JP2008248043A - Allergen inactivator and allergen inactivating product comprising the same - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、アレルゲンを不活性化させる粉体材料に関し、更に、それを配合する化粧料又はアレルゲン不活化用製品に関する。 The present invention relates to a powder material that inactivates an allergen, and further relates to a cosmetic or an allergen inactivation product that contains the powder material.
現在、日本全国の花粉症の有症患者数は2,000万人以上に及ぶとも言われ、日本国民のおよそ5人に1人が花粉症と言われている。患者数増加の背景には、アレルゲンとなる花粉の飛散量の増加、住環境の変化等が考えられる。 At present, it is said that there are more than 20 million patients with hay fever all over Japan, and about one out of every five Japanese people is said to have hay fever. The background of the increase in the number of patients is thought to be an increase in the amount of pollen, which is an allergen, and changes in the living environment.
花粉自体の飛散量が増えた背景には、戦後の日本の植林の影響が考えられる。スギは昭和33年〜47年にかけて植えられたものが杉人工林全体の47%を占める。30年程度の時間を経て、スギが花粉を盛んに生産するようになったことで飛散量が増えたと考えられる。 The background of the increase in the amount of pollen scattering can be attributed to post-war Japanese plantations. The cedar planted from 1958 to 1947 accounted for 47% of the total cedar plantation. It is thought that the amount of scattering increased because cedar actively produced pollen after about 30 years.
飛散する花粉を避ける方法として、マスクや眼鏡の使用により直接の接触を避けるという方法があるが、接触を完全に避けることは事実上無理であり、ゆえに花粉自体の無害化が最も望ましい花粉症の解決方法であると考えられる。 One way to avoid scattered pollen is to avoid direct contact with the use of a mask or glasses, but it is virtually impossible to avoid contact completely, so detoxification of the pollen itself is most desirable for hay fever. It seems to be a solution.
従来、花粉アレルゲンを不活性化する技術が種々提案されている。例えば、花粉アレルゲン不活性化用スプレー(特許文献1参照)、花粉アレルゲンを吸着し不活性化するフィルター(特許文献2参照)、熱、アルカリ、酸又はプロテアーゼの存在下に花粉アレルゲンを維持することにより花粉アレルゲンを不活性化する方法(特許文献3,4参照)、柿抽出物を含むハウスダスト処理剤(特許文献5参照)、イチョウの葉部、黄杞の葉部、茶の葉部、レモンバームの葉部及び茎部、キャベジローズの花部及び蕾部、並びにピーナッツの渋皮を含むアレルゲン不活化剤(特許文献6参照)、茶抽出物、ハイドロキシアパタイト
、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、没食子酸及び没食子酸と炭素数1から4までのアルコールとのエステル化合物を含む抗アレルゲン組成物(特許文献7参照)、アルコール等の有機溶剤、タンニン酸等のポリフェノール類、ハイドロキシアパタイト、カチオン系界面活性剤(特にグアニジノ基を有し、かつ界面活性能を有する化合物またはその塩)を含む抗アレルゲン組成物(特許文献8参照)等が提案されている。
Conventionally, various techniques for inactivating pollen allergens have been proposed. For example, pollen allergen inactivation spray (see Patent Document 1), filter that adsorbs and inactivates pollen allergen (see Patent Document 2), maintaining pollen allergen in the presence of heat, alkali, acid or protease A method for inactivating pollen allergens (see Patent Documents 3 and 4), a house dust treatment agent containing a koji extract (see Patent Document 5), a ginkgo leaf part, a yellow ginger leaf part, a tea leaf part, Lemon balm leaves and stems, cabbage rose flowers and buds, and allergen inactivator including peanut astringent skin (see Patent Document 6), tea extract, hydroxyapatite, epicatechin, epigallocatechin, epicatechin Anti-allele containing gallate, epigallocatechin gallate, gallic acid and ester compound of gallic acid and alcohol having 1 to 4 carbon atoms Gen composition (see Patent Document 7), organic solvent such as alcohol, polyphenols such as tannic acid, hydroxyapatite, cationic surfactant (particularly a compound having a guanidino group and having a surface active ability or a salt thereof) An antiallergen composition (see Patent Document 8) and the like have been proposed.
また、近年、室内環境の快適化と引き換えにダニ類の繁殖が助長されており、屋内でのダニ類の繁殖に伴い、コナヒョウヒダニ(Dermatophagoides
farinae)、ヤケヒョウヒダニ(Dermatophagoides
pteronyssinus)等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニをアレルゲンとするアレルギー性疾患が問題となっている。これらのダニは、アレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のI型アレルギー性疾患の一因と考えられている。
In recent years, the mite breeding has been promoted in exchange for the comfort of the indoor environment, and along with the indoor mite breeding, the Dermatophagoides
farinae), Dermatophagoides
allergic diseases in which mites belonging to the genus Lepidoptera, such as Pteronyssinus, are allergens. These mites are considered to contribute to type I allergic diseases such as allergic asthma, rhinitis, conjunctivitis, and atopic dermatitis.
ダニをアレルゲンとするアレルギー性疾患の対策としては、アレルゲンであるダニを駆除して、ダニを生活環境中から排除することが考えられる。しかしながら、ダニを駆除したとしても、ダニの死骸、ダニの糞からも強力なアレルゲン物質が生活環境中に放出されるため、ダニアレルゲンを根本的に排除することができず、ダニによるアレルギー性疾患を解決することは困難である。したがって、ダニアレルゲン(ダニ、ダニの死骸及び糞等)を根本的に排除する技術が求められている。従来、ダニアレルゲンを根本的に排除する技術として、ローズマリー抽出物を含浸させた多孔性吸着剤を屋内に散布し、数時間経過後に電気掃除機等により吸引する技術(特許文献9参照)等が提案されている。
本発明の課題は、化粧料に使用可能な安全性の高い粉体材料から、花粉アレルゲン及び/又はダニアレルゲンを不活性化する物質を見出し、それを利用したアレルゲン不活性化剤を提供し、それを配合した化粧料又はアレルゲン不活化用製品を提供することである。 An object of the present invention is to find a substance that inactivates pollen allergens and / or mite allergens from a highly safe powder material that can be used in cosmetics, and provides an allergen inactivating agent using the same. It is to provide a cosmetic or allergen inactivating product containing the same.
上記課題を解決するため、本発明者らは、鋭意検討の結果、平均粒子サイズ150μm以下のシリカ、微粒子酸化亜鉛及びゼオライトにアレルゲン不活性化効果を見出し、本発明を完成するに至った。なお、上記アレルゲン不活性化剤の不活性化対象としてのアレルゲンは、花粉アレルゲン及び/又はダニアレルゲンである。 In order to solve the above problems, the present inventors have intensively studied and found an allergen inactivating effect in silica, fine particle zinc oxide and zeolite having an average particle size of 150 μm or less, and completed the present invention. The allergen as an inactivation target of the allergen inactivating agent is a pollen allergen and / or a mite allergen.
本発明のアレルゲン不活性化剤は、花粉アレルゲン及び/又はダニアレルゲンを不活性化することにより、花粉アレルゲン及び/又はダニアレルゲンにより引き起こされる花粉症や喘息やアトピ―性皮膚炎といったアレルギー症状の原因を予防、治療又は改善することができる。 The allergen inactivating agent of the present invention is a cause of allergic symptoms such as hay fever, asthma and atopic dermatitis caused by pollen allergen and / or mite allergen by inactivating pollen allergen and / or mite allergen. Can be prevented, treated or ameliorated.
本発明では、アレルゲン不活化剤として平均粒子サイズ150μm以下のシリカ、微粒子酸化亜鉛及びゼオライトの1種又は2種以上を含有し、水分保持能の高い保湿剤を併用することによって可能となった。 In the present invention, it has been made possible by using one or more of silica, fine particle zinc oxide and zeolite having an average particle size of 150 μm or less as an allergen inactivating agent and using a moisturizing agent having a high water retaining ability.
本発明に使用する「シリカ」とは、二酸化ケイ素(SiO2)のことであり、シリカ (silica)、無水ケイ酸とも呼ばれるケイ素の酸化物で、地殻を形成する物質のひとつとして重要である。圧力、温度の条件により、多様な結晶相(結晶多形)が存在する。結晶は共有結合結晶であり、ケイ素原子を中心とする正四面体構造が酸素原子を介して無数に連なる構造をしている。電球の内側に、明る過ぎないようにするため塗料として塗られ、無機ガラスの主成分である。そして、粉体化粧料の基剤としても使用される。また、平均粒子がサイズ150μmより大きい場合は、アレルゲン不活化効果はある程度有するものの、製剤化した場合にざらつき等を感じ、使用感触に不具合を感じる場合がある。 “Silica” used in the present invention is silicon dioxide (SiO 2), and is an oxide of silicon, also called silica or silicic acid, and is important as one of the substances forming the crust. Various crystal phases (crystal polymorphs) exist depending on the pressure and temperature conditions. The crystal is a covalent bond crystal and has a structure in which a regular tetrahedral structure centered on a silicon atom is innumerably connected via an oxygen atom. It is applied as a paint inside the bulb so as not to be too bright and is the main component of inorganic glass. And it is used also as a base of powder cosmetics. When the average particle size is larger than 150 μm, the allergen-inactivating effect is obtained to some extent, but when it is formulated, it may feel rough and feel a feeling of use.
本発明に使用する「酸化亜鉛」とは、酸化亜鉛(ZnO)のことであり、亜鉛華とも呼ばれる。工業的には金属亜鉛を熱して気化させ、空気で燃焼させるか、硫酸亜鉛または硝酸亜鉛を焼くことで得られる。粒子が細かく、鉛白より被覆力は劣るが毒性がなく、硫化水素で黒変しないことから白色顔料として重要である。その他亜鉛華軟膏・亜鉛華澱粉などの医薬品あるいは化粧品などの原料となる。 The “zinc oxide” used in the present invention is zinc oxide (ZnO) and is also called zinc white. Industrially, it is obtained by heating and vaporizing metallic zinc and burning it with air, or baking zinc sulfate or zinc nitrate. It is important as a white pigment because it has fine particles and is inferior in covering power than lead white but is not toxic and does not turn black with hydrogen sulfide. Other raw materials for pharmaceuticals such as zinc flower ointment and zinc flower starch, and cosmetics.
本発明に使用する「ゼオライト」とは、結晶中に微細孔を持つアルミノ珪酸塩の総称である。日本名は沸石(ふっせき)と呼ばれる。分子ふるい、イオン交換材、触媒、吸着材として利用されている。現在ではさまざまな性質を持つゼオライトが人工的に合成されており、工業的にも重要な物質となっている。 “Zeolite” used in the present invention is a general term for aluminosilicates having fine pores in crystals. The Japanese name is called fuseki. Used as molecular sieve, ion exchange material, catalyst, adsorbent. At present, zeolites with various properties are artificially synthesized and are industrially important substances.
本発明は、粉体のみでも、水が存在する環境下でもその機能を十分発揮することができる。そして、粉体表面が濡れた状態であれば、更にアレルゲンを捕捉する効力を増し、アレルゲン不活化作用を発揮する。 The present invention can sufficiently exhibit its function even in the presence of water alone or in an environment where water is present. If the powder surface is in a wet state, the effect of capturing allergens is further increased, and the allergen inactivating action is exhibited.
本発明における「保湿剤」は、グリセリン、1,3−ブチレングリコール、1,2−ペンタンジオール、ジグリセリンなどの多価アルコールやヒアルロン酸、アルギン酸、カラギーナン、寒天、キサンタンガムなどの天然高分子又はカルボキシルビニルポリマーなどの合成高分子を使用することができる。また、本発明における「保湿剤」の配合量は、本発明の効果を有する範囲であれば特に制限はないが、多価アルコールの場合は0.1〜20.0重量%が好ましく、天然高分子又はカルボキシルビニルポリマーなどの合成高分子の場合は、0.001〜0.1重量%が好ましい。 The “humectant” in the present invention is a polyhydric alcohol such as glycerin, 1,3-butylene glycol, 1,2-pentanediol, diglycerin, a natural polymer such as hyaluronic acid, alginic acid, carrageenan, agar, xanthan gum, or carboxyl. Synthetic polymers such as vinyl polymers can be used. Further, the blending amount of the “humectant” in the present invention is not particularly limited as long as it has the effect of the present invention, but in the case of a polyhydric alcohol, it is preferably 0.1 to 20.0% by weight. In the case of a synthetic polymer such as a molecule or a carboxyl vinyl polymer, 0.001 to 0.1% by weight is preferable.
本発明のアレルゲン不活性化剤は、平均粒子サイズ150μm以下のシリカ、微粒子酸化亜鉛及びゼオライトの花粉アレルゲン不活性化作用を通じて、I型アレルギー性疾患を引き起こす花粉アレルゲンを不活性化し、スギ花粉等の花粉アレルゲンにより引き起こされる花粉症を予防、治療又は改善することができるとともに、本発明の粉体が有するダニアレルゲン不活性化作用を通じて、I型アレルギー性疾患を引き起こすダニアレルゲンを不活性化し、ダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のI型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。 The allergen inactivating agent of the present invention inactivates pollen allergens that cause type I allergic diseases through inactivation of pollen allergens of silica, fine particles of zinc oxide and zeolite having an average particle size of 150 μm or less, such as cedar pollen It is possible to prevent, treat or ameliorate hay fever caused by pollen allergens, and inactivate mite allergens that cause type I allergic diseases through the mite allergen inactivating action of the powder of the present invention. Can prevent, treat or ameliorate type I allergic diseases such as allergic asthma, rhinitis, conjunctivitis, and atopic dermatitis.
花粉アレルゲンは、I型アレルギー性疾患を引き起こす作用を有する花粉であれば特に限定されるものではなく、例えば、スギ花粉、ヒノキ花粉、ブタクサ花粉、カモガヤ花粉等が挙げられ、本発明の花粉アレルゲン不活性化剤は、特にスギ花粉に対して有効である。また、ダニアレルゲンは、I型アレルギー性疾患を引き起こす作用を有するダニ等であれば特に限定されるものではなく、例えば、コナヒョウヒダニ(Dermatophagoides
farinae)、ヤケヒョウヒダニ(Dermatophagoides
pteronyssinus)等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニ、これらのダニの糞及び死骸等が挙げられる。
The pollen allergen is not particularly limited as long as it is a pollen having an action of causing type I allergic disease, and examples thereof include cedar pollen, cypress pollen, ragweed pollen, camodia pollen, etc. The activator is particularly effective against cedar pollen. The mite allergen is not particularly limited as long as it is a mite having an effect of causing type I allergic disease. For example, mite allergen (Dermatophagoides)
farinae), Dermatophagoides
mite belonging to the genus Lepidoptera, such as Pteronyssinus), feces and dead bodies of these mites.
本発明の化粧料、家屋用スプレー、フィルター類等における平均粒子サイズ150μm以下のシリカ、微粒子酸化亜鉛及びゼオライトの配合量は特に限定されるものではないが、総量を基準として0.001〜20.0重量%が好ましく、0.01〜5.0重量%であることがより好ましい。配合量が0.001重量%未満であると、本発明の効果が充分に得られない場合があり、一方20.0重量%を超えても、その増量に見合った効果の向上は認められない場合があるからである。 The blending amount of silica, fine particle zinc oxide and zeolite having an average particle size of 150 μm or less in the cosmetics, house sprays, filters and the like of the present invention is not particularly limited, but is 0.001 to 20 based on the total amount. 0 weight% is preferable and it is more preferable that it is 0.01 to 5.0 weight%. When the blending amount is less than 0.001% by weight, the effect of the present invention may not be sufficiently obtained. On the other hand, when the blending amount exceeds 20.0% by weight, the improvement corresponding to the increase is not recognized. Because there are cases.
本発明の化粧料及び家屋用スプレーは上記必須成分のほか、水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、賦形剤、界面活性剤、油剤、アルコール、pH調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、色素、香料等を必要に応じて混合して適宜配合することにより調製される。本発明の化粧料、皮膚外用剤の剤型は特に限定されず、化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料、及び液体状等種々の剤型とすることができるが、ここに挙げた例に限定されるものではない。 In addition to the above essential components, the cosmetic and home spray of the present invention are aqueous components, oily components, plant extracts, animal extracts, powders, excipients, surfactants, oils, alcohols, pH adjusters, preservatives. It is prepared by mixing antioxidants, thickeners, pigments, fragrances and the like as necessary and blending them appropriately. The dosage form of the cosmetic preparation and external preparation for skin of the present invention is not particularly limited, and various dosage forms such as lotion, milky lotion, cream, pack, powder, spray, ointment, dispersion, cleaning agent, and liquid are used. However, it is not limited to the examples given here.
以下に実施例を挙げて本発明を説明する。なお、本実施例により本発明が限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described with reference to examples. Note that the present invention is not limited to the embodiments.
「試験方法及び評価方法」
〔試験例1〕スギ花粉アレルゲン不活性化試験
(1)スギ花粉アレルゲン不活性化反応
各試料を2mgずつ96wellマイクロプレートに添加する。0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液に抗原(スギ花粉抗原:Cry j 1,生化学工業社製)を溶解した2ng/mLの抗原溶液を上記マイクロプレートに120μLずつ添加し、室温で2時間振とうする。振とう後、マイクロプレートの各wellからマイクロチューブにダニアレルゲン溶液を採取し、3,000rpmで5分遠心分離する。遠心分離後の上清を120μL採取し、当該溶液中に存在するスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)を下記に示すサンドイッチELISA法により測定した。
"Test method and evaluation method"
[Test Example 1] Cedar pollen allergen inactivation test (1) Cedar pollen allergen inactivation reaction 2 mg of each sample is added to a 96-well microplate. 120 μL each of a 2 ng / mL antigen solution in which an antigen (cedar pollen antigen: Cry j 1, manufactured by Seikagaku Corporation) was dissolved in a PBS solution containing 0.1% bovine serum albumin was added to the microplate at room temperature for 2 hours. Shake. After shaking, a mite allergen solution is collected from each well of the microplate into a microtube and centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes. 120 μL of the supernatant after centrifugation was collected, and the cedar pollen allergen concentration (ng / mL) present in the solution was measured by a sandwich ELISA method shown below.
(2)スギ花粉アレルゲン濃度の定量(サンドイッチELISA法)
10μg/mLのコーティング溶液(製品名:抗Cry j 1モノクローナル抗体013,生化学工業社製)100μLをELISAプレートの各wellに添加し、室温で2時間静置した。その後、コーティング溶液を除去し、0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液を250μL添加し、4℃で一晩静置した。一晩静置後、0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液を除去し、2時間振とうさせた上記スギ花粉アレルゲン溶液100μLを添加して、室温で2時間振とうした。
(2) Quantification of cedar pollen allergen concentration (sandwich ELISA method)
100 μL of a 10 μg / mL coating solution (product name: anti-Cry j 1 monoclonal antibody 013, manufactured by Seikagaku Corporation) was added to each well of the ELISA plate and allowed to stand at room temperature for 2 hours. Thereafter, the coating solution was removed, 250 μL of 0.1% bovine serum albumin-containing PBS solution was added, and the mixture was allowed to stand at 4 ° C. overnight. After standing overnight, the PBS solution containing 0.1% bovine serum albumin was removed, 100 μL of the cedar pollen allergen solution shaken for 2 hours was added, and the mixture was shaken at room temperature for 2 hours.
スタンダードとして、スギ花粉アレルゲン(製品名:精製花粉抗原Cry j 1,生化学工業社製)を0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液に溶解し、4ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.25ng/mLの検量線用標準溶液を調製した。各濃度の検量線用標準溶液100μLをELISAプレートに添加して、室温で2時間振とうした。振とう後、ELISAプレートを、0.05%Tween20を含むPBS溶液300μLで3度洗浄後、1000倍に希釈したスギ花粉アレルゲンモノクローナル抗体(製品名:西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Cry j 1モノクローナル抗体053,生化学工業社製)を100μL添加して、室温で2時間振とうした。そして、ELISAプレートを、0.05%Tween20を含むPBS溶液300μLで3度洗浄後、0.5mg/mLの基質溶液100μLを添加して室温で発色させ、3〜5分間反応させた後に2N
硫酸を100μL加えて反応を停止させ、20分以内にマイクロプレートリーダーにより490nmの吸光度を測定した。
As a standard, Japanese cedar pollen allergen (product name: purified pollen antigen Cry j 1, manufactured by Seikagaku Corporation) was dissolved in PBS solution containing 0.1% bovine serum albumin, 4 ng / mL, 2 ng / mL, 1 ng / mL, Standard solutions for calibration curves of 0.5 ng / mL and 0.25 ng / mL were prepared. 100 μL of standard solution for calibration curve at each concentration was added to the ELISA plate and shaken at room temperature for 2 hours. After shaking, the ELISA plate was washed 3 times with 300 μL of a PBS solution containing 0.05% Tween 20, and then diluted 1000 times to a cedar pollen allergen monoclonal antibody (product name: horseradish peroxidase-labeled anti-Cry j 1 monoclonal antibody 053). 100 μL of Seikagaku Corporation) was added and shaken at room temperature for 2 hours. The ELISA plate was washed three times with 300 μL of PBS solution containing 0.05% Tween 20, and then 100 μL of 0.5 mg / mL substrate solution was added to cause color development at room temperature, followed by reaction for 3 to 5 minutes, and then 2N
The reaction was stopped by adding 100 μL of sulfuric acid, and the absorbance at 490 nm was measured with a microplate reader within 20 minutes.
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度及び試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記の式に基づき、スギ花粉アレルゲン不活性化率(%)を算出した。 Using the calibration curve obtained from the absorbance of the standard solution for the calibration curve, the cedar pollen allergen concentration in the sample-added cedar pollen allergen solution and the cedar pollen allergen concentration in the sample-free cedar pollen allergen solution were quantified. The cedar pollen allergen inactivation rate (%) was calculated based on the following formula using the quantitative results.
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度及び試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記の式に基づき、スギ花粉アレルゲン不活性化率(%)を算出した。
スギ花粉アレルゲン不活性化率(%)=(B−A)/B×100
ただし、式中、Aは「試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)」を表し、Bは「試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)」を表す。
Using the calibration curve obtained from the absorbance of the standard solution for the calibration curve, the cedar pollen allergen concentration in the sample-added cedar pollen allergen solution and the cedar pollen allergen concentration in the sample-free cedar pollen allergen solution were quantified. The cedar pollen allergen inactivation rate (%) was calculated based on the following formula using the quantitative results.
Cedar pollen allergen inactivation rate (%) = (B−A) / B × 100
In the formula, A represents “the cedar pollen allergen concentration in the sample-added cedar pollen allergen solution (ng / mL)”, and B represents “the cedar pollen allergen concentration in the sample-free cedar pollen allergen solution (ng / mL)”. ".
平均粒子サイズ150μm以下のシリカ、微粒子酸化亜鉛及びゼオライトは、特許文献7及び特許文献8に示されるヒドロキシアパタイトよりもスギ花粉アレルゲン不活化作用が強いことを確認した。 It was confirmed that the silica, fine particle zinc oxide and zeolite having an average particle size of 150 μm or less have a stronger cedar pollen allergen inactivating effect than hydroxyapatite shown in Patent Document 7 and Patent Document 8.
〔試験例2〕ダニアレルゲン不活性化試験
各試料を2mgずつ96wellマイクロプレートに添加する。0.05% Tween20含有PBS溶液に抗原(精製ダニ抗原Der
fII)を溶解した400ng/mLの抗原溶液を上記マイクロプレートに100μLずつ添加し、室温で2時間振とうする。振とう後、マイクロプレートの各wellからマイクロチューブにダニアレルゲン溶液を70μLずつ採取し、3000rpmで5分遠心分離する。遠心分離後の上清を50μL採取し、当該溶液中に存在するダニアレルゲン濃度(ng/ml)を下記に示すサンドイッチELISA法により測定した。
[Test Example 2] Mite allergen inactivation test 2 mg of each sample is added to a 96-well microplate. 0.05% Tween20 containing PBS solution with antigen (purified mite antigen Der
100 μL of a 400 ng / mL antigen solution in which fII) is dissolved is added to the microplate and shaken at room temperature for 2 hours. After shaking, 70 μL of mite allergen solution is collected from each well of the microplate into a microtube and centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes. 50 μL of the supernatant after centrifugation was collected, and the mite allergen concentration (ng / ml) present in the solution was measured by the sandwich ELISA method shown below.
(2)ダニアレルゲン濃度の定量(サンドイッチELISA法)
2μg/mLのコーティング溶液(製品名:抗Derf IIモノクローナル抗体15E11,生化学工業社製)50μLをELISAプレートの各wellに添加し、室温で2時間静置した。その後、コーティング溶液を除去し、PBS300μLで3回洗浄後、1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液を200μL添加し、室温で1時間放置した。一時間静置後、0.05%Tween20含有PBS300μLで各wellを3回洗浄、標準溶液、検液を50μLずつ添加し、室温で2時間静置した。0.05%
Tween 20含有PBS
300μLで各wellを3回洗浄、250pg/mLの西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Der f IIモノクローナル抗体13A4pを50μL添加し、室温で2時間静置した。0.05%
Tween 20含有PBS
300μLで各wellを3回洗浄後、0.1Mクエン酸、リン酸緩衝液(pH5.0)10mLに対して、o−フェニレンジアミン4mg、3%過酸化水素を20μLの割合で加える。基質溶液を1wellに100μLずつ加え、15分程度静置した後、2N
硫酸を1wellにつき100μLずつ加え、酵素反応を停止した。硫酸添加後30分以内にプレートリーダーでA490−650の吸光度を測定した。
(2) Determination of mite allergen concentration (sandwich ELISA method)
50 μL of 2 μg / mL coating solution (product name: anti-Derf II monoclonal antibody 15E11, manufactured by Seikagaku Corporation) was added to each well of the ELISA plate and allowed to stand at room temperature for 2 hours. Thereafter, the coating solution was removed, washed 3 times with 300 μL of PBS, 200 μL of 1% bovine serum albumin-containing PBS solution was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 1 hour. After standing for 1 hour, each well was washed 3 times with 300 μL of PBS containing 0.05% Tween 20, 50 μL of standard solution and test solution were added, and the plate was allowed to stand at room temperature for 2 hours. 0.05%
PBS containing Tween 20
Each well was washed three times with 300 μL, 50 μL of 250 pg / mL horseradish peroxidase-labeled anti-Der f II monoclonal antibody 13A4p was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 2 hours. 0.05%
PBS containing Tween 20
After washing each well 3 times with 300 μL, 4 mg of o-phenylenediamine and 3% hydrogen peroxide are added at a ratio of 20 μL to 10 mL of 0.1 M citric acid and phosphate buffer (pH 5.0). Add 100 μL of substrate solution to each well and let stand for about 15 minutes.
100 μL of sulfuric acid was added per well to stop the enzyme reaction. Within 30 minutes after the addition of sulfuric acid, the absorbance of A490-650 was measured with a plate reader.
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度及び試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記の式に基づき、ダニアレルゲン不活性化率(%)を算出した。
ダニアレルゲン不活性化率(%)=(B−A)/B×100
式中、Aは「試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度(ng/mL)」を表し、Bは「試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度(ng/mL)」を表す。
上記試験の結果を表2に示す。
Using the calibration curve obtained from the absorbance of the standard curve standard solution, the mite allergen concentration in the sample-added mite allergen solution and the mite allergen concentration in the sample-free mite allergen solution were quantified. The mite allergen inactivation rate (%) was calculated based on the following formula using the quantitative result.
Mite allergen inactivation rate (%) = (B−A) / B × 100
In the formula, A represents “the mite allergen concentration in the sample-added mite allergen solution (ng / mL)”, and B represents “the mite allergen concentration in the sample-free mite allergen solution (ng / mL)”.
The results of the above test are shown in Table 2.
平均粒子サイズ150μm以下のシリカ、微粒子酸化亜鉛及びゼオライトは、特許文献7及び8に示されるヒドロキシアパタイトよりもダニアレルゲン不活化作用が強いことを確認した。 It was confirmed that silica, fine particle zinc oxide and zeolite having an average particle size of 150 μm or less have a stronger mite allergen inactivating action than hydroxyapatite shown in Patent Documents 7 and 8.
〔ダニアレルゲン不活化試験〕
表3に示した処方でスプレーを作成し、それぞれを不織布製のシートに吹きかけ、10分間放置した。300mm×300mmのプラスティック製のボックスを準備し、両側面に50mmの穴をあけ片面に実施例1〜5及び比較例1及び2の液を其々吹きかけて乾燥したシートを設置した。ボックス内に100ng/mLのダニアレルゲン水溶液を約10mL噴霧し、1時間放置後、ホース中間部にメンブランフィルターを装着した掃除機でシートを設置した面を吸引した。メンブランフィルターをPBS5mLに浸漬し、よく攪拌した後、溶液中のダニアレルゲン濃度をサンドイッチELISA法にて測定した。
[Mite allergen inactivation test]
Sprays were prepared according to the formulations shown in Table 3, and each was sprayed on a non-woven sheet and left for 10 minutes. A 300 mm × 300 mm plastic box was prepared, 50 mm holes were made on both sides, and the dried sheets were installed by spraying the liquids of Examples 1 to 5 and Comparative Examples 1 and 2 on one side. About 10 mL of a 100 ng / mL mite allergen aqueous solution was sprayed into the box, and after standing for 1 hour, the surface on which the sheet was installed was sucked with a vacuum cleaner equipped with a membrane filter in the middle of the hose. The membrane filter was immersed in 5 mL of PBS and stirred well, and then the mite allergen concentration in the solution was measured by a sandwich ELISA method.
表4で示す基準にて評価した結果を表5に示す。 The results of evaluation based on the criteria shown in Table 4 are shown in Table 5.
アレルゲン不活化剤を配合していないスプレーを吹き付けたシート(比較例1)と比較して、アレルゲン不活化剤を配合したシート(比較例2、実施例1〜6)のアレルゲン量が低下した。また、ハイドロキシアパタイト(比較例2)と比較しても本発明の粉体(実施例1〜6)のほうがアレルゲンの低下が著しかった。更に、保湿剤を含有しない実施例3と比較して、保湿剤を含有する実施例1、実施例2及び実施例4〜実施例6がアレルゲンの低下が著しかった。この結果は、本発明の粉体と保湿剤を併用して配合した場合に相乗的にアレルゲン不活化効果を高めることを示している。 Compared with the sheet (Comparative Example 1) sprayed with the spray not containing the allergen inactivating agent, the allergen amount of the sheet containing the allergen inactivating agent (Comparative Example 2, Examples 1 to 6) decreased. In addition, even when compared with hydroxyapatite (Comparative Example 2), the powders of Examples (Examples 1 to 6) of the present invention showed a significant decrease in allergen. Furthermore, compared with Example 3 which does not contain a humectant, Example 1, Example 2 and Examples 4 to 6 containing a humectant showed a significant decrease in allergen. This result indicates that when the powder of the present invention and a humectant are used in combination, the allergen inactivating effect is synergistically enhanced.
以下に本発明の処方例を挙げる。 The formulation example of this invention is given to the following.
<処方例1>化粧水
(成分名) (質量%)
シリカ(サイリシア350) 0.5
微粒子酸化亜鉛 0.1
グリセリン 5.0
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.0) 1.5
ヒアルロン酸ナトリウム 0.1
寒天 0.001
エタノール 8.0
クエン酸トリエチル 2.0
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
<Formulation example 1> lotion (component name) (mass%)
Silica (Silicia 350) 0.5
Fine zinc oxide 0.1
Glycerin 5.0
Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.0) 1.5
Sodium hyaluronate 0.1
Agar 0.001
Ethanol 8.0
Triethyl citrate 2.0
Preservative / Antioxidant
Purified water balance
<処方例2>乳液
(成分名) (質量%)
シリカ(エロジール200) 0.0001
ゼオライト 0.01
スクワラン 8.0
ワセリン 2.0
ミツロウ 0.5
ソルビタンセスキオレエート 0.8
ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.0) 1.2
カルボキシビニルポリマー 0.2
カラギーナン 0.01
グリセリン 1.5
水酸化カリウム 0.1
エタノール 7.0
グリセリン 2.0
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
<Formulation example 2> Emulsion (component name) (mass%)
Silica (Erogil 200) 0.0001
Zeolite 0.01
Squalane 8.0
Vaseline 2.0
Beeslow 0.5
Sorbitan sesquioleate 0.8
Polyoxyethylene oleyl ether (20E.0) 1.2
Carboxyvinyl polymer 0.2
Carrageenan 0.01
Glycerin 1.5
Potassium hydroxide 0.1
Ethanol 7.0
Glycerin 2.0
Perfume Appropriate amount of preservative / antioxidant Appropriate amount of purified water
<処方例3>軟膏
(成分名) (質量%)
シリカ(サイリシア350) 1.0
微粒子酸化亜鉛 0.5
酢酸トコフェロール 0.5
パラジメチルアミノ安息香酸オクチル 4.0
ブチルメトキシベンゾイルメタン 4.0
ステアリルアルコール 18.0
モクロウ 20.0
グリセリンモノステアリン酸エステル 0.3
ワセリン 33.0
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
<Prescription Example 3> Ointment (component name) (mass%)
Silica (Silicia 350) 1.0
Fine zinc oxide 0.5
Tocopherol acetate 0.5
Octyl paradimethylaminobenzoate 4.0
Butylmethoxybenzoylmethane 4.0
Stearyl alcohol 18.0
Owl 20.0
Glycerin monostearate 0.3
Vaseline 33.0
Perfume Appropriate amount of preservative / antioxidant Appropriate amount of purified water
<処方例4>ゲル
〈成分名〉 (重量%)
シリカ(エロジール200) 5.0
ゼオライト 5.0
エタノール 10.0
ペクチン 1.0
キサンタンガム 0.2
アルギン酸 0.01
1,3−BG 5.0
ジグリセリン 0.5
KOH 適量
塩化ナトリウム 0.02
精製水 残部
<Formulation example 4> Gel <Ingredient name> (wt%)
Silica (Erogil 200) 5.0
Zeolite 5.0
Ethanol 10.0
Pectin 1.0
Xanthan gum 0.2
Alginic acid 0.01
1,3-BG 5.0
Diglycerin 0.5
KOH proper amount Sodium chloride 0.02
Purified water balance
<処方例5>パウダリーファンデーション
〈成分名〉 (重量%)
シリカ(スパーマイクロビーズシリカC−30 10.0
微粒子酸化亜鉛 5.0
タルク 5.0
マイカ 35.0
カオリン 5.0
酸化チタン 10.0
雲母チタン 3.0
ステアリン酸亜鉛 1.0
ナイロンパウダー 10.0
スクワラン 6.0
酢酸ラノリン 1.0
モノオレイン酸ソルビタン 1.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
防腐剤・酸化防止剤 適量
色顔料 適量
<Prescription Example 5> Powdery Foundation
<Ingredient name> (wt%)
Silica (Spar microbead silica C-30 10.0
Fine zinc oxide 5.0
Talc 5.0
Mica 35.0
Kaolin 5.0
Titanium oxide 10.0
Mica titanium 3.0
Zinc stearate 1.0
Nylon powder 10.0
Squalane 6.0
Lanolin acetate 1.0
Sorbitan monooleate 1.0
1,3-butylene glycol 2.0
Preservatives and antioxidants Appropriate amount Color pigment Appropriate amount
<処方例6>家屋用スプレー
シリカ(サイリシア350) 2.0
1,3−ブチレングリコール 5.0
1,2−ペンタンジオール 2.0
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.0) 1.5
エタノール 15.0
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
<Prescription Example 6> Spray silica for houses (Silycia 350) 2.0
1,3-butylene glycol 5.0
1,2-pentanediol 2.0
Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.0) 1.5
Ethanol 15.0
Preservative / Antioxidant
Purified water balance
本発明は、アレルゲンによる痒みや炎症を防ぎ、アレルギーの原因となるアレルゲンを直接捕捉し、花粉症や喘息やアトピ―性皮膚炎といったアレルギー症状の原因を予防、治療又は改善することが可能となるため、室内用ミスト・スプレー、繊維、不織布、紙、フィルターなどのようなアレルゲン不活化用製品に広く応用が期待できる。
The present invention can prevent itching and inflammation caused by allergens, directly capture allergens that cause allergies, and prevent, treat or ameliorate the causes of allergic symptoms such as hay fever, asthma and atopic dermatitis. Therefore, it can be widely applied to products for inactivating allergens such as indoor mist / spray, fiber, non-woven fabric, paper, and filter.
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