JP2004137175A - New antibiotics, kigamicins, and their use - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain antibiotics which have new molecular skeletons and exhibit an antitumor activity and antibacterial activities against gram-positive bacteria. <P>SOLUTION: New antibiotics, Kigamicins A, B, C, D, and E, represented by formula (I) (R is a sugar chain of the formula or one of other sugar chains). The new antibiotics are obtained by culturing Amycolatopsis sp. ML630-mF1 strain. The Kigamicins A, B, C, D, and E, or their salts are antibiotics having antitumor activity and antibacterial activities against various bacteria. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

〔式中、ＲはキガマイシンＡでは次式

の糖鎖を示し、キガマイシンＢでは次式

の糖鎖を示し、キガマイシンＣでは次式

の糖鎖を示し、キガマイシンＤでは次式

の糖鎖を示し、またキガマイシンＥでは次式

の糖鎖を示す〕で表される化合物である、抗生物質キガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤ、およびキガマイシンＥ、あるいはこれらキガマイシン類の製薬学的に許容される塩が提供される。
【０００８】
一般式（Ｉ）で表されるキガマイシン類は、酸性物質であり、その製薬学的に許容される塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウムのようなアルカリ金属との塩があり、これらの塩も上記の抗菌活性と抗腫瘍活性を有する。
【０００９】
次に、本発明の抗生物質キガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥの理化学的性状を記載する。
（１）次式（Ｉａ）

で表される抗生物質キガマイシンＡの理化学的性状は次のとおりである。
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２２５℃
Ｃ）　比旋光度：［α］_Ｄ ^２４　−１５３．０°（ｃ　１．００、メタノール　）
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　４．４６分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：６６６．３０　（Ｍ＋Ｈ）^＋　６６４．３４　（Ｍ−Ｈ）⁻

Ｇ）　分子式：Ｃ_３４Ｈ_３５ＮＯ_１３
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１に１０μｇ／ｍｌの濃度の溶液でのスペクトル図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（４７２００）、２３６　（４３９００）、２５４　（４３６００）、２８０　（３４６００）、３４１　（１９１００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（４７３００）、　２３６　（４６６００）、２５４　（４７４００）、２８０　（３７４００）、３４１　（２１３００）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（３０９００）、３６６　（２００００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図２に示す。
ν_ｍａｘ（ｃｍ^{− １}）　２９３５、２８７３、１６５４、１６１９、１５８７、１４８６、１４６９、１４３６、１３６１、１２５７、１１９３、１１６６、１１２２、１０６４、９４１、８７１、８０４、６１９、４３１、４１２
Ｊ）　　^１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図３に示す。
Ｋ）　^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図４に示す。
【００１０】
（２）次式（Ｉｂ）

で表される抗生物質キガマイシンＢの理化学的性状は次のとおりである。
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２２５℃
Ｃ）　比旋光度：濃度が不足して測定が不正確なので記載しない。
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　７．９９分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：７８０．４　（Ｍ＋Ｈ）^＋７７８．４　（Ｍ−Ｈ）⁻

Ｇ）　分子式：Ｃ_４０Ｈ_４５ＮＯ_１５
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図５に１０μｇ／ｍｌの濃度の溶液でのスペクトル図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（５３３００）、　２３６　（５１４００）、２５４　（５０９００）、２８０　（４０５００）、３４１　（２２２００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（５７０００）、　２３６　（５４５００）、２５４　（５６９００）、２８０　（４３６００）、３４１　（２４９００）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（３７０００）、３６６　（２３４００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図６に示す。
ν_ｍａｘ（ｃｍ^{− １}）　２９４６、２８６７、２８３４、１６１７、１４８６、１４４０、１３６１、１３３２、１２７４、１２５７、１２０３、１１７０、１１２６、１０６０、９７７、９４４、８７５、７５７、６２２、４３０
Ｊ）　　^１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図７に示す。
Ｋ）　^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図８に示す。
【００１１】
（３）次式（Ｉｃ）

で表される抗生物質キガマイシンＣの理化学的性状は次のとおりである。
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２１０℃
Ｃ）　比旋光度：［α］_Ｄ ^２４　−１５４．０°（ｃ　１．００、メタノール）
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　７．７４分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：８１０．４（Ｍ＋Ｈ）^＋　８０８．４　（Ｍ−Ｈ）⁻

Ｇ）　分子式：Ｃ_４１Ｈ_４７ＮＯ_１６
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図９に１０μｇ／ｍｌでの図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（２３４００）、　２３６　（２１８００）、２５４　（２１０００）、２８０　（１６６００）、３４１　（１０５００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（２２７００）、　２３６　（２１８００）、２５４　（２２２００）、２８０　（１７６００）、３４１　（９７０）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（１４２００）、３６６　（８５００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図１０に示す。
ν_ｍａｘ（ｃｍ^{− １}）　２９４６、２８７７、２８３０、１６４８、１６１９、１５８３、１４８６、１４６７、１４４２、１３６３、１２７６、１２０５、１１７０、１１０３、１０６２、９４４、８７７、８０４、６２４、４１８
Ｊ）　　^１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図１１に示す。
Ｋ）　^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図１２に示す。
【００１２】
（４）次式（Ｉｄ）

で表される抗生物質キガマイシンＤの理化学的性状は次のとおりである。
【００１３】
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２１０℃
Ｃ）　比旋光度：［α］_Ｄ ^２４　−１９０．６°（ｃ　１．００、メタノール　）
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　１１．６９分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：９５４．６（Ｍ＋Ｈ）^＋９５２．４　（Ｍ−Ｈ）⁻

Ｇ）　分子式：Ｃ_４８Ｈ_５９ＮＯ_１９
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１３に１０μｇ／ｍｌの濃度の溶液でのスペクトル図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（３６２００）、　２３６　（３２９００）、２５４　（３１７００）、２８０　（２４８００）、３４１　（１３３００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（３４３００）、　２３６　（３２７００）、２５４　（３３４００）、２８０　（２５９００）、３４１　（１５０００）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（２１０００）、３６６　（１３３００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図１４に示す。
ν_ｍａｘ（ｃｍ^{− １}）　　２９７５、２９３８、２８７３、２８３２、１６１９、１５８５、１４６７、１４４２、１２７６、１２０３、１１６６、１１０５、１０６２、９８９、９４４、８０２、６２２、４７０、４４７、４０６
Ｊ）　　^１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図１５に示す。
Ｋ）　^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図１６に示す。
【００１４】
（５）次式（Ｉｅ）

で表される抗生物質キガマイシンＥの理化学的性状は次のとおりである。
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２１０℃
Ｃ）　比旋光度：［α］_Ｄ ^２４　−１７５．２°（ｃ　１．００、メタノール　）
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　１６．４９分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：１０９８．６　（Ｍ＋Ｈ）^＋１０９６．６　（Ｍ−Ｈ）⁻

Ｇ）　分子式：Ｃ_５５Ｈ_７１ＮＯ_２２
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１７に１０μｇ／ｍｌでの図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（３８９００）、　２３６　（３５１００）、２５４　（３３１００）、２８０　（２６５００）、３４１　（１４３００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（３７３００）、　２３６　（３５１００）、２５４　（３５３００）、２８０　（１６７００）、３４１　（１５６００）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λ_ｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（２２５００）、３６６　（１３７００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図１８に示す。
ν_ｍａｘ（ｃｍ^{− １}）　　２９７５、２９３５、２８３４、１６５０、１６１９、１５８３、１４６９、１４４２、１３７６、１３１１、１２７６、１２０３、１１６２、１１０５、１０６２、９８９、９４４、８７７、８０４、６２０
Ｊ）　　^１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図１９に示す。
Ｋ）　^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ_３／ＴＭＳ）：添付図面の図２０に示す。
【００１５】
さらに、本発明による一般式（Ｉ）の抗生物質キガマイシン類の生物学的性質を次に記載する。
【００１６】
Ａ）　抗菌活性
本発明による抗生物質キガマイシン類の各種細菌に対する最低発育阻止濃度は、次の表１にしめす通りである。この抗菌スペルトルは日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラーヒントン寒天培地で倍数希釈法により測定した。

【００１７】
Ｂ）癌細胞増殖抑制活性
各種の癌細胞を用いて癌細胞の増殖を５０％抑制するキガマイシンＤの濃度（ＩＣ_５０値）を、ＭＴＴ法（「Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ」　６５巻、５５−６０頁　（１９８３年）　参照）で測定した。その結果を表２に示す。

【００１８】
さらに、キガマイシン類は膵臓癌細胞ＰＡＮＣ−１細胞で、通常の細胞培養の条件下より栄養飢餓状態で細胞死を惹起する作用が強い。キガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥの結果を図２１に示した。キガマイシンＣとＤの場合、通常の培地を使用した場合は１０μｇ／ｍｌで１００％の細胞死を来たしたが、栄養飢餓状態では０．１ｇ／ｍｌで１００％の細胞死を惹起した。固形がんでは血管新生が追い付かずに栄養飢餓状態にあると考えられ、栄養条件のいい正常部位と比べてキガマイシンは選択的な制癌活性を示すと考えられる。
【００１９】
上記表１の結果から明らかなように、本発明による抗生物質キガマイシン類は、各種の細菌に対して抗菌活性を有することから抗菌剤として有用である。また、表２および図２１の結果から明らかなように、キガマイシン類は各種の癌細胞の増殖を抑制する抗腫瘍活性または抗癌活性を有するから抗腫瘍剤または抗癌剤として有用である。
【００２０】
さらに第２の本発明によれば、アミコラトプシス属に属する、前記の一般式（Ｉ）のキガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥの少くとも１つを生産するキガマイシン生産菌を栄養培地に培養し、培養物からキガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥの少くとも一つを採取することを特徴とする、抗生物質キガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤおよび（または）キガマイシンＥの製造法を提供される。
【００２１】
第２の本発明の方法で使用できるキガマイシン生産菌の一例として、アミコラトプシスＭＬ６３０−ｍＦ１株がある。
この生産菌は平成１３年６月、微生物化学研究所において、三重県鳥羽市の土壌より分離された放線菌で、ＭＬ６３０−ｍＦ１の菌株番号が付された。
【００２２】
ＭＬ６３０−ｍＦ１株の菌学的性状は下記のとおりである。
１．形態
基生菌糸はよく分技し、ジグザグ状を呈する。また分断が認められる。気菌糸は比較的長く、直状あるいは不規則な曲状に伸長し、円筒形の胞子に分断する。また、気菌糸が絡まり、胞子のう様を呈する場合がある。胞子の表面は平滑で、大きさは約０．４　〜　０．６　×　０．８　〜　１．９ミクロンである。輪生技、菌束糸、胞子のう及び運動性胞子は認められない。
【００２３】
２．各種培地における生育状態
色の記載について［　］内に示す標準は、コンティナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆＡｍｅｒｉｃａ　の　ｃｏｌｏｒ　ｈａｒｍｏｎｙ　ｍａｎｕａｌ）を用いた。
（１）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、２７℃培養）
うす黄茶［２　ｌｅ，　Ｍｕｓｔａｒｄ］−うす茶［３　ｌｅ，　Ｃｉｎｎａｍｏｎ］の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生し、可溶性色素は認められない。
（２）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、２７℃培養）
無色−うす黄［２　ｇｃ，　Ｂａｍｂｏｏ］の発育上に、白の気菌糸を着生し、可溶性色素は認められない。
（３）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、２７℃培養）
無色の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生し、可溶性色素は認められない。
（４）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養）
うす黄［２　ｇｃ，　Ｂａｍｂｏｏ］−うす黄茶［２　ｌｅ，　Ｍｕｓｔａｒｄ］の発育上に、白−茶白［３ｃｂ，　Ｓａｎｄ］の気菌糸を着生し、可溶性色素は認められない。
（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７、２７℃培養）
うす黄［２　ｇｃ，　Ｂａｍｂｏｏ］−うす黄茶［２　ｌｅ，　Ｍｕｓｔａｒｄ］の発育上に、白−黄味白［２　ｃｂ，　Ｉｖｏｒｙ　Ｔｉｎｔ］の気菌糸を着生し、可溶性色素は認められない。
（６）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）
無色の発育上に、白の気菌糸を着生し、可溶性色素は認められない。
【００２４】
３．生理的性質
（１）生育温度範囲
グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース　１．０％、Ｌ−アスパラギン　０．０５％、リン酸水素二カリウム　０．０５％、ひも寒天　３．０％、ｐＨ７．０）を用い、１０℃、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃及び４５℃の各温度で試験した結果、１０℃、４５℃での生育は認められず、２０℃−３７℃の範囲で生育した。生育至適温度は３０℃付近である。
（２）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地、ＩＳＰ−培地４、２７℃培養）
２７日間の培養でスターチの加水分解は認められない。
（３）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培地、ＩＳＰ−培地７；　いずれも２７℃培養）
いずれの培地においても陰性である。
（４）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養）
Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−マンニトールを利用して発育し、ラムノース、ラフィノースは利用しない。Ｌ−アラビノース、シュクロースもおそらく利用しない。
（５）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養）
硝酸塩の還元性は判然としないが、おそらく陰性である。
【００２５】
４．菌体成分
（１）細胞壁組成
メソ型の２、６−ジアミノピメリン酸を含有する。
（２）全菌体中の還元糖
アラビノース、ガラクトースを含み、Ａ型である。
（３）イソプレノイド・キノン
主要なメナキノンとして、ＭＫ−９（Ｈ_４）を含有する。
（４）リン脂質
ホスファチジルエタノールアミンを含み、ホスファチジルコリン及び未知のグルコサミン含有リン脂質を含まず、ＰＩＩ型を示す。
（５）ミコール酸
含有しない。
【００２６】
５．１６ＳｒＲＮＡ遺伝子解析
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列（１２３９　ｎｔ）を決定し、ＤＮＡデータベースに登録された公知菌株のデータと比較した。その結果、ＭＬ６３０−ｍＦ１株の塩基配列は以下に示したとおり、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属放線菌の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子と高い相同性を示した。Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ　ａｌｂｉｄｏｆｌａｖｕｓ　（９８％）、Ａ．　ｒｕｂｉｄｕｓ　（９８％）、Ａ．　ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ　（９７％）、Ａ．　ａｚｕｒｅａ　（９７％）　及びＡ．　ｃｏｌｏｒａｄｅｎｓｉｓ　（９７％）　等である。なお、カッコ内は塩基配列の相同値を表記した。
【００２７】
以上の性状を要約すると、ＭＬ６３０−ｍＦ１株は、その形態上、基生菌糸はよく分枝し、分断を認める。気菌糸は直状あるいは曲状で、円筒形の胞子に分断する。輪生技、菌束糸、胞子のう及び運動性胞子は認められない。種々の培地で、うす黄−うす黄茶の発育上に白の気菌糸を着生する。可溶性色素は認められない。メラニン様色素は生成せず、硝酸塩の還元反応はおそらく陰性、スターチの水解性は認められない。
ＭＬ６３０−ｍＦ１株の菌体成分は、細胞壁にメソ型の２、６−ジアミノピメリン酸を含有し、全菌体中の還元糖はＡ型、主要なメナキノンはＭＫ−９（Ｈ_４）で、リン脂質はＰＩＩ型である。ミコール酸を含有しない。
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列を公知菌株のデータと比較したところ、アミコラトプシス属放線菌の塩基配列と高い相同性を示した。
【００２８】
以上の結果より、ＭＬ６３０−ｍＦ１株はアミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ、文献、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、３６巻、２９−３７頁、１９８６年）属に属するものと考えられる。そこで、ＭＬ６３０−ｍＦ１株をアミコラトプシス・エスピー（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ　ｓｐ．）ＭＬ６３０−ｍＦ１とする。
なお、ＭＬ６３０−ｍＦ１株を独立行政法人産業技術総合研究所に寄託申請し、平成１４年６月７日、ＦＥＲＭ　Ｐ−１８８７５として受託された。
【００２９】
第２の本発明の方法を実施するに当たっては、アミコラトプシス属に属するキガマイシン生産菌を栄養培地に接種し、この培地中で培養する。ここで用いる栄養培地は、前記の生産菌が資化できる炭素源と窒素源を栄養成分として含有するものである。
【００３０】
その栄養源としては、通常微生物の栄養源として通常使用されるもの、例えば炭素源、窒素源、無機塩などの同化できる栄養源を使用できる。例えば、ぶどう糖、麦芽糖、糖密、デキストリン、グリセリン、澱粉などの炭水化物や、大豆油、落花生油などの油脂のごとき炭素源、ならびにペプトン、肉エキス、綿実粉、大豆粉、酵母エキス、カゼイン、コーン・スチープ・リカー、ＮＺ−アミン、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどの窒素源、さらに燐酸二カリウム、燐酸ナトリウム、食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガンなどの無機塩が使用でき、必要により微量金属例えばコバルト、鉄などを添加することができる。栄養源としては、その他、抗生物質キガマイシンを生産するのに使用菌が利用しうるものであればいずれの公知の栄養源でも使用できる。
【００３１】
培地における上記のごとき栄養源の配合割合は特に制約されるものでなく、広範囲に亘って変えることができ、使用するキガマイシン類の生産菌によって、最適の栄養源の組成及び配合割合は、当事者であれば簡単な小規模実験により容易に決定することができる。また、上記の栄養源からなる栄養培地は、培養に先立ち殺菌することができ、この殺菌の前又は後で、培地のｐＨを６−８の範囲、特にｐＨ６．５−７．５の範囲に調節するのが有利である。
【００３２】
かかる栄養培地でのキガマイシン類の生産菌の培養は、一般の放線菌による抗生物質の製造において通常使用されている方法に準じて行なうことができる。通常は好気条件下に培養するのが好適であり、通常攪拌しながら及び／又は通気しながら行なうことができる。また、培養方法としては静置培養、振とう培養、通気攪拌をともなう液内培養のいずれも使用可能であるが、液体培養がキガマイシンの大量生産に適している。
【００３３】
使用しうる培養温度はキガマイシン類の生産菌の発育が実質的に阻害されず、該抗生物質を生産しうる範囲であれば、特に制限されるものではなく、使用する生産菌に応じて適宜選択できるが、特に好ましいのは２５−３０℃の範囲内の温度を挙げることができる。
【００３４】
培養は通常はキガマイシン類が十分に蓄積するまで継続することができる。その培養時間は培地の組成や培養温度、使用温度、使用生産菌株などにより異なるが、通常７２−１２０時間の培養で目的の抗生物質を得ることができる。
【００３５】
培養中の新規抗生物質キガマイシン類の蓄積量はスタヒロコッカス・アウレウス・スミスを使用して、通常の抗生物質の定量に用いられる円筒平板法により定量することができる。
【００３６】
かくして、培養物中に蓄積されたキガマイシン類は、これを培養物から採取する。培養後、必要により、濾過、遠心分離などのそれ自体公知の分離方法によって菌体を除去した後、その濾液を有機溶媒、特に酢酸ブチルなどを用いた溶媒抽出や、吸着やイオン交換能を利用したクロマトグラフィー、ゲルろ過、向流分配を利用したクロマトグラフィーを単独でまたは、組み合わせて使用することにより単離精製して採取することができる。吸着やイオン交換能を有するクロマトグラフィー用担体としては、活性炭、シリカゲル、多孔性ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂もしくは各種のイオン交換樹脂を用いることができる。また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や菌体破砕による溶出法により菌体から目的の抗生物質を抽出し、上記と同様に単離精製することができる。かくして、前記した特性を有する新規抗生物質キガマイシン類が得られる。
【００３７】
さらに、第３の本発明では、前記に記載の一般式（Ｉ）で表されるキガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤおよびキガマイシンＥの少くとも１つ、またはその製薬学的に許容される塩を有効成分にして含有し、また製薬学的に許容される担体を配合されて含有することを特徴とする、医薬組成物が提供される。
【００３８】
さらに、第３の本発明に係る医薬組成物は抗腫瘍剤組成物、あるいは抗腫瘍剤組成物であることができる。
【００３９】
この医薬組成物においては、有効成分としての一般式（Ｉ）のキガマイシン類あるいはその塩は製薬学的に許容できる常用の固体または液体担体、例えばエタノール、水、デンプン等と混和されている形の組成物であることができる。
【００４０】
また、第４の本発明では、新規な微生物として、上記の一般式（Ｉ）のキガマイシン類を生産する特性をもつアミコラトプシス　ｓｐ．　ＭＬ６３０−ｍＦ１株が提供される。
【００４１】
【発明の実施の形態】
次に実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
【００４２】
【実施例１】
抗生物質キガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥの製造
ポテトスターチ２％、グルコース２％、酵母エキス０．５％、塩化ナトリウム０．２５％、トーストソーヤミール２％、炭酸カリウム０．３２％、硫酸銅０．０００５％、塩化マンガン０．０００５％、硫酸亜鉛０．００５％を含む液体培地（ｐＨ７．４に調整）を三角フラスコ（５００ｍｌ容）に１１０ｍｌずつ分注し、常法により１２０℃で２０分滅菌した。この滅菌した培地に寒天斜面培地に培養したアミコラトプシスＭＬ６３０−ｍＦ１株（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５４４２）を接種し、その後３０℃で５日間回転振とう培養した。これにより種母培養液を得た。
【００４３】
ガラクトース２％、デキストリン２％、ソイペプトン１％、コーンスティープリカー０．５％、グリセロール１％、硫酸アンモニウム．０２％、炭酸カリウム０．２％を含む液体培地（ｐＨ７．４に調整）を三角フラスコ（５００ｍｌ容）に１１０ｍｌずつ分注し、常法により１２０℃で２０分滅菌後、この滅菌された液体培地に上記種母培養液をそれぞれ２ｍｌずつ接種し、２７℃で４日間回転振とう培養した。
【００４４】
培地１０リットルを用いて、このようにして得られた培養液を遠心分離し、菌体を分離した。培養ろ液８．６リットルは、１Ｎ塩酸を添加してｐＨを２．０に調整して酢酸ブチル８．６リットルで抽出し、酢酸ブチル層を無水硫酸ナトリウムにより脱水した。
【００４５】
菌体は、メタノール９００　ｍｌを加え、撹拌後濾過した。このメタノール溶液は減圧下で２００ｍｌまで濃縮した。これを１Ｎ塩酸を添加してｐＨを２．０に調整して、酢酸ブチルで２００　ｍｌで二度抽出し、酢酸ブチル層は無水硫酸ナトリウムにより脱水した。
【００４６】
上記の二つの酢酸ブチル層を合わせ減圧下で濃縮乾固した。得られた残渣（約４．１　ｇ）をクロロホルム１００　ｍｌと水１００　ｍｌで撹拌し、クロロホルム層を濃縮乾固して１．５１　ｇ、不溶物として５２８　ｍｇを得た。それぞれシリカゲル６０Ｎ（フラッシュクロマトグラフィー用、関東化学）のカラムクロマトグラフィーを行った。クロロホルム層から得た１．５１　ｇは、２１０　ｇのシリカゲル６０Ｎを充填したカラム（径５．５　ｃｍ）に、不溶物の５２８　ｍｇは７０　ｇのシリカゲル６０Ｎを充填したカラム（径３．５　ｃｍ）にチャージした。それぞれクロロホルム−メタノール混液で展開し、薄層クロマトグラフィーで分析して同一成分を溶出する２活性画分を得た。フラクション１８６−２５０を濃縮乾固し、９３４．９　ｍｇ、フラクション１８６−２５０を濃縮乾固し、１０７　ｍｇの固形物を得た。前者の一部の２９４．８　ｍｇを９分割して、それぞれ高速液体クロマトグラフィー（Ｐｅｇａｓｉｌ　ＯＤＳ、径３０×２５０　ｍｍ）で４０％アセトニトリル−メタノールで溶出した。
【００４７】
分画３１−３９を集め減圧下に濃縮乾固して３７．２　ｍｇのキガマイシンＣ、分画４６−６０を集め１６８．３　ｍｇのキガマイシンＤおよび分画７６−９４を集め減圧下に濃縮乾固して２８．１　ｍｇのキガマイシンＥを得た。
【００４８】
シリカゲルクロマトグラフィーのフラクション１８６−２５０を濃縮乾固して得た１０７　ｍｇの固体物質を４分割して、それぞれ高速液体クロマトグラフィー（Ｐｅｇａｓｉｌ　ＯＤＳ、径３０×２５０　ｍｍ）で４０％アセトニトリル−メタノールで溶出した。その分画２６−３０を集め減圧下に濃縮乾固して３６．１　ｍｇのキガマイシンＡを得た。
【００４９】
培地３リットルを用いた別の培養からは、同様な精製法を行い、高速液体クロマトグラフィー（Ｐｅｇａｓｉｌ　ＯＤＳ、径３０×２５０　ｍｍ）で４０％アセトニトリル−メタノールで溶出した時、分画３５−３６を集め減圧下に濃縮乾固して１．９　ｍｇのキガマイシンＣを得た。分画３９−４１を集め１．９　ｍｇのキガマイシンＢを得た。また分画５１−５６を集め４６．６　ｍｇのキガマイシンＤ、および分画８２−８６を集め１２．９　ｍｇのキガマイシンＥを得た。
【図面の簡単な説明】
【図１】キガマイシンＡ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図２】キガマイシンＡのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図３】キガマイシンＡの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図４】キガマイシンＡの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図５】キガマイシンＢ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図６】キガマイシンＢのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図７】キガマイシンＢの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図８】キガマイシンＢの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図９】キガマイシンＣ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図１０】キガマイシンＣのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図１１】キガマイシンＣの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図１２】キガマイシンＣの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図１３】キガマイシンＤ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図１４】キガマイシンＤのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図１５】キガマイシンＤの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図１６】キガマイシンＤの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図１７】キガマイシンＥ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図１８】キガマイシンＥのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図１９】キガマイシンＥの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図２０】キガマイシンＥの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図２１】キガマイシンＡ〜Ｅの栄養条件を異にするＰＡＮＣ−１細胞に対する効果の比較である。
黒四角の線は栄養飢餓条件での培養の場合を示す
白丸の線は通常の培養の場合を示す[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel antibacterial substance kigamycin {Kigamicin}, which exhibits antibacterial activity and antitumor activity or anticancer activity, and more particularly to kigamycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D and kigamycin E, or salts thereof.
[0002]
The present invention also relates to a method for producing such kigamycins. Further, the present invention relates to a pharmaceutical composition containing a kigamycin or a salt thereof as an active ingredient, particularly an antibacterial agent and an antitumor agent composition. Further, the present invention relates to a novel microorganism Amicolatopsis @ sp.を Includes ML630-mF1 strain.
[0003]
In this specification, at least one or all of kigamycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D, and kigamycin E, or a mixture of at least two of them, are collectively referred to as kigamycins (a @ kigamicin). Sometimes.
[0004]
[Prior art]
Many different antimicrobial substances are known, and many different antitumor substances are known.
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
In chemotherapy of bacterial infections and cancer, it is always desirable to discover or create new compounds that have a different chemical structure and superior activity from known compounds that are conventionally known or used. It is rare and research is being done for it.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have promoted research on the development and practical application of useful antibiotics for the purpose of providing novel antibiotics having antibacterial activity and antitumor activity capable of meeting the above demand. Was. As a result, they succeeded in isolating a strain belonging to the genus Amycolatopsis from a soil sample as a novel microorganism, and found that this strain produced at least five kinds of antibiotics having a new structural skeleton. . We have successfully isolated these novel antibiotics and determined their chemical structure and have generically named kigamycin. Further, the five isolated antibiotics were named as kigamycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D, and kigamycin E, respectively. Furthermore, it has been found that these novel antibiotics show antibacterial activity against Gram-positive bacteria including drug-resistant bacteria (such as methicillin-resistant bacteria) and also have an inhibitory activity on the growth of cancer cells.
[0007]
That is, in the first invention, the following general formula (I):

[Wherein R is the following formula for kigamycin A:

And kigamycin B has the following formula:

In kigamycin C, the following formula

In kigamycin D, the following formula:

And kigamycin E has the following formula:

And a pharmaceutically acceptable salt of these antibiotics, i.e., kigamycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D, and kigamycin E, or kigamycins.
[0008]
Kigamycins represented by the general formula (I) are acidic substances, and as pharmaceutically acceptable salts thereof, salts with organic bases such as quaternary ammonium salts, salts with various metals, For example, there are salts with alkali metals such as sodium, and these salts also have the above antibacterial and antitumor activities.
[0009]
Next, the physicochemical properties of the antibiotics kigamycins A, B, C, D and E of the present invention will be described.
(1) The following formula (Ia)

The physical and chemical properties of the antibiotic kigamycin A represented by are as follows.
A) Appearance and properties: yellow powder, acidic substance
B) Melting point: 225 ° C
C) Specific rotation: [α]_D ²⁴-153.0 ° (c 1.00, methanol)
D) @ HPLC retention time (Retention time) value: $ 4.46 minutes
This is a case where the measurement is performed by high-performance liquid chromatography using a capsule pack (type UG120, 5 μm, 4.6 diameter × 150 mm, manufactured by Shiseido), eluting with 40% acetonitrile-60% purified water as an elution solvent.
E) {Mass spectrum (m / z): 666.30} (M + H)⁺{664.34} (MH)⁻

G) Molecular formula: C₃₄H₃₅NO_Thirteen
H) UV absorption spectrum: FIG. 1 of the accompanying drawings shows a spectrum diagram of a solution having a concentration of 10 μg / ml.
(Solid line) ＵＶ UV absorption spectrum measured in methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_maxNm (ε) 217 (47200), 236 (43900), 254 (43600), 280 (34600), 341 (19100)
(Dotted line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} HCl-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_maxNm (ε) 217 (47300), 236 (46600), 254 (47400), 280 (37400), 341 (21300)
(Dashed line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} NaOH-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_max{Nm} (ε) {280} (30900), 366 (20,000)
I) Infrared absorption spectrum (KBr tablet method): shown in FIG. 2 of the accompanying drawings.
ν_max(Cm^{− 1}) $ 2935, 2873, 1654, 1619, 1587, 1486, 1469, 1436, 1361, 1257, 1193, 1166, 1122, 1064, 941, 871, 804, 619, 431, 412
J)¹H-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 3 of the accompanying drawings.
K)^ThirteenC-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 4 of the accompanying drawings.
[0010]
(2) The following formula (Ib)

The physicochemical properties of the antibiotic kigamycin B represented by are as follows.
A) Appearance and properties: yellow powder, acidic substance
B) Melting point: 225 ° C
C) Specific rotation: Not described because measurement is inaccurate due to insufficient concentration.
D) @ HPLC retention time (Retention time) value: $ 7.99 minutes
This is a case where the measurement is performed by high-performance liquid chromatography using a capsule pack (type UG120, 5 μm, 4.6 diameter × 150 mm, manufactured by Shiseido), eluting with 40% acetonitrile-60% purified water as an elution solvent.
E) {Mass spectrum (m / z): 780.4} (M + H)⁺778.4 (MH)⁻

G) Molecular formula: C₄₀H₄₅NO_Fifteen
H) UV absorption spectrum: FIG. 5 of the accompanying drawings shows a spectrum diagram of a solution having a concentration of 10 μg / ml.
(Solid line) ＵＶ UV absorption spectrum measured in methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_max{Nm} (ε) {217} (53300), {236} (51400), 254} (50900), 280} (40500), 341} (22200)
(Dotted line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} HCl-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_maxNm (ε) 217 (57000), 236 (54500), 254 (56900), 280 (43600), 341 (24900)
(Dashed line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} NaOH-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_maxNm (ε) 280 (37000), 366 (23400)
I) {Infrared absorption spectrum (KBr} tablet method): shown in FIG. 6 of the accompanying drawings.
ν_max(Cm^{− 1}) $ 2946, 2867, 2834, 1617, 1486, 1440, 1361, 1332, 1274, 1257, 1203, 1170, 1126, 1060, 977, 944, 875, 757, 622, 430
J)¹H-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 7 of the accompanying drawings.
K)^ThirteenC-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 8 of the accompanying drawings.
[0011]
(3) The following equation (Ic)

The physicochemical properties of the antibiotic kigamycin C represented by are as follows.
A) Appearance and properties: yellow powder, acidic substance
B) Melting point: 210 ° C
C) Specific rotation: [α]_D ²⁴-154.0 ° (c 1.00, methanol)
D) @ HPLC retention time (Retention time) value: $ 7.74 minutes
This is a case where the measurement is performed by high-performance liquid chromatography using a capsule pack (type UG120, 5 μm, 4.6 diameter × 150 mm, manufactured by Shiseido), eluting with 40% acetonitrile-60% purified water as an elution solvent.
E) mass spectrum (m / z): 810.4 (M + H)⁺{808.4} (MH)⁻

G) Molecular formula: C₄₁H₄₇NO₁₆
H) Ultraviolet absorption spectrum: FIG. 9 of the accompanying drawings shows a diagram at 10 μg / ml.
(Solid line) ＵＶ UV absorption spectrum measured in methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_max{Nm} (ε) 217 (23400), {236 (21800), 254 (21000), 280 (16600), 341 (10500)
(Dotted line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} HCl-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_max{Nm} (ε) {217} (22700), {236} (21800), 254} (22200), 280} (17600), 341} (970)
(Dashed line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} NaOH-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_maxNm (ε) 280 (14200), 366 (8500)
I) Infrared absorption spectrum (KBr tablet method): shown in FIG. 10 of the accompanying drawings.
ν_max(Cm^{− 1}) $ 2946, 2877, 2830, 1648, 1619, 1583, 1486, 1467, 1442, 1363, 1276, 1205, 1170, 1103, 1062, 944, 877, 804, 624, 418
J)¹H-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 11 of the accompanying drawings.
K)^ThirteenC-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 12 of the accompanying drawings.
[0012]
(4) The following equation (Id)

The physicochemical properties of the antibiotic kigamycin D represented by are as follows.
[0013]
A) Appearance and properties: yellow powder, acidic substance
B) Melting point: 210 ° C
C) Specific rotation: [α]_D ²⁴１９-190.6 ° (c 1.00, methanol)
D) @ HPLC retention time (Retention time) value: $ 11.69 minutes
This is a case where the measurement is performed by high-performance liquid chromatography using a capsule pack (type UG120, 5 μm, 4.6 diameter × 150 mm, manufactured by Shiseido), eluting with 40% acetonitrile-60% purified water as an elution solvent.
E) mass spectrum (m / z): 954.6 (M + H)⁺952.4 (MH)⁻

G) Molecular formula: C₄₈H₅₉NO₁₉
H) UV absorption spectrum: FIG. 13 of the accompanying drawings shows a spectrum diagram of a solution having a concentration of 10 μg / ml.
(Solid line) ＵＶ UV absorption spectrum measured in methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_max{Nm} (ε) 217 (36200), {236 (32900), 254 (31700), 280 (24800), 341 (13300)
(Dotted line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} HCl-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_maxNm (ε) 217 (34300), 236 (32700), 254 (33400), 280 (25900), 341 (15000)
(Dashed line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} NaOH-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_max{Nm} (ε) 280 (21000), 366 (13300)
I) Infrared absorption spectrum (KBr tablet method): shown in FIG. 14 of the accompanying drawings.
ν_max(Cm^{− 1}) $ 2975, 2938, 2873, 2832, 1619, 1585, 1467, 1442, 1276, 1203, 1166, 1105, 1062, 989, 944, 802, 622, 470, 447, 406
J)¹H-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 15 of the accompanying drawings.
K)^ThirteenC-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 16 of the accompanying drawings.
[0014]
(5) The following formula (Ie)

The physicochemical properties of the antibiotic kigamycin E represented by are as follows.
A) Appearance and properties: yellow powder, acidic substance
B) Melting point: 210 ° C
C) Specific rotation: [α]_D ²⁴-175.2 ° (c 1.00, methanol)
D) @ HPLC retention time (Retention time) value: $ 16.49 minutes
This is a case where the measurement is performed by high-performance liquid chromatography using a capsule pack (type UG120, 5 μm, 4.6 diameter × 150 mm, manufactured by Shiseido), eluting with 40% acetonitrile-60% purified water as an elution solvent.
E) {Mass spectrum (m / z): 1098.6} (M + H)⁺1096.6 (MH)⁻

G) Molecular formula: C₅₅H₇₁NO₂₂
H) Ultraviolet absorption spectrum: FIG. 17 of the accompanying drawings shows a diagram at 10 μg / ml.
(Solid line) ＵＶ UV absorption spectrum measured in methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_max{Nm} (ε) {217} (38900), {236} (35100), 254} (33100), 280} (26500), 341} (14300)
(Dotted line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} HCl-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_maxNm (ε) 217 (37300), 236 (35100), 254 (35300), 280 (16700), 341 (15600)
(Dashed line) UV absorption spectrum measured in {0.01N} NaOH-methanol solution. The main peaks are as follows.
λ_max{Nm} (ε) {280} (22,500), 366} (13700)
I) Infrared absorption spectrum (KBr tablet method): shown in FIG. 18 of the accompanying drawings.
ν_max(Cm^{− 1}) $ 2975, 2935, 2834, 1650, 1619, 1583, 1469, 1442, 1376, 1311, 1276, 1203, 1162, 1105, 1062, 989, 944, 877, 804, 620
J)¹H-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 19 of the accompanying drawings.
K)^ThirteenC-NMR spectrum (CDCl₃/ TMS): shown in FIG. 20 of the accompanying drawings.
[0015]
Further, the biological properties of the antibiotic kigamycins of the general formula (I) according to the present invention are described below.
[0016]
A) Antibacterial activity
The minimum inhibitory concentrations of the antibiotics kigamycins of the present invention against various bacteria are shown in Table 1 below. This antibacterial speltor was measured by a multiple dilution method on Muller Hinton agar medium based on the standard method of the Japanese Society of Chemotherapy.

[0017]
B) Cancer cell growth inhibitory activity
Kigamycin D concentration (IC) that inhibits cancer cell growth by 50% using various cancer cells₅₀Values) were measured by the MTT method (see “Journal of Immunological Methods”, vol. 65, pp. 55-60 (1983)). Table 2 shows the results.

[0018]
Furthermore, kigamycins are more potent in inducing cell death in pancreatic cancer cells PANC-1 cells under nutrient starvation conditions than under normal cell culture conditions. The results for kigamycins A, B, C, D and E are shown in FIG. In the case of kigamycins C and D, 100% cell death was caused at 10 μg / ml when a normal medium was used, but 100% cell death was induced at 0.1 g / ml under nutrient starvation. Solid tumors are considered to be nutrient-starved because angiogenesis cannot catch up, and kigamycin may exhibit selective anti-cancer activity compared to normal sites with good nutritional conditions.
[0019]
As is clear from the results in Table 1, the antibiotics kigamycins according to the present invention are useful as antibacterial agents because they have antibacterial activity against various bacteria. In addition, as is clear from the results in Table 2 and FIG. 21, kigamycins have antitumor activity or anticancer activity for suppressing the growth of various cancer cells, and thus are useful as antitumor agents or anticancer agents.
[0020]
Further, according to the second invention, a kigamycin-producing bacterium belonging to the genus Amycolatopsis and producing at least one of kigamycins A, B, C, D or E of the above general formula (I) is added to the nutrient medium. Culturing and harvesting at least one of kigamycin A, B, C, D or E from the culture, wherein the antibiotic kigamycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D and / or kigamycin E is obtained. A manufacturing method is provided.
[0021]
An example of a kigamycin-producing bacterium that can be used in the second method of the present invention is the Amycolatopsis ML630-mF1 strain.
This produced microorganism was an actinomycete isolated from soil in Toba City, Mie Prefecture, Japan at the Institute of Microbial Chemistry in June 2001, and was assigned a strain number of ML630-mF1.
[0022]
The bacteriological properties of the ML630-mF1 strain are as follows.
1. Form
The underlying mycelium divides well and exhibits a zigzag shape. In addition, division is recognized. Aerial hyphae are relatively long and extend in a straight or irregularly curved shape and break into cylindrical spores. In addition, aerial hyphae may be entangled to give a spore-like appearance. The surface of the spores is smooth and has a size of about 0.4-0.6 × 0.8-1.9 microns. There is no cycling, fungal hypha, sporangia and motile spores.
[0023]
2. Growth status in various media
Regarding the description of the color, the standard shown in [] was a color harmony manual of Container Corporation of America (color harmony manual of Container Corporation of America).
(1) Yeast-malt agar medium (ISP-medium 2, cultured at 27 ° C)
Light yellow tea [2 @ le, @Mustard]-White aerial hyphae grow slightly on the growth of light tea [3 @ le, @Cinnamon], and no soluble pigment is observed.
(2) Oatmeal agar medium (ISP-medium 3, cultured at 27 ° C)
On the development of colorless-light yellow [2 @ gc, @Bamboo], white aerial hyphae were formed and no soluble pigment was observed.
(3) Starch / inorganic salt agar medium (ISP-medium 4, cultured at 27 ° C)
White aerial hyphae grow slightly on colorless growth, and no soluble pigment is observed.
(4) Glycerin-asparagine agar medium (ISP-medium 5, cultured at 27 ° C)
On growth of light yellow [2 @ gc, @Bamboo] -light yellow tea [2 @ le, @Mustard], aerial hyphae of white-brown [3cb, @Sand] are formed, and no soluble pigment is observed.
(5) Tyrosine agar medium (ISP-medium 7, cultured at 27 ° C)
On growth of light yellow [2 @ gc, @Bamboo] -light yellow tea [2 @ le, @Mustard], aerial hyphae of white-yellowish white [2 @ cb, @ Ivory @ Tint] are formed, and no soluble pigment is observed.
(6) Sucrose / nitrate agar medium (cultured at 27 ° C)
On colorless growth, white aerial hyphae are formed and no soluble pigment is observed.
[0024]
3. Physiological properties
(1) Growth temperature range
Using a glucose-asparagine agar medium (glucose 1.0%, L-asparagine 0.05%, dipotassium hydrogen phosphate 0.05%, string agar 3.0%, pH 7.0), 10 ° C, 20 ° C, As a result of testing at each of 24 ° C., 27 ° C., 30 ° C., 37 ° C., and 45 ° C., growth at 10 ° C. and 45 ° C. was not recognized, and growth was in a range of 20 ° C. to 37 ° C. The optimum growth temperature is around 30 ° C.
(2) Starch hydrolysis (starch / inorganic salt agar medium, ISP-medium 4, cultured at 27 ° C)
No hydrolysis of starch is observed after 27 days of culture.
(3) Production of melanin-like pigment (trypton yeast broth, ISP-medium 1; peptone yeast iron agar medium, ISP-medium 6; tyrosine agar medium, ISP-medium 7; {all cultured at 27 ° C.)
Both media are negative.
(4) Utilization of carbon source (Pridham Gottlieb agar medium, ISP-medium 9, culture at 27 ° C)
It grows using D-glucose, D-xylose, D-fructose, myo-inositol and D-mannitol, and does not use rhamnose or raffinose. L-arabinose, sucrose is probably not used either.
(5) Nitrate reduction reaction (peptone water containing 0.1% potassium nitrate, ISP-medium 8, cultured at 27 ° C.)
The reducing properties of nitrates are not clear, but are probably negative.
[0025]
4. Microbial components
(1) Cell wall composition
Contains meso-form 2,6-diaminopimelic acid.
(2) Reducing sugar in all cells
It contains arabinose and galactose and is type A.
(3) Isoprenoid quinone
As the main menaquinone, MK-9 (H₄).
(4) Phospholipid
It contains phosphatidylethanolamine, does not contain phosphatidylcholine and unknown glucosamine-containing phospholipids, and exhibits type PII.
(5) Mycolic acid
Does not contain.
[0026]
5.16S rRNA gene analysis
The partial base sequence (1239Ｓnt) of the 16S rRNA gene was determined and compared with the data of known strains registered in the DNA database. As a result, as shown below, the nucleotide sequence of the ML630-mF1 strain was Amycolatopsis (Amycolatopsis) High homology with the 16S rRNA gene of the genus Actinomyces.Amycolatopsis albidoflavus(98%),A. rubidus(98%),A. mediterraranei(97%),A. azurea{(97%)} andA. coloradensis{(97%)} and so on. In the parentheses, the homology value of the base sequence is shown.
[0027]
To summarize the above properties, in the ML630-mF1 strain, the basal hypha is well branched and its fragmentation is recognized due to its form. Aerial hyphae are straight or curved and break into cylindrical spores. There is no cycling, fungal hypha, sporangia and motile spores. In various media, white aerial hyphae develop on light yellow-light yellow tea development. No soluble dye is found. No melanin-like pigment is formed, the nitrate reduction reaction is probably negative, and starch does not have hydrolytic properties.
The cell component of the ML630-mF1 strain contains meso-form 2,6-diaminopimelic acid in the cell wall, the reducing sugar in all cells is type A, and the main menaquinone is MK-9 (H₄), The phospholipid is of the PII type. Contains no mycolic acid.
When the partial nucleotide sequence of the 16S rRNA gene was compared with that of known strains, it showed high homology with the nucleotide sequence of Amycolatopsis actinomycetes.
[0028]
From the above results, the ML630-mF1 strain was found to be Amycolatopsis (Amycolatopsis, Literature, International {Journal of Systematic Bacteriology, 36, 29-37, 1986). Therefore, the ML630-mF1 strain was transformed into Amycolatopsis sp.Amycolatopsis sp.) ML630-mF1.
In addition, the ML630-mF1 strain was deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, and was deposited as FERM @ P-18875 on June 7, 2002.
[0029]
In carrying out the second method of the present invention, a kigamycin-producing bacterium belonging to the genus Amycolatopsis is inoculated into a nutrient medium and cultured in this medium. The nutrient medium used here contains a carbon source and a nitrogen source which can be assimilated by the above-mentioned producing bacteria as nutrient components.
[0030]
As the nutrient, those which are usually used as nutrients of microorganisms, for example, assimilable nutrients such as carbon source, nitrogen source and inorganic salt can be used. For example, glucose, maltose, molasses, dextrin, glycerin, and carbohydrates such as starch, soybean oil, carbon sources such as oils such as peanut oil, and peptone, meat extract, cottonseed powder, soybean powder, yeast extract, casein, Nitrogen sources such as corn steep liquor, NZ-amine, ammonium sulfate, ammonium nitrate, ammonium chloride, and inorganic salts such as dipotassium phosphate, sodium phosphate, salt, calcium carbonate, magnesium sulfate, and manganese chloride can be used. Metals such as cobalt and iron can be added. As a nutrient source, any known nutrient source can be used as long as the bacteria used can produce the antibiotic kigamycin.
[0031]
The mixing ratio of the above-mentioned nutrients in the medium is not particularly limited and can be changed over a wide range. Depending on the bacterium producing kigamycins to be used, the optimum composition and mixing ratio of the nutrients may be determined by the parties concerned. If so, it can be easily determined by simple small-scale experiments. In addition, the nutrient medium consisting of the above-mentioned nutrients can be sterilized prior to culturing, and before or after this sterilization, the pH of the medium is adjusted to the range of 6-8, especially pH 6.5-7.5. It is advantageous to adjust.
[0032]
Cultivation of a kigamycin-producing bacterium in such a nutrient medium can be carried out according to a method generally used in the production of antibiotics by general actinomycetes. Usually, the culture is preferably performed under aerobic conditions, and can be usually performed with stirring and / or aeration. As a culture method, any of static culture, shaking culture, and submerged culture with aeration and stirring can be used, but liquid culture is suitable for mass production of kigamycin.
[0033]
The culture temperature that can be used is not particularly limited as long as the growth of the bacterium producing kigamycins is not substantially inhibited and the antibiotic can be produced, and is appropriately selected depending on the producing bacterium to be used. Although it is possible, particularly preferred is a temperature in the range of 25-30 ° C.
[0034]
The cultivation can usually be continued until the kigamycins have sufficiently accumulated. The culturing time varies depending on the composition of the medium, the culturing temperature, the working temperature, the used producing strain, etc., but the desired antibiotic can usually be obtained by culturing for 72 to 120 hours.
[0035]
The accumulated amount of the new antibiotic kigamycins during culturing can be determined by Staphylococcus aureus smith by the cylindrical plate method used for the usual determination of antibiotics.
[0036]
Thus, the kigamycins that have accumulated in the culture are harvested from the culture. After culturing, if necessary, after removing cells by a separation method known per se such as filtration or centrifugation, the filtrate is subjected to solvent extraction using an organic solvent, particularly butyl acetate, etc., and utilizing adsorption and ion exchange capacity. Chromatography, gel filtration, and chromatography using countercurrent distribution can be used alone or in combination for isolation and purification. Activated carbon, silica gel, porous polystyrene-divinylbenzene resin, or various ion exchange resins can be used as a chromatography carrier having adsorption or ion exchange ability. The desired antibiotic can be extracted from the isolated cells by a solvent extraction method using an appropriate organic solvent or an elution method by disrupting the cells, and can be isolated and purified in the same manner as described above. Thus, novel antibiotics kigamycins having the above-mentioned properties are obtained.
[0037]
Further, in the third invention, at least one of kigamycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D and kigamycin E represented by the above-mentioned general formula (I), or a pharmaceutically acceptable one thereof is used. The present invention provides a pharmaceutical composition characterized by comprising a salt as an active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier.
[0038]
Further, the pharmaceutical composition according to the third aspect of the present invention can be an antitumor agent composition or an antitumor agent composition.
[0039]
In this pharmaceutical composition, kigamycins of the general formula (I) or salts thereof as an active ingredient are mixed with a pharmaceutically acceptable conventional solid or liquid carrier such as ethanol, water, starch and the like. It can be a composition.
[0040]
In the fourth aspect of the present invention, as a novel microorganism, Amycolatopsis @ sp. Which has the property of producing the above-mentioned kigamycins of the general formula (I) is used. $ The ML630-mF1 strain is provided.
[0041]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Next, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but the present invention is not limited to the following Examples.
[0042]
Embodiment 1
Production of the antibiotics kigamycin A, B, C, D and E
Potato starch 2%, glucose 2%, yeast extract 0.5%, sodium chloride 0.25%, toasted soybean meal 2%, potassium carbonate 0.32%, copper sulfate 0.0005%, manganese chloride 0.0005%, A liquid culture medium (adjusted to pH 7.4) containing 0.005% of zinc sulfate was dispensed into Erlenmeyer flasks (500 ml volume) in 110 ml portions and sterilized at 120 ° C. for 20 minutes by a conventional method. The sterilized medium was inoculated with Amycolatopsis ML630-mF1 strain (FERM @ P-15442) cultured on an agar slant medium, followed by rotary shaking at 30 ° C. for 5 days. Thus, a seed culture was obtained.
[0043]
Galactose 2%, dextrin 2%, soy peptone 1%, corn steep liquor 0.5%, glycerol 1%, ammonium sulfate. 110 ml of a liquid medium (adjusted to pH 7.4) containing 02% and 0.2% of potassium carbonate was dispensed into an Erlenmeyer flask (500 ml) and sterilized at 120 ° C. for 20 minutes by a conventional method. The medium was inoculated with 2 ml of each of the above seed cultures, and cultured at 27 ° C. for 4 days with rotary shaking.
[0044]
The culture solution thus obtained was centrifuged using 10 liters of medium to separate the cells. 8.6 liters of the culture filtrate was adjusted to pH 2.0 by adding 1N hydrochloric acid, extracted with 8.6 liters of butyl acetate, and the butyl acetate layer was dehydrated with anhydrous sodium sulfate.
[0045]
The cells were filtered after adding 900 ml of methanol and stirring. This methanol solution was concentrated under reduced pressure to 200 ml. The pH was adjusted to 2.0 by adding 1N hydrochloric acid, extracted twice with butyl acetate at 200 ml, and the butyl acetate layer was dehydrated with anhydrous sodium sulfate.
[0046]
The two butyl acetate layers were combined and concentrated to dryness under reduced pressure. The obtained residue (about 4.1 mg) was stirred with 100 ml of chloroform and 100 ml of water, and the chloroform layer was concentrated to dryness to obtain 1.51 mg and 528 mg as insolubles. Each was subjected to column chromatography on silica gel 60N (for flash chromatography, Kanto Chemical). 1.51 g obtained from the chloroform layer was packed in a column (diameter 5.5 cm) packed with 210 g silica gel 60N, and 528 mg of insoluble material was packed with a column packed with 70 g silica gel 60N (diameter 3.5 cm). ). Each was developed with a chloroform-methanol mixture, and analyzed by thin layer chromatography to obtain two active fractions eluting the same component. Fraction 186-250 was concentrated to dryness, 934.9 mg and fraction 186-250 was concentrated to dryness to give 107 mg of solid. 294.8 mg of the former was divided into 9 parts, and each was eluted with 40% acetonitrile-methanol by high performance liquid chromatography (Pegasil ODS, diameter 30 x 250 mm).
[0047]
Fractions 31-39 were collected and concentrated to dryness under reduced pressure to collect 37.2 mg of kigamycin C, fractions 46-60 were collected and 168.3 mg of kigamycin D and fractions 76-94 were collected and concentrated to dryness under reduced pressure. This solidified to give 28.1 mg of kigamycin E.
[0048]
The silica gel chromatography fraction 186-250 was concentrated and dried to obtain a solid substance of 107 mg, which was divided into 4 parts, and eluted with 40% acetonitrile-methanol by high performance liquid chromatography (Pegasil ODS, diameter 30 x 250 mm). did. The fractions 26-30 were collected and concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 36.1 mg of kigamycin A.
[0049]
From another culture using 3 liters of medium, the same purification method was performed, and when eluted with 40% acetonitrile-methanol by high performance liquid chromatography (PegasilａｓODS, diameter 30 × 250 mm), fractions 35-36 were separated. The collected solution was concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 1.9 mg of kigamycin C. Fractions 39-41 were collected to give 1.9 mg of kigamycin B. Fractions 51-56 were collected to obtain 46.6 mg of kigamycin D, and fractions 82-86 were collected to obtain 12.9 mg of kigamycin E.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is an ultraviolet absorption spectrum of kigamycin A {(10 μg / ml)}.
Solid line: spectrum in methanol solution
Dotted line: spectrum in 0.01N HCl-methanol solution
Dashed line: spectrum of 0.01N NaOH- in methanol solution
FIG. 2 is an infrared absorption spectrum of kigamycin A measured by a KBr tablet method.
FIG. 3 is a proton nuclear magnetic resonance spectrum measured with a heavy chloroform solution of kigamycin A (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 4 is a 13 C nuclear magnetic resonance spectrum measured with a chloroform solution of kigamycin A (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 5 is an ultraviolet absorption spectrum of kigamycin B {(10 μg / ml)}.
Solid line: spectrum in methanol solution
Dotted line: spectrum in 0.01N HCl-methanol solution
Dashed line: spectrum of 0.01N NaOH- in methanol solution
FIG. 6 is an infrared absorption spectrum of kigamycin B measured by a KBr tablet method.
FIG. 7 is a proton nuclear magnetic resonance spectrum measured with a chloroform solution of kigamycin B (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 8 is a 13 C nuclear magnetic resonance spectrum measured with a chloroform solution of kigamycin B (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 9 is an ultraviolet absorption spectrum of kigamycin C {(10 μg / ml)}.
Solid line: spectrum in methanol solution
Dotted line: spectrum in 0.01N HCl-methanol solution
Dashed line: spectrum of 0.01N NaOH- in methanol solution
FIG. 10 is an infrared absorption spectrum of kigamycin C measured by a KBr tablet method.
FIG. 11 is a proton nuclear magnetic resonance spectrum measured with a heavy chloroform solution of kigamycin C (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 12 is a 13 C nuclear magnetic resonance spectrum measured with a chloroform solution of kigamycin C (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 13 is an ultraviolet absorption spectrum of kigamycin D {(10 μg / ml)}.
Solid line: spectrum in methanol solution
Dotted line: spectrum in 0.01N HCl-methanol solution
Dashed line: spectrum of 0.01N NaOH- in methanol solution
FIG. 14 is an infrared absorption spectrum of kigamycin D measured by a KBr tablet method.
FIG. 15 is a proton nuclear magnetic resonance spectrum measured with a heavy chloroform solution of kigamycin D (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 16 is a 13 C nuclear magnetic resonance spectrum measured with a heavy chloroform solution of kigamycin D (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 17 is an ultraviolet absorption spectrum of kigamycin E {(10 μg / ml)}.
Solid line: spectrum in methanol solution
Dotted line: spectrum in 0.01N HCl-methanol solution
Dashed line: spectrum of 0.01N NaOH- in methanol solution
FIG. 18 is an infrared absorption spectrum of kigamycin E measured by a KBr tablet method.
FIG. 19 is a proton nuclear magnetic resonance spectrum measured with a chloroform solution of kigamycin E (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 20 is a 13 C nuclear magnetic resonance spectrum measured with a heavy chloroform solution of kigamycin E (internal standard: trimethylsilane).
FIG. 21 is a comparison of the effects of kigamycins A to E on different PANC-1 cells under different nutritional conditions.
Black square lines indicate cultures under nutrient starvation conditions
White circles indicate normal culture

Claims (7)

The following general formula (I):

[Wherein R is the following formula for kigamycin A:

In kigamycin B, the following formula

In kigamycin C, the following formula

In kigamycin D, the following formula:

And kigamycin E has the following formula:

Or kamimycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D, or kigamycin E, or a pharmaceutically acceptable salt of these kigamycins. A kigamycin-producing bacterium, which belongs to the genus Amycolatopsis and produces at least one of kigamycins A, B, C, D or E of the general formula (I) according to claim 1, is cultured in a nutrient medium, and from the culture. A method for producing the antibiotics kigamycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D and / or kigamycin E, comprising collecting at least one of kigamycin A, B, C, D or E. As a bacterium producing kigamycin represented by the general formula (I), Amycolatopsis sp. The method according to claim 2, wherein the strain ML630-mF1 (deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology as FERM P-18875) is used. As an active ingredient, at least one of kigamycin A, kigamycin B, kigamycin C, kigamycin D and kigamycin E represented by the general formula (I) according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof is contained. And a pharmaceutically acceptable carrier. 5. The composition of claim 4, which is an antimicrobial composition. The composition according to claim 4, which is an antitumor agent composition. An amycolatopsis sp. Having the property of producing the antibiotic kigamycin A, B, C, D and E represented by the general formula (I) according to claim 1. ML630-mF1 strain.

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