JP2008133286A - 神経学的障害の治療に有用な方法および医薬用組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】老人性痴呆、糖尿病性ニューロパシー、色素性網膜炎、多発性硬化症、およびアルツハイマー病からなる群から選択される疾患の症状を治療、緩和、もしくは予防するための方法を提供する。
【解決手段】神経障害を持つ患者に、患者の循環血中ＤＨＡ量、血中ＡＲＡ量、または、その両者を正常なレベルに上昇させるのに有効な量の、ＤＨＡを含む単細胞微生物の油脂、ＡＲＡを含む単細胞微生物の油脂、または、その両者を投与することからなる、その神経障害を治療する方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含んだ単細胞微生物油脂（single cell microbial oil）、アラキドン酸（ＡＲＡ）を含んだ単細胞油脂（single cell oil）、またはＤＨＡ含有油脂とＡＲＡ含有油脂との組み合わせ物を治療学的に有効な量にて含む組成物を、神経学的障害の治療を必要とする個体に投与することによって、ある特定の神経退化性疾患や精神医学的障害も含めた神経学的障害を治療する方法に関する。これらの油脂は、医薬用組成物としても、補充食としても、あるいは植物油や脂肪の一部を置き換えることによって食品の形でも投与することができる。

ヒトの脳や他の神経組織には長鎖の多価不飽和脂肪酸が多く含まれており、これら組織の細胞膜の構造、流動性、および機能を調節する際に、こうした脂肪酸が重要な役割を果たすものと考えられている。アラキドン酸（以後ＡＲＡと呼ぶ）はω−６クラスの長鎖多価不飽和脂肪酸（５,８,１１,１４−エイコサテトラエン酸、２０：４ω−６）であり、人体中に最も豊富に存在するＣ₂₀多価不飽和脂肪酸である。ＡＲＡは、構造脂質（structural lipid）としての主要な役割の他に、多くの循環エイコセノイド（circulating eicosenoid）〔例えば、プロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）、プロスタサイクリンＩ₂（ＰＧＩ₂）、トロンボキサンＡ₂（Ｔ_xＡ₂）、およびロイコトリエンＢ₄（ＬＴＢ₄）とＣ₄（ＬＴＣ₄）〕に対する直接的な前駆体である。これらのエイコセノイドは、リポタンパク質の代謝、血液のレオロジー、血管の状態、白血球の機能、および血小板の活性化に対して調節作用を示す。ヒトの場合、ＡＲＡは新たに合成されないが、リノール酸（飲食物から摂取しなければならない必須脂肪酸）の伸長と不飽和化によって合成することができる。

ドコサヘキサエン酸（４,７,１０,１３,１６,１９−ドコサヘキサエン酸２２：６ω−３）（以後ＤＨＡと呼ぶ）は、ヒトの脳や他の神経組織における灰白質の構造成分のうち最も多く存在する脂肪酸である。ヒトの場合、ＤＨＡは新たに合成することはできない。しかしながら、飲食物中に適切な長鎖多価不飽和脂肪酸が供給されれば、幾つかの細胞タイプ（例えばアストログリア）によってこのω−３脂肪酸を合成できるという証拠がある〔S．ムーアらによる“ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー56（1991）518-524ページ”〕。脳と網膜の細胞膜中に見いだされるＤＨＡのほとんどは、食物供給源から得られたものであると考えられている。

脳細胞に対する回復不能な損傷を防止するために、脳の速やかな発達期に多価不飽和脂肪酸を供給することの重要性は、当業界においてよく知られている。幼児は特にＤＨＡの合成能力が低いが、幼児に母乳（必須脂肪酸、とりわけＤＨＡおよびＡＲＡを豊富に含有）を供給することによって、幾らかの不足分は補うことができる〔サンダーズ（Sanders）らによる“Am．J．Clin．Nutr.，31（1978）805-813ページ”〕。赤ん坊として母乳を与えられた子供と、赤ん坊として市販の幼児用調合乳を与えられた子供に対する標準的な知能検査の結果を比較した最近の研究によれば、飲食物中の母乳の割合とその結果得られるＩＱとの間に、用量作用の関係があることが示されている〔A．ルーカス，R．モーリー，T.J．コール，G．リスター，およびC．リーソンらによる“ペイネ・ランセット（Payne Lancet）339（1992）261-264ページ”〕。これらの研究は、食事調整療法（dietary intervention therapy）が、神経系の構造的発達に利用できるＤＮＡのレベルに影響を及ぼしうるということを示している。

リン脂質、ホスファチジルエタノールアミン、およびホスファチジルコリンの主要な２種類中のＤＮＡレベルが、アルツハイマー病患者の脳組織においてはかなり減少していることが観察されている。高齢の患者（臨床上からは、痴呆や他の精神障害は認められない）から採取した対照標準サンプルは、リン脂質のこれら２種類の脂肪酸組成にそれほどの変化はなかった。これらの結果は、アルツハイマー病患者の脳組織中におけるＤＨＡ濃度の変化が、通常の加齢によるものではなく、神経退化性疾患に含まれる病理学的メカニズムに特有のものであることを示している〔M．ソデルバーグ，C．エドランド，K．クリステンソン，およびG．ダリナーによる“脂質26（1991）421-425ページ”〕。

ペルオキシソーム障害は、極めて長い鎖をもつ脂肪酸のレベルが増大することを特徴とする一群の神経退化性障害であり、罹患した個体においてこれらの脂肪酸を分解するための能力が損なわれたことが原因で起こる。これらの障害は、いずれも、ペルオキシソームとして知られている亜細胞性小器官中に局在化したある欠陥が原因のようであるという点において関連している〔N．ゴードンによる「“ペルオキシソームの障害”，脳の発達９（1987）571-575ページ」〕。これらのペルオキシソーム障害は、特定の疾患においてみられるペルオキシソーム機能の消失の程度に基づいて３つのグループに分類されている〔A.C．テイルによる“ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ペディアトリクス，151（1992）117-120ページ”〕。

ペルオキシソーム障害の第１グループは、ペルオキシソームとペルオキシソーム機能の実質的に完全な消失を特徴とする。これらの障害としては、ツェルヴェーガー症候群、新生児の副腎白質ジストロフィー（adrenoleucodystrophy）、乳幼児のレフスム病、及びハイパーペペコリック酸血症（hyperpepecolic acidemia）がある。第２グループの障害は、多くのペルオキシソーム機能の消失を特徴とし、点状骨端形成異常、およびツェルヴェーガー様症候群がある。第３グループの障害は、１つのペルオキシソーム機能だけの消失を特徴とし、副腎白質ジストロフィー、副腎脊髄神経障害（adrenomyeloneuropathy）、アシル-CｏＡオキシダーゼ欠乏症、二官能タンパク質欠乏症、チオラーゼ欠乏症、タイプＩの高シュウ酸尿症、無カタラーゼ血症、および大人のレフスム病がある。ペルオキシソーム障害をもつ患者の臨床データによれば、表現型の表示に多様な広がりを示しており、この表現型の表示は患者の年齢によってかなり変化する。しかしながら、いずれの患者においても神経学的機能が徐々に損なわれ、このためしばしば自律神経機能の低下をきたし、早期に死に至ることが多い。

ペルオキシソーム障害をもった患者の組織における多価不飽和脂肪酸についての最近の研究によれば、これら組織中の脂肪酸のトータル量は正常だとしても、患者の組織における脂肪酸組成にかなりの変化が起きている、ということが判明した。これらの患者は、血清脂質組成物中のＤＨＡとＡＲＡのトータル量がかなり減少している。血清プラスマロゲンのレベルも低下している。

アッシャー症候群は、視覚細胞の退化に関連した常染色体の劣性遺伝障害であり、網膜炎pigmentsumを引き起こす。視覚細胞は、視覚細胞のキューター・セグメント（cuter segment）を構成する光受容体のリン脂質中でエステル化されたＤＨＡを極めて多量に含有している。バザン（Bazan）とその共同研究者らは最近、アッシャー病患者の血漿リン脂質は、罹患していない個体の血漿リン脂質に比べてＤＨＡとＡＲＡの含有量がかなり少ないということを見いだした〔N.G.バザン，B.L．スコット，T.S．レディ，およびM.Z．ペリアスによる“Biochem．Biophys Res．Comm．141（1986）600-604ページ”〕。

研究者らはさらに、他の臨床的な病気〔例えば、老年痴呆、糖尿病性ニューロパシー、多発性硬化症、精神分裂病、および重金属（例えば、鉛、アルミニウム、および水銀）を多量に取り込んだ場合に付きもののニューロパシー〕に罹っている患者は、血清脂質中にＤＨＡおよびＡＲＡを、健康体中に見られるレベルに比較してかなり低下したレベルにて含んでいることを見いだした。例えば最近の研究によれば、ＡＲＡの血小板リン脂質へのエステル化レベルの変化と、患者における情緒分裂障害の存在との間に相関性があることが判明した〔L．デミッシュらによる“Prostaglhndins Leukot．Essent．Fatty Acid 46（1992）47-52ページ”〕。精神分裂病患者の血漿リン脂質中で必須脂肪酸の異常な生化学が起こっている、という証拠が報告されている〔D.F．ホロビンによる“Prostaglandins Leukot．Essent．Fatty Acid 46（1992）71-77ページ”〕。

研究者らは神経退化性障害（例えば、アルツハイマー病や種々のペルオキシソーム障害）の理解に対してある程度の進歩を果たしたが、これらの障害を治療するための有効な手段は依然として確立されていない。同様に、精神分裂病や上記した他の神経学的障害を治療するための有効な薬物の開発が充分とはいえない。

したがって、本発明の目的は、必須脂肪酸であるＤＨＡとＡＲＡの血清、組織、もしくは膜でのレベルが影響を受けるという、神経学的障害を治療するための方法を提供することにある。

本発明は、有効量の脂肪酸ＤＨＡもしくはＡＲＡ、またはＤＨＡとＡＲＡの混合物を患者に投与することを含む、神経学的疾患に罹っている患者を治療する方法に関する。これらの脂肪酸は、ＤＨＡやＡＲＡが天然複合脂質として供給される油脂の形で（好ましくはトリグリセリドの形で）投与される。治療しようとする神経学的疾患としては、ペルオキシソーム疾患、アルツハイマー病、アッシャー症候群、老年痴呆、糖尿病性ニューロパシー、多発性硬化症、精神分裂病、および重金属（例えば、鉛、アルミニウム、および水銀）を多量に取り込んだ場合に付きもののニューロパシーだけでなく、血清、組織、または膜でのＤＨＡ濃度もしくはＡＲＡ濃度が、正常な個体において見られるＤＨＡ濃度もしくはＡＲＡ濃度に比較してかなり影響を受けている、という他の神経退化性疾患がある。本発明はさらに、これらのω−３およびω−６脂肪酸を治療有効量にて供給する、ＤＨＡもしくはＡＲＡを含有した医薬用組成物、あるいはＤＨＡとＡＲＡとを含有した組成物に関する。

これらの組成物を投与すると、神経退化性障害あるいはＤＨＡやＡＲＡの欠乏に関係した他の障害（例えば精神分裂病）をもっていると診断された患者に対して予防処置だけでなく治療処置も可能となる。これらの治療法や組成物はさらに、こうした神経学的障害のうちの１つを発現する恐れのある個体に対して予報処置を与える。

本発明によれば、神経学的障害を治療するための方法は、ＤＨＡを含んだ微生物油脂、ＡＲＡを含んだ微生物油脂、あるいはこれらの組み合わせ物をこのような障害に罹っている人に投与することを含む。こうした神経学的障害としては、神経退化性障害やある特定の精神医学的障害（例えば精神分裂病）があり、これらの障害においては、血清、組織、または膜での必須脂肪酸ＤＨＡとＡＲＡのレベルが影響を受けている。ＤＨＡとＡＲＡは天然複合脂質の形態を採っている。

ＤＨＡとＡＲＡはトリグリセリドの形態となっているのが好ましいが、リン脂質の形態となっていてもよい。ＤＨＡとＡＲＡは、ＤＨＡ生成微生物またはＡＲＡ生成有機体を油脂生成条件下にて培養することによって、単細胞微生物油脂として得られる。

本発明の好ましい実施態様によれば、ＤＨＡまたはＡＲＡを含有した単細胞微生物油脂を生成することのできる微生物が、このような有機体の成長を維持することのできる栄養素含有溶液中にて発酵槽で培養される。生成される微生物油脂は、当該脂肪酸を多量に含有しているのが好ましい（すなわち、少なくとも約２０重量％のＤＨＡまたは１０重量％のＡＲＡを含有）。

本発明においては、ＤＨＡもしくはＡＲＡを含有した微生物油脂を生成することのできるいかなる微生物も使用することができる。これらの微生物は、微生物の培養物から採取したバイオマスの脂肪酸分布にてＤＨＡ油脂もしくはＡＲＡ油脂が存在するかどうかを調べることによって識別することができる。これらの分布は一般に、サンプル中に存在する脂肪酸のメチルエステル誘導体のガスクロマトグラフィーによって得られる。

本明細書で使用している“微生物”や“いかなる特定のタイプの微生物”とは、野生型株、突然変異型株、または組み換え型株を含む。ＤＨＡまたはＡＲＡを含有する微生物細胞油脂を生成するよう設計された野生型微生物や組み換え型微生物を使用して、ＤＨＡ含有微生物油脂やＡＲＡ含有微生物油脂を生成させることができる。このような組み換え型株には、同じ基質が供給された場合に、同種の野生型微生物によって生成される量に比較して、より多くの量のＤＨＡもしくはＡＲＡを、より多くのトータル油脂を、あるいはこの両方を単細胞油脂にて生成するよう設計されたものも含まれる。より原価効率の良い基質を効率的に使用するよう選定・設計された微生物は、野生型微生物の場合と同量のＤＨＡもしくはＡＲＡ含有単細胞油脂を生成するものの、本発明の好ましい実施態様に対して特に有用である。

ＤＨＡ含有微生物油脂の生成には、光合成藻類の種〔例えば、チャットネラ（Chattonella）、スケレトネマ（Skeletonema）、タラシオシラ（Thalassiosira）、イソチリシス（Isochrysis）、ヒメノモナス（Hymenomonas）、またはクリプトモナス（Cryptomonas）〕を使用することができる。好ましい微生物は藻類の有機栄養種であり、渦鞭藻綱〔例えばクリプテコジニウム（Crypthecodinium）〕；チトリジオミセテス（Chytridiomycetes）〔例えばトラウストチトリウム（Thrausto-chytrium）〕やシトゾチトリウム（Schitzochytrium）等の真菌類；あるいは卵菌綱〔例えば、モルチエレラ（Mortierella）、サプロレグニア（Saprolegnia）、またはムコール（Mucor）〕などがあるが、これらに限定されない。

ＤＨＡを生成させるための好ましい微生物は、クリプテコジニウムも含めた双鞭毛虫類である。特に好ましいのは、偏性有機栄養生物であるクリプテコジニウム・コーニー（Crypthecodinium cohnii）であり、これについては１９９０年２月１３日付け出願の米国特許出願第４７９,１３５号に説明されている。Ｃ.コーニーが好ましいのは脂肪酸を生成するからであり、このときＤＨＡが、多価不飽和脂肪酸のトータル量の中で約１％より多い量で存在する唯一の多価不飽和脂肪酸であり、この量は本発明の方法を実施する上で重要な点である。メリーランド州ロックヴィルのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Culture Collection）にＣ.コーニーのある株のサンプル（多量のＤＨＡを生成する）を寄託し、ＡＴＣＣ承認番号４０７５０を付けた。

ＡＲＡを生成させるのに有用な微生物としては、藻類の種〔例えば、ポルフィリジウム（Porphyridium）、オチロモナス（Ochromonas）、およびヨーグレナ（Euglena）〕、および真菌類〔例えば、ピティウム（Pythium）やモルチエレラ〕などがある。ＡＲＡを生成するこれらの種の多くは、このほかに相当量のエイコサペンタン酸（ＥＰＡ）も生成する。予想外のことに、Ｐ.インシジオスム（P．insidiosum）およびＭ.アルピナ（M．alpina）はＡＲＡを生成するが、少なくとも実質的にはＥＰＡを含まない、ということが見いだされた。ここで“実質的に含まない”とは、ＡＲＡ対ＥＰＡの比が少なくとも５:１であるということを意味している。この比は少なくとも１０:１であるのが好ましい。油脂中の脂肪酸含量の１％以下がＥＰＡであるのが最も好ましい。魚油の場合もそうであるが、治療食中のＥＰＡレベルが高いと、食物リノール酸からＡＲＡを形成する能力が低下する。さらに、患者（特に、プロトロンビン時間の増大している高齢、高血圧、または妊娠中の患者）にＥＰＡを含有した魚油を投与することは、ＥＰＡが血液希薄効果をもっているので望ましくない。したがって、ＡＲＡとＥＰＡの両方を生成する真菌種は本発明の方法に使用することができるけれども、ＥＰＡをそれほど多くは生成しない種を使用するのが好ましい。好ましい種としては、ピティウム・インシジオスムおよびモルチエレラ・アルピナがある。どちらの種も市販されており、株は、メリーランド州ロックヴィルのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクティブ（American Type Culture Collective）に寄託されている（例えば、ＡＴＣＣ承認番号がそれぞれ２８２５１と４２４３０）。

同様に、ＤＨＡとＥＰＡの両方を生成する微生物種を、本発明において使用するＤＨＡ油脂の生成源として使用できるけれども、少なくとも実質的にＥＰＡを含まない種を使用するのが好ましい。この比は少なくとも１０:１であるのが好ましい。油脂中の脂肪酸含量の１％以下がＥＰＡであるのが最も好ましい。

ＤＨＡ含有油脂の生成
ＤＨＡを生成する微生物は、炭素源（例えばグルコース）と窒素源（例えば酵母抽出物やペプトン）を含有した単純な培地にて培養することができる。これらの成分を溶液（例えば海水）中で使用すると、経済的に重要な成長速度と細胞密度が得られる。例えば、３〜５日の発酵工程中、溶液１リットル当たりバイオマス少なくとも１０ｇ（好ましくは１リットル当たり２０〜４０ｇ）というＣ.コーニーの細胞密度を達成することができる。

培養はいかなる適切な発酵槽においても行うことができるが、有機体は、攪拌機つきのタンク発酵槽またはエアリフト発酵槽にて成長させるのが好ましい。攪拌機つきのタンク発酵槽を選定した場合は、ラッシュトン型（Rushton-type）の高効率タービン、ピッチ付きブレード、または船舶用インペラーを使用して攪拌が行われる。攪拌とスパージングにより、微生物への酸素の供給が繰り返される。攪拌速度は通常、酸素要求量の増大により、バイオマスが増大するにつれて大きくする。先端速度（tip speed）は約５００ｃｍ/秒以下（好ましくは約３００ｃｍ/以下）に保つのが望ましい。せん断による損傷を受けることなく、より大きな先端速度に耐えることのできる微生物の株の選定は、当技術者にとって公知のことである。

ＤＨＡ含有油脂の生成に使用される有機体は、いかなる適切な栄養素含有溶液中でも成長させることができる。前述のように、海水は、多くの有機体にとって栄養素含有溶液に代わる許容可能な培地である。海水は、天然のままでも、濾過しても、あるいは人工的に混合してもよく、またこれらのいずれも水で希釈して塩分濃度を、例えば通常濃度の１/２〜１/４に減少させても、あるいは通常濃度の２倍に濃縮してもよい。好ましい培地は、インスタントオーシャン（InstantOcean^R）ブランドの人工海水、あるいは、海水１リットル中４.５〜２０ｇのＮａＣｌ、海水１リットル中１．２３ｇのＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ、及び海水１リットル中９０ｍｇのＣａＣｌ₂を含んだ混合物である。微量栄養素を加えてもよく、また限定された培地を使用するときには微量栄養素が必要とされることがある。
しかしながら、このような微量栄養素に関しては当技術者によく知られており、一般には海水または水道水中に存在している。選定された有機体が有機栄養性である場合は（例えば、クリプテコジニウムやトラウストチトリウム）、還元炭素供給源（ｒｅｄｕｃｅｄ ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ）を加える。クリプテコジニウムとトラウストチトリウムは、成長のために還元炭素供給源を必要とする。

海水培地を発酵槽に加えた後、栄養素および培養しようとする微生物の種子培養物を加える前に、培地を含んだ発酵槽を滅菌処理し、そして冷却するのが好ましい。栄養素と海水とを一緒に滅菌処理することも可能である、このやり方で滅菌処理すると有効なグルコースが失われてしまうことがある。栄養素と微生物は同時に加えても、あるいは逐次的に加えてもよい。

効果的な種子濃度は、当技術者であれば容易に求めることができる。攪拌機つきタンク発酵槽を使用する場合は、発酵の開始時に乾量基準にて１リットル当たり約０．０５〜１．０ｇの母集団を加えるのが好ましい。例えば、１ｍｌ当たり少なくとも約１〜５×１０⁶個のＣ.コーニー細胞が適切であろう。したがって、３０リットルの発酵槽の場合は、生存能力のある細胞を１リットル当たり１０〜２０ｇ乾量の密度にて含有している播種用培地（seeding media）を１〜３リットル加えることになる。

酸素のレベルは、空気飽和レベルの少なくとも約１０％という溶解酸素レベルに保持するのが好ましい。ＤＨＡの生合成には酸素が必要であり、したがってＤＨＡをより高い収率で得るには、空気飽和レベルの約１０〜５０％という溶解酸素レベルが必要である。例えば、１秒当たり１５０〜２００ｃｍという攪拌先端速度と、１分当たり発酵槽１容当たり空気１容（１ volume of air per volume of fermentor per minute；VVM）という曝気速度とを組み合わせると、Ｃ.コーニーに対して、培地１リットル当たり約２５ｇ乾量というバイオマス密度にて、約２０〜３０％という溶解酸素レベルが得られる。細胞密度がより高くなるとより高い溶解酸素レベルが必要となり、こうした溶解酸素レベルの増大は、曝気速度を増大させること、酸素のスパージングを行うこと、あるいは発酵槽中の空気圧を増大させることよって達成することができる。

使用可能な炭素供給源は当技術者に公知である。例えば、炭素は、単糖類または二糖類（例えばスクロース、ラクトース（１dactose）、フルクトース、またはグルコース）の形で供給することができる。独立栄養生物は、二酸化炭素を炭素供給源として使用する。多くの有機体はさらに、他のより複雑な還元炭素源（例えば糖蜜、フルクトース高含量のコーンシロップ、および加水分解スターチ）上で成長する。一般には、１リットル当たり約２０〜５０ｇのグルコースで発酵を開始させる。必要に応じて、発酵中にさらなるグルコースを加える。これとは別に、１リットル当たり約５０〜１５０ｇのグルコースを最初に加えてもよく、これによってこの後の付加の頻度を最小限に抑えることもできる。他の有機体に供給される炭素源の量は、当技術者であれば容易に求めることができる。

還元炭素源のほかに、窒素源（例えば、酵母抽出物やペプトン）も培地に供給される。例えば、ディフコ（Difco）ブランドやマーコー（Marcor）ブランドの酵母抽出物やシェフトン（Sheftone）ブランドのペプトンを使用することができる。酵母抽出物やペプトンは、微量栄養素も含有する有機窒素源である。この他の窒素源は、当技術者であれば容易に見いだすことができる。しかしながら、このような化合物は、一般には酵母抽出物より高価である。ＤＨＡもしくはＡＲＡを生成する藻類の変異株で、尿素、アンモニア、または硝酸塩を窒素源として使用することのできる変異株であれば、いかなる変異株でも本発明において使用することができる。

一般には、１リットル当たり約６〜１２ｇの酵母抽出物で発酵を開始させる。必要に応じて、酵母抽出物をさらに加えてもよい。通常の発酵操作には、操作進行中１リットル当たり約８〜１５ｇの酵母抽出物が必要である。したがって、その量の酵母抽出物を最初に加えてもよく、こうすればその後の付加の必要性が少なくなる。正確な量は、当技術者であれば容易に決定することができる。一般に、グルコース対酵母抽出物の比は約２:１〜２５:１である。

培養は、いかなる生命維持温度でも行うことができる。一般に、微生物（例えば、クリプテコジニウムやトラウストチトリウム）は、約１５〜３４℃の温度で成長する。ある種の真菌類は、約１０〜８０℃の温度で効果的に成長する。温度は約２０〜３０℃に保持するのが好ましい。より高い温度で成長する株が好ましい。なぜなら、そうした株はより速い倍加時間を有し、これによってトータルの発酵時間が短縮されるからである。他の微生物に対する適切な温度範囲は、当技術者であれば容易に決定することができる。

培養は、広いｐＨ範囲（一般には、約５.０〜９.０のｐＨ）わたって行うことができる。発育相に対しては、約６.０〜７.０のｐＨ範囲を使用するのが好ましい。ＫＯＨやＮａＯＨ等の塩基を使用して、接種前に培地のｐＨを調節する。発酵の後期段階において、栄養素の使用につれて培地のｐＨが増大または減少することがある。必要であれば、適当な酸もしくは塩基を加えることによって、発酵中のｐＨを発育相における適切なアルカリ性または酸性に調節することができる。

培養物を窒素枯渇相もしくはリン酸塩枯渇相に到達させることにより、あるいは培養物のｐＨを上昇させることにより、定常相の誘導によって微生物中に微生物細胞油脂の生成が引き起こされる。培地に窒素源が枯渇するとともに、利用可能なグルコースのレベルが成長にとって充分なままであるよう、限定された量の酵母抽出物を供給することによって酵母抽出物の枯渇を引き起こすことができる。単細胞油脂の効率的な生成を促進するのは、炭素源対窒素源の比である。グルコースと酵母抽出物を例として使用すると、接種時における炭素源対窒素源の好ましい比は、（グルコース約１０〜１５部）対（酵母抽出物１部）である。当技術者であれば、他の炭素源および窒素源に関して同様な比を算出することができる。

油脂生成の誘導後、培養物をさらに２４時間成長させる。この時間中、ＤＨＡを含有した単細胞油脂が合成されており、顕微鏡を使用して観察すると、細胞の内部に油滴が見える。当技術者は、酵母抽出物の付加量に基づいて、予測量の細胞バイオマスを得るのに必要な発酵時間を容易に算出することができる。その時間が経過してから、培養物をさらに２４時間成長させて採取する。一般に、例えばクリプテコジニウムまたはトラウストチトリウムの細胞は約６０〜９０時間にわたって培養されるが、この時間は変わることがある。
例えば、クリプテコジニウム株（ＡＴＣＣ承認番号４０７５０と表示）を使用すると、得られるバイオマスのうち約１５〜３０％が抽出可能な油脂を含む。株を適切に選定すれば、この割合を増大させることができる。油脂は、一般には次のような脂肪酸組成を有するトリグリセリドを約７０％以上含むのが好ましい：
１５〜２０％のミリスチン酸（Ｃ_14:0）
１５〜２５％のパルミチン酸（Ｃ_16:0）
５〜１５％のオレイン酸（Ｃ_18:1）
３０〜５０％のＤＨＡ（Ｃ_22:6）
この粗製油脂は黄橙色であることを特徴とし、室温では液体である。油脂は少なくとも約２０重量％のＤＨＡを含有するのが好ましく、約４０重量％のＤＨＡを含有するのがさらに好ましく、少なくとも約５０重量％のＤＨＡを含有するのが最も好ましい。

当技術者に公知の従来手段（例えば遠心分離、凝集分離、または濾過による分離）によって有機体を採取し、これを直ちに処理することもできるし、あるいはさらなる処理のために乾燥することもできる。いずれの場合も、有効量の溶媒を使用して容易に油脂を抽出することができる。当技術者であれば、容易に適切な溶媒を決定することができる。しかしながら、好ましい溶媒としては、高純度ヘキサンや超臨界流体（supercritical fluid）（例えば超臨界ＣＯ₂）がある。抽出を行う前に、ある特定の親油性酸化防止剤〔例えばβ−カロチン、α−トコフェロール、パルミチン酸アスコルビル（ascorbyl palmitate）、およびＢＨＴ〕を加えることができる。これらの化合物は、抽出・精製工程時における油脂の酸化を起こしにくくする。

油脂高含量の植物種子からの油脂の抽出に対し、超臨界流体を使用する一般的な抽出法が開発されている（マフューらによる“超臨界流体による抽出，バターワース，1986）”。しかしながら、これらの標準法は、一般には微生物の抽出に適用できない。例えば、噴霧乾燥した藻類細胞は粉体のコンシステンシーを有しており、微生物バイオマスが圧縮されるので超臨界ＣＯ₂の流れが制約される。

さらに、微小藻類や真菌類の細胞壁は、ほとんどの種子油物質の細胞壁とは化学的に異なる。圧縮を防止し、効率的な流れと抽出を可能にするために、藻類バイオマスを０.１〜５.０部の脂質非含有構造剤（例えば、セライトや珪藻土）と混合することができる。５０ｍｌの反応器（４５０気圧，１００℃）において、Ｃ.コーニーから油脂の８６％を２５分で抽出し、そして１００％を８５分で抽出した。

抽出溶媒がヘキサンである場合は、ヘキサンと乾燥バイオマスの適切な割合は、乾燥バイオマス１ｋｇ当たりヘキサン約４リットルである。ヘキサンは、攪拌機つき反応容器中において約２０〜５０℃の温度で約２時間、バイオマスと混合するのが好ましい。ミキシング後、バイオマスを濾過し、油脂を含有しているヘキサンから分離する。これとは別に、湿潤状態のバイオマスペースト（固形分３０〜３５％）を、より極性の高い溶媒（例えばエタノール、イソプロパノール、又はヘキサンとイソプロパノールの混合物）を使用して直接抽出することもできる。

溶媒は、当技術者に公知の蒸留法によって油脂から除去する。濾過、分離、および蒸留を行うためには、従来の種子油加工処理装置が適切である。必要であれば、あるいは特定の用途のために望ましいのであれば、当技術者に公知のさらに他の加工処理工程を施すこともできる。さらに、これらの工程は従来の植物油加工処理に含まれている工程に類似しており、これらの工程により、ＤＨＡ高含量の極性脂質フラクションの分離が可能となる。

ＡＲＡ含有油脂の生成
ＡＲＡを生成する真菌類もしくは藻類を、ＡＲＡ含有油脂を生成する適切な培養条件下で培養する。必要であれば、微生物を先ず振とうフラスコ中で成長させ、次いで発酵槽に移すことができる。成長培地の組成は変わってもよいが、炭素源と窒素源は常に含有する。好ましい炭素源はグルコースであり、その量は、成長培地１リットル当たりグルコース約１０〜２００ｇという範囲でよい。一般に、振とうフラスコ培養に対しては、約５０ｇ/リットルのグルコースが使用される。グルコースの量は、最終培養物に求められる密度に応じて変わりうる。使用できる他の炭素源としては、糖蜜、フルクトース高含量のコーンシロップ、加水分解スターチ、あるいは発酵プロセスにおいて従来使用されている他のすべての低コスト炭素源などがある。さらに、ラクトースを炭素源として供給することもできる。したがって、ホエー透過物（whey permeate）（ラクトース含量が高く、かなり低コストの炭素源である）を基質として使用することができる。これら炭素源の適切な量は、当技術者であれば容易に決定することができる。通常は、発酵工程中において、追加量の炭素源を加える必要がある。

窒素は一般に、成長培地１リットル当たり約２〜１５ｇの濃度にて、酵母抽出物の形で供給する。１リットル当たり約８〜１０ｇの酵母抽出物を供給するのが好ましい。ペプトン、トリプトン、コーン・スティープ・リカー（corn steep liquor）なども含めた他の窒素源を使用することができる。これら供給源の付加量は、当技術者であれば容易に決定することができる。窒素は、培養操作全体にわたって加えてもよいし、あるいはバッチ方式で（すなわち、培養操作前に一度に全部）加えてもよい。

適切な温度（通常は約２５〜３０℃）で３〜４日培養した後、従来の攪拌機つきタンク発酵槽またはエアリフト発酵槽において接種物として使用するのに充分な量の真菌類または藻類が成長した。発酵は、バッチ発酵方式でも、供給バッチ（fed-batch）発酵方式でも、あるいは連続発酵方式でもよい。攪拌機つきタンク発酵槽には、ラッシュトン型タービンインペラー、または好ましくは船舶型軸インペラー（marine-type axial impeller）が取り付けられている。

所望の炭素源や窒素源を加えることによって発酵槽を調製する。例えば１.５リットル発酵槽は、水１リットル当たり約５０ｇのグルコースと約６ｇの酵母抽出物とをミキシングすることによって調製することができる。前述したように、他の炭素源や窒素源、あるいはそれらの混合物も使用することができる。

例えば、栄養溶液を含むレアクターは、ＤＨＡ生産用の微生物培養の所で先に考察したように、接種の前に加熱することによって滅菌しなければならない。３０℃に冷やした後、接種物を加え、培養を開始することができる。ガス変換は、空気噴霧によって提供される。空気噴霧速度は変えることができるが、望ましくは、約０、５から約２．０の空気容量／発酵槽容量／分に調整される。望ましくは、溶解酸素レベルは、溶液の空気飽和値の約１０％から約５０％になるように保たれる。従って、噴霧速度の調整は、培養を行っている間中、必要とされるであろう。

攪拌は、発酵を行っている間中、行うのが望ましい。攪拌は、羽根車によって提供される。攪拌チップの速度は、５０ｃｍ／秒から５００ｃｍ／秒、望ましくは、１００から２００ｃｍ／秒に設定するのが望ましい。

一般に、発酵に用いる接種物の量は、変えることができる。典型的には、発酵槽の全培養液量の約２％から１０％の対数増殖期の培養液を、接種物として用いることができる。
栄養レベルはモニターしなければならない。グルコースレベルが５ｇ／ｌより低くなった場合、さらにグルコースを加えなければならない。典型的な培養サイクルには、約１００ｇのグルコースおよび約１５ｇの酵母／ｌが用いられる。真菌または藻類では、この油脂生産を高めるように培養を行っている間は、窒素を涸渇させることが望ましい。このことは、エム．アルピナ（Ｍ．ａｌｐｉｎａ）を生産用微生物として用いる場合、特に真実である。

場合によっては、培養物は過剰な量の泡を作るであろう。所望により、熟練者に既知の、例えばＭａｚｕ３１０Ｒの様な、抗発泡剤を発泡を抑えるために加えることもできる。

培養の温度は変えることができる、しかし、ＡＲＡおよびＥＰＡの両方を生産する微生物は、より高い温度で培養した場合、ＥＰＡをより少なく、ＡＲＡをより多く生産する傾向にある。例えば、モルチエレラ アルピナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ Ａｌｐｉｎａ）を１８℃より低い温度で培養すると、ＥＰＡを作り始める。従って、ＡＲＡの優先的な生産を誘導する水準に温度を保つことが望ましい。適当は温度は、典型的には、約２５℃から約３０℃である。

望ましくは、培養は、所望するバイオマス濁度に到達するまで続ける。望ましいバイオマスは、約１５−４０ｇ／ｌの生物体である。典型的には、その様なバイオマスは、接種後４８−７２時間で達成される。この時、生物体は、典型的には、約５−４０％の複合脂質、その約１０−５０％はＡＲＡである、を含み、集菌することができる。

集菌は、濾過、遠心分離、または凝集のような任意の適当な方法によって行うことができる。より低い経費で行えるため、濾過が望ましいであろう。

集菌後、バイオマスは乾燥させることなく抽出することができる。所望により、バイオマスは、抽出の前に、真空乾燥、流動層乾燥、または凍結乾燥によって、任意の残余水分を除去することができる。水分が除去される場合、ＡＲＡ含有油脂を抽出するために非極性溶媒を用いることが望ましい。任意の非極性抽出が適当であり、ヘキサンが望ましい。上述のように、ＣＯ₂またはＮＯのような臨界超過流体もまた、藻類および真菌からＡＲＡを豊富に含む油脂を抽出するために用いることができる。Ｍ．ａｌｐｉｎａのような真菌は、予想外にＣＯ₂で抽出するのが難しいが、真菌バイオマスの油脂の８９％程を、９０℃以上で４００気圧の圧力で回収することができる。代わりに、約３０から５０％の固体を含む湿式バイオマスは、典型的には、細かく砕き、エタノール、イソプロピルアルコール、またはヘキサンとイソプロピルアルコールの混合物のような極性溶媒を用いて直接抽出することができる。

水性抽出の望ましい方法は、適当な反応ケットル中、バイオマスを極性溶媒イソプロピルアルコールと混合することが含まれる。その様なケットルは既知である。バイオマス１部当たり３−６部の溶媒を用いることが望ましい。最も望ましくは、混合は、窒素存在下、またはβ−カロチン、α−トコフェノール、アスコルビルパルミテート、またはＢＨＴのような抗酸化剤を加えて行われ、脂質抽出物中のＡＲＡの酸化を防ぐ。

溶媒は、ＤＨＡ含有油脂の生産に関して記載した部分に示した方法で、油脂から除去される。また、さらなる油脂精製のための追加段階を遂行することもできる。

収率は、１００ｇの乾燥バイオマス当たりのＡＲＡ含有油脂を約５ｇから５０ｇに変化させることができる。エム．アルピナ（Ｍ．ａｌｐｉｎａ）の場合、１００ｇの乾燥バイオマス１００ｇ当たり１０から５０ｇのトリグリセリドが得られる。オクロモナス（Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ）の場合、１００ｇのバイオマス当たり５−２０ｇのトリグリセリドが得られる。

望ましくは、エム．アルピナからの油脂は、一般的には、次の脂肪酸組成：
５−１５％ パルミチン酸
１５−２０％ ステアリン酸
５−１０％ オレイン酸
６−１０％ リノール酸
２−１０％ リノレン酸
２−１０％ ジホモγリノレン酸
４０−５０％ アラキドン酸：
をもつ約７０％をこえるトリグリセリドからなる。

ＤＨＡおよびＡＲＡ含有油脂の投与
本発明に従って、ＤＨＡ含有微生物油脂、ＡＲＡ含有微生物油脂、またはこれらの油脂の適当な組み合わせは、健康体で見られるレベルと比較して血液または組織内のＤＨＡおよび／またはＡＲＡのレベルが低下したことを特徴とする神経性疾患を患う患者に投与される。個有の投与治療の方針は、血清及び赤血球のＤＨＡ並びにＡＲＡレベルを正常化することを基本に決定されるであろう。これらのＤＨＡおよびＡＲＡの血清レベルは、神経膜の長鎖のポリ不飽和脂肪酸組成を反映していると考えられる。ある場合には、ＡＲＡおよびＤＨＡの血清レベルは治療効果を調べるために、一般的な母集団で正常と考えられるレベルの４から５倍に増加させる必要があるであろう。色素性網膜炎または老年痴呆の様なその様な状態を含む疾患に苦しむ患者は、ＤＨＡ含有油脂のみの投与に好反応を示すであろうが、副腎白質ジストロフィー、糖尿病誘導性神経細胞障害または精神分裂症の様な状態に苦しむ患者は、ＤＨＡ含有油脂およびＡＲＡ含有油脂の組み合わせの投与に、より好反応を示すであろう。なお、他の患者は、ＡＲＡを含む微生物油脂のみの投与で救済されるであろう。

治療方針は、治療する患者の血清中の関連する脂肪酸レベルを測定した後に決定することができる。何人かの患者では、治療中の赤血球または血清脂質中のＤＨＡ及びＡＲＡのレベルを測定した後に、神経組織中のＤＨＡまたはＡＲＡレベルを正常化することができるであろう。

ＤＨＡ−および／またはＡＲＡ−含有油脂は患者に直接投与することができるが、より一般的には、それらは、一つまたはそれ以上の医薬として適当な担体、および、所望により、他の治療成分、と組み合わせられるであろう。許容しうる担体とは、調合する他の成分と矛盾せず、かつ患者に有害でない担体である。

調合物は、経口、鼻、局所または（皮下、筋肉内、静脈内、および皮内を含む）非経口の投与に適当なそれらを含む。望ましい調合物は、患者の症状および年齢で変えることができる。調合物は、簡便には、例えば、エマルジョン、錠剤、および持続性放出カプセルのような投薬単位の形にすることができ、任意の適当な薬学的方法によって製造することができる。

本発明の経口投与に好適な調合物は、カプセルまたは錠剤のような分離した単位として存在させることができ、そのそれぞれは、予想量のＤＨＡあるいはＡＲＡ油脂、または予想量のＤＨＡおよびＡＲＡ油脂の適当な組み合わせ、を含む。

また、このような経口調合物は、水性液体あるいは非水性液体中の水溶液または懸濁液からなることができる。水溶液は、水中油脂の液体エマルジョンまたは油脂中水の液体エマルジョンの様なエマルジョンであることができる。油脂は、精製し滅菌した液体を、調製した経腸的処方箋に加え、次いで、飲み込むことの出来ない患者の栄養補給チューブに入れることによって投与することができる。

一つの好ましい実施態様では、ＤＨＡまたはＡＲＡ微生物油脂は、実施例６に記載するようなゲルカプセルに入れられる。しかしながら、本発明では、ゲルカプセルを製作する任意の既知の方法を用いうることが、認められるであろう。圧縮錠剤は、微生物油脂を適当な機械で圧縮または型取ることによって製造することができる。油脂は、カルボキシメチルセルロースのような乾燥した不活性付帯成分と混合することができる。所望により、錠剤は、コーティングまたはスコアリングすることができ、活性成分がゆっくりとまたは制御されながら遊離するように調合することができる。

局所投与に適したその他の調合物には、香味用主成分、通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカントゴム中のＤＨＡ油脂、ＡＲＡ油脂またはそれらの組み合わせからなるロゼンジが含まれる。

皮膚への局所投与に適した調合物は、医薬として適当な担体中のＤＨＡおよび／またはＡＲＡ油脂からなる軟膏、クリームおよびゲルとして存在することができる。望ましい局所配置システムは、投与される油脂を含む経皮性パッチである。

鼻投与に適した調合物では、担体は、従来の鼻噴霧または鼻点滴剤のような、液体である。

非経口投与に適した調合物には、所望により、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬および予定宿主の血液と調合物の浸透圧を等しくする溶質、を含みうる水性および非水性の無菌注射溶液；ならびに懸濁剤および濃化剤を含みうる水性および非水性の無菌懸濁液が含まれる。調合物は、単位投与量または多投与量の容器に入れておくことができる。本発明の好適な実施態様は、患者に非経口栄養を提供するための調合物の中にＤＨＡおよび／またはＡＲＡ油脂を混合することを含む。

本発明の微生物油脂組成物は、薬剤組成物として投与されることが必要とされるわけではない。また、それらは、ビタミンカプセルまたは普通食の食物置換のように、補食として調合することもできる。微生物油脂は、調理油に置き換えて調合投与することもでき、そうすることによって、標準的な使用法で、患者は、血清中および冒された神経組織膜中のこれらの脂肪酸の濃度を正常または正常に近いレベルにまで上昇させるに十分な量のＤＨＡおよび／またはＡＲＡを摂取するであろう。また、特異的なエマルジョン型であるマーガリンは、治療食中のバターまたは普通のマーガリンに置き換えて調合することもできる。単細胞微生物油脂を加工食品に加え、ω−３およびω−６不飽和脂肪酸の改良源を提供することもできる。油脂は、この技術分野で既知の方法を用い、ゼラチン、カゼイン、またはその他の適当なタンパク質をもちいて、マイクロカプセル化することができ、それによって、食品を加工するための乾燥成分型の油脂が提供される。その様な投与方法は、神経細胞変性疾患、例えばハンチングトン（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ）病またはアルツハイマー（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ）病のような、ＤＨＡまたはＡＲＡ代謝欠損に関連する疾患に対して遺伝的素因をもつことが分かっている人の場合にむしろ好適である。その様な個人に食物置換を提供すると、特別な疾患の徴候の始まりを遅らすと言う、意味深い予防効果を提供することができる。

長鎖のポリ不飽和脂肪酸ＤＨＡおよびＡＲＡの投与は、標準的な食品、またはサクラソウあるいはルリジシャの油脂のような特別な油脂から、リノール酸およびリノレン酸、これらの脂肪酸の前駆体をまったく過剰摂取しないと言う重要な利点を提供する。投与したＤＨＡおよびＡＲＡは、すでに活性な形で存在しているため、患者は食餌前駆体を代謝する必要がない。この結果、有効な投与量は、治療効果を生み出すのに必要とされる前駆体の投与量より明らかにより低いであろう。

特に上記した成分に加えて、本発明の調合物は、香味剤、防腐剤および抗酸化剤のような他の適当な薬剤を含むことができる。特に、微生物油脂を抗酸化剤と混合してＤＨＡまたはＡＲＡの酸化を防ぐことが望ましい。その様な抗酸化剤は、食品として受け入れられることが可能であり、ビタミンＥ、カロチン、ＢＨＴ、または当業者に既知の抗酸化剤を含むことができる。

患者に提供される本発明の組成物の毎日の投与量は、治療を始める前の血清脂質分析によって確認されたＤＨＡおよび／またはＡＲＡの欠乏程度に依存するであろう。典型的には、２２．６５ｋｇ（５０ポンド）より重い患者に提供させる初期投与量は、一日当たり約５０ｍｇＤＨＡから５０００ｍｇＤＨＡの範囲であろう。望ましい持続投与量は約５００ｍｇ／日である。例えば、使用されるＤＨＡ油脂が５０％のＤＨＡを含む場合、その様な投与量は、油脂約１０００ｍｇ／日の添加に相当するであろう。

２２．６５ｋｇ（５０ポンド）より重い患者に提供されるＡＲＡの毎日の投与量は、５０ｍｇＡＲＡから５０００ｍｇＡＲＡ／日であろう。望ましい維持投与量は、５００−１０００ｍｇ／日であろう。使用されるＡＲＡ油脂が５０％のＡＲＡを含む場合、その様な投与量は、ＡＲＡ油脂約１０００−２０００ｍｇ／日の添加に相当するであろう。油脂に含まれるＤＨＡおよびＡＲＡの適当な組み合わせによる投薬量は、１０００ｍｇＤＨＡおよび１０００ｍｇＡＲＡ／日であろう。

望ましくは、患者の血清脂肪酸のプロフィールは、この様な毎日の治療を約４週間行った後、再調査される。次いで、その後の投与量は、血漿脂質または赤血球細胞のＤＨＡおよびＡＲＡの観察レベルに応じて、また、治療への観察される医療応答に応じて、修正することができる。ペルオキシソーム疾患の患者は、血漿１ｍｌ当たりわずか１−３μｇＤＨＡのＤＨＡレベルの赤血球を有する。正常な目標値は血漿１ｍｌ当たり約１０−３０μｇのＤＨＡの範囲である。循環するＡＲＡの正常な目標値は、血漿１ｍｌ当たり約７５から約１２０μｇＡＲＡである。ひとたび、対象となる循環脂肪酸のレベルが正常になったならば、油脂の毎日の投与量は、循環するＤＨＡおよび／またはＡＲＡが望ましいレベルに保たれるように修正することができる。

上記のように、ある神経疾患を治療するためには、血液中の循環ＤＨＡおよび／またはＡＲＡのレベルを正常レベルの４から５倍に上昇させることが望ましい場合もある。それ故、循環ＤＨＡおよびＡＲＡのレベルは、それぞれ、約１２０−１５０μｇ／ｍｌおよび約４８０−６００μｇ／ｍｌに上昇させることができる。

任意の具体的な理論に結び付ける事を望むわけではないが、発見者らは、ＤＨＡの投与は、神経細胞のカルシウム吸収調節能力の故に、神経疾患の治療に効果的であると信じる。神経細胞の脱分極化は、細胞内のカルシウムレベルを上昇させる結果になり、ホスホリパーゼを活性化する原因となり、細胞膜から遊離ＤＨＡを放出させる結果になる。この遊離ＤＨＡはカルシウムチャンネル遮断薬として作用し、それ故、細胞へのカルシウムの侵入を制限する。この様に、ＤＨＡレベルは、神経細胞膜に存在し、それ故、これらの長鎖のポリ不飽和脂肪酸の活性化誘導放出に有効であり、細胞内のカルシウムレベルを制御するであろう。ＤＨＡ欠乏が存在する場合、細胞内のカルシウムレベルが上昇し、アミロイドプラークタンパク質の生産が剌激される。さらに、細胞内カルシウムが高いと、タウタンパク質に関連する微小管のリン酸化を剌激し、結果として神経細線維のもつれを発達させる結果になる。

血清脂質は、一般的には脂肪酸の輸送または運送システムとして働くので、血清脂質は、神経細胞に組み込まれるＤＨＡおよびＡＲＡの最も有望な源である。

動物およびヒトで研究すると、血清中の高レベルのＤＨＡおよびＡＲＡは、脳の高レベルのＤＨＡおよびＡＲＡと一致することが示された。それ故、全血清脂質組成中のＤＨＡおよびＡＲＡ濃度を高めることは、これらの成分を豊富に含む微生物油脂を補食として提供することによって、標的神経組織へのＤＨＡおよびＡＲＡの配達を増加させるに違いない。

ＡＲＡは、神経膜の主成分であるが、その神経単位細胞の機能へのＡＲＡの役割は余り明らかではない。多くの神経疾患がＤＨＡおよびＡＲＡの両方の欠乏を示している。本発明の目的は、これらの両成分のレベルを補充するために、微生物油脂からのＤＨＡおよびＡＲＡを用いて、これらの重要な脂肪酸の両方を正常化することである。神経組織中のＥＰＡレベルは一般的に低く、ＥＰＡの補充はＡＲＡレベルを低下させ、ある場合には禁忌を示すかもしれないので、任意の意味のある量のＥＰＡを加えることなくＤＨＡおよびＡＲＡを補充することは、本発明の重要な態様である。ＡＲＡ油脂と組み合わせたＤＨＡ油脂の治療投与は、正常な健康体のそれに匹敵する体内のω−３からω−６の長鎖のポリ不飽和脂肪酸の比率の維持または確立に有効であるかもしれない。

本発明は、一般的に記載されており、参照は以下の具体的な実施例を制限するものではない。

４．３ｋｇのＩｎｓｔａｎｔ ＯｃｅａｎＲを２３０リットルの水道水と混ぜ合わせることによって作られる１．５倍濃度の人造の海水の培養液を、３５０リットルの攪拌タンク発酵槽に入れた。培養液を含む発酵槽を滅菌し、２８℃に冷却した。濃度４００ｇ／ｌの濃縮した酵母エキスを６．８１、濃度４００ｇ／１のグルコースシロップを１２．５１、および濃度１０６細胞数／ｍｌまたは約１．３ｇ／ｌのバイオマス密度の接種用発酵槽からシー．コーニー（Ｃ．ｃｏｈｎｉｉ）接種物を３０１、培養液に加えた。攪拌は、チップ速度を７３ｃｍ／秒に設定し、通気は１ＶＶＭに設定し、これは２８０リットル／分と等価である。さらに、１２リットルのグルコースシロップを約４４時間後に加え、さらに４３リットルをそれから３２時間後に加えた。この様にして、全体で、６７．５リットルのグルコースシロップを加えた。

２０％をこえる溶解酸素を維持するために、攪拌チップ速度を、４４時間で１７５ｃｍ／秒に、５５時間で２２５ｃｍ／秒に上昇させた。７６時間で、チップ速度を１５０ｃｍ／秒に下げた。培養は、最後に負荷したグルコースが細胞内油脂に変換されるまでさらに十分な時間増殖させ、その後、集菌した。集菌した細胞は、約４％の水分含有量にまで乾燥させた。ヘキサンを乾燥させたバイオマスに加え、ガラスケットル中、２５℃で２時間攪拌した。ロータリーエバポレーターを用いてヘキサンを除去し、約７００ｇの粗ＤＨＡ含有油脂を調製した。

６０ｋｇの酵母エキス、４５ｋｇのＮａＣｌ、１２．３ｋｇのＭｇＳＯ4 ７Ｈ₂Ｏ、および０．９ｋｇのＣａＣｌ2 ２Ｈ2 Ｏを７，０００リットルの水に溶解し、１５，０００リットルの発酵槽に加えた。この溶液を滅菌した後、６５０ｋｇグルコース／３，０００リットルの濃度の滅菌グルコース溶液を３，０００リットル加えた。培養液の初期ｐＨは６．３に、温度は２８℃に、通気は０．５から１．０ＶＶＭに、ベッセルの背面圧は０．２バールに、さらに攪拌チップ速度は１２０ｃｍ／秒に設定し、その後、細胞密度約６０ｘ１０6細胞数／ｍｌ、これは接種用タンク中で１リットルの培養液当たり４−５ｇのバイオマス乾燥重量に等しい、に達したＣ．ｃｏｈｎｉｉの接種用培養液３００リットルをベッセルに接種した。発酵の経過中、Ｄｏｗ１５２０のような食物に加えうる消泡剤を必要に応じて加え、８Ｎ−Ｈ２ＳＯ４または４Ｎ−ＮａＯＨを必要に応じて用いｐＨを６．３に保った。溶解酸素レベルは、ベッセル背面圧および攪拌を高めることによって、空気飽和状態の２０％以上に保った。さらなるグルコースの添加は、グルコースレベルを５ｇ／ｌより上に保つために、９３時間および１１１時間に必要であった。１１９時間で、発酵槽を１７℃に冷却し、発酵培地を遠心分離で処理した。２５％の固体を含む６０８ｋｇのスラリーが回収された。スラリーは噴霧乾燥し、ＤＨＡ含有量４０−４５％の約３０−４０ｋｇの油脂を含む約１５０ｋｇの乾燥藻類粉末を生産した。乾燥藻類粉末は、標準的な野菜油抽出装置および方法を用いて、ヘキサン抽出した。溶媒除去に次いで、５０℃で水を加えることによって粗油のゴム質を取り除いた。脱ゴム油は遠心分離によって収集し、５５℃で１時間アルカリ塩基およびリン酸を混合することによって精製した。
次いで、精製し脱ゴム化した油脂を遠心分離によって収集し、９０℃でクエン酸および脱色クレーを加えることによって穏やかに脱色した。脱色クレーを濾過することによって、５ｍＥｑ／ｋｇより少ない過酸化物価の精製脱色油脂（ＲＢ−ｏｉｌ）を生産した。ＲＢ−ｏｉｌは、高真空短縮経路蒸留によって脱臭し、その後、得られた脱臭ＲＢ−ｏｉｌ（ＲＥＤ−ｏｉｌ）は、カプセル化、錠剤化、またはバラ積用に調製された。得られた油脂は、１ｍＥｑ／ｌより小さい過酸化物価、０．０５％より少ない遊離脂肪酸含量、４５から４７％のＤＨＡ含量、および約２００のヨウ素数を持っていた。

トラウストチトリウム アウルム （Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ａｕｒｕｍ）の脂質の調製
２．５ｇのＮａＣｌ、５ｇのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、１ｇのＫＣｌ、０．１ｇのＫＨ２ＰＯ４、０．２ｇのＣａＣＯ３、０．２ｇの（ＮＨ４）２ＳＯ４、２．０ｇのグルタミン酸ナトリウム／水１リットルを、１．７リットルの攪拌タンク発酵槽に入れた。タンクを滅菌した後、１０μｇのチアミン−ＨＣｌ、０．１ｇのＮａＨＣＯ３、および１０μｇのビタミンＢ12を含む滅菌水を加え、次いで、３０％の滅菌グルコースを１５０ｍｌ、および１０％の滅菌酵母エキスを５０ｍｌ加えた。ｐＨは６．０に調整し、通気は１．０ＶＶＭに調整し、かつ、攪拌は３００ｒｐｍに調整し、その後、同培養液で増殖させたトラウストチトリウムアウルムの５日令の振とう培養液を１００ｍｌ接種した。培養液は９日後に収集し、約４ｇ乾燥重量のバイオマスを得た。バイオマス中の脂質のＤＨＡ含量は１０から１５％である。

ピチウム インシディオスム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ）の 脂質の調製
８０リットル（総要量）の発酵槽中に、５１リットルの水道水、１．２ｋｇのグルコース、２４０ｇの酵母エキスおよび１５ｍｌのＭＡＺＵ ２１０ＳＲの消泡剤を入れた。発酵槽は１２１℃で４５分間滅菌した。滅菌過程の間に、さらに５リットルの凝縮水を加えた。ｐＨを６．２に調整し、次いで、細胞密度５から１０ｇ／ｌのピチウム インシディオスム（ＡＴＣＣ＃２８２５１）の接種物をおおよそ１リットル加えた。攪拌速度は、チップ速度２５０ｃｍ／秒に相当する１２５ＲＰＭに調整し、通気速度を１ＳＣＦＭ（ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｂｉｃ ｆｅｅｔ ｐｅｒ ｍｉｎｕｔｅ、標準立方フィート／分）に設定した。運転中、２４時間で、通気速度を３ＳＣＦＭに上昇させた。２８時間で、５０％重量のグルコースシロップをさらに２リットル加えた。５０時間で、発酵槽を集菌し、その結果、約２．２ｋｇ湿潤重量のバイオマスが得られ、これは、培養液１リットル当たりおおよそ１５ｇ乾燥重量に相当する。集菌したバイオマスは、吸引フィルター上、おおよを５０％の固体からなる高固体ケーキで圧搾し、その後、凍結乾燥させた。乾燥させたバイオマスは、モーターおよび乳房ですりつぶし、２００ｇの乾燥バイオマス当たり１リットルのヘキサンを加え、室温で２時間攪拌を続けて抽出した。次いで、混合物を濾過し、濾過物を減圧濃縮し、乾燥バイオマス１００ｇ当たり５から６ｇの粗油脂を得た。バイオマスは乾燥バイオマス２０ｇ当たり１リットルのエタノールで、１時間、室温で再抽出し、濾過し、溶媒を減圧濃縮し、１００ｇの乾燥バイオマス当たり２２ｇの粗油脂を得た。第二の画分は主にリン脂質であったが、これに対して第一の画分はリン脂質とトリグリセリドの混合物を含んでいた。画分は、一緒にして、約３０から３５％のアラキドン酸を含むがEＰＡの検出できない油脂を生成した。

Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａの脂質の調製
７，５００リットルの発酵槽を４，５００リットルの水で満たし、２２５ｋｇのデキストロース、２７ｋｇの酵母エキスおよび４５０ｇの消泡剤（Ｄｏｗ１５２０）を加えた。ｐＨは５．０に調整し、培養液は１２１℃で６０分間滅菌した。滅菌し２８℃に冷却した後、ｐＨはＮａＯＨで５．５に調整し、通気は０．２５ＶＶＭに調整し、背面圧は０．２バールに設定し、Ａ３１５羽根車での攪拌は８０ｃｍ／秒の速度に設定した。培養液には、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａの２０時間令の接種用培養液２．２ｇ／ｌを１８０リットル接種した。ｐＨは運転中、３７時間までは上下させておき、その時点で６．５に制御した。攪拌は、酸素要求量がピークに達した２６時間で１１０ｃｍ／秒に上昇させたが、３２時間で、８０ｃｍ／秒に戻した。１２３時間で、タンクは、４０ミクロンのバックに適応するボックバスケット遠心分離機を用いて集菌した。次いで、原料を液体床ドライヤーを用いて乾燥させ、実施例２のようにヘキサンで抽出した。

発酵により、ＡＲＡ含量４５％の粗油脂が１７ｋｇ得られた。

実施例１または２にしたがって調製したＤＨＡを豊富に含む油脂は、カプセル化または錠剤化のいずれかによって経口使用するために製造された。１ｇ／カプセルの透明にシールしたゼラチンカプセルは、従来の製造方法で製造した。１つの油脂または油脂混合物を含むバンド化ゲルキャップは、実際的な置換分岐ピペッターを用いてゲルキャップの底に２５０μｌの油脂を分配することによって製造した。この方法で、±３−５％の重量精度が得られた。次いで、頭部をゲルキャップの上に置き、カプセルバンド化装置を用い、色付きゼラチンでバンド化にした。変法として、ゲルキャップの底にカルボキシメチルセルロースを満たして、１２０μｌの油脂を、このバインダー上に直接ピペットで置いた（このバインダーは、油脂を吸収し、いかなる漏れをも防ぐであろう）。頭部にゲルキャップを置き、カプセルバンド化装置を用い、色付きゼラチンでバンド化にした。その他に、カルボキシメチルセルロースは、３部のカルボキシメチルセルロースに対して１部の油脂の比率で、分かれた容器内で油脂と混合し、次いで錠剤プレス機を用いて錠剤にプレスすることもできる。

この手順は実施例４および５に従って製造したＡＲＡを豊富に含む油脂を用いて繰り返した。

実施例１、２、３、４および５に記載したように、微生物から製造した粗微生物油脂は従来の野菜油加工処理方法を用いて加工処理した。油脂は５０℃で水と混合してホスファチドを除去することによって脱ゴム化し、次いで水とゴムの混合物を遠心分離で除去した。油脂は、アルカリ塩基、次いでリン酸と５５℃で混合することによって遊離の脂肪酸を除去して精製し、次いで水−脂肪酸混合物を遠心分離で除去した。加工処理した微生物油脂は、クエン酸および標準的漂白クレーを９０℃で混合することによって漂白し、濾過して、油脂内の使用済クレーおよび任意の残余極性粒子を除去した。ある場合、油脂は、高圧蒸留または向流蒸気臭気除去剤を用いて脱臭し、その結果、最終的に、精製、漂白および脱臭した油脂（ＲＢＤ ｏｉｌ）が得られた。典型的には、この過程をへた油脂の詳細は、２ｍＥｑ／ｋｇより小さい過酸化物値および０．０５％より小さい遊離脂肪酸レベルであった。この様な詳細は、標準的な野菜油で典型的であり、微生物油脂は、この状態で、マーガリン、ショートニング、スプーンで使えるドレッシング、液体ドレッシングの製造に、または他の工業的食物製造物の油脂成分として、野菜油の代わりに用いられる。微生物油脂は長鎖のポリ不飽和脂肪酸、とくにＤＨＡおよびＡＲＡ、を非常に豊富に含み、この微生物油脂少なくとも１部に対して、特別な生産物を調製するために選ばれた従来の油脂１０部で希釈する。チョコレート製品に取り入れるためには、油脂はココアバターで希釈される。ショートニングまたはベーキング製品として用いるためには、油脂はココナッツまたはパーム油で希釈される。サラダドレッシングとして用いるためには、油脂は、キャノーラ、大豆、べにばな、またはコーン油のような標準的なサラダ油脂で希釈される。

アルツハイマー病の症状を示す患者は、Ｃ．ｃｏｈｎｉｉから得たＤＨＡを豊富に含む油脂を、一日当たり１から３カプセル（１カプセル当たり５０％ＤＨＡを含むＤＨＡ単細胞微生物油脂を含む）投与することによって治療する。患者の血清のＤＨＡおよびプラスマロゲンのレベルは、これらの２物質の血清レベルが正常化される時期を測るため、投与期間中、日常的にモニターする。正常なアメリカ人の２倍の血清ＤＨＡレベルが望ましい。

ペルオキシソームに疾患を持つ患者は、０．５ｍｌ（５００ｍｇ）のＤＨＡ油脂を２００−２５０ｍｇのＤＨＡ濃度で、一日一回、Ｓｕｓｔｉｃａｌ（Ｒｏｓｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）からなる胃フェステル形成食に直接投与した。

患者の血清ＤＨＡおよびプロスマロゲンのレベルは、投与期間中、日常的にモニターした。治療を始めて６週間で、患者のＤＨＡレベルは、血漿１ｍｌ当たり１．８５μｇから１３．６μｇに改善された。正常なレベルは１９．０±６．４μｇ／ｍｌである。予想に反して、患者のプラスマロゲンのレベルはほぼ正常である。ＤＨＡ油脂単独での治療では、血清ＡＲＡレベルは正常レベルの約５０％で、比較的変化しないままであった。

血清ＤＨＡおよびＡＲＡレベルが低下する一つの形の老年痴呆を患っている患者は、１ｇのカプセルを一日当たり１個から３個投与され、それぞれのカプセルにはＤＨＡおよびＡＲＡ油脂が約２：１（ＡＲＡ：ＤＨＡ）の割合で含まれており、総投与量は、ＤＨＡ５００ｍｇ／日、ＡＲＡ１０００ｍｇ／日である。患者の血清脂質は、４週間で再照合した。血清ＤＨＡおよびＡＲＡのレベルが正常レベルの５倍より少なく（即ち、血清ＤＨＡが、血漿１ｍｌ当たり１００μｇより少なく、かつ血清ＡＲＡが血漿１ｍｌ当たり５００μｇより少ない）、かつ症状が続いていれば、患者は、血清ＡＲＡおよびＤＨＡレベルが所望のレベルに達するまで、および／または、症状が緩和されるまで、同じ投与量の療法を続けるべきである。その後、投与量は、症状が再び現れるまで、または、血清のＡＲＡおよびＤＨＡレベルが正常な範囲になるまで、低下させることができる。

精神分裂症の患者は、一日当たり１ｇのカプセルを１から９個投与され、それぞれのカプセルはＡＲＡ／ＤＨＡ比率が約２：１からなるバランスのＤＨＡおよびＡＲＡ油脂を含み、総投与量はＤＨＡ１０００ｍｇ／日、ＡＲＡ２０００ｍｇ／日である。患者の血清脂質は、４週間で再照合した。血清のＤＨＡおよびＡＲＡのレベルは正常レベルの５倍より少なく（即ち、ＤＨＡは血漿１ｍｌ当たり１００μｇより少なく、ＡＲＡは血漿１ｍｌ当たり５００μｇより少ない）、症状が持続していれば、患者は、血清のＤＨＡおよびＡＲＡが所望するレベルに到達する、および／または症状が緩和されるまで、同じ投与量の養生法を続けるべきである。ひとたび、神経病の症状が与えられた投与量で和らげられた場合、症状がもう一度表れるまで、または血清ＡＲＡおよびＤＨＡレベルが正常範囲になるまで、維持投与量を滴定により低下させることができる。

１０μｇ／ｄｌ以上の血液の鉛レベルは、米国疾病予防防止センター（ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）によって“神経学的に有意である”と考えられている。試験され、１０μｇ／ｄｌを越える血液の鉛レベルを持つと認められた患者は、一日当たり１ｇのゲルカプセルを１−３個投与され、それぞれのカプセルはＡＲＡ／ＤＨＡ比率約２：１からなるバランスのＤＨＡおよびＡＲＡ油脂を含み、ＤＨＡの総投与量は２５０ｍｇ／日、ＡＲＡは５００ｍｇ／日である。患者血清の鉛レベル、血漿の脂肪酸およびプラスマロゲンのレベルは、４週間で再照合された。血清のＤＨＡおよびＡＲＡレベルが正常レベルの５倍より少なく（即ち、ＤＨＡは血漿１ｍｌ当たり１００μｇより少なくＡＲＡは血漿１ｍｌ当たり５００μｇより少ない）、症状または高い鉛レベルが持続していれば、患者は、所望の脂肪酸レベルが達成されるまで、および／または症状が緩和されるまで、同じ投与量の養生法を続けるべきである。ひとたび、血清のＡＲＡおよびＤＨＡレベルが、正常レベルの５倍以上になれば、そののち、投与量レベルは減少させねばならない。もし神経障害の症状が和らげられる、または血清の鉛レベルが与えられた投与量で減少したならば、その後、症状が再び現れる、または血清のＡＲＡおよびＤＨＡレベルが正常の範囲になるまで、維持投与量を滴定により低下させてもよい。

Claims (34)

1. 老人性痴呆症、糖尿病性ニューロパシー、色素性網膜炎、多発性硬化症、およびアルツハイマー病からなる群から選択される疾患の症状を治療、緩和、もしくは予防するための医薬の製造における、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む組成物の使用であって、前記組成物が実質的にエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含まないことを特徴とする前記使用。
2. 前記組成物がアラキドン酸（ＡＲＡ）をさらに含む、請求項１記載の使用。
3. 前記ＤＨＡがＤＨＡを含有する微生物油ＤＨＡとして供給され、および／または、前記ＡＲＡがＡＲＡを含有する微生物油ＡＲＡとして供給される、請求項２記載の使用。
4. 前記ＤＨＡ含有微生物油が、クリプテコディニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｕｉｍ）、スラウストチトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）、またはシゾチトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）の種である微生物によって産生される、請求項３記載の使用。
5. 前記ＡＲＡ含有微生物油が、ポルフィリディウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）、オクロモナス（Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、ピシウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）、またはモルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）の種である微生物によって産生される、請求項３記載の使用。
6. 前記ＤＨＡ含有微生物油が少なくとも２０重量％のＤＨＡを含み、前記ＡＲＡ含有微生物油が少なくとも１０重量％のＡＲＡを含む、請求項２記載の使用。
7. 前記ＤＨＡを含有する微生物油ＤＨＡが少なくとも４０重量％のＤＨＡを含む、請求項１または請求項２に記載の使用。
8. 前記ＤＨＡ含有微生物油と前記ＡＲＡ含有微生物油が、一日当たり約５０〜約５０００ｍｇのＤＨＡおよび一日当たり約５０〜約５０００ｍｇのＡＲＡの用量濃度にて投与される、請求項３記載の使用。
9. 前記微生物油ＤＨＡが、一日当たり約５０〜約５０００ｍｇのＤＨＡの用量濃度にて投与される、請求項３記載の使用。
10. 前記組成物が経口投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
11. 前記組成物が、カプセル、錠剤、またはエマルジョンにて投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
12. 前記組成物が、栄養補助食品の成分として、好ましくはビタミンカプセルまたは食品代替物として投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
13. 前記組成物がさらに、ＤＨＡおよび／またはＡＲＡの血中濃度を、血漿１ｍｌ当たり約１０〜約３０μｇのＤＨＡおよび血漿１ｍｌ当たり約７５〜約１２０μｇのＡＲＡに保持するのに有効な濃度を含む、請求項２記載の使用。
14. ＤＨＡの欠乏に伴う病状に関連した神経障害を治療するための組成物を製造するための、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイルの使用であって、前記神経障害が色素性網膜炎であり、前記組成物が、経口投与、鼻腔投与、または局所投与に使用すべく製造される、前記使用。
15. ＡＲＡの欠乏に伴う病状に関連した神経障害を治療するための組成物を製造するための、アラキドン酸（ＡＲＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイルの使用であって、前記障害が多発性硬化症と色素性網膜炎からなる群から選択される、前記使用。
16. ＤＨＡとＡＲＡの欠乏に伴う病状に関連した神経障害を治療するための組成物を製造するための、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイルと、アラキドン酸（ＡＲＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイルの使用であって、前記障害が多発性硬化症と色素性網膜炎からなる群から選択され、前記組成物が、経口投与、鼻腔投与、または局所投与に使用すべく製造される、前記使用。
17. 前記組成物が経口投与に使用すべく製造される、請求項１４または請求項１６に記載の使用。
18. ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイルが魚油を含む、請求項１４または請求項１６に記載の使用。
19. ＤＨＡの欠乏に伴う病状に関連した神経障害を治療するための組成物を製造するための、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んでいて、ＤＨＡ対ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）の比が少なくとも１０：１であるオイルの使用であって、前記神経障害が糖尿病性ニューロパシーと多発性硬化症からなる群から選択される、前記使用。
20. ＡＲＡの欠乏に伴う病状に関連した神経障害を治療するための組成物を製造するための、アラキドン酸（ＡＲＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んでいて、ＡＲＡ対ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）の比が少なくとも１０：１であるオイルの使用であって、前記神経障害が糖尿病性ニューロパシーである、前記使用。
21. ＤＨＡとＡＲＡの欠乏に伴う病状に関連した神経障害を治療するための組成物を製造するための、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んでいて、ＤＨＡ対ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）の比が少なくとも１０：１であるオイル、およびアラキドン酸（ＡＲＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んでいて、ＡＲＡ対ＥＰＡの比が少なくとも１０：１であるオイルの使用であって、前記神経障害が糖尿病性ニューロパシーである、前記使用。
22. ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイルのＤＨＡ対ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）の比が少なくとも１０：１であり、アラキドン酸（ＡＲＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイルのＡＲＡ対ＥＰＡの比が少なくとも１０：１である、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の使用。
23. ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイル、および／または、アラキドン酸（ＡＲＡ）を含有するトリグリセリドおよび／またはリン脂質を含んだオイルが微生物油を含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の使用。
24. ＤＨＡを含んだ前記微生物油が少なくとも２０％のＤＨＡを含む、請求項２３記載の使用。
25. ＡＲＡを含んだ前記微生物油が少なくとも１０％のＡＲＡを含む、請求項２３記載の使用。
26. ＤＨＡまたはＡＲＡを含んだ前記微生物油が少なくとも４０％のＤＨＡまたはＡＲＡを含む、請求項２３記載の使用。
27. 神経障害を治療するための前記組成物は、投与すると、患者におけるＤＨＡおよび／またはＡＲＡの血清レベルを上昇させることができるか、あるいは患者の赤血球中のＤＨＡおよび／またはＡＲＡのレベルを上昇させることができる、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の使用。
28. 神経障害を治療するための前記組成物は、投与すると、体内におけるω−３長鎖ポリ不飽和脂肪酸とω−６長鎖ポリ不飽和脂肪酸との比を、正常な健常者における前記比と同等に保持できるか又は安定させることができる、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の使用。
29. ＤＨＡおよび／またはＡＲＡがトリグリセリドの形態をとっている、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の使用。
30. ＤＨＡ含有オイルを産生できる少なくとも１種の藻または真菌をＤＨＡオイル産生条件下にて培養することによって、そして産生されたオイルを回収することによって前記ＤＨＡオイルが得られ、および／または、ＡＲＡ含有オイルを産生できる少なくとも１種の藻または真菌をＡＲＡオイル産生条件下にて培養することによって、そして産生されたオイルを回収することによって前記ＡＲＡオイルが得られる、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の使用。
31. 前記ＤＨＡオイルが、渦鞭毛藻、チトリジオマイセート（Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅ）、またはウーマイセート（Ｏｏｍｙｃｅｔｅ）を培養することによって得られる、請求項３０記載の使用。
32. 前記の藻または真菌が、クリプテコディニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｕｉｍ）、スラウストチトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）、シゾチトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）、サプロレグニア（Ｓａｐｒｏｌｅｇｎｉａ）、またはムコール（Ｍｕｃｏｒ）の種である、請求項３０記載の使用。
33. 前記ＡＲＡ産生微生物が、ピシウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）またはモルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）の種を含む真菌であるか、あるいはオクロモナス（Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ）、ユーグレナ（Ｅｕｇｌｅｎａ）、またはポルフィリディウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）の種を含む藻である、請求項３０記載の使用。
34. 前記組成物が、カプセル、錠剤、エマルジョン、または加工食品の形態をとっている、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の使用。