JP2020055853A

JP2020055853A - 癌治療のための抗ｃｅａｃａｍ１および抗ｐｄ抗体を含む組成物

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Publication number: JP2020055853A
Application number: JP2019221240A
Authority: JP
Inventors: ベン‐モシェ，テヒラ; Ben-Moshe Tehila; サピア，ヤイル; Sapir Yair; マンデル，イラナ; Mandel Ilana; メイリン，エドナ; Meilin Edna
Original assignee: cCAM Biotherapeutics Ltd
Current assignee: cCAM Biotherapeutics Ltd
Priority date: 2013-11-25
Filing date: 2019-12-06
Publication date: 2020-04-09
Also published as: CN105744955A; EP3074035A4; JP2016537383A; KR20160108310A; KR102362803B1; MX2016006726A; PL3763387T3; JP6879739B2; ES2980417T3; HK1225998A1; WO2015075725A1; BR112016010557A2; US10081679B2; US20170166637A1; AU2014351308B2; RU2697522C1; AU2014351308A1; EP3763387A1; EP3763387B1; RU2016124540A

Abstract

【課題】癌進行の異なるメカニズムまたは相等しいメカニズムを標的とする複数の抗体を用いる、改善されたコンビナトリアルな抗体を基にした治療法の提供。【解決手段】ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、ならびにヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１種へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、および癌を治療する上でそれらを併用する方法を提供する。【選択図】なし

Description

発明の分野
本発明は、癌免疫療法、特には抗ＣＥＡＣＡＭ１と抗ＰＤ−１／ＰＤリガンド抗体との組合わせ、および癌を処置する上でのそれらの使用に関する。

発明の背景
膜貫通タンパク質癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１；胆汁糖タンパク質（ＢＧＰ）、ＣＤ６６ａおよびＣ−ＣＡＭ１としても既知）は、免疫グロブリンスーパーファミリーにも属する癌胎児性抗原ファミリー（ＣＥＡ）の一種である。ヒトＣＥＡＣＡＭ１には、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔアクセション番号Ｐ１３６８８が割りあてられた。ＣＥＡＣＡＭ１は、それ自身と、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ６）およびＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡ）タンパク質をはじめとする他の公知のＣＥＡＣＡＭタンパク質と相互作用する。それは、上皮細胞から造血性起源のもの（例えば、免疫細胞）まで広範囲の細胞で発現される。

多くの異なる機能が、ＣＥＡＣＡＭ１タンパク質に起因された。ＣＥＡＣＡＭ１タンパク質が、結腸、前立腺の一部の癌腫および黒色腫などの他の癌タイプにおいて過剰発現されることが示された。更なるデータから、血管新生および転移におけるＣＥＡＣＡＭ１の中心的関与が裏づけられている。ＣＥＡＣＡＭ１はまた、自然免疫および獲得免疫応答の調整において役割を担う。例えばＣＥＡＣＡＭ１は、ヒト腸上皮に含まれる活性化Ｔ細胞の阻害性受容体であることが示された（ＷＯ９９／５２５５２号およびＭｏｒａｌｅｓｅｔａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９，１６３，１３６３−１３７０）。更なる報告により、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはナイセリア・ゴノレア・Ｏｐａタンパク質のいずれかとのＴ細胞受容体架橋によるＣＥＡＣＡＭ１の会合が、Ｔ細胞活性化および増殖を阻害することが示された。ＣＥＡＣＡＭ１タンパク質に対する複数のモノクローナル抗体、例えば２６Ｈ７、５Ｆ４、ＴＥＣ−１１、１２−１４０−４、４／３／１７、ＣＯＬ−４、Ｆ３６−５４、３４Ｂ１、ＹＧ−Ｃ２８Ｆ２、Ｄ１４ＨＤ１１、ｂ１８．７．７、Ｄ１１−ＡＤ１１、ＨＥＡ８１、Ｂ１．１、ＣＬＢ−ｇｒａｎ−１０、Ｆ３４−１８７、Ｔ８４．１、Ｂ６．２、Ｂ１．１３、ＹＧ−Ｃ９４Ｇ７、１２−１４０−５、ＴＥＴ−２およびｓｃＦｖ−ＤＩＡＴＨＩＳ１（Ｗａｔｔｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００１，Ｖｏｌ．９８，ｐ１４６９−１４７９）が、既に知られている。ＷＯ２０１０／１２５５７号には、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのネズミモノクローナル抗体が記載されている。ＷＯ２０１３／０５４３３１号には、ヒトＣＥＡＣＡＭ１ＣＭ１０へのキメラモノクローナル抗体が記載されている。

プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）は、免疫応答を調節するためのシグナルを仲介する免疫受容体のＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーに属するＩ型膜貫通タンパク質である。ヒトＰＤ−１には、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔアクセション番号Ｑ１５１１６が割りあてられた。ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーのメンバーは、Ｔ細胞活性化をアップレギュレートするか（ＣＤ２８およびＩＣＯＳ）、またはダウンレギュレートする（ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１）のいずれかである。ＰＤ−１は、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、骨髄細胞および胸腺細胞の一部で発現される。ＰＤ−１タンパク質に対して複数のモノクローナル抗体、例えばＭＫ−３４７５（ヒト化ＩｇＧ４ｍＡｂ）、ＡＭＰ５１４、ＢＭＳ−９３６５５８（完全ヒトＩｇＧ４ｍＡｂ）、およびＣＴ−０１１としても既知のピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ヒト化ＩｇＧ１ｍＡｂ）（Ｔｏｐａｌｉａｎｅｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，Ｖｏｌ．２４（２），ｐ２０７−２１２）が、既に知られている。

分化２７４（ＣＤ１７４）またはＢ７相同体１（Ｂ７−Ｌ１）抗原群としても既知のプログラム細胞死−リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）は、ヒトにおいてＣＤ２７４遺伝子によりコードされたタンパク質である。ＰＤ−Ｌ１は、妊娠、組織同種移植などの特定の事象、および肝炎などの他の疾患状態において、免疫系を抑制することにおいて重要な役割を担うと推測された４０ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である。通常、免疫系は、外来抗原に対して反応し、リンパ節または脾臓において若干の蓄積物が存在し、抗原特異性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を惹起する。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１リガンド複合体の構造は、リンパ節のこれらのＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を低減する阻害性シグナルを伝達し、その補助として、ＰＤ−１は、遺伝子Ｂｃ１−２のより低い調節によりさらに仲介されるアポトーシスを介したリンパ節での外来抗原特異性Ｔ細胞の蓄積を制御することもできる（ＣｈｅｍｎｉｔｚＪＭｅｔａｌ．，２００４，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７３（２）：９４５−５４）。活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞および骨髄細胞で見出されたＰＤ−Ｌ１とその受容体ＰＤ−１との会合は、ＩＬ−２産生およびＴ細胞増殖のＴＣＲを介した活性化を阻害するシグナルを伝達する。プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣとしても既知）は、ヒトにおいてＰＤＣＤ１ＬＧ２遺伝子によりコードされたタンパク質である。ＰＤＣＤ１ＬＧ２は、ＣＤ２７３（分化抗原群２７３）とも称された

ＰＤ−１ならびにそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２は、Ｔ細胞の活性化、耐性と免疫病理とのバランスを調節する阻害性シグナルを伝達する。外来および自己抗原への免疫応答は、病原および腫瘍を浄化しながら耐性を維持するのに、特異的でバランスのとれた応答を必要とする。ヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２には、それぞれＳｗｉｓｓＰｒｏｔアクセション番号Ｑ９ＮＺＱ７およびＱ９ＢＱ５１が割りあてられている。Ｔ細胞耐性の導入および維持は、ＰＤ−１を必要とし、非造血細胞でのリガンドＰＤ−１は、エフェクターＴ細胞の応答を制限して、免疫による組織損傷から組織を保護することができる。ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ経路が、微生物および腫瘍に奪われると、抗微生物または腫瘍免疫が減弱になり、慢性感染および腫瘍生存が促進される。ＰＤ−Ｌ１タンパク質に対する複数のモノクローナル抗体、例えばＭＥＤＩ−４７３６、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８ＣおよびＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｌｕｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｒａｃｔ．，２０１４）が、既に知られている。ＰＤ−Ｌ２に対する他のモノクローナル抗体、例えばＰＣＴ出願公開番号ＷＯ／２０１０／０２７８２７号、ＷＯ／２０１０／０３６９５９号およびＷＯ／２０１１／０６６３４２号に開示されたものもまた公知である。ＷＯ／２０１４／０５９２５１号は、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−１および／または潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）のうちの２つ以上の阻害物質を投与することにより、対象における免疫応答を増強するため、および／またはＴ細胞耐性を低減するための組成物および方法に関する。

癌免疫療法は、免疫系を利用して癌を処置する。免疫療法は、細胞療法、抗体療法およびサイトカイン療法の主に３つに分けられる。それらは全て、癌細胞が多くの場合、表面に免疫系により検出され得る異なる分子を有する、という事実を活用する。これらの分子は、癌抗原として知られている。免疫療法は、これらの癌抗原を標的として使用することにより、免疫系に腫瘍細胞を攻撃させるために用いられる。

抗体療法は、現在、免疫療法の最も成功した形態であり、様々なの癌に対して多くの認可された治療法がある。抗体は、免疫系により産生されるタンパク質であり、細胞表面の標的抗原に結合する。正常な生理学的作用において、それらは、病原と戦うために免疫系により利用される。各抗体は、１種またはわずかの非常に類似したタンパク質に特異性があり、癌抗原に結合するものが、癌の治療に用いられる。抗体は、癌抗原に結合すると、抗体依存性の細胞による細胞傷害性を誘発すること、補体系を活性化すること、受容体がリガンドと相互作用することを防ぐこと、または化学療法もしくは放射線照射のペイロードを送達することができ、それらの全てが、細胞死を誘導し得る。米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により癌の治療に現在認可されている抗体がある：リツキシマブ（１９９７）、トラスツズマブ（１９９８）、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（２０００）、アレムツズマブ（２００１）、イブリツモマブ・チウキセタン（２００２）、トシツモマブ（２００３）、セツキシマブ（２００４）、ベバシズマブ（２００４）、パニツムマブ（２００６）、オファツムマブ（２００９）、イピリムマブ（２０１１）およびブレンツキシマブ・ベドチン（２０１１）。

複数の抗体は、本来、抗癌剤単独療法として認可されながら、化学療法などの他の抗癌療法との併用に向けてさらに認可されている。例えばＦＤＡは、これまで未治療であった患者およびこれまで慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）で治療していた患者の両方の治療に、フルダラビンおよびシクロホスファミドと併用されるリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）の認可を承認した。近年になりＦＤＡは、持続性、再発、または転移子宮頸癌の治療に、パクリタキセルと、シスプラチンまたはトポテカンのいずれかと併用されるベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）を認可した。

癌進行の異なるメカニズムまたは相等しいメカニズムを標的とする多種の抗体を用いる、改善されたコンビナトリアルな抗体を基にした治療が、依然として求められている。

発明の概要
本発明は、癌進行の異なるメカニズムまたは相等しいメカニズムを標的とする複数の抗体を用いる、改善されたコンビナトリアルな抗体を基にした治療を提供する。本発明は、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と、ＰＤ−１とその天然のリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との結合を破壊することを対象にした抗体との組合わせが、異なるタイプの癌に向けた、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）細胞およびリンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞などのリンパ球細胞の細胞傷害性を有意かつ相乗的に上昇させた、という驚くべき発見に由来している。リンパ球細胞をこれらの２タイプの抗体と共に、同時にインキュベートするよりもむしろ段階的にプレインキュベートすると、リンパ球による細胞傷害性が最大になることが、ここに初めて開示される。異なる抗体が癌患者に別個に投与されると、効能が最大になる、というこの予測されなかった発見が、改善された臨床転帰のために活用され得る。別の驚くべき発見が、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体によるＣＥＡＣＡＭ１の遮断が癌細胞上のＰＤ−Ｌ１発現を増加させること、であった。さらに、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と、ＰＤ−１とその天然のリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との結合を破壊することを対象にした抗体との抗体の組合わせが、免疫応答性ネズミモデルにおいて定着腫瘍の進行を相乗的に低減することが、初めて発見された。

従って本発明は、一態様において、別々の投与による癌の治療において使用するための、ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、ならびにヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１種へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。

本発明は、別の態様において、別々の投与による癌の治療において使用するための、ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、およびヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）とそのリガンドとの相互作用を阻害もしくは遮断することが可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物をさらに提供する。

本発明は、別の態様において、別々の投与による癌の治療において使用するための、ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）とそのリガンドとの相互作用を阻害または遮断することが可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をさらに提供する。

本発明は、さらに別の態様において、癌を有する患者を治療する方法であって、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物と、ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１種へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物とを、該患者に投与し、それにより癌を治療することを含む、方法をさらに提供する。

本発明は、さらに別の態様において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物と、ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１種へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物とを、含むキットを提供する。

本発明は、別の態様において、癌を治療する上で使用するための上記キットを提供する。

いくつかの実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１タンパク質に対して少なくとも約１０^−８Ｍの親和性で結合することが可能である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ３およびヒトＣＥＡＣＡＭ５タンパク質のうちの少なくとも一方に対して少なくとも約５×１０^−７Ｍの親和性で結合することが可能である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体は、ＣＭ−２４、２６Ｈ７、５Ｆ４、ＴＥＣ−１１、１２−１４０−４、４／３／１７、ＣＯＬ−４、Ｆ３６−５４、３４Ｂ１、ＹＧ−Ｃ２８Ｆ２、Ｄ１４ＨＤ１１、ｂ１８．７．７、Ｄ１１−ＡＤ１１、ＨＥＡ８１、Ｂ１．１、ＣＬＢ−ｇｒａｎ−１０、Ｆ３４−１８７、Ｔ８４．１、Ｂ６．２、Ｂ１．１３、ＹＧ−Ｃ９４Ｇ７、１２−１４０−５、ｓｃＦｖ−ＤＩＡＴＨＩＳ１、ＴＥＴ−２、それらの抗原結合断片、およびその任意の組合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体は、ＣＭ−２４もしくはその抗原結合断片、またはその任意の組合わせである。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２およびＳＥＱＩＤＮＯ：３からなる群から選択される配列を含む少なくとも１つの重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる群から選択される配列を含む少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲと、を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２およびＳＥＱＩＤＮＯ：３からなる群から選択される配列を含む少なくとも２つの重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる群から選択される配列を含む少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲと、を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０およびＳＥＱＩＤＮＯ：２１からなる群から選択される配列から得られる少なくとも５つの連続するアミノ酸の少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ配列と、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３およびＳＥＱＩＤＮＯ：２４からなる群から選択される配列から得られる少なくとも５つのアミノ酸の少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ配列と、を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片の結合部位は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、２、３、４、５、および６の６つのＣＤＲからなる。いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片の結合部位は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、８、９、１０、１１、および１２の６つのＣＤＲからなる。いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片の結合部位は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、および１８の６つのＣＤＲからなる。いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片の結合部位は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、２０、２１、２２、２３、および２４の６つのＣＤＲからなる。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１で示された配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：２で示された配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３で示された配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４で示された配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５で示された配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６で示された配列を含む軽鎖ＣＤＲ３と、それらの類似体および誘導体と、を含む。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７で示された配列を有する重鎖ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：８で示された配列を有する重鎖ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９で示された配列を有する重鎖ＣＤＲ３と、を含む。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３で示された配列を有する重鎖ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４で示された配列を有する重鎖ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５で示された配列を有する重鎖ＣＤＲ３と、を含む。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０で示された配列を有する軽鎖ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１で示された配列を有する軽鎖ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１２で示された配列を有する軽鎖ＣＤＲ３と、を含む。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６で示された配列を有する軽鎖ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７で示された配列を有する軽鎖ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８で示された配列を有する軽鎖ＣＤＲ３と、を含む。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、および１８で示されたＣＤＲ配列を含む。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、８、９、１０、１１、および１２で示されたＣＤＲ配列を含む。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２５で示された配列を有する重鎖可変ドメイン配列、または前記重鎖配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するそれらの類似体もしくは誘導体を含む。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２６で示された配列を有する軽鎖可変ドメイン配列、または前記軽鎖配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するそれらの類似体もしくは誘導体を含む。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２５で示された配列を有する重鎖可変ドメインおよびＳＥＱＩＤＮＯ：２６で示された配列を有する軽鎖可変ドメイン、または該抗体または断片の配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するそれらの類似体もしくは誘導体を含む。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、
ｉ．マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３からなる群から選択されるフレームワーク配列と；
ｉｉ．ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、および１８で示された配列を有する６つのＣＤＲ、またはＳＥＱＩＤＮＯ：７、８、９、１０、１１、および１２で示された配列を有する６つのＣＤＲと、前記ＣＤＲ配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するそれらの類似体および誘導体と、を含み、該モノクローナル抗体または断片は、少なくとも２つのＣＥＡＣＡＭサブタイプに対して約５×１０^−７Ｍの親和性で結合する。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、およびヒトＩｇＧ３からなる群から選択されるヒト由来定常領域を含む。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１サブタイプの定常領域サブクラスを含む。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、および１８で示された配列を有する６つのＣＤＲ、またはＳＥＱＩＤＮＯ：７、８、９、１０、１１、および１２で示された配列を有する６つのＣＤＲと、前記ＣＤＲ配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するそれらの類似体および誘導体と、を含み、該モノクローナル抗体は、ＣＥＡＣＡＭ１に対して少なくとも約１０^−８Ｍの親和性で結合する。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７に示された重鎖配列を含む。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２８に示された軽鎖配列を含む。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７に示された重鎖配列およびＳＥＱＩＤＮＯ：２８に示された軽鎖配列を含む。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、８、９、１０、１１、および１２で示された６つのＣＤＲ配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、および１８で示された６つのＣＤＲ配列を有するモノクローナル抗体が結合するＣＥＡＣＡＭ１分子上の同じエピトープに結合することが可能である、少なくとも抗原結合部分を含む。特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列ＶＬＬＬＶＨＮＬＰＱＱＬＦ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３２）およびＹＰＮＡＳＬＬＩＱＮＶＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３３）を有するヒトＣＥＡＣＡＭ１の残基１７〜２９および６８〜７９内のエピトープと反応性がある。

特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列ＶＬＬＬＶＨＮＬＰＱＱＬＦ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）の少なくとも４つのアミノ酸を含むエピトープと反応性がある。特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列ＶＬＬＬＶＨＮＬＰＱＱＬＦ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）およびＹＰＮＡＳＬＬＩＱＮＶＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３０）内のアミノ酸残基を含むエピトープと反応性がある。特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列ＶＬＬＬＶＨＮＬＰＱＱＬＦ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２９）およびＰＮＡＳＬＬＩ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３１）内のエピトープと反応性がある。

特定の実施形態において、該抗原結合断片は、示されたエピトープまたは抗原への対応する全長抗原の親和性の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％を保持する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定の実施形態において、該抗原結合断片は、示されたエピトープまたは抗原への対応する全長抗原の親和性の少なくとも５０％を保持する。特定の実施形態において、該抗原結合断片は、示されたエピトープまたは抗原への対応する全長抗原の親和性の少なくとも９０％を保持する。

いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体は、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ５１４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＣＴ−０１１、それらの抗原結合断片、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体は、ＭＥＤＩ−４７３６、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、それらの抗原結合断片、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ｔｈｅｎｔｉ−ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡＭＰ−２２４である。

いくつかの実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定の実施形態において、ヒト抗体は、単離されたヒト抗体であり、即ちヒトドナーから単離される。特定の実施形態において、ヒト抗体は、ハイブリドーマ細胞株から単離されたヒト抗体である。特定の実施形態において、ヒト抗体は、組換えヒト抗体を指し、即ち組換えＤＮＡ技術により生成される。

特定の実施形態において、上記医薬組成物は、リンパ球細胞または複数のリンパ球細胞をさらに含む。

いくつかの実施形態において、該リンパ球細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−１またはその両方を発現する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定のそのような実施形態において、該リンパ球細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−１を発現する。

いくつかの実施形態において、該リンパ球細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）細胞、リンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定のそのような実施形態において、該リンパ球細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）細胞およびリンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞からなる群から選択される。特定のそのような実施形態において、該リンパ球細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）細胞、または複数のＴＩＬ細胞である。特定のそのような実施形態において、該リンパ球細胞は、リンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、または複数のＬＡＫ細胞である。

特定の実施形態において、該リンパ球細胞は、活性化されている。いくつかの実施形態において、該リンパ球細胞は、癌細胞に対して細胞傷害性がある。

いくつかの実施形態において、癌細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはそれらの任意の組合わせを発現する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、癌細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−Ｌ１、またはその両方を発現する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、癌細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−Ｌ２、またはその両方を発現する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定のそのような実施形態において、癌細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を発現する。

いくつかの実施形態において、癌は、黒色腫、リンパ腫、肺癌、甲状腺癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、子宮頸癌、膵臓癌、白血病、骨髄腫、卵巣癌、子宮癌、肉腫、胆道癌、および子宮内膜細胞癌からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、癌は、黒色腫およびリンパ腫癌からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、癌は、黒色腫である。いくつかの実施形態において、癌は、リンパ腫である。

いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１つへのモノクローナル抗体は、ヒトＰＤ−１とそのリガンドとの相互作用を阻害または遮断することが可能である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、該方法は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記患者に投与することを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、該方法は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記患者に投与することを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、該方法は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記患者に投与することを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

該方法のいくつかの実施形態において、２種以上の該医薬組成物の投与は、同時に実施される。該方法のいくつかの実施形態において、２種以上の該医薬組成物の投与は、連続して実施される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と同時に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の後に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、２種以上の該医薬組成物の投与は、同時に実施される。該方法のいくつかの実施形態において、２種以上の該医薬組成物の投与は、連続して実施される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と同時に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の後に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と同時に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の後に投与される。

いくつかの実施形態において、上記方法は、リンパ球細胞を含む医薬組成物を前記患者に投与するステップをさらに含む。該方法のいくつかの実施形態において、リンパ球細胞を含む医薬組成物の投与は、該抗体を含む医薬組成物の少なくとも１種と同時に実施される。該方法のいくつかの実施形態において、２種以上の医薬組成物の投与は、連続して実施される。

いくつかの実施形態において、該リンパ球細胞は、投与の前に、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と共に、またはヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と共にプレインキュベートされる。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定のそのような実施形態において、該リンパ球細胞は、投与の前に、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と共にプレインキュベートされる。他の特定のそのような実施形態において、該リンパ球細胞は、投与の前に、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と共にプレインキュベートされ、その後、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と共にインキュベートされる。

いくつかの実施形態において、抗ＣＥＡＣＡＭ１、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、および抗ＰＤ−Ｌ２からなる群から選択される少なくとも２種の異なる抗体が、少なくとも２種の異なる医薬組成物に含まれる。いくつかの実施形態において、抗ＣＥＡＣＡＭ１、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、および抗ＰＤ−Ｌ２からなる群から選択される少なくとも１種の抗体と、少なくとも１種のリンパ球細胞とが、同じ医薬組成物に含まれる。

いくつかの実施形態において、キットは、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を含む。いくつかの実施形態において、キットは、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を含む。いくつかの実施形態において、キットは、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を含む。

特定の実施形態において、抗体またはその抗体結合断片を含む各医薬組成物が、キット内で別々の容器に含まれる。

特定の実施形態において、キットは、リンパ球細胞を含む医薬組成物をさらに含む。特定のそのような実施形態において、キットは、リンパ球細胞と、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と、を含む医薬組成物を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定のそのような実施形態において、キットは、リンパ球細胞と、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、を含む医薬組成物を含む。特定のそのような実施形態において、キットは、リンパ球細胞と、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、を含む医薬組成物を含む。特定の実施形態において、キットは、キットの使用説明書をさらに含む。

Ａ−Ｂ。ヒト黒色腫細胞は、ＩＦＮ−γ活性化によりＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ１を発現する。ＭＡＬＭＥ３Ｍ細胞を、ＩＦＮ−γと共に２４時間インキュベートし、ＰＥコンジュゲート抗ＰＤ−Ｌ１抗体（白いヒストグラム）もしくはアイソタイプ対照対応抗体（黒いヒストグラム）と共に（Ａ）、またはヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（白いヒストグラム）もしくはアイソタイプ対照対応抗体（黒いヒストグラム）と共に（Ｂ）、ＦＡＣＳにより解析したＡ−Ｂ。ヒトＴＩＬ細胞は、ＰＤ−１およびＣＥＡＣＡＭ１を発現する。ＴＩＬ細胞を、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体で染色し、ＦＡＣＳにより解析した。対応するアイソタイプ対照（黒いヒストグラム）と比較したＰＤ−１（白いヒストグラム）の発現（Ａ）を、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのＰＥコンジュゲートモノクローナル抗体（白いヒストグラム）もしくはアイソタイプ対照対応抗体（黒いヒストグラム）（Ｂ）と共に表している。ヒト黒色腫細胞に対するヒトＴＩＬ細胞の細胞傷害性に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−１抗体との相乗効果。ヒト黒色腫細胞を、ＩＦＮ−γの存在下で発育させて、ＰＤ−１発現を誘導した。ＴＩＬ細胞を様々な濃度の、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（黒い破線、丸いマーカ）、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体（灰色の実線、長方形のマーカ）または両抗体の組合わせ（黒い実線、三角形のマーカ）と共にインキュベートした。ＩＦＮ−γで処理した黒色腫細胞を添加し、一晩インキュベートした。結果は、処理あたり三重測定で得られた従来のＬＤＨ放出アッセイにより測定された％細胞傷害性±ＳＥの平均を表す。^＊ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体のみと比較した両側Ｔ検定でＰ＜０．０５Ａ−Ｂ。抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の添加前に抗ＰＤ−１抗体を添加した場合の、ヒト黒色腫細胞に対するヒトＴＩＬ細胞のグランザイムＢレベルおよび細胞傷害性に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−１抗体との相乗効果。ヒト黒色腫細胞をＩＦＮ−γの存在下で発育させて、ＰＤ−Ｌ１発現を誘発させた。ヒトＴＩＬ細胞を培地のみ（黒色）、非特異性ＩｇＧ抗体（白色）、様々な濃度の、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（縦縞）、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体（横縞）または両抗体の組合わせ（ドット）と共にインキュベートした。最初に、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体を３７℃で３０分間添加し、続いてヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体を添加した。ＩＦＮ−γで処理されたＭＡＬＭＥ３Ｍ細胞を添加し、一晩インキュベートのした。（Ａ）結果は、処理あたり三重測定で得られた従来のＬＤＨ放出アッセイにより測定された％細胞傷害性±ＳＥの平均を表す。^＊ＰＤ−１のみと比較した両側Ｔ検定でＰ≦０．０５。（Ｂ）結果は、処置あたり三重測定で得られた市販のグランザイムＢＥＬＩＳＡキットにより測定されたグランザイムＢレベル±ＳＥを表す。Ａ−Ｂ。抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の添加前に抗ＰＤ−Ｌ１抗体を添加した場合の、ヒト黒色腫細胞に対するヒトＴＩＬ細胞のグランザイムＢレベルおよび細胞傷害性に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗効果。ヒト黒色腫細胞をＩＦＮ−γの存在下で発育させて、ＰＤ−Ｌ１発現を誘発させた。ヒトＴＩＬ細胞を培地のみ（黒色）、非特異性ＩｇＧ抗体（白色）、様々な濃度の、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体（横縞）、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（縦縞）または両抗体の組合わせ（ドット）と共にインキュベートした。最初、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を３７℃で３０分間添加し、続いてヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体を添加した。細胞傷害評価の前に、ＩＦＮ−γで処理したＭＡＬＭＥ３Ｍ細胞を添加し、一晩インキュベートのした。（Ａ）結果は、処理あたり三重測定で得られた従来のＬＤＨ放出アッセイにより測定された％細胞傷害性±ＳＥの平均を表す。（Ｂ）結果は、処理あたり三重測定で得られた市販のグランザイムＢＥＬＩＳＡキットにより測定されたグランザイムＢレベル±ＳＥを表す。^＊抗ＰＤ−Ｌ１のみと比較した両側Ｔ検定でＰ≦０．０５。抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の添加前に抗ＰＤ−１抗体を添加した場合の、ヒト黒色腫細胞に対するヒトＬＡＫ細胞の細胞傷害性に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−１抗体との相乗効果。ヒト黒色腫細胞をＩＦＮ−γの存在下で発育させて、ＰＤ−Ｌ１発現を誘発させた。健常なヒトドナーからのＰＢＭＣをＩＬ−２で活性化することにより生成されたヒトＬＡＫ細胞を、培地のみ（黒色）、非特異性ＩｇＧ抗体（白色）、様々な濃度の、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（縦縞）、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体（横縞）または両抗体の組合わせ（ドット）と共にインキュベートした。最初、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体を３７℃で３０分間添加し、続いてヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体を添加した。ＩＦＮ−γで処理したＳＫＭＥＬ２８細胞を添加し、２４時間インキュベートした。結果は、処理あたり三重測定で得られた従来のＬＤＨ放出アッセイにより測定された％細胞傷害性±ＳＥの平均を表す。^＊抗ＰＤ−１のみと比較した両側Ｔ検定でＰ≦０．０５。併用係数を先に記載された通り計算した。Ａ−Ｂ。抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体での処理は、標的癌細胞上のＰＤ−Ｌ１発現を増加させる。ＮＫ細胞（ＮＫ９２ＭＩ）を、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（ＣＭ−２４）（１０μｇ／ｍｌ）を伴って、または伴わずにインキュベートし、続いてヒト黒色腫細胞（ＳＫＭＥＬ２８）を添加した。細胞を２４、４８および７２時間インキュベートし、ＰＤ−Ｌ１レベルを各時点でＦＡＣＳ解析により測定した。Ａ．異なる時点で、示された処理について適切なアイソタイプ対照と比較した抗ＰＤ−Ｌ１の平均比率。Ｂ．４８時間後のＰＤ−Ｌ１発現レベルの代表的ＦＡＣＳ解析。免疫応答性マウスにおける腫瘍進行に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗効果。ネズミリンパ腫細胞を、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの腹部に皮下移植した（１日目）。１０、１５および２０日目に、マウスにＰＢＳ（黒い破線、白い丸）、抗ネズミＣＥＡＣＡＭ１抗体（灰色の実線、灰色の長方形）、抗ネズミＰＤ−１抗体（灰色の実線、灰色の三角形）または両抗体の組合わせ（黒い実線、黒い丸）のいずれかを静脈内投与した。実験は、２２日目に終了した。Ａ−Ｄ。個々の腫瘍進行曲線。ＰＢＳ（Ａ）、抗ネズミＣＥＡＣＡＭ１抗体（Ｂ）、抗ネズミＰＤ−１抗体（Ｃ）または両抗体の組合わせ（Ｄ）で処理されたマウスの個々の腫瘍進行曲線。

発明の詳細な説明
本発明は、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と、ＰＤ−１とその天然のリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との結合を破壊することを対象にした抗体との組合わせが、異なるタイプの癌に対する、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）細胞およびリンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞などのリンパ球細胞の細胞傷害性を有意に上昇させた、という驚くべき発見に由来する。さらに驚くべきことに、リンパ球細胞をこれらの抗体と共に、同時にインキュベートするよりもむしろ段階的にプレインキュベートすると、リンパ球による細胞傷害性が最大になることが発見された。癌細胞への抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の結合はＰＤ−Ｌ１発現を増加させるため、癌細胞でのＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−リガンドの発現が関連づけられることも見出された。さらに、そのような抗体の組合わせが、免疫応答性ネズミモデルにおいて定着腫瘍の進行を有意に低減しており、仮説としてマウス天然リンパ球環境を活用することが、見出された。

任意の理論またはメカニズムに束縛されるわけではないが、本発明の発見によれば、ＣＥＡＣＡＭ１および／またはＰＤ−１を発現するリンパ球が、例えば癌細胞により、提示される対応するリガンド、ＣＥＡＣＡＭ１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用によりかなり抑制され得ると仮定される。その一方で、これらの抑制的相互作用が遮断されると、これらのリンパ球が、活性化によりこれらの癌細胞に対して細胞傷害性になり得り、悪性腫瘍細胞の殺傷を導き得る。

したがって本発明は、２種の主要な免疫抑制ホモタイプ相互作用、ＣＥＡＣＡＭ１^リンパ球／ＣＥＡＣＡＭ１^癌細胞、およびＰＤ−Ｌ１^リンパ球／ＰＤ−リガンド^癌細胞を遮断すること、ならびに癌と診断された患者の体内の抗癌傷害性細胞のレベルを上昇させること、を対象とした医薬組成物を提供する。いかなる理論またはメカニズムに限定されないが、本発明の組成物は、「ダブルパンチ」の組合わせを生じ、そこで癌患者の抗癌細胞傷害性リンパ球のレベルを上昇させながら、リンパ球自体により提示されたＣＥＡＣＡＭ１および／またはＰＤ−１分子、癌細胞により提示されたＣＥＡＣＡＭ１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２分子または両方に結合した抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体および／または抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２抗体との防御的相互作用により、それらの細胞傷害性が維持される、と仮定される。

したがって本発明は、一態様において、別々の投与による癌の治療において使用するための、ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、およびヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１種へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。

本発明は、別の態様において、別々の投与による癌の治療において使用するための、ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、およびヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）とそのリガンドとの相互作用を阻害または遮断することが可能なモノクローナル抗体または抗原結合断片を含む医薬組成物をさらに提供する。

本発明は、別の態様において、別々の投与による癌の治療において使用するための、ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）へのモノクローナルまたはその抗原結合断片、およびヒトプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）とそのリガンドとの相互作用を阻害または遮断することが可能なモノクローナル抗体または抗原結合断片をさらに提供する。

さらに、本発明は、別の態様において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物と、ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１種へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物とを、含むキットを提供する。

本発明は、別の態様において、癌を治療する上で使用するための、上記キットを提供する。

本明細書で用いられる用語「別々の投与」とは、別個の医薬組成物中に含まれる抗体などの異なる治療薬を指す。特定の実施形態において、異なる治療薬または異なる医薬組成物は、癌患者に同時に、または一方を他方の後に投与される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。例えば語句「別々の投与による癌の治療に使用するための、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体」は、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体が、抗ＰＤ−１抗体を含む組成物と異なる組成物に含まれることを意味する。

用語「ＣＥＡＣＡＭ１」は、ＣＥＡＣＡＭ１遺伝子、例えばＮＰ＿００１０２００８３．１、ＮＰ＿００１７０３．２のタンパク質産物を指すために用いられる。ヒトにおいては、これまでに、１１種の異なるＣＥＡＣＡＭ１スプライスバリアントが発見されている。個々のＣＥＡＣＡＭ１アイソフォームは、細胞外免疫グロブリン様ドメイン（例えば、４つの細胞外免疫グロブリン様ドメインを有するＣＥＡＣＡＭ１は、ＣＥＡＣＡＭ１−４として既知である）の数、膜固定（ｍｅｍｂｒａｎｅａｎｃｈｏｒａｇｅ）および／または細胞質テールの長さ（例えば、長い細胞質テールを有するＣＥＡＣＡＭ１−４は、ＣＥＡＣＡＭ１−４Ｌとして既知であり、短い細胞質テールを有するＣＥＡＣＡＭ１−４は、ＣＥＡＣＡＭ１−４Ｓとして既知である）に関して異なっている。ＣＥＡＣＡＭ１のＮ末端ドメインは、シグナルペプチドの直後に始まり、その構造はＩｇＶ型とされる。例えばＣＥＡＣＡＭ１のアノテーションＰ１３６８８において、Ｎ末端ＩｇＶ型ドメインは、アミノ酸３５〜１４２のアミノ酸１０８個で構成されている。このドメインは、同種親和性結合活性を担うものとして同定された（Ｗａｔｔｅｔａｌ．，２００１，Ｂｌｏｏｄ．９８，１４６９−７９）。これらのスプライスバリアントを含む全てのバリアントが、用語「ＣＥＡＣＡＭ１」に含まれる。

本明細書で用いられる用語「医薬組成物」とは、少なくとも１種の生物学的活性成分を含む組成物を指す。抗体、その抗原結合断片、およびリンパ球細胞が、生物学的活性成分の非限定的例である。

用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、モノクローナル抗体（全長またはインタクトモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、免疫調整剤、ならびに完全な抗体の所望の生物活性を保持および呈するのに十分なサイズの抗体断片を包含する。

互換的に用いられる用語「免疫調整剤」または「免疫調整タンパク質」または「抗体断片」は、特異的抗原に結合して複合体を形成することにより抗体のように作用する合成または遺伝子操作されたタンパク質を包含する。例えば抗体断片は、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片などの可変領域と、軽鎖および重鎖可変領域がペプチドリンカー（「ｓｃＦｖタンパク質」）により結合された組換え一本鎖ポリペプチド分子とからなる、単離された断片を包含する。該断片は、異なる方法で構築されて、多価および／または多重特異性結合形態を生成し得る。本発明の抗体または複数の抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などのインタクト抗体に加え、そのタンパク質分解断片、例えばＦｃ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）_２断片を包含する。さらに、キメラ抗体；ヒトおよびヒト化抗体；組換えおよび遺伝子操作された抗体；ならびにそれらの断片が、本発明の範囲に含まれる。

「ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体」、「ＣＥＡＣＡＭ１を認識する抗体」、「ＣＥＡＣＡＭ１に対する抗体」、または「ＣＥＡＣＡＭ１への抗体」は、十分な親和性および特異性でＣＥＡＣＡＭ１タンパク質に結合する抗体である。典型的には、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体は、約１０^−８または１０^−９Ｍの最小親和性でＣＥＡＣＡＭ１と結合することが可能である。いくつかのモノクローナル抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体は、約５×１０^−７Ｍの最小親和性でＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ５および／または８と結合することが可能である。特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体は、リンパ球により提示されるＣＥＡＣＡＭ１と、癌細胞により提示されるＣＥＡＣＡＭ１との相互作用を防止、妨害または解離することが可能である。

本明細書で用いられる用語「中和抗体」は、本明細書において、インビボまたはインビトロアッセイによる測定で、受容体を通して活性またはシグナル伝達を低減または阻害（遮断）することが可能な特異的受容体またはリガンド標的への抗原結合部位を有する分子を指す。

本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に同質の抗体の集団から得られた抗体を指し、即ち、集団を含む個々の抗体が、微量だけ存在し得る可能な天然由来の突然変異を除き、同一である。モノクローナル抗体は、単一抗原に対して高特異性である。さらに、典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは異なり、各モノクローナル抗体は、抗原上の１つの決定基を対象とする。修飾語「モノクローナル」は、いかなる特定の方法による抗体生成を必要とすること、と解釈されてはならない。モノクローナルＡｂは、当業者に知られている方法により得らえてもよい。例えば、本発明により用いられるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ１９７５，２５６，４９５により初めて記載されたハイブリドーマ法により作製することができ、または組換えＤＮＡ法により作製することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）。「モノクローナル抗体」は、例えばＣｌａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ１９９１，３５２，６２４−６２８またはＭａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１−５９７に記載された技術を利用して、ファージ抗体ライブラリから単離することもできる。

本明細書で用いられる用語「複数」は、２つ以上の指定された対象を指す。

ｍＡｂは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡをはじめとする任意の免疫グロブリンクラスであり得る。ｍＡｂを産生するハイブリドーマを、インビトロまたはインビボで培養することができる。個々のハイブリドーマから得られた細胞をプリスチン処置された（ｐｒｉｓｔｉｎｅ−ｐｒｉｍｅｄ）Ｂａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射して高濃度の所望のｍＡｂを含有する腹水を生成するインビボ産生で、高力価のｍＡｂを得ることができる。アイソタイプＩｇＭまたはＩｇＧのモノクローナル抗体は、当業者に周知のカラムクロマトグラフィー法を利用して、そのような腹水または培養上清から精製されてもよい

本発明による用語「抗原決定基」または「エピトープ」とは、特定の抗体と特異的に反応する抗原分子の領域を指す。「抗原」とは、抗体形成を誘発することおよび抗体により結合されることが可能な分子または分子の一部である。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得る。本発明による抗原は、ＣＥＡＣＡＭ１タンパク質またはその断片である。

抗体または免疫グロブリンは、ジスルフィド結合により連結された２つの重鎖と、２つの軽鎖とを含み、各軽鎖は、Ｙ形でジスルフィド結合により各重鎖に連結されている。抗体のタンパク質分解消化は、Ｆｖ（可変領域断片）およびＦｃ（結晶化可能断片）ドメインを生成する。抗原結合ドメインＦａｂは、ポリペプチド配列が様々である領域を含む。用語Ｆ（ａｂ’）_２は、ジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂ’アームを表す。抗体の中央軸は、Ｆｃ断片と称される。各重鎖は、一方の端部で可変ドメイン（ＶＨ）と、それに続く複数の定常ドメイン（ＣＨ）を有する。各軽鎖は、一方の端部で可変ドメイン（ＶＬ）を、そして他方の端部で定常ドメイン（ＣＬ）を有し、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと配列され、軽鎖定常ドメインは、重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）と配列されている。軽鎖と重鎖の各対の可変ドメインが、抗原結合部位を形成する。軽鎖と重鎖のドメインは、同じ一般構造を有し、各ドメインは、配列が比較的保存されていて、相補性決定領域として知られる３つの超可変ドメイン（ＣＤＲ１−３）により接合されている、４つのフレームワーク領域を含む。これらのドメインは、抗原結合部位の特異性および親和性に寄与する。重鎖のアイソタイプ（ガンマ、アルファ、デルタ、イプシロンまたはミュー）は、免疫グロブリンクラス（それぞれＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ）を決定する。軽鎖は、全ての抗体クラス中にある２つのアイソタイプ（カッパκまたはラムダλ）のいずれかである。

本明細書で用いられる用語「ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体」、「ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体」、「抗ＰＤ−Ｌ１抗体」および「抗ＰＤ−Ｌ２抗体」は、示された標的への結合が可能な、完全な免疫グロブリン分子、例えばＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡもしくはＩｇＧ、そのような免疫グロブリン分子の抗原結合ドメイン、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、キメラＦ（ａｂ’）_２断片もしくはキメラＦａｂ’断片、キメラＦａｂ断片、または単離されたＶＨもしくはＣＤＲ領域、ならびに免疫グロブリンの既知のアイソフォームおよび修飾物、例えば一本鎖抗体もしくは一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＡＢ／ｓｃＦｖ）または二重特異性抗体構築物を指す。本明細書で用いられる用語「抗ヒトＣＥＡＣＡＭ１抗体」、「抗ヒトＰＤ−１抗体」、「ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体」および「ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体」は、示された標的への結合が可能で、これらの標的がヒト起源である、抗体を指す。

本明細書で互換的に用いられる用語「抗体の抗原結合断片」および「抗原結合断片」とは、開示された抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。例えば抗原結合断片として、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ｓｃＦｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲ含有断片または単離ＣＤＲを挙げることができるが、これらに限定されない。それゆえヒトＣＥＡＣＡＭ１へのクローナル抗体の抗原結合断片は、例えばヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体のＦａｂ断片、または例えば化学分解もしくは酵素分解により、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体から直接得ずに、そのようなＦａｂ断片の配列および構造を模倣している任意の分子であり得る。

「抗体断片」は、インタクト抗体の一部のみを含み、一般にインタクト抗体の抗原結合部位を含み、つまり抗原に結合する能力を保持する。本発明の定義に包含される抗体断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＣＬ、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦａｂ断片；（ｉｉ）ＣＨ１ドメインのＣ末端に１つまたは複数のシステイン残基を有するＦａｂ断片であるＦａｂ’断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片；（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインと、ＣＨ１ドメインのＣ末端に１つまたは複数のシステイン残基と、を有するＦｄ’断片；（ｖ）抗体の一方のアームのＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖ断片；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ１９８９，３４１，５４４−５４６）；（ｖｉｉ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉｉｉ）ヒンジ領域のジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ’断片を含む二価断片、Ｆ(ａｂ')_２断片；（ｉｘ）一本鎖抗体分子（例えば、一本鎖Ｆｖ；ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８８，２４２，４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）１９８８，８５，５８７９−５８８３）；（ｘ）同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、２つの抗原結合部位を有する「二重特異性抗体」（例えば、欧州特許第４０４，０９７号；ＷＯ９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０，６４４４−６４４８参照）；（ｘｉ）相補的軽鎖ポリペプチドと共に一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む「線形抗体」（Ｚａｐａｔａｅｔａｌ．ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．，１９９５，８，１０５７−１０６２；および米国特許第５，６４１，８７０号）が挙げられる。

用語「一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）」とは、短い（通常はセリン、グリシン）リンカーにより連結された免疫グロブリンの重鎖可変領域と軽鎖可変領域との融合物を意味する。一本鎖抗体は、抗原結合能力を有し、免疫グロブリン軽鎖および重鎖の可変領域（連結したＶＨ−ＶＬまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））と相同的または類似したアミノ酸配列を含む、一本鎖複合ポリペプチドであり得る。ＶＨおよびＶＬは両者とも、天然のモノクローナル抗体配列を複製し得るか、または一方もしくは両方の鎖が、全内容が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，０９１，５１３号に記載されたタイプのＣＤＲ−ＦＲ構築物を含み得る。軽鎖および重鎖の可変領域と類似した別個のポリペプチドが、ポリペプチドリンカーにより結合される。特にＶＨおよびＶＬ鎖のポリペプチド構造をコードするＤＮＡが公知である、そのような一本鎖抗体の製造方法は、例えば全内容が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，０９１，５１３号および同第５，０９６，８１５号に記載された方法により実現することができる。

一本鎖抗体は、抗原結合能力を有し、免疫グロブリン軽鎖および重鎖の可変領域（即ち、連結したＶＨ−ＶＬまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））と相同的または類似したアミノ酸配列を含む、一本鎖複合ポリペプチドであり得る。

本明細書で用いられる用語「抗体の抗原結合部分を有する分子」は、任意のアイソタイプで任意の動物細胞株または細菌により産生されるインタクト免疫グロブリン分子だけでなく、非限定的にＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、その重鎖および／または軽鎖の可変部分、Ｆａｂミニ抗体（全内容が参照により本明細書に組み入れられる、ＷＯ９３／１５２１０号、ＷＯ９６／１３５８３号、ＷＯ９６／３７６２１号参照）、二量体二重特異性ミニ抗体（Ｍｕｌｌｅｒｅｔａｌ．，１９９８参照）およびそのような反応性画分を組み入れたキメラまたは一本鎖抗体、ならびにそのような抗体反応性画分が物理的に導入された任意の他のタイプの分子または細胞、例えばキメラＴ細胞受容体もしくはそのような受容体を有するＴ細胞、またはそのような反応性画分を含有する分子の一部によって治療性部分を送達するために開発された分子をはじめとした、それらの抗原結合反応性画分も含むものとする。そのような分子は、非限定的に酵素分解、ペプチド合成または組換え技術をはじめとした任意の公知技術により提供され得る。

本明細書で用いられる用語「抗原」は、抗体形成を誘発すること、および／または抗体により結合することが可能な分子または分子の一部を指す。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得る。例えばタンパク質ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２は、それぞれ本発明により抗原と見なされる。好ましい実施形態において、抗原はヒト抗原である。

本明細書で用いられる用語「ヒトＰＤ−１とそのリガンドとの相互作用を阻害または遮断することが可能である抗体」は、場合によりＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２と化学的および／または物理的に相互作用することにより、例えばリンパ球細胞により提示される、ＰＤ−１分子と、例えば癌細胞により提示される、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２分子との相互作用を妨害、阻害、低減、排除または防止する任意の抗体またはその抗原結合断片を指す。

本明細書で用いられる用語「癌を治療すること」は、癌と診断された患者に治療有効量の薬剤、例えば抗体および／またはリンパ球細胞を投与して、患者における悪性腫瘍細胞のさらなる発育を阻害すること、患者における悪性腫瘍細胞の拡散を阻害すること、および／または患者における悪性腫瘍細胞の死滅を誘発することを指す。したがって特定の実施形態において、癌を治療することは、腫瘍の進行を低減すること、患者における悪性腫瘍細胞の拡散を阻害すること、患者における悪性腫瘍細胞の死滅を誘発すること、およびそれらの任意の組合わせを意味する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定の実施形態において、癌を治療することは、腫瘍の進行を低減すること、患者における悪性腫瘍細胞の死滅を誘発すること、またはその両方を意味する。

用語「治療有効量」は、哺乳動物の疾患または障害を治療するのに効果的な薬物量を指す。癌の場合、治療有効量の薬物が、癌細胞の数を減少させ；腫瘍の大きさを減少させ；末梢器官への癌細胞浸潤を阻害し（即ち、ある程度緩徐にし、好ましくは停止し）；腫瘍の転移を阻害し（即ち、ある程度緩徐にし、好ましくは停止し）；腫瘍成長をある程度阻害し、そして／または障害に関連した１つまたは複数の症状をある程度軽減することができる。薬物が、既存の癌細胞の成長を防止し、そして／または既存の癌細胞を殺傷し得る限り、それは細胞増殖制性および／または細胞傷害性があり得る。癌治療では、インビボでの効能が、例えば生存期間、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）、奏効率（ＲＲ）、奏効期間、および／または生活の質を評価することにより測定され得る。

用語「癌」および「癌性」とは、典型的には未調節の細胞発育により特徴づけられる、哺乳動物の生理学的疾病を指すか、またはそれを記載する。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのような癌のより特別な例としては、黒色腫、肺癌、甲状腺癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、子宮頸癌、膵臓癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、卵巣癌、子宮癌、肉腫、胆道癌、または子宮内膜癌が挙げられる。

用語「抗悪性腫瘍組成物」とは、腫瘍の成長もしくは機能を阻害もしくは防御すること、および／または腫瘍細胞の破壊を誘発することが可能な少なくとも１種の活性治療薬を含む、癌を治療する上で有用な組成物を指す。癌を治療するための抗悪性腫瘍組成物中の好適な治療薬としては、化学療法剤、放射性同位体、毒素、インターフェロンなどのサイトカイン、およびサイトカイン、サイトカイン受容体または腫瘍細胞に関連する抗原を標的とする拮抗薬が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で用いられる用語「キット」とは、試薬と他の材料との組合わせを指す。該キットが、抗体、抗体混合物、緩衝液、希釈剤および他の水性溶液などの試薬、および／または１種もしくは複数の貯蔵バイアルもしくは他の容器を含み得ることが企図される。用語「キット」は、試薬および／または他の材料の特定の組合わせに限定されないものとする。

本発明は、２種の主要な免疫抑制相互作用：ＣＥＡＣＡＭ１^リンパ球／ＣＥＡＣＡＭ１^癌細胞、およびＰＤ−１^リンパ球／ＰＤ−リガンド^癌細胞を同時に遮断することを対象とした医薬組成物も提供する。したがって、いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

一態様において、本発明は、抗ヒトＣＥＡＣＡＭ１モノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片、抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片、および抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択されるモノクローナル抗体と、を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該医薬組成物は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

語句「該医薬組成物は、抗体Ａおよび抗体Ｂを含む」とは、各１種の医薬組成物が他の医薬組成物に含まれる抗体とは異なる少なくとも１種の抗体を含む、少なくとも２種の別個の該医薬組成物を指す。語句「該医薬組成物は、含む」とは、少なくとも２種の異なる抗体を含む単一の医薬組成物を指す。

ＣＥＡＣＡＭ１タンパク質に対する多くのモノクローナル抗体は、既に公知であり、その全てが、本発明の組成物および方法における使用に適すると見なされる。それにもかかわらず、いくつかの実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体は、ＣＭ−２４、２６Ｈ７、５Ｆ４、ＴＥＣ−１１、１２−１４０−４、４／３／１７、ＣＯＬ−４、Ｆ３６−５４、３４Ｂ１、ＹＧ−Ｃ２８Ｆ２、Ｄ１４ＨＤ１１、ｂ１８．７．７、Ｄ１１−ＡＤ１１、ＨＥＡ８１、Ｂ１．１、ＣＬＢ−ｇｒａｎ−１０、Ｆ３４−１８７、Ｔ８４．１、Ｂ６．２、Ｂ１．１３、ＹＧ−Ｃ９４Ｇ７、１２−１４０−５、ｓｃＦｖＤＩＡＴＨＩＳ１およびＴＥＴ−２、その抗原結合断片、およびその任意の組合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体は、ＣＭ−２４、その抗原結合断片、およびその任意の組合わせである。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

ＣＭ−２４のＣＤＲセグメントは、２種の異なるアルゴリズム法を利用して同定された：
１．ＩＭＧＴアルゴリズム（Ｌｅｆｒａｎｃｅｔａｌ．，１９９９，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２７，２０９−２１２）；
２．ＫＡＢＡＴアルゴリズム（ＷｕＴ．Ｔ．ａｎｄＫａｂａｔＥ．Ａ．，１９７０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１３２，２１１−２５０）。表１において、２種の方法を用いて決定されたＣＤＲ配列、ならびに両方の方法を用いて同定された配列の最小コンセンサス配列および結合配列（ｃｏｍｂｉｎｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅ）を要約する。

いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２およびＳＥＱＩＤＮＯ：３からなる群から選択される配列を含む少なくとも１つの重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる群から選択される配列を含む少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲと、を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２およびＳＥＱＩＤＮＯ：３からなる群から選択される配列を含む少なくとも２つの重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる群から選択される配列を含む少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲと、を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０およびＳＥＱＩＤＮＯ：２１からなる群から選択される配列から得られる少なくとも５つの連続するアミノ酸の少なくとも１つの重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３およびＳＥＱＩＤＮＯ：２４からなる群から選択される配列から得られる少なくとも５つの連続するアミノ酸の少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲと、を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、
ｉ．マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３からなる群から選択されるフレームワーク配列と；
ｉｉ．ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、および１８で示された配列を有する６つのＣＤＲ、またはＳＥＱＩＤＮＯ：７、８、９、１０、１１、および１２で示された配列を有する６つのＣＤＲと、前記ＣＤＲ配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するそれらの類似体および誘導体と、を含み、該モノクローナル抗体または断片は、少なくとも２つのＣＥＡＣＡＭサブタイプに対して少なくとも約５×１０^−７Ｍの親和性で結合する。

特定の実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１を認識するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、８、９、１０、１１、および１２で示された６つのＣＤＲ、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、１７、および１８で示された６つのＣＤＲを有するモノクローナル抗体が結合するＣＥＡＣＡＭ１分子上の同じエピトープに結合することが可能である、少なくとも抗原結合部分を含む。特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列ＶＬＬＬＶＨＮＬＰＱＱＬＦ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３２）およびＹＰＮＡＳＬＬＩＱＮＶＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３３）を有するヒトＣＥＡＣＡＭ１の残基１７〜２９および６８〜７９内のエピトープと反応性がある。

ＰＤ−１タンパク質に対する複数のモノクローナル抗体は、既に公知であり、その全てが、本発明の組成物および方法における使用に適すると見なされる。それにもかかわらず、いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体は、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ５１４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＣＴ−０１１、それらの抗原結合断片、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

ＰＤ−Ｌ１タンパク質に対する複数のモノクローナル抗体は、既に公知であり、その全てが、本発明の組成物および方法における使用に適すると見なされる。それにもかかわらず、いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体は、ＭＥＤＩ−４７３６、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、それらの抗原結合断片、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。本発明による抗体の非限定的例は、Ｂ７−ＤＣＩｇとしても知られるＡＭＰ−２２４であり、それは、ＰＣＴ出願公開ＷＯ／２０１０／０２７８２７号およびＷＯ／２０１１／０６６３４２号に記載された、ＰＤ−Ｌ１可溶性受容体と抗体のＦｃドメインとの融合タンパク質である。

過去にＰＣＴ出願公開ＷＯ／２０１０／０３６９５９号に開示されたものなど、ＰＤ−Ｌ２タンパク質に対する複数のモノクローナル抗体は、既に公知であり、その全てが、本発明の組成物および方法における使用に適すると見なされる。

特異的抗体を開発する工程が、非ヒト免疫系（マウスのものなど）における作製を含む場合、産生された抗体のタンパク質配列は、ヒトにおける天然由来の同種抗体とは部分的に異なり、それゆえヒト患者に投与されると、潜在的に免疫原性になる。

したがって、ヒト患者に投与された場合の免疫原性を回避するために、いくつかの実施形態において、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。

本明細書において用いられる用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むものとする。ヒト抗体は、例えばＣＤＲにおいて、ヒト生殖系免疫グロブリン配列（例えば、インビトロにおけるランダムもしくは部位特異的突然変異誘発により、またはインビボにおける体細胞突然変異により誘導された突然変異誘発）によりコードされていないアミノ酸残基を含み得る。しかし、本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖系由来のＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列上に移植した抗体は含まないものとする。特定の実施形態において、用語「ヒト抗体」は、単離されたヒト抗体を指し、即ちヒトドナーから単離される。特定の実施形態において、用語「ヒト抗体」は、ハイブリドーマ細胞株から単離されたヒト抗体を指す。特定の実施形態において、用語「ヒト抗体」は、組換えヒト抗体を指し、即ち組換えＤＮＡ技術により生成される。

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するもの、および／または本明細書で開示されたヒト抗体を作製するための任意の技術を使用して作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、特に非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を排除する。ヒト抗体は、様々な従来技術を用いて生成することが可能である。一実施形態において、ヒト抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリから選択される（Ｖａｕｇｈａｎｅｔａｌ．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１９９６１４，３０９−３１４；Ｓｈｅｅｔｓｅｔａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），１９９８，９５，６１５７−６１６２）；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍａｎｄＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２７，３８１；Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２，５８１）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物、例えば内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたマウス中に導入することにより産生することもできる。暴露時に、遺伝子再配列、アセンブリおよび抗体レパートリーをはじめとする全ての点でヒトに見られるものと密接に類似したヒト抗体生成が観察される。このアプローチは、例えば米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号、および次の科学文献に記載されている：Ｍａｒｋｓｅｔａｌ，ＢｉｏｓｕｒａｓｓｈｕＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ３６８：８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８２６（１９９６）；ＬｏｎｂｅｒｇａｎｄＨｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）。あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対して抗体を生成するヒトＢリンパ球の不死化により調製され得る（そのようなＢリンパ球は、個体から回収されてもよく、またはインビトロで免疫化されてもよい)。例えば、Ｃｏｌｅｅｔａｌ．，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ，ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい。

本明細書で用いられる用語「組換えヒト抗体」は、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．，ｅｔａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．２０：６２８７−６２９５参照）、または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、作製もしくは単離された抗体など、組換え手段により調製、発現、作製または単離された全てのヒト抗体を含むものとする。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかし特定の実施形態において、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（また、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物が用いられる場合には、インビボ体細胞突然変異誘発）に供され、したがって組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系ＶＨ配列およびＶＬ配列に由来し、かつそれらに関連しているが、インビボのヒト抗体生殖系レパートリー内には天然に存在しない可能性がある配列である。

本明細書で用いられる用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種の免疫グロブリンに由来のＣＤＲ（相補性決定領域）と、主にヒト免疫グロブリンに由来する抗体分子の残り部分と、を有する抗体を含むものとする。

非ヒト(例えば、ネズミ)抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、マウス、ラット、ウサギまたは所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト霊長類など、非ヒト種の超可変領域からの残基（ドナー抗体）によって置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体内、またはドナー抗体内に見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能を更に洗練させるために行われる。一般にヒト化抗体は、全てまたは実質的に全ての超可変ループが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てまたは実質的に全てのＦＲがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体はまた、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含む。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ１９８６，３２１，５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ１９８８，３３２，３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２２，５９３−５９６を参照されたい。

いかなるメカニズムまたは理論に束縛されるわけではないが、インビトロおよびインビボの両方で本発明の抗体の組合わせにより実証された実質的な抗癌細胞傷害効果が外因性リンパ球細胞により強化され得ることが、示唆される。したがって特定の実施形態において、上記医薬組成物は、リンパ球細胞または複数のリンパ球細胞をさらに含む。

本明細書で用いられる用語「リンパ球細胞」または「リンパ球」は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（通常、細胞を介した細胞傷害性自然免疫に関与する）、Ｔ細胞（通常、細胞を介した細胞傷害性獲得免疫に関与する）、Ｂ細胞（通常、液性抗体誘導性獲得免疫に関与する）、それらの複数およびそれらの任意の組合わせのうちのいずれか１つを指す。末梢血単核（ＰＢＭＣ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）細胞およびリンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞（通常、腫瘍細胞の殺傷に関与する）もまた、リンパ球細胞と見なされる。リンパ球の非限定的例としては、細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ、ＣＤ８^＋またはＣＤ４^＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ２^＋）、およびＴヘルパー細胞（ＣＤ４^＋）が挙げられる。

用語「リンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞」、「リンフォカイン活性化キラー細胞」および「ＬＡＫ細胞」は、互換的に用いられ、腫瘍細胞を殺傷するように、即ち腫瘍細胞に対してより細胞傷害性になるように、刺激または活性化されたリンパ球細胞を指す。ＬＡＫ細胞は、同種または異種細胞集団から産生され得るため、先の用語は、さらに、腫瘍細胞に対してより細胞傷害性になるように、刺激または活性化された同種または異種細胞集団を指す。具体的な実施形態において、ＬＡＫ細胞は、ＩＬ−２によりＰＢＭＣ細胞から産生される。

ＩＬ−２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）および／または抗ＣＤ３モノクローナル抗体などの公知のリンパ球活性化剤が、ＰＢＭＣ細胞などのリンパ球を形質転換して、より細胞傷害性になり、それによりインビトロおよびインビボの両方で、「活性化細胞傷害性リンパ球細胞」、「活性化リンパ球細胞」、「細胞傷害性リンパ球細胞」または「活性化リンパ球」と称される細胞集団を産生し得ることは、以前に確立されている。本発明などは、ＰＢＭＣを活性化させて、有害な副作用を生じずに活性化された細胞傷害性リンパ球細胞の多様な集団を産生する方法に関して、当業者に十分な指導を与える。例えば、ＳｔｅｐｈｅｎＥ．Ｅｔｔｉｎｇｈａｕｓｅｎおよびその共同研究者らは、組換えＩＬ−２の全身投与が、組織におけるインビボリンパ系細胞増殖を刺激すること（ＳｔｅｐｈｅｎＥ．Ｅｔｔｉｎｇｈａｕｓｅｎｅｔａｌ．，ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８５，Ｖｏｌ．１３５，Ｎｏ．２，ｐ１４８８−１４９７）、および組換えＩＬ−２が、養子免疫伝達されたＬＡＫ細胞のインビボ増殖を刺激すること（ＳｔｅｐｈｅｎＥ．Ｅｔｔｉｎｇｈａｕｓｅｎｅｔａｌ．，ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８５，Ｖｏｌ．１３５，Ｎｏ．５，ｐ３６２３−３６３５）を確立した。ＪｏｓｅｐｈＨ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓおよびその共同研究者らは、１００，０００ＵＩＬ−２／ｋｇ／ｑ８の連続投与が、進行結腸癌、悪性黒色腫または腎臓細胞癌の患者において、ＰＢＭＣ細胞を刺激してＬＡＫ細胞にするのに十分であることを確定した（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，１９８７，Ｖｏｌ．５，ｐｐ．１９３３−１９４１）。サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞は、後天的な非特異性抗腫瘍細胞傷害性を有し、このためＴ細胞とＮＫ細胞の二重の表現型を有する細胞集団に相当する、インビトロで活性化されたヒトＣＤ８Ｔ細胞である。それらのインビボ腫瘍内ホーミング、および移植片対宿主（ＧＶＨ）反応性の欠如により、ＣＩＫ細胞は、癌患者において自家性または同種のいずれかの方法で広範囲に用いられてきた。Ｍ．Ｉｎｔｒｏｎａら（ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ，２０１３，Ｖｏｌ．１５５，ｐ２７−３０）は、ＣＩＫ細胞の主な生物学的特徴と、それらの最も傑出した臨床結果の要約を提供している。

いかなるメカニズムまたは理論に束縛されるわけではないが、インビトロでの本発明のリンパ球により実証された所望の抗癌細胞傷害効果が、活性化されたリンパ球細胞を使用することにより最大になり得ることが示唆される。したがって特定の実施形態において、該リンパ球細胞は、活性化されている。

本明細書で用いられる用語「活性化された」は、例えばヒト黒色腫細胞（ＭＡＬＭＥ３ＭまたはＳＫＭＥＬ２８）などの癌細胞株に対して細胞傷害活性を示す、またはグランザイムＢ生成レベルの上昇を示す、任意のリンパ球細胞を指す。

いくつかの実施形態において、該リンパ球細胞は、癌細胞に対して細胞傷害性がある。

本明細書で用いられる用語「細胞傷害性」は、細胞の（癌細胞など）構造および／または機能を損傷する物質（リンパ球細胞など）を指す。例えば、機能不全に陥った体細胞に暴露されると、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）が、細胞毒パーフォリン、グランザイム、およびグラニュライシンを放出する。グランザイムは、パーフォリンの作用を通して、標的細胞の細胞質に侵入し、それらのセリンプロテアーゼ機能が、一連のシステインプロテアーゼであるカスパーゼカスケードを惹起して、最終的にアポトーシス（プログラム細胞死）に導く。

本発明により提供される組成物および方法は、起源とは無関係の複数の癌タイプに対して効果的であることが実証されている。いくつかの実施形態において、癌細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはそれらの任意の組合わせを発現する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、癌細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−Ｌ１、またはその両方を発現する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、癌細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−Ｌ２、またはその両方を発現する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定のそのような実施形態において、癌細胞は、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を発現する。

上述したように、本発明は、２種の主要な免疫抑制相互作用：ＣＥＡＣＡＭ１^リンパ球／ＣＥＡＣＡＭ１^癌細胞、およびＰＤ−１^リンパ球／ＰＤ−リガンド^癌細胞を同時に遮断することを対象とした医薬組成物を使用する方法を提供する。それゆえいくつかの実施形態において、該方法は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態において、該方法は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態において、該方法は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物およびヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記患者に投与することを含む。

該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と同時に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の後に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、２種以上の該医薬組成物の投与は、同時に実施される。該方法のいくつかの実施形態において、２種以上の該医薬組成物の投与は、連続して実施される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と同時に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の後に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の前に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と同時に投与される。該方法のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の後に投与される。

驚くべきことに、リンパ球細胞上の各標的への抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体および抗ＰＤ−１抗体の結合がなぜか相関的であることが見出された。したがっていくつかの実施形態において、リンパ球細胞は、投与の前に、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と共に、またはヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と共にプレインキュベートされる。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特定のそのような実施形態において、該リンパ球細胞は、投与の前に、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と共にプレインキュベートされる。他の特定のそのような実施形態において、該リンパ球細胞は、投与の前に、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と共にプレインキュベートされ、その後、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と共にインキュベートされる。

本明細書で用いられる用語「〜と共にプレインキュベートされる」は、一方または両方の抗体またはその抗原結合断片を特異的手法でリンパ球により提示される標的に結合させるような条件で、同じ医薬組成物に含まれる、リンパ球細胞、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、および／またはヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を指す。

ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）系は、ヒトにおける免疫系の調節を担う細胞表面のタンパク質をコードする遺伝子座である。ＨＬＡ遺伝子は、ほとんどの脊椎動物中で見出される主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）遺伝子のヒトのタイプである。ＨＬＡは、疾患患者を、細胞または臓器移植の健常なドナーと適合させるために日常的に用いられている。最良の移植転帰は、患者のＨＬＡとドナーのＨＬＡが密接に適合し、好ましくは同一である場合に起こる。本明細書で用いられる用語「自家リンパ球細胞」は、任意に抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体もしくはその抗原結合断片、および／または抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片と共に増殖またはインキュベートされて、同じ癌患者に投与される、癌患者から得られた、またはそれに由来するリンパ球細胞を指す。本明細書で用いられる用語「自家リンパ球細胞」は、さらに、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合ドナーから得られた、またはそれに由来するリンパ球細胞を指す。

以下の実施例は、本発明の化合物の作製および使用方法、ならびに本発明の方法を示しており、限定されるものとして解釈してはならない。ここに本発明を、具体的な実施形態と併せて記載するが、多くの改良および変更が当業者に自明となることは明らかである。したがって本発明は、添付の特許請求の範囲の精神および広範囲に含まれるそのような改良および変更の全てを包含するものとする。

実施例
実施例１ − ヒト黒色腫細胞は、ＩＦＮ−γ活性化によりＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ１を発現する
ヒト黒色腫細胞（ＭＡＬＭＥ３Ｍ）をＩＦＮ−γ（２０００単位／ｍｌ）と共に２４時間インキュベートし、続いてＰＥコンジュゲート抗ＰＤ−Ｌ１抗体（クローン２９Ｅ．２Ａ３）またはヒトＣＥＡＣＡＭ１へのＰＥコンジュゲートモノクローナル抗体（ｃＣＡＭＢｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより開発されたＣＭ−２４）を用いたＦＡＣＳ解析を実施した。類似のアッセイを、アイソタイプ対照について実施した。

図１は、実験で用いられたヒト黒色腫細胞がＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ１の両方を発現することを実証している。

実施例２ − ヒトＴＩＬ細胞はＰＤ−１およびＣＥＡＣＡＭ１を発現する
ヒトＴＩＬ細胞（Ｅｌｌａｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｂａｔｃｈ１４，ＴＩＬ１４の患者番号１４から増殖させた腫瘍浸潤リンパ球）を、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体（クローンＥ１２．２Ｈ７）またはヒトＣＥＡＣＡＭ１に対するＰＥコンジュゲートモノクローナル抗体（ＣＭ−２４）で染色し、続いてＦＡＣＳ解析を実施した。適合するアイソタイプ対照と比較したＰＤ−１（Ａ）およびＣＥＡＣＡＭ１（Ｂ）の発現を表す。

図２は、実験で用いられたヒトＴＩＬ細胞がＰＤ−１およびＣＥＡＣＡＭ１の両方を発現することを実証している。

実施例３ − ヒト黒色腫細胞に対するヒトＴＩＬ細胞の細胞傷害性に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−１抗体との相乗効果
ヒト黒色腫癌細胞（ＭＡＬＭＥ３Ｍ）をＩＦＮ−γの存在下で発育させて、ＰＤ−Ｌ１発現を誘発させた。ヒトＴＩＬ細胞（ＴＩＬ１４）を、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（ＣＭ−２４）（０．０１μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ）、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体（クローンＥ１２．２Ｈ７）または両抗体の組合わせ（各抗体０．００５、０．０２５、０．０５および０．２５μｇ／ｍｌ）と共に、３７℃で３０分間インキュベートした。

ＩＦＮ−γ処理されたヒト黒色腫癌細胞を添加し、一晩インキュベートした後、細胞傷害性を評価した（図３）。結果は、処理あたり三重測定で得られた従来のＬＤＨ放出アッセイにより測定された％細胞傷害性±ＳＥの平均を表す。^＊ＣＭ−２４のみと比較した両側Ｔ検定でＰ＜０．０５。併用係数（ＣＩ）は、以下の式に従って０．０２以下と計算された：

図３は、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体および抗ＰＤ−１抗体の両方が、ＴＩＬ細胞などのヒトリンパ球上のそれぞれの標的に結合し得たこと、およびこの結合が、各単独療法のみよりもヒト癌細胞に対するヒトＴＩＬ細胞の毒性を有意に増加させたことを実証している。それゆえ、図３に表されたデータから、標的癌細胞からの免疫抑制シグナルに対するリンパ球防御が、これらの癌細胞への実質的な細胞傷害性をもたらすことが示される。

実施例４ − 抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の添加前に抗ＰＤ−１抗体を添加した場合の、ヒト黒色腫細胞に対するヒトＴＩＬ細胞のグランザイムＢレベルおよび細胞傷害性に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−１抗体との相乗効果
ヒト黒色腫癌細胞（ＭＡＬＭＥ３Ｍ）をＩＦＮ−γの存在下で発育させて、ＰＤ−Ｌ１発現を誘発させた。ヒトＴＩＬ細胞（ＴＩＬ１４）を培地のみ（黒色）、非特異性ＩｇＧ抗体（０．８μｇ／ｍｌ、白色）、様々な濃度（０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ）の、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（ＣＭ−２４）、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体（クローンＥ１２．２Ｈ７）または両抗体の組合わせ（それぞれ０．０５μｇ／ｍｌ、それぞれ０．１μｇ／ｍｌ、それぞれ０．２μｇ／ｍｌ、それぞれ０．４μｇ／ｍｌ、それぞれ０．８μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートした。

最初に、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体を３７℃で３０分間添加し、続いてヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体を添加した。ＩＦＮ−γで処理されたヒト黒色腫癌細胞を添加し、一晩インキュベートした後、細胞傷害性を評価した（図４Ａ）。併用係数（ＣＩ）は、０．１５と計算された。結果は、処理あたり三重測定で得られた従来のＬＤＨ放出アッセイにより測定された％細胞傷害性±ＳＥの平均を表す。^＊抗ＰＤ−１のみと比較した両側Ｔ検定でＰ＜０．０５。同じアッセイにおいて、細胞傷害性細胞活性化により分泌される細胞傷害性タンパク質グランザイムＢのレベルを、市販のグランザイムＢＥＬＩＳＡキットにより評価した（図４Ｂ）。結果は、処理あたり三重測定で得られた平均グランザイムＢレベルを表す。

図４は、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体および抗ＰＤ−１抗体が、ＴＩＬ細胞などのヒトリンパ球上のそれぞれの標的に結合し得ること、およびこの結合が、ヒト癌細胞に対するヒトＴＩＬ細胞のグランザイムＢ分泌および毒性を増加させることを実証している。図４は、さらに、ヒトＴＩＬ細胞へのこれらの抗体の結合が、なぜか相関的であり、結合メカニズムのさらなる試験を行う必要があることを実証している。図３に表されたデータと同様に、図４は、標的癌細胞からの免疫抑制シグナルに対するリンパ球防御が、標的癌細胞への実質的な細胞傷害性をもたらすことを示し、タイミングが、併用療法における重大な因子になり得ることを示唆している。

実施例５ − 抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の添加前に抗ＰＤ−Ｌ１抗体を添加した場合の、ヒト黒色腫細胞に対するヒトＴＩＬ細胞のグランザイムＢレベルおよび細胞傷害性に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗効果
ヒト黒色腫細胞（ＭＡＬＭＥ３Ｍ）をＩＦＮ−γの存在下で発育させて、ＰＤ−Ｌ１発現を誘発させた。ヒトＴＩＬ細胞（ＴＩＬ１４）を培地のみ（黒色）、非特異性ＩｇＧ抗体（０．８μｇ／ｍｌ、白色）、様々な濃度（０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ）の、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（ＣＭ−２４）、ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体（クローン２９Ｅ．２Ａ３）または両抗体の組合わせ（それぞれ０．０５μｇ／ｍｌ、それぞれ０．１μｇ／ｍｌ、それぞれ０．２μｇ／ｍｌ、それぞれ０．４μｇ／ｍｌ、それぞれ０．８μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートした。最初に、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を３７℃で３０分間添加し、続いてヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体を添加した。

ＩＦＮ−γで処理されたヒト黒色腫癌細胞を添加し、一晩インキュベートした後、細胞傷害を評価した（図５Ａ）。併用係数（ＣＩ）は、０．６７と計算された。結果は、処理あたり三重測定で得られた従来のＬＤＨ放出アッセイにより測定された％細胞傷害性±ＳＥの平均を表す。^＊抗ＰＤ−Ｌ１のみと比較した両側Ｔ検定でＰ≦０．０５。同じアッセイにおいて、細胞傷害性細胞活性化により分泌される細胞傷害性タンパク質グランザイムＢのレベルを、市販のグランザイムＢＥＬＩＳＡキットにより評価した（図５Ｂ）。結果は、処理あたり三重測定で得られた平均グランザイムＢレベルを表す。

図５は、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体および抗ＰＤ−１抗体が、ヒトリンパ球（ＴＩＬ細胞など）上およびヒト癌細胞（黒色腫細胞など）上のそれぞれの標的に結合し得ること、およびこの結合が、ヒト癌細胞に対するヒトＴＩＬ細胞のグランザイムＢ分泌および毒性を増加させることを実証している。図５は、さらに、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１およびＣＥＡＣＡＭ１／ＣＥＡＣＡＭ１相互作用の遮断が、相乗効果をもたらし得ることを実証している。それゆえ図５に表されたデータは、ＰＤ−１^リンパ球／ＰＤ−リガンド^癌細胞免疫抑制シグナルからのリンパ球防御が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のいずれを標的とする抗原であるかにかかわらず、これらの癌細胞への実質的な細胞傷害性をもたらすことを示している。

実施例６ − 抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の添加前に抗ＰＤ−１抗体を添加した場合の、ヒト黒色腫細胞に対するヒトＬＡＫ細胞の細胞傷害性に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−１抗体との相乗効果
ヒト黒色腫細胞（ＳＫＭＥＬ２８、ＣＥＡＣＡＭ１陽性、ＰＤ−Ｌ１陽性）をＩＦＮ−γの存在下で発育させて、ＰＤ−Ｌ１発現を誘発させた。健常なヒトドナーからのＰＢＭＣをＩＬ−２（５００単位／ｍｌ）で７日間活性化することにより生成されたヒトＬＡＫ（リンフォカイン活性化キラー）細胞を、培地のみ（黒色）、非特異性ＩｇＧ抗体（０．８μｇ／ｍｌ、白色）、様々な濃度（０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ）の、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（ＣＭ−２４）、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体（クローンＥ１２．２Ｈ７）または両抗体の組合わせ（それぞれ０．０５μｇ／ｍｌ、それぞれ０．１μｇ／ｍｌ、それぞれ０．２μｇ／ｍｌ、それぞれ０．４μｇ／ｍｌ、それぞれ０．８μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートした。最初に、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体を３７℃で３０分間添加し、続いてヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体を添加した。

ＩＦＮ−γで処理されたヒト黒色腫細胞を添加し、２４時間インキュベートした後、細胞傷害を評価した（図６）。併用係数（ＣＩ）は、０．２未満と計算された。結果は、処理あたり三重測定で得られた従来のＬＤＨ放出アッセイにより測定された％細胞傷害性±ＳＥの平均を表す。^＊抗ＰＤ−Ｌ１のみと比較した両側Ｔ検定でＰ≦０．０５。

図６は、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体および抗ＰＤ−１抗体が、ＬＡＫ細胞などの活性化ヒトリンパ球上のそれぞれの標的に結合し得ること、およびこの結合が、ヒト癌細胞に対するヒトＬＡＫ細胞の毒性を増加させることを実証している。図６は、さらに、ＬＡＫ細胞へのこれらの抗体の結合が、なぜか相関的であり、結合メカニズムのさらなる試験を行う必要があること、およびこれらのメカニズムが様々な活性化リンパ球中に存在することを実証している。

実施例７ − 抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体での処理は、標的癌細胞でのＰＤ−Ｌ１発現を増加させる
ヒトＮＫ細胞（ＮＫ９２ＭＩ）を、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体（１０μｇ／ｍｌＣＭ−２４）を伴って、またはそれを伴わずにインキュベートし、続いてヒト黒色腫癌細胞（ＳＫＭＥＬ２８）を添加した。細胞を２４、４８および７２時間インキュベートし、ＰＤ−Ｌ１レベルを各時点にＦＡＣＳ解析により測定した。図７Ａは、異なる時点で、示された処理について適切なアイソタイプ対照と比較した抗ＰＤ−Ｌ１レベルの平均比率を示している。Ｂ．４８時間後のＰＤ−Ｌ１発現レベルの代表的ＦＡＣＳ解析。

図７は、癌細胞上でのＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ１の発現が、実際に相関的であることを実証している。抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の添加が、残存癌細胞上でのＰＤ−Ｌ１発現増加をもたらし、こうして両薬剤の併用処理のさらなる支持を提供している。それゆえ、最初に抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体を投与し、その後、抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＰＤ−Ｌ２抗体をさらに投与することにより癌を治療することは、癌細胞上でのＰＤ−Ｌ１タンパク質の数が相対的に高い状態を維持し、該細胞が抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体治療についてより感受性になり、併用療法が臨床転帰を改善し得ることが示唆されるため、癌の治療に有利になり得る。

実施例４〜６において表されたデータは、同時よりもむしろ別の時間の異なる抗体投与が、癌細胞に対するリンパ球の細胞傷害効果を最大にするという、驚くべき発見を実証している。いかなる理論またはメカニズムに束縛されるわけではないが、この発見は、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体での処理が標的癌細胞上でのＰＤ−Ｌ１発現を増加させるという本発明の別の驚くべき発見に結びつけることができる。仮説として、これは、細胞傷害性リンパ球の効能改善を得るための複数の抗体の必要性を裏づけている。抗ＰＤ−１抗体の投与は、最初、リンパ球上のＰＤ−１分子を遮断し、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体の後の投与が、リンパ球および／または標的癌細胞上でＣＥＡＣＡＭ１分子を遮断して、標的癌細胞上のＰＤ−１リガンドの発現を増加させる、ということが想定され得る。しかしリンパ球上のＰＤ−１分子は、既に遮断されているため、標的癌細胞上でのＰＤ−１リガンドの発現レベル上昇は、リンパ球が完全な細胞傷害能力を効率的に発揮するのを妨げない。

実施例８ − 免疫応答性マウスにおける腫瘍進行に及ぼす抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗効果
１日目に、ネズミリンパ腫細胞（５×１０^６、Ａ２０）を、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの腹部に、皮下注射により同種移植した。１０日目に、腫瘍は平均体積４５ｍｍ^３に達し、マウスを４つの別の群に無作為化して（１１〜１２匹／群）、ＰＢＳ（図８の黒い破線、白い丸）、ＣＣ−１（抗ネズミＣＥＡＣＡＭ１抗体、６ｍｇ／ｋｇ、図８の灰色の実線、灰色の長方形）、ＰＲＭ−１（抗ネズミＰＤ−１抗体、６ｍｇ／ｋｇ、図８の灰色の実線、灰色の三角形）またはＣＣ−１とＰＲＭ−１の組合わせ（それぞれ６ｍｇ／ｋｇ、図８の黒い実線、黒い丸）のいずれかを静脈内投与した。処理を、１５日目と２０日目に再度行った。実験を、２２日目に終了した。腫瘍成長阻害に及ぼす、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体単独、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体単独、および両抗体の組合わせの影響は、以下の通りであった。

この実験では、インタクト免疫系を有するマウスにおける抗ネズミＣＥＡＣＡＭ１および抗ネズミＰＤ−１抗体の生物活性の評価を可能にして、ネズミ癌細胞に対する全体的な免疫系反応を評価するために、免疫応答性Ｂａｌｂ／Ｃマウスを選択した。全体として、このモデルは、癌患者が抗ヒトＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ヒトＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２抗体の組合わせを投与されるという、ヒトにおける治療を促す。いかなる理論またはメカニズムに束縛されるわけではないが、抗ヒトＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ヒトＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２抗体の組合わせにより、癌細胞が患者の免疫系の活性化および細胞傷害性を回避するのを妨害し、それにより顕著な抗癌応答を生じると仮定される。

図８は、抗ヒＣＥＡＣＡＭ１抗体および抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２抗体が、インビボで腫瘍細胞および／または免疫細胞上のそれぞれの標的に結合し得ること、およびこの組合わせでの結合が、各単独療法と比較して有意に腫瘍進行を低減することを実証している。この結果は、かなりの体積の定着腫瘍であっても抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２の組合わせの利用の効能および潜在性の証拠であり、定着腫瘍を有する患者を治療する臨床現場を模倣しているため、非常に重要である。

図９は、各治療（対照、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、または抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と抗ＰＤ−１抗体の組合わせ）により群分けされた各マウス個体での腫瘍進行曲線を示している。

実施例９ − 抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体と、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組合わせによる癌異種移植モデルの処理
腫瘍を、癌細胞株（例えば、ＳＫＭＥＬ５などの黒色腫細胞）の皮下（ＳＣ）注射により、ＳＣＩＤＮＯＤマウスに異種移植した。ＴＩＬ細胞を伴う、または伴わない、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体（例えば、ＣＭ−２４）単独の効果、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体単独の効果、および両方の抗体の組合わせの効果を、腫瘍根絶、腫瘍成長阻害、および／またはマウス死亡率により検証する。

例えば、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスを、表２に開示された群に無作為化する。

腫瘍の発生 − 各マウスにＰＢＳ中の癌細胞（例えば、黒色腫）を、ＳＣ注射により右脇腹から投与する。処理 − 腫瘍接種日に、処理を開始する。腫瘍成長測定 − 実験手順を知らない人物がカリパスを用いて１週間に２回、測定を実施する。腫瘍発生日から、測定を開始する。エンドポイント − 腫瘍発生日から約６０〜８０日。アッセイ終了日に、全てのマウスを、全身放血および血清分離の後に殺処分する。腫瘍を、マウスごとに別の試験管内に移して固定する。

実施例１０ − 未処理癌、切除不能癌、または転移癌を有するヒト対象における抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１／／抗ＰＤ−Ｌ２／抗ＣＥＡＣＡＭ１単独療法対抗ＣＥＡＣＡＭ１と抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１／抗ＰＤ−Ｌ２との併用療法

Claims

別々の投与による癌の処置において使用するための、
ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物；ならびに
ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１種へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物。
ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＣＥＡＣＡＭ１タンパク質に対して少なくとも約１０^−８Ｍの親和性で結合することが可能である、請求項１に記載の医薬組成物。
前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＣＥＡＣＡＭ３およびヒトＣＥＡＣＡＭ５のうちの少なくとも一方に対して少なくとも約５×１０^−７Ｍの親和性で結合することが可能である、請求項５に記載の医薬組成物。
前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体が、ＣＭ−２４、２６Ｈ７、５Ｆ４、ＴＥＣ−１１、１２−１４０−４、４／３／１７、ＣＯＬ−４、Ｆ３６−５４、３４Ｂ１、ＹＧ−Ｃ２８Ｆ２、Ｄ１４ＨＤ１１、ｂ１８．７．７、Ｄ１１−ＡＤ１１、ＨＥＡ８１、Ｂ１．１、ＣＬＢ−ｇｒａｎ−１０、Ｆ３４−１８７、Ｔ８４．１、Ｂ６．２、Ｂ１．１３、ＹＧ−Ｃ９４Ｇ７、１２−１４０−５、ｓｃＦｖ−ＤＩＡＴＨＩＳ１、ＴＥＴ−２、それらの抗原結合断片、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１で示される配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：２で示される配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３で示される配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４で示される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５で示される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６で示される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３と、を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
前記ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体が、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ５１４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＣＴ−０１１、それらの抗原結合断片、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体が、ＭＥＤＩ−４７３６、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、それらの抗原結合断片、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記モノクローナル抗体が、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
ヒトリンパ球細胞をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記リンパ球細胞が、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−１またはその両方を発現する、請求項１２に記載の医薬組成物。
前記リンパ球細胞が、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−１を発現する、請求項１３に記載の医薬組成物。
前記リンパ球細胞が、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）細胞、リンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
前記リンパ球細胞が、ＴＩＬ細胞およびＬＡＫ細胞からなる群から選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
前記リンパ球細胞が、活性化されている、請求項１２に記載の医薬組成物。
前記リンパ球細胞が、癌細胞に対して細胞傷害性がある、請求項１２に記載の医薬組成物。
前記癌細胞が、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはそれらの任意の組合わせを発現する、請求項１８に記載の医薬組成物。
前記癌細胞が、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ１を発現する、請求項１９に記載の医薬組成物。
前記癌細胞が、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ２を発現する、請求項１９に記載の医薬組成物。
前記癌が、黒色腫、リンパ腫、肺癌、甲状腺癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、子宮頸癌、膵臓癌、白血病、骨髄腫、卵巣癌、子宮癌、肉腫、胆道癌、および子宮内膜細胞癌からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記癌が、黒色腫およびリンパ腫癌からなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
前記ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１つへのモノクローナル抗体が、ヒトＰＤ−１とそのリガンドとの相互作用を阻害または遮断することが可能である、請求項１に記載の医薬組成物。
癌を有する患者を治療する方法であって、
（ｉ）ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物；および
（ｉｉ）ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１つへのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、
を前記患者に投与するステップを含み、それにより前記癌を処置する方法。
（ｉ）ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物；および
（ｉｉ）ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、
を前記患者に投与することを含む、請求項２５に記載の方法。
（ｉ）ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物；および
（ｉｉ）ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、
を前記患者に投与することを含む、請求項２５に記載の方法。
前記ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体が、前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体の前に前記患者に投与される、請求項２７に記載の方法。
前記ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体が、前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体と同時に前記患者に投与される、請求項２７に記載の方法。
前記ヒトＰＤ−Ｌ１へのモノクローナル抗体が、前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体の後に前記患者に投与される、請求項２７に記載の方法。
（ｉ）ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物；および
（ｉｉ）ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、
を前記患者に投与することを含む、請求項２５に記載の方法。
前記ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体が、前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体の前に前記患者に投与される、請求項３１に記載の方法。
前記ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体が、前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体と同時に前記患者に投与される、請求項３１に記載の方法。
前記ヒトＰＤ−Ｌ２へのモノクローナル抗体が、前記ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体の後に前記患者に投与される、請求項３１に記載の方法。
リンパ球細胞を含む医薬組成物を前記患者に投与することをさらに含む、請求項２５〜３４のいずれか１項に記載の方法。
前記リンパ球細胞が、前記投与の前に、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体と共にプレインキュベートされる、請求項３５に記載の方法。
前記リンパ球細胞が、前記投与の前に、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体と共にプレインキュベートされる、請求項３６に記載の方法。
前記リンパ球細胞が、前記投与の前に、ヒトＰＤ−１へのモノクローナル抗体と共にプレインキュベートされ、その後、ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体と共にインキュベートされる、請求項３７に記載の方法。
前記リンパ球細胞が、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−１またはその両方を発現する、請求項３５に記載の方法。
前記リンパ球細胞が、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−１を発現する、請求項３９に記載の方法。
前記リンパ球細胞が、ＴＩＬ細胞、ＬＡＫ細胞、ＣＩＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
前記リンパ球細胞が、自家リンパ球細胞である、請求項３５に記載の方法。
前記リンパ球細胞が、活性化されている、請求項３５に記載の方法。
前記癌が、ＣＥＡＣＡＭ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはそれらの任意の組合わせを発現する、請求項２５に記載の方法。
前記癌が、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ１を発現する、請求項４４に記載の方法。
前記癌が、ＣＥＡＣＡＭ１およびＰＤ−Ｌ２を発現する、請求項４４に記載の方法。
前記癌が、黒色腫、リンパ腫、肺癌、甲状腺癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、子宮頸癌、膵臓癌、白血病、骨髄腫、卵巣癌、子宮癌、肉腫、胆道癌、および子宮内膜細胞癌からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
前記癌が、黒色腫およびリンパ腫癌からなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。
前記ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１つへのモノクローナル抗体が、ヒトＰＤ−１とそのリガンドとの相互作用を阻害または遮断することが可能である、請求項２５に記載の方法。
（ｉ）ヒトＣＥＡＣＡＭ１へのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物；および
（ｉｉ）ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のうちの少なくとも１つへのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、
を含むキット。