同じ対象における生理学的特性の後の比較のための対照値として機能し、したがって、対象における「ベースライン」生理学的特性からの変化の評価を可能にし得る。したがって、初期生理学的特性が、対象に存在してもよく、および／または対象において決定されてもよく、本発明の方法および化合物を使用して、対象におけるＨＢＶポリペプチドおよび／またはＨＢＶポリペプチド活性のレベルを低下させてもよく、初期生理学的特性は、その対象の対照として機能する。

本発明の方法を使用して、ＨＢＶ疾患またはＨＢＶ病態を治療するのに有効な量で本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を対象に投与してもよい。本発明の投与および治療の有効性は、ＨＢＶ疾患またはＨＢＶ病態の１つ以上の生理学的特性の変化を決定することによって評価され得る。非限定的な例では、本発明の方法による治療後に対象から得られた生体試料において決定されたＡＬＴレベル、ＡＳＴレベル、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上；ならびにウイルス量レベルが、治療前時点で対象から得られた生体試料中の生理学的特性の投与前レベルと比較して、または非接触対照中の決定された生理学的特性と比較して、少なくとも０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、９９．９９％または１００％低いことは、対象に投与された治療の有効性を実証する。本明細書に記載のＨＢＶの生理学的特性の決定は、ＨＢＶ遺伝子発現のレベルと相関することが理解される。本発明の方法の特定の実施形態は、ＨＢＶ遺伝子発現を阻害し、それによって、ＡＬＴレベル、ＡＳＴレベル、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上；ならびにウイルス量レベルを低下させるか、または他の方法で対象のＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の生理学的特性に正の影響を与えるのに有効な量で本発明のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤を対象に投与することを含む。

本発明のいくつかの実施形態は、限定するものではないが、（１）生理学的特性について、１例以上の対象から得られた１つ以上の生体試料を評価すること、（２）対象から細胞および／または組織生検（例えば、限定するものではないが、肝生検）を採取すること、ならびに（３）対象の身体検査などの方法を使用して、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の生理学的特性の存在、非存在および／または変化を決定することを含む。この決定は、本発明の治療方法の有効性を評価するために使用することができる。

キット
本発明の１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤と、本発明の方法におけるその使用のための説明書とを含むキットも本発明の範囲内である。本発明のキットは、ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態を治療するために使用され得るＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶセンスポリヌクレオチドおよびＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤のうちの１つ以上を含み得る。１つ以上のＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、ＨＢＶセンスポリヌクレオチドおよびＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド剤を収容するキットは、本発明の治療方法に使用するために調製され得る。本発明のキットの構成要素は、水性媒体または凍結乾燥形態のいずれかで包装され得る。本発明のキットは、試験管、バイアル、フラスコ、ボトル、シリンジなどの１つ以上の容器手段または一連の容器手段をその中に密接に閉じ込めた状態で受容するように区画化された担体を含み得る。第１の容器手段または一連の容器手段は、ＨＢＶｄｓＲＮＡ剤、および／または１つ以上のＨＢＶセンスポリヌクレオチド分子もしくはＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド分子などの１つ以上の化合物を収容し得る。第２の容器手段または一連の容器手段は、本発明の治療方法の実施形態で投与されるＨＢＶｄｓＲＮＡ剤の一部として含まれ得る標的化剤、標識剤、送達剤などを収容し得る。

本発明のキットはまた、説明書を含み得る。説明書は、典型的には、書面形式であり、キットによって具体化される治療の実行のため、およびその治療に基づいて決定を行うための指針を提供する。

以下の実施例は、本発明の実施の具体例を例示するために提供され、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。当業者に明らかであるように、本発明は、様々な組成物および方法において用途を見出すであろう。

実施例１．ＨＢＶＲＮＡｉ剤の合成
以下の一般的な手順に従って、上記の表２～表４に示すＨＢＶＲＮＡｉ剤二重鎖を合成した：

ホスホラミダイト化学に基づく十分に確立された固相合成法を使用して、オリゴヌクレオチド合成装置を用いて、ｓｉＲＮＡのセンス鎖配列およびアンチセンス鎖配列を合成した。オリゴヌクレオチド生長反応は、４段階のサイクル：各ヌクレオチドの付加のための脱保護、カップリング、キャッピング、および酸化または硫化ステップを通して達成される。合成は、制御細孔ガラス（ＣＰＧ、５００または１０００Å）から作製された固体支持体上で行った。モノマーホスホラミダイトを商業的供給源から購入した。本明細書の実施例２～３の手順に従って、ＧａｌＮＡｃリガンドクラスター（非限定的な例としてＧＬＰＡ１およびＧＬＰＡ２）を有するホスホラミダイトを合成した。インビトロスクリーニングに使用したｓｉＲＮＡ（表２）については２０ｎｍｏｌ規模で合成を行い、インビボ検査に使用したｓｉＲＮＡ（表３、表４および表５）については１μｍｏｌ以上の規模で合成を行った。ＧａｌＮＡｃリガンド（非限定的な例としてＧＬＯ－０）がセンス鎖の３’末端に結合している場合、ＧａｌＮＡｃリガンド結合ＣＰＧ固体支持体を使用した。ＧａｌＮＡｃリガンド（非限定的な例としてＧＬＳ－１またはＧＬＳ－２）がセンス鎖の５’末端に結合している場合、ＧａｌＮＡｃホスホラミダイト（非限定的な例としてＧＬＰＡ１またはＧＬＰＡ２）を最終カップリング反応に使用した。４，４’－ジメトキシトリチル保護基（ＤＭＴ）の脱保護のためにトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）３％のジクロロメタン溶液を使用した。活性剤として５－エチルチオ－１Ｈ－テトラゾールを使用した。それぞれ酸化反応および硫化反応に、Ｉ_２のＴＨＦ／Ｐｙ／Ｈ_２Ｏ溶液と、フェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）のピリジン／ＭｅＣＮ溶液とを使用した。最終固相合成ステップ後、２０％ジエチルアミンのアセトニトリル溶液を用いてシアノエチル保護基を除去した。核酸塩基の保護基を除去し、２８％水酸化アンモニウム溶液を用いて６５℃で２時間処理することによって、固体支持体に結合したオリゴマーを切断した。イオン対逆相ＨＰＬＣ（ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ）によって、粗一本鎖生成物を含有する水溶液を濃縮および精製した。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣからの精製一本鎖オリゴヌクレオチド生成物を、１．０ＭＮａＯＡｃに溶解し、氷冷ＥｔＯＨを加えることによって沈殿させることによって、ナトリウム塩に変換した。等モルの相補的センス鎖およびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの水中でのアニーリングを行って、二本鎖ｓｉＲＮＡ生成物を形成し、これを凍結乾燥して、ふわふわした白色固体を得た。

実施例２．中間体－Ａおよび中間体－Ｂの調製。
以下のスキーム１に示すように、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液を用いて市販のガラクトサミンペンタアセテートを処理することによって、中間体－Ａを合成した。これに続いて、Ｃｂｚ保護２－（２－アミノエトキシ）エタン－１－オールを用いてグリコシル化を行って、化合物ＩＩを得た。Ｃｂｚ保護基を水素化によって除去して、中間体－Ａをトリフルオロアセテート（ＴＦＡ）塩として得た。Ｃｂｚ保護２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エタン－１－オールを出発材料として使用したことを除いて、同じスキームに基づいて中間体Ｂを合成した。

スキーム１
化合物Ｉ（２０．０ｇ、５１．４ｍｍｏｌ）の１００ｍＬの１，２－ジクロロエタン（ＤＣＥ）溶液に、ＴＭＳＯＴｆ（１７．１ｇ、７７．２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応溶液を６０℃で２時間、次いで２５℃で１時間撹拌した。４Å粉末モレキュラーシーブ（１０ｇ）上で乾燥させたＣｂｚ保護２－（２－アミノエトキシ）エタン－１－オール（１３．５ｇ、５６．５ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（１００ｍＬ）溶液を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で上記反応溶液に滴下した。得られた反応混合物をＮ_２雰囲気下、２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、飽和ＮａＨＣＯ_３（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）および飽和ブライン（２００ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを２－メチルテトラヒドロフラン／ヘプタン（５／３、ｖ／ｖ、１．８０Ｌ）を用いて２時間粉砕した。得られた混合物を濾過し、乾燥させて、化合物ＩＩ（１５．０ｇ、収率５０．３％）を白色固体として得た。

乾燥させ、アルゴンでパージした水素化ボトルに、１０％Ｐｄ／Ｃ（１．５０ｇ）を慎重に加え、続いてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１０ｍＬを加え、次いで、化合物ＩＩ（１５．０ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）およびＴＦＡ（トリフルオロ酢酸、３．００ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）溶液を加えた。得られた混合物を脱気し、Ｈ_２で３回パージし、Ｈ_２（４５ｐｓｉ）雰囲気下、２５℃で３時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、溶媒：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）は、化合物ＩＩが完全に消費されたことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を無水ＤＣＭ（５００ｍＬ）に溶解し、濃縮した。このプロセスを３回繰り返して、中間体－Ａ（１４．０ｇ、収率９６．５％）を泡状の白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ７．９０（ｄ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｂｒｓ，３Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝３．２６Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２９，３．２６Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，１Ｈ），３．９８－４．０７（ｍ，３Ｈ），３．７９－３．９３（ｍ，２Ｈ），３．５５－３．６６（ｍ，５Ｈ），２．９８（ｂｒｄ，Ｊ＝４．７７Ｈｚ，２Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．９０（ｓ，３Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ）．

中間体－Ａの合成のための同様の手順を使用して中間体－Ｂを合成した。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ７．９０（ｂｒｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，４Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝３．５１Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，１Ｈ），３．９８－４．０６（ｍ，３Ｈ），３．８８（ｄｔ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７６－３．８３（ｍ，１Ｈ），３．４９－３．６１（ｍ，９Ｈ），２．９７（ｂｒｓ，２Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．７８（ｓ，３Ｈ）．Ｃ_２０Ｈ_３４Ｎ_２Ｏ_１１の質量計算値：４７８．２２；実測値：４７９．３（Ｍ＋Ｈ^＋）。

実施例３．ＧａｌＮＡｃリガンドクラスターホスホラミダイトＧＬＰＡ１、ＧＬＰＡ２およびＧＬＰＡ１５の合成。
以下のスキーム２に従って、ＧＬＰＡ１およびＧＬＰＡ２を調製した。ベンジル保護プロパン－１，３－ジアミンから出発し、ｔｅｒｔ－ブチル２－ブロモアセテートを用いてアルキル化して、トリエステル化合物Ｉを得た。ベンジル保護基を水素化によって除去して、第二級アミン化合物ＩＩを得た。６－ヒドロキシヘキサン酸とのアミドカップリングによって化合物ＩＩＩを得た。次いで、ＨＣｌのジオキサン溶液の処理時にｔｅｒｔ－ブチル保護基を除去して、三酸化合物ＩＶを生成した。三酸化合物ＩＶと中間体－Ａまたは中間体－Ｂとの間のアミドカップリングを行って、化合物ＶａまたはＶｂを得た。２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホラミダイトと触媒量の１Ｈ－テトラゾールとを用いて化合物ＶａまたはＶｂをホスフィチル化することによって、ホスホラミダイトＧＬＰＡ１またはＧＬＰＡ２を合成した。

スキーム２
Ｎ－ベンジル－１，３－プロパンジアミン（５．００ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１００ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル２－ブロモアセテート（２３．７ｇ、１２１ｍｍｏｌ）を加えた後、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、２３．６１ｇ、１８２ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた反応混合物を２５～３０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳは、Ｎ－ベンジル－１，３－プロパンジアミンが完全に消費されたことを示した。反応混合物をＨ_２Ｏ（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×２）を用いて抽出した。合わせた有機物を飽和ブライン（１Ｌ）を用いて洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル：酢酸エチル２０：１～５：１）によって精製した。化合物Ｉ（１２．１ｇ、収率７８．４％）を無色油状物として得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ７．２６－７．４０（ｍ，５Ｈ），３．７９（ｓ，２Ｈ），３．４３（ｓ，４Ｈ），３．２１（ｓ，２Ｈ），２．７２（ｄｔ，Ｊ＝１６．９，７．３４Ｈｚ，４Ｈ），１．７０（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．４４－１．５０（ｍ，２７Ｈ）．

乾燥させた水素化ボトルをアルゴンで３回パージした。Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ、１０％）を加えた後、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）を加え、次いで、化合物Ｉ（１．００ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を真空下で脱気し、Ｈ_２を再充填した。このプロセスを３回繰り返した。混合物をＨ_２（１５ｐｓｉ）雰囲気下、２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、化合物Ｉが完全に消費されたことを示した。反応混合物をＮ_２雰囲気下、減圧下で濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、化合物ＩＩ（６５５ｍｇ、収率７９．７％）を黄色油状物として得、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ３．４４（ｓ，４Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．８８（ｂｒｓ，１Ｈ），１．６９（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，２Ｈ），１．４４－１．５０（ｓ，２７Ｈ）．

ＤＭＦ（６ｍＬ）中の化合物ＩＩ（６５５ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）と、６－ヒドロキシヘキサン酸（２４９ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）と、ＤＩＥＡ（１．０２ｇ、７．８６ｍｍｏｌ）と、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ、９０４ｍｇ、４．７２ｍｍｏｌ）と、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、６３７ｍｇ、４．７２ｍｍｏｌ）との混合物を脱気し、Ｎ_２で３回パージし、次いで、Ｎ_２雰囲気下、２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは所望の生成物を示した。反応混合物をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ２０ｍＬ（１０ｍＬ×２）を用いて抽出した。有機物を合わせ、飽和ブライン（２０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル：酢酸エチル５：１～１：１）によって精製して、化合物ＩＩＩ（６５０ｍｇ、収率７７．８％）を黄色油状物として得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ３．９０－３．９５（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，２Ｈ），３．３８－３．４５（ｍ，６Ｈ），２．７２（ｔ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，２Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ，２Ｈ），１．５５－１．７５（ｍ，８Ｈ），１．４４（ｓ，２７Ｈ）．Ｃ_２７Ｈ_５０Ｎ_２Ｏ_８の質量計算値：５３０．３６；実測値：５３１．３（Ｍ＋Ｈ^＋）。

ＨＣｌ／ジオキサン（２Ｍ、５５ｍＬ）中の化合物ＩＩＩ（５．５ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）の混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、化合物ＩＩＩの完全な消費を示した。反応混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を用いて洗浄し、減圧下で乾燥させて粗生成物を得た。これをＣＨ_３ＣＮ（５０ｍＬ）に溶解し、揮発性物質を真空下で除去した。このプロセスを３回繰り返して、化合物ＩＶ（２．０５ｇ、収率５４．５％）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ ｐｐｍ４．２１（ｓ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，４Ｈ），３．９９（ｓ，１Ｈ），３．４５－３．５２（ｍ，３Ｈ），３．４２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３２－３．３８（ｍ，１Ｈ），３．２４－３．３１（ｍ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），１．９９（ｄｔ，Ｊ＝１５．５，７．５３Ｈｚ，１Ｈ），１．８５－１．９４（ｍ，１Ｈ），１．８５－１．９４（ｍ，１Ｈ），１．３９－１．５６（ｍ，４Ｈ），１．１９－１．３１（ｍ，２Ｈ）．

ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物ＩＶ（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）と、中間体－Ａ（２．０２ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）と、ＤＩＥＡ（８１３ｍｇ、６．３０ｍｍｏｌ）と、ＥＤＣＩ（７０４ｍｇ、３．６７ｍｍｏｌ）と、ＨＯＢｔ（４９６ｍｇ、３．６７ｍｍｏｌ）との混合物を脱気し、Ｎ_２で３回パージし、次いで、混合物をＮ２雰囲気下、２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは所望の生成物を示した。反応混合物をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）を加えることによってクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ×２）を用いて抽出した。合わせた有機物を１０％クエン酸（２０ｍＬ）を用いて抽出した。水相を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を用いて中和し、ＤＣＭ（１０ｍＬ×２）を用いて再抽出した。有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、化合物Ｖａ（５７０ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ、収率２６．８％）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）ｐｐｍ δ ７．８４－８．１２（ｍ，３Ｈ），６．８５－７．１５（ｍ，２Ｈ），６．６６－６．８１（ｍ，１Ｈ），５．３６（ｂｒｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，３Ｈ），５．１１－５．２７（ｍ，３Ｈ），４．６３－４．８５（ｍ，３Ｈ），３．９０－４．２５（ｍ，１８Ｈ），３．３７－３．７５（ｍ，２８Ｈ），３．１５－３．２８（ｍ，４Ｈ），２．６４（ｂｒｄ，Ｊ＝６．５３Ｈｚ，２Ｈ），２．３０－２．４６（ｍ，２Ｈ），２．１３－２．１８（ｍ，９Ｈ），２．０５（ｓ，９Ｈ），１．９４－２．０３（ｍ，１８Ｈ），１．６８（ｂｒｓ，２Ｈ），１．４５（ｂｒｓ，２Ｈ），１．１２（ｂｒｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）．

化合物Ｖａ（２６０ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（３０．３ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）を加え、続いて３－ビス（ジイソプロピルアミノ）ホスファニルオキシプロパンニトリル（１９４ｍｇ、０．６４５ｍｍｏｌ）をＮ_２下、周囲温度で滴下した。反応混合物を２０～２５℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、化合物Ｖａが完全に消費されたことを示した。－２０℃に冷却した後、反応混合物をブライン／飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１：１、５ｍＬ）の撹拌溶液に０℃で加えた。１分間撹拌した後、ＤＣＭ（５ｍＬ）を加えた。層を分離した。有機物をブライン／飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１：１、５ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、約１ｍＬの体積まで濃縮した。残渣溶液を撹拌しながらメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）２０ｍＬに滴下した。これにより、白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離し、固体を回収した。固体を１ｍＬのＤＣＭに再溶解し、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）を加えることによって沈殿させた。固体を遠心分離によって再度単離した。回収した固体を無水ＣＨ_３ＣＮに溶解した。揮発性物質を除去した。このプロセスをさらに２回繰り返し、ＧａｌＮＡｃリガンドホスホラミダイト化合物ＧＬＰＡ１（１５３ｍｇ、８４．４μｍｏｌ）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：ｐｐｍ δ ７．７１－８．０６（ｍ，２Ｈ），６．６０－７．０６（ｍ，３Ｈ），５．３７（ｂｒｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，３Ｈ），５．１８－５．３２（ｍ，３Ｈ），４．７０－４．８６（ｍ，３Ｈ），３．９２－４．２５（ｍ，１８Ｈ），３．４２－３．８５（ｍ，３０Ｈ），３．２５（ｍ，４Ｈ），２．５９－２．７５（ｍ，４Ｈ），２．２７－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．１５－２．２０（ｓ，９Ｈ）２．０７（ｓ，９Ｈ），１．９６－２．０３（ｍ，１８Ｈ），１．６５（ｂｒｓ，４Ｈ），１．４４（ｂｒｄ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ，２Ｈ），１．１４－１．２４（ｍ，１２Ｈ）．^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：ｐｐｍ δ １４７．１５．

中間体－Ｂを使用したことを除いて同じ手順を使用して、ＧａｌＮＡｃリガンドホスホラミダイト化合物ＧＬＰＡ２を合成した。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：ｐｐｍ δ ７．９４－８．１８（ｍ，１Ｈ），７．６９（ｂｒｓ，１Ｈ），６．６６－７．１０（ｍ，３Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，３Ｈ），５．０７－５．２５（ｍ，３Ｈ），４．７６－４．８６（ｍ，３Ｈ），４．０１－４．３１（ｍ，１０Ｈ），３．９１－４．０１（ｍ，８Ｈ），３．７４－３．８６（ｍ，４Ｈ），３．５２－３．７１（ｍ，３０Ｈ），３．４２－３．５０（ｍ，６Ｈ），３．１５－３．２５（ｍ，４Ｈ），２．５２－２．７０（ｍ，４Ｈ），２．２２－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．１５－２．２２（ｓ，９Ｈ），２．０６（ｓ，９Ｈ），１．９５－２．０３（ｍ，１８Ｈ），１．７７（ｂｒｓ，２Ｈ），１．５８－１．６６（ｍ，４Ｈ），１．４０（ｍ，２Ｈ），１．０８－１．２４（ｍ，１２Ｈ）．^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：ｐｐｍ δ １４７．１２．

以下のスキーム３に従って、ＧＬＰＡ１５を調製した。

スキーム３
第二級アミン化合物Ｉ（スキーム２の化合物ＩＩ）から出発して、Ｃｂｚ保護を導入して化合物ＩＩを得た。酸を用いた処理によって化合物ＩＩのｔｅｒｔ－ブチル基を除去して、三酸化合物ＩＩＩを得た。化合物ＩＩＩと中間体－Ａとのアミドカップリングにより、化合物ＩＶを得た。化合物ＩＶのＣｂｚ保護基を水素化によって除去して、第二級アミン化合物Ｖを得、これをグルタル酸無水物と反応させて、カルボン酸化合物ＶＩを得た。化合物ＶＩＩを得るために、アミドカップリング反応条件下でピペリジン－４－オールと反応させた化合物ＶＩ。２－シアノエチルＮ，Ｎジイソプロピルクロロホスホラミダイトと触媒量の１Ｈ－テトラゾールとを用いて化合物ＶＩＩを処理することによって、ホスホラミダイト化合物ＧＬＰＡ１５を合成した。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚｉｎＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ｐｐｍ８．０５（ｂｒｄ，Ｊ＝６．５０Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｂｒｄ，Ｊ＝９．０１Ｈｚ，３Ｈ），５．２２（ｄ，Ｊ＝３．２５Ｈｚ，３Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２６，３．２５Ｈｚ，３Ｈ），４．５５（ｂｒｄ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ，３Ｈ），４．０３（ｓ，９Ｈ），３．６４－３．９７（ｍ，１２Ｈ），３．５５－３．６３（ｍ，６Ｈ），３．５０（ｂｒｓ，５Ｈ），３．４０（ｂｒｄ，Ｊ＝６．１３Ｈｚ，６Ｈ），３．１７－３．３０（ｍ，９Ｈ），３．０７（ｂｒｄ，Ｊ＝１４．２６Ｈｚ，４Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝５．８２Ｈｚ，２Ｈ），２．１８－２．４７（ｍ，６Ｈ），２．１０（ｓ，９Ｈ），１．９９（ｓ，９Ｈ），１．８９（ｓ，９Ｈ），１．７８（ｓ，９Ｈ），１．５２－１．７４（ｍ，６Ｈ），１．１２－１．１９（ｍ，１２Ｈ）．３１ＰＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）：ｐｐｍ δ １４５．２５．

特定の試験では、ＧａｌＮＡｃを含む標的化基（本明細書ではＧａｌＮＡｃ送達化合物とも呼ばれる）をセンス鎖の５’末端に結合させるために使用した方法に、センス鎖の５’末端にヌクレオチドを付加するオリゴヌクレオチド生長反応が行われる場合に使用されるプロセスなどの合成プロセスを使用して、固相合成の最終カップリングステップにおけるＧａｌＮＡｃホスホラミダイト（ＧＬＰＡ１）の使用を含めた。

いくつかの試験では、ＧａｌＮＡｃを含む標的化基をセンス鎖の３’末端に結合させる方法に、ＧＬＯ－ｎを含む固体支持体（ＣＰＧ）の使用を含めた。いくつかの試験では、ＧａｌＮＡｃを含む標的化基をセンス鎖の３’末端に結合させる方法は、エステル結合を介してＧａｌＮＡｃ標的化基をＣＰＧ固体支持体に結合させること、およびセンス鎖を合成する際に、得られたＣＰＧを結合したＧａｌＮＡｃ標的化基とともに使用することを含み、その結果、センス鎖の３’末端に結合したＧａｌＮＡｃ標的化基が得られる。

実施例４．ＨＢＶｓｉＲＮＡ二重鎖のインビトロスクリーニング
ＨＢＶｓｉＲＮＡ剤のインビトロ評価には、ＨＢＶトランスフェクトＨｅｐＧ２．２．１５細胞株を使用した。ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を９６ウェルプレートに播種し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）ＲＮＡｉＭａｘをトランスフェクト剤として使用して、最終濃度０．０４ｎＭ、０．２ｎＭおよび１ｎＭでＨＢＶｓｉＲＮＡ剤によってトランスフェクトした。播種７２時間後に上清を採取した。ＨＢｓＡｇレベルをＥＬＩＳＡアッセイによって決定した。ＨＢＶｓｉＲＮＡ剤によってトランスフェクトした試料から得られたＨＢｓＡｇレベルを、トランスフェクトしていない対照試料（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）ＲＮＡｉＭａｘのみ）と比較することによって、ノックダウン活性を計算した。実験は３連で行った。結果を表５および表７に要約する。０．０４ｎＭであっても、複数のｓｉＲＮＡが、ＨＢｓＡｇ発現を抑制する良好な活性を示した。良好から優れた活性を示すｓｉＲＮＡのサブセットをインビボ検査のために選択した。

表５は、ＨＢｓＡｇ発現を阻害するための様々なＨＢＶＲＮＡｉ剤を使用したインビトロ試験の実験結果を提供する。試験は、本明細書の他の箇所に記載されている。

表７は、ＨＢｓＡｇ発現を阻害するための様々なＨＢＶＲＮＡｉ剤を使用したインビトロ試験の実験結果を提供する。試験は、本明細書の他の箇所に記載されている。

実施例５．ｓｉＲＮＡ剤のインビボスクリーニング
ＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルを使用して、ＨＢＶｓｉＲＮＡ剤のインビボ有効性を評価した。尾静脈注射を介して、５週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを１ｘ１０＾１１ｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶウイルスゲノムに感染させた。感染の１４日後、血液試料を採取し、マウス血清中のＨＢｓＡｇをＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。ＨＢｓＡｇの高い発現レベル（ｌｏｇＨＢｓＡｇＩＵ／ｍｌ＞４．９）を有するマウスを試験のために選択した。感染後１８日目に、各マウスに単回３ｍｇ／ｋｇ用量のＨＢＶｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ対照を皮下投与した。投与後７日目および１４日目に血液試料を採取した。血清ＨＢｓＡｇをＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。「処置前に対して正規化した」発現の比を決定するために、ある時点での各動物のＨＢｓＡｇレベルをその動物における発現の処置前レベル（感染後１４日目）で割った。個々の動物の「処置前に対して正規化した」比を、ＰＢＳ対照群の全マウスの平均「処置前に対して正規化した」比で割ることによって、ノックダウン活性を計算した。結果を表６に要約する。極めて有効なＨＢＶｓｉＲＮＡが同定された。特に、ｓｉＲＮＡ剤ＡＤ００１７０、ＡＤ００２６３、ＡＤ００２６５、ＡＤ００２６７、ＡＤ００２６８、ＡＤ００２６９、ＡＤ００１７３およびＡＤ００１７６によって処置したマウスは、ＨＢｓＡｇの９６％超の減少を示した（処置前に対して正規化した）。この実施例では、表３の該化合物中のＧＬＯ－０とは、Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈ，ｅｔａｌ．，（２０１４）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３６，１６９５８－１６９６１における化合物ＧａｌＮＡｃ３を指す。

表６．ＡＡＶ－ＨＢＶ形質導入マウスにおけるＨＢＶｓｉＲＮＡ単回３ｍｐｋ皮下用量スクリーニング。マウス血清中のＨＢｓＡｇの減少率を、ｓｉＲＮＡの投与前のＨＢｓＡｇレベル、およびＰＢＳ対照群に対して正規化した。

実施例６．ＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルにおけるｓｉＲＮＡ剤のインビボ検査
ＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルを使用して、ＨＢＶｓｉＲＮＡ剤のインビボ有効性を評価した。尾静脈注射を介して、５週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを１ｘ１０＾１１ｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶウイルスゲノムに感染させた。感染の１４日後、血液試料を採取し、マウス血清中のＨＢｓＡｇをＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。ＨＢｓＡｇの高い発現レベル（ｌｏｇＨＢｓＡｇＩＵ／ｍｌ＞４．９）を有するマウスを試験のために選択した。感染後１８日目に、各マウスに単回３ｍｇ／ｋｇ用量のＨＢＶｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ対照を皮下投与した。投与後７日目、１４日目および２１日目に血液試料を採取した。血清ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇをＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。「処置前に対して正規化した」発現の比を決定するために、ある時点での各動物のＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇレベルをその動物における発現の処置前レベル（感染後１４日目）で割った。個々の動物の「処置前に対して正規化した」比を、ＰＢＳ対照群の全マウスの平均「処置前に対して正規化した」比で割ることによって、ノックダウン活性を計算した。結果を表８および表９に要約する。極めて有効なＨＢＶｓｉＲＮＡが同定された。特に、ｓｉＲＮＡ剤ＡＤ００１７０、ＡＤ００２６３、ＡＤ００２６７、ＡＤ００３７８、ＡＤ００３８３およびＡＤ００３８４によって処置したマウスは、ＨＢｓＡｇの９６％超の減少を示した（処置前に対して正規化した）。この実施例では、表３の該化合物中のＧＬＯ－０とは、Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈ，ｅｔａｌ．，（２０１４）ＪＡｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３６，１６９５８－１６９６１における化合物ＧａｌＮＡｃ３を指す。

表８．ＡＡＶ－ＨＢＶ形質導入マウスにおけるＨＢＶｓｉＲＮＡ単回３ｍｐｋ皮下用量スクリーニング。マウス血清中のＨＢｓＡｇの減少率を、ｓｉＲＮＡの投与前のＨＢｓＡｇレベル、およびＰＢＳ対照群に対して正規化した。

表９．ＡＡＶ－ＨＢＶ形質導入マウスにおけるＨＢＶｓｉＲＮＡ単回３ｍｐｋ皮下用量スクリーニング。マウス血清中のＨＢｅＡｇの減少率を、ｓｉＲＮＡの投与前のＨＢｅＡｇレベル、およびＰＢＳ対照群に対して正規化した。

実施例７．ＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルにおけるｓｉＲＮＡ剤のインビボ検査
ＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルを使用して、ＨＢＶｓｉＲＮＡ剤のインビボ有効性を評価した。尾静脈注射を介して、５週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを１ｘ１０＾１１ｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶウイルスゲノムに感染させた。感染の１４日後、血液試料を採取し、マウス血清中のＨＢｓＡｇをＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。ＨＢｓＡｇの高い発現レベル（ｌｏｇＨＢｓＡｇＩＵ／ｍｌ＞４．９）を有するマウスを試験のために選択した。感染後１８日目に、各マウスに単回３ｍｇ／ｋｇ用量のＨＢＶｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ対照を皮下投与した。投与後７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、４２日目、４９日目、５６日目、６３日目、７０日目、７７日目、８４日目および９１日目に血液試料を採取した。ＥＬＩＳＡアッセイによってＨＢｓＡｇレベルを測定し、ｑＰＣＲによってＨＢＶＤＮＡレベルを決定した。結果を図１および図２に要約する。この実施例では、陽性対照は、国際公開第２０２００３６８６２号におけるＡＤ－８１８９０である。

均等物
本発明のいくつかの実施形態を本明細書で説明および例示してきたが、当業者であれば、本明細書に記載の機能を実行するため、ならびに／または結果、および／もしくは利点のうちの１つ以上を得るための様々な他の手段および／または構造を容易に想定し、そのような変形例および／または修正の各々は、本発明の範囲内にあると考えられる。さらに一般的には、当業者であれば、本明細書に記載のすべてのパラメータ、寸法、材料および構成が例示的であることを意味し、実際のパラメータ、寸法、材料および／または構成が、本発明の教示が使用される特定の単数または複数の用途に依存することを容易に理解するであろう。当業者であれば、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または常用的な実験のみを使用して確認することができるであろう。したがって、前述の実施形態は例としてのみ提示されており、添付の特許請求の範囲およびその均等物の範囲内にあることを理解されたい。本発明は、具体的に記載および特許請求されている以外の方法で実施されてもよい。本発明は、本明細書に記載の個々の特徴、システム、物品、材料および／または方法に関する。さらに、２つ以上のそのような特徴、システム、物品、材料および／または方法の任意の組合せが、そのような特徴、システム、物品、材料および／または方法が互いに矛盾しない場合、本発明の範囲内に含まれる。

本明細書で定義および使用されるすべての定義は、辞書の定義、参照により組み込まれる文献内の定義、および／または定義された用語の通常の意味を支配すると理解されるべきである。

本明細書および特許請求の範囲で使用される不定冠詞は、そうでないことが明確に示されない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。

本明細書および特許請求の範囲で使用される「および／または」という語句は、そのように結合された要素、すなわち、場合によっては結合的に存在し、他の場合には分離して存在する要素の「いずれかまたは両方」を意味すると理解されるべきである。そうでないことが明確に示されない限り、「および／または」節によって具体的に特定された要素以外に、具体的に特定された要素に関連するか否かにかかわらず、他の要素が任意に存在してもよい。

本出願において引用または参照されるすべての参考文献、特許および特許出願ならびに刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

Claims

細胞内のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、前記ｄｓＲＮＡ剤が、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド位置２～１８が、ＨＢＶＲＮＡ転写物に対する相補性領域であって、表１～表４のうちの１つに列挙されるアンチセンス配列のうちの１つから０、１、２または３ヌクレオチドだけ異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む相補性領域を含み、任意に標的化リガンドを含む、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤。
前記ＨＢＶＲＮＡ転写物に対する前記相補性領域が、表１～表４のうちの１つに列挙されるアンチセンス配列のうちの１つから３ヌクレオチド以下だけ異なる少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
ｄｓＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、配列番号６７３の標的領域のいずれか１つに少なくとも実質的に相補的であり、表１～表４のいずれか１つにおいて提供される、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
ｄｓＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、配列番号６７３の標的領域のいずれか１つに完全に相補的であり、表１～表４のいずれか１つにおいて提供される、請求項３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記ｄｓＲＮＡ剤が、表１～表４のいずれか１つにおいて記載されるセンス鎖配列を含み、前記センス鎖配列が、前記ｄｓＲＮＡ剤中の前記アンチセンス鎖配列に少なくとも実質的に相補的である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記ｄｓＲＮＡ剤が、表１～表４のいずれか１つにおいて記載されるセンス鎖配列を含み、前記センス鎖配列が、前記ｄｓＲＮＡ剤中の前記アンチセンス鎖配列に完全に相補的である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
表１～表４のいずれか１つにおいて記載されるアンチセンス鎖配列を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
表１～表４のいずれかに二重鎖配列として記載される配列を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記ｄｓＲＮＡ剤が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ。
前記アンチセンス鎖のヌクレオチドの全部または実質的に全部が修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’３’－セコヌクレオチド模倣物、ロックドヌクレオチド、非ロックド核酸ヌクレオチド（ＵＮＡ）、グリコール核酸ヌクレオチド（ＧＮＡ）、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、２’－メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、反転ヌクレオチド、反転脱塩基ヌクレオチド、反転２’－ＯＭｅヌクレオチド、反転２’－デオキシヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、および３’－ＯＭｅヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、もしくはコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、ホスホルアミデート、または非天然塩基含有ヌクレオチドを含む、請求項９または１０に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記アンチセンス鎖の５’末端にＥ－ビニルホスホネートヌクレオチドを含む、請求項９または１０に記載のｄｓＲＮＡ剤。
少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記センス鎖が、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記アンチセンス鎖が、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記センス鎖が、１、２、３、４、５または６個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記アンチセンス鎖が、１、２、３、４、５または６個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記センス鎖および前記アンチセンス鎖のヌクレオチドの全部または実質的に全部が修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記修飾センス鎖が、表２～表４のうちの１つにおいて記載される修飾センス鎖配列である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記修飾アンチセンス鎖が、表２～表４のうちの１つにおいて記載される修飾アンチセンス鎖配列である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖に相補的または実質的に相補的であり、前記相補性領域が１６～２３ヌクレオチド長である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記相補性領域が１９～２１ヌクレオチド長である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
各鎖が３０ヌクレオチド長以下である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
各鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
各鎖が２３ヌクレオチド長以下である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、１つ以上の標的化基または連結基をさらに含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記１つ以上の標的化基または連結基が、前記センス鎖にコンジュゲートされる、請求項２６に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記標的化基または連結基が、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む、請求項２６または２７に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記標的化基が、以下の構造を有する、請求項２６または２７に記載のｄｓＲＮＡ剤：
前記センス鎖の５’末端にコンジュゲートされた標的化基を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記センス鎖の３’末端にコンジュゲートされた標的化基を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記アンチセンス鎖が、３’末端に１つの反転脱塩基残基を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記センス鎖が、３’末端および／または５’末端に１つまたは２つの反転脱塩基残基を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
２つの平滑末端を有する、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
少なくとも１つの鎖が、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
少なくとも１つの鎖が、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記センス鎖が、配列番号２８１、２９０、２９５、３００、３０４、３０６、３０７、３３１、５５７、５６７、５６９、５７１、５７２、５７３、５６０、５６３、６０７、６２８～６３７、または９１８～９２１、好ましくは配列番号５５７、６０７、６３１、９１８、９１９または９２１のうちの１つを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
前記アンチセンス鎖が、配列番号４１９、４２８、４３３、４３８、４４２、４４４、４４５、４６９、５８２、５９２、５９４、５９６、５９７、５９８、５８５、５８８、６４２、６６３～６７２、または９２２～９２５、好ましくは配列番号５８２、６４２、６６６、９２２、９２３または９２５のうちの１つを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
配列番号２８１および配列番号４１９；配列番号２９０および配列番号４２８；配列番号２９５および配列番号４３３；配列番号３００および配列番号４３８；配列番号３０４および配列番号４４２；配列番号３０６および配列番号４４４；配列番号３０７および配列番号４４５；配列番号３３１および配列番号４６９；配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号５６７および配列番号５９２；配列番号５６９および配列番号５９４；配列番号５７１および配列番号５９６；配列番号５７２および配列番号５９７；配列番号５７３および配列番号５９８；配列番号５６０および配列番号５８５；配列番号５６３および配列番号５８８；配列番号６０７および配列番号６４２；配列番号６２８および配列番号６６３；配列番号６２９および配列番号６６４；配列番号６３０および配列番号６６５；配列番号６３１および配列番号６６６；配列番号６３２および配列番号６６７；配列番号６３３および配列番号６６８；配列番号６３４および配列番号６６９；配列番号６３５および配列番号６７０；配列番号６３６および配列番号６７１；または配列番号６３７および配列番号６７２、配列番号９１８および配列番号９２２、配列番号９１９および配列番号９２３、配列番号９２０および配列番号９２４、または配列番号９２１および配列番号９２５；好ましくは、配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号６０７および配列番号６４２、配列番号６３１および配列番号６６６、配列番号９１８および配列番号９２２、配列番号９１９および配列番号９２３、または配列番号９２１および配列番号９２５を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
請求項１～３９のいずれか一項に記載の１、２、３個またはそれ以上のｄｓＲＮＡ剤を含む組成物。
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項４０に記載の組成物。
１つ以上の追加の治療剤をさらに含む、請求項４１に記載の組成物。
キット、容器、パック、ディスペンサー、プレフィルドシリンジまたはバイアルに包装される、請求項４２に記載の組成物。
皮下投与用に製剤化されるか、または静脈内（ＩＶ）投与用に製剤化される、請求項４０に記載の組成物。
前記ｄｓＲＮＡ剤のうちの少なくとも１つの前記センス鎖が、配列番号２８１、２９０、２９５、３００、３０４、３０６、３０７、３３１、５５７、５６７、５６９、５７１、５７２、５７３、５６０、５６３、６０７、６２８～６３７、または９１８～９２１、好ましくは配列番号５５７、６０７、６３１、９１８、９１９または９２１のうちの１つを含む、請求項４０に記載の組成物。
前記ｄｓＲＮＡ剤のうちの少なくとも１つの前記アンチセンス鎖が、配列番号４１９、４２８、４３３、４３８、４４２、４４４、４４５、４６９、５８２、５９２、５９４、５９６、５９７、５９８、５８５、５８８、６４２、６６３～６７２、または９２２～９２５、好ましくは配列番号５８２、６４２、６６６、９２２、９２３または９２５のうちの１つを含む、請求項４０に記載の組成物。
前記ｄｓＲＮＡ剤のうちの少なくとも１つが、配列番号２８１および配列番号４１９；配列番号２９０および配列番号４２８；配列番号２９５および配列番号４３３；配列番号３００および配列番号４３８；配列番号３０４および配列番号４４２；配列番号３０６および配列番号４４４；配列番号３０７および配列番号４４５；配列番号３３１および配列番号４６９；配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号５６７および配列番号５９２；配列番号５６９および配列番号５９４；配列番号５７１および配列番号５９６；配列番号５７２および配列番号５９７；配列番号５７３および配列番号５９８；配列番号５６０および配列番号５８５；配列番号５６３および配列番号５８８；配列番号６２８および配列番号６６３；配列番号６２９および配列番号６６４；配列番号６３０および配列番号６６５；配列番号６３１および配列番号６６６；配列番号６３２および配列番号６６７；配列番号６３３および配列番号６６８；配列番号６３４および配列番号６６９；配列番号６３５および配列番号６７０；配列番号６３６および配列番号６７１；配列番号６３７および配列番号６７２、配列番号９１８および配列番号９２２；配列番号９１９および配列番号９２３；配列番号９２０および配列番号９２４；または配列番号９２１および配列番号９２５；好ましくは、配列番号５５７および配列番号５８２、配列番号６０７および配列番号６４２、配列番号６３１および配列番号６６６、配列番号９１８および配列番号９２２、配列番号９１９および配列番号９２３、または配列番号９２１および配列番号９２５を含む、請求項４０に記載の組成物。
請求項１～３９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含む細胞。
哺乳動物細胞、任意にヒト細胞である、請求項４８に記載の細胞。
細胞内のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）遺伝子の発現を阻害する方法であって、
（ｉ）請求項１～３９のいずれか一項に記載の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または請求項４０～４７のいずれか一項に記載の組成物の有効量を含む細胞を調製することを含む方法。
（ｉｉ）ＨＢＶ遺伝子の前記ｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間にわたって、請求項５０（ｉ）で調製された前記細胞を維持し、それによって、前記細胞内の前記ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害し、前記細胞内で前記ＨＢＶの複製を阻害し、前記細胞内の前記ＨＢＶ抗原のレベルを低下させること
をさらに含む、請求項５０に記載の方法。
前記１つ以上のＨＢＶ抗原が、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇである、請求項５１に記載の方法。
前記細胞が対象内にあり、前記ｄｓＲＮＡ剤が前記対象に皮下投与される、請求項５０または５１に記載の方法。
前記細胞が対象内にあり、前記ｄｓＲＮＡ剤がＩＶ投与によって前記対象に投与される、請求項５０または５１に記載の方法。
２、３、４個またはそれ以上のｄｓＲＮＡ剤が前記対象に投与される、請求項５０～５４のいずれか一項に記載の方法。
前記対象への前記ｄｓＲＮＡ剤の前記投与後に、前記ＨＢＶ遺伝子の阻害を評価することをさらに含み、前記評価のための手段が、
（ｉ）前記対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の１つ以上の生理学的特性を決定すること、ならびに
（ｉｉ）前記決定された生理学的特性と、前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／または前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性とを比較することを含み、前記比較が、前記対象における前記ＨＢＶ遺伝子の発現の阻害の存在または非存在のうちの１つ以上を示す、請求項５０～５５のいずれか一項に記載の方法。
前記対照生理学的特性が、ＨＢＶに感染し、前記ｄｓＲＮＡ剤を投与されていない対象における生理学的特性である、請求項５６に記載の方法。
前記対象における前記決定された生理学的特性が、前記対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、前記対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；前記対象におけるＨＢＶウイルス量；前記対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；前記対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；前記対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；前記対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベルのうちの１つ以上である、請求項５７に記載の方法。
前記生理学的特性が、前記対象から得られた生体試料において決定される、請求項５６に記載の方法。
前記生体試料が、血清試料、組織試料、細胞試料および肝臓試料のうちの１つ以上を含む、請求項５９に記載の方法。
前記対象における前記決定された生理学的特性が、前記生理学的特性の対照レベルと比較して異常である、請求項５６に記載の方法。
前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性および／または前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の前記ベースライン治療前生理学的特性と比較して統計的に有意に高いと決定された、前記対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上；ならびに１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体のうちの１つ以上のレベルが、前記対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の状態を示す、請求項６１に記載の方法。
前記対照生理学的特性が、ＨＢＶに感染し、前記ｄｓＲＮＡ剤を投与されていない対象における前記生理学的特性である、請求項６２に記載の方法。
前記対象における前記ＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ；ＨＢｓＡｇ；およびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上の減少が、前記対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す、請求項５６に記載の方法。
前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性および／または前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の前記ベースライン治療前生理学的特性と比較した、前記対象における抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の増加が、前記対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す、請求項５６に記載の方法。
前記ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態が、以下のうちの１つ以上である：前記疾患または病態が、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）、肝損傷、肝硬変、急性Ｂ型肝炎、急性劇症肝炎、および肝線維症、肝臓炎、および肝細胞癌のうちの１つ以上である、請求項５６に記載の方法。
対象におけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害する方法であって、請求項１～３９のいずれか一項に記載の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または請求項４０～４７のいずれか一項に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む方法。
前記ｄｓＲＮＡ剤のうちの２、３、４個またはそれ以上が前記対象に投与される、請求項６７に記載の方法。
前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下投与される、請求項６７または６８に記載の方法。
前記ｄｓＲＮＡ剤が、ＩＶ投与によって前記対象に投与される、請求項６７または６８に記載の方法。
前記１つ以上のｄｓＲＮＡ剤の前記投与後に、前記ＨＢＶ遺伝子の阻害を評価することをさらに含み、前記評価のための手段が、
（ｉ）前記対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の１つ以上の生理学的特性を決定すること、ならびに
（ｉｉ）前記決定された生理学的特性と、前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／または前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性とを比較することを含み、
前記比較が、前記対象における前記ＨＢＶ遺伝子の発現の阻害の存在または非存在のうちの１つ以上を示す、請求項６７～７０のいずれか一項に記載の方法。
前記対象における前記決定された生理学的特性が、前記対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、前記対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；前記対象におけるＨＢＶウイルス量；前記対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；前記対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；前記対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；前記対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベルのうちの１つ以上である、請求項７１に記載の方法。
前記生理学的特性が、前記対象から得られた生体試料において決定される、請求項７１に記載の方法。
前記生体試料が、血清試料、細胞試料、組織試料および肝臓試料のうちの１つ以上を含む、請求項７３に記載の方法。
前記対象における前記決定された生理学的特性が、前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／または前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性と比較してより異常である、請求項７１に記載の方法。
前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／または前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性と比較して統計的に有意に高い、低い、または変化していないと決定された、前記対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上；ならびに１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体のうちの１つ以上のレベルが、前記対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の状態を示す、請求項７３に記載の方法。
前記対象における前記ＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ；ＨＢｓＡｇ；およびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上の減少が、前記対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す、請求項７１に記載の方法。
前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性および／または前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の対照生理学的特性と比較した、前記対象における抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の増加が、前記対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す、請求項７６に記載の方法。
前記ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態が、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、急性Ｂ型肝炎、肝細胞癌、肝損傷、肝硬変、急性劇症肝炎、末期肝疾患、肝線維症、肝臓炎およびＤ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）のうちの１つ以上である、請求項７１に記載の方法。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質の存在に関連する疾患または病態を治療する方法であって、前記ＨＢＶタンパク質をコードするＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するために、請求項１～３９のいずれか一項に記載の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または請求項４０～４７のいずれか一項に記載の組成物の有効量を対象に投与することを含む方法。
２、３、４個またはそれ以上のｄｓＲＮＡ剤を前記対象に投与することを含む、請求項８０に記載の方法。
前記疾患または病態が、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、Ｄ型肝炎ウイルス感染（δ肝炎またはＨＤＶ）、肝損傷、肝硬変、急性Ｂ型肝炎、急性劇症肝炎、肝臓炎、肝線維症および肝細胞癌のうちの１つ以上である、請求項８０または８１に記載の方法。
追加の治療レジメンを前記対象に投与することをさらに含む、請求項８０または８１に記載の方法。
前記追加の治療レジメンが、１つ以上のＨＢＶアンチセンスポリヌクレオチド、追加のＨＢＶｄｓＲＮＡ治療剤、非ＨＢＶｄｓＲＮＡ治療剤、ＨＢＶ非ｄｓＲＮＡ治療剤および行動変容を前記対象に投与することを含む、請求項８１に記載の方法。
前記非ＨＢＶｄｓＲＮＡ治療剤が、抗ウイルス剤、抗ウイルスヌクレオシドまたはヌクレオチド類似体（ＮＵＣ）、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、免疫刺激薬、治療用ワクチン、ウイルス侵入阻害剤、ＨＢｓＡｇの分泌または放出を阻害するオリゴヌクレオチド、カプシド阻害剤、共有結合閉環状（ｃｃｃ）ＨＢＶＤＮＡ阻害剤のうちの１つ以上である、請求項８４に記載の方法。
前記ＮＵＣが、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）、テノホビルアラフェナミド、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、エンテカビル（ＥＴＶ）またはテルビブジンである、請求項８５に記載の方法。
前記免疫刺激薬が、ペグ化インターフェロンアルファ２ａ（ＰＥＧ－ＩＦＮ－ａ２ａ）、インターフェロンアルファ－２ｂ、組換えヒトインターロイキン－７、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニストまたはチェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ１阻害剤）である、請求項８５に記載の方法。
前記１つ以上のｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下投与される、請求項８０に記載の方法。
前記１つ以上のｄｓＲＮＡ剤が、ＩＶ投与によって前記対象に投与される、請求項８０に記載の方法。
前記対象における前記投与された１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の有効性を決定することをさらに含む、請求項８０～８９のいずれか一項に記載の方法。
前記対象における治療の有効性を決定する手段が、
（ｉ）前記対象の前記ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の１つ以上の生理学的特性を決定すること、および
（ｉｉ）前記決定された生理学的特性と、前記ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性とを比較することを含み、
前記比較が、前記対象への前記二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の前記投与の有効性の存在、非存在およびレベルのうちの１つ以上を示す、請求項９０に記載の方法。
前記対象における前記決定された生理学的特性が、前記対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、前記対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；前記対象におけるＨＢＶウイルス量；前記対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；前記対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；前記対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；前記対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベルのうちの１つ以上である、請求項９１に記載の方法。
前記生理学的特性が、前記対象から得られた生体試料において決定される、請求項９１に記載の方法。
前記生体試料が、血清試料、細胞試料、組織試料および肝臓試料のうちの１つ以上を含む、請求項９３に記載の方法。
前記対象における前記決定された生理学的特性が、前記ＨＢＶ関連疾患もしくはＨＢＶ関連病態の前記ベースライン治療前生理学的特性と、または前記生理学的特性の対照レベルと比較して異なる、請求項９１に記載の方法。
前記ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の前記ベースライン治療前生理学的特性と比較して統計的に有意に低いと決定された、前記対象におけるＡＬＴ；ＡＳＴ；ＨＢＶウイルス量、ＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）；１つ以上のＨＢＶ抗原；ＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のうちの１つ以上のレベルが、前記対象における減少したＨＢＶ遺伝子発現の状態を示す、請求項９５に記載の方法。
前記ベースライン治療前抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体、または抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の対照レベルと比較した、前記対象における抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の増加が、前記対象におけるＨＢＶ遺伝子発現の減少を示す、請求項９５に記載の方法。
前記ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態が、Ｂ型肝炎、慢性Ｂ型肝炎、急性Ｂ型肝炎、肝細胞癌、肝損傷、肝硬変、末期肝疾患、急性劇症肝炎、肝臓炎、肝線維症およびＤ型肝炎ウイルス感染（ｓ肝炎またはＨＤＶ）のうちの１つ以上である、請求項９１～９７のいずれか一項に記載の方法。
対象におけるＨＢＶタンパク質のベースライン治療前レベルと比較して、対象におけるＨＢＶタンパク質のレベルを低下させる方法であって、ＨＢＶ遺伝子発現のレベルを低下させるために、請求項１～３９のいずれか一項に記載の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または請求項４０～４７のいずれか一項に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む方法。
前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下投与されるか、またはＩＶ投与によって前記対象に投与される、請求項９９に記載の方法。
対象のＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態のベースライン治療前生理学的特性と比較して、対象のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）関連疾患またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）関連病態の生理学的特性を変化させる方法であって、前記対象の前記ＨＢＶ関連疾患またはＨＢＶ関連病態の前記生理学的特性を変化させるために、請求項１～３９のいずれか一項に記載の１つ以上の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤または請求項４０～４７のいずれか一項に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む方法。
前記１つ以上のｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下投与されるか、またはＩＶ投与によって前記対象に投与される、請求項１０１に記載の方法。
前記対象における決定された生理学的特性のうちの１つ以上が、前記対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベル、前記対象におけるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル；前記対象におけるＨＢＶウイルス量；前記対象におけるＨＢＶ共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）レベル；前記対象における１つ以上のＨＢＶ抗原のレベル；前記対象におけるＨＢｃＡｇ、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇのうちの１つ以上のレベル；前記対象における１つ以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体の存在、非存在および／またはレベルのうちの１つ以上である、請求項１０１に記載の方法。
前記ｄｓＲＮＡ剤の前記センス鎖が、配列番号２８１、２９０、２９５、３００、３０４、３０６、３０７、３３１、５５７、５６７、５６９、５７１、５７２、５７３、５６０、５６３、６０７、６２８～６３７、または９１８～９２１、好ましくは配列番号５５７、６０７、６３１、９１８、９１９または９２１のうちの１つを含む、請求項５０、６７、８０、９９および１０１のいずれか一項に記載の方法。
前記ｄｓＲＮＡ剤の前記アンチセンス鎖が、配列番号４１９、４２８、４３３、４３８、４４２、４４４、４４５、４６９、５８２、５９２、５９４、５９６、５９７、５９８、５８５、５８８、６４２、６６３～６７２、または９２２～９２５、好ましくは配列番号５８２、６４２、６６６、９２２、９２３または９２５のうちの１つを含む、請求項５０、６７、８０、９９および１０１のいずれか一項に記載の方法。
前記ｄｓＲＮＡ剤が、配列番号２８１および配列番号４１９；配列番号２９０および配列番号４２８；配列番号２９５および配列番号４３３；配列番号３００および配列番号４３８；配列番号３０４および配列番号４４２；配列番号３０６および配列番号４４４；配列番号３０７および配列番号４４５；配列番号３３１および配列番号４６９；配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号５６７および配列番号５９２；配列番号５６９および配列番号５９４；配列番号５７１および配列番号５９６；配列番号５７２および配列番号５９７；配列番号５７３および配列番号５９８；配列番号５６０および配列番号５８５；配列番号５６３および配列番号５８８；配列番号６０７および配列番号６４２；配列番号６２８および配列番号６６３；配列番号６２９および配列番号６６４；配列番号６３０および配列番号６６５；配列番号６３１および配列番号６６６；配列番号６３２および配列番号６６７；配列番号６３３および配列番号６６８；配列番号６３４および配列番号６６９；配列番号６３５および配列番号６７０；配列番号６３６および配列番号６７１；または配列番号６３７および配列番号６７２；配列番号９１８および配列番号９２２；配列番号９１９および配列番号９２３；配列番号９２０および配列番号９２４；または配列番号９２１および配列番号９２５；好ましくは、配列番号５５７および配列番号５８２；配列番号６０７および配列番号６４２；配列番号６３１および配列番号６６６；配列番号９１８および配列番号９２２、配列番号９１９および配列番号９２３、または配列番号９２１および配列番号９２５を含む、請求項５０、６７、８０、９９および１０１のいずれか一項に記載の方法。