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JP2023520330A - 結腸直腸がんに対する前臨床活性を有する発がん性ｃｈｄ１ｌの低分子阻害剤 - Google Patents

結腸直腸がんに対する前臨床活性を有する発がん性ｃｈｄ１ｌの低分子阻害剤 Download PDF

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JP2023520330A JP2022557840A JP2022557840A JP2023520330A JP 2023520330 A JP2023520330 A JP 2023520330A JP 2022557840 A JP2022557840 A JP 2022557840A JP 2022557840 A JP2022557840 A JP 2022557840A JP 2023520330 A JP2023520330 A JP 2023520330A
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ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ コロラド，ア ボディ コーポレイト
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Abstract

ＴＣＦ転写誘導性がん及びＥＭＴ誘導性がんを含めて、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がんの、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤を使用する治療。ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅを阻害し、ＣＨＤ１Ｌ依存性ＴＣＦ転写を阻害するＣＨＤＬ１の低分子阻害剤が同定された。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＴＣＦ複合体がＷｎｔ応答エレメント及びプロモーター部位に結合するのを妨げる。さらに詳細には、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＥＭＴの逆転を誘導する。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、さまざまながん、特にＣＲＣ及びｍ－ＣＲＣの治療において有用である。ＣＨＤ１Ｌ誘導性がんは、とりわけＣＲＣ、乳がん、神経膠腫、肝がん、肺がん又は胃腸（ＧＩ）がんである。本明細書に定義される式Ｉ及びＸＸのＣＨＤ１Ｌ阻害剤並びにそれらの塩、さらにはＣＨＤ１Ｌ阻害剤を含有する医薬組成物も提供される。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤と他の抗新生物剤の相乗組合せも記載されている。【選択図】 なし

Description

発明の詳細な説明
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０２０年３月２４日出願の米国特許仮出願第６２／９９４，２５９号及び２０２１年１月２０日出願の同第６３／１３９，３９４号の利益を主張し、これらの両方が、参照によりそれらの全体として本明細書に組み込まれる。
［米国政府助成の記載］
本発明は、米国国防総省（ＤｏＤ）によって発注されたグラント第Ｗ８１ＸＷＨ１８１０１４２号を受けて米国政府の助成で成された。米国政府は本発明に一定の権利を保有する。
［背景］
ゲノムの完全性は、遺伝子発現及び複製のためのＤＮＡへの接近しやすさを調節するクロマチン構造への立体構造変化によって維持される。クロマチン構造は、ヒストンの翻訳後修飾及びヌクレオソームの再編成によって維持される［Ｌｏｒｃｈら、２０１０；Ｋｕｍａｒら、２０１６；Ｓｗｙｇｅｒｔら、２０１４］。ＡＴＰ依存性クロマチンリモデラーは、ヒストン組成を変えること、及びヌクレオソームを排除すること又はそれらをＤＮＡに沿って移動させることによってクロマチンを変更する酵素である。それらの活性は、ＤＮＡの遺伝子発現並びにＤＮＡの複製、転写、及びＤＮＡ修復のための接近しやすさを調節することによって細胞機能において決定的な役割を果たす［Ｅｒｄｅｌら、２０１１；Ｂｒｏｗｎｌｅｅら、２０１５］。クロマチンリモデリングの調節障害は、ヒト疾患、特にがんに伴う［Ｚｈａｎｇら、２０１６；Ｖａｌｅｎｃｉａ及びＫａｄｏｃｈ、２０１９］。
この１０年間に、ＣＨＤ１Ｌ（クロモドメインヘリカーゼ／ＡＴＰａｓｅ ＤＮＡ結合タンパク質１様）と呼ばれ、ＡＬＣ１（肝がん１において増幅）とも呼ばれるクロマチンリモデラーは、顕著なヒトがんの病理と関係づけられるがん遺伝子として現れる（Ｍａら、２００８；Ｃｈｅｎｇら、２０１３］。ＣＨＤ１Ｌは、薬剤抵抗性排出ポンプ（例えば、ＡＢＣＢ１）の上方調節［Ｌｉら、２０１９］からＰＡＲＰ１媒介ＤＮＡ修復［Ｐｉｎｅｓら、２０１２；Ｔｓｕｄａら、２０１７］及び抗アポトーシス活性［Ｌｉら、２０１３；Ｃｈｅｎら、２００９］にわたる多剤抵抗性にも関与する。さらに、ＣＨＤ１Ｌの増幅又は過剰発現は、低全生存（ＯＳ）及び転移性疾患を含めて患者の不良な予後と相互関係がある［Ｈｅら、２０１５；Ｈｙｅｏｎら、２０１３；Ｓｕら、２０１４；Ｍｕら、２０１５；Ｓｕら、２０１５；Ｌｉら、２０１３；Ｈｅら、２０１２；Ｃｈｅｎら、２０１０］。ＣＨＤ１Ｌ過剰発現はまた、腫瘍進行と関係づけられ、不良な患者生存の予測因子として意味づけられる［Ｊｉら、２０１３］。ＣＨＤ１Ｌの多機能発癌機序は、がんにおいて魅力ある治療標的となる。ＣＨＤ１Ｌのがんを誘導する機序は、肝がん［Ｌｉら、２０１９］、乳がん［Ｗｕら、２０１４］、及び肺がん［Ｌｉら、２０１９］において研究されてきたが、結腸直腸がん（ＣＲＣ）におけるＣＨＤ１Ｌに関連した病理学的機序についてはほとんど知られていない。
ＣＲＣは、３番目に蔓延している毎年診断されるがんであり、ＣＲＣ患者の死亡率は世界的に２番目に高い［Ｊｅｍａｌら、２０１１］。手術と組み合わせたＣＲＣの早期発見及び５－フルオロウラシル（５ＦＵ）ベースの組合せ化学療法は、全生存率を最小限度に改善してきた［Ｊｅｍａｌら、２０１１；Ｆａｋｉｈ、２０１５］。現在の化学療法及び標的療法は、転移性ＣＲＣ（ｍＣＲＣ）に概ね無効であり、１１％という低い５年全生存率によって証明される［Ｊｅｍａｌら、２０１１；Ｆａｋｉｈ、２０１５］。当技術分野において、ＣＲＣ腫瘍進行及び転移の病理に関与する標的を同定し、特徴づける必要性がまだ満たされていない。
ＣＲＣ患者の大部分には、Ｗｎｔシグナル伝達経路において変異があり、異常なＴ細胞因子／リンパ系エンハンサー因子－転写又はＴＣＦ複合体を生じる［Ｋｉｎｚｌｅｒ及びＶｏｅｌｓｔｅｉｎ、１９９６；Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ、２０１２］。そのような変異は、恒常的なβ－カテニン移動及びＴＣＦ転写のトランス活性化を引き起こすおそれがある［Ｃｌｅｖｅｒｓ、２００６；Ｋｏｒｉｎｅｋら、１９９７］。ＴＣＦ複合体は、β－カテニン、ＰＡＲＰ１、及びＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）などの一連のコアクチベータとの相互作用を通して活性化されるＴＣＦ４（別名ＴＣＦＬ２）によって編成される［Ｓｈｉｔａｓｈｉｇｅら、２００８］。最近、ＴＣＦ４は、腺腫（すなわち、ポリープ）及び後期ｍＣＲＣからの両方の初期転移の特定のドライバーであることが示された［Ｈｙｅｏら、２０１３；Ｓｕら、２０１４］。
ＴＣＦ転写は、上皮－間葉移行（ＥＭＴ）の主要調節因子として機能することが報告された［Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｔｉｌｌａら、２０１１；Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。この方法は、比較的良性の上皮性腫瘍細胞を間葉細胞に転換するおそれがあり、ｍＣＲＣを誘導する、がん幹細胞（ＣＳＣ）の幹細胞性及び他の悪性特性を増加させる。［Ｃｈａｆｆｅｒら、２０１６］。最近、いくつかのＣＲＣドライバー遺伝子における変更は、原発性と転移性の両方の腫瘍対においてよく見られることが報告された［Ｈｕら、２０１９］。さらに詳細には、異常なＴＣＦ４は、ｍＣＲＣの特定のドライバーであると報告され［Ｈｕら、２０１９］、ＣＲＣは、初期腺腫（すなわち、ポリープ）において転移するおそれがあり（すなわち、ポリープ［Ｍａｇｒｉ及びＢａｒｄｅｌｌｉ、２０１９も参照のこと］、ＴＣＦ誘導性ＥＭＴによって引き起こされる可能性がある［Ｃｈａｆｆｅｒら、２０１６；Ｃｈａｆｆｅｒ及びＷｅｉｎｂｅｒｇ、２０１１］。これらの報告により、ＴＣＦ転写は、ＣＲＣ進行及び転移のすべての段階において誘導力であることが示される。
ＥＭＴは、多数のヒト疾患、特に固形腫瘍進行、薬剤及び放射線療法抵抗性、免疫応答及び免疫療法の回避、並びに転移の促進において主要な誘導力である［Ｃｈａｆｆｅｒら、２０１６；Ｃｈａｆｆｅｒ及びＷｅｉｎｂｅｒｇ、２０１１；Ｓｃｈｅｅｌ及びＷｅｉｎｂｅｒｇ、２０１２］。
がん及び他の疾患におけるＷｎｔシグナル伝達経路及びＴＣＦ転写の重要性のために［Ｃｌｅｖｅｒｓ、２００６］、Ｗｎｔシグナル伝達経路及びＴＣＦ転写を阻害する低分子薬が試験された［Ｌｅｅら、２０１１；Ｐｏｌａｋｉｓ、２０１２］。よく考えられた治療方針としては、受容体標的（例えば、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ）；Ｗｎｔリガンド分泌の予防（例えば、ヤマアラシ）；β－カテニン破壊複合体の阻害（例えば、タンキラーゼ）；並びにβ－カテニン及びコアクチベータ（例えば、ＣＢＰ）によるタンパク質－タンパク質阻害（ＰＰＩ）が挙げられる。臨床試験が進行中でありうるが、今までのところ、Ｗｎｔ／ＴＣＦ経路を標的とする薬剤はいずれも臨床的に承認されていない［Ｌｕら、２０１６］。対照的に、本発明には、Ｗｎｔ／ＴＣＦ誘導性ＣＲＣの治療のための、特に低分子薬を同定する新しい治療方針であって、ＣＨＤ１Ｌが、ＣＲＣにおける悪性表現型を調節するＴＣＦ転写に必要とされるＤＮＡ結合因子であると同定される、新しい治療方針が記載されている。
例えば、米国特許第９，６１６，０４７号には、結腸癌発生を減弱すると言われている、β－カテニンの低分子阻害剤又はβ－カテニン／ＴＣＦ－４複合体の撹乱剤が報告されている。その中に報告されているβ－カテニンの阻害剤としては、エスクレチン、並びにＨＩ－Ｂ１～ＨＩ－Ｂ２０、ＨＩ－Ｂ２２～ＨＩ－Ｂ２４、ＨＩ－Ｂ２６、ＨＩ－Ｂ３２及びＨＩ－Ｂ３４と名付けられた化合物が挙げられ、これらのそれぞれの構造がその特許に記載されている。この特許は、その中のいくつかの一般化学式で、β－カテニン阻害剤としてり、結腸癌発生の治療に有用であると言われている化合物をさらに記載している。この特許は、その中で特定の化合物の構造、本発明において有用であるとその中で言われている化合物の一般式及び変数定義について参照により全体として本明細書に組み込まれる。本明細書で同定された化合物は、この特許に記載されているものとは構造的に異なる。
２０１９年５月１７日に公開されたＣＮ１０９７６１９０９は（Ｅｓｐａｃｅｎｅｔでその英語版の要約に記載されているように）、ある式のいくつかのＮ－（４－（ピリミジン－４－アミノ）フェニル）スルホンアミド化合物又は塩が、Ｈｓｐ９０－Ｃｄｃ３７（熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０及びその補助シャペロンＣｄｃ３７）インタラクティブクライアントタンパク質発現を阻害し、Ｈｓｐ９０シグナルチャネルによって媒介されるさまざまな疾患の治療又は予防に有用であると報告されていることを報告している。この公開出願に記載されている式は、
Figure 2023520330000001
であり、式中、変数は、Ｅｓｐａｃｅｎｅｔ英語版機械翻訳によれば以下の通り定義される：
Ｒ１は、ｍｅｓ－トリメチルフェニル、４－メチルフェニル、４－トリフルオロメチルフェニル、ナフチル、２，３，４，５，－テトラメチルフェニル、４－メトキシフェニル、４－ｔｅｒｔ－ブチルフェニル、２，４－ジメトキシフェニル、２，５－ジメトキシフェニル又は４－フェノキシフェニルであり、
Ｒ２は、水素、メチルアセテート、アセテート、アミノアセチル、４－ギ酸ベンジル、４－イソプロピルベンジル、４－クロロベンジル又は４－メトキシベンジルであり、
Ｒ３は、塩素、－ＯＲａ又は－ＮＲｂＲｃであり、Ｒａは、鎖Ｃ１～３アルキル、Ｃ５～６シクロアルキル、Ｃ１～２アルコキシ、モノ－若しくはジ－Ｃ１～２アルキルアミノ、又はＣ５～６窒素含有又は酸素含有ヘテロ環式基であり、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれＣ１～５アルキル基である。さらに詳細には、Ｒ３は、塩素、２－ヒドロキシテトラヒドロピロリル、エタノールアミノ、２，３－ジヒドロキシ－１－メチルプロピルアミノ、２，３－ジヒドロキシプロピルアミノ、ピペラジニル、Ｎ－メチルピペラジニル、アゼピル、ピペリジニル、２－メチルプロピルアミノ、プロポキシ、メチルアミノ、エチルアミノ、シクロプロピルアミノ、１－エチルプロピルアミノ、テトラヒドロピラン－４－イルメトキシ又は２－メトキシエトキシである。参考文献は、式Ｉ－５：
Figure 2023520330000002
の化合物も指す。
この公開出願は、その中で特定の化合物の構造、本発明において有用であるとその中で言われている化合物の一般式及び変数定義について参照により全体として本明細書に組み込まれる。この公開出願に開示された構造は、本出願のいずれの化学式からも除外されうる。
本発明は、ＣＲＣにおけるＣＨＤ１Ｌの臨床病理学的特性を試験し、本明細書における結果により、ＣＨＤ１Ｌは、ＴＣＦ転写に関与するドラッガブル標的であることが示される。ＣＨＤ１Ｌ媒介ＴＣＦ転写の機序も本明細書において提案される。腫瘍オルガノイド及び患者由来の腫瘍オルガノイド（ＰＤＴＯ）を含めてさまざまな細胞モデルにおいて、ＴＣＦ転写を予防し、ＥＭＴ、及び他の悪性特性を逆転させることができる、ＣＨＤ１Ｌの低分子阻害剤が、本明細書において同定される。本明細書において同定されたいくつかのＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＲＣ及び他のがんの治療へのトランスレーショナル開発にとって重要な、インビボ薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）プロファイルを含めて薬剤らしい薬理学的特性を示す。
［概要］
本発明は、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、さらに詳細にはＴＣＦ転写誘導性がん、さらに詳細にはＥＭＴ誘導性がんの治療に関する。ＣＨＤ１Ｌは、ＴＣＦ転写複合体の必須成分であることがわかる。ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅを阻害し、ＣＨＤ１Ｌ依存性ＴＣＦ転写を阻害するＣＨＤＬ１の低分子阻害剤が同定された。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＴＣＦ複合体がＷｎｔ応答エレメント及びプロモーター部位に結合するのを妨げると考えられる。さらに詳細には、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＥＭＴの逆転を誘導する。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、さまざまながん、特にＣＲＣ及びｍ－ＣＲＣの治療において有用である。特にＣＲＣに関連して、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、実施形態において、がん幹細胞（ＣＳＣ）幹細胞性及び浸潤能を阻害するということが示される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＲＣ ＰＤＴＯにおいて細胞毒性を誘導する。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がんは、ＣＲＣ、乳がん、神経膠腫、肝がん、肺がん又は胃腸（ＧＩ）がんである。具体的な実施形態において、ＴＣＦ転写誘導性がんは、ｍＣＲＣを含めてＣＲＣである。具体的な実施形態において、ＥＭＴ誘導性がんは、ｍＣＲＣを含めてＣＲＣである。
本発明は、ＧＩがんを含めて、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、さらに詳細にはＴＣＦ転写誘導性がん、さらに詳細にはＥＭＴ誘導性がん、特にＣＲＣ及びｍＣＲＣを治療する方法であって、それを必要とする患者に、ＣＨＤ１Ｌ阻害に効果的であるか、ＴＣＦ転写異常の阻害に効果的であるか、又はＥＭＴ逆転の誘導に効果的である量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、式Ｉ～ＸＸ又はＸＸＸ～ＸＶＩＩのうちのいずれか１つの化合物である。さらに詳細には、本発明は、有効量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与することによって、ＴＣＦ転写異常、特にＣＲＣにおけるＴＣＦ転写異常を阻害する方法を提供する。さらに詳細には、本発明は、有効量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与することによって、ＥＭＴの逆転、特にＣＲＣ又はｍＣＲＣにおけるＥＭＴの逆転を誘導する方法を提供する。本発明は、有効量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与することによって、がん幹細胞（ＣＳＣ）幹細胞性及び／又は浸潤能、特にＣＲＣにおけるがん幹細胞（ＣＳＣ）幹細胞性及び／又は浸潤能を阻害する方法を提供する。本発明は、有効量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与することによって、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、又はＴＣＦ転写誘導性がん又はＥＭＴ誘導性がんのがん性腫瘍、特にＣＲＣにおけるがん性腫瘍を治療する方法を提供する。
実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＨＤ１Ｌの阻害に対して選択的である。実施形態において、本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤はＰＡＲＰ阻害剤でない。実施形態において、本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、トポイソメラーゼの阻害剤でない。特に、本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＤＮＡトポイソメラーゼの阻害剤でない。特に、本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＩＩα型トポイソメラーゼの阻害剤でない。実施形態において、本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、β－カテニンの阻害剤、特に米国特許第９，６１６，０４７号に記載されているような阻害剤でない。実施形態において、本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、Ｈｓｐ９０－Ｃｄｃ３７インタラクティブクライアントタンパク質発現の阻害剤でなく、特にＣＮ１０９７６１９０９に記載されている阻害剤でない。
本発明は、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、ＴＣＦ転写誘導性がん、又はＥＭＴ誘導性がんにおける腫瘍増殖、浸潤及び／又は転移の予防を必要とする患者に、ＣＨＤ１Ｌ阻害、ＴＣＦ転写異常の阻害に効果的な量又はＥＭＴの逆転に効果的な量の本発明のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与することによって、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、ＴＣＦ転写誘導性がん、又はＥＭＴ誘導性がんにおける腫瘍増殖、浸潤及び／又は転移を予防する方法も提供する。具体的な実施形態において、腫瘍は固形腫瘍である。実施形態において、腫瘍は、ＧＩがんに伴う腫瘍である。実施形態において、腫瘍は、ＣＲＣに伴う腫瘍である。実施形態において、腫瘍は、ｍＣＲＣに伴う腫瘍である。
具体的な実施形態において、本発明は、ｍＣＲＣを含めてＣＲＣを治療する方法であって、それを必要とする患者にＣＨＤ１Ｌの阻害に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与するステップを含む方法を提供する。具体的な実施形態において、本発明は、ｍＣＲＣを含めてＣＲＣを治療する方法であって、それを必要とする患者にＴＣＦ転写異常の阻害に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与するステップを含む方法を提供する。具体的な実施形態において、本発明は、ｍＣＲＣを含めてＣＲＣを治療する方法であって、それを必要とする患者にＥＭＴの逆転の誘導に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与するステップを含む方法を提供する。
具体的な実施形態において、本発明は、がん細胞におけるアポトーシスを誘導する方法であって、がん細胞を有効量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤と接触させるステップを含む方法を提供する。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＴＣＦ転写異常の阻害に効果的な量が提供される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＥＭＴの逆転の誘導に効果的な量が提供される。実施形態において、がん細胞は、ＣＲＣがん細胞である。実施形態において、がん細胞は、ｍＣＲＣがん細胞である。実施形態において、方法はインビボで適用される。実施形態において、方法は、患者においてインビボで適用される。実施形態において、方法はインビトロで適用される。
ＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与するステップを含む本明細書における方法の実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、所望の利益を得るためのいずれか公知の方法及び投与スケジュールによって投与される。実施形態において、投与は経口投与である。実施形態において、投与は静脈内注射による投与である。
本発明は、薬剤抵抗性がんを治療する方法であって、それを必要とする患者に、ＣＨＤ１Ｌ阻害、ＴＣＦ転写異常の阻害又はＥＭＴの逆転の誘導に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤をがんが抵抗性になった公知の治療と組み合わせて投与するステップを含む方法も提供する。具体的な実施形態において、がんが抵抗性になった治療は、従来の化学療法及び他の標的療法である。具体的な実施形態において、本発明は、がんにおけるＤＮＡ損傷薬の有効性を増加させる方法であって、がんをＤＮＡ損傷薬とＣＨＤ１Ｌ阻害剤を組み合わせて治療するステップを含み、ＤＮＡ損傷薬に対する抵抗性を低下させるのに効果的な量のＣＨＤ１Ｌが投与される、方法を提供する。実施形態において、ＤＮＡ損傷薬はトポイソメラーゼ阻害剤である。特に、ＤＮＡ損傷薬は、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤である。特に、ＤＮＡ損傷薬は、ＩＩα型トポイソメラーゼ阻害剤である。特に、ＤＮＡ損傷薬は、エトポシド又はテニポシドである。特に、ＤＮＡ損傷薬は、ＳＮ３８又はそのプロドラッグである。実施形態において、ＤＮＡ損傷薬は、チミジル酸シンターゼ阻害剤である。実施形態において、チミジル酸シンターゼ阻害剤は、葉酸類似体である。実施形態において、チミジル酸シンターゼ阻害剤は、ヌクレオチド類似体である。具体的な実施形態において、チミジル酸シンターゼ阻害剤は、ラルチトレキセド、ペメトレキセド、ノラトレキセド又はＺＤ９３３１である。特定の実施形態において、ＤＮＡ損傷薬は、５－フルオロウラシル又はカペシタビンである。
実施形態において、がんは、ＣＤＨ１Ｌ誘導性がんである。実施形態において、がんは、ＴＣＦ転写誘導性がんである。実施形態において、がんは、ＥＭＴ誘導性がんである。実施形態において、治療は、ＣＲＣの治療である。実施形態において、治療は、ｍＣＲＣの治療である。実施形態において、ＤＮＡ損傷薬及びＣＨＤ１ｌ阻害剤は、いずれか公知の方法によって、組合せ療法上の利点を実現するのに適した投与スケジュールで投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は経口投与され、ＤＮＡ損傷薬は、いずれか公知の投与方法及び投与スケジュールによって投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＤＮＡ損傷薬の投与に先立って投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＤＮＡ損傷薬の投与に先立って投与され、ＤＮＡ損傷薬の投与の後に任意選択で投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＤＮＡ損傷薬の静脈内注射による投与に先立って経口投与され、ＤＮＡ損傷薬の静脈内注射による投与の後に任意選択で経口投与される。
本発明は、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、ＴＣＦ転写誘導性がん、又はＥＭＴ誘導性がんを治療する方法であって、それを必要とする患者に、ＣＨＤ１Ｌ阻害若しくはＴＣＦ転写異常の阻害又はＥＭＴの逆転の誘導に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤をがんに対する代替治療方法と組み合わせて投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、がんは、ＧＩがんであり、又はさらに詳細にはＣＲＣがんであり、さらに詳細にはｍＣＲＣである。実施形態において、代替治療方法は、５－フルオロウラシル、フォリン酸（ロイコボリンとしても知られている）と組み合わせた５－フルオロウラシル、トポイソメラーゼ阻害剤、又は細胞傷害性剤若しくは抗新生物剤のうちの１つ又は複数の投与である。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、５－フルオロウラシルと組み合わせて投与されるか、又は５－フルオロウラシル及びフォリン酸と組み合わせて投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、特にイリノテカン（カンプトテシンとしても知られているＳＮ３８のプロドラッグ）又はＳＮ３８の他のいずれか公知のプロドラッグと組み合わせて投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びトポイソメラーゼ阻害剤を使用する組合せ治療は、がんに対して少なくとも相加的活性を示す。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤とトポイソメラーゼ阻害剤との組合せ治療は、がんに対して（相加的活性より高い）相乗的活性を示す。
実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、細胞傷害性剤又は抗新生物剤、特に白金ベースの抗新生物剤、さらに詳細にはシスプラチン、カルボプラチン又はオキサリプラチンと組み合わせて投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤及び白金ベースの抗新生物剤を使用する組合せ治療は、がんに対して少なくとも相加的活性を示す。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤と白金ベースの抗新生物剤との組合せ治療は、がんに対して（相加的活性より高い）相乗的活性を示す。実施形態において、白金ベースの抗新生物剤及びＣＨＤ１ｌ阻害剤は、いずれか公知の方法によって、組合せ療法上の利点を実現するのに適した投与スケジュールで投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は経口投与され、白金ベースの新生物剤は、いずれか公知の投与方法及び投与スケジュールによって投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、白金ベースの新生物剤の投与に先立って投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、白金ベースの抗新生物剤の投与に先立って投与され、白金ベースの抗新生物剤の投与の後に任意選択で投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、白金ベースの新生物剤の静脈内注射による投与に先立って経口投与され、白金ベースの新生物剤の静脈内注射による投与の後に任意選択で経口投与される。
実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＧＩがん、特にＣＲＣ及びｍＣＲＣの治療のための化学療法レジメンと組み合わせて投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＦＯＬＦＯＸと名付けられた化学療法レジメンと組み合わせて投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＦＯＬＦＩＲＩと名付けられた化学療法レジメンと組み合わせて投与される。実施形態において、化学療法レジメン及びＣＨＤ１ｌ阻害剤は、いずれか公知の方法によって、組合せ療法上の利点を実現するのに適した投与スケジュールで投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は経口投与され、化学療法レジメンは、いずれか公知の投与方法及び投与スケジュールによって投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化学療法レジメンの投与に先立って投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化学療法レジメンの投与に先立って投与され、化学療法レジメンの投与の後に任意選択で投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＰＡＲＰ阻害剤の静脈内注射による投与に先立って経口投与され、ＰＡＲＰ阻害剤の静脈内注射による投与の後に任意選択で経口投与される。
本発明は、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼＩ（ＰＡＲＰＩ）に感受性を示すがんを治療する方法であって、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、ＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせて使用される、方法を提供する。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害、ＴＣＦ転写異常の阻害又はＥＭＴの逆転の誘導に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、がんを治療するのに効果的な量のＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせて使用されて、がん治療の有効性を少なくとも向上させる。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びＰＡＲＰ阻害剤を使用する組合せ治療は、がんに対して少なくとも相加的活性を示す。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤とＰＡＲＰ阻害剤との組合せ治療は、がんに対して（相加的活性より高い）相乗的活性を示す。実施形態において、がんは、ＰＡＲＰ阻害剤による治療に感受性を示すがんである。実施形態において、がんは、ＰＡＲＰ阻害剤による治療に抵抗性であるか、又はＰＡＲＰ阻害剤による治療に抵抗性になったがんである。実施形態において、がんは、ＰＡＲＰ阻害剤による治療に感受性を示すがんであるか、又はＰＡＲＰ阻害剤による治療に抵抗性になり、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、ＴＣＦ誘導性がん若しくはＥＭＴ誘導性がんである。実施形態において、がんは、相同組換え欠損がんである（例えば、Ｚｈｏｕら、ＢｉｏＲｘｉｖ ２０２０を参照のこと）。実施形態において、治療されたがんは、ＰＡＲＰ阻害剤に感受性を示すがんであり、さらに詳細には乳がん又は卵巣がんである。具体的な実施形態において、がんは、ＢＲＣＡ欠損乳がん又は卵巣がんである。実施形態において、治療されたがんは、ＧＩがん、ＣＲＣ又はｍＣＲＣである。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤とＰＡＲＰ阻害剤との組合せ治療は、ＰＡＲＰ阻害剤による治療に対するがんの抵抗性を逆転させる。実施形態において、ＰＡＲＰ阻害剤は、オラパリブ、ベリパリブ又はタロゾパリブである。実施形態において、ＰＡＲＰ阻害剤は、ルカパリブ又はニラパリブである。本発明は、がんの治療に効果的な量のＰＡＲＰ阻害剤の投与をＣＨＤ１Ｌを阻害するのに効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤の投与と組み合わせて含む、がんを治療する方法も提供する。実施形態において、ＰＡＲＰ阻害剤及びＣＨＤ１ｌ阻害剤は、いずれか公知の方法によって、組合せ療法上の利点を実現するのに適した投与スケジュールで投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は経口投与され、ＰＡＲＰ阻害剤は静脈内注射によって投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びＰＡＲＰ阻害剤は共に、静脈内注射によって投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＰＡＲＰ阻害剤の投与に先立って投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＰＡＲＰ阻害剤の投与に先立って投与され、ＰＡＲＰ阻害剤の投与の後に任意選択で投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＰＡＲＰ阻害剤の投与の後に投与される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＰＡＲＰ阻害剤の静脈内注射による投与に先立って経口投与され、ＰＡＲＰ阻害剤の静脈内注射による投与の後に任意選択で経口投与される。
本発明は、ＣＨＤ１Ｌ依存性ＴＣＦ転写を阻害するＣＨＤ１Ｌ阻害剤を同定する方法であって、本明細書の実施例に記載されているように、選択された化合物がＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅを阻害するかどうかを決定するステップを含む方法も提供する。具体的な実施形態において、ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅの阻害が決定される。実施形態において、３０％以上の阻害（％）を示す化合物が、ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅを阻害するものとして選択される。実施形態において、８０％以上の阻害（％）を示す化合物が、ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅを阻害するものとして選択される。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ、特にｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅに対する用量応答アッセイにおいて１０μＭ未満のＩＣ５０を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ、特にｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅに対する用量応答アッセイにおいて５μＭ未満のＩＣ５０を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ、特にｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅに対する用量応答アッセイにおいて３μＭ未満のＩＣ５０を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、５μＭ未満のＩＣ５０を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、３μＭ未満のＩＣ５０を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、１μＭ未満のＩＣ５０を示す。
具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、特に、本明細書の実施例に記載されているようなものなど１つ又は複数のＣＲＣ細胞株を使用して、２Ｄがん細胞モデルにおいてＴＣＦ転写の阻害について評価される。具体的な実施形態において、ＴＣＦ転写の阻害は、ＴＯＰｆｌａｓｈレポーターコンストラクト、さらに詳細には本明細書に記載されるＴＯＰｆｌａｓｈルシフェラーゼレポーターコンストラクトを使用して決定される。具体的な実施形態において、細胞モデルにおいてＣＨＤ１Ｌ阻害剤によるＴＣＦ転写の阻害は用量依存的である。具体的な実施形態において、細胞モデルにおいてＣＨＤ１Ｌ阻害剤によるＴＣＦ転写の阻害は、１～５０μＭの範囲で用量依存的である。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、２０μＭにおいて７５％以下の細胞生存率に正規化されたＴＣＦ転写（％）を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、４０μＭにおいて５０％以下の細胞生存率に正規化されたＴＣＦ転写（％）を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、がん細胞株においてＴＯＰｆｌａｓｈレポーターを用いてアッセイして、１０μＭ未満のＩＣ５０で、ＴＣＦ転写の用量依存的阻害を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、がん細胞株においてＴＯＰｆｌａｓｈレポーターを用いてアッセイして、５μＭ未満のＩＣ５０で、ＴＣＦ転写の用量依存的阻害を示す。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、がん細胞株においてＴＯＰｆｌａｓｈレポーターを用いてアッセイして、３μＭ未満のＩＣ５０で、ＴＣＦ転写の用量依存的阻害を示す。実施形態において、がん細胞株は、ＣＲＣがん細胞、乳がん細胞、神経膠腫細胞、肝がん細胞、肺がん細胞又はＧＩがん細胞である。実施形態において、がん細胞株は、ＣＲＣがん細胞株である。具体的な実施形態において、ＣＲＣがん細胞株はＳＷ６２０である。
具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＥＭＴを逆転させるか、又は阻害するそれらの能力についてアセスされる。具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、腫瘍オルガノイドにおいてＥＭＴを逆転させるそれらの能力についてアセスされる。実施形態において、ＥＭＴの逆転又は阻害は、ビメンチンを発現する腫瘍オルガノイドにおいてアセスされ、ビメンチン発現の用量依存的減少がＥＭＴの逆転又は阻害を示す。実施形態において、ＥＭＴの逆転は、Ｅ－カドヘリンを発現する腫瘍オルガノイドにおいてアセスされ、Ｅ－カドヘリン発現の用量依存的増加がＥＭＴの逆転又は阻害を示す。実施形態において、ＥＭＴの逆転は、Ｅ－カドヘリン、ビメンチン又は両方を発現する腫瘍オルガノイドにおいてアセスされ、ビメンチンの用量依存的減少及びＥ－カドヘリン発現の用量依存的増加がＥＭＴの逆転又は阻害を示す。具体的な実施形態において、ＥＭＴの用量依存的逆転又は阻害は、０．１～１００μＭの化合物濃度にわたって測定される。具体的な実施形態において、ＥＭＴの用量依存的逆転は、０．３～５０μＭの化合物濃度にわたって測定される。
具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、がん幹細胞の幹細胞性を測定するのに十分に確立したアッセイであるクローン原性コロニー形成を阻害するそれらの能力についてアセスされる。実施形態において、細胞は、プレーティングに先立って、選択された濃度のＣＨＤ１Ｌ阻害剤で前処置される。実施形態において、細胞は、ＣＳＣのみが培養中の１０日にわたってコロニーを形成するような低密度で培養される。実施形態において、細胞は、１２～３６時間前処理される。実施形態において、細胞は、２４時間前処理される。実施形態において、細胞は、適切な対照と共に、０．５～５０μＭの範囲の濃度のＣＨＤ１Ｌ阻害剤で前処置される。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、４０μＭのＣＨＤ１Ｌ濃度で、無化合物対照と比べて４０％以上のクローン原性コロニー数の阻害を示す。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、２０μＭのＣＨＤ１Ｌ濃度で、無化合物対照と比べて４０％以上のクローン原性コロニー数の阻害を示す。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、２μＭのＣＨＤ１Ｌ濃度で、無化合物対照と比べて４０％以上のクローン原性コロニー数の阻害を示す。実施形態において、クローン原性コロニー形成の阻害は、培養中の１０日にわたって続く。
具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、いずれか公知の方法を採用し、特に本明細書の実施例に記載されている方法を採用して、浸潤能の損失についてさらにアセスされる。
具体的な実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、抗腫瘍活性について、腫瘍オルガノイドにおける細胞毒性の誘導によって測定して、さらにアセスされる。実施形態において、細胞は、選択された濃度（１～１００μＭ）のＣＨＤ１Ｌ阻害剤で選択された時間（例えば、２４～９６時間、好ましくは７２時間）処置される。実施形態において、細胞毒性は、当技術分野において公知であるさまざまな細胞毒性試薬のいずれか、例えば、損傷細胞に入り、入るときに測定可能な変化を示す低分子（例えば、セルトックス（ＣｅｌｌＴｏｘ）（商標）Ｇｒｅｅｎ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）又はＩｎｃｕＣｙｔｅＣｙｔｏｔｏｘ試薬（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、Ｆｒａｎｃｅ）などの蛍光）を使用して測定される。実施形態において、細胞傷害は、死細胞から放出されたＬＤＨ（乳酸デヒドロゲナーゼ）の測定によって測定される。
実施形態において、本明細書の治療方法において有用なＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、式Ｉ～ＸＸ、及びＸＸＸ～ＸＬＩＩの阻害剤又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物である。実施形態において、本発明は、本明細書におけるいずれかの式の新規化合物、特に式Ｉ～ＸＸ、ＸＸＸＶ～ＸＬＩＩの新規化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物を提供する。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、式Ｉの阻害剤である。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、式ＸＸの阻害剤である。実施形態において、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、式Ｉ～ＩＸ、Ｘｉ～ＸｉＸ、ＸＸ、又はＸＸＸＶ～ＸＬＩＩの阻害剤である。
具体的な実施形態において、本発明の方法は、化合物１～７３又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物のうちの１つ又は複数から選択されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤を採用する。２つ以上のＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、本明細書の方法において組み合わせて採用されうる。具体的な実施形態において、本発明において採用されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化合物６～３９又はそれらの薬学的に許容できる塩のうちの１つ又は複数から選択される。具体的な実施形態において、本発明の方法において採用されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化合物４０～５１又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物のうちの１つ又は複数から選択される。具体的な実施形態において、本発明の方法において採用されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化合物５２～６８又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物のうちの１つ又は複数から選択される。具体的な実施形態において、本発明の方法において採用されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化合物７０～７３又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物のうちの１つ又は複数から選択される。具体的な実施形態において、本発明の方法において採用されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化合物６、８、５２、５４、５６、６１、６２、６５若しくは６６又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物である。具体的な実施形態において、本発明の方法において採用されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化合物６、８又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物である。具体的な実施形態において、本発明の方法において採用されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化合物５２、５４又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物である。具体的な実施形態において、本発明の方法において採用されるＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、化合物２２、２３、２６若しくは２７又はそれらの薬学的に許容できる塩である。
具体的な実施形態において、本発明の方法は、式ＸＸのＣＨＤ１Ｌ阻害剤を採用し、式ＸＸについて本明細書に記載されるすべての実施形態を含む。本発明は、式ＸＸの新規化合物、それらの塩、並びにそのような化合物及び塩を含む医薬組成物も提供する。
本発明は、本発明のＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びいずれかのそのような阻害剤を含む薬学的に許容できる組成物も対象とする。実施形態において、本発明は、本明細書において化学式に記載されているいずれか新規の化合物又はその薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物を対象とする。特に、本発明は、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が化合物１～８又はそれらの塩若しくは溶媒和物でないことを例外として、本明細書において式に記載されているＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びそれらの薬学的に許容できる塩を対象とする。特に、本発明は、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が化合物１～９又はそれらの塩でないことを例外として、本明細書において式に記載されているＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びそれらの薬学的に許容できる塩を対象とする。実施形態において、本発明は、化合物９～３９、４０～６８、６９～７３又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物、或いはそのような化合物又は塩若しくは溶媒和物を含む薬学的に許容できる組成物のいずれかを対象とする。実施形態において、本発明は、化合物１０～３９若しくは４０～７３又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物、或いはそのような化合物又は塩若しくは溶媒和物を含む薬学的に許容できる組成物のいずれかを対象とする。実施形態において、本発明は、化合物５２～７３又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物、或いはそのような化合物又は塩若しくは溶媒和物を含む薬学的に許容できる組成物のいずれかを対象とする。実施形態において、本発明のＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、５以下のＣｌｏｇ Ｐを有する。実施形態において、本発明のＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、３～４のＣｌｏｇ Ｐを有する。
具体的な実施形態において、本発明は、以下の化合物及びこれらの化合物をがん、特にＣＲＣ及びｍＣＲＣの治療のために採用する本明細書における方法を対象とする：化合物５２～７３；化合物５２若しくは５３；化合物５４、５５若しくは６７；又は化合物５７、５８若しくは５９；又はそれらの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物；化合物８、化合物５２、化合物５３、化合物５４、化合物５５、化合物５６、化合物５７、化合物５８、化合物５９、化合物６１、化合物６２、化合物６５、化合物６６、又は化合物６７のうちのいずれか１つ。
本発明はまた、がんの治療薬、特にがん、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、ＴＣＦ誘導性がん、又はＥＭＴ誘導性がん、特にＧＩがん、さらに詳細にはＣＲＣ又はｍＣＲＣの治療薬の製造におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤の使用にも関する。本発明は、がん、ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、ＴＣＦ誘導性がん、又はＥＭＴ誘導性がん、特にＧＩがん、さらに詳細にはＣＲＣ又はｍＣＲＣの治療における使用のための本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤にさらに関する。
本発明の他の実施形態及び態様は、本明細書における図面、詳細な説明、及び実施例を検討すると、当業者に容易に明らかである。
ＨＴＳから同定されたＣＨＤ１Ｌ阻害剤の検証。（図１Ａ）ヒット１～７によるｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ Ｃ５０用量応答。平均ＩＣ５０値を独立した３つの実験から計算し、代表的なグラフを示す。（図１Ｂ）ＳＷ６２０、ＨＣＴ－１６、及びＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞をＴＯＰｆｌａｓｈレポーターと共に使用して、２４時間にわたって３回投与して、ＴＣＦ転写の阻害を測定した。 ＨＴＳから同定されたＣＨＤ１Ｌ阻害剤の検証。（図１Ａ）ヒット１～７によるｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ Ｃ５０用量応答。平均ＩＣ５０値を独立した３つの実験から計算し、代表的なグラフを示す。（図１Ｂ）ＳＷ６２０、ＨＣＴ－１６、及びＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞をＴＯＰｆｌａｓｈレポーターと共に使用して、２４時間にわたって３回投与して、ＴＣＦ転写の阻害を測定した。 ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＲＣにおいてＥＭＴ及び悪性表現型を逆転させる。ＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰレポーターの下方調節（図２Ａ）及びＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰレポーターの上方調節（図２Ｂ）のハイコンテントイメージングによって測定された、ＥＭＴをモジュレートするＣＨＤ１Ｌ阻害剤の用量応答。平均ＥＣ５０値±ＳＥＭを独立した３つの実験から計算する。（図２Ｃ）ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ及びＨＣＴ－１１６細胞においてＣＨＤ１Ｌ阻害剤で前処置した後のクローン原性コロニー形成によって測定されたＣＳＣ幹細胞性。（図２Ｄ）ＣＨＤ１Ｌ阻害剤処置後におけるＨＣＴ－１１６細胞の浸潤能の阻害。ウエルチｔ検定統計分析を使用して、有意性を決定した。＊＝Ｐ≦０．０５、＊＊＝Ｐ≦０．０１、＊＊＊＝Ｐ≦０．００１、＊＊＊＊＝Ｐ≦０．０００１。 ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＲＣにおいてＥＭＴ及び悪性表現型を逆転させる。ＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰレポーターの下方調節（図２Ａ）及びＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰレポーターの上方調節（図２Ｂ）のハイコンテントイメージングによって測定された、ＥＭＴをモジュレートするＣＨＤ１Ｌ阻害剤の用量応答。平均ＥＣ５０値±ＳＥＭを独立した３つの実験から計算する。（図２Ｃ）ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ及びＨＣＴ－１１６細胞においてＣＨＤ１Ｌ阻害剤で前処置した後のクローン原性コロニー形成によって測定されたＣＳＣ幹細胞性。（図２Ｄ）ＣＨＤ１Ｌ阻害剤処置後におけるＨＣＴ－１１６細胞の浸潤能の阻害。ウエルチｔ検定統計分析を使用して、有意性を決定した。＊＝Ｐ≦０．０５、＊＊＝Ｐ≦０．０１、＊＊＊＝Ｐ≦０．００１、＊＊＊＊＝Ｐ≦０．０００１。 ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＲＣにおいてＥＭＴ及び悪性表現型を逆転させる。ＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰレポーターの下方調節（図２Ａ）及びＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰレポーターの上方調節（図２Ｂ）のハイコンテントイメージングによって測定された、ＥＭＴをモジュレートするＣＨＤ１Ｌ阻害剤の用量応答。平均ＥＣ５０値±ＳＥＭを独立した３つの実験から計算する。（図２Ｃ）ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ及びＨＣＴ－１１６細胞においてＣＨＤ１Ｌ阻害剤で前処置した後のクローン原性コロニー形成によって測定されたＣＳＣ幹細胞性。（図２Ｄ）ＣＨＤ１Ｌ阻害剤処置後におけるＨＣＴ－１１６細胞の浸潤能の阻害。ウエルチｔ検定統計分析を使用して、有意性を決定した。＊＝Ｐ≦０．０５、＊＊＝Ｐ≦０．０１、＊＊＊＝Ｐ≦０．００１、＊＊＊＊＝Ｐ≦０．０００１。 ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＲＣにおいてＥＭＴ及び悪性表現型を逆転させる。ＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰレポーターの下方調節（図２Ａ）及びＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰレポーターの上方調節（図２Ｂ）のハイコンテントイメージングによって測定された、ＥＭＴをモジュレートするＣＨＤ１Ｌ阻害剤の用量応答。平均ＥＣ５０値±ＳＥＭを独立した３つの実験から計算する。（図２Ｃ）ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ及びＨＣＴ－１１６細胞においてＣＨＤ１Ｌ阻害剤で前処置した後のクローン原性コロニー形成によって測定されたＣＳＣ幹細胞性。（図２Ｄ）ＣＨＤ１Ｌ阻害剤処置後におけるＨＣＴ－１１６細胞の浸潤能の阻害。ウエルチｔ検定統計分析を使用して、有意性を決定した。＊＝Ｐ≦０．０５、＊＊＝Ｐ≦０．０１、＊＊＊＝Ｐ≦０．００１、＊＊＊＊＝Ｐ≦０．０００１。 化合物６は、ＣＲＣ細胞株及びＰＤＴＯにおいてアポトーシスを誘導する。（図３Ａ）Ｅｃａｄ－ＰｒｏＲＦＰレポーターアッセイを使用したＥ－カドヘリン発現誘導の時間経過評価及びセルトックス（商標） Ｇｒｅｅｎ細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉ）を使用した細胞毒性誘導の時間経過評価。（図３Ｂ）ＳＮ－３８及び６で１２時間処置した後のアポトーシスのアネキシンＶ－ＦＩＴＣ染色分析。（図３Ｃ）ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｂｌｕｅ（登録商標）細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用した、ＰＤＴＯ ＣＲＣ１０２における６の細胞毒性。平均ＥＣ５０値±標準偏差を独立した６つの実験から計算する。代表的なＰＤＴＯを挿入した代表的なグラフを示す。ウエルチｔ検定統計分析を使用して、有意性を決定する。＊＝Ｐ≦０．０５、＊＊＝Ｐ≦０．０１、＊＊＊＝Ｐ≦０．００１、＊＊＊＊＝Ｐ≦０．０００１。 化合物６は、ＣＲＣ細胞株及びＰＤＴＯにおいてアポトーシスを誘導する。（図３Ａ）Ｅｃａｄ－ＰｒｏＲＦＰレポーターアッセイを使用したＥ－カドヘリン発現誘導の時間経過評価及びセルトックス（商標） Ｇｒｅｅｎ細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉ）を使用した細胞毒性誘導の時間経過評価。（図３Ｂ）ＳＮ－３８及び６で１２時間処置した後のアポトーシスのアネキシンＶ－ＦＩＴＣ染色分析。（図３Ｃ）ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｂｌｕｅ（登録商標）細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用した、ＰＤＴＯ ＣＲＣ１０２における６の細胞毒性。平均ＥＣ５０値±標準偏差を独立した６つの実験から計算する。代表的なＰＤＴＯを挿入した代表的なグラフを示す。ウエルチｔ検定統計分析を使用して、有意性を決定する。＊＝Ｐ≦０．０５、＊＊＝Ｐ≦０．０１、＊＊＊＝Ｐ≦０．００１、＊＊＊＊＝Ｐ≦０．０００１。 化合物６は、ＣＲＣ細胞株及びＰＤＴＯにおいてアポトーシスを誘導する。（図３Ａ）Ｅｃａｄ－ＰｒｏＲＦＰレポーターアッセイを使用したＥ－カドヘリン発現誘導の時間経過評価及びセルトックス（商標） Ｇｒｅｅｎ細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉ）を使用した細胞毒性誘導の時間経過評価。（図３Ｂ）ＳＮ－３８及び６で１２時間処置した後のアポトーシスのアネキシンＶ－ＦＩＴＣ染色分析。（図３Ｃ）ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｂｌｕｅ（登録商標）細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用した、ＰＤＴＯ ＣＲＣ１０２における６の細胞毒性。平均ＥＣ５０値±標準偏差を独立した６つの実験から計算する。代表的なＰＤＴＯを挿入した代表的なグラフを示す。ウエルチｔ検定統計分析を使用して、有意性を決定する。＊＝Ｐ≦０．０５、＊＊＝Ｐ≦０．０１、＊＊＊＝Ｐ≦０．００１、＊＊＊＊＝Ｐ≦０．０００１。 ＳＷ６２０異種移植片腫瘍における化合物６の蓄積。化合物６を腹腔内注射によって胸腺欠損ヌードマウスＱＤに５日間投与して、ＳＷ６２０異種移植片腫瘍における蓄積を測定した。 ＣＨＤ１Ｌ媒介ＴＣＦ転写の作用機序の提案。ＣＨＤ１Ｌは、結合しているＴＣＦ複合体メンバーＰＡＲＰ１及びＴＣＦ４を通して活性化される［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。（１）一旦活性化されると、ＣＨＤ１Ｌは、クロマチン上に局在しているヒンダードＷＲＥを対象にする。（２）クロマチンリモデリング及びＤＮＡ移動が行われ、ＷＲＥ部位を露出させる。（３）ＴＣＦ複合体は、ＣＨＤ１Ｌによって促進された露出ＷＲＥに結合し、ｍＣＲＣに関連しているＥＭＴ遺伝子及び他の遺伝子を促進する。ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ阻害剤は、ステップ１を効果的に防ぎ、ＥＭＴ及びＣＲＣの他の悪性特性の逆転を引き起こす。 化合物８の評価。（図６Ａ）化合物８は、２ＤのＳＷ２６０細胞培養物において２４時間の時間経過にわたって報告されたＴＯＰＦｌａｓｈに基づいて、強力で低μＭの用量依存的ＴＣＦ転写阻害を示す。化合物８は、デュアルレポーターＳＷ６２０腫瘍オルガノイドにおいてＥＭＴを７２時間にわたって効果的に逆転させ、ビメンチンの下方調節（図６Ｂ）及びＥ－カドヘリンプロモーター活性の用量依存的な上方調節（図６Ｃ）によって証明される。化合物８は、２４時間前処理した後１０日にわたってクローン原性コロニー形成を有意に阻害し（図６Ｄ）、４８時間にわたってＨＣＴ１１６浸潤能を有意に阻害する（図６Ｅ）。スチューデントｔ検定では、＊＝Ｐ≦０．０５を示す。 化合物８の評価。（図６Ａ）化合物８は、２ＤのＳＷ２６０細胞培養物において２４時間の時間経過にわたって報告されたＴＯＰＦｌａｓｈに基づいて、強力で低μＭの用量依存的ＴＣＦ転写阻害を示す。化合物８は、デュアルレポーターＳＷ６２０腫瘍オルガノイドにおいてＥＭＴを７２時間にわたって効果的に逆転させ、ビメンチンの下方調節（図６Ｂ）及びＥ－カドヘリンプロモーター活性の用量依存的な上方調節（図６Ｃ）によって証明される。化合物８は、２４時間前処理した後１０日にわたってクローン原性コロニー形成を有意に阻害し（図６Ｄ）、４８時間にわたってＨＣＴ１１６浸潤能を有意に阻害する（図６Ｅ）。スチューデントｔ検定では、＊＝Ｐ≦０．０５を示す。 化合物８の評価。（図６Ａ）化合物８は、２ＤのＳＷ２６０細胞培養物において２４時間の時間経過にわたって報告されたＴＯＰＦｌａｓｈに基づいて、強力で低μＭの用量依存的ＴＣＦ転写阻害を示す。化合物８は、デュアルレポーターＳＷ６２０腫瘍オルガノイドにおいてＥＭＴを７２時間にわたって効果的に逆転させ、ビメンチンの下方調節（図６Ｂ）及びＥ－カドヘリンプロモーター活性の用量依存的な上方調節（図６Ｃ）によって証明される。化合物８は、２４時間前処理した後１０日にわたってクローン原性コロニー形成を有意に阻害し（図６Ｄ）、４８時間にわたってＨＣＴ１１６浸潤能を有意に阻害する（図６Ｅ）。スチューデントｔ検定では、＊＝Ｐ≦０．０５を示す。 化合物８の評価。（図６Ａ）化合物８は、２ＤのＳＷ２６０細胞培養物において２４時間の時間経過にわたって報告されたＴＯＰＦｌａｓｈに基づいて、強力で低μＭの用量依存的ＴＣＦ転写阻害を示す。化合物８は、デュアルレポーターＳＷ６２０腫瘍オルガノイドにおいてＥＭＴを７２時間にわたって効果的に逆転させ、ビメンチンの下方調節（図６Ｂ）及びＥ－カドヘリンプロモーター活性の用量依存的な上方調節（図６Ｃ）によって証明される。化合物８は、２４時間前処理した後１０日にわたってクローン原性コロニー形成を有意に阻害し（図６Ｄ）、４８時間にわたってＨＣＴ１１６浸潤能を有意に阻害する（図６Ｅ）。スチューデントｔ検定では、＊＝Ｐ≦０．０５を示す。 化合物８の評価。（図６Ａ）化合物８は、２ＤのＳＷ２６０細胞培養物において２４時間の時間経過にわたって報告されたＴＯＰＦｌａｓｈに基づいて、強力で低μＭの用量依存的ＴＣＦ転写阻害を示す。化合物８は、デュアルレポーターＳＷ６２０腫瘍オルガノイドにおいてＥＭＴを７２時間にわたって効果的に逆転させ、ビメンチンの下方調節（図６Ｂ）及びＥ－カドヘリンプロモーター活性の用量依存的な上方調節（図６Ｃ）によって証明される。化合物８は、２４時間前処理した後１０日にわたってクローン原性コロニー形成を有意に阻害し（図６Ｄ）、４８時間にわたってＨＣＴ１１６浸潤能を有意に阻害する（図６Ｅ）。スチューデントｔ検定では、＊＝Ｐ≦０．０５を示す。 例示的なＣＨＤＩＬ阻害剤での処置後の結腸直腸がん腫瘍オルガノイドの生存率。図は、指示化合物の対数濃度の関数として生存率（％）を表す代表的グラフを示す。（図７Ａ）化合物６．９での処置；（図７Ｂ）化合物６．１１での処置；スキーム１において使用される代替化合物数は、括弧に入れて記載されている。ＩＣ５０、場合によっては平均ＩＣ５０が、各図に記載されている。いくつかの例示的化合物についての生存率データは、表３に記載されている。 例示的なＣＨＤＩＬ阻害剤での処置後の結腸直腸がん腫瘍オルガノイドの生存率。図は、指示化合物の対数濃度の関数として生存率（％）を表す代表的グラフを示す。（図７Ａ）化合物６．９での処置；（図７Ｂ）化合物６．１１での処置；スキーム１において使用される代替化合物数は、括弧に入れて記載されている。ＩＣ５０、場合によっては平均ＩＣ５０が、各図に記載されている。いくつかの例示的化合物についての生存率データは、表３に記載されている。 ＣＨＤ１Ｌ媒介ＤＮＡ修復のアセスメント並びにＣＨＤ１Ｌ阻害剤６単独及びイリノテカン（ＳＮ３８のプロドラッグ）との組合せの「オンターゲット」効果。ＣＨＤ１Ｌは、ＰＡＲＰ－１媒介ＤＮＡ修復に不可欠であることが知られており、ＤＮＡ損傷化学療法に対する抵抗性を引き起こす［Ａｈｅｌら、２００９；Ｔｓｕｄａら、２０１７］。ＣＨＤ１Ｌを過剰発現するように設計されたＤＬＤ１細胞（ＤＬＤ１過剰発現、ＯＥ）と比べて低レベルのＣＨＤ１Ｌ発現を有するＤＬＤ１ ＣＲＣ細胞（ＤＬＤ１空ベクター、ＥＶ）が使用された。図８Ａは、ＤＬＤ１（ＥＶ）とＤＬＤ１（ＯＥ）におけるＣＨＤ１Ｌの発現を、これらの細胞におけるα－チューブリンの対照発現を考慮して比較するウェスタンブロットである。図８Ｂは、ＤＬＤ１空ベクター細胞及びＤＬＤ１過剰発現細胞における化合物単独、ＳＮ３８単独、及びその２つの組合せの（ＤＭＳＯに対する）γ－Ｈ２ＡＸ強度のグラフを示す。化合物６単独は、有意なＤＮＡ損傷を誘導せず、ＣＨＤ１Ｌの発現が低いＤＬＤ１細胞においてＳＮ３８と相乗作用を示さない。このグラフは、ＣＨＤ１Ｌを過剰発現するＤＬＤ１細胞においてＤＮＡ損傷を誘導するＳＮ３８と相乗作用を示す、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤の「オンターゲット」効果を示す。 ＣＨＤ１Ｌ媒介ＤＮＡ修復のアセスメント並びにＣＨＤ１Ｌ阻害剤６単独及びイリノテカン（ＳＮ３８のプロドラッグ）との組合せの「オンターゲット」効果。ＣＨＤ１Ｌは、ＰＡＲＰ－１媒介ＤＮＡ修復に不可欠であることが知られており、ＤＮＡ損傷化学療法に対する抵抗性を引き起こす［Ａｈｅｌら、２００９；Ｔｓｕｄａら、２０１７］。ＣＨＤ１Ｌを過剰発現するように設計されたＤＬＤ１細胞（ＤＬＤ１過剰発現、ＯＥ）と比べて低レベルのＣＨＤ１Ｌ発現を有するＤＬＤ１ ＣＲＣ細胞（ＤＬＤ１空ベクター、ＥＶ）が使用された。図８Ａは、ＤＬＤ１（ＥＶ）とＤＬＤ１（ＯＥ）におけるＣＨＤ１Ｌの発現を、これらの細胞におけるα－チューブリンの対照発現を考慮して比較するウェスタンブロットである。図８Ｂは、ＤＬＤ１空ベクター細胞及びＤＬＤ１過剰発現細胞における化合物単独、ＳＮ３８単独、及びその２つの組合せの（ＤＭＳＯに対する）γ－Ｈ２ＡＸ強度のグラフを示す。化合物６単独は、有意なＤＮＡ損傷を誘導せず、ＣＨＤ１Ｌの発現が低いＤＬＤ１細胞においてＳＮ３８と相乗作用を示さない。このグラフは、ＣＨＤ１Ｌを過剰発現するＤＬＤ１細胞においてＤＮＡ損傷を誘導するＳＮ３８と相乗作用を示す、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤の「オンターゲット」効果を示す。 例示的なＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びイリノテカン（ＳＮ３８のプロドラッグ）を用いたシナジー研究。（図９Ａ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６及び６．３を用いたシナジー研究。（図９Ｂ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６．９を用いたシナジー研究。（図９Ｃ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６．１１を用いたシナジー研究。ＳＮ３８と６及び６．３の組合せは、結腸ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを死滅させる際にＳＮ３８単独よりそれぞれ５０倍及び１５０倍強力である。ＳＮ３８と６．９及び６．１１の組合せは共に、ＳＮ３８単独より１００倍超強力である。化合物６、６．３、６．９及び６．１１のそれぞれは、ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを死滅させるのにイリノテカン（及びＳＮ３８）と相乗作用を示す。 例示的なＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びイリノテカン（ＳＮ３８のプロドラッグ）を用いたシナジー研究。（図９Ａ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６及び６．３を用いたシナジー研究。（図９Ｂ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６．９を用いたシナジー研究。（図９Ｃ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６．１１を用いたシナジー研究。ＳＮ３８と６及び６．３の組合せは、結腸ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを死滅させる際にＳＮ３８単独よりそれぞれ５０倍及び１５０倍強力である。ＳＮ３８と６．９及び６．１１の組合せは共に、ＳＮ３８単独より１００倍超強力である。化合物６、６．３、６．９及び６．１１のそれぞれは、ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを死滅させるのにイリノテカン（及びＳＮ３８）と相乗作用を示す。 例示的なＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びイリノテカン（ＳＮ３８のプロドラッグ）を用いたシナジー研究。（図９Ａ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６及び６．３を用いたシナジー研究。（図９Ｂ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６．９を用いたシナジー研究。（図９Ｃ）ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける化合物６．１１を用いたシナジー研究。ＳＮ３８と６及び６．３の組合せは、結腸ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを死滅させる際にＳＮ３８単独よりそれぞれ５０倍及び１５０倍強力である。ＳＮ３８と６．９及び６．１１の組合せは共に、ＳＮ３８単独より１００倍超強力である。化合物６、６．３、６．９及び６．１１のそれぞれは、ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを死滅させるのにイリノテカン（及びＳＮ３８）と相乗作用を示す。 マウスにおいて化合物６をイリノテカンと組み合わせたインビボシナジー研究。図１０は、化合物６単独（２）、イリノテカン単独（３）又はそれらの組合せ（４）での処置の日数（２８日まで）の関数として、ＳＷ６２０腫瘍異種移植片の腫瘍容積（倍数）を対照（１）と比べて表すグラフを含む。データ統計学的有意性を示すデータ表も記載されている。イリノテカンと化合物６の組合せは、単剤処置群と比べて、処置２８日以内に結腸ＳＷ６２０腫瘍異種移植片を腫瘍容積がほとんどない状態に有意に阻害する。 ＣＨＤ１Ｌ阻害剤の化合物６とイリノテカンのインビボシナジーは、処置後に継続する。図１１は、イリノテカン単独（１）又は化合物６とイリノテカンの組合せ（２）での処置の日数（４１日まで）の関数として、ＳＷ６２０瘍異種移植片の腫瘍容積（倍数）を表すグラフを含む。データ統計学的有意性を示すデータ表も記載されている。イリノテカンと化合物６の組合せは、イリノテカン単独と比べて、最後の処置（２８日目）を過ぎても結腸ＳＷ６２０腫瘍を腫瘍容積がほとんどない状態に有意に阻害する。最後のイリノテカン単独処置の２週間以内に、腫瘍容積は、最後の処置の容積を超えて増大し、腫瘍再発を意味した。対照的に、組合せは、より小さい腫瘍容積を維持した。 化合物６単独及びイリノテカンとの組合せは、ビヒクル及びイリノテカン単独と比べて、担ＣＲＣ腫瘍マウスの生存を有意に増加させる。図１２は、化合物６単独（２）、イリノテカン単独（３）又はそれらの組合せ（４）での２８日目の最後の処置から５２日後までの時間の関数として、生存（％）を対照（１）と比べて表すグラフを含む。データ統計学的有意性を示すデータ表も記載されている。生存率は、単一投与化合物又は対照と比べて組合せ処置が有意に高かった。 マウスにおける化合物６．１１をイリノテカンと組み合わせたインビボシナジー研究。図１３は、化合物６．１１単独（２）、イリノテカン単独（３）又はそれらの組合せ（４）での処置の日数（２０日まで）の関数として、ＳＷ６２０腫瘍異種移植片の腫瘍容積（倍数）を対照（１）と比べて表すグラフを含む。データ統計学的有意性を示すデータ表も記載されている。イリノテカンと化合物６．１１の組合せは、イリノテカン単独と比べて、処置２０日以内に結腸ＳＷ６２０腫瘍異種移植片を腫瘍容積がほとんどない状態に有意に阻害する。 ＣＨＤ１Ｌ阻害剤の化合物６．１１とイリノテカンのインビボシナジーは、処置後に継続する。図１４は、イリノテカン単独（１）又は化合物６とイリノテカンの組合せ（２）での処置の日数（４１日まで）の関数として、ＳＷ６２０腫瘍異種移植片の腫瘍容積（倍数）を表すグラフを含む。処置を３３日目に止めた（Ｔｘ放出）。イリノテカンと化合物６．１１の組合せは、イリノテカン単独と比べて、最後の処置（３３日目）を過ぎても結腸直腸ＳＷ６２０腫瘍を有意に阻害する。 ＣＨＤ１Ｌ阻害剤６．１１とイリノテカンのインビボシナジーは、延命効果を有意に増加させる。化合物６．１１とイリノテカンの組合せは、ビヒクル及びイリノテカン単独と比べて、担ＣＲＣ腫瘍マウスの生存を有意に増加させる。図１５は、化合物６単独（２）、イリノテカン単独（３）又はそれらの組合せ（４）での３３日目の最後の処置から５０日後までの時間の関数として、生存（％）を対照（１）と比べて表すグラフを含む。データ統計学的有意性を示すデータ表も記載されている。生存率は、イリノテカン単独又は対照と比べて組合せ処置が有意に高かった。
［詳細な説明］
本発明は、一般に、ＣＲＣにおける不良な予後及び生存に関連している腫瘍原性因子としての比較的新しいがん遺伝子であるＣＨＤ１Ｌの特徴づけに関する。ＴＣＦ誘導性ＥＭＴ及び他の悪性特性を促進するのに必要とされるＴＣＦ転写複合体のＤＮＡ結合因子としてのＣＨＤ１Ｌの新しい生物学的機能が明らかになった。Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びジャーナルウェブサイト（ｍｃｔ．ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ）から入手可能なこの論文の補足情報は、本明細書において呈示された実験及びデータの一部分を記載し、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれる。
ＣＨＤ１Ｌは、多くの種類のがんで増幅し（Ｃｈｒ１ｑ２１）、過剰発現している［Ｍａら、２００８；Ｃｈｅｎｇら、２０１３］。ＣＨＤ１Ｌ過剰発現は、多数のがんにおいて不良な予後及び転移のマーカーとして特徴づけられた［Ｍａら、２００８；Ｃｈｅｎｇら、２００８；Ｈｙｅｏｎら、２０１３；Ｓｕら、２０１４］。ＣＨＤ１Ｌを悪性がんのがん遺伝子及びドライバーとして実証する収集された文献は説得力があるが、ＣＨＤ１ＬがＣＲＣにおける分子標的としての可能性をもつがん遺伝子であるという先の研究及び仮説の厳密さが、本明細書において試験される。コンピューターによるトランスクリプトーム解析において、５８５名のＣＲＣ患者の大規模コホートから１５年にわたって得られたデータが報告された［Ｍａｒｉｓａら、２０１３］。際立って、低ＣＨＤ１Ｌ患者が高ＣＨＤ１Ｌ患者より有意に長生きし、ＣＨＤ１Ｌ発現は不良な生存と相互関係があった。同じコホートを使用して、Ｍａｒｉｓａら、２０１３は、ＣＲＣの臨床層別化の改良のために異なる６種のサブタイプを同定し、ＣＨＤ１Ｌは、６種すべてのサブタイプで普遍的に発現し、ＣＲＣの治療標的としてのその可能性を示す。ＣＨＤ１Ｌは、腫瘍－リンパ節－転移とも相互関係があり、発現が増加すると、Ｎ０（領域への進展なし）からＮ３（遠位領域への進展あり）に進行する。ＵＣＣＣ患者コホート（ｎ＝２５）からのトランスクリプトームデータを分析し、ＣＨＤ１Ｌ発現は、ＩＶ期及びｍＣＲＣと有意に相互関係があることが見出された。文献報告書及び本明細書における研究から、ＣＨＤ１Ｌは、悪性ＣＲＣを促進するがん遺伝子であり、その高発現は、ＣＲＣ患者の不良な予後及び生存と相関することが明らかになる。
ＴＣＦ誘導性ＥＭＴ及び他の悪性特性を促進するのに必要とされるＴＣＦ転写複合体のＤＮＡ結合因子としてのＣＨＤ１Ｌの新しい生物学的機能が明らかにされる。ＨＴＳ創薬を使用して、ＰＤＴＯを含めて、ＣＲＣの細胞ベースのモデルにおいて良好な薬理学的有効性を示すＣＨＤ１Ｌの最初の公知阻害剤が同定され、特徴づけられた。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＣＨＤ１Ｌ媒介ＴＣＦ転写を効果的に予防し、ＥＭＴ並びにＣＳＣ幹細胞性及び浸潤能を含めて他の悪性特性の逆転を引き起こす。注目すべきことに、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤６は、ＥＭＴの逆転及び死受容体を通した切断型Ｅ－カドヘリン媒介外因性アポトーシスの誘導と一致する細胞死を誘導する能力を示す。さらに、化合物６は、ＳＮ３８（すなわち、イリノテカン）と相乗作用を示し、ＳＮ３８単独と比べて強力なＤＮＡ損傷誘導を示し、ＰＡＲＰ１／ＣＨＤ１Ｌ媒介ＤＮＡ修復の阻害と一致する。薬剤らしい物理化学的特性及び好都合なインビボＰＫ／ＰＤ性質を有し、急性の肝毒性のないＣＨＤ１Ｌ阻害剤が同定された。
本明細書において呈示されたデータに基づいて、ＣＨＤ１Ｌによって媒介され、ＴＣＦを誘導し、ＣＲＣ腫瘍進行及び転移に関与するＥＭＴの作用機序が呈示される（図５）。この機序において、ＴＣＦ複合体は、具体的にＣＨＤ１Ｌを動員して、転移遺伝子発現を動的に調節する。この機序の中心として、ＣＨＤ１Ｌは、ＰＡＲＰ１及びＴＣＦ４とのタンパク質相互作用を介してＴＣＦ複合体によって指示されるときヌクレオソームヒンダードＷＲＥに結合する。重要なことに、ＰＡＲＰ１は、自己阻害を開放するマクロドメイン結合によるＣＨＤ１Ｌの主要な細胞アクチベータとして特徴づけられる［Ｌｅｈｍａｎｎら、２０１７；Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋら、２００９］。さらに、ＰＡＲＰ１は、β－カテニン及びＴＣＦ４と相互作用を形成するＴＣＦ複合体の必要とされる成分である［Ｉｄｏｇａｗａら、２００５］。したがって、機序は、ＣＨＤ１ＬがＴＣＦ複合体によって動員され、ＰＡＲＰ１及びＴＣＦ４によって活性化されることを示す。一旦活性化すると、ＣＨＤ１Ｌは、ヌクレオソーム移動によってＷＲＥを露出させ、ＴＣＦ複合体のＷＲＥへの結合及びＥＭＴを促進する悪性遺伝子の転写を容易にする。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、ＷＲＥのＴＣＦ複合体への露出を予防するＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ活性を阻害することによって独自の作用機序を有し、ＥＭＴ、特にｍＣＲＣに関連しているＴＣＦ標的遺伝子の転写を阻害する。
本明細書に記載されるＣＨＤ１Ｌの低分子阻害剤が、ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ活性の阻害に基づいてスクリーンで同定された。同定されたいくつかの阻害剤は、薬剤らしい物理化学的特性及び好都合なインビボＰＫ／ＰＤ性質を示し、急性の肝毒性をもたない。そのような阻害剤は、ＣＨＤ１Ｌ誘導性のさまざまながんの中でもとりわけＣＲＣ及びｍＣＲＣ（転移性ＣＲＣ）に対する治療として効果的である。
ドラッガビリティの周知のアセスメント方法を使用して、本発明の活性化合物を所与の治療用途への適用についてさらにアセスすることができる。用語「ドラッガビリティ」は、予期された薬剤の投与、分布、代謝及び排泄についての医薬的性質に関する。ドラッガビリティは、当技術分野においてさまざまな形でアセスされる。例えば、インビボ吸収及び透過性に関連した分子における薬剤らしい特性を決定するための「Ｌｉｐｉｎｓｋｉ Ｒｕｌｅ ｏｆ ５」を適用することができる［Ｌｉｐｉｎｓｋｉら、２００１；Ｇｈｏｓｅら、１９９９］。
本発明は、組合せ療法の方法であって、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤の投与を、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤でない１種又は複数の抗がん剤の投与と組み合わせる、方法を提供する。実施形態において、他の抗がん剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、白金ベースの抗新生物剤、ＰＡＲＰ阻害剤、又はそのような阻害剤及び作用剤のうちの２種以上の組合せである。実施形態において、組合せ療法は、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤の投与をトポイソメラーゼ阻害剤と組み合わせる。実施形態において、組合せ療法は、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤の投与を白金ベースの抗新生物剤と組み合わせる。実施形態において、組合せ療法は、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤の投与をＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせる。実施形態において、組合せ療法は、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤とトポイソメラーゼ阻害剤との投与をＰＡＲＰ阻害剤の投与と組み合わせる。実施形態において、組合せ療法は、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤の投与を特定のがんを治療する化学療法と組み合わせる。本明細書の実施形態において、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤と他の抗新生物剤の組合せは、相まって相乗的活性を示す。
本明細書の実施形態において、ＣＤＨ１Ｌを採用する療法を、所与のがんに適した放射線療法と組み合わせることができる。
さまざまなＰＡＲＰ阻害剤が当技術分野において公知である［例えば、Ｒｏｕｌｅａｕら、２０１０；Ｙｉら、２０１９；Ｚｈｏｕら、２０２０；Ｗａｈｌｂｅｒｇら、２０１２；Ｄ’Ａｎｄｒｅａ、２０１８を参照のこと］。これらの参考文献のそれぞれが、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤の作用機序、ＰＡＲＰ阻害剤を使用して治療されるがん、及びＰＡＲＰ阻害剤に対する抵抗性の記載について参照により全体として本明細書に組み込まれる。本明細書の具体的な実施形態において、ＰＡＲＰ抵抗性がんは、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤とＰＡＲＰ阻害剤の組合せで治療される。
さまざまなトポイソメラーゼ阻害剤が当技術分野において公知であり、臨床的に採用された（例えば、Ｈｅｖｅｎｅｒ、２０１８）。この参考文献は、トポイソメラーゼ阻害剤のタイプ、特定のトポイソメラーゼ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害の機序、トポイソメラーゼ阻害剤を使用して治療されるがん及びトポイソメラーゼ阻害剤を使用する組合せ療法の記載について参照により全体として本明細書に組み込まれる。実施形態において、本明細書の方法において有用なトポイソメラーゼ阻害剤としては、カンプトテシン及びそのプロドラッグ、イリノテカン、トポテカン、ベロテカン、インドテカン、又はインジミテカンが挙げられる。実施形態において、本明細書の方法において有用なトポイソメラーゼ阻害剤としては、エトポシド又はテニポシドが挙げられる。実施形態において、本明細書の方法において有用なトポイソメラーゼ阻害剤としては、ナミテカン、シラテカン、ボサロキシン、アルドキソルビシン、ベカテカリン、又はエドテカリンが挙げられる。
さまざまな白金ベースの抗新生物剤（プラチンとも呼ばれる）は当技術分野において公知であり、臨床的に採用され、又は臨床試験で採用されている［例えば、Ｗｈｅａｔｅら、２０１０］。この参考文献は、白金ベースの抗新生物剤のタイプ、特定の白金ベースの抗新生物剤、そのような作用剤の作用機序、そのような作用剤を使用して治療されるがん、及び白金ベースの抗新生物剤を使用する組合せ療法の記載について参照により全体として本明細書に組み込まれる。実施形態において、本明細書の方法において有用な白金ベースの抗新生物剤としては、シスプラチン、カーボンプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、ロバプラチン、又はヘプタプラチンが挙げられる。実施形態において、白金ベースの抗新生物剤としては、サトラプラチン又はピコプラチンが挙げられる。白金ベースの抗新生物剤は、リポソームカプセル化されうる（例えば、リポプラチン（Ｌｙｐｏｐｌａｔｉｎ）（商標））か、又はナノポリマーに結合されうる（例えば、プロリンダク（ＰｒｏＬｉｎｄａｃ）（商標））。
さまざまなチミジル酸シンターゼ阻害剤は当技術分野において公知であり、特にＣＲＣの治療において臨床的に採用された［Ｐａｐａｍｉｃｈａｅｌ、２００９；Ｌｅｈｍａｎ、２００２］。チミジル酸シンターゼ阻害剤としては、葉酸類似体及びヌクレオチド類似体が挙げられる。具体的な実施形態において、チミジル酸シンターゼ阻害剤は、ラルチトレキセド、ペメトレキセド、ノラトレキセド又はＺＤ９３３１である。より具体的な実施形態において、チミジル酸シンターゼ阻害剤は、５－フルオロウラシル又はカペシタビンである。
本発明は、次式のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を提供する。
本発明の方法において有用な化合物としては、式Ｉ
Figure 2023520330000003
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、
Ｂ環は、１、２又は３個の５員又は６員環を有するヘテロアリール環又は環系であり、これらのいずれか２個又は３個は、縮合環とすることができ、環は、炭素環式、ヘテロ環式、アリール又はヘテロアリール環であり、環の少なくとも１個は、ヘテロアリールであり、
Ｂ環において、Ｘはそれぞれ、Ｎ又はＣＨから独立的に選択され、少なくとも１つのＸはＮであり、
ＲＰは、第一級若しくは第二級アミン基［－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）］であり、又は－（Ｍ）ｘ－Ｐ基であり、Ｐは、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）又はアリール若しくはヘテロアリール基であり、ｘは、０又は１であって、Ｍの有無を示し、Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－又は－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、
Ｙは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ１）－、－Ｎ（Ｒ１）ＣＯ－、－ＳＯ２Ｎ（Ｒ１）－、又は－Ｎ（Ｒ１）ＳＯ２－からなる群から選択される２価の原子又は基であり、
Ｌ１は、任意選択で置換されており、飽和であるか、又は二重結合を含む（ｃｉｓでも、ｔｒａｎｓでもよい）任意選択の１～４個の炭素のリンカーであり、ｘは、０又は１であって、Ｌ１の有無を示し、
Ａ環は、１、２又は３個の環を有する炭素環式若しくはヘテロ環式環又は環系であり、これらのうちの２個又は３個は縮合されていてもよく、各環は、３～１０個の炭素原子を有し、１～６個のヘテロ原子を任意選択で有し、各環は、任意選択で飽和、不飽和又は芳香族であり、
Ｚは、Ｒ’基で置換されている少なくとも１個の窒素を含む２価の基であり、
実施形態において、Ｚは、－Ｎ（Ｒ’）－、－ＣＯＮ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－、－ＣＳＮ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＳ－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯＮ（Ｒ’）－、－ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２－、－ＣＨ（ＣＦ３）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＨ（ＣＦ３）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＨ２ＣＯＮ（Ｒ’）ＣＨ２－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯＣＨ２Ｎ（Ｒ’）ＣＨ２－、
Figure 2023520330000004
から選択される２価の基であり、又は２価のＺ基は、少なくとも１個の窒素環員を有する５員若しくは６員のヘテロ環式環、例えば
Figure 2023520330000005
を含み、
Ｌ２は、任意選択で置換されており、飽和であるか、又は二重結合を含む（ｃｉｓでも、ｔｒａｎｓでもよい）任意選択の１～４個の炭素のリンカーであり、ｚは、０又は１であって、Ｌ１の有無を示し、
Ｒは、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ’はそれぞれ、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ１は、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ２及びＲ３は、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、或いは
Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員の飽和、部分不飽和又は芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
ＲＡ及びＲＢは、それぞれ指示されたＡ及びＢ環又は環系上の水素又は１～１０個の非水素置換基を表し、ＲＡ及びＲＢ置換基は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アミノ、一置換又は二置換アミノ（－ＮＲＣＲＤ）、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、アシル、ハロアルキル、－ＣＯＯＲＣ、－ＯＣＯＲＣ、－ＣＯＮＲＣＲＤ、－ＯＣＯＮＲＣＲＤ、－ＮＲＣＣＯＲＤ、－ＳＲＣ、－ＳＯＲＣ、－ＳＯ２ＲＣ、及び－ＳＯ２ＮＲＣＲＤから独立的に選択され、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、及びアシルは、任意選択で置換されており、
ＲＣ及びＲＤはそれぞれ、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、これらの基のそれぞれは、１個又は複数のハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール置換アルキル、又はヘテロシクリル置換アルキルで任意選択で置換されており、
ＲＨは、任意選択で置換されているアリール又はヘテロアリール基であり、
任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６アシル、－ＣＯＯＲＥ、－ＯＣＯＲＥ、－ＣＯＮＲＥＲＦ、－ＯＣＯＮＲＥＲＤ、－ＮＲＥＣＯＲＦ、－ＳＲＥ、－ＳＯＲＥ、－ＳＯ２ＲＥ、及び－ＳＯ２ＮＲＥＲＦでの置換を含み、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、及びアシルは、任意選択で置換されており、
ＲＥ及びＲＦはそれぞれ、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６アシルから選択され、これらの基のそれぞれは、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、及びＣ１～Ｃ６アシルで任意選択で置換されている］。
式Ｉの実施形態において、
Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ’はそれぞれ、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールから独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ１～Ｒ３は、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールから独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ１～Ｒ３の１つ又は複数は、シクロアルキル置換アルキル、例えばシクロプロピルメチル、シクロペンチルメチル、又はシクロヘキシルメチルであり、
Ｒは、水素又はＣ１～Ｃ３アルキルであり、
Ｒ’はそれぞれ、独立的に水素又はＣ１～Ｃ３アルキルであり、
Ｒ１は、水素又はＣ１～Ｃ３アルキルであり、
Ｒ２及びＲ３は、水素又はＣ１～Ｃ３アルキルから独立的に選択され、或いは
Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、５～７員の飽和ヘテロ環式環を形成する。
式Ｉの具体的な実施形態において、
Ａ環は、任意選択で置換されているフェニルであり、
Ａ環は、任意選択で置換されているナフチルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているピリジルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているピリミジルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているピラジニルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているトリアジニルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているキナゾリニルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているプテリジニルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているキノリニルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているイソキノリニルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているナフチリジニルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているピリドピリミジルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているピリミドピリジルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているピラノピリジルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているピラノピリミジルであり、
Ｂ環は、任意選択で置換されているプリンであり、
Ａ環は、任意選択で置換されているフェニルであり、かつＢ環は、任意選択で置換されているピリミジニルであり、又は
Ａ環は、任意選択で置換されているフェニルであり、かつＢ環は、任意選択で置換されているプテリジニルである。
好ましいＡ及びＢ環置換としては、１つ又は複数のＣ１～Ｃ３アルキル、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル、Ｃ４～Ｃ１０シクロアルキル置換アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ３アシル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、一置換若しくは二置換フェニル又は一置換若しくは二置換ベンジルが挙げられる。より具体的なＡ及びＢ環置換としては、メチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、メトキシ、エトキシ、フェニル、ベンジル、ハロフェニル、ハロベンジル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３－、ＨＯ－、ＣＦ３Ｏ－、ＣＨ３ＣＯ－及びＣＨＣＯが挙げられる。
より具体的な実施形態において、Ｂ環は、スキーム４に示された構造、式ＲＢＩを有し、Ｘ１及びＸ２は、ＣＨ及びＮから選択され、Ｘ１及びＸ２のうちの少なくとも一方はＮであり、Ｘ３～Ｘ６は、ＣＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｎ及びＮＨから選択され、Ｂ環は、Ｘ１～Ｘ６の選択に依存して、飽和、不飽和又は芳香族であり、ＲＢは、式Ｉに対して定義された任意選択の置換を表す。実施形態において、ＲＢは水素を表し、Ｂ環は非置換である。実施形態において、ＲＢは、１個又は複数のハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アシル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシを表す。実施形態において、ＲＢは、１個又は複数のＦ、Ｃｌ若しくはＢｒ、メチル、エチル、アセチル若しくはメトキシ、又はそれらの組合せを表す。式Ｉの実施形態において、Ｂ環は、スキーム４に示されたＲＢ２～ＲＢ５のいずれかから選択される。
式Ｉの実施形態において、
ｘは１であり、Ｌ１は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１又は２であり、
ｘは０であり、Ｌ１は存在せず、
ｙは１であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１又は２であり、
ｙは１であり、Ｌ２は－ＣＨ＝ＣＨ－であり、
ｙは１であり、Ｌ２はｔｒａｎｓ－ＣＨ＝ＣＨ－であり、
ｘとｙの両方が０であり、
ｘは１であり、ｙは０であり、Ｌ１は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１又は２であり、
ｙは１であり、ｘは０であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１又は２であり、或いは
ｘとｙの両方が１であり、Ｌ２とＬ１の両方が－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１又は２である。
式Ｉの実施形態において、
Ｙは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ１）－、又は－Ｎ（Ｒ１）ＣＯ－であり、
Ｙは、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ１）－、又は－Ｎ（Ｒ１）ＣＯ－であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル又はＣ１～Ｃ３ハロアルキル、特にＣ１～Ｃ３フルオロアルキルであり、
Ｒ１は、水素、メチル基又はＣＦ３－であり、
Ｒ１は水素であり、
Ｙは、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ１）－、又は－Ｎ（Ｒ１）ＣＯ－であり、Ｒ１は、水素、メチル又はＣＦ３－であり、
Ｙは、－ＮＨ－、－ＣＯＮＨ－、又は－ＮＨＣＯ－であり、
Ｙは－Ｎ（Ｒ１）－であり、Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル又はＣ１～Ｃ３ハロアルキル、特にＣ１～Ｃ３フルオロアルキルであり、或いは
Ｙは－Ｎ（Ｒ１）－であり、Ｒ１は、水素、メチル又はＣＦ３－である。
式Ｉの実施形態において、ｘとｙは共に０であり、Ｙは－Ｎ（Ｒ１）－である。式Ｉの実施形態において、ｘとｙは共に０であり、Ｙは－ＮＨ－である。
式Ｉの実施形態において、
Ｚは、－Ｎ（Ｒ’）－、－ＣＯＮ（Ｒ’）－、又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－であり、
Ｚは－ＣＨ（ＣＦ３）Ｎ（Ｒ’）－であり、
Ｚは－ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）－であり、
Ｚは－Ｎ（Ｒ’）ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、
Ｚは－Ｎ（Ｒ’）ＣＨ２ＣＯＮ（Ｒ’）ＣＨ２－であり、
Ｚは、
Figure 2023520330000006
であり、
Ｚは、
Figure 2023520330000007
であり、
Ｚは、
Figure 2023520330000008
であり、
Ｒ’は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル又はＣ１～Ｃ３ハロアルキル、特にＣ１～Ｃ３フルオロアルキルであり、
Ｒ’は、水素又はＣ１～Ｃ３アルキルであり、
Ｒ’は、水素、メチル又はＣＦ３－であり、
Ｒ’は、水素又はメチルであり、
Ｒ’は水素であり、
Ｚは、－Ｎ（Ｒ’）－、－ＣＯＮ（Ｒ’）－、又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－であり、Ｒ’は、水素又はメチルであり、
Ｚは、－ＣＯＮ（Ｒ’）－又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－であり、Ｒ’は、水素又はメチルであり、
Ｚは－Ｎ（Ｒ’）ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、Ｒ’は両方とも水素であり、
Ｚは、
Figure 2023520330000009
であり、Ｒ’は水素であり、或いは
Ｚは、
Figure 2023520330000010
であり、Ｒ’は水素である。
式Ｉの実施形態において、
ｘは０であり、
ｘは１であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１～３であり、
ｙは０であり、ｘは１であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１～３であり、
ｘは０であり、Ｚは、－Ｎ（Ｒ’）－、－ＣＯＮ（Ｒ’）－、又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－であり、
ｘは０であり、Ｚは、－Ｎ（Ｒ’）－、－ＣＯＮ（Ｒ’）－、又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－であり、Ｒ’は、水素又はメチルであり、
ｘは０であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、
ｘは０であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、Ｒ’は、水素又はメチルであり、
ｘは０であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、Ｒ’は水素であり、
ｘは１であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１～３であり、Ｚは、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ’）－、又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－であり、
ｘは１であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１～３であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、
ｘは１であり、Ｌ２は－ＣＨ２－であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、
ｘは１であり、Ｌ２は－ＣＨ２－ＣＨ２－であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、
ｘは、０又は１であり、Ｌ２が存在する場合それは、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－ＣＨ２－であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、
ｘは、０又は１であり、Ｌ２が存在する場合それは、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－ＣＨ２－であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、Ｒ’は水素であり、
ｙは０であり、ｘは、０又は１であり、Ｌ２が存在する場合それは、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－ＣＨ２－であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、Ｒ’は水素であり、
ｙは０であり、Ｙは－Ｎ（Ｒ１）－であり、ｘは、０又は１であり、Ｌ２が存在する場合それは、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－ＣＨ２－であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）－であり、或いは
ｙは０であり、Ｙは－Ｎ（Ｒ１）－であり、Ｒ１は水素であり、ｘは、０又は１であり、Ｌ２が存在する場合それは、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－ＣＨ２－であり、Ｚは－ＣＯＮ（Ｒ’）であり、Ｒ’は水素である。
式Ｉの実施形態において、
ＲＰは、少なくとも１個の窒素を含み、或いは
ＲＰが－（Ｍ）ｘ－Ｐであり、ｘ＝０であるとき、Ｐは、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であるか、又はＰは、少なくとも１個の環Ｎを有するヘテロ環式若しくはヘテロアリール基であり、或いは
ＲＰが－（Ｍ）ｘ－Ｐであり、ｘ＝１であり、Ｍ＝－（ＣＨ２）ｎであるとき、Ｐは、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であるか、又はＰは、少なくとも１個の環Ｎを有するヘテロ環式若しくはヘテロアリール基である。
式Ｉの実施形態において、ＲＰは、
－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）［Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－又は－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、Ｒは、水素又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基である］、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）［Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、Ｒは、水素又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基である］、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）［Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、Ｒは、水素又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基であり、任意選択の置換は、１個若しくは複数のハロゲン又は１個若しくは複数のＣ１～Ｃ３アルキル基での置換である］、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）、［Ｍは、任意選択で置換されている－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、Ｒは、水素又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基である］、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）［Ｍは、任意選択で置換されている－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、Ｒは、Ｈ又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基であり、任意選択の置換は、１個若しくは複数のハロゲン又は１個若しくは複数のＣ１～Ｃ３アルキル基での置換である］、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）［Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である］、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）［Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である］、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）［Ｍは－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である］、
－（Ｍ）－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）［Ｍは－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である］、
－（Ｍ）ｘ－Ｐ基［Ｐは、アリール又はヘテロアリール基であり、ｘは、０又は１であって、Ｍの有無を示し、Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－又は－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、Ｒは、Ｈ又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基である］、
－（Ｍ）－Ｐ基［Ｐは、アリール又はヘテロアリール基であり、Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－又は－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、Ｒは、Ｈ又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基である］、
－（Ｍ）－Ｐ基［Ｐは、アリール又はヘテロアリール基であり、Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、Ｒは、Ｈ又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基である］、
－（Ｍ）－Ｐ基［Ｐは、アリール又はヘテロアリール基であり、Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～３の（１と３を含む）整数であり、Ｒは、Ｈ又は１～３個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアルキル基である］、
であり、
Ｐは、任意選択で置換されているフェニル又はナフチルであり、
Ｐは、任意選択で置換されているフェニル又はナフチルであり、任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルでの置換であり、
Ｐは、５員若しくは６員環又は２個の縮合５員若しくは６員環を有する任意選択で置換されているヘテロアリール基であり、
Ｐは、５員若しくは６員環又は２個の縮合５員若しくは６員環を有し、１～３個の窒素環員を有する任意選択で置換されているヘテロアリール基であり、
ＲＰにおけるＲ２は、水素であり（すなわち、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は第一級アミン基である）、
ＲＰにおけるＲ２及びＲ３は共に、水素以外の基であり（すなわち、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は第二級アミン基である）、
Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、任意選択で置換されている３～８員シクロアルキル基であり、
Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、３～８員シクロアルキル基で置換されているＣ１～Ｃ３アルキル基であり、
Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、６～１２個の炭素原子を有する任意選択で置換されているアリール基であり、
Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、６～１２個の炭素原子及び１～３個のヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、又はＳ）を有する任意選択で置換されているヘテロアリール基であり、
Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、６～１２個の炭素原子及び１～３個の環窒素を有する任意選択で置換されているヘテロアリール基であり、
Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員の飽和、部分不飽和若しくは芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
ＲＰは－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であり、ｎは、１又は２であり、Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員の飽和、部分不飽和若しくは芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
ＲＰは、－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であり、ｎは、１又は２であり、Ｒは、水素又はメチルであり、Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員の飽和、部分不飽和若しくは芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
ＲＰは－Ｍ－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であり、Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員の飽和、部分不飽和若しくは芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、二重結合を含まない任意選択で置換されている５員～１０員のヘテロ環式環を形成し、
ＲＰは、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であり、Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、二重結合を含まない任意選択で置換されている５員～１０員のヘテロ環式環を形成し、
Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、１、２又は３個の二重結合を含む任意選択で置換されている５員～１０員のヘテロ環式環を形成し、
ＲＰは－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であり、Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、１、２又は３個の二重結合を含む任意選択で置換されている５員～１０員のヘテロ環式環を形成し、
Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員のヘテロアリール環を形成し、或いは
ＲＰは－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であり、Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員のヘテロアリール環を形成する。
式Ｉの具体的な実施形態において、ＲＰ又は－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、
スキーム２のＲＮ１～ＲＮ３１のいずれか１つ；
ＲＮ１；
ＲＮ３；
ＲＮ２若しくはＲＮ４；
ＲＮ５若しくはＲＮ６；
ＲＮ７若しくはＲＮ８；
ＲＮ９；
ＲＮ１０；
ＲＮ１１；
ＲＮ１２；
ＲＮ１３；
ＲＮ１４；
ＲＮ１５；
ＲＮ１６；
ＲＮ１７若しくはＲＮ１８；
ＲＮ１９若しくはＲＮ２０；
ＲＮ２１；
ＲＮ２２；
ＲＮ２３若しくはＲＮ２４
ＲＮ２５；
ＲＮ２６～ＲＮ２９；
ＲＮ３０；
ＲＮ３１；
ＲＮ１、ＲＮ２、ＲＮ３、ＲＮ４、ＲＮ１１、ＲＮ１３、若しくはＲＮ１４；又は
非置換ＲＮ１～ＲＮ３１である。
式Ｉの実施形態において、ＲＨは、
任意選択で置換されているフェニル；
非置換フェニル；
任意選択で置換されているナフチル；
非置換ナフチル；
任意選択で置換されているナフト－２－イル；
任意選択で置換されているナフト－１－イル；
ナフト－２－イル；
ナフト－１－イル；
任意選択で置換されているチオフェニル；
ハロゲン置換チオフェニル；
臭素置換チオフェニル
任意選択で置換されているチオフェン－２－イル；
ハロゲン置換チオフェン－２－イル；
臭素置換チオフェン－２－イル
４－ハロチオフェン－２－イル；
４－ブロモチオフェン－２－イル；
任意選択で置換されているフリル；
任意選択で置換されているフル－２－イル
任意選択で置換されているインドリル；
非置換インドリル；
インドール－３－イル；
インドール－２－イル；
インドール－１－イル；
任意選択で置換されているピリジノピロリル；
任意選択で置換されているピリジノピロール－２－イル；
任意選択で置換されているベンゾイミダゾリル；
Figure 2023520330000011
である。
具体的な実施形態において、ＲＨの任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキル、Ｃ４～Ｃ７シクロアルキルアルキル、ＯＨ、アミノ、Ｃ１～Ｃ６アシル、－ＣＯＯＲＥ、－ＯＣＯＲＥ、－ＣＯＮＲＥＲＦ、－ＯＣＯＮＲＥＲＤ、－ＮＲＥＣＯＲＦ、－ＳＲＥ、－ＳＯＲＥ、－ＳＯ２ＲＥ、及び－ＳＯ２ＮＲＥＲＦでの置換であり、ＲＥ及びＲｅは以上に定義した通りであり、特に水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、フェニル又はベンジルである。さらに詳細には、ＲＨの任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン（特に、Ｂｒ又はＣｌ）、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキル（特に、ＣＦ３－）での置換である。
実施形態において、ＲＨは、式
Figure 2023520330000012
を有する
［式中、
Ｘ１１は、ＣＨ、ＣＲＴ又はＮであり、ＲＴは、上記の任意選択のＲＨ環置換であり、Ｒ及びＲ’は、独立的に水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ４～Ｃ１０シクロアルキルアルキル基、アリール基、ヘテロシクリル基、又はヘテロアリール基であり、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されている］。具体的な実施形態において、ＲＴは、水素又はハロゲン、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、若しくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルのうちの１つ若しくは複数での置換であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルであり、Ｒは、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルである。
実施形態において、ＲＨは、式
Figure 2023520330000013
を有する
［式中、
Ｘ１１は、ＣＨ、ＣＲＴ又はＮであり、Ｘ１０は、ＣＨ、ＣＲＴ又はＮであり、ＲＴは、上記の任意選択のＲＨ環置換であり、Ｒ及びＲ’は、独立的に水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ４～Ｃ１０シクロアルキルアルキル基、アリール基、ヘテロシクリル基、又はヘテロアリール基であり、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されている］。具体的な実施形態において、ＲＴは、水素又はハロゲン、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、若しくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルのうちの１つ若しくは複数での置換であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルであり、Ｒは、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルである。
実施形態において、ＲＨは、スキーム３における次式から選択される：
Ｒ１２－３、Ｒ１２－４、Ｒ１２－５、Ｒ１２－７、Ｒ１２－８、Ｒ１２－１０、Ｒ１２－２３、Ｒ１２－２５、Ｒ１２－２７、Ｒ１２－２９、若しくはＲ１２－３１；又は
Ｒ１２－１２、Ｒ１２－１３、Ｒ２－１４５、Ｒ１２－１５、Ｒ１２－１６、Ｒ１２－１７、Ｒ１２－１８、Ｒ１２－１９、Ｒ１２－２０、Ｒ１２－２１、Ｒ１２－２１若しくはＲ１２－２２［ｐは０である］、又は
Ｒ１２－３３、Ｒ１２－３４、Ｒ１２－３５、Ｒ１２－３６、Ｒ１２－３７、Ｒ１２－３８、Ｒ１２－３９、Ｒ１２－４０、Ｒ１２－４１、Ｒ１２－４２［ｐは０である］、又は
Ｒ１２－７０若しくはＲ１２－７１［ｐは０である］。
実施形態において、ＲＨは、一般式：
Figure 2023520330000014
の５員ヘテロ環式基から選択される
［式中、
Ｔ、Ｕ、Ｖ、及びＷは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ’’）（Ｒ’’）、Ｃ（Ｒ’’）－／、Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ－／、Ｎ（Ｒ’’）、又はＮ－／から選択され、
基は、Ｔ、Ｕ、Ｖ、及びＷの選択に依存して１個又は２個の二重結合を含み、
ＲＨ基は、式Ｉの化合物における－（Ｌ２）ｙ－Ｚ－部分にＣ－／、Ｃ（Ｒ’’）－／、又はＮ－／を通して結合しており、
Ｒ’’は、Ｎ又はＣ上における任意選択の置換を示す］。
さらに詳細には、ＲＨは、式：
Figure 2023520330000015
の５員ヘテロ環式基から選択される
［式中、
Ｔは、Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ－／、若しくはＮであり、又は
Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ’’）（Ｒ’’）、Ｃ（Ｒ’’）－／、Ｎ（Ｒ’’）、若しくはＮ－／であり、
Ｖは、ＣＲ’’、Ｃ－／、若しくはＮであり、
Ｗは、ＣＲ’’、Ｃ－／、Ｎであり、ＲＨ基は、式Ｉの化合物における－（Ｌ２）ｙ－Ｚ－部分にＣ－／、Ｃ（Ｒ’’）－／、又はＮ－／を通して結合しており、
ＲＨ基は、式Ｉの化合物における－（Ｌ２）ｙ－Ｚ－部分にＣ－／、Ｃ（Ｒ’’）－／、又はＮ－／を通して結合しており、
Ｒ’’は、Ｎ又はＣ上における任意選択の置換を示す］。記号「－／」は、ヘテロ環式基を本明細書の化合物において結合させている１価の結合を示す。例えば、Ｃ－／は、ヘテロ環式基を本明細書の化合物に結合させている、環炭素からの１価の結合を示す。
実施形態において、ＲＨは、式：
Figure 2023520330000016
の縮合ヘテロ環式基である
［式中、
Ｕ、Ｖ及びＷは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｃ（Ｒ’’）（Ｒ’’）、Ｃ（Ｒ’’）－／、Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ－／、Ｎ（Ｒ’’）、又はＮ－／から選択され、
Ｔ’、Ｕ’、Ｖ’及びＷは、Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ－／、Ｎ（Ｒ’’）、又はＮ－／から選択され、
ＲＨ基は、式Ｉの化合物における－（Ｌ２）ｙ－Ｚ－部分に指示された環におけるＣ－／、Ｃ（Ｒ’’）－／、又はＮ－／を通して結合しており、
基は、Ｕ、Ｖ、及びＷの選択に依存して結合を含み、
Ｒ’’は、Ｎ又はＣ上における任意選択の置換を示す］。
さらに詳細には、ＲＨは、式：
Figure 2023520330000017
の縮合ヘテロ環式基である
［式中、
Ｕ及びＶは、Ｎ、Ｃ（Ｒ’’）、又はＣ－／から選択され、
Ｗは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ’’）（Ｒ’’）、Ｃ（Ｒ’’）－／、Ｎ（Ｒ’’）、又はＮ－／から選択され、
Ｔ’、Ｕ’、Ｖ’及びＷ’は、Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ－／、Ｎ（Ｒ’’）、又はＮ－／から選択され、
ＲＨ基は、式Ｉの化合物における－（Ｌ２）ｙ－Ｚ－部分に指示された環におけるＣ－／、Ｃ（Ｒ’’）－／、又はＮ－／を通して結合しており、
Ｒ’’は、Ｎ又はＣ上における任意選択の置換を示す］。
Ｒ’’はそれぞれ、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６アシル、－ＣＯＯＲＥ、－ＯＣＯＲＥ、－ＣＯＮＲＥＲＦ、－ＯＣＯＮＲＥＲＤ、－ＮＲＥＣＯＲＦ、－ＳＲＥ、－ＳＯＲＥ、－ＳＯ２ＲＥ、及び－ＳＯ２ＮＲＥＲＦから独立的に選択され、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、及びアシルは、任意選択で置換されており、
ＲＥ及びＲＦはそれぞれ、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６アシルから選択され、これらの基のそれぞれは、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、及びＣ１～Ｃ６アシルで任意選択で置換されている。
より具体的な実施形態において、ＲＨは、
Figure 2023520330000018
のいずれか１つから選択される：
［式中、
ＲＴは、上記の任意選択のＲＨ環置換であり、Ｒ及びＲ’は、独立的に水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ４～Ｃ１０シクロアルキルアルキル基、アリール基、ヘテロシクリル基、又はヘテロアリール基であり、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されている］。具体的な実施形態において、ＲＴは、水素又はハロゲン、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、若しくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルの１つ若しくは複数での置換であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルであり、Ｒは、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルである。具体的な実施形態において、Ｒ及びＲ’は、独立的に水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル又はＣ４－Ｃ７シクロアルキルアルキルである。具体的な実施形態において、ＲＴは、水素又は１つのハロゲン、特にＢｒでの置換を表す。
実施形態において、ＲＨは、環中に１～３個の窒素、環中に１個若しくは２個の酸素、硫黄若しくは両方、又は環中に１個若しくは２個の窒素及び１個の酸素若しくは硫黄を有する、任意選択で置換されている６員ヘテロ環式又はヘテロアリール基であり、任意選択の置換は、式Ｉにあるように定義される。ヘテロ環式基は、不飽和、部分不飽和又はヘテロアリール基とすることができる。
実施形態において、ＲＨは、縮合環中に１～５個の窒素、縮合環中に１～３個の酸素、硫黄若しくは両方又は縮合環中に１～４個の窒素及び１個若しくは２個の酸素、硫黄若しくは両方を有する２個の縮合６員環を有する、任意選択で置換されている縮合ヘテロ環式又はヘテロアリール基であり、任意選択の置換は、式Ｉにあるように定義される。より具体的な実施形態において、縮合環は、縮合環中に１、２、３又は４個の窒素を有する。より具体的な実施形態において、縮合環は、縮合環中に１個又は２個の酸素又は硫黄を有する。より具体的な実施形態において、縮合環は、縮合環中に１個又は２個の窒素及び１個の酸素又は硫黄を有する。縮合ヘテロ環式基は、不飽和、部分不飽和又はヘテロアリール基とすることができる。
具体的な実施形態において、ＲＨ基は、フェニル、オキサジニル、ピリジニル、ピリミジニル、シンリイ、ピラニル、チアジニル、４Ｈ－ピラニル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、キナゾリニル、プテリジニル、プリニル及びクロマニルから選択され、ＲＨ基は、式Ｉの化合物における－（Ｌ２）ｙ－Ｚ－部分に利用可能ないずれの環位置でも結合している。具体的な実施形態において、ＲＨ基は、式Ｉの化合物における－（Ｌ２）ｙ－Ｚ－部分に環中の炭素で結合している。
式Ｉの具体的な実施形態において、－Ｚ－（Ｌ２）ｙ－ＲＨは、－ＮＨ－ＳＯ２－ＲＷ以外の基であり、ＲＷは、ｍｅｓ－トリメチルフェニル、４－メチルフェニル、４－トリフルオロメチルフェニル、ナフチル、２，３，４，５，－テトラメチルフェニル、４－メトキシフェニル、４－ｔｅｒｔ－ブチルフェニル、２，４－ジメトキシフェニル、２，５－ジメトキシフェニル又は４－フェノキシフェニルである。式Ｉの具体的な実施形態において、－Ｚ－（Ｌ２）ｙ－は、－ＮＲＸ－ＳＯ２－以外の部分であり、ＲＸは、Ｈ、水素、メチルアセテート、アセテート、アミノアセチル、４－ギ酸ベンジル、４－イソプロピルベンジル、４－クロロベンジル又は４－メトキシベンジルである。式Ｉの実施形態において、－Ｚ－は、－ＮＲＸ－ＳＯ２－以外であり、ＲＸは、Ｈ、水素、メチルアセテート、アセテート、アミノアセチル、４－ギ酸ベンジル、４－イソプロピルベンジル、４－クロロベンジル又は４－メトキシベンジルである。
式Ｉの実施形態において、ＲＨは、フェニル基又は任意選択で置換されているフェニル基以外である。式Ｉの実施形態において、ＲＨは、単一のハロゲン、特にＢｒで置換されているヘテロ環式基である。
式Ｉの実施形態において、ＲＰ又は－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、スキーム２に図示されている任意選択で置換されているアミン基ＲＮ１～ＲＮ３１である。基の例示的な任意選択の置換をスキーム２に図示する。図示されたＲ置換基は、利用可能ないずれの環位置にも配置されうる。スキーム２の部分において、好ましいアルキルは、Ｃ１～Ｃ３アルキルであり、アシルとしては、ホルミルが挙げられ、好ましいアシルは、Ｃ１～Ｃ６アシルであり、より好ましくはアセチルであり、ヒドロキシアルキルは、Ｃ１～Ｃ６ヒドロキシアルキルであり、好ましくは－ＣＨ２－ＣＨ２－ＯＨであり、アミン基にとって、好ましいアルキルは、Ｃ１～Ｃ３アルキルであり、－ＳＯ２アルキルにとって好ましいアルキルは、Ｃ１～Ｃ３アルキルであり、より好ましいのはメチルである。
式Ｉの具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ１である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ３である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、ＲＮ２又はＲＮ４である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、ＲＮ５又はＲＮ６である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、ＲＮ７又はＲＮ８である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ９である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ１０である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ１１である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ１２である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ１３である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ１４である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ１５である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ１６である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、ＲＮ１７又はＲＮ１８である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、ＲＮ１９又はＲＮ２０である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ２１である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ２２である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、ＲＮ２３又はＲＮ２４である。具体的な実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ２５である。実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、ＲＮ１、ＲＮ２、ＲＮ３、ＲＮ４、ＲＮ１１、ＲＮ１３、又はＲＮ１４である。実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）は、ＲＮ２６～ＲＮ２９である。実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ３０である。実施形態において、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）はＲＮ３１である。
式Ｉの実施形態において、ＲＨは、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－１～Ｒ１２－６９である。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－３５～Ｒ１２－４２である。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－４３～Ｒ１２－６９のいずれかである。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－４３～Ｒ１２－４５のいずれかである。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－４６～Ｒ１２－４８のいずれかである。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－４９～Ｒ１２－５１のいずれかである。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－５２～Ｒ１２－５４のいずれかである。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－５５～Ｒ１２－５８のいずれかである。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－５９～Ｒ１２－６２のいずれかである。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－６３～Ｒ１２－６６のいずれかである。実施形態において、ＲＨは、Ｒ１２－６７～Ｒ１２－６９のいずれかである。スキーム３の部分において、好ましいアルキル基は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、又はより好ましいＣ１～Ｃ３アルキル基であり、好ましいハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒであり、アシルとしては、ホルミルが挙げられ、好ましいアシルは、－ＣＯ－Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、より好ましいのはアセチルであり、フェニルは１個又は複数のハロゲン、アルキル又はアシルで任意選択で置換されている。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式ＩＩ：
Figure 2023520330000019
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、点線は、単結合又は二重結合を表す］。実施形態において、ｘは１であり、ｙは１である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ＲＰは－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）である。実施形態において、Ｌ１及びＬ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、独立的には１、２又は３である。実施形態において、ＲＨは、ヘテロ環式又はヘテロアリール基である。実施形態において、Ｙは、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ１）－、又は－Ｎ（Ｒ１）ＣＯ－である。実施形態において、Ｚは、－ＣＯＮ（Ｒ’）－又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－である。実施形態において、Ｒ’は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、ＲＡは、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル、メトキシ又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＨは、ＲＨ１～ＲＨ１２のいずれか１つである。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式ＩＩＩ：
Figure 2023520330000020
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、点線は、単結合又は二重結合を表す］。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ＲＰは－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ＲＨは、ヘテロシクリル又はヘテロアリール基である。実施形態において、Ｙは、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ１）－、又は－Ｎ（Ｒ１）ＣＯ－である。実施形態において、Ｚは、－ＣＯＮ（Ｒ’）－又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－である。実施形態において、Ｒ’は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、ＲＡは、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル、メトキシ又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＨは、ＲＨ１～ＲＨ１２のいずれか１つである。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式ＩＶ：
Figure 2023520330000021
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、点線は、単結合又は二重結合を表す］。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ＲＰは－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ＲＨは、ヘテロシクリル又はヘテロアリール基である。実施形態において、Ｒ１は水素である。実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｚは、－ＣＯＮ（Ｒ’）－又は－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－である。実施形態において、Ｒ’は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、ＲＡは、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル、メトキシ又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＨは、ＲＨ１～ＲＨ１２のいずれか１つである。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式Ｖ：
Figure 2023520330000022
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、点線は、単結合又は二重結合を表す］。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ＲＰは－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ＲＨは、ヘテロシクリル又はヘテロアリール基である。実施形態において、Ｒ１は水素である。実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒｓは、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、任意選択で置換されているＣ１～Ｃ３アルキル、又はアリールである。実施形態において、ＲＡは、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル、メトキシ又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＨは、ＲＨ１～ＲＨ１２のいずれか１つである。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式ＶＩ：
Figure 2023520330000023
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、点線は、単結合又は二重結合を表す］。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ｘは、１及び－Ｎ－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ＲＨは、ヘテロシクリル又はヘテロアリール基である。実施形態において、Ｒ１は水素である。実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒｓは、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、任意選択で置換されているＣ１～Ｃ３アルキル、又はアリールである。実施形態において、ＲＡは、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル、メトキシ又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＨは、ＲＨ１～ＲＨ１２のいずれか１つである。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式ＶＩＩ：
Figure 2023520330000024
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、点線は、単結合又は二重結合を表す］。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ｘは、１及び－Ｎ－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ＲＨは、ヘテロシクリル又はヘテロアリール基である。実施形態において、Ｒ１は水素である。実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒｓは、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、任意選択で置換されているＣ１～Ｃ３アルキル、又はアリールである。実施形態において、ＲＡは、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。実施形態において、Ｒ’は、水素、メチル、メトキシ又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＨは、ＲＨ１～ＲＨ１２のいずれか１つである。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式ＶＩＩＩ：
Figure 2023520330000025
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、点線は、単結合又は二重結合を表す］。Ｒ６～Ｒ９は、水素及び式Ｉにおいて定義されるＲＡ基から独立的に選択される。ＲＭは、縮合環上の任意選択の置換を表し、ＲＭは、式ＩにおけるＲＡの値をとる。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ｘは、１及び－Ｎ－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｘは０である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、Ｒ１は水素である。実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、任意選択で置換されているＣ１～Ｃ３アルキル、又はアリールから独立的に選択される。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９は、水素、ハロゲン Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから独立的に選択される。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９はすべて水素である。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＭは、１つ又は複数の水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、Ｃ４～Ｃ７シクロアルキルアルキル基又はＣ１～Ｃ３ハロアルキル基である。実施形態において、ＲＭは、１つ又は複数の水素、ハロゲン、特にＢｒ、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、ＲＭは水素である。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式ＩＸ：
Figure 2023520330000026
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、点線は、単結合又は二重結合を表す］。Ｒ６～Ｒ９は、水素及び式Ｉにおいて定義されるＲＡ基から独立的に選択され、ＲＭは、式Ｉにおいて定義される任意選択の置換を表す。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ｘは１であり、Ｍは－Ｎ－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｘは１であり、Ｍは－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｘは０である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、Ｒ１は水素である。実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、任意選択で置換されているＣ１～Ｃ３アルキル、又はアリールから独立的に選択される。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから独立的に選択される。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９はすべて水素である。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＭは、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル基又はＣ１～Ｃ３ハロアルキル基である。実施形態において、ＲＭは、水素、ハロゲン、特にＢｒ、メチル又はトリフルオロメチルである。
他の実施形態において、本発明は、式ＸＩ：
Figure 2023520330000027
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物を提供する
［式中、
Ｘはそれぞれ、Ｎ又はＣＨから独立的に選択され、少なくとも１つのＸはＮであり、
Ａ環は、３～１０個の炭素原子を有し、１～６個のヘテロ原子を任意選択で有し、任意選択で飽和、不飽和又は芳香族である、炭素環式又はヘテロ環式環であり、
Ｌ１は、任意選択で置換されている、任意選択の１～３個の炭素リンカーであり、ｘは、０又は１であって、Ｌ１の有無を示し、
Ｒ１は、水素、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクリル基、又はアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ２及びＲ３は、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール又はヘテロシクリルから独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、或いは
Ｒ２とＲ３は一緒になって、任意選択で置換されている５員～８員の飽和、部分不飽和又は芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール又はヘテロシクリルから独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、或いは
Ｒ４とＲ５は一緒になって、１個若しくは２個の二重結合を任意選択で含み、又は芳香族であり、１～３個のヘテロ原子を任意選択で含む、任意選択で置換されている５員又は６員環を形成し、
点線は、Ｒ４及びＲ５の選択に依存して単結合又は二重結合であり、
ＲＡは、水素又は指示された環上の１～１０個の置換基を表し、ＲＡ置換基は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アミノ、一置換若しくは二置換アミノ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、－ＯＲ１５、－ＣＯＲ１５、－ＣＯＯＲ１５、－ＯＣＯＲ１５、－ＣＯ－ＮＲ１６Ｒ１７、－ＯＣＯＮＲ１６Ｒ１７、－ＮＲ１６－ＣＯ－Ｒ１５、－ＳＲ１５、－ＳＯＲ１５、－ＳＯ２Ｒ１５、－ＳＯ２－ＮＲ１６Ｒ１７、Ｒ１０、－ＮＨ－ＣＯ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２、又は－ＮＨ－ＣＯ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２から独立的に選択され、Ｌ２は、任意選択の１～６個の炭素原子のリンカー基であり、そのリンカーは任意選択で置換されており、リンカーの１個又は２個の炭素は、Ｏ又はＳで任意選択で置き換えられ、ｙは、０又は１であって、Ｌ２の有無を示し、
Ｒ１０は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、又はアリールから選択され、これらの基のそれぞれは、１個又は複数のハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール置換アルキル、又はヘテロシクリル置換アルキルで任意選択で置換されており、
Ｒ１２は、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、若しくはアリールから選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、又はＲ１２は、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、又はアリールで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルであり、これらのそれぞれは、任意選択で置換されており、任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであり、
Ｒ１５はそれぞれ、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール又はヘテロシクリル、アリールアルキル（アリールで置換されているアルキル基）及びヘテロシクリルアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキルから独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ１６及びＲ１７はそれぞれ、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール又はヘテロシクリル、アリールアルキル（アリールで置換されているアルキル基）及びヘテロシクリルアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキルから独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、及びＣ６～Ｃ１２ヘテロシクリルでの置換を含む］。
実施形態において、化合物は、式ＸＩＩ：
Figure 2023520330000028
又はその塩若しくは溶媒和物を有する
［式中、変数は、式ＸＩに対して定義される通りである］。
実施形態において、化合物は、式ＸＩＩＩ：
Figure 2023520330000029
又はその塩若しくは溶媒和物を有する
［式中、変数は、式ＸＩにおいて定義される通りであり、
Ｙはそれぞれ、Ｎ又はＣＨから独立的に選択され、
ＲＢは、水素又は指示された環上の１～１０個の置換基を表し、ＲＡ置換基は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アミノ、一置換若しくは二置換アミノ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、－ＯＲ１５、－ＣＯＲ１５、－ＣＯＯＲ１５、－ＯＣＯＲ１５、－ＣＯ－ＮＲ１６Ｒ１７、－ＯＣＯＮＲ１６Ｒ１７、－ＮＲ１６－ＣＯ－Ｒ１５、－ＳＲ１５、－ＳＯＲ１５、－ＳＯ２Ｒ１５、－ＳＯ２－ＮＲ１６Ｒ１７、又は－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１０から独立的に選択され、Ｌ２は、任意選択の１～６個の炭素原子のリンカー基であり、そのリンカーは任意選択で置換されており、ｙは、０又は１であって、Ｌ２の有無を示す］。
実施形態において、化合物は、式ＸＩＶ又はＸＶ：
Figure 2023520330000030
又はその塩若しくは溶媒和物を有する
［式中、変数は、式ＸＩ、ＸＩＩ又はＸＩＩＩにおいて定義される通りである］。
実施形態において、化合物は、式ＸＶＩ又はＸＶＩＩ：
Figure 2023520330000031
又はその塩若しくは溶媒和物を有する
［式中、変数は、式ＸＩ又はＸＶにおいて定義される通りであり、
Ｒ１１及びＲ１２は、水素、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、又はヘテロシクリル基から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されている］。
実施形態において、化合物は、式ＸＶＩＩＩ：
Figure 2023520330000032
又はその塩（若しくは溶媒和物）を有する
［式中、
Ｒ１は、水素、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクリル基、又はアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており（置換を定義する必要がある）、
Ｒ２とＲ３は一緒になって、１個若しくは２個の二重結合を含むことができるか、又は芳香族とすることができる、任意選択で置換されている５員又は６員のヘテロ環式環を形成し、
Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、又はヘテロシクリル基から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、或いは
Ｒ４とＲ５は一緒になって、１個若しくは２個の二重結合を含むことができるか、又は芳香族とすることができる、任意選択で置換されている５員又は６員ヘテロ環式環を形成し、
点線は、Ｒ４及びＲ５の選択に依存して単結合又は二重結合であり、
Ｒ６～Ｒ９は、水素、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、又はヘテロシクリル基から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｌは、任意選択の１～６個の原子リンカー基であり、ｘは、１又は０であって、Ｌ基の有無を示し、
Ｒ１０は、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクリル基、又はアリール基から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されている］。
例えば、Ｌは、２～６個の原子リンカー基（例えば、－ＣＨ２－Ｏ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＯ－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＯ－、－ＣＨ２－ＣＯ－ＮＨ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯ－ＮＨ－）である。
実施形態において、化合物は、式ＸＩＸ：
Figure 2023520330000033
又はその塩（若しくは溶媒和物）を有する
［式中、
Ｒ１～Ｒ９は以上に定義した通りであり、点線は、Ｒ４及びＲ５の選択に依存している単結合又は二重結合を表し、
ｙは、０又は１～３に及ぶ（１と３を含む）整数であり、
Ｒ１０は、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクリル基、又はアリール基から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されている］。
実施形態において、ＣＤＨ１Ｌ阻害剤は、式ＸＸ：
Figure 2023520330000034
の化合物及びその塩又は溶媒和物である
［式中、Ｒ１～Ｒ９は、水素又は任意選択の置換基を表し、Ｒ１０は、効力に関連していると考えられる部分であり、ＲＮは、溶解度などの物理化学的特性に関連していると考えられる部分である］。実施形態において、Ｒ５は、代謝安定性に関連していると考えられる、水素以外の置換基である。具体的な実施形態において、Ｒ５は、ハロゲン、特にＦ又はＣｌ、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、特にメチル基である。実施形態において、Ｒ４は、水素以外の置換基であり、特にＣ１～Ｃ３アルキル基であり、さらに詳細にはメチル基である。具体的な実施形態において、Ｒ５はＦであり、Ｒ４はメチルである。実施形態において、Ｒ６～Ｒ９は、水素、Ｃ１～Ｃ３－アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、ホルミル、又はＣ１～Ｃ３アシルから選択される。実施形態において、Ｒ６～Ｒ９のうちの１つ又は２つは、水素以外の部分である。実施形態において、Ｒ６～Ｒ９のうちの１つは、ハロゲン、特にフッ素である。具体的な実施形態において、Ｒ６～Ｒ９のすべては、水素である。実施形態において、ＲＮは、アミノ部分－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）である。具体的な実施形態において、ＲＮは、任意選択で置換されているヘテロ環式基であり、別のヘテロ原子（Ｎ、Ｓ又はＯ）を任意選択で含む５員～７員環を有する。実施形態において、ＲＮは、任意選択で置換されているピロリジン－１－イル、ピペリジン－１－イル、アゼパン－１－イル、ピペラジン－１－イル、又はモルホリノである。実施形態において、ＲＮは、Ｃ１～Ｃ３アルキル、ホルミル、Ｃ１～Ｃ３アシル（特に、アセチル）、ヒドロキシル、ハロゲン（特に、Ｆ又はＣｌ）、ヒドロキシＣ１～Ｃ３アルキル（特に、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＯＨ）から選択される１つの置換基で置換されている。実施形態において、ＲＮは、非置換のピロリジン－１－イル、ピペリジン－１－イル、アゼパン－１－イル、ピペラジン－１－イル、又はモルホリノである。
実施形態において、Ｒ１０は、－ＮＲｙ－ＣＯ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２又は－ＣＯ－ＮＲｙ－－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２であり、ｙは、０又は１であって、任意選択の１～６個の炭素原子のリンカー基であるＬ２の有無を示し、そのリンカーは任意選択で置換されており、リンカーの１個又は２個の炭素は、Ｏ、ＮＨ、ＮＲｙ又はＳで任意選択で置き換えられ、Ｒｙは、水素又は１～３個の炭素のアルキルであり、Ｒ１２は、アリール基、シクロアルキル基、ヘテロ環式基、又はヘテロアリール基であり、これらのそれぞれは、任意選択で置換されている。実施形態において、ｙは１である。Ｌ２は－（ＣＨ２）ｐ－であり、ｐは、０～３である。実施形態において、Ｒ１２は、チオフェン－２－イル、チオフェン－３－イル、フラン－２－イル、フラン－３－イル、ピロール－２－イル、ピロール－３－イル、オキサゾール－４－イル、オキサゾール－５－イル、オキサゾール－２－イル、インドール－２－イル、インドール－３－イル、ベンゾフラン－２－イル、ベンゾフラン－３－イル、ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－イル、ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル、イソベンゾフラン－１－イル、イソインドル－１－イル、又はベンゾ［ｃ］チオフェン－１－イルである。実施形態において、Ｒ１は、水素又はメチルである。実施形態において、Ｒ１２は、チオフェン－２－イル、フラン－２－イル、ピロール－２－イル、オキサゾール－４－イル、インドール－２－イル、ベンゾフラン－２－イル、又はベンゾ［ｂ］チオフェン－２－イルである。実施形態において、Ｒ１２は、チオフェン－２－イル又はインドール－２－イルである。実施形態において、Ｒ１は、水素又はメチルである。
式ＸＸのより一般的な実施形態において、
Ｒ１は、水素、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクリル基、又はアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
ＲＮは－ＮＲ２Ｒ３であり、Ｒ２及びＲ３は、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール又はヘテロシクリルから独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、或いはＲ２とＲ３は一緒になって、任意選択で置換されている５員～８員の飽和、部分不飽和又は芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
Ｒ４～Ｒ９は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ又はジアルキル置換アミノ、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているシクロアルキル、任意選択で置換されているシクロアルケニル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロシクリル、－ＯＲ１５、－ＣＯＲ１５、－ＣＯＯＲ１５、－ＯＣＯＲ１５、－ＣＯ－ＮＲ１５Ｒ１６、－ＯＣＯＮＲ１５Ｒ１６、－ＮＲ１５－ＣＯ－Ｒ１６、－ＳＲ１５、－ＳＯＲ１５、－ＳＯ２Ｒ１５、及び－ＳＯ２－ＮＲ１５Ｒ１６から独立的に選択され、
Ｒ１０は、－ＮＲｙ－ＣＯ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２、－ＣＯ－ＮＲｙ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２であり、Ｌ２は、任意選択の１～６個の炭素原子のリンカー基であり、そのリンカーは任意選択で置換されており、リンカーの１個又は２個の炭素は、Ｏ又はＳで任意選択で置き換えられ、ｙは、０又は１であって、Ｌ２の有無を示し、
Ｒ１２は、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、又はアリールから選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、或いはＲ１２は、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、又はアリールで置換されているＣ１～Ｃ３アルキルであり、これらのそれぞれは、任意選択で置換されており、任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであり、
Ｒ１５及びＲ１６はそれぞれ、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール又はヘテロシクリル、アリールアルキル及びヘテロシクリルアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキルから独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ６～Ｃ１２ヘテロシクリル、－ＯＲ１７、－ＣＯＲ１７、－ＣＯＯＲ１７、－ＯＣＯＲ１７、－ＣＯ－ＮＲ１７Ｒ１８、－ＯＣＯＮＲ１７Ｒ１８、－ＮＲ１７－ＣＯ－Ｒ１８、－ＳＲ１７、－ＳＯＲ１７、－ＳＯ２Ｒ１７、及び－ＳＯ２－ＮＲ１７Ｒ１８での置換を含み、Ｒ１７及びＲ１８は、独立的に水素又はＣ１～Ｃ６アルキルである。
式ＸＸの実施形態において、ＲＮは、ＲＮ１～ＲＮ３１（スキーム２）のうちのいずれかから選択される、任意選択で置換されている環式アミン基である。基の例示的な任意選択の置換はスキーム２に図示されている。図示されたＲ置換基は、いずれか利用可能な環位置に配置されうる。スキーム２の部分において、好ましいアルキルは、Ｃ１～Ｃ３アルキルであり、アシルとしては、ホルミルが挙げられ、好ましいアシルは、Ｃ１～Ｃ６アシルであり、より好ましくはアセチルであり、ヒドロキシアルキルは、Ｃ１～Ｃ６ヒドロキシアルキルであり、好ましくは－ＣＨ２－ＣＨ２－ＯＨであり、アミン基にとって、好ましいアルキルは、Ｃ１～Ｃ３アルキルであり、－ＳＯ２アルキルにとって好ましいアルキルは、Ｃ１～Ｃ３アルキルであり、より好ましいのはメチルである。
式ＸＸの具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ１である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ３である。具体的な実施形態において、ＲＮは、ＲＮ２又はＲＮ４である。具体的な実施形態において、ＲＮは、ＲＮ５又はＲＮ６である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ７又はＲＮ８である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ９である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ１０である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ１１である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ１２である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ１３である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ１４である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ１５である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ１６である。具体的な実施形態において、ＲＮは、ＲＮ１７又はＲＮ１８である。具体的な実施形態において、ＲＮは、ＲＮ１９又はＲＮ２０である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ２１である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ２２である。具体的な実施形態において、ＲＮは、ＲＮ２３又はＲＮ２４である。具体的な実施形態において、ＲＮはＲＮ２５である。実施形態において、ＲＮはＲＮ１、ＲＮ２、ＲＮ３、ＲＮ４、ＲＮ１１、ＲＮ１３、又はＲＮ１４である。実施形態において、ＲＮは、ＲＮ２６～ＲＮ２９である。実施形態において、ＲＮはＲＮ３０である。実施形態において、ＲＮはＲＮ３１である。
式ＸＸの実施形態において、Ｒ１２は、任意選択で置換されているチエニル、チエニルメチル、フリル、フリルメチル、インドリル又はメチルインドリルである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－１～Ｒ１２－６９である。スキーム３の部分において、好ましいアルキル基は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、又はより好ましいＣ１～Ｃ３アルキル基であり、好ましいハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒであり、アシルとしては、ホルミルが挙げられ、好ましいアシルは、－ＣＯ－Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、より好ましいのはアセチルであり、フェニルは、１個又は複数のハロゲン、アルキル又はアシルで任意選択で置換されている。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－１～Ｒ１２－２２で置換されている、メチル、エチル基又はプロピルである。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－２である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－３である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－４である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－５である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－６である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－７である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－８である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－９である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１０である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１１である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１２である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１３である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１４である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１５である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１６である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１７である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１８である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－１９である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－２０である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－２１である。実施形態において、Ｒ１２はＲ１２－２２である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－２３～Ｒ１２－２６である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－２７～Ｒ１２－３０である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－３１～Ｒ１２－３４である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－３５～Ｒ１２－４２である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－４３～Ｒ１２－６９のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－４３～Ｒ１２－６９で置換されている、メチル、エチル基又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－４３～Ｒ１２－４５のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－４３～Ｒ１２－４５で置換されている、メチル、エチル基又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－４６～Ｒ１２－４８のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－４６～Ｒ１２－４８で置換されている、メチル、エチル基又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－４９～Ｒ１２－５１のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－４９～Ｒ１２－５１で置換されている、メチル、エチル基又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－５２～Ｒ１２－５４のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－５２～Ｒ１２－５４で置換されている、メチル、エチル基又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－５５～Ｒ１２－５８のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－５５～Ｒ１２－５８で置換されている、メチル、エチル基又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－５９～Ｒ１２－６２のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－５９～Ｒ１２－６２で置換されている、メチル、エチル基又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－６３～Ｒ１２－６６のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－６３～Ｒ１２－６６で置換されている、メチル、エチル基又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１２－６７～Ｒ１２－６９のいずれかである。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－６７～Ｒ１２－６９で置換されている、メチル、エチル又はプロピル基である。実施形態において、Ｒ１２は、スキーム３に図示された部分Ｒ１２－７０又はＲ１２－７１である。
本明細書の式ＸＸの実施形態において、ＲＮは、ＲＮ１～ＲＮ２５（スキーム２）のいずれかから選択される、任意選択で置換されている環式アミン基であり、Ｒ１２は、チエニル、チエニルメチル、フリル、フリルメチル、インドリル又はメチルインドリルである。式ＸＸの実施形態において、ＲＮは、ＲＮ１、ＲＮ２、ＲＮ３、ＲＮ４、ＲＮ１１、ＲＮ１３、ＲＮ１４又はＲＮ２５であり、Ｒ１２は、チエニル、チエニルメチル、フリル、フリルメチル、インドリル又はメチルインドリルである。実施形態において、Ｒ１０は－ＮＨＣＯＲ１２である。実施形態において、Ｒ１０は－ＣＯＮＨＲ１２である。本明細書の式ＸＸの実施形態において、Ｒ１０は－ＣＯ－ＮＨ－Ｒ１２であり、ＲＮは、ＲＮ１～ＲＮ２５のいずれか１つであり、Ｒ１２は、Ｒ１２－１～Ｒ１２－２２のいずれか１つである。本明細書の式ＸＸの実施形態において、Ｒ１０は－ＣＯ－ＮＨ－Ｒ１２であり、ＲＮは、ＲＮ１～ＲＮ２５のいずれか１つであり、Ｒ１２は、Ｒ１２－１～Ｒ１２－６９のいずれか１つである。
実施形態において、化合物は、式ＸＸＸ：
Figure 2023520330000035
又はその塩（若しくは溶媒和物）を有する
［式中、
Ｒ１は、水素、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクリル基、又はアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており（置換を定義する必要がある）、
Ｒ２とＲ３は一緒になって、１個若しくは２個の二重結合を含むことができるか、又は芳香族とすることができる、任意選択で置換されている５員又は６員ヘテロ環式環を形成し、
Ｒ６～Ｒ９は、水素、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、又はヘテロシクリル基から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｙは、０又は１～３に及ぶ（１と３を含む）整数であり、
Ｒ１０は、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクリル基、又はアリール基から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
Ｒ１１及びＲ１２は、水素、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、又はヘテロシクリル基から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されている］。実施形態において、Ｒ１０は、ＲＨ１～ＲＨ１２のいずれか１つである。
具体的な実施形態において、本明細書の方法において有用な化合物としては、式ＸＸＸＩ：
Figure 2023520330000036
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、Ｒ６～Ｒ９は、水素及び式Ｉにおいて定義されるＲＡ基から独立的に選択され、ＲＭは、縮合環上の任意選択の置換を表し、ＲＭは、式ＩにおけるＲＡの値を取り、Ｗ１は、Ｎ又はＣＨである］。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ｘは１であり、Ｍは－Ｎ－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｘは１であり、Ｍは－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｘは０である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、Ｒ１は水素である。実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、任意選択で置換されているＣ１～Ｃ３アルキル、又はアリールから独立的に選択される。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９は、水素、ハロゲンＣ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから独立的に選択される。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９はすべて水素である。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、Ｒ４とＲ５は一緒になって、飽和、部分不飽和又はヘテロ芳香族の、５員又は６員の炭素環式又はヘテロ環式環を形成する。実施形態において、ＲＭは、１つ又は複数の水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル基又はＣ１～Ｃ３ハロアルキル基である。実施形態において、ＲＭは、１つ又は複数の水素、ハロゲン、特にＢｒ、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、ＲＭは水素である。
実施形態において、本発明の方法において有用な化合物としては、式ＸＸＸＩＩ：
Figure 2023520330000037
の化合物又はそれらの塩若しくは溶媒和物が挙げられる
［式中、変数は、式Ｉに定義される通りであり、ＲＢは、式Ｉにおいて定義される任意選択の置換を表し、Ｒ６～Ｒ９は水素であるか、又は式ＩによるＲＡの値を取る］。
実施形態において、ｙは１である。実施形態において、ｙは０である。実施形態において、Ｘは両方とも窒素である。実施形態において、ｘは１であり、Ｍは－Ｎ－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｘは１であり、Ｍは－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、ｘは０である。実施形態において、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。実施形態において、Ｒ１は水素である。実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、Ｒ６～Ｒ９は、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、任意選択で置換されているＣ１～Ｃ３アルキル、又はアリールから独立的に選択される。実施形態において、Ｒ６～Ｒ９は、水素、ハロゲンＣ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、Ｃ１～Ｃ３アシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから独立的に選択される。実施形態において、Ｒ７～Ｒ９はすべて水素である。実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルから選択される。実施形態において、ＲＢは、１つ又は複数の水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３アルキル基又はＣ１～Ｃ３ハロアルキル基である。実施形態において、ＲＢは、１つ又は複数の水素、ハロゲン、特にＢｒ、メチル又はトリフルオロメチルである。実施形態において、ＲＢは水素である。実施形態において、ＲＨは、ヘテロシクリル又はヘテロアリール基である。実施形態において、ＲＨは、任意選択で置換されているナフチル、チオフェン、インドリル、又はピリジノピロリルである。
式ＸＸＸＶ～ＸＬＩＩの化合物は、本明細書の方法において有用である：
Figure 2023520330000038
Figure 2023520330000039
Figure 2023520330000040
Figure 2023520330000041
［式中、変数は、上記の式Ｉ～ＸＩＸに定義される通りであり、Ｘ５は、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒを含めてハロゲンであり、具体的な実施形態においてＢｒである］。式ＸＸＸＶ～ＸＬＩＩの具体的な実施形態において、ｙは０である。式ＸＸＸＶ～ＸＬＩＩの具体的な実施形態において、ｙは１であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、１、２又は３である。式ＸＸＸＶ～ＸＬＩＩの具体的な実施形態において、Ａ環はフェニル環であり、ＲＡは水素である。具体的な実施形態において、ＲＰは、ＲＮ－１～ＲＮ－３１のいずれか１つから選択される基である。具体的な実施形態において、式ＸＬＩＩのＢ環は、スキーム４に示す式ＲＢＩのＢ環である。より具体的な実施形態において、式ＸＬＩＩのＢ環は、スキーム４のＲＢ２～ＲＢ５のＢ環である。
本発明は、下記の式Ｉ～ＩＸ、ＸＩ～ＸＩＸ、ＸＸＸ～ＸＸＸＩＩ、ＸＸＸＶ～ＸＬＩＩ及び式ＸＸのいずれかの化合物のそれぞれの塩、特に薬学的に許容できる塩を提供する。本発明は、下記の式Ｉ～ＸＩＸ、ＸＸＸ～ＸＸＸＩＩ、ＸＸＸＶ、ＸＸＸＶ～ＸＬＩＩ及び式ＸＸのいずれかの化合物のそれぞれの溶媒和物及び塩、特に薬学的に許容できる溶媒和物及び塩を提供する。好ましい溶媒和物は水和物である。本発明は、本明細書における式のいずれか１つのいずれかの化合物を含む医薬組成物を提供する。
脂肪族化合物は、直鎖、分枝鎖、又は非芳香族環として結び合わされた炭素及び水素を含む有機化合物であり、単結合、二重結合、又は三重結合を含むことがある。脂肪族化合物は、芳香族化合物から区別される。本明細書では脂肪族基という用語は、芳香族でない、炭素及び水素を含む１価の基を指す。脂肪族基としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、及びシクロアルキニル、並びに他の脂肪族基で置換されている脂肪族基、例えばアルキル基で置換されているアルケニル基、シクロアルキル基で置換されているアルキル基が挙げられる。
アルキル又はアルキル基という用語は、直鎖又は分枝状の飽和炭化水素の１価の基を指す。アルキル基としては、直鎖及び分枝状のアルキル基が挙げられる。別段の指示がない限り、アルキル基は、１～８個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ８アルキル基）を有し、好ましいのは、１～６個の炭素原子を含むもの（Ｃ１～Ｃ６アルキル基）であり、より好ましいのは、１～３個の炭素原子を含むもの（Ｃ１～Ｃ３アルキル基）である。アルキル基は、本明細書に記載される１つ又は複数の非水素置換基で任意選択で置換されている。例示的なアルキル基としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、さまざまな分枝状ペンチル、ｎ－ヘキシル、さまざまな分枝状ヘキシルが挙げられ、これらのすべては、任意選択で置換されており、置換は本明細書において他の箇所で定義されている。置換アルキル基としては、１個又は複数の水素が１個又は複数のフッ素原子、塩素原子、臭素原子及び／又はヨウ素原子で置き換えられたアルキル基など、完全ハロゲン化又は半ハロゲン化アルキル基が挙げられる。置換アルキル基としては、完全フッ素化又は半フッ素化アルキルが挙げられる。
シクロアルキル基は、少なくとも１個の３員以上の炭素環を有するアルキル基である。シクロアルキル基としては、３～１２員炭素環を有するものが挙げられる。シクロアルキル基としては、３～２０個の炭素原子を有するもの及び３～１２個の炭素原子を有するものが挙げられる。さらに詳細には、シクロアルキル基は、少なくとも１個の３～１０員炭素環を有することができる。シクロアルキル基は、環中に３～１０個の炭素を有する単独の炭素環を有することができる。シクロアルキル基は、任意選択で置換されている。シクロアルキル基は、６～１２個の炭素を有する二環式とすることができる。例示的なシクロアルキル基としては、とりわけシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル及びシクロデシル基が挙げられる。二環式アルキル基としては、縮合二環式基及び架橋二環式基が挙げられる。例示的なビシクロアルキル基としては、とりわけビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［４．４．０］デシル（デカリニル）、及びビシクロ［２．２．２］ヘプチル（ノルボルニル）が挙げられる。
シクロアルキルアルキル基は、本明細書に記載されるシクロアルキル基で置換されている本明細書に記載されるアルキル基である。さらに詳細には、アルキル基は、メチル又はエチル基であり、シクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、又はシクロヘキシル基である。シクロアルキル基は、任意選択で置換されている。具体的な実施形態において、任意選択の置換としては、１個又は複数のハロゲン、１～３個の炭素原子を有するアルキル基、１～３個の炭素原子を有するアルコキシ基、ヒドロキシル及びニトロ基での置換が挙げられる。
アルキレンという用語は、直鎖又は分枝状の飽和炭化水素の２価の基を指す。アルキレン基は、別段の指示がない限り、１～１２個の炭素原子を有することができる。アルキレン基としては、２～１２個、２～８個、２～６個又は２～４個の炭素原子を有するものが挙げられる。本明細書ではリンカー基（Ｌ１）としては、アルキレン基、特に非置換直鎖アルキレン基－（ＣＨ２）－が挙げられ、ｎは１～１２であるか、ｎは１～１０であるか、ｎは１～９であるか、ｎは１～８であるか、ｎは１～７であるか、ｎは１～６であるか、ｎは１～５であるか、ｎは１～４であるか、ｎは１～３であるか、ｎは２～１０であるか、ｎは２～９であるか、ｎは２～８であるか、ｎは２～７であるか、ｎは２～６であるか、ｎは２～５であるか、又はｎは２～４である。
アルコキシ基は、酸素に連結している、広範囲に論じられているアルキル基（Ｒアルキル－Ｏ－）である。アルコキシ基は１価である。
アルケニレン基は、１個又は複数の炭素－炭素二重結合を有する直鎖又は分枝状のアルキレン基の２価の基である。具体的な実施形態において、同じ炭素原子は、２個の二重結合の一部分でない。アルケニレン基において、アルキレン基の１つ又は複数のＣＨ２－ＣＨ２部分が、炭素－炭素二重結合で置き換えられている。具体的な実施形態において、アルケニレン基は、２～１２個の炭素原子を含み、又はより好ましくは３～１２個の炭素原子を含む。具体的な実施形態において、アルケニレン基は、１個又は２個の二重結合を含む。具体的な実施形態において、アルケニレン基は、１個又は２個のｔｒａｎｓ－二重結合を含む。具体的な実施形態において、アルケニレン基は、１個又は２個のｃｉｓ－二重結合を含む。例示的なアルケニレン基としては、
－（ＣＨ２）ｎ－ＣＨ＝ＣＨ－（ＣＨ２）ｎ－［ここで、ｎは１～４であり、より好ましくは２である］、及び
－（ＣＨ２）ｎ－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ＝ＣＨ－（ＣＨ２）ｎ－［ここで、ｎは１～４であり、より好ましくは１又は２である］
が挙げられる。
アルコキシアルキル基は、非隣接の内部－ＣＨ２－基の１個又は複数が－Ｏ－で置き換えられているアルキル基であり、そのような基は、エーテル基と呼ばれることもある。アルコキシアルキル基は１価である。これらの基は、直鎖又は分枝状とすることができるが、直鎖基が好ましい。アルコキシアルキル基としては、２～１２個の炭素原子及び１、２、３又は４個の酸素原子を有するものが挙げられる。さらに詳細には、アルコキシアルキル基としては、３若しくは４個の炭素及び１個の酸素を有するもの、又は４、５若しくは６個の炭素及び２個の酸素を有するものが挙げられる。基中の酸素はそれぞれ、基中の炭素に結合している。基は、基中の炭素への結合を介して分子に結合している。
アルコキシアルキレン基は、２価のアルコキシアルキル基である。この基は、内部－ＣＨ２－基の１個又は複数が酸素で置き換えられているアルキレン基であると記載することができる。これらの基は、直鎖又は分枝状とすることができるが、直鎖基が好ましい。アルコキシアルキレン基としては、２～１２個の炭素原子及び１、２、３又は４個の酸素原子を有するものが挙げられる。さらに詳細には、アルコキシアルキレン基としては、３個若しくは４個の炭素及び１個の酸素を有するもの、又は４、５若しくは６個の炭素及び２個の酸素を有するものが挙げられる。基中の酸素はそれぞれ、基中の炭素に結合している。基は、基中の炭素への結合を介して分子に結合している。本明細書ではリンカー基（Ｌ１）としては、アルコキシアルキレン基、特に非置換直鎖アルコキシアルキレン基が挙げられる。具体的なアルコキシアルキレン基としては、とりわけ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、及び－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－が挙げられる。
アシル基という用語は、－ＣＯ－Ｒ基を指し、Ｒは、本明細書に記載される、水素、アルキル又はアリール基である。
アリール基としては、１個又は複数の５員又は６員芳香族環を有する１価の基が挙げられる。アリール基は、１、２又は３個の６員芳香族環を含むことができる。アリール基は、２個以上の縮合芳香族環を含むことができる。アリール基は、２個又は３個の縮合芳香族環を含むことができる。アリール基は、１個又は複数の非水素置換基で任意選択で置換されている。置換アリール基としては、とりわけ、任意選択で置換されていてもよいアルキル又はアルケニル基で置換されているものが挙げられる。具体的なアリール基としては、フェニル基、ビフェニル基、及びナフチル基が挙げられ、これらのすべては、本明細書に記載されるように任意選択で置換されている。置換アリール基としては、１個又は複数の水素が１個又は複数のフッ素原子、塩素原子、臭素原子及び／又はヨウ素原子で置き換えられているアリール基など、完全ハロゲン化又は半ハロゲン化アリール基が挙げられる。置換アリール基としては、１個又は複数の水素が１個又は複数のフッ素原子で置き換えられているアリール基など、完全フッ素化又は半フッ素化アリール基が挙げられる。
アルキル基としては、アルキル基がアリール基で置換されているアリールアルキル基が挙げられる。アリールアルキル基としては、とりわけベンジル及びフェネチル基が挙げられる。アリールアルキル基は、本明細書に記載されるように任意選択で置換されている。置換アリールアルキル基としては、アリール基が１～５個の非水素置換基で置換されているもの、特に１、２又は３個の非水素置換基で置換されているものが挙げられる。有用な置換基としては、とりわけメチル、メトキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、及びニトロが挙げられる。特に有用な置換基は、１個又は複数のハロゲンである。具体的な置換基としては、Ｆ、Ｃｌ、及びニトロが挙げられる。
ヘテロ環式基は、１個又は複数の飽和又は不飽和炭素環を有する１価の基であり、環１個当たり１～３個のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ又はＳ）を含む。これらの基は、１、２又は３個の二重結合を任意選択で含む。原子価要件を満たすために、環原子は、１個又は複数の水素に結合していることがあるか、又は本明細書に記載されるように置換されていることがある。ヘテロ環式環中の１個又は複数の炭素は、－ＣＯ－基であってもよい。ヘテロ環式基としては、３～１２個の炭素原子及び１～６個のヘテロ原子を有するものが挙げられ、１個又は２個の炭素原子が－ＣＯ－基で置き換えられている。ヘテロ環式基としては、３～１２個又は３～１０個の環原子を有するものが挙げられ、これらの環原子のうち３個までが炭素以外のヘテロ原子とすることができる。ヘテロ環式基は、１個又は複数の環を含むことができ、これらの環のそれぞれは飽和又は不飽和である。ヘテロ環式基としては、二環式及び三環式基が挙げられる。好ましいヘテロ環式基は、５員又は６員環を有する。ヘテロ環式基は、本明細書に記載されるように任意選択で置換されている。具体的には、ヘテロ環式基は、１個又は複数のアルキル基で置換されていてもよい。ヘテロ環式基としては、１個又は２個の窒素及び１個又は２個の二重結合を含む５員及び６員環を有するものが挙げられる。ヘテロ環式基としては、酸素又は硫黄及び１個又は２個の二重結合を有する５員及び６員環を有するものが挙げられる。ヘテロ環式基としては、５員又は６員環及び異なる２個のヘテロ原子、例えばＮとＯ、ＯとＳ又はＮとＳを有するものが挙げられる。具体的なヘテロ環式基としては、とりわけピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、チエニル、モルホリニル、オキサゾリル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、インドリル、トリアゾリル、及びトリアジニル基が挙げられる。
ヘテロシクリルアルキル基は、１個又は複数のヘテロシクリル基で置換されているアルキル基であり、アルキル基は、追加の置換基を任意選択で有し、ヘテロシクリル基は、任意選択で置換されている。具体的な基は、ヘテロシクリル置換メチル又はエチル基である。
ヘテロアリール基は、１個又は複数の芳香族環を有する１価の基であり、少なくとも１個の環は、ヘテロ原子（非炭素環原子）を含む。ヘテロアリール基としては、１、２又は３個のヘテロ原子を有する１個又は２個のヘテロ芳香族環を有するものが挙げられ、１個の６員芳香族環を任意選択で有する。ヘテロアリール基は、５～２０個、５～１２個又は５～１０個の環原子を含むことができる。ヘテロアリール基としては、ヘテロ原子を含む１個の芳香族環及び炭素環原子を含む１個の芳香族環を有するものが挙げられる。ヘテロアリール基としては、１個又は複数の５員又は６員芳香族のヘテロ芳香族環及び１個又は複数の６員炭素芳香族環を有するものが挙げられる。ヘテロ芳香族環は、環中に１個又は複数のＮ、Ｏ、又はＳ原子を含むことができる。ヘテロ芳香族環としては、１、２又は３個のＮを有するもの、１個又は２個のＯを有するもの、及び１個又は２個のＳを有するもの、或いは１個又は２個又は３個のＮ、Ｏ又はＳの組合せを挙げることができる。具体的なヘテロアリール基としては、フリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、キノリニル、プリニル、インドリル基が挙げられる。具体的な実施形態において、ヘテロアリール基は、インドリル基であり、さらに詳細にはインドール－３－イル基である。
ヘテロ原子としては、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｐ又はＢが挙げられる。さらに詳細には、ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ又はＳである。具体的な実施形態において、１個又は複数のヘテロ原子は、芳香族又は炭素環式環中の炭素に対して置換されている。原子価を満たすために、そのような芳香族又は炭素環式環中のいずれかのヘテロ原子が、Ｈ又は置換基、例えばアルキル基又は他の置換基に結合していてもよい。
ヘテロアリールアルキル基は、１個又は複数のヘテロアリール基で置換されているアルキル基であり、アルキル基は、追加の置換基を任意選択で有し、アリール基は、任意選択で置換されている。具体的なアルキル基は、メチル及びエチル基である。
アミノ基という用語は、－Ｎ（Ｈ）２という種を指す。アルキルアミノという用語は、－ＮＨＲ”という種を指し、Ｒ”はアルキル基であり、特に１～３個の炭素原子を有するアルキル基である。ジアルキルアミノという用語は、－Ｎ（Ｒ”）２という種を指し、Ｒ”はそれぞれ、独立的にアルキル基、特に１～３個の炭素原子を有するアルキル基である。
本明細書における基は、任意選択で置換されている。最も一般的に、いずれのアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロ環式基も、１個又は複数のハロゲン、ヒドロキシル基、ニトロ基、シアノ基、イソシアノ基、オキソ基、チオキソ基、アジド基、シアネート基、イソシアネート基、アシル基、ハロアルキル基、アルキル基、アルケニル基若しくはアルキニル基（特に、１～４個の炭素を有するもの）、（ハロゲン置換されているもの又はアルキル置換されているものを含めて）フェニル若しくはベンジル基、アルコキシ、アルキルチオ、又はメルカプト（ＨＳ－）で置換されていてもよい。具体的な実施形態において、任意選択の置換は、１～１２個の非水素置換基での置換である。具体的な実施形態において、任意選択の置換は、１～６個の非水素置換基での置換である。具体的な実施形態において、任意選択の置換は、１～３個の非水素置換基での置換である。具体的な実施形態において、任意選択の置換基は、６個以下の炭素原子を含む。具体的な実施形態において、任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、オキソ基、チオキソ基、Ｃ１～Ｃ６非置換アルキル基又は非置換アリール基による置換である。オキソ基及びチオキソ基という用語は、炭素原子を＝Ｏ又は＝Ｓで置換して、それぞれ－ＣＯ－（カルボニル）基又は－ＣＳ－（チオカルボニル）基を形成するものを指す。
具体的な置換アルキル基としては、ハロアルキル基、特にトリハロメチル基、具体的にトリフルオロメチル基が挙げられる。具体的な置換アリール基としては、モノハロ、ジハロ、トリハロ、テトラハロ及びペンタハロ置換フェニル基；モノハロ、ジハロ、トリハロ、テトラハロ、ペンタハロ、ヘキサハロ及びヘプタハロ置換ナフタレン基；３－又は４－ハロ置換フェニル基、３－又は４－アルキル置換フェニル基、３－又は４－アルコキシ置換フェニル基、３－又は４－ＲＣＯ置換フェニル、５－又は６－ハロ置換ナフタレン基が挙げられる。さらに詳細には、置換アリール基としては、アセチルフェニル基、特に４－アセチルフェニル基；フルオロフェニル基、特に３－フルオロフェニル及び４－フルオロフェニル基；クロロフェニル基、特に３－クロロフェニル及び４－クロロフェニル基；メチルフェニル基、特に４－メチルフェニル基、並びにメトキシフェニル基、特に４－メトキシフェニル基が挙げられる。
環式基に適用される芳香族という用語は、おそらく酸素原子、硫黄原子又は窒素原子などの１個又は複数のヘテロ原子を通して環構造全体を囲むように共役している二重結合を含む環構造を指す。アリール基及びヘテロアリール基は、芳香族基の例である。芳香族基の共役系は、典型的に非混成ｐ軌道である、共役系を構成する電子軌道を占有する特徴的な数の電子、例えば６個又は１０個の電子を含む。
炭素環式という用語は、３～１２個の炭素原子を含み、単環式、二環式又は三環式とすることができる炭素環又は環系を有する１価の基を指す。環は、いずれのヘテロ原子も含まない。環は、不飽和、部分不飽和又は飽和とすることができる。
本明細書における式の化合物及び置換基は、任意選択で置換されている。置換基は、単一原子（例えば、ハロゲン原子）又は相互に共有結合している２個以上の原子の一群を指し、典型的に水素原子の代わりに、分子中の原子（複数可）に共有結合して、分子の原子（複数可）の原子価要件を満たす。置換基の例としては、とりわけアルキル基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アシルオキシ基、メルカプト基、及びアリール基が挙げられる。置換基は、それ自体置換されていてもよい。
置換された又は置換は、分子又は化学基若しくは部分の水素原子の、例えばハロゲン、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、トリフルオロメチル、アシルオキシ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、アリールオキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、モルホリノ、ピペリジノ、ピロリジン－１－イル、ピペラジン－１－イル、ニトロ、スルファト、又は他のＲ基であるが、これらに限定されない１個又は複数の追加の置換基による置き換えを指す。
炭素環式又はヘテロ環式環は、本明細書におけるアルキル基やアリール基など他の基について一般に記載されているように任意選択で置換されている。置換が存在する場合、典型的に環Ｃ、環Ｎ又は両方上の置換である。さらに、炭素環式及びヘテロ環式環は、環中に－ＣＯ－、－ＣＯ－Ｏ－、－ＣＳ－又は－ＣＳ－Ｏ－部分を任意選択で含むことができる。
本明細書において置換されている、すなわち１個又は複数の非水素置換基を含む化学基のいずれに関しても、そのような基は、立体的に非実用的及び／又は合成的に非実行可能である置換又は置換パターンをいずれも含まないことが理解される。さらに、本発明の化合物としては、これらの化合物の置換から生じるすべての立体化学的異性体が挙げられる。
開示された化合物の保護誘導体も企図される。開示された化合物について使用のためのさまざまな好適な保護基が、Ｇｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；第３版；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ社、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９に開示されている。一般に、保護基が、分子の残りの部分に影響を及ぼさない条件下で除去される。これらの方法は、当技術分野において周知であり、酸加水分解、水素化分解などが挙げられる。好ましい一方法は、ルイス酸性条件を使用したホスホン酸エステルの開裂、例えばＴＭＳ－Ｂｒ媒介エステル開裂などエステルの除去を行って、遊離ホスホネートを得るものである。別の好ましい方法は、好適な溶媒系、例えばアルコール、酢酸など又はそれらの混合物中でパラジウム炭素を利用した水素化分解によるベンジル基の除去など保護基の除去を行うものである。ｔ－ブトキシカルボニル保護基を含めてｔ－ブトキシベースの基は、ＨＣｌ又はトリフルオロ酢酸など無機酸又は有機酸を好適な溶媒系、例えば水、ジオキサン及び／又は塩化メチレン中で利用して除去することができる。アミノ及びヒドロキシ官能アミノを保護するのに適した別の例示的な保護基はトリチルである。他の通常の保護基は公知であり、好適な保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；第３版；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ社、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９を参考にして当業者が選択することができる。アミンが脱保護されるとき、得られた塩は、容易に中和されて、遊離アミンを生じることができる。同様に、ホスホン酸部分など酸部分が現れると、化合物は、酸化合物又はその塩として単離されることがある。本明細書における化合物の保護誘導体が、例えば本明細書において構造的に関連がある化合物の合成において採用されてもよい。
本発明は、ＴＣＦ誘導性ＥＭＴを標的とする新規治療方針である、腫瘍細胞不均一性、ＭＤＲ、及び転移を助長する方法を提供する。本発明者らの構造に基づく医薬品設計によって、実施形態においてＴＣＦ誘導性ＥＭＴを標的とする新規の強力なＣＨＤ１Ｌ阻害剤が生成された。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤によるＥＭＴの逆転は、細胞傷害性化学療法及び標的抗腫瘍薬並びに放射線療法と組み合わせて使用されるとき効果的な治療とすることができる。これらのＥＭＴを標的とする作用剤は、原発腫瘍と転移病巣の両方を臨床的に重要な療法に感作させ、腫瘍細胞転移を潜在的に阻害することもできる。
したがって、本発明の一態様は、多種多様な進行した固形腫瘍及び血液がんの転移を治療するか、又は予防するために使用することができるＣＨＤ１Ｌ阻害剤である。本発明のＣＨＤ１Ｌ阻害剤化合物すべての薬学的に許容できる塩、プロドラッグ、立体異性体、及び代謝物も企図される。
本発明は、本明細書における式の化合物の薬学的に使用できる溶媒和物をはっきりと含む。具体的には、有用な溶媒和物は水和物である。式Ｉの化合物又はそれらの塩は、溶媒和させる（例えば、水和させる）ことができる。溶媒和は、製造プロセスの過程において生じることがあるか、又は（例えば、本明細書における式の最初は無水の化合物の吸湿性の結果として（水和））起こりうる。
本発明の化合物は、プロドラッグの形をとりうる。本発明の化合物のプロドラッグは、本発明の方法において有用である。インビボで変換されて、本発明の化合物の生物学的に、薬学的に又は治療的に活性な形をもたらすいずれの化合物もプロドラッグである。プロドラッグのさまざまな例及び形は、当技術分野において周知である。プロドラッグは、対象にプロドラッグを投与した後にインビボでの加水分解、代謝などの生理作用を通して活性化合物に化学修飾される活性又は不活性の化合物である。本文書全体にわたって使用されるプロドラッグという用語は、薬理学的に許容できるエステル、アミド及びホスフェートなどの誘導体を意味し、誘導体の得られたインビボ生体内変換産物は、本明細書に記載される化合物において定義される活性薬剤である。プロドラッグは、好ましくは優れた水性溶解度を有し、バイオアベイラビリティが増加し、インビボで活性ＴＯＰ２Ａ阻害剤に容易に代謝される。本明細書に記載される化合物のプロドラッグは、化合物中に存在する官能基を修飾して、修飾されたものが、ルーチンの操作によってか又はインビボで親化合物に開裂されるように調製することができる。プロドラッグの作製及び使用に関与する適合性及び技法は、当業者に周知である。プロドラッグの例は、とりわけＤｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ社、１９８５）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、４２巻、３０９～３９６頁、Ｋ． Ｗｉｄｄｅｒら編（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ社、１９８５）；Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｋｒｏｓｇａａｒｄ－Ｌａｒｓｅｎ及びＨ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編、５章、「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」、Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、１１３～１９１頁、１９９１）；Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、８巻、１～３８頁（１９９２）；Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、７７巻、２８５頁（１９８８）；並びにＮｏｇｒａｄｙ （１９８５）、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ社、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、３８８～３９２頁）に出ている。
化合物又は組成物の投与及びそれを投与することは、化合物若しくはその塩、化合物のプロドラッグ、又は化合物を含む医薬組成物を提供することを意味すると理解されるべきである。化合物又は組成物は、別の人が患者に（例えば、静脈内）投与することができるか、又は対象が自己投与することができる（例えば、錠剤又はカプセル剤）。「患者」という用語は、哺乳類（例えば、ヒト並びにイヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ヒツジ、及びウシなどの家畜）を指す。本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤を代替の抗がん剤、抗悪性腫瘍剤又はがん細胞傷害性剤など他の作用剤と組み合わせて投与が企図される。そのような組合せ投与としては、効果的であり、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤と組み合わされる予定のいずれか公知の代替治療の投与を損なわないことがわかっているように、２種以上の活性成分を同時に投与すること、又は分、時間若しくは日単位で隔てられた時間に投与することが挙げられる。組合せ投与としては、やはりＣＨＤ１Ｌ阻害剤と組み合わされる予定の公知の代替治療の投与を損なわないように、同じ方法及び／若しくは患者の身体の部位における投与又は異なる方法より異なる部位における投与がさらに挙げられる。
本明細書における医薬組成物は、所与の患者への所与の形の投与に対して所望の生物学的活性を達成するのに効果的な量の指名された活性成分を含み、薬学的に許容できるキャリアを任意選択で含有する。医薬組成物は、ある量（例えば、単位投与量）の、開示された化合物のうちの１種又は複数をキャリア、希釈剤、及び／又はアジュバントを含めて１種又は複数の薬学的に許容できる非毒性添加剤と一緒に含むことができ、他の生物活性成分を任意選択で含むことができる。そのような医薬組成物は、標準医薬品製剤技法、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．社、Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．（第１９版）に開示されている技法によって調製することができる。
薬学的に許容できるキャリアは、製剤中の他の成分と相溶性があり、生物学的に許容できるキャリアである。キャリアは、固体でも、液体でもよい。現在のところ、好ましいキャリアは液体キャリアであると企図されている。キャリアとしては、可溶化剤、懸濁化剤、充填剤、流動化剤、圧縮助剤、結合剤、錠剤崩壊剤、又はカプセル封入材料としても作用することができる１種又は複数の物質を挙げることができる。液体キャリアは、溶液、懸濁液、乳濁液、シロップ及びエリキシルを調製する際に使用することができる。活性成分は、（適切な純度、例えばパイロジェンフリー、無菌などの）水、有機溶媒、両方の混合物、又は薬学的に許容できる油若しくは脂肪などの薬学的に許容できる液体キャリアに溶解することができるか、又は懸濁することができる。液体キャリアは、例えば可溶化剤、乳化剤、緩衝液、保存剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、粘稠化剤、着色剤、粘性調節剤、安定剤又は浸透圧調節剤などの他の好適な医薬品添加物を含むことができる。経口投与用の組成物は、液体の形でも、固体の形でもよい。
経口投与及び非経口投与用の液体キャリアの好適な例としては、適切な純度の水、水性溶液（特に添加剤、例えばセルロース誘導体を含む、カルボキシメチルセルロースナトリウム溶液）、（１価アルコール及び多価アルコール、例えばグリコールを含めて）アルコール、及びそれらの誘導体、及び油が挙げられる。非経口投与では、キャリアは、オレイン酸エチル及びミリスチン酸イソプロピルなどの油性エステルとすることもできる。無菌液体キャリアは、非経口投与用に無菌液体の形の組成物において使用される。加圧組成物用の液体キャリアは、ハロゲン化炭化水素でも、他の薬学的に許容できる噴射剤でもよい。無菌溶液又は懸濁液である液体医薬組成物は、例えば筋肉内注射、腹腔内注射又は皮下注射によって投与することができる。無菌溶液は、静脈内注射で投与することもできる。経口投与用の組成物は、液体の形でも、固体の形でもよい。キャリアは、クリーム及び軟膏、ペースト、並びにゲルの形もとることができる。クリーム及び軟膏は、水中油型又は油中水型の粘性液体又は半固体の乳濁液とすることができる。
「治療有効量」の開示された化合物は、抗腫瘍効果又は抗転移効果など所望の治療効果を達成するのに十分な用量の化合物である。いくつかの例では、治療有効量は、組織培養、インビトロ、又はインビボにおいてＴＣＦ転写及び／又は上皮－間葉移行（ＥＭＴ）をモジュレートすることが示されているものと同様の作用部位における組織中濃度を達成するのに十分な量である。例えば、対象が約０．１μｇ／体重１ｋｇ／日～約１０００ｍｇ／体重１ｋｇ／日の用量、例えば約１μｇ／体重１ｋｇ／日～約１０００μｇ／体重１ｋｇ／日の用量、例えば約５μｇ／体重１ｋｇ／日～約５００μｇ／体重１ｋｇ／日の用量を受けるような治療有効量の化合物である。
モジュレートするという用語は、生物学的機能、疾患の進行、又は状態の改善の量、程度、又は速度を変更する開示された化合物の能力を指す。例えば、モジュレートすることは、血管新生の増加若しくは減少を誘発し、ＴＣＦ転写及び／若しくはＥＭＴを阻害し、又は腫瘍転移若しくは腫瘍形成を阻害する化合物の能力を指すことができる。
治療は、疾患又は病態の徴候又は症状を、それが発症し始めた後に改善する治療的介入を指す。本明細書では、疾患又は病態に関連して改善することという用語は、治療のいずれか観察可能な有用性のある効果を指す。有用性のある効果は、例えば、影響を受けやすい対象における疾患の臨床症状の発症の遅延、疾患の一部若しくはすべての臨床症状の重症度の低下、疾患進行の減速、対象の健康全般若しくは幸福の改善によって、又は特定の疾患に特有の当技術分野において周知である他のパラメータによって証明されうる。疾患を治療することという語句は、例えば疾患のリスクがある対象又はがん若しくは損なわれた免疫系に伴う疾患などの疾患に罹っている対象における疾患又は状態の十分な発症を阻害することを含む。疾患又は状態を予防することは、病理若しくは状態を発症するリスクを低下させるか、又は病理若しくは状態の重症度を減少させる目的で、疾患の徴候を示さないか、又は疾患の初期徴候のみを示す対象に組成物を予防的に投与することを指す。
本出願全体にわたってすべての参考文献、例えば発行若しくは登録特許又は均等物を含めて特許文献；特許出願公報；及び非特許文献又は他の資料は、参照により個別に組み込まれるかのように、それらの全体として参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されているすべての特許及び刊行物は、本発明が属する技術分野の当業者の技術レベルを示唆する。本明細書に引用された文献は、参照によりそれらの全体として本明細書に組み込まれて、従来技術、場合によってはそれらの出願日について示し、この情報を本明細書において採用して、必要に応じて先行技術に存在する具体的な実施形態を除外できる（例えば、否定できる）ことが意図されている。例えば、化合物が特許請求されるとき、本明細書に開示された参考文献（特に、参照された特許文献）に開示されたいくつかの化合物を含めて、先行技術において公知の化合物は、請求項に含まれることを意図したものではないことを理解すべきである。
Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその学術論文の補足情報はそれぞれ、本明細書におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤の活性及び特性を作製し、アセスする際に有用な生物学的及び化学的方法の記載について参照により全体として本明細書に組み込まれる。
置換基の一群が本明細書に開示されているとき、群メンバーのいずれの異性体及び鏡像異性体も含めて群の個々のメンバーすべて及び部分群すべて、並びに置換基を使用して形成することができる化合物のクラスが別々に開示されていることは理解されている。化合物が特許請求されているとき、本明細書に開示された参考文献に開示された化合物を含めて、当技術分野において公知の化合物が含まれることを意図したものではないことを理解すべきである。Ｍａｒｋｕｓｈ群又は他のグルーピングが本明細書で使用されるとき、群の個々のメンバーすべて並びに群の考えうる組合せ及び部分組合せすべては、本発明に個別に含まれるものとする。
化合物の特定の異性体、鏡像異性体又はジアステレオマーが例えば式又は化学名において指定されていないように、化合物が本明細書に記載されているとき、その記載は、記載されている化合物のそれぞれの異性体及び鏡像異性体（例えば、ｃｉｓ／ｔｒａｎｓ異性体、Ｒ／Ｓ鏡像異性体）を個別に又はいずれかの組合せで含むものとする。その上、別段の指定がない限り、本明細書に開示される化合物のすべての同位体バリアントは、本発明に包含されるものとする。例えば、開示された分子中のいずれか１個又は複数の水素を、ジュウテリウム又はトリチウムで置き換えできることが理解される。分子の同位体バリアントは、一般に分子のアッセイ並びに分子又はその使用に関連した化学的及び生物学的研究における標準として有用である。放射性同位体を有するものを含めて同位体バリアントは、診断アッセイ及び治療学においても有用でありうる。そのような同位体バリアントを作製する方法は、当技術分野において公知である。
本明細書に開示される分子は、１個又は複数のイオン化可能な基［プロトンを除去することができる基（例えば、－ＣＯＯＨ）若しくはプロトンを付加することができる基（例えば、アミン）又は四級化することができる基（例えば、アミン）］を含むことができる。そのような分子及びそれらの塩の可能な限りのイオンの形は、本明細書における本発明に個別に含まれるものとする。本明細書における化合物の塩に関して、当業者は、多種多様な利用可能な対イオンのうちから所与の用途のために本発明の塩の調製に適した対イオンを選択することができる。具体的な用途では、塩の調製のための所与のアニオン又はカチオンの選択によって、その塩の溶解度の増加又は低下をもたらすことができる。
本発明のＣＨＤ１Ｌ阻害剤は市販されているか、或いは過度の実験なしに、本明細書に開示される方法によって調製することができるか、又は市販されているか、若しくは公知の方法によって作製することができる出発物質及び試薬を使用する、そのような方法のルーチンの適合によって調製することができる。合成される化合物に依存して、出発物質中の潜在的に反応性を示す基を望ましくない結合から保護する必要がありうると認識されている。さまざまな反応性基にとって有用な保護基は、例えばＷｕｔｔｓ及びＧｒｅｅｎｅ、２００７に記載されているように当技術分野において公知である。
本明細書における化合物は、塩、例えばアンモニウム塩の形をとることができ、アニオン又は四級化アンモニウム塩が選択される。塩は、当技術分野において公知であるように遊離塩基への酸の付加によって形成することができる。塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、又は酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ－アセチルシステインなどの有機酸を用いて形成することができる。
具体的な実施形態において、本発明の化合物は、塩の形をとってもよい、１個又は複数の負に帯電した基（遊離酸）を含むことができる。無機塩基を用いて形成される遊離酸の例示的な塩としては、アルカリ金属塩（例えば、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋）、アルカリ土類金属塩（例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋）、非毒性重金属塩並びにアンモニウム塩（ＮＨ４ ＋）及び置換アンモニウム塩（Ｎ（Ｒ’）４ ＋［ここで、Ｒ’は水素、アルキル、又は置換アルキル、すなわちメチル、エチル、又はヒドロキシエチルであり、具体的にはトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、及びトリエタノールアンモニウム塩が挙げられる）、リシンアルギニン、Ｎ－エチルピペリジン、ピペリジンなどのカチオンの形の塩が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物は、双性イオンの形で存在することもできる。本明細書における化合物は、薬学的に許容できる塩の形をとることができ、遊離塩基又は遊離酸の生物学的有用性及び特性を保持し、生物学的に又はその他の点で望ましくないことはない塩を指す。
記載され、特許請求された本発明の範囲は、化合物のラセミ体並びにそれらの個々の鏡像異性体及び非ラセミ混合物を包含する。本発明の化合物は、１個又は複数の不斉炭素原子を含むことができ、したがって化合物は、異なる立体異性体として存在することができる。化合物は、例えばラセミ体又は光学活性体とすることができる。光学活性体は、ラセミ体の分割によって又は不斉合成によって得ることができる。本発明の好ましい実施形態において、本発明の鏡像異性体は、＋（正）の比旋光度を示す。好ましくは、（＋）鏡像異性体は、対応する（－）鏡像異性体を実質的に含まない。したがって、対応する鏡像異性体を実質的に含まない鏡像異性体は、分離技法によって単離されるか、若しくは分離されるか、又は対応する鏡像異性体を含まずに調製される化合物を指す。「実質的に含まない」は、化合物が著しく大きい割合の１つの鏡像異性体で構成されていることを意味する。好ましい実施形態において、化合物は、少なくとも約９０重量％の好ましい鏡像異性体で構成されている。本発明の他の実施形態において、化合物は、少なくとも約９９重量％の好ましい鏡像異性体で構成されている。好ましい鏡像異性体は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）並びにキラルな塩の形成及び結晶化を含めて当業者に公知のいずれかの方法によってラセミ混合物から単離することができるか、又は本明細書に記載される方法によって調製することができる［例えば、Ｊａｃｑｕｅｓら、１９８１；Ｗｉｌｅｎら、１９７７；Ｅｌｉｅｌ、１９６２；Ｗｉｌｅｎ、１９７２を参照のこと］。
本発明の化合物及びそれらの塩は、それらの互変異性形として存在することができ、互変異性形では、水素原子が分子の他の部分に転位し、その結果分子の原子間の化学結合が再配置される。存在することができるすべての互変異性形が本発明の範囲内に含まれることを理解すべきである。
別段の記載がない限り、本明細書において記載されるか、又は例示される成分のあらゆる製剤、化合物又は組合せを使用して、本発明を実施することができる。化合物の具体的な名称は、当業者が同じ化合物に異なる名称を付けることができるのは公知であるので、例示であるものとする。化合物の特定の異性体又は鏡像異性体が例えば式又は化学名において指定されていないように、化合物が本明細書に記載されているとき、その記載は、記載されている化合物のそれぞれの異性体及び鏡像異性体を個別に又はいずれかの組合せで含むものとする。
当業者は、具体的に例示されているもの以外の方法、代替療法、出発物質、及び合成法を過度の実験に頼ることなく本発明の実施において採用できることを理解する。いずれかそのような方法、デバイスエレメント、出発物質、及び合成法の技術的に公知の機能的均等物はすべて、本発明に含まれるものとする。範囲、例えば温度範囲、時間範囲、又は組成範囲が本明細書に記載されているときはいつでも、所与の範囲に含まれているすべての中間範囲及び部分範囲、並びにすべての個々の値が本発明に含まれるものとする。
単数の用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上からそうでないことがはっきりと示されていない限り複数の指示物を含む。同様に、「又は」という単語は、文脈上からそうでないことがはっきりと示されていない限り「及び」を含むものとする。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」を意味する。また、「Ａ又はＢを含むこと」は、文脈上からそうでないことがはっきりと示されていない限りＡ若しくはＢ、又はＡ及びＢを含むことを意味する。化合物について記載されている分子量又は分子質量の値はすべて、近似値であり、説明のために記載されていることはさらに理解されるべきである。本明細書に記載される方法及び材料と同様又は同等なものを本発明の実施又は試験において使用することができるが、好適な方法及び材料を後述する。さらに、材料、方法、及び例は例示にすぎず、限定するものではない。
本明細書では「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含むこと（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、又は「～を特徴とする」と同義であり、包括的又はオープンエンドであり、追加の未記載のエレメント又は方法ステップを除外しない。本明細書では「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、クレーム構成要素に指定されていないいずれのエレメント、ステップ、又は材料も除外する。本明細書では「から本質的になる」は、請求項の基本的で新規の特性に実質的に影響しない材料又はステップを除外しない。特に組成物の成分の記載又はデバイスの素子の記載における「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語の本明細書における記載はいずれも、記載された成分又は素子から本質的になり、それらからなる組成物及び方法を包含するように理解される。本明細書に例示的に記載される本発明は、好適には、本明細書に具体的には開示されないエレメント（複数可）、制限（複数可）がいずれも存在しない場合に実施されうる。
特定の理論に拘泥されることを望むのではないが、本発明に関する根本原理の信念又は理解について本明細書に考察がありうる。いずれの機械論的な説明又は仮説の究極的な正確さにも関係なく、本発明の実施形態は、やはり実行可能であり、有用でありうると認識されている。
本明細書に採用されてきた用語及び表現は、記載の用語として使用されるのであって、限定の用語として使用されるのではなく、そのような用語及び表現の使用において、示され、記載された特徴の均等物又はそれらの一部をいずれも排除する意図はなく、特許請求された本発明の範囲内でさまざまな修正が可能であることが認識されている。したがって、本発明を好ましい実施形態及び任意選択の特徴によって具体的に開示してきたが、本明細書に開示された概念の修正及び変形を当業者が行うことができ、そのような修正及び変形は、本発明の範囲内であるとみなされることを理解すべきである。
［実施例］
実施例１：ＣＲＣ患者を対象としたＣＨＤ１Ｌの臨床病理学的特徴づけ
ＣＨＤ１Ｌ発現は、いくつかのがんにおいて予後不良と相互関係があるが、ＣＲＣにおけるＣＨＤ１Ｌの病理について限られた情報のみが公知である。この実施例には、ＣＲＣ患者におけるＣＨＤ１Ｌについて病原性特徴づけ及び病理の機序が記載されている。５８５名のＣＲＣ患者の臨床病理学的特性を、Ｃａｒｔｅｓ ｄ’Ｉｄｅｎｔｉｔｅ ｄｅｓ Ｔｕｍｅｕｒｓ（ＣＩＴ）プログラムによりＣＨＤ１Ｌ発現を基準にして分析した（ＧＥＯ： ＧＳＥ３９５８２）［Ｍａｒｉｓａら、２０１３］。これらの特性は、Ａｂｂｏｔｔら、２０２０、補足情報にまとめられている。
この実施例の追加のデータは、Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足情報に見られる。フォローアップ情報は、１５年にわたるＣＩＴコホートにおけるすべての患者に利用可能である。患者コホート全体で、高ＣＨＤ１Ｌ発現は、高ＣＨＤ１Ｌ患者のより低いＯＳ（Ｐ＝０．０１６７）及び８．８年の生存期間中央値（ＭＳ）に関連している。低ＣＨＤ１Ｌコホートでは、７２％（１１５／１５９）の患者が打ち切られ、２６％（４２／１５９）の患者が死亡したので、生存期間中央値に到達しなかった。患者データは、ＴＮＭ病期分類システムを使用して評価した。Ｉ期及びＩＶ期の患者は、それぞれ生存又は死亡の可能性が高いので、ＩＩ期及びＩＩＩ期のＣＲＣ患者の生存を評価した。ＩＩ期及びＩＩＩ期のＣＲＣでは、高ＣＨＤ１Ｌ発現は、より低いＯＳ（Ｐ＝０．０１９１）及び１１年のＭＳに関連し、低ＣＨＤ１Ｌコホートでは、やはり生存期間中央値に到達しなかった。生存は、ＣＲＣの各病期についてＣＨＤ１Ｌ発現を基準にして分析した。ＩＩ期の患者は、生存における有意差（Ｐ＝００３１９）を１１年のＭＳで示し、Ｉ期、ＩＩＩ期又はＩＶ期の患者については、有意差は認められなかった。ＣＨＤ１Ｌ発現の分析から、がん病期による発現において有意差が示された。Ｉ期及びＩＩ期の結腸直腸がん患者対ＩＩＩ期及びＩＶ期の患者を評価し、ＩＩＩ期及びＩＶ期対初期のコホートでＣＨＤ１Ｌ発現の有意な増加を示した（Ｐ＝０．００５１）。リンパ節転移を基準にしたＣＨＤ１Ｌ発現の分析は、ＣＨＤ１Ｌが領域リンパ節転移が増加している患者において過剰発現していることを示唆している（Ｎ０と比較して、Ｎ１ Ｐ＝０．０１２８、Ｎ２ Ｐ＝０．０５）。Ｎ３コホートについて、ＣＨＤ１Ｌ発現の傾向は同じであったが、入手可能な患者試料の数が限られていたので、有意性は決定されなかった。腫瘍サイズ、転移又は部位を基準にしたＣＨＤ１Ｌ発現における有意差は見出されなかった。
ＣＲＣ分子サブタイプにおけるＣＨＤ１Ｌの評価
ＣＨＤ１Ｌ発現とＣＲＣの６つの分子サブタイプ：Ｃ１（免疫系ダウン、ｎ＝１１６）、Ｃ２（ミスマッチ修復欠損、ｎ＝１０４）、Ｃ３（ＫＲＡＳ変異体、ｎ＝７５）、Ｃ４（ＣＳＣ、ｎ＝５９）、Ｃ５（活性化ＷＮＴ経路、ｎ＝１５２）、及びＣ６（染色体不安定性正常、ｎ＝６０）との関連性［Ｍａｒｉｓａら、２０１３］を調査した。６つの分子サブタイプの間でＣＨＤ１Ｌ発現に有意差がある（Ｐ＜０．００１）。ＣＨＤ１Ｌ発現は、Ｃ５、Ｃ４、及びＣ３において高く、Ｃ２及びＣ６において低い。Ｃ２サブタイプは、ＷＮＴシグナル伝達経路の減少に関連し、ミスマッチ修復が欠損している。Ｃ４及びＣ６サブタイプは、他のサブタイプと比べて不十分な無再発生存率に関連している。Ｃ４サブタイプは、ＣＳＣ幹細胞性の増加に関連し、Ｃ５サブタイプは、活性化ＷＮＴシグナル伝達及び脱調節ＥＭＴ経路に関連している。Ｃ２（ミスマッチ修復欠損）サブタイプにおけるＣＨＤ１Ｌ発現の低下は、ＤＮＡ損傷応答におけるその公知機能と矛盾しない［Ａｈｅｌら、２００９］。その上、ＣＨＤ１Ｌ発現は、ミスマッチ修復が欠損していない患者より欠損している患者において低かった（Ｐ＜０．００１）。ＣＨＤ１Ｌ発現は、ＫＲＡＳ変異をもつ患者においても、より高かった（Ｐ＝０．０４９）。Ｃ３、Ｃ４、及びＣ５分子サブタイプにおけるＣＨＤ１Ｌの発現によって、ＥＭＴ、ＣＳＣ幹細胞性、及びＷＮＴ／ＴＣＦ経路におけるＣＨＤ１Ｌ発現の機能のさらなる調査が促された。
ＣＨＤ１Ｌ発現はＷｎｔ／ＴＣＦ関連遺伝子と相関する
ＵＣＣＣ ＧＩ腫瘍組織バンクからのＣＲＣ患者のより小さいコホート（ｎ＝２６）を利用して、同様の傾向が認められ、より大きなＣＩＴコホートと同様に、ＣＨＤ１Ｌ発現が初期及び原発性ＣＲＣと比べて後期及び転移性ＣＲＣと有意に相関した（Ａｂｂｏｔｔら、２０２０、補足情報）。発現は、ＦＰＫＭ（フラグメント数／エクソン１キロベース／マッピングされた１００万フラグメント）として定量される。転移性腫瘍試料は、原発性腫瘍より有意に多いＣＨＤ１Ｌを有した。その上、ＣＨＤ１Ｌレベルは、ＩＩ／ＩＩＩ期患者コホートと比べてＩＶ期において高かった。スピアマンの相関を使用して、ＣＨＤ１Ｌ発現をＫＥＧＧ ＷＮＴ経路に関与する遺伝子で分析するとき、１２５個の遺伝子のうち６５個で有意な正相関が認められた。これらのうちに、ＩＩα型トポイソメラーゼ（ＴＯＰ２Ａ）（ｒ＝０．６５、Ｐ＝０．００４［Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］やＴＣＦ４（ｒ＝０．６１、Ｐ＝０．００１２）（Ａｂｂｏｔｔら、補足図２）などのＴＣＦ媒介転写に関与する確立した遺伝子があった。遺伝子は、Ｐ＜０．０５相関値を有した。転写物発現をＦＰＫＭ（フラグメント数／エクソン１キロベース／マッピングされた１００万フラグメント）によってＬｏｇ２正規化及び定量した。
有意な正相関が、公知のＣＳＣマーカーＣＤ４４（ｒ＝０．４３、Ｐ＝０．０３８）、ＬＧＲ５（ｒ＝０．５５、Ｐ＝０．００７５）及びＣＨＤ１Ｌの間で認められた。ＣＩＴコホートをＵＣＣＣコホートと比較するとき、有意な相関がＴＯＰ２Ａ（ｒ＝４０４ ０．１２７５、Ｐ＝０．００２０）及びＴＣＦ４（ｒ＝０．１０５０、Ｐ＝０．０１１）について認められた。この結果と一致して、ＴＯＰ２ＡはＴＣＦ複合体の必要とされる成分であり、ＣＲＣにおけるＥＭＴを促進することが示されてきた［Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。したがって、ＣＨＤ１Ｌは、ＣＲＣ患者におけるＴＣＦ転写及びＥＭＴに関与するようである。
実施例２：ＣＨＤ１ＬはＣＲＣにおけるＴＣＦ転写を媒介する
ＣＨＤ１ＬとＴＣＦ複合体メンバーとの相関性に基づいて、ＣＨＤ１Ｌには、ＴＣＦ転写において機械的役割がありうる。この役割をアセスするために、内因性ＣＨＤ１Ｌ発現が高いＳＷ６２０細胞株及び内因性ＣＨＤ１Ｌ発現が低いＤＬＤ１細胞株を利用した。この実施例の追加のデータは、Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足情報に見られる。小型ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を使用して、ＳＷ６２０細胞においてＣＨＤ１Ｌをノックダウンした（ＳＷ６２０ＣＨＤ１Ｌ－ＫＤ）。ＣＨＤ１Ｌは、ＤＬＤ１細胞に過剰発現した（ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ）。ＳＷ６２０ＣＨＤ１Ｌ－ＫＤ又はＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥにトランスフェクトされたＴＯＰｆｌａｓｈルシフェラーゼレポーター［Ｍｏｒｉｎら、１９９７；Ｚｈｏｕら、２０１６］を使用して、ＣＨＤ１Ｌの過剰発現がＴＣＦ転写の有意な増加（Ｐ＜０．０００１）をもたらしたことが決定された（Ａｂｂｏｔｔら、２０２０）。逆に、ＳＷ６２０ＣＨＤ１Ｌ－ＫＤ細胞は、ＴＣＦ転写において有意な減少をしめした（Ｐ＝０．０００６）。これらの結果は、ＣＨＤ１ＬがＴＣＦ転写に直接関与する潜在因子であることを示している。Ｍｏｒｉｎら、１９９７及びＺｈｏｕら、２０１６のそれぞれは、ＴＯＰｆｌａｓｈレポーター及びそれを採用するアッセイの記載について参照により全体として本明細書に組み込まれる。
ＣＨＤ１ＬはＴＣＦ転写複合体と直接に相互作用する
ＴＣＦ転写の活性化は、コリプレッサータンパク質のシェディング、コアクチベータタンパク質の結合、及びクロマチン空間配置のリモデリングを伴う動的プロセスである［Ｌｏｒｃｈら、２０１０、Ｓｈｉｔａｓｈｉｇｅら、２００８］。ＴＣＦ４を用いた共免疫沈降（Ｃｏ－ＩＰ）研究を行い、ＣＨＤ１ＬはＴＣＦ複合体に直接結合することが明らかになった［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。
ＣＨＤ１Ｌは、ＤＮＡ損傷応答においてＰＡＲＰ１との結合相手としてよく特徴づけられた［Ｐｉｎｅｓ、２０１２；Ａｈｅｌら、２００９］。ＰＡＲＰ１は、ＴＣＦ４及びβ－カテニンに結合しているＴＣＦ複合体の成分でもある［Ｉｄｏｇａｗａら、２００５］。本明細書における結果から、ＣＨＤ１ＬはおそらくＴＣＦ４とＰＡＲＰ１の間の相互作用を通じてＴＣＦ複合体に結合することが明らかになる。
ＣＨＤ１ＬをＴＣＦ複合体の成分としてさらに特徴づけるために、ＣＨＤ１ＬのＴＣＦ複合体ＷＮＴ応答エレメント（ＷＲＥ）へのクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）をＳＷ６２０細胞において行った［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。ＣＨＤ１Ｌは、ｃ－Ｍｙｃ、ビメンチン、スラッグ、ＬＥＦ１、及びＮ－カドヘリンＷＲＥにおいて富化され、ＣＨＤ１ＬがＴＣＦ複合体と直接機能することがさらに裏づけられた。まとめると、データは、ＣＨＤ１ＬをＴＣＦ転写のクリティカルな成分として意味づける。
ＣＨＤ１Ｌ媒介ＴＣＦ転写はＣＲＣにおけるＥＭＴ及びＣＳＣ幹細胞性を促進する
以前に、ＴＣＦ転写は、ＣＲＣにおけるＥＭＴの主要調節因子として特徴づけられた［Ｚｈｏｕら、２０１６］。さらに、ＣＨＤ１Ｌは、ＥＭＴエフェクター遺伝子のＷＲＥに限局する［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。したがって、ＳＷ６２０ＣＨＤ１Ｌ－ＫＤ及びＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞におけるバイオマーカー発現を測定して、ＣＨＤ１Ｌのノックダウン又は過剰発現がＥＭＴをモジュレートするかどうかを決定した。ＣＨＤ１Ｌのノックダウンは、ＥＭＴの逆転を誘導し、Ｅ－カドヘリン発現を増加させながらビメンチン及びスラッグを減少させる［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。逆に、ＥＭＴをＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞において誘導し、Ｅ－カドヘリンの減少並びにビメンチン及びスラッグ発現の増加によって証明される［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。これらの結果は、ＣＨＤ１ＬがＣＲＣにおける間葉表現型の促進に関与するＥＭＴエフェクター遺伝子であることを示している。ＥＭＴの特徴はＣＳＣ幹細胞性の増加である。
クローン原性コロニー形成アッセイ［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］を行って、ＣＨＤ１Ｌ発現の幹細胞性に対する影響を特徴づけた［Ｆｒａｎｋｅｎら、２００６］。ＣＳＣ幹細胞性は、コロニー形成によって測定して、ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞において増加し（Ｐ＝０．０００１）、ＳＷ６２０ＣＨＤ１Ｌ－ＫＤ細胞において低下した（Ｐ＝０．００２）。
実施例３：ＣＨＤ１Ｌの低分子阻害剤の同定
本明細書において実施例１及び２で確立されたように、ＣＨＤ１Ｌは、ＴＣＦ媒介ＥＭＴのドライバーである。これに基づいて、ＣＨＤ１Ｌの低分子阻害剤を同定するアッセイが本明細書に記載されている。創薬の目標は、ＣＨＤ１Ｌの触媒ドメインＡＴＰａｓｅ活性に依存している、ＣＨＤ１Ｌ ＤＮＡ移動又はＤＮＡとの相互作用を標的とすることであった［Ｒｙａｎ及びＯｗｅｎ－Ｈｕｇｈｅｓ、２０１１；Ｆｌａｕｓら、２０１１］。
ＣＨＤ１Ｌは、二葉ＡＴＰａｓｅドメインを含む、クロマチンリモデラーのＳＮＦ２（ショ糖非発酵２）ＡＴＰａｓｅスーパーファミリーに属する［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足的情報］。ＣＨＤ１Ｌは、マクロドメインとＡＴＰａｓｅドメインの間の相互作用を通して自己阻害状態を促進する、他のクロマチンリモデラーに比べて独特なマクロドメインも有する。［Ｌｅｈｍａｎｎら、２０１７；Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋら、２００９］。しかし、マクロドメインは、ＣＨＤ１Ｌの主要なアクチベータであるＰＡＲＰ１に結合し、自己阻害を軽減する［Ｌｅｈｍａｎｎら、２０１７；Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋら、２００９］。
Ｌｅｈｍａｎｎら、２０１７の方法を使用して、全長ＣＨＤ１Ｌ（ｆｌ－ＣＨＤ１Ｌ）及び触媒ＡＴＰａｓｅドメイン（ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ）を精製した。［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足情報］。Ａｂｂｏｔｔら、２０２０に例示されるように、タンパク質構築物をＣＨＤ１Ｌの組換え発現及び精製のために使用し、インビトロＨＴＳを行った。ＳＤＳ ｐａｇｅゲルは、精製されたｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ（６８ｋＤ）及びｆｌ－ＣＨＤ１Ｌ（１０１ｋＤ）を示した。ｃａｔ－ＣＨＤ１ｌ対ｆｌ－ＣＨＤ１Ｌの酵素反応速度論を比較した。ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌは、Ｌｅｈｍａｎら、２０１７からの報告と矛盾しない、ｆｌ－ＣＨＤ１Ｌと比べて頑強なＡＴＰａｓｅアッセイを提供する。したがって、ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅの直接的阻害剤を同定するために、ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ、ｃ－Ｍｙｃ ＤＮＡ、ＡＴＰ、及び無機ホスフェート（Ｐｉ）を結合させると蛍光を発するホスフェート結合タンパク質を含む、ＴＣＦ転写の文脈の中で例示的なハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）アッセイが記載されている。
このアッセイを検証し、パイロットスクリーニングを臨床的に重要なキナーゼ阻害剤に対して前もって形成した［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足的情報］。パイロットスクリーニングではヒットが見出されず、ＣＨＤ１Ｌはキナーゼ阻害剤の有用な標的でないことが明らかになった。一旦検証されると、１０ｍＭ ＥＤＴＡを陽性対照として用いて、１％ＤＭＳＯ中２０μＭでスクリーニングされた、Ｌｉｆｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｅｔからの２０，０００個の化合物を使用して、１次ＨＴＳを前もって形成した［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足情報］。スクリーニングは頑強な統計を提供し、平均Ｚ’因子値が６４プレートにわたって０．５７±０．０６であった。平均化合物活性は９２．３％±１７．８であった。その結果、ヒット限界は、３９％のＡＴＰａｓｅ活性における平均値からの標準偏差を３に設定した。この厳密なヒット限界によって、６４個のヒットが同定され、それらのうちの５３個のヒットが組換えＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅ活性に対して確認された。
実施例４：例示的阻害剤
ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅに対して５０％阻害より高いさまざまなファーマコホアを表す、確認された７個のヒット（化合物１～７、スキーム１を参照のこと）のサブセットを購入した。化合物１～７を、ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅに対する用量応答研究にかけ、これらのヒットを９００ｎＭ～５μＭで活性を有する強力なＣＨＤ１Ｌ阻害剤として検証した（図１Ａ）。追加の例示的化合物８～７３の構造をスキーム１に記載し、ここでＳＥＭは保護基トリメチルシリルエトキシメチルを表す。なお、スキーム１においていくつかの場合に、本明細書中の表及び図に又はＡｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足情報に採用されうる追加の化合物番号は括弧で記載されている。
ＴＯＰｆｌａｓｈレポーターシステムを使用して、化合物１～７を、ＨＣＴ１１６、ＳＷ６２０、及びＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞においてＴＣＦ転写を阻害するそれらの能力について試験した（図１Ｂ）。化合物１～３は、細胞において有意な活性を有することが示されなかった。化合物４は、ＴＣＦ活性の用量依存的阻害はないが、細胞において適度な活性を有することが示された。しかし、化合物５～７は、３つのＣＲＣ細胞株すべてにおいてＴＣＦ転写に対して優れた用量依存的活性を示す。注目すべきことに、ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞において、２μＭという低用量の５～７では、ＴＣＦ転写の阻害の低下が認められた。これは、細胞内ＣＨＤ１Ｌ標的結合の証拠である。
ＣＨＤ１Ｌ阻害剤はＣＲＣにおけるＥＭＴ及び悪性特性を逆転させる
ヒット５～７をＣＨＤ１Ｌ媒介ＴＣＦ転写に対して検証した後、これらの化合物の、ＣＲＣにおけるＥＭＴ及び他の悪性特性を逆転させる能力を評価した。Ｅ－カドヘリン及びビメンチンは、それぞれ上皮及び間葉表現型の対する推定バイオマーカーである［ＭｃＤｏｎａｌｄら、２０１５］。Ｅ－カドヘリンの損失及びビメンチンの増加は、予後不良の臨床バイオマーカーでもある［Ｙｕｎら、２０１４；Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎら、２０１２；Ｄｈａｎａｓｅｋａｒａｎら、２００１；Ｋａｓｈｉｗａｇｉら、２０１０；Ｔｏｉｙａｍａら、２０１３］。上記に鑑み、Ｅ－カドヘリン（ｐＣＤＨ１－ＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰ）及びビメンチン（ｐＣＤＨ１－ＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰ）に対するレンチウイルスプロモーター誘導性レポーターが開発され、それぞれＥ－カドヘリン及びビメンチンタンパク質発現を正確にレポートする。［Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。ＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰ又はＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰでトランスデュースされたＳＷ６２０細胞は、腫瘍オルガノイドとして７２時間培養され、直径６００μｍに到達した。腫瘍オルガノイドを化合物５～７でさらに７２時間処置して、プロモーター活性をモジュレートする５０％有効濃度（ＥＣ５０）を決定した。３Ｄ共焦点像５０７をベースとするハイコンテント分析アルゴリズムを使用して、プロモーター発現の変化を定量した（図２Ａ～２Ｂ）［Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。
化合物５～７は、１５．６±１．７μＭ（５）、４．７±１．５μＭ（６）、及び１２．８±１．３μＭ（７）のＥＣ５０値でビメンチンプロモーター活性を効果的に下方調節した。逆に、Ｅ－カドヘリンプロモーター活性は、１１．９±０．３μＭ（５）、１１．４±０．３μＭ（６）、及び２８±０．００３μＭ（７）のＥＣ５０値で上方調節された。ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドにおいて化合物６によるＥＭＴの逆転をＥＭＴレポーターアッセイによって測定して示す代表的画像が、Ａｂｂｏｔｔら、２０２０に示されている。これらの結果は、ＣＨＤ１Ｌの低分子阻害剤がＣＲＣにおいてＴＣＦ誘導性ＥＭＴを逆転させることを示している。
ＣＨＤ１Ｌ阻害剤がＥＭＴを逆転させることを確認するために、ＥＭＴの２つの追加の推定バイオマーカーであるスラッグ（間葉）及び閉鎖帯－１（ＺＯ－１、上皮）のタンパク質発現を評価した。スラッグ及びＺＯ－１の変化は、ＥＭＴの大基準とみなされる［Ｚｅｉｓｂｅｒｇ及びＮｅｉｌｓｏｎ、２００９］。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤で処置したＳＷ６２０腫瘍オルガノイドは、スラッグを下方調節し、ＺＯ－１を上方調節し、ＥＭＴの逆転をさらに示す。追加のＥＭＴバイオマーカーであるスラッグ及びＺＯ１のタンパク質発現変化を示すウェスタンブロット分析は、Ａｂｂｏｔｔら、２０２０に示されている。
ＥＭＴの特徴は、ＣＳＣ幹細胞性及び細胞浸潤の増加である。したがって、ＨＣＴ－１１６及びＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞における遊走及び浸潤を阻害する化合物５～７の能力を試験した。３つの化合物はすべて、ＣＳＣ幹細胞性の有意な阻害を示した（図２Ｃ）。しかし、化合物５及び６は、より強力な用量依存的阻害を示す。なお、ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞は、ＨＣＴ－１１６細胞より２倍多いコロニーを形成し、中等度のＣＨＤ１Ｌ発現を有する。この知見は、ＣＨＤ１Ｌの発がん性及び腫瘍原性と矛盾しない。次に、５０％マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）（登録商標）マトリックス（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）に包埋された均一なひっかき傷を有するＨＣＴ－１１６細胞を使用して、細胞を指示された濃度のＣＨＤ１Ｌ阻害剤で処置し、浸潤を７２時間にわたってモニターした。化合物５～７は、浸潤の用量依存的阻害を示し（図２Ｄ）、化合物６が最も強力な活性を示した。
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実施例５：ＤＮＡ損傷薬のＣＨＤ１Ｌ阻害有効性
ＣＨＤ１Ｌは、ＰＡＲＰ１媒介ＤＮＡ損傷応答修復において機能することが知られており、ＤＮＡ損傷化学療法に対する薬剤抵抗性の増加の機序である［Ｌｉら、２０１９；Ａｈｅｌら、２００９；Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋら、２００９］。例えば、肺がんにおけるシスプラチンに対する薬剤抵抗性が、ＣＨＤ１Ｌを過剰発現させる細胞において認められた。シスプラチンの有効性を、ＣＨＤ１Ｌノックダウン後に回復させた。［Ｌｉ Ｙ．ら、２０１９］。さらに、ＣＨＤ１Ｌ単独のノックダウンでは、ＤＮＡ損傷を増加させない。［Ａｈｅｌ Ｄら、２００９］。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、ＣＲＣ細胞において、空ベクター（ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＥＶ）及び過剰発現ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥでトランスデュースされた低ＣＨＤ１Ｌ発現ＤＬＤ１細胞に対するＤＮＡ損傷薬の有効性を増加させることができるかどうかを決定するために、化合物６を単剤として単独で、並びにＳＮ－３８（プロドラッグのイリノテカンの活性ファーマコホア）、オキサリプラチン、及びエトポシドと組み合わせて評価した。ＤＮＡ損傷をアセスするために、ＤＮＡ損傷化学療法のバイオマーカーであるＨ２ＡＸ（γ－Ｈ２ＡＸ）の免疫蛍光法によるリン酸化［Ａｈｅｌ Ｄら、２００９］を、Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足情報に示されたように測定した。化合物６単独では、細胞を１０μＭで処置し、γ－Ｈ２ＡＸ活性を測定すると、有意なＤＮＡ損傷を示さず、以前に報告されたＣＨＤ１Ｌノックダウン研究と矛盾しない［Ａｈｅｌ Ｄら、２００９］。しかし、ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞において化合物６を用いた組合せ治療は、エトポシド（１０μＭ）及びＳＮ－３８（１μＭ）と相乗作用を示し、エトポシド及びＳＮ－３８単独と比べてＤＮＡ損傷を有意に増加させた。ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＥＶ細胞において、エトポシドと化合物６の組合せのみが、有意なシナジーを示した。使用した実験条件下において、オキサリプラチンではシナジーが認められなかった。それにもかかわらず、ＦＯＬＦＩＲＩと呼ばれる、ＳＮ－３８（すなわち、イリノテカン）組合せ療法は、ＣＲＣの治療において標準治療である。したがって、化合物６をＳＮ－３８と組み合わせて生じるＤＮＡ損傷の向上は、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤がＣＲＣ標準治療であるＤＮＡ損傷化学療法の有効性を増加させることができるという仮説を裏づける。
実施例６：ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は細胞死の誘導に先立ってＥＭＴを逆転させる
ＣＨＤ１Ｌは、カスパーゼ依存性アポトーシスの活性化を阻害することによって抗アポトーシス活性を付与すると報告された［Ｌｉら、２０１３；Ｓｕｎら、２０１６］。その上、ＥＭＴの逆転又は阻害は、がん細胞のアポトーシス活性を回復させることが知られている［Ｌｕら、２０１４］。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が細胞死の誘導に先立ってＥＭＴを逆転させるかどうかを決定するために、ＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰレポーター活性によるＥ－カドヘリン発現をモニターし、セルトックス（商標） Ｇｒｅｅｎアッセイを使用して、細胞毒性を測定した。細胞をＣＨＤ１Ｌ阻害剤で７２時間処置し、２時間毎に画像処理した。化合物６では、ＤＭＳＯに対して、細胞毒性の誘導に先立ってＥ－カドヘリン発現の有意な増加が示された（図３Ａ）。
ＣＨＤ１Ｌ阻害剤がＣＲＣにおけるアポトーシスを誘導することができるかどうかを決定するために、ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドからのウェスタンブロットを行い、Ｅ－カドヘリンは５及び６での処置後に開裂されることが認められた［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。Ｅ－カドヘリンの開裂は、アポトーシスのマーカーである［Ｓｔｅｉｎｈｕｓｅｎら、２００１］。
強力な方のＣＨＤ１Ｌ阻害剤６は、ＤＭＳＯ対照に対して、開裂ＰＡＲＰ１、開裂カスパーゼ８、及び開裂カスパーゼ３の増加を示した［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。これらの結果は、化合物６が、死受容体を通したＥ－カドヘリン媒介アポトーシスと一致している外因性アポトーシスを誘導することを示している［Ｌｕら、２０１４］。
ＣＨＤ１Ｌ阻害剤のアポトーシス活性をさらに特徴づけるために、ＳＷ６２０細胞における１２時間にわたるアネキシン－Ｖ染色を検査した。化合物６は、ＤＭＳＯ単独に比べて有意なアポトーシスを誘導し、イリノテカンの活性代謝物である陽性対照ＳＮ－３８と同様な活性を有した（図３Ｂ）。
ＣＨＤ１Ｌ阻害剤は、患者由来腫瘍オルガノイド（ＰＤＴＯ）に効果的である。前臨床薬剤開発におけるＰＤＴＯの使用が、臨床的有効性のための予測インビトロ細胞モデルとして確立された。［Ｄｒｏｓｔ Ｊ及びＣｌｅｖｅｒｓ Ｈ、２０１８］。ＥＭＴを逆転させ、アポトーシスを誘導する化合物６の能力を細胞株ベースのモデルを使用して確立した後、化合物６の有効性を、コロラド大学がんセンター（ＵＣＣＣ）胃腸（ＧＩ）組織バンクから得られた患者試料ＣＲＣ１０２から生成されたＰＤＴＯにおいて評価した（図３Ｃ）。ＣＲＣ細胞株における結果と一致して、化合物６は、ＰＤＴＯにおいて強力な細胞毒性を１１．６±２μＭのＥＣ５０で示した。
実施例７：例示的な阻害剤化合物６のインビトロ及びインビボＰＫ、ＰＤ、及び肝毒性
化合物６の薬剤らしい潜在力及び特性をインシリコでアセスするために、インビトロ及びインビボＰＫ研究を実施し、マウス肝ミクロソームにおけるＣＬｏｇＰ、水性溶解度、安定性、及びＣＤ－１マウスにおけるＰＫをアセスした。
表１に、化合物６のインビボ及びインビトロ薬物動態パラメータの要約を記載する。コンセンサスＬｏｇＰ（ＣＬｏｇＰ）値は、ＳｗｉｓｓＡＤＭＥウェブツールを使用して得られた［Ｄａｉｎａら、２０１７］。化合物６を胸腺欠損ヌードマウスＱＤに５日間腹腔内注射することによって投与して、ＳＷ６２０異種移植腫瘍における蓄積を測定し（図４）、肝毒性の組織病理をアセスした。ビヒクル処置動物と化合物６処置動物における肝臓の代表的なＨ＆Ｅ染色顕微鏡写真部分（倍率５倍）が、Ａｂｂｏｔｔら、２０２０に示されている。画像は、正常な肝細胞索及び小葉構造を示し、肝細胞変性、ネクローシス、過形成、又は実質の炎症が認められない。化合物６は、肝代謝酵素に比較的安定な、親油性（ＣＬｏｇＰ＝３．２）と水性溶解度の優れたバランス及びＣＤ－１マウスに投与されたときの優れたＰＫ体内動態を有する。化合物６は、高薬物血漿中濃度ＣＭａｘ（約３０，０００ｎｇ／ｍＬ）及びＡＵＣ（約８０，０００ｎｇ／ｍＬ／時）に到達し、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与後の半減期（Ｔ１／２λ）が３時間と比較的長い。
初期の研究において、化合物６は、肝ミクロソームにおける半減期が２０分未満であった。異なる肝ミクロソーム調製物（データを示さず）で実施された、その後の類似したインビトロ肝ミクロソーム半減期実験において、化合物６は、より長い半減期６７分を示し、化合物６．３は、（６より）改善されたインビトロ半減期９８分を示し、化合物６．１１は、（６より）さらに改善されたインビトロ半減期１３０分を示した。化合物６を用いた初期の半減期研究は、異なる肝ミクロソーム調製物で実施し、後期のインビトロミクロソーム半減期実験に匹敵しなかった。第２の一連のインビトロ及びインビボ半減期測定の結果を、表２に記載し、示されたいくつかの追加の化合物のデータが含まれる。
最大耐量の６（５０ｍｇ／ｋｇ）を胸腺欠損ヌードマウスに１日１回、５日にわたって腹腔内投与することによって使用して、第２の急性インビボ実験を実施した。この実験の目標は、（１）化合物６が肝臓への急性毒性を引き起こすかどうかを決定し、（２）ＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰ ＳＷ６２０異種移植腫瘍に蓄積するかどうかを決定し、（３）ＰＤ効果を決定することであった。化合物６は、ＳＷ６２０腫瘍に１０，５３３±５，５７９ｎｇ／ｍＬの濃度（ｎ＝４）で蓄積する。予想されるように、組織／血漿における化合物６蓄積の比を比較するとき、肝臓において、腫瘍と比べて２．７倍多くの蓄積が認められた（図４）。しかし、投与用量及びスケジュールでの化合物６から生じる明らかな肝毒性はなかった（表３）。全体的に見て、ビヒクル処置マウスの肝臓又は化合物６処置マウスの肝臓の間に有意な組織学的差はなかった。認められた１次的組織学的変化は、ビヒクル処置動物と化合物６処置動物の両方において最小線維化及び肝臓被膜の炎症であった。これは、非常に低い程度の準臨床的腹膜炎を示唆し、腹腔内薬剤投与に付随することと一致している。
化合物６の腫瘍における蓄積に従って、腫瘍組織に対するＰＤ効果をウェスタンブロット分析によって測定し、間葉マーカーであるビメンチン、ビメンチンレポーター（ＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰ）、及びスラッグの有意な下方調節が示された［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。統計学的に有意ではないが、上皮マーカーＺＯ－１の上方調節及び開裂カスパーゼ３（アポトーシスの推定バイオマーカー）の誘導も認められた。まとめると、化合物６によるＰＤ効果のこれらの知見から、化合物６のインビトロ細胞ベース抗腫瘍活性と一致した、インビボでのＥＭＴの逆転及びアポトーシスが示される。化合物６は、肝毒性が認められることなく、良好なＰＫの薬剤らしい特性、及びインビボでＥＭＴを変更し、アポトーシスを誘導する能力を示す。
対照的に、化合物６．１１は、化合物６の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与後６時間よりはるかに長い半減期と比べて有意に長い半減期（Ｔ１／２λ）を示す。
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実施例８：化合物８の生物学的評価
化合物８を上記のいくつかの生物学的アッセイにおいて評価した。結果を図７Ａ～Ｅに提示する。化合物８は、化合物６と比べて、ＣＨＤ１Ｌ媒介ＴＣＦ転写の強力な用量依存的阻害（図７Ａ）を示す。同様に、化合物８はＥＭＴを逆転させる。これは、ビメンチンの下方調節及びＥ－カドヘリンプロモーター活性の上方調節によって証明される（それぞれ図７Ｂ及び図７Ｃ）。化合物８は、クローン原性コロニー形成を１０日にわたって有意に阻害する（図７Ｄ）。化合物８は、ＨＣＴ１１６浸潤能を４８時間にわたって有意に阻害する（図７Ｅ）。
実施例９：本明細書における実施例に適用された方法
追加の材料と方法
抗体。モノクローナルマウス抗ＴＣＦ４抗体をＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入し（カタログ番号０５－５１１）、１：１０００希釈物をウェスタンブロットに使用し、タンパク質３００μｇ当たり抗体２μｇをＩＰに使用した。モノクローナルウサギ抗ＣＨＤ１Ｌ抗体をＡｂｃａｍ社（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入し（カタログ番号ａｂ１９７０１９）、１：５０００希釈物をウェスタンブロットに使用し、タンパク質３００μｇ当たり抗体１．５μｇをＩＰに使用した。モノクローナルウサギ抗ビメンチン（カタログ番号５７４１）、抗スラッグ（カタログ番号９５８５）、抗Ｅ－カドヘリン（カタログ番号３１９５）、抗ＺＯ－１（カタログ番号８１９３）、抗ヒストンＨ３（カタログ番号４６２０）をＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社（Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入し、マウス抗α－チューブリン（カタログ番号３８７３）をＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社から購入し、１：１０００希釈物をウェスタンブロットに使用した。モノクローナルウサギ抗β－カテニン（カタログ番号９５８２）をＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社から購入し、１：１０００希釈物をウェスタンブロットに使用した。モノクローナルウサギ抗ホスホ－β－カテニンをＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社から購入した（カタログ番号５６５１）。モノクローナルウサギ抗ＴＣＦ４（カタログ番号２５６９）及び抗ヒストンＨ３（カタログ番号４６２０）をＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社から購入し、タンパク質１ｍｇ当たり抗体２μｇをＣｈＩＰに使用した。抗ウサギＩｇＧ ＨＲＰ結合二次抗体（カタログ番号７０７４）をＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社から購入し、１：３０００希釈物をウェスタンブロットに使用した。抗ヤギ及び抗マウスＩｇＧ ＨＲＰ結合二次抗体（カタログ番号８０５－０３５－１８０及び１１５－０３５－００３）は、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社（Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）からのものであり、１：１０，０００希釈物をウェスタンブロットに使用した。
ＣＨＤ１Ｌの臨床病理学的特徴づけ
ＣＩＴコホートからの５８５名のＣＲＣ患者のトランスクリプトーム発現データ（ＧＥＯ： ＧＳＥ３９５８２）をインシリコ検証に使用した（ＧＳＥ３９５８２）。［Ｍａｒｉｓａら、２０１３］。遺伝子発現分析をＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ（商標）ヒトゲノムＵ１３３ Ｐｌｕｓ ２．０ Ａｒｒａｙ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）によって行った。ロバストマルチアレイ分析（ＲＭＡ）をデータ前処理に使用し、ＣｏｍＢａｔ（経験ベイズ回帰）をバッチ補正に使用した。シグナル強度をｌｏｇ２正規化した。疾患特異的生存に基づくＣＲＣリスク層別化のＣＨＤ１Ｌカットオフは、受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線によって決定した。ＣＨＤ１Ｌ発現のカットオフを６．４５に設定した。ＯＳにおける差をカプラン－マイヤー法によって推定し、ログランク検定を使用して比較した。フィッシャーの正確検定をカテゴリー変数の比較に使用した。マン－ウィットニーＵ検定を２群の連続変数に使用した。２群より多い場合には、データをクラスカル－ウォリスの検定によって分析した。すべて両側Ｐ値では、未調整の有意水準０．０５を適用した。
ＣＨＤ１Ｌカットオフ及び臨床病理学的特性を多重ｃｏｘ回帰分析によって評価した。有意性決定のためにＷａｌｄフォワードアルゴリズムを使用して、単変量分析において重要な変数のみをｃｏｘ回帰モデルに統合した。２群より多くを含むすべての変数を分類し、共変数の段階的エントリー基準はＰ＜０．０５であり、除去基準はＰ＞０．１であった。ＩＢＭ（登録商標） ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（ＩＢＭ社、Ａｒｍｏｎｋ、ＮＹ）、Ｐｒｉｓｍ８（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＪＭＰ（登録商標）（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ社、Ｃａｒｙ、ＮＣ）、及びＲＳｔｕｄｉｏ（商標）ＩＤＥ（ＲＳｔｕｄｉｏ Ｉｎｃ社、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、統計分析を行った。
ＵＣＣＣ患者試料ＲＮＡ－ｓｅｑ分析
ＣＲＣ患者腫瘍異種移植外植片からのＲＮＡ－ｓｅｑデータを、ＵＣＣＣ（コロラド大学がんセンター）ＧＩ腫瘍組織バンクから得て、先に記載のように分析した。［Ｓｃｏｔｔら、２０１７］。簡潔に言えば、遺伝子発現は、Ｌｏｇ２正規化され、ＦＰＫＭ（フラグメント数／転写物１キロベース／マッピングされた１００万リード）により測定された。Ｋｙｏｔｏ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅｓ（ＫＥＧＧ）により定義されたＷｎｔシグナル伝達経路を、この研究において遺伝子セットとして使用した。ＣＨＤ１Ｌ発現＜１ ＦＰＫＭの試料を低発現とみなし、この研究から除去した。ｍａｔｒｉｘ２ｐｎｇ（遺伝子をもとにしたＺ正規化）を使用して、有意なスピアマンの相関を有する遺伝子（Ｐ＜０．０５）をヒートマップとして示した［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足情報を参照のこと］。
ＣＨＤ１Ｌ過剰発現及びｓｈＲＮＡノックダウン
全長ＣＨＤ１ＬをｐＧＥＸ－６Ｐ－１プラスミド（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）で合成した。ＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩと隣接しているＣＨＤ１Ｌ配列を消化し、レンチウイルス主鎖にライゲーションして、ヒトＣＲＣ細胞におけるＣＨＤ１Ｌの過剰発現のためのｐＣＤＨ１－ＣＭＶ－ＣＨＤ１Ｌ－ＥＦ１－ｐｕｒｏプラスミドを作製した。ミッション（Ｍｉｓｓｉｏｎ）（登録商標） ｓｈＲＮＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ． ＬＬＣ社、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）（スクランブル型）並びにＣＨＤ１Ｌに特異的なＴＲＣＮ０００００１３４６９及びＴＲＣＮ０００００１３４７０（ｓｈ６９及びｓｈ７０）をＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。ＴｒａｎｓＩＴ（登録商標）－２９３試薬（Ｍｉｒｕｓ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、並びにプラスミドｐＨＲｄｅｌｔａ８．９及びｐＶＳＶ－Ｇを使用して、ウイルスをＨＥＫ２９３Ｔ細胞において生成した。ＣＲＣ細胞は、過剰発現又はｓｈＲＮＡノックダウンウイルスでトランスデュースされ、７日間２μｇ／ｍｌのピューロマイシンで選択された。
ウェスタンブロット
マウス由来のＣＲＣ細胞株及び均一化腫瘍組織試料を、ＲＩＰＡ溶解バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ ７．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１％ＮＰ－４０、１％デオキシコール酸ナトリウム、２．５ｍＭ ピロリン酸ナトリウム、１ｍＭ ｂ－グリセロホスフェート、１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４、０．１ｍＭ ＰＭＳＦ）に再懸濁した。Ｐｉｅｒｃｅ（商標） ＢＣＡタンパク質アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用して、タンパク質濃度を決定した。４０マイクログラムの試料を１０％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲルに流した。電気泳動後に、タンパク質をニトロセルロース膜に移動させた。膜を室温においてＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０（ＴＢＳＴは、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０を含む）（Ｃｒｏｄａ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＰＬＣ社、Ｓｎａｉｔｈ、ＵＫ）中５％脱脂乳で１時間ブロックした。膜をＴＢＳＴで３回洗浄した。ブロットを適切な一次抗体と共にＴＢＳＴ中５％脱脂乳において４℃で終夜インキュベートした。膜をＴＢＳＴで３回洗浄し、次いで適切な二次抗体と共に１時間インキュベートした。膜を再びＴＢＳＴで３回洗浄した。スーパーシグナル（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ）（商標）Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ ＰＬＵＳ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用してブロットを曝露し、ＣｈｅｍｉＤｏｃ画像処理システム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を使用して画像処理した［ウェスタンブロットについて、Ａｂｂｏｔｔら、２０２０及びその補足情報を参照のこと］。
ＴＯＰｆｌａｓｈ ＴＣＦ転写レポーターアッセイ
ＴＯＰｆｌａｓｈアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を使用して、ＣＲＣ細胞におけるＴＣＦ転写活性を評価した。１ウェルあたり合計２０，０００細胞を９６ウェル白色プレートに播種し、ＴｒａｎｓＩＴ（登録商標）－ＬＴ１トランスフェクション試薬（Ｍｉｒｕｓ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）をトランスフェクトした。細胞をトランスフェクションミックスと共に２４時間インキュベートした。次に、細胞をリン酸塩バッファー溶液（ＰＢＳ）で洗浄し、１：１の比のＰＢＳ：ＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼ試薬Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を添加し、ルミネセンスを１０分以内に検出した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、細胞生存率を測定するために、デュプリケート実験を実施し、これを使用して、ＴＯＰｆｌａｓｈルミネセンスを正規化して、ＴＣＦ活性の倍率変化を得た。実験を２回繰り返した（各実験についてｎ＝３）。
共免疫沈降（Ｃｏ－ＩＰ）
有核細胞可溶化物を無処置ＳＷ６２０細胞から１３８産生させた。入力対照のため、１ｍｇ／ｍＬの核抽出物１００μＬを保存し、入力として使用した。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）プロテインＡ ＩＰキット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を用いて、免疫沈降（ＩＰ）を行った。簡潔に言えば、２μｇの抗ＴＣＦ４並びに抗ＣＨＤ１Ｌ ＩＰ抗体、抗ウサギＩｇＧ及び抗マウスＩｇＧとインキュベートした３００μｇのライセートを非特異的結合対照として使用し、４℃で２時間回転した。プレインキュベートした後、５０μＬのビーズをプレインキュベートした抗体／ライセート混合物に移動させ、次に４℃で終夜インキュベートした。フロースルーを回収し、ビーズをＰＢＳＴで３回洗浄した。タンパク質を、７０℃で５０ｍＭのグリシン（ｐＨ＝２．８）２０μＬで１０分間溶離した。
クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）
先に記載の詳細な方法［Ｚｈｏｕら、２０１６］を使用して、細胞を１．４２％のホルムアルデヒドで１５分間架橋し、１２５ｍＭのグリシンで５分間クエンチした。細胞をＳｚａｋのＲＩＰＡ（放射性免疫沈降アッセイバッファー）バッファーで溶解し、音波処理した。ＩＰステップを４℃で以下の通り実施した：５０μＬのプロテインＡ／Ｇアガロースビーズを冷ＳｚａｋのＲＩＰＡバッファーで予洗し、１ｍｇのライセートで２時間インキュベートした。０．３ｍｇ／ｍＬのサケ精子ＤＮＡを添加し、２時間インキュベートした。ライセート（１００μＬ）を入力対照として取っておいた。抗ＣＨＤ１Ｌ（２μｇ）を残部に添加し、終夜インキュベートした。ビーズを洗浄し、上澄みを１００μＬまで吸引し、次に、２００μＬの１．５倍Ｔａｌｉａｎｉｄｉｓ溶離バッファー（７０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ ｐＨ ８．０、１ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ ８．０、１．５ｗ／ｖ％ ＳＤＳ）を添加した。イムノ複合体を溶離し、架橋を逆転させるために、１２μＬの５Ｍ ＮａＣｌを添加し、混合物を６５℃で１６時間インキュベートした。上澄みを２０μｇのプロテイナーゼＫと混合し、３７℃で３０分間インキュベートした。ＤＮＡをフェノール／クロロホルムで抽出し、エタノールで沈殿させた。公知の公開プライマーを使用して、ＩＰ生成物をＰｏｗｅｒＵｐ（商標） ＳＹＢＲ（商標） Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）で増幅させた［Ｚｈｏｕら、２０１６］。
クローン原性アッセイ
先に記載のＳＷ６２０細胞におけるＣＨＤ１Ｌノックダウン又はＤＬＤ１細胞における過剰発現の後に、コロニー形成をアセスした［Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。細胞を１，０００細胞／ウェルで６ウェルプレートに播種し、培地を１週間当たり２回、１０日の時間経過にわたって変えた。コロニー形成分析は、先に記載のようにも行った［Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。
ＣＨＤ１Ｌ阻害剤を、ＣＳＣ幹細胞性を抑制するそれらの能力についてアセスするために、ＨＣＴ－１１６又はＣＨＤ１Ｌを過剰発現させるＤＬＤ１細胞株を、単層培養中、ビヒクル対照（０．５％ＤＭＳＯ）又は図２Ｃに指示された濃度のＣＨＤ１Ｌ阻害剤で２４時間前処置した。前処理した生細胞を、１，０００細胞／ウェルで６ウェルプレートに播種するか、又は２００細胞／ウェルで２４ウェルプレートに播種した。（初期設定から改変された以下のパラメータを用いた：（１）ＨＣＴ１１６細胞では、セグメント化調整＝０．６；最小面積（μｍ２）＝３×１０４；最大面積（μｍ２）＝１．６×１０６；最大離心率＝０．９；（２）ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ ＯＥ細胞では、セグメント化調整＝１；最小面積（μｍ２）＝１×１０４；最大面積を限定しなかった；最大離心率＝０．９５）ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標） Ｓ３ ２０１８Ａ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、Ｆｒａｎｃｅ）ソフトウェアを使用して、コロニーを分析した。実験を２回繰り返した（各実験についてｎ＝２）。
腫瘍オルガノイド培養
５％ＦＢＳを含む、フェノールレッド不含ＲＰＭＩ－１６４０を使用して、細胞株を腫瘍オルガノイドとして培養し［Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］、５，０００細胞／ウェルをコーティングしていない９６ウェルのＵ字型底部Ｕｌｔｒａ Ｌｏｗ Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ社、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ）に播種し、次に１，０００ｒｐｍで１５分間遠心することによって、細胞集合を促進した。最終濃度２％のマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）（登録商標）マトリックス（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ社、Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を添加し、腫瘍オルガノイドを、処置前７２時間にわたってインキュベーション（５％ＣＯ２、３７℃、湿度）下に自己組織化させ、処置時間経過中、標準細胞培養条件下に維持した。
ＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰ及びＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰレポーター３Ｄハイコンテント画像処理アッセイ
先に報告されたｐＣＤＨ ｉｍＰｒｏ－ＧＦＰ－ＥＦ１－ｐｕｒｏウイルス又はｐＣＤＨ－ＥｃａｄＰｒｏ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＥＦ１－ｐｕｒｏウイルスを使用して、安定なＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰ又はＥｃａｄＰｒｏ－ＲＦＰ ＳＷ６２０レポーター細胞を産生させた［Ｚｈｏｕら、２０１６；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。安定な蛍光標識レポーター細胞を使用して、本明細書に記載される腫瘍オルガノイドを産生させた。腫瘍オルガノイドを、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤を用いて１０μＭでさらに７２時間処置した。処置後に、腫瘍オルガノイドを１６μＭのＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２で１時間染色した（核染色）。５倍空気対物レンズを用いて画像を撮った。Ｚスタックを、合計１５の光学切片に対して２６．５μｍ離して設定した。オペラフェニックス（Ｏｐｅｒａ Ｐｈｅｎｉｘ）（商標）及びハーモニー（Ｈａｒｍｏｎｙ）（登録商標）ソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、画像処理及びハイコンテント分析を行った。核を各層内で同定し、細胞をＧＦＰ又はｍＣｈｅｒｒｙチャネルで見出した。各チャネルの蛍光強度を計算し、閾値をバックグラウンド強度に基づいて設定した。ＧＦＰ又はｍＣｈｅｒｒｙ ＲＦＰ陽性細胞の百分率を計算し、ＤＭＳＯ処置群に対して正規化した。
腫瘍オルガノイド細胞毒性
ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを、本明細書に記載されるように培養した。ＣｅｌｌＴｏｘ（商標） Ｇｒｅｅｎ細胞毒性アッセイ溶液を、製造業者（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）のプロトコルに従って調製した。簡潔に言えば、腫瘍オルガノイドを、ＣｅｌｌＴｏｘ（商標） Ｇｒｅｅｎ試薬（０．５倍）及び０～１００μＭの範囲にわたるさまざまな用量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤で７２時間処置した。オペラフェニックス（商標） ２０７スクリーニングシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を４８８ｎｍにおける励起及び５００～５５０ｎｍにおける発光で使用して、オルガノイドを画像処理した。溶解バッファー（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を１００％細胞毒性対照及び０．５％ＤＭＳＯを０％細胞毒性対照として細胞毒性を計算するために、ウェル全体の平均強度を利用した。Ｐｒｉｓｍ８（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して、強度値をこれらの対照に正規化した。
浸潤アッセイ
ＨＣＴ１１６細胞を６０，０００細胞／ウェルでＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標） ＩｍａｇｅＬｏｃｋ ９６ウェルプレート（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、Ｆｒａｎｃｅ）に播種し、終夜付着させた。ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標） ＷｏｕｎｄＭａｋｅｒを使用して、すべてのウェルに傷を作製し、次いでＰＢＳで２回洗浄した。浸潤状態の調製中にマトリゲル（登録商標）マトリックス（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）の重合を避けるために、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＸＴ Ｃｏｏｌ Ｃｏｒｅを使用して、プレートを４℃にした。ウェルを、ＲＰＭＩ－１６４０培地中５０％マトリゲル（登録商標）マトリックス５０μＬでコーティングした。スイングバケットローターを使用して、プレートを、４℃にて１５０ｒｐｍで３分間遠心して、気泡のないマトリックスコーティングさえ確実にした。その後、プレートを、細胞培養インキュベータ内部で１０分間予め温められた（５％ＣＯ２、３７℃、湿度）Ｃｏｒｎｉｎｇ ＸＴ ＣｏｏｌＳｉｎｋモジュールに置いて、マトリックスを一様に重合し、次に５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０培地５０μＬに溶解したＣＨＤ１Ｌ阻害剤を添加した。最後に、プレートを、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標） Ｓ３生細胞画像処理装置（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、Ｆｒａｎｃｅ）に４８時間入れた。位相差チャネル及び１０倍対物レンズをワイドモードで使用して、傷を毎時画像処理した。
組換えヒトＣＨＤ１Ｌのクローニング及び精製
Ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ（残基１６－６１）及びｆｌ－ＣＨＤ１Ｌ（残基１６－８７９）構築物は、カロリンスカ研究所（Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓのＨｅｌｅｎａ Ｂｅｒｇｌｕｎｄからの寛大な寄贈物であった。タンパク質を、Ｔｅｒｒｉｆｉｃ Ｂｒｏｔｈ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ社、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）中ロゼッタ（Ｒｏｓｅｔｔａ）（商標） ２（ＤＥ３） ｐＬｙｓＳ細胞（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから入手可能なＮｏｖａｇｅｎ）において発現させた。０．２ｍＭ ＩＰＴＧを用いて、ＯＤ６００＝２．０で、培養物を１８℃にて１６時間誘導した。細胞を採取し、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．５）、５００ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭ ＫＣｌ、２０ｍＭ イミダゾール、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）、１０％グリセロール及び５００μＭ ＰＭＳＦを含むバッファー－Ａに再懸濁した。細胞を超音波処理によって溶解させ、細胞残屑を遠心によって除去した。上澄みをＮｉ－ＮＴＡ樹脂カラム（Ｑｉａｇｅｎ社、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）にロードした。カラムに結合しているタンパク質を、バッファー－Ａで１回洗浄し、１０ｍＭ ＡＴＰを含むバッファー－Ａで１回洗浄し、追加の回数バッファー－Ａで洗浄した。バッファー－Ｂ（５００ｍＭイミダゾールを含むバッファー－Ａ）を使用して、２０→５００ｍＭイミダゾールのグラジエントでタンパク質を溶離した。親和性精製後に、Ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ７．５）、２００ｍＭ ＮａＣｌ、及び１ｍＭ ＤＴＴに終夜透析した。同様に、ｆｌ－ＣＨＤ１Ｌを、２０ｍＭ ＭＥＳ（ｐＨ ６．０）、３００ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール、及び１ｍＭ ＤＴＴに終夜透析した。次いで、タンパク質を、イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。ｃａｔ－ＣＨＤ１ＬをＱ－セファロースカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）に結合させ、ｆｌ－ＣＨＤ１ＬをＳ－セファロースカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）に結合させ、ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌには０．２～１Ｍ及びｆｌ－ＣＨＤ１Ｌには０．３～１ＭのＮａＣｌグラジエントを使用して、タンパク質を溶離した。純粋な画分をプールし、濃縮し、スーパーデックス（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ）（商標） ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）を２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．５）、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＴＣＥＰ、及び１０％グリセロールを用いて使用するサイズ排除クロマトグラフィーによってさらに精製した。ＡＣＴＡ Ｓｔａｒｔ ＦＰＬＣ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）を使用して、タンパク質精製を実施した。
ＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅアッセイ
反応はすべて、低容積非結合表面３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．社、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＮＹ）を使用して実施した。ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌ若しくはｆｌ－ＣＨＤ１Ｌ（１００ｎＭ）及び２００ｎＭ ｃ－Ｍｙｃ ＤＮＡ又はモノヌクレオソーム（Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ社、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ７．５）、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、５％グリセロールを含むバッファーに添加した。反応は、１０μＭ ＡＴＰ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）を全容積１０μＬまで添加することによって開始され、３７℃で１時間インキュベートした。標識ホスフェート結合タンパク質、具体的にはフルオロフォアＭＤＣＣで標識された結合タンパク質を含む５００ｎＭのＰｈｏｓｐｈａｔｅ Ｓｅｎｓｏｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を添加し、励起（４３０ｎｍ）及び発光（４５０ｎｍ）をＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ）で直接測定することによって、ＡＴＰａｓｅ活性をアッセイした。無機ホスフェート検量線を使用して、蛍光を［Ｐｉ］に変換し、Ｐｒｉｓｍ８（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して、酵素反応速度を決定した。
ＣＨＤ１Ｌ阻害剤のＨＴＳ創薬
アッセイ組成は、反応混合物容積を薬剤又はＤＭＳＯの添加に適合するように改変したことを除いて、ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌを使用して上記と同じであった。Ｊａｎｕｓ（登録商標）リキッドハンドラー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、１００％ＤＭＳＯに溶解している選択された量の化合物を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ７．５）、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、５％グリセロールバッファーと混合し、１０％ＤＭＳＯ中２００μＭにした。次に、１μＬの各化合物を酵素混合物に添加して、最終濃度の２０μＭを得た。使用された陰性対照は１％ＤＭＳＯであり、１０ｍＭ ＥＤＴＡを陽性対照として使用した。１０μＭ ＡＴＰの添加により、反応を開始し、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＴＰａｓｅ活性は、５００ｎＭのＰｈｏｓｐｈａｔｅ Ｓｅｎｓｏｒを添加することによって蛍光により測定した。Ｃａｔ－ＣＨＤ１Ｌを、Ｌｉｆｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社（Ｗｏｏｄｂｒｉｄｇｅ、ＣＴ）からの２０，０００化合物多様性セット及びＳｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社（Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）からのキナーゼ阻害剤ライブラリーに対してスクリーニングした。両ライブラリーを、購入前に予めスクリーニングして、所望の標的と選択的に反応するより多くの生物学的標的と非特異的に反応する傾向があるパンアッセイ干渉化合物（ＰＡＩＮＳ）を除去した。［Ｂａｅｌｌ及びＮｉｓｓｉｎｋ、２０１８；Ｂａｅｌｌ及びＨｏｌｌｏｗａｙ、２０１０］。
患者由来の腫瘍オルガノイド（ＰＤＴＯ））培養及び生存率アッセイ
ＣＲＣ患者腫瘍組織をＵＣＣＣ ＧＩ組織バンクから得て、以下の確立されたプロトコルを拡大した［Ｍｏｒｉｎら、１９９７］。簡潔に言えば、細胞を１ウェル当たり５，０００細胞で９６ウェルプレートに播種し、ＰＤＴＯ形成を７２時間にわたって可能にする確立された方法［Ｆｒａｎｋｅｎら、２００６］によって培養した。ＰＤＴＯをＤＭＳＯ（０．５％）又はさまざまな濃度の化合物６でさらに７２時間で処置して、用量応答を得た。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｂｌｕｅ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、ＰＤＴＯ細胞生存率を測定した。培地（８０μＬ）をウェルから吸引し、８０μＬの試薬を添加し、４時間インキュベートし、励起（５６０ｎｍ）及び発光（５９０ｎｍ）を使用した蛍光強度により、細胞生存率を測定された。
アポトーシスの評価
ＳＷ６２０細胞を、３０，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。細胞を、ＤＭＳＯ（陰性対照）、ＳＮ－３８（アポトーシス陽性対照）、及び指示された濃度の化合物６で１２時間処置した。次いで、細胞を、冷ＰＢＳで２回、冷アネキシン－Ｖ染色バッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．４）、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、２．５ｍＭ ＣａＣｌ２）で１回すすぎ、次いでアネキシン－Ｖ ＦＩＴＣと１：１００で暗所に３０分間インキュベートした。次いで、細胞を、アネキシン－Ｖ染色バッファーで２回すすぎ、ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、ＦＩＴＣ強度を測定した。
ＤＮＡ損傷のγ－Ｈ２ＡＸによる評価
ＤＬＤ１ＣＨＤ１Ｌ－ＯＥ細胞を、９６ウェルのＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｒｉｅｒプレートに播種し、終夜接着させた。次いで、細胞を、１０μＭ（０．５％ＤＭＳＯ）の適切な化合物で処置したか、又はＣＨＤ１Ｌ阻害剤とＳＮ－３８（１μＭ）、オキサリプラチン（１０μＭ）、及びエトポシド（１０μＭ）との組合せで処置した。細胞を６時間処置した。培地を吸引し、細胞を冷ＰＢＳで洗浄した。次いで、細胞を、室温にて３％パラホルムアルデヒドで１５分間固定し、固定細胞をＰＢＳで３回洗浄した。細胞を、室温でＰＢＳ中５％ＢＳＡ、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００において１時間ブロックした。次いで、細胞を、ＰＢＳ中１％ＢＳＡ、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００での１：８００希釈を使用したホスホ－（Ｓ１３９）－ｇ－Ｈ２ＡＸウサギｍＡｂで４℃にて終夜免疫染色した。一次抗体を吸引し、細胞をＰＢＳで洗浄した。細胞を、室温でヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ Ｐｌｕｓ（商標） ６４７蛍光二次抗体と共に、ＰＢＳ中１％ＢＳＡ、０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００において５μｇ／ｍＬの濃度で２時間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２染色液をＰＢＳ中１：１０００の濃度に希釈し、細胞に室温で１５分間添加した。次いで、２０倍水対物レンズを使用して、オペラフェニックス（商標） ＨＣＳ画像処理システム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）で、細胞を画像処理した。薬物相互作用指数（ＣＤＩ）方程式ＣＤＩ＝（Ａ＋Ｂ）／（ＡＢ）を使用して、シナジーを決定した。シナジーをこれらの実験においてＣＤＩ＜０．８で定義された。相加性は０．８～１．２であり、拮抗作用はＣＤＩ＞１．２によって定義された。
水性溶解度及びＣＬｏｇＰ
最近報告された詳細な方法［Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］を使用して、水性溶解度を化合物６について測定した。ＰＢＳ ＵＶ吸収スペクトルを１－プロパノール中完全飽和溶液と比較し、線形回帰分析を使用して、化合物６のＰＢＳ（ｐＨ ７．４）中１０％ＤＭＳＯに対する溶解度を決定した。ＰＢＳに対する溶解度の測定を、二度繰り返す実験で実施した。ＳｗｉｓｓＡＤＭＥウェブツールを使用して、コンセンサスＬｏｇＰ（ＣＬｏｇＰ）値を得た［Ｄａｉｎａら、２０１７］。
ミクロソーム安定性研究
化合物６のミクロソーム安定性は、Ｓｅｋｉｓｕｉ ＸｅｎｏＴｅｃｈ社（Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ、ＫＳ）から購入した雌性ＣＤ－１マウスミクロソーム（Ｍ１５００）を使用し、最近報告された方法に従って決定した［Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。試料を２０，０００ｇで１０分間遠心し、上澄みをＬＣＭＳ分析のオートサンプラーバイアルに移した。以下の質量遷移（ｍ／ｚ、ａｍｕ）を、化合物６（分子量＝３９３．５）についてモニターした。
インビボ薬理
動物の研究はすべて、コロラド大学アンシュッツメディカルキャンパス（Ａｕｒｏｒａ， ＣＯ）及びコロラド州立大学（Ｆｏｒｔ Ｃｏｌｌｉｎｓ， ＣＯ）の動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＩＡＣＵＣ）により認可された動物プロトコル手順に従って実施した。
薬物動態
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ社（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入した９週齢の雌性ＣＤ－１マウスを、最近報告された方法［Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］を使用してＰＫ研究に使用した［Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。簡潔に言えば、３匹のマウス／時点で合計２１匹のマウス／化合物６について０．２５～２４時間の範囲をカバーするようにＰＫ研究を設計した。それぞれのマウスに、１００％ＤＭＳＯ中で調製された化合物６を５０ｍｇ／ｋｇで単回腹腔内注射により投与した。全血を特定の時点で採取し、分離された血漿を－８０℃で凍結して貯蔵するか、又はＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に使用した。
薬力及び肝毒性
マトリゲル（登録商標） マトリックス（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）とＲＰＭＩ １６４０の１：１混合物１００μＬに懸濁した２００万のＶｉｍＰｒｏ－ＧＦＰ ＳＷ６２０細胞を、９週齢の雌性胸腺欠損ヌードマウス（Ｎｕｄｅ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ（０６９））（Ｅｎｖｉｇｏ社、Ｈｕｎｔｉｎｇｄｏｎ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ、ＵＫ）の横腹に注射した。成長を、１週間当たり３回のカリパス測定でモニターした。４週で、マウスを２群にランダム化し、２００μＬのビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、４０％ＰＥＧ ４００、５０％ＰＢＳ ｐＨ＝７．４）中５０ｍｇ／ｋｇの化合物６又はビヒクル対照で処置した。処置を１日１回、５日にわたって腹腔内投与した。処置５日目に最終投与して２時間後に、マウスを屠殺した。ＬＣＭＳにより測定して化合物６蓄積を分析するために、腫瘍及び肝臓を収集し、ウェスタンブロット分析により、ＥＭＴ及びアポトーシス、並びに肝毒性に対する効果を測定した。
統計分析
データを、対応のない両側スチューデントのｔ検定に、ウエルチの補正統計分析と共にかけるか、又はＰｒｉｓｍ８（ＧｒａｐｈＰａｄ社、ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して別段に記載するようにしてかけた。実験はすべて、３回（ｎ＝３）繰り返したか、又は方法に記載されているように繰り返した。
実施例１０：化合物活性のアセスメントのための追加の実験的方法
ミクロソーム安定性。ＣＤ－１マウスミクロソームは市販品として購入し、反応を先に記載されたように行った。簡潔に言えば、マスターミックスを以下の通り調製した： １００ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ ７．４）中、ミクロソーム（０．５ｍｇ／ｍＬ）、ＤＭＳＯに可溶化した１０μＭ ＣＨＤ１Ｌｉ（０．１％）、５ｍＭ ＵＤＰＧＡ、２５μｇアラメチシン、及び１ｍＭ ＭｇＣｌ２。マスターミックスを３７℃で５分間プレインキュベートし、次いで１ｍＭ ＮＡＤＰＨを添加して、ミクロソーム活性反応を開始し、時間経過を通して３７℃で維持した。２００μＬのアセトニトリルを添加することによって、反応を０、５、１５、３０、４５、及び６０分に止め、質量分析により分析した。適切なミクロソーム対照も、同じ反応条件で行った。
イリノテカン（ＳＮ３８）を用いたγ－Ｈ２ＡＸ ＤＮＡ損傷組合せ研究。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤６単独及びＳＮ３８との組合せを、先に報告されたようにＤＮＡ損傷についてアセスした［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０；Ａｂｒａｈａｍら、２０１９］。低ＣＨＤ１Ｌ内因性発現を有するＤＬＤ１結腸直腸がん細胞及びＣＨＤ１Ｌを過剰発現するように設計されたＤＬＤ１細胞を使用して、ＤＮＡ損傷の確立したバイオマーカーであるγ－Ｈ２ＡＸの免疫蛍光を測定して、ＤＮＡ損傷研究を実施した［Ｊｉら、２０１７；Ｉｖａｓｈｋｅｖｉｃｈら、２０１２］。細胞を９６ウェルプレートに単層として播種し、１０μＭ（０．５％ＤＭＳＯ）の化合物６若しくはＳＮ－３８（１μＭ）、又は６とＳＮ３８の組合せで６時間にわたって処置した。培地を吸引し、細胞を冷ＰＢＳで洗浄した。次いで、細胞を、室温にて３％パラホルムアルデヒドで１５分間固定し、ＰＢＳで３回洗浄した。細胞を、室温でＰＢＳ中５％ＢＳＡ、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００において１時間ブロックした。次いで、ＰＢＳ中１％ＢＳＡ、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００での１：８００希釈を使用したホスホ－（Ｓ１３９）－γ－Ｈ２ＡＸウサギｍＡｂで、細胞を４℃で終夜免疫染色した。一次抗体を吸引し、細胞をＰＢＳで洗浄した。細胞を、室温でヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ Ｐｌｕｓ（商標） ６４７蛍光二次抗体と共に、ＰＢＳ中１％ＢＳＡ、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００において５μｇ／ｍＬの濃度で２時間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２染色液をＰＢＳ中１：１０００の濃度に希釈し、細胞に室温で１５分間添加した。次いで、２０倍水対物レンズを使用して、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｐｈｅｎｉｘ ＨＣＳ画像処理システムで、細胞を画像処理した。本発明者らは、ＣＨＤ１Ｌを過剰発現するＤＬＤ１細胞における損傷を誘導する際に化合物６とＳＮ３８の間のシナジーを認め、薬物相互作用指数（ＣＤＩ）方程式を使用して決定した。ＣＤＩ＝（Ａ＋Ｂ）／（ＡＢ）、シナジーをこれらの実験においてＣＤＩ＜０．８で決定し、相加性は、０．８～１．２であり、拮抗作用をＣＤＩ＞１．２によって定義した。ウエルチのｔ検定統計分析を使用して、有意性（＊＊＝Ｐ≦０．０１）を決定した。
細胞ベースの細胞毒性用量応答及び組合せ研究。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤及びＳＮ３８（イリノテカンの活性ファーマコホア）を、結腸直腸がん細胞株の単独又は組合せに対する抗腫瘍活性についてアセスした。先に報告されたように５％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ－１６４０を使用して、細胞株を単層又は３Ｄ腫瘍オルガノイドとして培養した［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。３Ｄ ＳＷ６２０腫瘍オルガノイド細胞毒性研究では、１００μＬ中２，０００細胞を、９６ウェルのＵ字型底部Ｕｌｔｒａ Ｌｏｗ Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．社、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、ＵＳＡ）の各ウェルに播種した。プレートを１，０００ｒｐｍで１５分間遠心して、細胞集合を促進した。遠心された細胞を１ウェル当たり２５μＬの１０％Ｍａｔｒｉｇｅｌでコーティングすることによって、最終の２％のＭａｔｒｉｇｅｌ濃度に到達した。次いで、プレートを処置前に３日間インキュベートした。３Ｄオルガノイドをさまざまな濃度の薬剤２５μＬで処置した。処置３日後に、オルガノイドを４０μＬの培地と共に、９６ウェルの白色孔なし底部プレートに手動で移した。等量のＣｅｌｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ ３Ｄ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を添加し、プレートをプレート振盪機上に４００ｒｐｍで４５分間維持した後、ルミネセンスをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）で読み取った。組合せ研究では、Ｃｏｍｂｅｎｅｆｉｔ分析を使用して、シナジースコアを決定した［Ｄｅ Ｖｅｒｏｌｉら、２０１６］。
インビボ研究。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤である化合物６及び６．１１を薬物動態学的にアセスして、９週齢の雌性ＣＤ－１マウスにおける血漿内半減期を、先に報告されたように決定した［Ａｂｂｏｔｔら、２０２０］。化合物６を単独及びイリノテカンとの組合せで、胸腺欠損ヌードマウスにおけるＳＷ６２０腫瘍異種移植片に対する抗腫瘍活性についてさらにアセスした。先に報告された方法［Ｚｈｏｕら、２０１６］を使用して、異種移植片を作製した。簡潔に言えば、化合物６を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）によって、５ｍｇ／ｋｇ、２回／日、７日／週、合計５週間投与した。化合物６処置の第１週後に、イリノテカンを６０ｍｇ／ｋｇ、１回／週、３週間腹腔内投与することを始めた。体重及び腫瘍容積を２回／週でモニターした。単一の腫瘍が２０００ｍｍ３に到達したか、又は全腫瘍容積が３０００ｍｍに到達したとき、マウスを屠殺し、組織を収集した［Ｊｉら、２０１７］。化合物６．１１を単独及びイリノテカンとの組合せで、ＳＷ６２０腫瘍異種移植片に対する抗腫瘍活性について同じようにアセスした。最近、ＣＲＣ Ｍ－表現型は、他のＣＲＣ ＥＭＴ－表現型より有意に腫瘍原性であること、及びＭ－表現型は有意に高いＴＣＦ転写も有することが報告された［Ｅｓｑｕｅｒら、２０２１及びその補足情報］。この研究において使用される異種移植片を、Ｅｓｑｕｅｒら、２０２１に記載されているように単離されたデュアルレポーター間葉細胞（Ｍ－表現型）を使用して作製した。化合物６．１１の半減期は、ＣＤ－１マウスにおいて８時間であり、化合物６（半減期＝３時間）と比べて２．７倍安定である。したがって、処置の回数を２回／日から１回／日に低減した。さらに、イリノテカンを５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。
図７Ａ及び７Ｂは、ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおける代表的な単剤の細胞毒性用量応答研究を図示し、指示された例示的化合物のＩＣ５０を提供する。下記の表４Ａ及び４Ｂは、例示的化合物の細胞毒性データの要約を提供する。表４Ａは、異なる数種のＣＲＣ腫瘍オルガノイドにおける代表的な単一の化合物の細胞毒性データを提供する。
Figure 2023520330000055
表４Ｂは、指示された代表的なＣＨＤ１Ｌ阻害剤（ＣＨＤ１Ｌｉ）とＳＮ３８又はオラパリブとの組合せ治療の結果を提供する。異なる４つのＣＲＣ腫瘍オルガノイドタイプにおいて処置を行った。ＣＨＤ１Ｌ阻害剤の濃度を、指示のように変える。組合せ処置のＩＣ５０は、一般にＳＮ３８及びオラパリブ単独と比べて低減される。
Figure 2023520330000056
図８Ｂは、ＤＬＤ１空ベクター（ＥＶ）細胞及びＤＬＤ１（ＯＥ）過剰発現細胞における化合物６単独、イリノテカン（ＳＮ３８）単独、及びそれらの２つの組合せの（ＤＭＳＯに対する）γ－Ｈ２ＡＸ強度のグラフを提示する。図８Ａは、ＤＬＤ１（ＯＥ）細胞と比べてＤＬＤ１（ＥＶ）細胞におけるＣＨＤ１Ｌの相対的発現を、これらの細胞におけるα－チューブリンの対照発現と比べて示すウェスタンブロットである。ＣＨＤ１Ｌは、ＰＡＲＰ－１媒介ＤＮＡ修復に不可欠であることが知られており、ＤＮＡ損傷化学療法に対する抵抗性を引き起こす［Ａｈｅｌら、２００９；Ｔｓｕｄａら、２０１７］。図８Ｂのデータは、ＤＮＡ損傷を誘導するＳＮ３８と相乗作用を示す、ＣＨＤ１Ｌ阻害剤の「オンターゲット」効果を示す。
図９Ａ－９Ｃは、ＳＷ６２０結腸直腸がん（ＣＲＣ）腫瘍オルガノイドにおいて例示的なＣＨＤ１Ｌ阻害剤６、６．３、６．９及び６．１１を用いたシナジー研究の結果を図示する。ＳＮ３８と６及び６．３の組合せは、結腸ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを死滅させる際にＳＮ３８単独よりそれぞれ５０倍及び１５０倍強力である。ＳＮ３８と６．９及び６．１１の組合せは共に、ＳＮ３８単独より１００倍超強力である。化合物６、６．３、６．９及び６．１１のそれぞれは、ＳＷ６２０腫瘍オルガノイドを死滅させるのにイリノテカン（及びＳＮ３８）と相乗作用を示す。
スコアがＤｅ Ｖｅｒｏｌｉら、２０１６に記載されているように決定される、例示的なＣＨＤ１Ｌ阻害剤のシナジースコアを、表５に記載する。シナジースコアの値を解釈するために、ＳｙｎｅｒｇｙＦｉｎｄｅｒが入力データを百分率の阻害として正規化したなので、それらを薬物相互作用に起因しうる細胞応答の割合として直接解釈することができる（例えば、シナジースコア２０は、予想を超える２０％の応答に相当する）。本発明者らの経験によれば、０に近いシナジースコアは、シナジー又は拮抗作用に対して限定された確信を与える。シナジースコアが
－１０未満であるとき、２種の薬剤間の相互作用は、拮抗作用である可能性が高い；
－１０～１０であるとき、２種の薬剤間の相互作用は、相加性である可能性が高い；
１０超であるとき、２種の薬剤間の相互作用は、シナジーである可能性が高い。
Figure 2023520330000057
図１０は、化合物６単独、イリノテカン単独又はそれらの組合せでの処置の日数（２８日まで）の関数として、ＳＷ６２０腫瘍異種移植片の腫瘍容積（倍数）を表すグラフを含む。イリノテカンと化合物６の組合せは、単剤処置群又は対照と比べて、処置２８日以内に結腸ＳＷ６２０腫瘍異種移植片を腫瘍容積がほとんどない状態に有意に阻害する。
図１１は、イリノテカン単独（１）又は化合物６とイリノテカンの組合せ（２）での処置の日数（２８日まで）の関数として、ＳＷ６２０腫瘍異種移植片の腫瘍容積（倍数）を表すグラフを含む。イリノテカンと化合物６の組合せは、イリノテカン単独と比べて、最後の処置を過ぎても結腸ＳＷ６２０腫瘍を腫瘍容積がほとんどない状態に有意に阻害する。最後のイリノテカン単独処置の２週間以内に、腫瘍容積は、最後の処置の容積を超えて増大し、腫瘍再発を意味した。対照的に、組合せは、より小さい腫瘍容積を維持した。
図１２は、化合物６単独及びイリノテカンとの組合せ（４）が、ビヒクル（１）、化合物６単独（２）及びイリノテカン単独（３）と比べて、担ＣＲＣ腫瘍マウスの生存を有意に増加させることを示す。
図１３は、化合物６．１１単独、イリノテカン単独又はそれらの組合せでの処置の日数（２０日まで）の関数として、ＳＷ６２０腫瘍異種移植片の腫瘍容積（倍数）を表すグラフを含む。イリノテカンと化合物６．１１の組合せは、イリノテカン単独又は対照と比べて、結腸直腸がんＳＷ６２０腫瘍異種移植片を有意に阻害する。
図１４は、イリノテカン単独又は化合物６．１１とイリノテカンの組合せでの処置での処置の日数（３３日まで）の関数として、ＳＷ６２０腫瘍異種移植片の腫瘍容積（倍数）を表すグラフを含む。イリノテカンと化合物６．１１の組合せは、イリノテカン単独と比べて、最後の処置（３３日目）を過ぎても結腸直腸ＳＷ６２０腫瘍を有意に阻害する。処置８日後に（Ｔｘ放出）、イリノテカン処置だけの腫瘍容積は、約３倍に増加し、腫瘍再発を意味した。逆に、６．１１とイリノテカンの組合せで処置した腫瘍容積は、処置後に（約１．５分の１）減少した。処置８日後、イリノテカン単独での処置と、６．１１とイリノテカンの組合せでの処置の間の腫瘍容積の差は３．４倍である。
図１５は、化合物６．１１とイリノテカンの組合せは、イリノテカン単独及び対照と比べて、担ＣＲＣ腫瘍マウスの生存を有意に増加させることを示す。
実施例１１：阻害剤の現在好ましい構造活性相関の要約
本発明のＣＤＨ１Ｌ阻害剤について式Ｉに基づいた現在好ましい構造活性相関は以下の通りである：
Figure 2023520330000058
Ｂ環では、環は、６員芳香族環又は６，６員縮合芳香族環であり、Ｘは両方ともＮであることが現在好ましい。第２の縮合環が存在する場合それは、１個又は２個の追加のＮを含むことができる。好ましいＲＢ（Ｂ環置換）が存在する場合それは、電気陰性基以外である。好ましいＲＢは、水素又はＣ１～Ｃ３アルキルである。好ましいＡ環は、任意選択で置換されているフェニルであり、非置換フェニル（ＲＡが水素である）がより好ましい。ＲＰ基は、水溶性に関連していると考えられ、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）基が、一般に好ましく、さらに特に好ましいのは任意選択で置換されているＮ含有ヘテロ環であり、Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、５員～８員の環を形成し、その環は、１個若しくは複数の追加のヘテロ原子を含むことができ、飽和（二重結合を含まない）であり、又は１個若しくは複数の二重結合を含むことができる。ＲＨは、活性及び効力並びに代謝安定性に関連していると考えられる。ＲＨは、好ましくは芳香族基、さらに詳細にはヘテロ芳香族基であり、芳香族環又はヘテロ芳香族環を安定化する環置換を含む。好ましいＹはＮＲであり、Ｒが水素であることがより好ましい。好ましくは、ｘは０である。好ましいＺは－ＣＯ－ＮＨ－である。好ましいＬ２は、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－ＣＨ２－である。
実施形態において、ＣＨＤ１ＬのＨＴＳスクリーニングにより、式ＸＸに図示されているフェニルアミノピリミジンファーマコホア及びその塩が同定された：
Figure 2023520330000059
［式中、Ｒ１～Ｒ９は、水素又は任意選択の置換基を表し、Ｒ１０は、効力に関連していると考えられる部分であり、ＲＮは、溶解度などの物理化学的特性に関連していると考えられる部分である］。実施形態において、Ｒ５は、代謝安定性に関連していると考えられる、水素以外の置換基である。具体的な実施形態において、Ｒ５は、ハロゲン、特にＦ又はＣｌ、Ｃ１～Ｃ３アルキル基、特にメチル基である。実施形態において、Ｒ４は、水素以外の置換基、特にはＣ１～Ｃ３アルキル基、さらに詳細にはメチル基である。具体的な実施形態において、Ｒ５はＦであり、Ｒ４はメチルである。実施形態において、Ｒ６～Ｒ９は、水素、Ｃ１～Ｃ３－アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、ホルミル、又はＣ１～Ｃ３アシルから選択される。実施形態において、Ｒ６～Ｒ９のうちの１個又は２個は、水素以外の部分である。実施形態において、Ｒ６～Ｒ９のうちの１個は、ハロゲン、特にフッ素である。具体的な実施形態において、Ｒ６～Ｒ９のすべては水素である。実施形態において、ＲＮはアミノ部分－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）である。具体的な実施形態において、ＲＮは、第２のヘテロ原子（Ｎ、Ｓ又はＯ）を任意選択で含む５員～７員環を有する、任意選択で置換されているヘテロ環式基である。実施形態において、ＲＮは、任意選択で置換されているピロリジン－１－イル、ピペリジン－１－イル、アゼパン－１－イル、ピペラジン－１－イル、又はモルホリノである。実施形態において、ＲＮは、Ｃ１～Ｃ３アルキル、ホルミル、Ｃ１～Ｃ３アシル（特にアセチル）、ヒドロキシル、ハロゲン（特にＦ又はＣｌ）、ヒドロキシＣ１～Ｃ３アルキル（特に－ＣＨ２－ＣＨ２－ＯＨ）から選択される１個の置換基で置換されている。実施形態において、ＲＮは、非置換のピロリジン－１－イル、ピペリジン－１－イル、アゼパン－１－イル、ピペラジン－１－イル、又はモルホリノである。
実施形態において、Ｒ１０は、－ＮＲｙ－ＣＯ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２又は－ＣＯ－ＮＲｙ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２であり、ここで、ｙは、０又は１であって、任意選択の１～６個の炭素原子のリンカー基であるＬ２の有無を示し、そのリンカーは任意選択で置換されており、リンカーの１個又は２個の炭素は、Ｏ、ＮＨ、ＮＲｙ又はＳで任意選択で置き換えられ、Ｒｙは、水素又は１～３個の炭素のアルキルであり、Ｒ１２は、アリール基、シクロアルキル基、ヘテロ環式基、又はヘテロアリール基であり、これらのそれぞれは、任意選択で置換されている。実施形態において、ｙは１である。Ｌ２は－（ＣＨ２）ｐ－であり、ｐは、０～３である。実施形態において、Ｒ１２は、チオフェン－２－イル、チオフェン－３－イル、フラン－２－イル、フラン－３－イル、ピロール－２－イル、ピロール－３－イル、オキサゾール－４－イル、オキサゾール－５－イル、オキサゾール－２－イル、インドール－２－イル、インドール－３－イル、ベンゾフラン－２－イル、ベンゾフラン－３－イル、ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－イル、ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル、イソベンゾフラン－１－イル、イソインドル－１－イル、又はベンゾ［ｃ］チオフェン－１－イルである。実施形態において、Ｒ１は、水素又はメチルである。実施形態において、Ｒ１２は、チオフェン－２－イル、フラン－２－イル、ピロール－２－イル、オキサゾール－４－イル、インドール－２－イル、ベンゾフラン－２－イル、又はベンゾ［ｂ］チオフェン－２－イルである。実施形態において、Ｒ１２は、チオフェン－２－イル又はインドール－２－イルである。実施形態において、Ｒ１は、水素又はメチルである。
本発明の例示的な化合物をスキーム１に図示する。
例示的なＲＰ及び－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）基をスキーム２に図示する。
例示的なＲ１２及びＲＨ基をスキーム３に図示する。
式Ｉの例示的なＢ環をスキーム４に図示する。
Figure 2023520330000060
Figure 2023520330000061
Figure 2023520330000062
Figure 2023520330000063
Figure 2023520330000064
Figure 2023520330000065
Figure 2023520330000066
Figure 2023520330000067
Figure 2023520330000068
Figure 2023520330000069
Figure 2023520330000070
Figure 2023520330000071
Figure 2023520330000072
Figure 2023520330000073
Figure 2023520330000074
Figure 2023520330000075
Figure 2023520330000076
Figure 2023520330000077
Figure 2023520330000078
Figure 2023520330000079
ここで、Ｘ１及びＸ２は、ＣＨ及びＮから選択され、Ｘ１及びＸ２はのうちの少なくとも１つはＮであり、Ｘ３～Ｘ６は、ＣＨ２、ＣＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、及びＮＨから選択され、Ｂ環は、Ｘ３～Ｘ６の選択に依存して、飽和、部分不飽和又は芳香族であり、ＲＢは、環炭素及び／又は環窒素において、式Ｉに対して定義された任意選択の置換を表す。
実施例１２：例示的な合成法
本発明の式ＸＸの化合物及び他の多くの化合物は、例えばスキーム５（変数は以上に定義した通りである）に図示される方法によって調製される。この３ステップ合成は、２，４－ジクロロ－ピリミジンＡ（例えば、２，４－ジクロロ－６－メチルピリミジン、ここで、Ｒ４はメチル又は２，４－ジクロロ－５～フルオロピリミジンであり、Ｒ５はフッ素である）の４位におけるｐ－フェニレンジアミンＢによる選択的芳香族求核置換で始まり、中間体Ｃを形成する。反応物をトリメチルアミンと共に氷冷エタノール添加し、室温で１５時間撹拌する例示的な反応条件をスキーム５に示す［Ｋｕｍａｒら、２０１４；Ｏｄｉｎｇｏら、２０１４］。次いで、塩素化中間体Ｃをアミノ化によりいずれかのアミンＨＮＲ２Ｒ３ Ｄと反応させて、中間体Ｅを生じる。反応物をＫ２ＣＯ３の存在下に高温でＤＭＦ中反応させる例示的なアミノ化条件をスキーム５に示す。ステップ３では、Ｒ１０基を採用する酸Ｆを中間体Ｅにカップリングさせる。さまざまな公知の合成法、例えばクロスカップリング、クリックケミストリー又は置換反応（例えば、ＳＮ２、芳香族、求電子）を採用して、選択されたＲ１０基を導入することができる［Ｌｉら、２０１４ａ；Ｌｉら、２０１４ｂ；ＬａＢａｒｂｅｒａら、２００７］。スキーム５は、化合物Ｇにおける－ＮＨ－ＣＯ－Ｒ１２であるＲ１０を形成するための、Ｅのアミン基と選択されたカルボン酸Ｆのカップリングを図示する。例示的なＲ１２は、アリール、アリール置換アルキル、ヘテロアリール及びヘテロアリール置換アルキルである。カップリングがプロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）及びトリエチルアミンの存在下に室温で進行して、所望の化合物Ｇを形成する例示的なカップリング条件をスキーム５に示す。図示された方法を採用して、例えば化合物６及び化合物８を調製した（スキーム６を参照のこと）。
さまざまな置換された出発物質Ａ、Ｂ、Ｄ及びＦは市販されているか、又は公知の方法を使用して調製することができる。実施形態において、Ｒ１０で既に置換されているアニリン誘導体（Ｂ’）をｐ－フェニレンジアミン誘導体Ｂの代わりに使用して、対応するＲ１０－置換中間体Ｃ’を形成することができる。中間体Ｃ’をＤと反応させることによって、図示された反応のステップ２を実施すると、対応する所望の化合物Ｇ’（ここで、Ｒ１０がＲ１２－ＣＯ－ＮＨ－に置き換わる）が生じる。当業者によって理解されるように、望ましくない副反応を防ぐために、示された反応中、出発物質又は中間体中のある種の基を保護することが有用であるうるか、又は必要でありうる。例えば、反応物Ｆ中の環Ｎは、適切なアミン保護基で保護することができる。適切な保護基の使用は、当技術分野において一般にルーチンである。さまざまな第一級若しくは第二級アミン（Ｄ）は市販されているか、又は周知の方法によって調製することができる。或いは、塩素化中間体Ｃを適切な求核試薬と反応させて、４－クロロの位置に選択された－ＮＲ２Ｒ３基を付加させることができる。例えば、Ｄは、ピロリジンなどの環式アミンとすることができる。別の考えうる代替案として、鈴木カップリングを使用して、Ｃ－Ｃ結合形成によりアミン含有基を導入することができる［Ｌｉら、２０１４ａ］。別の考えうる代替案として、バックワルド－ハートウィグクロスカップリングを使用して、そのような中間体に炭素とアミンの結合を形成することができる。
Figure 2023520330000080
化合物６及び８の詳細な合成（スキーム６）
Ｎ－（４－アミノフェニル）－２－クロロ－６－メチル－ピリミジン－４－アミン（１０２）。０℃で１０ｍＬのエタノールに溶解した０．５ｇ（３．０６ｍｍｏｌ）の２，４－ジクロロ－６－メチルピリミジン（１００）に、５１３．７μＬ（１．２当量、３７２．５ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン（ＴＥＡ）、及び３３０．５ｍｇ（３．０６ｍｍｏｌ）のｐ－フェニレンジアミン（１０１）を添加した。反応混合物を室温まで温め、その温度で終夜撹拌した。溶媒を真空中で除去し、得られた残渣を、４０％ヘキサン／酢酸エチルを溶離液として使用するシリカゲルクロマトグラフィーにかけて、５００ｍｇ（収率７０％）の純粋な生成物（１０２）を得た。1H NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 7.19 (広幅s, 1H), 7.02 (d, J = 8.8 Hz, 2H),6.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.18 (s, 1H), 3.77 (広幅s, 2H),2.26 (s, 3H).
Ｎ－（４－アミノフェニル）－６－メチル－２－（ピロリジン－１－イル）ピリミジン－４－アミン（１０４）。１２０ｍＬのＤＭＦに溶解した１．２ｇのＮ－（４－アミノフェニル）－２－クロロ－６－メチル－ピリミジン－４－アミン（１０２）に、室温で７７７．３ｍｇ（５．６２ｍｍｏｌ）の炭酸カリウム及び３．６３ｍｇ（４．１２ｍＬ、５１．１ｍｍｏｌ）のピロリジン（１０３）を添加した。反応混合物を８０℃に８時間加熱した。反応を室温に冷却し、水で希釈した。生成物を酢酸エチル（３回×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、ブラインで洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、油性粗生成物を得た。それを、１０％メタノール／ＤＣＭ（何滴かのＴＥＡを含む）を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにかけて、１．３１ｇ（収率９６％）の純粋な生成物（１０４）を得た。1H NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 7.11 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.67 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.25 (広幅s, 1H), 5.68 (s, 1H), 3.63 (広幅s, 2H), 3.56(t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.19 (s, 3H), 1.93 (t, J = 6.8 Hz, 4H).
Ｎ－（４－（（６－メチル－２－（ピロリジン－１－イル）ピリミジン－４－イル）アミノ）フェニル）－２－（チオフェン－２－イル）アセトアミド（６）。１５ｍＬ中７００ｍｇ（２．６０ｍｍｏｌ）のＮ－（４－アミノフェニル）－６－メチル－２－（ピロリジン－１－イル）ピリミジン－４－アミン（１０４）に、０℃で４０６ｍｇ（２．８６ｍｍｏｌ）の２－チオフェン酢酸（１０５）、９０６．８μＬ（６５７．５ｍｇ、６．５０ｍｍｏｌ）のＴＥＡ、及び３．０６ｍＬ（１．６５ｍｇ、５．２０ｍｍｏｌ）のＴ３Ｐ（酢酸エチル中５０％重量溶液）を添加した。混合物を室温まで温め、１５時間撹拌した。水を徐々に添加することによって、反応をクエンチし、生成物をＤＣＭ（３回×１５０ｍＬ）で抽出し、次にブラインで洗浄した。有機層を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲル及びＤＣＭ中１０％メタノールを使用して精製して、８６４．５ｍｇ（収率８４％）の純粋な生成物（６）を得た。1H NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.07 (s, 1H), 9.06 (広幅s, 1H), 7.64 (d, J =8.8 Hz, 2H), 7.49 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.39 - 7.37 (m, 1H), 6.98 - 6.96 (m,2H), 3.84 (s, 2H), 3.47 (s, 4H), 2.13 (s, 3H), 1.89 (t, J = 6.6 Hz, 4H). HPLC: 純度98%.
Ｂｏｃ保護インドール－３－カルボン酸１０６－ｂｏｃを、Ｔ３Ｐ及びＴＥＡの存在下における化合物１０４とのペプチドカップリング法で使用して、ｂｏｃ保護インドール誘導体８－ｂｏｃの合成を達成し、ｂｏｃ保護基のＴＦＡ脱保護を介してインドール誘導体８に好収率で変換した。なお、ｂｏｃ保護基は、－ＣＯＯ－ｔ－ブチル、Ｋ２Ｃｏ３、ＫＩ、ＥｔＯＨである。
Ｎ－（４－｛［６－メチル－２－（１－ピロリジニル）－４－ピリミジニル］アミノ｝フェニル）－１－｛［（２－メチル－２－プロパニル）オキシ］カルボニル｝－１Ｈ－インドール－３－カルボキサミド（８－ｂｏｃ）。８ｍＬのＤＣＭ中８０ｍｇ（０．２９７ｍｍｏｌ）の化合物１０４に、０℃で８５．３６ｍｇ（０．３２６７ｍｍｏｌのｂｏｃ－保護インドール－３－カルボン酸（１０６－ｂｏｃ）、１０３．６μＬ（７５．１３ｍｇ、０．７４２ｍｍｏｌ）のＴＥＡ、３５０μＬ（１８９ｍｇ、０．５９４ｍｍｏｌ）のＴ３Ｐを添加した。混合物を室温まで温め、２０時間撹拌した。水を徐々に添加することによって、反応をクエンチし、生成物をＤＣＭ（３回×５０ｍＬ）で抽出し、次にブラインで洗浄した。有機層を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲル及びＤＣＭ中１０％メタノールを使用して精製して、７６ｍｇ（収率５０％）の純粋な生成物（８－ｂｏｃ）を得た。1H NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 8.28 (広幅s, 1H), 8.24 - 8.13 (m, 3H), 7.57(q, J = 4.8, 8.8 Hz, 4H), 7.40 -7.31 m, 3H), 5.92 (s, 1H), 3.54 (s, 4H), 2.23(s, 3H), 1.86 (s, 4H), 1.66 (s, 9H).
Ｎ－（４－｛［６－メチル－２－（１－ピロリジニル）－４－ピリミジニル］アミノ｝フェニル）－１Ｈ－インドール－３－カルボキサミド（８）。７０ｍｇ（０．１３６ｍｍｏｌ）のＮ－（４－｛［６－メチル－２－（１－ピロリジニル）－４－ピリミジニル］アミノ｝フェニル）－１Ｈ－インドール－３－カルボキサミド（８－ｂｏｃ）をＤＣＭ中２５％ＴＦＡ（５ｍＬ）に溶解した。溶液を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、シリカゲル及びＤＣＭ中１０％メタノールを使用して、粗生成物を精製して、４３．７８ｍｇ（収率７８％）の純粋な生成物を得た。1H NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.7 (s, 1H), 9.65 (s, 1H),9.09 (s, 1H), 8.28 (広幅s, 1H), 8.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.67 (s, 4H), 7.47 (d, J = 8.0 Hz,1H), 7.20 -7.12 (m, 2H), 5.88 (s, 1H), 3.50 (s, 4H), 2.14 (s, 3H), 1.91 (s,4H).
Figure 2023520330000081
スキーム７は、化合物６の収量のために最適化された代替合成方法を図示する。この方法では、ｔ－ブチル保護カルバメート、例えば化合物３５を、選択された芳香族カルボン酸、例えば化合物３６と反応させて、保護されたカルバメート中間体、例えば化合物３７を形成する。中間体を、当技術分野において公知のように、例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて脱保護し、脱保護されたカルバメートを、第一級又は第二級アミン基（例えば、ピロリジニル基）を有する塩素化ヘテロ環式基、例えば化合物３８と反応させて、所望の式ＸＸの化合物、例えば化合物６を形成する。この方法は、出発物の芳香族カルボン酸及び第一級又は第二級アミン基を有する塩素化ヘテロ環化合物の選択によりさまざまな式ＸＸの化合物を調製するのにも採用されうる。
スキーム７において、化合物６の合成に採用される試薬を示す。第１の反応で、ＤＣＣはＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミドであり、ＤＭＡＰはジメチルアミノピリジンであり、溶媒ＤＣＭは、ジクロロメタンである。第２の反応では、ＴＦＡ脱保護後に、エタノール中炭酸カリウム及びヨウ化カリウムを採用する。当業者は、採用される試薬及び反応条件を所望の式ＸＸの化合物を調製するように容易に適合させることができる。
Figure 2023520330000082
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Claims (25)

  1. ＴＣＦ転写誘導性がんを治療する方法であって、それを必要とする患者にＣＨＤ１Ｌ阻害又はＴＣＦ転写異常の阻害に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与するステップを含む方法。
  2. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、式Ｉの化合物、又は塩若しくは溶媒和物、
    Figure 2023520330000083
    又はその塩若しくは溶媒和物である、
    ［式中、
    Ｂ環は、１、２又は３個の５員又は６員環を有するヘテロアリール環又は環系であり、これらのうちのいずれか２個又は３個は、縮合環とすることができ、前記環は、炭素環式、ヘテロ環式、アリール又はヘテロアリール環であり、前記環の少なくとも１個は、ヘテロアリールであり、
    前記Ｂ環において、Ｘはそれぞれ、Ｎ又はＣＨから独立的に選択され、少なくとも１つのＸはＮであり、
    ＲＰは、第一級若しくは第二級アミン基［－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）］であり、又は－（Ｍ）ｘ－Ｐ基であり、Ｐは、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）又はアリール若しくはヘテロアリール基であり、ｘは、０又は１であって、Ｍの有無を示し、Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－又は－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、
    Ｙは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ１）－、－Ｎ（Ｒ１）ＣＯ－、－ＳＯ２Ｎ（Ｒ１）－、又は－Ｎ（Ｒ１）ＳＯ２－からなる群から選択される２価の原子又は基であり、
    Ｌ１は、任意選択で置換されており、飽和であるか、又は二重結合を含む（ｃｉｓでも、ｔｒａｎｓでもよい）任意選択の１～４個の炭素のリンカーであり、ｘは、０又は１であって、Ｌ１の有無を示し、
    Ａ環は、１、２又は３個の環を有する炭素環式又はヘテロ環式環又は環系であり、これらのうちの２個又は３個は縮合されていてもよく、各環は、３～１０個の炭素原子を有し、１～６個のヘテロ原子を任意選択で有し、各環は、任意選択で飽和、不飽和又は芳香族であり、
    Ｚは、Ｒ’基で置換されている少なくとも１個の窒素を含む２価の基であり、
    実施形態において、Ｚは、－Ｎ（Ｒ’）－、－ＣＯＮ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－、－ＣＳＮ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＳ－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯＮ（Ｒ’）－、－ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２－、－ＣＨ（ＣＦ３）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＨ（ＣＦ３）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＨ２ＣＯＮ（Ｒ’）ＣＨ２－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯＣＨ２Ｎ（Ｒ’）ＣＨ２－、
    Figure 2023520330000084
    から選択される２価の基であり、又は前記２価のＺ基は、少なくとも１個の窒素環員を有する５員若しくは６員のヘテロ環式環、例えば
    Figure 2023520330000085
    を含み、
    Ｌ２は、任意選択で置換されており、飽和であるか、又は二重結合を含む（ｃｉｓでも、ｔｒａｎｓでもよい）任意選択の１～４個の炭素のリンカーであり、ｚは、０又は１であって、Ｌ１の有無を示し、
    Ｒは、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
    Ｒ’はそれぞれ、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
    Ｒ１は、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
    Ｒ２及びＲ３は、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、或いは
    Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員の飽和、部分不飽和又は芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
    ＲＡ及びＲＢは、それぞれ指示されたＡ及びＢ環又は環系上の水素又は１～１０個の非水素置換基を表し、ＲＡ及びＲＢ置換基は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アミノ、一置換又は二置換アミノ（－ＮＲＣＲＤ）、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、アシル、ハロアルキル、－ＣＯＯＲＣ、－ＯＣＯＲＣ、－ＣＯＮＲＣＲＤ、－ＯＣＯＮＲＣＲＤ、－ＮＲＣＣＯＲＤ、－ＳＲＣ、－ＳＯＲＣ、－ＳＯ２ＲＣ、及び－ＳＯ２ＮＲＣＲＤから独立的に選択され、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、及びアシルは、任意選択で置換されており、
    ＲＣ及びＲＤはそれぞれ、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、これらの基のそれぞれは、１個又は複数のハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール置換アルキル、又はヘテロシクリル置換アルキルで任意選択で置換されており、
    ＲＨは、任意選択で置換されているアリール又はヘテロアリール基であり、
    任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６アシル、－ＣＯＯＲＥ、－ＯＣＯＲＥ、－ＣＯＮＲＥＲＦ、－ＯＣＯＮＲＥＲＤ、－ＮＲＥＣＯＲＦ、－ＳＲＥ、－ＳＯＲＥ、－ＳＯ２ＲＥ、及び－ＳＯ２ＮＲＥＲＦでの置換を含み、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、及びアシルは、任意選択で置換されており、
    ＲＥ及びＲＦはそれぞれ、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル。Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６アシルから選択され、これらの基のそれぞれは、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、及びＣ１～Ｃ６アシルで任意選択で置換されている］
    請求項１に記載の方法。
  3. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、ＰＡＲＰ阻害剤でも、トポイソメラーゼの阻害剤でも、β－カテニンの阻害剤でもない、請求項１に記載の方法。
  4. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、式ＸＸの化合物、塩又は溶媒和物、
    Figure 2023520330000086
    及びそれらの塩又は溶媒和物である、
    ［式中、
    Ｒ１０は、－ＮＲｙ－ＣＯ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２又は－ＣＯ－ＮＲｙ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２であり、ｙは、０又は１であって、任意選択の１～６個の炭素原子のリンカー基であるＬ２の有無を示し、そのリンカーは、任意選択で置換されており、前記リンカーの１個又は２個の炭素は、Ｏ、ＮＨ、ＮＲｙ又はＳで場合によって置き換えられており、Ｒｙは、水素又は１～３個の炭素のアルキルであり、Ｒ１２は、アリール基、シクロアルキル基、ヘテロ環式基、又はヘテロアリール基であり、これらのそれぞれは、置換されていてもよく、
    ＲＮは、アミノ部分－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であり、Ｒ２及びＲ３は、水素若しくは場合によって置換されているアルキル基であり、又はＲ２とＲ３はそれらが結合している窒素と一緒になって、飽和若しくは部分不飽和の５～１０員ヘテロ環式環を形成し、
    Ｒ１、Ｒ６～Ｒ９は、水素又は任意選択の置換基を表す］
    請求項１に記載の方法。
  5. ＣＨＤ１Ｌ誘導性がん、ＥＭＴ誘導性がん又はＴＣＦ転写誘導性がんにおける腫瘍増殖、浸潤及び／又は転移を、それらの予防を必要とする患者にＣＨＤ１Ｌ阻害又はＴＣＦ転写異常の阻害に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与することによって予防する方法。
  6. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、式Ｉ又はＸＸのいずれか１つの化合物、塩又は溶媒和物である、請求項５に記載の方法。
  7. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、ＰＡＲＰ阻害剤でも、トポイソメラーゼの阻害剤でも、β－カテニンの阻害剤でもない、請求項５に記載の方法。
  8. ｍＣＲＣを含めてＣＲＣを治療する方法であって、それを必要とする患者に、ＴＣＦ転写異常の阻害に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与するステップを含む方法。
  9. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、式Ｉ又はＸＸの化合物、塩又は溶媒和物である、請求項８に記載の方法。
  10. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、ＰＡＲＰ阻害剤でも、トポイソメラーゼの阻害剤でも、β－カテニンの阻害剤でもない、請求項８に記載の方法。
  11. 薬剤抵抗性がんの治療方法であって、それを必要とする患者に、前記がんが抵抗性になった公知の治療と組み合わせてＣＨＤ１Ｌ阻害又はＴＣＦ転写異常の阻害に効果的な量のＣＨＤ１Ｌ阻害剤を投与するステップを含む方法。
  12. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、式Ｉ又はＸＸの化合物、塩又は溶媒和物である、請求項１１に記載の方法。
  13. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤が、ＰＡＲＰ阻害剤でも、トポイソメラーゼの阻害剤でも、β－カテニンの阻害剤でもない、請求項１１に記載の方法。
  14. がんが抵抗性になった治療が、従来の化学療法である、請求項１１に記載の方法。
  15. ＣＨＤ１Ｌ阻害剤をＰＡＲＰ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、白金ベースの抗新生物剤又はチミジル酸シンターゼ阻害剤と組み合わせて投与するステップを含む、がんの治療のための組合せ方法。
  16. 選択された化合物がＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅを阻害するかどうかを決定するステップを含む、ＣＨＤ１Ｌ依存性ＴＣＦ転写を阻害するＣＨＤ１Ｌ阻害剤を同定する方法。
  17. 化合物がＣＨＤ１Ｌ ＡＴＰａｓｅを阻害するかどうかを決定するステップを含む、がんの治療に有用な化合物を同定する方法。
  18. １つ又は複数の式Ｉ又はＸＸの化合物、塩又は溶媒和物を含む、がんの治療のための医薬組成物。
  19. 式Ｉの化合物、塩又は溶媒和物
    Figure 2023520330000087
    ［式中、
    Ｂ環は、１、２又は３個の５員又は６員環を有するヘテロアリール環又は環系であり、これらのうちのいずれか２個又は３個は、縮合環とすることができ、前記環は、炭素環式、ヘテロ環式、アリール又はヘテロアリール環であり、前記環の少なくとも１個は、ヘテロアリールであり、
    前記Ｂ環において、Ｘはそれぞれ、Ｎ又はＣＨから独立的に選択され、少なくとも１つのＸはＮであり、
    ＲＰは、第一級若しくは第二級アミン基［－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）］であり、又は－（Ｍ）ｘ－Ｐ基であり、Ｐは、－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）又はアリール若しくはヘテロアリール基であり、ｘは、０又は１であって、Ｍの有無を示し、Ｍは、任意選択で置換されているリンカー－（ＣＨ２）ｎ－又は－Ｎ（Ｒ）（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎはそれぞれ、独立的に１～６の（１と６を含む）整数であり、
    Ｙは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ１）－、－ＣＯＮ（Ｒ１）－、－Ｎ（Ｒ１）ＣＯ－、－ＳＯ２Ｎ（Ｒ１）－、又は－Ｎ（Ｒ１）ＳＯ２－からなる群から選択される２価の原子又は基であり、
    Ｌ１は、任意選択で置換されており、飽和であるか、又は二重結合を含む（ｃｉｓでも、ｔｒａｎｓでもよい）任意選択の１～４個の炭素のリンカーであり、ｘは、０又は１であって、Ｌ１の有無を示し、
    Ａ環は、１、２又は３個の環を有する炭素環式若しくはヘテロ環式環又は環系であり、これらのうちの２個又は３個は縮合されていてもよく、各環は、３～１０個の炭素原子を有し、１～６個のヘテロ原子を任意選択で有し、各環は、任意選択で飽和、不飽和又は芳香族であり、
    Ｚは、Ｒ’基で置換されている少なくとも１個の窒素を含む２価の基であり、
    実施形態において、Ｚは、－Ｎ（Ｒ’）－、－ＣＯＮ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯ－、－ＣＳＮ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＳ－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯＮ（Ｒ’）－、－ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２－、－ＣＨ（ＣＦ３）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＨ（ＣＦ３）－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＨ２ＣＯＮ（Ｒ’）ＣＨ２－、－Ｎ（Ｒ’）ＣＯＣＨ２Ｎ（Ｒ’）ＣＨ２－、
    Figure 2023520330000088
    から選択される２価の基であり、又は前記２価のＺ基は、少なくとも１個の窒素環員を有する５員若しくは６員のヘテロ環式環、例えば
    Figure 2023520330000089
    を含み、
    Ｌ２は、任意選択で置換されており、飽和であるか、又は二重結合を含む（ｃｉｓでも、ｔｒａｎｓでもよい）任意選択の１～４個の炭素のリンカーであり、ｚは、０又は１であって、Ｌ１の有無を示し、
    Ｒは、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
    Ｒ’はそれぞれ、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
    Ｒ１は、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、
    Ｒ２及びＲ３は、水素、脂肪族基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基及びヘテロアリール基からなる群から独立的に選択され、これらの基のそれぞれは、任意選択で置換されており、或いは
    Ｒ２とＲ３はそれらが結合しているＮと一緒になって、任意選択で置換されている５員～１０員の飽和、部分不飽和又は芳香族環のヘテロ環式環を形成し、
    ＲＡ及びＲＢは、それぞれ指示されたＡ及びＢ環又は環系の水素又は１～１０個の非水素置換基を表し、ＲＡ及びＲＢ置換基は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アミノ、一置換又は二置換アミノ（－ＮＲＣＲＤ）、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、アシル、ハロアルキル、－ＣＯＯＲＣ、－ＯＣＯＲＣ、－ＣＯＮＲＣＲＤ、－ＯＣＯＮＲＣＲＤ、－ＮＲＣＣＯＲＤ、－ＳＲＣ、－ＳＯＲＣ、－ＳＯ２ＲＣ、及び－ＳＯ２ＮＲＣＲＤから独立的に選択され、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、及びアシルは、任意選択で置換されており、
    ＲＣ及びＲＤはそれぞれ、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、これらの基のそれぞれは、１個又は複数のハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール置換アルキル、又はヘテロシクリル置換アルキルで任意選択で置換されており、
    ＲＨは、任意選択で置換されているアリール又はヘテロアリール基であり、
    任意選択の置換は、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６アシル、－ＣＯＯＲＥ、－ＯＣＯＲＥ、－ＣＯＮＲＥＲＦ、－ＯＣＯＮＲＥＲＤ、－ＮＲＥＣＯＲＦ、－ＳＲＥ、－ＳＯＲＥ、－ＳＯ２ＲＥ、及び－ＳＯ２ＮＲＥＲＦでの置換を含み、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、及びアシルは、任意選択で置換されており、
    ＲＥ及びＲＦはそれぞれ、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６アシルから選択され、これらの基のそれぞれは、１個又は複数のハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、モノ又はジ－Ｃ１～Ｃ３アルキル置換アミノ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルケニル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ６～Ｃ１２アリール、Ｃ５～Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ３～Ｃ１２ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ３アルコキシ、及びＣ１～Ｃ６アシルで任意選択で置換されている］（ただし、前記化合物が化合物１～９のうちの１つでないことを除く）。
  20. 式ＸＸの化合物又はその塩若しくは溶媒和物、
    Figure 2023520330000090
    及びその塩若しくは溶媒和物である、
    ［式中、
    Ｒ１０は、－ＮＲｙ－ＣＯ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２又は－ＣＯ－ＮＲｙ－（Ｌ２）ｙ－Ｒ１２であり、ｙは、０又は１であって、任意選択の１～６個の炭素原子のリンカー基であるＬ２の有無を示し、そのリンカーは任意選択で置換されており、前記リンカーの１個又は２個の炭素は、Ｏ、ＮＨ、ＮＲｙ又はＳで任意選択で置き換えられ、Ｒｙは、水素又は１～３個の炭素のアルキルであり、Ｒ１２は、アリール基、シクロアルキル基、ヘテロ環式基、又はヘテロアリール基であり、これらのそれぞれは、置換されていてもよく、
    ＲＮは、アミノ部分－Ｎ（Ｒ２）（Ｒ３）であり、Ｒ２及びＲ３は、水素若しくは任意選択で置換されているアルキル基であり、又はＲ２とＲ３はそれらが結合している窒素と一緒になって、飽和若しくは部分不飽和の５～１０員ヘテロ環式環を形成し、
    Ｒ１、Ｒ６～Ｒ９は、水素又は任意選択の置換基を表す］（ただし、前記化合物が化合物１～９のうちの１つでないことを除く）。
  21. 構造がスキーム１に記載されている化合物６．５、６．１１～６．２９から選択される化合物又はその塩若しくは溶媒和物。
  22. 構造がスキーム１に記載されている化合物６．５、６．１１、６．１６、６．１８、６．２０及び６．２１から選択される化合物又はその塩若しくは溶媒和物。
  23. 化合物６．５、６．１１～６．２９から選択される化合物又はその塩若しくは溶媒和物と薬学的に許容できるキャリアとを含む医薬組成物。
  24. がんの治療薬、特にＣＲＣ及びｍＣＲＣの治療薬の製造におけるＣＨＤ１Ｌ阻害剤の使用。
  25. がんの治療における使用のための、特にＣＲＣ及びｍＣＲＣの治療のためのＣＨＤ１Ｌ阻害剤。
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