JP2022524281A

JP2022524281A - ＴＧＦβのＬＴＢＰ複合体特異的阻害剤およびその使用

Info

Publication number: JP2022524281A
Application number: JP2021543179A
Authority: JP
Inventors: トーマスシャルフ; ジャスティンダブリュ．ジャクソン; ジョージコリコー; アビシェックダッタ; ステファンワウェルシック; クリストファーリトルフィールド; アダムフォーゲル; フレドリックジュニアシュトライヒ; ケイトリンシュタイン; ジュリアマクリアリー; マシューサロット
Original assignee: Scholar Rock Inc
Current assignee: Scholar Rock Inc
Priority date: 2019-01-30
Filing date: 2020-01-30
Publication date: 2022-05-02
Also published as: KR20210121174A; DOP2021000161A; SG11202108099WA; CN113677711A; MX2021009175A; US20210047396A1; MA54845A; IL285076A; EA202192130A1; EP3689905A2; EP3689905A3; CA3128042A1; US20220064276A1; PE20220279A1; CL2021001993A1; US11365245B2; AR117918A1; CO2021010062A2; BR112021015056A2; CR20210416A

Abstract

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβおよび／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβの複合体に選択的に結合する、阻害剤、例えば抗体、およびその抗原結合部分が本明細書において開示される。本出願はまた、例えば、ＴＧＦβ活性化を阻害するため、および、ＴＧＦβ関連の障害、例えば線維性状態を患っている対象を治療するための、これらの阻害剤の使用方法も提供する。それを必要とする対象のための、コンテキスト依存性またはコンテキスト非依存性アイソフォーム特異的ＴＧＦβ阻害剤を選択する方法も提供される。

Description

［関連出願］
この国際出願は、２０１９年１月３０日に出願された米国仮出願番号６２／７９８，９２７の利益および優先権を主張し、その内容は全体で参照により本明細書中に明白に援用される。

［背景］
増殖因子の形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーは、制限されないが、細胞増殖の阻害、組織恒常性、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）再構築、内皮間葉転換、細胞遊走および浸潤、および免疫調整／抑制、ならびに間葉上皮転換を含む様々な生物学的プロセスを調節する、複数のシグナリングカスケードに関与する。ＥＣＭ再構築に関して、ＴＧＦβシグナリングは、線維芽細胞集団およびＥＣＭ沈着（例えば、コラーゲン）を増大させ得る。免疫系では、ＴＧＦβリガンドは、制御性Ｔ細胞の機能と、免疫前駆細胞の増殖および恒常性の維持を調整する。正常な上皮細胞では、ＴＧＦβは、強力な増殖インヒビターおよび細胞分化のプロモーターである。しかしながら、腫瘍が発生して進行すると、ＴＧＦβに対する負の増殖応答を失うことが多い。この状況においては、ＴＧＦβは、血管新生を刺激、間質環境を変更、および、局所および全身性の免疫抑制を誘導するその能力に起因して、腫瘍発生のプロモーターとなり得る。これらおよび他の理由から、ＴＧＦβは、複数の臨床的徴候（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）に関する治療的標的となっている。複数のグループによって現在までになされた多くの試みにもかかわらず、ＴＧＦβ治療の臨床開発はチャレンジングである。

ラットおよびイヌを含む前臨床試験による観察により、インビボでのＴＧＦβの阻害と関連する特定の毒性が明らかとなった。さらに、いくつかのＴＧＦβ阻害剤が現在までに開発されているが、ＴＧＦβをターゲットとしたほとんどの臨床プログラムは、副作用または毒性リスクのため中止されている。

例えば、Ａｎｄｅｒｔｏｎｅｔａｌ．（ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙＰａｔｈｏｌｏｇｙ，３９：９１６－２４，２０１１）は、ＴＧＦβタイプＩ（ＡＬＫ５）受容体の小分子阻害剤が、前臨床動物モデルにおいて弁間質細胞の出血、炎症、変性および増殖によって特徴付けられる心臓弁病変を誘導することを報告した。毒性は、試験された全ての用量で全ての心臓弁において観察された。Ｆｒａｚｉｅｒｅｔａｌ．（ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙＰａｔｈｏｌｏｇｙ，３５：２８４－２９５，２００７）は、ＴＧＦβタイプＩ（ＡＬＫ５）受容体の小分子阻害剤ＧＷ７８８３８８の投与により、ラットにおいて骨端軟骨の形成異常が誘導されることを報告した。

Ｓｔａｕｂｅｒｅｔａｌ．（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔｉｃｅ４：３，２０１４）は、特定のがん治療のために研究されているＴＧＦβ受容体Ｉキナーゼの阻害剤であるＬＹ２１５７２９９の慢性の（≧３月）投与によって、ラットおよびイヌにおいて、心血管系、胃腸、免疫系、骨／軟骨、生殖系、および腎臓系を含む複数の臓器毒性が生じることを報告した。

ＴＧＦβの全てのヒトアイソフォームを中和することが可能な「ｐａｎ」ＴＧＦβ抗体であるフレソリムマブ（ＧＣ１００８）は、カニクイザル・マカクを用いた研究において、複数回投与後に歯肉、膀胱、および鼻甲介上皮の上皮過形成を誘導することが報告されている（Ｌｏｎｎｉｎｇｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１２：２１７６－８９，２０１１）。同様に、様々な皮膚皮疹／病変、歯肉出血および疲労が、薬剤の複数回用量の投与後の臨床試験において報告されている。フレソリムマブに対する最も顕著な有害反応は、ヒトがん患者における皮膚の角化棘細胞腫および／または扁平上皮細胞癌腫の誘導を含む（例えば：Ｌａｃｏｕｔｕｒｅｅｔａｌ．，２０１５，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，６４：４３７－４６；Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎｅｔａｌ．，２０１３，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２：８，ｅ２６２１８；およびＬｏｎｎｉｎｇｅｔａｌ．，２０１１を参照）。臨床試験によるさらなる証拠は、場合によりこの抗体が腫瘍進行を加速させ得ることを示唆している（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎｅｔａｌ．，２０１３，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２：８，ｅ２６２１８）。

したがって、がん、線維症および炎症などを含む、ＴＧＦβが関与する疾患および障害を効果的かつ安全に治療するために用いることのできる、ＴＧＦβシグナリングを調整するための新規の方法および組成物が必要である。

ＴＧＦβの広範な阻害と関連する潜在的に危険な副作用が次第に認識され、最近では、複数のグループが、アイソフォームの全てではないがサブセットを標的化し、なおかつ十分な有効性を維持する阻害剤の同定に切り替えている。例えば、ＷＯ２０１６／１６１４１０には、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２の両方に結合する中和抗体（すなわち、ＴＧＦβ１／２阻害剤）が開示されている。ＷＯ２００６／１１６００２は、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方に結合するが（すなわち、ＴＧＦβ１／３阻害剤）、優先的に前者に結合する中和抗体を提供する。伝統的なモノクローナル抗体に加えて、いくつかのグループは、いわゆる「リガンド・トラップ（ｌｉｇａｎｄｔｒａｐｓ）」として機能する改変された融合タンパク質を開発しており（例えば、ＷＯ２０１８／１５８７２７、ＷＯ２０１８０２９３６７およびＷＯ２０１８１２９３３１を参照）、それらのうち少なくとも一部は、ＴＧＦβ１／３に関して選択的であり得る。ＴＧＦβ１／３阻害剤の別のクラスは、α－Ｖ（αν）インテグリンの阻害剤、例えば、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方（すなわち、ＴＧＦβ１／３）を活性化することが知られているインテグリンであるανβ６に対する抗体を含む。さらに他のグループは、全ての３つのアイソフォームを阻害する「より良い」ｐａｎ－阻害剤（すなわち、ＴＧＦβ１／２／３またはｐａｎ－阻害剤）を探求し続けている（例えば、ＷＯ２０１８／１３４６８１を参照）。

しかしながら、有効性の観点から、この分野の通説では、治療的効果を達成するためにＴＧＦβの複数のアイソフォームを阻害することが有利であるとされており、これに適合するために、「慎重に投与するレジメン」による毒性管理が解決策として示唆されている（Ｂｒｅｎｎａｎｅｔａｌ．（２０１８）ｍＡｂｓ，１０：１，１－１７）。

最近になって、出願人は、動物モデルにおいて安全かつ効果的であることが示されたアイソフォーム選択的ＴＧＦβ１阻害剤を記載し（例えば、参照により援用されるＷＯ２０１７／１５６５００およびＷＯ２０１８／１２９３２９を参照）、全てのＴＧＦβアイソフォームを広範に拮抗するのとは対照的に、ＴＧＦβ１アイソフォームを選択的に標的化することは、許容できる毒性で有効性を達成するための有利な手法を提供し得るという概念を支持した。

インビボで有効であることが示された用量でのＴＧＦβ１の選択的阻害によって達成される、観察された安全性プロファイルは、臨床適用のためのＴＧＦβ１阻害剤の開発に向けた有望なステップであるが、ＴＧＦβ１効果の所定のサブセットに選択的に影響することが可能なＴＧＦβ１阻害剤（例えば、ＬＴＢＰによって提示される複合体に対して選択的であるＴＧＦβ阻害剤）の同定は、理解しにくい（ｅｌｕｓｉｖｅ）ままであった。最近、出願人は、そのような「ＬＴＢＰコンテキスト（ｃｏｎｔｅｘｔ）特異的」阻害剤を、出願人によって以前に記載された方法を用いて（例えば、ＷＯ２０１４／０７４５３２およびＷＯ２０１４／１８２６７６を参照）、生産することができることを示した（ＷＯ２０１９／０２３６６１、参照により本明細書中に援用される）。しかしながら、前述の国際公報に記載されるＬＴＢＰ選択的ＴＧＦβ１阻害剤は、最適以下の種交差反応性と合わせて、程々の親和性および阻害活性を示した。

本開示は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１のようなマトリックス関連ｐｒｏＴＧＦβ複合体を選択的に標的化することが可能な、改善されたＴＧＦβ阻害剤を提供する。

これらの阻害剤は、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３によって提示されるｐｒｏＴＧＦβに、高い親和性（少なくともナノモル範囲）で結合および阻害するが、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３によって提示されるｐｒｏＴＧＦβ１のような免疫細胞関連ＴＧＦβには結合および阻害せず、または、結合は意味のあるレベル未満である（例えば、ＬＴＢＰ複合体に関する親和性は、ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３複合体の少なくとも５０倍である）。したがって、これらの阻害剤は、ＴＧＦβの活性化をコンテキスト依存的（ｃｏｎｔｅｘｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）な様式で選択的に阻害することができ、したがって、それらは選択的に結合し、それにより、ＥＣＭと関連するＴＧＦβシグナリング軸を阻害する。特に、本開示は、マトリックス関連（例えば、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３関連）ＴＧＦβ活性化の選択的阻害剤を含む。一部の実施態様では、かかる阻害剤は、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３と関連するＴＧＦβの特定のアイソフォーム（例えば、ｐｒｏＴＧＦβ１、ｐｒｏＴＧＦβ２、および／またはｐｒｏＴＧＦβ３）に特異的に結合し、したがって、ＴＧＦβアイソフォーム特異性も提供する。特定の実施態様では、かかる阻害剤は、ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１に特異的に結合する。本発明の任意の実施態様では、かかる阻害剤は、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３によって仲介される免疫細胞機能と関連するＴＧＦβ１の活性化を阻害しない。本開示に含まれる改善された抗体は、少なくともナノモル範囲内（すなわち、１×１０^－９Ｍ～１０×１０^－９Ｍ）のヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する親和性を有する。一部の実施態様では、かかる抗体は、少なくともナノモル範囲内（すなわち、１×１０^－９Ｍ～１０×１０^－９Ｍ）のミューリンＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはミューリンＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する親和性も有する。

制御性Ｔ細胞上のＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体を標的化しないＴＧＦβ１阻害剤の治療的用途に関する理論的根拠は、少なくとも３つある：

第１に、制御性Ｔ細胞は、自己抗原に対する免疫寛容の維持および自己免疫疾患の防止において、極めて重要な役割を果たしている。Ｔｒｅｇは一般に、エフェクターＴ細胞の誘導および増殖を、抑制し、弱め、または下方調節するので、この機能の全身的阻害は、通常はＴｒｅｇ細胞によって提供される「ブレーク（ｂｒｅａｋ）」を無効にすることによって、宿主において過剰活性または誇張された免疫応答をもたらし得る。したがって、ここでとられる手法（例えば、Ｔｒｅｇ機能の無効化を伴わないＴＧＦβ１阻害）は、自己免疫を誘発するリスクを避けることを目的とする。さらに、過敏な免疫応答または自己免疫を発症する傾向を既に有する患者は、正常なＴｒｅｇ機能が利用できず、そのような状態を引き起こすか悪化させるリスクが特にある可能性があり；したがって、マトリックスＴＧＦβ１を選択的に標的化する阻害剤は、そのようなリスクを有利に最小化させ得る。

第２に、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比の変更により、線維症を進行させるＴｈ１７サイトカインの不均衡が生じ、そのことは、肝線維症などの線維症の重症度と相関するという証拠が示唆されている（例えば、Ｓｈｏｕｋｒｙｅｔａｌ．（２０１７）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１９８（１Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）：１９７．１２を参照）。本発明者らは、ＴＧＦβ１機能のＧＡＲＰアームの混乱は、直接的または間接的に線維性状態を悪化させ得ると判断した。

第３に、制御性Ｔ細胞は、免疫恒常性および自己免疫の防止に不可欠である。特に、長期または慢性の投与を目的とするＴＧＦβ１阻害療法には、免疫恒常性の維持における正常なＴｒｅｇ機能の混乱から生じる潜在的副作用を避けることが望ましいと判断された（例えば、Ｒｉｃｈｅｒｔ－ＳｐｕｈｌｅｒａｎｄＬｕｎｄ（２０１５）ＰｒｏｇＭｏｌＢｉｏｌＴｒａｎｓｌＳｃｉ．１３６：２１７－２４３に概説される）。このストラテジーは、とりわけ感染と闘うために必要である正常な免疫機能を維持することを少なくとも部分的に目的としている。

この目的を達成するために、本開示の発明者らは、マトリックス関連ＴＧＦβ１活性化を選択的に標的化するが免疫細胞関連ＴＧＦβ１活性化を標的としない、ＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的なコンテキスト選択的阻害剤を産生することを目指した。

現在までに存在する技術的挑戦は、インビボの様々なコンテキスト（または「ニッチ（ｎｉｃｈｅｓ）」）内に存在するＴＧＦβ１のこれらのサブプールを識別し選択的に調整する能力の制限を含む。

この挑戦を対処する試みにおいて、本発明者らは、本明細書に記載されるように、潜在型ＴＧＦβ１プロドメインに結合し、潜在型ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３への検出可能な結合がなく、インテグリンによって仲介される潜在型ＴＧＦβ１の活性化をインビトロでコンテキスト依存性によって阻害する、アイソフォーム特異的モノクローナル抗体を同定した。かかる抗体の発見および特性化は、ＴＧＦβ１活性化の、コンテキスト依存性の、細胞に基づくアッセイの開発によって少なくとも部分的に可能であった。この新規のアッセイの開発および検証の過程において、αＶβ６インテグリンと同様に、αＶβ８もＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１を活性化することができることが示された。さらに、ＬＴＢＰ１複合体と同様に、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１がαＶβ６によって活性化され得ることが示された。これらのアッセイにおいてスクリーニングによって発見された抗体は、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３によって提示された場合にのみＴＧＦβ１に結合して阻害する抗体のクラスを明らかにした。そのようなＬＴＢＰ特異的抗体は、免疫関連ＴＧＦβ１の提示因子（ｐｒｅｓｅｎｔｅｒ）ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３のコンテキストにおいてＴＧＦβ１を阻害しない。かかる抗体は、例えば線維性状態を含む障害の治療のための治療候補であり、慢性投与が可能であり、ＴＧＦβ関連の免疫系活性化を避けることができる。様々な線維性状態のためのコンテキスト特異的またはコンテキスト非依存的なＴＧＦβ１阻害剤を選択する方法も、本明細書において提供される。

したがって、一態様では、本発明は、Ｋ_Ｄ≦５０ｎＭでＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合するという点で特徴付けられる、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、Ｋ_Ｄ≦２５ｎＭでＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合するという点で特徴付けられる、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、Ｋ_Ｄ≦１０ｎＭでＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合するという点で特徴付けられる、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する単離された抗体、またはその抗原結合部分を提供し、ここで、抗体、またはその抗原結合部分は、以下の標的：（ａ）ＬＴＢＰ１単独；（ｂ）ｐｒｏＴＧＦβ１単独；（ｃ）ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体；および（ｄ）ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のうちの１つまたは複数に結合しない。さらなる実施態様では、本発明は、Ｋ_Ｄ＜５ｎＭでＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合するという点で特徴付けられる、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一態様では、本発明は、ＬＴＢＰ１／３によって提示されるｐｒｏＴＧＦβ潜在型複合体に選択的に結合する、細胞外マトリックス関連ＴＧＦβ活性化の阻害剤を提供する。一実施態様では、阻害剤は、免疫細胞関連ＴＧＦβ１活性化、例えば、ＧＡＲＰによって提示されるｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体の活性化に起因する免疫細胞関連ＴＧＦβ１活性化を阻害しない。例示的な実施態様では、阻害剤は、抗体、またはその抗原結合部分である。

他の態様では、本発明は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合するという点で特徴付けられる、ＴＧＦβ抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１に選択的に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、ヒトおよびミューリンの相対物の両方に結合する。

一態様では、本発明は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ潜在型複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ潜在型複合体に選択的に結合し、それにより、潜在型複合体からの成熟ＴＧＦβ増殖因子の放出を調整する単離された抗体、またはその抗原結合部分を提供し、ここで、抗体、またはその抗原結合部分は、成熟ＴＧＦβ１単独またはＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体には結合しない。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体に結合しない。あるいは、一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体に結合する。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体に特異的である。他の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体に特異的である。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、少なくとも約１０^－８Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に＜５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

本開示は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に選択的に結合し、１つまたは複数のさらなる有利な特性を有する、抗体およびその抗原結合フラグメントをさらに提供する。実際に、本発明者らは、驚くべきことに、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に高い親和性かつ有利に遅い解離速度で結合し、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体およびマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体と交差反応性でもあり、そして、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体（または実に、ヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体）への有意な結合を示さない抗体を提供できることが分かった。

さらに、本明細書中に開示される抗体（前述の有利な特性の１つまたは複数または実に全てを有する抗体を含む）は、細胞に基づくアッセイにおいてＴＧＦβ１シグナリングの強力な阻害を示し、線維症の複数の動物モデルにおいて、線維症マーカーおよびＴＧＦβシグナリングを有意に減少させる。

したがって、一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＢＬＩによって測定した場合に＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し、以下の特性の１つまたは複数を有する：
ｉ）マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体と交差反応性である；
ｉｉ）マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体と交差反応性である；
ｉｉｉ）ＢＬＩによって測定した場合に＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する；
ｉｖ）ＢＬＩによって測定した場合に＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する；
ｖ）同一のアッセイ条件下でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低いＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する；
ｖｉ）ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示さない；
ｖｉｉ）ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体（例えば、ヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体）への検出可能な結合を示さない。

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、上記の少なくとも特性（ｉ）～（ｖ）を有し、（ｖｉｉ）を有してもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、上記の少なくとも特性（ｉ）～（ｉｖ）および（ｖｉ）を有し、（ｖｉｉ）を有してもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、上記の少なくとも特性（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）を有し、（ｖｉｉ）を有してもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、上記の少なくとも特性（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）を有し、（ｖｉｉ）を有してもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、上記の少なくとも特性（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉ）を有し、（ｖｉｉ）を有してもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、上記の少なくとも特性（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）を有し、（ｖｉｉ）を有してもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、上記の少なくとも特性（ｉ）～（ｉｉｉ）および（ｖ）を有し、（ｖｉｉ）を有してもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、上記の少なくとも特性（ｉ）～（ｉｉｉ）および（ｖｉ）を有し、（ｖｉｉ）を有してもよい。

一部の好ましい実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、ＢＬＩによって測定した場合に＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し、上記の特性（ｉ）～（ｖｉｉ）の全てを有する。

抗体または抗原結合フラグメントは、ＬＴＢＰ１／３によって提示されるｐｒｏＴＧＦβ潜在型複合体に選択的に結合し得て、細胞外マトリックス関連ＴＧＦβの活性化を阻害する。

さらに、ＴＧＦβ１活性化のさらに有利なアイソフォーム選択的阻害剤は、遅い解離速度（すなわち、オフ速度、ｋ_ＯＦＦ）を示すモノクローナル抗体（免疫グロブリンおよびその抗原結合フラグメントまたは部分を含む）を含んでよい。したがって、本発明はさらに、線維症のような慢性および進行性疾患の治療が、そのような抗体の解離速度に反映され得る優れた耐久性を有する阻害剤を必要とし得るという認識に基づく。

抗原に対する抗体の親和性は典型的に、平衡解離定数、すなわちＫ_Ｄとして測定される。実験的に測定されるｏｆｆおよびｏｎ速度の比（ｋ_ＯＦＦ／ｋ_ＯＮ）を用いて、Ｋ_Ｄ値を計算することができる。ｋ_ＯＦＦ値は抗体解離速度を表わし、その抗原からどれくらい速く解離するかを示し、一方で、ｋ_ＯＮ値は抗体会合速度を表わし、その抗原にどれくらい速く結合するのかを提供する。後者は典型的に濃度依存性であり、前者は濃度非依存性である。Ｋ_Ｄ値は、抗体の濃度（特定の実験に関して必要な抗体の量）に関し、したがって、Ｋ_Ｄ値が低ければ低いほど（濃度が低ければ低いほど）、抗体の親和性は高い。参照抗体に対して、より高い親和性抗体は、より低いｋ_ＯＦＦ速度、より高いｋ_ＯＮ速度、またはその両方を有し得る。

ｋ_ＯＦＦおよびｋ_ＯＮ速度は両方とも、特定の抗体のその抗原に対する全体的親和性に寄与し、各構成要素の相対的重要性または影響は、抗体の作用機序に依存し得る。例えば、成熟増殖因子（例えば、潜在型複合体から遊離する可溶性の一過的ＴＧＦβ１リガンド）に結合する中和抗体は、インビボで、リガンド結合に関して、内因性の高親和性受容体と競合しなければならない。リガンド受容体間の相互作用は局所的であり、また、リガンドは短期的（ｓｈｏｒｔ－ｌｉｖｅｄ）であるので、かかる抗体は、組織においてリガンドがその細胞受容体を見つける前に可溶性増殖因子を急速に標的化および隔離して、それにより、ＴＧＦβ１シグナリング経路を活性化させることが可能である必要がある。したがって、リガンド標的化中和抗体が強力であるためには、標的増殖因子に速く結合する能力、すなわち、高い会合速度（ｋ_ＯＮ）が特に重要であり得る。

対照的に、出願人は、潜在型複合体からの成熟増殖因子の活性化（例えば放出）を防止することによりＴＧＦβ１シグナリングを阻害する抗体（「活性化阻害剤」）は、抗体が標的抗原（例えば、ｐｒｏＴＧＦβ１複合体）と結合した時点で、遅い解離速度を有することが優先的に有利であり得ると判断した。中和抗体とは異なり、そのような抗体は、細胞受容体と直接競合するのではなく、むしろ、組織環境内で休止状態のままである不活性の前駆体形態（例えば、潜在型ｐｒｏＴＧＦβ１複合体）を標的化して、それにより、ＴＧＦβ１の活性化を先行して防止することにより、シグナリングの上流で作用する。そのような抗体は、その阻害活性を、成熟増殖因子が潜在型複合体から遊離するのを防止することによって与え得る。例えば、そのような抗体は、不活性の（例えば「潜在型」）状態で維持するためにプロドメインのかご構造（ｃａｇｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）内に活性の増殖因子を閉じ込めるための「クランプ（ｃｌａｍｐ）」のように機能し得る。実際に、エピトープ・マッピングを含む構造解析により、これらの抗体がＴＧＦβ１活性化をブロックする能力を強調する分子メカニズムに対する見識が提供された。この点について、プロドメインのＬａｔｅｎｃｙＬａｓｓｏ領域は特に有用な標的であり得る。

標的の結合の際、標的への結合を維持することのできる（例えば、潜在型複合体から非常にゆっくり解離する）抗体は、効果および／または結合性の高い耐久性に起因して、優れたインビボ効能を達成するのに有利であると期待される。この認識に基づき、本開示の出願人は、以前に記載された抗体と比較して特に低いｋ_ＯＦＦ値を有するＴＧＦβ１のアイソフォーム選択的活性化阻害剤を同定しようとした。したがって、本発明によれば、好ましい抗体は、速い会合速度（ｋ_ＯＮ）と対照的に遅い解離速度（ｋ_ＯＦＦ）に主に寄与し得る高い親和性を有する。したがって、一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＢＬＩによって測定した場合に＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し、以下の特性の１つまたは複数を有する（上記に示された特性（ｉ）～（ｖｉｉ）のうちの１つまたはそれらの組み合わせに追加されてよい）：
（ｖｉｉｉ）ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合したときに、≦５×１０^－４（１／ｓ）の低い解離速度（ｋ_ＯＦＦ）（例えば、適切なインビトロ結合／速度論アッセイによって、例えばＢＬＩによって、例えば、Ｏｃｔｅｔに基づくシステムによって測定）；および／または
（ｉｘ）ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合したときに、≧４５分の長い結合半減期（ｈａｌｆ－ｂｉｎｄｉｎｇｔｉｍｅ）（ｔ^１／２）（例えば、ＳＰＲによって測定）。

一部の好ましい実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲを含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ）アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_１）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＬまたはＧである；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧ（Ｘ_２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＶ、ＲまたはＬであり、Ｘ_２はＹ、ＳまたはＴである；
ｄ）アミノ酸配列ＴＲＳ（Ｘ_１）Ｇ（Ｘ_２）ＩＤ（Ｘ_３）ＮＹＶＱを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮ、Ｌ、ＳまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである；
ｅ）アミノ酸配列ＥＤ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＲＰＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＮ、ＦまたはＡであり、Ｘ_２はＱ、ＩまたはＶである；および
ｆ）アミノ酸配列Ｑ（Ｘ_１）ＹＤ（Ｘ_２）（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｑ（Ｘ_５）ＶＶを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、ＨまたはＷであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、Ａ、Ｌ、ＥまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである。

一部の好ましい実施態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３１８に示される重鎖可変領域配列および配列番号３１９に示される軽鎖可変領域配列を有する抗体（例えば、Ａｂ４２）と競合または交差競合する。抗体は、配列番号３１８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号３１９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでよい。

本明細書において提供される抗体またはその抗原結合フラグメントは、一部の好ましい実施態様では、以下の６個のＣＤＲ（例えば、Ａｂ４２のもの）を含んでよい：
アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨ（配列番号１６６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６７）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２；
アミノ酸配列ＡＲＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹ（配列番号１６８）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３；
アミノ酸配列ＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱ（配列番号１６９）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ１；
アミノ酸配列ＥＤＮＱＲＰＳ（配列番号１７０）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ２；および
アミノ酸配列ＱＳＹＤＹＤＴＱＧＶＶ（配列番号１７１）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ３。

抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３１８と少なくとも９５％同一の（少なくとも９８％同一であってもよい）アミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号３１９と少なくとも９５％同一の（少なくとも９８％同一であってもよい）アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域をさらに含んでよい。

一部の代替の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲを含む：
ａ）アミノ酸配列ＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＤＰＳＹＤＳ（Ｘ_２）ＡＧＭ（Ｘ_３）Ｖを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＡまたはＩであり、Ｘ_３はＤまたはＱである；
ｄ）アミノ酸配列ＲＡＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＩＳ（Ｘ_３）ＹＬＮを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＫまたはＱであり、Ｘ_２はＶまたはＳであり、Ｘ_３はＳまたはＹである；
ｅ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＡＳ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＱＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＮであり、Ｘ_３はＬまたはＲである；
ｆ）アミノ酸配列ＱＱ（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）Ｐ（Ｘ_４）Ｔを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＦまたはＮであり、Ｘ_３はＷまたはＦであり、Ｘ_４はＦまたはＬである。

一部の実施態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６０に示される重鎖可変領域配列および配列番号３６１に示される軽鎖可変領域配列を有する抗体（例えば、Ａｂ６３）と競合または交差競合する。抗体は、配列番号３６０と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号３６１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでよい。

本明細書において提供される抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲ（例えば、Ａｂ６３のもの）を含んでよい：
アミノ酸配列ＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧ（配列番号２９２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹ（配列番号２９３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２；
アミノ酸配列ＡＧＤＰＳＹＤＳＩＡＧＭＱＶ（配列番号２９４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３；
アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号２９５）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ１；
アミノ酸配列ＡＡＳＮＬＱＳ（配列番号２９６）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ２；および
アミノ酸配列ＱＱＳＦＤＷＰＬＴ（配列番号２９７）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ３。

抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３６０と少なくとも９５％同一の（少なくとも９８％同一であってもよい）アミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号３６１と少なくとも９５％同一の（少なくとも９８％同一であってもよい）アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域をさらに含んでよい。

一態様では、本発明は、対象における線維性障害を治療するための方法での使用のための抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず、ここで、ａ）線維性障害は、慢性炎症を含む；ｂ）対象は、免疫抑制によって利益を受ける；ｃ）対象は、自己免疫疾患を有するか、または発症するリスクがある；ｄ）対象は、同種移植片移植の候補者であり、またはそれを受けたことがある；ｅ）対象は、高いＴｈ１７／Ｔｒｅｇ比を有する；および／または、ｆ）対象は、ＴＧＦβ１阻害剤の長期または慢性の投与が必要である。一部の実施態様では、対象は、代謝障害を有し、または発症するリスクがある（および、対象は、ａ）～ｆ）の１つまたは複数に係る対象であってもよい）。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アイソフォーム特異的ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１阻害剤および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１阻害剤である。

本明細書において提供される抗体またはその抗原結合フラグメントは、対象における線維性障害を治療するための方法において用いられ得る。線維性障害は、慢性炎症を含んでよい。対象は、免疫抑制によって利益を受け得る。対象は、自己免疫疾患を有してよく、または発症するリスクがあってよい。対象は、同種移植片移植の候補者であってよく、または受けたことがあってよい。

代わりに、または加えて、対象は、高いＴｈ１７／Ｔｒｅｇ比を有してよい。対象は、ＴＧＦβ１阻害剤の長期または慢性の投与が必要であってよい。

代わりに、または加えて、対象は、代謝障害を有してよく、または発症するリスクがあってよい。

別の態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合しない抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を作製するための方法を提供し；ここで、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＴＧＦβ１を阻害するが、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３を阻害せず、その方法は、ｉ）ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１を含む少なくとも１つの抗原を提供するステップ、ｉｉ）ステップ（ｉ）の少なくとも１つの抗原に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１のプールを選択して、それにより、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１の特異的な結合物質（ｂｉｎｄｅｒ）を提供するステップ；ｉｉｉ）ＴＧＦβ１の活性化を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントの第２のプールを選択して、それにより、ＴＧＦβ１活性化の特異的な阻害剤を産生するステップ；ｉｖ）抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントを医薬組成物に処方して、それにより、抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を作製するステップを含む。

一実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１のプールから、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ１、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ２、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ２、成熟ＴＧＦβ２、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ３、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ３、成熟ＴＧＦβ３、またはそれらの任意の組み合わせに結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。一実施態様では、その方法は、ステップ（ｉｉ）および／または（ｉｉｉ）において選択される抗体、またはその抗原結合フラグメントのアイソフォーム特異性を決定または確認するステップをさらに含む。一実施態様では、その方法は、ヒトおよび齧歯類抗原に対して交差反応性である抗体、またはその抗原結合フラグメントに関して選択するステップをさらに含む。一実施態様では、その方法は、抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントの、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントを産生するステップをさらに含む。

一実施態様では、その方法は、抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはそのフラグメントを提供するステップをさらに含む。一実施態様では、親和性成熟／最適化は、抗体の第１のプールおよび／または抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載の軽鎖シャッフリングに供するステップを含む。一実施態様では、親和性成熟／最適化は、抗体の第１、第２、および／または第３のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載のＣＤＲＨ１／Ｈ２多様化に供するステップを含む。一実施態様では、親和性成熟／最適化は、抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載のＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発に供するステップを含む。一実施態様では、親和性成熟／最適化は、抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載の軽鎖ＣＤＲ突然変異誘発に供するステップを含む。一実施態様では、親和性成熟／最適化は、抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載の軽鎖ＣＤＲＬ１／Ｌ２多様化に供するステップを含む。

一実施態様では、その方法は、抗体の第１および／または第２のプールから、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する抗体、またはその抗原結合フラグメントの親和性を決定するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞１００ｎＭ、＞５０ｎＭ、＞２５ｎＭ、または＞１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。

一実施態様では、その方法は、第１および／または第２のプールから、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する抗体、またはその抗原結合フラグメントの親和性を決定するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞１００ｎＭ、＞５０ｎＭ、または＞１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。

一実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合しない任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。

一実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のｃａｇａアッセイのような適切な機能性のインビトロの細胞に基づくアッセイによって測定して、抗体、またはその抗原結合フラグメントのＩＣ_５０を決定するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載の細胞に基づくアッセイ（例えばｃａｇａアッセイ）によって測定した場合に１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１０ｎＭ、または５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメント抗体を除去するステップを含む。

一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載の内因性ＬＴＢＰｃａｇａアッセイによって測定した場合に５０ｎＭまたは１０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。

一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のヒトＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定した場合に５０ｎＭ、２５ｎＭ、または１０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。

一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のミューリンＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定した場合に５０ｎＭ、２５ｎＭ、１０ｎＭ、または５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。

治療的使用に適切なＴＧＦβ１選択的阻害剤を同定または選択するためのプロセスおよび方法は、ＴＧＦβ１選択的阻害剤を含む組成物を作製するための方法と同様に、本発明に包含される。好ましい実施態様では、ＴＧＦβ１阻害剤（例えば、選択阻害剤）は、以下：ｉ）ヒトＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のそれぞれに対する高親和性（例えば、Ｋ_Ｄ＜５ｎＭ）、および、ｉｉ）低い解離速度（ｋ_ＯＦＦ）、例えば、適切なインビトロ結合／速度論アッセイによって、例えばＢＬＩ、例えば、Ｏｃｔｅｔに基づくシステムによって測定した場合に、≦５×１０^－４（１／ｓ）によって特徴付けられる、特に有利な速度論基準を有する１つまたは複数の抗体または抗原結合フラグメントを含む。低い解離速度基準は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体からの、長い解離半減期（ｈａｌｆ－ｔｉｍｅ）（ｔ^１／２）、例えば、≧４５分に反映され得る。好ましくは、マトリックス関連複合体（単数または複数）に関する抗体またはその抗原結合フラグメントの長い解離半減期は、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のような細胞関連複合体に関する短い解離半減期と合わせられる。特に、好ましい抗体またはフラグメントは、１０分以内、より好ましくは５分以内のｔ^１／２でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体から解離する。同様に、本明細書中に記載のＴＧＦβ１選択的阻害剤を含む組成物を作製するための方法は、そのような抗体を選択するステップをさらに含んでよい。選択された抗体または複数の抗体は、適切な前臨床モデルを用いて、有効性試験および毒物学／安全性試験を含む前臨床試験において評価される。有効性試験において決定される抗体（単数または複数）の有効量は、毒物学／安全性試験において決定される望ましくない毒性を生じさせるレベルの下である。好ましくは、少なくとも３倍、６倍、より好ましくは１０倍の治療濃度域を有する抗体（単数または複数）が選択される。本開示に係る抗体の有効量は、毎週投与される場合、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇであってよい。好ましい実施態様では、本開示に係る抗体の最大投与可能量（ＭＴＤ）は、少なくとも４週間にわたって毎週投与される場合、＞１００ｍｇ／ｋｇである。一部の実施態様では、前臨床毒物学試験において、抗体は、＞１００ｍｇ／ｋｇ／週、＞２００ｍｇ／ｋｇ／週または＞３００ｍｇ／ｋｇ／週のＮＯＡＥＬを示し、ここで毒物学試験は、４週試験、８週試験、または１２週試験であってもよい。例えば、ＮＯＡＥＬは、健康なマウスまたはラットにおける１２週の亜慢性投与レジメンでは、＞１００ｍｇ／ｋｇ／週である。

本開示はまた、ＴＧＦβ３選択的阻害剤によるＴＧＦβ３の阻害が、マウスにおいて線維症を進行させる効果を生じさせたという驚くべき発見を含む。同様に、ＴＧＦβ１選択的阻害剤およびＴＧＦβ３選択的阻害剤の組み合わせを用いた、同一モデルにおけるＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方の同時的な阻害は、ＴＧＦβ１阻害剤の抗線維化効果を弱めた。これらの観察は、非選択的ＴＧＦβ阻害剤（例えばｐａｎ－阻害剤およびＴＧＦβ１／３阻害剤）が、実際に線維症を悪化させ得る可能性を高める。有利に、本明細書中に開示される抗体（例えば、本明細書中に記載のＡｂ４２およびその変異体）は、潜在型ＴＧＦβ１複合体を特異的に標的化し、かつ、低い解離速度で標的化するという点で、アイソフォーム選択的である。したがって、本発明は、線維性状態を有する患者（例えば、ＥＣＭ調節不全を伴う疾患）のための特定のＴＧＦβ阻害剤を選択する場合に、ＥＣＭ調節不全を悪化させるリスクを避けるようにアイソフォーム選択性を慎重に考慮すべきであるという認識を含む。したがって、本開示は、線維性状態（本明細書中に記載の好ましい線維性状態を含む）を有する対象を治療するために、ＴＧＦβ３を阻害しないＴＧＦβ阻害剤を選択するステップを含む治療的方法を含む。

本明細書において用いられるアイソフォーム選択的ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体選択的阻害剤は、一部の実施態様では、Ａｂ３１、Ａｂ３４、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ６２、Ａｂ６３、およびＡｂ６４（Ａｂ４２またはＡｂ６３であってもよい）（すなわち、本明細書において提供される対応するＡｂの重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体または抗原結合フラグメント）、それらの変異体／誘導体またはそれらの抗原結合フラグメント、またはそれらの抗原結合フラグメントを含む改変された分子から選択されてよい。一部の好ましい実施態様では、ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体選択的阻害剤は、Ａｂ４２、変異体／誘導体またはその抗原結合フラグメント、またはその抗原結合フラグメントを含む改変された分子である。好ましい実施態様では、ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体選択的阻害剤は、Ａｂ４２またはその抗原結合フラグメントである。

ＴＧＦβ１の潜在型の標的化が、アイソフォームおよびコンテキスト特異性を提供することをグラフで示す。潜在型ＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的およびＬＴＢＰ複合体特異的な結合物質の同定を説明する。図２Ａは、ＳＲ－ＡＢ１が、提示分子と関係なく、潜在型ＴＧＦβ１に結合することを説明する。ＳＲ－ＡＢ１は、酵母ディスプレイによって発見されたヒトモノクローナル抗体であり、潜在型ＴＧＦβ１に選択的に結合し、潜在型ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３、または成熟ＴＧＦβ１には検出可能に結合しない。ＳＲ－ＡＢ１は、マウス、ラット、およびカニクイザルタンパク質と交差反応し、４つの潜在型ＴＧＦβ１複合体の全てに結合する。図２Ｂは、ＳＲ－ＡＢ２（抗－ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１抗体）が、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１または成熟ＴＧＦβ１に結合しないことを説明する。ＳＲ－ＡＢ２は、齧歯類ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応する。活性化された組み換え潜在型ＴＧＦβ１の阻害を検出するための機能性アッセイ（効能アッセイ）を説明する。図３Ａは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）内に沈着された潜在型ＴＧＦβ１の活性化を示す。このアッセイでは、提示分子は、インテグリン発現細胞内にｐｒｏＴＧＦβ１と共トランスフェクトされる。一時的にトランスフェクトされた細胞を、阻害剤の存在下でアッセイプレート内に蒔く。潜在型ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体は、ＥＣＭ内に埋め込まれている。それから、ＴＧＦβレポーター細胞を系に添加し；フリーの増殖因子（インテグリンによって放出される）がシグナル伝達をして、ルシフェラーゼアッセイによって検出される。図３Ｂは、細胞表面上に提示された潜在型ＴＧＦβ１の活性化を示す。提示分子は、インテグリン発現細胞内にｐｒｏＴＧＦβ１と共トランスフェクトされる。潜在型ＴＧＦβ１は、ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３によって細胞表面上に発現される。それから、ＴＧＦβレポーター細胞および阻害剤を系に添加し；フリーの増殖因子（インテグリンによって放出される）がシグナル伝達して、ルシフェラーゼアッセイによって検出される。組み換え機能性アッセイの最適化を示す。図４Ａは、提示分子およびｐｒｏＴＧＦβ１の共トランスフェクションの際の、提示分子および／またはｐｒｏＴＧＦβ１の活性化の相対的寄与を示す。図４Ｂは、共トランスフェクションの最適化：提示分子およびｐｒｏＴＧＦβ１に関するプラスミドＤＮＡの比を示す。各プラスミドの同等量が共トランスフェクションに最適であった。フィブロネクチンが、ＬＴＢＰによって提示される潜在型ＴＧＦβ１のインテグリンによる活性化を促進することを説明する。アッセイプレートを、ヒト血漿から精製されたフィブロネクチンで事前コーティングした。フィブロネクチンは、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３によって提示される潜在型ＴＧＦβ１の、インテグリンが仲介する活性化を増大させる。ＳＲ－ＡＢ１が、ＴＧＦβ１活性化のコンテキスト非依存性阻害剤であることを説明するグラフである。ＳＲ－ＡＢ１は、提示分子とは関係なくＴＧＦβ１のインテグリン依存性の活性化を阻害することが示された。ＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体（ＬＬＣ）のＬＴＢＰ選択的阻害を確認するデータを提供する。図７Ａは、ＳＲ－ＡＢ２が、ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し；ｐｒｏＴＧＦβ１またはＬＴＢＰ１単独には結合しないことを説明する。ＳＲ－ＡＢ２は、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１にも結合しない。図７Ｂは、ＳＲ－ＡＢ２が、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１（ヒトおよびマウス複合体）のインテグリンによる活性化を阻害することを示す。図７Ｃは、ＳＲ－ＡＢ２が、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１のインテグリンによる活性化を阻害することを示す。ＳＲ－ＡＢ２の重鎖および軽鎖可変領域配列（それぞれ、出現順に配列番号７～８）を提供する。相補性決定領域（ＣＤＲ）には下線が引かれている。ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対するＳＲ－ＡＢ２の結合特異性を説明するグラフである。ＳＲ－ＡＢ２によるマトリックス関連ＴＧＦβ１活性化のコンテキスト選択的阻害を示すデータを提供する。図１０Ａは、ＳＲ－ＡＢ２がＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβを阻害することを説明し、ここで、トランスフェクトされたｐｒｏＴＧＦβ１は、内因性ＬＴＢＰ１／３によって提示される。図１０Ｂは、ＳＲ－ＡＢ２がＧＡＲＰによって提示されるＴＧＦβ１活性化を阻害しないことを説明する。これらのアッセイは、高ＬＴＢＰ３ｍＲＮＡ、低ＬＴＢＰ１ｍＲＮＡ、検出不能ＧＡＲＰ、および検出不能ＬＲＲＣ３３を発現するＬＮ２２９細胞において行われた。ビヒクルに対して正規化されたＴＧＦβ活性をｙ軸に示す。ＬＴＢＰ複合体特異的抗体ＳＲ－ＡＢ１０、ＳＲ－ＡＢ２、およびＳＲ－１３に関する結合プロファイルおよび親和性データを提供する。最適化されたＬＴＢＰ複合体特異的抗体の改善された効能を示すグラフである。図１２Ａは、細胞に基づくＴＧＦβレポーターアッセイによって測定した、ＳＲ－ＡＢ１４（最適化されたＳＲ－ＡＢ１０）の改善された阻害効能を示すグラフを提供する。図１２Ｂは、細胞に基づくＴＧＦβアッセイによって測定した、ＳＲ－ＡＢ１５（最適化されたＳＲ－ＡＢ１３）の改善された阻害効能を示すグラフを提供する。図１３Ａおよび図１３Ｂは、細胞に基づくＴＧＦβレポーターアッセイによって測定した、ＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発後の最適化されたＬＴＢＰ複合体特異的抗体（すなわち、ＳＲ－ＡＢ２０、ＳＲ－ＡＢ２１、ＳＲ－ＡＢ２２、およびＳＲ－ＡＢ２３）の改善された効能を示すグラフである。図１４Ａおよび図１４Ｂは、細胞に基づくＴＧＦβレポーターアッセイによって測定した、ＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発後の最適化されたＬＴＢＰ複合体特異的抗体（すなわち、ＳＲ－ＡＢ２４、ＳＲ－ＡＢ２５、ＳＲ－ＡＢ２６、ＳＲ－ＡＢ２７、ＳＲ－ＡＢ２８、およびＳＲ－ＡＢ２９）の改善された効能を示すグラフである。親和性成熟抗体が、ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への特異的な結合を示すことを示すグラフである。細胞に基づくＴＧＦβレポーターアッセイによって測定した、抗体最適化のサイクル１、２および３の後の、最適化されたＬＴＢＰ複合体特異的抗体の改善された効能を示すグラフである。バキュロウイルス（ＢＶ）粒子への抗体結合を示す酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）の結果を示し、それは、抗体多特異性を試験するものである。アフィニティ捕獲自己相互作用ナノ粒子分光法（ＡＣ－ＳＩＮＳ）アッセイの結果を示し、それは、抗体自己相互作用を試験するものである。プラズモン波長の増大は、自己相互作用を示す。ＳＲ－ＡＢ４２およびＳＲ－ＡＢ３１による処置が、コリン欠乏高脂肪食（ＣＤＨＦＤ）の動物における肝臓組織中のヒドロキシプロリン（ＨＹＰ）（μｇ／組織ｍｇ）の増大を阻害したことを示すグラフである。図２０Ａは、アルポートマウスモデルにおける、リン酸化－対－総（リン酸化および非リン酸化）Ｓｍａｄ２／３の相対比（ｐＳＭＡＤ２／３：ｔＳＭＡＤ２／３）を示すグラフである。単一用量のＳＲ－ＡＢ４２またはＳＲ－ＡＢ６３は、全腎臓溶解物におけるｐＳｍａｄ２／３シグナリングを有意に阻害するのに十分であった。図２０Ｂは、ＥＬＩＳＡによって決定した、リン酸化ＳＭＡＤ２／３（ｐＳＭＡＤ２／３）の量を示すグラフであり、図２０Ｃは、ＥＬＩＳＡによって決定した、総ＳＭＡＤ２／３（ｔＳＭＡＤ２／３）タンパク質の量を示すグラフである。図２０Ｂおよび図２０Ｃによって示されるように、ｐＳＭＡＤの減少は、図２０Ａに示される比の変化に寄与している。リード・サイクル３（ｌｅａｄｃｙｃｌｅ３）抗体が、ＬＴＢＰ－ＴＧＦβ３アッセイにおいて阻害を示さないことを示すグラフである。コントロール、参照Ａｂ、ＴＧＦβ３阻害剤、または両方で処置されたＣＤＨＦＤマウスによる、５つの代表的なＰＳＲ染色画像を提供する（左）。コントロールと比較して、参照Ａｂ、ＴＧＦβ３阻害剤、または両方で処置したＣＤＨＦＤマウスの肝臓切片内のピクロシリウス・レッド領域（％）を示すグラフも提供する（右）。ＳＲ－ＡＢ６３のようなＬＴＢＰ－複合体抗体が、非常に特異的であり、ピコモルの一価親和性を有することを示す。ＳＲ－ＡＢ４２のようなＬＴＢＰ－複合体抗体が、非常に特異的であり、ピコモルの一価親和性を有することを示す。

本発明は、ＴＧＦβの活性化を減少させるのに有用な組成物を提供する。増殖因子－受容体間の相互作用の上流で、潜在型ｐｒｏＴＧＦβ複合体を標的化する阻害剤は、一般に、ＴＧＦβの活性化阻害剤と呼ばれる。

現在までに、ＴＧＦβに関する４つの提示分子：潜在型ＴＧＦβ－結合タンパク質１（「ＬＴＢＰ１」）、潜在型ＴＧＦβ－結合タンパク質３（「ＬＴＢＰ３」）、糖タンパク質Ａ反復優位型（「ＧＡＲＰ」）およびロイシンリッチ反復含有タンパク質３３（「ＬＲＲＣ３３」）が同定されている。これらの提示分子はそれぞれ、ＴＧＦβ前駆体のホモ二量体プロタンパク質複合体、すなわちｐｒｏＴＧＦβとジスルフィド結合を形成することができる。ｐｒｏＴＧＦβ複合体は、活性化イベントが複合体からの可溶性増殖因子の放出をトリガーするまで、それぞれの細胞外ニッチ（例えば、ＥＣＭおよび免疫細胞表面）内で休止状態（潜在型）のままである。

広範に発現されるＴＧＦβ増殖因子および受容体と比べて、提示分子は、より限定的または選択的（例えば、組織特異的）な発現パターンを示し、関連性によってＴＧＦβ活性の機能性コンパートメント化を生じさせる。４つの提示分子－ｐｒｏＴＧＦβ複合体、すなわち、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβおよびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβは、したがって、提示分子が発現される組織において、ＴＧＦβシグナリングの別個の「コンテキスト」を提供する。これらのコンテキストは、２つの広いカテゴリー：ｉ）ＥＣＭと関連するＴＧＦβシグナリング（例えば、マトリックス関連ＴＧＦβの機能）；およびｉｉ）細胞と関連するＴＧＦβシグナリング（特に、特定の免疫細胞の機能）に分類され得る。ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβおよびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体は１つ目のカテゴリーに入り、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβおよびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体は２つ目のカテゴリーに入る。したがって、ＥＣＭと関連するＴＧＦβの活性化を選択的に阻害することが可能なＴＧＦβの阻害剤が本明細書中に開示される。一部の実施態様では、阻害剤は、特定のＴＧＦβアイソフォーム（例えば、ｐｒｏＴＧＦβ１、ｐｒｏＴＧＦβ２、および／またはｐｒｏＴＧＦβ３）に関しても選択的である。

例示的な実施態様では、本明細書中に記載の組成物は、ＬＴＢＰタンパク質、例えば、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３タンパク質のコンテキストにおけるＴＧＦβ１の活性化を選択的に減少させるのに有用である。かかる組成物は、免疫関連ＴＧＦβ１提示分子ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３のコンテキストにおけるＴＧＦβ１を阻害せずに、細胞外マトリックス関連ＴＧＦβ１の活性化を有利に阻害する。本明細書中に記載の組成物は、ＴＧＦβ１活性化、例えば、線維性障害と関連する障害を治療するのに有用である。したがって、一実施態様では、本発明は、ＴＧＦβ１の活性化を減少させる組成物、その使用方法、製造方法、および治療方法を提供する。線維性障害の症候を示している対象のためのＴＧＦβ１阻害剤を選択する方法も提供される。

定義
本開示がより容易に理解され得るように、特定の用語が最初に定義される。これらの定義は、本開示の残部に照らして、当業者によって理解されるように読まれるべきである。別段の定義がない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。さらなる定義が、詳細な説明の全体にわたって示される。

親和性：親和性は、分子（例えば抗体）の、そのリガンド（例えば抗原）に対する結合の強度である。それは典型的に、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）によって測定および報告される。Ｋ_Ｄは、抗体の、抗体会合速度（「ｏｎｒａｔｅ」またはＫ_ｏｎ）（その抗原にどれくらい速く結合するか）に対する、抗体解離速度（「ｏｆｆｒａｔｅ」またはＫ_ｏｆｆ）（その抗原からどれくらい速く解離するか）の比である。例えば、≦１μＭの親和性を有する抗体は、適切なインビトロ結合アッセイによって決定される１μＭ以下のＫ_Ｄ値（すなわち、１μＭ以上の親和性）を有する。適切なインビトロアッセイ、例えば、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ）または表面プラズモン共鳴（例えば、ＢｉａｃｏｒｅＳｙｓｔｅｍ）を用いて、良く知られた方法に基づくＫ_Ｄ値によって測定される親和性を評価することができる。

親和性成熟：親和性成熟は、抗体最適化の１つのタイプであり、抗体またはフラグメントの、その抗原に対する親和性を改善するプロセスであり、典型的に、より高い親和性を達成するために抗体またはフラグメントのアミノ酸配列に対して１つまたは複数の変更を行なうステップを含む。典型的に、親抗体および親和性成熟相対物は、同一のエピトープを保持している。親和性成熟は、１つまたは複数のＣＤＲ配列の多様化および／または突然変異誘発を含んでよい。

抗体：用語「抗体」は、本明細書中の他のどこかにさらに説明される、任意の天然起源、組み換え、改変または操作された免疫グロブリンもしくは免疫グロブリン様構造、またはそれらの抗原結合フラグメントもしくは部分、またはそれらの誘導体を包含する。したがって、その用語は、標的抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子を指し、例えば、キメラ、ヒト化、完全ヒト、および二重特異性抗体を含む。逆の指定がされない限り、本明細書において用いられる用語「抗体」は、抗原結合フラグメントおよびその変異体を含む。無傷の抗体は、一般に、少なくとも２つの全長重鎖および２つの全長軽鎖を含むが、場合によっては、重鎖のみを含み得るラクダ類で天然に生じる抗体のように、より少ない鎖を含んでよい。抗体は、単一の由来だけから得てよく、または、「キメラ」であってよく、すなわち、抗体の異なる部分が２つの異なる抗体に由来してよい。抗体、またはその抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技術によって、または無傷の抗体の酵素的もしくは化学的切断によって、ハイブリドーマにおいて産生され得る。本明細書において用いられる用語「抗体」は、それぞれ、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書において「抗体模倣物」と呼ぶことがある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書において「抗体コンジュゲート」と呼ぶことがある）を含む。一部の実施態様では、その用語は、ぺプチボディも包含する。

抗原：用語「抗原」は、抗体またはフラグメントが特異的に結合する結合領域（単数または複数）内の抗原性決定因子を含んでいる任意の分子を広く含む。抗原は、単一単位分子（例えばタンパク質単量体またはフラグメント）、または、複数の構成要素で構成される複合体であってよい。抗原は、選択的結合剤、例えば抗原結合タンパク質（例えば抗体を含む）による結合が可能な、エピトープ、例えば、分子もしくは分子の部分、または、分子もしくは分子の部分の複合体を提供する。したがって、選択的結合剤は、複合体において２以上の構成要素によって形成される抗原に特異的に結合し得る。一部の実施態様では、抗原は、その抗原に結合することが可能な抗体を産生するために動物において用いることが可能である。抗原は、異なる抗原結合タンパク質、例えば抗体と、相互作用することが可能な１つまたは複数のエピトープを保有してよい。本開示のコンテキストにおいて、適切な抗原は、複合体（例えば、関連した複数の構成要素からなる多量体複合体）であり、ｐｒｏＴＧＦ二量体（「小さな潜在型複合体」またはＳＬＣ）を含み、好ましくは、提示分子を伴う（合わせて、「大きな潜在型複合体」またはＬＬＣ）。ｐｒｏＴＧＦ二量体のそれぞれの単量体は、フューリン切断配列によって分離されたプロドメインおよび増殖因子ドメインを含む。２つのそのような単量体は、ｐｒｏＴＧＦ二量体複合体を形成する。そしてこれが、ｐｒｏＴＧＦ単量体のそれぞれのＮ末端付近に存在するシステイン残基が関与するジスルフィド結合を介して提示分子と共有結合する。提示分子に結合したｐｒｏＴＧＦ二量体によって形成されるこの多重複合体は一般に、大きな潜在型複合体と呼ばれる。抗体または抗原結合フラグメントをスクリーニングするのに適切な抗原複合体は、例えば、大きい潜在型複合体の提示分子構成要素を含む。そのような提示分子構成要素は、全長提示分子またはそのフラグメント（単数または複数）であってよい。提示分子の最小の必要部分は、典型的に、ｐｒｏＴＧＦβ１二量体と共有結合を形成することが可能な２つのシステイン残基を含む提示分子ポリペプチドの少なくとも５０アミノ酸であるが、より好ましくは少なくとも１００アミノ酸を含む。

抗原結合部分／フラグメント：本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合フラグメント」は、抗原（例えば、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数のフラグメントを指す。抗原結合部分は、限定されないが、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然起源の、酵素的に得ることのできる、合成の、または遺伝学的に操作された、ポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。一部の実施態様では、抗体の抗原結合部分は、例えば、抗体の可変（定常でもよい）ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む、タンパク質分解または組み換え遺伝子工学技術のような任意の適切な標準的技術を用いて、完全な抗体分子から取得してよい。抗原結合部分の非限定的な例は、（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子（例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．（１９８８）ＳＣＩＥＮＣＥ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．（１９８８）ＰＲＯＣ．ＮＡＴ’Ｌ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３を参照）；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント（例えば、Ｗａｒｄｅｔａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ３４１：５４４－５４６を参照）；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を含む。単鎖抗体の他の形態、例えばダイアボディも包含される。抗体の抗原結合部分という用語は、他には、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）およびリンカーを含んでいる「ｓｃＦａｂ」として知られる「単鎖Ｆａｂフラグメント」を含み、ここで、前記抗体ドメインおよび前記リンカーは、Ｎ末端からＣ末端の方向で、以下の順番の１つ：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１またはｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬを有し；ここで前記リンカーは、少なくとも３０個のアミノ酸、好ましくは３２～５０個のアミノ酸のポリペプチドである。

進行性線維症：本明細書において用いられる対象は、進行性段階の線維性障害、特に臓器線維症を有する場合、進行性線維症を患い、それにより患者は、同種移植片移植を受けるかまたはそれが必要な候補者となる。

必要に応じて：投与レジメンのコンテキストにおいて、用語「必要に応じて」は、事前に決められた投与スケジュールに基づくものではないが、その代わり、治療中に定期的に測定または監視される１つまたは複数のパラメーターまたはマーカーに基づく投与レジメンを指し、それは、追加の用量が対象／患者にとって有益であるかどうかに関する情報またはガイダンスを提供するものである。例えば、ＴＧＦβ１／２／３阻害剤（「ｐａｎ」阻害剤）、ＴＧＦβ１／２阻害剤およびＴＧＦβ１／３阻害剤のようなＴＧＦβ阻害剤を含む医薬組成物は、「必要に応じ」た基準のもと、臨床利益（例えば、線維症の１つまたは複数の臨床マーカーの減少）を達成および／または維持するのに十分な治療的有効量で、断続的に投与されてよい。一部の実施態様では、本明細書中に開示される抗体（例えば、Ａｂ３１、Ａｂ３４、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ６２、Ａｂ６３、またはＡｂ６４（Ａｂ４２であってもよい））のいずれか１つのようなＬＴＢＰ１／３－複合体選択的ＴＧＦβ阻害剤の投与は、治療的有効性を決定または監視する方法と組み合わせて用いてよい。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１／３－複合体選択的ＴＧＦβ阻害剤は、追加用量のＴＧＦβ阻害剤による臨床利益が期待される場合にのみ患者に投与される。毒性を管理するために、断続的または「必要に応じ」た投与レジメンが、本明細書中に開示されるもののようなＴＧＦβ１選択的阻害剤と比較して、ＴＧＦβのアイソフォーム非選択的阻害剤ではより頻繁に必要であり得ると考えられる。

バイアス：本開示のコンテキストにおいて、用語「バイアス（ｂｉａｓ）」は、抗体が特異的に結合することのできる抗原のサブセットに向けた、またはそれに対する、歪んだ、または不均等な親和性を指す。例えば、抗体は、一方の抗原複合体に関する親和性と他方の抗原複合体に関する親和性が同等でない（例えば、親和性が５倍差を超える）場合、バイアスがあると言われる。「非バイアス（ｕｎｂｉａｓｅｄ）」として特徴付けられる抗体は、そのような抗原複合体に向けた、ほぼ同等の親和性を有する（例えば、親和性が５倍差未満である）。本開示の抗体は、ＥＭＣ関連複合体（ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ）に「選択的に」結合する。そのような選択的結合は、一部の実施態様では、マトリックス関連複合体の少なくとも１つと細胞関連複合体の少なくとも１つ（好ましくは両方）（ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体）との間の相対的親和性が５０倍よりも高い結合を含んでよい。

バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）：ＢＬＩは、例えばバイオセンサーチップ表面上に固定化されたリガンドと溶液中の分析物との間の、生体分子の相互作用を光学的に測定するためのラベルフリーの技術である。ＢＬＩは、結合特異性、会合および解離の速度、または濃度を精密かつ高精度に監視する能力を提供する。ＢＬＩプラットフォーム機器は、例えばＦｏｒｔｅＢｉｏによって市販されており、一般にＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍと呼ばれる。ＢＬＩは、本明細書中に記載のインビトロ結合アッセイを行なうために用いることができる。

自己免疫疾患：自己免疫疾患は、正常な身体部分に対する異常または過剰活性の免疫応答によって生じる状態である。自己免疫性の状態を有するそのような患者への免疫賦活剤の投与は、状態を悪化させ得る。

細胞関連ｐｒｏＴＧＦβ１：その用語は、膜に結合される（例えば、細胞表面に固定される）ＴＧＦβ１またはそのシグナリング複合体（例えば、ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１）を指す。典型的に、そのような細胞は免疫細胞である。ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１は、細胞関連ＴＧＦβ１である。ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３は、特定の細胞の細胞表面上に提示される膜貫通型提示分子である。ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１は、「細胞関連（または「細胞表面」）ｐｒｏＴＧＦβ１複合体と総称され得て、細胞関連（例えば、免疫細胞関連）ＴＧＦβ１活性化／シグナリングを仲介する。

慢性炎症：本開示のコンテキストにおいて、慢性炎症を伴う線維性障害は、組織に対する連続的または持続的な損傷のため最初の損傷後の通常の治療では解決しないことを特徴とする。慢性炎症は、炎症部位（例えば、線維化組織）に存在する細胞のタイプの漸進的変化を含む長期の炎症性応答を指す。それは、炎症過程からの組織の同時の破壊および修復を特徴とする。急性型の炎症を伴う場合があり、または長期の低グレード型である場合がある。

臨床利益：本明細書において用いられる用語「臨床利益」は、療法の有効性および安全性の両方を含むことが意図される。したがって、望ましい臨床利益を達成する治療的処置は、有効かつ安全である（例えば、耐容または許容できる毒性または有害事象を有する）。

組合せ（Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｙ）またはコンビナトリアル（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ）エピトープ：コンビナトリアル・エピトープは、抗原の構成要素（単数または複数）の非連続部分によって形成されていて、三次元構造においてごく接近してエピトープを形成する部位（すなわち、抗原性決定因子）における、コンビナトリアル抗体によって認識および結合されるエピトープである。したがって、本発明の抗体は、ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１複合体の２以上の構成要素（例えば、部分または区分）によって形成されたエピトープに結合してよい。組合せエピトープは、複合体の第１の構成要素由来のアミノ酸残基（単数または複数）および複合体の第２の構成要素由来のアミノ酸残基（単数または複数）などを含んでよい。それぞれの構成要素は、抗原性複合体の単一のタンパク質または２以上のタンパク質のものであってよい。組合せエピトープは、抗原または抗原複合体の２以上の構成要素（例えば部分または区分、例えばアミノ酸残基）による構造寄与によって形成される。

相補性決定領域：本明細書において用いられる用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれに３個のＣＤＲが存在し、可変領域のそれぞれについてＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と指定される。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なって定義されている。Ｋａｂａｔによって記載されるシステム（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．（１９８７；１９９１）ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明白な残基ナンバリングシステムを提供するだけでなく、重鎖および軽鎖のそれぞれにある３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲと呼ばれ得る。

立体構造的エピトープ：立体構造的エピトープは、三次元コンフォメーションで立体構造的抗体によって認識および結合されるが、同一のアミノ酸配列の折りたたまれていないペプチドでは認識および結合されないエピトープである。立体構造的エピトープは、コンフォメーション特異的エピトープ、コンフォメーション依存性エピトープ、またはコンフォメーション感受性エピトープと呼ばれ得る。そのようなエピトープに特異的に結合する対応する抗体またはそのフラグメントは、コンフォメーション特異的抗体、コンフォメーション選択的抗体、またはコンフォメーション依存性抗体と呼ばれ得る。立体構造的エピトープへの抗原の結合は、抗原または抗原複合体の三次元構造（コンフォメーション）に依存する。

コンテキスト特異的：本発明のコンテキスト（ｃｏｎｔｅｘｔ）特異的（またはコンテキスト選択的）抗体は（「コンテキスト非依存性」抗体と対照的に）、特定の生物学的コンテキストと関連するｐｒｏＴＧＦβ１複合体の全てではないがサブセットに選択的に結合することができる。例えば、マトリックス選択的な標的化は、ＥＣＭと関連するＴＧＦβ１機能の特異的な阻害が可能である。ＥＣＭ選択的阻害は、ＥＣＭ構成要素、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１を選択的に標的化する抗体またはそのフラグメントの使用によって達成することができる。本明細書中に開示される抗体およびフラグメントはしたがって、コンテキスト特異的抗体の１つのクラスを表わす。ＴＧＦβ１活性化のＬＴＢＰ１特異的およびＬＴＢＰ３特異的阻害剤もまた、コンテキスト特異的抗体である。

交差ブロック（Ｃｒｏｓｓ－ｂｌｏｃｋ／ｃｒｏｓｓ－ｂｌｏｃｋｉｎｇ）：第１の抗体またはその抗原結合部分および第２の抗体またはその抗原結合部分は、例えば、標準的な試験条件を用いて、例えば製造元の説明書に従って（例えば、結合は、室温、約２０～２５℃でアッセイされる）、バイオレイヤー干渉法（例えばＯｃｔｅｔ）または表面プラズモン共鳴（例えばＢｉａｃｏｒｅＳｙｓｔｅｍ）によってアッセイして測定した場合に、同一の抗原に関して互いと交差ブロックする。第１の抗体またはそのフラグメントおよび第２の抗体またはそのフラグメントは同一エピトープを有してよく；同一でないが重複するエピトープを有してよく；または、離れた（異なる）エピトープ（三次元空間において極めて接近すると、立体障害を介して抗体結合が交差ブロックされる）を有してよい。「交差ブロック」は、抗原に対する第１の抗体の結合が、同一抗原に対する第２の抗体の結合を妨げ、同様に、抗原に対する第２の抗体の結合が、同一抗原に対する第１の抗体の結合を妨げることを意味する。

解離速度：本明細書において用いられる用語「解離速度」は、適切な分野（例えば、抗体技術）における当業者によって理解される意味を有しており、どれくらい速く／遅くリガンド（例えば、抗体またはフラグメント）がその結合標的（例えば、抗原）から解離するかによって測定される速度論パラメーターを指す。解離速度は、「ｏｆｆ」速度（「ｋ_ＯＦＦ」）とも呼ばれる。抗体とその抗原の間の相対的ｏｎ／ｏｆｆ速度（すなわち、ｋ_ＯＮおよびｋ_ＯＦＦ）は、相互作用の全体的な強さ、すなわち親和性を決定し、典型的に解離定数、すなわちＫ_Ｄとして表される。したがって、同等の親和性（例えば、Ｋ_Ｄ値）は、速い会合（高いｋ_ＯＮ）、遅い解離（低いｋ_ＯＦＦ）、または両方の因子による寄与を有することによって達成され得る。一価の相互作用は、一価の抗原結合分子／フラグメント、例えばｆＡｂ（Ｆａｂ）の使用によって測定され得て、二価相互作用は、二価の抗原結合分子、例えば全免疫グロブリン（例えばＩｇＧｓ）の使用によって測定され得る。解離速度論は、解離半減期（しばしば、結合半減期（ｈａｌｆｂｉｎｄｉｎｇｔｉｍｅ）とも呼ばれる）、すなわちｔ^１／２の観点から表され得て、抗体分子（例えば、ｍＡｂ、Ｆａｂなど）の半数が、結合した抗原から解離するのにかかる持続時間として定義される。したがって、遅い解離速度を有する抗体は長い解離半減期を有し、速い解離速度を有する抗体は短い解離半減期を有する。

投薬量：本明細書において用いられる、本発明の抗体の典型的な治療的投薬量は、用量あたり約１～３０ｍｇ／ｋｇの範囲である。典型的な投与レジメンは、毎週１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、１ヶ月に１回、６週間ごとに１回などを含んでよい。

ＥＣＭ関連（または「マトリックス関連」）ＴＧＦβ１：その用語は、細胞外マトリックスの構成要素である（例えばその中に沈着する）、ＴＧＦβ１またはそのシグナリング複合体（例えば、ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１）を指す。ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３によって提示されるＴＧＦβ１は、ＥＣＭ関連ＴＧＦβ１である。

有効量：「有効量」（または治療的有効量）は、患者集団において統計的に有意な臨床利益を達成する投薬量または投与レジメンである。

線維性障害：用語「線維症」または「線維性状態／障害」は、組織または臓器内の、コラーゲンのような細胞外マトリックス（ＥＣＭ）構成要素の病理学的蓄積によって特徴付けられる過程または兆候を指す。線維症は、一次線維症、ならびに、疾患または障害と関連する二次線維症を含んでよい。

ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１：本明細書において用いられる用語「ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１」は、糖タンパク質Ａ反復優位型タンパク質（ＧＡＲＰ）またはそのフラグメントもしくは変異体と関連する形質転換増殖因子－β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型を含むタンパク質複合体を指す。ｐｒｏＴＧＦβ１ホモ二量体は、ジスルフィド結合を介してＧＡＲＰの単一分子と共有結合を形成することが可能である。用語「ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１」は、相互交換可能に用いられ得る。ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１発現は、特定の細胞型、例えば制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に限定される。

ヒト抗体：本明細書において用いられる用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本開示のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的突然変異誘発またはインビボでの体細胞突然変異によって導入される突然変異）を、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３内に含んでよい（例えば、ＣＤＲ－Ｈ３またはＣＤＲ－Ｌ３突然変異誘発）。

ヒト化抗体：用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えばマウス）由来の重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」に、すなわち、ヒト生殖細胞系の可変配列により似ているように変更されている抗体を指す。ヒト化抗体の１つのタイプはＣＤＲグラフト抗体である。

免疫抑制（Ｉｍｍｕｎｅｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ／ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）：用語「免疫抑制」は、体の免疫系の強さの抑制または減少を指す。「免疫抑制によって利益を受ける」患者は、臓器線維症の進行性ステージを有する者を含み、移植の候補者であり、そのように考えられ、またはそれを受けたことがある。

アイソフォーム特異的：用語「アイソフォーム特異性」は、あるアイソフォームを他の構造的に関連するアイソフォームに対して区別する薬剤の能力を指す（すなわち、選択性）。アイソフォーム特異的ＴＧＦβ阻害剤は、所定の濃度で、ＴＧＦβの一方のアイソフォームに対する阻害活性を与えるが、ＴＧＦβの他方のアイソフォームには与えない。例えば、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１抗体は、ＴＧＦβ１に選択的に結合する。ＴＧＦβ１特異的阻害剤（抗体）は、実質的により高い親和性で、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３よりもＴＧＦβ１アイソフォームを優先的に標的化する（結合し、それにより阻害する）。例えば、このコンテキストにおける選択性は、ＯｃｔｅｔおよびＢｉａｃｏｒのようなインビトロ結合アッセイによって測定して、それぞれの親和性の少なくとも５００～１０００倍差を指してよい。一部の実施態様では、選択性とは、阻害剤が、ＴＧＦβ１をインビボで阻害するのに効果的な投薬量で用いた場合に、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３を阻害しないことである。本開示のコンテキスト特異的阻害剤は、アイソフォーム特異的でもある。

単離された：本明細書において用いられる「単離された」抗体は、異なる抗原性特異性を有する他の抗体から実質的にフリーである抗体を指す。一部の実施態様では、単離された抗体は、他の意図しない細胞物質および／または化学物質から実質的にフリーである。

長期または慢性の投与：本明細書において用いられる、６ヶ月を超える治療を含む治療的レジメンは、長期であると考えられる。一部の患者集団において、長期の治療的レジメンは、不定の持続時間にわたる薬物（例えばコンテキスト選択的ＴＧＦβ１阻害剤）の投与を含む。

ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１：本明細書において用いられる用語「ＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体」は、形質転換増殖因子－β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型と、ロイシンリッチ反復含有タンパク質３３（ＬＲＲＣ３３；活性酸素種の負のレギュレーター、すなわちＮＲＲＯＳとしても知られる）またはそのフラグメントまたは変異体との間の複合体を指す。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体は、１つまたは複数のジスルフィド結合を介してｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１と共有結合したＬＲＲＣ３３を含む。他の実施態様では、ＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体は、ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合したＬＲＲＣ３３を含む。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体は、天然起源の複合体、例えば細胞内のＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体である。

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１：本明細書において用いられる用語「ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体」（または「ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体」）は、形質転換増殖因子－β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型（本明細書において「ｐｒｏＴＧＦβ１」と呼ばれてよい）および潜在型ＴＧＦ－β結合タンパク質１（ＬＴＢＰ１）またはそのフラグメントまたは変異体を含む、タンパク質複合体を指す。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体は、１つまたは複数のジスルフィド結合を介してｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１と共有結合したＬＴＢＰ１を含む。他の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体は、ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合したＬＴＢＰ１を含む。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体は、天然起源の複合体、例えば細胞内のＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体である。例示的なＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体を図３に示す。

ＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１：本明細書において用いられる用語「ＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体」（または「ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体」）は、形質転換増殖因子－β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロタンパク質形態または潜在型（本明細書において「ｐｒｏＴＧＦβ１」と呼ばれてよい）および潜在型ＴＧＦ－β結合タンパク質３（ＬＴＢＰ３）またはそのフラグメントまたは変異体を含むタンパク質複合体を指す。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体は、１つまたは複数のジスルフィド結合を介してｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１と共有結合したＬＴＢＰ３を含む。他の実施態様では、ＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体は、ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合したＬＴＢＰ１を含む。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体は、天然起源の複合体、例えば細胞内のＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体である。例示的なＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体を図３に示す。

マクロファージ：マクロファージは、免疫系の白血球の一種であり、骨髄細胞の異種の表現型的に様々な亜集団を含む。一部のマクロファージは、骨髄由来の循環している単球から分化して、一方で、他のものは、特定の解剖学的または組織位置内に存在する組織特異的なマクロファージ（「常在性」マクロファージ）である。組織特異的なマクロファージは、限定されないが：脂肪組織マクロファージ；クッパー細胞（肝臓）；洞組織球（リンパ節）；肺胞マクロファージ（または塵埃細胞、肺の肺胞）；巨大細胞へ導く組織マクロファージ（組織球）（結合組織）；ランゲルハンス細胞（皮膚および粘膜）；ミクログリア（中枢神経系）；ホーフバウアー細胞（胎盤）；糸球体内メサンギウム細胞（腎臓）；破骨細胞（骨）；類上皮細胞（肉芽腫）；赤脾髄マクロファージ（または類洞内皮細胞、脾臓の赤脾髄）；腹膜マクロファージ（腹膜腔）；および、ＬｙｓｏＭａｃ（パイエル板）を含む。マクロファージ、例えば、骨髄由来単球は、特定の刺激（例えばサイトカイン）によって活性化され得て、極性化した表現型、例えば、Ｍ１およびＭ２をもたらす。Ｍ２バイアスの活性化マクロファージは、いくつかの表現型的に別個のサブタイプ、例えばＭ２ａ、Ｍ２ｂ、Ｍ２ｃ（例えば、線維症促進性）およびＭ２ｄ（腫瘍促進性またはＴａｍ様）にさらに分類される。

マトリックス関連ｐｒｏＴＧＦβ１：ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の構成要素である提示分子である。ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１は、「ＥＣＭ関連」（または「マトリックス関連」）ｐｒｏＴＧＦβ１複合体と総称され得て、ＥＣＭ関連のＴＧＦβ１活性化／シグナリングを仲介する。

最大投与可能量（ＭＴＤ）：用語ＭＴＤは、一般に、安全性／毒物学の考慮のコンテキストにおいて、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）で評価される試験品目（例えばＴＧＦβ１阻害剤）の最大量を指す。例えば、ラットにおけるＡｂ２に関するＮＯＡＥＬは、４週間の毒物学試験に基づき、評価された最大用量（１００ｍｇ／ｋｇ）であり、Ａｂ２に関するＭＴＤは＞１００ｍｇ／ｋｇであることが示唆された。

骨髄系由来サプレッサー細胞：骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、様々な病理学的状態中に生産される細胞の不均一集団であり、単球および相対的に未熟の好中球の活性化の病理学的状態を表わすと考えられる。ＭＤＳＣは、ｉ）好中球と表現型的および形態学的に似ている「顆粒球性」（Ｇ－ＭＤＳＣ）または多形核（ＰＭＮ－ＭＤＳＣ）；およびｉｉ）単球と表現型的および形態学的に似ている単球性（Ｍ－ＭＤＳＣ）と呼ばれる少なくとも２つの細胞カテゴリーを含む。ＭＤＳＣは、別個のセットのゲノムおよび生化学的特性によって特徴付けられ、特異的な表面分子によって区別することができる。例えば、ヒトＧ－ＭＤＳＣ／ＰＭＮ－ＭＤＳＣは、典型的に、細胞表面マーカーＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５およびＣＤ６６を発現する。さらに、ヒトＧ－ＭＤＳＣ／ＰＭＮ－ＭＤＳＣは、ＨＬＡ－ＤＲおよび／またはアルギナーゼも発現し得る。対照的に、ヒトＭ－ＭＤＳＣは、典型的に、細胞表面マーカーＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３およびＣＤ１４を発現する。ＭＤＳＣは、ＣＤ３９およびＣＤ７３も発現して、臓器線維症（例えば肝線維症、および肺線維症）、がん、および骨髄線維症）に関与するアデノシンのシグナリングを仲介し得る。さらに、ヒトＭ－ＭＤＳＣは、ＨＬＡ－ＤＲも発現し得る。そのような細胞表面マーカーに加えて、ＭＤＳＣは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびＢ細胞のような免疫細胞を抑制する能力によって特徴付けられる。ＭＤＳＣの免疫抑制機能は、抗原非特異的機能の阻害および抗原特異的機能の阻害を含んでよい。ＭＤＳＣは、細胞表面ＬＲＲＣ３３および／またはＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１を発現し得る。

筋線維芽細胞：筋線維芽細胞は、線維芽細胞および平滑筋細胞の特定の表現型を有する細胞であり、一般に、ビメンチン、α平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ；ヒト遺伝子ＡＣＴＡ２）およびパラディンを発現する。細胞外マトリックス調節不全（マトリックス剛性の増大など）を伴う多くの疾患状態において、正常な線維芽細胞は、ＴＧＦβ依存性の様式で筋線維芽細胞へ脱分化される。

Ｏｆｆ速度（ｋ _ＯＦＦ）：ｏｆｆ速度は、抗体（例えばｍＡｂ）または抗原結合フラグメント（例えばｆＡｂ）がそれくらい速くまたはどれくらいゆっくり、その抗原から解離するかについての速度論パラメーターであり、解離速度とも呼ばれ得る。解離速度は、ＢＬＩ（Ｏｃｔｅｔ（登録商標））および／またはＳＰＲ（Ｂｉａｃｏｒｅ）に基づくシステムのような適切なインビトロ結合アッセイにおいて実験的に測定することができる。抗体抗原結合の速度論のコンテキストにおいて、用語「結合半減期（ｈａｌｆ－ｂｉｎｄｉｎｇ－ｔｉｍｅ）」（Ｔ_１／２）または「解離半減期（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｈａｌｆ－ｔｉｍｅ）」は、抗体分子（例えば、ｍＡｂ、Ｆａｂ）の半数が、結合した抗原（例えば、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１）から解離するのに必要な持続時間を指す。したがって、抗原からゆっくり解離する（すなわち低いｏｆｆ速度）抗体は、長いＴ_１／２を有する。反対に、抗原から急速に解離する（すなわち、高いｏｆｆ速度）抗体は、短いＴ_１／２を有する。

Ｐａｎ－ＴＧＦβ阻害剤／ＴＧＦβのｐａｎ－阻害：用語「ｐａｎ－ＴＧＦβ阻害剤」は、ＴＧＦβの３つのアイソフォーム全てを阻害または拮抗することが可能な任意の薬剤を指す。かかる阻害剤は、ＴＧＦβアイソフォームの小分子阻害剤であってよい。その用語は、ＴＧＦβアイソフォームのそれぞれ、すなわち、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３に結合することが可能な任意の抗体を指すｐａｎ－ＴＧＦβ抗体を含む。一部の実施態様では、ｐａｎ－ＴＧＦβ抗体は、３つのアイソフォーム全ての活性、すなわち、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３活性を結合および中和する。

効能：本明細書において用いられる用語「効能」は、所定の効果を産生する薬物の濃度または量に関して、阻害活性を有する機能性抗体（またはフラグメント）のような薬物の活性を指す。例えば、所定の投薬量で特定の効果を産生することが可能な抗体は、同等の効果を産生するために２倍の量（投薬量）を必要とする別の抗体よりも強力である。効能は、ＴＧＦβ活性化／阻害アッセイのような細胞に基づくアッセイにおいて測定され得る。場合によっては、インテグリン結合によってトリガーされる活性化のようなＴＧＦβ活性化の程度は、細胞に基づくシステムにおいて、試験品目（例えば、阻害抗体）の存在下または不存在下で測定することができる。典型的に、より高い親和性を有する抗体は、より低い親和性を有する抗体よりも高い効能を示す傾向がある。

提示分子：提示分子は、潜在型プロタンパク質（例えば、ｐｒｏＴＧＦβ１）と共有結合を形成し、不活性複合体を細胞外ニッチ（例えばＥＣＭまたは免疫細胞表面）において「提示」するタンパク質であり、それにより、その潜在性を、活性化イベントが生じるまで維持するタンパク質である。ｐｒｏＴＧＦβ１に関する公知の提示分子は、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３を含み、提示分子－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体、すなわち、それぞれ、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１を形成することができる。ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の構成要素であり；したがって、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１は、「ＥＣＭ関連」（または「マトリックス関連」）ｐｒｏＴＧＦβ１複合体と総称され得て、ＥＣＭ関連のＴＧＦβ１シグナリング／活性を仲介する。一方、ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３は、特定の細胞の細胞表面上に発現される膜貫通タンパク質であり；したがって、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１は、「細胞関連」（または「細胞表面」）ｐｒｏＴＧＦβ１複合体と総称され得て、細胞関連（例えば、免疫細胞関連）のＴＧＦβ１シグナリング／活性を仲介する。

ＰｒｏＴＧＦβ１：本明細書において用いられる用語「ｐｒｏＴＧＦβ１」は、複合体内にＴＧＦβ１のプロドメイン配列を含む不活性ＴＧＦβ１複合体の前駆体形態を包含することが意図される。したがって、その用語は、ＴＧＦβ１のｐｒｏ－形態、ならびに潜在型－形態を含んでよい。表現「ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１」は、相互交換可能に用いてよい。ＴＧＦβ１の「ｐｒｏ」形態は、フューリン部位におけるタンパク質分解切断の前に存在する。切断された時点で、生じる形態は、ＴＧＦβ１の「潜在型」形態であると言われる。「潜在型」複合体は、さらなる活性化、例えばインテグリンによって駆動される（ｄｒｉｖｅｎ）活性化イベントをトリガーするまで、関連したままである。ｐｒｏＴＧＦβ１複合体は、ジスルフィド結合によって結合した二量体ＴＧＦβ１プロタンパク質ポリペプチドで構成される。潜在型二量体複合体は、各ｐｒｏＴＧＦβ１ポリペプチドの４位のシステイン残基（Ｃｙｓ４）を介して単一の提示分子に共有結合される。形容詞「潜在型」は一般に、インテグリン仲介または他の活性化イベント前の、ＴＧＦβ１の「不活性」状態を説明するために用いられ得る。ｐｒｏＴＧＦβ１ポリペプチドは、プロドメイン（ＬＡＰ）および増殖因子ドメイン（配列番号１２）を含む。

制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）：「制御性Ｔ細胞」すなわちＴｒｅｇは、バイオマーカー、ＣＤ４、フォークヘッドボックスＰ３（ＦＯＸＰ３）、およびＣＤ２５、ならびにＳＴＡＴ５の発現によって特徴付けられる免疫細胞の１つのタイプである。Ｔｒｅｇは、しばしば制御性Ｔ細胞と呼ばれ、免疫系を調整し、自己抗原に対する寛容を維持し、および、自己免疫疾患を防止する、Ｔ細胞の亜集団を表わす。Ｔｒｅｇは免疫抑制性であり、一般に、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞の誘導および増殖を抑制または下方調節する。Ｔｒｅｇは、胸腺において発生し得て（いわゆる、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋「天然（ｎａｔｕｒａｌ）」Ｔｒｅｇ）、または、例えばＴＧＦβまたはレチノイン酸に対する曝露後、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞のプライミングの際に、周囲において分化する。Ｔｒｅｇ細胞は、ＩＬ－１０およびＴＧＦβ１を含むサイトカインを産生および分泌する。一般に、ＴｒｅｇおよびＴｈ１７細胞の分化は、負に相関している。

特異的結合：本明細書において用いられる用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、抗原と抗体、またはその抗原結合部分の相互作用が、特定の構造（例えば、抗原性決定因子またはエピトープ）の存在に依存性であることを意味する。例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、一般のタンパク質よりむしろ、特異的なタンパク質に結合する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、その抗体が標的に関して少なくとも約１０^－６ＭのＫ_Ｄを有するならば、標的（例えばＴＧＦβ１）に特異的に結合する。より好ましくは、そのような抗体の測定されるＫ_Ｄ値は、１０～１００ｎＭの範囲である。より好ましくは、そのような抗体の測定されるＫ_Ｄ値は、０．１～１０ｎＭの範囲である。

対象：治療的適用のコンテキストにおける用語「対象」は、臨床ケアまたは介入、例えば治療、診断などを受ける個体を指す。適切な対象は脊椎動物を含み、制限されないが哺乳類（例えば、ヒトおよび非ヒト哺乳類）を含む。対象がヒト対象である場合、用語「患者」は相互交換可能に用いられてよい。臨床コンテキストでは、用語「患者集団」または「患者亜集団」は、臨床基準のような基準（例えば、症状（ｄｉｓｅａｓｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ）、疾患ステージ、特定の状態に対する感受性、療法に対する応答性など）、病歴、健康状態、性別、年齢群、遺伝子基準（例えば、特定の突然変異、多型、遺伝子重複、ＤＮＡ配列反復などのキャリア）およびライフスタイル因子（例えば、喫煙、アルコール消費量、運動など）のセットに入る個体のグループを指すために用いられる。

ＴＧＦβ阻害剤：用語「ＴＧＦβ阻害剤」は、ＴＧＦβ増殖因子（例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３）の生物学的活性または機能に拮抗することが可能な任意の薬剤を指す。その用語は、その作用機序を限定することを意図せず、例えば、ＴＧＦβの中和阻害剤、受容体拮抗薬、可溶性リガンド・トラップ、および活性化阻害剤を含む。

ヘルパーＴ１７細胞：ヘルパーＴ１７細胞（Ｔｈ１７）は、マーカーＳＴＡＴ３およびＲＯＲγｔ、ならびに、インターロイキン１７（ＩＬ－１７Ａ／Ｆ）およびＩＬ－２２を含むサイトカインの産生によって特徴付けられる炎症促進性ヘルパーＴ細胞のサブセットである。Ｔｈ１７細胞は、ナイーブＴ細胞がＴＧＦβおよびＩＬ－６に曝露された場合に分化する。Ｔｈ１７細胞は一般に、組織炎症、自己免疫、および特定の病原体のクリアランスと関連する。Ｔｈ１７細胞およびＴｒｅｇ細胞の分化は一般に、逆関係である。Ｔｈ１７対Ｔｒｅｇ比（例えば「Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ」）の不均衡は、線維性状態および自己免疫性の状態のような複数の病理に関与している。

Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比：Ｔｈ１７対Ｔｒｅｇ比は、目的の組織またはサンプル中の、Ｔｒｅｇ細胞の数に対するＴｈ１７細胞の数の測定された比（相対的割合）を指す。典型的に、公知の細胞マーカーは、細胞型を同定し、分類し、または単離するために用いられる。そのようなマーカーは、特定の細胞型の上に発現される細胞表面分子；特定の細胞型によって産生される（例えば分泌される）サイトカインまたはサイトカインパネル、および／または、特定の細胞型のシグネチャー／プロファイルとして働く特定の遺伝子マーカーのｍＲＮＡ発現を含む。例えば、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比が１であるというのは、評価される組織またはサンプル内に、等しい（ｅｑｕａｌ）または同等の（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）数のそれぞれの細胞型が存在することを意味する。Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比が２であるというのは、Ｔｒｅｇ細胞と比較して、およそ２倍の数のＴｈ１７細胞が組織またはサンプル中に存在することを意味する。高いＴｈ１７／Ｔｒｅｇ比は、Ｔｈ１７細胞の数の増大、Ｔｒｅｇ細胞の数の減少、またはそれらの組み合わせによって生じ得る。

治療濃度域：用語「治療濃度域」は、対象において、重大な／観察可能な／許容できない副作用を生じさせずに（例えば、許容可能または忍容可能な副作用の範囲内で）治療的応答を生じる用量／濃度の範囲を指す。治療濃度域は、最小有効濃度（ＭＥＣ）と最小毒性濃度（ＭＴＣ）の間の比として計算され得る。説明すると、１０ｍｇ／ｋｇでインビボ有効性を達成し、１００ｍｇ／ｋｇで忍容性または許容できる毒性を示すＴＧＦβ１阻害剤は、少なくとも１０倍（例えば１０×）の治療濃度域を提供する。対照的に、１０ｍｇ／ｋｇで有効であるが５ｍｇ／ｋｇで副作用を生じさせるＴＧＦβのｐａｎ－阻害剤は、「用量制限毒性」を有すると言われる。例えば、出願人らは、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤抗体は、約＜３～３０ｍｇ／ｋｇ／週の範囲の投薬量で有効であり、４週間にわたり少なくとも１００ｍｇ／ｋｇ／週でＴＧＦβのｐａｎ－阻害と関連する観察可能な毒性がないことをラットのような前臨床モデルにおいて見いだした。これに基づき、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤抗体は、最小で３．３倍および最大で３３倍の治療濃度域を示す。

毒性：本明細書において用いられる用語「毒性（単数または複数）」は、望ましくない副作用および有害事象のような、患者に施される療法と関連する、患者における不要なインビボ効果を指す。「忍容性」は、毒性のせいで療法を中止せずに患者が合理的に認容することのできる療法または治療的レジメンと関連する毒性のレベル（すなわち、許容できるレベルの毒性）を指す。典型的に、毒性／毒物学試験は、薬物候補（例えば、モノクローナル抗体療法）の安全性プロファイルを評価するために、臨床開発の前に１つまたは複数の前臨床モデルにおいて行われる。毒性／毒物学試験は、どの治療濃度域が推測され得るかに基づき、試験品目の「無毒性量（ＮＯＡＥＬ）」および「最大投与可能量（ＭＴＤ）」を決定するのを助け得る。好ましくは、特定の介入に対して感受性であることが示された種は、安全性／毒性試験が行われる前臨床動物モデルとして選択されるべきである。ＴＧＦβ阻害の場合、適切な種は、ラット、イヌ、およびカニクイザル（ｃｙｎｏｓ）を含む。マウスは、ＴＧＦβの薬理学的阻害に対する感受性が低いことが報告されており、ヒトを含む他の種において潜在的に危険である毒性を明らかにしないかも知れないが、特定の試験では、マウスにおけるＴＧＦβのｐａｎ－阻害で観察された毒性が報告されている。説明すると、ラットにおけるコンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤抗体に関するＮＯＡＥＬは、４週間の毒物学試験に基づいて、評価された最大用量（１００ｍｇ／ｋｇ）であり、ＭＴＤは、１週間あたり＞１００ｍｇ／ｋｇであることが示唆された。

治療する（Ｔｒｅａｔ）／治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）：用語「治療する」または「治療」は、治療的治療、予防的治療、および、対象が障害または他の危険因子を発症するリスクを減少させる適用を含む。したがって、その用語は、例えば、体の免疫を高めるまたはブーストすることによって；免疫抑制を減少または反転させることによって；体から有害な細胞または物質を減少、除去または根絶させることによって；疾患負荷（例えば、腫瘍負荷）を減少させることによって；再発またはぶり返しを防止することによって；不応期を延長させることによって、および／または、他の方法で生存を改善することによって、患者において治療的利益を引き起こすことを広く意味することが意図される。治療は、障害の完全な治癒を必要とせず、症候または根底にある危険因子を減少させる実施態様を包含する。併用療法のコンテキストにおいて、その用語は、ｉ）第２の治療が、第１の治療の効果的投薬量を減少させて、それにより副作用を減少させて耐容性を増大させる能力；ｉｉ）第２の療法が、第１の療法に対して患者をより応答性にさせる能力；および／または、ｉｉｉ）相加的または相乗的な臨床利益を実現する能力を指してもよい。

可変領域：用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の軽鎖および／または重鎖の部分を指し、典型的に、重鎖内のおよそアミノ末端１２０～１３０アミノ酸および軽鎖内の約１００～１１０アミノ末端アミノ酸を含む。特定の実施態様では、異なる抗体の可変領域は、同一種の抗体の間でさえ、アミノ酸配列が広範囲に異なる。抗体の可変領域は典型的に、特定の抗体のその標的に関する特異性を決定する。

ＴＧＦβ１
哺乳類では、形質転換増殖因子－β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーは、少なくとも３３個の遺伝子産物で構成される。これらは、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、アクチビン、増殖および分化因子（ＧＤＦ）、ならびに、ＴＧＦβファミリーの３つのアイソフォーム：ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３を含む。ＴＧＦβｓは、細胞増殖の阻害、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）再構築、および免疫の恒常性のような様々なプロセスにおいて重要な役割を果たしていると考えられる。Ｔ細胞恒常性に関するＴＧＦβ１の重要性は、ＴＧＦβ１－／－マウスが、３～４週しか生きず、強力な免疫活性化に起因して多臓器不全で死亡するという観察によって説明される（Ｋｕｌｋａｒｎｉ，Ａ．Ｂ．，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９３．９０（２）：ｐ．７７０－４；Ｓｈｕｌｌ，Ｍ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９２．３５９（６３９７）：ｐ．６９３－９）。ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３の役割は、それほど明らかではない。３つのＴＧＦβアイソフォームは、別個の時間的および空間的発現パターンを有するが、それらは、同一の受容体、ＴＧＦβＲＩおよびＴＧＦβＲＩＩを通してシグナル伝達し、しかしながら場合によっては、例えばＴＧＦβ２シグナリングについては、ベータグリカンのようなタイプＩＩＩ受容体も必要である（Ｆｅｎｇ，Ｘ．Ｈ．ａｎｄＲ．Ｄｅｒｙｎｃｋ，ＡｎｎｕＲｅｖＣｅｌｌＤｅｖＢｉｏｌ，２００５．２１：ｐ．６５９－９３；Ｍａｓｓａｇｕｅ，Ｊ．，ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ，１９９８．６７：ｐ．７５３－９１）。ＴＧＦβＲＩ／ＩＩのリガンド誘導性オリゴマー化は、ＳＭＡＤ転写因子のリン酸化をトリガーし、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ３ａ１、ＡＣＴＡ２、およびＳＥＲＰＩＮＥ１のような標的遺伝子の転写をもたらす（Ｍａｓｓａｇｕｅ，Ｊ．，Ｊ．Ｓｅｏａｎｅ，ａｎｄＤ．Ｗｏｔｔｏｎ，ＧｅｎｅｓＤｅｖ，２００５．１９（２３）：ｐ．２７８３－８１０）。ＳＭＡＤ非依存性ＴＧＦβシグナリング経路は、例えば、Ｍａｒｆａｎマウスの癌または大動脈病変においても説明されている（Ｄｅｒｙｎｃｋ，Ｒ．ａｎｄＹ．Ｅ．Ｚｈａｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ，２００３．４２５（６９５８）：ｐ．５７７－８４；Ｈｏｌｍ，Ｔ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１．３３２（６０２７）：ｐ．３５８－６１）。

ヒトにおけるＴＧＦβパスウェイの生物学的重要性は、遺伝子疾患によって確認されている。Ｃａｍｕｒａｔｉ－Ｅｎｇｅｌｍａｎ疾患は、ＴＧＦＢ１遺伝子内の常染色体優性の突然変異に起因して骨形成異常をもたらし、ＴＧＦβ１シグナリングの構成的活性化をもたらす（Ｊａｎｓｓｅｎｓ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，ＪＭｅｄＧｅｎｅｔ，２００６．４３（１）：ｐ．１－１１）。Ｌｏｅｙｓ／Ｄｉｅｔｚ症候群を有する患者は、ＴＧＦβシグナリング経路の構成要素内に常染色体優性の突然変異を保有し、大動脈動脈瘤、隔離症、および二分口蓋垂を生じさせる（ＶａｎＬａｅｒ，Ｌ．，Ｈ．Ｄｉｅｔｚ，ａｎｄＢ．Ｌｏｅｙｓ，ＡｄｖＥｘｐＭｅｄＢｉｏｌ，２０１４．８０２：ｐ．９５－１０５）。ＴＧＦβパスウェイ調節不全は、複数の疾患に関与しているので、ＴＧＦβパスウェイを標的化するいくつかの薬物が開発されて患者において試験されているが、成功は限られている。現在までに説明される大部分のＴＧＦβ阻害剤は、以下に簡単に要約されるようにアイソフォーム特異性がない。

ＴＧＦβの３つのアイソフォーム全てに結合および阻害するフレソリムマブ（ヒト化モノクローナル抗体）が、限局性の分節性糸球体硬化症、悪性メラノーマ、腎細胞がん、および全身性硬化症を有する患者において臨床的に試験されている（Ｒｉｃｅ，Ｌ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２０１５．１２５（７）：ｐ．２７９５－８０７；Ｔｒａｃｈｔｍａｎ，Ｈ．，ｅｔａｌ．，ＫｉｄｎｅｙＩｎｔ，２０１１．７９（１１）：ｐ．１２３６－４３；Ｍｏｒｒｉｓ，Ｊ．Ｃ．，ｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ、２０１４．９（３）：ｐ．ｅ９０３５３）。さらなる企業が、ＴＧＦβアイソフォームに関する選択性の程度が異なるＴＧＦβ増殖因子に対するモノクローナル抗体を開発した。そのような薬剤は、ＴＧＦβ１以外の他のＴＧＦβファミリーメンバーに対する残存活性を通してインビボで毒性を誘発する可能性がある。このようなアイソフォーム特異性の欠如は、アイソフォーム間の高度の配列同一性に起因し得る。

ＴＧＦβパスウェイを標的化するための他の手法は、Ａｃｃｅｌｅｒｏｎによる、ＡＣＥ－１３３２、可溶性ＴＧＦβＲＩＩ－Ｆｃリガンド・トラップ（Ｙｕｎｇ，Ｌ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＡＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，２０１６．１９４（９）：ｐ．１１４０－１１５１）、または、ＥｌｉＬｉｌｌｙのガルニサーチブ（ｇａｌｕｎｉｓｅｒｔｉｂ）のようなＡＬＫ５キナーゼの小分子阻害剤を含む。ＡＣＥ－１３３２は、同等に高い親和性でＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３と結合し（Ｙｕｎｇ，Ｌ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，２０１６．１９４（９）：ｐ．１１４０－１１５１）、ＡＬＫ５阻害剤は、ＴＧＦＲ１を通してシグナル伝達する全ての増殖因子の活性をブロックする。ＡＬＫ５阻害剤を用いた前臨床試験において、実質的な毒性が見つかっており（Ａｎｄｅｒｔｏｎ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＴｏｘｉｃｏｌＰａｔｈｏｌ，２０１１．３９（６）：ｐ．９１６－２４；Ｓｔａｕｂｅｒ，Ａ．，ｅｔａｌ．，ＣｌｉｎｉｃａｌＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１４．４（３）：ｐ．１－１０）、有害事象を減少させながら有効性を維持するためには精巧な臨床投与スキームが必要とされる（Ｈｅｒｂｅｒｔｚ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，ＤｒｕｇＤｅｓＤｅｖｅｌＴｈｅｒ、２０１５．９：ｐ．４４７９－９９）。実際に、ＴＧＦβシグナリング特異性の問題、および、公知のＴＧＦβ阻害剤で観察された毒性に対するそのあり得る効果は、ＴＧＦβのブロックを試みた候補薬物の全てではないにしてもほとんどにおいて、検討されていない（ｈａｓｎｏｔｂｅｅｎｒａｉｓｅｄ）。例えば、どれほど多くの毒性がＴＧＦβ１対ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３の阻害に起因するかどうかは、対処されていない。同様に、ＴＧＦβ活性化のモデルは、ＴＧＦβシグナリングに拮抗する方法の設計または開発において考慮されていない。

ＴＧＦβ１の活性化メカニズムに対する最近の構造的洞察（Ｓｈｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１１．４７４（７３５１）：ｐ．３４３－９）は、ＴＧＦβ阻害に対してより特異的な手法を可能にしている（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／２１９７２を参照し、その内容全体は参照により本明細書中に援用される）。他のサイトカインとは異なり、ＴＧＦβスーパーファミリーメンバーは、活性の増殖因子として分泌されないが、Ｎ末端プロドメインおよびＣ末端増殖因子ドメインからなる二量体のプロタンパク質として分泌される。フューリンプロテアーゼによるｐｒｏＴＧＦβ１の切断は、そのプロドメイン（潜在型関連ペプチド（ｌａｔｅｎｃｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ）（ＬＡＰ）とも呼ばれる）から、ホモ二量体増殖因子ドメインを分離する。しかしながら、増殖因子およびＬＡＰは、非共有結合したままであり、その受容体に結合してシグナリングを誘導することのできない、潜在型複合体を形成する。翻訳中に、潜在型ＴＧＦβ１（小さな潜在型複合体（ＳＬＣ）とも呼ばれる）は、ジスルフィド架橋を介して「提示分子」に結合され、大きな潜在型複合体（ＬＬＣ）を形成する。これらの分子は、ｐｒｏＴＧＦβ１が特異的な細胞または組織コンテキストで提示されるのを可能にする。潜在型ＴＧＦβ１のＮ末端付近の２つのシステインが、提示分子上の適切な位置のシステインに結合される。提示分子の同一性は、潜在型ＴＧＦβ１を産生する環境および細胞型に依存する。例えば、線維芽細胞は、潜在型ＴＧＦβ結合タンパク質（ＬＴＢＰ）につなげられた潜在型ＴＧＦβ１を分泌し、それが細胞外マトリックス（ＥＣＭ）内のタンパク質（すなわち、フィブロネクチン、フィブリリン－１）と関連して、潜在型ＴＧＦβをＥＣＭに結合させる（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎｅｔａｌ．ＭａｔｒｉｘＢｉｏｌ４７：４４－５３（２０１５）（図２Ａ）。活性化された制御性Ｔ細胞の表面上で、潜在型ＴＧＦβ１は、膜貫通タンパク質ＧＡＲＰ（糖タンパク質Ａ反復優位型タンパク質（ＧＡＲＰ）に共有結合し、ＧＡＲＰに密接に関連するタンパク質、ＬＲＲＣ３３（ロイシンリッチ反復含有タンパク質３３）は、単球、マクロファージおよびミクログリアの表面上のＴＧＦβ１のための提示分子として働く（Ｗａｎｇ，Ｒ．，ｅｔａｌ．，ＭｏｌＢｉｏｌＣｅｌｌ，２０１２．２３（６）：ｐ．１１２９－３９、および、Ｔ．Ａ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｉｎｔ．ＢＭＰＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ２０１６）。

複数の研究により、ＴＧＦβ１活性化のメカニズムが明らかとなってきた。３つのインテグリン、αＶβ６、αＶβ８、およびαＶβ１は、潜在型ＴＧＦβ１の重要なアクチベーターであることが示された（Ｒｅｅｄ，Ｎ．Ｉ．，ｅｔａｌ．，ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０１５．７（２８８）：ｐ．２８８ｒａ７９；Ｔｒａｖｉｓ，Ｍ．Ａ．ａｎｄＤ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ，ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ，２０１４．３２：ｐ．５１－８２；Ｍｕｎｇｅｒ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９９．９６（３）：ｐ．３１９－２８）。αＶインテグリンは、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ１ＬＡＰ内に存在するＲＧＤ配列に高親和性で結合する（Ｄｏｎｇ，Ｘ．，ｅｔａｌ．，ＮａｔＳｔｒｕｃｔＭｏｌＢｉｏｌ，２０１４．２１（１２）：ｐ．１０９１－６）。インテグリン結合を妨げるが分泌を妨げない（ｂｕｔｎｏｔｓｅｃｒｅｔｉｏｎ）ＴＧＦβ１ＲＧＤ部位内の突然変異を有するトランスジェニックマウスは、ＴＧＦβ１－／－マウスの表現型を模写する（Ｙａｎｇ，Ｚ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００７．１７６（６）：ｐ．７８７－９３）。β６およびβ８インテグリンの両方ともが欠失したマウスは、多臓器炎症および口蓋裂を含むＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３ノックアウトマウスの全ての本質的な表現型を再現し、発達および恒常性におけるＴＧＦβ１活性化に関するこれらの２つのインテグリンの本質的な役割が確認されている（Ａｌｕｗｉｈａｒｅ，Ｐ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００９．１２２（Ｐｔ２）：ｐ．２２７－３２）。潜在型ＴＧＦβ１のインテグリン依存性活性化に関して重要なのは、提示分子に対する共有結合であり；突然変異誘発によるＧＡＲＰとＴＧＦβ１ＬＡＰの間のジスルフィド結合の破壊は、複合体形成を損なわないが、αＶβ６によるＴＧＦβ１活性化を完全に消滅させる（Ｗａｎｇ，Ｒ．，ｅｔａｌ．，ＭｏｌＢｉｏｌＣｅｌｌ，２０１２．２３（６）：ｐ．１１２９－３９）。最近の潜在型ＴＧＦβ１の構造により、インテグリンがどのようにして潜在型複合体からの活性ＴＧＦβ１の放出を可能にするのか明らかになり：潜在型ＴＧＦβ１の、その提示分子への共有結合は、潜在型ＴＧＦβ１を、ＬＴＢＰを介してＥＣＭに固定し、または、ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３を介して細胞骨格に固定する。ＲＧＤ配列に対するインテグリン結合は、ＬＡＰの構造に力依存性の変化をもたらし、活性ＴＧＦβ１が放出されて受容体の近くに結合されるのを可能にする（Ｓｈｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１１．４７４（７３５１）：ｐ．３４３－９）。疾患におけるインテグリン依存性ＴＧＦβ１活性化の重要性も十分に確認されている。αＶβ１の小分子阻害剤は、ブレオマイシン誘導性の肺線維症および四塩化炭素誘導性の肝線維症に対して保護し（Ｒｅｅｄ，Ｎ．Ｉ．，ｅｔａｌ．，ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０１５．７（２８８）：ｐ．２８８ｒａ７９）、抗体を用いたαＶβ６ブロックまたはインテグリンβ６発現の欠損は、ブレオマイシン誘導性の肺線維症および放射線誘導性の線維症を抑制する（Ｍｕｎｇｅｒ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９９．９６（３）：ｐ．３１９－２８）；Ｈｏｒａｎ，Ｇ．Ｓ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，２００８．１７７（１）：ｐ．５６－６５）。インテグリンに加えて、トロンボスポンジン－１、および、プロテアーゼ、例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、カテプシンＤまたはカリクレインによる活性化を含む、ＴＧＦβ１活性化の他のメカニズムが実施されている。しかしながら、これらの研究の大部分は、精製されたタンパク質を用いてインビトロで行われ、インビボ研究によるこれらの分子の役割に関する証拠はより少ない。トロンボスポンジン－１のノックアウトは、一部の組織においてＴＧＦβ１－／－表現型のいくつかの態様を再現するが、ＴＧＦβ依存性であることが知られるブレオマイシン誘導性の肺線維症を保護しない（Ｅｚｚｉｅ，Ｍ．Ｅ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｅｌｌＭｏｌＢｉｏｌ，２０１１．４４（４）：ｐ．５５６－６１）。さらに、候補プロテアーゼのノックアウトは、ＴＧＦβ１表現型を生じなかった（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ，Ｊ．Ｊ．，Ｊ．Ｅ．Ｋｌｅｍｅｎｔｏｗｉｃｚ，ａｎｄＭ．Ａ．Ｔｒａｖｉｓ，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈｅｍＳｃｉ，２０１１．３６（１）：ｐ．４７－５４）。このことは、発達および恒常性よりむしろ、特定の疾患においては重複性（ｒｅｄｕｎｄａｎｃｉｅｓ）またはこれらのメカニズムが重要であることによって説明することができる。

ＴＧＦβは、線維症、免疫調整およびがん進行を含む複数の生物学的プロセスに関与している。ＴＧＦβ１は、タンパク質のＴＧＦβスーパーファミリーの最初に同定されたメンバーであった。ＴＧＦβスーパーファミリーの他のメンバーと同様に、ＴＧＦβ１およびアイソフォームＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３は、初めに不活性の前駆体プロタンパク質形態（ｐｒｏＴＧＦβと呼ばれる）として発現される。ＴＧＦβタンパク質（例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３）は、プロタンパク質転換酵素（例えば、フューリン）によってタンパク質分解切断されて、潜在型（潜在型ＴＧＦβと呼ばれる）が産生される。一部の実施態様では、ＴＧＦβタンパク質のプロタンパク質形態または潜在型（例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３）は、「ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβタンパク質」と呼ばれ得る。ＴＧＦβ１は、例えば、ＧＡＲＰ（ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体を形成する）、ＬＲＲＣ３３（ＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体を形成する）、ＬＴＢＰ１（ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体を形成する）、および／またはＬＴＢＰ３（ＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体を形成する）を含む複数の分子との複合体で、他の分子に対して提示され得る。これらの複合体において存在するＴＧＦβ１は、潜在型（潜在型ＴＧＦβ１）または前駆体形態（ｐｒｏＴＧＦβ１）のいずれかであってよい。

アイソフォーム選択性およびＴＧＦ阻害剤の作用機序
安全性の観点から、アイソフォームにわたるＴＧＦβの広範な阻害は観察される毒性の原因となり得るという認識が次第になされるようになり、それにより、今日までＴＧＦβ阻害剤の開発が成功しなかったという事実が強調される。潜在的に危険な副作用を回避するために、複数のグループが、最近になって、アイソフォームの全てではないがサブセットを標的化し、なおいかつ有効性を維持している阻害剤を同定することに切り替えている。しかしながら、有効性の観点から、この分野の通説では、治療的効果を達成するためにＴＧＦβの複数のアイソフォームを阻害することが有利であるとされていて、これに適合するために、「慎重に投与するレジメン」による毒性管理が解決策として示唆されている（Ｂｒｅｎｎａｎｅｔａｌ．（２０１８）ｍＡｂｓ，１０：１、１－１７）。この前提と一致して、非常に多くのグループが、１つよりも多いアイソフォームを標的化するＴＧＦβ阻害剤を開発している。これらは、ＴＧＦβ受容体の低分子量拮抗薬、例えば、ＡＬＫ５拮抗薬、例えばガルニサーチブ（ｇａｌｕｎｉｓｅｒｔｉｂ）（ＬＹ２１５７２９９一水和物）；３つのアイソフォームの全てを阻害するモノクローナル抗体（例えば中和抗体）（「ｐａｎ－阻害剤」抗体）（例えば、ＷＯ２０１８／１３４６８１を参照）；３つのアイソフォームのうちの２つを優先的に阻害するモノクローナル抗体（例えば、ＴＧＦβ１／２に対する抗体（例えばＷＯ２０１６／１６１４１０）およびＴＧＦβ１／３（例えばＷＯ２００６／１１６００２）；および、改変された分子（例えば、融合タンパク質）、例えばリガンド・トラップ（例えば、ＷＯ２０１８／０２９３６７；ＷＯ２０１８／１２９３３１およびＷＯ２０１８／１５８７２７）を含む。同様に、αＶβ６のようなインテグリンの阻害剤も、ＴＧＦβ１とＴＧＦβ３の両方のインテグリン依存性活性化をブロックし、したがって、ＴＧＦβシグナリングのアイソフォーム非選択的阻害剤と考えられ得る。さらに、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２の両方に選択的に結合して中和する抗体（すなわち、ＴＧＦβ１／２阻害剤）の例は、ＸＯＭＡ０８９（またはＮＩＳ７９３）および変異体を含む（例えば、ＷＯ２０１６／１６１４１０を参照）。

以前に、出願人は、ＴＧＦβ１単独の阻害が、ＴＧＦβ１／３の両方が同時発現される腫瘍においてさえ、免疫抑制性腫瘍をチェックポイント阻害剤療法に対して感受性にさせるのに十分であることを示した（ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４１３７３）。同様に、免疫組織化学によって観察されるように、ＴＧＦβ１選択的阻害剤は、別々の細胞型であろうともＴＧＦβ１／３アイソフォームの両方が線維化組織内で同時発現されるマウス肝線維症モデルを含む前臨床モデルにおいて、線維症を和らげることが示されている（データ示さず）。驚くべきことに、ＴＧＦβ３の阻害は、線維症を進行させる表現型を促進させた。線維症の悪化が、ＴＧＦβ３阻害剤を単独で用いた場合に観察される。さらに、ＴＧＦβ３阻害剤は、ＴＧＦβ１選択的阻害剤と組み合わせて用いると、線維化肝臓におけるコラーゲン蓄積の増大によって証明されるように、ＴＧＦβ１選択的阻害剤の抗線維化効果を弱めた。これらの結果は、ＴＧＦβ３に対する阻害効能が、線維症が心配される状況における療法として用いるには、ＴＧＦβ阻害剤の望ましくない特性であり得るという可能性を高める。

線維症を進行させる表現型（例えば、ＥＣＭ内のコラーゲン沈着の増大）は、線維症だけでなく、腫瘍の浸潤および転移のようながん進行の態様とも関係があるので、線維症のコンテキスト以外に、この予期されない発見に対するより広範な包含が存在する。例えば、Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｈｙｅｔａｌ．（ＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，（２０１８）９：４６９２「ＴＧＦ－β－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘｇｅｎｅｓｌｉｎｋｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｔｏｉｍｍｕｎｅｅｖａｓｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｆａｉｌｕｒｅ」を参照。）。様々な腫瘍タイプの線維化組織および間質を含む、調節不全ＥＣＭを有する病変組織は、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方を発現し得る。現在、複数のグループが、これらのアイソフォームの両方を標的化するＴＧＦβ阻害剤、例えば、リガンド・トラップ、中和抗体およびインテグリン阻害剤を開発しようとしている。しかしながら、本明細書中に示される発見は、そのような手法が、疾患を実際には悪化させ得る（例えば、より悪くさせ得る）ことを警告する。

したがって、本開示は、ＥＣＭ調節不全を伴う障害、例えば線維症およびがんの治療のためには、ＴＧＦβ３を特異的に標的化しないＴＧＦβ阻害剤を選択すべきであるという教示を提供する。好ましくは、そのような阻害剤は、ＴＧＦβ１のアイソフォーム選択的阻害剤、例えば、ＬＴＢＰ１／３関連ＴＧＦβ１を選択的に標的化する阻害剤である（例えば本明細書中に開示される）。関連する方法は、対象における線維性障害の治療での使用のためのＴＧＦβ阻害剤を選択する方法を含み、その方法は、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３を阻害する能力について、１つまたは複数の候補阻害剤の効能を試験するステップ、および、ＴＧＦβ１を阻害するがＴＧＦβ３を阻害しない阻害剤を、治療的使用のために選択するステップを含む。関連する治療方法は、ＴＧＦβ１を阻害するがＴＧＦβ３を阻害しない阻害剤を、線維性障害を治療するのに十分な量で、または、線維性障害を有するかまたは発症するリスクがある対象を治療するのに十分な量で、対象に投与するステップをさらに含んでよい。好ましくは、選択される阻害剤は、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３関連ＴＧＦβ１シグナリングを選択的に阻害する抗体またはそのフラグメントである（例えば本明細書中に開示される）。一部の実施態様では、線維性障害を発症するリスクがある対象は、糖尿病、肥満およびＮＡＳＨのような代謝障害を患い得る。患者亜集団の提案される除外は、線維症を進行させる効果をトリガーする、促進させる、または悪化させるリスクを、減少させることを目的とする。

上記で対処されるＴＧＦβ３の阻害のあり得る心配に加えて、Ｔａｋａｈａｓｈｉら（ＮａｔＭｅｔａｂ．２０１９，１（２）：２９１－３０３）は最近、代謝調節におけるＴＧＦβ２の有益な役割を報告した。著者らは、ＴＧＦβ２を、運動によって誘導されるアディポカインとして同定し、それは、グルコースおよび脂肪酸の取り込みをインビトロで刺激し、同様に、組織グルコースの取り込みをインビボで刺激し；肥満マウスにおける代謝を改善し；高脂肪食によって誘導される炎症を減少させる。さらに著者らは、運動中に筋肉から放出される代謝産物である乳酸が、ヒト脂肪細胞においてＴＧＦβ２発現を刺激すること、および、乳酸を下げる薬剤が、循環ＴＧＦβ２レベルを減少させ、運動によって刺激されるグルコース耐性の改善を減少させることを観察した。これらの観察は、ＴＧＦβ２アイソフォームに対する阻害活性を有するＴＧＦβ阻害剤の治療的使用が、少なくとも代謝態様において有害であり得ることを示唆している。

特定の理論によって拘束されずに、ＮＡＳＨと関連する肝線維症のような、代謝疾患の治療での使用のためのＴＧＦβ阻害剤として、ＴＧＦβ１選択的阻害剤を選択することが有利であると考えられる。好ましい実施態様では、本明細書中に開示される抗体およびフラグメントのような、代謝疾患の治療での使用のために選択されるＴＧＦβ１選択的阻害剤は、ＬＴＢＰ１／３関連ＴＧＦβ１を選択的に阻害する。したがって、本発明は、対象における代謝疾患の治療での使用のためのＴＧＦβ阻害剤を含み、ここで、治療は、ＴＧＦβ１を阻害するがＴＧＦβ２を阻害しないＴＧＦβ阻害剤（ここで阻害剤は、ＴＧＦβ１選択的であってもよい）の選択および代謝疾患を患っている対象への阻害剤の投与を含む。代謝疾患は、肝線維症、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤのような肝臓疾患であってよく、肥満および／または２型糖尿病を伴ってもよい。好ましい実施態様では、ＴＧＦβ１選択的阻害剤は、本明細書中に開示されるもののような、マトリックス関連ＴＧＦβ１（例えば、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１）を選択的に標的化する抗体またはその抗原結合フラグメントである。

好ましい実施態様では、線維性障害の治療での使用のためのＴＧＦβ阻害剤は、マトリックス関連ＴＧＦβ１を含んでいる潜在型複合体をインビボで標的化することが可能な、ＴＧＦβ１のアイソフォーム選択的活性化阻害剤（例えば、本明細書中に開示される、低いｋ_ＯＦＦまたは長いｔ^１／２を有する新規の抗体）である。

本開示の抗体は、ＴＧＦβ１活性化のステップを防止することにより作用する。一部の実施態様では、そのような阻害剤は、ＴＧＦβ１のインテグリン依存性（例えば、機械的（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ）または力駆動（ｆｏｒｃｅ－ｄｒｉｖｅｎ））の活性化を阻害することができる。一部の実施態様では、そのような阻害剤は、プロテアーゼ依存性またはプロテアーゼ誘導性のＴＧＦβ１活性化を阻害することができる。後者は、インテグリン非依存性の様式でＴＧＦβ１活性化ステップを阻害する阻害剤を含む。一部の実施態様では、そのような阻害剤は、活性化のモードに関係なくＴＧＦβ１活性化を阻害することができ、例えば、ＴＧＦβ１のインテグリン依存性活性化およびプロテアーゼ依存性活性化の両方を阻害する。ＴＧＦβ１を活性化し得るプロテアーゼの非限定的な例は、セリンプロテアーゼ、例えば、カリクレイン、キモトリプシン、トリプシン、エラスターゼ、プラスミン、トロンビン、ならびに、亜鉛メタロプロテアーゼ（ＭＭＰファミリー）、例えば、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３およびＡＤＡＭプロテアーゼ（例えば、ＡＤＡＭ１０およびＡＤＡＭ１７）を含む。カリクレインは、血漿カリクレインおよび組織カリクレイン、例えば、ＫＬＫ１、ＫＬＫ２、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ９、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４およびＫＬＫ１５を含む。

潜在型ＴＧＦβ－結合タンパク質（ＬＴＢＰ）
哺乳類には、４つの公知のＬＴＢＰ、ＬＴＢＰ１～４が存在し、それぞれ複数のスプライス変異を有する（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｉ．Ｂ．，ｅｔａｌ．，ＭａｔｒｉｘＢｉｏｌ，２０１５．４７：ｐ．４４－５３）。ＬＴＢＰ２は、潜在型ＴＧＦβと関連しない唯一のＬＴＢＰである（Ｓａｈａｒｉｎｅｎ，Ｊ．ａｎｄＪ．Ｋｅｓｋｉ－Ｏｊａ，ＭｏｌＢｉｏｌＣｅｌｌ，２０００．１１（８）：ｐ．２６９１－７０４）。ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３と潜在型ＴＧＦβ１との間の関連性は十分に確認されているが、ＴＧＦβ提示におけるＬＴＢＰ４の役割はあまり明らかでない。ＬＴＢＰ４と潜在型ＴＧＦβ１の複合体は、潜在的に、ＬＴＢＰ４のＴＧＦβ結合ドメイン内の負に帯電したいくつかの残基の不存在に起因して、さらにより低効率で形成すると考えられる（Ｓａｈａｒｉｎｅｎ，Ｊ．ａｎｄＪ．Ｋｅｓｋｉ－Ｏｊａ，ＭｏｌＢｉｏｌＣｅｌｌ，２０００．１１（８）：ｐ．２６９１－７０４；Ｃｈｅｎ，Ｙ．，ｅｔａｌ．，ＪＭｏｌＢｉｏｌ，２００５．３４５（１）：ｐ．１７５－８６）。ＬＴＢＰ４Ｓ－／－マウスおよびＬＴＢＰ４内にヌル突然変異を有するＵｒｂａｎ－Ｒｉｆｋｉｎ－Ｄａｖｉｓ症候群患者の両方とも、破壊された弾性の繊維集合体に悩まされる（Ｕｒｂａｎ，Ｚ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＨｕｍＧｅｎｅｔ，２００９．８５（５）：ｐ．５９３－６０５；Ｄａｂｏｖｉｃ，Ｂ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０１５．２３０（１）：ｐ．２２６－３６）。さらに、ＬＴＢＰ４Ｓ－／－マウスは、肺の中隔作成および弾性繊維形成の欠陥を有するが、潜在型ＴＧＦβ１と複合体を形成できないＬＴＢＰ４を有するトランスジェニックマウスは、明白な表現型を有さない（Ｄａｂｏｖｉｃ，Ｂ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０１５．２３０（１）：ｐ．２２６－３６）。ＬＴＢＰ４が、提示分子として機能することによって潜在型ＴＧＦβ１の調節に直接関与しているかどうかは明確でなく；そのかわり、ＬＴＢＰ４は、ＥＣＭにおける弾性の原線維の適切な形成に必要であり得て、その損失は、ＥＣＭにおける欠陥を通して潜在型ＴＧＦβ１活性化に間接的に影響する。

一態様では、本発明は、ＴＧＦβプロタンパク質およびＬＴＢＰタンパク質（例えば、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３）を含む複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、免疫グロブリン、例えば、抗体、またはその抗原結合部分に関する。好ましい実施態様では、ＴＧＦβタンパク質はＴＧＦβ１である。一部の実施態様では、本明細書中に開示される結合分子は、ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３を含む複合体に選択的に結合する。そのような結合分子は、コンテキスト依存性な様式で、すなわち、他の提示分子（例えば、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３）と複合体となっているＴＧＦβ１の活性を調整せずに、ＬＴＰＢタンパク質のコンテキストにおいてＴＧＦβ１を調整することにより、ＴＧＦβ１活性を選択的に調整することが可能であり得る。

ＬＴＢＰによって仲介されるＴＧＦβ活性化を選択的に阻害する抗体
本発明は、マトリックスまたはＥＣＭ関連のＴＧＦβ活性を選択的に標的化する新規のＴＧＦβ阻害剤を提供する。より具体的には、そのような阻害剤は、ＥＣＭ環境内でＴＧＦβ１の潜在型（例えば、ｐｒｏＴＧＦβ１複合体）に特異的に結合して、ニッチにおける複合体からの成熟増殖因子の放出を防ぐ、ＴＧＦβ１活性化のアイソフォーム特異的、コンテキスト選択的阻害剤を含む。そのようなマトリックス標的化阻害剤は、ＥＣＭ提示分子（すなわちＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３）と関連するｐｒｏＴＧＦβ１に選択的に結合するという点でコンテキスト特異的である。したがって、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体内に存在するエピトープに結合することが可能なモノクローナル抗体およびそのフラグメントが本明細書中に開示されるが、そのエピトープは、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体内には存在しない。

一部の実施態様では、本開示のコンテキスト選択的阻害剤は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体の両方に、Ｏｃｔｅｔのような適切なインビトロ結合アッセイで、それぞれ＜５ｎＭの親和性（測定されたＫ_Ｄ値）で特異的に結合することが可能である。好ましい実施態様では、そのような抗体は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１の両方に、Ｏｃｔｅｔのような適切なインビトロ結合アッセイで、それぞれ＜５ｎＭの親和性（測定されたＫ_Ｄ値）で結合する。一方で、これらのコンテキスト特異的抗体は、同一のアッセイ条件下で、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対するいかなる検出可能な結合も示さない。好ましくは、そのような抗体またはフラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のそれぞれに１ｎＭ未満のＫＤで結合する。

一部の実施態様では、本開示のコンテキスト選択的阻害剤は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のいずれかに特異的に結合することが可能である。いずれも、同一のアッセイ条件下で、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対するいかなる検出可能な結合も示さない。

当該分野は、例えば、ＯｃｔｅｔのようなＢＬＩに基づくアッセイおよびＢｉａｃｏｒｅのようなＳＰＲに基づくアッセイを含む、適切なインビトロ結合アッセイに精通しており、抗体抗原相互作用（例えば、結合速度論）を測定するために用いることができる。本明細書において用いられる「結合なし（ｎｏｂｉｎｄｉｎｇ）」は、これらのコンテキストにおいて、特定のアッセイによる検出可能な結合がないこと、例えば、結合があったにしてもアッセイの感度未満であることを指し得る。一部の実施態様では、「結合なし」は、特定のアッセイシステムによって測定した場合に意味があると考えられるのに必要な最小レベルを規定するカットオフによって設定された、「意味がある結合なし」を指し得る。例えば、ＢＬＩ（Ｏｃｔｅｔ）アッセイでは、所定の分析物（例えば、標的抗原）濃度（例えば、１００ｎＭ、２００ｎＭなど）で測定される０．１ｎｍの光学シフトは、意味がある結合を示し得て、それよりも下では、結合なしと考えられ得る（例えば、実施例９を参照）。同様に、典型的なＳＰＲ（Ｂｉａｃｏｒｅ）アッセイでは、カットオフのレベルは、０．２ＲＵ（共鳴単位）であり得る。一部の実施態様では、０ｎＭ抗体でのシグナル（例えば、バックグラウンド・ノイズ）が、より高い濃度で得られた全てのセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍｓ）から引かれる。ＳＰＲ（Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いるこれらの条件下では、０．２ＲＵが適切なカットオフであり得る。

一部の実施態様では、本開示のコンテキスト選択的阻害剤は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合することが可能であり、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定して、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示さない。

一部の実施態様では、本開示のコンテキスト選択的阻害剤は、同一のアッセイ条件下でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低い（例えば、少なくとも７５倍低い、少なくとも１００倍低い）Ｋ_Ｄで、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、Ｋ_Ｄは、ＢＬＩまたはＳＰＲによって決定される。一部の実施態様では、Ｋ_Ｄは、ＳＰＲによって決定される。

一部の実施態様では、本開示のコンテキスト選択的阻害剤は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合することが可能であり、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定して、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体への検出可能な結合を示さない。

一部の実施態様では、本開示のコンテキスト選択的阻害剤は、同一のアッセイ条件下でヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低い（例えば、少なくとも７５倍低い、少なくとも１００倍低い）Ｋ_Ｄで、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、Ｋ_Ｄは、ＢＬＩまたはＳＰＲによって決定される。一部の実施態様では、Ｋ_Ｄは、ＳＰＲによって決定される。

本発明は、好ましい抗体（例えば、免疫グロブリンおよび抗原結合フラグメント、例えばＦａｂ、ならびに、そのようなフラグメントを取り込んでいる改変された構築物）は、その標的／抗原（例えば、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１、ヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１）に結合した時点で、抗原からゆっくり解離するという認識を含む。したがって、本発明の新規の抗体は、それらの高い全体的な親和性（例えば、５ｎＭ以内のＫＤ）だけでなく、特にそれらの低い解離速度に関して選択される。本開示によれば、そのような抗体は、ＢＬＩによって測定して≦５×１０^－４（１／ｓ）の解離速度を有する（例えば、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１に結合する場合）。抗体または抗原結合フラグメントの≦５×１０^－４（１／ｓ）という解離速度は、一価の解離速度または二価の解離速度であってよい。一部の実施態様では、抗体またはフラグメントは、ＳＰＲによって測定して少なくとも４５分（例えば、≧４５、６０、７５、９０分）の一価の解離半減期（ｔ^１／２）で、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１から、好ましくはヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１の両方に関して、ゆっくり解離する。一方で、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体への結合が検出可能な場合は、そのような抗体は、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体（単数または複数）、特にヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１から急速に解離する。一部の実施態様では、抗体は、ＳＰＲによって測定して５分未満のｔ^１／２でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１から解離する。特に好ましい実施態様では、抗体またはフラグメントは、種交差反応性を示し、したがって、同等の親和性でミューリン相対物に結合する。

これらの複合体内に存在するＴＧＦβ１は、潜在型（潜在型ＴＧＦβ１）または前駆体形態（ｐｒｏＴＧＦβ１）のいずれかであってよい。一実施態様では、阻害剤は、ＬＴＢＰ１単独には有意に結合しない（例えば、ＴＧＦβ１と複合体を形成していない場合）。別の実施態様では、阻害剤は、ＬＴＢＰ３単独には有意に結合しない（例えば、ＴＧＦβ１と複合体を形成していない場合）。別の実施態様では、阻害剤は、ＴＧＦβ１単独（例えば、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３と複合体を形成していないｐｒｏまたは潜在型ＴＧＦβ１、または成熟ＴＧＦβ１）には有意に結合しない。別の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤は、ＴＧＦβ１および他の提示分子を含んでいる複合体、例えば、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体（例えば、ｐｒｏまたは潜在型ＴＧＦβ１と複合体を形成したＧＡＲＰ）および／またはＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体（例えば、ｐｒｏまたは潜在型ＴＧＦβ１と複合体を形成したＬＲＲＣ３３）には有意に結合しない。一実施態様では、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１に選択的に結合する阻害剤は、以下：ＬＴＢＰ１単独、ＴＧＦβ１単独、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体、およびＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体の１つまたは複数（例えば、２以上、３以上、または４つ全て）に有意に結合しない。さらに、一部の実施態様では、阻害剤は、ＬＴＢＰ３単独には有意に結合しない。

本明細書において用いられる用語「阻害剤」は、ＴＧＦβ１シグナリングをブロックまたは拮抗することが可能な任意の薬剤を指す。そのような薬剤は、ＴＧＦβ１の小分子拮抗薬およびＴＧＦβ１の生物学的拮抗薬（例えば、タンパク質フラグメントおよび抗体）を含んでよい。一部の実施態様では、阻害剤は、抗体（そのフラグメント、例えば、米国特許６，２９１，１５８；６，５８２，９１５；６，５９３，０８１；６，１７２，１９７；および６，６９６，２４５に記載されるようなドメイン抗体（ｄＡｂ）を含む）、小分子阻害剤、Ａｄｎｅｃｔｉｎ、Ａｆｆｉｂｏｄｙ、ＤＡＲＰｉｎ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ、Ａｖｉｍｅｒ、Ｖｅｒｓａｂｏｄｙまたは遺伝子療法であってよい。本発明によって包含される阻害剤の使用は、抗体模倣物、例えばモノボディおよび単一ドメイン抗体も含む。モノボディは、典型的に分子足場としてフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（ＦＮ３）を用いる合成の結合タンパク質である。モノボディは、１０番目のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに基づくＡｄｎｅｃｔｉｎｓ（商標）を含む。

一部の態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体上に存在し、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体上には存在しないエピトープに選択的に結合する。一部の実施態様では、エピトープは、ＬＴＢＰ１／３とＴＧＦβ１が複合体を形成するときに生じるＬＴＢＰ１／３および／またはＴＧＦβ１における立体構造的変化に起因して利用可能である。この実施態様では、エピトープは、タンパク質が複合体において関連していない場合は、ＬＴＢＰ１／３またはＴＧＦβ１内に存在しない。一実施態様では、ＴＧＦβ１がＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３との複合体内にある場合は、エピトープはＴＧＦβ１上に存在する。別の実施態様では、ＬＴＢＰ１がＴＧＦβ１との複合体内にある場合は、エピトープはＬＴＢＰ１上に存在する。別の実施態様では、ＬＴＢＰ３がＴＧＦβ１との複合体内にある場合は、エピトープはＬＴＢＰ３上に存在する。別の実施態様では、エピトープは、ＬＴＢＰ１およびＴＧＦβ１の両方由来の残基を含む。別の実施態様では、エピトープは、ＬＴＢＰ３およびＴＧＦβ１の両方由来の残基を含む。

驚くべきことに、本明細書中に開示されるＬＴＢＰ１／３複合体選択的抗体の一部（例えば、Ａｂ１４、Ａｂ２０、Ａｂ２１～２３、Ａｂ１７、およびＡｂ２４～２９）は、提示分子（例えば、ＬＴＢＰ１／３）の不存在下で、小さな潜在型複合体（ｐｒｏＴＧＦβ１Ｃ４Ｓ）に結合することが可能であり、それでもなお、コンテキスト選択性を与える。理論によって拘束されることを望まずに、この知見は、抗体（およびその変異体、または交差競合抗体）が、ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびｐｒｏＴＧＦβ１単独においては利用可能であるがＬＲＲＣタイプの提示分子（ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３）が存在する場合は利用可能でないエピトープに結合し得ることを示唆する。エピトープは、完全に潜在型ＴＧＦβ１上であってよいが、ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３が複合体形成された場合は（直接的または間接的に）塞がれる。

あるいは、本開示に係るＬＴＢＰ選択的阻害剤は、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３の１つまたは複数のアミノ酸残基とｐｒｏＴＧＦβ１の１つまたは複数のアミノ酸残基とを含むコンビナトリアル・エピトープに結合し得て、それにより、ＧＡＲＰ／ＬＲＲＣ３３が結合した複合体よりもＬＴＢＰが結合した複合体に対するコンテキスト選択性を与える。これらの実施態様では、アイソフォーム（ＴＧＦβ１）に対する選択性ならびにコンテキスト（ＥＣＭ）は、抗原複合体の両方のエレメント由来の組み合わせた寄与に帰すことができる。

一部の実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＴＧＦβ１アイソフォームに関して選択的である。そのような実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３に結合しない。例えば、一実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合するが、ＴＧＦβ２、またはＴＧＦβ２を含んでいる複合体には結合しない。別の実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合するが、ＴＧＦβ３、またはＴＧＦβ３を含んでいる複合体には結合しない。

一部の実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＴＧＦβ１がインテグリンに結合するのを妨げない。例えば、一部の実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＴＧＦβ１のインテグリン結合部位をマスクしない。

一態様では、本発明は、ＴＧＦβ１活性を調整する機能性阻害剤、例えば、抗体を提供する。例示的な実施態様では、本明細書中に記載の抗体は、ＴＧＦβ１の機能または活性を阻害する阻害抗体である。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体によるＴＧＦβ１の活性化（放出）を阻害する。本開示は、例示的な実施態様では、ＴＧＦβ１活性化の「コンテキスト特異的」または「コンテキスト選択的」阻害剤を提供する。かかる阻害剤は、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に結合して、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１の活性化を阻害せずにＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３によって提示されるＴＧＦβ１の活性化を阻害することができる。したがって、一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害するが、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害しない。ＬＴＢＰ、ＧＡＲＰ、およびＬＲＲＣ３３の示差的局在に起因して、本発明によって提供されるＴＧＦβ１のコンテキスト特異的阻害剤は、ＴＧＦβ１活性の特定のサブセットをインビボでブロックすることができる。一実施態様では、本発明において提供される、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１を阻害するがＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１またはＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１を阻害しないコンテキスト特異的抗体は、細胞外マトリックスに局在化したＴＧＦβ１を阻害するために用いることができる。別の実施態様では、コンテキスト特異的抗体は、ＴＧＦβ１関連の免疫活性または免疫応答を調整せずにＴＧＦβ１を阻害することができる。別の実施態様では、コンテキスト特異的抗体は、造血細胞と関連するＴＧＦβ１活性を調整せずに細胞外マトリックスと関連するＴＧＦβ１活性を阻害するために用いることができる。したがって、コンテキスト特異的抗体は、本明細書中に記載のように、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３のコンテキストにおけるＴＧＦβ１活性化については望ましくない適用において、ＬＴＢＰ１／３関連のＴＧＦβ１活性を阻害するために用いることができる。

一部の実施態様では、ＴＧＦβ１は、天然起源の哺乳類アミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１は、天然起源のヒトアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１は、ヒト、サル、ラットまたはマウスのアミノ酸配列を含む。

一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＴＧＦβ１タンパク質と、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３とを含む複合体に選択的に結合する。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分は、非天然起源のＴＧＦβ１アミノ酸配列（他の方法で、本明細書において非天然起源のＴＧＦβ１と呼ばれる）を含むＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する。例えば、非天然起源のＴＧＦβ１は、天然起源ＴＧＦβ１アミノ酸配列に対して、１つまたは複数の組換えにより生産された突然変異を含んでよい。

一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分は、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３、または、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３を含むタンパク質複合体には結合しない。例示的なＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３アミノ酸配列を、配列番号１０および１１にそれぞれ示す。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、またはＴＧＦβ３アミノ酸配列は、表１に示される配列番号１２～２３に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１アミノ酸配列は、表２に示される配列番号２４～３１に記載のアミノ酸配列を含む。

ＴＧＦβ１
ＬＳＴＣＫＴＩＤＭＥＬＶＫＲＫＲＩＥＡＩＲＧＱＩＬＳＫＬＲＬＡＳＰＰＳＱＧＥＶＰＰＧＰＬＰＥＡＶＬＡＬＹＮＳＴＲＤＲＶＡＧＥＳＡＥＰＥＰＥＰＥＡＤＹＹＡＫＥＶＴＲＶＬＭＶＥＴＨＮＥＩＹＤＫＦＫＱＳＴＨＳＩＹＭＦＦＮＴＳＥＬＲＥＡＶＰＥＰＶＬＬＳＲＡＥＬＲＬＬＲＬＫＬＫＶＥＱＨＶＥＬＹＱＫＹＳＮＮＳＷＲＹＬＳＮＲＬＬＡＰＳＤＳＰＥＷＬＳＦＤＶＴＧＶＶＲＱＷＬＳＲＧＧＥＩＥＧＦＲＬＳＡＨＣＳＣＤＳＲＤＮＴＬＱＶＤＩＮＧＦＴＴＧＲＲＧＤＬＡＴＩＨＧＭＮＲＰＦＬＬＬＭＡＴＰＬＥＲＡＱＨＬＱＳＳＲＨＲＲＡＬＤＴＮＹＣＦＳＳＴＥＫＮＣＣＶＲＱＬＹＩＤＦＲＫＤＬＧＷＫＷＩＨＥＰＫＧＹＨＡＮＦＣＬＧＰＣＰＹＩＷＳＬＤＴＱＹＳＫＶＬＡＬＹＮＱＨＮＰＧＡＳＡＡＰＣＣＶＰＱＡＬＥＰＬＰＩＶＹＹＶＧＲＫＰＫＶＥＱＬＳＮＭＩＶＲＳＣＫＣＳ（配列番号９）

ＴＧＦβ２
ＳＬＳＴＣＳＴＬＤＭＤＱＦＭＲＫＲＩＥＡＩＲＧＱＩＬＳＫＬＫＬＴＳＰＰＥＤＹＰＥＰＥＥＶＰＰＥＶＩＳＩＹＮＳＴＲＤＬＬＱＥＫＡＳＲＲＡＡＡＣＥＲＥＲＳＤＥＥＹＹＡＫＥＶＹＫＩＤＭＰＰＦＦＰＳＥＮＡＩＰＰＴＦＹＲＰＹＦＲＩＶＲＦＤＶＳＡＭＥＫＮＡＳＮＬＶＫＡＥＦＲＶＦＲＬＱＮＰＫＡＲＶＰＥＱＲＩＥＬＹＱＩＬＫＳＫＤＬＴＳＰＴＱＲＹＩＤＳＫＶＶＫＴＲＡＥＧＥＷＬＳＦＤＶＴＤＡＶＨＥＷＬＨＨＫＤＲＮＬＧＦＫＩＳＬＨＣＰＣＣＴＦＶＰＳＮＮＹＩＩＰＮＫＳＥＥＬＥＡＲＦＡＧＩＤＧＴＳＴＹＴＳＧＤＱＫＴＩＫＳＴＲＫＫＮＳＧＫＴＰＨＬＬＬＭＬＬＰＳＹＲＬＥＳＱＱＴＮＲＲＫＫＲＡＬＤＡＡＹＣＦＲＮＶＱＤＮＣＣＬＲＰＬＹＩＤＦＫＲＤＬＧＷＫＷＩＨＥＰＫＧＹＮＡＮＦＣＡＧＡＣＰＹＬＷＳＳＤＴＱＨＳＲＶＬＳＬＹＮＴＩＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＳＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＩＧＫＴＰＫＩＥＱＬＳＮＭＩＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号１０）

ＴＧＦβ３
ＳＬＳＬＳＴＣＴＴＬＤＦＧＨＩＫＫＫＲＶＥＡＩＲＧＱＩＬＳＫＬＲＬＴＳＰＰＥＰＴＶＭＴＨＶＰＹＱＶＬＡＬＹＮＳＴＲＥＬＬＥＥＭＨＧＥＲＥＥＧＣＴＱＥＮＴＥＳＥＹＹＡＫＥＩＨＫＦＤＭＩＱＧＬＡＥＨＮＥＬＡＶＣＰＫＧＩＴＳＫＶＦＲＦＮＶＳＳＶＥＫＮＲＴＮＬＦＲＡＥＦＲＶＬＲＶＰＮＰＳＳＫＲＮＥＱＲＩＥＬＦＱＩＬＲＰＤＥＨＩＡＫＱＲＹＩＧＧＫＮＬＰＴＲＧＴＡＥＷＬＳＦＤＶＴＤＴＶＲＥＷＬＬＲＲＥＳＮＬＧＬＥＩＳＩＨＣＰＣＨＴＦＱＰＮＧＤＩＬＥＮＩＨＥＶＭＥＩＫＦＫＧＶＤＮＥＤＤＨＧＲＧＤＬＧＲＬＫＫＱＫＤＨＨＮＰＨＬＩＬＭＭＩＰＰＨＲＬＤＮＰＧＱＧＧＱＲＫＫＲＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＴＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＬＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＳＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号１１）

一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合することが可能である。一部の実施態様では、抗原性タンパク質複合体（例えば、ＬＴＢＰ－ＴＧＦβ１複合体）は、以下：ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、およびＬＴＢＰ４から選択されるＬＴＢＰタンパク質を含んでよい。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、天然起源タンパク質である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、非天然起源タンパク質である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、組み換えタンパク質である。かかる組み換えＬＴＢＰ１タンパク質は、ＬＴＢＰ１、あるいはそのスプライス変異体、および／またはそのフラグメントを含んでよい。組み換えＬＴＢＰ１タンパク質は、１つまたは複数の検出可能なラベルを含むように改変されてもよい。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、リーダー配列（例えば、ネイティブまたは非ネイティブのリーダー配列）を含む。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、リーダー配列を含まない（すなわち、リーダー配列は、プロセッシングまたは切断されている）。かかる検出可能なラベルは、限定されないがビオチンラベル、ポリヒスチジンタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよび／または蛍光タグを含んでよい。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、哺乳類のＬＴＢＰ１タンパク質である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、ヒト、サル、マウス、またはラットのＬＴＢＰ１タンパク質である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、表３の配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１タンパク質は、表３の配列番号３３または配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。

一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合することが可能である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、天然起源タンパク質である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、非天然起源タンパク質である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、組み換えタンパク質である。かかる組み換えＬＴＢＰ３タンパク質は、ＬＴＢＰ３、あるいはそのスプライス変異体および／またはそのフラグメントを含んでよい。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、リーダー配列（例えば、ネイティブまたは非ネイティブのリーダー配列）を含む。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、リーダー配列を含まない（すなわち、リーダー配列は、プロセッシングまたは切断されている）。組み換えＬＴＢＰ３タンパク質は、１つまたは複数の検出可能なラベルを含むように改変されてもよい。かかる検出可能なラベルは、限定されないがビオチンラベル、ポリヒスチジンタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよび／または蛍光タグを含んでよい。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、哺乳類のＬＴＢＰ３タンパク質である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、ヒト、サル、マウス、またはラットのＬＴＢＰ３タンパク質である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ３タンパク質は、配列番号３６または３７に示されるアミノ酸配列を含む。

例示的な実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、およびその抗原結合部分は、ＴＧＦβ１とＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３とを含む複合体に結合しない。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号３８または配列番号３９に示される配列を有するＧＡＲＰタンパク質に結合せず、前記ＧＡＲＰタンパク質を含む複合体に結合しない。別の実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号４０または配列番号４１に示される配列を有するＧＡＲＰタンパク質に結合せず、前記ＧＡＲＰタンパク質を含む複合体に結合しない。一実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号４２または配列番号４３に示される配列を有するＬＲＲＣ３３タンパク質に結合せず、前記ＬＲＲＣ３３タンパク質を含む複合体に結合しない。一実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＧＡＲＰ／ＬＲＲＣ３３キメラ、例えば、配列番号４４に示されるＧＡＲＰ／ＬＲＲＣ３３キメラに結合しない。

別の態様では、本発明は、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３のコンテキストにおいてＴＧＦβ１活性化を阻害する方法を提供する。一実施態様では、その方法は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体を、本明細書中に記載の阻害剤、抗体またはその抗原結合部分、および／または医薬組成物に曝露するステップを含む。例えば、一実施態様では、阻害剤は、ＬＴＢＰ１／３によって提示されるｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体に選択的に結合する、細胞外マトリックス関連ＴＧＦβ１活性化の阻害剤である。一実施態様では、阻害剤は、免疫細胞関連ＴＧＦβ１活性化、例えば、ＧＡＲＰによって提示されるｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体の活性化によって生じる免疫細胞関連ＴＧＦβ１活性化を阻害しない。別の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体に選択的に結合し、それにより、潜在型複合体からの成熟ＴＧＦβ１増殖因子の放出を調整し、ここで抗体、またはその抗原結合部分は、成熟ＴＧＦβ１単独またはＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体には結合しない。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害しない。

一実施態様では、その方法はインビトロで行われる。別の実施態様では、その方法はインビボで行われる。一実施態様では、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体は、細胞外マトリックス内にある。細胞外マトリックスは、例えば、フィブリリンおよび／またはフィブロネクチンを含んでよい。一部の実施態様では、細胞外マトリックスは、ＲＧＤモチーフを含んでいるタンパク質を含む。

前述の態様の一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、免疫エフェクター細胞を刺激しない。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害し、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害しない。

一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する本開示の阻害剤、例えば、抗体は、相対的に高い親和性、例えば、１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ未満またはそれよりも低い解離定数（Ｋ_Ｄ）で、複合体に結合することができる。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に、約１０^－８Ｍ、約１０^－９Ｍ、約１０^－１０Ｍ、約１０^－１１Ｍ、約１０^－１２Ｍ、または約１０^－１３Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）で結合する。例えば、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体は、５ｐＭ～５００ｎＭ、例えば１０ｐＭ～１００ｎＭ、例えば５０ｐＭ～５０ｎＭの親和性で複合体に結合することができる。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、約３００ｎｍ未満、例えば約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約５００ｐＭ以下、または約５ｐＭ以下の親和性でＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合することができる。例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、約１ｎｍ～約３５０ｎｍ、約１０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１５ｎｍ～約２５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１ｎｍ、約２０ｎｍ、約２５ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１５０ｎｍ、約２００ｎｍ、約２５０ｎｍ、約３００ｎｍ、または約５００ｐｍの親和性でＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合することができる。

本開示は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合に関して本明細書中に記載の任意の抗体と競合する抗体または抗原結合フラグメントも含む。一部の実施態様では、そのような抗体は、複合体に関して５０ｎＭ以下（例えば、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５００ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、または５ｐＭ以下）の親和性を有する。ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体（またはその抗原結合フラグメント）の親和性および結合速度論は、制限されないがバイオセンサー技術（例えば、ＯＣＴＥＴまたはＢＩＡＣＯＲＥ）を含む任意の適切な方法を用いて試験することができる。

一実施態様では、本開示の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への結合に関して抗体ＳＲ－Ａｂ１と競合しない。

本開示の態様は、本明細書において提供される任意の抗体と競合または交差競合する抗体に関する。本明細書において抗体に関して用いられる用語「競合する」は、第１の抗体が、第２の抗体の結合と十分に似た様式で、エピトープ（例えば、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体のエピトープおよび／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体のエピトープ）に結合し、それにより、第１の抗体のそのエピトープとの結合の結果が、第２の抗体の不存在下での第１の抗体の結合と比較して、第２の抗体の存在下で検出可能に低減することを指す。第２の抗体のそのエピトープへの結合も第１の抗体の存在下で検出可能に低減するという代替があり得るが、必ずしもそうでなくてよい。すなわち、第１の抗体は、第２の抗体のそのエピトープへの結合を、その第２の抗体が第１の抗体のそれぞれのエピトープへの結合を阻害することなく、阻害することができる。しかしながら、それぞれの抗体が、他方の抗体のそのエピトープまたはリガンドに対する結合を、同等、より大きい、またはより小さい程度であれ、検出可能に阻害する場合、抗体は、それらのそれぞれのエピトープ（単数または複数）の結合に関して互いに「交差競合する」と言われる。競合する抗体および交差競合する抗体の両方とも、本開示の範囲内である。そのような競合または交差競合が生じるメカニズムにかかわらず（例えば、立体障害、立体構造的変化、または共通エピトープ、またはその部分への結合）、当業者は、そのような競合する抗体および／または交差競合する抗体が包含され、本明細書において提供される方法および／または組成物に有用であり得ることを理解するであろう。

本開示の態様は、本明細書において提供される任意の特異的な抗体、またはその抗原結合部分、例えば、表５に示される１つまたは複数のＣＤＲ配列（１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲ配列）を有する抗体と競合または交差競合する抗体に関する。一実施態様では、本発明は、表５に示される配列番号１、配列番号２、および配列番号３を含む重鎖ＣＤＲ配列、および／または表５に示される配列番号４、配列番号５、および配列番号６を含む軽鎖ＣＤＲ配列を有する抗体と競合または交差競合する抗体、およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号７を含む重鎖可変領域配列、および／または配列番号８を含む軽鎖可変領域配列を有する抗体、またはその抗原結合部分と競合または交差競合する抗体を提供する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、本明細書において提供される任意の抗体と同一のエピトープにおいて又はその付近に結合する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、エピトープの１５個以下のアミノ酸残基の範囲内に結合するならば、エピトープの付近に結合する。一部の実施態様では、本明細書において提供される任意の抗体、またはその抗原結合部分は、本明細書において提供される任意の抗体によって結合されるエピトープの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸残基の範囲内に結合する。

別の実施態様では、抗体とタンパク質の間の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）が１０^－６Ｍ未満で、本明細書において提供される任意の抗原（例えば、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体）への結合に関して競合または交差競合する、抗体、またはその抗原結合部分が本明細書において提供される。他の実施態様では、抗体は、１０^－１１Ｍ～１０^－６Ｍの範囲内のＫ_Ｄで本明細書において提供される任意の抗原への結合に関して競合または交差競合する。他の実施態様では、抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＯｃｔｅｔ（登録商標）のようなＢＬＩによって測定して＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合に関して競合または交差競合する。他の実施態様では、抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＯｃｔｅｔのようなＢＬＩによって測定して＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合に関して競合または交差競合する。

一部の実施態様では、抗体または抗原結合部分は、表６に示されるＡｂ４２の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列（例えば、それぞれ配列番号３１８および３１９）を有する抗体と競合または交差競合する。抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＯｃｔｅｔのようなＢＬＩによって決定して＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合に関して競合または交差競合し得る。抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＯｃｔｅｔのようなＢＬＩによって決定して＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合に関して競合または交差競合し得る。抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＯｃｔｅｔのようなＢＬＩによって決定して＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し得る。抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＢＬＩ（例えば、Ｏｃｔｅｔ）において、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体へのいかなる検出可能な結合も示し得ない。抗体は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示し得ない。代替して、または追加して、抗体または抗原結合部分は、同一アッセイ条件下で、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低いＫ_Ｄで（ヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低くてもよい）、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し得る（例えば、選択的に結合する）。

一部の実施態様では、抗体は、表６に示されるＡｂ６３の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列（例えば、それぞれ配列番号３６０および３６１）を有する抗体と競合または交差競合する。抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＯｃｔｅｔのようなＢＬＩによって決定して＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合に関して競合または交差競合し得る。抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＯｃｔｅｔのようなＢＬＩによって決定して＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合に関して競合または交差競合し得る。抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＯｃｔｅｔのようなＢＬＩによって決定して＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し得る。抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えばＢＬＩ（例えば、Ｏｃｔｅｔ）において、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体へのいかなる検出可能な結合も示し得ない。抗体は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示し得ない。代替して、または追加して、抗体または抗原結合部分は、同一アッセイ条件下で、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低いＫ_Ｄで（ヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低くてもよい）、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し得る（例えば、選択的に結合する）。

さらなる実施態様では、ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体は、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体が２００ｎＭの濃度である場合に、ＢＬＩアッセイ（例えば、Ｏｃｔｅｔ）において、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への曝露の際に、意味がある結合を示し得ない（例えば、０．１単位（ｎｍ）を超える応答を示し得ない）。

一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分との結合に関して競合する抗－ＴＧＦβ１抗体、またはその抗原結合部分が本明細書において提供される。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分と同一のエピトープに結合する抗－ＴＧＦβ１抗体、またはその抗原結合部分が本明細書において提供される。

本明細書において提供される抗体は、任意の適切な方法を用いて特徴付けることができる。例えば、１つの方法は、抗原が結合するエピトープを同定すること、すなわち「エピトープ・マッピング」である。タンパク質上のエピトープの位置をマッピングおよび特徴付けするための多くの適切な方法が存在し、これには、抗体抗原複合体の結晶構造の解析、競合アッセイ、遺伝子フラグメント発現アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイが含まれ、例えば、ＨａｒｌｏｗａｎｄＬａｎｅ，ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９９の第１１章に記載されている。さらなる例では、エピトープ・マッピングは、抗体が結合する配列を決定するために用いることができる。エピトープは、線状エピトープであってよく、すなわち単一の一続きのアミノ酸内に含まれてよく、または、単一の一続き（一次構造線状配列）内に必ずしも含まれなくてよいアミノ酸の三次元相互作用によって形成される立体構造的エピトープであってよい。一部の実施態様では、エピトープは、ＴＧＦβ１がＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体内にある場合にのみ、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分による結合に利用可能である、ＴＧＦβ１エピトープである。一部の実施態様では、エピトープは、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体上に存在し、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体上には存在しない。一部の実施態様では、エピトープは、ＬＴＢＰ１／３およびＴＧＦβ１が複合体を形成した場合に生じるＬＴＢＰ１／３および／またはＴＧＦβ１における立体構造的変化に起因して利用可能である。この実施態様では、タンパク質が複合体において関連していない場合は、エピトープはＬＴＢＰ１／３またはＴＧＦβ１内に存在しない。一実施態様では、ＴＧＦβ１がＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３との複合体内にある場合は、エピトープはＴＧＦβ１上に存在する。別の実施態様では、ＬＴＢＰ１がＴＧＦβ１との複合体内にある場合は、エピトープはＬＴＢＰ１上に存在する。別の実施態様では、ＬＴＢＰ３がＴＧＦβ１との複合体内にある場合は、エピトープはＬＴＢＰ３上に存在する。別の実施態様では、エピトープは、ＬＴＢＰ１およびＴＧＦβ１の両方由来の残基を含む。別の実施態様では、エピトープは、ＬＴＢＰ３およびＴＧＦβ１の両方由来の残基を含む。異なる長さ（例えば、少なくとも４～６アミノ酸長）のペプチドを、単離または合成（例えば、組換えによって）することができ、抗体との結合アッセイのために用いることができる。別の例では、抗体が結合するエピトープは、標的抗原配列に由来するオーバーラッピング・ペプチドを用いることにより、および、抗体による結合を決定することにより、体系的なスクリーニングにおいて決定することができる。遺伝子フラグメント発現アッセイによれば、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームは、ランダムに、または特異的な遺伝的構築物のいずれかによってフラグメント化され、試験される抗体と抗原の発現フラグメントの反応性が決定される。遺伝子フラグメントは、例えばＰＣＲによって生産され得て、それから転写されて、放射性アミノ酸の存在下で、インビトロでタンパク質に翻訳される。それから、放射性標識された抗原フラグメントに対する抗体の結合が、免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定される。特定のエピトープは、ファージ粒子の表面上にディスプレイされたランダムペプチド配列の大きなライブラリー（ファージライブラリー）を用いることによっても同定することができる。あるいは、オーバーラッピング・ペプチドフラグメントの所定のライブラリーを、単純な結合アッセイにおいて試験抗体に対する結合に関して試験することができる。さらなる例では、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメイン・スワッピング実験およびアラニン・スキャニング突然変異誘発を行なって、エピトープ結合に必要な、十分な、および／または必須の残基を同定することができる。例えば、ドメイン・スワッピング実験は、標的抗原の突然変異体を用いて行なうことができ、ここでＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体の様々なフラグメントは、密接に関連するが抗原性が別であるタンパク質、例えばＴＧＦβタンパク質ファミリーの別のメンバー（例えば、ＧＤＦ１１）由来の配列で置換（スワップ）されている。ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体の突然変異体に対する抗体の結合を評価することにより、抗体結合に対する特定の抗原フラグメントの重要性を評価することができる。

あるいは、同一抗原に結合することが知られている他の抗体を用いて競合アッセイを行なって、抗体が他の抗体と同一のエピトープに結合できるかどうかを決定することができる。競合アッセイは、当業者によく知られている。

さらに、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体内の１つまたは複数の残基と本明細書において提供される任意の抗体の相互作用は、ルーチン技術によって決定することができる。例えば、結晶構造を決定することができ、それにより、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体内の残基と、抗体内の１つまたは複数の残基との間の距離を決定することができる。そのような距離に基づいて、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体内の特定の残基が抗体内の１つまたは複数の残基と相互作用するかどうかを決定することができる。さらに、適切な方法、例えば競合アッセイおよび標的突然変異誘発アッセイを用いて、候補抗体の優先的結合を決定することができる。

一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、表５に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つまたは複数を含む。一部の実施態様では、本発明は、本明細書中に記載の、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。一実施態様では、核酸分子は、表５に示されるＣＤＲ配列の１つまたは複数をコードする。

一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する本発明の抗体は、表５に提供される、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３、またはそれらの組み合わせを含む、任意の抗体、またはその抗原結合部分を含む。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体は、表５に提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。

本発明はまた、表５に提供される、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３、またはそれらの組み合わせを含む分子をコードする、核酸配列も提供する。

抗体重鎖および軽鎖ＣＤＲ３ドメインは、抗原に関する抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たし得る。したがって、一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分、または、これらの抗体、またはその抗原結合部分をコードする核酸分子は、表５に示される抗体の少なくとも重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３を含んでよい。

本発明の態様は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合し、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む、モノクローナル抗体、またはその抗原結合部分に関する。抗体、またはその抗原結合部分は、表５に示される抗体のうちの１つ（例えば、Ａｂ４２）のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有してよい。

一部の実施態様では、ＣＤＲＨ１は、配列番号１に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ２は、配列番号２に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ３は、配列番号３に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ１は、配列番号４に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ２は、配列番号５に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ３は、配列番号６に示される配列を含む。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合しない、単離された抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、完全ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号３；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号４；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号５；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号６から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数までのアミノ酸変更を含んでもよい。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、それぞれのＣＤＲに関して、１、２、３、４、５、または６個までのアミノ酸変更を含む。

一部の実施態様では（例えば、表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ２に関して）、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号３のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号２のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

表５に示される抗体（例えば、ＳＲ－ＡＢ２）の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列を、表６に提供する。

一部の実施態様では、ＣＤＲＨ１は、配列番号９４に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ２は、配列番号９５に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ３は、配列番号９６に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ１は、配列番号９７に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ２は、配列番号９８に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ３は、配列番号９９に示される配列を含む。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合しない、単離された抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、完全ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、それぞれのＣＤＲに関して１、２、３、４、５、または６個までのアミノ酸変更を含む。

一部の実施態様では（例えば、表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ１０に関して）、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号９８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および、配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９６のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９５のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号９８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９４のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

表５に示される抗体（例えば、ＳＲ－ＡＢ１０）の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列を表６に提供する。

一部の実施態様では、ＣＤＲＨ１は、配列番号１００に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１０１に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１０２に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ１は、配列番号１０３に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ２は、配列番号１０４に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ３は、配列番号１０５に示される配列を含む。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合しない単離された抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、完全ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、それぞれのＣＤＲに関して１、２、３、４、５、または６個までのアミノ酸変更を含む。

一部の実施態様では（例えば、表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ１３に関して）、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１０２のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１０１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１０４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１００のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１０３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

表５に示される抗体（例えば、ＳＲ－ＡＢ１３）の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列を表６に提供する。

一部の実施態様では、ＣＤＲＨ１は、配列番号１２４に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１２５に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１２６に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ１は、配列番号１２７に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ２は、配列番号１２８に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ３は、配列番号１２９に示される配列を含む。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する単離された抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、完全ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１２４；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１２５；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１２６；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１２７；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１２８；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１２９から選択される少なくとも３個のＣＤＲ（６個すべてであってもよい）を含み、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数までのアミノ酸変更を含んでもよい。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、それぞれのＣＤＲに関して１、２、３、４、５、または６個までのアミノ酸変更を含む。

一部の実施態様では（例えば、表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ３１に関して）、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１２６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１２８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および、配列番号１２９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１２５のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

表５に示される抗体（例えば、ＳＲ－ＡＢ３１）のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのアミノ酸配列を表６に提供する。

一部の実施態様では、ＣＤＲＨ１は、配列番号１６６に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１６７に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１６８に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ１は、配列番号１６９に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ２は、配列番号１７０に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ３は、配列番号１７１に示される配列を含む。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する単離された抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、完全ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１６６；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１６７；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１６８；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１６９；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１７０；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１７１から選択される少なくとも３個のＣＤＲ（６個全てであってもよい）を含み、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数までのアミノ酸変更を含んでもよい。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、それぞれのＣＤＲに関して１、２、３、４、５、または６個までのアミノ酸変更を含む。

一部の実施態様では（例えば、表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ４２に関して）、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１６６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１６８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１６８のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１６７のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１６６のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

表５に示される抗体（例えば、ＳＲ－ＡＢ４２）のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのアミノ酸配列を表６に提供する。

一部の実施態様では、ＣＤＲＨ１は、配列番号２９２に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ２は、配列番号２９３に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＨ３は、配列番号２９４に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ１は、配列番号２９５に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ２は、配列番号２９６に示される配列を含む。一部の実施態様では、ＣＤＲＬ３は、配列番号２９７に示される配列を含む。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する単離された抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、完全ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号２９２；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２９３；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号２９４；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号２９５；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号２９６；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号２９７から選択される少なくとも３個のＣＤＲ（６個全てであってもよい）を含み、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数までのアミノ酸変更を含んでもよい。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、それぞれのＣＤＲに関して１、２、３、４、５、または６個までのアミノ酸変更を含む。

一部の実施態様では（例えば、表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ６３に関して）、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号２９２に示されるアミノ酸配列を含んでいるＣＤＲＨ１、配列番号２９３に示されるアミノ酸配列を含んでいるＣＤＲＨ２、配列番号２９４に示されるアミノ酸配列を含んでいるＣＤＲＨ３、配列番号２９５に示されるアミノ酸配列を含んでいるＣＤＲＬ１、配列番号２９６に示されるアミノ酸配列を含んでいるＣＤＲＬ２、および配列番号２９７に示されるアミノ酸配列を含んでいるＣＤＲＬ３を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号２９４のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号２９７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号２９３のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号２９６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号を有する２９２のアミノ酸配列相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含んでいる重鎖可変領域、および、配列番号２９５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

表５に示される抗体（例えば、ＳＲ－ＡＢ６３）のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列を表６に提供する。

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ＬＴＢＰ１／３のコンテキストにおいて提示される成熟ＴＧＦβの放出を阻害する、１０個のさらなる抗体（Ａｂ３～Ａｂ１２）を開発した。表６は、表５において参照される抗体のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列に加えて、これらのさらなるＬＴＢＰコンテキスト特異的抗体のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列も提供する。

本発明の態様は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合し、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含む、モノクローナル抗体、またはその抗原結合部分に関する。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合しない、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し；ここで抗体またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体またはその抗原結合フラグメントは、完全ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであり；ここで抗体またはその抗原結合フラグメントは、表６に示される可変領域アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する可変重鎖を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、または配列番号１０６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、または配列番号１０７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号７５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号７５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号７５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号７７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号７７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号７７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号７９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号７９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号７９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号８１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号８１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号８１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号８３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号８３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号８３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号８５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号８５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号８５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号８７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号８７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号８７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号８９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号８９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号８９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号９１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号９１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号９１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号９３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号９３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号９３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号１０７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号１０７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号１０７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。抗体は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に選択的に結合してよい。抗体またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合しなくてよい。抗体またはその抗原結合フラグメントは、完全ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであってよい。抗体またはその抗原結合フラグメントは、表６に示される可変領域アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する可変の重鎖を含んでよい。一部の実施態様では、同一性のレベルは、少なくとも９５％である（少なくとも９８％であってもよい）。

したがって、一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３１８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号３１９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３１８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号３１９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでよい。抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３１８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３１９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでよい。

別の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号３６１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号３６１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでよい。抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３６１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでよい。

一部の実施態様では、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域配列は、本明細書において提供される任意のＣＤＲ配列内で変化しない。例えば、一部の実施態様では、配列変動の程度（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）は、本明細書において提供される任意のＣＤＲ配列を除いた重鎖可変および／または軽鎖可変アミノ酸配列内で生じ得る。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、配列番号３１８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および／または配列番号３１９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでいる抗体、またはその抗原結合フラグメントは、本明細書において提供されるＡｂ４２の任意のＣＤＲ配列内で変化しない。一部の実施態様では、配列番号３６０と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および／または配列番号３６１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでいる抗体、またはその抗原結合フラグメントは、本明細書において提供されるＡｂ６３の任意のＣＤＲ配列内で変化しない。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、表６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、表６に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。例えば、一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号８３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号８３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号８３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号９１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号９１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号９１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号３１８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号３１９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号３１８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号３１９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号３１８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号３１９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号３６０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号３６１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号３６０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、または、配列番号３６１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号３６０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメイン、および、配列番号３６１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列を以下に提供する。

ＳＲ－ＡＢ２－重鎖可変領域アミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＰＬＧＮＦＤＳＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号７）

ＳＲ－ＡＢ２－軽鎖可変領域アミノ酸配列
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＳＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＮＨＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号８）

表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ１０の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列を以下に提供する。

ＳＲ－ＡＢ１０－重鎖可変領域アミノ酸配列
ＱＬＱＬＱＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＮＹＰＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＳＹＤＧＩＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８８）

ＳＲ－ＡＢ１０－軽鎖可変領域アミノ酸配列
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＳＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＤＮＱＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号８９）

表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ１３の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列を以下に提供する。

ＳＲ－ＡＢ１３－重鎖可変領域アミノ酸配列
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＳＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＳＹＤＳＩＡＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１０６）

ＳＲ－ＡＢ１３－軽鎖可変領域アミノ酸配列
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＦＤＦＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１０７）

表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ４２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列を以下に提供する。

ＳＲ－ＡＢ４２－重鎖可変領域アミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１８）

６３－軽鎖可変領域アミノ酸配列
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＳＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＹＤＴＱＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３１９）

表５に示される抗体ＳＲ－ＡＢ６３の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列を以下に提供する。

ＳＲ－ＡＢ６３－重鎖可変領域アミノ酸配列
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＧＤＰＳＹＤＳＩＡＧＭＱＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号３６０）

ＳＲ－ＡＢ６３－軽鎖可変領域アミノ酸配列
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＦＤＷＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３６１）

一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、および／またはＣＤＲＬ３と実質的に似ている１つまたは複数のＣＤＲ配列を有する。例えば、抗体は、配列番号１～６、配列番号９４～９９または配列番号１００～１０５のいずれか１つにおける対応するＣＤＲ領域と比較して、６、５、４、３、２、または１個までのアミノ酸残基変動を含んでいる、表５（配列番号１～６、配列番号９４～９９または配列番号１００～１０５）に示される１つまたは複数のＣＤＲ配列を含んでよい。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号３；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号４；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号５；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号６から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、それぞれのＣＤＲに関して６個までのアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、それぞれのＣＤＲに関して６個までのアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、それぞれのＣＤＲに関して６個までのアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１６６；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１６７；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１６８；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１６９；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１７０；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１７１から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、それぞれのＣＤＲに関して６個までのアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号２９２；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２９３；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号２９４；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号２９５；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号２９６；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号２９７から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、それぞれのＣＤＲに関して６個までのアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。

一態様では、本発明は、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２；およびＣＤＲ－Ｈ３：配列番号３を含んでいる重鎖可変領域；および、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号４；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号５；およびＣＤＲ－Ｌ３：配列番号６を含んでいる軽鎖可変領域を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数のアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。

一態様では、本発明は、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；およびＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６を含んでいる重鎖可変領域；および、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；およびＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９を含んでいる軽鎖可変領域を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数のアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。

一態様では、本発明は、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１；およびＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２を含んでいる重鎖可変領域；および、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；およびＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５を含んでいる軽鎖可変領域を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数のアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。

一態様では、本発明は、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１６６；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１６７；およびＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１６８を含んでいる重鎖可変領域；および、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１６９；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１７０；およびＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１７１を含んでいる軽鎖可変領域を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数のアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更を含んでもよい。例えば、ＣＤＲ内に変更が存在する場合は、ＣＤＲあたり１個までの変更が存在してよい。全ての６個のＣＤＲにわたって２個以内の変更が存在してよい。

一態様では、本発明は、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号２９２；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２９３；およびＣＤＲ－Ｈ３：配列番号２９４を含んでいる重鎖可変領域；および、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号２９５；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号２９６；およびＣＤＲ－Ｌ３：配列番号２９７を含んでいる軽鎖可変領域を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数のアミノ酸変更、例えば１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸変更（例えば、２個まで）を含んでもよい。例えば、ＣＤＲ内に変更が存在する場合は、ＣＤＲあたり１個までの変更が存在してよい。全ての６個のＣＤＲにわたって２個以内の変更が存在してよい。

一態様では、本発明は、特定のアミノ酸変更を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、および／またはＣＤＲ－Ｌ３を含んでいる重鎖可変領域を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。本明細書において用いられる語句「アミノ酸変更」または「アミノ酸残基における変更」は、アミノ酸の置換、付加、および／または欠失を含む。一部の実施態様では、本明細書中に記載のＣＤＲおよび／または可変領域のいずれか１つに（ｗｉｔｈ）アミノ酸残基に対する１つまたは複数の変更が存在する。例えば、一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、１つのアミノ酸変更を含む。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、２個までのアミノ酸変更を含む。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、３個までのアミノ酸変更を含む。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、４個までのアミノ酸変更を含む。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、５個までのアミノ酸変更を含む。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、６個までのアミノ酸変更を含む。一部の実施態様では、１つまたは複数のアミノ酸変更は、７個までのアミノ酸変更を含む。

例えば、一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１の４位のトレオニン残基が、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニン、またはグリシンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１の５位のセリン残基が、ロイシンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１の９位のセリン残基が、アラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１の４位のトレオニン残基は、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニン、またはグリシンで置換されてもよい；（ｉｉ）配列番号１の５位のセリン残基は、ロイシンで置換されてもよい；および／または、（ｉｉｉ）配列番号１の９位のセリン残基は、アラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２の３位のセリン残基が、アスパラギン酸またはアスパラギンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２の５位のチロシン残基が、ヒスチジンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２の６位のアスパラギン残基が、セリンで置換されてもよいという条件でＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２の８位のアスパラギン残基が、フェニルアラニン、ロイシン、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、またはセリンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２の１０位のアスパラギン残基が、アスパラギン酸またはアラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号２の３位のセリン残基は、アスパラギン酸またはアスパラギンで置換されてもよい；（ｉｉ）配列番号２の５位のチロシン残基は、ヒスチジンで置換されてもよい；（ｉｉｉ）配列番号２の６位のアスパラギン残基は、セリンで置換されてもよい；（ｉｖ）配列番号２の８位のアスパラギン残基は、フェニルアラニン、ロイシン、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、またはセリンで置換されてもよい；および／または、（ｖ）配列番号２の１０位のアスパラギン残基は、アスパラギン酸またはアラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１
ｉ．配列番号１の４位のトレオニン残基は、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニン、またはグリシンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１の５位のセリン残基は、ロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１の９位のセリン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２
ｉ．配列番号２の３位のセリン残基は、アスパラギン酸またはアスパラギンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号２の５位のチロシン残基は、ヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号２の６位のアスパラギン残基は、セリンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号２の８位のアスパラギン残基は、フェニルアラニン、ロイシン、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、またはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｖ．配列番号２の１０位のアスパラギン残基は、アスパラギン酸またはアラニンで置換されてもよい；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号３。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号４に示されるＣＤＲ－Ｌ１をさらに含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号５に示されるＣＤＲ－Ｌ２をさらに含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号６に示されるＣＤＲ－Ｌ３をさらに含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメント、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１
ｉ．配列番号１の４位のトレオニン残基は、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニン、またはグリシンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１の５位のセリン残基は、ロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１の９位のセリン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２
ｉ．配列番号２の３位のセリン残基は、アスパラギン酸またはアスパラギンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号２の５位のチロシン残基は、ヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号２の６位のアスパラギン残基は、セリンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号２の８位のアスパラギン残基は、フェニルアラニン、ロイシン、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、またはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｖ．配列番号２の１０位のアスパラギン残基は、アスパラギン酸またはアラニンで置換されてもよい；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号３；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号４；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号５；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号６。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合しない。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合しない。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合しない。

特定の一実施態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体またはヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合しない、単離された抗体を提供し；ここで抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１
ｉ．配列番号１の４位のトレオニン残基は、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニン、またはグリシンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１の５位のセリン残基は、ロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１の９位のセリン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２
ｉ．配列番号２の３位のセリン残基は、アスパラギン酸またはアスパラギンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号２の５位のチロシン残基は、ヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号２の６位のアスパラギン残基は、セリンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号２の８位のアスパラギン残基は、フェニルアラニン、ロイシン、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、またはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｖ．配列番号２の１０位のアスパラギン残基は、アスパラギン酸またはアラニンで置換されてもよい；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号３；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号４；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号５；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号６。

一部の実施態様では、そのような抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、そのような抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、そのような抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、そのような抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、そのような抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、そのような抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、そのような抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、そのような抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

別の実施態様では、かかる抗体は、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である。一部の実施態様では、かかる抗体は、マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１とも交差反応性である。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

別の実施態様では、そのような抗体は、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合しない。好ましい実施態様では、かかるコンテキスト選択的抗体は、ＬＴＢＰ１／３と関連したＴＧＦβ１の活性化を選択的に結合および阻害し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１には結合しないという点で、アイソフォーム特異的である。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の２位のトレオニン残基が、アラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の４位のアスパラギン残基が、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の５位のアスパラギン残基が、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の６位のチロシン残基が、アルギニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の７位のプロリン残基が、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の８位のイソロイシン残基が、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の９位のヒスチジン残基が、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；（ｉｉ）配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；（ｉｉｉ）配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；（ｉｖ）配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；（ｖ）配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；（ｖｉ）配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、（ｖｉｉ）配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；および
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１をさらに含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２をさらに含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメント、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３をさらに含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９。

特定の一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９。

一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

別の実施態様では、かかる抗体は、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である。一部の実施態様では、かかる抗体は、マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１とも交差反応性である。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

別の実施態様では、かかる抗体は、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合しない。好ましい実施態様では、かかるコンテキスト選択的抗体は、ＬＴＢＰ１／３と関連したＴＧＦβ１に選択的に結合して、その活性化を阻害するという点で、アイソフォーム特異的でもある。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含み、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＳである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含み、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＦである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＬである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく；Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく；Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく；Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく；Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく；Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく；Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＫである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＨである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＬである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＬである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＦである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＹである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＹである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＬである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＫである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい；および
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく；Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく；Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく；Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく；Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく；Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく；Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１をさらに含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２をさらに含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３をさらに含む。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい；
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく、Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく、Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく、Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく、Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく、Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく、Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

特定の一実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい；
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく、Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく、Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく、Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく、Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく、Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく、Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合すし；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_２）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含み、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく；Ｘ_２はＦまたはＬであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＦである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＬである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩ（Ｘ_２）ＡＲＲＧＧＦＧＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、Ｘ_１はＲまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＡまたはＬであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＬである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_２）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく；Ｘ_２はＦまたはＬであってもよい；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩ（Ｘ_２）ＡＲＲＧＧＦＧＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＡまたはＬであってもよい。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_２）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく；Ｘ_２はＦまたはＬであってもよい；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩ（Ｘ_２）ＡＲＲＧＧＦＧＹを含んでいるＣＤＲ－であって、ここで、Ｘ_１はＲまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＡまたはＬであってもよい；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

特定の一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_２）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであり；Ｘ_２はＦまたはＬである；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩ（Ｘ_２）ＡＲＲＧＧＦＧＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＡまたはＬであってもよい；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１００の７位のセリン残基が、アラニンまたはグリシンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１００の１１位のグリシン残基が、トレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；（ｉｉ）配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、（ｉｉｉ）配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０１の３位のセリン残基が、アラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１０１を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメント、配列番号１０１の６位のグリシン残基が、アラニンまたはセリンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１０１を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１０１を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；（ｉｉ）配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、（ｉｉｉ）配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１０１を含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；および
ｃ）３、４、５または６個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０３に示されるＣＤＲ－Ｌ１をさらに含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０４に示されるＣＤＲ－Ｌ２をさらに含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０５に示されるＣＤＲ－Ｌ３をさらに含む。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；および
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２．
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合しない。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合しない。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合しない。

特定の一実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

別の実施態様では、かかる抗体は、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である。一部の実施態様では、かかる抗体は、マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１とも交差反応性である。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含み、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＰである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＨである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＮである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＶである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含み、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＴである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく；Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく；Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく；Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく；Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく；Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく；Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく；Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく；Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＰである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＹである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＨである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＴである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＥである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＥである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＮである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＴである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＴである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＱである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＥである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＫである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＴである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＭである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＬである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＱである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＮである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＮである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＥである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＫである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい；および
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく；Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく；Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく；Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく；Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく；Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく；Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく；Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく；Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい；
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく；Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく；Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく；Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく；Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく；Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく；Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく；Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく；Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

特定の一実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい；
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく、Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく、Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく、Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく、Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく、Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく、Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく、Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく、Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０３に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０４に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０５に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

別の実施態様では、かかる抗体は、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である。一部の実施態様では、かかる抗体は、マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１とも交差反応性である。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１００ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜５０ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜２５ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、かかる抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合し；および／または、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＜１０ｎＭのＫＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）ＳＳＳＹＹＷ（Ｘ_３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含み、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく；Ｘ_２はＨまたはＲであってもよく；Ｘ_３はＧ、ＩまたはＮであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＰである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＨである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＮである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）Ｄ（Ｘ_２）ＳＹＤ（Ｘ_３）（Ｘ_４）ＡＧＭ（Ｘ_５）（Ｘ_６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＰまたはＶであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＡであってもよく、Ｘ_４はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであってもよく、Ｘ_５はＤ、Ｑ、またはＧであってもよく、Ｘ_６はＶまたはＲであってもよい。一部の実施態様では、Ｘ_１はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＰである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＱである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＲである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）ＳＳＳＹＹＷ（Ｘ_３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく；Ｘ_２はＨまたはＲであってもよく；Ｘ_３はＧ、ＩまたはＮであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）Ｄ（Ｘ_２）ＳＹＤ（Ｘ_３）（Ｘ_４）ＡＧＭ（Ｘ_５）（Ｘ_６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＰまたはＶであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＡであってもよく、Ｘ_４はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであってもよく、Ｘ_５はＤ、Ｑ、またはＧであってもよく、Ｘ_６はＶまたはＲであってもよい。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）ＳＳＳＹＹＷ（Ｘ_３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく；Ｘ_２はＨまたはＲであってもよく；Ｘ_３はＧ、ＩまたはＮであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）Ｄ（Ｘ_２）ＳＹＤ（Ｘ_３）（Ｘ_４）ＡＧＭ（Ｘ_５）（Ｘ_６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＰまたはＶであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＡであってもよく、Ｘ_４はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであってもよく、Ｘ_５はＤ、Ｑ、またはＧであってもよく、Ｘ_６はＶまたはＲであってもよい；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

特定の一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）ＳＳＳＹＹＷ（Ｘ_３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく；Ｘ_２はＨまたはＲであってもよく；Ｘ_３はＧ、ＩまたはＮであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）Ｄ（Ｘ_２）ＳＹＤ（Ｘ_３）（Ｘ_４）ＡＧＭ（Ｘ_５）（Ｘ_６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＰまたはＶであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＡであってもよく、Ｘ_４はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであってもよく、Ｘ_５はＤ、Ｑ、またはＧであってもよく、Ｘ_６はＶまたはＲであってもよい；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

さらにより高い親和性、および、結合特性のさらに有利な組み合わせで、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントもまた、本明細書において提供される。

したがって、一態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲを含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ）アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_１）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＬまたはＧである；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧ（Ｘ_２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＶ、ＲまたはＬであり、Ｘ_２はＹ、ＳまたはＴである；
ｄ）アミノ酸配列ＴＲＳ（Ｘ_１）Ｇ（Ｘ_２）ＩＤ（Ｘ_３）ＮＹＶＱを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮ、Ｌ、ＳまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである；
ｅ）アミノ酸配列ＥＤ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＲＰＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＮ、ＦまたはＡであり、Ｘ_２はＱ、ＩまたはＶである；および
ｆ）アミノ酸配列Ｑ（Ｘ_１）ＹＤ（Ｘ_２）（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｑ（Ｘ_５）ＶＶを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、ＨまたはＷであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、Ａ、Ｌ、ＥまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである。

一部の実施態様では、ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＲまたはＬである。ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_２はＹであってよい。ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_３はＤであってよく、Ｘ_４はＴであってよい。一部の好ましい実施態様では、ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＲまたはＬであり（Ｒであってもよい）、ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_２はＹであり；ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_３はＤであり；Ｘ_４はＴである。

代替の実施態様では、ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＲまたはＬであり（Ｒであってもよい）、ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_２はＹであり、ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮであり、Ｘ_５はＡである。

一部の実施態様では、ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹであり；ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＮまたはＦであり、Ｘ_２はＱまたはＶであり；ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｙ、ＤまたはＷであり、Ｘ_３はＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、ＬまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである。一部の実施態様では、ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＮであり、Ｘ_３はＮまたはＹであり；ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＮであり、Ｘ_２はＱまたはＶであり；ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、ＹまたはＷであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、ＲまたはＡである。一部の実施態様では、ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＳまたはＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、ＲまたはＡである。一部の実施態様では、ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧまたはＡである。一部の好ましい実施態様では、ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＴであり、Ｘ_５はＧである。

特に好ましい実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、Ａｂ４２のＣＤＲ、例えば：アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨ（配列番号１６６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６７）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２；アミノ酸配列ＡＲＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹ（配列番号１６８）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３；アミノ酸配列ＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱ（配列番号１６９）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ１；アミノ酸配列ＥＤＮＱＲＰＳ（配列番号１７０）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ２；およびアミノ酸配列ＱＳＹＤＹＤＴＱＧＶＶ（配列番号１７１）を含んでいるＣＤＲ－Ｌ３を有する。

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３１８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および配列番号３１９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ＢＬＩのような適切なインビトロ結合アッセイによって測定して＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する。例えば、抗体、または抗原結合フラグメントは、ＢＬＩのような適切なインビトロ結合アッセイによって測定して＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し得る。一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ＢＬＩのような適切なインビトロ結合アッセイによって測定して＜１ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示さない。例えば、抗体、または抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示さなくてよい。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、同一のアッセイ条件下でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低い（例えば、少なくとも７５倍低い、少なくとも１００倍低い）Ｋ_Ｄで、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する。例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、同一のアッセイ条件下でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低い（例えば、少なくとも７５倍低い、少なくとも１００倍低い）Ｋ_Ｄで、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合してよい。一部の実施態様では、Ｋ_Ｄは、ＢＬＩまたはＳＰＲによって決定される。一部の実施態様では、Ｋ_Ｄは、ＳＰＲによって決定される。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体への検出可能な結合を示さない。例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１潜在型複合体への検出可能な結合を示さなくてよい。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、同一のアッセイ条件下でヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低い（例えば、少なくとも７５倍低い、少なくとも１００倍低い）Ｋ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する。例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、同一のアッセイ条件下でヒトＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低い（例えば、少なくとも７５倍低い、少なくとも１００倍低い）Ｋ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合してよい。一部の実施態様では、Ｋ_ＤはＢＬＩまたはＳＰＲによって決定される。一部の実施態様では、Ｋ_ＤはＳＰＲによって決定される。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＢＬＩによって測定して＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＢＬＩによって測定して＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

さらなる実施態様では、ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体は、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体が２００ｎＭの濃度である場合、ＢＬＩアッセイ（例えば、Ｏｃｔｅｔ）において、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対する曝露の際に、意味がある結合を示さなくてよい（例えば、０．１単位（ｎｍ）を超える応答を示さなくてよい）。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲを含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＴＹＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＧまたはＡであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＴであってもよい；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＤＰＳＹＤＳ（Ｘ_２）ＡＧＭ（Ｘ_３）Ｖを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＡまたはＩであってもよく、Ｘ_３はＤまたはＱであってもよい；
ｄ）アミノ酸配列ＲＡＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＩＳ（Ｘ_３）ＹＬＮを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＫまたはＱであってもよく、Ｘ_２はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＹであってもよい；
ｅ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＡＳ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＱＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＮであってもよく、Ｘ_３はＬまたはＲであってもよい；
ｆ）アミノ酸配列ＱＱ（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）Ｐ（Ｘ_４）Ｔを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＦまたはＮであってもよく、Ｘ_３はＷまたはＦであってもよく、Ｘ_４はＦまたはＬであってもよい。

一部の実施態様では：ＣＤＲ－Ｈ１において、Ｘ_１はＳであり；Ｘ_２はＳまたはＲであり；Ｘ_３はＳであり；Ｘ_４はＧであり；ＣＤＲ－Ｈ２において、Ｘ_１はＧまたはＡであり；Ｘ_２はＳまたはＴであり；ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであり；Ｘ_２はＡまたはＩであり；Ｘ_３はＤまたはＱであり；ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＫまたはＱであり、Ｘ_２はＶまたはＳであり、Ｘ_３はＳまたはＹであり；ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＮであり、Ｘ_３はＬまたはＲであり；ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＦまたはＮであり、Ｘ_３はＷまたはＦであり、Ｘ_４はＦまたはＬである。

一部の実施態様では：ＣＤＲ－Ｈ１は、アミノ酸配列ＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧを含み；ＣＤＲ－Ｈ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹを含み；ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＡまたはＩであり、Ｘ_３はＤまたはＱであり；ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＫまたはＱであり、Ｘ_２はＶまたはＳであり、Ｘ_３はＳまたはＹであり；ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＮであり、Ｘ_３はＬまたはＲであり；ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＦまたはＮであり、Ｘ_３はＷまたはＦであり、Ｘ_４はＦまたはＬである。

一部の実施態様では：ＣＤＲ－Ｈ１は、アミノ酸配列ＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧ（配列番号２９２）を含み；ＣＤＲ－Ｈ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹ（配列番号２９３）を含み；ＣＤＲ－Ｈ３は、アミノ酸配列ＡＧＤＰＳＹＤＳＩＡＧＭＱＶ（配列番号２９４）を含み；ＣＤＲ－Ｌ１は、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号２９５）を含み；ＣＤＲ－Ｌ２は、アミノ酸配列ＡＡＳＮＬＱＳ（配列番号２９６）を含み；ＣＤＲ－Ｌ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＦＤＷＰＬＴ（配列番号２９７）を含む。

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３６０と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および配列番号３６１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ＢＬＩのような適切なインビトロ結合アッセイによって測定して＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する。例えば、抗体、または抗原結合フラグメントは、ＢＬＩのような適切なインビトロ結合アッセイによって測定して＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合してよい。一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ＢＬＩのような適切なインビトロ結合アッセイによって測定して＜１ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、同一のアッセイ条件下でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低い（例えば、少なくとも７５倍低い、少なくとも１００倍低い）Ｋ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する。例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、同一のアッセイ条件下でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低い（例えば、少なくとも７５倍低い、少なくとも１００倍低い）Ｋ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合してよい。一部の実施態様では、Ｋ_Ｄは、ＢＬＩまたはＳＰＲによって決定されるとおりである。一部の実施態様では、Ｋ_ＤはＳＰＲによって決定されるとおりである。

さらなる実施態様では、ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体は、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体が２００ｎＭの濃度である場合に、ＢＬＩアッセイ（例えば、Ｏｃｔｅｔ）において、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への曝露の際に、意味がある結合を示さなくてよい（例えば、０．１単位（ｎｍ）を超える応答を示さらなくてよい）。

一部の実施態様では、２つのアミノ酸配列の「同一性パーセント」は、ＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：２２６４－６８，１９９０（ＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７３－７７，１９９３で改変）のアルゴリズムを用いて決定される。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で行なって、目的のタンパク質分子と相同のアミノ酸配列を得ることができる。２つの配列間にギャップが存在する場合は、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２，１９９７に記載のようにＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴが使用され得る。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合は、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターが用いられ得る。

本明細書に記載の任意の抗体または抗原結合フラグメントにおいて、１つまたは複数の保存的突然変異が、残基が抗体抗原相互作用に関与する可能性がない位置において、ＣＤＲまたはフレームワーク配列内に導入され得る。一部の実施態様では、そのような保存的突然変異（単数または複数）は、結晶構造に基づいて決定されるように、残基が、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体との相互作用に関与する可能性がない位置（単数または複数）において、ＣＤＲまたはフレームワーク配列内に導入され得る。一部の実施態様では、同様の界面（例えば、抗原抗体相互作用に関与する残基）は、構造類似性を共有する別の抗原に関する公知の構造情報から推定され得る。

本明細書において用いられる「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換がなされるタンパク質の相対的な電荷またはサイズ特性を変更しないアミノ酸置換を指す。変異体は、そのような方法を集める参考文献（例えば、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８９，または、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋのＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ）に見られるような、当業者に公知のポリペプチド配列を変更するための方法に従って調製され得る。アミノ酸の保存的置換は、以下の群：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；および（ｇ）Ｅ、Ｄ内のアミノ酸の間でなされる置換を含む。

一部の実施態様では、本明細書において提供される抗体は、望ましい特性を抗体に与える突然変異を含む。例えば、Ｆａｂアーム交換に起因する潜在的な問題を避けるために（ネイティブＩｇＧ４ｍＡｂで生じることが知られる）、本明細書において提供される抗体は、安定化「Ａｄａｉｒ」突然変異を含んでよく（Ａｎｇａｌｅｔａｌ．，「Ａｓｉｎｇｌｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｂｏｌｉｓｈｅｓｔｈｅｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙｏｆｃｈｉｍｅｒｉｃｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎ（ＩｇＧ４）ａｎｔｉｂｏｄｙ，」ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ３０，１０５－１０８；１９９３）、ここで、セリン２２８（ＥＵナンバリング；残基２４１Ｋａｂａｔナンバリング）は、プロリンに転換されて、ＩｇＧ１様（ＣＰＰＣＰ（配列番号４５））ヒンジ配列をもたらす。したがって、任意の抗体は、安定化「Ａｄａｉｒ」突然変異またはアミノ酸配列ＣＰＰＣＰ（配列番号４５）を含んでよい。一実施態様では、本明細書中に記載の抗体は、ＩｇＧ_１様ヒンジを生じさせて鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にするＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を有するヒトＩｇＧ_４の重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する本開示の抗体は、抗体定常領域またはその部分を含んでもよい。例えば、Ｖ_Ｌドメインは、そのＣ末端においてＣκまたはＣλのような軽鎖定常ドメインに付着されてよい。同様に、Ｖ_Ｈドメインまたはその部分は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭなどの重鎖、ならびに任意のアイソタイプサブクラスの全てまたは部分に付着されてよい。抗体は、適切な定常領域を含んでよい（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎｏ．９１－３２４２，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照）。したがって、本開示の範囲内の抗体は、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン、またはその抗原結合部分を、任意の適切な定常領域と組み合わせて含んでよい。例示的な実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ_１またはヒトＩｇＧ_４定常ドメインの全てまたは部分を含んでいる重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ヒトＩｇλ定常ドメインまたはヒトＩｇκ定常ドメインの全てまたは部分を含んでいる軽鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。

一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体は、配列番号７および８の抗体のフレームワーク領域を含んでよく、または含まなくてよい。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体は、ミューリン抗体であり、ミューリンフレームワーク領域配列を含む。他の実施態様では、抗体は、キメラ抗体、またはその抗原結合フラグメントである。別の実施態様では、抗体は、ヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントである。別の実施態様では、抗体は、完全ヒト抗体、またはその抗原結合フラグメントである。一実施態様では、抗体は、ヒト生殖細胞系アミノ酸配列を含んでいるフレームワーク領域を含む。

本明細書中に記載の抗体、およびその抗原結合フラグメントは、抗原に結合するのに適切な任意の構造を有してよい。例えば、一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、２つの重鎖可変領域と２つの軽鎖可変領域を含んでいる４つのポリペプチド鎖を含む。別の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、１つの重鎖可変領域および１つの軽鎖可変領域を含む。例示的な実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ_１定常ドメインまたはヒトＩｇＧ_４定常ドメインの重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。例示的な実施態様では、重鎖免疫グロブリン定常ドメインは、ヒトＩｇＧ_４定常ドメインである。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、立体構造的エピトープに結合する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、コンビナトリアル・エピトープに結合する。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ_１様ヒンジを生じさせて鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にするＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を有するヒトＩｇＧ_４定常ドメインの重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ヒトＩｇλ定常ドメイン、またはヒトＩｇκ定常ドメインを含んでいる軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む。

一実施態様では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖である４つのポリペプチド鎖を有するＩｇＧである。例示的な実施態様では、抗体は、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体であってよい。一実施態様では、抗体は、ヒト生殖細胞系アミノ酸配列を有するフレームワークを含む。

一実施態様では、本発明は、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分との結合に関して競合する抗体、またはその抗原結合部分を提供する。一実施態様では、本発明は、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合部分と、同一のエピトープに結合する抗体、またはその抗原結合部分を提供する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への結合に関して抗体ＳＲ－Ａｂ１と競合しない。

新規の抗体の結合速度論
本明細書において開示される新規の抗体およびその抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ）は、高い結合特性によって特徴付けられる。抗体およびフラグメントは、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体（大きな潜在型複合体（ＬＬＣ）としても知られる）に選択的に結合することが可能である。組換えで生産された、精製されたタンパク質複合体を、抗原（例えば、抗原複合体）として用いて、適切なインビトロ結合アッセイにおいて、抗原複合体に結合する抗体の能力をスクリーニング、評価、または確認してよい。かかるアッセイは当技術分野でよく知られており、限定されないが：ＢＬＩに基づくアッセイ（例えばＯｃｔｅｔ（登録商標））およびＳＰＲに基づくアッセイ（例えばＢｉａｃｏｒｅ）を含む。

以前に、ＬＬＣに対して高い親和性（例えば、ナノモル未満（ｓｕｂ－ｎａｎｏｍｏｌａｒ）のＫ_Ｄ）を示す抗体およびフラグメントを同定した。ここでは有利に、特に持続性の阻害効果を達成することを目的として、特に遅い解離速度を有する抗体およびフラグメントを特に選択した。

したがって、本開示に従った方法および治療的使用を行なうための適切なＴＧＦβ阻害剤の選択は、結合速度論を測定するためにインビトロ結合アッセイを行なうステップを含んでよい。好ましい実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、本明細書中に記載のように、高い親和性および低い解離速度ｋ_ＯＦＦでｈＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはｈＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する。好ましくは、抗体またはフラグメントは、さらに、ミューリンＬＬＣ相対物、すなわち、ｍＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはｍＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に、ヒトＬＬＣと同等の親和性で結合する。インビトロ結合速度論は、試験抗体（例えば抗原結合フラグメント）および適切な抗原（例えばＬＬＣおよび小さな潜在型複合体（ＳＬＣ））の相互作用を測定することによって容易に決定され得る。結合速度論のパラメーターを決定するためのインビトロ結合アッセイのための適切な方法は、ＯｃｔｅｔのようなＢＬＩに基づくアッセイ、およびＢｉａｃｏｒｅシステムのような表面プラズモン共鳴に基づくアッセイを含む。Ｏｃｔｅｔに基づくインビトロ結合アッセイの例を実施例９／表９に提供する。いくつかの抗体は、この実験において、≦５×１０^－４（１／ｓ）の「ＯＦＦ」速度（ｋ_ＯＦＦ）を有することが示された。これらの結果は、Ａｂ１０に関して示された結果に対して著しく対照的であり、それについては、ｈＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはｈＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１への結合が同一のＯｃｔｅｔアッセイによって検出すらされなかった（表８）。ＳＰＲに基づくインビトロ結合アッセイの例を実施例９に提供する。ＴＧＦβ１の活性化阻害剤であるＡｂ４２、Ａｂ６３およびＡｂ４３のＦａｂフラグメントをこの実験で用いた。この実施例に説明されるように、これらの抗体は、ナノモル未満のＫ_Ｄおよび≦５×１０^－４（１／ｓ）の「ＯＦＦ」速度を有する。したがって、例えば、Ａｂ４２は、相対的に迅速に抗原から「落ちる（ｆａｌｌｓｏｆｆ）」（例えば解離する）さらにより高い「ＯＦＦ」速度を有する抗体よりも、さらにより長い持続時間（例えば、より長いｔ１／２）、抗原に結合したままでいられる。したがって、解離速度論における違いは、主に、それらの全体的な親和性（Ｋ_Ｄ）の顕著な違いのせいであり、それにより高い効能を生じさせ得る。したがって、結合速度論の特性化は、効果の潜在的耐久性に関する有用な情報を提供し、インビボ効能をもたらす。

したがって、本発明は、治療的使用のためのＴＧＦβ活性化阻害剤を選択する方法を含み、その方法は、ＳＰＲによって測定して≦５×１０^－４（（１／ｓ）の解離速度を有する抗体またはその抗原結合フラグメントの選択を含む。一部の実施態様では、抗体またはフラグメントは、１ｎＭ未満（すなわち、ナノモル未満）、例えば、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、または５０ｐＭ未満の親和性で抗原に結合する。

選択方法は、ＢＬＩに基づくアッセイおよびＳＰＲに基づくアッセイのような適切な手段によって、試験抗体の解離半減期（結合半減期またはｔ^１／２とも呼ばれる）を決定または測定するステップを含んでよい。一価または多価（例えば、二価）の試験抗体を用いてよい。例えば、Ｆａｂフラグメントは、解離半減期を決定するために用いることのできる適切な一価抗体である。同様に、全長免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）を用いて解離半減期を決定してよい。一部の実施態様では、その方法は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対して４５分以上のｔ^１／２を有する抗体またはその抗原結合フラグメントの選択を含む。好ましくは、抗体またはフラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１のそれぞれに対して４５分以上のｔ^１／２を有する。より好ましくは、抗体またはフラグメントは、さらに、ミューリンＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはミューリンＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対して４５分以上のｔ^１／２を有する。最も好ましくは、抗体またはフラグメントは、ミューリンＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびミューリンＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１のそれぞれに対して４５分以上のｔ^１／２を有する。その方法は、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１に対して５分以下のｔ^１／２を有する抗体または抗原結合フラグメントの選択をさらに含んでよい。有利な解離半減期を有する任意のこれらの抗体は、好ましくは、ＢＬＩ（例えば、Ｏｃｔｅｔ）またはＳＰＲ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）によって測定して１ｎＭ未満のＫＤを有するべきである。好ましくは、ＳＰＲアッセイが、解離半減期（ｔ^１／２）を決定するために用いられる。

ポリペプチド
本開示の一部の態様は、単離されたポリペプチドに関する。例えば、一実施態様では、本発明は、表５に提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３、またはそれらの組み合わせを含む単離されたポリペプチドを提供する。例示的な一実施態様では、単離されたポリペプチドは、表５に提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むことができる。他の実施態様では、単離されたポリペプチドは、表５に提供されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むことができる。一部の実施態様では、ポリペプチドは、表５に提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３、またはそれらの組み合わせのいずれか１つにおける対応するＣＤＲ領域と比較して、６、５、４、３、２、または１個までのアミノ酸残基変動を含むことができる。一実施態様では、本発明は、配列番号７を含む単離されたポリペプチドを提供する。別の実施態様では、本発明は、配列番号８を含む単離されたポリペプチドを提供する。別の実施態様では、本発明は、配列番号７および配列番号８を含む単離されたポリペプチドを提供する。この実施態様では、配列番号７および配列番号８は、リンカーペプチドによって連結することができてもよい。一部の実施態様では、ポリペプチドは、重鎖可変ドメインである。一部の実施態様では、ポリペプチドは、配列番号７と少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である。一部の実施態様では、ポリペプチドは、軽鎖可変ドメインである。一部の実施態様では、ポリペプチドは、配列番号８と少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である。

別の実施態様では、本発明は、表６に示される重鎖可変領域配列を含む単離されたポリペプチドを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号７、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、または配列番号１０６を含む単離されたポリペプチドを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号８、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、または配列番号１０７を含む単離されたポリペプチドを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号３１８を含む単離されたポリペプチドを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号３１９を含む単離されたポリペプチドを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号３６０を含む単離されたポリペプチドを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号３６１を含む単離されたポリペプチドを提供する。

別の実施態様では、本発明は、表６に示される軽鎖可変領域を含む単離されたポリペプチドを提供する。別の実施態様では、本発明は、表６に示される重鎖可変領域配列（例えば、配列番号７、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、または配列番号１０６）および表６に示される軽鎖可変領域配列（例えば、配列番号８、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、または配列番号１０７）を含む単離されたポリペプチドを提供する。この実施態様では、重鎖および軽鎖配列（例えば、配列番号７および配列番号８）は、リンカーペプチドによって連結することができてもよい。一部の実施態様では、ポリペプチドは、重鎖可変ドメインである。一部の実施態様では、ポリペプチドは、配列番号７、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、または配列番号１０６と少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である。一部の実施態様では、ポリペプチドは、軽鎖可変ドメインである。一部の実施態様では、ポリペプチドは、配列番号８、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、または配列番号１０７と少なくとも７５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である。

別の実施態様では、本発明は、配列番号３１８に示される重鎖可変領域配列および配列番号３１９に示される軽鎖可変領域配列を含む単離されたポリペプチドを提供する。別の実施態様では、本発明は、配列番号３６０に示される重鎖可変領域配列および配列番号３６１に示される軽鎖可変領域配列を含む単離されたポリペプチドを提供する。この実施態様では、重鎖および軽鎖配列（例えば、配列番号３１８および配列番号３１９）は、リンカーペプチドによって連結することができる。一部の実施態様では、ポリペプチドは、重鎖可変ドメインである。一部の実施態様では、ポリペプチドは、配列番号３１８または配列番号３６０と少なくとも８５％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である。一部の実施態様では、ポリペプチドは、軽鎖可変ドメインである。一部の実施態様では、ポリペプチドは、配列番号３１９または配列番号３６１と少なくとも８５％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一である。

核酸
一部の実施態様では、本開示の抗体、その抗原結合部分、および／または組成物は、核酸分子によってコードされてよい。かかる核酸分子は、制限されずに、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ分子、ベクター、プラスミドなどを含む。一部の実施態様では、本開示は、本開示の化合物および／または組成物をコードする核酸分子を発現するようにプログラムまたは生産された細胞を含んでよい。

一部の実施態様では、本発明は、前述の抗体、またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。例えば、一実施態様では、本発明は、表５に提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３、またはそれらの組み合わせを含むポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。核酸分子は、一部の実施態様では、表５に提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むポリペプチドをコードすることができる。一部の実施態様では、核酸分子は、表５に提供されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むポリペプチドをコードすることができる。一部の実施態様では、核酸分子は、表５に提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３、またはそれらの組み合わせのいずれか１つにおける対応するＣＤＲ領域と比較して、６、５、４、３、２、または１個までのアミノ酸残基変動を含むことができるポリペプチドをコードする。例示的な一実施態様では、核酸分子は、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。一実施態様では、核酸分子は、表６に示される重鎖可変領域配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または、表６に示される軽鎖可変領域配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。例示的な一実施態様では、核酸分子は、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号７、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、または配列番号１０６に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および、配列番号８、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、または配列番号１０７に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合部分をコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号７に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および、配列番号８に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合部分をコードする。

別の実施態様では、本発明は、前述の抗体、またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。例示的な一実施態様では、核酸分子は、配列番号３１８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号３１９に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。別の実施態様では、核酸分子は、配列番号３６０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または、配列番号３６１に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。

別の実施態様では、本発明は、配列番号３１８に示される重鎖可変領域配列および配列番号３１９に示される軽鎖可変領域配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。別の実施態様では、本発明は、配列番号３６０に示される重鎖可変領域配列および配列番号３６１に示される軽鎖可変領域配列を含む単離されたポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。この実施態様では、重鎖および軽鎖配列（例えば、配列番号３１８および配列番号３１９）は、リンカーペプチドによって連結することができる。一部の実施態様では、核酸分子は、重鎖可変ドメインであるポリペプチドをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号３１８または配列番号３６０と少なくとも８５％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一のポリペプチドをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、軽鎖可変ドメインであるポリペプチドをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号３１９または配列番号３６１と少なくとも８５％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一のポリペプチドをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号３１８に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および、配列番号３１９に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合部分をコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号３６０に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および、配列番号３６１に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合部分をコードする。

場合によっては、本開示の核酸は、コドン最適化核酸を含む。コドン最適化核酸を作製する方法は当技術分野で知られており、限定されないが米国特許番号５，７８６，４６４および６，１１４，１４８に記載されるものを含んでよく、それぞれの内容はそれらの全体で参照により本明細書中に援用される。任意の前述の核酸（単数または複数）を含む発現ベクターも本明細書において提供される。

ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に結合する抗体の生産
本分野は、本開示の抗体、またはその抗原結合フラグメントを取得するために用いられ得る様々な技術および方法に精通している。例えば、抗体は、組換えＤＮＡ方法、ハイブリドーマ技術、ファージまたは酵母ディスプレイ技術、トランスジェニック動物（例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標））またはそれらの何らかの組み合わせを用いて生産することができる。

免疫付与およびハイブリドーマ
本明細書中に記載の一部の方法では、特定の抗原（例えば、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体）を用いて、非ヒト動物（「宿主」）、例えば、齧歯類、例えば、マウス、ハムスター、またはラットに免疫付与することができる。一実施態様では、非ヒト動物はマウスである。別の実施態様では、宿主はラクダ類であってよい。

免疫付与（抗原曝露（例えば注入）の単一または多数のステップを含んでもよい）後、脾細胞を動物から採取して、関係があるＢ細胞を不死化骨髄腫細胞と融合して抗体産生のためのハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは、公知の方法（例えば、ＫｏｈｌｅｒａｎｄＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－４９９を参照）に従って生産され得る。それから、この様式で形成されたハイブリドーマを、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）技術（例えば、ＯＣＴＥＴ）および表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）分析のような標準的な方法を用いてスクリーニングして、特定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する１つまたは複数のハイブリドーマを同定する。組み換え抗原、天然起源形態、それらの任意の変異体またはフラグメント、ならびにそれらの抗原性ペプチド（例えば、線状エピトープとして本明細書中に記載される任意のエピトープまたは立体構造的エピトープとして足場内）のような、任意の形態の特定の抗原を免疫原として用いてよい。

スクリーニングライブラリー（単数／複数）
一部の実施態様では、抗体を作製または同定する方法またはプロセスは、抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を発現するタンパク質発現ライブラリー、例えば、ファージ、酵母、またはリボソーム・ディスプレイ・ライブラリーをスクリーニングするステップを含む。例えば、ヒトコンビナトリアル抗体またはｓｃＦｖフラグメントのライブラリーを、ファージまたは酵母上に合成することができ、それから、そのライブラリーを、目的の抗原またはその抗体結合部分を用いてスクリーニングして、抗原に結合するファージまたは酵母を単離して、そこから抗体または免疫反応性フラグメントを取得してよい（Ｖａｕｇｈａｎら、１９９６、ＰＭＩＤ：９６３０８９１；Ｓｈｅｅｔｓら、１９９８、ＰＭＩＤ：９６００９３４；Ｂｏｄｅｒら、１９９７、ＰＭＩＤ：９１８１５７８；Ｐｅｐｐｅｒら、２００８、ＰＭＩＤ：１８３３６２０６）。

ファージディスプレイは、例えば、Ｌａｄｎｅｒｅｔａｌ．，米国特許番号５，２２３，４０９；Ｓｍｉｔｈ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２８：１３１５－１３１７；Ｃｌａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８；Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；およびＷＯ９０／０２８０９にさらに記載される。酵母ディスプレイは、例えば、ＵＳ７，７００，３０２およびＵＳ８，８７７，６８８にさらに記載される。特定の方法では、酵母ディスプレイ・ライブラリーは全長抗体（例えば、Ａｄｉｍａｂ，ＬＬＣ）を発現する。

ファージまたは酵母ディスプレイ・ライブラリーを作製するためのキットは市販されている。抗体ディスプレイ・ライブラリーの作製およびスクリーニングにおいて用いることのできる他の方法および試薬も存在する（ＵＳ５，２２３，４０９；ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９１／１７２７１、ＷＯ９２／２０７９１、ＷＯ９２／１５６７９、ＷＯ９３／０１２８８、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／０９６９０；およびＢａｒｂａｓら、１９９１，ＰＭＩＤ：１８９６４４５を参照）。かかる技術は、大量の候補抗体のスクリーニングを有利に可能にする。

どのように取得されたかにかかわらず、抗体産生細胞（例えば、酵母コロニー、ハイブリドーマなど）は、例えば、強い増殖、高い抗体産生および望ましい抗体特性、例えば目的抗原に関する高親和性を含む、望ましい特性に関して選択されてよく、クローニングされてよく、さらにスクリーニングされてよい。コロニーおよび／またはハイブリドーマを選択、クローニングおよび拡大する方法は、当業者によく知られている。所望の抗体が同定された時点で、関連のある遺伝物質が、一般的な、当該分野で認識されている分子生物学および生化学的技術を用いて単離され、操作され、発現され得る。

ヒト化
本発明の抗体またはフラグメントは、好ましくは完全ヒト抗体またはヒト化抗体である。したがって、由来が何であれ、当該方法は、１つまたは複数の抗体またはそのフラグメントをヒト化するステップを含んでよく、ここでヒト抗体配列は、当該分野で公知の分子工学技術を用いて作製され得て、本明細書中に記載の発現系および宿主細胞内に導入され得ることが理解されよう。そのような非天然の組換えによって生産されたヒト抗体（および対象組成物）は、本開示の教示と完全に適合し、本発明の範囲内に明白に含まれる。特定の選択態様では、本発明のＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体結合および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体結合抗体は、組み換えによって生産されたヒト抗体を含む。

親和性成熟
一部の実施態様では、上述の方法によって生産される抗体は、中程度の親和性（約１０^６～１０^７Ｍ－１のＫａ）であってよい。したがって、抗体またはそのフラグメントは、必要に応じて、最適化の一部として親和性成熟のプロセスに供されてよい。用語「親和性成熟」は、当業者によって容易に理解される意味を有する。手短には、候補抗体またはフラグメントのアミノ酸配列（しばしば「親（ｐａｒｅｎｔ）」と呼ばれる）をさらに改変して、特定の抗原に対して改善された結合プロファイルを達成することを指す。典型的に、親の抗体および親和性成熟の相対物（しばしば「子孫（ｐｒｏｇｅｎｙ）」または「子（ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ）」と呼ばれる）は、同一のエピトープを保持する。適切なインビトロ結合アッセイが、親和性成熟プロセス中の適切なステップ（単数または複数）において、改善された結合物質（ｂｉｎｄｅｒ）に関するスクリーニングのために行なわれてよい。任意選択で、一部の実施態様では、機能性アッセイ（例えば、細胞に基づく効能アッセイ）が、所望の機能を確認するために行なわれてもよい。

親和性成熟は、配列多様化および／または突然変異誘発を典型的に含むが、突然変異を導入または作製する正確な手段は限定されない。一部の実施態様では、突然変異誘発は、１つまたは複数のＣＤＲのアミノ酸残基における１つまたは複数の変更（例えば、置換または欠失）の導入を含む。したがって、一部の実施態様では、本明細書中に記載のＶＲまたはＣＤＲ配列は、１、２、３、４、５、または６個までのアミノ酸変更を含んでよい。一部の実施態様では、本明細書中に記載のＶＲまたはＣＤＲ配列は、１、２、３、４、５、または６個までのアミノ酸置換を含んでよい。一部の実施態様では、本明細書中に記載のＶＲまたはＣＤＲ配列は、１、２、３、または４個までの欠失を含んでよい。追加または代替で、突然変異誘発は、可変領域またはＣＤＲのいわゆるオリゴ－ウォーキングを含んでよい。

例えば、抗体の親和性成熟は、ランダム突然変異誘発（ＧｒａｍＨ．，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９２）８９，３５７６－３５８０、およびＨａｗｋｉｎｓＲ．Ｅ．，ｅｔａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９２）２２６，８８９－８９６）、ＣＤＲ配列のランダム突然変異誘発、例えば、ＣＤＲウォーキング（ＹａｎｇＷ．Ｐ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９５）２５４，３９２－４０３）、残基の方向付けられた突然変異誘発（ＨｏＭ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００５）２８０，６０７－６１７およびＨｏＭ．，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００６）１０３，９６３７－９６４２）、および、体細胞高頻度突然変異（ＳＨＭ）をインビトロで再現する手法（ＢｏｗｅｒｓＰ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２０１１）１０８，２０４５５－２０４６０）を含む、複数の方法によって達成することができる。

一実施態様では、抗体は、可変重鎖または可変軽鎖領域に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変重鎖ＣＤＲまたは可変軽鎖ＣＤＲのいずれか一方に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変重鎖ＣＤＲ３に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る（例えば、ＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発）。別の実施態様では、抗体は、可変重鎖ＣＤＲ２に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る（例えば、ＣＤＲ－Ｈ２突然変異誘発）。別の実施態様では、抗体は、可変重鎖ＣＤＲ１に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１突然変異誘発）。別の実施態様では、抗体は、可変軽鎖ＣＤＲ３に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る（例えば、ＣＤＲ－Ｌ３突然変異誘発）。別の実施態様では、抗体は、可変軽鎖ＣＤＲ２に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る（例えば、ＣＤＲ－Ｌ２突然変異誘発）。別の実施態様では、抗体は、可変軽鎖ＣＤＲ１に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る（例えば、ＣＤＲ－Ｌ１突然変異誘発）。

一部の実施態様では、抗体は、３個の軽鎖ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）のいくつかまたは全てに対して突然変異誘発を別々に実施して３個までの異なる抗体ライブラリー（それぞれ、３個のＣＤＲのうちの１つにおいて特有の突然変異を有する）を産生することによって、親和性成熟および／または最適化されてよい。それから、新たな抗体を、改善された特性（例えば、抗原結合）に関してスクリーニングすることができる。それから、さらなる親和性の改善が所望ならば、それぞれのライブラリー由来の特有のＣＤＲを混ぜ合わせて新しい抗体ライブラリーを産生し、改善された特性（例えば、抗原結合）に関してスクリーニングすることができる。一部の実施態様では、親和性成熟は、１つまたは複数のＣＤＲの変異（「レパートリー」）を含む抗体ライブラリーをスクリーニングするステップを含み、それを親抗体の少なくとも１つのＣＤＲと組み合わせてよい。このプロセスは、ＣＤＲシャッフリングまたはＣＤＲ多様化と呼ばれることがある。一部の実施態様では、可変重鎖ＣＤＲ３（例えば、ＣＤＲ－Ｈ３）を用いて、可変重鎖ＣＤＲ１およびＣＤＲ２変異レパートリーを含むライブラリーをスクリーニングしてよい（ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化としても知られる）。一部の実施態様では、可変軽鎖ＣＤＲ３（例えば、ＣＤＲ－Ｌ３）を用いて、可変軽鎖ＣＤＲ１およびＣＤＲ２変異レパートリーを含むライブラリーをスクリーニングしてよい（ＣＤＲ－Ｌ１／Ｌ２多様化としても知られる）。

一部の実施態様では、親和性成熟は、軽鎖変異体（「レパートリー」）を含む抗体ライブラリーをスクリーニングするステップを含み、それを親抗体の重鎖と組み合わせてよい（軽鎖シャッフル）。例えば、一部の実施態様では、選択された重鎖が、軽鎖変異体を含んでいる抗体ライブラリーに導入されて、それにより、改善された親和性に関してスクリーニングされ得る新たな抗体ライブラリーが作製される。一部の実施態様では、天然起源の可変領域変異体のレパートリーを、免疫付与されていないドナーから得てよい。重鎖または軽鎖シャッフルの例は、以下の文献：Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．，（１９９２）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ１０：７７９－７８；Ｓｃｈｉｅｒｅｔａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５，２８－４３；Ｐａｒｋｅｔａｌ．，（２０００）ＢＢＲＣ．２７５．５５３－５５７；および、Ｃｈａｍｅｓｅｔａｌ．，（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１１１０－１１１８に記載される。一部の実施態様では、軽鎖ライブラリーは、λ軽鎖の変異体を含む。一部の実施態様では、軽鎖ライブラリーは、κ軽鎖の変異体を含む。一部の実施態様では、軽鎖ライブラリーは、λおよびκ軽鎖の変異体の両方を含む。

親和性成熟のための様々な方法を任意の順序で組み合わせてよいことが理解されるべきである。例えば、一実施態様では、選択抗体は、重鎖ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化を受けて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発を受けてよい。別の実施態様では、選択抗体は、重鎖ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化を受けて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発を受けて、その後に軽鎖シャッフリングを受けてよい。別の実施態様では、選択抗体は、重鎖ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化を受けて、その後に軽鎖シャッフリングを受けて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発を受けてよい。別の実施態様では、選択抗体は、軽鎖シャッフリングを受けて、その後に重鎖ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化を受けて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発を受けてよい。別の実施態様では、選択抗体は、軽鎖シャッフリングを受けて、その後に重鎖ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化を受けて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発を受けて、その後にＣＤＲ－Ｌ３突然変異誘発を受けてよい。

一部の実施態様では、選択抗体は、軽鎖シャッフリングを受けて、その後に重鎖ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化を受けて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発を受けて、その後にＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、および／またはＣＤＲＬ３突然変異誘発を受けてよい。一部の実施態様では、選択抗体は、重鎖ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化を受けて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発を受けて、その後にＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、および／またはＣＤＲＬ３突然変異誘発を受けてよい。一部の実施態様では、軽鎖ＣＤＲ突然変異誘発は、３個の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲＬ３）のいくつかまたは全てに対して別々に実施されて、３個までの抗体ライブラリーが生産される。一部の実施態様では、それぞれのライブラリー由来の軽鎖ＣＤＲを混ぜ合わせて、軽鎖ＣＤＲ突然変異の特有の組み合わせを有する新たな抗体ライブラリーが産生される。

上述の親和性成熟のための任意の方法において、生じる新たな抗体は、公知技術（例えば、ＦＡＣＳ）を用いて、標的抗原（例えば、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体）への結合に関して選択され得る。ＦＡＣＳを用いた結合特異性および親和性は、異なる抗原濃度および／または未標識（コールド）抗原に関する競合によって試験されてよい。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、ＢＬＩ（例えば、ＯＣＴＥＴ）、およびＳＰＲ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）のような当技術分野で知られている他の技術を用いてさらに評価することができる。

上述の親和性成熟プロセスに加えて、さらなる最適化が行なわれて所望の産物プロファイルが達成され得る。したがって、抗体は、最適化のステップにさらに供されてよく、特定の有利な物理化学的特性に基づいて選択されてよい。治療的抗体（生物製剤）については、評価され得る開発可能性に関する物理化学的基準は、限定されないが：溶解度、安定性、免疫原性、自己会合または凝集しないこと、Ｆｃ機能、内部移行プロファイル、ｐＨ感受性、グリコシル化および製造可能性、例えば細胞生存能力および／または遺伝子発現を含む。一部の実施態様では、最適化のプロセスは、定常領域内の１つまたは複数のアミノ酸配列の突然変異誘発を含む。

一態様では、本発明は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合しない抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を作製するための方法を提供し；ここで抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＴＧＦβ１を阻害するが、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３を阻害せず、その方法は、ｉ）ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１を含む少なくとも１つの抗原を提供するステップ、ｉｉ）ステップ（ｉ）の少なくとも１つの抗原に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１のプールを選択して、それにより、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１の特異的な結合物質を提供するステップ；ｉｉｉ）ＴＧＦβ１の活性化を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントの第２のプールを選択して、それにより、ＴＧＦβ１活性化の特異的阻害剤を産生するステップ；ｉｖ）抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントを医薬組成物に処方して、それにより、抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を作製するステップを含む。

一実施態様では、その方法は、抗体の第１のプールおよび／または抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはそのフラグメントを提供するステップをさらに含む。一実施態様では、親和性成熟および／または最適化は、抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載の軽鎖シャッフリングに供するステップを含む。一実施態様では、親和性成熟および／または最適化は、抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載のＣＤＲＨ１／Ｈ２多様化に供するステップを含む。一実施態様では、親和性成熟および／または最適化は、抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載のＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発に供するステップを含む。一実施態様では、親和性成熟および／または最適化は、抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載の軽鎖ＣＤＲ突然変異誘発に供するステップを含む。一実施態様では、親和性成熟および／または最適化は、抗体、またはその抗原結合フラグメントを、本明細書中に記載の軽鎖ＣＤＲＬ１／Ｌ２多様化に供するステップを含む。

さらなる最適化ステップを行なって、治療的組成物にとって有利な物理化学的特性を提供してよい。かかるステップは、限定されないが、改善された溶解度、自己凝集の欠如、安定性、ｐＨ感受性、Ｆｃ機能などを提供するための突然変異誘発または操作を含んでよい。

一実施態様では、その方法は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する抗体、またはその抗原結合フラグメントの親和性を決定するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、任意のバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。

一実施態様では、その方法は、抗体の第１および／または第２のプール由来の抗体、またはその抗原結合フラグメントの、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する親和性を決定するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞１００ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞２５ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、＞１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。

一実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のｃａｇａアッセイのような適切な機能性のインビトロの細胞に基づくアッセイによって測定して、抗体、またはその抗原結合フラグメントのＩＣ_５０を決定するステップをさらに含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のｃａｇａアッセイによって測定して、５０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のｃａｇａアッセイによって測定して、２５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のｃａｇａアッセイによって測定して、１０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のｃａｇａアッセイによって測定して、５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。

一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載の内因性ＬＴＢＰｃａｇａアッセイによって測定して、１００ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載の内因性ＬＴＢＰｃａｇａアッセイによって測定して、５０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載の内因性ＬＴＢＰｃａｇａアッセイによって測定して、２５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載の内因性ＬＴＢＰｃａｇａアッセイによって測定して、１０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、本明細書中に記載の内因性ＬＴＢＰｃａｇａアッセイによって測定して、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。

一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のヒトＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、１００ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のヒトＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、５０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のヒトＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、２５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のヒトＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、１０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のヒトＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。

一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のミューリンＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、１００ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のミューリンＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、５０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のミューリンＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、２５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のミューリンＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、１０ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。一部の実施態様では、その方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、本明細書中に記載のミューリンＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイによって測定して、５ｎＭよりも高いＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む。

別の実施態様では、モノクローナル抗体は非ヒト動物から得られて、それから、適切な組み換えＤＮＡ技術を用いて改変される（例えば、キメラが作製される）。キメラ抗体を作製するための様々な手法が説明されている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６８５１，１９８５；Ｔａｋｅｄａｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３１４：４５２、１９８５、Ｃａｂｉｌｌｙｅｔａｌ．，米国特許番号４，８１６，５６７；Ｂｏｓｓｅｔａｌ．，米国特許番号４，８１６，３９７；Ｔａｎａｇｕｃｈｉｅｔａｌ．，欧州特許公報ＥＰ１７１４９６；欧州特許公報０１７３４９４、英国特許ＧＢ２１７７０９６Ｂを参照。

さらなる抗体生産技術については、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ｅｄｓ．Ｈａｒｌｏｗｅｔａｌ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照。本開示は、抗体の任意の特定の由来、生産方法、または他の特別な特徴に必ずしも制限されない。

本開示の一部の態様は、ポリヌクレオチドまたはベクターによって形質転換された宿主細胞に関する。宿主細胞は、原核生物または真核生物細胞であってよい。宿主細胞内に存在するポリヌクレオチドまたはベクターは、宿主細胞のゲノム中に組み込まれてよく、または、染色体外に維持されてよい。宿主細胞は、任意の原核生物または真核生物細胞、例えば、細菌、昆虫、真菌、植物、動物またはヒト細胞であってよい。一部の実施態様では、真菌細胞は、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属のもの、特にＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種のものである。用語「原核生物」は、抗体または対応する免疫グロブリン鎖の発現のためにＤＮＡまたはＲＮＡ分子によって形質転換またはトランスフェクトされ得る全ての細菌を含む。原核生物宿主は、グラム陰性ならびにグラム陽性細菌、例えば、大腸菌、ネズミチフス菌、霊菌および枯草菌を含んでよい。用語「真核生物」は、酵母、高等植物、昆虫および脊椎動物細胞、例えば、ＮＳＯおよびＣＨＯ細胞のような哺乳類細胞を含む。組換え生産手順に用いられる宿主に応じて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体または免疫グロブリン鎖は、グリコシル化されてよく、または、グリコシル化されなくてよい。抗体または対応する免疫グロブリン鎖は、最初のメチオニンアミノ酸残基を含んでもよい。

一部の実施態様では、ベクターが適切な宿主内に組み込まれた時点で、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベルの発現に適切な条件下で維持されてよく、必要に応じて、免疫グロブリン軽鎖、重鎖、軽／重鎖二量体または無傷の抗体、抗原結合フラグメントまたは他の免疫グロブリン形態の回収および精製が続いてよい；Ｂｅｙｃｈｏｋ，ＣｅｌｌｓｏｆＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，（１９７９）を参照。したがって、ポリヌクレオチドまたはベクターが細胞内に導入されて、次いで、抗体または抗原結合フラグメントが生産される。さらに、前述の宿主細胞を含むトランスジェニック動物（好ましくは哺乳類）が、抗体または抗体フラグメントの大スケールの生産のために用いられてよい。

形質転換された宿主細胞は、発酵槽内で増殖され得て、任意の適切な技術を用いて培養され得て、最適な細胞増殖を達成する。発現された時点で、抗体全体、それらの二量体、個々の軽鎖および重鎖、他の免疫グロブリン形態、または抗原結合フラグメントは、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティカラム、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当該分野の標準的な手順に従って精製されてよい；Ｓｃｏｐｅｓ，「ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」，ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９８２）を参照。抗体または抗原結合フラグメントは、それから、増殖培地、細胞溶解物、または細胞膜画分から単離されてよい。例えば微生物によって発現された抗体または抗原結合フラグメントの単離および精製は、予備クロマトグラフィー分離および免疫学的分離（例えば抗体の定常領域に対して方向付けられたモノクローナルまたはポリクローナル抗体の使用を伴うもの）のような任意の従来の手段によるものであってよい。

本開示の態様は、モノクローナル抗体の無期限に長期の材料を提供するハイブリドーマに関する。ハイブリドーマの培養物から直接的に免疫グロブリンを得る代わりとして、不死化ハイブリドーマ細胞が、その後の発現および／または遺伝子操作のための再配列された重鎖および軽鎖座の材料として用いられ得る。再配列された抗体遺伝子を適切なｍＲＮＡから逆転写して、ｃＤＮＡが生産され得る。一部の実施態様では、重鎖定常領域は、異なるアイソタイプのものに交換または完全に除去されてよい。可変領域は、単鎖Ｆｖ領域をコードするように結合されてよい。複数のＦｖ領域が、１よりも多い標的に対する結合能力を与えるように結合されてよく、またはキメラ重軽鎖の組み合わせを用いてよい。任意の適切な方法が、抗体可変領域のクローニングおよび組換え抗体の産生に用いられ得る。

一部の実施態様では、重鎖および／または軽鎖の可変領域をコードする適切な核酸が得られて、標準的な組換え宿主細胞内にトランスフェクトされ得る発現ベクター内に挿入される。様々なそのような宿主細胞が用いられ得る。一部の実施態様では、哺乳類宿主細胞は、効率的なプロセッシングおよび生産のために有利であり得る。この目的に有用である典型的な哺乳類細胞株は、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、またはＮＳＯ細胞を含む。抗体または抗原結合フラグメントの生産は、宿主細胞の増殖およびコード配列の発現に適切な培養条件下で、改変された組換え宿主を培養することによって行われ得る。抗体または抗原結合フラグメントは、培養物からそれらを単離することによって回収され得る。発現系は、生じる抗体が培地中に分泌されるようにシグナルペプチドを含むように設計され得るが；細胞内生産も可能である。

本開示はまた、本明細書に記載の抗体の免疫グロブリン鎖の少なくとも可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施態様では、ポリヌクレオチドによってコードされる可変領域は、上述のハイブリドーマの任意の１つによって生産される抗体の可変領域のＶＨおよび／またはＶＬの少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

抗体または抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、または合成的に生産されたＤＮＡもしくはＲＮＡ、または組み換えによって生産されたキメラ核酸分子（任意のこれらのポリヌクレオチドを単独または組み合わせのいずれかで含む）であってよい。一部の実施態様では、ポリヌクレオチドは、ベクターの一部である。そのようなベクターは、適切な宿主細胞内および適切な条件下でのβベクター（ｔｈｅ β ｔｈｅｖｅｃｔｏｒ）を可能にするマーカー遺伝子のようなさらなる遺伝子を含んでよい。

一部の実施態様では、ポリヌクレオチドは、原核生物または真核生物細胞における発現を可能にする発現制御配列に作動可能に結合している。ポリヌクレオチドの発現は、翻訳可能なｍＲＮＡへのポリヌクレオチドの転写を含む。真核生物細胞、好ましくは哺乳類細胞における発現を確実にする調節エレメントは、当業者によく知られている。それらは、転写開始を促進する調節配列を含んでよく、転写終結および転写安定化を促進するポリ－Ａシグナルを含んでもよい。さらなる調節エレメントは、転写ならびに翻訳エンハンサー、および／または、天然に関係があるまたは異種のプロモーター領域を含んでよい。原核生物宿主細胞における発現を可能にする、あり得る調節エレメントは、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＰＬ、Ｌａｃ、ＴｒｐまたはＴａｃプロモーターを含み、真核生物宿主細胞における発現を可能にする調節エレメントの例は、ＡＯＸ１またはＧＡＬ１プロモーター（酵母）、または、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター（ラウス肉腫ウイルス）、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサーまたはグロビンイントロン（哺乳類および他の動物細胞）である。

転写開始を担うエレメントの他に、かかる調節エレメントはまた、ポリヌクレオチドの下流に、ＳＶ４０－ポリ－Ａ部位またはｔｋ－ポリ－Ａ部位のような転写終結シグナルを含んでもよい。さらに、用いられる発現系に応じて、ポリペプチドを細胞区画へ向けること、または、培地中へそれを分泌することが可能なリーダー配列が、ポリヌクレオチドのコード配列に追加されてよく、以前に説明されている。リーダー配列（単数または複数）は、翻訳、開始および終結配列と共に適切なフェーズにおいて集められて、および好ましくは、リーダー配列は、翻訳されたタンパク質、またはその一部を、例えば細胞外培地へ分泌するように指示することが可能である。所望の特性、例えば、発現された組換え産物の安定化または単純化された精製を与えるＣまたはＮ末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチド配列を用いてもよい。

一部の実施態様では、軽鎖および／または重鎖の少なくとも可変ドメインをコードするポリヌクレオチドは、免疫グロブリン鎖の両方または片方のみの可変ドメインをコードしてよい。同様に、ポリヌクレオチドは、同一プロモーターの制御下であってよく、発現に関して別々に制御されてよい。さらに、一部の態様は、抗体の免疫グロブリン鎖の可変ドメインまたは抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む、遺伝子操作において慣習的に用いられるベクター、特にプラスミド、コスミド、ウイルスおよびバクテリオファージに関し；抗体の他方の免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドと組み合わせてもよい。

一部の実施態様では、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクター内に真核生物プロモーター系として提供されるが、原核生物宿主に関する制御配列が用いられてもよい。レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、またはウシ乳頭腫ウイルスのようなウイルス由来の発現ベクターは、標的化された細胞集団へのポリヌクレオチドまたはベクターの送達のために用いられ得る（例えば、抗体または抗原結合フラグメントを発現するように細胞を改変するため）。様々な適切な方法を用いて、組換えウイルスベクターを構築することができる。一部の実施態様では、ポリヌクレオチドおよびベクターは、標的細胞への送達のためにリポソーム内に再構成され得る。ポリヌクレオチド（例えば、免疫グロブリン鎖の重および／または軽可変ドメイン（単数または複数）をコードする配列および発現制御配列）を含むベクターは、細胞の宿主のタイプに応じて異なる適切な方法によって宿主細胞内に移行され得る。

改変
本開示の抗体、またはその抗原結合部分は、制限されないが、酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、放射性材料、陽電子放出金属、非放射性常磁性金属イオン、およびＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体の検出および／または単離のための親和性標識を含む、検出可能な標識または検出可能な部分によって改変されてよい。検出可能な物質または部分は、本開示のポリペプチドに直接的に、または、適切な技術を用いて中間体（例えばリンカーなど（例えば、切断可能なリンカー））を通して間接的に、連結またはコンジュゲートされてよい。適切な酵素の非限定的な例は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含み；適切な補欠分子族複合体の非限定的な例は、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンを含み；適切な蛍光材料の非限定的な例は、ビオチン、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリンを含み；発光材料の例は、ルミノールを含み；生物発光材料の非限定的な例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンを含み；適切な放射性材料の例は、放射性金属イオン、例えば、α－エミッターまたは他の放射性同位体、例えば、ヨウ素（^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２１Ｉ）、炭素（^１４Ｃ）、硫黄（^３５Ｓ）、トリチウム（^３Ｈ）、インジウム（^１１５ｍＩｎ、^１１３ｍＩｎ、^１１２Ｉｎ、^１１１Ｉｎ）、およびテクネチウム（^９９Ｔｃ、^９９ｍＴｃ）、タリウム（^２０１Ｔｉ）、ガリウム（^６８Ｇａ、^６７Ｇａ）、パラジウム（^１０３Ｐｄ）、モリブデン（^９９Ｍｏ）、キセノン（^１３３Ｘｅ）、フッ素（^１８Ｆ）、^１５３Ｓｍ、Ｌｕ、^１５９Ｇｄ、^１４９Ｐｍ、^１４０Ｌａ、^１７５Ｙｂ、^１６６Ｈｏ、^９０Ｙ、^４７Ｓｃ、^８６Ｒ、^１８８Ｒｅ、^１４２Ｐｒ、^１０５Ｒｈ、^９７Ｒｕ、^６８Ｇｅ、^５７Ｃｏ、^６５Ｚｎ、^８５Ｓｒ、^３２Ｐ、^１５３Ｇｄ、^１６９Ｙｂ、^５１Ｃｒ、^５４Ｍｎ、^７５Ｓｅ、およびスズ（^１１３Ｓｎ、^１１７Ｓｎ）を含む。検出可能な物質は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に特異的に結合する本開示の抗体に直接的に、または、適切な技術を用いて中間体（例えばリンカーなど）を介して間接的に、連結またはコンジュゲートされてよい。検出可能な物質にコンジュゲートされた本明細書において提供される任意の抗体は、本明細書中に記載のものなどの任意の適切な診断アッセイに用いてよい。

さらに、本開示の抗体、またはその抗原結合部分は、例えば抗体薬物コンジュゲートを形成するために、薬物を用いて改変されてもよい。薬物は、本開示のポリペプチドに直接的に、または、適切な技術を用いて中間体（例えばリンカー（例えば切断可能なリンカー）など）を介して間接的に、連結またはコンジュゲートされてよい。

標的化薬剤
一部の実施態様では、本開示の方法は、対象における特定の部位へ、本明細書中に開示される抗体、またはその抗原結合部分を標的化するための１つまたは複数の標的化薬剤の使用であって、そのような薬剤（単数または複数）を目的のニッチに濃縮または局在化させる目的のための使用を含む。一部の実施態様では、かかる標的化は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ放出の調整を達成し得る。例えば、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体は、典型的に、細胞外マトリックスに局在化する。したがって、一部の実施態様では、本明細書中に開示される抗体は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体が存在する部位へ抗体を局在化させる目的のために細胞外マトリックス標的化薬剤にコンジュゲートすることができる。そのような実施態様では、抗体の選択的標的化は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体の選択的な調整へと導く。一部の実施態様では、抗体の選択的標的化は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体の選択的阻害へと導く（例えば、線維症を治療する目的のため）。一部の実施態様では、細胞外マトリックス標的化薬剤は、ヘパリン結合剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ結合剤、リシルオキシダーゼ結合ドメイン、フィブリリン結合剤、ヒアルロン酸結合剤、およびその他を含む。

一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する第１の部分と、標的部位の構成要素、例えばＥＣＭの構成要素（例えば、フィブリリン）に選択的に結合する第２の部分とを有する二重特異性抗体を用いてよい。

一部の実施態様では、そのような標的化薬剤は、目的のニッチに複合体を運搬または局在化させるための別の薬剤または治療剤に結合されてよい。

安全性／毒性の考慮
組織病理学、毒物学
上述のように、全てのＴＧＦβアイソフォーム、すなわち、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３に拮抗する公知のｐａｎ－阻害剤は、複数の哺乳類種にわたって様々な毒性を引き起こすことが証明されている。最も顕著な公知の毒性は、心血管系の毒性（例えば弁膜症）および上皮過形成、皮膚病変、炎症および出血を含む。より具体的には、文献に報告されるｐａｎ－ＴＧＦβ阻害剤（例えば、ＴＧＦβＲの小分子拮抗薬および非選択的中和抗体）と関連する観察される毒性の一部は、以下を含む。

ＴＧＦβ阻害と関連する心血管系の毒性は、大動脈弁、右房室弁、および左房室弁における過形成；大動脈弁、左房室弁、および上行大動脈における炎症；上行大動脈、大動脈弁および左房室弁における出血；上行大動脈における結合組織変性（例えば、Ｓｔｒａｕｂｅｒｅｔａｌ．（２０１４）「ＮｏｎｃｌｉｎｉｃａｌｓａｆｅｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ β ｒｅｃｅｐｔｏｒＩｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｉｎＦｉｓｃｈｅｒ３４４ｒａｔｓａｎｄｂｅａｇｌｅｄｏｇｓ」Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ４（３）：１０００１９６を参照）を含む。

さらに、全ての３つのＴＧＦβアイソフォームに結合する中和抗体は、特定の上皮毒性と関連しており、それらを以下の表に要約する。

本開示の出願人は、潜在型ｐｒｏＴＧＦβ１複合体を標的化することにより、ＴＧＦβ１の活性化ステップを選択的にブロックするモノクローナル抗体の改善された安全性プロファイルを以前に示した（例えば、ＷＯ２０１７／１５６５００およびＷＯ２０１８／１２９３２９を参照）。そこに記載されるラットの毒物学試験では、４週間にわたり、毎週１００ｍｇ／ｋｇまでの阻害剤を動物に投与した場合に、観察することのできる試験品目に関連する毒性はなかった。

従来のＴＧＦβ拮抗薬のアイソフォーム特異性がないことがＴＧＦβ阻害と関連する毒性の原因の根底にあり得るという本開示の出願人による初期の認識がなされたので（ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２１９７２を参照）、本発明者らは、ＴＧＦβ１調節不全、特に線維性状態が現れる様々な疾患を、高い安全性／忍容性で治療するためのコンテキスト選択的ＴＧＦβ１阻害をさらに達成することを求めた。したがって、本明細書において提供される研究は、高親和性阻害剤の中でも、耐久性を改善するために特に低い解離速度（ｋ_ＯＦＦ）を有する抗体のサブセットをさらに提供する。

したがって、一部の実施態様では、本開示に係る新規の抗体は、少なくとも４週間（例えば、４、６、８、１０、１２週間）、毎週投与した場合に、＞１００ｍｇ／ｋｇの最大投与可能量（ＭＴＤ）を有する。一部の実施態様では、本開示に係る新規の抗体は、ラットにおいて少なくとも４週間、毎週投与した場合に、１００ｍｇ／ｋｇまでの無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を有する。一部の実施態様では、抗体は、マウスにおいて４週間または１２週間投与した場合に、少なくとも１００ｍｇ／ｋｇ／週のＮＯＡＥＬを有する。ＴＧＦβ阻害剤およびＴＧＦβ１阻害剤に関する安全性／毒物学試験を実施するために用いられる適切な動物モデルは、限定されないが：ラット、イヌ、カニクイザル（ｃｙｎｏｓ）、およびマウスを含む。好ましい実施態様では、適切な前臨床有効性試験に基づく抗体の最小有効量は、ＮＯＡＥＬよりも下である。より好ましくは、抗体の最小有効量は、ＮＯＡＥＬの約３分の１以下である。特に好ましい実施態様では、抗体の最小有効量は、ＮＯＡＥＬの約６分の１以下である。一部の実施態様では、抗体の最小有効量は、ＮＯＡＥＬの約１０分の１以下である。

一部の実施態様では、本発明は、ＴＧＦβ１シグナリングを阻害することが可能なアイソフォーム選択的抗体を包含し、それは、対象へ投与された場合に、ＴＧＦβ１関連の徴候を治療するのに効果的な用量で心血管系または公知の上皮毒性を生じさせない。一部の実施態様では、抗体は、毎週、隔週または毎月投与される約３～１０ｍｇ／ｋｇの最小有効量を有する。好ましくは、抗体は、最小有効量の少なくとも６倍の用量で、毒性が生じないか最小限である（例えば、６倍の治療濃度域）。より好ましくは、抗体は、最小有効量の少なくとも１０倍の用量で、毒性が生じないか最小限である（例えば、１０倍の治療濃度域）。さらにより好ましくは、抗体は、最小有効量の少なくとも１５倍の用量で、毒性が生じないか最小限である（例えば、１５倍の治療濃度域）。

したがって、治療的使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントの選択は、１つまたは複数のＴＧＦβ阻害剤の基準に合う抗体または抗原結合フラグメントを選択するステップ（例えば、遅い解離速度、例えば＜５×１０^－４（１／ｓ）のｋ_ＯＦＦを有することなどについて選択されるモノクローナル抗体および抗原結合フラグメント）；インビボ有効性試験を適切な前臨床モデルにおいて行なって、抗体またはフラグメントの有効量を決定するステップ；インビボ安全性／毒物学試験を適切なモデルにおいて行なって、安全または毒性である抗体の量（例えば、ＭＴＤ、ＮＯＡＥＬ、または任意の当該分野で認識されている安全性／毒性を評価するためのパラメーター）を決定するステップ；および、少なくとも３倍の治療濃度域（好ましくは６倍、より好ましくは１０倍の治療濃度域、さらにより好ましくは１５倍の治療濃度域）を提供する抗体またはフラグメントを選択するステップを含んでよい。選択された抗体またはフラグメントは、抗体またはフラグメントを含む医薬組成物の製造において用いてよい。かかる医薬組成物は、本明細書中に記載の対象におけるＴＧＦβ１徴候の治療において用いられ得る。例えば、ＴＧＦβ１徴候は、線維性障害であってよい。好ましくは、治療的使用または大規模製造のために選択されるＴＧＦβ阻害剤は、少なくとも４週、例えば、８週、および１２週の持続した曝露後に、処置された動物において観察可能な副作用を生じさせない。一部の実施態様では、病理組織学的分析において観察される特定の毒性は、不利でない（ｎｏｎ－ａｄｖｅｒｓｅ）と考えられる。

免疫の安全性評価
サイトカインは、正常な免疫応答において重要な役割を果たしているが、免疫系が過剰活性にトリガーされると、サイトカイン産生の正のフィードバック・ループが「サイトカイン・ストーム」または高サイトカイン血症へと導く可能性があり、その状況においては、過剰なサイトカイン産生が、臓器、特に肺および腎臓を損傷させ得る免疫応答を引き起こし、死さえもたらす。そのような状態は、血清中の著しく高い炎症促進性サイトカインによって特徴付けられる。歴史的に、健常者における抗－ＣＤ２８モノクローナル抗体ＴＧＮ１４１２の第１相試験は、炎症促進性サイトカインの予期されない全身性および迅速な誘導によって生じる生命を脅かす「サイトカイン・ストーム」応答をもたらした（ＳｕｎｔｈａｒａｌｉｎｇａｍＧｅｔａｌ．ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．２００６Ｓｅｐ７；３５５（１０）：１０１８－２８）。この出来事は、Ｔ細胞の薬理学刺激と関連する潜在的危険性の高い意識を刺激した。

ＴＧＦβに向けられた療法は、特定のＴ細胞受容体またはそのリガンドを標的化しないが、例えば、インビトロのサイトカイン放出アッセイ、ＴＧＦβ阻害剤処置された非ヒト霊長類の血漿サンプル由来のインビボのサイトカイン測定、およびヒト血小板を用いた血小板アッセイ免疫を含む、安全性評価を行なうことが賢明であると考えられる。

一部の実施態様では、治療的使用のためのＴＧＦβ阻害剤の選択および／またはその大規模生産は、ＴＧＦβ阻害剤がサイトカイン産生細胞からのサイトカイン放出をトリガーする能力の評価を含む。そのような評価においては、１つまたは複数サイトカイン（例えば、炎症性サイトカイン）ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ－１β、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、およびＩＬ－６がアッセイされ得る。一部の実施態様では、サイトカイン産生細胞は、健康なドナー由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）成分を含んでよい。本明細書中のＴＧＦβ阻害剤（例えば開示される抗体）に対する曝露後のサイトカイン応答は、コントロール、例えば、ＩｇＧアイソタイプのネガティブコントロール、または試験されるＴＧＦβ阻害剤に応じて任意の他の適切なコントロールに対する曝露後の放出と比較され得る。サイトカイン活性化は、プレート結合（例えば、固定化）および／または可溶性アッセイの形式で評価され得る。ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＩＬ－１β、ＴＮＦα、ＩＬ－６、およびＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）のレベルは、ネガティブコントロールにおける活性化の１０倍、例えば、８、６、４、または２倍を超えるべきでない。一部の実施態様では、サンプルにおける、例えばＰＢＭＣにおける、サイトカイン活性化を確認するためにポジティブコントロールを用いてもよい。一部の実施態様では、これらのインビトロのサイトカイン放出の結果を、例えばサル毒物学試験（例えば、４週ＧＬＰまたは非ＧＬＰ反復用量サル試験）のような動物モデルにおいて、インビボでさらに確認してよい。

一部の実施態様では、治療的使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントの選択は、本明細書に記載される１つまたは複数の基準に合う抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；インビボ有効性試験を適切な前臨床モデルにおいて行なって、抗体またはフラグメントの有効量を決定するステップ；インビボ安全性／毒物学試験を適切なモデルにおいて行なって、安全または毒性である抗体の量（例えば、ＭＴＤ、ＮＯＡＥＬ、または任意の当該分野で認識されている安全性／毒性を評価するためのパラメーター）を決定するステップ；および、少なくとも３倍の治療濃度域（好ましくは６倍、より好ましくは１０倍の治療濃度域、さらにより好ましくは１５倍の治療濃度域）を提供する抗体またはフラグメントを選択するステップを含んでよい。特定の実施態様では、インビボ有効性試験は、ヒトの状態を再現する２以上の適切な前臨床モデルにおいて行われる。一部の実施態様では、かかる前臨床モデルは、ＴＧＦβ１ポジティブの線維症を含む。一部の実施態様では、前臨床モデルは、肝線維症モデル、腎線維症モデル、肺線維症モデル、心臓（ｈｅａｒｔ（ｃａｒｄｉａｃ））線維症モデル、皮膚線維症モデルから選択される。

治療的使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントの同定は、免疫安全性アッセイを行なうステップをさらに含み、制限されないが、サイトカイン放出の測定および／または血小板結合、活性化、および／または凝集に対する抗体または抗原結合フラグメントの影響の決定を含んでよい。特定の実施態様では、サイトカイン放出は、ＰＢＭＣを用いてインビトロで、または、非ヒト霊長類のような前臨床モデルを用いてインビボで測定され得る。特定の実施態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、免疫安全性評価において、ＩｇＧコントロールサンプルでのレベルと比較して、ＩＬ－６、ＩＦＮγ、および／またはＴＮＦαレベルにおいて１０倍よりも高い放出を誘導しない。特定の実施態様では、血小板結合、活性化、および凝集の評価は、ＰＢＭＣを用いてインビトロで行われ得る。一部の実施態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、免疫安全性評価において、バッファーまたはアイソタイプコントロールと比較して、血小板結合、活性化、および／または凝集において１０％よりも多い増大を誘導しない。

選択される抗体またはフラグメントは、その抗体またはフラグメントを含む医薬組成物の製造において用いられ得る。かかる医薬組成物は、本明細書中に記載の対象におけるＴＧＦβ徴候の治療において用いられ得る。例えば、ＴＧＦβ徴候は、臓器線維症のような線維性障害、例えば、肝線維症であってよい。したがって、本発明は、ＴＧＦβ阻害剤を含む医薬組成物を製造するための方法を含み、ここで、その方法は、ＴＧＦβ阻害剤を選択するステップを含み、それが、免疫安全性評価（サイトカイン放出アッセイを含み、血小板アッセイをさらに含んでもよい）によって評価される免疫安全性に関して試験される。その方法によって選択されるＴＧＦβ阻害剤は、コントロール（例えばＩｇＧコントロール）と比較して、許容できないレベルのサイトカイン放出をトリガーしない。同様に、その方法によって選択されるＴＧＦβ阻害剤は、許容できないレベルの血小板凝集、血小板活性化および／または血小板結合を生じさせない。かかるＴＧＦβ阻害剤は、その結果、ＴＧＦβ阻害剤を含む医薬組成物の商業生産のために、大規模で、例えば２５０Ｌまたはそれよりも多く、例えば、１０００Ｌ、２０００Ｌ、３０００Ｌ、４０００Ｌまたはそれよりも多く製造される。

医薬組成物
本発明は、ヒトおよび非ヒト対象における投与に適切な薬品として用いられる医薬組成物をさらに提供する。ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する１つまたは複数の抗体は、薬学的に許容できる担体（賦形剤）（例えばバッファーを含む）とともに処方または混合されて、医薬組成物を形成することができる。かかる製剤は、ＴＧＦβシグナリングまたはその調節不全を伴う疾患または障害の治療のために用いられ得る。一部の実施態様では、ＴＧＦβシグナリングと関連するそのような疾患または障害は、１つまたは複数のコンテキストを含み、すなわち、ＴＧＦβは、特定のタイプ（単数または複数）の提示分子と関連する。一部の実施態様では、そのようなコンテキストは、細胞型特異的および／または組織特異的な様式で生じる。一部の実施態様では、例えば、ＴＧＦβシグナリングのそのようなコンテキスト依存性の作用は、部分的に、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３を介して仲介される。

一部の実施態様では、本発明の抗体は、単一コンテキストのＴＧＦβに選択的に結合し、したがって、抗体は、ＬＴＢＰ提示分子、例えば、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３との複合体におけるＴＧＦβに結合する。したがって、そのような医薬組成物は、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３によるＴＧＦβ１活性化／放出と関連するＴＧＦβ関連の徴候（例えば、線維症）を緩和するために患者へ投与され得る。

薬学的に「許容できる」担体（賦形剤）とは、担体が、組成物の活性成分と適合し（および好ましくは、活性成分を安定することが可能であり）、治療される対象に対して有害でないことを意味する。バッファーを含む薬学的に許容できる賦形剤（担体）の例は当業者に明らかであり、以前に記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ２０ｔｈＥｄ．（２０００）ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒを参照。一例では、本明細書中に記載の医薬組成物は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する１よりも多い抗体を含み、ここで、抗体は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体の異なるエピトープ／残基を認識する。

この方法において用いられる医薬組成物は、薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定化剤を凍結乾燥された製剤または水溶液の形態で含んでよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ２０ｔｈＥｄ．（２０００）ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）。許容できる担体、賦形剤、または安定化剤は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸のようなバッファー；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンのようなアミノ酸；単糖類、二糖類、および、グルコース、マンノース、またはデキストランを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールのような糖類；ナトリウムのような塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ－タンパク質錯体）；および／または、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン性界面活性剤を含んでよい。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書においてさらに説明される。

本発明ははまた、本発明に係る抗体またはそのフラグメントおよび薬学的に許容できる賦形剤を含む、医薬組成物も含む。

したがって、その抗体またはそのような抗体の抗原結合フラグメントを含んでいる分子は、ヒト投与に適切な医薬組成物へと処方することができる。

医薬製剤は、１つまたは複数の賦形剤を含んでよい。一部の実施態様では、賦形剤（単数または複数）は、以下：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｓｃｒｉｐｔｓ／ｃｄｅｒ／ｉｉｇ／ｉｎｄｅｘ．Ｃｆｍ？ｅｖｅｎｔ＝ｂｒｏｗｓｅＢｙＬｅｔｔｅｒ．ｐａｇｅ＆Ｌｅｔｔｅｒ＝Ａに提供されるリストから選択され得る。

医薬組成物は典型的に、活性の生物学的薬剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃ）（例えば、モノクローナル抗体、抗原結合フラグメントを含んでいる改変された結合分子など）の最終濃度が約２ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬであるように処方される。例えば、製剤の最終濃度（ｗｔ／ｖｏｌ）は、約２～２００、２～１８０、２～１６０、２～１５０、２～１２０、２～１００、２～８０、２～７０、２～６０、２～５０、２～４０、５～２００、５～１８０、５～１６０、５～１５０、５～１２０、５～１００、５～８０、５～７０、５～６０、５～５０、５～４０、１０～２００、１０～１８０、１０～１６０、１０～１５０、１０～１２０、１０～１００、１０～８０、１０～７０、１０～６０、１０～５０、１０～４０、２０～２００、２０～１８０、２０～１６０、２０～１５０、２０～１２０、２０～１００、２０～８０、２０～７０、２０～６０、２０～５０、２０～４０、３０～２００、３０～１８０、３０～１６０、３０～１５０、３０～１２０、３０～１００、３０～８０、３０～７０、３０～６０、３０～５０、３０～４０、４０～２００、４０～１８０、４０～１６０、４０～１５０、４０～１２０、４０～１００、４０～８０、４０～７０、４０～６０、４０～５０、５０～２００、５０～１８０、５０～１６０、５０～１５０、５０～１２０、５０～１００、５０～８０、５０～７０、５０～６０、６０～２００、６０～１８０、６０～１６０、６０～１５０、６０～１２０、６０～１００、６０～８０、６０～７０、７０～２００、７０～１８０、７０～１６０、７０～１５０、７０～１２０、７０～１００、７０～８０ｍｇ／ｍＬの範囲であってよい。一部の実施態様では、製剤中の生物学的薬剤の最終濃度は、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００ｍｇ／ｍＬである。

一部の実施態様によれば、ＴＧＦβ阻害剤は、約３０００ｍｇ、２４００ｍｇ、１６００ｍｇ、８００ｍｇ、２４０ｍｇ、８０ｍｇ、またはそれ未満の量で投与される。

本発明の医薬組成物は、好ましくは、適切なバッファーを用いて処方される。適切なバッファーは、限定されないが、リン酸バッファー、クエン酸バッファー、およびヒスチジンバッファーを含む。

製剤の最終ｐＨは、典型的にｐＨ５．０～８．０である。例えば、医薬組成物のｐＨは、約５．０、５．２、５．５、６．０、６．２、６．５、６．８、７．０、７．２、７．４、７．５、７．６、または７．８であってよい。

本開示の医薬組成物は、医薬製剤での使用に承認された非イオン系洗剤のような界面活性剤を含んでよい。かかる界面活性剤は、例えば、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ－２０）、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ－８０）およびＮＰ－４０のようなポリソルベートを含む。

本開示の医薬組成物は、安定化剤を含んでよい。液体タンパク質製剤については、安定性は、ｐＨ緩衝化塩の選択によって高めることができ、しばしばアミノ酸を用いることもできる。それは、液体／空気界面または液体／固体界面における（パッケージングとの）相互作用であり、タンパク質の吸着およびアンフォールディングの後に凝集へと導く。適切な安定化剤は、限定されないが、スクロース、マルトース、ソルビトール、ならびに、ヒスチジン、グリシン、メチオニンおよびアルギニンのような特定のアミノ酸を含む。

本開示の医薬組成物は、以下の賦形剤：リン酸ナトリウム、アルギニン、スクロース、塩化ナトリウム、トロメタミン、マンニトール、ベンジルアルコール、ヒスチジン、スクロース、ポリソルベート８０、クエン酸ナトリウム、グリシン、ポリソルベート２０、トレハロース、ポロキシマー１８８、メチオニン、トレハロース、ｒｈヒアルロニダーゼ、コハク酸ナトリウム、リン酸カリウム、エデト酸二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マルトース、酢酸ヒスチジン、ソルビトール、ペンテト酸、ヒト血清アルブミン、ペンテト酸のうちの１つまたは任意の組み合わせを含んでよい。

一部の実施態様では、本開示の医薬組成物は、防腐剤を含んでよい。

本開示の医薬組成物は、典型的に液体または凍結乾燥の形態として提供される。典型的に、産物は、バイアル（例えばガラスバイアル）内に提供することができる。シリンジ、ペン、または自動注入装置において利用可能な産物は、これらのコンテナー／閉鎖系において予め充填された液体として提供され得る。

一部の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体を含むリポソームを含み、それは、Ｅｐｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇｅｔａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４０３０（１９８０）；および米国特許番号４，４８５，０４５および４，５４４，５４５に記載されるもののような任意の適切な方法によって調製され得る。増大された循環時間を有するリポソームは、米国特許番号５，０１３，５５６に開示される。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生産され得る。リポソームは、規定されたポアサイズのフィルターを通して押し出されて、所望の直径を有するリポソームを生じさせる。

一部の実施態様では、標的化特性を有するリポソームが、特定の組織または細胞型へ医薬組成物を優先的に送達または局在化させるために選択される。例えば、骨髄標的化特性を有する特定のナノ粒子に基づく担体、例えば、脂質に基づくナノ粒子またはリポソームを用いてよい。例えば、Ｓｏｕ（２０１２）「Ａｄｖａｎｃｅｄｄｒｕｇｃａｒｒｉｅｒｓｔａｒｇｅｔｉｎｇｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ」、ＲｅｓｅａｒｃｈＧａｔｅｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ２３２７２５１０９を参照。

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体は、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル中（それぞれコロイド状薬物輸送系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションにおいて）、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－（メタクリル酸メチル（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に、トラップされてもよい。例示的な技術は、以前に説明されていて、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ２０ｔｈＥｄ．ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）を参照。

他の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、徐放性形式で製剤化され得る。徐放性製剤の適切な例は、抗体を含む固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、そのマトリックスは、成形品、例えばフィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許番号３，７７３，９１９）、Ｌ－グルタミン酸および７エチル－Ｌ－グルタミン酸の共重合体、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸共重合体、例えば、ＬＵＰＲＯＮＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸共重合体およびリュープロリドアセテートからなる注入可能なマイクロスフェア）、スクロースアセテートイソブチレート、およびポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含む。

インビボ投与のために用いられる医薬組成物は、滅菌されなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することによって容易に達成される。治療的抗体組成物は、一般的に、滅菌アクセスポートを有するコンテナー、例えば、皮下注入針によって突き刺すことが可能なストッパーを有する静脈内投与用の溶液バッグまたはバイアルの中に置かれる。

本明細書に記載の医薬組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与、または吸入もしくはガス注入による投与のための、単位剤形、例えば、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、顆粒、溶液もしくは懸濁液、または坐薬であってよい。

適切な表面活性剤は、特に、非イオン性剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン（例えばＴＷＥＥＥＮ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）および他のソルビタン（例えばＳＰＡＮ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）を含む。表面活性剤を有する組成物は、０．０５～５％の表面活性剤を好適に含み、０．１～２．５％であってよい。他の成分、例えばマンニトールまたは他の薬学的に許容できるビヒクルが、必要ならば添加されてよいことが理解される。

適切なエマルションは、ＩＮＴＲＡＬＩＰＩＤ（商標）、ＬＩＰＳＹＮ（商標）、ＩＮＦＯＮＵＴＲＯＬ（商標）、ＬＩＰＯＦＵＮＤＩＮ（商標）およびＬＩＰＩＰＨＹＳＡＮ（商標）のような市販される脂肪エマルションを用いて調製され得る。活性成分は、予混合エマルション組成物内に溶解されてよく、またはあるいは、油（例えば大豆油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、コーン油またはアーモンド油）中、および、リン脂質（例えば卵リン脂質、大豆リン脂質または大豆レシチン）と水との混合の際に形成されるエマルション中に溶解されてよい。エマルションの張性を調節するために、グリセロールまたはグルコースのような他の成分が添加され得ることが理解される。適切なエマルションは、２０％までの油（例えば５～２０％）を典型的に含む。

エマルション組成物は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体を、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその構成要素（大豆油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することによって調製されたものであってよい。

ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤の使用
本明細書中に記載の、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体およびその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３と関連するＴＧＦβ１活性の調整が所望である多種多様の適用において用いることができる。

一実施態様では、本発明は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体を、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分に曝露することによる、ＴＧＦβ１活性化を阻害する方法を提供する。前述の方法は、インビトロで、例えば培養細胞においてＴＧＦβ１活性化を阻害するために行なうことができる。前述の方法は、インビボで、例えば、ＴＧＦβ１阻害を必要とする対象において、またはＴＧＦβ１阻害の効果が評価される動物モデルにおいて、行なうこともできる。

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する、本明細書中に記載の任意の阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分、および、そのような抗体を含む任意の医薬組成物は、本発明の方法における使用に適切である。例えば、一実施態様では、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合するが、ＬＴＢＰ１単独、成熟ＴＧＦβ１単独、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体、ＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体、およびそれらの組み合わせから選択される１つまたは複数の標的には結合しない。例示的な阻害剤、例えば、抗体は、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害せずに、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害することができる。

抗体、またはその抗原結合部分は、一部の実施態様では、約１０^－８Ｍ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）でＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合することができる。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、約１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄ値を有する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、約１０^－１０Ｍ以下（例えば、約１０^－１１Ｍ以下）のＫ_Ｄ値を有する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＢＬＩ（例えば、Ｏｃｔｅｔ）のような適切なインビトロ結合アッセイで測定して、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対して、＜１０ｎＭ、＜５ｎＭ＜１ｎＭ）のＫ_Ｄ値を有する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、表５に示される少なくとも１（例えば、１、２、または３）個の重鎖ＣＤＲ、および／または、表５に示される少なくとも１（例えば、１、２、３）個の軽鎖ＣＤＲを含む。例示的な一実施態様では、抗体、またはその抗原結合部分は、配列番号７を含んでいる重鎖可変領域、および／または、配列番号８を含んでいる軽鎖可変領域を含む。前述の抗体と同一のエピトープに結合する、および／または、前述の抗体とＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１への結合に関して競合する抗体およびその抗原結合もまた、本明細書中に記載の方法において有用である。本発明の方法の実施に適切な抗体、またはその抗原結合部分のさらなる特徴が本明細書において説明される。

一実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体を、阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分と接触させることは、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する。一実施態様では、前記の接触は、ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３以外の提示分子からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害しない。例えば、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体またはＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体を、コンテキスト特異的阻害剤、例えば、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１に選択的に結合するがＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３のコンテキストにおけるＴＧＦβ１には結合しない抗体に曝露することは、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体またはＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害しない。

ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３は、一般に、細胞外マトリックス内に沈着される。したがって、一実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１を含む複合体は、細胞外マトリックスと関連し、例えば、細胞外マトリックスに結合する。一部の実施態様では、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体は、フィブリリン、および／または、ＲＧＤモチーフを含んでいるタンパク質を含んでいる細胞外マトリックスに結合する。

本発明はまた、本明細書中に記載のＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分を対象へ投与することによる、対象におけるＴＧＦβ１活性化を減少させる方法を提供する。ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する本明細書中に記載の任意の抗体、またはその抗原結合部分、および、そのような抗体を含む任意の医薬組成物は、本発明の方法での使用に適切である。

例示的なＬＴＢＰ１／３阻害剤、例えば、抗体は、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１の放出を阻害せずにＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３によって提示されるＴＧＦβ１の放出を阻害することにより、コンテキスト特異的な様式でＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に結合し、ＴＧＦβ１活性化を阻害する。そのような抗体は、ＴＧＦβ１活性の特定のサブセットをインビボでブロックするのに有用である。一実施態様では、本明細書において提供されるコンテキスト特異的抗体を用いて、細胞外マトリックスに局在化したＴＧＦβ１を阻害することができる。別の実施態様では、コンテキスト特異的抗体は、主にＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１によって仲介されるＴＧＦβ１関連の免疫活性または免疫応答を調整せずにＴＧＦβ１を阻害することができる。別の実施態様では、コンテキスト特異的抗体を用いて、造血細胞（例えば、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３を発現する造血細胞）と関連するＴＧＦβ１活性を調整せずに、細胞外マトリックスと関連するＴＧＦβ１活性（例えば、ＬＴＢＰ１関連のＴＧＦβ１活性およびＬＴＢＰ３関連のＴＧＦβ１活性）を阻害することができる。

臨床適用
出願人は、限定されないが、がんおよび線維症を含む、ＴＧＦβ１調節不全を伴う様々な疾患および障害を治療するのに有用であり得る、ＴＧＦβ１のいわゆる「コンテキスト非依存性（ｃｏｎｔｅｘｔ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）」阻害剤を以前に説明した（例えば：ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２１９７２およびＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０１２６０１を参照）。伝統的なＴＧＦβ１拮抗薬とは異なり、これらのコンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤は、ＴＧＦβ１アイソフォームを選択的に標的化することが可能である。しかしながら、ＴＧＦβ１アイソフォームによって駆動される多面的な生物学的機能の範囲内で、コンテキスト非依存性阻害剤は、組織特異的（したがって、コンテキスト特異的）ｐｒｏＴＧＦβ１複合体を区別せず、したがって、そのような阻害剤は、結合することによって任意の提示分子－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体からの成熟増殖因子の放出および活性化を阻害することができる。

ＴＧＦβ活性のサブセットのみを標的化することにおいてさらにより大きな選択性を提供することは有利であり得るという認識に少なくとも一部基づき、本開示のコンテキスト選択的阻害剤が生産された。ＴＧＦβ機能を阻害する特定の生物学的コンテキストをさらに狭めることによって、さらに大きな安全性が疾患状態または患者集団のサブセットにおいて達成され得ると考えられる。特に、本発明の発明者らは、特定の状態において、免疫調節の全身的混乱が特に望ましくないであろうと認識している。ＴＧＦβは、免疫応答の仲介および免疫恒常性の維持において重要な役割を果たしているので、コンテキスト非依存性な様式でもたらされるＴＧＦβ活性の広範な阻害は、正当な利益なく不要な副作用をもたらし得る。このような状況においては、ＴＧＦβ１機能の免疫の構成要素を阻害しない本明細書中に含まれるもののようなコンテキスト選択的阻害剤を用いて、マトリックス関連ＴＧＦβ機能を特異的に標的化および阻害することが有利であると考えられる。

したがって、コンテキスト特異的抗体は、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３のコンテキストにおけるＴＧＦβ活性化が望ましくＧＡＲＰおよび／またはまたはＬＲＲＣ３３のコンテキストにおけるＴＧＦβ活性化が有害である適用において、ＬＴＢＰ１／３関連のＴＧＦβ活性を阻害するために用いることができる。

疾患は、ＥＣＭの構成要素または機能の調節不全または機能障害を伴ってよく、コラーゲン沈着の増大を含む。一部の実施態様では、ＥＣＭの構成要素または機能の調節不全または機能障害は、増大された剛性および／またはＥＣＭ再編成をさらに含んでよい。一部の実施態様では、ＥＣＭの構成要素または機能の調節不全または機能障害は、疾患部位における筋線維芽細胞の増大を含む。一部の実施態様では、ＥＣＭの調節不全は、マトリックスの剛性の増大を含み、それは、様々な線維性状態および腫瘍の病因および／または疾患進行に関与している。一部の実施態様では、ＥＣＭの調節不全は、フィブロネクチンおよび／またはフィブリリンが関与している。

ＧＡＲＰ関連ＴＧＦβを阻害しない、マトリックスを標的化したＴＧＦβ阻害剤の開発に関する理論的根拠
本発明は、ＬＴＢＰ１関連および／またはＬＴＢＰ３関連ＴＧＦβのコンテキスト特異的阻害剤を含む。かかる阻害剤はしたがって、ＥＣＭ関連の潜在型ＴＧＦβ複合体（例えば、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１）を特異的に標的化することが可能であり、それにより、疾患環境、例えば、線維化組織における潜在型複合体からの成熟ＴＧＦβ増殖因子の放出を阻害する。かかる阻害剤は、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対する有意な結合活性を示さず、それにより、不要な全身性免疫の調整を最小化させる。かかる抗体は、ＥＣＭの異常な再構築および／または剛性のようなＥＣＭ調節不全を伴う状態の治療での使用に有利であり得る。

本明細書において提供されるコンテキスト選択的抗体は、対象の免疫応答を刺激することが望ましくない状態の治療において、および／または、対象が線維症の多くのタイプのような慢性状態を管理するための長期のＴＧＦβ阻害療法によって利益を受けることが期待される状況において、用いられ得る。

制御性Ｔ細胞上に発現されたＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体を標的化しないＴＧＦβ阻害剤の潜在的利益を支持する少なくとも３つの根拠を以下に述べる。

第一に、ＧＡＲＰを発現している制御性Ｔ細胞は、他の細胞の免疫応答を抑制または弱める免疫系の構成要素である。この概念は、「寛容」と呼ばれ得る。これは、一部の状況においては敗血症、サイトカイン放出症候群およびサイトカイン・ストームのような生命を脅かす状態をもたらす可能性がある過剰な反応を防ぐために免疫系の中に構築された重要な「自己チェック」である。Ｔｒｅｇ－阻害効果を与えるＴＧＦβ阻害療法はしたがって、正常なＴｒｅｇ機能が損なわれる場合、特に長期の持続時間にわたる、例えば、６ヶ月以上の治療を含む治療的レジメン、および無期限の期間にわたって施される慢性治療では、特定のリスクとなり得る。この理由から、特に、自己免疫を誘発するリスクを避けるために、ＴＧＦβ阻害療法を必要とする患者は、正常なＴｒｅｇ機能を直接混乱させないＴＧＦβ１阻害剤の利益を受け得る。例えば、長期のＴＧＦβ阻害療法を必要とする患者集団は、ＤＭＤ、ＣＦおよびその他のような遺伝性または先天性状態を有する者を含んでよい。さらに、炎症を含む状態を患う患者集団は、既存の炎症状態を悪化させるリスクを最小限にするようにＧＡＲＰ／Ｔｒｅｇ機能を混乱させないコンテキスト特異的阻害剤によって利益を受け得る。

第二に、不釣り合いなＴｈ１７／Ｔｒｅｇ比と炎症および／または線維症を含む病理との間の関係を指摘する証拠が増えている。２つの細胞型、Ｔｈ１７およびＴｒｅｇの分化が、逆相関で負に調節されることが一般に認められている。ＴＧＦβ１は、このプロセスの主なゲートキーパーであると考えられ、したがって、ＴＧＦβ１曝露は、ナイーブＴ細胞がＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇへ分化するのを促進し、一方で、ＩＬ－６と組み合わせたＴＧＦβ１は、その代わりに、ナイーブＴ細胞がＲＯＲγｔ＋Ｔｈ１７細胞へ分化するのを促進する。さらに、一旦分化すると、これらの細胞集団は互いを負に調節する。

これらの証拠は、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比の不均衡が、慢性炎症を伴う線維性状態の病因および／または進行、またはその重症度と相関することを示唆している。

例えば、Ｓｈｏｕｋｒｙらは、Ｔｈ１７サイトカインが、ＴＧＦβシグナリングを調節することによって肝線維症を駆動する（ｄｒｉｖｅ）ことを報告した。著者らは、肝臓生検サンプル内のＴｈ１７およびＴｒｅｇ集団の頻度をエクスビボで試験し、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比の増大が、適度の（ｍｏｄｅｒａｔｅ）線維症または健康な組織サンプルと比較して、進行性線維症と相関することを見いだした。この観察と一致して、Ｔｈ１７サイトカイン、特にＩＬ－２２に対する強いバイアスが線維化肝臓にも検出された。これらのデータは、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比の増大が、線維症を進行させるＴｈ１７サイトカインの不均衡をもたらし、それは肝線維症の重症度と相関することを示唆する。

Ｔｈ１７およびＴｒｅｇ集団の同様の逆相関は、他の疾患において観察される。

例えば、ＩＬ－１７の筋肉発現の増大が、慢性炎症が現れる状態であるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）を有する患者において報告されている。ＤｅＰａｓｑｕａｌｅら（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ７８（１７）：１３０９－１４）は、ＤＭＤ筋肉生検サンプルが、コントロールと比べて、より高いレベルのＩＬ－１７（Ｔｈ１７マーカー）、および、より低いレベルのＦｏｘｐ３（Ｔｒｅｇマーカー）ｍＲＮＡを含むことを見いだした。他の炎症促進性サイトカイン、例えばＴＮＦ－αおよびＭＣＰ－１の上昇も観察され、患者の、より悪い臨床転帰と関連することが見いだされた。著者らは、データがＩＬ－１７のあり得る病原性役割を示していると結論付けた。

同様に、Ｊａｍｓｈｉｄｉａｎら（ＪＮｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ２０１３，２６２（１－２）：１０６－１２）は、再発した多発性硬化症を有する患者における、炎症性表現型へ向かう調節から離れたバイアスのかかったＴｒｅｇ／Ｔｈ１７バランスおよび臨床症候の重症度とのその相関を報告した。

制御性Ｔ細胞の役割は、嚢胞性線維症（ＣＦ）の病因にも関与している。特に、疾患によって影響を受けたＣＦ肺は、誇張されたＴｈ１７およびＴｈ２細胞応答と関連し、古典的な炎症性表現型を示すが、Ｔｒｅｇ細胞の数または機能における欠陥（すなわち、機能障害）も伴う（ＭｃＧｕｉｒｅ（２０１５）ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ１９１（８）：８６６－８）。

さらに、Ｚｈｕａｎｇら（ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｐｏｒｔｓ（２０１７）７：４０１４１）は、急性前部ブドウ膜炎（ヒトＩ型主要組織適合複合体の陽性を伴う前部区分の眼球内炎症）を有する患者におけるＴｈ１７／Ｔｒｅｇ細胞の不均衡を見いだし、Ｔｈ１７細胞の顕著な増大およびＴｒｅｇ細胞の顕著な低減の両方が見られた。

合わせると、本開示の発明者らは、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比の上昇と関連するこれらの様々な疾患において共通の特徴であると考えられるのは、患者が炎症性構成要素を伴う線維性状態を患うことであると認識した。

したがって、本開示において、ＴＧＦβ機能のＴｒｅｇ／ＧＡＲＰアームを残す（ｓｐａｒｅ）ＴＧＦβ阻害療法は、上昇したレベルのＴｈ１７／Ｔｒｅｇ比によって特徴付けられる疾患の効果的な治療に特に有利であり得ると考えられる。このようにして、本発明に係るＴＧＦβのコンテキスト選択的阻害剤は、患者における既存の線維症／炎症状態の悪化を導き得る、Ｔｒｅｇ機能を妨げ得るＴＧＦβ阻害のより全身性の効果を避けることを目的とする。したがって、本明細書中に記載のマトリックス標的化ＴＧＦβ阻害剤は、炎症を含む線維性障害を有するまたは発症するリスクがある患者を治療するための方法において用いられる。一部の実施態様では、患者は、高いＴｈ１７対Ｔｒｅｇ細胞比を有する。一部の実施態様では、高いＴｈ１７／Ｔｒｅｇ比は、Ｔｈ１７細胞の数の増大に主に起因し得て、一方で、他の実施態様では、高いＴｈ１７／Ｔｒｅｇ比は、患者（または患者から回収された生物学的サンプル）内のＴｒｅｇ細胞の数の低減に主に起因し得る。さらなる実施態様では、高いＴｈ１７／Ｔｒｅｇ比は、Ｔｈ１７細胞の数の増大およびＴｒｅｇ細胞の数の低減の組み合わせに起因し得る。一部の実施態様では、患者において検出される（または患者から回収されたサンプルにおいて測定される）高いレベルのＩＬ－１７および／またはＩＬ－２２も、慢性炎症を伴う線維性状態を示す。したがって、そのような患者は、本明細書において開示されるコンテキスト選択的ＴＧＦβ１阻害剤療法を受ける候補として選択され得る。

ＴＧＦβ阻害療法においてＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１軸をそのまま（ｉｎｔａｃｔ）に維持する第三の根拠は、正常なＴｒｅｇ機能を維持する利益に関する。説明したように、ＧＡＲＰは、Ｔｒｅｇの細胞表面上に発現され、ＴＧＦβによって仲介される免疫調節における役割を果たすと考えられる。Ｔｒｅｇは免疫恒常性および自己免疫の予防に不可欠であるので、その不必要な混乱は、特定の患者集団を、例えば、感染のより高いリスクに曝し得る（例えば、Ｒｉｃｈｅｒｔ－ＳｐｕｈｌｅｒａｎｄＬｕｎｄ（２０１５）ＰｒｏｇＭｏｌＢｉｏｌＴｒａｎｓｌＳｃｉ．１３６：２１７－２４３によって概説される）。

ＴＧＦβ阻害療法においてＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１軸をそのまま（ｉｎｔａｃｔ）に維持する第三の根拠は、制御性Ｔ細胞が、過剰反応性の免疫応答を調整または弱めるための「ブレーク（ｂｒｅａｋ）」として機能することである。Ｔｒｅｇ細胞の発生および機能の主要調節因子としてのＦｏｘｐ３の発見は、Ｔｒｅｇ細胞生物学の理解にとって重大であった。Ｆｏｘｐ３における不活化突然変異は、マウスにおけるカサカサした（ｓｃｕｒｆｙ）表現型およびヒトにおけるＩＰＥＸ症候群（「免疫調節不全、多腺性内分泌障害、腸疾患、Ｘ連鎖性」）を有する重大な自己免疫の自発的な（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ）発生をもたらす（Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ－ＶｉｌｌｅａｒａｎｄＨａｌｅｒ，ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１９，６６５－６７３，２０１８を参照）。したがって、ＴＧＦｂ機能のＴｒｅｇ／ＧＡＲＰアームの阻害効果を誘発するＴＧＦｂ１療法は、特に長期の治療において、自己免疫性の応答を引き起こし得て、または悪化させ得るという可能性が高まる。

Ｔｒｅｇは、過剰すぎるエフェクター免疫応答を弱める作用をするだけでなく、病原体クリアランスおよび付随的ダメージからの宿主の保護に関与することにより病原体に対する適切な免疫応答を増強する能力も有することを示唆する証拠が増えている。Ｔｒｅｇ細胞のそのような様々な機能は、様々な病原体および他の外来構成要素（例えば、ウイルス病原体、細菌病原体、真菌病原体、およびアレルゲン）が宿主細胞に接近し得る外的環境に常に曝される肺のような繊細な組織において特に明らかである。

例えば、インフルエンザウイルス感染は、多量の免疫細胞の浸潤によって強い炎症促進性のサイトカイン応答を誘発する。急性および／または重度の感染では、そのような応答は、感染しやすい個体において重大な後遺症を引き起こす可能性がある。Ｔｒｅｇは、宿主における免疫応答の大きさを制御することによって、ウイルス感染と関係がある病理を弱めるためのメカニズムを提供する。実際に、病原体に曝露されたＴｒｅｇは、養子移植において保護効果を維持する。さらに、感作された（ｐｒｉｍｅｄ）Ｔｒｅｇのそのような養子移植は、インフルエンザウイルスと関係がある病的状態を寛解させ、重度の免疫不全動物モデルにおいて生存を延長させることが示されている。

したがって、本発明は、対象におけるマトリックス関連ＴＧＦβ調節不全を伴う疾患の治療のための、ＥＣＭを標的とするコンテキスト選択的ＴＧＦβ阻害剤（例えば、ＴＧＦβ１活性化阻害剤のＬＴＢＰ１選択的またはＬＴＢＰ１／３選択的阻害剤）の使用を提供する。対象は、感染を患っているか、またはそのリスクがある。感染は、ウイルス感染（例えば、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスすなわちＲＳＶ、ヒト免疫不全ウイルスすなわちＨＩＶ、ＭＡＲＳ、ＳＡＲＳ、単純ヘルペスウイルスすなわちＨＳＶ、Ａ型肝炎ウイルスすなわちＨＡＶ、Ｂ型肝炎ウイルスすなわちＨＢＶ、Ｃ型肝炎ウイルスすなわちＨＣＶ、ＣＭＶ、デングウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、およびウエストナイルウイルス）、細菌感染（髄膜炎、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、およびＥ．ｃｏｌｉ）、および／または真菌感染（例えば、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、およびＣｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）であってよい。

典型的に、高リスクの集団またはリスクのある集団（重度の感染または感染によってトリガーされる応答を特に起こしやすいと考えられる個体）は、小児集団（幼児、幼い子ども、例えば、７才未満のヒト個体）；年配集団（６５歳以上の者）；医学的状態、健康状態、喫煙などの生活習慣、および／または免疫抑制効果を有する薬剤などに起因して易感染性の免疫系を有する者を含む。

例えば、化学療法、造血細胞を標的化する療法、例えばＣＤ３３療法、ステロイド、免疫抑制剤、およびスタチン系薬剤のような特定の薬剤は、免疫を弱める。

一部の実施態様では、高リスクの集団またはリスクのある集団は、既存の医学的状態を有する者、例えば、ＨＩＶのような慢性感染を有する者、骨髄移植を有する者、前糖尿病性の個体、糖尿病性の個体、ＲＡ、喘息およびアレルギーのような自己免疫障害を有する者である。

したがって、本明細書中に包含されるマトリックスを標的化するコンテキスト選択的ＴＧＦβ阻害剤は、長期または慢性のＴＧＦβ療法を必要とする患者を治療するのに特に有利であり得、それは、これらのシナリオにおいては、免疫恒常性および上記に例示したもののような様々な病原体に起因するあり得る感染に効果的に応答する能力を提供する正常な免疫機能の機能障害を避けるのに有益であるからである。

したがって、ＬＴＢＰ－ＴＧＦβ（例えば、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１）に選択的に結合し、免疫関連ＴＧＦβの提示因子（ｐｒｅｓｅｎｔｅｒ）であるＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３のコンテキストにおいてＴＧＦβを阻害しない抗体は、臓器線維症のような線維症の徴候の治療のための治療的候補であり、ＴＧＦβ関連の包括的な免疫活性化を避けることを目的とするものである。一実施態様では、コンテキスト特異的抗体は、ＴＧＦβによって仲介される免疫抑制が有益である適用において、例えば、移植を受けたことのある対象、移植を受ける候補である対象、または移植を受けることが期待される対象において、ＬＴＢＰ１／３関連ＴＧＦβ活性を阻害するために用いることができる。一部の実施態様では、対象は、進行性ステージの線維症および／または骨髄疾患を有する。一部の実施態様では、対象は、自己免疫障害を有するか、または、それを発症するリスクがある。

前述の方法は、ＬＴＢＰ関連ＴＧＦβ活性の阻害または減少が有益な状態を有する対象を治療するために用いることができる。例えば、対象は、細胞外マトリックス関連ＴＧＦβ活性が関連付けられている障害を有してよく、または、それを発症するリスクがある。

細胞外マトリックスにおける潜在型ＴＧＦβのインテグリンによって仲介される活性化は、線維症に対する主な原因である。理論によって拘束されることを望まずに、αＶβ６およびαＶβ８を含むインテグリンは、ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３を含む提示分子からのＴＧＦβの放出をトリガーし得ることが現在理解されている。このコンテキストにおけるＴＧＦβの放出または活性化の阻害は、線維症、および／またはそれと関係がある症候を減少または除去することができる。

説明したように、ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３は、産生されて、ＥＣＭの構成要素として細胞外に沈着され、そこにおいて、それらは、ＥＣＭ内にｐｒｏＴＧＦβ複合体（ＴＧＦβ１の潜在型の不活性前駆体）を「提示」することができる。刺激の際に、ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体は、ＴＧＦβ増殖因子（増殖因子の活性成熟型）を放出し、その結果、局所組織微小環境の調節、例えばＥＣＭ維持／再構築および線維症のプロセスに、場合により様々なサイトカイン、ケモカインおよび増殖因子に応答することにより、および、フィブロネクチン、フィブリリン、コラーゲン、エラスチン、およびマトリックスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ）のような他のＥＣＭ構成要素と相互作用することにより、関与すると考えらえる。

損傷に応答して生じる正常な創傷治癒プロセスにおいては、例えば、ＴＧＦβは、粒状組織形成、血管新生、およびコラーゲン合成および産生を促進すると考えられる。ＴＧＦβシグナリングは、異常な組織線維形成（すなわち、線維症）にも関与し、コラーゲンのような細胞外マトリックス（ＥＣＭ）構成要素の病理学的蓄積によって特徴付けられる、修復または反応プロセスにおける臓器または組織内の過剰な線維性結合組織の形成をもたらす。これらおよび他の状況では、ＴＧＦβ軸は、（線維化の態様に加えて）、様々な細胞型の炎症、動員および表現型スイッチのようなさらなる態様に影響し得て、それは、ＧＡＲＰ／ＬＲＲＣ３２およびＬＲＲＣ３３のような他の提示分子の１つまたは複数とのその相互作用によって仲介され得る。特定の例では、線維症を駆動するＥＣＭ関連ＴＧＦβが選択的に阻害されるべき状況において、ＴＧＦβ１活性化の他のコンテキストの１つまたは複数を著しく阻害せずに、ＴＧＦβ活性化のＬＴＢＰ１／３コンテキストを優先的に阻害することが有利である。

したがって、一実施態様では、本発明は、本明細書中に記載のＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分を対象へ投与することによって、線維性障害を有する、またはそれを発症するリスクがある対象におけるＴＧＦβ活性化を減少させる方法を提供する。別の実施態様では、本発明は、本明細書中に記載のＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合部分を対象へ投与することによる、線維性障害を治療する方法を提供する。

一実施態様では、線維性障害は臓器線維症であり、ここで臓器線維症は、進行性臓器線維症であってもよい。さらなる実施態様では、臓器線維症は、腎線維症、肝線維症、肺線維症、心臓線維症、膵臓線維症、皮膚線維症、強皮症、筋線維症、子宮線維症および子宮内膜症からなる群より選択される。別のさらなる実施態様では、慢性炎症を含む線維性障害は、筋ジストロフィー、多発性硬化症（ＭＳ）、または嚢胞性線維症（ＣＦ）である。さらなる実施態様では、筋ジストロフィーは、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である。別のさらなる実施態様では、ＭＳは血管周囲線維症を含む。さらなる実施態様では、肺線維症は特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。別のさらなる実施態様では、対象は慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する。別の実施態様では、対象は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有する。

例示的な実施態様では、線維性障害は、線維症、アルポート症候群、子宮筋腫、線維増生、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、またはデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である。

一実施態様では、対象は線維増生を有する。

一実施態様では、対象は、臓器線維症、例えば、腎線維症（例えば、慢性腎疾患（ＣＫＤ）と関連する線維症）、肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）と関連する線維症）、肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ））、心臓線維症、および／または皮膚線維症（例えば、強皮症）を有する。一部の実施態様では、対象は、進行性臓器線維症を有してよい。例えば、対象は臓器移植を必要としてよい。一実施態様では、対象は、臓器移植を必要としてよく、本明細書中に記載の化合物および組成物が、移植を受けた後に対象において同種移植片線維症が発症するのを防ぐために投与される。

最近の研究では、インテグリンαＶβ６の阻害によって、腎臓移植後の、ＴＧＦβによって仲介される同種移植片線維症を防ぐことができるかどうか試験された（Ｌｏｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．（２０１３）,１３：３０８５－３０９３）。驚くべきことに、阻害抗－αＶβ６抗体で処置された動物は、プラセボ動物と比較して、拒絶のない生存の有意な低減を経験した。著者らは、ＴＧＦβの免疫抑制特性は同種移植片拒絶を防ぐのを助けるので、この結果は腎臓移植におけるＴＧＦβ阻害に対して警告すると結論付けている。本明細書中に記載の阻害剤、例えば、抗体、およびその抗原結合部分は、細胞外マトリックス内のＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３によって提示されるＴＧＦβの活性化を有利に阻害するが、免疫細胞上のＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβの活性化を阻害しない。したがって、本明細書中に記載のコンテキスト特異的ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ阻害剤、例えば抗体は、同種移植片拒絶を防ぐのに有用であるＴＧＦβの免疫抑制特性を除去せずに、同種移植片線維症を防止または減少させることができる。したがって、一態様では、本発明は、治療的に有効量のＴＧＦβシグナリングの阻害剤を対象へ投与するステップを含む、対象における線維性障害を治療するための方法を提供し、ここで阻害剤は、ＥＣＭ関連ＴＧＦβの選択的阻害剤であり；ここで対象は、免疫の抑制によって利益を受ける。一実施態様では、対象は、線維性状態を有し、同種移植片移植によって利益を受け、または同種移植片移植を受けたことがある。

本開示の抗体および／または組成物が治療的に用いられ得るさらなる線維性状態は、限定されないが、肺の徴候（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）、アレルギー性喘息、嚢胞性線維症（ＣＦ）、急性肺損傷、好酸性食道炎、肺動脈高血圧症および化学的ガス損傷（ｃｈｅｍｉｃａｌｇａｓ－ｉｎｊｕｒｙ））、腎臓の徴候（例えば、糖尿病性糸球体硬化症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性腎疾患、腎臓移植および慢性拒絶と関連する線維症、ＩｇＡ腎障害、および溶血性尿毒症症候群）、肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性ウイルス肝炎、寄生虫血症、代謝の先天異常、毒素によって仲介される線維症、例えばアルコール線維症、非アルコール性脂肪性肝炎－肝細胞癌腫（ＮＡＳＨ－ＨＣＣ）、原発性胆汁性肝硬変、および硬化性胆管炎）、心血管系の線維症（例えば、心筋症、肥大性心筋症、アテローム性動脈硬化および再狭窄、）全身性硬化症、皮膚線維症（例えば、全身性硬化症、びまん性皮膚全身性硬化症、強皮症、病理学的皮膚瘢痕、ケロイド、手術後の瘢痕、瘢痕修復外科的処置、放射線によって誘導される瘢痕および慢性創傷における、皮膚線維症）、眼が関連する状態、例えば、網膜下線維症、ブドウ膜炎症候群、特発性後腹膜線維化症と関連するブドウ膜炎、外眼筋線維症、主要組織適合複合体（ＭＨＣクラスＩ）または組織適合性抗原と関連する眼の疾患、黄斑変性症（例えば、加齢黄斑変性症）における網膜下線維症、および、がんまたは二次的線維症（例えば、骨髄線維症、頭頚部がん、Ｍ７急性巨核芽球性白血病および粘膜炎）を含む。本開示の化合物および／または組成物を用いて治療され得る線維症と関係のある他の疾患、障害または状態は、限定されないが、マルファン症候群、硬い皮膚（ｓｔｉｆｆｓｋｉｎ）症候群、強皮症、関節リウマチ、骨髄線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、全身性紅斑性狼瘡、筋ジストロフィー、（例えばＤＭＤ）、デュピュイトラン拘縮、カムラチ・エンゲルマン症候群、神経瘢痕、認知症、増殖性硝子体網膜症、角膜損傷、緑内障のドレナージ外科的処置後の合併症、および多発性硬化症（ＭＳ）を含む。そのような線維性の徴候の多くは、影響を受けた組織（単数または複数）の炎症とも関連し、免疫構成要素の関与を示唆している。そのような炎症は、Ｔｈ１７細胞の数の増大、Ｔｒｅｇ細胞の数の減少、および／または両方のような、異常な免疫細胞集団を伴い得る。それぞれの場合において、影響を受けた患者は、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ細胞比の増大を示し得る。一部の実施態様では、本開示に係る抗体によって治療される疾患は、代謝肝臓障害のような代謝障害を含む。代謝障害の非限定的な例は、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤ、２型糖尿病および肥満を含む。一部の実施態様では、本開示に係る抗体によって治療される疾患は、大動脈狭窄である。

別の態様では、本発明は、対象における線維性障害の治療のためのアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤を選択する方法を提供し、（ａ）対象が、線維症および以下の１つまたは複数：（ｉ）炎症；（ｉｉ）免疫抑制；（ｉｉｉ）増殖性調節不全；（ｉｖ）同種移植片移植の必要性；（ｖ）重度の感染のリスク；（ｖｉ）長期のＴＧＦβ１阻害療法の必要；および（ｖｉｉ）自己免疫性の状態（単数または複数）の兆候を含む臨床症状を現わすかどうかを判定するステップ；および（ｂ）ステップ（ａ）で判定された臨床症状に基づいて線維性障害の治療のためのアイソフォーム特異的、コンテキスト依存性ＴＧＦβ１阻害剤またはアイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を選択するステップを含む。

別の態様では、本発明は、線維性障害を有する対象を治療する方法を提供し、（ａ）対象のためのアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤を含む治療レジメンを選択するステップ（前記選択は、（ｉ）線維性障害が、線維症および以下の１つまたは複数：炎症、免疫抑制、増殖性調節不全、および同種移植片移植の必要性を含む臨床症状を現わすかどうか判定するステップを含む）；および（ｉｉ）ステップ（ｉ）で判定された臨床症状に基づいてアイソフォーム特異的、コンテキスト依存性ＴＧＦβ１阻害剤またはアイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を含む治療レジメンを選択するステップ；および（ｂ）選択された治療レジメンを対象に施すステップを含む。

前述の態様の一実施態様では、線維性障害は、線維症、炎症、免疫抑制、および増殖性調節不全を含む臨床症状を現わす。例示的な一実施態様では、線維性障害は骨髄線維症であり、選択されるアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤は、アイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤である。

別の実施態様では、線維性障害は、線維症、炎症、および同種移植片移植の必要を含む臨床症状を現わす。一実施態様では、線維性障害は、線維症および炎症を含む臨床症状を現わす。別の実施態様では、線維性障害は変性疾患である。

一実施態様では、線維性障害は、免疫抑制および増殖性調節不全を含む臨床症状を現わす。例示的な一実施態様では、線維性障害は固形腫瘍と関連し、選択されるアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤は、アイソフォーム特異的ＬＴＢＰ１／３特異的阻害剤および／またはＧＡＲＰ選択的阻害剤である。一実施態様では、固形腫瘍は悪性腫瘍である。別の実施態様では、腫瘍は良性腫瘍である。一実施態様では、対象は、線維増生、例えば、膵臓の線維増生を有する。別の実施態様では、対象は子宮筋腫を有する。

別の態様では、本発明は、アイソフォーム特異的、ＬＴＢＰ１／３特異的ＴＧＦβ１阻害剤を用いて、線維性障害を有する対象を治療する方法を提供し、線維性障害が線維症および同種移植片移植の必要を含む臨床症状を現わすかどうか判定するステップ；および、線維性障害が線維症および同種移植片移植の必要を現わすならば、有効量のアイソフォーム特異的、ＬＴＢＰ１／３特異的ＴＧＦβ１阻害剤を対象へ投与するステップを含む。

別の態様では、本発明は、アイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を用いて、線維性障害を有する対象を治療する方法を提供し、線維性障害が線維症、免疫抑制および／または増殖性調節不全を含む臨床症状を現わすかどうか判定するステップ；および、線維性障害が免疫抑制および／または増殖性調節不全とともに線維症を現わすならば、有効量のアイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を対象へ投与するステップを含む。

本明細書中に記載の阻害剤、例えば、抗体は、線維症の症候を治療または減少させるのに効果的な量で対象へ投与することができる。かかる阻害剤の有効量は、対象における治療的有効性および臨床安全性の両方を達成するのに効果的な量である。一実施態様では、有効量は、細胞外マトリックスにおけるＴＧＦβ１活性を減少させるのに効果的な量である。別の実施態様では、有効量は、対象における線維症を減少させるのに効果的な量である。別の実施態様では、有効量は、ＴＧＦβ１によって仲介される免疫抑制を阻害しない。一部の実施態様では、かかる阻害剤、例えば、抗体は、ＬＴＢＰを含んでいる、ＥＣＭ関連ＴＧＦβ１によって仲介されるＴＧＦβ１の活性化をブロックすることのできる、コンテキスト特異的阻害剤である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰはＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３である。線維症の変更に関して、本開示の阻害剤、例えば、抗体、および／または組成物の有効性を決定するのに有用なアッセイは、限定されないが、線維芽細胞をカウントするための組織学的アッセイおよび当技術分野で知られている基礎的な免疫組織化学分析を含む。

プロテアーゼが関与する疾患：
ＴＧＦβの、その潜在型複合体からの活性化は、力依存性の様式でインテグリンによって、および／または、プロテアーゼによってトリガーされ得る。証拠は、限定されないが、Ｓｅｒ／Ｔｈｒプロテアーゼ、例えば、トロンビン、カリクレイン、ケモトリプシン、エラスターゼ、プラスミン、ならびに、ＡＤＡＭ１０およびＡＤＡＭ１７のようなＡＤＡＭファミリーの亜鉛メタロプロテアーゼ、ならびに、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９およびＭＭＰ－１３のようなＭＭＰファミリーを含む特定のクラスのプロテアーゼが、プロセスに関与し得ることを示唆している。ＭＭＰ－２は、基底膜の最も大量の構成要素であるコラーゲンＩＶを分解し、ＥＣＭ関連のＴＧＦβ１調節において役割を果たし得るという可能性を高める。ＭＭＰ－９は、腫瘍進行、血管新生、間質再構築および転移において中心的な役割を果たすと考えられている。したがって、ＥＣＭにおけるＴＧＦβ１のプロテアーゼ依存性の活性化は、がん治療に重要であり得る。

カリクレイン（ＫＬＫ）は、トリプシン－またはキモトリプシン－様のセリンプロテアーゼであり、血漿カリクレインおよび組織カリクレインを含む。ＥＣＭは、組織恒常性における役割を果たし、構造的およびシグナリングの足場および悪性増殖物を抑制するためのバリアとして作用している。ＫＬＫは、ＥＣＭタンパク質および腫瘍の拡大および浸潤を促進し得る他の構成要素を分解する役割を果たし得る。例えば、ＫＬＫ１は、特定の乳がんにおいて非常に上方調節され、ｐｒｏ－ＭＭＰ－２およびｐｒｏ－ＭＭＰ－９を活性化することができる。ＫＬＫ２は、潜在型ＴＧＦβ１を活性化し、線維芽細胞に隣接する前立腺がんを、がん増殖に対して許容性（ｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ）にさせる。ＫＬＫ３は、前立腺がんに関する診断マーカーとして広く研究されている（ＰＳＡ）。ＫＬＫ３は、プラスミノゲンをプラスミンにプロセッシングすることによってＴＧＦβ１を直接的に活性化し得て、ＬＡＰをタンパク質分解切断する。ＫＬＫ６は、アルツハイマー病に関する潜在的マーカーであり得る。

ＴＧＦβ１の公知のアクチベーター、例えば、プラスミン、ＴＳＰ－１およびαＶβ６インテグリンは、全て、ＬＡＰと直接的に相互作用する。ＬＡＰのタンパク質分解切断は、ＬＡＰ－ＴＧＦβ相互作用を不安定化させ得て、それにより活性のＴＧＦβ１を放出すると仮定される。５４－ＬＳＫＬＲＬ－５９を含む領域は、ＴＧＦβ１潜在型（ｌａｔｅｎｃｙ）を維持するのに重要であることが示唆されている。したがって、相互作用を安定化させる、またはＬＡＰのタンパク質分解切断をブロックする薬剤（例えば、抗体）は、ＴＧＦβ活性化を防止し得る。

病状（例えば、がん）と関連するこれらのプロテアーゼの多くは、別個の作用機序を通して機能する。したがって、特定のプロテアーゼ、またはプロテアーゼの組み合わせの標的化された阻害は、プロテアーゼ－ＴＧＦβ軸が関与している状態の治療に関して治療的利益を提供し得る。したがって、プロテアーゼによって誘導されるＴＧＦβ１の活性化を選択的に阻害する阻害剤（例えば、ＴＧＦβ１抗体）は、そのような疾患（例えば、がん）の治療において有利であり得ると考えられる。同様に、他方のプロテアーゼを上回る一方のプロテアーゼによるＴＧＦβ１活性化の選択的な阻害もまた、治療される状態に応じて、好ましくあり得る。

プラスミンは、プラスミノゲンと呼ばれる前駆体形態として産生されるセリンプロテアーゼである。放出されるとプラスミンは循環に入り、したがって血清内に検出される。プラスミンのレベルの上昇は、場合により、腫瘍細胞の運動性、浸潤、および転移を促進する細胞外マトリックス（例えば、基底膜および間質バリア）の破壊を伴うメカニズムを通して、がん進行と相関すると考えられる。プラスミンは、接着、増殖、アポトーシス、がんの栄養摂取、酸素供給、血管形成、およびＶＥＧＦの活性化にも影響し得る（Ｄｉｄｉａｓｏｖａｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ，２０１４，１５，２１２２９－２１２５２）。さらに、プラスミンは、腫瘍微小環境へのマクロファージの遊走を促進し得る（Ｐｈｉｌｉｐｓｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２０１１Ｎｏｖ１；７１（２１）：６６７６－８３、および、Ｃｈｏｏｎｇｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｏｒｔｈｏｐ．Ｒｅｌａｔ．Ｒｅｓ．２００３，４１５Ｓ、Ｓ４６－Ｓ５８）。実際に、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は、腫瘍の増殖、浸潤、転移、および血管新生を促進するその能力を通した腫瘍形成の非常に特徴付けられたドライバー（ｄｒｉｖｅｒ）である。

プラスミン活性は、主に、ＥＣＭの破壊に関連付けられている（ｔｉｅｄｔｏ）。しかしながら、プラスミンは下流のＭＭＰおよびＴＧＦβ活性化も調節するという証拠が増えている。特に、プラスミンは、潜在型関連ペプチド（ＬＡＰ）のタンパク質分解切断を通したＴＧＦβの活性化を生じさせることが示唆されており、それは、ＴＧＦβ遺伝子産物のＮ末端領域に由来し（Ｈｏｒｉｇｕｃｈｉｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｃｈｅｍ．２０１２Ｏｃｔ；１５２（４）：３２１－９）、活性の増殖因子の放出をもたらす。ＴＧＦβ１は、がん進行を促進させ得るので、このことは、プラスミンによって誘導されるＴＧＦｂの活性化が少なくとも部分的にこのプロセスを仲介し得るという可能性が高まる。

ＴＧＦβ１は、ｕＰＡの発現を調節することも示されており、それは、プラスミノゲンをプラスミンに変換する重大な因子である（Ｓａｎｔｉｂａｎｅｚ，ＪｕａｎＦ．，ＩＳＲＮＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２０１３：５９７９２７）。ｕＰＡは、その細胞表面受容体（ｕＰＡＲ）に結合することにより、および、プラスミノゲンがプラスミンに変換するのを促進することにより、がんの進行（例えば、接着、増殖、および遊走）を促進することが、独立して示されている。さらに、研究によって、ｕＰＡおよび／またはプラスミノゲン・アクチベーター阻害剤－１（ＰＡＩ－１）の発現が、結腸直腸がん（Ｄ．Ｑ．Ｓｅｅｔｏｏ，ｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｕｒｇｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．８２，ｎｏ．３，ｐｐ．１８４－１９３，２００３）、乳がん（Ｎ．Ｈａｒｂｅｃｋｅｔａｌ．，ＣｌｉｎｉｃａｌＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ，ｖｏｌ．５，ｎｏ．５，ｐｐ．３４８－３５２，２００４）、および皮膚がん（Ｓａｎｔｉｂａｎｅｚ，ＪｕａｎＦ．，ＩＳＲＮＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２０１３：５９７９２７）における予後不良の予測因子であることが示されている。したがって、特定の理論によって拘束されることを望まずに、プラスミン、ＴＧＦβ１、およびｕＰＡの間の相互作用は、がん進行の促進に向けて正のフィードバック・ループを形成し得る。したがって、プラスミン依存性ＴＧＦβ１活性化を選択的に阻害する阻害剤は、プラスミン／ＴＧＦβ１シグナリング軸に依存したがんの治療に特に適切であり得る。

本発明の一態様では、本明細書中に記載のＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的阻害剤は、ＴＧＦβ１のプロテアーゼ依存性活性化を阻害することのできる阻害剤を含む。一部の実施態様では、阻害剤は、インテグリン非依存性の様式でプロテアーゼ依存性ＴＧＦβ１活性化を阻害することができる。一部の実施態様では、そのような阻害剤は、活性化のモードを問わずにＴＧＦβ１活性化を阻害することができ、例えば、ＴＧＦβ１のインテグリン依存性活性化およびプロテアーゼ依存性活性化の両方を阻害することができる。一部の実施態様では、プロテアーゼは、セリンプロテアーゼ、例えば、カリクレイン、ケモトリプシン、トリプシン、エラスターゼ、プラスミン、ならびに、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９およびＭＭＰ－１３のような亜鉛メタロプロテアーゼ（ＭＭＰファミリー）からなる群より選択される。

一部の実施態様では、阻害剤は、プラスミンによって誘導されるＴＧＦβ１の活性化を阻害することができる。一部の実施態様では、阻害剤は、プラスミン－およびインテグリン－誘導性のＴＧＦβ１活性化を阻害することができる。一部の実施態様では、阻害剤は、ＴＧＦβ１に特異的に結合するモノクローナル抗体である。一部の実施態様では、抗体は、ｐｒｏＴＧＦβ１に特異的に結合するモノクローナル抗体である。一部の実施態様では、抗体は、潜在型ｐｒｏＴＧＦβ１に結合して、それにより、潜在型複合体からの成熟増殖因子の放出を阻害する。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１活性化の、高親和性、ＬＴＢＰ複合体特異的阻害剤は、ＴＧＦβ１のプラスミン依存性活性化を阻害する方法での使用に適切である。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１活性化の、ＬＴＢＰ複合体特異的阻害剤は、Ａｂ３１、Ａｂ３４、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ６２、Ａｂ６３、およびＡｂ６４（Ａｂ４２またはＡｂ６３であってもよい）（すなわち、本明細書において提供される、対応するＡｂの重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体または抗原結合フラグメント）、その変異体／誘導体またはその抗原結合フラグメント、または、その抗原結合フラグメントを含む改変された分子から選択される。一部の好ましい実施態様では、ＴＧＦβ１活性化の、ＬＴＢＰ複合体特異的阻害剤は、Ａｂ４２、その変異体／誘導体または抗原結合フラグメント、またはその抗原結合フラグメントを含む改変された分子である。好ましい実施態様では、ＴＧＦβ１活性化の、ＬＴＢＰ複合体特異的阻害剤は、Ａｂ４２またはその抗原結合フラグメントである。

一部の実施態様では、阻害剤（例えば、ＴＧＦβ１抗体）は、がん細胞の遊走を阻害する。一部の実施態様では、阻害剤は、マクロファージの遊走を阻害する。一部の実施態様では、阻害剤は、ＴＡＭの蓄積を阻害する。

別の態様では、それを必要とする対象における、がん治療のための方法が本明細書において提供され、その方法は、有効量のＴＧＦβ１阻害剤（例えば、ＴＧＦβ１抗体）を対象へ投与するステップを含み、ここで、阻害剤は、プロテアーゼによって誘導されるＴＧＦβ１活性化を阻害し（例えば、プラスミン）、それにより、対象におけるがんを治療する。

別の態様では、それを必要とする対象における、腫瘍増殖を減少させる方法が本明細書において提供され、その方法は、有効量のＴＧＦβ１阻害剤（例えば、ＴＧＦβ１抗体）を対象へ投与するステップを含み、ここで、阻害剤は、プロテアーゼによって誘導されるＴＧＦβ１の活性化を阻害し（例えば、プラスミン）、それにより、対象における腫瘍増殖を減少させる。

ＥＣＭ調節不全を伴う疾患
細胞外マトリックスは、細胞を取り囲む細胞分泌ネットワークであり、主にプロテオグリカンおよび繊維状タンパク質からなり、その最も多くがコラーゲンである。本明細書において開示される新規の抗体は、細胞外マトリックス調節不全と関連する疾患の治療において用いられ得る。細胞外マトリックス調節不全と関連する疾患は、典型的に筋線維芽細胞によって駆動される病理であり、がん、線維症、および心血管系の疾患を含む（例えば、ＬａｍｐｉａｎｄＲｅｉｎｈａｒｔ－Ｋｉｎｇ（２０１８）「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘｓｔｉｆｆｎｅｓｓｔｏａｔｔｅｎｕａｔｅｄｉｓｅａｓｅ：Ｆｒｏｍｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｔｏｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ」ＳｃｉＴａｒｎｓｌＭｅｄ１０（４２２）：ｅａａｏ０４７５に概説される）。線維性状態の進行は、ＥＣＭ内に沈着するマトリックス構成要素のレベルの増大および／またはＥＣＭの維持／再構築を伴う。ＴＧＦβ１は、少なくとも部分的にこのプロセスに寄与する。このことは、例えば、コラーゲンのようなＥＣＭ構成要素の沈着の増大が、ＥＣＭの機械的物性（例えば、マトリックス／基材の剛性）を変更させ得るという観察によって支持され、この現象はＴＧＦβ１シグナリングと関連する。本明細書中に記載のもののようなＴＧＦβ１の阻害剤は、ＥＣＭの変更を伴う疾患の進行、例えば線維症に対抗するために、このプロセスをブロックするために用いられ得る。そのような阻害剤のＬＴＢＰアームは、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３によって提示されるＥＣＭ関連ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ複合体を直接的にブロックすることができ、それにより、疾患ニッチにおける複合体からの増殖因子の活性化／放出を防止する。一部の実施態様では、本明細書中に記載のもののようなアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤は、ＥＣＭ剛性を正常化させて、インテグリン依存性シグナリングが関与する疾患を治療し得る。一部の実施態様では、インテグリンは、α１１鎖、β１鎖、または両方を含む。

したがって、抗体は、細胞外マトリックス調節不全を伴う疾患と診断される対象へ、疾患を治療するのに効果的な量で投与され得る。抗体の治療的に有効量は、筋線維芽細胞の１つまたは複数のマーカー、例えばα－ＳＭＡの発現を減少させるのに十分な量であってよい。その量は、影響を受けた組織（例えば、線維化組織）の細胞外マトリックスの剛性を減少させるのに十分な量であってよい。その量は、ＴＧＦβ１下流エフェクター、例えば、ＳＭＡＤ２および／またはＳＭＡＤ３のリン酸化を減少させるのに十分な量であってよい。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１のアイソフォーム選択的活性化阻害剤は、Ａｂ３１、Ａｂ３４、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ６２、Ａｂ６３、およびＡｂ６４（Ａｂ４２またはＡｂ６３であってもよい）、その変異体／誘導体またはその抗原結合フラグメント、または、その抗原結合フラグメントを含む改変された分子から選択される。一部の好ましい実施態様では、ＴＧＦβ１のアイソフォーム選択的活性化阻害剤は、Ａｂ４２、その変異体／誘導体または抗原結合フラグメント、または、その抗原結合フラグメントを含む改変された分子である。好ましい実施態様では、ＴＧＦβ１選択的阻害剤は、Ａｂ４２またはその抗原結合フラグメントである。

上皮間葉転換（ＥＭＴ）を伴う疾患：
ＥＭＴ（上皮間葉転換）は、固い結合を有する上皮細胞を、間葉の特性（表現型）に変える、例えば細胞間の接触を緩めるプロセスである。そのプロセスは、複数の正常な生物学的プロセス、ならびに、胚形成、創傷治癒、がん転移および線維症を含む病理学的状況において観察される（例えば、Ｓｈｉｇａｅｔａｌ．（２０１５）「Ｃａｎｃｅｒ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ：ＴｈｅｉｒＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄＴｈｅｉｒＲｏｌｅｓｉｎＴｕｍｏｒＧｒｏｗｔｈ．」Ｃａｎｃｅｒｓ，７：２４４３－２４５８に概説される）。一般に、ＥＭＴシグナルは主にＴＧＦβによって誘導されると考えられる。多くのタイプのがんは、例えば、間葉表現型へ向かう細胞の分化転換を伴うと考えられ（例えばＣＡＦ）、それは、より不良な予後と相関する。したがって、本明細書中に記載のもののようなＴＧＦβ１のＬＴＢＰ特異的阻害剤は、ＥＭＴによって開始または駆動される疾患を治療するために用いられ得る。実際に、本明細書において例示されるデータは（例えば、図１２および１３）、そのような阻害剤が、α－ＳＭＡ、Ｃｏｌ１（Ｉ型コラーゲン）、およびＦＮ（フィブロネクチン）のようなＣＡＦマーカーのインビボでの発現を抑制する能力を有することを示す。

マトリックスの硬化および再構築を伴う疾患
線維性状態の進行は、ＥＣＭ内に沈着するマトリックス構成要素のレベルの増大および／またはＥＣＭの維持／再構築を伴う。ＴＧＦβ１は、少なくとも部分的にこのプロセスに寄与する。このことは、例えば、コラーゲンのようなＥＣＭ構成要素の沈着の増大が、ＥＣＭの機械的物性（例えば、マトリックス／基材の剛性）を変更させ得るという観察によって支持され、この現象はＴＧＦβ１シグナリングと関連する。この概念を確認するために、本発明者らは、ｐｒｏＴＧＦβおよびＬＴＢＰ１でトランスフェクトされて所定の剛性（例えば、５ｋＰａ、１５ｋＰａまたは１００ｋＰａ）を有するシリコン系の基材上で増殖された一次線維芽細胞における、ＴＧＦβのインテグリン依存性活性化に影響を与えるマトリックス剛性の役割を評価した。より高い剛性を有するマトリックスはＴＧＦβ１活性化を高め、これは、結合してそれによりＬＴＢＰ１／３と関連するＴＧＦβ１活性化を阻害することが可能な抗体、およびその抗原結合部分によって抑制され得る。これらの観察は、ＴＧＦβ１が、ＥＣＭ特性（例えば剛性）に影響を及ぼし、その結果、疾患進行を反映するＴＧＦβ１活性化をさらに誘導し得ることを示唆する。したがって、本明細書中に記載のもののようなＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１の複合体に選択的に結合する抗体、およびその抗原結合部分は、ＥＣＭの変更を伴う疾患進行、例えば、線維症、腫瘍増殖、浸潤、転移および線維増生に対抗するために、このプロセスをブロックするために用いられ得る。そのような阻害剤は、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３によって提示されるＥＣＭ関連ｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ複合体を直接的にブロックし、それにより、疾患ニッチにおける複合体からの増殖因子の活性化／放出を防止することができる。

線維症：
物理的損傷（ｄａｍａｇｅ）／外傷（ｔｒａｕｍａ）、毒性物質、および／または感染に起因する組織損傷（ｉｎｊｕｒｙ）または慢性の損傷（ｉｎｓｕｌｔ）に応答して、線維芽細胞、いくつかの異なるタイプの免疫細胞、および常在性の上皮および内皮細胞を含むいくつかの細胞型を含む自然な修復プロセスが始まる。しかしながら、チェックされないままの場合、このプロセスは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の過剰な蓄積および線維症をもたらし得て、その結果、組織機能の進行性の喪失および臓器不全をもたらし得る（Ｃａｊａｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１８，１９，１２９４）。

線維症は、肺、腎臓、肝臓、心臓、および皮膚を含むいくつかの異なる臓器において生じ得る。臓器と関係なく、線維化応答は、炎症、上皮間葉相互作用の変更、および線維芽細胞の増殖によって特徴付けられる。線維症の特徴（ｈａｌｌｍａｒｋｓ）の１つは、線維芽細胞の筋線維芽細胞への分化であり、ＥＣＭの調節不全に大いに寄与する。しかしながら、筋線維芽細胞は、他の細胞（例えば、内皮細胞、上皮細胞、および間葉系幹細胞に由来することも提案されている（Ｋｉｍ，Ｋ．Ｋ．ｅｔａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２０１７；Ｏｋａｂｅ，Ｈ．Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐｈａｔｈｏｌ．，２０１６，３１、１４１－１４８；およびＬｉ，Ｃｅｔａｌ，ＮａｔＣｏｍｍｕｎ．，２０１６，７，１１４５５）。さらに、免疫細胞は、筋線維芽細胞の分化を促進し、ＥＣＭ沈着を刺激し、さらなる免疫細胞を損傷組織へ動員するサイトカインおよびケモカインを分泌することにより、プロセスにおいて重要な役割を果たす（Ｃａｊａｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１８，１９，１２９４）。

線維化組織と同様に、がん関連の線維芽細胞の活性化は、腫瘍環境（ｍｉｌｉｅｕ）において生じ得て、過剰量のＥＣＭを産生する。ＥＣＭは、他の細胞（例えば、腫瘍促進性（ｐｒｏ－ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ）免疫細胞）の浸潤のための足場および細胞遊走のための基材を提供する。別の例では、過剰なＥＣＭは、抗－腫瘍化免疫細胞に対するバリアとして作用し得る。

ＴＧＦβは、線維化応答の中心的な編成因子（ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｏｒ）として認識されている。ＴＧＦβは、筋線維芽細胞分化を促進し、免疫細胞を動員し、上皮および内皮細胞分化に影響を及ぼすことができる。特に、ＴＧＦβは、ＥＣＭ、および、フィブロネクチン、コラーゲン、ラミニン、オステオポンチン、テネイシン、エラスチン、デコリンのような基底膜タンパク質の産生を上方調節する。ＴＧＦβによって誘導される筋線維芽細胞分化は、ＥＣＭタンパク質のさらなる沈着、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の分泌、および筋線維芽細胞増殖をもたらし得る（Ｆａｂｒｅｇａｔｅｔａｌ，ＦＥＢＳＪ．２０１６，２８３，２２１９－２２３２；Ｍｅｎｇｅｔａｌ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．２０１６，１２，３２５－３３８；およびＫｕｌｋａｒｎｉｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．ＣｅｌｌＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２０１６，５４，７５１－７６０）。さらに、ＴＧＦβは、血管平滑筋細胞（ＶＳＣＭ）内の収縮性タンパク質およびコラーゲンＩに影響を及ぼす表現型変化を仲介し、筋線維芽細胞および他の間質細胞を活性化してコラーゲン架橋タンパク質、例えば、マトリックス再構築酵素のリシルオキシダーゼ（ＬＯＸ）ファミリーの合成を高めることができる（Ｂｕｓｎａｄｉｅｇｏｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２０１３，３３，２３８８－２４０１）。さらに、ＴＧＦβは、ＥＭＴおよびＥｎｄＭＴの両方を調節することが示されており、それは、筋線維芽細胞およびＣＡＦのような線維症を進行させる細胞型の分化に寄与する。さらに、ＴＧＦβは、上皮アポトーシスを誘導することが示されており、それは、他の組織の中でも肺および肝臓の線維症を促進し得る（Ｂａｒｂａｓ－Ｆｉｌｈｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．２００１，５４，１３２－１３８；およびＷａｎｇｅｔａｌ．，Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２０１７，２４７，４９２－５０８）。

先天性または動員であれ、マクロファージは、組織損傷および修復に対する応答において重要な役割を果たすと考えられる。しかしながら、特定のシグナルの際に、それらは線維症を進行させるようになり得る。他のサイトカインの中でもＴＧＦβは、炎症促進性であるＭ２マクロファージを活性化することも示されている。活性化されると、これらのマクロファージは、それら自身のサイトカインを分泌し、ＴＧＦβ、ＥＣＭ構成要素、血管新生因子、および遊走因子を含む。Ｍ２マクロファージは、ＴＧＦβ駆動の肺線維症に必須であることが示されている（Ｍｕｒｒａｙｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．２０１１，４３，１５４－１６２）。

多くのタイプの線維症における疾患（ｄｉｓｅｓａｓｅ）進行に関するＭ２型マクロファージの重要性を示す証拠が増えていることを踏まえると、ＬＴＢＰ１／３関連ＴＧＦβ１単独のコンテキスト選択的阻害（すなわち、ＴＧＦβ１活性のマクロファージ関連の、ＬＲＲＣ３３アームを扱わない）が、強力な抗線維化効果をインビボで生じるのに十分であるかどうかという疑問が残った。しかしながら、驚くべきことに、本明細書において提供されるデータは、マトリックス関連ＴＧＦβ１（例えば、ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１）の選択的標的化は、複数の前臨床モデルにおいて抗線維化効果を達成するのに、ＴＧＦβ１のいわゆるコンテキスト非依存性阻害剤の使用による、全ての４つの公知のＬＬＣ（例えば、ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１）の標的化と、（より良いわけでないにしても）まさに同じく効果的であると考えられること（例えば、図１９および２０を参照）、および、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１阻害を介して仲介されるＴ細胞刺激をトリガーしないことを、示唆している。さらに、以前に開示されたＬＴＢＰ１／３複合体選択的抗体は、前臨床（例えば、齧歯類）および臨床（例えば、ヒト）の使用の両方に有利である強い種交差反応性がなかった。アイソフォーム選択性およびコンテキスト選択性の両方を与えると考えられる稀なエピトープが、好適な種交差反応性プロファイルも可能にするかどうかは明らかでなかった。有利に、本明細書において開示される新規の抗体は、これらの基準の全てを保有する。

本発明によれば、本明細書中に記載のもののようなアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１は、対象における線維症（例えば、線維性の徴候、線維性状態）の治療において用いられる。本発明を行なうのに適切な阻害剤は、線維症を変更または寛解させるのに有用であり得る本開示に係る抗体および／または組成物を含む。より具体的には、そのような抗体および／または組成物は、様々なタイプの提示分子によって提示されるＴＧＦβ１を標的化することが可能なＴＧＦβ１の選択的拮抗薬である。ＴＧＦβ１は、線維化応答の中心的な編成因子として認識されている。ＴＧＦβを標的化する抗体は、非常に多くの前臨床モデルにおいて線維症を低減させる。そのような抗体および／または抗体に基づく化合物は、ＬＹ２３８２７７０（ＥｌｉＬｉｌｌｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を含む。米国特許番号ＵＳ６，４９２，４９７、ＵＳ７，１５１，１６９、ＵＳ７，７２３，４８６および米国出願公開番号２０１１／０００８３６４に記載されるものも含まれ、それぞれの内容はそれらの全体で参照により本明細書中に援用される。従来技術のＴＧＦβ拮抗薬は、例えば、ＴＧＦβのインテグリン依存性活性化を標的化およびブロックする薬剤を含む。

しかしながら、証拠は、そのような従来技術の薬剤は、アイソフォーム特異的阻害を仲介せず、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３の正常な機能を意図せずブロックすることによる不要な効果を引き起こし得ることを示唆している。実際に、本明細書において提供されるデータは、この概念を支持している。正常な（非疾患）肺組織は、相対的に低いが測定可能なレベルのＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３を含むが、ＴＧＦβ１はとりわけ少ない。比較して、線維症のような特定の疾患状態では、ＴＧＦβ１は、他のアイソフォームと比較して優先的に上方調節されるようになる。好ましくは、そのような状態の治療での使用のためのＴＧＦβ拮抗薬は、組織における持続性（ｔｏｎｉｃ）シグナリングを仲介するために通常発現される他のアイソフォームの機能を保持しながら、疾患誘導性または疾患関連アイソフォームに対してのみそれらの阻害活性を発揮する。従来技術の阻害剤（ＬＹ２１０９７６１、小分子ＴＧＦβ受容体拮抗薬、およびαＶβ６インテグリンを標的化するモノクローナル抗体）は両方とも、非疾患ラットＢＡＬにおいて持続性（ｔｏｎｉｃ）シグナリングの下流でＴＧＦβを阻害することが示されており、これらの阻害剤が不要な副作用を生じさせ得る可能性が高まる。これに代え又はこれに加えて、ＴＧＦβのインテグリン依存性活性化を標的化およびブロックする薬剤は、様々な細胞型によって発現され病因における役割を果たす非常に多くのインテグリンタイプの中でも、疾患関連ＴＧＦβ１活性化の原因となるインテグリンのサブセットのみをブロックすることが可能であり得る。さらに、そのような拮抗薬がインテグリンによって仲介されるＴＧＦβ１アイソフォームの活性化を選択的にブロックし得る場合でさえ、プロテアーゼ依存性活性化のような他のモードによってトリガーされるＴＧＦβ１活性化のブロックにおいては非効果的であり得る。したがって、本明細書中に記載のもののようなＴＧＦβ１アイソフォーム特異的阻害剤は、アイソフォーム選択性を維持しながら、活性化の特定のモードにかかわらずＴＧＦβ１の活性化ステップを防止することを目的とする。

さらに、細胞関連抗原複合体よりもマトリックス関連を優先的に阻害する（すなわち、コンテキスト－バイアスを示す）アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤は、特定の臨床状況において治療的利点を提供し得ると考えられる（例えば、本明細書中に記載のＬＴＢＰ特異的阻害剤）。例えば、ＴＧＦβ１コンテキスト非依存性阻害剤（全ての４つの抗原複合体を標的化する）は、細胞関連ＴＧＦβ１（例えば、制御性Ｔ細胞上に発現されるＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１）の標的化を通して免疫活性化を増大させ得る。免疫活性化は、特定の患者、例えば、自己免疫疾患を有する患者または敗血症のリスクがある者にとって、不利であり得る。したがって、コンテキスト－バイアス抗体は、免疫活性化を最小限にしながら、マトリックス関連ＴＧＦβ１複合体と関連する疾患（例えば、線維症）を治療するのに有用であり得る。

以前、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ３阻害剤は、特定の病状において追加の治療的利益を提供すると考えられた。例えば、ＴＧＦβ１阻害剤で治療される特定の線維性疾患は、疾患組織（例えば、線維化組織）が両方のアイソフォームを発現するという点で特徴付けられる、ＴＧＦβ３ポジティブ（すなわち、ＴＧＦβ１＋／ＴＧＦβ３＋線維化組織）でもあり得る。したがって、本発明は、そのような状態の治療における、アイソフォーム選択的ＴＧＦβ３阻害剤とともにアイソフォーム選択的ＴＧＦβ１阻害剤の使用を含む。

本開示の抗体および／または組成物が治療的に用いられ得る線維性の徴候は、限定されないが、肺の徴候（例えば、特発性肺の線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）、アレルギー性喘息、急性肺損傷、好酸性食道炎、肺動脈高血圧症および化学的ガス損傷）、腎臓の徴候（例えば、糖尿病性糸球体硬化症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、腎臓移植および慢性拒絶と関連する線維症、ＩｇＡ腎障害、および溶血性尿毒症症候群）、肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性ウイルス肝炎、寄生虫血症、代謝の先天異常、毒素によって仲介される線維症、例えばアルコール線維症、非アルコール性脂肪性肝炎－肝細胞癌腫（ＮＡＳＨ－ＨＣＣ）、原発性胆汁性肝硬変、および硬化性胆管炎）、心血管系の線維症（例えば、心筋症、肥大性心筋症、アテローム性動脈硬化および再狭窄、）全身性硬化症、皮膚線維症（例えば、全身性硬化症、びまん性皮膚全身性硬化症、強皮症、病理学的皮膚瘢痕、ケロイド、手術後の瘢痕、瘢痕修復外科的処置、放射線によって誘導される瘢痕および慢性創傷における皮膚線維症）、眼が関連する状態、例えば、網膜下線維症、ブドウ膜炎症候群、特発性後腹膜線維化症と関連するブドウ膜炎、外眼筋線維症、主要組織適合複合体（ＭＨＣクラスＩ）または組織適合性抗原と関連する眼の疾患、黄斑変性症（例えば、加齢黄斑変性症）における網膜下線維症、およびがんまたは二次的線維症（例えば、骨髄線維症、頭頚部がん、Ｍ７急性巨核芽球性白血病および粘膜炎）を含む。本開示の化合物および／または組成物を用いて治療され得る線維症と関連する他の疾患、障害または状態（退行性の障害を含む）は、限定されないが、腺筋症、子宮内膜症、マルファン症候群、硬い皮膚（ｓｔｉｆｆｓｋｉｎ）症候群、強皮症、関節リウマチ、骨髄線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、全身性紅斑性狼瘡、筋ジストロフィー（例えばＤＭＤ）、パーキンソン病、ＡＬＳ、デュピュイトラン拘縮、カムラチ・エンゲルマン症候群、神経瘢痕、認知症、増殖性硝子体網膜症、角膜損傷、緑内障のドレナージ外科的処置後の合併症、および多発性硬化症（ＭＳ）を含む。多くのそのような線維性の徴候は、影響を受けた組織（単数または複数）の炎症とも関連し、免疫の構成要素の関与を示唆している。そのような炎症は、異常な免疫細胞集団、例えば、Ｔｈ１７細胞の数の増大、Ｔｒｅｇ細胞の数の減少、および／または両方を伴い得る。それぞれの場合において、影響を受けた患者は、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ細胞比の増大を示し得る。

一部の実施態様では、本明細書中に記載の組成物および／または方法で治療され得る線維性の徴候は、臓器線維症、例えば、肺の線維症（例えば、ＩＰＦ）、腎臓の線維症（例えば、ＣＫＤと関連する線維症）、肝臓の線維症、心臓または心臓組織の線維症、皮膚の線維症（例えば、強皮症）、子宮の線維症（例えば、子宮内膜、子宮筋）、および骨髄の線維症を含む。一部の実施態様では、そのような療法は、患者における臓器移植の必要性を減少または遅延させ得る。一部の実施態様では、そのような療法は、患者の生存を延長させ得る。

ＩＰＦを治療するために、治療によって利益を受け得る患者は、家族性ＩＰＦを有する者および孤発性ＩＰＦを有する者を含む。ＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的阻害剤の治療的に有効量の投与は、肺組織における筋線維芽細胞の蓄積を減少させ得て、コラーゲン沈着を減少させ得て、ＩＰＦ症候を減少させ得て、肺機能を改善または維持し得て、生存を延長させ得る。一部の実施態様では、阻害剤は、ＩＰＦの線維性環境内のＥＣＭ関連ＴＧＦβ１（例えば、ＬＴＢＰ１／３によって提示されるｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１）の活性化をブロックする。

非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、単純性の肝臓の脂肪浸潤（単純性または孤立性脂肪症（ｓｉｍｐｌｅｏｒｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｅａｔｏｓｉｓ）または非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）としても知られる）で始まり、次第に、ときには何十年もかけて、慢性炎症（脂肪性肝炎またはＮＡＳＨ）、線維症、および最終的に硬変の発症へと進行し得る、組織学的変化の範囲を含む。ＮＡＦＬを有する患者のほんのサブグループが、ＮＡＳＨおよびその後の硬変に進行する。現在のところ、このグループの患者を特定する明確な基準はない。ＮＡＦＬＤは、北米における慢性肝臓疾患の最も一般的な原因である。現在のところ、ＮＡＳＨの治療のための承認された薬物はない。ＮＡＳＨの高い流行、関係がある病的状態、末期の肝臓疾患の負荷の増大、および、臓器移植のための肝臓の利用率の制限を考慮すると、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤの進行を遅らせる、止める、または反転させる療法の同定は、アンメット・メディカル・ニーズを対処する。

ＴＧＦβは肝線維症における中心的プレイヤーであるというコンセンサスがある（例えば、Ｄｅｗｉｄａｒｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌｓ２０１９，８，１４１９に概説され、その内容は参照により本明細書中に援用される）。本明細書において提供されるもののようなアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤（すなわち、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に関して選択的なＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的阻害剤、または「マトリックス標的化」阻害剤）は、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）などの肝臓の線維性状態および脂肪肝と関連する線維症（例えば、ＮＡＳＨ）を治療するために用いられ得る。脂肪肝は、炎症性であってよく、または炎症性でなくてよい。脂肪肝に起因する肝臓の炎症（すなわち、脂肪性肝炎）は、瘢痕（線維症）に発展し得て、その結果、しばしば、硬変（肝臓の構造をゆがめて、その機能を損なわせる瘢痕）に進行する。阻害剤はしたがって、そのような状態を治療するために用いられ得る。一部の実施態様では、阻害剤は、肝臓の線維性環境内のＥＣＭ関連ＴＧＦβ１（例えば、ＬＴＢＰ１／３によって提示されるｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１）の活性化をブロックする。そのような状態を有する対象における阻害剤の投与は、阻害剤で治療されないコントロール集団と比較して、阻害剤で治療される患者集団において、１つまたは複数の症候を減少させ得て、疾患の進行を防止または遅延させ得て、肝臓における脂肪蓄積を減少または安定化させ得て、疾患関連のバイオマーカー（例えば血清コラーゲンフラグメント）を減少させ得て、肝臓瘢痕を減少させ得て、肝臓剛性を減少させ得て、および／または、臨床的に意味のある成果を他の方法で生じさせ得る。一部の実施態様では、有効量の阻害剤は、ＮＡＳＨ患者において、肝脂肪の減少および線維症（例えば、瘢痕）の減少の両方を達成し得る。一部の実施態様では、有効量の阻害剤は、ＮＡＳＨ患者において、脂肪性肝炎を悪化させずに少なくとも１段階、線維症の改善を達成し得る。一部の実施態様では、有効量の阻害剤は、ＮＡＳＨ患者において、肝不全および／または肝臓がんの発生率を減少させ得る。一部の実施態様では、有効量の阻害剤は、療法の開始後、例えば、１２～３６週に評価して、複数の炎症性または線維性血清バイオマーカーのレベルを、コントロールと比較して正常化させ得る。一部の実施態様では、ＮＡＳＨ患者において、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤は、限定されないがミオスタチン阻害剤（ＮＡＳＨを含むメタボリック症候群の臨床兆候を有する患者において一般に代謝調節を高め得る）を含む１つまたは複数のさらなる療法を受ける患者において投与され得る。

一部の実施態様では、ＮＡＳＨまたはＮＡＦＬＤ患者において、アイソフォーム特異的、マトリックス標的化、ＴＧＦβ１阻害剤は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤（ＡＣＣｉ）（例えば、フィルソコスタット（ａｋａＧＳ－０９７６）またはＰＦ－０５２２１３０４）を受ける患者において投与され得る。本明細書中に記載の改善されたアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤と組み合わせて有用であり得る他の治療学は、限定されないが、ＧＬＰ－１受容体アゴニストまたはアナログ（例えば、セマグルチド）、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト（例えば、ＧＳ－９６７４；ａｋａＣｉｌｏｆｅｘｏｒ）、ＡＳＫ１阻害剤（例えば、セロンセルチブ（ｓｅｌｏｎｓｅｒｔｉｂ））；オベチコール酸、ＰＰＡＲアゴニスト（例えば、ＧＦＴ５０５；ａｋａｅｌａｆｉｂｒａｎｏｒ）；ニタゾキサニド、ケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）阻害剤（例えば、ＰＦ－０６８３５９１９）；ミオスタチン阻害剤および／またはジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）阻害剤（例えば、ＰＦ－０６８６５５７１）を含む。一部の実施態様では、上述した治療学の任意の１つまたは複数は、本開示のアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤と組み合わせて、例えば、ＦＸＲアゴニスト、ＡＣＣ阻害剤、および／またはＧＬＰ－１アナログと組み合わせたアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤を用いることができる。一部の実施態様では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤのような対象における代謝肝臓疾患、およびそれと関係がある肝線維症の治療において、ミオスタチン阻害剤と組み合わせて用いられ得る。対象は、２型糖尿病および／または肥満を患ってもよい。用いられるＴＧＦβ阻害剤は、好ましくはＴＧＦβ１選択的阻害剤、より好ましくは、本明細書において開示されるもののようなＬＴＢＰ１／２関連ＴＧＦβ１を標的するコンテキスト選択的ＴＧＦβ１選択的阻害剤である。ミオスタチン阻害剤は、好ましくはミオスタチン選択的阻害剤、例えばＳＲＫ－０１５（例えば、ＷＯ２０１７／２１８５９２Ａ１を参照）およびトレボグルマブ（ｔｒｅｖｏｇｒｕｍａｂ）、またはそれらの任意の変異体、またはＷＯ２０１６／０９８３５７に記載の抗体である。

一部の実施態様では、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤単独、または、１つまたは複数のさらなる治療学と組み合わせた治療は、ＭＲＩ－ＰＤＦＦによって測定される肝臓脂肪を減少させる。一部の実施態様では、肝臓脂肪の減少は、少なくとも２０％、例えば、≧２０％、≧２５％、≧３０％、≧３５％、≧４０％、≧４５％、または≧５０％である。一部の実施態様では、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤単独または１つまたは複数のさらなる治療学と組み合わせた治療は、血清ＡＬＴおよび／またはＧＧＴを、少なくとも２０％、例えば、≧２０％、≧２５％、≧３０％、≧３５％、≧４０％、≧４５％、または≧５０％減少させる。一部の実施態様では、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤単独または１つまたは複数のさらなる治療学と組み合わせた治療は、胆汁酸合成を減少させる。

一部の実施態様では、単剤療法として、または１つまたは複数のさらなる療法とともに（例えば、併用療法）、本開示のＴＧＦβ１阻害剤は、ＮＡＳＨを治療するのに効果的であり得る。「効果的な治療」は、肝臓脂肪症、肝臓剛性、肝臓生化学および血清線維症マーカーの改善を指してよい。一部の実施態様では、１２週の治療は、磁気共鳴イメージング－プロトン密度脂肪率（ＭＲＩ－ＰＤＦＦ）によって測定して、少なくとも５０％の割合の患者において、ベースラインから１２週までの肝臓脂肪の少なくとも３０％の有意な低下をもたらし得る。少なくとも２５％のメジアン相対的減少の血清ＡＬＴ、および、胆汁酸合成減少のマーカーとともに、少なくとも２５％のＧＧＴを含む、肝臓生化学試験における改善は、１２週において達成され得る。

一部の実施態様では、ＮＡＳＨ患者は、進行性肝線維症（ステージＦ３／Ｆ４）を有し得る。一部の実施態様では、かかる患者は、ステージＦ３の進行性肝線維症を有する。一部の実施態様では、かかる患者は、硬変によって特徴付けられるステージＦ４の肝線維症を有する。一部の実施態様では、ＮＡＳＨ患者は、肝細胞癌腫および／または食道静脈瘤を発症し、または発症するリスクがある。

ＮｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃＳｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＮｅｔｗｏｒｋＰａｔｈｏｌｏｇｙＣｏｍｍｉｔｔｅｅによって得られる分類に従った非アルコール性脂肪性肝疾患における線維症のステージを以下に提供する：

治療的利益は、疾患の負荷および患者報告アウトカムによっても評価され得る。ＮＡＳＨは、患者報告アウトカム（ＰＲＯ）を通して測定される、その状態と共に生活している者に関する生活の質に対する影響も有する。ＰＲＯは、治療前（例えば、ベースライン）の慢性肝臓疾患アンケート（ＣＬＤＱ－ＮＡＳＨ）のようなツール、特に身体健康関連スコア（ｐｈｙｓｉｃａｌｈｅａｌｔｈ－ｒｅｌａｔｅｄｓｃｏｒｅ）に関するものを用いて評価され得る。

ＴＧＦβ１阻害剤（例えば、本明細書中に記載のＬＴＢＰ１／３複合体選択的阻害剤）を用いた、単独（例えば、単剤療法）または別の療法と組み合わせた治療は、ベースラインと比較して、または標準集団のものと比較して、ＰＲＯを改善させるのに効果的であり得る。一部の実施態様では、真性糖尿病は、身体機能、体痛、健康全般および体力を含むＰＲＯにおける機能障害と関連し得る。ＴＧＦβ１阻害剤（例えば、本明細書中に記載のＬＴＢＰ１／３複合体選択的阻害剤）を用いた、単独（例えば、単剤療法）または他の療法と組み合わせた治療は、糖尿病（例えば、２型糖尿病）および／または肥満を有する対象の間で身体健康関連スコア（例えばＰＲＯ）を改善させるのに効果的であり得る。

文献における公表された研究は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）が、重症度がより高い後期のステージの線維症への肝臓疾患の進行において役割を果たし得ることを示唆している。例えば、Ｚｈａｎｇらは、肝臓硬変の持続性が、線維症の解決のプロセスを阻害する肝内制御性Ｔ細胞によって維持されることを報告した（ＴｒａｎｓｌＲｅｓ．２０１６；１６９：６７－７９．ｅ１－２）。Ｋｏｂａｙａｓｈｉらは、Ｔｒｅｇが、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）への肝線維症の進行（肝臓癌形成と呼ばれるプロセス）に関与することを示唆した（ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００７；１３（３）：９０２－９１１）。

したがって、特定の患者または患者集団に対する治療的利益を最大にするために疾患タイプおよび疾患進行のステージに合わせた適切なＴＧＦβ阻害剤の注意深い選択が考慮されるべきであると考えられる。

一部の実施態様では、本明細書において開示されるもののような、マトリックス関連ＴＧＦβ１（例えば、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１）を標的化するＴＧＦβ１選択的、コンテキスト選択的阻害剤は、非アルコール性脂肪肝（「ＮＡＦＬ」）およびＮＡＳＨと関連する非硬変性肝線維症のような初期ステージの肝臓疾患の治療における使用に選択される。非硬変性肝線維症は、ステージ１～３の肝線維症を含む。ＴＧＦβ１選択的、コンテキスト選択的阻害剤は、疾患を治療する、例えば、ＮＡＦＬおよび非硬変性のＮＡＳＨの進行を遅らせる、止める、または反転させるのに効果的な量で対象へ投与される。好ましくは、有効量は、硬変および硬変合併症への進行を防止、肝臓移植の必要性を減少、および／または、生存を改善させるのに十分である。一部の実施態様では、有効性は、例えば、炎症性変化の減少、線維症の改善、または両方によって示され得る。一部の実施態様では、対象は、肥満、２型糖尿病のような代謝状態を有する。非硬変性ＮＡＳＨを有する対象は、４以上のＮＡＳＨ活動性スコア（ＮＡＳ）と、それぞれ少なくとも１ポイントの炎症および風船様変性（ｂａｌｌｏｏｎｉｎｇ）と、ステージ１の線維症よりも高いがステージ４の線維症よりも低いＮＡＳＨＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＮｅｔｗｏｅｒｋ（ＣＲＮ）線維症スコアとを有する者を含んでよい。一部の実施態様では、治療は、全体的な病理組織学的解釈に対する脂肪性肝炎の解決（ｒｅｓｏｌｕａｔｉｏｎ）を達成し、ＮＡＳＨＣＲＮ線維症スコアに対する肝線維症を悪化させない。脂肪性肝炎の解決は、脂肪のない（ａｂｓｅｎｔｆａｔｔｙ）肝臓疾患、または、脂肪性肝炎を伴わない孤立性（ｉｓｏｌａｔｅｄ）または単純性（ｓｉｍｐｌｅ）脂肪症、および、炎症についてＮＡＳスコア０～１、風船様変性について０、および、脂肪症に関する任意の値；または、１ステージ以上の肝線維症における改善（ＮＡＳＨＣＲＮ線維症スコア）および脂肪性肝炎の悪化なし（風船様変性、炎症または脂肪症に関するＮＡＳにおける増大なしとして定義される）；または、上記に定義される脂肪性肝炎の解決（ｒｅｓｏｌｕａｉｔｏｎ）および線維症の改善の両方として定義される。

一部の実施態様では、本明細書において開示されるもののようなマトリックス関連ＴＧＦβ１（例えば、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１）を標的化するＴＧＦβ１選択的、コンテキスト選択的阻害剤は、代償性肝硬変を伴うＮＡＳＨの治療での使用に選択される。ＮＡＳＨ関連の代償性肝硬変は、高密度の細胞外マトリックスに囲まれた小結節内にクラスター化した肝細胞とともに、組織病理学によって明らかな重大な瘢痕形成によって特徴付けられる。ＴＧＦβ１選択的、コンテキスト選択的阻害剤は、線維症の進行を止めるまたは遅らせる、臨床的代償不全（ｄｅｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ）を防止する、肝臓移植の必要性を減少させる、および／または生存を改善させるのに効果的な量で対象へ投与される。

非代償性肝硬変を伴うＮＡＳＨは、以下の基準：門脈高血圧症（門脈高血圧症の証拠は、低い血小板カウント、食道静脈瘤、腹水、肝性脳症の病歴、脾腫大を含んでよい）；ビリルビンの上昇；または高い国際標準化比または長いプロトロンビン時間の１つまたは複数によって特徴付けられ得る。したがって、代償性肝硬変を伴うＮＡＳＨを有する患者は、前述の非代償性肝硬変基準の１つまたは複数を満たさない者であってよい。

一部の実施態様では、本明細書において開示されるもののようなマトリックス関連ＴＧＦβ１（例えば、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１）を標的化するＴＧＦβ１選択的、コンテキスト選択的阻害剤は、非代償性肝硬変を伴うＮＡＳＨまたは肝線維症と関連するＨＣＣの治療での使用に選択される。一部の実施態様では、疾患（ｄｉｓｅｓａｓｅ）の、硬変またはＨＣＣの兆候によって特徴付けられる後期ステージまたは末期ステージの肝臓疾患への進行の際に、ＴＧＦβ１選択的、コンテキスト選択的阻害剤は、肝臓硬変またはＨＣＣを治療するのに効果的な量の、マトリックス関連および免疫細胞関連ＴＧＦβ１、例えば、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１の両方を標的化することが可能な、ＴＧＦβ１選択的、コンテキスト非依存性阻害剤（例えば、ＷＯ２０２０／０１４４７３を参照）で置き換えられる。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１選択的、コンテキスト選択的阻害剤および／またはＴＧＦβ１選択的、コンテキスト非依存性阻害剤は、単剤療法として、または、１つまたは複数のさらなる療法とともに用いてよい。

一部の実施態様では、有効量の阻害剤は、療法の開始後、例えば、１２～３６週に評価して、複数の炎症性または線維性血清バイオマーカーのレベルを、コントロールと比較して正常化し得る。一部の実施態様では、炎症性または線維性バイオマーカーは、ＮＡＦＬＤの重症度を評価するため（肝臓脂肪症のレベルを測定することによる）、治療のための患者を選択するため、および／または、疾患進行または治療応答を監視するために用いられ得る。例えば、血液バイオマーカーおよびパネルは、限定されないが以下を含んでよい：
ｉ）脂肪肝の指標（ＢＭＩ、腹囲、血清トリグリセリド、およびγ－グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）；
ｉｉ）肝臓脂肪症の指標（血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）：アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）比、ＢＭＩ、性別、および真性糖尿病の存在）；
ｉ）ＮＡＦＬＤ肝臓脂肪スコア（血清ＡＬＴ、ＨＤＬコレステロール、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｉｃｅｒｉｄｅｓ）、ヘモグロビンＡ_１ｃおよび白血球カウント）；
ｉｉ）ＳｔｅａｔｏＴｅｓｔ（ＢｉｏＰｒｅｄｉｃｔｉｖｅ）（以下の血清レベル：総ビリルビン、ＧＧＴ、α２－マクログロビン、ハプトグロビン、ＡＬＴ、アポリポタンパク質ＡＩ、総コレステロール、トリグリセリド、グルコース（年齢および性別に合わせる）およびＢＭＩ）；および
ｉｉｉ）ＮＡＦＬＤリッジスコア（以下の血清レベル：ＡＬＴ、ＨＤＬコレステロール、トリグリセリド、ヘモグロビンＡ_１ｃ、白血球カウント、および併存症データ（および高血圧の存在））。

一部の実施態様では、イメージングバイオマーカーを用いて肝臓脂肪症のレベルを評価することができる。例えば、イメージングバイオマーカーは、限定されないが：超音波検査、ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒ（ＣＡＰ）、ＭＲＩによって評価されるプロトン密度脂肪率（ＭＲＩ－ＰＤＦＦ）、および磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）を含んでよい。

肝臓生検は、ＮＡＳＨを診断するための現在の標準であるが、病理学者間の変動性が、そのような診断方法の有効性を制限する。したがって、ＦａｔｔｙＬｉｖｅｒＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＰｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ（ＦＬＩＰ）アルゴリズムの使用（組織学的脂肪症、活動性および線維症スコアを含む）を用いて、生検によるＮＡＳＨ診断の一貫性が改善され得る。さらに、多くの非侵襲のバイオマーカーは、疾患の診断および監視にも有用であり得る。したがって、一部の実施態様では、炎症性または線維化バイオマーカーを用いて、ＮＡＳＨの重症度が評価され、治療のための患者が選択され、および／または、疾患の進行または治療応答が監視され得る。血液マーカーは以下を含んでよい：
ｉ）アポトーシスマーカー、例えば、ＣＫ１８フラグメント、総サイトケラチンおよびｓＦＡＳ；
ｉｉ）炎症性マーカー、例えば、ＣＲＰ、ＴＮＦ、ＩＬ－８、およびＣＸＣＬ１０；
ｉｉｉ）脂質酸化産物、例えば、１１－ＨＥＴＥ、９－ＨＯＤＥ、１３－ＨＯＤＥ、１２－ｏｘｏ－ＯＤＥ、ＬＡ－１３－ＨＯＤＥ（ｏｘＮＡＳＨｓｃｏｒｅ）、および１１，１２－ｄｉＨＥＴｒＥ；
ｉｖ）リソソーム酵素、例えば、カテプシンＤ；および
ｖ）組み合わせのパネル、例えば、ＮＡＳＨＴｅｓｔ（ＢｉｏＰｒｅｄｉｃｔｉｖｅ）およびＮＡＳＨ診断パネル（真性糖尿病の存在、性別、ＢＭＩ、ならびに、トリグリセリド、ＣＫ１８フラグメント、および総ＣＫ１８の血清レベルを含む）。

一部の実施態様では、バイオマーカーおよび関連するパネルは、線維症および／または硬変のレベルの診断、治療のための患者の選択、および／または、疾患進行または治療応答の監視において有用であり得る。例えば、肝線維症および硬変の非侵襲の試験は、限定されないが以下を含む：ＡＳＴ：ＡＬＴ比、ＡＳＴ：血小板比の指標、線維症－４つの指標（年齢、ＡＳＴ、ＡＬＴ、および血小板カウント）、ＮＡＦＬＤ線維症スコア（年齢、ＢＭＩ、空腹時血糖異常および／または糖尿病、ＡＳＴＡＬＴ、血小板カウント、およびアルブミン）、ＢＡＲＤスコア（ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＢＭＩ、および糖尿病）。

特異的な線維症マーカーおよびパネルも有用であり得て、限定されないが：ヒアルロン酸；ＰＩＩＰＮＰ；Ｐｒｏ－Ｃ３；ＴＩＭＰ１；ラミニン；高い肝線維症（ＥＬＦ）パネル（ＰＩＩＮＰ、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ１）；ＦｉｂｒｏＴｅｓｔ（ＧＧＴ、総ビリルビン、α_２ｍ、アポリポタンパク質ＡＩ、およびハプトグロビン）；およびＦｉｂｒｏＭｅｔｅｒＮＡＦＬＤ（体重、プロトロンビン指標、ＡＬＴ、ＡＳＴ、フェリチン、および空腹時血糖）を含む。肝線維症のためのイメージングバイオマーカーは、限定されないが：ＦｉｂｒｏＳｃａｎ（ＴＥ）、ポイント・シェア・ウェイブ（ｐｏｉｎｔｓｈｅａｒｗａｖｅ）エラストグラフィー（ｐＳＷＥ）（ａｋａ音響放射力インパルス（ａｃｏｕｓｔｉｃｒａｄｉａｔｉｏｎｆｏｒｃｅｉｍｐｕｌｓｅ）（ＡＲＦＩ））、２Ｄ－３ＤＳＷＥ、磁気共鳴エラストグラフィー（ＭＲＥ）、および多パラメーターＭＲＩを含んでよい。

炎症性または自己炎症性エレメントを有する任意のＲＧＦｂ関連疾患は、制御性Ｔ細胞機能を残しておく（ｓｐａｒｅ）本開示の新規の阻害剤によって利益を受け得る。特に、肝臓疾患、例えば、代謝肝臓状態において、マトリックス関連ＴＧＦｂ１シグナリングを選択的に標的するＴＧＦｂ阻害剤を選択することが有利であり得る。

一実施態様では、本明細書中に記載の使用のための方法および組成物は、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）を有する対象を治療するのに有用である。一実施態様では、ＰＢＣを有する対象は、ＵＤＣＡ（ウルソデオキシコール酸）治療に非応答性であった対象である。一実施態様では、対象は、バルセロナ、パリ－Ｉ、トロント、ロッテルダム、またはパリ－ＩＩの、ＵＣＤＡに対する不十分な応答を有する。一実施態様では、ＰＢＣを有する対象は、標準的な推奨される用量（１０～１５ｍｇ／ｋｇｂ．ｗ．／日）でＵＤＣＡを用いた少なくとも１年の療法にもかかわらず、ＡＬＰ≧２ｘＵＬＮ（正常上限）、およびビリルビン＞１ｘＵＬＮを有する。

別の実施態様では、本明細書中に記載の使用のための方法および組成物は、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）を有する対象を治療するのに有用である。一実施態様では、ＰＳＣを有する対象は、高いＡＬＰ、異常な胆管造影、内視鏡的逆行性膵胆管造影、または経皮経肝胆道造影を有する。一実施態様では、ＰＳＣを有する対象は、少なくとも１４の末期ステージ肝臓疾患（ＭＥＬＤ）スコアに関するモデルを有する。

別の実施態様では、本明細書中に記載の使用のための方法および組成物は、ＮＡＳＨを有する対象を治療するのに有用である。一実施態様では、対象は、線維化ステージ２のＮＡＳＨ、線維化ステージ３のＮＡＳＨ、または線維化ステージ４のＮＡＳＨを有する。一実施態様では、対象は、少なくとも４、または少なくとも５のＮＡＳ（ＮＡＦＬＤ活性スコア）を有する。一実施態様では、ＮＡＳＨを有する対象は、ＮＡＳ＞４および線維化ステージ２またはステージ３を有する。一実施態様では、ＮＡＳＨを有する対象は、ＮＡＳ＞５および線維化ステージ２またはステージ３を有する。一実施態様では、ＮＡＳＨを有する対象は、少なくとも１４の末期ステージ肝臓疾患（ＭＥＬＤ）スコアに関するモデルを有する。

本明細書において提供されるもののようなアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤は、腎臓の線維性状態、例えば、細胞外マトリックス蓄積（ＩｇＡ腎障害、限局性および分節性糸球体硬化症、半月体性糸球体腎炎、ループス腎炎および糖尿病性腎障害）によって特徴付けられる疾患（糸球体および尿細管間質におけるＴＧＦβの有意に増大した発現が観察されている）を治療するために用いられ得る。ＴＧＦβ、フィブロネクチンＥＤＡ＋およびＰＡＩ－１によって誘導される２つのマトリックス構成要素の糸球体および尿細管間質の沈着は、マトリックス蓄積を有する全ての疾患において有意に上昇したが、相関分析によって、主にＴＧＦβ１アイソフォームとの密接な関係が明らかにされている。したがって、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤は、ＴＧＦβが細胞外マトリックスの病理学的蓄積と関連するヒト糸球体障害の範囲のための治療剤として有用である。

一部の実施態様では、腎臓の線維性状態は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）と関連する。ＣＫＤは、主に高血圧または糖尿病によって生じ、毎年１００万を超える生存を奪う（ｃｌａｉｍｓ）。ＣＫＤ患者は、厳格な食事制限および薬剤から透析および移植までに及ぶ生涯医療を必要とする。一部の実施態様では、本明細書中に記載のＴＧＦβ１阻害剤療法は、透析および／または移植の必要性を減少または遅延させ得る。一部の実施態様では、かかる療法は、他の治療に関する必要性（例えば投薬量、頻度）を減少させ得る。一部の実施態様では、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤は、１つまたは複数のさらなる療法（限定されないが、ＣＫＤを有する患者において代謝調節を一般に高め得るミオスタチン阻害剤を含む）を受ける患者において投与され得る。

本開示のＴＧＦβ１阻害剤で治療され得る線維性状態は、線維症および／または慢性炎症を含む状態を含む。そのような状態は神経筋障害であってよく、限定されないが、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、および他の遺伝的障害、例えば、多発性硬化症（ＭＳ）および嚢胞性線維症（ＣＦ）を含む。ＥＣＭおよび免疫細胞関連ＴＧＦβ１アームの両方の阻害を通して、本明細書中に記載のもののようなＴＧＦβ１阻害剤は、線維化の進行を抑制し、Ｍ１／Ｍ２マクロファージの分極を修復すると考えられる。

本明細書において提供される方法で治療され得る臓器線維症は、心臓（例えば、心血管系）線維症を含む。一部の実施態様では、心臓線維症は、心不全、例えば、慢性心不全（ＣＨＦ）と関連する。一部の実施態様では、心不全は、心筋疾患および／または代謝疾患と関連し得る。一部の実施態様では、アイソフォーム特異的、ＴＧＦβ１阻害剤は、１つまたは複数のさらなる療法を受ける患者において投与され得て、限定されないが、心臓線維症および代謝障害を伴う心機能不全を有する患者におけるミオスタチン阻害剤を含む。

一部の実施態様では、本明細書中に記載の組成物および／または方法で治療され得る線維性状態は、線維増生を含む。線維増生は、新生物の周りに生じ得て、腫瘍の周りの高密度の線維症（例えば、線維形成性の間質）、または腹部の外科的処置後の腹部内の瘢痕組織を生じさせる。一部の実施態様では、線維増生は、悪性腫瘍と関連する。悪性腫瘍を取り囲むその高密度の形成のせいで、従来の抗－がん治療学（例えば、化学療法）は、臨床効果のためにがん性細胞に到達するように効果的に浸透し得ない。本明細書中に記載のもののようなＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的阻害剤は、線維増生を破壊するために用いられ得て、それにより、線維性形成を緩めて抗－がん療法の効果を助けることができる。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１のアイソフォーム特異的阻害剤は、単剤療法として用いることができる（さらに以下）。

一部の実施態様では、患者は、線維性固形腫瘍（例えば、線維増生）を有しており、外科的候補者プールから除外され、または除外されたことがあり、したがって、線維性固形腫瘍は切除不可能または手術不可能と考えられる（例えば、外科的介入のリスクがその潜在的利益を上回る）。そのような患者は、本開示のＴＧＦβ１阻害療法を受ける候補者であり得る。そのような患者へ投与される本発明のＴＧＦβ１阻害療法は、腫瘍を切除可能または手術可能にさせ得て、したがって、患者は、外科的切除のための候補者となり得る。

線維性状態を有する患者を治療するために、ＴＧＦβ１アイソフォーム特異的阻害剤は、線維症を治療するのに効果的な量で対象へ投与される。そのような抗体の有効量は、対象において治療的有効性および臨床安全性の両方を達成するのに効果的な量である。一部の実施態様では、阻害剤は、ＥＣＭ内に局在化される（例えば固定される）ＬＴＢＰ仲介のＴＧＦβ１の活性化をブロックすることのできる抗体である。一部の実施態様では、ＬＴＢＰは、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３である。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１のＬＴＢＰ特異的阻害剤は、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβの阻害剤と組み合わせることができる。

線維症の変更に関する本開示の抗体および／または組成物の有効性を判定するのに有用なアッセイは、限定されないが、線維芽細胞をカウントするための組織学的アッセイおよび当技術分野で知られている基礎的な免疫組織化学分析を含む。

一部の実施態様では、循環しているＬＡＰフラグメント（単数または複数）を、線維形成の血清マーカーとして用いてよい。例えば、米国特許第８，１９８，４１２号を参照し、その内容は参照により本明細書中に援用される。

線維症を研究するために開発された多くの動物モデルが存在する。例えば、マウスにおける特定の高脂肪食は、ヒトＮＡＦＬＤの組織病理学および病因の両方を模擬することが示されている。さらに、ｄｂ／ｄｂおよびｏｂ／ｏｂマウスモデルのような一部の遺伝的モデルは、ヒトメタボリック症候群およびＮＡＦＬＤの特徴も示す。ＮＡＳＨの研究のための動物モデルも存在し、様々な食事によって誘導されるモデルから主になり、制限されないが、メチオニンおよびコリン－欠乏食（ＭＣＤ）、高コレステロール食（ＨＣＤ）、コリン欠乏高脂肪食（ＣＤＨＦＤ）、コリン欠乏Ｌ－アミノ酸欠乏食、コリン欠乏Ｌ－アミノ酸欠乏食＋四塩化炭素、高脂肪食＋ストレプトゾトシン、高脂肪＋高コレステロール食（ＨＦＨＣ）、高フルクトース食（ＨＦＤ）、および高フルクトース高脂肪食（ＨＦＨＦ）を含む。ＮＡＳＨの研究のための遺伝的マウスモデルは、限定されないが、ｆｏｚ／ｆｏｚマウス、肝細胞特異的ＰＴＥＮ欠損マウス、Ｄｂ／ｄｂマウス＋ジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）、およびｄｂ／ｄｂマウス＋ＭＣＤを含む。それぞれ＋および－を含む全てのこれらのモデルの詳細は、ＪｅｎｎｉｅＫａＣｈｉｎｇＬａｕｅｔａｌ．，ＪＰａｔｈｏｌ２０１７；２４１：３６－４４に概説され；その内容は参照により本明細書中に援用される。

線維症におけるＴＧＦβ阻害剤の有効性を試験するのに有用な他のモデルは、四塩化炭素（ＣＣＬ_４）によって誘導される肝線維症モデルおよびアデニンによって誘導される腎線維症モデルを含む。肝線維症におけるアイソフォーム特異的ＴＧＦβ阻害剤の有効性を試験するのに有用な別のモデルは、胆管結紮（ＢＤＬ）モデルを含む（例えば、Ｔａｇｅｔａｌ．，ＪＶｉｓＥｘｐ．２０１５；（９６）：５２４３８を参照）。腎線維症の有用な遺伝的モデルは、アルポートモデルを含む（本明細書中の他のどこかにおいて議論される）。

そのような前臨床モデルのいずれかにおいて、線維症における有効性（例えば、インビボでの、線維症を進行させるまたは抗線維化の効果）は、任意の適切な方法、例えば：組織切片内のピクロシリウス・レッド（ＰＳＲ）陽性領域のパーセント；組織内のヒドロキシプロリンの含有量（定量化）；および、組織切片上のｃｏｌ１Ａ染色の免疫組織化学検出および定量化によって評価され得る。一部の実施態様では、線維症のスコア化システムを用いることのできる病理組織学的評価が行われ得る。試験品目（例えば、ＴＧＦβ阻害剤）の薬理的効果は、適切な薬力学（ＰＤ）測定によって、例えば下流のシグナル伝達イベントを測定することによって試験され得る。ＴＧＦβパスウェイの場合、例えば、適切なＰＤ測定は、ＳＭＡＤ２／３の相対的リン酸化を含む。

線維症と関連する筋肉状態
ＴＧＦβが、筋肉の恒常性、修復、および再生において重要な役割を果たすことを示す証拠が蓄積している。ＬＴＢＰ関連ＴＧＦβシグナリングを選択的に調整する本明細書中に記載のモノクローナル抗体のような薬剤は、より広範に作用するＴＧＦβ阻害剤と関連する毒性を伴わずに、例えば、慢性／遺伝性筋ジストロフィー、眼／外眼筋の先天性線維症、および急性筋損傷において、損傷した筋線維を治療するのに効果的であり得る。

したがって、本発明は、インビボで、ＴＧＦβ効果の全てではないがサブセットを優先的に調整する薬剤を用いて、損傷した筋線維を治療する方法を提供する。そのような薬剤は、特定のコンテキストで、すなわち、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３によって提示される場合に、ＴＧＦβ１シグナリングを選択的に調整することができる（「アイソフォーム特異的な調整」）。

骨格筋において、ＴＧＦβは、増殖および分化の阻害、萎縮の誘導、および線維症の進行を含む様々な役割を果たす。ＴＧＦβは、衛星細胞の増殖を減少させ、分化を防止する（ＭｙｏＤおよびミオゲニンの阻害を介する）（Ａｌｌｅｎ，Ｒ．Ｅ．ａｎｄＬ．Ｋ．ＪＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ，１９８７．１３３（３）：ｐ．５６７－７２；Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｔ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９１．８８（９）：ｐ．３８２２－６；Ｍａｓｓａｇｕｅ，Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９８６．８３（２１）：ｐ．８２０６－１０；Ｏｌｓｏｎ，Ｅ．Ｎ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｅｌｌＢｉｏｌ，１９８６．１０３（５）：ｐ．１７９９－８０５）。ＴＧＦβのアイソフォーム（すなわち、ＴＧＦβ１、２、または３）は、これらの初期の論文では特定されていないが、ＴＧＦβ１であると推定される。ＴＧＦβは、筋線維症にも寄与し；組み換えＴＧＦβ１の直接的な注入は骨格筋線維症をもたらし、ｐａｎ－ＴＧＦβ阻害は、急性および慢性の負傷した筋肉における線維症を低減させる（Ｌｉ，Ｙ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２００４．１６４（３）：ｐ．１００７－１９；Ｍｅｎｄｉａｓ，Ｃ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，ＭｕｓｃｌｅＮｅｒｖｅ，２０１２．４５（１）：ｐ．５５－９；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．Ａ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２０１１．１７８（６）：ｐ．２６１１－２１）。ＴＧＦβ１は、骨格筋内の筋線維、マクロファージ、制御性Ｔ細胞、線維芽細胞、および線維細胞によって発現されて（Ｌｉ，Ｙ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２００４．１６４（３）：ｐ．１００７－１９；Ｌｅｍｏｓ，Ｄ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，ＮａｔＭｅｄ，２０１５．２１（７）：ｐ．７８６－９４；Ｖｉｌｌａｌｔａ，Ｓ．Ａ．，ｅｔａｌ．，ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０１４．６（２５８）：ｐ．２５８ｒａ１４２；Ｗａｎｇ，Ｘ．，ｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ，２０１６．１９７（１２）：ｐ．４７５０－４７６１）；発現は、損傷の際に、および疾患において増大する（Ｌｉ，Ｙ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２００４．１６４（３）：ｐ．１００７－１９；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．Ａ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２０１１．１７８（６）：ｐ．２６１１－２１；Ｂｅｒｎａｓｃｏｎｉ，Ｐ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，１９９５．９６（２）：ｐ．１１３７－４４；Ｉｓｈｉｔｏｂｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ，２０００．１１（１８）：ｐ．４０３３－５）。ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３もまた、ＴＧＦβ１よりも少ない程度ではあるが、ｍｄｘ筋肉（デュシェンヌ型筋ジストロフィーのマウスモデル）において（ｍＲＮＡレベルで）上方調節される（Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．Ａ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２０１１．１７８（６）：ｐ．２６１１－２１；Ｚｈｏｕ，Ｌ．，ｅｔａｌ．，ＮｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌＤｉｓｏｒｄ，２００６．１６（１）：ｐ．３２－８）。Ｐｅｓｓｉｎａらは、最近になって、系統トレース実験を用いて、ジストロフィー筋内の複数の起源の細胞がＴＧＦβ依存性パスウェイを介して線維形成の結末をたどることを示した（Ｐｅｓｓｉｎａ，Ｐ．，ｅｔａｌ．，ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ，２０１５．４（６）：ｐ．１０４６－６０）。

ＴＧＦβ１は、ヒト筋ジストロフィーに関与している。デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、ジストロフィンの不存在に起因する、重度の、進行性の、最終的には致命的になる疾患である（Ｂｕｓｈｂｙ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，ＬａｎｃｅｔＮｅｕｒｏｌ，２０１０．９（１）：ｐ．７７－９３）。ジストロフィンの欠損は、収縮によって誘導される損傷に対する感受性を増大させ、断続的な筋肉変性をもたらす（Ｐｅｔｒｏｆ，Ｂ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９３．９０（８）：ｐ．３７１０－４；Ｄｅｌｌｏｒｕｓｓｏ，Ｃ．，ｅｔａｌ．，ＪＭｕｓｃｌｅＲｅｓＣｅｌｌＭｏｔｉｌ，２００１．２２（５）：ｐ．４６７－７５；Ｐｒａｔｔ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＭｏｌＬｉｆｅＳｃｉ，２０１５．７２（１）：ｐ．１５３－６４）。修復の繰り返しラウンドは、慢性炎症、線維症、衛星細胞プールの枯渇、可動性の終局的な喪失および死の原因となる（Ｂｕｓｈｂｙ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，ＬａｎｃｅｔＮｅｕｒｏｌ，２０１０．９（１）：ｐ．７７－９３；ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｃ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＭｕｓｃｌｅＮｅｒｖｅ，２０１３．４８（３）：ｐ．３４３－５６）。ＴＧＦβ１の発現は、ＤＭＤを有する患者において有意に増大し、これらの患者において観察される線維症の程度と相関する（Ｂｅｒｎａｓｃｏｎｉ，Ｐ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，１９９５．９６（２）：ｐ．１１３７－４４；Ｃｈｅｎ，Ｙ．Ｗ．，ｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２００５．６５（６）：ｐ．８２６－３４）。過剰なＥＣＭ沈着は、筋肉の収縮特性に対して有害な効果を有し、筋線維がその血液供給から単離されるので、栄養へのアクセスが制限され得る（Ｋｌｉｎｇｌｅｒ，Ｗ．，ｅｔａｌ．，ＡｃｔａＭｙｏｌ，２０１２．３１（３）：ｐ．１８４－９５）。最近になって、さらなるデータが、筋ジストロフィーにおけるＴＧＦβ１をさらに関連付けている。ＬＴＢＰ４における変異は、マウスおよびヒトにおいて疾患重症度を改変させることが見いだされている。マウスでは、ＬＴＢＰ４の変異は、ジストロフィンまたはγ－サルコグリカンが欠損したマウスにおいて保護的である（Ｃｏｌｅｙ，Ｗ．Ｄ．，ｅｔａｌ．，ＨｕｍＭｏｌＧｅｎｅｔ，２０１６．２５（１）：ｐ．１３０－４５；Ｈｅｙｄｅｍａｎｎ，Ａ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２００９．１１９（１２）：ｐ．３７０３－１２）。ヒトでは、２つのグループが独立に、ＬＴＢＰ４の変異がＤＭＤにおいて保護的であると同定し、歩行の喪失を数年遅らせた（Ｆｌａｎｉｇａｎ，Ｋ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＡｎｎＮｅｕｒｏｌ，２０１３．７３（４）：ｐ．４８１－８；ｖａｎｄｅｎＢｅｒｇｅｎ，Ｊ．Ｃ．，ｅｔａｌ．，ＪＮｅｕｒｏｌＮｅｕｒｏｓｕｒｇＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１５．８６（１０）：ｐ．１０６０－５）。

マウスおよびヒトにおける遺伝的変異の性質は異なるが、両方の種において、保護的な変異は、ＴＧＦβシグナリングの低減をもたらす（Ｈｅｙｄｅｍａｎｎ，Ａ．，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２００９．１１９（１２）：ｐ．３７０３－１２）；Ｃｅｃｏ，Ｅ．，ｅｔａｌ．，ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０１４．６（２５９）：ｐ．２５９ｒａ１４４）。骨格筋生物学におけるＴＧＦβ１の多くの機能が、精製された活性の増殖因子が動物内に注入され、または培地中の細胞に添加される実験から推察されている（Ｍａｓｓａｇｕｅ，Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９８６．８３（２１）：ｐ．８２０６－１０；Ｌｉ，Ｙ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２００４．１６４（３）：ｐ．１００７－１９；Ｍｅｎｄｉａｓ，Ｃ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，ＭｕｓｃｌｅＮｅｒｖｅ，２０１２．４５（１）：ｐ．５５－９）。ＴＧＦβ１の特有の機能に関する細胞コンテキストの重要性を考慮すると（例えば、Ｈｉｎｃｋｅｔａｌ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ、２０１６．８（１２）を参照）、これらの実験において観察される効果の一部は、インビボでのサイトカインの内因性役割（単数または複数）を反映しない可能性がある。例えば、組み換えＴＧＦβ１、ミオスタチン、またはＧＤＦ１１を用いたヒト皮膚の線維芽細胞の治療は、これらの細胞における遺伝子発現においてほぼ同一の変化を生じさせるが、インビボでは、これらのタンパク質の役割はかなり異なる（Ｔａｎｎｅｒ，Ｊ．Ｗ．，Ｋｈａｌｉｌ，Ａ．，Ｈｉｌｌ，Ｊ．，Ｆｒａｎｔｉ，Ｍ．，ＭａｃＤｏｎｎｅｌｌ，Ｓ．Ｍ．，ＧｒｏｗｔｈＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎＦａｃｔｏｒ１１ＰｏｔｅｎｔｉａｔｅｓＭｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｉｎＦｉｂｒｏｓｉｓ：ＦｒｏｍＢａｓｉｃＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｔｏＴａｒｇｅｔｅｄｔｈｅｒａｐｉｅｓ．２０１６：Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，ＣＯ）。

複数の研究者が、ＴＧＦβの阻害剤を用いて、インビボでの増殖因子の役割を明らかにしている。ｐａｎ－ＴＧＦβ中和抗体１Ｄ１１を用いたｍｄｘマウスの治療は、線維症の減少（組織学およびヒドロキシプロリン含有量による）、筋肉損傷の減少（血清クレアチンキナーゼの減少およびより大きな筋線維密度）、および、筋肉機能の改善（プレチスモグラフィー、単離されたＥＤＬ筋肉の力発生、および前肢握力の増大による）を明らかにもたらす（Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．Ａ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２０１１．１７８（６）：ｐ．２６１１－２１；Ａｎｄｒｅｅｔｔａ，Ｆ．，ｅｔａｌ．，ＪＮｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，２００６．１７５（１－２）：ｐ．７７－８６；Ｇｕｍｕｃｉｏ，Ｊ．Ｐ．，ｅｔａｌ．，ＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ（１９８５），２０１３．１１５（４）：ｐ．５３９－４５）。さらに、ドミナントネガティブＴＧＦβタイプＩＩ受容体の筋線維特異的発現は、δ－サルコグリカン－／－マウスにおいて心臓毒損傷後の筋肉損傷に対して保護する（Ａｃｃｏｒｎｅｒｏ，Ｆ．，ｅｔａｌ．，ＨｕｍＭｏｌＧｅｎｅｔ，２０１４．２３（２５）：ｐ．６９０３－１５）。骨格筋内に大量にあり、ＴＧＦβ活性を阻害し、ｍｄｘマウスにおける筋線維症を低減させ、そして、裂傷損傷後の、プロテオグリカンデコリン（Ｌｉ，Ｙ．，ｅｔａｌ．，ＭｏｌＴｈｅｒ，２００７．１５（９）：ｐ．１６１６－２２；Ｇｏｓｓｅｌｉｎ，Ｌ．Ｅ．，ｅｔａｌ．，ＭｕｓｃｌｅＮｅｒｖｅ，２００４．３０（５）：ｐ．６４５－５３）。ＴＧＦβ阻害活性を有するの他の分子、例えば、スラミン（抗腫瘍性剤）およびロサルタン（アンジオテンシン受容体ブロッカー）は、筋肉病理を改善させ、損傷、マルファン症候群、および筋ジストロフィーのマウスモデルにおいて線維症を減少させるのに効果的であった（Ｓｐｕｒｎｅｙ，Ｃ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，ＪＣａｒｄｉｏｖａｓｃＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，２０１１．１６（１）：ｐ．８７－９５；Ｔａｎｉｇｕｔｉ，Ａ．Ｐ．，ｅｔａｌ．，ＭｕｓｃｌｅＮｅｒｖｅ，２０１１．４３（１）：ｐ．８２－７；Ｂｅｄａｉｒ，Ｈ．Ｓ．，ｅｔａｌ．，ＡｍＪＳｐｏｒｔｓＭｅｄ，２００８．３６（８）：ｐ．１５４８－５４；Ｃｏｈｎ，Ｒ．Ｄ．，ｅｔａｌ．，ＮａｔＭｅｄ，２００７．１３（２）：ｐ．２０４－１０）。上述の治療的薬剤は全て、ＴＧＦβ１またはそのシグナリングを阻害するが、それらはいずれも、ＴＧＦβ１アイソフォームに特異的でない。例えば、１Ｄ１１は、ＴＧＦβ１、２、および３アイソフォームに結合して阻害する（Ｄａｓｃｈ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ，１９８９．１４２（５）：ｐ．１５３６－４１）。スラミンは、ＴＧＦβ１に加えてＰＤＧＦ、ＦＧＦ、およびＥＧＦを含む複数の増殖因子がその受容体に結合する能力を阻害する（Ｈｏｓａｎｇ，Ｍ．，ＪＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍ，１９８５．２９（３）：ｐ．２６５－７３；Ｏｌｉｖｉｅｒ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ，１９９０．２６（８）：ｐ．８６７－７１；Ｓｃｈｅｒ，Ｈ．Ｉ．ａｎｄＷ．Ｄ．Ｈｅｓｔｏｎ，ＣａｎｃｅｒＴｒｅａｔＲｅｓ，１９９２．５９：ｐ．１３１－５１）。デコリンは、直接結合およびホリスタチン（ミオスタチン阻害剤）の上方調節を通して、ミオスタチン活性も阻害する（Ｍｉｕｒａ，Ｔ．，ｅｔａｌ．，ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００６．３４０（２）：ｐ．６７５－８０；Ｂｒａｎｄａｎ，Ｅ．，Ｃ．Ｃａｂｅｌｌｏ－Ｖｅｒｒｕｇｉｏ，ａｎｄＣ．Ｖｉａｌ，ＭａｔｒｉｘＢｉｏｌ，２００８．２７（８）：ｐ．７００－８；Ｚｈｕ，Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００７．２８２（３５）：ｐ．２５８５２－６３）。ロサルタンは、レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系に対するその効果を通して、ＩＧＦ－１／ＡＫＴ／ｍＴＯＲパスウェイを含む、さらなるシグナリング経路に影響を及ぼす（Ｂｕｒｋｓ，Ｔ．Ｎ．，ｅｔａｌ．，ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０１１．３（８２）：ｐ．８２ｒａ３７；Ｓａｂｈａｒｗａｌ，Ｒ．ａｎｄＭ．Ｗ．Ｃｈａｐｌｅａｕ，ＥｘｐＰｈｙｓｉｏｌ，２０１４．９９（４）：ｐ．６２７－３１；ＭｃＩｎｔｙｒｅ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，１９９７．７４（２）：ｐ．１８１－９４）。したがって、これらの療法は全て、その治療的効果、ならびに毒性に寄与し得るさらなる分子を阻害する。

慢性炎症とは別に、ＤＭＤの特徴は、過剰な、進行性の線維症である。進行性疾患においては、線維症は非常に重度なので、個々の筋線維をその血液供給から実際に単離し得る。それはまた、筋肉の収縮特性も変える。ヒト患者では、ＴＧＦβ１上方調節の程度と線維症との間に強い相関があり、線維症の程度と負の可動性結果との間に強い関連がある。したがって、一部の実施態様では、ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１阻害剤は、疾患におけるＥＣＭ関連ＴＧＦβ１効果を選択的に標的化するために、線維症の予防および／または減少のためにジストロフィー患者へ投与され得る。一部の実施態様では、本明細書中に記載の様々なアイソフォームおよび／またはコンテキスト選択的薬剤を用いて、ＴＧＦβ１シグナリングの阻害を達成し、免疫系に対して不要な効果（例えばＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３を介する）を有することなく、線維症を防止および筋形成を促進することができる。

投与
本明細書において開示される方法を実施するために、有効量の上述の医薬組成物を、適切な経路、例えば静脈内投与を介して、例えばボーラスとして、または長年にわたる連続的なインフュージョンによって、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、髄腔内、経口、吸入または局所経路によって、治療を必要とする対象（例えばヒト）へ投与することができる。線維症および／または代謝状態の治療で用いられる場合、好ましくは、ＴＧＦβ阻害剤は皮下投与される。ジェット噴霧器および超音波噴霧器を含む液体製剤用の市販される噴霧器は、投与に有用である。液体製剤を直接噴霧することができ、および、凍結乾燥粉末を再構成後に噴霧することができる。あるいは、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、フッ化炭素製剤および定量吸入器を用いてエアロゾル化することができ、または、凍結乾燥および破砕された粉体として吸入することができる。

本明細書中に記載の方法によって治療される対象は、哺乳類、より好ましくはヒトであってよい。哺乳類は、限定されないが、家畜、競技動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットを含む。治療が必要なヒト対象は、上記に記載したもののようなＴＧＦβ関連の徴候を有する、そのリスクがある、または有する疑いがある、ヒト患者であってよい。ＴＧＦβ関連の徴候を有する対象は、日常的な医療実験、例えば、検査テスト、臓器機能性テスト、ＣＴスキャン、または超音波によって同定することができる。そのような徴候のいずれかを有する疑いのある対象は、徴候の１つまたは複数の症候を示す。徴候に関するリスクがある対象は、その徴候に関するリスク因子の１つまたは複数を有する対象であり得る。

本明細書において用いられる用語「有効量」および「効果的な用量」は、許容できる利益／リスク比で、その意図される目的（単数または複数）、すなわち、組織または対象における所望の生物学的または薬物応答を満たすのに十分な、化合物または組成物の任意の量または用量を指す。例えば、本発明の特定の実施態様では、意図される目的は、ＴＧＦβ－１活性化をインビボで阻害すること、ＴＧＦβ－１阻害と関連する臨床的に意味がある成果を達成することであってよい。有効量は、当業者によって認識されるように、治療される特定の状態、状態の重症度、年齢、健康状態、大きさ、性別および重量を含む個々の患者パラメーター、治療の持続時間、同時的な療法の性質（あるならば）、特定の投与経路、および、健康専門家の知識および技術内の同様の因子に応じて変化する。これらの因子は当業者によく知られており、日常的な実験以内で扱うことができる。個々の構成要素またはその組み合わせの最大用量、すなわち、理にかなった医学的判断に従った最も高い安全用量を用いることが一般に好ましい。しかしながら、患者は、医学的理由、心理的理由または実質的に任意の他の理由のため、より少ない用量または耐容可能な用量を要求し得ることが、当業者によって理解される。

半減期のような経験的考慮は、一般に、投薬量の決定に寄与する。例えば、ヒト免疫系と適合する抗体、例えばヒト化抗体または完全ヒト抗体を用いて、抗体の半減期を延長させ得て、抗体が宿主の免疫系によって攻撃されるのを防止し得る。投与の頻度は、治療の過程にわたって決定および調節され得て、一般に、必ずではないが、ＴＧＦβ関連の徴候の治療および／または抑制および／または寛解および／または遅延に基づく。あるいは、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体の持続した連続的な放出製剤が適切であり得る。徐放性を達成するための様々な製剤およびデバイスが当業者に明らかであり、本開示の範囲内である。

一例では、本明細書中に記載のＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体に関する投薬量は、阻害剤の１または複数の投与（単数または複数）が与えられたことのある個体において経験的に決定され得る。個体は、増加的な投薬量の阻害剤を与えられる。有効性を評価するために、ＴＧＦβ関連の徴候の指標（ｉｎｄｉｃａｔｏｒ）が後に続いてよい。例えば、筋線維の損傷、筋線維の修復、筋肉における炎症レベル、および／または筋肉における線維化レベルに関して測定する方法は、当業者によく知られている。

本発明は、アイソフォーム特異的な様式、およびコンテキスト特異的な様式で、ＴＧＦβｓの活性化ステップを調整することが可能な薬剤が、薬品として用いた場合に安全性プロファイルの改善を提供し得るという認識を包含する。したがって、本発明は、ＴＧＦβ１に選択的に結合してその活性化を阻害するが、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３には結合および阻害せず、それにより、ＴＧＦβ２および／またはＴＧＦβ３シグナリングに影響を与えることによる不要な副作用を最小限にしながらインビボでのＴＧＦβ１シグナリングの特異的な阻害を与える、阻害剤、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。同様に、本発明は、ＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３によって提示されるＴＧＦβ１の活性化を選択的に阻害するが、ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１の活性化を阻害せず、それにより、ＧＡＲＰ関連ＴＧＦβ１および／またはＬＲＲＣ３３関連ＴＧＦβ１の調整に起因する不要な副作用を最小限にしながらインビボでのＬＴＢＰ１／３関連ＴＧＦβ１シグナリングの特異的な阻害を与える、阻害剤、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。

一部の実施態様では、本明細書中に記載の阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、対象に投与した場合に、毒性でない。一部の実施態様では、本明細書中に記載の阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２の両方に結合する抗体と比べて、対象に投与した場合の毒性の減少を示す。一部の実施態様では、本明細書中に記載の阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方に結合する抗体と比べて、対象に投与した場合の毒性の減少を示す。一部の実施態様では、本明細書中に記載の阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３に結合する阻害剤と比べて、対象に投与した場合の毒性の減少を示す。

一般に、本明細書中に記載の任意の阻害剤、例えば、抗体の投与に関し、最初の候補投薬量は、用量あたり約０．５～３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、用量あたり約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇであってよい。典型的に、本開示によって包含される抗体またはそのフラグメントを含む組成物は、適切な間隔での投薬量で、例えば、１週間に１回または２回、１～８週間ごとなどで、ヒト患者に投与される。一部の実施態様では、投与頻度は、例えば、１週間に２回、１週間に１回、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、８週間ごとなどに調節されてよい。本開示の目的に関し、典型的な毎日の投薬量は、上述の因子に応じて、約１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇまでのいずれかまたはそれよりも多くの範囲である。数日またはより長くにわたる繰り返し投与に関しては、状態に応じて、治療は、症候の所望の抑制が生じるまで、または、ＴＧＦβ関連の徴候、またはその症候を緩和するための十分な治療的レベルが達成されるまで、維持される。

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、０．１～３０ｍｇ／ｋｇ、０．５～３０ｍｇ／ｋｇ、１～３０ｍｇ／ｋｇ、５～３０ｍｇ／ｋｇ、１０～３０ｍｇ／ｋｇ、１５～３０ｍｇ／ｋｇ、２０～３０ｍｇ／ｋｇ、２５～３０ｍｇ／ｋｇ、０．１～２５ｍｇ／ｋｇ、０．５～２５ｍｇ／ｋｇ、１～２５ｍｇ／ｋｇ、５～２５ｍｇ／ｋｇ、１０～２５ｍｇ／ｋｇ、１５～２５ｍｇ／ｋｇ、２０～２５ｍｇ／ｋｇ、０．１～２０ｍｇ／ｋｇ、０．５～２０ｍｇ／ｋｇ、１～２０ｍｇ／ｋｇ、５．０～２０ｍｇ／ｋｇ、１０～２０ｍｇ／ｋｇ、１５～２０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１５ｍｇ／ｋｇ、０．５～１５ｍｇ／ｋｇ、１～１５ｍｇ／ｋｇ、５～１５ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ、５．０～２０ｍｇ／ｋｇ、１０～２０ｍｇ／ｋｇ、１５～２０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、０．５～１０ｍｇ／ｋｇ、１～１０ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で対象へ投与され、ここで対象は、抗体、またはその抗原結合部分を、１週間に２回、１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、１ヶ月に１回、または隔月で投与されてもよい。

例示的な投与レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの初回用量の後に、１または複数の維持用量を投与するステップを含む。例えば、初回用量は約２～３０ｍｇ／ｋｇを、例えば、１週間に１回または１週間に２回であってよい。その後に、例えば、約０．１～２０ｍｇ／ｋｇを、例えば、１週間に１回、隔週、１ヶ月に１回などの維持用量（単数または複数）が続いてよい。しかしながら、熟練者が達成を望む薬物動態衰退パターンに応じて、他の投薬レジメンが有用であり得る。薬物動態実験は、本明細書において開示される阻害剤、例えば、抗体（例えば、ＳＲ－ＡＢ２）の血清濃度が、前臨床動物モデル（例えばマウスモデル）への投与後少なくとも７日間、安定したままであることを示した。任意の特定の理論によって拘束されることを望まずに、投与後のこの安定性は、抗体が投与される対象（例えばヒト対象）において臨床的に効果的な血清濃度を維持しながら、抗体がより頻度が低く投与され得るので、有利であり得る。一部の実施態様では、投与頻度は、１週間ごと、２週間ごと、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間ごと、または１０週間ごとに１回；または、１ヶ月ごと、２ヶ月ごと、または３ヶ月ごと、またはそれよりも長い期間に１回である。この療法の進行は、従来の技術およびアッセイによって簡単に監視される。投与レジメン（用いられる抗体を含む）は、経時的に変化し得る。

一部の実施態様によれば、本開示に従ったＴＧＦβ１関連の徴候を治療するのに治療的に効果的なＬＴＢＰコンテキスト選択的ＴＧＦβ１阻害剤の血清濃度は、少なくとも約１０μｇ／ｍＬ、例えば、約１０μｇ／ｍＬ～１．０ｍｇ／ｍＬであってよい。一部の実施態様では、血清濃度によって測定される抗体の有効量は、約２０～４００μｇ／ｍＬである。一部の実施態様では、血清濃度によって測定される抗体の有効量は、約１００～８００μｇ／ｍＬである。一部の実施態様では、血清濃度によって測定される阻害剤の有効量は、少なくとも約２０μｇ／ｍＬ、例えば、少なくとも約５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬまたは２００μｇ／ｍＬである。好ましい実施態様では、非ヒト霊長類において、少なくとも４週間、例えば、少なくとも４週間、好ましくは少なくとも８週間、より好ましくは少なくとも１２週間、約２，０００から３，０００μｇ／ｍＬの血清濃度レベルを維持した後に、そのような阻害剤と関連する観察される毒性がない（例えば：心臓毒性、過形成および炎症、歯および歯肉の所見がない）。したがって、約１０～１００倍の治療濃度域が達成され得る。

一部の実施態様では、正常体重の成人患者のために、約０．３～５．００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が投与され得る。特定の投薬レジメン、例えば、用量、タイミングおよび反復は、特定の個体およびその個体の病歴、ならびに、個々の薬剤の特性（例えば、薬剤の半減期、および他の関連のある考慮）に依存する。

本開示の目的のために、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントの適切な投薬量は、用いられる特定の抗体（またはその組成物）、徴候のタイプおよび重症度、抗体が予防的または治療的目的のために投与されるのかどうか、以前の療法、患者の病歴および阻害剤に対する応答、ならびに、主治医医師の裁量に依存する。一部の実施態様では、臨床医は、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体を、所望の結果を達成する投薬量に到達するまで投与する。ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与目的が治療的または予防的であるかどうか、および当業者に公知の他の因子により、連続的または断続的であってよい。ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体の投与は、事前に選択された期間にわたって本質的に連続的であってよく、または、一連の間の空いた投与、例えば、ＴＧＦβ関連の徴候の発症前、発症中、または発症後のいずれかであってよい。

ＴＧＦβ３の阻害が、線維症においてコラーゲン沈着または蓄積を増大させ得るという観察に基づき、ＴＧＦβ１選択的阻害剤（例えば本明細書において開示される新規の抗体）を含むアドオン療法が、ＴＧＦβ３阻害活性を有するＴＧＦβ阻害剤、例えば、ＴＧＦβ１／２／３、ＴＧＦβ１／３およびＴＧＦβ３の阻害剤を用いて治療される患者のために検討され得る。ＴＧＦβ３阻害する活性を有するＴＧＦβ阻害剤の例は、限定されないが：ＴＧＦβ受容体の低分子量拮抗薬、例えば、ガルニサーチブ（ｇａｌｕｎｉｓｅｒｔｉｂ）（ＬＹ２１５７２９９一水和物）のようなＡＬＫ５拮抗薬；３つのアイソフォーム全てを阻害するモノクローナル抗体（例えば中和抗体）（「ｐａｎ－阻害剤」抗体）（例えば、ＷＯ２０１８／１３４６８１を参照）；３つのアイソフォームのうち２つを優先的に阻害するモノクローナル抗体（例えば、ＴＧＦβ１／３（例えばＷＯ２００６／１１６００２）；および改変された分子（例えば、融合タンパク質）例えば、リガンド・トラップ（例えば、ＷＯ２０１８／０２９３６７；ＷＯ２０１８／１２９３３１およびＷＯ２０１８／１５８７２７）を含む。一部の実施態様では、リガンド・トラップは、ＷＯ／２０１８／１５８７２の開示に従った構造を含む。一部の実施態様では、リガンド・トラップは、ＷＯ２０１８／０２９３６７；ＷＯ２０１８／１２９３３１の開示に従った構造を含む。一部の実施態様では、リガンド・トラップは、Ｍ７８２４として知られる構築物である。一部の実施態様では、リガンド・トラップはＡＶＩＤ２００として知られる構築物である。一部の実施態様では、中和ｐａｎ－ＴＧＦβ抗体は、ＧＣ１００８またはその誘導体である。一部の実施態様では、かかる抗体は、ＷＯ／２０１８／１３４６８１の開示に従った配列を含む。

一部の実施態様では、抗体は、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方に特異的に結合する中和抗体である。一部の実施態様では、そのような抗体は、ＴＧＦβ３よりもＴＧＦβ１に優先的に結合する。例えば、抗体は、ＷＯ／２００６／１１６００２の開示に従った配列を含む。一部の実施態様では、抗体は２１Ｄ１である。

アドオン療法は、ＴＧＦβ３阻害活性を有するＴＧＦβ阻害剤を受けたことのある、または受けている患者において、ＴＧＦβ３阻害の線維症を進行させる効果に対抗または克服することを目的とする。一部の実施態様では、患者は、線維性障害を有しており、または、線維性障害を発症するリスクがある。例えば、患者は、肝線維症を発症するより高いリスクと関連する代謝状態を患い得る。そのようなリスクと関連する代謝状態は、肥満、２型糖尿病およびＮＡＳＨを含む。したがって、本発明は、ＴＧＦβ３阻害剤の線維症を進行させる効果を減少させるのに十分な量での、ＴＧＦβ３阻害剤により治療される対象のアドオン療法における使用のためのＴＧＦβ１選択的阻害剤を含む。一部の実施態様では、対象は線維症を有する。一部の実施態様では、対象は、骨髄線維症を有する。一部の実施態様では、対象は、進行性のがん、例えば、転移性または局所進行性の腫瘍を有する。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１選択的阻害剤は、Ａｂ３１、Ａｂ３４、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ６２、Ａｂ６３、およびＡｂ６４（Ａｂ４２またはＡｂ６３であってもよい）、その変異体／誘導体またはその抗原結合フラグメント、または、その抗原結合フラグメントを含んでいる改変された分子から選択される。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１選択的阻害剤は、Ａｂ４２、その変異体／誘導体または抗原結合フラグメント、または、その抗原結合フラグメントを含んでいる改変された分子である。好ましい実施態様では、ＴＧＦβ１選択的阻害剤は、Ａｂ４２またはその抗原結合フラグメントである。

理論によって拘束されずに、一部の実施態様では、抗－ＴＧＦβ３活性を有するＴＧＦβ阻害剤を残しておくこと（ｓｐａｒｉｎｇ）は、非常に転移性の、骨髄線維症（ｍｙｅｌｏｆｉｂｒｏｔｉｃ）であることが知られるがんのタイプと診断される患者、および／または、線維性状態を有するまたは発症するリスクがある者を治療するのに特に有用であり得る。したがって、本明細書における開示は、がんの治療での使用のためのＴＧＦβ阻害剤を含み、ここで、阻害剤はＴＧＦβ３を阻害せず、患者は転移性がんまたは骨髄線維症を有しており、または、患者は線維性状態を有しており、もしくは発症するリスクがあり、ここで線維性状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であってもよい。

本明細書において用いられる用語「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、ＴＧＦβ関連の徴候、徴候の症候、または徴候に向かう体質を有する対象への、徴候、徴候の症候、または徴候に向かう体質を、治癒する（ｃｕｒｅ）、治す（ｈｅａｌ）、緩和する（ａｌｌｅｖｉａｔｅ）、軽減する（ｒｅｌｉｅｖｅ）、変更する（ａｌｔｅｒ）、修復する（ｒｅｍｅｄｙ）、寛解させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、改善する（ｉｍｐｒｏｖｅ）、または影響を及ぼす（ａｆｆｅｃｔ）目的での、１つまたは複数の活性の薬剤を含む組成物の適用または投与を指す。

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば抗体を用いてＴＧＦβ関連の徴候を緩和するステップは、徴候の発生または進行を遅延させるステップ、または、徴候の重症度を減少させるステップを含む。徴候を緩和させるステップは、治癒的な結果を必ずしも必要としない。本明細書において用いられる、ＴＧＦβ関連の徴候と関連する徴候の発生の「遅延」は、徴候の進行を、延ばす（ｄｅｆｅｒ）、妨げる（ｈｉｎｄｅｒ）、遅らせる（ｓｌｏｗ）、妨害する（ｒｅｔａｒｄ）、安定化させる（ｓｔａｂｉｌｉｚｅ）、および／または、延期する（ｐｏｓｔｐｏｎｅ）ことを意味する。この遅延は、治療される徴候および／または個体の経歴に応じて、時間の長さが変化してよい。徴候の発生を「遅延させる」または緩和する方法、または、徴候の発症を遅延させる方法は、その方法を用いない場合に比べて、所定の時間枠内で徴候の１つまたは複数の症候が発生する可能性を減少させる、および／または、所定の時間枠内で症候の程度を減少させる方法である。そのような比較は典型的に、統計的に有意な結果を与えるのに十分な対象数を用いた臨床試験に基づく。

線維性障害を治療するためのＴＧＦβ阻害剤の選択
ＴＧＦβの阻害剤は、アイソフォーム非選択的阻害剤およびアイソフォーム選択的阻害剤を含み、前者は公知のＴＧＦβ阻害剤／拮抗薬の大部分である。アイソフォーム非選択的阻害剤の中には、ｐａｎ－阻害剤（ＴＧＦβ１／２／３阻害剤）、ＴＧＦβ１／２阻害剤およびＴＧＦβ１／３阻害剤がある。アイソフォーム選択的阻害剤は、１つのアイソフォームに選択的に結合する中和抗体およびアイソフォーム選択的な様式で潜在型ｐｒｏＴＧＦβ複合体を標的化する活性化阻害剤を含む。活性化阻害剤のクラスは、コンテキスト非依存性およびコンテキスト選択的阻害剤を含む。例えば、ＬＴＢＰ１／３、ＧＡＲＰ、またはＬＲＲＣ３３によって提示されたｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１に結合し、提示分子複合体からの成熟ＴＧＦβ１の放出を阻害する、アイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤も記載されている（例えば、ＷＯ２０１７／１５６５００、ＷＯ２０２０／０１４４７３およびＷＯ２０２０／０１４４６０を参照）。前述の出願のそれぞれの内容全体は、参照により本明細書中に援用される。ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合してＧＡＲＰのコンテキストにおいて提示されるＴＧＦβ１の活性化を阻害するコンテキスト特異的抗体が、近年のＷＯ２０１８／０１３９３９に記載されている。

本発明は、ＥＣＭ関連ＴＧＦβ１活性化の特異的な阻害剤、例えば、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合し、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３のコンテキストにおいて提示されるＴＧＦβ１の活性化を阻害する抗体、およびその抗原結合部分を含む。本開示は、特定の患者集団に合わせた、上記に挙げたものの中でも適切なＴＧＦβ阻害剤の選択、および、関連する治療的レジメンの両方に関するガイダンスをさらに提供する。

ＴＧＦβ３阻害が実際にＥＣＭ調節不全をさらに悪化させ得ることを示す本明細書において示される驚くべき観察（実施例１７；図２２を参照）は、適切なＴＧＦβ阻害剤を選択する決定プロセスにおいて情報価値がある。例えば、線維性状態の治療での使用には、ＴＧＦβ３に対する阻害活性のないＴＧＦβ阻害剤を選択することが有利であり得る。ＴＧＦβ３阻害に応答した、線維症の観察される悪化（例えば、線維症を進行させる効果）は、ＴＧＦβ３の役割が恒常性を超えて拡大するという可能性を高める。さらにより重要なことに、このことは、線維性状態に関連し得るだけでなく、他の疾患コンテキストにおいても関連し得る。十分な証拠により、ＥＣＭの調節不全は線維症およびがんを含む複数の疾患状態において見られることが示唆されている。実際に、線維症を進行させる主な遺伝子の多くは、様々ながんのマーカーの中にも認識されている。これらのマーカーは、例えば、ｃｏｌ１Ａ１、ｃｏｌ３Ａ１、ＰＡＩ－１、ＣＣＬ２、ＡＣＴＡ２、ＦＮ－１、ＣＴＧＦおよびＴＧＦＢ１を含む。したがって、ＴＧＦβ３のブロックが線維症において有害であるようだという発見（例えば、線維症を進行させる効果を有すること）は、ＥＣＭ調節不全と関連するより広範な状態に適用可能であり得る。

本発明は、特定の基準および／または臨床特徴を有する疾患状態を治療するために、「適切な患者」のために「適切なＴＧＦβ阻害剤」を選択する見識を包含する。一態様では、本発明は、線維性状態を有する特定の患者集団に適切な好ましいＴＧＦβ１阻害剤の使用を提供する。したがって、本発明は、対象における線維性状態の治療でのＬＴＢＰ１／ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１阻害剤の使用を含み、ここで対象は、免疫抑制によって利益を受ける。これは、ＴＧＦβ１活性の少なくともサブセットが、ＧＡＲＰ関連および／またはＬＲＲＣ３３関連ＴＧＦβ１によって仲介される免疫調節を伴うという概念に基づく。したがって、本発明は、ＴＧＦβ１効果の免疫態様にも影響するＴＧＦβ１阻害剤の使用が、免疫賦活によって疾患の悪化が生じ得る線維性状態を有する患者の治療に有害であり得るという認識を含む。本発明はしたがって、不要な免疫賦活を防ぐように、非ＥＣＭコンテキスト（例えば、細胞表面上にＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３を発現している免疫細胞、白血球など）と関連するＴＧＦβ１効果を残し（ｓｐａｒｉｎｇ）ながら、ＥＣＭコンテキスト（例えば、ＬＴＢＰ関連）内のＴＧＦβ１効果を選択的に阻害する手段を提供することを少なくとも部分的に目的とする。この手法は、非硬変性の肝線維症のような初期ステージの線維症において特に有利であり得る。

一部の実施態様では、ｉ）ＴＧＦβ１シグナリングの阻害、および、ｉｉ）免疫抑制の両方によって利益を受ける患者集団は、重度または後期ステージの臓器線維症を患う者および同種移植片臓器移植を受ける予定の者を含む。重度または後期ステージの臓器線維症は、ＩＰＦ、ＣＫＤ、および／またはＮＡＳＨと関連し得る。そのような患者は、線維性疾患の治療のための他の療法を既に受けたことがあるが、状態を十分に治療または管理することができなかった者であり得る。主治医は、残っている治療選択肢が同種移植片移植を含み得ることを決定し得る。そのような患者は、移植のために利用可能な臓器に関する待ちリストに置かれてよい。そのような患者は、免疫抑制剤を用いて治療され得る。ＧＡＲＰによって提示されるＴＧＦβ１活性化を阻害しない、ＬＴＢＰ１／ＬＴＢＰ３によって提示されるＴＧＦβ１活性化の選択的阻害剤は、エフェクターＴ細胞によって仲介される免疫賦活をトリガーするリスクを高めずに、そのような患者を治療するために用いることができる。同様に、移植後に、そのような患者は、臓器拒絶のリスクを避けるために、ＬＴＢＰ１／ＬＴＢＰ３によって提示されるＴＧＦβ１活性化の選択的阻害剤を受け続けてよい。

一部の実施態様では、ｉ）ＴＧＦβ１シグナリングの阻害、および、ｉｉ）免疫抑制の両方によって利益を受ける患者集団は、線維性障害を患う者および炎症性または自己免疫性の状態を有する者を含む。

一部の実施態様では、患者または患者集団は、以下のような自己免疫障害の１つまたは複数を有しており、または発症するリスクがある：アカラシア；アディソン病；成人スティル病；無ガンマグロブリン血症；円形脱毛症；アミロイドーシス；強直性脊椎炎；抗－ＧＢＭ／抗－ＴＢＭ腎炎；抗リン脂質抗体症候群；自己免疫性血管浮腫；自己免疫性自律神経障害；自己免疫性脳脊髄炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）；自己免疫性心筋炎；自己免疫性卵巣炎；自己免疫性精巣炎；自己免疫性膵炎；自己免疫性網膜症；自己免疫性じんましん；軸索および神経の神経障害（Ａｘｏｎａｌ＆ｎｅｕｒｏｎａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）（ＡＭＡＮ）；バロー病；ベーチェット病；良性粘膜類天疱瘡；水疱性類天疱瘡；キャッスルマン病（ＣＤ）；セリアック病；シャーガス病；慢性炎症性脱髄性多発性神経障害（ＣＩＤＰ）；慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）；チャーグ・ストラウス症候群（ＣＳＳ）または好酸性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）；瘢痕性類天疱瘡；コーガン症候群；寒冷凝集素症；先天性心ブロック；コクサッキー心筋炎；ＣＲＥＳＴ症候群；クローン病；疱疹状皮膚炎；皮膚筋炎；デビック病（視神経脊髄炎）；円板状ループス；ドレスラー症候群；子宮内膜症；好酸性食道炎（ＥｏＥ）；好酸球性筋膜炎；結節性紅斑；本態性混合型クリオグロブリン血症；エヴァンス症候群；線維筋痛；線維性肺胞炎；巨細胞動脈炎（側頭動脈炎）；巨大細胞心筋炎；糸球体腎炎；グッドパスチャー症候群；多発血管炎性肉芽腫症；グレーブス病；ギランバレー症候群；橋本甲状腺炎；溶血性貧血；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）；妊娠性ヘルペスまたは妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）；汗腺膿瘍（ＨＳ）（反対型ざ瘡（ＡｃｎｅＩｎｖｅｒｓａ））；低ガンマグロブリン血症（Ｈｙｐｏｇａｍｍａｌｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）；ＩｇＡ腎障害；ＩｇＧ４関連の硬化性疾患；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）；封入体筋炎（ＩＢＭ）；間質膀胱炎（ＩＣ）；若年性関節炎；若年性糖尿病（１型糖尿病）；若年性筋炎（ＪＭ）；川崎病；ランバート・イートン症候群；白血球破壊性血管炎；扁平苔癬；硬化性苔癬；木質性結膜炎；線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）；ループス；慢性ライム病；メニエール病；顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）；混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）；モーレン潰瘍；ムッハ・ハーベルマン病；多巣性運動ニューロパチー（ＭＭＮ）またはＭＭＮＣＢ；多発性硬化症；重症筋無力症；筋炎；睡眠発作；新生児ループス；視神経脊髄炎；好中球減少；眼部瘢痕性類天疱瘡；視神経炎；回帰性リウマチ（ＰＲ）；ＰＡＮＤＡＳ；傍腫瘍性小脳変性症（ＰＣＤ）；発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）；パリ－・ロンバーグ（ＰａｒｒｙＲｏｍｂｅｒｇ）症候群；毛様体扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）；パーソネージ・ターナー症候群；天疱瘡；末梢神経障害；静脈周囲の脳脊髄炎；悪性貧血（ＰＡ）；ＰＯＥＭＳ症候群；結節性多発動脈炎；多腺性症候群タイプＩ、ＩＩ、ＩＩＩ；リウマチ性多発筋痛症；多発性筋炎；心筋梗塞後症候群；心膜切開後症候群；原発性胆汁性肝硬変；原発性硬化性胆管炎；プロゲステロン皮膚炎；乾癬；乾癬性関節炎；赤芽球癆（ＰＲＣＡ）；壊疽性膿皮症；レイノー現象；反応性関節炎；反射性交感神経性ジストロフィー；再発性多発性軟骨炎；下肢静止不能症候群（ＲＬＳ）；後腹膜線維症；リウマチ熱；関節リウマチ；サルコイドーシス；シュミット症候群；強膜炎；強皮症；シェーグレン症候群；精子＆精巣自己免疫；全身硬直症候群（ＳＰＳ）；亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）；スザック症候群；交感性眼炎（ＳＯ）；高安動脈炎；側頭動脈炎／巨大細胞；動脈炎血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）；トロサ・ハント症候群（ＴＨＳ）；横断性脊髄炎；１型糖尿病；潰瘍性大腸炎（ＵＣ）；未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）；ブドウ膜炎；血管炎；白斑；Ｖｏｇｔ－Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａ疾患。

一部の実施態様では、炎症性または自己免疫性の状態は、線維症と関連する。線維症と関連する炎症性または自己免疫性の状態の非限定的な例は、筋ジストロフィー、例えばＤＭＤを含む。

他の実施態様では、ｉ）ＴＧＦβ１シグナリングの阻害、および、ｉｉ）免疫抑制の両方によって利益を受ける患者集団は、線維性疾患を患う者および線維症を直接関連しないが、むしろ別個の障害と関連する炎症性または自己免疫性の状態を有する者を含む。

そのような炎症性または自己免疫性の状態は、根底にある（ｕｎｄｅｒｌｉｎｉｎｇ）線維性疾患または別の状態（単数または複数）と直接関連してもしなくても、ヒト自己免疫疾患における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の不均衡に起因し得て、またはそれと関連し得る。例えば、Ｔｒｅｇ調節不全と関連する障害は、限定されないが：若年性特発性関節炎；関節リウマチ（ＲＡ）；脊椎関節炎；乾癬性関節炎；ＨＣＶ混合型クリオグロブリン血症；クリオグロブリン血症；多発性硬化症；自己免疫性肝臓疾患；全身性ループスエリテマトーデス；免疫介在性糖尿病；重症筋無力症；原発性シェーグレン症候群；川崎病；および、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を含む。

したがって、本明細書中に記載のもののようなＴＧＦβ１シグナリングのＬＴＢＰ１／３選択的阻害剤は、線維性状態および上記に挙げた障害の１つまたは複数のような炎症性または自己免疫性の状態を患う患者を治療するために用いることができる。したがって、用いられるＴＧＦβ１シグナリングのＬＴＢＰ１／３選択的阻害剤は、免疫関連ＴＧＦβ１シグナリングを残し（ｓｐａｒｉｎｇ）しながら、ＥＣＭにおけるＴＧＦβ１依存性線維症を治療または緩和することができる。

したがって、本発明の関連する方法は、対象における線維性障害の臨床兆候に基づき、線維性障害を治療するための適切なＴＧＦβ１阻害剤を選択する方法を含む。一実施態様では、本発明は、対象における線維性障害の治療のためのアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤を選択する方法を提供する。その方法は、（ａ）線維性障害が、線維症、ならびに、炎症、免疫抑制、増殖性調節不全、および同種移植片移植のうちの１つまたは複数の必要性を含む臨床症状を現わすかどうか決定するステップ、および（ｂ）ステップ（ａ）において決定される臨床症状に基づき、線維性障害の治療のためのアイソフォーム特異的、コンテキスト依存性ＴＧＦβ１阻害剤またはアイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を選択するステップを含む。別の実施態様では、本発明は、線維性障害を有する対象を治療する方法を提供し、対象のためのアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤を含む治療レジメンを選択するステップ、および、選択された治療レジメンを対象に施すステップを含み、ここで選択は、（ａ）線維性障害が、線維症および以下の１つまたは複数：炎症、免疫抑制、増殖性調節不全、および同種移植片移植の必要性を含む臨床症状を現わすかどうか決定するステップ；および（ｂ）ステップ（ａ）において決定された臨床症状に基づき、アイソフォーム特異的、コンテキスト依存性ＴＧＦβ１阻害剤またはアイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を含む治療レジメンを選択するステップを含む。

線維性障害に悩む対象は、線維症に加えて広範な症候を示し得る。対象における臨床兆候の特定の組み合わせは、適切なＴＧＦβ１阻害治療レジメンの選択をガイドすることができる。例えば、対象の臨床兆候が、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３の活性を調整せずにＴＧＦβ１の阻害の必要性を示す場合は、コンテキスト非依存性、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤を用いて対象を治療することができる。対象の臨床兆候が細胞外マトリックスにおけるＴＧＦβ１の阻害が有益であることを示す場合は、ＬＴＢＰコンテキスト特異的阻害剤を含む治療レジメンを用いて対象を治療することができる。ＬＴＢＰコンテキスト特異的阻害剤は、対象の臨床兆候が、免疫エフェクター細胞の刺激が望ましくないことを示す場合にも有利である。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）上のＴＧＦβ１の活性化／放出のブロックが、例えばＴｒｅｇ細胞がエフェクターＴ細胞活性を抑制するのを防止するために有益であることを対象の臨床兆候が示す場合は、ＧＡＲＰコンテキスト特異的阻害剤を用いて対象を治療することができる。骨髄性細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞および／またはミクログリア上のＴＧＦβ１の活性化／放出のブロックが、例えば対象における免疫抑制を反転または減少させるために有益であることを対象の臨床兆候が示す場合は、ＬＲＲＣ３３コンテキスト特異的阻害剤を用いて対象を治療することができる。

例として、線維性障害を有する対象は、線維症、炎症、免疫抑制、および増殖性調節不全を含む臨床兆候を示し得る。症候の前述の組み合わせを一般に示す線維性障害は、例えば、骨髄線維症を含む。この実施態様では、アイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を、対象を治療するために選択することができる。

線維性障害を有する対象は、線維症、炎症、および同種移植片移植の必要性を含む臨床兆候を示し得る。症候の前述の組み合わせを一般に示す線維性障害は、例えば、腎線維症（例えば、慢性腎疾患と関連する線維症）、肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）と関連する線維症）、または肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）と関連する線維症）のような臓器線維症を含む。この実施態様では、コンテキスト特異的ＬＴＢＰ１／３特異的阻害剤が、対象を治療するために選択される。

別の例では、線維性障害を有する対象は、線維症および炎症を含む臨床兆候を示し得る。症候の前述の組み合わせを一般に示す線維性障害は、例えば強皮症を含む。この実施態様では、コンテキスト特異的ＬＴＢＰ１／３特異的阻害剤が、対象を治療するために選択される。症候の前述の組み合わせを一般に示すさらなる線維性障害は、例えば、変性疾患、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）のような筋ジストロフィーを含む。この実施態様では、コンテキスト特異的ＬＴＢＰ１／３特異的阻害剤が、対象を治療するために選択される。

線維性障害を有する対象は、免疫抑制および増殖性調節不全を含む臨床兆候を示し得る。症候の前述の組み合わせを一般に示す線維性障害は、例えば固形腫瘍を含む。一部の実施態様では、固形腫瘍は悪性腫瘍である。他の実施態様では、固形腫瘍は良性腫瘍である。例示的な実施態様では、対象は、線維増生（例えば、膵臓の線維増生）を有する。一部の実施態様では、患者は、「手術不可能」または外科的切除に適切でないと評価された固形腫瘍を有し得る。したがって、一部の実施態様では、患者は、腫瘍の外科的切除のための候補者ではない。しかしながら、本発明のコンテキスト選択的ＴＧＦβ１阻害剤を含むＴＧＦβ１阻害療法は、そのような非候補患者が外科的処置を受けるのにより適しているように反転させ得る。一部の実施態様では、固形腫瘍を有する対象は、化学療法、放射線療法、ＣＡＲ－Ｔ療法およびチェックポイント阻害剤療法のようながん療法に対して応答が悪い（例えば、腫瘍は、がん療法に対して耐性である）。本発明のコンテキスト選択的ＴＧＦβ１阻害剤を含むＴＧＦβ１阻害療法は、少なくとも部分的に、患者ががん療法に対してより応答性になるように耐性を反転させ得る。一部の実施態様では、コンテキスト選択的ＴＧＦβ１阻害療法およびがん療法の両方を含む併用療法は、がんを相乗的に治療し得る。一部の実施態様では、がん療法とともに施されるコンテキスト選択的ＴＧＦβ１阻害療法は、同等または改善された臨床効果を生じるために必要とされるがん療法の投薬量を減少させ得る。

別の例示的な実施態様では、対象は子宮筋腫を有する。線維性障害が免疫抑制および増殖性調節不全を含む臨床兆候を示す前述の実施態様では、コンテキスト特異的ＬＴＢＰ１／３特異的阻害剤および／またはコンテキスト特異的ＧＡＲＰ特異的阻害剤が、対象を治療するために選択される。

別の態様では、本発明は、線維症および同種移植片移植の必要性を含む臨床症状を現わす線維性障害を有する対象を選択して、有効量のアイソフォーム特異的、ＬＴＢＰ１／３特異的ＴＧＦβ１阻害剤を対象へ投与することにより、アイソフォーム特異的、ＬＴＢＰ１／３コンテキスト特異的ＴＧＦβ１阻害剤を用いて線維性障害を有する対象を治療する方法を提供する。一実施態様では、その方法は、線維性障害が、線維症および同種移植片移植の必要性を含む臨床症状を現わすかどうか決定するステップを含む。対象が、線維症および同種移植片移植の必要性を含む症候を示す場合は、ＬＴＢＰ１／３特異的ＴＧＦβ１阻害剤が対象に投与される。

別の態様では、本発明は、線維症、免疫抑制、および／または増殖性調節不全を含む臨床症状を現わす線維性障害を有する対象を選択して、有効量のアイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を対象へ投与することにより、アイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤を用いて線維性障害を有する対象を治療する方法を提供する。一実施態様では、その方法は、線維性障害が、線維症、免疫抑制、および／または増殖性調節不全を含む臨床症状を現わすかどうか決定するステップを含む。対象が、線維症、免疫抑制、および／または増殖性調節不全を含む症候を示す（ｉｎｈｉｂｉｔｓ）場合は、アイソフォーム特異的、コンテキスト非依存性ＴＧＦβ１阻害剤が対象へ投与される。

炎症、免疫抑制、増殖性調節不全、および／または同種移植片移植の必要性を含む臨床兆候は、当技術分野で知られている方法およびプラクティスを用いて、線維性障害を有する対象において決定することができる。かかる方法は、例えば、物理的試験および標準的な診断テストを含む。一実施態様では、炎症は、対象が血漿、血液、または血清中の炎症性バイオマーカーのレベルの上昇を示すかどうか判定することによって評価することができる。かかる炎症性バイオマーカーは、例えば、Ｃ－応答性タンパク質、インターロイキン１（ＩＬ－１）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、またはそれらの組み合わせを含む。赤血球沈降速度（ＥＳＲ）および血漿粘度（ＰＶ）を含む血液テストもまた、線維性障害を有する対象における炎症の存在を示すことができる。別の実施態様では、免疫抑制は、対象の血液細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージなどの数および組成を決定することによって評価することができる。免疫抑制はまた、対象が免疫抑制剤を摂取しているまたは摂取する病歴を有するかどうか決定することによって、または、対象が免疫抑制と関連する状態（例えば、血液学的悪性腫瘍、ＨＩＶ／ＡＩＤＳなど）を有するかどうか決定することによって、評価することもできる。別の実施態様では、増殖性調節不全は、血液テスト、生検、および／または、ＣＴスキャン、超音波、およびＭＲＩのようなイメージング手順を含む標準的なテストを用いて評価することができる。がんを診断するための他の標準的なテスト（例えば、バイオマーカーテストなど）を用いて増殖性調節不全を評価することもできる。同種移植片移植の必要性は、標準的な手順を用いて臨床医によって決定され得る。一実施態様では、臓器機能の喪失もしくは部分的喪失、または、臓器機能の喪失の可能性の増大は、移植の必要性を示す。

言及したように、本発明は、ＬＴＢＰによって提示されるＴＧＦβ１前駆体に特異的に結合することが可能な抗体の使用により可能にされる、ＥＣＭ関連ＴＧＦβ１複合体の選択的標的化を提供する。本発明の一部の抗体はＬＴＢＰ１－およびＬＴＢＰ３－関連ｐｒｏＴＧＦβ１複合体の両方に結合して阻害することが可能であるが、その他は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１にのみ結合するという点で、さらにより高い選択性を示す。

本発明はしたがって、特定の患者集団は、ＴＧＦβシグナリングの免疫構成要素すなわち、ＧＡＲＰと関連するＴＧＦβにも影響を及ぼすＴＧＦβ阻害剤よりも、ＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１に特異的なコンテキスト選択的阻害剤を含むＴＧＦβ１阻害療法によって利益を受け得るという認識を包含する。したがって、本明細書において、自己免疫性の状態を有する対象またはそれを発症するリスクがある対象におけるＴＧＦβに関連する状態を治療するためには、マトリックス関連ＴＧＦβを選択的に阻害するＴＧＦβ阻害剤（例えば、本明細書において開示されるＴＧＦβ１のＬＴＢＰ１／３コンテキスト選択的阻害剤）が、免疫系を過剰刺激するリスクを最小限にしながら治療的利益を提供し得ると考えられる。そのような対象は、以下のような自己免疫障害を患い得て、またはそれを発症するリスクがあり得る：アカラシア；アディソン病；成人スティル病；無ガンマグロブリン血症；円形脱毛症；アミロイドーシス；強直性脊椎炎；抗－ＧＢＭ／抗－ＴＢＭ腎炎；抗リン脂質抗体症候群；自己免疫性血管浮腫；自己免疫性自律神経障害；自己免疫性脳脊髄炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）；自己免疫性心筋炎；自己免疫性卵巣炎；自己免疫性精巣炎；自己免疫性膵炎；自己免疫性網膜症；自己免疫性じんましん；軸索および神経の神経障害（ＡＭＡＮ）；バロー病；ベーチェット病；良性粘膜類天疱瘡；水疱性類天疱瘡；キャッスルマン病（ＣＤ）；セリアック病；シャーガス病；慢性炎症性脱髄性多発性神経障害（ＣＩＤＰ）；慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）；チャーグ・ストラウス症候群（ＣＳＳ）または好酸性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）；瘢痕性類天疱瘡；コーガン症候群；寒冷凝集素症；先天性心ブロック；コクサッキー心筋炎；ＣＲＥＳＴ症候群；クローン病；疱疹状皮膚炎；皮膚筋炎；デビック病（視神経脊髄炎）；円板状ループス；ドレスラー症候群；子宮内膜症；好酸性食道炎（ＥｏＥ）；好酸球性筋膜炎；結節性紅斑；本態性混合型クリオグロブリン血症；エヴァンス症候群；線維筋痛；線維性肺胞炎；巨細胞動脈炎（側頭動脈炎）；巨大細胞心筋炎；糸球体腎炎；グッドパスチャー症候群；多発血管炎性肉芽腫症；グレーブス病；ギランバレー症候群；橋本甲状腺炎；溶血性貧血；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）；妊娠性ヘルペスまたは妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）；汗腺膿瘍（ＨＳ）（反対型ざ瘡）；低ガンマグロブリン血症；ＩｇＡ腎障害；ＩｇＧ４関連の硬化性疾患；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）；封入体筋炎（ＩＢＭ）；間質膀胱炎（ＩＣ）；若年性関節炎；若年性糖尿病（１型糖尿病）；若年性筋炎（ＪＭ）；川崎病；ランバート・イートン症候群；白血球破壊性血管炎；扁平苔癬；硬化性苔癬；木質性結膜炎；線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）；ループス；慢性ライム病；メニエール病；顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）；混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）；モーレン潰瘍；ムッハ・ハーベルマン病；多巣性運動ニューロパチー（ＭＭＮ）またはＭＭＮＣＢ；多発性硬化症；重症筋無力症；筋炎；睡眠発作；新生児ループス；視神経脊髄炎；好中球減少；眼部瘢痕性類天疱瘡；視神経炎；回帰性リウマチ（ＰＲ）；ＰＡＮＤＡＳ；傍腫瘍性小脳変性症（ＰＣＤ）；発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）；パリ－・ロンバーグ症候群；毛様体扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）；パーソネージ・ターナー症候群；天疱瘡；末梢神経障害；静脈周囲の脳脊髄炎；悪性貧血（ＰＡ）；ＰＯＥＭＳ症候群；結節性多発動脈炎；多腺性症候群タイプＩ、ＩＩ、ＩＩＩ；リウマチ性多発筋痛症；多発性筋炎；心筋梗塞後症候群；心膜切開後症候群；原発性胆汁性肝硬変；原発性硬化性胆管炎；プロゲステロン皮膚炎；乾癬；乾癬性関節炎；赤芽球癆（ＰＲＣＡ）；壊疽性膿皮症；レイノー現象；反応性関節炎；反射性交感神経性ジストロフィー；再発性多発性軟骨炎；下肢静止不能症候群（ＲＬＳ）；後腹膜線維症；リウマチ熱；関節リウマチ；サルコイドーシス；シュミット症候群；強膜炎；強皮症；シェーグレン症候群；精子＆精巣自己免疫；全身硬直症候群（ＳＰＳ）；亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）；スザック症候群；交感性眼炎（ＳＯ）；高安動脈炎；側頭動脈炎／巨大細胞；動脈炎血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）；トロサ・ハント症候群（ＴＨＳ）；横断性脊髄炎；１型糖尿病；潰瘍性大腸炎（ＵＣ）；未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）；ブドウ膜炎；血管炎；白斑；Ｖｏｇｔ－Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａ疾患。

ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３はどちらもＥＣＭの構成要素であり、そこでそれらは、潜在型ＴＧＦβ前駆体複合体をディスプレイ（ｄｉｓｐｌａｙ）または「提示（ｐｒｅｓｅｎｔ）」することができる。発現試験によるいくつかの観察は、ＬＴＢＰ３の欠失、アブレーションまたは機能性阻害が、特定の毒性を引き起こし得るという可能性を高める。ＬＴＢＰ３－／－マウス（ならびに一部のヒト突然変異）は、低身長、ならびに骨および歯の異常を有する。これらの表現型は、発達における破壊と関連する可能性があるが、ＬＴＢＰ３が成体におけるこれらの組織の恒常性において役割を果たすという可能性がある（成体の骨における発現が報告されている）。これらの観察に基づき、特定の臨床状況において（ＬＴＢＰ３を発現することが知られており毒性と関連する組織において疾患が現れる場合）、または、発達がまだ活動的である小児患者のような特定の患者集団においては、ＬＴＢＰ３関連の阻害の潜在的毒性を避けることが賢明であり得る。ＬＴＢＰ１－／－ＫＯマウスは肝線維症に対して保護されるので（胆管結紮によって誘導される）、ＬＴＢＰ１機能の喪失は、少なくとも一部の形態の線維症に対して保護するのに十分であると考えられる。合わせると、これらのデータは、ＬＴＢＰ１特異的ＴＧＦβ１阻害が、特定の状況において、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１阻害剤と比較して優れた安全性プロファイルを有することができるという可能性を高める。

したがって、本発明のＬＴＢＰ１／３選択的阻害剤が適切またはそれにより利益を受ける可能性がある患者または患者集団の選択は、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ｐｒｏ－または成熟ＴＧＦβ１、ｐｒｏ－または成熟ＴＧＦβ２、ｐｒｏ－または成熟ＴＧＦβ３、またはそれらの任意の組み合わせの発現プロファイルを評価または確認するステップを含んでよい。発現プロファイルは、対象（例えば、患者）から回収された生物学的サンプルからの適切なアッセイにおいて、ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の存在／不存在またはレベルを測定することによって得てよい。一部の実施態様では、ＬＡＰの可溶性（ｓｌｕｂｌｅ）循環フラグメント（単数または複数）を、特定のＴＧＦβアイソフォームの発現に関する代替マーカーとして用いてよい。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１ＬＡＰフラグメントは、線維形成のマーカーとして用いられ得る。例えば、米国特許第８，１９８，４１２号を参照し、その内容は参照により本明細書中に援用される。

疾患の遺伝子マーカー：
様々な疾患状態におけるＴＧＦβ１シグナル伝達パスウェイの異常な活性化は、複数のマーカーの遺伝子発現の変更と関連することが観察されている。これらの遺伝子発現マーカー（例えばｍＲＮＡによって測定される）は、限定されないが：Ｓｅｒｐｉｎｅ１（ＰＡＩ－１をコードする）、ＭＣＰ－１（ＣＣＬ２としても知られる）、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ３ａ１、ＦＮ１、ＴＧＦβ１、ＣＴＧＦ、ＡＣＴＡ２（α－ＳＭＡをコードする）、ＳＮＡＩ１（Ｅ－カドヘリン（Ｃｄｈ１）を下方調節することにより、線維症および転移においてＥＭＴを駆動する）、ＭＭＰ２（ＥＭＴと関連するマトリックスメタロプロテアーゼ）、ＭＭＰ９（ＥＭＴと関連するマトリックスメタロプロテアーゼ）、ＴＩＭＰ１（ＥＭＴと関連するマトリックスメタロプロテアーゼ）、ＦＯＸＰ３（Ｔｒｅｇ誘導のマーカー）、ＣＤＨ１（ＴＧＦβによって下方調節されるＥカドヘリン（上皮細胞のマーカー））、および、ＣＤＨ２（ＴＧＦβによって上方調節されるＮカドヘリン（間葉系細胞のマーカー））を含む。興味深いことに、これらの遺伝子の多くは、様々なタイプの臓器線維症を含む疾患状態の様々なセットにおいて、ならびに、骨髄線維症を含む多くのがんにおいて、役割を果たすことが含意される。実際に、線維性状態と、異常な細胞増殖、腫瘍形成および転移との間の病態生理学的関連が示唆されている。例えば、ＣｏｘａｎｄＥｒｌｅｒ（２０１４）ＣｌｉｎｉｃａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ２０（１４）：３６３７－４３「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｈｗａｙｓ：ｃｏｎｎｅｃｔｉｎｇｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｓｏｌｉｄｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ」；Ｓｈｉｇａｅｔａｌ．（２０１５）Ｃａｎｃｅｒｓ７：２４４３－２４５８「Ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ：ｔｈｅｉｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｔｈｅｉｒｒｏｌｅｓｉｎｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ」；ＷｙｎｎａｎｄＢａｒｒｏｎ（２０１０）Ｓｅｍｉｎ．ＬｉｖｅｒＤｉｓ．３０（３）：２４５－２５７「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ：ｍａｓｔｅｒｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｆｉｂｒｏｓｉｓ」を参照し、その内容は参照により本明細書中に援用される。特定の理論によって拘束されることを望まずに、本開示の発明者らは、ＴＧＦβ１シグナリング経路が、実際にこれらの広範な病理間の重要な関連であり得ると考える。

走化性サイトカイン（またはケモカイン）が、負傷または疾患組織への白血球動員（例えば、単球／マクロファージ）を仲介する能力は、疾患進行において極めて重要な結果を有する。Ｃ－Ｃケモカインファミリーのメンバー、例えば、ＣＣＬ２としても知られる単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ－１）、ＣＣＬ３としても知られるマクロファージ炎症性タンパク質１－α（ＭＩＰ－１α）、および、ＣＣＬ４としても知られるＭＩＰ－１βは、このプロセスに関連付けられている。

例えば、ＭＣＰ－１／ＣＣＬ２は、線維症およびがんの両方において役割を果たすと考えられる。ＭＣＰ－１／ＣＣＬ２は、線維症を進行させるケモカインとして特徴付けられ、単球化学誘引物質であり、がんの開始および進行の両方に関与し得ることを示唆する証拠がある。線維症では、ＭＣＰ－１／ＣＣＬ２は、線維症の炎症性段階において重要な役割を果たすことが示されている。例えば、ＭＣＰ－１の中和は、糸球体半月形成およびＩ型コラーゲンの沈着における劇的な低減をもたらした。同様に、抗－ＭＣＰ－１または抗－ＭＩＰ－１α抗体のいずれかを用いた受動免疫療法は、ブレオマイシンを曝露されたマウスにおいて単核貪食細胞の蓄積を有意に減少させることが示されており、ＭＩＰ－１αおよびＭＣＰ－１が、肺炎症性応答中の白血球の動員に寄与することを示唆している（Ｓｍｉｔｈ，ＢｉｏｌＳｉｇｎａｌｓ．１９９６Ｊｕｌ－Ａｕｇ；５（４）：２２３－３１，「Ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｓｍｅｄｉａｔｅｌｅｕｋｏｃｙｔｅｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔｉｎｆｉｂｒｏｔｉｃｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅ」）。嚢胞性線維症および多発性骨髄腫を有する患者におけるＭＩＰ－１αのレベルの上昇が報告されており（例えば：Ｍｒｕｇａｃｚｅｔａｌ．，ＪＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＣｙｔｏｋｉｎｅＲｅｓ．２００７Ｊｕｎ；２７（６）：４９１－５を参照）、ＭＩＰ－１αが、局所または全身の炎症性応答と関連するという概念を示唆している。

一連の証拠は、腫瘍進行におけるＣ－Ｃケモカインの関与を示す。例えば、腫瘍由来のＭＣＰ－１／ＣＣＬ２は、マクロファージにおいて、「がん促進性（ｐｒｏ－ｃａｎｃｅｒ）」表現型を促進し得る。例えば、肺がんでは、ＭＣＰ－１／ＣＣＬ２が、間質細胞によって産生されて転移を促進することが示されている。ヒト膵がんでは、腫瘍はＣＣＬ２を分泌し、免疫抑制性のＣＣＲ２陽性マクロファージがこれらの腫瘍に浸潤する。高いＣＣＬ２発現／低いＣＤ８Ｔ細胞浸潤を示す腫瘍を有する患者は、生存が有意に低減する。特定の理論によって拘束されることを望まずに、損傷または病変組織環境へ動員される単球は、続いて、局所的な合図（ｃｕｅｓ）に応答して（例えば、腫瘍由来サイトカインに応答して）分極し得て、それにより、疾患進行にさらに寄与すると考えられる。これらのＭ２様マクロファージは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞のようなエフェクター細胞を抑制することによって免疫回避に寄与する可能性がある。一部の実施態様では、このプロセスは、活性化マクロファージによって発現されるＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１によって部分的に仲介される。一部の実施態様では、そのプロセスは、Ｔｒｅｇによって発現されるＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１によって部分的に仲介される。

同様に、ＰＡＩ－１／Ｓｅｒｐｉｎｅ１の関与は、様々ながん、血管新生、炎症、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に関連付けられている。腫瘍および／または血清におけるＰＡＩ－１の発現の上昇は、乳がんおよび膀胱がんのような様々ながん（例えば、移行細胞癌腫）ならびに骨髄線維症において、予後不良（例えば、より短い生存、転移の増大）と相関している。線維性状態のコンテキストにおいて、ＰＡＩ－１は、ＴＧＦβ１によって誘導される線維症の重要な下流エフェクターとして認識されており、ＰＡＩ－１発現の増大は、肺線維症（例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ））、腎線維症、肝線維症および強皮症を含む様々な形態の組織線維症において観察されている。一部の実施態様では、そのプロセスは、ＥＣＭ関連ＴＧＦβ１によって、例えばＬＴＢＰ１および／またはＬＴＢＰ３を介して部分的に仲介される。

したがって、一部の実施態様では、ＴＧＦβ１阻害剤療法のインビボ効果は、遺伝子マーカーにおける変化を測定することによって評価され得る。適切なマーカーは、ＴＧＦβ（例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３）を含む。適切なマーカーは、ＴＧＦβ（例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３）に関する１つまたは複数の提示分子、例えば、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、ＧＡＲＰ（またはＬＲＲＣ３２）およびＬＲＲＣ３３を含んでもよい。一部の実施態様では、適切なマーカーは、間葉転換遺伝子（例えば、ＡＸＬ、ＲＯＲ２、ＷＮＴ５Ａ、ＬＯＸＬ２、ＴＷＩＳＴ２、ＴＡＧＬＮ、および／またはＦＡＰ）、免疫抑制性遺伝子（例えば、ＩＬ１０、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＣ）、単球およびマクロファージ走化性遺伝子（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８およびＣＣＬ１３）、および／または、本明細書において議論される様々な線維性マーカーを含む。好ましいマーカーは、血漿マーカーである。

一部の実施態様では、ＴＧＦβ１のＬＴＢＰ複合体阻害剤は、以下：ＰＡＩ－１（Ｓｅｒｐｉｎｅ１によってコードされる）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＣＰ－１（ＣＣＬ２としても知られる）、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ３ａ１、ＦＮ１、ＴＧＦβ１、ＣＴＧＦ、α－ＳＭＡ、ＩＴＧＡ１１、およびＡＣＴＡ２の１つまたは複数の過剰発現と関連する疾患の治療において用いられ、ここで治療は、疾患を治療するのに効果的な量での、疾患を患っている対象への阻害剤の投与を含む。一部の実施態様では、阻害剤は、ＰＡＩ－１、ＭＣＰ－１／ＣＣＬ２、ＣＴＧＦ、および／またはα－ＳＭＡの過剰発現と関連する疾患を治療するために用いられる。一部の実施態様では、疾患は骨髄線維症である。一部の実施態様では、疾患はがんであり、例えば、固形腫瘍を含むがんである。一部の実施態様では、疾患は臓器線維症であり、例えば、肝臓、腎臓、肺、筋肉、皮膚および／または、心臓または心血管系組織の線維症である。一部の実施態様では、疾患はアルポート症候群である。一部の実施態様では、阻害剤は、以下：ＰＡＩ－１（Ｓｅｒｐｉｎｅ１によってコードされる）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＣＰ－１（ＣＣＬ２としても知られる）、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ３ａ１、ＦＮ１、ＴＧＦβ１、ＣＴＧＦ、α－ＳＭＡ、ＩＴＧＡ１１、およびＡＣＴＡ２の１つまたは複数の発現を減少させる。

ＴＧＦβ１阻害剤療法のインビボ効果を評価するために用いられ得る別のバイオマーカーは、血中尿素窒素（ＢＵＮ）である。尿素は、タンパク質分解の副産物として体内に自然に形成される。尿素は、肝臓から腎臓まで移動し、そこで血液から濾過／除去される。したがって、ＢＵＮレベルは、患者の腎臓が正しく機能していない状況において増大し得る。例えば、腎線維症を有する患者は、ＢＵＮの増大を示し得る。したがって、一部の実施態様では、ＢＵＮは、本明細書中に記載のＴＧＦβ１のＬＴＢＰ特異的阻害剤のインビボ効果を評価するために測定される。他の実施態様では、ＴＧＦβ１のＬＴＢＰ特異的阻害剤は、ＢＵＮの増大と関連する疾患（例えば、腎線維症および／または急性または慢性腎疾患、損傷、または不全）の治療において用いられる。特定の実施態様では、ＢＵＮの増大と関連する疾患は、アルポート症候群である。

したがって、本開示は、ＴＧＦβ１阻害療法に反応する可能性がある候補患者または患者集団を選択する方法を含む。かかる方法は、患者（または患者集団）から回収された生物学的サンプル、例えば生検サンプルを、本明細書において議論される１つまたは複数のマーカーの発現に関して試験するステップを含んでよい。同様に、そのような遺伝子マーカー（単数または複数）は、療法に対する患者の反応性を監視する目的のために用いられ得る。監視は、例えば、療法を施す前および後、および、治療的レジメンの過程を経時的に、患者から回収された２以上の生物学的サンプルを試験して、治療的応答または有効性を示す１つまたは複数のマーカーの遺伝子発現レベルにおける変化を評価するステップを含んでよい。

一部の実施態様では、ＴＧＦβ１阻害療法に反応する可能性がある候補患者または患者集団を選択する方法は、本明細書中に記載のもののような遺伝子マーカー（単数または複数）に関して以前に試験されて、異常なその発現を示した、患者または患者集団を同定するステップを含んでよい。一部の実施態様では、異常なマーカー発現は、以下：ＴＧＦβ１（および／またはＴＧＦＢ１）、ＬＲＲＣ３３、ＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＰＡＩ－１／Ｓｅｒｐｉｎｅ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ３ａ１、ＦＮ１、ＣＴＧＦ、α－ＳＭＡ、ＩＴＧＡ１１、およびＡＣＴＡ２の少なくとも１つの上昇されたレベルを含む。一部の実施態様では、患者または患者集団（例えば、それらから回収された生物学的サンプル）は、上昇したＴＧＦβ１活性化、ホスホ－Ｓｍａｄ２／３、またはそれらの組み合わせを示す。一部の実施態様では、患者または患者集団は、ＢＵＮの上昇を示す。

併用療法
本開示は、インビボでＴＧＦβ１阻害によって利益を受け得る対象を治療するための併用療法として用いられる、医薬組成物および関連方法をさらに包含する。任意のこれらの実施態様では、かかる対象は、少なくとも１つのＴＧＦβ１阻害剤、例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分を含む第１の組成物を、同一または重複する疾患または臨床状態を治療することが意図される少なくとも１つのさらなる治療を含む第２の組成物とともに含む、併用療法を受け得る。第１および第２の組成物は両方とも、同一の細胞標的、または別個の細胞標的に対して作用し得る。一部の実施態様では、第１および第２の組成物は、疾患または臨床状態の症候または態様の同一または重複するセットを治療または緩和し得る。一部の実施態様では、第１および第２の組成物は、疾患または臨床状態の症候または態様の別個のセットを治療または緩和し得る。一例であるが提供すると、第１の組成物は、ＴＧＦβ１シグナリングと関連する疾患または症状を治療し得て、一方で、第２の組成物は、同一の疾患と関連する炎症または線維症などを治療し得る。かかる併用療法は、互いとともに施されてよい。併用療法の文脈における語句「とともに」は、第１の療法の治療的効果が、併用療法を受ける対象において、第２の療法の治療的効果と時間的および／または空間的に重複することを意味する。したがって、併用療法は、同時的な投与のための単一製剤、または療法の連続的投与のための別個の製剤として、処方され得る。

好ましい実施態様では、併用療法は、疾患の治療において相乗効果を生じる。用語「相乗」は、それぞれの単剤療法を合わせた相加的効果よりも大きな効果（例えば、より大きな有効性）を指す。

一部の実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物を含む併用療法は、別の療法（例えば、第２の薬剤の単剤療法）によって生じるものと全体的に同等の有効性を生じるが、第２の薬剤の単剤療法と比較して、第２の薬剤と関連する不要な副作用がより少なく、または、毒性の重度がより低い。一部の実施態様では、かかる併用療法は、より少ない投薬量の第２の薬剤を可能にするが、全体的な有効性を維持する。かかる併用療法は、長期の治療が保証される、および／または、小児科の患者を含む患者集団に、特に適切であり得る。

したがって、本発明は、本明細書に記載の、ＴＧＦβ１タンパク質活性化の減少のための併用療法での使用のための医薬組成物および方法、および、ＴＧＦβ１シグナリングと関連する疾患または症状の治療または予防を提供する。したがって、当該方法または医薬組成物は、第２の療法をさらに含む。一部の実施態様では、第２の療法は、ＴＧＦβ１シグナリングと関連する疾患または症状を治療または予防するのに有用であり得る。第２の療法は、標的の疾患と関連する少なくとも１つの症候（単数または複数）を減少または治療し得る。第１および第２の療法は、同様または関係のない作用機序によってそれらの生物学的効果を発揮し得て；または、第１および第２の療法のいずれか一方または両方は、作用機序の多重性によってそれらの生物学的効果を発揮し得る。

本明細書に記載の医薬組成物は、それぞれの記載される実施態様に関して、同一の薬学的に許容できる担体または異なる薬学的に許容できる担体中に、第１および第２の療法を有してよいことが理解されるべきである。第１および第２の療法は、記載される実施態様において、同時に、または連続して施されてよいことが、さらに理解されるべきである。

一実施態様では、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する、本明細書中に記載の阻害剤、例えば、抗体は、ＴＧＦβ１活性を阻害する別の薬剤とともに投与することができる。例えば、第２の薬剤は、別のコンテキスト特異的ＴＧＦβ１阻害剤であってよい。一実施態様では、併用療法は、（ｉ）ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体またはその抗原結合部分、および（ｉｉ）ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体またはその抗原結合部分を含む。別の実施態様では、併用療法は、（ｉ）ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体またはその抗原結合部分、および（ｉｉ）ＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体またはその抗原結合部分を含む。ＬＲＲＣ３３－ＴＧＦβ１に選択的に結合するコンテキスト特異的抗体は、例えばＵＳ６２／５０３，７８５に記載されており、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１に選択的に結合するコンテキスト特異的抗体は、上記に記載されている。前述の出願の内容全体は参照により本明細書中に援用される。一実施態様では、併用療法は、（ｉ）ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体またはその抗原結合部分、および（ｉｉ）提示分子（例えば、ＬＴＢＰ１／３、ＧＡＲＰ、および／またはＬＲＲＣ３３）との複合体においてｐｒｏ／潜在型ＴＧＦβ１に選択的に結合する、コンテキスト非依存性阻害剤、例えば、抗体またはその抗原結合部分を含む。ＴＧＦβ１のコンテキスト非依存性阻害剤は、例えばＷＯ２０１７／１５６５００に記載されており、その内容全体は参照により本明細書中に援用される。

本発明の１つまたは複数の抗－ＴＧＦβ１阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分は、１つまたは複数のさらなる治療的薬剤と組み合わせて用いられ得る。本発明の抗－ＴＧＦβ抗体とともに用いることのできるさらなる治療的薬剤の例は、限定されないが、ミオスタチン阻害剤、ＶＥＧＦアゴニスト、ＩＧＦ１アゴニスト、ＦＸＲアゴニスト、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ５阻害剤、デュアルＣＣＲ２／ＣＣＲ５阻害剤、リシルオキシダーゼ－様－２阻害剤、ＡＳＫ１阻害剤、アセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤、ｐ３８キナーゼ阻害剤、ピルフェニドン、ニンテダニブ、セロンセルチブ（ｓｅｌｏｎｓｅｒｔｉｂ）、ｃｉｌｏｆｅｘｏｒ、フィルソコスタット、ピルフェニドン、オベチコール酸、エラフィブラノール（ｅｌａｆｉｂｒａｎｏｒ）、抗－ＣＤ１４７抗体、抗－ＧＰ７３抗体、ガラクチン－１阻害剤、セロンセルチブ（ｓｅｌｏｎｓｅｒｔｉｂ）、カスパーゼ阻害剤（Ｅｍｒｉｃａｓａｎ、ＩＤＮ－６５５６、ＰＦ－０３４９１３９０）、ＧＤＦ１１阻害剤、ＧＤＦ８／ミオスタチン阻害剤などを含む。ＧＤＦ８／ミオスタチン阻害剤は、好ましくは、ミオスタチン選択的阻害剤（例えば、抗体または抗原結合フラグメント）である。ミオスタチン選択的阻害剤は、潜在型ミオスタチンに結合し得る。ミオスタチン選択的阻害剤の非限定的な例は、ＳＲＫ－０１５（例えばＷＯ２０１７／２１８５９２Ａ１を参照）およびトレボグルマブ（ｔｒｅｖｏｇｒｕｍａｂ）、またはそれらの任意の変異体、またはＷＯ２０１６／０９８３５７に記載の抗体を含む。

一部の実施態様では、さらなる薬剤は、チェックポイント阻害剤である。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、ＰＤ－１拮抗薬、ＰＤＬ１拮抗薬、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤＬ２融合タンパク質、ＣＴＬＡ４拮抗薬、ＧＩＴＲアゴニスト、抗－ＩＣＯＳ抗体、抗－ＩＣＯＳＬ抗体、抗－Ｂ７Ｈ３抗体、抗－Ｂ７Ｈ４抗体、抗－ＴＩＭ３抗体、抗－ＬＡＧ３抗体、抗－ＯＸ４０抗体、抗－ＣＤ２７抗体、抗－ＣＤ７０抗体、抗－ＣＤ４７抗体、抗－４１ＢＢ抗体、抗－ＰＤ－１抗体、腫瘍溶解性ウイルス、およびＰＡＲＰ阻害剤からなる群より選択される。一部の実施態様では、さらなる療法は放射線である。一部の実施態様では、さらなる薬剤は化学療法剤である。一部の実施態様では、化学療法剤はタキソールである。一部の実施態様では、さらなる薬剤は抗－炎症性薬剤である。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、単球／マクロファージ動員および／または組織浸潤のプロセスを阻害する。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、肝星細胞活性化の阻害剤である。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、ケモカイン受容体拮抗薬、例えば、ＣＣＲ２拮抗薬およびＣＣＲ５拮抗薬である。一部の実施態様では、そのようなケモカイン受容体拮抗薬は、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５拮抗薬のようなデュアル特異的拮抗薬である。一部の実施態様では、併用療法として投与されるさらなる薬剤は、増殖因子のＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーまたはそのレギュレーターであり、または含む。一部の実施態様では、そのような薬剤は、ＧＤＦ８／ミオスタチンおよびＧＤＦ１１のモジュレーター（例えば、インヒビターおよびアクチベーター）から選択される。一部の実施態様では、そのような薬剤は、ＧＤＦ８／ミオスタチンシグナリングの阻害剤である。一部の実施態様では、そのような薬剤は、ｐｒｏ／潜在型ミオスタチン複合体に結合してミオスタチンの活性化をブロックするモノクローナル抗体である。一部の実施態様では、ｐｒｏ／潜在型ミオスタチン複合体に結合してミオスタチンの活性化をブロックするモノクローナル抗体は、フリーの成熟ミオスタチンには結合しない。

１つまたは複数のさらなる療法とともにＴＧＦβ阻害剤（例えば本明細書において開示されるＴＧＦβ１選択的阻害剤）を含む併用療法は、様々な肝臓疾患を治療するために検討され得る。肝臓疾患の非限定的な例は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含み、以下を含んでよい：肝線維症を伴う非硬変性ＮＡＳＨ、肝臓硬変、代償性肝硬変を伴うＮＡＳＨ、非代償性肝硬変を伴うＮＡＳＨ、線維症を伴う肝臓炎症、線維症を伴わない肝臓炎症；ステージ２および３の肝線維症、ステージ４の線維症（線維症を伴うＮＡＳＨ硬変または硬変ＮＡＳＨ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）（以前は原発性胆汁性肝硬変として知られていた）、および原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）。

以下の療法の１つまたは複数を、上記に挙げたもののような肝臓疾患の治療のために、ＴＧＦβ阻害剤（例えば本明細書において開示されるＴＧＦβ１選択的阻害剤）とともに用いてよい：ピオグリタゾン（ＰＰＡＲγアゴニスト）；エラフィブラノール（Ｅｌａｆｉｂｒａｎｏｒ）（ＰＰＡＲα／δアゴニスト）；サログリタザル（ＰＰＡＲα／γアゴニスト）；オベチコール酸（ＦＸＲアゴニスト）；リラグルチド（ＧＬＰ－１受容体アゴニスト）；アラムコール（Ａｒａｍｃｈｏｌ）（ＳＣＤ阻害剤）；ボリキシバット（Ｖｏｌｉｘｉｂａｔ）（ＳＨＰ－６２６）（ＡＳＢＴ阻害剤）；ＢＭＳ－９８６０３６（ＦＧＦ－２１アナログ）；ＮＧＭ－２８２（ＦＧＦ－１９アナログ）；テサモレリン（ＧＨＲＨアナログ）；ＮＤＩ－０１０９７６（ＡＣＣ阻害剤）；ＧＳ－９６７４（ＦＸＲアゴニスト）；Ｄｕｒ－９２８（硫酸化オキシステロール）；ＡＺＤ４０７６（ｍｉＲ－１０３／１０７拮抗薬）；ロスバスタチン（ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤）；ＩＮＴ－７６７（ＦＸＲ／ＴＧＲ５アゴニスト）；セベラマー（胆汁酸捕捉剤）；ビタミンＥ（抗酸化）；ペントキシフィリン（ＰＤＥ阻害剤）；セニクリビロック（Ｃｅｎｉｃｒｉｖｉｒｏｃ）（ＣＣＲ２／ＣＣＲ５拮抗薬）；Ｅｍｒｉｃａｓａｎ（カスパーゼ阻害剤）；ＧＳ－４９９７（ＡＳＫ１阻害剤）；アンレキサノクス（ＩＫＫε／ＴＢＫ１阻害剤）；ＰＸＳ－４７２８Ａ（ＶＡＰ－１阻害剤）；オルリスタット（腸リパーゼ阻害剤）；ＩＭＭ－１２４ｅ（ＩｇＧリッチのウシ初乳）；ソリスロマイシン（抗生物質）；糞便微生物移植（消化管マイクロバイオームの調整）；シムツズマブ（Ｓｉｍｔｕｚｕｍａｂ）（ＬＯＸＬ２抗体）；ＧＲ－ＭＤ－０２（ガレクチン－３阻害剤）；トレボグルマブ（ｔｒｅｖｏｇｒｕｍａｂ）（ミオスタチン阻害剤）；ガレトスマブ（Ｇａｒｅｔｏｓｍａｂ）（アクチビンＡ阻害剤）；およびＳＲＫ－０１５（ミオスタチン阻害剤）。

そのような併用療法は、より少ない投薬量の投与される治療的薬剤を有利に利用し得て、したがって、様々な単剤療法と関連するあり得る毒性または合併症を避ける。

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体を検出するためのアッセイ
一部の実施態様では、本明細書において提供される方法および組成物は、対象から得られたサンプルにおけるＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体を検出する方法に関する。本明細書において用いられる「対象」は、個々の生物、例えば、個々の哺乳類を指す。一部の実施態様では、対象はヒトである。一部の実施態様では、対象は非ヒト哺乳類である。一部の実施態様では、対象は非ヒト霊長類である。一部の実施態様では、対象は齧歯類である。一部の実施態様では、対象はヒツジ、ヤギ、ウシ、家禽、ネコ、またはイヌである。一部の実施態様では、対象は、脊椎動物、両生類、爬虫類、魚類、昆虫、ハエ、または線虫である。一部の実施態様では、対象は研究動物である。一部の実施態様では、対象は、遺伝学的に操作された、例えば、遺伝学的に操作された非ヒト対象である。対象は、いずれの性別および任意の進行ステージであってよい。一部の実施態様では、対象は、患者または健常者である。

一部の実施態様では、対象から得られたサンプルにおけるＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体を検出する方法は、（ａ）サンプルを、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する抗体と、抗原への抗体の結合に適切な条件下で接触させるステップ（抗原がサンプル中に存在するならば、それにより結合複合体を形成する）；および（ｂ）抗原に結合した抗体のレベルを決定するステップ（例えば、結合複合体のレベルを決定する）を含む。

一実施態様では、例えば、固定（ｔｅｔｈｅｒ）を提供することによって、インテグリンによる潜在型ＴＧＦβの活性化を可能にする、表面上に固定化されたビオチン化潜在型ＴＧＦβ１複合体を用いるスクリーニングアッセイが使用される。他には、非インテグリンアクチベーターを、そのシステムにおいて試験することもできる。読み出し（ｒｅａｄｏｕｔ）は、レポーター細胞または他のＴＧＦβ依存性細胞の応答を通して測定することができる。

ＴＧＦβ活性化を測定するための細胞に基づくアッセイ
ＴＧＦβの活性化（および、抗体のようなＴＧＦβ試験阻害剤によるその阻害）は、当技術分野で知られている任意の適切な方法によって測定され得る。例えば、インテグリンによって仲介されるＴＧＦβの活性化は、本明細書においてさらに詳細に説明されるように、「ＣＡＧＡ１２」ルシフェラーゼアッセイのような細胞に基づくアッセイにおいて使用することができる。そのようなアッセイシステムは、以下の構成要素：ｉ）ＴＧＦβの由来（組み換え、内因性またはトランスフェクト）；ｉｉ）インテグリンの由来（組み換え、内因性、またはトランスフェクト）；およびｉｉｉ）ＴＧＦβ活性化に応答するレポーターシステム、例えば、ＴＧＦβに応答して、シグナルを読み出し可能なアウトプット（例えば、ＣＡＧＡ１２細胞または他のレポーター細胞株におけるルシフェラーゼ活性）に変換することが可能な、ＴＧＦβ受容体を発現している細胞を含んでよい。一部の実施態様では、レポーター細胞株は、ＴＧＦβ応答性プロモーター（例えば、ＰＡＩ－１プロモーター）の制御下のレポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ遺伝子）を含む。一部の実施態様では、感受性を与える特定のプロモーターエレメントが、レポーターシステム内に取り込まれてよい。一部の実施態様では、そのようなプロモーターエレメントは、ＣＡＧＡ１２エレメントである。アッセイにおいて用いられ得るレポーター細胞株は、例えば、Ａｂｅｅｔａｌ．（１９９４）ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍ．２１６（２）：２７６－８４に記載されており、参照により本明細書中に援用される。一部の実施態様では、前述のアッセイ構成要素のそれぞれは、同じ由来（例えば、同じ細胞）から提供される。一部の実施態様では、前述のアッセイ構成要素のうちの２つは同じ由来から提供され、第３のアッセイ構成要素は異なる由来から提供される。一部の実施態様では、全ての３つのアッセイ構成要素は異なる由来から提供される。例えば、一部の実施態様では、インテグリンおよび潜在型ＴＧＦβ複合体（ｐｒｏＴＧＦβおよび提示分子）は、同一の由来（例えば、同一のトランスフェクトされた細胞株）からアッセイのために提供される。一部の実施態様では、インテグリンおよびＴＧＦは、別個の由来（例えば、２つの異なる細胞株、精製されたインテグリンおよびトランスフェクトされた細胞の組み合わせ）からアッセイのために提供される。１つまたは複数のアッセイ構成要素の由来として細胞が用いられる場合、アッセイのそのような構成要素は、細胞に内因性であってよく、細胞内に安定的に発現されてよく、一時的にトランスフェクトされてよく、またはそれらの任意の組み合わせであってよい。

当業者は、そのようなアッセイを様々な適切な構成に、容易に適合させることができる。例えば、様々な由来のＴＧＦβが考慮され得る。一部の実施態様では、ＴＧＦβの由来は、ＴＧＦβを発現および沈着させる細胞である（例えば、一次細胞、増殖細胞、不死化細胞または細胞株など）。一部の実施態様では、ＴＧＦβの由来は、適切な手段を用いてアッセイシステムにおいて固定化された、精製および／または組換えＴＧＦβである。一部の実施態様では、アッセイシステムにおけるＴＧＦβ固定化は、脱細胞してまたはせずにアッセイプレート上の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）組成物内に提示され、それは線維芽細胞由来のＴＧＦβを模倣している。一部の実施態様では、ＴＧＦβは、アッセイにおいて用いられる細胞の細胞表面上に提示される。さらに、選択の提示分子は、適切な潜在型－ＴＧＦβ複合体を提供するためにアッセイシステムにおいて含まれ得る。当業者は、どの提示分子（単数または複数）が、特定の細胞または細胞型において提示または発現され得るのか容易に決定することができる。そのようなアッセイシステムを用いて、試験薬剤（例えば抗体）の存在または不存在におけるＴＧＦβ活性化の相対的変化を容易に測定して、ＴＧＦβ活性化に対する試験薬剤の効果をインビトロで評価し得る。

そのような細胞に基づくアッセイは、試験されるＴＧＦβアイソフォーム、潜在型複合体（例えば、提示分子）のタイプなどに応じて、複数の方法で改変または仕立てられ得る。一部の実施態様では、ＴＧＦβを活性化することが可能なインテグリンを発現することが知られる細胞を、アッセイにおけるインテグリンの由来として用いてよい。そのような細胞は、ＳＷ４８０／β６細胞（例えば、クローン１Ｅ７）を含む。一部の実施態様では、インテグリン発現細胞は、目的の提示分子（例えばＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、ＬＴＢＰ（例えば、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３）など）をコードするプラスミドおよび目的のＴＧＦβアイソフォームのプロ形態（ｐｒｏ－ｆｏｒｍ）（例えばｐｒｏＴＧＦβ１）をコードするプラスミドと共トランスフェクトされ得る。トランスフェクション後に、細胞は、トランスフェクトされた遺伝子の発現を可能にするのに十分な時間インキュベートされ（例えば、約２４時間）、細胞を洗浄して、段階希釈の試験薬剤（例えば抗体）とともにインキュベートする。一部の実施態様では、組織培養ウェルまたはプレートは、細胞が付着、増殖、および／またはＥＣＭ構成要素を沈着させ得る好ましい基材を提供する物質でコーティングされてよい。このことは、ＥＣＭの構造、組織化またはそれに対する細胞の接着を促進させ得る。例えば、ポリ－リジンのような荷電物質を用いて、組織培養基材を事前コーティングしてよい。追加してまたは代替して、ＥＣＭの１つまたは複数の構成要素、例えば、ラミニン、フィブロネクチンなどを、コーティングのための基材として用いてよい。一部の実施態様では、細胞は、トランスフェクションの前に、ＥＣＭタンパク質でコーティングされたウェル／プレートの上に蒔かれる。一部の実施態様では、細胞は、トランスフェクション後に、ＥＣＭでコーティングされたウェル／プレート上に蒔かれる。一部の実施態様では、ウェル／プレートは、フィブロネクチンでコーティングされる。一部の実施態様では、ウェル／プレートは、ヒトフィブロネクチンでコーティングされる。

トランスフェクション後（および、ＥＣＭでコーティングされたウェル／プレート上に蒔いた後であってもよい）、レポーター細胞株（例えば、ＣＡＧＡ１２細胞）をアッセイシステムに添加して、その後に適切なインキュベーション時間を続けて、ＴＧＦβシグナリングを可能する。インキュベーション期間（例えば、約１８～２０時間）後に、試験薬剤の添加に続いて、シグナル／読み出し（例えば、ルシフェラーゼ活性）が適切な手段を用いて検出される（例えば、ルシフェラーゼ発現レポーター細胞株については、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いることができる）。一部の実施態様では、ルシフェラーゼ蛍光は、オートゲイン設定でＢｉｏＴｅｋ（ＳｙｎｅｒｇｙＨ１）プレートリーダーを用いて検出され得る。

ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβと関連する疾患／障害を緩和させる使用のためのキット
本開示は、ＴＧＦβ関連の徴候と関連する疾患／障害を緩和させる使用のためのキットも提供する。そのようなキットは、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分、例えば、本明細書中に記載される任意のものを含んでいる１つまたは複数のコンテナーを含んでよい。

一部の実施態様では、当該キットは、本明細書中に記載の任意の方法に従った使用のための説明書を含んでよい。含まれる説明書は、本明細書中に記載のもののような標的疾患を、治療、発症遅延、または緩和するための、ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分の投与の説明を含んでよい。当該キットは、個体が標的疾患を有するかどうかの同定に基づき、治療に適切な個体を選択する説明をさらに含んでよい。さらに他の実施態様では、説明書は、標的疾患のリスクがある個体への、抗体、またはその抗原結合部分の投与の説明を含む。

ＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分の使用に関する説明書は、一般に、意図される治療のための、投薬量、投与スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。コンテナーは、単位用量、バルクのパッケージ（例えば、多数回用量パッケージ）またはサブ単位用量であってよい。本開示のキットにおいて供給される説明書は、典型的に、ラベルまたは添付文書上に記載された説明書（例えば、キット内に含まれるペーパーシート）であるが、機械可読な説明書（例えば、磁気または光ディスク記憶装置上に保持される説明書）も許容される。ラベルまたは添付文書は、組成物が、ＴＧＦβ関連の徴候と関連する疾患または障害を治療、発症遅延、および／または、緩和するために用いられることを示してよい。説明書は、本明細書に記載の任意の方法を実施するために提供され得る。

本開示のキットは、適切なパッケージ内に提供されてよい。適切なパッケージは、制限されないが、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージ（例えば、密封マイラまたはプラスチックバッグ）などを含む。特定のデバイス、例えば、吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、噴霧器）またはミニポンプのようなインフュージョンデバイスと組み合わせた使用のためのパッケージも検討される。キットは、滅菌アクセスポートを有してよい（例えば、コンテナーは、皮下注入針によって突き刺すことが可能なストッパーを有する静脈内投与用の溶液バッグまたはバイアルであってよい）。コンテナーは、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、コンテナーは、皮下注入針によって突き刺すことが可能なストッパーを有する静脈内投与用の溶液バッグまたはバイアルであってよい）。組成物内の少なくとも１つの活性剤は、本明細書中に記載のＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体および／またはＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合部分である。

キットは、バッファーおよび解釈上の情報のような、さらなる構成要素を提供してもよい。通常、キットは、コンテナーと、コンテナー上またはそれと関連したラベルまたは添付文書（単数または複数）とを含む。一部の実施態様では、本開示は、上述のキットの内容を含む製造物を提供する。

診断、患者選択、監視
ＴＧＦβ１阻害療法を含む治療的方法は、ＴＧＦβ１徴候の診断および／またはそのような療法に反応する可能性がある患者の選択を含んでよい。さらに、ＴＧＦβ１阻害剤を受ける患者は、治療の治療的効果について監視されてよく、それは典型的に、状態を示すものであって治療の前および後に測定され得る（例えばアッセイされ得る）１つまたは複数の適切なパラメーターの測定、および、治療と関連するパラメーター変化の評価を含む。例えば、そのようなパラメーターは、患者から回収された生物学的サンプル中に存在するバイオマーカーのレベルを含んでよい。バイオマーカーは、ＲＮＡに基づいてよく、タンパク質に基づいてよく、細胞に基づいてよく、および／または組織に基づいてよい。例えば、特定の疾患状態において過剰発現される遺伝子は、疾患または療法に対する応答を診断および／または監視するためのバイオマーカーとして働き得る。疾患関連の細胞集団の細胞表面タンパク質は、バイオマーカーとして働き得る。そのような方法は、特定の疾患の程度を示す疾患パラメーターの直接的な測定を含んでよい。血清／血液サンプル、生検、およびイメージングのような任意の適切なサンプリング方法を用いてよい。

生検は伝統的に、線維症（例えば、臓器線維症）および増殖性障害（例えば、がん）のような様々な疾患を診断および監視するための標準であるが、より侵襲性の低い代替法が好ましくあり得る。例えば、多くの非侵襲性のインビボイメージング技術を用いて、治療に関する患者を診断、監視、および選択してよい。したがって、本発明は、患者または対象における疾患を診断および／または監視するためのインビボでのイメージング技術の使用を含む。一部の実施態様では、患者または対象は、本明細書中に記載のアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤を受けている。一部の実施態様では、患者または対象は、本明細書中に記載のアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤を受けている。他の実施態様では、インビボでのイメージング技術を用いて、アイソフォーム特異的ＴＧＦβ１阻害剤による治療のための患者を選択してよい。一部の実施態様では、そのような技術は、ＴＧＦβ１阻害療法のような療法に、患者が反応するかどうかまたはどのように反応するのかを決定するために用いられ得る。

その方法のために用いられる例示的なインビボでのイメージング技術は、限定されないが、Ｘ線撮影、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、医用超音波検査または超音波、内視鏡検査、エラストグラフィー、触覚性イメージング、サーモグラフィー、医用撮影を含む。他のイメージング技術は、核医学機能イメージング、例えば、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）および単一光子放出型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）を含む。これらの技術を実施して結果を分析する方法は、当技術分野で知られている。

がんを診断および監視するために一般に用いられる非侵襲性イメージング技術は、限定されないが：磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、超音波、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放出型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、蛍光反射イメージング（ＦＲＩ）、および蛍光を介したトモグラフィー（ＦＭＴ）を含む。ハイブリッドイメージングのプラットフォームを用いて、がんを診断および監視してもよい。例えば、ハイブリッド技術は、限定されないが：ＰＥＴ－ＣＴ、ＦＭＴ－ＣＴ、ＦＭＴ－ＭＲＩ、およびＰＥＴ－ＭＲＩを含む。ダイナミックコントラスト増強ＭＲＩ（ＤＣＥ－ＭＲＩ）は、乳がんを検出するために一般に用いられる別のイメージング技術である。これらの技術を実施して結果を分析する方法は当技術分野で知られている。

線維症を診断および監視するために一般に用いられる非侵襲性イメージング技術は、限定されないが：超音波（例えば、従来のまたはコントラスト増強超音波）、超音波エラストグラフィー（例えば、トランジェント・エラストグラフィー、ポイント・シェア・ウェイブ（ｐｏｉｎｔｓｈｅａｒｗａｖｅ）エラストグラフィーおよび２Ｄ－シェア・ウェイブ・エラストグラフィー）、ＣＴスキャン（例えば、従来のＣＴまたはＣＴ灌流イメージング）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）（例えば、従来のＭＲＩ、磁気共鳴エラストグラフィー、拡散強調磁気共鳴イメージング、ガドキセト酸二ナトリウム、および磁気共鳴灌流イメージング）を含む。

一部の実施態様では、非侵襲性イメージング技術は、肝線維症または肝臓脂肪症のレベルを評価するために用いられる。例えば、肝線維症を評価するのに特に有用なイメージング技術は、限定されないが：ＦｉｂｒｏＳｃａｎ（トランジェント・エラストグラフィー；ＴＥ）、ポイント・シェア・ウェイブ・エラストグラフィー（ｐＳＷＥ；別名：音響放射力インパルス（ＡＲＦＩ））、２Ｄ－３ＤＳＷＥ、磁気共鳴エラストグラフィー（ＭＲＥ）、および多パラメーターＭＲＩを含んでよい。肝臓脂肪症を評価するのに特に有用なイメージング技術は、限定されないが：超音波検査、制御減衰パラメーター（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒ）（ＣＡＰ）エラストグラフィー、ＭＲＩによって評価されるプロトン密度脂肪率（ＭＲＩ－ＰＤＦＦ）、および磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）を含んでよい。一部の実施態様では、インビボイメージング技術を用いて、肝臓剛性が評価される。一部の実施態様では、インビボイメージング技術を用いて、肝内トリグリセリドレベルが検出および評価される。一部の実施態様では、インビボイメージング技術を用いて、肝臓表面小結節形成（ＬＳＮ；別名：「肝臓スコア」）、肝臓剛性、および／または肝臓部分の体積比（ｌｉｖｅｒｓｅｇｍｅｎｔａｌｖｏｌｕｍｅｒａｔｉｏ）（ＬＳＶＲ）が評価され、それらは全て、肝臓線維症の病期分類（ｓｔａｇｉｎｇ）および硬変のサブ病期分類（ｓｕｂ－ｓｔａｇｉｎｇ）に有益である。これらの技術を実施して結果を分析する方法は、当技術分野で知られている。

最近では、目的の細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、マクロファージ、および、がん細胞）のインビボでの検出を可能にする非侵襲性イメージング方法が開発されている。例えば、ｗｗｗ．ｉｍａｇｉｎａｂ．ｃｏｍ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／；Ｔａｖａｒｅｅｔａｌ．（２０１４）ＰＮＡＳ，１１１（３）：１１０８－１１１３；Ｔａｖａｒｅｅｔａｌ．（２０１５）ＪＮｕｃｌＭｅｄ５６（８）：１２５８－１２６４；Ｒａｓｈｉｄｉａｎｅｔａｌ．（２０１７）ＪＥｘｐＭｅｄ２１４（８）：２２４３－２２５５；ＢｅｃｋｆｏｒｄＶｅｒａｅｔａｌ．（２０１８）ＰＬｏＳＯＮＥ１３（３）：ｅ０１９３８３２；および、Ｔａｖａｒｅｅｔａｌ．（２０１５）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ７６（１）：７３－８２を参照し、それぞれ参照によって本明細書中に援用される。いわゆる「Ｔ細胞トラッキング」は、抗－腫瘍エフェクターＴ細胞をインビボで検出および局在化させることを目的とする。これは、固形腫瘍の免疫抑制性の表現型を理解するのに有用な見識を与え得る。細胞傷害性Ｔ細胞が十分に浸潤した腫瘍（「炎症性」または「ホット」腫瘍）は、チェックポイント・ブロック療法（ＣＢＴ）のようながん療法に反応する可能性がある。一方、免疫抑制性の表現型を有する腫瘍は、抗－腫瘍免疫応答がある場合でさえ、Ｔ細胞浸潤が少ない傾向がある。これらのいわゆる「免疫排除（ｉｍｍｕｎｅｅｘｃｌｕｄｅｄ）」腫瘍は、ＣＢＴのようながん療法に反応しない可能性がある。Ｔ細胞トラッキング技術は、これらの異なる表現型を明らかにし得て、患者に利益を与えると考えられる治療的手法においてガイドするための情報を提供する。例えば、「免疫排除」腫瘍を有する患者は、免疫抑制性の表現型を反転させるのを助けるためのＴＧＦβ１阻害剤療法によって利益を受ける可能性がある。同様の技術を用いて他の疾患、例えば、線維症を診断および監視し得ると考えられる。典型的に、検出部分（例えば、放射標識、蛍光など）によって改変された抗体または抗体様分子を、患者内に注入することができ、それから、特定のマーカー（例えば、ＣＤ８＋およびＭ２マクロファージ）の部位へ分配および局在化する。

非侵襲性のインビボイメージング技術は、患者を診断する；ＴＧＦβ１阻害剤療法によって利益を受ける可能性がある患者を選択または同定する；および／または、治療の際の治療的応答について患者を監視する目的のための、様々な適切な方法において適用され得る。公知の細胞表面マーカーを有する任意の細胞は、細胞マーカーに特異的に結合する抗体または同様の分子を用いることによって、検出／局在化され得る。典型的に、そのような技術の使用によって検出される細胞は、免疫細胞、例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、制御性Ｔ細胞、ＭＤＳＣ、疾患関連マクロファージ、（ＴＡＭおよびＦＡＭのようなＭ２マクロファージ）、ＮＫ細胞、樹状細胞、および好中球である。

適切な免疫細胞マーカーの非限定的な例は、単球マーカー、マクロファージマーカー（例えば、Ｍ１および／またはＭ２マクロファージマーカー）、ＣＴＬマーカー、抑制性免疫細胞マーカー、ＭＤＳＣマーカー（例えば、Ｇ－および／またはＭ－ＭＤＳＣに関するマーカー）を含み、限定されないが：ＣＤ８、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ６８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ６６、ＣＤ３４、ＣＤ２５、およびＣＤ４７を含む。

一部の実施態様では、インビボイメージング技術は、肝臓脂肪症、肝臓トリグリセリド、免疫細胞（例えば以下に記載）、および／または筋線維芽細胞を測定する。一部の実施態様では、治療は、病変組織において、トリグリセリド、脂肪症、肝臓表面小結節、炎症、および／またはマクロファージを減少させる。一部の実施態様では、選択される患者は、肝臓体積の＞５．５％の肝内トリグリセリド含有量を有し、ここで肝内トリグリセリド含有量は、肝臓体積の＞１０％であってもよい。一部の実施態様では、治療は、肝内トリグリセリド含有量を肝臓体積の≦５．５％まで減少させる。一部の実施態様では、治療は、病変組織におけるＭＤＳＣを減少させる。一部の実施態様では、治療は、病変組織におけるマクロファージを減少させる。一部の実施態様では、有効量は、０．１ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇであり、３ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇであってもよい。一部の実施態様では、その方法は、本明細書中に記載の治療的応答に関して対象を監視するステップをさらに含む（例えば、トリグリセリドの減少、脂肪症の減少、肝臓表面小結節の減少、炎症の減少、マクロファージの減少、および／または、肝臓スコアの減少）。

スクリーニングのプロセス；製造
本発明は、スクリーニング方法、生産方法およびｈＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはｈＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合して遅い速度で解離する抗体またはそのフラグメントの製造プロセス、ならびに、医薬組成物およびそれを含んでいる関連するキットを包含する。

抗体（またはその抗原結合フラグメントを含んでいる改変された構築物）を含む医薬組成物を作製する方法は、望ましい属性を有するそのような抗体の同定および選択を要する。ここで、本発明は、低いｋ_ＯＦＦ値を有する抗体はこれらの活性化阻害剤の作用機序を反映する耐久性を提供し得て、それは、内因性受容体との結合に急速に競合する能力に依存するのではなく、むしろ、組織内のＴＧＦβ１の不活性の潜在型に付着する（ｌａｔｃｈｉｎｇｏｎｔｏ）ことによって阻害効果を発揮するという認識を含む。潜在型抗原複合体に結合したままでいる能力（低い解離速度に対応する）は、耐久性の効能をインビボで達成し得る。

したがって、本発明は、ＴＧＦβ１選択的活性化阻害剤を含んでいる医薬組成物を製造する方法を提供し、その方法は、低い解離速度（例えば、≦５×１０^－４（１／ｓ））でヒトＬＬＣに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを選択するステップ、および、その抗体を大規模で産生するステップを含む。

好ましいｏｆｆ速度（低い解離）を有する阻害剤の選択は、一価抗体（例えば、Ｆａｂフラグメント）または全長抗体（例えば、ＩｇＧ）を用いて決定され得る。

一部の実施態様では、産生するステップは、２５０Ｌ以上、例えば、１０００Ｌ、２０００Ｌ、３０００Ｌ、４０００Ｌの容量を有する哺乳類細胞培養を含む。その方法は、細胞培養から抗体を精製するステップをさらに含んでよく、精製された抗体を医薬組成物に処方するステップをさらに含んでもよい。一部の実施態様では、その方法は、選択された抗体を適切な前臨床モデルにおいて有効性および安全性に関して試験するステップ、および、その抗体がＮＯＡＥＬで効果的であることを確認するステップをさらに含む。安全性評価は、組織病理学を含むインビボ毒物学試験、および、例えば、インビトロのサイトカイン放出アッセイおよび血小板アッセイを含む免疫目的の（ｄｉｒｅｃｔｅｄ）安全性評価を含んでよい。

耐久性の阻害効果を達成するために、１０．０Ｅ－４（ｓ^－１）以下（例えば、５．０Ｅ－４以下、１．０Ｅ－４以下、５．０Ｅ－５以下）の解離速度（例えば、一価解離速度）を有する抗体が、本開示に従って、治療的使用および／または大規模製造のために選択され得る。

本開示のいくつかの実施態様が本明細書において記載および例示されているが、当業者は、機能を発揮するため、および／または、本明細書中に記載の結果および／または１つまたは複数の利点を得るための、様々な他の手段および／または構造を容易に想像し、かかるバリエーションおよび／または改変はそれぞれ、本開示の範囲内とみなされる。より一般には、当業者は、本明細書中に記載の全てのパラメーター、寸法、材料、および構造は例示的であることを意味し、実際のパラメーター、寸法、材料、および／または構造は、本開示の教示が用いられる特定の適用（単数または複数）に依存することを容易に理解する。当業者は、ルーチン実験の範囲内で、本明細書中に記載の開示の特定の実施態様に対する多くの等価物を認識し、または確認することが可能である。したがって、前述の実施態様はほんの一例として提供されること、および、添付の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内で、本開示は、明確に記載され特許請求の範囲に記載されるのとは別の方法で実施され得ることが理解されるべきである。本開示は、本明細書中に記載のそれぞれの個々の特徴、システム、物品、材料、および／または方法に関する。さらに、かかる特徴、システム、物品、材料、および／または方法の２以上の任意の組み合わせは、かかる特徴、システム、物品、材料、および／または方法が互いに矛盾しないならば、本開示の範囲内に含まれる。

本発明は、以下の実施例によってさらに説明され、それらは、いかなる方法においても制限を意図しない。本出願全体に挙げられる全ての参考文献、特許および公開された特許出願の内容全体、ならびに図面は、参照により本明細書中に援用される。

形質転換増殖因子β１（ＴＧＦβ１）は、Ｃ末端増殖因子およびＮ末端プロドメインにタンパク質分解切断されるプロタンパク質として発現される。切断後、プロドメインは、増殖因子と非共有結合したままであり、受容体の結合を防止する。この潜在型ＴＧＦβ１は、プロドメインを提示分子に連結するジスルフィド結合を通して大きな潜在型複合体（ＬＬＣ）を形成し、これらの大きな潜在型複合体は、それから、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）内に沈着され、または、細胞表面へと運ばれる。これらの提示分子は、特定のαＶβインテグリンのための固定（ａｎｃｈｏｒ）を提供して、潜在型ＴＧＦβ１上のトラクション力を与える。４つのＴＧＦβ１提示タンパク質が同定されている：潜在型ＴＧＦβ結合タンパク質－１（ＬＴＢＰ１）およびＬＴＢＰ３は、細胞外マトリックス内に沈着し、一方、糖タンパク質Ａ反復優位型（ＧＡＲＰ／ＬＲＲＣ３２）およびロイシンリッチ反復含有タンパク質３３（ＬＲＲＣ３３）は、免疫細胞の表面上に潜在型ＴＧＦβ１を提示する。ＴＧＦβ１は、組織恒常性プロセスおよび免疫応答の調節に関与し、その活性化の調節不全は、臓器線維症、がん、および自己免疫の主なドライバー（ｄｒｉｖｅｒ）である。

広範に発現されるＴＧＦβ増殖因子および受容体と比較して、４つの提示分子－ｐｒｏＴＧＦβ複合体、すなわち、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβおよびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβは、より限定的または選択的（例えば、組織特異的）な発現パターンを示し、関連性によってＴＧＦβ活性の機能性コンパートメント化を生じさせる。提示分子－ｐｒｏＴＧＦβ複合体は、したがって、提示分子が発現される組織内のＴＧＦβシグナリングの個別的な「コンテキスト」を提供する。これらのコンテキストは、２つの広範なカテゴリーに分けられ得る：ｉ）ＥＣＭと関連するＴＧＦβシグナリング（例えば、マトリックス関連ＴＧＦβ機能）；およびｉｉ）細胞と関連するＴＧＦβシグナリング（特に、特定の免疫細胞機能）。ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβおよびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体は第１のカテゴリーに入り、一方、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβおよびＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体は第２のカテゴリーに入る。

治療的目的のためのＴＧＦβ活性の非選択的標的化は、ｐａｎ－ＴＧＦβパスウェイ阻害剤に関して報告された用量制限毒性、ならびに、慢性のＴＧＦβ抑制を通した免疫系活性化のため、チャレンジングであった。ＴＧＦβ１標的化のためのアイソフォーム－およびコンテキスト－選択性の両方に関するこの治療的必要性に対処する試みにおいて、ＥＣＭと関連するＴＧＦβの活性化を選択的に阻害することが可能なＴＧＦβの阻害剤が本明細書において提供される。一部の実施態様では、阻害剤は、特定のＴＧＦβアイソフォーム（例えば、ｐｒｏＴＧＦβ１、ｐｒｏＴＧＦβ２、および／またはｐｒｏＴＧＦβ３）に関しても選択的である。アイソフォーム特異的モノクローナル抗体は、潜在型ＴＧＦβ１プロドメインに結合し、潜在型ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３への検出可能な結合はなく、インテグリンが仲介する潜在型ＴＧＦβ１の活性化をインビトロでコンテキスト選択的に阻害する。抗体の発見および特性化努力を促進するために、ＴＧＦβ１活性化のコンテキスト依存性の細胞に基づくアッセイが開発された。

実施例１：ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１複合体に結合するコンテキスト特異的阻害剤の開発
ＳＲ－ＡＢ１をコントロールとして用いた。ＳＲ－ＡＢ１は、提示分子と関係なく潜在型ＴＧＦβ１に結合する（図２Ａを参照）。

ＴＧＦβ１を含んでいる大きな潜在型複合体に関して選択的な抗体を開発した。ＳＲ－ＡＢ２を、以下の実施例に記載される機能性アッセイを用いてさらに分析するために選択した。ＳＲ－ＡＢ２の重鎖および軽鎖可変領域をシーケンシングした（図８）；相補性決定領域に下線を引いてある。ＳＲ－ＡＢ２は、ＬＴＢＰによって提示される潜在型ＴＧＦβ１複合体に結合するが、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１またはｐｒｏＴＧＦβ１単独には結合しないことが示された（図２Ｂ）。しかしながら、以下に説明するように、そのような選択的結合の機能性効果は未知であり、新規の機能性アッセイのさらなる開発なしには、現在公知の技術を用いて決定することはできなかった。

実施例２：活性化組換え潜在型ＴＧＦβ１の阻害を検出するための機能性アッセイ
潜在型ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３への検出可能な結合がなく潜在型ＴＧＦβ１プロドメインに結合し、インテグリンによって仲介される潜在型ＴＧＦβ１の活性化をインビトロでコンテキスト依存性によって阻害するアイソフォーム特異的阻害剤を同定するために、新規の機能性アッセイが必要であった。本発明以前、ＬＴＢＰにのみ結合するアイソフォーム特異的ＴＧＦβ１抗体を検出することのできるアッセイは利用可能でなかった。特に、以前のアッセイ形式は、内因性提示分子によって提示されるｐｒｏＴＧＦβ１の活性化と、外因性ＬＴＢＰによって提示されるｐｒｏＴＧＦβ１の活性化との間を区別することができなかった。インテグリン発現細胞を直接トランスフェクトすることにより、本明細書において開示される新規のアッセイは、内因性の提示因子（ｐｒｅｓｅｎｔｅｒ）－ｐｒｏＴＧＦβ１活性と外来性ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１活性との間のウインドウを確立する。ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体は細胞外マトリックス内に埋め込まれているので、アッセイプレートコーティングもまた、アッセイの重要な構成要素である。ＥＣＭタンパク質フィブロネクチンでコーティングされた高結合プレートの使用は、ＬＴＢＰアッセイをより強く（ｒｏｂｕｓｔ）させた。換言すれば、本開示以前、ｐｒｏＴＧＦβ１トランスフェクションと、ＬＴＢＰ１／３＋ｐｒｏＴＧＦβ１の共トランスフェクションとの間に、アッセイ・ウインドウは存在しなかった。本発明以前、唯一利用可能なアッセイ形式は、トリプル共培養システム：トランスフェクタント（潜在型ＴＧＦβ提示細胞）＋インテグリン発現細胞（アクチベーター）＋ＣＡＧＡ細胞（レポーター）であった。最初の２つの細胞集団を組み合わせて、インテグリン発現細胞を、ＴＧＦβおよび提示分子とともに直接トランスフェクトすることにより、ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１活性化に関するウインドウを本明細書において確立した。

「バルク・トランスフェクション」（すなわち、アッセイウェル内に蒔く前の、別個のウェル／プレート／ディッシュ内のトランスフェクション）対「ダイレクト・トランスフェクション」（すなわち、アッセイウェル内のトランスフェクション）プロトコルの問題、および、アッセイ・ウインドウがＬＴＢＰ複合体に関して見られるかどうかは、一部の状況において細胞依存性であると考えられる。したがって、ＬＴＢＰ１／３－ＴＧＦβ１阻害剤、例えば、抗体およびその抗原結合部分の発見および特性化は、本明細書中に記載のＴＧＦβ１活性化のコンテキスト依存性の細胞に基づくアッセイの開発なしには不可能であった（図３Ａおよび３Ｂも参照）。

特に、実施例１において開発された抗体が機能性であるかどうか決定するために、それぞれ公知の提示分子：ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３に関して特異的である、ＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体（ＬＬＣ）のαＶβインテグリン活性化の細胞に基づくアッセイを開発した。アッセイの開発および最適化のプロセスを通して、フィブロネクチンが、ＬＴＢＰによって提示されるＴＧＦβ１ＬＬＣのインテグリン依存性のインビトロ活性化にとって重大なＥＣＭタンパク質であることが決定された。また、コンテキスト非依存性およびＬＴＢＰ複合体特異的ＴＧＦβ１ＬＬＣ抗体も、以下のアッセイを用いて、インテグリン依存性活性化の阻害剤として確認された。したがって、実施例１において開発された抗体は、２つのクラス：全てのＴＧＦβ１含有複合体に結合する抗体（アイソフォーム特異的およびコンテキスト非依存性）、および、ＬＴＢＰによって提示されるＴＧＦβ１ＬＬＣにのみ結合する抗体に分けることができる。本明細書においてより詳細に説明されるように、本明細書において開発および説明されるアッセイ以前は同定することのできなかったＬＴＢＰ複合体特異的なクラスの阻害剤の開発は、線維性の徴候を治療するための治療的アプローチを可能にし、免疫抑制細胞のＴＧＦβ１阻害に起因する免疫系活性化を避けながら慢性の投与を可能にすることができた。

アッセイＩ．ＳＷ４８０／β６細胞を用いた潜在型ＴＧＦβ１の活性化
図３Ａに示されるアッセイについて、以下のプロトコルを開発した。このアッセイは、インテグリン細胞による細胞外マトリックス（ＬＴＢＰによって提示される）活性化に最適である。

材料：
・ＭｖＬｕ１－ＣＡＧＡ１２細胞（クローン４Ａ４）
・ＳＷ４８０／β６細胞（クローン１Ｅ７）（αＶサブユニットは高レベルで内因的に発現され；β６サブユニットは安定的に過剰発現される）
・Ｃｏｓｔａｒの白い壁の（ｗｈｉｔｅｗａｌｌｅｄ）ＴＣ処理９６ウェルアッセイプレート＃３９０３
・ＧｒｅｉｎｅｒＢｉｏ－ＯｎｅＨｉｇｈＢｉｎｄｉｎｇの白いμｃｌｅａｒ９６ウェルアッセイプレート＃６５５０９４
・ヒトフィブロネクチン（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５４００８）
・Ｐ２００マルチチャネル・ピペット
・それぞれに関して滅菌フィルターチップを有する、Ｐ２０、Ｐ２００、およびＰ１０００ピペット
・滅菌マイクロチューブおよびラック
・滅菌試薬リザーバー
・０．４％トリパンブルー
・２ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、および２５ｍＬ滅菌ピペット
・組織培養処理１００ｍｍまたは１５０ｍｍプレート
・７０％エタノール
・Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ還元血清培地（ＬｉｆｅＴｅｃｈ＃３１９８５－０７０）
・リポフェクタミン３０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈ＃Ｌ３００００１５）
・Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ２６２０）
・０．２５％トリプシン＋０．５３ｍＭＥＤＴＡ
・ｐｒｏＴＧＦｂ１発現プラスミド、ヒト（ＳＲ００５）
・ＬＴＢＰ１Ｓ発現プラスミド、ヒト（ＳＲ０４４）
・ＬＴＢＰ３発現プラスミド、ヒト（ＳＲ１１７）
・ＬＲＲＣ３２（ＧＡＲＰ）発現プラスミド、ヒト（ＳＲ１１６）
・ＬＲＲＣ３３発現プラスミド、ヒト（ＳＲ３８６）

機器：
・ＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＨ１プレートリーダー
・ＴＣフード
・ベンチトップ遠心分離機
・ＣＯ２インキュベーター３７℃ ５％ＣＯ２
・３７℃水／ビーズバス
・プラットフォーム・シェイカー
・顕微鏡
・血球計数器／ｃｏｕｎｔｅｓｓ

定義：
・ＣＡＧＡ１２４Ａ４細胞：ルシフェラーゼ遺伝子発現を駆動する、ＣＡＧＡ１２合成プロモーターで安定的にトランスフェクトされた、ＭｖＬｕ１細胞（ミンク肺上皮細胞）の誘導体
・ＤＭＥＭ－０．１％ＢＳＡ：アッセイ培地；基礎培地はＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９９５－０６５）であり、培地は、０．１％ｗ／ｖに希釈されたＢＳＡ、ペニシリン／ストレプトマイシン、および４ｍＭグルタミンも含む
・Ｄ１０：ＤＭＥＭ１０％ＦＢＳ，Ｐ／Ｓ，４ｍＭグルタミン、１％ＮＥＡＡ、１ＸＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３５０５００６１）
・ＳＷ４８０／β６培地：Ｄ１０＋１０００μｇ／ｍＬＧ－４１８
・ＣＡＧＡ１２（４Ａ４）培地：Ｄ１０＋０．７５μｇ／ｍＬピューロマイシン

手順：
０日目に、トランスフェクションのために細胞を蒔いた。ＳＷ４８０／β６（クローン１Ｅ７）細胞をトリプシンで分離させて、ペレット化した（２００×ｇでスピン５分）。細胞ペレットをＤ１０培地中に再懸濁させて、生存細胞（／ｍｌ）を数えた。細胞を、５．０ｅ６細胞／１２ｍｌ／１００ｍｍＴＣディッシュで蒔いた。ＣＡＧＡ１２細胞については、細胞をＴ７５フラスコあたり１００万の密度で継代培養して、３日目にアッセイのために用いた。培養は、３７℃および５％ＣＯ_２でインキュベートした。

１日目に、インテグリン発現細胞をトランスフェクトした。リポフェクタミン３０００試薬を用いたトランスフェクションに関する製造元のプロトコルに従った。手短には、以下をＯｐｔｉＭＥＭＩ中に希釈した（ウェルあたり１２５μｌについて）：７．５μｇＤＮＡ（提示分子）＋７．５μｇＤＮＡ（ｐｒｏＴＧＦβ１）、３０μｌＰ３０００、およびＯｐｔｉＭＥＭＩで１２５μｌまで。ＤＮＡを一緒にピペッティングすることによってウェルを混合し、それから、ＯｐｔｉＭＥＭを添加した。Ｐ３０００を添加して、ピペッティングによって全てを十分に混合した。リポフェクタミン３０００のマスターミックスを作製して、ＤＮＡミックスに添加した：ＬＴＢＰ１アッセイについては：１５μｌリポフェクタミン３０００、ＯｐｔｉＭＥＭＩ中１２５μｌまで（ウェルあたり）；ＬＴＢＰ３アッセイについては：４５μｌリポフェクタミン３０００、ＯｐｔｉＭＥＭＩ中１２５μｌ（ウェルあたり）。希釈したリポフェクタミン３０００をＤＮＡに添加して、ピペッティングにより十分に混合して、室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、溶液をピペッティングにより数回混合して、それから、ディッシュあたり２５０μｌのＤＮＡ：リポフェクタミン３０００（２×１２５μｌ）を滴下した。それぞれのディッシュを穏やかに渦巻き状に混合して、ディッシュを組織培養インキュベーターに約２４時間戻した。

１～２日目に、アッセイプレートをヒトフィブロネクチンでコーティングした。具体的には、凍結乾燥されたフィブロネクチンを、超高純度蒸留水（滅菌）中１ｍｇ／ｍｌに希釈した。１ｍｇ／ｍｌストック溶液をＰＢＳ（滅菌）中１９．２μｇ／ｍｌに希釈した。それから、５０μｌ／ウェルをアッセイプレート（高結合）に添加して、組織培養インキュベーター（３７℃および５％ＣＯ２）中で一晩インキュベートした。最終濃度は３．０μｇ／ｃｍ^２だった。

２日目に、トランスフェクト細胞を、アッセイおよび阻害剤添加のためにプレーティングした。まず、２００μｌ／ウェルのＰＢＳを、既にアッセイプレート内にあるフィブロネクチン溶液に添加することによって、フィブロネクチンコーティングを洗浄した。マルチチャネル・ピペットを用いて手作業で洗浄を除去した。洗浄は、合計２回の洗浄を繰り返した。プレートを、細胞添加の前に蓋を外して室温で乾燥させた。それから、トリプシンを用いて分離することによって、細胞をプレーティングして、ペレット化した（２００×ｇでスピン５分）。ペレットをアッセイ培地中に再懸濁させて、生存細胞を数えた（／ｍｌ）。ＬＴＢＰ１アッセイについては、細胞を０．１０ｅ６細胞／ｍｌに希釈して、ウェルあたり５０μｌ蒔いた（ウェルあたり５，０００細胞）。ＬＴＢＰ３アッセイについては、細胞を０．０５ｅ６細胞／ｍｌに希釈して、ウェルあたり５０μｌ蒔いた（ウェルあたり２，５００細胞）。機能性抗体希釈を調製するために、抗体を、ビヒクル中、一貫した作用濃度（ｗｏｒｋｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）に事前希釈した。ストック抗体をビヒクル中に段階希釈した（ＰＢＳが最適であり、クエン酸ナトリウムバッファーを避ける）。段階希釈の各ポイントを、４×最終濃度の抗体のためにアッセイ培地中に希釈した。ウェルあたり２５μｌの４×抗体を添加して、培養を、３７℃および５％ＣＯ_２で約２４時間インキュベートした。

３日目に、ＴＧＦβレポーター細胞を添加した。アッセイのためのＣＡＧＡ１２（クローン４Ａ４）細胞をトリプシンで分離してペレット化した（２００×ｇでスピン５分）。ペレットをアッセイ培地中に再懸濁させて、生存細胞（／ｍｌ）を数えた。細胞を０．４ｅ^６細胞／ｍｌに希釈して、ウェルあたり５０μｌ蒔いた（ウェルあたり２０，０００細胞）。細胞をインキュベーターに戻した。

４日目に、アッセイを読み取った（抗体および／またはレポーター細胞添加の１６～２０時間後）。読み取りの前に、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬および試験プレートを室温にさせた。ＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＨ１上の読み取り設定は、ＴＭＬＣ＿ｓｔｄプロトコルを使用して設定した－この方法はオートゲイン設定を有する。オートスケール（高）に関して、ポジティブコントロールのウェルを選択した。ウェルあたり１００μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬を添加した。２分間、振とうしながら室温で、光からプレートを保護してインキュベートした。プレートをＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＨ１上で読み取った。

一部の実施態様では、内因性提示分子（例えば、ＬＴＢＰ１／３）と関連するＴＧＦβ活性は、ｐｒｏＴＧＦβ１のみをトランスフェクトすることにより（すなわち、ＬＴＢＰ１／３と共トランスフェクトせずに）、評価され得る。一部の実施態様では、提示分子およびｐｒｏＴＧＦβ ＤＮＡは、本質的に上述のように、別個のウェル／ディッシュ／プレートにおいて細胞をトランスフェクトする（すなわち、「バルク・トランスフェクション」）よりむしろ、アッセイウェル内に蒔かれたＳＷ４８０／β６細胞中に直接トランスフェクトされ得る（すなわち、「ダイレクト・トランスフェクション」）。ダイレクト・トランスフェクションのプロトコルについては、以下のアッセイＩＩも参照。一部の実施態様では、ＳＷ４８０／β６細胞は、以下のアッセイＩＩに本質的に記載されるように、フィブロネクチンを伴わずにアッセイウェル内に蒔かれてよい。

結果：
このアッセイから得られたデータは、細胞上清におけるＴＧＦβ活性を反映した（図３Ａ）。具体的には、ＳＷ４８０／β６細胞を、ＬＴＢＰ１／３およびｐｒｏＴＧＦβ１でバルク・トランスフェクトして、上述のようにフィブロネクチン上に蒔いた。生データ単位は、相対発光量（ＲＬＵ）であった。図３Ａは、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１のトランスフェクションは、ＴＧＦβ活性化シグナルを誘導するが、ｐｒｏＴＧＦβ１単独では誘導しないことを示す。

アッセイを、図４に示すようにさらに最適化した。具体的には、潜在型ＴＧＦβ１活性化に対する提示分子および／またはｐｒｏＴＧＦβ１の相対的寄与を決定した。このアッセイでは、ＳＷ４８０／β６細胞を、示されたＤＮＡ分子でバルク・トランスフェクトして、本質的に上述のように、フィブロネクチンで事前コーティングされたアッセイウェル上に蒔いた。図４Ａに示されるように、提示分子およびｐｒｏＴＧＦβ１の共トランスフェクションの際に、潜在型ＴＧＦβ１活性化における有意な増大が観察された。図４Ｂは、提示分子およびｐｒｏＴＧＦβ１に関するプラスミドＤＮＡの比を変更することによる、共トランスフェクションの最適化を示す。同等量の各プラスミドが、共トランスフェクションに最適であることが分かった。

図５は、フィブロネクチンが、ＬＴＢＰによって提示された潜在型ＴＧＦβ１のインテグリン活性化を促進することを示す。このアッセイでは、ＳＷ４８０／β６細胞を、示されたＤＮＡ分子でバルク・トランスフェクトして、ヒト血漿から精製された異なる濃度のフィブロネクチンで事前コーティングされたアッセイウェル上に蒔いた。フィブロネクチンは、ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３によって提示された潜在型ＴＧＦβの活性化を増大させた。

アッセイＩＩ．ＬＮ２２９細胞を用いた潜在型ＴＧＦβ１の活性化
図３Ｂに示されるアッセイのために、以下のプロトコルを開発した。このアッセイ、すなわち「ダイレクト－トランスフェクション」プロトコルは、インテグリン細胞による細胞表面に提示されたＴＧＦβ１（ＧＡＲＰまたはＬＲＲＣ３３提示因子（ｐｒｅｓｅｎｔｅｒ））活性化に最適である。ＬＮ２２９細胞は、インテグリンαＶβ８を発現する（αＶβ６を発現するように改変されたＳＷ４８０ｂ６細胞株とは対照的である）。

これらの２つの細胞株は、２つの最も確証されたＴＧＦβ活性化インテグリンのいずれかによって活性化される潜在型ＴＧＦβ１に対する抗体の試験を可能にする。

材料：
・ＭｖＬｕ１－ＣＡＧＡ１２細胞（クローン４Ａ４）
・ＬＮ２２９細胞株（高レベルの内因性αＶβ８インテグリン）
・Ｃｏｓｔａｒの白い壁のＴＣ処理９６ウェルアッセイプレート＃３９０３
・ＧｒｅｉｎｅｒＢｉｏ－ＯｎｅＨｉｇｈＢｉｎｄｉｎｇの白いμｃｌｅａｒ９６ウェルアッセイプレート＃６５５０９４
・ヒトフィブロネクチン（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５４００８）
・Ｐ２００マルチチャネル・ピペット
・それぞれに関して滅菌フィルターチップを有するＰ２０、Ｐ２００、およびＰ１０００ピペット
・滅菌マイクロチューブおよびラック
・滅菌試薬リザーバー
・０．４％トリパンブルー
・２ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、および２５ｍＬ滅菌ピペット
・組織培養処理１００ｍｍまたは１５０ｍｍプレート
・７０％エタノール
・Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ還元血清培地（ＬｉｆｅＴｅｃｈ＃３１９８５－０７０）
・リポフェクタミン３０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈ＃Ｌ３００００１５）
・Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ２６２０）
・０．２５％トリプシン＋０．５３ｍＭＥＤＴＡ
・ｐｒｏＴＧＦｂ１発現プラスミド、ヒト（ＳＲ００５）
・ＬＴＢＰ１Ｓ発現プラスミド、ヒト（ＳＲ０４４）
・ＬＴＢＰ３発現プラスミド、ヒト（ＳＲ１１７）
・ＬＲＲＣ３２（ＧＡＲＰ）発現プラスミド、ヒト（ＳＲ１１６）
・ＬＲＲＣ３３発現プラスミド、ヒト（ＳＲ３８６）

機器：
・ＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＨ１プレートリーダー
・ＴＣフード
・ベンチトップ遠心分離機
・ＣＯ_２インキュベーター３７℃ ５％ＣＯ２
・３７℃水／ビーズバス
・プラットフォーム・シェイカー
・顕微鏡
・血球計数器／ｃｏｕｎｔｅｓｓ

定義：
・ＣＡＧＡ１２４Ａ４細胞：ルシフェラーゼ遺伝子発現を駆動する、ＣＡＧＡ１２合成プロモーターで安定的にトランスフェクトされた、ＭｖＬｕ１細胞（ミンク肺上皮細胞）の誘導体
・ＤＭＥＭ－０．１％ＢＳＡ：アッセイ培地；基礎培地はＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９９５－０６５）であり、培地は、０．１％ｗ／ｖに希釈されたＢＳＡ、ペニシリン／ストレプトマイシン、および４ｍＭグルタミンも含む
・Ｄ１０：ＤＭＥＭ１０％ＦＢＳ，Ｐ／Ｓ，４ｍＭグルタミン、１％ＮＥＡＡ、１ＸＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３５０５００６１）
・ＣＡＧＡ１２（４Ａ４）培地：Ｄ１０＋０．７５ｕｇ／ｍＬピューロマイシン

手順：
０日目に、トランスフェクションのためにインテグリン発現細胞を蒔いた。細胞をトリプシンで分離して、ペレット化した（２００×ｇでスピン５分）。細胞ペレットをＤ１０培地中に再懸濁させて、生存細胞（／ｍｌ）を数えた。細胞を０．１ｅ^６細胞／ｍｌに希釈して、アッセイプレート中にウェルあたり１００μｌ蒔いた（ウェルあたり１０，０００細胞）。ＣＡＧＡ１２細胞については、Ｔ７５フラスコあたり１５０万の密度で継代培養して、２日目のアッセイのために用いた。培養を、３７℃および５％ＣＯ_２でインキュベートした。

１日目に、細胞をトランスフェクトした。リポフェクタミン３０００試薬を用いたトランスフェクションに関して、製造元のプロトコルに従った。手短には、以下をＯｐｔｉＭＥＭＩ中に希釈した（５μｌ／ウェルについて）：０．１μｇＤＮＡ（提示分子）＋０．１μｇＤＮＡ（ｐｒｏＴＧＦβ１）、０．４μｌＰ３０００、およびＯｐｔｉＭＥＭＩで５μｌまで。ＤＮＡを一緒にピペッティングすることによりウェルを混合して、それから、ＯｐｔｉＭＥＭを加えた。Ｐ３０００を加えて、全てをピペッティングによって十分に混合する。マスターミックスを、リポフェクタミン３０００を用いて作製し、ＤＮＡ混合物に添加した：０．２μｌリポフェクタミン３０００、ＯｐｔｉＭＥＭＩ中５μｌまで（ウェルあたり）。希釈したリポフェクタミン３０００をＤＮＡに添加して、ピペッティングによって十分に混合して、室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、溶液をピペッティングによって数回混合して、それから、１０μｌ／ウェルのＤＮＡ：リポフェクタミン３０００（２×５μｌ）を添加した。細胞プレートを組織培養インキュベーターに約２４時間戻した。

２日目に、抗体およびＴＧＦβレポーター細胞を添加した。機能性抗体希釈を調製するために、ビヒクル（ＰＢＳが最適である）中にストック抗体を段階希釈した。それから、各ポイントを２×最終濃度の抗体のためにアッセイ培地中に希釈した。抗体の調製後、細胞プレートを吸引（陰圧吸引器）によってアッセイ培地で２回洗浄し、その後に、１００μｌ／ウェルのアッセイ培地を添加した。２回目の洗浄後、アッセイ培地を５０μｌ／ウェルの２×抗体で置き換えた。細胞プレートを約１５～２０分間インキュベーターに戻した。

アッセイのためのＣＡＧＡ１２（クローン４Ａ４）細胞を調製するために、細胞をトリプシンで分離してペレット化した（２００×ｇでスピン５分）。ペレットをアッセイ培地中に再懸濁させて、生存細胞（／ｍｌ）を数えた。細胞を０．３ｅ^６細胞／ｍｌに希釈して、ウェルあたり５０μｌ蒔いた（ウェルあたり１５，０００細胞）。細胞をインキュベーターに戻した。

３日目に、アッセイを、抗体および／またはレポーター細胞添加の約１６～２０時間後に読み取った。読み取りの前に、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬および試験プレートを室温にさせた。ＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＨ１上の読み取り設定は、ＴＭＬＣ＿ｓｔｄプロトコルを使用するように設定した－この方法はオートゲイン設定を有する。ポジティブコントロールのウェルは、オートスケール（高）に関して設定した。ウェルあたり１００μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬を添加した。２分間、振とうしながら室温で、光からプレートを保護してインキュベートした。プレートをＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＨ１上で読み取った。

一部の実施態様では、内因性提示分子（例えば、ＬＴＢＰ１／３）と関連するＴＧＦβ活性は、ｐｒｏＴＧＦβ１のみをトランスフェクトすることにより（すなわち、ＬＴＢＰ１／３と共トランスフェクトせずに）、評価され得る。一部の実施態様では、提示分子およびｐｒｏＴＧＦβ ＤＮＡは、細胞を直接トランスフェクトする（すなわち、「ダイレクト・トランスフェクション」）よりむしろ、アッセイＩにおいて本質的に上述されるように、別個のウェル／ディッシュ／プレートにおいてＬＮ２２９細胞内にバルク・トランスフェクトされ得る（すなわち、「バルク・トランスフェクション」）。一部の実施態様では、ＬＮ２２９細胞は、フィブロネクチンを有するアッセイウェル内に蒔かれてよい（フィブロネクチン事前コーティングプロトコルに関するアッセイＩを参照）。

このアッセイから得られるデータは、細胞上清におけるＴＧＦβ１活性を反映する（図３Ｂ）。具体的には、ＬＮ２２９細胞を、フィブロネクチンを伴わずにアッセイウェル内に蒔いて、「ダイレクト・トランスフェクション」によって、示されたＤＮＡ分子でトランスフェクトした。生データ単位は、相対発光量（ＲＬＵ）である。高いＲＬＵ値を有するサンプルは多い量のフリーのＴＧＦβを含み、低いＲＬＵ値を有するサンプルは少ないレベルのＴＧＦβを含んでいた。

実施例３．ＳＲ－ＡＢ１は、インテグリンによるＴＧＦβ ＬＬＣ活性化のコンテキスト非依存性阻害剤である
図６は、ＳＲ－ＡＢ１が、インテグリンによるＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体（ＬＬＣ）のコンテキスト非依存性阻害剤であることを示すグラフである。このアッセイでは、ＳＷ４８０／β６細胞をアッセイウェル内にフィブロネクチンを伴わずに蒔いて、実施例２における上記プロトコルに本質的に説明されるように、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１またはＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１でそれぞれ直接トランスフェクトした。ＬＴＢＰ１によるＴＧＦβ１の活性化を評価するために、ＬＮ２２９細胞を、フィブロネクチンで事前コーティングされたアッセイウェル内に蒔いて、実施例２において上記プロトコルに本質的に説明されるように、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１で直接トランスフェクトした。ＳＲ－ＡＢ１は、提示分子と関係なくＴＧＦβのインテグリン活性化を阻害することが示された。

実施例４．ＳＲ－ＡＢ２は、ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１の複合体特異的阻害剤である
ＳＲ－ＡＢ２を、異なるＴＧＦβ提示分子への結合に関する特異性についてさらに分析および試験するために選択した。はじめに、ＥＬＩＳＡアッセイを行なって、以下のように複合体特異性を試験した。

材料：
・ニュートラアビジン・コーティング由来のソリッドの白い９６ウェルプレート（９６ウェルプレートＳＯＰ）
・ビオチン化抗原
・ＭａｉｎｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｅｒｖｉｃｅｓ抗－Ｈｉｓ抗体ＭＡＢ２３０Ｐ
・ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓペルオキシダーゼＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅヤギα－ヒトＦＣγ
・フラグメント特異的。カタログ番号１０９－０３５－００８。
・ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅヤギα－マウスＦＣγフラグメント特異的。
・カタログ番号１１５－０３５－００８
・ＱｕａｎｔａＢｌｕＥＬＩＳＡ基材（ＰｉｅｒｃｅＢｉｏｔｅｃｈカタログ番号１５１６２）

機器：
・マルチチャネル・ピペット
・Ｐ２００チップ
・テーブルトップ超遠心分離機
・１．５ｍＬ遠心分離管
・０．５ｍＬ遠心分離管
・Ｐ１０００
・Ｐ１０００チップ
・Ｐ２００
・Ｐ１０
・Ｐ１０チップ
・１５ｍＬファルコンチューブ
・５０ｍＬファルコンチューブ
・ＢｉｏｔｅｋＥＬｘ４０５ＳｅｌｅｃｔＣＷプレートウォッシャー
・マルチドロップ
・ＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＨ１プレートリーダー

定義：
・洗浄バッファー：ＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水；５０ｍＭＴｒｉｓ－Ｃｌ、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．６）（０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む。）ＢＳＡは粘りがあり自動化プレートウォッシャーシステムとともに用いるべきでないので、手動（ハンド）洗浄のために０．１％ＢＳＡを添加する。
・サンプルバッファー：ＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水；５０ｍＭＴｒｉｓ－Ｃｌ、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．６）（０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０および０．１％ＢＳＡを含む）。
・ＥＬＩＳＡ３Ｘプロトコル：ＢｉｏｔｅｋＥＬｘ４０５ＳｅｌｅｃｔＣＷプレートウォッシャーに対する洗浄プロトコル。２００μＬの洗浄バッファーで洗浄する。洗浄をさらに２回繰り返す。仕様：３サイクル。振とうさせない。ウェルあたり２００μＬを分注。分注流量設定７（範囲１～１０）。分注高さ１５．２４ｍｍ。水平ｘ分注位置０ｍｍ。水平ｙ分注位置０ｍｍ。吸引高さ３．０４８ｍｍ。水平ｘ吸引位置１．３７２ｍｍ。水平吸引ｙ位置０．４５２ｍｍ。吸引速度３．４ｍｍ／秒。吸引遅延０ミリ秒。最後の洗浄で十字線（Ｃｒｏｓｓｗｉｒｅ）吸引。十字線高さ３．０４８ｍｍ。十字線水平ｘ位置：－１．８２９ｍｍ。十字線水平ｙ位置：－０．４５７ｍｍ。

手順：
事前コーティングおよび事前ブロックされた９６ウェルプレートを４℃から取り出す。０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含む１×ＰＢＳｐＨ７．４１％ＢＳＡをプレートから捨てて、ペーパータオルと並べられたＳｔｙｒｏｆｏａｍパッド上にプレートを力強く叩く。９６ウェルプレートがまだ準備されていない場合は、９６ウェルプレートのニュートラアビジン・コーティングのプロトコルを用いてそれを準備する。具体的には、１つのニュートラアビジンによってコーティングされたプレートに関し、１ｍｇ／ｍＬのニュートラアビジンストック溶液の上部から５μＬを取り出して、それを、１０ｍＬの１×カーボネートバッファーｐＨ９．４中に希釈する。ファルコンチューブを逆さにすることによって混合する。マルチチャネル・ピペットを用いて、Ｃｏｒｎｉｎｇ高結合９６ウェルアッセイプレートの各ウェル内に１００μＬを入れて、９６ウェルプレートを４℃で一晩インキュベートする。９６ウェルプレートをウェルあたり２００μＬの洗浄バッファーで洗浄して、このステップをさらに２回繰り返す。プレートは合計３回洗浄すべきである。ウェルあたり２００μＬの１％ＢＳＡ（ＰＢＳ中、ｐＨ７．４）を用いてプレートをブロッキングして、プレートを３７℃で１時間または４℃で一晩インキュベートする。

サンプルバッファー中でビオチン化抗原を希釈する。最適なキャプチャー濃度は、それぞれの個々のタンパク質について滴定によって最初に決定すべきである。ウェルあたり５０μｌを添加して、１時間室温でインキュベートする。

ＥＬＩＳＡ３Ｘプロトコルを用いて、洗浄バッファーとともにプレートウォッシャーを用いてプレートを洗浄する。

サンプルバッファー中で抗体を希釈する。抗体のスクリーニングを１μｇ／ｍＬで行なう。サンプルバッファー中１μｇ／ｍＬで、α－Ｈｉｓコーティング・コントロール抗体（ＭａｉｎｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｅｒｖｉｃｅｓカタログ番号：ＭＡＢ２３０Ｐ）を調製する。５０μＬの希釈された抗体を指定のウェル上に置いて、室温で１時間インキュベートする。

ヒト二次抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓペルオキシダーゼＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅヤギα－ヒトＦＣγフラグメント特異的。カタログ番号１０９－０３５－００８）を、サンプルバッファー中、１：１０，０００に希釈する。α－ｈｉｓウェルに関して、マウス二次抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅヤギα－マウスＦＣγフラグメント特異的。カタログ番号１１５－０３５－００８）を、サンプルバッファー中、１：１０，０００に希釈する。

５０μＬの希釈された抗体を指定のウェル上に置く。室温で１時間インキュベートする。ＥＬＩＳＡ３Ｘプロトコルを用いて、洗浄バッファーとともにプレートウォッシャーを用いてプレートを洗浄する。

製造元のプロトコルに従って、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌＥＬＩＳＡＦｅｍｔｏＳｕｂｓｔｒａｔｅ（ＰｉｅｒｃｅＢｉｏｔｅｃｈカタログ番号１５１６２）使用液（ｗｏｒｋｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎ）を調製する。１つのプレートに１０ｍＬが必要である。ウェルあたり１００μＬのＱｕａｎｔＢｌｕＳｕｂｓｔｒａｔｅ使用液を入れる。室温で１０分間インキュベートする。

励起光３２５ｎｍおよび蛍光４２０ｎｍで、プレートリーダー上で相対蛍光単位（ＲＦＵ’ｓ）を測定する。

結果：
図７Ａは、ＳＲ－ＡＢ２がＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体にのみ結合し；ｐｒｏＴＧＦβ１またはＬＴＢＰ１単独には結合しないことをＥＬＩＳＡによって示す。図７Ａは、ＳＲ－ＡＢ２が、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合しないことをＥＬＩＳＡによって示す。

さらに、ＳＲ－ＡＢ２が、細胞に基づくアッセイにおいてＬＴＢＰ１／３－ｐｒｏＴＧＦβ１を阻害する能力も調べた。実施例２において本質的に上述されるように、ＬＮ２２９細胞を、フィブロネクチンによって事前コーティングされたアッセイウェル上に蒔いて、示されたＤＮＡ分子で直接トランスフェクトした。図７Ｂは、ＳＲ－ＡＢ２が、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１（ヒトおよびマウス複合体）のインテグリン活性化を阻害することを示す。図７Ｃは、ＳＲ－ＡＢ２が、ＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１のインテグリン活性化を阻害することを示す。

ＥＬＩＳＡによって、本質的に上述されるように、ＳＲ－ＡＢ２は、ｐｒｏＴＧＦβ１：ＬＴＢＰ１＆３複合体に特異的に結合し、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１またはＧＡＲＰ－Ｌａｐ複合体には結合しないことが示された（図９を参照）．

上述のように、ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３は、細胞外マトリックス内に沈着し、一方で、ＧＡＲＰ／ＬＲＲＣ３２およびＬＲＲＣ３３は、免疫細胞の表面上に潜在型ＴＧＦβ１を提示する。ＳＲ－ＡＢ２は、ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１シグナリングを阻害するが、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１には影響を及ぼさないことが示された（図１０Ａおよび図１０Ｂ）。図１０Ａは、ＳＲ－ＡＢ２が、内因性ＬＴＢＰ１／３によって提示されたＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβを阻害することを示す。このアッセイは、フィブロネクチンによって事前にコーティングされたウェル上に蒔かれてｐｒｏＴＧＦβ１で直接トランスフェクトされたＬＮ２２９細胞において行なわれた。図１０Ｂは、ＳＲ－ＡＢ２が、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβを阻害しないことを示す。ＳＲ－ＡＢ１は、提示分子とは関係なく潜在型ＴＧＦβ１に結合する。このアッセイは、フィブロネクチンを伴わずにアッセイウェル内に蒔かれてＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１で直接トランスフェクトされたＬＮ２２９細胞において行なわれた。

ＳＲ－ＡＢ２によるＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１の阻害は、細胞に基づくアッセイにおける、ＬＴＢＰ１によって提示されたＴＧＦβ１のαＶβ６インテグリン依存性活性化においても示された（ヒトおよびマウス、データ示さず）。ＳＲ－ＡＢ２は、過剰発現されたＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対しては阻害効果を示さなかった。

実施例５：ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１抗体のＯｃｔｅｔビニング
５００ｎＭのヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦｂ１複合体を、１μＭの各試験抗体とともに事前インキュベートした。一晩のインキュベーション後、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１＋一次抗体を、抗－ヒトＩｇＧＦｃキャプチャー（ＡＨＣ）センサーチップに固定化された二次抗体に対する結合に関して試験した（６７ｎＭ）。ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１＋一次抗体を調べる（ｓｅｅｉｎｇ）前に、センサーチップをネガティブコントロール抗体（ＨｕＮｅｇ）でブロックした。

特異的な二次抗体に対する複合体の結合を、阻害されない（ｕｎｉｎｈｉｂｉｔｅｄ）相互作用、すなわち、ＴＧＦβ複合体に結合しないネガティブコントロール抗体（ＨｕＮｅｇ）の存在下の複合体に対して正規化した。７０％未満の正規化された応答または０．７未満の阻害されない相互作用を、交差ブロックする抗体と考えた。１よりも大きい応答は両方の抗体が同時に結合することを示した。結果を以下の表７に示す。

表７に示されるように、抗体ＳＲ－ＡＢ１３、ＳＲ－ＡＢ１０、ＳＲ－ＡＢ２およびＳＲ－ＡＢ１は互いに交差ブロックせず、したがって、それぞれの抗体は、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１の表面上の別個のエピトープを占めている。

実施例６：インビトロ結合プロファイルおよび親和性データ
結合速度論のパラメーターを決定するためのインビトロ結合アッセイに関する適切な方法は、Ｏｃｔｅｔのようなバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）に基づくアッセイ、およびＢｉａｃｏｒｅシステムのような表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイを含む（例えば：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｗｐ－ｃｏｎｔｅｎｔ／ｕｐｌｏａｄｓ／２０１１／０２／Ｂｉａｃｏｒｅ＿ａｓｓａｙ＿ｈａｎｄｂｏｏｋ．ｐｄｆを参照）。

ＳＲ－ＡＢ１０、ＳＲ－ＡＢ２およびＳＲ－ＡＢ１３の親和性を、Ｏｃｔｅｔアッセイによって測定した。本明細書において提供される複合体に対する抗体の親和性を測定するために用いられるプロトコルを以下に要約する。

材料：
・９６ウェル黒ポリプロピレンプレート
・ＡＨＣＯｃｔｅｔチップ（抗－ヒトＩｇＧＦｃキャプチャーチップ）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）
・１０×速度論バッファー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）（ＰＢＳ中、１×に希釈）
・ｒｅｉｎｅｒＢｉｏ－Ｏｎｅ９６ウェル・ハーフ領域マイクロプレート（ＶＷＲカタログ番号８２０５０－０４４）

手順：
注意：Ｏｃｔｅｔ実験中の各ウェル内の容量は１００ｕＬである。シェイク速度１０００ｒｐｍを全てのアッセイステップに用いる。
プレウェットチップ：
・バイオセンサーは、実験を開始する前に少なくとも１０分間、１×速度論バッファー（１×ＫＢ）中でプレウェットさせなければならない。これは、Ｏｃｔｅｔの内側またはベンチ上で行なうことができる。
ローディング：
・チップは、ローディング前に１分間、１×ＫＢ中でベースライン化される。
・ＡＨＣチップに、１μｇ／ｍＬ（約７ｎＭ）の濃度で３分間、抗体をローディングする。いずれか１つのセンサーが１ナノメートルの応答に到達した場合にローディングが止まるようにリミットを設定する。
・ローディング後１分間、バッファー中でチップをベースライン化する。この時間のあいだ、抗体はチップから解離すべきでない。
抗原関連性：
・様々な提示分子との複合体におけるＴＧＦβ１は、１×ＫＢ中、１００ｎＭの単一濃度で固定化抗体と関連付けられた。
抗体解離：
・１×ＫＢ中での解離は、３分間行なわれた。
ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ分析ソフトウェア８．２を用いたデータ分析：
・手順：Ｙ軸をベースラインの最後の５秒に並べて、解離と並べてインターステップ補正を行ない、Ｓａｖｉｔｚｋｙ－Ｇｏｌａｙフィルタリングを行なう．
・分析：１：１フィッティングモデルを使用する。フィッティングは、ローカルおよびフルである。（ローカルは、各抗体が別個に評価されることを示し、フルは、会合および解離の両方が考慮されることを示す）曲線をフィットさせて、そして報告を保存し／データをエクスポートする。

結果：
図１１は、ＬＴＢＰ複合体特異的抗体ＳＲ－ＡＢ１０、ＳＲ－ＡＢ２、およびＳＲ－ＡＢ１３に関する結合プロファイルおよび親和性データを示す。注目すべきことに、ＳＲ－ＡＢ１３は、ｐｒｏＴＧＦβ１と複合化したヒトＬＴＢＰ１およびヒトＬＴＢＰ３の両方に結合し、ＳＲ－ＡＢ２およびＳＲ－ＡＢ１０は、ＴＧＦβ１と複合体化したヒトＬＴＢＰ１に特異的に結合する。

実施例７：最適化ＬＴＢＰ－複合体特異的抗体の改善された効能
ＬＴＢＰ複合体特異的抗体ＳＲ－ＡＢ１０およびＳＲ－ＡＢ１３を、親和性成熟／最適化の最初のラウンドに選択して（すなわち、本明細書中に記載のＨ１／Ｈ２ＣＤＲシャッフリング／多様化）、特定の子孫抗体（ＳＲ－ＡＢ１４およびＳＲ－ＡＢ１５）を、ＬＮ２２９細胞を用いて、ＴＧＦβ活性を阻害するそれらの能力に関して評価した。図１２Ａおよび１２Ｂに示されるアッセイに関して、実施例２におけるアッセイＩＩの改変版である以下のプロトコルを用いた。

材料：
・ＭｖＬｕ１－ＣＡＧＡ１２細胞（クローン４Ａ４）
・ＬＮ２２９細胞株（高レベルの内因性αＶβ８インテグリン）
・Ｃｏｓｔａｒの白い壁のＴＣ処理９６ウェルアッセイプレート＃３９０３
・ＧｒｅｉｎｅｒＢｉｏ－ＯｎｅＨｉｇｈＢｉｎｄｉｎｇの白いμｃｌｅａｒ９６ウェルアッセイプレート＃６５５０９４
・ヒトフィブロネクチン（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５４００８）
・Ｐ２００マルチチャネル・ピペット
・それぞれに関して滅菌フィルターチップを有するＰ２０、Ｐ２００、およびＰ１０００ピペット
・滅菌マイクロチューブおよびラック
・滅菌試薬リザーバー
・０．４％トリパンブルー
・２ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、および２５ｍＬ滅菌ピペット
・組織培養処理１００ｍｍまたは１５０ｍｍプレート
・７０％エタノール
・Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ還元血清培地（ＬｉｆｅＴｅｃｈ＃３１９８５－０７０）
・リポフェクタミン３０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈ＃Ｌ３００００１５）
・Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ２６２０）
・０．２５％トリプシン＋０．５３ｍＭＥＤＴＡ
・ｐｒｏＴＧＦｂ１発現プラスミド、ヒト
・ＬＴＢＰ１Ｓ発現プラスミド、ヒト

機器：
・ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー
・ＴＣフード
・ベンチトップ遠心分離機
・ＣＯ２インキュベーター３７℃ ５％ＣＯ２
・３７℃水／ビーズバス
・プラットフォーム・シェイカー
・顕微鏡
・血球計数器／ｃｏｕｎｔｅｓｓ

手順：
・常に滅菌安全キャビネット内で作業し、滅菌技術を常時用いるべきである。
・全ての培地を調製し、全ての材料を滅菌し、開始前に材料を安全キャビネット内に移動させる。
・増殖培地は、３７℃に温めるべきである。
・このアッセイ中のほとんどすべてのステップに、逆ピペッティング技術を用いる。
・ｐｒｏＴＧＦβ１のＬＴＢＰ提示に依拠するアッセイは、トランスフェクションのために細胞を蒔く前に４時間～一晩、フィブロネクチンによるアッセイプレートの事前コーティングを要する。

－１日目に、アッセイプレートをフィブロネクチンでコーティングした。フィブロネクチンの１ｍｇ／ｍｌストック溶液を超純水（滅菌）中に調製した。ストック溶液を、ＰＢＳ中、１９．２μｇ／ｍｌ使用液に希釈して、５０μｌを各ウェルに加えた（３μｇ／ｃｍ^２）。プレートを３７℃および５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。

０日目に、細胞を蒔く前に、アッセイプレートをフィブロネクチンでコーティングした（ＬＴＢＰ過剰発現アッセイのみ）。フィブロネクチンの１ｍｇ／ｍｌストック溶液を、超純水（滅菌）中に調製した。ストック溶液を、ＰＢＳ中、１９．２μｇ／ｍｌ使用液に希釈して、５０μｌを各ウェルに加えた（３μｇ／ｃｍ^２）。プレートを３７℃および５％ＣＯ_２で４時間インキュベートした。コーティングの後に、アッセイプレートを、２００μｌ／ウェルのＰＢＳの２回洗浄で、マルチチャネル・ピペットを用いて手作業で洗浄した。最後の洗浄後、プレートを、蓋を外したフード内で乾燥させた。それから、ＬＮ２２９細胞をトリプシンで分離させてペレット化した（２００×ｇで５分間スピンした）。細胞ペレットをＤ１０培地中に再懸濁させて、生存細胞（／ｍｌ）を数えた。細胞を０．１２５ｅ^６細胞／ｍｌに希釈して、アッセイプレート内にウェルあたり１００μｌ蒔いた（ウェルあたり１２，５００細胞）。２日目のアッセイのために用いられるＣＡＧＡ１２細胞については、Ｔ７５フラスコあたり１５０万の密度で細胞を継代培養した。培養は、３７℃および５％ＣＯ_２でインキュベートされた。

１日目に、ＬＮ２２９細胞をトランスフェクトした。リポフェクタミン３０００試薬を用いたトランスフェクションについては製造元のプロトコルに従った。手短には、ウェルあたり５μｌに関して以下をＯｐｔｉＭＥＭＩ中に希釈した：０．１μｇＤＮＡ（ｐｒｏＴＧＦβ１）（０．１μｇＬＴＢＰ１ＤＮＡであってもよい）、０．４μｌＰ３０００、および、ＯｐｔｉＭＥＭＩで５μｌまで。図１２Ａに関して、０．１μｇのｐｒｏＴＧＦβ１（ヒト）ＤＮＡを、ＬＴＢＰＤＮＡを伴わずに単独でトランスフェクトして、内因性提示分子の存在下で活性化を測定した。図１２Ｂに関して、０．１μｇのＬＴＢＰ１（ヒト）ＤＮＡをｐｒｏＴＧＦβ１（ヒト）ＤＮＡと共トランスフェクトして、過剰発現されたＬＴＢＰ１の存在下で活性化を測定した。

リポフェクタミン３０００のマスターミックスを、０．２μｌリポフェクタミン３０００をＯｐｔｉＭＥＭＩ中に（ウェルあたり、ＯｐｔｉＭＥＭＩ中、５μｌまで）希釈することによって作製した。希釈したリポフェクタミン３０００をＤＮＡ混合物に添加して、ピペッティングによって十分に混合して、室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、１０μｌのＤＮＡ：リポフェクタミン３０００（２×５μｌ）混合物を各ウェルに添加した。プレートを組織培養インキュベーターに約２４時間戻した。

２日目に、示された抗体およびＴＧＦβレポーター細胞（ＣＡＧＡ１２）をウェルに添加した。抗体をＰＢＳ中に段階希釈して、それから、アッセイ培地中に２×最終濃度までさらに希釈した。プレートを、アッセイ培地で吸引（陰圧吸引器）によって２回洗浄して、その後に、ウェルあたり１００μｌのアッセイ培地を添加した。２回目の洗浄後、アッセイ培地を５０μｌ（／ウェル）の２×抗体で置き換えた。細胞プレートをインキュベーターに約１５～２０分間戻した。ＣＡＧＡ１２（クローン４Ａ４）細胞を、トリプシンを用いて分離して、ペレット化した（２００×ｇで５分スピンした）。ペレットをアッセイ培地中に再懸濁させて、生存細胞を数えた。生存細胞を０．３ｅ^６細胞／ｍｌに希釈して、ウェルあたり５０μｌ蒔いた（ウェルあたり１５，０００細胞）。細胞をインキュベーターに戻した。

３日目に、アッセイを、抗体および／またはレポーター細胞添加の約１６～２０時間後に読み取った。読み取りの前に、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬および試験プレートを室温にさせた。ＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＨ１上の読み取り設定は、ＴＭＬＣ＿ｓｔｄプロトコルを使用するように設定した－この方法はオートゲイン設定を有する。ポジティブコントロールのウェルは、オートスケール（高）に関して設定した。ウェルあたり１００μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬を添加した。２分間、振とうしながら室温で、光からプレートを保護してインキュベートした。それから、発光をプレートリーダー上で検出した。

結果：
このアッセイから得られたデータは、細胞上清におけるＴＧＦβ活性を反映した。図１２Ａは、ＴＧＦβ活性によって測定して、ＳＲ－ＡＢ１４（最適化ＳＲ－ＡＢ１０）の改善された効能を示すグラフである。注目すべきことに、ＳＲ－ＡＢ１４活性は、コンテキスト非依存性抗体ＳＲ－ＡＢ１と同様である。このアッセイは、ＬＴＢＰ１を過剰発現させずに行なわれたものであり、したがって、内因性提示分子の存在下でのＴＧＦβの活性化を測定する。図１２Ｂは、ＴＧＦβ活性によって測定される、ＳＲ－ＡＢ１５（最適化ＳＲ－ＡＢ１３）の改善された効能を示すグラフである。このアッセイは、過剰発現されたヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１の存在下で行なわれた。注目すべきことに、ＳＲ－ＡＢ１４活性は、コンテキスト非依存性抗体ＳＲ－ＡＢ１と同様である。

図１２Ａおよび１２Ｂに示されるアッセイは両方とも、低ＬＴＢＰ１ｍＲＮＡ、高ＬＴＢＰ３ｍＲＮＡ、検出不能ＧＡＲＰ、および検出不能ＬＲＲＣ３３を発現するＬＮ２２９細胞において行なわれた。

実施例８：ＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発後の、最適化ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１特異的抗体の改善された親和性
親和性成熟／最適化の第１ラウンドによるＬＴＢＰ複合体特異的抗体（ＳＲ－ＡＢ１４、ＳＲ－ＡＢ１６、ＳＲ－ＡＢ１７、ＳＲ－ＡＢ１８、ＳＲ－ＡＢ１９）を、親和性成熟／最適化の第２ラウンド（すなわち、本明細書中に記載のＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発）に選択し、特定の子孫抗体（ＳＲ－ＡＢ２０、ＳＲ－ＡＢ２１、ＳＲ－ＡＢ２２、ＳＲ－ＡＢ２３、ＳＲ－ＡＢ２４、ＳＲ－ＡＢ２５、ＳＲ－ＡＢ２６、ＳＲ－ＡＢ２７、ＳＲ－ＡＢ２８、およびＳＲ－ＡＢ２９）を、様々なｐｒｏＴＧＦβ１構築物に結合するそれらの能力について評価した。最適化抗体の結合親和性を、実施例６において本質的に記載される、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１、ヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦｂ１、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１、マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦｂ１、およびＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対してＯｃｔｅｔによって測定した。手短には、試験抗体を抗－ヒトＦｃキャプチャーバイオセンサー（ＡＨＣ）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標））の表面に固定化して、それから、１００ｎＭの単一濃度で様々なＴＧＦβ１複合体に対して結合を試験して、結合親和性を評価した。抗原を、３分間会合させた後に５分解離させた。速度論バッファー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標））を、実験全体を通して用い、それぞれの抗体抗原ペアについて１：１フィッティングモデルを用いてＫ_Ｄを決定した。

表８は、Ｏｃｔｅｔによって決定された、示されたＬＴＢＰ複合体特異的抗体（ＩｇＧ１－ａｇｌｙ）に関する結合プロファイルおよび親和性データを提供する。注目すべきことに、最適化抗体ＳＲ－ＡＢ２０、ＳＲ－ＡＢ２１、ＳＲ－ＡＢ２２、ＳＲ－ＡＢ２３、ＳＲ－ＡＢ２４、ＳＲ－ＡＢ２５、ＳＲ－ＡＢ２６、ＳＲ－ＡＢ２７、ＳＲ－ＡＢ２８、およびＳＲ－ＡＢ２９は、ｐｒｏＴＧＦβ１と複合体化したヒトＬＴＢＰ１およびヒトＬＴＢＰ３の両方に関して１桁のｎＭ親和性を示す。さらに、どの抗体も、ｐｒｏＴＧＦβ１と複合体化したヒトＧＡＲＰに結合せず、抗体がＬＴＢＰ複合体に関して特異的であることが示された。

実施例９：軽鎖最適化サイクル３の後の、最適化ＬＴＢＰ複合体特異的抗体の改善された親和性
親和性成熟／最適化の第２ラウンドによるＬＴＢＰ複合体特異的抗体を、親和性成熟／最適化の第３ラウンド（すなわち、本明細書中に記載の軽鎖最適化）に選択して、特定の子孫抗体を、様々なｐｒｏＴＧＦβ１構築物にそれらが結合する能力について評価した。

サイクル３抗体は、軽鎖ＣＤＲ３全体を通して突然変異誘発を行ない、軽鎖ＣＤＲ１およびＣＤＲ２に関する事前に作製された配列のシャッフルを行なうことによって生産された。目的の抗体を、ポジティブおよびネガティブ選択の両方を用いた酵母ディスプレイを通して、その後にシーケンシングすることによって同定した。

最適化抗体の結合親和性を、実施例６において本質的に説明されるように、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１、ヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１、マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１、およびＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対してＯｃｔｅｔによって測定した。手短には、試験抗体を抗－ヒトＦｃキャプチャーバイオセンサー（ＡＨＣ）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標））の表面に固定化して、それから、１００ｎＭの単一濃度で様々なＴＧＦβ１複合体に対して結合を試験して、結合親和性を評価した。抗原を、３分間会合させた後に５分解離させた。速度論バッファー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標））を、実験全体を通して用い、それぞれの抗体抗原ペアについて１：１フィッティングモデルを用いてＫＤを決定した。

表９は、軽鎖最適化サイクル３によって同定され、Ｏｃｔｅｔによって決定された、示されたＬＴＢＰ複合体特異的抗体（ＩｇＧ１－ａｇｌｙ）に関する結合プロファイルおよび親和性データを示す。注目すべきことに、いくつかの最適化抗体は、ヒトＬＴＢＰ１およびヒトＬＴＢＰ３が複合体化したｐｒｏＴＧＦβ１の両方に関して、１桁のｎＭ親和性を示す。さらに、表１０に示されるように、いくつかの抗体は、同一のアッセイ条件下で、ｐｒｏＴＧＦβ１と複合体化したヒトＧＡＲＰに結合せず、抗体がＬＴＢＰ複合体に特異的であることが示された。

図１５は、親和性成熟抗体が、ＬＴＢＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に対して特異的な結合を示すことを示す。この実験は、２００、１００、５０、および２５ｎＭのヒトＧＡＲＰｐｒｏＴＧＦｂ１およびヒトＬＴＢＰ１ｐｒｏＴＧＦｂ１で行なわれた。図１５は、どれが意味のある結合でありどれが意味のある結合でないかを決定するために０．１ｎｍカットオフを用いた場合の、２００ｎＭの値を示す。図１５に示されるように、一部の抗体に関して、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１への結合は、非常に高い濃度（２００ｎＭ）でのみ意味があり、一部の抗体は、その高い濃度でさえＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１への結合を示さない。

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイ
Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋシステムを用いて、試験抗体の一価結合親和性および抗原結合に関する速度論パラメーターを決定した。抗原複合体に対する、ＦａｂフラグメントＳＲ－ＡＢ４２－ＨｕＦａｂ、ＳＲ－ＡＢ６３－ＨｕＦａｂおよびＳＲ－ＡＢ４３－ＨｕＦａｂの会合および解離の反応速度を測定した。得られたｋａ、ｋｄおよびＫＤを以下に提供する。手短には、Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて表面プラズモン共鳴によって結合速度論を評価した。ビオチン化キャプチャー抗原をチップに固定化した（１０ｎＭ、約２００ＲＵローディング）。ビオチンキャプチャーセンサーチップを用いて、ビオチン化抗原をキャプチャーした。１０、５、２．５、１．２５、および０．６ｎＭの濃度でのＦａｂを、キャプチャーされた抗原の上に注入した。０ｎＭを参照として用いた。ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３に対するＬＴＢＰ抗体の親和性を、より高い濃度のＦａｂ（１００、５０、２５、１２．５、６．２５ｎＭ）を用いて確認した。０ｎＭを参照として用いた。それぞれの分析物の濃度が別個のサイクルにおいて注入され、センサーチップ表面がそれぞれのサイクル後に再生される場合、マルチサイクル速度論を用いた。全てのアッセイは、調製されたばかりの１×ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）中で行なわれた。データを、１：１結合モデルに対して全体的にフィットさせて速度論パラメーターを得た。０ｎＭの分析物の濃度に関するセンサーグラムを参照として用いた。

結果を以下の表１１～１５に示す。図２３および図２４はそれぞれ、ＳＲ－ＡＢ６３およびＳＲ－ＡＢ４２ヒトＦａｂが、ｈｕＬＴＢＰ１ｐｒｏＴＧＦβ１およびｈｕＬＴＢＰ３ｐｒｏＴＧＦβ１に関する新規の抗体のコンテキスト選択的結合を示すことを示す。

実施例１０：ＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発後の、最適化ＬＴＢＰ複合体特異的抗体の改善された効能
親和性成熟／最適化の第１ラウンドによるＬＴＢＰ複合体特異的抗体（すなわち、ＳＲ－ＡＢ１４、ＳＲ－ＡＢ１６、ＳＲ－ＡＢ１７、ＳＲ－ＡＢ１８、ＳＲ－ＡＢ１９）を、親和性成熟／最適化の第２ラウンドに選択して（すなわち、本明細書中に記載のＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発）、特定の子孫抗体（ＳＲ－ＡＢ２０、ＳＲ－ＡＢ２１、ＳＲ－ＡＢ２２、ＳＲ－ＡＢ２３、ＳＲ－ＡＢ２４、ＳＲ－ＡＢ２５、ＳＲ－ＡＢ２６、ＳＲ－ＡＢ２７、ＳＲ－ＡＢ２８、およびＳＲ－ＡＢ２９）を、ＬＮ２２９細胞を用いて、ＴＧＦβ活性を阻害するそれらの能力に関して評価した。図１３Ａ、１３Ｂ、１４Ａ、および１４Ｂに示されるアッセイに関して、実施例２におけるアッセイＩＩの改変版である以下のプロトコルを用いた。

材料：
・ＭｖＬｕ１－ＣＡＧＡ１２細胞（クローン４Ａ４）
・ＬＮ２２９細胞株（高レベルの内因性αＶβ８インテグリン）
・Ｃｏｓｔａｒの白い壁のＴＣ処理９６ウェルアッセイプレート＃３９０３
・ＧｒｅｉｎｅｒＢｉｏ－ＯｎｅＨｉｇｈＢｉｎｄｉｎｇの白いｕｃｌｅａｒ９６ウェルアッセイプレート＃６５５０９４
・ヒトフィブロネクチン（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５４００８）
・Ｐ２００マルチチャネル・ピペット
・それぞれに関して滅菌フィルターチップを有するＰ２０、Ｐ２００、およびＰ１０００ピペット
・滅菌マイクロチューブおよびラック
・滅菌試薬リザーバー
・０．４％トリパンブルー
・２ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、および２５ｍＬ滅菌ピペット
・組織培養処理１００ｍｍまたは１５０ｍｍプレート
・７０％エタノール
・Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ還元血清培地（ＬｉｆｅＴｅｃｈ＃３１９８５－０７０）
・リポフェクタミン３０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈ＃Ｌ３００００１５）
・Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ２６２０）
・０．２５％Ｔｒｙｓｐｉｎ＋０．５３ｍＭＥＤＴＡ
・ｐｒｏＴＧＦｂ１発現プラスミド、ヒト
・ｐｒｏＴＧＦｂ１発現プラスミド、マウス
・ＬＴＢＰ１Ｓ発現プラスミド、マウス

機器：
・ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー
・ＴＣフード
・ベンチトップ遠心分離機
・ＣＯ２インキュベーター３７Ｃ５％ＣＯ２
・３７Ｃ水／ビーズバス
・プラットフォーム・シェイカー
・顕微鏡
・血球計数器／ｃｏｕｎｔｅｓｓ

手順：
・常に滅菌安全キャビネット内で作業し、滅菌技術を常時用いるべきである。
・全ての培地を調製し、全ての材料を滅菌し、開始前に材料を安全キャビネット内に移動させる。増殖培地は、３７℃に温めるべきである。
・このアッセイ中のほとんどすべてのステップに、逆ピペッティング技術を用いる。

０日目に、細胞を蒔く前に、アッセイプレートをフィブロネクチンでコーティングした（ＬＴＢＰ過剰発現アッセイのみ）。フィブロネクチンの１ｍｇ／ｍｌストック溶液を、超純水（滅菌）中に調製した。ストック溶液をＰＢＳ中、１９．２ｕｇ／ｍｌ使用液に希釈して、５０μｌを各ウェルに加えた（３ｕｇ／ｃｍ^２）。プレートを３７℃および５％ＣＯ_２で４時間インキュベートした。コーティングの後に、アッセイプレートを、２００ｕｌ／ウェルのＰＢＳの２回洗浄で、マルチチャネル・ピペットを用いて手作業で洗浄した。最後の洗浄後、プレートを、蓋を外したフード内で乾燥させた。それから、ＬＮ２２９細胞をトリプシンで分離させてペレット化した（２００×ｇで５分間スピンした）。細胞ペレットをＤ１０培地中に再懸濁させて、生存細胞（／ｍｌ）を数えた。細胞を０．１２５ｅ^６細胞／ｍｌに希釈して、アッセイプレート内にウェルあたり１００μｌ蒔いた（ウェルあたり１２，５００細胞）。２日目のアッセイのために用いられるＣＡＧＡ１２細胞については、Ｔ７５フラスコあたり１５０万の密度で細胞を継代培養した。培養は、３７℃および５％ＣＯ_２でインキュベートされた。

１日目に、ＬＮ２２９細胞をトランスフェクトした。リポフェクタミン３０００試薬を用いたトランスフェクションについては製造元のプロトコルに従った。手短には、ウェルあたり５μｌに関して以下をＯｐｔｉＭＥＭＩ中に希釈した：０．１μｇの提示分子ＤＮＡと合わせて０．１μｇのｐｒｏＴＧＦβ１ＤＮＡ、および０．４μｌＰ３０００、ＯｐｔｉＭＥＭＩで５μｌまで。図１３Ａおよび図１４Ａに関して、０．１μｇのヒトｐｒｏＴＧＦβ１ＤＮＡを、ＬＴＢＰＤＮＡを伴わずに０．１ｕｇの空ベクターでトランスフェクトして、内因性提示分子の存在下で活性化を測定した。図１３Ｂおよび図１４Ｂに関して、０．１μｇのマウスＬＴＢＰ１ＤＮＡを、マウスｐｒｏＴＧＦβ１ＤＮＡと共トランスフェクトして、過剰発現されたＬＴＢＰ１の存在下で活性化を測定した。

リポフェクタミン３０００のマスターミックスを、０．２μｌリポフェクタミン３０００をＯｐｔｉＭＥＭＩ中に（ウェルあたり、ＯｐｔｉＭＥＭＩ中、５μｌまで）希釈することによって作製した。希釈したリポフェクタミン３０００をＤＮＡ混合物に添加して、ピペッティングによって十分に混合して、室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、１０ｕμｌのＤＮＡ：リポフェクタミン３０００（２×５μｌ）混合物をそれぞれのウェルに添加した。プレートを組織培養インキュベーターに約２４時間戻した。

３日目に、アッセイを、抗体および／またはレポーター細胞添加の約１６～２０時間後に読み取った。読み取りの前に、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬および試験プレートを室温にさせた。ウェルあたり１００μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ試薬を添加した。２分間、振とうしながら室温で、光からプレートを保護してインキュベートした。それから、発光をプレートリーダー上で検出した。

結果：
このアッセイから得られたデータは、細胞上清におけるＴＧＦβ活性を反映した。図１３Ａおよび１３Ｂは、ＴＧＦβ活性によって測定した、抗体ＳＲ－ＡＢ２０、ＳＲ－ＡＢ２１、ＳＲ－ＡＢ２２、およびＳＲ－ＡＢ２３（ＳＲ－ＡＢ１０ファミリー抗体）の改善された効能を示すグラフである。図１３Ａのアッセイは、ＬＴＢＰ１を過剰発現させずに行われ、したがって、内因性提示分子の存在下でのＴＧＦβの活性化を測定する。図１３Ｂのアッセイは、過剰発現されたミューリンＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１を用いて行なわれた。注目すべきことに、抗体ＳＲ－ＡＢ２２およびＳＲ－ＡＢ２３は、両方のアッセイにおいて、コンテキスト非依存性抗体ＳＲ－ＡＢ１と同様（またはそれよりも大きな）活性を示す。

図１４Ａおよび図１４Ｂは、ＴＧＦβ活性によって測定した、抗体ＳＲ－ＡＢ２４、ＳＲ－ＡＢ２５、ＳＲ－ＡＢ２６、ＳＲ－ＡＢ２７、ＳＲ－ＡＢ２８、およびＳＲ－ＡＢ２９（ＳＲ－ＡＢ１３ファミリー抗体）の改善された効能を示すグラフである。図１４Ａのアッセイは、ＬＴＢＰ１を過剰発現させずに行われ、したがって、内因性提示分子の存在下でのＴＧＦβの活性化を測定する。図１４Ｂのアッセイは、過剰発現されたミューリンＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１を用いて行なわれた。注目すべきことに、最適化抗体は、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１過剰発現細胞アッセイにおいて、コンテキスト非依存性抗体ＳＲ－ＡＢ１よりも大きな活性を示す（図１４Ｂ）。

図１３Ａ、図１３Ｂ、図１４Ａ、および図１４Ｂに示されるアッセイは全て、低ＬＴＢＰ１ｍＲＮＡ、高ＬＴＢＰ３ｍＲＮＡ、検出不能ＧＡＲＰ、および検出不能ＬＲＲＣ３３を発現するＬＮ２２９細胞において行なわれた。

実施例１１：軽鎖突然変異誘発後の、最適化ＬＴＢＰ複合体特異的抗体の改善された効能
親和性成熟／最適化の第３および第４ラウンドからのＬＴＢＰ複合体特異的抗体を、ＬＮ２２９細胞を用いて、ＴＧＦβ活性を阻害するそれらの能力に関して評価した。アッセイは、実施例１０に記載されたプロトコルを用いて行なわれた。

阻害効能（ＩＣ５０）値を計算するために、生の発光値を、ＰＢＳのみ（ビヒクル）で処理されたウェルに対して正規化した。正規化された値を、ＰＲＩＳＭ（登録商標）ソフトウェアを用いてプロットして、３点の非線形回帰を用いて値を計算した。以下の表は、２つの異なるアッセイ形式：内因性ヒトＬＴＢＰ（ｈＬＴＢＰ）アッセイおよびマウスＬＴＢＰアッセイ（ｍＬＴＢＰ）におけるアイソフォーム特異的抗体に関するＩＣ５０値（ｎＭ）を示す。ＩＣ５０値は、２つのアッセイ形式において、表１６～１９に示される４つの異なる抗体系統：ＳＲ－ＡＢ２２、ＳＲ－ＡＢ２３、ＳＲ－ＡＢ２４およびＳＲ－ＡＢ２６に関して決定された。

このアッセイから得られたデータは、細胞上清におけるＴＧＦβ活性を反映した。図１６に示されるように、ＬＴＢＰ複合体特異的抗体の機能性活性（効能）は、親和性成熟の各サイクルにおいて改善した。図１６に示されるように、親和性成熟の各サイクルによる改善は、潜在型ＴＧＦβ１の強力なコンテキスト非依存性阻害剤であるコンテキスト非依存性参照抗体（ＲｅｆＡｂ）を超える活性をもたらした。上述のアッセイは全て、ミューリンＬＴＢＰ１およびミューリンｐｒｏＴＧＦβ１によって一時的にトランスフェクトされたＬＮ２２９細胞において行なわれた。

表２０に示される結果に関して、アッセイは、実施例１０において説明されるプロトコルを用いて行なわれたが、このアッセイでは、Ｆａｂを使用した。

実施例１２：開発可能性
好ましい生物物理学的特性を示す抗体は、開発における成功率が増大する。親和性成熟／最適化の第３および第４ラウンドによるＬＴＢＰ複合体特異的抗体を、凝集傾向および多特異性について評価した。図１７は、バキュロウイルス（ＢＶ）粒子に対するＳＲ－ＡＢ結合を示す酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）の結果を示す。図１８は、アフィニティ捕獲自己相互作用ナノ粒子分光法（ＡＣ－ＳＩＮＳ）アッセイの結果を示す。このアッセイは、抗体がそれ自身と相互作用する可能性を試験する。それは、抗－Ｆｃ抗体でコーティングされた金ナノ粒子を用いる。抗体の希釈溶液が添加されると、それらは、Ｆｃでコーティングされた金ビーズ上に急速に固定化される。これらの抗体が続いて互いに相互作用する場合は、より短い原子間距離および分光法によって検出することのできるプラズモン波長の増大をもたらす。

これらの結果は、候補抗体が、ＡＣ－ＳＩＮＳアッセイにおける５ｎＭ未満のプラズモンシフトおよびネガティブコントロールの５倍未満のＢＶＥＬＩＳＡシグナルによって証明されるように、好ましい開発可能性特性を示すことを示す。

実施例１３：マウスＮＡＳＨのコリン欠乏高脂肪食（ＣＤＨＦＤ）モデルにおけるＬＴＢＰ複合体特異的抗体によるＴＧＦβシグナリングの阻害
コリン欠乏高脂肪食（ＣＤＨＦＤ）は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の食事によって誘導される確立されたモデルである。このモデルでは、雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、コリン欠損、０．１％メチオニン、高脂肪食を１２週間与える。ＣＤＨＦＤの開始の３～６週間後、線維症を進行させるプロセスの活性化が、α－平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）タンパク質（肝星細胞の活性化に関するマーカー）の発現増大、およびコラーゲン合成および沈着の増大を反映する組織ヒドロキシプロリン含有量の上昇を通して検出され得る（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏｅｔ．ａｌ，ＩｎｔＪＥｘｐＰａｔｈｏｌ．２０１３Ａｐｒ；９４（２）：９３－１０３）。

ＬＴＢＰ複合体特異的抗体を、ＣＤＨＦＤモデルにおいて、マウスにおける肝線維症の程度を阻害および／または減少させる能力に関して、以下のように試験した。試験の概要を以下の表２１に示す。

試験コホート内の動物は、試験の持続時間のあいだ、ＣＤＨＦＤであった。マウスの別コホート（群１）は、試験コントロールとして通常の固形飼料食が投与された。抗体ＳＲ－ＡＢ４２およびＳＲ－ＡＢ３１を、ＣＤＨＦＤの開始４週後に始めて、腹腔内（ｉ．ｐ．）注入によってマウスに投与した。動物は、１５ｍｇ／ｋｇを１週間に２回（すなわち、３０ｍｇ／ｋｇ／週）の抗体試験濃度で、８週の試験持続時間（すなわち、４週目から１２週目まで）投与された。マウスＩｇＧ１アイソタイプ抗体を、１５ｍｇ／ｋｇを１週間に２回（すなわち、３０ｍｇ／ｋｇ／週）でネガティブコントロールとして用いた。ＲｅｆＡｂを、ＴＧＦβ１の強力なコンテキスト非依存性阻害剤であることに起因して参照抗体として用いた。８週の投与の後に、動物を屠殺して、分析のために肝臓を回収した。エンドポイントの読み出しは、ヒドロキシプロリン含有量であった。

ＣＤＨＦＤ肝線維症モデルにおけるヒドロキシプロリン含有量
アミノ酸プロリンのヒドロキシル化によって生産されるヒドロキシプロリンは、原線維コラーゲンの主な構成要素に関するシグネチャーアミノ酸であり、タンパク質のおよそ１３．５％を含む。ヒドロキシプロリンは、線維症の重症度の重要な診断指標として働く。ＣＤＨＦＤを与えられた動物は、肝臓組織内のヒドロキシプロリン（ＨＹＰ）の増大を示す。図１９に示されるように、ＳＲ－ＡＢ４２およびＳＲ－ＡＢ３１による処置は、ＣＤＨＦＤの動物における肝臓組織内のＨＹＰ（μｇ／ｍｇ組織）の増大を阻害した。

実施例１４：アルポート症候群の遺伝的モデルにおける、ＬＴＢＰ複合体特異的抗体によるＴＧＦβシグナリングの阻害
ミューリンＣｏｌ４ａ３－／－モデルは、常染色体劣性アルポート症候群の確立された遺伝的モデルである。アルポートマウスは、機能性コラーゲン４Ａ３遺伝子が欠損しており（Ｃｏｌ４Ａ３－／－）、したがって、α３、α４、およびα５鎖を必要とする正常なＩＶ型コラーゲン三量体を形成できない。Ｃｏｌ４ａ３－／－マウスは、間質線維症および管状萎縮を含むヒト患者における腎線維化と一致する腎臓における線維症を発症し、Ｃｏｌ４ａ３－／－マウスは、マウスの遺伝的背景に応じて８～３０週齢で末期ステージの腎疾患（ＥＳＲＤ）を発症する。Ｃｏｌ４ａ３－／－マウスにおける腎臓病理の構造的および機能的徴候は、ＥＳＲＤへの進行と合わせて、Ｃｏｌ４ａ３－／－マウスを、腎線維症を理解するための理想的なモデルにさせる。以前の報告は、このプロセスにおけるＴＧＦβシグナリング経路の重要性を指摘し、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の公知のアクチベーターであるαＶβ６インテグリンの阻害剤、または、ＴＧＦβリガンド・トラップのいずれかによる治療は、アルポートマウスにおける腎線維症および炎症を防止することが報告されている（Ｈａｈｍｅｔａｌ．（２００７）ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，１７０（１）：１１０－１２５）。

ＬＴＢＰ複合体特異的抗体を、アルポートマウスにおいて、腎線維化を阻害および／または減少させるそれらの能力について、以下のように試験した。試験の概要を以下の表２２に示す。

Ｃ５７ＢＬ／６遺伝的背景のＣｏｌ４ａ３＋／－雌に交配させた１２９／Ｓｖ遺伝的背景のＣｏｌ４ａ３＋／－雄によるＦ１子孫を、この試験に用いた。これらのマウスは典型的に４～５週齢までにタンパク尿を示し、典型的に１３～１５週齢までにＥＳＲＤへと進行し、処置の有効性を試験するための良好な治療濃度域を提供する。１１週齢Ｃｏｌ４ａ３－／－マウスに、動物屠殺および腎臓回収の４８時間前に、３０ｍｇ／ｋｇのＳＲ－ＡＢ４２およびＳＲ－ＡＢ６３を腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。ＲｅｆＡｂを、ＴＧＦβ１活性化の強力なコンテキスト非依存性阻害剤であることに起因して参照抗体として用いた。

アルポート腎臓モデルにおけるｐＳＭＡＤ分析
ＴＧＦβ受容体活性化は、Ｓｍａｄ２／３のリン酸化を含む細胞内イベントの下流シグナリングカスケードを導くことが十分に証明されている。したがって、ＳＲ－ＡＢ４２およびＳＲ－ＡＢ６３処置がＴＧＦβシグナリングを阻害する能力を、製造元の説明書に従ってＥＬＩＳＡ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によってアッセイされるＳｍａｄ２／３の相対的リン酸化レベルを測定することによって、腎臓溶解サンプルにおいて評価した。図２０Ａは、アルポートマウスモデルにおける、リン酸化－対－総（リン酸化および非リン酸化）Ｓｍａｄ２／３の相対比（ｐＳＭＡＤ２／３：ｔＳＭＡＤ２／３）を示すグラフである。図２０Ｂは、ＥＬＩＳＡによって決定されるリン酸化ＳＭＡＤ２／３（ｐＳＭＡＤ２／３）の量を示すグラフであり、図２０Ｃは、ＥＬＩＳＡによって決定される総ＳＭＡＤ２／２（ｔＳＭＡＤ２／３）タンパク質の量を示すグラフである。図２０Ｂおよび図２０Ｃによって示されるように、ｐＳＭＡＤの減少は、図２０Ａに示される比の変化に寄与している。単一用量のＳＲ－ＡＢ４２またはＳＲ－ＡＢ６３は、全腎臓溶解物においてｐＳｍａｄ２／３シグナリングを有意に阻害するのに十分であり、ＳＲ－ＡＢ４２およびＳＲ－ＡＢ６３による効率的な標的結合およびアルポートモデルにおけるＬＴＢＰ複合体特異的阻害がｐＳｍａｄレベルを減少させることを示した。

実施例１５．ｐｒｏＴＧβ１Ｃ４Ｓ結合の決定
ｐｒｏ－ドメインの４位のシステイン残基がセリン残基で置換されている改変されたｐｒｏＴＧＦβ１複合体（ｐｒｏＴＧＦβ１Ｃ４Ｓ）（ＷＯ２０１４／１８２６７６に記載）を用いて、Ｃ４Ｓ抗原への抗体結合をＯｃｔｅｔによって評価した。サイクル２抗体を固定化して、３抗原に対して試験した。以下の表に示されるように、ＬＴＢＰ－１ｐｒｏＴＧＦβ１抗原（表２３）およびｐｒｏＴＧＦβ１Ｃ４Ｓ抗原への強い抗体結合が観察され（表２４）、一方で、ＬＲＲＣ３３ｐｒｏＴＧＦβ１抗原への結合は観察されなかった（表２５）。

実施例１６．サイクル３リード（Ｃｙｃｌｅ３Ｌｅａｄ）抗体は、ＴＧＦβ３アッセイにおいて阻害を示さない
図２１は、リード・サイクル３（ｌｅａｄｃｙｃｌｅ３）抗体が、ＬＴＢＰ－ＴＧＦβ３アッセイにおいて阻害を示さないことを示すグラフである。ＴＧＦβ３アッセイは、実施例１０におけるアッセイと同様に行なわれるが、ｐｒｏＴＧＦβ１の代わりにｐｒｏＴＧＦβ３がトランスフェクトされる。このアッセイはＬＮ２２９細胞株における内因性提示分子に依拠するので、ＬＴＢＰ構築物はトランスフェクトされない。

実施例１７：肝線維症モデルにおけるＴＧＦβ３選択的活性化阻害剤の線維症を進行させる効果
肝臓は、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３の両方を発現する。ＣＤＨＦＤモデルにおける両方のアイソフォームの阻害が肝臓の線維症をさらに和らげるかどうか調べるために、ＣＤＨＦＤマウスを、強力なＴＧＦβ１選択的活性化阻害剤（ヒトＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３複合体のコンテキストにおいてＴＧＦβ１の活性化を阻害する）およびＴＧＦβ３選択的活性化阻害剤を単独または組み合わせて用いて処置した。ＴＧＦβ３阻害剤で処置されたマウスにおいて、ＰＳＲ分析およびさらなる組織病理学分析によって証明されるように疾患の悪化が観察された（図２２）。１２週において、例えば、試験の終わりに、ＴＧＦβ１選択的活性化阻害剤を受けた動物は、ＩｇＧによって処置された動物（ネガティブコントロール）と比較して有意に少ない線維症を示した。対照的に、ＴＧＦβ３選択的阻害剤で処置された動物は、およそ１２％ＰＳＲの陽性領域で、有意により多い線維症を示した。ＴＧＦβ３選択的阻害剤およびＴＧＦβ１選択的阻害剤の両方の組み合わせを受けた動物は、中間レベルの線維症を示し、ＴＧＦβ１選択的活性化阻害剤の抗線維形成効果がＴＧＦβ３阻害によって和らげられることが示唆された。

実施例１８：軽鎖最適化サイクル４の後の、最適化ＬＴＢＰ－複合体特異的抗体の改善された親和性
親和性成熟／最適化の第３ラウンドによるＬＴＢＰ複合体特異的抗体を、親和性成熟／最適化の第４ラウンド（すなわち、本明細書中に記載の軽鎖最適化）のために選択し、特定の子孫抗体を、様々なｐｒｏＴＧＦβ１構築物に結合するそれらの能力について評価した。

材料：
・９６ウェルプレート－Ｇｒｅｉｎｅｒｂｉｏ－ｏｎｅＲＥＦ６５０１０１
・マイクロプレートＦｏｉｌｓ－ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ－カタログ番号２８－９７５８－１６
・ＢｉｏｔｉｎＣＡＰｔｕｒｅＫｉｔＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ製品番号２８９２０２３３
・Ｂｉａｃｏｒｅランニング・バッファー－（２０×溶液として供給、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中に希釈、ＴＥＫｎｏｖａカタログ番号Ｈ８０２２）

方法：
これらの実験は、方法「ＢｉｏｔｉｎＣＡＰｔｕｒｅキットを用いた多サイクル速度論／親和性」を用いて、Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋを使用して行われた。

データ収集速度を１０Ｈｚに設定し、ＢｉｏｔｉｎＣＡＰｔｕｒｅステップを２μＬ／分の流速で３００秒間行なった。ＢｉｏｔｉｎＣＡＰｔｕｒｅ試薬は、１×Ｂｉａｃｏｒｅランニング・バッファー中、１：５希釈後に用いた。ビオチン化リガンド（ＴＧＦβ１の様々な複合体）を１０ｎＭの濃度で使用し、１０μＬ／分の流速で１８０秒間、センサーチップに固定化させた。Ｆａｂのそれぞれである分析物を、０ｎＭのコントロールを含めて１０、５、２．５、１．２５、および０．６２５ｎＭで試験した。分析物の接触時間は１２０秒であり、解離時間は９００秒であった。使用された再生サイクルは、１０μＬ／分の流速で１２０秒であった。

用いた評価方法は「キャプチャーを用いた多サイクル親和性」であり、１：１結合モデルを用いた。所定のビオチン化抗原に対して試験される全てのＦａｂに関して、Ｒｍａｘを、有意により遅い結合ｏｆｆ速度を有しており、よって同一実験において同一抗原に対してより高い親和性結合を有する、参照Ａｂの親和性成熟バージョンのＲｍａｘと同等に設定した。全体的なフィットを全てのＫＤ決定に使用した。ＫＤ値を以下の表２６に示す。

表２７は、一価の結合半減期（Ｔ^１／２）を示す。一価の結合半減期（Ｔ^１／２）の値は、ｈＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびｈＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のそれぞれについて、少なくとも４５分であった。一価Ｔ^１／２値は、ＳＰＲによって測定して、ｈＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１およびｈＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のそれぞれについて５分未満であった。

実施態様
本発明は様々な実施態様を包含する。非限定的な例を以下に挙げる：

１．以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４：
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９
のうちの少なくとも３個を含む、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２．実施態様１に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい；および
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく、Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく、Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく、Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく、Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく、Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく、Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３
のうちの少なくとも３個を含む。

３．実施態様２に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）ＣＤＲ－Ｈ２において、Ｘ_２はＳであり；および
ｂ）ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＡであり、Ｘ_２はＲまたはＶであり、Ｘ_３はＲであり、Ｘ_４はＩであり、Ｘ_５はＡまたはＬであり、Ｘ_６はＡであり、Ｘ_７はＦであり、Ｘ_８はＧであり、Ｘ_９はＹである。

３．１実施態様３に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のうちの１つまたは複数は、ＣＤＲ多様化および／または突然変異誘発によって親和性成熟および／または最適化される。

４．先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み；および／または、抗体は、配列番号８９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含む。

５．先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
配列番号８８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および
配列番号８９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

６．抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００：
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１：
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５
のうちの少なくとも３個を含む。

７．実施態様６に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、以下の６個のＣＤＲ：
ｇ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい；
ｈ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい；
ｉ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく、Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく、Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく、Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく、Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく、Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく、Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく、Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく、Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい；
ｊ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｋ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および
ｌ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５
のうちの少なくとも３個を含む。

８．実施態様７に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ｇ）ＣＤＲ－Ｈ１において、Ｘ_２はＨまたはＲであり、Ｘ_３はＳであり、Ｘ_４はＧ、ＩまたはＮである；および
ｈ）ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＡであり、Ｘ_３はＰまたはＶであり、Ｘ_４はＳであり、Ｘ_５はＤであり、Ｘ_６はＳまたはＡであり、Ｘ_７はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであり、Ｘ_８はＡであり、Ｘ_９はＭであり、Ｘ_１０はＤ、Ｑ、またはＧであり、Ｘ_１１はＶまたはＲである。

８．１ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のうちの１つまたは複数が、ＣＤＲ多様化および／または突然変異誘発によって親和性成熟および／または最適化される、実施態様８に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

９．以下：
ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００；
ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１；
ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；
ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５
から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含む（それぞれのＣＤＲに関して１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい）、実施態様６～８．１のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１０．可変重鎖領域および可変軽鎖領域を含む実施態様６～９のうちの１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ｉ）可変重鎖領域は、配列番号１０６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み；および／または、
ｉｉ）可変の軽鎖可変領域は、配列番号１０７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。

１１．実施態様６～９のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、抗体またはその抗原結合部分が、
ｉ）配列番号１０６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域；および、
ｉｉ）配列番号１０７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

１２．６個のＣＤＲを全て含む、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１２．１上記の１つまたは複数のアミノ酸変更が１個のアミノ酸変更を含む、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１２．２上記の１つまたは複数のアミノ酸変更が２個までのアミノ酸変更を含む、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１２．３上記の１つまたは複数のアミノ酸変更が３個までのアミノ酸変更を含む、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１２．４上記の１つまたは複数のアミノ酸変更が４個までのアミノ酸変更を含む、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１２．５上記の１つまたは複数のアミノ酸変更が５個までのアミノ酸変更を含む、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１２．６上記の１つまたは複数のアミノ酸変更が６個までのアミノ酸変更を含む、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１２．７上記の１つまたは複数のアミノ酸変更が７個までのアミノ酸変更を含む、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１２．８ＣＤＲのいずれもアミノ酸変更を含まない、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１３．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１４．ヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１５．ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に結合しない、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント

１６．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１７．成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合しない、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１８．完全ヒトまたはヒト化抗体である、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

１９．単離された抗体、またはその抗原結合フラグメントである、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２０．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への結合に関して、抗体ＳＲ－Ａｂ１、ＳＲ－Ａｂ２またはＳＲ－Ａｂ１３のいずれとも競合しない、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２１．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への結合に関して、抗体ＳＲ－Ａｂ１、ＳＲ－Ａｂ２またはＳＲ－Ａｂ１０のいずれとも競合しない、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２２．抗体がＩｇＧ４またはＩｇＧ１サブタイプである、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２３．抗体がヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２４．抗体がヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２５．抗体がヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２６．抗体がヒトＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体またはＧＡＲＰ－ＴＧＦβ３複合体に結合しない、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２７．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２８．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２９．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３０．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３１．マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である、実施態様２７～３０のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３２．マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である、実施態様２７～３０のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３３．マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１の両方と交差反応性である、実施態様２７～３０のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３４．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント

３５．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３６．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３７．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３８．ＬＴＢＰ１／３と関連したＴＧＦβ１に選択的に結合してその活性化を阻害するという点でアイソフォーム特異的である、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

３９．ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１に結合しない、実施態様３８に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４０．以下の６個のＣＤＲ：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ）アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_１）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＬまたはＧである；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧ（Ｘ_２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＶ、ＲまたはＬであり、Ｘ_２はＹ、ＳまたはＴである；
ｄ）アミノ酸配列ＴＲＳ（Ｘ_１）Ｇ（Ｘ_２）ＩＤ（Ｘ_３）ＮＹＶＱを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮ、Ｌ、ＳまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである；
ｅ）アミノ酸配列ＥＤ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＲＰＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＮ、ＦまたはＡであり、Ｘ_２はＱ、ＩまたはＶである；および
ｆ）アミノ酸配列Ｑ（Ｘ_１）ＹＤ（Ｘ_２）（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｑ（Ｘ_５）ＶＶを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、ＨまたはＷであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、Ａ、Ｌ、ＥまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである
を含む、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４１．ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＲまたはＬである、実施態様４０に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４２．ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_２はＹである、実施態様４１に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４３．ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＴである、実施態様４２に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４４．ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮであり、Ｘ_５はＡである、実施態様４２に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４５．ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである；
ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＮまたはＦであり、Ｘ_２はＱまたはＶである；および
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｙ、ＤまたはＷであり、Ｘ_３はＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、ＬまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである、
実施態様４１に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４６．ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＮであり、Ｘ_３はＮまたはＹである；
ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＮであり、Ｘ_２はＱまたはＶである；および
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、ＹまたはＷであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、ＲまたはＡである、
実施態様４５に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４７．ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＳまたはＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、ＲまたはＡである、実施態様４６に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４８．ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧまたはＡである、実施態様４７に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

４９．ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＴであり、Ｘ_５はＧである、実施態様４８に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

５０．実施態様４５～４９に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）ＣＤＲ－Ｈ１は配列番号１６６のアミノ酸配列を含み；
ｂ）ＣＤＲ－Ｈ２は配列番号１６７のアミノ酸配列を含み；
ｃ）ＣＤＲ－Ｈ３は配列番号１６８のアミノ酸配列を含み；
ｄ）ＣＤＲ－Ｌ１は配列番号１６９のアミノ酸配列を含み；
ｅ）ＣＤＲ－Ｌ２は配列番号１７０のアミノ酸配列を含み；および
ｆ）ＣＤＲ－Ｌ３は配列番号１７１のアミノ酸配列を含む。

５１．配列番号３１８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および
配列番号３１９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施態様４０～５０のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

５２．配列番号３１８に示される重鎖可変領域配列および配列番号３１９に示される軽鎖可変領域配列を有する抗体と競合または交差競合する、実施態様４０～５１のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

５３．ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合し、配列番号３１８に示される重鎖可変領域配列および配列番号３１９に示される軽鎖可変領域配列を有する抗体と競合または交差競合する、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

５４．以下の６個のＣＤＲ：
ｇ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい；
ｈ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＴＹＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＧまたはＡであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＴであってもよい；
ｉ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＤＰＳＹＤＳ（Ｘ_２）ＡＧＭ（Ｘ_３）Ｖを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＡまたはＩであってもよく、Ｘ_３はＤまたはＱであってもよい；
ｊ）アミノ酸配列ＲＡＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＩＳ（Ｘ_３）ＹＬＮを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＫまたはＱであってもよく、Ｘ_２はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＹであってもよい；
ｋ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＡＳ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＱＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＮであってもよく、Ｘ_３はＬまたはＲであってもよい；
ｌ）アミノ酸配列ＱＱ（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）Ｐ（Ｘ_４）Ｔを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＦまたはＮであってもよく、Ｘ_３はＷまたはＦであってもよく、Ｘ_４はＦまたはＬであってもよい、
を含む、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

５５．実施態様５４に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）ＣＤＲ－Ｈ１において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＳまたはＲであり、Ｘ_３はＳであり、Ｘ_４はＧである；
ｂ）ＣＤＲ－Ｈ２において、Ｘ_１はＧまたはＡであり、Ｘ_２はＳまたはＴである；
ｃ）ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであり、Ｘ_２はＡまたはＩであり、Ｘ_３はＤまたはＱである；
ｄ）ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＫまたはＱであり、Ｘ_２はＶまたはＳであり、Ｘ_３はＳまたはＹである；
ｅ）ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＮであり、Ｘ_３はＬまたはＲである；および
ｆ）ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＦまたはＮであり、Ｘ_３はＷまたはＦであり、Ｘ_４はＦまたはＬである。

５６．実施態様５５に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）ＣＤＲ－Ｈ１は、アミノ酸配列ＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧを含む；
ｂ）ＣＤＲ－Ｈ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹを含む；
ｃ）ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＡまたはＩであり、Ｘ_３はＤまたはＱである；
ｄ）ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＫまたはＱであり、Ｘ_２はＶまたはＳであり、Ｘ_３はＳまたはＹである；
ｅ）ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＮであり、Ｘ_３はＬまたはＲである；および
ｆ）ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＦまたはＮであり、Ｘ_３はＷまたはＦであり、Ｘ_４はＦまたはＬである。

５７．実施態様５６に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ｇ）ＣＤＲ－Ｈ１は配列番号２９２のアミノ酸配列を含み；
ｈ）ＣＤＲ－Ｈ２は配列番号２９３のアミノ酸配列を含み；
ｉ）ＣＤＲ－Ｈ３は配列番号２９４のアミノ酸配列を含み；
ｊ）ＣＤＲ－Ｌ１は配列番号２９５のアミノ酸配列を含み；
ｋ）ＣＤＲ－Ｌ２は配列番号２９６のアミノ酸配列を含み；および
ｌ）ＣＤＲ－Ｌ３は配列番号２９７のアミノ酸配列を含む。

５８．実施態様５４～５７のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、請求項１～５のいずれか１つに係る抗体。

５９．配列番号３６０と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および
配列番号３６１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施態様５４～５８のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６０．配列番号３６０に示される重鎖可変領域配列および配列番号３６１に示される軽鎖可変領域配列を有する抗体と競合または交差競合する、実施態様５４～５９のいずれか１つに係る、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６１．ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合し、配列番号３６０に示される重鎖可変領域配列および配列番号３６１に示される軽鎖可変領域配列を有する抗体と競合または交差競合する、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６２．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示さない、実施態様４０～６１のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６３．同一のアッセイ条件下でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低いＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する、実施態様４０～６２のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６４．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への測定可能な結合を示さない、実施態様４０～６３のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６５．ＳＰＲによって測定した場合に、ｈＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびｈＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のそれぞれについて、少なくとも４５分の一価の結合半減期（ｔ^１／２）を有する、実施態様４０～６４のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６６．ＳＰＲによって測定した場合に、ｈＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１およびｈＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のそれぞれについて、５分未満の一価ｔ^１／２を有する、実施態様６５に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６７．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜５ｎＭ（＜１ｎＭであってもよい）のＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６８．マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

６９．マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

７０．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

７１．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

７２．＜５ｎＭのＫ_Ｄ（＜１ｎＭであってもよい）で、ヒトおよびミューリンＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体とそれぞれ交差反応する、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント

７３．抗体が、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１サブタイプである、先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

７４．抗体が、ヒトＩｇＧ４サブタイプであって、抗体が、ＩｇＧ１様ヒンジを生じさせるＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を含んでもよい、実施態様７３に係る抗体、またはその抗原結合フラグメント。

７５．先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体、またはその抗原結合フラグメントおよび薬学的に許容できる賦形剤を含む、医薬組成物。

７６．静脈内投与または皮下投与のために調製される、実施態様７５に係る医薬組成物。

７７．実施態様７５または７６の医薬組成物を含んでいる複数回投与バイアルを含む、組成物。

７８．実施態様７５または７６の医薬組成物を含んでいる単回投与シリンジ（使い捨てシリンジであってもよい）を含む、組成物。

７９．ヒト対象における線維性状態の治療のための方法での使用のための実施態様７５または７８のいずれか１つに係る組成物であって、治療は、線維性障害を治療するのに効果的な量での対象への組成物の投与を含む。

８０．線維性障害が臓器線維症である、実施態様７９に係る使用のための組成物。

８１．臓器線維症が進行性臓器線維症である、実施態様８０に係る使用のための組成物。

８２．臓器線維症が、腎線維症、肝線維症、肺線維症、心臓線維症、膵臓線維症、皮膚線維症、強皮症、筋線維症、子宮線維症および子宮内膜症からなる群より選択される、実施態様８０または８１に係る使用のための組成物。

８３．実施態様８２に係る使用のための組成物であって、
ａ）線維性障害は、慢性炎症を含む；
ｂ）対象は、免疫抑制によって利益を受ける；
ｃ）対象は、自己免疫疾患を有するか、または発症するリスクがある；
ｄ）対象は、同種移植片移植のための候補者である；および／または、
ｅ）対象は、同種移植片移植を受けたことがある。

８４．慢性炎症を含む線維性障害が、筋ジストロフィー、多発性硬化症（ＭＳ）、または嚢胞性線維症（ＣＦ）である、実施態様７９に係る使用のための組成物。

８５．筋ジストロフィーがデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である、実施態様８４に係る使用のための組成物。

８６．ＭＳが血管周囲線維症を含む、実施態様８４に係る使用のための組成物。

８７．肺線維症が特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、実施態様８２に係る使用のための組成物。

８８．対象が慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する、実施態様８２に係る使用のための組成物。

８９．対象が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）と関連する肝線維症を有する、実施態様８２に係る使用のための組成物。

９０．対象が、ＮＡＳＨと関連する硬変または肝細胞癌腫を有する、実施態様８９に係る使用のための組成物。

９１．対象が代謝状態（例えば、肥満、２型糖尿病）を患う、実施態様９０に係る使用のための組成物。

９２．実施態様８９～９１のいずれか１つに係る組成物であって、対象は、ミオスタチン阻害剤によってさらに治療され、ここでミオスタチン阻害剤は、ミオスタチン選択的阻害剤であってもよく、さらにミオスタチン選択的阻害剤は、ＳＲＫ－０１５、トレボグルマブ（ｔｒｅｖｏｇｒｕｍａｂ）、またはそれらの任意の変異体、またはＷＯ２０１６／０９８３５７に記載の抗体であってもよい。

９３．抗体が０．１～３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で対象へ投与される、実施態様７９～９２のいずれか１つに係る使用のための組成物。

９４．抗体が１週間に２回、１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、１ヶ月ごとに１回、６週間ごとに１回、または隔月で投与される、実施態様９３に係る使用のための組成物。

９５．治療的レジメンが治療の初期相および治療の後続相を含み、
対象は、初期相中に負荷用量を受けて、その後に、後続相中に維持用量を受ける、実施態様９３に係る使用のための組成物。

９６．負荷用量が２～３０ｍｇ／ｋｇであり、維持用量が０．１～２０ｍｇ／ｋｇである、実施態様９５に係る使用のための組成物。

９７．負荷用量が対象へ１週間に２回、１週間に１回、２週間または３週間ごとに１回投与される、実施態様９５または９６に係る使用のための組成物。

９８．維持用量が対象へ２～１２週間ごとに１回投与される、実施態様９５～９７のいずれか１つに係る使用のための組成物。

９９．維持用量が対象へ必要に応じて投与される、実施態様９５～９７のいずれか１つに係る使用のための組成物。

１００．実施態様７９～９９のいずれか１つに係る使用のための組成物であって、その方法は、対象から回収された生物学的サンプルにおけるＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３の発現を試験または確認するステップをさらに含む。

１０１．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む実施態様７５～７８のいずれか１つに係る組成物を作製するための方法であって、その抗体またはフラグメントは、ＴＧＦβ１を阻害するがＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３を阻害せず、その方法は、
ｉ）ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１を含む少なくとも１つの抗原を提供するステップ、
ｉｉ）ステップ（ｉ）の少なくとも１つの抗原に特異的に結合する抗体またはフラグメントの第１のプールを選択して、それにより、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１の特異的な結合物質（ｂｉｎｄｅｒ）を提供するステップ；
ｉｉｉ）ＴＧＦβ１の活性化を阻害する抗体またはフラグメントの第２のプールを選択して、それにより、ＴＧＦβ１活性化の特異的阻害剤を産生するステップ；および
ｉｖ）抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体またはフラグメントを医薬組成物に処方して、それにより、上記抗体またはフラグメントを含む組成物を作製するステップを含む。

１０２．抗体またはフラグメントの第１のプールから、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ１、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ２、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ２、成熟ＴＧＦβ２、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ３、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ３、成熟ＴＧＦβ３、またはそれらの任意の組み合わせに結合する任意の抗体またはフラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１０１の方法。

１０３．ステップ（ｉｉ）および／または（ｉｉｉ）において選択された抗体またはフラグメントのアイソフォーム特異性を決定または確認するステップをさらに含む、実施態様１０１または１０２の方法。

１０４．ヒトおよび齧歯類抗原に対して交差反応性である抗体またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１０１～１０３のいずれか１つに係る方法。

１０５．抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に提供される（ｔｈａｔｉｓｐｒｅｓｅｎｔｅｄ）抗体またはフラグメントの、完全ヒトまたはヒト化抗体またはフラグメントを産生するステップをさらに含む、実施態様１０１～１０４のいずれか１つに係る方法。

１０６．抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップをさらに含む、実施態様１０１～１０５のいずれか１つに係る方法。

１０７．親和性成熟および／または最適化が、抗体、またはその抗原結合フラグメントを軽鎖シャッフリングに供するステップを含む、実施態様１０１～１０６のいずれか１つに係る方法。

１０８．親和性成熟および／または最適化が、抗体、またはその抗原結合フラグメントをＣＤＲＨ１／Ｈ２多様化に供するステップを含む、実施態様１０１～１０７のいずれか１つに係る方法。

１０９．親和性成熟および／または最適化が、抗体、またはその抗原結合フラグメントをＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発に供するステップを含む、実施態様１０１～１０８のいずれか１つに係る方法。

１１０．親和性成熟および／または最適化が、抗体、またはその抗原結合フラグメントを軽鎖ＣＤＲ突然変異誘発に供するステップを含む、実施態様１０１～１０９のいずれか１つに係る方法。

１１１．親和性成熟および／または最適化が、抗体、またはその抗原結合フラグメントを軽鎖ＣＤＲＬ１／Ｌ２多様化に供するステップを含む、実施態様１０１～１１０のいずれか１つに係る方法。

１１２．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する抗体、またはその抗原結合フラグメントの親和性を決定するステップをさらに含む、実施態様１０１～１１１のいずれか１つに係る方法。

１１３．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＞１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１０１～１１２に係る方法。

１１４．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＞５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１０１～１１３に係る方法。

１１５．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＞２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１０１～１１４に係る方法。

１１６．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＞１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１０１～１１５に係る方法。

１１７．抗体の第１および／または第２のプール由来の抗体、またはその抗原結合フラグメントの、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する親和性を決定するステップをさらに含む、実施態様１０１～１１６のいずれか１つに係る方法。

１１８．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＞１００ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１１７に係る方法。

１１９．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＞５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１１７に係る方法。

１２０．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＞２５ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１１７に係る方法。

１２１．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＞１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１１７に係る方法。

１２２．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合しない任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む、実施態様１０１～１２１のいずれか１つに係る方法。

１２３．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、適切な機能性のインビトロの細胞に基づくアッセイによって測定して、抗体、またはその抗原結合フラグメントのＩＣ_５０を決定するステップをさらに含む、実施態様１０１～１２２のいずれか１つに係る方法。

１２４．適切な機能性のインビトロの細胞に基づくアッセイがｃａｇａアッセイである、実施態様１２３に係る方法。

１２５．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、＞１００ｎＭのＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む、実施態様１２３または１２４に係る方法。

１２６．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、＞５０ｎＭのＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む、実施態様１２３または１２４に係る方法。

１２７．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、＞２５ｎＭのＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む、実施態様１２３または１２４に係る方法。

１２８．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、＞１０ｎＭのＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む、実施態様１２３または１２４に係る方法。

１２９．抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１および／または第２のプールから、＞５ｎＭのＩＣ_５０を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップを含む、実施態様１２３または１２４に係る方法。

１３０．ｃａｇａアッセイが内因性ＬＴＢＰｃａｇａアッセイである、実施態様１２４～１２９のいずれか１つに係る方法。

１３１．ｃａｇａアッセイがヒトＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイである、実施態様１２４～１２９のいずれか１つに係る方法。

１３２．ｃａｇａアッセイがミューリンＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイである、実施態様１２４～１２９のいずれか１つに係る方法。

１３３．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に選択的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を製造するための方法であって、その方法は、以下のステップを含む：
免疫細胞関連ＴＧＦβ１よりもマトリックス関連ＴＧＦβ１を優先的に阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントを選択するステップ；
抗体を発現する細胞を含む細胞培養物において抗体を産生するステップ（細胞培養物は２５０Ｌ以上の容量を有する）、
細胞培養物から抗体を精製するステップをさらに含んでもよい；および
さらに、精製された抗体を医薬組成物に処方するステップを含んでもよい。

１３４．医薬組成物が皮下投与のために処方される、１３３に係る方法。

１３５．選択するステップが、ＳＰＲによって測定した場合に、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβおよびヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体のそれぞれについて４５分以上のｔ^１／２（ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体について５分以下のｔ^１／２であってもよい）を有する抗体または抗原結合フラグメントを選択するステップをさらに含む、１３３に係る方法。

１３６．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、
ｉ）（ＣＤＲ－Ｈ１）配列番号９４、（ＣＤＲ－Ｈ２）配列番号９５、および（ＣＤＲ－Ｈ３）配列番号９６の少なくとも３個の重鎖ＣＤＲ配列を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ；および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

１３７．実施態様１３６に係る方法であって、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ＣＤＲ－Ｌ１）配列番号９７、（ＣＤＲ－Ｌ２）配列番号９８、および（ＣＤＲ－Ｌ３）配列番号９９の軽鎖ＣＤＲ配列をさらに含む。

１３８．実施態様１３６または１３７に係る方法であって、抗体またはフラグメントは、配列番号８８に示されるアミノ酸配列を有する可変重鎖領域を含む。

１３９．実施態様１３６～１３８のいずれか１つに係る方法であって、抗体またはフラグメントは、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含む。

１４０．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、
ｉ）（ＣＤＲ－Ｈ１）配列番号１００、（ＣＤＲ－Ｈ２）配列番号１０１、および（ＣＤＲ－Ｈ３）配列番号１０２の少なくとも３個のＣＤＲ配列を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ；および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

１４１．実施態様１４０の方法であって、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ＣＤＲ－Ｌ１）配列番号１０３、（ＣＤＲ－Ｌ２）配列番号１０４、および（ＣＤＲ－Ｌ３）配列番号１０５の軽鎖ＣＤＲ配列をさらに含む。

１４２．実施態様１４０または１４１に係る方法であって、抗体またはフラグメントは、配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を有する可変重鎖領域を含む。

１４３．実施態様１４０～１４２のいずれか１つに係る方法であって、抗体またはフラグメントは、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含む。

１４４．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、
ｉ）（ＣＤＲ－Ｈ１）配列番号１０８、（ＣＤＲ－Ｈ２）配列番号１０９、および（ＣＤＲ－Ｈ３）配列番号１１０の少なくとも３個の重鎖ＣＤＲ配列を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ、および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

１４５．実施態様１４４に係る方法であって、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ＣＤＲ－Ｌ１）配列番号１１１、（ＣＤＲ－Ｌ２）配列番号１１２、および（ＣＤＲ－Ｌ３）配列番号１１３の軽鎖ＣＤＲ配列をさらに含む。

１４６．実施態様１４４または１４５に係る方法であって、抗体またはフラグメントは、配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を有する可変重鎖領域を含む。

１４７．実施態様１４４～１４６のいずれか１つに係る方法であって、抗体またはフラグメントは、配列番号１１５に示されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含む。

１４８．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、
ｉ）（ＣＤＲ－Ｈ１）配列番号１１６、（ＣＤＲ－Ｈ２）配列番号１１７、および（ＣＤＲ－Ｈ３）配列番号１１８の少なくとも３個の重鎖ＣＤＲ配列を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ、および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

１４９．実施態様１４８に係る方法であって、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ＣＤＲ－Ｌ１）配列番号１１９、（ＣＤＲ－Ｌ２）配列番号１２０、および（ＣＤＲ－Ｌ３）配列番号１２１の軽鎖ＣＤＲ配列をさらに含む。

１５０．実施態様１４８または１４９に係る方法であって、抗体またはフラグメントは、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を有する可変重鎖領域を含む。

１５１．実施態様１４８～１５０のいずれか１つに係る方法であって、抗体またはフラグメントは、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を含む、

１５２．ステップ（ｉｉ）が軽鎖シャッフリングを含む、実施態様１３６～１５１のいずれか１つに係る方法。

１５３．ステップ（ｉｉ）がＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化を含む、実施態様１３６～１５２のいずれか１つに係る方法。

１５４．ステップ（ｉｉ）がＣＤＲ－Ｌ１／Ｌ２多様化を含む、実施態様１３６～１５３のいずれか１つに係る方法。

１５５．ステップ（ｉｉ）が、ＣＤＲ、可変領域、および／または定常領域のいずれか１つにおける突然変異誘発を含む、実施態様１３６～１５４のいずれか１つに係る方法。

１５６．突然変異誘発がＣＤＲ内である、実施態様１５５に係る方法。

１５７．突然変異誘発がＣＤＲ－Ｈ３内である、実施態様１５５および１５６のいずれか１つに係る方法。

１５８．突然変異誘発がＣＤＲ－Ｌ１内である、実施態様１５５～１５７のいずれか１つに係る方法。

１５９．突然変異誘発がＣＤＲ－Ｌ２内である、実施態様１５５～１５８のいずれか１つに係る方法。

１６０．突然変異誘発がＣＤＲ－Ｌ３内である、実施態様１５５～１５９のいずれか１つに係る方法。

１６１．突然変異誘発が可変領域内である、実施態様１５５に係る方法。

１６２．突然変異誘発が定常領域内である、実施態様１５５に係る方法。

１６３．ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ１、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ２、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ２、成熟ＴＧＦβ２、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ３、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ３、成熟ＴＧＦβ３、またはそれらの任意の組み合わせに結合しない親和性成熟および／または最適化抗体、またはその抗原結合フラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１６２のいずれか１つの方法。

１６４．親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントのアイソフォーム特異性を決定または確認するステップをさらに含む、実施態様１３６～１６３のいずれか１つの方法。

１６５．ヒトおよび齧歯類抗原に対して交差反応性である抗体またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１６４のいずれか１つに係る方法。

１６６．親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントの、完全ヒトまたはヒト化抗体またはフラグメントを産生するステップをさらに含む、実施態様１３６～１６５のいずれか１つに係る方法。

１６７．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する、親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントの親和性を決定するステップをさらに含む、実施態様１３６～１６６のいずれか１つに係る方法。

１６８．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＜１００ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１６７に係る方法。

１６９．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＜５０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１６８に係る方法。

１７０．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＜２５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１６９に係る方法。

１７１．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＜１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１７０に係る方法。

１７２．マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に対する、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントの親和性を決定するステップをさらに含む、実施態様１３６～１７１のいずれか１つに係る方法。

１７３．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＜１００ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１７２に係る方法。

１７４．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＜５０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１７３に係る方法。

１７５．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＜２５ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１７４に係る方法。

１７６．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１７５に係る方法。

１７７．マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１に結合しない親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、実施態様１３６～１７６のいずれか１つに係る方法。

１７８．適切な機能性のインビトロの細胞に基づくアッセイによって測定して、親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントのＩＣ_５０を決定するステップをさらに含む、実施態様１３６～１７７のいずれか１つに係る方法。

１７９．適切な機能性のインビトロの細胞に基づくアッセイがｃａｇａアッセイである、実施態様１７８に係る方法。

１８０．＜１００ｎＭのＩＣ_５０を有する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップを含む、実施態様１３６～１７９のいずれか１つに係る方法。

１８１．＜５０ｎＭのＩＣ_５０を有する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップを含む、実施態様１３６～１７９のいずれか１つに係る方法。

１８２．＜２５ｎＭのＩＣ_５０を有する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップを含む、実施態様１３６～１７９に係る方法。

１８３．＜１０ｎＭのＩＣ_５０を有する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップを含む、実施態様１３６～１７９に係る方法。

１８４．＜５ｎＭのＩＣ_５０を有する親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを選択するステップを含む、実施態様１３６～１７９に係る方法。

１８５．ｃａｇａアッセイが内因性ＬＴＢＰｃａｇａアッセイである、実施態様１７９～１８４のいずれか１つに係る方法。

１８６．ｃａｇａアッセイがヒトＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイである、実施態様１７９～１８４のいずれか１つに係る方法。

１８７．ｃａｇａアッセイがミューリンＬＴＢＰ過剰発現ｃａｇａアッセイである、実施態様１７９～１８４のいずれか１つに係る方法。

１８８．先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体またはフラグメント、それらの使用、それらの関連する方法であって、
ａ）以下の可変重鎖および／または可変軽鎖配列またはそれらの変異体を含む：
ｉ）可変重鎖配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
または
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ここで変異体は、対応する可変重鎖配列と少なくとも８５％同一、９０％同一、または９５％同一であってもよい。
ｉｉ）可変軽鎖配列
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＳＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＤＮＱＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
または
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＳＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＤＮＱＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ここで変異体は、対応する可変軽鎖配列と少なくとも８５％同一、９０％同一、または９５％同一であってもよい；
ｂ）以下の可変重鎖ＣＤＲ配列またはそれらの変異体を有する：
ｉ）ＦＴＦＲＳＹＶＭＨのＣＤＲ－Ｈ１であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；
ｉｉ）ＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧのＣＤＲ－Ｈ２であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；および／または；
ｉｉｉ）ＡＶＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹまたはＡＲＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹのＣＤＲ－Ｈ３であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；および／または；
ｃ）以下の可変軽鎖ＣＤＲ配列またはそれらの変異体を有する：
ｉ）ＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱのＣＤＲ１－Ｌ１であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；
ｉｉ）ＥＤＮＱＲＰＳのＣＤＲ－Ｌ２であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；および／または；
ｉｉｉ）ＱＳＹＤＳＤＮＱＧＶＶのＣＤＲ－Ｌ３であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい。

Ａ１．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
その抗体は、以下：
ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００；
ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１；
ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；
ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含み、ＣＤＲのそれぞれについて、３個までのアミノ酸変更を含んでもよい。

Ａ１．１．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
その抗体は、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００：
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１：
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；
ｃ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；
ｄ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ｆ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５
のうちの少なくとも３個を含む。

Ａ２．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
その抗体は、配列番号１０６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み；および／または、
その抗体は、配列番号１０７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含む。

Ａ３．実施態様Ａ２に係る抗体であって、その抗体は、
配列番号１０６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および
配列番号１０７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

Ａ３．１ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４：
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）６個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９
のうちの少なくとも３個を含む。

Ａ３．２．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
その抗体は、配列番号８８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み；および／または、
その抗体は、配列番号８９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含む。

Ａ３．３．実施態様Ａ３．２に係る抗体であって、その抗体は、
配列番号８８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および
配列番号８９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

Ａ３．４．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
その抗体は、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１：
ｉ．配列番号１の４位のトレオニン残基は、ヒスチジン、リジン、フェニルアラニン、またはグリシンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１の５位のセリン残基は、ロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１の９位のセリン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２：
ｉ．配列番号２の３位のセリン残基は、アスパラギン酸またはアスパラギンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号２の５位のチロシン残基は、ヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号２の６位のアスパラギン残基は、セリンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号２の８位のアスパラギン残基は、フェニルアラニン、ロイシン、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、またはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｖ．配列番号２の１０位のアスパラギン残基は、アスパラギン酸またはアラニンで置換されてもよい；
ｃ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号３；
ｄ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号４；
ｅ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号５；および、
ｆ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号６
のうちの少なくとも３個を含む。

Ａ３．５．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
その抗体は、配列番号７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み；および／または、
その抗体は、配列番号８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含む。

Ａ３．６．配列番号７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および配列番号８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施態様Ａ３．５に係る抗体。

Ａ４．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への結合に関して、抗体ＳＲ－Ａｂ１、ＳＲ－Ａｂ２またはＳＲ－Ａｂ１０のいずれとも競合しない、実施態様Ａ１～Ａ３．６のいずれか１つに係る抗体。

Ａ５．ＩｇＧ４またはＩｇＧ１サブタイプである、実施態様Ａ１～Ａ４のいずれか１つに係る抗体。

Ａ５．１ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、実施態様Ａ１～Ａ５のいずれか１つに係る抗体。

Ａ５．２ヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、実施態様Ａ１～Ａ５．１のいずれか１つに係る抗体。

Ａ５．３ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、実施態様Ａ１～Ａ５．２のいずれか１つに係る抗体。

Ａ５．４ヒトＧＡＲＰ－ＴＧＦβ１複合体またはＧＡＲＰ－ＴＧＦβ３複合体に結合しない、実施態様Ａ１～Ａ５．３のいずれか１つに係る抗体。

Ａ６．実施態様Ａ１～Ａ５．４のいずれか１つの抗体および薬学的に許容できる賦形剤を含む、医薬組成物。

Ａ７．静脈内投与または皮下投与のために調製される、実施態様Ａ６に係る医薬組成物。

Ａ８．実施態様Ａ６またはＡ７の医薬組成物を含んでいる複数回投与バイアルを含む、組成物。

Ａ９．実施態様Ａ６またはＡ７の医薬組成物を含んでいる単回投与シリンジ（使い捨てシリンジであってもよい）を含む、組成物。

Ａ１０．ヒト対象における線維性状態の治療のための方法での使用のための実施態様Ａ６～Ａ９のいずれか１つの組成物であって、その治療は、線維性障害を治療するのに効果的な量での対象への組成物の投与を含む。

Ａ１１．線維性障害が臓器線維症である、実施態様Ａ１０に係る使用のための組成物。

Ａ１２．臓器線維症が進行性臓器線維症である、実施態様Ａ１１に係る使用のための組成物。

Ａ１３．臓器線維症が、腎線維症、肝線維症、肺線維症、心臓線維症、膵臓線維症、皮膚線維症、強皮症、筋線維症、子宮線維症および子宮内膜症からなる群より選択される、実施態様Ａ１０またはＡ１１に係る使用のための組成物。

Ａ１４．実施態様Ａ１０に係る使用のための組成物であって、
ａ）線維性障害は、慢性炎症を含む；
ｂ）対象は、免疫抑制によって利益を受ける；
ｃ）対象は、自己免疫疾患を有するか、または発症するリスクがある；
ｄ）対象は、同種移植片移植のための候補者である；および／または、
ｅ）対象は、同種移植片移植を受けたことがある。

Ａ１５．慢性炎症を含む線維性障害が、筋ジストロフィー、多発性硬化症（ＭＳ）、または嚢胞性線維症（ＣＦ）である、実施態様Ａ１０に係る使用のための組成物。

Ａ１６．筋ジストロフィーがデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である、実施態様Ａ１５に係る使用のための組成物。

Ａ１７．ＭＳが血管周囲線維症を含む、実施態様Ａ１５に係る使用のための組成物。

Ａ１８．肺線維症が特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、実施態様Ａ１３に係る使用のための組成物。

Ａ１９．対象が慢性慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する、実施態様Ａ１３に係る使用のための組成物。

Ａ２０．対象が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有する、実施態様Ａ１３に係る使用のための組成物。

Ａ２１．抗体が０．１～３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で対象へ投与される、実施態様Ａ１０～Ａ２０のいずれか１つに係る使用のための組成物。

Ａ２２．抗体が、１週間に２回、１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、１ヶ月に１回、または隔月で投与される、実施態様Ａ２１に係る使用のための組成物。

Ａ２３．実施態様Ａ２１に係る使用のための組成物であって、治療的レジメンが、治療の初期相および治療の後続相を含み、
対象は、初期相中に負荷用量を受けて、その後に、後続相中に維持用量を受ける。

Ａ２４．負荷用量が２～３０ｍｇ／ｋｇであり、維持用量が０．１～２０ｍｇ／ｋｇである、実施態様Ａ２１に係る使用のための組成物。

Ａ２５．負荷用量が対象へ１週間に２回または１週間に１回投与される、実施態様Ａ２１に係る使用のための組成物。

Ａ２６．維持用量が対象へ２～８週間ごとに１回投与される、実施態様Ａ２１に係る使用のための組成物。

Ａ２７．実施態様Ａ１０～Ａ２６のいずれか１つに係る使用のための組成物であって、その方法は、対象から回収された生物学的サンプルにおけるＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３の発現を試験または確認するステップをさらに含む。

Ａ２８．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む、実施態様Ａ６～Ａ９のいずれか１つの組成物を作製するための方法であって、その抗体またはフラグメントは、ＴＧＦβ１を阻害するがＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３を阻害せず、その方法は、
ｉ）ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１を含む少なくとも１つの抗原を提供するステップ、
ｉｉ）ステップ（ｉ）の少なくとも１つの抗原に特異的に結合する抗体またはフラグメントの第１のプールを選択して、それにより、ＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１および／またはＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１の特異的な結合物質（ｂｉｎｄｅｒ）を提供するステップ；
ｉｉｉ）ＴＧＦβ１の活性化を阻害する抗体またはフラグメントの第２のプールを選択して、それにより、ＴＧＦβ１活性化の特異的阻害剤を産生するステップ；および
ｉｖ）抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体またはフラグメントを医薬組成物に処方して、それにより、抗体またはフラグメントを含む組成物を作製するステップを含む。

Ａ２９．実施態様Ａ２８の方法であって、その方法は、
抗体またはフラグメントの第１のプールから、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ１、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ２、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ２、成熟ＴＧＦβ２、ＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ３、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ３、成熟ＴＧＦβ３、またはそれらの任意の組み合わせに結合する任意の抗体またはフラグメントを除去するステップをさらに含む。

Ａ３０．実施態様Ａ２８またはＡ２９の方法であって、その方法は、
ステップ（ｉｉ）および／または（ｉｉｉ）において選択された抗体またはフラグメントのアイソフォーム特異性を決定または確認するステップをさらに含む。

Ａ３１．実施態様Ａ２８～Ａ３０のいずれか１つの方法であって、その方法は、
ヒトおよび齧歯類抗原に対して交差反応性である抗体またはフラグメントを選択するステップをさらに含む。

Ａ３２．実施態様Ａ２８～Ａ３１のいずれか１つの方法であって、その方法は、
抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に提供される（ｔｈａｔｉｓｐｒｅｓｅｎｔｅｄ）抗体またはフラグメントの、完全ヒトまたはヒト化抗体またはフラグメントを産生するステップをさらに含む。

Ａ３３．実施態様Ａ２８～Ａ３２のいずれか１つの方法であって、その方法は、
抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップをさらに含む。

Ａ３４．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、その方法は、
ｉ）（ＣＤＲ－Ｈ１）配列番号１、（ＣＤＲ－Ｈ２）配列番号２、および（ＣＤＲ－Ｈ３）配列番号３の少なくとも３個のＣＤＲ配列を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ；および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

Ａ３５．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、その方法は、
ｉ）（ＣＤＲ－Ｈ１）配列番号９４、（ＣＤＲ－Ｈ２）配列番号９５、および（ＣＤＲ－Ｈ３）配列番号９６の少なくとも３個のＣＤＲ配列を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ；および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

Ａ３６．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、その方法は、
ｉ）（ＣＤＲ－Ｈ１）配列番号１００、（ＣＤＲ－Ｈ２）配列番号１０１、および（ＣＤＲ－Ｈ３）配列番号１０２の少なくとも３個のＣＤＲ配列を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ；および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

Ａ３７．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、その方法は、
ｉ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ；および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体、またはフラグメントを提供するステップを含む。

Ａ３８．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、その方法は、
ｉ）配列番号８８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ；および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

Ａ３９．抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、その方法は、
ｉ）配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体またはフラグメントを提供するステップ；および
ｉｉ）ステップ（ｉ）の抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップを含む。

Ａ４０．ステップ（ｉｉ）が突然変異誘発を含む、実施態様Ａ３４～Ａ３９のいずれか１つの方法。

Ａ４１．突然変異誘発がＣＤＲ内である、実施態様Ａ４０の方法。

Ａ４２．突然変異誘発が可変領域内である、実施態様Ａ４０の方法。

Ａ４３．突然変異誘発が定常領域内である、実施態様Ａ４０の方法。

Ａ４４．ステップ（ｉｉ）が軽鎖シャッフリングを含む、実施態様Ａ３４～Ａ４３のいずれか１つの方法。

［関連出願］
この国際出願は、２０１９年１月３０日に出願された米国仮出願番号６２／７９８，９２７の利益および優先権を主張し、その内容は全体で参照により本明細書中に明白に援用される。
［配列表］
本出願はＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年５月１３日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは１２７０３６－０３０２０＿ＳＬ．ｔｘｔという名称で、サイズは３７６，８３１バイトである。

一部の好ましい実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲを含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨ（配列番号１６６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ）アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_１）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＬまたはＧである（配列番号３６６）；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧ（Ｘ_２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＶ、ＲまたはＬであり、Ｘ_２はＹ、ＳまたはＴである（配列番号３６７）；
ｄ）アミノ酸配列ＴＲＳ（Ｘ_１）Ｇ（Ｘ_２）ＩＤ（Ｘ_３）ＮＹＶＱを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮ、Ｌ、ＳまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである（配列番号３６８）；
ｅ）アミノ酸配列ＥＤ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＲＰＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＮ、ＦまたはＡであり、Ｘ_２はＱ、ＩまたはＶである（配列番号３６９）；および
ｆ）アミノ酸配列Ｑ（Ｘ_１）ＹＤ（Ｘ_２）（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｑ（Ｘ_５）ＶＶを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、ＨまたはＷであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、Ａ、Ｌ、ＥまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである（配列番号３７０）。

一部の代替の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲを含む：
ａ）アミノ酸配列ＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧ（配列番号２９２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹ（配列番号２９３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＤＰＳＹＤＳ（Ｘ_２）ＡＧＭ（Ｘ_３）Ｖを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＡまたはＩであり、Ｘ_３はＤまたはＱである（配列番号３７１）；
ｄ）アミノ酸配列ＲＡＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＩＳ（Ｘ_３）ＹＬＮを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＫまたはＱであり、Ｘ_２はＶまたはＳであり、Ｘ_３はＳまたはＹである（配列番号３８９）；
ｅ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＡＳ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＱＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＮであり、Ｘ_３はＬまたはＲである（配列番号３９０）；
ｆ）アミノ酸配列ＱＱ（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）Ｐ（Ｘ_４）Ｔを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＦまたはＮであり、Ｘ_３はＷまたはＦであり、Ｘ_４はＦまたはＬである（配列番号３９１）。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の２位のトレオニン残基が、アラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の４位のアスパラギン残基が、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の５位のアスパラギン残基が、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の６位のチロシン残基が、アルギニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の７位のプロリン残基が、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の８位のイソロイシン残基が、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４の９位のヒスチジン残基が、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。これらの置換を含む配列番号９４は、配列番号３９９として開示される。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；（ｉｉ）配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；（ｉｉｉ）配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；（ｉｖ）配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；（ｖ）配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；（ｖｉ）配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、（ｖｉｉ）配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４を含む。これらの置換を含む配列番号９４は、配列番号３９９として開示される。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４（以下の置換を含む配列番号９４は、配列番号３９９として開示される）
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；および
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４（以下の置換を含む配列番号９４は、配列番号３９９として開示される）
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９。

特定の一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで、抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４（以下の置換を含む配列番号９４は、配列番号３９９として開示される）
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含み、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい（配列番号３９２）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＳである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含み、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい（配列番号３９３）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＦである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＬである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく；Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく；Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく；Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく；Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく；Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく；Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい（配列番号３９４）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＫである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＨである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＬである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＬである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＦである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＹである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＹである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＬである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＫである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい（配列番号３９２）；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい（配列番号３９３）；および
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく；Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく；Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく；Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく；Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく；Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく；Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい（配列番号３９４）。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい（配列番号３９２）；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい（配列番号３９３）；
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく、Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく、Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく、Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく、Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく、Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく、Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい（配列番号３９４）；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

特定の一実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい（配列番号３９２）；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい（配列番号３９３）；
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく、Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく、Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく、Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく、Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく、Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく、Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい（配列番号３９４）；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_２）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含み、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく；Ｘ_２はＦまたはＬであってもよい（配列番号３８２）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＦである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＬである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩ（Ｘ_２）ＡＲＲＧＧＦＧＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、Ｘ_１はＲまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＡまたはＬであってもよい（配列番号３８３）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＬである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい（配列番号３９２）；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_２）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく；Ｘ_２はＦまたはＬであってもよい（配列番号３８２）；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩ（Ｘ_２）ＡＲＲＧＧＦＧＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＡまたはＬであってもよい（配列番号３８３）。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい（配列番号３９２）；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_２）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく；Ｘ_２はＦまたはＬであってもよい（配列番号３８２）；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩ（Ｘ_２）ＡＲＲＧＧＦＧＹを含んでいるＣＤＲ－であって、ここで、Ｘ_１はＲまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＡまたはＬであってもよい（配列番号３８３）；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

特定の一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい（配列番号３９２）；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_２）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであり；Ｘ_２はＦまたはＬである（配列番号３８２）；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩ（Ｘ_２）ＡＲＲＧＧＦＧＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＡまたはＬであってもよい（配列番号３８３）；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１００の７位のセリン残基が、アラニンまたはグリシンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１００の１１位のグリシン残基が、トレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００を含む。これらの置換を含む配列番号１００は、配列番号４００として開示される。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；（ｉｉ）配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、（ｉｉｉ）配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００を含む。これらの置換を含む配列番号１００は、配列番号４００として開示される。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０１の３位のセリン残基が、アラニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１０１を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメント、配列番号１０１の６位のグリシン残基が、アラニンまたはセリンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１０１を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１０１を含む。これらの置換を含む配列番号１０１は、配列番号４０１として開示される。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；（ｉｉ）配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、（ｉｉｉ）配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよいという条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１０１を含む。これらの置換を含む配列番号１０１は、配列番号４０１として開示される。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００（以下の置換を含む配列番号１００は、配列番号４００として開示される）
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１（以下の置換を含む配列番号１０１は、配列番号４０１として開示される）
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；および
ｃ）３、４、５または６個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００（以下の置換を含む配列番号１００は、配列番号４００として開示される）
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１（以下の置換を含む配列番号１０１は、配列番号４０１として開示される）
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；および
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２．
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

特定の一実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００（以下の置換を含む配列番号１００は、配列番号４００として開示される）
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１（以下の置換を含む配列番号１０１は、配列番号４０１として開示される）
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含み、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい（配列番号３９５）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＰである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＨである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＮである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＶである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含み、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９６）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＴである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく；Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく；Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく；Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく；Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく；Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく；Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく；Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく；Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい（配列番号３９７）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＰである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＹである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＨである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＴである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＥである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＥである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＮである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＴである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＴである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＱである。一部の実施態様では、Ｘ_７はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＥである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＫである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_８はＴである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＭである。一部の実施態様では、Ｘ_９はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＬである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＱである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＮである。一部の実施態様では、Ｘ_１０はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＮである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＥである。一部の実施態様では、Ｘ_１１はＫである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい（配列番号３９５）；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９６）；および
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく；Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく；Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく；Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく；Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく；Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく；Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく；Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく；Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい（配列番号３９７）。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい（配列番号３９５）；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９６）；
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく；Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく；Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく；Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく；Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく；Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく；Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく；Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく；Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく；Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい（配列番号３９７）；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

特定の一実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい（配列番号３９５）；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９６）；
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく、Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく、Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく、Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく、Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく、Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく、Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく、Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく、Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい（配列番号３９７）；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０３に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０４に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号１０５に示されるＣＤＲ－Ｌ３。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）ＳＳＳＹＹＷ（Ｘ_３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含み、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく；Ｘ_２はＨまたはＲであってもよく；Ｘ_３はＧ、ＩまたはＮであってもよい（配列番号３８４）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＰである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＨである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＮである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）Ｄ（Ｘ_２）ＳＹＤ（Ｘ_３）（Ｘ_４）ＡＧＭ（Ｘ_５）（Ｘ_６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＰまたはＶであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＡであってもよく、Ｘ_４はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであってもよく、Ｘ_５はＤ、Ｑ、またはＧであってもよく、Ｘ_６はＶまたはＲであってもよい（配列番号３８５）。一部の実施態様では、Ｘ_１はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_１はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＰである。一部の実施態様では、Ｘ_２はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＳである。一部の実施態様では、Ｘ_３はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＡである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＲである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＩである。一部の実施態様では、Ｘ_４はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＤである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＱである。一部の実施態様では、Ｘ_５はＧである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＶである。一部の実施態様では、Ｘ_６はＲである。

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲを含み、ここで、重鎖ＣＤＲは以下を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）ＳＳＳＹＹＷ（Ｘ_３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく；Ｘ_２はＨまたはＲであってもよく；Ｘ_３はＧ、ＩまたはＮであってもよい（配列番号３８４）；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９６）；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）Ｄ（Ｘ_２）ＳＹＤ（Ｘ_３）（Ｘ_４）ＡＧＭ（Ｘ_５）（Ｘ_６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＰまたはＶであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＡであってもよく、Ｘ_４はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであってもよく、Ｘ_５はＤ、Ｑ、またはＧであってもよく、Ｘ_６はＶまたはＲであってもよい（配列番号３８５）。

一部の実施態様では、抗体、または抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）ＳＳＳＹＹＷ（Ｘ_３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく；Ｘ_２はＨまたはＲであってもよく；Ｘ_３はＧ、ＩまたはＮであってもよい（配列番号３８４）；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９６）；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）Ｄ（Ｘ_２）ＳＹＤ（Ｘ_３）（Ｘ_４）ＡＧＭ（Ｘ_５）（Ｘ_６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＰまたはＶであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＡであってもよく、Ｘ_４はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであってもよく、Ｘ_５はＤ、Ｑ、またはＧであってもよく、Ｘ_６はＶまたはＲであってもよい（配列番号３８５）；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

特定の一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体には結合せず；ここで、抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず；ここで抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体またはそのフラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）ＳＳＳＹＹＷ（Ｘ_３）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく；Ｘ_２はＨまたはＲであってもよく；Ｘ_３はＧ、ＩまたはＮであってもよい（配列番号３８４）；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９６）；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）Ｄ（Ｘ_２）ＳＹＤ（Ｘ_３）（Ｘ_４）ＡＧＭ（Ｘ_５）（Ｘ_６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＰまたはＶであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＡであってもよく、Ｘ_４はＡ、Ｒ、ＩまたはＶであってもよく、Ｘ_５はＤ、Ｑ、またはＧであってもよく、Ｘ_６はＶまたはＲであってもよい（配列番号３８５）；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５。

したがって、一態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲを含む：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１（配列番号１６６）；
ｂ）アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_１）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＬまたはＧである（配列番号３６６）；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧ（Ｘ_２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＶ、ＲまたはＬであり、Ｘ_２はＹ、ＳまたはＴである（配列番号３６７）；
ｄ）アミノ酸配列ＴＲＳ（Ｘ_１）Ｇ（Ｘ_２）ＩＤ（Ｘ_３）ＮＹＶＱを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮ、Ｌ、ＳまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである（配列番号３６８）；
ｅ）アミノ酸配列ＥＤ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＲＰＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＮ、ＦまたはＡであり、Ｘ_２はＱ、ＩまたはＶである（配列番号３６９）；および
ｆ）アミノ酸配列Ｑ（Ｘ_１）ＹＤ（Ｘ_２）（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｑ（Ｘ_５）ＶＶを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、ＨまたはＷであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、Ａ、Ｌ、ＥまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである（配列番号３７０）。

別の態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下の６個のＣＤＲを含む：
ａ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい（配列番号３８６）；
ｂ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＴＹＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＧまたはＡであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９８）；
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＤＰＳＹＤＳ（Ｘ_２）ＡＧＭ（Ｘ_３）Ｖを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＡまたはＩであってもよく、Ｘ_３はＤまたはＱであってもよい（配列番号３８７）；
ｄ）アミノ酸配列ＲＡＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＩＳ（Ｘ_３）ＹＬＮを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＫまたはＱであってもよく、Ｘ_２はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＹであってもよい（配列番号３８９）；
ｅ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＡＳ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＱＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＮであってもよく、Ｘ_３はＬまたはＲであってもよい（配列番号３９０）；
ｆ）アミノ酸配列ＱＱ（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）Ｐ（Ｘ_４）Ｔを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＦまたはＮであってもよく、Ｘ_３はＷまたはＦであってもよく、Ｘ_４はＦまたはＬであってもよい（配列番号３９１）。

一部の実施態様では：ＣＤＲ－Ｈ１は、アミノ酸配列ＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧ（配列番号２９２）を含み；ＣＤＲ－Ｈ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹ（配列番号２９３）を含み；ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＡまたはＩであり、Ｘ_３はＤまたはＱであり；ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＫまたはＱであり、Ｘ_２はＶまたはＳであり、Ｘ_３はＳまたはＹであり；ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＮであり、Ｘ_３はＬまたはＲであり；ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＦまたはＮであり、Ｘ_３はＷまたはＦであり、Ｘ_４はＦまたはＬである。

ＴＧＦβ１の公知のアクチベーター、例えば、プラスミン、ＴＳＰ－１およびαＶβ６インテグリンは、全て、ＬＡＰと直接的に相互作用する。ＬＡＰのタンパク質分解切断は、ＬＡＰ－ＴＧＦβ相互作用を不安定化させ得て、それにより活性のＴＧＦβ１を放出すると仮定される。５４－ＬＳＫＬＲＬ－５９（配列番号３８８）を含む領域は、ＴＧＦβ１潜在型（ｌａｔｅｎｃｙ）を維持するのに重要であることが示唆されている。したがって、相互作用を安定化させる、またはＬＡＰのタンパク質分解切断をブロックする薬剤（例えば、抗体）は、ＴＧＦβ活性化を防止し得る。

１．以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４（以下の置換を含む配列番号９４は、配列番号３９９として開示される）：
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９
のうちの少なくとも３個を含む、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

２．実施態様１に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、Ｘ_１はＳまたはＲであってもよく、Ｘ_２はＧまたはＳであってもよい（配列番号３９２）；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＦまたはＬであってもよい（配列番号３９３）；および
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであってもよく、Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであってもよく、Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであってもよく、Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであってもよく、Ｘ_６はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_７はＦまたはＹであってもよく、Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであってもよく、Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫであってもよい（配列番号３９４）
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３
のうちの少なくとも３個を含む。

６．抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００（以下の置換を含む配列番号１００は、配列番号４００として開示される）：
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１（以下の置換を含む配列番号１０１は、配列番号４０１として開示される）：
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；
ｃ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；
ｄ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ｆ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５
のうちの少なくとも３個を含む。

７．実施態様６に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、以下の６個のＣＤＲ：
ｇ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＰであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい（配列番号３９５）；
ｈ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡ（Ｘ_１）ＴＹＹＮＰＳＬＫＳを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９６）；
ｉ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｙ（Ｘ_５）（Ｘ_６）（Ｘ_７）（Ｘ_８）Ｇ（Ｘ_９）（Ｘ_１０）（Ｘ_１１）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであってもよく、Ｘ_２はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_３はＰ、Ｙ、Ｒ、Ｖ、Ｉ、Ｈ、ＴまたはＥであってもよく、Ｘ_４はＳ、Ｄ、ＥまたはＮであってもよく、Ｘ_５はＤ、ＡまたはＴであってもよく、Ｘ_６はＳ、Ｇ、ＴまたはＡであってもよく、Ｘ_７はＩ、Ａ、Ｒ、Ｑ、またはＶであってもよく、Ｘ_８はＡ、Ｅ、Ｋ、ＧまたはＴであってもよく、Ｘ_９はＭまたはＩであってもよく、Ｘ_１０はＤ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、ＮまたはＧであってもよく、Ｘ_１１はＶ、Ｒ、Ｎ、ＥまたはＫであってもよい（配列番号３９７）；
ｊ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｋ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および
ｌ）１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５
のうちの少なくとも３個を含む。

４０．以下の６個のＣＤＲ：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨ（配列番号１６６）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ）アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_１）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＬまたはＧである（配列番号３６６）；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧ（Ｘ_２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＶ、ＲまたはＬであり、Ｘ_２はＹ、ＳまたはＴである（配列番号３６７）；
ｄ）アミノ酸配列ＴＲＳ（Ｘ_１）Ｇ（Ｘ_２）ＩＤ（Ｘ_３）ＮＹＶＱを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮ、Ｌ、ＳまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである（配列番号３６８）；
ｅ）アミノ酸配列ＥＤ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＲＰＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＮ、ＦまたはＡであり、Ｘ_２はＱ、ＩまたはＶである（配列番号３６９）；および
ｆ）アミノ酸配列Ｑ（Ｘ_１）ＹＤ（Ｘ_２）（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｑ（Ｘ_５）ＶＶを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、ＨまたはＷであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、Ａ、Ｌ、ＥまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである（配列番号３７０）
を含む、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

５４．以下の６個のＣＤＲ：
ｇ）アミノ酸配列Ｇ（Ｘ_１）Ｉ（Ｘ_２）Ｓ（Ｘ_３）ＳＹＹＷ（Ｘ_４）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳであってもよく、Ｘ_２はＳ、ＨまたはＲであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_４はＧ、Ｉ、ＮまたはＶであってもよい（配列番号３８６）；
ｈ）アミノ酸配列ＳＩＳＹＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＴＹＹを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＧまたはＡであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＴであってもよい（配列番号３９８）；
ｉ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＤＰＳＹＤＳ（Ｘ_２）ＡＧＭ（Ｘ_３）Ｖを含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＲ、ＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＡまたはＩであってもよく、Ｘ_３はＤまたはＱであってもよい（配列番号３８７）；
ｊ）アミノ酸配列ＲＡＳ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＩＳ（Ｘ_３）ＹＬＮを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＫまたはＱであってもよく、Ｘ_２はＶまたはＳであってもよく、Ｘ_３はＳまたはＹであってもよい（配列番号３８９）；
ｋ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＡＳ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＱＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであってもよく、Ｘ_２はＳまたはＮであってもよく、Ｘ_３はＬまたはＲであってもよい（配列番号３９０）；
ｌ）アミノ酸配列ＱＱ（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｄ（Ｘ_３）Ｐ（Ｘ_４）Ｔを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであってもよく、Ｘ_２はＦまたはＮであってもよく、Ｘ_３はＷまたはＦであってもよく、Ｘ_４はＦまたはＬであってもよい（配列番号３９１）、
を含む、抗体、またはその抗原結合フラグメント。

５６．実施態様５５に係る抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）ＣＤＲ－Ｈ１は、アミノ酸配列ＧＳＩＲＳＳＳＹＹＷＧ（配列番号２９２）を含む；
ｂ）ＣＤＲ－Ｈ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＹＳＡＴＴＹＹ（配列番号２９３）を含む；
ｃ）ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＡまたはＩであり、Ｘ_３はＤまたはＱである；
ｄ）ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＫまたはＱであり、Ｘ_２はＶまたはＳであり、Ｘ_３はＳまたはＹである；
ｅ）ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＹ、ＡまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＮであり、Ｘ_３はＬまたはＲである；および
ｆ）ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＦまたはＮであり、Ｘ_３はＷまたはＦであり、Ｘ_４はＦまたはＬである。

１８８．先行する実施態様のいずれか１つに係る抗体またはフラグメント、それらの使用、それらの関連する方法であって、
ａ）以下の可変重鎖および／または可変軽鎖配列またはそれらの変異体を含む：
ｉ）可変重鎖配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１４）
または
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１８）
ここで変異体は、対応する可変重鎖配列と少なくとも８５％同一、９０％同一、または９５％同一であってもよい。
ｉｉ）可変軽鎖配列
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＳＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＤＮＱＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号８９）
または
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＳＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＤＮＱＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号８９）
ここで変異体は、対応する可変軽鎖配列と少なくとも８５％同一、９０％同一、または９５％同一であってもよい；
ｂ）以下の可変重鎖ＣＤＲ配列またはそれらの変異体を有する：
ｉ）ＦＴＦＲＳＹＶＭＨ（配列番号１６６）のＣＤＲ－Ｈ１であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；
ｉｉ）ＶＩＳＨＥＧＳＬＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６７）のＣＤＲ－Ｈ２であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；および／または；
ｉｉｉ）ＡＶＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹ（配列番号１１０）またはＡＲＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧＹ（配列番号１６８）のＣＤＲ－Ｈ３であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；および／または；
ｃ）以下の可変軽鎖ＣＤＲ配列またはそれらの変異体を有する：
ｉ）ＴＲＳＳＧＮＩＤＮＮＹＶＱ（配列番号１６９）のＣＤＲ１－Ｌ１であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；
ｉｉ）ＥＤＮＱＲＰＳ（配列番号１７０）のＣＤＲ－Ｌ２であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい；および／または；
ｉｉｉ）ＱＳＹＤＳＤＮＱＧＶＶ（配列番号１１３）のＣＤＲ－Ｌ３であって、１つまたは複数のアミノ酸変更を含んでもよい。

Ａ１．１．ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
その抗体は、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１００（以下の置換を含む配列番号１００は、配列番号４００として開示される）：
ｉ．配列番号１００の４位のセリン残基はヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１００の７位のセリン残基はアラニンまたはグリシンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１００の１１位のグリシン残基はトレオニン、セリン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、バリン、またはアラニンで置換されてもよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１０１（以下の置換を含む配列番号１０１は、配列番号４０１として開示される）：
ｉ．配列番号１０１の３位のセリン残基はアラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号１０１の６位のグリシン残基はアラニンまたはセリンで置換されてもよい；および／または、
ｉｉｉ．配列番号１０１の７位のセリン残基はトレオニンで置換されてもよい；
ｃ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１０２；
ｄ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１０３；
ｅ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０４；および、
ｆ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１０５
のうちの少なくとも３個を含む。

Ａ３．１ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
その抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
その抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４（以下の置換を含む配列番号９４は、配列番号３９９として開示される）：
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）６個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）３個までのアミノ酸変更を含んでもよい、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９
のうちの少なくとも３個を含む。

Claims

ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
前記抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
前記抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
前記抗体は、以下の６個のＣＤＲ：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号９４：
ｉ．配列番号９４の２位のトレオニン残基は、アラニンで置換されてもよい；
ｉｉ．配列番号９４の４位のアスパラギン残基は、アラニン、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｉｉ．配列番号９４の５位のアスパラギン残基は、グルタミン、セリン、グリシン、リジン、グルタミン酸、アルギニン、またはヒスチジンで置換されてもよい；
ｉｖ．配列番号９４の６位のチロシン残基は、アルギニンで置換されてもよい；
ｖ．配列番号９４の７位のプロリン残基は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、アスパラギン、バリン、アスパラギン酸、またはグルタミンで置換されてもよい；
ｖｉ．配列番号９４の８位のイソロイシン残基は、メチオニンまたはロイシンで置換されてもよい；および／または、
ｖｉｉ．配列番号９４の９位のヒスチジン残基は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはセリンで置換されてもよい；
ｂ）６個までのアミノ酸変更を含む、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号９５；
ｃ）３個までのアミノ酸変更を含む、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号９６；
ｄ）３個までのアミノ酸変更を含む、ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９７；
ｅ）３個までのアミノ酸変更を含む、ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号９８；および、
ｆ）３個までのアミノ酸変更を含む、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号９９
のうちの少なくとも３個を含む、
抗体。
ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合し、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ複合体には結合しない、単離された抗体であって、
前記抗体は、成熟ＴＧＦβ１、成熟ＴＧＦβ２または成熟ＴＧＦβ３に結合せず、
前記抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、
前記抗体は、配列番号８８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む；および／または、
前記抗体は、配列番号８９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含む、
抗体。
以下の６個のＣＤＲ：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＲであり、Ｘ_２はＧまたはＳである；
ｂ）アミノ酸配列（Ｘ_１）ＩＳＨＥＧ（Ｘ_２）（Ｘ_３）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＶまたはＳであり、Ｘ_２はＳまたはＧであり、Ｘ_３はＦまたはＬである；および
ｃ）アミノ酸配列（Ｘ_１）（Ｘ_２）Ｐ（Ｘ_３）（Ｘ_４）（Ｘ_５）（Ｘ_６）ＲＲＧＧ（Ｘ_７）（Ｘ_８）（Ｘ_９）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＡまたはＶであり、Ｘ_２はＲ、Ｖ、ＧまたはＫであり、Ｘ_３はＲ、ＨまたはＬであり、Ｘ_４はＩ、ＶまたはＧであり、Ｘ_５はＡ、Ｓ、またはＬであり、Ｘ_６はＡまたはＶであり、Ｘ_７はＦまたはＹであり、Ｘ_８はＤ、Ｇ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ_９はＹ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｖ、ＡまたはＫである
ｄ）３個までのアミノ酸変更を含む、配列番号９７に示されるＣＤＲ－Ｌ１；
ｅ）３個までのアミノ酸変更を含む、配列番号９８に示されるＣＤＲ－Ｌ２；および
ｆ）３個までのアミノ酸変更を含む、配列番号９９に示されるＣＤＲ－Ｌ３
のうちの少なくとも３個を含む、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項３に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ｂ）ＣＤＲ－Ｈ２において、Ｘ_２はＳであり；および
ｃ）ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＡであり、Ｘ_２はＲまたはＶであり、Ｘ_３はＲであり、Ｘ_４はＩであり、Ｘ_５はＡまたはＬであり、Ｘ_６はＡであり、Ｘ_７はＦであり、Ｘ_８はＧであり、Ｘ_９はＹである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体であって、
前記抗体は、配列番号８８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および
配列番号８９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、
抗体。
請求項３から５のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
前記の３個までのアミノ酸変更は、２個までのアミノ酸変更を含む、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
６個のＣＤＲ全てを含む、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体であって、
前記抗体は、ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、
抗体。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体であって、
前記抗体は、ヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、
抗体。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体であって、
前記抗体は、ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に特異的である、
抗体。
以下の６個のＣＤＲ：
ａ）アミノ酸配列ＦＴＦＲＳＹＶＭＨを含んでいるＣＤＲ－Ｈ１；
ｂ）アミノ酸配列ＶＩＳＨＥＧＳ（Ｘ_１）ＫＹＹＡＤＳＶＫＧを含んでいるＣＤＲ－Ｈ２であって、ここで、Ｘ_１はＬまたはＧである；および
ｃ）アミノ酸配列Ａ（Ｘ_１）ＰＲＩＡＡＲＲＧＧＦＧ（Ｘ_２）を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３であって、ここで、Ｘ_１はＶ、ＲまたはＬであり、Ｘ_２はＹ、ＳまたはＴである；
ｄ）アミノ酸配列ＴＲＳ（Ｘ_１）Ｇ（Ｘ_２）ＩＤ（Ｘ_３）ＮＹＶＱを含んでいるＣＤＲ－Ｌ１であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮ、Ｌ、ＳまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである；
ｅ）アミノ酸配列ＥＤ（Ｘ_１）（Ｘ_２）ＲＰＳを含んでいるＣＤＲ－Ｌ２であって、ここで、Ｘ_１はＮ、ＦまたはＡであり、Ｘ_２はＱ、ＩまたはＶである；および
ｆ）アミノ酸配列Ｑ（Ｘ_１）ＹＤ（Ｘ_２）（Ｘ_３）（Ｘ_４）Ｑ（Ｘ_５）ＶＶを含んでいるＣＤＲ－Ｌ３であって、ここで、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｆ、Ｙ、Ｄ、ＨまたはＷであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、Ａ、Ｌ、ＥまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである
を含む、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１１に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｈ３において、Ｘ_１はＲまたはＬである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１２に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_２はＹである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１３に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＴである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１３に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮであり、Ｘ_５はＡである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１２に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＳまたはＨであり、Ｘ_２はＮまたはＡであり、Ｘ_３はＮ、ＤまたはＹである；
ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＮまたはＦであり、Ｘ_２はＱまたはＶであり；および
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｙ、ＤまたはＷであり、Ｘ_３はＤまたはＳであり、Ｘ_４はＮ、ＬまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、Ｒ、ＡまたはＬである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１６に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｌ１において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＮであり、Ｘ_３はＮまたはＹであり；
ＣＤＲ－Ｌ２において、Ｘ_１はＮであり、Ｘ_２はＱまたはＶであり；および
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、ＹまたはＷであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、ＲまたはＡである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１７に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＳまたはＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧ、ＲまたはＡである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１８に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＮまたはＴであり、Ｘ_５はＧまたはＡである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１９に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＣＤＲ－Ｌ３において、Ｘ_１はＳであり、Ｘ_２はＹであり、Ｘ_３はＤであり、Ｘ_４はＴであり、Ｘ_５はＧである、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１６から２０のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）ＣＤＲ－Ｈ１は配列番号１６６のアミノ酸配列を含み；
ｂ）ＣＤＲ－Ｈ２は配列番号１６７のアミノ酸配列を含み；
ｃ）ＣＤＲ－Ｈ３は配列番号１６８のアミノ酸配列を含み；
ｄ）ＣＤＲ－Ｌ１は配列番号１６９のアミノ酸配列を含み；
ｅ）ＣＤＲ－Ｌ２は配列番号１７０のアミノ酸配列を含み；および
ｆ）ＣＤＲ－Ｌ３は配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１１から２１のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
配列番号３１８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および
配列番号３１９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１１から２２のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
配列番号３１８に示される重鎖可変領域配列および配列番号３１９に示される軽鎖可変領域配列を有する抗体と競合または交差競合する、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
ヒトＬＴＢＰ１－ＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に選択的に結合し、配列番号３１８に示される重鎖可変領域配列および配列番号３１９に示される軽鎖可変領域配列を有する抗体と競合または交差競合する、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１１から２４のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示さない、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１１から２５のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
同一のアッセイ条件下でヒトＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する場合のＫ_Ｄよりも少なくとも５０倍低いＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合する、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１１から２６のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体への結合を測定するために用いられるのと同一のアッセイ条件下でＢＬＩによって測定した場合に、ＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体への検出可能な結合を示さない、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項１１から２７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＳＰＲによって測定した場合に、ｈＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびｈＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のそれぞれについて、少なくとも４５分の一価の結合半減期（ｈａｌｆ－ｂｉｎｄｉｎｇ－ｔｉｍｅ）（ｔ^１／２）を有する、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
請求項２８に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ＳＰＲによって測定した場合に、ｈＧＡＲＰ－ｐｒｏＴＧＦβ１およびｈＬＲＲＣ３３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体のそれぞれについて、５分未満の一価ｔ^１／２を有する、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜５ｎＭのＫ_ＤでヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体およびヒトＬＴＢＰ３－ＴＧＦβ１複合体に結合し、それは＜１ｎＭであってもよい、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
マウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
マウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１と交差反応性である、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した場合に、＜１０ｎＭのＫ_ＤでマウスＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合する、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
ヒトおよびミューリンＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ１およびＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ１複合体と、それぞれ＜５ｎＭのＫＤで交差反応し、またはそれは＜１ｎＭであってもよい、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントであって、
前記抗体はＩｇＧ４またはＩｇＧ１サブタイプであり、ここで、前記抗体はヒトＩｇＧ４サブタイプであってもよく、ＩｇＧ１様ヒンジを生じさせるＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を含んでもよい、
抗体、またはその抗原結合フラグメント。
先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体および薬学的に許容できる賦形剤を含む、
医薬組成物。
請求項３７に記載の医薬組成物であって、
静脈内投与または皮下投与のために調製される、
医薬組成物。
請求項３７または３８の医薬組成物を含んでいる複数回投与バイアルを含む、
組成物。
請求項３７または３８の医薬組成物を含んでいる単回投与シリンジを含む組成物であって、
前記シリンジが、使い捨てシリンジであってもよい、
組成物。
ヒト対象における線維性状態の治療のための方法での使用のための請求項３７から４０のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記治療は、線維性障害を治療するのに効果的な量での前記対象への前記組成物の投与を含む、
組成物。
請求項４１に記載の使用のための組成物であって、
前記線維性障害が臓器線維症である、
組成物。
請求項４２に記載の使用のための組成物であって、
前記臓器線維症が進行性臓器線維症である、
組成物。
請求項４２または４３に記載の使用のための組成物であって、
前記臓器線維症は、腎線維症、肝線維症、肺線維症、心臓線維症、膵臓線維症、皮膚線維症、強皮症、筋線維症、子宮線維症および子宮内膜症からなる群より選択される、
組成物。
請求項４４に記載の使用のための組成物であって、
前記肺線維症が特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、
組成物。
請求項４４に記載の使用のための組成物であって、
前記対象が慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する、
組成物。
請求項４４に記載の使用のための組成物であって、
前記肝線維症は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）と関連する、
組成物。
請求項４１から４７のいずれか一項に記載の使用のための組成物であって、
前記抗体が０．１～３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で前記対象に投与される、
組成物。
請求項４８に記載の使用のための組成物であって、
前記抗体が、１週間に２回、１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、１ヶ月に１回、または隔月で投与される、
組成物。
請求項４８に記載の使用のための組成物であって、
治療的レジメンは、治療の初期相（ｉｎｉｔｉａｌｐｈａｓｅ）および治療の後続相（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｐｈａｓｅ）を含み、ここで前記対象は、前記初期相中に負荷用量（ｌｏａｄｉｎｇｄｏｓｅ）を受け、その後に、前記後続相中に維持用量（ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｄｏｓｅ）を受ける、
組成物。
請求項５０に記載の使用のための組成物であって、
前記負荷用量は２～３０ｍｇ／ｋｇであり、前記維持用量は０．１～２０ｍｇ／ｋｇである、
組成物。
請求項５０または５１に記載の使用のための組成物であって、
前記負荷用量は、前記対象へ１週間に２回または１週間に１回投与される、
組成物。
請求項５０から５２のいずれか一項に記載の使用のための組成物であって、
前記維持用量は、前記対象へ２～８週間ごとに１回投与される、
組成物。
請求項４１から５３のいずれか一項に記載の使用のための組成物であって、
前記方法は、前記対象から回収された生物学的サンプルにおけるＴＧＦβ１、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３の発現を試験または確認するステップをさらに含む、
組成物。
ヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項３７から４０のいずれか一項の組成物を作製するための方法であって、
前記方法は、
ｉ）少なくとも４５分のｔ^１／２でヒトＬＴＢＰ１－ｐｒｏＴＧＦβ複合体および／またはヒトＬＴＢＰ３－ｐｒｏＴＧＦβ複合体から解離する抗体またはその抗原結合フラグメントを選択するステップ、および、
ｉｉ）前記抗体またはフラグメントを医薬組成物に処方して、それにより、前記抗体またはフラグメントを含む組成物を作製するステップ、
を含む、
方法。
請求項５５の方法であって、
細胞に基づくアッセイによって測定した場合に、＜５ｎＭのＩＣ_５０を有する抗体または抗原結合フラグメントを選択するステップをさらに含み、それは＜２ｎＭであってもよい、
方法。
請求項５５または５６の方法であって、
インビボ前臨床モデルにおける有効性を確認するステップをさらに含み、
ここで前記前臨床モデルは、肝線維症モデル、腎線維症モデル、または心臓線維症モデルであってもよい、
方法。
請求項５５から５７のいずれか一項の方法であって、
前記方法は、ヒトおよび齧歯類の抗原に対して交差反応性である抗体またはフラグメントを選択するステップをさらに含む、
方法。
請求項５５から５８のいずれか一項の方法であって、
前記方法は、抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体またはフラグメントを親和性成熟および／または最適化に供して、それにより親和性成熟および／または最適化抗体またはフラグメントを提供するステップをさらに含む、
方法。