JP2006525291A - １−アリール−３−（インドール−５−イル）プロパ−２−エン−１−オン、該化合物を含む組成物、及びそれらの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、新規な化合物に関し、とりわけ新規な１−アリール−３−（インドール−５−イル）プロパ−２−エン−１−オン、それを含む組成物、及びその使用に関する。
本発明は特に治療活性、とりわけ癌に有用な新規な置換１−アリール−３−（インドール−５−イル）プロパ−２−エン−１−オンに関する。
【化１】

Description

本発明は、新規な化合物に関し、とりわけ、新規な１−アリール−３−（インドール−５−イル）プロパ−２−エン−１−オン、それらを含む組成物、及び医薬としてのそれらの使用に関する。

より詳しくは、本発明は抗癌活性、とりわけチューブリンの重合抑制活性を示す新規な特定の１−アリール−３−（インドール−５−イル）プロパ−２−エン−１−オンに関する。

１−アリール−３−（インドール−５−イル）プロパ−２−エン−１−オンは、フェニル環がインドールで置き換わったカルコン類のサブクラスを表す。一般に、カルコン類は、一世紀以上にわたって広範囲に文献に記載されている。しかしながら、数百の刊行物がカルコン類の治療用途を対象にしているが、腫瘍にそれらを使用することを言及しているものは少ない。

腫瘍にカルコン類を使用することを記載した文献の中から、下記の特許と刊行物を挙げることができる。

ＷＯ ０１／７２９８０は、抗癌と抗炎症の活性を示す置換カルコン類を開示している。

ＷＯ ９９／２２７２８は、特にかつ一般的に、ステロイドホルモンに対する５α−還元酵素の活性を抑制するため、脱毛症、禿頭症、肥満症、皮膚病、前立腺癌、及び乳癌のような病状の治療のための置換カルコン類をクレームしている。

ＷＯ ９９／００１１４は、そのプロパ−２−エン−１−オン鎖が飽和又は不飽和でよいカルコン類の使用をクレームしている。

ＷＯ ９８／５８９１３は、増殖抑制作用を有する１−（２−ヒドロキシフェニル）−３−アリール−プロパ−２−エン−１−オンから誘導されたカルコン類を記載している。

ＥＰ ２８８７９４−Ｂ１は、１−アリール−３−（４−Ｘ−フェニル）プロパ−２−エン−１−オン（ここでＸは置換基ＮＲ₂又はＮＨＣＯＲ，Ｒ＝アルキル）を腫瘍に使用することをクレームしている。

ＷＯ ９１／１７７４９は、特定のカルコン類を用いた癌の治療法をクレームしている。これらのカルコン類は、非常に一般的に記載されクレームされている。

Ｍｉｃｈａｅｌ Ｌ． Ｅｄｗａｒｄｓらは、文献「Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９０，Ｖｏｌ．３３，ｐｐ１９４８−１９５４」の中で、抗有糸分裂剤として使用可能なカルコン類を紹介している。カルコン類が示されインビトロで癌細胞系において試験されている。

Ｓｙｌｖｉｅ Ｄｕｃｋｉらは、文献「Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １９８８，ｖｏｌ．８，ｐｐ１０５１−１０５６」で、抗有糸分裂活性を有するカルコン類を紹介している。彼らの研究は、上記引用のＭｉｃｈａｅｌ Ｌ．Ｅｄｗａｒｄｓらの研究を基礎にしている。著者は、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ置換基を４−メトキシ置換基と３−ヒドロキシ置換基で置き換えることが、とりわけＫ５６２細胞に関して、抗有糸分裂活性を相当に改良することを観察している。

しかしながら、驚いたことに、１−アリール−３−（インドール−５−イル）プロパ−２−エン−１−オン単位を有する生成物が、高いチューブリンの重合抑制活性を有することが見出されている。

さらに、これらの生成物は、インビボで壊死を非常に大きく誘発し、このことは、癌の治療のための有効な薬剤の今後の開発にとって非常に望ましい結果である。

また、本発明の生成物を用いると、テスト生成物の注入から数分以内に、腫瘍の壊死が生じ、その腫瘍の中心が一日以内に完全に壊され、そして周辺の正常細胞には明らかな作用がないことが観察されている。したがって、これらの生成物は、手術できない腫瘍患者、即ち、（ｉ）患者の当面の延命にとって、又は（ii）患者のクオリティ・オブ・ライフへの起こり得る影響にとって、外科切除が非常に高い危険性を与える（無効）患者の治療に有用であることができる。

さらに、本発明の生成物は、生体によって概ね迅速に代謝され、長期間にわたる影響を制限する。

与えられたもう１つの課題は、カルコン類の生成物の検討の際に遭遇することが多い不利を被ることなく、上記の全ての利点を有する生成物を得ることにあった。これらの不利とは、（ｉ）心毒性の問題であり、これは具体的には、Ｈｅｒｇリセプタの抑制を測定することによって評価することができる、（ii）最終的には、程度は比較的低いが変異原性の問題であり、これは具体的には、Ａｍｅｓテストによって評価することができる。

これまでに、本出願人は、上記の分野において相当な研究努力を注いできたが、その知見から、これらの全ての基準を同時に満足する２つの非常に小さな生成物の類を、ようやく特定することができた。

これらの生成物は、次式（Ｉ）に対応する：

ここで、
ａ）Ｙは、ハロゲン、メチルからなる群より選択され、
ｂ）Ａｒは、下記の群から選択され、

ｃ）Ｒは次の通りである：
−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＨ。

本発明の生成物は異性体を含む。異性体のうち、Ｚ異性体とＥ異性体は本発明の一部を形成する。Ｅ異性体が好ましい。

好ましくは、ＹはＣＨ₃である。

さらに、この類の中で２つの生成物が、注目できる特質とりわけ溶解性の問題に関する付加的な利点のため区別できる。この溶解性の問題は、通常、重大な副作用を引き起こしかねないプロドラッグ又はガレヌス製剤を調製することによって、不満足にしか解決されていない。

これらの２つの生成物とは、次のものである。
- Ｅ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノン：

及び
- Ｅ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノン：

本発明の生成物の価値は、医薬的に許容される賦形剤と組み合わせて、医薬組成物の形態に調製することによって有利に高めることができる。

本発明による生成物は、病的状態の治療、とりわけ癌の治療に有用な医薬の製造に使用することができる。

また、本発明は、選択される投与形態に応じた医薬的に許容される賦形剤との組み合わせの、本発明の化合物を含む治療用組成物に関する。この医薬組成物は、固体又は液体の形態、あるいはリポソームの形態で提供することができる。

固体組成物としては、記載された散剤、ゼラチンカプセル剤、及び錠剤が挙げられる。経口剤型には、胃の酸性媒体から保護される固体形態もまた挙げることができる。この固体形態に使用されるキャリヤは、とりわけ、燐酸塩や炭酸塩のような無機キャリヤ、又はラクトース、セルロース、スターチ、又はポリマーのような有機物キャリヤが挙げられる。液体形態には、液剤、懸濁剤、又は分散剤が挙げられる。それらは、分散性キャリヤとして、水、又は有機溶媒（エタノールやＮＭＰ等）、あるいは界面活性剤と溶媒との混合物、又は錯化剤（ｃｏｍｐｌｅｘｉｎｇ ａｇｅｎｔ）と溶媒との混合物を含む。

液体形態は、好ましくは注射可能であり、したがって、こうした用途に受け入れられる処方を有するものとなるであろう。

注射による投与の許容可能なルートは、静脈内、腹腔内、筋肉内、及び皮下のルートが挙げられ、静脈内ルートが好ましい。

投与される本発明化合物の用量は、投与ルート、患者、及び患者の状態に応じて、医者によって調整される。

本発明の化合物は、単独で、又は別な抗癌剤との混合物として投与することができる。あり得る併用薬を下記に示す。
・アルキル化剤、とりわけ、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド、クロランブシル、ブスルファン、チオテパ、プレドニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ステプトゾトシン、デカルバジン、テモゾロミド、プロカルバジン、及びヘキサメチルメラミン
・白金誘導体、とりわけ、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン
・抗生物質剤、とりわけ、ブレオマイシン、マイトマイシン、ダクチノマイシン
・抗微小管（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ）剤、とりわけ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンオレルビン、タキソイド（パクリタキセル、ドセタキセル）
・アントラサイクリン、とりわけ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、ロソキサントロン
・グループＩとIIのトポイソメラーゼ、例えば、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、及びトムデックス
・フルオロピリミジン、例えば、５−フルオロウラシル、ＵＦＴ、フロクスウリジン
・シチジン類似体、例えば、５−アザシチジン、シタラビン、ゲムシタビン、６−メルカプトムリン、６−チオグアニン
・アデノシン類似体、例えば、ペントスタチン、シタラビン、又はフルダラビンホスフェート
・メトトレキサートとホリン酸
・種々の酵素と化合物、例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ、ヒドロキシウレア、トランス−レチノイン酸、スラミン、デクスラゾキサン、アミホスチン、ハーセプチン、エストロゲン、アンドロゲンホルモン
・抗血管新生剤、例えば、コンブレタスタチン又はコルヒチンの誘導体及びそれらのプロドラッグ

また、本発明の化合物を放射線療法と組み合わせることもできる。これらの治療は、同時に、別々に、又は順次に行うことができる。この治療は、医者によって治療される患者に適合されるであろう。

本発明による生成物は、血管組織に由来する細胞群の崩壊を促進することができる。より詳しくは、本発明の生成物は、癌細胞の成長を抑制し、同時に存在する血管を破壊する最初の治療用途に用いることができる。血管新生の抑制は、下記の細胞脱離テストによって定量される。

血管新生抑制の定量を可能にするテスト
内皮細胞の脱離を定量するテストを、“インビトロ”の活性に関して生成物を選択するために開発した。内皮細胞の脱離を定量するためのこのテストは、底が好ましくはゼラチン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンから選択された結合剤で覆われた平板培地に、内皮細胞を植え、培養の後、テストされるべき化合物を含む培地でサプリメントされ、次いでその細胞が蛍光物質で標識され、脱離した細胞が洗浄除去され、残存する細胞の蛍光が蛍光光度計でカウントされることを特徴とする。

このテストは、好ましくは、フィブロネクチン、ビトロネクチン、又はゼラチンから選択された結合剤を主成分とする基体の上で培養された内皮細胞の脱離を測定することからなる。好ましくは、例えば、９６ウェルを含む平板培地に細胞を植えた１日後、テストすべき化合物を含んで血清を含まない培地にその培地を置き換える。同様の調製を、３つの異なる濃度（０．１、 ０．３、 及び０．６μＭ）で６回、及び抗血管新生剤生成物を添加しない６回の対照について行う。テストされるべき物質で処理した２時間後、０．１％ ＢＳＡでサプリメントした培地の中で、細胞をカルセイン−ＡＭ（１．６μｇ／ｍｌ）で標識する。脱離した細胞は、０．１％ウシ血清アルブミンを含む培地で洗浄除去し、各ウェルに１００μｌの培地を添加する。残存する細胞の蛍光を蛍光光度計でカウントする。得られたデータは、対照（未処理の細胞）との比較で表す。

インビトロにおける内皮細胞の脱離の評価は、次の仕方で定量する。ＨＤＭＥＣ細胞（Ｈｕｍａｎ Ｄｅｒｍａｌ Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ（ヒトの皮膚の微小血管の内皮細胞）, Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ, ｃ−１２２１０２）を、５％のウシ胎仔血清、増殖因子（ＥＧＦ１０ｎｇ／ｍｌ、ヒドロコルチゾン１μｇ／ｍｌ、ヘパリン入りの０．４％成長サプリメント）、及び抗生物質（アンホテラシン５０ｎｇ／ｍｌ、ゲンタマイシン５０μｇ／ｍｌ）を含むＥＣＧＭ−ＭＶ培地に培養する。脱離テストのため、フィブロネクチン（１０μｇ／ｍｌ）又はビトロネクチン（１μｇ／ｍｌ）又はゼラチンをプレコートしたきれいな底の９６ウェル平板培地（Ｃｏｓｔｅｒ）の中に５０００細胞のＨＤＭＥＣを植える。２時間後、その培地を、表示された生成物を含むＥＣＧＭ−ＭＶ ０．１％ ＢＳＡ培地と交換する。テスト濃度は、各生成物について０．１〜０．３μＭ、及び１μＭである。処理の２時間後、ＥＣＧＭ−ＭＶ ０．１％ ＢＳＡ培地の中のカルセイン（１．６μｇ／ｍｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）で１時間にわたって標識化する。次いで脱離した細胞をＥＣＧＭ−ＭＶ ０．１％ ＢＳＡ培地で洗浄除去し、１００μｌの培地を各ウェルに添加する。ウェルの基体に結合したままの細胞の蛍光を、蛍光光度計Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒ Ｐｌｕｓ（Ｔｅｃａｎ励起４８５ｎｍ、発光５３５ｎｍ）を用いてカウントする。データは、６つの異なるサンプルの平均であり、対照（未処理の細胞）の百分率として表す。

１５％以上の細胞脱離効果は有意であると考えられる。

本発明による生成物は、チューブリンの重合を抑制するのに有用であることができる。チューブリンの抑制は、インビトロで行うことができる。チューブリンのインビトロにおける抑制方法の例を以下に記載する。

チューブリンの重合抑制の評価
チューブリンは、公表された方法「Ｓｈｅｌａｎｓｋｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７０，７６５−７６８．Ｗｅｉｎｇａｒｔｅｎら，１９７５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７２，１８５８−１８６２」にしたがい、ブタの脳から精製される。簡単に言うと、脳を磨砕し、抽出バッファー中で遠心分離する。抽出物の上清に含まれるチューブリンは、ホスホセルロースＰ１１カラム（Ｗｈａｔｍａｎ）を用いたクロマトグラフィーによりＭＡＰｓ（Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ，微小管付随タンパク質）から分離される前に、３７℃での重合と４℃での解重合の２つの順次のサイクルに供される。このようにして分離したチューブリンは、純度が９５％を上回る。これを呼称ＲＢ／２の３０％グリセロールのバッファーに保存し、この組成は次の通りである：５０ｍＭ ＭＥＳ−ＮａＯＨ［２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸］、ｐＨ６．８；０．２５ｍＭ ＭｇＣｌ₂；０．５ｍＭ ＥＧＴＡ；３０％（ｖ／ｖ）グリセロール、０．２ｍＭ ＧＴＰ（グアノシン−５'−トリホスフェート）。

チューブリンの微小管への重合は、次のように比濁法によってモニターされる:１ｍＭのＧＴＰと６ｍＭのＭｇＣｌ₂を添加したＲＢ／２の３０％グリセロールのバッファー中で、チューブリンを１０μＭ（１ｍｇ／ｍｌ）の濃度に調整する。温度調節キュベットホルダーを備えたＵＶＩＫＯＮ９３１分光光度計（Ｋｏｎｔｒｏｎ）の中に配置した１ｃｍの光路長を有するキュベットの中で、温度を６℃から３７℃に高めることによって、重合を誘発させる。溶液の濁度の増加を３５０ｎｍでモニターする。

生成物をＤＭＳＯ中に１０ｍＭ溶解させ、重合前にいろいろな濃度（０．５〜１０μＭ）でチューブリン溶液に添加する。ＩＣ₅₀は、５０％の割合で重合を抑制する生成物の濃度と定義する。ＩＣ₅₀が３μＭ以下の生成物は非常に活性であると考えられる。

Ｈｅｌａ腫瘍細胞又は内皮細胞ＨＤＭＥＣの増殖抑制の評価
Ｈｅｌａ又はＨＤＭＥＣ細胞の増殖を、次のようにして¹⁴Ｃチミジンの取り込みを測定することによって評価する。Ｈｅｌａ細胞（ヒトに由来する上皮腫瘍細胞）を、１０％のウシ胎仔血清と抗生物質（１％ペニシリン、１％ストレプトマイシン）を含むＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）で培養する。増殖テストを行うため、細胞を１ウェルあたり５０００細胞の割合で９６ウェルＣｙｔｏｓｔａｒミクロプレート（Ａｍｅｒｓｈａｍ）に植える。次いで、¹⁴Ｃチミジン（０．１μＣｉ／ウェル）と評価すべき生成物を添加する。１０μＭ以下のいろいろな濃度で生成物を用い、ＤＭＳＯ（生成物を可溶性にするために用いる溶媒）は、培地中で０．５％を超えないようにする。３７℃での培養で４８時間後、細胞中に取り込まれた放射能を、ＴＲＩ−ＬＵＸカウンター（Ｗａｌｌａｃ）の中の平板培地をカウントすることによって測定する。ＩＣ₅₀は、未処理の対照と比較して、放射能が５０％低下する生成物の濃度と定義する。ＩＣ₅₀が１μＭ未満である生成物は細胞傷害性であると考えられる。

インビボにおける腫瘍壊死の評価
マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ，ＵＳＡ）より入手の種からＩＦＦＡ-ＣＲＥＤＯ（Ｄｏｍａｉｎｅ ｄｅｓ Ｏｎｃｉｎｓ，６９２１０ Ｌ'Ａｒｂｒｅｓｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）によって、あるいはＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（ＵＳＡ）より入手の種からＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｆｒａｎｃｅ（７６４１０ Ｓｔ Ａｕｂｉｎ ｌｅｓ Ｅｌｂｅｕｆ，Ｆｒａｎｃｅ）によって飼育する。マウスは、試験の開始時には初めに１８ｇを上回る重さがある。マウスは、食物（ＵＡＲ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ １１３，Ｖｉｌｌｅｍｏｉｓｓｏｎ，９１１６０ Ｅｐｉｎａｙ ｓｕｒ Ｏｒｇ，Ｆｒａｎｃｅ）と水を自由に摂取する。

用いた腫瘍は、現在、本発明者らの研究所に移植している。これらの腫瘍はいずれもＮａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）の冷凍腫瘍貯蔵庫のＦｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆａｃｉｌｉｔｙ（Ｆｒｅｄｒｉｃｋ，ＭＤ，ＵＳＡ）、又はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）にある。

腫瘍の移植、化学療法、及びデータ解析の手法は、詳細に発表されている（Ｃｏｒｂｅｔｔら、１９８２ａ；Ｃｏｒｂｅｔｔら、１９８２ｂ）。

要約すると、１つの実験に必要な動物が集められ、日数０（ゼロ）で左右相称に（ｂｉｌａｔｅｒａｌｌｙ）移植される。充実性腫瘍の成長は、所望のサイズまで自由に進行する。次いで、マウスは、溶液中のテスト化合物の静脈注射の処置をされる。

腫瘍サンプルの採取は、通常（必須ではない）、処置後の２４時間に行われる。

脳を転位させてマウスを絶命させる。移植した腫瘍、それを覆う皮膚、及び周辺組織を回収し、１０％（ｖ／ｖ）ホルムアルデヒド（Ｃａｒｌｏ Ｅｒｂａ，Ｖａｌ ｄｅ Ｒｅｕｉｌ，Ｆｒａｎｃｅ）の中に保存する。

次いでサンプルを処置し、セクションに切断し、ヘマトキシリン、エオシン、及びサフランイエローで染色し、次いで肉眼的に検査する。腫瘍の壊死（壊死±変性）は、０から５までの範囲の等級を用いて鏡検して評価する。
０＝ 壊死は存在しない
１＝ ごく僅か ＜５％
２＝ 少ない ５〜２５％
３＝ 中程度 ２５〜５０％
４＝ 顕著 ５０〜７５％
５＝ 多量 ＞７５％

テスト化合物の投与の２４時間後に腫瘍壊死に対して付された値は、生成物に応じた壊死にもっぱら対応するものであり、これは実験に起因する全ての既存の壊死から確かに区別することができる。

実験による壊死を、未処理の対照に基づいて評価した。

腫瘍モデルは、Ｃ５１ネズミ腺癌である。この結腸腫瘍は、グレードIIIの粘膜結腸腺腫である。これは、雌性のＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、１８日ごとの連続皮下継代によって維持される。実験は、雌性のＢＡＬＢ／ｃマウスで行なわれた。

結果
記載の条件下で、次の結果が下記の実施例について得られた。
実施例２：
選択の投薬：３５ｍｇ／ｋｇ − グレード５の壊死

参照文献
ＣＯＲＢＥＴＴ，Ｔ．Ｈ．，ＬＥＯＰＯＬＤ，Ｗ．Ｒ．，ＤＹＫＥＳ，Ｄ．Ｊ．，ＲＯＢＥＲＴＳ，Ｂ．Ｊ．，ＧＲＩＳＷＯＬＤ，Ｄ．Ｐ．，Ｊｒ．ａｎｄ ＳＣＨＡＢＥＬ，Ｆ．Ｍ．，Ｊｒ．，Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｔｒｉａｚｉｎｅ ａｎｔｉｆｏｌａｔｅ （ＮＳＣ １２７７５５）．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９８２ａ，４２，１７０７−１７１５．
ＣＯＲＢＥＴＴ，Ｔ．Ｈ．，ＲＯＢＥＲＴＳ，Ｂ．Ｊ．，ＴＲＡＤＥＲ，Ｍ．Ｗ．，ＬＡＳＴＥＲ，Ｗ．Ｒ．，Ｊｒ．，ＧＲＩＳＷＯＬＤ，Ｄ．Ｐ．，Ｊｒ．ａｎｄ ＳＣＨＡＢＥＬ Ｆ．Ｍ．，Ｊｒ．，Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｂｌｅ ｔｕｍｏｒｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｔｏ ａｎｔｈｒａｃｅｎｅｄｉｏｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｌｏｎｅ ａｎｄ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｕｓｅｆｕｌ ａｇｅｎｔｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｐ．，１９８２ｂ，６６，１１８７−１２００．

定義
「ハロゲン」とはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩから選択される元素である。

一般式（Ｉ）のカルコン：

（ここに、Ａｒは先に定義されたものであり、Ｙはハロゲン原子と異なるものであり、ＲはインドールのＮＨ官能基を保護する基である）は、一般式（II）の芳香族ケトン（Ｙはハロゲン原子と異なるものである）と一般式（III）の芳香族アルデヒドを、スキーム（Ｉ）にしたがい「Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，３３，１９４８」に記載の条件下で結合させることによって製造することができる。

この操作は、一般に、ピペリジン、酢酸、及びモレキュラーシーブの存在下で、エタノールのようなアルコールの還流温度において、ソックスレー型装置において行われる。

一般式（II）のケトンと一般式（III）のアルデヒドの間の結合は、トリメチルシリル、トリエチルシリル、又はｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルのような保護基を用いて実施できることが理解されている。インドールのＮＨ官能基のための保護基の結合と開裂は、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （Ｗｉｌｅｙ ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ）」に記載の条件下で行うことができる。

一般式（III）の芳香族アルデヒドは市販されているか、または、文献に既述されている。

一般式（II）の芳香族ケトンは文献に記載されており、また、一般に、市販の対応する芳香族アルデヒドから製造することもできる。Ｙがメチル基の場合、その手順は、アルデヒドと適切に選択された有機金属試薬を反応させ、次いで「Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，３３，１９４８」に記載の条件下で得られたベンジルアルコールを酸化させることによって首尾よく行うことができる。

一般式（Ｉ）のカルコン：

（ここに、Ａｒは上記の通りであり、Ｒはハロゲン交換の条件下で置換されない置換基、Ｙはハロゲン原子、好ましくは臭素又はヨウ素原子である）は、ハロゲンの付加とその後のカルコンの脱ハロゲン化水素反応によって製造することができ、ここで、Ｙはスキーム（II）においてハロゲン原子である。インドールの窒素を例えばトリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、又はｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルによって保護する形態でこの一連の付加・脱離を行い、次いで脱保護することは、とりわけ有益である。Ｙがフッ素の場合、当業者には公知のように、シリル化された保護基の使用は推奨されない。

ハロゲン、好ましくは臭素又は塩素の付加は、一般に、クロロホルムや四塩化炭素のような溶媒中で０〜５０℃の温度において行う。脱ハロゲン化水素は、一般に、ジクロロメタンのような溶媒中で、トリエチルアミン又は水酸化ナトリウム又は炭酸カリウムのような有機又は無機塩基の存在下で、０℃から反応媒体の還流温度までの温度において行う。この脱ハロゲン化水素は、とりわけｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基の場合、使用される保護基に応じて、インドールの窒素の少なくとも部分的な脱保護を同時に伴うことができる。

一般式（Ｉ）のカルコン：

（ここに、Ａｒ、Ｒ、及びＹは本発明に一致する）は、置換基Ｒが水素原子である一般式（Ｉ）のカルコンのアルキル化によって製造することができる。この反応は、２つの段階で行われる。第１の段階において、例えば、ＮａＨ、ＬｉＨ、又はＫＨのようなアルカリ金属水素化物を利用してアルカリ金属塩の形態でインドールの窒素を活性化した後、２−ブロモエトキシ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシランのようなハロゲン化アルキルを、Ｒが２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチルである一般式（Ｉ）の生成物を生成させるために反応させる。第２の段階は、テトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムフルオリドのようなアルカリ金属フッ化物を利用して、トリメチルシリル保護基を開裂させ、Ｒが−ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨである本発明の生成物を生成させることからなる。

〔実施例〕
下記の実施例は、本発明の説明のために提示するものである。

実施例１： Ｅ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノン

段階１： ピペリジン２ｍｌと酢酸１ｍｌを含むエタノール１００ｍｌ中の２．２４ｇの１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロパノン（「Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，８（９），１０５１」にしたがって製造できる）と２．７６ｇの１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルインドール−５−カルボキシアルデヒド（「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２，６７（１７），６２５６−５９」にしたがって製造できる）を、３Åモレキュラーシーブ充填のソックスレーを載置した２５ｍｌの３つ口フラスコに順次に入れた。反応媒体を還流下で４８時間にわたって加熱した。冷却の後、反応媒体を減圧下で濃縮し、次いで酢酸エチル１００ｍｌに取り、有機相を水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上のフラッシュ・クロマトグラフィーと、シクロヘキサンと酢酸エチルの混合物（容量比７０／３０）を用いた溶出によって精製し、薄黄色のオイルの形態で、２．２ｇの純粋なＥ−２−メチル−３−［１−（１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノンを得た。これをそのまま次の段階に使用した。

段階２： ０．７ｇのＥ−２−メチル−３−［１−（１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノンをＴＨＦ１５ｍｌに溶かした。次いでメタノール１．５ｍｌとナトリウムメトキシド０．２５ｇを順次に添加した後、室温で１８時間にわたって反応媒体を撹拌した。減圧下で濃縮した後、反応媒体を酢酸エチル７５ｍｌと水３５ｍｌに取った。有機相をデカンテーションによって分離し、水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、ジクロロメタンとジイソプロピルエーテルの混合物（容量比５０／５０）を用いた溶出によって精製した後、オレンジ色のオイルの形態で、５０５ｍｇの純粋なＥ−２−メチル−３−（１−Ｈ−インドール−５−イル）−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノンを得た。この特性は下記の通りであった。
マススペクトル（ＥＩ）： ｍ／ｚ＝３５１
元素分析： Ｃ＝７１．２６％、Ｈ＝６．５４％、Ｎ＝３．７２％

段階３： ３６０ｍｇの水素化ナトリウム（オイル中６０％）を、０℃に冷やしたピリジン４０ｍｌ中の段階２で得られた１．４ｇのＥ−２−メチル−３−（１−Ｈ−インドール−５−イル）−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノンの溶液にゆっくりと添加した。ガスの発生が止まるまで０℃で１時間にわたって撹拌した後、９６０ｍｇの２−ブロモエトキシ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシランを添加し、反応媒体を６０℃で２時間にわたって加熱した。水８０ｍｌを添加した後、反応媒体を酢酸エチル５０ｍｌで３回抽出した。合一した有機相を水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で乾燥するまで濃縮した。得られた茶色のオイル状の残留物を、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、ジクロロメタンとジイソプロピルエーテルの混合物（容量比５０／５０）を用いた溶出によって精製した。このようにして１．５ｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチル）インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノンを黄色のオイルの形態で得、これを次の段階でそのまま使用した。

段階４： テトラヒドロフラン５０ｍｌの中の１．５ｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチル）インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノンの溶液を、テトラヒドロフラン中のテトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド１Ｍ溶液の２３．５ｍｌとともに室温で４８時間にわたって撹拌した。水２５ｍｌを添加した後、反応媒体を酢酸エチル５ｍｌで３回抽出した。合一した有機相を水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で乾燥するまで濃縮した。オレンジ色の残留物を、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、ジクロロメタンとエタノールの混合物（容量比９５／５）を用いた溶出、さらにイソプロパノールからの結晶化によって精製した。このようにして７５０ｍｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノンを得、この特性は次の通りであった。
マススペクトル（ＥＩ）： ｍ／ｚ＝３９５
元素分析： Ｃ＝６９．７２％、Ｈ＝６．２５％、Ｎ＝３．５３％
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝１１９℃

実施例２： Ｅ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）インドール−５−イル］−１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロペノン

段階１： アルゴン雰囲気下の２５０ｍｌの３つ口フラスコ内で、ＤＭＦ９０ｍｌとＤＭＳＯ１８ｍｌの中に５ｇのインドール−５−カルボキシアルデヒドを溶解させ、次いで反応媒体を０℃に冷やした。次いでオイル中６０％の水素化ナトリウム２．０６ｇを分割して添加し、次いで室温に戻しながら、ガス発生が止まるまで反応媒体を撹拌した。次いで（２−トリメチルシリルエチル）オキシメチルクロリド８．６ｇを滴状で注いだ後、反応媒体を室温で２０時間にわたって撹拌した。次いで反応媒体を水３００ｍｌと砕氷１００ｇの混合物の上に注いだ後、酢酸エチル１５０ｍｌで３回抽出した。合一した有機相を塩化ナトリウムの飽和水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で乾燥するまで濃縮した。得られた茶色のオイルを、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、シクロヘキサンと酢酸エチルの混合物（容量比７０／３０）を用いた溶出によって精製した。このようにしてオレンジ色のオイルの形態で９ｇの１−（２−トリメチルシリルエチル）オキシメチルインドール−５−カルボキシアルデヒドが得られ、これをそのまま次の段階で使用した。

段階２： ２．１ｇの１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロパノン（「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８１，４６（１４），２９６９−７１」にしたがって製造できる）と、ピペリジン２ｍｌと酢酸１ｍｌを含むエタノール１００ｍｌ中の２．７６ｇの１−（２−トリメチルシリルエチル）オキシメチルインドール−５−カルボキシアルデヒドを、還流下で加熱しながら９６時間にわたって、３Åモレキュラーシーブ充填のソックスレーを載置した２５０ｍｌの３つ口フラスコに順次に入れた。冷却の後、反応媒体を減圧下で濃縮し、１００ｍｌの酢酸エチルに取り、有機相を水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、シクロヘキサンと酢酸エチルの混合物（容量比７０／３０）を用いた溶出、さらにジイソプロピルエーテルからの結晶化によって精製した。白い結晶の形態で２ｇの純粋なＥ−２−メチル−３−［１−（２−トリメチルシリルエチル）オキシメチル−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロペノンを得た。この特性は次の通りであった。
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝９０℃

段階３： アルゴン雰囲気下の２５０ｍｌの３つ口フラスコ内で、４２ｍｌのＴＨＦに２ｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−トリメチルシリルエチル）オキシメチル−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロペノンを溶かし、次いでＴＨＦ中のテトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムフルオリドの１Ｍ溶液の４．３ｍｌを添加し、反応媒体を還流下で２０時間にわたって加熱した。減圧下で濃縮した後、反応媒体を酢酸エチル７５ｍｌと水７５ｍｌに取った。有機相をデカンテーションによって分離し、水洗し、硫酸マグネシウム上で乾かし、減圧下で乾燥するまで濃縮した。得られた赤色オイルを、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィー、シクロヘキサンと酢酸エチルの混合物（容量比７０／３０）を用いた溶出、さらにイソプロパノールからの結晶化によって精製した。このようにしてベージュ色の固体の形態で、４２０ｍｇの純粋なＥ−２−メチル−３−（１−Ｈ−インドール−５−イル）−１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロペノンが得られた。この特性は次の通りであった。
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝１４０℃

段階４： 実施例１の段階３の手順を踏襲し、但し、実施例１７で得られた６７１ｍｇのＥ−２−メチル−３−（１−Ｈ−インドール−５−イル）−１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロペノン、オイル中６０％の水素化ナトリウム１８０ｍｇ、ピリジン２０ｍｌ中の２−ブロモエトキシ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン４７９ｍｇから出発し、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、酢酸エチルとシクロヘキサンの混合物（容量比３０／７０）を用いた溶出による精製の後、黄色オイルの形態で、８３０ｍｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチル）インドール−５−イル］−１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロペノンが得られた。これをそのまま次の段階に使用した。

段階５： 実施例１の段階４の手順を２０時間にわたって踏襲し、但し、テトラヒドロフラン２５ｍｌ中の８３０ｍｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチル）インドール−５−イル］−１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロペノンとテトラヒドロフラン中のテトラブチルアンモニウムフルオリドの１Ｍ溶液の１３．５ｍｌから出発し、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィー、酢酸エチルとシクロヘキサンの混合物（容量比５０／５０）を用いた溶出、さらにイソプロピルエーテルからの結晶化によって精製した後、ベージュ色の粉末の形態で、３８５ｍｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）インドール−５−イル］−１−（３−メトキシ−４，５−メチレンジオキシフェニル）プロペノンが得られた。この特性は次の通りであった。
マススペクトル（ＥＩ）： ｍ／ｚ＝３７９
元素分析： Ｃ＝６９．８４％、Ｈ＝６．５０％、Ｎ＝３．６２％
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝８３℃

実施例３： Ｅ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノン

段階１： ４．８６ｇの１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロパノンと、ピペリジン５ｍｌと酢酸２．５３ｍｌを含むエタノール２８０ｍｌ中の６．１３ｇの１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルインドール−５−カルボキシアルデヒド（「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２，６７（１７），６２５６−５９」にしたがって製造できる）を、還流下で加熱しながら４８時間にわたって、３Åモレキュラーシーブ充填のソックスレーを載置した５００ｍｌの３つ口フラスコに順次に添加した。冷却の後、反応媒体を減圧下で濃縮し、次いで１００ｍｌの酢酸エチルに取り、有機相を水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、シクロヘキサンと酢酸エチルの混合物（容量比９０／１０）を用いた溶出によって精製した。黄色オイルの形態で２．３ｇの純粋なＥ−２−メチル−３−［１−（１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノンを得、これをそのまま次の段階に使用した。

段階２： ２．３ｇのＥ−２−メチル−３−［１−（１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノンを、テトラヒドロフラン５７ｍｌに溶かした。次いでメタノール５．７ｍｌとナトリウムメトキシド０．７３ｇを順次に加え、反応混合物を室温で２０時間にわたって撹拌した。減圧下で濃縮した後、その反応媒体を酢酸エチル７５ｍｌと水３５ｍｌに取った。有機相をデカンテーションによって分離し、水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧下で濃縮した。シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、酢酸エチルとシクロヘキサンの混合物（容量比３０／７０）を用いた溶出による精製の後、黄色のペーストの形態で１．５ｇの純粋なＥ−２−メチル−３−（１−Ｈ−インドール−５−イル）−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノンが得られた。この特性は次の通りであった。
マススペクトル（ＥＩ）： ｍ／ｚ＝３２１
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝５２〜５５℃

段階３： 例１の段階３の手順を踏襲し、但し、１ｇのＥ−２−メチル−３−（１−Ｈ−インドール−５−イル）−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノン、オイル中６０％の水素化ナトリウム２８０ｍｇ、及びピリジン３０ｍｌ中の２−ブロモエトキシ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン７５０ｍｇから出発し、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィーと、酢酸エチルとシクロヘキサンの混合物（容量比３０／７０）を用いた溶出による精製の後、茶色のオイルの形態で、１．４５ｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチル）インドール−５−イル］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノンを得た。これをそのまま次の段階に使用した。

段階４： 例１の段階４の手順を２０時間にわたって踏襲し、但し、テトラヒドロフラン４５ｍｌ中の１．４５ｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチル）インドール−５−イル］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノンとテトラヒドロフラン中のテトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムフルオリドの１Ｍ溶液２５ｍｌから出発し、シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）上でのフラッシュ・クロマトグラフィー、酢酸エチルとシクロヘキサンの混合物（容量比３０／７０）を用いた溶出、さらにイソプロパノールからの結晶化によって精製した後、黄色い結晶の形態で、６１０ｍｇのＥ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）インドール−５−イル］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノンが得られた。この特性は次の通りであった。
マススペクトル（ＥＩ）： ｍ／ｚ＝３６５
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝１１２℃

Claims (11)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   （式中、
   ａ） Ｙは、ハロゲンとメチルからなる群より選択され、
   ｂ） Ａｒは、下記の群：
   

   

   から選択され、
   ｃ） Ｒは、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＨである）
   に相当する生成物及びこれらの異性体。
2. ＹがＣＨ₃である請求項１に記載の生成物。
3. 下記式：
   

   

   で表わされる、Ｅ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノン。
4. 下記式：
   

   

   で表わされる、Ｅ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）プロペノン。
5. 下記式：
   

   

   で表わされる、Ｅ−２−メチル−３−［１−（２−ヒドロキシエチル）−１−Ｈ−インドール−５−イル］−１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペノン。
6. 請求項１〜５のいずれか１項に記載の生成物を、医薬的に許容される賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物。
7. チューブリンの重合抑制剤としての請求項１〜６のいずれか１項に記載の生成物の使用。
8. 腫瘍を供給する血管壁を形成する内皮細胞の脱離を促進させるための請求項１〜６のいずれか１項に記載の生成物の使用。
9. 腫瘍壊死を促進させるための請求項１〜６のいずれか１項に記載の生成物の使用。
10. 病的状態の治療に有用な医薬を製造するための請求項１〜６のいずれか１項に記載の生成物の使用。
11. 病的状態が癌である請求項１０に記載の使用。