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JP2022535840A - Ｃｄ７３に特異的な結合分子と結合分子の使用 - Google Patents

Ｃｄ７３に特異的な結合分子と結合分子の使用 Download PDF

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JP2022535840A JP2021571826A JP2021571826A JP2022535840A JP 2022535840 A JP2022535840 A JP 2022535840A JP 2021571826 A JP2021571826 A JP 2021571826A JP 2021571826 A JP2021571826 A JP 2021571826A JP 2022535840 A JP2022535840 A JP 2022535840A
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Abstract

ＣＤ７３に特異的な結合分子とその結合分子の使用。具体的には、ＣＤ７３と結合し、ＣＤ７３の活性を阻害する分離抗体およびその分離抗体の抗原結合部分、および疾患の治療における分離抗体またはその抗原結合部分の使用が提供される；また、分離抗体またはその抗原結合部をコードする核酸分子、分離抗体またはその抗原結合部を発現するための発現ベクター、宿主細胞、および調製方法が提供される。

Description

本発明は、ＣＤ７３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片に関するものであり、本発明はまた、疾患の治療における単離された抗体またはその抗原結合断片の使用に関するものであり、本発明は、単離された抗体またはその抗原結合断片の治療法に関するものである。
ＣＤ７３（エクト－５’－ヌクレオチダーゼ）は約７０ｋＤａの大きさの膜結合型／遊離型タンパク質で、Ｎ末端とＣ末端のサブユニットと柔軟な連結部からなる。Ｃ末端はグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）を介して細胞膜に固定されている。ＣＤ７３は、開閉立体配置のスイッチを介して酵素活性を発揮する（Knapp, K. et al. (2012), Structure, 20(12), 2161-2173）。アデノシン経路では、ＣＤ７３はＣＤ３９によって産生されたＡＭＰをアデノシンに加水分解し続けることができる。アデノシンは、ＣＤ４＋ ＴやＣＤ８＋ Ｔの増殖抑制、ＮＫ細胞活性抑制、Ｔｒｅｇ増殖促進など、様々な免疫抑制作用を発揮する。
ＣＤ７３は、胃がん、トリプルネガティブ乳がん、非小細胞腺がん、直腸腺がん、大腸がん、腎細胞がん、卵巣がん、前立腺がん、口腔扁平上皮がん、頭頸部扁平上皮がんなど様々な腫瘍で高発現しており、ＣＤ７３発現の高値は予後不良と関連していたことが広く報告されている（Vijayan, D. et al., (2017), Nature reviews Cancer, 17, 709）。腫瘍微小環境におけるＣＤ７３の発現増加は、患者の腫瘍増殖、転移、血管新生、生存不良と関連していた（Allard, B. et al., (2017), Immunological reviews, 276 (1), 121-144）。高発現のＣＤ７３により、増加したアデノシンは、腫瘍の内因性及び宿主介在性腫瘍促進機構を活性化し、免疫細胞の浸潤及び細胞傷害性やサイトカイン（インターフェロン等）の産生を制限することで腫瘍免疫を抑制し、強い免疫抑制を引き起こす（Ohta, A. et al., (2016), Front Immunol, 7, 109）。免疫抑制はがんの典型的な特徴であり、抑制性障壁を克服することが重要である。したがって、ＣＤ７３を阻害することで腫瘍微小環境におけるアデノシンの産生を阻害し、それによって免疫を活性化し、腫瘍増殖を阻害するという、非常に可能性のある治療指向である。
抗体は、活性型に対するアロステリックなＣＤ７３を拮抗することにより、ＣＤ７３の酵素活性を阻害することができるが、ＣＤ７３活性部位に直接的に結合してその酵素活性を阻害できる抗体の報告はない。一方、ＣＤ７３は非常に可能性のある治療標的であるが、ＣＤ７３標的の予後を検証し、関連する薬剤や併用療法を開発するためには、さらに多くの研究が必要である。
本発明は、ＣＤ７３に特異的に結合する単離された抗体または抗原結合断片を提供し、治療疾患におけるそれらの使用を提供する。
一態様では、本発明は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片であって：
（ａ） ＨＣＤＲ１は、配列番号５、１８、３１、４３および５６、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｂ） ＨＣＤＲ２は、配列番号６、１９、３２、４４および５７、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｃ） ＨＣＤＲ３は、配列番号７、２０、３３、４５および５８、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｄ） ＬＣＤＲ１は、配列番号１０、２３、３６、４８および６１、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；
（ｅ） ＬＣＤＲ２は、配列番号１１、２４、３７、４９および６２、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；および
（ｆ） ＬＣＤＲ３は、配列番号１２、２５、３８、５０および６３、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む
単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
１） （ａ）配列番号５を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号１２を含むＬＣＤＲ３；
２） （ａ）配列番号１８を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２３を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２４を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号２５を含むＬＣＤＲ３；
３） （ａ）配列番号３１を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３２を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３３を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３６を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３７を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号３８を含むＬＣＤＲ３；
４） （ａ）配列番号４３を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４８を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４９を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５０を含むＬＣＤＲ３；または
５） （ａ）配列番号５６を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５７を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５８を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号６１を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６２を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号６３を含むＬＣＤＲ３。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は以下を含む：（ａ）配列番号５を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号１２を含むＬＣＤＲ３。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は以下を含む：（ａ）配列番号１８を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２３を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２４を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号２５を含むＬＣＤＲ３。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は以下を含む：（ａ）配列番号３１を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３２を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３３を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３６を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３７を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号３８を含むＬＣＤＲ３。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は以下を含む：（ａ）配列番号４３を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４８を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４９を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５０を含むＬＣＤＲ３。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は以下を含む：（ａ）配列番号５６を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５７を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５８を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号６１を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６２を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号６３を含むＬＣＤＲ３。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は以下を含む：
（ｉ） 配列番号３、１６、２９、４１、５４、６６、６７、７６、７７および７８、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ） 配列番号８、２１、３４、４６、５９、６８、６９、７０、７９および８０、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）。
いくつかの実施態様では、重鎖可変領域が、（ｉ）の群から選択される重鎖可変領域に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、（ｉｉ）の群から選択される軽鎖可変領域に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は以下を含む：
１） 配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
２） 配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
３） 配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
４） 配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
５） 配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
６） 配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
７） 配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
８） 配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
９） 配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
１０） 配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
１１） 配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
１２） 配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
１３） 配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号８０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
１４） 配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
１５） 配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号８０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
１６） 配列番号７８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
１７） 配列番号７８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号８０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖および軽鎖可変領域が、１）～１７）からなる群から選択される、前記重鎖および軽鎖可変領域に対してそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様では、単離された抗体がＩｇＧである。
いくつかの実施態様では、単離された抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。
いくつかの実施態様では、単離された抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト改変抗体、ヒト抗体、Ｆｖ、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨまたはＦ（ａｂ’）2である。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片が以下の重鎖および軽鎖を含む：
（Ｉ） 配列番号１３、１５、２６、２７、３９、５１、５２、６４、７１、７２、８１、８２、８３、８６、８７、９０、９１、１２４、１２５、１２６および１２７、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖；および
（ＩＩ） 配列番号１４、２８、４０、５３、６５、７３、７４、７５、８４、８５、８８および８９、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖。
いくつかの実施態様では、重鎖が、（Ｉ）の群から選択される重鎖に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖が、（ＩＩ）の群から選択される軽鎖に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片が以下を含む：
１） 配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２） 配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
３） 配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
４） 配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
５） 配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
６） 配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
７） 配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
８） 配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
９） 配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１０） 配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１１） 配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１２） 配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１３） 配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１４） 配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１５） 配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１６） 配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１７） 配列番号８２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１８） 配列番号８２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
１９） 配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２０） 配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２１） 配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２２） 配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２３） 配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２４） 配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２５） 配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２６） 配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２７） 配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２８） 配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
２９） 配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
３０） 配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
３１） 配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；または
３２） 配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖。
いくつかの実施態様では、重鎖および軽鎖が、１）～３２）からなる群より選択される重鎖および軽鎖可変領域に対して、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、配列番号７１の重鎖および配列番号７３の軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、配列番号７２から実質的になる重鎖および配列番号７４から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号７２の重鎖および配列番号７５の軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本発明は、配列番号８１から実質的になる重鎖および配列番号８５から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、配列番号８２から実質的になる重鎖および配列番号８４から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本発明は、配列番号８３から実質的になる重鎖および配列番号８５から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本発明は、配列番号１２４から実質的になる重鎖および配列番号８５から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、配列番号１２５から実質的になる重鎖および配列番号８５から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
いくつかの実施態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ７３のアンタゴニストまたはＣＤ７３の５’－ヌクレオチダーゼのアンタゴニストである。
いくつかの実施態様では、ＣＤ７３はヒトＣＤ７３である。
ある態様では、本発明は、腫瘍で対象中のアデノシンレベルを減少させる方法であって、単離された抗体またはその抗原結合断片の治療的有効量を投与することを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、腫瘍を有する対象におけるＴ細胞反応を改善する方法であって、単離された抗体またはその抗原結合断片の治療的有効量を投与することを含む方法を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、対象における免疫反応を刺激する方法であって、単離された抗体またはその抗原結合断片の治療的有効量を投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施態様では、対象が腫瘍を有する対象である。
いくつかの実施態様では、対象が、ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞および／またはＣＤ７３を含む腫瘍微小環境を有する。
ある態様では、本発明は、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、単離された抗体またはその抗原結合断片の治療的有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、腫瘍細胞および／または腫瘍微小環境中のアデノシンレベルを減少させるための医薬の製造における単離された抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、腫瘍を有する対象におけるＴ細胞反応を刺激するための医薬の製造における単離された抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
ある態様では、本発明は、対象における免疫反応を刺激するための医薬の製造における単離された抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
いくつかの実施態様では、対象が腫瘍を有する対象である。
いくつかの実施態様では、対象が、ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞および／またはＣＤ７３を含む腫瘍微小環境を有する。
別の態様では、本発明は、対象中の腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬の製造における単離された抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、腫瘍細胞および／または腫瘍微小環境中のアデノシンレベルを減少させるために使用するための、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
ある態様では、本発明は、腫瘍を有する対象におけるＴ細胞反応の刺激に使用するための、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本発明は、対象における免疫反応の刺激に使用するための、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
いくつかの実施態様では、対象が腫瘍を有する対象である。
いくつかの実施態様では、対象が、ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞および／またはＣＤ７３を含む腫瘍微小環境を有する、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本発明は、対象における腫瘍細胞の増殖の阻害に使用するための、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、以下を含む単離された核酸の組成物を提供する：
（Ｉ） 配列番号４、１７、３０、４２、５５、９２、９３、１０２、１０３および１０４からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の核酸；
（ＩＩ） 配列番号９、２２、３５、４７、６０、９４、９５、９６、１０５および１０６からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の核酸。
いくつかの実施態様では、単離された核酸の組成物は以下を含む：
１） 配列番号４を含む第１の核酸および配列番号９を含む第２の核酸；
２） 配列番号１７を含む第１の核酸および配列番号２２を含む第２の核酸；
３） 配列番号３０を含む第１の核酸および配列番号３５を含む第２の核酸；
４） 配列番号４２を含む第１の核酸および配列番号４７を含む第２の核酸；
５） 配列番号５５を含む第１の核酸および配列番号６０を含む第２の核酸；
６） 配列番号９２を含む第１の核酸および配列番号９４を含む第２の核酸；
７） 配列番号９２を含む第１の核酸および配列番号９５を含む第２の核酸；
８） 配列番号９２を含む第１の核酸および配列番号９６を含む第２の核酸；
９） 配列番号９３を含む第１の核酸および配列番号９４を含む第２の核酸；
１０） 配列番号９３を含む第１の核酸および配列番号９５を含む第２の核酸；
１１） 配列番号９３を含む第１の核酸および配列番号９６を含む第２の核酸；
１２） 配列番号１０２を含む第１の核酸および配列番号１０５を含む第２の核酸；
１３） 配列番号１０２を含む第１の核酸および配列番号１０６を含む第２の核酸；
１４） 配列番号１０３を含む第１の核酸および配列番号１０５を含む第２の核酸；
１５） 配列番号１０３を含む第１の核酸および配列番号１０６を含む第２の核酸；
１６） 配列番号１０４を含む第１の核酸および配列番号１０５を含む第２の核酸；または
１７） 配列番号１０４を含む第１の核酸および配列番号１０６を含む第２の核酸。
ある態様では、本発明は、以下を含む発現ベクター組成物を提供する：
（Ｉ） 配列番号４、１７、３０、４２、５５、９２、９３、１０２、１０３および１０４からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター；
（ＩＩ） 配列番号９、２２、３５、４７、６０、９４、９５、９６、１０５および１０６からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター。
いくつかの実施態様では、発現ベクター組成物は以下を含む：
１） 配列番号４のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
２） 配列番号１７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号２２のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
３） 配列番号３０のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号３５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
４） 配列番号４２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号４７のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
５） 配列番号５５のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号６０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
６） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９４のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
７） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
８） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
９） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９４のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１０） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１１） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１２） 配列番号１０２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１３） 配列番号１０２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１４） 配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１５） 配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１６） 配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；または
１７） 配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター。
別の態様では、本発明は、以下を含む発現ベクターを提供する：
（Ｉ） 配列番号４、１７、３０、４２、５５、９２、９３、１０２、１０３および１０４からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列；ならびに
（ＩＩ） 配列番号９、２２、３５、４７、６０、９４、９５、９６、１０５および１０６からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列。
いくつかの実施態様では、発現ベクターは以下を含む：
１） 配列番号４のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
２） 配列番号１７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号２２のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
３） 配列番号３０のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号３５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
４） 配列番号４２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号４７のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
５） 配列番号５５のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号６０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
６） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９４のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
７） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
８） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
９） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９４のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１０） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１１） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１２） 配列番号１０２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１３） 配列番号１０２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１４） 配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１５） 配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１６） 配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１７） 配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列。
さらに別の態様では、本発明は、以下を含む単離された核酸の組成物を提供する：
（Ｉ） 配列番号９７、９８、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３、１１６および１１７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の核酸；
（ＩＩ） 配列番号９９、１００、１０１、１１０、１１１、１１４および１１５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の核酸。
いくつかの実施態様では、単離された核酸の組成物は以下を含む：
１） 配列番号９７を含む第１の核酸および配列番号９９を含む第２の核酸；
２） 配列番号９７を含む第１の核酸および配列番号１００を含む第２の核酸；
３） 配列番号９７を含む第１の核酸および配列番号１０１を含む第２の核酸；
４） 配列番号９８を含む第１の核酸および配列番号９９を含む第２の核酸；
５） 配列番号９８を含む第１の核酸および配列番号１００を含む第２の核酸；
６） 配列番号９８を含む第１の核酸および配列番号１０１を含む第２の核酸；
７） 配列番号１０７を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
８） 配列番号１０７を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
９） 配列番号１０８を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
１０） 配列番号１０８を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
１１） 配列番号１０９を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
１２） 配列番号１０９を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
１３） 配列番号１１６を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
１４） 配列番号１１６を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
１５） 配列番号１１７を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
１６） 配列番号１１７を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
１７） 配列番号１１２を含む第１の核酸および配列番号１１４を含む第２の核酸；
１８） 配列番号１１２を含む第１の核酸および配列番号１１５を含む第２の核酸；
１９） 配列番号１１３を含む第１の核酸および配列番号１１４を含む第２の核酸；または
２０） 配列番号１１３を含む第１の核酸および配列番号１１５を含む第２の核酸。
ある態様では、本発明は、以下を含む発現ベクター組成物を提供する：
（Ｉ） 配列番号９７、９８、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３、１１６および１１７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター；ならびに
（ＩＩ） 配列番号９９、１００、１０１、１１０、１１１、１１４および１１５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター。
いくつかの実施態様では、以下を含む、発現ベクター組成物を提供する：
１） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９９のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
２） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１００のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
３） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
４） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９９のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
５） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１００のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
６） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
７） 配列番号１０７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
８） 配列番号１０７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
９） 配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１０） 配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１１） 配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１２） 配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１３） 配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１４） 配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１５） 配列番号１１７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１６） 配列番号１１７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１７） 配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１８） 配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
１９） 配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；または
２０） 配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター。
別の態様では、本発明は、以下を含む発現ベクターを提供する：
（Ｉ） 配列番号９７、９８、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３、１１６および１１７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列、ならびに
（ＩＩ） 配列番号９９、１００、１０１、１１０、１１１、１１４および１１５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列。
いくつかの実施態様では、発現ベクターは以下を含む：
１） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９９のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
２） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１００のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
３） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
４） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９９のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
５） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１００のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
６） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
７） 配列番号１０７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
８） 配列番号１０７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
９） 配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１０） 配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１１） 配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１２） 配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１３） 配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１４） 配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１５） 配列番号１１７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１６） 配列番号１１７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１７） 配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１８） 配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
１９） 配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；または
２０） 配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列。
さらに別の態様では、本発明は、いずれか一の発現ベクター組成物を含む細胞を提供する。
ある態様では、本発明は、細胞において単離された抗体またはその抗原結合断片を発現させること、および単離された抗体または抗原結合断片を細胞から単離することを含む、単離された抗体またはその抗原結合抗体を調製する方法を提供する。
別の態様では、本発明は、単離された抗体またはその抗原結合断片、ならびに薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、単離された抗体またはその抗原結合断片を含むキットを提供する。
ある態様では、本発明は、治療的有効量の単離された抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物を、それを必要とする対象を投与することを含む、腫瘍を治療する方法を提供する。いくつかの実施態様では、腫瘍が、固形腫瘍または血液学的腫瘍から選択される。いくつかの実施態様では、腫瘍が、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、卵巣がん、精巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎がん、頭頸部がん、肺がん（小細胞肺がんまたは非小細胞肺がん）、胃がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、およびウイルス関連がんから選択される。
別の態様では、本発明は、腫瘍を治療するための医薬の製造のための、単離された抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物の使用を提供する。いくつかの実施態様では、腫瘍が、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎がん、頭部および頸部がん、肺がん（小細胞肺がんまたは非小細胞肺がん）、胃がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、およびウイルス関連がんから選択される。
さらに別の態様では、本発明は、腫瘍の治療に用いるための、単離された抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物が提供される。いくつかの実施態様では、前記腫瘍が固形腫瘍または血液学的腫瘍から選択される。いくつかの実施態様では、前記がんが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、卵巣がん、精巣がん、前立腺がん、食道がん、消化器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎がん、頭部および頸部がん、肺がん（小細胞肺がんまたは非小細胞肺がん）、胃がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、およびウイルス関連がんから選択される。
表１ 本発明の抗体配列リストの記載
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特記事項：ここで特記する配列を除き、全てのアミノ酸番号はカバットシステムのＥＵ指数（Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242）に従う。ａａ：アミノ酸、ｎｔ：ヌクレオチド。
図１は、陽性クローンおよび可溶性ｈｕＣＤ７３タンパク質の結合能アッセイを示す。 図２は、陽性クローンおよび天然ＣＤ７３タンパク質の結合能アッセイを示す。 図３は、可溶性組換えヒトＣＤ７３の活性遮断を示す。 図４は、細胞を用いた活性阻害試験を示す。 図５は、ＣＤ７３抗体によって逆転されたＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖を示す。 図６は、抗体によってブロックされたＣＤ４＋ Ｔ細胞のＣＤ７３酵素活性を示す。 図７は、抗体によって逆転したＣＤ４＋ Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ放出を示す。 図８は、ＣＤ７３抗体によって媒介されるＣＤ７３エンドサイトーシスを示す。 図９は、ＥＬＩＳＡで検出されたヒト化抗体およびキメラ抗体の親和性を示す。 図１０は、ＦＡＣによって検出されたヒト化抗体およびキメラ抗体の親和性を示す。 図１１は、ヒト化抗体によってブロックされた細胞表面上の５’エキソヌクレアーゼ活性を示す。 図１２は、ヒト化抗体によってブロックされたＵ８７－ＭＧ細胞の５’エクトヌクレオチダーゼ活性を示す。 図１３は、ヒト化ＣＤ７３抗体によって逆転されたＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖を示す。 図１４は、ヒト化ＣＤ７３抗体によって逆転されたＣＤ４＋ Ｔ細胞から放出されるＩＦＮ－γを示す。 図１５Ａおよび図１５Ｂは、異種移植動物モデルにおける腫瘍の５’エキソヌクレアーゼ活性に対するヒト化抗体の阻害作用を示す。 図１６は、Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植モデルに対するヒト化抗体の腫瘍抑制作用を示す。詳細な説明
本明細書中に記載されるのは、単離された抗体、特にモノクローナル抗体、例えば、ＣＤ７３に特異的に結合し、それによってＣＤ７３活性を減少させるヒトモノクローナル抗体（「アンタゴニスト抗ＣＤ７３抗体」）である。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、特異的重および軽鎖生殖系列配列に由来し、および／または特異的アミノ酸配列を含むＣＤＲ領域のような特異的構造的特徴を含む。本明細書中に提供されるのは、単離された抗体、そのような抗体を調製する方法である。本明細書では、腫瘍増殖を減少させるための抗体を単独で、または他の治療薬（例えば、抗体）および／またはがん療法と組合せて使用する方法も提供される。したがって、本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体は、例えば、腫瘍増殖の抑制、転移の抑制、および腫瘍に対する免疫反応の増強を含む、多種多様な治療用途の治療に使用することができる。
＜定義＞
本記述をより容易に理解するために、ある種の用語を最初に定義する。詳細な説明の全体にわたって、追加の定義を述べる。
本明細書で使用する用語「分化抗原群（分化のクラスター）７３」または「ＣＤ７３」は、細胞外ヌクレオシド５’一リン酸をヌクレオシドに変換することができる酵素（ヌクレオチダーゼ）、すなわち、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）をアデノシンに変換する酵素を指す。ＣＤ７３は通常、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合を介して細胞膜に固定された二量体として見出され、エクト酵素活性を有し、シグナル導入に働いている。ＣＤ７３の主な機能は、細胞外ヌクレオチド（例えば、５’ＡＭＰ）を高免疫抑制分子であるアデノシンに変換することである。したがって、エクト－５’－ヌクレオチダーゼはプリンおよびピリミジンのリボ－およびデオキシリボヌルセオシド一リン酸の対応するヌクレオシドへの脱リン酸化を触媒する。ＣＤ７３は広範な基質特異性 を有するが、プリン系リボヌクレオシドを好む。
ＣＤ７３はエクト－５’ヌクレアーゼ（ｅｃｔｏ－５’ＮＴ、ＥＣ ３．１．３．５）とも呼ばれる。用語「ＣＤ７３」は、細胞によって自然に発現されるＣＤ７３の任意のバリアントまたはイソ型を含む。したがって、本明細書に記載される抗体は、ヒト以外の種（例えば、カニクイザルＣＤ７３）由来のＣＤ７３と交差反応することができる。あるいは、抗体はヒトＣＤ７３に特異的であってもよく、他の種といかなる交差反応性も示さないことがある。ＣＤ７３またはそのいずれかのバリアントおよびアイソフォームは、それらを自然に発現する細胞または組織から単離されてもよく、または当該技術における周知の技術および／または本明細書に記載されている技術を用いて組換え的に産生されてもよい。
ヒトＣＤ７３の２つのアイソフォームが同定されており、両者は同じＮ末端部分とＣ末端部分を共有している。アイソフォーム１（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＮＰ＿００２５１７．１；配列番号１）は、５７４個のアミノ酸と９個のエクソンからなる最も長いタンパク質を表す。アイソフォーム２（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＮＰ＿００１１９１７４２．１）は、アミノ酸４０４～４５３を欠く５２４個のアミノ酸からなるより短いタンパク質をコードしている。アイソフォーム２は交互のインフレームエクソンを欠き、８つのみのエクソンをもつ転写産物を生じるが、Ｎ末端とＣ末端の配列は同じである。
カニクイザル（ｃｙｎｏ） ＣＤ７３タンパク質配列は配列番号２として提供される。用語カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）と ｃｙｎｏの両方は、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ種を指し、明細書全体で同義的に使用されている。
本明細書中で使用される用語「抗体」は、抗体全体および任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）またはその単鎖を含み得る。「抗体」とは、１つの実施形態において、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖をジスルフィド結合によって相互結合することを含む糖タンパク質またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（ここではＶＨと略す）および重鎖定常領域からなる。いくつかの天然に存在するＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＡ抗体において、重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３つのドメインから構成される。いくつかの天然に存在する抗体において、各々の軽鎖は、軽鎖可変領域（ここではＶＬと略記する）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬから成る。ＶＨ領域とＶＬ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域と、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域に細分化することができ、両者は混在した配置である。ここで、ＶＨ領域のＣＤＲはＨＣＤＲと略記する。すなわち、ＶＨ領域の３つのＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と略記することができる。ＶＬ領域のＣＤＲはＬＣＤＲと略記する。すなわち、ＶＬ領域の３つのＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と略記することができる。 各ＶＨとＶＬは３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に並んでいる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
抗体の重鎖は末端リジン（Ｋ）、あるいは末端グリシンとリジン（ＧＫ）を含む場合と含まない場合がある。したがって、本明細書に提供される重鎖配列および重鎖定常領域配列のいずれも、配列の最後のアミノ酸が何を提供するかにかかわらず、ＧＫまたはＧのいずれかで終わることができるし、またはＫまたはＧＫを欠くことができる。これは、末端のリジンと、ときにはグリシンとリジンが、抗体の発現の際に切断されるからである。
通常、抗体は、１０-7から１０-11Ｍ以下の解離定数（ＫD）によって反映される高親和性のコグネイト抗原に固有に結合する。約１０-6Ｍより大きいＫDは、一般に、特異的ではない結合を示すと考えられる。本明細書中で使用されるように、抗原に「特異的に結合する」抗体は、抗原および実質的に同一の抗原に、高親和性（それは、１０-7Ｍ以下、好ましくは１０-8Ｍ以下、さらにより好ましくは５×１０-9Ｍ以下、および最も好ましくは１０-8Ｍから１０-10Ｍ以下の間のＫDを有することを意味する）で結合するが、無関係な抗原に高親和性で結合しない抗体を指す。抗原は、例えば、与えられた抗原の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％以上の配列同一性を示す場合、与えられた抗原と高度の配列同一性を示すならば、与えられた抗原と「実質的に同一である」。例を挙げると、ヒトＣＤ７３に特異的に結合する抗体はまた、一部の非ヒト霊長類種（例えば、カニクイザル）由来のＣＤ７３と交差反応し得るが、他の種由来のＣＤ７３またはＣＤ７３以外の抗原と交差反応し得ない。
免疫グロブリンは、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭを含むが、これらに限定されない、一般的に知られているイソタイプのいずれからでもよい。ＩｇＧイソタイプは、ある種ではサブクラスに分けられる：ヒトではＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４、マウスではＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３である。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ７３抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２サブタイプのものである。例えばヒトＩｇＧ１のような免疫グロブリンはいくつかのアロタイプに存在し、それらは多くても少数のアミノ酸が互いに異なる。「抗体」は、例として、天然に存在するおよび天然に存在しない両方の抗体；モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体；キメラ抗体およびヒト化抗体；ヒトおよび非ヒト抗体；全合成抗体；および単鎖抗体を含み得る。
本明細書で使用する抗体の用語「抗原結合部分」とは、抗原（例えば、ヒトＣＤ７３）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行うことができることが示されている。抗体、例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体の用語「抗原結合部分」内に包含される結合断片としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）2断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）または（ｖｉｉ）合成リンカーによって任意に連結され得る２つ以上の単離されたＣＤＲの組合せが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬとＶＨは、異なった遺伝子によってコードされているが、それらは、ＶＬとＶＨ領域が対合して単鎖Ｆｖ （ｓｃＦｖ）として知られる単価分子を形成する単一のタンパク質連鎖として作ることを可能にする合成リンカーによって、組換え法を用いて、それらを連結することができる。例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６； および Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３）． このような単鎖抗体はまた、抗体の用語「抗原結合部分」内に包含されることを意図している。これらのコンストラクトおよびその他のコンストラクトの可能性については、Ｃｈａｎ ＆ Ｃａｒｔｅｒ （２０１０） Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３０１に記載されている。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を用いて得られ、断片は、インタクト抗体と同様に有用性についてスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術、またはインタクトの免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって作製することができる。
「保存的改変型のアミノ酸配列」という用語は、該アミノ酸配列を含む抗体の結合特徴に有意に影響しないか、または変化させないアミノ酸改変を意味し、改変にはアミノ酸置換、付加および欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発のような標準的技術によって本発明の抗体に導入することができる。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置換されたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。したがって、本発明の抗体のＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができ、改変された抗体を、本明細書中に記載される機能性アッセイを使用して、保持された機能について試験することができる。好ましくは、保存的改変は１個以下または２個以下である。
「二重特異性」または「二官能性抗体」は、２つの異なる重／軽鎖対を有する人工ハイブリッド抗体であり、異なる抗原に対して特異性を有する２つの抗原結合部位を生じる。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含む種々の方法によって産生することができる。例えば、Songsivilai & Lachmann, Clin.Exp.Immunol.79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol.148, 1547-1553 (1992)を参照。
本明細書中で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、特異的エピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す抗体、または全ての抗体が特異的エピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す抗体の組成物をいう。典型的には、このようなモノクローナル抗体は、細胞または核酸をコードする単一の抗体に由来し、任意の配列変化を意図的に導入することなく増殖されるであろう。したがって、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変および任意の定常領域を有するモノクローナル抗体を意味する。ある実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、例えば、トランスジェニックまたは染色体非ヒト動物に由来するＢ細胞（例えば、ヒト重鎖トランスジーンおよび軽鎖トランスジーンを含むゲノムを有するトランスジェニックマウス）を不死化細胞と融合することによって得られるハイブリドーマによって産生される。
本明細書中で使用される用語「組換えヒト抗体」は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックもしくはトランスクロモソームである動物（例えば、マウス）から単離された抗体またはそれらから調製されたハイブリドーマ、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、産生または単離された抗体など、組換え手段によって調製、発現、産生または単離される全てのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、特異的なヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列を利用し、生殖細胞系遺伝子によってコードされる可変領域および定常領域を含むが、その後の再編成および、例えば抗体成熟の間に起こる変異を含む。当該技術分野（例えば、Lonberg(2005) Nature Biotech.23(9):11171125参照）において公知であるように、可変領域は、外因性抗原に特異的な抗体を形成するために再編成する種々の遺伝子によってコードされる抗原結合ドメインを含む。再編成に加えて、可変領域はさらに多数の単一アミノ酸変化（体細胞変異または高頻度突然変異と呼ばれる）によって修飾され、外来抗原に対する抗体細胞の親和性を高めることができる。定常領域は抗原に応じてさらに変化する（すなわち、イソタイプスイッチ）。したがって、抗原に反応して軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする再編成および体細胞変異した核酸配列は、元の生殖細胞系配列と同一ではなく、その代わりに実質的に同一または類似している（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）可能性がある。
「ヒト」抗体（ＨｕＭＡｂ）は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を意味する。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域はまた、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本明細書に記載される抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、ランダムまたは部位特異的突然変異誘発ｉｎ ｖｉｔｒｏによって、または体細胞変異ｉｎ ｖｉｖｏによって導入された変異）。しかしながら、本明細書中で使用される用語「ヒト抗体」は、マウスのような別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含むことを意図していない。用語の「ヒト」抗体および「完全ヒト」抗体は、同義的に使用される。
「ヒト化」抗体とは、非ヒト抗体のＣＤＲドメイン外のアミノ酸の大部分または全部の一部が、ヒト免疫グロブリンに由来する対応するアミノ酸と置換された抗体を意味する。ヒト化形態の抗体の１つの実施形態において、ＣＤＲドメイン外のアミノ酸の一部、大部分または全部はヒト免疫グロブリン由来のアミノ酸で置換されているが、一方、１つまたは複数のＣＤＲ領域内の一部、大部分または全部のアミノ酸は変化していない。アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換または修飾は、抗体の特異的抗原への結合能を阻害しない限り許容される。「ヒト化」抗体は、元の抗体のものと同様の抗原特異性を保持する。
「キメラ抗体」とは、可変領域が１つの種に由来し、定常領域が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域がマウス抗体に由来し、定常領域がヒト抗体に由来する抗体をいう。
「改変された重鎖定常領域」は、定常ドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖定常領域を意味し、ここで、定常ドメインの１つまたは複数が、異なったイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）由来である。いくつかの実施形態において、改変された定常領域は、ヒトＩｇＧ２ ＣＨ１ドメインおよびヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインおよびヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインに融合されたヒトＩｇＧ２ヒンジを含む。特定の実施形態では、このような改変された定常領域はまた、野生型アミノ酸配列に対する１以上のドメイン内のアミノ酸改変を含む。
本明細書中で使用される「イソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体）を意味する。
「アロタイプ」とは、特異的イソタイプ群における天然に存在するバリアントであって、いくつかのアミノ酸が異なるバリアントを指す（例えば、ジェフェリスら（２００９） ｍＡｂ１：１参照）。本明細書中に記載される抗体は、いずれのアロタイプのものでもよい。
本明細書中で特に断りのない限り、全てのアミノ酸番号は、カバットシステムのＥＵ指数（Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242）に従う。
用語「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」は、本明細書中で「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。
本明細書中で使用される用語「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことを意図する（例えば、ＣＤ７３に特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ７３以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ＣＤ７３のエピトープに特異的に結合する単離された抗体は、様々な種由来の他のＣＤ７３タンパク質と交差反応性を有し得る。
本明細書中で使用される場合、「ＣＤ７３を阻害する」抗体は、ＣＤ７３の生物学的および／または酵素的機能を阻害する抗体を意味する。これらの機能には、例えば、ＣＤ７３酵素活性を阻害する抗体の能力、例えば、アデノシンのＣＤ７３調節産生またはｃＡＭＰ産生の減少が含まれる。
本明細書中で使用される場合、「内部移行」する抗体は、細胞表面抗原に結合すると細胞膜を通過する抗体を意味する。内部移行には、抗体媒介受容体、例えばＣＤ７３、内部移行が含まれる。一部の実施形態では、抗体は、約１０分以下に等しいＴ1/2速度でＣＤ７３を発現する細胞に「内部移行」する。
「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用、またはそれから生じる生化学的事象を意味する。例示的な「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣおよび抗体依存性細胞媒介貪食（ＡＤＣＰ）のようなＦｃγＲ媒介エフェクター機能、および細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）のダウンレギュレーションを含む。このようなエフェクター機能には、一般に、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と結合するＦｃ領域が必要である。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲは、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的スプライシング形態を含むＦｃγＲファミリーの受容体を含む。ＦｃγＲファミリーは３つの活性化受容体（マウスではＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃγＲＩＶ；ヒトではＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ）と１つの阻害受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）からなる。ヒトＦｃγＲのさまざまな性質を表Ａにまとめた。自然エフェクター細胞タイプの大部分は、１つ以上の活性化ＦｃγＲと抑制性ＦｃγＲＩＩＢを共発現するが、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は１つの活性化Ｆｃ受容体（マウスではＦｃγＲＩＩＩ、ヒトではＦｃγＲＩＩＩＡ）を選択的に発現するが、マウスとヒトでは抑制性ＦｃγＲＩＩＢを発現しない。ヒトＩｇＧ１はほとんどのヒトＦｃ受容体に結合し、それが結合する活性化Ｆｃ受容体の種類はマウスＩｇＧ２ａと同等であると考えられている。
表Ａ． ヒトＦｃγＲの特徴
Figure 2022535840000029
「ヒンジ」、「ヒンジドメイン」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結し、ヒンジの上部、中部、および下部を含む重鎖定常領域のドメインを意味する（Ｒｏｕｘら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８ １６１：４０８３）。ヒンジは、抗体の結合領域とエフェクター領域との間の様々な柔軟性のレベルを提供し、また、２つの重鎖定常領域間の分子間ジスルフィド結合のための部位を提供する。用語「ヒンジ」は、野生型ヒンジ、ならびにそのバリアント（例えば、天然に存在しないヒンジまたは修飾ヒンジ）を含む。例えば、用語「ＩｇＧ２ヒンジ」は、野生型ＩｇＧ２ヒンジ、および１、２、３、４、５、１－３、１－５、３－５および／または多くても５、４、３、２、または１変異、例えば、置換、欠失または付加を有するバリアントを含む。
用語「ＣＨ１ドメイン」は、重鎖定常ドメインにおいて可変ドメインをヒンジに連結する重鎖定常領域を意味する。用語「ＣＨ１ドメイン」は、野生型ＣＨ１ドメイン、ならびにそのバリアント（例えば、非天然に存在するＣＨ１ドメインまたは改変されたＣＨ１ドメイン）を含む。例えば、用語「ＣＨ１ドメイン」は、１、２、３、４、５、１－３、１－５、３－５および／または多くても５、４、３、２、または１変異、例えば、置換、欠失または付加を有する野生型ＣＨ１ドメインおよびそのバリアントを含む。
例示的なＣＨ１ドメインは、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは半減期などの抗体の生物学的活性を変更させる変異を有するＣＨ１ドメインを含む。抗体の生物学的活性に影響を及ぼすＣＨ１ドメインの改変が本明細書で提供される。
用語「ＣＨ２ドメイン」は、重鎖定常ドメイン中のヒンジをＣＨ３ドメインに連結する重鎖定常領域を意味する。用語「ＣＨ２ドメイン」は、野生型ＣＨ２ドメイン、ならびにそのバリアント（例えば、非天然に存在するＣＨ２ドメインまたは改変されたＣＨ２ドメイン）を含む。例えば、用語「ＣＨ２ドメイン」は、１、２、３、４、５、１－３、１－５、３－５および／または多くても５、４、３、２、または１変異、例えば、置換、欠失または付加を有する野生型ＣＨ２ドメインおよびそのバリアントを含む。例示的なＣＨ２ドメインは、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは半減期などの抗体の生物学的活性を変更させる変異を有するＣＨ２ドメインを含む。
用語「ＣＨ３ドメイン」は、重鎖定常ドメインにおけるＣＨ２ドメインのＣ末端である重鎖定常領域を意味する。用語「ＣＨ３ドメイン」は、野生型ＣＨ３ドメイン、ならびにそのバリアント（例えば、非天然に存在するＣＨ３ドメインまたは改変されたＣＨ３ドメイン）を含む。例えば、用語「ＣＨ３ドメイン」は、１、２、３、４、５、１－３、１－５、３－５および／または多くても５、４、３、２、または１変異、例えば、置換、欠失または付加を有する野生型ＣＨ３ドメインおよびそのバリアントを含む。例示的なＣＨ３ドメインは、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは半減期などの抗体の生物学的活性を変更させる変異を有するＣＨ３ドメインを含む。抗体の生物学的活性に影響を及ぼすＣＨ３ドメインの改変が本明細書で提供される。
「ＣＬドメイン」とは、軽鎖の一定のドメインを意味する。用語「ＣＬドメイン」は、野生型ＣＬドメインおよびそのバリアントを含む。
「ネイティブ配列Ｆｃ領域」または「ネイティブ配列Ｆｃ」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。ネイティブ配列ヒトＦｃ領域は、ネイティブ配列ヒトＩｇＧｌ Ｆｃ領域；ネイティブ配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；ネイティブ配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；およびネイティブ配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域ならびにその天然に存在するバリアントを含む。ネイティブ配列Ｆｃは、Ｆｃの様々なアロタイプを含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓら（２００９） ｍＡｂ１：１を参照）。
用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原（例えば、ＣＤ７３）上の部位を意味する。タンパク質抗原のエピトープは、連続したアミノ酸から形成されるもの（通常、線形エピトープ）と、タンパク質の３次折り畳みによって並置された非連続アミノ酸から形成されるもの（通常、立体配置エピトープ）の両方が考えられる。連続するアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、常にではないが、変性溶媒に曝露した場合に保持されるが、一方、三次折り畳みによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理した場合に失われる。エピトープは、典型的には、独特の空間的構造において少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５のアミノ酸を含む。所定の抗体によってどのようなエピトープが結合されるかを決定する方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当該技術分野において周知であり、例えば、免疫ブロット法および免疫沈降解析を含み、ここで、重複または隣接ペプチド（例えば、ＣＤ７３から）が所与の抗体（例えば、抗ＣＤ７３抗体）との反応性について試験される。エピトープの空間的構造を決定する方法には、当該技術分野における技術および本明細書に記載されている技術、例えば、Ｘ線結晶学、２－次元核磁気共鳴およびＨＤＸ－ＭＳが含まれる（例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)参照）。
「エピトープマッピング」という用語は、抗体－抗原認識に関与する抗原上の分子決定因子の同定過程を指す。
２つ以上の抗体に関する用語「同じエピトープに結合する」とは、所与の方法で決定されたとき、抗体がアミノ酸残基の同一セグメントに結合することを意味する。本明細書に記載される抗体の「ＣＤ７３上の同じエピトープ」に抗体が結合するかどうかを決定するための技術には、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線分析、および水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）などのエピトープマッピング法が含まれる。抗原断片（例えばタンパク質分解断片）または抗原の変異バリアントへの抗体の結合をモニターする他の方法では、抗原配列中のアミノ酸残基の修飾による結合の喪失がエピトープ成分の指標と考えられることが多い（（例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発－ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＆ Ｗｅｌｌｓ （１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４： １０８１）。さらに、エピトープマッピングのための計算コンビナトリアル法も用いることができる。これらの方法は、コンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリーから特定の短いペプチドを親和性単離する目的の抗体の能力に依存する。
「標的への結合について別の抗体と競合する」抗体とは、別の抗体の標的への結合を阻害する（部分的または完全に阻害する）抗体を意味する。２つの抗体が標的への結合に関して互いに競合するかどうか、すなわち、１つの抗体が標的への別の抗体の結合を阻害するかどうか、およびどの程度阻害するかは、実施例に記載されているような既知の競合実験を用いて決定され得る。特定の実施形態では、抗体は別の抗体と競合し、結合の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％を阻害する。阻害または競合の程度は、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、標的と最初にインキュベートされるコールド 抗体）であるかによって異なることがある。競合アッセイは、例えば、Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Pro toe ; 2006; doi: 10.1101/pdb.prot4277 または "Using Antibodies" 第１１章by Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999に記載されているように実施することができる。競合する抗体は、同じエピトープ、重複するエピトープ、あるいは隣り合うエピトープに結合する（たとえば、立体障害によって証明される）。
他の競合結合アッセイには、固相直接または間接放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）参照）；固相直接標識化サンドイッチ分析（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ （１９８８）参照）；Ｉ－１２５標識化を使用する固相直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ （Ｃｈｅｕｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０））；および直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃａｎｄ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：７７ （１９９０）を含む。
本明細書中で使用される場合、用語「特異的結合」、「選択結合」、「選択的結合」、および「特異的な結合」は、あらかじめ決められた抗原上のエピトープに結合するが、他の抗原には結合しない抗体を意味する。典型的には、抗体は、（ｉ）ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標） ２０００ 表面プラズモン共鳴装置において、所定の抗原、例えばリコンビナントヒトＣＤ７３をアナライトとして、抗体をリガンドとして、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術により測定した場合、または抗原陽性細胞に対する抗体の結合のスキャッチャード分析により測定した場合、およそ１０-7Ｍ、例えば、およそ１０-8Ｍまたは１０-9Ｍまたは１０-10Ｍ未満、またはさらに低い平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、（ｉｉ）所定の抗原または近縁の抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に対する結合の親和性よりも少なくとも２倍大きい親和性で、所定の抗原に結合する。したがって、特に指示されない限り、「ヒトＣＤ７３に特異的に結合する」抗体は、１０-7Ｍ以下のＫＤを有する可溶性または細胞結合ヒトＣＤ７３に結合する抗体、例えば、およそ１０-8Ｍ、１０-9Ｍ、または１０-10Ｍ未満、またはさらに低い抗体を指す。「カニクイザルＣＤ７３と架橋反応する」抗体とは、１０-8Ｍ、１０-9Ｍ、または１０-10Ｍ未満、またはそれ以下など、１０-7Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＣＤ７３に結合する抗体を指す。特定の実施形態では、非ヒト種由来のＣＤ７３と交差反応しない抗体は、通常の結合アッセイにおいて、これらのタンパク質に対して実質的に検出不可能な結合を示す。
本明細書で使用する用語「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」は、特異的抗体－抗原相互作用の会合速度定数を指すことを意図しており、他方、本明細書で使用する用語「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」は、特異的抗体－抗原相互作用の解離速度定数を指すことを意図している。用語「ＫD」は、本明細書中で使用されるように、ＫｄとＫａの比率（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される平衡解離定数を指すことを意図している。抗体のＫD値は、当該技術分野で十分に確立された方法を用いて測定することができる。抗体のＫDを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を用いることによって分析することであり、好ましくは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴システムまたはフローサイトメトリーおよびスキャッチャードなどのバイオセンサーシステムを用いる。
抗体またはその抗原結合断片を用いるｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイとの関連における用語「ＥＣ５０」とは、最大反応の５０％である反応を誘導する抗体またはその抗原結合部分の濃度、すなわち、最大反応と基線との間の半分を意味する。
例えばＣＤ７３の、抗体または受容体の、例えば抗ＣＤ７３抗体によって媒介される「内部移行の速度」は、例えば実施例に示すように、例えば内部移行のＴ1/2によって表されることができる。抗ＣＤ７３抗体の内部移行の速度は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７５％、２回、３回、５回以上増強され、その結果、抗体の重鎖定常領域を改変重鎖定常領域、例えば、ＩｇＧ２ヒンジおよびＩｇＧ２ ＣＨ１ドメインを含むものに変化させることにより、Ｔ1/2を少なくとも１０％、３０％、５０％、７５％、２回、３回、５回以上減少させることができる。例えば、１０分のＴ1/2を有する代わりに、改変された重鎖定常領域は、内部移行の速度を増やし、それによってＴ1/2を５分に減らすことができ（すなわち、内部移行の速度が２倍に増えるか、またはＴ1/2が２倍に減る）。「Ｔ1/2」は、抗体を細胞に加えた時点から測定して「最大内部移行の半分が達成される時間」として定義される。内部移行の最大レベルは、抗体濃度に対してプロットした内部移行を表すグラフのプラトーにおける内部移行のレベルである。改変された重鎖定常領域は、抗体の内部移行の最大レベルを少なくとも１０％、３０％、５０％、７５％、２倍、３倍、５倍以上、増大させ得る。異なった抗体、例えば、変性重鎖定常領域を有すると有しない同一の抗体の内部移行効果を比較するもう１つの方法は、ある抗体濃度（例えば、１００ｎＭ）もしくは所定の時間（例えば、２分、５分、１０分、３０分）での内部移行のレベルを比較することである。内部移行のレベルを比較することは、内部移行のＥＣ５０レベルを比較することによっても行うことができる。
用語「天然に存在する」は、本明細書で使用されるとき、対象が天然に見いだされるという事実に関連して適用されるものである。例えば、生物（ウイルスを含む）に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列であって、天然に存在し、かつ実験室内でヒトが意図的に改変したものではないものは、天然に存在するものである。
「ポリペプチド」とは、鎖の長さに上限がなく、少なくとも連続して２つの結合したアミノ酸残基を含む鎖をいう。タンパク質中の１つ以上のアミノ酸残基は、限定されるわけではないが、グリコシル化、リン酸化またはジスルフィド結合のような改変を含み得る。「タンパク質」は、１つ以上のポリペプチドを含み得る。
本明細書で使用する「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことを意図している。核酸分子は、一本鎖または二重鎖であってよく、ｃＤＮＡであってもよい。また、本明細書に記載される配列番号に示される配列の「保存的配列改変」、すなわち、アミノ酸配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる抗体の抗原への結合を妨げないヌクレオチドおよびアミノ酸配列改変が提供される。このような保存的な配列改変には、保存的なヌクレオチドおよびアミノ酸の置換、ならびにヌクレオチドおよびアミノ酸の付加および欠失が含まれる。例えば、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発のような、当該技術分野で知られている標準技術によって本明細書に記載されている配列番号に改変を導入することができる。保存的配列改変には保存的アミノ酸置換があり、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置換される。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。したがって、抗ＣＤ７３抗体中の予測される非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換されることが好ましい。抗原結合を排除しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当該技術分野において周知である（例えば Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al.Protein Eng.12(10):879-884 (1999); およびBurks et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417 (1997)を参照）。あるいは、別の実施形態では、変異を、飽和突然変異誘発などにより、抗ＣＤ７３抗体コード配列の全部または一部に沿ってランダムに導入することができ、得られた改変された抗ＣＤ７３抗体は、改良された結合活性を介してスクリーニングすることができる。
核酸について、「実質的な同一性」という用語は、２つの核酸、またはその指定配列が、最適にアラインメントされ、比較される場合、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、通常はヌクレオチドの少なくとも約９０％～９５％、およびより好ましくはヌクレオチドの少なくとも約９８％～９９．５％において、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って同一であることを示す。あるいは、セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件下で鎖の相補体にハイブリダイズするときには、実質的な同一性が存在する。
ポリペプチドについて、用語「実質的同一性」は、２つのポリペプチド、またはその指定配列が、最適にアラインメントされ比較される場合、少なくとも約８０％のアミノ酸、通常少なくとも約９０％～９５％、およびより好ましくは少なくとも約９８％～９９．５％のアミノ酸において、適切なアミノ酸挿入または欠失を伴って同一であることを示す。
２つの配列間の同一性％は、配列が最適にアラインメントされている場合、配列が共有する同一位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）。最適アラインメントは、ギャップの数、および２つの配列の最適アラインメントのために導入する必要のあるそれぞれのギャップの長さを考慮して決定される。以下の非限定的な例で述べるように、配列の比較と２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを用いて行うことができる。
２つのヌクレオチド配列間の同一性％は、ＮＷＳｇａｐｄｎａを用いて、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）中のＧＡＰプログラムを用いて決定することができる。ＣＭＰマトリックスとギャップ重みづけ４０、５０、６０、７０、または８０、長さ重みづけ１、２、３、４、５、または６。２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一性のパーセントは、ＰＡＭ１２０重みづけ残基表、ギャップ長ペナルティ１２、ギャップペナルティ４を用いて、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ． ＭｅｙｅｒｓとＷ． Ｍｉｌｌｅｒ （ＣＡＢ， ４： １１－１７ （１９８９））のアルゴリズムを用いて決定することもできる。さらに、２つのアミノ酸配列間の％同一性は、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、ならびにギャップ重みづけ１６、１４、１２、１０、８、６、または４、および長さ重みづけ１、２、３、４、５、または６のいずれかを用いて、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）中のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（J. Mol. Biol. (48):444-453(1970)）のアルゴリズムを使用することによって決定することができる。
本明細書に記載される核酸およびタンパク質配列は、さらに、公的データベースに対する検索を実施して、例えば関連配列を同定するための「問い合わせ配列」として使用することができる。このような検索は、Altschul, et al. (1990)(J. Mol.Biol.215: 403-10)のNBLASTおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）で行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ここに記載の核酸分子と同一のヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコアー＝１００、ワードレングス＝１２で行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ここに記載のタンパク質と同一のアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコアー＝５０、ワールドレングス＝３で行うことができる。比較目的のためのギャップされたアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されているように、ギャップされたＢＬＡＳＴを使用することができる。 ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。
これらの核酸は、細胞全体、細胞溶解物、または部分的に精製された、または実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば他の細胞核酸（例えば、染色体の他の部分）またはタンパク質から遠ざけて精製されると、アルカリ性／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド法、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当技術分野でよく知られている他を含む通常の技術によって「単離される」または「実質的に純粋になる」。F. Ausubel, et al., edを参照。分子生物学における最新のプロトコール、Ｇｒｅｅｎｅ ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇおよびＷｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８７）
遺伝子配列を提供するために、標準的な技術に従って、核酸、例えばｃＤＮＡを突然変異させてもよい。コード配列については、これらの変異は、所望されるようにアミノ酸配列に影響を与え得る。具体的には、ネイティブＶ、Ｄ、Ｊ、定常、スイッチおよび本明細書に記載される他のそのような配列と実質的に同一またはそれに由来するＤＮＡ配列が意図される。
「ベクター」という用語は、本明細書中で使用される場合、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図される。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、これは、他のＤＮＡセグメントが連結され得る環状二重鎖ＤＮＡループを意味する。別のタイプのベクターはウイルスベクターであり、ここで、他のＤＮＡセグメントはウイルスゲノムに連結され得る。いくつかのベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自律的複製が可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それにより宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある種のベクターは、それらが機能的に連結されている遺伝子の発現を指令することができる。このようなベクターは、本明細書中では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術に用いられる発現ベクターは、プラスミドの形をとることが多い。本記載では、「プラスミド」と「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であるので、互換的に使用することができる。しかしながら、同様に含まれるのは、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）のような発現ベクターの他の形態であり、これらは同等の機能を果たす。
本明細書中で使用される用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、細胞中に自然に存在しない核酸を含む細胞を指すことを意図し、組換え発現ベクターが導入された細胞であってもよい。このような用語は、特異的な対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫を指すことを意図していることを理解すべきである。ある種の改変は、変異または環境の影響のいずれかにより、連続した世代において起こり得るので、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一ではなくてもよいが、本明細書で使用する用語「宿主細胞」の範囲内に依然として含まれている。
本明細書中で使用される、用語「抗原」は、タンパク質、ペプチド、またはハプテンのような任意の天然または合成の免疫原性物質を指す。抗原は、ＣＤ７３またはその断片であり得る。
「免疫反応」とは、外因性物質についての脊椎動物における生物学的応答を意味し、そのような応答は、これらの物質およびそれらによって引き起こされる疾患に対して生体を保護する。免疫反応は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中球）およびこれらの細胞または肝臓（抗体、サイトカイン、および補体を含む）のいずれかによって産生される可溶性巨大分子の作用によって媒介され、その作用は、病原体、がん性または他の異常細胞に感染した、または自己免疫または病的炎症の場合、正常ヒト細胞または組織の侵入病原体、細胞または組織に対する脊椎動物の機関への選択的ターゲティング、結合、損傷、破壊、および／または除去をもたらす。免疫応答または反応には、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞、またはＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋ Ｔ細胞などのＴｈ細胞の活性化もしくは阻害、またはＴｒｅｇ細胞の阻害が含まれる。
「免疫調整物質」または「免疫調節物質」とは、免疫応答の調整、調節、または変更に関与しうる、シグナル伝達経路の成分などの物質を指す。免疫反応を「調節する」、「調整する」、または「変更する」とは、免疫系の細胞またはそのような細胞（例えば、エフェクターＴ細胞）の活性における任意の変化を意味する。そのような調節には、様々な細胞型の数の増減、これらの細胞の活性の増減、または免疫系内で起こり得る任意の他の変更によって発現され得る免疫系の刺激または抑制が含まれる。抑制性免疫調節物質と刺激性免疫調節物質の両方が同定されており、その一部は腫瘍微小環境において機能が増強された可能性がある。免疫調節物質は、Ｔ細胞の表面に存在し得る。「免疫調節標的」または「免疫調節標的」は、物質、物質、部分、化合物または分子の結合によってその活性が変化する結合を標的とする免疫調節物質である。免疫調節標的には、例えば、細胞の表面上の受容体（「免疫調節受容体」）および受容体リガンド（「免疫調節リガンド」）が含まれる。
免疫反応を刺激する能力の増大、または免疫系は、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト活性の増強および／または抑制性受容体のアンタゴニスト活性の増強に起因し得る。免疫反応または免疫系を刺激する能力の増大は、免疫反応、例えばサイトカインまたはケモカインの放出の変化を測定するアッセイ、サイトカイン活性（標的細胞に直接的に決定される、またはＣＤ １０７ａまたはグランザイムの検出を通して間接的に決定される）および拡散を測定するアッセイの、ＥＣ５０の時間の増大または免疫反応の最大レベルによって反映される可能性がある。免疫反応または免疫系活性を刺激する能力は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７５％、２回、３回、５回以上増強され得る。
「免疫療法」とは、免疫反応を誘導、増強、抑制またはその他の方法で修飾することを含む方法によって、疾病に罹患した、または疾病の再発に罹患または罹患する危険性のある対象の治療を意味する。
「免疫刺激療法（ｉｍｍｕｎｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｙ）」または「免疫刺激療法 （ｉｍｍｕｎｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｔｈｅｒａｐｙ）」とは、例えば、がんを治療するための対象において免疫反応を増加（誘導または増強）させる治療を意味する。
「内因性免疫反応を増強する」とは、対象において存在する免疫反応の有効性または効力を増大させることを意味する。この有効性と効力の増加は、例えば、内因性宿主免疫応答を抑制する機構を克服すること、または内因性宿主免疫応答を増強する機構を刺激することによって達成され得る。
「Ｔエフェクター」（「Ｔｅｆｆ」）細胞とは、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞）のほか、細胞溶解活性を有するＴヘルパー（Ｔｈ）細胞を指し、サイトカインを分泌し、他の免疫細胞を活性化して誘導するが、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）は含まない。
本明細書中で使用される「結合（ｌｉｎｋａｇｅ）」という用語は、２つ以上の分子の会合を意味する。結合は共有結合でも非共有結合でもよい。結合はまた、遺伝的であり得る（すなわち、組換え的に融合した）。このような結合は、化学的結合および組換えタンパク質産生のような、広く公知の技術を用いて達成することができる。
本明細書中で使用される場合、「投与すること」は、当業者に公知の種々の方法および送達系のいずれかを使用して、対象への治療薬を含む組成物の物理的導入を指す。本明細書に記載される抗体の好ましい投与経路には、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路、例えば注射または注入による投与が含まれる。本明細書中で使用される「非経口投与」という表現は、経腸および局所投与以外の，通常注射による投与様式を意味し、限定されるものではないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下（嚢下）、くも膜下、髄腔内、硬膜外および胸骨内注射および注入、ならびにｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーションを含む。代わりに、本明細書に記載される抗体は、非経口経路、例えば局所、表皮または粘膜経路、例えば鼻腔内、経口、膣内、直腸内、舌下または局所的に投与することができる。投与は、例えば、１回、複数回、および／または１回以上の延長された期間にわたって行うこともできる。
本明細書中で使用される、用語「Ｔ細胞媒介応答」は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）およびヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）を含むＴ細胞によって媒介される応答を意味し、Ｔ細胞媒介応答は、例えば、Ｔ細胞細胞傷害性および増殖を含む。
本明細書中で使用される「細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）反応」という用語は、細胞傷害性Ｔ細胞によって誘導される免疫反応を指す。ＣＴＬ応答は主にＣＤ８＋ Ｔ細胞によって媒介される。
本明細書中で使用される「阻害」または「遮断（例えば、ＣＤ７３結合または活性の阻害／遮断を指す）」という用語は、互換的に使用され、部分的および完全な阻害／遮断の両方を包含する。
本明細書中で使用される「がん」は、体内の異常な細胞の制御されない増殖によって特徴付けられる広範な疾患群を意味する。調節されていない細胞分裂により悪性腫瘍または細胞が形成されることがあるため、近隣の組織に侵入し、リンパ系または血流を介して身体の遠隔部位に転移することがある。
本明細書中で使用される用語「治療する」、「治療すること」、および「治療」とは、疾病に関連する症状、合併症、状態または生化学的指標の進行、進展、重症度または再発を逆転、軽減、改善、抑制、または減速または防止することを目的として、対象に対して実施または投与される任意の種類の介入またはプロセスをいう。予防とは、病気にかかっていない対象に投与することで、病気が起きないようにするか、もしある場合にはその影響を最小限に抑えることを意味する。
「血液悪性腫瘍」には、リンパ腫、白血病、骨髄腫またはリンパ系悪性腫瘍のほか、脾臓およびリンパ節のがんが含まれる。例示的なリンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫およびＴ細胞リンパ腫の両方を含む。Ｂ細胞リンパ腫には、ホジキンリンパ腫とほとんどの非ホジキンリンパ腫の両方が含まれる。Ｂ細胞リンパ腫の非限定的な例としては、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病との重複）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、リンパ節周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症が挙げられる。Ｔ細胞リンパ腫の非限定的な例としては、節外性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、および血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫が挙げられる。血液悪性腫瘍には、二次性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、および急性リンパ芽球性白血病などの白血病も含まれるが、これらに限定されるものではない。血液悪性腫瘍にはさらに、多発性骨髄腫およびくすぶり型多発性骨髄腫などの骨髄腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。他の血液学的および／またはＢ細胞またはＴ細胞関連のがんは、用語の血液悪性腫瘍に包含される。
用語「有効用量」または「有効投与量」は、所望の効果を達成するのに十分な、または少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。薬物または治療薬の「治療上の有効用量」または「治療上の有効投与量」とは、単独で使用した場合、または別の治療薬と組合せて使用した場合に、疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度および期間の増大、または疾患の苦痛による障害もしくは障害の予防によって証明される疾患の退縮を促進する、薬物の任意の量である。薬物の「予防的有効用量量」または「予防的有効投与量」とは、単独で、または別の治療薬と組合せて、疾患を発症する危険性がある、または疾患の再発を被る危険性がある対象に投与された場合に、疾患の発症または再発を阻害する、薬物の量である。疾患の退縮を促進する、または疾患の発症もしくは再発を阻害する治療または予防薬の能力は、臨床試験の間のヒト対象におけるような、ヒトにおける効力を予測する動物モデル系における、またはインビトロアッセイにおける薬剤の活性をアッセイすることによって、当業者に公知の様々な方法を用いて評価することができる。
一例として、抗がん剤は、対象においてがんの進行を遅らせるか、またはがんの退縮を促進する薬物である。好ましい実施形態では、薬物の治療的有効量は、がんを排除する点までがんの退縮を促進する。「がん退縮を促進する」とは、薬物の有効量を単独で、または抗腫瘍剤と組合せて投与することにより、腫瘍増殖または大きさの減少、腫瘍の壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度および期間の増加、疾患の苦痛による障害または障害の予防、または他の方法での疾患症状の改善がもたらされることを意味する。薬理学的有効性とは、薬物が患者のがん回帰係数を促進できることをいう。生理学的安全性とは、薬物の投与に起因する細胞、臓器および／または生体レベルでの許容できるほど低レベルの毒性、または他の有害な生理学的影響（有害作用）を意味する。
例えば、腫瘍の治療のために、薬物の治療上の有効用量または投与量は、好ましくは、細胞増殖または腫瘍増殖を、未処理の対象に対して少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは約６０％、さらに好ましくは少なくとも約８０％阻害する。最も好ましい実施形態では、薬物の治療上の有効用量または投与量は、細胞増殖または腫瘍増殖を完全に阻害する、すなわち、好ましくは、細胞増殖または腫瘍増殖を１００％阻害する。化合物の腫瘍増殖阻害能は、上記のアッセイを用いて評価することができる。あるいは、組成物のこの特徴は、化合物の細胞増殖を阻害する能力を試験することによって評価することができ、このような阻害は、当業者に公知のアッセイによってｉｎ ｖｉｔｒｏ測定することができる。本明細書に記載される他の好ましい実施形態では、腫瘍退行が観察され得、少なくとも約２０日間、より好ましくは少なくとも約４０日間、またはさらにより好ましくは少なくとも約６０日間継続し得る。
用語「患者」および「対象」は、予防的または治療的処置のいずれかを受ける任意のヒトまたは非ヒト動物を意味する。例えば、本明細書に記載される方法および組成物は、がんを有する対象を治療するために用いることができる。「ヒト以外の動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば哺乳類および非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの非哺乳類を含む。
「薬学的に許容される」とは、製剤を含む他の成分および／またはそれで処理される哺乳動物と化学的および／または毒性学的に適合しなければならない物質または組成物を指すことを意図する。
「薬学的に許容されるベクター」は、薬学的に許容されるベクター、賦形剤、および希釈剤を包含し、液状または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶剤またはカプセル化材料など、対象のある臓器または身体部分から別の臓器または身体部分へ薬学的薬剤を運搬または輸送することを含む材料、組成物、またはビヒクルを指すことを意図している。
実施例１：抗ＣＤ７３抗体のスクリーニングおよび同定
Ｃ５７／ ＢＬ６マウスを、ヒトＣＤ７３エクト－ドメイン組換えタンパク質（ｈｕＣＤ７３、配列番号１）で免疫化した。ｈｕＣＤ７３タンパク質５０μｇ＋フロイント完全アジュバントのエマルジョンで初回免疫（腹腔内注射）を行い、２回目の免疫（皮下注射）は２５μｇ ｈｕＣＤ７３タンパク質＋不完全フロイントアジュバントのエマルジョンで行い、３回目の免疫（腹腔内注射）は２５μｇ ｈｕＣＤ７３タンパク質＋不完全フロイントアジュバントのエマルジョンで行い、４回目の免疫（皮下注射）は２５μｇ ｈｕＣＤ７３タンパク質＋不完全フロイントアジュバントのエマルジョンで行い、最後に５０μｇ ｈｕＣＤ７３タンパク質で最終ブースト免疫（腹腔内注射）を行った。ブースト免疫の４日後、免疫脾臓細胞を電気融合によりＳＰ２／０細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を調製した。マウスを同様に免疫し、ファージライブラリー抗体を調製した。ＥＬＩＳＡおよびフローサイトメトリーにより一次スクリーニングを行い、３２のハイブリドーマ抗体および２つのファージ抗体を得て、ヒトＣＤ７３およびカニクイザルＣＤ７３と結合させた。そして、ｈｕＣＤ７３（２９３Ｔ／１７－ｈｕＣＤ７３）を発現する２９３Ｔ／１７個の細胞を用いて遮断（ｂｌｏｃｋａｄｅ）酵素活性を更にスクリーニングし、最後にＣＤ７３酵素活性をブロックする機能を有する５個のクローンを得た。
実施例２：ＥＬＩＳＡによる抗体のＣＤ７３への結合の間接的アッセイ
間接的ＥＬＩＳＡ法を用いて、それぞれの陽性クローンの可溶性ｈｕＣＤ７３タンパク質への結合能を評価した。可溶性ｈｕＣＤ７３をコートし、勾配希釈試料をインキュベートした後、ＨＰＲ標識二次抗体を添加し、最終的にＴＭＢを添加して発色させ、終了後にＯＤ４５０を読み取った。図１に示すように、６６Ｆ２Ａ８Ｄ６（配列番号１１８および１１９）、９４Ａ１２Ｇ１１Ｆ２（配列番号１２０および１２１）、１９１Ｃ３Ａ８Ｂ９（配列番号１２２および１２３）の３つ全てのクローン化抗体、Ｓ１Ｂ５（配列番号１３および１４）およびＪＢ２４Ｃｈｉ（配列番号２６および２８）の２つのファージ抗体すべてが、ナノモル以下の親和性で可溶性組換えＣＤ７３に結合することが示された。
表１：可溶性ｈｕＣＤ７３タンパク質に対する陽性クローンの結合能
Figure 2022535840000030
実施例３：フローサイトメトリーによる天然ＣＤ７３細胞表面への抗体の結合のアッセイ
２９３Ｔ／１７－ｈｕＣＤ７３細胞を用いて、細胞表面上の天然ＣＤ７３に対する５つの抗体の結合能力を評価した。２９３Ｔ／１７－ｈｕＣＤ７３細胞を用いた勾配希釈化抗体をインキュベートした後、蛍光標識抗体を追加し、蛍光強度値を読み取り、ＥＣ50を算出した。図２に示すように、すべての抗体がナノモルあるいはサブナノモルの親和性で細胞表面のＣＤ７３に結合することが示された。
表２：天然ＣＤ７３タンパク質に対する陽性クローンの結合能
Figure 2022535840000031
実施例４：可溶性ＣＤ７３組換えプロテアーゼ活性の遮断の検討
このアッセイでは、可溶性ｈｕＣＤ７３組換えプロテアーゼの５’エキソヌクレアーゼに対するＣＤ７３抗体の遮断能を評価する。抗体が結合すると、ｈｕＣＤ７３組換えタンパク質のＡＭＰをアデノシンと無機リン酸に加水分解する活性がブロックされる。一方、ＡＭＰとＡＴＰとの競合により、ルシフェラーゼの発光能が阻害される。このように、遮断抗体は発光を減弱させ、ＲＬＵ値の低下をもたらす。図３に示すように、６６Ｆ２Ａ８Ｄ６、９４Ａ１２Ｇ１１Ｆ２、１９１Ｃ３Ａ８Ｂ９、抗体Ｓ１Ｂ５およびＪＢ２４Ｃｈｉはいずれも可溶性ＣＤ７３組換えタンパク質の活性に対して阻害効果を有しており、ＩＣ50はナノモラーまたはサブナノモラーレベルであった。
表３：可溶性ＣＤ７３組換えプロテアーゼ活性に対するＣＤ７３抗体の阻害能
Figure 2022535840000032
実施例５：ＣＤ７３抗体に対する細胞表面活性の５’エキソヌクレアーゼの遮断
この方法は、２９３Ｔ／１７－ｈｕＣＤ７３および２９３Ｔ／１７－ｃｙｎｏＣＤ７３細胞に基づいて、細胞表面活性上の５’エキソヌクレアーゼに対するＣＤ７３抗体の遮断能力を評価し、５個の抗体の生化学的活性をさらに確認した。図４に示すように、すべての抗体は細胞表面活性の５’エキソヌクレアーゼを阻害することができた。その中で、１９１Ｃ３Ａ８Ｂ９のｈｕＣＤ７３に対する阻害活性は、カニクイザルＣＤ７３と比較して弱く、他はヒト／カニクイザルＣＤ７３に対する阻害活性が類似していた。全ての抗体のＩＣ50は１０-11～１０-12Ｍ（表４）であった。
［表４］ＣＤ７３抗体の細胞表面活性の５’エキソヌクレアーゼ阻害能
Figure 2022535840000033
実施例６：ＡＭＰ介在性ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖阻害に対するＣＤ７３抗体のリバース効果
抗体はＣＤ７３の酵素活性を遮断し、アデノシンの産生を阻害することにより、ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞アデノシンの増殖抑制を解除した。本法により、ＣＤ７３抗体がＡＭＰ介在性ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖抑制を解放する能力がｉｎ ｖｉｔｒｏで確認され、同時にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（プロメガ）試薬によりＣＤ４＋ Ｔ細胞ＣＤ７３に対するＣＤ７３抗体の遮断が検出され、細胞培養上清中のＩＦＮ－γレベルがＥＬＩＳＡ法により検出された。
その結果、６６Ｆ２Ａ８Ｄ６、９４Ａ１２Ｇ１１Ｆ２、Ｓ１Ｂ５、ＪＢ２４ＣｈｉはＡＭＰを介したＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖抑制を逆転させることができ（図５）、ＥＣ50は１０-11～１０-12Ｍ（表５）ですべて比較的近似していた。表５ ＡＭＰ介在性ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖阻害を逆転させるＣＤ７３抗体の能力
Figure 2022535840000034
ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖実験の結果と同様に、６６Ｆ２Ａ８Ｄ６、９４Ａ１２Ｇ１１Ｆ２、Ｓ１Ｂ５、ＪＢ２４Ｃｈｉはいずれも強力な酵素活性阻害作用を示し（図６）、阻害能は１０-11～１０-12Ｍであった（表６）。
表６ ＣＤ４＋ Ｔ細胞を遮断する抗体の能力
Figure 2022535840000035
図７に示すように、ＥＬＩＳＡ検出キット（Ｄａｋｅｗｅ）を用いて上清ＩＦＮ－γを検出したところ、６６Ｆ２Ａ８Ｄ６、９４Ａ１２Ｇ１１Ｆ２、Ｓ１Ｂ５およびＪＢ２４ＣｈｉはＣＤ４＋ Ｔ細胞を刺激してＩＦＮ－γを放出させることができ、それぞれの抗体刺激Ｔ細胞がＩＦＮ－γを分泌するＥＣ50は１０-11～１０-12Ｍの範囲内であった（表７）。
表７ ＣＤ４＋ Ｔ細胞からのＩＦＮ－γの放出を逆転させる抗体の能力
Figure 2022535840000036
実施例７：ＣＤ７３抗体を介したＣＤ７３内部移行の実験
６６－ＩｇＧ２（配列番号３９および４０）、９４－ＩｇＧ２（配列番号５１および５３）、Ｓ１Ｂ５、ＪＢ２４Ｃｈｉ抗体を介するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞への内部移行効果を、Ｆａｂ－ＺＡＰサポリンコンジュゲート（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて検出した。図８に示すように、４種のキメラ抗体はいずれもＣＤ７３の内部移行影響を用量依存的に媒介し、それぞれの抗体のＩＣ50は約１０-11Ｍであった。
表８ ＣＤ７３の抗体媒介性内部移行の能力
Figure 2022535840000037
実施例８：抗体のヒト化
ＣＤＲ領域とフレームワーク領域には番号をつけ、ＣＤＲ領域とフレームワーク領域のそれぞれの抗体のアミノ酸にはカバットシステムに従って番号をつけている（表Ｉ参照）。ＣＤＲ移植法により２種類の抗体９４Ａ１２Ｅ７Ｄ５とＪＢ２４Ｃｈｉをヒト化した。２つのマウス抗体とヒト抗体の配列同一性と構造類似性をそれぞれ解析し、上記に基づいてマウス抗体のＣＤＲを一連のヒト抗体鋳型に移植した。ＥＬＩＳＡによる予備的スクリーニングの後、ＪＢ２４Ｃｈｉの３つのヒト化抗体および９４Ａ１２Ｅ７Ｄ５の３つのヒト化抗体が得られ、それらはそれぞれＪＢ２４Ｈ２Ｌ１（配列番号７１および７３）、ＪＢ２４Ｈ３Ｌ２（配列番号７２および７４）、ＪＢ２４Ｈ３Ｌ３（配列番号７２および７５）、ＪＢ９４Ｈ１Ｌ３（配列番号８１および８５）、ＪＢ９４Ｈ２Ｌ１（配列番号８２および８４）、ＪＢ９４Ｈ３Ｌ３（配列番号８３および８５）と名付けられた。９４Ａ１２Ｇ１１ＦおよびヒトＩｇＧ１のマウス由来抗体のＦｖとヒトκ定常領域からなるキメラ抗体をＪＢ９４Ｃｈｉ（配列番号５２および５３）と名付けた。
実施例９：ヒト化抗体およびキメラ抗体の親和性のアッセイ
間接ＥＬＩＳＡによって決定したヒト化抗体の親和性：９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを１μｇ／ｍｌのＣＤ７３組換えタンパク質で被覆し、５０ｕｌ／ウェル、ウェル当たり２００ｕｌのＰＢＳＴで３回洗浄し、室温で１％のＢＳＡの２００ｕｌ／ウェルで１時間ブロックし、プレートを２００ｕｌ／ウェルのＰＢＳＴで３回洗浄した。常温で１時間、勾配希釈された１００μＬ／ウェルの抗体とインキュベートした。プレートを２００ｕｌ／ウェルのＰＢＳＴで３回洗浄した後、各ウェルに１：５０００の比率で希釈ＨＲＰラベルをつけた二次抗体１００ｕｌを加え、プレートを常温で１時間インキュベートした。プレートはＰＢＳＴの２００ｕｌ／ウェルで３回洗浄し、１００ｕｌのＴＭＢを各ウェルに加え、暗所室温で５分間反応した。５３０ｎｍの励起、５９０ｎｍの発光、５７０ｎｍのカットオフ、ＯＤ値を読み取った。その結果は図９のとおりであり、ヒト化抗体及び親抗体の親和性は抗原と同様であった（表９）。
表９ 可溶性ｈｕＣＤ７３に対するヒト化抗体の親和性
Figure 2022535840000038
フローサイトメトリーアッセイ：ｈｕＣＤ７３またはｃｙｎｏＣＤ７３を発現する２９３Ｔ／１７細胞を用いてヒト化抗体の結合能力を評価した。ＰＢＳ緩衝液に再懸濁した２ｘ１０6 細胞を９６－ウェルプレートに分配し、勾配希釈ヒト化抗体と４℃または氷上で１時間インキュベートした後、細胞を４℃で１５００ｒｐｍ、３分間遠心分離し、ＰＢＳにより３回洗浄し、希釈したＡＰＣ標識ヤギ抗ヒトポリクローナル抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を冷蔵庫４℃で３０分間インキュベートした。最後に、細胞を上記のようにＰＢＳで３回洗浄し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーターで分析した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアを用いてデータグラフと統計学的親和性データを作成した。図１０に示すように、ＪＢ２４Ｃｈｉおよび９４Ａ１２Ｇ１１Ｆのヒト化抗体は、それらの親抗体と同様のＥＣ50値を有し、両方とも１０-11Ｍから１０-12Ｍであった（表１０）。
表１０ 細胞表面のｈｕＣＤ７３およびｃｙｎｏＣＤ７３抗原に対するヒト化抗体およびキメラ抗体の親和性
Figure 2022535840000039
実施例１０：ヒト化抗体に対する細胞表面活性の５’エキソヌクレアーゼの遮断
この方法は、２９３Ｔ／１７－ｈｕＣＤ７３細胞を用いて、ＣＤ７３によって阻害されたＡＭＰの加水分解を評価し、ヒト化抗体の生化学的活性をさらに確認する。図１１に示すように、ＪＢ２４Ｈ３Ｌ３、ＪＢ９４Ｈ１Ｌ３、９４Ｈ１Ｌ３ ｈＩｇＧ２（配列番号８５および１２４）の全てのヒト化抗体の酵素的遮断活性は、１０-11～１０-12Ｍのレベルにあった（表１１）。
表１１ ヒト化抗体に対する細胞表面活性の５’エキソヌクレアーゼの遮断活性
Figure 2022535840000040
さらに、Ｕ８７－ＭＧ細胞を用いて、ＣＤ７３により触媒されるＡＭＰの加水分解を評価し、さらにヒト化抗体の生化学的活性を確認した。Ｕ８７‐ＭＧ細胞をトリプシンで消化した後、ＭＥＭ培地で細胞密度を４×１０5細胞／ｍｌに調整し、９６‐ウェルプレートに５０μｌ／ウェルを加えた。ヒト化抗体をＭＥＭ培地で勾配希釈し、５０μｌ／ウェルをウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。１００μｌの３６０μＭのＡＭＰを各ウェルに加え、３７℃で１時間インキュベートした。次にプレートを１５００ｒｐｍで３分間遠心分離し、一定量の培養上清を不透明な９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ、３９１２）に移し、２Ｘ ＡＴＰを加えて最終反応濃縮液２５μＭとした。最後に、Ｐｒｏｍｅｇａの指示書に従って、対応する容量のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬を１：１の割合で加えた。室温で５分間平衡化した後、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダーで発光値を読み、ＡＴＰレベルを測定して細胞ＣＤ７３酵素活性を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、データグラフと統計的酵素動態データを作成した。ＪＢ２４ＣｈｉおよびＪＢ９４Ｃｈｉのヒト化抗体の遮断活性を図１２に示したが、ＩＣ50の価値はいずれもサブナノモルクラスにある（表１２）。
表１２ ヒト化抗体に対するＵ８７－ＭＧ細胞の５’エキソヌクレアーゼ活性の遮断能
Figure 2022535840000041
実施例１１：ＡＭＰ介在性ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖阻害に対するヒト化抗体のリバース効果
本法により、ヒト化ＣＤ７３抗体がＡＭＰ介在性ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖抑制を解放する能力がｉｎ ｖｉｔｒｏで確認され、同時にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（プロメガ）試薬によりＣＤ４＋ Ｔ細胞ＣＤ７３酵素活性に対するヒト化抗体の遮断能が検出され、細胞培養上清中のＩＦＮ－γレベルがＥＬＩＳＡ法により検出された。
ＪＢ２４Ｃｈｉ及びＪＢ９４Ｃｈｉのヒト化抗体の活性結果は図１３のとおりであり、このうちＪＢ９４Ｈ１Ｌ３、９４Ｈ１Ｌ３ ｈＩｇＧ２及びＪＢ９４Ｈ３Ｌ３の活性は約１０-11～１０-12Ｍであった（表１３）。
表１３ ＡＭＰ媒介ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖阻害を逆転させるヒト化抗体の能力
Figure 2022535840000042
ＥＬＩＳＡ検出キット（Ｄａｋｅｗｅ）を用いて、細胞上清ＩＦＮ‐γレベルを検出した。図１４に示すように、ＪＢ２４Ｈ３Ｌ３を除いて、各々のヒト化抗体は、１０-11～１０-12ＭのＥＣ50でＩＦＮ－γを分泌するようにＴ細胞を刺激した（表１４）。
表１４ ＣＤ４＋ Ｔ細胞からのＩＦＮ－γの放出を逆転させるヒト化Ｃｄ７３抗体の能力
Figure 2022535840000043
実施例１２：ヒト化抗体によるＡ３７５異種移植モデル中の５’エキソヌクレアーゼ活性の抑制
Ｂ－ＮＤＧマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ）にＡ３７５細胞を皮下接種し、３日後に抗体ＪＢ９４Ｈ１Ｌ３、９４Ｈ３Ｌ３ ｈＩｇＧ１（配列番号９１および８５）またはＰＢＳを週２回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射し、２週間投与し、投与１日後、２日後、３日後、７日後に腫瘍を採取した。新鮮な組織を液体窒素で満たした小さなカップに入れて速やかに凍結させ、ＯＣＴに包埋し、５～６μｍの厚さに切り、室温で乾燥させる。腫瘍切片を４℃のあらかじめ冷却したアセトンで２０分間固定する。乾燥後、－８０℃で保存する。腫瘍切片を－８０℃の冷蔵庫から出し、室温で５～１０分間平衡化し、５０ｍＭトリス・マレイン酸緩衝液（ＰＨ７．４、２ｍＭ ＣａＣｌ2及び０．２５Ｍスクロースを含む）中に入れ、室温で１時間プレインキュベートし、１時間後インキュベーション緩衝液を除き、再び５０ｍＭトリス・マレイン酸緩衝液（ＰＨ７．４、５ｍＭ ＭｎＣｌ2、２ｍＭ硝酸鉛、２．５％デキストランＴ２００、２．５ｍＭレバミソール及び４００μＭ ＡＭＰを含む）を加え、３７℃で１．５時間インキュベートし、水で３回洗い、切片を１％（ＮＨ4）2Ｓで１分間室温でインキュベートした後、速やかに３回水で洗い、ヘマトキシリン・エオジン、脱水キシレン透明液で切片を対比染色し、顕微鏡下で写真撮影した。茶色は活性化されたＣＤ７３の存在を示し、茶色の欠失はこの抗体がＣＤ７３の活性を阻止していることを示している。結果を図１５Ａおよび図１５Ｂに示す。
以上より、ＪＢ９４Ｈ１Ｌ３および９４Ｈ３Ｌ３ ｈＩｇＧ１は異種移植動物モデルの腫瘍の５’エキソヌクレアーゼ活性を有意に低下させ、投与時期と関連することが示された。中止３日目、ＪＢ９４Ｈ１Ｌ３処理群のＣＤ７３酵素活性は最低点まで低下し、その後７日目にはやや上昇した。９４Ｈ３Ｌ３ ｈＩｇＧ１処理群のＣＤ７３酵素活性は、投与後１日目から漸増した。まとめると、ＣＤ７３活性抑制作用は両抗体とも良好であった。
実施例１３：Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植モデルに対するヒト化抗体の腫瘍抑制作用
Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞をＮＣＧマウスの右季肋部の皮下に接種し、ＰＢＭＣはＰＢＳに再懸濁した後、マウスに接種した。腫瘍が3５０～１００ｍｍに成長したとき、２群で投与し、ＪＢ９４Ｈ１Ｌ３（１０ｍｇ／ｋｇ）または溶剤対照を与えた。腫瘍体積は、ノギスを用いて１週間に２回測定し、腫瘍の長径・短径を計測し、体積算出式は、体積＝０．５×長径×短径2とした。図１６に示すように、ＪＢ９４Ｈ１Ｌ３は有意な腫瘍増殖抑制作用を示した。
これらの結果は、以下の材料および方法を用いて得られた：
抗体製剤：
ハイブリドーマ抗体の作製：解凍したハイブリドーマ細胞を１０％ ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地で７～１０日間培養し、細胞培養上清を採取し、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、上清をタンパク質Ｇ ＨＰスピントラップ（ＧＥヘルスケア）で精製した。定量はＵＶ５ｎａｎｏ （ミリポア）分光光度計を用いて行った。
組換え抗体：生存率９９％のＥｘｐｉＣＨＯ細胞（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を６×１０6ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に調製した。細胞を１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、再懸濁した。発現ベクター希釈液、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯ試液希釈液及びＤＮＡ－ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯ複合体を指示書に従って調製し、ＤＮＡ－ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ複合体を細胞培養液に移す。８％ＣＯ2振盪器中で３７℃で８日間インキュベートする。細胞上清を集めるために１１，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。ＮＧＣクロマトグラフィーシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）およびｒＰｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｂｅａｄｓ ４ＦＦｐｒｅ－ａｓｓｅｍｂｌｅｄカラムを用いて抗体を精製した。定量はＵＶ５ｎａｎｏ（ミリポア）分光光度計を用いて行った。
アッセイ１：間接ＥＬＩＳＡ
組換えＣＤ７３タンパク質１ｕｇ／ｍｌをＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｎｉｎｇ）に塗布し、４℃で一晩インキュベートした。翌日、ＰＢＳで５回洗浄し、２００ｕｌ／ウェルの２％のスキムミルクでブロックし、一定用量範囲のＣＤ７３抗体で常温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴ洗浄バッファー（ＰＢＳ、０．０５％ツイーン２０）で５回洗浄し、ＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（プロメガ）を加え、常温で１時間インキュベートし、抗ＣＤ７３抗体を検出する；プレートを５回洗浄し、再度ＴＭＢ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えて５～１０分間発色させ、最後に１Ｎ ＨＣＬを加えて反応を停止し、４５０ｎｍでＯＤ値を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ソフトウエアを用いてデータグラフと統計学的親和性データを作成した。
アッセイ２：フローサイトメトリー
１００μＬの、ｈｕＣＤ７３（２９３Ｔ／１７－ｈｕＣＤ７３）、ｃｙｎｏＣＤ７３（２９３Ｔ／１７－ｃｙｎｏＣＤ７３）またはｍｏＣＤ７３（２９３Ｔ／１７－ｍｏＣＤ７３）を発現する２×１０5細胞／ウェルをＵ字型の９６ウェルの細胞培養プレートに加える。試験対象試料を勾配希釈後４℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ＡＰＣ標識二次抗体１００μＬを各ウェルに添加し、３０分間インキュベートした。洗浄後、機器上で検出し、蛍光値を読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアを用いてデータグラフと統計学的親和性データを作成した。
組換え宿主細胞２９３Ｔ／１７－ｈｕＣＤ７３、２９３Ｔ／１７－ｃｙｎｏＤ７３、２９３Ｔ／１７－ｍｏＤ７３の構築：ｈｕＣＤ７３、ｃｙｎｏＣＤ７３およびｍｏＣＤ７３遺伝子およびピュロマイシン耐性を有するＰＬＶＸ－ＥＦ１ａウィルスベクターを２９３Ｔ／１７細胞にＴｒａｎｓＩＴ（登録商標）－２９３トランスフェクション試薬でトランスフェクトし、約２日後、ピュロマイシンを含む完全培地を代替して培養し、細胞を増殖および培養した後、限定勾配希釈法を用いて単一クローン細胞を選択し、ＰＥ標識した抗ｈｕＣＤ７３、ｃｙｎｏＣＤ７３およびｍｏＣＤ７３抗体を用いて、トランスフェクション後の細胞表面抗原を検出した。次に、細胞を増殖させ、培養して、酵素活性アッセイおよびフローサイトメトリーを行う。
アッセイ３：可溶性ＣＤ７３ 酵素活性阻害試験
可溶性ＣＤ７３組換えタンパク質に基づいて、抗体による酵素活性の遮断機能を測定した。５００ｎｇ／ｍｌ ＣＤ７３組換えタンパク質の存在では、９６ウェル平面丸底プレートに特定用量範囲のＣＤ７３抗体を加え、１時間３７℃でインキュベートし、最終濃度１８０ｕＭおよび２５ｕＭのＡＭＰおよびＡＴＰを各ウェルに加えた。３７℃で３０分間インキュベートし、一定量の細胞上清をブランクプレートに移し、ルシフェラーゼを含むＣｅｌｌＴｉｔｅｒｒ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を室温で暗所で５分間平衡させた後、上記のウェルに１：１の比率で加える。最後に、Ｅｎｓｐｉｒｅマイクロプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて発光値を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、酵素動態データのデータグラフと統計量を作成した。
酵素阻害率を次のように評価する：
○ＡＴＰ＋ＡＭＰ：最大ルシフェラーゼ阻害（１００％）
○ＡＴＰ＋ＡＭＰ＋ＣＤ７３：ルシフェラーゼ阻害なし（０％）
残存ＣＤ７活性の公式は、以下のように評価した：
Figure 2022535840000044
アッセイ４：細胞ＣＤ７３活性阻害試験
２９３Ｔ／１７－ｈｕＣＤ７３細胞を消化し、３分間１５００ｒｐｍで遠心し、上清を捨てた。細胞を血清フリーＤＭＥＭ培地に再懸濁し、Ｂｉｏｒａｄ ＴＣ２０細胞カウンターで計数した。細胞密度を調整し、８，０００細胞、５０ｕＬ ／ウェルで９６－ウェルプレートに細胞を広げ、対応するウェルに５０ｕＬの勾配希釈した抗体溶液を加え、３７℃で５％ＣＯ2インキュベーター中で１時間インキュベーターした後、最終濃度１８０ｕＭで１００ｕＬを加え、３７℃で５％ＣＯ2中で１時間インキュベーターした後、細胞プレートを１５００ｒｐｍで３分間遠心分離し、一定量の培養上清を不透明な９６ウェル平底プレート（コスター、３９１２）に移し、次いで２ＸＡＴＰ溶液を加えて２５ｕＭの最終反応濃度とする。最後にＰｒｏｍｅｇａの指示書に従い、対応する容量のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬を１：１の割合で加える。室温で５分間平衡化した後、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダーの発光量を読み、ＡＴＰレベルを測定してＣＤ７３の活性を測定する。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、データグラフと統計的酵素動態データを作成した。
アッセイ５：Ｆａｂ ＺＡＰエンドサイトーシス実験
初日に、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の２０００細胞／ウェルを９６ウェルの平底プレートに５０ｕｌ／ウェルで平板培養し、３７℃で５％ＣＯ2中で一夜インキュベートした。翌日、８０ｎＭ Ｆａｂ－ＺＡＰ試薬（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で一定の投与量範囲に勾配希釈した抗体を室温で３０分間インキュベートし、試験する抗体にＦａｂ－ＺＡＰを結合させた後、抗体をプレミックスし、その混合物の５０ｕＬをＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞ウェルに加え、３７℃で５％ＣＯ２中で３日間インキュベートした後、細胞プレートをとり、ＣＴＧ試薬（プロメガ）を加えて２分間細胞を溶解した後、室温で５分間平衡化した。発光はＥｎｓｐｉｒｅマイクロプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて測定し、細胞増殖曲線はＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより分析した。

Claims (71)

  1. ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片であって：
    （ａ） ＨＣＤＲ１は、配列番号５、１８、３１、４３および５６、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；
    （ｂ） ＨＣＤＲ２は、配列番号６、１９、３２、４４および５７、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；
    （ｃ） ＨＣＤＲ３は、配列番号７、２０、３３、４５および５８、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；
    （ｄ） ＬＣＤＲ１は、配列番号１０、２３、３６、４８および６１、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；
    （ｅ） ＬＣＤＲ２は、配列番号１１、２４、３７、４９および６２、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む；および
    （ｆ） ＬＣＤＲ３は、配列番号１２、２５、３８、５０および６３、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む
    単離された抗体またはその抗原結合断片。
  2. 以下を含む、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    １） （ａ）配列番号５を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号１２を含むＬＣＤＲ３；
    ２） （ａ）配列番号１８を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２３を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２４を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号２５を含むＬＣＤＲ３；
    ３） （ａ）配列番号３１を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３２を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３３を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３６を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３７を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号３８を含むＬＣＤＲ３；
    ４） （ａ）配列番号４３を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４８を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４９を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５０を含むＬＣＤＲ３；または
    ５） （ａ）配列番号５６を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５７を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５８を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号６１を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６２を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号６３を含むＬＣＤＲ３。
  3. 以下を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    （ａ） 配列番号５を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号１２を含むＬＣＤＲ３。
  4. 以下を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    （ａ） 配列番号１８を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２３を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２４を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号２５を含むＬＣＤＲ３。
  5. 以下を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    （ａ）配列番号３１を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３２を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３３を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３６を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３７を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号３８を含むＬＣＤＲ３。
  6. 以下を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    （ａ）配列番号４３を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４８を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４９を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５０を含むＬＣＤＲ３。
  7. 以下を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    （ａ）配列番号５６を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５７を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５８を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号６１を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６２を含むＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号６３を含むＬＣＤＲ３。
  8. 以下を含む、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    （ｉ） 配列番号３、１６、２９、４１、５４、６６、６７、７６、７７および７８、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および
    （ｉｉ） 配列番号８、２１、３４、４６、５９、６８、６９、７０、７９および８０、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）。
  9. 重鎖可変領域が、（ｉ）の群から選択される重鎖可変領域に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、（ｉｉ）の群から選択される軽鎖可変領域に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  10. 以下を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    １） 配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ２） 配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ３） 配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ４） 配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ５） 配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ６） 配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ７） 配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ８） 配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ９） 配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    １０） 配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    １１） 配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    １２） 配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    １３） 配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号８０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    １４） 配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    １５） 配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号８０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    １６） 配列番号７８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    １７） 配列番号７８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号８０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）。
  11. 前記重鎖および軽鎖可変領域が、１）～１７）からなる群から選択される、前記重鎖および軽鎖可変領域に対してそれぞれ少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  12. 単離された抗体がＩｇＧである、請求項１～１１のいずれか一項記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  13. 単離された抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４である、請求項１～１２のいずれか一項記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  14. 単離された抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト改変抗体、ヒト抗体、Ｆｖ、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨまたはＦ（ａｂ’）2である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  15. 以下の重鎖および軽鎖を含む、請求項１～１４のいずれか一項記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    （Ｉ） 配列番号１３、１５、２６、２７、３９、５１、５２、６４、７１、７２、８１、８２、８３、８６、８７、９０、９１、１２４、１２５、１２６および１２７、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖；および
    （ＩＩ） 配列番号１４、２８、４０、５３、６５、７３、７４、７５、８４、８５、８８および８９、ならびにそれらの保存的改変からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖。
  16. 重鎖が、（Ｉ）の群から選択される重鎖に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖が、（ＩＩ）の群から選択される軽鎖に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  17. 以下を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片：
    １） 配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２） 配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ３） 配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ４） 配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ５） 配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ６） 配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ７） 配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ８） 配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ９） 配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １０） 配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １１） 配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １２） 配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １３） 配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １４） 配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １５） 配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １６） 配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １７） 配列番号８２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １８） 配列番号８２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    １９） 配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２０） 配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２１） 配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２２） 配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２３） 配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２４） 配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２５） 配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２６） 配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２７） 配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２８） 配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ２９） 配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ３０） 配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；
    ３１） 配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    ３２） 配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖。
  18. 重鎖および軽鎖が、１）～３２）からなる群より選択される重鎖および軽鎖可変領域に対して、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１７のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  19. 配列番号７１の重鎖および配列番号７３の軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  20. 配列番号７２から実質的になる重鎖および配列番号７４から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  21. 配列番号７２の重鎖および配列番号７５の軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  22. 配列番号８１から実質的になる重鎖および配列番号８５から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  23. 配列番号８２から実質的になる重鎖および配列番号８４から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  24. 配列番号８３から実質的になる重鎖および配列番号８５から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  25. 配列番号１２４から実質的になる重鎖および配列番号８５から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  26. 配列番号１２５から実質的になる重鎖および配列番号８５から実質的になる軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
  27. ＣＤ７３のアンタゴニストまたはＣＤ７３の５’－ヌクレオチダーゼのアンタゴニストである、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  28. ＣＤ７３がヒトＣＤ７３である、請求項２７に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  29. 腫瘍で対象中のアデノシンレベルを減少させる方法であって、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片の治療的有効量を投与することを含む方法。
  30. 腫瘍を有する対象におけるＴ細胞反応を改善する方法であって、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片の治療的有効量を投与することを含む方法。
  31. 対象における免疫反応を刺激する方法であって、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片の治療的有効量を投与することを含む方法。
  32. 対象が腫瘍を有する対象である、請求項３１記載の方法。
  33. 対象が、ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞および／またはＣＤ７３を含む腫瘍微小環境を有する、請求項３１記載の方法。
  34. 対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片の治療的有効量を対象に投与することを含む方法。
  35. 腫瘍細胞および／または腫瘍微小環境中のアデノシンレベルを減少させるための医薬の製造における請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片の使用。
  36. 腫瘍を有する対象におけるＴ細胞反応を刺激するための医薬の製造における請求項１～２８のいずれか一項記載の単離された抗体またはその抗原結合断片の使用。
  37. 対象における免疫反応を刺激するための医薬の製造における請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片の使用。
  38. 対象が腫瘍を有する対象である、請求項３７記載の使用。
  39. 対象が、ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞および／またはＣＤ７３を含む腫瘍微小環境を有する、請求項３７記載の使用。
  40. 対象中の腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬の製造における請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片の使用。
  41. 腫瘍細胞および／または腫瘍微小環境中のアデノシンレベルを減少させるために使用するための、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  42. 腫瘍を有する対象におけるＴ細胞反応の刺激に使用するための、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  43. 対象における免疫反応の刺激に使用するための、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  44. 対象が腫瘍を有する対象である、請求項４３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  45. 対象が、ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞および／またはＣＤ７３を含む腫瘍微小環境を有する、請求項４３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  46. 対象における腫瘍細胞の増殖の阻害に使用するための、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  47. 以下を含む、単離された核酸の組成物：
    （Ｉ） 配列番号４、１７、３０、４２、５５、９２、９３、１０２、１０３および１０４からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の核酸；
    （ＩＩ） 配列番号９、２２、３５、４７、６０、９４、９５、９６、１０５および１０６からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の核酸。
  48. 以下を含む、請求項４７に記載の単離された核酸の組成物：
    １） 配列番号４を含む第１の核酸および配列番号９を含む第２の核酸；
    ２） 配列番号１７を含む第１の核酸および配列番号２２を含む第２の核酸；
    ３） 配列番号３０を含む第１の核酸および配列番号３５を含む第２の核酸；
    ４） 配列番号４２を含む第１の核酸および配列番号４７を含む第２の核酸；
    ５） 配列番号５５を含む第１の核酸および配列番号６０を含む第２の核酸；
    ６） 配列番号９２を含む第１の核酸および配列番号９４を含む第２の核酸；
    ７） 配列番号９２を含む第１の核酸および配列番号９５を含む第２の核酸；
    ８） 配列番号９２を含む第１の核酸および配列番号９６を含む第２の核酸；
    ９） 配列番号９３を含む第１の核酸および配列番号９４を含む第２の核酸；
    １０） 配列番号９３を含む第１の核酸および配列番号９５を含む第２の核酸；
    １１） 配列番号９３を含む第１の核酸および配列番号９６を含む第２の核酸；
    １２） 配列番号１０２を含む第１の核酸および配列番号１０５を含む第２の核酸；
    １３） 配列番号１０２を含む第１の核酸および配列番号１０６を含む第２の核酸；
    １４） 配列番号１０３を含む第１の核酸および配列番号１０５を含む第２の核酸；
    １５） 配列番号１０３を含む第１の核酸および配列番号１０６を含む第２の核酸；
    １６） 配列番号１０４を含む第１の核酸および配列番号１０５を含む第２の核酸；または
    １７） 配列番号１０４を含む第１の核酸および配列番号１０６を含む第２の核酸。
  49. 以下を含む発現ベクター組成物：
    （Ｉ） 配列番号４、１７、３０、４２、５５、９２、９３、１０２、１０３および１０４からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター；
    （ＩＩ） 配列番号９、２２、３５、４７、６０、９４、９５、９６、１０５および１０６からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター。
  50. 以下を含む、請求項４９に記載の発現ベクター組成物：
    １） 配列番号４のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ２） 配列番号１７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号２２のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ３） 配列番号３０のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号３５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ４） 配列番号４２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号４７のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ５） 配列番号５５のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号６０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ６） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９４のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ７） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ８） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ９） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９４のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １０） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １１） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １２） 配列番号１０２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １３） 配列番号１０２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １４） 配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １５） 配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １６） 配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；または
    １７） 配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター。
  51. 以下を含む発現ベクター：
    （Ｉ） 配列番号４、１７、３０、４２、５５、９２、９３、１０２、１０３および１０４からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列；ならびに
    （ＩＩ） 配列番号９、２２、３５、４７、６０、９４、９５、９６、１０５および１０６からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列。
  52. 以下を含む請求項５１に記載の発現ベクター：
    １） 配列番号４のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ２） 配列番号１７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号２２のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ３） 配列番号３０のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号３５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ４） 配列番号４２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号４７のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ５） 配列番号５５のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号６０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ６） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９４のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ７） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ８） 配列番号９２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ９） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９４のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １０） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １１） 配列番号９３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １２） 配列番号１０２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １３） 配列番号１０２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １４） 配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １５） 配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １６） 配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １７） 配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列。
  53. 以下を含む単離された核酸の組成物：
    （Ｉ） 配列番号９７、９８、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３、１１６および１１７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の核酸；
    （ＩＩ） 配列番号９９、１００、１０１、１１０、１１１、１１４および１１５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の核酸。
  54. 以下を含む、請求項５３に記載の単離された核酸の組成物：
    １） 配列番号９７を含む第１の核酸および配列番号９９を含む第２の核酸；
    ２） 配列番号９７を含む第１の核酸および配列番号１００を含む第２の核酸；
    ３） 配列番号９７を含む第１の核酸および配列番号１０１を含む第２の核酸；
    ４） 配列番号９８を含む第１の核酸および配列番号９９を含む第２の核酸；
    ５） 配列番号９８を含む第１の核酸および配列番号１００を含む第２の核酸；
    ６） 配列番号９８を含む第１の核酸および配列番号１０１を含む第２の核酸；
    ７） 配列番号１０７を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
    ８） 配列番号１０７を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
    ９） 配列番号１０８を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
    １０） 配列番号１０８を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
    １１） 配列番号１０９を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
    １２） 配列番号１０９を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
    １３） 配列番号１１６を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
    １４） 配列番号１１６を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
    １５） 配列番号１１７を含む第１の核酸および配列番号１１０を含む第２の核酸；
    １６） 配列番号１１７を含む第１の核酸および配列番号１１１を含む第２の核酸；
    １７） 配列番号１１２を含む第１の核酸および配列番号１１４を含む第２の核酸；
    １８） 配列番号１１２を含む第１の核酸および配列番号１１５を含む第２の核酸；
    １９） 配列番号１１３を含む第１の核酸および配列番号１１４を含む第２の核酸；または
    ２０） 配列番号１１３を含む第１の核酸および配列番号１１５を含む第２の核酸。
  55. 以下を含む発現ベクター組成物：
    （Ｉ） 配列番号９７、９８、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３、１１６および１１７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター；ならびに
    （ＩＩ） 配列番号９９、１００、１０１、１１０、１１１、１１４および１１５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター。
  56. 以下を含む、請求項５５に記載の発現ベクター組成物：
    １） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９９のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ２） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１００のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ３） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ４） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号９９のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ５） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１００のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ６） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１０１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ７） 配列番号１０７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ８） 配列番号１０７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    ９） 配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １０） 配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １１） 配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １２） 配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １３） 配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １４） 配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １５） 配列番号１１７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １６） 配列番号１１７のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １７） 配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １８） 配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；
    １９） 配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター；または
    ２０） 配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む第１の発現ベクター、および配列番号１１５のヌクレオチド配列を含む第２の発現ベクター。
  57. 以下を含む発現ベクター：
    （Ｉ） 配列番号９７、９８、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３、１１６および１１７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列、ならびに
    （ＩＩ） 配列番号９９、１００、１０１、１１０、１１１、１１４および１１５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列。
  58. 以下を含む請求項５７に記載の発現ベクター：
    １） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９９のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ２） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１００のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ３） 配列番号９７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ４） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号９９のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ５） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１００のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ６） 配列番号９８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１０１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ７） 配列番号１０７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ８） 配列番号１０７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    ９） 配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １０） 配列番号１０８のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １１） 配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １２） 配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １３） 配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １４） 配列番号１１６のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １５） 配列番号１１７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １６） 配列番号１１７のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１１のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １７） 配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １８） 配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；
    １９） 配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列；または
    ２０） 配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む第１の核酸配列および配列番号１１５のヌクレオチド配列を含む第２の核酸配列。
  59. 請求項４９、５０、５１、５２、５５、５６、５７および５８のいずれか一項に記載の発現ベクター組成物を含む細胞。
  60. 請求項５９に記載の細胞において単離された抗体またはその抗原結合断片を発現させること、および単離された抗体または抗原結合断片を細胞から単離することを含む、単離された抗体またはその抗原結合抗体を調製する方法。
  61. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片、ならびに薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
  62. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片を含むキット。
  63. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の治療的有効量の単離された抗体またはその抗原結合断片、または請求項６１に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象を投与することを含む、腫瘍を治療する方法。
  64. 腫瘍が、固形腫瘍または血液学的腫瘍から選択される、請求項６３に記載の方法。
  65. 腫瘍が、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、卵巣がん、精巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎がん、頭頸部がん、肺がん（小細胞肺がんまたは非小細胞肺がん）、胃がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、およびウイルス関連がんから選択される、請求項６３または６４に記載の方法。
  66. 腫瘍を治療するための医薬の製造のための、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片、または請求項６１に記載の医薬組成物の使用。
  67. 腫瘍が、固形腫瘍または血液学的腫瘍から選択される、請求項６６に記載の使用。
  68. 腫瘍が、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎がん、頭部および頸部がん、肺がん（小細胞肺がんまたは非小細胞肺がん）、胃がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、およびウイルス関連がんから選択される、請求項６６または６７に記載の使用。
  69. 腫瘍の治療に用いるための、請求項１～２８のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片、または請求項６１に記載の医薬組成物。
  70. 前記腫瘍が固形腫瘍または血液学的腫瘍から選択される、単離された抗体またはその抗原結合断片、または請求項６９に記載の医薬組成物。
  71. 前記がんが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、卵巣がん、精巣がん、前立腺がん、食道がん、消化器がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎がん、頭部および頸部がん、肺がん（小細胞肺がんまたは非小細胞肺がん）、胃がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、およびウイルス関連がんから選択される、請求項６９または７０に記載の単離された抗体もしくは抗原結合断片、または医薬組成物。
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