JP2022523145A - 抗trem1抗体及び関連方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2019年2月6日に出願された米国仮特許出願第62/802,161号及び2019年8月21日に出願された米国仮出願第62/889,994号の利益を主張し、これらは、全体が本明細書で参照により組み込まれる。
本出願は、EFS-Webを介して送信されている配列表を含有し、全体が本明細書で参照により組み込まれる。20XX年月XX日に作成された該ASCIIコピーは、XXXXXUS_sequencelisting.txtという名称であり、サイズがX,XXX,XXXバイトである。
免疫は、腫瘍増生を防止する役割を果たす。複雑な微小環境が病変内で発生し得、T細胞の動員にも関わらず、多くの場合、発生する腫瘤の効果的な制御はない。腫瘍排除及び腫瘍エスケープ間のバランスの理解は、骨髄細胞が腫瘍の微小環境で果たす異なる役割の理解に依存し得る。
一態様では、ヒトTREM1(配列番号1)に結合する単離抗体が本明細書で提供され、抗体は、i)ヒトTREM1(配列番号1)の残基21~34(配列番号42)、103~109(配列番号43)、及び128~136(配列番号44)内で結合し、ヒトFc領域を含む。
定義
別途定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、表記法、及び他の科学用語は、当業者らが一般的に理解する意味を有することが意図される。ある場合では、通常理解される意味を有する用語が、明確にするために及び/またはすぐに参照のために本明細書で定義され、そのような定義の包含は、本明細書では、当該技術分野において一般に理解されるものを超える差を表すように解釈されるべきではない。本明細書に記載または参照される手法及び手順は、例えば、Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual 4th ed.(2012)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NYに記載の広く利用されている分子クローニング法などの、当業者らにより従来の手法を使用して、一般に十分に理解され、通常利用される。必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を含む手順は、別途記載のない限り、一般に、製造者が規定されるプロトコール及び条件に従って実行される。
構造
本出願は、非刺激性骨髄細胞を無効化する抗体を含む、TREM1タンパク質に結合する抗体を含む抗体及び組成物を提供する。
*CDR-H1のC末端は、Kabat番号付け規則を使用して番号付けされる場合、CDRの長さに応じてH32及びH34間で変動する。
VHドメイン
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、及び18から選択されるVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号3のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号4のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号5のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号6のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号7のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号8のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号9のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号10のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号11のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号12のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号13のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号14のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号15のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号16のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号17のVH配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号18のVH配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号19、20、21、及び22から選択されるVL配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号19のVL配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号20のVL配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号21のVL配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号22のVL配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、及び18から選択されるVH配列、ならびに、配列番号19、20、21、及び22から選択されるVL配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、及び18から選択されるVHドメインの1~3つのCDRを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、及び18から選択されるVHドメインの2~3つのCDRを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、及び18から選択されるVHドメインの3つのCDRを含む。一部の態様では、CDRは、例示的なCDRである。一部の態様では、CDRは、Kabat CDRである。一部の態様では、CDRは、Chothia CDRである。一部の態様では、CDRは、AbM CDRである。一部の態様では、CDRは、Contact CDRである。一部の態様では、CDRは、IMGT CDRである。
本明細書の「Fcドメイン」または「Fc領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のC末端領域を定義するために使用される。用語は、天然配列Fc領域及びバリアントFc領域を含む。種々の免疫グロブリンのFc領域の構造、及びそこに含有されるグリコシル化部位は、当該技術分野で既知である。全体が参照により組み込まれるSchroeder and Cavacini,J.Allergy Clin.Immunol.,2010,125:S41-52を参照のこと。Fc領域は、天然に存在するFc領域、または当該技術分野または本開示の他の箇所に記載されるように改変されたFc領域であってよい。
S298A/E333A/K334A、S298A/E333A/K334A/K326A(Lu Y,Vernes JM,Chiang N,et al.J Immunol Methods.2011 Feb 28;365(1-2):132-41);
F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L、F243L/R292P/Y300L/L235V/P396L(Stavenhagen JB,Gorlatov S,Tuaillon N,et al.Cancer Res.2007 Sep 15;67(18):8882-90;Nordstrom JL,Gorlatov S,Zhang W,et al.Breast Cancer Res.2011 Nov 30;13(6):R123);
F243L(Stewart R,Thom G,Levens M,et al.Protein Eng Des Sel.2011 Sep;24(9):671-8.),S298A/E333A/K334A(Shields RL,Namenuk AK,Hong K,et al.J Biol Chem.2001 Mar 2;276(9):6591-604);
S239D/I332E/A330L、S239D/I332E(Lazar GA,Dang W,Karki S,et al.Proc Natl Acad Sci U S A.2006 Mar 14;103(11):4005-10);
S239D/S267E、S267E/L328F(Chu SY,Vostiar I,Karki S,et al.Mol Immunol.2008 Sep;45(15):3926-33);
S239D/D265S/S298A/I332E、S239E/S298A/K326A/A327H、G237F/S298A/A330L/I332E、S239D/I332E/S298A、S239D/K326E/A330L/I332E/S298A、G236A/S239D/D270L/I332E、S239E/S267E/H268D、L234F/S267E/N325L、G237F/V266L/S267DならびにWO2011/120134及びWO2011/120135(参照により本明細書に組み込まれる)に列挙される他の変異。Therapeutic Antibody Engineering(William R.Strohl and Lila M.Strohl,Woodhead Publishing series in Biomedicine No 11,ISBN 1 907568 37 9,Oct 2012)は、283頁に変異を列挙する。
「親和性」は、分子(例えば、抗体)の単一の結合部位及びその結合パートナー(例えば、抗原またはエピトープ)間の非共有相互作用の合計の強さを指す。別途明記のない限り、本明細書で使用される場合、「親和性」は、結合ペアのメンバー(例えば、抗体及び抗原またはエピトープ)間の1:1の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。パートナーYに対する分子Xの親和性は、解離平衡定数(KD)で表すことができる。解離平衡定数に寄与する速度論的成分は、以下でより詳細に説明される。親和性は、表面プラズモン共鳴(SPR)技術(例えば、BIACORE(登録商標))またはバイオレイヤー干渉法(例えば、FORTEBIO(登録商標))などの本明細書に記載のものを含む、当該技術分野で既知の一般的な方法により測定することができる。
「エフェクター機能」は、抗体のFc領域により媒介される生物活性を指し、この活性は、抗体アイソタイプに応じて変動し得る。抗体エフェクター機能の例としては、補体依存性細胞傷害(CDC)を活性化するC1q結合、抗体依存性細胞傷害(ADCC)を活性化するFc受容体結合、及び抗体依存性細胞貪食(ADCP)、受容体リガンド遮断、アゴニズム、またはアンタゴニズムが挙げられる。
抗TREM1抗体の使用を含む、非刺激性骨髄細胞(NSM)を無効化及び/または検出するための方法及び組成物が本明細書に記載される。NSMタンパク質を発現する非刺激性骨髄細胞を標的及び/または検出するための方法及び組成物もまた本明細書で提供される。
本明細書で使用される場合、刺激性骨髄細胞(特定の態様ではSDCとも呼ばれる)は、免疫応答を刺激するのに有効な骨髄細胞である(例えば、非刺激性骨髄細胞と比較して、腫瘍微小環境で抗腫瘍応答を刺激するのにより効果的である)。一部の実施形態では、刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞と比較して、抗原(例えば、腫瘍抗原)をT細胞に提示するのに有効であるか、または腫瘍特異的T細胞応答を刺激するのに有効である。一部の実施形態では、刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞と比較して、腫瘍関連抗原のT細胞への取り込み、プロセッシング、及び/または提示能力の増加を示し得る。刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞と比較して、細胞傷害性Tリンパ球をリプライミングする低減した能力を有するか、または、一部の場合では、効果的な腫瘍細胞殺傷を刺激し得る。刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞と比較して、限定されないが、CD80、CD86、MHCI、及びMHCIIを含む、抗原プロセッシング、抗原提示、及び/または抗原共刺激に関与する遺伝子及び細胞表面マーカーのより高い発現を示し得る。
本出願は、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに、本明細書に記載の抗体のうちのいずれか1つ以上を含む医薬組成物を含む、抗体を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物は、無菌である。医薬組成物は一般に、有効量の抗体を含む。
調製方法
本明細書に記載の抗体は、例えば、米国特許第4,816,567号に記載されるような、組み換え方法及び組成物を使用して産生され得る。
本明細書に記載のTREM1抗体の投与方法は、サイトカイン、ケモカインなどの前炎症性分子の誘導、または骨髄細胞による骨髄活性化受容体の発現をもたらし得る。一般に、誘発された前炎症性分子は、アイソタイプ対照で達成されるレベルよりも高いレベルで存在する。一部の実施形態では、骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞である。一部の実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、TREM1発現(TREM1+)細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、骨髄由来抑制細胞または腫瘍関連好中球である。一部の実施形態では、TREM1+細胞は、骨髄由来抑制細胞または腫瘍関連好中球である。そのような前炎症性分子は、次いで、限定されないが、T細胞活性化、M1様マクロファージ活性化、及びNK細胞活性化を含む抗腫瘍免疫の活性化をもたらす。従って、抗TREM1抗体の投与は、腫瘍破壊につながる複数の抗腫瘍免疫機構を誘発し得る。
一態様では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を、ヒトまたはヒト化抗体などの抗TREM1抗体と接触させる方法を提供し、これにより、非刺激性骨髄細胞の無効化がもたらされる。
別の態様では、本発明は、抗TREM1抗体を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体において免疫関連状態を処置する方法(例えば、免疫応答を増強する方法または非刺激性骨髄細胞の無効化をもたらす方法)を提供する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、がんの処置に有用であり、したがって、抗TREM1抗体または抗TREM1抗体を投与されている個体は、がんを有する。
一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、個体において、免疫関連状態の処置に有用である。一実施形態では、個体は、ヒトであり、抗体は、TREM1抗体である。別の実施形態では、個体は、マウスであり、抗体は、TREM1抗体である。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、少なくとも1つの追加の治療薬とともに投与される。任意の好適な追加の治療薬または免疫療法薬は、本明細書で提供される抗体とともに投与されてもよい。一部の実施形態では、免疫療法は、チェックポイント阻害薬;T細胞のチェックポイント阻害薬;抗PD1抗体;抗PDL1抗体;抗CTLA4抗体;養子細胞療法;養子T細胞療法;CAR-T細胞療法;樹状細胞ワクチン;STINGアゴニスト;単球ワクチン;カルメット-ゲラン菌ワクチン;T細胞及び抗原提示細胞の両方に結合する抗原結合タンパク質;BiTE二重抗原結合タンパク質;Toll様受容体リガンド;サイトカイン;細胞傷害療法;化学療法;放射線療法;小分子阻害薬;小分子アゴニスト;免疫調節薬;腫瘍溶解性ウイルス;ならびにエピジェネティック調節薬、ならびにそれらの組み合わせが選択されるが、これらに限定されない。
本出願は、本明細書に記載の抗体組成物のうちのいずれか1つ以上を含むキットを提供する。一部の実施形態では、キットはさらに、二次抗体、免疫組織化学分析用試薬、薬学的に許容される賦形剤、及び取扱説明書、ならびにそれらの任意の組み合わせのいずれかから選択される構成成分を含有する。特定の一実施形態では、キットは、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに、本明細書に記載の抗体組成物のうちのいずれか1つ以上を含む医薬組成物を含む。
以下は、特定の実施形態を列挙する段落である。
a.CDR-H1が、配列番号23に記載の配列を含み、
b.CDR-H2が、配列番号24に記載の配列を含み、
c.CDR-H3が、配列番号33に記載の配列を含み、
d.CDR-L1が、配列番号26に記載の配列を含み、
e.CDR-L2が、配列番号27に記載の配列を含み、
f.CDR-L3が、配列番号28に記載の配列を含む、
前記単離抗体。
a.CDR-H1が、配列番号23に記載の配列を含み、
b.CDR-H2が、配列番号24に記載の配列を含み、
c.CDR-H3が、配列番号32に記載の配列を含み、
d.CDR-L1が、配列番号26に記載の配列を含み、
e.CDR-L2が、配列番号27に記載の配列を含み、
f.CDR-L3が、配列番号28に記載の配列を含む、
前記単離抗体。
a.CDR-H1が、配列番号23に記載の配列を含み、
b.CDR-H2が、配列番号24に記載の配列を含み、
c.CDR-H3が、配列番号33に記載の配列を含み、
d.CDR-L1が、配列番号26に記載の配列を含み、
e.CDR-L2が、配列番号27に記載の配列を含み、
f.CDR-L3が、配列番号28に記載の配列を含む、
前記方法。
a.CDR-H1が、配列番号23に記載の配列を含み、
b.CDR-H2が、配列番号24に記載の配列を含み、
c.CDR-H3が、配列番号33に記載の配列を含み、
d.CDR-L1が、配列番号26に記載の配列を含み、
e.CDR-L2が、配列番号27に記載の配列を含み、
f.CDR-L3が、配列番号28に記載の配列を含む、
前記方法。
ヒトTREM1に特異的なモノクローナルマウスIgG1クローンTREM-26を入手し、配列決定及びヒト化に使用した。簡単に言うと、抗体のジスルフィド結合をジチオスレイトール(DTT)で還元し、遊離のスルフヒドリル基をヨードアセトアミドでアルキル化した。アルキル化抗体を配列決定グレードのエンドプロテイナーゼで消化し、スピンカラムを使用して精製し、配列をLC-MS/MS分析で決定した(以下を参照のこと)。
抗体の産生及び特性決定
標準的な方法を使用して、重鎖及び軽鎖発現ベクターをexpi293細胞にトランスフェクトした。細胞を最大7日間成長させ、その後、上清を抗体精製のために採取した。expi293に加えて、CRISPR/Cas9編集(Alexander Weiss、トロント大学)により、哺乳動物のα1,6フコシルトランスフェラーゼ(FUT8)を欠損させたexpi293細胞においても、抗体を産生した。上清のpHを、1MのHEPES pH7.4で調整し、微生物の成長を防止するために、アジ化ナトリウムを加えた。KanCap A樹脂を使用して、タンパク質を捕捉し、1MのNaClを含有するPBS及びPBSで抗体を洗浄した後に、50mMのクエン酸 pH3.5、100mMのNaClで溶出させた。溶出後直ちに、0.5Mのアルギニンを含有する1MのTris(pH8)で溶液を中和した。標準的手法を使用して、PBSに緩衝液交換されたタンパク質に対する生物物理学的特性決定を行った。タンパク質をOD280で定量化し、計算された吸光係数を使用して、量及び濃度を決定した。還元及び非還元SDS-PAGE(Biorad基準トリス/グリシン/SDS、4~20%)またはPerkin Elmer GXIIキャピラリー電気泳動システムを使用して、純度及びおおよその分子量を決定した。Sepax Zenix-C SEC-300、3um、300Å、4.6*150mmサイズ排除カラム及びPBSランニング緩衝液を使用する、280nmでの検出を用いるUHPLCで、凝集状態を決定した。
PI-4026バリアントへのヒトTREM1結合の親和性を、BIAcore T200(GE Healthcare、英国)でSPRにより測定した。全てのデータを25℃で収集した。10mMのHEPES(pH7.4)、150mMのNaCl、3mMのEDTA、0.05%(v/V)の界面活性剤P20を移動緩衝液として及びmAbの全ての希釈のために使用した。アミンカップリング化学を使用して、抗マウスFcをCM4バイオセンサーチップ(GE Healthcare)上に固定化した。ヒトキメラTREM1-mIgG Fcを1つのフローセルに捕捉し、別のフローセル(基準面として使用)をブランクのままにした。複数サイクルで、両方のフローセルを通して、様々な濃度のPI-4026バリアント(分析物としての全てのhIgG1アイソタイプ)を注入した。各サイクルの後、グリシンHCl緩衝液(10mM、pH2.0)を注入することによって、表面を再生した。BIAevaluationソフトウェアを使用して、速度論的評価を実施した。速度論的評価は、1:1ラングミュア結合モデルに適合させたセンサーグラムの生成によるものであった。
PI-4026バリアントへのヒトTREM1結合の親和性を、BIAcore T200(GE Healthcare、英国)でSPRにより測定した。全てのデータを25℃で収集した。10mMのHEPES(pH7.4)、150mMのNaCl、3mMのEDTA、0.05%(v/V)の界面活性剤P20を移動緩衝液として及びmAbの全ての希釈のために使用した。アミンカップリング化学を使用して、抗ヒトFcをCM4バイオセンサーチップ(GE Healthcare)上に固定化した。PI-4026バリアント(全てhIgG1アイソタイプ)を1つのフローセルの抗ヒトFcで捕捉し、別のフローセル(基準面として使用)をブランクのままにした。複数のサイクルで、捕捉されたPI-4026バリアント及び参照セルを含むフローセルを通して、様々な濃度のHisタグ化ヒトTREM1(分析物として)を注入した。各サイクルの後、3MのMgCl2を注入することによって、表面を再生した。BIAevaluationソフトウェアを使用して、速度論的評価を実施した。速度論的評価は、1:1ラングミュア結合モデルに適合させたセンサーグラムの生成によるものであった。
PI-4026バリアントの融解温度をナノ示差走査蛍光測定(DSF)で決定した。PI-4026バリアント試料を、20℃~100℃、1.5℃/分のランプ速度で実行した。試料に浸すことにより、試料をnanoDSFグレードのキャピラリーに充填した。サーマルスキャン中の蒸発を最小限にするために、キャピラリーの両端を不活性オイルベースの液体ゴムシーリングペーストで密閉した。
対数成長期のHEK293対照細胞を培養物から採取し、洗浄し、1×105細胞/ウェルで96ウェルU底プレートにプレーティングした。指示されたPI-4026バリアント及びアイソタイプ対照の滴定を細胞に加え、氷上で30分間インキュベートした。1:500に希釈したAlexa 647コンジュゲート抗ヒトFcγ二次抗体(Jackson Immunoresearch)を使用して、結合した一次抗体を検出した。二次抗体を細胞とともに氷上で30分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、室温で15分間細胞生存率を決定した。結合した抗体の蛍光シグナルをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で評価した。
表2は、ヒト化TREM1抗体のそれぞれについて、抗体結合力、単量体の親和性、細胞結合、及びDSFの結果を示す。
ヒト化TREM1抗体の種特異性
hTREM1過剰発現細胞
対数成長期のHEK293対照またはヒトTREM1過剰発現細胞を培養物から採取し、洗浄し、1×105細胞/ウェルで96ウェルU底プレートにプレーティングした。示された濃度の非コンジュゲートhIgG1対照またはPI-4026-5抗体の滴定を細胞に加え、氷上で30分間インキュベートした。1:500に希釈したAlexa 647コンジュゲート抗ヒトFcγ二次抗体(Jackson Immunoresearch)を使用して、結合した一次抗体を検出した。二次抗体を細胞とともに氷上で30分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、室温で15分間細胞生存率を決定した。結合した抗体の蛍光シグナルをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で評価した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
対数成長期のHEK293過剰発現カニクイザルまたはマウスTREM1を培養物から採取し、洗浄し、1×105細胞/ウェルで96ウェルU底プレートにプレーティングした。示された濃度の非コンジュゲートhIgG1対照またはPI-4026-5抗体の滴定を細胞に加え、氷上で30分間インキュベートした。1:500に希釈したAlexa 647コンジュゲート抗ヒトFcγ二次抗体(Jackson Immunoresearch)を使用して、結合した一次抗体を検出した。二次抗体を細胞とともに氷上で30分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、室温で15分間細胞生存率を決定した。結合した抗体の蛍光シグナルをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で評価した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
ヒトドナー由来の新しい血液(Stanford Blood Centre)の赤血球を溶解させ、洗浄して、PBMC及び顆粒球の含有量を富化した。細胞をプレーティングし、Fc受容体をヒト血清(Jackson Immunoresearch)、ヒトFcX(Biolegend)、及びペプチドベースのFcRブロック溶液(Innovex Biosciences)の組み合わせでブロックした。また、細胞生存率を決定するために、細胞をZombie NIR(Biolegend)で染色した。Zombie NIRで染色した後、主要な免疫サブセットのマーカー及びヒトIgG1対照またはPI-4026-5の滴定を含むフローサイトメトリーカクテルで細胞を染色した。使用された全ての抗体は直接コンジュゲートされていた。データをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で取得した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
図2A及び2Bで示されるように、PI-4026-5は、高い特異性でヒトTREM1過剰発現細胞に結合するが、ヒトTREM1を過剰発現しない細胞には結合しない。さらに、PI-4026-5は、ヒト末梢血中の好中球及び単球に結合する(図3A及び3B)。
ADCC及びADCPアッセイ
平底白色96ウェルプレート(ThermoFisher)中、示された濃度で、PI-4026-5またはhIgG1アイソタイプ対照の滴定とともに、ヒトTREM1を過剰発現するHEK293標的細胞をインキュベートした。室温で15分間インキュベートした後、hCD16またはhCD32発現NFAT-ルシフェラーゼレポーターJurkat細胞(Promega、ウィスコンシン州マディソン)を、3:1の比の標的細胞/抗体混合物に加えた。レポーター細胞を加えた後、アッセイを5%のCO2雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。ルシフェラーゼ基質(Promega、ウィスコンシン州マディソン)に曝露することによって、ルシフェラーゼ活性の量を決定し、発光リーダー(EnVision、Perkin Elmer)で検出した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
図5A及び5Bに示されるように、PI-4026-5は、用量依存的なTREM1特異的な方法で、下流のFcγR媒介性シグナル伝達を誘導する。図5Aは、FcγRシグナル伝達の誘導(hCD16レポーターアッセイシステムを使用)を示し、図5Bは、FcγRシグナル伝達の誘導(hCD32レポーターアッセイシステムを使用)を示す。
タンパク質の結晶化
hTREM1 IgV:キメラPI-4026 FabのSEC精製複合体の回折品質の結晶を、20℃でシッティングドロップ蒸気拡散法により得た。結晶を凍結防止し、X線回折データをEuropean Synchrotron(ESRF)(フランス・グルノーブル)で収集した。CCP4のプログラムMOLREPを使用する分子置換により、hTREM1 IgV:PI-4026 Fab複合体の構造を決定した。1.93Åの解像度で、最終モデルを16.4%のRwork及び21.6%のRfreeに改良した。最終的な改良された構造の解析は、1つのPI-4026 Fabが1つのTREM1 IgV分子と相互作用することを示していた。
図7A~Eは、TREM1 IgVドメインの特定の残基とのPI-4026Fabの各CDRの特定の残基の相互作用を示す。各パネルでは、濃灰色の構造は、示された抗体CDRを表し、淡灰色の構造は、TREM1 IgVドメインを表す。相互作用する残基は、一文字アミノ酸名称、それに続く、ヒトTREM1配列、またはPI-4026重鎖もしくは軽鎖におけるそれらの位置で表される。点線は、CDR残基及びTREM1 IgV 残基間の水素結合を示す。点線に付属する数値は、オングストローム(Å)で測定された残基間の距離である。PI-4026 FabのCDRL2は、TREM1 IgVドメインとの相互作用にとって重要ではなかった。PyMOLソフトウェアを使用して、全ての図及び相互作用を生成及びモデル化した。
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)によるH2O2酸化評価
最終抗体濃度1mg/mLで、PI-4026-5及びPI-4026-7バリアントを示された濃度のH2O2中、40℃で1時間インキュベートすることによって、酸化の分析を達成した。Superdex 200 Increase 10/300 GLカラム(GE Healthcare)のThermoFisher分析UHPLCシステムを使用して、種々の濃度及び時点のSECで、試料を分析した。PBS(pH7.4)を移動相緩衝液として使用し、流速は0.5mL/分であった。データを解析し、Chromeleon7機器ソフトウェア(ThermoFisher)を使用して、A280のピークのAUCを積分した。
PI-4026-5バリアントへのカニクイザルTREM1結合の親和性を、BIAcore T200(GE Healthcare)でSPRにより測定した。全てのデータを25℃で収集した。10mMのHEPES(pH7.4)、150mMのNaCl、3mMのEDTA、0.05%(v/V)の界面活性剤P20を移動緩衝液として及びmAbの全ての希釈のために使用した。アミンカップリング化学を使用して、抗マウスFcをCM4バイオセンサーチップ(GE Healthcare)上に固定化した。キメラカニクイザルTREM1-mIgG Fcを1つのフローセルに捕捉し、基準面として使用される別のフローセルをブランクのままにした。補足されたカニクイザルTREM1-mIgG Fcを含むフローセル及び参照セルを通して、様々な濃度のPI-4026-5バリアント(分析物として、hIgG1アイソタイプ)を注入した。各サイクルの後、グリシンHCl緩衝液(10mM、pH2.0)を注入することによって、表面を再生した。BIAevaluationソフトウェアを使用して、速度論的評価を実施した。速度論的評価は、1:1ラングミュア結合モデルに適合させたセンサーグラムの生成によるものであった。
CRISPR/Cas9編集(Alexander Weiss、University of Toronto)により哺乳類のα1,6-フコシルトランスフェラーゼ(FUT8)を欠損させたexpi293細胞に目的の抗体の重鎖及び軽鎖プラスミド(例えば、PI-4026-5)をトランスフェクトすることによって、アフコシル化抗体を産生した。細胞をトランスフェクトした時点で、それらを最大7日間膨張させ、その後、培地を回収し、一段階プロテインAカラム精製ステップ(HiTrap MabSelect SuRe、GE Healthcare)で、抗体を精製した。その後、抗体をPBSに緩衝液交換し、エンドトキシン(LAL Endotoxin試験、Charles River Laboratories)、濃度(NanoDrop、ThermoFisher Scientific)、及びUHPLC(ThermoFisher Scientific)による任意の凝集について評価した。凝集特性に応じて抗体を単量体にSEC精製した(95%未満の単量体性)。アフコシル化は、Lens Culinaris凝集(LCA)抗原(L-1040-10、Vector Biolabs)に対する抗体を用いるウェスタンブロット、または目的の抗体の完全なグリカンプロファイルの評価(Bionova Scientific)で検証される。
図8に示されるように、PI-4026-5は、SECで評価されたCDRH3(RMAAMDY)のMet100で酸化リスクを有する。H2O2用量依存的に、抗体のパーセント不均一性が増加し、単量体のパーセントが減少する。これは、0.3%、0.1%、及び0.01%のH2O2で処置された試料のSECプロファイルで観察された二重ピークで示される。表3は、SECの結果の定量化を提供する。
ヒト細胞結合アッセイ
ヒトドナー由来の新しい血液(Stanford Blood Centre)の赤血球を溶解させ、洗浄して、PBMC及び顆粒球の含有量を富化した。細胞をプレーティングし、Fc受容体をヒト血清(Jackson Immunoresearch)、ヒトFcX(Biolegend)、及びペプチドベースのFcRブロック溶液(Innovex Biosciences)の組み合わせでブロックした。細胞を、また、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、細胞生存率を決定した。Zombie NIRの後、主要な免疫サブセットのマーカーを用いるフローサイトメトリーカクテル、及び重鎖の残基100に特定の変異を含有するヒトIgG1対照、PI-4170、PI-4026-5、またはPI-4026-5変異体のいずれかの滴定で、細胞を染色した。PI-4026-5及びPI-4026-5変異体は、完全にフコシル化またはアフコシル化されていた。使用された全ての抗体は、直接コンジュゲートされており、データをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で取得した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
新しいカニクイザルの血液(Worldwide Primates Inc)の赤血球を溶解させ、洗浄して、PBMC及び顆粒球含有量を富化した。細胞をプレーティングし、Fc受容体をヒト血清(Jackson Immunoresearch)及びペプチドベースのFcRブロック溶液(Innovex Biosciences)の組み合わせでブロックした。細胞を、また、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、細胞生存率を決定した。Zombie NIRの後、主要な免疫サブセットのマーカーを用いるフローサイトメトリーカクテル、及び重鎖の残基100に特定の変異を含有するヒトIgG1対照、PI-4170、PI-4026-5、またはPI-4026-5変異体のいずれかの滴定で、細胞を染色した。PI-4026-5及びPI-4026-5変異体は、完全にフコシル化またはアフコシル化されていた。使用された全ての抗体は、直接コンジュゲートされており、データをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で取得した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
平底白色96ウェルプレート(ThermoFisher)中、示された濃度で、フコシル化またはアフコシル化型のPI-4170、PI-4026-5、PI-4026-5変異体、またはhIgG1アイソタイプ対照の滴定とともに、ヒトTREM1を過剰発現するHEK293標的細胞をインキュベートした。室温で15分間インキュベートした後、hCD16発現NFAT-ルシフェラーゼレポーターJurkat細胞(Promega、ウィスコンシン州マディソン)を、3:1の比の標的細胞/抗体混合物に加えた。レポーター細胞の添加後、アッセイを5%のCO2雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。ルシフェラーゼ基質(Promega、ウィスコンシン州マディソン)に曝露することによって、ルシフェラーゼ活性の量を決定し、発光リーダー(Envision、Perkin Elmer)で検出した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
図9A及び9Bに示されるように、フコシル化PI-4026-5抗体及びアフコシル化PI-4026-5抗体は、ヒト末梢単球に結合する。図9Aは、フコシル化抗体の結合を示し、図9Bは、アフコシル化抗体の結合を示す。同様に、フコシル化PI-4026-5抗体及びアフコシル化PI-4026-5抗体は、カニクイザル単球に結合する(図10A及び10B)。PI-4026-5-M100L及びPI-4026-5-M100Q CDRH3バリアントが、カニクイザル単球への最良の結合を示した。
以前のデータに基づき、種々の生化学的アッセイを使用して、2つのアフコシル化CDRH3変異型抗体をさらに特性決定した。これらは、アフコシル化PI-4026-5-M100L(新たにPI64052と命名)、及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(新たにPI64062と命名)であった。
Superdex 200 Increase 10/300 GLカラム(GE Healthcare)上のThermoFisher分析UHPLCシステムを使用する種々の濃度及び時点のSECで、アフコシル化PI-4026-5M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5 M100Q(PI64062)を分析した。PBS(pH7.4)を移動相緩衝液として使用し、流速は0.5mL/分であった。データを解析し、Chromeleon7機器ソフトウェア(ThermoFisher)を使用して、A280のピークのAUCを積分した。
830nmレーザーを備えた温度制御DynaProプレートリーダー(Wyatt)を使用して、示された濃度及び時点のアフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)のデータを37℃で取得した。自動化されたハイスループットデータ収集を可能にするために、試料を384ウェルプレートに充填した。散乱光を169℃で監視した。DYNAMICSソフトウェアを使用して、流体力学的直径及び多分散度指数を解析及び計算した。
MAbPac HIC-10、分析用カラム、5μm、4.6×100mm(ThermoFisher)の分析用UHPLCシステムを使用するHICで、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)を分析した。0.1Mのリン酸ナトリウム(pH6.0)、1Mの硫酸アンモニウムを移動相1として使用し、0.1Mのリン酸ナトリウム(pH6.0)を移動相2として使用して、1mL/分の流速の勾配を生じた。勾配で溶出させた試料をA280で監視した。データを解析し、Chromeleon 7機器ソフトウェア(ThermoFisher)及びPrismソフトウェア(Graphpad)を使用して、ピークのAUCを積分した。
830nmレーザーを備えた温度制御DynaProプレートリーダー(Wyatt)を使用して、示された濃度及び時点のアフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)のデータを37℃で取得した。自動化されたハイスループットデータ収集を可能にするために、試料を384ウェルプレートに充填した。散乱光を169℃で監視した。DYNAMICSソフトウェアを使用して、流体力学的直径及び多分散度指数を解析及び計算した。
アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)の融解温度をナノ示差走査蛍光測定(DSF)で決定した。試料を、20℃~100℃、1.5℃/分のランプ速度で実行した。試料に浸すことにより、試料をnanoDSFグレードのキャピラリーに充填した。サーマルスキャン中の蒸発を最小限にするために、キャピラリーの両端を不活性オイルベースの液体ゴムシーリングペーストで密閉した。
Superdex 200 Increase 10/300 GLカラム(GE Healthcare)上、ThermoFisher分析UHPLCシステムを使用して、示された濃度、温度(37℃)、及び時点のアフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)のデータを収集した。PBS(pH7.4)を移動相緩衝液として使用し、流速は0.5mL/分であった。データを解析し、Chromeleon 7機器ソフトウェア(ThermoFisher)及びPrismソフトウェア(Graphpad)を使用して、A280のピークのAUCを積分した。
1mg/mLの最終抗体濃度で、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)を示された濃度のH2O2中、40℃で1時間インキュベートすることによって、酸化の分析を達成した。MAbPac HIC-10、分析カラム、5μm、4.6×100mm(ThermoFisher)上、ThermoFisher分析UHPLCシステムを使用する指定された時点のHICで、試料を分析した。0.1Mのリン酸ナトリウム(pH6.0)、1Mの硫酸アンモニウムを移動相1として使用し、0.1Mのリン酸ナトリウム(pH6.0)を移動相2として使用して、1mL/分の流速の勾配を生じた。勾配で溶出させた試料をA280で監視した。データを解析し、Chromeleon 7機器ソフトウェア(ThermoFisher)及びPrismソフトウェア(Graphpad)を使用して、ピークのAUCを積分した。
1mg/mLの最終抗体濃度で、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)を示された濃度のH2O2中、40℃で1時間インキュベートすることによって、酸化の分析を達成した。Superdex 200 Gain 10/300 GLカラム(GE Healthcare)上、ThermoFisher分析UHPLCシステムを使用した、示された時点でのSECにより、試料を分析した。PBS(pH7.4)を移動相緩衝液として使用し、流速は0.5mL/分であった。データを解析し、Chromeleon7機器ソフトウェア(ThermoFisher)を使用して、A280のピークのAUCを積分した。
アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)を、示されたpH値及び示された温度(4℃または40℃)で、示された緩衝液(PBS(pH7.4)、トリス(pH8)、またはクエン酸塩(pH4.5))中1mg/mLの最終抗体濃度で12時間インキュベートした。12時間後、試料をチャージバリアントキット(Perkin Elmer)に従って調製し、試料をLabChipII GX機器及びLabChip GXソフトウェア(Perkin Elmer)で実行して解析した。
表8は、ヒト及びカニクイザルTREM1タンパク質へのPI64052及びPI64062の結合特性の結果を示す。PI64052は、単量体ヒトTREM1への、より良いヒト結合力及び結合を有していたが、PI64062は、より良いカニクイザル結合力を有していた。
次に、細胞結合ならびにADCC及びADCPの誘導を含む種々の機能アッセイを使用して、PI64052及びPI64062を特性決定した。
対数成長期のHEK293 GFP対照細胞を培養物から採取し、洗浄し、1×105細胞/ウェルで96ウェルU底プレートにプレーティングした。アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)、ならびにアイソタイプ対照の滴定を細胞に加え、氷上で30分間インキュベートした。1:500に希釈したAlexa 647コンジュゲート抗ヒトFcγ二次抗体(Jackson Immunoresearch)を使用して、結合した一次抗体を検出した。二次抗体を細胞とともに氷上で30分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、室温で15分間細胞生存率を決定した。結合した抗体の蛍光シグナルをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で評価した。
ヒトドナー由来の新しい血液(Stanford Blood Centre)の赤血球を溶解させ、洗浄して、PBMC及び顆粒球の含有量を富化した。細胞をプレーティングし、Fc受容体をヒト血清(Jackson Immunoresearch)、ヒトFcX(Biolegend)、及びペプチドベースのFcRブロック溶液(Innovex Biosciences)の組み合わせでブロックした。細胞を、また、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、細胞生存率を決定した。Zombie NIRの後、主要な免疫サブセットのマーカーを含むフローサイトメトリーカクテル、及びヒトIgG1対照、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)のいずれかの滴定で、細胞を染色した。使用された全ての抗体は、直接コンジュゲートされており、データをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で取得した。
対数成長期のHEK293細胞過剰発現ヒトTREM1を培養物から採取し、洗浄し、1×105細胞/ウェルで96ウェルU底プレートにプレーティングした。示された濃度の非コンジュゲートhIgG1対照、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)の滴定を細胞に加え、氷上で30分間インキュベートした。1:500に希釈したAlexa 647コンジュゲート抗ヒトFcγ二次抗体(Jackson Immunoresearch)を使用して、結合した一次抗体を検出した。二次抗体を細胞とともに氷上で30分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、室温で15分間細胞生存率を決定した。結合した抗体の蛍光シグナルをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で評価した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
対数成長期のHEK293細胞過剰発現カニクイザルTREM1を培養物から採取し、洗浄し、1×105細胞/ウェルで96ウェルU底プレートにプレーティングした。示された濃度の非コンジュゲートhIgG1対照、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)の滴定を細胞に加え、氷上で30分間インキュベートした。1:500に希釈したAlexa 647コンジュゲート抗ヒトFcγ二次抗体(Jackson Immunoresearch)を使用して、結合した一次抗体を検出した。二次抗体を細胞とともに氷上で30分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、室温で15分間細胞生存率を決定した。結合した抗体の蛍光シグナルをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で評価した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
ヒトドナー由来の新しい血液(Stanford Blood Centre)の赤血球を溶解させ、洗浄して、PBMC及び顆粒球の含有量を濃縮した。細胞をプレーティングし、Fc受容体をヒト血清(Jackson Immunoresearch)、ヒトFcX(Biolegend)、及びペプチドベースのFcRブロック溶液(Innovex Biosciences)の組み合わせでブロックした。細胞を、また、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、細胞生存率を決定した。Zombie NIRの後、主要な免疫サブセットのマーカーを含むフローサイトメトリーカクテル、及びヒトIgG1対照、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)のいずれかの滴定で、細胞を染色した。使用された全ての抗体は、直接コンジュゲートされており、データをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で取得した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
新しいカニクイザルの血液(Worldwide Primates Inc)の赤血球を溶解させ、洗浄して、PBMC及び顆粒球含有量を富化した。細胞をプレーティングし、Fc受容体をヒト血清(Jackson Immunoresearch)及びペプチドベースのFcRブロック溶液(Innovex Biosciences)の組み合わせでブロックした。細胞を、また、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、細胞生存率を決定した。Zombie NIRの後、主要な免疫サブセットのマーカーを含むフローサイトメトリーカクテル、及びヒトIgG1対照、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)のいずれかの滴定で、細胞を染色した。使用された全ての抗体を、直接コンジュゲートされており、データをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で取得した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
ヒトTREM1を過剰発現するHEK293標的細胞を、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)、アフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)、またはhIgG1アイソタイプ対照の滴定とともに、平底白色96ウェルプレート(ThermoFisher)中、示された濃度でインキュベートした。室温で15分間インキュベートした後、hCD16発現NFAT-ルシフェラーゼレポーターJurkat細胞(Promega、ウィスコンシン州マディソン)を、3:1の比の標的細胞/抗体混合物に加えた。レポーター細胞を加えた後、アッセイを5%のCO2雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。ルシフェラーゼ基質(Promega、ウィスコンシン州マディソン)に曝露することによって、ルシフェラーゼ活性の量を決定し、発光リーダー(Envision、Perkin Elmer)で検出した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
コンジュゲートされていないhIgG1対照、アフコシル化PI-4026-5-M100L(PI64052)、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)の滴定とともに、ヒトTREM1を過剰発現するGFP陽性expi293細胞を室温で15~30分間インキュベートした。次に、洗浄せずに、Cell Trace Violet(ThermoFisher)で標識された、2人のドナー由来のCD14+単球から分極したヒトマクロファージを、1:1の比のexpi293及び抗体の混合物に加えた。アッセイを5%のCO2雰囲気中、37℃で6時間インキュベートし、その後、アッセイをフローサイトメトリー(ThermoFisher Attune NxT)で評価した。1細胞でゲーティングされたGFP陽性及びCell Trace Violet陽性マクロファージの数を列挙することによって、ADCPを測定した。EC50値をPrismソフトウェア(Graphpad)で計算した。
1μg/mlの示された組み換えヒトHisタグ化FcγRタンパク質(Sino Biologicals)をMaxisorpプレート上に4℃で一晩コーティングした。翌日、プレートを洗浄し、示された濃度のフコシル化またはアフコシル化PI-4026-5-M100L及びPI-4026-5 M100Q、またはhIgG4アイソタイプ対照(Biolegend)の滴定をコーティングされたプレートに加えた。コーティングされたFcγRタンパク質への抗体のFc媒介性結合は、ヒトIgGのFab’2部分に対するHRPコンジュゲートFab’2フラグメントを用いて検出された(Jackson Immunoresearch)。TMB基質(ThermoFisher)を使用して、一次抗体に結合しているHRPコンジュゲート二次試薬の量を定量し、H3PO4を使用して反応を停止させた。Spectramaxプレートリーダー(Life Technologies)を使用して、450nmでの吸光度を測定した。
HEK293親細胞結合の個々の実験的複製が、図18A、18B、及び18Cに示される。アイソタイプ対照と比較して、HEK293細胞へのPI64052及びPI64062の検出可能な結合はなかった。
受容体の占有
全血が複数のヒトドナーから供給され(Stanford Blood Centre)、赤血球を除去した。残りの白血球を、96ウェルプレートに1ウェル当たり5×106の細胞でプレーティングした。プレーティングした後、細胞を非コンジュゲートhIgG1アイソタイプ、アフコシル化hIgG1アイソタイプ、PI-4026-5-M100Q、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)とともに滴定依存的に24時間インキュベートした。
全血が、複数のヒトドナーから供給され(Stanford Blood Centre)、赤血球を除去した。残りの白血球を、96ウェルプレートに1ウェル当たり5×106の細胞でプレーティングした。プレーティングした後、細胞を非コンジュゲートhIgG1アイソタイプ、アフコシル化hIgG1アイソタイプ、PI-4026-5-M100Q、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)とともに滴定依存的に24時間インキュベートした。
PI-4026-5-M100Q及びアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)は、単球(図27A)と好中球(図27B)において実質的に異なる用量依存的な受容体占有率(RO)を示さなかった。
In Vivoサイトカイン検出
対数期のPy8119乳癌株(ATCC、バージニア州マナッサス)を採取し、等量のマトリゲルと混合された2×106細胞/マウスの用量で、雌C57BL/6マウス(Jackson Laboratories)の右腹側腹部に皮下注射した。マウスの大多数の腫瘍が70~130mm3に達した後、マウスを無作為割り当てし、示された抗体の投与を開始した。2用量に対し5日毎の頻度で、抗TREM1及びmIgG2aアイソタイプに対して15mg/kg、抗PD-1及びmIgG1アイソタイプに対して5mg/kgの抗体を腹腔内投与した。抗TREM1及びmIgG2aアイソタイプは、両方ともアフコシル化されており、使用された抗TREM1抗体は、PI-4928であった。
抗TREM1抗体(アフコシル化PI-4928)及びPD-1の組み合わせは、in vivoでIFN-γ(図29A)及びTNFα(図29B)の両方のサイトカイン応答を誘導した。**は、p<0.01を示し、****は、p<0.0001を示す。
Panc02有効性実験
対数期のPanc02膵管腺癌細胞株(NCI細胞リポジトリー)を採取し、2×106細胞/マウスの用量で、雌C57BL/6マウス(Charles River Laboratories)の右脇腹に皮下注射した。マウスの大多数の腫瘍が80~100mm3に達した後、マウスを無作為割り当てし、示された抗体の投与を開始した。4用量に対し3または5日毎の頻度で、抗TREM1及びmIgG2aアイソタイプに対して15mg/kg、抗PD-1及びmIgG1アイソタイプに対して10mg/kgの抗体を腹腔内投与した。抗TREM1及びmIgG2aアイソタイプは、両方とも、アフコシル化されており、使用された抗TREM1抗体は、PI-9067Lであった。式V(mm3)=(L×W×W)÷2(式中、V=体積、L=長さ、及びW=幅)を使用して、腫瘍サイズを評価した。ノギスを使用して、腫瘍を測定し、体積が2000mm3に達した時、マウスを安楽死させた。
加えて、抗TREM1抗体療法は、Panc02腫瘍モデルにおいて単剤療法活性を有している。単独のアフコシル化PI-9067L抗TREM1抗体の投与は、in vivoでの腫瘍体積の減少をもたらし、抗PD1抗体との組み合わせも同様であった(図30)。個々の処置群が、図31A~Dに示される。アイソタイプ処置が図31Aに示され、抗PD-1単独処置が図31Bに示され、抗TREM1処置が図31Cに示され、抗TREM1及び抗PD-1処置の組み合わせが31Dに示される。28日目の各処置群におけるマウス腫瘍体積の定量化が、図32に提供される。
材料及び方法
フローサイトメトリー
フローサイトメトリーにより、種々の適応症由来のヒト腫瘍の微小環境において、TREM1発現を評価した。得られた腫瘍組織は、新たに外科的に切除した(Cooperative Human Tissue Network、CHTN)か、または以前に解離して急速凍結した(Folio Conversant)ものであった。患者から切除されてから24時間以内に、新たに外科的に切除された腫瘍を解離した(Human Tumor Dissociation Kit、Miltenyi Biotec)。
RNAscope実験が、Advanced Cell Diagnostics(ACD)で実施された。Advanced Cell Diagnostics(ACD)により、膀胱癌、前立腺癌、黒色腫、頭頸部癌、膵臓癌、直腸癌、腎臓癌、肺癌、卵巣癌、及び乳癌由来の組織を含有する専用のTMAのセットにおいて、TREM1に対するRNAscope(登録商標)検出が実施された。PPIBに対する陽性対照プローブ(ハウスキーピング遺伝子)及び細菌遺伝子dapBに対する陰性対照プローブで切片を染色することによって、試料品質を評価した。陽性対照シグナルを最大化し、陰性対照シグナルを最小化するように、各プローブに対する染色条件を最適化した。ゲノムのオフターゲット領域への最小のクロスハイブリダイゼーションを有するように、ACDにより、TREM1プローブ配列を選択した。製造者の使用説明書に従い、RNAscope(登録商標)LS Duplex Reagent Kit(Advanced Cell Diagnostics,Inc.、カリフォルニア州ニューアーク)を使用して、自動化プラットフォームで、TREM1、TREM2、CD163、CD8A、及びNCAM1 mRNAのRNA in situハイブリダイゼーションを実施した。5μmのホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織切片を、標的オリゴプローブとのハイブリダイゼーションの前に、熱及びプロテアーゼで前処理した。次に、プリアンプ、アンプ、及びHRP/AP標識オリゴをハイブリダイズさせ、それに続いて、発色性沈殿物を発生させた。各試料は、PPIB/POLR2A RNAに特異的なRNAscope(登録商標)プローブでRNAの完全性について品質管理され、細菌dapBRNAに特異的なプローブでバックグラウンドについて品質管理された。特定のRNA染色シグナルが、緑/赤の点状のドットとして特定された。試料は、Gillのヘマトキシリンで対比染色された。ヒトTREM1(カタログ番号431508、24-1063ntに対するもの)、ヒトTREM2(カタログ番号420498、5-1069ntに対するもの)、ヒトCD163(カタログ番号417068-C2、210-1565ntに対するもの)、ヒトNCAM-1(カタログ番号421468、832-1751ntに対するもの)、及びヒトCD8a(カタログ番号560398、871-2342ntに対するもの)に対するRNAプローブが使用された。各プローブの半定量的スコア(0~4)が、セクション全体の1細胞当たりの染色ドットの数に基づいて、ACDの科学者により全ての試料に対して定義された。スコアリング基準は、次の通りであった:スコア0:染色なしもしくは1ドット/10細胞未満;スコア1:1~3ドット/細胞;スコア2:4~9ドット/細胞及びドットクラスターがないか非常に少ない;スコア3:10~15ドット/細胞及び/または10%ドット未満がクラスター内にある;スコア4:15ドット/細胞超及び/または10%ドット超がクラスター内にある。品質管理に合格するために、TREM1の定量化のために、2~4(中程度~高い)陽性対照シグナル及び0(検出されない)陰性対照シグナルを有する試料を選択した。TREM1陽性適応症が、品質管理に合格し、1以上のTREM1スコアを有していたものと定義された。
単一のヒト卵巣患者の解離腫瘍細胞(DTC)を、Discovery Life Sciencesから購入した。細胞は、免疫細胞を富化するためにCD45陽性についてフローサイトメトリーで選別し、10Xゲノミクスクロムコントローラを使用して、単一細胞RNA配列決定のためにカプセル化した。10XのCellRangerプログラム及びRプログラミング言語のSeuratモジュールを使用して、得られた生データを順次処理した。細胞型特異的マーカー遺伝子を使用して、得られたt分布型確率的近傍埋め込み法(tSNE)の次元削減の細胞集団に手作業で注釈を付け、TREM1発現をプロットした。
TREM1の発現は、肺腺癌、卵巣癌、腎細胞癌、前立腺腺癌、膀胱腺癌、結腸直腸腺癌、乳癌、及び胃腺癌を含む、様々ながんの適応症の腫瘍微小環境における骨髄細胞上にだけ見られた(図33)。TREM1発現は、好中球、TAM、及び/または従来の単球上に一貫して発現し、CD3+細胞上では陰性である。
材料及び方法
試料調製
全血が、複数のヒトドナーから供給され(Stanford Blood Centre)、赤血球を除去した。残りの白血球を、96ウェルプレートに1ウェル当たり5×106の細胞でプレーティングした。プレーティングした後、細胞を、アフコシル化hIgG1アイソタイプ、またはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)とともに滴定依存的に24時間インキュベートした。CD80及びCD86細胞表面発現のために、単一濃度のアフコシル化hIgG1アイソタイプまたはアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)で、追加の細胞を24時間処置した。24時間後、上清を採取した。
サイトカイン及びケモカインの測定では、ヒト前炎症性及びケモカインキット(パネル1、Meso Scale Diagnostics)を使用して、各条件で試料を評価した。Meso Scale診断技術を使用してデータを取得し、Excel(Microsoft)及びPrism(Graphpad)で解析した。Prism(Graphpad)でプロットされた滴定曲線に基づいて、EC50値を計算し、ナノモル濃度に対して正規化した。
24時間後、細胞をPBSで1回洗浄し、Zombie NIR(Biolegend)で染色して、細胞生存率を決定した。ヒト血清(Jackson Immunoresearch)、ヒトFcX(Biolegend)、及びペプチドベースのFcγRブロック溶液(Innovex Biosciences)の組み合わせで、Fcγ受容体(FcγR)もブロックした。FcγRをブロッキング試薬とともにインキュベートした後、腫瘍内サブセットのマーカー、ならびにHLA-DR(クローンL243)、CD40(クローン5C3)、CD80(クローン2D10、Biolegendカタログ番号306216)、及びCD86(クローンBU63、Biolegendカタログ番号374212)を含むフローサイトメトリーカクテルで、目的の表面受容体を染色した。フローサイトメトリーによる表現型解析に使用された全ての抗体は直接コンジュゲートされていた。Attune NxT解析装置(ThermoFisher)を使用してデータを取得し、FlowJo(BD Biosciences)、Prism(Graphpad)、及びExcel(Microsoft)を使用して解析した。CD14+単球上の細胞表面HLA-DR、CD40、CD80、及びCD86のための代表的なヒストグラムオーバーレイが示される。
5人の健常なヒトドナー由来の全ヘパリン加血を、それぞれ、1mg/ml(約7nM)のアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)またはアイソタイプ対照抗体で、37℃、5%のCO2で16時間処置した。インキュベーション期間の後、血液を移し、その後の全てのステップを氷上で実施した。次に、血液を赤血球溶解し、白血球を系統特異的マーカーに対する抗体で染色した。抗CD15(クローンW6D3、Biolegend)を使用して、好中球を同定し、抗CD14(クローンM5E2、Biolegend)を使用して、単球を同定し、抗CD3(クローンUCHT1、Biolegend)を使用して、T細胞を同定し、抗CD56(クローン5.1H11、Biolegend)を使用して、NK細胞を同定した。染色された細胞をフローサイトメトリーソーティングに供し、CD15+好中球、CD14+単球、CD3+T細胞、及びCD56+NK細胞の純粋な集団が得られる。全RNAを各細胞サブセット特異的試料から単離し、ハイスループットRNA配列決定に供した。後続データを、ヒトゲノム(GRCh38.p12)にアラインさせ、遺伝子毎の発現値を各試料について作表した。RパッケージDESeq2を使用して、得られた発現マトリックスを対数正規化し、ユークリッド距離及び最遠隣法を使用して、全ての試料にわたって最高分散の1000の遺伝子をクラスタリングした。最初の細胞選別の純度は、細胞型の完全な分離、及びドナー特異的分離により示される。各細胞型の標準的なマーカーが右側に示される。
5人の健常なヒトドナー由来の全ヘパリン加血を、それぞれ、1mg/ml(約7nM)のアフコシル化PI-4026-5-M100Q(PI64062)またはアイソタイプ対照抗体で、37℃、5%のCO2で16時間処置した。インキュベーション期間の後、血液を移し、その後の全てのステップを氷上で実施した。次に、血液を赤血球溶解し、白血球を系統特異的マーカーに対する抗体で染色し、フローサイトメトリーソーティングに供して、CD15+好中球、CD14+単球、CD3+T細胞、及びCD56+NK細胞の純粋な集団が得られた。全RNAを各細胞サブセット特異的試料から単離し、ハイスループットRNA配列決定に供した。後続データを、ヒトゲノム(GRCh38.p12)にアラインさせ、遺伝子毎の発現値を各試料について作表した。得られた発現マトリックスは、単球プロファイル及び正規化された百万当たりの数に低減した。HLA-DR、CD40、CD80、及びCD86の得られた発現値を、全ての単球由来試料にわたってプロットした。活性化マーカーは、単球のみで特異的に発現され、差次的に制御された。
アフコシル化PI-4026-5-M100Qは、in vitroでケモカイン及びサイトカインの選択的なセットを誘導した。図34Aは、アイソタイプ抗体処置と比較した、PI-4026-5-M100Qでの処置後の示されたケモカインまたはサイトカインの相対的な変化倍率を提供する。図34Aに示されるサイトカインが10pg/ml超で検出され、複数のドナーの実験全体で上方制御された。
材料及び方法
タンパク質リン酸化の定量化
ホスホ-フロー解析に使用される細胞を、健常なヒトドナー由来の全血軟膜から得た。BD Pharm Lyse緩衝液中、37Cで、2ラウンド、それぞれ15分間インキュベートすることにより、軟膜を赤血球溶解させた。赤血球溶解後に、X-VIVO 15培地中の得られた白血球を、5×106白血球/ウェルで、96マルチウェルディープウェルプレートにプレーティングした。細胞を37℃、5%のCO2で2時間回復させて、基礎リン酸化レベルを減少させた。回復期間後、細胞を、陽性対照としてのPMA(0.1μg/ml)及びイオノマイシン(1μg/ml)で、または、5μg/mlのアフコシル化PI-4026-5-M100Qもしくはアフコシル化hIgG1アイソタイプで、0、2、10、30、60、及び90分間刺激した。次に、予熱されたBD CytoFix緩衝液を使用して、細胞を37℃で10分間固定した。固定後、試料をFACS緩衝液(2%のFBS、2mMのEDTAを含むDPBS)で2回洗浄し、100μl/試料のBD Perm緩衝液IIIで透過処理した。次に、試料をFACS緩衝液ですすぎ、50μlのInnovex及びヒトTrueStain FCXブロックで氷上で30分間ブロックし、FACS緩衝液で2回洗浄した。細胞ペレットを、白血球系統マーカーに対する抗体のカクテル中に再懸濁し、ホスホ-タンパク質染色のために2つの試料に分けた。抗ホスホ-ERK1/2(Y202/Y204)(Biolegend、クローン4B11B69)及び抗ホスホ-STAT3(S727)(Biolegend、クローンA16089B)を使用した。試料を、抗ホスホ抗体を含む抗体カクテルとともに、室温で60分間インキュベートした。インキュベーション後、試料を、FACS緩衝液で2回洗浄し、次に、2%のパラホルムアルデヒドとともにインキュベートすることによって、氷上で10分間固定した。試料をFACS緩衝液で2回洗浄し、200μlのFACS緩衝液に再懸濁し、Attuneフローサイトメーターで取得するまで4℃で保存した。
PCT/US2018/045680の実施例14に記載されるように、MC38腫瘍を有するマウス(1群当たりn=10)をアフコシル化PI-9067LまたはmIgG2aアイソタイプ対照で処置した。移植後19日目(2回目の処置の48時間後)に腫瘍を採取した。RNAが抽出し、配列決定した。MSigDB由来の遺伝子セットのc5コレクションを使用したBroad Instituteの遺伝子セットエンリッチメント解析(GSEA)ツールを使用して、抗体処置と関連する差次的に誘導された経路を評価した。デフォルトのパラメーターを使用したCytoscapeのエンリッチメントマップモジュールを使用して、著しく上方制御された経路(FDR<0.1)を可視化した。
5人の健常なヒトドナー由来の全ヘパリン加血を、それぞれ、1mg/ml(約7nm)のPY159及びアイソタイプ対照抗体で5%のCO2、37℃で16時間処置した。インキュベーション期間の後、血液を移し、その後の全てのステップを氷上で実施した。次に、血液を赤血球溶解し、白血球を系統特異的マーカーに対する抗体で染色し、フローサイトメトリーソーティングに供して、CD15+好中球、CD14+単球、CD3+T細胞、及びCD56+NK細胞の純粋な集団が得られた。全RNAを各細胞サブセット特異的試料から単離し、ハイスループットRNA配列決定に供した。後続データを、ヒトゲノム(GRCh38.p12)にアラインさせ、遺伝子毎の発現値を各試料について作表した。RパッケージDESeq2を使用して、各細胞型に対して、PY159及び対照処理試料間の正規化及びその後の差次的発現を実施した。各細胞サブセットの得られたデータを、変化倍率により順序付け、遺伝子をコードするタンパク質のみを含むようにサブセッティングし、遺伝子セットエンリッチメント解析ソフトウェア(v4.0.0)(Broad Instituteから入手可能)に渡した。Broad Instituteの遺伝子オントロジーコレクション(MsigDB c5)に対するデフォルト設定を使用して、事前にランク付けされた解析を実行した。
PI-4026-5-M100Qは、単球及び好中球においてERK及びSTAT3のリン酸化を誘導したが、T細胞では誘導しなかった(図38A)。TREM1抗体のみが、好中球または単球においてERKのリン酸化を誘導し、ERKのリン酸化は、hIgG1処置細胞において観察されなかった。TREM1抗体は、hIgG1処置と比較して、好中球及び単球で高レベルのリン酸化STAT3を誘導した。図38AのSTAT3パネルでは、TREM1試料が右側のバーとして示され、hIgG1処置試料が左側のバーで示される。
in vivoでの使用のための抗体を全て、エンドトキシンについて試験し、0.2EU/mg以下のタンパク質を使用した。抗PD-1(クローンRMP1-14)をAbsolute Antibody Incから購入するか、または、PionyrのマウスIgG1 D265Aフォーマットとして組み換え産生した。マウスIgG1(クローンMOPC-21)及びマウスIgG2a(クローンC1.18.4)アイソタイプ対照を、BioXCellから購入するか、または、PionyrのHEK293細胞で組み換え産生した。抗TREM1抗体のキメラマウスIgG2aバージョン(PI-9067L)を、PionyrのHEK293細胞で産生し、SEC及びCE-SDSならびにエンドトキシン試験で単分散及び純度について評価した。
PCT/US2018/045680の実施例13に記載の抗TREM1アフコルシル化PI-9067L抗体及び抗PD-1抗体処置後の以前のCT26腫瘍モデル試験の腫瘍不含のBALB/cマウスを、1×106のCT26腫瘍細胞で3ヶ月再負荷した。腫瘍体積を、移植後25日間測定した。同齢の処置ナイーブマウスに、同等数のCT26細胞を投与し、試験期間中に腫瘍の成長について追跡した。試験期間中、マウスに追加の処置を提供しなかった。
レベル2、firehose_getを使用して、大腸癌試料のThe Cancer Genome AtlasのコホートのRNAseqデータを、Broad Instituteからダウンロードした。腫瘍(n=282)及び隣接する正常試料(n=41)の両方由来のTREM1に対するRSEM値を、log2(百万当たりの数)に変換し、Rでプロットした(図42A)。566の大腸腫瘍にわたる事前正規化されたTREM1発現プロファイル及び関連臨床データは、NCBIのGEO Webサイト(アクセッションGSE39582)からダウンロードした。発現プロファイルを、TREM1の中央値レベルに基づいて2つのコホートに分けた。Kaplan-Meier生存曲線を、各コホートについてプロットし、Rの生存及びsurvminerパッケージを使用して、関連するログランク検定を実行した(図42B)。
材料及び方法
雌CD-1マウスに、0.1、1、10、及び100mg/kgの漸増用量のアフコシル化PI-4928抗TREM1抗体を静脈内投与した。血漿を、投与の0.25、1、2、24、72、168、及び336時間に収集した。PI-4928抗体及び可溶性マウスTREM1の血漿濃度を、以下に記載されるように決定した。本実施例では、PI-4928が、マウスTREM1に結合し、in vivoでの抗がん治療効果を提供することが示されているので、上述の抗体をin vivo代用物として使用された。
アフコシル化PI-4928抗体は、マウスにおいて用量依存的薬物動態を有していた(図43A)。図43Bに示されるように、抗TREM1抗体による処置は、血漿中に可溶性マウスTREM1タンパク質の用量依存的蓄積をもたらし、PI-4928抗体もまた可溶性マウスTREM1タンパク質を安定化したことが示された。
材料及び方法
約8週齢の雌BALB/cマウスをTaconicから入手した。マウス乳腺腫瘍細胞株EMT6(CRL-2755)をAmerican Type Culture Collectionから入手し、ガイドラインに従って培養した。低継代の細胞を無血清培地中の1×107細胞/mlで再懸濁した。腫瘍細胞懸濁液を、BALB/cマウスの剃毛された右腹側腹部に皮下注射した。腫瘍体積成長を、垂直腫瘍直径の測定で監視し、式(mm3)=0.5x(長さ)×(幅)2を使用して計算した。薬物処置のために、マウスに、マウス抗マウスアイソタイプ対照IgG2a(15mg/kgのクローンC1.18.4)、抗マウスアイソタイプ対照IgG1(15mg/kgのクローンMOPC-21)、抗マウスPD-1(5mg/kgのPionyr Pi-0004-AB)、抗マウスTREM1(15mg/kgのクローンPi-9067L)、または抗TREM1抗体及び抗PD-1抗体の組み合わせを腹腔内投与した。抗PD-1(クローンRMP1-14)を、BioXCell(West Lebanon、米国ニューハンプシャー州)から購入するか、または、マウスIgG1 D265Aフォーマットとして組み換え技術で生成した。群の平均腫瘍体積が62mm3の平均値(図45A)または/及び173mm3の平均値(図45B)であった場合、処置を開始した。縦線は、抗体を腹腔内投与した日を示す。プロトコールAUP0606で、Explora Biolabs施設内動物管理及び使用委員会に従って、全ての試験を実施した。USDA実験動物福祉法に準拠した実験動物管理及び使用に関するNIHガイドに概説される条件下で、マウスを飼育した。動物を実験食の齧歯動物固形飼料及び水に自由に摂取させた。安楽死を必要とし得る臨床的異常について、研究者または獣医スタッフが、マウスを少なくとも週に2回監視した。ベースライン体重測定と比較して20%を超える正味の体重減少を示すマウスを安楽死させた。
図44A及び44Bは、皮下EMT6担腫瘍雌BALB/cマウスにおける抗TREM1、抗PD-1、または抗TREM1及び抗PD-1処置の組み合わせの抗腫瘍有効性を示す。図44Aは、62mm3の「小さな」腫瘍を有するマウスの処置中の腫瘍体積を示す。図44Bは、173mm3の「大きな」腫瘍を有するマウスの処置中の腫瘍体積を示す。小さな腫瘍では、単独の、または抗PD-1抗体と組み合わせた抗TREM1抗体処置は、抗腫瘍有効性を示した。抗TREM1抗体処置は、47%の腫瘍成長阻害をもたらし、抗PD-1抗体処置は、65%の腫瘍成長阻害及び2つの完全退縮をもたらし、抗TREM1抗体及び抗PD-1抗体処置の組み合わせは、91%の腫瘍成長阻害及び3つの完全退縮をもたらした(図44A)。大きな腫瘍において、抗TREM1抗体処置は、1つの完全寛解をもたらし、抗PD-1抗体処置は、10%の腫瘍成長阻害をもたらし、抗TREM1抗体及び抗PD-1抗体処置の組み合わせは、75%の腫瘍成長阻害をもたらした(図44A)。従って、抗TREM1抗体は、単剤療法及び併用療法の両方の有効性を示す。
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ヒトTREM1(配列番号1)に結合する単離抗体であって、前記抗体が、
i)ヒトTREM1(配列番号1)の残基21~34(配列番号42)、103~109(配列番号43)、及び128~136(配列番号44)内で結合し、
ii)任意に、ヒトFc領域を含む、
前記単離抗体。
[本発明1002]
ヒトTREM1(配列番号1)に結合する単離抗体であって、3つの重鎖CDR配列であるCDR-H1、CDR-H2、及びCDR-H3を含む可変重(VH)鎖配列を含む重鎖、ならびに3つの軽鎖CDR配列であるCDR-L1、CDR-L2、及びCDR-L3を含む可変軽(VL)鎖配列を含む軽鎖を含み、
a.CDR-H1が、配列番号23に記載の配列を含み、
b.CDR-H2が、配列番号24に記載の配列を含み、
c.CDR-H3が、配列番号29に記載の配列を含み、Xが、ロイシン(L)、グルタミン(Q)、メチオニン(M)、イソロイシン(I)、またはグルタミン酸(E)であり、
d.CDR-L1が、配列番号26に記載の配列を含み、
e.CDR-L2が、配列番号27に記載の配列を含み、
f.CDR-L3が、配列番号28に記載の配列を含む、
前記単離抗体。
[本発明1003]
前記抗体が、配列RXAAMDY(配列番号29)を含むCDR-H3を含み、Xが、ロイシン(L)、グルタミン(Q)、メチオニン(M)、イソロイシン(I)、またはグルタミン酸(E)である、本発明1001の単離抗体。
[本発明1004]
配列番号23に記載の配列を含むCDR-H1及び配列番号24に記載の配列を含むCDR-H2をさらに含む、本発明1001または1003の単離抗体。
[本発明1005]
前記CDR-H3が、配列番号33に記載の配列を含み、前記抗体が、配列番号23に記載の配列を含むCDR-H1及び配列番号24に記載の配列を含むCDR-H2をさらに含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1006]
配列番号26に記載の配列を含むCDR-L1、配列番号27に記載の配列を含むCDR-L2、及び配列番号28に記載の配列を含むCDR-L3をさらに含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1007]
配列番号16、17、または18に記載の配列から選択されるVH配列を含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1008]
配列番号17に記載のVH配列を含む、本発明1007の単離抗体。
[本発明1009]
配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1010]
配列番号20に記載のVL配列を含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1011]
配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1012]
scFvである、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1013]
scFvであり、且つ配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、本発明1001~1011のいずれかの単離抗体。
[本発明1014]
scFvであり、且つ配列番号16、17、または18に記載の配列から選択されるVH配列及び配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、本発明1001~1011のいずれかの単離抗体。
[本発明1015]
前記抗体が、配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含み、前記ヒトFc領域が、野生型ヒトIgG1 Fcを含む、本発明1001~1011のいずれかの単離抗体。
[本発明1016]
配列番号34に記載の重鎖配列及び配列番号35に記載の軽鎖配列を含む、本発明1001~1011または1015のいずれかの単離抗体。
[本発明1017]
配列番号4、5、または6に記載の配列から選択されるVH配列を含む、本発明1002の単離抗体。
[本発明1018]
配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、本発明1017の単離抗体。
[本発明1019]
配列番号8、9、または10に記載の配列から選択されるVH配列を含む、本発明1017または1018の単離抗体。
[本発明1020]
前記CDR-H3が、配列番号32に記載の配列を含み、前記抗体が、配列番号23に記載の配列を含むCDR-H1及び配列番号24に記載の配列を含むCDR-H2をさらに含む、本発明1002の単離抗体。
[本発明1021]
配列番号12、13、または14に記載の配列から選択されるVH配列を含む、本発明1020の単離抗体。
[本発明1022]
配列番号13に記載のVH配列を含む、本発明1021の単離抗体。
[本発明1023]
配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、本発明1020~1022のいずれかの単離抗体。
[本発明1024]
配列番号20に記載のVL配列を含む、本発明1023の単離抗体。
[本発明1025]
配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、本発明1001~1024のいずれかの単離抗体。
[本発明1026]
scFvであり、且つ配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、本発明1020~1025のいずれかの単離抗体。
[本発明1027]
scFvであり、且つ配列番号112、13、または14に記載の配列から選択されるVH配列及び配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、本発明1001~1011のいずれかの単離抗体。
[本発明1028]
前記抗体が、配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含み、前記ヒトFc領域が、野生型ヒトIgG1 Fcを含む、本発明1020~1025のいずれかの単離抗体。
[本発明1029]
配列番号36に記載の重鎖配列及び配列番号37に記載の軽鎖配列を含む、本発明1020~1028のいずれかの単離抗体。
[本発明1030]
配列番号17、13、または9に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなる、本発明1001~1004または1006のいずれかの単離抗体。
[本発明1031]
配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなる、本発明1001~1006のいずれかの単離抗体。
[本発明1032]
配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなる、本発明1001~1004または1006のいずれかの単離抗体。
[本発明1033]
配列番号9に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなる、本発明1001~1004または1006のいずれかの単離抗体。
[本発明1034]
配列番号34に記載の重鎖配列及び配列番号35に記載の軽鎖配列からなる、本発明1001~1006のいずれかの単離抗体。
[本発明1035]
配列番号36に記載の重鎖配列及び配列番号37に記載の軽鎖配列からなる、本発明1001~1004または1006のいずれかの単離抗体。
[本発明1036]
アフコシル化されている、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1037]
ヒトTREM1(配列番号1)に結合する単離抗体であって、アフコシル化されており、且つ配列番号17、13、または9に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、前記単離抗体。
[本発明1038]
配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、本発明1037の単離抗体。
[本発明1039]
配列番号34に記載の重鎖配列及び配列番号35に記載の軽鎖配列を含む、本発明1038の単離抗体。
[本発明1040]
配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、本発明1037の単離抗体。
[本発明1041]
アフコシル化されており、且つ配列番号36に記載の重鎖配列及び配列番号37に記載の軽鎖配列を含む、本発明1040の単離抗体。
[本発明1042]
配列番号9に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、本発明1037の単離抗体。
[本発明1043]
アフコシル化されており、且つ配列番号38に記載の重鎖配列及び配列番号39に記載の軽鎖配列を含む、本発明1042の単離抗体。
[本発明1044]
ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1045]
ヒト化抗体である、本発明1044の単離抗体。
[本発明1046]
IgG、IgA、IgD、IgE、及びIgMから選択されるクラスの重鎖ヒト定常領域を含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1047]
Fc領域を含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1048]
前記Fc領域が、ヒトFc領域である、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1049]
前記ヒトFc領域が、クラスIgGの、且つIgG1、IgG2、IgG3、及びIgG4から選択されるサブクラスの、ヒト重鎖定常領域を含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1050]
前記ヒトFc領域が、野生型ヒトIgG1 Fcを含む、本発明1049の単離抗体。
[本発明1051]
前記抗体が、配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなり、前記ヒトFc領域が、野生型ヒトIgG1 Fcを含む、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1052]
前記Fc領域が、1つ以上のアミノ酸置換を含み、前記1つ以上の置換が、前記1つ以上の置換のないFcと比較して、抗体半減期の増加、ADCC活性の増加、ADCP活性の増加、またはCDC活性の増加をもたらす、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1053]
前記Fc領域が、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa、及びFcγRIIIbからなる群より選択されるFcγ受容体と結合する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1054]
モノクローナル抗体である、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1055]
表面プラズモン共鳴(SPR)アッセイで測定した際に、約0.5、1、2、3、4、5、6、または7×10 -9 Mまたはそれ以下のK D でヒトTREM1に結合する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1056]
表面プラズモン共鳴(SPR)アッセイで測定した際に、約7nMまたはそれ以下のK D でヒトTREM1に結合する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1057]
アゴニスト抗体である、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1058]
アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞における少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインの発現の増加を誘導する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1059]
前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、IFN-γ、IL-1α、IL-12、IL-2、TNFSF9、TNFSF10、CXCL9、CXCL10、CCL17、CXCL1、CXCL5、CXCL8、CXCL11、CXCL15、CCL3、CCL4、CCL2、FasL、CD274、CRTAM、グランザイムA(GzmA)、またはグランザイムB(GzmB)からなる群より選択される、本発明1058の単離抗体。
[本発明1060]
前記サイトカインまたはケモカインが、CXCL10またはIFN-γである、本発明1059の単離抗体。
[本発明1061]
アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞における少なくとも1つの骨髄共刺激タンパク質の発現の増加を誘導する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1062]
前記骨髄共刺激タンパク質が、細胞におけるHLA-DR、CD40、CD80、またはCD86である、本発明1061の単離抗体。
[本発明1063]
アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞におけるERK及び/またはSTAT3細胞内シグナル伝達経路の活性化の増加を誘導する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1064]
アイソタイプ対照抗体と比較して、抗腫瘍記憶応答を誘導する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1065]
前記抗体が、
a.ヒトTREM1への結合についてヒトTREM-26抗体と競合する、
b.ヒトTREM1に結合する、
c.カニクイザルTREM1に結合する、
d.TREM1シグナル伝達を刺激する、
e.免疫シグナル伝達経路を誘導する、
f.サイトカインまたはケモカインの分泌を誘導する、
g.共刺激分子の発現を誘導する、
h.骨髄細胞を殺傷する、無効化する、もしくは枯渇させる、または
i.a~hの任意の組み合わせの能力を有する、
先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1066]
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)活性を有する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1067]
抗体媒介性細胞貪食(ADCP)活性を有する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1068]
補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1069]
前記細胞が、TREM1+細胞である、本発明1058~1068のいずれかの単離抗体。
[本発明1070]
前記TREM1+細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ(TAM)、骨髄由来抑制細胞(MDSC)、好中球、及び腫瘍関連好中球(TAN)からなる群より選択される、本発明1069の単離抗体。
[本発明1071]
前記TREM1+細胞が、骨髄由来抑制細胞または腫瘍関連好中球である、本発明1070の単離抗体。
[本発明1072]
前記抗体が、TREM1+細胞の細胞表面上でTREM1をTREM1に架橋する、本発明1001~1071のいずれかの単離抗体。
[本発明1073]
医薬として使用される、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1074]
がんまたは感染症の処置に使用される、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1075]
固形腫瘍及び液体腫瘍から選択されるがんの処置に使用される、先行本発明のいずれかの単離抗体。
[本発明1076]
先行本発明のいずれかの抗体、そのVH、そのVL、その軽鎖、その重鎖、またはその抗原結合部分、任意にcDNAをコードする、単離ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセット。
[本発明1077]
本発明1076のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを含む、ベクターまたはベクターのセット。
[本発明1078]
本発明1076のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドのセット、または本発明1077のベクターもしくはベクターのセットを含む、宿主細胞。
[本発明1079]
本発明1078の宿主細胞で抗体を発現させること、及び発現された抗体を単離することを含む、抗体の製造方法。
[本発明1080]
本発明1001~1075のいずれかの抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
[本発明1081]
本発明1001~1075のいずれかの抗体または本発明1080の医薬組成物及び使用説明書を含む、キット。
[本発明1082]
抗TREM1抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を対象に投与することを含む、免疫応答を増加させる方法。
[本発明1083]
前記組成物が、本発明1001~1075のいずれかの抗体または本発明1080の医薬組成物を含む、本発明1082の方法。
[本発明1084]
前記抗体が、受容体-リガンド遮断活性、アゴニスト活性、またはアンタゴニスト活性を有する、本発明1082の方法。
[本発明1085]
前記抗体が、アゴニスト活性を有する、本発明1084の方法。
[本発明1086]
前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞における少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインの発現の増加を誘導する、本発明1082~1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、IFN-γ、IL-1α、IL-12、IL-2、TNFSF9、TNFSF10、CXCL9、CXCL10、CCL17、CXCL1、CXCL5、CXCL8、CXCL11、CXCL15、CCL3、CCL4、CCL2、FasL、CD274、CRTAM、グランザイムA(GzmA)、またはグランザイムB(GzmB)からなる群より選択される、本発明1086の方法。
[本発明1088]
前記サイトカインまたはケモカインが、CXCL10またはIFN-γである、本発明1087の方法。
[本発明1089]
前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、少なくとも1つの骨髄性共刺激タンパク質の発現の増加を誘導する、本発明1082~1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
前記骨髄共刺激タンパク質が、細胞におけるHLA-DR、CD40、CD80、またはCD86である、本発明1089の方法。
[本発明1091]
前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞におけるERK及び/またはSTAT3細胞内シグナル伝達経路の活性化の増加を誘導する、本発明1082~1090のいずれかの方法。
[本発明1092]
前記抗体が、記憶免疫応答を誘導する、本発明1082~1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
前記細胞が、TREM1+細胞である、本発明1082~1092のいずれかの方法。
[本発明1094]
前記TREM1+細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ(TAM)、骨髄由来抑制細胞(MDSC)、好中球、及び腫瘍関連好中球(TAN)からなる群から選択される、本発明1093の方法。
[本発明1095]
前記TREM1+細胞が、骨髄由来抑制細胞または腫瘍関連好中球である、本発明1094の方法。
[本発明1096]
前記抗体が、TREM1+細胞の細胞表面上でTREM1をTREM1に架橋する、本発明1082~1095のいずれかの方法。
[本発明1097]
前記対象が、ヒトである、本発明1082~1096のいずれかの方法。
[本発明1098]
抗TREM1抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を対象に投与することを含む、がんを処置する方法。
[本発明1099]
前記組成物が、本発明1001~1075のいずれかの抗体または本発明1080の医薬組成物を含む、本発明1098の方法。
[本発明1100]
前記抗体が、受容体-リガンド遮断活性、アゴニスト活性、またはアンタゴニスト活性を有する、本発明1098の方法。
[本発明1101]
前記抗体が、アゴニスト活性を有する、本発明1098の方法。
[本発明1102]
前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞における少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインの発現の増加を誘導する、本発明1098~1101のいずれかの方法。
[本発明1103]
前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、IFN-γ、IL-1α、IL-12、IL-2、TNFSF9、TNFSF10、CXCL9、CXCL10、CCL17、CXCL1、CXCL5、CXCL8、CXCL11、CXCL15、CCL3、CCL4、CCL2、FasL、CD274、CRTAM、グランザイムA(GzmA)、またはグランザイムB(GzmB)からなる群より選択される、本発明1102の方法。
[本発明1104]
前記サイトカインまたはケモカインが、CXCL10またはIFN-γである、本発明1103の方法。
[本発明1105]
前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、少なくとも1つの骨髄性共刺激タンパク質の発現の増加を誘導する、本発明1098~1104のいずれかの方法。
[本発明1106]
前記骨髄共刺激タンパク質が、細胞におけるHLA-DR、CD40、CD80、またはCD86である、本発明1105の方法。
[本発明1107]
前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞におけるERK及び/またはSTAT3細胞内シグナル伝達経路の活性化の増加を誘導する、本発明1098~1106のいずれかの方法。
[本発明1108]
前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、抗腫瘍記憶応答を誘導する、本発明1098~1107のいずれかの方法。
[本発明1109]
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)活性を有する、本発明1098の方法。
[本発明1110]
前記抗体が、補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する、本発明1098の方法。
[本発明1111]
前記抗体が、抗体媒介性貪食(ADCP)活性を有する、本発明1098の方法。
[本発明1112]
前記細胞が、TREM1+細胞である、本発明1098~1108のいずれかの方法。
[本発明1113]
前記TREM1+細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ(TAM)、骨髄由来抑制細胞(MDSC)、好中球、及び腫瘍関連好中球(TAN)からなる群から選択される、本発明1112の方法。
[本発明1114]
前記TREM1+細胞が、骨髄由来抑制細胞または腫瘍関連好中球である、本発明1113の方法。
[本発明1115]
前記抗体が、TREM1+細胞の細胞表面上でTREM1をTREM1に架橋する、本発明1098~1114のいずれかの方法。
[本発明1116]
前記対象が、ヒトである、本発明1098~1115のいずれかの方法。
[本発明1117]
前記がんが、固形がんである、本発明1098~1116のいずれかの方法。
[本発明1118]
前記がんが、液体がんである、本発明1098~1117のいずれかの方法。
[本発明1119]
前記がんが、黒色腫、腎臓癌、肝胆道癌、頭頸部扁平上皮癌(HNSC)、膵臓癌、結腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、膠芽腫、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、食道癌、腎臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣癌、及び中皮腫からなる群から選択される、本発明1098~1118のいずれかの方法。
[本発明1120]
前記がんが、胃癌、卵巣癌、結腸癌、または乳癌である、本発明1119の方法。
[本発明1121]
前記接触が、前記対象の免疫応答を増強する、本発明1098~1120のいずれかの方法。
[本発明1122]
増強された免疫応答が、適応免疫応答である、本発明1121の方法。
[本発明1123]
増強された免疫応答が、自然免疫応答である、本発明1122の方法。
[本発明1124]
前記対象が、免疫療法を以前に受けているか、同時に受けているか、または後に受けることになる、本発明1098~1123のいずれかの方法。
[本発明1125]
前記免疫療法が、チェックポイント阻害薬;T細胞のチェックポイント阻害薬;抗PD1抗体;抗PDL1抗体;抗CTLA4抗体;養子細胞療法;養子T細胞療法;CAR-T細胞療法;樹状細胞ワクチン;STINGアゴニスト;単球ワクチン;カルメット-ゲラン菌ワクチン;T細胞及び抗原提示細胞の両方と結合する抗原結合タンパク質;BiTE二重抗原結合タンパク質;Toll様受容体リガンド;サイトカイン;細胞傷害療法;化学療法;放射線療法;小分子阻害薬;小分子アゴニスト;免疫調節薬;腫瘍溶解性ウイルス;ならびにエピジェネティック調節薬のうちの少なくとも1つである、本発明1124の方法。
[本発明1126]
前記免疫療法が、抗PD1抗体、抗PDL1抗体、または抗CTLA4抗体からなる群から選択される、本発明1125の方法。
[本発明1127]
骨髄細胞上に発現する誘発性受容体1(TREM1)を細胞表面上に発現する骨髄細胞を、殺傷する、無効化する、または枯渇させる方法であって、前記骨髄細胞を、本発明1001~1075のいずれかの抗体または本発明1080の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。
[本発明1128]
前記抗体が、ADCC、CDC、及びADCPのうちの少なくとも1つで前記骨髄細胞を殺傷し、無効化し、または枯渇させ、任意に、前記抗体が、ADCCで前記骨髄細胞を殺傷し、無効化し、または枯渇させ、任意に、前記抗体が、CDCで前記骨髄細胞を殺傷し、無効化し、または枯渇させ、任意に、前記抗体が、ADCPで前記骨髄細胞を殺傷し、無効化し、または枯渇させる、本発明1127の方法。
[本発明1129]
前記抗体が、ADCC、CDC、及びADCPのうちの少なくとも1つで、前記骨髄細胞を殺傷する、本発明1127または1128の方法。
[本発明1130]
前記抗体が、ADCC、CDC、及びADCPのうちの少なくとも1つで、前記骨髄細胞を無効化する、本発明1127~1129のいずれかの方法。
[本発明1131]
前記抗体が、ADCC、CDC、及びADCPのうちの少なくとも1つで、前記骨髄細胞を枯渇させる、本発明1127~1129のいずれかの方法。
[本発明1132]
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)活性を有する、本発明1127~1131のいずれかの方法。
[本発明1133]
前記抗体が、補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する、本発明1127~1131のいずれかの方法。
[本発明1134]
前記抗体が、抗体媒介性貪食(ADCP)活性を有する、本発明1127~1131のいずれかの方法。
[本発明1135]
前記抗体が、受容体-リガンド遮断活性、アゴニスト活性、またはアンタゴニスト活性を有する、本発明1127~1134のいずれかの方法。
[本発明1136]
前記骨髄細胞が、刺激性骨髄細胞である、本発明1127~1135のいずれかの方法。
[本発明1137]
前記骨髄細胞が、非刺激性骨髄細胞である、本発明1127~1135のいずれかの方法。
[本発明1138]
前記骨髄細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ(TAM)、好中球、単球、または骨髄由来抑制細胞の少なくとも1つを含む、本発明1127~1137のいずれかの方法。
[本発明1139]
前記骨髄細胞が、好中球または腫瘍関連好中球である、本発明1138の方法。
[本発明1140]
前記骨髄細胞が、腫瘍関連マクロファージである、本発明1139の方法。
[本発明1141]
前記骨髄細胞が、単球性骨髄由来抑制細胞である、本発明1138の方法。
[本発明1142]
前記骨髄細胞が、腫瘍内にある、本発明1127~1141のいずれかの方法。
[本発明1143]
前記骨髄細胞が、刺激性骨髄細胞及び非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団中にある、本発明1127~1142のいずれかの方法。
[本発明1144]
前記接触が、in vitroまたはin vivoである、本発明1127~1143のいずれかの方法。
[本発明1145]
前記接触が、対象においてin vivoで生じ、任意に、前記対象が、がんを有する、本発明1127~1144のいずれかの方法。
[本発明1146]
前記対象が、ヒトである、本発明1127~1145のいずれかの方法。
[本発明1147]
前記がんが、固形がんである、本発明1127~1146のいずれかの方法。
[本発明1148]
前記がんが、液体がんである、本発明1127~1146のいずれかの方法。
[本発明1149]
前記がんが、黒色腫、腎臓癌、肝胆道癌、頭頸部扁平上皮癌(HNSC)、膵臓癌、結腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、膠芽腫、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、食道癌、腎臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣癌、及び中皮腫からなる群より選択される、本発明1146の方法。
[本発明1150]
前記がんが、胃癌、卵巣癌、結腸癌、または乳癌である、本発明1149の方法。
[本発明1151]
前記接触が、前記対象の免疫応答を増強する、本発明1150の方法。
[本発明1152]
増強された免疫応答が、適応免疫応答である、本発明1151の方法。
[本発明1153]
増強された免疫応答が、自然免疫応答である、本発明1151の方法。
[本発明1154]
増強された免疫応答が、少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインの発現を含む、本発明1151の方法。
[本発明1155]
前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、IFN-γ、IL-1α、IL-12、IL-2、TNFSF9、TNFSF10、CXCL9、CXCL10、CCL17、CXCL1、CXCL5、CXCL8、CXCL11、CXCL15、CCL3、CCL4、CCL2、FasL、CD274、CRTAM、グランザイムA(GzmA)、またはグランザイムB(GzmB)からなる群より選択される、本発明1154の方法。
[本発明1156]
前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、CXCL10またはIFN-γである、本発明1155の方法。
[本発明1157]
前記対象が、免疫療法を以前に受けているか、同時に受けているか、または後に受けることになる、本発明1127~1156のいずれかの方法。
[本発明1158]
前記免疫療法が、チェックポイント阻害薬;T細胞のチェックポイント阻害薬;抗PD1抗体;抗PDL1抗体;抗CTLA4抗体;養子細胞療法;養子T細胞療法;CAR-T細胞療法;樹状細胞ワクチン;STINGアゴニスト;単球ワクチン;カルメット-ゲラン菌ワクチン;T細胞及び抗原提示細胞の両方に結合する抗原結合タンパク質;BiTE二重抗原結合タンパク質;Toll様受容体リガンド;サイトカイン;細胞傷害療法;化学療法;放射線療法;小分子阻害薬;小分子アゴニスト;免疫調節薬;腫瘍溶解性ウイルス;ならびにエピジェネティック調節薬のうちの少なくとも1つである、本発明1157の方法。
[本発明1159]
前記免疫療法が、抗PD1抗体、抗PDL1抗体、または抗CTLA4抗体からなる群から選択される、本発明1158の方法。
本発明のこれら及び他の特徴、態様、及び利点は、以下の説明及び添付図面に関して、よりよく理解されるようになるであろう。
図8に示されるように、PI-4026-5は、SECで評価されたCDRH3(RMAAMDY(配列番号25))のMet100で酸化リスクを有する。H2O2用量依存的に、抗体のパーセント不均一性が増加し、単量体のパーセントが減少する。これは、0.3%、0.1%、及び0.01%のH2O2で処置された試料のSECプロファイルで観察された二重ピークで示される。表3は、SECの結果の定量化を提供する。
Claims (159)
- ヒトTREM1(配列番号1)に結合する単離抗体であって、前記抗体が、
i)ヒトTREM1(配列番号1)の残基21~34(配列番号42)、103~109(配列番号43)、及び128~136(配列番号44)内で結合し、
ii)任意に、ヒトFc領域を含む、
前記単離抗体。 - ヒトTREM1(配列番号1)に結合する単離抗体であって、3つの重鎖CDR配列であるCDR-H1、CDR-H2、及びCDR-H3を含む可変重(VH)鎖配列を含む重鎖、ならびに3つの軽鎖CDR配列であるCDR-L1、CDR-L2、及びCDR-L3を含む可変軽(VL)鎖配列を含む軽鎖を含み、
a.CDR-H1が、配列番号23に記載の配列を含み、
b.CDR-H2が、配列番号24に記載の配列を含み、
c.CDR-H3が、配列番号29に記載の配列を含み、Xが、ロイシン(L)、グルタミン(Q)、メチオニン(M)、イソロイシン(I)、またはグルタミン酸(E)であり、
d.CDR-L1が、配列番号26に記載の配列を含み、
e.CDR-L2が、配列番号27に記載の配列を含み、
f.CDR-L3が、配列番号28に記載の配列を含む、
前記単離抗体。 - 前記抗体が、配列RXAAMDY(配列番号29)を含むCDR-H3を含み、Xが、ロイシン(L)、グルタミン(Q)、メチオニン(M)、イソロイシン(I)、またはグルタミン酸(E)である、請求項1に記載の単離抗体。
- 配列番号23に記載の配列を含むCDR-H1及び配列番号24に記載の配列を含むCDR-H2をさらに含む、請求項1または3に記載の単離抗体。
- 前記CDR-H3が、配列番号33に記載の配列を含み、前記抗体が、配列番号23に記載の配列を含むCDR-H1及び配列番号24に記載の配列を含むCDR-H2をさらに含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号26に記載の配列を含むCDR-L1、配列番号27に記載の配列を含むCDR-L2、及び配列番号28に記載の配列を含むCDR-L3をさらに含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号16、17、または18に記載の配列から選択されるVH配列を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号17に記載のVH配列を含む、請求項7に記載の単離抗体。
- 配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号20に記載のVL配列を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- scFvである、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- scFvであり、且つ配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、請求項1~11のいずれか1項に記載の単離抗体。
- scFvであり、且つ配列番号16、17、または18に記載の配列から選択されるVH配列及び配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、請求項1~11のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記抗体が、配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含み、前記ヒトFc領域が、野生型ヒトIgG1 Fcを含む、請求項1~11のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号34に記載の重鎖配列及び配列番号35に記載の軽鎖配列を含む、請求項1~11または15のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号4、5、または6に記載の配列から選択されるVH配列を含む、請求項2に記載の単離抗体。
- 配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、請求項17に記載の単離抗体。
- 配列番号8、9、または10に記載の配列から選択されるVH配列を含む、請求項17または18に記載の単離抗体。
- 前記CDR-H3が、配列番号32に記載の配列を含み、前記抗体が、配列番号23に記載の配列を含むCDR-H1及び配列番号24に記載の配列を含むCDR-H2をさらに含む、請求項2に記載の単離抗体。
- 配列番号12、13、または14に記載の配列から選択されるVH配列を含む、請求項20に記載の単離抗体。
- 配列番号13に記載のVH配列を含む、請求項21に記載の単離抗体。
- 配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、請求項20~22のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号20に記載のVL配列を含む、請求項23に記載の単離抗体。
- 配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、請求項1~24のいずれか1項に記載の単離抗体。
- scFvであり、且つ配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、請求項20~25のいずれか1項に記載の単離抗体。
- scFvであり、且つ配列番号112、13、または14に記載の配列から選択されるVH配列及び配列番号20、21、または22に記載の配列から選択されるVL配列を含む、請求項1~11のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記抗体が、配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含み、前記ヒトFc領域が、野生型ヒトIgG1 Fcを含む、請求項20~25のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号36に記載の重鎖配列及び配列番号37に記載の軽鎖配列を含む、請求項20~28のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号17、13、または9に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなる、請求項1~4または6のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなる、請求項1~6のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなる、請求項1~4または6のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号9に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなる、請求項1~4または6のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号34に記載の重鎖配列及び配列番号35に記載の軽鎖配列からなる、請求項1~6のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 配列番号36に記載の重鎖配列及び配列番号37に記載の軽鎖配列からなる、請求項1~4または6のいずれか1項に記載の単離抗体。
- アフコシル化されている、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- ヒトTREM1(配列番号1)に結合する単離抗体であって、アフコシル化されており、且つ配列番号17、13、または9に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、前記単離抗体。
- 配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、請求項37に記載の単離抗体。
- 配列番号34に記載の重鎖配列及び配列番号35に記載の軽鎖配列を含む、請求項38に記載の単離抗体。
- 配列番号13に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、請求項37に記載の単離抗体。
- アフコシル化されており、且つ配列番号36に記載の重鎖配列及び配列番号37に記載の軽鎖配列を含む、請求項40に記載の単離抗体。
- 配列番号9に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列を含む、請求項37に記載の単離抗体。
- アフコシル化されており、且つ配列番号38に記載の重鎖配列及び配列番号39に記載の軽鎖配列を含む、請求項42に記載の単離抗体。
- ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- ヒト化抗体である、請求項44に記載の単離抗体。
- IgG、IgA、IgD、IgE、及びIgMから選択されるクラスの重鎖ヒト定常領域を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- Fc領域を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記Fc領域が、ヒトFc領域である、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記ヒトFc領域が、クラスIgGの、且つIgG1、IgG2、IgG3、及びIgG4から選択されるサブクラスの、ヒト重鎖定常領域を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記ヒトFc領域が、野生型ヒトIgG1 Fcを含む、請求項49に記載の単離抗体。
- 前記抗体が、配列番号17に記載のVH配列及び配列番号20に記載のVL配列からなり、前記ヒトFc領域が、野生型ヒトIgG1 Fcを含む、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記Fc領域が、1つ以上のアミノ酸置換を含み、前記1つ以上の置換が、前記1つ以上の置換のないFcと比較して、抗体半減期の増加、ADCC活性の増加、ADCP活性の増加、またはCDC活性の増加をもたらす、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記Fc領域が、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa、及びFcγRIIIbからなる群より選択されるFcγ受容体と結合する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- モノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 表面プラズモン共鳴(SPR)アッセイで測定した際に、約0.5、1、2、3、4、5、6、または7×10-9Mまたはそれ以下のKDでヒトTREM1に結合する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 表面プラズモン共鳴(SPR)アッセイで測定した際に、約7nMまたはそれ以下のKDでヒトTREM1に結合する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- アゴニスト抗体である、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞における少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインの発現の増加を誘導する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、IFN-γ、IL-1α、IL-12、IL-2、TNFSF9、TNFSF10、CXCL9、CXCL10、CCL17、CXCL1、CXCL5、CXCL8、CXCL11、CXCL15、CCL3、CCL4、CCL2、FasL、CD274、CRTAM、グランザイムA(GzmA)、またはグランザイムB(GzmB)からなる群より選択される、請求項58に記載の単離抗体。
- 前記サイトカインまたはケモカインが、CXCL10またはIFN-γである、請求項59に記載の単離抗体。
- アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞における少なくとも1つの骨髄共刺激タンパク質の発現の増加を誘導する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記骨髄共刺激タンパク質が、細胞におけるHLA-DR、CD40、CD80、またはCD86である、請求項61に記載の単離抗体。
- アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞におけるERK及び/またはSTAT3細胞内シグナル伝達経路の活性化の増加を誘導する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- アイソタイプ対照抗体と比較して、抗腫瘍記憶応答を誘導する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記抗体が、
a.ヒトTREM1への結合についてヒトTREM-26抗体と競合する、
b.ヒトTREM1に結合する、
c.カニクイザルTREM1に結合する、
d.TREM1シグナル伝達を刺激する、
e.免疫シグナル伝達経路を誘導する、
f.サイトカインまたはケモカインの分泌を誘導する、
g.共刺激分子の発現を誘導する、
h.骨髄細胞を殺傷する、無効化する、もしくは枯渇させる、または
i.a~hの任意の組み合わせの能力を有する、
先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。 - 抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)活性を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 抗体媒介性細胞貪食(ADCP)活性を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記細胞が、TREM1+細胞である、請求項58~68のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 前記TREM1+細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ(TAM)、骨髄由来抑制細胞(MDSC)、好中球、及び腫瘍関連好中球(TAN)からなる群より選択される、請求項69に記載の単離抗体。
- 前記TREM1+細胞が、骨髄由来抑制細胞または腫瘍関連好中球である、請求項70に記載の単離抗体。
- 前記抗体が、TREM1+細胞の細胞表面上でTREM1をTREM1に架橋する、請求項1~71のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 医薬として使用される、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- がんまたは感染症の処置に使用される、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 固形腫瘍及び液体腫瘍から選択されるがんの処置に使用される、先行請求項のいずれか1項に記載の単離抗体。
- 先行請求項のいずれか1項に記載の抗体、そのVH、そのVL、その軽鎖、その重鎖、またはその抗原結合部分、任意にcDNAをコードする、単離ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセット。
- 請求項76に記載のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを含む、ベクターまたはベクターのセット。
- 請求項76に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドのセット、または請求項77に記載のベクターもしくはベクターのセットを含む、宿主細胞。
- 請求項78に記載の宿主細胞で抗体を発現させること、及び発現された抗体を単離することを含む、抗体の製造方法。
- 請求項1~75のいずれか1項に記載の抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
- 請求項1~75のいずれか1項に記載の抗体または請求項80に記載の医薬組成物及び使用説明書を含む、キット。
- 抗TREM1抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を対象に投与することを含む、免疫応答を増加させる方法。
- 前記組成物が、請求項1~75のいずれか1項に記載の抗体または請求項80に記載の医薬組成物を含む、請求項82に記載の方法。
- 前記抗体が、受容体-リガンド遮断活性、アゴニスト活性、またはアンタゴニスト活性を有する、請求項82に記載の方法。
- 前記抗体が、アゴニスト活性を有する、請求項84に記載の方法。
- 前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞における少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインの発現の増加を誘導する、請求項82~85のいずれか1項に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、IFN-γ、IL-1α、IL-12、IL-2、TNFSF9、TNFSF10、CXCL9、CXCL10、CCL17、CXCL1、CXCL5、CXCL8、CXCL11、CXCL15、CCL3、CCL4、CCL2、FasL、CD274、CRTAM、グランザイムA(GzmA)、またはグランザイムB(GzmB)からなる群より選択される、請求項86に記載の方法。
- 前記サイトカインまたはケモカインが、CXCL10またはIFN-γである、請求項87に記載の方法。
- 前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、少なくとも1つの骨髄性共刺激タンパク質の発現の増加を誘導する、請求項82~88のいずれか1項に記載の方法。
- 前記骨髄共刺激タンパク質が、細胞におけるHLA-DR、CD40、CD80、またはCD86である、請求項89に記載の方法。
- 前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞におけるERK及び/またはSTAT3細胞内シグナル伝達経路の活性化の増加を誘導する、請求項82~90のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体が、記憶免疫応答を誘導する、請求項82~91のいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞が、TREM1+細胞である、請求項82~92のいずれか1項に記載の方法。
- 前記TREM1+細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ(TAM)、骨髄由来抑制細胞(MDSC)、好中球、及び腫瘍関連好中球(TAN)からなる群から選択される、請求項93に記載の方法。
- 前記TREM1+細胞が、骨髄由来抑制細胞または腫瘍関連好中球である、請求項94に記載の方法。
- 前記抗体が、TREM1+細胞の細胞表面上でTREM1をTREM1に架橋する、請求項82~95のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象が、ヒトである、請求項82~96のいずれか1項に記載の方法。
- 抗TREM1抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を対象に投与することを含む、がんを処置する方法。
- 前記組成物が、請求項1~75のいずれか1項に記載の抗体または請求項80に記載の医薬組成物を含む、請求項98に記載の方法。
- 前記抗体が、受容体-リガンド遮断活性、アゴニスト活性、またはアンタゴニスト活性を有する、請求項98に記載の方法。
- 前記抗体が、アゴニスト活性を有する、請求項98に記載の方法。
- 前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞における少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインの発現の増加を誘導する、請求項98~101のいずれか1項に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、IFN-γ、IL-1α、IL-12、IL-2、TNFSF9、TNFSF10、CXCL9、CXCL10、CCL17、CXCL1、CXCL5、CXCL8、CXCL11、CXCL15、CCL3、CCL4、CCL2、FasL、CD274、CRTAM、グランザイムA(GzmA)、またはグランザイムB(GzmB)からなる群より選択される、請求項102に記載の方法。
- 前記サイトカインまたはケモカインが、CXCL10またはIFN-γである、請求項103に記載の方法。
- 前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、少なくとも1つの骨髄性共刺激タンパク質の発現の増加を誘導する、請求項98~104のいずれか1項に記載の方法。
- 前記骨髄共刺激タンパク質が、細胞におけるHLA-DR、CD40、CD80、またはCD86である、請求項105に記載の方法。
- 前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、細胞におけるERK及び/またはSTAT3細胞内シグナル伝達経路の活性化の増加を誘導する、請求項98~106のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体が、アイソタイプ対照抗体と比較して、抗腫瘍記憶応答を誘導する、請求項98~107のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)活性を有する、請求項98に記載の方法。
- 前記抗体が、補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する、請求項98に記載の方法。
- 前記抗体が、抗体媒介性貪食(ADCP)活性を有する、請求項98に記載の方法。
- 前記細胞が、TREM1+細胞である、請求項98~108のいずれか1項に記載の方法。
- 前記TREM1+細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ(TAM)、骨髄由来抑制細胞(MDSC)、好中球、及び腫瘍関連好中球(TAN)からなる群から選択される、請求項112に記載の方法。
- 前記TREM1+細胞が、骨髄由来抑制細胞または腫瘍関連好中球である、請求項113に記載の方法。
- 前記抗体が、TREM1+細胞の細胞表面上でTREM1をTREM1に架橋する、請求項98~114のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象が、ヒトである、請求項98~115のいずれか1項に記載の方法。
- 前記がんが、固形がんである、請求項98~116のいずれか1項に記載の方法。
- 前記がんが、液体がんである、請求項98~117のいずれか1項に記載の方法。
- 前記がんが、黒色腫、腎臓癌、肝胆道癌、頭頸部扁平上皮癌(HNSC)、膵臓癌、結腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、膠芽腫、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、食道癌、腎臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣癌、及び中皮腫からなる群から選択される、請求項98~118のいずれか1項に記載の方法。
- 前記がんが、胃癌、卵巣癌、結腸癌、または乳癌である、請求項119に記載の方法。
- 前記接触が、前記対象の免疫応答を増強する、請求項98~120のいずれか1項に記載の方法。
- 増強された免疫応答が、適応免疫応答である、請求項121に記載の方法。
- 増強された免疫応答が、自然免疫応答である、請求項122に記載の方法。
- 前記対象が、免疫療法を以前に受けているか、同時に受けているか、または後に受けることになる、請求項98~123のいずれか1項に記載の方法。
- 前記免疫療法が、チェックポイント阻害薬;T細胞のチェックポイント阻害薬;抗PD1抗体;抗PDL1抗体;抗CTLA4抗体;養子細胞療法;養子T細胞療法;CAR-T細胞療法;樹状細胞ワクチン;STINGアゴニスト;単球ワクチン;カルメット-ゲラン菌ワクチン;T細胞及び抗原提示細胞の両方と結合する抗原結合タンパク質;BiTE二重抗原結合タンパク質;Toll様受容体リガンド;サイトカイン;細胞傷害療法;化学療法;放射線療法;小分子阻害薬;小分子アゴニスト;免疫調節薬;腫瘍溶解性ウイルス;ならびにエピジェネティック調節薬のうちの少なくとも1つである、請求項124に記載の方法。
- 前記免疫療法が、抗PD1抗体、抗PDL1抗体、または抗CTLA4抗体からなる群から選択される、請求項125に記載の方法。
- 骨髄細胞上に発現する誘発性受容体1(TREM1)を細胞表面上に発現する骨髄細胞を、殺傷する、無効化する、または枯渇させる方法であって、前記骨髄細胞を、請求項1~75のいずれか1項に記載の抗体または請求項80の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。
- 前記抗体が、ADCC、CDC、及びADCPのうちの少なくとも1つで前記骨髄細胞を殺傷し、無効化し、または枯渇させ、任意に、前記抗体が、ADCCで前記骨髄細胞を殺傷し、無効化し、または枯渇させ、任意に、前記抗体が、CDCで前記骨髄細胞を殺傷し、無効化し、または枯渇させ、任意に、前記抗体が、ADCPで前記骨髄細胞を殺傷し、無効化し、または枯渇させる、請求項127に記載の方法。
- 前記抗体が、ADCC、CDC、及びADCPのうちの少なくとも1つで、前記骨髄細胞を殺傷する、請求項127または128に記載の方法。
- 前記抗体が、ADCC、CDC、及びADCPのうちの少なくとも1つで、前記骨髄細胞を無効化する、請求項127~129のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体が、ADCC、CDC、及びADCPのうちの少なくとも1つで、前記骨髄細胞を枯渇させる、請求項127~129のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)活性を有する、請求項127~131のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体が、補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する、請求項127~131のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体が、抗体媒介性貪食(ADCP)活性を有する、請求項127~131のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体が、受容体-リガンド遮断活性、アゴニスト活性、またはアンタゴニスト活性を有する、請求項127~134のいずれか1項に記載の方法。
- 前記骨髄細胞が、刺激性骨髄細胞である、請求項127~135のいずれか1項に記載の方法。
- 前記骨髄細胞が、非刺激性骨髄細胞である、請求項127~135のいずれか1項に記載の方法。
- 前記骨髄細胞が、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ(TAM)、好中球、単球、または骨髄由来抑制細胞の少なくとも1つを含む、請求項127~137のいずれか1項に記載の方法。
- 前記骨髄細胞が、好中球または腫瘍関連好中球である、請求項138に記載の方法。
- 前記骨髄細胞が、腫瘍関連マクロファージである、請求項139に記載の方法。
- 前記骨髄細胞が、単球性骨髄由来抑制細胞である、請求項138に記載の方法。
- 前記骨髄細胞が、腫瘍内にある、請求項127~141のいずれか1項に記載の方法。
- 前記骨髄細胞が、刺激性骨髄細胞及び非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団中にある、請求項127~142のいずれか1項に記載の方法。
- 前記接触が、in vitroまたはin vivoである、請求項127~143のいずれか1項に記載の方法。
- 前記接触が、対象においてin vivoで生じ、任意に、前記対象が、がんを有する、請求項127~144のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象が、ヒトである、請求項127~145のいずれか1項に記載の方法。
- 前記がんが、固形がんである、請求項127~146のいずれか1項に記載の方法。
- 前記がんが、液体がんである、請求項127~146のいずれか1項に記載の方法。
- 前記がんが、黒色腫、腎臓癌、肝胆道癌、頭頸部扁平上皮癌(HNSC)、膵臓癌、結腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、膠芽腫、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、食道癌、腎臓癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣癌、及び中皮腫からなる群より選択される、請求項146に記載の方法。
- 前記がんが、胃癌、卵巣癌、結腸癌、または乳癌である、請求項149に記載の方法。
- 前記接触が、前記対象の免疫応答を増強する、請求項150に記載の方法。
- 増強された免疫応答が、適応免疫応答である、請求項151に記載の方法。
- 増強された免疫応答が、自然免疫応答である、請求項151に記載の方法。
- 増強された免疫応答が、少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインの発現を含む、請求項151に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、IFN-γ、IL-1α、IL-12、IL-2、TNFSF9、TNFSF10、CXCL9、CXCL10、CCL17、CXCL1、CXCL5、CXCL8、CXCL11、CXCL15、CCL3、CCL4、CCL2、FasL、CD274、CRTAM、グランザイムA(GzmA)、またはグランザイムB(GzmB)からなる群より選択される、請求項154に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのサイトカインまたはケモカインが、CXCL10またはIFN-γである、請求項155に記載の方法。
- 前記対象が、免疫療法を以前に受けているか、同時に受けているか、または後に受けることになる、請求項127~156のいずれか1項に記載の方法。
- 前記免疫療法が、チェックポイント阻害薬;T細胞のチェックポイント阻害薬;抗PD1抗体;抗PDL1抗体;抗CTLA4抗体;養子細胞療法;養子T細胞療法;CAR-T細胞療法;樹状細胞ワクチン;STINGアゴニスト;単球ワクチン;カルメット-ゲラン菌ワクチン;T細胞及び抗原提示細胞の両方に結合する抗原結合タンパク質;BiTE二重抗原結合タンパク質;Toll様受容体リガンド;サイトカイン;細胞傷害療法;化学療法;放射線療法;小分子阻害薬;小分子アゴニスト;免疫調節薬;腫瘍溶解性ウイルス;ならびにエピジェネティック調節薬のうちの少なくとも1つである、請求項157に記載の方法。
- 前記免疫療法が、抗PD1抗体、抗PDL1抗体、または抗CTLA4抗体からなる群から選択される、請求項158に記載の方法。
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