JP2022540620A - 胸腺間質性リンパ球新生因子（ｔｓｌｐ）受容体シグナル伝達に干渉する薬剤 - Google Patents

Abstract

本開示は、（ヒト）胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）に特異的に結合および中和する、抗体（例えば、ヒト抗体）およびその抗原結合性断片に関する。このような分子は、抗体半減期を増加させる、プロテアーゼに対する抵抗性を増加させる、および／またはＦｃガンマ受容体と相互作用する能力を低下させる、改変されたＦｃ領域を有することができる。このような分子は、ＴＳＬＰ関連障害および疾患に関連するアレルギー性および非アレルギー性炎症の処置に有用である。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１９年７月１１日に出願された米国仮出願第６２／８７３，０５１号に対する優先権の利益を主張するものである。

電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書に添付して電子的に提出されたテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式コピー（ファイル名：ＴＡＢＩ＿００２＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５；記録日、２０２０年７月３日；ファイルサイズ、４９キロバイト）。

本開示の背景
胸腺間質性リンパ球新生因子、ＴＳＬＰは、免疫応答の調節および造血細胞の分化において決定的な役割を果たすインターロイキン７様サイトカインである。ＴＳＬＰは、肺、皮膚および腸の上皮細胞、胸腺髄質におけるハッサル小体、粘膜関連リンパ組織ならびに扁桃腺に広く発現される（Ｌｉｕ， Ｓｏｕｍｅｌｉｓ ｅｔ ａｌ． ２００７、Ｒｏｃｈｍａｎ ａｎｄ Ｌｅｏｎａｒｄ ２００８、Ｓｏｋｏｌ， Ｂａｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ． ２００８）。肺、骨格筋、腎臓、脾臓、卵巣、小腸および結腸における発現レベルと比較して、高いＴＳＬＰ発現レベルが、心臓、肝臓、脾臓および前立腺に見出される（Ｑｕｅｎｔｍｅｉｅｒ， Ｄｒｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００１）。

上皮細胞由来サイトカインは、環境的および炎症促進性刺激に応答して産生される。これは、単球からＴ細胞誘引性ケモカインの放出を誘導し、骨髄性樹状細胞の成熟を増強する。胸腺内で、ＴＳＬＰは、骨髄性および形質細胞様樹状細胞を活性化し、調節性Ｔ細胞の産生をもたらす。ＴＳＬＰは、樹状細胞、ＴおよびＢ細胞におけるその活性を介した２型（Ｔｈ２、Ｔ２）免疫の調節、ならびに抗原特異的Ｔｈ２細胞によるサイトカインの産生に重要である（Ｚｉｅｇｌｅｒ， Ｒｏａｎ ｅｔ ａｌ． ２０１３）。

ＴＳＬＰは、胸腺間質性リンパ球新生因子受容体（ＴＳＬＰＲ）およびＩＬ－７Ｒアルファ鎖で構成されているヘテロ二量体受容体複合体を介してシグナル伝達する（Ｖｅｒｓｔｒａｅｔｅ， ｖａｎ Ｓｃｈｉｅ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。その受容体複合体との結合において、ＴＳＬＰは、複数のシグナルトランスダクション経路を活性化することができる（Ｚｈｏｎｇ， Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。ＴＳＬＰによるＩＬ７Ｒ／ＴＳＬＰＲ複合体の刺激は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）のリン酸化および活性化を誘導する。活性化されたＪＡＫは次いで、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂおよびＳＴＡＴ６を含む複数の転写（ＳＴＡＴ）因子の活性を調節する。ＡＫＴ１、ＥＲＫ１／２、ＪＮＫ、リボソームタンパク質Ｓ６キナーゼおよび４Ｅ－ＢＰ１等のいくつかの他のタンパク質もＴＳＬＰ刺激によって活性化される。加えて、ホスホプロテオミクス（ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃ）解析は、ＴＳＬＰが、ＳＨＰ－１およびＳＨＰ－２等のキナーゼおよびタンパク質ホスファターゼを含む２２６種のタンパク質のリン酸化を調節することができることを明らかにしている。

ＴＳＬＰは、炎症性カスケードの惹起に関与することが公知であり、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、潰瘍性大腸炎および多くの慢性線維増殖性障害を含む慢性疾患の発症に寄与することができる（Ｖａｎｎｅｌｌａ， Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ ｅｔ ａｌ． ２０１６）。研究は、ＴＳＬＰが、感染症（Ｐｉｌｉｐｏｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ． ２０１６）、がん（Ｄｅ Ｍｏｎｔｅ ｅｔ ａｌ． ２０１１）、自己免疫（Ｍｏｒｅｔ ｅｔ ａｌ． ２０１１）を含む免疫障害；ならびに自然および適応免疫応答（Ｚｉｅｇｌｅｒ， Ｒｏａｎ， ２０１３；Ｈｅａｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ． ２００９）に関与することも示唆した。

ＴＳＬＰは、アレルギー性炎症、特に、２型炎症性経路のマスター調節因子であり、したがって、喘息の処置のための有望な標的となってきた。喘息は、気管支内側の粘液の産生増加による、気管支の炎症によって特徴付けられる障害である。喘息患者は、典型的には好酸球浸潤による慢性気道応答性亢進が原因で、咳嗽、喘鳴、息切れ、胸部絞扼感、疼痛または圧等の症状を経験する（Ｏｈｔａ， Ｎａｇａｓｅ ｅｔ ａｌ． ２０１７）。重度喘息を有する一部の患者は、経口グルココルチコイドありまたはなしの高用量吸入グルココルチコイドによる連続的処置にもかかわらず、持続性好酸球性炎症に関連する増悪を高頻度に有する。従来の処置に応答しない難治性（ｒｅｆｒａｃｔｉｌｅ）喘息患者の一定のパーセンテージは、非好酸球、非Ｔｈ２細胞集団が原因である可能性が最も高い重度症状を有する。ＴＳＬＰ発現は、喘息患者の気道において、健康対照の気道におけるよりも高く、そのレベルは、Ｔｈ２サイトカインおよびケモカイン発現ならびに疾患重症度と相関する（Ｇａｕｖｒｅａｕ， Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。さらに最近、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合するヒト抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ_２抗体であるテゼペルマブ（ＡＭＧ １５７）は、制御されない喘息のために臨床試験中である（Ｃｏｍｅａｕ， ＤＥＳＭＥＤＴ ｅｔ ａｌ． ２００６）（Ｃｏｍｅａｕ， Ｓｍｏｔｈｅｒｓ ｅｔ ａｌ． ２０１２）（Ｃｏｒｒｅｎ， Ｐａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ． ２０１７）。

ＴＳＬＰ標的化の他に、ＩＬ－５に対して誘導された３種のｍＡｂが、重度喘息および好酸球性表現型を有する患者のために承認されており、メポリズマブおよびレスリズマブは、ＩＬ－５に直接的に結合し、ベンラリズマブは、ＩＬ－５受容体に結合する（Ｏｒｔｅｇａ， Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ． ２０１４）（Ｃａｓｔｒｏ， Ｚａｎｇｒｉｌｌｉ ｅｔ ａｌ． ２０１５）（Ｂｌｅｅｃｋｅｒ， ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ ｅｔ ａｌ． ２０１６）。Ｉｌ－４受容体アルファ鎖に結合し、ＩＬ－４およびＩＬ－１３の両方の結合を防止する抗体であるデュピルマブは、中等度から重度の好酸球性喘息を有する患者のために承認された（Ｃａｓｔｒｏ， Ｃｏｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ． ２０１８）。注目すべきことに、これらの治療抗体は全て、増加するレベルのＴ２バイオマーカーを有する患者において、より低いレベルを有する患者と比べてより効果的であると思われる。

他の非アレルギー性疾患およびいくつかの線維性状態におけるＴＳＬＰの蔓延も、標的化療法のための正当化として考慮されるべきである（Ｙｉｎｇ， Ｚｈａｎｇ ２０１５）。自己免疫性疾患である全身性硬化症において、ＴＳＬＰは、血管周囲区域および皮膚の免疫細胞に高度に発現される。ＴＳＬＰは、全身性硬化症患者の皮膚性上皮細胞、マスト細胞および線維芽細胞において上方調節される（Ｕｓａｔｅｇｕｉ， Ｃｒｉａｄｏ ｅｔ ａｌ． ２０１３）。ＴＳＬＰおよびその受容体は、重度線維性肺疾患である特発性肺線維症患者の肺に強く発現される（Ｄａｔｔａ， Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１３）。線維性皮膚疾患において、真皮線維芽細胞は、ケロイド組織においてＴＧＦβに応答して高レベルのＴＳＬＰを産生する。

治療標的としてのＴＳＬＰに対するさらなる支持は、ＴＳＬＰが、種々の腫瘍の惹起および進行に役割を有するという知見から得られる。そのような腫瘍は、固形腫瘍（乳房、結腸および膵臓等）と共に血液学的腫瘍（Ｂ細胞急性リンパ球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）等）を含む（Ｃｏｒｒｅｎ， Ｚｉｅｇｌｅｒ ２０１９）。Ｔｈ２型応答を呈する腫瘍は一般に、優勢にＴｈ型応答を有する腫瘍よりも悪い予後を有する。腫瘍細胞は、がん関連線維芽細胞によるＴＳＬＰ発現に要求されるＩｌ－１αおよびＩＬ－１βを分泌し、腫瘍および腫瘍微小環境が、ＴＳＬＰの誘導において重要であることを示唆する。ヒト子宮頸部癌細胞、胃および卵巣がんによる研究も、腫瘍および間質に浸潤する造血細胞ならびに腫瘍それ自体の間にＴＳＬＰ媒介性クロストークが存在することの証拠を提供する。

ＴＳＬＰは、がんに重要な役割を有するが、腫瘍促進（ｐｒｏ－ｔｕｍｏｒ）因子または抗腫瘍因子としてのその機能は、腫瘍の型に依存する。転移性乳がんにおけるＴＳＬＰは、集中的に研究が為されている分野であるが、マウスモデルおよびヒト乳房腫瘍細胞系において矛盾した知見が見られた。同様に、皮膚腫瘍におけるＴＳＬＰの役割は、２つに分かれている。Ｂ－ＡＬＬにおけるＴＳＬＰの役割は、予後不良の患者の５０～６０％に発生する、ＴＳＬＰシグナル伝達経路の構成成分をコードする遺伝子における変異による遺伝的病変の存在によって複雑化されている（Ｃｏｒｒｅｎ， Ｚｉｅｇｌｅｒ ２０１９）。

これらの観察は、ヒト疾患におけるＴＳＬＰの重要な役割を示唆し、ＴＳＬＰおよびＴＳＬＰ受容体シグナル伝達経路の破壊は、有効な処置が欠如している疾患のための臨床利益を有し得る。喘息については、例として、喘息関連症状が原因の死亡率は、世界的に年間２５０，０００人前後であり、この数は、２０２５年までに１億を超えるまで伸びると予測される（Ｐａｗａｎｋａｒ ２０１４）。アレルギー性喘息患者は、糖尿病、肥満、心血管疾患、胃食道疾患等の他の状態を有することが多く、より複雑化されたより悪い転帰をもたらす。喘息患者の約７０％はまた、アレルギーを有する。アレルギー性疾患は、アナフィラキシー、食物アレルギー、ある特定の形態の喘息、鼻炎、結膜炎、血管浮腫、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、湿疹、好酸球性食道炎を含む好酸球性障害、ならびに薬物および昆虫アレルギーを含む（Ｐａｗａｎｋａｒ ２０１４）（Ｋａｙ ２００１）。
高い医療費、罹患率、クオリティ・オブ・ライフに対する影響、常習的欠勤、より不振な勤務成績、アレルギー性および非アレルギー性疾患を有する患者人口の増加のため、疑いの余地なく、Ｔｈ２サイトカイン関連炎症を低下させる必要性が著しくある。ＴＳＬＰ受容体結合およびシグナル伝達に干渉し、所望の有効性および薬物動態プロファイルを有する中和抗体分子等の薬剤は、慢性炎症性状態に関連する（Ｔ２高およびＴ２低の両方の）症状を阻害するための満たされていない必要性である。

Ｃｏｒｒｅｎ，Ｊ．およびＺｉｅｇｌｅｒ，Ｓ．Ｆ． Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１９）２０：１６０３～１６０９ Ｐａｗａｎｋａｒ，Ｒ． Ｗｏｒｌｄ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１４）７（１）：１～３ Ｋａｙ，Ａ．Ｂ． Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００１）３４４（１）：３０～３７

本開示の概要
本開示は、胸腺間質性リンパ球新生因子、ＴＳＬＰに特異的に結合し、その少なくとも１種の活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低下するかまたはそれに対して干渉するモノクローナル抗体およびその抗原結合性断片を提供する。本明細書に開示されている抗体またはその断片によって中和、阻害、遮断、抑止、低下または干渉され得るＴＳＬＰの活性は、ＴＳＬＰによるその受容体複合体の活性化の中和、その他を含むがこれらによって限定されない。実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、例えば、マウスモノクローナル抗体またはヒト化抗体である。実施形態では、抗体は、抗原結合抗体断片である。

本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列、および配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む、ＴＡＶＯ２０２として指定された、ヒトＴＳＬＰに対するマウスモノクローナル抗体を提供する。

本開示は、それぞれ配列番号３、配列番号４および配列番号５として示すアミノ酸配列を有する、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３として指定された、３種の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＴＡＶＯ２０２の重鎖可変領域を提供する。

本開示は、それぞれ配列番号６、配列番号７および配列番号８として示すアミノ酸配列を有する、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３として指定された、３種のＣＤＲを含むＴＡＶＯ２０２の軽鎖可変領域を提供する。

本開示は、配列番号９として示すアミノ酸配列を有する、２０２Ｈ２として指定された、ＴＡＶＯ２０２の１種のヒト化重鎖可変領域を提供する。

本開示は、それぞれ配列番号１０および配列番号１１として示すアミノ酸配列を有する、２０２Ｌ３および２０２Ｌ４として指定された、ＴＡＶＯ２０２の２種のヒト化軽鎖可変領域を提供する。

実施形態では、本開示は、それぞれ配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８に従う、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むヒト化抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号９に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。ある実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１０または配列番号１１に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。

非限定的な例として、本開示は、配列番号１２として示す重鎖配列および配列番号１３として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ６２６４として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ３とヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第１のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１２として示す重鎖配列および配列番号１４として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ６２６５として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ４とヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第２のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１５として示す重鎖配列および配列番号１３として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ７２６４として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ３とＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５Ｌ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第３のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１５として示す重鎖配列および配列番号１４として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ７２６５として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ４とＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５Ｌ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第４のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１６として示す重鎖配列および配列番号１３として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ９７６４として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ３とＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第５のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１６として示す重鎖配列および配列番号１４として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ９７６５として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ４とＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第６のヒト化抗体を提供する。

抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体は、全長ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４抗体であってもよい、または（例えば、ヒト）ＴＳＬＰに特異的に結合し、ＴＳＬＰの少なくとも１種の活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低下するかもしくはそれに対して干渉する、Ｆ_ａｂ、Ｆ（_ａｂ’）_２もしくはｓｃＦｖ断片を含む抗原結合性部分のみを含むことができる。抗体骨格は、機能性に影響を与えるように、例えば、残留するエフェクター機能を排除するように改変することができる。

本開示はまた、野生型抗体と比較して、延長された半減期を有する抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を提供する。半減期の延長は、親野生型抗体と比較して、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４ＡおよびＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａから選択されるいずれか１セットの変異を有する抗体のＣ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３ドメインを操作することにより実現することができ、残基ナンバリングはＥＵインデックスに従う。

本開示はまた、残基２２２～２３７（ＥＵナンバリング）の間でまたは当該残基において野生型抗体を切断するプロテアーゼによるタンパク質分解に対して増強された抵抗性を有する抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を提供する。タンパク質分解に対する抵抗性は、親野生型抗体と比較して、ヒンジ領域におけるＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ変異と、Ｇ２３６欠失を操作することにより実現することができ、残基ナンバリングはＥＵインデックスに従う。

本開示はまた、本開示のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

本開示はまた、本開示の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を産生する方法であって、抗体が発現される条件下で本開示の宿主細胞を培養するステップと、抗体を精製するステップとを含む方法を提供する。

本開示はまた、本開示の抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

本開示はまた、抗ＴＳＬＰ抗体の結合を検出する方法を提供する。

本開示はまた、ＴＳＬＰのその受容体ＴＬＰＲへの結合を遮断する方法であって、ＴＳＬＰＲを、本明細書に提供される抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片のうちいずれか１種と接触させるステップを含む方法を提供する。

本開示はまた、喘息を処置する方法であって、必要がある被験体に、治療有効量の、ＴＳＬＰに対する提供される抗体を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示はまた、ＣＯＰＤおよび特発性肺線維症を処置する方法であって、必要がある被験体に、治療有効量の、ＴＳＬＰに対する提供される抗体を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示はまた、アトピー性皮膚炎の症状を処置する方法であって、必要がある被験体に、治療有効量の、ＴＳＬＰに対する提供される抗体を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示はまた、湿疹の症状を処置する方法であって、必要がある被験体に、治療有効量の、ＴＳＬＰに対する提供される抗体を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示はまた、好酸球性食道炎等の他のアレルギー性状態の症状を処置する方法であって、必要がある被験体に、治療有効量の、ＴＳＬＰに対する提供される抗体を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示はまた、炎症性腸疾患の症状を処置する方法であって、必要がある被験体に、治療有効量の、ＴＳＬＰに対する提供される抗体を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示はまた、全身性硬化症、全身性特発性肺線維症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）およびケロイド疾患等の線維性状態を処置する方法であって、必要がある被験体に、治療有効量の、ＴＳＬＰに対する提供される抗体を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示はまた、がん、すなわち、乳がん、膵がん、結腸直腸がん、リンパ芽球性白血病、頭頸部がんを処置する方法であって、必要がある被験体に、治療有効量の、ＴＳＬＰに対する提供される抗体を投与するステップを含む方法を提供する。

図１：マウスモノクローナル抗ヒトＴＳＬＰ抗体ＴＡＶＯ２０２による（Ａ）ヒトおよび（Ｂ）マウスＴＳＬＰへの結合。

図２：（Ａ）．ヒトＴＳＬＰ受容体複合体をトランスフェクトされたＢＡＦ細胞におけるヒトＴＳＬＰによる刺激の際の細胞増殖の応答。（Ｂ）．ＴＡＶＯ２０２によるヒトＴＳＬＰ駆動細胞増殖の用量依存的な中和。

図３：（Ａ）．ルシフェラーゼレポーターアッセイにおけるヒトＴＳＬＰによる刺激の際の用量依存的なＳＴＡＴ５レポーター遺伝子発現。（Ｂ）．ヒトＴＳＬＰ駆動レポーター遺伝子発現アッセイにおけるＴＡＶＯ２０２によるレポーター遺伝子発現の用量依存的な中和。

図４：ヒト化Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌバリアントを有するＴＡＶＯ２０２の重鎖および軽鎖可変領域の配列アライメント。ヒト化抗体は、ヒト化Ｖ_Ｈバリアント（２０２Ｈ２）および２種のヒト化Ｖ_Ｌバリアント（２０２Ｌ３および２０２Ｌ４）を異なるＩｇＧ Ｆｃと共に対形成することにより形成することができる。

図５：（Ａ）非還元および（Ｂ）還元条件下における、例としてのヒト化抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析。（Ｃ）．例としての抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）解析。

図６：例としてのヒト化抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体による（Ａ）ヒトおよび（Ｂ）カニクイザルＴＳＬＰへの結合。

図７：ＳＴＡＴ５レポーター遺伝子発現アッセイにおける、例としてのヒト化抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体によるヒトＴＳＬＰ駆動レポーター遺伝子活性化の中和。

図８：ヒト化抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体による、２名のドナーから単離された樹状細胞からのヒトＴＳＬＰ駆動ＣＣＬ１７放出の中和。

図９：半減期延長Ｆｃ変異を有するヒト化抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体ＴＡＶＯ９７６５およびこのような変異を欠如するＴＡＶＯ７２６５による、ｐＨ６．０におけるマウスＦｃＲｎへの結合。

図１０：カニクイザルにおける抗ＴＳＬＰ抗体のＰＫプロファイル。半減期延長のためのＦｃ変異を有する抗ＴＳＬＰ抗体（ＴＡＶＯ９７６５）を、カニクイザルへと４ｍｇ／ｋｇ静脈内用量として投与した。血漿濃度は、投薬後最大３５日目の時点まで表示される。

本開示の詳細な説明
定義
本明細書に使用されている用語法は、単に実施形態を説明することを目的としており、限定を意図するものではない。他に規定がなければ、本明細書に使用されているあらゆる技術および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本開示を記載および特許請求することにおいて、次の用語法が使用されるであろう。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容がそれ以外のことを明らかに指示しない限り、複数形の指示対象を含む。よって、例えば、「１つの細胞（ａ ｃｅｌｌ）」の参照は、２つまたはそれよりも多い細胞の組合せ、その他を含む。

「抗体」は、広義で企図され、マウス、ヒト、ヒト化およびキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗体断片、二特異性または多特異性抗体、二量体、四量体または多量体抗体、単鎖抗体、ドメイン抗体、ならびに要求される特異性の抗原結合部位を含む他のいずれかの改変された構成の免疫グロブリン分子を含む免疫グロブリン分子を含む。「全長抗体分子」は、ジスルフィド結合によって相互接続された２本の重鎖（ＨＣ）および２本の軽鎖、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）で構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および重鎖定常領域（ドメインＣ_Ｈ１、ヒンジ、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３で構成される）で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）および軽鎖定常領域（Ｃ_Ｌ）で構成される。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）を散在させた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名された高頻度可変性の領域へとさらに細分することができる。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲセグメントで構成されており、これらは、アミノ末端からカルボキシル末端へと、次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４で配置されている。

「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、抗体における「抗原結合部位」である。ＣＤＲは、様々な用語を使用して定義することができる：（ｉ）相補性決定領域（ＣＤＲ）は、３個はＶ_Ｈにあり（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、３個はＶ_Ｌにあり（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）、配列可変性に基づく（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ １９７０）（Ｋａｂａｔ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ ｅｔ ａｌ． １９９１）；（ｉｉ）「高頻度可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」は、３個はＶ_Ｈにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３個はＶ_Ｌにあり（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ １９８７）によって定義される通り、構造が高頻度可変である抗体可変ドメインの領域を指す。Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位の標準化されたナンバリングおよび定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶおよびＩＭＧＴ描写の間の一致は、Ｌｅｆｒａｎｃら（Ｌｅｆｒａｎｃ， Ｐｏｍｍｉｅ ｅｔ ａｌ． ２００３）に記載されている。用語「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」および「ＬＣＤＲ３」は、本明細書で使用される場合、本明細書にそれ以外のことが明確に記述されていない限り、上記の方法、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴのいずれかによって定義されるＣＤＲを含む。

免疫グロブリンは、重鎖定常領域アミノ酸配列に応じて、５種の主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭに割り当てることができる。ＩｇＡおよびＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ_１、ＩｇＡ_２、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３およびＩｇＧ_４としてさらに細分類される。いずれかの脊椎動物種の抗体軽鎖は、その定常領域のアミノ酸配列に基づき、２種の明らかに別個の型、すなわちカッパー（κ）およびラムダ（λ）の一方に割り当てることができる。

「抗体断片」は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２および３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２および３、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）、または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）等の重鎖および／または軽鎖抗原結合部位を保持する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗体断片は、周知のＦ_ａｂ、Ｆ（_ａｂ’）２、Ｆ_ｄおよびＦ_ｖ断片、ならびに１個のＶ_Ｈドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）を含む。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメインは、合成リンカーを介して一体に連結して、Ｖ_Ｈ／Ｖ_Ｌドメインが分子内で対形成し得る様々な型の単鎖抗体設計を形成することができるか、またはＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメインが別々の単鎖抗体構築物によって発現される場合は分子間で対形成し得、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）またはダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）等の一価抗原結合部位を形成し得る：例えば、国際特許公開番号ＷＯ１９９８／４４００１、ＷＯ１９８８／０１６４９、ＷＯ１９９４／１３８０４およびＷＯ１９９２／０１０４７に記載されている。

「モノクローナル抗体」は、抗体重鎖からのＣ末端リシンの除去等の可能な周知の変更を除いて、各重および各軽鎖に単一のアミノ酸組成を有する抗体集団を指す。モノクローナル抗体は典型的に、二特異性モノクローナル抗体が２種の別個の抗原エピトープに結合することを除いて、１種の抗原エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、抗体集団内に不均一なグリコシル化を有することができる。モノクローナル抗体は、単一特異性もしくは多特異性、または一価、二価もしくは多価であってもよい。二特異性抗体は、モノクローナル抗体という用語の中に含まれる。

「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない、抗体または抗体断片を指す（例えば、ＴＳＬＰに例えば特異的に結合する単離された抗体は、ＴＳＬＰ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。

「単離された抗体」は、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％純粋である抗体等、より高い純度まで単離された抗体を包含する。

「ヒト化抗体」は、抗原結合部位が非ヒト種に由来し、可変領域フレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する、抗体を指す。ヒト化抗体はフレームワークにおける置換を含むことができ、フレームワークが発現されたヒト免疫グロブリンまたはヒト免疫グロブリン生殖系列遺伝子配列の正確なコピーとならなくてよい。

「ヒト抗体」は、フレームワークおよび抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重および軽鎖可変領域を有する抗体を指し、ヒト被験体に投与されたときに、最小の免疫応答を有するように最適化されている。抗体が、定常領域または定常領域の部分を含有する場合、定常領域はまた、ヒト起源の配列に由来する。

本明細書全体にわたる抗体定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、他に明確に記述されていない限り、Ｋａｂａｔらに記載されているＥＵインデックスに従う（Ｋａｂａｔ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ ｅｔ ａｌ． １９９１）。

従来の１文字および３文字アミノ酸コードが、表１に示す通り、本明細書で使用されている。
表１．

ポリペプチド（例えば、抗原結合タンパク質または抗体）の「バリアント」は、別のポリペプチド配列と比べて、１個または複数のアミノ酸残基が、アミノ酸配列に挿入された、欠失されたおよび／または置換されたアミノ酸配列を含む。バリアントは、本明細書に提供される抗体もしくは断片、または列挙されるＤＮＡもしくはアミノ酸配列を有する抗体もしくは断片に対して列挙されているパーセント同一性を有する抗体およびその断片を含む。

用語「同一性」は、配列の整列および比較によって決定される、２種もしくはそれよりも多いポリペプチド分子または２種もしくはそれよりも多い核酸分子の配列の間の関係性を指す。「パーセント同一性」、「パーセント相同性」、「配列同一性」または「配列相同性」その他は、比較される分子におけるアミノ酸またはヌクレオチドの間の同一残基のパーセントを意味し、これは、比較されている分子の最小のサイズに基づき計算される。このような計算のため、整列におけるギャップ（あるとすれば）が、好ましくは、特定の数理モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって取り組まれる。整列された核酸またはポリペプチドの同一性の計算に使用することができる方法は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， （Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．， ｅｄ．）， １９８８， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ， （Ｓｍｉｔｈ， Ｄ． Ｗ．， ｅｄ．）， １９９３， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ， Ｐａｒｔ Ｉ， （Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ａ． Ｍ．， ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ｈ． Ｇ．， ｅｄｓ．）， １９９４， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ： Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ， Ｇ．， １９８７， Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ， （Ｇｒｉｂｓｋｏｖ， Ｍ． ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．， ｅｄｓ．）， １９９１， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｍ． Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， １９８８， ＳＩＡＭ Ｊ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ． ４８：１０７３に記載されている方法を含む。パーセント同一性の計算において、比較されている配列は、典型的に、配列の間で最大のマッチが得られる仕方で整列される。

哺乳動物ＩｇＧ重鎖の定常領域配列は、配列においてＣ_Ｈ１－ヒンジ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３として指定される。ＩｇＧの「ヒンジ」、「ヒンジ領域」または「ヒンジドメイン」は、一般に、ＥＵインデックスに従ったヒトＩｇＧ_１のＧｌｕ２１６を含み、Ｐｒｏ２３０で終結するものとして定義されるが、機能的には、鎖の可撓性部分は、Ｇｌｕ２１６～Ｇｌｙ２３７等、上部および下部ヒンジ領域と命名された追加的な残基を含むと考慮することができ、下部ヒンジは、概してＦ_ｃγＲ結合の原因となるＦ_ｃ領域の残基２３３～２３９と称される。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間Ｓ－Ｓ結合を形成する最初および最後のシステイン残基を置くことにより、ＩｇＧ_１配列と整列することができる。ＥＵインデックスに従ってナンバリングされる境界は、僅かに変動し得るが、Ｃ_Ｈ１ドメインは、Ｖ_Ｈドメインにおよび免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域のアミノ末端に隣接し、免疫グロブリン重鎖の第１（最もアミノ末端側）の定常領域、例えば、約ＥＵ位置１１８～２１５を含む。Ｆ_ｃドメインは、アミノ酸２３１からアミノ酸４４７に延在する；Ｃ_Ｈ２ドメインは、約Ａｌａ２３１からＬｙｓ３４０またはＧｌｙ３４１に、Ｃ_Ｈ３は、約Ｇｌｙ３４１またはＧｌｎ３４２からＬｙｓ４４７に延在する。Ｃ_Ｈ１領域のＩｇＧ重鎖定常領域の残基は、Ｌｙｓで終結する。Ｆ_ｃドメイン含有分子は、抗体定常領域の少なくともＣ_Ｈ２ドメインおよびＣ_Ｈ３ドメインを含み、したがって、ＩｇＧ重鎖定常領域の少なくとも約Ａｌａ２３１からＬｙｓ４４７の領域を含む。Ｆ_ｃドメイン含有分子は、ヒンジ領域の少なくとも部分を必要に応じて含むことができる。

「エピトープ」は、抗体が特異的に結合する抗原の部分を指す。エピトープは典型的に、アミノ酸または多糖側鎖等の部分の化学的に活性な（極性、非極性または疎水性等）表面グルーピング（ｓｕｒｆａｃｅ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）からなり、特異的な三次元構造特徴と共に、特異的な電荷特徴を有することができる。エピトープは、コンフォメーション空間単位を形成する連続的および／または非連続的アミノ酸で構成され得る。非連続的エピトープのため、抗原の直鎖状配列の異なる部分由来のアミノ酸は、タンパク質分子のフォールディングにより、三次元空間において近付く。抗体「エピトープ」は、エピトープの同定に使用される方法論に依存する。

「リーダー配列」は、本明細書で使用される場合、ヒトＢ２Ｍリーダーを含む、哺乳動物細胞によってプロセシングされ得るいずれかのシグナルペプチドを含む。このような配列は、当技術分野で周知である。

用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書で互換的に使用され、コードされたおよびコードされていないアミノ酸、化学的または生化学的に改変または誘導体化されたアミノ酸、ならびに改変されたペプチド骨格を有するポリペプチドを含むことができる、いずれかの長さのアミノ酸のポリマー形態を指す。これらの用語は、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、タンパク質分解性切断その他等、ポリペプチドの同時翻訳（例えば、シグナルペプチド切断）および翻訳後改変を有するポリペプチドも含む。さらに、本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持するのであれば、ネイティブ配列に対して欠失、付加および置換（当業者にとって公知の通り、一般に保存的な性質の）等の改変を含むタンパク質を指す。これらの改変は、部位特異的変異誘発による等、計画的であってもよい、あるいはタンパク質を産生する宿主の変異またはＰＣＲ増幅もしくは他の組換えＤＮＡ法が原因のエラーによる等、偶発的であってもよい。

用語「組換え」は、核酸分子を説明するために本明細書で使用される場合、その起源または操作によって、それが自然界では関連するポリヌクレオチド配列の全体または部分と関連していない、ゲノム、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成および／または合成起源のポリヌクレオチドを意味する。用語「組換え」は、宿主細胞またはウイルスに関して使用される場合、組換えポリヌクレオチドが導入された宿主細胞またはウイルスを指す。組換えはまた、材料（例えば、細胞、核酸、タンパク質またはベクター）を参照して、当該材料が、異種材料（例えば、細胞、核酸、タンパク質またはベクター）の導入によって改変されたことを指すように本明細書で使用される。

用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」および「核酸分子」は、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかであるヌクレオチドのポリマー形態を含むように本明細書で互換的に使用される。この用語は、分子の一次構造のみを指す。

「ベクター」は、生物システム内で重複され得る、またはこのようなシステム間で移動され得るポリヌクレオチドを指す。ベクターポリヌクレオチドは典型的に、ベクターを重複することができる生物学的構成成分を利用して、細胞、ウイルス、動物、植物および再構成された生物システム等の生物システムにおけるこのようなポリヌクレオチドの重複または維持を容易にするように機能する、複製起点、ポリアデニル化シグナルまたは選択マーカー等のエレメントを含有する。ベクターポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖の、ＤＮＡもしくはＲＮＡ分子、ｃＤＮＡ、またはこれらのハイブリッドであってもよい。

「発現ベクター」は、発現ベクター中に存在するポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの翻訳を方向付けるために、生物システムまたは再構成された生物システムにおいて利用され得るベクターを指す。

「～価（ｖａｌｅｎｔ）」は、分子中の抗原に特異的な、特定化された数の結合部位の存在を指す。したがって、用語「一価」、「二価」、「四価」および「六価」は、分子中の抗原に特異的な、それぞれ１、２、４および６個の結合部位の存在を指す。

本明細書で使用される場合、核酸配列、タンパク質またはポリペプチドに関して使用される用語「異種」は、これらの分子が、異種核酸配列、タンパク質またはポリペプチドが得られた細胞において天然に存在しないことを意味する。例えば、ヒト細胞ではない細胞に挿入されたヒトポリペプチドをコードする核酸配列は、当該文脈において異種核酸配列である。異種核酸は、異なる生物または動物種に由来することができる一方で、このような核酸は、異種となるのに、別々の生物種に必ずしも由来しない。例えば、一部の実例では、合成核酸配列またはそれにコードされるポリペプチドは、それが導入される細胞が、当該合成核酸を以前に含有していなかったという点において、それが導入される細胞にとって異種であってもよい。したがって、例えば、合成核酸配列またはそれにコードされるポリペプチドの１種または複数の構成成分が、本来ヒト細胞から得られた場合であっても、合成核酸配列またはそれにコードされるポリペプチドは、ヒト細胞にとって異種とみなすことができる。

「宿主細胞」は、本明細書で使用される場合、ｉｎ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｖｉｔｒｏ真核細胞、または単細胞の実体として培養された多細胞生物由来の細胞（例えば、細胞系）を表示し、このような真核細胞は、核酸（例えば、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクター）のレシピエントとして使用することができるまたは使用されており、核酸によって遺伝子改変された元の細胞の子孫を含む。単一細胞の子孫が、天然、偶発的または計画的変異が原因で、必ずしも、元の親と形態またはゲノムもしくは総ＤＮＡ含量（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）において完全に同一でなくてよいことが理解される。

「組換え宿主細胞」（「遺伝子改変された宿主細胞」とも称される）は、異種核酸、例えば、発現ベクターが導入された宿主細胞である。例えば、遺伝子改変された真核宿主細胞は、適した真核宿主細胞への、異種核酸、例えば、真核宿主細胞にとって外来である外因性核酸または真核宿主細胞において正常には見出されない組換え核酸の導入によって遺伝子改変される。

「特異的結合」または「特異的に結合する」または「結合する」は、他の抗原に対するよりも優れた親和性での特異的抗原への抗体結合を指す。典型的には、結合に関する平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）が、約１×１０^－８Ｍまたはそれ未満、例えば、約１×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約１×１０^－１０Ｍもしくはそれ未満、約１×１０^－１１Ｍもしくはそれ未満または約１×１０^－１２Ｍもしくはそれ未満であり、典型的には、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に関するそのＫ_Ｄの多くとも百分の１のＫ_Ｄによる場合、抗体は、「特異的に結合する」。Ｋ_Ｄは、標準手順を使用して測定することができる。

本明細書で使用される場合、用語「処置」、「処置すること」その他は、所望の薬理学および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に予防するとの観点から予防的であってもよい、ならびに／または疾患および／もしくは疾患に起因し得る有害効果の部分的もしくは完全治癒の観点から治療的であってもよい。

「処置」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物、例えば、ヒトにおける疾患のいずれかの処置を網羅し、（ａ）疾患の素因がある可能性があるが、疾患を有するとは未だ診断されていない被験体において疾患が発生するのを防止すること；（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その発症を抑止すること；および（ｃ）疾患を緩和すること、すなわち、疾患の退縮を引き起こすことを含む。

本明細書で互換的に使用される用語「個体」、「被験体」、「宿主」および「患者」は、マウス（例えば、ラット、マウス）、ウサギ類（例えば、ウサギ）、非ヒト霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）等を含むがこれらに限定されない、哺乳動物を指す。

「治療有効量」または「効果的な量」は、疾患を処置するために哺乳動物または他の被験体に投与された場合に、疾患のためのこのような処置に影響を与えるのに十分である、薬剤の量または２種の薬剤の組み合わせた量を指す。「治療有効量」は、薬剤、疾患およびその重症度、ならびに処置されるべき被験体の年齢、体重等に応じて変動するであろう。

本開示についてさらに説明する前に、説明されている実施形態は、当然ながら変動し得るため、本開示が、説明されている実施形態に限定されないことを理解されたい。本開示の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書に使用されている用語法が、単に実施形態を説明することを目的としており、限定を意図するものではないことも理解されたい。

抗ＴＳＬＰ抗体および抗原結合性断片の組成
ＴＳＬＰに特異的に結合し、ＴＳＬＰの少なくとも１種の活性、例えば、ＴＳＬＰのその受容体複合体に対する機能活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低下するかまたはそれに対して干渉する、モノクローナル抗体およびその抗原結合性断片が本明細書において記載されている。抗ＴＳＬＰ抗体および抗原結合性断片は、被験体に治療的に投与して、ＴＳＬＰ媒介性疾患を処置することができる。

本開示は、ヒト胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）に特異的に結合し、その少なくとも１種の活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低下するかまたはそれに対して干渉する、マウスハイブリドーマスクリーニングから同定された、ＴＡＶＯ２０２として指定された、マウスモノクローナル抗体を提供する。ＴＡＶＯ２０２は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列、および配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む。ＴＡＶＯ２０２の重鎖可変領域は、それぞれ配列番号３、配列番号４および配列番号５として示すアミノ酸配列を有する、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３として指定された、３種の相補性決定領域を含む。ＴＡＶＯ２０２の軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６、配列番号７および配列番号８として示すアミノ酸配列を有する、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３として指定された、３種の相補性決定領域を含む。

抗ヒトＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ２０２の重鎖可変領域配列（配列番号１）

重鎖の３種のＣＤＲの配列に下線を引く。

抗ヒトＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ２０２の軽鎖可変領域配列（配列番号２）

軽鎖の３種のＣＤＲの配列に下線を引く。

抗ヒトＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ２０２のＨＣＤＲ１配列（配列番号３）

抗ヒトＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ２０２のＨＣＤＲ２配列（配列番号４）

抗ヒトＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ２０２のＨＣＤＲ３配列（配列番号５）

抗ヒトＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ２０２のＬＣＤＲ１配列（配列番号６）

抗ヒトＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ２０２のＬＣＤＲ２配列（配列番号７）

抗ヒトＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ２０２のＬＣＤＲ３配列（配列番号８）

マウス抗ヒトＴＳＬＰ抗体ＴＡＶＯ２０２は、マウスＣＤＲをヒト生殖系列足場にグラフトすることによってヒト化することができる。いくつかの肝要なマウス残基は、復帰変異によって保存されて、免疫原性を最小化しつつ、より高い安定性およびより優れた発現を達成する。ＴＡＶＯ２０２のために、１種のヒト化ＶＨバリアント（２０２Ｈ２）が、ＩＧＨＶ１－６９^＊０２に基づき設計され、２種のヒト化ＶＬバリアントが、ＩＧＫＶ１－９^＊０１に基づき２０２Ｌ３により、ＩＧＫＶ６－２１^＊０１に基づき２０２Ｌ４により設計され、２個の復帰変異はフレームワークに存在する。

前述に基づき、本開示は、配列番号９として示すアミノ酸配列を有する、２０２Ｈ２として指定された、ＴＡＶＯ２０２の１種のヒト化重鎖可変領域を提供する。

ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２配列（配列番号９）

ヒト化重鎖の３種のＣＤＲの配列に下線を引く。

本開示は、それぞれ配列番号１０および配列番号１１として示すアミノ酸配列を有する、２０２Ｌ３および２０２Ｌ４として指定された、ＴＡＶＯ２０２の２種のヒト化軽鎖可変領域を提供する。

ヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ３配列（配列番号１０）

ヒト化軽鎖の３種のＣＤＲの配列に下線を引く。

ヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ４配列（配列番号１１）

ヒト化軽鎖の３種のＣＤＲの配列に下線を引く。

非限定的な例として、ヒト化２０２Ｈ２重鎖可変領域ならびに２種のヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ３および２０２Ｌ４を、異なるＩｇＧ Ｆｃと共に対形成することにより、ＴＡＶＯ２０２のための６種のヒト化抗体を作製することができる（図４、表２）。
表２． 例示的な抗体

本開示は、配列番号１２として示す重鎖配列および配列番号１３として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ６２６４として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ３とヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第１のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１２として示す重鎖配列および配列番号１４として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ６２６５として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ４とヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第２のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１５として示す重鎖配列および配列番号１３として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ７２６４として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ３とＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５Ｌ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第３のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１５として示す重鎖配列および配列番号１４として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ７２６５として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ４とＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５Ｌ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第４のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１６として示す重鎖配列および配列番号１３として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ９７６４として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ３とＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第５のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１６として示す重鎖配列および配列番号１４として示す軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ９７６５として指定された、ヒト化重鎖可変領域２０２Ｈ２およびヒト化軽鎖可変領域２０２Ｌ４とＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、ＴＡＶＯ２０２のための第６のヒト化抗体を提供する。

２０２Ｈ２とＩｇＧ２ Ｆｃに基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体重鎖（配列番号１２）

重鎖の可変ドメインの配列に下線を引く。

２０２Ｌ３に基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体軽鎖（配列番号１３）

軽鎖の可変ドメインの配列に下線を引く。

２０２Ｌ４に基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体軽鎖（配列番号１４）

軽鎖の可変ドメインの配列に下線を引く。

２０２Ｈ２とＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５Ｌ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃに基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体重鎖（配列番号１５）

重鎖の可変ドメインの配列に下線を引く。Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５Ｌ変異を太字で示す。

２０２Ｈ２とＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃに基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体重鎖（配列番号１６）

重鎖の可変ドメインの配列に下線を引く。Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ変異を太字で示す。

本開示はまた、配列番号９として示すアミノ酸配列を有する２０２Ｈ２として指定されたＴＡＶＯ２０２の１種のヒト化重鎖可変領域と、それぞれ配列番号１０および配列番号１１として示すアミノ酸配列を有する２０２Ｌ３および２０２Ｌ４として指定されたＴＡＶＯ２０２の２種のヒト化軽鎖可変領域のうち１種を含む、ＦａｂまたはｓｃＦｖドメインを有することにより、いずれか２、３または４種のＴＳＬＰエピトープの係合を含むことができる、二特異性抗体または多特異性抗体の調製物を提供する。例えば、これは、２、３または４種のエピトープに係合することができる、ＦａｂもしくはｓｃＦｖドメイン２０２Ｈ２と２０２Ｌ３および２０２Ｈ２と２０２Ｌ４、または他のいずれかのドメイン並べ替えを有する二特異性抗体であってもよい。

本開示のＴＳＬＰ結合抗体および断片は、ＴＳＬＰに特異的に結合する十分な能力を保持する抗原結合性断片を包含する。ＴＳＬＰ結合性断片は、本明細書で使用される場合、抗体のいずれか３個またはそれよりも多い連続的アミノ酸（例えば、４個もしくはそれよりも多い、５個もしくはそれよりも多い、６個もしくはそれよりも多い、８個もしくはそれよりも多い、またはさらには１０個もしくはそれよりも多い連続的アミノ酸）を含むことができ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦ（ｖ）断片、あるいは個々の軽もしくは重鎖可変領域またはその部分を包含する。これらの断片は、無傷抗体のＦ_ｃ断片を欠如し、無傷抗体よりも急速に循環から排除され、より低い非特異的組織結合を有することができる。これらの断片は、周知方法を使用して、例えば、パパイン（Ｆａｂ断片を産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生するため）等の酵素によるタンパク質分解性切断によって、無傷抗体から産生することができる。

本開示のＴＳＬＰ結合抗体および断片は、ＶＨおよびＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上に発現されるが、同じ鎖上の２個のドメインの間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用しており、これにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２個の抗原結合部位を創出する、二価抗体であるダイアボディを包含することもできる。

本開示のＴＳＬＰ結合抗体および断片は、ＴＳＬＰに結合する単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）を包含することもできる。ｓｃＦｖは、抗体軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）に作動可能に連結した抗体重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、一緒にまたは個々に、ＴＳＬＰに結合する結合部位を形成する。このようなＴＳＬＰ結合性断片は、例えば、抗体分子の重および軽鎖の可変部分ならびにアミノ酸ＧｌｙおよびＳｅｒで構成されている可撓性タンパク質リンカーの合成またはＰＣＲ媒介性増幅等、当技術分野で公知の方法によって調製することができる。その結果得られるＤＮＡ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉまたは哺乳動物細胞における発現のためにクローニングされる。発現されたＴＳＬＰ結合性断片は、宿主細胞から精製される。

本開示のＴＳＬＰ結合抗体および断片は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む全長抗体を包含する。例示的なヒトまたはヒト化抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体を含む。本抗体は、いずれかのクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧＡ、ＩｇＤ等）またはアイソタイプのものであってもよい。例えば、ヒト抗体は、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のうち少なくとも１種等、ＩｇＧ Ｆｃドメインを含むことができる。

一部の実例では、ＩｇＧ Ｆ_ｃドメインは、配列番号１７としてのＩｇＧ_１ Ｆ_ｃ配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実例では、ＩｇＧ Ｆ_ｃドメインは、配列番号１８としてのＩｇＧ_２ Ｆ_ｃ配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実例では、ＩｇＧ Ｆ_ｃドメインは、配列番号１９としてのＩｇＧ_３ Ｆ_ｃ配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実例では、ＩｇＧ Ｆ_ｃドメインは、配列番号２０としてのＩｇＧ_４ Ｆ_ｃ配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

Ｓ２２８Ｐ変異をＩｇＧ４抗体中に作製して、ＩｇＧ_４安定性を増強することができる。

ＩｇＧ_１ Ｆ_ｃ（配列番号１７）：

ＩｇＧ_２ Ｆ_ｃ（配列番号１８）：

ＩｇＧ_３ Ｆ_ｃ（配列番号１９）：

ＩｇＧ_４ Ｆ_ｃ（配列番号２０）

本抗ＴＳＬＰ抗体は、改変されたＦ_ｃ領域を含むことができ、改変されたＦ_ｃ領域は、野生型Ｆ_ｃ領域と比べて少なくとも１個のアミノ酸改変を含む。一部の実施形態では、本抗ＴＳＬＰ抗体は、改変されたＦ_ｃ領域を備えており、この場合、天然に存在するＦ_ｃ領域は、生物学的環境において親野生型抗体と比較して抗体の半減期、例えば、血清半減期またはｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイによって測定される半減期を延長するように改変されている。

単独でまたは組み合わせて作製することができる例示的な変異は、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｉ２５３Ａ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｐ２５７Ｉ、Ｔ３０７Ａ、Ｄ３７６Ｖ、Ｅ３８０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｓ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｈ４３５ＡおよびＨ４３５Ｒ変異、または前記Ｆｃ変異がない対照と比べて増強された循環抗体半減期を有するＦｃ）のＣ末端へのアルブミン結合ペプチドの融合である。

ある特定の実施形態では、半減期の延長は、配列番号２１としてのＩｇＧ１ Ｆ_ｃにおけるＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ変異を操作することにより実現することができ、残基ナンバリングはＥＵインデックスに従う（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ， Ｋｉｅｎｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００６）。

ある特定の実施形態では、半減期の延長は、配列番号２２としてのＩｇＧ_１ Ｆ_ｃにおけるＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異を操作することにより実現することもできる（Ｚａｌｅｖｓｋｙ， Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ ｅｔ ａｌ． ２０１０）。

ある特定の実施形態では、半減期の延長は、配列番号２３としてのＩｇＧ_１ Ｆ_ｃにおけるＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ変異を操作することにより実現することもできる（Ｈｉｎｔｏｎ， Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ． ２００６）。

ある特定の実施形態では、半減期の延長は、配列番号２４としてのＩｇＧ_１ Ｆ_ｃにおけるＮ４３４Ａ変異を操作することにより実現することもできる（Ｓｈｉｅｌｄｓ， Ｎａｍｅｎｕｋ ｅｔ ａｌ． ２００１）。

ある特定の実施形態では、半減期の延長は、配列番号２５としてのＩｇＧ_１ Ｆ_ｃにおけるＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ変異を操作することにより実現することもできる（Ｐｅｔｋｏｖａ， Ａｋｉｌｅｓｈ ｅｔ ａｌ． ２００６）。

抗体半減期の延長におけるＦ_ｃ操作の効果は、ネイティブＩｇＧ Ｆ_ｃを有する抗体と比べて、マウスのＰＫ試験において評価することができる。

Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ変異を有するＩｇＧ_１ Ｆ_ｃ（配列番号２１）

Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異を有するＩｇＧ_１ Ｆ_ｃ（配列番号２２）

Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ変異を有するＩｇＧ_１ Ｆ_ｃ（配列番号２３）

Ｎ４３４Ａ変異を有するＩｇＧ_１ Ｆ_ｃ（配列番号２４）

Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ変異を有するＩｇＧ_１ Ｆ_ｃ（配列番号２５）

一部の実施形態では、本抗ＴＳＬＰ抗体は、改変されたＦ_ｃ領域を備えており、この場合、天然に存在するＦ_ｃ領域は、残基２２２～２３７（ＥＵナンバリング）の間でまたは当該残基において野生型抗体を切断するプロテアーゼによるタンパク質分解に対する抗体の抵抗性を増強するように改変されている。

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃの下部ヒンジ領域（例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃの残基２２２～２３７と等価）に変異をさらに含み、内在性タンパク質分解活性を有する環境において、ネイティブＩｇＧ１抗体と比べて増加したプロテアーゼ抵抗性（例えば、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、カテプシンＧ、ペプシン、ＩｄｅＳまたはＧｌｕＶ８による分解に対する抵抗性）を可能にする。

ある特定の実施形態では、タンパク質分解に対する抵抗性は、配列番号２６として、親野生型抗体と比較して、ヒンジ領域においてＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ変異とＧ２３６欠失を操作することにより実現することができ、残基ナンバリングはＥＵインデックスに従う（Ｋｉｎｄｅｒ， Ｇｒｅｅｎｐｌａｔｅ ｅｔ ａｌ． ２０１３）。

Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ変異を有し、Ｇ２３６が欠失されたＩｇＧ_１ Ｆ_ｃ（配列番号２６）

エフェクター機能性が所望されない場合、本開示の抗体は、活性化Ｆ_ｃγ受容体（Ｆ_ｃγＲ）への抗体の結合を低下させる、および／またはＣ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）もしくはファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）等のＦ_ｃエフェクター機能を低下させる、少なくとも１個の変異を抗体Ｆ_ｃに導入するようにさらに操作することができる。

活性化Ｆ_ｃγＲへの抗体の結合を低下させ、その後、エフェクター機能を低下させるために変異され得るＦ_ｃ位置は、例えば、（Ｘｕ， Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ． ２０００）（Ｖａｆａ， Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ ｅｔ ａｌ． ２０１４）（Ｂｏｌｔ， Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ ｅｔ ａｌ． １９９３）（Ｃｈｕ， Ｖｏｓｔｉａｒ ｅｔ ａｌ． ２００８）（Ｓｈｉｅｌｄｓ， Ｎａｍｅｎｕｋ ｅｔ ａｌ． ２００１）に記載されている位置である。最小のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣ、Ｆｃ媒介性細胞活性化を伴うＦｃ変異は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４のためのシグマ変異としても記載された（Ｔａｍ， ＭｃＣａｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ． ２０１７）。

単独でまたは組み合わせて作製することができる例示的な変異は、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３またはＩｇＧ_４におけるＫ２１４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｇ２３６欠失、Ｖ２３４Ａ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｑ２６８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３２７Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ変異である。

ＡＤＣＣを低下させるために作製され得る例示的な組合せ変異は、ＩｇＧ_１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ_２におけるＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ_４におけるＦ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ_４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３またはＩｇＧ_４におけるＮ２９７Ａ、ＩｇＧ_２におけるＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、ＩｇＧ_１におけるＫ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、ＩｇＧ_２におけるＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ_１におけるＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、ＩｇＧ_１におけるＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、ＩｇＧ_１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ_４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、およびＩｇＧ_４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓである。ＩｇＧ_２由来の残基１１７～２６０およびＩｇＧ_４由来の残基２６１～４４７を有するＦ_ｃ等、ハイブリッドＩｇＧ_２／４ Ｆ_ｃドメインを使用することもできる。

一部の実施形態では、本抗ＴＳＬＰ抗体は、改変されたＦ_ｃ領域を備えており、この場合、天然に存在するＦ_ｃ領域は、Ｆ_ｃヘテロ二量体化による二特異性抗体の作製を容易にするように改変されている。

ある特定の実施形態では、Ｆｃヘテロ二量体化は、２種の親抗体におけるＦ４０５ＬおよびＫ４０９Ｒ変異を操作すること、ならびにＦａｂアーム交換として公知のプロセスにおける二特異性抗体の作製により実現することができる（Ｌａｂｒｉｊｎ， Ｍｅｅｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。

ある特定の実施形態では、Ｆｃヘテロ二量体化は、ノブ・イン・ホール（Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅ）戦略を容易にするためのＦｃ変異によって実現することもできる（例えば、国際公開番号ＷＯ２００６／０２８９３６を参照）。小型の側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、一方のＦ_ｃドメインに導入され、大型の側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、他方のＦ_ｃドメインに導入される。２本の重鎖の同時発現後に、「ノブ」を有する重鎖と「ホール」を有する重鎖との優先的相互作用の結果として、ヘテロ二量体が形成される（Ｒｉｄｇｗａｙ， Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ． １９９６）。

ノブおよびホールを形成する例示的なＦ_ｃ変異対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４ＳおよびＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖである。

ある特定の実施形態では、Ｆｃヘテロ二量体化は、静電気的にマッチした相互作用戦略を容易にするためのＦｃ変異によって実現することもできる（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ， Ｐｅｎｔｏｎｙ ｅｔ ａｌ． ２０１０）。変異は、米国特許公開番号ＵＳ２０１０／００１５１３３；米国特許公開番号ＵＳ２００９／０１８２１２７；米国特許公開番号ＵＳ２０１０／０２８６３７または米国特許公開番号ＵＳ２０１１／０１２３５３２に記載されている通り、一方のＦｃドメインに正に荷電した残基を、他方のＦｃドメインに負に荷電した残基を作製するように操作することができる。重鎖ヘテロ二量体化は、２個の変異したＦｃの間の静電気的にマッチした相互作用によって形成することができる。

保存的改変をさらに含む本開示の抗体は、本開示の範囲内にある。

「保存的改変」は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特徴に有意に影響を与えることも変更することもないアミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸置換、付加および欠失を含む。保存的置換は、アミノ酸が、同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、十分に定義されており、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、ベータ－分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および硫黄含有側鎖（システイン、メチオニン）を有するアミノ酸を含む。さらに、アラニンスキャニング変異誘発について以前に記載された通り（（ＭａｃＬｅｎｎａｎ， Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ． １９９８）；（Ｓａｓａｋｉ ａｎｄ Ｓｕｔｏｈ １９９８））、ポリペプチドにおけるいずれかのネイティブ残基をアラニンに置換することもできる。本開示の抗体に対するアミノ酸置換は、公知方法によって、例えば、ＰＣＲ変異誘発によって行うことができる（米国特許第４，６８３，１９５号）。その代わりに、バリアントのライブラリーは、例えば、ランダム（ＮＮＫ）または非ランダムコドン、例えば、１１種のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドンを使用して作製することができる。その結果得られる抗体バリアントは、本明細書に記載されているアッセイを使用して、その特徴について検査することができる。

本開示の抗体は、グリコシル化、異性化、脱グリコシルまたは天然に存在しない共有結合性改変、例えば、ポリエチレングリコール部分の付加（ペグ化）および脂質付加等のプロセスによって翻訳後改変することができる。このような改変は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで発生し得る。例えば、本開示の抗体は、ポリエチレングリコールにコンジュゲート（ＰＥＧ化）して、その薬物動態プロファイルを改善することができる。コンジュゲーションは、当業者にとって公知の技法によって実行することができる。ＰＥＧと治療抗体のコンジュゲーションは、機能に干渉することなく、薬力学を増強することが示された（Ｌｅｏｎｇ， ＤｅＦｏｒｇｅ ｅｔ ａｌ． ２００１、Ｙａｎｇ， Ｂａｓｕ ｅｔ ａｌ． ２００３、Ｋｎｉｇｈｔ， Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ． ２００４）。

本開示の抗体は、安定性、選択性、交差反応性、親和性、免疫原性または他の望ましい生物学的もしくは生物物理学的特性を改善するように改変することができ、これは、本開示の範囲内にある。抗体の安定性は、（１）その固有の安定性に影響を与える個々のドメインのコアパッキング、（２）ＨＣおよびＬＣ対形成に影響を与えるタンパク質／タンパク質界面相互作用、（３）極性および荷電残基の埋没、（４）極性および荷電残基のためのＨ結合ネットワーク；ならびに（５）分子内および分子間力の中でもとりわけ表面電荷および極性残基分布を含む、いくつかの因子によって影響される（Ｗｏｒｎ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ２００１）。潜在的な構造不安定化残基は、抗体の結晶構造に基づき、またはある特定の事例では分子モデリングによって同定することができ、抗体安定性における残基の効果は、同定された残基に変異を有するバリアントを作製し評価することにより検査することができる。抗体安定性を増加させる仕方の１つは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって測定される熱転移中点（Ｔ_ｍ）を上昇させることである。一般に、タンパク質Ｔ_ｍは、その安定性と相関し、タンパク質がアンフォールドする傾向に依存する、アンフォールディングおよび溶液中の変性および分解プロセスに対するその感受性と逆相関する（Ｒｅｍｍｅｌｅ ａｎｄ Ｇｏｍｂｏｔｚ ２０００）。いくつかの研究は、ＤＳＣにより熱安定性として測定される製剤の物理的安定性および他の方法により測定される物理的安定性のランキングの間の相関を見出した（Ｍａａ ａｎｄ Ｈｓｕ １９９６、Ｒｅｍｍｅｌｅ， Ｎｉｇｈｔｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ． １９９７、Ｇｕｐｔａ ａｎｄ Ｋａｉｓｈｅｖａ ２００３、Ｂｅｄｕ－Ａｄｄｏ， Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ． ２００４、Ｚｈａｎｇ， Ｒｏｙ ｅｔ ａｌ． ２００４）。製剤研究は、Ｆａｂ Ｔ_ｍが、対応するｍＡｂの長期物理的安定性に意味を有することを示唆する。

本開示の抗体は、製造および薬物安定性を改善する、Ｆ_ｃ領域におけるアミノ酸置換を有することができる。ＩｇＧ_１についての例は、ラジカルにより誘導される切断を遮断する、ヒンジ２２１－ＤＫＴＨＴＣ－２２６（Ｅｕナンバリング）におけるＨ２２４Ｓ（またはＨ２２４Ｑ）であり（Ｙａｔｅｓ， Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ． ２０１０）；ＩｇＧ_４については、Ｓ２２８Ｐ変異が、半抗体（ｈａｌｆ－ａｎｔｉｂｏｄｙ）交換を遮断する（Ａｎｇａｌ， Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ． １９９３、Ｌａｂｒｉｊｎ， Ｂｕｉｊｓｓｅ ｅｔ ａｌ． ２００９）。

抗ＴＳＬＰ抗体の発現および精製
本開示の抗ＴＳＬＰ抗体および断片は、単一の核酸（例えば、抗体の軽および重鎖ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一の核酸）によって、またはそれぞれが抗体もしくは抗体断片の異なる部分をコードする２種もしくはそれよりも多い別々の核酸によってコードされ得る。

非限定的な例として、本開示は、２０２Ｈ２とＩｇＧ２ Ｆｃに基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体重鎖をコードする配列番号２７としての核酸配列、２０２Ｌ３に基づく抗ＴＳＬＰ抗体軽鎖配列をコードする配列番号２８としての核酸配列、および２０２Ｌ４に基づく抗ＴＳＬＰ抗体軽鎖配列をコードする配列番号２９としての核酸配列を提供する。

２０２Ｈ２とＩｇＧ２ Ｆｃに基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体重鎖のためのヌクレオチド配列（配列番号２７）

２０２Ｌ３に基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体軽鎖のためのヌクレオチド配列（配列番号２８）

２０２Ｌ４に基づく抗ＴＳＬＰヒト化抗体軽鎖のためのヌクレオチド配列（配列番号２９）

核酸は、ベクター、例えば、核酸発現ベクターおよび／または標的化ベクターに挿入することができる。このようなベクターは、様々な仕方で、例えば、細胞またはトランスジェニック動物における抗ＴＳＬＰ結合抗体または抗体断片の発現のために使用することができる。ベクターは典型的に、ベクターが使用されることになる宿主細胞において機能的となるように選択される。抗ＴＳＬＰ結合抗体または断片をコードする核酸分子は、原核、酵母、昆虫（バキュロウイルス系）および／または真核宿主細胞において増幅／発現され得る。宿主細胞の選択は、一部には、抗ＴＳＬＰ結合抗体または断片が、翻訳後改変（例えば、グリコシル化および／またはリン酸化）されるか否かに依存するであろう。そうされるべきである場合、酵母、昆虫または哺乳動物宿主細胞が好ましい。発現ベクターは典型的に、次の構成成分のうち１種または複数を含有する：プロモーター、１種または複数のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナーおよびアクセプタースプライス部位を含有する完全イントロン配列、分泌のためのリーダー配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現されるべきポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、ならびに選択可能マーカーエレメント。

大部分の事例では、リーダーまたはシグナル配列は、抗ＴＳＬＰ抗体または断片のＮ末端において操作されて、その分泌をガイドする。宿主細胞からの抗ＴＳＬＰ抗体または断片の分泌は、抗体または断片からのシグナルペプチドの除去をもたらすであろう。よって、成熟抗体または断片は、いかなるリーダー配列もシグナル配列も欠如するであろう。真核宿主細胞発現系においてグリコシル化が所望される場合等、一部の事例では、グリコシル化または収量を改善するための様々なプレ配列を操作することができる。例えば、シグナルペプチドのペプチダーゼ切断部位を変更することができる、または同様にグリコシル化に影響を与え得るプロ配列を付加することができる。

本開示はさらに、本開示の核酸またはベクターを含む細胞（例えば、単離または精製された細胞）を提供する。細胞は、本開示の核酸またはベクターにより形質転換されて、それによってコードされるポリペプチドを産生することができるいずれかの型の細胞であってもよい。抗ＴＳＬＰ結合抗体または断片を発現させるために、上述の通りに得られる部分的または全長軽および重鎖をコードするＤＮＡは、遺伝子が転写および翻訳制御配列に操作可能に連結されるように、発現ベクターに挿入される。

単離された細胞に核酸およびベクターを導入する方法、ならびにｉｎ ｖｉｔｒｏでの形質転換宿主細胞の培養および選択の方法は、当技術分野で公知であり、塩化カルシウム媒介性形質転換、形質導入、コンジュゲーション、三親交配（ｔｒｉｐａｒｅｎｔａｌ ｍａｔｉｎｇ）、ＤＥＡＥ、デキストラン媒介性トランスフェクション、感染、リポソームによる膜融合、ＤＮＡコーティングされた微小発射体（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ）による高速衝突（ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）、単一細胞への直接的マイクロインジェクション、および電気穿孔の使用を含む。

細胞に本開示の核酸またはベクターを導入した後に、細胞は、コードされた配列の発現に適した条件下で培養される。次に、抗体、抗原結合性断片または抗体の部分を、細胞から単離することができる。

ある特定の実施形態では、抗ＴＳＬＰ結合抗体またはその抗原結合性断片を一緒にコードする２種またはそれよりも多いベクターを、細胞に導入することができる。

細胞培地に分泌された抗ＴＳＬＰ結合抗体または断片の精製は、親和性、免疫親和性またはイオン交換クロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、調製用ゲル電気泳動または等電点電気泳動、クロマトフォーカシング、および高圧液体クロマトグラフィーを含む種々の技法を使用して達成することができる。例えば、Ｆ_ｃ領域を含む抗体は、Ｆ_ｃ領域に選択的に結合するプロテインＡによる親和性クロマトグラフィーによって精製することができる。

抗体または抗原結合性断片の改変形態は、そのカルボキシルまたはアミノ末端のいずれかにおける、ヘキサヒスチジン、またはＦＬＡＧ（Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ Ｃｏ．、Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ、Ｃｏｎｎ．）もしくはｍｙｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）等の他の小型のペプチド等の親和性タグにより調製し、１ステップ親和性カラムによって精製することができる。例えば、ポリヒスチジンは、優れた親和性および特異性でニッケルに結合し、よって、ニッケルの親和性カラム（Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）ニッケルカラム等）は、ポリヒスチジンタグが付いた選択的結合剤の精製に使用することができる。一部の実例では、２以上の精製ステップを用いることができる。

抗体または抗原結合性断片の改変形態は、そのカルボキシルまたはアミノ末端のいずれかにおける、ヘキサヒスチジン、またはＦＬＡＧ（Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ Ｃｏ．、Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ、Ｃｏｎｎ．）もしくはｍｙｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）等の他の小型のペプチド等の親和性タグにより調製し、１ステップ親和性カラムによって精製することができる。例えば、ポリヒスチジンは、優れた親和性および特異性でニッケルに結合し、よって、ニッケルの親和性カラム（Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）ニッケルカラム等）は、ポリヒスチジンタグが付いた選択的結合剤の精製に使用することができる。一部の実例では、２以上の精製ステップを用いることができる。

ＴＳＬＰ
胸腺間質性リンパ球新生因子、ＴＳＬＰは、アレルギー性炎症に関係付けられるサイトカインファミリーに属する上皮細胞由来タンパク質である（Ｃｉａｎｆｅｒｏｎｉ ａｎｄ Ｓｐｅｒｇｅｌ ２０１４）。これは、線維芽細胞、上皮細胞および異なる上皮様細胞等の非造血細胞によって主に産生され、抗原提示細胞の活性化によるＴ細胞集団の成熟における重要な役割を果たす。ＴＳＬＰは、炎症促進性刺激に応答して産生され、主にＴヘルパー（Ｔｈ）２サイトカイン産生のための樹状細胞における影響によって、アレルギー性炎症性応答を駆動する。

ヒトＴＳＬＰは、２種のアイソフォームを有する。長い形態のＴＳＬＰ、ｌｆＴＳＬＰは、心臓、肝臓および前立腺を含むいくつかの組織において発現され、単球からのＴ細胞誘引性ケモカインの放出を誘導し、ＣＤ１１ｃ－樹状細胞の成熟を増強する。これは、マスト細胞を直接的に活性化することにより、アレルギー性炎症を誘導することができる（Ｒｅｃｈｅ， Ｓｏｕｍｅｌｉｓ ｅｔ ａｌ． ２００１、Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｚｈｏｕ ２０１２）。アイソフォーム２は、短い形態のＴＳＬＰ、ｓｆＴＳＬＰであり、口腔粘膜、皮膚のケラチノサイトおよび唾液腺において優勢な形態であり、抗菌ペプチドとして機能することができる（Ｂｊｅｒｋａｎ， Ｓｏｎｅｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ． ２０１６）。ヒトＴＳＬＰは、染色体５ｑ２２．１にマッピングされる（Ｑｕｅｎｔｍｅｉｅｒ， Ｄｒｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００１）。

ｌｆＴＳＬＰのアミノ酸配列は、配列番号３０として提供され、そのうち最初の２８アミノ酸は、シグナルペプチドを構成し、Ｙ２９～Ｑ１５９が、成熟形態である。ｓｆＴＳＬＰのアミノ酸配列は、配列番号３１として提供される。

長い形態のＴＳＬＰ、ｌｆＴＳＬＰのためのアミノ酸配列（配列番号３０）

短い形態のＴＳＬＰ、ｓｆＴＳＬＰのためのアミノ酸配列（配列番号３１）

ＴＳＬＰ受容体（ＴＳＬＰＲ）は、低親和性でＴＳＬＰに結合し、ヘマトポエチン受容体ファミリーのメンバーである（Ｐａｒｋ， Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ． ２０００）。ＩＬ－７受容体アルファ鎖（ＩＬ－７Ｒα）およびＴＳＬＰＲの組合せは、三元複合体を形成するためのＴＳＬＰの高親和性結合に要求される（Ｖｅｒｓｔｒａｅｔｅ， ｖａｎ Ｓｃｈｉｅ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。三元複合体は、細胞増殖およびシグナル伝達に必要である。

ＴＳＬＰの結合後に、ＳＴＡＴ５リン酸化が誘導され、下流転写因子の発現をもたらす。初期結果は、ＴＳＬＰＲ複合体におけるＴＳＬＰ係合が、検出可能なＪＡＫ活性化を伴わずにＳＴＡＴ５を活性化することを示唆するが、近年の結果は、それぞれＩＬ－７ＲαおよびＴＳＬＰＲ鎖に結合するＪＡＫ１およびＪＡＫ２が、ＴＳＬＰ媒介性ＳＴＡＴ５活性化に要求されることを実証する（Ｒｏｃｈｍａｎ， Ｋａｓｈｙａｐ ｅｔ ａｌ． ２０１０）。ＥＲＫ１、２およびｐ７０Ｓ６Ｋの活性化等、多くのサイトカインによって刺激される他のシグナル伝達経路は、ＴＳＬＰ活性に関与しない（Ｑｕｅｎｔｍｅｉｅｒ， Ｄｒｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００１）。

マウスおよびヒトＴＳＬＰの間の相同性は４３％であり、ＴＳＬＰＲについては３９％であり、種間に交差反応性はない。マウスおよびヒトＴＳＬＰの間ならびにマウスおよびヒトＴＳＬＰＲの間の不十分なアミノ酸配列同一性にもかかわらず、両方の種におけるＴＳＬＰのその受容体への高親和性結合がＩＬ－７Ｒαを要求するという事実は、ヒトＴＳＬＰおよびＴＬＰＬＲが、マウスＴＳＬＰおよびＴＳＬＰＲのオルソログであることを示唆する。よって、マウスモデルが、キメラヒトＴＳＬＰおよびヒトＴＳＬＰＲトランスジェニックマウス系統の使用を含む、様々な生物学的研究のために使用された（Ｆｒａｎｃｉｓ， Ｍｉｌｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ． ２０１６）。

ＴＳＬＰ発現は、喘息（Ｙｉｎｇ， Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ ｅｔ ａｌ． ２００５）、炎症性関節炎（Ｋｏｙａｍａ， Ｏｚａｗａ ｅｔ ａｌ． ２００７）、炎症性腸疾患（Ｐａｒｋ， Ｊｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ． ２０１７）、アトピー性皮膚炎（Ｅｂｎｅｒ， Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ． ２００７）、湿疹、好酸球性食道炎および他のアレルギー性状態（Ｓｏｕｍｅｌｉｓ ａｎｄ Ｌｉｕ ２００４）、（Ｓｏｕｍｅｌｉｓ， Ｒｅｃｈｅ ｅｔ ａｌ． ２００２）を含む多くの病状に関連する。ＴＳＬＰ産生の機構および産生を遮断する潜在的な物質の理解は、これらの状態を予防または処置するためのより良い方法を可能にすることができる。よって、ＴＳＬＰの標的化は、喘息およびＴｈ２サイトカイン媒介性炎症性障害に関与する複数の生物学的経路を阻害することができる（Ｇａｕｖｒｅａｕ， Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。

抗ＴＳＬＰ抗体の結合および機能活性
本開示は、他の抗原に対するよりも優れた親和性で、ＴＳＬＰに選択的に結合する抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体または抗体断片を包含する。抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体および断片は、ヒトＴＳＬＰに選択的に結合することができるが、非ヒトＴＳＬＰにも検出可能に結合する。その代わりにまたはその上、ＴＳＬＰ結合抗体および抗体断片は、組換えヒトＴＳＬＰおよび内在性ヒトＴＳＬＰに対して同じまたは実質的に同じ効力を有することができる。

ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび細胞に基づくアッセイは、ＴＳＬＰ抗体のその標的への結合の決定における使用のために当技術分野で十分に記載されている。例えば、ＴＳＬＰのその受容体への結合は、ＴＳＬＰ結合抗体を固定化し、固定化された抗体によりＴＳＬＰを隔絶し、ＴＳＬＰが抗体に結合されているか否かを決定し、可溶性形態の受容体を結合されたＴＳＬＰ／抗体複合体と接触させ、可溶性受容体が複合体に結合されているか否かを決定することにより、決定することができる。プロトコールは、ＴＳＬＰ抗体との接触前に、可溶性受容体を固定化された抗体と接触させて、可溶性受容体が固定化された抗体に結合しないことを確認するステップを含むこともできる。このプロトコールは、結合相互作用の動態解析のためのＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）機器を使用して行うことができる。このようなプロトコールを用いて、抗体または他の分子が、ＴＳＬＰのその受容体への結合を許容するかまたは遮断するかを決定することもできる。

他のＴＳＬＰ／受容体結合アッセイのため、その受容体へのＴＳＬＰ結合の許容または遮断は、ＴＳＬＰ抗体またはそのＴＳＬＰ結合性断片の存在または非存在下でＴＳＬＰのその受容体への結合を比較することにより決定することができる。遮断は、対応する緩衝液または希釈剤を含有するが、ＴＳＬＰ抗体またはそのＴＳＬＰ結合性断片を含有しない対照試料と比較して、抗ＴＳＬＰ抗体またはそのＴＳＬＰ結合性断片の存在下における、その受容体へのＴＳＬＰ結合の指定された低下としてアッセイ読み取り値において同定される。アッセイ読み取り値は、遮断の存在もしくは非存在を指し示すものとして定性的に検分することができる、または抗体もしくは断片の存在による結合の低下パーセントもしくは倍数での低下（ｆｏｌｄ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）を指し示すものとして定量的に検分することができる。ＴＳＬＰ結合抗体またはＴＳＬＰ結合性断片が、その受容体へのＴＳＬＰ結合を実質的に遮断する場合、その受容体へのＴＳＬＰ結合は、抗体または断片の非存在下における同じ濃度のＴＳＬＰおよびその受容体の結合と比較して、多くとも１０分の１、その代わりに多くとも約２０分の１、その代わりに多くとも約５０分の１、その代わりに多くとも約１００分の１、その代わりに多くとも約１０００分の１、その代わりに多くとも約１００００分の１にまたはそれよりもさらに低下される。

本開示に従った使用のための好まれる抗ＴＳＬＰ抗体は一般に、例えば、約１０ｎＭもしくはそれ未満、約５ｎＭもしくはそれ未満、約１ｎＭもしくはそれ未満、約５００ｐＭもしくはそれ未満、あるいはより好ましくは、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約２５ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満、約５ｐＭもしくはそれ未満、約３ｐＭもしくはそれ未満、約１ｐＭもしくはそれ未満、約０．７５ｐＭもしくはそれ未満、約０．５ｐＭもしくはそれ未満、または約０．３ｐＭもしくはそれ未満のＴＳＬＰに対する平衡結合解離定数（ＫＤ）等、高い親和性（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥにより決定される）でヒトＴＳＬＰに結合する。

本開示の抗体または断片は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定される、約１０ｎＭもしくはそれ未満、約５ｎＭもしくはそれ未満、約２ｎＭもしくはそれ未満、約１ｎＭもしくはそれ未満、約０．７５ｎＭもしくはそれ未満、約０．５ｎＭもしくはそれ未満、約０．４ｎＭもしくはそれ未満、約０．３ｎＭもしくはそれ未満、またはさらには約０．２ｎＭもしくはそれ未満のＥＣ５０で、ＴＳＬＰに結合することができる。

好ましくは、本開示の抗体または抗体断片は、ＴＳＬＰ以外のいかなる標的とも交差反応しない。例えば、本抗体および断片は、ＴＳＬＰに結合することができるが、他のタンパク質には検出可能に結合しない、または他のタンパク質へのその結合と比べて、ＴＳＬＰへのその結合において少なくとも約１００倍（例えば、少なくとも約１５０倍、少なくとも約２００倍またはさらには少なくとも約２５０倍）高い選択性を有する。

本開示に記載されているＴＳＬＰ結合抗体または断片によって結合される肝要なアミノ酸残基（エピトープ）は、例えば、ＰｅｐＳｐｏｔ（商標）ペプチドアレイ（ＪＰＴ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）等のペプチドアレイを使用して決定することができ、それによると、各ペプチドが前のペプチドと１１アミノ酸重複する、ＴＳＬＰアミノ酸配列全体に及ぶ１２種のアミノ酸ペプチドのスキャンが、膜上に直接的に合成される。その代わりにまたはそれに加えて、抗体競合実験を行うことができ、このようなアッセイは、当技術分野で周知である。

本開示はまた、ＴＳＬＰに結合してその生物活性を中和する、中和抗体またはその中和断片を包含する。ＴＳＬＰの生物活性の中和は、レポーターアッセイにおけるＴＳＬＰ刺激性レポーター遺伝子発現等、生物活性の１種または複数の指標のアッセイによって評価することができる。ＴＳＬＰの生物活性の中和は、喘息またはアトピー性皮膚炎の動物モデルによってｉｎ ｖｉｖｏで評価することもできる。好ましくは、本開示のＴＳＬＰ結合抗体および断片は、ＴＳＬＰによって結合されたその受容体のシグナル伝達機能に繋がるＴＳＬＰの生物活性を中和する。

本抗体または断片は、ＴＳＬＰの生物活性に影響を与えるＴＳＬＰエピトープに特異的に結合する中和抗体または断片であってもよい。本抗体または断片は、ＴＳＬＰの中和感受性エピトープに結合することができる。ＴＳＬＰの中和感受性エピトープが、本抗体または断片のうち１種によって結合されると、その結果は、エピトープを含有する生物活性の喪失である。

ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその断片は、ＴＳＬＰの標的化される活性に直接的に関与するＴＳＬＰのエピトープに結合することにより、ＴＳＬＰの活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低下するかまたはそれに対して干渉することができる。別の実施形態では、本開示の抗体またはその断片は、ＴＳＬＰの標的化される活性に直接的に関与しないＴＳＬＰのエピトープに結合することにより、ＴＳＬＰの活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低下するかまたはそれに対して干渉することができるが、それに結合する抗体または断片は、ＴＳＬＰの標的化される活性を立体的にまたはコンフォメーション的に阻害する、遮断する、抑止する、低下するかまたはそれに対して干渉する。さらに別の実施形態では、本開示の抗体またはその断片は、ＴＳＬＰの標的化される活性に直接的に関与しないＴＳＬＰのエピトープに結合する（すなわち、非遮断抗体）が、それに結合する抗体または断片は、ＴＳＬＰのクリアランスの増強をもたらす。

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ａ）ＴＳＬＰおよびＴＳＬＰＲの結合を阻害する；ｂ）ＴＳＬＰ依存性遺伝子の発現レベルを低下させる；ｃ）ＴＳＬＰ誘導性細胞増殖を阻害する；ｄ）ＴＳＬＰ誘導性ＳＴＡＴ５活性化を阻害する；ならびに／またはｅ）初代ヒト樹状細胞からのＴＳＬＰ誘導性ＣＣＬ１７産生を阻害する。

医薬組成物
本開示に従った使用のためのＴＳＬＰ結合抗体および抗体断片は、本明細書における方法における使用のために、組成物、特に、医薬組成物において製剤化することができる。このような組成物は、適した担体、例えば、薬学的に許容される作用物質との混合物中に、治療または予防有効量の本開示のＴＳＬＰ結合抗体または抗体断片を含む。典型的には、本開示のＴＳＬＰ結合抗体および抗体断片は、医薬組成物における製剤化の前に、動物への投与のために十分に精製されている。

薬学的に許容される作用物質は、担体、賦形剤、希釈剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）、抗酸化剤、保存料、着色剤、矯味矯臭剤および希釈剤（ｄｉｌｕｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝液、送達ビヒクル、張度剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝化剤、抗菌薬ならびに界面活性物質を含む。

組成物は、液体形態または凍結乾燥もしくはフリーズドライ形態であってもよく、１種または複数の凍結保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、賦形剤、界面活性物質、高分子量構造的添加物（ｈｉｇｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｄｄｉｔｉｖｅ）および／または増量剤を含むことができる。

組成物は、非経口投与に適することができる。例示的な組成物は、関節内、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、病巣内、直腸内、経皮、経口および吸入経路等、当業者に利用できるいずれかの経路による動物への注射または注入に適する。

本明細書に記載されている医薬組成物は、産物の局所的濃縮（例えば、ボーラス、デポー効果）、持続放出および／または特定の局所的環境における増加された安定性もしくは半減期をもたらす様式での制御送達または持続送達のために製剤化することができる。

使用方法
本抗体および断片は、ＴＳＬＰ媒介性疾患または医学的状態、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、アレルギーおよびある特定のがんの予防法および処置に有用である。

本開示の一態様は、それを必要とする被験体に、治療有効量の対象抗体またはその抗原結合性断片および対象医薬組成物のうちいずれか１種を投与することにより、Ｔｈ２駆動ではない喘息を含む中等度から重度の制御されない喘息を処置する方法を提供する。

本開示の別の態様は、それを必要とする被験体に、治療有効量の対象抗体またはその抗原結合性断片および対象医薬組成物のうちいずれか１種を投与することにより、全身性硬化症、全身性特発性肺線維症およびケロイド疾患を含む線維性疾患および関連状態を処置する方法を提供する。

本開示の別の態様は、それを必要とする被験体に、治療有効量の対象抗体またはその抗原結合性断片および対象医薬組成物のうちいずれか１種を投与することにより、気腫、慢性気管支炎および難治性喘息等の慢性閉塞性肺疾患を処置する方法を提供する。

本開示の別の態様は、鼻炎、アトピー性皮膚炎、湿疹、食物アレルギーおよび炎症性腸疾患を含む炎症性疾患に関連する障害を処置する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の対象抗体またはその抗原結合性断片および対象医薬組成物のうちいずれか１種を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示の別の態様は、肺癌、乳癌、膵癌、結腸直腸癌、リンパ芽球性白血病、頭頸部癌を含むある特定のがんを処置する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の対象抗体またはその抗原結合性断片および対象医薬組成物のうちいずれか１種を投与するステップを含む方法を提供する。

本開示のある態様はまた、ＴＳＬＰのその受容体ＴＬＰＲへの結合を遮断するための医薬、ならびに／または本明細書に提供されるもの等のＴＳＬＰ媒介性疾患もしくは医学的状態の予防法および処置のための医薬の製造における、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの使用を提供する。本開示のある態様はまた、ＴＳＬＰのその受容体ＴＬＰＲへの結合を遮断するための、ならびに／または本明細書に提供されるもの等のＴＳＬＰ媒介性疾患もしくは医学的状態の予防法および処置のための方法における、提供される抗体またはその抗原結合性断片の使用を提供する。例えば、実施形態では、本開示は、喘息、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、アトピー性皮膚炎、湿疹、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患、全身性硬化症、全身性特発性肺線維症、ケロイド疾患またはがんを処置するための方法における本明細書に提供される抗体の使用を提供する。

治療上の使用に加えて、酵素結合免疫吸着アッセイ（Ｒｉｚｏｓ Ｃ．Ｖ．）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織の免疫組織化学等の従来のイムノアッセイを使用して、本抗体および断片を診断方法において使用して、ＴＳＬＰ（例えば、血清または血漿等の生体試料における）を検出することができる。

生体試料におけるＴＳＬＰを検出するための方法は、生体試料を本抗体または断片のうち１種または複数と接触させるステップと、ＴＳＬＰに結合している抗体もしくは断片、または結合していない抗体もしくは断片のいずれかを検出して、これにより、生体試料におけるＴＳＬＰを検出するステップとを含むことができる。抗体または断片は、検出可能な物質で直接的にまたは間接的に標識して、結合しているまたは結合していない抗体の検出を容易にすることができる。適した検出可能な物質は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料および放射性材料を含む。

次の実施例は、本開示をさらに詳細に記載するために提供されている。これは、本開示の説明を意図しており、限定を意図するものではない。

（実施例１）
マウス抗ＴＳＬＰ抗体ＴＡＶＯ２０２についてのＴＳＬＰ結合親和性
ＴＡＶＯ２０２は、ハイブリドーマスクリーニングによってマウス抗ヒトＴＳＬＰ抗体として同定した。ＥＬＩＳＡに基づく結合アッセイを用いて、組換えヒトＴＳＬＰへのＴＡＶＯ２０２結合を評価した。このアッセイにおいて、１μｇ／ｍＬ組換えヒトＴＳＬＰ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。増加する濃度のＴＡＶＯ２０２抗体をプレートに加え、その組換えヒトＴＳＬＰへの結合をＨＲＰコンジュゲート抗マウス二次抗体によって検出した。ＴＡＶＯ２０２が、２．４ｎｇ／ｍＬにおけるＥＣ５０で組換えヒトＴＳＬＰに用量依存的に結合したことが観察された（図１Ａ）。

マウスＴＳＬＰ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）でプレートをコーティングすることによる同様のＥＬＩＳＡアッセイにおいて、マウスＴＳＬＰへのＴＡＶＯ２０２の結合も評価した。ＴＡＶＯ２０２は、マウスＴＳＬＰに対して有意な結合親和性を示さなかった（図１Ｂ）。

（実施例２）
ＴＡＶＯ２０２によるＴＳＬＰ中和に関するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ
ＴＳＬＰ媒介性細胞増殖アッセイを開発して、ＴＡＶＯ２０２の機能活性を評価した。このアッセイにおいて、ヒトＩＬ－７受容体アルファ（ＩＬ－７Ｒα）およびＴＳＬＰ受容体（ＴＳＬＰＲ）をＢＡＦ３マウスプロＢ細胞に共トランスフェクトした。組換えヒトＴＳＬＰをトランスフェクト細胞に添加し、２日後に細胞増殖アッセイにより細胞増殖を定量化した。組換えヒトＴＳＬＰが、０．１８ｎｇ／ｍＬにおけるＥＣ５０で、用量依存的な様式でトランスフェクトＢＡＦ３細胞系の増殖を刺激することができることが観察された（図２Ａ）。

ＴＡＶＯ２０２の機能活性を評価するために、増加する濃度のＴＡＶＯ２０２を０．５ｎｇ／ｍＬヒトＴＳＬＰと共に、ＩＬ－７ＲαおよびＴＳＬＰＲを共トランスフェクトしたＢＡＦ３細胞に加えた。ＴＡＶＯ２０２が、６．６ｎｇ／ｍＬにおけるＩＣ５０で、トランスフェクトＢＡＦ３細胞増殖の刺激において、ＴＳＬＰ活性を用量依存的に中和することができることが観察された（図２Ｂ）。

細胞増殖アッセイの他に、ＴＳＬＰ駆動レポーター遺伝子発現アッセイも開発して、ＴＡＶＯ２０２の機能活性を評価した。ＳＴＡＴ５活性化は、ＴＳＬＰが、その受容体複合体（ＴＳＬＰＲ：ＩＬ－７Ｒα）に結合しこれを活性化した後に発生する下流事象である。このアッセイにおいて、ＴＳＬＰＲ、ＩＬ－７ＲαおよびＳＴＡＴ５ルシフェラーゼレポーター構築物を発現するプラスミドを、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に一過性にトランスフェクトした。トランスフェクション１日後に、組換えヒトＴＳＬＰを添加し、２４時間後にＴＳＬＰ駆動ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現を定量化した。ヒトＴＳＬＰが、１．４ｎｇ／ｍＬにおけるＥＣ５０で、レポーター遺伝子発現を用量依存的に駆動することができることが観察された（図３Ａ）。

ＴＡＶＯ２０２の機能活性を評価するために、増加する濃度のＴＡＶＯ２０２を１０ｎｇ／ｍＬヒトＴＳＬＰと共に、ＩＬ－７Ｒα、ＴＳＬＰＲおよびＳＴＡＴ５ルシフェラーゼレポーター遺伝子を共トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に加えた。ＴＡＶＯ２０２が、２０ｎｇ／ｍＬのＩＣ５０で、レポーター遺伝子発現の刺激において、ＴＳＬＰ活性を用量依存的に中和したことが観察された（図３Ｂ）。

（実施例３）
マウス抗ヒトＴＳＬＰ抗体ＴＡＶＯ２０２のヒト化
マウスＣＤＲをヒト生殖系列足場にグラフトすることにより、マウス抗ヒトＴＳＬＰ抗体ＴＡＶＯ２０２をヒト化した。いくつかの肝要なマウス残基を復帰変異によって保存して、免疫原性を最小化しつつ、より高い安定性およびより優れた発現を達成した。ＴＡＶＯ２０２のため、ＩＧＨＶ１－６９^＊０２に基づき１種のヒト化Ｖ_Ｈバリアント（２０２Ｈ２）を設計し、２個の復帰変異を有するそれぞれＩＧＫＶ１－９^＊０１およびＩＧＫＶ６－２１^＊０１に基づき２０２Ｌ３および２０２Ｌ４により２種のヒト化Ｖ_Ｌバリアントを設計した（図４）。２種のヒト化Ｖ_Ｌバリアントとヒト化Ｖ_Ｈバリアントとの組合せによって、ＴＡＶＯ６２６４およびＴＡＶＯ６２６５として指定された、ＩｇＧ２ Ｆｃを有する２種のヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体を、それぞれ２０２Ｌ３および２０２Ｌ４と対形成する２０２Ｈ２バリアントにより作製した（図４）。同様に、ＴＡＶＯ７２６４およびＴＡＶＯ７２６５として指定された、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｆ４０５Ｌ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃを有する２種のヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体も、それぞれ２０２Ｌ３および２０２Ｌ４と対形成する２０２Ｈ２バリアントにより作製した。その他に、ＴＡＶＯ９７６４およびＴＡＶＯ９７６５として指定された、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃを有する２種のヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体も、それぞれ２０２Ｌ３および２０２Ｌ４と対形成する２０２Ｈ２バリアントにより作製した（図４）。

（実施例４）
ヒト化ＴＡＶＯ２０２の発現および精製
トランスフェクションキットの指示（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って、ＴＡＶＯ６２６４、ＴＡＶＯ６２６５、ＴＡＶＯ７２６４、ＴＡＶＯ７２６５、ＴＡＶＯ９７６４、ＴＡＶＯ９７６５の重鎖および軽鎖をコードするプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞に共トランスフェクトした。トランスフェクション５日後に細胞をスピンダウンし、上清を０．２μｍフィルターに通した。プロテインＡアガロースカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）における親和性クロマトグラフィーによって、上清中の発現された抗体の精製を実行した。精製された抗体を、透析によりＤＰＢＳ、ｐＨ７．２に緩衝液交換し、２８０ｎｍにおけるＵＶ吸光度によってタンパク質濃度を決定した。

精製されたヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体をＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析に付し、ＴＡＶＯ７２６４およびＴＡＶＯ７２６５の例を図５Ａおよび図５Ｂに示した。還元条件下で、全４種の抗体が、予想される分子量を有する重鎖および軽鎖を示した。非還元条件下で、全４種の抗体が、１５０ｋＤａ前後の分子量を有する主要タンパク質バンドとして移動した。精製されたヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体もサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって評価した。図５Ｃは、例としての抗体ＴＡＶＯ７２６４およびＴＡＶＯ７２６５のＳＥＣプロファイルを明らかにした。

（実施例５）
ヒト化ＴＡＶＯ２０２によるＴＳＬＰへの結合
ＥＬＩＳＡに基づく結合アッセイを用いて、組換えヒトＴＳＬＰ抗原に結合するヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体を評価した。このアッセイにおいて、１μｇ／ｍＬ組換えヒトＴＳＬＰ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。増加する濃度のヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体をプレートに加え、その組換えヒトＴＳＬＰへの結合をＨＲＰコンジュゲート抗マウス二次抗体によって検出した。例として、ＴＡＶＯ６２６４およびＴＡＶＯ６２６５が、マウス抗体ＴＡＶＯ２０２と同様の匹敵する効力で、組換えヒトＴＳＬＰに用量依存的に結合したことが観察された（図６Ａ）。

カニクイザルＴＳＬＰでプレートをコーティングすることによる同様のＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＴＳＬＰにおけるヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体の結合も評価した。ＴＡＶＯ７２６４またはＴＡＶＯ７２６５抗体のいずれも、サルＴＳＬＰに結合することができなかった（図６Ｂ）。

固定化された組換えＴＳＬＰへのヒト化抗体の結合をさらに測定するために、Ｂｉａｃｏｒｅを使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）結合アッセイが行われることになる。このアッセイは、結合親和性を測定することができるだけでなく、結合の動態速度定数および熱力学を測定することもできる。

（実施例６）
ヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体によるＴＳＬＰ中和に関するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ
ＴＳＬＰ駆動ＳＴＡＴ５ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現アッセイを用いて、ヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体の機能活性を評価した。増加する濃度のＴＡＶＯ６２６４およびＴＡＶＯ６２６５を１０ｎｇ／ｍＬヒトＴＳＬＰと共に、ＩＬ－７Ｒα、ＴＳＬＰＲおよびＳＴＡＴ５ルシフェラーゼレポーター遺伝子を共トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に加えた。ＴＡＶＯ６２６４およびＴＡＶＯ６２６５の両方が、ＴＡＶＯ２０２に匹敵するＩＣ５０で、レポーター遺伝子発現の刺激において、ＴＳＬＰ活性を用量依存的に中和することができることが観察された（図７）。

（実施例７）
ヒト化ＴＡＶＯ２０２によるＴＳＬＰ媒介性樹状細胞活性化の阻害
ＴＳＬＰは、ＣＣＬ１７ケモカインの分泌増加により、初代ヒトＣＤ１ｃ^＋血液樹状細胞の活性化を刺激することができる。ｅｘ ｖｉｖｏアッセイをセットアップして、活性化された樹状細胞からのＴＳＬＰ駆動ＣＣＬ１７放出の中和におけるヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体を評価した。抗ＣＤ１ｃ^＋抗体コーティング磁気ビーズ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）によって、ドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からＣＤ１ｃ^＋樹状細胞を単離した。単離された細胞を組換えヒトＴＳＬＰと共にインキュベートし、ＣＣＬ１７の放出をＥＬＩＳＡによって定量化した。１５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＴＳＬＰが、４８時間インキュベーション後に、活性化された樹状細胞からの数倍増強されたＣＣＬ１７放出を刺激することができることが観察された。ＴＡＶＯ７２６４およびＴＡＶＯ７２６５の両方が、ＴＳＬＰと共に１ｕｇ／ｍＬで添加されたときに、活性化された樹状細胞からのＴＳＬＰ駆動ＣＣＬ１７放出を遮断することができた。図８は、２名の異なるドナーから単離されたＰＢＭＣによるアッセイの結果を示した。

（実施例８）
延長された半減期および低下されたエフェクター機能のためのヒト化抗体のＦ_ｃ操作
ヒト化抗体のＰＫプロファイルを改善するために、Ｆ_ｃ変異をＩｇＧ１抗体に導入して、抗体半減期を延長することができる。具体的には、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異は、ＦｃＲｎ結合親和性を増加させることにより抗体半減期を延長することが実証された（Ｂｏｏｔｈ， Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ ｅｔ ａｌ． ２０１８）。さらに、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ Ｆ_ｃ変異は、ＩｇＧ１抗体のＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を消失させることができる（Ｈｅｚａｒｅｈ， Ｈｅｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ． ２００１）。したがって、配列番号１６として示す配列を含む、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（ＡＡＬＳ）変異を有する２０２Ｈ１に基づくヒト化ＩｇＧ１重鎖を作製した。このＦｃ操作２０２Ｈ１重鎖をヒト化２０２Ｌ３または２０２Ｌ４軽鎖のいずれかと対形成することにより、延長された半減期および低下されたエフェクター機能を有する２種のヒト化ＴＡＶＯ２０２抗体を作製し、それぞれＴＡＶＯ９７６４およびＴＡＶＯ９７６５として指定した（図４）。

Ｆ_ｃ操作抗体が、改善されたＦｃＲｎ結合親和性を有するか否かを研究するために、マウスＦｃＲｎへのＴＡＶＯ９７６５およびＴＡＶＯ７２６５による結合を、ＥＬＩＳＡに基づく結合アッセイにおいて評価した。１μｇ／ｍＬ組換えマウスＦｃＲｎ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。増加する濃度のＴＡＶＯ９７６５およびＴＡＶＯ７２６５抗体をプレートに加え、ｐＨ６．０でのそれらの組換えＦｃＲｎへの結合をＨＲＰコンジュゲート抗ヒト二次抗体によって検出した。Ｆｃ Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異を有するＴＡＶＯ９７６５が、このような半減期延長変異を欠如するＴＡＶＯ７２６５よりも約１０倍優れた効力で、ＦｃＲｎに結合することができることが観察された（図９）。

Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異が、抗ＴＳＬＰ抗体の循環半減期を延長することができるか否かを決定するために、カニクイザルＰＫモデルにおいてＴＡＶＯ９７６５を検査した。ＴＡＶＯ９７６５を４ｍｇ／ｋｇの静脈内注入として、０日目の体重に基づき１．０ｍＬ／ｋｇの体積で３分間、雄ナイーブカニクイザルに投与した。投薬前に、ならびに投薬後１時間、２時間および２、５、９、１２、１６、２１、２４、２６、２９、３２、３５日目に、全血を採取してＥＤＴＡ－Ｋ２採取管に入れた。３５００×ｇで１０分間、４℃における遠心分離によって血漿を分離し、次いで－８０℃での貯蔵のために微量遠心管に移した。血漿試料を標準ＥＬＩＳＡ方法によって測定して、ヒトＩｇＧを検出した。ヤギ抗ヒトＩｇＧは、捕捉抗体であり、ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）は、検出抗体であった。捕捉および検出抗体の希釈倍率は、それぞれ１３，３３３および３０，０００であった。Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎ ６．４ソフトウェアを使用して、ＰＫデータを、半減期；Ｃ_０、ＡＵＣ、Ｖｄおよびクリアランスについて解析した。ＴＡＶＯ９７６５の血漿濃度対時間のＰＫプロファイルを図１０に示す。ＴＡＶＯ９７６５のＰＫパラメーターは次の通りであった：Ｃ_０：１３１４０５ｎｇ・ｍＬ^－１、半減期：２６．１３１日、ＡＵＣ_０－ｔ：１２６８６２１ｎｇ・日・ｍＬ^－１、ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}：２１２８７２８ｎｇ・日・ｍＬ^－１、クリアランス：１．８７９ｍＬ・ｋｇ^－１・日^－１、Ｖｄ：７１．０４９ｍＬ・ｋｇ^－１。

参考文献

Claims (42)

1. 胸腺間質性リンパ球新生因子ＴＳＬＰに特異的に結合し、ＴＳＬＰの活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低下するかまたはそれに対して干渉する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
2. 配列番号１として示す重鎖可変領域および配列番号２として示す軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体または抗体断片である、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
3. それぞれ配列番号３、配列番号４および配列番号５に従う重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
4. それぞれ配列番号６、配列番号７および配列番号８に従う軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
5. ヒト化抗体または抗体断片である、請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
6. 前記ヒト化抗体または断片が、配列番号９として示す重鎖可変領域を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
7. 前記ヒト化抗体または断片が、配列番号１０として示す軽鎖可変領域を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
8. 前記ヒト化抗体または断片が、配列番号１１として示す軽鎖可変領域を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
9. 前記抗体または断片が、それぞれ配列番号３、配列番号４および配列番号５に従う重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号６、配列番号７および配列番号８に従う軽鎖のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、ここで前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および配列番号１０または１１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
10. 前記ヒト化抗体が、配列番号１２として示すヒトＩｇＧ重鎖配列を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
11. 前記ヒト化抗体が、配列番号１３として示すヒト軽鎖配列を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
12. 前記ヒト化抗体が、配列番号１４として示すヒト軽鎖配列を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
13. 前記ヒト化抗体が、配列番号１５として示すヒトＩｇＧ重鎖配列を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
14. 前記ヒト化抗体が、配列番号１６として示すヒトＩｇＧ重鎖配列を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
15. 前記抗体が、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３またはＩｇＧ_４アイソタイプである、請求項１～１４に記載の抗体または抗原結合性断片。
16. 前記抗体が、親野生型抗体と比較して、操作された抗体の半減期を延長する１個または複数のＦ_ｃ変異を有する、請求項１～１４に記載の抗体または抗原結合性断片。
17. 前記抗体が、親野生型抗体と比較して、プロテアーゼによるタンパク質分解に対する操作された抗体の抵抗性を増強する１個または複数のＦ_ｃ変異を有する、請求項１～１４に記載の抗体または抗原結合性断片。
18. 前記抗体が、親野生型抗体と比較して、操作された抗体のエフェクター機能を低下または排除する１個または複数のＦ_ｃ変異を有する、請求項１～１４に記載の抗体または抗原結合性断片。
19. 前記抗体が、親野生型抗体と比較して、操作された抗体の半減期を延長し、エフェクター機能を低下させる、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ Ｆ_ｃ変異を有し、残基ナンバリングが、ＥＵインデックスに従う、請求項１～１４に記載の抗体または抗原結合性断片。
20. 前記ヒト化抗体または断片が、配列番号１６として示す、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ Ｆｃ変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合性断片。
21. ヒトＴＳＬＰのその受容体複合体への結合を遮断する、請求項１～２０に記載の抗体または抗原結合性断片。
22. ＴＳＬＰのその受容体複合体に対する機能活性を中和する、低下するまたはそれに対して干渉する、請求項１～２０に記載の抗体または抗原結合性断片。
23. ＳＴＡＴ５レポーター遺伝子アッセイにおいてＴＳＬＰ駆動レポーター遺伝子活性化を中和する、請求項１～２０に記載の抗体または抗原結合性断片。
24. 細胞増殖アッセイにおいてＴＳＬＰ受容体複合体を発現する細胞のＴＳＬＰ駆動増殖を中和する、請求項１～２０に記載の抗体または抗原結合性断片。
25. サイトカイン放出アッセイにおいてヒト樹状細胞からのＴＳＬＰ駆動サイトカイン放出を阻害する、請求項１～２０に記載の抗体または抗原結合性断片。
26. 動物喘息モデルにおいてＴＳＬＰ駆動喘息および肺炎症を阻害する、請求項１～２０に記載の抗体または抗原結合性断片。
27. 請求項１～２０に記載の抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
28. 請求項２７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
29. 発現ベクターである、請求項２８に記載のベクター。
30. 請求項２８または２９に記載のベクターを含む宿主細胞。
31. 請求項１～２０に記載の抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体または断片を産生する方法であって、前記抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体または断片が発現される条件で、請求項２９に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体または断片を単離するステップとを含む、方法。
32. 請求項１～２０に記載の抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体または断片の半減期を測定する方法。
33. 請求項１～２０に記載の抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体または断片のタンパク質分解に対する抵抗性を測定する方法。
34. 請求項１～２０に記載の抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体または断片のエフェクター機能を測定する方法。
35. ＴＳＬＰ媒介性疾患または障害の処置を必要とする被験体におけるＴＳＬＰ媒介性疾患または障害を処置するための方法であって、前記被験体に、有効量の請求項１～２０に記載の抗ＴＳＬＰ ＩｇＧ抗体または断片を投与するステップを含む、方法。
36. 前記ＴＳＬＰ媒介性疾患または障害が、中等度から重度の制御されない喘息を含む喘息である、請求項３５に記載の方法。
37. 前記ＴＳＬＰ媒介性疾患または障害が、全身性硬化症、全身性特発性肺線維症およびケロイド疾患を含む線維性疾患および関連状態である、請求項３５に記載の方法。
38. 前記ＴＳＬＰ媒介性疾患または障害が、気腫、慢性気管支炎および難治性喘息等の慢性閉塞性肺疾患である、請求項３５に記載の方法。
39. 前記ＴＳＬＰ媒介性疾患または障害が、鼻炎、アトピー性皮膚炎、湿疹、全身性硬化症、食物アレルギーおよび炎症性腸疾患を含む炎症性疾患である、請求項３５に記載の方法。
40. 前記ＴＳＬＰ媒介性疾患または障害が、肺癌、乳癌、膵癌、結腸直腸癌、リンパ芽球性白血病、頭頸部癌を含むある特定のがんである、請求項３５に記載の方法。
41. 処置を必要とする前記被験体に第２の薬剤を投与するステップをさらに含む、請求項３５～４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記第２の薬剤が、コルチコステロイド、気管支拡張薬、抗ヒスタミン薬、抗ロイコトリエン薬、ＰＤＥ－４阻害剤；抗がん薬物、免疫調節薬およびサイトカイン療法薬からなる群から選択される、請求項４１に記載の方法。
    
    

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