JP2023099723A

JP2023099723A - ロコモティブシンドローム改善用組成物

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Publication number: JP2023099723A
Application number: JP2023085314A
Authority: JP
Inventors: 季理子秋山; Kiriko Akiyama; 繁松見; Shigeru Matsumi; 昭彦下出; Akihiko Shimode; 徹也丸山; Tetsuya Maruyama
Original assignee: YOMEISHU SEIZO CO Ltd
Current assignee: YOMEISHU SEIZO CO Ltd
Priority date: 2018-04-13
Filing date: 2023-05-24
Publication date: 2023-07-13
Anticipated expiration: 2039-04-11
Also published as: JP2019180409A; JP7328670B2; JP2019182863A; JP7385325B2

Abstract

【課題】食品等の利用形態にも適合可能な天然植物素材を用いて、優れた機能性を有する組成物を提供する。【解決手段】クロモジエキスを、関節保護用に用いられるロコモティブシンドローム改善用組成物の有効成分として用いる。前記クロモジエキスは、クロモジの熱水抽出物を含むものであることが好ましい。【選択図】なし

Description

本発明は、天然植物素材を有効成分として含有する、ロコモティブシンドローム改善用組成物に関する。

クスノキ科植物のクロモジは北海道の南部から九州まで広く分布している落葉低木であり、その枝葉は烏樟（うしょう）と呼ばれ、古くから消化器系を助ける生薬や民間薬の原料として用いられてきた。また、良い香りがあるのが特徴で、和菓子に添える高級爪楊枝や、水蒸気蒸留して採取した精油がアロマなどに利用されている。

従来、このクロモジには、種々の機能性が報告されている。例えば、特許文献１には、クスノキ科クロモジ樹皮の抽出物からなるメラニン産生抑制剤が記載されている。また、特許文献２には、クロモジ等の植物の抽出物を有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤が記載されている。また、特許文献３には、クロモジ等のクスノキ科の植物の一部位の粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキスを含有するアルコール障害予防剤が記載されている。また、特許文献４には、クロモジ属(Lindera Thunb.)に属する植物の抽出物を有効成分とするプロテアーゼ阻害剤が記載されている。また、特許文献５には、クロモジ等のクスノキ科植物の水蒸気蒸留水を含有することを特徴とする化粧料組成物が記載されている。また、特許文献６には、クロモジ等の植物の抽出物を有効成分とする抗インフルエンザウイルス剤が記載されている。また、特許文献７には、クロモジ等の植物又はそのエキスを含有することを特徴とする血圧降下剤が記載されている。また、特許文献８には、クロモジ等の植物エキスを有効成分として含有するメイラード反応阻害剤が記載されている。また、特許文献９には、クロモジ等の植物の処理物を含有することを特徴とするＩｇＥ産生抑制組成物及び抗アレルギー組成物が記載されている。また、特許文献１０には、クロモジ等の植物の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするセラミダーゼ活性阻害剤が記載されている。

特開平０７－２７７９４１号公報特開平１１－００１４２９号公報特開２０００－３４４６７５号公報特開２００１－１２２７２８号公報特開２００１－２２６２１８号公報特開２００４－０５９４６３号公報特開２００７－０５１１２９号公報特開２０１０－０７７１２３号公報特開２０１０－１８０１４１号公報特開２０１７－１２４９８４号公報

本発明の目的は、食品等の利用形態に適合可能な天然植物素材を用いて、優れた機能性を有する組成物を提供することにある。

本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究した結果、クスノキ科植物のクロモジから抽出したクロモジエキスには、骨密度の低下を抑える作用や、筋肉量の低下を抑える作用や、関節のプロテオグリカン量の低下を抑える作用を見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、第１には、クロモジエキスを有効成分として含有することを特徴とするロコモティブシンドローム改善用組成物を提供するものである。

上記ロコモティブシンドローム改善用組成物においては、該組成物は、骨の維持又は強化用に用いられるものであることが好ましい。

また、上記ロコモティブシンドローム改善用組成物においては、該組成物は、筋肉維持用に用いられるものであることが好ましい。

また、上記ロコモティブシンドローム改善用組成物においては、該組成物は、関節保護用に用いられるものであることが好ましい。

また、上記ロコモティブシンドローム改善用組成物においては、前記クロモジエキスは、クロモジの熱水抽出物を含むものであることが好ましい。

本発明によれば、クスノキ科植物のクロモジから抽出したクロモジエキスには、骨密度の低下を抑える作用や、筋肉量の低下を抑える作用や、関節のプロテオグリカン量の低下を抑える作用があることが明らかとなった。これにより、そのクロモジエキスを有効成分にして、例えば、ロコモティブシンドローム改善用組成物等、優れた機能性を有する組成物を提供することができる。また、その組成物は、食品等の利用形態にも適している。

試験例１において生活習慣病モデルマウスへのクロモジエキスの投与が骨密度に与える影響を検証した結果を示す図表であり、（ａ）はクロモジエキス投与群に関する結果を示す図表であり、（ｂ）は参考薬剤による陽性対照の結果を示す図表である。試験例２において生活習慣病モデルマウスへのクロモジエキスの投与が筋肉量に与える影響を検証した結果を示す図表である。試験例３において正常ラットの関節部位に発現したプロテオグリカン量を検証した結果の一例を示す図表であり、（ａ）はサフラニンＯ染色標本の顕微観察の可視像であり、（ｂ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分を白抜きにした像であり、（ｃ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分のうち赤色がより濃く染まった部分を赤色にした像である。試験例３において糖尿病病態モデルラットの関節部位に発現したプロテオグリカン量を検証した結果の一例を示す図表であり、（ａ）はサフラニンＯ染色標本の顕微観察の可視像であり、（ｂ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分を白抜きにした像であり、（ｃ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分のうち赤色がより濃く染まった部分を赤色にした像である。試験例３において糖尿病病態モデルラットへのクロモジエキスの投与が関節部位のプロテオグリカン量に与える影響を検証した結果の一例を示す図表であり、（ａ）はサフラニンＯ染色標本の顕微観察の可視像であり、（ｂ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分を白抜きにした像であり、（ｃ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分のうち赤色がより濃く染まった部分を赤色にした像である。試験例４において正常マウスの関節部位に発現したプロテオグリカン量を検証した結果の一例を示す図表であり、（ａ）はサフラニンＯ染色標本の顕微観察の可視像であり、（ｂ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分を白抜きにした像であり、（ｃ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分のうち赤色がより濃く染まった部分を赤色にした像である。試験例４において生活習慣病モデルマウスの関節部位に発現したプロテオグリカン量を検証した結果の一例を示す図表であり、（ａ）はサフラニンＯ染色標本の顕微観察の可視像であり、（ｂ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分を白抜きにした像であり、（ｃ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分のうち赤色がより濃く染まった部分を赤色にした像である。試験例４において生活習慣病モデルマウスへのクロモジエキスの投与が関節部位のプロテオグリカン量に与える影響を検証した結果の一例を示す図表であり、（ａ）はサフラニンＯ染色標本の顕微観察の可視像であり、（ｂ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分を白抜きにした像であり、（ｃ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分のうち赤色がより濃く染まった部分を赤色にした像である。試験例４において生活習慣病モデルマウスへの血糖降下剤であるメトホルミン塩酸塩の投与が関節部位のプロテオグリカン量に与える影響を検証した結果の一例を示す図表であり、（ａ）はサフラニンＯ染色標本の顕微観察の可視像であり、（ｂ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分を白抜きにした像であり、（ｃ）は可視像をデジタル処理して赤色染色部分のうち赤色がより濃く染まった部分を赤色にした像である。試験例４において膝関節部分におけるサフラニンＯ染色による染色面積について正常群の平均値を１００としたときの相対値で比較した結果を示す表である。

本発明は、クスノキ科植物のクロモジから抽出したクロモジエキスには、骨密度の低下を抑える作用や、筋肉量の低下を抑える作用や、関節のプロテオグリカン量の低下を抑える作用があることを見出し、これに基づき、ロコモティブシンドローム改善用組成物等を提供するものである。また、ロコモティブシンドローム改善用組成物は、骨の維持又は強化用に用いられたり、筋肉維持用に用いられたり、関節保護用に用いられたりする。すなわち、ヒトや動物の生体に作用する機能性を備えた組成物を提供するものであり、以下では、説明の便宜のために「機能性組成物」あるいは単に「組成物」という場合がある。

本発明に用いられるクロモジエキスの基原としては、クロモジ属（Ｌｉｎｄｅｒａ）に属する植物であればよく、例えば、クロモジ（ＬｉｎｄｅｒａｕｍｂｅｌｌａｔａＴｈｕｎｂ．）、オオバクロモジ（Ｌｉｎｄｅｒａｕｍｂｅｌｌａｔａｖａｒ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅａ（Ｍａｘｉｍ．）Ｍｏｍｉｙａｍａ）、ヒメクロモジ（Ｌｉｎｄｅｒａｕｍｂｅｌｌａｔａｖａｒ．ｌａｎｃｅａＭｏｍｉｙａｍａ）、ケクロモジ（Ｌｉｎｄｅｒａｓｅｒｉｃｅａ（Ｓｉｅｂ．ｅｔＺｕｃｃ．）Ｂｌｕｍｅ）、ウスゲクロモジ（Ｌｉｎｄｅｒａｓｅｒｉｃｅａｖａｒ．ｇｌａｂｒａｔａＢｌｕｍｅ）、シロモジ（Ｌｉｎｄｅｒａｔｒｉｌｏｂａ（Ｓｉｅｂ．ｅｔＺｕｃｃ．）Ｂｌｕｍｅ）、アメリカクロモジ（Ｌｉｎｄｅｒａｂｅｎｚｏｉｎ（Ｌ．）Ｂｌｕｍｅ）、ヤマコウバシ（ＬｉｎｄｅｒａｇｌａｕｃａＢｌｕｍｅ）、ダンコウバイ（ＬｉｎｄｅｒａｏｂｔｕｓｉｌｏｂａＢｌｕｍｅ）、テンダイウヤク（Ｌｉｎｄｅｒａｓｔｒｙｃｈｎｉｆｏｌｉａ（Ｓｉｅｂ．ｅｔＺｕｃｃ．）Ｆ．Ｖｉｌｌ．）などが挙げられる。これらの中でも、特に、クロモジ（ＬｉｎｄｅｒａｕｍｂｅｌｌａｔａＴｈｕｎｂ．）が好ましい。

上記植物の部位としては、特に制限はなく、例えば、幹枝、幹、枝葉、葉、樹皮、根、根茎、根皮、茎、花、種子、果皮、果肉、果実、地上部、地下部、全木などが挙げられる。これらの中でも、特に、幹枝が好ましい。

本発明においては、上記植物を基原として抽出物を調製して、それを有効成分として用いる。より具体的には、クロモジの抽出物たるクロモジエキスを、上記した機能性の関与成分として用いるものである。その抽出に用いられる抽出溶媒としては、適宜適当なものを用いればよいが、典型的には水、有機溶媒、又は含水の有機溶媒が挙げられる。特には、水であることがより好ましい。有機溶媒としては、特には、例えば、メタノール、エタノール等の低級脂肪族アルコール、酢酸エチル、アセトン、クロロホルム、ｎ－ヘキサンなどの水に相溶性のある有機溶媒が挙げられる。これら有機溶媒は二種以上を混合して用いることもできる。また、含水の有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒の含有量は、０体積％超～１００体積％未満の範囲であり得るが、５０体積％以下であることが好ましく、５～５０体積％であることがより好ましく、１０～４５体積％が更により好ましく、２０～４０体積％が特に好ましい。また、その抽出にエタノール又は含水エタノールを用いる場合には、エタノール含量５０体積％以下の含水エタノールが好ましく、エタノール含量５～５０体積％の含水エタノールがより好ましく、エタノール含量１０～４５体積％の含水エタノールが更により好ましく、エタノール含量２０～４０体積％の含水エタノールが特に好ましい。

抽出の具体的手法としては、一般的な抽出手段を採用することができ、例えば、クロモジの幹枝の乾燥物を適当に裁断した後、その全質量に対して１～５０倍、好ましくは５～２０倍量の抽出溶媒を加え、１～２４時間程度、室温～使用溶媒の沸点の範囲で浸漬・加熱抽出を行うことができる。必要に応じて、加圧下に抽出を行ってもよい。抽出後には、必要に応じて濾過を行ったり、得られた抽出液を減圧濃縮したり、凍結乾燥したりして、溶媒を除去したりしてもよく、適宜目的とする抽出物を調製することができる。乾燥手段としては、減圧乾燥や噴霧乾燥であってもよい。なお、例えば、抽出溶媒が水である場合には、抽出温度は５～１００℃であることが好ましく、３０～１００℃であることがより好ましく、５０～１００℃であることが更により好ましい。また、抽出溶媒がエタノール又は含水エタノールである場合には、抽出温度は５～７０℃であることが好ましく、３０～７０℃であることがより好ましく、５０～７０℃であることが更により好ましい。

上記のようにして得られたクロモジエキスは、後述の実施例で示されるように、骨密度の低下を抑える効果や、筋肉量の低下を抑える効果や、関節のプロテオグリカン量の低下を抑える効果に優れている。よって、これを生体に作用させることにより、ロコモティブシンドロームを改善するのに、効果的に用いられ得る。また、本発明による機能性組成物は、骨の維持又は強化用に用いられたり、筋肉維持用に用いられたり、関節保護用に用いられたりするのにも、効果的に用いられ得る。なお、「改善」とは、本発明による組成物を適用しない場合に比べて、適用したほうが諸般の症状や身体的状態を適用者にとってより良い状態にさせることを意味するともに、日頃からそのようなより良い状態を崩さずに維持するための予防的適用をも含む意味である。

ここで、一般にロコモティブシンドロームとは、骨、筋肉、関節などの運動器のいずれか又は複数機能が低下したために移動機能が低下した状態をいう。この筋肉、骨、関節はお互いを支えあっているため、一部の機能の改善を試みても大きな移動機能の改善にはつながりにくい。例えば運動不足により骨格筋が低下すると筋肉による骨への刺激が不足し、骨が弱くなるため、骨だけを改善しようとしても筋肉が衰えていればなかなか骨はよくならず、移動機能の大きな改善は期待できない。このように複数部位の機能が低下している場合は、どれか一つを改善するより、それら複数部位を一緒に改善した方がより効果的といえる。本発明によれば、骨、筋肉、関節など複数部位のいずれに対しても、その機能の改善効果が期待でき、よって、移動機能が低下した状態を効果的に改善することができる。

本発明による組成物は、例えば、経口的に投与されるものであってもよい。経口投与のための形態としては、特に制限はなく、上記に説明したクロモジエキスと、経口摂取用として許容される基材や担体、溶媒等を用いて、固体状物、液状物、乳化状物、ペースト状物、ゼリー状物等の形態とすることができる。また、錠剤、顆粒剤、散剤、液剤、カプセル剤等の形態とすることができる。また、上記に説明したクロモジエキスを適当な担体、好ましくは脂肪酸トリグリセライドと混合し、液状のままソフトカプセル等に充填し、調製することもできる。

一方、本発明による組成物は、例えば皮膚外用等、非経口的に投与されるものであってよい。そのための形態としては、特に制限はなく、溶液、乳液の形態や、分散剤、懸濁剤、安定剤などを添加した形態、パップ剤、ローション剤、軟膏剤、チンキ剤、クリーム剤等の形態で用いることができる。

製剤化においては、経口剤や非経口剤となす場合に限られず、必要に応じて、通常使用されている賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、界面活性剤、溶解補助剤、還元剤、緩衝剤、吸着剤、流動化剤、帯電防止剤、抗酸化剤、甘味剤、矯味剤、清涼化剤、遮光剤、着香剤、香料、芳香剤、コーティング剤、可塑剤等の製剤添加物の１種または２種以上を適宜選択して添加してもよい。

そのような製剤添加物としては、具体的には、例えば、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、マルトデキストリン、エチルセルロース、乳糖、ソルビトール、無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸、オレイン酸、流動パラフィン、第二リン酸カルシウム、セバチン酸ジブチル、マクロゴール、プロピレングリコール、コーンスターチ、デンプン、アルファー化デンプン、ゼラチン、ポピドン、クロスポピドン、グリセリン、ポリソルベート８０、クエン酸、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、炭酸ナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等を挙げることができる。

本発明によるロコモティブシンドローム改善用組成物においては、上記に説明したクロモジエキスを有効成分とし、更に、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、脂肪酸、食物繊維等の他の成分を添加してもよい。

本発明によるロコモティブシンドローム改善用組成物においては、有効成分たる上記クロモジエキスを全体中に乾燥分換算で０．００１～９９質量％含有していることが好ましく、０．０１～７０質量％含有していることがより好ましく、０．０５～５０質量％含有していることが更により好ましい。

本発明によるロコモティブシンドローム改善用組成物をヒトに経口投与する場合、その投与量としては、年齢や体重によっても異なるが、例えば、成人１日当たり、上記に説明したクロモジエキスの乾燥分換算で１．０ｍｇ～５０ｇ程度であることが好ましく、５．０ｍｇ～２０ｇ程度であることがより好ましく、１０ｍｇ～１０ｇ程度であることが更により好ましい。

本発明によるロコモティブシンドローム改善用組成物の使用形態としては、特に制限はない。例えば、機能性食品、サプリメント、医薬品、化粧品などの形態であってよい。なお、これらの形態は、ヒト用だけに限られず、動物用であってもよい。より具体的には、機能性表示食品、特定保健用食品、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、医薬品、医薬部外品、化粧品、動物用健康食品、動物用機能性食品、動物用栄養補助食品、動物用サプリメント、動物用医薬品、動物用医薬部外品、動物用化粧品など各種の製品形態で、あるいはそれら製品と組み合わせて使用されることが可能である。

本発明によるロコモティブシンドローム改善用組成物の使用形態としては、食品組成物の形態であってもよい。すなわち、上記に説明したクロモジエキスを飲食物に所定量配合することにより、所定の機能性を発揮させるための食品組成物と成すことができる。具体的には、例えば、固形状、粉末状、顆粒状のものとしては、ビスケット、クッキー、ケーキ、スナック、煎餅などの各種の菓子類、パン、粉末飲料（粉末コーヒー、粉末ココアなど）、飴、キャラメル等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。また、液状、乳化状、ペースト状、ゼリー状のものとしては、ドリンク、ゼリー、ムースなどの各種製品や薬用酒等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。更には、これら飲食物に配合するために用いられる食品添加用の組成物の形態であってもよい。

以下に実施例を挙げて本発明について更に具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。

［調製例１］
クロモジ（Lindera umbellata Thunb.）の幹枝の乾燥物を裁断した後、その全質量に対して１０倍量の水を加え加熱し、沸騰後１時間浸漬・加熱抽出を行った。抽出後は濾過により不溶物を除き、得られた抽出液を減圧濃縮し、凍結乾燥にて抽出溶媒を除去して、乾燥粉末状のクロモジエキスを得た。

＜試験例１＞
調製例１で得られたクロモジエキス末（熱水抽出物）を用いて、骨密度に与える影響を検証した。

評価には生活習慣病モデルマウスであるC57BLKS/J Iar-+Lwprdb /+Lwprdb （db/dbマウス）を使用した。そして、正常マウスであるC57BLKS/J Iar-m+/+Lwprdb （db/+マウス）と比較したとき、生活習慣病モデルマウスのほうが骨密度の低下がみられるが、これをクロモジエキスが抑制できるかどうか評価した。

具体的には、使用動物（生活習慣病モデルマウスと正常マウス、雄、７週齢）は、１週間予備飼育後、オールフレッシュエアー、温度２４±２℃、湿度：５０±１０％、照明時間：１日１２時間（７～１９時）に設定されたバリア施設内の飼育室で飼育した。餌は放射線滅菌した固形飼料（ラボMRストック、日本農産工業株式会社）を使用し、飲料水は塩素消毒した井水を給水瓶を用いて自由摂取させた。投与は正常群および対照群は蒸留水を、クロモジエキス投与群は３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを、経口ゾンデを用いて１２週間毎日経口投与した。また、参考薬剤として血糖降下剤であるメトホルミン塩酸塩を、３５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与量で、同様に経口ゾンデを用いて１２週間毎日経口投与した。投与期間終了後、イソフルラン吸入麻酔下で心臓より全採血を行い、そののち右側後肢の脛骨を採取後、骨密度の測定まで冷凍保存した。骨密度の測定はマイクロフォーカスＸ線ＣＴスキャナー断層画像撮影（「Scan Xmate-L090」、コムスキャンテクノ社）を使用し、電圧７５ｋＶ、電流１００μＡ、拡大率９．６６７倍、解像度１０．３３４μｍ／ｐｉｘｅｌ、スライス厚１０．３３４μｍの条件で脛骨近位端の海綿骨を撮影し、解析ソフト（「TRI/3D-BON」、ラトックシステムエンジニアリング社）により解析を行い、以下の式により骨密度を算出した。

骨密度（％）＝海綿骨体積／骨組織体積×１００ …（１）

各試験群についてそれぞれ３例の結果を、骨密度の平均値と標準偏差にして、図１に示す。なお、クロモジエキス投与群と参考薬剤による陽性対照の試験は、正常群及び対照群に対する試験を、それぞれ別日に行った。

その結果、図１（ａ）に示されるように、クロモジエキスの投与により、生活習慣病モデルマウスの骨密度の低下が抑えられ、正常マウスの骨密度のレベルまで骨密度が維持されること明らかとなった。一方、図１（ｂ）に示されるように、参考薬剤として用いた血糖降下剤の投与では、骨密度の低下が抑えられることはなかった。

＜試験例２＞
調製例１で得られたクロモジエキス末（熱水抽出物）を用いて、筋肉量に与える影響を検証した。

評価には生活習慣病モデルマウスであるC57BLKS/J Iar-+Lwprdb /+Lwprdb （db/dbマウス）を使用した。そして、正常マウスであるC57BLKS/J Iar-m+/+Lwprdb （db/+マウス）と比較したとき、生活習慣病モデルマウスのほうが筋肉量の低下がみられるが、これをクロモジエキスが抑制できるかどうか評価した。

具体的には、使用動物、予備飼育、飼育環境、給餌や給水、クロモジエキスの投与方法は、すべて試験例１と同様とした。ただし、クロモジエキス投与群としては、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙと３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの２種類の投与量の投与群を設けた。また、参考薬剤として血糖降下剤であるメトホルミン塩酸塩を、３５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与量で、同様に経口ゾンデを用いて１２週間毎日経口投与した。投与期間終了後、イソフルラン吸入麻酔下で心臓より全採血を行い、そののち腓腹筋を採取し、重量を測定した。

各試験群についてそれぞれ９～１０例の結果を、腓腹筋重量の平均値と標準偏差にして、図２に示す。

その結果、図２に示されるように、クロモジエキスの投与により、特に、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与量の投与群において、生活習慣病モデルマウスの筋肉量が増加した。一方、参考薬剤として用いた血糖降下剤の投与では、筋肉量が増加することはなかった。

＜試験例３＞
調製例１で得られたクロモジエキス末（熱水抽出物）を用いて、関節部位のプロテオグリカン量に与える影響を検証した。

評価では、使用動物（Slc:SDラット、雄、6週齢）にストレプトゾトシン（STZ: streptozotocin）を６０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与量で腹腔内注射して、投与３日後に血糖値を測定して、血糖値３００ｍｇ／ｄＬ以上を示した動物を糖尿病病態モデルとして使用した。そして、ストレプトゾトシン非投与の正常ラットと比較したとき、糖尿病病態モデルラットのほうが関節部位のプロテオグリカン量の低下がみられるが、これをクロモジエキスが抑制できるかどうか評価した。

具体的には、使用動物（Slc:SDラット、雄、6週齢）は、１週間予備飼育後、オールフレッシュエアー、温度２４±２℃、湿度：５０±１０％、照明時間：１日１２時間（７～１９時）に設定されたバリア施設内の飼育室で飼育した。餌は放射線滅菌した固形飼料（ラボMRストック、日本農産工業株式会社）を使用し、飲料水は塩素消毒した井水を給水瓶を用いて自由摂取させた。投与は正常群および対照群は蒸留水を、クロモジエキス投与群は３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを経口ゾンデを用いて８週間毎日経口投与した。投与期間終了後、イソフルラン吸入麻酔下で腹大動脈より全採血を行い、そののち左側後肢の脛骨、大腿骨は膝関節を分離せずに１０％中性緩衝ホルマリン液中に保存した。検体をEDTAにて脱灰した後、パラフィンブロックを作製し、ミクロトーム（LEICA SM200R）にて厚さ３μｍに薄切、サフラニンＯ染色標本を作製した。

サフラニンＯ染色により赤く染色したプロテオグリカンを顕微観察（「デジタルマイクロスコープVH-S30」、KEYENCE）した。また、得られた画像は画像解析ソフト（ImageJ）により解析し、膝関節部分で赤い染色が視認できる部分を抽出して、その面積と、そのうちの染色がより濃く染まった部分（ImageJソフトで所定の色濃度範囲を選択）の面積を測定した。

図３Ａには、ストレプトゾトシン非投与の正常ラットにおける結果の一例を示す。また、図３Ｂには、ストレプトゾトシン投与の糖尿病病態モデルラットにおける結果の一例を示す。また、図３Ｃには、糖尿病病態モデルラットにおいてクロモジエキスを投与したときの結果の一例を示す。

図３Ａと図３Ｂとの比較にみられるように、糖尿病病態モデルラットでは、正常ラットと比べて、関節部位に発現したプロテオグリカンが濃く染まる部分の面積が減少した。これは、糖尿病病態モデルラットでは、関節部位のプロテオグリカン量が正常ラットに比べて減少していることを示す。これに対して、図３Ｃにみられるように、糖尿病病態モデルラットにおいてクロモジエキスを投与すると、プロテオグリカンが濃く染まる部分の面積が回復した。よって、糖尿病病態モデルラットにおける関節部位のプロテオグリカン量の低下を、クロモジエキスの投与により抑制できることが明らかとなった。

＜試験例４＞
調製例１で得られたクロモジエキス末（熱水抽出物）を用いて、関節部位のプロテオグリカン量に与える影響を検証した。

評価には試験例２と同様の生活習慣病モデルマウスを使用した。そして、正常マウスと比較したとき、生活習慣病モデルマウスのほうが関節部位のプロテオグリカン量の低下がみられるが、これをクロモジエキスが抑制できるかどうか評価した。

具体的には、使用動物、予備飼育、飼育環境、給餌や給水、クロモジエキスの投与方法は、すべて試験例１と同様とした。ただし、クロモジエキス投与群としては３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与群を設け、また、参考薬剤として血糖降下剤であるメトホルミン塩酸塩を、３５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与量で経口ゾンデを用いて１２週間毎日経口投与し、これを陽性対照として加えた以外は、試験例３と同様にして測定を行った。

図４Ａには、正常マウスにおける結果の一例を示す。また、図４Ｂには、生活習慣病モデルマウスにおける結果の一例を示す。また、図４Ｃには、生活習慣病モデルマウスにおいてクロモジエキスを投与したときの結果の一例を示す。また、図４Ｄには、生活習慣病モデルマウスにおいて血糖降下剤であるメトホルミン塩酸塩を投与したときの結果の一例を示す。更に、図５には、膝関節部分におけるサフラニンＯ染色を各群６例の試験動物で行って、試験例３と同様にして染色がより濃く染まった部分の面積を求めて、正常群の平均値を１００としたときの相対値で比較した結果を示す。

結果は、試験例３の結果と同様であった。すなわち、図４Ａと図４Ｂとの比較、及び図５にみられるように、生活習慣病モデルマウスでは、正常マウスと比べて、関節部位に発現したプロテオグリカンが濃く染まる部分の面積が減少した。これは、生活習慣病モデルマウスでは、関節部位のプロテオグリカン量が正常マウスに比べて減少していることを示す。これに対して、図４Ｃ、及び図５にみられるように、生活習慣病モデルマウスにおいてクロモジエキスを投与すると、プロテオグリカンが濃く染まる部分の面積が回復した。よって、糖尿病病態モデルラットの結果と同様に生活習慣病モデルマウスにおいても関節部位のプロテオグリカン量の低下を、クロモジエキスの投与により抑制できることが明らかとなった。一方、図４Ｄ、及び図５にみられるように、参考薬剤として用いた血糖降下剤の投与では、サフラニンＯ染色によるプロテオグリカン染色の面積の回復は限定的であった。

（処方例１）
以下に示す組成でクロモジエキスを含有する飴を調製した。
（１）飴：
（組成）（重量部）
粉末ソルビトール８９．７０
香料０．２５
調製例１のクロモジエキス末１０．００
ソルビトールシード０．０５
全量１００．００

（処方例２）
以下に示す組成でクロモジエキスを含有するガムを調製した。
（２）ガム：
（組成）（重量部）
ガムベース２０．００
炭酸カルシウム２．００
ステビオサイド０．１０
調製例１のクロモジエキス末１０．００
乳糖６６．９０
香料１．００
全量１００．００

（処方例３）
以下に示す組成でクロモジエキスを含有するキャラメルを調製した。
（３）キャラメル：
（組成）（重量部）
グラニュー糖３２．００
水飴２０．００
粉乳３０．００
硬化油４．００
食塩０．６０
香料０．０３
水３．３７
調製例１のクロモジエキス末１０．００
全量１００．００

（処方例４）
以下に示す組成でクロモジエキスを含有する炭酸飲料を調製した。
（４）炭酸飲料：
（組成）（重量部）
グラニュー糖８．００
濃縮レモン果汁１．００
Ｌ－アスコルビン酸０．１０
クエン酸０．０９
クエン酸ナトリウム０．０５
着色料０．０５
炭酸水８０．７１
調製例１のクロモジエキス末１０．００
全量１００．００

（処方例５）
以下に示す組成でクロモジエキスを含有するジュースを調製した。
（５）ジュース：
（組成）（重量部）
冷凍濃縮オレンジ果汁５．００
果糖ブドウ糖液糖１．００
クエン酸０．１０
Ｌ－アスコルビン酸０．０９
調製例１のクロモジエキス末１０．００
香料０．２０
色素０．１０
水８３．５１
全量１００．００

（処方例６）
以下に示す組成でクロモジエキスを含有する乳酸菌飲料を調製した。
（６）乳酸菌飲料：
（組成）（重量部）
乳固形２１％発酵乳１４．７６
果糖ブドウ糖液糖１３．３１
ペクチン０．５０
クエン酸０．０８
香料０．１５
水６１．２０
調製例１のクロモジエキス末１０．００
全量１００．００

（処方例７）
以下に示す組成でクロモジエキスを含有するアルコール飲料を調製した。
（７）アルコール飲料：
（組成）（重量部）
５０％エタノール３２．００
砂糖８．６０
果汁２．４０
調製例１のクロモジエキス末１０．００
水４７．００
全量１００．００

Claims

クロモジエキスを有効成分として含有し、関節保護用に用いられるものであることを特徴とするロコモティブシンドローム改善用組成物。
前記クロモジエキスは、クロモジの熱水抽出物を含むものである、請求項１記載のロコモティブシンドローム改善用組成物。