JP2022525703A

JP2022525703A - 抗ａｄａｍ１２抗体およびキメラ抗原受容体、ならびにそれを含む組成物および方法

Info

Publication number: JP2022525703A
Application number: JP2022504036A
Authority: JP
Inventors: ビークーパー，アンソニー
Original assignee: Javelin Oncology Inc
Current assignee: Javelin Oncology Inc
Priority date: 2019-03-20
Filing date: 2020-03-20
Publication date: 2022-05-18
Also published as: CN114008079A; US20240317892A1; WO2020191293A1; CA3133633A1; EP3938405A1; EP3938405A4

Abstract

抗ＡＤＡＭ１２抗体（Ａｂ）、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂおよび抗原結合Ａｂ断片、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの抗ＡＤＡＭ１２剤が提供される。また、このような抗ＡＤＡＭ１２剤をコードする核酸配列およびベクター、このような抗ＡＤＡＭ１２剤を含む細胞および薬学的組成物、ならびにこのような細胞を拡張するための方法が提供される。がんなどの疾患を治療し、予防し、または診断する方法、およびそのような材料を使用して免疫応答を刺激する方法も提供される。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願
本出願は、２０１９年３月２０日に出願され、名称が「ＡＮＴＩ－ＡＤＡＭ１２ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＡＮＤＣＨＩＭＥＲＩＣＡＮＴＩＧＥＮＲＥＣＥＰＴＯＲＳ，ＡＮＤＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳＡＮＤＭＥＴＨＯＤＳＣＯＭＰＲＩＳＩＮＧ」である米国仮出願第６２／８２１，２５７号に対する優先権を主張し、その内容全体が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

配列表の開示
本出願は、その開示の一部として、ＥＦＳ－Ｗｅｂを通じて同時に提出される生物学的配列表を含む。上述の生物学的配列表は、「１１５６８６７ｏ００１６１３．ｔｘｔ」という名称のファイルに含まれ、このファイルは２０２０年２月２５日に作成され、サイズが２０４，３４２バイトであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本開示は、抗ＡＤＡＭ１２抗体（Ａｂ）、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂおよび抗原結合Ａｂ断片、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの抗ＡＤＡＭ１２剤に関する。本開示はまた、このような抗ＡＤＡＭ１２剤をコードする核酸配列およびベクター、このような抗ＡＤＡＭ１２剤を含む細胞および薬学的組成物、ならびにこのような細胞を拡張するための方法に関する。本開示はさらに、このような抗ＡＤＡＭ１２剤および組成物を使用して対象を治療する方法、ならびにがんなどの疾患を治療し、予防し、または診断する方法、ならびに免疫応答を刺激する方法に関する。本発明はまた、このような抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物を製造する方法に関する。

免疫療法は、成長しつつある分野であり、これまで有効な治療オプションがなかった様々な疾患の治療を可能にする。ＣＤ２０（非ホジキンリンパ腫）、ＨＥＲ２（ＨＥＲ２ポジティブ乳がん）、ならびにＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＣＴＬＡ－４などの免疫チェックポイント（種々のがん）を標的とする抗体療法を含め、免疫療法の多くの例が、腫瘍学において用いられてきた。様々な免疫療法もまた、自己免疫疾患などの非がん疾患適応のために開発され、試験され、および／または上市されている（ＷｒａｉｔｈＤ．Ｃ．ｅｔａｌ，ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ．２０１７Ｎｏｖ２８；８：１６６８．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１７．０１６６８．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ２０１７）。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法は、患者のリンパ球が、特定の抗原の認識を可能にする受容体を発現するように遺伝子改変される、新しく出現してきた種類の免疫療法である。抗原認識すると、これらの改変されたＴ細胞は、シグナル伝達ドメインを介して活性化され、それらの細胞を強力な細胞キラーへと変換する。２０１７年に、抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞産物は、Ｂ細胞リンパ腫についてＦＤＡの承認を受け、このことは、がん（例えば、血液がん）におけるこの治療アプローチの可能性を示している（ＬｅｙｆｍａｎＹ，ｅｔｌａ．，ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＩｎｔ．２０１８Ｎｏｖ１４；１８：１８２．ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１２９３５－０１８－０６８５－ｘ．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ２０１８）。固形腫瘍の治療のための大いなる将来性も示す一方で（ＬｏｕｉｓＣ．Ｕ．ｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１１Ｄｅｃ１；１１８（２３）：６０５０－６０５６．２０１１年１０月７日にオンラインで前公開、ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１１－０５－３５４４４９）、ＣＡＲＴ細胞療法は、これらの適応において、免疫抑制腫瘍微小環境の存在、腫瘍への接近の課題、および「オフ腫瘍（ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ）」毒性を最小化するのに必要とされる腫瘍選択的標的化の欠如といったさらなる課題に直面している（ＹｏｎｇＣ．Ｓ．Ｍ．ｅｔａｌ．，ＩｍｍｕｎｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ．２０１７Ａｐｒ；９５（４）：３５６－３６３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｉｃｂ．２０１６．１２８．Ｅｐｕｂ２０１６Ｄｅｃ２２）。

酵素のＡＤＡＭファミリー（ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼファミリー）は、多機能であり、一般的に膜に結合した亜鉛プロテアーゼである（Ｎｙｒｅｎ－ＥｒｉｃｋｓｏｎＥ．Ｋ．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ．２０１３Ｏｃｔ；１８３０（１０）：４４４５－５５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂａｇｅｎ．２０１３．０５．０１１．Ｅｐｕｂ２０１３Ｍａｙ１３）。ＡＤＡＭ１２（ＡＤＡＭメタロペプチダーゼドメイン１２、ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼ－１２、ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質１２、ＡＤＡＭ１２－ＯＴ１、ＣＡＲ１０、ＭＣＭＰ、ＭＣＭＰＭｌｔｎａ、Ｍｅｌｔｒｉｎ－ａ、ＭＬＴＮ、またはＭＬＴＮＡとしても知られる）は、ＡＤＡＭファミリーのメンバーである。ヒトにおいて、ＡＤＡＭ１２は、１０番染色体上のＡＤＡＭ１２遺伝子によってコードされ、遺伝子位置１０ｑ２６．２（ＮＣＢＩ）を有し、ＡＤＡＭ１２－ＬおよびＡＤＡＭ１２－Ｓと命名された２つの天然に存在するＡＤＡＭ１２スプライスバリアントが存在する（ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００８；４０（９）：１６８５－７０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｅｌ．２００８．０１．０２５．Ｅｐｕｂ２００８Ｆｅｂ１）。ＡＤＡＭ１２－Ｌドメイン組成物は、原型的な膜貫通ＡＤＡＭタンパク質に類似しており、細胞外プロ－、メタロプロテイナーゼ、ディスインテグリン様、システインリッチ、および上皮成長因子（ＥＧＦ）様ドメイン、その後に膜貫通ドメインおよび細胞質テールドメインを含有する。ＡＤＡＭ１２－Ｓ（可溶性スプライスバリアント）は、膜貫通および細胞質ドメインが、Ｃ末端内の３３個のアミノ酸の固有の伸長部によって置き換えられていることを除き、ＡＤＡＭ１２－Ｌと同じドメインを含有する。

健康な組織におけるＡＤＡＭ１２発現は低いが、ＡＤＡＭ１２の一般的な生物学的役割は、細胞接着および融合、細胞外マトリックス再構築、および細胞シグナル伝達における役割である（Ｎｙｒｅｎ－ＥｒｉｃｋｓｏｎＥ．Ｋ．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ．２０１３Ｏｃｔ；１８３０（１０）：４４４５－５５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂａｇｅｎ．２０１３．０５．０１１．Ｅｐｕｂ２０１３Ｍａｙ１３）。ＡＤＡＭ１２は、多くの異なる種類のがんを含め、種々の疾患の病因に関与している。

本発明は、抗ＡＤＡＭ１２剤に関する。

いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、抗体（Ａｂ）または抗原結合Ａｂ断片である。Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、ＡＤＡＭ１２に結合してもよく、（ａ）重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｂ）軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。ＶＨは、ＨＣ相補性決定領域（ＣＤＲ）１（ＣＤＲ－Ｈ１とも称される）と、ＨＣＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２とも称される）と、ＨＣＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３とも称される）と、ヒト様ＨＣフレームワーク領域とを含み得る。ＶＬは、ＬＣＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）と、ＬＣＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）と、ＬＣＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）と、ヒト様ＬＣフレームワーク領域とを含み得る。

いくつかの態様では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１３２、１３３、および１３４に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１３６、１３７、および１３８に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２３２、２３３、および２３４によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２３６、２３７、および２３８によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよい。あるいは、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１４２、１４３、および１４４に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１４６、１４７、および１４８に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２４２、２４３、および２４４によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２４６、２４７、および２４８によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよい。

いくつかの態様では、ヒト様ＨＣフレームワークは、ヒトＨＣフレームワークと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり得る。ヒト様ＬＣフレームワークは、ヒトＬＣフレームワークと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり得る。

特定の態様では、ＨＣ可変ドメインは、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣ可変ドメインは、配列番号１３５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＨＣ可変ドメインは、配列番号２３１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣ可変ドメインは、配列番号２３５によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。あるいは、ＨＣ可変ドメインは、配列番号１４１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣ可変ドメインは、配列番号１４５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＨＣ可変ドメインは、配列番号２４１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣ可変ドメインは、配列番号２４５によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。

いくつかの態様では、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、例えば、限定されないが、モノクローナルＡｂ、単一特異性Ａｂ、二重特異性Ａｂ、多重特異性Ａｂ、ヒト化Ａｂ、四量体Ａｂ、四価Ａｂ、単鎖Ａｂ、ドメイン特異性Ａｂ、ドメイン欠失Ａｂ、ｓｃＦｃ融合タンパク質、キメラＡｂ、合成Ａｂ、組換えＡｂ、ハイブリッドＡｂ、変異Ａｂ、ＣＤＲ接合されたＡｂ、断片抗原結合（Ｆａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’断片、可変断片（Ｆｖ）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆｄ断片、ダイアボディ、またはミニボディであり得る。

特定の態様では、抗体または抗原結合Ａｂ断片は、（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、２つ以上の結合特異性を含み得る。第１の特異性は、ＡＤＡＭ１２のエピトープに対する特異性であり得る。一態様では、第２の特異性は、ＡＤＡＭ１２の別のエピトープに対する特異性であり得る。別の態様では、第２の特異性は、ＡＤＡＭ１２以外の第２の抗原のエピトープに対する特異性であり得る。特定の態様では、第２の抗原は、例えば、限定されないが、ＣＤ３、ＮＫＧ２Ｄ、または４－１ＢＢであり得る。

いくつかの態様では、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、ヒト様断片結晶化可能（Ｆｃ）領域を含み得る。ヒト様Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり得る。ヒト様Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合し得る。ＦｃＲは、例えば、限定されないが、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃｇＲ）、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＢ１、ＦｃｇＲＩＩＢ２、ＦｃｇＲＩＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＩＢ、Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃｅＲ）、ＦｃｅＲＩ、ＦｃｅＲＩＩ、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃａＲ）、ＦｃａＲＩ、Ｆｃアルファ／ミュー受容体（Ｆｃａ／ｍＲ）、および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）であり得る。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。ＡＤＣは、（ａ）上述の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片と、（ｂ）Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片にコンジュゲートされる薬物とを含み得る。

いくつかの態様では、薬物は、例えば、限定されないが、抗がん性薬物、抗増殖性薬物、細胞傷害性薬物、抗血管新生薬物、アポトーシス薬物、免疫刺激薬物、抗菌薬物、抗生物質薬物、抗ウイルス薬物、抗炎症性薬物、抗線維化薬物、免疫抑制薬物、ステロイド、気管支拡張剤、β遮断薬、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、ＡＤＡＭ１２阻害剤、ＡＤＡＭ１２シグナル伝達阻害剤、酵素、ホルモン、神経伝達物質、毒素、放射性同位体、化合物、小分子、小分子阻害剤、タンパク質、ペプチド、ベクター、プラスミド、ウイルス粒子、ナノ粒子、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、またはイメージング薬物であってもよい。

いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ククルビタシン、カエトシン、ケトグロボシン、クラミドシン、カリケアミシン、ネモルビシン、クリプトフィシン、メンサカルシン、アンサマイトシン、マイトマイシンＣ、ゲルダナマイシン、メケルカルマイシン、レベッカマイシン、サフラシン、オキラクトマイシン、オリゴマイシン、アクチノマイシン、サンドラマイシン、ヒポテマイシン、ポリケトマイシン、ヒドロキシエリプチシン、チオコルヒチン、メトトレキサート、トリプトリド、タルトブリン、ラクタシスチン、ドラスタチン、アウリスタチン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、テロメスタチン、ツバスタチンＡ、コンブレタスタチン、マイタンシノイド、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＦ、ＤＭ１、ＤＭ４、ＤＴＴ、１６－ＧＭＢ－ＡＰＡ－ＧＡ、１７－ＤＭＡＰ－ＧＡ、ＪＷ５５、ピロロベンゾジアゼピン、ＳＮ－３８、Ｒｏ５－３３３５、プワイナフィシン、デュオカルマイシン、バフィロマイシン、タキソイド、ツブリシン、フェルレノール、ルシオールＡ、フマギリン、ハイグロリジン、グルコピエリシジン、アマニチン、アンサトリエニン、シネルビン、ファラシジン、ファロイジン、フィトスフィンゴシン、ピエリシジン、ポロネチン（ｐｏｒｏｎｅｔｉｎ）、フォドフィロトキシン（ｐｈｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）、グラミシジンＡ、サンギナリン、シネフンギン、エルボキシジエン、マイクロコリンＢ、ミクロシスチン、ムスコトキシン（ｍｕｓｃｏｔｏｘｉｎ）Ａ、トリトキシン、トリポリンＡ、ミオセベリン、ミトキシンＢ、ノクオリン（ｎｏｃｕｏｌｉｎ）Ａ、プソイドラリン酸Ｂ、プセウロチンＡ、シクロパミン、クルブリン、コルヒチン、アフィジコリン、エングレリン、コルジセピン、アポプトリジン、エポチロンＡ、リマキノン（ｌｉｍａｑｕｉｎｏｎｅ）、イサトロポロン（ｉｓａｔｒｏｐｏｌｏｎｅ）、イソフィスツラリン（ｉｓｏｆｉｓｔｕｌａｒｉｎ）、キナルドペプチン、イキサベピロン、アエロプリシニン、アルギノシン（ａｒｒｕｇｉｎｏｓｉｎ）、アグロケリン、エポチロン、および上述のうちのいずれか１つの誘導体からなる群から選択される薬物を含み得る。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。ＣＡＲは、（ａ）ＡＤＡＭ１２に結合するＡＢドメインと、（ｂ）膜貫通（ＴＭ）ドメインと、（ｃ）細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインと、（ｄ）任意選択で、上述のＡＢドメインおよび上述のＴＭドメインを連結するヒンジと、（ｅ）任意選択で、１つ以上の共刺激（ＣＳ）ドメインとを含み得る。

いくつかの態様では、ＡＢドメインは、上述の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片であり得る。

一態様では、ＡＢドメインは、（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

さらに別の態様では、ＡＢドメインは、（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖと、ＡＤＡＭ１２への結合を競合し得る。

特定の態様では、ＡＢドメインは、天然のＡＤＡＭ１２結合分子のＡＤＡＭ１２結合ドメインと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。一態様では、天然のＡＤＡＭ１２結合分子は、例えば、限定されないが、アルファアクチニン２（ＡＣＴＮ２）、インスリン様成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）、ＩＧＦＢＰ－５、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ制御サブユニットアルファ（ＰＩＫ３Ｒ１）、ヘパリン結合上皮成長因子（ＨＢ－ＥＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ベータセルリン、デルタ様１、胎盤ロイシンアミノペプチダーゼ（Ｐ－ＬＡＰ）、およびマトリックスメタロプロテアーゼ１４（ＭＭＰ－１４）であり得る。

いくつかの態様では、ＴＭドメインは、例えば、限定されないが、ＣＤ２８、ＣＤ３ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＴＣＲａ、ＴＣＲｂ、およびＣＤ３ｚのＴＭ領域、またはその膜貫通部分に由来し得る。

特定の態様では、ＴＭドメインは、ＣＤ２８のＴＭ領域、またはその膜貫通部分に由来し得る。ＴＭドメインは、任意選択で、（ｉ）配列番号１６１に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２６１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、ＩＣＳドメインは、例えば、限定されないが、ＣＤ３ｚ、リンパ球受容体鎖、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体タンパク質、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）サブユニット、ＩＬ－２受容体サブユニット、ＦｃＲｇ、ＦｃＲｂ、ＣＤ３ｇ、ＣＤ３ｄ、ＣＤ３ｅ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃｅＲＩ、ＤＡＰ１０、またはＤＡＰ１２の細胞質シグナル伝達配列またはその機能的断片に由来し得る。

特定の態様では、ＩＣＳドメインは、ＣＤ３ｚの細胞質シグナル伝達配列、またはその機能的断片に由来し得る。ＩＣＳドメインは、任意選択で、（ｉ）配列番号１６２に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２６２によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、ヒンジは、ＣＤ２８に由来し得る。ヒンジは、任意選択で、（ｉ）配列番号１６３に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号または２６３によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ配列を含み得る。

いくつかの態様では、１つ以上のＣＳドメインのうちの少なくとも１つは、例えば、限定されないが、ＣＤ２８、ＤＡＰ１０、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２７、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＴＬＡ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＤＳ、ＣＲＴＡＭ、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＥＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＬ２Ｒｂ、ＩＬ２Ｒｇ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ－１、ＰＳＧＬ１、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、ＶＬＡ－６、またはＣＤ８３リガンドの細胞質シグナル伝達配列またはその機能的断片に由来し得る。

特定の態様では、ＣＳドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、またはＤＡＰ１０の細胞質シグナル伝達配列、またはその機能的断片に由来し得る。ＣＳドメインは、任意選択で、（ｉ）配列番号１６４に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２６４によってコードされるアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号１６５に記載されるアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号２６５によってコードされるアミノ酸配列、（ｖ）配列番号１６６に記載されるアミノ酸配列、または（ｖｉ）配列番号２６６によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ配列を含み得る。

特定の態様では、ＣＡＲは、（ｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７１）のアミノ酸配列、（ｉｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７２）のアミノ酸配列、（ｉｉｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７３）のアミノ酸配列、（ｉｖ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７４）のアミノ酸配列、（ｖ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７５）のアミノ酸配列、（ｖｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７６）のアミノ酸配列、（ｖｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７７）のアミノ酸配列、（ｖｉｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７８）のアミノ酸配列、（ｉｘ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７９）のアミノ酸配列、（ｘ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８０）のアミノ酸配列、（ｘｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８１）のアミノ酸配列、（ｘｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８２）のアミノ酸配列、または（ｘｉｉｉ）配列番号２７１～２８２のうちのいずれか１つによってコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＡＢドメインにコンジュゲートされた細胞傷害性薬物をさらに含み得る。

本発明は、上述の任意の抗ＡＤＡＭ１２剤をコードする単離された核酸配列に関する。

いくつかの実施形態では、単離された核酸配列は、抗体（Ａｂ）または抗原結合Ａｂ断片をコードし得る。Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、ＡＤＡＭ１２に結合し、ＨＣ可変ドメイン（ＶＨ）とＬＣ可変ドメイン（ＶＬ）とを含み得る。ＶＨは、ＨＣ相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＨＣＣＤＲ２と、ＨＣＣＤＲ３と、ヒト様ＨＣフレームワークとを含み得る。ＶＬは、ＬＣＣＤＲ１と、ＬＣＣＤＲ２と、ＬＣＣＤＲ３と、ヒト様ＬＣフレームワーク領域とを含み得る。

いくつかの態様では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３は、
それぞれ配列番号１３２、１３３、および１３４に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１３６、１３７、および１３８に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２３２、２３３、および２３４によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２３６、２３７、および２３８によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよい。あるいは、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１４２、１４３、および１４４に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１４６、１４７、および１４８に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２４２、２４３、および２４４によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２４６、２４７、および２４８によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよい。

特定の態様では、単離された核酸配列は、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片をコードしていてもよく、ＶＨは、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＶＬは、配列番号１３５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号２３１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＶＬは、配列番号２３５によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。あるいは、ＶＨは、配列番号１４１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＶＬは、配列番号１４５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号２４１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＶＬは、配列番号２４５によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。

いくつかの態様では、単離された核酸配列は、例えば、限定されないが、モノクローナルＡｂ、単一特異性Ａｂ、二重特異性Ａｂ、多重特異性Ａｂ、ヒト化Ａｂ、四量体Ａｂ、四価Ａｂ、単鎖Ａｂ、ドメイン特異性Ａｂ、ドメイン欠失Ａｂ、ｓｃＦｃ融合タンパク質、キメラＡｂ、合成Ａｂ、組換えＡｂ、ハイブリッドＡｂ、変異Ａｂ、ＣＤＲ接合されたＡｂ、断片抗原結合（Ｆａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’断片、可変断片（Ｆｖ）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆｄ断片、ダイアボディ、またはミニボディであるＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片をコードし得る。

特定の態様では、単離された核酸配列は、（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸を含むＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片をコードし得る。

いくつかの態様では、単離された核酸配列は、２つ以上の結合特異性を含むＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片をコードし得る。第１の特異性は、ＡＤＡＭ１２のエピトープに対する特異性であり得る。一態様では、第２の特異性は、ＡＤＡＭ１２の別のエピトープに対する特異性であり得る。別の態様では、第２の特異性は、ＡＤＡＭ１２以外の第２の抗原のエピトープに対する特異性であり得る。特定の態様では、第２の抗原は、例えば、限定されないが、ＣＤ３、ＮＫＧ２Ｄ、または４－１ＢＢであり得る。

いくつかの態様では、単離された核酸は、ヒト様断片結晶化可能（Ｆｃ）領域を含むＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片をコードし得る。特定の態様では、ヒト様Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり得る。

ヒト様Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合し得る。ＦｃＲは、例えば、限定されないが、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃｇＲ）、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＢ１、ＦｃｇＲＩＩＢ２、ＦｃｇＲＩＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＩＢ、Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃｅＲ）、ＦｃｅＲＩ、ＦｃｅＲＩＩ、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃａＲ）、ＦｃａＲＩ、Ｆｃアルファ／ミュー受容体（Ｆｃａ／ｍＲ）、または新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）であり得る。

いくつかの実施形態では、単離された核酸配列は、上述の任意のＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、（ａ）ＡＤＡＭ１２に結合するＡＢドメインと、（ｂ）膜貫通（ＴＭ）ドメインと、（ｃ）細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインと、（ｄ）任意選択で、上述のＡＢドメインおよび上述のＴＭドメインを連結するヒンジと、（ｅ）任意選択で、１つ以上の共刺激（ＣＳ）ドメインとを含み得る。

いくつかの態様では、単離された核酸配列は、ＡＢドメインが上述のＡＢドメインをコードする核酸配列のうちのいずれかによってコードされるＣＡＲをコードし得る。

特定の態様では、単離された核酸配列は、ＡＢドメインが（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードし得る。

特定の態様では、単離された核酸配列は、ＡＢドメインが（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖと、ＡＤＡＭ１２への結合を競合するＣＡＲをコードし得る。

特定の態様では、単離された核酸配列は、ＡＢドメインが、天然のＡＤＡＭ１２結合分子のＡＤＡＭ１２結合ドメインと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードし得る。ある特定の実施形態では、天然のＡＤＡＭ１２結合分子は、例えば、限定されないが、アルファアクチニン２（ＡＣＴＮ２）、インスリン様成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）、ＩＧＦＢＰ－５、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ制御サブユニットアルファ（ＰＩＫ３Ｒ１）、ヘパリン結合上皮成長因子（ＨＢ－ＥＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ベータセルリン、デルタ様１、胎盤ロイシンアミノペプチダーゼ（Ｐ－ＬＡＰ）、およびマトリックスメタロプロテアーゼ１４（ＭＭＰ－１４）であり得る。

いくつかの態様では、単離された核酸配列は、ＴＭドメインが、例えば、限定されないが、ＣＤ２８、ＣＤ３ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＴＣＲａ、ＴＣＲｂ、およびＣＤ３ｚのＴＭ領域、またはその膜貫通部分に由来するＣＡＲをコードし得る。特定の態様では、ＴＭドメインは、ＣＤ２８のＴＭ領域、またはその膜貫通部分に由来し得る。ＴＭドメインは、任意選択で、（ｉ）配列番号１６１に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２６１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、単離された核酸配列は、ＩＣＳドメインが、例えば、限定されないが、ＣＤ３ｚ、リンパ球受容体鎖、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体タンパク質、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）サブユニット、ＩＬ－２受容体サブユニット、ＦｃＲｇ、ＦｃＲｂ、ＣＤ３ｇ、ＣＤ３ｄ、ＣＤ３ｅ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃｅＲＩ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２の細胞質シグナル伝達配列またはその機能的断片に由来するＣＡＲをコードし得る。特定の態様では、ＩＣＳドメインは、ＣＤ３ｚの細胞質シグナル伝達配列、またはその機能的断片に由来し得る。ＩＣＳドメインは、任意選択で、（ｉ）配列番号１６２に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２６２によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、単離された核酸配列は、ヒンジがＣＤ２８に由来するＣＡＲをコードし得る。ヒンジは、任意選択で、（ｉ）配列番号１６３に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２６３によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ配列を含み得る。

いくつかの態様では、単離された核酸配列は、１つ以上のＣＳドメインのうちの少なくとも１つが、例えば、限定されないが、ＣＤ２８、ＤＡＰ１０、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２７、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＴＬＡ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＤＳ、ＣＲＴＡＭ、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＥＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＬ２Ｒｂ、ＩＬ２Ｒｇ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ－１、ＰＳＧＬ１、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、ＶＬＡ－６、またはＣＤ８３リガンドの細胞質シグナル伝達配列またはその機能的断片に由来するＣＡＲをコードし得る。特定の態様では、ＣＳドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、またはＤＡＰ１０の細胞質シグナル伝達配列、またはその機能的フラグメントに由来し得る。ＣＳドメインは、任意選択で、（ｉ）配列番号１６４に記載されるアミノ酸配列、または（ｉｉ）配列番号２６４によってコードされるアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号１６５に記載されるアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号２６５によってコードされるアミノ酸配列、（ｖ）配列番号１６６に記載されるアミノ酸配列、または（ｖｉ）配列番号２６６によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ配列を含み得る。

いくつかの態様では、単離された核酸配列は、（ｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７１）のアミノ酸配列、（ｉｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７２）のアミノ酸配列、（ｉｉｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７３）のアミノ酸配列、（ｉｖ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７４）のアミノ酸配列、（ｖ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７５）のアミノ酸配列、（ｖｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７６）のアミノ酸配列、（ｖｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７７）のアミノ酸配列、（ｖｉｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７８）のアミノ酸配列、（ｉｘ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７９）のアミノ酸配列、（ｘ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８０）のアミノ酸配列、（ｘｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８１）のアミノ酸配列、（ｘｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８２）のアミノ酸配列、または（ｘｉｉｉ）配列番号２７１～２８２のうちのいずれか１つによってコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードし得る。

いくつかの実施形態では、上のいずれかの単離された核酸配列は、リーダー配列（ＬＳ）をさらに含み得る。一態様では、ＬＳは、任意選択で、配列番号２６０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。

いくつかの実施形態では、上のいずれか１つの単離された核酸配列は、Ｔ２Ａ配列および／または切断ＣＤ１９（ｔｒＣＤ１９）をコードする配列をさらに含み得る。一態様では、Ｔ２Ａ配列は、任意選択で、配列番号２６９と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。一態様では、ｔｒＣＤ１９は、任意選択で、配列番号１７０と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。特定の態様では、ｔｒＣＤ１９は、配列番号２７０と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされ得る。

本発明は、抗ＡＤＡＭ１２剤をコードする任意の核酸配列を含むベクターに関する。

いくつかの実施形態では、ベクターは、上述の任意の核酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、ベクターは、例えば、限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、コスミド、ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターであり得る。

本発明は、組換えまたは単離された細胞に関する。

いくつかの実施形態では、組換えまたは単離された細胞は、（ｉ）上述の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、（ｉｉ）上述の任意のＡＤＣ、（ｉｉｉ）上述の任意のＣＡＲ、（ｉｖ）上述の任意の核酸配列、または（ｖ）上述の任意のベクターを含み得る。

いくつかの態様では、組換えまたは単離された細胞は、例えば、限定されないが、非哺乳動物細胞、任意選択で、植物細胞、細菌細胞、真菌細胞、酵母細胞、原虫細胞、または昆虫細胞であり得る。

いくつかの態様では、組換えまたは単離された細胞は、例えば、限定されないが、哺乳動物細胞、任意選択で、ヒト細胞、ラット細胞、またはマウス細胞であり得る。

いくつかの態様では、組換えまたは単離された細胞は、例えば、限定されないが、幹細胞であり得る。

いくつかの態様では、組換えまたは単離された細胞は、例えば、限定されないが、初代細胞、任意選択で、ヒト初代細胞、またはそれに由来する細胞であり得る。

いくつかの態様では、組換えまたは単離された細胞は、例えば、限定されないが、細胞株、任意選択でハイブリドーマ細胞株であり得る。

いくつかの態様では、組換えまたは単離された細胞は、例えば、限定されないが、免疫細胞であり得る。

いくつかの態様では、組換えまたは単離された細胞は、ＭＨＣ＋またはＭＨＣ－であり得る。

いくつかの態様では、組換えまたは単離された細胞は、例えば、限定されないが、細胞株、Ｔ細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）細胞、最終分化したエフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、およびａ／ｂＴ細胞、ｇ／ｄＴ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、パーフォリン欠損細胞、グランザイム欠損細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、単球、マクロファージ、または樹状細胞であり得る。

特定の態様では、組換えまたは単離された細胞は、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆細胞であり得る。

特定の態様では、組換えまたは単離された細胞は、その内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が、（ｉ）発現されないか、（ｉｉ）機能的に発現されないか、または（ｉｉｉ）野生型Ｔ細胞と比較して減少したレベルで発現するように改変されたＴ細胞であり得る。

特定の態様では、組換えまたは単離された細胞は、ＣＡＲが、その標的分子に結合する場合、活性化されるか、または刺激されて、増殖し得る。

特定の態様では、組換えまたは単離された細胞は、ＣＡＲが、標的分子に結合する場合、標的分子を発現する細胞に対して細胞障害性を示し得る。

特定の態様では、組換えまたは単離された細胞を投与すると、ＣＡＲが、その標的分子に結合する場合、疾患、がん、心臓の状態、自己免疫状態、炎症状態、または線維化状態を改善し得る。

特定の態様では、組換えまたは単離された細胞は、ＣＡＲが、その標的分子に結合する場合、サイトカインおよび／またはケモカインの発現を増加させ得る。サイトカインは、ＩＦＮ－ｇであり得る。

特定の態様では、組換えまたは単離された細胞は、ＣＡＲが、その標的に結合する場合、サイトカインおよび／またはケモカインの発現を減少させ得る。サイトカインは、ＴＧＦ－ｂであり得る。

本発明は、組換えまたは単離された細胞の集合体に関する。

いくつかの実施形態では、集合体は、上述の少なくともいずれかの１つの組換えまたは単離された細胞を含み得る。

本発明は、薬学的組成物に関する。

いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、（ａ）（ａ－ｉ）上述の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、（ａ－ｉｉ）上述の任意のＡＤＣ、（ｉｉｉ）上述の任意のＣＡＲ、（ｉｖ）上述の任意の核酸配列、（ｖ）上述の任意のベクター、（ｖｉ）上述の任意の細胞、または（ｖｉｉ）細胞の任意の集合体と、任意選択で、（ｂ）薬学的に許容される賦形剤もしくは担体を含み得る。

本発明は、対象を治療する方法に関する。

いくつかの実施形態では、本方法は、対象を治療する方法であってもよく、本方法は、それを必要とする対象に治療有効量の（ｉ）上述の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、（ｉｉ）上述の任意のＡＤＣ、（ｉｉｉ）上述の任意のＣＡＲ、（ｉｖ）上述の任意の核酸配列、（ｖ）上述の任意のベクター、（ｖｉ）上述の任意の細胞、（ｖｉｉ）上述の細胞の任意の集合体、または（ｖｉｉｉ）上述の任意の薬学的組成物を投与することを含み得る。

いくつかの態様では、本方法は、例えば、限定されないが、がん、線維症、自己免疫、心血管状態、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、もしくは炎症性障害の治療に使用され得る。特定の態様では、本方法は、がんの治療に使用されてもよく、がんは、例えば、限定されないが、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、または甲状腺がんである。

いくつかの実施形態では、本方法は、抗ＡＤＡＭ１２剤で対象を治療する方法であり得る。本方法は、（ａ）対象から生体試料を得るステップ、または得たステップと、（ｂ）生体試料中のＡＤＡＭ１２の発現レベルを測定するステップと、（ｃ）対象がＡＤＡＭ１２過剰発現者であるかどうかを決定するステップと、（ｄ）対象がＡＤＡＭ１２過剰発現者である場合、対象に治療有効量の（ｄ－ｉ）上述の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、（ｄ－ｉｉ）上述の任意のＡＤＣ、（ｄ－ｉｉｉ）上述の任意のＣＡＲ、（ｄ－ｉｖ）上述の任意の核酸配列、（ｄ－ｖ）上述の任意のベクター、（ｄ－ｖｉ）上述の任意の細胞、（ｄ－ｖｉｉ）上述の細胞の任意の集合体、または（ｄ－ｖｉｉｉ）上述の任意の薬学的組成物を投与するステップと含み得る。特定の態様では、ＡＤＡＭ１２過剰発現者は、ＡＤＡＭ１２発現が、正常もしくは健康な対象のＡＤＡＭ１２発現よりも少なくとも１．５倍高い対象である。特定の態様では、ＡＤＡＭ１２過剰発現者は、ＡＤＡＭ１２発現が、正常もしくは健康な対象のＡＤＡＭ１２発現よりも少なくとも１．７５倍高い対象である。特定の態様では、ＡＤＡＭ１２過剰発現者は、ＡＤＡＭ１２発現が、正常もしくは健康な対象のＡＤＡＭ１２発現よりも少なくとも２倍高い対象である。

いくつかの態様では、対象は、がんに罹患していてもよい。がんは、例えば、限定されないが、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、または甲状腺がんであり得る。

本発明は、免疫刺激の方法に関する。

いくつかの実施形態では、本方法は、対象において免疫応答を刺激するための方法であって、対象に治療有効量の（ｉ）上述の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、（ｉｉ）上述の任意のＡＤＣ、（ｉｉｉ）上述の任意のＣＡＲ、（ｉｖ）上述の任意の核酸配列、（ｖ）上述の任意のベクター、（ｖｉ）上述の任意の細胞、（ｖｉｉ）上述の細胞の任意の集合体、または（ｖｉｉｉ）上述の任意の薬学的組成物を投与することを含む、方法であり得る。

本発明は、疾患を治療する方法に関する。

いくつかの実施形態では、本方法は、対象において疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の（ｉ）上述の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、（ｉｉ）上述の任意のＡＤＣ、（ｉｉｉ）上述の任意のＣＡＲ、（ｉｖ）上述の任意の核酸配列、（ｖ）上述の任意のベクター、（ｖｉ）上述の任意の細胞、（ｖｉｉ）上述の細胞の任意の集合体、または（ｖｉｉｉ）上述の任意の薬学的組成物を投与することを含む、方法であり得る。

いくつかの態様では、疾患は、例えば、限定されないが、がん、線維症、自己免疫、心血管状態、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、または炎症性障害であり得る。

特定の態様では、疾患は、がんであってもよく、がんは、任意選択で、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、または甲状腺がんであり得る。

本発明はさらに、細胞の集合体を拡張する方法に関する。

いくつかの態様では、本方法は、対象において細胞の集合体を拡張する方法であり得る。

いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、（ｉ）上述の任意の核酸配列、（ｉｉ）上述の任意のベクター、（ｉｉｉ）上述の任意の細胞、（ｉｖ）上述の任意の細胞の集合体、または（ｖ）上述の任意の薬学的組成物を投与することを含み得る。

いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも１つの所望の細胞、例えば、上述の任意のＡｂもしくはＡｂ断片、上述の任意のＡＤＣ、および／または上述の任意のＣＡＲを含み得る細胞を含む細胞の集合体をもたらし得る。ある特定の実施形態では、細胞は、そのようなＡｂもしくはＡｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲをコードする核酸を含み得る。

いくつかの実施形態では、得られた前記細胞の集合体は、対象において投与後の少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２年間、または少なくとも３年間維持され得る。

いくつかの実施形態では、対象は、がんに罹患していてもよい。

ある特定の実施形態では、疾患は、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、または甲状腺がんであり得る。

いくつかの態様では、上述の方法のいずれかは、第２の薬剤を投与することをさらに含み得る。

特定の態様では、第２の薬剤は、限定されないが、抗がん性薬物、抗増殖性薬物、細胞傷害性薬物、抗血管新生薬物、アポトーシス薬物、免疫刺激薬物、抗菌薬物、抗生物質薬物、抗ウイルス薬物、抗炎症性薬物、抗線維化薬物、免疫抑制薬物、ステロイド、気管支拡張剤、β遮断薬、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、ＡＤＡＭ１２阻害剤、ＡＤＡＭ１２シグナル伝達阻害剤、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤、酵素、ホルモン、神経伝達物質、毒素、放射性同位体、化合物、小分子、小分子阻害剤、タンパク質、ペプチド、ベクター、プラスミド、ウイルス粒子、ナノ粒子、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、またはイメージング薬物であり得る。

本発明はさらに、上述の任意のＣＡＲを含む細胞を生成する方法に関する。

いくつかの実施形態では、本方法は、（ｉ）（ｉ－ａ）上のいずれか１つに記載の少なくとも１つのＣＡＲをコードする核酸配列、または（ｉ－ｂ）上のいずれか１つに記載の少なくとも１つの核酸配列を細胞に導入すること、または
（ｉｉ）上のいずれか１つに記載のベクターを用いて細胞を形質導入することを含み得る。任意選択で、本方法はさらに、（ｉｉｉ）フローサイトメトリーまたは免疫蛍光アッセイを介して決定される上述のＣＡＲおよび／または選択可能なマーカーの発現に基づいて、細胞を単離することとを含み得る。

本開示のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の例示的な概略図を提供する。図１Ａは、本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の概略図を示す。図１Ｂは、本開示のＣＡＲ構築物の例示的な概略図を示し、ＣＡＲ構築物は、抗原結合（ＡＢ）ドメインと、膜貫通（ＴＭ）ドメインと、細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインとを含み、さらに、ＡＢドメインおよびＴＭドメインを連結するヒンジと、１つまたは２つの共刺激（ＣＳ）ドメインとを含む。図１Ｃは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、リーダー配列（ＬＳ）と、図１Ｂに示されるような例示的なＣＡＲ構築物とを含む。図１Ｅは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、さらに、例示的なリボソームスキップ配列（Ｔ２Ａ）と、例示的な発現／精製マーカーである切断ＣＤ１９（ｔｒＣＤ１９）とを含む。本開示のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の例示的な概略図を提供する。図１Ａは、本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の概略図を示す。図１Ｂは、本開示のＣＡＲ構築物の例示的な概略図を示し、ＣＡＲ構築物は、抗原結合（ＡＢ）ドメインと、膜貫通（ＴＭ）ドメインと、細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインとを含み、さらに、ＡＢドメインおよびＴＭドメインを連結するヒンジと、１つまたは２つの共刺激（ＣＳ）ドメインとを含む。図１Ｃは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、リーダー配列（ＬＳ）と、図１Ｂに示されるような例示的なＣＡＲ構築物とを含む。図１Ｅは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、さらに、例示的なリボソームスキップ配列（Ｔ２Ａ）と、例示的な発現／精製マーカーである切断ＣＤ１９（ｔｒＣＤ１９）とを含む。本開示のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の例示的な概略図を提供する。図１Ａは、本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の概略図を示す。図１Ｂは、本開示のＣＡＲ構築物の例示的な概略図を示し、ＣＡＲ構築物は、抗原結合（ＡＢ）ドメインと、膜貫通（ＴＭ）ドメインと、細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインとを含み、さらに、ＡＢドメインおよびＴＭドメインを連結するヒンジと、１つまたは２つの共刺激（ＣＳ）ドメインとを含む。図１Ｃは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、リーダー配列（ＬＳ）と、図１Ｂに示されるような例示的なＣＡＲ構築物とを含む。図１Ｅは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、さらに、例示的なリボソームスキップ配列（Ｔ２Ａ）と、例示的な発現／精製マーカーである切断ＣＤ１９（ｔｒＣＤ１９）とを含む。本開示のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の例示的な概略図を提供する。図１Ａは、本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の概略図を示す。図１Ｂは、本開示のＣＡＲ構築物の例示的な概略図を示し、ＣＡＲ構築物は、抗原結合（ＡＢ）ドメインと、膜貫通（ＴＭ）ドメインと、細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインとを含み、さらに、ＡＢドメインおよびＴＭドメインを連結するヒンジと、１つまたは２つの共刺激（ＣＳ）ドメインとを含む。図１Ｃは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、リーダー配列（ＬＳ）と、図１Ｂに示されるような例示的なＣＡＲ構築物とを含む。図１Ｅは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、さらに、例示的なリボソームスキップ配列（Ｔ２Ａ）と、例示的な発現／精製マーカーである切断ＣＤ１９（ｔｒＣＤ１９）とを含む。本開示のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の例示的な概略図を提供する。図１Ａは、本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の概略図を示す。図１Ｂは、本開示のＣＡＲ構築物の例示的な概略図を示し、ＣＡＲ構築物は、抗原結合（ＡＢ）ドメインと、膜貫通（ＴＭ）ドメインと、細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインとを含み、さらに、ＡＢドメインおよびＴＭドメインを連結するヒンジと、１つまたは２つの共刺激（ＣＳ）ドメインとを含む。図１Ｃは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、リーダー配列（ＬＳ）と、図１Ｂに示されるような例示的なＣＡＲ構築物とを含む。図１Ｅは、本開示のＣＡＲをコードするベクター構築物の例示的な概略図を示し、ベクターは、さらに、例示的なリボソームスキップ配列（Ｔ２Ａ）と、例示的な発現／精製マーカーである切断ＣＤ１９（ｔｒＣＤ１９）とを含む。いくつかの実施形態のＣＡＲの種々の例示的なＡＢドメイン構築物を示す概略図を示す。最初の２つの例は、「ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ」（または「ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ」）および「ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ」（または「ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ」）であり、これらは「ｈ６Ｅ６」に由来するｓｃＦｖであり、マウス抗ＡＤＡＭ１２抗体６Ｅ６のヒト化態様である。次の２つの例は、「ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ」（または「ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ」）および「ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ」（または「ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ」）であり、これらは「ｈ６Ｃ１０」に由来するｓｃＦｖであり、マウス抗ＡＤＡＭ１２抗体６Ｃ１０のヒト化態様である。最後の２つの例では、ＡＤＡＭ１２に結合する天然に存在する分子、またはそのような分子のＡＤＡＭ１２結合部分が、ＡＢドメインに使用される。本発明のいくつかの実施形態の種々の例示的なＣＡＲ構築物の概略図を含む。図３Ａの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、ＣＤ２８ＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。図３Ｂの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、４１ＢＢＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。図３Ｃの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、ＤＡＰ１０ＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。ＣＤ２８Ｈは、ヒトＣＤ２８に由来するヒンジである。ＣＤ２８ＴＭは、ヒトＣＤ２８に由来するＴＭドメインである。ＣＤ２８ＣＳは、ヒトＣＤ２８の細胞質シグナル伝達配列に由来するＣＳ領域である。ＣＤ３ｚＩＣＳは、ヒトＣＤ３ゼータに由来するＩＣＳドメインである。図１Ｃに示されるように、この図または本出願に記載されるＣＡＲ構築物のうちのいずれも、ＬＳ、Ｔ２Ａ、および／またはｔｒＣＤ１９とともに使用され得る。本発明のいくつかの実施形態の種々の例示的なＣＡＲ構築物の概略図を含む。図３Ａの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、ＣＤ２８ＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。図３Ｂの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、４１ＢＢＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。図３Ｃの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、ＤＡＰ１０ＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。ＣＤ２８Ｈは、ヒトＣＤ２８に由来するヒンジである。ＣＤ２８ＴＭは、ヒトＣＤ２８に由来するＴＭドメインである。ＣＤ２８ＣＳは、ヒトＣＤ２８の細胞質シグナル伝達配列に由来するＣＳ領域である。ＣＤ３ｚＩＣＳは、ヒトＣＤ３ゼータに由来するＩＣＳドメインである。図１Ｃに示されるように、この図または本出願に記載されるＣＡＲ構築物のうちのいずれも、ＬＳ、Ｔ２Ａ、および／またはｔｒＣＤ１９とともに使用され得る。本発明のいくつかの実施形態の種々の例示的なＣＡＲ構築物の概略図を含む。図３Ａの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、ＣＤ２８ＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。図３Ｂの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、４１ＢＢＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。図３Ｃの例示的な構築物では、図２に示されるＡＢドメインの１つをＡＢドメインとして使用し、ＣＤ２８Ｈをヒンジとして使用し、ＣＤ２８ＴＭをＴＭドメインとして使用し、ＤＡＰ１０ＣＳをＣＳドメインとして使用し、ＣＤ３ｚＩＣＳをＩＣＳドメインとして使用する。ＣＤ２８Ｈは、ヒトＣＤ２８に由来するヒンジである。ＣＤ２８ＴＭは、ヒトＣＤ２８に由来するＴＭドメインである。ＣＤ２８ＣＳは、ヒトＣＤ２８の細胞質シグナル伝達配列に由来するＣＳ領域である。ＣＤ３ｚＩＣＳは、ヒトＣＤ３ゼータに由来するＩＣＳドメインである。図１Ｃに示されるように、この図または本出願に記載されるＣＡＲ構築物のうちのいずれも、ＬＳ、Ｔ２Ａ、および／またはｔｒＣＤ１９とともに使用され得る。インビトロまたはインビボアッセイに使用され得る、単離された組換えＣＡＲ発現細胞を製造するための多くの可能な方法の１つを示すフローチャートを示す。フローサイトメトリーによって分析したがん細胞株のＡＤＡＭ１２染色のヒストグラムを含む。ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞（ＡＤＡＭ１２発現ベクターでトランスフェクトされたヒト乳がん細胞株）（左）を、抗ヒトＡＤＡＭ１２抗体（クローン７Ｂ８）を産生する細胞を保有するマウスから採取した未精製腹水試料で染色し、Ｕ８７－ＭＧ細胞（膠芽腫細胞株）（右）を、抗ヒトＡＤＡＭ１２抗体（クローン８Ｆ８）を産生する細胞を保有するマウスから採取した未精製腹水試料で、またはマウス抗ヒトＡＤＡＭ１２モノクローナル抗体（クローン６Ｃ１０）で染色した。本発明の抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ発現細胞の細胞傷害性を示すグラフを含む。ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞を、ルシフェラーゼ発現ベクターＪＣ７で形質導入し、標的細胞として使用した。ドナー１由来のヒトＴ細胞を、抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ（抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１または抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ２）をコードするベクター、または空のベクター（ＥＶ、すなわち、ＣＤ１９のみ）で形質導入し、ＣＤ１９陽性細胞を濃縮し、拡張し、エフェクター細胞として使用した。様々なエフェクター（ＣＡＲＴ細胞）：標的（腫瘍細胞）比で細胞を共培養し、２４時間（上部）または４８時間（底部）の共培養後、ルシフェラーゼプレートアッセイを使用して細胞傷害性を評価した。アスタリスクは、スチューデントのＴ検定を使用した抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲとＥＶＴ細胞との間の有意性を表す（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１）。実施例６に記載のインビボ有効性試験からの結果を含有する。腹腔内ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２－Ｌｕｃ腫瘍を有するＮＳＧマウスを、ｔｒＣＤ１９を発現するが抗ＡＤＡＭ１２を発現しないヒトＴ細胞（ＥＶＴ）または抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１を発現するヒトＴ細胞（ＣＡＲ１Ｔ）で治療した。図７Ａは、各治療群における腫瘍負荷の変化を示す一連のＸｅｎｏｇｅｎ－ＩＶＩＳ（登録商標）画像である。図７Ｂは、発光シグナル強度（放射輝度（光子／秒））を使用して、２つの治療群における平均腫瘍負荷を比較するグラフである。エラーバー：平均の標準誤差（ＳＥＭ）。これらの群間の統計的な差は、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙランキングを用いたスチューデントのＴ検定を用いて分析した（^＊＊ｐ＜０．０１、および^＊＊＊ｐ＜０．００１）。図７Ｃは、２つの群における平均体重を比較するグラフである。実施例６に記載のインビボ有効性試験からの結果を含有する。腹腔内ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２－Ｌｕｃ腫瘍を有するＮＳＧマウスを、ｔｒＣＤ１９を発現するが抗ＡＤＡＭ１２を発現しないヒトＴ細胞（ＥＶＴ）または抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１を発現するヒトＴ細胞（ＣＡＲ１Ｔ）で治療した。図７Ａは、各治療群における腫瘍負荷の変化を示す一連のＸｅｎｏｇｅｎ－ＩＶＩＳ（登録商標）画像である。図７Ｂは、発光シグナル強度（放射輝度（光子／秒））を使用して、２つの治療群における平均腫瘍負荷を比較するグラフである。エラーバー：平均の標準誤差（ＳＥＭ）。これらの群間の統計的な差は、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙランキングを用いたスチューデントのＴ検定を用いて分析した（^＊＊ｐ＜０．０１、および^＊＊＊ｐ＜０．００１）。図７Ｃは、２つの群における平均体重を比較するグラフである。実施例６に記載のインビボ有効性試験からの結果を含有する。腹腔内ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２－Ｌｕｃ腫瘍を有するＮＳＧマウスを、ｔｒＣＤ１９を発現するが抗ＡＤＡＭ１２を発現しないヒトＴ細胞（ＥＶＴ）または抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１を発現するヒトＴ細胞（ＣＡＲ１Ｔ）で治療した。図７Ａは、各治療群における腫瘍負荷の変化を示す一連のＸｅｎｏｇｅｎ－ＩＶＩＳ（登録商標）画像である。図７Ｂは、発光シグナル強度（放射輝度（光子／秒））を使用して、２つの治療群における平均腫瘍負荷を比較するグラフである。エラーバー：平均の標準誤差（ＳＥＭ）。これらの群間の統計的な差は、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙランキングを用いたスチューデントのＴ検定を用いて分析した（^＊＊ｐ＜０．０１、および^＊＊＊ｐ＜０．００１）。図７Ｃは、２つの群における平均体重を比較するグラフである。実施例５に記載されるサイトカイン産生試験からの結果を含む。抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１、抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ２、またはＥＶＴ細胞をＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２とともに２４時間培養し、上清中のＩＦＮ－ｇの濃度を比較した。エラーバー：平均の標準誤差（ＳＥＭ）。ＩＦＮ－ｇレベルの統計的な差は、スチューデントのＴ検定を用いて計算した（^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

本発明の一態様は、一般に、新規なＡＤＡＭ１２結合剤の構築および使用に関する。

一態様では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、例えば、限定されないが、抗ＡＤＡＭ１２抗体（Ａｂ）、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。

一態様では、抗原結合Ａｂ断片は、ＡＢドメインを含む。

一態様では、抗原結合Ａｂ断片は、ＡＢドメインであり得る。

本発明はまた、ＡＤＡＭ１２に結合するこのようなＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、このようなポリヌクレオチドを含むベクター、ならびにこのようなＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ（例えば、ポリヌクレオチド、またはこのようなベクター）を含む細胞を提供する。本発明はまた、このようなＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、ＣＡＲ、このようなポリヌクレオチド、このようなベクター、またはこのような細胞を含む組成物を提供する。

本発明はさらに、ＡＤＡＭ１２に結合するＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、もしくはＣＡＲ、またはＡＤＡＭ１２に結合するＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、もしくはＣＡＲを発現する細胞を製造し、使用する方法を提供する。本発明はまた、がんなどの対象におけるＡＤＡＭ１２発現に関連する状態を治療するための方法を提供する。このような抗ＡＤＡＭ１２Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、ＣＡＲ、およびこのようなＡＤＡＭ１２に結合するＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、もしくはＣＡＲをコードする核酸配列を含む細胞を使用して、ＡＤＡＭ１２を発現する細胞の望ましくない増殖と関連する疾患、障害、または状態を治療し得る。

結合標的
一態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、ＡＤＡＭ１２に結合する。

一態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤の標的または結合標的は、ＡＤＡＭ１２である。

一態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２抗体（Ａｂ）、抗ＡＤＡＭ１２抗原結合Ａｂ断片、抗ＡＤＡＭ１２多重特異性Ａｂ、抗ＡＤＡＭ１２多重特異性抗原結合Ａｂ断片、抗ＡＤＡＭ１２抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、および抗ＡＤＡＭ１２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、個々に、ＡＤＡＭメタロプロテイナーゼドメイン１２、ディスインテグリン、ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質１２、ＡＤＡＭ１２－ＯＴ１、ＣＡＲ１０、ＭＣＭＰ、ＭＣＭＰＭｌｔｎａ、Ｍｅｌｔｒｉｎ－ａ、ＭＬＴＮ、またはＭＬＴＮＡとしても知られる、ＡＤＡＭ１２（ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼ－１２）に結合するＡＢドメインを含む。

ヒトにおいて、ＡＤＡＭ１２は、１０番染色体上のＡＤＡＭ１２遺伝子によってコードされ、遺伝子位置１０ｑ２６．２（ＮＣＢＩ）を有し、ＡＤＡＭ１２－Ｌ（Ｌは長いものに対する）およびＡＤＡＭ１２－Ｓ（Ｓは短いものに対する）と命名された２つの天然に存在するＡＤＡＭ１２スプライスバリアントが存在する（ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００８；４０（９）：１６８５－７０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｅｌ．２００８．０１．０２５．Ｅｐｕｂ２００８Ｆｅｂ１）。

ＡＤＡＭ１２－Ｌドメイン組成物は、原型的な膜貫通ＡＤＡＭタンパク質に類似しており、細胞外プロ－、メタロプロテイナーゼ、ディスインテグリン様、システインリッチ、および上皮成長因子（ＥＧＦ）様ドメイン、その後に膜貫通ドメインおよび細胞質テールドメインを含有する。ＡＤＡＭ１２－Ｓ（可溶性スプライスバリアント）は、膜貫通および細胞質ドメインが、Ｃ末端内の３３個のアミノ酸の固有の伸長部によって置き換えられていることを除き、ＡＤＡＭ１２－Ｌと同じドメインを含有する。

ヒトＡＤＡＭ１２－Ｌは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション：ＡＡＣ０８７０２．２として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有する。一態様では、ヒトＡＤＡＭ１２－Ｌは、配列番号１０１として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有する。ヒトＡＤＡＭ１２－Ｓは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション：ＡＡＣ０８７０３．２として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有する。一態様では、ヒトＡＤＡＭ１２－Ｓは、配列番号１０２として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有する。

いくつかの態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、ＡＤＡＭ１２－Ｌに結合する。

いくつかの態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、ＡＤＡＭ１２－Ｓに結合する。

いくつかの態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、ＡＤＡＭ１２－ＬおよびＡＤＡＭ１２－Ｓの両方に結合する。

ＡＤＡＭ１２は、多種多様ながん、例えば、限定されないが、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、および甲状腺がんにおいて、上方制御され、および／または病理学的役割を果たす（ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００８；４０（９）：１６８５－７０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｅｌ．２００８．０１．０２５．Ｅｐｕｂ２００８Ｆｅｂ１、ＬｅＰａｂｉｃＨ．ｅｔｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２００３Ｍａｙ；３７（５）：１０５６－６６、ＳｋｕｂｉｔｚＫ．Ｍ．ｅｔａｌ．，ＪＬａｂＣｌｉｎＭｅｄ．２００４Ｆｅｂ；１４３（２）：８９－９８．、Ｃａｒｌ－ＭｃＧｒａｔｈＳ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＯｎｃｏｌ．２００５Ｊａｎ；２６（１）：１７－２４、ＭｏｃｈｉｚｕｋｉＳ．ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＳｃｉ．２００７Ｍａｙ；９８（５）：６２１－８．Ｅｐｕｂ２００７Ｍａｒ９、ＣｏｌｏｍｂｏＣ．ｅｔａｌ．，ＪＰａｔｈｏｌ．２０１１Ｄｅｃ；２２５（４）：５７４－８２．ｄｏｉ：１０．１００２／ｐａｔｈ．２９５１．Ｅｐｕｂ２０１１Ａｕｇ８、ＳｏｏｋｐｒａｓｅｒｔＡ．ｅｔａｌ．，ＡｓｉａｎＰａｃＪＣａｎｃｅｒＰｒｅｖ．２０１２；１３Ｓｕｐｐｌ：３－６、ＵｅｈａｒａＥ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＯｎｃｏｌ．２０１２Ｍａｙ；４０（５）：１４１４－２２．ｄｏｉ：１０．３８９２／ｉｊｏ．２０１２．１３３９．Ｅｐｕｂ２０１２Ｊａｎ２０、ＢａｒｅｎＪ．Ｐ．ｅｔａｌ．，ＢｒＪＣａｎｃｅｒ．２０１２Ｊｕｎ２６；１０７（１）：１４３－９．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｂｊｃ．２０１２．２３９．Ｅｐｕｂ２０１２Ｊｕｎ７、ＲａｏＶ．Ｈ．ｅｔａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２０１２Ｊｕｎ７；３１（２３）：２８８８－９８．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｏｎｃ．２０１１．４６０．Ｅｐｕｂ２０１１Ｏｃｔ１０、ＫａｎａｋｉｓＤ．ｅｔａｌ．，ＤｉｓＭａｒｋｅｒｓ．２０１３；３４（２）：８１－９１．ｄｏｉ：１０．３２３３／ＤＭＡ－１２０９５３、ＧｅｏｒｇｅｓＳ．ｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ．２０１３Ｊｕｎ；４９（９）：２２５３－６３．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｊｃａ．２０１３．０２．０２０．Ｅｐｕｂ２０１３Ｍａｒ１３、ＣｉｒｅａｐＮ．ｅｔａｌ．，ＰａｔｈｏｌＯｎｃｏｌＲｅｓ．２０１３Ｏｃｔ；１９（４）：７５５－６２．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１２２５３－０１３－９６３９－８．Ｅｐｕｂ２０１３Ｍａｙ６、ＢｉｌｇｉｎＤｏｇｒｕＥ．ｅｔａｌ．，ＴｕｍｏｕｒＢｉｏｌ．２０１４Ｎｏｖ；３５（１１）：１１６４７－５３．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１３２７７－０１４－２５１４－８．Ｅｐｕｂ２０１４Ａｕｇ２０、ＣｈｅｏｎＤ．Ｊ．Ｅｔａｌ．，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１５Ｊｕｌ；３６（７）：７３９－４７．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｃａｒｃｉｎ／ｂｇｖ０５９．Ｅｐｕｂ２０１５Ａｐｒ２９、ＲａｏＶ．Ｈ．ｅｔａｌ．，ＭｏｌＣａｒｃｉｎｏｇ．２０１５Ｏｃｔ；５４（１０）：１０２６－３６．ｄｏｉ：１０．１００２／ｍｃ．２２１７１．Ｅｐｕｂ２０１４Ｍａｙ５、ＬｉＺ．ｅｔａｌ．，ＯｎｃｏｌＲｅｐ．２０１５Ｄｅｃ；３４（６）：３２３１－７、ＬｉｕＧ．ｅｔａｌ．，ＯｎｃｏｌＲｅｐ．２０１６Ｎｏｖ；３６（５）：３００５－３０１３．ｄｏｉ：１０．３８９２／ｏｒ．２０１６．５０６４．Ｅｐｕｂ２０１６Ｓｅｐ５、ＦｒｏｈｌｉｃｈＣ．ｅｔａｌ．，ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００６Ｄｅｃ１５；１２（２４）：７３５９－６８、ＲｏｙＲ．ｅｔａｌ．，ＭｏｌＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２０１７Ｎｏｖ；１５（１１）：１６０８－１６２２．ｄｏｉ：１０．１１５８／１５４１－７７８６．ＭＣＲ－１７－０１８８．Ｅｐｕｂ２０１７Ａｕｇ１、ＸｉｏｎｇＬ．ｅｔａｌ．，ＪＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．２０１８Ｊｕｎ３０；１８２：３４－４４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｐｒｏｔ．２０１８．０４．０３３．Ｅｐｕｂ２０１８Ｍａｙ２、ＶｅｅｎｓｔｒａＶ．Ｌ．ｅｔａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１８Ｎｏｖ１６；７（１１）：８７．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１３８９－０１８－００９６－９）。したがって、いくつかの態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、上述のがん種のがん細胞上のＡＤＡＭ１２に結合し得るか、またはＡＤＡＭ１２を標的化し得る。

いくつかの実施形態では、本開示の抗ＡＤＡＭ１２剤は、膀胱がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、骨がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、脳がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、乳がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、結腸がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、結腸直腸がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、デスモイド腫瘍細胞に結合し得る。

いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、食道がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、線維腫症細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、膠芽腫細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、頭頸部がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、肝臓がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、肺がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、黒色腫細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、食道胃腺がん細胞に結合し得る。

いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、乏突起膠腫細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、口腔がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、口腔扁平上皮がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、骨肉腫細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、卵巣がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、膵臓がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、前立腺がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、皮膚がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、小細胞肺がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、胃がん細胞に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤は、甲状腺がん細胞に結合し得る。

注目すべきことに、様々な疾患におけるＡＤＡＭ１２の過剰発現は、極めて低く、かつ乳房および卵巣組織に限定される正常な組織上でのその発現とは顕著に対照的である。加えて、ＡＤＡＭ１２発現は、腫瘍成長の加速、腫瘍血管新生の促進、および予後不良に関与している（ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００５Ｊｕｎ１；６５（１１）：４７５４－６１、ＲｏｙＲ．ｅｔａｌ．，ＭｏｌＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２０１７Ｎｏｖ；１５（１１）：１６０８－１６２２．ｄｏｉ：１０．１１５８／１５４１－７７８６．ＭＣＲ－１７－０１８８．Ｅｐｕｂ２０１７Ａｕｇ１）。これらの観察は、本方法による治療標的としてのＡＤＡＭ１２の価値を特に強調する。

ＡＤＡＭ１２はまた、多くの他の疾患および状態、例えば、限定されないが、アルツハイマー病、変形性関節症、筋ジストロフィー、多発性硬化症、線維症、心臓肥大症、全身性硬化症における皮膚線維症および間質性肺疾患、腎線維症、末梢動脈疾患、子宮内膜症、ならびにデュピュイトラン病において、上方制御され、および／または病理学的役割を果たす（ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００８；４０（９）：１６８５－７０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｅｌ．２００８．０１．０２５．Ｅｐｕｂ２００８Ｆｅｂ１、ＨａｒｏｌｄＤ．ｅｔａｌ．，ＡｍＪＭｅｄＧｅｎｅｔＢＮｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒＧｅｎｅｔ．２００７Ｊｕｎ５；１４４Ｂ（４）：４４８－５２、ＫｅｒｎａＩ．ｅｔａｌ．，ＲｈｅｕｍａｔｏｌＩｎｔ．２０１２Ｆｅｂ；３２（２）：５１９－２３．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２９６－０１０－１７１７－６．Ｅｐｕｂ２０１１Ｊａｎ２２、ＤｕｌａｕｒｏｙＳ．ｅｔａｌ．，ＮａｔＭｅｄ．２０１２Ａｕｇ；１８（８）：１２６２－７０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．２８４８．Ｅｐｕｂ２０１２Ｊｕｌ２９、ＢｅｒｒｙＥ．ｅｔａｌ．，ＪＶａｓｃＲｅｓ．２０１３；５０（１）：５２－６８．ｄｏｉ：１０．１１５９／０００３４５２４０．Ｅｐｕｂ２０１２Ｎｏｖ１７、ＴａｎｉｇｕｃｈｉＴ．ｅｔａｌ．，ＪＥｕｒＡｃａｄＤｅｒｍａｔｏｌＶｅｎｅｒｅｏｌ．２０１３Ｊｕｎ；２７（６）：７４７－５３．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１４６８－３０８３．２０１２．０４５５８．ｘ．Ｅｐｕｂ２０１２Ａｐｒ２８、ＲａｍｄａｓＶ．ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ．２０１３Ｄｅｃ；１８３（６）：１８８５－１８９６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｊｐａｔｈ．２０１３．０８．０２７．Ｅｐｕｂ２０１３Ｏｃｔ６、ＤｏｋｕｎＡ．Ｏ．ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＨｅａｒｔＣｉｒｃＰｈｙｓｉｏｌ．２０１５Ｓｅｐ；３０９（５）：Ｈ７９０－８０３．ｄｏｉ：１０．１１５２／ａｊｐｈｅａｒｔ．００８０３．２０１４．Ｅｐｕｂ２０１５Ｊｕｌ１０、ＭｉｌｌｅｒＭ．Ａ．ｅｔａｌ．，ＳｃｉＲｅｐ．２０１５Ｏｃｔ１９；５：１５１５０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ１５１５０；ＳｅｄｉｃＭ．ｅｔａｌ．，（２０１２）ＵｓｉｎｇＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＧｅｎｏｍｉｃｓｔｏＩｄｅｎｔｉｆｙＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ：ＡＤｕｐｕｙｔｒｅｎ’ｓＤｉｓｅａｓｅＥｘａｍｐｌｅ．Ｉｎ：ＬａｒｓｏｎＲ．（編集）ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎｄＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ．ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＰｒｏｔｏｃｏｌｓ），ｖｏｌ９１０．ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）。したがって、いくつかの態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、上述の疾患または状態の細胞上のＡＤＡＭ１２に結合し得るか、またはＡＤＡＭ１２を標的化し得る。

いくつかの実施形態では、本開示の抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、アルツハイマー病を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、変形性関節症を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、筋ジストロフィーを治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、多発性硬化症を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、線維症を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、心臓肥大症を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、全身性硬化症における皮膚線維症および間質性肺疾患を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、腎線維症を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、末梢動脈疾患を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、子宮内膜症を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、デュピュイトラン病を治療するために使用され得る。

抗ＡＤＡＭ１２抗体、抗原結合断片、多重特異性抗体、多重特異性抗原結合断片、および抗体－薬物コンジュゲート
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２抗体（Ａｂ）、抗ＡＤＡＭ１２抗原結合（ＡＢ）断片、抗ＡＤＡＭ１２多重特異性Ａｂ、抗ＡＤＡＭ１２多重特異性抗原結合Ａｂ断片、および抗ＡＤＡＭ１２抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、個々に、ＡＤＡＭ１２に結合する少なくとも１つのＡＢドメインを含む。

ＡＤＡＭ１２結合ドメイン（すなわち、ＡＢドメイン）は、マウス抗ＡＤＡＭ１２モノクローナル抗体のヒト化態様のＡＢドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ＡＤＡＭ１２結合ドメイン（すなわち、ＡＢドメイン）は、マウス抗ＡＤＡＭ１２モノクローナル抗体クローン６Ｅ６および６Ｃ１０のヒト化態様またはそれらのバリアントのＡＢドメインを含み得る。

マウス抗ＡＤＡＭ１２モノクローナル抗体６Ｅ６は、（ａ）配列番号２１１によってコードされ得る、配列番号１１１に記載される重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（ＶＨ）配列と、（ｂ）配列番号２１５によってコードされ得る、配列番号１１５に記載される軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（ＶＬ）配列とを含む。ＶＨ（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）の相補性決定領域１、２、および３（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号２１２、２１３、および２１４によってコードされ得る、それぞれ配列番号１１２、１１３、および１１４のアミノ酸配列を含む。ＶＬ（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２１６、２１７、および２１８によってコードされ得る、それぞれ配列番号１１６、１１７、および１１８のアミノ酸配列を含む。

マウス抗ＡＤＡＭ１２モノクローナル抗体クローン６Ｃ１０は、（ａ）配列番号２２１によってコードされ得る、配列番号１２１に記載されるＶＨ配列と、（ｂ）配列番号２２５によってコードされ得る、配列番号１２５に記載されるＶＬ配列とを含む。ＶＨ（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２２２、２２３、および２２４によってコードされ得る、それぞれ配列番号１２２、１２３、および１２４のアミノ酸配列を含む。ＶＬ（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２２６、２２７、および２２８によってコードされ得る、それぞれ配列番号１２６、１２７、および１２８のアミノ酸配列を含む。

本願発明者は、本明細書の実施例１に記載されるように、６Ｅ６抗体のヒト化を実施した。６Ｅ６のヒト化態様（ｈ６Ｅ６と称され得る）は、（ａ）配列番号２３１によってコードされ得る、配列番号１３１に記載されるＶＨ配列と、（ｂ）配列番号２３５によってコードされ得る、配列番号１３５に記載されるＶＬ配列とを含む。ＶＨ（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２３２、２３３、および２３４によってコードされ得る、それぞれ配列番号１３２、１３３、および１３４のアミノ酸配列を含み得る。ＶＬ（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２３６、２３７、および２３８によってコードされ得る、それぞれ配列番号１３６、１３７、および１３８のアミノ酸配列を含み得る。

本願発明者は、本明細書の実施例１に記載されるように、６Ｃ１０抗体のヒト化を実施した。６Ｃ１０のヒト化態様（ｈ６Ｃ１０と称され得る）は、（ａ）配列番号２４１によってコードされ得る、配列番号１４１に記載されるＶＨ配列と、（ｂ）配列番号２４５によってコードされ得る、配列番号１４５に記載されるＶＬ配列とを含む。ＶＨ（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２４２、２４３、および２４４によってコードされ得る、それぞれ配列番号１４２、１４３、および１４４のアミノ酸配列を含み得る。ＶＬ（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２４６、２４７、および２４８によってコードされ得る、それぞれ配列番号１４６、１４７、および１４８のアミノ酸配列を含み得る。

したがって、いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤のＡＤＡＭ１２結合ドメイン（すなわち、ＡＢドメイン）は、（ａ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３と、（ｂ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３とを含み得る。

いくつかの態様では、ＡＤＡＭ１２結合ドメイン（すなわち、ＡＢドメイン）は、（ａ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３、およびヒト様ＨＣフレームワークを含む、ＶＨと、（ｂ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３、およびヒト様ＬＣフレームワークを含む、ＶＬとを含み得る。

いくつかの態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤のＡＢ結合ドメインにおいて、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、それぞれ配列番号１３２、１３３、および１３４に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、それぞれ配列番号１３６、１３７、および１３８に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、それぞれ配列番号２３２、２３３、および２３４によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、それぞれ配列番号２３６、２３７、および２３８によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよい。

いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、それぞれ配列番号１４２、１４３、および１４４に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、それぞれ配列番号１４６、１４７、および１４８に記載されるアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３は、それぞれ配列番号２４２、２４３、および２４４によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３は、それぞれ配列番号２４６、２４７、および２４８によってコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよい。

一般に、マウス抗体をヒト化するために、マウス抗体由来のＣＤＲをヒト抗体フレームワークに接合してもよい。したがって、ヒト様フレームワークは、ヒトフレームワークと１００％同一であってもよい。本願発明者は、ヒト化を実施するためにＴａｂｈｕプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｃｉｒｃｅ．ｍｅｄ．ｕｎｉｒｏｍａ１．ｉｔ／ｔａｂｈｕ／）を使用し、このプログラムは、以下の４つのステップを含む。（ｉ）ループ接合、（ｉｉ）天然抗体とヒト抗体との間の結合態様類似性の推定、（ｉｉｉ）復帰突然変異、および（ｉｖ）入力抗体とヒト化抗体との間の結合態様類似性の再評価（ＯｌｉｍｐｉｅｒｉＰ．Ｐ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１５Ｆｅｂ１；３１（３）：４３４－５．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｕ６６７．Ｅｐｕｂ２０１４Ｏｃｔ９）。したがって、いくつかの実施形態では、フレームワークは、ヒトフレームワークと１００％同一ではなくてもよいが、依然としてヒトフレームワークに対して顕著な配列同一性を含んでいてもよい。

いくつかの態様では、（ａ）ヒト様ＨＣフレームワークは、ヒトＨＣフレームワークと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であってもよく、（ｂ）ヒト様ＬＣフレームワークは、ヒトＬＣフレームワークと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であってもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＡＤＡＭ１２剤の可変ドメインを、ＡＤＡＭ１２結合を阻害することなく変化させ得る。ＡＢドメインがＡＤＡＭ１２に十分に結合する限り、可変ドメインの配列を変化させ得る。抗原－Ａｂ相互作用は、主に６つのＣＤＲによって決定されるが、当業者であれば、正確なＣＤＲ配列からのいくらかの逸脱が可能であり得ることを理解するであろう。親和性成熟などの任意の好適な技術を使用して、ＣＤＲ配列を変化させることができる。６つのＣＤＲのうち、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬＣＤＲ３は、抗原認識における特異性の主要な決定因子であると一般的に考えられている。特に、ＶＨのＣＤＲ３（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ３）における多様性は、ほとんどの抗体特異性を提供するために特に重要であり得る（ＸｕＪ．Ｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０００Ｊｕｌ；１３（１）：３７－４５）。したがって、１つ以上の変異は、Ａｂのより所望の特性を達成しつつ結合親和性を大幅に低下させることなく、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２に組み込まれ得る。本明細書に開示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、および／またはＣＤＲ－Ｌ３とそれぞれ少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、および／またはＣＤＲ－Ｌ３を含むＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片もまた、本発明の範囲内である。さらに、ＣＤＲ－Ｈ３における１つ以上の変異は、ＡＢドメインの結合または任意の他の特性を改変し、増加させ、または微調整するために組み込まれ得る。あるいは、任意の１つの変異は、親和性に加えて、熱力学的安定性または免疫原性などの生化学的特性を変化させ得るので、６つのＣＤＲのいずれか、および／またはそれらの任意の組み合わせ、および／またはフレームワーク配列においてさえも、すべての可能な変異を試験して、配列改変が改善された全体的特性を提供するか、またはより所望の全体的特性を提供するかを確認してもよい（ＲａｊｐａｌＡ．ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．２００５Ｊｕｎ１４；１０２（２４）：８４６６－８４７１．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．０５０３５４３１０２、ＪｕｌｉａｎＭ．Ｃ．ｅｔａｌ．，ＳｃｉＲｅｐ．２０１７；７：４５２５９．２０１７年３月２８日にオンラインで前公開、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ４５２５９）。改変されたＡｂの標的への結合を試験するために、限定されないが、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＦＡＣＳ、バイオアッセイ、またはウエスタンブロットアッセイなどの任意の適切な技術を使用してもよい。

いくつかの態様では、ＨＣ可変ドメイン（すなわち、ＶＨ）は、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣ可変ドメインは、配列番号１３５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。ＨＣ可変ドメインは、配列番号２３１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣ可変ドメイン（すなわち、ＶＬ）は、配列番号２３５によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。

いくつかの態様では、ＶＨは、配列番号１４１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＶＬは、配列番号１４５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号２４１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＶＬは、配列番号２４５によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含んでいてもよい。

いくつかの態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、例えば、限定されないが、モノクローナルＡｂ、単一特異性Ａｂ、二重特異性Ａｂ、多重特異性Ａｂ、ヒト化Ａｂ、四量体Ａｂ、四価Ａｂ、単鎖Ａｂ、ドメイン特異性Ａｂ、ドメイン欠失Ａｂ、ｓｃＦｃ融合タンパク質、キメラＡｂ、合成Ａｂ、組換えＡｂ、ハイブリッドＡｂ、変異Ａｂ、ＣＤＲ接合されたＡｂ、断片抗原結合（Ｆａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’断片、可変断片（Ｆｖ）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆｄ断片、ダイアボディ、およびミニボディであり得る。

特定の態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤のＡＢドメインは、（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、２つ以上の結合特異性（すなわち、二重特異性、三重特異性、または一般的に多重特異性）を含み得る。第１の特異性は、ＡＤＡＭ１２のエピトープ（第１のＡＤＡＭ１２エピトープ）に対する特異性である。

一態様では、本開示の抗ＡＤＡＭ１２剤は、ＡＤＡＭ１２の別のエピトープ（すなわち、第２のＡＤＡＭ１２エピトープ）に対する第２の結合特異性を有し得る。第２のＡＤＡＭ１２エピトープは、第１のＡＤＡＭ１２エピトープと重複していてもよく、または重複していなくてもよい。

別の態様では、第２の特異性は、ＡＤＡＭ１２以外の第２の抗原のエピトープに対する特異性であり得る。本開示の多重特異性ＡＤＡＭ１２結合剤は、ＡＤＡＭ１２および１つ以上の他の標的に結合し得る。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＡＤＡＭ１２剤は、エフェクター細胞上のＡＤＡＭ１２およびタンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＡＤＡＭ１２剤は、標的（例えば、がん）細胞上のＡＤＡＭ１２およびタンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原への結合は、抗ＡＤＡＭ１２剤の機能的特徴、例えば、動員、エフェクター機能、標的細胞の溶解を改善し得る。

特定の態様では、第２の抗原は、例えば、限定されないが、ＣＤ３、ＮＫＧ２Ｄ、４－１ＢＢ、またはＦｃ受容体（ＦｃＲ）、例えば、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃｇＲ）、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＢ１、ＦｃｇＲＩＩＢ２、ＦｃｇＲＩＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＩＢ、Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃｅＲ）、ＦｃｅＲＩ、ＦｃｅＲＩＩ、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃａＲ）、ＦｃａＲＩ、Ｆｃアルファ／ミュー受容体（Ｆｃａ／ｍＲ）、または新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）であり得る。抗ＡＤＡＭ１２Ａｂおよび抗原結合Ａｂ断片については、ＦｃＲに対する特異性を有することで、ＡＤＡＭ１２発現細胞の抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、またはＦｃ発現細胞による細胞傷害性メディエーター放出などのＦｃＲ媒介作用を可能にする。

第２のエピトープがＦｃＲ内にある場合、ＦｃＲは、限定されないが、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃｇＲ）、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＢ１、ＦｃｇＲＩＩＢ２、ＦｃｇＲＩＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＩＢ、Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃｅＲ）、ＦｃｅＲＩ、ＦｃｅＲＩＩ、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃａＲ）、ＦｃａＲＩ、Ｆｃアルファ／ミュー受容体（Ｆｃａ／ｍＲ）、または新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）であり得る。

抗ＡＤＡＭ１２剤が２つの特異性を有する場合、この薬剤は、二重特異性と呼ばれ得る。二重特異性抗ＡＤＡＭ１２剤には、二重特異性抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片が含まれる。抗ＡＤＡＭ剤が２つ以上の特異性を有する場合、この薬剤は、多重特異性と呼ばれ得る。多重特異性抗ＡＤＡＭ１２剤には、多重特異性抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片が含まれる。

本発明は、ＢｒｉｎｋｍａｎｎＵ．ｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ．２０１７Ｆｅｂ－Ｍａｒ；９（２）：１８２－２１２．２０１７年１月１０日にオンラインで前公開、ｄｏｉ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１６．１２６８３０７、ＫｌｅｉｎＣ．ｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ．２０１６Ａｕｇ－Ｓｅｐ；８（６）：１０１０－２０．ｄｏｉ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１６．１１９７４５７に概説されるような任意の種類の二重特異性Ａｂ様分子（Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片）を包含する。本開示の二重特異性の実施形態では、ＡＢドメインのうちの１つは、抗ＡＤＡＭ１２結合ドメインである。二重特異性または多重特異性Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を設計および構築するための一般的な方法は、当該技術分野で既知である（ＢｒｉｎｋｍａｎｎＵ．ｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ．２０１７Ｆｅｂ－Ｍａｒ；９（２）：１８２－２１２．２０１７年１月１０日にオンラインで前公開、ｄｏｉ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１６．１２６８３０７、ＤｉｍａｓｉＮ．ｅｔａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１８Ａｕｇ１１．ｐｉｉ：Ｓ１０４６－２０２３（１８）３０１４９－Ｘ．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｙｍｅｔｈ．２０１８．０８．００４、ＳｅｄｙｋｈＳ．Ｅ．ｅｔａｌ．，ＤｒｕｇＤｅｓＤｅｖｅｌＴｈｅｒ．２０１８；１２：１９５－２０８）。そのような方法には、化学的コンジュゲーション、断片の共有結合、および遺伝子工学が含まれる。例えば、完全長二重特異性Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、それぞれが異なる特異性を有する重鎖および軽鎖の２つの対を共発現することによって生成され得る。この２つの対は、１つのベクターにおいてコードされてもよく、または別個のベクターにおいてコードされてもよいが、同じ宿主細胞（ｈｓｏｔｃｅｌｌ）において発現されてもよい。あるいは、異なる特異性を有する抗原結合Ａｂ断片またはＡＢドメインは、例えば、スルフヒドリル結合（例えば、ＨＣのＣ末端ヒンジ領域の結合）および／または適切なカップリングもしくは架橋剤を使用して、別々に生成され、次いで互いにコンジュゲートされてもよい。二重特異性抗原結合Ａｂ断片はまた、例えば、ロイシンジッパーを使用することによって、またはｓｃＦｖ二量体を使用することによって生成されてもよい（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１９９２Ｍａｒ１；１４８（５）：１５４７－５３を参照されたい）。本発明の二重特異性薬剤の結合は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、フローサイトメトリー、バイオアッセイ、またはウェスタンブロットなどに限定されないが、任意の適切な方法を使用して確認してもよい。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、ヒト様断片結晶化可能（Ｆｃ）領域を含み得る。

いくつかの態様では、ヒト様Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり得る。

特定の態様では、ヒト様Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合し得る。ＦｃＲは、例えば、限定されないが、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃｇＲ）、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＢ１、ＦｃｇＲＩＩＢ２、ＦｃｇＲＩＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＩＢ、Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃｅＲ）、ＦｃｅＲＩ、ＦｃｅＲＩＩ、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃａＲ）、ＦｃａＲＩ、Ｆｃアルファ／ミュー受容体（Ｆｃａ／ｍＲ）、または新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）であり得る。

いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤がＡｂである場合、Ａｂは、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＡアイソタイプであり得る。

いくつかの態様では、ＡｂがＩｇＧである場合、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であり得る。

Ｆｃ領域における特定のアミノ酸改変は、限定されないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、および半減期などのＡｂエフェクター機能および特性を調節することが知られている（ＷａｎｇＸ．ｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＣｅｌｌ．２０１８Ｊａｎ；９（１）：６３－７３、Ｄａｌｌ’ＡｃｑｕａＷ．Ｆ．ｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００６Ａｕｇ１８；２８１（３３）：２３５１４－２４．Ｅｐｕｂ２００６Ｊｕｎ２１、ＭｏｎｎｅｔＣ．ｅｔａｌ，ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ．２０１５Ｆｅｂ４；６：３９．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１５．０００３９．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ２０１５）。変異は、対称または非対称であり得る。特定の場合には、非対称突然変異を有するＦｃ領域（すなわち、２つのＦｃ領域は同一ではない）を有する抗体は、ＡＤＣＣなどのよりよい機能を与え得る（ＬｉｕＺ．ｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２０１４Ｆｅｂ７；２８９（６）：３５７１－３５９０）。

ＡｂがＩｇＧ１である場合、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。置換は、例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｇ２３６欠失、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｐ３９６Ｌ、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｑ、Ｇ２３６Ｗ、Ｓ２３９Ｍ、Ｈ２６８Ｄ、Ｄ２７０Ｅ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０Ｍ、Ｋ３３４Ｅ、Ｇ２３６Ａ、Ｋ３２６Ｗ、Ｓ２３９Ｄ、Ｅ３３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０ＹＭ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、および／またはそれらの任意の組み合わせであり得る（残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けに従う）（Ｄａｌｌ’ＡｃｑｕａＷ．Ｆ．ｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００６Ａｕｇ１８；２８１（３３）：２３５１４－２４．Ｅｐｕｂ２００６Ｊｕｎ２１、ＷａｎｇＸ．ｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＣｅｌｌ．２０１８Ｊａｎ；９（１）：６３－７３）。Ｆｃ領域は、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み得る。置換は、例えば、限定されないが、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１８、および／またはそれらの任意の組み合わせであり得る（残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けに従う）。

ＡｂがＩｇＧ２である場合、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。置換は、例えば、限定されないが、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、および／またはそれらの任意の組み合わせであり得る（残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けに従う）。Ｆｃ領域は、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み得る。置換は、例えば、限定されないが、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、および／またはそれらの任意の組み合わせであり得る（残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けに従う）。

ＡｂがＩｇＧ３である場合、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。置換は、例えば、限定されないが、Ｅ２３５Ｙであり得る（残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けに従う）。

ＡｂがＩｇＧ４である場合、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。置換は、例えば、限定されないが、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、および／またはそれらの任意の組み合わせであり得る（残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けに従う）。置換は、例えば、Ｓ２２８Ｐであり得る（残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けに従う）。

いくつかの態様では、ヒト様Ｆｃ領域のグリカンは、エフェクター機能を改変するように操作され得る（例えば、ＬｉＴ．ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．２０１７Ｍａｒ２８；１１４（１３）：３４８５－３４９０．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１７０２１７３１１４．Ｅｐｕｂ２０１７Ｍａｒ１３を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり得る。ＡＤＣは、（ａ）本明細書に記載の任意のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片と、（ｂ）Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片にコンジュゲートされる薬物とを含み得る。

いくつかの態様では、薬物は、限定されないが、抗がん性薬物、抗増殖性薬物、細胞傷害性薬物、抗血管新生薬物、アポトーシス薬物、免疫刺激薬物、抗菌薬物、抗生物質薬物、抗ウイルス薬物、抗炎症性薬物、抗線維化薬物、免疫抑制薬物、ステロイド、気管支拡張剤、β遮断薬、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、ＡＤＡＭ１２阻害剤、ＡＤＡＭ１２シグナル伝達阻害剤、酵素、ホルモン、神経伝達物質、毒素、放射性同位体、化合物、小分子、小分子阻害剤、タンパク質、ペプチド、ベクター、プラスミド、ウイルス粒子、ナノ粒子、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、およびイメージング薬物であり得る。

毒素は、細菌、真菌、植物もしくは動物の毒素、またはその断片であり得る。例としては、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素、エキソトキシンＡ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファサルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、またはＰｈｙｔｏｌａｃｃａＡｍｅｒｉｃａｎａタンパク質が挙げられる。

抗がん性薬物または抗増殖性薬物は、例えば、限定されないが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ククルビタシン、カエトシン、ケトグロボシン、クラミドシン、カリケアミシン、ネモルビシン、クリプトフィシン、メンサカルシン、アンサマイトシン、マイトマイシンＣ、ゲルダナマイシン、メケルカルマイシン、レベッカマイシン、サフラシン、オキラクトマイシン、オリゴマイシン、アクチノマイシン、サンドラマイシン、ヒポテマイシン、ポリケトマイシン、ヒドロキシエリプチシン、チオコルヒチン、メトトレキサート、トリプトリド、タルトブリン、ラクタシスチン、ドラスタチン、アウリスタチン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、テロメスタチン、ツバスタチンＡ、コンブレタスタチン、マイタンシノイド、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＦ、ＤＭ１、ＤＭ４、ＤＴＴ、１６－ＧＭＢ－ＡＰＡ－ＧＡ、１７－ＤＭＡＰ－ＧＡ、ＪＷ５５、ピロロベンゾジアゼピン、ＳＮ－３８、Ｒｏ５－３３３５、プワイナフィシン、デュオカルマイシン、バフィロマイシン、タキソイド、ツブリシン、フェルレノール、ルシオールＡ、フマギリン、ハイグロリジン、グルコピエリシジン、アマニチン、アンサトリエニン、シネルビン、ファラシジン、ファロイジン、フィトスフォンゴシン（ｐｈｙｔｏｓｐｈｏｎｇｏｓｉｎｅ）、ピエリシジン、ポロネチン（ｐｏｒｏｎｅｔｉｎ）、フォドフィロトキシン（ｐｈｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）、グラミシジンＡ、サンギナリン、シネフンギン、ヘルボキシジエン、マイクロコリンＢ、ミクロシスチン、ムスコトキシン（ｍｕｓｃｏｔｏｘｉｎ）Ａ、トリトキシン、トリポリンＡ、ミオセベリン、ミトキシンＢ、ノクオリン（ｎｏｃｕｏｌｉｎ）Ａ、プソイドラリン酸Ｂ、プソイロチンＡ、シクロパミン、クルブリン、コルヒチン、アフィジコリン、エングレリン、コルジセピン、アポプトリジン、エポチロンＡ、リマキノン（ｌｉｍａｑｕｉｎｏｎｅ）、イサトロポロン（ｉｓａｔｒｏｐｏｌｏｎｅ）、イソフィスツラリン（ｉｓｏｆｉｓｔｕｌａｒｉｎ）、キナルドペプチン、イキサベピロン、アエロプリシニン、アルギノシン（ａｒｒｕｇｉｎｏｓｉｎ）、アグロケリン、エポチロン、およびそれらの誘導体であり得る（例えば、ＰｏｌａｋｉｓＰ．ｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｖ．２０１６Ｊａｎ；６８（１）：３－１９．ｄｏｉ：１０．１１２４／ｐｒ．１１４．００９３７３を参照されたい）（薬物は、ＣｒｅａｔｉｖｅＢｉｏｌａｂｓ（登録商標）を含め、多くのベンダーから得られてもよい）。

放射性同位体は、例えば、限定されないが、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉｎ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体であり得る。

特定の態様では、薬物は、限定されないが、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦであり得る。

いくつかの態様では、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、薬物に直接的にコンジュゲートされてＡＤＣを形成する。

いくつかの態様では、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、薬物に間接的にコンジュゲートされてＡＤＣを形成する。

任意の適切なコンジュゲーション方法を使用して、ＡＤＣを生成してもよい（例えば、ＮｏｌｔｉｎｇＢ．ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ．２０１３；１０４５：７１－１００．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８－１－６２７０３－５４１－５＿５、ＪａｉｎＮ．ｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍＲｅｓ．２０１５Ｎｏｖ；３２（１１）：３５２６－４０．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１１０９５－０１５－１６５７－７．Ｅｐｕｂ２０１５Ｍａｒ１１、ＴｓｕｃｈｉｋａｍａＫ．ｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＣｅｌｌ．２０１８Ｊａｎ；９（１）：３３－４６．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１３２３８－０１６－０３２３－０．Ｅｐｕｂ２０１６Ｏｃｔ１４、ＰｏｌａｋｉｓＰ．ｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｖ．２０１６Ｊａｎ；６８（１）：３－１９．ｄｏｉ：１０．１１２４／ｐｒ．１１４．００９３７３）。コンジュゲーションを実行するために使用され得る方法の例としては、限定されないが、化学的コンジュゲーションおよび酵素的コンジュゲーションが挙げられる。

化学的コンジュゲーションは、例えば、これらに限定されないが、リジンアミドカップリング、システインカップリング、および／または遺伝子工学による非天然アミノ酸組み込みを利用し得る。酵素的コンジュゲーションは、例えば、これらに限定されないが、ソルターゼを使用するトランスペプチド化、微生物トランスグルタミナーゼを使用するトランスペプチド化、および／またはＮ－グリカン操作を利用し得る。

特定の態様では、切断可能なリンカーのうちの１つ以上が、コンジュゲーションのために使用され得る。切断可能なリンカーは、例えば、これらに限定されないが、細胞外および細胞内環境（ｐＨ、酸化還元電位など）間の環境差に応答するか、または特定のリソソーム酵素による薬物の切断を可能にし得る。

切断可能なリンカーの例としては、限定されないが、ヒドラゾンリンカー、カテプシンＢ応答性リンカーを含むペプチドリンカー、例えば、バリン－シトルリン（ｖｃ）リンカー、ジスルフィドリンカー、例えば、
Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）（ＳＰＰ）リンカー、またはＮ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）リンカー、およびピロリン酸ジエステルリンカーが挙げられる。

あるいは、または同時に、切断不可能なリンカーのうちの１つ以上が使用され得る。切断不可能なリンカーの例としては、Ｎ－スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）などのチオエーテルリンカー、およびマレイミドカプロイル（ｍｃ）リンカーが挙げられる。一般に、切断不可能なリンカーは、切断可能なリンカーと比較して、タンパク質分解に対してより耐性を有し、より安定である。

抗ＡＤＡＭ１２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＡＤＡＭ１２剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり得る。特に、本発明のＣＡＲは、ＡＤＡＭ１２に結合する抗原結合（ＡＢ）ドメインと、膜貫通（ＴＭ）ドメインと、細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインとを含む。

本発明の一般的なＣＡＲ構築物を示す概略図を図１Ａに示す。

ＣＡＲは、任意選択で、ＡＢドメインおよび上述のＴＭドメインを連結するヒンジを含み得る。

ＣＡＲは、任意選択で、１つ以上の共刺激（ＣＳ）ドメインを含み得る。

本発明の２つ以上の一般的なＣＡＲ構築物を示す概略図を、図１Ｂおよび図１Ｃに示す。

ＡＢドメイン
本発明のＣＡＲは、ＡＤＡＭ１２に結合する抗原結合（ＡＢ）ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＢドメインは、本明細書に開示される抗ＡＤＡＭ１２剤のうちのいずれかを含み得る。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＢドメインは、本明細書に開示される抗ＡＤＡＭ１２剤のいずれかのＡＢドメインのいずれかを含み得る。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＢドメインは、本明細書に開示される抗ＡＤＡＭ１２Ａｂ、抗ＡＤＡＭ１２抗原結合Ａｂ断片、抗ＡＤＡＭ１２多重特異性Ａｂ、抗ＡＤＡＭ１２多重特異性抗原結合Ａｂ断片、および抗ＡＤＡＭ１２ＡＤＣ、またはそのＡＢドメインのうちのいずれかを含み得る。

いくつかの態様では、ＣＡＲのＡＢドメインは、抗ＡＤＡＭ１２ｓｃＦｖを含み得る。

いくつかの態様では、ＡＢドメインは、（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの態様では、ＡＢドメインは、（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９、もしくは１５０、または（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖと、ＡＤＡＭ１２への結合を競合し得る。

あるいは、または同時に、ＡＢドメインは、ＡＤＡＭ１２に結合する分子のＡＤＡＭ１２結合部分を含み得る。

生理学的ＡＤＡＭ１２基質の例としては、限定されないが、アルファアクチニン２（ＡＣＴＮ２）、インスリン様成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）、ＩＧＦＢＰ－５、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ制御サブユニットアルファ（ＰＩＫ３Ｒ１）、ヘパリン結合上皮成長因子（ＨＢ－ＥＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ベータセルリン、デルタ様１、および胎盤ロイシンアミノペプチダーゼ（Ｐ－ＬＡＰ）、ならびにマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ－１４）が挙げられる（ＧａｌｌｉａｎｏＭ．Ｆ．ｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２０００Ｍａｙ５；２７５（１８）：１３９３３－９、ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００８；４０（９）：１６８５－７０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｅｌ．２００８．０１．０２５．Ｅｐｕｂ２００８Ｆｅｂ１、ＫａｎｇＱ．ｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００１Ｊｕｌ６；２７６（２７）：２４４６６－７２．Ｅｐｕｂ２００１Ａｐｒ１９、ＡｌｂｒｅｃｈｔｓｅｎＲ．ｅｔａｌ．，ＪＣｅｌｌＳｃｉ．２０１３Ｏｃｔ１５；１２６（Ｐｔ２０）：４７０７－２０．ｄｏｉ：１０．１２４２／ｊｃｓ．１２９５１０．Ｅｐｕｂ２０１３Ｓｅｐ４）。上述のＡＤＡＭ１２基質のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、および１５９に記載されている。

本発明のＣＡＲのＡＢドメイン、または任意の他の抗ＡＤＡＭ１２剤の例を図２に示す。

ヒンジ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＡＢドメインおよびＴＭドメインの間のヒンジ配列を含み得る。当業者は、ヒンジ配列が、柔軟性を促進するアミノ酸の短い配列であることを理解するであろう（例えば、ＷｏｏｆＪ．Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４（２）：８９－９９（２００４）を参照されたい）。ヒンジ配列は、任意の好適な分子に由来するか、または任意の好適な分子から得られる任意の好適な配列であり得る。

いくつかの実施形態では、ヒンジ配列の長さは、標的分子内のエピトープの位置に基づいてもよいＣＡＲの細胞外部分の所望の長さに基づいて最適化されてもよい。例えば、エピトープが標的分子内の膜近位領域にある場合、より長いヒンジが最適であり得る。

いくつかの実施形態では、ヒンジは、免疫グロブリンＦｃ領域、例えば、ＩｇＧ１Ｆｃ領域、ＩｇＧ２Ｆｃ領域、ＩｇＧ３Ｆｃ領域、ＩｇＧ４Ｆｃ領域、ＩｇＥＦｃ領域、ＩｇＭＦｃ領域、もしくはＩｇＡＦｃ領域の少なくとも一部に由来していてもよく、またはそれらを含んでもよい。ある特定の実施形態では、ヒンジは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはそのＣＨ２およびＣＨ３ドメイン内に入るＩｇＡ免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部分を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジはまた、対応する免疫グロブリンヒンジ領域の少なくとも一部を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒンジは、改変された免疫グロブリンＦｃ領域、例えば、改変されたＩｇＧ１Ｆｃ領域、改変されたＩｇＧ２Ｆｃ領域、改変されたＩｇＧ３Ｆｃ領域、改変されたＩｇＧ４Ｆｃ領域、改変されたＩｇＥＦｃ領域、改変されたＩｇＭＦｃ領域、または改変されたＩｇＡＦｃ領域の少なくとも一部に由来するか、またはそれらを含む。改変された免疫グロブリンＦｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）へのヒンジの結合の障害を引き起こす１つ以上のアミノ酸置換、改変、または欠失を引き起こす１つ以上の変異（例えば、点変異、挿入、欠失、重複）を有し得る。いくつかの態様では、改変された免疫グロブリンＦｃ領域は、限定されないが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ１、Ｆｃγ２Ｂ２、Ｆｃγ３Ａ、Ｆｃγ３Ｂ、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲ２、ＦｃαＲＩ、Ｆｃα／μＲ、またはＦｃＲｎを含む１つ以上のＦｃＲへのヒンジの結合の障害を引き起こす１つ以上のアミノ酸置換、改変、または欠失を引き起こす１つ以上の変異を伴って設計され得る。

いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域の一部は、ＡＢドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはナノボディ）およびＴＭドメインの間のヒンジとして機能する。ヒンジは、ヒンジが存在しない場合と比較して、抗原結合後のＣＡＲ発現細胞の応答性の増加をもたらす長さのものであり得る。いくつかの例では、ヒンジは、１２アミノ酸長または約１２アミノ酸長であるか、または１２アミノ酸長以下である。例示的なヒンジとしては、少なくとも約１０～２２９個のアミノ酸、約１０～２００個のアミノ酸、約１０～１７５個のアミノ酸、約１０～１５０個のアミノ酸、約１０～１２５個のアミノ酸、約１０～１００個のアミノ酸、約１０～７５個のアミノ酸、約１０～５０個のアミノ酸、約１０～４０個のアミノ酸、約１０～３０個のアミノ酸、約１０～２０個のアミノ酸、または約１０～１５個のアミノ酸を有するもの、および列挙される範囲のいずれかの端点間の任意の整数を含むものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ヒンジは、約１２個以下のアミノ酸、約１１９個以下のアミノ酸、または約２２９個以下のアミノ酸を有する。例示的なヒンジとしては、ＣＤ２８ヒンジ、ＩｇＧ４ヒンジ単独、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに結合したＩｇＧ４ヒンジ、またはＣＨ３ドメインに結合したＩｇＧ４ヒンジが挙げられる。例示的なヒンジとしては、限定されないが、ＨｕｄｅｃｅｋＭ．ｅｔａｌ．（２０１３）Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，１９：３１５３、国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／０３１６８７号、米国特許第８，８２２，６４７号、または公開された出願第ＵＳ２０１４／０２７１６３５号に記載されるものが挙げられる。

いくつかの実施形態では、ヒンジ配列は、ＣＤ８α分子またはＣＤ２８分子に由来する。好ましい実施形態では、ヒンジ配列は、ＣＤ２８に由来する。一実施形態では、ヒンジは、ヒトＣＤ２８ヒンジのアミノ酸配列（配列番号１６３）または配列番号２６３によってコードされる配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジは、配列番号１６３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を有する。

膜貫通（ＴＭ）ドメイン
ＴＭドメインに関して、ＣＡＲは、ＣＡＲのＡＢドメインと融合されるＴＭドメインを含むように設計することができる。ヒンジ配列は、ＡＢドメインとＴＭドメインとの間に挿入され得る。一実施形態では、ＣＡＲ内のドメインのうちの１つと自然に会合したＴＭドメインが使用される。場合によっては、ＴＭドメインはアミノ酸置換によって選択または改変され、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインとのそのようなドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にすることができる。

ＴＭドメインは、天然供給源または合成供給源のいずれかに由来し得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来し得る。典型的には、ＴＭドメインは、一体型タンパク質としても知られる膜貫通タンパク質の単一の膜貫通αヘリックスを示す。本発明における特定の使用のＴＭドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３ ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＴＣＲ α、ＴＣＲ β、またはＣＤ３ゼータおよび／またはこれらの機能的バリアントを含むＴＭドメイン、例えば、これらの構造的（例えば、膜貫通）特性のかなりの部分を保持するものに由来し得る（すなわち、これらの膜貫通領域を含み得る）。

あるいは、ＴＭドメインは合成的であってよく、その場合、ＴＭドメインは、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含むことになる。好ましくは、フェニルアラニン、トリプトファン、およびバリンのトリプレットは、合成ＴＭドメインの各末端に見出される。本発明のＴＭドメインは、膜中で熱力学的に安定である。単一のαヘリックス、膜貫通βバレル、グラミシジンＡのβヘリックス、または任意の他の構造であり得る。膜貫通ヘリックスは、通常、約２０アミノ酸長である。

好ましくは、本発明のＣＡＲにおけるＴＭドメインは、ＣＤ２８のＴＭ領域に由来する。一実施形態では、ＴＭドメインは、ヒトＣＤ２８ＴＭ（配列番号１６１）のアミノ酸配列、または配列番号２６１によってコードされる配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＭドメインは、配列番号１６１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。

任意選択で、好ましくは２～１０アミノ酸長の短いオリゴまたはポリペプチドスペーサーは、ＴＭドメインとＣＡＲのＩＣＳドメインとの間の連結部を形成してもよい。グリシン－セリンダブレットが好適なスペーサーを提供し得る。

細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインおよび共刺激（ＣＳ）ドメイン
本発明のＣＡＲのＩＣＳドメインまたはそれ以外の細胞質ドメインは、ＣＡＲが配置されている細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化の引き金となるか、または誘発する。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊な機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。したがって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」または「ＩＣＳドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に指示して特殊な機能を実施するタンパク質の部分を指す。通常は、ＩＣＳドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を使用する範囲内で、かかる切断部分がエフェクター機能シグナルを伝達する限り、それをインタクトな鎖の代わりに使用することができる。したがって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」または「ＩＣＳドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分である、ＩＣＳドメインの任意の切断された部分を含むことを意味する。

本発明のＣＡＲで使用するためのＩＣＳドメインの好ましい例には、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および抗原受容体関与後にシグナル伝達を開始するために協調して作用する補助受容体の細胞質配列、ならびにこれらの配列の任意の誘導体またはバリアントおよび同じ機能的能力を有する任意の合成配列が含まれる。

１つのＩＣＳドメインのみを介して生成されたシグナルは、細胞の完全な活性化に不十分な場合があり、二次または共刺激シグナルも必要とされる場合がある。そのような場合、共刺激ドメイン（ＣＳドメイン）は、ＣＡＲの細胞質部分に含まれ得る。ＣＳドメインは、そのような二次または共刺激シグナルを形質導入するドメインである。任意選択で、本発明のＣＡＲは、２つ以上のＣＳドメインを含み得る。ＣＳドメインは、ＩＣＳドメインの上流またはＩＣＳドメインの下流に配置され得る。少なくとも１つのＣＳドメインを含有する本発明のＣＡＲ構築物の２つの例示的な概略図を、図１Ｂおよび図１Ｃに示す。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列によって媒介されると言うことができる。すなわち、ＴＣＲ（一次細胞質シグナル伝達配列）を介して抗原依存性の一次活性化を開始するものと、抗原非依存的に作用して、二次または共刺激シグナル（二次細胞質シグナル伝達配列）を提供するものである。一次細胞質シグナル伝達配列は、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性に、または阻害性に調節する。刺激性に作用する一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシン依存性活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含み得る。かかる細胞質シグナル伝達配列は、本発明のＣＡＲのＩＣＳまたはＣＳドメインに含まれ得る。

本発明において特に有用なＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、リンパ球受容体鎖のＩＣＳドメイン、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体タンパク質、Ｆｃ受容体サブユニット、ＩＬ－２受容体サブユニット、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。

本発明のＣＡＲにおけるＩＣＳドメインは、ＣＤ３ゼータに由来する細胞質シグナル伝達配列を含むことが特に好ましい。一実施形態では、ＩＣＳドメインは、ヒトＣＤ３ζＩＣＳのアミノ酸配列（配列番号１６２）、または配列番号２６２によってコードされる配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＳドメインは、配列番号１６２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。

好ましい実施形態では、ＣＡＲの細胞質ドメインは、それ自体でＣＤ３ζＩＣＳドメインを含むように設計され得る。別の好ましい実施形態では、ＣＤ３ζＩＣＳドメインは、本発明のＣＡＲの文脈で有用な任意の他の所望の細胞質ドメインのうちの１つ以上と組み合わせられ得る。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ζＩＣＳドメインと、ＣＳドメインとを含むことができる。ＣＳ領域は、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部分を指す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要な抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。

様々なＣＳドメインは、異なる特性を付与することが報告されている。例えば、４－１ＢＢＣＳドメインは、インビボ異種移植モデルにおいて増強された持続性を示した（ＭｉｌｏｎｅＭ．Ｃ．ｅｔａｌ．ＭｏｌＴｈｅｒ２００９；１７：１４５３－１４６４、ＳｏｎｇＤ．Ｇ．ｅｔａｌ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１１；７１：４６１７－４６２７）。加えて、これらの異なるＣＳドメインは、異なるサイトカインプロファイルを生成し、次いで、標的細胞媒介性細胞傷害性および疾患微小環境への影響を生成し得る。実際、ＮＫ細胞におけるＤＡＰ１０シグナル伝達は、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＴｈ１の増加およびＴｈ２型サイトカイン産生の阻害と関連付けられている（ＢａｒｂｅｒＡ．ｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ２０１１；１１７：６５７１－６５８１）。

共刺激分子の例としては、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＴＬＡ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８ α、ＣＤ８ β、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＲＴＡＭ、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＤＳ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１０、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＬ２Ｒ β、ＩＬ２Ｒ γ、ＩＬ７Ｒ α、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ－１、ＰＳＧＬ１、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、ＶＬＡ－６、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。したがって、本発明は、主にＣＳドメインとしてＣＤ２８、ＤＡＰ１０、および／または４－１ＢＢの領域で例示されるが、他の共刺激要素は、本発明の範囲内である。

本発明のＣＡＲのＩＣＳドメインおよびＣＳドメインは、ランダムまたは指定された順序で互いに連結され得る。任意選択で、好ましくは２～１０アミノ酸長の短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、連結部を形成してもよい。グリシン－セリンダブレットは、特定の好適なリンカーを提供する。

一実施形態では、ＣＡＲは、ＩＣＳドメインとしてＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達配列を含み、ＣＳドメインとしてＣＤ２８の細胞質シグナル伝達配列を含むように設計される。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＩＣＳドメインとしてＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達配列を含み、ＣＳドメインとしてＤＡＰ１０の細胞質シグナル伝達配列を含むように設計される。さらに別の実施形態では、ＣＡＲは、ＩＣＳドメインとしてＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達配列を含み、ＣＳドメインとして４－１ＢＢの細胞質シグナル伝達配列を含むように設計される。ＣＤ３ζのかかる細胞質シグナル伝達配列は、ヒトＣＤ３ｚＩＣＳのアミノ酸配列（配列番号１６２）を含むＣＤ３ζＩＣＳドメインと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。ＣＤ３ゼータのかかる細胞質シグナル伝達配列は、配列番号２６２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされ得る。

ＣＤ２８のかかる細胞質シグナル伝達配列は、ヒトＣＤ２８ＣＳドメイン（配列番号１６４）の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。ＣＤ２８のかかる細胞質シグナル伝達配列は、配列番号２６４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされ得る。かかるＤＡＰ１０の細胞質シグナル伝達配列は、ヒト４－１ＢＢＣＳドメイン（配列番号１６５）の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。４－１ＢＢのかかる細胞質シグナル伝達配列は、配列番号２６５と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされ得る。かかるＤＡＰ１０の細胞質シグナル伝達配列は、ヒトＤＡＰ１０ＣＳドメイン（配列番号１６６）の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。ＤＡＰ１０のかかる細胞質シグナル伝達配列は、配列番号２６６と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の核酸配列によってコードされ得る。

あるいは、ＡＢドメインが、上述のＡＤＡＭ１２に結合する分子のＡＤＡＭ１２結合部分を含む場合、ＣＡＲのＴＭドメインは、分子の膜貫通部分に由来し得る。

例示的なＣＡＲ構築物
以下のＣＡＲの例では、ＣＡＲ構築物は、「ＡＢドメイン－ヒンジ－ＴＭドメイン－ＣＳドメイン－ＩＣＳドメイン」として記載されている。

本発明のＣＡＲは、以下の例示的な構築物のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７１に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７１に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７２に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７２に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７３に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７３に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７４に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７４に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７５に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７５に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７６に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７６に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７７に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７７に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７８に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７８に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１７９に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２７９に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１８０に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２８０に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１８１に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２８１に記載される配列を含み得る。

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳとして記載されてもよく、配列番号１８２に記載されるアミノ酸配列を含み得る。かかるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号２８２に記載される配列を含み得る。

いくつかの実施形態の特定のＣＡＲ構築物の例を示す概略図を図３Ａ～Ｃに示す。

いくつかの実施形態では、リーダー配列（ＬＳ）は、前述の例示的なＣＡＲをコードするポリヌクレオチド配列の上流に配置され得る。リーダー配列は、細胞表面上のＣＡＲの発現を促進する。かかるリード配列のポリヌクレオチド配列は、配列番号１６０に記載されるアミノ酸配列をコードする、配列番号２６０に記載される通りであってもよい。細胞表面上のＣＡＲの発現を促進する任意の他の配列を使用してもよい。

本発明のＬＳ含有ＣＡＲのための構築物の一般的な例示的な概略図を図１Ｄに示す。

いくつかの実施形態では、前述の例示的なＣＡＲを発現するためのポリヌクレオチド配列は、Ｔ２Ａリボソームスキップ配列（またはＴ２Ａとも称される）および／または切断ＣＤ１９（またはｔｒＣＤ１９とも称される）をコードする配列をさらに含む。Ｔ２Ａの核酸配列は、配列番号１６９によって提供されるアミノ酸配列をコードする、配列番号２６９によって提供される通りであり得る。ｔｒＣＤ１９は、例えば、配列番号２７０によってコードされ得る、配列番号１７０によって提供される配列を有し得る。

そのようなポリヌクレオチド構築物を示す概略図を図１Ｅに示す。

Ｔ２ＡおよびｔｒＣＤ１９配列がＣＡＲ配列の下流に配置されると、翻訳は、Ｔ２Ａ配列によって中断され、２つの別個の翻訳産物であるＣＡＲタンパク質およびｔｒＣＤ１９タンパク質が得られる。

本開示は、本明細書に開示されるＣＡＲのいずれかをコードする核酸配列を包含する。

さらなる改変
本発明のＣＡＲ、本発明のＣＡＲをコードするヌクレオチド配列、本発明のＣＡＲをコードするベクター、および前述のＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む細胞は、様々な特徴を提供または選択するためにさらに改変され、操作され、最適化され、または付加され得る。これらの特徴は、限定されないが、有効性、持続性、標的特異性、免疫原性の低下、多標的化、免疫応答の向上、拡張、成長、オフターゲット効果の低下、対象毒性の低下、標的細胞傷害性の向上、疾患を緩和する免疫細胞の誘引の向上、検出、選択、標的化などを含み得る。例えば、細胞は、別のＣＡＲを発現するように、または自殺機構を有するように操作されてもよく、ＴＣＲおよび／またはＭＨＣ分子などの内因性受容体または分子の発現を除去または改変するように改変され得る。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするベクターまたは核酸配列は、他の遺伝子をさらにコードする。ベクターまたは核酸配列は、２つ以上のプラスミドの同時トランスフェクション、複数または双方向プロモーターの使用、またはバイシストロニックまたはマルチシストロニックベクターの生成を含む多数の技術を使用して、複数の遺伝子の同時発現を可能にするように構築され得る。マルチシストロニックベクターの構築は、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２ＡなどのＩＲＥＳ要素または２Ａペプチドをコードすることを含み得る（例えば、Ｋｉｍ，Ｊ．Ｈ．，ｅｔａｌ．，“Ｈｉｇｈｃｌｅａｖａｇｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆａ２Ａｐｅｐｔｉｄｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｐｏｒｃｉｎｅｔｅｓｃｈｏｖｉｒｕｓ－１ｉｎｈｕｍａｎｃｅｌｌｌｉｎｅｓ，ｚｅｂｒａｆｉｓｈａｎｄｍｉｃｅ”，ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１１；６（４）を参照されたい）。特定の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸配列またはベクターは、Ｔ２Ａリボソームスキップ配列を使用してｔｒＣＤ１９をさらにコードする。

ＣＡＲ発現細胞は、１つ以上の内在性遺伝子に対する破壊をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、内因性遺伝子は、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ５２、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、デオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ）、または免疫チェックポイントタンパク質、例えば、プログラム死－１（ＰＤ－１）などをコードする。

有効性
本発明のＣＡＲおよびこれらのＣＡＲを発現する細胞は、標的分子を発現する細胞に対する有効性を改善するためにさらに改変され得る。細胞は、ＡＤＡＭ１２を発現する細胞であり得る。ＡＤＡＭ１２を発現する細胞は、がん細胞、血管細胞、または任意の他の標的疾患関連細胞であり得る。いくつかの実施形態では、改善された有効性は、標的分子を発現する細胞に対する細胞傷害性、例えば、がん細胞に対する細胞傷害性の増加によって測定され得る。いくつかの実施形態では、改善された有効性は、限定されないが、ＩＦＮγ、パーフォリン、およびグランザイムＢなどの細胞傷害性メディエーターの産生の増加によっても測定され得る。いくつかの実施形態では、改善された有効性は、疾患のシグネチャサイトカインの減少、またはＣＡＲ発現細胞が対象に投与されるときの疾患の症状の緩和によって示され得る。減少され得る他のサイトカインとしては、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－６、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、および／またはＩＬ－１３が挙げられる。改善された有効性は、Ｔ細胞細胞傷害性などのＡＤＡＭ１２特異的免疫細胞応答によって示され得る。がんの場合、改善された有効性は、より良い腫瘍細胞傷害性、腫瘍へのより良い浸潤、免疫抑制メディエーターの減少、体重減少の減少、腹水の減少、腫瘍負荷の減少、および／または寿命の延長によって示され得る。自己免疫疾患の場合、自己反応性細胞の応答性の低下、または自己反応性Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＡｂの減少は、改善された有効性を表し得る。いくつかの実施形態では、遺伝子発現プロファイルもまた、ＣＡＲの有効性を評価するために調査され得る。

一態様では、ＣＡＲ発現細胞は、限定されないが、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）およびアデノシンを含む、免疫抑制メディエーターの活性を回避または中和するようにさらに改変される。いくつかの実施形態では、この回避または中和は、直接的である。他の実施形態では、この回避または中和は、１つ以上の結合パートナー（例えば、エズリン）を用いたタンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）の阻害を介して媒介される。特定の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ペプチド「調節サブユニットＩアンカーディスラプター」（ＲＩＡＤ）をさらに発現する。ＲＩＡＤは、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）とエズリンとの会合を阻害すると考えられており、これによりＴＣＲ活性化のＰＫＡの阻害を防止する（ＮｅｗｉｃｋＫ．ｅｔａｌ．ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓ．２０１６Ｊｕｎ；４（６）：５４１－５１．ｄｏｉ：１０．１１５８／２３２６－６０６６．ＣＩＲ－１５－０２６３．Ｅｐｕｂ２０１６Ａｐｒ４）。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ発現細胞は、エピトープ拡散と一致する広範な免疫応答を誘導し得る。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ発現細胞は、ホーミング機構をさらに含む。例えば、細胞は、１つ以上の刺激性ケモカイン、またはそのサイトカインもしくは受容体を遺伝子導入的に発現し得る。特定の実施形態では、細胞は、１つ以上の刺激性サイトカインを発現するように遺伝子改変される。ある特定の実施形態では、１つ以上のホーミング機構を使用して、本発明の細胞が疾患部位により効果的に蓄積することを補助する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ活性化の際に誘導性サイトカインを放出するように、例えば、標的細胞（いわゆる第４の世代ＣＡＲまたはＴＲＵＣＫＳ）に先天性免疫細胞を誘引または活性化するように、さらに改変される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、疾患部位への輸送を増加させるために、ホーミング分子、例えば、ＣＣＲ４またはＣＣＲ２ｂを共発現し得る。

ＣＡＲ発現を制御する
場合によっては、ＣＡＲまたはＣＡＲ発現細胞ＣＡＲの活性を調節することが有利であり得る。例えば、二量体化ドメインに融合されたカスパーゼを使用してアポトーシスを誘発すること（例えば、Ｄｉｅｔａｌ．，ＮＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１Ｎｏｖ．３；３６５（１８）：１６７３－１６８３を参照されたい）は、本発明のＣＡＲ療法における安全スイッチとして使用することができる。別の例では、ＣＡＲ発現細胞はまた、二量体薬物（例えば、リミデュシド（ＡＰ１９０３（ＢｅｌｌｉｃｕｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）またはＡＰ２０１８７（Ａｒｉａｄ）とも呼ばれる））の投与時に、誘導性Ｃａｓｐａｓｅ－９（ｉＣａｓｐａｓｅ－９）分子を発現し、Ｃａｓｐａｓｅ－９の活性化および細胞のアポトーシスを生じさせることができる。ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、二量体化の化学誘導因子（ＣＩＤ）結合ドメインを含み、ＣＩＤの存在下での二量体化を媒介する。これにより、ＣＡＲ発現細胞の誘導性および選択的枯渇を引き起こす。場合によっては、ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、ＣＡＲコードベクターとは別の核酸分子によってコードされる。場合によっては、ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、ＣＡＲコードベクターと同じ核酸分子によってコードされる。ｉＣａｓｐａｓｅ－９は、ＣＡＲ発現細胞の任意の毒性を回避するための安全スイッチを提供することができる。例えば、Ｓｏｎｇｅｔａｌ．ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ．２００８；１５（１０）：６６７－７５、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌＩｄ．Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０７９６３、およびＤｉｅｔａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１；３６５：１６７３－８３を参照されたい。

本発明のＣＡＲ療法を調節するための代替的な戦略としては、例えばＣＡＲ発現細胞を欠失させることによって、例えば抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導することによって、ＣＡＲ活性を非活性化またはオフにする小分子または抗体を利用することが挙げられる。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、細胞死、例えば、ＡＤＣＣまたは補体誘発性細胞死を誘発することができる分子によって認識される抗原も発現し得る。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、抗体または抗体断片によって標的化されることができる受容体も発現し得る。そのような受容体の例としては、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（例えば、インテグリンαｖβ３、α４、αＩ３／４β３、α４β７、α５β１、αｖβ３、αｖ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＰＤＧＦ受容体、インターフェロン受容体、葉酸受容体、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＡＭ－１、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ１、ＴＡＧ－７２、ＩＬ－６受容体、５Ｔ４、ＧＤ２、ＧＤ３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ－１、ＣＤ１５、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３／ｌｇＥ受容体、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１４７／バシギン、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５４／ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１９５／ＣＣＲ５、ＣＤ３１９／ＳＬＡＭＦ７、およびＥＧＦＲ、ならびにそれらの切断態様（例えば、１つ以上の細胞外エピトープを保存しているが、細胞質ドメイン内の１つ以上の領域を欠く態様）が挙げられる。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、シグナル伝達能力を欠くが、ＡＤＣＣを誘導することができる分子、例えば、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））によって認識されるエピトープを保持する切断上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を発現してもよく、その結果、セツキシマブの投与は、ＡＤＣＣを誘導し、その後のＣＡＲ発現細胞の枯渇を引き起こす（例えば、ＷＯ２０１１／０５６８９４、およびＪｏｎｎａｌａｇａｄｄａｅｔａｌ．，“ＧｅｎｅＴｈｅｒ．２０１３；２０（８）８５３－８６０を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ細胞は、例えば、ＲＱＲ８などの自殺ポリペプチド（ｓｕｉｃｉｄｅｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）をコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３／１５３３９（１Ａ）号を参照されたい。ポリヌクレオチドを含むＣＡＲ細胞において、自殺ポリペプチドは、ＣＡＲ細胞の表面で発現されてもよい。自殺ポリペプチドはまた、アミノ末端にシグナルペプチドを含み得る。別の戦略は、リツキシマブに結合する、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞内のＣＤ３２およびＣＤ２０抗原の両方からの標的エピトープを組み合わせた、高度に圧縮されたマーカー／自殺遺伝子を発現させることを含み、例えば、ＡＤＣＣによって、ＣＡＲ発現細胞の選択的枯渇をもたらす（例えば、Ｐｈｉｌｉｐｅｔａｌ．，“Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２４（８）１２７７－１２８７を参照されたい）。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を枯渇させるための他の方法としては、例えば、ＡＤＣＣを誘導することによって、破壊するために、成熟リンパ球、例えば、ＣＡＲ発現細胞に選択的に結合し、標的化するモノクローナル抗ＣＤ５２抗体であるＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）の投与が挙げられる。他の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲリガンド、例えば、抗イディオタイプ抗体を使用して選択的に標的化され得る。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えば、ＡＤＣＣまたはＡＤＣ活性を引き起こし、それによってＣＡＲ発現細胞の数を減少させることができる。他の実施形態では、ＣＡＲリガンド、例えば、抗イディオタイプ抗体は、細胞死滅を誘導する薬剤（例えば、毒素）に結合し、それによってＣＡＲ発現細胞の数を減少させることができる。あるいは、ＣＡＲ分子自体を、以下に記載されるように、活性を調節する（例えば、オンおよびオフにする）ことができるように構成することができる。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ活性を制御することができる調節可能なＣＡＲ（ＲＣＡＲ）は、ＣＡＲ療法の安全性および有効性を最適化するために望ましい。いくつかの実施形態では、ＲＣＡＲは、本明細書に記載の標準的なＣＡＲの成分（例えば、ＡＢドメインおよびＩＣＳドメイン）が、別個のポリペプチドまたはメンバーに分配されているポリペプチドのセット、最も単純な実施形態では、典型的には２つのポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、二量体化分子の存在時に、ポリペプチドを互いに結合させることができ、例えば、ＡＢドメインをＩＣＳドメインに結合させることができる二量体化スイッチを含む。そのような調節可能なＣＡＲのさらなる説明および例示的な構成は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１５／０９０２２９号に提供される。

一態様では、ＲＣＡＲは、以下の２つのポリペプチドまたはメンバーを含む。１）ＩＣＳドメイン、例えば、本明細書に記載される一次ＩＣＳドメインと、第１のスイッチドメインとを含む細胞内シグナル伝達メンバー、２）例えば、本明細書に記載されるように、本明細書に記載される標的分子に特異的に結合するＡＢドメインと、第２のスイッチドメインとを含む抗原結合メンバー。任意選択で、ＲＣＡＲは、本明細書に記載のＴＭドメインを含む。一実施形態では、ＴＭドメインは、細胞内シグナル伝達メンバー上に、抗原結合メンバー上に、または両方に配置され得る。別段の指示がない限り、ＲＣＡＲのメンバーまたは要素が本明細書に記載されている場合、その順序は提供されている通りであってもよいが、他の順序も同様に含まれる。言い換えると、一実施形態では、その順序は文書に記載されているとおりであるが、他の実施形態では、その順序は異なっている場合がある。例えば、膜貫通領域の一方の側の要素の順序は、例とは異なってもよく、例えば、ＩＣＳドメインに対するスイッチドメインの配置は、異なってもよく、例えば、逆であってもよい。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現免疫細胞は、ＣＡＲのみを一過性に発現し得る。例えば、本発明の細胞は、本発明のＣＡＲをコードする核酸配列を含むｍＲＮＡで形質導入されてもよい。この流れで、本発明はまた、細胞に直接トランスフェクトされ得るＲＮＡ構築物を含む。トランスフェクションで使用するためのｍＲＮＡを生成する方法は、３’および５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップおよび／または内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、発現される核酸、ならびにポリＡテール（典型的には５０～２０００塩基長）を含有する構築物を生成するために、特別に設計されたプライマーを用いたテンプレートのインビトロ転写（ＩＶＴ）と、その後のポリＡ付加を伴う。このようにして産生されたＲＮＡは、異なる種類の細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。一実施形態では、テンプレートは、ＣＡＲのための配列を含む。一実施形態では、ＲＮＡＣＡＲベクターは、エレクトロポレーションによって細胞内に形質導入される。

標的特異性
本発明のＣＡＲ発現細胞は、第１のＣＡＲに加えて、１つ以上のＣＡＲをさらに含み得る。これらの追加のＣＡＲは、第１のＣＡＲの標的分子に特異的であってよく、または特異的でなくてもよい。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加のＣＡＲは、阻害性または活性化ＣＡＲとして作用し得る。いくつかの態様では、いくつかの実施形態のＣＡＲは、刺激性または活性化ＣＡＲであり、他の態様では、ＣＡＲは、共刺激性ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、細胞は、阻害性ＣＡＲをさらに含み（ｉＣＡＲｓ、Ｆｅｄｏｒｏｖｅｔａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１３Ｄｅｃ；５（２１５）：２１５ｒａ１７２を参照されたい）、例えば、第１のＣＡＲの標的分子以外の抗原を認識するＣＡＲであって、第１のＣＡＲを通して送達される活性化シグナルが、阻害性ＣＡＲのそのリガンドへの結合によって、例えば、オフターゲット効果を低減するために減少または阻害される、ＣＡＲなどが挙げられる。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＡＢドメインは、免疫コンジュゲートであるか、またはその一部であり、ＡＢドメインは、１つ以上の異種分子、例えば、限定されないが、細胞傷害性剤、イメージング剤、検出可能な部分、多量体化ドメイン、または他の異種分子などにコンジュゲートされる。細胞傷害性剤としては、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、成長阻害剤、酵素およびその断片、例えば、核酸分解酵素、抗生物質、毒素、例えば、小分子毒素または酵素活性毒素が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＡＢドメインは、化学療法剤もしくは薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはその断片）、または放射性同位体などの１つ以上の細胞傷害性剤にコンジュゲートされる。

いくつかの実施形態では、持続性を向上させるために、本発明の細胞をさらに修飾して、生存促進シグナルを過剰発現させるか、抗生存シグナルを逆に発現させるか、Ｂｃｌ－ｘＬを過剰発現させるか、ｈＴＥＲＴを過剰発現させるか、Ｆａｓを欠くか、またはＴＧＦ－βドミナントネガティブ受容体を発現させることができる。持続性はまた、サイトカイン、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、およびＩＬ－１５の投与によって促進され得る。

ベクター
本発明はまた、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤をコードするポリヌクレオチドを挿入するベクターを提供する。

ベクターは、例えば、ＤＮＡベクターまたはＲＮＡベクターであり得る。ベクターは、例えば、限定されないが、プラスミド、コスミド、またはウイルスベクターであり得る。ウイルスベクターは、ＤＮＡウイルス（アデノウイルスであってもよい）のベクターであってもよく、またはＲＮＡウイルス（レトロウイルスであってもよい）のベクターであってもよい。Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、および／またはＣＡＲのための一連のベクターの種類は、当該技術分野で既知である（例えば、ＲｉｔａＣｏｓｔａＡ．ｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＰｈａｒｍＢｉｏｐｈａｒｍ．２０１０Ｆｅｂ；７４（２）：１２７－３８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｊｐｂ．２００９．１０．００２．Ｅｐｕｂ２００９Ｏｃｔ２２、ＦｒｅｎｚｅｌＡ．ｅｔａｌ．ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ．２０１３；４：２１７．２０１３年７月２９日にオンラインで公開ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１３．００２１７を参照されたい）。

宿主細胞が昆虫細胞である場合、例えば、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を産生するために、昆虫特異的ウイルスが使用され得る。昆虫特異的ウイルスの例としては、限定されないが、Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅのファミリー、特に、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が挙げられる。宿主細胞が植物細胞である場合、植物特異的ウイルスおよび細菌、例えば、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓが使用され得る。

レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来する発現ベクターは、発現ベクターは、導入遺伝子の長期的で安定的な組み込みおよび娘細胞におけるその増殖を可能にするので、長期的な遺伝子移入を達成するのに好適なツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入することができるという点で、マウス白血病ウイルスなどのがんレトロウイルスに由来するベクターと比べ、さらなる利点を有する。これらのベクターはまた、低免疫原性という追加の利点を有する。このことは、ＣＡＲ構築物を発現するために特に有益である。

簡潔にまとめると、抗ＡＤＡＭ１２剤をコードする核酸の発現は、典型的には、抗ＡＤＡＭ１２剤ポリペプチドまたはその一部をコードする核酸をプロモーターに作動可能に連結し、構築物を発現ベクターに組み込むことによって達成される。ベクターは、真核生物の複製および組み込みに好適なものであり得る。典型的なクローニングベクターは、転写および翻訳ターミネーター、開始配列、および所望の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含む。

本発明の発現構築物も、標準的な遺伝子送達プロトコルを使用して、核酸免疫化および遺伝子療法に使用し得る。遺伝子送達方法は、当該技術分野で既知である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，３９９，３４６号、同第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６６号を参照されたい。別の実施形態では、本発明は、遺伝子療法ベクターを提供する。

核酸は、いくつかの種類のベクターにクローニングすることができる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、およびコスミドを含むがこれらに限定されないベクターにクローニングされ得る。特に関心のあるベクターとしては、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、および配列決定ベクターが挙げられる。

さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．（２００１，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ）、および他のウイルス学および分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、限定されないが、レトロウイルス、γ－レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスが挙げられる。一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つ以上の選択可能なマーカーを含有する（例えば、ＷＯ０１／９６５８４、ＷＯ０１／２９０５８、および米国特許第６，３２６，１９３号）。

いくつかのウイルスベース系が、哺乳動物細胞への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための便利なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当該技術分野において既知の技術を使用して、ベクターに挿入され、レトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。その後、組換えウイルスを単離し、対象の細胞にインビボまたはエクスビボのいずれかで送達することができる。いくつかのレトロウイルス系が当該技術分野で既知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。いくつかのアデノウイルスベクターが当該技術分野で既知である。一実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。

追加のプロモーター要素、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは開始部位の上流３０～１１０ｂｐの領域に位置するが、いくつかのプロモーターは、開始部位の下流にも機能的要素を含むことが最近示されている。多くの場合、プロモーター要素間の間隔は柔軟であり、そのため、要素が互いに反転したり移動したりしても、プロモーターの機能は維持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーター要素間の間隔を５０ｂｐまで広げることができる。プロモーターに応じて、個々の要素が協調的にまたは独立して機能して転写を活性化することができると思われる。

限定されないが、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＣＭＶ－アクチン－グロビンハイブリッド（ＣＡＧ）プロモーター、伸長成長因子－１α（ＥＦ－１α）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイルス前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにヒト遺伝子プロモーター（例えば、限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーター）を含む種々のプロモーター配列が使用され得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターもまた、本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、そのような発現が所望されるときに作動可能に連結されるポリヌクレオチド配列の発現をオンにすることができる、または発現が所望されないときに発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例としては、限定されないが、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。

ＣＡＲポリペプチドまたはその一部の発現を評価するために、細胞に導入される発現ベクターはまた、選択可能なマーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子のいずれか、または両方を含有して、ウイルスベクターによってトランスフェクトされるか、または感染されることが求められる細胞の集合体からの発現細胞の同定および選択を促進することができる。他の態様では、選択可能なマーカーは、別個のＤＮＡピース上に保有され、共トランスフェクション手順で使用されてもよい。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両方が、宿主細胞において発現を可能にするために適切な調節配列に隣接していてもよい。有用な選択可能なマーカーとして、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。

いくつかの実施形態では、選択可能なマーカー遺伝子は、切断ＣＤ１９（ｔｒＣＤ１９）をコードする核酸配列を含む。細胞表面上で発現させることができるｔｒＣＤ１９などのマーカーが使用される場合、マーカーの発現は、限定されないが、フローサイトメトリーまたは免疫蛍光アッセイを含む任意の利用可能な技術を介して決定され得る。そのようなマーカーの発現は、典型的には、マーカー遺伝子とともに導入された導入遺伝子の導入および発現に成功したことを示す。したがって、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤を発現する細胞は、例えば、マーカーの発現に基づいて選択され得る。

レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定し、調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織内に存在しないか、またはレシピエント生物または組織によって発現されず、その発現がいくつかの容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって発現されるポリペプチドをコードする遺伝子である。ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の好適な時点でレポーター遺伝子の発現をアッセイする。好適なレポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌アルカリ性ホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が含まれ得る（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉｅｔａｌ．，２０００ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ４７９：７９－８２）。好適な発現系は既知であり、既知の技術を使用して調製し得るか、または商業的に入手し得る。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’隣接領域を有する構築物は、プロモーターとして特定される。かかるプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され、プロモーターによって引き起こされる転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用され得る。

トランスフェクション／形質導入
遺伝子を細胞に導入し、発現する方法は、当該技術分野で知られている。発現ベクターの文脈において、ベクターは、当該技術分野における任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母、または昆虫細胞に容易に導入され得る。例えば、発現ベクターは、宿主細胞に、物理的、化学的、または生物学的手段によってトランスフェクトすることができる。

ＣＡＲ発現細胞を得るためのＣＡＲ構築物の形質導入のために、単離されたＣＡＲ発現細胞を製造するための潜在的な方法を示すフローチャートが、図４に提供される。

宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、パーティクルボンバードメント、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクターおよび／または外来性核酸を含む細胞を産生するための方法は当該技術分野において既知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．（２００１，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ）を参照されたい。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。

目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための生物学的方法としては、ＤＮＡベクターおよびＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞に遺伝子を挿入するための最も広く使用される方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号および同第５，５８５，３６２号を参照されたい。

ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段としては、巨大分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油型エマルション、ミセル、混合ミセル、およびリポソームを含む脂質系などのコロイド分散系が挙げられる。インビトロおよびインビボでの送達ビヒクルとしての使用のための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。

非ウイルス送達系が利用される場合、例示的な送達ビヒクルは、リポソームである。脂質製剤の使用は、宿主への核酸の導入（インビトロ、エクスビボ、またはインビボ）のために企図される。別の態様では、核酸は、脂質と会合し得る。脂質に会合する核酸は、リポソームの水性内部に封入され、リポソームの脂質二重層内に分散され、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方に会合する連結分子を介してリポソームに結合され、リポソームに捕捉され、リポソームと複合体形成され、脂質を含有する溶液中に分散され、脂質と混合され、脂質と組み合わされ、脂質中に懸濁液として含有され、ミセルに含有されるか、またはミセルと複合体形成され、またはそれ以外の方法で脂質と会合し得る。脂質、脂質／ＤＮＡ、または脂質／発現ベクター会合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、これらは、ミセルとして二層構造に存在していてもよく、または「崩壊した」構造を有していてもよい。これらはまた、溶液中に単純に分散されてもよく、サイズまたは形状が均一ではない凝集体を形成する可能性もある。脂質は、天然に存在するか、または合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質としては、細胞質内で天然に存在する脂肪滴、ならびに長鎖脂肪族炭化水素およびそれらの誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒドを含む化合物のクラスが挙げられる。

使用に好適な脂質を商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．から得ることができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆ＫＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、Ｎ．Ｙ．）から得ることができ、コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、ＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、Ａｌａ．）から得てもよい。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質の原料液は、約－２０℃で保存することができる。クロロホルムは、メタノールよりも容易に蒸発するので、唯一の溶媒として使用される。「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によって形成される様々な単一および多層脂質ビヒクルを包含する総称である。リポソームは、リン脂質二層膜および内側水性媒体を有する小胞状構造を有することを特徴とし得る。多層リポソームは、水性媒体によって分離された複数の脂質層を有する。過剰な水溶液中にリン脂質が懸濁されると、自発的に形成される。脂質成分は、閉じた構造が形成される前に自己再配列を受け、脂質二重層の間に水と溶解した溶質を閉じ込める（Ｇｈｏｓｈｅｔａｌ．，“１９９１Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ５：５０５－１０）。しかしながら、通常の小胞状構造とは異なる溶液中の構造を有する組成物も包含される。例えば、脂質は、ミセル構造であると推測することが可能であり、または単に脂質分子の不均一な凝集体として存在する場合がある。リポフェクタミン－核酸複合体も企図される。

外来性核酸を宿主細胞に導入するか、またはそれ以外の方法で細胞を本発明の阻害剤に曝露するために使用される方法にかかわらず、宿主細胞における組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイが行われ得る。このようなアッセイには、例えば、サザンブロッティングおよびノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲおよびＰＣＲなどの当業者に既知の「分子生物学的」アッセイ、例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）によって、または本明細書に記載のアッセイによって、本発明の範囲に含まれる薬剤を識別することによって特定のペプチドの存在または非存在を検出するなどの「生化学的」アッセイが含まれる。

細胞
細胞、細胞集合体、および細胞を含有する組成物、例えば、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤をコードする核酸配列を含む細胞も提供される。抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を発現する細胞を使用して、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を採取し得る。抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲを発現する細胞は、対象に投与され得るか、または対象に投与される組成物に組み込まれ得る。組成物の中には、養子細胞療法用などの投与用の薬学的組成物および製剤が含まれる。

また、ＡｂまたはＡｂ断片、または細胞および組成物を対象、例えば患者に投与するための治療方法も提供される。

細胞型
したがって、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤を発現する細胞も提供される。

抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を発現するために、任意の適切な細胞が使用され得る。例えば、細胞は、（ｉ）グラム陰性菌およびグラム陽性菌などの原核細胞、または（ｉｉ）酵母、糸状菌、原虫、昆虫細胞、植物細胞、および哺乳動物細胞などの真核細胞であり得る（ＦｒｅｎｚｅｌＡ．ｅｔａｌ．ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ．２０１３；４：２１７．２０１３年７月２９日にオンラインで公開ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１３．００２１７に概説される）。

Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片の産生に好適なグラム陰性菌の具体的な例には、限定されないが、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｒｏｔｅｕｓｍｉｒａｂｉｌｉｓ、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａｓが挙げられる。グラム陽性菌の具体的な例としては、限定されないが、Ｂａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｔｏ－ｂａｃｉｌｌｕｓｚｅａｅ／ｃａｓｅｉ、およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉが挙げられる。Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片の産生に好適な酵母菌の具体的な例としては、限定されないが、Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ、およびＹａｒｒｏｗｉａｌｉｐｏｌｙｔｉｃａが挙げられる。Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片の産生に好適な糸状菌の具体的な例としては、限定されないが、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ属およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ａ．ｎｉｇｅｒ（ｓｕｂｇｅｎｕｓＡ．ａｗａｍｏｒｉ）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ、およびＣｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅが挙げられる。Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片の産生に好適な原虫の具体的な例としては、限定されないが、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｔａｒｅｎｔｏｌａｅが挙げられる。Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片の産生に好適な昆虫細胞の具体的な例としては、限定されないが、ＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａのＳｆ－９およびＳｆ－２１などの昆虫細胞株、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒのＤＳ２細胞、ＴｒｉｃｈｏｐｕｌｓｉａｎｉのＨｉｇｈＦｉｖｅ細胞（ＢＴＩ－ＴＮ－５Ｂ１－４）、またはＤ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒのＳｃｈｎｅｉｄｅｒ２（Ｓ２）細胞が挙げられる。これらの細胞は、Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅ科、特に、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）由来の昆虫特異的ウイルスで効果的にトランスフェクトすることができる。Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片の産生に好適な哺乳動物細胞の具体的な例としては、限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚網膜細胞株Ｐｅｒ．Ｃ６［Ｃｒｕｃｅｌｌ、Ｌｅｉｄｅｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ］、ＣＨＯ由来細胞株、例えば、Ｋ１－、ＤｕｋＸＢ１１－、Ｌｅｃ１３、およびＤＧ４４－細胞株、マウス骨髄腫細胞株、例えば、ＳＰ２／０、ＹＢ２／０、およびＮＳ０細胞、ＧＳ－ＮＳＯ、ハイブリドーマ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、およびヒト胚腎臓細胞株ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨＥＫ２９３Ｅ、ならびにヒト神経前駆細胞株ＡＧＥ１．ＨＮ（Ｐｒｏｂｉｏｇｅｎ、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。

あるいは、トランスジェニック植物およびトランスジェニック動物などの遺伝子組み換え生物を使用してもよい。使用され得る例示的な植物としては、限定されないが、タバコ、トウモロコシ、ウキクサ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ、Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ、Ｎｉｃｏｔｉａｎａｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ、およびＮｉｃｏｔｉａｎａｂｅｎｔｈａｍｉａｎａが挙げられる。使用され得る例示的な動物としては、限定されないが、マウス、ラット、およびニワトリが挙げられる。

抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲを発現するために、細胞は、一般に、哺乳動物細胞などの真核細胞であり、典型的には、ヒト細胞、より典型的には、初代ヒト細胞、例えば、同種または自己ドナー細胞である。ＣＡＲを導入するための細胞は、試料、例えば、生体試料、例えば、対象から得られた試料または対象由来の試料などから単離され得る。いくつかの実施形態では、細胞が単離される対象は、疾患もしくは状態を有する対象、または細胞療法を必要とする対象、または細胞療法が行われる対象である。いくつかの実施形態における対象は、細胞が単離され、処理され、および／または操作されている養子細胞療法などの特定の治療的介入を必要とするヒトである。いくつかの実施形態では、細胞は、血液、骨髄、リンパ、またはリンパ器官に由来し、免疫系の細胞、例えば、先天性免疫または適応免疫の細胞、例えば、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、好酸球、好塩基球、または脂肪細胞を含む骨髄細胞、またはリンパ球、典型的にはＴ細胞および／またはＮＫ細胞を含むリンパ球である。他の例示的な細胞には、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む、複能性幹細胞および多能性幹細胞などの幹細胞が含まれる。細胞は、典型的には、対象から直接単離された細胞および／または対象から単離され、凍結された細胞などの初代細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、機能、活性化状態、成熟度、分化の可能性、拡張、再循環、局在化、および／または持続能、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の臓器もしくはコンパートメントにおける存在、マーカーもしくはサイトカイン分泌プロファイル、および／または分化度によって定義されるものなどの、Ｔ細胞または他の細胞型の１つ以上のサブセット、例えば、全Ｔ細胞集合体、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ならびにそれらの亜集合体を含む。

あるいは、不死化細胞または細胞株は、本開示のＣＡＲを発現するために使用され得る。このような例としては、限定されないが、Ｔ細胞株、ＣＤ４＋Ｔ細胞株、ＣＤ８＋Ｔ細胞株、制御性Ｔ細胞株、ＮＫ－Ｔ細胞株、ＮＫ細胞株（例えば、ＮＫ－９２）、単球株、マクロファージ株、樹状細胞株、および肥満細胞株が挙げられる。さらに、ＣＡＲ発現のための所望の細胞型、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、胚性幹細胞、ｉＰＳＣ、または造血幹細胞などの幹細胞から生成され得る。

抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲを発現する細胞で治療される対象に関して、細胞は、同種および／または自己であってもよい。本方法の中には、既製の方法が含まれる。既製の技術などのいくつかの態様では、細胞は、多能性および／または複能性の例えば幹細胞、例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である。いくつかの実施形態では、本方法は、対象から細胞を単離することと、本明細書に記載されるように、それらを調製、処理、培養、および／または操作することと、凍結保存の前または後に、それらを同じ患者に再導入することと、を含む。

いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の亜型および亜集合体の中には、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞およびその亜型、例えば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）、または最終分化したエフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然に存在する適応制御性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞、ヘルパーＴ細胞、例えば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞ヘルパーＴ細胞、α／β Ｔ細胞、およびδ／γ Ｔ細胞などがある。

いくつかの実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞などである。いくつかの実施形態では、細胞は、単球または顆粒球、例えば骨髄細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、および／または好塩基球である。発現するＣＡＲ発現食細胞は、標的細胞に結合し、食作用を起こすか、または標的細胞に食らいつくことが可能であり得る（ＭｏｒｒｉｓｓｅｙＭ．Ａ．ｅｔａｌ．，Ｅｌｉｆｅ．２０１８Ｊｕｎ４；７．ｐｉｉ：ｅ３６６８８．ｄｏｉ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．３６６８８）。

いくつかの実施形態では、細胞は、細胞株、例えば、Ｔ細胞株に由来する。いくつかの実施形態では、細胞は、異種遺伝子源、例えば、マウス、ラット、非ヒト霊長類、およびブタから得られる。

抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ発現のための細胞取得
抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲを発現するための細胞については、拡張および遺伝子改変の前に、細胞の供給源を、様々な非限定的方法を通じて対象から得ることができる。細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および線維化部位または腫瘍などの疾患部位を含む、多くの非限定的な供給源から得られ得る。いくつかの実施形態では、当業者に利用可能であり、既知の任意の数のＴ細胞株を用いてもよい。いくつかの実施形態では、細胞は、健康なドナー、がんと診断された患者、または感染症と診断された患者に由来し得る。いくつかの実施形態では、細胞は、異なる表現型特徴を呈する細胞の混合集合体の一部であり得る。

したがって、いくつかの実施形態における細胞は、初代細胞、例えば、初代ヒト細胞である。試料には、対象から直接採取された組織、流体、および他の試料、ならびに分離、遠心分離、遺伝子工学（例えば、ウイルスベクターによる形質導入）、洗浄、および／またはインキュベーションなどの１つ以上の処理ステップから生じた試料が含まれる。生体試料は、生物学的供給源から直接得られる試料または処理される試料であり得る。生体試料としては、限定されないが、血液、血漿、血清、脳脊髄液、滑液、尿および汗、組織および臓器サンプルなどの体液が挙げられ、それらに由来する処理された試料を含む。

いくつかの態様では、細胞の由来となるか、または細胞が単離される試料は、血液または血液由来の試料であるか、またはＣｒｅｓｉｓもしくは白血球除去療法の生成物であるか、またはそれに由来する。例示的な試料としては、全血、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検、線維化組織、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、腸管関連リンパ組織、粘膜関連リンパ組織、脾臓、他のリンパ組織、肝臓、肺、胃、腸管、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、子宮頸部、精巣、卵巣、扁桃腺、または他の器官、および／またはそれらに由来する細胞が挙げられる。試料としては、細胞療法、例えば、養子細胞療法の文脈において、自己および同種の供給源からの試料が挙げられる。

いくつかの例では、対象の循環血液由来の細胞は、例えば、アフェレーシスまたは白血球除去療法によって得られる。試料は、いくつかの態様では、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球細胞、赤血球細胞、および／または血小板を含むリンパ球を含有し、いくつかの態様では、赤血球細胞および血小板以外の細胞を含有する。

本明細書ではまた、上述の方法のいずれかに従って形質転換された細胞から得られた細胞株を提供する。本明細書ではまた、免疫抑制治療に耐性のある改変細胞も提供される。いくつかの実施形態では、本発明の単離された細胞は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。

細胞精製
いくつかの実施形態では、細胞の単離は、１つ以上の調製および／または非親和性に基づく細胞分離ステップを含む。いくつかの例では、細胞は、１つ以上の試薬存在下で洗浄され、遠心分離され、および／またはインキュベートされ、例えば、望ましくない成分を除去し、所望の成分を濃縮し、特定の試薬に感受性のある細胞を溶解または除去する。いくつかの例では、細胞は、密度、接着特性、サイズ、感受性および／または特定の成分に対する耐性などの１つ以上の特性に基づいて分離される。

いくつかの実施形態では、対象から収集された血液細胞を洗浄して、例えば血漿画分を除去し、細胞を後続の処理ステップのために適切な緩衝液または培地に入れる。いくつかの実施形態では、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。いくつかの実施形態では、洗浄液は、カルシウムおよび／またはマグネシウムおよび／または多くのもしくはすべての二価カチオンを含まない。いくつかの態様では、洗浄ステップは、製造業者の指示に従って、半自動化された「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ２９９１セルプロセッサ、Ｂａｘｔｅｒ）によって達成される。いくつかの態様では、洗浄ステップは、製造業者の指示に従って、タンジェント流濾過（ＴＦＦ）によって達成される。いくつかの実施形態では、細胞は、例えば、Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋遊離ＰＢＳなどの洗浄後に、様々な生体適合性緩衝液中に再懸濁される。ある特定の実施形態では、血液細胞試料の成分を除去し、細胞を培養培地中に直接再懸濁させる。

いくつかの実施形態では、単離方法は、表面マーカー、例えば、表面タンパク質、細胞内マーカー、または核酸などの１つ以上の特定の分子の細胞内での発現または存在に基づく、異なる細胞型の分離を含む。これは、ＣＡＲ発現細胞を単離するために特に有用であろう。特定の実施形態では、表面メーカー（ｓｕｒｆａｃｅｍａｋｅｒ）は、ｔｒＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、そのようなマーカーに基づいて分離するための任意の既知の方法を使用してもよい。いくつかの実施形態では、分離は、親和性または免疫親和性に基づく分離である。例えば、いくつかの態様では、単離は、１つ以上のマーカー（典型的には細胞表面マーカー）の細胞の発現または発現レベルに基づく、例えば、このようなマーカーに特異的に結合する抗体もしくは結合パートナーとともに行うインキュベーションによる、細胞および細胞集合体の分離、その後に、一般的には洗浄ステップ、および抗体もしくは結合パートナーに結合していないこれらの細胞からの抗体もしくは結合パートナーに結合した細胞の分離を含む。

かかる分離ステップは、試薬に結合している細胞を、さらなる使用のために保持する陽性選択、および／または抗体もしくは結合パートナーに結合していない細胞を保持する陰性選択に基づくことができる。いくつかの例では、両方の画分がさらなる使用のために保持される。いくつかの態様では、陰性選択は、異種集合体において細胞型を特異的に識別する抗体が利用可能ではない場合に特に有用な場合があり、その結果、分離は、所望の集合体以外の細胞によって発現されるマーカーに基づいて最も良く実施される。

いくつかの実施形態では、複数回の分離ステップが実行され、１つのステップから陽性または陰性に選択された画分に、別の分離ステップ（例えば、その後の陽性分離または陰性分離）が行われる。いくつかの例では、単一の分離ステップは、例えば、陰性選択の標的となるマーカーにそれぞれ特異的な複数の抗体または結合パートナーとともに細胞をインキュベートすることによって、複数のマーカーを同時に発現する細胞を枯渇させることができる。同様に、細胞を様々な細胞型上に発現された複数の抗体または結合パートナーとともにインキュベートすることによって、複数の細胞型を同時に陽性選択することができる。

例えば、いくつかの態様では、Ｔ細胞の特定の亜集合体、例えば、陽性の細胞、または高レベルの１つ以上の表面マーカー、例えば、ＣＤ２８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、および／またはＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞を発現する細胞を、陽性または陰性選択技術によって単離する。例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞は、ＣＤ３コンジュゲート磁気ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３／ＣＤ２８ＴＣｅｌｌＥｘｐａｎｄｅｒ）を使用して陽性選択することができる。

いくつかの実施形態では、単離は、陽性選択による特定の細胞集合体の濃縮、または陰性選択による特定の細胞集合体の枯渇によって実行される。いくつかの実施形態では、陽性選択または陰性選択は、細胞を、それぞれ、陽性または陰性に選択された細胞に対して相対的に高いレベル（マーカーハイ）で発現されるか、または発現される（マーカー＋）１つ以上の表面マーカーに特異的に結合する１つ以上の抗体または他の結合剤とともに細胞をインキュベートすることによって達成される。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、Ｂ細胞、単球などの非Ｔ細胞、またはＣＤ１４などの他の白血球細胞上に発現されるマーカーの陰性選択によって、ＰＢＭＣ試料から分離される。いくつかの態様では、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋選択ステップを使用して、ＣＤ４＋ヘルパーおよびＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞を分離する。そのようなＣＤ４＋およびＣＤ８＋集合体は、１つ以上のナイーブ、メモリー、および／またはエフェクターＴ細胞の亜集合体上で比較的高い程度に発現または発現されるマーカーの陽性選択または陰性選択によって、亜集合体にさらに選別され得る。

いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、例えば、それぞれの亜集合体と会合する表面抗原に基づく陽性選択または陰性選択によって、ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリー、および／またはセントラルメモリー幹細胞をさらに濃縮させるか、または枯渇させる。いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、投与後の長期生存、拡張、および／または生着を改善するなどの有効性を増加させるために行われ、いくつかの態様では、そのような亜集合体において特に堅牢である。Ｔｅｒａｋｕｒａｅｔａｌ．（２０１２）Ｂｌｏｏｄ．１：７２－８２、Ｗａｎｇｅｔａｌ．（２０１２）ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６８９－７０１を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＴＣＭ濃縮されたＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞を組み合わせることで、有効性をさらに増強する。複数の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ６２Ｌサブセットの両方に存在する。ＰＢＭＣは、例えば、抗ＣＤ８および抗ＣＤ６２Ｌ抗体を使用して、ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ８＋および／またはＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８分画を濃縮または枯渇させることができる。

いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、および／またはＣＤ１２７の陽性または高表面発現に基づく。いくつかの態様では、ＣＤ４５ＲＡおよび／またはグランザイムＢを発現または高度に発現する細胞の陰性選択に基づく。いくつかの態様では、ＴＣＭ細胞について濃縮されたＣＤ８＋集合体の単離は、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ４５ＲＡを発現する細胞の枯渇と、ＣＤ６２Ｌを発現する細胞の陽性選択または濃縮によって行われる。一態様では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、ＣＤ１４およびＣＤ４５ＲＡの発現に基づく陰性選択を受ける、ＣＤ４発現に基づいて選択される細胞の陰性画分から開始し、ＣＤ６２Ｌに基づく陽性選択が行われる。いくつかの態様では、このような選択は同時に行われ、他の態様では、いずれかの順序で順次行われる。いくつかの態様では、ＣＤ８＋細胞集合体または亜集合体を調製する際に使用される同一のＣＤ４発現ベースの選択ステップもまた、ＣＤ４＋細胞集合体または亜集合体を生成するために使用され、ＣＤ４ベースの分離からの陽性画分および陰性画分の両方が保持され、任意選択で１つ以上のさらなる陽性または陰性選択ステップに続いて、本方法の後続ステップにおいて使用される。

いくつかの態様では、分離される細胞の試料または組成物は、磁気応答性粒子または微粒子、例えば常磁性ビーズ（例えば、ＤｙｎａｌｂｅａｄまたはＭＡＣＳビーズ）などの、小さい磁化可能材料または磁気応答性材料とともにインキュベートされる。磁気応答性材料、例えば、粒子は、一般に、分離することが望ましい（例えば、陰性選択または陽性選択することが望ましい）細胞、複数の細胞、または細胞の集合体上に存在する分子、例えば、表面マーカーに特異的に結合する結合パートナー（例えば、抗体）に直接的または間接的に接続する。

いくつかの実施形態では、磁性粒子またはビーズは、抗体または他の結合パートナーなどの特定の結合メンバーに結合された磁気応答性材料を含む。磁気分離法には多くの既知な磁気応答性材料が使用されている。好適な磁性粒子には、参照により本明細書に組み込まれるＭｏｌｄａｙ，米国特許第４，４５２，７７３号、および欧州特許明細書第ＥＰ４５２３４２Ｂ号に記載されるものが含まれる。コロイドサイズの粒子、例えば、Ｏｗｅｎ米国特許第４，７９５，６９８号、およびＬｉｂｅｒｔｉｅｔａｌ．，米国特許第５，２００，０８４号に記載されるものが、他の例である。

インキュベーションは、一般に、抗体または結合パートナー、またはそのような抗体または結合パートナー、またはそのような抗体または結合パートナーに特異的に結合し、磁性粒子またはビーズに結合する分子（例えば、二次抗体または他の試薬）が、試料内の細胞上に存在する場合には細胞表面分子に特異的に結合する条件下で行われる。

いくつかの態様では、試料は磁場中に配置され、それに磁気応答性または磁化可能粒子が付着したそれらの細胞は、磁石に引き寄せられ、標識されていない細胞から分離される。陽性選択では、磁石に引き寄せられている細胞が保持され、陰性選択では、引き寄せられていない細胞（標識されていない細胞）が保持される。いくつかの態様では、陽性選択および陰性選択の組み合わせは、同じ選択ステップの間に実行され、陽性画分および陰性画分が保持され、さらに処理されるか、またはさらなる分離ステップが行われる。

ある特定の実施形態では、磁気応答性粒子は、一次抗体または他の結合パートナー、二次抗体、レクチン、酵素、またはストレプトアビジンでコーティングされる。ある特定の実施形態では、磁性粒子は、１つ以上のマーカーに特異的な一次抗体のコーティングを介して細胞に接続される。ある特定の実施形態では、細胞は、ビーズではなく、一次抗体または結合パートナーで標識され、次いで細胞型特異的二次抗体または他の結合パートナー（例えば、ストレプトアビジン）コーティングされた磁性粒子が添加される。ある特定の実施形態では、ストレプトアビジンでコーティングされた磁性粒子は、ビオチン化一次抗体または二次抗体と併用される。

いくつかの実施形態では、磁気応答性粒子は、その後にインキュベートされ、培養され、および／または操作される細胞に付着したままであり、いくつかの態様では、粒子は、患者への投与のために細胞に付着したままである。いくつかの実施形態では、磁化可能粒子または磁気応答性粒子は、細胞から除去される。細胞から磁化可能粒子を除去する方法が知られており、例えば、競合する非標識抗体、磁化可能粒子、または切断可能なリンカーにコンジュゲートされた抗体などの使用が含まれる。いくつかの実施形態では、磁化可能粒子は、生分解性である。

ある特定の実施形態では、単離または分離は、本方法の単離、細胞調製、分離、処理、インキュベーション、培養、および／または製剤化ステップのうちの１つ以上を実行するシステム、デバイス、または装置を使用して実行される。いくつかの態様では、システムは、例えば、エラー、ユーザの取り扱い、および／または汚染を最小限に抑えるために、閉鎖環境または無菌環境においてこれらのステップの各々を実行するために使用される。一例では、システムは、国際特許出願公開第ＷＯ２００９／０７２００３、またはＵＳ２０１１／０００３３８０（Ａ１）に記載されるシステムである。

いくつかの実施形態では、システムまたは装置は、集積型または自己完結型のシステムで、および／または自動化またはプログラム可能な方法で、１つ以上、例えば、すべての単離、処理、操作、および製剤化ステップを実行する。いくつかの態様では、システムまたは装置は、システムまたは装置と通信するコンピュータおよび／またはコンピュータプログラムを含み、これにより、ユーザは、処理、単離、操作、および製剤化ステップのプログラム、制御、結果の評価、および／または様々な態様の調整が可能になる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞集合体は、複数の細胞表面マーカーについて染色された細胞が流体流中に保持されるフローサイトメトリーを介して収集され、濃縮される（または枯渇される）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞集合体は、分取スケール（ＦＡＣＳ）選別を介して収集され、濃縮される（または枯渇される）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の細胞集合体は、ＦＡＣＳベースの検出システムと組み合わせて、微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップを使用することによって、収集され、濃縮される（または枯渇される）（例えば、ＷＯ２０１０／０３３１４０号、Ｃｈｏｅｔａｌ．（２０１０）ＬａｂＣｈｉｐ１０，１５６７－１５７３、およびＧｏｄｉｎｅｔａｌ．（２００８）ＪＢｉｏｐｈｏｔｏｎ．１（５）：３５５－３７６を参照されたい。いずれの場合も、細胞を複数のマーカーで標識することができ、高純度での十分に定義されたＴ細胞サブセットの単離を可能にする。

いくつかの実施形態では、抗体または結合パートナーは、陽性選択および／または陰性選択のための分離を容易にするために、１つ以上の検出可能なマーカーで標識される。例えば、分離は、蛍光標識抗体への結合に基づいてもよい。いくつかの例では、１つ以上の細胞表面マーカーに特異的な抗体または他の結合パートナーの結合に基づく細胞の分離は、例えば、フローサイトメトリー検出システムと組み合わせて、分取スケール（ＦＡＣＳ）および／または微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップを含む、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの流体流中で行われる。このような方法は、複数のマーカーに基づく陽性選択および陰性選択を同時に可能にする。

いくつかの実施形態では、本方法は、赤血球細胞を溶解させることによる末梢血からの白血球の調製、およびＰｅｒｃｏｌｌまたはＦｉｃｏｌｌ勾配を通じた遠心分離などの、密度に基づく細胞分離方法を含む。

前述の分離ステップのいずれにおいても、分離は、特定の細胞集合体または特定のマーカーを発現する細胞の１００％濃縮または除去をもたらす必要はない。例えば、特定の型の細胞、例えば、マーカーを発現する細胞の陽性選択または濃縮は、かかる細胞の数またはパーセンテージを増加させることを指すが、マーカーを発現しない細胞が完全に存在しないようにする必要はない。同様に、特定の型の細胞、例えば、マーカーを発現する細胞の陰性選択、除去、または枯渇は、かかる細胞の数またはパーセンテージを減少させることを指すが、そのような細胞すべてを完全に除去する必要はない。

細胞調製および拡張
いくつかの実施形態では、提供される方法は、栽培、インキュベーション、培養、および／または遺伝子操作ステップを含む。例えば、いくつかの実施形態では、枯渇させた細胞集合体および培養開始組成物をインキュベートおよび／または操作するための方法が提供される。

したがって、いくつかの実施形態では、細胞集合体を、培養開始組成物中でインキュベートする。インキュベーションおよび／または操作は、培養容器、例えば、ユニット、チャンバ、ウェル、カラム、チューブ、チューブセット、バルブ、バイアル、培養皿、袋、または細胞を培養または栽培するための他の容器内で行われ得る。

いくつかの実施形態では、細胞は、遺伝子操作の前、またはこれに関連して、インキュベートおよび／または培養される。インキュベーションステップは、培養、栽培、刺激、活性化、および／または増殖を含み得る。

いくつかの実施形態では、組成物または細胞は、刺激条件または刺激剤の存在下でインキュベートされる。かかる条件には、集合体内の細胞の増殖、拡張、活性化、および／または生存を誘導し、抗原曝露を模倣し、および／または遺伝子操作、例えば組換え抗原受容体の導入のために細胞をプライミングするように設計されたものが含まれる。本発明の細胞は、細胞の遺伝子改変の前または後のいずれかで、例えば、限定されないが、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号、および米国特許出願公開第２００６／０１２１００５号に一般に記載される方法を使用して、活性化され、拡張され得る。条件は、特定の培地、温度、酸素含有量、二酸化炭素含有量、時間、薬剤、例えば、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および／または刺激因子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、ならびに細胞を活性化するように設計された任意の他の薬剤のうちの１つ以上を含み得る。

特に、ＣＡＲ発現細胞に関して、Ｔ細胞は、インビトロまたはインビボで拡張することができる。一般に、本発明のＴ細胞は、例えば、Ｔ細胞の表面上でＣＤ３ＴＣＲ複合体および共刺激分子を刺激する薬剤との接触により拡張されて、Ｔ細胞の活性化シグナルを作製することができる。例えば、カルシウムイオンフォアＡ２３１８７、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）、またはフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）のような有糸分裂レクチンのような化学物質を使用して、Ｔ細胞の活性化シグナルを作製することができる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集合体は、例えば、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片、または表面上に固定された抗ＣＤ２抗体と接触させることにより、あるいはカルシウムイオノフォアとともにタンパク質キナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）と接触させることにより、インビトロで刺激され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集合体は、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）との接触によってインビトロで刺激され得る。Ｔ細胞の表面上の補助分子の共刺激には、補助分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集合体は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。Ｔ細胞培養に適切な条件としては、血清（例えば、ウシ胎仔血清またはヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＴＧＦ－β、およびＴＮＦを含む増殖および生存能に必要な因子、または当業者に知られている細胞の成長のための任意の他の添加剤を含有し得る適切な培地（例えば、最小必須培地もしくはＲＰＭＩＭｅｄｉａ１６４０（登録商標）もしくはＸ－ｖｉｖｏ５（登録商標）、（Ｌｏｎｚａ））が挙げられる。好ましい実施形態では、Ｔ細胞は、ＯＫＴ３およびＩＬ－２への暴露によってインビトロで刺激される。細胞の成長のための他の添加剤としては、限定されないが、界面活性剤、プラスマネート、ならびにＮ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエタノールなどの還元剤が挙げられる。培地としては、ＲＰＭＩ１６４０（登録商標）、Ａ１Ｍ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、ａ－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ１（登録商標）、およびＸ－Ｖｉｖｏ２０（登録商標）、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを挙げることができ、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加され、無血清であるか、または適切な量の血清（もしくは血漿）もしくは定義されたホルモン一式、および／またはＴ細胞の成長および拡張に十分な量のサイトカインが補充されるかのいずれかである。抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験用培養物にのみ含まれ、対象に注入される細胞の培養物には含まれない。標的細胞は、成長を補助するのに必要な条件下、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）下で維持される。様々な刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。

いくつかの実施形態では、本発明の単離された細胞は、組織または細胞と共培養することによって拡張することができる。細胞はまた、インビボで、例えば、細胞を対象に投与した後の対象の血液中で拡張することができる。

いくつかの実施形態では、細胞がインビボで拡張されるとき、少なくとも１つの本発明の細胞が対象に投与されてもよく、投与が対象における細胞の拡張を引き起こし、細胞の集合体を生じさせてもよい。あるいは、本発明の核酸配列またはベクターが、対象に投与され得る。核酸配列またはベクターが対象内の細胞によって取り込まれ、細胞が対象内で増殖または拡張すると、対象内で本発明の細胞の集合体が生じ得る。

ある特定の実施形態では、得られた細胞の集合体は、対象において投与後の少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２年間、または少なくとも３年間維持される。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、培養開始組成物フィーダー細胞（例えば、非分裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ））に（例えば、得られる細胞の集合体が、拡張される初期集合体において各Ｔリンパ球について少なくとも約５、１０、２０、または４０以上のＰＢＭＣフィーダー細胞を含むように）添加し、培養物をインキュベートする（例えば、Ｔ細胞の数を拡張させるのに十分な時間）ことによって拡張される。いくつかの態様では、非分裂フィーダー細胞は、γ照射ＰＢＭＣフィーダー細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、細胞分裂を防止するために、約３０００～３６００ｒａｄの範囲のγ線を照射される。いくつかの態様では、フィーダー細胞は、Ｔ細胞集合体の添加前に培養培地に添加される。

いくつかの実施形態では、調製方法は、単離、インキュベーション、および／または操作の前または後のいずれかで、細胞を凍結、例えば、凍結保存するためのステップを含む。いくつかの実施形態では、凍結およびその後の解凍ステップは、細胞集合体において顆粒球を除去し、ある程度単球を除去する。いくつかの実施形態では、細胞は、例えば、血漿および血小板を除去するための洗浄ステップの後に、凍結溶液中に懸濁される。いくつかの態様において様々な既知の凍結溶液およびパラメータのうちのいずれかが使用され得る。１つの例は、２０％のＤＭＳＯおよび８％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、または他の好適な細胞凍結培地を含むＰＢＳを使用することを含む。次いで、これを、ＤＭＳＯおよびＨＳＡの最終濃度がそれぞれ１０％および４％となるように、培地で１：１に希釈する。次に、細胞を－８０℃まで毎分１度の速度で凍結させ、液体窒素貯蔵タンクの蒸気相中に貯蔵する。

細胞培養物からのＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片の単離
本発明のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片を産生する細胞（例えば、ハイブリドーマ）は、標準的な方法を使用して、この目的のための好適な培養培地（例えば、Ｄ－ＭＥＭまたはＲＰＭＩ－１６４０）中、または腹水としてインビボで成長し得る。細胞によって分泌されるＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片は、例えば、限定されないが、タンパク質Ａ－セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順を使用して、培養培地、腹水液、または血清から分離することができる（ＭａＨ．ｅｔａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１７Ｍａｒ１；１１６：２３－３３．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｙｍｅｔｈ．２０１６．１１．００８．Ｅｐｕｂ２０１６Ｎｏｖ１８、ＳｈｕｋｌａＡ．Ａ．ｅｔａｌ．ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０Ｍａｙ；２８（５）：２５３－６１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｉｂｔｅｃｈ．２０１０．０２．００１．Ｅｐｕｂ２０１０Ｍａｒ１９、ＡｒｏｒａＳ．ｅｔａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１７Ｍａｒ１；１１６：８４－９４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｙｍｅｔｈ．２０１６．１２．０１０．Ｅｐｕｂ２０１６Ｄｅｃ２２）。

多重特異性および二重特異性Ａｂおよび抗原結合Ａｂ断片を発現、単離、および評価するための方法もまた、当該技術分野で既知である（例えば、ＢｒｉｎｋｍａｎｎＵ．ｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ．２０１７Ｆｅｂ－Ｍａｒ；９（２）：１８２－２１２．２０１７年１月１０日にオンラインで前公開、ｄｏｉ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１６．１２６８３０７、ＤｉｍａｓｉＮ．ｅｔａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１８Ａｕｇ１１．ｐｉｉ：Ｓ１０４６－２０２３（１８）３０１４９－Ｘ．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｙｍｅｔｈ．２０１８．０８．００４を参照されたい）。

治療的応用
本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤（Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、多重特異性Ａｂ、多重特異性抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＡＭ１２に結合するＡＤＣ、またはＣＡＲ）、かかる薬剤をコードする核酸、かかる薬剤をコードするベクター、上述の方法によって得られる単離された細胞、またはかかる単離された細胞に由来する細胞株、および／またはそれらを含む薬学的組成物は、対象における疾患、障害、または状態の治療における医薬品として使用され得る。いくつかの実施形態では、そのような医薬品を、ＡＤＡＭ１２関連疾患または状態を治療するために使用することができる。

標的疾患および状態
ＡＤＡＭ１２関連状態は、例えば、限定されないが、がん、線維症、自己免疫、心血管状態、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、または炎症性障害であり得る。

特定の実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、がんを治療するために使用し得る。ＡＤＡＭ１２は、多種多様ながん、例えば、限定されないが、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、および甲状腺がんにおいて、上方制御され、および／または病理学的役割を果たす（ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００８；４０（９）：１６８５－７０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｅｌ．２００８．０１．０２５．Ｅｐｕｂ２００８Ｆｅｂ１、ＬｅＰａｂｉｃＨ．ｅｔｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２００３Ｍａｙ；３７（５）：１０５６－６６、ＳｋｕｂｉｔｚＫ．Ｍ．ｅｔａｌ．，ＪＬａｂＣｌｉｎＭｅｄ．２００４Ｆｅｂ；１４３（２）：８９－９８．、Ｃａｒｌ－ＭｃＧｒａｔｈＳ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＯｎｃｏｌ．２００５Ｊａｎ；２６（１）：１７－２４、ＭｏｃｈｉｚｕｋｉＳ．ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＳｃｉ．２００７Ｍａｙ；９８（５）：６２１－８．Ｅｐｕｂ２００７Ｍａｒ９、ＣｏｌｏｍｂｏＣ．ｅｔａｌ．，ＪＰａｔｈｏｌ．２０１１Ｄｅｃ；２２５（４）：５７４－８２．ｄｏｉ：１０．１００２／ｐａｔｈ．２９５１．Ｅｐｕｂ２０１１Ａｕｇ８、ＳｏｏｋｐｒａｓｅｒｔＡ．ｅｔａｌ．，ＡｓｉａｎＰａｃＪＣａｎｃｅｒＰｒｅｖ．２０１２；１３Ｓｕｐｐｌ：３－６、ＵｅｈａｒａＥ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＯｎｃｏｌ．２０１２Ｍａｙ；４０（５）：１４１４－２２．ｄｏｉ：１０．３８９２／ｉｊｏ．２０１２．１３３９．Ｅｐｕｂ２０１２Ｊａｎ２０、ＢａｒｅｎＪ．Ｐ．ｅｔａｌ．，ＢｒＪＣａｎｃｅｒ．２０１２Ｊｕｎ２６；１０７（１）：１４３－９．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｂｊｃ．２０１２．２３９．Ｅｐｕｂ２０１２Ｊｕｎ７、ＲａｏＶ．Ｈ．ｅｔａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２０１２Ｊｕｎ７；３１（２３）：２８８８－９８．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｏｎｃ．２０１１．４６０．Ｅｐｕｂ２０１１Ｏｃｔ１０；ＫａｎａｋｉｓＤ．ｅｔａｌ．，ＤｉｓＭａｒｋｅｒｓ．２０１３；３４（２）：８１－９１．ｄｏｉ：１０．３２３３／ＤＭＡ－１２０９５３、ＧｅｏｒｇｅｓＳ．ｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ．２０１３Ｊｕｎ；４９（９）：２２５３－６３．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｊｃａ．２０１３．０２．０２０．Ｅｐｕｂ２０１３Ｍａｒ１３、ＣｉｒｅａｐＮ．ｅｔａｌ．，ＰａｔｈｏｌＯｎｃｏｌＲｅｓ．２０１３Ｏｃｔ；１９（４）：７５５－６２．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１２２５３－０１３－９６３９－８．Ｅｐｕｂ２０１３Ｍａｙ６、ＢｉｌｇｉｎＤｏｇｒｕＥ．ｅｔａｌ．，ＴｕｍｏｕｒＢｉｏｌ．２０１４Ｎｏｖ；３５（１１）：１１６４７－５３．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１３２７７－０１４－２５１４－８．Ｅｐｕｂ２０１４Ａｕｇ２０、ＣｈｅｏｎＤ．Ｊ．Ｅｔａｌ．，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１５Ｊｕｌ；３６（７）：７３９－４７．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｃａｒｃｉｎ／ｂｇｖ０５９．Ｅｐｕｂ２０１５Ａｐｒ２９、ＲａｏＶ．Ｈ．ｅｔａｌ．，ＭｏｌＣａｒｃｉｎｏｇ．２０１５Ｏｃｔ；５４（１０）：１０２６－３６．ｄｏｉ：１０．１００２／ｍｃ．２２１７１．Ｅｐｕｂ２０１４Ｍａｙ５、ＬｉＺ．ｅｔａｌ．，ＯｎｃｏｌＲｅｐ．２０１５Ｄｅｃ；３４（６）：３２３１－７、ＬｉｕＧ．ｅｔａｌ．，ＯｎｃｏｌＲｅｐ．２０１６Ｎｏｖ；３６（５）：３００５－３０１３．ｄｏｉ：１０．３８９２／ｏｒ．２０１６．５０６４．Ｅｐｕｂ２０１６Ｓｅｐ５、ＦｒｏｈｌｉｃｈＣ．ｅｔａｌ．，ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００６Ｄｅｃ１５；１２（２４）：７３５９－６８、ＲｏｙＲ．ｅｔａｌ．，ＭｏｌＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２０１７Ｎｏｖ；１５（１１）：１６０８－１６２２．ｄｏｉ：１０．１１５８／１５４１－７７８６．ＭＣＲ－１７－０１８８．Ｅｐｕｂ２０１７Ａｕｇ１、ＸｉｏｎｇＬ．ｅｔａｌ．，ＪＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．２０１８Ｊｕｎ３０；１８２：３４－４４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｐｒｏｔ．２０１８．０４．０３３．Ｅｐｕｂ２０１８Ｍａｙ２、ＶｅｅｎｓｔｒａＶ．Ｌ．ｅｔａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１８Ｎｏｖ１６；７（１１）：８７．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１３８９－０１８－００９６－９）。本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤を使用して、上述のがんのいずれかを治療してもよい。上方制御は、乳がんにおいて特に高く、興味深いことに、ＡＤＡＭ１２は、既知の乳がん抗原であるＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現を誘導することが知られている（Ｎｙｒｅｎ－ＥｒｉｃｋｓｏｎＥ．Ｋ．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ．２０１３Ｏｃｔ；１８３０（１０）：４４４５－５５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂａｇｅｎ．２０１３．０５．０１１．Ｅｐｕｂ２０１３Ｍａｙ１３）。したがって、乳がんは、本発明の好ましい標的疾患の１つである。本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、ＡＤＡＭ１２が上方制御されているか、または病理学的役割を有する任意の他のがんを治療するためにも使用し得る。

ある特定の実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、非がん疾患または状態を治療するために使用し得る。ＡＤＡＭ１２は、多くの他の疾患および状態、例えば、限定されないが、アルツハイマー病、変形性関節症、筋ジストロフィー、多発性硬化症、線維症、心臓肥大症、全身性硬化症における皮膚線維症および間質性肺疾患、腎線維症、末梢動脈疾患、子宮内膜症、ならびにデュピュイトラン病において、上方制御され、および／または病理学的役割を果たす（ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００８；４０（９）：１６８５－７０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｅｌ．２００８．０１．０２５．Ｅｐｕｂ２００８Ｆｅｂ１、ＨａｒｏｌｄＤ．ｅｔａｌ．，ＡｍＪＭｅｄＧｅｎｅｔＢＮｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒＧｅｎｅｔ．２００７Ｊｕｎ５；１４４Ｂ（４）：４４８－５２、ＫｅｒｎａＩ．ｅｔａｌ．，ＲｈｅｕｍａｔｏｌＩｎｔ．２０１２Ｆｅｂ；３２（２）：５１９－２３．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２９６－０１０－１７１７－６．Ｅｐｕｂ２０１１Ｊａｎ２２、ＤｕｌａｕｒｏｙＳ．ｅｔａｌ．，ＮａｔＭｅｄ．２０１２Ａｕｇ；１８（８）：１２６２－７０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．２８４８．Ｅｐｕｂ２０１２Ｊｕｌ２９、ＢｅｒｒｙＥ．ｅｔａｌ．，ＪＶａｓｃＲｅｓ．２０１３；５０（１）：５２－６８．ｄｏｉ：１０．１１５９／０００３４５２４０．Ｅｐｕｂ２０１２Ｎｏｖ１７、ＴａｎｉｇｕｃｈｉＴ．ｅｔａｌ．，ＪＥｕｒＡｃａｄＤｅｒｍａｔｏｌＶｅｎｅｒｅｏｌ．２０１３Ｊｕｎ；２７（６）：７４７－５３．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１４６８－３０８３．２０１２．０４５５８．ｘ．Ｅｐｕｂ２０１２Ａｐｒ２８、ＲａｍｄａｓＶ．ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ．２０１３Ｄｅｃ；１８３（６）：１８８５－１８９６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｊｐａｔｈ．２０１３．０８．０２７．Ｅｐｕｂ２０１３Ｏｃｔ６、ＤｏｋｕｎＡ．Ｏ．ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＨｅａｒｔＣｉｒｃＰｈｙｓｉｏｌ．２０１５Ｓｅｐ；３０９（５）：Ｈ７９０－８０３．ｄｏｉ：１０．１１５２／ａｊｐｈｅａｒｔ．００８０３．２０１４．Ｅｐｕｂ２０１５Ｊｕｌ１０、ＭｉｌｌｅｒＭ．Ａ．ｅｔａｌ．，ＳｃｉＲｅｐ．２０１５Ｏｃｔ１９；５：１５１５０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ１５１５０；ＳｅｄｉｃＭ．ｅｔａｌ．，（２０１２）ＵｓｉｎｇＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＧｅｎｏｍｉｃｓｔｏＩｄｅｎｔｉｆｙＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ：ＡＤｕｐｕｙｔｒｅｎ’ｓＤｉｓｅａｓｅＥｘａｍｐｌｅ．Ｉｎ：ＬａｒｓｏｎＲ．（編集）ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎｄＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ．ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＰｒｏｔｏｃｏｌｓ），ｖｏｌ９１０．ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）。したがって、いくつかの実施形態では、本開示の抗ＡＤＡＭ１２剤および組成物を使用して、アルツハイマー病、変形性関節症、筋ジストロフィー、多発性硬化症、線維症、心臓肥大症、全身性硬化症における皮膚線維症および間質性肺疾患、腎線維症、末梢動脈疾患、子宮内膜症、またはデュピュイトラン病を治療し得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＡＤＡＭ１２剤および組成物は、ＡＤＡＭ１２発現の増加を特徴とする任意の状態の治療に使用し得る。

対象
本明細書で言及される対象は、任意の生体対象であり得る。好ましい実施形態では、対象は、哺乳動物である。本明細書で言及される哺乳動物は、任意の哺乳動物であり得る。本明細書で使用される場合、「哺乳動物」という用語は、限定されないが、Ｒｏｄｅｎｔｉａ目の哺乳動物、例えば、マウスおよびハムスター、およびＬｏｇｏｍｏｒｐｈａ目の哺乳動物、例えば、ウサギを含む、任意の哺乳動物を指す。哺乳動物は、Ｆｅｌｉｎｅ（ネコ）およびＣａｎｉｎｅ（イヌ）を含む、Ｃａｒｎｉｖｏｒａ目からの哺乳動物であり得る。哺乳動物は、Ｂｏｖｉｎｅ（ウシ）およびＳｗｉｎｅ（ブタ）を含むＡｒｔｉｏｄａｃｔｙｌａ目、またはＥｑｕｉｎｅ（ウマ）を含むＰｅｒｓｓｏｄａｃｔｙｌａ目からの哺乳動物であり得る。哺乳動物は、Ｐｒｉｍａｔｅ、Ｃｅｂｏｉｄ、またはＳｉｍｏｉｄ目（サル）、またはＡｎｔｈｒｏｐｏｉｄ目（ヒトおよび類人猿）からの哺乳動物であり得る。

いくつかの実施形態では、Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、ＣＡＲ発現細胞、細胞、細胞集合体、または組成物が投与される対象は、ヒトなどの霊長類である。いくつかの実施形態では、霊長類は、サルまたは類人猿である。対象は、男性または女性であってもよく、乳幼児、若年期、青年期、成人、および老年の対象を含む任意の好適な年齢であり得る。いくつかの例では、患者または対象は、疾患、養子細胞療法、および／またはサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）などの毒性転帰を評価するための検証済み動物モデルである。

いくつかの実施形態では、対象は、例えば、別の免疫療法および／または他の療法での治療後に、持続性または再発性の疾患を有する。いくつかの実施形態では、この投与は、対象が別の療法に対して耐性になったにもかかわらず、対象を効果的に治療する。いくつかの実施形態では、対象は再発していないが、再発の危険性が高いなど、再発の危険性があると判定され、したがって、本化合物または組成物は、予防的に、例えば、再発の可能性を減少させるか、または予防するために投与される。

いくつかの実施形態では、本方法は、対象、組織、または細胞、例えば、ＡＤＡＭ１２に関連する疾患、状態または障害、がん、線維症、自己免疫、心血管状態、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、および炎症性障害を有するもの、それらの危険性があるもの、またはそれらを有する疑いがあるものに対する、Ａｂ、Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ発現細胞、またはかかる抗ＡＤＡＭ１２剤を含む組成物の投与を含む。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ剤および／または組成物は、治療される特定の疾患または状態を有する対象に、例えば、養子Ｔ細胞療法などの養子細胞療法を介して投与される。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、疾患または状態を有するか、またはそれらの危険性がある対象などの対象に投与される。いくつかの態様では、本方法は、それによって、例えば、ＡＤＡＭ１２および／またはＡＤＡＭ１２発現細胞を低減し、阻害し、または不活性化することによって、疾患または状態の１つ以上の症状を治療し、例えば、改善する。

細胞起源
宿主細胞または細胞集合体が投与される抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ療法の方法のために、細胞は、対象に対して異種、同種、または自己由来である細胞であってもよい。

いくつかの実施形態では、細胞療法、例えば、養子細胞療法、例えば、養子Ｔ細胞療法は、細胞が、細胞療法を受ける対象、またはそのような対象に由来する試料から単離され、および／またはそれ以外の方法で調製される、自己移入によって行われる。したがって、いくつかの態様では、細胞は、治療を必要とする対象、例えば、患者に由来し、細胞は、単離および処理の後に、同じ対象に投与される。

いくつかの実施形態では、細胞療法、例えば、養子細胞療法、例えば、養子Ｔ細胞療法は、細胞が、細胞療法を受ける対象、または細胞療法を最終的に受ける対象とは異なる対象（例えば、第１の対象）から単離され、および／またはそれ以外の方法で調製される同種移入によって行われる。このような実施形態では、細胞は、次いで、同じ種の異なる対象、例えば、第２の対象に投与される。いくつかの実施形態では、第１の対象と第２の対象は、遺伝的に同一である。いくつかの実施形態では、第１の対象と第２の対象は、遺伝的に類似している。いくつかの実施形態では、第２の対象は、第１の対象と同じＨＬＡクラスまたはスーパータイプを発現する。

ある特定の実施形態では、細胞がＴ細胞であり、対象に対して自己ではない場合、細胞の内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現が抑制されるか、または妨害される場合がある。ＴＣＲ発現は、任意の適切な技術を介して、例えば、限定されないが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、または人工マイクロＲＮＡなどのツールを使用して内因性ＴＣＲの任意のコンパートメントをサイレンシングすることによって抑制され得る。あるいは、ＴＣＲ遺伝子は、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（例えば、ＴＡＬＥＮ（登録商標））、または亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して、任意の適切な技術を介して破壊または欠失されてもよい。ＴＣＲの抑制または破壊は、ＴＣＲが対象における抗原を外来物として認識し、対象に対する免疫応答、しばしば移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）と呼ばれる免疫攻撃を引き起こす、望ましくない効果の低減または予防を可能にし得る。

ある特定の実施形態では、細胞（ドナー細胞）が対象に対して自己ではない場合、内因性ＭＨＣまたはＨＬＡ遺伝子の発現を抑制または破壊することができ、このことは、限定されないが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、人工マイクロＲＮＡ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（例えば、ＴＡＬＥＮ（登録商標））、または亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用した遺伝子編集などの任意の適切な技術を介して達成され得る。ＭＨＣまたはＨＬＡ遺伝子の抑制または破壊は、対象の内因性Ｔ細胞がドナー細胞のＭＨＣ分子上に提示されるドナー細胞の抗原を外来物として認識し、ドナー細胞に対する免疫応答を引き起こし、対象内で投与される細胞の持続性を増加させる、望ましくない効果の低減または予防を可能にし得る。抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を発現する細胞、またはそれらを含む組成物も対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を発現するＢ細胞または形質細胞は、養子的に転写され得る。

機能的活性
一実施形態では、本発明は、単離された細胞が、ＡＤＡＭ１２に対するＣＡＲを発現するように遺伝子改変され、ＣＡＲ細胞がそれを必要とする対象に注入される、ある種の細胞療法を含む。かかる投与は、疾患または障害の細胞が破壊の標的となるように、標的分子特異的な方法で細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞活性化）を促進することができる。細胞がＴ細胞である場合、ＣＡＲＴ細胞などの細胞は、インビボで複製することができ、ＡＤＡＭ１２、がん、線維化状態、心血管状態、炎症状態、または自己免疫状態に関連する疾患、障害、または状態の持続的制御をもたらし得る長期持続性をもたらす。

一実施形態では、本発明の単離された細胞は、インビボ拡張を受けることができ、長時間にわたって持続することができる。別の実施形態では、単離された細胞がＴ細胞である場合、本発明の単離されたＴ細胞は、任意のさらなる標的分子発現細胞の成長を阻害するために再活性化され得る特異的なメモリーＴ細胞に進化する。Ｔ細胞は、遭遇時にインビボでセントラルメモリー様の状態に分化し、その後、代用抗原を発現する標的細胞を除去し得る。同様に、単離された細胞がＢセルである特定の実施形態では、単離されたＢ細胞は、任意の追加の標的分子発現細胞の成長を阻害するために再活性化され得るメモリーＢ細胞に進化し得る。

いずれかの特定の理論に拘束されることを望むものではないが、単離された抗ＡＤＡＭ１２剤によって改変された免疫細胞によって誘発される免疫応答は、能動的免疫応答または受動的免疫応答であり得る。加えて、抗ＡＤＡＭ１２剤によって媒介される免疫応答は、抗ＡＤＡＭ１２剤によって改変された免疫細胞が抗ＡＤＡＭ１２剤のＡＢドメインに特異的な免疫応答を誘導する養子免疫療法アプローチの一部であり得る。

ある特定の実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤発現細胞は、任意の数の方法で改変され、その治療有効性または予防有効性が増加する。例えば、抗ＡＤＡＭ１２剤は、リンカーを介して標的部分に直接的にまたは間接的にコンジュゲートされ得る。化合物（例えば、ＣＡＲ）を標的部分にコンジュゲートする実施は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｗａｄｗａｅｔａｌ．，Ｊ．ＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｉｎｇ３：１１１（１９９５）、および米国特許第５，０８７，６１６号を参照されたい。

細胞が対象（例えば、ヒト）に投与されると、いくつかの態様における操作された細胞集合体および／または抗体の生物学的活性は、いくつかの既知の方法のうちのいずれかによって測定される。評価するパラメータには、インビボで（例えば、イメージングによる）、またはエクスビボで（例えば、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメモリーによる）、操作されたＴ細胞もしくは天然Ｔ細胞または他の免疫細胞の抗原への特異的結合が含まれる。ある特定の実施形態では、操作された細胞が標的細胞を破壊する能力は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法、例えば、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，３２（７）：６８９－７０２（２００９）、およびＨｅｒｍａｎｅｔａｌ．Ｊ．ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ，２８５（１）：２５－４０（２００４）に記載される細胞障害毒性アッセイを使用して測定され得る。ある特定の実施形態では、細胞の生物学的活性は、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－６、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＴＮＦ－α、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＦＮ－γ、グランザイムＢ、パーフォリン、ＣＤ１０７ａ、またはＩＬ－２などの特定のメディエーターの発現および／または分泌をアッセイすることによっても測定することができる。

いくつかの態様では、生物学的活性は、疾患症状の減少などの臨床転帰を評価することによって測定される。自己免疫疾患の場合、自己反応性Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＡｂの減少、ならびに炎症の減少は、成功した生物学的活性を表し得る。がんの場合、改善された有効性は、疾患を解決する免疫細胞の腫瘍へのより良い浸潤、腫瘍サイズの低減、または腹水の低減によって示され得る。いくつかの実施形態では、遺伝子発現プロファイルもまた、活性を評価するために調査され得る。

標的細胞
本発明の任意の抗ＡＤＡＭ１２剤によって標的化され得る細胞は、任意のＡＤＡＭ１２発現細胞を含む。標的細胞は、血液またはリンパ循環、および疾患に影響を受ける組織を含む、対象の身体の任意の部分に存在し得る。例えば、標的疾患が固形癌である場合、疾患の影響を受ける組織としては、限定されないが、膀胱、骨、脳、乳房、結腸、直腸、結合組織、食道、真皮、皮下結合組織、ニューロン、扁平上皮細胞、肝臓、肺、表皮、食道、胃、乏突起腫、口腔組織、口腔扁平上皮細胞、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、肺、および甲状腺が挙げられる。あるいは、標的細胞は、血液細胞または造血細胞であってもよい。

好ましくは、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤発現細胞は、ＡＤＡＭ１２が上方制御されるがんを治療するために使用される。特に、本発明の細胞は、乳がん、肺がん、脳がん、胃がん、または皮膚がんの治療に使用され得る。

一般に、ＡＤＡＭ１２に対して陽性である細胞は、既知の方法、例えば、特定の抗体を使用した免疫蛍光またはフローサイトメトリーを介して、または代替的に、標的細胞に対する細胞傷害性を介して特定され得る。標的細胞を認識する能力および抗原特異性について抗ＡＤＡＭ１２剤を試験する方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｃｌａｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６３：５０７－５１３（１９９９）は、サイトカイン（例えば、インターフェロンγ、顆粒球／単球コロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、またはインターロイキン２（ＩＬ－２））の放出を測定する方法を教示する。加えて、ＣＡＲ機能は、Ｚｈａｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７４：４４１５－４４２３（２００５）に記載されるように、細胞の細胞障害毒性の測定によって評価することができる。

生検は、個体から組織および／または細胞を除去することである。そのような除去は、除去された組織および／または細胞に対して実験を行うために、個体から組織および／または細胞を収集するためのものであってよい。この実験は、個体が特定の状態または疾患状態を有するか、および／またはそれらを患っているかを判定する実験を含み得る。状態または疾患は、例えば、がんであってもよい。宿主における抗ＡＤＡＭ１２剤を発現する細胞の存在の検出に関して、宿主の細胞を含む試料は、全細胞、その溶解物、または全細胞溶解物の画分、例えば、核画分または細胞質画分、全タンパク質画分、または核酸画分を含む試料であり得る。試料が全細胞を含む場合、細胞は、宿主の任意の細胞、例えば、血液細胞または内皮細胞を含む任意の臓器または組織の細胞であり得る。

薬学的組成物
本発明の組成物は、局所治療が所望されるか、または全身治療が所望されるかに応じて、いくつかの方法で投与され得る。

一般に、投与は、局所投与、非経口投与、または経腸投与であってもよい。

本明細書で使用される場合、薬学的組成物の「非経口投与」には、対象の組織の物理的突破を特徴とする任意の投与経路と、組織内の突破を通じた薬学的組成物の投与とが含まれ、したがって、一般に、血流内、筋肉内、または内臓内への直接投与をもたらす。したがって、非経口投与には、限定されないが、組成物の注射による、外科的切開による組成物の適用による、組織浸透性の非外科的創傷による組成物の適用などによる、薬学的組成物の投与が含まれる。特に、非経口投与には、限定されないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸腔内、静脈内、動脈内、髄腔内、心室内、尿道内、頭蓋内、滑液内注射または注入、ならびに腎臓透析注入技術を含むことが企図される。好ましい実施形態では、本発明の組成物の非経口投与は、皮下投与または腹腔内投与を含む。

「経口」、「腸の」、「経腸的に」、「経口的に」、「非非経口」、「非非経口的に」などの用語は、消化管に沿った経路または態様による個体への化合物または組成物の投与を指す。組成物の「経口」投与経路の例としては、限定されないが、口から液体または固体形態の組成物を飲み込むこと、経鼻空腸管または胃瘻管を介した組成物の投与、組成物の十二指腸内投与、および直腸投与、例えば、消化管の下部腸管のための坐剤を使用することを含む。

本発明の組成物は、局所投与、非経口投与、または経腸投与に好適であり得る。

好ましくは、Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ、それをコードするポリヌクレオチドもしくはベクター、またはそれを発現する細胞を含む製剤化された組成物は、非経口投与、例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、または静脈内注射を介して投与するのに好適である。

非経口投与に好適な薬学的組成物の製剤は、典型的には、滅菌水または滅菌等張食塩水などの薬学的に許容される担体と組み合わせた有効成分を一般に含む。かかる製剤は、ボーラス投与または連続投与に好適な形態で調製され、包装され、または販売され得る。注射可能な製剤は、アンプルまたは防腐剤を含有する複数回投与容器などの単位剤形で調製され、包装され、または販売され得る。非経口投与のための製剤としては、限定されないが、懸濁液、溶液、油性または水性ビヒクル中のエマルション、ペーストなどが挙げられる。かかる製剤は、懸濁剤、安定化剤、または分散剤を含むがこれらに限定されない１つ以上の追加の成分をさらに含んでもよい。非経口投与のための製剤の一実施形態では、活性成分は、再構築された組成物の非経口投与の前に、好適なビヒクル（例えば、滅菌の発熱物質を含まない水）で再構築するための乾燥（すなわち、粉末または顆粒状）形態で提供される。非経口製剤には、塩類、炭水化物および緩衝剤（好ましくは３～９までのｐＨ）などの賦形剤を含有し得る水溶液も含まれるが、いくつかの用途のために、それらの製剤は、滅菌非水溶液として、または滅菌された、発熱物質を含まない水などの好適なビヒクルと併用される乾燥形態として、より好適に製剤化され得る。例示的な非経口投与形態として、滅菌水溶液の溶液または懸濁液、例えば、プロピレングリコールまたはデキストロース水溶液が挙げられる。かかる投与形態は、所望の場合、好適に緩衝化され得る。有用である他の非経口投与可能な製剤には、微結晶形態で、またはリポソーム調製物に活性成分を含むものが含まれる。非経口投与のための製剤は、即時放出および／または修飾放出であるように製剤化され得る。改変放出製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的放出およびプログラム放出が含まれる。そのような製剤は、例えば、限定されないが、エチレン酢酸ビニル、ポリ（アルキルシアノアクリレート）、ポリ（無水物）、ポリ（アミンデス）（ｐｏｌｙ（ａｍｉｎｄｅｓ））、ポリ（エステル）、ポリ（エステルアミンデス）（ｐｏｌｙ（ｅｓｔｅｒａｍｉｎｄｅｓ））、ポリ（ホスホエステル）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸－コ－グリコリド酸）（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｃａｃｉｄ））（ＰＬＡＧＡ）、または天然に存在する生分解性ポリマー、例えば、キトサンおよびヒアルロン酸系ポリマーなどの生分解性生体適合性ポリマーから作製され得る（ＫａｍａｌｙＮ．ｅｔａｌ，ＣｈｅｍＲｅｖ．Ａｕｔｈｏｒｍａｎｕｓｃｒｉｐｔ、ＰＭＣ２０１７Ｊｕｌ１３で入手可能）。

局所投与用の薬学的組成物および製剤は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液体、半固体、単相組成物、多相組成物（例えば、水中油、油中水）、フォーム、マイクロスポンジ、リポソーム、ナノエマルション、エアロゾルフォーム、ポリマー、フラーレン、および粉末を含み得る。従来の薬学的担体、水性、粉末または油性の基剤、増粘剤などが必要な場合があるか、または望ましい場合がある。

非経口、髄腔内、または心室内投与用の組成物および製剤は、緩衝液、希釈剤、ならびに限定されないが、浸透促進剤、カーダー化合物、ならびに他の薬学的に許容される担体または賦形剤などであるがこれらに限定されない他の好適な添加剤も含み得る滅菌水溶液を含み得る。

経口投与のための組成物および製剤には、粉末または顆粒、水または非水性媒体中の懸濁液または溶液、カプセル、小袋または錠剤が含まれる。増粘剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤または結合剤が望ましい場合がある。

本発明の薬学的組成物には、溶液、エマルション、およびリポソーム含有製剤が含まれるが、これらに限定されない。これらの組成物は、限定されないが、予め形成された液体、自己乳化固体、および自己乳化半固体を含む様々な構成要素から生成され得る。

簡便に単位剤形で提示され得る本発明の薬学的組成物は、製薬業界で既知の従来技術に従って調製され得る。このような技術には、活性成分を薬学的担体または賦形剤と会合させるステップが含まれる。一般に、製剤は、活性成分を液体担体または細かく分割された固体担体またはその両方と均一かつ密接に会合させ、次いで必要に応じて、製品を成形することにより調製される。

本発明の組成物は、活性成分の適切なインビボ分布を提供するように製剤化されてもよい。多くの場合、腫瘍部位における抗腫瘍薬物の分布を濃縮することは困難であり、薬物ががん細胞によって発現される分子に対して特異性を有する場合であっても、同じであり得る。この問題に対処するために様々な戦略が開発されており、任意の適切な戦略が本発明に適用され得る（例えば、ＲｏｓｅｎｂｌｕｍＤ．ｅｔａｌ．，ＮａｔＣｏｍｍｕｎ．２０１８Ａｐｒ１２；９（１）：１４１０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１４６７－０１８－０３７０５－ｙに概説される）。薬物を脳に送達するには、薬物は血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する必要がある。ＢＢＢの通過を可能にする任意の適切な戦略は、薬剤の抗ＡＤＡＭ１２剤のいずれかの送達のために利用され得る（例えば、例示的な戦略については、ＤｏｎｇＸ．ｅｔａｌ．，Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１８；８（６）：１４８１－１４９３を参照されたい）。

本発明の組成物は、錠剤、カプセル剤、液体シロップ剤、軟質ゲル剤、坐剤、エアロゾル剤、および浣腸剤などであるがこれらに限定されない多くの可能な剤形のうちのいずれかに製剤化され得る。本発明の組成物はまた、水性、非水性、または混合媒体中の懸濁液として製剤化してもよい。水性懸濁液は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランを含む、懸濁液の粘度を増加させる物質をさらに含有し得る。懸濁液はまた、安定化剤を含有し得る。

本発明の一実施形態では、薬学的組成物は、フォームとして製剤化され、使用され得る。薬学的フォームは、エマルション、マイクロエマルション、クリーム、ゼリー、およびリポソームなどの製剤を含むがこれらに限定されない。これらの製剤は、基本的に類似した性質を有するが、成分および最終生成物の一貫性が異なる。細胞レベルでのオリゴヌクレオチドの取り込みを増強する薬剤も、本発明の薬学的組成物および他の組成物に添加され得る。例えば、カチオン性脂質、例えば、リポフェクチン（米国特許第５，７０５，１８８号）、カチオン性グリセロール誘導体、およびポリカチオン性分子、例えば、ポリリジン（ＷＯ９７／３０７３１）もまた、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増強する。

本発明の組成物は、追加的に、薬学的組成物中に従来から見出される他の補助成分を含有し得る。したがって、例えば、組成物は、例えば、鎮痒剤、収斂剤、局所麻酔剤または消炎剤などの追加の適合性の薬学的活性材料を含有してもよく、または例えば、染料、香味剤、防腐剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤、および安定化剤などの本発明の組成物の様々な剤形の物理的製剤化に有用な追加の材料を含有してもよい。しかしながら、かかる材料は、添加されるとき、本発明の組成物の構成要素の生物学的活性を不当に妨げるべきではない。製剤は、滅菌することができ、所望の場合、製剤の核酸と有害に相互作用しない補助剤、例えば、滑沢剤、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝液、着色剤、香料および／または芳香族物質などと混合し得る。

本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤のいずれかまたは本発明の抗ＡＤＡＭＣＡＲなどの抗ＡＤＡＭ１２剤のいずれかを発現する細胞の集合体を含む製剤は、薬学的に許容される賦形剤を含み得る。製剤に含まれる賦形剤は、例えば、ＣＡＲ構築物、使用される細胞の亜集合体、および投与態様に応じて、異なる目的を有する。一般的に使用される賦形剤の例としては、限定されないが、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、感染用水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせ、安定化剤、可溶化剤および界面活性剤、緩衝液および防腐剤、等張化剤、増量剤、および滑沢剤が挙げられる。本発明のＣＡＲ発現細胞の集合体を含む製剤は、典型的には、動物血清（例えば、ウシ血清アルブミン）などの任意の非ヒト構成要素が存在しない状態で調製され、培養されたであろう。

製剤または組成物は、結合分子または細胞で治療される特定の適応症、疾患、または状態に有用な複数の活性成分、好ましくは結合分子または細胞に相補的な活性を有するものを含有してもよく、それぞれの活性は互いに悪影響を及ぼさない。かかる活性成分は、意図する目的に効果的な量で組み合わせて存在するのが好適である。したがって、いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、他の薬学的に活性な薬剤または薬物をさらに含む。このような薬剤または薬物は、限定されないが、抗がん性薬物、抗増殖性薬物、細胞傷害性薬物、抗血管新生薬物、アポトーシス薬物、免疫刺激薬物、抗菌薬物、抗生物質薬物、抗ウイルス薬物、抗炎症性薬物、抗線維化薬物、免疫抑制薬物、ステロイド、気管支拡張剤、β遮断薬、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、ＡＤＡＭ１２阻害剤、ＡＤＡＭ１２シグナル伝達阻害剤、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤、酵素、ホルモン、神経伝達物質、毒素、化合物、小分子、小分子阻害剤、タンパク質、ペプチド、ベクター、プラスミド、ウイルス粒子、ナノ粒子、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、またはイメージング薬物であり得る。具体的な例は、例えば、限定されないが、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンなどである。

いくつかの態様では、薬学的組成物は、組成物の送達が治療される部位の感作の前に、かつ十分な時間で行われるように、時間放出、遅延放出、および持続放出送達系を用いることができる。多くの種類の放出送達系が利用可能であり、既知である。そのような系は、組成物の反復投与を回避し、それによって対象および医師への利便性を増加させることができる。

キット
本明細書ではまた、（ａ）抗ＡＤＡＭ１２剤（Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、ＣＡＲ）、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードするベクター、それを発現する細胞のうちの１つ以上と、（ｂ）例えば、ＡＤＡＭ１２に関連する疾患または状態の治療または診断における使用のための説明書と、を含むキットも提供する。本キットは、キットの内容物の意図された使用を示すラベルを含み得る。本明細書で使用される「ラベル」という用語は、キットに供給されるか、キットとともに供給されるか、キット内に供給されるか、またはキットに添付される、任意の書面による資料、マーケティング資料、または記録された資料を含む。

投与方法
本発明の方法で使用される投与経路は、局所治療が所望されるか、または全身治療が所望されるかに応じて、任意の適切な経路であり得る。

好ましくは、Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ、またはそれをコードするポリヌクレオチドもしくはベクター、それを発現する細胞を含む製剤化された組成物は、非経口で、例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、または静脈内注射を介して投与され得る。

養子細胞療法の場合、養子細胞療法のための細胞の投与方法が知られており、提供される方法および組成物に関連して使用され得る。例えば、養子Ｔ細胞療法方法は、例えば、Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇｅｔａｌに対する米国特許出願公開第２００３／０１７０２３８号、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇに対する米国特許第４，６９０，９１５号、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（２０１１）ＮａｔＲｅｖＣｌｉｎＯｎｃｏｌ．８（１０）：５７７－８５）に記載される。例えば、Ｔｈｅｍｅｌｉｅｔａｌ．（２０１３）ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１（１０）：９２８－９３３、Ｔｓｕｋａｈａｒａｅｔａｌ．（２０１３）ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ４３８（１）：８４－９、Ｄａｖｉｌａｅｔａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳＯＮＥ８（４）：ｅ６１３３８を参照されたい。

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、任意の適切な医療デバイスを使用して投与され得る（例えば、ＲｉｃｈｔｅｒＢ．Ｂ．，Ｊ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１８）３２：４２５に概説される）。

投薬量
本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤および組成物のいずれかの投与に関して、投薬量は様々であり、例えば、標的疾患、疾患の重症度、投与経路、および薬物動態因子に依存する。投薬量は、対象において観察される応答に基づいて修正され得る。

抗ＡＤＡＭ１２Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＤＣ、またはそれを含む組成物のいずれかの投与について、適切な投薬レジメンは、任意の適切な方法論を使用して決定され得る（例えば、ＢａｉＳ．ｅｔａｌ．，ＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．２０１２Ｆｅｂ１；５１（２）：１１９－３５．ｄｏｉ：１０．２１６５／１１５９６３７０－０００００００００－０００００）。

いくつかの実施形態では、投薬量は、１日あたり約１ｎｇ／ｋｇ～約１ｇ／ｋｇ（対象の体重の）であり得る。いくつかの態様では、用量は、約１０ｎｇ／ｋｇ／日～約９００ｍｇ／ｋｇ／日、約２０ｎｇ／ｋｇ／日～約８００ｍｇ／ｋｇ／日、約３０ｎｇ／ｋｇ／日～約８００ｍｇ／ｋｇ／日、約４０ｎｇ／ｋｇ／日～約７００ｍｇ／ｋｇ／日、約５０ｎｇ／ｋｇ／日～約６００ｍｇ／ｋｇ／日、約６０ｎｇ／ｋｇ／日～約５００ｍｇ／ｋｇ／日、約７０ｎｇ／ｋｇ／日～約４００ｍｇ／ｋｇ／日、約８０ｎｇ／ｋｇ／日～約３００ｍｇ／ｋｇ／日、約９０ｎｇ／ｋｇ／日～約２００ｍｇ／ｋｇ／日、または約１００ｎｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日であり得る。治療は、数日間、数ヶ月間、または数年間、または所望の効果が達成されるまで、対象に繰り返しまたは定期的に行われてもよい。例示的な投薬レジメンは、抗ＡＤＡＭ１２Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＤＣの初回用量を約２ｍｇ／ｋｇ、続いて約１ｍｇ／ｋｇの維持用量を週に１回投与することを含む。

投薬頻度は、例えば、１日に３回、１日に２回、１日に１回、隔日に１回、週に１回、隔週に１回、３週に１回、４週に１回、５週に１回、６週に１回、７週に１回、８週に１回、９週に１回、１０週に１回、３か月に１回、４か月に１回、６か月に１回、年に１回、またはそれ以下の頻度であり得る。

いくつかの実施形態における薬学的組成物は、疾患または状態を治療または予防するのに有効な量、例えば、治療有効量または予防有効量で本発明のＣＡＲを発現する細胞を含有する。いくつかの実施形態では、治療有効性または予防有効性は、治療される対象の定期的評価によって監視される。数日間以上にわたる反復投与については、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が発生するまで治療を繰り返す。しかしながら、他の投薬レジメンが有用な場合もあり、決定することができる。所望の投薬量は、組成物の単回ボーラス投与によって、組成物の複数回ボーラス投与によって、または組成物の連続注入投与によって送達され得る。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲなどの抗ＡＤＡＭ１２剤を発現する遺伝子操作された細胞の文脈において、対象に、例えば、約１００万～約１０００億個の細胞の範囲、例えば、１００万～約５００億個の細胞（例えば、約５００万個の細胞、約２５００万個の細胞、約５０００万個の細胞、約１０億個の細胞、約５０億個の細胞、約２００億個の細胞、約３００億個の細胞、約４００億個の細胞、または前述の値のうちの任意の２つによって定義される範囲）、例えば、約１０００万～約１兆個の細胞（例えば、約２０００万個の細胞、約３０００万個の細胞、約４０００万個の細胞、約６０００万個の細胞、約７０００万個の細胞、約８０００万個の細胞、約９０００万個の細胞、約１００億個の細胞、約２５０億個の細胞、約５００億個の細胞、約７５０億個の細胞、約９００億個、または前述の値のうちの任意の２つによって定義される範囲）、場合によっては、約１億個の細胞～約５００億個の細胞（例えば、約１．２億個の細胞、約２．５億個の細胞、約３．５億個の細胞、約４．５億個の細胞、約６．５億個の細胞、約８億個の細胞、約９億個の細胞、約３０億個の細胞、約３００億個の細胞、約４５０億個の細胞）、またはこれらの範囲の間の任意の値、および／または対象の体重１キログラムあたりのそのような細胞数を投与する。例えば、いくつかの実施形態では、細胞または細胞集合体の投与は、体重１ｋｇあたり約１０３～約１０９個の細胞の投与を含むことができ、これらの範囲内の細胞数のすべての整数値を含む。

細胞または細胞の集合体は、１回以上の用量で投与することができる。いくつかの実施形態では、上述の有効量の細胞は、単回用量として投与され得る。いくつかの実施形態では、上述の有効量の細胞は、ある期間にわたって２回以上の用量として投与され得る。投与のタイミングは、主治医の判断の範囲内であり、患者の臨床状態に依存する。細胞または細胞の集合体は、血液バンクまたはドナーなどの任意の供給源から得てもよい。個々の必要性は変化するが、特定の疾患または状態に対する所与の細胞型の有効量の最適範囲の決定は、当該技術分野の範囲内である。有効量は、治療的利益または予防的利益を提供する量を意味する。投与される投薬量は、レシピエントの年齢、健康状態および体重、もしあれば同時治療の種類、治療の頻度および所望の効果の性質に依存するであろう。いくつかの実施形態では、有効量の細胞またはそれらの細胞を含む組成物は、非経口投与される。いくつかの実施形態では、投与は、静脈内投与であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、疾患部位への注射によって直接的に行われ得る。

本発明の目的のために、投与される本発明の抗ＡＤＡＭ１２材料の量または用量は、合理的な時間枠にわたって対象または動物において治療応答または予防応答をもたらすのに十分でなければならない。例えば、本発明の抗ＡＤＡＭ１２材料の用量は、投与時から約２時間以上、例えば、約１２～約２４時間以上の期間で、抗原に結合するか、または疾患を検出、治療、または予防するのに十分であるべきである。ある特定の実施形態では、この期間は、さらに長くなり得る。用量は、特定の本発明の抗ＡＤＡＭ１２材料の有効性および動物（例えば、ヒト）の状態、ならびに治療される動物（例えば、ヒト）の体重によって決定されるであろう。

本発明の目的のために、例えば、標的細胞が溶解される程度、またはＣＡＲの文脈において、各々異なる用量のＴ細胞が与えられる一連の哺乳動物の中で、ＩＦＮ－γが、所与の用量のＴ細胞を哺乳動物に投与した際に、本発明のＣＡＲ、ポリペプチド、またはタンパク質を発現するＴ細胞によって分泌される程度を比較することを含むアッセイを使用して、哺乳動物に投与される開始用量を決定することができる。特定の用量の投与時に標的細胞が溶解されるか、またはＩＦＮ－γが分泌される程度は、当該技術分野で既知の方法によってアッセイすることができる。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物のうちの２つ以上を、組み合わせて、または別々に対象に投与してもよい。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、抗体または操作された細胞または受容体または薬剤などの別の治療的介入と同時に、または任意の順序で連続的に、細胞障害性薬剤または治療薬剤などの併用治療の一部として投与される。いくつかの実施形態における細胞または抗体は、１つ以上の追加の治療薬剤とともに、または別の治療的介入と組み合わせて、同時に、または任意の順序で連続的に共投与される。いくつかの文脈では、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物は、抗ＡＤＡＭ１２剤または組成物が１つ以上の追加の治療薬剤の効果を増強するように、またはその逆も同様になるように、時間的に十分に近い別の療法と同時に投与される。いくつかの実施形態では、細胞または抗体は、１つ以上の追加の治療薬剤の前に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＡＤＡＭ１２剤、例えば、抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲＴ細胞または抗体は、１つ以上の追加の治療薬剤の後に投与される。さらに、本発明の組成物は、手術または放射線療法であり得る他の療法のうちの１つ以上とともに、対象に与えられ得る。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲＴ療法において、リンパ枯渇化学療法は、ＣＡＲ細胞の投与（例えば、注入）の前に、投与と同時に、または投与の後に対象に投与される。一実施例では、リンパ枯渇化学療法は、細胞の投与前に対象に投与される。例えば、リンパ枯渇化学療法は、ＣＡＲ細胞注入の１～４日（例えば、１、２、３、または４日）前に終了する。複数の実施形態では、複数回用量のＣＡＲ細胞を、例えば、本明細書に記載のように投与する。複数の実施形態では、リンパ枯渇化学療法は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入）の前に、投与と同時に、または投与の後に対象に投与される。リンパ枯渇の例としては、限定され得ないが、骨髄非破壊的リンパ枯渇化学療法、骨髄破壊的リンパ枯渇化学療法、全身照射などが挙げられる。リンパ枯渇剤の例としては、限定されないが、抗胸腺細胞グロブリン、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＤ２抗体、ＴＣＲαβ遮断薬、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、ボルテゾミブ、リツキシマブ、抗ＣＤ１５４抗体、ラパマイシン、ＣＤ３免疫毒素、フルダラビン、シクロホスファミド、ブスルファン、メルファラン、マブセラ、タクロリムス、アレファセプト、アレムツズマブ、ＯＫＴ３、ＯＫＴ４、ＯＫＴ８、ＯＫＴ１１、フィンゴリモド、抗ＣＤ４０抗体、抗ＢＲ３抗体、Ｃａｍｐａｔｈ－１Ｈ、抗ＣＤ２５抗体、カルシニューリン阻害剤、ミコフェノレート、およびステロイドが挙げられ、これらは単独で使用されてもよく、または組み合わせて使用されてもよい。

診断ツールとしての使用
本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤、例えば、抗ＡＤＡＭ１２Ａｂおよび抗原結合Ａｂ断片は、インビボ、エクスビボ、またはインビトロで使用され得る診断ツールとしても有用であり得る。

例えば、イメージング剤にコンジュゲートされた抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を、患者の疾患細胞または組織がＡＤＡＭ１２を発現するかどうかを試験するために対象または患者に投与してもよい。診断は、イメージング剤を検出することができる任意のイメージングツールを使用して行われ得る。あるいは、限定されないが、血液試料または生検試料などの生体試料を得てもよく、抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片を試料に適用して、ＡＤＡＭ１２の発現を試験してもよい。

これらの試験は、対象、または対象の細胞もしくは組織がＡＤＡＭ１２を発現するか否かを判定し得る。いくつかの実施形態では、試験は、対象、または対象の細胞もしくは組織が、本発明の抗ＡＤＡＭ１２治療薬剤によって標的化されるのに十分な量のＡＤＡＭ１２を発現するかどうかを判定し得る。いくつかの実施形態では、試験は、患者を異なるレベルのＡＤＡＭ１２発現に分類し得る。一態様では、対象は、発現者または非発現者として分類され得る。別の態様では、対象は、過剰発現者、中間発現者、または低発現者に分類され得る。

いくつかの実施形態では、適切な治療的アプローチは、ＡＤＡＭ１２発現に応じて決定され得る。発現は、本明細書に記載の本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤を使用して、または代替的に、任意の適切な方法を使用して、例えば、限定されないが、ＲＮＡ発現レベルを測定することによって、または適切なツールおよび／または技術を使用してＡＤＡＭ１２タンパク質レベルを定量することによって、決定され得る。一態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、発現者に与えられるが、非発現者には与えられない場合がある。別の態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、過剰発現者に与えられるが、中間発現者または低発現者には与えられない場合がある。別の態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、過剰発現者または中間発現者に与えられるが、低発現者には与えられない場合がある。さらに別の態様では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤は、中間発現者に与えられるが、高発現者または低発現者には与えられない場合がある。

変形例
本発明の範囲には、本明細書に記載の本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤の機能的部分が含まれる。「機能的部分」という用語は、Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲに関して使用される場合、本発明のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲのいずれかの部分または断片であって、その部分または断片が、その一部（親）であるＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲの生物学的活性を保持する、部分または断片を指す。機能的部分は、例えば、親と同様の程度、同じ程度、またはより高い程度まで、標的細胞を認識する能力、または疾患を検出、治療、もしくは予防する能力を保持する、Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲのそれらの部分を包含する。親Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲに関して、機能的部分は、例えば、親の約１０％、２５％、３０％、５０％、６８％、８０％、９０％、９５％、またはそれより多くを含み得る。

機能的部分は、その部分のアミノ末端もしくはカルボキシ末端に、または両方の末端に追加のアミノ酸を含むことができ、これらの追加のアミノ酸は、親Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲのアミノ酸配列には見られない。望ましくは、追加のアミノ酸は、例えば、標的細胞を認識する、線維症および／または炎症を検出する、治療する、または予防するなどの機能的部分の生物学的機能を妨げない。より望ましくは、追加のアミノ酸は、親Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲの生物学的活性と比較して、生物学的活性を増強する。

本発明の範囲には、本明細書に記載の本発明のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲの機能的バリアントが含まれる。本明細書で使用される「機能的バリアント」という用語は、Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲポリペプチド、または、その機能的バリアントが、そのバリアントであるＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲの生物学的活性を保持する親と実質的または顕著な配列同一性または類似性を有するタンパク質を指す。機能的バリアントは、例えば、本明細書に記載されるＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ（親）のバリアントであって、親と同様の程度、同一の程度、またはより高い程度まで標的細胞を認識する能力を保持するバリアントを包含する。親Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲに関して、機能的バリアントは、例えば、親に対するアミノ酸配列と少なくとも約３０％、５０％、７５％、８０％、９０％、９８％またはそれ以上同一であり得る。

機能的バリアントは、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親のアミノ酸配列を含み得る。代替的に、または追加的に、機能的バリアントは、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換は、機能的バリアントの生物学的活性を妨げたり阻害したりしないことが好ましい。非保存的アミノ酸置換は、機能的バリアントの生物学的活性が親と比較して増加するように、機能的バリアントの生物学的活性を増強し得る。

本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤のアミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野で既知であり、特定の物理的特性および／または化学的特性を有する１つのアミノ酸が、同じまたは類似の化学的特性または物理的特性を有する別のアミノ酸と交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性／負に帯電した極性アミノ酸（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕ）に置換された酸性／負に帯電した極性アミノ酸、非極性側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌなど）に置換された非極性側鎖を有するアミノ酸、別の塩基性／正に帯電した極性アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇなど）に置換された塩基性／正に帯電した極性アミノ酸、極性側鎖を有する別の非帯電アミノ酸（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）に置換された極性側鎖を有する非帯電アミノ酸、β分岐側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、およびＶａｌ）に置換されたβ分岐側鎖を有するアミノ酸、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、およびＴｙｒなど）に置換された芳香族側鎖を有するアミノ酸などであり得る。

また、アミノ酸は、ベクター設計に基づいて配列から付加または除去され得る。

抗ＡＤＡＭ１２剤は、他の構成要素、例えば、他のアミノ酸が、機能的バリアントの生物学的活性を実質的に変化させないように、本明細書に記載される特定のアミノ酸配列または複数の配列から本質的になることができる。

本発明の実施形態のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ（機能的部分および機能的バリアントを含む）は、任意の長さを有することができ、すなわち、任意の数のアミノ酸を含むことができるが、ただし、Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ（またはその機能的部分および機能的バリアント）は、それらの生物学的活性、例えば、抗原に特異的に結合する能力、哺乳動物において疾患細胞を検出する能力、または哺乳動物における疾患を治療もしくは予防する能力などを保持する。例えば、Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲは、約５０～約５０００アミノ酸長、例えば、５０、７０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、またはそれ以上のアミノ酸長であり得る。

本発明の実施形態のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ（本発明の機能的部分および機能的バリアントを含む）は、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含み得る。そのような合成アミノ酸は、当該技術分野で既知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－およびトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリン、β－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’、Ｎ’－ビベンジル－リジン、６－ヒドロキシリシン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロパン酸、ホモフェニルアラニン、およびα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。

本発明の実施形態のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ（機能的部分および機能的バリアントを含む）は、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ－アシル化、例えばジスルフィド架橋を介して環化されるか、または酸付加塩に変換されるか、および／または任意選択で二量体化もしくは重合されるか、またはコンジュゲート化され得る。

本発明の実施形態のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ（その機能的部分および機能的バリアントを含む）は、当該技術分野で知られている方法によって得ることができる。Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、およびＣＡＲは、ポリペプチドまたはタンパク質を作製するための任意の好適な方法によって作製され得る。ポリペプチドおよびタンパク質をデノボ合成する好適な方法は、Ｃｈａｎｅｔａｌ．，“ＦｍｏｃＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵｎｉｔｅｄＫｉｎｇｄｏｍ，２０００、“ＰｅｐｔｉｄｅａｎｄＰｒｏｔｅｉｎＤｒｕｇＡｎａｌｙｓｉｓ”，ｅｄ．Ｒｅｉｄ，Ｒ．，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００、“ＥｐｉｔｏｐｅＭａｐｐｉｎｇ”，ｅｄ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄｅｔａｌ．，“ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵｎｉｔｅｄＫｉｎｇｄｏｍ，２００１、および米国特許第５，４４９，７５２号などの参考文献に記載される。また、ポリペプチドおよびタンパク質は、標準的な組換え方法を使用して、本明細書に記載の核酸を使用して組換え産生することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，“ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ”，３ｒｄｅｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１、およびＡｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，“ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ”，ＧｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓａｎｄＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４を参照されたい。さらに、本発明のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＣＡＲ（その機能的部分および機能的バリアントを含む）のいくつかは、植物、細菌、昆虫、哺乳動物、例えば、ラット、ヒトなどの供給源から単離および／または精製することができる。単離および精製方法は、当該技術分野で既知である。あるいは、本明細書に記載のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲ（その機能的部分および機能的バリアントを含む）は、企業によって商業的に合成され得る。この点で、本発明のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、ＡＤＣ、またはＣＡＲは、合成され、組換られ、単離され、および／または精製され得る。

定義
本発明の様々な実施形態および実施例は、特定の分子、組成物、方法、またはプロトコルを参照して記載されているが、本発明は、これらが変化し得るため、本明細書に記載される特定の分子、組成物、方法、またはプロトコルに限定されないことが理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定の態様または実施形態を説明するためだけのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されたい。

特許文献および非特許文献を含む本明細書で引用されるすべての参考文献は、それらの全体において参照により本明細書に組み込まれる。本明細書におけるいかなるものも、本発明が、先行発明のためにそのような開示に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。

上の明細書および添付の特許請求の範囲において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「伴う（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「～から構成される」等のすべての移行句は、オープンエンドであること、すなわち、含むが、それらに限定されないことを意味することを理解されたい。「～からなる」および「～から本質的になる」という移行句のみは、それぞれ、クローズドまたは半分クローズドの移行句であるものとする。

また、文脈上別段の指示がない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、複数の参照物も含むことに留意されたい。したがって、「細胞（ａｃｅｌｌ）」との言及は、当業者に既知の１つ以上の細胞およびその等価物などを指す。別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

別途明確に示されない限り、２つ以上のステップを含む本明細書に開示または請求される任意の方法において、実行されるステップの順序は、引用されるステップの順序によって制限されないことが理解されるべきである。

本明細書で使用される「４－１ＢＢ」、「４１ＢＢ」、または「ＢＢ」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ５３１３３．１として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有するＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指す。一態様では、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、「４－１ＢＢＣＳドメイン」または「４１ＢＢＣＳ」とも呼ばれ、４－１ＢＢの細胞質ドメインに由来し得る。いくつかの実施形態では、「４１ＢＢＣＳ」は、配列番号１６５として提供される配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を含む。いくつかの実施形態では、「４１ＢＢＣＳ」は、配列番号２６５として提供される核酸配列によってコードされ得る。

本明細書で使用される「５’キャップ」との用語（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７－メチルグアノシンキャップまたはＲＮＡｍ７Ｇキャップとも称される）は、転写開始の直後に真核生物のメッセンジャーＲＮＡの「フロント」または５’末端に付加された、改変されたグアニンヌクレオチドである。５’キャップは、第１の転写ヌクレオチドに連結された末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識およびＲＮａｓｅからの保護にとって重要である。キャップ付加は、転写に結合し、共転写的に起こり、その結果、それぞれが他と影響する。転写開始の直後、合成されるｍＲＮＡの５’末端は、ＲＮＡポリメラーゼと会合するキャップ合成複合体によって結合される。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、複数ステップの生化学反応として進行する。キャッピング部分を改変し、ｍＲＮＡの機能性、例えばその安定性または翻訳効率などを調節することができる。

重量、質量、体積、濃度、または時間などの数値を指すときに本明細書で使用される「約」または「およそ」という用語は、列挙された数値に限定されるべきではなく、所与の値の＋／－１０％の変動を包含する。

本明細書で使用される「ＡＤＡＭ１２」は、ＡＤＡＭメタロペプチダーゼドメイン１２、ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼ－１２、ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質１２、ＡＤＡＭ１２－ＯＴ１、ＣＡＲ１０、ＭＣＭＰ、ＭＣＭＰＭｌｔｎａ、Ｍｅｌｔｒｉｎ－ａ、ＭＬＴＮ、またはＭＬＴＮＡとしても知られ、ＡＤＡＭファミリー（ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼファミリー）のメンバーである。ヒトにおいて、ＡＤＡＭ１２は、１０番染色体上のＡＤＡＭ１２遺伝子によってコードされ、遺伝子位置１０ｑ２６．２（ＮＣＢＩ）を有し、ＡＤＡＭ１２－Ｌ（Ｌは長いものに対する）およびＡＤＡＭ１２－Ｓ（Ｓは短いものに対する）と命名された２つの天然に存在するＡＤＡＭ１２スプライスバリアントが存在する（ＫｖｅｉｂｏｒｇＭ．ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２００８；４０（９）：１６８５－７０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｅｌ．２００８．０１．０２５．Ｅｐｕｂ２００８Ｆｅｂ１）。ヒトＡＤＡＭ１２－Ｌは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション：ＡＡＣ０８７０２．２として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有する。一態様では、ヒトＡＤＡＭ１２－Ｌは、配列番号１０１として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有する。ヒトＡＤＡＭ１２－Ｓは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション：ＡＡＣ０８７０３．２として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有する。一態様では、ヒトＡＤＡＭ１２－Ｓは、配列番号１０２として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有する。

本明細書で使用される「同種」という用語は、物質が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の物質を指す。１つ以上の遺伝子座における遺伝子が同一でない場合、２つ以上の個体は、互いに同種であるといわれる。いくつかの態様では、同じ種の個体由来の同種物質は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝的に似ていなくてもよい。

本明細書で使用される「抗体」または「Ａｂ」、または「免疫グロブリン」という用語は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。典型的には、全サイズＡｂは、鎖の２つの対を含み、各対は、重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）とを含む。ＨＣは、典型的には、可変領域と定常領域とを含む。ＬＣも、典型的には、可変領域と定常領域とを含む。重鎖（ＶＨ）の可変領域は、典型的には、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、本明細書ではＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（またはそれぞれＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３と称される）と称される。ＨＣの定常領域は、典型的には、Ａｂのアイソタイプ、Ａｂが結合するＦｃ受容体の種類、およびしたがってＡｂのエフェクター機能を決定する断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）を含む。Ｆｃ受容体の種類としては、限定されないが、ＦｃａＲ（例えば、ＦｃａＲＩ）、Ｆｃａ／ｍＲ、ＦｃｅＲ（例えば、ＦｃｅＲＩ、ＦｃｅＲＩＩ）、およびＦｃｇＲ（例えば、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＢ１、ＦｃｇＲＩＩＢ２、ＦｃｇＲＩＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＩＢ）が挙げられ、それらの関連する下流のエフェクターは、当該技術分野でよく知られている。軽鎖（ＶＬ）の可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（またはそれぞれＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３と称される）であるＣＤＲも含む。いくつかの実施形態では、抗原は、ＡＤＡＭ１２である。抗体は、天然供給源または組換え供給源に由来するインタクトな免疫グロブリンであり得る。抗原への特異的な結合を可能にする構造を含む抗体の一部は、Ａｂの「抗原結合断片」、「ＡＢドメイン」、「抗原結合領域」、または「ＡＢ領域」と呼ばれる。

本明細書で使用される「抗体－薬物コンジュゲート」「Ａｂ－薬物コンジュゲート」、または「ＡＤＣ」という用語は、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片と薬物とのコンジュゲートを指す。薬物は、リンカーを介するなどの直接的または間接的結合を介して、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片の任意の部分に接続され得る。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ペイロード薬物（多くの場合、細胞障害性）に連結された抗体（または一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）などの抗体断片）を含み得る。抗体は、ＡＤＣを標的がん細胞に結合させる。いくつかの実施形態では、ＡＤＣは次いで、細胞によって内在化され、薬物が細胞内に放出される。標的化のため、副作用はさらに低くなる可能性があり、より広い治療ウインドウを提供し得る。親水性リンカー（例えば、ＰＥＧ４Ｍａｌ）は、薬物がＭＤＲ（多剤耐性）トランスポーターを介して耐性がん細胞から圧送されることを防止し得る。本開示はまた、細胞毒素、薬物（例えば、免疫抑制剤）または放射性毒素などの治療薬剤にコンジュゲートされた抗ＡＤＡＭ１２結合剤を含む免疫コンジュゲートに関する。このようなコンジュゲートは、「免疫コンジュゲート」と称される場合がある。１つ以上の細胞毒素を含む免疫コンジュゲートは、「免疫毒素」と称される場合もある。細胞毒素または細胞傷害性剤には、細胞に有害な（例えば、細胞を死滅させる）任意の薬剤が含まれる。細胞毒素は、当該技術分野で利用可能なリンカー技術を使用して、本発明の少なくともいくつかの実施形態の抗体にコンジュゲートされ得る。細胞毒素を抗体にコンジュゲートするために使用されてきたリンカーの種類の例としては、限定されないが、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィド、およびペプチド含有リンカーが挙げられる。リンカーは、例えば、リソソームコンパートメント内の低いｐＨによって切断されやすいか、またはカテプシン（例えば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）などの腫瘍組織で優先的に発現されるプロテアーゼなどのプロテアーゼによって切断されやすいものを選択することができる。細胞毒素、治療薬剤を抗体にコンジュゲートするためのリンカーおよび方法の種類のさらなる議論については、Ｓａｉｔｏ，Ｇ．ｅｔａｌ．（２００３）Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５５：１９９－２１５、Ｔｒａｉｌ，Ｐ．Ａ．ｅｔａｌ．（２００３）ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８－３３７、Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ３：２０７－２１２、Ａｌｌｅｎ，Ｔ．Ｍ．（２００２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ２：７５０－７６３、Ｐａｓｔａｎ，Ｉ．ａｎｄＫｒｅｉｔｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ３：１０８９－１０９１、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．ａｎｄＳｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｊ．（２００１）Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：２４７－２６４を参照されたい。本発明の抗体はまた、放射性同位体にコンジュゲートされて、細胞障害性放射性医薬品（放射性免疫コンジュゲートとも称される）を生成することができる。

本明細書で使用される「抗体断片」または「Ａｂ断片」という用語は、ＩｇＧおよびそのサブクラス、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤを含む任意のクラスまたはサブクラスのものであり得るインタクトまたは完全長Ａｂを含む、Ａｂの任意の部分または断片を指す。この用語は、１つ以上のＡｂの１つ以上の部分または断片を使用して構築される分子を包含する。Ａｂ断片は、インタクトな免疫グロブリンの免疫反応性部分であり得る。この用語は、最も広義に使用され、断片抗原結合（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、一本鎖抗体断片（一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む）、ダイアボディ、およびシングルドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片を含め、インタクトな抗体および機能性（抗原結合）抗体断片を含む、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む。この用語はまた、遺伝子操作および／または他の方法で改変された形態の免疫グロブリン、例えば、イントラボディ、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖを包含する。特定の実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖである。

別段の指示がない限り、「Ａｂ断片」という用語は、その機能的抗体断片を包含するものと理解すべきである。抗原への特異的な結合を可能にする構造を含むＡｂ断片の一部は、Ａｂ断片の「抗原結合Ａｂ断片」、「ＡＢドメイン」、「抗原結合領域」、または「抗原結合領域」と呼ばれる。

本明細書で使用される場合、Ａｂの「重鎖」または「ＨＣ」は、すべてのＡｂ分子にそれらの天然に存在する立体配座で存在する２種類のポリペプチド鎖のうち、大きい方を指す。

本明細書で使用される場合、Ａｂの「軽鎖」または「ＬＣ」は、すべてのＡｂ分子にそれらの天然に存在する立体配座で存在する２種類のポリペプチド鎖のうち、小さい方を指す。カッパ軽鎖およびラムダ軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。

本明細書で使用される「抗ＡＤＡＭ１２剤」または「抗ＡＤＡＭ１２材料」は、ＡＤＡＭ１２を直接的または間接的に標的化することができる任意の薬剤を指す。本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤としては、限定されないが、抗ＡＤＡＭ１２Ａｂ、抗ＡＤＡＭ１２抗原結合Ａｂ断片、抗ＡＤＡＭ１２多重特異性Ａｂ、抗ＡＤＡＭ１２多重特異性抗原結合Ａｂ断片、抗ＡＤＡＭ１２ＡＤＣ、抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ、およびこれらをコードする核酸配列およびベクター、ならびにそれらを発現する細胞が挙げられる。広義には、抗ＡＤＡＭ１２剤はまた、上述の抗ＡＤＡＭ１２剤のいずれかを含む薬学的組成物を包含し得る。

「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を誘発する分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、または特定の免疫適格細胞の活性化、またはその両方のいずれかを伴ってもよい。当業者は、事実上すべてのタンパク質またはペプチドを含む任意の巨大分子が、抗原として機能し得ることを理解するであろう。さらに、抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。したがって、当業者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、その用語が本明細書で使用されるように、「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者であれば、抗原が、遺伝子の全長ヌクレオチド配列のみによってコードされる必要がないことを理解するであろう。本発明は、限定されないが、１より多い遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用を含むこと、およびこれらのヌクレオチド配列が、所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードするために様々な組み合わせで配置されていることは容易に明らかである。さらに、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要が全くないことを理解するであろう。抗原が生成され得る、合成され得る、または生体試料由来であり得る、またはポリペプチド以外の巨大分子であり得ることは容易に明らかである。そのような生体試料は、限定されないが、組織試料、がん組織試料、腫瘍組織試料、白血病細胞試料、炎症組織試料、ならびに他の生物学的成分を有する細胞または流体を含み得る。いくつかの実施形態では、抗原は、ＡＤＡＭ－１２である。

「抗原結合ドメイン」または「ＡＢドメイン」という用語は、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤の一部を指し、この部分は、抗ＡＤＡＭ１２剤のＡＤＡＭ１２への特異的結合を可能にする構造を含む。抗ＡＤＡＭ１２剤がＡｂである場合、ＡＢドメインは、Ａｂの可変領域または可変領域の一部（例えば、ＣＤＲ）を含み得る。抗ＡＤＡＭ１２剤が抗原結合Ａｂ断片または抗体－薬物コンジュゲートである場合、ＡＢドメインは、抗ＡＤＡＭ１２剤の由来となるＡｂの可変領域または可変領域の一部（例えば、ＣＤＲ）を含み得る。抗ＡＤＡＭ１２剤がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である場合、ＡＢドメインは、ＡＤＡＭ１２に対する特異性を有するＣＡＲの１つ以上の細胞外ドメインであり得る。ＡＢドメインが、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片に由来する場合、ＡＢドメインは、ＡＢドメイン、例えば、その由来となるＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片の可変領域または可変領域の一部、例えばＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤のＡＢドメインは、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＡＢドメインは、ＡＤＡＭ１２または分子のＡＤＡＭ１２結合部分に結合する天然に存在する分子を含むか、またはそれらに由来し得る。そのような分子の例として、限定されないが、アルファアクチニン２（ＡＣＴＮ２）、インスリン様成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ制御サブユニットアルファ（ＰＩＫ３Ｒ１）、ＩＧＦＢＰ－３（インスリン様成長因子結合タンパク質３）、ＩＧＦＢＰ－５、ヘパリン結合上皮成長因子（ＨＢ－ＥＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ベータセルリン、デルタ様１、胎盤ロイシンアミノペプチダーゼ（Ｐ－ＬＡＰ）、およびマトリックスメタロプロテアーゼ１４（ＭＭＰ－１４）が挙げられる。

本明細書で使用される「アフェレーシス」という用語は、ドナーまたは患者の血液がドナーまたは患者から除去され、選択された特定の構成成分を分離し、残りを例えば再輸血によってドナーまたは患者の循環に戻す装置を通過する、当該分野で認識されている体外プロセスを指す。したがって、「アフェレーシス試料」の文脈では、アフェレーシスを使用して得られた試料を指す。

本明細書で使用される「自己」または「ドナー由来」という用語は、それが後で再導入されるのと同じ個体に由来する任意の材料を指す。

「結合する」という用語は、分子が互いに近接している状態で安定した会合をもたらす、２つの分子間の誘引的な相互作用を指す。分子結合の結果は、時に、構成要素を互いに保持する誘引力が一般的に非共有性であり、したがって、共有結合よりも通常はエネルギー的に弱い、分子複合体の形成である。

「がん」という用語は、異常細胞の無制御な成長を特徴とする疾患を指す。がん細胞は、局所的に、または血流およびリンパ系を通じて身体の他の部分に拡散し得る。本発明に関連する種々のがんの例としては、限定されないが、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、腎がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、または甲状腺がんなどが挙げられる。

本明細書で使用される、「二重特異性」という用語は、２つの結合特異性を有することを指す。例えば、本発明の抗ＡＤＡＭ１２二重特異性Ａｂまたは二重特異性抗原結合Ａｂ断片は、ＡＤＡＭ１２に対して少なくとも１つの特異性を有する。第１の特異性が、ＡＤＡＭ１２のためのエピトープに対する特異性である場合、第２の特異性は、ＡＤＡＭ１２の別の非重複または非競合エピトープに対する特異性であってもよく、またはＡＤＡＭ１２以外の分子に対する特異性であってもよい。「二重特異性」という用語は、抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲなどの本発明の任意の他の抗ＡＤＡＭ１２剤に対しても同じ方法で使用される。

「ＣＤ２８」という用語は、Ｔ細胞活性化および生存に必要とされる共刺激シグナルを提供するＴ細胞上に発現されるタンパク質の１つである、分化クラスター２８というタンパク質を指す。ヒトＣＤ２８タンパク質は、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００６１３０または刺激活性を有するその断片と少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％の同一性を有し得る。「ＣＤ２８ＴＭドメイン」または「ＣＤ２８ＴＭ」とも称される「ＣＤ２８膜貫通ドメイン」という用語は、ＣＤ２８の膜貫通ドメインに由来するアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、「ＣＤ２８ＴＭ」は、配列番号１６１として提供される配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を含む。いくつかの実施形態では、「ＣＤ２８ＴＭドメイン」は、配列番号２６１として提供される核酸配列によってコードされ得る。本明細書で使用される「ＣＤ２８ヒンジ」という用語は、いくつかの実施形態のＣＡＲにおいて、ドメイン内で２つのドメインまたは２つの部分を連結するために使用され得るアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、「ＣＤ２８ヒンジ」は、配列番号１６３として提供される配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を含む。いくつかの実施形態では、「ＣＤ２８ヒンジ」は、配列番号２６３として提供される核酸配列によってコードされ得る。「ＣＤ２８ＣＳドメイン」または「ＣＤ２８ＣＳ」とも称される「ＣＤ２８共刺激ドメイン」という用語は、ＣＤ２８の細胞質ドメインに由来するアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、「ＣＤ２８ＣＳ」は、配列番号１６４として提供される配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を含む。いくつかの実施形態では、「ＣＤ２８ＣＳドメイン」は、配列番号２６４として提供される核酸配列によってコードされ得る。

「ＣＤ３ゼータ」、または代替的に、「ゼータ」、「ゼータ鎖」、「ＣＤ３－ゼータ」、「ＣＤ３ｚ」、「ＴＣＲ－ゼータ」、もしくは「ＣＤ２４７」という用語は、ヒトにおいて、遺伝子位置１ｑ２４．２を有する第１染色体上のＣＤ２４７遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＣＤ３ゼータは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）およびＣＤ３（ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、および２つのＣＤ３イプシロンから構成されるタンパク質複合体）とともに、ＴＣＲ複合体を形成する。ヒトＣＤ３ゼータは、ＮＰ＿０００７２５またはＮＰ＿９３２１７０として提供されるアミノ酸配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を有し得る。「ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメイン」、または代替的に「ＣＤ３ゼータＩＣＳドメイン」もしくは「ＣＤ３ｚＩＣＳ」という用語は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分な、ＣＤ３ゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基、またはその機能的誘導体として定義される。一態様では、「ＣＤ３ゼータＩＣＳドメイン」は、配列番号１６２として提供される配列である。一態様では、「ＣＤ３ゼータＩＣＳドメイン」は、配列番号２６２として提供される核酸配列によってコードされる。

「キメラ抗原受容体」、または代替的に「ＣＡＲ」という用語は、免疫エフェクター細胞の場合に、細胞に標的細胞に対する特異性を与え、細胞内シグナル生成を行わせる、ポリペプチドのセット、典型的には、最も単純な実施形態では２つを指す。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも、細胞外抗原結合ドメイン（ＡＢドメイン）と、膜貫通ドメイン（ＴＭドメイン）と、以下に定義するような刺激分子および／または共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン（本明細書で「細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＣＳドメイン）とも称される」と、を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドのセットは互いに連続している。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、二量体化分子の存在時に、ポリペプチドを互いに結合させることができ、例えば、ＡＢドメインをＩＣＳドメインに結合させることができる二量体化スイッチを含む。一態様では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体と会合したゼータ鎖である。一態様では、ＣＡＲの細胞質部分は、以下に定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを含む共刺激ドメイン（ＣＳドメイン）をさらに含む。一態様では、共刺激分子は、本明細書に記載の共刺激分子、例えば、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＤＡＰ１０および／またはＣＤ２８から選択される。一態様では、ＣＡＲは、細胞外ＡＢドメインと、ＴＭドメインと、刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含むＩＣＳドメインと、を含む、キメラ融合タンパク質を含む。一態様では、ＣＡＲは、細胞外ＡＢドメインと、ＴＭドメインと、刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含むＩＣＳドメインと、共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含むＣＳドメインと、を含む、キメラ融合タンパク質を含む。一態様では、ＣＡＲは、細胞外ＡＢドメインと、ＴＭドメインと、刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含むＩＣＳドメインと、互いに同じであるか、または異なっている共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを各々２つ含む２つのＣＳドメインと、を含む、キメラ融合タンパク質を含む。一態様では、ＣＡＲは、細胞外ＡＢドメインと、ＴＭドメインと、刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含むＩＣＳドメインと、互いに同じであるか、または異なっている共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを各々含む少なくとも２つのＣＳドメインと、を含む、キメラ融合タンパク質を含む。一態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）に任意のリーダー配列を含む。一態様では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端にリーダー配列をさらに含み、リーダー配列は、細胞プロセシングおよび細胞膜へのＣＡＲの局在化の間に、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から任意選択で切断される。いくつかの実施形態では、リーダー配列（ＬＳ）は、配列番号１６０として提供されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＳは、配列番号２６０として提供される核酸配列によってコードされ得る。

「競合する」という用語は、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤のいずれかのＡＢドメインのＡｂ、抗原結合Ａｂ断片に関して本明細書で使用される場合、第１のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインが、第２のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインの結合と十分に類似した方法でエピトープに結合し、その結果、第１のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインとその同族エピトープとの結合の結果が、第２のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインが存在しない状態での第１のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインの結合と比較して、第２のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメイン存在下では検出可能に低下することを意味する。代替的に、第２のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインのそのエピトープへの結合も、第１の抗体の存在下で検出可能に低下する場合も考えられるが、必ずしもそうである必要はない。すなわち、第２のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインが第１のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインのそのそれぞれのエピトープへの結合を阻害することなく、第１のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインが、第２のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインのそのエピトープへの結合を阻害し得る。しかしながら、各Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインが、他のＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインとその同族エピトープまたはリガンドとの結合を検出可能に阻害する場合、同一の程度、より大きい程度、またはより小さい程度にかかわらず、その２つ（Ａｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメイン）は、それらのそれぞれのエピトープについて互いに「交差競合する」といわれる。競合および交差競合するＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインは両方とも、本発明によって包含される。かかる競合または交差競合が生じる機構（例えば、立体障害、立体構造変化、または共通のエピトープへの結合、またはその一部）にかかわらず、当業者は、本明細書で提供される教示に基づいて、かかる競合および／または交差競合するＡｂ、抗原結合Ａｂ断片、またはＡＢドメインが包含され、本明細書に開示される方法に有用であることを理解するであろう。

「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義であり、抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指し、抗原特異性および／または結合親和性を付与することが当該技術分野で既知である。一般に、各重鎖可変領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）には３つのＣＤＲが存在し、各軽鎖可変領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）には３つのＣＤＲが存在する。

本明細書における「保存的アミノ酸置換」という用語は、当該技術分野で一般的に使用される通りであり、特定の物理的特性および／または化学的特性を有する１つのアミノ酸が、同じまたは類似の化学的特性または物理的特性を有する別のアミノ酸と交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性／負に帯電した極性アミノ酸（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕ）に置換された酸性／負に帯電した極性アミノ酸、非極性側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌなど）に置換された非極性側鎖を有するアミノ酸、別の塩基性／正に帯電した極性アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇなど）に置換された塩基性／正に帯電した極性アミノ酸、極性側鎖を有する別の非帯電アミノ酸（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）に置換された極性側鎖を有する非帯電アミノ酸、β分岐側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、およびＶａｌ）に置換されたβ分岐側鎖を有するアミノ酸、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、およびＴｙｒなど）に置換された芳香族側鎖を有するアミノ酸などであり得る。非保存的アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換ではないアミノ酸置換である。

「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによって、Ｔ細胞による共刺激応答、例えば、限定されないが、増殖を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、限定されないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＴＬＡ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＤＳ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１０、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ－１、ＰＳＧＬ１、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、ＶＬＡ－６、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドが挙げられる。ＣＡＲが１つ以上のＣＳドメインを含む実施形態では、各ＣＳドメインは、共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、コードされるＣＳドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、またはＤＡＰ１０を含む。一実施形態では、ＣＳドメインは、ＣＤ２８ＣＳ、４１ＢＢＣＳ、またはＤＡＰ１０ＣＳ（配列番号１６４、１６５、もしくは１６６）のアミノ酸配列を含むか、または配列番号２６４、２６５、もしくは２６６として提供されるコードされるヌクレオチド配列によってコードされる。

本明細書で使用される「サイトカイン」という用語は、細胞シグナル伝達に関与する小さなタンパク質の広範なカテゴリーを指す。一般に、それらの放出は、その周囲の細胞の挙動に何らかの影響を及ぼす。サイトカインは、免疫調節剤としての自己分泌シグナル伝達、傍分泌シグナル伝達および／または内分泌シグナル伝達に関与し得る。サイトカインには、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、および腫瘍壊死因子が含まれる。サイトカインは、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球および肥満細胞などの免疫細胞、ならびに内皮細胞、線維芽細胞、上皮細胞、および様々な間質細胞を含む広範囲の細胞によって産生される。「ケモカイン」は、一般に、走化性の媒介に関与するサイトカインのファミリーである。

「細胞傷害性」という用語は、一般に、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤またはそれを含む細胞が、ＡＤＡＭ１２を発現する細胞に曝露されることによって生じる任意の細胞殺傷活性を指す。この活性は、ＩＦＮ－γ産生アッセイを含む既知の細胞傷害性アッセイによって測定され得る。標的細胞ががんまたは腫瘍細胞である場合、「抗がん細胞傷害性」または「抗腫瘍細胞傷害性」という用語が使用され得る。

「ＤＡＰ１０」という用語は、ヒトにおいてＨＳＣＴ遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。ＨＳＣＴ、ＫＡＰ１０、ＰＩＫ３ＡＰ、または造血細胞シグナル変換器とも称され得る。いくつかの実施形態では、ＤＡＰ１０は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｑ９ＵＢＫ５．１で提供される配列を有し得る。「ＤＡＰ１０ＣＳドメイン」または「ＤＡＰ１０ＣＳ」とも称される「ＤＡＰ１０共刺激ドメイン」という用語は、ＤＡＰ１０の細胞質ドメインに由来するアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、「ＤＡＰ１０ＣＳ」は、配列番号１６６として提供される配列、または非ヒト種（例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など）由来の等価な残基を含む。いくつかの実施形態では、「ＤＡＰ１０ＣＳドメイン」は、配列番号２６６として提供される核酸配列によってコードされ得る。

「ＡＤＡＭ１２の発現に関連する疾患」または「ＡＤＡＭ１２関連疾患」という語句は、限定されないが、例えば、がんもしくは悪性腫瘍もしくは前がん状態などの増殖性疾患を含む、ＡＤＡＭ１２の発現に関連する疾患、またはＡＤＡＭ１２を発現する細胞と関連する状態、あるいはＡＤＡＭ１２を発現する細胞と関連する非がん関連適応症が挙げられる。ＡＤＡＭ１２と関連する非がん関連適応症としては、線維症、自己免疫、心血管状態、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、および炎症性障害が挙げられる。ＡＤＡＭ１２を発現する種々のがんの例としては、限定されないが、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、および甲状腺がんなどが挙げられる。

「有効量」または「治療に有効な量」は、個体における疾患、状態、または障害を予防または治療するのに十分な用量を指す。治療的使用または予防的使用に有効な量は、例えば、治療される疾患または障害の段階および重症度、患者の年齢、体重、および一般的な健康状態、別の既存の状態、および処方する医師の判断に依存するであろう。用量のサイズはまた、選択された活性成分、投与方法、投与のタイミングおよび頻度、特定の活性成分の投与に付随し得る任意の有害な副作用の存在、性質、および程度、ならびに所望の生理学的効果によって決定される。当業者には、種々の疾患または障害が、各ラウンドまたは種々のラウンドの投与において、おそらく本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤、核酸、ベクター、細胞、または組成物を使用して、複数回の投与を伴う長期間の治療を必要とし得ることが理解されるであろう。

「腸の」、「経腸的に」、「経口」、「経口的に」、「非非経口」、「非非経口的に」などの用語は、消化管に沿った経路または態様による個体への化合物または組成物の投与を指す。組成物の「経口」投与経路の例としては、限定されないが、口から液体または固体形態の組成物を飲み込むこと、経鼻空腸管または胃瘻管を介した組成物の投与、組成物の十二指腸内投与、および直腸投与、例えば、消化管の下部腸管のための坐剤を使用することを含む。

本明細書で使用される「フレームワーク」という用語は、Ａｂの可変領域、またはいくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合Ａｂ断片またはＡＢドメインの非ＣＤＲ部分を指す。「重鎖（ＨＣ）フレームワーク」は、ＨＣ可変領域の非ＣＤＲ部分を指し、一般に、各全長重鎖可変領域に４つのフレームワーク領域（ＦＲ）（ＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、およびＦＲ－Ｈ４）が存在する。「軽鎖（ＬＣ）フレームワーク」は、ＬＣ可変領域の非ＣＤＲ部分を指し、一般に、各全長軽鎖可変領域に４つのＦＲ（ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、およびＦＲ－Ｌ４）が存在する。いくつかの実施形態では、「ヒト様ＨＣフレームワーク」は、ヒトＨＣフレームワークと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。いくつかの実施形態では、「ヒト様ＬＣフレームワーク」は、ヒトＬＣフレームワークと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。

「遺伝子」という用語は、生物学的機能に関連するポリヌクレオチドの任意のセグメントを指すために広く使用される。したがって、遺伝子は、ゲノム配列中にあるようなイントロンおよびエクソン、またはｃＤＮＡ中にあるような単なるコード配列および／またはそれらの発現に必要な調節配列を含む。例えば、遺伝子は、ｍＲＮＡもしくは機能的ＲＮＡを発現するか、または特定のタンパク質をコードし、調節配列を含む核酸断片も指す。

「ヒンジ」、「スペーサー」、または「リンカー」という用語は、典型的には、柔軟性、改善された空間構成、近接性などを付与するために、ポリペプチド構築物の２つ以上のドメインまたは部分の間でコードされる可変長のアミノ酸配列を指す。

本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、および／または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に開示されるヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製された抗体を意味する。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技術を使用して産生され得る。一実施形態では、ヒト抗体は、ファージライブラリーから選択され、ファージライブラリーは、ヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：３０９－３１４，１９９６、Ｓｈｅｅｔｓｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６１５７－６１６２，１９９８、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍａｎｄＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１，１９９１、Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１，１９９１）。また、ヒト免疫グロブリン遺伝子座が内因性遺伝子座の代わりに遺伝子導入された動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたマウスの免疫化によってもヒト抗体を作製することができる。このアプローチについては、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、および同第５，６６１，０１６号に記載される。あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対して指向される抗体を産生するヒトＢリンパ球を不死化することによって調製され得る（かかるＢリンパ球は、個体から、またはｃＤＮＡの単一細胞クローニングから回収され得るか、またはインビトロで免疫化され得る）。例えば、Ｃｏｌｅｅｔａｌ．ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ，ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７，１９８５、Ｂｏｅｒｎｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５，１９９１、および米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい。

Ａｂの「ヒト化」という用語は、非ヒト由来のＡｂを改変して、ヒトで天然に産生されるＡｂとの配列類似性を増加させることを指す。本明細書で使用される「ヒト化抗体」という用語は、Ａｂのヒト化を介して生成されるＡｂを指す。一般に、ヒト化抗体または操作された抗体は、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、または他の哺乳動物に限定されないが、非ヒト供給源由来の１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらのヒトアミノ酸残基は、しばしば「インポート」残基と称され、これらは、典型的には、既知のヒト配列の「インポート」可変ドメイン、定常ドメイン、または他のドメインから得られる。既知のヒトＩｇ配列は、例えば、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌに開示され、各々は、参照により本明細書に完全に組み込まれる。かかるインポート配列は、当該技術分野で既知であるように、免疫原性を低下させるか、または結合、親和性、アビディティ、特異性、半減期、またはいずれかの他の好適な特徴を低減、増強または改変するために使用することができる。一般に、非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部またはすべてが維持されており、一方、フレームワークおよび／または定常領域の非ヒト配列の一部またはすべては、ヒトまたは他のアミノ酸で置き換えられる。抗体はまた、当業者に既知の三次元免疫グロブリンモデルを用いて、抗原に対する高い親和性および他の有利な生物学的特性を保持しつつ、任意選択でヒト化することができる。選択された候補免疫グロブリン配列のあり得そうな三次元立体構造を図示し、表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を可能にする。このようにして、フレームワーク（ＦＲ）残基を選択し、コンセンサス配列およびインポート配列から組み合わせることで、標的抗原に対する親和性の増加などの所望の抗体特性を達成することができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を与えることに直接的かつ最も実質的に関与する。本発明の抗体のヒト化または操作は、例えば、限定されないが、Ｗｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４（１９８８））、Ｓｉｍｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）、ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）、Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）、Ｐｒｅｓｔａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）、米国特許第５，７２３，３２３号、同第５，９７６，８６２号、同第５，８２４５１４号、同第５，８１７４８３号、同第５，８１４４７６号、同第５，７６３，１９２号、同第５，７２３，３２３号、同第５，７６６，８８６号、同第５，７１４，３５２号、同第６，２０４，０２３号、同第６，１８０，３７０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，２２５，５３９号、同第４，８１６，５６７号（そこに引用される参考文献を含め、それぞれ参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるものなどの任意の既知の方法を使用して行うことができる。

「ｉＣＡＲ」という用語は、阻害性受容体シグナル伝達ドメインを含有するキメラ抗原受容体である。これらのドメインは、例えば、プロテクチンＤ１（ＰＤ１）またはＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）に基づき得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ発現細胞は、ｉＣＡＲを発現するようにさらに形質導入される。一態様では、このｉＣＡＲは、ＣＡＲを発現する細胞の機能活性を腫瘍細胞に限定するために添加される。

「免疫細胞」という用語は、先天的および／または適応免疫応答の開始および／または実行に機能的に関与する造血由来の細胞を指す。

本明細書で使用される「細胞内シグナル伝達ドメイン」または「ＩＣＳドメイン」という用語は、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ、例えば、ＣＡＲＴ細胞を含む核酸配列で形質導入された細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＣＡＲＴ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性およびヘルパー活性が挙げられる。ＩＣＳドメインとしては、リンパ球受容体鎖のＩＣＳドメイン、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体タンパク質、Ｆｃ受容体サブユニット、ＩＬ－２受容体サブユニット、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３エプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃエプシロンＲＩ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２が挙げられる。

「単離された」生物学的構成要素（例えば、単離されたタンパク質、核酸、ベクター、または細胞）は、構成要素が天然に存在する生物の細胞内のその環境または他の生物学的構成要素（例えば、他の染色体および染色体外ＤＮＡおよびＲＮＡ、タンパク質、および細胞小器官）から実質的に分離または精製された構成要素を指す。「単離」されている核酸およびタンパク質は、標準的な精製方法によって精製された核酸およびタンパク質を含む。この用語は、組換え技術および化学合成によって調製された核酸およびタンパク質も包含する。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在し得るか、または例えば、宿主細胞などの非天然環境に存在し得る。

本明細書で使用される「リーダー配列」または「ＬＳ」は、当該技術分野において、「シグナルペプチド」、「シグナル配列」、「標的化シグナル」、「局在化シグナル」、「局在化配列」、「トランジットペプチド」、または「リーダーペプチド」とも称され、分泌経路に向けられた新しく合成されたタンパク質の大部分のＮ末端に存在する短いペプチドである。シグナルペプチドのコアは、疎水性アミノ酸の長い伸長部を含有し得る。シグナルペプチドは、成熟ポリペプチドから切断されてもよく、または切断されなくてもよい。

ＳｃＦｖの文脈で使用される「リンカー」という用語は、可変重鎖領域および可変軽鎖領域を一緒に連結するために、単独で、または組み合わせて使用されるグリシンおよび／またはセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態では、可撓性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列単位Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１６７）の１つ以上の反復を含む。一実施形態では、可撓性ポリペプチドリンカーは、Ｇ４ＳＸ３（配列番号１６８）とも称される（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３を含むが、これらに限定されない。かかるリンカーは、例えば、配列番号２６８に記載される核酸配列によってコードされ得る。

「哺乳動物」という用語は、限定されないが、Ｒｏｄｅｎｔｉａ目の哺乳動物、例えば、マウス、ラット、およびハムスター、およびＬｏｇｏｍｏｒｐｈａ目の哺乳動物、例えば、ウサギを含む、任意の哺乳動物を指す。哺乳動物は、Ｆｅｌｉｎｅ（ネコ）およびＣａｎｉｎｅ（イヌ）を含む、Ｃａｒｎｉｖｏｒａ目からの哺乳動物であり得る。哺乳動物は、Ｂｏｖｉｎｅ（ウシ）およびＳｗｉｎｅ（ブタ）を含むＡｒｔｉｏｄａｃｔｙｌａ目、またはＥｑｕｉｎｅ（ウマ）を含むＰｅｒｓｓｏｄａｃｔｙｌａ目からの哺乳動物であり得る。哺乳動物は、Ｐｒｉｍａｔｅ、Ｃｅｂｏｉｄ、またはＳｉｍｏｉｄ目（サル）、またはＡｎｔｈｒｏｐｏｉｄ目（ヒトおよび類人猿）からの哺乳動物であり得る。

「マスクされたＣＡＲ」という用語は、マスキングペプチドをさらに含むＣＡＲ発現細胞を指す。このマスキングペプチドは、オフターゲット細胞殺傷を防止し得る。マスキングペプチドは、多くの場合、ＣＡＲ構築物に対してＮ末端であり、意図しない標的に結合する細胞の能力を遮断し得る。マスキングペプチドは、腫瘍に遭遇したときにＣＡＲ発現細胞から切断されてもよく、それによりＣＡＲ発現細胞は、オフターゲット細胞を殺傷することなく、その標的を攻撃することができる。本発明の抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲは、マスクされたＣＡＲであるように構築されてもよい。

本明細書で使用される、「多重特異性」という用語は、２つ以上の結合特異性を有することを指す。例えば、本発明の抗ＡＤＡＭ１２多重特異性Ａｂまたは多重特異性抗原結合Ａｂ断片は、ＡＤＡＭ１２に対して少なくとも１つの特異性を有する。第１の特異性がＡＤＡＭ１２のためのエピトープに対する特異性である場合、第２の（または第３の、第４のなどの）特異性は、ＡＤＡＭ１２のための別のエピトープに対する特異性であってもよく、またはＡＤＡＭ１２以外の分子に対する特異性であってもよい。「多重特異性」という用語は、抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲなどの本発明の任意の他の抗ＡＤＡＭ１２剤に対しても同じ方法で使用される。

「核酸」および「ポリヌクレオチド」という用語は、直鎖状もしくは分岐状、一本鎖もしくは二本鎖、またはそれらのハイブリッドであるＲＮＡもしくはＤＮＡを指す。この用語は、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドも包含する。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である。遺伝子または遺伝子断片、エクソン、イントロン、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐鎖ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブおよびプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体、ウラシル、他の糖およびフルオロリボースおよびチオレートのような連結基、およびヌクレオチド分枝のような、改変ヌクレオチドを含み得る。ヌクレオチドの配列は、例えば、標識成分とのコンジュゲーションにより、重合後にさらに改変され得る。この定義に含まれる他の種類の改変は、キャップ、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つ以上の類似体による置換、およびポリヌクレオチドをタンパク質、金属イオン、標識成分、他のポリヌクレオチド、または固体支持体に付着させるための手段の導入である。ポリヌクレオチドは、化学合成によって得られ得るか、または微生物に由来し得る。

「ＯＫＴ３」または「ムロモナブ－ＣＤ３」または「オルトクローンＯＫＴ３」という用語は、モノクローナル抗ＣＤ３Ａｂを指す。

本明細書で使用される「非経口」または「非経口的」という用語は、対象の組織の物理的突破を特徴とする化合物もしくは組成物の任意の投与経路と、組織内の突破を通じた薬学的組成物の投与とが含まれ、したがって、一般に、血流内、筋肉内、または内臓内への直接投与をもたらす。したがって、非経口投与には、限定されないが、組成物の注射による、外科的切開による組成物の適用による、組織浸透性の非外科的創傷による組成物の適用などによる、薬学的組成物の投与が含まれる。特に、非経口投与には、限定されないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸腔内、静脈内、動脈内、髄腔内、脳室内、尿道内、頭蓋内、滑液内注射または注入、ならびに腎臓透析注入技術を含むことが企図される。好ましい実施形態では、本発明の組成物の非経口投与は、皮下投与または腹腔内投与を含む。

本明細書で使用される「薬学的に許容される賦形剤」、「薬学的賦形剤」、「賦形剤」、「薬学的に許容される担体」、「薬学的担体」、または「担体」という用語は、製剤化中および／または保管を可能にするために、薬学的組成物中で通常使用される化合物または材料を指す。

「プロモーター」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリヌクレオチド配列の特定の転写を開始するために必要な、細胞の合成機構によって認識されるかＤＮＡ配列、または導入された合成機構として定義される。

「リボソームスキップ配列」は、翻訳されるときに、リボソーム上の新生ポリタンパク質の切断を引き起こし、複数の遺伝子の共発現を可能にするアミノ酸配列を指す。一態様では、リボソームスキップ配列は、配列番号１６９などのＴ２Ａ配列であってもよく、配列番号２６９によってコードされ得る。あるいは、任意の他の２Ａ配列を使用してもよい。他の配列の例は、関連する技術分野の文献の他の箇所に見出され得る（例えば、Ｋｉｍ，Ｊ．Ｈ．，ｅｔａｌ．，Ｈｉｇｈｃｌｅａｖａｇｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆａ２Ａｐｅｐｔｉｄｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｐｏｒｃｉｎｅｔｅｓｃｈｏｖｉｒｕｓ－１ｉｎｈｕｍａｎｃｅｌｌｌｉｎｅｓ，ｚｅｂｒａｆｉｓｈａｎｄｍｉｃｅ．ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１１；６（４）を参照されたい）。

「組換え」という用語は、天然に存在しないか、または天然に存在しない配置で別のポリヌクレオチド、タンパク質、細胞などに連結されている半合成もしくは合成由来のポリヌクレオチド、タンパク質、細胞などを意味する。

「ｓｃＦｖ」、「一本鎖Ｆｖ」、または「一本鎖可変断片」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片とを含み、軽鎖可変領域および重鎖可変領域が、例えば、合成リンカー、例えば、短い可撓性ポリペプチドリンカーを介して連続して連結され、一本鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、ｓｃＦｖが、その由来となるインタクトな抗体の特異性を保持する、融合タンパク質を指す。特定されない限り、本明細書で使用される場合、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に関して、いずれかの順序でＶＬおよびＶＨ可変領域を有してもよく、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでもよく、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでもよい。リンカーは、フレームワーク配列の一部を含んでいてもよい。ＳｃＦｖにおいて、重鎖可変ドメイン（ＨＣＶ、ＨＣＶ、またはＶＨ）は、軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶ、ＬＣＶ、またはＶＬ）の上流に配置されてもよく、この２つのドメインは、任意選択で、リンカー（例えば、Ｇ４ＳＸ３リンカー）を介して連結されてもよい。この場合、ｓｃＦｖが例えばｈ６Ｅ６に由来する場合、構築物は、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ、ｈ６Ｅ６ＨＬ、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＶＨＶＬ、またはｈ６Ｅ６ＶＨＶＬと称されてもよい。あるいは、重鎖可変ドメインは、軽鎖可変ドメインの下流に配置されてもよく、この２つのドメインは、任意選択で、リンカー（例えば、Ｇ４ＳＸ３リンカー）を介して連結されてもよい。この場合、ｓｃＦｖが例えばｈ６Ｅ６に由来する場合、構築物は、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ、ｈ６Ｅ６ＬＨ、ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＶＬＶＨ、またはｈ６Ｅ６ＶＬＶＨと称されてもよい。同じ命名規則が、本明細書の他の同様の構築物に適用される。

「シグナル伝達ドメイン」という用語は、第２のメッセンジャーを生成することによって、またはそのようなメッセンジャーに応答することによってエフェクターとして機能することによって、定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するために細胞内に情報を伝達することによって作用するタンパク質の機能的部分を指す。

「刺激分子」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）によって発現され、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様について、刺激性の方法で免疫細胞の活性化を調節する細胞質シグナル伝達配列を提供する分子を指す。一態様では、シグナルは、例えば、ペプチドがロードされたＭＨＣ分子とＴＣＲ／ＣＤ３複合体が結合することによって開始され、限定されないが、増殖、活性化、分化などを含むＴ細胞応答の媒介につながる一次シグナルである。刺激性の方法で作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容体チロシン依存性活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用なＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達配列の例としては、限定されないが、ＣＤ３ゼータ、コモンＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃエプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３エプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。本発明の特定のＣＡＲでは、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲＳにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えば、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達配列を含む。本発明の特定のＣＡＲにおいて、本明細書において「ＣＤ３ｚＩＣＳ」と称される、ヒトＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達配列は、配列番号１６２として提供されるアミノ酸配列であり、配列番号２６２のヌクレオチド配列によってコードされ得る。あるいは、非ヒトまたはマウス種、例えば、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基を利用してもよい。

本明細書で使用される「対象」という用語は、任意の生きている生物、好ましくは哺乳動物であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトなどの霊長類である。いくつかの実施形態では、霊長類は、サルまたは類人猿である。対象は、男性または女性であってもよく、乳幼児、若年期、青年期、成人、および老年の対象を含む任意の好適な年齢であり得る。いくつかの例では、患者または対象は、疾患、養子細胞療法、および／または毒性転帰を評価するための検証済み動物モデルである。対象はまた、当該技術分野において「患者」と称され得る。対象は、疾患を有し得るか、または健康であり得る。

本明細書で使用される「自殺機構」という用語は、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤発現細胞が、かかる細胞を投与された対象から根絶され得る機構を指す。自殺機構は、例えば、誘導性カスパーゼ９（ＢｕｄｄｅＬ．Ｅ．ｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１３Ｄｅｃ１７；８（１２）：ｅ８２７４２．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００８２７４２．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ２０１３）、コドン最適化ＣＤ２０（ＭａｒｔｉｎＶ．ｅｔａｌ．，ＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒＭｅｔｈｏｄｓ．２０１２Ｄｅｃ；２３（６）：３７６－３８６）、ＣＤ３４、またはポリペプチドＲＱＲ８（Ｐｈｉｌｉｐｅｔａｌ、およびＷＯ２０１３／１５３３９（１Ａ）、参照により本明細書に組み込まれる）によって駆動され得る。いくつかの実施形態では、自殺機構が、本発明のＣＡＲ発現細胞に含まれ、利用され、対象の系内に留まるためにＣＡＲ発現細胞の長さ、または毒性を低減もしくは最小化し、および／またはＣＡＲ発現細胞の利益を最大化するようにＣＡＲ発現細胞の量を最適化し得る。

本明細書で使用される「合成Ａｂ」または「合成抗原結合Ａｂ断片」という用語は、組換えＤＮＡ技術、例えば、本明細書に記載されるようなバクテリオファージによって発現される抗体などを使用して生成されるＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片を指す。この用語はまた、抗体をコードするＤＮＡ分子の合成によって生成され、ＤＮＡ分子が抗体タンパク質を発現する抗体、または抗体を特定するアミノ酸配列を意味すると解釈されるべきであり、ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、当該技術分野で入手可能でありかつ既知の合成ＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を使用して得られている。

本明細書で使用される「標的」という用語は、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤が特異的に結合する分子を指す。この用語はまた、標的分子を発現する細胞および組織、ならびに標的の発現に関連する疾患も包含する。

本明細書で使用される「標的細胞」という用語は、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤の標的分子（例えばＡＤＡＭ１２）を細胞表面上で発現する細胞を指す。いくつかの実施形態では、標的細胞は、がん細胞または腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、血管細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、線維芽細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、上皮細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、がんまたは炎症の病理において特定の役割を有する細胞型である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、例えば、限定されないが、がん、線維症、自己免疫疾患、心血管状態、代謝性疾患、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、および炎症性障害などの疾患の病理において特定の役割を有する細胞型である。

本明細書で使用される「標的分子」という用語は、本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤によって標的化される分子を指す。本発明の抗ＡＤＡＭ１２剤のＡＢドメインは、標的分子に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、標的分子は、ＡＤＡＭ１２である。

「ｔｒＣＤ１９」という用語は、ＣＤ１９（分化クラスター１９）としても知られるＣＤ１９タンパク質、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９の切断態様を指し、これは、ヒトにおいてＣＤ１９遺伝子によってコードされ、かつＢ細胞の表面に見出されるタンパク質である。ＴｒＣＤ１９構築物は、検出、選択、および／または標的化の目的で、この構築物をコードする核酸配列を宿主細胞に形質導入し、この細胞の表面に発現させ得るような、上述のタンパク質の任意の切断態様である。一態様では、ヒトｔｒＣＤ１９は、配列番号１７０のアミノ酸配列、またはそのような配列をコードするヌクレオチド配列、例えば、配列番号２７０を含み得る。

「トランスフェクトされた」、「形質転換された」、または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクトされた、形質転換された、または形質導入された細胞である。細胞は、初代対象細胞およびその子孫を含む。

「膜貫通ドメイン」または「ＴＭドメイン」という用語によって、暗示されるのは、膜内で熱力学的に安定である任意の三次元タンパク質構造である。これは、単一のアルファヘリックス、膜貫通ベータバレル、グラミシジンＡのベータヘリックス、または任意の他の構造であり得る。膜貫通ヘリックスは、通常、約２０アミノ酸長である。典型的には、膜貫通ドメインは、一体型タンパク質としても知られる膜貫通タンパク質の単一の膜貫通アルファヘリックスを示す。

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、または「治療すること」という用語は、一般に、疾患または状態の進行、重症度、および／または期間を軽減もしくは緩和するための、または疾患の１つ以上の状態もしくは症状（好ましくは、１つ以上の識別可能なもの）を緩和するための臨床手順を指す。治療される疾患または状態の種類は、例えば、限定されないが、がん、線維症または線維化疾患、自己免疫、心血管状態、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、および炎症性障害であり得る。がんの例としては、限定されないが、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、および甲状腺がんが挙げられる。線維化疾患の例としては、限定されないが、肺線維症、間質性肺疾患、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、サルコイドーシス、アレルギー性気道疾患、強皮症、肝線維症、または心臓線維症が挙げられる。治療される状態は、例えば、線維症、酸化ストレス、または炎症であり得る。特定の実施形態では、「治療」の効果は、１つ以上の療法（例えば、抗ＡＤＡＭ１２Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片、抗ＡＤＡＭ１２ＡＤＣ、または抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ発現細胞）の投与から生じる、疾患の少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの緩和によって評価され得る。パラメータは、例えば、遺伝子発現プロファイル、疾患の影響を受ける組織の質量、炎症関連マーカー、がん関連マーカー、疾患関連細胞の数または頻度、腫瘍負荷、特定のサイトカインもしくはケモカイン、または他の疾患関連分子の有無であってもよく、患者によって必ずしも識別可能ではない場合がある。他の実施形態では、「治療する」、「治療」、または「治療すること」は、身体的に、例えば、識別可能な症状の安定化によって、生理学的に、例えば、物理的パラメータの安定化によって、またはその両方によって、疾患の進行の阻害をもたらし得る。他の実施形態では、「治療する」、「治療」、および「治療すること」という用語は、がん性組織または細胞の減少または安定化を指す。加えて、「治療する」、および「予防する」という用語、ならびにそれに由来する単語は、本明細書で使用される場合、必ずしも１００％または完全な治癒または予防を意味しない。むしろ、当業者が潜在的な利益または治療効果を有するものとして認識する治療効果または予防効果の程度は様々である。この観点で、本発明の方法は、哺乳動物における疾患の任意の量の任意のレベルの治療効果または予防効果を提供することができる。さらに、本発明の方法によって提供される治療または予防は、治療または予防される疾患の１つ以上の状態または症状の治療または予防を含み得る。また、本明細書の目的のために、「予防」は、疾患、またはその症状もしくは状態の発症を遅らせることを包含し得る。

「異種（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ）」または「異種（ｘｅｎｏ－）」という用語は、異なる種の動物に由来する移植片を指す。

実験の実験的詳細は、以下の実施例に記載されている。これらの実施例は、特許請求される発明を、限定するのではなく、説明するために提示される。

実施例１：マウス抗ＡＤＡＭ１２抗体のヒト化
＜材料＞
マウス抗ＡＤＡＭ１２抗体（クローン６Ｅ６）配列
重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（ＶＨ）：配列番号２１１によってコードされる、配列番号１１１。

ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３：配列番号２１２、２１３、および２１４によってコードされる、配列番号１１２、１１３、および１１４。

軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（ＶＬ）：配列番号２１５によってコードされる、配列番号１１５。

ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３：配列番号２１６、２１７、および２１８によってコードされる、配列番号１１６、１１７、および１１８。

マウス抗ＡＤＡＭ１２抗体（クローン６Ｃ１０）配列
重鎖（ＨＣ）可変ドメイン（ＶＨ）：配列番号２２１によってコードされる、配列番号１２１。

ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３：配列番号２２２、２２３、および２２４によってコードされる、配列番号１２２、１２３、および１２４。

軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン（ＶＬ）：配列番号２２５によってコードされる、配列番号１２５。

ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３：配列番号２２６、２２７、および２２８によってコードされる、配列番号１２６、１２７、および１２８。

＜方法＞
６Ｅ６および６Ｃ１０のＶＨおよびＶＬ由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列は、本願発明者によってヒトフレームワーク配列に接合され、さらにヒト化された。

＜結果＞
以下の配列を有する、６Ｅ６および６Ｃ１０のヒト化態様を得た。

ヒト化抗ＡＤＡＭ１２抗体（ｈ６Ｅ６）配列
ＶＨ：配列番号２３１によってコードされる、配列番号１３１

ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３：配列番号２３２、２３３、および２３４によってコードされる、配列番号１３２、１３３、および１３４。

ＶＬ：配列番号２３５によってコードされる、配列番号１３５。

ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３：配列番号２３６、２３７、および２３８によってコードされる、配列番号１３６、１３７、および１３８。

ヒト化抗ＡＤＡＭ１２抗体（ｈ６Ｃ１０）配列
ＶＨ：配列番号２４１によってコードされる、配列番号１４１。

ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３：配列番号２４２、２４３、および２４４によってコードされる、配列番号１４２、１４３、および１４４。

ＶＬ：配列番号２４５によってコードされる、配列番号１４５。

ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３：配列番号２４６、２４７、および２４８によってコードされる、配列番号１４６、１４７、および１４８。

実施例２：がん細胞株上のＡＤＡＭ１２発現
＜材料＞
ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞（ＡＤＡＭ１２発現ベクターでトランスフェクトされたヒト乳がん細胞株ＭＣＦ７）およびＵ８７－ＭＧ細胞（ヒト膠芽腫細胞株）。

マウス抗ヒトＡＤＡＭ１２ＩｇＧ一次抗体（クローン６Ｃ１０）
マウス抗ヒトＡＤＡＭ１２抗体（クローン７Ｂ８または８Ｆ８）を産生する細胞を保有するマウスから採取した未精製腹水試料。

ＦＩＴＣ標識された抗マウスＩｇＧ二次抗体
＜方法＞
細胞を、最初に、マウス抗ヒトＡＤＡＭ１２ＩｇＧ一次抗体（クローン６Ｃ１０）または抗ヒトＡＤＡＭ１２抗体（クローン７Ｂ８または８Ｆ８）を産生する細胞を保有するマウスから採取した未精製腹水試料で染色した。次いで、細胞を、ＦＩＴＣ標識された抗マウスＩｇＧで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。

＜結果＞
フローサイトメトリーからの結果を図５に示す。すべての細胞が、ＡＤＡＭ１２発現について陽性に染色された。

実施例３：ＣＡＲの生成および発現
＜材料＞
ドナー１由来のヒトＴ細胞。

ｔｒＣＤ１９をコードする空のベクター（ＥＶ）。

ＣＡＲおよびｔｒＣＤ１９をコードするベクター。

＜方法＞
ドナー１由来のヒトＴ細胞を、抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１、抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ２をコードするベクター、または空のベクター（ＥＶ、すなわち、ｔｒＣＤ１９のみ）で形質導入し、ｔｒＣＤ１９陽性細胞を濃縮した。実施例３で使用される配列は、配列番号１９４および２９４（それぞれ、「ＬＳ－ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ－Ｔ２Ａ－ｔｒＣＤ１９」である抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ２のためのアミノ酸配列および核酸配列）と、配列番号１９７および２９７（それぞれ、「ＬＳ－ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ－Ｔ２Ａ－ｔｒＣＤ１９」である抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１のためのアミノ酸配列および核酸配列）である。

＜結果＞
両者のＣＡＲの発現が確認された。

実施例４：抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ発現Ｔ細胞によるインビトロ細胞傷害性
＜材料＞
ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞。

ルシフェラーゼ発現ベクターＪＣ７３。

ＴｒＣＤ１９を発現するが抗ＡＤＡＭ１２を発現しないヒトＴ細胞（ＥＶ、実施例３で生成される）。

抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１を発現するヒトＴ細胞（実施例３で生成される）。

抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ２を発現するヒトＴ細胞（実施例３で生成される）。

＜方法＞
ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞をルシフェラーゼ発現ベクターで形質導入し、ピューロマイシンを用いてルシフェラーゼ陽性細胞を選択し、標的細胞として使用した。実施例３からのヒトＴ細胞を発現する抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲを拡張させ、エフェクター細胞として使用した。Ｔ細胞を、９６ウェルの遮光性ルミノメータープレート中の１０：１、３：１、１：１、および０．３：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で、５，０００個のルシフェラーゼ発現ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞とともに播種した。２４時間の共培養の後、残りの生存腫瘍細胞を、発光によって測定したルシフェラーゼ活性によって検出した（図６の上側）。４８時間の測定を可能にするために、プレートをさらに２４時間インキュベートした（図６の下側）。

＜結果＞
２４時間の共培養の後、１：１、３：１、および１０：１のＥ：Ｔ比で抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１Ｔ細胞を用いたときと、１０：１のＥ：Ｔ比で抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ２Ｔ細胞を用いたときに、ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞の有意な減少が観察された（図６の上側）。４８時間後、残りのＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞からのシグナルは、ＣＡＲ１およびＣＡＲ２の両方について、すべてのＥ：Ｔ比で有意に減少した（図６の下側）。

実施例５：抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ発現Ｔ細胞によるインビトロサイトカイン産生
＜方法＞
実施例３からの抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ発現ヒトＴ細胞およびＥＶ形質導入ヒトＴ細胞を拡張させた。１０＾５個のＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞を、９６ウェルプレート中のウェルあたり、１０＾５個のＣＡＲ１Ｔ細胞、１０＾５個のＣＡＲ２Ｔ細胞、１０＾５個のＥＶＴ細胞とともに、またはＴ細胞を用いずに２４時間培養した。また、１０＾５個のＣＡＲ１Ｔ細胞、ＣＡＲ２Ｔ細胞、またはＥＶＴ細胞のみを含有する対照ウェルも含まれた。上清を収集し、ＩＦＮ－ｇレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。

＜結果＞
上清中のＩＦＮ－ｇ濃度を図８に示す。ＥＶＴ細胞をＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２と共培養した場合と比較して、ＣＡＲ１またはＣＡＲ２Ｔ細胞をＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２と共培養した場合に、有意に高いＩＦＮ－ｇレベルが観察された。Ｔ細胞のみまたはＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞のみのウェルからは、無視できる量のＩＦＮ－ｇしか検出されなかった。ＩＦＮ－ｇ産生は、ＡＤＡＭ１２発現標的細胞が存在しない状態では、無視できるものであった。

実施例６：抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ発現Ｔ細胞によるインビボでの有効性
＜材料＞
ＮＯＤｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウス。

ルシフェラーゼで形質導入されたＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２細胞（ＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２－Ｌｕｃ）。

ＴｒＣＤ１９を発現するが抗ＡＤＡＭ１２を発現しないヒトＴ細胞（実施例３で生成された、ＥＶＴ）。

＜方法＞
２．５×１０^６個のＭＣＦ７－ＡＤＡＭ１２－Ｌｕｃ細胞を、０日目に、ＮＳＧマウスに腹腔内注射した。次いで、マウスに、ｔｒＣＤ１９を発現するが抗ＡＤＡＭ１２を発現しない５×１０^６個のヒトＴ細胞（ＥＶＴ）、または抗ＡＤＡＭ１２ＣＡＲ１を発現する５×１０^６個のヒトＴ細胞（ＣＡＲ１Ｔ）を７日目に腹腔内投与した。個々のマウスの腫瘍負荷を、６日目から開始して毎週、Ｘｅｎｏｇｅｎ－ＩＶＩＳ（登録商標）ＩｍａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍを使用した生物発光イメージングによって監視した。個々のマウスの体重を、０日目から開始して定期的に記録した。

＜結果＞
２つの治療群（ＥＶＴおよびＣＡＲ１Ｔ）における腫瘍負荷の変化を図７Ａおよび７Ｂに示す。両群において、腫瘍負荷は、６日目に検出可能であった（両者ともおよそ１．２×１０^９個の光子／秒）。１３日目までに、ＣＡＲ１Ｔ群において腫瘍負荷が劇的に減少し、２０日目、２７日目、および３４日目に腫瘍負荷は低いままであった。ＣＡＲ１Ｔ群の腫瘍負荷は、実験全体を通して、ＥＶＴ群よりも有意に低かった。両群のマウスは、３４日目以降に体重が減少したＥＶＴ群からの１匹のマウスを除き、体重増加が続き、４４日目に安楽死させた。図７Ｃに示すように、治療群間の平均体重に統計的に有意な差はみられなかった。

前述の発明は、明確な理解のために図解および実施例により、ある程度詳細に記載されてきたが、当業者は、ある特定の変化および修正が、添付の特許請求の範囲内で実施され得ることを理解するであろう。さらに、本明細書で提供される各参照は、各参照が参照により個別に組み込まれるかのように同じ程度まで、その全体が参照により組み込まれる。
補遺：アミノ酸および核酸配列
ＡＤＡＭ１２：
ヒトＡＤＡＭ１２－Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＣ０８７０２．２）
（配列番号１０１）タンパク質配列：
ＭＡＡＲＰＬＰＶＳＰＡＲＡＬＬＬＡＬＡＧＡＬＬＡＰＣＥＡＲＧＶＳＬＷＮＱＧＲＡＤＥＶＶＳＡＳＶＲＳＧＤＬＷＩＰＶＫＳＦＤＳＫＮＨＰＥＶＬＮＩＲＬＱＲＥＳＫＥＬＩＩＮＬＥＲＮＥＧＬＩＡＳＳＦＴＥＴＨＹＬＱＤＧＴＤＶＳＬＡＲＮＹＴＶＩＬＧＨＣＹＹＨＧＨＶＲＧＹＳＤＳＡＶＳＬＳＴＣＳＧＬＲＧＬＩＶＦＥＮＥＳＹＶＬＥＰＭＫＳＡＴＮＲＹＫＬＦＰＡＫＫＬＫＳＶＲＧＳＣＧＳＨＨＮＴＰＮＬＡＡＫＮＶＦＰＰＰＳＱＴＷＡＲＲＨＫＲＥＴＬＫＡＴＫＹＶＥＬＶＩＶＡＤＮＲＥＦＱＲＱＧＫＤＬＥＫＶＫＱＲＬＩＥＩＡＮＨＶＤＫＦＹＲＰＬＮＩＲＩＶＬＶＧＶＥＶＷＮＤＭＤＫＣＳＶＳＱＤＰＦＴＳＬＨＥＦＬＤＷＲＫＭＫＬＬＰＲＫＳＨＤＮＡＱＬＶＳＧＶＹＦＱＧＴＴＩＧＭＡＰＩＭＳＭＣＴＡＤＱＳＧＧＩＶＭＤＨＳＤＮＰＬＧＡＡＶＴＬＡＨＥＬＧＨＮＦＧＭＮＨＤＴＬＤＲＧＣＳＣＱＭＡＶＥＫＧＧＣＩＭＮＡＳＴＧＹＰＦＰＭＶＦＳＳＣＳＲＫＤＬＥＴＳＬＥＫＧＭＧＶＣＬＦＮＬＰＥＶＲＥＳＦＧＧＱＫＣＧＮＲＦＶＥＥＧＥＥＣＤＣＧＥＰＥＥＣＭＮＲＣＣＮＡＴＴＣＴＬＫＰＤＡＶＣＡＨＧＬＣＣＥＤＣＱＬＫＰＡＧＴＡＣＲＤＳＳＮＳＣＤＬＰＥＦＣＴＧＡＳＰＨＣＰＡＮＶＹＬＨＤＧＨＳＣＱＤＶＤＧＹＣＹＮＧＩＣＱＴＨＥＱＱＣＶＴＬＷＧＰＧＡＫＰＡＰＧＩＣＦＥＲＶＮＳＡＧＤＰＹＧＮＣＧＫＶＳＫＳＳＦＡＫＣＥＭＲＤＡＫＣＧＫＩＱＣＱＧＧＡＳＲＰＶＩＧＴＮＡＶＳＩＥＴＮＩＰＬＱＱＧＧＲＩＬＣＲＧＴＨＶＹＬＧＤＤＭＰＤＰＧＬＶＬＡＧＴＫＣＡＤＧＫＩＣＬＮＲＱＣＱＮＩＳＶＦＧＶＨＥＣＡＭＱＣＨＧＲＧＶＣＮＮＲＫＮＣＨＣＥＡＨＷＡＰＰＦＣＤＫＦＧＦＧＧＳＴＤＳＧＰＩＲＱＡＤＮＱＧＬＴＩＧＩＬＶＴＩＬＣＬＬＡＡＧＦＶＶＹＬＫＲＫＴＬＩＲＬＬＦＴＮＫＫＴＴＩＥＫＬＲＣＶＲＰＳＲＰＰＲＧＦＱＰＣＱＡＨＬＧＨＬＧＫＧＬＭＲＫＰＰＤＳＹＰＰＫＤＮＰＲＲＬＬＱＣＱＮＶＤＩＳＲＰＬＮＧＬＮＶＰＱＰＱＳＴＱＲＶＬＰＰＬＨＲＡＰＲＡＰＳＶＰＡＲＰＬＰＡＫＰＡＬＲＱＡＱＧＴＣＫＰＮＰＰＱＫＰＬＰＡＤＰＬＡＲＴＴＲＬＴＨＡＬＡＲＴＰＧＱＷＥＴＧＬＲＬＡＰＬＲＰＡＰＱＹＰＨＱＶＰＲＳＴＨＴＡＹＩＫ
ヒトＡＤＡＭ１２－Ｓ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＣ０８７０３．２）
（配列番号１０２）タンパク質配列：
ＭＡＡＲＰＬＰＶＳＰＡＲＡＬＬＬＡＬＡＧＡＬＬＡＰＣＥＡＲＧＶＳＬＷＮＱＧＲＡＤＥＶＶＳＡＳＶＲＳＧＤＬＷＩＰＶＫＳＦＤＳＫＮＨＰＥＶＬＮＩＲＬＱＲＥＳＫＥＬＩＩＮＬＥＲＮＥＧＬＩＡＳＳＦＴＥＴＨＹＬＱＤＧＴＤＶＳＬＡＲＮＹＴＶＩＬＧＨＣＹＹＨＧＨＶＲＧＹＳＤＳＡＶＳＬＳＴＣＳＧＬＲＧＬＩＶＦＥＮＥＳＹＶＬＥＰＭＫＳＡＴＮＲＹＫＬＦＰＡＫＫＬＫＳＶＲＧＳＣＧＳＨＨＮＴＰＮＬＡＡＫＮＶＦＰＰＰＳＱＴＷＡＲＲＨＫＲＥＴＬＫＡＴＫＹＶＥＬＶＩＶＡＤＮＲＥＦＱＲＱＧＫＤＬＥＫＶＫＱＲＬＩＥＩＡＮＨＶＤＫＦＹＲＰＬＮＩＲＩＶＬＶＧＶＥＶＷＮＤＭＤＫＣＳＶＳＱＤＰＦＴＳＬＨＥＦＬＤＷＲＫＭＫＬＬＰＲＫＳＨＤＮＡＱＬＶＳＧＶＹＦＱＧＴＴＩＧＭＡＰＩＭＳＭＣＴＡＤＱＳＧＧＩＶＭＤＨＳＤＮＰＬＧＡＡＶＴＬＡＨＥＬＧＨＮＦＧＭＮＨＤＴＬＤＲＧＣＳＣＱＭＡＶＥＫＧＧＣＩＭＮＡＳＴＧＹＰＦＰＭＶＦＳＳＣＳＲＫＤＬＥＴＳＬＥＫＧＭＧＶＣＬＦＮＬＰＥＶＲＥＳＦＧＧＱＫＣＧＮＲＦＶＥＥＧＥＥＣＤＣＧＥＰＥＥＣＭＮＲＣＣＮＡＴＴＣＴＬＫＰＤＡＶＣＡＨＧＬＣＣＥＤＣＱＬＫＰＡＧＴＡＣＲＤＳＳＮＳＣＤＬＰＥＦＣＴＧＡＳＰＨＣＰＡＮＶＹＬＨＤＧＨＳＣＱＤＶＤＧＹＣＹＮＧＩＣＱＴＨＥＱＱＣＶＴＬＷＧＰＧＡＫＰＡＰＧＩＣＦＥＲＶＮＳＡＧＤＰＹＧＮＣＧＫＶＳＫＳＳＦＡＫＣＥＭＲＤＡＫＣＧＫＩＱＣＱＧＧＡＳＲＰＶＩＧＴＮＡＶＳＩＥＴＮＩＰＬＱＱＧＧＲＩＬＣＲＧＴＨＶＹＬＧＤＤＭＰＤＰＧＬＶＬＡＧＴＫＣＡＤＧＫＩＣＬＮＲＱＣＱＮＩＳＶＦＧＶＨＥＣＡＭＱＣＨＧＲＧＶＣＮＮＲＫＮＣＨＣＥＡＨＷＡＰＰＦＣＤＫＦＧＦＧＧＳＴＤＳＧＰＩＲＱＡＥＡＲＱＥＡＡＥＳＮＲＥＲＧＱＧＱＥＰＶＧＳＱＥＨＡＳＴＡＳＬＴＬＩ
マウスＡＤＡＭ１２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０３１４２６．２）
（配列番号１０３）タンパク質配列：
ＭＡＥＲＰＡＲＲＡＰＰＡＲＡＬＬＬＡＬＡＧＡＬＬＡＰＲＡＡＲＧＭＳＬＷＤＱＲＧＴＹＥＶＡＲＡＳＬＬＳＫＤＰＧＩＰＧＱＳＩＰＡＫＤＨＰＤＶＬＴＶＱＬＱＬＥＳＲＤＬＩＬＳＬＥＲＮＥＧＬＩＡＮＧＦＴＥＴＨＹＬＱＤＧＴＤＶＳＬＴＲＮＨＴＤＨＣＹＹＨＧＨＶＱＧＤＡＡＳＶＶＳＬＳＴＣＳＧＬＲＧＬＩＭＦＥＮＫＴＹＳＬＥＰＭＫＮＴＴＤＳＹＫＬＶＰＡＥＳＭＴＮＩＱＧＬＣＧＳＱＨＮＫＳＮＬＴＭＥＤＶＳＰＧＴＳＱＭＲＡＲＲＨＫＲＥＴＬＫＭＴＫＹＶＥＬＶＩＶＡＤＮＲＥＦＱＲＱＧＫＤＬＥＫＶＫＱＲＬＩＥＩＡＮＨＶＤＫＦＹＲＰＬＮＩＲＩＶＬＶＧＶＥＶＷＮＤＩＤＫＣＳＩＳＱＤＰＦＴＳＬＨＥＦＬＤＷＲＫＩＫＬＬＰＲＫＳＨＤＮＡＱＬＩＳＧＶＹＦＱＧＴＴＩＧＭＡＰＩＭＳＭＣＴＡＥＱＳＧＧＶＶＭＤＨＳＤＳＰＬＧＡＡＶＴＬＡＨＥＬＧＨＮＦＧＭＮＨＤＴＬＥＲＧＣＳＣＲＭＡＡＥＫＧＧＣＩＭＮＰＳＴＧＦＰＦＰＭＶＦＳＳＣＳＲＫＤＬＥＡＳＬＥＫＧＭＧＭＣＬＦＮＬＰＥＶＫＱＡＦＧＧＲＫＣＧＮＧＹＶＥＥＧＥＥＣＤＣＧＥＰＥＥＣＴＮＲＣＣＮＡＴＴＣＴＬＫＰＤＡＶＣＡＨＧＱＣＣＥＤＣＱＬＫＰＰＧＴＡＣＲＧＳＳＮＳＣＤＬＰＥＦＣＴＧＴＡＰＨＣＰＡＮＶＹＬＨＤＧＨＰＣＱＧＶＤＧＹＣＹＮＧＩＣＱＴＨＥＱＱＣＶＴＬＷＧＰＧＡＫＰＡＰＧＩＣＦＥＲＶＮＳＡＧＤＰＹＧＮＣＧＫＤＳＫＳＡＦＡＫＣＥＬＲＤＡＫＣＧＫＩＱＣＱＧＧＡＳＲＰＶＩＧＴＮＡＶＳＩＥＴＮＩＰＱＱＥＧＧＲＩＬＣＲＧＴＨＶＹＬＧＤＤＭＰＤＰＧＬＶＬＡＧＴＫＣＡＥＧＫＩＣＬＮＲＲＣＱＮＩＳＶＦＧＶＨＫＣＡＭＱＣＨＧＲＧＶＣＮＮＲＫＮＣＨＣＥＡＨＷＡＰＰＦＣＤＫＦＧＦＧＧＳＴＤＳＧＰＩＲＱＡＤＮＱＧＬＴＶＧＩＬＶＳＩＬＣＬＬＡＡＧＦＶＶＹＬＫＲＫＴＬＭＲＬＬＦＴＨＫＫＴＴＭＥＫＬＲＣＶＨＰＳＲＴＰＳＧＰＨＬＧＱＡＨＨＴＰＧＫＧＬＬＭＮＲＡＰＨＦＮＴＰＫＤＲＨＳＬＫＣＱＮＭＤＩＳＲＰＬＤＡＲＡＶＰＱＬＱＳＰＱＲＶＬＬＰＬＨＱＴＰＲＡＰＳＧＰＡＲＰＬＰＡＳＰＡＶＲＱＡＱＧＩＲＫＰＳＰＰＱＫＰＬＰＡＤＰＬＳＲＴＳＲＬＴＳＡＬＶＲＴＰＧＱＱＥＰＧＨＲＰＡＰＩＲＰＡＰＫＨＱＶＰＲＰＳＨＮＡＹＩＫ

Claims

抗体（Ａｂ）または抗原結合Ａｂ断片であって、前記Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片が、ＡＤＡＭ１２に結合し、
（ａ）重鎖（ＨＣ）可変ドメインであって、
ＨＣ相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＨＣ相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、
ＨＣ相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）、および
ヒト様ＨＣフレームワークを含む、ＨＣ可変ドメインと、
（ｂ）軽鎖（ＬＣ）可変ドメインであって、
ＬＣ相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＬＣ相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、
ＬＣ相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）、および
ヒト様ＬＣフレームワークを含む、ＬＣ可変ドメインと、を含み、
任意選択で、前記ＡｂまたはＡｂ断片が、モノクローナルＡｂ、単一特異性Ａｂ、二重特異性Ａｂ、多重特異性Ａｂ、ヒト化Ａｂ、四量体Ａｂ、四価Ａｂ、単鎖Ａｂ、ドメイン特異性Ａｂ、ドメイン欠失Ａｂ、ｓｃＦｃ融合タンパク質、キメラＡｂ、合成Ａｂ、組換えＡｂ、ハイブリッドＡｂ、変異Ａｂ、ＣＤＲ接合されたＡｂ、断片抗原結合（Ｆａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’断片、可変断片（Ｆｖ）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆｄ断片、ダイアボディ、およびミニボディからなる群から選択される、Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片。
（ｉ）前記ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３が、それぞれ配列番号１３２、１３３、および１３４に記載されるアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３が、それぞれ配列番号１３６、１３７、および１３８に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｉｉ）前記ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３が、それぞれ配列番号２３２、２３３、および２３４によってコードされるアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３が、それぞれ配列番号２３６、２３７、および２３８によってコードされるアミノ酸配列を含むか、
（ｉｉｉ）前記ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３が、それぞれ配列番号１４２、１４３、および１４４に記載されるアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３が、それぞれ配列番号１４６、１４７、および１４８に記載されるアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３が、それぞれ配列番号２４２、２４３、および２４４によってコードされるアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３が、それぞれ配列番号２４６、２４７、および２４８によってコードされるアミノ酸配列を含み、
任意選択で、
（ａ）前記ヒト様ＨＣフレームワークが、ヒトＨＣフレームワークと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり、
（ｂ）前記ヒト様ＬＣフレームワークが、ヒトＬＣフレームワークと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、請求項１に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片。
（ｉ）前記ＨＣ可変ドメインが、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ可変ドメインが、配列番号１３５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むか、
（ｉｉ）前記ＨＣ可変ドメインが、配列番号２３１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ可変ドメインが、配列番号２３５によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むか、
（ｉｉｉ）前記ＨＣ可変ドメインが、配列番号１４１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ可変ドメインが、配列番号１４５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｖ）前記ＨＣ可変ドメインが、配列番号２４１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ可変ドメインが、配列番号２４５によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片。
（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９もしくは１５０に記載されるアミノ酸配列、または
（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片。
２つ以上の結合特異性を含み、第１の特異性が、ＡＤＡＭ１２のエピトープに対する特異性であり、
（ｉ）第２の特異性が、ＡＤＡＭ１２の別のエピトープに対する特異性であるか、または
（ｉｉ）前記第２の特異性が、ＣＤ３、ＮＫＧ２Ｄ、４－１ＢＢ、およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）からなる群から任意選択で選択される、ＡＤＡＭ１２以外の第２の抗原のエピトープに対する特異性である、請求項１～４のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片。
ヒト様断片結晶化可能（Ｆｃ）領域を含み、
（ｉ）任意選択で、前記ヒト様Ｆｃ領域が、ヒトＦｃ領域と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり、
かつ
（ｉｉ）さらに、任意選択で、前記ヒト様Ｆｃ領域が、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃｇＲ）、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＢ１、ＦｃｇＲＩＩＢ２、ＦｃｇＲＩＩＩＡ、ＦｃｇＲＩＩＩＢ、Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃｅＲ）、ＦｃｅＲＩ、ＦｃｅＲＩＩ、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃａＲ）、ＦｃａＲＩ、Ｆｃアルファ／ミュー受容体（Ｆｃａ／ｍＲ）、および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）からなる群から選択されるＦｃＲに結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片。
抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、
（ａ）請求項１～６のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片と、
（ｂ）前記Ａｂまたは抗原結合Ａｂ断片にコンジュゲートされた薬物と、を含み、
（ｉ）任意選択で、前記薬物が、抗がん性薬物、抗増殖性薬物、細胞傷害性薬物、抗血管新生薬物、アポトーシス薬物、免疫刺激薬物、抗菌薬物、抗生物質薬物、抗ウイルス薬物、抗炎症性薬物、抗線維化薬物、免疫抑制薬物、ステロイド、気管支拡張剤、β遮断薬、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、ＡＤＡＭ１２阻害剤、ＡＤＡＭ１２シグナル伝達阻害剤、酵素、ホルモン、神経伝達物質、毒素、放射性同位体、化合物、小分子、小分子阻害剤、タンパク質、ペプチド、ベクター、プラスミド、ウイルス粒子、ナノ粒子、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、またはイメージング薬物であり、
（ｉｉ）さらに任意選択で、前記薬物が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ククルビタシン、カエトシン、ケトグロボシン、クラミドシン、カリケアミシン、ネモルビシン、クリプトフィシン、メンサカルシン、アンサマイトシン、マイトマイシンＣ、ゲルダナマイシン、メケルカルマイシン、レベッカマイシン、サフラシン、オキラクトマイシン、オリゴマイシン、アクチノマイシン、サンドラマイシン、ヒポテマイシン、ポリケトマイシン、ヒドロキシエリプチシン、チオコルヒチン、メトトレキサート、トリプトリド、タルトブリン、ラクタシスチン、ドラスタチン、アウリスタチン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、テロメスタチン、ツバスタチンＡ、コンブレタスタチン、マイタンシノイド、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＦ、ＤＭ１、ＤＭ４、ＤＴＴ、１６－ＧＭＢ－ＡＰＡ－ＧＡ、１７－ＤＭＡＰ－ＧＡ、ＪＷ５５、ピロロベンゾジアゼピン、ＳＮ－３８、Ｒｏ５－３３３５、プワイナフィシン、デュオカルマイシン、バフィロマイシン、タキソイド、ツブリシン、フェルレノール、ルシオールＡ、フマギリン、ハイグロリジン、グルコピエリシジン、アマニチン、アンサトリエニン、シネルビン、ファラシジン、ファロイジン、フィトスフォンゴシン（ｐｈｙｔｏｓｐｈｏｎｇｏｓｉｎｅ）、ピエリシジン、ポロネチン（ｐｏｒｏｎｅｔｉｎ）、フォドフィロトキシン（ｐｈｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）、グラミシジンＡ、サンギナリン、シネフンギン、ヘルボキシジエン、マイクロコリンＢ、ミクロシスチン、ムスコトキシン（ｍｕｓｃｏｔｏｘｉｎ）Ａ、トリトキシン、トリポリンＡ、ミオセベリン、ミトキシンＢ、ノクオリン（ｎｏｃｕｏｌｉｎ）Ａ、プソイドラリン酸Ｂ、プソイロチンＡ、シクロパミン、クルブリン、コルヒチン、アフィジコリン、エングレリン、コルジセピン、アポプトリジン、エポチロンＡ、リマキノン（ｌｉｍａｑｕｉｎｏｎｅ）、イサトロポロン（ｉｓａｔｒｏｐｏｌｏｎｅ）、イソフィスツラリン（ｉｓｏｆｉｓｔｕｌａｒｉｎ）、キナルドペプチン、イキサベピロン、アエロプリシニン、アルギノシン（ａｒｒｕｇｉｎｏｓｉｎ）、アグロケリン、エポチロン、および上述のうちのいずれか１つの誘導体からなる群から選択される、ＡＤＣ。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ａ）ＡＤＡＭ１２に結合する抗原結合（ＡＢ）ドメインと、
（ｂ）膜貫通（ＴＭ）ドメインと、
（ｃ）細胞内シグナル伝達（ＩＣＳ）ドメインと、
（ｄ）任意選択で、前記ＡＢドメインおよび前記ＴＭドメインを結合するヒンジと、
（ｅ）任意選択で、１つ以上の共刺激（ＣＳ）ドメインと、を含む、ＣＡＲ。
前記ＡＢドメインが、請求項１～６のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片であり、
任意選択で、
（Ｉ）前記ＡＢドメインが、
（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９もしくは１５０に記載されるアミノ酸配列、または
（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むか、
（ＩＩ）前記ＡＢドメインが、
（ｉ）配列番号１３９、１４０、１４９もしくは１５０に記載されるアミノ酸配列、または
（ｉｉ）配列番号２３９、２４０、２４９、もしくは２５０によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖと、ＡＤＡＭ１２への結合を競合するか、あるいは
（ＩＩＩ）前記ＡＢドメインが、天然のＡＤＡＭ１２結合分子のＡＤＡＭ１２結合ドメインと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、
さらに任意選択で、前記天然のＡＤＡＭ１２結合分子が、アルファアクチニン２（ＡＣＴＮ２）、インスリン様成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）、ＩＧＦＢＰ５、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ制御サブユニットアルファ（ＰＩＫ３Ｒ１）、ヘパリン結合上皮成長因子（ＨＢ－ＥＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ベータセルリン、デルタ様１、胎盤ロイシンアミノペプチダーゼ（Ｐ－ＬＡＰ）、およびマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ－１４）からなる群から選択される、請求項８に記載のＣＡＲ。
前記ＴＭドメインが、
（Ｉ）ＣＤ２８、ＣＤ３ｅ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＴＣＲａ、ＴＣＲｂ、およびＣＤ３ｚからなる群から選択されるタンパク質のＴＭ領域またはその膜貫通部分に由来し、
（ＩＩ）任意選択で、ＣＤ２８のＴＭ領域またはその膜貫通部分に由来し、
（ＩＩＩ）さらに任意選択で、
（ｉ）配列番号１６１に記載されるアミノ酸配列、または
（ｉｉ）配列番号２６１によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項８または９に記載のＣＡＲ。
前記ＩＣＳドメインが、
（Ｉ）ＣＤ３ｚ、リンパ球受容体鎖、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体タンパク質、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）サブユニット、ＩＬ－２受容体サブユニット、ＦｃＲｇ、ＦｃＲｂ、ＣＤ３ｇ、ＣＤ３ｄ、ＣＤ３ｅ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃｅＲＩ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２からなる群から選択されるタンパク質の細胞質シグナル伝達配列またはその機能的断片に由来し、
（ＩＩ）任意選択で、ＣＤ３ｚの細胞質シグナル伝達配列またはその機能的断片に由来し、
（ＩＩＩ）さらに任意選択で、
（ｉ）配列番号１６２に記載されるアミノ酸配列、または
（ｉｉ）配列番号２６２によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項８～１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記ヒンジが、
（Ｉ）ＣＤ２８に由来し、
（ＩＩ）任意選択で、
（ｉ）配列番号１６３に記載されるアミノ酸配列、または
（ｉｉ）配列番号２６３によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ配列を含む、請求項８～１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記１つ以上のＣＳドメインのうちの少なくとも１つが、
（Ｉ）ＣＤ２８、ＤＡＰ１０、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２７、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＴＬＡ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＤＳ、ＣＲＴＡＭ、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＥＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＬ２Ｒｂ、ＩＬ２Ｒｇ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ－１、ＰＳＧＬ１、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、ＶＬＡ－６、およびＣＤ８３リガンドからなる群から選択されるタンパク質の細胞質シグナル伝達配列またはその機能的断片に由来し、
（ＩＩ）任意選択で、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、またはＤＡＰ１０の細胞質シグナル伝達配列またはその機能的断片に由来し、
（ＩＩＩ）さらに任意選択で、
（ｉ）配列番号１６４に記載されるアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号２６４によってコードされるアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１６５に記載されるアミノ酸配列、
（ｉｖ）配列番号２６５によってコードされるアミノ酸配列、
（ｖ）配列番号１６６に記載されるアミノ酸配列、または
（ｖｉ）配列番号２６６によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ配列を含む、請求項８～１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（ｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７１）のアミノ酸配列、
（ｉｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７２）のアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７３）のアミノ酸配列、
（ｉｖ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７４）のアミノ酸配列、
（ｖ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７５）のアミノ酸配列、
（ｖｉ）ｈ６Ｅ６ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７６）のアミノ酸配列、
（ｖｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７７）のアミノ酸配列、
（ｖｉｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７８）のアミノ酸配列、
（ｉｘ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＨＬ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１７９）のアミノ酸配列、
（ｘ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８０）のアミノ酸配列、
（ｘｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－４１ＢＢＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８１）のアミノ酸配列、
（ｘｉｉ）ｈ６Ｃ１０ｓｃＦｖＬＨ－ＣＤ２８Ｈ－ＣＤ２８ＴＭ－ＤＡＰ１０ＣＳ－ＣＤ３ｚＩＣＳ（配列番号１８２）のアミノ酸配列、または
（ｘｉｉｉ）配列番号２７１～２８２のうちのいずれか１つによってコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項８～１３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記ＡＢドメインにコンジュゲートされた細胞傷害性薬物をさらに含む、請求項８～１４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体（Ａｂ）または抗原結合Ａｂ断片をコードする、単離された核酸配列。
請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする、単離された核酸配列。
さらに
（Ｉ）リーダー配列（ＬＳ）であって、前記ＬＳが、任意選択で、配列番号２６０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である、ＬＳと、任意選択で、
（ＩＩ）Ｔ２Ａ配列および／または切断ＣＤ１９（ｔｒＣＤ１９）をコードする配列であって、前記Ｔ２Ａ配列が、任意選択で、配列番号２６９と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であり、前記ｔｒＣＤ１９が、任意選択で、配列番号１７０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、Ｔ２Ａ配列および／またはｔｒＣＤ１９をコードする配列とを含む、請求項１７に記載の単離された核酸配列。
ベクターであって、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の核酸配列を含み、
任意選択で、前記ベクターが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、コスミド、ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択される、ベクター。
組換えまたは単離された細胞であって、
（ｉ）請求項１～６のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、
（ｉｉ）請求項７に記載のＡＤＣ、
（ｉｉｉ）請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、
（ｉｖ）請求項１６～１８のいずれか一項に記載の核酸配列、または
（ｖ）請求項１９に記載のベクターを含み、
任意選択で、前記細胞が、
（Ｉ）植物細胞、細菌細胞、真菌細胞、酵母細胞、原虫細胞、および昆虫細胞からなる群から任意選択で選択される、非哺乳動物細胞、
（ＩＩ）ヒト細胞、ラット細胞、およびマウス細胞からなる群から任意選択で選択される、哺乳動物細胞、
（ＩＩＩ）幹細胞、
（ＩＶ）初代細胞、任意選択で、ヒト初代細胞、またはそれに由来する細胞、
（Ｖ）細胞株、任意選択でハイブリドーマ細胞株、
（ＶＩ）免疫細胞、
（ＶＩＩ）ＭＨＣ＋もしくはＭＨＣ－であるか、または
（ＶＩＩＩ）細胞株、Ｔ細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）細胞、最終分化したエフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、およびａ／ｂＴ細胞、ｇ／ｄＴ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、パーフォリン欠損細胞、グランザイム欠損細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、単球、マクロファージ、および樹状細胞からなる群から選択される、組換えまたは単離された細胞。
前記細胞が、請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現し、任意選択で、前記細胞が、その内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が、
（ｉ）発現されないか、
（ｉｉ）機能的に発現されないか、または
（ｉｉｉ）野生型Ｔ細胞と比較して減少したレベルで発現するように改変されたＴ細胞であり、
さらに任意選択で、前記ＣＡＲが、その標的分子に結合する場合、
（Ｉ）前記細胞が、活性化されるか、または刺激されて、増殖し、
（ＩＩ）前記細胞が、前記標的分子を発現する細胞に対して細胞障害性を示し、
（ＩＩＩ）前記細胞を投与すると、疾患、がん、心臓の状態、自己免疫状態、炎症状態、または線維化状態を改善し、
（ＩＶ）前記細胞が、サイトカインおよび／またはケモカインの発現を増加させ、任意選択で、前記サイトカインがＩＦＮ－ｇであるか、または
（Ｖ）前記細胞が、サイトカインおよび／またはケモカインの発現を減少させ、任意選択で、サイトカインがＴＧＦ－ｂである、請求項２０に記載の組換えまたは単離された細胞。
細胞の集合体であって、請求項２０もしくは２１に記載の少なくとも１つの第１の組換えまたは単離された細胞と、任意選択で、前記第１の組換えまたは単離された細胞とは異なるＣＡＲ、ＡＤＣ、または抗体もしくは抗原結合抗体断片を発現するように操作された少なくとも１つの第２の組換えまたは単離された細胞を含む、細胞の集合体。
薬学的組成物であって、
（ａ）（ｉ）請求項１～６のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、
（ｉｉ）請求項７に記載のＡＤＣ、
（ｉｉｉ）請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、
（ｉｖ）請求項１６～１８のいずれか一項に記載の核酸配列、
（ｖ）請求項１９に記載のベクター、
（ｖｉ）請求項２０もしくは２１に記載の細胞、または
（ｖｉｉ）請求項２２に記載の細胞の集合体と、
（ｂ）任意選択で、薬学的に許容される賦形剤もしくは担体とを含む、薬学的組成物。
対象を治療する方法であって、前記方法が、それを必要とする対象に治療有効量の
（ｉ）請求項１～６のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、
（ｉｉ）請求項７に記載のＡＤＣ、
（ｉｉｉ）請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、
（ｉｖ）請求項１６～１８のいずれか一項に記載の核酸配列、
（ｖ）請求項１９に記載のベクター、
（ｖｉ）請求項２０もしくは２１に記載の細胞、
（ｖｉｉ）請求項２２に記載の細胞の集合体、または
（ｖｉｉｉ）請求項２３に記載の薬学的組成物を投与することを含み、
任意選択で、前記方法が、
（Ｉ）がん、線維症、自己免疫、心血管状態、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、もしくは炎症性障害、または
（ＩＩ）がんであって、前記がんが、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、がんの治療に使用される、方法。
抗ＡＤＡＭ１２剤で対象を治療する方法であって、前記方法が、
（ａ）前記対象から生体試料を得るステップ、または得たステップと、
（ｂ）前記生体試料中のＡＤＡＭ１２の発現レベルを測定するステップと、
（ｃ）前記対象がＡＤＡＭ１２過剰発現者であるかどうかを決定するステップと、
（ｄ）前記対象がＡＤＡＭ１２過剰発現者である場合、前記対象に治療有効量の
（ｉ）請求項１～６のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、
（ｉｉ）請求項７に記載のＡＤＣ、
（ｉｉｉ）請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、
（ｉｖ）請求項１６～１８のいずれか一項に記載の核酸配列、
（ｖ）請求項１９に記載のベクター、
（ｖｉ）請求項２０もしくは２１に記載の細胞、
（ｖｉｉ）請求項２２に記載の細胞の集合体、または
（ｖｉｉｉ）請求項２３に記載の薬学的組成物を投与するステップとを含み、
任意選択で、前記対象が、がんを患っており、前記がんが、任意選択で、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、方法。
対象において免疫応答を刺激するための方法であって、前記対象に治療有効量の
（ｉ）請求項１～６のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、
（ｉｉ）請求項７に記載のＡＤＣ、
（ｉｉｉ）請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、
（ｉｖ）請求項１６～１８のいずれか一項に記載の核酸配列、
（ｖ）請求項１９に記載のベクター、
（ｖｉ）請求項２０もしくは２１のいずれか一項に記載の細胞、
（ｖｉｉ）請求項２２に記載の細胞の集合体、または
（ｖｉｉｉ）請求項２３に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
対象において疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の
（ｉ）請求項１～６のいずれか一項に記載のＡｂまたは抗原結合Ａｂ断片、
（ｉｉ）請求項７に記載のＡＤＣ、
（ｉｉｉ）請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、
（ｉｖ）請求項１６～１８のいずれか一項に記載の核酸配列、
（ｖ）請求項１９に記載のベクター、
（ｖｉ）請求項２０もしくは２１に記載の細胞、
（ｖｉｉ）請求項２２に記載の細胞の集合体、または
（ｖｉｉｉ）請求項２３に記載の薬学的組成物を投与することを含み、
前記疾患が、
（Ｉ）がん、線維症、自己免疫、心血管状態、アレルギー性状態、呼吸器疾患、腎症、神経疾患、筋疾患、肝疾患、代謝症候群、感染、もしくは炎症性障害、または
（ＩＩ）膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、がん、
（ＩＩＩ）または上述のいずれかの組み合わせである、方法。
対象において細胞の集合体を拡張する方法であって、前記方法が、前記対象に
（ｉ）請求項１６～１８のいずれか一項に記載の核酸配列、
（ｉｉ）請求項１９に記載のベクター、
（ｉｉｉ）請求項２０もしくは２１に記載の細胞、
（ｉｖ）請求項２２に記載の細胞の集合体、または
（ｖ）請求項２３に記載の薬学的組成物を投与することを含み、
（Ｉ）任意選択で、得られた前記細胞の集合体が、前記対象において投与後の少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２年間、または少なくとも３年間維持され、
（ＩＩ）さらに任意選択で、前記対象が、がんを患っており、前記がんが、さらに任意選択で、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、デスモイド腫瘍、食道がん、線維腫症、膠芽腫、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、食道胃腺がん、乏突起膠腫、口腔がん、口腔扁平上皮がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、胃がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、方法。
第２の薬剤を投与することをさらに含み、前記第２の薬剤が、任意選択で、抗がん性薬物、抗増殖性薬物、細胞傷害性薬物、抗血管新生薬物、アポトーシス薬物、免疫刺激薬物、抗菌薬物、抗生物質薬物、抗ウイルス薬物、抗炎症性薬物、抗線維化薬物、免疫抑制薬物、ステロイド、気管支拡張剤、β遮断薬、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、ＡＤＡＭ１２阻害剤、ＡＤＡＭ１２シグナル伝達阻害剤、酵素、ホルモン、神経伝達物質、毒素、放射性同位体、化合物、小分子、小分子阻害剤、タンパク質、ペプチド、ベクター、プラスミド、ウイルス粒子、ナノ粒子、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、イメージング薬物、またはＡＤＡＭ１２以外の抗原を標的とするＣＡＲ、ＡＤＣもしくは抗体もしくは抗原結合抗体断片、またはＡＤＡＭ１２以外の抗原を標的とするＣＡＲ、ＡＤＣもしくは抗体もしくは抗原結合抗体断片を発現するように操作された組換えまたは単離された細胞である、請求項２４～２８のいずれか一項に記載の方法。
請求項８～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む細胞を生成する方法であって、前記方法が、
（ｉ）（ｉ－ａ）請求項８～１５のいずれか一項に記載の少なくとも１つのＣＡＲをコードする核酸配列、または（ｉ－ｂ）請求項１７もしくは１８に記載の少なくとも１つの核酸配列を細胞に導入すること、または
（ｉｉ）請求項１９に記載のベクターを用いて細胞を形質導入することと、
任意選択で、さらに
（ｉｉｉ）フローサイトメトリーまたは免疫蛍光アッセイを介して決定される前記ＣＡＲおよび／または選択可能なマーカーの発現に基づいて、前記細胞を単離することとを含む、方法。