JP2004523476A - NF-κB inhibitor - Google Patents

Abstract

The present invention provides novel compounds and methods for treating diseases using aminothiophene inhibitors of IKK-β phosphorylation of IκB.

Description

【００１１】
［式中：
Ｒ_１はＮＲ_５Ｒ_６であって；
Ｒ_２はＣＯＮＨ_２またはＳＯ_２ＮＨ_２であり；
Ｒ_３はＨまたはハロゲンであり；
Ｒ_４はアリールまたはヘテロアリールであって；
Ｒ_５はＨまたはアルキルであり；
Ｒ_６はＨ、ＣＯ−Ｃ_１−６アルキル、ＳＯ_２−Ｃ_１−６アルキル、ＣＯＮＨ−Ｒ_７、ＣＯＮＨ−Ｒ_８、ＣＳＮＨ−Ｒ_７、ＣＳＮＨ−Ｒ_８、ＳＯ_２ＮＨ−Ｒ_８およびＳＯ_２ＮＨ−Ｒ_９からなる群から選択され；
Ｒ_７はＨまたはアルキルである；ただし、Ｒ_２がＣＯＮＨ_２およびＲ_５がＨである場合、Ｒ_７はＨ以外の基であり；
Ｒ_８はアリールまたはヘテロアリールであり；および
Ｒ_９はＨまたはアルキルである］
で示される化合物あるいはその医薬上許容される塩、水和物または溶媒和物から選択される。
【００１２】
本発明の好ましい化合物は、
Ｒ_３がＨであり；
Ｒ_５がＨであって；および
Ｒ_６がＣＯ−Ｃ_１−６アルキル、ＳＯ_２−Ｃ_１−６アルキル、ＣＯＮＨ−Ｒ_７およびＳＯ_２ＮＨ−Ｒ_９からなる群から選択される
ところの化合物である。
より好ましい化合物は、
Ｒ６がＣＯＮＨ−Ｒ_７またはＳＯ_２ＮＨ−Ｒ_９である
ところのものである。
【００１３】
本発明はまた、
Ｒ_１がＮＲ_５Ｒ_６であって；
Ｒ_２がＳＯ_２ＮＨ_２であり；
Ｒ_３がＨまたはハロゲンであり；
Ｒ_４がアリールまたはヘテロアリールであって；
Ｒ_５がＨまたはアルキルであり；
Ｒ_６がＨ、ＣＯ−Ｃ_１−６アルキル、ＳＯ_２−Ｃ_１−６アルキル、ＣＯＮＨ−Ｒ_７、ＣＯＮＨ−Ｒ_８、ＣＳＮＨ−Ｒ_７、ＣＳＮＨ−Ｒ_８、ＳＯ_２ＮＨ−Ｒ_８およびＳＯ_２ＮＨ−Ｒ_９からなる群から選択され；
Ｒ_７がＨまたはアルキルであり；
Ｒ_８がアリールまたはヘテロアリールであり；および
Ｒ_９がＨまたはアルキルである
ところの化合物を含む。
【００１４】
本発明のもう一つ別の具体例は、
Ｒ_１がＮＲ_５Ｒ_６であって；
Ｒ_２がＣＯＮＨ_２であり；
Ｒ_３がＨまたはハロゲンであり；
Ｒ_４がアリールまたはヘテロアリールであって；
Ｒ_５がＨまたはアルキルであり；
Ｒ_６がＳＯ_２−Ｃ_１−６アルキル、ＳＯ_２ＮＨ−Ｒ_８またはＳＯ_２ＮＨ−Ｒ_９であり；
Ｒ_８がアリールまたはヘテロアリールであり；および
Ｒ_９がＨまたはアルキルである
ところの化合物である。
【００１５】
本発明のさらにもう一つ別の具体例は、
Ｒ_１がＮＲ_５Ｒ_６であって；
Ｒ_２がＣＯＮＨ_２であり；
Ｒ_３がＨまたはハロゲンであり；
Ｒ_４がアリールおよびヘテロアリール（４−ピリジルを除く）からなる群より選択され；
Ｒ_５がアルキルであり；
Ｒ_６がＨ、ＣＯ−Ｃ_１−６アルキル、ＳＯ_２−Ｃ_１−６アルキル、ＣＯＮＨ−Ｒ_７、ＣＯＮＨ−Ｒ_８、ＣＳＮＨ−Ｒ_７およびＣＳＮＨ−Ｒ_８からなる群から選択され；
Ｒ_７がＨまたはアルキルであり；
Ｒ_８がアリールまたはヘテロアリールであり；および
Ｒ_９がＨまたはアルキルである
ところの化合物である。
【００１６】
この具体例において有用な化合物は、
２−［（ピリジン−３−イルメチル）−アミノ］−５−ｐ−トリル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；および
５−フェニル−２−［（ピリジン−４−イルメチル）−アミノ］−チオフェン−３−カルボン酸アミド
を包含する。
【００１７】
本発明のさらにもう一つ別の具体例は、
Ｒ_１がＮＲ_５Ｒ_６であって；
Ｒ_２がＣＯＮＨ_２であり；
Ｒ_３がＨまたはハロゲンであり；
Ｒ_４がアリール（置換されていないフェニルを除く）またはヘテロアリール（４−ピリジルを除く）から選択され；
Ｒ_５がＨであり；
Ｒ_６がＣＯＮＨ−Ｒ_７、ＣＯＮＨ−Ｒ_８、ＣＳＮＨ−Ｒ_７およびＣＳＮＨ−Ｒ_８からなる群から選択され；
Ｒ_７がＨ（Ｒ_５がＨである場合を除く）またはアルキルであり；および
Ｒ_８がアリールまたはヘテロアリールである
ところの化合物を包含する。
【００１８】
この具体例において有用な化合物は、
２−（３−イソプロピル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（３−クロロ−フェニル）−２−（３−メチル−ウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（４−フルオロ−フェニル）−２−（３−メチル−ウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−エチル−チオウレイド）−５−（４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（４−フルオロ−フェニル）−２−（３−プロピル−チオウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−メチル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−エチル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−５’−クロロ−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
５−（２−フルオロ−フェニル）−２−（３−メチル−ウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（４−フルオロ−フェニル）−２−（３−メチル−チオウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（３−メチル−ウレイド）−［２，３’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
２−（３−メチル−ウレイド）−５−ｐ−トリル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸アミド
を包含する。
【００１９】
本発明のさらにもう一つ別の具体例は、
Ｒ_１がＮＲ_５Ｒ_６であって；
Ｒ_２がＣＯＮＨ_２であり；
Ｒ_３がＨまたはハロゲンであり；
Ｒ_４がアリール（置換されていないフェニル、１または２個のハロゲンまたはメチル、トリフルオロメチル、メトキシで置換されたフェニルを除く）またはヘテロアリール（４−ピリジルを除く）であり；
Ｒ_５がＨであり；
Ｒ_６がＣＯ−Ｃ_１−６アルキルである
ところの化合物を包含する。
【００２０】
この具体例において有用な化合物は、
５−アセチルアミノ−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−シアノ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−メタンスルホニル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−アミノ−４−メチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−メチルスルファニル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−ヒドロキシメチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−［２，３’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−４’−メチル−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−５’−メチル−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−ナフタレン−２−イル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−アセチルアミノ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−ホルミル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−エチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−ホルミル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド
を包含する。
【００２１】
本発明はさらに、ＮＦ−κＢ活性化に伴う疾患の好ましい治療法であって、その治療を必要とする対象に、
２−アミノ−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アミノ−５−（４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アミノ−５−（３−クロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アミノ−５−（２−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アミノ−５−（４−クロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−メトキシ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（２−メトキシ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−［（ピリジン−３−イルメチル）−アミノ］−５−ｐ−トリル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−フェニル−２−［（ピリジン−４−イルメチル）−アミノ］−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
【００２２】
２−アセチルアミノ−５−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−シアノ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（２−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−ブロモ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−メタンスルホニル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−ｐ−トリル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−アミノ−４−メチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３；４−ジフルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
【００２３】
２−アセチルアミノ−５−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−メチルスルファニル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（２，４−ジクロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−ヒドロキシメチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（２，３−ジクロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−ブロモ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（２−ブロモ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−イソプロピル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（３−クロロ−フェニル）−２−（３−メチル−ウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
【００２４】
５−（４−フルオロ−フェニル）−２−（３−メチル−ウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−［２，３’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−４’−メチル−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−５’−メチル−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−ナフタレン−２−イル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−アセチルアミノ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−エチル−チオウレイド）−５−（４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（４−フルオロ−フェニル）−２−（３−プロピル−チオウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−アミノ−［２，３’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
２−アミノ−５−ナフタレン−２−イル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−クロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−メチル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−ホルミル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−クロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−エチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−ｐ−トリル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
【００２５】
２−アセチルアミノ−５−（３−ホルミル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（２，３−ジフルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−エチル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−５’−クロロ−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
５−（２−フルオロ−フェニル）−２−（３−メチル−ウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（４−フルオロ−フェニル）−２−（３−メチル−チオウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（３−メチル−ウレイド）−［２，３’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
２−（３−メチル−ウレイド）−５−ｐ−トリル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；および
５−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸アミド
からなる群より選択される１またはそれ以上の化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【００２６】
本発明において有用なさらに好ましい化合物は、
２−アセチルアミノ−５−（３−クロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−メチル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−ホルミル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−クロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（４−エチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−ｐ−トリル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−ホルミル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（２，３−ジフルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−アセチルアミノ−５−（３−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
２−（３−エチル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−アセチルアミノ−５’−クロロ−［２，２’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；
５−（２−フルオロ−フェニル）−２−（３−メチル−ウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（４−フルオロ−フェニル）−２−（３−メチル−チオウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸アミド；
５−（３−メチル−ウレイド）−［２，３’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミド；および
２−（３−メチル−ウレイド）−５−ｐ−トリル−チオフェン−３−カルボン酸アミド
からなる群より選択される。
【００２７】
本発明は、炎症および組織修復障害、特に慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、喘息およびＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）、変形性関節症、骨粗鬆症および線維症、皮膚病、例えば、乾癬、アトピー性皮膚炎および紫外線（ＵＶ）誘発皮膚損傷、自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、組織器官拒絶、アルツハイマー病、発作、アテローム性動脈硬化、再狭窄、糖尿病、糸球体腎炎、癌、例えば、ホジキン病、悪液質、感染および後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を含む特定のウイルス感染に伴う炎症、成人呼吸窮迫症候群ならびに毛細血管拡張性運動失調を含む、ＮＦ−κＢ活性化に付随する種々の疾患の、治療法を提供する。
【００２８】
定義
本発明は本発明の化合物のあらゆる水和物、溶媒和物、複合体およびプロドラッグを含む。プロドラッグはインビボで式ＩおよびＩＩに記載の活性親薬物を放出する複数の共有結合性の化合物である。キラル中心または異性体中心の別の形態が本発明の化合物中に存在する場合、このような異性体、エナンチオマーおよびジアステレオマーを含む、の形態すべては本明細書に包含されるものとする。キラル中心を含有する本発明の化合物はラセミ混合物、エナンチオマーに富む混合物として使用されるだろう、またはラセミ混合物は既知の技術を使用して分離されて個々のエナンチオマーは単独で使用されるだろう。化合物が不飽和炭素−炭素二重結合を有する場合、シス（Ｚ）およびトランス（Ｅ）異性体の両方が本発明の範囲内である。化合物がケト−エノール互変異性体のような、互変異性体で存在する場合、各互変異性体は平衡で存在するにせよ一方の形態が優勢に存在するにせよ本発明内に含まれるものと考える。
特記しない限り、式Ｉまたはその下位式中にある一の置換基のいずれの意味も他にある場合のその意味、すなわち他のどの置換基の意味からも、独立している。
【００２９】
本明細書で用いる「アルキル」なる語は、一つの炭素−炭素結合で連結した置換されてもよい炭化水素基をいう。アルキル炭化水素基は直鎖状、枝分かれ状または環状であってもよく、飽和または不飽和であってもよい。置換されてもよいアルキルの置換基はアリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＣＯ、ハロゲン、ＣＦ_３、およびＯＣＦ_３からなる群から選択される。
本明細書で用いる「アリール」なる語は、二個までの共役または縮合環系を含有する、共役π電子系を有する少なくとも一つの環がある、置換されてもよい芳香族基をいう。アリールは炭素環式アリール、およびジアリール基をいい、その全て所望により置換されてもよい。置換基はハロゲン、Ｃ_１−４アルキル、ＮＨ_２、ＯＣＦ_３、ＣＦ_３、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＣＮ、ＣＨＯ、ＳＯ_２−アルキルおよびＮＯ_２からなる群から選択される。
【００３０】
本明細書で用いる「ヘテロアリール」なる語は、二個までの共役または縮合環系およびＯ、ＳおよびＮから選択される１−３個のヘテロ原子を含有する、共役π電子系を有する少なくとも一つの環がある、置換されてもよい芳香族基をいう。ヘテロアリールは炭素環式ヘテロアリール、アリール−ヘテロアリールおよびジヘテロアリールアリール基を含み、その全て所望により置換されてもよい。好ましいアリールはフェニルおよびナフチルである。より好ましいアリールはフェニルを含む。好ましい置換基はハロゲン、Ｃ_１−４アルキル、ＮＨ_２、ＯＣＦ_３、ＣＦ_３、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＣＮ、ＣＨＯ、ＳＯ_２−アルキルおよびＮＯ_２からなる群から選択される。ヘテロアリール環の例はピロール、フラン、チオフェン、インドール、イソインドール、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、ベンゾチオフェン（ｂｅｎｚｏｔｈｉｐｈｅｎｅ）、ピリジン、キノリン、イソキノリン、キノリジン、ピラゾール、イミダゾール、イソオキサゾール、オキサゾール、イソチアゾール、チアゾール、ピリダジン、ピリミジン、およびピラジンを含む。
本明細書で用いる「ハロゲン」なる語はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩをいう。
【００３１】
製法
本発明の化合物は以下のスキーム１−８に記載される方法によって容易に調製することができる。アミノチオフェンカルボキシアミドの一般的な溶液調製はＡ Ｃ．Ｇｏｕｄｉｅの米国特許第３９６３７５０号（出典明示により本明細書の一部とする）に開示されており、それは以下およびスキーム１に記載される。別法を以下およびスキームに記載する。対応するスルホンアミドの一般的な製法をスキーム３または４に概説する。チオフェンカルボキシアミド尿素またはチオ尿素類似物の一般的な製法をスキーム５に記載し、チオフェンスルホンアミド尿素またはチオ尿素類似物の一般的な製法をスキーム６に記載する。チオフェンカルボキシアミドスルホニル尿素類似物の一般的な製法をスキーム７に記載し、チオフェンスルホキシアミドスルホニル尿素類似物の一般的な製法をスキーム８に記載する。
【００３２】
一般的調製：
米国特許第３９６３７５０号の操作を用いて、トリエチルアミンを、４０−４５℃のシアノアセトアミドおよび硫黄のＤＭＦ中混合物に加え、得られた溶液をアリールアセトアルデヒドで処理し、アミノチオフェンを得る。得られたアミノチオフェンを酸無水物または酸塩化物とピリジン中で反応させて対応するアミドを得る（スキーム１）。該アミンを、ピリジン中、塩化スルホニルで処理して対応するスルホンアミドを得る（スキーム１）。別法として、Ｋ．Ｈ．ＷｅｂｅｒおよびＨ．Ｄａｎｉｅｌ（Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ． １９７９， ３２８−３３３）の方法を用いて、シアノアセトアミドとメルカプトアセトアルデヒドをエタノール中でトリエチルアミンと一緒に還流温度で反応させ、アミノチオフェンを得る。保護されたアミノチオフェンの水性バッファー中でのＢｒ_２を用いての臭素化を行って５−ブロモチオフェンを得、それを種々のボロン酸と反応させて対応する５−アリールチオフェン類似物を得る（スキーム２）。対応するスルホンアミドはシアノスルホンアミド（米国特許第２９７８４８２号に記載の方法に従って製造）から出発して製造することができる（スキーム３および４）。アミノチオフェンカルボキシアミドとアルキルまたはアリールイソシアナートまたはイソチオシアナートとの反応により対応するアルキルまたはアリール尿素もしくはチオ尿素を得る（スキーム５）。アミノチオフェンスルホンアミド類似物をアルキルまたはアリールイソシアナートまたはイソチオシアナートと反応させて対応するアルキルまたはアリール尿素またはチオ尿素を得る（スキーム６）。アミノチオフェンスルホンアミド類似物をクロロスルホニルイソシアナートまたはクロロスルホニルチオイソシアナートと反応させ、その後で水でクエンチすることにより対応する一級尿素またはチオ尿素を得る（スキーム６）。アミノチオフェンカルボキシアミドをアミノスルホニルクロリドと反応させて対応するスルホニル尿素を得る（スキーム７）。アミノチオフェンスルホンアミド類似物をアミノスルホニルクロリドと反応させて対応するスルホニル尿素を得る（スキーム８）。
【００３３】
スキーム１
【化８】

【００３４】
スキーム２
【化９】

【００３５】
スキーム３
【化１０】

【００３６】
スキーム４
【化１１】

【００３７】
スキーム５
【化１２】

【００３８】
スキーム６
【化１３】

【００３９】
スキーム７
【化１４】

【００４０】
スキーム８
【化１５】

【００４１】
上記のスキーム１−８に記載される式Ｉの化合物の製法を参照すると、当業者であれば本発明が式Ｉの化合物を製造するのに必要とされる新規中間物質全てを含むことがわかるだろう。
本明細書で用いる開始物質は市販されているか、または当該分野の当業者に周知の常法により調製される。その方法は、ＣＯＭＰＥＮＤＩＵＭ ＯＦ ＯＲＧＡＮＩＣ ＳＹＮＴＨＥＴＩＣ ＭＥＴＨＯＤＳ、Ｖｏｌ．Ｉ−ＶＩ（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行）などの基本参考書に見出すことができる。
式Ｉの化合物の酸付加塩は適当な溶媒中で親化合物および、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸またはメタンスルホン酸のような、過剰な酸から標準の技術で調製される。該化合物のあるものは許容される内部塩または両性イオンを形成する。カチオン塩は親化合物を、適当なカチオンを含有する、水酸化物、炭酸塩またはアルコキシドのような、過剰なアルカリ試薬で；または適当な有機アミンで処理して調製される。Ｌｉ^＋、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、Ｃａ^＋＋、Ｍｇ^＋＋およびＮＨ_４ ^＋のようなカチオンは医薬上許容される塩中にあるカチオンの具体例である。ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、アルカン酸塩（例えば酢酸塩およびトリフルオロ酢酸塩）、安息香酸塩、およびスルホン酸塩（例えばメシラート）は医薬上許容される塩のアニオンの例である。
【００４２】
本発明は式Ｉ記載の化合物および医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。従って、式Ｉの化合物は医薬の製造において使用されるだろう。下記のように調製される式Ｉの化合物の医薬組成物は非経口投与形態では溶液または凍結乾燥散剤として処方されるだろう。散剤は使用前に適当な希釈剤または他の医薬上許容される担体を加えて復元させてもよい。液体処方は緩衝液、等張液、水溶液であるだろう。適当な希釈剤の例として通常の生理食塩水、標準５％デキストロース水溶液または酢酸ナトリウムまたはアンモニウム緩衝液である。このような処方は非経口投与に特に適しているが、経口投与で使用されても吸入剤として用量計測吸入器または噴霧器内に含有されていてもよい。ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アカシアガム、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムのような賦形剤を加えるのが望ましいだろう。
【００４３】
別法として、これらの化合物は経口投与用にカプセル化、錠剤化または乳化剤またはシロップに調製してもよい。医薬上許容される固形または液状担体が該組成物を促進するかまたは安定化するため、または該組成物の調製を容易にするために加えられてもよい。固形担体はスターチ、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチン、アカシアガム、アガーガムまたはゼラチンを含む。液状担体はシロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、食塩水および水を含む。該担体はまたグリセリルモノステアリン酸塩またはグリセリルジステアリン酸塩のような、持続放出物質を単独またはワックスとともに含むだろう。固形担体の量は様々であるが、好ましくは、単位投与当たり約２０ｍｇないし約１ｇとすることができる。医薬調製は錠剤の場合必要なのは、粉砕、混合、顆粒化、および圧縮；またはハードゼラチンカプセルでは粉砕、混合および封入を含む製薬学の従来の技術に従って行われる。液状担体が用いられる場合、その調製はシロップ、エリキシル、乳化剤または水性または非水性懸濁液の形態であるだろう。このような液体処方は直接経口投与またはソフトゼラチンカプセルに封入することができる。
【００４４】
直腸投与の場合、本発明の化合物はまたココアバター、グリセリン、ゼラチンまたはポリエチレングリコールのような賦形剤と合してもよく、坐剤に成形される。
本発明の方法は式Ｉの化合物の局所的吸入および結腸内投与を含む。局所投与は非全身投与を意味し、本発明の化合物を外部から表皮に、口腔に塗布すること、および耳、眼および鼻に上記化合物を点注することを含み、その点で該化合物は有意に血流には入らない。全身投与は経口、静脈内、腹腔内および筋肉内投与を意味する。局所投与に関して治療または防止効果に要する本発明の化合物の量は（活性成分として下記に記載）、もちろん、選択される化合物、治療される疾患の種類および重度および治療を受ける動物によって様々で、最終的には顧問医の裁量による。
活性成分を原化学物質として単独で投与することも可能であるが、医薬処方として提供することが好ましい。活性成分は、局所投与の場合、処方の０．０１ないし５．０重量％を含む。
【００４５】
本発明の局所処方は、家畜用およびヒト医用の両方で、一つまたはそれ以上の許容される担体とともに活性成分を含み、他のいくつかの治療成分を含んでいてもよい。担体は処方の他の成分と和合し得るという意味で「許容」されなければならなくてレシピエントに有害であってはならない。
局所投与に適した処方は：リニメント、ローション、クリーム、軟膏またはペーストのような皮膚を介して治療が必要とされる部位へ浸透するのに適した液体または半液体製剤、および眼、耳または鼻への投与に適した滴剤を含む。
本発明の滴剤は無菌の水性または油性の溶液または懸濁液を含み、活性成分を適当な殺菌剤および／または殺真菌剤および／または他のいくつかの適当な保存料内に溶解させて調製されるだろうし、界面活性剤を含むのが好ましい。得られた溶液を濾過によって清澄にし、適当な容器に移し、ついでそれを密封してオートクレーブまたは９０ないし１００℃で３０分間維持することによって滅菌処理してもよい。別法として、溶液を濾過によって滅菌処理して無菌的技術で容器に移してもよい。滴剤に適した殺菌剤および殺真菌剤の例として硝酸または酢酸フェニル水銀（０．００２％）、塩化ベンザルコニウム（０．０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０．０１％）がある。油性溶液の調製に適した溶媒はグリセロール、希釈アルコールおよびプロピレングリコールを含む。
【００４６】
本発明のローションは皮膚または眼への塗布に適したものを含む。眼用ローションは殺菌剤を含んでいてもよい滅菌水溶液を含み、滴剤の調製に類似の方法で調製されるだろう。皮膚への塗布用のローションまたはリニメントはまた、アルコールまたはアセトンのような、乾燥を早め皮膚を冷却させる物質、および／またはグリセロールまたはヒマシ油またはピーナッツ油のような油のような保湿剤を含んでいてもよい。
本発明のクリーム、軟膏またはペーストは活性成分の外部塗布用半固体処方である。それらは細かく分割したまたは粉末形態で活性成分を混合して、単独または水性または非水性流体の溶液または懸濁液中で、適当な機械を使用して、油性または非油性基剤とともに、製造されるだろう。基剤はハード、ソフトまたは液体パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属性石鹸のような炭化水素；粘滑剤；アーモンド、トウモロコシ、ピーナッツ、ヒマシまたはオリーブ油のような天然油；羊毛脂またはその誘導体、またはステアリン酸またはオレイン酸のような脂肪酸をプロピレングリコールまたはマクロゴールのようなアルコールとともに含むだろう。処方はソルビタンエステルまたはポリオキシエチレン誘導体のようなアニオン性、カチオン性または非イオン性界面活性剤のようないくつかの適当な界面活性剤を含むだろう。また、天然ガム、セルロース誘導体またはシリカなどの無機物質の懸濁剤、およびラノリンなどの他の成分が含まれていてもよい。
【００４７】
（本発明の利用）
式Ｉの化合物はＩκＢのＩＫＫ−ベータキナーゼリン酸化の阻害剤として有用であってＮＦ−κＢ活性化の阻害剤である。本発明の方法は上記の化合物の組成物および処方を利用し、上記の化合物の医薬組成物および処方を含む。
本発明は特に不適当なＮＦ−κＢ活性化に伴う疾患の治療法であって、式Ｉの一つまたはそれ以上の化合物を要する動物、特に哺乳類、最も好ましくはヒトに投与することを含む方法を提供する。本発明は、特に、炎症および組織修復障害、特に慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、喘息およびＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）、変形性関節症、骨粗鬆症および線維症、皮膚病、例えば、乾癬、アトピー性皮膚炎および紫外線（ＵＶ）誘発皮膚損傷、自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、組織器官拒絶、アルツハイマー病、発作、アテローム性動脈硬化、再狭窄、糖尿病、糸球体腎炎、癌、例えば、ホジキン病、悪液質、感染および後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を含む特定のウイルス感染に伴う炎症、成人呼吸窮迫症候群ならびに毛細血管拡張性運動失調の治療法を提供する。
【００４８】
急性期治療に関して、式Ｉの一つまたはそれ以上の化合物の非経口投与は有用である。５％デキストロース水または通常の食塩水中該化合物の静脈内注入、または適当な賦形剤での類似の処方は、最も有効であるが、筋肉内ボーラス注射もまた有用である。典型的には、非経口投与量は、ＩＫＫ−ベータおよびそれに続くＮＦ−κＢの活性化を阻害するのに有効な濃度において血漿内薬物濃度を維持する方法では、約０．０１ないし約５０ｍｇ／ｋｇ；好ましくは０．１ないし２０ｍｇ／ｋｇであるだろう。該化合物は約０．４ないし８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの１日総用量を達成するレベルでは１日１ないし４回投与される。治療効果のある本発明の方法で使用される化合物の正確な量、および上記化合物が投与される最善の経路は、治療効果を有するのに要する濃度と物質の血液レベルを比較する当該分野では通常の技術で容易に定量される。
【００４９】
式Ｉの化合物はまた薬物濃度がＩＫＫ−ベータおよびそれに続くＮＦ−κＢの活性化を阻害するまたは本明細書で開示されるような他のいずれの指摘をも達成するのに十分である方法で、患者に経口投与されてもよい。典型的には、該化合物を含有する医薬組成物が患者の症状に合わせた方法で約０．１ないし約５０ｍｇ／ｋｇの経口投与量で投与される。経口投与量は約０．５ないし約２０ｍｇ／ｋｇであるのが好ましいだろう。
式Ｉの化合物はまた薬物濃度がＩＫＫ−ベータおよびそれに続くＮＦ−κＢの活性化を阻害するまたは本明細書で開示されるような他のいずれの指摘をも達成するのに十分である方法で、患者に局所投与されてもよい。典型的には、該化合物を含有する医薬組成物が約０．０１％ないし約５％ｗ／ｗの局所処方で投与される。
本発明の化合物が本発明に従って投与される場合、許容され得ない毒性効果は予想されない。
【００５０】
本明細書に記載される化合物のＮＦ−κＢの阻害効果はＩＫＫ−βによるＩκＢ−αのＮ末端断片のリン酸化阻害効果として明示される（実施例の表１参照）。これらの化合物はまた前炎症刺激（例えば、ＴＮＦ−α、ＬＰＳ、など）による細胞の活性化に関するヒト単球および他の哺乳類の細胞におけるＩκＢ−αの分解および核転位を阻害する。加えてこれらの化合物はＬＰＳ刺激ヒト単球および刺激されたヒト滑膜線維芽細胞からの炎症メディエーター前駆物質産生を阻害する。疾患の治療に関する本発明のＮＦ−κＢ阻害剤の利用は様々な疾患におけるＮＦ−κＢの重要性を前提とする。
ＮＦ−κＢはＴＮＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＩＬ−８のようなサイトカイン（Ｍｕｋａｉｄａら、１９９０；ＬｉｂｅｒｍａｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ、１９９０；Ｍａｔｓｕｓａｋａら、１９９３）、ＩＣＡＭおよびＶＣＡＭのような、細胞接着分子（Ｍａｒｕｉら、１９９３；Ｋａｗａｉら、１９９５；ＬｅｄｅｂｕｒおよびＰａｒｋｓ、１９９５）、および誘導型一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）（Ｘｉｅら、１９９４；Ａｄｃｏｃｋら、１９９４）を含む多数の炎症メディエーター前駆物質の発現調節において重要な役割を担っている。（全体の参照引用は本セクションの終わりにある）。このようなメディエーターは炎症部位への白血球の供給において作用することが知られており、ｉＮＯＳの場合、いくつかの炎症性および自己免疫疾患において器官破壊を誘導する（ＭｃＣａｒｔｎｅｙ−Ｆｒａｎｃｉｓら、１９９３；Ｋｌｅｅｍａｎｎら、１９９３）。
【００５１】
炎症性障害におけるＮＦ−κＢの重要な役割に関する証拠が喘息患者の研究で得られた。軽度のアトピー性喘息から得られた気管支生検を通常の非アトピー性対照からの生検と比較すると活性化ＮＦ−κＢ、総ＮＦ−κＢ、およびＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦαのようなＮＦ−κＢ調節サイトカインに関する粘膜下組織染色で細胞の数が顕著に増加していることがわかる（Ｗｉｌｓｏｎら、１９９８）。さらに、ＮＦ−κＢ免疫反応性を発現する血管の割合が生検標本の上皮においてＩＬ−８免疫反応性と同様に増加している（Ｗｉｌｓｏｎら、１９９８）。このように、ＮＦ−κＢの阻害によるＩＬ−８産生阻害は、これらの化合物によって実証されるように気道炎症において有利であると考えられるだろう。
最近の研究ではＮＦ−κＢはまた炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病因において重要な役割を担っていることが示された。活性化ＮＦ−κＢはクローン病および潰瘍性大腸炎患者からの結腸の生検標本で見られる（Ａｒｄｉｔｅら、１９９８；Ｒｏｇｌｅｒら、１９９８；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、１９９８）。炎症粘膜で活性化が確認されているが非炎症粘膜ではなく（Ａｒｄｉｔｅら、１９９８；Ｒｏｇｌｅｒら、１９９８）同部位でＩＬ−８ｍＲＮＡ発現増加に関連している（Ａｒｄｉｔｅら、１９９８）。さらに、コルチコステロイド治療は腸管ＮＦ−κＢ活性化を強固に阻害して結腸の炎症を減少させる（Ａｒｄｉｔｅら、１９９８；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、１９９８）。再び、ＮＦ−κＢの阻害によるＩＬ−８産生阻害は、これらの化合物によって実証されるように気道炎症において有利であると考えられるだろう。
【００５２】
胃腸の炎症の動物モデルは結腸の炎症の重要な調節因子としてのＮＦ−κＢに関してさらなる支持を提供する。ＮＦ−κＢ活性の増加がマウスにおいて２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘発大腸炎の粘膜固有層マクロファージ内に観察されてｐ６５が活性化複合体の主要な要素である（Ｎｅｕｒａｔｈら、１９９６；ＮｅｕｒａｔｈおよびＰｅｔｔｅｒｓｓｏｎ、１９９７）。ｐ６５のアンチセンスの局所投与によって処置した動物において毒性の徴候なしに慢性大腸炎の徴候が消失する（ＮｅｕｒａｔｈおよびＰｅｔｔｅｒｓｓｏｎ、１９９７）。このように、ＮＦ−κＢの低分子阻害剤がＩＢＤの治療において有用であると考えられるだろう。
炎症性障害におけるＮＦ−κＢの役割に関するさらなる証拠が滑膜リウマチの研究から得られた。ＮＦ−κＢは通常不活性の細胞質複合体として存在するが、最近の免疫組織化学研究によってＮＦ−κＢがヒト滑膜リウマチ（Ｈａｎｄｅｌら、１９９５；Ｍａｒｏｋら、１９９６；Ｓｉｏｕｄら、１９９８）および上記疾患の動物モデル（Ｔｓａｏら、１９９７）において核内に存在する、すなわち活性を有することが示された。染色はＡ型滑膜細胞および血管内皮細胞に関連している（Ｍａｒｏｋら、１９９６）。さらに、ＮＦ−κＢの構造活性化が培養された滑膜細胞（Ｒｏｓｈａｋら、１９９６；Ｍｉｙａｚａｗａら、１９９８）およびＩＬ−１βまたはＴＮＦαで刺激した滑膜細胞培地で（Ｒｏｓｈａｋら、１９９６；Ｆｕｊｉｓａｗａら、１９９６；Ｒｏｓｈａｋら、１９９７）確認される。このように、ＮＦ−κＢの活性化は炎症のある滑膜に特徴的なサイトカイン産生増加および白血球浸潤に基づく。これらの化合物のＮＦ−κＢを阻害およびそれに続くこれらの細胞による炎症メディエーター前駆物質（例えばサイトカインおよびプロスタノイド）の産生を阻害する能力は関節リウマチにおいて有利であると考えられる。
【００５３】
生物学的分析：
本発明の化合物は、一定の薬理学的効果を有するのに要する化合物の濃度を定量するためにいくつかの生物学的分析の一つで試験されるだろう。
ＮＦ−κＢ活性はまた核内ＮＦ−κＢタンパクの存在を評価するために電気泳動度シフトアッセイ（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ）（ＥＭＳＡ）で測定されるだろう。目的の細胞を１ｘ１０^６／ｍＬの密度まで培養する。細胞を遠心して収集し、Ｃａ^２＋およびＭｇ^２＋不含のＰＢＳで洗浄してＣａ^２＋およびＭｇ^２＋含有のＰＢＳに１ｘ１０^７細胞／ｍｌにて再懸濁させる。化合物のＮＦ−κＢの活性化に関する効果を試験するために、細胞懸濁液を異なる濃度の薬物またはビヒクル（ＤＭＳＯ、０．１％）で３０分間３７℃で処理し、その後さらに１５分間ＴＮＦ−α（５．０ｎｇ／ｍＬ）で刺激する。細胞および核抽出物を以下のように調製する。簡単には、インキュベーションの終了時に細胞（１ｘ１０^７細胞）をＣａ^２＋およびＭｇ^２＋不含のＰＢＳで２回洗浄する。得られた細胞ペレットを２０μＬの緩衝液Ａ（１０ｍＭヘペス（ｐＨ７．９）、１０ｍＭＫＣｌ、１．５ｍＭＭｇＣｌ２、０．５ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）および０．１％ＮＰ４０）で再懸濁して１０分間氷上でインキュベートする。核を３５００ｒｐｍで１０分間４℃でマイクロ遠心してペレット状にする。得られた上清を細胞抽出物として収集して核ペレットを１５μＬの緩衝液Ｃ（２０ｍＭヘペス（ｐＨ７．９）、０．４２ＭＮａＣｌ、１．５ｍＭＭｇＣｌ２、２５％グリセロール、０．２ｍＭＥＤＴＡ、０．５ｍＭＤＴＴ、および０．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフロリド（ＰＭＳＦ））で再懸濁した。懸濁液を２０分間４℃で穏やかに混合して１４０００ｒｐｍで１０分間４℃でマイクロ遠心に付す。上清を収集して６０μＬの緩衝液Ｄ（２０ｍＭヘペス（ｐＨ７．９）、５０ｍＭＫＣｌ、２０％グリセロール、０．２ｍＭＥＤＴＡ、０．５ｍＭＤＴＴ、および０．５ｍＭＰＭＳＦ）で希釈する。全サンプルは分析まで−８０℃で保存される。抽出物のタンパク濃度をＢｉｏＲａｄ試薬でＢｒａｄｆｏｒｄの方法に従って定量する。
【００５４】
転写因子活性化に関する化合物の効果を上記のように処理された細胞からの抽出物を使用して電気泳動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）で評価する。二重鎖ＮＦ−κＢコンセンサスオリゴヌクレオチド（５’−ＡＧＴＴＧＡＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＣＡＧＧＣ−３’）をＴ４ポリヌクレオチドキナーゼおよび［ｇ−^３２Ｐ］ＡＴＰで標識する。結合混合物（２５ｕＬ）は１０ｍＭヘペス−ＮａＯＨ（ｐＨ７．９）、４ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．９）、６０ｍＭＫＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭジチオトレイトール、１０％グリセロール、０．３ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン、および１ｕｇポリ（ｄＩ−ｄＣ）ポリ（ｄＩ−ｄＣ）を含有する。結合混合物（１０ｕｇ核抽出タンパク）を０．５ｎｇの^３２Ｐ−標識オリゴヌクレオチド（５００００−１０００００ｃｐｍ）とともに未標識の競合物質のある場合とない場合で２０分間室温でインキュベートしてその後混合物を１ｘトリスホウ酸塩／ＥＤＴＡで調製した４％ポリアシルアミドゲル上に流して２００Ｖで２時間電気泳動させる。電気泳動後ゲルを乾燥させて結合反応の検出のためにフィルムに曝す。
【００５５】
化合物のＩκＢのリン酸化に関する効果はウェスタンブロットでモニター観察することができる。細胞抽出物を１０％ゲル（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）上でドデシル硫酸ナトリウムポリアシルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に付してタンパクをニトロセルロースシート（Ｈｙｂｏｎｄｔｍ−ＥＣＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ社、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）に移す。ＩκＢαまたはＩκＢβに対するポリクローナルウサギ抗体をさらにペルオキシダーゼ共役ロバ抗ウサギ二次抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ社、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）を使用して免疫ブロットアッセイを行う。増幅化学発光（ＥＣＬ）アッセイシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ社、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）を使用して免疫反応バンドを検出する。
【００５６】
ＩκＢキナーゼに関するアッセイを以下のようにして行った：ＩＫＫ−αをヘキサヒスチジン標識タンパクとしてバキュロウイルス感染昆虫細胞内で発現させてＮｉ−ＮＴＡアフィニティーカラムに通して精製した。示される（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）ような異なる濃度の化合物またはＤＭＳＯビヒクルおよびＡＴＰを含有するアッセイ緩衝液（２０ｍＭヘペス、ｐＨ７．７、２ｍＭＭｇＣｌ_２、１０ｍＭβ−グリセリンリン酸、１０ｍＭＮａＦ、１０ｍＭＰＮＰＰ、０．３ｍＭＮａ_３ＶＯ_４、１ｍＭベンズアミジン、２μＭＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌアプロチニン、１ｕｇ／ｍＬロイペプチン、１ｕｇ／ｍＬペプスタチン、１ｍＭＤＴＴ）内で５０ｎｇの精製タンパクを使用してキナーゼ活性をアッセイした。２００ｎｇのＩκＢ−ＧＳＴ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ）を加えて、総量５０μＬで反応を開始した。反応を１時間３０℃で続けた後最終濃度２０ｍＭになるようにＥＤＴＡを加えて反応を停止した。ＩκＢ−αリン酸（Ｓｅｒ３２）抗体（Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ、Ｔｕｒｋｕ、Ｆｉｎｌａｎｄ）およびＥｕ３＋標識抗ウサギＩｇＧ（Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ、Ｔｕｒｋｕ、Ｆｉｎｌａｎｄ）を使用する解離増強ランタニド蛍光免疫アッセイ（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｅｄ ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）でキナーゼ活性を定量した。標準ユーロピウムプロトコール（励起３４０ｎｍ、発光６１５ｎｍ；４００μ秒間その後４００μ秒遅れて測定された蛍光）を使用して、ＶＩＣＴＯＲ １４２０マルチ標識計数器（Ｗａｌｌｅｃ）でプレートを読んだ。データは蛍光（ｃｐｓ）単位で表現される。
【００５７】
ＩＫＫ−βをＧＳＴ標識タンパクとして発現させ、その活性を９６ウェルシンチレーション近位アッセイ（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ａｓｓａｙ）（ＳＰＡ）で評価した。簡単には、異なる濃度の化合物またはＤＭＳＯビヒクル、２４０ｎＭＡＴＰおよび２００ｎＣｉ［γ−^３３Ｐ］−ＡＴＰ（１０ｍＣｉ／ｍＬ、２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；ＮＥＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）とともに、アッセイ緩衝液ＩＫＫ−βを上記のようにアッセイ緩衝液（ファイナル２０ｎＭ）で希釈した。ＩκＢ−αの１５−４６のアミノ酸（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ）を含むビオチン化ペプチドを最終濃度２．４μＭになるように加えて、総量５０μＬで反応を開始した。サンプルを１時間３０℃でインキュベートした後、０．２ｍｇストレプトアビジン被覆ＳＰＡ ＰＶＴビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を含有する１５０ｕＬの停止緩衝液（ＰＢＳｗ／ｏＣａ２＋、Ｍｇ２＋、０．１％トリトンＸ−１００（ｖ／ｖ）、１０ｍＭＥＤＴＡ）を加えた。サンプルを混合して、１０分間室温でインキュベートし、遠心して（１０００ｘｇ、２分）、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔで測定した。
【００５８】
ＩＫＫ−β阻害剤の一次滑膜線維芽細胞メディエーター産生に関する効果を以下のように評価した：上記（Ｒｏｓｈａｋら、１９９６ｂ）の関節リウマチの成人患者から得た滑膜を酵素消化してヒトＲＳＦの一次培地を得た。１０％仔ウシ血清（ＦＢＳ）、１００ユニット／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を含むアール最小必須培地（Ｅａｒｌ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＥＭＥＭ）内、３７℃および５％ＣＯ_２で細胞を培養した。より画一のＢ型線維芽細胞数を得るために継代４から９の培養基を使用した。いくつかの実験では、線維芽細胞を１６ｍｍ（直径）２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）内に５ｘ１０４細胞／ｍＬで平板培養した。細胞（７０−８０％集密）をＩＬ−１β（１ｎｇ／ｍＬ）（Ｇｅｎｚｙｍｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）に所定の時間曝した。ＩＬ−１を加える１５分前にＤＭＳＯビヒクル（１％）内薬物を細胞培地に加えた。異なるドナーからの滑膜細胞を使用して３−４回実験を行った。ＲＳＦ細胞抽出物を上記のように処理した細胞から調製した。簡単には、ヒトＲＳＦをトリプシン／ＥＤＴＡで除去して、洗浄し、遠心して収集した。細胞抽出物を上記（Ｄｉａｇｎａｍら、１９８３；Ｏｓｂｏｒｎら、１９８９）のように調製した。簡単には、インキュベーションの終了時に細胞（１ｘ１０^７細胞）をＣａ^２＋およびＭｇ^２＋不含のＰＢＳで２回洗浄した。得られた細胞ペレットを２０μＬの緩衝液Ａ（１０ｍＭヘペス（ｐＨ７．９）、１０ｍＭＫＣｌ、１．５ｍＭＭｇＣｌ_２、０．５ｍＭ）で再懸濁した。
【００５９】
ＩＫＫ−β阻害のヒト単球刺激によるエイコサノイドおよびサイトカイン産生に関する効果を以下のように評価した：上記のようにヘパリン処理した全血液から二重勾配遠心法（ｄｏｕｂｌｅ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ）によって単球を単離した。ＰＢＭＣｓに富む単離単球を２４ウェル培養プレートにＲＰＭＩ１６４０ １０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ）内２ｘ１０^６細胞／ｍＬで２時間付着させて単球数をさらに増加させた。培地を除去して、細胞をＲＰＭＩ１６４０で一回洗浄し、１ｍＬＲＰＭＩ１６４０ １０％ＦＢＳをウェルに加えた。試験化合物を最終ビヒクル濃度０．０５％のＤＭＳＯとともにウェルに加えた。２００ｎｇ／ｍＬの内毒素（ＬＰＳ；Ｅ．ｃｏｌｉ血清型０２６：Ｂ６）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ．）を加えて単球を活性化させて２４時間インキュベートした。無細胞上清をＴＮＦ−α（ＳＢで開発したＥＩＡ）、ＰＧＥ２（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）ならびにＩＬ−８およびＩＬ−６（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｃａｍａｒｉｌｌｏ、ＣＡ）についてＥＬＩＳＡで分析した。細胞の生存可能性はトリパンブルー排除で定量した。
【００６０】
ＩＫＫ−β阻害剤のホルボールエステル誘発炎症に関する効果を以下のように評価した：Ｂａｌｂ／ｃマウスの外耳にホルボールエステル（ＰＭＡ）を皮膚塗布して誘発させた炎症反応が表皮の多因子炎症細胞浸潤および炎症性変化を試験するのに有用なモデルであることが明らかになった。強度な炎症病変は好中球浸潤で占められ、好中球内に存在するミエロペルオキシダーゼ、アズール好性顆粒酵素の組織濃度を測定することによって容易に計量できる。加えて、炎症反応の全体の強度は耳の厚さを定量して測定できる。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６／グループ）に薬物処理またはビヒクルさらにＰＭＡ（４ｕｇ／耳）を投与した。マウスを４時間後に殺し、耳の厚さを定量してＮＦ−κＢ活性化をＩκＢウェスタンまたはＥＭＳＡ分析でモニターした。
【００６１】
ＩＫＫ−βのラットカラゲナン誘発足肢浮腫に関する効果を以下のように評価した：雄ルイス系ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｐｉｖｅｒ−Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ）を飼育して食べ物および水を自由に摂取できるようにしておくと、各実験での体重は２００ないし２７５ｇであった。化合物またはビヒクル（０．５％トラガカント（経口）または１０％ＤＭＳＯ、５％ＤＭＡ、３０％クレモフォール（腹腔内））をカラゲナン注入の３０分ないし１時間前に投与した。滅菌ｄＨ_２Ｏ（０．０５ｍｌ／足肢）中１％カラゲナンを右後肢の足底表面に注入して浮腫を誘発した。足肢の体積変化を定量するために、足肢の厚さを化合物またはビヒクルの投与前に測定し、再度３時間後に測定した。ラットをＣＯ_２吸入によって殺し、右後肢を除去し、液体窒素で急速冷凍させて分析のために−８０℃で保存した。
【００６２】
総論
核磁気共鳴スペクトルを２５０、３００または４００ＭＨｚのいずれかで、各々、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＭ２５０、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＲＸ３００またはＢｒｕｋｅｒ ＡＣ４００分光計を使用して記録した。ＣＤＣｌ３はジュウテリオクロロホルムであって、ＤＭＳＯ−ｄ６はヘキサジュウテリオジメチルスルホキシドであり、ＣＤ３ＯＤはテトラジュウテリオメタノールである。化学シフトを内部標準テトラメチルシランからの百万（ｄ）ダウンフィールド（ｄｏｗｎｆｉｅｌｄ）当たりの部分で表記する。ＮＭＲデータに関する省略は以下の通りである：ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｍ＝マルチプレット、ｄｄ＝ダブレットのダブレット、ｄｔ＝トリプレットのダブレット、ａｐｐ＝アパレント、ｂｒ＝ブロード。Ｊはヘルツで測定したＮＭＲカップリング定数を示す。連続波赤外線（ＩＲ）スペクトルをＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ６８３赤外線分光計で記録し、フーリエ変換赤外線（ＦＴＩＲ）スペクトルをＮｉｃｏｌｅｔ Ｉｍｐａｃｔ４００Ｄ赤外線分光計で記録した。ＩＲおよびＦＴＩＲスペクトルをトランスミッションモードで記録して、バンド位置を逆波数（ｃｍ^−１）で表記する。質量スペクトルをＶＧ７０ＦＥ、ＰＥ Ｓｙｘ ＡＰＩ ＩＩＩ、またはＶＧ ＺＡＢ ＨＦ装置のいずれかで高速原子衝撃（ＦＡＢ）または電子射出（ＥＳ）イオン化法を使用して計測した。Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ２４０Ｃ元素分析器を使用して元素分析を得た。Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ融点装置で融点を計測したが修正していない。全ての温度は摂氏度で表記される。
【００６３】
Ａｎａｌｔｅｃｈ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ＧＦおよびＥ．Ｍｅｒｃｋ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ６０Ｆ−２５４薄層板を薄層クロマトグラフィーで使用した。閃光および重力クロマトグラフィーの両方をＥ．Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０（２３０−４００メッシュ）シリカゲルで行った。
示される場合、その物質はＡｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＴＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲから購入した。
【００６４】
実施例
以下の合成実施例において、温度は摂氏度（℃）である。特に示されていなければ、すべての開始物質は市販で入手される。さらに詳述しないが、当業者は、上記の説明を使用して、本発明をそのすべてにおいて利用することができると考えられる。下記の実施例は本発明を説明するものであり、その範囲を制限するものではない。本発明者が保留するものに関してはクレームに言及される。
【００６５】
実施例１
２−アミノ−５− （４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
ａ．（４−フルオロ−フェニル）−アセトアルデヒド
ＰＣＣ（２３ｇ、１０７ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）中溶液に、２−（４−フルオロフェニル）−エタノール（１０ｇ、７１．４ミリモル）を３０分間にわたって滴下した。得られた暗色溶液を室温で１８時間（一夜）攪拌した。エチルエーテル（２００ｍＬ）を該溶液に添加し、１０分間攪拌した。反応混合物をフルオロシルを介して濾過し、減圧下で濃縮して褐色油を得、ついでフラッシュクロマトグラフィーカラム（ヘキサン中１０％ないし５０％酢酸エチル）により精製し、標記化合物を褐色固体として得た（３．５ｇ、２５．４ミリモル）。
【００６６】
ｂ．２−アミノ−５− （４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
Ａ．Ｃ．Ｇｏｕｄｉｅの米国特許第３９６３７５０号に記載されるように、２−シアノアセトアミド（２ｇ、２４ミリモル）、硫黄（０．７７ｇ、２４ミリモル）および実施例１ａからの（４−フルオロ−フェニル）−アセトアルデヒド（３．３ｇ、２４ミリモル）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（３．３ｍＬ、２４ミリモル）を滴下した。得られた溶液を室温で１８時間（一夜）攪拌した。ついで、反応混合物を氷水（２０ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（３ｘ２５ｍＬ）に溶かした。有機相をブライン（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて濃縮した。ついで、該生成物を酢酸エチルから再結晶し、標記化合物を明褐色固体として得た（３ｇ、１２．７ミリモル、５３％収率）。母液をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％−８０％酢酸エチル）を介して精製することによりさらに大きな収率を得ることもできる。ＬＣ ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ２３７。
【００６７】
実施例２
２−アセチルアミノ−５−（４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
Ａ．Ｃ．Ｇｏｕｄｉｅの米国特許第３９６３７５０号に記載されるように、実施例１からの化合物（０．０１モル）およびピリジン（２０ｍＬ）の０℃で激しく攪拌した混合物をアセチルクロリド（０．０１１モル）で滴下処理した。得られた溶液を０℃でさらに３０分間攪拌し、ついで冷水中に注いだ。沈殿物を濾過により集め、水で洗浄して乾燥させた。エタノールから再結晶し、標記化合物を得た（９０％、融点２３０−２３３℃）。
【００６８】
実施例３
２−アミノ−５−（４−メチル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例１に記載の操作を用い、ただし４−フルオロフェニルアセトアルデヒドの代わりに４−メチルフェニルアセトアルデヒドを用いて、標記化合物を得た。融点２２８−２３０℃。
【００６９】
実施例４
２−アミノ−５−（４−クロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例１に記載の操作を用い、ただし４−フルオロフェニルアセトアルデヒドの代わりに４−クロロフェニルアセトアルデヒドを用いて、標記化合物を得た。融点２５５−２５７℃。
【００７０】
実施例５
２−アミノ−５−（３−クロロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例１に記載の操作を用い、ただし４−フルオロフェニルアセトアルデヒドの代わりに３−クロロフェニルアセトアルデヒドを用いて標記化合物を得た。融点１９０−１９２℃。
【００７１】
実施例５
２−アミノ−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例１に記載の操作を用い、ただし４−フルオロフェニルアセトアルデヒドの代わりにフェニルアセトアルデヒドを用いて標記化合物を得た。
【００７２】
実施例６
２−アセチルアミノ−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例２に記載の操作を用い、ただしアミノ−５−（４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの代わりに実施例５の化合物を用いて標記化合物を得た。
【００７３】
実施例７
２−アセチルアミノ−５−（４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
ａ．２−アミノ−チオフェン−３−カルボン酸アミド
チオアセトアルデヒドおよびシアノアセトアミドのエタノール中混合物をトリエチルアミンと一緒に還流温度で１時間加熱し、その反応物を濾過し、濾過物を酢酸エチルに溶かし、２Ｎ ＮａＯＨで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させて蒸発させる。ジエチルエーテルから再結晶し、標記化合物を得る。
【００７４】
ｂ．２−アセチルアミノ−チオフェン−３−カルボン酸アミド
実施例２に記載の操作を用い、実施例７ａからの化合物を無水酢酸とピリジン中で反応させて標記化合物を得る。
【００７５】
ｃ．２−アセチルアミノ−５−ブロモ−チオフェン−３−カルボン酸アミド
ＨＢｒ／酢酸中の実施例７ｂからの化合物を０℃で臭素を用いて処理する。出発物質のすべてが消費されるまで反応を続ける。ついで、反応物を水でクエンチし、中和し、酢酸エチルで抽出する。有機抽出液をチオ硫酸ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、蒸発させて標記化合物を得る。
【００７６】
ｄ．２−アセチルアミノ−５−（４−フルオロ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミド
実施例７ｃ（１当量）、４−フルオロフェニルボロン酸（１当量）、触媒としての（Ｐｈ_３Ｐ）_４Ｐｄおよび２Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３（水性）のトルエン／ＥｔＯＨ（４：１）中混合物を還流温度で２４時間加熱する。該混合物を冷却し、層を分離する。水層を酢酸エチルで抽出し、Ｎａ_２ＣＯ_３（水性）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させて蒸発させる。フラッシュクロマトグラフィーによる精製に付し、標記化合物を得る。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ２７９。
【００７７】
実施例８
２−アセチルアミノ−５−（３−シアノ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例７ｄの方法を用い、ただし４−フルオロフェニルボロン酸の代わりに３−シアノフェニルボロン酸を用い、分取性逆相ＨＰＬＣに付した後、標記化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ２８６。
【００７８】
実施例９
２−アセチルアミノ−５−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例７ｄの方法を用い、ただし４−フルオロフェニルボロン酸の代わりに４−ジメチルアミノフェニルボロン酸を用い、分取性逆相ＨＰＬＣに付した後、標記化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ３０４。
【００７９】
実施例１０
２−アセチルアミノ−５−（４−メタンスルホニル−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例７ｄの方法を用い、ただし４−フルオロフェニルボロン酸の代わりに４−メタンスルホニルフェニルボロン酸を用い、分取性逆相ＨＰＬＣに付した後、標記化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ３３９。
【００８０】
実施例１１
２−アセチルアミノ−５−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５ｙｌ−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例７ｄの方法を用い、ただし４−フルオロフェニルボロン酸の代わりに３，４−メチレンジオキシフェニルボロン酸を用い、分取性逆相ＨＰＬＣに付した後、標記化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ３０５。
【００８１】
実施例１２
２−アセチルアミノ−５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例７ｄの方法を用い、ただし４−フルオロフェニルボロン酸の代わりに３−ヒドロキシフェニルボロン酸を用い、分取性逆相ＨＰＬＣに付した後、標記化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ２９１。
【００８２】
実施例１３
５−アセチルアミノ−［２，３’］ビチオフェニル−４−カルボン酸アミドの調製
実施例７ｄの方法を用い、ただし４−フルオロフェニルボロン酸の代わりに３−チオフェンボロン酸を用い、分取性逆相ＨＰＬＣに付した後、標記化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ２６７。
【００８３】
実施例１４
２−アセチルアミノ−５−ナフタレン−２−イル−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製
実施例７ｄの方法を用い、ただし４−フルオロフェニルボロン酸の代わりに２−ナフタレンボロン酸を用い、分取性逆相ＨＰＬＣに付した後、標記化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ３１１。
【００８４】
実施例１５
２−（３−メチル−ウレイド）−５−フェニル−チオフェン−３−カルボン酸アミドの調製 実施例５の化合物を、ピリジン中、メチルイソシアナートと室温で反応させた。蒸発させ、逆相ＨＰＬＣにより精製して標記化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｅ ２７６。
【００８５】
上記の明細書および実施例は本発明の化合物の製法および使用法を十分に開示している。しかしながら、本発明は上記の特定の具体例に限定するものでなく、あらゆる修正も以下の請求の範囲内に含む。本明細書で引用した雑誌、特許および他の刊行物に関する様々な参照は当業者に公知であって、仮に十分に記載されているとしていても、その出典を明示することにより本明細書の一部とする。[0001]
(Technical field)
The present invention generally relates to methods of inhibiting the pathological activation of transcription factor NF-κB (nuclear factor-κB) using aminothiophene compounds. Such methods are particularly useful for treating diseases associated with NF-κB activation. More specifically, these methods can be used to inhibit IKK-β (IκB kinase-β) phosphorylation of IκB (inhibitory protein κB), which inhibition is followed by degradation of NF-κB dimer And prevent activation. Such methods include inflammation and tissue repair disorders, particularly rheumatoid arthritis, inflammatory bowel disease, asthma and COPD (chronic obstructive pulmonary disease), osteoarthritis, osteoporosis and fibrosis, skin diseases such as psoriasis, atopic skin Flame and ultraviolet (UV) -induced skin damage, autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, organ organ rejection, Alzheimer's disease, seizures, atherosclerosis, restenosis , Diabetes, glomerulonephritis, cancer, eg, Hodgkin's disease, cachexia, inflammation associated with certain viral infections including infection and acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), adult respiratory distress syndrome and ataxia telangiectasia. It is useful for treating various diseases associated with NF-κB activation, including.
[0002]
(Prior art)
Recent developments in the scientific research of mediators associated with acute and chronic inflammatory diseases and cancer have led to new strategies in the search for effective treatments. Traditional methods involve direct targeted intervention such as the use of specific antibodies, receptor antagonists, or enzyme inhibitors. Recent breakthroughs in the description of the regulatory mechanisms associated with the transcription and translation of various mediators have increased interest in therapeutics directed at gene transcription levels.
Nuclear factor κB (NF-κB) belongs to a closely related dimeric transcription factor complex family composed of various combinations of the Rel / NF-κB family of polypeptides. This family consists of five separate gene products in mammals, RelA (p65), NF-κB1 (p50 / p105), NF-κB2 (p49 / p100), c-Rel and RelB, all of which are hetero or homologous. Monomers can be formed. These proteins have a highly homologous 300 amino acid "Rel homology region" including DNA binding and dimerization regions. At the C-terminus of the Rel homology region is a nuclear translocation sequence important for the transport of NF-κB from the cytoplasm to the nucleus. In addition, p65 and cRel have a strong interactive region at their C-terminus.
[0003]
The activity of NF-κB is regulated by interaction with one of the inhibitory IκB protein families. This interaction effectively blocks the NF-κB protein nuclear localization sequence and inhibits translocation of the dimer to the nucleus. A variety of stimuli activate NF-κB via analogs to multiple signal transduction pathways. Includes bacterial products (LPS), some viruses (HIV-1, HTLV-1), inflammatory cytokines (TNFα, IL-1), environmental and oxidative stress and DNA damaging agents. However, clearly common to all stimuli is the phosphorylation and subsequent degradation of IκB. IκB is phosphorylated at two N-terminal serines by recently identified IκB kinases (IKK-α and IKK-β). Site-directed mutagenesis studies indicate that these phosphorylations are important for subsequent activation of NF-κB in that once phosphorylated, proteins are degraded and fragmented via the ubiquitin-proteasome pathway. Was done. In the absence of IκB, the active NF-κB complex translocates to the nucleus and can bind in a selective manner to the preferred gene-specific enhancer sequence. Genes regulated by NF-κB include a number of cytokines and chemokines, cell adhesion molecules, acute phase proteins, immunomodulatory proteins, eicosanoid metabolizing enzymes and anti-apoptotic genes.
[0004]
NF-κB is innumerable inflammation including cytokines such as TNF, IL-1β, IL-6 and IL-8, cell adhesion molecules such as ICAM and VCAM, and inducible nitric oxide synthase (iNOS) It is well known that it plays an important role in regulating the expression of mediator precursors. Such mediators act in the supply of leukocytes to sites of inflammation and, in the case of iNOS, induce organ destruction in several inflammatory and autoimmune diseases.
The importance of NF-κB in inflammatory disorders was further supported by studies of airway inflammation, including asthma, which showed that NF-κB was activated. This activation may be based on increased cytokine production and leukocyte infiltration characteristic of these diseases. In addition, inhaled steroids are known to reduce airway hyperreactivity and suppress inflammatory reactions in asthmatic airways. In light of recent findings on corticosteroid inhibition of NF-κB, these effects could be thought to be mediated through inhibition of NF-κB.
[0005]
Further evidence for a role for NF-κB in inflammatory disorders comes from studies of rheumatoid synovium. Although NF-κB is normally present as a cytoplasmic complex, recent immunohistochemical studies have shown that NF-κB is present in the nucleus, ie, active, in multiple cells, including rheumatoid arthritis. . Furthermore, NF-κB was shown to be activated in human synovial cells in response to TNF-α or IL-1β stimulation. Such explanation is the basic mechanism for increased cytokine and eicosanoid production in this tissue. Roshak, A .; K. J. et al. Biol. Chem. , 271, 31496-31501 (1996). Expression of IKK-β has been demonstrated in synovial cells of rheumatoid arthritis patients, and gene transfer studies have demonstrated a central role for IKK-β in stimulating inflammatory mediator production in these cells. Aupperele et al. immunology 1999.163: 427-433 and Aupperele et al. See Immunology 2001; 166: 2705-11. More recently, intra-articular administration of a wild-type IKK-β adenovirus construct has been shown to cause paw swelling, while intra-articular administration of dominant-negative IKK-β in rats inhibited adjuvant-induced arthritis. See Taka et al., Arthritis and Rheumismm 2001; 44: 1897-1907.
[0006]
NF-κB / Rel and IκB proteins also appear to play important roles in neoplastic transformation and metastasis. Members of the family have been implicated in cell transformation as a result of overexpression, gene amplification, rearrangement or transposition in vitro and in vivo. In addition, rearrangements and / or amplifications of the genes encoding these proteins are found in 20-25% of human lymphomas. Furthermore, NF-κB is activated by the oncogene ras, which is most commonly deleted in human tumors, and blocking NF-κB activation inhibits ras-mediated cell transformation. In addition, the role of NF-κB in regulating apoptosis has been reported, enhancing the role of this transcription factor in regulating tumor cell growth. TNF, ionizing radiation and DNA damaging agents have all been shown to activate NF-κB and instead up-regulate the expression of some anti-apoptotic proteins. Conversely, inhibition of NF-κB has been shown to enhance apoptotic death by these substances in some tumor cell types. Since this is thought to represent a major mechanism of chemoresistant tumor cells, inhibitors of NF-κB activation would be useful chemotherapeutic agents alone or as an adjunct therapy. Recent reports indicate that NF-κB is an inhibitor of skeletal cell differentiation as well as regulation of cytokine-induced muscle wasting (Guttridge et al., Science; 2000; 289: 2363-2365), and NF-KB as a novel cancer treatment. Supports the potential of -κB inhibitors.
[0007]
Some NF-KB inhibitors are C.I. Wahl et al. Clin. Invest. 101 (5), 1163-1174 (1998); W. Sullivan et al. Med. Chem. 41, 413-419 (1998); W. Pierce et al. J. Biol. Chem. 272, 21096-21103 (1997).
The marine natural product hymenialdisine is known to inhibit NF-κB. Roshak, A .; Et al., JPET, 283, 955-961 (1997). Breton, J .; J and Chabot-Fletcher, M .; C. , JPET, 282, 459-466 (1997).
In addition, patent applications have been filed for indole and benzimidazole inhibitors of the IKK complex (see DE 199 28 424 and WO200130774), the natural products staurosporine, quesertin, K252a and K252b being IKK-β inhibitors. (Peet, GW and Li, J, J. Biol. Chem., 274, 32655-32661 (1999) and Wisniewski, D. et al., Analytical Biochem. 274, 220-228 (1999). )reference).
U.S. Pat. No. 3,963,750 describes the preparation of certain aminothiophenes.
[0008]
(Disclosure of the Invention)
The present invention relates to novel compounds and their use in inhibiting the activating transcription factor NF-κB.
It is an object of the present invention to provide a method for treating diseases that are therapeutically modified by altering the activity of the transcription factor NF-κB.
Accordingly, in a first aspect, the present invention provides a novel compound and a pharmaceutical composition comprising a compound according to formula I.
In another aspect, the invention provides a method of treating a disease wherein the pathology of the disease is therapeutically modified by inhibiting the phosphorylation and subsequent degradation of IκB by IKK-β.
In yet another aspect, the invention provides a method of treating a disease wherein the pathology of the disease is therapeutically modified by inhibiting pathological activation of NF-κB.
[0009]
In certain embodiments, the present invention relates to inflammation and tissue repair disorders, particularly rheumatoid arthritis, inflammatory bowel disease, asthma and COPD (chronic obstructive pulmonary disease), osteoarthritis, osteoporosis and fibrosis, dermatological diseases, such as Psoriasis, atopic dermatitis and ultraviolet (UV) -induced skin damage, autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, tissue organ rejection, Alzheimer's disease, seizures, atheroma Atherosclerosis, restenosis, diabetes, glomerulonephritis, cancer, eg, inflammation associated with certain viral infections including Hodgkin's disease, cachexia, infection and acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), adult respiratory distress syndrome and capillary Methods for treating various diseases associated with NF-κB activation, including vasodilator ataxia, are provided.
[0010]
(Best Mode for Carrying Out the Invention)
The compounds of the present invention have the following formula (I):
Embedded image

[0011]
[In the formula:
R₁Is NR₅R₆And;
R₂Is CONH₂Or SO₂NH₂And;
R₃Is H or halogen;
R₄Is aryl or heteroaryl;
R₅Is H or alkyl;
R₆Is H, CO-C_1-6Alkyl, SO₂-C_1-6Alkyl, CONH-R₇, CONH-R₈, CSNH-R₇, CSNH-R₈, SO₂NH-R₈And SO₂NH-R₉Selected from the group consisting of:
R₇Is H or alkyl; provided that R₂Is CONH₂And R₅Is H₇Is a group other than H;
R₈Is aryl or heteroaryl; and
R₉Is H or alkyl]
Or a pharmaceutically acceptable salt, hydrate or solvate thereof.
[0012]
Preferred compounds of the invention are
R₃Is H;
R₅Is H; and
R₆Is CO-C_1-6Alkyl, SO₂-C_1-6Alkyl, CONH-R₇And SO₂NH-R₉Selected from the group consisting of
However, it is a compound.
More preferred compounds are
R6 is CONH-R₇Or SO₂NH-R₉Is
Place.
[0013]
The present invention also provides
R₁Is NR₅R₆And;
R₂Is SO₂NH₂And;
R₃Is H or halogen;
R₄Is aryl or heteroaryl;
R₅Is H or alkyl;
R₆Is H, CO-C_1-6Alkyl, SO₂-C_1-6Alkyl, CONH-R₇, CONH-R₈, CSNH-R₇, CSNH-R₈, SO₂NH-R₈And SO₂NH-R₉Selected from the group consisting of:
R₇Is H or alkyl;
R₈Is aryl or heteroaryl; and
R₉Is H or alkyl
Including the compound.
[0014]
Another embodiment of the present invention is:
R₁Is NR₅R₆And;
R₂Is CONH₂And;
R₃Is H or halogen;
R₄Is aryl or heteroaryl;
R₅Is H or alkyl;
R₆Is SO₂-C_1-6Alkyl, SO₂NH-R₈Or SO₂NH-R₉And;
R₈Is aryl or heteroaryl; and
R₉Is H or alkyl
However, it is a compound.
[0015]
Yet another embodiment of the present invention is:
R₁Is NR₅R₆And;
R₂Is CONH₂And;
R₃Is H or halogen;
R₄Is selected from the group consisting of aryl and heteroaryl (excluding 4-pyridyl);
R₅Is alkyl;
R₆Is H, CO-C_1-6Alkyl, SO₂-C_1-6Alkyl, CONH-R₇, CONH-R₈, CSNH-R₇And CSNH-R₈Selected from the group consisting of:
R₇Is H or alkyl;
R₈Is aryl or heteroaryl; and
R₉Is H or alkyl
However, it is a compound.
[0016]
Compounds useful in this embodiment include:
2-[(pyridin-3-ylmethyl) -amino] -5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide; and
5-phenyl-2-[(pyridin-4-ylmethyl) -amino] -thiophen-3-carboxylic acid amide
Is included.
[0017]
Yet another embodiment of the present invention is:
R₁Is NR₅R₆And;
R₂Is CONH₂And;
R₃Is H or halogen;
R₄Is selected from aryl (excluding unsubstituted phenyl) or heteroaryl (except 4-pyridyl);
R₅Is H;
R₆Is CONH-R₇, CONH-R₈, CSNH-R₇And CSNH-R₈Selected from the group consisting of:
R₇Is H (R₅Is H) or alkyl; and
R₈Is aryl or heteroaryl
Including the compound.
[0018]
Compounds useful in this embodiment include:
2- (3-isopropyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-chloro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-thioureido) -5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-propyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-chloro- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5- (2-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-methyl-ureido)-[2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-p-tolyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-chloro-4-fluoro-phenyl) -2-ureido-thiophen-3-carboxylic acid amide
Is included.
[0019]
Yet another embodiment of the present invention is:
R₁Is NR₅R₆And;
R₂Is CONH₂And;
R₃Is H or halogen;
R₄Is aryl (excluding unsubstituted phenyl, phenyl substituted with one or two halogen or methyl, trifluoromethyl, methoxy) or heteroaryl (excluding 4-pyridyl);
R₅Is H;
R₆Is CO-C_1-6Is alkyl
Including the compound.
[0020]
Compounds useful in this embodiment include:
5-acetylamino- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-cyano-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-dimethylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methanesulfonyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-amino-4-methyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-benzo [1,3] dioxol-5-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methylsulfanyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3,4-dimethoxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-hydroxymethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino- [2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-4'-methyl- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-methyl- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-naphthalen-2-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-acetylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-ethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
Is included.
[0021]
The present invention further provides a preferred method of treating a disease associated with NF-κB activation, wherein the subject in need thereof is
2-amino-5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-amino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-amino-5- (3-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-amino-5- (2-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-amino-5- (4-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methoxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2-methoxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-[(pyridin-3-ylmethyl) -amino] -5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide;
5-phenyl-2-[(pyridin-4-ylmethyl) -amino] -thiophen-3-carboxylic acid amide;
[0022]
2-acetylamino-5- (3-trifluoromethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-cyano-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-dimethylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-trifluoromethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-bromo-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methanesulfonyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-amino-4-methyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3; 4-difluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
[0023]
2-acetylamino-5-benzo [1,3] dioxol-5-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methylsulfanyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3,4-dimethoxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,4-dichloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-bromo-2-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-hydroxymethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,4-difluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,3-dichloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-bromo-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2-bromo-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-isopropyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-chloro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
[0024]
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino- [2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-4'-methyl- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-methyl- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-naphthalen-2-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-acetylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-thioureido) -5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-propyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-amino- [2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-amino-5-naphthalen-2-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-ethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide;
[0025]
2-acetylamino-5- (3-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,3-difluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-chloro- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5- (2-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-methyl-ureido)-[2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-p-tolyl-thiophen-3-carboxylic acid amide; and
5- (3-chloro-4-fluoro-phenyl) -2-ureido-thiophen-3-carboxylic acid amide
A method comprising administering one or more compounds selected from the group consisting of:
[0026]
More preferred compounds useful in the present invention are
2-acetylamino-5- (3-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-ethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,3-difluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-chloro- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5- (2-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-methyl-ureido)-[2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide; and
2- (3-methyl-ureido) -5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide
Selected from the group consisting of:
[0027]
The present invention relates to disorders of inflammation and tissue repair, especially rheumatoid arthritis, inflammatory bowel disease, asthma and COPD (chronic obstructive pulmonary disease), osteoarthritis, osteoporosis and fibrosis, dermatoses such as psoriasis, atopic Dermatitis and ultraviolet (UV) -induced skin damage, autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, tissue organ rejection, Alzheimer's disease, seizures, atherosclerosis, relapse Stenosis, diabetes, glomerulonephritis, cancer such as Hodgkin's disease, cachexia, inflammation associated with infection and certain viral infections including acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), adult respiratory distress syndrome and ataxia telangiectasia And methods for treating various diseases associated with NF-κB activation, including:
[0028]
Definition
The present invention includes all hydrates, solvates, conjugates and prodrugs of the compounds of the present invention. Prodrugs are multiple covalent compounds that release the active parent drug according to Formulas I and II in vivo. When alternative forms of chiral or isomeric centers are present in compounds of the present invention, all such forms, including isomers, enantiomers and diastereomers, are intended to be included herein. Compounds of the invention containing a chiral center may be used as a racemic mixture, an enantiomerically enriched mixture, or the racemic mixture may be separated using known techniques and the individual enantiomers used alone. Where a compound has an unsaturated carbon-carbon double bond, both the cis (Z) and trans (E) isomers are within the scope of the invention. Where the compounds exist in tautomeric forms, such as keto-enol tautomers, each tautomer is included in the present invention, whether present in equilibrium or one form predominantly present. Think of things.
Unless otherwise specified, the meaning of any one substituent in formula I or a subformula thereof is independent of its meaning where otherwise, i.e., the meaning of any other substituent.
[0029]
The term "alkyl" as used herein refers to an optionally substituted hydrocarbon group connected by one carbon-carbon bond. The alkyl hydrocarbon group may be linear, branched or cyclic, and may be saturated or unsaturated. The substituent of the alkyl which may be substituted is aryl, OH, O-alkyl, CO, halogen, CF₃, And OCF₃Selected from the group consisting of:
As used herein, the term "aryl" refers to an optionally substituted aromatic group containing at least one ring having a conjugated pi-electron system containing up to two conjugated or fused ring systems. Aryl refers to carbocyclic aryl and diaryl groups, all of which may be optionally substituted. The substituent is halogen, C_1-4Alkyl, NH₂, OCF₃, CF₃, O-alkyl, S-alkyl, CN, CHO, SO₂-Alkyl and NO₂Selected from the group consisting of:
[0030]
As used herein, the term "heteroaryl" refers to at least a conjugated pi-electron system containing up to two conjugated or fused ring systems and 1-3 heteroatoms selected from O, S and N. Refers to an optionally substituted aromatic group having one ring. Heteroaryl includes carbocyclic heteroaryl, aryl-heteroaryl, and diheteroarylaryl groups, all of which may be optionally substituted. Preferred aryls are phenyl and naphthyl. More preferred aryls include phenyl. Preferred substituents are halogen, C_1-4Alkyl, NH₂, OCF₃, CF₃, O-alkyl, S-alkyl, CN, CHO, SO₂-Alkyl and NO₂Selected from the group consisting of: Examples of heteroaryl rings are pyrrole, furan, thiophene, indole, isoindole, benzofuran, isobenzofuran, benzothiophene, pyridine, quinoline, isoquinoline, quinolidine, pyrazole, imidazole, isoxazole, oxazole, isothiazole, thiazole, Including pyridazine, pyrimidine, and pyrazine.
As used herein, the term "halogen" refers to F, Cl, Br, and I.
[0031]
Manufacturing method
Compounds of the present invention can be readily prepared by the methods described in Schemes 1-8 below. General solution preparation of aminothiophene carboxamide is described in AC. U.S. Pat. No. 3,963,750 to Goudie, which is incorporated herein by reference, which is described below and in Scheme 1. Alternatives are described below and in the scheme. The general preparation of the corresponding sulfonamides is outlined in Scheme 3 or 4. The general preparation of a thiophene carboxamidourea or thiourea analog is described in Scheme 5, and the general preparation of a thiophene sulfonamide urea or thiourea analog is described in Scheme 6. The general preparation of thiophenecarboxamidosulfonylurea analogs is described in Scheme 7, and the general preparation of thiophenesulfoxyamidosulfonylurea analogs is described in Scheme 8.
[0032]
General preparation:
Using the procedure of US Pat. No. 3,963,750, triethylamine is added to a mixture of cyanoacetamide and sulfur in DMF at 40-45 ° C., and the resulting solution is treated with arylacetaldehyde to give aminothiophene. The resulting aminothiophene is reacted with an acid anhydride or acid chloride in pyridine to give the corresponding amide (Scheme 1). Treatment of the amine with a sulfonyl chloride in pyridine gives the corresponding sulfonamide (Scheme 1). Alternatively, K. H. Weber and H.W. Using the method of Daniel (Liebigs Ann. Chem. 1979, 328-333), cyanoacetamide and mercaptoacetaldehyde are reacted with triethylamine in ethanol at reflux temperature to give aminothiophene. Br of protected aminothiophene in aqueous buffer₂Is performed to give 5-bromothiophene, which is reacted with various boronic acids to give the corresponding 5-arylthiophene analogs (Scheme 2). The corresponding sulfonamide can be prepared starting from cyano sulfonamide (prepared according to the method described in US Pat. No. 2,978,482) (Scheme 3 and 4). Reaction of an aminothiophene carboxamide with an alkyl or aryl isocyanate or isothiocyanate gives the corresponding alkyl or aryl urea or thiourea (Scheme 5). The aminothiophene sulfonamide analog is reacted with an alkyl or aryl isocyanate or isothiocyanate to give the corresponding alkyl or aryl urea or thiourea (Scheme 6). The aminothiophene sulfonamide analog is reacted with chlorosulfonyl isocyanate or chlorosulfonyl thioisocyanate, followed by quenching with water to give the corresponding primary urea or thiourea (Scheme 6). The aminothiophene carboxamide is reacted with aminosulfonyl chloride to give the corresponding sulfonylurea (Scheme 7). The aminothiophene sulfonamide analog is reacted with aminosulfonyl chloride to give the corresponding sulfonylurea (Scheme 8).
[0033]
Scheme 1
Embedded image

[0034]
Scheme 2
Embedded image

[0035]
Scheme 3
Embedded image

[0036]
Scheme 4
Embedded image

[0037]
Scheme 5
Embedded image

[0038]
Scheme 6
Embedded image

[0039]
Scheme 7
Embedded image

[0040]
Scheme 8
Embedded image

[0041]
With reference to the preparation of compounds of Formula I described in Schemes 1-8 above, those skilled in the art will recognize that the present invention includes all novel intermediates required to make compounds of Formula I. right.
The starting materials used herein are either commercially available or prepared by conventional methods well known to those skilled in the art. The method is described in COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS, Vol. It can be found in basic reference books such as I-VI (published by Wiley-Interscience).
The acid addition salt of the compound of formula I may be prepared in a suitable solvent with the parent compound and hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydrofluoric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, maleic acid, succinic acid or methanesulfonic acid. Prepared by standard techniques from excess acid, such as Some of the compounds form acceptable internal salts or zwitterions. Cationic salts are prepared by treating the parent compound with an excess of an alkaline reagent, such as a hydroxide, carbonate or alkoxide, containing the appropriate cation; or with a suitable organic amine. Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺And NH₄ ⁺Cations such as are specific examples of cations in pharmaceutically acceptable salts. Halides, sulfates, phosphates, alkanates (eg, acetate and trifluoroacetate), benzoates, and sulfonates (eg, mesylate) are examples of pharmaceutically acceptable salt anions.
[0042]
The present invention provides a pharmaceutical composition comprising a compound according to Formula I and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient. Thus, the compounds of formula I will be used in the manufacture of a medicament. Pharmaceutical compositions of the compound of formula I, prepared as described below, will be formulated as a solution or lyophilized powder for parenteral administration. The powder may be reconstituted with a suitable diluent or other pharmaceutically acceptable carrier before use. Liquid formulations will be buffers, isotonic and aqueous solutions. Examples of suitable diluents are normal saline, standard 5% dextrose in water or sodium or ammonium buffer. Such formulations are particularly suitable for parenteral administration, but may be used for oral administration or contained as an inhaler in a metered dose inhaler or nebulizer. It may be desirable to add excipients such as polyvinylpyrrolidone, gelatin, hydroxycellulose, gum acacia, polyethylene glycol, mannitol, sodium chloride or sodium citrate.
[0043]
Alternatively, these compounds may be encapsulated, tableted, or prepared in an emulsifier or syrup for oral administration. A pharmaceutically acceptable solid or liquid carrier may be added to facilitate or stabilize the composition, or to facilitate preparation of the composition. Solid carriers include starch, lactose, calcium sulfate dihydrate, terra alba, magnesium or stearic acid, talc, pectin, acacia, agar gum or gelatin. Liquid carriers include syrup, peanut oil, olive oil, saline and water. The carrier will also include a sustained release material alone or with a wax, such as glyceryl monostearate or glyceryl distearate. The amount of solid carrier varies but, preferably, will be from about 20 mg to about 1 g per unit dose. Pharmaceutical preparations in the case of tablets are carried out in accordance with conventional techniques of pharmacy, including grinding, mixing, granulating and compressing; or in hard gelatin capsules, grinding, mixing and encapsulation. If a liquid carrier is used, the preparation will be in the form of a syrup, elixir, emulsifier or aqueous or non-aqueous suspension. Such a liquid formulation can be administered directly orally or enclosed in a soft gelatin capsule.
[0044]
For rectal administration, the compounds of the invention may also be combined with excipients such as cocoa butter, glycerin, gelatin or polyethylene glycols and formed into suppositories.
The methods of the present invention include topical inhalation and intracolonic administration of a compound of Formula I. Topical administration means non-systemic administration, which includes applying the compound of the present invention externally to the epidermis, to the oral cavity, and instilling the compound into the ear, eye and nose, in which the compound is significantly Does not enter the bloodstream. Systemic administration means oral, intravenous, intraperitoneal and intramuscular administration. The amount of a compound of the invention required for therapeutic or preventive effect with respect to topical administration (described below as the active ingredient) will, of course, vary with the compound selected, the type and severity of the disease being treated and the animal being treated, At the discretion of the consulting physician.
While it is possible for the active ingredient to be administered alone as the raw chemical, it is preferable to present it as a pharmaceutical formulation. The active ingredient may comprise from 0.01 to 5.0% by weight of the formulation for topical administration.
[0045]
The topical formulations of the present invention include the active ingredient with one or more acceptable carriers, for both domestic and human medicine, and may include certain other therapeutic ingredients. The carrier must be "acceptable" in the sense that it is compatible with the other ingredients of the formulation and must not be harmful to the recipient.
Formulations suitable for topical administration are: liquid or semi-liquid preparations suitable for penetration through the skin, such as liniments, lotions, creams, ointments or pastes, to the area in need of treatment; and eyes, ears or nose Contains drops suitable for administration to
Drops of the present invention include sterile aqueous or oily solutions or suspensions, wherein the active ingredient is dissolved in a suitable fungicide and / or fungicide and / or some other suitable preservative. It will be prepared and preferably contains a surfactant. The resulting solution may be clarified by filtration, transferred to a suitable container, then sealed and sterilized by autoclaving or maintaining at 90-100 ° C for 30 minutes. Alternatively, the solution may be sterilized by filtration and transferred to the container by aseptic technique. Examples of fungicides and fungicides suitable for drops are phenylmercuric nitrate or acetate (0.002%), benzalkonium chloride (0.01%) and chlorhexidine acetate (0.01%). Suitable solvents for the preparation of an oily solution include glycerol, diluted alcohol and propylene glycol.
[0046]
Lotions of the present invention include those suitable for application to the skin or eyes. Ophthalmic lotions will contain a sterile aqueous solution which may contain a bactericide and will be prepared in a manner similar to the preparation of drops. Lotions or liniments for application to the skin may also contain substances that speed drying and cool the skin, such as alcohol or acetone, and / or humectants such as glycerol or oils such as castor oil or peanut oil. It may be.
The cream, ointment or paste of the present invention is a semi-solid formulation for external application of the active ingredient. They are prepared by mixing the active ingredients in finely divided or powdered form, alone or in solution or suspension in aqueous or non-aqueous fluids, with an oily or non-oily base using suitable machines. Would. Bases are hydrocarbons such as hard, soft or liquid paraffin, glycerol, beeswax, metallic soaps; demulcents; natural oils such as almonds, corn, peanuts, castor or olive oil; wool fat or derivatives thereof, or stearic acid. Or they may contain fatty acids such as oleic acid along with alcohol such as propylene glycol or macrogol. The formulation will include some suitable surfactant such as an anionic, cationic or non-ionic surfactant such as a sorbitan ester or a polyoxyethylene derivative. It may also contain natural gums, suspending agents for inorganic substances such as cellulose derivatives or silica, and other components such as lanolin.
[0047]
(Use of the present invention)
The compounds of formula I are useful as inhibitors of IKK-beta kinase phosphorylation of IKB and are inhibitors of NF-KB activation. The methods of the present invention utilize the compositions and formulations of the compounds described above, and include the pharmaceutical compositions and formulations of the compounds described above.
The invention is particularly directed to a method of treating a disease associated with inappropriate NF-κB activation, comprising administering to an animal, particularly a mammal, most preferably a human, in need of one or more compounds of formula I. I will provide a. The invention is particularly useful for inflammation and tissue repair disorders, especially rheumatoid arthritis, inflammatory bowel disease, asthma and COPD (chronic obstructive pulmonary disease), osteoarthritis, osteoporosis and fibrosis, skin diseases such as psoriasis, Atopic dermatitis and ultraviolet (UV) -induced skin damage, autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, tissue organ rejection, Alzheimer's disease, seizures, atherosclerosis Restenosis, diabetes, glomerulonephritis, cancer, eg, Hodgkin's disease, cachexia, inflammation associated with certain viral infections including infection and acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), adult respiratory distress syndrome and telangiectasia Provide a treatment for ataxia.
[0048]
For acute treatment, parenteral administration of one or more compounds of Formula I is useful. Intravenous infusion of the compound in 5% dextrose water or normal saline, or a similar formulation with appropriate excipients, is most effective, but an intramuscular bolus injection is also useful. Typically, parenteral dosages will range from about 0.01 to about 50 mg / day in a method that maintains plasma drug concentrations at a concentration effective to inhibit IKK-beta and subsequent NF-κB activation. kg; preferably between 0.1 and 20 mg / kg. The compound is administered one to four times daily at a level to achieve a total daily dose of about 0.4 to 80 mg / kg / day. The exact amount of the compound used in the methods of the invention having therapeutic effect, and the best route by which the compound will be administered, is determined in the art by comparing the blood levels of the substance to the concentrations required to have a therapeutic effect. It is easily quantified with the technology described above.
[0049]
The compound of formula I may also be used in such a way that the drug concentration is sufficient to inhibit IKK-beta and subsequent activation of NF-κB or to achieve any of the other indications as disclosed herein. May be administered orally to the patient. Typically, a pharmaceutical composition containing the compound is administered at an oral dosage of about 0.1 to about 50 mg / kg in a manner tailored to the condition of the patient. Preferably, the oral dose will be from about 0.5 to about 20 mg / kg.
The compound of formula I may also be used in such a way that the drug concentration is sufficient to inhibit IKK-beta and subsequent activation of NF-κB or to achieve any of the other indications as disclosed herein. May be administered locally to the patient. Typically, a pharmaceutical composition containing the compound will be administered in a topical formulation from about 0.01% to about 5% w / w.
When a compound of the present invention is administered in accordance with the present invention, no unacceptable toxic effects are expected.
[0050]
The inhibitory effect of the compounds described herein on NF-κB is demonstrated as an inhibitory effect of IKK-β on the phosphorylation of the N-terminal fragment of IκB-α (see Table 1 in the Examples). These compounds also inhibit IκB-α degradation and nuclear translocation in human monocytes and other mammalian cells for activation of cells by pro-inflammatory stimuli (eg, TNF-α, LPS, etc.). In addition, these compounds inhibit inflammatory mediator precursor production from LPS-stimulated human monocytes and stimulated human synovial fibroblasts. The use of the NF-κB inhibitors of the present invention for the treatment of diseases presupposes the importance of NF-κB in various diseases.
NF-κB is a cytokine such as TNF, IL-1β, IL-6 and IL-8 (Mukaida et al., 1990; Liberman and Baltimore, 1990; Matsusaka et al., 1993), cell adhesion molecules such as ICAM and VCAM ( Marui et al., 1993; Kawai et al., 1995; Ledebur and Parks, 1995), and in regulating the expression of a number of inflammatory mediator precursors, including inducible nitric oxide synthase (iNOS) (Xie et al., 1994; Adcock et al., 1994). Plays an important role. (The entire reference citation is at the end of this section). Such mediators are known to act in the supply of leukocytes to sites of inflammation, and in the case of iNOS, induce organ destruction in several inflammatory and autoimmune diseases (McCartney-Francis et al., 1993; Kleemannn). Et al., 1993).
[0051]
Evidence for an important role of NF-κB in inflammatory disorders has been obtained in studies of asthmatics. Bronchial biopsies obtained from mild atopic asthma are compared to biopsies from normal non-atopic controls when activated NF-κB, total NF-κB, and NF-κB regulation such as GM-CSF and TNFα Submucosal tissue staining for cytokines shows a marked increase in cell number (Wilson et al., 1998). In addition, the proportion of blood vessels expressing NF-κB immunoreactivity is increasing in the epithelium of biopsy specimens, as well as IL-8 immunoreactivity (Wilson et al., 1998). Thus, inhibition of IL-8 production by inhibition of NF-κB would be considered beneficial in airway inflammation as demonstrated by these compounds.
Recent studies have shown that NF-κB also plays an important role in the pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD). Activated NF-κB is found in colon biopsy specimens from patients with Crohn's disease and ulcerative colitis (Ardite et al., 1998; Rogler et al., 1998; Schreiber et al., 1998). Activation has been confirmed on inflammatory mucosa but not on non-inflammatory mucosa (Ardite et al., 1998; Rogler et al., 1998) and is associated with increased IL-8 mRNA expression at the same site (Ardite et al., 1998). Furthermore, corticosteroid treatment strongly inhibits intestinal NF-κB activation and reduces colonic inflammation (Ardite et al., 1998; Schreiber et al., 1998). Again, inhibition of IL-8 production by inhibition of NF-κB would be considered beneficial in airway inflammation as demonstrated by these compounds.
[0052]
Animal models of gastrointestinal inflammation provide further support for NF-κB as a key regulator of colon inflammation. Increased NF-κB activity is observed in lamina propria macrophages of 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS) -induced colitis in mice, and p65 is a major component of the activation complex (Neurath et al. , 1996; Neuroth and Petersson, 1997). The signs of chronic colitis disappear in animals treated by topical administration of antisense p65 without signs of toxicity (Neurath and Petersson, 1997). Thus, small molecule inhibitors of NF-κB would be useful in treating IBD.
Further evidence for a role for NF-κB in inflammatory disorders came from studies of rheumatoid synovium. Although NF-κB is normally present as an inactive cytoplasmic complex, recent immunohistochemistry studies have shown that NF-κB has been associated with human rheumatoid arthritis (Handel et al., 1995; Marok et al., 1996; Sioud et al., 1998) and the aforementioned diseases. In animal models (Tsao et al., 1997). Staining has been associated with type A synovial cells and vascular endothelial cells (Marok et al., 1996). In addition, synovial cells in which structural activation of NF-κB was cultured (Roshak et al., 1996; Miyazawa et al., 1998) and in synovial cell cultures stimulated with IL-1β or TNFα (Roshak et al., 1996; Fujisawa et al. 1996; Roshak et al., 1997). Thus, activation of NF-κB is based on increased cytokine production and leukocyte infiltration characteristic of inflamed synovium. The ability of these compounds to inhibit NF-κB and subsequently inhibit the production of inflammatory mediator precursors (eg, cytokines and prostanoids) by these cells would be advantageous in rheumatoid arthritis.
[0053]
Biological analysis:
The compounds of the present invention will be tested in one of several biological assays to quantify the concentration of the compound required to have certain pharmacological effects.
NF-κB activity will also be measured in an electrophoretic mobility shift assay (EMSA) to assess the presence of NF-κB protein in the nucleus. 1x10 cells of interest⁶Incubate to a density of / mL. Cells are harvested by centrifugation and Ca²⁺And Mg²⁺Wash with PBS without²⁺And Mg²⁺1x10 in PBS containing⁷Resuspend in cells / ml. To test the effect of compounds on NF-κB activation, cell suspensions were treated with different concentrations of drug or vehicle (DMSO, 0.1%) for 30 minutes at 37 ° C., followed by another 15 minutes of TNF-κB. Stimulate with α (5.0 ng / mL). Cell and nuclear extracts are prepared as follows. Briefly, at the end of the incubation, cells (1 × 10⁷Cells)²⁺And Mg²⁺Wash twice with PBS free. The resulting cell pellet is resuspended in 20 μL of buffer A (10 mM HEPES (pH 7.9), 10 mM KCl, 1.5 mM MgCl 2, 0.5 mM dithiothreitol (DTT) and 0.1% NP40) and placed on ice for 10 minutes Incubate with The nuclei are pelleted by microcentrifugation at 3500 rpm for 10 minutes at 4 ° C. The resulting supernatant was collected as a cell extract and the nuclear pellet was treated with 15 μL of Buffer C (20 mM Hepes (pH 7.9), 0.42 M NaCl, 1.5 mM MgCl 2, 25% glycerol, 0.2 mM EDTA, 0.5 mM DTT, And 0.5 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF). The suspension is gently mixed for 20 minutes at 4 ° C and subjected to microcentrifugation at 14000 rpm for 10 minutes at 4 ° C. The supernatant is collected and diluted with 60 μL of Buffer D (20 mM Hepes pH 7.9, 50 mM KCl, 20% glycerol, 0.2 mM EDTA, 0.5 mM DTT, and 0.5 mM PMSF). All samples are stored at -80 C until analysis. The protein concentration of the extract is quantified with BioRad reagent according to the method of Bradford.
[0054]
The effect of the compound on transcription factor activation is assessed by electrophoretic mobility shift assay (EMSA) using extracts from cells treated as described above. The duplex NF-κB consensus oligonucleotide (5′-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3 ′) was converted to T4 polynucleotide kinase and [g-³²P] Label with ATP. The binding mixture (25 uL) contained 10 mM Hepes-NaOH (pH 7.9), 4 mM Tris-HCl (pH 7.9), 60 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 10% glycerol, 0.3 mg / mL bovine serum albumin, and 1 ug. Poly (dI-dC) Contains poly (dI-dC). 0.5 ng of the binding mixture (10 ug nuclear extract protein)³²Incubate with P-labeled oligonucleotide (50,000-100,000 cpm) with and without unlabeled competitor for 20 minutes at room temperature, then mix the mixture on a 4% polyacylamide gel prepared in 1 × trisborate / EDTA. Run for 2 hours at 200V. After electrophoresis, the gel is dried and exposed to film for detection of the binding reaction.
[0055]
The effect of the compound on the phosphorylation of IκB can be monitored by Western blot. The cell extract was subjected to sodium dodecyl sulfate polyacylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) on a 10% gel (BioRad, Hercules, Calif.) To convert the protein to a nitrocellulose sheet (Hybondtm-ECL, Amersham, Arlington Heights, USA). IL). A polyclonal rabbit antibody against IκBα or IκBβ is further subjected to immunoblot assay using a peroxidase-conjugated donkey anti-rabbit secondary antibody (Amersham, Arlington Heights, Ill.). Immunoreactive bands are detected using an amplified chemiluminescence (ECL) assay system (Amersham, Arlington Heights, IL).
[0056]
The assay for IκB kinase was performed as follows: IKK-α was expressed as a hexahistidine-tagged protein in baculovirus-infected insect cells and purified through a Ni-NTA affinity column. Assay buffer (20 mM Hepes, pH 7.7, 2 mM MgCl 2) containing different concentrations of compound or DMSO vehicle and ATP as indicated (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ)₂, 10 mM β-glycerin phosphate, 10 mM NaF, 10 mM PNPP, 0.3 mM Na₃VO₄Kinase activity was assayed using 50 ng of purified protein in 1 mM benzamidine, 2 μMPMSF, 10 μg / ml aprotinin, 1 ug / mL leupeptin, 1 ug / mL pepstatin, 1 mM DTT). 200 ng of IκB-GST (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) was added and the reaction was started in a total volume of 50 μL. After the reaction was continued for 1 hour at 30 ° C., the reaction was stopped by adding EDTA to a final concentration of 20 mM. Dissociation-enhanced lanthanide fluorescence immunoassay using a IκB-α-phosphate (Ser32) antibody (Wallac Oy, Turku, Finland) and an Eu3 + -labeled anti-rabbit IgG (Wallac Oy, Turku, Finland). Activity was quantified. Plates were read on a VICTOR 1420 multilabel counter (Wallec) using the standard europium protocol (excitation 340 nm, emission 615 nm; fluorescence measured 400 μs then 400 μs later). Data is expressed in fluorescence (cps) units.
[0057]
IKK-β was expressed as a GST-labeled protein, and its activity was evaluated in a 96-well scintillation proximity assay (SPA). Briefly, different concentrations of compound or DMSO vehicle, 240 nMATP and 200 nCi [γ-³³Assay buffer IKK-β was diluted with assay buffer (final 20 nM) as described above, along with [P] -ATP (10 mCi / mL, 2000 Ci / mmol; NEN Life Science Products, Boston, MA). A biotinylated peptide containing 15-46 amino acids of IκB-α (American Peptide) was added to a final concentration of 2.4 μM, and the reaction was started in a total volume of 50 μL. After incubating the samples for 1 hour at 30 ° C., 150 uL of stop buffer (PBSw / oCa2 +, Mg2 +, 0.1% Triton X) containing 0.2 mg streptavidin-coated SPA PVT beads (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). -100 (v / v), 10 mM EDTA). The samples were mixed, incubated for 10 minutes at room temperature, centrifuged (1000 × g, 2 minutes) and measured on a Hewlett-Packard TopCount.
[0058]
The effect of the IKK-β inhibitor on primary synovial fibroblast mediator production was evaluated as follows: Synovium from an adult patient with rheumatoid arthritis as described above (Roshak et al., 1996b) was enzymatically digested to produce human RSF. A primary medium was obtained. In Earl's Minimal Essential Medium (EMEM) containing 10% calf serum (FBS), 100 units / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin (GIBCO, Grand Island, NY) at 37 ° C. and 5 ° C. % CO₂The cells were cultured in. Culture media from passages 4 to 9 were used to obtain a more uniform type B fibroblast count. In some experiments, fibroblasts were plated at 5 × 10 4 cells / mL in 16 mm (diameter) 24-well plates (Costar, Cambridge, Mass.). Cells (70-80% confluent) were exposed to IL-1β (1 ng / mL) (Genzyme, Cambridge, Mass.) For a predetermined time. Drug in DMSO vehicle (1%) was added to the cell medium 15 minutes before adding IL-1. Experiments were performed 3-4 times using synovial cells from different donors. RSF cell extracts were prepared from cells treated as described above. Briefly, human RSF was removed with trypsin / EDTA, washed, and collected by centrifugation. Cell extracts were prepared as described above (Diagnam et al., 1983; Osborn et al., 1989). Briefly, at the end of the incubation, cells (1 × 10⁷Cells)²⁺And Mg²⁺Washed twice with PBS free. The obtained cell pellet is mixed with 20 μL of buffer A (10 mM Hepes (pH 7.9), 10 mM KCl, 1.5 mM MgCl 2).₂, 0.5 mM).
[0059]
The effects of IKK-β inhibition on eicosanoid and cytokine production upon human monocyte stimulation were evaluated as follows: Monocytes were isolated from heparinized whole blood as described above by double gradient centrifugation (double gradient centrifugation). did. PBMCs-enriched isolated monocytes were plated in 24-well culture plates at 2 × 10 4 in RPMI 1640 10% FBS (Hyclone, Logan, Utah).⁶Monocytes were further increased by attachment at cells / mL for 2 hours. The medium was removed, the cells were washed once with RPMI 1640, and 1 mL RPMI 1640 10% FBS was added to the wells. Test compounds were added to the wells with a final vehicle concentration of 0.05% DMSO. Monocytes were activated with 200 ng / mL endotoxin (LPS; E. coli serotype 026: B6) (Sigma, St. Louis, MO.) And incubated for 24 hours. Cell-free supernatants were analyzed by ELISA for TNF-α (EIA developed at SB), PGE2 (Cayman Chemical, Ann Arbor, Mich.) And IL-8 and IL-6 (Biosource International, Camarillo, Calif.). Cell viability was quantified by trypan blue exclusion.
[0060]
The effects of IKK-β inhibitors on phorbol ester-induced inflammation were evaluated as follows: the inflammatory response induced by dermal application of phorbol ester (PMA) to the outer ear of Balb / c mice was a multifactorial inflammation of the epidermis It proved to be a useful model for testing cell invasion and inflammatory changes. Strong inflammatory lesions are occupied by neutrophil infiltration and can be easily quantified by measuring the tissue concentration of myeloperoxidase, azulophil granulase present in neutrophils. In addition, the overall intensity of the inflammatory response can be measured by quantifying ear thickness. Balb / c mice (n = 6 / group) received drug treatment or vehicle plus PMA (4 ug / ear). Mice were sacrificed after 4 hours and ear thickness was quantified and NF-KB activation was monitored by IKB Western or EMSA analysis.
[0061]
The effect of IKK-β on rat carrageenan-induced paw edema was assessed as follows: Male Lewis rats (Charles River-Raleigh, NC) were maintained with free access to food and water. The weight in each experiment was between 200 and 275 g. Compounds or vehicle (0.5% tragacanth (oral) or 10% DMSO, 5% DMA, 30% cremophor (ip)) were administered 30 minutes to 1 hour before carrageenan infusion. Sterilized dH₂Edema was induced by injecting 1% carrageenan in O (0.05 ml / paw) into the plantar surface of the right hindpaw. To quantify changes in paw volume, paw thickness was measured before administration of compound or vehicle and again 3 hours later. Rat CO₂They were killed by inhalation, the right hind limb was removed, snap frozen in liquid nitrogen and stored at -80 ° C for analysis.
[0062]
General remarks
Nuclear magnetic resonance spectra were recorded at either 250, 300 or 400 MHz using a Bruker AM250, Bruker ARX300 or Bruker AC400 spectrometer, respectively. CDCl3 is deuteriochloroform, DMSO-d6 is hexadeuteriodimethylsulfoxide, and CD3OD is tetradeuteriomethanol. Chemical shifts are expressed in parts per million (d) downfield from the internal standard tetramethylsilane. Abbreviations for NMR data are as follows: s = singlet, d = doublet, t = triplet, q = quartet, m = multiplet, dd = doublet of doublet, dt = doublet of triplet, app = apparent, br = Broad. J indicates the NMR coupling constant measured in Hertz. Continuous wave infrared (IR) spectra were recorded on a Perkin-Elmer 683 infrared spectrometer, and Fourier transform infrared (FTIR) spectra were recorded on a Nicolet Impact 400D infrared spectrometer. The IR and FTIR spectra were recorded in transmission mode and the band position was set to the inverse wavenumber (cm^-1). Mass spectra were measured using fast atom bombardment (FAB) or electron ejection (ES) ionization on either a VG70FE, PE Syx API III, or VG ZAB HF instrument. Elemental analysis was obtained using a Perkin-Elmer 240C elemental analyzer. Melting points were measured on a Thomas-Hoover melting point apparatus but were not corrected. All temperatures are given in degrees Celsius.
[0063]
Analtech Silica Gel GF and E.I. Merck Silica Gel 60F-254 lamina was used for thin layer chromatography. Both flash and gravity chromatography were performed using E. coli. Performed on Merck Kieselgel 60 (230-400 mesh) silica gel.
Where indicated, the material was purchased from Aldrich Chemical, Milwaukee, Wisconsin, TCI America, Portland, OR.
[0064]
Example
In the following synthesis examples, temperatures are in degrees Celsius (° C.). Unless otherwise indicated, all starting materials are commercially available. Without further elaboration, it is believed that one skilled in the art can, using the preceding description, utilize the present invention in all thereof. The following examples illustrate the invention and do not limit its scope. Reference is made to the claims as to what the inventor reserves.
[0065]
Example 1
Preparation of 2-amino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
a. (4-fluoro-phenyl) -acetaldehyde
To a solution of PCC (23 g, 107 mmol) in CH2Cl2 (200 mL) was added 2- (4-fluorophenyl) -ethanol (10 g, 71.4 mmol) dropwise over 30 minutes. The resulting dark solution was stirred at room temperature for 18 hours (overnight). Ethyl ether (200 mL) was added to the solution and stirred for 10 minutes. The reaction mixture was filtered through fluorosil and concentrated under reduced pressure to give a brown oil, which was then purified by flash chromatography column (10% to 50% ethyl acetate in hexane) to give the title compound as a brown solid ( 3.5 g, 25.4 mmol).
[0066]
b. Preparation of 2-amino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
A. C. 2-cyanoacetamide (2 g, 24 mmol), sulfur (0.77 g, 24 mmol) and (4-fluoro-phenyl) -acetaldehyde from Example 1a as described in US Pat. No. 3,963,750 to Goudie. To a solution of 3.3 g (24 mmol) in DMF (10 mL) was added dropwise triethylamine (3.3 mL, 24 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature for 18 hours (overnight). The reaction mixture was then poured into ice water (20mL) and dissolved in ethyl acetate (3x25mL). The organic phase was washed with brine (2 × 20 mL), dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated. The product was then recrystallized from ethyl acetate to give the title compound as a light brown solid (3g, 12.7mmol, 53% yield). Greater yields can also be obtained by purifying the mother liquor via flash chromatography (30% -80% ethyl acetate in hexane). LC MS [M + H] + m / e 237.
[0067]
Example 2
Preparation of 2-acetylamino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
A. C. A vigorously stirred mixture of the compound from Example 1 (0.01 mol) and pyridine (20 mL) at 0 ° C. is added dropwise with acetyl chloride (0.011 mol) as described in US Pat. No. 3,963,750 to Goudie. Processed. The resulting solution was stirred at 0 ° C. for a further 30 minutes and then poured into cold water. The precipitate was collected by filtration, washed with water and dried. Recrystallization from ethanol gave the title compound (90%, mp 230-233 ° C).
[0068]
Example 3
Preparation of 2-amino-5- (4-methyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained using the procedure described in Example 1, except that 4-methylphenylacetaldehyde was used instead of 4-fluorophenylacetaldehyde. 228-230 ° C.
[0069]
Example 4
Preparation of 2-amino-5- (4-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained using the procedure described in Example 1, except that 4-chlorophenylacetaldehyde was used instead of 4-fluorophenylacetaldehyde. 255-257 ° C.
[0070]
Example 5
Preparation of 2-amino-5- (3-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained using the procedure described in Example 1, but using 3-chlorophenylacetaldehyde instead of 4-fluorophenylacetaldehyde. 190-192 ° C.
[0071]
Example 5
Preparation of 2-amino-5-phenyl-thiophene-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained using the procedure described in Example 1, except that phenylacetaldehyde was used in place of 4-fluorophenylacetaldehyde.
[0072]
Example 6
Preparation of 2-acetylamino-5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained using the procedure described in Example 2, but using the compound of Example 5 in place of amino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophene-3-carboxylic acid amide.
[0073]
Example 7
Preparation of 2-acetylamino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
a. 2-amino-thiophene-3-carboxylic acid amide
A mixture of thioacetaldehyde and cyanoacetamide in ethanol was heated at reflux with triethylamine for 1 hour, the reaction was filtered, the filtrate was dissolved in ethyl acetate, washed with 2N NaOH, and dried over magnesium sulfate. Allow to evaporate. Recrystallize from diethyl ether to obtain the title compound.
[0074]
b. 2-acetylamino-thiophene-3-carboxylic acid amide
Using the procedure described in Example 2, react the compound from Example 7a with acetic anhydride in pyridine to give the title compound.
[0075]
c. 2-acetylamino-5-bromo-thiophen-3-carboxylic acid amide
The compound from Example 7b in HBr / acetic acid is treated at 0 ° C. with bromine. Continue the reaction until all of the starting material has been consumed. The reaction is then quenched with water, neutralized and extracted with ethyl acetate. Wash the organic extract with sodium thiosulfate, dry over magnesium sulfate and evaporate to give the title compound.
[0076]
d. 2-acetylamino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
Example 7c (1 equivalent), 4-fluorophenylboronic acid (1 equivalent), (Ph₃P)₄Pd and 2M Na₂CO₃The mixture in (aqueous) toluene / EtOH (4: 1) is heated at reflux for 24 hours. Cool the mixture and separate the layers. The aqueous layer was extracted with ethyl acetate, Na₂CO₃(Aqueous), washed with MgSO₄Dry on top and evaporate. Purification by flash chromatography gives the title compound. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 279.
[0077]
Example 8
Preparation of 2-acetylamino-5- (3-cyano-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained after preparative reverse phase HPLC using the method of Example 7d, except that 3-cyanophenylboronic acid was used instead of 4-fluorophenylboronic acid. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 286.
[0078]
Example 9
Preparation of 2-acetylamino-5- (4-dimethylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained after preparative reverse phase HPLC using the method of Example 7d, except that 4-dimethylaminophenylboronic acid was used instead of 4-fluorophenylboronic acid. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 304.
[0079]
Example 10
Preparation of 2-acetylamino-5- (4-methanesulfonyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained after preparative reverse phase HPLC using the method of Example 7d, except that 4-methanesulfonylphenylboronic acid was used instead of 4-fluorophenylboronic acid. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 339.
[0080]
Example 11
Preparation of 2-acetylamino-5-benzo [1,3] dioxole-5yl-thiophene-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained after preparative reverse phase HPLC using the method of Example 7d except that 3,4-methylenedioxyphenylboronic acid was used instead of 4-fluorophenylboronic acid. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 305.
[0081]
Example 12
Preparation of 2-acetylamino-5- (3-hydroxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained after preparative reverse phase HPLC using the method of Example 7d, except that 3-hydroxyphenylboronic acid was used instead of 4-fluorophenylboronic acid. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 291.
[0082]
Example 13
Preparation of 5-acetylamino- [2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide
The title compound was obtained after preparative reverse phase HPLC using the method of Example 7d, except that 3-thiophenboronic acid was used instead of 4-fluorophenylboronic acid. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 267.
[0083]
Example 14
Preparation of 2-acetylamino-5-naphthalen-2-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide
The title compound was obtained after preparative reverse phase HPLC using the method of Example 7d, except that 2-naphthaleneboronic acid was used instead of 4-fluorophenylboronic acid. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 311.
[0084]
Example 15
Preparation of 2- (3-methyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide The compound of Example 5 was reacted with methyl isocyanate in pyridine at room temperature. Evaporated and purified by reverse phase HPLC to give the title compound. MS (LC / MS) [M + H] + m / e 276.
[0085]
The above specification and examples fully disclose how to make and use the compounds of the present invention. However, the invention is not limited to the specific embodiments described above, and all modifications are within the scope of the following claims. Various references to journals, patents, and other publications cited herein are known to those of skill in the art, and even if fully described, may be incorporated herein by reference. Department.

Claims (26)

A method of inhibiting IKK-β phosphorylation and subsequent degradation of IκB, wherein the effective amount of formula (I) is in a patient in need thereof.

[In the formula:
R ₁ is NR ₅ R ₆ ;
R ₂ is CONH ₂ or SO ₂ NH ₂ ;
R ₃ is H or halogen;
R ₄ is aryl or heteroaryl;
R ₅ is H or alkyl;
R ₆ is H, CO—C _1-6 alkyl, SO ₂ —C _1-6 alkyl, CONH—R ₇ , CONH—R ₈ , CSNH—R ₇ , CSNH—R ₈ , SO ₂ NH—R ₈ and SO Selected from the group consisting of ₂ NH-R ₉ ;
R ₇ is H or alkyl; provided that when R ₂ is CONH ₂ and R ₅ is H, R ₇ is a group other than H;
R ₈ is aryl or heteroaryl; and R ₉ is H or alkyl.
Or a pharmaceutically acceptable salt, hydrate or solvate thereof. R ₃ is H;
R ₅ is a H; and _{R 6} is _{CO-C 1-6} alkyl, where is selected from the group consisting of _{CONH-R 7} and _SO 2 _{NH-R 9,} a compound according to claim 1. Where R ₆ is _{CONH-R 7} or _SO 2 _{NH-R 9,} compound of claim 2. The compound is
2-amino-5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-amino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-amino-5- (3-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-amino-5- (2-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-amino-5- (4-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methoxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2-methoxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-[(pyridin-3-ylmethyl) -amino] -5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide;
5-phenyl-2-[(pyridin-4-ylmethyl) -amino] -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-trifluoromethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-cyano-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-dimethylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-trifluoromethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-bromo-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methanesulfonyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-amino-4-methyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3; 4-difluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-benzo [1,3] dioxol-5-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methylsulfanyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3,4-dimethoxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,4-dichloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-bromo-2-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-hydroxymethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,4-difluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,3-dichloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-bromo-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2-bromo-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-isopropyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-chloro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino- [2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-4′-methyl- [2,2 ′] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-methyl- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-naphthalen-2-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-acetylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-thioureido) -5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-propyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-amino- [2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-amino-5-naphthalen-2-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-ethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,3-difluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-chloro- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5- (2-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-methyl-ureido)-[2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-p-tolyl-thiophen-3-carboxylic acid amide; and 5- (3-chloro-4-fluoro-phenyl) -2-ureido-thiophen-3-carboxylic acid amide The method of claim 1, wherein the method is selected from the group consisting of: The compound is
2-acetylamino-5- (3-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-chloro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-ethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (2,3-difluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-chloro- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5- (2-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-methyl-ureido)-[2,3 ′] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide; and 2- (3-methyl-ureido) -5-p-tolyl-thiophene-3-carboxylic acid amide 5. The method of claim 4, wherein the method is selected from a group. 2. The method of claim 1, wherein the disease is inflammation or a tissue repair disorder. Diseases include inflammation and tissue repair disorders, especially rheumatoid arthritis, inflammatory bowel disease, asthma and COPD (chronic obstructive pulmonary disease), osteoarthritis, osteoporosis and fibrosis, skin diseases such as psoriasis, atopic skin Flame and ultraviolet (UV) -induced skin damage, autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, organ organ rejection, Alzheimer's disease, seizures, atherosclerosis, restenosis From diabetes, glomerulonephritis, cancer such as Hodgkin's disease, cachexia, inflammation associated with infection and certain viral infections including acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), adult respiratory distress syndrome and ataxia-telangiectasia 7. The method of claim 6, wherein the method is selected from the group consisting of: The method according to claim 7, wherein the disease is a skin disease. 2. The method according to claim 1, wherein the disease is selected from the group consisting of psoriasis, atopic dermatitis and UV-induced skin damage. The disease is selected from the group consisting of an autoimmune disease, tissue organ rejection, Alzheimer's disease, stroke, atherosclerosis, restenosis, diabetes, glomerulonephritis, osteoarthritis, osteoporosis and ataxia telangiectasia The method according to claim 1. 2. The method according to claim 1, wherein the disease is an autoimmune disease. 2. The method according to claim 1, wherein the autoimmune disease is systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, psoriatic arthritis or ankylosing spondylitis, diabetes. 2. The method according to claim 1, wherein the disease is cancer and / or a malignant substance. 2. The method of claim 1, wherein the cancer is Hodgkin's disease. 2. The method of claim 1, wherein the disease is infection and inflammation associated with a particular viral infection, including acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). 2. The method of claim 1, wherein the disease is AIDS. 2. The method according to claim 1, wherein the disease is adult respiratory distress syndrome. 2. The method of claim 1, further characterized by dual inhibition of NF-KB and checkpoint kinase. The following formula (I):

[In the formula:
R ₁ is NR ₅ R ₆ ;
R ₂ is SO ₂ NH ₂ ;
R ₃ is H or halogen;
R ₄ is aryl or heteroaryl;
R ₅ is H or alkyl;
R ₆ is from the group consisting of H, CO—C _1-6 alkyl, CONH—R ₇ , CONH—R ₈ , CSNH—R ₇ , CSNH—R ₈ , SO ₂ NH—R ₈ and SO ₂ NH—R ₉ Selected;
R ₇ is H or alkyl;
R ₈ is aryl or heteroaryl; and R ₉ is H or alkyl.
A compound represented by the formula: The following formula (I):

[In the formula:
R ₁ is NR ₅ R ₆ ;
R ₂ is CONH ₂ ;
R ₃ is H or halogen;
R ₄ is aryl or heteroaryl;
R ₅ is H or alkyl;
R ₆ is SO ₂ NH—R ₈ or SO ₂ NH—R ₉ ;
R ₈ is aryl or heteroaryl; and R ₉ is H or alkyl.
A compound represented by the formula: The following formula (I):

[In the formula:
R ₁ is NR ₅ R ₆ ;
R ₂ is CONH ₂ ;
R ₃ is H or halogen;
R ₄ is selected from the group consisting of aryl and heteroaryl (excluding 4-pyridyl);
R ₅ is alkyl;
R ₆ is selected from the group consisting of H, CO—C _1-6 alkyl, CONH—R ₇ , CONH—R ₈ , CSNH—R ₇ , and CSNH—R ₈ ;
R ₇ is H or alkyl;
R ₈ is aryl or heteroaryl; and R ₉ is H or alkyl.
A compound represented by the formula: 2-[(pyridin-3-ylmethyl) -amino] -5-p-tolyl-thiophen-3-carboxylic acid amide; and 5-phenyl-2-[(pyridin-4-ylmethyl) -amino] -thiophen-3 22. The compound of claim 21, wherein the compound is selected from the group consisting of carboxamides. The following formula (I):

[In the formula:
R ₁ is NR ₅ R ₆ ;
R ₂ is CONH ₂ ;
R ₃ is H or halogen;
R ₄ is selected from aryl (excluding unsubstituted phenyl) or heteroaryl (except 4-pyridyl);
R ₅ is H;
R ₆ is selected from the group consisting of CONH-R ₇ , CONH-R ₈ , CSNH-R ₇ and CSNH-R ₈ ;
R ₇ is H (except when R ₅ is H) or alkyl; and R ₈ is aryl or heteroaryl]
A compound represented by the formula: 2- (3-isopropyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide; 5- (3-chloro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-thioureido) -5- (4-fluoro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-propyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2- (3-ethyl-ureido) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-chloro- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5- (2-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-ureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (4-fluoro-phenyl) -2- (3-methyl-thioureido) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5- (3-methyl-ureido)-[2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2- (3-methyl-ureido) -5-p-tolyl-thiophen-3-carboxylic acid amide; and 5- (3-chloro-4-fluoro-phenyl) -2-ureido-thiophene-3-carboxylic acid amide 23. The compound of claim 22, wherein the compound is selected from the group consisting of: The following formula (I):

[In the formula:
R ₁ is NR ₅ R ₆ ;
R ₂ is CONH ₂ ;
R ₃ is H or halogen;
R ₄ is aryl (excluding unsubstituted phenyl, 1 or 2 halogen or methyl, trifluoromethyl, phenyl substituted with methoxy) or heteroaryl (excluding 4-pyridyl);
R ₅ is H;
R ₆ is CO—C _1-6 alkyl]
A compound represented by the formula: 5-acetylamino- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-cyano-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-dimethylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methanesulfonyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-amino-4-methyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-benzo [1,3] dioxol-5-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-methylsulfanyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3,4-dimethoxy-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (3-hydroxymethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
5-acetylamino- [2,3 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-4′-methyl- [2,2 ′] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
5-acetylamino-5'-methyl- [2,2 '] bithiophenyl-4-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5-naphthalen-2-yl-thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-acetylamino-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide;
2-acetylamino-5- (4-ethyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide; and 2-acetylamino-5- (3-formyl-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid amide.
13. The compound according to claim 12, wherein the compound is selected from the group consisting of: