JP2019507164A

JP2019507164A - Ｂａｃｅ１阻害剤

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Publication number: JP2019507164A
Application number: JP2018545835A
Authority: JP
Inventors: ハープ，ヴォルフガング; ヴォルテリング，トーマス
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2016-03-01
Filing date: 2017-02-28
Publication date: 2019-03-14
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Also published as: EP3423450B1; CN108699051B; HK1257566A1; TW201734010A; WO2017148878A1; EP3423450A1; JP6616525B2; US20190055231A1; TWI644913B; CN108699051A; US20210101894A1; AR107752A1; US20220298152A1

Abstract

本発明は、ＢＡＣＥ１阻害活性を有する式（Ｉ）の化合物、その製造、それを含有する医薬組成物及び治療活性物質としてのその使用を提供する。本発明の活性化合物は、例えばアルツハイマー病の治療的及び／又は予防的処置に有用である。

Description

［背景技術］
アルツハイマー病（ＡＤ）は、中枢神経系の神経変性障害であり、そして高齢者人口における進行性認知症の主な原因である。その臨床症状は、記憶、認識、時間及び場所の見当識、判断力ならびに論理的思考の機能障害であるが、また重度の情緒障害でもある。現在のところ、この疾患又はその進行を防ぐか、あるいはその臨床症状を安定に回復させることができる利用可能な処置法は存在しない。ＡＤは、高い平均余命を持つすべての社会において主要な健康問題になっており、そしてまたそれらの医療制度にとって重大な経済的負担にもなっている。

ＡＤは、中枢神経系（ＣＮＳ）における２つの主要な病態である、アミロイド斑及び神経原線維変化（neurofibrillar tangle）の発生によって特徴付けられる（Hardy et al., The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics, Science. 2002 Jul 19;297(5580):353-6, Selkoe, Cell biology of the amyloid beta-protein precursor and the mechanism of Alzheimer's disease, Annu Rev Cell Biol. 1994;10:373-403）。マウスにおけるＢＡＣＥ１遺伝子の遺伝子除去によって、その活性はＡβ−ペプチドの生成をもたらすＡＰＰのプロセシングにとって不可欠であり、ＢＡＣＥ１の非存在下ではＡβ−ペプチドが産生されないことが明確に示されている。両方の病態はまた、ダウン症候群（２１トリソミー）の患者においても一般に観察されるが、これらの患者も若年期にＡＤ様症状を呈する。神経原線維変化は、微小管結合タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）の細胞内凝集体である。アミロイド斑は、細胞外空間において生じる；その主成分は、Ａβ−ペプチドである。後者は、一連のタンパク質分解切断工程により、β−アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）に由来するタンパク質分解断片の一群である。ＡＰＰの幾つかの型が同定されており、その中で最も豊富なものは、６９５、７５１及び７７０アミノ酸長のタンパク質である。それらはすべて、単一遺伝子からディファレンシャルスプライシングにより生じる。Ａβ−ペプチドは、ＡＰＰの同じドメインに由来するが、そのＮ−及びＣ−末端が異なり、主要な種は４０及び４２アミノ酸長のものである。凝集Ａβ−ペプチドがＡＤの発症における必須の分子であることを強く示唆する幾つかの証拠が存在する：１）Ａβ−ペプチドから形成されたアミロイド斑は、ＡＤ病態の不変部分である；２）Ａβ−ペプチドは、ニューロンに対して毒性がある；３）家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）において、疾患遺伝子のＡＰＰ、ＰＳＮ１、ＰＳＮ２における突然変異は、Ａβ−ペプチドのレベルの上昇及び早期の脳アミロイドーシスをもたらす；４）このようなＦＡＤ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスは、ヒトの疾患と多くの類似点を持つ病態を呈する。Ａβ−ペプチドは、β−及びγ−セクレターゼと称される２種のタンパク質分解酵素の連続作用によりＡＰＰから産生される。β−セクレターゼは、最初にＡＰＰの細胞外ドメインにおいて、膜貫通ドメイン（ＴＭ）の外側約２８アミノ酸を切断して、ＴＭ−及び細胞質ドメインを含有するＡＰＰのＣ−末端断片（ＣＴＦβ）を産生する。ＣＴＦβは、γ−セクレターゼの基質であり、これが、ＴＭ内の幾つかの隣接位置で切断して、Ａβペプチド及び細胞質断片を産生する。γ−セクレターゼは、少なくとも４種の異なるタンパク質の複合体であり、その触媒サブユニットは、プレセニリンタンパク質（ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２）の可能性が非常に高い。β−セクレターゼ（ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２；ＢＡＣＥは、β部位ＡＰＰ切断酵素を表す）は、膜貫通ドメインにより膜中に固定されているアスパルチルプロテアーゼである（Vassar et al., Beta-secretase cleavage of Alzheimer's amyloid precursor protein by the transmembrane aspartic protease BACE, Science. 1999 Oct 22;286(5440):735）。これは、人体の多くの組織において発現するが、そのレベルは、ＣＮＳにおいて特に高い。マウスにおけるＢＡＣＥ１遺伝子の遺伝子除去によって、その活性はＡβ−ペプチドの生成をもたらすＡＰＰのプロセシングに不可欠であり、ＢＡＣＥ１の非存在下ではＡβ−ペプチドは産生されないことが明確に示されている（Luo et al., Mice deficient in BACE1, the Alzheimer's beta-secretase, have normal phenotype and abolished beta-amyloid generation, Nat Neurosci. 2001 Mar; 4(3):231-2, Roberds et al., BACE knockout mice are healthy despite lacking the primary beta-secretase activity in brain: implications for Alzheimer's disease therapeutics, Hum Mol Genet. 2001 Jun 1;10(12):1317-24）。ヒトＡＰＰ遺伝子を発現するように遺伝子操作されており、そして加齢の間に広範なアミロイド斑及びアルツハイマー病様病態を形成するマウスは、ＢＡＣＥ１対立遺伝子の１つの遺伝子除去によりβ−セクレターゼ活性が減少されると、そういった病態を呈することがない（McConlogue et al., Partial reduction of BACE1 has dramatic effects on Alzheimer plaque and synaptic pathology in APP Transgenic Mice. J Biol Chem. 2007 Sep 7;282(36):26326）。したがって、ＢＡＣＥ１活性の阻害剤は、アルツハイマー病（ＡＤ）における治療的介入のために有用な薬剤となり得ることが推測される。

Ａβペプチドの蓄積及び凝集は、ＡＤの根底にある原因の１つである。ＡＰＰは、ＢＡＣＥ１によって切断されて、ＡＰＰの可溶性Ｎ末端外部ドメイン（ｓＡＰＰβ）及び膜結合断片Ｃ９９を生成する。このＣ９９断片は、次いで、γ−セクレターゼによって切断されて、Ａβ４０及びＡβ４２等の様々なＡβ種を生成する。これらＡβ種は、最も神経毒性の強い種であり、そして、アミロイド斑の形成に関与している。

更に、神経組織（例えば、脳）内、上又は周囲におけるβ−アミロイドペプチドの形成、又は形成及び沈着は、本化合物によって阻害される、すなわち、ＡＰＰ又はＡＰＰ断片からのＡβ産生が阻害される。

ＢＡＣＥ１の阻害剤は、更に、以下の疾患を処置するために使用することができる：ＩＢＭ（封入体筋炎)（Vattemi G. et al., Lancet. 2001 Dec 8;358(9297):1962-4）、ダウン症候群（Barbiero L. et al, Exp Neurol. 2003 Aug;182(2):335-45）、ウィルソン病（Sugimoto I. et al., J Biol Chem. 2007 Nov 30;282(48):34896-903）、ウィップル病（Desnues B. et al., Clin Vaccine Immunol. 2006 Feb;13(2):170-8）、脊髄小脳失調症１型及び脊髄小脳失調症７型（Gatchel J.R. et al., Proc Natl Acad Sci U S A 2008 Jan 29;105(4):1291-6）、皮膚筋炎（Greenberg S.A. et al., Ann Neurol. 2005 May;57(5):664-78及びGreenberg S.A. et al., Neurol 2005 May;57(5):664-78）、カポジ肉腫（Lagos D. et al, Blood, 2007 Feb 15; 109(4):1550-8）、多形神経膠芽腫（E-MEXP-2576, http://www.ebi.ac.uk/microarray-as/aer/result?queryFor=PhysicalArrayDesign&aAccession=A-MEXP-258）、関節リウマチ（Ungethuem U. et al, GSE2053）、筋萎縮性側索硬化症（Koistinen H. et al., Muscle Nerve. 2006 Oct;34(4):444-50及びLi Q.X. et al, Aging Cell. 2006 Apr;5(2):153-65）、ハンチントン病（Kim Y.J. et al., Neurobiol Dis. 2006 May;22(2):346-56. Epub 2006 Jan 19及びHodges A. et al., Hum Mol Genet. 2006 Mar 15;15(6):965-77. Epub 2006 Feb 8）、多発性骨髄腫（Kihara Y. et al, Proc Natl Acad Sci U S A. 2009 Dec 22;106(51):21807-12）、悪性黒色腫（Talantov D. et al, Clin Cancer Res. 2005 Oct 15;11(20):7234-42）、シェーグレン症候群（Basset C. et al., Scand J Immunol. 2000 Mar;51(3):307-11）、紅斑性狼瘡（Grewal P.K. et al, Mol Cell Biol. 2006, Jul;26(13):4970-81）、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、乳癌（Hedlund M. et al, Cancer Res. 2008 Jan 15;68(2):388-94及びKondoh K. et al., Breast Cancer Res Treat. 2003 Mar;78(1):37-44）、胃腸疾患（Hoffmeister A. et al, JOP. 2009 Sep 4;10(5):501-6）、自己免疫／炎症性の疾患（Woodard-Grice A.V. et al., J Biol Chem. 2008 Sep 26;283(39):26364-73. Epub 2008 Jul 23）、関節リウマチ（Toegel S. et al, Osteoarthritis Cartilage. 2010 Feb;18(2):240-8. Epub 2009 Sep 22）、炎症反応（Lichtenthaler S.F. et al., J Biol Chem. 2003 Dec 5;278(49):48713-9. Epub 2003 Sep 24）、動脈血栓症（Merten M. et al., Z Kardiol. 2004 Nov;93(11):855-63）、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患（Maugeri N. et al., Srp Arh Celok Lek. 2010 Jan;138 Suppl 1:50-2)、ならびにグレーブス病（Kiljanski J. et al, Thyroid. 2005 Jul;15(7):645-52)。

ＷＯ２０１４／１６６９０６号、ＷＯ２０１４／１３４３４１号及びＷＯ２０１５／１５６４２１号には、ＢＡＣＥ−１阻害剤としてのオキサジン及びその使用が記載されている。

本発明は、式Ｉの新規化合物、その製造、本発明に係る化合物に基づく医薬及びその生産に加えて、アルツハイマー病等の病気の管理又は予防における式Ｉの化合物の使用を提供する。更に、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫／炎症性の疾患、乳癌等の癌、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形神経膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症反応、カポジ肉腫、コストマン病、紅斑性狼瘡、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症７型、ウィップル病、ならびにウィルソン病の処置における式Ｉの化合物の使用。式Ｉの新規化合物は、改善された薬理学的特性を有する。

発明の分野
本発明は、ＢＡＣＥ１阻害特性を有するＮ−［６−［（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−５−フルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−１，３−オキサジン−４−イル］−５−フルオロ−２−ピリジル］−５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボキサミド、その製造、それを含有する医薬組成物及び治療活性物質としてのその使用を提供する。

発明の概要
本発明は、式Ｉの化合物

又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

本化合物は、Ａｓｐ２（β−セクレターゼ、ＢＡＣＥ１又はメマプシン−２）阻害活性を有するので、β−アミロイドレベル及び／又はβ−アミロイドオリゴマー及び／又はβ−アミロイド斑の増大ならびに更には沈着を特徴とする疾患及び障害、特に、アルツハイマー病の治療的及び／又は予防的処置において使用することができる。本化合物及びその薬学的に活性のある塩は、例えば良好なバイオアベイラビリティ等の更なる幾つかの特性を有し、該特性によって創薬に好適なものとなる。

発明の詳細な説明
本発明は、式Ｉの化合物及びその薬学的に許容し得る塩、上述の化合物の調製、それを含有する医薬ならびにその製造に加えて、アルツハイマー病等のＢＡＣＥ１の阻害に関連する疾患及び障害の治療的及び／又は予防的処置における上述の化合物の使用を提供する。更に、神経組織（例えば、脳）内、上又は周囲のβ−アミロイド斑の形成又は形成及び沈着は、ＡＰＰ又はＡＰＰ断片からのＡβ産生を阻害することによって、本化合物によって阻害される。

本明細書で用いられる一般用語の以下の定義は、問題の用語が単独で用いられるか又は他の群と組み合わせて用いられるかに関係なく適用される。

特に記載しない限り、本明細書及び特許請求の範囲を含む本願で使用される以下の用語は、下記定義を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈上特に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。

用語「薬学的に許容し得る塩」は、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適な塩を指す。無機酸及び有機酸との好適な塩の例は、酢酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、塩酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、硝酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、トリフルオロ酢酸等であるが、これらに限定されない。具体的な酸は、ギ酸、トリフルオロ酢酸及び塩酸である。特定の酸は、塩酸、トリフルオロ酢酸及びフマル酸である。

用語「薬学的に許容し得る担体」及び「薬学的に許容し得る補助物質」は、処方の他の成分と適合する希釈剤又は賦形剤等の担体及び補助物質を指す。

用語「医薬組成物」は、所定の量又は比率の指定の成分を含む製品、ならびに指定の量の指定の成分を合わせることによって直接又は間接的に得られる任意の製品を包含する。特に、医薬組成物は、１つ以上の活性成分と不活性成分を含む任意の担体とを含む製品に加えて、成分のうちの任意の２つ以上の組み合わせ、複合体化若しくは凝集から、又は成分のうちの１つ以上の解離から、又は成分のうちの１つ以上の他の種類の反応若しくは相互作用から直接又は間接的に得られる任意の製品を包含する。

用語「阻害剤」は、特定のリガンドの特定の受容体に対する結合と競合する、該結合を低減若しくは阻止するか、又は特定のタンパク質の機能の阻害を低減若しくは阻止する化合物を意味する。

用語「最大半量阻害濃度」（ＩＣ_５０）は、インビトロで生物学的プロセスを５０％阻害するのに必要な特定の化合物の濃度を意味する。ＩＣ_５０値は、ｐＩＣ_５０値（−ｌｏｇＩＣ_５０）に対数的に変換することができ、この場合、より高い値が指数関数的により高い効力を示す。ＩＣ_５０値は絶対値ではなく、実験条件、例えば、使用する濃度に依存する。ＩＣ_５０値は、Cheng-Prusoff式（Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099）を用いて絶対阻害定数（Ｋｉ）に変換することができる。用語「阻害定数」（Ｋｉ）は、特定の阻害剤の受容体に対する絶対結合親和性を意味する。それは、競合結合アッセイを用いて測定され、そして、競合するリガンド（例えば、放射性リガンド）が存在しない場合、特定の阻害剤が受容体の５０％を占有する濃度に等しい。Ｋｉ値は、ｐＫｉ値（−ｌｏｇＫｉ）に対数的に変換することができ、この場合、より高い値が指数関数的により高い効力を示す。

「治療上有効な量」は、疾患状態を処置するために被験体に投与したとき、該疾患状態にこのような処置の効果をもたらすのに十分な化合物の量を意味する。「治療上有効な量」は、化合物、処置される疾患状態、重篤度又は処置される疾患、被験体の年齢及び相対健康、投与の経路及び形態、担当する医師又は獣医の判断、ならびに他の要因に依存して変動するであろう。

用語「本明細書に定義される」及び「本明細書に記載される」には、変数について言及するとき、該変数の広い定義に加えて、もしあれば、具体的な、より具体的な及び最も具体的な定義も参照により組み込まれる。

用語「処理する」、「接触させる」及び「反応させる」は、化学反応について言及するとき、指定の及び／又は所望の生成物を生成するために適切な条件下で２つ以上の試薬を添加又は混合することを意味する。指定の及び／又は所望の生成物を生成する反応は、必ずしも、最初に添加された２つの試薬の組み合わせから直接得られなくてもよく、すなわち、混合物中で生成される１つ以上の中間体が存在し、これが最終的に指定の及び／又は所望の生成物の形成に導いてもよいことを理解すべきである。

用語「保護基」は、合成化学における従来それに関係する意味において、別の保護されていない反応性部位で化学反応を選択的に実行することができるように、多官能性化合物の反応性部位を選択的にブロックする基を意味する。保護基は、適切な時点で除去することができる。例示的な保護基は、アミノ保護基、カルボキシ保護基又はヒドロキシ保護基である。用語「アミノ保護基」(本明細書ではＸともいう）は、アミノ基を保護することを意図する基を意味し、そして、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（カルボベンジルオキシ、ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、tert−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）及びトリフルオロアセチルを含む。これら基の更なる例は、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, 2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, 1991, chapter 7；E. Haslam, “Protective Groups in Organic Chemistry”, J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, NY, 1973, Chapter 5、及びT.W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley and Sons, New York, NY, 1981に見られる。用語「保護されたアミノ基」は、アミノ保護基によって置換されているアミノ基を指す。具体的なアミノ保護基は、tert−ブトキシカルボニル基及びジメトキシトリチルである。

用語「脱離基」は、合成有機化学において従来それに関連する意味を有する基、すなわち、置換反応条件下で置換可能な原子又は基を意味する。脱離基の例は、ハロゲン、特にブロモ、アルカン−又はアリーレンスルホニルオキシ、例えば、メタンスルホニルオキシ、エタンスルホニルオキシ、チオメチル、ベンゼンスルホニルオキシ、トシルオキシ、ジハロホスフィノイルオキシ、場合により置換されているベンジルオキシ、イソプロピルオキシ、及びアシルオキシを含む。

用語「薬学的に許容し得る賦形剤」は、医薬製品の製剤化において用いられる崩壊剤、結合剤、充填剤、溶媒、緩衝剤、等張化剤、安定剤、酸化防止剤、界面活性剤又は滑沢剤等の、治療活性を有さず、そして、非毒性である任意の成分を意味する。

化学構造中に不斉炭素が存在する場合は常に、その不斉炭素に関連するすべての立体異性体が純粋な立体異性体及びその混合物として該構造に包含されることを意図する。

本発明はまた、医薬組成物、前述の化合物の使用方法及び調製方法を提供する。

すべての別個の実施態様は、組み合わせてもよい。

本発明の一実施態様は、式Ｉの化合物

又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

特定の実施態様は、Ｎ−［６−［（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−５−フルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−１，３−オキサジン−４−イル］−５−フルオロ−２−ピリジル］−５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボキサミドに関する。

特定の実施態様は、式Ｉの化合物の代謝物Ｍ１に関する。

特定の実施態様は、本明細書に定義される式Ｉの化合物であって、式ＸＩ’の化合物を式ＸＩＩ’の化合物と反応させて、式Ｉの化合物にすることを含むプロセスに関する

（式中、Ｘは、アミノ保護基である）。

本発明の特定の実施態様は、上に定義されたプロセスにより調製されたときの、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、治療活性物質として使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、ＢＡＣＥ１活性の阻害剤として使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、β−アミロイドレベル及び／若しくはβ−アミロイドオリゴマー及び／若しくはβ−アミロイド斑の増大ならびに更には沈着を特徴とする疾患及び障害、又はアルツハイマー病を治療的及び／又は予防的に処置するための治療活性物質として使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、アルツハイマー病を治療的及び／又は予防的に処置するための治療活性物質として使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫／炎症性の疾患、乳癌等の癌、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形神経膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症反応、カポジ肉腫、コストマン病、紅斑性狼瘡、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症７型、ウィップル病又はウィルソン病を治療的及び／又は予防的に処置するための治療活性物質として使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、本明細書に記載される式Ｉの化合物と薬学的に許容し得る担体及び／又は薬学的に許容し得る補助物質とを含む医薬組成物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、ＢＡＣＥ１活性の阻害において使用するための医薬を製造するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物の使用を提供する。

本発明の特定の実施態様は、β−アミロイドレベル及び／若しくはβ−アミロイドオリゴマー及び／若しくはβ−アミロイド斑の増大ならびに更には沈着を特徴とする疾患及び障害、又はアルツハイマー病を治療的及び／又は予防的に処置するための医薬を製造するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物の使用を提供する。

本発明の特定の実施態様は、アルツハイマー病を治療的及び／又は予防的に処置するための医薬を製造するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物の使用を提供する。

本発明の特定の実施態様は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫／炎症性の疾患、乳癌等の癌、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形神経膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症反応、カポジ肉腫、コストマン病、紅斑性狼瘡、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症７型、ウィップル病又はウィルソン病を治療的及び／又は予防的に処置するための医薬を製造するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物の使用を提供する。

本発明の特定の実施態様は、ＢＡＣＥ１活性の阻害において使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、β−アミロイドレベル及び／若しくはβ−アミロイドオリゴマー及び／若しくはβ−アミロイド斑の増大ならびに更には沈着を特徴とする疾患及び障害、又はアルツハイマー病の治療的及び／又は予防的処置において使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、アルツハイマー病の治療的及び／又は予防的処置において使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫／炎症性の疾患、乳癌等の癌、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形神経膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症反応、カポジ肉腫、コストマン病、紅斑性狼瘡、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症７型、ウィップル病又はウィルソン病の治療的及び／又は予防的処置において使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。

本発明の特定の実施態様は、ＢＡＣＥ１活性の阻害において使用する方法、特に、β−アミロイドレベル及び／若しくはβ−アミロイドオリゴマー及び／若しくはβ−アミロイド斑の増大ならびに更には沈着を特徴とする疾患及び障害、又はアルツハイマー病を治療的及び／又は予防的に処置する方法であって、本明細書に記載される式Ｉの化合物をヒト又は動物に投与することを含む方法を提供する。

本発明の特定の実施態様は、アルツハイマー病の治療的及び／又は予防的処置において使用するための方法であって、本明細書に記載される式Ｉの化合物をヒト又は動物に投与することを含む方法を提供する。

本発明の特定の実施態様は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫／炎症性の疾患、乳癌等の癌、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形神経膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症反応、カポジ肉腫、コストマン病、紅斑性狼瘡、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症７型、ウィップル病又はウィルソン病の治療的及び／又は予防的処置において使用する方法であって、本明細書に記載される式Ｉの化合物をヒト又は動物に投与することを含む方法を提供する。

当業者は、式Ｉの化合物が互変異性体形態で存在し得ることを認識するであろう。

すべての互変異性体形態が本発明に包含される。

式Ｉの化合物は、以下のスキームに従って調製することができる。出発物質は、市販されているか、又は公知の方法に従って調製することができる。任意の既に定義された残基及び変数は、特に指定しない限り、既に定義された意味を引き続き有するであろう。

式Ｉの光学的に純粋な鏡像異性体は、化合物の異性体の総重量に基づいて、該化合物が＞９０重量％の所望の異性体、具体的には＞９５重量％の所望の異性体、又はより具体的には＞９９重量％の所望の異性体を含有することを意味する。キラル的に純粋な又はキラル的に濃縮された化合物は、キラル選択的合成又は鏡像異性体の分離によって調製され得る。鏡像異性体の分離は、最終生成物に対して、あるいは好適な中間体に対して実施し得る。

式Ｉの化合物は、以下のスキームに従って調製することができる。出発物質は、公知の方法に従って調製することができる。任意の既に定義された残基及び変数は、特に指定しない限り、既に定義された意味を引き続き有する。

式Ｉの化合物は、反応スキーム１に従って調製することができる。ＨＡＴＵ、ＴＢＴＵ、ＢＯＰ−Ｃｌ、塩化オキサリル、Ghosez試薬等の好適なアミドカップリング試薬の存在下、ＤＩＥＡ、トリエチルアミン等の好適な塩基の存在下、アセトニトリル、ジクロロメタン、ＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＮＭＰ等の有機溶媒中で、芳香族アミン１（ＣＡＳ１６３０９７３−７５−９；ＷＯ２０１４１６６９０６号）を５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸（ＣＡＳ１２６２８６０−４９−０）と反応させて、アミド２を形成する。ＴＦＡ、ギ酸、メチルスルホン酸等の適切な酸を使用することによって化合物２のＢｏｃ保護基を除去して、化合物Ｉを形成することができる。

酸との対応する薬学的に許容し得る塩は、当業者に公知の標準的な方法、例えば、ジオキサン又はＴＨＦ等の好適な溶媒中に式Ｉの化合物を溶解させ、そして、適切な量の対応する酸を添加することによって得ることができる。生成物は、通常、濾過又はクロマトグラフィーによって単離することができる。式Ｉの化合物を塩基で処理することによって、該化合物を該塩基との薬学的に許容し得る塩に変換することができる。このような塩を形成する１つの可能な方法は、例えば、塩基性塩、例えばＭ（ＯＨ）_ｎ（式中、Ｍ＝金属又はアンモニウムのカチオンであり、そして、ｎ＝ヒドロキシドアニオンの数である）１／ｎ当量を該化合物の好適な溶媒（例えば、エタノール、エタノール−水混合物、テトラヒドロフラン−水混合物）溶液に添加し、そして、蒸発又は凍結乾燥によって該溶媒を除去することによるものである。

その調製が実施例に記載されていない限り、式Ｉの化合物及びすべての中間生成物は、類似の方法に従って又は本明細書に記載される方法に従って調製することができる。出発物質は、市販されているか、当技術分野において公知であるか、又は当技術分野において公知の方法若しくはそれに類似する方法により調製することができる。

本発明における一般式Ｉの化合物は、官能基で誘導体化されて、インビボで親化合物に変換し直すことができる誘導体を与えることができると理解されよう。

比較化合物１、２、及び３（式ＩＩａ／ＩＩｂ）の合成
より詳細には、本発明に係る式ＩＩの化合物は、以下に与える方法及び手順によって調製することができる。式ＩＩａ及びＩＩｂの化合物を調製するための幾つかの典型的な手順をスキーム１に説明する。

一般式Ｂ３の市販されていないアリールケトンは、テトラヒドロフラン又はジエチルエーテル等の不活性非プロトン性溶媒中で、強塩基、例えばＬＤＡ及びアルキルクロロシラン、好ましくはトリエチルクロロシランと反応させることによって、ピリジンＢ１から調製されるシリル保護されたピリジンＢ２から合成することができる。次いで、保護されたピリジンＢ２を、テトラヒドロフラン又はジエチルエーテル等の不活性非プロトン性溶媒中で、強塩基、例えばＬＤＡ及びアミド、例えばＲ^３＝Ｍｅの場合アセトアミド、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドと再度反応させて、所望のアリールケトンＢ３を与えることができる。

式Ｂ４のスルフィニルイミンは、ルイス酸、例えばチタン（ＩＶ）アルコキシド、より具体的にはチタン（ＩＶ）エトキシドの存在下、エーテル、例えばジエチルエーテル、又はより具体的にはテトラヒドロフラン等の溶媒中で、式Ｂ３のアリールケトンと、スルフィンアミド、例えばアルキルスルフィンアミド、最も具体的には（Ｒ）−tert−ブチルスルフィンアミド又は（Ｓ）−tert−ブチルスルフィンアミドとを縮合させることによって、T.P. Tang & J.A. Ellman, J. Org. Chem. 1999, 64, 12と同様に調製することができる。

式Ｂ４のスルフィニルイミンの式Ｂ５のペンタフルオロケトン水和物への変換は、Tang & Ellmanによって記載されている通り、キラル配向基によって立体選択的に進行する。式Ｂ４のスルフィニルイミンは、例えばOrg. Synth. 1999, 76, 151に記載されている通り、ヘキサフルオロイソプロパノールをｎ−ブチルリチウム２当量で単純に処理することによって生成し得るリチウムペンタフルオロプロペン−２−オラートと反応させることができる。

式Ｂ５のペンタフルオロケトン水和物の式Ｂ６のペンタフルオロケトン水和物への変換は、酸、例えば酢酸の存在下、エーテル又はアミド、好ましくはＴＨＦとジメチルホルムアミドとの混合物中、周囲温度から高温、特に２３〜４０℃で、フッ化テトラブチルアンモニウム又は好ましくはフッ化カリウムを用いて行うことができる。

式Ｂ７のペンタフルオロアルコールは、エーテル、例えばジエチルエーテル又はより具体的にはテトラヒドロフランと水とを含有する溶媒混合物、又はアルコール性溶媒、例えばメタノール又はエタノール中、０℃〜周囲温度の温度で、式Ｂ６のペンタフルオロケトン水和物をアルカリ水素化物、例えば水素化ホウ素リチウム又は水素化ホウ素ナトリウム、好ましくは水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元することによって調製することができる。式Ｂ７ａ及びＢ７ｂの異性化合物は、この段階で、カラムクロマトグラフィー等の標準的な方法によって分離することができる。

式Ｂ８ａ又はＢ８ｂのアミノアルコールを与えるための式Ｂ７ａ又はＢ７ｂのキラル配向基の加水分解は、エーテル、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、又はより具体的には１，４−ジオキサン等の溶媒中、鉱酸、例えば硫酸又は具体的には塩酸を用いて行うことができる。

式Ｂ９ａ又はＢ９ｂのアミノオキサジン（Ｒ、Ｒ’＝Ｈ）は、アルコール、具体的にはエタノール等の溶媒中、式Ｂ８ａ又はＢ８ｂのアミノアルコールを臭化シアンと反応させることによって調製することができる。

一般式Ｂ１０ａ又はＢ１０ｂの化合物を生成するための式Ｂ９ａ又はＢ９ｂの２−アミノオキサジン残基のアミノ基の保護は、塩基性条件下、例えば、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン等のアミンの存在下、テトラヒドロフラン又はジクロロメタン等の溶媒中、０〜４０℃の温度、具体的には周囲温度で、ジ−tert−ブチルジカーボナートと反応させることによって行うことができる。

あるいは、一般式Ｂ１０ａ又はＢ１０ｂの化合物は、以下の順序によって調製することもできる：第１に、式Ｂ８ａ又はＢ８ｂのアミノアルコールを、酢酸エチル、テトラヒドロフラン又はアセトニトリル等の溶媒中、０℃〜８０℃の温度、好ましくは２３℃で、ベンゾイルイソチオシアナート（ＢｚＮＣＳ）等のイソチオシアナートと反応させて、チオ尿素アルコールを与え；第２に、溶媒、例えば酢酸エチル、テトラヒドロフラン又はアセトニトリル、好ましくはアセトニトリル中、２３℃〜１００℃の温度、好ましくは８０℃で、カルボジイミド、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド又はＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）、好ましくはＥＤＣ・ＨＣｌとの反応を通したデヒドロスルフレーションによって、該チオ尿素アルコールを環化して式Ｂ９ａ又はＢ９ｂのＮ−ベンゾイル化オキサジン（Ｒ＝Ｈ、Ｒ’＝Ｂｚ）にし；第３に、トリエチルアミン又はＮ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン等のアミン塩基の存在下、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン又はアセトニトリル等の溶媒中、０℃〜４０℃の温度、好ましくは２３℃における、式Ｂ９ａ又はＢ９ｂの二重にアシル化されたオキサジン（Ｒ＝Ｂｏｃ、Ｒ’＝Ｂｚ）を与えるためのジ−tert−ブチルジカーボナート（Ｂｏｃ_２Ｏ）との第１の反応、そして、溶媒、例えばジクロロメタン又はテトラヒドロフラン、好ましくはテトラヒドロフラン中、０℃〜４０℃の温度、好ましくは２３℃における、該式Ｂ９ａ又はＢ９ｂの二重にアシル化されたオキサジン（Ｒ＝Ｂｏｃ、Ｒ’＝Ｂｚ）とアミン求核剤、例えばジエチルアミン、ジメチルアミン又はアンモニア、好ましくはアンモニアとの反応による第２のベンゾイル基の選択的除去による二工程手順で、式Ｂ９ａ又はＢ９ｂのＮ−ベンゾイル化オキサジン（Ｒ＝Ｈ、Ｒ’＝Ｂｚ）から式Ｂ１０ａ又はＢ１０ｂのＮ−tert−ブトキシカルボニル化オキサジンへの保護基の切り換えを達成することができる。

式Ｂ１０ａ又はＢ１０ｂにおけるブロモ基の式Ｂ１１ａ又はＢ１１ｂにおけるアミン基への変換は、Ｌ−アスコルビン酸塩及びアルキル−１，２−ジアミン、特にtrans−Ｎ，Ｎ’−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミンの存在下、アルコール、特にエタノール等のプロトン性溶媒及び水、又は１，４−ジオキサン等の極性エーテル及び水中、高温、好ましくは約７０℃で、アジド、特に、アジ化ナトリウム及びハロゲン化銅（Ｉ）、特にヨウ化銅（Ｉ）と反応させることによって実施することができる。

式Ｂ１２ａ又はＢ１２ｂのアミドを与えるための芳香族アミンＢ１１ａ又はＢ１１ｂとカルボン酸とのカップリングは、ＥｔＯＡｃ等の非プロトン性溶媒中、周囲温度で、Ｔ３Ｐを用いて行うことができる。あるいは、ジクロロメタン等の塩素化溶媒中、０℃で、塩化オキサリル又は１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチル−１−プロペニルアミン（Ghosez試薬、ＣＡＳ番号２６１８９−５９−３）等の試薬を使用することによってカルボン酸を活性化し、続いて、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン等のアミン塩基の存在下、０℃〜周囲温度で、芳香族アミンＢ１１ａ又はＢ１１ｂと反応させてもよい。

一般式ＩＩａ又はＩＩｂの化合物を生成するための、式Ｂ１２ａ又はＢ１２ｂの化合物における保護しているtert−ブトキシカルボニル基の切断は、ジクロロメタン等の不活性溶媒中、０℃〜周囲温度の温度で、トリフルオロ酢酸等の酸によって行うことができる。

比較物４〜５の合成は、ＷＯ２０１４／１３４３４１号に記載されており、そして、６〜７は、ＷＯ２０１４／１６６９０６号に記載されている。

酸との対応する薬学的に許容し得る塩は、当業者に公知の標準的な方法、例えば、好適な溶媒、例えばジオキサン又はテトラヒドロフラン中に式Ｉの化合物を溶解させ、そして、適切な量の対応する酸を添加することによって得ることができる。生成物は、通常、濾過又はクロマトグラフィーによって単離することができる。式Ｉの化合物を塩基で処理することによって、該化合物を該塩基との薬学的に許容し得る塩に変換することができる。このような塩を形成する１つの可能な方法は、例えば、塩基性塩、例えばＭ（ＯＨ）_ｎ（式中、Ｍ＝金属又はアンモニウムのカチオンであり、そして、ｎ＝ヒドロキシドアニオンの数である）１／ｎ当量を該化合物の好適な溶媒（例えば、エタノール、エタノール−水混合物、テトラヒドロフラン−水混合物）溶液に添加し、そして、蒸発又は凍結乾燥によって該溶媒を除去することによるものである。具体的な塩は、塩酸塩、ギ酸塩及びトリフルオロ酢酸塩である。特定の塩は、トリフルオロ酢酸塩である。

薬理試験
式Ｉの化合物及びその薬学的に許容し得る塩は、有用な薬理学的特性を有する。本発明の化合物は、ＢＡＣＥ１活性の阻害に関連していることが見出された。下記試験に従って該化合物について調べた。

細胞Ａβ減少アッセイ：
Abeta 40 AlphaLISAアッセイを用いることができる。ＨＥＫ２９３ＡＰＰ細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートの細胞培養培地（Iscove’s ＋１０％(v/v) ウシ胎仔血清、ペニシリン／ストレプトマイシン）に播種して約８０％コンフルエントになるまで培養し、そして、培養培地の１／３の体積に３×濃度の化合物を添加した（最終ＤＭＳＯ濃度は１％v/vで維持した）。加湿したインキュベータ内にて３７℃及び５％ＣＯ_２で１８〜２０時間インキュベートした後、Perkin-Elmer Human Amyloid beta 1-40（高特異性）キット（カタログ＃ＡＬ２７５Ｃ）を用いてＡβ４０濃度を求めるために培養上清を収集した。

Perkin-Elmer White Optiplate-384（カタログ＃６００７２９０）において、培養上清２μLを１０×AlphaLISA Anti-hＡβアクセプタビーズ＋ビオチン化抗体抗Ａβ 1-40 Mix（５０μg/mL／５nM）２μLと合わせた。室温で１時間インキュベートした後、ストレプトアビジン（ＳＡ）ドナービーズ（２５μg/mL）の１．２５×調製物１６μLを添加し、そして、暗条件下で３０分間インキュベートした。次いで、６１５nmにおける発光をEnVision-Alpha Readerを用いて記録した。培養上清中のＡβ４０のレベルを、最高シグナル（阻害剤無しで１％ＤＭＳＯで処理された細胞）の百分率として計算した。Excel XLfitソフトウェアを用いてＩＣ_５０値を計算した。

ＢＡＣＥ１無細胞アッセイ（ＢＡＣＥ１酵素アッセイ）
ＢＡＣＥ１無細胞ＩＣ５０アッセイは、H. Hilpert et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 3980-3995 (dx.doi.org/10.1021/jm400225m)に記載されていた。

細胞Ａβ減少アッセイ（細胞ベースアッセイ）
細胞Ａβ減少ＩＣ５０アッセイは、H. Hilpert et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 3980-3995 (dx.doi.org/10.1021/jm400225m)に記載されていた。

ＢＡＣＥ２無細胞アッセイ（ＢＡＣＥ２酵素アッセイ）
ＢＡＣＥ２無細胞ＩＣ５０アッセイは、H. Hilpert et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 3980-3995 (dx.doi.org/10.1021/jm400225m)に記載されていた。

マウス急性インビボモデル（野性型マウスの脳におけるＡβ４０の阻害）
急性インビボモデルは、H. Hilpert et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 3980-3995 (dx.doi.org/10.1021/jm400225m)に記載されていた。

ＢＡＣＥ１Ｋ_ＤＳＰＲアッセイ
表面プラズモン共鳴測定は、Biacore T200機器において実施した。ＢＡＣＥ−１の固定化は、〜８０００pg/mm2（ＲＵ）のタンパク質表面密度を得るためにＣＭ５センサにおいて標準的なアミンカップリング化学によって実施した。固定化は、２５℃でランニングバッファとして酢酸バッファ（２５mM 酢酸Ｎａ、１５０mM ＮａＣｌ、０．０１％Ｐ２０、３mM ＥＤＴＡ、ｐＨ４．５）を使用して実施した。第１の工程では、ＣＭ５センサ表面を０．２M Ｎ−エチル−Ｎ−ジメチルアミノポリカルボジイミド（N-ethyl-N-dimethylaminopolycarboodiimide）（ＥＤＣ）及び０．０５M Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の溶液と７分間接触させることによって、該センサ表面のカルボキシル基を反応性のスクシンイミドエステルに転換した。活性化後、所望のタンパク質表面密度に達するように、センサ表面を、１０mM 酢酸ナトリウムカップリングバッファ（ｐＨ４．５）中〜５μg/mL ＢＡＣＥ１タンパク質溶液と接触させた。最後に、該表面上の過剰の活性化カルボン酸基をエタノールアミン（１M、ｐＨ８．５、７分間）でクエンチした。

結合アッセイは、タンパク質の固定化と同じバッファ条件下、１８℃で実施した。化合物を１０mM 原液としてＤＭＳＯに溶解させ、そして、ランニングバッファで希釈して、並行してタンパク質及びレファレンス（活性化及び不活化されたＣＭ５センサ表面）の表面上において滴定系列（希釈係数２の５つの濃度）を実施した。活性部位低分子リガンド（ＣＡＳ８８３８８９−５３−０）をレファレンスとして用いて、実験中のＢＡＣＥ１の結合活性をモニタリングした。

（R. Copeland et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2006 (5), 730-739.）に公開されている等式：ｔ_１／２＝０．６９３／k_offを用いて、ＢＡＣＥ１標的滞留時間を計算した。

ｈＥＲＧＩＣ_２０アッセイ
ｈＥＲＧＩＣ２０値を求めるための方法は、Industrializing electrophysiology: HT automated patch clamp on SyncroPatch（登録商標） 96 using instant frozen cells. Polonchuk L., Methods Mol Biol. 2014;1183:81-92. (doi: 10.1007/978-1-4939-1096-0_5.) PMID:25023303に記載されていた。

ｈＥＲＧパッチライナーアッセイ
ｈＥＲＧＩＣ２０パッチライナー値を求めるための方法は、Toward a New Gold Standard for Early Safety: Automated Temperature-Controlled hERG Test on the PatchLiner. Polonchuk L., Front Pharmacol. 2012 Jan 26;3:3. (doi: 10.3389/fphar.2012.00003. eCollection 2012.) PMID:22303293に記載されていた。

Ｐ−ｇｐ輸送アッセイ（ヒト及びマウス）（Ｐ−ｇｐアッセイ）
Ｐ−ｇｐ輸送アッセイは、H. Hilpert et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 3980-3995 (dx.doi.org/10.1021/jm400225m)に記載されていた。

ラット単回投与ＰＫ試験（WistarラットにおけるＣＳＦＡβ４０の阻害）
ラット単回投与ＰＫ試験は、H. Hilpert et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 3980-3995 (dx.doi.org/10.1021/jm400225m)に記載されていたものをわずかに改変した。

Ａβ４０濃度は、アクセプタビーズ（PerkinElmer、カタログ６７７２００２）に結合している、ラットＡβのＮ末端部分に対する市販されている抗体（２５２Ｑ６、Invitrogenカタログ番号ＡＭＢ００６２）及びインハウスのＣ末端特異的抗Ａβ４０抗体（ＢＡＰ−２４、Brockhaus M. et al., J. Neuroreport, 1998, 9:1481-1486）を用いて、改変されたPerkin-Elmerのプロトコールに従って、固相抽出を用いずに決定した。１ウェル当たり分析物２０μL（再構成された抽出物又は標準）をWhite Optiplate-96（Perkin-Elmer、カタログ＃６００５２９０）に投入した。次いで、１×AlphaLISAバッファ（Perkin-Elmer、AL000F）中、AlphaLISAアクセプタビーズ（Perkin-Elmerカタログ番号６７７２００２）に結合している、ビオチン化されたＢＡＰ２４抗体（最終濃度約１nMで１：２０００希釈）と抗体２５２Ｑ６（１：１００希釈、最終濃度１０μg/mL）との混合物を添加した。暗条件下室温で１時間インキュベートした後、ストレプトアビジンでコーティングされたドナービーズ希釈物（４０μg/mL）２０μLを添加し、そして、暗条件下で３０分間インキュベートした。６１５nmにおける発光をEnVision AlphaScreen Reader（Perkin-Elmer）を用いて記録した。Ａβ４０のレベルを非処置動物由来のベースラインサンプルの百分率として計算した。

血漿製剤ラット：
ラベルを付けたＥＤＴＡ−Ｋ２エッペンドルフチューブに血液を移し、そして、該チューブを数回反転させることによってサンプルを混合する。血液を−２０℃で保存する。

カニクイザル（Macacaca fascicularis）単回投与ＰＫ試験及び血漿Ａβ４０の決定
動物の取り扱い：
血液及び血漿の回収は、常に、処置ケージ内で実施されよう。動物を世話する飼育者は、バーを通して１本の腕又は１本の脚を掴む。静脈をよりよく見えるようにするために剃毛する。血管を圧迫し、蝶形物を使用することによって静脈を穿刺し、そして、血液を採取する。十分な血液が回収されたら、注射部位に綿棒を置き、そして、針を静かに取り出す。創傷に綿棒を加圧することによって、出血を止める。血漿サンプルを５分〜４８時間の間採取する。

血漿製剤カニクイザル：
ラベルを付けたＥＤＴＡ−Ｋ２エッペンドルフチューブに血液を移し、そして、該チューブを数回反転させることによってサンプルを混合する。血液を−２０℃で保存する。

カニクイザル血漿サンプルにおけるＡβの決定は、固相抽出後に行った（Lanz, T. et al., J. of Neuroscience Methods, 2006, 157:71-81）。凍結させた血漿サンプルを２５℃の水浴で解凍した。血漿１００μLを、完全プロテアーゼ阻害剤（Roche ０５０５６４８９００１）を含有する５０mM ＮａＣｌを含む０．２％ＤＥＡ水溶液（Sigma Ｄ８８８５）９００μLに添加し、続いて、室温で３０分間インキュベートした。Oasis ＨＬＢＬＰ９６ウェルプレート（Waters, Milford Massachusetts, USA；カタログ１８６０００６７９）６０mgを抽出プレートマニホールド（Waters, Milford Massachusetts, USA）に入れ、そして、真空に接続した。カラムプレートをメタノール（ＭｅＯＨ）１mL、続いて、蒸留水１mLで活性化した。ＤＥＡで抽出されたサンプルを投入し、そして、体積１mLの５％及び３０％ＭｅＯＨで逐次洗浄し、そして、９０％ＭｅＯＨ中２％ＮＨ４ＯＨ０．８mLで溶出した。溶出されたサンプルをClavepak 96 racked 1.1 mL tubes（Denville Scientific）に回収し、そして、Caliper Turbovap96内においてＮ２流で乾燥させた。サンプルが乾燥したら、−８０℃で保存し又は直ちに測定した。乾燥したサンプルをAlphaLISAバッファ３０μLで再構成した。

Ａβ濃度は、カニクイザルＡβのＮ末端部分に対する市販されている抗体（６Ｅ１０、Signet ＩＧ−３９３４０)及びインハウスのＣ末端特異的抗Ａβ４０抗体（ＢＡＰ−２４、Brockhaus M. et al., J. Neuroreport, 1998, 9:1481-1486）を用いて、改変されたPerkin-Elmerのプロトコールに従って決定した。１ウェル当たり分析物２０μL（再構成された抽出物又は標準）をWhite Optiplate-96（Perkin-Elmer、カタログ＃６００５２９０）に投入した。次いで、１×AlphaLISAバッファ（Perkin-Elmer、AL000F）中、AlphaLISAアクセプタビーズ（Perkin-Elmerカタログ番号６７７２００２）に結合している、ビオチン化された６Ｅ１０抗体（最終濃度約１nMで１：２０００希釈）とＢＡＰ２４（１：１００希釈、最終濃度１０μg/mL）との混合物を添加した。暗条件下室温で１時間インキュベートした後、ストレプトアビジンでコーティングされたドナービーズ希釈物（４０μg/mL）２０μLを添加し、そして、暗条件下で３０分間インキュベートした。６１５nmにおける発光をEnVision AlphaScreen Reader（Perkin-Elmer）を用いて記録した。Ａβ４０のレベルを非処置動物由来のベースラインサンプルの百分率として計算した。

ＢＡＣＥ１活性の決定は、酵素的無細胞蛍光アッセイ（ＢＡＣＥ１無細胞、表２）を使用することにより、又はＨＥＫ２９３ＡＰＰ細胞を使用する全細胞アッセイ（細胞Ａβ減少、表２）により測定することができる。両アッセイは、ＢＡＣＥ１阻害を求めるのに好適である。表１に示す通り、実施例１は両アッセイにおいて強力な阻害を示し、それぞれＩＣ_５０値は３６nM及び１５nMである。驚くべきことに、比較物１、２及び３等のオキサジン部分に１個の更なるフッ素原子を含有する化合物は、細胞Ａβ減少アッセイにおいて著しく低い有効性を示し、実施例１よりも１３〜２５００倍活性が低い。

これら化合物は、細胞Ａβ減少アッセイにおいて、実現可能な薬物候補の閾値として当業者に考えられている１００nMのＩＣ_５０を優に上回る有効性を示す。したがって、オキサジン環に結合しているトリフルオロメチル基に加えて、更なるフッ素原子１個のみが、その分野において実現可能な薬物候補について許容される。

更に、比較物３及び７は、トリフルオロメチル基の立体化学が驚くべきほど重要な役割を果たすことを示す。実施例１では、６Ｓ配置のトリフルオロメチル基が高い効力を生じさせるが、一方、６Ｒ配置の比較物３及び７では細胞Ａβ減少アッセイにおいて著しく低い有効性となり、活性は６．４〜２５００倍低く、比較物７は、医薬品として更に開発するのに適しているとみなされる化合物についての閾値である１００nM 活性に近い。

トリフルオロメチル基の６Ｓ（比較物６）又は６Ｒ（比較物７）の配置が異なる、近い構造の類似体である比較物６及び７を比較したとき、この効果は更により顕著であり、ほぼ１桁に達する。

関連する標的に対する選択性は、薬物候補の安全性の観点で重要である。ＢＡＣＥ２は、ＢＡＣＥ１の近縁の同族体である。ＢＡＣＥ２は、色素細胞特異的メラニン形成細胞タンパク質（ＰＭＥＬ）を処理することによって、皮膚の色素沈着において重要な役割を果たすことが最近報告された。(Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Jun 25;110(26):10658-63. doi: 10.1073/pnas.1220748110. Epub 2013 Jun 10)。ＰＭＥＬはメラニン形成に寄与すると考えられる。したがって、ＢＡＣＥ２に対する選択性は、それが皮膚の色素沈着に至るとき有利である。それぞれ無細胞アッセイで求められたＢＡＣＥ２ＩＣ_５０値をＢＡＣＥ１ＩＣ_５０値で除することによって、ＢＡＣＥ２／ＢＡＣＥ１ＩＣ_５０の選択性比を計算した。表１に示すように、実施例１は、ＢＡＣＥ２に対して２倍の選択性を有する。驚くべきことに、比較物４及び５は、ＢＡＣＥ１阻害よりもＢＡＣＥ２阻害に対してより強力であり、ＢＡＣＥ２／ＢＡＣＥ１ＩＣ_５０比はそれぞれ０．７及び０．６であることが見出された。これは、比較物４及び５に比べて実施例１が３倍改善されたことを示す。

マウスにおける単回投与の有効性
H. Hilpert et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 3980-3995 (dx.doi.org/10.1021/jm400225m)に記載の通り、ＤＥＡ抽出後にＣ５７Ｂｌ／６Ｊ野性型マウス由来の脳ホモジナートにおいて、マウスの単回投与の有効性を測定した。

Ａβ４０濃度は、アクセプタビーズ（PerkinElmer、カタログ６７７２００２）に結合している、ラットＡβのＮ末端部分に対する市販されている抗体（２５２Ｑ６、Invitrogenカタログ番号ＡＭＢ００６２）及びインハウスのＣ末端特異的抗Ａβ４０抗体（ＢＡＰ−２４、Brockhaus M. et al., J. Neuroreport, 1998, 9:1481-1486）を用いて、上記の通りの固相抽出後に、そして、改変されたPerkin-Elmerのプロトコールに従って決定した。１ウェル当たり分析物２０μL（再構成された抽出物又は標準）をWhite Optiplate-96（Perkin-Elmer、カタログ＃６００５２９０）に投入した。次いで、１×AlphaLISAバッファ（Perkin-Elmer、AL000F）中、AlphaLISAアクセプタビーズ（Perkin-Elmerカタログ番号６７７２００２）に結合している、ビオチン化されたＢＡＰ２４抗体（最終濃度約１nMで１：２０００希釈）と抗体２５２Ｑ６（１：１００希釈、最終濃度１０μg/mL）との混合物を添加した。暗条件下室温で１時間インキュベートした後、ストレプトアビジンでコーティングされたドナービーズ希釈物（４０μg/mL）２０μLを添加し、そして、暗条件下で３０分間インキュベートした。６１５nmにおける発光をEnVision AlphaScreen Reader（Perkin-Elmer）を用いて記録した。Ａβ４０のレベルを非処置動物由来のベースラインサンプルの百分率として計算した。

Ａβ４０減少は、野性型マウス（Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウス、ｎ＝３〜４）において経口投与後、投与の４時間後に決定した。野性型マウスは正常な生理学的レベルのＡＰＰ発現を有し、ＡＰＰトランスジェニック生物よりもＡβペプチド産生についてより優れた生理学的モデルを提供すると予測されるため、野性型マウスを使用した。インビボにおける有効性は、適切な薬物候補についての重要な要因であり、インビトロ活性よりも関連が深い。

実施例１は、用量依存的にマウスの脳において驚くべきほど高いＡβ４０産生阻害を示す。１オンス当たり１０mg/kgの用量では、Ａβ４０の９２％減少が観察された。３mg/kgでは、Ａβ４０の５８％減少が観察された。全く対照的に、比較物１及び２は、３mg/kgの用量で２〜１０％という非常に弱いＡβ４０減少しか示さなかった。比較物３は、細胞効力が＞３５μMと非常に低かったことからインビボにおいて活性である可能性は非常に低いため、インビボにおいて試験しなかった。驚くべきことに、比較物４及び特に実施例１に近い類似体である比較物５は、実施例１よりも著しく活性が低く、３mg/kgにおけるＡβ４０の減少はそれぞれ３３％及び７％である。比較物４及び５について表２に列挙されたインビトロ効力に基づいて、この結果は驚くべきことである。比較物７は、用量３０mg/kgにおける活性が１０mg/kgにおける実施例１よりも低く、Ａβ４０減少は７０％であり、オキサジン環のトリフルオロメチル基の適切な立体化学の驚くべき重要性が確認される。

解離定数及び標的滞留時間は、薬理学的効果及び標的選択性について重要な側面である（R. Copeland et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2006 (5), 730-739.）。低い解離定数Ｋ_Ｄ及び特により長い標的滞留時間は、インビボにおける持続した薬理学的効果につながると予測される。したがって、創薬においては、より長い標的滞留時間が好ましい。驚くべきことに、実施例１は、比較物６よりもＢＡＣＥ１に対してより緊密に結合し、Ｋ_Ｄ値はそれぞれ２．０nM対６．３nMである。また、実施例１の緊密な結合は、１６分間というＢＡＣＥ１におけるより長い滞留時間にも反映されている。対照的に、比較物６は、ＢＡＣＥ１において〜４倍短い標的滞留時間を有する。

ＱＴ延長は、ｈＥＲＧチャネル（ヒト遅延整流性カリウムイオンチャネル）を阻害する薬物候補によって引き起こされる心血管系のリスクである。想定される治療効果を達成するのに必要な、ｈＥＲＧＩＣ_２０値と遊離血漿濃度との間の十分な安全域が望ましい（ICH. The nonclinical evaluation of the potential for delayed ventricular repolarization (QT interval prolongation) by human pharmaceuticals (S7B)、CPMP/ICH/423/02として発行、２００５年５月にCHMPによって承認（http://www.ich.org/cache/compo/276-254-1.html；Redfern WS, Carlsson L, Davis AS, Lynch WG, MacKenzie I, Palethorpe S, Siegl PK, Strang I, Sullivan AT, Wallis R, Camm AJ, Hammond TG. Relationships between preclinical cardiac electrophysiology, clinical QT interval prolongation and torsade de pointes for a broad range of drugs: evidence for a provisional safety margin in drug development. Cardiovasc Res. 2003 Apr 1;58(1):32-45.））。Ｐ−糖タンパク質Ｐ−ｇｐ等の血液脳関門で発現する排出輸送体に対する活性が低下した結果、脳透過性が最適化されることによって遊離血漿濃度が低下し得る。

上述した通りのＰ−ｇｐ排出比ＥＲのアッセイでは、ＥＲ＜２．５の化合物が最も好適であるとみなされる。更に、ｈＥＲＧチャネル結合の低い化合物も同様に好適である。

表５における実施例１は、ｈＥＲＧＩＣ_２０アッセイについて＞１０００nMという驚くべきほど好ましい値を示す。ｈＥＲＧパッチライナーアッセイにおける更なる評価によって、実施例１のＩＣ_２０値が２３４０nMであることが明らかになった。また、実施例１は、ヒトＰ−ｇｐＥＲについて１．７という好ましい値を示した。

対照的に、比較物４はｈＥＲＧに非常に強く結合し、ＩＣ_２０値は４０nMである。これは、治療濃度においてＱＴ延長が強くなる非常に高いリスクを示し得る。比較物４のＰ−ｇｐは好ましい範囲内であり、ＥＲは１．９である。比較物５は、実施例１よりもｈＥＲＧに対して５．３倍高い親和性を示し、そして、更に、２倍高いＰ−ｇｐ排出比を有する。両アッセイの組み合わせは、比較物５に比べて実施例１が開発に好適であることを更に強調している。比較物６は、同様に、実施例１と比べてｈＥＲＧに対して６倍高い親和性を有するが、Ｐ−ｇｐＥＲは、１．１と好ましい範囲内である。

表５は、１mg/kgで化合物を投与した４時間後における、ラットのＰＫデータ及びラットＣＳＦにおけるＡβ４０の減少を示す。驚くべきことに、実施例１は、投与の４時間後に、６２％の良好な経口バイオアベイラビリティ及びラットＣＳＦにおけるＡβ４０の８０％減少という強いインビボ有効性を示した。４時間における血漿濃度は９０nMであると測定され、遊離未結合濃度は１２．５nMであった。ｈＥＲＧ安全域は、遊離血漿濃度によって除されたｈＥＲＧＩＣ_２０値を使用して計算することができる。実施例１は、ｈＥＲＧパッチライナーアッセイのＩＣ_２０値を用いて計算された１８７倍の安全域を有する。比較物６は、１mg/kgで投与されたとき、１９％の低い経口バイオアベイラビリティしか示さなかった。遊離血漿濃度は投与の４時間後に３６．３nMであると測定され、ラットＣＳＦにおけるＡβ４０の７７％減少につながった。この値は、実施例１と同様の範囲内であるので、ｈＥＲＧ安全域の計算は同様に実施することができる。比較物６は、１１倍のｈＥＲＧ安全域しか示さなかった。したがって、実施例１は、ラットＣＳＦにおけるＡβ４０の約８０％減少という同等の有効性レベルにおいて、１７倍の安全域改善を有する。

カニクイザルにおけるＰＫ試験等のより高等な種のＰＫ試験は、ヒトにおける薬物候補のＰＫ特性の予測におけるツールである（Ward, K. W. and B. R. Smith (2004). "A Comprehensive Quantitative And Qualitative Evaluation Of Extrapolation Of Intravenous Pharmacokinetic Parameters From Rat, Dog, And Monkey To Humans. I. Clearance." DMD 32: 603-611）。実施例１及び比較物６は、それぞれ、５２％及び６３％のいずれも中等度の経口バイオアベイラビリティを示す。驚くべきことに、実施例１は、１９時間の長い半減期に関連する２．１mL/min/kgというサルにおける低いクリアランスと、４１６０h*kg*ng/mL/mgの用量正規化された高い血漿曝露ＡＵＣ（０−２４）を示した。更に、５７％（投与の２４時間後）及び５０％（投与の４８時間後）の持続した血漿Ａβ４０減少が観察された。対照的に、比較物６は、９．７mL/min/kgの著しく高いクリアランスを示し、これは、１１時間のはるかに短い半減期及び実施例１と比較して５倍低い曝露と言い換えられる。

実施例１及び比較物６の代謝物を分析したとき、両化合物のアミド結合の加水分解によってＭ１（スキーム３）が形成されることを示すことができた。驚くべきことに、カニクイザルＰＫ試験におけるＭ１の形成は、実施例１の合計量のわずか１〜２％しか観察されなかった。対照的に、比較物６の合計量の２０％でＭ１の形成が生じている。アミド加水分解をブロックすると、より低いクリアランス、より長い半減期及び持続した薬理学的効果につながるであろうし、これは、実際に実施例１に当てはまる。

医薬組成物
式Ｉの化合物及び薬学的に許容し得る塩は、治療活性物質として、例えば医薬製剤の形態で使用され得る。医薬製剤は、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤又は懸濁剤の形態で、経口投与され得る。しかしながら、投与はまた、例えば坐剤の形態で経直腸的に、又は例えば注射液剤の形態で非経口的に実施され得る。

式Ｉの化合物及びその薬学的に許容し得る塩は、医薬製剤の製造のため、薬学的に不活性な無機又は有機の担体と共に処理され得る。乳糖、トウモロコシデンプン又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等は、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠及び硬ゼラチンカプセル剤のためのそのような担体として使用され得る。軟ゼラチンカプセル剤に適切な担体は、例えば、植物油、ロウ、脂肪、半固体及び液体ポリオール等である。しかしながら、活性物質の性質に応じて、軟ゼラチンカプセル剤の場合は、通常担体を必要としない。液剤及びシロップ剤の製造に適切な担体は、例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油等である。坐剤に適切な担体は、例えば、天然又は硬化油、ロウ、脂肪、半液体又は液体のポリオール等である。

更に医薬製剤は、薬学的に許容し得る補助物質、例えば、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、香味剤、浸透圧を変化させる塩、緩衝剤、マスキング剤又は酸化防止剤を含有することができる。これらはまた、更に他の治療上価値のある物質を含有することができる。

式Ｉの化合物又はその薬学的に許容し得る塩及び治療上不活性な担体を含有する医薬も、本発明により提供され、また、それらの製造のためのプロセスであって、１つ以上の式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容し得る塩と、所望により、１つ以上の他の治療上価値のある物質とを、１つ以上の治療上不活性な担体と共にガレヌス製剤の投与形態にすることを含むプロセスも、本発明により提供される。

投与量は、広い範囲内で変化させることができ、そして当然ながら各特定の症例における個々の要求に適合させる必要があろう。経口投与の場合には、成人の投与量は、１日当たり約０．０１mg〜約１０００mgの一般式Ｉの化合物、又は対応する量のその薬学的に許容し得る塩と変化させることができる。１日投与量は、１回用量として又は分割用量で投与されてもよく、加えて、必要性が示される場合、上限を超えることもできる。

下記の例は、本発明を限定することなく説明するものであり、単にその代表的なものとして役立つ。医薬製剤は、好都合には、式Ｉの化合物を約１〜５００mg、特に１〜１００mg含有する。以下は本発明による組成物の例である：

実施例Ａ
以下の組成の錠剤を常法で製造する：

製造手順
１．成分１、２、３及び４を混合して、精製水で造粒する。
２．顆粒を５０℃で乾燥させる。
３．顆粒を適切な粉砕装置に通す。
４．成分５を加えて、３分間混合する；適切なプレス機で打錠する。

実施例Ｂ−１
以下の組成のカプセル剤を製造する：

製造手順
１．成分１、２及び３を適切なミキサーで３０分間混合する。
２．成分４及び５を加えて、３分間混合する。
３．適切なカプセルに充填する。

式Ｉの化合物、乳糖及びトウモロコシデンプンを最初にミキサーで、次に粉砕機で混合する。この混合物をミキサーに戻す；タルクをそれに加え、充分に混合する。この混合物を機械で適切なカプセル、例えば、硬ゼラチンカプセルに充填する。

実施例Ｂ−２
以下の組成の軟ゼラチンカプセル剤を製造する：

製造手順
式Ｉの化合物を他の成分の温溶融液に溶解して、この混合物を適切なサイズの軟ゼラチンカプセルに充填する。充填した軟ゼラチンカプセルを常法により処理する。

実施例Ｃ
以下の組成の坐剤を製造する：

製造手順
坐薬用基剤をガラス又はスチール容器中で溶融し、充分に混合して、４５℃に冷却する。その後すぐに、微粉化した式Ｉの化合物をそれに加えて、完全に分散するまで撹拌する。この混合物を適切なサイズの坐剤成形型に注ぎ入れ、冷却させる；次に坐剤を成形型から取り外し、個々にロウ紙又は金属箔に包装する。

実施例Ｄ
以下の組成の注射液剤を製造する：

製造手順
式Ｉの化合物を、ポリエチレングリコール４００及び注射用水（一部）の混合物に溶解する。酢酸によりｐＨを５．０に調整する。残量の水の添加により、容量を１．０mlに調整する。この溶液を濾過し、適切な過剰量を用いてバイアルに充填して滅菌する。

実施例Ｅ
以下の組成のサシェ剤を製造する：

製造手順
式Ｉの化合物を乳糖、微晶質セルロース及びカルボキシメチルセルロースナトリウムと混合して、水中のポリビニルピロリドンの混合物により造粒する。この顆粒をステアリン酸マグネシウム及び香味添加剤と混合してサシェに充填する。

実験の部
以下の実施例は、本発明の説明のため提供される。これらは、本発明の範囲を限定するものではなく、単にその代表例として考慮されるべきである。

ＮＭＲ：^１ＨＮＭＲスペクトルは、内部標準としてＴＭＳ（テトラメチルシラン）又は所与の重水素化溶媒の残留^１Ｈを用いて、２５℃で、Bruker AC-300分光計において記録した。

ＭＳ：質量スペクトル（ＭＳ）は、Perkin-Elmer SCIEX API 300においてイオンスプレーポジティブ若しくはネガティブ（ＩＳＰ又はＩＳＮ）法を用いて、又はFinnigan MAT SSQ 7000分析計において電子衝撃法（ＥＩ、７０eV）を用いて測定した。

ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ、陽イオン又は陰イオン）データは、ＥＳイオン化モード（ポジティブ及び／又はネガティブ）を用いて、Waters Acquity、CTC PALオートサンプラー及びWaters SQDシングル四重極質量分析計を備えるWaters UPLC-MSシステムにおいて記録した。分離は、Zorbax Eclipse Plus C18 １，７μm ２．１×３０mmカラム、５０℃で達成した；Ａ＝水中０．０１％ギ酸、Ｂ＝流量１におけるアセトニトリル；勾配：０分３％Ｂ、０．２分３％Ｂ、２分９７％Ｂ、１．７分９７％Ｂ、２．０分９７％Ｂ。注入体積は、２μLであった。ＭＳ（ＥＳＩ、陽イオン又は陰イオン）：ＦＩＡ（フローインジェクション分析）−ＭＳは、AppliedBiosystem API150質量分析計において記録した。サンプル導入は、CTC PALオートサンプラー及びShimadzu LC-10ADVP Pumpを用いて行った。カラムを用いずに、５０μL／分の流量でアセトニトリル及び１０mM 酢酸アンモニウム（１：１）の混合物を流しながら、質量分析計のＥＳＩ源にサンプルを直接流した。注入体積は、２μLであった。

実施例１
Ｎ−（６−（（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−５−フルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−５−シアノ−３−メチルピコリンアミド

実施例１ａ： tert−ブチルＮ−［（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−４−［６−［（５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］−３−フルオロ−２−ピリジル］−５−フルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−１，３−オキサジン−２−イル］カルバマート

ＣＨ_２Ｃｌ_２（５６０μl）中の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸（ＣＡＳ１２６２８６０−４９−０）（３８．７mg、２３９μmol）の懸濁液に、１−クロロ−Ｎ，Ｎ−２−トリメチルプロパ−１−エン−１−アミン（Ghosez試薬）（３４．２mg、３３．９μl、２５６μmol）を０℃で加えた。形成した無色の溶液を０℃で１５分間撹拌した。ＣＨ_２Ｃｌ_２（１．１mL）及びトリエチルアミン（５１．８mg、７１．３μL、５１２μmol）中のtert−ブチル（（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−４−（６−アミノ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５−フルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート（ＣＡＳ１６３０９７３−７５−９；ＷＯ２０１４１６６９０６号）（０．０７ｇ、１７１μmol）の溶液を、反応混合物に０℃で加えた。得られた淡黄色の溶液を２５℃に放温し、更に６０分間撹拌した。反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３mL）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で抽出した（２×１．５mL）。水層をＥｔＯＡｃで逆抽出した（３×２mL）。有機層を合わせ、飽和ＮａＣｌ水溶液（１×２mL）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて、真空下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４ｇ、ｎ−ヘプタン中１０％〜５０％ＥｔＯＡｃ）により２回精製して、実施例１ａを白色の固体として生成した（４４mg；４７％）。ｍ／ｚ＝５５５．３［Ｍ＋Ｈ］^＋、ＣＤＣｌ３中の１ＨＮＭＲは、所望の生成物と一致する。

実施例１：Ｎ−（６−（（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−５−フルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−５−シアノ−３−メチルピコリンアミド
ＣＨ_２Ｃｌ_２（３００μl）中のtert−ブチル（（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−４−（６−（５−シアノ−３−メチルピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５−フルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート（０．０４４ｇ、７９．４μmol）（実施例１ａ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（４５２mg、３０６μL、３．９７mmol）を２５℃で加えた。反応混合物を３０分間撹拌した。反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（１５mL）で希釈し、氷浴中で０℃に冷却し、１０％Ｎａ_２ＣＯ_３溶液でｐＨ〜１０に調整して、１０分間撹拌した。有機層を分離し、水層をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×２０mL）及びＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１９：１（２×２０mL）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、淡黄色の固体を与えた。その後、淡黄色の固体をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４ｇ、ＤＣＭ中１〜４％２N ＮＨ_３／ＭｅＯＨ）により２回精製して、標記化合物を白色の固体として生成した（１５．９mg；４４％）。ｍ／ｚ＝４５５．２［Ｍ＋Ｈ］^＋、ＣＤＣｌ３中の１ＨＮＭＲ。

中間体スルフィニルイミンＢ４の合成
Ｂ４（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（１−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）エチリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド

ＴＨＦ（５９ml）中のBadiger, S. et al., 国際特許出願ＷＯ２０１２０９５４６９Ａ１に従って調製した１−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）エタノン（８．１３ｇ）の溶液に、（Ｒ）−（＋）−tert−ブチルスルフィンアミド（３．２６ｇ）及びチタン（ＩＶ）エトキシド（１１．２ｇ）を続けて２２℃で加え、溶液を６０℃で６時間撹拌した。混合物を２２℃に冷却し、ブラインで処理し、懸濁液を１０分間撹拌して、ジカライト（dicalite）で濾過した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を水で洗浄し、乾燥させて、蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、５：１）により精製して、標記化合物（７．５ｇ、７０％）を黄色の油状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４３５．３、４３７．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

中間体ペンタフルオロケトン水和物Ｂ５の合成
Ｂ５（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４，４−ジヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド

アルゴン雰囲気下、−７０℃で、無水テトラヒドロフラン（２４７ml）中の１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール（２６．９ｇ、１６０mmol、当量：１．３）の撹拌した溶液に、内部温度を−４０℃より低く保持しながら、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．６M）（２００ml、３２１mmol、当量：２．６）をゆっくりと加え、次にゆっくりと０℃にして、そこで撹拌を１．５時間続けた。混合物を−７０℃に再び冷却し、テトラヒドロフラン（６１．７ml）中の（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（１−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）エチリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドＢ４ａ（５３．７ｇ、１２３mmol、当量：１）の溶液を加え、次に混合物を−７０℃〜２３℃で１６時間撹拌した。ブラインに注ぎ、酢酸エチルで抽出して、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過し、真空下で溶媒を除去したところ、褐色の油状物が残った。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３００ｇ、ヘプタン中０％〜５０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４，４−ジヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（５６．３ｇ、９３．６mmol、収率７５．９％）を淡褐色の泡状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５８３．１、５８５．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

中間体ペンタフルオロケトン水和物Ｂ６の合成
Ｂ６（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４，４−ジヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド

Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４６８ml）及び酢酸（５．６２ｇ、５．３６ml、９３．６mmol、当量：１）中の（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４，４−ジヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（５６．３ｇ、９３．６mmol、当量：１）の撹拌した溶液に、フッ化カリウム（１０．９ｇ、１８７mmol、当量：２）を加え、混合物を２３℃で１６時間撹拌した。水及びＴＢＭＥで抽出し、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾別し、完全に蒸発させて、粗生成物を暗褐色の油状物として与えた（６０ｇ）。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００ｇ、ヘプタン中０％〜４０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４，４−ジヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２８．５８ｇ、５８．７mmol、収率６２．７％）を淡褐色の泡状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４８７．２、４８９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

中間体ペンタフルオロアルコールＢ７の合成
Ｂ７ａ（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｒ，４Ｓ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド及びＢ７ｂ（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｒ，４Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド

メタノール（２０８ml）中の（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４，４−ジヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２５．２８ｇ、５１．９mmol、当量：１）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（３．９３ｇ、１０４mmol、当量：２）を０℃で少量ずつ加えた。添加が完了した後、反応混合物を２３℃で１時間撹拌した。氷水に注ぎ、ＮＨ_４Ｃｌ溶液で希釈し、次に酢酸エチルで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾別して、完全に蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、５０ｇ、ヘプタン中０〜５０％ＥｔＯＡｃ）に付して、（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｒ，４Ｓ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（８．７ｇ、１８．５mmol、収率３５．６％）（より速く溶出する異性体：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４７１．１、４７３．１［Ｍ＋Ｈ］^＋）を橙色の泡状物として、及び（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｒ，４Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（１３．０８ｇ、２７．８mmol、収率５３．５％）（よりゆっくり溶出する異性体：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４７１．１、４７３．１［Ｍ＋Ｈ］^＋）を橙色の泡状物として与えた。

中間体アミノアルコールＢ８の合成
Ｂ８ａ（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−１，１，１，３，３−ペンタフルオロペンタン−２−オール

２３℃で、テトラヒドロフラン（４１７ml）中の（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｒ，４Ｓ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（９．８３ｇ、２０．９mmol、当量：１）の撹拌した溶液に、濃ＨＣｌ（８．２２ｇ、６．８５ml、８３．４mmol、当量：４）を加え、混合物を１時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾別して、完全に蒸発させた。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５０ｇ、ヘプタン中０％〜３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−１，１，１，３，３−ペンタフルオロペンタン−２−オール（７．１ｇ、１９．３mmol、収率９２．７％）を淡褐色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３６７．０、３６９．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

Ｂ８ｂ（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−１，１，１，３，３−ペンタフルオロペンタン−２−オール

２３℃で、テトラヒドロフラン（２２２ml）中の（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｒ，４Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−３，３，５，５，５−ペンタフルオロ−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（５．２３ｇ、１１．１mmol、当量：１）の撹拌した溶液に、濃ＨＣｌ（４．３７ｇ、３．６５ml、４４．４mmol、当量：４）を加え、１時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾別して、完全に蒸発させた。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５０ｇ、ヘプタン中０％〜３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−１，１，１，３，３−ペンタフルオロペンタン−２−オール（２．４１ｇ、６．５７mmol、収率５９．２％）を淡褐色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３６７．０、３６９．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

中間体Ｂｏｃ−アミノオキサジンＢ１０の合成（中間体Ｂ９を介して）
Ｂ１０ａ（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

工程１：Ｎ−［［（１Ｒ，３Ｓ）−１−（６−ブロモ−３−フルオロ−２−ピリジル）−２，２，４，４，４−ペンタフルオロ−３−ヒドロキシ−１−メチル−ブチル］カルバモチオイル］ベンズアミド

０℃で、テトラヒドロフラン（４４６ml）中の（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−１，１，１，３，３−ペンタフルオロペンタン−２−オール（７．１ｇ、１９．３mmol、当量：１）の撹拌した溶液に、ベンゾイルイソチオシアナート（３．１６ｇ、２．６３ml、１９．３mmol、当量：１）を加え、混合物を２３℃で１時間撹拌した。すべての揮発物を真空下で除去して、粗チオ尿素を与え、これを次の工程にそのまま用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５３０．１、５３２．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程２（中間体Ｂ９ａ（Ｒ＝Ｂｚ、Ｒ’＝Ｈ；Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：Ｎ−（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）ベンズアミド

上記で調製した粗チオ尿素を、アセトニトリル（１４９ml）に２３℃で溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（３．７１ｇ、１９．３mmol、当量：１）を加えて、この混合物を８０℃で２時間撹拌した。完全に蒸発させ、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５０ｇ、ヘプタン中０％〜４０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、Ｎ−（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）ベンズアミド（６．８５ｇ、１３．８mmol、収率７１．４％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４９６．２、４９８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程３（中間体Ｂ９ａ（Ｒ＝Ｂｚ、Ｒ’＝Ｂｏｃ；Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチルベンゾイル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

２３℃で、テトラヒドロフラン（３６８ml）中のＮ−（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）ベンズアミド（６．８５ｇ、１３．８mmol、当量：１）の撹拌した溶液に、ジ−tert−ブチルジカーボナート（Ｂｏｃ_２Ｏ）（３．３１ｇ、３．５３ml、１５．２mmol、当量：１．１）及びトリエチルアミン（１．５４ｇ、２．１２ml、１５．２mmol、当量：１．１）、次いでＤＭＡＰ（３３７mg、２．７６mmol、当量：０．２）を加え、混合物を２３℃で３０分間撹拌した。真空下、２３℃で溶媒を除去したところ、粗二重保護化合物が淡黄色の油状物として残り（８ｇ）、これを次の工程でそのまま用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５９６．２、５９８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程４： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

上記で調製した粗二重保護化合物をＭｅＯＨ（５５２ml）に溶解し、０℃に冷却し、アンモニア（ＭｅＯＨ中７M）（１９７ml、１．３８mol、当量：１００）を加えて、混合物を２３℃で１時間撹拌した。すべての揮発物を真空下で除去し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００ｇ、ヘプタン中０％〜３５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート（５．７７ｇ、１１．７mmol、収率８４．９％）を淡黄色の泡状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４９２．２、４９４．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

Ｂ１０ｂ（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

工程１：Ｎ−［［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（６−ブロモ−３−フルオロ−２−ピリジル）−２，２，４，４，４−ペンタフルオロ−３−ヒドロキシ−１−メチル−ブチル］カルバモチオイル］ベンズアミド

０℃で、テトラヒドロフラン（９８６ml）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−１，１，１，３，３−ペンタフルオロペンタン−２−オール（１０．９ｇ、２９．７mmol、当量：１）の撹拌した溶液に、ベンゾイルイソチオシアナート（４．８５ｇ、３．９９ml、２９．７mmol、当量：１）を加え、混合物を２３℃で１時間撹拌した。すべての揮発物を真空下で除去して、粗チオ尿素を与え、これを次の工程にそのまま用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５３０．１、５３２．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程２（中間体Ｂ９ｂ（Ｒ＝Ｂｚ、Ｒ’＝Ｈ；Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）：Ｎ−（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）ベンズアミド

上記で調製した粗チオ尿素を、アセトニトリル（３２９ml）に２３℃で溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（５．６９ｇ、２９．７mmol、当量：１）を加えて、この混合物を８０℃で２時間撹拌した。完全に蒸発させ、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００ｇ、ヘプタン中０％〜４０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、Ｎ−（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）ベンズアミド（５．２０ｇ、１０．５mmol、収率３５．３％）を淡黄色の泡状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４９６．０、４９８．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程３（中間体Ｂ９ｂ（Ｒ＝Ｂｚ、Ｒ’＝Ｂｏｃ；Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチルベンゾイル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

２３℃で、テトラヒドロフラン（３１２ml）中のＮ−（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）ベンズアミド（５．８０ｇ、１１．７mmol、当量：１）の撹拌した溶液に、ジ−tert−ブチルジカーボナート（Ｂｏｃ_２Ｏ）（２．８１ｇ、２．９９ml、１２．９mmol、当量：１．１）及びトリエチルアミン（１．３０ｇ、１．７９ml、１２．９mmol、当量：１．１）、次いでＤＭＡＰ（２８６mg、２．３４mmol、当量：０．２）を加え、混合物を２３℃で３０分間撹拌した。真空下、２３℃で溶媒を除去したところ、粗二重保護化合物が淡黄色の油状物として残り、これを次の工程でそのまま用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５９６．２、５９８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程４： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

上記で調製した粗二重保護化合物をＭｅＯＨ（４６８ml）に溶解し、０℃に冷却し、アンモニア（ＭｅＯＨ中７M）（１６７ml、１．１７mol、当量：１００）を加えて、混合物を２３℃で１時間撹拌した。すべての揮発物を真空下で除去し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００ｇ、ヘプタン中０％〜３５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート（４．２７ｇ、８．６８mmol、収率７４．２％）を橙色の泡状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４９２．２、４９４．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

中間体Ｂｏｃ−アミノピリジンＢ１１の合成
Ｂ１１ａ（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−アミノ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

ジオキサン（４０ml）及び水（１３．３ml）中のtert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１０ａ（１．０５ｇ、２．１３mmol、当量：１）の溶液に、アジ化ナトリウム（１．１１ｇ、１７．１mmol、当量：８）、ヨウ化銅（Ｉ）（１６３mg、８５３μmol、当量：０．４）、アスコルビン酸ナトリウム（８４．５mg、４２７μmol、当量：０．２）及び（１Ｒ，２Ｒ）−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−１，２−シクロヘキサンジアミン（１８２mg、２０２μl、１．２８mmol、当量：０．６）を加え、この混合物を７０℃で１時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出し、合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾別して、完全に蒸発させた。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５０ｇ、ヘプタン中０％〜５０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、標記化合物（８４mg、１９６μmol、収率９．１９％）を無色の油状物として（ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４２９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋）、及びジ−Ｂｏｃ物質 tert−ブチルＮ−［（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−アミノ−３−フルオロ−２−ピリジル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−６Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル］−Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−カルバマート（４８０mg、９０８μmol、収率４２．６％）を淡黄色の泡状物として与え、これを以下の工程でも用いることができた（ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５２９．４［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

Ｂ１１ｂ（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−アミノ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−ブロモ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１０ｂ（２．０５ｇ）を、化合物Ｂ１１ａの調製と同様にアジ化ナトリウムと反応させて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５０ｇ、ヘプタン中０％〜５０％ＥｔＯＡｃ）の後、標記化合物（２７０mg、１５％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４２９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。また、ジ−Ｂｏｃ物質 tert−ブチルＮ−［（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−アミノ−３−フルオロ−２−ピリジル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−６Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル］−Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−カルバマート（２５０mg、４７３μmol、収率１１．４％）を白色の泡状物として得て、これを以下の工程でも用いることができた（ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５２９．４［Ｍ＋Ｈ］^＋）。

中間体Ｂｏｃ−アミドＢ１２及び脱保護アミドＩの合成
Ｂｏｃ−アミドＢ１２へのＢｏｃ−アミノピリジンＢ１１と酸とのカップリングについての一般手順
Ghosez試薬−方法：０℃で、乾燥ジクロロメタン（１．５ml）中の酸（１９７μmol、当量：１．５）の懸濁液に、１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミン（Ghosez試薬）（５２．８mg、３９５μmol、当量：３）を滴下し、混合物を０℃で１時間撹拌した。次に、この混合物を０℃で、乾燥ジクロロメタン（１．５ml）中のＢｏｃ−アミノピリジンＢ１１（又は対応するジ−Ｂｏｃ物質）（１３２μmol、当量：１．００）及びジイソプロピルエチルアミン（５１．０mg、６９．０μl、３９５μmol、当量：３）の溶液に加えた。氷浴を取り外し、混合物を周囲温度で１〜１６時間撹拌した。周囲温度で完全に蒸発させて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘプタン中ＥｔＯＡｃの勾配）によりそのまま精製して、Ｂｏｃ−アミドＢ１２（又は対応するジ−Ｂｏｃ物質）を与えた。

アミドＩへのＢｏｃ−アミドＢ１２の脱保護についての一般手順
ジクロロメタン（０．５ml）中のＢｏｃ−アミドＢ１２（０．０４mmol）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１．２mmol）を２２℃で加え、撹拌を１〜１６時間続けた。混合物を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃで希釈して、再び蒸発させた。残留物をジエチルエーテル／ペンタンで粉砕し、懸濁液を濾過し、残留物を乾燥させて、アミドＩを与えた。遊離塩基を得るための代替的なワークアップ：１〜１６時間撹拌した後、すべての揮発物を真空下で除去し、残留物をＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ_３溶液との間で分配し、有機層をブラインで洗浄して、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過し、真空下で溶媒を除去したところ、粗生成物が残り、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製してアミドＩを与えた。

Ｂ１２ａ−１（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−（５−シアノピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−アミノ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１１ａ（７０mg、１６３μmol、当量：１）を、Ghosez試薬−方法に従って、５−シアノピコリン酸とカップリングさせて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％〜７０％ＥｔＯＡｃ）の後、標記化合物（８７mg、１５６μmol、収率９５．３％）を白色の泡状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５５９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

Ｂ１２ａ−２（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−（５−シアノ−３−メチルピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−アミノ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１１ａ（７０mg、１６３μmol、当量：１）を、Ghosez試薬−方法に従って、５−シアノ−３−メチルピコリン酸とカップリングさせて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％〜７０％ＥｔＯＡｃ）の後、標記化合物（８８mg、１５４μmol、収率９４．１％）を白色の泡状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５７３．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

Ｂ１２ｂ−１（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−（５−シアノピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−アミノ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１１ｂ（７０mg、１６３μmol、当量：１）を、Ghosez試薬−方法に従って、５−シアノピコリン酸とカップリングさせて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％〜７０％ＥｔＯＡｃ）の後、標記化合物（９１mg、１６３μmol、収率９９．７％）を白色の泡状物として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５５９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

Ｂ１２ｂ−２（Ｒ^２＝Ｆ；Ｒ^３＝Ｍｅ）： tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−（５−シアノ−３−メチルピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマート

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−アミノ−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１１ｂ（７０mg、１６３μmol、当量：１）を、Ghosez試薬−方法に従って、５−シアノ−３−メチルピコリン酸とカップリングさせて、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０ｇ、ヘプタン中０％〜７０％ＥｔＯＡｃ）の後、標記化合物（６０mg、１０５μmol、収率６４．１％）を白色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５７３．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

比較物１
Ｎ−（６−（（４Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−５−シアノピコリンアミド

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−（５−シアノピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１２ａ−１（８０mg、１４３μmol）を脱保護し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＮＨ_２−シリカゲル、１０ｇ、ヘプタン中０％〜１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、標記化合物（５２mg、１１３μmol、収率７９．２％）を白色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４５９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

比較物２
Ｎ−（６−（（４Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−５−シアノ−３−メチルピコリンアミド

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｓ）−４−（６−（５−シアノ−３−メチルピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１２ａ−２（８８mg、１５４μmol）を脱保護し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１０ｇ、ヘプタン中０％〜６０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、標記化合物（６３mg、１３３μmol、収率８６．８％）を白色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４７３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

比較物３
Ｎ−（６−（（４Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−５−シアノピコリンアミド

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−（５−シアノピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１２ｂ−１（８５mg、１５２μmol）を脱保護し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１０ｇ、ヘプタン中０％〜６０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、標記化合物（５３mg、１１６μmol、収率７６％）を白色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４５９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

比較物４
Ｎ−（６−（（４Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−５−シアノ−３−メチルピコリンアミド

tert−ブチル（（４Ｒ，６Ｒ）−４−（６−（５−シアノ−３−メチルピコリンアミド）−３−フルオロピリジン−２−イル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル）カルバマートＢ１２ｂ−２（６０mg、１０５μmol）を脱保護し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１０ｇ、ヘプタン中０％〜６０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、標記化合物（４９mg、１０４μmol、収率９９％）を白色の固体として与えた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４７３．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

Claims

式Ｉの化合物

又はその薬学的に許容し得る塩。
Ｎ−［６−［（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−５−フルオロ−４−メチル−６−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ−１，３−オキサジン−４−イル］−５−フルオロ−２−ピリジル］−５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボキサミドである、式Ｉの化合物。
式Ｉの化合物の代謝物Ｍ１。
請求項１又は２記載の式Ｉの化合物を調製するプロセスであって、式ＸＩ’の化合物を式ＸＩＩ’の化合物と反応させて、式Ｉの化合物にすることを含むプロセス

（式中、Ｘは、アミノ保護基である）。
請求項４記載のプロセスにより調製されたときの、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物。
治療活性物質として使用するための、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物。
β−アミロイドレベル及び／若しくはβ−アミロイドオリゴマー及び／若しくはβ−アミロイド斑の増大ならびに更には沈着を特徴とする疾患及び障害、又はアルツハイマー病を治療的及び／又は予防的に処置するための治療活性物質として使用するための、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物。
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫／炎症性の疾患、乳癌等の癌、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形神経膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症反応、カポジ肉腫、コストマン病、紅斑性狼瘡、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症７型、ウィップル病又はウィルソン病を治療的及び／又は予防的に処置するための治療活性物質として使用するための、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物。
請求項１又は２記載の式Ｉの化合物と、薬学的に許容し得る担体及び／又は薬学的に許容し得る補助物質とを含む医薬組成物。
アルツハイマー病を治療的及び／又は予防的に処置するための医薬を製造するための、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物の使用。
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫／炎症性の疾患、乳癌等の癌、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形神経膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症反応、カポジ肉腫、コストマン病、紅斑性狼瘡、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症７型、ウィップル病又はウィルソン病を治療的及び／又は予防的に処置するための医薬を製造するための、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物の使用。
アルツハイマー病、又は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫／炎症性の疾患、乳癌等の癌、心筋梗塞及び卒中等の心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形神経膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症反応、カポジ肉腫、コストマン病、紅斑性狼瘡、マクロファージ筋膜炎、若年性特発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症７型、ウィップル病又はウィルソン病の治療的及び／又は予防的処置において使用する方法であって、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物をヒト又は動物に投与することを含む方法。
本明細書に記載した発明。