JP2006528627A - アロ反応性ナチュラルキラー細胞を使用する治療用抗体の有効性を増加するための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、一般に、治療用抗体の有効性を増加するための方法および組成物に関する。それらの有効性は、ＡＤＣＣ機構の増加によって増強される。より詳細には、本発明は、ヒト対象において治療用抗体による処置の有効性を増強するための、アロ反応性ナチュラルキラー細胞との組み合わせにおける治療用抗体の使用に関する。

Description

発明の詳細な説明

発明の分野
本発明は、一般に、治療用抗体の有効性を増加するための方法および組成物に関する。より詳細には、本発明は、ヒト対象において、特に、ＡＤＣＣ機構の増加を介して、処置の有効性を増強するために、アロ反応性ナチュラルキラー細胞との組み合わせにおける治療用抗体の使用に関する。

発明の背景
ヒトにおける多様な治療ストラテジーが治療用抗体の使用に基づいている。このことは、例えば、標的細胞、特に、ウイルス感染細胞などの疾患細胞、腫瘍細胞または他の病原性細胞を枯渇するために開発された治療用抗体の使用を含む。そのような抗体は、典型的に、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３ Ｆｃ部分を典型的に伴うＩｇＧ種のモノクローナル抗体である。これらの抗体は、生来のまたは組換え抗体、ヒト化マウス抗体（即ち、多様な種、典型的に、ヒトまたは非ヒト霊長類起源のＦｃ部分、およびマウス起源の可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の機能的ドメインを含んでなる）であり得る。あるいは、モノクローナル抗体は、ヒトＩｇ遺伝子座トランスジェニックマウスにおける免疫化を介する完全なヒト起源であるか、またはヒト細胞から誘導されるｃＤＮＡライブラリーを介して得ることができる。そのような治療用抗体の特定の例は、ＣＤ２０特異性を付与するマウス可変ドメインに連結されるヒトγ１およびκ定常領域（従って、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ部分を伴う）で作製されるキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であるリツキシマブ（Ｍａｂｔｈｅｒａ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））である。過去数年間で、リツキシマブは、Ｂリンパ球増殖性悪性疾患、特に、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する治療ストラテジーを相当に改変している。ヒト化ＩｇＧ１抗体の他の例として、Ｂ細胞性悪性腫瘍の処置に使用されるアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（登録商標））、または乳癌の処置に使用されるトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））が挙げられる。開発中にある治療用抗体のさらなる例については当該分野において開示されている。

治療用抗体の作用機序についてはなお議論の段階にある。抗体の注入により、抗体によって特異的に認識される抗原を有する細胞の枯渇がもたらされる。この枯渇は、少なくとも３つの機序：抗体仲介性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）、補体依存性溶解、および抗体によって標的化される抗原を介して与えられるシグナルによる腫瘍増殖の直接的抗腫瘍阻害を介して仲介され得る。

これらの抗体はヒトへの治療に対する新規の有効なアプローチを提示する一方、特に、腫瘍の処置では、それらは、常に強力な効力を示すわけではない。例えば、リツキシマブは、単独または化学療法との併用で、低〜中および高度ＮＨＬの両方の処置において効果的であることが示されたが、低度ＮＨＬを伴う３０％〜５０％の患者では、リツキシマブに対する臨床応答が認められない。リンパ腫細胞上におけるＣＤ２０発現のレベル、処置時における高腫瘍負荷量の存在または低血清リツキシマブ濃度は、いくつかの患者においてリツキシマブの効力を欠くことを説明することが示唆されている。それにもかかわらず、処置の実際の原因は概して不明のままである。従って、当該分野において治療用抗体の有効性を増加する必要性がある。

発明の概要
本発明は、治療用抗体の効力を増強するための新規のアプローチを開示する。これらのアプローチは、治療用抗体が注入される場合のインビボでのＡＤＣＣ機構の増加に基づく。好ましくは、ＡＤＣＣ機構の増加が、アロ反応性ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の投与によって達成される。

より具体的には、本発明は、アロ反応性ヒトＮＫ細胞が治療用抗体またはそのフラグメントと共に対象に同時投与される対象の処置の方法を開示する。ヒト対象において本発明者らが実証するように、アロ反応性ＮＫ細胞自家移植ＮＫ細胞と比較して、かなり強力なＡＤＣＣ活性を示す。アロ反応性とは、ＮＫ細胞が宿主のＨＬＡと適合するＫＩＲ阻害型受容体を示さないことを意味する。本発明者らは、治療用抗体の有効性が、選択されたアロ反応性ＮＫの同時注入によって顕著に増強され得ることをここに実証する。

本発明は、治療用抗体またはそのフラグメントおよびアロ反応性ヒトナチュラルキラー細胞を含んでなる医薬組成物に関する。本発明はまた、治療用抗体またはそのフラグメントおよびアロ反応性ヒトナチュラルキラー細胞を含んでなるキットに関する。

本発明は、治療用抗体による処置の有効性を増加するか、または治療用抗体またはそのフラグメントによる処置を受ける対象においてＡＤＣＣを増加するためのアロ反応性ＮＫ細胞の使用に関する。

本発明はまた、疾患を処置するための薬物の調製のためのアロ反応性ナチュラルキラー細胞および治療用抗体またはそのフラグメントの使用に関する。より詳細には、疾患の処置には、標的化された細胞、好ましくは、ウイルス感染細胞などの疾患細胞、腫瘍細胞または同種免疫担当細胞を含む他の病原性細胞の枯渇が必要である。好ましくは、疾患は、癌、感染性または免疫疾患である。より好ましくは、疾患は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、ウイルス性疾患よりなる群から選択される。疾患はまた、移植片拒絶、より詳細には、同種移植片拒絶、および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）に関する。

本発明はまた、治療用抗体、例えば、ＣＤ１６によって結合される抗体の用量を減少するための方法に関する。例えば、治療用抗体およびアロ反応性ナチュラルキラー細胞の同時投与は、より低用量の治療用抗体を使用することを可能にする。治療用抗体は、これに関して、化合物の非存在下で推奨される用量より２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれより低い用量で使用することができる。

さらに、本発明は、治療用抗体、例えば、ＣＤ１６により結合される抗体の治療上有効な減少された用量を決定するための方法を提供し、該方法は、ｉ）第１の濃度の治療用抗体を、標的細胞およびＮＫ細胞と共に、アロ反応性ナチュラルキラー細胞の非存在下で同時インキュベートすること；ｉｉ）第２のより低い濃度の治療用抗体を、標的細胞、ＮＫ細胞と共に、かつアロ反応性ナチュラルキラー細胞の存在下で同時インキュベートすること；ｉｉｉ）工程ｉｉ）において観察される標的細胞の枯渇が工程ｉ）において観察される枯渇と同程度に大きいかどうかを決定することを含んでなる。工程ｉｉ）が工程ｉ）と同様に有効であることが観察される場合、所定の患者における使用、例えば、患者の特定の要件に依存して、標的細胞の枯渇、低減された用量の治療用抗体、または低減された用量のアロ反応性ナチュラルキラー細胞を最大化するのに適切である異なる条件を同定するために、アロ反応性ナチュラルキラー細胞および治療用抗体の相対濃度を変動し、枯渇を観察することができる。

特定の態様では、本発明は、処置を要する対象の処置の方法に関し、以下を含んでなる：
ａ）前記対象にアロ反応性ナチュラルキラー細胞を投与すること；および
ｂ）前記対象に治療用抗体を投与すること。

前記治療用抗体は、免疫複合体を形成することが可能である。好ましくは、前記治療用抗体は、ＮＫ細胞上のＣＤ１６受容体により、好ましくは、そのＦｃ領域を介して結合され得る。好適な実施態様では、治療用抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分を有する。好ましくは、治療用抗体は、モノクローナル抗体またはフラグメントあるいはその誘導体、より好ましくは、ヒト化、ヒトもしくはキメラ抗体である。特定の実施態様では、治療用抗体はリツキシマブである。前記フラグメントまたはその誘導体は、好ましくは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’２フラグメント、ＣＤＲおよびＳｃＦｖから選択される。

発明の詳細な説明
本発明は、治療用抗体の有効性を増加するための手段を提供する。本発明は、所定の表現型または特性を有するアロ反応性ＮＫ細胞の使用により、治療用抗体の有効性を有意に増加することができることをより具体的に開示する。実際、本発明者らは、治療用抗体の有効性が、アロ反応性ナチュラルキラー細胞の同時注入によって顕著に増強され得ることを実証する。

従って、本発明は、処置を要する対象の疾患の処置の方法に関し、以下を含んでなる：
ａ）前記対象にアロ反応性ナチュラルキラー細胞を投与すること；および
ｂ）前記対象に治療用抗体を投与すること。

前記治療用抗体は、ＣＤ１６によって、好ましくは、そのＦｃ領域を介して、結合され得る。場合により、方法は、同種移植片を前記対象に移植するさらなる工程を含んでなる。好ましくは、前記同種移植は造血細胞移植である。場合により、前記造血細胞移植は骨髄移植である。

より詳細には、疾患の処置には、標的化された細胞、好ましくは、ウイルス感染細胞などの疾患細胞、腫瘍細胞または同種免疫担当細胞を含む他の病原性細胞の枯渇が必要である。好ましくは、疾患は、癌、感染性または免疫疾患である。より好ましくは、疾患は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、ウイルス性疾患よりなる群から選択される。疾患はまた、移植片拒絶、より詳細には、同種移植片拒絶、および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）に関する。

前記疾患は、造血細胞の新生物増殖を含む。場合により、前記疾患は、リンパ芽球性白血病、急性または慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、および慢性リンパ性白血病よりなる群から選択される。前記疾患はまた、ＥＮＴ癌、大腸癌、乳癌、上皮癌を含む。前記疾患はＣＭＶ感染、およびＢ型肝炎を含む。前記疾患は、クローン病、慢性関節リウマチ、喘息、乾癬、多発性硬化症、または糖尿病を含む。

好ましくは、前記治療用抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分、特に、モノクローナル抗体またはそのフラグメント、さらに好ましくは、ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体またはそれらのフラグメント、例えば、リツキシマブを有する。

アロ反応性ナチュラルキラー細胞は、治療用抗体の投与の前、同時、または後に対象に投与され得ることが意図される。好ましくは、治療用抗体は、ナチュラルキラー細胞の投与の５日間内、より好ましくは２日間内に投与される。好ましくは、治療用抗体は、アロ反応性ナチュラルキラー細胞の前または同時に投与される。

好ましくは、前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞は、そのＮＫ細胞内容物のうち、少なくとも５％、好ましくは、少なくとも２０または３０％、より好ましくは、少なくとも４０または５０％、なおより好ましくは、少なくとも６０、７０または９０％のレシピエント細胞に対するアロ反応性ＮＫ細胞を含んでなる。場合により、本質的にすべてのＮＫ細胞が、レシピエント細胞に対してアロ反応性である。

好ましくは、前記対象は、アロ反応性ナチュラルキラー細胞の投与の前に骨髄減少レジメンまたは免疫抑制処置、場合により、骨髄切除レジメン下で処置される。

さらなる態様では、本発明は、治療用抗体処置を受容する対象のＡＤＣＣを増加する方法に関し、前記方法は、前記治療用抗体の投与の前、同時または後に、ＡＤＣＣを増加するのに十分な量のアロ反応性ナチュラルキラー細胞を前記対象に投与することを含んでなる。前記治療用抗体は、ＮＫ細胞に上のＣＤ１６によって、好ましくは、そのＦｃ領域を介して、結合され得る。好ましくは、前記治療用抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分、特に、モノクローナル抗体またはそのフラグメント、さらに好ましくは、キメラ、ヒトもしくはヒト化抗体またはそれらのフラグメント、例えば、リツキシマブを有する。

さらなる態様では、本発明は、治療用抗体の有効性を増加する方法に関し、前記方法は、前記治療用抗体の投与の前、同時または後に、前記治療用抗体の有効性を増加するのに十分な量のアロ反応性ナチュラルキラー細胞を前記対象に投与することを含んでなる。前記治療用抗体は、ＣＤ１６によって、好ましくは、そのＦｃ領域を介して、結合され得る。好ましくは、前記治療用抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分、特に、モノクローナル抗体またはそのフラグメント、さらに好ましくは、ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体またはそれらのフラグメント、例えば、リツキシマブを有する。

本発明は、血液障害を有する対象を処置する方法であって、前記障害を処置するように、同種移植片を前記対象に移植することを含んでなる上記方法に関し、前記対象に有効量のアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞および治療用抗体を投与することを含んでなることを改良点とする。

本発明は、対象に有効量の活性アロ反応性ドナー対レシピエントヒトナチュラルキラー細胞および治療用抗体を投与することを含んでなる、対象における腫瘍再発を回避する方法であって、同種移植片を対象に移植することとの組み合わせで腫瘍再発に対し有効である、上記方法を意図している。

本発明に関して、対象または患者は、任意の哺乳動物対象または患者、より好ましくは、ヒト対象または患者を含む。

治療用抗体
本発明に関して、用語「治療用抗体または抗体」は、より具体的に、患者において標的細胞を枯渇するために機能する任意の抗体を示す。そのような標的細胞の具体的例として、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、同種細胞、アレルギーに関与する病理学的免疫担当細胞（例えば、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、抗原提示細胞など）、自己免疫疾患、同種反応など、または健常な細胞（例えば、抗血管新生治療ストラテジーにおける内皮細胞）が挙げられる。本発明に関する最も好適な標的細胞は腫瘍細胞およびウイルス感染細胞である。治療用抗体は、例えば、細胞障害効果または細胞溶解を、特に、抗体依存性細胞仲介細胞障害性（ＡＤＣＣ）によって仲介することができる。ＡＤＣＣは、機能がＩｇＧ感作抗原をＦｃγＲを有する細胞障害性細胞に連結すること、および細胞活性化機構を誘発することであるＩｇＧ（ＦｃγＲ）のＦｃ部分の白血球受容体を必要とする。この作用機序についてはヒトにおいてインビボでは立証されていない一方、それは、そのような標的細胞を枯渇する治療用抗体の効力を説明し得る。従って、治療用抗体は、免疫複合体を形成することが可能である。例えば、免疫複合体は、治療用抗体によって被覆された腫瘍標的であり得る。より詳細には、抗体は、ＣＤ１６によって、好ましくは、そのＦｃ領域を介して、結合され得る。治療用抗体は、ポリクローナルであってもよく、または好ましくは、モノクローナルである。それらは、ハイブリドーマまたは所望される可変および定常ドメインを発現するように操作された組換え細胞によって産生され得る。抗体は、一本鎖抗体であってもまたは抗原特異性およびヒンジ下流領域またはその変異体を保持する他の抗体の誘導体であってもよい。これらは、多機能抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、フラグメントまたはそれらの変異体であってもよい。前記フラグメントまたはその誘導体は、好ましくは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’２フラグメント、ＣＤＲおよびＳｃＦｖから選択される。治療用抗体は、表面抗原、例えば、膜抗原に特異的である。最も好適な治療用抗体は、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＥｒｂＢ２（またはＨＥＲ２／Ｎｅｕ）、ＣＤ３３、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＭＵＣ−１、ＣＥＡ、ＫＤＲ、αＶβ３などのような腫瘍抗原（例えば、腫瘍細胞により特異的に発現される分子）、特に、リンパ腫抗原（例えば、ＣＤ２０）に特異的である。治療用抗体は、好ましくは、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分、より好ましくはヒトＩｇＧ１を有する。

１つの実施態様では、抗体は、ＡＤＣＣ中の抗体とＮＫ細胞との相互作用を増強するそれらのＦｃ部分における改変を含む。そのような改変された治療用抗体（「変更された抗体」）は、一般に、好ましくは、１つもしくはそれ以上Ｆｃ？Ｒに対する抗体の結合親和性を改変するＦｃ領域における改変を含んでなる。１つもしくはそれ以上のＦｃ？Ｒへの改変された結合で抗体を改変するための方法は当該分野において公知であり、例えば、ＰＣＴ公報国際公開第２００４／０１６７５０号（国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２５３９９号）パンフレット、国際公開第９９／１５８５７２号パンフレット、国際公開第９９／１５１６４２号パンフレット、国際公開第９８／１２３２８９号パンフレット、国際公開第８９／１０７１４２号パンフレット、国際公開第８８／１０７０８９号パンフレット、および米国特許第５，８４３，５９７号明細書および同第５，６４２，８２１号明細書（そのそれぞれは、それらの全体が本明細書において参考として援用される）を参照のこと。

慢性関節リウマチを処置するために使用されるＤ２Ｅ７（ケンブリッジ・アンチボディ・テクノロジー・グループ，ｐｌｃ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ， ｐｌｃ）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、英国）／ＢＡＳＦ（Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ、独国））のような本明細書において同定された治療用抗体、またはインフリキシマブ（セントコル，Ｉｎｃ．（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．）、Ｍａｌｖｅｒｎ，ペンシルベニア州；クローン病および慢性関節リウマチを処置するために使用される）、または国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２５３９９号パンフレット（その全体が参考として本明細書において援用される）において開示される抗体は、上記および下記において同定される出願にの教示内容の通りに改変することができ、そのような抗体が典型的に使用される疾患の処置のために使用することができる。いくつかの実施態様では、本発明は、Ｆｃ？Ｒ、例えば、Ｆｃ？ＲＩＩＩを活性化するための変更された親和性（高いまたは低い親和性のいずれか）を有する変更された抗体を提供する。ある好適な実施態様では、Ｆｃ？Ｒに対しより高い親和性を有する変更された抗体が提供される。好ましくは、そのような改変はまた、変更されたＦｃ仲介エフェクター機能を有する。

Ｆｃ仲介エフェクター機能に影響を及ぼす改変は、当該分野において周知である（例えば、米国特許第６，１９４，３５１号明細書（その全体が本明細書において参考として援用される）を参照のこと）。改変することができるアミノ酸として、プロリン３２９、プロリン３３１、およびリジン３２２が挙げられるが、これらに限定されない。プロリン３２９および／または３３１、およびリジン３２２は、アラニンで置換されるのが好ましいが、任意の他のアミノ酸での置換も考えられる。国際公開第００／１４２０７２号パンフレットおよび米国特許第６，１９４，５５１号明細書（それらの全体が参考として本明細書に援用される）を参照のこと。

従って、Ｆｃ領域の改変は、抗体Ｆｃ領域に見出されるアミノ酸に対する１つもしくはそれ以上の変更を含んでなり得る。そのような変更は、変更された抗体仲介エフェクター機能、他のＦｃ受容体（例えば、Ｆｃ活性化受容体）への変更された結合、変更されたＡＤＣＣ活性、変更されたＣｌｑ結合活性、変更された補体依存性細胞障害活性、またはそれらの任意の組み合わせを伴う抗体を生じ得る。

１つの実施態様では、抗体は、ＦＣＧＲ３Ａ（ＣＤ１６とも呼ばれる、ＦＣＧＲ３、免疫グロブリンＧ Ｆｃ受容体ＩＩＩ；ＩＧＦＲ３、ＩｇＧのＦｃフラグメントに対する受容体、低親和性ＩＩＩａ、；例えば、ＯＭＩＭ１４６７４０を参照のこと）、ＦＣＧＲ２Ａ（ＣＤ３２とも呼ばれる、ＣＤｗ３２、ＩｇＧのＦｃフラグメントに対する受容体、低親和性ＩＩａ、ＦＣＧ２、免疫グロブリンＧ Ｆｃ受容体ＩＩ；例えば、ＯＭＩＭ１４６７９０を参照のこと）；ＦＣＧＲ２Ｂ（ＣＤ３２とも呼ばれる、ＩｇＧのＦｃフラグメントに対する受容体、低親和性ＩＩｂ；ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣ−γ−ＲＩＩＢ；例えば、ＯＭＩＭ６０４５９０を参照のこと）、ＦＣＧ１ＲＡ（ＣＤ６４とも呼ばれる；ＩｇＧのＦｃフラグメントに対する受容体、高親和性Ｉａ；ＩＧＦＲ１；例えば、ＯＭＩＭ１４６７６０を参照のこと）；ＩｇＧのＦＣＧＲ１フラグメント、高親和性Ｉｃ、免疫グロブリンＧ Ｆｃ受容体ＩＣ、ＩＧＦＲＣ；例えば、ＯＭＩＭ６０１５０３を参照のこと）；またはＦＣＧＲ１Ｂ（ＣＤ６４とも呼ばれる、ＩｇＧのＦｃフラグメントに対する受容体、高親和性Ｉｂ；免疫グロブリンＧ Ｆｃ受容体ＩＢ、；ＩＧＦＲＢ；例えば、ＯＭＩＭ６０１５０２を参照のこと）のようなＦｃγ受容体によって、特異的に認識される。

本発明の治療用抗体の典型的な例として、リツキシマブ、アレムツズマブおよびトラスツズマブがある。そのような抗体は、ヒト対象での使用について認可されている臨床プロトコルに従って、使用してもよい。治療用抗体のさらなる具体的な例として、例えば、エプラツズマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、セツキシマブ、ラベツズマブ、セビルマブ、ツブリマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、オマリズマブ、エファリズマブ、ナタリズマブ、クレノリキシマブなどが挙げられる。他の例として、抗フェリチン抗体（米国特許出願公開第２００２／０１０６３２４号明細書）、抗ｐ１４０および抗ｓｃ５抗体（国際公開第０２／５０１２２号パンフレット）が挙げられ、抗ＫＩＲ（ＮＫ細胞キラー阻害型受容体）抗体（ＫＩＲ受容体については、キャリントン（Ｃａｒｒｉｎｇｔｏｎ）およびノルマン（Ｎｏｒｍａｎ）、（Ｔｈｅ ＫＩＲ Ｇｅｎｅ Ｃｌｕｓｔｅｒ、２００３年５月３日：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓにおいて利用可能）、（その開示内容は本明細書において参考として援用される）に記載されている。他の例は以下の表に列挙しており、そのいずれも（およびその他も）本発明の方法において使用することができる。以下の表または本明細書の他の箇所において記載されているか否かにかかわらず、好ましくは、ＡＤＣＣによって、標的細胞を枯渇することができるあらゆる抗体は、本発明の方法から利益を享受することができ、以下の表は、本明細書において列挙された抗体または列挙された抗体の標的もしくは適応症について、そのすべてを網羅しているわけではないことが理解されよう。

アロ反応性ナチュラルキラー細胞
本明細書において使用する「ドナー」は、ナチュラルキラー細胞が本来取り出される天然の供給源である対象を意味する。また、本明細書において使用する「レシピエント」は、ナチュラルキラー細胞が導入される対象である。

主要組織適合性（ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔａｂｉｌｉｔｙ）複合体抗原（ヒト白血球抗原、ＨＬＡとも呼ばれる）は、これらの細胞に独特な抗原同一性を付与する細胞の表面上において発現されるタンパク質分子である。ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原は、免疫エフェクター細胞と同じ造血再構成幹細胞の供給源（「自己」）から誘導されるか、または造血再構成細胞とは別の供給源（「非自己」）から誘導される所定の免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）によって認識される標的分子である。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、従来にない免疫に関与するリンパ球のサブ集団である。ＮＫ細胞は、血液サンプル、血球分離、収集など、当業界で公知の様々な技術によって得ることができる。ＮＫ細胞は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ特異的阻害型受容体によって負に調節される（ケレ（Ｋａｅｒｒｅ）ら、１９８６年；エーレン（Ｏｅｈｌｅｎ）ら、１９８９；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）。ヒトでは、キラーＩｇ様受容体（ＫＩＲ）と呼ばれる受容体がＨＬＡクラスＩ対立遺伝子のグループを認識する。ＫＩＲおよび他のクラスＩ阻害型受容体（モレッタ（Ｍｏｒｅｔｔａ）ら、１９９７年；バリアンテ（Ｖａｌｉａｎｔｅ）ら、１９９７年ａ；ラニーア（Ｌａｎｉｅｒ）、１９９８年；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）は、ＮＫ細胞によって同時発現され得るが、いかなる所定の個体のＮＫレパートリーにおいても、単一のＫＩＲを発現する細胞が存在し、特異的クラスＩ対立遺伝子グループのみによって、阻止される。不一致型同種細胞上においてＫＩＲリガンドの発現が欠けているため、従って、ＮＫ細胞アロ反応性が誘発され得る（シッコネ（Ｃｉｃｃｏｎｅ）ら、１９９２年ａ、１９９２年ｂ；コロンナ（Ｃｏｌｏｎｎａ）ら、１９９３年ａ、１９９３年ｂ；ベロネ（Ｂｅｌｌｏｎｅ）ら、１９９３年；バリアンテ（Ｖａｌｉａｎｔｅ）ら、１９９７年ｂ；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）。造血細胞移植中、レシピエントのクラスＩ対立遺伝子がすべてのドナーのＮＫ細胞を阻止するわけではない場合、ドナーのアロ反応性ＮＫクローンを作製することができる（ルゲリ（Ｒｕｇｇｅｒｉ）ら、１９９９年；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）。

ＮＫ細胞の特徴および生物学的特性として、ＣＤ１６、ＣＤ５６、および／またはＣＤ５７を含む表面抗原の発現、ならびに細胞表面上において発現されるα／βまたはγ／δＴＣＲ複合体の不在；特定の細胞溶解性酵素の活性化により、「自己の」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現することができない細胞に結合し、死滅させる能力；ＮＫＲ−リガンドを発現する腫瘍細胞を提供する腫瘍細胞を死滅させる能力；免疫応答を刺激または阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力；ならびに複数回の細胞分裂を経て、親細胞と類似の生物学的特性を伴う娘細胞を産生する能力が挙げられる。単球の特性として、細菌および「非自己」細胞を飲み込む能力（食作用）；Ｔ細胞およびＮＫ細胞を刺激するサイトカインの合成；炎症を引き起こす分子の放出；ならびにＴ細胞に対する抗原の提示が挙げられる。「活性」ＮＫ細胞は、十分な生物学的に活性なＮＫ細胞、より好ましくは、標的細胞を溶解する能力を有するＮＫ細胞を意図する。より詳細には、「活性」ＮＫ細胞は、エクスビボ培養物または拡張されたＮＫ細胞集団、より詳細には、インターロイキン、より好ましくは、ＩＬ−２などのサイトカインの存在下でインビトロまたはエクスビボで処置もしくは培養されたＮＫ細胞集団を指す。例えば、「活性」ＮＫ細胞は、ＮＫＲ−リガンドを発現し、「自己の」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原（ＫＩＲ不適合細胞）を発現することができない細胞を死滅させることが可能である。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞溶解の阻害は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子またはＨＬＡの多形性決定基に結合する特異的受容体を介してシグナル伝達される。いくつかの受容体は、キラー細胞阻害型受容体（ＫＩＲ）として公知のＩｇ様分子のファミリーである。

本明細書において使用するアロ反応性ＮＫ細胞は、レシピエント（ドナー対レシピエント方向でＫＩＲ不適合性）のＭＨＣ／ＨＬＡ抗原に結合可能なＫＩＲ（キラー細胞阻害型受容体）を発現しないＮＫ細胞を指す。より詳細には、前記アロ反応性ＮＫ細胞は、宿主におけるＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢまたはＨＬＡ−Ｃ抗原、好ましくは、ＨＬＡ−ＢまたはＨＬＡ−Ｃ抗原のうちの１つに結合することができない。２つのＩｇドメイン（ＫＩＲ２ＤＬ）を伴うＫＩＲがＨＬＡ−Ｃアロタイプ：ＫＩＲ２ＤＬ２（以前はｐ５８．１と命名された）を同定するか、または緊密に関連する遺伝子産物ＫＩＲ２ＤＬ３がグループ１のＨＬＡ−Ｃアロタイプ（Ｃｗ１、３、７、および８）と共有するエピトープを認識する一方、ＫＩＲ２ＤＬ１（ｐ５８．２）は対抗グループ２のＨＬＡ−Ｃアロタイプ（Ｃｗ２、４、５、および６）と共有するエピトープを認識する。３つのＩｇドメインを伴う１つのＫＩＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１（ｐ７０）は、ＨＬＡ−Ｂｗ４対立遺伝子と共有するエピトープを認識する。最終的に、３つのＩｇドメインを伴う分子のホモダイマーＫＩＲ３ＤＬ２（ｐ１４０）は、ＨＬＡ−Ａ３および−Ａ１１を認識する。

最も興味深いＫＩＲはＨＬＡ−Ｃアロタイプを同定する。実際、ただ２つのＫＩＲ、即ち、ＫＩＲ２ＤＬ２またはＫＩＲ２ＤＬ３、およびＫＩＲ２ＤＬ１は、ほとんどのＨＬＡ−Ｃアロタイプ、それぞれグループ１ＨＬＡ−Ｃアロタイプおよびグループ２ＨＬＡ−Ｃアロタイプを含むのに十分である。

ＫＩＲ遺伝子は、それぞれが個々のＮＫ細胞のいくつかによって発現され、個体間でかなりのばらつきが認められる。発達中に、各ＮＫ細胞前駆体は、該前駆体が発現するＫＩＲ遺伝子を無作為に選択し、ＨＬＡクラスＩ分子の異なる組み合わせが自己のＨＬＡクラスＩに対する受容体を発現するＮＫ細胞を選択すると考えられている。結果として、任意の所定の個体由来のＮＫ細胞は、それらのＫＩＲリガンドを欠く他者由来の細胞に対してアロ反応性であり、対照的に、同じまたはさらなるＫＩＲリガンドを有する別の個体由来の細胞に耐性がある。

従って、アロ反応性ＮＫ細胞は、ドナー、より詳細には、３つの主要なＨＬＡ、好ましくは、ＨＬＡ−ＣおよびＨＬＡ−Ｂのそれらのうちの少なくとも１つの抗原に対して、レシピエントと不一致であることについて選択されるアロ反応性ドナーから誘導される。例えば、レシピエントがグループ１ ＨＬＡ−Ｃアロタイプを提示する場合、ドナーはグループ２ ＨＬＡ−Ｃアロタイプを有する。逆に、グループ２ ＨＬＡ−Ｃアロタイプを有するレシピエントに対しては、ドナーは、グループ１ ＨＬＡ−Ｃアロタイプを提示するように選択される。さらなる例では、グループＢｗ４ ＨＬＡ−Ｂアロタイプを有するレシピエントに対して、ドナーは、グループＢｗ４ ＨＬＡ−Ｂアロタイプを提示しないように選択される。逆に、グループＢｗ４ ＨＬＡ−Ｂアロタイプを有さないレシピエントに対して、ドナーは、グループＢｗ４ ＨＬＡ−Ｂアロタイプを提示するように選択される。

特に、ドナー−レシピエントのハプロタイプ不一致対もまた、（この例におけるように）ＫＩＲリガンドの不一致である場合、１００％の試験したドナーがそれらのレパートリーにおいて（少なくともいくつかの）アロ反応性ＮＫ細胞を有した。従って、アロ反応性ドナー由来のＮＫ細胞の集団では、５〜５０％のＮＫ細胞がアロ反応性である。

アロ反応性ＮＫ細胞は、当業者に公知の異なる技術によって、ドナーから調製される。より詳細には、これらの細胞は、末梢血単核細胞を使用する異なる単離および富化方法（リンホプレップ（ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）、白血球分離採取法など）によって、入手することができる。これらの細胞は、Ｐｅｒｃｏｌｌ密度勾配（ティモネン（Ｔｉｍｏｎｅｎ）ら、１９８２年；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）、ネガティブ枯渇方法（ザーリング（Ｚａｒｌｉｎｇ）ら、１９８１年；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）またはＦＡＣＳ分別方法（ラニーア（Ｌａｎｉｅｒ）ら、１９８３年；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）によって、調製することができる。これらの細胞は、アビジン−ビオチン系を使用するカラム免疫吸着（ハンドグレティンガー（Ｈａｎｄｇｒｅｔｉｎｇｅｒ）ら、１９９４年；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）または抗体でグラフト化したマイクロビーズを使用する免疫選択（ガイセルハート（Ｇｅｉｓｅｌｈａｒｔ）ら、１９９６−９７年；その開示内容は、本明細書において参考として援用される）によって、単離することができる。また、場合によりプラスチック粘着方法と組み合わされたこれらの異なる技術の組み合わせを使用することも可能である。例えば、アロ反応性ＮＫ細胞は、ドナーからＴ細胞を枯渇させた血中単核細胞を提供し、前記細胞をフィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）で活性化し、前記細胞をインターロイキン（ＩＬ）−２および照射されたフィーダー細胞と共に培養することによって、調製することができる。場合により、ＮＫ細胞の細胞の集団を、レシピエント細胞に対するアロ反応性について試験することができる。場合により、前記ＮＫ細胞をクローニングすることができ、各クローンは、レシピエント細胞に対するアロ反応性について試験される。場合により、アロ反応性を提示するＮＫ細胞クローンがプールされる。アロ反応性は、レシピエントＰＨＡリンパ芽球、またはエプスタイン・バール（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ウイルス形質転換Ｂリンパ芽球様細胞系統に対する標準的な５１Ｃｒ放出細胞障害性によって試験される。

従って、本発明に従うアロ反応性ＮＫ細胞は：ａ）アロ反応性ドナー由来のＮＫ細胞を提供すること；ｂ）前記ＮＫ細胞をＩＬ−２で活性化すること；ｃ）工程ｂ）から得られる活性ＮＫ細胞を回収すること、を含んでなる方法によって、調製することができる。場合により、前記方法は、レシピエント細胞に対して工程ｃ）から回収されるＮＫ細胞のアロ反応性を試験するさらなる工程を含んでなる。あるいは、本発明に従うアロ反応性ＮＫ細胞は：ａ）アロ反応性ドナー由来のＮＫ細胞を提供すること；ｂ）前記ＮＫ細胞を単離またはクローニングすること；ｃ）前記ＮＫ細胞をＩＬ−２で活性化すること；ｄ）レシピエント細胞に対して工程ｃ）から回収されるＮＫ細胞のアロ反応性を試験すること；および場合により、ｅ）アロ反応性ＮＫ細胞をプールすることを含んでなる方法によって、調製することができる。ＮＫ細胞は、インビボまたはインビトロでさらに拡張させることができる。

第１の実施態様では、前記アロ反応性ＮＫ細胞は、本質的に、アロ反応性ＮＫ細胞のみを含有する。代替的実施態様では、前記アロ反応性ＮＫ細胞は、アロ反応性ドナーから調製されるＮＫ細胞の集団を指す。この場合、前記集団は、アロ反応性および非アロ反応性ＮＫ細胞の両方を含んでなる。好ましくは、このＮＫ細胞集団は、少なくとも５％のアロ反応性ＮＫ細胞、より好ましくは、少なくとも２０％のアロ反応性ＮＫ細胞、なおより好ましくは、少なくとも３０％のアロ反応性ＮＫ細胞を含んでなる。

組成物および投与
本発明は、アロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞および治療用抗体を含んでなる組成物、治療用抗体の有効性を増加するため、治療用抗体で処置される対象のＡＤＣＣを増加するため、または疾患、より詳細には標的化された細胞、好ましくは、ウイルス感染細胞などの疾患細胞、腫瘍細胞または同種免疫担当細胞を含む他の病原性細胞の枯渇を必要とする疾患を有する対象を処置するための前記組成物の使用に関する。好ましくは、疾患は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、ウイルス性疾患よりなる群から選択される。疾患はまた、移植片拒絶、より詳細には、同種移植片拒絶、および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）に関する。

前記治療用抗体は、ＣＤ１６によって、好ましくは、そのＦｃ領域を介して、結合され得る。好ましくは、前記治療用抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分、特に、モノクローナル抗体またはそのフラグメント、さらに好ましくは、ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体またはそれらのフラグメント、例えば、リツキシマブを有する。

好ましくは、前記組成物は、非アロ反応性ナチュラルキラー細胞内容物について、アロ反応性ナチュラルキラー細胞において富化される。前記組成物は、そのＮＫ細胞内容物のうち、少なくとも５％、好ましくは、少なくとも２０または３０％、より好ましくは、少なくとも４０または５０％、なおより好ましくは、少なくとも６０、７０または９０％のアロ反応性ＮＫ細胞を含んでなる。場合により、前記組成物に含まれる本質的にすべてのＮＫ細胞が、レシピエント細胞に対してアロ反応性である。

本発明の組成物は、場合により、安定化剤、保存剤などで補充された任意の薬学的に許容可能なキャリアまたは賦形剤、典型的に、緩衝液、等張液、水性懸濁液を含んでなり得る。典型的な処方は、食塩水溶液、および場合により、高分子量タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）のような保護または安定化分子を含む。

本発明の方法および組成物に従えば、活性アロ反応性ＮＫ細胞および治療用抗体が有効量で投与される。

レシピエントに投与されるアロ反応性ＮＫ細胞の有効量は、約０．０５ １０^６〜約１００ １０^６個の細胞／レシピエントの体重のｋｇの間であり得る。純粋なアロ反応性ＮＫ細胞のサブ範囲もまた、例えば、約０．０５ １０^６〜５ １０^６個の細胞／レシピエントの体重のｋｇ、約５ １０^６〜１０ １０^６個の細胞／レシピエントの体重のｋｇ、約１０ １０^６〜５０ １０^６個の細胞／レシピエントの体重のｋｇ、約５０ １０^６〜１００ １０^６個の細胞／レシピエントの体重のｋｇで提供される。好ましくは、レシピエントに投与されるアロ反応性ＮＫ細胞の量は、５ １０^６〜１５ １０^６個の細胞／レシピエントの体重のｋｇの間に含まれる。

レシピエントに投与される治療用抗体の有効量は、好ましくは、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間であり得る。しかし、抗体の有効量は、抗体の形態（Ｉｇ全体、またはフラグメント）、ｍＡｂの親和性および各特定の抗体について決定しなければならない薬物動態パラメータに依存する。

本発明の重要な実施態様では、本発明のアロ反応性ＮＫ細胞の使用により、減少した用量の治療用抗体で治療効力を達成させることを可能にすることができる。治療用抗体の使用（例えば、用量、投与レジメン）は、副作用、例えば、リツキシマブの場合、発熱、頭痛、息苦しさ、血圧降下などによって制限され得る。従って、多くの患者では、治療用抗体の標準的用量が本明細書に記載のアロ反応性ＮＫ細胞との併用で投与され（即ち、他の任意の化合物の非存在下で推奨される用量）、それによって、より高い治療効力を必要とする患者、他の患者、例えば、重度の副作用の影響を受けた患者では、標準的用量の効能が増強される一方、本発明の化合物の投与では、減少した用量の治療用抗体で治療効力を達成させることが可能であり、それによって、副作用が回避される。実際には、熟練した医療従事者であれば、所定の患者のための治療用抗体およびアロ反応性ＮＫ細胞の理想的用量および投与レジメン、例えば、特定の要件および患者の全体的条件の観点から最も適切である治療ストラテジーを決定することが可能である。治療用抗体およびアロ反応性ＮＫ細胞の両方のための適切な用量の決定において指導するための多数の参考文献、例えば、レミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、ゲンナロ（Ｇｅｎｎａｒｏ）（２００３年）、ＩＳＢＮ：０７８１７５０２５３；グッドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）およびギルマンス（Ｇｉｌｍａｎｓ）Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ハードマン（Ｈａｒｄｍａｎ）、リンバード（Ｌｉｍｂｉｒｄ）およびギルマン（Ｇｉｌｍａｎ）（２００１年）、ＩＳＢＮ：００７１３５４６９７；ロウリンスＥ．Ａ．（Ｒａｗｌｉｎｓ Ｅ．Ａ．）編、「Ｂｅｎｔｌｅｙ’ｓ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ」、ロンドン（Ｌｏｎｄｏｎ）：バリエレ，チンダル・アンド・コックス（Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ，Ｔｉｎｄａｌｌ ａｎｄ Ｃｏｘ）、（１９７７年）などが利用可能である。

１つの実施態様では、医療従事者は、アロ反応性ＮＫ細胞の投与との併用で与えられる治療用抗体の量を用量または投与回数のいずれかについて緩徐に低減し、治療用抗体の効力をモニターし；例えば、ＮＫ細胞活性をモニターし；患者における標的細胞の存在をモニターし、多様な臨床適応症をモニターし、あるいは他の任意の手段によるか、ならびにモニタリングの結果を考慮して、治療用抗体および／もしくはアロ反応性ＮＫ細胞の相対濃度または投与様式を調整して、治療効力および副作用の制限を最大限にすることができる。

本発明に従う組成物は、典型的に、静脈内、腹腔内、動脈内、筋肉内または経皮的経路によって、対象に直接注入することができる。いくらかのモノクローナル抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）またはＸｏｌａｉｒ（オマリズマブ）、ならびに類似の投与レジメン（即ち、処方および／または用量および／または投与プロトコル）が本発明の組成物と共に使用され得るような臨床的状況において有効であることが示されている。

さらに、本発明の組成物は、他の有効な薬剤または化学療法もしくは他の免疫療法のような治療プログラムをさらに含んでなり得るかあるいはそれらとの組み合わせで、同時または連続のいずれかで、使用し得る。

有利なことに、本発明の方法は、有効量の分子、好ましくは、ＮＫ細胞活性を刺激することが可能なサイトカインの１回もしくは数回の注入をさらに含んでなる。この分子は、阻害型受容体を阻止するかまたはＮＫ細胞の活性化受容体を刺激する化合物との組み合わせで使用することができ、従って、ＡＤＣＣおよび治療用抗体の効力のより顕著な増大が生じる。前記分子またはサイトカインは、例えば、ＮＫ細胞増殖、ＮＫ細胞サイトカイン産生、細胞内遊離カルシウムレベル、もしくはリダイレクト死滅アッセイ（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ａｓｓａｙ）における標的細胞を溶解するＮＫ細胞の能力を増加することができる。従って、本発明はまた、処置を要する対象の疾患の処置の方法であって：ａ）前記対象に、化合物、好ましくは、阻害型受容体を阻止するかもしくはＮＫ細胞の活性化受容体を刺激する抗体またはそのフラグメントを投与すること；ｂ）前記対象に治療用抗体を投与すること；および（ｃ）前記対象にＮＫ細胞活性を刺激することが可能なサイトカインを投与することを含んでなる上記方法を提供する。そのようなサイトカインの例は、ＩＬ２（リサーチ・ダイアグノスティクス（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、ニュージャージー州、ＲＤＩ−２０２）、ＩＬ１２（リサーチ・ダイアグノスティクス（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、ニュージャージー州、ＤＩ−２１２）、ＩＬ１５（リサーチ・ダイアグノスティクス（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、ニュージャージー州、ＲＤＩ−２１５）、ＩＬ２１（アサノ（Ａｓａｎｏ）ら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２００２年；５２８：７０−６）などのインターロイキンまたはそれらの組み合わせを含む。

サイトカインは、任意の適切な投与レジメンに従って投与することができ、阻害型受容体を阻止するかまたはＮＫ細胞の活性化受容体を刺激する化合物の投与の前、同時および／または後、ならびに治療用抗体の投与の前、同時および／または後に投与してもよい。典型的な例では、サイトカインは、５〜１０日間の期間で連日投与され、サイトカインは、最初に、阻害型受容体を阻止するかもしくはＮＫ細胞の活性化受容体を刺激する化合物の最初の注入と同じ日に注入される。前記方法は、好ましくは、皮下経路によるサイトカインの１回もしくは２回の注入／日を含んでなる。

サイトカインの用量は、処置しようとする患者の状態に依存して選択される。好適な実施例では、相対的に低い用量のサイトカインを使用することができる。例えば、サイトカイン含有医薬組成物が連日皮下注入で使用される場合、ａの有効量は、典型的に１００万単位／平方メートル／日未満サイトカインである。好適な実施例では、ＩＬ−２は、５〜１０日間、１００万単位／ｍ^２未満の連日用量で、皮下に注入される。サイトカインの使用に関するさらなる詳細については、国際特許公開第ＰＣＴ／ＥＰ／０３１４７１６号パンフレットおよび米国特許出願第６０／４３５，３４４号明細書、表題「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｈａｖｉｎｇ ａｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＫ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｅ」（その開示内容は本明細書において参考として援用される）に記載されている。

本発明に従えば、宿主患者は、同種移植片の移植前に条件付けられる。条件付けは、致死未満、致死あるいは致死過剰（ｓｕｐｒａｌｅｔｈａｌ）条件下で、例えば、全身照射（ＴＢＩ）ならびに／または骨髄減少もしくは骨髄切除および免疫抑制剤による処置によって、行うことができる。標準的なプロトコルに従えば、致死照射線量は７〜９．５Ｇｙ ＴＢＩの範囲内であり、致死未満線量は３〜７Ｇｙ ＴＢＩの範囲内であり、致死過剰線量は９．５〜１６Ｇｙ ＴＢＩの範囲内である。

プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、Ｔ細胞に対するモノクローナル抗体、例えば、ＯＫＴ３、およびヒトリンパ球（抗リンパ球グロブリン−−ＡＬＳ）もしくは胸腺細胞（抗胸腺細胞グロブリン−−ＡＴＧ）に対する抗血清のような拒絶反応を制御するために移植において使用される免疫抑制剤、またはそのような薬剤の組み合わせを、本発明に従って使用することができる。本発明に従って使用することができる骨髄切除剤の例には、ブスルファン、ジメチルミレラン（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｍｙｌｅｒａｎ）およびチオテパがある。

実施例
ヒトＮＫクローンの調製。ネガティブ抗ＣＤ３イムノ−磁気選択（ミロテニー（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ））によりＴ細胞を枯渇した血中単核細胞を、限界希釈条件下でプレート化し、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）（バイオクロムＫＧ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＫＧ）、ベルリン、独国）で活性化し、インターロイキン（ＩＬ）−２（カイロンＢ．Ｖ．（Ｃｈｉｒｏｎ Ｂ．Ｖ．）、アムステルダム、蘭国）および照射されたフィーダー細胞と共にインキュベートする。クローニング効率は、すべてのドナーにおいて等価であり、１０個のプレート化したＮＫ細胞において５個中１個〜１０個中１個の間の範囲である。クローニングしたＮＫ細胞を、１０：１のエフェクター：標的比での既知のＨＬＡタイプのエプスタイン・バール（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ウイルス形質転換Ｂリンパ芽球様細胞系統に対する標準的な^５１Ｃｒ遊離細胞障害性によって、アロ反応性についてスクリーニングする。＝３０％溶解を示すクローニングをアロ反応性と評価した。原則として、クローンは、＜５％または＞４０％溶解のいずれかを示す。

細胞障害性実験
ＮＫクローンの細胞障害活性を、標準的な４時間５１Ｃｒ放出アッセイによって評価し、ここで、エフェクターＮＫ細胞を、ＮＫ細胞溶解に対する感受性について既知のＣｗ３またはＣｗ４陽性ＥＢＶ細胞系統（ＣＤ２０陽性）に対して試験した。すべての標的を、マイクロ滴定プレートのウェルあたり５０００個の細胞で使用し、標的比に対するエフェクター（ＮＫ細胞クローン）を図１に示す。特定の実験では、治療用キメラ抗ＣＤ２０リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ、アイデック（Ｉｄｅｃ））を、５μｇ／ｍｌで、エフェクター標的混合物に添加する。

この実験は、アロ反応性ＮＫ細胞のみが細胞を溶解する能力を提示することを示した。非アロ反応性ＮＫと共に使用した場合、抗体単独では、細胞溶解に対する効果を有さなかった。細胞とアロ反応性ＮＫ細胞および抗体の両方とのインキュベーションは、溶解の速度を約３倍増加し、次いで、アロ反応性ＮＫ細胞の細胞障害性を増加する。

ヒトＥＢＶ系統移植マウスの調製
３．５Ｇｙ照射ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウス（チャールズ・リバー・イタリア（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｉｔａｌｉａ）、Ｃａｌｃｏ、イタリア）に、２×１０^７ヒトＥＢＶ系統細胞を与えた。これらのマウスは、２週間以内に死亡し、ＥＢＶ系統細胞による広範な骨髄および脾臓浸潤を示した。

アロ反応性ＮＫ細胞＋ＡＤＣＣによるマウスの救出
６時間の輸注のＥＢＶ系統マウスに、多様なＥ：ＴでＥＢＶ系統に対してアロ反応性であるヒトＮＫ細胞（または対照非アロ反応性細胞）を、ヒトでのＫｇ用量あたり同量で、臨床的に利用可能なヒト化抗ＣＤ２０抗体を伴うもしくは伴わずに、与える。アロ反応性ＮＫ細胞単独は、それらを１：２５のＥ：Ｔ比で使用する場合、１００％のマウスを救出するが、１：１００のような低い比では、救出しない。本発明者らは、１：１００比のアロ反応性ＮＫ細胞と、抗ＣＤ２０抗体とを組み合わせる場合、本発明者らは、アロ反応性ＮＫ細胞の治療可能性の４倍の増加を観察する（１：１００比のアロ反応性ＮＫ細胞を受容した１００％のマウスが生存した）。（図２）

参考文献
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コロンナＭ（Ｃｏｌｏｎｎａ Ｍ）、ボルセリノＧ（Ｂｏｒｓｅｌｌｉｎｏ Ｇ）、ファルコＭ（Ｆａｌｃｏ Ｍ）、フェラーラＧＢ（Ｆｅｒｒａｒａ ＧＢ）、ストロミンガーＪＬ（Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ ＪＬ） （１９９３ｂ）「ＨＬＡ−Ｃ ｉｓ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｌｉｇａｎｄ ｔｈａｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｌｙｓｉｓ ｂｙ ＮＫ１−ａｎｄ ＮＫ２−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ」Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：１２０００−４
ガイセルハートＡ（Ｇｅｉｓｅｌｈａｒｔ Ａ）、ノイＳ（Ｎｅｕ Ｓ）、ブクホルツＦ（Ｂｕｃｈｈｏｌｚ Ｆ）、ラングＰ（Ｌａｎｇ Ｐ）、ナイサンマーＤ（Ｎｉｅｔｈａｍｍｅｒ Ｄ）、ハンドグレティンガーＲ（Ｈａｎｄｇｒｅｔｉｎｇｅｒ Ｒ）（１９９６−９７）「Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ５６＋ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｂｙ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ」Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎ １５：２２７−３３
ハンドグレティンガーＲ（Ｈａｎｄｇｒｅｔｉｎｇｅｒ Ｒ）、ウェルテＢ（Ｗｅｌｔｅ Ｂ）、ドファーＲ（Ｄｏｐｆｅｒ Ｒ）、ナイサンマーＤ（Ｎｉｅｔｈａｍｍｅｒ Ｄ）（１９９４年）「Ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ５６＋ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔ＋ ｓｕｂｓｅｔ」Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ａｎａｌ ８：４４３−６
カリＫ（Ｋａｒｒｅ Ｋ）、リュンゲルンＨＧ（Ｌｊｕｎｇｇｒｅｎ ＨＧ）、ピオンテックＧ（Ｐｉｏｎｔｅｋ Ｇ）、キーススリングＲ（Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇ Ｒ）、（１９８６年）「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈ−２−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｖａｒｉａｎｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔｓ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｅｎｃｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ」Ｎａｔｕｒｅ ３１９：６７５−８
カリＫ（Ｋａｒｒｅ Ｋ）（２００２）「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． Ａ ｐｅｒｆｅｃｔ ｍｉｓｍａｔｃｈ」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９５：２０２９−３１
ラニーアＬＬ（Ｌａｎｉｅｒ ＬＬ）、レＡＭ（Ｌｅ ＡＭ）、フィリップスＪＨ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ＪＨ）、ワーナーＮＬ（Ｗａｒｎｅｒ ＮＬ）、バブコックＧＦ（Ｂａｂｃｏｃｋ ＧＦ）（１９８３年）「Ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｅｕ−７ （ＨＮＫ−１） ａｎｄ Ｌｅｕ−１１ （ＮＫ−１５） ａｎｔｉｇｅｎｓ」Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３１：１７８９−９６
ラニーアＬＬ（Ｌａｎｉｅｒ ＬＬ）（１９９８年）「ＮＫ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６：３５９−９３
モレッタＡ（Ｍｏｒｅｔｔａ Ａ）、モレッタＬ（Ｍｏｒｅｔｔａ Ｌ）（１９９７年）「ＨＬＡ ｃｌａｓｓ Ｉ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：６９４−７０１
オーレンＣ（Ｏｈｌｅｎ Ｃ）、クリングＧ（Ｋｌｉｎｇ Ｇ）、ホグランドＰ（Ｈｏｇｌｕｎｄ Ｐ）、ハンソンＭ（Ｈａｎｓｓｏｎ Ｍ）、スキャンゴスＧ（Ｓｃａｎｇｏｓ Ｇ）、ビーベリッヒＣ（Ｂｉｅｂｅｒｉｃｈ Ｃ）、ジェイＧ（Ｊａｙ Ｇ）、カリＫ（Ｋａｒｒｅ Ｋ）（１９８９年）「Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｇｒａｆｔ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｈ−２ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｉｎ ｄｏｎｏｒ ｍｉｃｅ」Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：６６６−８
レイベッチＪＨ（Ｒａｖｅｔｃｈ ＪＶ）およびボランＳ（Ｂｏｌｌａｎｄ Ｓ）（２００１年）「ＩｇＧ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９、２７５−２９０
ルゲリＬ（Ｒｕｇｇｅｒｉ Ｌ）、カパンニＭ（Ｃａｐａｎｎｉ Ｍ）、カスッチＭ（Ｃａｓｕｃｃｉ Ｍ）、ボルピＩ（Ｖｏｌｐｉ Ｉ）、トスティＡ（Ｔｏｓｔｉ Ａ）、ペルチオＫ（Ｐｅｒｒｕｃｃｉｏ Ｋ）、アーバニＥ（Ｕｒｂａｎｉ Ｅ）、ネグリンＲＳ（Ｎｅｇｒｉｎ ＲＳ）、マーテリＭＦ（Ｍａｒｔｅｌｌｉ ＭＦ）、ヴィーラーディＡ（Ｖｅｌａｒｄｉ Ａ）（１９９９年）「Ｒｏｌｅ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ＨＬＡ−ｍｉｓｍａｔｃｈｅｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ」Ｂｌｏｏｄ ９４：３３３−９
ルゲリＬ（Ｒｕｇｇｅｒｉ Ｌ．）、カパンニＭ（Ｃａｐａｎｎｉ Ｍ．）、アーバニＥ．（Ｕｒｂａｎｉ Ｅ．）、ペルチオＫ（Ｐｅｒｒｕｃｃｉｏ Ｋ．）、シュロムチックＷＤ（Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ Ｗ．Ｄ．）、トスティＡ（Ｔｏｓｔｉ Ａ．）、ポサティＳ（Ｐｏｓａｔｉ Ｓ．）、ロイゲイアＤ（Ｒｏｇａｉａ Ｄ．）、フラソーニＦ（Ｆｒａｓｓｏｎｉ Ｆ．）、アバーサＦ（Ａｖｅｒｓａ Ｆ．）ら、（２００２年）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｄｏｎｏｒ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｍｉｓｍａｔｃｈｅｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９５、２０９７−２１００
ティモネンＴ（Ｔｉｍｏｎｅｎ Ｔ）、レイノルズＣＷ（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ＣＷ）、オルタルドＪＲ（Ｏｒｔａｌｄｏ ＪＲ）、ハーバーマンＲＢ（Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ ＲＢ）、（１９８２年）「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｒａｔ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ５１、２６９−７７
バリアンテＮＭ（Ｖａｌｉａｎｔｅ ＮＭ）、リーネルトＫ（Ｌｉｅｎｅｒｔ Ｋ）、シリングＨＧ（Ｓｈｉｌｌｉｎｇ ＨＧ）、スミッツＢＪ（Ｓｍｉｔｓ ＢＪ）、パーハムＰ（Ｐａｒｈａｍ Ｐ）（１９９７年ａ）「Ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ： ｋｅｅｐｉｎｇ ｐａｃｅ ｗｉｔｈ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ」Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ １５５：１５５−６４
バリアンテＮＭ（Ｖａｌｉａｎｔｅ ＮＭ）、パーハムＰ（Ｐａｒｈａｍ Ｐ）（１９９７年ｂ）「Ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ，ＨＬＡ ｃｌａｓｓ Ｉ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ａｎｄ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ」Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ３：２２９−３５
ザーリングＪＭ（Ｚａｒｌｉｎｇ ＪＭ）、クラウズＫＡ（Ｃｌｏｕｓｅ ＫＡ）、ビディソンＷＥ（Ｂｉｄｄｉｓｏｎ ＷＥ）、クンＰＣ（Ｋｕｎｇ ＰＣ）、（１９８年１）「Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７、２５７５−８０

ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞に対するアロ反応性または非アロ反応性ヒトＮＫ細胞によるＡＤＣＣ。ＡＤＣＣはアロ反応性ＮＫ細胞に関してさらに強力である。 アロ反応性ＮＫ細胞およびＲｉｔｕｘａｎによるＥＢＶリンパ増殖性疾患からのＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスの救出。Ｒｉｔｕｘａｎ単独ではＮＯＤ−ＳＣＩＤにおいて効果を有さない。アロ反応性ＮＫは、１個のＮＫ細胞対２５個のＥＢＶ標的細胞の割合を使用する場合、ＥＢＶ形質転換癌細胞系統によって誘発される白血病からＮＯＤ ＳＣＩＤを救出する。１個のＮＫ対１００個のＥＢＶ標的の割合を使用する場合、マウスは救出されない。Ｒｉｔｕｘａｎと組み合わせる場合、エフェクターの後者の割合は、マウスを救出するのに十分である。

Claims (33)

1. 処置を要するヒト対象における疾患の処置の方法であって、
   ａ）前記対象にアロ反応性ナチュラルキラー細胞を投与すること；次いで
   ｂ）前記対象にＣＤ１６により結合され得る治療用抗体を投与すること、
   を含んでなる、方法。
2. 前記治療用抗体がヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分を有する、請求項１に記載の方法。
3. 前記治療用抗体がモノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求項２に記載の方法。
4. 前記治療用抗体がキメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体またはそのフラグメントである、請求項２または３に記載の方法。
5. 前記治療用抗体がリツキシマブである、請求項４に記載の方法。
6. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも５％を含んでなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
7. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも３０％を含んでなる、請求項６に記載の方法。
8. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも５０％を含んでなる、請求項７に記載の方法。
9. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも９０％を含んでなる、請求項８に記載の方法。
10. 前記治療用抗体および前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞が前記対象に同時に投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記治療用抗体が前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞の前に前記対象に投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
12. 前記疾患が癌、感染性または免疫疾患である、請求項１に記載の方法。
13. ＣＤ１６によって結合され得る治療用抗体、およびアロ反応性ナチュラルキラー細胞を含んでなる医薬組成物。
14. 前記治療用抗体がヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分を有する、請求項１３に記載の組成物。
15. 前記治療抗体がモノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求項１４に記載の組成物。
16. 前記治療用抗体がヒト、ヒト化、もしくはキメラ抗体またはそのフラグメントである、請求項１４または１５に記載の組成物。
17. 前記治療用抗体がリツキシマブである、請求項１６に記載の組成物。
18. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも５％を含んでなる、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
19. 前記活性アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも３０％を含んでなる、請求項１８に記載の組成物。
20. 前記活性アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも５０％を含んでなる、請求項１９に記載の組成物。
21. 前記活性アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも９０％を含んでなる、請求項２０に記載の組成物。
22. 治療用抗体処置を受ける対象のＡＤＣＣを増加させる方法であって、前記抗体がＣＤ１６によって結合され得るものであり、前記治療用抗体の投与の前、同時または後に、ＡＤＣＣを増加するのに十分な量のアロ反応性ナチュラルキラー細胞を前記対象を投与することを含んでなる、方法。
23. 対象における治療用抗体処置の有効性を増加する方法であって、前記抗体がＣＤ１６に結合することが可能なものであり、前記治療用抗体の投与の前、同時または後に、前記治療用抗体の有効性を増加するのに十分な量のアロ反応性ナチュラルキラー細胞を前記対象に投与することを含んでなる、方法。
24. 前記治療用抗体がヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃ部分を有する、請求項２２または２３に記載の方法。
25. 前記治療抗体がモノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求項２４に記載の方法。
26. 前記治療用抗体がヒト、ヒト化、もしくはキメラ抗体またはそのフラグメントである、請求項２４または２５に記載の方法。
27. 前記治療用抗体がリツキシマブである、請求項２６に記載の方法。
28. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも５％を含んでなる、請求項２２〜２７のいずれか１項に記載の方法。
29. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも３０％を含んでなる、請求項２８に記載の方法。
30. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも５０％を含んでなる、請求項２９に記載の方法。
31. 前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞がアロ反応性ドナー対レシピエントナチュラルキラー細胞の少なくとも９０％を含んでなる、請求項３０に記載の方法。
32. 前記治療用抗体および前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞が前記対象に同時に投与される、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記治療用抗体が前記アロ反応性ナチュラルキラー細胞の前に前記対象に投与される、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
    
    

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