[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

JP2021075548A - 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用 - Google Patents

多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2021075548A
JP2021075548A JP2021016201A JP2021016201A JP2021075548A JP 2021075548 A JP2021075548 A JP 2021075548A JP 2021016201 A JP2021016201 A JP 2021016201A JP 2021016201 A JP2021016201 A JP 2021016201A JP 2021075548 A JP2021075548 A JP 2021075548A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
meditope
antibody
antigen
available
antibodies
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2021016201A
Other languages
English (en)
Inventor
ウィリアムズ，ジョン，シー．
C Williams John
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
City of Hope
Original Assignee
City of Hope
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by City of Hope filed Critical City of Hope
Publication of JP2021075548A publication Critical patent/JP2021075548A/ja
Priority to JP2023077629A priority Critical patent/JP2023100903A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

【課題】細胞表面抗原の分布を改変するための方法を提供する。【解決手段】細胞表面抗原に結合し得る複数のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントに接触させるステップと、複数のメディトープ利用可能抗体の第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントのメディトープ結合性部位を多価メディトープからの第１のメディトープと接触させるステップと、複数のメディトープ利用可能抗体の第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第２のメディトープと接触させて、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生じさせ、それによって、第１および第２のメディトープ利用可能抗体と多価メディトープとの架橋が、細胞表面抗原の分布を改変するステップとを含む方法とする。【選択図】図１

Description

優先権の主張
本出願は、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる２０１４年１０月２日
出願の米国特許仮出願第６２／０５９，１４６号に基づく利益を主張するものである。
配列一覧の参照による組込み
本出願は、電子フォーマットでの配列一覧と共に出願されている。その配列一覧は、２
０１５年１０月２日に作成された４５１キロバイトのサイズの７０６１２２０００５４０
ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴという名称のファイルとして提供されている。配列一覧の電子フ
ォーマット内の情報は、その全体が参照によって組み込まれる。
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、いくつかの治療用、診断用、および研究用途で使用
されている。治療用および診断用分野には、癌、抗ウイルス治療、自己免疫疾患および炎
症性疾患、アレルギー、心臓血管疾患、骨粗鬆症、およびリウマチ学が包含される。
タンパク質工学などの努力によって、有効性および標的化が改善されていて（例えば、
二重特異性ｍＡｂ）、限局性、組織浸透、および血液クリアランスが改善されていて（例
えば、単鎖Ｆａｂ可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）
、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）、および他のフラグメント）、かつ（例えば、変
異またはグリコシル化によって）修飾されたＦｃ領域を含有するものなど免疫賦活性、安
全性、毒性、および／または薬物速度／薬物動態特性が改変されているｍＡｂが作成され
ている。送達の改善のために小分子の部位特異的コンジュゲーションが可能となるように
（例えば、ＴｈｉｏＭＡＢ）、またはその同源エピトープに不可逆的に結合するように（
例えば、無限親和性ｍＡｂ）、ｍＡｂは再設計されている。また、生理活性ペプチドおよ
び他の生物製剤（例えば、ＣｏｖＸ−ｂｏｄｙ）の循環および提示が改善されるように、
ｍＡｂは開発されている。様々な薬剤とのコンジュゲーションによって、標的化免疫療法
および診断方法が可能になっている。事前標的化療法のために、かつ腫瘍イメージングに
おける検出限界を改善するために、ヘテロ多量体ｓｃＦｖおよびアビジンと融合したｓｃ
ＦｖまたはｍＡｂが開発されている。
ｍＡｂは有効であり、小分子による手法を上回る利点を有し得るが、既存の抗体および
方法には、様々な限界がある。これらの限界には、オフターゲット相互作用から生じる有
害な副作用および／またはとりわけ抗体−薬物コンジュゲートの長時間循環などによる付
随的損傷が包含され得る。加えて、一部の抗体は、細胞表面抗原上のエピトープに効果的
に結合し得る一方で、それらは、所望か、または意図されている結果を生じさせるために
、細胞による内部移行を必要とし得る。コグネイト抗原への単なる結合は、治療応答を誘
発するためには不十分なことがある。細胞表面抗原の内部移行比率が上昇することで、抗
体または抗体治療の有効性が改善され得るであろう。
これらの欠点を考慮して、有効性、相乗作用、特異性、および安全性の改善をもたらす
ものを包含する改善された抗体および関連化合物、ならびにその方法および使用が必要と
されている。そのような必要に対処する、ペプチドおよび他の分子を包含する抗体、化合
物、および組成物、ならびに関連方法を本明細書において提供する。
本開示は、抗体の細胞内部移行を増加または促進する方法であって、細胞に、細胞また
は細胞表面抗原上に存在するエピトープに特異的に結合するメディトープ利用可能抗体お
よび多価メディトープを投与するステップと、それによって、標的細胞の表面上の細胞表
面抗原の内部移行を促進するステップとを含む方法を含む。
細胞上の細胞表面抗原のクラスター化を増加または促進する方法であって、細胞に、細
胞表面抗原に特異的に結合するメディトープ利用可能抗体および多価メディトープを投与
するステップと、それによって、標的細胞の表面上の細胞表面抗原のクラスター化を促進
するステップとを含む方法も提供する。一態様では、メディトープ利用可能抗体および多
価メディトープの投与後のクラスター化度は、抗体のみと共にインキュベートした後に観
察されるクラスター化度と比較して増加するか、または抗体および一価メディトープとの
インキュベーションと比較して増加する。
別の実施形態は、細胞上の細胞表面抗原の内部移行を増加または促進する方法であって
、細胞に、細胞表面抗原に特異的に結合するメディトープ利用可能抗体および多価メディ
トープを投与するステップと、それによって、標的細胞の表面上の細胞表面抗原の内部移
行を促進するステップとを含む方法を提供する。一態様では、メディトープ利用可能抗体
および多価メディトープの投与後の内部移行度は、抗体のみとのインキュベート後の抗原
の内部移行度と比較して増加するか、または抗体および一価メディトープとのインキュベ
ーションと比較して増加する。
別の実施形態は、細胞への多価メディトープの送達であって、細胞に、細胞表面抗原に
特異的に結合するメディトープ利用可能抗体および多価メディトープを投与することと、
それによって、標的細胞の表面上の細胞表面抗原のクラスター化および／または抗原の内
部移行を促進することを含む送達を提供する。別の態様では、目的の抗原は、内部移行性
または非内部移行性抗原である。別の態様では、メディトープの非存在下での単一特異性
二価抗体の結合は、抗原の内部移行をもたらさず、その内部移行度は、代謝回転から、も
しくは抗原に特異的な抗体の非存在下で生じるもの以下であるか、または代謝回転もしく
は抗原特異的抗体の非存在下で生じるものの２倍超を越えない。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、二価または二重特異性である。別
の実施形態はさらに、細胞に、メディトープ利用可能抗体が結合するエピトープとは別個
の抗原上のエピトープに結合するか、それと結合について競合しないか、または細胞表面
上の異なる抗原の異なるエピトープに特異的に結合する別のメディトープ利用可能抗体を
投与することを含む。
一例では、治療方法は、対象に、１つまたは複数のメディトープ利用可能抗体またはフ
ラグメント、例えば、本明細書において記載されているもののうちの任意のものを投与す
ることを包含する。一例では、この方法は、対象に、１つまたは複数の、メディトープ利
用可能抗体またはフラグメントと、メディトープ、例えば、多価メディトープおよび治療
剤または診断剤にカップリングしているメディトープを包含する本明細書において記載さ
れているもののうちの任意のものとを投与することを包含する。一態様では、メディトー
プ利用可能抗体またはフラグメントと、１つまたは複数のメディトープとを逐次的に投与
する。別の態様では、それらを同時に投与する。
一般に、１つまたは複数のメディトープは、メディトープ利用可能抗体のメディトープ
結合性部位またはその抗原結合性フラグメントに結合するペプチドを含む。一態様では、
メディトープ利用可能抗体を、１つまたは複数のメディトープの投与と同時に、その前に
、またはその後に投与する。一部の態様では、１つまたは複数のメディトープを、薬物、
小分子、化学療法剤、治療用抗体、毒素、放射性同位体、酵素、ヌクレアーゼ、ホルモン
、免疫調節剤、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉ分子、ｓｉＲＮＡ分子、キレート剤、ホウ
素化合物、光活性剤、色素、蛍光または発光物質、金属、金属合金、増感剤、および有機
または無機ナノ粒子からなる群から選択される治療剤などの治療剤にカップリングさせる
。
また、提供するメディトープのうちには、２つ以上のメディトープおよび１つまたは複
数のリンカーを含むものなどの多価メディトープがあり、例えば、ここで、２つ以上のメ
ディトープの各々は、メディトープ利用可能抗体のメディトープ結合部位に結合するペプ
チドである。そのような多価メディトープは、本明細書において記載されているメディト
ープのうちの任意のものを含んでよい。一態様では、２つ以上のメディトープは、少なく
とも３つのメディトープまたは少なくとも４つのメディトープを含む。一態様では、１つ
または複数のリンカーには、ペプチド、小さな化学的スキャフォールド、ビオチン−スト
レプトアビジン、有機もしくは無機ナノ粒子、ポリヌクレオチド配列、ペプチド核酸、有
機ポリマー、または免疫グロブリンＦｃドメインが包含される。
例示的な多価メディトープは、二価、三価、および四価メディトープ、さらには、５、
６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、数
１００、１０００、数１０００以上のメディトープを含有する多価メディトープである。
一部の態様では、そのような多価メディトープは、メディトープをナノ粒子、ウイルス、
および／または例えば、他の半固体支持体などの他の支持体、例えば、ナノチューブ、バ
ッキーボール、ＬＧＡ粒子、および／または手術中イメージングにおいて使用するための
量子ドットにカップリングさせることによって達成される。
多価メディトープのうちには、リンカーを介して免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域また
はその部分（例えば、下式のＲ4A）に連結しているメディトープを包含する１つまたは複
数の鎖を包含する化合物がある。Ｉｇ定常領域またはその部分は、一部の実施形態では、
Ｆｃ領域またはその部分、例えば、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、および／またはＣＨ３ドメイン
である。一部の態様では、Ｉｇ定常領域部分はさらに、ＣＨ４ドメインを包含する。Ｉｇ
は、一部の態様では、ＩｇＧである。一部の態様では、定常領域部分は、ＣＨ２を含有せ
ず、ＣＨ１を含有せず、ＣＨ４を含有せず、かつ／または可変領域または抗原結合性部分
を含有しない。そのような化合物およびメディトープは多くの場合に、複数のＩｇ定常領
域部分、例えば、Ｆｃ部分の間の相互作用によって、二価または多価、例えば、四価であ
る。一例では、多価メディトープは、下式を有する、１つまたは複数のポリペプチド鎖な
どの１つまたは複数の鎖を有する：
Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A（式Ｉ）
［式中、Ｒ3Aは、ペプチドメディトープまたは結合性部分などのメディトープまたは中央
空洞結合性部分であり、Ｌ3Aは、Ｒ3AおよびＲ4Aを連結するペプチジルリンカーなどのリ
ンカーであり、Ｒ4Aは、Ｉｇ Ｆｃ領域またはその機能性フラグメントを含む免疫グロブ
リン（Ｉｇ）重鎖定常領域部分である］。
一部の実施形態では、鎖は下式を有する：
Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A−Ｚ1（式ＩＩ）
［式中、Ｒ3Aは、ペプチドメディトープまたは結合性部分などの第１のメディトープまた
は中央空洞結合性部分であり；Ｌ3Aは、ペプチジルリンカーなどの第１のリンカーであり
；Ｒ4Aは、Ｉｇ Ｆｃ領域またはその機能性フラグメントを含む免疫グロブリン（Ｉｇ）
重鎖定常領域部分であり；Ｚ1は、水素、０〜５０アミノ酸を含むアミノ酸配列、−Ｌ3B
−Ｒ3B、または−Ｌ3B−Ｒ3B−Ｒ5Bであり、Ｌ3Bは、第２のリンカーであり；Ｒ3Bは、第
２のメディトープであり；Ｒ5Bは、０〜５０アミノ酸を含むアミノ酸配列である］。
一部の場合には、メディトープは、第１のメディトープであり、リンカーは、第１のリ
ンカーであり、鎖は、下式を含む：
Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A−Ｌ3B−Ｒ3B（式ＩＩＩ）
［式中、Ｌ3Bは、Ｒ4AおよびＲ3Bを連結する第２のリンカーであり；Ｒ3Bは、第２のメデ
ィトープまたは中央空洞結合性部分である］。
一部の状況では、化合物、鎖、メディトープまたは中央空洞結合性部分、例えば、ペプ
チドメディトープは、テールまたはリーダー配列、例えば、１個または複数のグリシンま
たはセリン、またはアスパルタート残基を有する配列を包含する。したがって、一部の実
施形態では、鎖は、下式を含む：
Ｒ5A−Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A−Ｒ5B（式ＩＶ）、または
Ｒ5A−Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A−Ｌ3B−Ｒ3B−Ｒ5B（式Ｖ）
［式中、Ｒ5AおよびＲ5Aのそれぞれは、ヌルである（存在しない）か、または０〜５０ア
ミノ酸長さ、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、
１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２
７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０
、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０を含む配列であ
る］。
一部の実施形態では、化合物は、鎖、例えば、ペプチドメディトープ（Ｒ3AまたはＲ3B
など）などのメディトープまたは中央空洞結合性部分、およびＩｇ Ｆｃ領域またはその
機能性フラグメントを含む重鎖定常領域部分を有する第１の鎖を含む。鎖のこれらの２つ
の成分は典型的には、Ｌ3AまたはＬ3Bのリンカーなどのリンカー、典型的にはペプチジル
リンカーを介して連結される。一部の態様では、鎖はさらに、１〜５０アミノ酸のアミノ
酸配列であり得るテールおよび／またはリーダー配列を包含する。
一部の実施形態では、鎖の様々な成分は、例えば、アミド結合（複数可）によって共有
結合される。一部の実施形態では、鎖およびメディトープおよび化合物のリンカー、例え
ば、Ｌ3A、Ｌ3B、または両方は、２５〜４０アミノ酸長さであるか、または２５、２６、
２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４
０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０アミノ酸長さ
（もしくはその概数）、例えば、３０、３６、３７、または３９アミノ酸長さ（もしくは
その概数）である。一部の態様では、リンカー、例えば、Ｌ3A、Ｌ3B、または両方は、約
２Å〜約３００Å、例えば、約２Å〜約２００Åの長さであるか；約５０Å〜約１５０Å
または約５０Å〜約２００Åの長さであるか；または約１００Å〜約１４０Åの長さ、例
えば、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１
０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１
１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１
２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１
３９、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００、２５０、また
は３００Åの長さ（もしくはその概数）である。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１９９、２００、２０１、２０２、２０３
、もしくは２０４の配列、またはその修飾変異体、例えば、残基のいずれか１、２、３、
または４個がコンジュゲートされたアミノ酸で置換されていてもよく、かつ／または１個
または複数のリシンがアルギニンなどの異なるアミノ酸に変異されているものを包含する
か、または有する。一部の場合には、コンジュゲートされたアミノ酸は、リシンについて
置換されている（すなわち、リシンの代わりに挿入）。
メディトープ（多価および／または標識されたメディトープを包含する）、メディトー
プ利用可能抗体、および複合体、ならびに／または例えば、上記の本明細書に記載の他の
化合物を含む組成物、例えば、医薬組成物も提供する。一例では、組成物は、複合体、メ
ディトープ、および／またはメディトープ利用可能抗体、ならびに薬学的に許容される担
体を包含する。
また、対象に、本明細書において記載されている、例えば、上記のような医薬組成物あ
るいはメディトープ利用可能抗体、メディトープ、複合体、および／または他の化合物の
うちの任意のものを投与することによって実施される方法などの治療方法を提供する。一
例では、この方法は、対象に、上記のとおりの抗体またはフラグメントを投与することを
包含する。
多価および／または標識されたメディトープを包含するメディトープ、メディトープ利
用可能抗体−メディトープ複合体などを送達する方法も提供する。一態様では、そのよう
な方法は、複合体または医薬組成物を投与することを含み得るか、またはメディトープ利
用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを投与することをさらに包含し、投与は、
メディトープ利用可能抗体が特異的に結合する細胞表面抗原の凝集および／または内部移
行の増加を誘導する。抗原は、腫瘍関連または腫瘍特異的抗原であり得る。抗原は、内部
移行性または非内部移行性抗原であり得る。そのような方法は、治療剤または診断剤を、
目的の抗原を発現する細胞に送達することを伴い得る。様々な態様で、治療剤または診断
剤は、１つまたは複数のメディトープに、メディトープ利用可能抗体に、様々なメディト
ープのリンカーに、またはそのような薬剤のコンジュゲーションを収容するために適した
多価メディトープの他の構造的特徴にカップリングされていてよい。ある種の態様では、
投与から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１５時間以内、または１
、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１４、２１、もしくは２８日以内に、多価メ
ディトープは、目的の抗原を発現する細胞のリソソームコンパートメントに送達される。
一部の実施形態では、細胞表面抗原の分布を改変する方法は、細胞を、細胞表面抗原に
結合することができる複数のメディトープ利用可能抗体、またはその抗原結合性フラグメ
ントと接触させるステップと、複数のメディトープ利用可能抗体の第１のメディトープ利
用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディ
トープからの第１のメディトープと接触させるステップと、複数のメディトープ利用可能
抗体の第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントのメディトー
プ結合性部位を、多価メディトープからの第２のメディトープと接触させて、第１および
第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生じさせ、それによって、第１および第２のメ
ディトープ利用可能抗体と多価メディトープとの架橋が、細胞表面抗原の分布を改変する
ステップとを包含する。
一部の実施形態では、細胞表面抗原の同時局在化を増加させるための方法は、細胞を、
細胞表面抗原に結合することができる複数のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
合性フラグメントと接触させるステップと、複数のメディトープ利用可能抗体の第１のメ
ディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントのメディトープ結合性部位を
、多価メディトープからの第１のメディトープと接触させるステップと、複数のメディト
ープ利用可能抗体の第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメント
のメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第２のメディトープと接触させて
、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生じさせ、それによって、第１お
よび第２のメディトープ利用可能抗体と多価メディトープとの架橋が、細胞表面抗原また
は受容体の同時局在化を増加させるステップとを包含する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体の細胞内部移行を増加させるための方
法は、細胞表面抗原を発現する細胞を、複数のメディトープ利用可能抗体またはその抗原
結合性フラグメントと接触させ、それによって、前記複数のメディトープ利用可能抗体ま
たはその抗原結合性フラグメントを細胞表面抗原に結合させるステップと、複数のメディ
トープ利用可能抗体の第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメン
トのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第１のメディトープと接触させ
るステップと、複数のメディトープ利用可能抗体の第２のメディトープ利用可能抗体また
はその抗原結合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第
２のメディトープと接触させて、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生
じさせ、それによって、第１および第２のメディトープ利用可能抗体と多価メディトープ
との架橋が、細胞表面抗原に結合した第１および第２のメディトープ利用可能抗体の細胞
内部移行を増加させるステップとを包含する。
一部の実施形態では、細胞表面抗原の細胞内部移行を増加させるための方法は、第１の
細胞表面抗原を、細胞表面抗原に結合する第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗
原結合性フラグメントと接触させるステップと、第２の細胞表面抗原を、第２の細胞表面
抗原に結合する第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントと接
触させるステップと、複数のメディトープ利用可能抗体の第１のメディトープ利用可能抗
体またはその抗原結合性フラグメントのメディトープ結合性部位を多価メディトープから
の第１のメディトープと接触させるステップと、複数のメディトープ利用可能抗体の第２
のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントのメディトープ結合性部
位を多価メディトープからの第２のメディトープと接触させ、それによって、第１および
第２のメディトープ利用可能抗体を架橋させ、第１および第２の細胞表面抗原の細胞内部
移行を増加させるステップとを包含する。
一部の実施形態では、抗体治療の有効性を増加させる方法は、対象に、有効量の、細胞
表面抗原に特異的に結合するメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメン
ト、および有効量の多価メディトープを投与するステップと、第１の細胞表面抗原に結合
した第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントに結合した多価
メディトープの第１のメディトープ、および第２の細胞表面抗原に結合した第２のメディ
トープ利用可能抗体またはそのフラグメントに結合した多価メディトープの第２のメディ
トープの複合体を形成して、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生じさ
せ、それによって、第１および第２の抗体の架橋が、抗体治療の有効性を増加させるステ
ップとを包含する。
一部の実施形態では、対象において所望の治療効果を達成するために必要とされる抗体
治療の投薬量を低減する方法は、対象に、有効量のメディトープ利用可能抗体またはその
フラグメント、および有効量の多価メディトープを投与するステップと、多価メディトー
プの第１のメディトープを第１のメディトープ利用可能抗体またはそのフラグメントと接
触させるステップと、多価メディトープの第２のメディトープを第２のメディトープ利用
可能抗体またはそのフラグメントと接触させて、第１および第２のメディトープ利用可能
抗体の架橋を生じさせ、それによって、第１および第２の抗体の架橋が、対象において所
望の治療効果を達成するために必要とされる抗体治療の投薬量を低減するステップとを包
含する。
一部の実施形態では、第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメ
ント、および第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを架橋
する方法は、細胞を第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメント
と接触させるステップであって、前記第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
合性フラグメントが第１のメディトープ結合性部位を包含するステップと、前記第１のメ
ディトープ結合性部位を多価メディトープと接触させるステップであって、前記多価メデ
ィトープが第２のメディトープに結合する第１のメディトープを包含するステップと、前
記多価メディトープを第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメン
トと接触させるステップであって、前記第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原
結合性フラグメントが第２のメディトープ結合性部位を包含するステップと、前記第１の
メディトープ結合性部位を前記第１のメディトープに結合させ、前記第２のメディトープ
結合性部位を前記第２のメディトープに結合させ、前記第１のメディトープ利用可能抗体
またはその抗原結合性フラグメントを前記細胞に結合させ、かつ前記第２のメディトープ
利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを前記細胞に結合させ、それによって、
前記第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメント、および前記第
２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを架橋するステップと
を包含する。
一部の実施形態では、細胞表面抗原は、受容体媒介性細胞内取り込み作用が可能である
受容体である。
一部の実施形態では、多価メディトープは、メディトープに連結した免疫グロブリンＦ
ｃ領域またはその部分を包含する。一部の実施形態では、メディトープは、リンカーにカ
ップリングされている。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１９９、２００、２
０１、２０２、２０３、もしくは２０４の配列、またはその変異体を含む。
一部の実施形態では、多価メディトープは、治療剤または診断剤にカップリングされて
いる。一部の実施形態では、治療剤は、化学療法剤、治療用抗体、毒素、放射性同位体、
酵素、キレート剤、ホウ素化合物、光活性剤、色素、金属、金属合金、およびナノ粒子か
らなる群から選択される；または診断剤は、蛍光物質、発光物質、色素、および放射性同
位体からなる群から選択されるイメージング剤である。
一部の実施形態では、第１のメディトープ利用可能抗体は、第２のメディトープ利用可
能抗体とは異なるエピトープに結合する。一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗
体またはその抗原結合性フラグメントは、細胞またはその組織の疾患または状態によって
発現される抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、疾患または状態は、癌である
。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントお
よびメディトープを逐次的に投与する。一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体
またはその抗原結合性フラグメントの少なくとも１つは、下記からなる群から選択される
抗体またはその抗原結合性フラグメントと抗原結合について競合するか、またはそれらと
同じエピトープに結合する：アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツム
マブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、ペンテト酸アルツモマブ、アナツモマブ、アナツ
モマブマフェナトクス、アルシツモマブ、アトリズマブ、バシリキシマブ、ベクツモマブ
、エクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、カナ
キヌマブ、カプロマブ、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セルトリズマブ、クリ
バツズマブテトラキセタン、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エドレコロマブ
、エファリズマブ、エタラシズマブ、エルツマキソマブ、ファノレソマブ、フォントリズ
マブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、イ
ンフリキシマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、メポリズマブ、ムロモナブ、ムロモナブ
−ＣＤ３、ナタリズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ
、オレゴボマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、サツモマ
ブ、スレソマブ、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、トシリズマブ、トシツ
モマブ、トラスツズマブ、ウステキヌマブ、ビシリズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、
ブロダルマブ、アンルキンズマブ、バピヌズマブ、ダロツズマブ、デムシズマブ、ガニツ
マブ、イノツズマブ、マブリリムマブ、モキセツモマブパスドトックス、リロツムマブ、
シファリムマブ、タネズマブ、トラロキヌマブ、トレメリムマブ、およびウレルマブ；ま
たは以下からなる群から選択される抗原に特異的に結合するメディトープ利用可能抗体ま
たはフラグメント：ＣＡ−１２５、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体、ＴＮ
Ｆ−α、ＣＤ５２、ＴＡＧ−７２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、インターロイキン−６受容
体（ＩＬ−６Ｒ）、ＩＬ−２、インターロイキン−２受容体ａ−鎖（ＣＤ２５）、ＣＤ２
２、Ｂ細胞活性化因子、インターロイキン−５受容体（ＣＤ１２５）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧ
Ｆ−Ａ、ＣＤ３０、ＩＬ−１β、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ３、ＥｐＣＡＭ
、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、ＭＵＣ１、ヒトインターロイキン−２受容体、Ｔａｃ、Ｒ
ＡＮＫリガンド、Ｃ５または他の補体タンパク質、ＣＤ１１ａ、アルファ−ｖベータ−３
インテグリン、ＨＥＲ２、ｎｅｕ、ＣＤ１５、ＣＤ２０、インターフェロンガンマ、ＣＤ
３３、ＣＡ−ＩＸ、ＣＴＬＡ−４、ＩＬ−５、ＣＤ３イプシロン、ＣＡＭ、アルファ−４
−インテグリン、ＩｇＥ、ＩｇＥ Ｆｃ領域、ＲＳＶ抗原、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ
）のＦ（または融合）タンパク質、ＮＣＡ−９０（顆粒球細胞抗原）、ＩＬ−６、ＧＤ２
、ＧＤ３、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１７、ＣＴＡＡ１６．８８、ベータ−アミロ
イド、ＩＧＦ−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）、顆粒球マ
クロファージコロニー刺激因子受容体のアルファサブユニット、肝細胞成長因子、ＩＦＮ
−アルファ、神経成長因子、ＩＬ−１３、ＣＤ３２６、ＣＤ１９、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ４７
、およびＣＤ１３７。
一部の実施形態では、多価メディトープは、下式を有するペプチドを包含する：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２（式
ＶＩ）
［式中、
Ｘ１は、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、β−アラニン、ジアミノプロピオン酸、β−アジドアラニン
、またはヌルであり；
Ｘ２は、Ｇｌｎまたはヌルであり；
Ｘ３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、β，β’−ジフェニル−Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、２−ブロ
モ−Ｌ−フェニルアラニン、３−ブロモ−Ｌフェニルアラニン、４−ブロモ−Ｌ−フェニ
ルアラニン、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、修飾Ｐｈｅ、水和性カルボニル含有残基、またはボロン酸
含有残基であり；
Ｘ４は、ＡｓｐまたはＡｓｎであり；
Ｘ５は、Ｌｅｕ；β，β’−ジフェニル−Ａｌａ；Ｐｈｅ；フェニルアラニン、トリプ
トファン、またはチロシンの非天然類似体；水和性カルボニル含有残基；またはボロン酸
含有残基であり；
Ｘ６は、ＳｅｒまたはＣｙｓであり；
Ｘ７は、Ｔｈｒ、ＳｅｒまたはＣｙｓであり；
Ｘ８は、Ａｒｇ、修飾Ａｒｇ、または水和性カルボニル含有残基もしくはボロン酸含有
残基であり；
Ｘ９は、ＡｒｇまたはＡｌａであり；
Ｘ１０は、Ｌｅｕ；Ｇｌｎ；Ｇｌｕ；β，β’−ジフェニル−Ａｌａ；Ｐｈｅ；フェニ
ルアラニン、トリプトファン、もしくはチロシンの非天然類似体；水和性カルボニル含有
残基；またはボロン酸含有残基であり；
Ｘ１１は、Ｌｙｓであり；
Ｘ１２は、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、７−アミノヘプタン酸、β−アラニン、ジアミノプロピオ
ン酸、プロパルギルグリシン、イソアスパラギン酸、またはヌルである］。
一部の実施形態では、多価メディトープは、配列番号１、２、１５、１６、１７、１８
、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、
３２、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４
６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、１８６、１８７、１８８
、１８９、もしくは２０７のアミノ酸配列、またはそれに由来する環式ペプチドを包含す
る。
一部の実施形態では、多価メディトープは、第１のリンカーにカップリングしている第
１のメディトープおよび第２のメディトープを包含し、第１のリンカーは、ＰＡＳ化配列
、ソルターゼ配列、Ｓｓｐ Ｉｃインテイン配列、Ｓｓｐ ＩＮインテイン配列、および
／またはアルデヒドタグを含む。一部の実施形態では、多価メディトープは、第２のリン
カーを包含する。
一部の実施形態では、第１のリンカーは、Ｓｓｐ ＩCインテイン配列およびＳｓｐ
ＩNインテイン配列を包含する。一部の実施形態では、第１のリンカーは、Ｓｓｐ Ｉcイ
ンテイン配列を包含し、第２のリンカーは、Ｓｓｐ ＩNインテイン配列を包含する。一
部の実施形態では、ソルターゼ配列は、配列ＬＰＸＴＧ（配列番号２４９）を包含し、Ｘ
は、任意のアミノ酸である。一部の実施形態では、第１のリンカーおよび／または第２の
リンカーはさらに、グリシン残基を包含する。一部の実施形態では、アルデヒドタグは、
配列番号２４７の配列を包含する。一部の実施形態では、第１のおよび／または第２のリ
ンカーはさらに、リシン、チロシン、グルタミン酸、アスパラギン酸および／または非天
然アミノ酸残基を包含する。一部の実施形態では、第１のおよび／または第２のリンカー
は、治療剤または診断剤にコンジュゲートされている。
一部の実施形態では、複合体は、細胞および多価メディトープに結合している第１およ
び第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを包含し、前記第
１および第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントはそれぞれ
、メディトープ結合性部位を包含し、多価メディトープは、第１および第２のメディトー
プを含み、多価メディトープの第１のメディトープは、第１のメディトープ利用可能抗体
のメディトープ結合性部位に結合しており、多価メディトープの第２のメディトープは、
第２のメディトープ利用可能抗体のメディトープ結合性部位に結合している。
腫瘍治療を増強するための一実施形態における作用機序が示されている。例示されている実施形態では、二価抗体は、腫瘍細胞上で過剰発現される抗原上のエピトープ（例えば、ＥｒｂＢ受容体ファミリー）に結合し（左側のパネル）、かつ受容体シグナル伝達をブロックし、細胞内取り込み作用および受容体リサイクリングを改変し、かつ／または免疫応答を誘発する。ＥＧＦＲの別のドメインを認識するマツズマブなどの抗体をセツキシマブと組み合わせて加えることが場合によって、表面受容体のデイジーチェーニングによって、より有効であり得る（右側のパネル１）。多価メディトープ（この特定の実施例では、三価）は治療用ｍＡｂをテザー（ｔｅｔｈｅｒ）／架橋して、その治療可能性を増強することができる（右側）。加えて、多価メディトープ（ここでは、三価バージョンとして示されている）は、治療法と、さらにはイメージングとの両方を増強することができるイメージング剤を担持することができる。 例示的な二価メディトープが示されている。このメディトープは、ＩｇＧのＦｃ領域に直接融合しているペプチドリンカーのＮ末端に直接融合している。この例では、このＦｃは、発現中に自然にホモ二量体化するので、メディトープ−Ｆｃコンストラクトからの最終生成物は二価である。 ある種の実施形態で使用してもよい代替のメディトープ−Ｆｃリンカー、多重コイルである。 ＳＰＲによって決定された、一価（左側のパネル）および四価（右側のパネル）メディトープとセツキシマブとの結合反応速度が示されている。表面プラスモン共鳴トレースの上のパネルは、二価ＩｇＧ上を通過する一価メディトープのイラストを示している。右側のパネルに示されているとおり、アビジンは、ビオチン化メディトープで飽和されて、同じ固定化セツキシマブＩｇＧ上を通過した。多価メディトープのオフレートは、少なくとも１／３６に低減された（２つの実験の間で時間尺度が異なることに注意されたい）。 ラクタム結合を含有するメディトープについて、一部の実施形態による二量体および三量体メディトープの合成が示されている。配列の説明：（ＧＱＦＤＬＳＴＲＲＬＫＧ）配列番号１７３；（ＧＫＬＲＲＴＳＬＤＦＱＧ）配列番号１７４。 メディトープ結合パラメーターを最適化するために使用することができ、本明細書において記載されている実施形態によって使用することができる修飾されたＡｒｇ８残基が示されている（Ｒ＝アルキル、置換アルキル、芳香族、またはＮＨＲ’’’であり、ここで、Ｒ’’’＝アルキル、置換アルキル、または芳香族である）。 一部の実施形態によるメディトープの化学構造が示されている。円は、修飾して、例えばＦａｂに対するメディトープ親和性を向上させることができる位置を示している。囲みは、環化ストラテジーを示している。上段と下段の一番右の囲み内の「クリック」化学およびオレフィン複分解はそれぞれ、メディトープを環化するための追加の経路である。 セツキシマブのフレームワークループに結合しているメディトープペプチドが示されている。図８Ａ：セツキシマブＦａｂ（軽鎖はＶLおよびＣLによって示されている；重鎖はＶHおよびＣHによって示されている）と環式ＣＱＦＤＬＳＴＲＲＬＫＣ（網掛け部分内に示されており、語「メディトープ」で標識されている）（配列番号１）との複合体は、このメディトープが、セツキシマブのＣＤＲループとは別であるＦａｂフレームワークのインターフェースに結合することを示している。図８Ｂ（上）は、ｃＱＦＤメディトープの棒モデルによる表示を示しており、（下）は、ｃＱＹＮメディトープの棒モデルによる表示を示している。Ｎ末端およびＣ末端システインは、溶媒に曝露されており、高い温度因子を示す。 既に仮定されていたとおり、ｃＱＦＤおよびｃＱＹＮメディトープが、セツキシマブのＣＤＲには結合しないことが示されている。図９Ａには、２つの結晶構造が重ねて示されており、一方は、セツキシマブＦａｂおよびその抗原ＥＧＦＲドメインＩＩＩであり、他方は、ｃＱＦＤメディトープおよびセツキシマブＦａｂを示しており、ここで、ｃＱＦＤメディトープは、セツキシマブＦａｂの中央空洞部に結合している。抗原ＥＧＦＲドメインＩＩＩは、メディトープ結合部位からかなり離れた相補性決定領域で結合している。 図９Ｂの左側には、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ結果が、かつ右側には、対応するサイズ排除クロマトグラフィー結果が示されている。個々の成分であるＦａｂ、ＥＧＦＲドメインＩＩＩ、およびＳＭＴ−ｃＱＦＤメディトープ、さらには、それら３種全ての混合物のサイズ排除実験によって、ヘテロ三量体複合体の形成およびその共溶出が示されている。非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルは、初めに溶出された画分を示しており、このことは、混合物で観察される新たなピーク（「複合体」の薄灰色に網掛けされている一番左のピーク）中に、３つの成分全てが存在することを示している。図９Ｃには、ＦＡＣＳ分析の結果が示されており、これは、ｃＱＦＤメディトープは、セツキシマブの存在下でのみ、ＥＧＦＲ陽性ＭＤ−ＭＢＡ−４６８細胞に結合したことを示している（矢印）。メディトープ単独またはＭ４２５、マウスＥＧＦＲ抗体の存在下でのメディトープは、結合しなかった。 図９Ｄには、セツキシマブｓｃＦｖまたはＦａｂとカップリングしたセンサーチップを使用する表面プラスモン共鳴実験の結果が示されている。実験によって、１００μＭという高濃度のｃＱＦＤメディトープでも、ｓｃＦｖは飽和され得ないことが示されている。セツキシマブＦａｂをカップリングさせたセンサーチップを使用する同じ実験では、完全な飽和が示されている。この実験での解離定数は６６０ｎＭである。対照ＳＰＲ実験（下段のパネル）によって、セツキシマブｓｃＦｖは可溶性ＥＧＦＲドメインＩＩＩフラグメントに容易に結合することが示されており、これは、ＣＤＲループが機能性であったことを示している。 ｓｃＦｖ−メディトープのリンカーが示されている。１２〜２０アミノ酸リンカー（典型的には｛ＧＧＧＳ｝3-5）を介して軽鎖可変ドメインを重鎖可変ドメインに（またはその逆で）融合させることによって、ｓｃＦｖを作る。この例では、フレキシブルなリンカー配列の一部を、メディトープ配列に置き換えることができる。 セツキシマブ（Ｃ）またはＭ４２５をＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞と共に事前インキュベートした後のＦＡＣＳ分析の結果が示されている。単量体メディトープ（ｃＱＦＤ）３μＭを添加し、ＦＡＣＳ分析に進める前に洗浄するか、または洗浄しないかのいずれかであった。 メディトープ利用可能化変異が抗原認識を妨害しなかったことを示す研究結果が示されている。市販のトラスツズマブ（親）、ＮＳ０細胞から生成したトラスツズマブ（ＮＳ０親）、およびｍｅｍＡｂトラスツズマブ（ｍｅｍＡｂ）をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８で標識し、ＳＫＢＲ３細胞（上部のパネル）に施与した。過剰なｍＡｂを洗い流した後に、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７−メディトープ−Ｆｃ（ＭＦＣ）を施与した。３種のｍＡｂは同じ範囲で細胞に結合したが、ｍｅｍＡｂ標識された細胞のみが、ＭＦＣ結合を増強している。 抗体（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８定常状態）の非存在下、トラスツズマブ（メディトープ使用不可能）（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８ １０ｎＭ Ｔ）の存在下、３分間のｍｅｍＡｂトラスツズマブおよび四価メディトープ（Ｍ４Ｆｃ）の存在下（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８ １０ｎＭ ｍｅＴｖ２ １０ｎＭ Ｍ４Ｆｃ ３分）、および１０分間のｍｅｍＡｂトラスツズマブおよび四価メディトープ（Ｍ４Ｆｃ）の存在下（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８ １０ｎＭ ｍｅＴｖ２ １０ｎＭ Ｍ４Ｆｃ １０分）での、２４時間後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞上のＨＥＲ２分布の棒グラフが示されている。 ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２と抗体との相互作用のＳＰＲセンサグラムが示されている。図１４Ａには、ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２と固定化メディトープ利用可能トラスツズマブＩｇＧとの相互作用を示すＳＰＲセンサグラムが示されている。図１４Ｂには、ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２と固定化ＨＥＲ２との結合相互作用を示すＳＰＲセンサグラムが示されている。 ｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬとｍｅｍＡｂトラスツズマブとの相互作用が示されている。図１５Ａには、ｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬと固定化ｍｅｍＡｂトラスツズマブとの相互作用を示すＳＰＲセンサグラムが示されている。図１５Ｂには、漸増比のＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬとｍｅｍＡｂトラスツズマブＩｇＧとの相互作用を示す分析用サイズ排除クロマトグラフィートレースが示されている。 多価メディトープのゲル濾過クロマトグラムが示されている。図１６Ａには、三価メディトープの代表的なゲル濾過カラムクロマトグラム（ＨｉＬｏａｄ ｐｒｅｐ７５ ２６／６００ＰＧ）が示されている。図１６Ｂには、二価メディトープの代表的なゲル濾過カラムクロマトグラム（ＨｉＬｏａｄ ｐｒｅｐ７５ ２６／６００ＰＧ）が示されている。 メディトープ利用可能トラスツズマブへの多価メディトープ結合が示されている。図１７Ａには、メディトープ利用可能トラスツズマブへのＢＶＭ画分２６〜２９結合が示されている。図１７Ｂには、ｍｅｍＡｂトラスツズマブへのＴＶＭ精製からのＳＥＣ画分の結合分析が示されている。 精製三価メディトープの分析が示されている。図１８Ａには、ＨＰＬＣによる精製三価メディトープの分析が示されている。図１８Ｂには、質量分析による精製三価メディトープの分析が示されている。 低濃度（Ａ）、中濃度（Ｂ）、および高濃度（Ｃ）でのメディトープ利用可能抗体への多価メディトープの結合分析が示されている。 低濃度（上のパネル）、中濃度（中央のパネル）、および高濃度（下のパネル）のメディトープ利用可能抗体で、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、１：１の多価メディトープ：メディトープ利用可能抗体結合モデルに対するデータフィット品質が示されている。
複数のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントに結合している複
数の多価メディトープを含む複合体を本明細書において提供する。これらの複合体の形成
は、複数の抗体またはその抗原結合性フラグメントが結合する細胞表面抗原の分布を改変
する。多価メディトープおよびメディトープ利用可能抗体、ならびに標的抗原上のその同
源エピトープの相互作用を介しての複合体の形成は、細胞上の細胞表面抗原のクラスター
化または同時局在化を増加または促進することができ、このことによって、複合体の内部
移行が増加または促進され得る。次に、内部移行の増加を使用して、標的細胞の表面から
細胞表面抗原の濃度を除去または減少させることができ、標的細胞へのメディトープ利用
可能抗体−メディトープ複合体の内部移行の比率を上昇させることができる。内部移行比
率の上昇は、ある種の治療の有効性を上昇させるか、または特定の治療効果を達成するた
めに必要な薬物の量を減少させることができる。細胞表面抗原のクラスター化を増加また
は促進する方法は、細胞に、細胞表面抗原に特異的に結合する１つまたは複数のメディト
ープ利用可能抗体を投与するステップと、１つまたは複数の多価メディトープを投与し、
それによって、標的細胞の表面上の細胞表面抗原のクラスター化を促進するステップとを
含み得る。特定の実施形態では、多価メディトープは、１つまたは複数の薬剤にコンジュ
ゲートされている。
Ａ． 細胞表面抗原提示を変更するための多価メディトープ
多価メディトープは、標的細胞表面抗原に対するメディトープ利用可能抗体と共に使用
され、宿主細胞の表面上でのそれらの分布に変化を生じさせることができる。例えば、腫
瘍関連抗原などの細胞表面抗原、ＧＰＣＲなどの受容体、受容体チロシンキナーゼ、ＣＴ
ＬＡ４などの他のシグナル伝達分子、および細胞表面タンパク質上に存在する他のエピト
ープの提示を、多価メディトープ、およびそれらの抗原上のエピトープを認識するメディ
トープ利用可能抗体の使用によって操作および／または再構成することができる。受容体
およびシグナル伝達分子の再構成は、シグナル伝達経路および細胞応答に対して顕著な効
果を有し得る。
ｉｎ ｖｉｖｏでは、この種の再構成は、細胞−細胞接触によって起こり、その際、１
個の細胞からのリガンドが他の細胞上の受容体にエンゲージして、多価相互作用を効果的
にもたらす。この接触点によって、受容体／リガンドは局在化するか、または相互に近接
して、シグナル伝達「シナプス」をもたらす。そのシグナル伝達シナプスは、細胞内で翻
訳後修飾を開始し、例えば、アクチンおよび微小管構成を改変し、最終的に、特異的転写
イベントをもたらし得る。
多価メディトープの使用を、細胞表面抗原の分布を改変するために、同様の様式で使用
することができる。具体的には、１つまたは複数のメディトープ利用可能抗体を、１つま
たは複数の多価メディトープと併せて投与し、細胞表面上の標的抗原に結合させることが
できる。一実施形態では、多価メディトープは、それらのコグネイト抗原に結合した連結
メディトープ利用可能抗体の複合体の形成を可能にする。メディトープ利用可能抗体は、
多価メディトープと会合して、表面抗原を相互に引き寄せるか、または架橋させて、細胞
表面上のそれらの抗原の提示を効果的に改変する。
この効果を、二価メディトープをメディトープ利用可能抗体と共に使用することによっ
て例示する。この組み合わせは、第１のメディトープ利用可能抗体の１つのＦａｂアーム
が、第２のメディトープ利用可能抗体の１つのＦａｂアームとエンゲージすることを可能
にする。このシナリオでは、メディトープ利用可能抗体に結合した細胞表面抗原および二
価メディトープの「線状」配置が予測されるであろう。三価、四価、またはより高い価の
メディトープを使用し、追加のメディトープ利用可能抗体に会合した表面由来抗原をクラ
スター化することが可能である。多価メディトープを、クラスター化のジオメトリーを正
確に制御するために調整することができる。例えば、２つの受容体を近接させ、可能性と
して細胞内シグナル伝達分子のより高い活性につなげることが有利であり得る。この場合
、２つ以上のメディトープの間のリンカーは、ＰＥＧリンカー、ペプチドリンカー、また
はＤＮＡ、例えば、ＤＮＡオリガミによって約１〜１０Å（例えば）であり得る。別法で
は、受容体を遠位に保持することが有利であり得る。この場合、特定の受容体を「押し」
分けるために、メディトープ間で硬いリンカーを使用することができる。これらの硬いリ
ンカーは、メディトープが、軽鎖および／または重鎖のＮおよび／またはＣ末端に融合し
ている全ＩｇＧなどのタンパク質ドメインであり得るであろう。別法では、各メディトー
プの距離を直接制御するために、ＤＮＡを使用することができる。さらに、ＤＮＡオリガ
ミの最近の進歩は、各メディトープの位置をしっかりと制御することができる追加の例を
提供している。
別の実施形態では、メディトープ利用可能抗体を非内部移行性抗原に対して、かつ第２
のメディトープ利用可能抗体をシグナル伝達に関係する抗原に対して使用することが可能
である。この場合には、多価メディトープ利用可能抗体を、シグナル伝達受容体を、シグ
ナル伝達において活性な細胞膜の領域から隔離するために使用することができるであろう
。代わりに、シグナル伝達事象が活性なままであることを保証することが有利であること
がある。柔軟か、または硬く、規定の長さを有する多価メディトープを、その対を調節す
るために使用することができる。
別の実施形態では、メディトープ利用可能抗体および多価メディトープを、免疫応答の
ために特異的な細胞をマークするために使用することができる。この場合、多価メディト
ープを介してのメディトープ利用可能抗体−会合受容体のクラスター化は、Ｔ細胞上のＦ
ｃＲで「高」濃度のＦｃドメインを提供するであろう。複数回の調査によって、Ｆｃドメ
インは、適切な応答を誘発する限定数の点変異によって、特異的に調節することができる
ことが実証されている。
別の実施形態では、メディトープ利用可能抗体についての多価メディトープの結合親和
性を操作することによって、標的抗原上のコグネイトエピトープについて好ましい結合親
和性を有するメディトープ利用可能抗体を選択することによって、または寿命を最適化す
るために両方の特徴を、さらには、メディトープ利用可能抗体−多価メディトープ複合体
の標的化の特異性を操作することによって、抗体治療の有効性を改変および改善すること
ができる。具体的には、相互作用の寿命は、キネティックオフレート（ｋｉｎｅｔｉｃ
ｏｆｆ−ｒａｔｅ）に関連している。一部の事例では、最長の可能寿命が有利であろうこ
とが想像され得る。他の場合では、中等度の寿命（ｔａｕ＝１０ｍｓから１０分）が有利
であろう。後者の場合では、腫瘍組織上で過剰発現されるが、ある種の健康な組織でも、
より低いレベル（１０、１００、または１０００分の１）ではあるが発現される特異的な
受容体（例えば、ＥＧＦＲまたはＨｅｒ２）が存在する。臨床的には、腫瘍には結合し、
健康な組織には結合しないことが望まれ得る。中等度の寿命を有するメディトープ利用可
能抗体および多価メディトープの組合せの使用が、多価メディトープの選択性を増強する
。具体的には、正常な細胞に存在する低濃度の抗原で、メディトープ利用可能抗体は、抗
原に結合することができるであろうし、多価メディトープも相互作用することができるで
あろう。しかしながら、第２のメディトープ利用可能抗体が抗原にエンゲージする可能性
は低く、多価メディトープは解離される。病態では、隣接するメディトープ利用可能抗体
が抗原にエンゲージする可能性は高く、２つ以上のメディトープ利用可能抗体会合抗原を
架橋することが可能である。
他の実施形態では、提供する方法は、細胞の特性を利用し、多価メディトープと会合し
た薬剤を効率的に放出するために、内部移行およびコンジュゲートされた生物製剤のソー
ティング経路を改変する。研究によって、内部移行の機構には、細胞膜に局在化される粒
子のサイズが重要であることが実証されており（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ． ２００４ Ｊａ
ｎ １；３７７（Ｐｔ １）：１５９〜６９；Ｊ Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
、２０１４年２月３日；１２：５．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７７−３１５５−１２
−５を参照されたい）、会合リガンドのサイズが、内部移行経路をもたらし得ることを示
唆している。メディトープ利用可能抗体との多価メディトープの使用は、細胞表面抗原に
結合した単一の抗体と比較して、より大きな粒径を有するリガンドの出現をもたらすであ
ろう。
内部移行を促進するか、内部移行比率を改変する代替の手法は、本明細書において提供
する特定の実施形態においてのとおり、細胞結合受容体の凝集を促進または制御すること
による。本明細書における一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体と連結した多
価メディトープを使用して、同時局在化、クラスター化、凝集、内部移行、および／また
は細胞内輸送もしくはソーティングを行うか、繰り返すか、または増強もしくは改変する
。抗体のみの投与と比較して、そのような受容体抗原を認識するメディトープ利用可能抗
体および多価メディトープを細胞に投与した後に、そのような表面受容体のクラスター化
および／または内部移行に、本明細書において差異が観察される。提供する実施形態のう
ちには、メディトープ利用可能抗体によって認識される表面抗原の同時局在化およびクラ
スター化、ならびに／または受容体などの細胞表面抗原などのそのような抗原の内部移行
／輸送／ソーティングを促進する多価メディトープがある。内部移行される宿主細胞上の
細胞表面タンパク質は、そのリガンドに応答する宿主細胞の能力に影響を及ぼし得るであ
ろうそれらのコグネイトリガンドとの相互作用について、利用可能性が低いであろう。
例えば、治療およびイメージング法における、細胞にメディトープおよび／またはカッ
プリングされた薬剤を送達する際のそのような多価メディトープの方法および使用も提供
する。例示的な方法は、多価メディトープにカップリングされた細胞毒素または放射標識
された薬剤の送達を行う方法である。標的細胞の表面上に豊富な特異的な抗原を認識する
一部の潜在的に有用な抗体は、「不十分に内部移行性」である（Ｍａｔｚｋｕら、Ｉｎｔ
．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １９８８ ２：１１〜１４；Ｒｅｉｌｌｙら、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｋｉｎｅｔ．１９９５ ２８：１２６〜１４２）。不十分か、または最適以下の
内部移行は、標的臓器または組織における細胞内送達および蓄積を減らす（Ｍａｔｚｋｕ
ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １９８８ ２：１１〜１４；Ｒｅｉｌｌｙら、Ｃｌｉｎ
．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．１９９５ ２８：１２６〜１４２）。したがって、これ
らの「不十分に内部移行性」の抗体は、細胞内標的化のために最適化されない。したがっ
て、抗体標的化および細胞による内部移行を増強する抗体系が必要とされている。一部の
実施形態では、当該方法は、細胞表面抗原の内部移行の程度または比率の増加をもたらす
。例えば、ＡＤＣなど、細胞に薬剤を送達するために、抗体が使用される状況において、
増加したか、またはより急速な内部移行は有利であり得る。抗体を送達する場合に、疾患
の進行に関連するか、またはその原因となっている表面受容体または他の表面抗原のダウ
ンレギュレーションを促進することも有利であり得る。これはまた、例えば、細胞表面上
の受容体または他の表面抗原の量を減少させることによって、例えば、分解のためにそれ
を標的化することによって有利であり得る。補助受容体を包含する一部のそのような受容
体は、細胞シグナル伝達を行うか、または媒介することができる。したがって、一部の実
施形態では、本明細書に記載の方法は、有害な細胞シグナル伝達経路を減少、妨害、また
は除去することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法は、
抗原内部移行を１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍，７倍、８倍、９倍、１０倍、
２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、
５００倍以上増加させることができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物お
よび方法は、細胞表面上に存在する抗原の量を１．５分の１、２分の１、３分の１、４分
の１、５分の１、６分の１，７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、２０分の１、
３０分の１、４０分の１、５０分の１、７５分の１、１００分の１、２００分の１、３０
０分の１、４００分の１、５００分の１以上減少させることができる。一部の実施形態で
は、本明細書に記載の組成物および方法は、低い内部移行比率を有する抗体の内部移行を
包含する抗体内部移行を１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍，７倍、８倍、９倍、
１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、１００倍、２００倍、３００倍、４
００倍、５００倍以上増加させることができる。
一部の抗体は、細胞に侵入した後で、治療効果を発揮する。一部の実施形態では、増加
したか、またはより急速な内部移行は、抗体の効力または有効性を増加させ得る。したが
って、一部の実施形態では、同じ治療効果を達成するために、より少ない投薬量を使用す
ることができる。一部の実施形態では、多価メディトープと結合したメディトープ利用可
能抗体の投与は、１．５分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１，
７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、２０分の１、３０分の１、４０分の１、５
０分の１、７５分の１、１００分の１、２００分の１、３００分の１、４００分の１、ま
たは５００分の１の薬物を使用して、抗体のみの投与と同じ治療効果を達成することがで
きる。
一部の実施形態では、増加したか、またはより急速な内部移行は、エンドソームへの抗
体の増加したか、またはより急速な送達をもたらす。一部の抗体は、タンパク質分解切断
部位を含むリンカーを含む。そのリンカーを、イメージング剤または治療剤を包含する薬
剤にコンジュゲートすることができ、次いで、これは、内部移行すると抗体によって放出
される。一部の実施形態では、リンカー切断は、エンドソームまたはリソソームにおいて
起こる。したがって、エンドソームまたはリソソームへの抗体の増加したか、またはより
急速な送達は、抗体の効力または有効性を増加させ得る。
一部の状況では、よりゆっくりか、またはそれほど急速ではない内部移行率が望まれ得
る。一部の実施形態では、細胞表面抗原の同時局在化またはクラスター化の増加は、抗体
依存性細胞媒介細胞障害（ＡＤＣＣ）および／または補体媒介性溶解などの望ましいエフ
ェクター機能を促進し、かつ／または細胞表面受容体抗原を介してのシグナル伝達をエン
ゲージおよび促進し得る。
メディトープを送達し、かつ／または標的細胞上の細胞表面抗原の同時局在化またはク
ラスター化を増強または増加させるための方法を提供する。一部の実施形態では、当該方
法を、細胞に、細胞表面抗原（複数可）に特異的に結合する１つまたは複数のメディトー
プ利用可能抗体、および多価メディトープを投与することによって実施する。一部の実施
形態では、抗原の同時局在化、クラスター化、および／または凝集を増強または増加させ
る。一部の態様では、増加は、メディトープ利用可能抗体および／もしくは多価メディト
ープを添加する前、またはその非存在下で、またはメディトープを伴わない抗体の存在下
で観察されたものと比較して、程度、比率、および／または期間の増加である。一部の実
施形態では、当該方法は、細胞表面抗原によるシグナルおよび／または結合した抗体を介
して媒介されるエフェクター機能を促進するか、またはその程度を増強する。
メディトープ、それにカップリングされた薬剤を送達するための、かつ／または標的細
胞上の細胞表面抗原の内部移行および／または分解を増強または増加するための方法を提
供する。一部の実施形態では、当該方法を、細胞に、細胞表面抗原（複数可）に特異的に
結合する１つまたは複数のメディトープ利用可能抗体、および多価メディトープを投与す
ることによって実施する。一部の実施形態では、抗原の内部移行および／または分解を促
進、増強、または増加させる。一部の態様では、内部移行の増加は、メディトープ利用可
能抗体および／もしくは多価メディトープを添加する前に、またはその非存在下で、また
はメディトープを伴わない抗体の存在下で観察されたものと比較して、程度、比率、およ
び／または期間の増加である。一部の実施形態では、メディトープを、ＡＤＣまたは放射
性免疫療法（ＲＩＴ）において使用するためなど、化学療法剤、細胞毒素、または放射標
識された薬剤などの治療剤または診断剤とカップリングさせる。一部の実施形態では、当
該方法は、内部移行または細胞内輸送を改変する。一部の実施形態では、当該方法は、細
胞間または細胞内シグナル伝達を改変する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、抗体によって標的とされる抗原を発現
する細胞または組織へと抗体媒介性送達するためのＡＤＣまたはＲＩＴまたは他の方法な
どにおいて、薬剤の送達を増強するために有用である。一部の実施形態では、当該方法は
、それらが癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、腫瘍関連糖タンパク質（ＴＡＧ−７２）、ＫＳ１／
４などの非内部移行性抗原の状況において、クラスター化、したがって、抗原、抗原に結
合した抗体、および抗体と会合した薬剤の内部移行を促進することにおいて有利である（
Ｓｃｈｍｉｔｄら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、２００８年
１２月；５７（１２）：１８７９〜１８９０；Ｍｙｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９
９３；５３：３９５６〜３９６３を参照されたい）。
ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）として販売されている抗Ｈｅｒ２ ＡＤＣであるＴＤＭ１
の開発の成功にも関わらず、コンジュゲート薬物の僅かな画分（約２％）しか、腫瘍に送
達されない。そのような低い送達率の正確な理由は不明だが、これはおそらく、細胞が利
用する種々の内部移行経路（例えば、クラスリン媒介性細胞内取り込み作用および／また
は小胞媒介性細胞内取り込み作用および／またはマクロピノサイトーシス）、さらには、
いったん細胞内に取り込まれた物質の経路指定（リサイクリングエンドソーム、または後
期エンドソームもしくはリソソーム）に由来する。ジスルフィドリンカーを介して抗体に
コンジュゲートしている薬物は、細胞質の還元環境によって放出され得る。別法では、一
部は、エンドソームベシクルにおいて活性な特異的なプロテアーゼによって放出され得る
（例えば、オーリスタチン）。種々のリンカーを使用する他の研究によって、リソソーム
は、コンジュゲーション化学とは独立して、薬物の放出において有効な手段であることが
示されている。ジスルフィドも、血清中で還元することができ、プロテアーゼは、健康な
組織において活性であり得る。一部の実施形態では、提供する方法、抗体、およびメディ
トープは、疾患を治療するための毒素などの薬剤のより特異的、かつ有効な送達などの改
善をもたらす。
腫瘍免疫療法では、多くの抗原は、腫瘍特異的であることとは対照的に、腫瘍に関連し
ているか、または腫瘍細胞／環境で比較的高いレベルで発現されているに過ぎない。例え
ば、Ｈｅｒ２およびＥＧＦＲは、Ｈｅｒ２＋乳癌および結腸直腸癌などの腫瘍組織におい
て著しく過剰発現されるが、それらは、健康な組織でも発現され、このことが、オン−タ
ーゲット、オフ−組織毒性（ｏｎ−ｔａｒｇｅｔ，ｏｆｆ−ｔｉｓｓｕｅ ｔｏｘｉｃｉ
ｔｉｅｓ）をもたらし得る。他の種類の抗原（腫瘍特異的抗原および胎児腫瘍性抗原、例
えば、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）など）は、腫瘍組織においてのみ、かつ／または他ではわ
ずかに、または発生のある種の段階でのみ発現される。同じ抗原上で独自のエピトープを
認識するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を組み合わせると、様々な抗体エフェクター機能
（例えば、ＡＤＣＣ、補体依存性溶解、シグナル伝達阻害）の増強、細胞死の増強、およ
び癌標的化抗体の場合には、腫瘍増殖阻害の増強を包含する相乗効果が生まれ得る。例え
ば、Ｄｅｃｈａｎｔ Ｍら、「Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｔｕｍｏｒ
ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｂｙ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ
ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ」、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、２００８年７月１日；６８（１３）：４９９８〜５
００３；Ｓｃｈｅｕｅｒ Ｗら、「Ｓｔｒｏｎｇｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｔｉｔｕ
ｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ａｎｄ ｐｅｒｔｕｚｕｍ
ａｂ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ＨＥＲ２−ｐｏｓｉｔｉｖ
ｅ ｈｕｍａｎ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌｓ」、Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ、２００９年１２月１５日；６９（２４）：９３３０〜６；Ｃａｒｄａｒｅｌｌｉ
ＰＭら、「Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ＣＤ２０ ｂｙ ａｎｔｉ−Ｂ１ ａｎｔｉｂｏｄｙ
ｏｒ Ｆ（ａｂ’）（２） ｉｓ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｆｏｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ Ｂ−ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ」、Ｃａｎｃｅｒ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、２００２年３月；５１（１）：１５〜２４． Ｅ
ｐｕｂ ２００１年１２月１８日を参照されたい。この細胞死増強の正確な機構について
は論争中であるが、研究によって、効果の増強を達成するためには、ｍＡｂは両方とも多
価（例えば、全抗体または一価Ｆａｂに対してＦ（ａｂ）’2）であるべきことが示され
ており、このことは、第２の二価ｍＡｂ（同じ抗原上で独自のエピトープに結合する）が
細胞表面抗原をクラスター化し、より有効に作用する、例えば、腫瘍細胞をより有効に死
滅させ得ることを示唆している。図１および２を参照されたい。
一部の態様では、例えば、メディトープ利用可能抗体と組み合わせて相乗作用を達成す
るために、多価メディトープを第２の抗体または二重特異性抗体の代わりに使用する。一
部の態様では、同じ抗原上の別のエピトープを認識する第２の抗体の使用と比較して、多
価メディトープは利点をもたらす。例えば、多価メディトープの生成は、第２の抗体と比
較した場合に、より効率的で、かつ費用効果が高くなり得る。例えば、いくつかの前臨床
／治験が２種のモノクローナル抗体の同時投与を調査しているが、そのような治療剤の製
造および販売の費用はおそらく、非常に高価となるであろう。一部の態様では、多価メデ
ィトープはまた、腫瘍などの疾患部位に対して比較的より容易に標的化される。メディト
ープ結合性部位（メディトープ結合性部位内で、抗体ＣＤＲとは別）の性質、および選択
した任意の抗体をメディトープ利用可能化するための本明細書において提供する幅広く適
用可能な方法があれば、多価メディトープはまた、治療的に許容される特徴を有する第２
の抗体またはエピトープを同定する必要なしに、広範な治療用抗体に容易に適用可能であ
るという利点を有する。したがって、一部の態様では、多価メディトープの使用によって
、許容される特徴を有する第２のｍＡｂを同定する必要性、およびそれを開発する関連す
る多大なコストが回避される。
一部の実施形態では、多価メディトープは、二価抗体を上回る利点、および／またはそ
の改善をもたらす。一部の実施形態では、二重特異性抗体のみの使用と比較して、例えば
、二重特異性抗体の異なるアームによって結合される２つの抗原、例えば、細胞表面抗原
の凝集を増強するために、例えば、親和性、抗体によって誘導されるシグナル伝達、エフ
ェクター機能、および／または内部移行を増強するために、多価メディトープを二重特異
性メディトープ利用可能抗体と共に使用する。したがって、一部の態様では、多価メディ
トープを二重特異性メディトープ利用可能抗体に関連して使用すると、それは、二重特異
性抗体のみと比較して、例えば、追加的なクラスター化程度をもたらすことによって、有
効性レベルの上昇をもたらす。
一部の実施形態では、それぞれ、同じ細胞の表面上で発現される異なる抗原に特異的に
結合する２つのメディトープ利用可能抗体を多価メディトープと一緒に、二価抗体の代わ
りに使用して、細胞表面上での相互に対する２つの抗原の密度または存在比に関わらず、
抗原（例えば、受容体）凝集の増強、および／または特定のレベルの凝集を得る。一部の
態様では、そのような実施形態は、抗原の細胞表面クラスター化、および／または同時局
在化を増強する。一実施形態では、多価メディトープを、そのようなクラスター化を達成
するために、多数の異なる抗原を認識する多数のメディトープ利用可能抗体と一緒に使用
する。したがって、一部の実施形態では、クラスター化が、抗体の各アームがその個々の
抗原に結合している場所でのみ起こるであろう二重特異性抗体と比較して、そのような実
施形態におけるクラスター化は、抗体の１つによって結合される抗原が、別の抗体によっ
て結合される抗原と比較して、かなり高い密度で細胞表面上に存在する場合にも、達成さ
れ得る。
同様に、イメージング剤などの様々な薬剤にコンジュゲートした抗体を用いる場合、細
胞をクラスター化または同時局在化し、かつ／または表面抗原を内部移行する能力が重要
であり得る。例えば、薬剤、例えば、実薬を、標的組織内に、多くの場合に、標的組織の
細胞または腫瘍細胞などの標的細胞内に選択的に送達することを目標として、抗体−薬物
コンジュゲート（ＡＤＣ）などの薬物−コンジュゲート生物製剤を一般に設計する。生物
製剤、例えば、抗体の標的化は一般に、目的の細胞に優先的に結合するように設計される
；標的細胞または組織上のみに存在し、かつ／または他の組織上には非常に少量か、また
はまれにしか存在しない抗原への選択的結合が特に望まれ得る。特に、罹患細胞、例えば
、腫瘍細胞を直接標的化する薬物−コンジュゲート抗体では、薬剤−コンジュゲート抗体
が、細胞表面上の標的抗原に結合した後に、標的細胞内に内部移行されることがことが望
まれ得るか、または重要である。例えば、Ｔｒａｉｌら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ２０１
３、２、１１３〜１２９；Ｐｅｒｅｚら、Ｈ．Ｌ．．Ｐｅｒｅｚら、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ
−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｆｕｔｕ
ｒｅ ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ」、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ（２０１３）を参
照されたい。一部の状況では、抗原の内部移行をもたらす抗体は、放射性免疫療法（ＲＩ
Ｔ）の状況においても望まれ得る。Ｂｏｕｄｏｕｓｑ Ｖら、（２０１３）「Ｃｏｍｐａ
ｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｉｎｇ Ａｎｔｉ−ＨＥＲ２ ｍＡ
ｂｓ ａｎｄ Ｎｏｎ−Ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｉｎｇ Ａｎｔｉ−ＣＥＡ ｍＡｂｓ ｉ
ｎ Ａｌｐｈａ−Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｓｍａｌｌ Ｖｏｌｕ
ｍｅ Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｏｓｉｓ Ｕｓｉｎｇ 212Ｐｂ」
、ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（７）：ｅ６９６１３を参照されたい。一般に、コンジュゲート
された薬剤、例えば、薬物は、標的細胞内で放出され、活性である。一部の状況では、例
えば、腫瘍環境に対して特異的な特定の細胞外マトリックス成分および／または抗原を標
的化する際には、内部移行が必要ないことがある。Ａｃｋｅｒｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、２００８年７月；５７（７）：１０１７〜１
０２７を参照されたい。
一部の実施形態では、非内部移行性抗原は、メディトープの非存在下での単一特異性二
価抗体の結合が、抗原の内部移行をもたらさず、代謝回転から、もしくは抗原に特異的な
抗体の非存在下で生じるもの以下であるか、または代謝回転から、もしくは抗原特異的抗
体の非存在下で生じるものの２倍超を越えない内部移行度をもたらすものである。一部の
実施形態では、単一特異性二価抗体と共にインキュベートした後の抗原は、代謝回転から
、または抗原特異的抗体の非存在下で生じるものの３倍、４倍、５倍、６倍，７倍、８倍
、または９倍超である比率で内部移行しない。
一部の実施形態では、非内部移行性抗原は、細胞表面抗原のみのための天然結合パート
ナーまたはリガンドの結合が、抗原の内部移行をもたらさないか、あるいは代謝回転から
、もしくは結合パートナーもしくはリガンドの非存在下で生じるもの以下であるか、また
は代謝回転から、もしくはリガンド／結合パートナーの非存在下で生じるものの２倍超を
越えない内部移行度をもたらすものである。一部の実施形態では、抗原の天然リガンドま
たは結合パートナーと共に細胞をインキュベートした後の抗原は、代謝回転から、または
天然リガンドもしくは結合パートナーの非存在下で生じるものの３倍、４倍、５倍、６倍
，７倍、８倍、または９倍超である比率で内部移行しない。一部の実施形態では、抗原は
、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６時間以上の半減期で、単
一特異性二価抗体または天然リガンドまたは結合パートナーの結合の後に内部移行する。
Ｂ． 多価メディトープ
細胞表面抗原の分布を改変する開示の方法と共に使用するための多価メディトープ、さ
らには、それを含有するベクター、細胞、ライブラリ、および他のシステムを本明細書に
おいて提供する。
用語「多価メディトープ」は、本明細書において使用される場合、複数のメディトープ
、および１つまたは複数のリンカーまたは連結手段を指す。そのような多価メディトープ
は、これらだけに限定されないが、本明細書に記載のメディトープを包含する任意のメデ
ィトープを含んでよい。一態様では、多価メディトープは、２、３、４、５、６、７、８
、９、１０以上のメディトープを含んでよい。多価メディトープを構成するメディトープ
は、同じか、または異なる構造または配列を有してよい。
用語「メディトープ」は、本明細書において使用される場合、Ｋａｂａｔナンバリング
に従うとその軽鎖の４０位にトレオニン、４１位にアスパラギン、および８５位にアスパ
ルタートを有するか、または本明細書において開示するセツキシマブ、メディトープ利用
可能トラスツズマブ、もしくはメディトープ利用可能Ｍ５Ａのメディトープ結合性部位内
のものに対応する残基を含有するメディトープ結合性部位を含有するメディトープ利用可
能抗体またはその抗原結合性フラグメントのメディトープ結合性部位などの中央空洞に結
合するペプチドまたは複数のペプチドを指す。例示的なメディトープには、これらだけに
限定されないが、ｃＱＦＤ（配列番号１）およびｃＱＹＮ（配列番号２）ペプチド、なら
びにその変異体（「メディトープ変異体」または「変異型メディトープ」）が含まれる。
メディトープの特徴と同様の機能的特徴を有する他の分子も、メディトープ利用可能抗体
のメディトープ結合性部位に結合し得る。「メディトープ類似体」と定義されるそのよう
な分子には、これらだけに限定されないが、メディトープと同じメディトープ結合性部位
に結合し得る小分子、アプタマー、核酸分子、ぺプチボディおよび任意の他の物質が含ま
れ得る。一部の実施形態では、メディトープ配列を、本明細書において開示するとおり環
化させる（例えば、末端（または末端近くの）システイン残基がジスルフィド結合を形成
する）。
用語「リンカー」は、本明細書において使用される場合、複数のメディトープがそれに
よって連結または接続される手段を指す。一実施形態を例示するために、２つ以上のメデ
ィトープを含む多価メディトープの場合には、メディトープは、１つまたは複数のリンカ
ーによって連結される。一態様では、２つのメディトープを含む多価メディトープは、３
つのリンカーを使用することによって環化させることができるであろう。
メディトープを連結して多価メディトープを形成するための１つまたは複数のリンカー
または連結手段は、個々のメディトープを連結および分離するために適した任意の構造で
あってよい。修飾ペプチドバックボーン、小さな化学的スキャフォールド、ビオチン−ス
トレプトアビジン、有機もしくは無機ナノ粒子、ポリヌクレオチド配列、ペプチド−核酸
、有機ポリマー、または免疫グロブリンＦｃドメインを有する一部の実施形態では、例示
的なリンカーは、ペプチドを形成するために使用してよい１つまたは複数のアミノ酸の使
用を包含する。連結のための手段は、共有結合および／または非共有結合を含み得る。
１つまたは複数のリンカーは、様々な機能または特性を提供する様々な配列または他の
構造的特徴を包含し得る。例えば、１つまたは複数のリンカーは、多価メディトープの誘
導体化を可能にする構造的要素を含有し得る。例示的な構造的要素には、プロテアーゼ切
断部位の存在または非存在、免疫原性配列、例えば、ＰＡＳ化およびインテイン配列を包
含する多価メディトープの環化をもたらすか、または補助する配列、ならびに例えば、治
療剤または診断剤とコンジュゲートしている、例えば、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧ
Ｅ）と適合性のアルデヒドタグ、リシン、チロシン、グルタミン酸、アスパラギン酸およ
び使用することができる非天然アミノ酸を包含する残基、部位またはタグが包含される。
本来、多くの場合に多価を介して、特異性および親和性が達成される。リンカーを伴う
二価リガンドでは、これは、ΔＧ全体＝ΔＧ１＋ΔＧ２−ΔＧリンカーと表すことができ
る。言い換えると、Ｋ全体＝Ｋ1×Ｋ2／Ｋリンカーである。リンカーが自由エネルギーに
寄与していない場合（Ｋリンカー約１）、二価標的のための二価リガンドの見掛けの親和
性は、単量体結合定数の積である。したがって、一般に多価を介して、親和性の有意な増
大を達成することができる（例えば、ＫD＝１μＭのメディトープでは、「理論」二価メ
ディトープの親和性は１ｐＭである）。そのような大きな増大は一般には稀にしか見られ
ないが（主に、二価／三価／多価受容体の幾何学的形状によって）、相乗作用は観察され
る。細胞表面で発現される抗原の幾何学的形状は、多価メディトープのリンカーに対して
厳密な制約を課し得るが、特異性も保証することができ、この特異性は、標的化送達する
ためなどの一部の状況においては、例えば、オフターゲット効果のリスクを最小限にする
ことによって、重要な目標であり得る。
一例では、多価メディトープは、Ｆｃ領域の実質的に全てなど、抗体のＦｃ領域または
その一部を含有する。リガンドを「二量体化する」ためにＦｃ領域を使用することは確立
されており、例えば、Ｊａｚａｙｅｒｉ ＪＡ ＆ Ｃａｒｒｏｌｌ ＧＪ．、「Ｆｃ−
ｂａｓｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ： ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｆｏｒ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉ
ｎｇ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、ＢｉｏＤｒｕｇｓ、２２（１）
：１１〜２６（２００８）に記載されている。一部の例では、二価メディトープを作成す
るために、メディトープをリンカー、典型的にはペプチドリンカー、例えば、フレキシブ
ルなペプチドリンカーを介してＦｃ領域に（例えば、ＩｇＧのＦｃ領域のＮ末端に）融合
させる。一例では、１７、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３
９、４０アミノ酸長さなど、ＩｇＧのＦａｂの間の距離におおよそ合うように、リンカー
の長さを選択する。一部の態様では、このリンカーは、グリシン、セリン、および／また
はそれらの組合せを含有する。例示的な「メディトープ−Ｆｃ」融合を配列番号３および
４に示す。図２も参照されたい。
一部の態様では、メディトープ−Ｆｃは、免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域または定常
領域部分に連結しているメディトープであるか、またはそれを含有する。Ｉｇ定常領域は
一般に、Ｆｃ領域もしくは定常領域ドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）または
その機能性フラグメントを含む。
一部の実施形態では、メディトープ、例えば、多価メディトープは、下式を有する１つ
または複数の鎖（例えば、ポリペプチド鎖）を有する化合物である：
Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A（式Ｉ）
［式中、Ｒ3Aは、ペプチドメディトープなどのメディトープ（例えば、本明細書において
提供するメディトープのいずれか）であり、Ｌ3Aは、Ｒ3AおよびＲ4Aを連結するペプチジ
ルリンカーなどのリンカーであり、Ｒ4Aは、Ｉｇ Ｆｃ領域またはその機能性フラグメン
トを含む免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖定常領域部分である］。
一部の態様では、メディトープは、第１のメディトープであり、リンカーは、第１のリ
ンカーであり、鎖は、下式を含む：
Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A−Ｌ3B−Ｒ3B（式ＩＩＩ）
［式中、Ｌ3Bは、Ｒ4AおよびＲ3Bを連結するペプチジルリンカーなどの第２のリンカーで
あり；Ｒ3Bは、第２のメディトープ（例えば、本明細書において提供するメディトープの
いずれか）である］。一部の状況では、鎖は、下式を包含する：
Ｒ5A−Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A−Ｒ5B（式ＩＶ）または
Ｒ5A−Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A−Ｌ3B−Ｒ3B−Ｒ5B（式Ｖ）
［式中、Ｒ5AおよびＲ5Aのそれぞれは、テールもしくはリーダー配列、またはヌルであり
、例えば、ヌルであるか、または０〜５０アミノ酸長さを含む配列である］。様々な成分
が、アミド結合などによって、共有結合されてよい。
一部の場合には、多価メディトープを包含するメディトープ含有化合物、例えば、メデ
ィトープ−Ｆｃｓなどの提供する化合物のリンカー、例えば、Ｌ3A、Ｌ3B、またはその両
方は、２５〜４０アミノ酸長さ、例えば、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、
３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０（（もしくはその概数）
）以上、例えば、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０アミノ
酸長さであり、かつ／または約２Å〜約２００Åの長さ、例えば、約５０Å〜約１５０Å
の長さ、約５０Å〜約２００Åの長さ、約５０Å〜約３００Åの長さ、約１００Å〜約１
４０Åの長さ、例えば、約１３０Å（（もしくはその概数））など、または１００、１０
１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１
１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２
１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３
１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１５
０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５
０、２６０、２７０、２８０、２９０、または３００Å（（もしくはその概数））の長さ
である。
一部の態様では、リンカーを、標的である細胞表面上の２個の受容体の間の距離と同じ
か、またはほぼ同じである長さを有するように設計する。一部の実施形態では、受容体は
、同じか、または異なってよい。例えば、２つの受容体は、異なるアミノ酸配列および／
または異なるエピトープを含んでよい。一部の状況では、単一抗原上の異なるエピトープ
を認識する２つのｍＡｂは、相乗的に作用する（Ｋａｍａｔ，Ｖ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｂ
ｉｏｌ Ｔｈｅｒ ７、７２６〜７３３（２００８）を参照されたい）。一部の例では、
メディトープ−Ｆｃなどの二価メディトープは、第２のモノクローナル抗体様分子として
機能するが、任意のメディトープ利用可能抗体と対になり得る柔軟性を有し、したがって
、一部の態様では、第２の治療用モノクローナル抗体を同定および開発するコストを低減
する。一部の実施形態では、多価メディトープ変異体（価および／またはリンカーの幾何
学的配置を改変することによって作成される）は、特異性および相乗効果をさらに増強す
る。したがって、一部の例では、リンカーの長さを、ＩｇＧ、例えば、全長ＩｇＧなどの
抗体のＣＤＲの間の距離を模倣するか、またはそれに近いように設計する。
一部の態様では、多価メディトープを包含するメディトープ含有化合物、例えば、メデ
ィトープ−Ｆｃなど、提供する化合物のリンカー、例えば、Ｌ3A、Ｌ3B、またはその両方
は、リソソームコンパートメントに存在するプロテアーゼのための切断部位などのタンパ
ク質分解性切断部位、例えば、ＭＭＰ切断部位、ＡＤＡＭ切断部位、および／またはカテ
プシン切断部位を含む。
一部の態様では、多価メディトープを包含するメディトープ含有化合物、例えば、メデ
ィトープ−Ｆｃなど、提供する化合物のリンカー、例えば、Ｌ3A、Ｌ3B、またはその両方
は、非構造化、無秩序、または相対的に非構造化もしくは無秩序リンカーである。一部の
態様では、リンカーは、次の特性の１つまたは複数を有する：非構造化立体配座、配座異
性柔軟性、増強された水溶性、高度なプロテアーゼ抵抗性、低い免疫原性、哺乳類受容体
への低い結合、規定の荷電度、および増加した流体力学的（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ）
（またはストークス）半径。
一部の実施形態では、リンカーを、抗体／エピトープ相互作用、抗体／抗体相互作用、
または抗体／メディトープ相互作用の立体障害を阻止するか、またはそれをもたらすよう
に規則的に、または無作為に設計する。修飾例には、アミノ酸置換、付加、欠失、修飾が
含まれる。一部の実施形態では、立体障害は、受容体がクラスター化、シグナル伝達する
ことを、または受容体媒介性細胞内取り込み作用を受けることを阻止し得る。一部の実施
形態では、立体障害の阻止によって、受容体はクラスター化し、シグナル伝達し得るか、
または受容体媒介性細胞内取り込み作用を受け得る。
一部の態様では、リンカーを、ペプチドバックボーンの大きな配座異性自由度を有する
など、生理学的条件下で変性ペプチド配列のような挙動を有するように設計する。一部の
例では、リンカーは本質的に、例えば、生理学的条件で、または水溶液中で、二次構造を
欠いている。
所与のポリペプチドにおいて二次および三次構造の存在または非存在を識別するために
、様々な方法が当技術分野において樹立されている。特に、二次構造を、分光測光法で、
例えば、「遠ＵＶ」スペクトル領域（１９０〜２５０ｎｍ）での円偏光二色性分光法で測
定することができる。アルファ−へリックスおよびベータ−シートなどの二次構造要素は
それぞれ、特徴的な形状およびＣＤスペクトルの大きさをもたらす。また、米国特許出願
公開第２００３０２２８３０９Ａ１号において記載されているとおりの周知のＣｈｏｕ−
Ｆａｓｍａｎアルゴリズム（Ｃｈｏｕ，Ｐ．Ｙ．ら（１９７４） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ、１３：２２２〜４５）およびＧａｒｎｉｅｒ−Ｏｓｇｕｔｈｏｒｐｅ−Ｒｏｂｓｏ
ｎ（「ＧＯＲ」）アルゴリズム（Ｇａｒｎｉｅｒ Ｊ、Ｇｉｂｒａｔ Ｊ Ｆ、Ｒｏｂｓ
ｏｎ Ｂ．（１９９６）、ＧＯＲ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｐｒ
ｏｔｅｉｎ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｆｒｏｍ ａｍｉｎｏ ａｃｉ
ｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２６６：５４０〜５５３）
などのある種のコンピュータープログラムまたはアルゴリズムによって、ポリペプチド配
列について二次構造を予測することもできる。所与の配列では、多少の二次構造が存在す
るか、まったく存在しないかを、アルゴリズムによって予測することができ、それは、例
えば、アルファ−へリックスまたはベータ−シートを形成する配列の残基の全部および／
またはそのパーセンテージ、または無作為なコイル形成（二次構造を欠いている）をもた
らすと予測される配列の残基のパーセンテージとして表される。
一実施形態では、リンカーは、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによって決定する
と、０％〜約５％未満の範囲のアルファ−ヘリックスパーセンテージを有する。別の実施
形態では、リンカーは、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによって決定すると、０％
〜約５％未満の範囲のベータ−シートパーセンテージを有する。一部の実施形態では、リ
ンカーは、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによって決定すると、０％〜約５％未満
の範囲のアルファ−ヘリックスパーセンテージおよび０％〜約５％未満の範囲のベータ−
シートパーセンテージを有する。一部の実施形態では、リンカーは、約２％未満のアルフ
ァ−ヘリックスパーセンテージおよび約２％未満のベータ−シートパーセンテージを有し
、ＧＯＲアルゴリズムによって決定すると、ランダムコイル少なくとも約８０％、少なく
とも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なく
とも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なく
とも約９８％、または少なくとも約９９％など、ＧＯＲアルゴリズムによって決定すると
、高い程度のランダムコイルパーセンテージを有する。例えば、一部の態様では、リンカ
ーは、水溶液中または生理学的溶液中で三次構造を欠いているか、実質的に欠いている。
一部の態様では、これは、ＧＯＲアルゴリズムによって決定すると、ランダムコイル形成
９０％、８５％、８０％、７５％、または７０％超、および／またはＣｈｏｕ−Ｆａｓｍ
ａｎアルゴリズムによって決定すると、アルファへリックスおよび／またはベータシート
５、４、３、２、もしくは１％未満、または０％、例えば、２％未満を有する。一部の態
様では、（ｉ）グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グ
ルタマート（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）残基の合計は、リンカーの総アミノ酸残基の少な
くとも約８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、または９０％
を構成し；リンカーは、少なくとも１個のプロリンを含有し、少なくとも１個のグルタマ
ートを含有し、少なくとも１個のリシンを含有し、少なくとも１個のセリンを含有し、か
つ／または少なくとも１個のグルタミンを含有し；リンカーは、アスパラギン残基（複数
可）よりも多いグルタミン残基（複数可）を含有し；リンカーは、トレオニン残基よりも
多いセリン残基（複数可）を含有し；リンカーは、トリプトファンを含有せず、チロシン
を含有せず、フェニルアラニンを含有せず、システインを含有せず、イソロイシンを含有
せず、ロイシンを含有せず、かつ／またはアスパラギンを含有せず；リンカーは、Ｗを含
有せず；Ｙを含有せず；かつ／またはＦを含有せず；リンカーは、芳香族残基を含有せず
；リンカーは、１個以下のＷ、Ｙ、および／またはＦを含有し、かつ／または１個以下の
芳香族残基を含有し；リンカーは、ヒスチジンを含有せず、システインを含有せず、かつ
／またはヒスチジンまたはシステインを含有せず；リンカーは、１個以下のヒスチジン、
１個以下のヒスチジン、および／または１個以下のヒスチジンまたはシステインを含有し
；かつ／またはリンカー中の大部分の残基は、荷電している。一部の態様では、リンカー
を、血清プロテアーゼ（複数可）によって切断するための部位などのある種のプロテアー
ゼ切断部位の存在を回避するように、かつ／または免疫原性を回避するように設計する。
一部の態様では、リンカーを、非反復または相対的に非反復であるように設計する。用
語「非反復性」は、ポリペプチドの文脈において本明細書において使用される場合、ペプ
チドまたはポリペプチド配列において内部相同性がないか、その程度が限られていること
を指す。用語「実質的に非反復」は、例えば、その配列において、同一のアミノ酸種類で
ある４個の連続アミノ酸の事例がほとんどないか、もしくはないこと；またはポリペプチ
ドが３以下の平均サブ配列スコアを有すること；またはポリペプチド配列を構成する配列
モチーフに、Ｎ末端からＣ末端への順でパターンが存在しないことを意味し得る。用語「
反復性」は、ポリペプチドの文脈において本明細書において使用される場合、ペプチドま
たはポリペプチド配列における内部相同性の程度を指す。対照的に、「反復性」配列は、
短いアミノ酸配列の多数の同一のコピーを含有し得る。ポリペプチドの文脈では、配列は
、規程されているか、もしくは変動可能な長さの短い配列の多数のコピー、またはモチー
フ自体が非反復配列を有し、全長ポリペプチドを実質的に非反復にするモチーフを含有し
得る。
ポリペプチドまたは遺伝子の反復性の程度は、コンピュータープログラムもしくはアル
ゴリズムによって、または当技術分野で公知の他の手段によって測定することができる。
本開示では、本明細書において開示するリンカーなどの特定のポリペプチドの反復性の程
度を計算する際に使用するためのアルゴリズムを開示する。一態様では、所定の長さのポ
リペプチドの反復性を、式１によって示される式に従って、計算することができる（本明
細書において下記では、「サブ配列スコア」）：
Figure 2021075548
 ［式中：ｍ＝（ポリペプチドのアミノ酸長さ）−（サブ配列のアミノ酸長さ）＋１；
Ｃｏｕｎｔi＝配列i内でのそれぞれ特有のサブ配列の出現の累積数］。特定のペプチド
配列のサブ配列スコアを計算するための例は、その開示があらゆる目的のために参照によ
って本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／００１７９９７号において提
供されている。
一部の態様では、これは、アミノ酸がセリンまたはグリシンでない限り、同一の３個の
連続アミノ酸を含有しないか、または１０、９、８、７、６、５、４、３、または２未満
のサブ配列スコアを有するか、またはグリシンおよびセリン以外の少なくとも１個の残基
を含有する。一部の態様では、リンカーは、任意の血清プロテアーゼのためか、または血
液凝集経路ファミリーのタンパク質、ＸＩＩＩａ、ＸＩＩａ、ＸＩａ、Ｘａ、ＩＸａ、お
よびＶＩＩａ因子、トロンビン、血漿カリクレイン、活性化ＰＣ、プロトロンビナーゼ、
ｈＫ１、ＰＳＡ／ｈＫ３、ｈＫ１０、ｈＫ１５、活性化タンパク質Ｃ（ＡＰＣ）、Ｈａｇ
ｅｍａｎ因子（凝固因子ＸＩＩ）、因子Ｘａ、ＡＤＡＭＴＳ１３、フォンヴィレブランド
因子−切断プロテアーゼ（ＶＷＦＣＰ）、プロテアーゼネキシン２、プラスミン、トリプ
シン、α−キモトリプシン、マトリックスメタロプロテイナーゼ−２、マトリックスメタ
ロプロテイナーゼ−９、エラスターゼ、ＭＡＳＰ−１（マンノース−結合性レクチン−関
連セリンプロテアーゼ−１）、ＭＡＳＰ−２、ＭＡＳＰ−３、カテプシンＫ、カテプシン
Ｂ、ストレプトキナーゼ、血漿プロカルボキシぺプチダーゼＢ、トロンビン活性化フィブ
リン溶解阻害薬（ＴＡＦＩ）、プラスミノーゲン活性化因子ファミリー（組織プラスミノ
ーゲン活性化因子、尿プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）など）、ウロキナーゼ、補
体コンバターゼファミリータンパク質、因子Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、因子Ｄ、ならびにＣ４ｂ・
２ａ、Ｃ３ｂ・Ｂｂ、およびＣ３ｂ・Ｂｂ・Ｃ３ｂなどのＣ３コンバターゼの１種もしく
は複数またはいずれかのための切断部位を含有しない（またはそれによって切断されない
）。
提供するリンカーのうちには、配列番号１９９、２００、２０１、２０２、２０３、も
しくは２０４として示されるアミノ酸配列、または残基のいずれか１個、２個、３個、も
しくは４個が、リジン残基などに代わって、コンジュゲートされたアミノ酸で置換されて
いてもよいその修飾変異体を有するものがある。
一部の実施形態では、Ｔ細胞エピトープ（複数可）の可能性を最小限にすることなどに
よって、潜在的な免疫原性を回避するか、または減少させるように、リンカーを設計する
。抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上に提示するための、所与のＭＨＣクラスＩＩ分子に結
合するペプチドの能力は、ペプチドの一次配列を包含するいくつかの因子に依存している
。一態様では、本開示のペプチドまたはリンカーは、その配列がＡＰＣにおける抗原プロ
セシングに対して抵抗性であるので、低い免疫原性度を有する。別の態様では、本開示の
ペプチドまたはリンカーは、ＭＨＣ受容体に実質的に結合しないか、または免疫応答を誘
発するために十分な程度ではＭＨＣ受容体に結合しない配列を有する。本開示は、リンカ
ー、およびリンカーを含むペプチドを提供し、そのリンカーおよびペプチドは、一次配列
において実質的に非反復性であり、ＭＨＣ ＩＩ受容体との結合を減少させるように設計
される。他の態様では、本開示のペプチドおよびリンカーは、Ｔ細胞受容体または抗体結
合のためのエピトープを形成せず、低い免疫原性度をもたらす。一態様では、免疫原性の
回避は、少なくとも部分的に、リンカー配列の配座異性柔軟性の結果；すなわち、アミノ
酸残基の選択および順序による二次構造の欠如に寄与し得る。例えば、水溶液中、または
生理的条件下でコンパクトに折り畳まれた立体配座に適合する傾向を有する配列は、水溶
液中、または生理的条件下でコンパクトに折り畳まれた立体配座に適合する傾向が相対的
に低い配列よりも、配座エピトープをもたらす可能性が高い。従来の治療実施および投与
を使用しての、本開示のリンカーを含む融合タンパク質の投与は一般に、リンカー配列に
対する中和抗体の形成をもたらさないであろう。一態様では、例えば、リンカーがメディ
トープに連結して融合している場合には、低免疫原性のリンカー配列は、融合パートナー
の免疫原性を減少させる。
一実施形態では、リンカーは、ヒトＴ細胞によって認識されるエピトープを含有しても
よいし、または実質的に含有しなくてもよい。より低い免疫原性タンパク質を生じさせる
目的でのそのようなエピトープの除去は、以前に開示されており；例えば、参照によって
本明細書に組み込まれるＷＯ９８／５２９７６、ＷＯ０２／０７９２３２、およびＷＯ０
０／３３１７を参照されたい。同じ原理、例えば、エピトープの同定を使用して、そのよ
うなエピトープをリンカーに導入することができる。ヒトＴ細胞エピトープのためのアッ
セイは、記載されている（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ，Ｍ．ら、（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ
Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８１：９５〜１０８）。Ｔ細胞エピトープまたは非ヒト配列の作成
を伴うか、または伴わずにオリゴマー化することができるペプチド配列が、特に重要であ
る。これは、Ｔ細胞エピトープの存在について、および非ヒトの６〜１５マーおよび、特
に、９マー配列の出現について、これらの配列の直接的な繰り返しを試験し、次いで、エ
ピトープ配列を包含するか、または除去もしくは破壊するように、リンカー配列の設計を
改変することによって達成される。一部の実施形態では、リンカー配列は、ＭＨＣ受容体
に結合すると予測されるリンカーのエピトープの数の制限によって、実質的に非免疫原性
である。ＭＨＣ受容体に結合することができるエピトープの数を制限することで、Ｔ細胞
活性化の可能性、さらには、Ｔ細胞ヘルパー機能が随伴して低下し、Ｂ細胞活性化または
アップレギュレーションが低下し、抗体産生が低下する。予測されるＴ細胞エピトープの
低度は、例えば、ＴＥＰＩＴＯＰＥ（Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏ，Ｔ．ら、（１９９９）Ｎａｔ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１７：５５５〜６１）などのエピトープ予測アルゴリズムによ
って決定することができる。Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏ，Ｔ．ら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １７：５５５）において開示されているとおり、タンパク質
内の所与のペプチドフレームのＴＥＰＩＴＯＰＥスコアは、複数の最も共通するヒトＭＨ
Ｃ対立遺伝子に対するそのペプチドフレームの結合のＫd（解離定数、親和性）のｌｏｇ
である。スコアは、少なくとも２０ｌｏｇ超で、約１０から約−１０までの範囲であり（
１０ｅ10Ｋd〜１０ｅ-10Ｋdの結合制限に対応する）、Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｆなどの、ＭＨ
Ｃ上でペプチド提示中にアンカー残基として役立つ疎水性アミノ酸を回避することによっ
て減少させることができる。一部の実施形態では、リンカー配列は、約−５、または−６
、または−７、または−８、または−９のＴＥＰＩＴＯＰＥ閾値スコア、または−１０の
ＴＥＰＩＴＯＰＥスコアの予測Ｔ細胞エピトープを有しない。本明細書において使用され
る場合、「−９」のスコアは、−５のスコアよりもストリンジェントなＴＥＰＩＴＯＰＥ
閾値である。
９マーペプチド配列のＴＥＰＩＴＯＰＥスコアは、Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏ［Ｓｔｕｒｎｉ
ｏｌｏ，Ｔ．ら、（１９９９） Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１７：５５５］によっ
て記載されているとおりに、ポケットポテンシャルを付加することによって計算すること
ができる。この方法によって計算されるＴＥＰＩＴＯＰＥスコアは、およそ−１０〜＋１
０の範囲である。しかしながら、Ｐ１位に疎水性アミノ酸（ＦＫＬＭＶＷＹ）（配列番号
２４０）を欠いた９マーペプチドは、−１００９〜−９８９の範囲の計算されたＴＥＰＩ
ＴＯＰＥスコアを有する。この値は、生物学的に意味がなく、疎水性アミノ酸が、ＨＬＡ
結合のためのアンカー残基として役立ち、かつＰ１に疎水性残基を欠いたペプチドは、Ｈ
ＬＡに対するバインダーとは判断されないという事実を反映している。
一部の実施形態では、リンカーは、例えば、エピトープ同定プログラムまたアルゴリズ
ムによって予測されるとおり、いくつかのＭＨＣクラスＩＩエピトープを含有すると予測
されるか、または予測されない。一実施形態では、本開示のリンカーは、０、１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、
１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のＭ
ＨＣクラスＩＩエピトープを有するか、または有すると予測される。別の実施形態では、
本明細書において開示するリンカーは、約２以下、約３以下、約４以下、約５以下、約６
以下、約７以下、約８以下、約９以下、約１０以下、約１１以下、約１２以下、約１３以
下、約１４以下、約１５以下、約１６以下、約１７以下、約１８以下、約１９以下、約２
０以下、約２１以下、約２２以下、約２３以下、約２４以下、約２５以下、約２６以下、
約２７以下、約２８以下、約２９以下、または約３０以下のＭＨＣクラスＩＩエピトープ
を有するか、または有すると予測される。
一部の実施形態では、リンカーは、Ｓｉｎｇｈ，Ｈ．およびＲａｇｈａｖａ，Ｇ．Ｐ．
Ｓ．（２００１）、ＰｒｏＰｒｅｄ：Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＬＡ−ＤＲ ｂｉ
ｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１７（１２）：１２３６〜３
７において記載されているＰｒｏＰｒｅｄツールによって予測されるとおり、いくつかの
予測ＭＨＣクラスＩＩエピトープを含有してもよいし、または含有しなくてもよい。Ｐｒ
ｏＰｒｅｄは、抗原タンパク質配列においてＭＨＣクラスＩＩ結合領域を予測するための
グラフィカルウェブツールである。一態様では、ＰｒｏＰｒｅｄツールを使用するＭＨＣ
クラスＩＩエピトープの予測は、Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏ、Ｔ．、ｅｔ ａｌ．（１９９９）
、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１７： ５５５に由来する定量マトリックスを利用す
る。
加えて、リンカー配列中の非反復配列および対応するエピトープの欠如は、リンカーに
結合するか、またはリンカーによって活性化されるＢ細胞の能力を限定または増強する。
反復配列は認識され、少数のＢ細胞とでも多価接触を形成し得、複数のＴ細胞独立受容体
の架橋の結果として、Ｂ細胞増殖および抗体産生を刺激し得る。対照的に、リンカーは、
その延長配列にわたって多くの異なるＢ細胞と接点を作成し得るが、それぞれ個々のＢ細
胞は、配列の反復性の欠如によって、個々のリンカーと１つまたは少数の接点しか作成し
得ない。一実施形態では、本開示のリンカーは典型的には、Ｂ細胞の増殖、したがって、
免疫応答を刺激するかなり低い傾向を有する。一実施形態では、リンカーに融合したメデ
ィトープは、リンカーに融合していない対応するメディトープと比較すると、低い免疫原
性を有する。
一実施形態では、非反復リンカーは典型的には、高度な反復性を有するリンカーよりも
弱い接点を抗体と共に形成する。抗体は、多価分子であり、例えば、ＩｇＧは、２つの同
一な結合性部位を有し、ＩｇＭは、１０の同一な結合性部位を含有する。したがって、反
復性配列に対する抗体は、高い結合活性で、そのような反復配列との多価接点を形成する
ことができ、そのことは、そのような反復配列の効力および／または除去に影響を及ぼし
得る。対照的に、非反復リンカーに対する抗体はおそらく、一価相互作用のみをもたらし
、非反復リンカーを含むペプチドが長期間、循環中に残存し得るように、免疫クリアラン
スのより低い可能性をもたらす。
例えば、ＭＨＣクラスＩエピトープを予測するためのアルゴリズムを使用して、リンカ
ー配列を、ＭＨＣクラスＩエピトープの候補を同定するために評価することができる。所
与のポリペプチドにおいて、潜在的なＭＨＣクラスＩエピトープ、すなわち、ＭＨＣクラ
スＩ分子上で表示され得るエピトープを同定するために、多くの異なる予測プログラムが
利用可能である。いくつかの例示的なアルゴリズムが、その開示があらゆる目的のために
参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２００９／０５１５５５において記載されてい
る。エピトープ同定プログラムの例は、次の機構および施設のウェブサイトにおいて見出
すことができる：Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ（Ｉｎｄｉａ）、Ｓｉｎｇｈ，Ｈ．およびＲａｇｈａｖａ、Ｇ．Ｐ．Ｓ．Ｂｉｏｉｎｆ
ｏｒｍａｔｉｃｓ ２２；１９（８）：１００９〜１４（２００３）において記載されて
いるとおりのＰｒｏＰｒｅｄ−Ｉツール。Ｈａｎｓ−Ｇｅｏｒｇ Ｒａｍｍｅｎｓｅｅら
、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９９）５０：２１３〜２１９において記載されて
いるとおりのＳＹＦＰＥＩＴＨＩ。Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｄａｔａｂａｓｅ。
例えば、Ｋｉｍ Ｙ、Ｓｉｄｎｅｙ Ｊ、Ｐｉｎｉｌｌａ Ｃ、Ｓｅｔｔｅ Ａ、Ｐｅｔ
ｅｒｓ Ｂ．、ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １０：３９４（２００９）を参
照されたい。Ｍａｘ−Ｐｌａｎｃｋ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
Ｂｉｏｌｏｇｙ。例えば、Ｊ．Ｈａｋｅｎｂｅｒｇ、Ａ．Ｎｕｓｓｂａｕｍ、Ｈ．Ｓｃ
ｈｉｌｄ、Ｈ．−Ｇ．Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ、Ｃ．Ｋｕｔｔｌｅｒ、Ｈ．−Ｇ．Ｈｏｌｚｈ
ｕｅｔｔｅｒ、Ｐ．−Ｍ．Ｋｌｏｅｔｚｅｌ、Ｓ．Ｈ．Ｅ．Ｋａｕｆｍａｎｎ、Ｈ．−Ｊ
．Ｍｏｌｌｅｎｋｏｐｆ（２００３） ＭＡＰＰＰ − ＭＨＣ−Ｉ Ａｎｔｉｇｅｎｉ
ｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ． Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２（３）：１５５〜１５８を参照されたい。Ｎｉｅｌ
ｓｅｎ Ｍ、Ｌｕｎｄｅｇａａｒｄ Ｃ、Ｌｕｎｄ Ｏ、Ｋｅｓｍｉｒ Ｃ．、Ｉｍｍｕ
ｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．５７（１−２）：３３〜４１、２００５において記載されている
とおりのＴｅｃｈｎｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｄｅｎｍａｒｋ、ＮｅｔＣ
ｈｏｐ Ｓｅｒｖｅｒ。
これらの予測ウェブサイト内で使用されるアルゴリズムは、同じサイトにおいて見出す
ことができる。以下は、適切な予測アルゴリズムを記載している参照文献の非排他的リス
トである：Ｐａｒｋｅｒら（１９９４） Ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｒａｎｋｉｎｇ ｐｏ
ｔｅｎｔｉａｌ ＨＬＡ−Ａ２ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ
ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｐｅｐｔｉ
ｄｅ ｓｉｄｅ−ｃｈａｉｎｓ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２、１６３〜１７５；Ｈａ
ｎｓ−Ｇｅｏｒｇ Ｒａｍｍｅｎｓｅｅら（１９９９）ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ：ｄａｔａｂ
ａｓｅ ｆｏｒ ＭＨＣ ｌｉｇａｎｄｓ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｏｔｉｆｓ，
Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ５０：２１３〜２１９；Ｒｅｃｈｅら（２００２）Ｐｒ
ｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ Ｉ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ
ｕｓｉｎｇ ｐｒｏｆｉｌｅ ｍｏｔｉｆｓ． Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６３（９）
：７０１〜９；Ｇｒｅｅｎｂａｕｍら（２００７）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ２０（２）：７５〜８２。
一実施形態では、本開示のリンカーは、ＭＨＣ受容体のためのいずれのエピトープも含
有しない。一実施形態では、本開示のリンカーは、いずれのＭＨＣクラスＩまたはクラス
ＩＩエピトープも含有しない。別の実施形態では、本明細書において開示するリンカーは
、例えば、エピトープ同定プログラムまたはアルゴリズムによって予測すると、いずれの
予測ＭＨＣクラスＩエピトープも含有しない。一実施形態では、本開示のリンカーは、０
、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、
１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、ま
たは３０のＭＨＣクラスＩエピトープを有するか、または有すると予測される。別の実施
形態では、本明細書において開示するリンカーは、約２以下、約３以下、約４以下、約５
以下、約６以下、約７以下、約８以下、約９以下、約１０以下、約１１以下、約１２以下
、約１３以下、約１４以下、約１５以下、約１６以下、約１７以下、約１８以下、約１９
以下、約２０以下、約２１以下、約２２以下、約２３以下、約２４以下、約２５以下、約
２６以下、約２７以下、約２８以下、約２９以下、または約３０以下のＭＨＣクラスＩエ
ピトープを有するか、または有すると予測される。
提供するメディトープおよび化合物の定常領域部分、例えば、Ｒ4Aは一般に、ＩｇＧ分
子などのＩｇ分子、またはその機能性部分のＦｃ領域に存在する１つまたは複数の定常領
域を包含する。一部の態様における部分は、可変領域ドメインまたはその機能性フラグメ
ントを包含しない。例えば、一部の状況では、定常領域部分は、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、お
よび／またはＣＨ３の１つまたは複数を含有する。一部の例では、定常領域部分は、ＣＨ
４をさらに包含してよい。一部の場合には、部分は、ＣＨ３のみを包含し、例えば、ＣＨ
１、ＣＨ２、またはＣＨ４部分を包含しない。例示的な定常領域部分は、２０５および２
０６、ならびに例えば、いずれか１個、２個、３個、または４個のアミノ酸が、リシン残
基での置換など、コンジュゲートアミノ酸で置換されているその修飾変異体を包含する。
一部の実施形態では、リンカーは、誘導体化するために、例えば、例えば、スキャフォ
ールドまたはリンカーを介して、診断剤、例えば、イメージング剤または治療剤などの薬
剤に多価メディトープをコンジュゲートするために使用することができる反応性官能基を
含有する。一部の実施形態では、リンカーは、例えば、スキャフォールド、リンカー、ま
たは薬剤のコンジュゲーションにおいて有用なリシン、チロシン、グルタミン酸、アスパ
ラギン酸、ＦＧＥ配列、または非天然アミノ酸を包含する１つまたは複数のコンジュゲー
ション部位を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション部位の数および場所を、コ
ンジュゲーション部位を付加または除去することによって制御し、それによって、後でコ
ンジュゲートされる薬剤の量または場所を制御することができる。一部の実施形態では、
ＰＡＳ化配列、ソルターゼ配列、またはインテイン配列を含むリンカーはさらに、１つま
たは複数のコンジュゲーション部位を含む。例えば、一部の実施形態では、多価メディト
ープは、例えば、リンカー中を包含して、１つまたは複数のＰＡＳ化配列を含む。ＰＡＳ
化配列は、規定の、またはランダムな配列中にプロリン、アラニン、およびセリンを含み
得る。したがって、ＰＡＳ化配列は、中性および疎水性アミノ酸を含むペプチドを包含し
得る。配列番号２３１は、例示的な三価メディトープを開示している。ＰＡＳ化を含む配
列は、Ｍｏｒａｔｈら、Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ、２０１５年５月４日；１２（５）：１４３
１〜４２において記載されている。ＰＡＳ化は、薬物送達を改善し、血漿半減期を延長し
得る。例えば、ＰＡＳ化は、タンパク質の流体力学的体積を増加させ得て、循環を延長し
、かつ／または腎臓濾過前の生体活性を増進させる。
一部の実施形態では、チオール官能基を、リンカー上の任意の適切な位置に導入するこ
とができ、イメージング剤、他のタンパク質およびペプチド、金属キレート剤、ｓｉＲＮ
Ａ、ナノ粒子、細胞傷害性薬物などの診断剤または治療剤を含有するいくつかの外部試薬
を使用して選択的に修飾することができる。
例えば、一部の実施形態では、メディトープ、例えば、多価メディトープは、配列番号
５７、５８、５９、６４、２５０、２５１、２５２、もしくは１９２のアミノ酸配列、ま
たは残基の任意の１個、２個、３個、または４個がリシンなどのコンジュゲートされるア
ミノ酸で置換されていてもよいその修飾変異体を有する１つまたは複数の鎖（例えば、ポ
リペプチド鎖）を有する。一部の実施形態における鎖は、金属イオンに結合する金属キレ
ート剤、小分子、化学療法剤、治療用抗体もしくはその機能性フラグメント、毒素、放射
性同位体、酵素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、オリゴヌクレオチド、有機もし
くは無機ナノ粒子、ＲＮＡｉ分子、ｓｉＲＮＡ分子、キレート剤、ホウ素化合物、光活性
剤、色素、蛍光もしくは発光物質、酵素、増感剤、放射性物質、またはキレート剤を含む
コンジュゲートされるペプチジル部分である。
一部の実施形態では、多価メディトープを環状化してよい。環状化多価メディトープは
、線状多価メディトープよりも安定であるか、またはより限定された幾何学的配置を有し
得る。環状化多価メディトープは、より急速なクリアランスを包含する、線状多価メディ
トープを上回る異なる機能特性も有し得る。一部の実施形態では、多価メディトープは、
多価メディトープの環状化またはメディトープの線状鎖の作成を助け得る１つまたは複数
のソルターゼまたは「インテイン」配列を含む。一部の実施形態では、多価メディトープ
のリンカーは、ソルターゼまたはインテイン配列を含む。インテイン配列は、Ｓｓｐ Ｉ
cおよびＳｓｐ ＩN配列を包含し、Ｓｃｏｔｔら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃ
ｉ Ｕ Ｓ Ａ．、１９９９年１１月２３日；９６（２４）：１３６３８〜４３において
記載されている。配列番号２３１は、配列番号２３１の１１８および１１９位に「ＧＧ」
配列、ならびに２５４〜２５８位に「ＰＥＴＧ」ソルターゼ配列を含むスプリットソルタ
ーゼ配列を含む。一部の実施形態では、ソルターゼ配列は、配列ＬＰＸＴＧ（配列番号２
４９）を含み、Ｘは、任意のアミノ酸を含む。ソルターゼ配列は、Ａｎｔｏｓら、Ｊ Ｂ
ｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２００９年６月５日；２８４（２３）：１６０２８〜３６において
記載されている。配列番号２３７〜２３９は、追加の例示的な多価メディトープペプチド
を開示している。
一部の態様では、多価メディトープの鎖は第１の鎖であり、メディトープはさらに、例
えば、式Ｒ3A−Ｌ3A−Ｒ4A（式Ｉ）またはＲ3A−Ｌ3A−Ｒ4A−Ｌ3B−Ｒ3B（式ＩＩＩ）を
有する、本明細書において上記したとおりの鎖などの第２の鎖を包含する。
一部の実施形態では、リンカーの組成および／またはＦｃとメディトープとの間の距離
を、例えば親和性および特異性を最適化するために体系的に改変する。一実施形態では、
各天然または非天然残基を、最適化のために、リンカー内の任意の位置で置換することが
できる。一部の態様では、リンカーは、２〜１００（またはその概数）残基長さ、例えば
、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、
３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１
００、１２５、１５０、１７５、または２００（またはその概数）残基（アミノ酸）長さ
、あるいはそれ以上である。一例では、現在および未来のＤＮＡシンセサイザーを使用し
て、そのようなリンカーを作成し、メディトープとＦｃ領域との間に挿入する。このリン
カーをまた、回転半径を制限し、かつＦｃ−メディトープの親和性および特異性を増強す
るために「硬直化（ｒｉｇｉｄｉｆｉｅｄ）」することもできる。例えば、多重コイルド
メインを、メディトープとＦｃとの間に設けることができる（図３）。他の例では、不活
性タンパク質ドメイン（例えば、免疫グロブリンフォールド）をリンカーの代わりに用い
る。多数の免疫グロブリンフォールドを、メディトープとＦｃドメインとの間に設けるこ
とができる。ある種の実施形態では、リンカーの組成は、あり得る抗原性を緩和するため
に、ヒト由来のものである。
一部の例では、例えば、選択性および結合親和性の増強のために、提供するメディトー
プをスキャフォールドにテザーして、多価メディトープを作成する。一部の実施形態では
、腫瘍関連抗原に結合するメディトープ利用可能ｍＡｂにスキャフォールドを設け、それ
を「デイジーチェーン」して、リガンド拮抗作用を増強し、受容体細胞内取り込み作用を
改変し、かつ／またはＡＤＣＣ／ＣＤＣを介する免疫応答を改善するために、多価メディ
トープスキャフォールドを使用する（図１を参照されたい）。したがって、一部の実施形
態では、２つ以上の抗体またはその機能性フラグメントをテザーするために、メディトー
プを使用する。そのようなメディトープは、例えば、癌または腫瘍の治療およびイメージ
ングを増強するための多価メディトープの一部であってよい。多価メディトープには、多
価メディトープテザリング体を作るために、リンカー（複数可）を介して、例えば長いリ
ンカーおよびビオチンを介してストレプトアビジンにカップリングしている２つ以上のメ
ディトープを包含し得る。
一実施形態では、多価メディトープテザリング体は、四価メディトープテザリング剤で
ある。一態様では、四量体テザリング体は、表面プラスモン共鳴によって、一価ペプチド
と比較して、抗体への結合の増大を有することが示されており、このことは、多価相互作
用と一致する。一例では、そのような多価メディトープ（例えば、四価メディトープ）の
使用は、抗体単独または一価メディトープ単独の使用と比較して、抗原へのメディトープ
利用可能抗体の結合親和性（例えば、セツキシマブの場合には、ＥＧＦＲ陽性細胞に対す
る結合親和性）の増大をもたらす。そのような結合親和性は、よく知られている方法を使
用して、例えば、ＦＡＣＳ分析によって決定することができる。図４を参照されたい。
一部の実施形態では、リンカー上での受容体の制約に対処するために、未修飾か、また
は修飾されている、例えば、変異型の、例えば、最適化されているメディトープを、リン
カーを最適化することなどによって、多価スキャフォールドにカップリングさせる。一部
の態様では、多価メディトープを隣接する抗体、例えば、ＩｇＧに「ラッチ−オン（ｌａ
ｔｃｈ−ｏｎ）」して、「デイジーチェーン」様配列を形成することができ（図１を参照
されたい）、これは、例えば腫瘍抗原を標的化している抗体において、腫瘍細胞の抗原密
度が高い場合に使用することができる。二価メディトープおよび抗体の分子内会合が可能
である一方で、抗体、例えば、ＩｇＧのＣ２対称性が、そのような相互作用について、リ
ンカーに幾何形状的制約を課し得る。したがって、一部の態様では、多価メディトープは
三価以上のスキャフォールドに基づき、１個超の抗体が「デイジーチェーン」されるであ
ろうことを保証する。第３のメディトープアームを包含することによって、三価メディト
ープと抗原結合抗体との当初遭遇の寿命が延長され得る。このことは次いで、その追加の
アームが隣接する抗原結合抗体に結合して、複合体全体を安定化させる確率を上昇させ得
る。他の実施形態では、メディトープ利用可能抗体および他の標的、例えば他のＢ細胞お
よびＴ細胞表面タンパク質、例えばＴ細胞受容体および同時刺激分子に同時に結合する多
官能化メディトープを構成することができる。一部の実施形態では、異なるメディトープ
について特異性を有する複数のメディトープ利用可能抗体（例えば、１つまたは複数の修
飾メディトープ利用可能抗体を包含）をそのような異なるメディトープと一緒に、そのよ
うな多価実施形態で使用する。
様々なリンカーおよびスキャフォールドが当技術分野では知られており、これらの実施
形態に関連して使用することができる。例示的なスキャフォールド合成スキームを図５に
示し、かつ本明細書中の実施例において検討する。一部の態様では、図５に示されている
テンプレート４および５の使用によって、二価および三価メディトープの両方の形成がそ
れぞれ可能となる。一部の実施形態では、例えば、結合または他の特性を改善または改変
するために、種々の長さのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および／または他のリンカ
ーを使用する。一部の態様では、ＰＥＧ長さは、１０（またはその概数）Ａ〜１０００（
またはその概数）Ａまたはその付近である。合成手法は、放射性核種イメージング用のＤ
ＯＴＡを組み込むためにも適している。例えば、ＦＩＴＣ標識二価メディトープ、すなわ
ち化合物１３の合成では、３０ÅのＰＥＧ二官能性アームが組み込まれている（図５）。
一部の例におけるＩｇＧ内のＣＤＲ領域間の距離は、約１３０Åである。距離は、例えば
、約５０Å〜約１５０Åの長さ；または約５０Å〜約２００Åの長さ、または約１００Å
および約１４０Åの長さ、例えば、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、
１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、
１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、
１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、
１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、
または２００Åの長さ（もしくはその概数）などで変動し得る。この手法が最適であるこ
とを保証するために、ＰＥＧリンカーの長さを体系的に変えることができる。市販のＰＥ
Ｇのエンドツーエンド距離は、９０Åに達し、これは、ＩｇＧ距離を超えるであろう。
他の実施形態では、例えば、高親和性多価メディトープを作成し、かつ／または相乗作
用をもたらすために、他のスキャフォールドおよび／またはリンカーを使用する。例えば
、ＤＮＡを、より硬直したスキャフォールドを作るためのメディトープ用のスキャフォー
ルドとして使用することができる。例えば、多価を達成するために、生物および化学由来
の種々のスキャフォールドも使用することができる。これには、これらに限定されないが
、二価または三価スキャフォールドの構築、四価スキャフォールドとしてストレプトアビ
ジン（欧州特許出願公開第２０６５４０２（Ａ１）号を参照されたい）またはストレパビ
ジン、独自のスキャフォールド（Ｈｕｔｃｈｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ， ＪＭＢ４０６：４
，５９５（２０１１））、Ｏｒｉｇａｍｉ ＤＮＡ（Ｇｕら、Ｎａｔｕｒｅ Ｎａｎｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４、２４５〜２４８（２００９）を参照されたい）などの使用が包
含される。これらに限定されないが、ＤＮＡ（一本鎖、二重鎖、Ｈｏｌｌｉｄａｙジャン
クション、アプタマーなど）、ＲＮＡ（一本鎖、ヘアピン、ステムループ、アプタマーな
ど）、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、硬直のためのＤＮＡ／ＰＮＡ二重鎖および三重鎖、有機
およびまたは無機ナノ粒子（直接カップリングしているか、またはＰＥＧなどの有機ポリ
マーを介してカップリングしている）、それ自体と、および／またはＤＮＡもしくはＰＮ
Ａと二重鎖を形成し得る有機ポリマーを包含する分子を使用して、化学的スキャフォール
ドを作ることもできる。
多価メディトープのキャラクタリゼーション
例えば、多価スキャフォールドへのコンジュゲーションが、メディトープ−Ｉｇ相互作
用に影響を及ぼさないことを保証するために、ＳＰＲおよびＩＴＣを包含するいくつかの
知られている方法のうちのいずれかによって、メディトープ利用可能抗体への多価メディ
トープの結合特性をキャラクタライズすることができる。これらの手法が一般的に、細胞
表面上に（腫瘍細胞の表面上などに）存在する抗原に関連していない場合、場合によって
は、そのような測定は、多価および相乗効果を決定するその能力において制限を受け得る
。したがって、一部の態様では、ＦＡＣＳ分析および／または細胞生存率アッセイを使用
して、メディトープ利用可能抗体（例えば、セツキシマブの状況では、ＥＧＦＲを過剰発
現する細胞）が認識する抗原を発現する細胞そのものに対する多価メディトープの作用を
定量する。一般に、メディトープ利用可能抗体が認識する抗原を発現（例えば、過剰発現
）する細胞系をメディトープ利用可能抗体と共に、抗体が、細胞上に発現されている抗原
に結合する条件下でインキュベートする。場合によっては、様々な濃度の抗体を使用する
。同時にか、またはその後に、細胞を多価メディトープと共に、場合によっては濃度を変
えてインキュベートする。適切なインキュベーション時間および洗い出しを実施する。第
２の抗体および一価メディトープを、陽性対照および陰性対照としてそれぞれ使用するこ
とができる。抗体およびメディトープを、よく知られているフローサイトメトリーまたは
顕微鏡によって検出可能な薬剤で標識することもできる。一部の例では、一価メディトー
プと比較して、多価メディトープの存在下でのシグナルのシフト（ＦＡＣＳの場合）また
は上昇は、相乗作用または相加作用を示している。他の例では、多価メディトープの相加
作用をさらに確認するために、非標識の一価メディトープを競合アッセイで使用して、そ
れが、抗原結合したメディトープ利用可能抗体について、標識された多価メディトープと
競合し得るかどうかを決定する。
他の例では、細胞生存性アッセイを使用して、メディトープ利用可能抗体の細胞死滅効
果を増強する多価メディトープの能力を決定する。例えば、目的の抗原を発現する細胞を
、メディトープ利用可能抗体および／または多価メディトープの濃度を変えながらインキ
ュベートすることができる。一価メディトープおよび第２抗体を再び、対照として使用す
ることができる。一部の例では、ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル
）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）を使用して、生細胞の数またはパーセ
ンテージを定量する。細胞生存性、増殖、および／または死を測定するための他の手法が
当技術分野では知られており、それらを使用することもできる。
他の例では、そのようなアッセイにおいて活性を実証する多価メディトープについて、
ウェスタンブロット分析または他の生化学的手法またはシグナル伝達による手法を行って
、細胞表面受容体などの特定の抗原に関連するシグナル伝達の阻害を調査する（例えば、
セツキシマブの場合には、ＥＧＦＲシグナル伝達経路の一部であるＥＧＦＲ、ＡＫＴ、Ｍ
ＡＰのリン酸化状態を追跡する）。そのような研究からのデータを、メディトープ利用可
能抗体のみ（すなわち、メディトープなし）、一価メディトープで、かつ／またはチロシ
ンキナーゼまたは他の既知の阻害剤（ＡＧ１４７８など）で処置された細胞からのデータ
と比較することができる。一部の例では、多価メディトープ濃度を関数として細胞死の上
昇が観察されるが、このことは、多価メディトープの相乗的細胞死滅効果を実証している
。
Ｉ．変異型メディトープ
提供するメディトープのうちには、メディトープ１または２（配列番号１または２のメ
ディトープ）と比較して１つまたは複数の修飾、例えば、構造的修飾を有するメディトー
プ変異体（変異型メディトープとも呼ばれる）があり、かつそれらを生産する方法を提供
する。一部の実施形態では、ｃＱＦＤおよびｃＱＹＮメディトープを、メディトープ変異
体を設計する際の出発点として使用する。一部の態様では、例えば、未修飾のメディトー
プ、ｃＱＦＤおよびｃＱＹＮと比較して、セツキシマブおよび本明細書において記載され
ている他の抗体を包含する１つまたは複数の提供するメディトープ利用可能抗体について
の親和性の上昇または改変、ｐＨ依存性の改変、または異なる生理学的条件下での異なる
親和性などの改変された特性を有するように、メディトープ変異体を設計する。様々な化
学的および生物物理的方法を使用して、メディトープ変異体を設計および生産する。
メディトープ変異体には、これらに限定されないが、メディトープ、例えば、ｃＱＦＤ
およびｃＱＹＮならびに本明細書において記載されている他のものなどに修飾が組み込ま
れている変異体が包含される。適切な修飾には、これらに限定されないが、ペプチド環化
の様式および／または位置に対する修飾、環式ペプチドの１つもしくは複数のアミノ酸成
分に対する修飾、または環式ペプチドへの１つもしくは複数のアミノ酸の付加もしくはそ
れらからのアミノ酸の欠失などの、当技術分野で知られている任意のペプチド修飾が包含
されるが、これらに限定されない。特定の例では、ｃＱＦＤを、以下の修飾のうちの１つ
または複数で改変することができる：Ａｒｇ８の修飾、Ｐｈｅ３の修飾、Ｌｅｕ５の修飾
、Ｌｅｕ１０の修飾、ペプチド環化の様式の変更、および／または１つもしくは複数の位
置での水和可能カルボニル官能基の組み込み、および１つもしくは複数のアミノ酸欠失も
しくは付加。ｃＱＹＮの場合には、適切な修飾には、以下のうちの１つまたは複数が包含
され得る：Ａｒｇ８の修飾、Ｌｅｕ５の修飾、Ｌｅｕ１０の修飾、ペプチド環化の様式の
変更、および／または１つもしくは複数の位置での水和可能カルボニル官能基の組み込み
、および１つもしくは複数のアミノ酸欠失もしくは付加。メディトープ内の一定のアミノ
酸位置を欠失させるか、または異なる天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸で置き換える
ことができるか、あるいは、例えば「クリック化学」を使用することによって、メディト
ープをフラグメントと化学的にコンジュゲートさせることができる。配列番号１のＡｒｇ
９がシトルリンに変異しているメディトープは、セツキシマブに結合することが、本明細
書では示されている。加えて、アミノおよびカルボキシ末端をさらなるアミノ酸で、メデ
ィトープ変異体の環式部分より先まで（すなわち、それに加えて）伸長して、Ｆａｂに追
加的に接触させることができる。例えば、プロテインＬをｃＱＦＤメディトープのＣ末端
に加えたところ、先行データによって、これは、かなり高い親和性で結合することが示さ
れている。
一部の実施形態では、メディトープには、表１および２に列挙されているもの、さらに
は１６アミノ酸長さまでのものなど、追加のアミノ酸を含むそのようなメディトープが包
含される。例えば、一部の態様では、メディトープは、第１の残基の前、すなわち、０位
にセリンをさらに包含するメディトープ１、２、または１５〜５５のうちの一つである。
表１に列挙されているメディトープは、ＣおよびＮ末端を接続するために、ジスルフィド
結合を使用するが、ただし、ある種のメディトープが、テールまたはリーダーなどの追加
の配列を含有して、結合が２つの末端残基の間にない場合を除く。例示的なテールおよび
リーダー配列は、本明細書においてＲ5AおよびＲ5Bとして示されるテールなどの、１〜４
０、１〜３０、１〜２５、１〜２０、１〜１５、１〜１０、９、８、７、６、５、４、３
、または２アミノ酸長さなどの１〜５０アミノ酸長さを有するものである。例示的なテー
ルおよびリーダー配列は、いずれか１つまたは複数のＧ、Ｓ、Ｐ、Ｋ、および／またはＤ
残基（複数可）を含有する。例示的なテールおよびリーダーは、ＧＧＧＳＫ、Ｇ、ＧＰＧ
ＧＳＤＰＧ、およびＧＰＧＧＳＤＰＧを包含する。例えば、配列番号３１を有するメディ
トープは、追加のテールを含有したが、これは、ジスルフィド結合が、２つの末端残基の
間にないことを意味した。同様に、表中のある種の他のメディトープ（配列番号１８７〜
１９０、２０７）は、テールおよび／またはリーダーを含有し、末端残基以外の残基の間
に結合が生じている。表２のペプチドでは、ラクタム架橋、ジスルフィド以外の結合（［
３＋２］付加環化など）または結合なしが利用されている（例えば、非環式または線状変
異体）。本明細書において記載されている実施形態に従って使用することができる追加の
メディトープには、本明細書において定義されるとおりの任意のメディトープ、セツキシ
マブまたは任意の他の治療用抗体の抗体フレームワーク結合インターフェース（すなわち
、Ｆａｂ軽鎖および重鎖の間）に結合するペプチドが包含される。例えば、環式ペプチド
ｃＱＦＤおよびｃＱＹＮに加えて、一部の実施形態は、ｃＱＦＤおよびｃＱＹＮの１つま
たは複数の変異体を包含する。
Figure 2021075548
Figure 2021075548
メディトープ変異体は典型的には、５〜１６アミノ酸長さ、例えば、５、６、７、８、
９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６アミノ酸長さ、例えば８〜１３ア
ミノ酸長さ、例えば、９〜１２アミノ酸長さのアミノ酸配列長さを有する。加えて、メデ
ィトープは、（例えば、融合タンパク質またはペプチドの一部としての）他の分子、例え
ば、リンカーまたは薬剤を包含する他のペプチドとコンジュゲートまたは会合していてよ
い。したがって、この場合、メディトープを含有する化合物は、このパラグラフに記載さ
れている長さを超える追加のアミノ酸残基を含有することがあり、その際、メディトープ
部分が、５〜１６アミノ酸を含有し、複合体または化合物が追加のアミノ酸を含有する。
例は、本明細書において記載されており、例えば、上記の配列番号３１である。
一部の実施形態では、変異型メディトープは環式ペプチドである。他の実施形態では、
それらは、線状または非環式ペプチドである。
メディトープは、例えば、下式を有するペプチドまたはそのようなペプチドに由来する
環式ペプチドを包含し得る：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２（式
ＶＩ）
［例えば、式中：
Ｘ１＝Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、β−アラニン、ジアミノプロピオン酸、β−アジドアラニン、
またはヌル；
Ｘ２＝Ｇｌｎまたはヌル；
Ｘ３＝Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、β−β’−ジフェニル−Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、２−ブロモ
−Ｌ−フェニルアラニン、３−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニンもしくは４−ブロモ−Ｌ−
フェニルアラニン、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、修飾Ｐｈｅ、水和性カルボニル含有残基；またはボ
ロン酸含有残基；
Ｘ４＝ＡｓｐまたはＡｓｎ；
Ｘ５＝Ｌｅｕ；β−β’−ジフェニル−Ａｌａ；Ｐｈｅ；Ｔｒｐ；Ｔｙｒ；フェニルア
ラニン、トリプトファン、もしくはチロシンの非天然類似体；水和性カルボニル含有残基
；またはボロン酸含有残基；
Ｘ６＝Ｓｅｒ；
Ｘ７＝ＴｈｒまたはＳｅｒ；
Ｘ８＝Ａｒｇ、Ｓｅｒ、修飾Ａｒｇ、または水和性カルボニルもしくはボロン酸含有残
基；
Ｘ９＝Ａｒｇ、Ａｌａ；
Ｘ１０＝Ｌｅｕ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、β−β’−ジフェニル−Ａｌａ；Ｐｈｅ；Ｔｒｐ；
Ｔｙｒ；フェニルアラニン、トリプトファン、もしくはチロシンの非天然類似体；水和性
カルボニル含有残基；またはボロン酸含有残基；
Ｘ１１＝Ｌｙｓ；および
Ｘ１２＝Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、７−アミノヘプタン酸、β−アラニン、ジアミノプロピオン
酸、プロパルギルグリシン、イソアスパラギン酸、またはヌル］。
一部の態様では、修飾Ａｒｇは、図６に示されている式の構造を有する。一部の態様で
は、修飾Ｐｈｅは、フェニル環に１個または複数のハロゲンが組み込まれたＰｈｅである
。一部の態様では、式ＶＩは、配列番号１または配列番号２ではない。
一部の実施形態では、メディトープは、式ＶＩＩの構造を有するペプチドまたは薬学的
に許容されるその塩である：
Figure 2021075548
 ［式中、
「＊」でマークされている中心は、「Ｒ」または「Ｓ」配置であり；
Ｒ3およびＲ3'はそれぞれ独立に、Ｈか、またはＣ1〜4アルキル、−ＯＨ、フルオロ、
クロロ、ブロモ、およびヨードから独立に選択される１、２、または３個の置換基で置換
されていてもよいフェニルであり；
Ｒ5は以下の（Ａ）あるいは（Ｂ）であり：
（Ａ）オキソ、アセタール、ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、ホスホナ
ートエステル、オルトエステル、−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−Ｃ
Ｈ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｈ、
および−ＣＯＮＨ2基からなる群から選択される１個もしくは複数の置換基で置換されて
いてもよいＣ1〜8アルキル；あるいは
（Ｂ）以下のａ）またはｂ）で置換されているＣ1〜4アルキル：
ａ）１個もしくは２個のフェニル基（ここで、各フェニルは、−ＯＨ、フルオロ、クロ
ロ、ブロモ、およびヨードから独立に選択される１、２、もしくは３個の置換基で置換さ
れていてもよい）；または
ｂ）ナフチル、イミダゾール、もしくはインドール基；
Ｒ6は、−Ｃ1〜4アルキル−ＯＨまたは−Ｃ1〜4アルキル−ＳＨであり；
Ｒ7は、−Ｃ1〜4アルキル−ＯＨまたは−Ｃ1〜4アルキル−ＳＨであり；
ｍは、０、１、２、３、４、または５であり；
Ｒ8は下記の（ａ）あるいは（ｂ）であり：
（ａ）−ＯＨ、−ＮＲaＲb、−Ｎ（Ｒc）Ｃ（Ｏ）Ｒe、または−Ｎ（Ｒc）Ｃ（＝ＮＲd）
Ｒe；（ここで、
ＲaはＨであり；
Ｒbは、Ｈか、またはオキソ、アセタールおよびケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、−ＳＨ、ボ
ロン酸エステル、ホスホナートエステル、オルトエステル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−Ｃ
Ｈ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｈ、
もしくは−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル基からなる群から選択される１個もしくは複数の置換基
で置換されていてもよいＣ1〜8アルキルであり；
Ｒcは、Ｈ、Ｃ1〜8アルキル、Ｃ3〜8シクロアルキル、分枝アルキル、またはアリール
であり；
Ｒdは、Ｈか、またはそれぞれ、−Ｎ3、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、オキソ
、アセタール、ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、ホスホナートエステル、
オルトエステル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−Ｃ
Ｈ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｈ、および−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル基からなる
群から選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよいＣ1〜8アルキル、Ｃ
2〜8アルケニル、Ｃ2〜8アルキニル、Ｃ3〜8シクロアルキル、分枝アルキル、もしくはア
リール基であり；かつ
Ｒeは、Ｈ；−ＮＨＲd；または−Ｎ3、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＳＨ、オキソ、Ｃ2〜4アセ
タール、Ｃ2〜4ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、ホスホナートエステル、
オルトエステル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−Ｃ
Ｈ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、および−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル基からなる群から選択さ
れる１個もしくは複数の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ1〜12アルキル、Ｃ3〜
8シクロアルキル、Ｃ2〜12アルケニル、Ｃ2〜8アルキニル、またはアリール基である）；
あるいは
（ｂ）オキソ、アセタール、ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、−ＳＨ、−
ＯＨ、ホスホナートエステル、オルトエステル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＣＨ−
Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、または−ＣＯ2Ｃ1〜4ア
ルキル基で置換されているＣ1〜12アルキル；
Ｒ9は、Ｃ1〜4アルキルまたは−Ｃ1〜2アルキレン−Ｒxであり；
（ここで、Ｒxは、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ2、または−ＣＨ2
ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ2である）；
Ｒ10は下記の（１）あるいは（２）であり：
（１）オキソ、アセタール、ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、ホスホナー
トエステル、オルトエステル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4ア
ルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｈ、お
よび−ＣＯＮＨ2基からなる群から選択される１個または複数の置換基で置換されていて
もよいＣ1〜8アルキル；あるいは
（２）１もしくは２個のフェニル基、または１個のナフチル、イミダゾール、もしくはイ
ンドール基で置換されているＣ1〜4アルキル基（ここで、各フェニルは、−ＯＨ、フルオ
ロ、クロロ、ブロモ、およびヨードから独立に選択される１、２、または３個の置換基で
置換されていてもよい）；
ｎは、０または１であり；
ｐは、０または１であり；
Ｘは、その各炭素がオキソ、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＣＯ2Ｈ、−ＮＨ2、
または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒyで置換されていてもよいＣ1〜8アルキレンまたはＣ2〜8アルケ
ニレンであり；
（ここで、前記アルキレンのうちの１個の炭素は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、５員のヘテロアリ
ール環、または−Ｓ−Ｓ−で置き換えられていてもよい）；かつ
Ｒyは、−Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ（ＲZ）Ｃ（Ｏ）−または−ＣＨ（Ｒz）ＣＯ2Ｈであ
る
（ここで、Ｒzは、−Ｈか、または−ＯＨ、−ＳＨ、もしくは−ＮＨ2で置換されていても
よい−Ｃ1〜4アルキルである）］。
場合によっては、Ｘは、その各炭素が−ＣＯ2Ｈ、−ＮＨ2、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒy
で置換されていてもよいＣ1〜8アルキレンまたはＣ2〜8アルケニレンであり（ここで、前
記アルキレンのうちの１個の炭素は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、５員のヘテロアリール環、また
は−Ｓ−Ｓ−で置き換えられていてもよい）；Ｒyは、−Ｃ1〜4アルキルまたは−ＣＨ（
Ｒz）ＣＯ2Ｈである（ここで、Ｒzは、−Ｈか、または−ＯＨ、−ＳＨ、もしくは−ＮＨ2
で置換されていてもよい−Ｃ1〜4アルキルである）；またはその薬学的に許容される塩。
場合によっては、そのようなメディトープは、配列番号１もしくは２ではないか、また
はそのような配列に由来する環式ペプチドではなく、かつ／またはメディトープ１または
２ではない。
式ＶＩＩのメディトープの一部の実施形態では、ｍは、０、１、もしくは２である。他
の実施形態では、Ｒ3は、Ｈまたはフェニルであり、Ｒ3'は、フェニル、２−ブロモフェ
ニル、３−ブロモフェニル、または４−ブロモフェニルである。さらなる実施形態では、
Ｒ5は、オキソ、−Ｂ（ＯＨ）2、−ＣＯ2Ｈ、もしくは−ＣＯＮＨ2基で、またはブロモも
しくはクロロ置換基でそれぞれ置換されていてもよい１個もしくは２個のフェニル基でそ
れぞれ置換されていてもよいメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブ
チル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルである。さらなる実施形態では、Ｒ8は
、−ＯＨ、−ＮＨ2、−Ｎ（Ｒc）Ｃ（Ｏ）Ｒe、または−Ｎ（Ｒc）Ｃ（＝ＮＲd）Ｒeであ
る。なおさらなる実施形態では、Ｒcは、Ｈまたはメチルであり、Ｒdは、ＨまたはＣ1〜4
アルキルであり、かつＲeは、Ｃ1〜4アルキルまたは−ＮＨ（Ｃ1〜4アルキル）である。
他の実施形態では、Ｒ9は、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ2、また
は−ＣＨ2ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ2で置換されていてもよいメチルまたはエチルである。な
お他の実施形態では、Ｒ10は、オキソ、−Ｂ（ＯＨ）2、−ＣＯ2Ｈ、または−ＣＯＮＨ2
基でそれぞれ置換されていてもよいメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、
イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルである。なお他の実施形態では、
−Ｘ−ＮＨ−は、−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）6−Ｎ
Ｈ−、−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨＣＨ2Ｃ
Ｈ（ＣＯ2Ｈ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2ＣＨ（ＣＯ2
Ｈ）−ＮＨ−、−β−Ａｌａ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−ＮＨ−、または−Ｃ（Ｏ
）ＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2−トリアジニル−ＣＨ2−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−ＮＨ−である。
一部の実施形態では、メディトープは、式ＶＩＩＩの構造を有するペプチドである：
Figure 2021075548
「＊」でマークされている中心は、「Ｒ」または「Ｓ」配置である。記号
Figure 2021075548
 は、Ｌ1AへのＲ1Aの結合点を示す。
Ｒ3およびＲ3'はそれぞれ独立に、Ｈか、またはＣ1〜4アルキル、−ＯＨ、フルオロ、
クロロ、ブロモ、およびヨードから独立に選択される１、２、または３個の置換基で置換
されていてもよいフェニルであり；
Ｒ5は、以下の（Ａ）あるいは（Ｂ）である：
（Ａ）オキソ、アセタール、ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、ホスホナ
ートエステル、オルトエステル、−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−Ｃ
Ｈ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｈ、
および−ＣＯＮＨ2基からなる群から選択される１個もしくは複数の置換基で置換されて
いてもよいＣ1〜8アルキル；あるいは
（Ｂ）以下のａ）またはｂ）で置換されているＣ1〜4アルキル基：
ａ）１個もしくは２個のフェニル基（ここで、各フェニルは、−ＯＨ、フルオロ、クロ
ロ、ブロモ、およびヨードから独立に選択される１、２、もしくは３個の置換基で置換さ
れていてもよい）；または
ｂ）ナフチル、イミダゾール、もしくはインドール基。
Ｒ6は、−Ｃ1〜4アルキル−ＯＨまたは−Ｃ1〜4アルキル−ＳＨである。Ｒ7は、−Ｃ1
〜4アルキル−ＯＨまたは−Ｃ1〜4アルキル−ＳＨである。記号ｍは、０、１、２、３、
４、または５である。
Ｒ8は、−ＯＨ、−ＮＲaＲb、−Ｎ（Ｒc）Ｃ（Ｏ）Ｒe、または−Ｎ（Ｒc）Ｃ（＝ＮＲ
d）Ｒeである。Ｒaは、Ｈである。Ｒbは、Ｈか、またはオキソ、アセタールおよびケター
ル、−Ｂ（ＯＨ）2、−ＳＨ、ボロン酸エステル、ホスホナートエステル、オルトエステ
ル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ
Ｏ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｈ、もしくは−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル基からなる群から選択
される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよいＣ1〜8アルキルである。Ｒcは
、Ｈ、Ｃ1〜8アルキル、Ｃ3〜8シクロアルキル、分枝アルキル、またはアリールである。
Ｒdは、Ｈか、または−Ｎ3、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、オキソ、アセタール
、ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、ホスホナートエステル、オルトエステ
ル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ
Ｏ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｈ、および−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル基からなる群から選択さ
れ１個もしくは複数の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ1〜8アルキル、Ｃ2〜8ア
ルケニル、Ｃ2〜8アルキニル、Ｃ3〜8シクロアルキル、分枝アルキル、もしくはアリール
基である。Ｒeは、Ｈ；−ＮＨＲd；または−Ｎ3、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＳＨ、オキソ、Ｃ
2〜4アセタール、Ｃ2〜4ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、ホスホナートエ
ステル、オルトエステル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキ
ル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、および−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル基からなる群か
ら選択される１個もしくは複数の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ1〜12アルキ
ル、Ｃ3〜8シクロアルキル、Ｃ2〜12アルケニル、Ｃ2〜8アルキニル、またはアリール基
である。別法では、Ｒ8は、オキソ、アセタール、ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エ
ステル、−ＳＨ、−ＯＨ、ホスホナートエステル、オルトエステル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ
Ｏ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、ま
たは−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル基で置換されているＣ1〜12アルキルである。
Ｒ9は、Ｃ1〜4アルキルまたは−Ｃ1〜2アルキレン−Ｒxである。Ｒxは、−ＣＯ2Ｈ、−
ＣＯＮＨ2、−ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ2、または−ＣＨ2ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ2である。
Ｒ10は、下記の（１）あるいは（２）である：
（１）オキソ、アセタール、ケタール、−Ｂ（ＯＨ）2、ボロン酸エステル、ホスホナー
トエステル、オルトエステル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）Ｃ1〜4ア
ルキル、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｃ1〜4アルキル、−ＣＯ2Ｈ、お
よび−ＣＯＮＨ2基からなる群から選択される１個または複数の置換基で置換されていて
もよいＣ1〜8アルキル；あるいは
（２）１もしくは２個のフェニル基、または１個のナフチル、イミダゾール、もしくはイ
ンドール基で置換されているＣ1〜4アルキル基（ここで、各フェニルは、−ＯＨ、フルオ
ロ、クロロ、ブロモ、およびヨードから独立に選択される１、２、または３個の置換基で
置換されていてもよい）；
記号ｎは、０または１である。記号ｐは、０または１である。
Ｘは、下記の（１）〜（３）である：
（１）本明細書において論述するメディトープ環化ストラテジーのいずれかから生じるリ
ンカー；（２）置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘ
テロシクロアルキレン、置換アリーレン、または置換ヘテロアリーレンあるいは（３）そ
の各炭素がオキソ、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ2、−ＮＨＣ（Ｏ）−、または−ＮＨＣ（Ｏ）
Ｒyで置換されていてもよいＣ1〜8アルキレンまたはＣ2〜8アルケニレン。Ｘ Ｃ1〜8ア
ルキレンのうちの１個の炭素は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、５員のヘテロアリール環、または−
Ｓ−Ｓ−で置き換えられていてもよい。Ｒyは、−Ｃ1〜4アルキルまたは−ＣＨ（Ｒz）Ｃ
（Ｏ）−または−ＣＨ（Ｒz）ＣＯ2Ｈである。Ｒzは、−Ｈか、または−ＯＨ、−ＳＨ、
もしくは−ＮＨ2で置換されていてもよい−Ｃ1〜4アルキルである。式ＶＩＩには、すべ
ての適切な薬学的に許容される塩が包含される。（１）において、Ｘは、その化学的三価
によって、かつＸが上述したとおりのさらなる置換基（例えば、−ＮＨ2およびオキソ）
を包含してもよいことによって、置換リンカーと考えられる。一部の実施形態では、Ｘは
、下式である：
Figure 2021075548
式ＩＸにおいて、＊＊は、式ＶＩＩＩ中のＸに結合するグルタミンへの結合点を表し、
＊＊＊は、式ＶＩＩＩ中のＸおよびリシンに結合する窒素への結合点を表す。記号
Figure 2021075548
 は、分子の残りの部分へのＸの結合点を示す。
式ＶＩＩＩのメディトープの一部の実施形態では、ｍは、０、１、または２である。他
の実施形態では、Ｒ3は、Ｈまたはフェニルであり、Ｒ3'は、フェニル、２−ブロモフェ
ニル、３−ブロモフェニル、または４−ブロモフェニルである。さらなる実施形態では、
Ｒ5は、オキソ、−Ｂ（ＯＨ）2、−ＣＯ2Ｈ、もしくは−ＣＯＮＨ2基で、またはブロモも
しくはクロロ置換基でそれぞれ置換されていてもよい１もしくは２個のフェニル基でそれ
ぞれ置換されていてもよいメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチ
ル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルである。さらなる実施形態では、Ｒ8は、
−ＯＨ、−ＮＨ2、−Ｎ（Ｒc）Ｃ（Ｏ）Ｒe、または−Ｎ（Ｒc）Ｃ（＝ＮＲd）Ｒeである
。いっそうさらなる実施形態では、Ｒcは、Ｈまたはメチルであり、Ｒdは、ＨまたはＣ1
〜4アルキルであり、Ｒeは、Ｃ1〜4アルキル、または−ＮＨ（Ｃ1〜4アルキル）である。
他の実施形態では、Ｒ9は、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ2、また
は−ＣＨ2ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ2で置換されていてもよいメチルまたはエチルである。な
お他の実施形態では、Ｒ10は、オキソ、−Ｂ（ＯＨ）2、−ＣＯ2Ｈ、または−ＣＯＮＨ2
基でそれぞれ置換されていてもよいメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、
イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルである。なお他の実施形態では、
−Ｘ−ＮＨ−は、−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−（例えば、ジスルフィド架橋を介して結合）、−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）6−ＮＨ−、−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−、−Ｃ（
Ｏ）ＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨＣＨ2ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（Ｎ
Ｈ2）ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−ＮＨ−、−β−Ａｌａ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2
ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−ＮＨ−、または−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2−トリアジニル−ＣＨ2
−ＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−ＮＨ−である。
ａ． 修飾
構造データおよび熱力学的データに基づき、本明細書において記載されているメディト
ープ１および２内のいくつかの位置が、全体結合親和性を増強し、かつ／または本明細書
において記載されているとおりの他の特性を改変するために例えば、種々の天然または非
天然アミノ酸で修飾するための標的部位として同定されている。そのような修飾には、こ
れらに限定されないが、ヘッドトゥテールの環式ラクタムペプチドを作成するためのｃＱ
ＦＤまたはｃＱＹＮの修飾、Ａｒｇ８の修飾、３位の修飾（例えば、ｃＱＦＤまたはその
変異体のＰｈｅ３）、Ｌｅｕ５の修飾、Ｌｅｕ１０の修飾、および／または水和性カルボ
ニル官能基の組み込みが包含される（図７を参照されたい）。本明細書において実証され
ているとおり、ｃＱＦＤの元のメディトープにおいてＰｈｅ３、Ｌｅｕ５、およびＡｒｇ
８をそれぞれアラニンに変異させると、メディトープ利用可能抗体結合インターフェース
に対する、生じた化合物の親和性が１０〜１４０分の１に低下する。一部の態様では、変
異型メディトープには、配列番号１もしくは２のメディトープまたは表１もしくは２に列
挙されている他のメディトープの１、３、５、８、１０、および１２位のうちの１つまた
は複数に修飾を有するものが包含される。
８位
一部の実施形態では、メディトープ変異体は、メディトープ１または２の８位（Ａｒｇ
８）に対応する位置に修飾を含有する。未修飾のメディトープ（ｃＱＦＤ；配列番号１）
において、Ａｒｇ８は伸長されて、メディトープ利用可能抗体重鎖のＱ１０５の重鎖カル
ボニルと水素結合を形成している。この残基のすぐ周囲の範囲は、溶媒に曝露されても疎
水性である。一部の態様では、このメディトープは、この位置に修飾された残基を含有す
る（例えば、修飾されたＡｒｇ８）。一部の例では、この修飾された残基は、メディトー
プ利用可能抗体Ｈ−結合のために有用なＡｒｇ８残基のイミニウム官能基を維持しており
、置換または非置換の疎水性アームを導入して、空洞を満たす。リガンドドッキング計算
によって裏付けられるとおり、そのような修飾は、エントロピーの上昇によって結合をか
なり増大させる。Ｎ−アルキルグアニジニウム基またはアルキル−アミジン官能基を使用
することによって、そのような修飾を組み込むことができる。いずれの場合においても、
末端Ｎ原子の置換される基は、アルキルまたはアリールであってよく、その場合、そのア
ルキルまたはアリール基の各位置は、末端位を包含する基内で、追加の官能基で場合によ
って置換されていてよい。一例では、図６に示されているとおりの構造を有する修飾され
たアルギニン（修飾されたＡｒｇ８）は、例えば、配列番号１または２のメディトープの
Ａｒｇ８について、ＮＨ2上でブチル基で置換されている（図６ではＮＨＲとして示され
ている）。一部の態様では、変異型メディトープは、８位にｎ−ブチル−アルギニンまた
はブチルアミジン修飾を含有する。
３位
一部の実施形態では、メディトープ変異体は、メディトープ１のＰｈｅ３など、３位に
対応する位置に修飾を含有する。メディトープ変異体Ｐｈｅ３Ｔｙｒ ｃＱＹＮ（配列番
号２）のヒドロキシル基は、ｃＱＦＤ（配列番号１）と比較して、Ａｒｇ８側鎖の伸長さ
れた立体配座中に改変を有する。本明細書のデータによって、Ｆａｂへの水結合を伴う、
好ましい水素結合ネットワークの形成が示唆されている。エンタルピーによって駆動され
る最適化は、薬物設計における多くの小分子手法で成功することが判明しており、提供す
るメディトープには、エントロピーの上昇を操作する機会が存在する。一部の実施形態で
は、メディトープ設計においてエンタルピーおよび／またはエントロピーを上昇させる手
法を使用して、様々なメディトープを作成する、例えば、結合を最適化する。
例えば、メディトープ利用可能抗体に結合すると、Ｐｈｅ３の疎水性フェニル環は、メ
ディトープ利用可能抗体Ｆａｂの側鎖残基のかなり極性の配列に囲まれる。一部の実施形
態では、１個または複数のハロゲンをこの残基のフェニル環に導入して、極性側鎖残基と
のハロゲン結合相互作用を可能にする。ハロゲン結合は、水素結合と類似しているが、臭
素または塩素（または他のハロゲン）などのハロゲンと酸素原子との相互作用を伴う比較
的強い非共有結合である。一部の態様では、この位置の残基を、ハロゲン置換基を組み込
むように修飾する。一部の態様では、メディトープ利用可能抗体との、例えば、メディト
ープ利用可能抗体のそれぞれＴｙｒ８７（軽鎖）、Ｇｌｎ３８、および／またはＴｙｒ９
１（重鎖）位でのハロゲン結合に適した位置に臭素原子が位置するように、Ｐｈｅ３を、
２−ブロモ−、３−ブロモ−、または４−ブロモフェニルアラニンで置き換える。そのよ
うなフェニルアラニン誘導体は市販されており、かつ一部の態様では固相ペプチド合成（
ＳＰＰＳ）によって、環式ペプチドメディトープ変異体に組み込まれる。例示的な変異型
メディトープには、２−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニン、３−ブロモ−Ｌ−フェニルアラ
ニン、または４−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニンをメディトープ１のＰｈｅ３に対応する
位置に含有するものが包含される。
他の例では、メディトープに、追加のフェニル基をこの位置で、例えば、Ｐｈｅ３をβ
，β’−ジフェニルアラニンに置き換えることによって組み込む。
５および１０位（例えば、メディトープ１または２のＬｅｕ５、Ｌｅｕ１０）
一部の実施形態では、メディトープ変異体は、メディトープ１または２の５または１０
位（Ｌｅｕ５またはＬｅｕ１０）に対応する位置に修飾を含有する。本明細書において示
されているとおり、メディトープ１のＬｅｕ５およびＬｅｕ１０の側鎖は、メディトープ
利用可能Ｆａｂ、セツキシマブに疎水性に接触している。ある種の実施形態では、異なる
天然アミノ酸または非天然アミノ酸をこれらの位置のうちの一方または両方に組み込み、
例えばそれによって、伸長され得る表面積量を変えることによって、メディトープの１つ
または複数の特性、例えば、親和性を改変する。一実施形態では、天然アミノ酸（Ｐｈｅ
／Ｔｙｒ／Ｔｒｐ）および非天然類似体（例えば、β，β’−ジフェニル−Ｌ−アラニン
または、分枝アルキル、ナフチルなどの伸長された芳香族、もしくは他の疎水基を包含す
る側鎖が組み込まれているアミノ酸）を、ＳＰＰＳを介して、一方または両方の位置に体
系的に導入する。
「水和性」官能基
ある種の実施形態では、メディトープ利用可能抗体のメディトープ結合部位を囲む１個
または複数のＦａｂヒドロキシル支持側鎖を、選択的なトラッピングを介して、水和性官
能基が組み込まれているメディトープと共有結合を形成することによって利用する。した
がって、一部の実施形態では、例えば、高度に選択的であるが、メディトープ利用可能抗
体または他の物質との不可逆的な相互作用を生じさせるために、メディトープは、水和性
置換基を有する１個または複数の残基を含有する。例えば、メディトープ１のＡｒｇ８は
、Ｋａｂａｔナンバリングに従うとメディトープ利用可能抗体の軽鎖のＳｅｒ４３（３．
５Å）および重鎖のＴｙｒ９１（３．８Å）の近傍まで伸長している。メディトープのＡ
ｒｇ８またはＬｅｕ１０の末端に水和性官能基を組み込むことで、セリンまたはチロシン
ヘミアセタールの選択的な形成が可能になるであろう。そのような共有付加物は本質的に
、不可逆的な結合をもたらすであろう。加えて、ボロン酸を含有する残基も、水和性基と
してメディトープに取り込むことができる。ボロン酸は、多発性骨髄腫を治療するために
使用されるボルテザミブ（ｂｏｒｔｅｚａｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））の構
造活性において重要な役割を果たす。水和性残基のさらなる代表的な例を図６にも示すが
、ここで、Ｒ＝−ＣＨ2ＣＨＯまたは−ＣＨ2Ｂ（ＯＨ）2である。一部の例では、ＳＰＰ
Ｓを使用して、そのような基を含有する残基を組み込むことによって、そのような変異体
を調製する。
抗体のＦａｂ−メディトープ結合部位内で新たなアミノ酸残基を設計する際、および必
要な相補性「水和性」官能基をそのメディトープの種々の位置に導入する際に、そのよう
な水和性ストラテジーを適用することができる。システイン残基をＦａｂ領域に導入する
ことによって、類似のストラテジーを適用することができ、このストラテジーでは、この
官能基を、メディトープ内に含有される求電子性カルボニル基またはその誘導体などの「
水和性」官能基を求核的に攻撃するために、またはＦａｂ領域と、必要なチオール官能基
またはチオール同等官能基を含有するメディトープとの間に選択的ジスルフィド結合（−
Ｓ−Ｓ−）を作るために使用する。このアイデアによる他の実施形態には、α，β−不飽
和カルボニル官能基などの、メディトープに含有されるマイケルアクセプタを導入するこ
とが包含されるであろう。これらの官能基は、チオールと選択的に反応して、安定な共有
炭素−硫黄結合を形成することがよく知られている。
別の環化ストラテジーおよびジスルフィド架橋の置き換え
ある種の実施形態では、変異型メディトープは、ｃＱＦＤおよびｃＱＹＮ中においてと
同様に、ジスルフィド架橋を包含する。２個のシステイン残基の側鎖が反応することによ
って、ジスルフィド架橋が形成され得る。ある種の実施形態では、メディトープ、例えば
、メディトープ１または２中のジスルフィド架橋を、別の結合に置き換えるか、または除
去する。したがって、変異型メディトープのうちには、元のメディトープとは別の結合を
有するか、またはそれらのジスルフィド架橋を欠いたものがある。
一部の態様では、アミノ酸鎖内の１個または複数の非天然アミノ酸の間に結合を作る。
非天然アミノ酸で作ることができる結合の例には、以下を含む結合が包含される：（ｉ）
アルデヒドまたはケトンを含む残基と、アミン基（ここで、そのアミン窒素は、−ＮＨ２
またはアルキルオキシ基で置換されている）を含む残基との反応（例えば、ｐ−アセチル
フェニルアラニン、ｍ−アセチルフェニルアラニン、またはｐ−（３−オキソブタノイル
）−Ｌ−フェニルアラニン残基と、ｐ−（２−アミノ−３−ヒドロキシエチル）−フェニ
ルアラニン残基との反応）によって作られる安定なヒドラゾンまたはオキシムベースの結
合、（ｉｉ）フェニルセレニジルアラニン（ｐｈｅｎｙｌｓｅｌｅｎｉｄｙｌａｌａｎｉ
ｎｅ）を組み込むことによる、チオール反応性、（ｉｉｉ）ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニ
ルアラニンを組み込むことによる、ベンゾフェノンを含有するＵＶ架橋剤、（ｉｖ）ｐ−
イソプロピルチオカルボニル−フェニルアラニンまたはｐ−エチルチオカルボニル−フェ
ニルアラニンを組み込むことによる、アミン反応性、（ｖ）例えば、アジド基を含有する
残基と、アルキン基を含有する残基とのＨｕｉｓｇｅｎ付加環化を介しての反応（例えば
、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン残基とｐ−アジドフェニルアラニン残基との
反応）によって作られる、トリアジン、チアゾール、チアゾリジン、またはオキサゾール
結合などの複素環式結合；（ｖ）一方の残基中の酸基と他方の残基中のアミン基との反応
によって作られるアミド結合；（ｖｉ）一方の残基中の酸基と、セリンなどの他方の残基
中のアルコールとの反応によって作られるエステル結合；（ｖｉｉ）末端オレフィンをそ
れぞれ含有する２個の残基の反応によって、例えば、オレフィン複分解（例えば、２個の
アリルグリシン残基または２個のＮ−アリル置換アミノ酸の反応）によって作られる二重
結合、あるいは（ｖｉｉｉ）当技術分野で知られている適切な残基の任意の他の対の反応
による結合。総説については、例えば、Ｄａｖｉｅｓ，Ｊ．Ｓ．、「Ｔｈｅ Ｃｙｃｌｉ
ｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｊ．
Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉ． ２００３、９、４７１〜５０１を参照されたい。一実施形
態では、メディトープは、反応性基を、ｐ−アセチルフェニルアラニンなどのＦａｂに組
み込まれている非天然アミノ酸に向けることもできる。
例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ安定性に対処し、かつ後続のコンジュゲーション化学作用のた
めに化学選択的制御を可能にするために、メディトープを環化させるための様々な方法を
使用することができる。一部の実施形態では、環化ストラテジーは、ヘッドトゥテール（
ヘッドテール）ラクタム環化（非環式ペプチドの末端残基の間での環化）および／または
他の残基の間でのラクタム結合を包含するラクタム環化ストラテジーである。また、グリ
シン、β−Ａｌａ、７−アミノヘプタン酸などの残基を、非環式メディトープ環化前駆体
に組み込んで、異なるラクタム環サイズおよび結合様式を生じさせることによって、ラク
タム形成を行うことができる。「クリック」化学およびオレフィン複分解などの追加の環
化ストラテジーも使用することができる（図７、右の囲みを参照されたい）。ペプチドお
よびペプチド模倣物質を環化するそのような方法は、当技術分野でよく知られている。
一部の実施形態では、ラクタム結合を含有するメディトープは、ｉｎ ｖｉｖｏでより
安定であり、例えば、他の結合を有するメディトープと比較して、ｉｎ ｖｉｖｏでより
安定な結合を有する。
一部の実施形態では、非環式ペプチドの末端残基を反応させて、環式メディトープ、例
えば、環式メディトープ変異体を形成する。他の実施形態では、残基３と１１との、およ
び４と１１との間を包含する他の位置が環化に適している。したがって、一部の態様では
、メディトープは、例えば１２−アミノ酸ペプチドの残基３と１１との、および／または
４と１１との間など、Ｎ末端残基およびＣ末端残基以外の残基の間で形成される結合を含
有する。
一部の実施形態では、メディトープ、例えば、変異型メディトープは、反応性アミン官
能基（例えば、Ｌｙｓ１１）を含有し、これは、メディトープ変異体を、例えば、スキャ
フォールドもしくはリンカーに、または本明細書において記載されているとおりの診断用
、例えば、イメージング剤または治療剤などの薬剤に後でコンジュゲートするために使用
することができる。例えば、図５は、メディトープ変異体をＦＡＣＳ分析用のフルオレセ
インとコンジュゲートするための手順を示している；このストラテジーは、ｉｎ ｖｉｖ
ｏＰＥＴイメージング用のＤＯＴＡを包含する他のイメージング剤および他の薬剤に適用
することもできる。
メディトープのキャラクタリゼーション
一部の実施形態では、例えば、本明細書において実施例で記載されている方法などのＩ
ＴＣ、ＳＰＲ、および／または回折、および／または他の方法によって、変異型メディト
ープなどのメディトープをキャラクタライズする。一例では、例えば、最も望ましい特性
、例えば、１つまたは複数のメディトープ利用可能抗体に対して最大の親和性、またはｐ
Ｈ依存性などの他の望ましい特性を有するメディトープ変異体を引き続き修飾して望まし
い特性を向上させるように、メディトープの合成およびそのキャラクタリゼーションを反
復して実施する。
一例では、メディトープのメディトープ利用可能抗体への結合をキャラクタライズする
ために、そのメディトープを均一性＞９５％まで精製し、質量分析法によって構造的にキ
ャラクタライズする。ペプチドを水中で透析し、その濃度をＵＶ−Ｖｉｓによって測定し
、かつ元素分析で較正し、適切な緩衝液中に希釈する（＞１００×）。メディトープ利用
可能抗体への結合を、ＩＴＣ、ＳＰＲ、Ｘ線回折、またはそれらの組合せによって厳密に
キャラクタライズする。ＩＴＣ測定は、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ｎａｎｏＩＴＣ
で、測定１回当たり僅かペプチド１〜２ｍｇを用いるだけで行うことができる。一例では
、ＳＰＲ測定のためには、低密度チップおよび高密度チップをメディトープ利用可能抗体
、例えば、Ｆａｂまたは完全ＩｇＧとコンジュゲートさせる。場合によっては、セツキシ
マブの場合、ＥＧＦＲ（残基１〜６２１）の全細胞外ドメインのうちの可溶性フラグメン
トなどの抗原を使用して、そのチップを初めにキャラクタライズする。本明細書において
報告される研究では、例えば、ＳＰＲおよびＩＴＣによって測定した場合に、ｃＱＦＤメ
ディトープは、完全に無傷のセツキシマブＩｇＧと比較して、同様のエンタルピーおよび
エントロピーで、セツキシマブＦａｂフラグメントに結合した。したがって、セツキシマ
ブまたは他のメディトープ利用可能抗体の全ＩｇＧまたはＦａｂフラグメントを使用して
、結合測定を実施することができる。一例では、回折のために、セツキシマブＦａｂフラ
グメントおよび配列番号１のメディトープの共結晶化条件を十分に確立し、回折品質の結
晶を典型的には、１〜３日、典型的には１日で得る。全データセットは社内ソース（Ｒｉ
ｇａｋｕ ００７−ＨＦおよびＲ−Ａｘｉｓ ＩＶ＋＋）では８〜１２時間で、かつＳｔ
ａｎｆｏｒｄ Ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｌｉｇｈｔｓｏｕｒｃｅ
では１０分間で収集されるので、メディトープ変異体とメディトープ利用可能抗体との相
互作用を迅速にキャラクタライズすることができる。
一部の態様では、ＩＴＣ、ＳＰＲ、およびＸ線回折データは、例えば総合的に、後続の
化学的修飾のガイドとなり、かつ最終的にメディトープの親和性を向上させ、かつ／また
はメディトープを他に改変するための原子の詳細を提示する。ΔＧ＝−ＲＴ ｌｎ Ｋａ
に基づく計算によって、セツキシマブに対するメディトープのマイクロモルからナノモル
までの親和性の相違は、強い水素結合程度に基づく３００Ｋでの約４ｋＣａｌ／ｍｏｌの
自由エネルギーの変化から生じていることが示されている。したがって、タンパク質結合
ポケットから、整列していた水分子が失われるか、またはアミノ酸残基鎖が再配向するだ
けでも十分に、結合は数桁変わり得る。
一部の例では、メディトープの特性を改変するために、例えば、メディトープ−Ｆａｂ
相互作用の親和性を向上させるために、他の手法を使用する。一例では、上記の研究で得
られるものなどの構造データを使用して、例えば、相補性メディトープ結合を改善し得る
ように、例えば追加の水素結合を加える、アミノ酸で非天然アミノ酸を置換する、または
疎水性インターフェースを改変する変異誘発によって、Ｆａｂ中の残基を置き換えること
ができる。一部の例では、蛍光偏光アッセイを使用して、配列番号１などの所与のメディ
トープに置き換わり得るメディトープ変異体を同定する。他の例では、同じ技術を使用し
て、メディトープに置き換わり得る小分子を同定し、次いでこれらの小分子をテンプレー
トとして使用して、メディトープの結合親和性をさらに向上させる。
一部の例では、メディトープ変異体を、ｐＨ依存性に基づき、例えば、異なるｐＨ条件
では異なる親和性を有するように設計する。したがって、ある種の実施形態では、メディ
トープ利用可能抗体メディトープ相互作用をｐＨに関して微調整する。そのようなメディ
トープの例を本明細書において記載する。一部の態様では、メディトープ変異体の結合親
和性を、緩衝液のｐＨを関数として測定する。例えば、変異型メディトープは、１つまた
は複数のメディトープ利用可能抗体またはフラグメントに対して、リソソームのｐＨレベ
ルでは低いか、または低酸素環境では高い結合親和性を有するメディトープを包含する。
例えば、メディトープ利用可能抗体に対して、中性ｐＨ（例えば、ｐＨ７〜８、例えば、
ｐＨ７．３〜７．５）では比較的高い結合親和性を示し、かつその抗体に対して、より酸
性のｐＨ、例えば、４〜６．５（またはその概数）のｐＨでは、例えば、エンドソームの
ｐＨ（例えば、５（またはその概数）〜６．５（またはその概数））またはリソソームの
ｐＨ（例えば、４．５（またはその概数）〜５（またはその概数））では、比較的低い結
合親和性を示す変異型メディトープを提供する。他の例では、メディトープは、腫瘍環境
などの低酸素環境では、例えば、血液中などの他の生理学的条件下で観察される親和性と
比較して、抗体に対して高い結合親和性を有する。一部の実施形態では、低いｐＨで（例
えば、薬物送達のためにリソソームにおいて）特異的に放出するためのメディトープ変異
体またはメディトープ「類似体」の修飾；および低酸素環境（例えば、腫瘍間質ｐＨは多
くの場合に、正常組織よりも低い）においてより高い親和性で結合するようなメディトー
プの修飾を提供する。
別の例では、メディトープは、メディトープ利用可能抗体に対して第１のｐＨでは低い
か、または限られた結合親和性を、かつ第２のｐＨでは高い結合親和性を有し得る。一部
の実施形態では、第１のｐＨは、非生理学的ｐＨであり得、第２のｐＨは、生理学的ｐＨ
または標的組織もしくは疾患状態のｐＨであり得る。一部の実施形態では、メディトープ
およびメディトープ利用可能抗体を、メディトープおよびメディトープ利用可能抗体が製
造または貯蔵中に低いか、または限られた架橋を示すように第１のｐＨで、単一の組成物
で一緒に製造または貯蔵することができる。したがって、メディトープおよびメディトー
プ利用可能抗体は、溶液中では相対的に可溶性で、未結合のままであるが、生理学的条件
下を包含する第２のｐＨで使用または投与した後に、結合し、クラスターを形成し、かつ
同時局在化を増加させ得る。そのようなメディトープ変異体を作成するための方法も提供
する。
一部の実施形態によれば、メディトープ結合部位を利用または最適化して、メディトー
プ利用可能抗体およびその機能性フラグメントの結合、それらの精製、および／またはそ
れらを使用するイメージング方法もしくは他の方法を増強することができる。別の実施形
態では、メディトープは、メディトープ結合部位のＦａｂ中の１個または複数の操作シス
テイン（例えば、ＴｈｉｏＭＡｂ）に結合する１個または複数のシステイン残基を含有し
てよい。これによって、このメディトープは、任意の診断用および／または治療用物質、
分子、または化合物にコンジュゲートする。例えば、その物質は、マーカーなどの小分子
診断用分子であってよい。この「Ｃｙｓメディトープ」は、そのコンジュゲートを抗体に
向かわせ、共有結合を介して結合する。別法では、このメディトープをＦａｂに、メディ
トープ結合部位に組み込まれている１つまたは複数の非天然アミノ酸にコンジュゲートさ
せることができる。
ＩＩ． メディトープ−薬剤コンジュゲート
特定の実施形態では、多価メディトープを、治療有効量の１種または複数の治療剤また
は診断剤に、例えば、イメージング剤、治療上有効な薬剤または化合物に、または両方に
コンジュゲートする。一部の実施形態では、複数のメディトープ、１つまたは複数リンカ
ー、および１つまたは複数の薬剤を含むそのような複合体を提供する。
本開示は、疾患または状態を治療、予防、診断、またはモニターするための治療剤また
は診断剤または化合物にコンジュゲートした多価メディトープ、またはその変異体の使用
を企図する。一態様では、薬剤への多価メディトープのそのようなコンジュゲーションは
、メディトープ利用可能モノクローナル抗体と関連して使用する場合、疾患を治療および
検出するためのｍＡｂをベースとした治療法およびイメージング法を著しく改善するであ
ろう高度に多角的なプラットフォーム技術を提供する（図１を参照されたい）。
薬剤を、当技術分野で公知の任意の手段によってコンジュゲートすることができる。一
部の実施形態では、薬剤を、リシン、チロシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、ホルミ
ルグリシンまたはアルデヒドタグ、非天然アミノ酸などにコンジュゲートする。ホルミル
グリシンまたはアルデヒドタグは、反応性アルデヒド基を作成するためにホルミルグリシ
ン生成酵素（ＦＧＥ）によって認識および標的化され得る６−アミノ酸（ＬＣＴＰＳＲ；
配列番号２４７）または１３−アミノ酸（ＬＣＴＰＳＲＧＳＬＦＴＧＲ、配列番号２４８
）配列を含むことができる。反応性アルデヒド基は、メディトープまたは多価メディトー
プを薬剤にコンジュゲートすることを含むサブ配列反応において有用であり得る。Ｃａｒ
ｒｉｃｏら、Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３、３２１〜３２２（
２００７）を参照されたい。
診断剤および治療剤には、関連技術においてよく知られているような任意のそのような
薬剤が包含される。イメージング剤のうちには、これらに限定されないが、「色素」、「
標識」、または「指示薬」と一般に称される様々な有機または無機小分子を包含する蛍光
および発光物質がある。例には、フルオレセイン、ローダミン、アクリジン色素、Ａｌｅ
ｘａ色素、およびシアニン色素が包含される。本開示の実施形態に従ってイメージング剤
として使用することができる酵素には、これらに限定されないが、ホースラディッシュペ
ルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、グルコースオキシダー
ゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコロニダーゼ、またはβ−ラクタマーゼが包含され
る。そのような酵素を、色素原、蛍光原化合物または、発光原化合物と組み合わせて使用
して、検出可能なシグナルを生成することができる。
本開示の実施形態に従ってイメージング剤として使用することができる放射性物質には
、これらに限定されないが、18Ｆ、32Ｐ、33Ｐ、45Ｔｉ、47Ｓｃ、52Ｆｅ、59Ｆｅ、62Ｃ
ｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、77Ａｓ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、89Ｚｒ、94Ｔｃ、
94Ｔｃ、９９ｍＴｃ、99Ｍｏ、105Ｐｄ、105Ｒｈ、111Ａｇ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、12
5Ｉ、131Ｉ、142Ｐｒ、143Ｐｒ、149Ｐｍ、153Ｓｍ、154-1581Ｇｄ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、
166Ｈｏ、169Ｅｒ、175Ｌｕ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、194Ｉｒ、198Ａｕ
、199Ａｕ、211Ａｔ、211Ｐｂ、212Ｂｉ、212Ｐｂ、213Ｂｉ、223Ｒａおよび225Ａｃが包
含される。本開示の実施形態に従って追加のイメージング剤として使用することができる
常磁性イオンには、これらに限定されないが、遷移金属およびランタニド金属（例えば、
原子番号２１〜２９、４２、４３、４４、または５７〜７１を有する金属）のイオンが包
含される。これらの金属には、Ｃｒ、Ｖ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｌａ、Ｃｅ、
Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、およびＬ
ｕのイオンが包含される。
イメージング剤が放射性金属または常磁性イオンである場合、この薬剤を、これらのイ
オンに結合するための長いテールに結合している１個または複数のキレート基を有する長
いテールを有するテールの長い他の試薬と反応させることができる。その長いテールは、
金属またはイオンを結合のためにそれに加えることができる懸垂基を有するポリリシン、
多糖、または他の誘導体化もしくは誘導体化可能な鎖などのポリマーであってよい。本開
示に従って使用することができるキレート基の例には、これらに限定されないが、エチレ
ンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ＤＯＴＡ、
ＮＯＴＡ、ＮＥＴＡ、ＴＥＴＡ、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビス−
チオセミカルバゾン、ポリオキシム、および同様の基が包含される。免疫反応性の最小限
の低下ならびに最小限の凝集および／または内部架橋を伴って、分子への結合の形成を可
能にする基によって、キレートは通常、ＰＳＭＡ抗体または機能性抗体フラグメントに連
結する。同じキレートを、マンガン、鉄、およびガドリニウムなどの非放射性金属と複合
体化させて、本明細書において記載されている抗体および担体と共に使用すると、そのキ
レートはＭＲＩのために有用である。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、およびＴＥＴＡなどの大環状
キレートが、様々な金属、ならびにこれらに限定されないが、それぞれガリウム、イット
リウム、および銅の放射性核種を包含する放射性金属と共に使用される。ＲＡＩＴのため
に223Ｒａなどの核種を安定的に結合するために重要な大環状ポリエーテルなどの他の環
状キレートも使用することができる。ある種の実施形態では、Ａｌ−18Ｆ複合体などのＰ
ＥＴイメージング剤をＰＥＴ分析において使用するための標的化分子に結合させるために
、キレート部分を使用することができる。
例示的な治療剤には、これらに限定されないが、薬物、化学療法剤、治療用抗体および
抗体フラグメント、毒素、放射性同位体、酵素（例えば、腫瘍の部位でプロドラッグを切
断して細胞毒性剤にするための酵素）、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、アンチセ
ンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉ分子（例えば、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ）、キレ
ート剤、ホウ素化合物、光活性剤、ならびに色素が包含される。治療剤には、キレート剤
に結合している金属、金属合金、金属間またはコア−シェルナノ粒子も包含され得、これ
らは、健康な細胞と比較して、標的化細胞の放射線療法に対する感度を上げるための放射
線増感剤として作用する。さらに、治療剤には、ＭＲＩコントラスト剤のための常磁性ナ
ノ粒子（例えば、マグネタイトまたはＦｅ3Ｏ4）が包含され得、これらは、他の種類の療
法（例えば、光線力学的療法および温熱療法ならびにイメージング（例えば、蛍光イメー
ジング（ＡｕおよびＣｄＳｅ））と共に使用することができる。
化学療法剤は多くの場合に、本来、細胞毒性または細胞増殖抑制性であり、それらには
、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害
剤、ホルモン療法、標的化治療剤、および免疫治療剤が包含され得る。一部の実施形態で
は、本開示の実施形態に従って治療剤として使用することができる化学療法剤には、これ
らに限定されないが、１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−
アザシチジン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アク
チノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチ
ノイン、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、ア
メトプテリン、アミホスチン、アナグレリド、アナストロゾール、アラビノシルシトシン
、三酸化ヒ素、アムサクリン、アミノカンプトテシン、アミノグルテチミド、アスパラギ
ナーゼ、オーリスタチン、ジメチルバリン−バリン−ドライソロイシン−ドラプロイン−
フェニルアラニン−ｐ−フェニレンジアミン（ＡＦＰ）、ドバリン−バリン−ドライソロ
イシン−ドラプロイン−フェニルアラニン（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（
ＭＭＡＥ）、オーロマイシン、アザシチジン、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、ベン
ダムスチン、ベバシズマブ、エタネルセプト、ベキサロテン、ビカルタミド、ビスマス、
ボルテゾミブ、ブレオマイシン、ブスルファン、ロイコボリンカルシウム、シトロボラム
因子、カペシタビン、カネルチニブ、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、ク
ロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルチゾン、シクロホスファミド、シタラ
ビン、ｃｃ１００６５、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、デシタ
ビン、デニロイキンジフチトクス、デキサメタゾン、デキサゾン、デクスラゾキサン、ダ
クチノマイシン、ダウノルビシン、デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ドセタキ
セル、ドロスタチン、ドキソルビシン、ドキシフルリジン、エニルウラシル、エピルビシ
ン、エポエチンアルファ、エルロチニブ、エベロリムス、エキセメスタン、エストラムス
チン、臭化エチジウム、エトポシド、フィルグラスチム、フルオキシメステロン、フルベ
ストラント、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、
フルタミド、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゴセレリン、
顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘキサメチルメラミ
ン、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ
、インターロイキン２、インターロイキン１１、イソトレチノイン、イキサベピロン、イ
ダルビシン、メシル酸イマチニブ、イホスファミド、イリノテカン、ラパチニブ、レナリ
ドマイド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、リポソームＡｒａ−Ｃ（ｌｉｐ
ｏｓｏｍａｌ Ａｒａ−Ｃ）、ロムスチン、メクロレタミン、メゲストロール、メルファ
ラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メチルプレドニゾロン、マイトマ
イシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、マイタンシノイド（ｍａｙｔｏｎｓｉｎｏｉｄ
）、ネララビン、ニルタミド、オクトレオチド、オプレルベキン、オキサリプラチン、パ
クリタキセル、パミドロネート、ペメトレキセド、パニツムマブ、ＰＥＧインターフェロ
ン、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ペン
トスタチン、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキ
シフェン、リシン、リシンＡ鎖、リツキシマブ、ロミプロスチム、ラリトレキセド（ｒａ
ｌｉｔｒｅｘｅｄ）、サパシタビン、サルグラモスチム、サトラプラチン、ソラフェニブ
、スニチニブ、セムスチン、ストレプトゾシン、タキソール、タモキシフェン、テガフー
ル、テガフール−ウラシル、テムシロリムス、テモゾラミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ
）、テニポシド、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、
トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、トリミトレキサート（ｔｒｉｍｉｔｒｅ
ｘａｔｅ）、アルルビシン（ａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、
ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、イットリエウム（ｙｔｔｒｉｅｕｍ）、ま
たはゾレドロン酸が包含される。
本開示の実施形態に従って治療剤として使用することができる治療抗体およびその機能
性フラグメントには、これらに限定されないが、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキ
シマブ、エドレコロマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、パニツムマブ、
リツキシマブ、トシツモマブ、およびトラスツズマブ、ならびに本明細書に列挙されてい
る具体的な疾患に関連する他の抗体が包含される。
本開示の実施形態に従って治療剤として使用することができる毒素には、これらに限定
されないが、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）、ＤＮアーゼＩ、ブド
ウ球菌エンテロトキシンＡ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒
素、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素が包含される。
本開示の実施形態に従って治療剤として使用することができる放射性同位体には、これ
らに限定されないが、32Ｐ、89Ｓｒ、90Ｙ、99mＴｃ、99Ｍｏ、131Ｉ、153Ｓｍ、177Ｌｕ
、186Ｒｅ、213Ｂｉ、223Ｒａ、および225Ａｃが包含される。
Ｃ． メディトープ利用可能抗体
メディトープ結合部位を介して１つまたは複数のメディトープに結合し得るメディトー
プ利用可能抗体およびその抗体結合性フラグメントを提供する。場合によっては、メディ
トープ利用可能抗体は、配列番号１または２（メディトープ１または２）の環式ペプチド
に、かつ／あるいはメディトープ１、２、１６〜１８、２３、２９、３１、３２、３６、
３９、４２、４３、４５、４６、５１、５２、５４、または５５（配列番号１、２、１６
〜１８、２３、２９、３１、３２、３６、３９、４２、４３、４５、４６、５１、５２、
５４、または５５で示される配列を有するペプチドに基づくメディトープ）などの１種ま
たは複数のその変異体、または場合によっては、メディトープ１、２、または１５〜５５
かつ／あるいは配列番号１８６〜１９０および２０７のメディトープの任意のものに結合
する。提供するメディトープ利用可能抗体のうちには、セツキシマブの親和性と類似の親
和性で１つのメディトープまたは複数のメディトープに結合するものがある。例えば、あ
る種の態様では、１０（もしくはその概数）μＭ以下、５（もしくはその概数）μＭ以下
、または２（もしくはその概数）μＭ以下、１（もしくはその概数）μＭ以下、５００、
４００、３００、２００、１００（もしくはその概数）ｎＭ以下、あるいはそれ未満、例
えば２００（もしくはその概数）ピコモル以下の解離定数で、抗体はメディトープに結合
する。場合によっては、本明細書に列挙されているもののうちの任意のものなど解離定数
は、表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、蛍光、蛍光偏光、Ｎ
ＭＲ、ＩＲ、熱量滴定；結合平衡除外；円偏光二色性、示差走査熱分析、または他の知ら
れている方法などの特定の技術を使用して測定される解離定数である。例えば、場合によ
っては、類似体またはメディトープは、ＳＰＲによって測定した場合に、もしくはＩＴＣ
によって測定した場合に、またはこれらの方法のうちの任意の方法によって測定した場合
に、１０（もしくはその概数）μＭ以下、５（もしくはその概数）μＭ以下、または２（
もしくはその概数）μＭ以下、１（もしくはその概数）μＭ以下、５００、４００、３０
０、２００、１００（もしくはその概数）ｎＭ以下、あるいはそれ未満の結合定数を示す
。
一部の例では、メディトープ結合性部位は、モノクローナル抗体セツキシマブの構造的
特徴である。したがって、一部の場合には、メディトープ結合性部位は、セツキシマブの
メディトープ結合性部位内のものに対応する残基を含有する。Ｘ線結晶解析によって、配
列番号１のペプチドは、約７００ｎＭの結合定数で、重鎖および軽鎖の様々な残基によっ
て規定されるセツキシマブＦａｂフラグメントの中央空洞内のメディトープ結合性部位（
図８および９Ａを参照されたい）に結合することが明らかになっている。
ある種の実施形態では、メディトープとセツキシマブ結合部位との独自の相互作用を利
用して、追加のメディトープ利用可能抗体を作成する。一部の実施形態では、配列番号１
もしくは２のメディトープまたはその変異体などの提供するメディトープのうちの１つま
たは複数に結合する能力を与えるように、セツキシマブのＣＤＲとは別である１つまたは
複数のＣＤＲを有する抗体などのセツキシマブ以外の抗体（時にはテンプレート抗体と称
される）を修飾することによって、メディトープ利用可能抗体を作成する。このテンプレ
ート抗体は、ヒトもしくはヒト化抗体またはマウス抗体であってよい。一態様では、修飾
には、Ｆａｂフラグメントの中央空洞内、典型的には重鎖および軽鎖可変領域のフレーム
ワーク領域（ＦＲ）ならびに／または定常領域内の残基を、そのテンプレート抗体がメデ
ィトープ利用可能となるように置換することが包含される。例えば、テンプレート抗体が
ヒトまたはヒト化抗体である場合、修飾は一般的に、重鎖および軽鎖可変領域のＦＲ内の
残基での置換を包含する。一部の実施形態では、そのような残基を、セツキシマブまたは
匹敵するアミノ酸中に存在する対応する残基と置き換える。したがって、ある種の実施形
態では、ヒトまたはヒト化抗体のＦＲ内の残基を、対応するマウス残基で置き換え；ある
種の実施形態では、それらを、メディトープと相互作用する類似の官能基または部分を有
する残基などの他の残基によって置き換える。典型的には、対応するマウス（または他の
）残基によって置き換えられる残基は、中央Ｆａｂ空洞内に存在するので、免疫系に曝露
されない。したがって、一部の実施形態では、ヒト対象への送達に関して、これらのアミ
ノ酸置換をヒトまたはヒト化抗体に導入することで、修飾されたテンプレート抗体の抗原
性は上昇しないか、または実質的に上昇しない。加えて、抗原性予測アルゴリズムをさら
に使用して、点突然変異を有するヒト配列が抗原性であるはずがないことをさらに示すこ
とができる。
一部の実施形態では、置き換えられる１個または複数の残基は、Ｋａｂａｔナンバリン
グ（その全体が参照によって本明細書に組み込まれるＫａｂａｔ Ｅ．Ａ．ら（１９９１
） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１〜３２４２
を参照されたい）に従うと軽鎖フレームワーク残基１０、３９〜４３、４５、８３、８５
、１００、および／もしくは１０４および／またはＫａｂａｔナンバリングに従うと重鎖
フレームワーク残基番号４０、８９、および１０５から選択される。一般に、別段の指定
がない限り、抗体の重鎖または軽鎖中のアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔナンバリングに関す
る。セツキシマブメディトープ結合部位内の残基などの本明細書において記載されている
セツキシマブの残基に対応する他の抗体中の残基も、本開示内に包含される。一部の実施
形態では、軽鎖残基９、１０、３９、４０、４１、４２、４３、８３、８５、１００、お
よび／もしくは１０４ならびに／または重鎖残基４０、８９、および／もしくは１０５に
対応するテンプレート抗体中の残基を、例えば、セツキシマブ内でそれらの位置に存在す
るアミノ酸で置き換える。一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖
フレームワーク領域内（またはＦＲ、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、お
よび／またはＦＲ−Ｌ４などの１つまたは複数内）で、テンプレート抗体の軽鎖フレーム
ワーク領域（またはそれぞれ１つまたは複数のＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少なくとも
７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８
８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（も
しくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレームワーク領域（または
１つまたは複数のそのようなＦＲ、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、およ
び／またはＦＲ−Ｈ４内）で、テンプレート抗体の重鎖フレームワーク領域（または個々
の１種または複数のＦＲ−Ｈ（複数可））に対して少なくとも７５、７６、７７、７８、
７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９
２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の同一性
を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内で、テンプレート抗体のＶＨ領域に対して少なく
とも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７
、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％
（もしくはその概数）の同一性を含有するか；かつ／またはそのＶＬ領域内で、テンプレ
ート抗体のＶＬ領域に対して少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８
２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５
、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の同一性を含有する。一部の実
施形態では、抗体は、テンプレート抗体と比較して、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲ
の１つまたは複数、例えば、すべての内で、完全または少なくとも９５、９６、９７、９
８、もしくは９９％の同一性を含有する。一部の態様では、抗体は、テンプレート抗体と
比較して、軽鎖（例えば、ＦＲ−Ｌ）内に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、
１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾を含有し、
かつ／またはテンプレート抗体と比較して、重鎖（例えば、ＦＲ−Ｈ）内に１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１
９、または２０の修飾を含有する。
一実施形態では、置き換えられる１個または複数の残基は、これらだけに限定されない
が、Ｋａｂａｔナンバリングに従うと４０、４１、８３および８５を包含する軽鎖フレー
ムワーク残基である。一実施形態では、軽鎖残基４０は、トレオニンで置き換えられ；軽
鎖残基４１は、アスパラギンで置き換えられ、軽鎖残基８３は、イソロイシンまたはバリ
ンで置き換えられ、かつ／または軽鎖残基８５は、アスパラルタートで置き換えられる。
一実施形態では、軽鎖残基４０は、トレオニンで置き換えられ；軽鎖残基４１は、アスパ
ラギンで置き換えられ、軽鎖残基８３は、グルタマートで置き換えられ、かつ／または軽
鎖残基８５は、アスパルタートで置き換えられる。特定の例では、軽鎖フレームワークＰ
ｒｏ４０は、Ｔｈｒ（Ｐ４０Ｔ）またはＳｅｒ（Ｐ４０Ｓ）で置き換えられ、軽鎖フレー
ムワークＧｌｙ４１は、Ａｓｎ（Ｇ４１Ｎ）で置き換えられ、軽鎖フレームワーク残基Ｐ
ｈｅ８３は、Ｉｌｅ（Ｆ８３Ｉ）またはＶａｌ（Ｆ８３Ｖ）またはグルタマート（Ｆ８３
Ｅ）で置き換えられ、軽鎖フレームワーク残基Ｔｈｒ８５は、Ａｓｐ（Ｔ８５Ｄ）または
Ａｓｎ（Ｔ８５Ｎ）で置き換えられる。
したがって、提供するメディトープ利用可能抗体のうちには、１つまたは複数の修飾、
典型的にはアミノ酸置換を、セツキシマブまたは他のメディトープ利用可能抗体（メディ
トープ利用可能トラスツズマブおよびメディトープ利用可能Ｍ５Ａを包含する本明細書に
おいて記載されているものなど）のメディトープ結合部位内の位置に対応する残基に有す
る抗体がある。それらの抗体のうちには、Ｋａｂａｔナンバリングに従うと４０位にトレ
オニン、セリンまたはアスパルタート、４１位にグリシン以外の残基、および８５位にア
スパルタートまたはアスパラギンを有するＶＬ領域を有する抗体、例えば、４０位にトレ
オニン、４１位にアスパラギン、および８５位にアスパルタートを有するＶＬ領域を備え
た抗体がある。一部の実施形態では、この抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングに従うと、４
０位にセリンおよび８９位にイソロイシンを備えたＶＨ領域、ならびに／または４０位に
セリンまたはプロリンおよび８９位にイソロイシン、チロシン、メチオニン、フェニルア
ラニン、またはトリプトファンを備えたＶＨ領域を有する。一部の実施形態では、ＶＬ領
域は、１０位にイソロイシンもしくはロイシンおよび／または８３位にイソロイシンまた
は８３位にグルタマートを有する。一部の実施形態では、このＶＬ領域は、９位にバリン
またはイソロイシンおよび／または１００位にグルタミン以外の残基を有する。
一部の例では、Ｋａｂａｔナンバリングに従うと、そのＶＬ領域は、９位にバリンまた
はイソロイシン、１０位にイソロイシンまたはロイシン、３９位にアルギニン、４０位に
トレオニン、４１位にアスパラギン、４２位にグリシン、４３位にセリン、８３位にイソ
ロイシンもしくはグルタマート、８５位にアスパルタート、および１００位にアラニンを
有し、かつそのＶＨ領域は、４０位にセリンおよび８９位にイソロイシンを有する。一部
の例では、そのＶＬ領域は、Ｋａｂａｔナンバリングに従うと４０位にプロリン、４１位
にグリシン、もしくは８５位にトレオニンを含有せず、かつ／またはそのＶＨ領域は、Ｋ
ａｂａｔナンバリングに従うと４０位にアスパラギンもしくはアラニン、または８９位に
バリンを含有しない。一部の例では、そのＶＬ領域は、Ｋａｂａｔナンバリングに従うと
１０位にセリン、４０位にプロリン、４１位にグリシン、８３位にフェニルアラニン、ま
たは８５位にトレオニンを含有せず、かつ／あるいはそのＶＨ領域はＫａｂａｔナンバリ
ングに従うと４０位にアスパラギンもしくはアラニンまたは８９位にバリンを含有しない
。
一部の態様では、抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングに従うとＰ８、Ｖ９またはＩ９、Ｉ
１０またはＬ１０、Ｑ３８、Ｒ３９、Ｔ４０、Ｎ４１、Ｇ４２、Ｓ４３、Ｐ４４、Ｒ４５
、Ｄ８２、Ｉ８３、Ａ８４、Ｄ８５、Ｙ８６、Ｙ８７、Ｇ９９、Ａ１００、Ｇ１０１、Ｔ
１０２、Ｋ１０３、Ｌ１０４、Ｅ１０５、Ｒ１４２、Ｓ１６２、Ｖ１６３、Ｔ１６４、Ｅ
１６５、Ｑ１６６、Ｄ１６７、Ｓ１６８、およびＹ１７３を有する軽鎖、ならびに／また
はＫａｂａｔナンバリングに従うとＱ６、Ｐ９、Ｒ３８、Ｑ３９、Ｓ４０、Ｐ４１、Ｇ４
２、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｌ４５、Ｓ８４、Ｄ８６、Ｔ８７、Ａ８８、Ｉ８９、Ｙ９０、Ｙ９
１、Ｗ１０３、Ｇ１０４、Ｑ１０５、Ｇ１０６、Ｔ１０７、Ｌ１０８、Ｖ１０９、Ｔ１１
０、Ｖ１１１、Ｙ１４７、Ｅ１５０、Ｐ１５１、Ｖ１５２、Ｔ１７３、Ｆ１７４、Ｐ１７
５、Ａ１７６、Ｖ１７７、Ｙ１８５、Ｓ１８６、およびＬ１８７を有する重鎖を有する。
一部の態様では、抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングに従うとＰ８、Ｖ９またはＩ９、Ｉ
１０またはＬ１０、Ｑ３８、Ｒ３９、Ｔ４０、Ｎ４１、Ｇ４２、Ｓ４３、Ｐ４４、Ｒ４５
、Ｄ８２、Ｅ８３、Ａ８４、Ｄ８５、Ｙ８６、Ｙ８７、Ｇ９９、Ａ１００、Ｇ１０１、Ｔ
１０２、Ｋ１０３、Ｌ１０４、Ｅ１０５、Ｒ１４２、Ｓ１６２、Ｖ１６３、Ｔ１６４、Ｅ
１６５、Ｑ１６６、Ｄ１６７、Ｓ１６８、およびＹ１７３を有する軽鎖、ならびに／また
はＫａｂａｔナンバリングに従うとＱ６、Ｐ９、Ｒ３８、Ｑ３９、Ｓ４０、Ｐ４１、Ｇ４
２、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｌ４５、Ｓ８４、Ｄ８６、Ｔ８７、Ａ８８、Ｉ８９、Ｙ９０、Ｙ９
１、Ｗ１０３、Ｇ１０４、Ｑ１０５、Ｇ１０６、Ｔ１０７、Ｌ１０８、Ｖ１０９、Ｔ１１
０、Ｖ１１１、Ｙ１４７、Ｅ１５０、Ｐ１５１、Ｖ１５２、Ｔ１７３、Ｆ１７４、Ｐ１７
５、Ａ１７６、Ｖ１７７、Ｙ１８５、Ｓ１８６、およびＬ１８７を有する重鎖を有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体を、例えば、セツキシマブにおける対
応する位置（Ｋａｂａｔナンバリングに基づく）に似るように、ヒトまたはヒト化抗体、
例えば、トラスツズマブなどの抗体の軽鎖において１、２、３、４、５、６、７、８、９
、１０、または１１の残基を変異させることによって作成する。一部の態様では、そのよ
うな抗体は、ヒトまたはヒト化配列と比較して、Ｋａｂａｔナンバリングに基づき軽鎖の
９、１０、３９、４０、４１、４２、４３、４５、８３、８５、および１００位に変異残
基を含有する。一態様では、メディトープ利用可能抗体の軽鎖は、Ｋａｂａｔナンバリン
グに基づき、Ｖ９またはＩ９、Ｉ１０またはＬ１０、Ｒ３９、Ｔ４０、Ｎ４１ Ｇ４２、
Ｓ４３、Ｒ４５、Ｉ８３またはＥ８３、Ｄ８５、およびＡ１００、例えば：Ｖ９、Ｉ１０
、Ｒ３９、Ｔ４０、Ｎ４１、Ｇ４２、Ｓ４３、Ｒ４５、Ｉ８３、Ｄ８５、およびＡ１００
を含有する。一部の実施形態では、抗体は、他の点では、ヒトであるか、またはヒト化さ
れている。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体を、例えば、セツキシマブにおける対
応する位置に似るように、ヒトまたはヒト化抗体、例えば、トラスツズマブなどの抗体の
重鎖において１または２残基などの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または
１１の残基を変異させることによって作成する。一部の態様では、そのような抗体は、ヒ
トまたはヒト化配列と比較して、Ｋａｂａｔナンバリングに基づき、重鎖において４０お
よび８９位に変異残基を含有する。一態様では、重鎖は、Ｋａｂａｔナンバリングに基づ
きＳ４０およびＩ８９を含有する。一部の実施形態では、抗体は、他の点では、ヒトであ
るか、またはヒト化されている。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、例えば、ヒト化またはヒト配列と
比較して、１３の変異を含有する。一態様では、メディトープ利用可能抗体は、ヒト化ま
たはヒト配列と比較して、１１の変異を有する軽鎖、および２つの変異を有する重鎖を含
有する。一部の態様では、抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングに基づき、軽鎖においてＶ９
またはＩ９、Ｉ１０またはＬ１０、Ｒ３９、Ｔ４０、Ｎ４１、Ｇ４２、Ｓ４３、Ｒ４５、
Ｉ８３、Ｄ８５、およびＡ１００、ならびに重鎖においてＳ４０およびＩ８９を含有する
。一部の態様では、抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングに基づき、軽鎖においてＶ９または
Ｉ９、Ｉ１０またはＬ１０、Ｒ３９、Ｔ４０、Ｎ４１、Ｇ４２、Ｓ４３、Ｒ４５、Ｅ８３
、Ｄ８５、およびＡ１００、ならびに重鎖においてＳ４０およびＩ８９を含有する。一部
の態様では、抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングに基づき、軽鎖においてＶ９、Ｉ１０、Ｒ
３９、Ｔ４０、Ｎ４１、Ｇ４２、Ｓ４３、Ｒ４５、Ｉ８３、Ｄ８５、およびＡ１００、な
らびに重鎖においてＳ４０およびＩ８９を含有する。一部の態様では、抗体は、Ｋａｂａ
ｔナンバリングに基づき、軽鎖においてＶ９、Ｉ１０、Ｒ３９、Ｔ４０、Ｎ４１ Ｇ４２
、Ｓ４３、Ｒ４５、Ｅ８３、Ｄ８５、およびＡ１００、ならびに重鎖においてＳ４０およ
びＩ８９を含有する。一部の実施形態では、抗体および／またはそのフレームワーク領域
は、他の点では、ヒトであるか、またはヒト化されている。
他の実施形態では、ＣＤＲグラフティングを介して、典型的には、本明細書において記
載されているメディトープ利用可能抗体のうちの任意のものなどのメディトープ利用可能
抗体の重鎖および／または軽鎖の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、
ＣＤＲ１〜３のうちの１つまたは複数）を、それらを既存抗体または新たな抗体のＣＤＲ
などの他のＣＤＲと置き換えるように変更することによって、メディトープ利用可能抗体
を作成する。ＣＤＲグラフティングは、例えば、マウスなどの非ヒト種において作成され
る抗体のＣＤＲをヒト抗体フレームワーク上にグラフト化することによる、ヒト化モノク
ローナル抗体を生産するための標準的な実行法である。米国特許第５，５５８，８６４号
および同第８，１３３，９８２号；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、「Ｈｕｍａｎｉｚａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｂｙ Ｃ
ＤＲ−ｇｒａｆｔｉｎｇ： ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ
ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｎ ｌｏｏｐ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ」、Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｅｎｇ．、４：７７３〜７８３（１９９１）を参照されたい。したがって、ある種の実施
形態では、目的の既存抗体または新たに生じさせた抗体のＣＤＲをグラフト化することに
よって、メディトープ利用可能抗体の抗原特異性を改変する。また、提供するメディトー
プ利用可能抗体のうちには、そのようなＣＤＲグラフト化されたメディトープ利用可能抗
体がある。
一部の実施形態では、本明細書において開示されている抗体（例えば、セツキシマブ、
メディトープ利用可能トラスツズマブ、またはメディトープ利用可能Ｍ５Ａ（抗ＣＥＡ）
抗体）のうちの１種をテンプレート配列として使用し、かつそれを改変する、例えば、そ
の抗原結合特徴を改変するための１つまたは複数の既知の抗体操作方法を実施して、別の
特徴を持つメディトープ利用可能抗体を生成することで、メディトープ利用可能抗体を作
成する。抗原結合特性および他の特性を改変するために典型的に使用される既知の抗体操
作方法には、様々なｉｎ ｖｉｔｒｏ無作為化、親和性成熟、選択法が包含され、この選
択法には、エラープローンＰＣＲ、スパイクＰＣＲ（ｓｐｉｋｅｄ ＰＣＲ）、特定部位
の変異誘発、ファージディスプレイ、および他の選択方法が包含される。また、コンスト
ラクト、ライブラリ、およびＧＰＩに連結している発現系を包含する発現系を、そのよう
な方法を実施するために提供する。したがって、ある種の実施形態では、提供するメディ
トープ利用可能抗体は、軽鎖および／または重鎖可変領域を、セツキシマブ、メディトー
プ利用可能トラスツズマブ、またはメディトープ利用可能Ｍ５Ａなどのメディトープ利用
可能抗体のフレームワーク領域または領域（ＦＲ）（またはそのような抗体のＦＲ（複数
可）に対して少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６
、９７、９８、もしくは９９（またはその概数）％の同一性を有するＦＲ（複数可））と
共に有する。一部の態様では、そのような抗体は、そのメディトープ利用可能抗体のＣＤ
Ｒとは別である１つまたは複数のＣＤＲを有する。
例えば、一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号７１で示される軽鎖配列の軽鎖フ
レームワーク領域（ＦＲ）１（ＦＲ−Ｌ１）、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／または
ＦＲ−Ｌ４（あるいは配列番号７１のＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／ま
たはＦＲ−Ｌ４に対して少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、
９５、９６、９７、９８、もしくは９９（またはその概数）％同一であるＦＲ−Ｌ１、Ｆ
Ｒ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ−Ｌ４）ならびに一部の態様では、配列番号
７１で示される軽鎖配列のＣＤＲとは別である少なくとも１つのＣＤＲを含むアミノ酸配
列を有し；かつ／またはＶＨ領域は、配列番号７２で示される重鎖配列の重鎖ＦＲ１（Ｆ
Ｒ−Ｈ１）、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４（あるいは配列番号７
２のＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４に対して少なくと
も７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしく
は９９（またはその概数）％同一であるＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／
またはＦＲ−Ｈ４）ならびに一部の態様では、配列番号７２で示される重鎖配列のＣＤＲ
とは別である少なくとも１つのＣＤＲを有するアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号９で示される軽鎖配列の軽鎖フレームワー
ク領域（ＦＲ）１（ＦＲ−Ｌ１）、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ−Ｌ４
（あるいは配列番号９のＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ−Ｌ
４に対して少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、
９７、９８、もしくは９９（またはその概数）％同一であるＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、Ｆ
Ｒ−Ｌ３、および／またはＦＲ−Ｌ４）ならびに一部の態様では、配列番号９で示される
軽鎖配列のＣＤＲとは別である少なくとも１つのＣＤＲを含むアミノ酸配列を有し；かつ
／またはＶＨ領域は、配列番号６で示される重鎖配列の重鎖ＦＲ１（ＦＲ−Ｈ１）、ＦＲ
−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４（あるいは配列番号６のＦＲ−Ｈ１、Ｆ
Ｒ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４に対して少なくとも７５、８０、８５
、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９（またはその
概数）％同一であるＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４）
ならびに一部の態様では、配列番号６で示される重鎖配列のＣＤＲとは別である少なくと
も１つのＣＤＲを有するアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号６８で示される軽鎖配列の軽鎖フレームワ
ーク領域（ＦＲ）１（ＦＲ−Ｌ１）、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ−Ｌ
４（あるいは配列番号６８のＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ
−Ｌ４に対して少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９
６、９７、９８、もしくは９９（またはその概数）％同一であるＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２
、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ−Ｌ４）ならびに一部の態様では、配列番号６８で示
される軽鎖配列のＣＤＲとは別である少なくとも１つのＣＤＲを含むアミノ酸配列を有し
；かつ／またはＶＨ領域は、配列番号７０で示される重鎖配列の重鎖ＦＲ１（ＦＲ−Ｈ１
）、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４（あるいは配列番号７０のＦＲ
−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４に対して少なくとも７５、
８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９（
またはその概数）％同一であるＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦ
Ｒ−Ｈ４）ならびに一部の態様では、配列番号７０で示される重鎖配列のＣＤＲとは別で
ある少なくとも１つのＣＤＲを有するアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号６１で示される軽鎖配列の軽鎖フレームワ
ーク領域（ＦＲ）１（ＦＲ−Ｌ１）、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ−Ｌ
４（あるいは配列番号６１のＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ
−Ｌ４に対して少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９
６、９７、９８、もしくは９９（またはその概数）％同一であるＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２
、ＦＲ−Ｌ３、および／またはＦＲ−Ｌ４）ならびに一部の態様では、配列番号６１で示
される軽鎖配列のＣＤＲとは別である少なくとも１つのＣＤＲを含むアミノ酸配列を有し
；かつ／またはＶＨ領域は、配列番号６３で示される重鎖配列の重鎖ＦＲ１（ＦＲ−Ｈ１
）、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４（あるいは配列番号６３のＦＲ
−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４に対して少なくとも７５、
８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９（
またはその概数）％同一であるＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦ
Ｒ−Ｈ４）ならびに一部の態様では、配列番号６３で示される重鎖配列のＣＤＲとは別で
ある少なくとも１つのＣＤＲを有するアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、メデ
ィトープ利用可能抗体は、配列番号６、７、９、１０、１２、１４、６１、６３、６８、
６９、７０、７１、および／または７２で示されるＣＤＲとは別である１つまたは複数の
ＣＤＲを有する。
一部の実施形態では、メディトープは、セツキシマブ以外の抗体であり、ＥＧＦＲに特
異的に結合せず、ＥＧＦＲ以外の抗原に結合し、かつ／またはセツキシマブが特異的に結
合するＥＧＦＲ上のエピトープに特異的に結合しない。
一部の例では、メディトープ利用可能抗体を、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリ
ムマブ、アデカツムマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、ペンテト酸アルツモマブ、ア
ナツモマブ、アナツモマブマフェナトクス、アルシツモマブ、アトリズマブ、バシリキシ
マブ、ベクツモマブ、エクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベバシズマブ、ブレ
ンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セ
ルトリズマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマ
ブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エタラシズマブ、エルツマキソマブ、ファノレソ
マブ、Ｆｂｔａ０５、フォントリズマブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、ゴリムマブ
、イブリツモマブ、イゴボマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、メポ
リズマブ、ムロモナブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマ
ブ、オファツムマブ、オマリズマブ、オレゴボマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニ
ビズマブ、リツキシマブ、サツモマブ、スレソマブ、イブリツモマブ、イブリツモマブチ
ウキセタン、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、Ｔｒｂｓ０７、ウステキヌ
マブ、ビシリズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ブロダルマブ、アンルキンズマブ、バ
ピヌズマブ、ダロツズマブ、デムシズマブ、ガニツマブ、イノツズマブ、マブリリムマブ
、モキセツモマブパスドトックス、リロツムマブ、シファリムマブ、タネズマブ、トラロ
キヌマブ、トレメリムマブ、ハイブリドーマ１０Ｂ５によって産生される抗体、Ｂ６Ｈ１
２．２、およびウレルマブ、そのフラグメント、そのＣＤＲおよび／または抗原結合領域
を有する抗体、および／もしくは結合についてそのような抗体と競合する抗体；ならびに
／または配列番号７８〜１２４および／または１２５〜１７０のうちの任意のもので示さ
れる配列を有する抗体、そのフラグメント、そのＣＤＲおよび／または抗原結合領域を有
する抗体、ならびに／または結合についてそのような抗体と競合する抗体のうちから選択
されるテンプレート抗体を基にして作成する。表３に、一定の抗体についてのＣＡＳ（登
録商標）登録番号を列挙する。
Figure 2021075548
Figure 2021075548
他の例では、テンプレート抗体は、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、ア
デカツムマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、ペンテト酸アルツモマブ、アナツモマブ
、アナツモマブマフェナトクス、アルシツモマブ、アトリズマブ、バシリキシマブ、ベク
ツモマブ、エクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマ
ブ、カナキヌマブ、カプロマブ、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セルトリズマ
ブ、クリバツズマブテトラキセタン、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エドレ
コロマブ、エファリズマブ、エタラシズマブ、エルツマキソマブ、ファノレソマブ、Ｆｂ
ｔａ０５、フォントリズマブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、ゴリムマブ、イブリツ
モマブ、イゴボマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、メポリズマブ、
ムロモナブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、オファ
ツムマブ、オマリズマブ、オレゴボマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、
リツキシマブ、サツモマブ、スレソマブ、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン
、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、Ｔｒｂｓ０７、ウステキヌマブ、ビシ
リズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ハイブリドーマ１０Ｂ５によって産生される抗体
、およびブロダルマブまたはチウゼタン（ｔｉｕｚｅｔａｎ）のうちから選択される。一
部のそのような例では、１つまたは複数のＣＤＲは、これらのテンプレート抗体に存在す
るＣＤＲであり、かつ／または抗体は、そのような抗体と同じ抗原もしくはエピトープに
特異的に結合し、かつ／またはそれらの抗原への結合について、そのような抗体と競合す
る。
したがって、場合によっては、メディトープ利用可能抗体（そのフラグメントを包含）
は、ＣＡ−１２５、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体、ＴＮＦ−α、ＣＤ５
２、ＴＡＧ−７２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ
）、ＩＬ−２、インターロイキン−２受容体ａ−鎖（ＣＤ２５）、ＣＤ２２、ＣＤ２３（
ＣＤ２３Ａ、ＦｃイプシロンＲＩＩ、ＦｃεＲＩＩ、ＦＣＥ２、ＣＬＥＣ４Ｊ、Ｃ型レク
チンドメインファミリー４メンバーＪ、免疫グロブリンＥ結合因子、リンパ球ＩｇＥ受容
体、ＢＬＡＳＴ−２、またはＩＧＥＢＦとしても公知）、ＣＤ３７（テトラスパニン−２
６、ＴＳＰＡＮ２６、ｔｓｐａｎ−２６、またはＧＰ５２−４０としても公知）、Ｍｕｃ
ｉｎ−１、プロラクチン受容体（ＰＲＬ−Ｒとしても公知）、ＳＤＣ−１（ＣＤ１３８、
シンデカンプロテオグリカン１、シンデカン１、またはヘパラン硫酸プロテオグリカン繊
維芽細胞成長因子受容体としても公知）、Ｂ細胞活性化因子、インターロイキン−５受容
体（ＣＤ１２５）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＣＤ３０、ＩＬ−１β、前立腺特異的膜抗
原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ３、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、ＭＵＣ１、ヒトイン
ターロイキン−２受容体、Ｔａｃ、ＲＡＮＫリガンド、補体タンパク質、例えば、Ｃ５、
ＥｐＣＡＭ、ＣＤ１１ａ、例えば、ヒトＣＤ１１ａ、インテグリン、例えば、αｖβ３イ
ンテグリン、ビトロネクチン受容体αｖβ３インテグリン、ＨＥＲ２、ｎｅｕ、ＣＤ３、
ＣＤ１５、ＣＤ２０（小ループおよび／または大ループ）、インターフェロンγ、ＣＤ３
３、ＣＡ−ＩＸ、ＴＮＦα、ＣＴＬＡ−４、癌胎児性抗原、ＩＬ−５、ＣＤ３ε、ＣＡＭ
、α−４−インテグリン、ＩｇＥ、例えば、ＩｇＥ Ｆｃ領域、ＲＳＶ抗原、例えば、呼
吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質、ＴＡＧ−７２、ＮＣＡ−９０（顆粒細胞
抗原）、ＩＬ−６、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１７、ＣＴＡＡ１
６．８８、ＩＬ１３、インターロイキン−１β、β−アミロイド、ＩＧＦ−１受容体（Ｉ
ＧＦ−１Ｒ）、デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因
子受容体のαサブユニット、肝細胞成長因子、ＩＦＮ−α、神経成長因子、ＩＬ−１３、
ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ３２６、ＣＤ４７、およびＣＤ１３７からなる群から選択される抗原に
特異的に結合する。一部の例では、メディトープ利用可能抗原は、癌または他の疾患など
の目的の疾患または状態において標的として同定されている他の抗原に結合する。
ＣＤ１９
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗ＣＤ１９抗体、例えば、ＭＯＲ２０８などの
ＣＤ１９のためのヒトもしくはヒト化抗体またはマウス抗体、あるいはそのような抗体の
重鎖、軽鎖、ＶＨ、またはＶＬを有する抗体、あるいはその機能性フラグメントである。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、ＣＤ１９に特異的に結合する。ＣＤ
１９（または分化−１９のクラスター）は、例えば、ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎ
ｏ．ＮＰ＿００１１７１５６９またはＵｎｉＰｒｏｔ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｐ１５３
９１によって同定される。一態様では、ＣＤ１９は、Ｂ芽細胞に進展中の早期認識可能な
Ｂ系列細胞からのＢ細胞の表面に存在するが、血漿細胞への成熟で失われる。ある種の態
様では、ＣＤ１９は、抗原受容体依存性刺激のための閾値を低下させる調節分子である。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、ＭＯＲ２０８（ＸｍＡｂ（登録商標）５５
７４）（ＣＤ１９、例えば、未熟、成熟、および悪性Ｂ細胞のＣＤ１９に特異的に結合す
るモノクローナル抗体）の、それぞれ軽鎖および重鎖アミノ酸配列を示す配列番号２２６
および／または配列番号２２７のアミノ酸配列（リーダー配列を含むか、または含まない
）を含み、かつ／またはそれぞれＭＯＲ２０８のＶＬおよびＶＨアミノ酸配列を示す配列
番号２４５および／または２４６のアミノ酸配列（リーダー配列を含むか、または含まな
い）を含む。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号２２６で
示される軽鎖配列、またはＭＯＲ２０８の軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち、１つま
たは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、および／
または配列番号２２７で示される重鎖、またはＭＯＲ２０８の重鎖もしくはＶＨのＣＤＲ
（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣ
ＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、リーダー配列を含むか、ま
たは含まずに、配列番号２４５として示されるアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９
、または２０の修飾などの１つまたは複数、一般に複数の修飾（一般に、フレームワーク
領域において）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗体のＶＨ領域は、リーダ
ー配列を含むか、または含まずに、配列番号２４６として示されるアミノ酸配列のＶＨ領
域のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾などの１つまたは複数
、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において）を含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、ＭＯＲ２０８、または配列番号２２６の軽鎖フレ
ームワーク領域（またはそれぞれ１つもしくは複数のＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少な
くとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８
７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９
％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またその重鎖フレームワーク領域内（
または１つもしくは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−
Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、ＭＯＲ２０８、または配列番号２２７の重鎖フ
レームワーク領域（またはそれぞれ１つまたは複数のＦＲ−Ｈ））に対して少なくとも７
５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８
、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もし
くはその概数）の同一性を含有し；および／またはそのＶＨ領域内で、ＭＯＲ２０８また
は配列番号２４６のＶＨ領域に対して少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、
８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９
４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；か
つ／またはそのＶＬ領域内で、ＭＯＲ２０８または配列番号２４５のＶＬ領域に対して少
なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、
８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９
９％（もしくはその概数）の同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、ＭＯＲ２
０８と比較すると（例えば、配列番号２２６または２２７のＣＤＲ（複数可）と比較する
と）、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲの１つまたは複数、例えば、全部の内で、完全
または少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、ＭＯＲ２０８によって特異的に結合さ
れるＣＤ１９のエピトープに特異的に結合しないが、ＣＤ１９には特異的に結合するか、
またはＭＯＲ２０８のＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合についてＭＯＲ２０８
と競合しないが、ＣＤ１９には特異的に結合する。
ＣＤ２２
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗ＣＤ２２抗体、例えば、エプラツズマブ、も
しくはモキセツモマブなどのＣＤ２２のためのヒトもしくはヒト化抗体またはマウス抗体
、あるいはそのような抗体の重鎖、軽鎖、ＶＨ、またはＶＬを有する抗体、あるいはその
機能性フラグメントである。一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、ＣＤ２
２に特異的に結合する。ＣＤ２２（または分化−２２のクラスター）は、例えば、ＮＣＢ
Ｉ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＰ＿００１７６２またはＵｎｉＰｒｏｔ Ｉｄｅｎｔ
ｉｆｉｅｒ Ｐ２０２７３によって同定されるとおりのレクチンのＳＩＧＬＥＣファミリ
ーに属する分子である。一態様では、ＣＤ２２は、成熟Ｂ細胞の表面上に、かつより少な
い規模で一部の未熟Ｂ細胞上に存在する。ある種の態様では、ＣＤ２２は、免疫系の過剰
活性化および自己免疫疾患の発生を予防する調節分子である。一実施形態では、ＣＤ２２
のためのテンプレート抗体は、配列番号１７５のアミノ酸配列を有するポリペプチドもし
くはタンパク質、または配列番号１７６の核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコー
ドされるアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはタンパク質上の１つまたは複数のエピ
トープに特異的に結合する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、エプラツズマブ（ＣＤ２２、例えば、成熟
および悪性Ｂ細胞のＣＤ２２に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体）の軽鎖およ
び重鎖アミノ酸配列をそれぞれ示す配列番号１７７および／または配列番号１７８のアミ
ノ酸配列（各配列において、下記ではイタリック体で示されるリーダー配列を含むか、ま
たは含まない）を含み、かつ／またはエプラツズマブのＶＬおよびＶＨアミノ酸配列をそ
れぞれ示す配列番号１７９および／または１８３のアミノ酸配列（各配列において、イタ
リック体で示されるリーダー配列を含むか、または含まない）を含む。
エプラツズマブ軽鎖配列（配列番号１７７）：
ＭＫＬＰＶＲＬＬＶＬＬＬＦＷＩＰＡＳＲＧＤＶＱＶＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ
ＩＴＣＲＳＳＱＳＬＡＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＫＡＰＱＬＬＩＹＧＩＳＮＲＦ
ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰ
ＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬ
ＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬ
ＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ。
エプラツズマブ重鎖配列（配列番号１７８）：
ＭＤＦＧＦＳＬＶＦＬＡＬＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳ
ＣＫＡＳＧＹＲＦＴＮＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＮＰＧＮＮＹＡＴＹＲ
ＲＫＦＱＧＲＶＴＭＴＡＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＥＧＹ
ＧＮＹＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ
ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳ
ＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ
ＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹ
ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ
ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧ
ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ。
エプラツズマブ軽鎖可変（ＶＬ）領域配列（配列番号１７９）：
ＭＫＬＰＶＲＬＬＶＬＬＬＦＷＩＰＡＳＲＧＤＶＱＶＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ
ＩＴＣＲＳＳＱＳＬＡＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＫＡＰＱＬＬＩＹＧＩＳＮＲＦ
ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰ
ＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ。
エプラツズマブ重鎖可変（ＶＨ）領域配列（配列番号１８３）：
ＭＤＦＧＦＳＬＶＦＬＡＬＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳ
ＣＫＡＳＧＹＲＦＴＮＹＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＮＰＧＮＮＹＡＴＹＲ
ＲＫＦＱＧＲＶＴＭＴＡＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＥＧＹ
ＧＮＹＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号１７７も
しくは配列番号１７９において示される軽鎖もしくはＶＬ配列、またはエプラツズマブの
軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、Ｃ
ＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、および／または配列番号１７８もしくは１８３で示
される重鎖もしくはＶＨ配列、またはエプラツズマブの重鎖もしくはＶＨのＣＤＲ（すな
わち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３
）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、リーダー配列を含むか、ま
たは含まずに、配列番号１７９として示されるアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９
、または２０の修飾などの１つまたは複数、一般に複数の修飾（一般に、フレームワーク
領域において）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗体のＶＨ領域は、リーダ
ー配列を含むか、または含まずに、配列番号１８３のアミノ酸配列と比較して、１、２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８
、１９、または２０の修飾などの１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレー
ムワーク領域において）を含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、エプラツズマブ、または配列番号１７７もしくは
１７９の軽鎖フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））に
対して少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５
、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、
もしくは９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレーム
ワーク領域（または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ
２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、エプラツズマブ、または配列番号１
７８もしくは１８３の重鎖フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｈ）
に対して少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８
５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８
、もしくは９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内
で、エプラツズマブのＶＨ領域に対して（例えば、配列番号１８３のアミノ酸配列に対し
て）少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、
８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、も
しくは９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、
エプラツズマブのＶＬ領域に対して（例えば、配列番号１７９のアミノ酸配列に対して）
少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６
、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または
９９％（もしくはその概数）の同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖お
よび／または軽鎖内のＣＤＲの１つまたは複数、例えば、全部の内で、エプラツズマブと
比較すると（例えば、配列番号１７７もしくは１７９または配列番号１７８もしくは１８
３のＣＤＲ（複数可）と比較すると）完全または少なくとも９５、９６、９７、９８、ま
たは９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、エプラツズマブによって特異的に結合
されるＣＤ２２のエピトープに特異的に結合しないが、ＣＤ２２には特異的に結合するか
、またはエプラツズマブのＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合についてエプラツ
ズマブと競合しないが、ＣＤ２２には特異的に結合する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、モキセツモマブ（抗ＣＤ２２マウスモノク
ローナル抗体）のＶＬおよびＶＨアミノ酸配列をそれぞれ示す配列番号６５および／また
は配列番号６７のアミノ酸配列（リーダー配列を含むか、または含まない）を含み、かつ
／またはモキセツモマブの重鎖アミノ酸配列を示す配列番号６６のアミノ酸配列（適用可
能な場合には、イタリック体で示されているリーダー配列を含むか、または含まない）を
含む。
モキセツモマブ軽鎖可変（ＶＬ）領域配列（配列番号６５）：
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰ
ＤＧＴＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱ
ＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＣＧＴＫＬＥＩＫ。
モキセツモマブ重鎖配列（配列番号６６）：
ＭＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱ
ＴＰＥＫＣＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬ
ＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＴＨＷＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶ
ＴＶＳＡＫＡＳＧＧＰＥＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷ
ＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳ
ＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧ
ＡＡＮＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＶＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷ
ＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡ
ＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡ
ＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＳＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬ
ＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮ
ＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＲＥＤＬＫ。
モキセツモマブ重鎖可変（ＶＨ）領域配列（配列番号６７）：
ＭＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲ
ＱＴＰＥＫＣＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴ
ＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＴＨＷＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬ
ＶＴＶＳＡ。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号６５で示
されるＶＬ配列、またはモキセツモマブの軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち、１つま
たは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、および／
または配列番号６６もしくは６７で示される重鎖もしくはＶＨ配列、またはモキセツモマ
ブの重鎖またはＶＨのＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、
ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、リーダー配列を含むか、も
しくは含まない配列番号６５として示されるアミノ酸配列、またはモキセツモマブのＶＬ
と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１
５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の修
飾（一般に、フレームワーク領域において）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可
能抗体のＶＨ領域は、リーダー配列を含むか、もしくは含まない配列番号６７のアミノ酸
配列、またはモキセツモマブのＶＨと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾など
、１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において）を含有
する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、モキセツモマブ、または配列番号６５の軽鎖フレ
ームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少なくとも
７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８
８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（
もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレームワーク領域（また
は１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、
および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、モキセツモマブ、または配列番号６６もしくは６７の
重鎖フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｈ）に対して少なくとも７
５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８
、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（も
しくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内で、モキセツモマブの
ＶＨ領域に対して（例えば、配列番号６７のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７
６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９
、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくは
その概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、モキセツモマブのＶＬ領
域に対して（例えば、配列番号６５のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７
７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０
、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数
）の同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖および／または軽鎖内のＣＤ
Ｒの１つまたは複数、例えば、全部の内で、モキセツモマブと比較すると（例えば、配列
番号６５または６６または６７のＣＤＲ（複数可）と比較すると）完全または少なくとも
９５、９６、９７、９８、または９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、モキセツモマブによって特異的に結合
されるＣＤ２２のエピトープに特異的に結合しないが、ＣＤ２２には特異的に結合するか
、またはモキセツモマブのＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合についてモキセツ
モマブと競合しないが、ＣＤ２２には特異的に結合する。
ＣＤ２３
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗ＣＤ２３抗体、例えば、ルミリキシマブなど
、ＣＤ２３のためのヒトもしくはヒト化抗体またはマウス抗体、あるいはそのような抗体
の重鎖、軽鎖、ＶＨ、またはＶＬを有する抗体、あるいはその機能性フラグメントである
。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、ＣＤ２３に特異的に結合する。Ｃ
Ｄ２３は、ＦｃイプシロンＲＩＩ、またはＦｃεＲＩＩとしても公知であり、アレルギー
および寄生虫に対する耐性に関係する抗体アイソタイプであるＩｇＥのための「低親和性
」受容体であり、ＩｇＥレベルの調節において重要である。ＣＤ２３は、例えば、ＮＣＢ
Ｉ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＰ＿００１１９３９４８．２またはＵｎｉＰｒｏｔ
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｐ０６７３４によって同定されているとおりのＣ型レクチンであ
る。ＣＤ２３抗原は、複数の造血細胞種上で発現される４５−ｋＤａのＩＩ型膜貫通糖タ
ンパク質である。一部の態様では、ＣＤ２３は、成熟Ｂ細胞、活性化マクロファージ、好
酸球、濾胞性樹状細胞、および血小板上で発現される。ＣＤ２３は、免疫グロブリン遺伝
子スーパーファミリーに属さない唯一のＦｃＲである。ＣＤ２３の機能には、Ｂ細胞によ
るＩｇＥ産生のモジュレーション、および胚中心由来Ｂ細胞の生存の促進が包含される。
ＣＤ２３の発現は、正常に活性化された濾胞性Ｂ細胞およびＣＬＬ細胞において高度にア
ップレギュレーションされる。
一実施形態では、ＣＤ２３のためのテンプレート抗体は、配列番号１７２のアミノ酸配
列を有するポリペプチドもしくはタンパク質、または配列番号１８４の核酸配列を含むポ
リヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドもしくはタンパ
ク質上の１つまたは複数のエピトープに特異的に結合する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、ルミリキシマブのＶＬおよびＶＨアミノ酸
配列をそれぞれ示す配列番号１８５および／または配列番号１９０のアミノ酸配列（適用
可能な場合には、イタリック体で示されているリーダー配列を含むか、または含まない）
を含む。
ルミリキシマブ軽鎖可変（ＶＬ）領域配列＋リーダー（配列番号１８５）：
Figure 2021075548
ルミリキシマブ重鎖可変（ＶＨ）領域配列＋リーダー（配列番号１９０）：
ＭＥＦＧＬＳＷＶＦＬＶＰＬＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＡＫＰＧＧＳＬＲＬＳ
ＣＡＡＳＧＦＲＦＴＦＮＮＹＹＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＳＲＩＳＳＳＧＤＰＴＷ
ＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＥＮＡＮＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＬ
ＴＴＧＳＤＳＷＧＱＧＶＬＶＴＶＳＳ。
ルミリキシマブ（ＩＤＥＣ−１５２、Ｐ５Ｅ８、ゴミリキシマブ；Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄ
ｅｃとしても公知）は、カニクイザル可変領域およびヒト定常領域（ＩｇＧ１−κ）を含
有する霊長類化抗ＣＤ２３ｍＡｂである。活性化ヒト末梢血Ｂ細胞によるＩｇＥの産生を
阻害するために元々開発されたが；しかしながら、後で、強力な抗ＣＤ２３ｍＡｂとして
の評価を得た。前臨床データは、ルミリキシマブが、主に固有のアポトーシス経路（すな
わち、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ＸＬおよびＸＩＡＰのダウンレギ
ュレーション、Ｂａｘの活性化、ならびにミトコンドリアシトクロムｃの放出を誘導）に
よって、ＣＬＬ細胞およびＣＤ２３発現Ｂ細胞に対して、その抗腫瘍効果を媒介すること
を示唆している。異種移植片モデルにおいて、ルミリキシマブをリツキシマブまたはフル
ダラビンと組み合わせた場合に、相乗的細胞毒性も、ＣＤ２３発現Ｂ細胞系および一次Ｃ
ＬＬ細胞について実証されている。４６人の高度に事前治療されたＣＬＬ患者のフェーズ
Ｉ治験において、ルミリキシマブは、単一薬剤としては中等度の臨床的活性を示した。客
観的完全応答（ＣＲ）または部分応答（ＰＲ）は観察されなかったが、ルミリキシマブは
、患者の５２％において肥大リンパ節サイズを減少させ、患者の９１％において末梢血リ
ンパ球数を低下させた。ルミリキシマブの安全性プロファイルは、主な有害事象（ＡＥ）
がグレード１／２に限定されることを実証した。ルミリキシマブは、免疫抑制性ではなく
、ＭＴＤ（最大許容用量）は達成されなかった。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号１８５で
示されるＶＬ配列、またはルミリキシマブの軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち、１つ
または複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、および
／または配列番号１９０で示されるＶＨ配列、またはルミリキシマブの重鎖もしくはＶＨ
のＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／
またはＣＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、リーダー配列を含むか、も
しくは含まない配列番号１８５として示されるアミノ酸配列、またはルミリキシマブのＶ
Ｌと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、
１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の
修飾（一般に、フレームワーク領域において）を含有し、かつ／またはメディトープ利用
可能抗体のＶＨ領域は、リーダー配列を含むか、もしくは含まない配列番号１９０のアミ
ノ酸配列、またはルミリキシマブのＶＨと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、
９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾
など、１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において）を
含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、ルミリキシマブ、または配列番号１８５の軽鎖フ
レームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少なくと
も７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、
８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％
（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレームワーク領域（ま
たは１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３
、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、ルミリキシマブ、または配列番号１９０の重鎖フレ
ームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｈ）に対して少なくとも７５、７６
、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、
９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはそ
の概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内で、ルミリキシマブのＶＨ領域
に対して（例えば、配列番号１９０のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７
７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０
、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはその概
数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、ルミリキシマブのＶＬ領域に対
して（例えば、配列番号１８５のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７７、
７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９
１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の
同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲの
１つまたは複数、例えば、全部の内で、ルミリキシマブと比較すると（例えば、配列番号
１８５または１９０のＣＤＲ（複数可）と比較すると）完全または少なくとも９５、９６
、９７、９８、または９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、ルミリキシマブによって特異的に結合
されるＣＤ２３のエピトープに特異的に結合しないが、ＣＤ２３には特異的に結合するか
、またはルミリキシマブのＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合についてルミリキ
シマブと競合しないが、ＣＤ２３には特異的に結合する。
ＣＤ３３
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗ＣＤ３３抗体、例えば、ゲムツズマブなどの
ＣＤ３３のためのヒトもしくはヒト化抗体またはマウス抗体、あるいはそのような抗体の
重鎖、軽鎖、ＶＨ、またはＶＬを有する抗体、あるいはその機能性フラグメントである。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、ＣＤ３３に特異的に結合する。ＣＤ
３３（または分化−３３のクラスター）は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｉｄｅｎｔｉｆｉ
ｅｒ Ｐ２０１３８によって同定される。一態様では、ＣＤ３３は、骨髄系細胞の表面上
に存在する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、ゲムツズマブ（マイロターグ）（ＣＤ３３
、例えば、未熟、成熟、および悪性Ｂ細胞のＣＤ３３に特異的に結合するモノクローナル
抗体）の、それぞれ軽鎖および重鎖アミノ酸配列を示す配列番号２２４および／または配
列番号２２５のアミノ酸配列（リーダー配列を含むか、または含まない）を含み、かつ／
またはそれぞれゲムツズマブのＶＬおよびＶＨアミノ酸配列を示す配列番号２４３および
／または２４５のアミノ酸配列（リーダー配列を含むか、または含まない）を含む。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号２２４で
示される軽鎖配列、またはゲムツズマブの軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち、１つま
たは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、および／
または配列番号２２５で示される重鎖、またはゲムツズマブの重鎖もしくはＶＨのＣＤＲ
（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣ
ＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、リーダー配列を含むか、ま
たは含まない配列番号２４３として示されるアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、
または２０の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の修飾（一般に、フレームワーク領
域において）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗体のＶＨ領域は、リーダー
配列を含むか、または含まない配列番号２４４として示されるアミノ酸配列のＶＨ領域の
アミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１
３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾など、１つまたは複数、例
えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において）を含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、ゲムツズマブ、または配列番号２２４の軽鎖フレ
ームワーク領域（またはそれぞれ１つもしくは複数のＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少な
くとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８
７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９
％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またその重鎖フレームワーク領域内（
または１つもしくは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−
Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、ゲムツズマブ、または配列番号２２５の重鎖フ
レームワーク領域（またはそれぞれ１つまたは複数のＦＲ−Ｈ））に対して少なくとも７
５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８
、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もし
くはその概数）の同一性を含有し；および／またはそのＶＨ領域内で、ゲムツズマブまた
は配列番号２４４のＶＨ領域に対して少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、
８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９
４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；か
つ／またはそのＶＬ領域内で、ゲムツズマブまたは配列番号２４３のＶＬ領域に対して少
なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、
８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９
９％（もしくはその概数）の同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、ゲムツズ
マブと比較すると（例えば、配列番号２２４または２２５のＣＤＲ（複数可）と比較する
と）、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲの１つまたは複数、例えば、全部の内で、完全
または少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、ゲムツズマブによって特異的に結合さ
れるＣＤ３３のエピトープに特異的に結合しないが、ＣＤ３３には特異的に結合するか、
またはゲムツズマブのＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合についてゲムツズマブ
と競合しないが、ＣＤ３３には特異的に結合する。
ＣＤ３７
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗ＣＤ３７抗体、例えば、オトレルツズマブ（
ｏｔｌｅｒｔｕｚｕｍａｂ）などのＣＤ３７のためのヒトもしくはヒト化抗体またはマウ
ス抗体、あるいはそのような抗体の重鎖、軽鎖、ＶＨ、またはＶＬを有する抗体、あるい
はその機能性フラグメントである。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、ＣＤ３７に特異的に結合する。Ｇ
Ｐ５２−４０またはＴＳＰＡＮ２６としても公知のＣＤ３７は、テトラスパニンファミリ
ーとしても公知の膜貫通４スーパーファミリーのメンバーである。その開示があらゆる目
的のためにその全体で参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２０１１１１２９７８は
、ＣＤ３７結合分子およびその免疫複合体を開示している。
一実施形態では、ＣＤ３７のためのテンプレート抗体は、配列番号１９１のアミノ酸配
列を有するポリペプチドもしくはタンパク質、または配列番号１９２の核酸配列を含むポ
リヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドもしくはタンパ
ク質上の１つまたは複数のエピトープに特異的に結合する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、オトレルツズマブのＶＬおよびＶＨアミノ
酸配列をそれぞれ示す配列番号１９３および／または配列番号１９４のアミノ酸配列を含
む。
オトレルツズマブ（ＢｅｔａｌｕｔｉｎまたはＩＭＧＮ５２９としても公知）は、ＮＨ
Ｌサブタイプ上のＣＤ２０の発現プロファイルと同様の発現プロファイルを有するＣＤ３
７を標的とする。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号１９３で
示されるＶＬ配列、またはオトレルツズマブの軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち、１
つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、およ
び／または配列番号１９４で示されるＶＨ配列、またはオトレルツズマブの重鎖もしくは
ＶＨのＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およ
び／またはＣＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、配列番号１９３として示さ
れるアミノ酸配列、またはオトレルツズマブのＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６
、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または
２０の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の修飾（一般に、フレームワーク領域にお
いて）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗体のＶＨ領域は、配列番号１９４
のアミノ酸配列、またはオトレルツズマブのＶＨと比較して、１、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２
０の修飾など、１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域にお
いて）を含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、オトレルツズマブ、または配列番号１９３の軽鎖
フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少なく
とも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７
、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９
％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレームワーク領域（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ
３、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、オトレルツズマブ、または配列番号１９４の重鎖
フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｈ）に対して少なくとも７５、
７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８
９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしく
はその概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内で、オトレルツズマブのＶ
Ｈ領域に対して（例えば、配列番号１９４のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７
６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９
、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくは
その概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、オトレルツズマブのＶＬ
領域に対して（例えば、配列番号１９３のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６
、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、
９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその
概数）の同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖および／または軽鎖内の
ＣＤＲの１つまたは複数、例えば、全部の内で、オトレルツズマブと比較すると（例えば
、配列番号１９３または１９４のＣＤＲ（複数可）と比較すると）完全または少なくとも
９５、９６、９７、９８、または９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、オトレルツズマブによって特異的に結
合されるＣＤ３７のエピトープに特異的に結合しないが、ＣＤ３７には特異的に結合する
か、またはオトレルツズマブのＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合についてオト
レルツズマブと競合しないが、ＣＤ３７には特異的に結合する。
ムチン−１
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗ムチン−１抗体、例えば、ｈＰＡＭ４−Ｃｉ
ｄｅ（クリバツズマブテトラキセタンとしても公知）などのムチン−１のためのヒトもし
くはヒト化抗体またはマウス抗体、あるいはそのような抗体の重鎖、軽鎖、ＶＨ、または
ＶＬを有する抗体、あるいはその機能性フラグメントである。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、ムチン１に特異的に結合する。ム
チン−１は、ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）、または多形性上皮ムチン（ＰＥＭ）
）としても公知であり、例えば、ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＰ＿００１０
１８０２１またはＵｎｉＰｒｏｔ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｐ１５９４１によって同定さ
れるとおり、ヒトにおいてＭＵＣ１遺伝子によってコードされるムチンである。一実施形
態では、ムチン−１のためのテンプレート抗体は、配列番号１９５のアミノ酸配列を有す
るポリペプチドもしくはタンパク質、または配列番号１９６の核酸配列を含むポリヌクレ
オチドによってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドもしくはタンパク質上の
１つまたは複数のエピトープに特異的に結合する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、それぞれｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅ（クリバツ
ズマブテトラキセタンとしても公知）のそれぞれＶＬおよびＶＨアミノ酸配列を示す配列
番号１９７および／または配列番号１９８のアミノ酸配列を含む。その開示があらゆる目
的のために参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２０１００４２５６２は、追加のム
チン−１抗体を開示している。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号１９７で
示されるＶＬ配列、またはｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅの軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち
、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、
および／または配列番号１９８で示されるＶＨ配列、またはｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅの重鎖
もしくはＶＨのＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ
２、および／またはＣＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、リーダー配列を含むか、も
しくは含まない配列番号１９７として示されるアミノ酸配列、またはｈＰＡＭ４−Ｃｉｄ
ｅのＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、
１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾など、１つまたは複数、一般に
複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において）を含有し、かつ／またはメディトー
プ利用可能抗体のＶＨ領域は、リーダー配列を含むか、もしくは含まない配列番号１９８
のアミノ酸配列、またはｈＰＡＭ４−ＣｉｄｅのＶＨと比較して、１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、また
は２０の修飾など、１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域
において）を含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、ｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅ、または配列番号１９７の
軽鎖フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少
なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、
８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは
９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレームワーク領
域（または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ
−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、ｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅ、または配列番号１９
８の重鎖フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｈ）に対して少なくと
も７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、
８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％
（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内で、ｈＰＡＭ４−
ＣｉｄｅのＶＨ領域に対して（例えば、配列番号１９８のアミノ酸配列に対して）少なく
とも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７
、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９
％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、ｈＰＡＭ４
−ＣｉｄｅのＶＬ領域に対して（例えば、配列番号１９７のアミノ酸配列に対して）少な
くとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８
７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９
％（もしくはその概数）の同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖および
／または軽鎖内のＣＤＲの１つまたは複数、例えば、全部の内で、ｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅ
と比較すると（例えば、配列番号１９７または１９８のＣＤＲ（複数可）と比較すると）
完全または少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％の同一性を含有する。配列
番号１９７は、ｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅ軽鎖可変（ＶＬ）領域配列を示し、配列番号１９８
は、ｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅ重鎖可変（ＨＬ）領域配列を示す。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、ｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅによって特異的
に結合されるムチン１のエピトープに特異的に結合しないが、ムチン１には特異的に結合
するか、またはｈＰＡＭ４−ＣｉｄｅのＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合につ
いてｈＰＡＭ４−Ｃｉｄｅと競合しないが、ムチン１には特異的に結合する。
プロラクチン受容体
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）抗体、例え
ば、ＬＦＡ−１０２または００２−Ｈ０８などのプロラクチン受容体のためのヒトもしく
はヒト化抗体またはマウス抗体、あるいはそのような抗体の重鎖、軽鎖、ＶＨ、またはＶ
Ｌを有する抗体、あるいはその機能性フラグメントである。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、プロラクチン受容体に特異的に結
合する。一態様では、プロラクチン受容体は、染色体５ｐ１３−１４上の遺伝子によって
コードされ、膜貫通受容体としてプロラクチン分子と相互作用する。プロラクチン受容体
は、プロラクチンに結合する細胞外領域、膜貫通領域、および細胞質領域を含有する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、ＩｇＧ１カッパサブタイプのヒト化モノク
ローナル抗体であり、非リガンド競合的手法でＰＲＬＲの推定上の二量化領域に結合し、
ＰＲＬ誘発性シグナル伝達を阻害するＬＦＡ−１０２のＶＬおよび／またはＶＨアミノ酸
配列のアミノ酸配列を含む。ＬＦＡ−１０２は、その開示があらゆる目的のためにその全
体で参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願第２０１１０１５０７６０号にお
いて開示されている。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、ＬＦＡ−１０２の
ＶＬのＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およ
び／またはＣＤＲ３）、および／またはＬＦＡ−１０２のＶＨのＣＤＲ（すなわち、１つ
または複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）を有する
。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、ＬＦＡ−１０２のＶＬと比
較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、
１６、１７、１８、１９、または２０の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の修飾（
一般に、フレームワーク領域において）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗
体のＶＨ領域は、ＬＦＡ−１０２のＶＨと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、
９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾
など、１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において）を
含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、ＬＦＡ−１０２の軽鎖フレームワーク領域（また
はそれぞれ１つもしくは複数のＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少なくとも７５、７６、７
７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０
、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数
）の同一性を含有し；かつ／またその重鎖フレームワーク領域内（または１つもしくは複
数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／または
ＦＲ−Ｈ４内）で、ＬＦＡ−１０２の重鎖フレームワーク領域（またはそれぞれ１つまた
は複数のＦＲ−Ｈ））に対して少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、
８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９
５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；および／
またはそのＶＨ領域内で、ＬＦＡ−１０２のＶＨ領域に対して少なくとも７５、７６、７
７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０
、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数
）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、ＬＦＡ−１０２のＶＬ領域に対し
て少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８
６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、また
は９９％（もしくはその概数）の同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、ＬＦ
Ａ−１０２と比較すると、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲの１つまたは複数、例えば
、全部の内で、完全または少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の同一性
を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、ＬＦＡ−１０２によって特異的に結合
されるプロラクチン受容体のエピトープに特異的に結合しないが、プロラクチン受容体に
は特異的に結合するか、またはＬＦＡ−１０２のＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原
結合についてＬＦＡ−１０２と競合しないが、プロラクチン受容体には特異的に結合する
。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、００２−Ｈ０８のそれぞれＶＬおよびＶＨ
アミノ酸配列を示す配列番号２０８および／または配列番号２０９のアミノ酸配列を含む
。その開示があらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公
開第２０１２０３１５２７６は、００２−Ｈ０８を包含するプロラクチン受容体抗体を開
示する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号２０８で
示されるＶＬ配列、または００２−Ｈ０８の軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち、１つ
または複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、および
／または配列番号２０９で示されるＶＨ配列、または００２−Ｈ０８の重鎖もしくはＶＨ
のＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／
またはＣＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、配列番号２０８として示さ
れるアミノ酸配列、または００２−Ｈ０８のＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２
０の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の修飾（一般に、フレームワーク領域におい
て）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗体のＶＨ領域は、配列番号２０９と
して示されるアミノ酸配列、または００２−Ｈ０８のＶＨと比較して、１、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、
または２０の修飾など、１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク
領域において）を含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、００２−Ｈ０８、または配列番号２０８の軽鎖フ
レームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少なくと
も７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、
８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％
（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレームワーク領域（ま
たは１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３
、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、００２−Ｈ０８、または配列番号２０９の重鎖フレ
ームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｈ）に対して少なくとも７５、７６
、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、
９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはそ
の概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内で、００２−Ｈ０８のＶＨ領域
に対して（例えば、配列番号２０９のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７
７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０
、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはその概
数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、００２−Ｈ０８のＶＬ領域に対
して（例えば、配列番号２０８のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７７、
７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９
１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の
同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲの
１つまたは複数、例えば、全部の内で、００２−Ｈ０８と比較すると（例えば、配列番号
２０８または２０９のＣＤＲ（複数可）と比較すると）完全または少なくとも９５、９６
、９７、９８、または９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、００２−Ｈ０８によって特異的に結合
されるプロラクチン受容体のエピトープに特異的に結合しないが、プロラクチン受容体に
は特異的に結合するか、または００２−Ｈ０８のＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原
結合について００２−Ｈ０８と競合しないが、プロラクチン受容体には特異的に結合する
。
ＳＤＣ−１
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗ＳＤＣ−１抗体、例えば、インダツキシマブ
・ラブタンシンなどのＳＤＣ−１のためのヒトもしくはヒト化抗体またはマウス抗体（シ
ンデカン１、またはＣＤ１３８としても公知）、あるいはそのような抗体の重鎖、軽鎖、
ＶＨ、もしくはＶＬを有する抗体、あるいはその機能性フラグメントである。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、ＳＤＣ−１に特異的に結合する。
一態様では、ＳＤＣ−１は、膜貫通（Ｉ型）へパラン硫酸プロテオグリカンであり、シン
デカンプロテオグリカンファミリーのメンバーである。シンデカンは、細胞結合、細胞シ
グナル伝達、および細胞骨格構築を媒介し、シンデカン受容体は、ＨＩＶ−１ ｔａｔタ
ンパク質の内部移行に必要である。シンデカン−１タンパク質は、内在性膜タンパク質と
して機能し、細胞外マトリックスタンパク質のためのその受容体を介して、細胞増殖、細
胞遊走、および細胞−マトリックス相互作用に関係する。改変されたシンデカン−１発現
は、いくつかの異なる腫瘍種において検出されている。複数の転写変異体がこの遺伝子に
は存在し得て、今日までに、２種のみの全長特質が記載されている。これらの２種は、こ
の遺伝子の主な変異体を表しており、同じタンパク質をコードする。一実施形態では、Ｓ
ＤＣ−１のためのテンプレート抗体は、配列番号２１０のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドまたはタンパク質上の１つまたは複数のエピトープに特異的に結合する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、インダツキシマブ・ラブタンシンのそれぞ
れＶＬおよびＶＨアミノ酸配列を示す配列番号２１１および／または配列番号２１２のア
ミノ酸配列を含む。インダツキシマブ・ラブタンシン（ＢＴ−０６２、ＢＴ０６２、また
はＢ−Ｂ４としても公知）は、ＳＤＣ−１抗体である。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号２１１で
示されるＶＬ配列、またはインダツキシマブ・ラブタンシンの軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ
（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣ
ＤＲ３）、および／または配列番号２１２で示されるＶＨ配列、またはインダツキシマブ
・ラブタンシンの重鎖もしくはＶＨのＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例え
ば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、配列番号２１１として示さ
れるアミノ酸配列、またはインダツキシマブ・ラブタンシンのＶＬと比較して、１、２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８
、１９、または２０の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の修飾（一般に、フレーム
ワーク領域において）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗体のＶＨ領域は、
リーダー配列を含むか、もしくは含まない配列番号２１２のアミノ酸配列、またはインダ
ツキシマブ・ラブタンシンのＶＨと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾など、
１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において）を含有す
る。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、インダツキシマブ・ラブタンシン、または配列番
号２１１の軽鎖フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））
に対して少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８
５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８
、もしくは９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレー
ムワーク領域（または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−
Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、インダツキシマブ・ラブタンシン
、または配列番号２１２の重鎖フレームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−
Ｈ）に対して少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４
、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、
９８、もしくは９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領
域内で、インダツキシマブ・ラブタンシンのＶＨ領域に対して（例えば、配列番号２１２
のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２
、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、
９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／また
はそのＶＬ領域内で、インダツキシマブ・ラブタンシンのＶＬ領域に対して（例えば、配
列番号２１１のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７７、７８、７９、８０
、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、
９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の同一性を含有する
。一部の実施形態では、抗体は、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲの１つまたは複数、
例えば、全部の内で、インダツキシマブ・ラブタンシンと比較すると（例えば、配列番号
２１１または２１２のＣＤＲ（複数可）と比較すると）完全または少なくとも９５、９６
、９７、９８、または９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、インダツキシマブ・ラブタンシンによ
って特異的に結合されるＳＤＣ−１のエピトープに特異的に結合しないが、ＳＤＣ−１に
は特異的に結合するか、またはインダツキシマブ・ラブタンシンのＣＤＲを含有せず、か
つ／もしくは抗原結合についてインダツキシマブ・ラブタンシンと競合しないが、ＳＤＣ
−１には特異的に結合する。
ＥＧＦＲ
一実施形態では、テンプレート抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、ＡＢＴ−８０６、ザ
ツキシマブなどのＥＧＦＲのためのヒトもしくはヒト化抗体またはマウス抗体、あるいは
そのような抗体の重鎖、軽鎖、ＶＨ、またはＶＬを有する抗体、あるいはその機能性フラ
グメントである。一部の態様では、抗ＥＧＦＲテンプレート抗体は、セツキシマブではな
く、セツキシマブの全部または一部のＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは結合についてセ
ツキシマブと競合しない。
一実施形態では、ＥＧＦＲのためのテンプレート抗体は、配列番号２１３のアミノ酸配
列を有するポリペプチドもしくはタンパク質、または配列番号２１４の核酸配列を含むポ
リヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドもしくはタンパ
ク質上の１つまたは複数のエピトープに特異的に結合する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、ＥＧＦＲ抗体であるＡＢＴ−８０６（ｍＡ
ｂ８０６／４１４としても公知）のそれぞれＶＬおよびＶＨアミノ酸配列を示す配列番号
２１５および／または配列番号２１６のアミノ酸配列を含み、かつ／またはそれぞれＡＢ
Ｔ−８０６の軽鎖および重鎖配列を示す配列番号２１７および配列番号２１８のアミノ酸
配列を含む。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号２１５で
示されるＶＬ配列、またはＡＢＴ−８０６の軽鎖もしくはＶＬ配列のＣＤＲ（すなわち、
１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、お
よび／または配列番号２１６で示されるＶＨ配列、またはＡＢＴ−８０６の重鎖もしくは
ＶＨのＣＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およ
び／またはＣＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、配列番号２１５として示さ
れるアミノ酸配列、またはＡＢＴ−８０６のＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２
０の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の修飾（一般に、フレームワーク領域におい
て）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗体のＶＨ領域は、配列番号２１６と
して示されるアミノ酸配列、またはＡＢＴ−８０６のＶＨと比較して、１、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、
または２０の修飾など、１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク
領域において）を含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、ＡＢＴ−８０６、または配列番号２１５の軽鎖フ
レームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少なくと
も７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、
８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％
（もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレームワーク領域（ま
たは１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３
、および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、ＡＢＴ−８０６、または配列番号２１６の重鎖フレ
ームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｈ）に対して少なくとも７５、７６
、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、
９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはそ
の概数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内で、ＡＢＴ−８０６のＶＨ領域
に対して（例えば、配列番号２１６のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７
７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０
、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはその概
数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、ＡＢＴ−８０６のＶＬ領域に対
して（例えば、配列番号２１５のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７７、
７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９
１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の
同一性を含有する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲの
１つまたは複数、例えば、全部の内で、ＡＢＴ−８０６と比較すると（例えば、配列番号
２１５または２１６のＣＤＲ（複数可）と比較すると）完全または少なくとも９５、９６
、９７、９８、または９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、ＡＢＴ−８０６によって特異的に結合
されるＥＧＦＲのエピトープに特異的に結合しないが、ＥＧＦＲには特異的に結合するか
、またはＡＢＴ−８０６のＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合についてＡＢＴ−
８０６と競合しないが、ＥＧＦＲには特異的に結合する。
一部の実施形態では、テンプレート抗体は、ザツキシマブのそれぞれＶＬおよびＶＨア
ミノ酸配列を示す配列番号２１９および／または配列番号２２０のアミノ酸配列を含み、
かつ／またはザツキシマブ、ＥＧＦＲ抗体の軽鎖および重鎖配列を示す配列番号２２１お
よび／または２２２のアミノ酸配列を含む。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体またはフラグメントは、配列番号２１９で
示されるＶＬ配列、またはザツキシマブの軽鎖もしくはＶＬのＣＤＲ（すなわち、１つま
たは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）、および／
または配列番号２２０で示されるＶＨ配列、またはザツキシマブの重鎖もしくはＶＨのＣ
ＤＲ（すなわち、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／また
はＣＤＲ３）を有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体のＶＬ領域は、配列番号２１９として示さ
れるアミノ酸配列、またはザツキシマブのＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０
の修飾など、１つまたは複数、一般に複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において
）を含有し、かつ／またはメディトープ利用可能抗体のＶＨ領域は、配列番号２２０のア
ミノ酸配列、またはザツキシマブのＶＨと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、
９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の修飾
など、１つまたは複数、例えば、複数の修飾（一般に、フレームワーク領域において）を
含有する。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体は、その軽鎖フレームワーク領域内（
または１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ
３、および／またはＦＲ−Ｌ４内）で、ザツキシマブ、または配列番号２１９の軽鎖フレ
ームワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｌ（複数可））に対して少なくとも
７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８
８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（
もしくはその概数）の同一性を含有し；かつ／またはその重鎖フレームワーク領域（また
は１つまたは複数のそのような領域内、例えば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、
および／またはＦＲ−Ｈ４内）で、ザツキシマブ、または配列番号２２０の重鎖フレーム
ワーク領域（または個々の１つまたは複数ＦＲ−Ｈ）に対して少なくとも７５、７６、７
７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０
、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはその概
数）の同一性を含有し；かつ／またはそのＶＨ領域内で、ザツキシマブのＶＨ領域に対し
て（例えば、配列番号２２０のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７７、７
８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１
、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％（もしくはその概数）の
同一性を含有し；かつ／またはそのＶＬ領域内で、ザツキシマブのＶＬ領域に対して（例
えば、配列番号２２０のアミノ酸配列に対して）少なくとも７５、７６、７７、７８、７
９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２
、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％（もしくはその概数）の同一性を
含有する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖および／または軽鎖内のＣＤＲの１つまた
は複数、例えば、全部の内で、ザツキシマブと比較すると（例えば、配列番号２１９また
は２２０のＣＤＲ（複数可）と比較すると）完全または少なくとも９５、９６、９７、９
８、または９９％の同一性を含有する。
一部の態様では、メディトープ利用可能抗体は、ザツキシマブによって特異的に結合さ
れるＥＧＦＲのエピトープに特異的に結合しないが、ＥＧＦＲには特異的に結合するか、
またはザツキシマブのＣＤＲを含有せず、かつ／もしくは抗原結合についてザツキシマブ
と競合しないが、ＥＧＦＲには特異的に結合する。
メディトープ利用可能抗体は一般的に、一般的にはヒト定常領域または部分的にヒト定
常領域である定常領域、典型的には重鎖および軽鎖定常領域をさらに包含する。一部の態
様では、重鎖定常領域は、ＣＨ１またはその一部分を包含する。一部の態様では、軽鎖定
常領域は、ＣＬまたはその一部分を包含する。一部の実施形態では、その定常領域の部分
は、例えば、必要な結合親和性で、抗体がメディトープに結合し得るようにするために十
分なものである。一部の態様では、その定常領域は、セツキシマブまたはトラスツズマブ
の定常領域である。したがって、一部の態様では、重鎖定常領域は、１つまたは複数のヒ
トＩｇＧ１定常領域であり；一部の態様では、軽鎖定常領域は、κ定常鎖領域である。他
の例では、定常領域は、ヒト（または他の生物、例えば、マウスまたはニワトリ）ＩｇＧ
１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥｓ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、またはＩ
ｇＭを包含する他のアイソタイプのものを包含し得、かつκまたはλ定常領域を包含し得
る。したがって、提供するメディトープ利用可能抗体のうちには、ヒト、マウス、もしく
はニワトリなどの他のＩｇＧ、または他の免疫グロブリン中の残基の変異によって生じる
ものがある。言い換えると、本明細書において提供するメディトープ利用可能化方法は、
ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、およびＩｇＭを包含し、かつこれらに限定されないが、ニワト
リ、マウス、ラット、ウシ、ウサギ、霊長類、およびヤギを包含する、抗体を産生する任
意の生物に由来する任意の抗体のために使用することができる。
例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の第１の定常領域（ＣＨ
１）の配列は、セツキシマブのメディトープ結合性領域内ではない残基で異なり、メディ
トープ利用可能化技術をセツキシマブのＩｇＧ１以外のアイソタイプに適用可能であるこ
とが確認される。別の例として、ＩｇＧ１およびＩｇＥ Ｆａｂドメインの配列および構
造的アラインメントは、メディトープ結合性部位に近いＩｇＥ上の残基を示す。
モノクローナル抗体内のＦａｂ空洞にメディトープ部位をグラフト化するために提供す
る方法を使用して、メディトープ結合のための独自のハンドルを作り、既に開示した技術
と共に、新たに作成する抗体のために使用することができる。ある種の実施形態では、メ
ディトープ結合部位を、既存の抗体および未来のモノクローナル抗体全てに作ることがで
きる。
また、例えば、親和性、結合活性、ｐＨ依存性を包含するメディトープとの相互作用の
態様、さらには、抗体の薬物速度（ＰＫ）および薬物動態（ＰＤ）を包含する他の態様を
包含するメディトープ利用可能抗体の様々な特性を改変するように、メディトープ利用可
能抗体を修飾する方法も提供する。したがって、提供するメディトープ利用可能抗体のう
ちには、以下のセクションＦに記載されている任意の１つまたは複数の修飾を有する抗体
を包含する、これらの方法に従って、例えば、ファルマコホア結合モデルを作成すること
によって作成された修飾抗体もある。
また、メディトープ利用可能抗体を作成するためにテンプレート抗体として使用される
抗体のうちには、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ（商標）などの修飾抗体およびその部分がある。し
たがって、提供するメディトープ利用可能抗体のうちには、提供するメディトープのうち
の１種または複数に、例えば、本明細書において記載されているとおりの親和性で結合し
得るように修飾されたＣｏｖＸ-ｂｏｄｙがある。
また、本明細書において記載されている抗体のうちの任意のものなどのメディトープ利
用可能抗体に結合している１つまたは複数のメディトープを含有する複合体を提供する。
また、メディトープ利用可能抗体をコードするｃＤＮＡおよびＲＮＡ分子などの核酸、
ならびにそれらを含有するベクターおよびライブラリ、さらには、選択および発現方法を
包含するそれらを使用するための方法、ならびにそのようなコンストラクトを使用してト
ランスジェニック動物を発生させるための方法を提供する。
Ｄ． 使用方法および組成物
多価メディトープを包含するメディトープの方法および使用も提供する。方法のうちに
は、メディトープ、抗体、および／またはそれにコンジュゲートした薬剤を、メディトー
プ利用可能抗体によって認識される抗原を発現する細胞および組織に送達する方法がある
。
一部の実施形態では、提供する方法は、腫瘍細胞の特性を利用し、薬剤を効率的に放出
するために、コンジュゲートした生物製剤の内部移行およびソーティング経路を改変する
。一部の実施形態では、当該方法は、例えば、メディトープ利用可能抗体の投与に関連し
て、例えば、それと併せて、その前、またはその後に、多価メディトープを投与すること
によって、抗原および／もしくはメディトープ利用可能抗体の同時局在化、クラスター化
、凝集、内部移行、および／もしくは細胞内輸送またはソーティング、ならびに／または
その発生反復または増強または改変を行う。そのような受容体抗原を認識するメディトー
プ利用可能抗体および多価メディトープを細胞に投与した後の、そのような表面受容体の
クラスター化および／または内部移行には、抗体のみの投与と比較して、差異が観察され
る。提供する実施形態のうちには、メディトープ利用可能抗体（ｍｅｄｉｔｏｐｅ−ｅｎ
ａｂｌｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）（メディトープ利用可能抗体（ｍｅｄｉｔｏｐｅ
ｅｎａｂｌｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ））によって認識される表面抗原の同時局在化お
よびクラスター化、ならびに／または受容体などの細胞表面抗原などのそのような抗原の
内部移行／輸送／ソーティングを促進する多価メディトープを投与することを含む方法が
ある。
また、例えば、イメージングおよび治療方法において、メディトープおよび／またはカ
ップリングされた薬剤を細胞に送達する際の多価メディトープの方法および使用を提供す
る。例示的な方法は、多価メディトープにカップリングされた細胞毒素または放射標識さ
れた薬剤の送達を行う方法である。一部の実施形態では、当該方法は、細胞表面抗原の内
部移行の程度および／または比率の増加をもたらす。例えば、薬剤を細胞に送達するため
に抗体を使用するか、または例えば、癌などの疾患の進行に関連するか、またはその原因
である表面受容体または他の表面抗原のダウンレギュレーションを、分解のためにそれら
を標的とすることによって促進するために抗体を送達するＡＤＣまたは他の使用の状況に
おいて、増加したか、またはより急速な内部移行は、有利であり得る。ＡＤＣＣおよび／
または補体媒介性溶解などのエフェクター機能を促進するために、かつ／または細胞−表
面受容体抗原を介するシグナル伝達をエンゲージおよび促進するために、抗体を送達する
状況などの一部の状況では、よりゆっくりとした程度か、またはそれほど急速ではない内
部移行が望ましいことがある。
メディトープを送達し、かつ／または標的細胞上の細胞表面抗原の同時局在化またはク
ラスター化を増強または増加させるための方法を提供する。一部の実施形態では、当該方
法を、細胞に、細胞表面抗原（複数可）に特異的に結合する１つまたは複数のメディトー
プ利用可能抗体、および多価メディトープを投与することによって実施する。一部の実施
形態では、抗原の同時局在化、クラスター化、および／または凝集を増強または増加させ
る。一部の態様では、増加は、メディトープ利用可能抗体および／もしくは多価メディト
ープを添加する前、またはその非存在下で、またはメディトープを伴わない抗体の存在下
で観察されたものと比較して、程度、比率、および／または期間の増加である。一部の実
施形態では、当該方法は、細胞表面抗原によるシグナルおよび／または結合した抗体を介
して媒介されるエフェクター機能を促進するか、またはその程度を増強する。
メディトープ、それにカップリングされた薬剤を送達するための、かつ／または標的細
胞上の細胞表面抗原の内部移行および／または分解を増強または増加するための方法を提
供する。一部の実施形態では、当該方法を、細胞に、細胞表面抗原（複数可）に特異的に
結合する１つまたは複数のメディトープ利用可能抗体、および多価メディトープを投与す
ることによって実施する。一部の実施形態では、抗原の内部移行および／または分解を促
進、増強、または増加させる。一部の態様では、増加は、メディトープ利用可能抗体およ
び／もしくは多価メディトープを添加する前に、またはその非存在下で、またはメディト
ープを伴わない抗体の存在下で観察されたものと比較して、程度、比率、および／または
期間の増加である。一部の実施形態では、メディトープを、ＡＤＣまたはＲＩＴにおいて
使用するためなど、化学療法剤、細胞毒素、または放射標識された薬剤などの治療剤また
は診断剤とカップリングさせる。一部の実施形態では、当該方法は、内部移行または細胞
内輸送を改変する。
一部の態様では、例えば、メディトープ利用可能抗体と組み合わせて相乗作用を達成す
るために、多価メディトープを第２の抗体または二重特異性抗体の代わりに使用する。一
部の態様では、同じ抗原上の別のエピトープを認識する第２の抗体の使用と比較して、多
価メディトープは利点をもたらす。例えば、多価メディトープの生成は、第２の抗体と比
較した場合に、より効率的で、かつ費用効果が高くなり得る。例えば、いくつかの前臨床
／治験が２種のモノクローナル抗体の同時投与を調査しているが、そのような治療剤の製
造および販売の費用はおそらく、非常に高価となるであろう。一部の態様では、多価メデ
ィトープはまた、腫瘍などの疾患部位に対して比較的より容易に標的化される。メディト
ープ結合性部位（メディトープ結合性部位内で、抗体ＣＤＲとは別）の性質、および選択
した任意の抗体をメディトープ利用可能化するための本明細書において提供する幅広く適
用可能な方法があれば、多価メディトープはまた、治療的に許容される特徴を有する第２
の抗体またはエピトープを同定する必要なしに、広範な治療用抗体に容易に適用可能であ
るという利点を有する。したがって、一部の態様では、多価メディトープの使用によって
、許容される特徴を有する第２のｍＡｂを同定する必要性、およびそれを開発する関連す
る多大なコストが回避される。
一部の実施形態では、多価メディトープは、二価抗体を上回る利点、および／またはそ
の改善をもたらす。一部の実施形態では、二重特異性抗体のみの使用と比較して、例えば
、二重特異性抗体の異なるアームによって結合される２つの抗原、例えば、細胞表面抗原
の凝集を増強するために、例えば、親和性、抗体によって誘導されるシグナル伝達、エフ
ェクター機能、および／または内部移行を増強するために、多価メディトープを二重特異
性メディトープ利用可能抗体と共に使用する。したがって、一部の態様では、多価メディ
トープを二重特異性メディトープ利用可能抗体に関連して使用すると、それは、二重特異
性抗体のみと比較して、例えば、追加的なクラスター化程度をもたらすことによって、有
効性レベルの上昇をもたらす。
一部の実施形態では、それぞれ、同じ細胞の表面上で発現される異なる抗原に特異的に
結合する２つのメディトープ利用可能抗体を多価メディトープと一緒に、二価抗体の代わ
りに使用して、細胞表面上での相互に対する２つの抗原の密度または存在比に関わらず、
抗原（例えば、受容体）凝集の増強、および／または特定のレベルの凝集を得る。一部の
態様では、そのような実施形態は、抗原の細胞表面クラスター化、および／または同時局
在化を増強する。一実施形態では、多価メディトープを、そのようなクラスター化を達成
するために、多数の異なる抗原を認識する多数のメディトープ利用可能抗体と一緒に使用
する。したがって、一部の実施形態では、クラスター化が、抗体の各アームがその個々の
抗原に結合している場所でのみ起こるであろう二重特異性抗体と比較して、そのような実
施形態におけるクラスター化は、抗体の１つによって結合される抗原が、別の抗体によっ
て結合される抗原と比較して、かなり高い密度で細胞表面上に存在する場合にも、達成さ
れ得る。
一部の実施形態では、当該方法は、抗体によって標的とされる抗原を発現する細胞また
は組織への抗体媒介性送達のためのＡＤＣまたはＲＩＴまたは他の方法などにおいて、薬
剤の送達を増強する。一部の実施形態では、当該方法は、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、腫瘍
関連糖タンパク質（ＴＡＧ−７２）、ＫＳ１／４（Ｓｃｈｍｉｔｄら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｄｅｃ ２００８；５７（１２）：１８７９〜１
８９０；Ｍｙｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９３；５３：３９５６〜３９６３を参
照されたい）、およびＣＤ２０などの非内部移行性抗原の状況において、抗原、抗原に結
合した抗体、および抗体と会合した薬剤のクラスター化を、したがってそれらの内部移行
を促進することにおいて有利である。
当該方法は、治療用および診断用使用、さらには、抗体精製を包含する他の使用を包含
する、メディトープ、例えば、多価メディトープ、およびメディトープ利用可能抗体、な
らびにそれらを含有する複合体の投与を伴う方法を包含する。そのような診断および治療
方法において使用するための、ペプチジル中央空洞結合性カッパ軽鎖結合性融合タンパク
質、メディトープ（変異体および多価メディトープおよびメディトープ融合タンパク質を
包含する）を含有する医薬組成物も提供する。
提供する抗体および結合性化合物（例えば、メディトープ）は、実際的な有用性を有し
、一部の実施形態では、利用可能なｍＡｂをベースとする技術に関連する障害を克服する
ことができる。一部の実施形態では、提供する化合物および方法は、例えば、新たな表面
を露出し、抗原性であり得る非天然試薬で生じ得る抗原性の問題、ならびに／またはその
ような分子の製造における安定性およびスケーラビリティに伴う懸念に対処する（Ｎｅｌ
ｓｏｎ ＡＬ （２０１０） Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ：ｈｏｐｅ ａｎ
ｄ ｈｙｐｅ． ＭＡｂｓ ２（１）：７７〜８３）。セツキシマブは、臨床において成
功裏に使用されており、安定していて、大規模に生産されている。一部の実施形態では、
メディトープ結合性部位に沿って並ぶ残基の特有の組合せは、配列において遠位であり（
すなわち、おそらくペプチドＴ細胞エピトープではない）、深い空洞内に位置する（すな
わち、おそらく表面露出Ｂ細胞エピトープではない））。したがって、一部の実施形態で
は、メディトープ結合性部位を含有するｍＡｂは、免疫原性ではない。
本明細書におけるデータは、二価メディトープ−Ｆｃ化合物とメディトープ利用可能抗
体で処理された細胞との安定な相互作用を実証している。提供する化合物および方法は、
一部の実施形態では、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ＤＭら（２０１２） Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ
ｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ
ａｐｙ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ ２（５）：５２３〜５４０；Ｐａｇｅｌ ＪＭ，
ら（２００６） Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａ ｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔ ｓｉｎｇ
ｌｅ−ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒ
ｏｔｅｉｎ ａｎｄ ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ｃｈｅｍｉ
ｃａｌ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｆｏｒ ｐｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｔｉ−ＣＤ２０
ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｂ−ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．Ｂ
ｌｏｏｄ １０８（１）：３２８〜３３６において記載されているものなどの、事前標的
化イメージングおよび薬物送達方法において有用である。
一部の実施形態では、化合物および方法は、トラスツズマブ−ペルツズマブの組合せに
おいて観察されたとおり（Ｂａｓｅｌｇａ Ｊら（２０１２） Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ
ｐｌｕｓ ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｐｌｕｓ ｄｏｃｅｔａｘｅｌ ｆｏｒ ｍｅｔａ
ｓｔａｔｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６６（２
）：１０９〜１１９）、相乗的腫瘍阻害の誘導において有用である（Ｋａｍａｔ，Ｖ．ら
、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ ７、７２６〜７３３（２００８）；Ｋｏｅｆｏｅ
ｄ Ｋら、（２０１１） Ｒａｔｉｏｎａｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ
ｎ ｏｐｔｉｍａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｉｘｔｕｒｅ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ
ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ． Ｍ
Ａｂｓ ３（６）：５８４〜５９５；Ｓｐａｎｇｌｅｒ ＪＢら、（２０１０） Ｃｏｍ
ｂｉｎａｔｉｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔ
ｅｓ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｙ ｉ
ｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｅｎｄｏｓｏｍａｌ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０７（３０）：１３２５２〜１３２５７）。一部の例で
は、メディトープ−Ｆｃなどの二価メディトープは、第２の「ｍＡｂ」様分子として機能
するが、任意のメディトープ利用可能抗体と対となり得る柔軟性を有する。一部の態様で
は、これによって、第２の治療用ｍＡｂを同定および開発するコストが減少する。一部の
実施形態では、多価メディトープ変異体（例えば、価および／またはリンカー幾何学的配
置を改変することによって作成）は、特異性および相乗効果をさらに増強する。
一部の実施形態では、メディトープ結合性部位を、利用可能な方法による有効なＡＤＣ
の開発に典型的に影響を及ぼす異質性およびコンジュゲーション効率の問題を回避する際
に有用なコンジュゲーションの特異点として使用する。毒素を有するメディトープは、一
部の実施形態では、反応性化学物質をＦａｂ空洞に向かわせることができ、特異性および
単位化学量論に有利である。
一部の態様では、中程度の親和性のメディトープ（例えば、ｃＱＦＤおよびｃＱＹＮメ
ディトープ）は、多価手法を考慮する場合などに有利であり（（Ｍａｍｍｅｎ Ｍ、Ｃｈ
ｏｉ Ｓ、＆ Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ Ｇ（１９９８） Ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ ｉｎｔ
ｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ：Ｉｍｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ ｌ
ｉｇａｎｄｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ． Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ
．Ｅｎｇ ３７：２７５５））、一部の実施形態では、種々の非天然アミノ酸、環化スト
ラテジー、および／またはスクリーニング法を使用して、親和性および／または薬物動態
／薬力学／毒性を改善する。本明細書において実証するとおり、一部の実施形態では、メ
ディトープの変化に順応するように、メディトープ結合性部位を適合させることが等しく
可能である。
Ｉ．治療用および診断用の使用ならびに医薬組成物
一実施形態では、典型的には、（同時にか、または別々に）１つまたは複数のメディト
ープ利用可能モノクローナル抗体と組み合わせて投与する場合に、メディトープ、メディ
トープ変異体、多価メディトープ、ＭＰＬ、多価メディトープテザリング剤、および多価
メディトープ変異体テザリング剤の特異性および結合を使用して、疾患または状態を治療
、診断（例えば、イメージング）するための治療剤、診断剤（例えば、イメージング剤）
、またはそれらの組合せを送達する。
一例では、下記でさらに記載するとおりの事前標的化療法または事前標的化イメージン
グのために、メディトープ利用可能モノクローナル抗体を投与し、その後で、メディトー
プ、メディトープ変異体、多価メディトープテザリング剤、または多価メディトープ変異
体テザリング剤を投与することによって、メディトープ、例えば、多価メディトープを使
用する。さらに、操作ｓｃＦｖｓまたは化学的にコンジュゲートされたｍＡｂについて実
証されているとおり、多価メディトープを使用することによって、選択性を増強し、かつ
腫瘍の検出を改善することができるが、これらの非ヒトコンストラクトに固有の起こり得
る免疫原性は回避される。
したがって、本明細書において記載されているプラットフォーム技術は、ｍＡｂ送達分
野において大きなインパクトを有し、かつ抗体の使用が適応とされるものなど、癌を包含
する様々な疾患および条件を治療および診断するための有用な方法を提供する。例えば、
結腸直腸癌、扁平上皮細胞癌腫、頭頚部癌を包含するＥＧＦＲ陽性癌を対象とするメディ
トープ利用可能抗体は、セツキシマブおよびメディトープの使用から利益を受けるであろ
う。加えて、そのような抗体のメディトープ利用可能バージョンを作成するために他の治
療用抗体を修飾することによって、このプラットフォーム技術を、いくつかの他の癌、疾
患、および他の状態を治療および診断するための方法において利用することができる。
そのような方法でのメディトープの使用は、例えば抗体に結合またはコンジュゲートす
るための他の手段と比較して、例えば、特異性によって有利である。例えば、ＰｐＬ（プ
ロテインＬ）およびＳｐＡ（プロテインＡ）は、マウス特異的またはキメラ抗体特異的で
はない。ＰｐＬは、マウスの約６６％に、かつヒトＩｇＧκ軽鎖の約５０％に結合し、Ｓ
ｐＡは、マウスの１２％およびヒト可変重鎖の５０％に結合する（Ｇｒａｉｌｌｅら、２
００２）。対照的に、本明細書において実証されているとおり、メディトープとメディト
ープ利用可能抗体との相互作用は高度に特異的であり、このことによって、オフターゲッ
ト作用を包含する有害作用が回避され得、例えば、対象に内因性の免疫グロブリンへの治
療用化合物の結合が回避され得る。
一部の実施形態では、メディトープ利用可能抗体と組み合わせて投与されるメディトー
プ、抗体−メディトープ複合体、メディトープ利用可能抗体と組み合わせて投与されるメ
ディトープ、またはそれらの組合せを、１つまたは複数のイメージング剤とコンジュゲー
トすることができる。一態様では、イメージング剤には、これらに限定されないが、蛍光
、発光、磁気性タンパク質、または放射性核種タンパク質、ペプチドもしくはその誘導体
（例えば、遺伝子操作された変異体）が包含され得る。ｍＲＮＡ成分によって発現され得
る蛍光タンパク質には、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、高感度ＧＦＰ（ＥＧＦＰ）、赤
色、青色、黄色、シアン、およびサファイア蛍光タンパク質、ならびにリーフコーラル蛍
光タンパク質が包含される。ｍＲＮＡ成分によって発現され得る発光タンパク質には、ル
シフェラーゼ、エクオリン、およびその誘導体が包含される。多数の蛍光および発光色素
およびタンパク質が、当技術分野では知られている（例えば、いずれも、本明細書におい
て全て示されているかのように、参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開
第２００４／００６７５０３号；Ｖａｌｅｕｒ，Ｂ．、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｆｌｕｏ
ｒｅｓｃｅｎｃｅ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｊｏ
ｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、２００２；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｕｏｒ
ｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ， ９．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、２００２；および
Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ−−Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏ
ｂｅｓ ａｎｄ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ、１０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎウェブサイトで入手可能）を参照
されたい）。
他の態様では、メディトープ利用可能抗体と組み合わせて投与されるメディトープ、抗
体−メディトープ複合体、メディトープ利用可能抗体と組み合わせて投与されるメディト
ープ、またはそれらの組合せを、ナノ粒子、放射性物質（例えば、放射性同位体、放射性
核種、放射標識、または放射性トレーサー）、色素、コントラスト剤、蛍光化合物または
分子、生物発光化合物または分子、酵素、および増感剤（例えば、常磁性イオン）などの
非タンパク質イメージング剤または送達ビヒクルとさらにコンジュゲートさせるか、また
は別段に会合させることができる。加えて、一部のナノ粒子、例えば量子ドットおよび金
属ナノ粒子（下記）は、イメージング剤または治療剤として使用するためにも適し得るこ
とに留意すべきである（例えば、温熱および光線力学的療法を使用して、さらには蛍光お
よびまたはＭＲＩコントラストを介するイメージング剤）。
メディトープ−ｍＡｂ技術によって、１つまたは複数のメディトープ利用可能抗体、治
療剤、イメージング剤、またはそれらの組合せにさらにコンジュゲートさせることができ
る抗体−メディトープ複合体を作成するために使用することができるシステムが可能であ
る。したがって、独自の細胞毒性剤またはイメージング剤にそれぞれコンジュゲートして
いるメディトープまたは高親和性メディトープ変異体のセットによって、治療に望ましい
メディトープコンジュゲートおよびメディトープ利用可能ｍＡｂを同時に投与することが
できるであろう。メディトープコンジュゲートは、化学的修飾、ペイロードの放出、およ
び一貫しないペイロードコンジュゲーションによる特異性の低下などの欠点を有する現行
の抗体−薬物コンジュゲートを上回る改善である。治療用抗体またはその機能性フラグメ
ントの結合親和性を増大するための方法を本明細書では提供する。そのような方法は、対
象に、治療有効量の医薬組成物を、任意の適切な投与経路を介して投与することを包含し
得る。医薬組成物は、メディトープ利用可能抗体と組み合わせたメディトープまたはメデ
ィトープ変異体、メディトープ利用可能抗体と組み合わせた多価メディトープまたはメデ
ィトープ変異体テザリング体、メディトープ利用可能治療用抗体またはその機能性フラグ
メント、薬学的に許容される担体、ならびに任意のそれらの組合せを包含し得る。多価メ
ディトープの結合親和性の増大は、細胞表面に結合しているＩｇＧの多価架橋に帰せられ
得る。ＩｇＧの架橋（親マウスＭ４２５抗体を介するか、または抗ＩｇＧ ＩｇＭを使用
）は、シグナル伝達、受容体細胞内取り込み作用および再循環、ならびに細胞死に大きな
影響を及ぼす。したがって、多価ペプチドは、治療用モノクローナル抗体と相乗的に作用
して、その治療効力を増強させ得る。
一部の実施形態では、メディトープは単独で、またはテザリング体の一部として、結合
部位でＦａｂシステインに結合するシステインまたは他の適切なアルキル化剤を含有して
、システイン−システイン相互作用をもたらし得る。別法では、メディトープは、非天然
アミノ酸（例えば、ｐ−アセチルフェニルアラニン）でＦａｂに結合し得る。このＣｙｓ
メディトープは、任意の物質とコンジュゲートし、そのコンジュゲートをＩｇＧへと向け
る。
治療用抗体によって標的化され得る疾患または状態で、治療を特定の種類の細胞または
細胞群に向けるための方法において、抗体−メディトープ複合体を使用することもできる
。そのような治療方法は、治療有効量の医薬組成物を、疾患または状態を有する対象に、
任意の適切な投与経路を介して投与することを包含し得る。医薬組成物は、メディトープ
利用可能抗体と組み合わせたメディトープまたはメディトープ変異体、メディトープ利用
可能抗体と組み合わせた多価メディトープまたはメディトープ変異体テザリング体、メデ
ィトープ利用可能治療用抗体またはその機能性フラグメントを包含し得る。
他の実施形態では、腫瘍または他の組織をイメージングするための方法を提供する。そ
のような方法では、未修飾の治療用抗体を、対応する抗原を過剰発現する腫瘍または他の
組織を標的化するために投与することができる。その後、イメージング剤で標識されてい
る多価メディトープテザリング体を、任意の適切な投与経路を介して投与し、標的腫瘍ま
たは組織に結合している治療用抗体に結合させる。図１を参照されたい。イメージング剤
の例には、これらに限定されないが、放射標識（例えば、3Ｈ、14Ｃ、35Ｓ、90Ｙ、99mＴ
ｃ、125Ｉ、131Ｉ、177Ｌｕ、166Ｈｏ、および153Ｓｍ）、金属または磁気性標識（例え
ば、金、鉄、ガドリニウム）、ビオチン、キレート化剤（例えば、１，４，７，１０−テ
トラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’’’−四酢酸（「ＤＯＴＡ」））、また
は上記の任意の薬剤が包含される。一実施形態では、本明細書において記載されている方
法で使用されるイメージング剤は、ＤＯＴＡである。
上記のイメージングまたは治療方法には、既知の方法を上回るいくつかの利点が存在す
る。第一には、治療用モノクローナル抗体の二価特性によって、腫瘍に対する選択性が増
強される。下記でさらに検討するとおり、この選択性の増強は、ｓｃＦｖｓを使用すると
失われ、かつ親和性の増強によっても完全には補償されない。第二には、標識されている
多価メディトープテザリング体の質量が、濾過について腎閾値未満であり（６０ｋＤａ未
満、約１０ｋＤａの低さであることもある）、身体から容易に濾過によって排出され得る
。対照的に、治療用抗体をイメージング剤または他の治療剤で直接標識することは典型的
には回避される。それというのも、その抗体が、体内を長期間（数日から数週間）にわた
って循環するであろうためである。したがって、腫瘍または他の罹患器官のイメージング
は多くの場合に、選択性の低いｓｃＦｖｓを使用して実行されている。
さらなる実施形態では、メディトープを使用して２つ以上の治療用分子を合わせて、癌
、自己免疫疾患、または他の状態を治療するために医薬組成物の一部として、治療有効量
で対象に投与することができる医薬化合物を形成することができる。２つ以上の治療用分
子には、これらに限定されないが、上記のものなどの腫瘍または疾患特異的受容体を標的
化し得る機能性抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）2またはＦａｂフラグメント）
、ペプチド、または他の小分子が包含され得る。それらの治療用分子は、同じ治療用分子
が２つ以上であってもよいし、または別法では、同じ腫瘍または罹患組織を標的化する異
なる分子が２つ以上であってもよい。
一部の実施形態では、医薬化合物または組成物には、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ（商標）など
の特許権下の抗体またはその一部が包含され得る。一例では、メディトープを、２つ以上
の治療用分子を特別に設計されたＣｏｖＸ抗体に結合するためのリンカーとして使用する
。一例では、そのようなメディトープに随伴する小分子、ペプチド、またはｓｃＦｖは、
ＣｏｖＸ抗体のメディトープ結合部位（例えば、フレームワーク結合インターフェース）
によって認識される。これらの成分を合わせると、その結果生じる二価ＣｏｖＸ−Ｂｏｄ
ｙ（商標）は、抗体の長い半減期も保持しながら、小分子、ペプチド、またはｓｃＦｖの
生物学的作用を持つ。
一部の実施形態では、提供するメディトープ、メディトープ利用可能抗体、およびその
複合体を、治療用抗体を使用することで治療または標的化することができる任意の癌、疾
患、または他の状態を包含する疾患または状態の治療、診断、またはイメージングにおい
て使用する。癌は、免疫系を活発に抑制することによって、免疫学的監視を回避する。こ
の免疫抑制に対抗することを目的とする方法の一つは、腫瘍細胞によって独自に発現また
は過剰発現される抗原のエピトープを使用するワクチン接種を介するものである。例えば
、シグナル伝達経路を阻害し、増殖因子を抑制し、かつ／または免疫応答を誘導するモノ
クローナル抗体（ｍＡｂ）は、癌および他の疾患を治療するために成功裏に臨床導入され
ている。
したがって、それらの疾患および条件には、任意の癌、さらには治療用ｍＡｂを使用し
て標的化されるものなどの他の疾患および条件が包含され、これらに限定されないが、白
血病およびリンパ腫（例えば、アレムツズマブ、ベクツモマブ、ゲムツズマブ、ＦＢＴＡ
０５、イブリツモマブチウゼタン、オファツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブのメデ
ィトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることができる）、乳
癌（例えば、トラスツズマブ、アデカツムマブ、エルツマキソマブ（ｅｒｔｕｍａｘｏｍ
ａｂ）のメディトープ利用可能バージョンを使用して、治療またはイメージングすること
ができる）、前立腺癌（例えば、アデカツムマブ、カプロマブペンデチド、エタラシズマ
ブのメディトープ利用可能バージョンを使用して、治療またはイメージングすることがで
きる）、結腸直腸癌（例えば、ラベツズマブ、パニツムマブ、ペンテト酸アルツムマブ、
ボツムマブのメディトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングするこ
とができる）、胃腸癌（例えば、アルシツムマブ、カツマキソマブのメディトープ利用可
能バージョンを使用して治療またはイメージングすることができる）、卵巣癌（例えば、
アバゴボマブ、カツマキソマブ、エタラシズマブ、イゴボマブ、オレゴボマブのメディト
ープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることができる）、肺癌（
例えば、アナツムマブマフェナトックスのメディトープ利用可能バージョンを使用して治
療またはイメージングすることができる）、膵臓癌（例えば、クリバツズマブテトラキセ
タンのメディトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることがで
きる）、腎臓癌（例えば、ギレンツキシマブのメディトープ利用可能バージョンを使用し
て治療またはイメージングすることができる）、黒色腫癌（例えば、エタラシズマブ、イ
ピリムマブ、ＴＲＢＳ０７のメディトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメ
ージングすることができる）、膠腫（例えば、ニモツズマブのメディトープ利用可能バー
ジョンを使用して治療またはイメージングすることができる）、骨転移（例えば、デノス
マブのメディトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることがで
きる）、頭頚部癌（例えば、ザルツムマブのメディトープ利用可能バージョンを使用して
治療またはイメージングすることができる）、心臓血管疾患（例えば、アブシキシマブの
メディトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることができる）
、自己免疫障害（例えば、アダリムマブ、インフリキシマブのメディトープ利用可能バー
ジョンを使用して治療またはイメージングすることができる）、関節リウマチ（例えば、
アトリズマブ、ゴリムマブ、インフリキシマブのメディトープ利用可能バージョンを使用
して治療またはイメージングすることができる）、移植拒絶（例えば、バシリキシマブ、
ダクリズマブ、ムロモナブ−ＣＤ３のメディトープ利用可能バージョンを使用して治療ま
たはイメージングすることができる）、クローン病（例えば、セルトリズマブ、フォント
リズマブ、ナタリズマブ、インフリキシマブ、ビシリズマブのメディトープ利用可能バー
ジョンを使用して治療またはイメージングすることができる）、ヘモグロビン尿（エクリ
ズマブのメディトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることが
できる）、乾癬（例えば、エファリズマブ、インフリキシマブ、ウステキヌマブのメディ
トープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることができる）、多発
性硬化症（例えば、ナタリズマブ、ウステキヌマブのメディトープ利用可能バージョンを
使用して治療またはイメージングすることができる）、喘息（例えば、ベンラリズマブ、
メポリズマブ、オマリズマブのメディトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイ
メージングすることができる）、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）（例えば、パリビズマブ
のメディトープ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることができる
）、黄斑変性（例えば、ラニビズマブのメディトープ利用可能バージョンを使用して治療
またはイメージングすることができる）、虫垂炎（例えば、ファノレソマブのメディトー
プ利用可能バージョンを使用して治療またはイメージングすることができる）、および抗
体で標的化または治療され得る任意の他の状態が包含される。上記で列挙された抗体およ
び関連疾患または障害は単なる例であり、プラットフォームを制限するものではない。
ある種の実施形態では、メディトープまたはその変異体を１つまたは複数のメディトー
プ利用可能抗体に治療上有効な化合物と共に結合させることで、疾患または状態を治療、
予防、診断、モニタリングし得るように、１つまたは複数のメディトープ、メディトープ
変異体、多価メディトープテザリング剤、または多価メディトープ変異体テザリング剤を
、１種または複数のイメージング剤、治療有効量の治療上有効な薬剤もしくは化合物、ま
たは両方にコンジュゲートさせることができる。メディトープ利用可能ｍＡｂにカップリ
ングする高親和性および／または多価メディトープのそのようなコンジュゲーションは、
疾患を治療および検出するためのｍＡｂベースの治療およびイメージング方法をかなり改
善する高度に多用途のプラットフォーム技術を提供する（図１を参照されたい）。
一部の実施形態では、提供する方法および化合物は、抗体工学、抗体−薬物コンジュゲ
ート（ＡＤＣ）、抗体−指向酵素プロドラッグ治療（ＡＤＥＰＴ）、免疫系エンゲージメ
ント（例えば、Ｆｃ修飾（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ ＪＲ ＆ Ｌａｚａｒ ＧＡ （２０
１１） Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃ
ｔｉｏｎ．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ３１７（９）：１２７８〜１２８５）、ケモカイ
ン融合、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（Ｗｏｌｆ Ｅ、Ｈｏｆｍｅｉｓｔｅｒ Ｒ、
Ｋｕｆｅｒ Ｐ、Ｓｃｈｌｅｒｅｔｈ Ｂ、＆ Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＰＡ （２００５）
ＢｉＴＥｓ：ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ ｗｉ
ｔｈ ｕｎｉｑｕｅ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ
ｏｖ Ｔｏｄａｙ １０（１８）：１２３７〜１２４４）および疾患イメージング（例え
ば、イムノＰＥＴおよび事前標的放射性核種イメージング（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ＤＭ
ら（２０１２） Ｐｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ａｎ
ｄ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ ２（５）：
５２３〜５４０；Ｐａｇｅｌ ＪＭら（２００６） Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａ
ｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔ ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｓｔｒｅｐｔ
ａｖｉｄｉｎ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｓｔ
ｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｆｏｒ ｐｒｅｔａｒ
ｇｅｔｅｄ ａｎｔｉ−ＣＤ２０ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｂ−
ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ． Ｂｌｏｏｄ １０８（１）：３２８〜３３６）におい
て有用である。
一部の態様では、提供する方法および化合物は、利用可能なそのような方法、例えば、
例えば治療およびイメージング用途に有害な望ましくない結果につながり得る遺伝子配列
の翻訳後化学修飾または操作を使用する方法において観察される問題を克服する。例えば
、利用可能な方法を使用して疾患部位に細胞毒素を指向させるＡＤＣでは、毒素の化学的
コンジュゲーション（典型的には、ｍＡｂ上のリシン、還元システイン、または糖を伴う
）は、ｍＡｂの特異性および安定性に不利な影響を及ぼし、その生体内分布を改変し得る
不均一な混合物を生成し得る。
別の例として、利用可能な方法を使用して、腫瘍浸透を促進し、かつイメージングを増
強するために、ｍＡｂのサイズをＦａｂフラグメント（例えば、一本鎖Ｆａｂ可変ドメイ
ン（ｓｃＦｖ））に低減することは、価を減少させ、したがって、元のｍＡｂと比較して
、親和性および組織特異性の両方に影響を及ぼし得る。他の場合には、利用可能な方法で
、検出を増強するための事前標的イメージングプロトコルの一部として、スキャフォール
ドを介して一緒にステッチされた（例えば、「ロック−アンド−ドック」）ストレプトア
ビジンまたは多数のＦａｂ／ｓｃＦｖとコンジュゲートされたｍＡｂは、免疫原性であり
、血清において不安定であり、かつ技術的に困難であり、かつ特に臨床使用に必要な規模
では、生産に費用がかかり得る。提供する化合物および方法は、一部の実施形態では、例
えば、癌ならびに他の疾患および状態のための代替のｍＡｂプラットフォームならびに改
善されたｍＡｂベースの送達系を提供することによって、そのような困難の克服に有用で
ある。
実施形態および例示的な実施例に関して本発明を記載したが、記載および例示されてい
るとおりの本発明を、本明細書に開示されているとおりの本発明の意図および範囲から逸
脱することなく変更することを、当業者であれば認め得るであろう。実施例は、本発明の
理解を促進するために示されているものであって、本発明の範囲をいかなる形でも制限す
ることを意図したものでも、そのように解釈されるべきものでもない。実施例は、従来方
法の詳細な説明を含まない。そのような方法は、当業者によく知られており、多くの刊行
物において記載されている。さらに、上記および下記の実施例において引用されている参
照文献は全てその全体が、本明細書に完全に記載されているかのように、参照によって本
明細書に組み込まれる。
次の文献は、あらゆる目的のためにそれらの全体で参照によって本明細書に組み込まれ
る：２０１２年２月１０日出願の米国特許出願第６１／５９７，７０８号；２０１１年１
０月１０日出願の米国特許出願第１３／２７０，２０７号、現在の米国特許第８，６５８
，７７４号；２０１１年１０月１０日出願の国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０５５
６５６号；２０１２年４月１０日出願の国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１２／３２９３８号；
２０１２年４月１０日出願の米国特許出願第１３／４４３，８０４号、現在の米国特許第
８，９６２，８０４号；２０１２年２月１０日出願の米国特許出願第６１／７４９，８３
０号、および２０１３年２月１１日出願の米国特許出願第１３／７６４，７６２号。
Ｅ． 定義
「抗体」は、本明細書で使用される場合、抗原またはエピトープに特異的に結合するか
、または免疫学的に反応する免疫グロブリン分子を指し、これには、ポリクローナル抗体
およびモノクローナル抗体の両方、さらには、これらに限定されないが、フラグメント抗
原結合性（Ｆａｂ）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント
、Ｆｖフラグメント、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）フラグメント、単鎖可変フラグメント（
ｓｃＦｖ）、および単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）フラ
グメントを包含する機能性抗体フラグメントが包含される。用語「抗体」には、細胞内抗
体、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、メ
ディトープ利用可能抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体、
ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（
ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ−ｓｃＦｖ）など、免
疫グロブリンの遺伝子操作されているか、または別段に修飾された形態が包含される。別
段に述べられていない限り、用語「抗体」には、これらの機能性抗体フラグメントが包含
されると理解すべきである。
用語「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」は、当技術分野では、抗原特異性および結合
親和性をもたらす抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指すことが知られている。一
般に、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３）
が、かつ各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３
）が存在する。「フレームワーク領域」および「ＦＲ」は、重鎖および軽鎖の可変領域の
非ＣＤＲ部分を指すことが当技術分野では知られている。一般に、各重鎖可変領域には４
つのＦＲ（ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、およびＦＲ−Ｈ４）が、かつ各軽鎖可
変領域には４つのＦＲ（ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、およびＦＲ−Ｌ４）が存
在する。
Ｋａｂａｔら（１９９１）、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔ
ｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、
Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａ
ｎｉら（１９９７）、ＪＭＢ ２７３、９２７〜９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリン
グスキーム）、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２〜７４５
（１９９６）、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ： Ｃ
ｏｎｔａｃｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｔｏｐｏｇｒａ
ｐｈｙ」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２、７３２〜７４５、（「Ｃｏｎｔａｃｔ」ナン
バリングスキーム）、Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰら、「ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅ
ｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐ
ｔｏｒ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ
Ｖ−ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ」、Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００３年１月
；２７（１）：５５〜７７（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）、ならびにＨｏｎｅｇ
ｇｅｒ ＡおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ Ａ、「Ｙｅｔ ａｎｏｔｈｅｒ ｎｕｍｂｅｒｉ
ｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏ
ｍａｉｎｓ： ａｎ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉ
ｓ ｔｏｏｌ」、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２００１年６月８日；３０９（３）：６５７〜
７０（ＡＨｏナンバリングスキーム）に記載されているものを包含する、いくつかのよく
知られているスキームのうちの任意のものを使用することで、所与のＣＤＲまたはＦＲの
正確なアミノ酸配列の境界を容易に決定することができる。
所与のＣＤＲまたはＦＲの境界は、同定のために使用されるスキームに応じて変化し得
る。例えば、Ｋａｂａｔスキームは構造アラインメントに基づくが、Ｃｈｏｔｈｉａスキ
ームは構造情報に基づく。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａスキームでのナンバリングは
両方とも、最も共通する抗体領域の配列長さに基づき、挿入は、例えば「３０ａ」など、
挿入文字によって収められ、欠失が一部の抗体で現れる。これら２つのスキームは、異な
る位置に一定の挿入および欠失（「インデル」）を設けるので、ナンバリングに相違が生
じる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは複雑な結晶構造の分析に基づき、多くの観点においてＣ
ｈｏｔｈｉａナンバリングスキームと類似している。
以下の表４に、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、およびＣｏｎｔａｃｔスキームによって
個々に同定されたＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、およびＣＤＲ−Ｈ１、Ｃ
ＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３の位置を列挙している。ＣＤＲ−Ｈ１では、Ｋａｂａｔおよび
Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームの両方を使用して、残基ナンバリングをリストに挙
げる。ＫａｂａｔナンバリングスキームはＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに挿入を設けているの
で、Ｋａｂａｔナンバリング規則を使用してナンバリングした場合のＣｈｏｔｈｉａ Ｃ
ＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じて、Ｈ３２からＨ３４の間で変動するこ
とに注意されたい。
Figure 2021075548
したがって、別段の指定がない限り、所与の抗体またはその領域、例えば、その可変領
域などの「ＣＤＲ」もしくは「相補性決定領域」、または個々に指定されるＣＤＲ（例え
ば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２）は、公知のスキームのうちの任意のものによって規定
されるとおりの任意の（または具体的な）相補性決定領域を包含すると理解されるべきで
ある。同様に、別段の指定がない限り、所与の抗体またはその領域、例えば、その可変領
域などの「ＦＲ」もしくは「フレームワーク領域」、または個々に指定されるＦＲ（例え
ば、ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２）は、公知のスキームのうちの任意のものによって定義され
るとおりの任意の（または具体的な）フレームワーク領域を包含すると理解されるべきで
ある。一部の例では、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＣｏｎｔａｃｔ方法によって
定義されるとおりのＣＤＲなど、特定の１つのＣＤＲ、ＦＲ、または複数のＦＲもしくは
ＣＤＲを同定するためのスキームが指定されている。他の場合には、ＣＤＲまたはＦＲの
特定のアミノ酸配列が示されている。
用語「メディトープ利用可能」抗体および「メディトープ利用可能抗体」および「メデ
ィトープ利用可能抗体」は、メディトープ結合部位を介してメディトープに結合し得る抗
体またはその機能性フラグメントを指す。メディトープ利用可能抗体の例には、これに限
定されないが、本明細書において記載されているセツキシマブなどが包含される。「メデ
ィトープ結合部位」は、結合したメディトープと相互作用するアミノ酸残基を含有するメ
ディトープ利用可能抗体の領域であり、その残基には、重鎖および軽鎖のフレームワーク
領域（ＦＲ）の残基が包含される。抗体のＦａｂフラグメントまたはＦａｂ部分に関して
、メディトープ結合部位は、Ｆａｂフラグメントまたは部分の中央空洞内に位置している
。
Ｆａｂの三次元構造に関して、「中央空洞」は、重鎖および軽鎖の可変および定常領域
の部分によってライニングされているＦａｂの内部空洞を指す。したがって、中央空洞は
、ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１、およびＣＬ領域の残基によってライニングされており、抗原結合
部位を包含しない。
一部の実施形態では、メディトープ結合部位は、Ｋａｂａｔナンバリングに従うとメデ
ィトープ利用可能抗体の軽鎖の残基４０、４１、８３、および８５、ならびに／またはＫ
ａｂａｔナンバリングに従うとメディトープ利用可能抗体の重鎖の残基３９、８９、１０
５、および１０８を包含する。
一部の実施形態では、メディトープ結合部位は、Ｋａｂａｔナンバリングに従うと抗体
の軽鎖の残基８、９、１０、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、８２、
８３、８４、８５、８６、８７、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０
５、１４２、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、および１７３
、ならびに重鎖の残基６、９、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、８４
、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１
０８、１１１、１１０、１４７、１５０、１５１、１５２、１７３、１７４、１７５、１
７６、１７７、１８５、１８６、および１８７によって形成される空洞内に位置している
。
メディトープ利用可能抗体のＦａｂ部分に関して、メディトープ結合部位は、中央空洞
内に残基を包含する。メディトープ結合部位は典型的に、定常領域の残基をさらに包含す
る。
「治療剤」は、本明細書で使用される場合、疾患または状態を治療する際に有用な原子
、分子、または化合物である。
「治療有効量」、「治療有効濃度」、または「治療有効用量」は、標的状態の予防もし
くは治療、その状態に関連する症状の緩和、所望の生理学的効果の提示、または疾患もし
くは状態の治療をもたらす状態のイメージングまたは診断を可能にすることなど、所望の
治療効果を対象においてもたらす化合物の量である。正確な治療有効量は、所与の対象に
おける治療の有効性に関して、最も有効な結果をもたらす組成物の量である。この量は、
これらに限定されないが、治療用化合物の特徴（活性、薬物速度、薬物動態、および生物
学的利用能を包含）、対象の生理学的状態（年齢、性別、疾患の種類および段階、全身状
態、所与の投薬量および薬物種に対する反応性を包含）、製剤中の薬学的に許容される１
種の担体または複数の担体の性質、ならびに投与経路を包含する様々な因子に応じて変化
するはずである。臨床分野および薬理学的分野の当業者であれば、日常的な実験を介して
、即ち、化合物の投与に対する対象の反応をモニタリングし、それにしたがって投薬量を
調節することによって、治療有効量を決定することができる。補足的なガイダンスについ
ては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｙ 第２１版、Ｕｎｉｖ． ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌ
ａｄｅｌｐｈｉａ（ＵＳＩＰ）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌ
ｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、２００５を参照されたい。
「薬学的に許容される担体」は、目的の化合物を身体のある組織、器官、または部分か
ら、身体の別の組織、器官、または部分へと担持または運搬することに従事する薬学的に
許容される材料、組成物、またはビヒクルを指す。例えば、この担体は、液体または固体
の増量剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、もしくはカプセル封入材料、またはそれらの一部の組
合せであってよい。担体の各成分は、「薬学的に許容される」必要があり、その際、担体
は、製剤の他の成分と相容性でなければならない。また、担体が遭遇し得る身体のいずれ
の組織、器官、または部分との接触にも適していなければならず、このことは、担体が、
毒性、刺激、アレルギー性応答、免疫原性、またはその治療効果を上回る何らかの他の合
併症のリスクを持っていてはならないことを意味している。
「投与経路」は、これらに限定されないが、エアゾール、腸内、経鼻、眼、経口、非経
口、直腸、経皮、または膣による経路を包含する当技術分野で知られている任意の投与経
路を指し得る。局所用クリーム剤もしくは軟膏剤を使用して、または経皮パッチによって
、「経皮」投与を達成することができる。「非経口」は、眼窩内、点滴、動脈内、嚢内、
心臓内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、髄腔内、胸骨内、髄腔内、子宮内、静脈内、クモ
膜下、被膜下、皮下、経粘膜、または経皮気管内を包含する、一般的に注入に関連する投
与経路を指す。
「組み合わせて」または「〜と組み合わせて」は、複数の薬剤、治療剤、または治療の
文脈において本明細書において使用される場合、対象における同じ疾患または状態を治療
する過程において、２種以上の薬剤、薬物、治療レジメン、治療様式、またはそれらの組
合せ（例えば、メディトープと組み合わせた抗体またはメディトープ）を任意の順序で施
すことを意味する。これには、同時投与（または「共投与」）、第１の薬剤を投与し、そ
の前または後に第２の薬剤を投与すること、さらには、最大で数日間の時間的間隔を空け
て順番に投与することが包含される。また、そのような併用治療は、任意の１種または複
数の薬剤、薬物、治療レジメン、または治療様式の複数回の施与を包含し得る。さらに、
２種以上の薬剤、薬物、治療レジメン、治療様式、またはそれらの組合せの施与は、同じ
か、または異なる投与経路によるものであってよい。
「治療用抗体」は、癌、自己免疫疾患、移植拒絶、心臓血管疾患、または本明細書にお
いて記載されているものなどの他の疾患もしくは状態を治療するために使用される任意の
抗体またはその機能性フラグメントを指し得る。本明細書において記載されている実施形
態に従って使用することができる治療用抗体の例には、これらに限定されないが、マウス
抗体、マウス化もしくはヒト化キメラ抗体、またはヒト抗体が包含され、それらには、こ
れらに限定されないが、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、ＲｅｏＰｒｏ（アブシキシマ
ブ）、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（バシリキシマブ）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（インフリキシマブ）；
Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（ムロモナブ（ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）−ＣＤ３）；Ｒｉ
ｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｂｅｘｘａｒ（トシツモマブ）、Ｈｕｍｉｒａ（アダリム
マブ）、Ｃａｍｐａｔｈ（アレムツズマブ）、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（バシリキシマブ）、Ａ
ｖａｓｔｉｎ（ベバシズマブ）、Ｃｉｍｚｉａ（セルトリズマブペゴル）、Ｚｅｎａｐａ
ｘ（ダクリズマブ）、Ｓｏｌｉｒｉｓ（エクリズマブ）、Ｒａｐｔｉｖａ（エファリズマ
ブ）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（ゲムツズマブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（イブリツモマブ・チウキセ
タン）、Ｔｙｓａｂｒｉ（ナタリズマブ）、Ｘｏｌａｉｒ（オマリズマブ）、Ｓｙｎａｇ
ｉｓ（パリビズマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（ラニビ
ズマブ）、およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）が包含される。
ある状態を「治療すること」またはその「治療」は、その状態を予防すること、その状
態の発症または発生速度を遅らせること、その状態が発生するリスクを低減すること、そ
の状態に関連した症状の発生を予防または遅延させること、その状態に関連する症状を低
減または終息させること、その状態の完全または部分的退縮を生じさせること、あるいは
これらの一部の組合せを指し得る。
本明細書で使用される場合、用語「包含すること」、「含有すること」、および「含む
こと」は、そのオープンな非限定的な意味で使用されている。
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈によ
って別段に明瞭に示されていない限り、複数指示物も包含する。
より簡潔な説明を提供するために、本明細書に示されている量的表現のうちの一部は、
用語「約」で修飾されていない。用語「約」が明確に使用されているか、使用されていな
いかに関わらず、本明細書に示されている全ての量は、実際に示されている値を指すこと
が意図されており、かつ示されているそのような値についての実験条件および／または測
定条件による同値および近似値を包含する、当技術分野の通常の技能に基づき合理的に推
測されるであろう示されているそのような値の近似値も指すことが意図されていることは
理解されるであろう。
本明細書で使用される場合、「アルキル」は、１〜１２個の炭素原子を有する飽和の直
鎖または分枝鎖炭化水素基を指す。代表的なアルキル基には、これらに限定されないが、
メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、２−メチル−１−プロピル、２−メチル
−２−プロピル、２−メチル−１−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−３−
ブチル、２，２−ジメチル−１−プロピル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１
−ペンチル、４−メチル−１−ペンチル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−
ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、２，２−ジメチル−１−ブチル、３，３−ジメチ
ル−１−ブチル、２−エチル−１−ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペン
チル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシルなど、およびヘプチル、オクチルなど
のより長いアルキル基が包含される。用語「Ｃx〜yアルキル」（ここで、ｘおよびｙは整
数である）は、ｘ〜ｙ個の炭素原子を有するアルキルを指す。
本明細書で使用される場合、「アルケニル」は、その中に１つまたは複数の二重結合を
有し、かつ２〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖炭化水素基を指す。アルケニ
ル基の実例には、これらに限定されないが、エチレニル、ビニル、アリル、ブテニル、ペ
ンテニル、ヘキセニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、ヘキサジエニル、２−エチルヘ
キセニル、２−プロピル−２−ブテニル、４−（２−メチル−３−ブテン）−ペンテニル
などが包含される。用語「Ｃx〜yアルケニル」（ここで、ｘおよびｙは整数である）は、
ｘ〜ｙ個の炭素原子を有するアルケニルを指す。
用語「アルキレニル」または「アルキレン」は、二価のアルキル基を指す。用語「アル
ケニレン」または「アルケニレン」は、二価のアルケニル基を指す。
本明細書で使用される場合、「アルキニル」は、その中に１つまたは複数の三重結合を
有し、かつ２〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖炭化水素基を指す。例示的な
アルキニル基には、これらに限定されないが、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチ
ニル、ヘキシニル、メチルプロピニル、４−メチル−１−ブチニル、４−プロピル−２−
ペンチニル、４−ブチル−２−ヘキシニルなどが包含される。
用語「ヘテロアルキル」は、単独で、または別の用語との組合せで、別段に述べない限
り、少なくとも１個の炭素原子、ならびにＯ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ、およびＳからなる群から選
択される少なくとも１個のヘテロ原子を包含し、窒素および硫黄原子が酸化されていても
よく、窒素ヘテロ原子が第四級化されていてもよい安定な直鎖もしくは分枝鎖、またはそ
の組み合わせを意味する。ヘテロ原子（複数可）Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、およびＳｉは、ヘテロ
アルキル基の任意の内部位で、またはアルキル基が分子の残りの部分に結合する位置で置
き換えられていてよい。例には、これらだけに限定されないが−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ
3、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｓ
−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）2−Ｃ
Ｈ3、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ3、−Ｓｉ（ＣＨ3）3、−ＣＨ2−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ3、−Ｃ
Ｈ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ3、−Ｏ−ＣＨ3、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ3、および−ＣＮが含
まれる。最高２または３個のヘテロ原子が連続してよく、例えば、−ＣＨ2−ＮＨ−ＯＣ
Ｈ3および−ＣＨ2−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ3）3などである。
同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、単独で、または別の置換基の一部として、別段
に述べない限り、限定ではないが、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−および−ＣＨ2
−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−によって例示されるとおりのヘテロアルキルに由来
する二価ラジカルを意味する。ヘテロアルキレン基では、ヘテロ原子は、鎖末端の一方ま
たは両方を占めてもよい（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレン
アミノ、アルキレンジアミノなど）。なおさらには、アルキレンおよびヘテロアルキレン
架橋基では、架橋基の配列は、架橋基の式が記載されている方向によって示されない。例
えば、式−Ｃ（Ｏ）2Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）2Ｒ’−および−Ｒ’Ｃ（Ｏ）2−の両方を表
す。上記のとおり、ヘテロアルキル基は、本明細書において使用される場合、−Ｃ（Ｏ）
Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＯＲ’、−ＳＲ’、および／または−ＳＯ
2Ｒ’など、ヘテロ原子を介して分子の残りの部分に結合する基を包含する。−ＮＲ’Ｒ
’’などの具体的なヘテロアルキル基の列挙に続いて「ヘテロアルキル」が言及されてい
る場合、ヘテロアルキルおよび−ＮＲ’Ｒ’’という用語は、重複していないか、または
相互に排他的ではないと理解されるであろう。むしろ、具体的なヘテロアルキル基は、明
確さを付与するために列挙されている。したがって、用語「ヘテロアルキル」は、本明細
書において、−ＮＲ’Ｒ’’などの具体的なヘテロアルキル基を排除すると解釈されるべ
きではない。
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、単独で、または別の用語
の一部として、別段に述べない限り、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」の
環式バージョンを意味する。加えて、ヘテロシクロアルキルでは、ヘテロ原子は、複素環
が分子の残りの部分に結合する位置を占めることができる。シクロアルキルの例には、こ
れらだけに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘ
キシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが含まれる
。ヘテロシクロアルキルの例には、これらだけに限定されないが、１−（１，２，５，６
−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、
４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフ
ラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−
ピペラジニル、２−ピペラジニルなどが含まれる。「シクロアルキレン」および「ヘテロ
シクロアルキレン」は単独で、または別の置換基の一部として、それぞれシクロアルキル
およびヘテロシクロアルキルに由来する二価ラジカルを意味する。
用語「アリール」は、別段に述べない限り、一緒に融合しているか（すなわち、縮合環
アリール）、または共有結合している単一の環または複数の環（好ましくは、１〜３個の
環）であり得るポリ不飽和、芳香族、炭化水素置換基を意味する。縮合環アリールは、縮
合環の少なくとも１個がアリール環である一緒に融合している複数の環を指す。用語「ヘ
テロアリール」は、Ｎ、Ｏ、またはＳなどの少なくとも１個のヘテロ原子を含有し、窒素
および硫黄原子が酸化していてもよく、窒素原子（複数可）が第四級化していてもよいア
リール基（または環）を指す。したがって、用語「ヘテロアリール」は、縮合環ヘテロア
リール基（すなわち、縮合環の少なくとも１個がヘテロ芳香環である一緒に縮合した複数
の環）を包含する。５，６−縮合環ヘテロアリーレンは、一方の環が５員を有し、他方の
環が６員を有し、少なくとも１個の環がヘテロアリール環である一緒に縮合している２個
の環を指す。同様に、６，６−縮合環ヘテロアリーレンは、一方の環が６員を有し、他方
の環が６員を有し、少なくとも１個の環がヘテロアリール環である一緒に縮合している２
個の環を指す。また、６，５−縮合環ヘテロアリーレンは、一方の環が６員を有し、他方
の環が５員を有し、少なくとも１個の環がヘテロアリール環である一緒に縮合している２
個の環を指す。ヘテロアリール基は、炭素またはヘテロ原子を介して分子の残りの部分に
結合することができる。アリールおよびヘテロアリール基の非限定的例には、フェニル、
１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロ
リル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサ
ゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−
イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４
−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル
、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−
ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンゾイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノ
リル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、お
よび６−キノリルが含まれる。上述のアリールおよびヘテロアリール環系のそれぞれのた
めの置換基は、下記の許容される置換基の群から選択される。「アリーレン」および「ヘ
テロアリーレン」は単独で、または別の置換基の一部として、それぞれアリールおよびヘ
テロアリールに由来する二価ラジカルを意味する。ヘテロアリール基の非限定的例には、
ピリジニル、ピリミジニル、チオフェニル、フラニル、インドリル、ベンゾオキサジアゾ
リル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキサニル、チアナフタニル、ピロロピリジニル、
インダゾリル、キノリニル、キノキサリニル、ピリドピラジニル、キナゾリノニル、ベン
ゾイソオキサゾリル、イミダゾピリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、フェ
ニル、ナフチル、ビフェニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ピラジニル、オキ
サゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、フリルチエニル、ピリジル、ピリミジル、ベ
ンゾチアゾリル、プリニル、ベンゾイミダゾリル、イソキノリル、チアジアゾリル、オキ
サジアゾリル、ピロリル、ジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ベンゾチアジアゾ
リル、イソチアゾリル、ピラゾロピリミジニル、ピロロピリミジニル、ベンゾトリアゾリ
ル、ベンゾオキサゾリル、またはキノリルが含まれる。上記の例は、置換または非置換で
あってよく、上記の各ヘテロアリール例の二価ラジカルは、ヘテロアリーレンの非限定的
例である。
用語「ボロン酸エステル」は、置換基−Ｂ（ＯＲ）2を指す（ここで、各Ｒ基は独立に
、Ｃ1〜4アルキルであるか、または２個のＲ基は一緒になって、Ｃ2〜6アルキレンを形成
している）。
用語「アセタール」は、−ＣＨ（ＯＲ）2基を指す（ここで、各Ｒ基は独立に、Ｃ1〜4
アルキルであるか、または２個のＲ基は一緒になって、Ｃ2〜6アルキレンを形成している
）。例示的なアセタール基には、ジメチルアセタールもしくはジエチルアセタールまたは
環式アセタールが包含される。用語「ケタール」は、−Ｃ（ＯＲ）2−基を指す（ここで
、各Ｒ基は独立に、Ｃ1〜4アルキルであるか、または２個のＲ基は一緒になって、Ｃ2〜6
アルキレンを形成している）。例示的なケタールには、ジメチルケタールもしくはジエチ
ルケタールまたは環式ケタールが包含される。
用語「ハロ」は、クロロ、フルオロ、ブロモ、またはヨードを表す。一部の実施形態で
は、ハロは、クロロ、フルオロ、またはブロモである。用語「ハロゲン」は、本明細書で
使用される場合、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。用語「オルトエステル」は
、−Ｃ（ＯＲ）3基を指す（ここで、各Ｒ基は独立に、Ｃ1〜4アルキルであるか、または
２個のＲ基は一緒になって、Ｃ2〜6アルキレンを形成している）。用語「オキソ」は、＝
Ｏ基を意味し、炭素原子または硫黄原子に結合していてよい。用語「ホスホン酸エステル
」は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）2基を指す（ここで、各Ｒ基は独立に、Ｃ1〜4アルキルである
か、または２個のＲ基は一緒になって、Ｃ2〜6アルキレンを形成している）。
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキル」は、３〜１５個の環炭素原子を有
する飽和または部分飽和の単環式、縮合多環式、架橋多環式、またはスピロ多環式炭素環
を指す。シクロアルキル基の非限定的カテゴリーは、３〜６個の炭素原子を有する飽和ま
たは部分飽和の単環式炭素環である。シクロアルキル基の実例には、これらに限定されな
いが、以下の部分が包含される：
Figure 2021075548
本明細書で使用される場合、用語「５員のヘテロアリール」は、炭素、酸素、窒素、お
よび硫黄から選択される５個の環原子を有する単環式芳香族複素環を指す。５員のヘテロ
アリール基の例には、これらに限定されないが、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリ
ル、テトラゾリル、フラニル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル
、イソチアゾリル、ピロリル、およびチアジアゾリルが包含される。５員のヘテロアリー
ルの特定の例には、アジドとプロパルギル基との間でのＨｕｉｓｇｅｎ反応などの１，３
−付加環化反応によって形成され得るものが包含される。
本明細書で使用される場合、用語「置換」は、指定の基または部分が、１個または複数
の適切な置換基を持っていることを意味している。本明細書で使用される場合、用語「非
置換」は、指定の基が置換基を持っていないことを意味している。本明細書で使用される
場合、用語「置換されていてもよい」は、指定の基が非置換であるか、または指定の数の
置換基によって置換されていることを意味している。構造系を説明するために用語「置換
」が使用されている場合、その置換は、その系の上の、価が許容する任意の位置に存在す
ることが意図されている。本明細書で使用される場合、表現「１個または複数の置換基」
は、その系の上の、価が許容する任意の位置に存在し得る１個から最大可能な数までの置
換を示している。ある種の実施形態では、「１個または複数の置換基」は、１、２、３、
４、または５個の置換基を意味する。別の実施形態では、１個または複数の置換基は、１
、２、または３置換基を意味する。
「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）」または「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔ
ｕｅｎｔ）」は、本明細書において使用される場合、下記の（Ａ）および（Ｂ）の部分か
ら選択される基を意味する：
（Ａ）オキソ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ
2、−ＮＯ2、−ＳＨ、−ＳＯ2Ｃｌ、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ4Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＮＨＮＨ2
、−ＯＮＨ2、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ2、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ2、−ＮＨＳＯ2Ｈ、−
ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ3、−ＯＣＨＦ2、非置
換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキ
ル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
（Ｂ）下記のｉ．およびｉｉ．から選択される少なくとも１個の置換基で置換されている
アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、および
ヘテロアリール：
ｉ．
オキソ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ2、−
ＮＯ2、−ＳＨ、−ＳＯ2Ｃｌ、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ4Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＮＨＮＨ2、−
ＯＮＨ2、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ2、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ2、−ＮＨＳＯ2Ｈ、−ＮＨ
Ｃ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ3、−ＯＣＨＦ2、非置換ア
ルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、
非置換アリール、非置換ヘテロアリール、および
ｉｉ． 下記の１．および２．から選択される少なくとも１個の置換基で置換されている
アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、および
ヘテロアリール：
１．
オキソ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ2、−
ＮＯ2、−ＳＨ、−ＳＯ2Ｃｌ、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ4Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＮＨＮＨ2、−
ＯＮＨ2、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ2、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ2、−ＮＨＳＯ2Ｈ、−ＮＨ
Ｃ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ3、−ＯＣＨＦ2、非置換ア
ルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、
非置換アリール、非置換ヘテロアリール、および
２．
オキソ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ2、−
ＮＯ2、−ＳＨ、−ＳＯ2Ｃｌ、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ4Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＮＨＮＨ2、−
ＯＮＨ2、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ2、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ2、−ＮＨＳＯ2Ｈ、−ＮＨ
Ｃ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ3、−ＯＣＨＦ2、非置換ア
ルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、
非置換アリール、および非置換ヘテロアリールから選択される少なくとも１個の置換基で
置換されているアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ア
リール、またはヘテロアリール。
「サイズ限定置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」または「サイズ限定置換基（ｓｕｂ
ｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）」は、本明細書において使用される場合、「置換基」の
ために上記した置換基のすべてから選択される基を意味し、各置換または非置換アルキル
は、置換または非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルであり、各置換または非置換ヘテロアルキルは
、置換または非置換２〜２０員ヘテロアルキルであり、各置換または非置換シクロアルキ
ルは、置換または非置換Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキルであり、各置換または非置換ヘテロシク
ロアルキルは、置換または非置換３〜８員ヘテロシクロアルキルであり、各置換または非
置換アリールは、置換または非置換Ｃ6〜Ｃ10アリールであり、各置換または非置換ヘテ
ロアリールは、置換または非置換５〜１０員ヘテロアリールである。「低級置換基（ｓｕ
ｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」または「低級置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）」
は、本明細書において使用される場合、「置換基」のために上記した置換基のすべてから
選択される基を意味し、各置換または非置換アルキルは、置換または非置換Ｃ1〜Ｃ8アル
キルであり、各置換または非置換ヘテロアルキルは、置換または非置換２〜８員ヘテロア
ルキルであり、各置換または非置換シクロアルキルは、置換または非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロ
アルキルであり、各置換または非置換ヘテロシクロアルキルは、置換または非置換３〜７
員ヘテロシクロアルキルであり、各置換または非置換アリールは、置換または非置換Ｃ6
〜Ｃ10アリールであり、各置換または非置換ヘテロアリールは、置換または非置換５〜９
員ヘテロアリールである。
一部の実施形態では、本明細書における化合物において記載される各置換された基は、
少なくとも１個の置換基で置換されている。より具体的には、一部の実施形態では、本明
細書における化合物において記載される各置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シク
ロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アル
キレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、
置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレンは、少なくとも１個の置換基で置
換されている。他の実施形態では、これらの基の少なくとも１個または全部は、少なくと
も１個のサイズ限定置換基で置換されている。他の実施形態では、これらの基の少なくと
も１個または全部は、少なくとも１個の低級置換基で置換されている。
本明細書における他の実施形態では、各置換または非置換アルキルは、置換または非置
換Ｃ1〜Ｃ20アルキルであってよく、各置換または非置換ヘテロアルキルは、置換または
非置換２〜２０員ヘテロアルキルであり、各置換または非置換シクロアルキルは、置換ま
たは非置換Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキルであり、各置換または非置換ヘテロシクロアルキルは
、置換または非置換３〜８員ヘテロシクロアルキルであり、各置換または非置換アリール
は、置換または非置換Ｃ6〜Ｃ10アリールであり、かつ／または各置換または非置換ヘテ
ロアリールは、置換または非置換５〜１０員ヘテロアリールである。本明細書における化
合物の一部の実施形態では、各置換または非置換アルキレンは、置換または非置換Ｃ1〜
Ｃ20アルキレンであり、各置換または非置換ヘテロアルキレンは、置換または非置換２〜
２０員ヘテロアルキレンであり、各置換または非置換シクロアルキレンは、置換または非
置換Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキレンであり、各置換または非置換ヘテロシクロアルキレンは、
置換または非置換３〜８員ヘテロシクロアルキレンであり、各置換または非置換アリーレ
ンは、置換または非置換Ｃ6〜Ｃ10アリーレンであり、かつ／または各置換または非置換
ヘテロアリーレンは、置換または非置換５〜１０員ヘテロアリーレンである。
一部の実施形態では、各置換または非置換アルキルは、置換または非置換Ｃ1〜Ｃ8アル
キルであり、各置換または非置換ヘテロアルキルは、置換または非置換２〜８員ヘテロア
ルキルであり、各置換または非置換シクロアルキルは、置換または非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロ
アルキルであり、各置換または非置換ヘテロシクロアルキルは、置換または非置換３〜７
員ヘテロシクロアルキルであり、各置換または非置換アリールは、置換または非置換Ｃ6
〜Ｃ10アリールであり、かつ／または各置換または非置換ヘテロアリールは、置換または
非置換５〜９員ヘテロアリールである。一部の実施形態では、各置換または非置換アルキ
レンは、置換または非置換Ｃ1〜Ｃ8アルキレンであり、各置換または非置換ヘテロアルキ
レンは、置換または非置換２〜８員ヘテロアルキレンであり、各置換または非置換シクロ
アルキレンは、置換または非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキレンであり、各置換または非置換
ヘテロシクロアルキレンは、置換または非置換３〜７員ヘテロシクロアルキレンであり、
各置換または非置換アリーレンは、置換または非置換Ｃ6〜Ｃ10アリーレンであり、かつ
／または各置換または非置換ヘテロアリーレンは、置換または非置換５〜９員ヘテロアリ
ーレンである。
本明細書に示されている、価が満たされていない任意の原子は、原子価を満たすために
十分な数の水素原子を有すると仮定されている。アルキル、Ｒ3、またはＲ5などの任意の
変数記号が、本明細書中で提示されているいずれかの式または説明中に１回より多く出現
している場合、各出現におけるその変数記号の定義は、他のどの出現におけるその定義か
らも独立している。数値範囲は、本明細書で使用される場合、連続する数値全体を包含す
ることが意図されている。例えば、「０から４」または「０〜４」と表されている範囲は
、０、１、２、３、および４を包含する。多官能価部分が示されている場合、核への結合
点は、線またはハイフンによって示されている。例えば、−ＯＨは、酸素原子が分子の残
りの部分へのヒドロキシル基の結合点である部分を指す。
本明細書において示されている式はいずれも、構造式によって示されている構造を有す
る化合物、さらには特定の変形または形態を表すことが意図されている。例えば、本明細
書のいずれの式の化合物も不斉中心またはキラル中心を有することがあり、したがって種
々の立体異性体型で存在し得る。その一般式の化合物の、光学異性体、鏡像異性体、およ
びジアステレオ異性体を包含する立体異性体およびその混合物は全て、その式の範囲内に
あるものとみなす。さらに、ある種の構造は、幾何異性体（すなわち、シスおよびトラン
ス異性体）として、互変異性体として、またはアトロプ異性体として存在し得る。そのよ
うな異性体型およびその混合物は全て、本明細書においては、本発明の一部として企図さ
れる。したがって、本明細書において示されている式はいずれも、ラセミ化合物、１種も
しくは複数の鏡像異性体型、１種もしくは複数のジアステレオ異性体型、１種もしくは複
数の互変異性体型、またはアトロプ異性体型、およびその混合物を表すことが意図されて
いる。
ジアステレオ異性体混合物は、例えば、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶化
などによる当業者によく知られている方法によって、その物理的化学的相違に基づき、そ
の個々のジアステレオ異性体に分離することができる。適切な光学的に活性な化合物（例
えば、キラルアルコールまたはモッシャー酸塩化物などのキラル補助剤）との反応（また
はジアステレオ異性体塩の混合物の形成）によって、鏡像異性体の混合物をジアステレオ
異性体混合物に変換し、そのジアステレオ異性体を分離し、かつ個々のジアステレオ異性
体を対応する純粋な鏡像異性体に変換（例えば、加水分解または脱塩）することによって
、鏡像異性体を分離することができる。鏡像異性体は他にも、キラルＨＰＬＣカラムを使
用することによって分離することができる。本発明の化合物のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ
１９７４推奨によって定義されるとおり「Ｒ」もしくは「Ｓ」と、またはペプチド文献
に合わせて「Ｄ」もしくは「Ｌ」名称によって命名することができる。
本明細書で使用される場合、下付き文字と共に表示されている構造の一部を囲む囲みは
、その囲み内にある構造フラグメントが、下付き文字に従って繰り返されることを示して
いる。例えば、下部構造：
Figure 2021075548
 ［式中、ｘは０、１、または２である］は、そのフラグメントが構造に存在しないか、ま
たは−フラグメント−であるか、または−フラグメント−フラグメント−であることを示
している。例えば、式ＶＩＩ内では、以下の下部構造：
Figure 2021075548
 ［式中、ｐは０または１である］は、囲み内の−Ｘ−ＮＨ−基が構造に存在しないか（ｐ
が０である）、または１回存在する（ｐが１である）ことを意味している。
本発明の化合物は、薬学的に許容される塩を形成することができ、これも、本発明の範
囲内のものである。「薬学的に許容される塩」は、非毒性で、生理学的に許容可能で、そ
れを製剤化した医薬組成物と相容性で、かつ他の点でも、対象への処方および／または投
与に適している本明細書において記載されている化合物の遊離の酸または塩基の塩を指す
。本明細書における化合物に対する言及は、別段に示されていない限り前記化合物の薬学
的に許容される塩に対する言及を包含すると理解されたい。
化合物塩には、無機酸および／または有機酸で形成される酸塩、さらには、無機塩基お
よび／または有機塩基で形成される塩基塩が包含される。加えて、所与の化合物が、これ
らに限定されないが、ピリジンまたはイミダゾールなどの塩基性部分と、これらに限定さ
れないが、カルボン酸などの酸性部分との両方を含有する場合、当業者は、その化合物が
双性イオン（分子内塩）として存在し得ることが分かるであろう；そのような塩は、本明
細書で使用されるとおりの用語「塩」の範囲内に包含される。例えば、塩がその中で沈殿
するものなどの媒体中か、または水性媒体中で化合物を、当量などの量の適切な酸または
塩基と反応させ、続いて凍結乾燥させることによって、本発明の化合物の塩を調製するこ
とができる。
例示的な塩には、これらに限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩
、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコ
チン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン
酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、
ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩
、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩（「メシル酸塩」）、エタンスルホ
ン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち
、１，１’−メチレン−ビス（２−ヒドロキシ−３−ナフトアート））が包含される。薬
学的に許容される塩は、アセタートイオン、スクシナートイオン、または他の対イオンな
どの他の分子の包接を伴うことがある。対イオンは、親化合物上の電荷を安定させる任意
の有機または無機部分であってよい。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造中に１
個超の荷電原子を有することがある。多数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部であ
る例は、多数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容される塩は、１個もしく
は複数の荷電原子および／または１個もしくは複数の対イオンを有し得る。
例示的な酸付加塩には、酢酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸
塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、フマル
酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン
酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、サリ
チル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩（ト
シル酸塩としても知られている）などが包含される。
例示的な塩基性塩には、アンモニウム塩、ナトリウム塩、リチウム塩、およびカリウム
塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩
、ジクロヘキシルアミン、ｔ−ブチルアミンなどの有機塩基（例えば、有機アミン）を有
する塩、ならびにアルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩などが包含される。塩基性窒
素含有基を、低級アルキルハロゲン化物（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化メチル、エ
チル、およびブチル）、ジアルキル硫酸塩（例えば硫酸ジメチル、ジエチルおよびジブチ
ル）、長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化デシル、ラウリル、および
ステアリル）、アラルキルハロゲン化物（例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル）など
の薬剤で第四級化することができる。
医薬化合物から薬学的に有用な塩を形成するために適していると一般に考えられている
酸および塩基は、例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌらによって（Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ．（編）Ｈａ
ｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅ
ｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ．（２００２）Ｚｕｒｉｃｈ：Ｗｉｌｅｙ−Ｖ
ＣＨ；Ｓ．Ｂｅｒｇｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ（１９７７）６６（１）、１〜１９；Ｐ．Ｇｏｕｌｄ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ Ｊ． ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９８６）３３、２０１〜２１７
；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ（１９９６）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；および
Ｔｈｅ Ｏｒａｎｇｅ Ｂｏｏｋ（Ｆｏｏｄ ＆ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉ
ｏｎ、ＭＤ、ＦＤＡから入手可能）において検討されている。これらの開示は、参照によ
って本明細書に組み込まれる。
本明細書において記載されている化合物はいずれも、そのような化合物の任意の非溶媒
和形態または水和物、溶媒和物、もしくは多形およびその混合物も指すことが意図されて
いる（そのような形態が、明確に列挙されていなくても）。「溶媒和物」は、本発明の化
合物と１個または複数の溶媒分子との物理的会合を意味する。この物理的会合は、水素結
合を包含する、様々な程度のイオン結合および共有結合を伴う。特定の場合には、例えば
１個または複数の溶媒分子が結晶質固体の結晶格子中に組み込まれている場合には、溶媒
和物を単離することができる。「溶媒和物」は、溶液相および単離可能な溶媒和物の両方
を包含する。適切な溶媒和物には、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒と共に
形成されるものが包含される。一部の実施形態では、溶媒は水であり、溶媒和物は水和物
である。
本明細書に示されている式はいずれも、化合物の標識されていない形態、さらには同位
体標識された形態を表すことが意図されている。同位体標識された化合物は、本明細書に
示されている式によって示されるが、ただし、１個または複数の原子が、選択された原子
質量または質量数を有する原子によって置き換えられている構造を有する。本発明の化合
物に組み込むことができる同位体の例には、それぞれ2Ｈ、3Ｈ、11Ｃ、13Ｃ、14Ｃ、15Ｎ
、18Ｏ、17Ｏ、31Ｐ、32Ｐ、35Ｓ、18Ｆ、36Ｃｌ、および125Ｉなどの水素、炭素、窒素
、酸素、リン、フッ素、塩素、およびヨウ素の同位体が包含される。そのような同位体で
標識された化合物は、代謝研究（例えば、14Ｃを用いる）、反応速度研究（例えば、2Ｈ
または3Ｈを用いる）、薬物もしくは基質組織分布アッセイを包含する検出もしくはイメ
ージング技術［陽電子放射型断層撮影法（ＰＥＴ）もしくは単光子放射型コンピューター
断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）など］、または患者の放射性治療において有用である。特に、
18Ｆまたは11Ｃ標識された化合物は、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ研究に特に適し得る。さら
に、ジュウテリウム（すなわち、2Ｈ）などの比較的重い同位体で置換することで、より
高い代謝安定性、例えばｉｎ ｖｉｖｏ半減期の延長または投薬必要量の低減から生じる
、ある種の治療上の利点を得ることができる。一般的には、下記のスキームまたは実施例
および調製において開示されている手順を実施し、その際、容易に利用可能な同位体標識
された試薬を同位体標識されていない試薬の代わりに用いることによって、同位体標識さ
れた本発明の化合物およびそのプロドラッグを調製することができる。
メディトープＦｃ結合
メディトープを、ポリ−グリシン−セリンリンカーを介してＦｃドメインのＮ末端に融
合させることによって、メディトープ−Ｆｃコンストラクトを作成した。このメディトー
プ−Ｆｃコンストラクトのための遺伝子は、ＤＮＡ２．０によってコンストラクトされ（
３７残基リンカーを介してヒトＩｇＧガンマ重鎖３（受入番号ＡＡＷ６５９４７）残基２
２〜２４１に結合したｃＱＦＤメディトープ）、ｐＡｃＧＰ６７Ａベクター（ＢＤ Ｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にクローニングされ、Ｓｆ９細胞において産生された。タンパク質
を、プロテインＡおよびサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した。メディトー
プ−Ｆｃは、配列番号５７で示されるとおりのアミノ酸配列を有するポリペプチドを包含
した（１位にリーダー（「Ｇ」）を有して下記に示されており、メディトープは太字、リ
ンカーはイタリック体、Ｆｃ部分は通常文字）：
ＧＣＱＦＤＬＳＴＲＲＬＲＣＧＧＳＲＳＧＧＴＳＧＧＧＳＶＰＧＳＧＳＳＧＳＴＳＧＳＧ
ＫＳＳＥＧＳＧＱＡＳＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭ
ＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ
ＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩ
ＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦ
ＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶ
ＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号
５７）。
このコンストラクトを使用すると、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって
、セツキシマブＦａｂ、ＥＧＦＲｄＩＩＩおよびメディトープが複合体を形成することが
実証された。メディトープ−Ｆｃコンストラクトを、ＥＧＦＲｄＩＩＩおよびセツキシマ
ブＦａｂの化学量論的複合体に付与すると、Ｆａｂ−ＥＧＦＲｄＩＩＩ複合体よりもかな
り早く溶離される新たなピークが観察され、流体力学的質量の増加と一致した。この新た
なピークのＳＤＳ−ＰＡＧＥは、３つのタンパク質すべての存在を示した。これらの研究
によって、メディトープが抗原認識を著しく妨害することはないことがさらに確認された
。
メディトープ利用可能トラスツズマブの作成
メディトープ結合性部位を、ヒトｍＡｂフレームワーク上にグラフト化して、メディト
ープ利用可能抗体（ｍｅｄｉｔｏｐｅ−ｅｎａｂｌｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）（メデ
ィトープ利用可能抗体（ｍｅｄｉｔｏｐｅ ｅｎａｂｌｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ））
、具体的には、メディトープ利用可能抗体トラスツズマブを作成した。セツキシマブおよ
びトラスツズマブの配列をアラインさせ、配列同一性をトラスツズマブの原子モデルにマ
ッピングした（１Ｎ８Ｚ、Ｃｈｏら、Ｎａｔｕｒｅ ４２１、７５６〜７６０（２００３
）を参照されたい）。このマッピング、ならびにｃＱＦＤ−セツキシマブおよびトラスツ
ズマブ構造の重ね合わせに基づき、セツキシマブおよびトラスツズマブの間で異なり、そ
の側鎖が、メディトープと直接接触しているか、またはメディトープ結合に間接的に影響
を及ぼし得るかのいずれかである１３個の残基を同定した。これらの残基は：軽鎖中にＴ
ｈｒ４０、Ａｓｎ４１、Ａｓｐ８５（上記を参照されたい）、非結合リン酸基を配位させ
ており、かつ一部の例では、軽鎖中のＴｈｒ４０およびＡｓｎ４１を含有するループを安
定化させている軽鎖中のＡｒｇ３９、およびＡｒｇ４５、メディトープ中のＬｅｕ１０の
側鎖近くの浅い疎水性表面の形成に関係しているＶａｌ９およびＩｌｅ１０、ならびに軽
鎖中のＧｌｙ４２、Ｓｅｒ４３、Ｉｌｅ８３およびＡｌａ１００、さらに、重鎖中のＳｅ
ｒ４０およびＩｌｅ８９。
トラスツズマブ配列における同等の位置を変異させ（Ｋａｂａｔナンバリングに基づき
、軽鎖ではＴｈｒ４０、Ａｓｎ４１、Ａｓｐ８５、Ａｒｇ３９、Ａｒｇ４５、Ｉｌｅ９、
Ｌｅｕ１０、Ｇｌｙ４２、Ｓｅｒ４３、Ｉｌｅ８３およびＡｌａ１００に、ならびに重鎖
ではＳｅｒ４０およびＩｌｅ８９に）、タンパク質を生成および精製した。ＳＰＲを使用
すると、ｃＱＦＤメディトープが、セツキシマブと同様の親和性で、グラフト化されたト
ラスツズマブＦａｂに結合したことが示された（ＫD＝１．２μＭ）。メディトープ利用
可能トラスツズマブＦａｂが、市販供給元から単離されたＦａｂと同様の親和性で、可溶
性ＨＥＲ２に結合したことも観察され、変異が、抗原結合に対して有害作用を有さないこ
とが確認された。サイズ排除クロマトグラフィーによって、メディトープ利用可能トラス
ツズマブ、ｓＨＥＲ２、およびメディトープ−Ｆｃが同時溶離したことが実証された。
点変異がＦａｂの全体構造を著しく混乱させなかったことをさらに確認するために、ト
ラスツズマブメディトープ利用可能抗体のＦａｂを、ｃＱＦＤメディトープを伴って、お
よびそれを伴わずに結晶化させた。結晶化を補助するために、プロテインＡおよびプロテ
インＬの存在下で、十分な回折結晶を得た。アポ−メディトープ利用可能抗体トラスツズ
マブおよびメディトープ含有複合体の構造を、それぞれ１．９５および２．０Åで解析し
た。プロテインＡおよびプロテインＬに結合した親トラスツズマブＦａｂも結晶化させ、
２．０８Å解像度まで解析した。「アポ」−メディトープ利用可能抗体トラスツズマブ上
へのアポ−親トラスツズマブＦａｂまたはＨＥＲ２結合親トラスツズマブＦａｂ（２２）
のいずれかの重ね合わせは、全体構造におけるマイナーな変化のみを明らかにした（ＲＭ
ＳＤ＝４３３および４３１Ｃα原子でそれぞれ０．２２Åおよび０．５６Å）。「アポ」
−およびメディトープ−リガンド結合型メディトープ利用可能抗体トラスツズマブの重ね
合わせによって、セツキシマブで観察されたことと同様に、メディトープ占有が、オープ
ンな立体配座における重鎖ループ（残基３９〜４４）を安定化させ、一部で、僅かに高い
ＲＭＳＤの原因となったことが示された。より重要なことには、「アポ」−およびメディ
トープ−リガンド結合型メディトープ利用可能抗体における配列マッピングによって同定
された残基（Ｔｈｒ４０、Ａｓｎ４１およびＡｓｐ８５）は本質的に、セツキシマブにお
けるそれらのカウンターパートと同じ位置にあり、メディトープと共に同様の相互作用を
形成した。メディトープの重要な側鎖回転異性体も本質的に、ｃＱＦＤ−セツキシマブ構
造においてと同じであった。セツキシマブを伴う場合と同じく、ＣＤＲループの有意な改
変は観察されなかった。
これらのデータは、抗原結合に著しい影響を及ぼすことなく、ヒトＦａｂフレームワー
ク上へのメディトープ結合性部位のグラフト化の成功を実証している。メディトープ部位
のグラフト化の成功は、回折データを介して得られた当初セツキシマブ−メディトープモ
デルおよび相互作用の特異性をさらに実証している。データによって、結合活性を介して
メディトープ結合親和性を増強する実行可能性がさらに確認され、二価メディトープが特
異的であり、高い親和性で、ただし、コグネイトメディトープ利用可能抗体の存在下での
み、抗原を過剰発現している細胞に結合することが示されている。
多価、高親和性メディトープ
この実施例では、改善された親和性を有し、例えば、抗体事前標的イメージングおよび
／または薬物送達において有用な多価メディトープの作成を記載する。特異性および親和
性は、結合活性／多価によって一般に得られる（Ｍａｍｍｅｎ Ｍ、Ｃｈｏｉ Ｓ、＆
Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ Ｇ（１９９８） Ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏ
ｎｓ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏ
ｒ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ ｌｉｇａｎｄｓ
ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．編、Ｅｎｇ ３７：２
７５５）。
二価メディトープ−Ｆｃコンストラクトを、上記の実施例１においてのとおりに作製し
た；この化合物は、細胞−会合セツキシマブまたは細胞−会合トラスツズマブメディトー
プ利用可能抗体に対して、メディトープと比較すると、増強された見掛けの親和性を有す
ることが実証された。メディトープ−Ｆｃ（ＭＦＣ）は、セツキシマブで事前処理された
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞（ＥＧＦＲ−過剰発現乳癌細胞系）に結合し、大々的な洗浄手
順（本質的に二価メディトープの約１０6倍希釈）にも関わらず結合し続けたことが観察
された。メディトープ−Ｆｃコンストラクトは、未処理の細胞またはＭ４２５、メディト
ープ結合性部位を有さないマウス抗ＥＧＦＲ ｍＡｂで事前処理された細胞には結合しな
かった（Ｋａｍａｔ，Ｖ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ ７、７２６〜７３３
（２００８）；Ｒｏｄｅｃｋ Ｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４７（１４）：３６９２〜
３６９６（１９８７））。ＦＩＴＣ標識された単量体ｃＱＦＤメディトープは、セツキシ
マブ事前処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞に結合したが、そのシグナルは、ＦＡＣＳ
によって測定すると、１回の洗浄後に、バックグラウンドレベルに低下した（約１００倍
希釈、その結合親和性と一致）ことも実証された（図１１）。
メディトープ−Ｆｃとセツキシマブとの安定した特異的相互作用は、ＭＤＡ−ＭＢ−４
６８細胞の表面上でのその同時局在化によっても明らかに見られた（図１１）。これらの
ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究によって、二価メディトープを作成することによって得られる結合
活性は、セツキシマブの存在下でのみ、病的濃度のＥＧＦＲを発現する細胞へのその選択
的結合を促進したことが確認された。
メディトープ−Ｆｃでの研究を、メディトープ利用可能抗体トラスツズマブを使用して
実施した。メディトープ利用可能抗体トラスツズマブを、ＨＥＲ２−過剰発現ＳＫＢＲ３
乳癌細胞で試験した。ＦＡＣＳおよび蛍光顕微鏡法の両方によると、グラフト化されたト
ラスツズマブは、親トラスツズマブと同じレベルで細胞に結合した。ＦＡＣＳ分析によっ
て、本発明者らが作成したトラスツズマブメディトープ利用可能抗体および親トラスツズ
マブが、細胞表面ＨＥＲ２に対して、市販のトラスツズマブと同じ範囲の親和性を有した
ことが示された（図１２）。セツキシマブでの場合と同じく、顕微鏡法によって、メディ
トープ−ＦｃがＳＫＢＲ３細胞上のメディトープ利用可能抗体トラスツズマブと同時局在
化したことが実証された。同じ特異的結合が反復された。メディトープ利用可能抗体トラ
スツズマブおよび親対照は、グラフト化された残基で異なるだけであったので、特異性が
完全に、メディトープ利用可能化点変異に由来したことが確認された。
次の多価メディトープ−Ｆｃコンストラクトも作成した。
Figure 2021075548
配列番号２３７〜２３９は、追加の多価メディトープペプチドを開示している。
上記配列のそれぞれでは、適用可能な場合には、リーダーおよびテール配列は下線付き
であり、メディトープ配列は太字であり、リンカー配列はイタリック体であり、Ｆｃ部分
は、通常の文字で示されている。
四価メディトープ−Ｆｃは、細胞表面抗原に結合したメディトープ利用可能抗体を介し
て、高い親和性で結合することが示された。一部の実施形態では、上記四価および二価コ
ンストラクトのそれぞれ、または１種もしくは複数は、細胞表面抗原に結合したメディト
ープ利用可能抗体を介して、例えば、高い親和性で結合することが示されている。
メディトープ利用可能抗体および多価メディトープの投与後の抗原局在化および分布の評
価
この実施例では、様々な蛍光標識分子を使用して実施した超解析および共焦点顕微鏡研
究を記載する。これらの研究を、メディトープ利用可能抗体（ｍｅｄｉｔｏｐｅ−ｅｎａ
ｂｌｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）（メディトープ利用可能抗体（ｍｅｄｉｔｏｐｅ ｅ
ｎａｂｌｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ））および多価メディトープの投与後に、内部移行
およびクラスター化を包含する抗原局在化および分布を評価するために実施した。抗体お
よび標識メディトープの局在化も、投与後に評価した。
抗原特異的抗体を単独で、かつ多価メディトープと組み合わせて投与した後のこれらの
受容体抗原の分布を観察するために、光活性化可能なＨｅｒ２およびＥＧＦＲコンストラ
クトを作成した。蛍光プローブを抗体、例えば、メディトープ利用可能抗体、および／ま
たは多価メディトープにコンジュゲートして、蛍光を使用しての、それらの局在化の観察
を可能にした。超解析および共焦点顕微鏡法を行った。
Ａ． 材料および方法
メディトープ利用可能抗体によって標的化される細胞表面抗原の可視化を可能にするた
めに、光活性化可能なＨＥＲ２およびＥＧＦＲコンストラクトを作成した。メディトープ
の局在化を可視化するために、四価メディトープを包含する標識多価メディトープも作成
した。
ｐｅｒｂＢ２−ｐａＧＦＰ（またはＨＥＲ２−ｐａＧＦＰ）部位特異的突然変異誘発
ｐｅｒｂＢ２−ＥＧＦＰ ｐｃＤＮＡ３．１（＋）プラスミドを、Ａｄｇｅｎｅから購
入した（プラスミド＃３９３２１）。このプラスミドを、光活性化可能な（ｐａ）ＧＦＰ
をコードする領域を作成するようにＥＧＦＰコード領域を変異させる反復部位特異的突然
変異誘発（ＳＤＭ）のために使用した。様々なプライマー対を、プラスミドのＥＧＦＰコ
ード領域において５アミノ酸を改変する反復ＳＤＭのために使用した。
ＳＤＭの各ラウンドの後に、得られたＤＮＡを、ＢＰ５アルファコンピテント細胞（Ｂ
ＩＯＰＩＯＮＥＥＲ）に形質転換し、ＬＢ／アンピシリン寒天プレート上、３７℃で平板
培養した。単一コロニーを選択し、ＬＢ１０ｍＬ中で増幅させて、ＳＤＭのその後のラウ
ンドにおいて使用するためにプラスミドＤＮＡを精製した。ＳＤＭの最終ラウンドの後に
、プラスミドを、Ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ（ＣＯＨ）Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｇｅｎ
ｏｍｉｃｓ ＣｏｒｅにおいてＳａｎｇｅｒ配列決定に掛けた。
ａｄｄｇｅｎｅコンストラクトによってコードされたタンパク質のアミノ酸配列を、Ｈ
ＥＲ２−ｐａＧＦＰベクターによってコードされたものと比較するＣｌｕｓｔａｌアライ
ンメントを行った。次の変異が見出された：Ｌ１３３５Ｆ、Ｔ１３３６Ｓ、Ｖ１４３４Ａ
、Ｔ１４７４Ｈ、およびＡ１４７７Ｋ。
ｐｅｒｂＢ１−ｐａＧＦＰ（またはＥＧＦＲ−ｐａＧＦＰ）の作成
ｐＥＧＦＰ−Ｎ１ベクターにおけるＥＧＦＲ−ＧＦＰは、Ａｄｄｇｅｎｅ（Ｐｌａｓｍ
ｉｄ ＩＤ ３２７５１、Ｕｌｌｒｉｃｈ／Ｊｏｓｅｐｈ Ｓｃｈｅｌｅｓｓｉｎｇｅｒ
、Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｘｅｌ Ｕｌｌｒｉｃｈ、Ｍａｘ Ｐｌａｎｃｋ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）から得た。Ｎ１ベクターにお
けるＰＡＧＦＰを元々は、Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ｌｉｐｐｉｎｏｔｔ−Ｓｃｈｗａｒｔｚか
ら得たが；これはＡ２０６Ｋ変異を含有した。
ＥＧＦＲ−ＧＦＰ ＤＮＡを、コンストラクトをマッピングするプライマーを使用して
配列させた。ＧＦＰの代わりにＰＡＧＦＰインサートをクローニングするために、Ａｇｅ
ＩおよびＢｓｒＧＩ切断部位を使用した。簡単には、ベクターおよびインサートプラスミ
ドを、ＡｇｅＩおよびＢｓｒＧＩ制限酵素（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を３
７℃で３０分間使用して消化した。消化されたプラスミドを、２％アガロースゲル上で可
視化した。適切なサイズのバンドを切断し、ベクターおよびインサートＤＮＡを作成する
ために精製し、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ酵素（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を室
温で３０分間使用してライゲートした。ライゲーション反応生成物をコンピテントＢＰ５
α細菌細胞に形質転換し、カナマイシン耐性プレート上に播種した。プレートを３７℃で
終夜インキュベートした。コロニーを選び、カナマイシン補充されたＬＢブロス中で成長
させた。ＤＮＡを抽出し、ＥＧＦＲ−ＰＡＧＦＰコンストラクトを確認するために配列決
定に送った。
四価メディトープ−Ｆｃ（Ｍ４ＦＣ）および蛍光標識Ｍ４ＦＣの生成
配列番号５８のアミノ酸配列を有し、実施例３において記載した四価メディトープ−Ｆ
ｃ（Ｍ４ＦＣ）を生成し、この実施例の研究において使用した。Ｍ４ＦＣを生成するため
に使用したヌクレオチド配列を、配列番号２２３において提供する。
このＭＭ４Ｆｃをコードするベクターを生成するために、ＤＮＡをＤＮＡ２．０によっ
て合成した。コンストラクトをＢａｍＨＩおよびＢｇｌＩＩで切断し、ＢＤ Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ製の分泌型ｐＡｃＧＰ６７Ａベクターにクローニングした。
バキュロウイルスコンストラクション：
下記の製造者推奨プロトコルに従ってＢＤ ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ（商標）Ｔｒａｎｓ
ｆｅｃｔｉｏｎ ＫｉｔからのＢＤ ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ Ｂｒｉｇｈｔ ＤＮＡを使
用して、同時遺伝子導入を実施した。２百万のＳｆ９細胞（Ｇｉｂｃｏ）を６０ｍｍ組織
培養プレート上に、ＳＦＭ−９００ ＩＩ培地２ｍＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で播種
した。細胞がしっかりと結合した後に、ＳＦＭを除去し、遺伝子導入緩衝液Ａ１ｍＬを、
定速の過流下で添加した。その間に、ＢＤ ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄバキュロウイルスＤＮ
Ａ０．５μｇおよびｐＡｃＧＰ６７Ａ−Ｍ４ＦＣベクター２μｇを混合し、５分間放置し
、その後、遺伝子導入緩衝液Ｂ１ｍＬをＤＮＡ混合物に混合した。次いで、プレートを定
速で揺らしながら、溶液を昆虫細胞に１滴ずつ添加した。プレートを２７℃で４時間イン
キュベートし、その後、遺伝子導入緩衝液を除去し、ＳＦＭ５ｍＬに交換した。プレート
を、湿ったキムワイプを備えた１０ｃｍ組織培養皿内に入れ、すべての細胞が死ぬまで、
２７℃でインキュベートした。
バキュロウイルス増幅：
１５０ｍｍ組織培養プレートへの接種物Ｐ１ウイルス３００μＬを、ＳＦＭ−９００
ＩＩ培地４０ｍＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に２０×１０6のＳｆ９細胞と共に播種し
た。すべての細胞が７日目までに死滅したことが確認された。死滅しなければ、Ｐ１体積
を少なくとも３倍増加させた。ウイルスによって死滅した細胞は、プレートに付着したま
まであった；過成長から死滅した細胞は剥離した。Ｐ２を同様に増幅させたが、５〜６日
目までに細胞が死滅することが確認され；Ｐ３を同様に増幅させたが、４〜５日目までに
細胞が死滅することが確認された。こうして得たＰ３は、力価＝２×１０8ｐｆｕ／ｍＬ
であると推測された。
発現：
Ｈｉ−Ｆｉｖｅ細胞を、懸濁培養物（２×１０6細胞／ｍＬ）にＭ．Ｏ．Ｉ．＝３（例
えば、細胞１００ｍＬにＰ３ ３ｍＬ）で接種した。翌日に成長停止、および４日までに
完全な細胞死をもたらしたら、接種を有効と考えた。したがって、Ｐ３のＭ．Ｏ．Ｉを、
必要に応じて、最高１０に調節した。Ｍ．Ｏ．Ｉ＝１０を超える必要があれば、Ｐ４増幅
を考慮する。
一部の場合には、感染を促進するために、最終体積にする前に２時間、Ｐ３を、より高
い密度の細胞培養物で事前インキュベートした。過剰な細胞デブリの存在によるタンパク
質分解を防止するために、３日目に、または＞８０％細胞がトリパンブルーについて陽性
であったときに、培養上清を一般に採取した。
精製：
１０，０００ｇ以上で、少なくとも３０分間、４℃で、細胞デブリを回転させた。上清
を、０．２２μｍフィルターを通して濾過した。一部の場合には、ｐＨを、ｐＨストリッ
プを使用して評価し、酸性過ぎれば、ｐＨを１Ｍトリス、ｐＨ８．０または１０倍ＰＢＳ
、ｐＨ７．４で７〜８に調節した；ｐＨは一般に、中性に近かった。
プロテインＡまたはプロテインＧのいずれかを、精製のために使用した（一般に、８に
近いｐＨを有する上清では、プロテインＡを使用した）。カラムに、プロテインＡまたは
Ｇアガロースビーズ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を充填し、５カラム体積の１×ＰＢＳで平衡
化させた。濾過上清を、重力流によってカラムに通した。体積が大きい場合には（＞１Ｌ
）、カラムを２〜３カラム体積の１倍ＰＢＳで間欠的に洗浄した。カラムを１０カラム体
積の１×ＰＢＳで洗浄した。
０．７カラム体積の０．１Ｍグリシン、ｐＨ３．０を適用し、通過させた。タンパク質
を２カラム体積の０．１Ｍグリシン、ｐＨ３．０で溶離した。溶離するタンパク質が、即
時中和のための０．１溶離体積の１Ｍトリス、ｐＨ９．０、および沈殿を防止するための
０．１カラム体積の１０倍ＰＢＳのレザバーに直接滴下することが保障された。Ｏ．Ｄ．
を２８０ｎｍで測定して、収量を決定した（典型的な収量は＞３０ｍｇ／Ｌであった）。
Ｍ４ＦＣおよびＦｃのみ（分解生成物）を識別するために、タンパク質調製物を、分析
用サイズ排除クロマトグラフィーによって評価した。５μＭセツキシマブＩｇＧを、最終
体積８０μＬの６μＭ粗製Ｍ４ＦＣ（１倍ＰＢＳで調節）と混合し、室温で５分間放置し
、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １０／３００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に施
与した。所望の複合体の存在を、約１０ｍＬのその溶離によって確認した。
ゲル濾過サイズ排除クロマトグラフィーを精製の最終ラウンドで使用し、続いて、１倍
ＰＢＳへの透析によって緩衝液を交換した。Ｍ４ＦＣを約１５０μＭに濃縮した。
貯蔵：
Ｍ４ＦＣは一般に、４℃で最大１か月間安定していた。長期貯蔵では、タンパク質を少
量アリコットでフラッシュ凍結し、−８０℃で貯蔵した。解凍したＭ４ＦＣをリサイズし
て、凝集物を除去した。
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ標識：
典型的には、Ｍ４ＦＣタンパク質を、５０μＬ反応物において標識した。タンパク質濃
度を２ｍｇ／ｍＬに調節し、０．１体積の１Ｍ炭酸水素ナトリウムと混合した。２０μＬ
ピペットチップのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ粉末／フレークサイズをタンパク質混合物に直
接添加し、室温でインキュベートし、３０〜６０分間、添加した色素の量および所望の標
識程度に応じて、光を遮断した。蛍光顕微鏡法によると、タンパク質は一般に、３〜５色
素で標識された。未反応の色素を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０−Ｆｉｎｅ（ＧＥ Ｈｅａ
ｌｔｈｃａｒｅ）を充填されたＢｉｏ−Ｓｐｉｎカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）によって分離
した。５０％ＰＢＳ平衡化セファデックススラリーを充填し、３〜５分、１，１００ｇ回
転で、スイングバケット遠心器内の１５ｍＬチューブホルダー中でビーズを圧縮すること
によって、カラムをパッキングした。反応混合物をＳｅｐｈａｄｅｘカラムの上部に装填
し、標識タンパク質を２分、１，１００ｇ回転で溶離液中に収集した。標識タンパク質を
、１０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−０．５ｍＬ遠心濾過フィルターユ
ニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して新鮮なＰＢＳに緩衝液交換し、０．２２μｍ濾
過した。
ＥＧＦＲ−ＰＡＧＦＰの超解像イメージング
Ｈｅｌｌｍａｎｅｘ ＩＩおよび塩基性ピラニア腐食プロトコルを使用して、カバーガ
ラスを清浄にした。ＰＡＬＭ顕微鏡法では、細胞を、フィブロネクチン様改変タンパク質
（ＰＢＳ、ｐＨ７．４中の２５μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）でコーティングされた清浄なカ
バーガラス上で成長させた。ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＡＴＣＣから元々は得た）をフェノールレッド
非含有ダルベッコ改変イーグル培地、すなわち、２０％ウシ胎児血清、１ｍＭピルビン酸
ナトリウム、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００単位／ｍｌのストレプトマイシン、
および２．５ｍＭ Ｌ−グルタミンを補充された栄養素混合物Ｆ−１２（ＤＭＥＭ／Ｆ１
２）中で培養した。製造者の指示に従ってＦｕＧＥＮＥ６（Ｐｒｏｍｅｇａ）遺伝子導入
試薬を使用して、ＥＧＦＲ−ＰＡＧＦＰコンストラクト２ｕｇを、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３
細胞に一過性に遺伝子導入した。遺伝子導入の約２４時間後に、細胞をリン酸緩衝生理食
塩水（ＰＢＳ）ｐＨ＝７．４中、３７℃で迅速に洗浄し、４％（ｗ／ｖ）パラホルムアル
デヒドおよび０．２％（ｗ／ｖ）グルタルアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓ
ｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、３０分間、室温で、ＰＢＳ中で固定した。ＰＢＳ中の
フィルター滅菌された２５ｍＭグリシンで、クエンチを１０分間行い、細胞を最後に、Ｐ
ＢＳで３回洗浄した。カバーガラスを、イメージ収集中のドリフトを修正するための基準
マーカーとして役立つ１：４０００希釈されたＴｅｔｒａＳｐｅｃｋビーズ（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ）と共にＰＢＳ、５分間インキュベートした。カバーガラスを、ＰＢＳを補充
されたＡｔｔｏｆｌｕｏｒセルチャンバー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中での調製直後にイ
メージングした。
Ｈｅｒ２−ＰＡＧＦＰの超解像イメージング
細胞を清浄なコーティングされたカバーガラス上に播種した。Ｈｅｒ２−ｐａＧＦＰを
、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３（ＤＮＡ３ｕｇ、Ｆｕｇｉｎｅ ＨＤ遺伝子導入試薬、４８時間
）およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８（ＤＮＡ２ｕｇ、ＪｅｔＰｒｉｍｅ遺伝子導入試薬、２４
時間または４８時間）細胞に一過性に遺伝子導入した。細胞を１０ｎＭトラスツズマブと
共に１０分間インキュベートし、洗浄し、本明細書において上記したとおりに固定し、イ
メージングした。ＰＣ−ＰＡＬＭを使用して、Ｈｅｒ２の分布を画定した。
Ｂ． メディトープ利用可能抗ＨＥＲ２抗体および多価メディトープの投与後のＨＥＲ２
分布の評価
細胞を、定常状態で（抗体添加なし）、またはメディトープ利用可能化されていないト
ラスツズマブと共に１０分間インキュベートした後に評価した。Ｈｅｒ２の分布は、単一
指数分布に従っていると観察され、単一レベルの構成を意味した。定常状態では（抗体添
加なし）、遺伝子導入から２４時間目に、１０の異なる細胞からの１４エリアの評価に基
づき、遺伝子導入されたＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞は、１クラスター当たり平均５つのＨ
ＥＲ２タンパク質を提示した。密度は、２つの集団が同時存在したことを示し：観察され
たエリアの半分は、１クラスター当たり３〜５つのタンパク質を有し、観察されたエリア
の他の半分は、１クラスター当たり６〜９つのタンパク質を有した。
トラスツズマブと共に１０分間インキュベートした後に、Ｈｅｒ２−ｐａＧＦＰ遺伝子
導入されたＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞は、１クラスター当たり平均６つのタンパク質を提
示した。
別の研究では、効果を、メディトープ利用可能抗体と組み合わせて多価メディトープと
共にインキュベートした後に観察された効果と比較した。ＨＥＲ２−ｐａＧＦＰは、上記
のとおりにＭＤＡ−４６８細胞中で発現された。細胞を、配列番号９の重鎖、および８３
Ｅを有する配列番号６の配列である軽鎖を有する１０ｎＭメディトープ利用可能トラスツ
ズマブｖ２．０と共に、３７℃で１０分間インキュベートした。細胞を迅速に、事前加温
しておいた（３７℃）培地で１回洗浄し、次いで、新鮮な１０ｎＭ四価メディトープ（Ｍ
４Ｆｃ）と共に３７℃で、２つの異なる時点（３分および１０分）でインキュベートした
。
８３Ｅメディトープ利用可能抗体トラスツズマブの軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＩＬＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＲＴ
ＮＧＳＰＲＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ
ＥＤＥＡＤＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ
ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ
ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ
ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２４１）。
８３Ｅメディトープ利用可能抗体トラスツズマブのＶＬ配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＩＬＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＲＴ
ＮＧＳＰＲＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ
ＥＤＥＡＤＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ
（配列番号２４２）。
図１３において示されているとおり、１０ｎＭ Ｍ４Ｆｃ（四価メディトープ）と共に
３分間インキュベートした細胞は、１０ｎＭ Ｍ４Ｆｃと共に１０分間インキュベートし
た細胞での４１±８分子／μｍ2（ｎ＝８、細胞数＝４）と比較して、１９６±４１分子
／μｍ2（ｎ＝９、細胞数＝５）で、より高い密度のＨＥＲ２−ｐａＧＦＰを有すること
が観察された。加えて、１クラスター当たり、より多数のＨＥＲ２タンパク質およびより
大きなクラスター半径によって実証されるとおり、Ｍ４Ｆｃとの１０分間のインキュベー
ションと比較して、３分後には、より多いクラスター化が観察された。抗体の非メディト
ープ利用可能形態のみとのインキュベーションと比較して、メディトープ利用可能抗体と
の事前インキュベーション後の四価メディトープＦｃの添加は、３分までに受容体抗原の
急速な蓄積およびクラスター化をもたらした。抗体の非メディトープ利用可能形態のみと
のインキュベーションと比較して、１０分までに、このインキュベーションは、これらの
受容体の急速な内部移行をもたらした。これらのデータは、抗体のみとのインキュベーシ
ョンと比較して、多価メディトープの添加が、細胞−表面受容体抗原の分布および内部移
行に影響を及ぼしたことを実証している。
Ｃ． メディトープ利用可能抗体および多価メディトープを投与した後の抗体およびメデ
ィトープ−局在化の評価
単独、および多価メディトープを伴うメディトープ利用可能抗体と共にインキュベート
した後の細胞内取り込みプロセスに対する効果を共焦点顕微鏡法によって評価した。具体
的には、二価メディトープＦｃ（ＭＦＣ）および上記四価メディトープ−Ｆｃ（Ｍ４ＦＣ
）の効果を、蛍光顕微鏡法によって評価した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ標識セツキシマブ
を、これらのメディトープのそれぞれを伴わずに、またはそれらと組み合わせて、ＭＤＡ
−ＭＢ−４６８細胞と共に１５分間、１時間４０分、３時間３５分、および６時間３５分
、同時インキュベートした。インキュベーションの終了時に、細胞をホルムアルデヒドに
よって固定し、適切な場合には、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ標識された抗体を、特異的細胞
マーカーについて染色するために施与し、その後、カバーガラスを載せ、サンプルを分析
した。メディトープの結合は、メディトープ利用可能抗体（セツキシマブ）の存在に依存
しており；単独で施与されたメディトープは、細胞結合をもたらさなかった。
二価メディトープ−Ｆｃ（ＭＦＣ）は、ほぼ完全に同時インキュベーション期間を通じ
て、セツキシマブと同時局在化し；イメージによって、これが細胞内取り込みされたこと
が実証された。同時インキュベーションから４．５時間後に観察されたメディトープおよ
び抗体の多少の分離に併せて、局在化はより斑点状になった。早期エンドソーム（ＥＥＡ
１）、リソソーム（ＬＡＭＰ１およびＬＡＭＰ２）およびゴルジ（ＧＭ１３０）のマーカ
ーの染色によって、通常、細胞の最も濃縮したスポットでのＥＥＡ１およびセツキシマブ
／ＭＦＣの非常に僅かな重複を除いて、細胞内取り込み経路の古典的なコンパートメント
内には、セツキシマブ／ＭＦＣの同時局在化は存在しなかったことが示された。ＡＰＰＬ
１エンドソームは、成長因子受容体輸送およびシグナル伝達に関係し、ＥＥＡ１早期エン
ドソームとは別個であり、クラスリン由来細胞内取り込みベシクルおよびマクロピノソー
ムのサブセットに共通の早期細胞内取り込み中間体を表す。ＡＰＰＬ１の染色によって、
細胞内セツキシマブ／ＭＦＣがＡＰＰＬ１エンドソームの部分ではないことも示された。
ＭＦＣの存在は、斑点の形成を促進した。セツキシマブのみを伴うインキュベーション
は、いくつかの斑点形成をもたらしたが；しかしながら、ドットが、さらにより顕著であ
った。ドットをカウントするＩｍａｇｅＰｒｏソフトウェアを使用すると、セツキシマブ
のみに対して、セツキシマブ＋ＭＦＣと共にインキュベートされた細胞において観察され
るドットは、約２倍多かった。ドットはまた、これらの細胞において平均して２倍明るか
った（＋ＭＦＣ細胞では２００ルーメン／ピクセル2で７５ドットに対して、セツキシマ
ブのみの細胞では１００ルーメン／ピクセル2で３７ドット）。抗体とＭＦＣとの二価相
互作用に依存する斑点の出現も観察された。セツキシマブＦａｂ部分（一価）が代わりに
使用された場合（ＭＦＣと共にインキュベート）、４時間の同時インキュベーション後で
も、処理細胞は、細胞内斑点を含有せず、ＦａｂおよびＭＦＣと共にインキュベートされ
た細胞の両方の染色パターンは、ＩｇＧ＋ＭＦＣの早期同時インキュベーション時点によ
く似ていた。斑点形成はまた、セツキシマブおよびＭ４２５（別の抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ）
の両方をＭＤＡ−ＭＢ−４６８に施与した場合に見ることができたが、これは、斑点が受
容体架橋から生じることを示している。
同時インキュベートした場合、四価メディトープ−Ｆｃ（Ｍ４ＦＣ）はまた、セツキシ
マブとの重複位置を示した。しかしながら、細胞との終夜インキュベーションの後でも観
察された二価ＭＦＣとは異なり、Ｍ４ＦＣは、３．５時間超のインキュベーションの後に
、かろうじて検出可能となった。さらに、Ｍ４ＦＣの内部移行が、ＭＦＣよりも急速に起
こり、早くも２０分で観察された。
これらの研究は、蛍光コンジュゲートされた四価コンジュゲートされたメディトープの
蛍光シグナルの急速な消失を実証し、多価メディトープおよび薬剤のこの組合せが、リソ
ソームに急速に輸送され、タンパク分解されることを示唆した。
特異的な細胞内取り込み経路を遮断する薬物（クラスリン媒介性細胞内取り込み作用で
はＤｙｎａｓｏｒｅ、および微飲作用ではＥＩＰＡなど）を、細胞を処理し、メディトー
プ利用可能抗体、例えば、セツキシマブ、および多価メディトープ、例えば、メディトー
プ−Ｆｃの局在化に対する効果を観察するために使用する。
一例では、クラスリン媒介性細胞内取り込み作用を遮断することができるダイナミン阻
害薬の細胞透過性阻害薬であるＤｙｎａｓｏｒｅを使用した。細胞を、５０μＭ Ｄｙｎ
ａｓｏｒｅで１時間、事前処理し、その後、Ｍ４ＦＣおよびセツキシマブをさらに３時間
添加した。この処理の後に、セツキシマブおよびＭ４ＦＣの両方が、核周囲領域に蓄積さ
れるのが観察された。インキュベーション後に、細胞をＭ４２５（別の抗ＥＧＦＲ抗体）
で染色して、抗原の位置を評価した。Ｍ４２５染色によって区別されるとおり、ＥＧＦＲ
の局在化と対照させた場合に、多価メディトープおよびメディトープ利用可能抗体の細胞
内残留はより顕著であった。クラスリンコーティングされたベシクルを形成しないと（Ｄ
ｙｎａｓｏｒｅの存在下で）、より少ないセツキシマブが形質膜上に見られた。効果はま
た、ＥＧＦＲからのセツキシマブの分離を示し得る。Ｍ４ＦＣの形質膜会合はすでに、セ
ツキシマブよりも弱く、ダイナミン遮断は、より顕著な細胞内存在をもたらした。
合わせて、これらのデータは、標的細胞に薬物を効果的に放出するために、多価メディ
トープをイメージング剤、治療剤、および／または細胞傷害剤、例えば、細胞毒素などの
薬剤とコンジュゲートすることができることを示している。これらのデータは、多価メデ
ィトープをメディトープ利用可能抗体と組み合わせて使用すると、腫瘍特異的なそのよう
な抗原を包含する、ＣＥＡなどの長い寿命を有する受容体抗原、非内部移行性抗原、また
は低速内部移行性抗原の内部移行を誘導することができることを示している。
８３Ｅメディトープ利用可能抗体を使用しての結合研究
様々な技術を使用して、メディトープ利用可能抗体のＶＨ領域における残基８３を改変
する効果を試験した。下記で論述するとおり、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏモデリングの使用、さ
らには、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｅｘ ｖｉｖｏ結合研究は、メディトープ利用可能抗体
に対する、メディトープ結合親和性を増加させるメディトープ結合性ポケットのこの改変
の能力を実証した。
Ｉ８３Ｅ変異トラスツズマブメディトープ利用可能抗体の結晶構造のグラフ表示を、Ｖ
Ｌの８３位にイソロイシンを有するメディトープ利用可能抗体トラスツズマブ、バージョ
ン１の上に重ね合わせた。抗体をメディトープ利用可能にするために成されたアミノ酸置
換は、標的抗体のバックボーン、または抗体フラグメントの現在の形態を著しく改変する
ことはできなかった。
モデルは、８３位の残基をイソロイシンからグルタマートに変える効果を例示している
。グルタマート側鎖は、メディトープとの静電結合を形成すると考えられる。この相互作
用は大部分埋れているので、誘電性は、約４（タンパク質の内部）から８０（平均水誘電
性）の範囲と予測される。２つの電荷の間の力は、ｑ１×ｑ２×Ｒ／４×ｐｉ×ｅ×ｒ｜
Ｒ｜＾２であり、式中、Ｒは、２つの電荷の間のベクトルであり、ｑは、電荷であり、ｅ
は、誘電性である。Ａｒｇ９位での誘電性は未知であるが、これはおそらく、８０よりも
かなり低い。議論のために、これが４であれば、グルタマートとアルギニンとの間の相互
作用は、約２０強い。この関係は、下記で論述するとおり、メディトープ利用可能抗体抗
体のＩ８３Ｅバージョンとメディトープとの間の親和性の増加を説明し得る。
Ｉ８３Ｅ修飾を含有するメディトープ利用可能抗体へのメディトープの結合を、表面プ
ラスモン共鳴（ＳＰＲ）およびＩ８３Ｅ修飾を有するメディトープ利用可能抗体ペルツズ
マブを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ結合研究において次で試験した。ＳＰＲセンサーグラム
は、メディトープＣＱＦＤＬＳＴＲＲＬＫＣ（配列番号１）と固定化ペルツズマブＩ８３
Ｅ ＩｇＧとの結合相互作用を示した。濃度を、約１０ｕｍから１５６ｎＭまで２倍希釈
した。データは、実際に、Ｋｄをデータにフィットさせることができないほど高い、高い
Ｋｄを示す。観察された長期のオフレートのために、実験のさらなる最適化が必要とされ
るであろう。
次の研究では、Ｉ８３Ｅ修飾を有するメディトープ利用可能抗体ＵＣＨＴ１抗体の結合
を、この置換を有さないＵＣＨＴ１抗体と比較した。健康なドナーのＰＢＭＣから濃縮し
たＴ細胞をＲＰＭＩ完全培地中で終夜培養した。細胞を収集し、１ｕｇの親ＵＣＨＴ１（
メディトープ使用不可能）またはメディトープ利用可能ＵＣＨＴ１を細胞に４℃で１５分
間添加した。細胞をＰＢＳ＋２％ＢＳＡで洗浄し、次いで、ＡｌｅｘａＦ−６４７標識さ
れたメディトープで４℃で３０分間染色した。細胞を洗浄し、ＤＡＰＩ溶液中に再懸濁さ
せた。サンプルをＣＹＡＮ機器に流し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。
細胞を、ＤＡＰＩ-リンパ球でゲーティングした。結果は、２種の異なる細胞種における
明らかなシグナルシフトによって実証されるとおり、残基８３をグルタマートに変えるこ
とによる抗体におけるメディトープ結合性部位の改変が、抗原結合にマイナスの影響を及
ぼさないことを実証している。
メディトープ利用可能抗体Ｍ５Ａ抗ＣＥＡ抗体を使用する受容体細胞内取り込み作用
癌胎児性抗原（ＣＥＡ）は、結腸直腸癌などの癌のための腫瘍マーカーであり、莫大な
量の研究の焦点となっている。この実施例では、８３Ｅ改変を含有するメディトープ利用
可能抗体である抗ＣＥＡ抗体（Ｍ５Ａ）を結合親和性のために使用した。
ヒトＣＥＡ産生結腸腫瘍細胞系であるＬＳ１７４Ｔ細胞を、抗体結合を研究するために
使用した。ＬＳ１７４Ｔ細胞をトリプシン処理し、４０μｍフィルターで濾過して、デブ
リを除去し、次いで、２００ｇで５分間回転させた。細胞培地を除去し、細胞を０．３％
ＢＳＡ−ＰＢＳ１ｍｌで洗浄した。約１×１０6細胞を各処理で使用し、洗浄緩衝液１０
０μｌ中で再懸濁させ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７−コンジュゲートしたＭ５Ａ ｍ
Ａｂを、１００ｎＭの最終濃度まで添加し、室温で約５分間インキュベートした。次いで
、各処理を２つに分割し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８−Ｍ４ＦＣまたはＭＦＣのいず
れかを２５０ｎＭの最終濃度まで添加し、サンプルを約１５分間さらにインキュベートし
た。インキュベーションの終了時に、細胞を１回洗浄し、死細胞を排除するためにＳＹＴ
ＯＸブルーを補充された緩衝液１ｍｌ中に再懸濁させた。
細胞を、初めに前方側方散乱光（ｆｏｒｗａｒｄ ａｎｄ ｓｉｄｅ ｓｃａｔｔｅｒ
）で、次いで、ＳＹＴＯＸブルーでゲーティングした。
メディトープの結合は、ＳＰＲによる親和性測定と相関し、バインダーが緊密なほど、
メディトープと結合した細胞が多いことを示す。さらに、四価メディトープの比較的高い
価が、１３Ｍと１３Ｍ（Ｉ８３Ｅ）との間の親和性の差異をもたらすことが分かり得る。
これらの結果は、多価メディトープの使用が、メディトープについて比較的低い親和性を
有するメディトープ利用可能抗体抗体の結合特徴を改善し得ることを示している。
表面受容体架橋用途のためのヘテロ−二価ＭＰＬ：アフィボディ融合タンパク質
疾患を検出するための目的の他のタンパク質に加えて、これらだけに限定されないが、
ＨＥＲ２およびＩＧＦ１Ｒを包含する表面細胞受容体に結合するいくつかの修飾されたブ
ドウ球菌プロテインＡ変異体が存在する。これらは、脱免疫化されていて、組織イメージ
ング用途のために、より大きく、より高価なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）およびｍＡｂ
フラグメントの代わりとして開発中である小さなタンパク質である。この技術の非限定的
例を、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１０年４月３０日；３９８（２）：２３２〜４７；Ｐ
ｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１０年８月２４日；１０７（３
４）：１５０３９〜４４；Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０年９
月１日；１１（６）：５８１〜９；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２０１１
年４月；２４（４）：３８５〜９６；およびＥｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ Ｍｏｌ Ｉ
ｍａｇｉｎｇ．２０１３年２月；４０（３）：４３９〜４９において見出すことができる
。
これらのアフィボディタンパク質のいくつかを用いて、メディトープ利用可能抗体（メ
ディトープ利用可能抗体）を、ｍＡｂのみを使用してもアクセス不可能な幾何学的配置を
介して他の表面細胞受容体に連結するために、メディトーププロテインＬ（ＭＰＬ）の融
合タンパク質が、細胞表面タンパク質クラスター化を促進するためのツールとして開発さ
れている。次のアフィボディ融合タンパク質が生成された：
−ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２（抗ヒト上皮性成長因子受容体アフィボディ）
−ｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬ（抗インスリン成長因子受容体アフィボディ）
Ａ． 材料／方法
ＤＮＡコンストラクト
Ｈｉｓ６−ＳＭＴ−ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２コード配列を、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔから、ｐｅ
ｔ２８ｂ＋修飾ベクターにおいて、配列番号２３２（核酸）および配列番号２３３（アミ
ノ酸）において示されているとおりに配列させた。Ｈｉｓ６−ＳＭＴ３タグを除去するた
めのＵＬＰ１プロテアーゼ切断ステップの結果として、Ｎ末端Ｓ残基が、最終精製タンパ
ク質上に存在する。
ｚＩＧＦ１Ｒ-ＭＰＬ
ｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬを、ＤＮＡ２．０から、ＰＪ４１１ベクターにおいて無タグコン
ストラクトとして配列させた。核酸配列は、配列番号２３４において示されており、アミ
ノ酸配列は、配列番号２３５において示されている。
Ｂ． タンパク質発現／精製
Ｈｉｓ６−ＳＭＴ３−ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２
プラスミドを、ＢＬ２１（ＤＥ３）コンピテント細胞に形質転換し、Ｋａｎ ＬＢ寒天
プレート上に終夜、３７℃で播種した。単一コロニーを選択し、スターター培養物として
Ｋａｎを含むＬＢ培地５０ｍＬ中で一晩、大規模発現のために成長させた。２Ｌシェーカ
ーフラスコ内でＫａｎを含むＬＢ１Ｌに接種するために、終夜培養物１０ｍＬを使用した
。約０．６のＯＤ６００値が達成されるまで、フラスコを３７℃で振盪した。タンパク質
発現を１Ｍ ＩＰＴＧ２００μＬで誘導し、培養を４時間振盪し続けた。次いで、細胞を
遠心によって採取し、１倍ＰＢＳ緩衝液 ｐＨ７．４中に再懸濁させた。精製するまで、
細胞を−２０℃で凍結させた。
精製の前に、細胞を室温に解凍し、フレンチプレッシャーセルによって溶解させた。細
胞溶解産物を４℃、４５分間、４５，０００ｒｐｍでの遠心によって清澄化した。アフィ
ニティークロマトグラフィー精製の前に、細胞溶解産物を濾過した。Ｎｉ−ＮＴＡアフィ
ニティークロマトグラフィーを、洗浄および溶離のためにＰＢＳおよびイミダゾール勾配
を使用する当初の精製のために使用した。溶離されたタンパク質を、ＰＢＳに透析しなが
ら、ＵＬＰ１酵素を１０ｍＭ ＤＴＴと共に用いて４℃で終夜切断した。次いで、終夜透
析したタンパク質を逆Ｎｉ−ＮＴＡクロマトグラフィーによってさらに精製した。次いで
、カラム通過画分および洗浄液を濃縮し、最終精製のために、分取グレードＳ７５ゲル濾
過カラムに施与した。最終材料を濃縮し、小さな体積に分取し、凍結させ、−８０℃で貯
蔵した。
ｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬ
プラスミドを、ＢＬ２１（ＤＥ３）コンピテント細胞に形質転換し、Ｋａｎ ＬＢ寒天
プレート上に終夜、３７℃で播種した。単一コロニーを選択し、スターター培養物として
Ｋａｎを含むＬＢ培地５０ｍＬ中で一晩、大規模発現のために成長させた。２Ｌシェーカ
ーフラスコ内でＫａｎを含むＬＢ１Ｌに接種するために、終夜培養物１２ｍＬを使用した
。約０．６のＯＤ６００値が達成されるまで、フラスコを３７℃で振盪した。タンパク質
発現を１Ｍ ＩＰＴＧ２００μＬで誘導し、培養を４時間振盪し続けた。次いで、細胞を
遠心によって採取し、１倍ＰＢＳ緩衝液 ｐＨ７．４中に再懸濁させた。精製するまで、
細胞を−２０℃で凍結させた。
精製の前に、細胞を室温に解凍し、フレンチプレッシャーセルによって溶解させた。硫
酸アンモニウムを添加し（３０％ｍ／ｖ）、溶解産物を磁気撹拌棒によって４℃で１時間
撹拌した。タンパク質溶液を、３４００ｒｐｍで２０分間遠心した。上清およびペレット
を慎重に分離した。ペレットをＰＢＳ２０ｍＬに再懸濁させ、２．５時間後に１回緩衝液
を交換して一晩透析した。透析した材料を濃縮し、最終精製のために、分取グレードＳ７
５ゲル濾過カラムに施与した。最終材料を濃縮し、小さな体積に分取し、凍結させ、−８
０℃で貯蔵した。
Ｃ． 結合アッセイ：
メディトープ利用可能トラスツズマブ（融合タンパク質のＭＰＬ部分を介して）および
、融合タンパク質のｚＨＥＲ２アフィボディ部分を介してのＨＥＲ２の両方とのＭＰＬ−
ｚＨＥＲ２結合相互作用を、表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）によってモニターした。非常
に安定な相互作用の長いオフレートによって、結合親和性を計算するために、追加の最適
化が必要なことがある。
ＳＰＲを、泳動緩衝液としてＨＢＳ−ＥＰ＋を使用して２５℃で実施した。メディトー
プ利用可能抗体トラスツズマブまたはＨＥＲ２の細胞外部分のいずれかをＥＤＣ／ＮＨＳ
アミンカップリングを使用する一連のＳ ＣＭ５センサーチップ上に固定化した。分析物
タンパク質（ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２またはｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬ）の２倍希釈物を固定化表
面上に３０μＬ／分の流速で流した。
ＳＥＣ結合アッセイを、４℃で、分析用ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ゲル濾過カラムで、Ｐ
ＢＳ緩衝液中で実施した。初めに、種々の比のメディトープ利用可能抗体トラスツズマブ
ＩｇＧおよびｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬを、装填する前に、氷上で３０分間事前インキュベー
トした。ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２と固定化メディトープ利用可能トラスツズマブＩｇＧとの相
互作用を示すＳＰＲセンサグラムを生成した。ＭＰＬ−ｚＨＥＲ２と固定化ＨＥＲ２の結
合相互作用を示すＳＰＲセンサグラムも生成した。
メディトープ利用可能トラスツズマブとのｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬ結合相互作用
ｚＩＧＦ１Ｒ−ＭＰＬと固定化メディトープ利用可能トラスツズマブとの相互作用のＳ
ＰＲセンサグラムは、０．９３ｎＭの計算ＫDをもたらした。
メディトープ利用可能抗体／メディトープ−Ｆｃ架橋を使用する抗体内部移行の増加
Ａ． 抗体生成
配列番号２２４を含む軽鎖および配列番号２２５を含む重鎖を有するメディトープ利用
可能ゲムツズマブ抗体を、遺伝子導入されたＦＲＥＥＳＴＹＬＥ（商標）２９３−Ｆ細胞
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中で生成した。細胞をＦＲＥＥＳＴ
ＹＬＥ（商標）２９３Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃ
ａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中で培養した。遺伝子導入の日に、細胞を収集し、３００ｇで５
分間、室温で遠心して、１ｍｌ当たり１．１×１０6細胞の最終濃度を得た。
遺伝子導入のためのＤＮＡを、次のとおりに調製した：内毒素非含有発現プラスミド１
μｇを、Ｏｐｔｉｍｅｍ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に添加
して、遺伝子導入体積各１ｍｌにつき３３．５μｌの総体積にした。別に、２９３Ｆｅｃ
ｔｉｎ（商標）１．３３μｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を、遺
伝子導入体積各１ｍｌにつきＯｐｔｉｍｅｍ培地３２．１７μｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に室温で添加し、穏やかに混合し、室温で５分間インキュベ
ートした。次いで、ＤＮＡ混合物および２９３Ｆｅｃｔｉｎ（商標）混合物を合わせ、混
合し、室温で２０〜３０分間インキュベートした。
ＤＮＡ遺伝子導入混合物を、シェーカーフラスコ内のＦＲＥＥＳＴＹＬＥ（商標）２９
３−Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に、細胞１ｍｌ当たり遺
伝子導入混合物６７μｌの比で添加した。遺伝子導入された細胞を１２５ＲＰＭ、湿度８
５％、ＣＯ2８％、および３７℃で４〜６日間インキュベートした。次いで、細胞を収集
し、３０００ｇで１０分間遠心した。上清を遠心された細胞から収集し、０．２２ミクロ
ンフィルターを使用して滅菌した。フロースルーを滅菌２０ｍＭヒスチジン＋５％スクロ
ース緩衝液中、４℃、分光測光法（Ｎａｎｏｄｒｏｐ ２０００ｃ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）によって分析して５ｍｇ／ｍｌの最終
濃度で貯蔵した。インタクトな抗体の生成を、標準的なタンパク質ゲル上での可視化によ
って確認した。
Ｂ． 抗体標識
メディトープ利用可能ゲムツズマブ抗体を、製造者の指示に従ってｐＨｒｏｄｏ（商標
）Ｒｅｄ ＳＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、
ＭＡ）で標識した。ｐＨｒｏｄｏ（商標）色素は、ｐＨ感受性であり；その蛍光は、ｐＨ
が低下するにつれて上昇する。したがって、ｐＨｒｏｄｏ（商標）標識された抗体の蛍光
の定量化によって、抗体細胞内取り込み作用の比率が示される。簡単には、ｐＨｒｏｄｏ
（商標）を無水ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で調製し
て、色素の２〜５μＭの最終濃度を達成した。抗体２ｍｇをｐＨ９のリン酸緩衝生理食塩
水（ＰＢＳ）２ｍＬに溶かした。次いで、蛍光プローブを５０ｕｌ刻みで４回、抗体溶液
にゆっくり添加し、各添加で１５分間、振盪しながら室温でインキュベートした。メディ
トープ−Ｆｃタンパク質（配列番号２３６）を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８で標識
した。
Ｃ． 蛍光顕微鏡
ヒト前骨髄球性白血病細胞系であるＨＬ−６０細胞を、蛍光顕微鏡のために染色して、
ｐＨｒｏｄｏ（商標）標識抗体の受容体媒介性細胞内取り込み作用比率を決定した。細胞
を、Ｎｕｎｃ（登録商標）Ｌａｂ−Ｔｅｋ（登録商標）ＩＩチャンバー化８ウェルカバー
ガラスポリスチレンチャンバー（０．７ｃｍ2／ウェル）内で染色した。細胞を、１００
ｎＭ抗体および１００ｎＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（登録商標）標識メディト
ープ−Ｆｃか、または１００ｎＭ抗体のみ（対照）のいずれかを使用して３０分間、３７
℃で、血清非含有培地中で染色した。ＨＬ−６０細胞の核も、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２
（２μｇ／ｍＬ最終濃度で２０分間）で染色した。
適切な時点で、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で固定する前に、カバーガラス
を氷冷ＢＳＡ／ＰＢＳ中で洗浄した。その後、ウェルをＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ Ｇ（Ｓ
ｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）上に載せ
た。細胞を共焦点顕微鏡で、ｐＨｒｏｄｏ（商標）標識抗体、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４
８８標識されたメディトープ−Ｆｃ、およびＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２標識核のために
適切な波長設定を使用してイメージングした。Ｚセクショニングは、内部移行した物質の
可視化を可能にし、すべての定量的測定を同じ規定のセクション高さで行った。イメージ
ングされた細胞（ｎ＝９）の各染色内部および外部の総蛍光を、３０分の単一時点でＩｍ
ａｇｅＪ分析を使用して計算した。ゲムツズマブのみでの総染色は、６６０４．５７±４
６３．９５と計算された。メディトープ−Ｆｃに結合したゲムツズマブでの総染色は、１
１６１１．８３±１１４０．４４と計算され、ＨＬ−６０細胞が、メディトープ−Ｆｃに
結合した抗体を、抗体のみのほぼ２倍の比率で内部移行させたことを示している（ｐ＝２
．４４Ｅ−０８）。
メディトープ利用可能抗体／メディトープ−Ｆｃ架橋を使用しての抗体内部移行の増加
Ａ． 抗体生成
配列番号２２６を含む軽鎖および配列番号２２７を含む重鎖を有するメディトープ利用
可能ＭＯＲ２０８抗体を、上記のとおりの遺伝子導入されたＦＲＥＥＳＴＹＬＥ（商標）
２９３−Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）ヒト胎児由来腎臓２
９３（ＨＥＫ−２９３）において生成した。
Ｂ．抗体標識
ヒトリンパ芽球、ＣＣＬ−８６（商標）、ＡＴＣＣ（登録商標）に由来するヒトＢリン
パ球細胞系であるＲａｊｉ−Ｂ細胞を、蛍光顕微鏡法のために染色して、ｐＨｒｏｄｏ（
商標）標識ＣＤ−１９抗体の受容体媒介性細胞内取り込み作用比率を決定した。細胞を、
Ｎｕｎｃ（登録商標）Ｌａｂ−Ｔｅｋ（登録商標）ＩＩチャンバー化８ウェルカバーガラ
スポリスチレンチャンバー（０．７ｃｍ2／ウェル）内で染色した。細胞を、１００ｎＭ
抗体および１００ｎＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（登録商標）標識メディトープ
−Ｆｃか、または１００ｎＭ抗体のみ（対照）のいずれかを使用して３０分間、３７℃で
、血清非含有培地中で染色した。Ｒａｊｉ−Ｂ細胞の核も、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（
２μｇ／ｍＬ最終濃度で２０分間）で染色した。
細胞を共焦点顕微鏡で、ｐＨｒｏｄｏ（商標）標識された抗体、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏ
ｒ４８８標識されたメディトープ−Ｆｃ、およびＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２標識核のた
めに適切な波長設定を使用してイメージングした。Ｚセクショニングは、内部移行した物
質の可視化を可能にし、すべての定量的測定を同じ規定のセクション高さで行った。細胞
を可視化し、各可視化事象での各時点で定量化した。イメージングされた細胞の各染色内
部および外部の総蛍光を、３０分の単一時点でＩｍａｇｅＪ分析を使用して計算した。Ｍ
ＯＲ−２０８のみでの総染色は、１７９７．７１±１９４．９７（ｎ＝８）と計算された
。メディトープ−Ｆｃに結合したＭＯＲ−２０８での総染色は、４４３０．４３±６３２
．５９（ｎ＝８）と計算された。結果は、Ｒａｊｉ−Ｂ細胞が、メディトープ−Ｆｃに結
合したＭＯＲ２０８抗体を、抗体のみの比率のほぼ２倍の比率で内部移行させることを実
証している（ｐ＝３．９４Ｅ−０３）。
多価メディトープ細胞標識
Ａ． 多価メディトープ生成
二価メディトープ（ＢＶＭ）および三価メディトープ（ＴＶＭ）を、Ｎ末端Ｈｉｓ６−
ＳＭＴ３−ＴＶＭタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を有するｐＥＴ２８ｂ＋プラスミドにおい
てコドン最適化遺伝子から発現させた。ＢＶＭは、配列番号２２８の核酸配列および配列
番号２２９のペプチド配列を有した。ＴＶＭは、配列番号２３０の核酸配列および配列番
号２３１のペプチド配列を有した。
タンパク質発現のために、プラスミドを、ＢＬ２１（ＤＥ３）コンピテント細胞に形質
転換した。テリフィックブロス（ＴＢ）およびカナマイシン（Ｋａｎ）中の終夜培養物を
、ＴＢ／Ｋａｎの１Ｌ培養物に接種するために使用し、これは、Ｏ．Ｄ．６００＝０．５
〜０．６であり、そこまで成長させた。培養物を５００μＭの最終濃度のＩＰＴＧで誘導
し、シェーカー上、１８℃で終夜、または３７℃で４時間成長させた。細胞を、４０００
ｒｐｍでの遠心によって４℃で３０分間採取した。培養上清を廃棄し、細胞を３００ｍＭ
ＮａＣｌおよび１０ｍＭイミダゾールを含有するＰＢＳ中に再懸濁させ、精製するまで
−２０℃で凍結させた。
細胞を、ＤＮＡＳＥ１およびＰＭＳＦを用いてフレンチプレッシャーセルによって溶解
させた。溶解産物を４５，０００ｒｐｍでの遠心によって４℃で３０〜４５分間清澄化し
た。タンパク質を、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）（
Ｎｉ−ＮＴＡ Ｑｉａｇｅｎ）によって精製した。次いで、Ｈｉｓ６−ＳＭＴタグをＨｉ
ｓ６−ＵＬＰ１によって切断し、続いて、逆ＩＭＡＣによって分離した。逆カラム通過画
分および洗浄液を濃縮し、ＨｉＬｏａｄ分取７５ ２６／６００ ＰＧゲル濾過カラム（
ＧＥ）に施与した。両方のタンパク質での代表的なクロマトグラムが図１６Ａ（ＴＶＭ）
および図１６Ｂ（ＢＶＭ）において示されている。２８０ｎｍ、２３０ｎｍ、および２６
０ｎｍでの吸光度測定が示されている。さらなる分析のために、画分２１〜２３をＴＶＭ
のために選択し、画分２６〜２９をＢＶＭのために選択した。
選択した画分のＳＰＲ分析は、ＢＶＭおよびＴＶＭがメディトープ利用可能抗体トラス
ツズマブ抗体に結合したことを示した（それぞれ図１７Ａおよび図１７Ｂ）。ＴＶＭ生成
物を、ＨＰＬＣによって確認した（図１８Ａ）。図１８Ａの４．２分での主要なピークは
、正確な単量体ＴＶＭ分子量であり、５．３分でのピークは、二量体である。主なピーク
を含有する画分を、質量分析によって分析した（図１８Ｂ）。
Ｂ． 顕微鏡法
ＴＶＭを、製造者プロトコル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、
Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）に従って、ＮＨＳ−Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識した
（０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液ｐＨ８．０、室温で１時間）。実施例２において記
載したとおり、標識されたＴＶＭを、ＳＫＢＲ３細胞、ＨＴＢ−３０（商標）ＡＴＣＣ（
登録商標）に、メディトープ利用可能抗体トラスツズマブまたは親トラスツズマブと共に
添加した。
メディトープ利用可能抗体トラスツズマブで標識された細胞は、正常な形態を示し、プ
レートに結合したままであった。対照的に、メディトープ利用可能抗体トラスツズマブお
よび三価メディトープで標識された細胞は、丸まった形態を示し、多くの場合に、カバー
ガラスの表面から分離した。イメージングされ得たメディトープ利用可能抗体トラスツズ
マブおよび三価メディトープで標識された細胞は、細胞の周囲に沿って、ＴＶＭ−ａｌｅ
ｘａｆｌｕｏｒ６４７に対応する蛍光を示した。形態のこの変化は、親トラスツズマブお
よび三価メディトープでは観察されず、形態の変化および細胞の分離が、多価メディトー
プとメディトープ利用可能抗体との併用処理によるものであったことを示した。
メディトープ−薬物コンジュゲートの細胞毒性作用の評価
メディトープ利用可能抗体、および細胞毒素にコンジュゲートした多価メディトープと
共にインキュベートした後の細胞に対する細胞毒性作用を評価する。二価メディトープＦ
ｃ（ＭＦＣ）および上記の四価メディトープ−Ｆｃ（Ｍ４ＦＣ）をオーリスタチンにコン
ジュゲートする。
ＨＬ−６０細胞を、９６ウェル組織培養プレートに１０００細胞／ウェルの密度で播種
する。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で終夜インキュベートする。翌日、細胞を次の条件下で
３連でインキュベートする：１）非染色対照；２）メディトープ利用可能ゲムツズマブ抗
体のみ；３）未標識ＭＦＣを伴うメディトープ利用可能ゲムツズマブ抗体；および４）オ
ーリスタチンにカップリングしたＭＦＣを伴うメディトープ利用可能ゲムツズマブ抗体。
細胞を６日間培養する。インキュベート期間の終了時に、Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅまたは
Ｐｒｅｓｔｏ Ｂｌｕｅ１２μｌを各ウェルに添加し、４時間インキュベートする。プレ
ートを、５４０励起および５９０発光波長を用いるＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ４
プレートリーダーを使用して読み取る。
次いで、細胞生存パーセンテージを各ウェルにおいて計算し、データを、シグモイド用
量応答の非線形フィッティングを使用して分析する。ＩＣ５０値を、Ｐｒｉｓｍグラフ作
成ソフトウェアを使用して計算し、オーリスタチンにカップリングしたＭＦＣを伴うメデ
ィトープ利用可能ゲムツズマブ抗体の細胞毒性作用を、実験において使用した対照と比較
した。
データは、オーリスタチンにカップリングしたＭＦＣを伴うメディトープ利用可能化ゲ
ムツズマブ抗体がＨＬ−６０細胞において細胞毒性を誘導することを示している。したが
って、結果は、オーリスタチン細胞毒素にカップリングしたＭＦＣを伴うメディトープ利
用可能ゲムツズマブ抗体が細胞傷害薬をＨＬ−６０細胞に選択的に送達し得ることを実証
している。
多価メディトープ価の試験
多価メディトープ結合を、様々なリガンド密度に対して試験して、価を決定した。
メディトープ利用可能トラスツズマブバージョン２（配列番号６の軽鎖および配列番号
９の重鎖）をＣＭ５チップ上に、アミンカップリング化学（ＥＤＣ／ＮＨＳ）を使用して
様々な密度で固定した。低密度チャネルは約１５０ＲＵであり（図１９Ａ）、中密度チャ
ネルは約７５０ＲＵ（図１９Ｂ）であり、高密度チャネルは約１５００ＲＵであった（図
１９Ｃ）。
三価メディトープ（ＴＶＭ）（配列番号２３１）濃度を５倍希釈列として、ＨＢＳ−Ｅ
Ｐ＋中で１μＭから２．６ｐＭまで調製した。サンプルを３０μＬ／分、３７℃で、４つ
のチャネルすべての上に流した。センサグラムは、チャネル１上にあり、２つの「０」濃
度緩衝液ブランクを有するブランク固定を二重に参照した（ｄｏｕｂｌｅ ｒｅｆｅｒｅ
ｎｃｅｄ）。
対照メディトープペプチドを実験の開始時および終了時に流して、実験中の表面活性の
低下を評価した。実験が完了した後に、最も密なリガンド表面で、シグナルの５％未満の
低下が観察された。実験のための再生緩衝液は、２〜１０秒の変動時間での１０ｍＭグリ
シンｐＨ３．０のパルスであり、泳動緩衝液ＨＢＳ−ＥＰ＋の３０秒パルスが続いた。
１：１フィットモデルを用いるＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、
データフィットを行った。リガンドの表面密度が上昇するにつれて、１：１結合モデルに
対するデータフィット品質は低下し、オフレートは、曲率の欠如によって、十分に決定さ
れなかった。データを表５において示す。
Figure 2021075548
データは、メディトープ利用可能抗体の密度が上昇するにつれて、１個よりも多いメデ
ィトープ利用可能抗体に結合する個々の多価メディトープの数が増加することを示してい
る。密度が上昇するにつれて、チップ上の個々のメディトープ利用可能抗体間の距離が縮
まる。したがって、２個以上の抗体が、単一多価メディトープのリーチ内にあるチャンス
が増加し、より多い多価結合が予測される。
この効果が観察された。データは、リガンド密度が上昇するにつれて、１：１フィット
からの偏差の増加を示したが、これは、結合活性を示す（図２０）。低密度表面で計算さ
れた解離定数は、３８ｎＭであると予め計算された一価メディトープに匹敵するが、反応
速度定数は異なる。３７℃での一価メディトープの半減期は、４．７分であり、最も高密
度に固定化された表面上の三価メディトープで計算された半減期は、１４５分であり；＞
３０倍の改善である。より高い密度でのデータは、価の増加およびより長期のオフレート
を示す。データは、多価メディトープがリガンド密度の増加に対応して多価結合し得るこ
とを示す。

Claims (29)

  1. 細胞表面抗原の分布を改変するための方法であって、
    細胞を、細胞表面抗原に結合し得る複数のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントに接触させるステップと；
    複数のメディトープ利用可能抗体の第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第１のメディト
    ープと接触させるステップと；
    複数のメディトープ利用可能抗体の第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第２のメディト
    ープと接触させて、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生じさせ、それ
    によって、第１および第２のメディトープ利用可能抗体と多価メディトープとの架橋が、
    細胞表面抗原の分布を改変するステップと
    を含む方法。
  2. 細胞表面抗原の同時局在化を増加させるための方法であって、
    細胞を、細胞表面抗原に結合し得る複数のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントに接触させるステップと；
    複数のメディトープ利用可能抗体の第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第１のメディト
    ープと接触させるステップと；
    複数のメディトープ利用可能抗体の第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第２のメディト
    ープと接触させて、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生じさせ、それ
    によって、第１および第２のメディトープ利用可能抗体と多価メディトープとの架橋が、
    細胞表面抗原または受容体の同時局在化を増加させるステップと
    を含む方法。
  3. メディトープ利用可能抗体の細胞内部移行を増加させるための方法であって、
    細胞表面抗原を発現する細胞を、複数のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合
    性フラグメントと接触させ、それによって、前記複数のメディトープ利用可能抗体または
    その抗原結合性フラグメントが、細胞表面抗原に結合するステップと；
    複数のメディトープ利用可能抗体の第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第１のメディト
    ープと接触させるステップと；
    複数のメディトープ利用可能抗体の第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第２のメディト
    ープと接触させて、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生じさせ、それ
    によって、第１および第２のメディトープ利用可能抗体と多価メディトープとの架橋が、
    細胞表面抗原に結合する第１および第２のメディトープ利用可能抗体の細胞内部移行を増
    加させるステップと
    を含む方法。
  4. 細胞表面抗原の細胞内部移行を増加させるための方法であって、
    第１の細胞表面抗原を、細胞表面抗原に結合する第１のメディトープ利用可能抗体また
    はその抗原結合性フラグメントと接触させるステップと；
    第２の細胞表面抗原を、第２の細胞表面抗原に結合する第２のメディトープ利用可能抗
    体またはその抗原結合性フラグメントと接触させるステップと；
    複数のメディトープ利用可能抗体の第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第１のメディト
    ープと接触させるステップと；
    複数のメディトープ利用可能抗体の第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結
    合性フラグメントのメディトープ結合性部位を、多価メディトープからの第２のメディト
    ープと接触させ、それによって、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生
    じさせ、第１および第２の細胞表面抗原の細胞内部移行を増加させるステップと
    を含む方法。
  5. 抗体治療の有効性を増加させる方法であって、
    対象に、有効量の、細胞表面抗原に特異的に結合するメディトープ利用可能抗体または
    その抗原結合性フラグメント、および有効量の多価メディトープを投与するステップと；
    第１の細胞表面抗原に結合した第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性
    フラグメントに結合した多価メディトープの第１のメディトープ；および第２の細胞表面
    抗原に結合した第２のメディトープ利用可能抗体またはそのフラグメントに結合した多価
    メディトープの第２のメディトープの複合体を形成して、第１および第２のメディトープ
    利用可能抗体の架橋を生じさせ、それによって、第１および第２の抗体の架橋が、抗体治
    療の有効性を増加させるステップと
    を含む方法。
  6. 対象において所望の治療効果を達成するために必要とされる抗体治療の投薬量を減少さ
    せる方法であって、
    対象に、有効量のメディトープ利用可能抗体またはそのフラグメント、および有効量の
    多価メディトープを投与するステップと；
    多価メディトープの第１のメディトープを、第１のメディトープ利用可能抗体またはそ
    のフラグメントに接触させるステップと；
    多価メディトープの第２のメディトープを、第２のメディトープ利用可能抗体またはそ
    のフラグメントに接触させて、第１および第２のメディトープ利用可能抗体の架橋を生じ
    させ、それによって、第１および第２の抗体の架橋が、対象において所望の治療効果を達
    成するために必要とされる抗体治療の投薬量を減少させるステップと
    を含む方法。
  7. 第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントおよび第２のメデ
    ィトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを架橋させる方法であって、
    細胞を、第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントと接触さ
    せるステップであって、前記第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラ
    グメントが第１のメディトープ結合性部位を含むステップと；
    前記第１のメディトープ結合性部位を、多価メディトープと接触させるステップであっ
    て、前記多価メディトープが、第２のメディトープに結合する第１のメディトープを含む
    ステップと；
    前記多価メディトープを、第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラ
    グメントと接触させるステップであって、前記第２のメディトープ利用可能抗体またはそ
    の抗原結合性フラグメントが、第２のメディトープ結合性部位を含むステップと；
    前記第１のメディトープ結合性部位を前記第１のメディトープに結合させ、前記第２の
    メディトープ結合性部位を前記第２のメディトープに結合させ、前記第１のメディトープ
    利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを前記細胞に結合させ、かつ前記第２の
    メディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを前記細胞に結合させ、そ
    れによって、前記第１のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントお
    よび前記第２のメディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントを架橋させ
    るステップと
    を含む方法。
  8. 細胞表面抗原が、受容体媒介性細胞内取り込み作用が可能な受容体である、先行請求項
    のいずれか一項に記載の方法。
  9. 多価メディトープが、メディトープに連結した免疫グロブリンＦｃ領域またはその部分
    を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  10. 多価メディトープのメディトープが、リンカーにカップリングされている、先行請求項
    のいずれか一項に記載の方法。
  11. リンカーが、配列番号１９９、２００、２０１、２０２、２０３、もしくは２０４の配
    列、またはその変異体を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  12. 多価メディトープが、治療剤または診断剤にカップリングされている、先行請求項のい
    ずれか一項に記載の方法。
  13. 治療剤が、化学療法剤、治療用抗体、毒素、放射性同位体、酵素、キレート剤、ホウ素
    化合物、光活性剤、色素、金属、金属合金、およびナノ粒子からなる群から選択されるか
    ；または
    診断剤が、蛍光物質、発光物質、色素、および放射性同位体からなる群から選択される
    イメージング剤である、請求項１２に記載の方法。
  14. 第１のメディトープ利用可能抗体が、第２のメディトープ利用可能抗体とは異なるエピ
    トープに結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  15. メディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントが、細胞またはその組織
    の疾患または状態によって発現される抗原に特異的に結合する、先行請求項のいずれかに
    記載の方法。
  16. 疾患または状態が癌である、請求項１５に記載の方法。
  17. メディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントおよびメディトープを逐
    次的に投与する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  18. メディトープ利用可能抗体またはその抗原結合性フラグメントの少なくとも１つが、ア
    バゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アレムツズマブ、アルツ
    モマブ、ペンテト酸アルツモマブ、アナツモマブ、アナツモマブマフェナトクス、アルシ
    ツモマブ、アトリズマブ、バシリキシマブ、ベクツモマブ、エクツモマブ、ベリムマブ、
    ベンラリズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、カプロ
    マブペンデチド、カツマキソマブ、セルトリズマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ダ
    クリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エタラシズ
    マブ、エルツマキソマブ、ファノレソマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブ、ギレンツ
    キシマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ
    、ラベツズマブ、メポリズマブ、ムロモナブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナタリズマブ、ネシ
    ツムマブ、ニモツズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、オレゴボマブ、パリビズマブ
    、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、サツモマブ、スレソマブ、イブリツモマ
    ブ、イブリツモマブチウキセタン、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、−ウ
    ステキヌマブ、ビシリズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ブロダルマブ、アンルキンズ
    マブ、バピヌズマブ、ダロツズマブ、デムシズマブ、ガニツマブ、イノツズマブ、マブリ
    リムマブ、モキセツモマブパスドトックス、リロツムマブ、シファリムマブ、タネズマブ
    、トラロキヌマブ、トレメリムマブ、およびウレルマブからなる群から選択される抗体ま
    たはその抗原結合性フラグメントと抗原結合について競合するか、またはそれと同じエピ
    トープに結合するか；または
    メディトープ利用可能抗体またはフラグメントが、ＣＡ−１２５、糖タンパク質（ＧＰ
    ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体、ＴＮＦ−アルファ、ＣＤ５２、ＴＡＧ−７２、癌胎児性抗原
    （ＣＥＡ）、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）、ＩＬ−２、インターロイキン
    −２受容体ａ−鎖（ＣＤ２５）、ＣＤ２２、Ｂ細胞活性化因子、インターロイキン−５受
    容体（ＣＤ１２５）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＣＤ３０、ＩＬ−１ベータ、前立腺特異
    的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ３、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、ＭＵＣ１、ヒ
    トインターロイキン−２受容体、Ｔａｃ、ＲＡＮＫリガンド、Ｃ５または他の補体タンパ
    ク質、ＣＤ１１ａ、アルファ−ｖベータ−３インテグリン、ＨＥＲ２、ｎｅｕ、ＣＤ１５
    、ＣＤ２０、インターフェロンガンマ、ＣＤ３３、ＣＡ−ＩＸ、ＣＴＬＡ−４、ＩＬ−５
    、ＣＤ３イプシロン、ＣＡＭ、アルファ−４−インテグリン、ＩｇＥ、ＩｇＥ Ｆｃ領域
    、ＲＳＶ抗原、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）のＦ（または融合）タンパク質、ＮＣＡ−
    ９０（顆粒球細胞抗原）、ＩＬ−６、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−
    １７、ＣＴＡＡ１６．８８、ベータ−アミロイド、ＩＧＦ−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、
    デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体のアル
    ファサブユニット、肝細胞成長因子、ＩＦＮ−アルファ、神経成長因子、ＩＬ−１３、Ｃ
    Ｄ３２６、ＣＤ１９、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ４７、およびＣＤ１３７からなる群から選択され
    る抗原に特異的に結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  19. 多価メディトープが、下式を有するペプチドを含む、先行請求項のいずれかに記載の方
    法：
    Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２（式
    ＶＩ）
    ［式中、
    Ｘ１は、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、β−アラニン、ジアミノプロピオン酸、β−アジドアラニン
    、またはヌルであり；
    Ｘ２は、Ｇｌｎまたはヌルであり；
    Ｘ３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、β，β’−ジフェニル−Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、２−ブロ
    モ−Ｌ−フェニルアラニン、３−ブロモ−Ｌフェニルアラニン、４−ブロモ−Ｌ−フェニ
    ルアラニン、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、修飾Ｐｈｅ、水和性カルボニル含有残基、またはボロン酸
    含有残基であり；
    Ｘ４は、ＡｓｐまたはＡｓｎであり；
    Ｘ５は、Ｌｅｕ；β，β’−ジフェニル−Ａｌａ；Ｐｈｅ；フェニルアラニン、トリプ
    トファン、もしくはチロシンの非天然類似体；水和性カルボニル含有残基；またはボロン
    酸含有残基であり；
    Ｘ６は、ＳｅｒまたはＣｙｓであり；
    Ｘ７は、Ｔｈｒ、ＳｅｒまたはＣｙｓであり；
    Ｘ８は、Ａｒｇ、修飾Ａｒｇ、または水和性カルボニル含有残基もしくはボロン酸含有
    残基であり；
    Ｘ９は、ＡｒｇまたはＡｌａであり；
    Ｘ１０は、Ｌｅｕ；Ｇｌｎ；Ｇｌｕ；β，β’−ジフェニル−Ａｌａ；Ｐｈｅ；フェニ
    ルアラニン、トリプトファン、もしくはチロシンの非天然類似体；水和性カルボニル含有
    残基；またはボロン酸含有残基であり；
    Ｘ１１は、Ｌｙｓであり；
    Ｘ１２は、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、７−アミノヘプタン酸、β−アラニン、ジアミノプロピオ
    ン酸、プロパルギルグリシン、イソアスパラギン酸、またはヌルである］。
  20. 多価メディトープが、配列番号１、２、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
    ２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３４、３５、３
    ６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９
    、５０、５１、５２、５３、５４、５５、１８６、１８７、１８８、１８９、もしくは２
    ０７のアミノ酸配列、またはそれに由来する環式ペプチドを含む、先行請求項のいずれか
    に記載の方法。
  21. 第１のリンカーにカップリングされている第１のメディトープおよび第２のメディトー
    プを含み、第１のリンカーが、ＰＡＳ化配列、ソルターゼ配列、Ｓｓｐ Ｉcインテイン
    配列、Ｓｓｐ ＩNインテイン配列、および／またはアルデヒドタグを含む、多価メディ
    トープ。
  22. 第２のリンカーをさらに含む、請求項２１に記載の多価メディトープ。
  23. 第１のリンカーが、Ｓｓｐ Ｉcインテイン配列およびＳｓｐ ＩNインテイン配列を含
    む、請求項２１に記載の多価メディトープ。
  24. 第１のリンカーがＳｓｐ Ｉcインテイン配列を含み、第２のリンカーがＳｓｐ ＩNイ
    ンテイン配列を含む、請求項２２に記載の多価メディトープ。
  25. ソルターゼ配列が配列ＬＰＸＴＧ（配列番号２４９）を含み、Ｘが任意のアミノ酸であ
    る、請求項２１に記載の多価メディトープ。
  26. 第１のリンカーおよび／または第２のリンカーが、グリシン残基をさらに含む、請求項
    ２１、２２、または２５に記載の多価メディトープ。
  27. アルデヒドタグが、配列番号２４７の配列を含む、請求項２１から２６のいずれかに記
    載の多価メディトープ。
  28. 第１および／または第２のリンカーが、リシン、チロシン、グルタミン酸、アスパラギ
    ン酸、および／または非天然アミノ酸残基をさらに含む、請求項２１から２７のいずれか
    一項に記載の多価メディトープ。
  29. 第１および／または第２のリンカーが、治療剤または診断剤にコンジュゲートされてい
    る、請求項２１から２８のいずれか一項に記載の多価メディトープ。
JP2021016201A 2014-10-02 2021-02-04 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用 Pending JP2021075548A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2023077629A JP2023100903A (ja) 2014-10-02 2023-05-10 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462059146P 2014-10-02 2014-10-02
US62/059,146 2014-10-02

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017517706A Division JP2017536091A (ja) 2014-10-02 2015-10-02 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023077629A Division JP2023100903A (ja) 2014-10-02 2023-05-10 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2021075548A true JP2021075548A (ja) 2021-05-20

Family

ID=55631766

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017517706A Pending JP2017536091A (ja) 2014-10-02 2015-10-02 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用
JP2021016201A Pending JP2021075548A (ja) 2014-10-02 2021-02-04 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用
JP2023077629A Pending JP2023100903A (ja) 2014-10-02 2023-05-10 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017517706A Pending JP2017536091A (ja) 2014-10-02 2015-10-02 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023077629A Pending JP2023100903A (ja) 2014-10-02 2023-05-10 多価メディトープ、メディトープ結合性抗体およびそれらの使用

Country Status (8)

Country Link
US (2) US20180148514A1 (ja)
EP (2) EP3200823B1 (ja)
JP (3) JP2017536091A (ja)
KR (2) KR20170063881A (ja)
CN (2) CN106999587B (ja)
AU (2) AU2015327824B2 (ja)
CA (1) CA2962957A1 (ja)
WO (1) WO2016054603A2 (ja)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011056124A1 (en) * 2009-11-04 2011-05-12 Affibody Ab Her3 binding polypeptides
DK3294764T3 (da) 2015-05-15 2021-01-25 Hope City Kimæriske antigenreceptor sammensætninger
WO2017120599A1 (en) * 2016-01-08 2017-07-13 Meditope Biosciences, Inc. Self-crosslinking antibodies
US20190111149A1 (en) * 2016-02-02 2019-04-18 Meditope Biosciences, Inc. Anti-egfr antibody drug conjugate
WO2018075813A1 (en) 2016-10-19 2018-04-26 City Of Hope Use of endogenous viral vaccine in chimeric antigen receptor t cell therapy
US11491247B2 (en) 2017-05-02 2022-11-08 Cornell University Methods and reagents for tumor targeting with greater efficacy and less toxicity
US20210061879A1 (en) * 2017-12-29 2021-03-04 City Of Hope Meditope-enabled t cells
EP3775196A4 (en) 2018-04-04 2021-12-22 Nautilus Biotechnology, Inc. NANOREWAL AND MICROREWAL GENERATION PROCESSES
CN108610415A (zh) * 2018-05-15 2018-10-02 大连理工大学 一种抗体复合物的制备方法
CA3116314A1 (en) * 2018-10-15 2020-04-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Monoclonal antibodies against human dickkopf3 and uses thereof
JP2023544457A (ja) * 2020-09-29 2023-10-23 クンミン シノウェイ ナチュラル ファーマシューティカルズ カンパニー リミテッド ヒト化抗ｃｄ２２組換え免疫毒素およびその用途
AU2021352915A1 (en) * 2020-10-01 2023-06-08 Cornell University Methods and compositions for increasing uptake, internalization, and/or retention of small molecule ligands
JP2023549350A (ja) 2020-11-11 2023-11-24 ノーティラス・サブシディアリー・インコーポレイテッド 向上した結合及び検出特徴を有する親和性試薬
KR20230169143A (ko) 2021-03-11 2023-12-15 노틸러스 서브시디어리, 인크. 생체분자 보유를 위한 시스템 및 방법
CN117003882B (zh) * 2023-10-07 2023-12-12 北京丹大生物技术有限公司 一种用于检测戈利木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013055404A1 (en) * 2011-10-10 2013-04-18 City Of Hope Meditopes and meditope-binding antibodies and uses thereof

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992015683A1 (en) 1991-03-06 1992-09-17 MERCK Patent Gesellschaft mit beschränkter Haftung Humanized and chimeric monoclonal antibodies
CA2290485C (en) 1997-05-21 2008-08-05 Biovation Limited Method for the production of non-immunogenic proteins
GB9815157D0 (en) 1998-07-13 1998-09-09 Metron Designs Ltd High resolution pulse width setting from relatively low frequency clocks
US20030228309A1 (en) 2000-11-08 2003-12-11 Theodora Salcedo Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
WO2002079415A2 (en) 2001-03-30 2002-10-10 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Reducing the immunogenicity of fusion proteins
CN100419426C (zh) 2002-04-22 2008-09-17 佛罗里达州立大学 功能化纳米微粒及其使用方法
EP1701979A2 (en) * 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
JP2007536932A (ja) 2004-05-10 2007-12-20 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ヒト化ＦｃγＲＩＩＢ特異的抗体とその利用法
US10183986B2 (en) 2005-12-15 2019-01-22 Industrial Technology Research Institute Trimeric collagen scaffold antibodies
CA2661023C (en) 2006-08-18 2017-08-15 Novartis Ag Prlr-specific antibody and uses thereof
GB0720118D0 (en) 2007-10-15 2007-11-28 Achour Adnane Modified mhc class 1 binding peptides
WO2010042562A2 (en) 2008-10-06 2010-04-15 Minerva Biotechnologies Corporation Muc1* antibodies
EP2332995A1 (en) 2009-12-10 2011-06-15 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Neutralizing prolactin receptor antibodies and their therapeutic use
AU2011226672B2 (en) 2010-03-12 2015-07-23 Immunogen, Inc. CD37-binding molecules and immunoconjugates thereof
US20130017997A1 (en) 2010-08-19 2013-01-17 Amunix Operating Inc. Factor VIII Compositions and Methods of Making and Using Same
EP2624868B1 (en) 2010-10-08 2018-09-26 City of Hope A monoclonal antibody framework binding interface for meditopes, meditope delivery systems and methods for their use
US8962804B2 (en) * 2010-10-08 2015-02-24 City Of Hope Meditopes and meditope-binding antibodies and uses thereof
WO2013016653A1 (en) * 2011-07-28 2013-01-31 Cell Signaling Technology, Inc. Multi component detection

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013055404A1 (en) * 2011-10-10 2013-04-18 City Of Hope Meditopes and meditope-binding antibodies and uses thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANTOS ET AL., THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 284, no. 23, JPN6019039820, 2009, pages 16028 - 16036, ISSN: 0005140711 *
SCHLAPSCHY ET AL., PROTEIN ENGINEERING, DESIGN & SELECTION, vol. 26, no. 8, JPN6019039819, 2013, pages 489 - 501, ISSN: 0005140710 *
SCOTT ET AL., PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE USA, vol. 96, no. 24, JPN6019039821, 1999, pages 13638 - 13643, ISSN: 0005140712 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106999587B (zh) 2023-09-29
AU2015327824A1 (en) 2017-04-27
AU2015327824B2 (en) 2021-01-07
AU2020289727A1 (en) 2021-01-28
KR20170063881A (ko) 2017-06-08
EP4218810A3 (en) 2023-08-09
EP4218810A2 (en) 2023-08-02
US20180148514A1 (en) 2018-05-31
WO2016054603A3 (en) 2016-05-06
JP2017536091A (ja) 2017-12-07
CA2962957A1 (en) 2016-04-07
CN117442748A (zh) 2024-01-26
US20230391887A1 (en) 2023-12-07
JP2023100903A (ja) 2023-07-19
WO2016054603A2 (en) 2016-04-07
KR20230066491A (ko) 2023-05-15
EP3200823A4 (en) 2018-07-18
AU2020289727B2 (en) 2023-04-06
EP3200823A2 (en) 2017-08-09
CN106999587A (zh) 2017-08-01
EP3200823B1 (en) 2022-11-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020289727B2 (en) Multivalent meditopes, meditope-binding antibodies and uses thereof
JP7309797B2 (ja) メディトープおよびメディトープ結合性抗体ならびにそれらの使用
JP7051692B2 (ja) Ｐｄ－１に特異的に結合する抗体及びその使用
TWI751979B (zh) 抗ｇａｒｐ抗體
US11459397B2 (en) Self-crosslinking antibodies
CN117279953A (zh) 靶向bcma、gprc5d和cd3的三特异性抗体
WO2023143535A1 (zh) 一种靶向il-18bp的抗体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210304

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220301

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220527

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220726

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220901

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20230110

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230510

A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20230621

A912 Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912

Effective date: 20230901