JP2023537220A - Ｐａｒｐ阻害剤としてのインドロヘプタアシルオキシム類似体の結晶及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

ＰＡＲＰ阻害剤としての一連のインドロヘプタアシルオキシム類似体の結晶及びその製造方法であって、具体的に言えば、式（Ｉ）の化合物の結晶及びその製造方法に関する。【化１】TIFF2023537220000032.tif44170

Description

関連出願の相互参照

本願は、２０２０年７月３１日に中国国家知識産権局へ提出された中国特許出願第２０２０１０７６２４８４．９号、２０２０年８月４日に中国国家知識産権局へ提出された中国特許出願第２０２０１０７７２７６４．８号の優先権を主張し、それらを全体として援用して本明細書に組み込む。

本願は、ＰＡＲＰ阻害剤としてのインドロヘプタアシルオキシム類似体の結晶及びその製造方法に関し、具体的に言えば、式（Ｉ）に示される化合物の結晶及びその製造方法に関する。

ＰＡＲＰ（ｐｌｏｙ（ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ）は１種のポリＡＤＰ－リボースポリメラーゼであり、ＡＤＰ－リボース残基の様々な標的タンパク質への付加を触媒できる酵素ファミリーである。これまでに同定及び特徴付けされたサブタイプは、合計で１８個である。ＰＡＲＰファミリーは様々な酵素を含んでいるが、ＰＡＲＰ－１は細胞内のＡＤＰ－リボシル化の９０％以上を担うため、ＰＡＲＰ阻害剤の研究は主にＰＡＲＰ－１阻害剤を中心としている。

人間の生活環境では、人間のＤＮＡが常に環境（例えば、酸化ストレス、放射線療法・化学療法など）の影響により損傷される。ＰＡＲＰ－１はＤＮＡの修復及びゲノムの機能維持に密接に関連している。ＤＮＡが損傷されると、一般に一本鎖切断（ＳＳＢ、Ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ）が行われ、ＰＡＲＰ－１は最初にＤＮＡの切断された箇所に結合し、次に活性化され、ＰＡＲＰ－１酵素の構造が変わると、ＮＡＤ^＋（補酵素ＩＩ）を動員してポリ（ＡＤＰ）リボースを合成させ、これがＤＮＡリガーゼ、ＤＮＡポリメラーゼβなどのその他の修復酵素が機能を果たすシグナルにもなる。ＰＡＲＰ－１の結合と活性化というプロセスは塩基除去修復（ＢＥＲ、Ｂａｓｅ ｅｘｃｉｓｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ）と呼ばれ、ＤＮＡの増幅修復プロセスに役立つ。ＰＡＲＰ－１がＰＡＲＰ阻害剤によって阻害されると、ＤＮＡは切断されたＤＮＡをＳＳＢにより修復できないため、二本鎖切断（ＤＳＢ、Ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋ）が活性化され、ＤＳＢに対する人体の修復方法は主に、相同組換え（ＨＲ）及び非相同ＤＮＡ末端結合（ＮＨＥＪ、Ｎｏｎ－Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ Ｅｎｄ Ｊｏｉｎｉｎｇ）の２つであり、そのうち相同組換えはＤＳＢ修復の主な方式であり、信頼性の高い修復である。ＢＲＣＡ１及びＢＲＣＡ２は相同組換えにおいて重要な役割を果たしている（Ｎａｔｕｒｅ，２００５，９１３－９１７）。卵巣がん、乳がん、前立腺がんでは、いずれもＢＲＣＡ１／２変異があり、ＢＲＣＡ１／２を欠く腫瘍にとって、ＰＡＲＰ阻害剤が好ましい選択であるということは関連の研究で明らかになった。ＰＡＲＰ阻害剤は単独で使用するだけでなく、化学療法薬、放射線療法薬と併用して、用量低減と効果向上の目的を達成できる。これに鑑みて、様々なタイプの化合物が開発されている（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０，４５６１）。このような化合物のうち、既に販売されているのはオラパリブ（Ｏｌａｐａｒｉｂ）、ルカパリブ（Ｒｕｃａｐａｒｉｂ）、ニラパリブ（Ｎｉｒａｐａｒｉｂ、ＭＫ－４８２７）、タラゾパリブ（Ｔａｌａｚｏｐａｒｉｂ、ＢＭＮ－６７３）である。さらに、ＰＡＲＰ阻害剤の適応症が絶えず拡大するにつれて、ＰＡＲＰ阻害剤の使用が一層広がり、腫瘍だけでなく、脳卒中、心筋虚血、炎症、糖尿病にもある程度は効果が認められている。現在、多くの臨床試験が行われている。

がんや他の疾患を治療するためのＰＡＲＰ阻害剤の開発に向けての取り組みが行われてきているが、満足のいく治療が実現せずにいる。そのため、新規なＰＡＲＰ阻害剤の開発が必要である。

本願の一態様として、式（Ｉ）の化合物を提供する。

本願の別の態様として、式（Ｉ）の化合物の結晶を提供する。

本願の別の態様として、式（Ｉ）の化合物の結晶組成物を提供し、前記式（Ｉ）の化合物の結晶は、前記結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは７５％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める。

本願の別の態様として、治療有効量の前記式（Ｉ）の化合物、又はその結晶、又は前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物を含む医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は他の賦形剤を含んでもよい。

本願の別の態様として、ＰＡＲＰ受容体関連病状の予防又は治療薬物の製造における前記式（Ｉ）の化合物、前記式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物の使用を提供する。

本願の別の態様として、ＰＡＲＰ受容体関連病状を予防又は治療するための前記式（Ｉ）の化合物、前記式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物の使用を提供する。

本願の別の態様として、治療有効量の前記式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物を必要とする哺乳動物に投与することを含むＰＡＲＰ受容体関連病状の予防又は治療方法を提供する。

本願の別の態様として、ＰＡＲＰ阻害剤としての前記式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物を提供する。

本願の別の態様として、ＰＡＲＰ受容体関連病状を予防又は治療するための前記式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物を提供する。

本願の別の態様として、式（Ｉ）の化合物又はその結晶の製造方法を提供し、前記結晶の製造方法は、式（Ｉ）の化合物の非晶質を有機溶媒において加熱して撹拌し、さらに冷却して晶析させ、濾過して前記結晶を製造することであり、ＣｕＫα線を用いる前記式（Ｉ）の化合物の非晶質の粉末Ｘ線回折パターンは図１に示されるとおりであり、前記結晶の製造方法では、前記有機溶媒はアセトン、テトラヒドロフラン及び酢酸エチルから選ばれ、好ましくは、アセトンである。

本願の一態様として、式（Ｉ）の化合物を提供する。

本願の別の態様として、さらに、式（Ｉ）の化合物の結晶を提供する。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°での回折ピークから選ばれる２つ、３つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°での回折ピークから選ばれる３つ、４つ、５つ、６つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°での回折ピークから選ばれる３つ、４つ、５つ、６つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°での回折ピークから選ばれる３つ、４つ、５つ、６つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１６．００±０．２０°、１７．２０±０．２０°、１９．４０±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°、２５．９６±０．２０°、２７．４８±０．２０°及び３１．６８±０．２０°での回折ピークから選ばれる６つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１３．３２±０．２０°、１３．８８±０．２０°、１５．３８±０．２０°、１６．００±０．２０°、１７．２０±０．２０°、１９．４０±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２２．２４±０．２０°、２２．５６±０．２０°、２４．０２±０．２０°、２５．１４±０．２０°、２５．９６±０．２０°、２７．４８±０．２０°、２８．２０±０．２０°、２９．３２±０．２０°、３１．６８±０．２０°、３１．９８±０．２０°及び３２．２８±０．２０°での回折ピークから選ばれる９つ、１０、１１、１２又はそれ以上を特徴ピークとして含む。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１３．３２±０．２０°、１３．８８±０．２０°、１４．７０±０．２０°、１５．３８±０．２０°、１６．００±０．２０°、１７．２０±０．２０°、１８．８０±０．２０°、１９．４０±０．２０°、１９．７２±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２１．３０±０．２０°、２１．７３±０．２０°、２２．２４±０．２０°、２２．５６±０．２０°、２３．５０±０．２０°、２４．０２±０．２０°、２５．１４±０．２０°、２５．９６±０．２０°、２６．８４±０．２０°、２７．４８±０．２０°、２８．２０±０．２０°、２９．３２±０．２０°、３０．３６±０．２０°、３１．６８±０．２０°、３１．９８±０．２０°、３２．２８±０．２０°、３２．９０±０．２０°、３３．５９±０．２０°、３４．７２±０．２０°、３５．２２±０．２０°、３５．９８±０．２０°、３６．５８±０．２０°及び３８．４８±０．２０°での回折ピークから選ばれる１２、１３、１４、１５又はそれ以上を特徴ピークとして含む。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°で回折ピークを有する。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°で回折ピークを有する。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°で回折ピークを有する。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°で回折ピークを有する。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１６．００±０．２０°、１７．２０±０．２０°、１９．４０±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°、２５．９６±０．２０°、２７．４８±０．２０°及び３１．６８±０．２０°で回折ピークを有する。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１３．３２±０．２０°、１３．８８±０．２０°、１５．３８±０．２０°、１６．００±０．２０°、１７．２０±０．２０°、１９．４０±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２２．２４±０．２０°、２２．５６±０．２０°、２４．０２±０．２０°、２５．１４±０．２０°、２５．９６±０．２０°、２７．４８±０．２０°、２８．２０±０．２０°、２９．３２±０．２０°、３１．６８±０．２０°、３１．９８±０．２０°及び３２．２８±０．２０°で回折ピークを有する。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１３．３２±０．２０°、１３．８８±０．２０°、１４．７０±０．２０°、１５．３８±０．２０°、１６．００±０．２０°、１７．２０±０．２０°、１８．８０±０．２０°、１９．４０±０．２０°、１９．７２±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２１．３０±０．２０°、２１．７３±０．２０°、２２．２４±０．２０°、２２．５６±０．２０°、２３．５０±０．２０°、２４．０２±０．２０°、２５．１４±０．２０°、２５．９６±０．２０°、２６．８４±０．２０°、２７．４８±０．２０°、２８．２０±０．２０°、２９．３２±０．２０°、３０．３６±０．２０°、３１．６８±０．２０°、３１．９８±０．２０°、３２．２８±０．２０°、３２．９０±０．２０°、３３．５９±０．２０°、３４．７２±０．２０°、３５．２２±０．２０°、３５．９８±０．２０°、３６．５８±０．２０°及び３８．４８±０．２０°で回折ピークを有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶ＡのＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンは、図２に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶ＡのＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークのピーク位置及び相対強度は、表１に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの示差走査熱量測定曲線は、２８５．６±５℃で発熱ピークの開始点を有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの示差走査熱量測定曲線は、２８８．６±５℃で発熱ピークのピークトップを有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線は、図３に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの熱重量分析曲線は、２００．０±５℃での重量損失が０．５６％である。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの熱重量分析曲線は、図４に示されるとおりである。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角１５．８６±０．２０°、２１．６２±０．２０°及び２３．５４±０．２０°での回折ピークから選ばれる１つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角１４．７２±０．２０°、１５．８６±０．２０°、２１．６２±０．２０°、２３．１４±０．２０°、２３．５４±０．２０°及び２６．２８±０．２０°での回折ピークから選ばれる２つ、３つ、４つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角１３．６６±０．２０°、１４．７２±０．２０°、１５．８６±０．２０°、１８．３０±０．２０°、２１．６２±０．２０°、２３．１４±０．２０°、２３．５４±０．２０°、２５．８０±０．２０°、２６．２８±０．２０°及び２７．９６±０．２０°での回折ピークから選ばれる４つ、５つ、６つ、７つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角１１．５２±０．２０°、１３．６６±０．２０°、１４．２８±０．２０°、１４．７２±０．２０°、１５．８６±０．２０°、１６．８４±０．２０°、１８．３０±０．２０°、１８．７２±０．２０°、２１．６２±０．２０°、２３．１４±０．２０°、２３．５４±０．２０°、２４．４８±０．２０°、２４．８４±０．２０°、２５．８０±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．９６±０．２０°、２８．４０±０．２０°、２８．８４±０．２０°、２９．８２±０．２０°、３０．２２±０．２０°、３１．７４±０．２０°、３２．０４±０．２０°、３２．６９±０．２０°、３３．９０±０．２０°、３４．５０±０．２０°、３５．０２±０．２０°、３６．０８±０．２０°、３６．９４±０．２０°、３７．４６±０．２０°及び３７．９２±０．２０°での回折ピークから選ばれる７つ、８つ、９つ、１０又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角１５．８６±０．２０°、２１．６２±０．２０°及び２３．５４±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角１４．７２±０．２０°、１５．８６±０．２０°、２１．６２±０．２０°、２３．１４±０．２０°、２３．５４±０．２０°及び２６．２８±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角１３．６６±０．２０°、１４．７２±０．２０°、１５．８６±０．２０°、１８．３０±０．２０°、２１．６２±０．２０°、２３．１４±０．２０°、２３．５４±０．２０°、２５．８０±０．２０°、２６．２８±０．２０°及び２７．９６±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角１１．５２±０．２０°、１３．６６±０．２０°、１４．２８±０．２０°、１４．７２±０．２０°、１５．８６±０．２０°、１６．８４±０．２０°、１８．３０±０．２０°、１８．７２±０．２０°、２１．６２±０．２０°、２３．１４±０．２０°、２３．５４±０．２０°、２４．４８±０．２０°、２４．８４±０．２０°、２５．８０±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．９６±０．２０°、２８．４０±０．２０°、２８．８４±０．２０°、２９．８２±０．２０°、３０．２２±０．２０°、３１．７４±０．２０°、３２．０４±０．２０°、３２．６９±０．２０°、３３．９０±０．２０°、３４．５０±０．２０°、３５．０２±０．２０°、３６．０８±０．２０°、３６．９４±０．２０°、３７．４６±０．２０°及び３７．９２±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶ＢのＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンは、図５に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶ＢのＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークのピーク位置及び相対強度は、表２に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの示差走査熱量測定曲線は、２８７．４±５℃で発熱ピークの開始点を有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの示差走査熱量測定曲線は、２９０．６±５℃で発熱ピークのピークトップを有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線は、図６に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの熱重量分析曲線は、２００．０±５℃での重量損失が０．７０％である。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの熱重量分析曲線は、図７に示されるとおりである。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２３．３０±０．２０°及び２４．９２±０．２０°での回折ピークから選ばれる３つ、４つ、５つ、６つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°及び２７．８２±０．２０°での回折ピークから選ばれる６つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°及び２７．８２±０．２０°での回折ピークから選ばれる６つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°及び２７．８２±０．２０°での回折ピークから選ばれる６つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、９．９４±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１６．３２±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°、２６．１４±０．２０°、２６．８６±０．２０°、２７．８２±０．２０°、２８．５２±０．２０°及び２９．３４±０．２０°での回折ピークから選ばれる９つ、１０、１１、１２又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、９．５９±０．２０°、９．９４±０．２０°、１０．５８±０．２０°、１１．４２±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１３．４０±０．２０°、１４．８６±０．２０°、１５．６６±０．２０°、１６．３２±０．２０°、１７．００±０．２０°、１７．５４±０．２０°、１７．８４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°、２６．１４±０．２０°、２６．８６±０．２０°、２７．３４±０．２０°、２７．８２±０．２０°、２８．５２±０．２０°、２９．３４±０．２０°、３０．１８±０．２０°、３１．３６±０．２０°及び３２．３６±０．２０°での回折ピークから選ばれる１２、１３、１４、１５又はそれ以上を特徴ピークとして含む式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２３．３０±０．２０°及び２４．９２±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°及び２７．８２±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°及び２７．８２±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°及び２７．８２±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターン２θ角が、６．４６±０．２０°、９．９４±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１６．３２±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°、２６．１４±０．２０°、２６．８６±０．２０°、２７．８２±０．２０°、２８．５２±０．２０°及び２９．３４±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願は、さらに、ＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンが、２θ角６．４６±０．２０°、９．５９±０．２０°、９．９４±０．２０°、１０．５８±０．２０°、１１．４２±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１３．４０±０．２０°、１４．８６±０．２０°、１５．６６±０．２０°、１６．３２±０．２０°、１７．００±０．２０°、１７．５４±０．２０°、１７．８４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°、２６．１４±０．２０°、２６．８６±０．２０°、２７．３４±０．２０°、２７．８２±０．２０°、２８．５２±０．２０°、２９．３４±０．２０°、３０．１８±０．２０°、３１．３６±０．２０°及び３２．３６±０．２０°で回折ピークを有する式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供する。

本願の一実施形態では、ＣｕＫα線を用いる式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの粉末Ｘ線回折パターンは、図８に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶ＣのＣｕＫα線を用いる粉末Ｘ線回折パターンにおける特徴ピークのピーク位置及び相対強度は、表３に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの示差走査熱量測定曲線は、２６１．６±５℃で発熱ピークの開始点を有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの示差走査熱量測定曲線は、２６７．５±５℃で発熱ピークのピークトップを有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線は、図９に示されるとおりである。

本願は、さらに、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄを提供し、前記結晶Ｄは非晶質であり、ＣｕＫα線を用いるその粉末Ｘ線回折パターンは図１に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄは、有機溶媒及び塩酸の存在下で化合物１から製造される。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄは、化合物１を有機溶媒及び塩酸の存在下で撹拌し、晶析させ、濾過して得られる。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄの製造において、前記有機溶媒は酢酸エチルから選ばれる。

本願では、化合物１の構造は以下に示されるとおりである。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａは、有機溶媒において式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから得られる。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａは、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄを有機溶媒において加熱及び撹拌して製造される。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａは、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄを有機溶媒において加熱及び撹拌し、さらに冷却して晶析させ、濾過して製造される。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの製造において、前記有機溶媒はアセトン、テトラヒドロフラン及び酢酸エチルから選ばれ、好ましくは、アセトンである。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの製造において、前記有機溶媒と式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄの体積：モル比は２～１０ｍＬ：１ｍｍｏｌであり、好ましくは、４～６ｍＬ：１ｍｍｏｌである。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの製造において、前記加熱温度は４０～８０℃であり、好ましくは、４０～６０℃である。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの製造において、前記加熱温度は有機溶媒の還流温度である。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの製造において、前記撹拌時間は１０～４８時間であり、好ましくは、１６～４８時間である。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの製造において、２５～３５℃に、好ましくは２５～３０℃に冷却して前記晶析を行う。

本願の別の態様として、有機溶媒において式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから製造される式（Ｉ）の化合物の結晶Ａを提供し、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ａは前記結晶Ａの結晶特性を有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａは、アセトン、テトラヒドロフラン及び酢酸エチルから選ばれる１つ又は１つ以上の混合溶媒において式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから製造される。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａは、アセトンにおいて式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから製造される。

本願の特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂは、有機溶媒において式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから製造される。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂは、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄを有機溶媒において加熱及び撹拌して製造される。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂは、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄを有機溶媒において加熱及び撹拌し、さらに冷却して晶析させ、濾過して製造される。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの製造において、前記有機溶媒はアセトニトリルから選ばれる。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの製造において、前記有機溶媒と式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄの体積：モル比は２～１０ｍＬ：１ｍｍｏｌであり、好ましくは、４～６ｍＬ：１ｍｍｏｌである。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの製造において、前記加熱温度は３０～８０℃であり、好ましくは、４０～６０℃である。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの製造において、前記加熱温度は有機溶媒の還流温度である。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの製造において、前記撹拌時間は１０～４８時間であり、好ましくは、１６～４８時間である。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂの製造において、２５～３５℃に、好ましくは２５～３０℃に冷却して前記晶析を行う。

本願の別の態様として、有機溶媒において式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから製造される式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂを提供し、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂは前記結晶Ｂの結晶特性を有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂは、アセトニトリルにおいて式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから製造される。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃは、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄを有機溶媒及び塩基の存在下で遊離させ、さらに塩酸の存在下で製造される。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃは、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄを有機溶媒及び塩基の存在下で遊離させ、分液した後、さらに塩酸の存在下で撹拌し、晶析させ、濾過して製造される。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの製造において、前記遊離ステップで有機溶媒は酢酸エチルから選ばれる。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの製造において、前記遊離ステップで塩基は炭酸水素ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素カリウム及び炭酸ナトリウムから選ばれ、好ましくは、炭酸水素ナトリウムである。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの製造において、前記遊離ステップで塩基は前記塩基の飽和水溶液の形態である。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの製造において、前記遊離ステップで式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄと前記有機溶媒と塩基の飽和水溶液のモル：体積：体積比は１ｍｍｏｌ：１２～２０ｍＬ：４～１０ｍＬであり、好ましくは、１ｍｍｏｌ：１２～１６ｍＬ：４～６ｍＬである。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの製造において、前記遊離ステップは撹拌しながら８～１２分間、好ましくは１０分間行う。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの製造において、前記塩酸は有機溶媒に入っており、前記有機溶媒は酢酸エチル、クロロホルム、四塩化炭素及びジオキサンから選ばれ、好ましくは、酢酸エチルである。

本願の一実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃの製造において、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄと前記塩酸の当量比は１：０．８５である。

本願の別の態様として、有機溶媒において式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから製造される式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃを提供し、前記式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃは前記結晶Ｃの結晶特性を有する。

本願の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃは酢酸エチルにおいて式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄから製造される。

本願に記載の塩酸は、ＨＣｌガスを有機溶媒に流し込んで溶液として調製した予備形態であってもよく、前記有機溶媒は酢酸エチル、クロロホルム、四塩化炭素及びジオキサンから選ばれ、好ましくは、酢酸エチルである。

本願の別の態様として、式（Ｉ）の化合物の結晶組成物を提供し、前記式（Ｉ）の化合物の結晶は、前記結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは７５％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める。前記結晶組成物は、式（Ｉ）の化合物の他の結晶又は非結晶形態を少量に含んでもよい。

本願の別の態様として、治療有効量の前記式（Ｉ）の化合物、前記式（Ｉ）の化合物の結晶、又は前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物を含む医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は他の賦形剤を含んでもよい。

本願の別の態様として、ＰＡＲＰ受容体関連病状の予防又は治療薬物の製造における前記式（Ｉ）の化合物、前記式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物の使用を提供する。

本願の別の態様として、ＰＡＲＰ受容体関連病状を予防又は治療するための前記式（Ｉ）の化合物、前記式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物の使用を提供する。

本願の別の態様として、治療有効量の前記式（Ｉ）の化合物、前記式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物を必要とする哺乳動物に投与することを含むＰＡＲＰ受容体関連病状の予防又は治療方法を提供する。

本願の別の態様として、ＰＡＲＰ阻害剤としての前記式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物を提供する。

本願の別の態様として、ＰＡＲＰ受容体関連病状を予防又は治療するための前記式（Ｉ）の化合物、前記式（Ｉ）の化合物の結晶、前記式（Ｉ）の化合物の結晶組成物、又は前記医薬組成物を提供する。

本願の一実施形態では、前記哺乳動物は、ヒトである。

本願の一実施形態では、前記ＰＡＲＰ受容体関連病状は、腫瘍、がんから選ばれる。

本願の一実施形態では、前記ＰＡＲＰ受容体関連病状は、乳がんから選ばれる。

本願の別の態様として、式（Ｉ）の化合物又はその結晶の製造方法を提供し、前記結晶の製造方法は、式（Ｉ）の化合物の非晶質を有機溶媒において加熱して撹拌し、さらに冷却して晶析させ、濾過して前記結晶を製造することであり、ＣｕＫα線を用いる前記式（Ｉ）の化合物の非晶質の粉末Ｘ線回折パターンは図１に示されるとおりであり、前記結晶の製造方法では、前記有機溶媒はアセトン、テトラヒドロフラン及び酢酸エチルから選ばれ、好ましくは、アセトンである。好ましくは、前記結晶は結晶Ａである。

本願の一実施形態では、前記結晶の製造方法において、前記有機溶媒と式（Ｉ）の化合物の非晶質の体積：モル比は２～１０ｍＬ：１ｍｍｏｌであり、好ましくは、４～６ｍＬ：１ｍｍｏｌである。

本願の一実施形態では、前記結晶の製造方法において、前記式（Ｉ）の化合物の非晶質は有機溶媒及び塩酸の存在下で化合物１を撹拌し、晶析させ、濾過して得られ、前記有機溶媒は酢酸エチルから選ばれ、前記化合物１は下記の構造を有する。

本願では、医薬組成物を特定の剤形として提供することができ、投与方式として好ましいのは経口投与、非経口投与（皮下、筋肉内、静脈内を含む）、直腸投与などである。例えば、経口投与に適する剤形はタブレット剤、カプセル、顆粒剤、散剤、ピル剤、粉末、錠剤、トローチ、懸濁剤を含み、非経口投与に適する剤形は水系又は非水系の注射用溶液、エマルションを含み、直腸投与に適する剤形は親水性又は疎水性の担体を使用する坐剤を含む。必要に応じて、前記剤形は有効成分の急速放出、遅延放出又は調節放出に適するものとして提供することができる。

本願の医薬組成物は、本分野で周知される手法、例えば、混合、溶解、造粒、糖衣錠法、粉砕、乳化、凍結乾燥などの通常の方法で製造することができる。

本願に記載の結晶は、非溶媒和物の形態であってもよいし、溶媒和物の形態であってもよく、例えば、水和物である。

本願で、サンプルのＸ線粉末回折パターンは、次の条件で測定する。装置：丹東浩元ＤＸ－２７００ＢＨ Ｘ線回折装置、線源：ＣｕＫα、波長λ＝１．５４１８４Å、２θ角の範囲：３～４０°、発散スリット：１ｍｍ、検出器スリット：０．３ｍｍ、発散制限スリット：１ｍｍ、管電圧及び管電流：４０ｋＶ、３０ｍＡ。

本願で、ＤＳＣ曲線は、次の条件で測定する。装置：ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯ ＤＳＣ１示差走査熱量計、温度範囲：４０～３５０℃、加熱速度：１０℃／分。

本願で、ＴＧＡ曲線は、次の条件で測定する。装置：ＴＡ ＴＧＡ５５０熱重量分析装置、ガス流速：４０ｍＬ／分、温度範囲：４０～５００℃、加熱速度：１０℃／分。

なお、Ｘ線粉末回折パターンで、ピークの位置又はピークの相対強度が測定装置、測定方法／条件などの要因によって異なる可能性がある。いかなる特定の結晶でも、ピークの位置に誤差がある可能性があり、２θ角の測定誤差は±０．２°である。そのため、各結晶を確定する際には、当該誤差を考慮すべきであり、誤差内にあるものが本願の範囲に含まれる。

なお、同じ結晶でも、ＤＳＣ曲線における吸熱ピークの出現位置は測定装置、測定方法／条件などの要因によって異なる可能性がある。いかなる特定の結晶でも、吸熱ピークの位置に誤差がある可能性があり、誤差は±５℃であってもよい。そのため、各結晶を確定する際には、当該誤差を考慮すべきであり、誤差内にあるものが本願の範囲に含まれる。

なお、同じ結晶でも、ＴＧＡ曲線における重量損失温度の出現位置は測定装置、測定方法／条件などの要因によって異なる可能性がある。いかなる特定の結晶でも、重量損失温度の位置に誤差がある可能性があり、誤差は±５℃であってもよい。各結晶を確定する際には、当該誤差を考慮すべきであり、誤差内にあるものが本願の範囲に含まれる。

本願に記載の化合物１は、ＰＡＲＰ－１酵素に高い阻害活性があり、且つＢＲＣＡ１変異ＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞にも優れた抗増殖活性がある一方、ＢＲＣＡ野生型ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞には阻害活性がないことから、本願の化合物は選択性及び安全性に優れていることが示される。本願の化合物１は、ポリＡＤＰリボシル化にもある程度は阻害効果がある。さらに、本願の化合物１は薬物動態特性に優れており、生体内では安定的に代謝され、生物学的利用能が高い。全体的には、本願の化合物は活性が高いだけでなく合成しやすく、優れた薬物動態特性を有している。

本願に記載の式（Ｉ）の化合物は安定的な結晶特性を有し、高湿度及び高温などの条件では良好な安定性を示し、長期試験条件でも良好な安定性を示している。本願に記載の式（Ｉ）の化合物の結晶は、薬物活性、薬物動態、生物学的利用能、安定性、純度、製造しやすさなどにおいて利点を有するため、薬物の生産、保管、輸送及び製剤などに関する要件を満たすことができる。

「定義と説明」
特に説明がない限り、本明細書で用いられる下記の用語及び表現は以下の意味を有する。特定の表現又は用語は、特別に定義されない場合に、確定していない又は不明瞭なものではなく、通常の意味で理解される。本明細書で商品名が記載される場合に、対応する製品又はその有効成分を意味する。

「哺乳動物」は、ヒト、実験室用哺乳動物や愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）などの飼育動物、野生哺乳動物などの非飼育哺乳動物を含む。

用語「医薬組成物」とは、本分野で一般に生理活性化合物を哺乳動物、例えばヒトに伝達するための使用が認められる媒体と本願の化合物の製剤を指す。前記媒体は、薬学的に許容される全ての使用可能な担体を含む。医薬組成物にするのは、化合物を生体に投与しやすいためである。

用語「治療有効量」とは、毒性を持たず所望の効果を得られる薬物又はその製剤の十分な用量を指す。当該有効量は、投与対象の年齢、一般状況から決定され、有効物質種によって異なる。実際の投与では、当業者が通常の試験を行って適切な有効量を决定することができる。

用語「治療」とは、疾患又は前記疾患に関連する１つ又は複数の症状を改善又は解消するために、本願に記載の化合物又は製剤を投与することを意味し、且つ以下の事項を含む。
（ｉ）疾患又は疾患の状態を阻害し、即ちその進行を抑えること、
（ｉｉ）疾患又は疾患の状態を緩和し、即ち当該疾患又は疾患の状態を解消させること。

用語「予防」とは、疾患又は前記疾患に関連する１つ又は複数の症状を予防するために、本願に記載の化合物又は製剤を投与することを意味し、且つ、哺乳動物における疾患又は疾患の状態の出現を予防することであって、特に当該疾患の状態になりやすい哺乳動物が、当該疾患の状態と診断されていない時の予防を含む。

本願では、「薬学的に許容される担体」とは、有効成分と共に投与され、生体に明らかな刺激がなく、しかも活性化合物の生理活性や特性を損なわない担体を指す。担体の他の情報に関しては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）を参照することができ、当該文献の内容を援用して本明細書に組み込む。

本願では、「室温」とは、２０～３０℃を指す。

本願では、「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルを表す。

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、類似の用語及び英語の同等な表現、例えば、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ又は同等なものは、「…を含むが、それらに限定されない」と開放的で非排他的な表現として理解され、列挙されている要素、成分又はステップの他に、明記していない要素、成分又はステップを含んでもよいということを意味する。

本明細書では、明確な規定がない限り、単数形の用語は複数の指示対象の場合をカバーしており、逆の場合も同様である。

本明細書では、特に説明がない限り、各パラメータ（２θ角、反応条件を含む）はいずれも、測定などによる値の誤差を含むように用語「約」で修飾されたものと見なされ、例えば、記載された値に対して、±５％の誤差がある。

本明細書では説明と開示のために、特許、特許出願又は既存の刊行物を援用して明確に組み込む。これらの刊行物は本願の出願日前に発表されているため提供できる。これらの書類の開示日に関する声明又はその内容の記載は出願人が知り得た情報に基づくもので、これらの書類の開示日又はその内容が正しいと承諾するものではない。しかも全ての対象国において、本明細書へのこれらの刊行物の援用で当該刊行物は本分野で周知される常識になると認めるものではない。

図１は、式（Ｉ）の化合物の結晶ＤのＸＲＰＤパターンである。 図２は、実施例２の方法１で製造した式（Ｉ）の化合物の結晶ＡのＸＲＰＤパターンである。 図３は、式（Ｉ）の化合物の結晶ＡのＤＳＣ曲線である。 図４は、式（Ｉ）の化合物の結晶ＡのＴＧＡ曲線である。 図５は、式（Ｉ）の化合物の結晶ＢのＸＲＰＤパターンである。 図６は、式（Ｉ）の化合物の結晶ＢのＤＳＣ曲線である。 図７は、式（Ｉ）の化合物の結晶ＢのＴＧＡ曲線である。 図８は、式（Ｉ）の化合物の結晶ＣのＸＲＰＤパターンである。 図９は、式（Ｉ）の化合物の結晶ＣのＤＳＣ曲線である。 図１０は、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの分子の立体モデルである。

次に、実施例を用いて本願の詳細な説明を行う。これは本願に何らかの限定を加えるためではない。本願の化合物は、下記の特定の実施形態、他の化学的合成方法と組み合わせた実施形態及び当業者が熟知する均等な代替形態を含み、好ましい実施形態は本願の実施例を含み、ただしそれらに限定されない、当業者が熟知する様々な合成方法で製造することができる。本願の趣旨と範囲から逸脱することなく本願の特定の実施形態に様々な変形と改善を行えるということは、当業者にとって自明である。

実施例１：化合物１の製造

ステップＡ：化合物１－１（２５ｇ、１２９．４２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２５０ｍＬ）に溶解し、０℃でトリエチルアミン（２６．１９ｇ、２５８．８３ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン（３．１６ｇ、２５．８８ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（３１．０７ｇ、１４２．３６ｍｍｏｌ）を加えた。当該反応系を２５℃で２時間撹拌した。反応系に飽和塩化アンモニウム水溶液（８０ｍＬ×３）及び飽和ブライン（５０ｍＬ×２）を加えて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して化合物１－２を得た。

ステップＢ：ジイソプロピルアミン（１３．８０ｇ、１３６．３８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）に溶解し、－７８℃、窒素保護下で、３０分以内で前記反応系に２．５Ｍ ｎ－ブチルリチウム（４７．７３ｍＬ）を滴加した。０℃で反応液を３０分間撹拌し、次に０℃、窒素保護下で、化合物１－２（２５ｇ、２８５．１４ｍｍｏｌ）及びホウ酸トリイソプロピル（２４．０５ｇ、１２７．８６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）溶液を入れた別の三つ口フラスコに前記反応溶液を滴加し、０℃で迅速に滴加した。０℃で反応液を１時間撹拌した。次に酢酸溶液（５０ｍＬ）で反応系をクエンチして、水（６０ｍＬ）を加えて希釈して、酢酸エチル（６０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ×３）及び飽和ブライン（４０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。アセトニトリル（１００ｍＬ）と水溶液（３００ｍＬ）で粗生成物をパルプ化し、オイルポンプを用いてケーキを乾燥して、化合物１－３を得た。

ステップＣ：０℃で３回に分けて化合物１－３（４５ｇ、１３３．４９ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２００ｍＬ）溶液に加え、０℃、窒素保護下で、反応系を１時間撹拌した。次に反応液を氷水（３００ｍＬ）に注ぎ、固体が析出してケーキを得て、オイルポンプを用いて減圧下で濃縮して化合物１－４を得た。

ステップＤ：マグネシウム切粉（２．５８ｇ、１０５．９８ｍｍｏｌ）及びヨウ素（４８９．０５ｍｇ、１．９３μｍｏｌ）を入れた三つ口フラスコで、化合物１－５（２５ｇ、１０５．９８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１００．００ｍＬ）に溶解して、７０℃、窒素保護下で、３０分以内で前記反応系に滴加した。反応液を７０℃で１時間撹拌し、次に反応系を２０℃に冷却した。－７０℃、窒素保護下で、３０分以内で２－オキシピロリジン－１－ｔｅｒｔ－ブチルカルボキシレート（１７．８４ｇ、９６．３４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）溶液を入れた別の三つ口フラスコに前記反応溶液を滴加した。反応液を－７０℃で２時間撹拌し、次に１０℃に加熱して１時間撹拌した。反応系を飽和塩化アンモニウム水溶液（６０ｍＬ）でクエンチして、酢酸エチル（６０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて、飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して減圧下で濃縮した。シリカゲルカラムで残留物を精製して、化合物１－６を得た。

ステップＥ：０℃で化合物１－６（５０ｇ、１４６．１０ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２５０ｍＬ）に加えた。１５℃で当該反応系を１２時間撹拌した。４０％水酸化ナトリウム水溶液で反応液のｐＨを１４に調整して、黄色い固体が析出し、濾過し、少量の水でケーキを洗浄し、スピン乾燥して化合物１－７を得た。

ステップＦ：化合物１－７（１５ｇ、６６．９４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）に溶解した。窒素保護下で反応系を－７８℃に冷却し、３０分以内で三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（１９ｇ、１３３．８７ｍｍｏｌ）を前記反応系に滴加した。－７８℃で当該反応系を３０分間撹拌した。次に前記反応系にメチルリチウム溶液（１．６Ｍ、８３．６７ｍＬ）を滴加した。当該反応系を７８℃にゆっくりと加熱して１９．５時間撹拌した。反応系を室温に冷却して飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、水（３０ｍＬ）を加えて、酢酸エチル（８０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて飽和ブライン（３０×２ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して化合物１－８を得た。

ステップＧ：化合物１－８（１６ｇ、６６．６３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に溶解し、０℃でトリエチルアミン（２０．２３ｇ、１９９．８８ｍｍｏｌ）を加え、次に二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２９．０８ｇ、１３３．２６ｍｍｏｌ）を加えた。１５℃で当該反応系を１時間撹拌した。反応系を減圧下で濃縮及びスピン乾燥して、飽和塩化アンモニウム水溶液（６０ｍＬ）を加えて酢酸エチル（８０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて飽和ブライン（３０×３ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して化合物１－９を得た。

ステップＨ：化合物１－９（９ｇ、２６．４５ｍｍｏｌ）及び化合物１－４（７．５２ｇ、３１．７４ｍｍｏｌ）をエチレングリコールジメチルエーテル（１００ｍＬ）と水（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸水素ナトリウム（６．６７ｇ、７９．３５ｍｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド （１．７２ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を加えた。窒素で３回置換して、８０℃、窒素保護下で当該反応系を１２時間撹拌した。反応系を減圧下で濃縮及びスピン乾燥し、飽和ブライン溶液（６０ｍＬ）を加えて、酢酸エチル（６０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して残留物を得た。シリカゲルカラムで残留物を精製して、化合物１－１０を得た。

ステップＩ：塩化オキサリル（５．６１ｇ、４４．２０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に加え、０℃、窒素保護下でＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４．８５ｇ、６６．３０ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴加した。当該反応系を０℃で１５分間撹拌した。次に化合物１－１０（１０ｇ、２２．１０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解して、０℃で反応系に加えた。当該反応系を１５℃で３０分間撹拌した。反応溶液を１０％酢酸アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）でクエンチして、酢酸エチル（４５ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ×３）及び飽和ブライン（５０ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して化合物１－１１を得た。

ステップＪ：化合物１－１１（１０．６２ｇ、２２．１０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８０ｍＬ）に溶解し、０℃でトリエチルアミン（６．７１ｇ、６６．３０ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（９．６５ｇ、４４．２０ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン（８１０．０１ｍｇ、６．６３ｍｍｏｌ）を加えた。当該反応系を１５℃で１時間撹拌した。反応系を減圧下で濃縮及びスピン乾燥して、飽和塩化アンモニウム水溶液（６０ｍＬ）を加えて酢酸エチル（６０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせて飽和ブライン（３０×３ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して化合物１－１２を得た。

ステップＫ：化合物１－１２（１２．７５ｇ、２１．９６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）とメタノール（２５ｍＬ）に溶解した。反応系を０℃に冷却して、水素化ホウ素ナトリウム（１．２５ｇ、３２．９４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で当該反応系を４０分間撹拌した。反応系を飽和塩化アンモニウム水溶液（８０ｍＬ）でクエンチして、酢酸エチル（８０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせて水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して化合物１－１３を得た。

ステップＬ：化合物１－１３（１２．７９ｇ、２１．９５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に溶解してトリエチルアミン（４．４４ｇ、４３．９０ｍｍｏｌ）を加え、次に０℃、窒素保護下でメタンスルホニルクロリド（３．０２ｇ、２６．３４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で当該反応系を１時間撹拌した。反応系を減圧下で濃縮及びスピン乾燥して、酢酸エチル（８０ｍＬ）を加え、有機相を飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ×２）及び飽和ブライン（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して化合物１－１４を得た。

ステップＭ：化合物１－１４（１４．４５ｇ、２１．８７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５０ｍＬ）に溶解し、炭酸ナトリウム（４．６４ｇ、４３．７４ｍｍｏｌ）、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド（５．３５ｇ、３２．８０ｍｍｏｌ）を加えた。当該反応系を６５℃で１２時間撹拌した。反応系に水溶液（６０ｍＬ）を加えて酢酸エチル（８０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ×３）及び飽和ブライン（５０ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、減圧下で濃縮して残留物を得た。シリカゲルカラムで残留物を精製して、化合物１－１５を得た。

ステップＮ：化合物１－１５（１５ｇ、２０．６１ｍｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解し、９８％ヒドラジン水和物（３．１０ｇ、６１．８３ｍｍｏｌ）を加えた。６５℃、窒素保護下で当該反応系を２時間撹拌した。反応系を濾過し、減圧下で濃縮して残留物を得た。シリカゲルカラムで残留物を精製して、化合物１－１６を得た。

ステップＯ：キラルＨＰＬＣカラム（分離カラム：ＡＤ－Ｈ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ，５μｍ）、移動相［０．１％水酸化アンモニウム－イソプロパノール］、溶離勾配：２５％－２５％、２．７分、４００分）で化合物１－１６を分離して、化合物１＿ＡＡ（保持時間２．１６１分、ｅｅ値（鏡像体過剰率）１００％）及び化合物１＿ＢＢ（保持時間＝２．３５３分、ｅｅ値（鏡像体過剰率）９７％）を得た。

ｅｅ値（鏡像体過剰率）の測定方法：分析カラム：Ａｍｙｃｏａｔ ５０×４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．，３μｍ、移動相：ＣＯ_２中１０～２０％イソプロパノール（０．０５％ジエチルアミン）、流速：３ｍＬ／分、波長：２２０ｎｍ。

ステップＰ：トリフルオロ酢酸で化合物１＿ＡＡを脱保護基して、化合物１を得た（時間３．４６１分、ｅｅ値（鏡像体過剰率）９８％）。

ｅｅ値（鏡像体過剰率）の測定方法：分離カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ Ｃｅｌｌｕｃｏａｔ ５０×４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．，３μｍ、移動相：ＣＯ_２中１０～４０％イソプロパノール（０．０５％ジエチルアミン）、流速：３ｍＬ／分、波長：２２０ｎｍ。
化合物１：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １２．００（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１１．３０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．２３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．６２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．７５Ｈｚ，４Ｈ），７．４５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．１３Ｈｚ，２Ｈ），５．４４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．５１Ｈｚ，１Ｈ），５．１４－５．３１（ｍ，１Ｈ），２．９９－３．４２（ｍ，２Ｈ），１．８９－２．２３（ｍ，４Ｈ），１．５３（ｂｒ ｓ，３Ｈ）。

実施例２：式（Ｉ）の化合物の結晶Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤの製造

結晶Ｄの製造：
ステップ１であって、－４０～－２０℃で、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）にＨＣｌガスを流し込んで、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（塩酸－酢酸エチル、７ｍｏｌ、１００ｍＬ）溶液を調製した。

ステップ２であって、－２０～－１０℃で、化合物１＿ＡＡ（１０ｇ、１７．６８ｍｍｏｌ）を数回に分けて前記溶液に加え、完了したら、冷浴を取り外して、自然に約２０℃に上げて、引き続き３時間撹拌したら、大量の固体が析出した。

ステップ３であって、濾過して、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で３回洗浄し、固体を収集し、オーブンの中で１６時間乾燥させて、式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄを得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １２．１５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１１．３０（ｓ，１Ｈ），１０．４５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．２９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．６１－７．７５（ｍ，４Ｈ），７．３９－７．５１（ｍ，２Ｈ），５．４５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．７９Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝７．４０，１４．７３Ｈｚ，１Ｈ），３．２９－３．３６（ｍ，２Ｈ），２．３４－２．４５（ｍ，１Ｈ），２．１４－２．３０（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．１６Ｈｚ，１Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ）。

結晶Ａの製造：
方法１：
式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄ（１ｇ、２．４９ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのアセトンに加え、還流しながら１６時間撹拌し、次に約３０℃に冷却し、濾過して固体を収集し、３５～４０℃で乾燥させて、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａを得た。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １２．２４－１２．０６（ｍ，１Ｈ），１１．４１－１１．２２（ｍ，１Ｈ），１０．３９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．５０－８．９７（ｍ，１Ｈ），７．７９－７．５９（ｍ，４Ｈ），７．５５－７．３３（ｍ，２Ｈ），５．５６－５．３７（ｍ，１Ｈ），５．３１－５．１５（ｍ，１Ｈ），３．５０－３．４２（ｍ，１Ｈ），３．３６－３．２９（ｍ，１Ｈ），２．４５－２．３４（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．１４－２．０１（ｍ，１Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ）。

方法２：
式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄ（２００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を２ｍＬの酢酸エチルに加え、４０℃還流しながらで４８時間撹拌し、次に濾過して固体を収集し、３５～４０℃で乾燥させて、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａを得た。

方法３：
式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄ（２００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を２ｍＬのテトラヒドロフランに加え、４０℃還流しながらで４８時間撹拌し、次に濾過して固体を収集し、３５～４０℃で乾燥させて、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａを得た。

結晶Ｂの製造：
式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄ（１ｇ、２．４９ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのアセトニトリルに加え、還流しながら１６時間撹拌し、次に約３０℃に冷却し、濾過して固体を収集し、乾燥させ、当該固体は式（Ｉ）の化合物の結晶Ｂであった。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １２．１４（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），１１．３０（ｓ，１Ｈ），１０．４７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．２７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７６－７．６０（ｍ，４Ｈ），７．４５（ｄｔ，Ｊ＝２．３，９．５Ｈｚ，２Ｈ），５．５６－５．３８（ｍ，１Ｈ），５．２２（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４９－３．４０（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），２．３８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２９－２．１３（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｓ，１Ｈ），２．０７（ｓ，１Ｈ），２．０７－１．９９（ｍ，１Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ）。

結晶Ｃの製造：
式（Ｉ）の化合物の結晶Ｄ（１０ｇ、２．４９ｍｍｏｌ）を４０ｍＬの酢酸エチルに加え、さらに飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１５ｍＬ）を加えて、１０分間撹拌し、分液して乾燥させた後、固体を得て適切な反応フラスコに加えて、－２０℃に冷却し、次に塩酸－酢酸エチル（０．５Ｍ、４．２３ｍＬ、０．８５当量）をゆっくりと加え、滴加を完了したら自然に室温に回復させて、２．５時間反応させ、次に濾過して固体を収集し、乾燥させ、当該固体は式（Ｉ）の化合物の結晶Ｃであった。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １２．１１－１２．１９（ｍ，１Ｈ），１１．３０（ｓ，１Ｈ），１０．４１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．２０－９．３５（ｍ，１Ｈ），７．６３－７．７２（ｍ，４Ｈ），７．４２－７．５０（ｍ，２Ｈ），５．４５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１５．２８Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｄｄ，Ｊ＝７．１５，１４．８６Ｈｚ，１Ｈ），３．４４－３．６６（ｍ，１Ｈ），３．３１－３．３６（ｍ，１Ｈ），２．３３－２．４５（ｍ，１Ｈ），２．１４－２．２９（ｍ，２Ｈ），２．００－２．１１（ｍ，１Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ）。

実験例１：式（Ｉ）の化合物の結晶Ａ及び結晶Ｂの安定性試験
１．予備安定性試験
試験条件：６０℃×７５％湿度の条件で、結晶Ａ及び結晶Ｂに対して同時に安定性試験を行い、結果は次のとおりである。

２．加速試験
試験条件：式（Ｉ）の化合物の結晶Ａのサンプルを２層薬用低密度ポリエチレン袋に入れ、各層の薬用低密度ポリエチレン袋をそれぞれジッパーで密封し、さらにアルミ箔袋に入れて、熱シールした。４０℃±２℃／７５±５％ＲＨの条件で加速試験を行った。結果は次のとおりである。

結論：式（Ｉ）の化合物の結晶Ａ及び結晶Ｂは良好な安定性を有している。

実験例２：ＰＡＲＰ－１の酵素学的実験
実験材料：被験化合物、ＨＴ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ＰＡＲＰ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（キット）（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ社より購入）。ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ、リン酸緩衝生理食塩水）（維森特生物技術有限公司より購入）。Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（麦克林生化科技有限公司より購入）。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）。

ＨＴ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ＰＡＲＰ Ａｓｓａｙ ｋｉｔキット成分表

実験手順：
（１）試薬の調製：
１．洗浄液：１×ＰＢＳにＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を加えたもので、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００の最終濃度は０．１％であった。

２． １×ＰＡＲＰバッファー：キット中の２０×ＰＡＲＰバッファーを水で２０倍希釈して、１×ＰＡＲＰバッファーを調製した。当該バッファーは、化合物、酵素溶液、基質溶液を調製するために使用された。

３． １×Ｓｔｒｅｐ－Ｄｉｌｕｅｎｔ溶液：キット中の１０×Ｓｔｒｅｐ希釈剤を水で１０倍希釈して、１×Ｓｔｒｅｐ希釈剤溶液を調製した。

（２）被験化合物の調製：
被験化合物を２００μＭから２．５６ｎＭに希釈し、ＤＭＳＯの濃度は１００％であった。阻害剤の各濃度勾配を２μＬずつ化合物ミドルプレートに入れ、３８μＬの１×ＰＡＲＰバッファーを加えて均一に混合しておいた。この時にＤＭＳＯの濃度は５％であった。

（３）実験方法：
ａ）１ウェル当たり５０μＬでテストプレートに１×ＰＡＲＰバッファーを加えて、２５℃で３０分間インキュベートした。

ｂ）インキュベーションが終了すると、テストプレート中の液体を捨て、化合物ミドルプレートから各濃度勾配の化合物を取り出して、１ウェル当たり１０μＬでテストプレートに加えた。各ウェルは２回繰り返した。

ｃ）テストプレートに１ウェル当たり１５μＬで酵素溶液（０．５ＩＵ）を加えた。化合物と酵素を２５℃で共に１０分間インキュベートした。

ｄ）インキュベートが終了すると、テストプレートの各ウェルに２５μＬの１×ＰＡＲＰカクテルを加え、２５μＬの１×ＰＡＲＰカクテルは、２．５μＬの１０×ＰＡＲＰカクテルと、２．５μＬの１０×活性化ＤＮＡと、２０μＬの１×ＰＡＲＰバッファーとを含む。２５℃でテストプレートを１時間インキュベートした。化合物の最終濃度は２μＭから０．０２５６ｎＭであり、ＤＭＳＯの濃度は１％であった。

ｅ）インキュベーションが終了すると、１ウェル当たり２００μＬの洗浄液でテストプレートを２回洗浄し、次に１ウェル当たり２００μＬのＰＢＳで２回洗浄した。

ｆ）１×Ｓｔｒｅｐ－Ｄｉｌｕｅｎｔ溶液でキット中のＳｔｒｅｐ－ＨＲＰを５００倍希釈して、１ウェル当たり５０μＬでテストプレートに加え、２５℃で１時間インキュベートした。

ｇ）インキュベーションが終了すると、１ウェル当たり２００μＬの洗浄液でテストプレートを２回洗浄し、次に１ウェル当たり２００μＬのＰＢＳで２回洗浄した。

キット中のＰｅｒｏｘｙＧｌｏｗ ＡとＢを１：１混合して、１ウェル当たり１００μＬでテストプレートに混合液を加え、直ちにＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社のＥｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダーを用いて化学発光を読み取り、積分時間は０．５秒であった。

データ分析：算式：（サンプル－Ｍｉｎ）／（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）×１００％でオリジナルデータを阻害率に換算し、ＩＣ_５０の値は４パラメーターロジスティック曲線による当てはめで得た（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍの「ｌｏｇ（阻害剤）対応答－可変傾き」モードから得た）。表４では、本願の化合物１のＰＡＲＰ－１に対する酵素学的阻害活性を示している。

実験結果：
本願の化合物１のＰＡＲＰ－１酵素に対する阻害活性を上記の実験方法で測定し、化合物１のインビトロ酵素学的阻害活性（ＩＣ_５０）を表４に示している。

実験結論：化合物１は、ＰＡＲＰ－１に優れた阻害活性を示している。

実験例３：ＭＤＡ－ＭＢ－４３６ ＣＴＧ細胞における抗増殖実験
実験材料：被験化合物、ＲＰＭＩ－１６４０培地、ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン抗生物質。ＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞株。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）。

実験手順：
１．実験方法：
ＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞を白色９６ウェルプレートに接種し、１ウェル当たり８０μＬの細胞懸濁液で、３０００個のＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞が含まれていた。細胞培養用プレートをＣＯ_２インキュベーターに入れて一晩培養した。

マルチチャンネルピペットを用いて被験化合物を５倍希釈して８つの濃度を得て、つまり２ｍＭから２６ｎＭに希釈し、各ウェルは２回繰り返した。ミドルプレートに７８μＬの培地を加え、位置が対応するように、１ウェル当たり２μＬで勾配希釈化合物をミドルプレートに移し、均一に混合して１ウェル当たり２０μＬで細胞培養用プレートに移した。細胞培養用プレートをＣＯ_２インキュベーターに入れて７日培養した。もう１つの細胞培養用プレートを用意し、試薬を加える当日に読み取った信号値をＭａｘ値としてデータ分析に使用した。当該細胞培養用プレートに１ウェル当たり２５μＬでＰｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを加え、室温で１０分間インキュベートすると発光信号が安定した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社のＥｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダーを用いて読み取った。

細胞培養用プレートに１ウェル当たり２５μＬでＰｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加え、室温で１０分間インキュベートすると発光信号が安定した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社のＥｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダーを用いて読み取った。

２．データ分析：算式：（サンプル－Ｍｉｎ）／（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）×１００％でオリジナルデータを阻害率に換算し、ＩＣ_５０の値は４パラメーターロジスティック曲線による当てはめで得た（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍの「ｌｏｇ（阻害剤）対応答－可変傾き」モードから得た）。表５では、本願の化合物のＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞の増殖に対する阻害活性を示している。

実験結果：化合物１及び式（Ｉ）の化合物の結晶Ａのインビトロ抗増殖を示す半数阻害濃度（ＩＣ_５０）を測定し、表５に示している。

実験結論：化合物１及び式（Ｉ）の化合物の結晶Ａは、ＢＲＣＡ１変異ＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞に対して優れた抗増殖活性を有する。そのうち、式（Ｉ）の化合物の結晶ＡはＢＲＣＡ１変異ＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞に顕著な抗増殖活性を有する。

実験例４：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＣＴＧ細胞における抗増殖実験
実験材料：被験化合物、Ｒ ＤＭＥＭ培地、ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン抗生物質、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞株、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダー。

実験方法：
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を白色９６ウェルプレートに接種し、１ウェル当たり８０μＬの細胞懸濁液で、５０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞が含まれていた。細胞培養用プレートをＣＯ_２インキュベーターに入れて一晩培養した。

本実験で各化合物は８つの濃度を設け、マルチチャンネルピペットを用いて被験化合物を３倍希釈して８つの濃度を得て、つまり２ｍＭから９２０ｎＭに希釈し、各ウェルは２回繰り返した。ミドルプレートに７８μＬの培地を加え、位置が対応するように、１ウェル当たり２μＬで勾配希釈化合物をミドルプレートに移し、均一に混合して１ウェル当たり２０μＬで細胞培養用プレートに移した。細胞培養用プレートをＣＯ_２インキュベーターに入れて３日培養した。もう１つの細胞培養用プレートを用意し、試薬を加える当日に読み取った信号値をＭａｘ値としてデータ分析に使用した。当該細胞培養用プレートに１ウェル当たり２５μＬでＰｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを加え、室温で１０分間インキュベートすると発光信号が安定した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社のＥｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダーを用いて読み取った。

細胞培養用プレートに１ウェル当たり２５μＬでＰｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加え、室温で１０分間インキュベートすると発光信号が安定した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社のＥｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダーを用いて読み取った。

データ分析：算式：（サンプル－Ｍｉｎ）／（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）×１００％でオリジナルデータを阻害率に換算し、ＩＣ_５０の値は４パラメーターロジスティック曲線による当てはめで得た（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍの「ｌｏｇ（阻害剤）対応答－可変傾き」モードから得た）。表６では、本願の化合物のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の増殖に対する阻害活性を示している。

実験結果：化合物１のＢＲＣＡ野生型ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に対する抗増殖活性を前記実験方法で測定し、化合物１のインビトロ抗増殖を示す半数阻害濃度（ＩＣ_５０）を表６に示している。

実験結論：化合物１がＢＲＣＡ野生型ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に対して阻害活性がないことから、化合物１は優れた選択性を有することが示されている。

実験例５：ポリＡＤＰリボシル化（ＰＡＲｒｙｌａｔｉｏｎ）による抗増殖実験
実験材料：被験化合物、Ｆ１２Ｋ培地、Ｌｏｖｏ細胞、抗ポリ（ＡＤＰ－リボース）マウスモノクローナル抗体、ＦＩＴＣ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ、過酸化水素、ＤＡＰＩ、ＰＢＳ、メタノール、アセトン、ポリソルベート２０、脱脂粉乳、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダー。

試薬の調製：
１日目：６万個の細胞／ウェルでＬｏｖｏ細胞をプレーティングし、３７℃×５％ＣＯ_２で一晩保持した。

２日目：試薬の調製：
１．洗浄液：１×ＰＢＳにポリソルベート２０を加えたもので、ポリソルベート２０の最終濃度は０．０５％であった。

２．ブロッキング溶液：洗浄液に脱脂粉乳を加えたもので、脱脂粉乳の最終濃度は５％であった。

３．細胞固定液：メタノールとアセトンを７：３混合したもの。

被験化合物の調製：化合物ミドルプレート１：ＤＭＳＯとＰＢＳで化合物を希釈して最終濃度は１０μＭ～０．１３ｎＭであり、ＤＭＳＯの濃度は１％であった。化合物ミドルプレート２：ＤＭＳＯと、５０ｍＭ 過酸化水素を含有しているＰＢＳで化合物を希釈して最終濃度は１０μＭ～０．１３ｎＭであり、ＤＭＳＯの濃度は１％であった。

実験手順：
１．細胞上清を捨て、化合物ミドルプレート１から１ウェル当たり４０μＬで化合物を細胞培養用プレートに入れ、３７℃で３０分間インキュベートした。
化合物ウェル：化合物、ＤＭＳＯ１％。
陰性対照及び陽性対照：ＤＭＳＯを１％加えた。
ブランク対照：細胞のないウェルで、ＰＢＳを加えた。

２．インキュベーションが終了すると、化合物ミドルプレート２から１ウェル当たり４０μＬで化合物を細胞培養用プレートに加え、Ｈ_２Ｏ_２の最終濃度は２５ｍＭであった。
化合物ウェル：化合物＋２５ｍＭ Ｈ_２Ｏ_２。
陽性対照及び陰性対照：１％ＤＭＳＯ＋２５ｍＭ Ｈ_２Ｏ_２。
ブランク対照：細胞のないウェルで、ＰＢＳを加えた。

４．インキュベーションが終了すると、氷冷したＰＢＳで１回洗浄し、各ウェルには予め冷やした１００μＬの細胞固定液を加え、－２０℃で１０分間静置した後、遠心分離して細胞固定液を除去した。

５．細胞培養用プレートを大気にさらして自然乾燥させた後、各ウェルに２００μＬのＰＢＳを加えて洗浄し、ＰＢＳを捨てた。

６．各ウェルに１００μＬのブロッキング溶液を加えて、２５℃で３０分間インキュベートした後、遠心分離してブロッキング溶液を除去した。

７．各ウェルに、ブロッキング溶液において１：５０希釈した２５μＬの抗ＰＡＲ抗体を加え、２５℃で６０分間インキュベートした。
陰性対照ウェル：各ウェルに２５μＬのブロッキング溶液を加えた。
ブランク対照ウェル：各ウェルに２５μＬのブロッキング溶液を加えた。

８．インキュベーションが終了すると、１ウェル当たり２００μＬの洗浄液で細胞培養用プレートを毎回３分間で４回洗浄し、遠心分離して洗浄液を除去した。

９．各ウェルには１：５０希釈されたＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ及び０．５μｇ／ｍＬ ＤＡＰＩを含有している２５μＬのブロッキング溶液を加え、２５℃で６０分間インキュベートした。

１０．インキュベーションが終了すると、１ウェル当たり２００μＬの洗浄液で細胞培養用プレートを毎回３分間で４回洗浄した。

１１．液体を除去し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎにおいて、ＦＩＴＣ：４８０ｎｍ、５３０ｎｍ、ＤＡＰＩ：３６０ｎｍ、４６０ｎｍと蛍光値を読み取った。

データ分析：算式：（ＦＩＴＣ－陰性対照）／（ＤＡＰＩ－ブランク対照）でオリジナルデータの正規化処理を行い、算式：（サンプル－陽性対照）／（陰性対照－陽性対照）×１００％で正規化後のデータを阻害率に換算し、ＩＣ_５０の値は４パラメーターロジスティック曲線による当てはめで得た（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍの「ｌｏｇ（阻害剤）対応答－可変傾き」モードから得た）。表７では、本願の化合物の阻害活性を示している。

実験結果：化合物１のポリＡＤＰリボシル化（ＰＡＲｒｙｌａｔｉｏｎ）に対する半数阻害濃度（ＩＣ_５０）を表７に示す。

実験結論：化合物１は、ポリＡＤＰリボシル化（ＰＡＲｒｙｌａｔｉｏｎ）に顕著な阻害活性を有している。

実験例６：血漿タンパク質結合率試験
本願の化合物のヒト、ＣＤ－１マウス及びＳＤラットの血漿におけるタンパク質結合率を測定した。ヒト、ＣＤ－１マウス及びＳＤラットのブランク血漿を７９６μＬ採取し、被験化合物ワーキングソリューション（４００μＭ）又はワルファリンワーキングソリューション（４００μＭ）を４μＬ加えて、血漿サンプルにおける被験化合物又はワルファリンの最終濃度をいずれも２μＭとした。サンプルを充分に混合した。有機相のＤＭＳＯの最終濃度は０．５％とし、被験化合物及びワルファリン血漿サンプル５０μＬをサンプル受取プレートに移し（３回繰り返す）、直ちに対応する量の対応するブランク血漿又はバッファーを加えて、各サンプルウェルの最終体積を１００μＬとし、血漿と透析バッファーの体積比は１：１とし、次にこれらのサンプルに４００μＬの停止溶液を加えて、当該サンプルはＴ_０サンプルとして回収率及び安定性の測定に供する。Ｔ_０サンプルを２～８℃で保存し、透析を終えた他のサンプルと一緒に後続の処理を受け、被験化合物及びワルファリン血漿サンプル１５０μＬを各透析ウェルの投与側に加え、透析ウェルの対応する受取側に１５０μＬのブランクの透析バッファーを加えた。次に透析用プレートにガス透過性フィルムを被せて、加湿した５％ＣＯ_２インキュベーターに入れ、３７℃×約１００ｒｐｍで振盪しながら４時間インキュベートした。透析が終了すると、透析を終えたバッファーサンプル及び透析を終えた血漿サンプル５０μＬを新しいサンプル受取プレートに移した。サンプルには対応する量の対応するブランク血漿又はバッファーを加え、各サンプルウェルの最終体積を１００μＬとし、血漿と透析バッファーの体積比は１：１とした。すべてのサンプルはタンパク質を沈殿させてからＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を行い、算式：タンパク質未結合率（％）＝１００×透析フィルム通過薬物濃度／透析液未通過薬物濃度、タンパク質結合率（％）＝１００－％タンパク質未結合率、％回収率＝１００×（透析フィルム通過薬物濃度＋透析液未通過薬物濃度）／透析前総薬物濃度により、タンパク質結合率及び回収率を算出した。

実験結果：表８に示す。

実験結論：化合物１は、適切な血漿タンパク質結合率を有している。

実験例７：シトクロムＰ４５０アイソザイム阻害性試験
被験化合物のヒトシトクロムＰ４５０アイソザイムの異なるサブタイプに対する阻害性を測定する。被験化合物、標準阻害剤（１００×最終濃度）及び混合基質ワーキングソリューションを用意し、－８０℃の冷蔵庫で冷凍したミクロソームを取り出して解凍した。２μＬの被験化合物及び標準阻害剤溶液を対応するウェルに加え、さらに、２μＬの対応する溶媒を阻害剤なし対照ウェル（ＮＩＣ）及びブランク対照ウェル（Ｂｌａｎｋ）ウェルに加えた。次に、２０μＬの混合基質溶液を対応するウェルに加え、ブランク（Ｂｌａｎｋ）ウェルは除外した（ブランク（Ｂｌａｎｋ）ウェルには２０μＬのＰＢを加えた）。ヒト肝臓由来ミクロソーム溶液を用意し（使用後は日時を記して直ちに冷蔵庫に戻す）、すぐに全てのウェルに１５８μＬのミクロソーム溶液を加えた。前記サンプルプレートを３７℃ウォーターバスに入れて予めインキュベートし、直ちに補酵素因子（ＮＡＤＰＨ）溶液を用意した。１０分間後、全てのウェルに２０μＬのＮＡＤＰＨ溶液を加え、サンプルプレートを振って均一になると、３７℃ウォーターバスに入れて１０分間インキュベートした。所定の時刻に４００μＬの常温アセトニトリル溶液を加えて（内部標準物質は２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミドとラベタロール）反応を停止させた。サンプルプレートにおいて混合して均一になると、４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して、タンパク質を沈殿させた。２００μＬの上清を取り分けて１００μＬの水に加え、振って均一になるとＬＣ／ＭＳ／ＭＳで検出した。

実験結果：表９に示す。

結論：化合物１は、５種のＣＹＰ酵素に阻害効果がないか、弱い阻害効果を有している。

実験例８：ミクロソームにおける代謝安定性
実験目的：被験化合物の３つの生物種の肝臓由来ミクロソームにおける代謝安定性を測定した。

実験方法：３７℃で、１μＭ 被験化合物及びミクロソーム（０．５ｍｇ／ｍＬ）にＮＡＤＰＨ再生系を添えてインキュベートした。陽性対照はそれぞれテストステロン（３Ａ４基質）、プロパフェノン（２Ｄ６基質）、ジクロフェナク（２Ｃ９基質）であり、３７℃で、陽性対照及びミクロソーム（０．５ｍｇ／ｍＬ）にＮＡＤＰＨ再生系を添えてインキュベートした。異なる時刻（０分、５分、１０分、２０分、３０分及び６０分）でサンプルを、内部標準物質を含んでいる常温アセトニトリルと直接的に混合して反応を停止させた。化合物及びミクロソームはＮＡＤＰＨ再生系を含有しない条件で６０分間インキュベートした。各時刻は１回の実施とした（ｎ＝１）。サンプルはＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析した。化合物の濃度は分析物質のピーク面積と内部標準物質のピーク面積との比で表す。

実験結果：表１０に示す。

実験結論：化合物１は、ラット、ヒト及びマウスの３つの種においていずれも中程度の安定性を有している。

実験例９：マウスへの単回投与による薬物動態試験
実験目的：被験動物は雄のＣ５７ＢＬ／６マウスであり、単回投与後に血漿、肝臓及び脳脊髄液における化合物の薬物濃度を測定し、薬物動態特性を評価した。

実験方法：健常の成年雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを使用し、強制経口投与した。被験化合物と適量のＤＭＳＯ１０％／（２０％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン）９０％を混合し、ボルテックスして超音波処理を行うことにより０．５ｍｇ／ｍＬ 清澄溶液を得た。マウスに１ｍｇ／ｋｇ 静脈内注射及び５ｍｇ／ｋｇ 経口で投与し、所定の時間後に全血を採取して血漿を得て、肝臓及び脳脊髄液を採取し、サンプルを前処理した後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで薬物濃度を分析し、ソフトウェアＰｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎを利用して薬物動態パラメータを計算した。

実験結果：表１１に示す。

実験結論：化合物１は、マウスにおいて良好なＡＵＣ_{０～ｌａｓｔ}及び生物学的利用能を有している。

実験例１０：ヒト乳がんＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞皮下異種移植による腫瘍ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスモデルにおける化合物のインビボ薬力学試験
実験目的：ヒト乳がんＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞皮下異種移植による腫瘍ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスモデルにおける被験化合物のインビボ薬力学を検討、評価した。

実験設計は、次のとおりである。

実験材料：週齢及び体重の選択：６～８週齢で体重１８～２２ｇの雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを選んだ。動物は受け入れた後、実験を行うまでに実験環境で３～７日飼育した。各ケージの動物情報カードには動物数、性別、系統、受入日、投与計画、実験番号、群及び実験開始日を記載していた。ケージ、床敷及び飲料水はいずれも使用前に滅菌した。ケージ、飼料及び飲料水は週２回交換した。実験動物は耳タグでマークした。被験品はニラパリブ（Ｎｉｒａｐａｒｉｂ）、化合物１であった。全ての被験品はＤＭＳＯ１０％＋（２０％ＨＰ－β－ＣＤ）溶媒９０％で配合し、ブランク対照群は当該溶媒だけの投与とした。

実験方法：
１．細胞培養：ヒト乳がんＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞（バージニア州マナサスＡＴＣＣ提供、カタログ番号ＨＴＢ－１３０）をインビトロで単層培養し、具体的にはＲＰＭＩ－１６４０培地に１０％ウシ胎児血清、１％抗生物質－抗真菌剤溶液（１％Ａｎｔｉ－ａｎｔｉ）を加え、３７℃×５％ＣＯ_２インキュベーターにおいて培養した。パンクレアチン－ＥＤＴＡで週２回通常の消化を行って継代させた。細胞飽和密度が８０～９０％になり、所望の数量に達していると、細胞を回収して、計数、接種を行った。

２．腫瘍細胞接種（腫瘍接種）：０．２ｍＬ（１×１０^７個）のＭＤＡ－ＭＢ－４３６細胞（体積比１：１でマトリゲル添加）を各マウスの右背部に皮下接種し、平均腫瘍体積が３１８ｍｍ^３に達したらランダムな群別投与を開始した。

３．実験動物の日常観察：動物の健康状態及び死亡を毎日確認し、定期的な検査は腫瘍増殖観察、動物の日常挙動に対する投与治療の影響（例えば、行動、摂餌・摂水量、体重の変化、外見又は他の異常）を含む。

４．腫瘍測定及び実験指標：実験指標は腫瘍増殖が阻害、緩和又は治癒されたかどうかを検討するためのものである。バーニヤで週２回腫瘍の直径を測定した。腫瘍体積の計算式はＶ＝０．５ａ×ｂ^２であり、ａは腫瘍の長径、ｂは短径を表す。化合物の腫瘍阻害効果はＴＧＩ（％）又は相対的腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）で評価した。ＴＧＩ（％）は腫瘍増殖阻害率を反映する。ＴＧＩ（％）の計算式は、ＴＧＩ（％）＝[（１－（対象処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該処理群の投与開始時の平均腫瘍体積））／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）]×１００％である。相対的腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）の計算式は、Ｔ／Ｃ％＝Ｔ_ＲＴＶ／Ｃ_ＲＴＶ×１００％（Ｔ_ＲＴＶは治療群のＲＴＶで、Ｃ_ＲＴＶは陰性対照群のＲＴＶ）である。腫瘍測定結果から相対的腫瘍体積（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ、ＲＴＶ）を計算し、計算式はＲＴＶ＝Ｖ_ｔ／Ｖ_０であり、ここでＶ_０は群別投与時（即ちｄ_０）に測定した平均腫瘍体積で、Ｖ_ｔは対象測定時の平均腫瘍体積であり、Ｔ_ＲＴＶとＣ_ＲＴＶは同日のデータを使用した。

５．データ分析：各群の各時刻での腫瘍体積の平均値及び標準誤差（ＳＥＭ）を含む。治療群では実験終了時に、投与２７日目で最も優れた効果を表していることから、当該データに基づく統計学的分析で群間の違いを評価した。本実験では１元配置分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）として、ゲームス・ハウエル（Ｇａｍｅｓ－Ｈｏｗｅｌｌ）法でデータを分析した。ＳＰＳＳ １７．０を利用して全てのデータを分析した。ｐ＜０．０５であれば有意差があるとした。

実験結果：
１．実験動物の体重を、薬物の毒性を間接的に測定するための参照指標とした。当該モデルでは、実験中に他に発症又は死亡した例がなかった。

２．被験化合物の有効性評価指標：

実験結論：化合物１の有効性は、所定の用量勾配ではいずれも用量依存効果を示しており、且つ腫瘍増殖阻害が優れている。体重変化をみると、化合物１の３つの用量群では体重変化が大きくないことから、いずれも良好な忍容性が示されている。

実験例１１：式（Ｉ）の化合物の結晶Ａから製造された単結晶の単位胞パラメータ
式（Ｉ）の化合物の結晶Ａから製造された単結晶：
１５ｍｇの式（Ｉ）の化合物の結晶Ａのサンプルを室温で１ｍＬのエタノール／アセトン／水（２：２：１）に溶解し、サンプル溶液を４ｍＬの半密閉サンプル瓶に入れて、室温でゆっくりと揮発させて、３日目に黄色い塊状結晶を得た。

実験結果：
式（Ｉ）の化合物の結晶Ａから製造された単結晶の分子の立体モデルを図１０に示しており、Ｒ配置であった。

実施例１２：電位差滴定による式（Ｉ）の化合物の結晶Ａの塩素イオンの含有量の測定
実験材料：自動電位差滴定装置、電子天秤、超純水装置、硝酸銀滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）。
試験手順：
１）５０ｍＬの精製水を適切なビーカーに入れて、Ｂｌａｎｋとマークし、
２）約１００ｍｇの式（Ｉ）の化合物の結晶Ａを正確に秤量して、適切なビーカーに入れ、５０ｍＬの精製水を加えて溶解し、試供品溶液とマークし、
３）電位差滴定法（中国薬局方四部通則０７０１）に従い、硝酸銀滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）で試供品溶液及びブランク溶液を滴定し、１ｍＬの硝酸銀滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）は３．５４５ｍｇの塩素（Ｃｌ）に相当する。

式中：Ｆは力価であり、１ｍＬの硝酸銀滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）は３．５４５ｍｇの塩素（Ｃｌ）に相当し、
Ｗ_ＳＰＬ：秤量した試供品溶液サンプルの量（ｇ）であり、
Ｖ_ＳＰＬ：試供品溶液によって消費された硝酸銀滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）の体積（ｍＬ）であり、
Ｖ_０：ブランク溶液によって消費された硝酸銀滴定液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）の体積（ｍＬ）である。

試験結果：前記算式から塩素イオンの含有量は８．７％と計算した。

試験結論：塩素イオンの含有量から、式（Ｉ）の化合物の結晶Ａは塩酸塩を１つ含有していることが分かった。

Claims (20)

1. 式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
   

   
2. ＣｕＫα線を用いる前記結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１６．００±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２５．１４±０．２０°及び２５．９６±０．２０°での回折ピークから選ばれる２つ、３つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
3. ＣｕＫα線を用いる前記結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角８．５９±０．２０°、１１．７４±０．２０°、１２．３４±０．２０°、１２．５６±０．２０°、１３．３２±０．２０°、１３．８８±０．２０°、１４．７０±０．２０°、１５．３８±０．２０°、１６．００±０．２０°、１７．２０±０．２０°、１８．８０±０．２０°、１９．４０±０．２０°、１９．７２±０．２０°、２０．７６±０．２０°、２１．３０±０．２０°、２１．７３±０．２０°、２２．２４±０．２０°、２２．５６±０．２０°、２３．５０±０．２０°、２４．０２±０．２０°、２５．１４±０．２０°、２５．９６±０．２０°、２６．８４±０．２０°、２７．４８±０．２０°、２８．２０±０．２０°、２９．３２±０．２０°、３０．３６±０．２０°、３１．６８±０．２０°、３１．９８±０．２０°、３２．２８±０．２０°、３２．９０±０．２０°、３３．５９±０．２０°、３４．７２±０．２０°、３５．２２±０．２０°、３５．９８±０．２０°、３６．５８±０．２０°及び３８．４８±０．２０°での回折ピークから選ばれる１２、１３、１４、１５又はそれ以上を特徴ピークとして含む請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
4. 前記結晶は、下記の粉末Ｘ線回折パターンデータを有し、
   

   

   典型的に、その粉末Ｘ線回折パターンは図２に示されるとおりである請求項２又は３に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
5. 前記結晶の示差走査熱量測定曲線は、２８５．６±５℃で発熱ピークの開始点を有し且つ／又は２８８．６±５℃で発熱ピークのピークトップを有し、好ましくは、前記結晶の示差走査熱量測定曲線は図３に示されるとおりである請求項２～４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
6. ＣｕＫα線を用いる前記結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角１５．８６±０．２０°、２１．６２±０．２０°及び２３．５４±０．２０°での回折ピークから選ばれる１つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
7. ＣｕＫα線を用いる前記結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角１１．５２±０．２０°、１３．６６±０．２０°、１４．２８±０．２０°、１４．７２±０．２０°、１５．８６±０．２０°、１６．８４±０．２０°、１８．３０±０．２０°、１８．７２±０．２０°、２１．６２±０．２０°、２３．１４±０．２０°、２３．５４±０．２０°、２４．４８±０．２０°、２４．８４±０．２０°、２５．８０±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．９６±０．２０°、２８．４０±０．２０°、２８．８４±０．２０°、２９．８２±０．２０°、３０．２２±０．２０°、３１．７４±０．２０°、３２．０４±０．２０°、３２．６９±０．２０°、３３．９０±０．２０°、３４．５０±０．２０°、３５．０２±０．２０°、３６．０８±０．２０°、３６．９４±０．２０°、３７．４６±０．２０°及び３７．９２±０．２０°での回折ピークから選ばれる７つ、８つ、９つ、１０又はそれ以上を特徴ピークとして含む請求項６に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
8. 前記結晶は、下記の粉末Ｘ線回折パターンデータを有し、
   

   

   典型的に、その粉末Ｘ線回折パターンは図５に示されるとおりである請求項６又は７に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
9. 前記結晶の示差走査熱量測定曲線は、２８７．４±５℃で発熱ピークの開始点を有し且つ／又は２９０．６±５℃で発熱ピークのピークトップを有し、好ましくは、前記結晶の示差走査熱量測定曲線は図６に示されるとおりである請求項６～８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
10. ＣｕＫα線を用いる前記結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角６．４６±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２３．３０±０．２０°及び２４．９２±０．２０°での回折ピークから選ばれる３つ、４つ、５つ、６つ又はそれ以上を特徴ピークとして含む請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
11. ＣｕＫα線を用いる前記結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、２θ角６．４６±０．２０°、９．５９±０．２０°、９．９４±０．２０°、１０．５８±０．２０°、１１．４２±０．２０°、１２．４４±０．２０°、１３．４０±０．２０°、１４．８６±０．２０°、１５．６６±０．２０°、１６．３２±０．２０°、１７．００±０．２０°、１７．５４±０．２０°、１７．８４±０．２０°、１８．７８±０．２０°、１９．８２±０．２０°、２０．２２±０．２０°、２０．６８±０．２０°、２０．９８±０．２０°、２１．７０±０．２０°、２２．３２±０．２０°、２２．６８±０．２０°、２３．３０±０．２０°、２４．０８±０．２０°、２４．９２±０．２０°、２６．１４±０．２０°、２６．８６±０．２０°、２７．３４±０．２０°、２７．８２±０．２０°、２８．５２±０．２０°、２９．３４±０．２０°、３０．１８±０．２０°、３１．３６±０．２０°及び３２．３６±０．２０°での回折ピークから選ばれる１２、１３、１４、１５又はそれ以上を特徴ピークとして含む請求項１０に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
12. 前記結晶は、下記の粉末Ｘ線回折パターンデータを有し、
    

    

    典型的に、その粉末Ｘ線回折パターンは図８に示されるとおりである請求項１０又は１１に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
13. 前記結晶の示差走査熱量測定曲線は、２６１．６±５℃で発熱ピークの開始点を有し且つ／又は２６７．５±５℃で発熱ピークのピークトップを有し、好ましくは、前記結晶の示差走査熱量測定曲線は図９に示されるとおりである請求項１０～１２のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶。
14. 請求項１～１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の結晶は、総重量の５０％以上、好ましくは７５％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める式（Ｉ）の化合物の結晶組成物。
15. 治療有効量の請求項１～１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶及び／又は請求項１４に記載の結晶組成物を含む医薬組成物であって、少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は他の賦形剤を含んでもよい医薬組成物。
16. ＰＡＲＰ阻害剤の製造における請求項１～１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶、請求項１４に記載の結晶組成物及び請求項１５に記載の医薬組成物の使用。
17. 腫瘍、がんから選ばれることが好ましく、乳がんであることがより好ましいＰＡＲＰ受容体関連病状の予防又は治療薬物の製造における、請求項１～１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶、請求項１４に記載の結晶組成物及び請求項１５に記載の医薬組成物の使用。
18. 請求項２～４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその結晶の製造方法であって、前記結晶の製造方法は、式（Ｉ）の化合物の非晶質を有機溶媒において加熱して撹拌し、さらに冷却して晶析させ、濾過して結晶を得ることであり、ＣｕＫα線を用いる前記式（Ｉ）の化合物の非晶質の粉末Ｘ線回折パターンは図１に示されるとおりであり、前記結晶の製造方法では、前記有機溶媒はアセトン、テトラヒドロフラン及び酢酸エチルから選ばれ、好ましくは、アセトンである前記製造方法。
19. 前記有機溶媒と式（Ｉ）の化合物の非晶質の体積：モル比は、２～１０ｍＬ：１ｍｍｏｌであり、好ましくは、４～６ｍＬ：１ｍｍｏｌである請求項１８に記載の結晶の製造方法。
20. 前記式（Ｉ）の化合物の非晶質は、化合物１を有機溶媒及び塩酸の存在下で撹拌し、晶析させ、濾過して得られ、前記有機溶媒は酢酸エチルから選ばれ、前記化合物１は下記の構造を有する請求項１８に記載の結晶の製造方法。
    

    

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