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JP2004131471A - New use of rfrp and ot7t022 - Google Patents

New use of rfrp and ot7t022 Download PDF

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JP2004131471A
JP2004131471A JP2003206386A JP2003206386A JP2004131471A JP 2004131471 A JP2004131471 A JP 2004131471A JP 2003206386 A JP2003206386 A JP 2003206386A JP 2003206386 A JP2003206386 A JP 2003206386A JP 2004131471 A JP2004131471 A JP 2004131471A
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Japan
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amino acid
acid sequence
seq
phe
ot7t022
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Application number
JP2003206386A
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Japanese (ja)
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Hisao Kasuga
春日　久男
Kuniji Hinuma
日沼　州司
Hideaki Miyashita
宮下　英昭
Kunio Matsuoka
松岡　邦夫
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Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Takeda Chemical Industries Ltd
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Publication date
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide new uses of RFRP and OT7T022. <P>SOLUTION: The RFRP and OT7T022 (a receptor protein of RFRP), DNA encoding the substances and OT7T022 agonist are useful as an agent for the prevention/treatment/amelioration of adrenal insufficiency, spasm, aggressive behavior, gait abnormality, elevation of body temperature, decrease in white blood cell count, decrease in platelet count, increase in locomotor activity or loss of muscle strength. A non-human animal of O7T022 gene expression insufficiency is useful for the screening of the preventing/treating/ameliorating agent for the above diseases. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＲＦＲＰおよびＲＦＲＰのレセプター蛋白質であるＯＴ７Ｔ０２２の新規用途に関する。
さらに、本発明は、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された非ヒト哺乳動物の胚幹細胞、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト哺乳動物、それらを用いるスクリーニング方法およびそのスクリーニングによって得られうる予防・治療・改善薬などに関する。
【０００２】
【従来の技術】
新規な受容体ＯＴ７Ｔ０２２とそれに結合するＣ末端がＬＰＬ　ＲＦ　ａｍｉｄｅ様、ＬＰＬ　ＲＳ　ａｍｉｄｅ様、ＬＰＱ　ＲＦ　ａｍｉｄｅ様またはＬＰＬ　ＲＬａｍｉｄｅ様のペプチド（ＲＦＲＰ−１、ＲＦＲＰ−２、ＲＦＲＰ−３）が報告されている（特許文献１）。
ＯＴ７Ｔ０２２とＲＦＲＰ−１、ＲＦＲＰ−２、ＲＦＲＰ−３がプロラクチン分泌に関与していることが報告されている（特許文献２）。
ＲＦＲＰ−１に対応するＮＰＳＦやＲＦＲＰ−３に対応するＮＰＶＦがＯＴ７Ｔ０２２に結合し、抗オピオイドに関与していることが記載されている（非特許文献１）。
しかし、ＲＦＲＰおよびＯＴ７Ｔ０２２の生体内における機能および作用機序については、さらに解明すべき点が数多く残されている。
【０００３】
【特許文献１】
ＷＯ００／２９４４１号
【特許文献２】
ＷＯ０１／６６１３４号
【非特許文献１】
Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　ｖｏｌ．２７６，　Ｎｏ．４０，　ｐ３６９６１−３６９６９，　２００１
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された非ヒト動物ＥＳ細胞の作製に成功すれば、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物を作出することができる。そして、得られるＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物は、ＯＴ７Ｔ０２２により誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、ＯＴ７Ｔ０２２の生物活性の不活性化を原因とする疾病のモデルとなり、これらの疾病の原因究明および治療法の検討が可能となる。
本発明は、ＲＦＲＰおよびＯＴ７Ｔ０２２のさらなる機能を解明し、新たな医薬を提供することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の課題に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物を作出することに成功し、該動物の発現型として、予想外にも体温上昇、腎臓絶対重量の増加、胸腺絶対重量の増加、白血球数の減少、血小板数の減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、攻撃行動の誘発、後退歩行、筋力の低下などが起こることを見出した。本発明者らは、これらの知見に基づいて、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、
〔１〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔２〕ポリペプチドが配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドである上記〔１〕記載の剤、
〔３〕部分ペプチドが、
（ｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第８８番目（Ｌｅｕ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、それぞれ配列番号：１または３で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第８７番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜８７個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−１）、
（ｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、それぞれ配列番号：１または３で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１００番目（Ａｒｇ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１００個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−２）、
（ｉｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、それぞれ配列番号：１または３で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１２６番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１２６個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−３）、
（ｉｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第８８番目（Ｌｅｕ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第８７番目（Ｌｙｓ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜８７個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−１）、
（ｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｌｅｕ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１００番目（Ａｒｇ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１００個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−２）、
（ｖｉ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１２６番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１２６個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−３）、
（ｖｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第９０番目（Ｌｅｕ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第８９番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜８９個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（マウスＲＦＲＰ−１）、
（ｖｉｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１２０番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１２０個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（マウスＲＦＲＰ−３）、
（ｉｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第９０番目（Ｌｅｕ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、それぞれ配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第８９番目（Ｖａｌ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜８９個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ラットＲＦＲＰ−１）、
（ｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、それぞれ配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１２０番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１２０個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるペプチド（ラットＲＦＲＰ−３）、
（ｘｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、または
（ｘｉｖ）上記（ｘｉ）〜（ｘｉｉｉ）の付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチドである上記〔１〕記載の剤、
〔４〕部分ペプチドが、
（ｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第５６番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−１）、
（ｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−２）、
（ｉｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−３）、
（ｉｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｌｙｓ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−１）、
（ｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｌｅｕ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−２）、
（ｖｉ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｌａ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−３）、
（ｖｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（マウスＲＦＲＰ−１）、
（ｖｉｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（マウスＲＦＲＰ−３）、
（ｉｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ａｓｐ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ラットＲＦＲＰ−１）、
（ｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ラットＲＦＲＰ−３）、
（ｘｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド（欠失型）、
（ｘｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド（付加型）、
（ｘｉｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド（挿入型）、
（ｘｉｖ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド（置換型）、または
（ｘｖ）上記（ｘｉ）〜（ｘｉｖ）の欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチドである上記〔１〕記載の剤、
〔５〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔６〕ＤＮＡが配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするＤＮＡである上記〔５〕記載の剤、
〔７〕ＤＮＡが、
（ｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第５６番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−１）、
（ｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−２）、
（ｉｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトＲＦＲＰ−３）、
（ｉｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｌｙｓ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−１）、
（ｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｌｅｕ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−２）、
（ｖｉ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｌａ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ウシＲＦＲＰ−３）、
（ｖｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（マウスＲＦＲＰ−１）、
（ｖｉｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（マウスＲＦＲＰ−３）、
（ｉｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ａｓｐ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ラットＲＦＲＰ−１）、
（ｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド（ラットＲＦＲＰ−３）、
（ｘｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド（欠失型）、
（ｘｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド（付加型）、
（ｘｉｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド（挿入型）、
（ｘｉｖ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド（置換型）、または
（ｘｖ）上記（ｘｉ）〜（ｘｉｖ）の欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチド、
をコードするＤＮＡである上記〔５〕記載の剤、
〔８〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の変化または筋力変化の診断剤、
〔９〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、
〔１０〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の変化、筋力変化の診断剤、
〔１１〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、
〔１２〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔１３〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、
〔１４〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔１５〕ＯＴ７Ｔ０２２が配列番号：１１で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質である上記〔１４〕記載の剤、
〔１６〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔１７〕ＤＮＡが配列番号：１１で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡである上記〔１６〕記載の剤、
〔１８〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の変化または筋力変化の診断剤、
〔１９〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、
〔２０〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の変化または筋力変化の診断剤、
〔２１〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、
〔２２〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニストを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔２３〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、
〔２４〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔２５〕配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、
〔２６〕哺乳動物に対して、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩、
（ｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善方法、
〔２７〕哺乳動物に対して、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（ｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善方法、
〔２８〕筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤を製造するための
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩、
（ｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用、
〔２９〕筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤を製造するための
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（ｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用、
〔３０〕ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された哺乳動物胚幹細胞、
〔３１〕薬剤耐性である上記〔３０〕記載の胚幹細胞、
〔３２〕薬剤がネオマイシンである上記〔２９〕記載の胚幹細胞、
〔３３〕レポーター遺伝子の挿入によりＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された上記〔３０〕記載の胚幹細胞、
〔３４〕レポーター遺伝子がｌａｃＺ遺伝子である上記〔３３〕記載の胚幹細胞、
〔３５〕哺乳動物がマウスである上記〔３０〕記載の胚幹細胞、
〔３６〕ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が配列番号：１２、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２８または配列番号：３２で表わされる塩基配列を含有する遺伝子である上記〔３０〕記載の胚幹細胞、
〔３７〕ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト哺乳動物、
〔３８〕レポーター遺伝子の挿入によりＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された上記〔３７〕記載の動物、
〔３９〕非ヒト哺乳動物がマウスである上記〔３７〕記載の動物、
〔４０〕ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が配列番号：１２、配列番号：２８または配列番号：３２で表わされる塩基配列を含有する遺伝子である上記〔３７〕記載の動物、
〔４１〕野生型非ヒト哺乳動物に比べて、胸腺退縮遅延がみられる上記〔３７〕記載の動物、
〔４２〕野生型非ヒト哺乳動物に比べて、後退歩行がみられる上記〔３７〕記載の動物、
〔４３〕野生型非ヒト哺乳動物に比べて、侵害刺激（例、熱侵害刺激）に対して鈍麻がみられる上記〔３７〕記載の動物、
〔４４〕野生型非ヒト哺乳動物に比べて、攻撃的行動が多い上記〔３７〕記載の動物、
〔４５〕野生型非ヒト哺乳動物に比べて、腎臓絶対重量または胸腺絶対重量の低下がみられる上記〔３７〕記載の動物、
〔４６〕野生型非ヒト哺乳動物に比べて、白血球数または血小板数の減少がみられる上記〔３７〕記載の動物、
〔４７〕野生型非ヒト哺乳動物に比べて、筋力が低下している上記〔３７〕記載の動物、
〔４８〕上記〔３７〕記載の動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞を用いることを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法、
〔４９〕上記〔３７〕記載の動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞に試験化合物を投与することを特徴とする上記〔４８〕記載のスクリーニング方法、
〔５０〕上記〔４８〕記載のスクリーニング方法により得られる、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬、
〔５１〕上記〔４８〕記載のスクリーニング方法により得られる予防・治療・改善薬を含有してなる痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔５２〕上記〔３７〕記載の動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物、
〔５３〕上記〔３７〕記載の動物に対する薬剤誘発またはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、
〔５４〕上記〔５２〕記載の動物に対する薬剤誘発またはストレス負荷によって生じる病体モデル動物、
〔５５〕上記〔５２〕〜〔５４〕のいずれかに記載の動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞を用いることを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法、
〔５６〕上記〔５２〕〜〔５４〕のいずれかに記載の動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞に試験化合物を投与することを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法、
〔５７〕上記〔５５〕または〔５６〕記載のスクリーニング方法により得られる、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬、
〔５８〕上記〔５５〕または〔５６〕記載のスクリーニング方法により得られる予防・治療・改善薬を含有してなる痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔５９〕上記〔３８〕記載の動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とするＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
〔６０〕上記〔５９〕記載のスクリーニング方法で得られうるＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩、
〔６１〕上記〔５９〕記載のスクリーニング方法で得られうるＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤、
〔６２〕上記〔５９〕記載のスクリーニング方法で得られうるＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、鎮痛剤、モルヒネの鎮痛作用促進剤、モルヒネ耐性回避剤またはモルヒネ依存性回避剤、
〔６３〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の減少の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法、および
〔６４〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善薬のスクリーニング用キットを提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明で用いられるＲＦＲＰは、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド（以下、ＲＦＲＰと称する場合がある）であり、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、網膜細胞、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくは癌細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、網膜、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など、または血球系の細胞もしくはその培養細胞（例えば、ＭＥＬ，Ｍ１，ＣＴＬＬ−２，ＨＴ−２，ＷＥＨＩ−３，ＨＬ−６０，ＪＯＳＫ−１，Ｋ５６２，ＭＬ−１，ＭＯＬＴ−３，ＭＯＬＴ−４，ＭＯＬＴ−１０，ＣＣＲＦ−ＣＥＭ，ＴＡＬＬ−１，Ｊｕｒｋａｔ，ＣＣＲＴ−ＨＳＢ−２，ＫＥ−３７，ＳＫＷ−３，ＨＵＴ−７８，ＨＵＴ−１０２，Ｈ９，Ｕ９３７，ＴＨＰ−１，ＨＥＬ，ＪＫ−１，ＣＭＫ，ＫＯ−８１２，ＭＥＧ−０１など）に由来するポリペプチドであってもよく、合成ポリペプチドであってもよい。
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。
アミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；マトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；フィルタリング＝ＯＦＦ）にて計算することができる。例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第２２〜１８０番目のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列や、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表されるアミノ酸配列などがあげられる。
【０００８】
本発明に用いられるＲＦＲＰは、具体的には、前記の配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなるポリペプチドまたは配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表されるアミノ酸配列など）を有し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなるポリペプチドと実質的に同質のプロラクチン分泌促進活性などを有するポリペプチドである。
実質的に同質とは、プロラクチン分泌促進活性などが性質的に（例、生理化学的に、または薬理学的に）同質であることを示す。従って、プロラクチン分泌促進活性が同等（例、約０．１〜１００倍、好ましくは約０．５〜１０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度、ポリペプチドの分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
プロラクチン分泌促進活性の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができるが、例えば、ＷＯ０１／６６１３４号の実施例１に従って測定することができる。
また、ＲＦＲＰとしては、例えば、▲１▼配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表わされるアミノ酸配列中の１〜２０個（好ましくは、１〜１５個、さらに好ましくは、１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、▲２▼配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表わされるアミノ酸配列に１〜２０個（好ましくは、１〜１５個、さらに好ましくは、１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、▲３▼配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表わされるアミノ酸配列に１〜２０個（好ましくは、１〜１５個、さらに好ましくは、１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、▲４▼配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表わされるアミノ酸配列中の１〜２０個（好ましくは、１〜１５個、さらに好ましくは、１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または▲５▼それら欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列を有するポリペプチドも含まれる。
上記のようにアミノ酸配列が欠失、付加、挿入または置換されている場合、その欠失、付加、挿入または置換の位置は特に限定されない。
【０００９】
本明細書におけるポリペプチドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰをはじめとするＲＦＲＰは、Ｃ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の何れであってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ１−６アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３−８シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ６−１２アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ１−２アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ１−２アルキル基などのＣ７−１４アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
ＲＦＲＰがＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明でいうＲＦＲＰの範囲に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、ＲＦＲＰには、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ１−６アルカノイルなどのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ１−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。以下、これらのポリペプチドを含めてＲＦＲＰと略称することもある。
【００１０】
本発明で用いられるＲＦＲＰの具体例としては、例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ、配列番号：３で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ、配列番号：７で表わされるアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰ、配列番号：９で表わされるアミノ酸配列からなるマウスＲＦＲＰ、配列番号：２２で表わされるアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰなどが用いられ、例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ、配列番号：３で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰが好ましく用いられる。
【００１１】
ＲＦＲＰの部分ペプチド（以下、ＲＦＲＰ部分ペプチドと称する場合がある）としては、前記したＲＦＲＰの部分ペプチドであって、後述するＯＴ７Ｔ０２２（配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその塩）に結合する能力を有するものであれば、いかなるものでもよい。
また、ＲＦＲＰ部分ペプチドは、そのアミノ酸配列中の１〜５個（好ましくは、１〜３個のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１〜５個（好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列に１〜５個（好ましくは、１〜３個のアミノ酸が挿入され、または、そのアミノ酸配列中の１〜５個（好ましくは、１〜３個のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるものであってもよく、または、それら欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるものであってもよい。
また、ＲＦＲＰ部分ペプチドはＣ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）（Ｒは上記と同意義を示す）のいずれであってもよい。なかでも、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ２）であるものが好ましい。
ＲＦＲＰ部分ペプチドがＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明でいうＲＦＲＰ部分ペプチドに含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、ＲＦＲＰ部分ペプチドには、前記したＲＦＲＰと同様に、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。以下、これらの部分ペプチドも含めてＲＦＲＰ部分ペプチドと略称することもある。
ＲＦＲＰ部分ペプチドとして好ましくは、ＲＦａｍｉｄｅ、ＲＳａｍｉｄｅまたはＲＬａｍｉｄｅ構造を有するペプチド、より好ましくは、ＲＦａｍｉｄｅまたはＲＳａｍｉｄｅ構造を有するペプチド、特に好ましくは、ＲＦａｍｉｄｅを有するペプチドが挙げられる。ＲＦａｍｉｄｅ構造とは、ぺプチドのＣ末端がＡｒｇｉｎｉｎｅ（アルギニン）−Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ（フェニルアラニン）−ＮＨ２構造になっていることをいい、ＲＳａｍｉｄｅ構造とは、ぺプチドのＣ末端がＡｒｇｉｎｉｎｅ（アルギニン）−Ｓｅｒｉｎｅ（セリン）−ＮＨ２構造になっていることをいい、ＲＬａｍｉｄｅ構造とは、ぺプチドのＣ末端がＡｒｇｉｎｉｎｅ（アルギニン）−Ｌｅｕｃｉｎｅ（ロイシン）−ＮＨ２構造になっていることを意味する。
【００１２】
ＲＦＲＰ部分ペプチドの中でも、例えば、
（ｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第８８番目（Ｌｅｕ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、それぞれ配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第８７番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜８７個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−１、
（ｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、ぞれぞれ配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１００番目（Ａｒｇ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１００個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−２、
（ｉｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、それぞれ配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１２６番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１２６個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−３、
（ｉｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第８８番目（Ｌｅｕ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第８７番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜８７個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−１、
（ｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｌｅｕ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１００番目（Ａｒｇ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１００個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−２、
（ｖｉ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１２６番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１２６個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−３、
（ｖｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第９０番目（Ｌｅｕ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第８９番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜８９個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるマウスＲＦＲＰ−１、
（ｖｉｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１２０番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１２０個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるマウスＲＦＲＰ−３、
（ｉｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第９０番目（Ｌｅｕ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第８９番目（Ａｓｎ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜８９個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰ−１、
（ｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有し、そのアミノ酸配列のＮ末端側に、配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１２０番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列のＣ末端から数えて１〜１２０個のアミノ酸が付加していてもよいアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰ−３、
（ｘｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、または
（ｘｉｖ）上記（ｘｉ）〜（ｘｉｉｉ）の付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチドなどが用いられる。
【００１３】
これらのＲＦＲＰ部分ペプチドの中でも、
（ｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第５６番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−１、
（ｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−２、
（ｉｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−３、
（ｉｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｌｙｓ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−１、
（ｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｌｅｕ）のアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−２、
（ｖｉ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｌａ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−３、
（ｖｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるマウスＲＦＲＰ−１、
（ｖｉｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるマウスＲＦＲＰ−３、
（ｉｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ａｓｐ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰ−１、
（ｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰ−３、
（ｘｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなる欠失型ペプチド、
（ｘｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなる付加型ペプチド、
（ｘｉｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなる挿入型ペプチド、
（ｘｉｖ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなる置換型ペプチド、または
（ｘｖ）上記（ｘｉ）〜（ｘｉｖ）の欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチドなどが好ましく用いられる。
【００１４】
特にこれらのペプチドのアミド体（好ましくは、これらペプチドのＣ末端のカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）がアミド化された（−ＣＯＮＨ２）ペプチド）が好ましい。
具体的には、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列で表されるペプチドのＣ末端がアミド化された（−ＣＯＮＨ２）ペプチド（配列番号：１３）、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列で表されるペプチドのＣ末端がアミド化された（−ＣＯＮＨ２）ペプチド（配列番号：１５）および配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列で表されるペプチドのＣ末端がアミド化された（−ＣＯＮＨ２）ペプチド（配列番号：１４）などがあげられる。
【００１５】
ＲＦＲＰまたはＲＦＲＰ部分ペプチドの塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。
ＲＦＲＰもしくはその塩またはＲＦＲＰ部分ペプチドもしくはその塩は、ＷＯ００／２９４４１号、ＷＯ０１／６６１３４号などに記載の方法に従って製造することができる。
【００１６】
ＲＦＲＰをコードするＤＮＡとしては、前述したＲＦＲＰをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織よりｔｏｔａｌＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｃｈａｉｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ（以下、ＲＴ−ＰＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。
【００１７】
ＲＦＲＰをコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０または配列番号：２３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０または配列番号：２３で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表されるアミノ酸配列からなるＲＦＲＰと実質的に同質の活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡなどであれば何れのものでもよい。
配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０または配列番号：２３で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、それぞれ配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０または配列番号：２３で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
塩基配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；フィルタリング＝ＯＮ；マッチスコア＝１；ミスマッチスコア＝−３）にて計算することができる。
ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ）２ｎｄ（Ｊ．　Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂ．　Ｐｒｅｓｓ，　１９８９）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
【００１８】
より具体的には、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。また、配列番号：３で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰをコードするＤＮＡとしては、配列番号：４で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。配列番号：５で表わされるアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。配列番号：７で表わされるアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰをコードするＤＮＡとしては、配列番号：８で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。配列番号：９で表わされるアミノ酸配列からなるマウスＲＦＲＰをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。配列番号：２２で表わされるアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２３で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
【００１９】
ＲＦＲＰ部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、前述したＲＦＲＰ部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
ＲＦＲＰ部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０または配列番号：２３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０または配列番号：２３で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表されるアミノ酸配列からなるＲＦＲＰと実質的に同質の活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。
配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０または配列番号：２３で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡは、前記と同意義を示す。
塩基配列の相同性は、前記した相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴを用い、同様の条件にて計算することができる。
ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用いられる。
【００２０】
また、ＲＦＲＰ部分ペプチドをコードするＤＮＡとしてより具体的には、前記した具体的なＲＦＲＰ部分ペプチドをコードするＤＮＡなどが用いられる。例えば、
（ｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第５６番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−１をコードするＤＮＡとしては、それぞれ配列番号：２または配列番号：４で表わされる塩基配列の第１６６番目〜第２７６番目、第２０８番目〜第２７６番目、第２１７番目〜第２７６番目、第２４１番目〜第２７６番目または第２５０番目〜第２７６番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−２をコードするＤＮＡとしては、それぞれ配列番号：２または配列番号：４で表わされる塩基配列の第３０１番目〜第３３６番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるヒトＲＦＲＰ−３をコードするＤＮＡとしては、それぞれ配列番号：２または配列番号：４で表わされる塩基配列の第３０１番目〜第３９３番目、第３１０番目〜第３９３番目、第３４３番目〜第３９３番目、第３７０番目〜第３９３番目、第３７３番目〜第３９３番目、第３７６番目〜第３９３番目または第３７９番目〜第３９３番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｉｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｌｙｓ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−１をコードするＤＮＡとしては、配列番号：６で表わされる塩基配列の第１７２番目〜第２７６番目、第２０８番目〜第２７６番目、第２１７番目〜第２７６番目、第２４１番目〜第２７６番目または第２５０番目〜第２７６番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｌｅｕ）のアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−２をコードするＤＮＡとしては、配列番号：６で表わされる塩基配列の第３０１番目〜第３３６番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｌａ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるウシＲＦＲＰ−３をコードするＤＮＡとしては、配列番号：６で表わされる塩基配列の第３０１番目〜第３９３番目、第３１０番目〜第３９３番目、第３４３番目〜第３９３番目、第３７０番目〜第３９３番目、第３７３番目〜第３９３番目、第３７６番目〜第３９３番目または第３７９番目〜第３９３番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｖｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるマウスＲＦＲＰ−１をコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第１７２番目〜第２８２番目、第２１４番目〜第２８２番目、第２２３番目〜第２８２番目、第２４７番目〜第２８２番目または第２５０番目〜第２８２番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｖｉｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるマウスＲＦＲＰ−３をコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０で表わされる塩基配列の第３５２番目〜第３７５番目、第３５６番目〜第３７５番目、第３５８番目〜第３７５番目または第３６１番目〜第３７５番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｉｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ａｓｐ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰ−１をコードするＤＮＡとしては、それぞれ配列番号：８または５１で表わされる塩基配列の第１７２番目〜第２８２番目、第２１４番目〜第２８２番目、第２２３番目〜第２８２番目、第２４７番目〜第２８２番目または第２５０番目〜第２８２番目の塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるラットＲＦＲＰ−３をコードするＤＮＡとしては、それぞれ配列番号：８または５１で表わされる塩基配列の第３５２番目〜第３７５番目、第３５５番目〜第３７５番目、第３５８番目〜第３７５番目または第３６１番目〜第３７５番目の塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
【００２１】
ＲＦＲＰまたはその部分ペプチドを完全にコードするＤＮＡのクローニングは、ＷＯ００／２９４４１号、ＷＯ０１／６６１３４号などに記載の方法に従って行うことができる。
また、ＲＦＲＰまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡからＲＦＲＰまたはその部分ペプチドを製造する場合、ＷＯ００／２９４４１号、ＷＯ０１／６６１３４号などに記載の方法に従って行うことができる。
ＲＦＲＰもしくはその部分ペプチド、後述のＯＴ７Ｔ０２２もしくはその部分ペプチド、およびこれらをコードするＤＮＡは、自体公知の方法で標識化されていてもよく、具体的にはアイソトープラベル化されたもの、蛍光標識されたもの（例えば、フルオレセインなどによる蛍光標識）、ビオチン化されたものまたは酵素標識されたものなどがあげられる。
【００２２】
ＲＦＲＰもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、ＲＦＲＰ部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２（以下、ＯＴ７Ｔ０２２と略記する）としては、例えば、配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質が用いられる。
【００２３】
ＯＴ７Ｔ０２２は、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、モルモット、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）のあらゆる細胞（例えば、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）や血球系の細胞、またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁頭核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、視床下核、大脳皮質、延髄、小脳、後頭葉、前頭葉、側頭葉、被殻、尾状核、脳染、黒質）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、末梢血球、前立腺、睾丸、精巣、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など（特に、脳や脳の各部位）に由来する蛋白質であってもよく、また合成蛋白質であってもよい。
配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
【００２４】
配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質としては、例えば、配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列からなるＯＴ７Ｔ０２２と実質的に同質の活性を有するレセプター蛋白質などが好ましく、具体的には、配列番号：２４で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質などがあげられる。
アミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；マトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；フィルタリング＝ＯＦＦ）にて計算することができる。実質的に同質の活性としては、例えば、リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などが挙げられる。実質的に同質とは、それらの活性が性質的に同質であることを示す。したがって、リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などの活性が同等（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．５〜２０倍、より好ましくは約０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度や蛋白質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などの活性の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができるが、例えば、後述するリガンドの決定方法やスクリーニング方法に従って測定することができる。
また、ＯＴ７Ｔ０２２としては、▲１▼配列番号：１１または配列番号：２４で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、▲２▼配列番号：１１または配列番号：２４で表わされるアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、▲３▼配列番号：１１または配列番号：２４で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または▲４▼それら欠失・付加・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質なども用いられる。
【００２５】
本明細書におけるＯＴ７Ｔ０２２は、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列からなるＯＴ７Ｔ０２２をはじめとするＯＴ７Ｔ０２２は、Ｃ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）のいずれであってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ１−６アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３−８シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ６−１２アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ１−２アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ１−２アルキル基などのＣ７−１４アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
【００２６】
ＯＴ７Ｔ０２２がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものもＯＴ７Ｔ０２２の範囲に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、ＯＴ７Ｔ０２２には、上記したＯＴ７Ｔ０２２において、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチルなどのＣ２−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチルなどのＣ２−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。
ＯＴ７Ｔ０２２の具体例としては、例えば、配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列からなるラットＯＴ７Ｔ０２２、配列番号：２４で表されるアミノ酸配列からなるヒトＯＴ７Ｔ０２２などが用いられる。
【００２７】
ＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドとしては、前記したＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドであれば何れのものであってもよいが、例えば、ＯＴ７Ｔ０２２蛋白質分子のうち、細胞膜の外に露出している部位であって、レセプター結合活性を有するものなどが用いられる。
具体的には、配列番号：１１または配列番号：２４で表わされるアミノ酸配列からなるＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドとしては、疎水性プロット解析において細胞外領域（親水性（Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ）部位）であると分析された部分を含むペプチドである。また、疎水性（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ）部位を一部に含むペプチドも同様に用いることができる。個々のドメインを個別に含むペプチドも用い得るが、複数のドメインを同時に含む部分のペプチドでも良い。
ＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドのアミノ酸の数は、前記したＯＴ７Ｔ０２２の構成アミノ酸配列のうち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個以上、より好ましくは１００個以上のアミノ酸配列からなるペプチドなどが好ましい。
また、ＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドは、上記アミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。
また、ＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドはＣ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）（Ｒは上記と同意義を示す）のいずれであってもよい。
ＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドがＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものもＯＴ７Ｔ０２２の範囲に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、ＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドには、前記したＯＴ７Ｔ０２２と同様に、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。
ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。
ＯＴ７Ｔ０２２またはその塩、およびＯＴ７Ｔ０２２を発現する細胞またはその細胞膜画分は、ＷＯ００／２９４４１号、ＷＯ０１／６６１３４号などに記載の方法に従って製造することができる。
【００２８】
ＯＴ７Ｔ０２２をコードするポリヌクレオチドとしては、ＯＴ７Ｔ０２２をコードする塩基配列（ＤＮＡまたはＲＮＡ、好ましくはＤＮＡ）を含有するものであればいかなるものであってもよい。該ポリヌクレオチドとしては、ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡ、ｍＲＮＡ等のＲＮＡであり、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドでもよい。一本鎖の場合は、センス鎖（即ち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖（即ち、非コード鎖）であってもよい。
ＯＴ７Ｔ０２２をコードするポリヌクレオチドを用いて、例えば、公知の実験医学増刊「新ＰＣＲとその応用」１５（７）、１９９７記載の方法またはそれに準じた方法により、ＯＴ７Ｔ０２２のｍＲＮＡを定量することができる。
ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡとしては、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織よりｔｏｔａｌＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｃｈａｉｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ（以下、ＲＴ−ＰＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。
【００２９】
具体的には、ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１２、配列番号：２５または配列番号：２６で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：１２、配列番号：２５または配列番号：２６で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：１１または配列番号：２４で表されるアミノ酸配列からなるＯＴ７Ｔ０２２と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など）を有するレセプター蛋白質をコードするＤＮＡであれば何れのものでもよい。
配列番号：１２、配列番号：２５または配列番号：２６で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１２、配列番号：２５または配列番号：２６で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
塩基配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；フィルタリング＝ＯＮ；マッチスコア＝１；ミスマッチスコア＝−３）にて計算することができる。
ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ）２ｎｄ（Ｊ．　Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂ．　Ｐｒｅｓｓ，　１９８９）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
該ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
より具体的には、配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列からなるラットＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡとしては、配列番号：１２で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。配列番号：２４で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡとしては、配列番号：２５または配列番号：２６で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
【００３０】
ＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、前述したＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織よりｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｃｈａｉｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ（以下、ＲＴ−ＰＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。
具体的には、ＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、（１）配列番号：１２、配列番号：２５または配列番号：２６で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または（２）配列番号：１２、配列番号：２５または配列番号：２６で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：１１または配列番号：２４で表わされるアミノ酸配列からなるＯＴ７Ｔ０２２と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用など）を有するレセプター蛋白質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。
ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡからＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドを製造する場合、ＷＯ００／２９４４１号、ＷＯ０１／６６１３４号などに記載の方法に従って行うことができる。
【００３１】
ＲＦＲＰ、その部分ペプチド、もしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体は、自体公知の方法、例えばＷＯ００／２９４４１号、ＷＯ０１／６６１３４号などに記載の方法に従って製造し、使用することができる。
ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、自体公知の方法、例えばＷＯ００／２９４４１号、ＷＯ０１／６６１３４号などに記載の方法に従って製造し、使用することができる。
【００３２】
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡの塩基配列の一部、または該ＤＮＡと相補的な塩基配列の一部を含有してなるポリヌクレオチドとは、上記したＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の部分ペプチドをコードするＤＮＡを包含するだけではなく、ＲＮＡをも包含する意味で用いられる。
本発明に従えば、ＲＦＲＰ遺伝子またはＯＴ７Ｔ０２２遺伝子の複製または発現を阻害することのできるアンチセンス・ポリヌクレオチド（核酸）を、クローン化した、あるいは決定されたＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡの塩基配列情報に基づき設計し、合成しうる。そうしたポリヌクレオチド（核酸）は、ＲＦＲＰ遺伝子またはＯＴ７Ｔ０２２遺伝子のＲＮＡとハイブリダイズすることができ、該ＲＮＡの合成または機能を阻害することができるか、あるいはＲＦＲＰ関連ＲＮＡまたはＯＴ７Ｔ０２２関連ＲＮＡとの相互作用を介してＲＦＲＰ遺伝子またはＯＴ７Ｔ０２２遺伝子の発現を調節・制御することができる。ＲＦＲＰ関連ＲＮＡまたはＯＴ７Ｔ０２２関連ＲＮＡの選択された配列に相補的なポリヌクレオチド、およびＲＦＲＰ関連ＲＮＡまたはＯＴ７Ｔ０２２関連ＲＮＡと特異的にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドは、生体内および生体外でＲＦＲＰ遺伝子またはＯＴ７Ｔ０２２遺伝子の発現を調節・制御するのに有用であり、また病気などの治療または診断に有用である。用語「対応する」とは、遺伝子を含めたヌクレオチド、塩基配列または核酸の特定の配列に相同性を有するあるいは相補的であることを意味する。ヌクレオチド、塩基配列または核酸とペプチド（蛋白質）との間で「対応する」とは、ヌクレオチド（核酸）の配列またはその相補体から誘導される指令にあるペプチド（蛋白質）のアミノ酸を通常指している。ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子の５’端ヘアピンループ、５’端６−ベースペア・リピート、５’端非翻訳領域、ポリペプチド翻訳開始コドン、蛋白質コード領域、ＯＲＦ翻訳開始コドン、３’端非翻訳領域、３’端パリンドローム領域、および３’端ヘアピンループは好ましい対象領域として選択しうるが、ＲＦＲＰ遺伝子またはＯＴ７Ｔ０２２遺伝子内の如何なる領域も対象として選択しうる。
【００３３】
目的核酸と、対象領域の少なくとも一部に相補的でハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドとの関係は、対象物と「アンチセンス」であるということができる。アンチセンス・ポリヌクレオチドは、２−デオキシ−Ｄ−リボースを含有しているポリデオキシリボヌクレオチド、Ｄ−リボースを含有しているポリリボヌクレオチド、プリンまたはピリミジン塩基のＮ−グリコシドであるその他のタイプのポリヌクレオチド、あるいは非ヌクレオチド骨格を有するその他のポリマー（例えば、市販の蛋白質核酸および合成配列特異的な核酸ポリマー）または特殊な結合を含有するその他のポリマー（但し、該ポリマーはＤＮＡやＲＮＡ中に見出されるような塩基のペアリングや塩基の付着を許容する配置をもつヌクレオチドを含有する）などが挙げられる。それらは、２本鎖ＤＮＡ、１本鎖ＤＮＡ、２本鎖ＲＮＡ、１本鎖ＲＮＡ、さらにＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッドであることができ、さらに非修飾ポリヌクレオチド（または非修飾オリゴヌクレオチド）、さらには公知の修飾の付加されたもの、例えば当該分野で知られた標識のあるもの、キャップの付いたもの、メチル化されたもの、１個以上の天然のヌクレオチドを類縁物で置換したもの、分子内ヌクレオチド修飾のされたもの、例えば非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、カルバメートなど）を持つもの、電荷を有する結合または硫黄含有結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を持つもの、例えば蛋白質（ヌクレアーゼ、ヌクレアーゼ・インヒビター、トキシン、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジンなど）や糖（例えば、モノサッカライドなど）などの側鎖基を有しているもの、インターカレント化合物（例えば、アクリジン、プソラレンなど）を持つもの、キレート化合物（例えば、金属、放射活性をもつ金属、ホウ素、酸化性の金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾された結合を持つもの（例えば、αアノマー型の核酸など）であってもよい。ここで「ヌクレオシド」、「ヌクレオチド」および「核酸」とは、プリンおよびピリミジン塩基を含有するのみでなく、修飾されたその他の複素環型塩基をもつようなものを含んでいて良い。こうした修飾物は、メチル化されたプリンおよびピリミジン、アシル化されたプリンおよびピリミジン、あるいはその他の複素環を含むものであってよい。修飾されたヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた糖部分が修飾されていてよく、例えば、１個以上の水酸基がハロゲンとか、脂肪族基などで置換されていたり、あるいはエーテル、アミンなどの官能基に変換されていてよい。
【００３４】
本発明のアンチセンス・ポリヌクレオチド（核酸）は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、あるいは修飾された核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ）である。修飾された核酸の具体例としては核酸の硫黄誘導体やチオホスフェート誘導体、そしてポリヌクレオシドアミドやオリゴヌクレオシドアミドの分解に抵抗性のものが挙げられるが、それに限定されるものではない。本発明のアンチセンス核酸は次のような方針で好ましく設計されうる。すなわち、細胞内でのアンチセンス核酸をより安定なものにする、アンチセンス核酸の細胞透過性をより高める、目標とするセンス鎖に対する親和性をより大きなものにする、そしてもし毒性があるならアンチセンス核酸の毒性をより小さなものにする。
こうして修飾は当該分野で数多く知られており、例えば　Ｊ．　Ｋａｗａｋａｍｉ　ｅｔ　ａｌ．，Ｐｈａｒｍ　Ｔｅｃｈ　Ｊａｐａｎ，　Ｖｏｌ．　８，　ｐｐ．２４７，　１９９２；　Ｖｏｌ．　８，　ｐｐ．３９５，　１９９２；　Ｓ．　Ｔ．　Ｃｒｏｏｋｅ　ｅｔ　ａｌ．　ｅｄ．，　Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，　ＣＲＣ　Ｐｒｅｓｓ，　１９９３　などに開示がある。
本発明のアンチセンス核酸は、変化せしめられたり、修飾された糖、塩基、結合を含有していて良く、リポゾーム、ミクロスフェアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子治療により適用されたり、付加された形態で与えられることができうる。こうして付加形態で用いられるものとしては、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリカチオン体、細胞膜との相互作用を高めたり、核酸の取込みを増大せしめるような脂質（例えば、ホスホリピド、コレステロールなど）といった粗水性のものが挙げられる。付加するに好ましい脂質としては、コレステロールやその誘導体（例えば、コレステリルクロロホルメート、コール酸など）が挙げられる。こうしたものは、核酸の３’端あるいは５’端に付着させることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介して付着させることができうる。その他の基としては、核酸の３’端あるいは５’端に特異的に配置されたキャップ用の基で、エキソヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅなどのヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げられる。こうしたキャップ用の基としては、ポリエチレングリコール、テトラエチレングリコールなどのグリコールをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が挙げられるが、それに限定されるものではない。
アンチセンス核酸の阻害活性は、本発明の形質転換体、本発明の生体内や生体外の遺伝子発現系、あるいはＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質の生体内や生体外の翻訳系を用いて調べることができる。該核酸それ自体公知の各種の方法で細胞に適用できる。
【００３５】
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするポリヌクレオチドに対するｓｉＲＮＡ（以下、本発明のｓｉＲＮＡ）は、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＲＮＡの一部とそれに相補的なＲＮＡを含有する二重鎖ＲＮＡである。
ｓｉＲＮＡは、公知の方法（例、Ｎａｔｕｒｅ，　４１１巻，　４９４頁，　２００１年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＲＮＡの一部を含有するリボザイムは、公知の方法（例、ＴＲＥＮＤＳ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　７巻，　２２１頁，　２００１年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。例えば、公知のリボザイムの配列の一部をＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＲＮＡの一部に置換することによって製造することができる。ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＲＮＡの一部としては、公知のリボザイムによって切断され得るコンセンサス配列ＮＵＸ（式中、Ｎはすべての塩基を、ＸはＧ以外の塩基を示す）の近傍の配列などが挙げられる。
【００３６】
後述するように、ＯＴ７Ｔ０２２を欠損した非ヒト哺乳動物の表現型から、ＲＦＲＰおよびＯＴ７Ｔ０２２は、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下などに関与していることが分かった。したがって、▲１▼ＲＦＲＰ、その部分ペプチド、もしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩（以下、ＲＦＲＰと略記する）、▲２▼ＲＦＲＰをコードするＤＮＡ、▲３▼ＲＦＲＰに対する抗体、▲４▼ＲＦＲＰをコードするＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡ、▲５▼ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩（ＯＴ７Ｔ０２２と略記する）、▲６▼ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡ、▲７▼ＯＴ７Ｔ０２２に対する抗体、▲８▼ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡは、以下のような用途を有している。
【００３７】
（１）ＲＦＲＰの機能不全に関連する疾患の予防・治療・改善剤
ａ）ＲＦＲＰ、ｂ）ＲＦＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＯＴ７Ｔ０２２またはｄ）ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の機能不全に関連する疾患の予防・治療・改善剤などの医薬として使用することができる。
例えば、生体内においてＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２が減少しているために、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の機能が期待できない患者がいる場合に、ａ）ＲＦＲＰを該患者に投与し該ＲＦＲＰの量を補充したり、ｂ）（イ）ＲＦＲＰをコードするＤＮＡまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを該患者に投与し発現させることによって、あるいは（ロ）対象となる細胞にＲＦＲＰをコードするＤＮＡまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを挿入し発現させた後に、該細胞を該患者に移植することなどによって、患者の体内におけるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の量を増加させ、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の機能を充分に発揮させることができる。すなわち、ＲＦＲＰをコードするＤＮＡまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡは、安全で低毒性なＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の機能不全に関連する疾患の予防および／または治療剤として有用である。
具体的には、ａ）ＲＦＲＰ、ｂ）ＲＦＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＯＴ７Ｔ０２２またはｄ）ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡは、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に、筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤として使用することができる。
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２を上記予防・治療・改善剤として使用する場合は、常套手段に従って製剤化することができる。
一方、ＲＦＲＰをコードするＤＮＡまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを上記予防・治療・改善剤として使用する場合は、これらＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って実施することができる。ＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
例えば、ａ）ＲＦＲＰ、ｂ）ＲＦＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＯＴ７Ｔ０２２またはｄ）ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡは、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、ａ）ＲＦＲＰ、ｂ）ＲＦＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＯＴ７Ｔ０２２またはｄ）ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
【００３８】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。
【００３９】
また、上記予防・治療・改善剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填される。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
ＲＦＲＰの投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
ＤＮＡの投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００４０】
（２）遺伝子診断剤
ＲＦＲＰをコードするＤＮＡ、ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡ、またはこれらＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡは、プローブとして使用することにより、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）におけるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤として有用である。
ＤＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ），第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８９年））などにより実施することができる。
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションによりＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現低下または発現過剰が検出された場合は、例えば、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の機能不全または過剰発現に関連する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の機能不全または過剰発現に関連する疾患としては、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の変化、筋力変化など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の変化または筋力変化などが挙げられる。
特に、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の機能不全に関連する疾患としては、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下などが挙げられる。
一方、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の過剰発現に関連する疾患としては、例えば、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少、痛み、モルヒネ耐性、特に筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少などが挙げられる。
【００４１】
（３）ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡは、プローブとして用いることにより、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、例えば、（ｉ）非ヒト哺乳動物のａ）血液、ｂ）特定の臓器、ｃ）臓器から単離した組織もしくは細胞、または（ｉｉ）形質転換体等に含まれるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のｍＲＮＡ量を測定することによる、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
【００４２】
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のｍＲＮＡ量の測定は具体的には以下のようにして行なう。
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には免疫不全モデルラット、マウス、ウサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。
得られた細胞に含まれるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のｍＲＮＡは、例えば、通常の方法により細胞等からｍＲＮＡを抽出し、例えば、ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲなどの手法を用いることにより定量することができ、自体公知の手段によりノーザンブロットを行うことにより解析することもできる。
（ｉｉ）ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２を発現する形質転換体をＷＯ００／２９４４１号またはＷＯ０１／６６１３４号に記載の方法に従い作製し、該形質転換体に含まれるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のｍＲＮＡを同様にして定量、解析することができる。
【００４３】
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングは、
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間前（３０分前〜２４時間前、好ましくは３０分前〜１２時間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは一定時間後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投与し、投与後一定時間経過後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、細胞に含まれるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のｍＲＮＡ量を定量、解析することにより行なうことができ、
（ｉｉ）形質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、一定時間培養後（１日後〜７日後、好ましくは１日後〜３日後、より好ましくは２日後〜３日後）、該形質転換体に含まれるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のｍＲＮＡ量を定量、解析することにより行なうことができる。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが用いられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
試験化合物は塩を形成していてもよく、試験化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
【００４４】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を変化させる作用を有する化合物またはその塩であり、具体的には、（イ）ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を増加させることにより、ＯＴ７Ｔ０２２を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＡＭＰ生成抑制、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性など）を増強させる化合物またはその塩、（ロ）ＲＦＲＰの発現量を減少させることにより、該細胞刺激活性を減弱させる化合物またはその塩である。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物としては、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
該化合物の塩としては、前記したＲＦＲＰの塩と同様のものが用いられる。
上記スクリーニング方法で得られるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を増加させる化合物またはその塩は、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の変化、筋力変化など、好ましくは筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の変化または筋力変化、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下に対する安全で低毒性な予防・治療・改善剤として用いることができる。
上記スクリーニング方法で得られるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を減少させる化合物またはその塩は、例えば、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少に対する安全で低毒性な予防・治療・改善剤、鎮痛剤、モルヒネの鎮痛作用促進剤、モルヒネ耐性回避剤、モルヒネ依存性回避剤などとして用いることができる。
【００４５】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記したＲＦＲＰを含有する予防・治療・改善剤と同様に製造することができる。
得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につきＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を増加させる化合物またはその塩を約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では、通常例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につきＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の発現量を増加させる化合物またはその塩を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００４６】
（４）抗体を用いる診断方法
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記する）は、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２を特異的に認識することができるので、被検液中のＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の検出や中和に使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化されたＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化されたＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の割合を測定することを特徴とする被検液中のＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の定量法、および
（ｉｉ）被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中のＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の定量法を提供する。
【００４７】
上記（ｉｉ）の定量法においては、一方の抗体がＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のＮ端部を認識する抗体で、他方の抗体がＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のＣ端部に反応する抗体であることが望ましい。
また、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２に対するモノクローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体）を用いてＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の定量を行うことができるほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子のＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、あるいはＦａｂ画分を用いてもよい。
本発明の抗体を用いるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の定量法は、特に制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例えば、ＲＦＲＰ量またはＯＴ７Ｔ０２２量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。
【００４８】
標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例えば、〔１２５Ｉ〕、〔１３１Ｉ〕、〔３Ｈ〕、〔１４Ｃ〕などが用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系を用いることもできる。
抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物理吸着を用いてもよく、また通常酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あるいはガラス等があげられる。
サンドイッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中のＲＦＲＰ量を定量することができる。１次反応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。
【００４９】
本発明のサンドイッチ法によるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の測定法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例えば、２次反応で用いられる抗体が、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用いられる。
本発明のモノクローナル抗体をサンドイッチ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるいはネフロメトリーなどに用いることができる。
競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原（Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、および、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。
イムノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後、固相と液相を分離するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させた後、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。
また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えてＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の測定系を構築すればよい。これらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。
例えば、入江　寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江　寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年発行）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ」Ｖｏｌ．　７０（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ａ））、　同書　Ｖｏｌ．　７３（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｂ））、　同書　Ｖｏｌ．　７４（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｃ））、　同書　Ｖｏｌ．　８４（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｄ　：　Ｓｅｌｅｃｔｅｄ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ））、　同書　Ｖｏｌ．　９２（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｅ　：　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　Ｍｅｔｈｏｄｓ））、　同書　Ｖｏｌ．　１２１（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｉ　：　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ））（以上、アカデミックプレス社発行）などを参照することができる。
以上のようにして、本発明の抗体を用いることによって、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２を感度良く定量することができる。
【００５０】
さらには、本発明の抗体を用いてＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の濃度を定量することによって、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の濃度の減少が検出された場合、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下などの疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２の濃度の増加が検出された場合には、例えば、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少、痛み、モルヒネ耐性などの疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
【００５１】
（５）ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩（アゴニスト、アンタゴニストなど）のスクリーニング方法、およびＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬
ＯＴ７Ｔ０２２を用いるか、または組換え型ＯＴ７Ｔ０２２の発現系を構築し、該発現系を用いたレセプター結合アッセイ系を用いることによって、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少、痛み、モルヒネ耐性などの予防・治療・改善薬として有用なＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物（例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物など）またはその塩を効率よくスクリーニングすることができる。
このような化合物には、（イ）ＯＴ７Ｔ０２２を介して細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＡＭＰ生成抑制、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性など）を有する化合物（いわゆる、ＯＴ７Ｔ０２２アゴニスト）、（ロ）ＯＴ７Ｔ０２２を介する細胞刺激活性を阻害する化合物（いわゆる、ＯＴ７Ｔ０２２アンタゴニスト）、（ハ）ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合力を増強する化合物、または（ニ）ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合力を減少させる化合物などが含まれる。
すなわち、本発明は、
（１）ＲＦＲＰおよび（または）ＯＴ７Ｔ０２２を用いることを特徴とする痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少、痛み、モルヒネ耐性など、特に痛覚障害、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少などの予防・治療・改善薬のスクリーニング方法、
（２）（ｉ）ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２とを接触させた場合と（ｉｉ）ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２および試験化合物とを接触させた場合との比較を行なうことを特徴とする痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少、痛み、モルヒネ耐性など、特に痛覚障害、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法を提供する。
痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少、痛み、モルヒネ耐性などの予防・治療・改善薬は、ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩である。
本発明のスクリーニング方法においては、（ｉ）と（ｉｉ）の場合における、例えば、ＯＴ７Ｔ０２２に対するＲＦＲＰの結合量、細胞刺激活性などを測定して、比較することを特徴とする。
【００５２】
より具体的には、本発明は、
ａ）標識したＲＦＲＰを、ＯＴ７Ｔ０２２に接触させた場合と、標識したＲＦＲＰおよび試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２に接触させた場合における、標識したＲＦＲＰのＯＴ７Ｔ０２２に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
ｂ）標識したＲＦＲＰを、ＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、標識したＲＦＲＰおよび試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識したＲＦＲＰの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
ｃ）標識したＲＦＲＰを、ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したＯＴ７Ｔ０２２に接触させた場合と、標識したＲＦＲＰおよび試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したＯＴ７Ｔ０２２に接触させた場合における、標識したＲＦＲＰのＯＴ７Ｔ０２２に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
【００５３】
ｄ）ＲＦＲＰを活性化する化合物またはその塩（例えば、ＲＦＲＰなど）をＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞に接触させた場合と、ＲＦＲＰを活性化する化合物またはその塩および試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞に接触させた場合における、ＯＴ７Ｔ０２２を介した細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、および
ｅ）ＲＦＲＰを活性化する化合物またはその塩（例えば、ＲＦＲＰなど）をＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したＯＴ７Ｔ０２２に接触させた場合と、ＲＦＲＰを活性化する化合物またはその塩および試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したＯＴ７Ｔ０２２に接触させた場合における、レセプターを介する細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法では、ＲＦＲＰの代わりに、ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性を変化させる化合物またはその塩を用いることもできる。このＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性を変化させる化合物またはその塩は、ＲＦＲＰを用いて本発明のスクーニング方法を実施することによって得ることができる。
【００５４】
本発明のスクリーニング方法の具体的な説明を以下にする。
まず、本発明のスクリーニング方法に用いるＯＴ７Ｔ０２２としては、ＯＴ７Ｔ０２２を含有する哺乳動物の臓器の細胞膜画分が好適である。しかし、特にヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、スクリーニングに用いられるものとしては、組換え体を用いて大量発現させたヒト由来のＯＴ７Ｔ０２２などが適している。
ＯＴ７Ｔ０２２を製造するには、ＷＯ００／２９４４１号またはＷＯ０１／６６１３４号に記載の方法が用いられるが、ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡを哺乳細胞や昆虫細胞で発現することにより行なうことが好ましい。目的とする蛋白質部分をコードするＤＮＡ断片には相補ＤＮＡが用いられるが、必ずしもこれに制約されるものではない。例えば、遺伝子断片や合成ＤＮＡを用いてもよい。ＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡ断片を宿主動物細胞に導入し、それらを効率よく発現させるためには、該ＤＮＡ断片を昆虫を宿主とするバキュロウイルスに属する核多角体病ウイルス（ｎｕｃｌｅａｒ　ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ；ＮＰＶ）のポリヘドリンプロモーター、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスのプロモーター、メタロチオネインプロモーター、ヒトヒートショックプロモーター、サイトメガロウイルスプロモーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に組み込むのが好ましい。発現したレセプターの量と質の検査はそれ自体公知の方法で行うことができる。例えば、文献〔Ｎａｍｂｉ，Ｐ．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．），２６７巻，１９５５５〜１９５５９頁，１９９２年〕に記載の方法に従って行なうことができる。
したがって、本発明のスクリーニング方法において、ＯＴ７Ｔ０２２を含有するものとしては、それ自体公知の方法に従って精製したＯＴ７Ｔ０２２であってもよいし、ＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞を用いてもよく、またＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞の膜画分を用いてもよい。
【００５５】
本発明のスクリーニング方法において、ＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従って行なうことができる。
ＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞としては、ＯＴ７Ｔ０２２を発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが好ましい。
細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍ型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ社製）のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（５００〜３０００ｒｐｍ）で短時間（通常、約１〜１０分）遠心し、上清をさらに高速（１５０００〜３００００ｒｐｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したＯＴ７Ｔ０２２と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
ＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞や膜画分中のＯＴ７Ｔ０２２の量は、１細胞当たり１０３〜１０８分子であるのが好ましく、１０５〜１０７分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりのＯＴ７Ｔ０２２結合活性（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。
【００５６】
ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩をスクリーニングする上記のａ）〜ｃ）を実施するためには、例えば、適当なＯＴ７Ｔ０２２画分と、標識したＲＦＲＰが必要である。
ＯＴ７Ｔ０２２画分としては、天然型のＯＴ７Ｔ０２２画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型ＯＴ７Ｔ０２２画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活性、シグナル情報伝達作用などを示す。
標識したＲＦＲＰとしては、標識したＲＦＲＰ、標識したＲＦＲＰアナログ化合物などが用いられる。例えば〔３Ｈ〕、〔１２５Ｉ〕、〔１４Ｃ〕、〔３５Ｓ〕などで標識されたＲＦＲＰなどが用いられる。
具体的には、ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物のスクリーニングを行なうには、まずＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞または細胞の膜画分を、スクリーニングに適したバッファーに懸濁することによりＯＴ７Ｔ０２２標品を調製する。バッファーには、ｐＨ４〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０ＴＭ（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性剤をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテアーゼによるＯＴ７Ｔ０２２やＲＦＲＰの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。０．０１〜１０ｍｌの該レセプター溶液に、一定量（５０００〜５０００００ｃｐｍ）の標識したＲＦＲＰを添加し、同時に１０−４Ｍ〜１０−１０Ｍの試験化合物を共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰の未標識のＲＦＲＰを加えた反応チューブも用意する。反応は約０〜５０℃、望ましくは約４〜３７℃で、約２０分〜２４時間、望ましくは約３０分〜３時間行う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンターまたはγ−カウンターで計測する。拮抗する物質がない場合のカウント（Ｂ０）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ０−ＮＳＢ）を１００％とした時、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が、例えば、５０％以下になる試験化合物を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。
【００５７】
ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩をスクリーニングする上記のｄ）〜ｅ）の方法を実施するためには、例えば、ＯＴ７Ｔ０２２を介する細胞刺激活性を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測定することができる。
具体的には、まず、ＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。スクリーニングを行なうにあたっては前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、試験化合物などを添加して一定時間インキュベートした後、細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、アラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してアッセイを行なってもよい。また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用として検出することができる。
細胞刺激活性を測定してスクリーニングを行なうには、適当なＯＴ７Ｔ０２２を発現した細胞が必要である。ＯＴ７Ｔ０２２を発現した細胞としては、天然型のＯＴ７Ｔ０２２を有する細胞株、上記の組換え型ＯＴ７Ｔ０２２を発現した細胞株などが望ましい。
試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。
また、試験化合物としては、ＯＴ７Ｔ０２２の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケットの位置に基づいて、リガンド結合ポケットに結合するように設計された化合物が好ましく用いられる。ＯＴ７Ｔ０２２の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケットの位置の測定は、公知の方法あるいはそれに準じる方法を用いて行うことができる。
【００５８】
ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング用キットは、ＲＦＲＰ、ＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞またはその細胞膜画分を含有するものなどである。
本発明のスクリーニング用キットの例としては、次のものが挙げられる。
１．スクリーニング用試薬
ａ）測定用緩衝液および洗浄用緩衝液
Ｈａｎｋｓ’　Ｂａｌａｎｃｅｄ　Ｓａｌｔ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ギブコ社製）に、０．０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたもの。
孔径０．４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃で保存するか、あるいは用時調製しても良い。
ｂ）ＯＴ７Ｔ０２２標品
ＯＴ７Ｔ０２２を発現させたＣＨＯ細胞を、１２穴プレートに５×１０５個／穴で継代し、３７℃、５％ＣＯ２、９５％ａｉｒで２日間培養したもの。
ｃ）標識ＲＦＲＰ
市販の〔３Ｈ〕、〔１２５Ｉ〕、〔１４Ｃ〕、〔３５Ｓ〕などで標識したＲＦＲＰ
水溶液の状態のものを４℃あるいは−２０℃にて保存し、用時に測定用緩衝液にて１μＭに希釈する。
ｄ）ＲＦＲＰ標準液
ＲＦＲＰを０．１％ウシ血清アルブミン（シグマ社製）を含むＰＢＳで１ｍＭとなるように溶解し、−２０℃で保存する。
【００５９】
２．測定法
ａ）１２穴組織培養用プレートにて培養したＯＴ７Ｔ０２２発現ＣＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで２回洗浄した後、４９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加える。
ｂ）１０−３〜１０−１０Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた後、標識ＲＦＲＰを５μｌ加え、室温にて１時間反応させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代わりに１０−３ＭのＲＦＲＰを５μｌ加えておく。
ｃ）反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄する。細胞に結合した標識ＲＦＲＰを０．２Ｎ　ＮａＯＨ−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレーターＡ（和光純薬製）と混合する。
ｄ）液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）を用いて放射活性を測定し、Ｐｅｒｃｅｎｔ　Ｍａｘｉｍｕｍ　Ｂｉｎｄｉｎｇ（ＰＭＢ）を次の式で求める。
ＰＭＢ＝［（Ｂ−ＮＳＢ）／（Ｂ０−ＮＳＢ）］×１００
ＰＭＢ：Ｐｅｒｃｅｎｔ　Ｍａｘｉｍｕｍ　Ｂｉｎｄｉｎｇ
Ｂ　　：検体を加えた時の値
ＮＳＢ：Ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｂｉｎｄｉｎｇ（非特異的結合量）
Ｂ０　　：最大結合量
【００６０】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物としては、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
上記スクリーニング方法で得られる化合物の塩としては、前記したＲＦＲＰの塩と同様の塩が用いられる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性またはシグナル伝達を変化させる作用を有する化合物またはその塩であり、具体的には、（イ）ＯＴ７Ｔ０２２を介して細胞刺激活性を有する化合物またはその塩（いわゆる、ＯＴ７Ｔ０２２アゴニスト）、（ロ）該細胞刺激活性を有しない化合物またはその塩（いわゆる、ＯＴ７Ｔ０２２アンタゴニスト）、（ハ）ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合力を増強する化合物またはその塩、または（ニ）ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合力を減少させる化合物またはその塩である。
ＯＴ７Ｔ０２２アゴニストであるか、アンタゴニストであるかの具体的な評価方法は以下の（ｉ）および（ｉｉ）に従えばよい。
（ｉ）例えば、前記ａ）〜ｃ）のスクリーニング方法で示されるバインディング・アッセイを行い、ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性を変化させる（特に、結合を阻害する）化合物またはその塩を得た後、該化合物またはその塩が上記したＯＴ７Ｔ０２２を介する細胞刺激活性を有しているか否かを測定する。細胞刺激活性を有する化合物またはその塩はＯＴ７Ｔ０２２アゴニストであり、該活性を有しない化合物またはその塩はＯＴ７Ｔ０２２アンタゴニストである。
（ｉｉ）（ａ）試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞に接触させ、上記ＯＴ７Ｔ０２２を介した細胞刺激活性を測定する。細胞刺激活性を有する化合物またはその塩はＯＴ７Ｔ０２２アゴニストである。
（ｂ）ＯＴ７Ｔ０２２を活性化する化合物（例えば、ＲＦＲＰなど）をＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞に接触させた場合と、ＯＴ７Ｔ０２２を活性化する化合物および試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２を含有する細胞に接触させた場合における、ＯＴ７Ｔ０２２を介した細胞刺激活性を測定し、比較する。ＯＴ７Ｔ０２２を活性化する化合物による細胞刺激活性を減少させ得る化合物またはその塩はＯＴ７Ｔ０２２アンタゴニストである。
ＯＴ７Ｔ０２２アゴニストは、ＲＦＲＰが有する生理活性と同様の作用を有しており安全で低毒性な医薬として有用である。
ＯＴ７Ｔ０２２アンタゴニストは、ＲＦＲＰが有する生理活性を抑制することができるので、ＲＦＲＰの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合力を増強する化合物またはその塩は、ＲＦＲＰが有する生理活性を増強することができるので、安全で低毒性な医薬として有用である。
ＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合力を減少させる化合物またはその塩は、ＲＦＲＰが有する生理活性を減少させることができるので、ＲＦＲＰの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
【００６１】
具体的には、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＯＴ７Ｔ０２２アゴニストおよびＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合力を増強する化合物またはその塩は、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下に対する予防・治療・改善剤として有用である。
一方、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＯＴ７Ｔ０２２アンタゴニストおよびＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合力を減少させる化合物またはその塩は、例えば、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少に対する予防・治療・改善剤、鎮痛剤、モルヒネの鎮痛作用促進剤、モルヒネ耐性回避剤、モルヒネ依存性回避剤などとして有用である。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩を上記の医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記したＲＦＲＰを含有する予防・治療・改善剤と同様に製造することができる。
得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につきＯＴ７Ｔ０２２アゴニストを約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につきＯＴ７Ｔ０２２アゴニストを約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００６２】
（６）細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬
ＯＴ７Ｔ０２２に対する抗体は、ＯＴ７Ｔ０２２を特異的に認識することができるので、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、例えば、
（ｉ）非ヒト哺乳動物のａ）血液、ｂ）特定の臓器、ｃ）臓器から単離した組織もしくは細胞等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれるＯＴ７Ｔ０２２を定量することによる、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（ｉｉ）ＯＴ７Ｔ０２２を発現する形質転換体等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれるＯＴ７Ｔ０２２を定量することによる、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（ｉｉｉ）非ヒト哺乳動物のａ）血液、ｂ）特定の臓器、ｃ）臓器から単離した組織もしくは細胞等を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
（ｉｖ）ＯＴ７Ｔ０２２を発現する形質転換体等を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
【００６３】
細胞膜画分に含まれるＯＴ７Ｔ０２２の定量は具体的には以下のようにして行なう。
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には免疫不全ラット、マウス、化ウサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細胞等を、例えば、適当な緩衝液（例えば、トリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヘペス緩衝液など）等に懸濁し、臓器、組織あるいは細胞を破壊し、界面活性剤（例えば、トリトンＸ１００ＴＭ、ツイーン２０ＴＭなど）などを用い、さらに遠心分離や濾過、カラム分画などの手法を用いて細胞膜画分を得る。
細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍ型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ社製）による破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（５００〜３０００ｒｐｍ）で短時間（通常、約１分〜１０分）遠心し、上清をさらに高速（１５０００〜３００００ｒｐｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したＯＴ７Ｔ０２２と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
細胞膜画分に含まれるＯＴ７Ｔ０２２は、例えば、本発明の抗体を用いたサンドイッチ免疫測定法、ウエスタンブロット解析などにより定量することができる。
かかるサンドイッチ免疫測定法は上記の方法と同様にして行なうことができ、ウエスタンブロットは自体公知の手段により行なうことができる。
（ｉｉ）ＯＴ７Ｔ０２２を発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、細胞膜画分に含まれるＯＴ７Ｔ０２２を定量することができる。
【００６４】
細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングは、
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間前（３０分前〜２４時間前、好ましくは３０分前〜１２時間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは一定時間後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投与し、投与後一定時間経過後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を定量することにより行なうことができ、
（ｉｉ）形質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、一定時間培養後（１日後〜７日後、好ましくは１日後〜３日後、より好ましくは２日後〜３日後）、細胞膜におけるＲＦＲＰの量を定量することにより行なうことができる。
細胞膜画分に含まれるＯＴ７Ｔ０２２の確認は具体的には以下のようにして行なう。
（ｉｉｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には免疫不全モデルラット、マウス、ウサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細胞等を、常法に従い組織切片とし、本発明の抗体を用いて免疫染色を行う。細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することにより、定量的または定性的に、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を確認することができる。
（ｉｖ）ＯＴ７Ｔ０２２を発現する形質転換体等を用いて同様の手段をとることにより確認することもできる。
試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。
【００６５】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物は、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を変化させる作用を有する化合物であり、具体的には、（イ）細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を増加させることにより、ＯＴ７Ｔ０２２を介する細胞刺激活性を増強させる化合物、（ロ）細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を減少させることにより、該細胞刺激活性を減弱させる化合物である。
上記スクリーニング方法で得られる化合物の塩としては、前記したＲＦＲＰの塩と同様の塩が用いられる。
細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を増加させることにより、細胞刺激活性を増強させる化合物またはその塩は、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下に対する安全で低毒性な予防・治療・改善剤として有用である。
細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を減少させることにより、細胞刺激活性を減弱させる化合物またはその塩は、例えば、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少に対する安全で低毒性な予防・治療・改善剤、鎮痛剤、モルヒネの鎮痛作用促進剤、モルヒネ耐性回避剤、モルヒネ依存性回避剤などとして有用である。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記したＲＦＲＰを含有する予防・治療・改善剤と同様に製造することができる。
得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を増加させる化合物またはその塩を一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では、通常例えば、痛覚障害患者（体重６０ｋｇとして）においては、細胞膜におけるＯＴ７Ｔ０２２の量を増加させる化合物またはその塩を一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００６６】
（７）ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２に対する抗体を含有してなる医薬
ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２に対して抗体（特に、中和抗体）は、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２が関与するシグナル伝達、例えば、ＯＴ７Ｔ０２２を介する細胞刺激活性を不活性化することができる。
したがって、ＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２に対する抗体は、例えば、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少に対する予防・治療・改善剤、鎮痛剤、モルヒネの鎮痛作用促進剤、モルヒネ耐性回避剤、モルヒネ依存性回避剤などとして用いることができる。
上記予防・治療・改善剤は、前記したＲＦＲＰを含有する医薬と同様にして製造し、使用することができる。
【００６７】
（８）アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを含有してなる医薬
ＲＦＲＰをコードするＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡ（以下、アンチセンスＤＮＡと略記する）または本発明のｓｉＲＮＡは、例えば、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少に対する予防・治療・改善剤、鎮痛剤、モルヒネの鎮痛作用促進剤、モルヒネ耐性回避剤、モルヒネ依存性回避剤などとして用いることができる。
例えば、該アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを用いる場合、該アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って実施することができる。該アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
さらに、該アンチセンスＤＮＡは、組織や細胞におけるＲＦＲＰまたはＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。
【００６８】
（９）ＯＴ７Ｔ０２２ノックアウト動物
〔ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不活性哺乳動物ＥＳ細胞〕
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された哺乳動物ＥＳ細胞とは、哺乳動物ＥＳ細胞が有するＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に人為的に変異を加えることにより、遺伝子の発現能を抑制するか、もしくは該遺伝子がコードしているＯＴ７Ｔ０２２の活性を実質的に喪失させることにより、遺伝子が実質的にＯＴ７Ｔ０２２の発現能を有さない不活性化された（以下、本発明のノックアウト遺伝子と称することがある）哺乳動物のＥＳ細胞をいう。
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子としては、前記したＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡが用いられるが、具体的には、マウスＯＴ７Ｔ０２２遺伝子としては、配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列からなるマウスＯＴ７Ｔ０２２の部分蛋白質をコードする、配列番号：３２または配列番号：２８で表わされる塩基配列からなる遺伝子（ゲノムＤＮＡ）などが用いられる。
ラットＯＴ７Ｔ０２２遺伝子としては、配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列からなるＯＴ７Ｔ０２２をコードする、配列番号：１２で表わされる塩基配列を含有する遺伝子などが用いられる。
本明細書中、ＥＳ細胞の材料とする哺乳動物としては、例えば、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。
また、本明細書中、非ヒト動物としては、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子を有するヒト以外の動物ならば、いかなる動物でもよいが、非ヒト哺乳動物が好ましい。非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。非ヒト哺乳動物のなかでも、病態動物モデル系の作製の面から個体発生および生物サイクルが比較的短く、また繁殖が容易なゲッ歯動物、とりわけマウス（例えば純系として、Ｃ５７ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６Ｃ３Ｆ１系統，ＢＤＦ１系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ１系統，ＢＡＬＢ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など（なかでも好ましくは、純系として、Ｃ５７ＢＬ／６系統など、交雑系として、ＢＤＦ１系統またはＩＣＲ系統など））またはラット（例えば、Ｗｉｓｔａｒ系統，ＳＤ系統など）などが特に好ましい。
【００６９】
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に人為的に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手法により該遺伝子配列の一部又は全部の削除、もしくは他遺伝子の挿入または置換があげられる。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠をずらすか、プロモーターあるいはエキソンの機能を破壊することにより本発明のノックアウト遺伝子を作製することができる。
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された哺乳動物（好ましくは、非ヒト哺乳動物）ＥＳ細胞（以下、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子不活性化ＥＳ細胞またはノックアウトＥＳ細胞と略記する）の具体例としては、例えば、薬剤耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子またはゼオシン耐性遺伝子など、好ましくは、ネオマイシン耐性遺伝子など）、あるいはレポーター遺伝子（例えば、ｌａｃＺ（大腸菌β−ガラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）、ＧＵＳ（β−グルクロニダーゼ遺伝子）、ルシフェラーゼ遺伝子、エクオリン遺伝子、タウマリン遺伝子、ＧＦＰ（Ｇｒｅｅｎ　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）遺伝子など、好ましくは、ｌａｃＺなど）等を挿入することによりＯＴ７Ｔ０２２遺伝子のエキソンの機能を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、ｐｏｌｙＡ付加シグナルなど）を挿入し、完全なｍＲＮＡを合成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊するように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡベクター（以下、ターゲティングベクターと略記する）を作製する。レポーター遺伝子を挿入してエキソンの機能を破壊する場合、該レポーター遺伝子は、ＯＴ７Ｔ０２２プロモーターの制御下で発現するように挿入することが好ましい。
上記「薬剤耐性遺伝子」とは、抗生物質などの薬剤耐性に関与する遺伝子を示し、導入される遺伝子が細胞において発現したか否かを選抜するマーカーとして利用される。
また、上記「レポーター遺伝子」とは、遺伝子発現の指標になる遺伝子群のことを示し、通常、発光反応や呈色反応を触媒する酵素の構造遺伝子が利用されることが多く、▲１▼遺伝的背景がないもの、▲２▼遺伝子発現を定量的に行える高感度の方法があるもの、▲３▼形質転換細胞への影響が少ないもの、▲４▼発現部位の局在性が示されるものなどが好ましく用いられる（植物細胞工学、第２巻、第７２１頁、１９９０）。また、上記の「薬剤耐性遺伝子」なども同じ目的で使用されるが、「レポーター遺伝子」は、単に導入される遺伝子が細胞において発現したかどうかだけではなく、どの組織でいつ発現したかを調べることができ、しかも定量的に発現量を正確に調べることができるものである。
さらに、ターゲティングベクターを、例えば、相同組換え法により該動物の染色体に導入し、得られたＥＳ細胞についてＯＴ７Ｔ０２２遺伝子上あるいはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析あるいはターゲティングベクター上のＤＮＡ配列とターゲティングベクター作製に使用したＯＴ７Ｔ０２２遺伝子以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマーとしたＰＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥＳ細胞を選別することにより得ることができる。
上記のターゲティングベクターとしては、例えば、大腸菌由来のプラスミド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐＵＣ１３など）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１０，ｐＴＢ５，ｐＣ１９４など）、酵母由来のプラスミド（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５など）、λファージなどのバクテリオファージ、モロニー白血病ウイルスなどのレトロウイルス、ワクシニアウイルスまたはアデノウイルスベクター、バキュロウイルス、ウシ乳頭腫ウイルス、ヘルペスウイルス群からのウイルス、またはエプスタイン・バー・ウイルスなどの動物ウイルスなどが用いられる。
【００７０】
また、相同組換え法等によりＯＴ７Ｔ０２２遺伝子を不活性化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知のＥｖａｎｓとＫａｕｆｍａｎの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般的には１２９系統のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で免疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するなどの目的で、例えば、Ｃ５７ＢＬ／６系統マウスやＤＢＡ／２系統との交雑種ＢＤＦ１系統マウス（Ｃ５７ＢＬ／６系統とＤＢＡ／２系統とのＦ１）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。ＢＤＦ１系統マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が操作上にであるという利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６系統マウスを遺伝的背景に持つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６系統マウスと戻し交配することでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６系統に戻すことが可能である点で有利に用い得る。
また、ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３．５日目の胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚（受精後２．５日目頃の８細胞期胚が好ましい）を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期胚を取得することができる。
【００７１】
また第二次セレクションは、Ｇ−バンディング法などを用いた核型分析等により行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウトした後、正常細胞（例えばマウスでは染色体数が２ｎ＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ましい。
このようにして得られたＥＳ細胞株は、通常その増殖性は大変良いが、個体発生できる再生能を失いやすいので、注意深く継代培養することが必要である。例えば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上でＬＩＦ（１〜１００００Ｕ／ｍｌ）存在下に炭酸ガス培養器内（好ましくは、５％炭酸ガス、９５％空気または５％酸素、５％炭酸ガス、９０％空気）で約３７℃で培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液（通常０．００１〜０．５％トリプシン／０．１〜５ｍＭ　ＥＤＴＡ、好ましくは約０．１％トリプシン／１ｍＭ　ＥＤＴＡ）処理により単細胞化し、新たに用意したフィーダー細胞上に播種する方法などがとられる。このような継代は、通常１〜３日毎に行なうが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が見受けられた場合は、その培養細胞は放棄することが望まれる。
ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔Ｍ．　Ｊ．　Ｅｖａｎｓ及びＭ．　Ｈ．　Ｋａｕｆｍａｎ，　ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）第２９２巻、１５４頁、１９８１年；Ｇ．　Ｒ．　Ｍａｒｔｉｎ　プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．）第７８巻、７６３４頁、１９８１年；Ｔ．　Ｃ．　Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎ　ら、ジャーナル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・モルフォロジー、第８７巻、２７頁、１９８５年〕、本発明のＥＳ細胞を分化させて得られるＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全細胞は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＯＴ７Ｔ０２２の細胞生物学的検討において有用である。
また、ＥＳ細胞を保存する場合には、適当な凍結用培地（例えば、１０％ＤＭＳＯ、１０％牛胎児血清を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）などを用いて、約−８０℃以下で凍結保存する。
【００７２】
本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物（以下、遺伝子発現不全非ヒト動物と称す場合がある）とは、例えば、前記のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された哺乳動物ＥＳ細胞由来の細胞を用いて遺伝子工学的に作出されたものであり、例えば、生殖細胞および体細胞に胚形成初期に不活性化ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子配列を導入された非ヒト動物である。
該非ヒト動物としては、前記と同様のものが用いられる。
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子をノックアウトさせるには、前記のターゲティングベクターを非ヒト動物ＥＳ細胞または非ヒト動物卵細胞に公知の方法（例えば、エレクトロポレーション法、マイクロインジェクション法、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、凝集法、パーティクルガン法、ＤＥＡＥ−デキストラン法など）によって導入し（好ましい導入法としては、ＥＳ細胞に導入する場合にはエレクトロポレーション法、卵細胞に導入する場合にはマイクロインジェクション法などがあげられる）、ターゲティングベクターの不活性化されたＯＴ７Ｔ０２２遺伝子配列を相同組換えにより、非ヒト動物ＥＳ細胞または非ヒト動物卵細胞の染色体上のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子と入れ換えることにより行うことができる。ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子がノックアウトされた細胞は、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲティングベクターに使用したマウス由来のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子以外の近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法による解析で判定することができる。
非ヒト動物ＥＳ細胞を用いた場合は、相同組換えにより、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された細胞株をクローニングし、その細胞を胚形成の初期の適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト動物胚または胚盤胞に注入し（注入法）、またはＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化されたＥＳ細胞塊を２個の８細胞期胚ではさみ込む（集合キメラ法）ことにより作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒト動物の子宮に移植する。
作出された動物は正常なＯＴ７Ｔ０２２遺伝子座をもつ細胞と人為的に変異したＯＴ７Ｔ０２２遺伝子座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物である。
該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異したＯＴ７Ｔ０２２遺伝子座をもつ場合、このようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、全ての組織が人為的に変異を加えたＯＴ７Ｔ０２２遺伝子座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コートカラーの判定等により選別することにより得られる。このようにして得られた個体は、通常、ＯＴ７Ｔ０２２ヘテロ発現不全個体であり、ＯＴ７Ｔ０２２ヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔からＯＴ７Ｔ０２２ホモ発現不全個体を得ることができる。
卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマイクロインジェクション法で遺伝子溶液を注入することによりターゲティングベクターを染色体内に導入したトランスジェニック非ヒト動物を得ることができ、これらのトランスジェニック非ヒト動物を比較することにより、相同組換えによりＯＴ７Ｔ０２２遺伝子座に変異のあるものを選択することにより得られる。
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公知の方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、正常動物と区別することが可能である。
【００７３】
このようにしてＯＴ７Ｔ０２２遺伝子がノックアウトされている個体は、交配により得られた動物個体も該遺伝子がノックアウトされていることを確認して通常の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。
さらに、生殖系列の取得および保持についても常法に従って行うことができる。即ち、該不活化遺伝子配列を保有する雌雄の動物を交配することにより、該不活化遺伝子配列を相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得することができる。得られたホモザイゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，ホモザイゴート複数になるような状態で飼育することにより効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物の雌雄を交配することにより、該不活化遺伝子配列を有するホモザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代することができる。このようにして得られた該不活化遺伝子配列を有する動物の子孫も本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物に含まれる。
本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物（特に、ＯＴ７Ｔ０２２ホモ欠損非ヒト動物、好ましくはＯＴ７Ｔ０２２ホモ欠損マウス）は、次のような性質を有している。
（１）野生型動物に比べて、成熟齢以降に胸腺の重量が増加している。
（２）野生型動物に比べて、後退歩行を主な特徴とする歩行異常さらに、振戦または痙攣などを示す場合がある。
（３）野生型動物に比べて、侵害刺激（例、熱侵害刺激）に対して反応性の低下が見られる。
（４）野生型動物に比べて、攻撃的行動が多い。
（５）野生型動物に比べて、腎臓絶対重量または胸腺絶対重量の低下がみられる。
（６）野生型動物に比べて、白血球数または血小板数の減少がみられる。
（７）野生型動物に比べて、筋力が低下している。
【００７４】
このようにＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された哺乳動物ＥＳ細胞は、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物を作出する上で、非常に有用である。また、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物、該動物に対する薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じるより良い病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物に対する薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物およびＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物を用いた骨髄移植動物、もしくはそれらの組織またはそれらに由来する細胞は、ＯＴ７Ｔ０２２の欠損に起因する疾病、例えば、ＯＴ７Ｔ０２２により誘導され得る種々の生物活性の欠失に基づく、ＯＴ７Ｔ０２２の生物活性の不活性化に起因する疾病（例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下など）のより良いモデルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療法の検討に有用である。ここで、他の病態モデル動物としては、例えば、血液細胞側のみの遺伝子発現の欠損あるいは上昇に限局させた骨髄移植を用いたモデルマウスも挙げられる［Ｌｉｎｔｏｎ，　Ｍ．　Ｆ．，　ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２６７：　１０３４−１０３７　（１９９５）　］。骨髄移植マウスは遺伝子機能の変化が限局されることで、より適した病態モデル動物となる可能性を秘めている。例えば、上記されたＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物から得られた病態モデル動物をドナー動物として、その骨髄を採取し、あらかじめ放射線照射で骨髄を破壊した他のレシピエント動物に移植したマウス、あるいは、他の病態モデル動物をドナー動物として、その骨髄を採取し、あらかじめ放射線照射で骨髄を破壊したＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物から得られた病態モデル動物をレシピエント動物として移植した骨髄移植マウスなども含まれる。
このように、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物、該動物に対する薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物に対する薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物から得られた病態モデル動物と他の病態モデル動物を用いて骨髄移植して得られた病態モデル動物、もしくはそれらの組織またはそれらに由来する細胞を、該疾病の予防・治療・改善薬のスクリーニングに用いることができる。ここで、上記組織やそれに由来する細胞の例としては、肝臓や腎臓などのホモジネートを用いて特定の活性を測定する、あるいは、腹腔マクロファージを用いて特定産物の活性や産生量を測定することでスクリーニングに用いることができる。
【００７５】
［本発明のスクリーニング方法Ａ］
本発明は、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞を用いることを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下、特に痛覚障害、筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法において用いられるＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物、該動物の薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物に対する薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物から得られた病態モデル動物と他の病態モデル動物を用いて骨髄移植して得られた病態モデル動物、もしくはそれらの組織またはそれらに由来する細胞としては、前記と同様のものが挙げられる。
試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。
具体的には、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物、該動物の薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物に対する薬剤誘発あるいはストレス負荷によって生じる病態モデル動物およびＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物から得られた病態モデル動物と他の病態モデル動物を用いて骨髄移植して得られた病態モデル動物（以下、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物等と称する場合がある）、もしくはそれらの組織またはそれらに由来する細胞を、試験化合物で処理し、無処理の対照動物と比較し、該動物の各器官、組織、細胞、疾病の症状等の変化、特に痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下の改善効果を指標として試験化合物の予防・治療・改善効果を試験することができる。
【００７６】
試験動物（ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物等）を試験化合物で処理する方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用いられ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。また、試験化合物の投与量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。
例えば、肥満症の予防・治療・改善薬をスクリーニングする場合、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物等にコレステロール負荷処置を行い、コレステロール負荷処置前または処置後に試験化合物を投与し、該動物の血中コレステロール値および体重変化などを経時的に測定することによりスクリーニングすることができる。また、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物等にＳＴＺあるいはアロキサンなどの薬剤投与を行い、糖負荷処置前または処置後に試験化合物を投与し、該動物の血糖値および体重変化などを経時的に測定することによりスクリーニングすることができる。
例えば、該スクリーニング方法において、試験動物に試験化合物を投与した場合、該試験動物の体重が約１０％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５０％以上減少した場合、該試験化合物を肥満症に対して治療・予防効果を有する物質として選択することができる。
また、痛覚障害の予防・治療・改善薬をスクリーニングする場合、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物等に試験化合物を投与し、該動物の痛み防御行動（例、なめる行動、あばれる行動、引っかき行動など）などを経時的に測定することによりスクリーニングすることができる。さらには、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物等にモルヒネなどの鎮痛薬の投与を行った後、試験化合物を投与し、該動物の痛み防御行動（例、なめる行動、あばれる行動、引っかき行動など）などを経時的に測定することによりスクリーニングすることができる。
例えば、該スクリーニング方法において、試験動物に試験化合物を投与した場合、該試験動物の痛み防御行動が約１０％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５０％以上上昇した場合、該試験化合物を痛覚障害に対して治療・予防効果を有する物質として選択することができる。
【００７７】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる予防・治療・改善薬は、上記した試験化合物から選ばれた化合物またはその塩を含有するものであり、ＯＴ７Ｔ０２２欠損によって引き起こされる疾患の予防・治療・改善効果を有するので、ＯＴ７Ｔ０２２の欠損によって引き起こされる疾病に対する安全で低毒性な治療・予防薬などの医薬として有用である。また、該化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
該スクリーニング方法で得られた化合物の塩としては、例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などの薬学的に許容し得る塩などがあげられる。
無機塩基との塩の好適な例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、並びにアルミニウム塩、アンモニウム塩などがあげられる。
有機塩基との塩の好適な例としては、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６−ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩あげられる。
無機酸との塩の好適な例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などとの塩があげられる。
有機酸との塩の好適な例としては、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸などとの塩があげられる。
塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアルギニン、リジン、オルチニンなどとの塩があげられ、酸性アミノ酸との好適な例としては、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩があげられる。
【００７８】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を上述の治療・予防薬として使用する場合、常套手段に従って実施することができ、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、該化合物またはその塩を薬学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントゴム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。
【００７９】
注射用の水溶液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例えば、エタノールなど）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０など）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが挙げられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填される。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、症状などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）の拒食症患者においては、一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常成人（体重６０ｋｇとして）の拒食症患者においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００８０】
［本発明のスクリーニング方法Ｂ］
本発明は、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明の遺伝子に対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
上記スクリーニング方法において、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物としては、前記した本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物の中でも、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子がレポーター遺伝子を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子がＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーターの制御下で発現しうるものが用いられる。
試験化合物としては、前記と同様のものがあげられる。
レポーター遺伝子としては、前記と同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子をレポーター遺伝子で置換された本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物では、レポーター遺伝子がＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーターの支配下に存在するので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレースすることにより、プロモーターの活性を検出することができる。
【００８１】
例えば、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子の発現する組織で、ＯＴ７Ｔ０２２の代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラクトシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することにより、簡便にＯＴ７Ｔ０２２の動物生体内における発現状態を観察することができる。具体的には、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子欠損マウスまたはその組織切片をグルタルアルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組織標本を１ｍＭ　ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄することによって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコードするｍＲＮＡを検出してもよい。
例えば、該スクリーニング方法において、試験動物に試験化合物を投与した場合、レポーター蛋白質の発現が約１０％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５０％以上増加した場合、該試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩として選択でき、試験動物に試験化合物を投与した場合、レポーター蛋白質の発現が約１０％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５０％以上減少した場合、該試験化合物をＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩として選択できる。
上記スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた物質であり、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩である。
該スクリーニング方法で得られた化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
【００８２】
ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、ＯＴ７Ｔ０２２の発現を促進し、ＯＴ７Ｔ０２２の機能を促進することができるので、例えば、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下など疾患の予防・治療・改善剤などの医薬として使用することができる。
一方、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、ＯＴ７Ｔ０２２の発現を阻害し、ＯＴ７Ｔ０２２の機能を阻害することができるので、例えば、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少の予防・治療・改善剤、鎮痛剤、モルヒネの鎮痛作用促進剤、モルヒネ耐性回避剤、モルヒネ依存性回避剤などの医薬として使用することができる。
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
【００８３】
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記したスクリーニング方法Ａで得られた化合物またはその塩を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、痛覚障害の治療目的でＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進する物質を経口投与する場合、一般的に成人患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該化合物またはその塩を約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物またはその塩の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、痛覚障害の治療目的でＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩を注射剤の形で通常成人患者（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該物質を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００８４】
このように、本発明のＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物は、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリーニングする上で極めて有用であり、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全に起因する各種疾患の原因究明または予防・治療・改善薬の開発に大きく貢献することができる。
また、ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子のプロモーター領域を含有するＤＮＡを使って、その下流に種々の蛋白質をコードする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞に注入していわゆるトランスジェニック動物（遺伝子移入動物）を作成すれば、特異的にそのペプチドを合成させ、その生体での作用を検討することも可能となる。さらに上記プロモーター部分に適当なレポーター遺伝子を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれば、ＯＴ７Ｔ０２２そのものの体内での産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系として使用できる。
【００８５】
（１０）各種薬物の作用メカニズムの解明方法
ＯＴ７Ｔ０２２を用いることによって、各種薬物がＯＴ７Ｔ０２２を介して薬理効果を発揮しているか否かを確認することができる。
すなわち、本発明は、
（１）ＯＴ７Ｔ０２２を用いることを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少に対する予防・治療・改善薬、鎮痛薬、モルヒネの鎮痛作用促進薬、モルヒネ耐性回避薬などがＯＴ７Ｔ０２２に結合することを確認する方法、
（２）ＯＴ７Ｔ０２２を用いることを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加、筋力低下など、特に筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量（特に、夜間自発行動量）の増加または筋力低下に対する予防・治療・改善薬がＯＴ７Ｔ０２２に対するアゴニストであることを確認する方法、
（３）ＯＴ７Ｔ０２２を用いることを特徴とする、筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量（特に、夜間自発行動量）の減少に対する予防・治療・改善薬、鎮痛薬、モルヒネの鎮痛作用促進薬、モルヒネ耐性回避薬などがＯＴ７Ｔ０２２に対するアンタゴニストであることを確認する方法、
（４）各薬をＯＴ７Ｔ０２２に接触させた場合における、各薬とＯＴ７Ｔ０２２との結合量を測定することを特徴とする上記（１）〜（３）記載のスクリーニング方法を提供する。
この確認方法は、前記したＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法において、試験化合物に代えて、上記の薬物を使用することによって実施することができる。
また、本発明の確認方法用キットは、前記したＲＦＲＰとＯＴ７Ｔ０２２との結合性を変化させる化合物のスクリーニング用キットにおいて、試験化合物に代えて、上記の薬物を含有するものである。
このように、本発明の確認方法を用いることによって、市販または開発途中の各種薬物がＯＴ７Ｔ０２２を介して薬理効果を発揮していることを確認することができる。
【００８６】
本明細書および図面において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
ＤＮＡ　　　　　：デオキシリボ核酸
ｃＤＮＡ　　　　：相補的デオキシリボ核酸
Ａ　　　　　　：アデニン
Ｔ　　　　　　：チミン
Ｇ　　　　　　：グアニン
Ｃ　　　　　　：シトシン
Ｉ　　　　　　　　　　　　：イノシン
Ｒ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）
Ｙ　　　　　　　　　　　　：チミン（Ｔ）またはシトシン（Ｃ）
Ｍ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）またはシトシン（Ｃ）
Ｋ　　　　　　　　　　　　：グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｓ　　　　　　　　　　　　：グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）
Ｗ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）またはチミン（Ｔ）
Ｂ　　　　　　　　　　　　：グアニン（Ｇ）、グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｄ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｖ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）
Ｎ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）もしくはチミン（Ｔ）または不明もしくは他の塩基
ＲＮＡ　　　　　：リボ核酸
ｍＲＮＡ　　　　：メッセンジャーリボ核酸
ｄＡＴＰ　　　　：デオキシアデノシン三リン酸
ｄＴＴＰ　　　　：デオキシチミジン三リン酸
ｄＧＴＰ　　　　：デオキシグアノシン三リン酸
ｄＣＴＰ　　　　：デオキシシチジン三リン酸
ＡＴＰ　　　　　：アデノシン三リン酸
ＥＤＴＡ　　　　：エチレンジアミン四酢酸
ＳＤＳ　　　　　：ドデシル硫酸ナトリウム
ＢＨＡ　　　　　：ベンズヒドリルアミン
ｐＭＢＨＡ　　　：ｐ−メチルベンズヒドリルアミン
Ｔｏｓ　　　　　：ｐ−トルエンスルフォニル
Ｂｚｌ　　　　　：ベンジル
Ｂｏｍ　　　　　：ベンジルオキシメチル
Ｂｏｃ　　　　　：ｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ　　　　　：ジクロロメタン
ＨＯＢｔ　　　　：１−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＤＣＣ　　　　　：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＴＦＡ　　　　　：トリフルオロ酢酸
ＤＩＥＡ　　　　：ジイソプロピルエチルアミン
Ｇｌｙ　　　　　　：グリシン
ＡｌａまたはＡ　：アラニン
ＶａｌまたはＶ　　：バリン
ＬｅｕまたはＬ　：ロイシン
ＩｌｅまたはＩ　　：イソロイシン
ＳｅｒまたはＳ　　：セリン
ＴｈｒまたはＴ　　：スレオニン
ＣｙｓまたはＣ　　：システイン
ＭｅｔまたはＭ　　：メチオニン
ＧｌｕまたはＥ　　：グルタミン酸
ＡｓｐまたはＤ　　：アスパラギン酸
ＬｙｓまたはＫ　　：リジン
ＡｒｇまたはＲ　　：アルギニン
ＨｉｓまたはＨ　　：ヒスチジン
ＰｈｅまたはＦ　　：フェニルアラニン
ＴｙｒまたはＹ　　：チロシン
ＴｒｐまたはＷ　　：トリプトファン
ＰｒｏまたはＰ　　：プロリン
ＡｓｎまたはＮ　　：アスパラギン
ＧｌｎまたはＱ　　：グルタミン
ｐＧｌｕ　　　　：ピログルタミン酸
【００８７】
本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。
〔配列番号：１〕
ＲＦＲＰのアミノ酸配列（ヒト型）を示す。
〔配列番号：２〕
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するＲＦＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３〕
ＲＦＲＰのアミノ酸配列（ヒト型）を示す。
〔配列番号：４〕
配列番号：３で表わされるアミノ酸配列を有するＲＦＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：５〕
ＲＦＲＰのアミノ酸配列（ウシ型）を示す。
〔配列番号：６〕
配列番号：５で表わされるアミノ酸配列を有するＲＦＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：７〕
ＲＦＲＰのアミノ酸配列（ラット型）を示す（リクローニング前）。
〔配列番号：８〕
配列番号：７で表わされるアミノ酸配列を有するＲＦＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：９〕
ＲＦＲＰのアミノ酸配列（マウス型）を示す。
〔配列番号：１０〕
配列番号：９で表わされるアミノ酸配列を有するＲＦＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１１〕
ラット由来Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質ｒＯＴ７Ｔ０２２のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１２〕
ラット由来Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質ｒＯＴ７Ｔ０２２をコードするｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３〕
ＲＦＲＰ部分ペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１４〕
ＲＦＲＰ部分ペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１５〕
ＲＦＲＰ部分ペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１６〕
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１７〕
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１８〕
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１９〕
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：２０〕
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の、第１番目（Ｍｅｔ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：２１〕
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の、第１番目（Ｍｅｔ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：２２〕
ＲＦＲＰのアミノ酸配列（ラット型）を示す（リクローニング後）。
〔配列番号：２３〕
配列番号：２２で表わされるアミノ酸配列を有するＲＦＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２４〕
ヒト由来Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質ｈＯＴ７Ｔ０２２をコードするアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２５〕
配列番号：２４で表されるアミノ酸配列を有するｈＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２６〕
配列番号：２４で表されるアミノ酸配列を有するｈＯＴ７Ｔ０２２をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２７〕
マウス由来Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２の部分アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２８〕
配列番号：２７で表されるアミノ酸配列を有するマウス由来ＯＴ７Ｔ０２２をコードするゲノムＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２９〕
実施例３で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：３０〕
実施例３で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：３１〕
実施例３で使用したプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：３２〕
配列番号：２７で表されるアミノ酸配列を有するマウス由来ＯＴ７Ｔ０２２をコードするゲノムＤＮＡの塩基配列を示す。配列番号：２８で表される塩基配列中のｎを特定した配列である。
【００８８】
後述の実施例１で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐＫＳ−ＯＴ７Ｔ０２２１は２００２年１０月１７日から茨城県つくば市東１丁目１番地１　中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所　特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−８２１０として寄託されている。
後述の実施例１で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐＫＳ−ＯＴ７Ｔ０２２２は２００２年１０月１７日から茨城県つくば市東１丁目１番地１　中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所　特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−８２１１として寄託されている。
後述の実施例１で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐＫＳ−ＯＴ７Ｔ０２２３は２００２年１０月１７日から茨城県つくば市東１丁目１番地１　中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所　特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−８２１２として寄託されている。
後述の実施例１で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐＫＳ−ＯＴ７Ｔ０２２４は２００２年１０月１７日から茨城県つくば市東１丁目１番地１　中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所　特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−８２１３として寄託されている。
後述の実施例２で得られた形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐ０２２Ｔｇｖ−２は２００２年１０月１７日から茨城県つくば市東１丁目１番地１　中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所　特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−８２１４として寄託されている。
【００８９】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではない。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法は、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ）に記載されている方法に従った。
【００９０】
実施例１　マウスＯＴ７Ｔ０２２のクローニング
ラットＯＴ７Ｔ０２２　ｃＤＮＡ（配列番号：１２、ＷＯ００／２９４４１号）をプローブにした。ラットｃＤＮＡ　の５８０−１１７０　ｂｐのＤＮＡ断片をプローブとして作製した（ＰＣＲ−ＤＩＧ　プローブ合成キット、ロシュダイアゴニスティックス社）。そのプローブを用いて、マウス１２９ＳｖＪラムダゲノムライブラリー（ストラタジ−ン社）に１ｓｔ　プラークハイブリダイゼーションを行った結果、陽性プラークが６個得られた。１ｓｔ　プラークハイブリダイゼーションで得られた６個の陽性プラークに対して２ｎｄ　プラークハイブリダイゼーションを行い、２個の陽性クローンを単離した。
サザンハイブリダイゼーションを行った結果、約　４．５　ｋｂｐの　Ｂａｍ　ＨＩ断片にＯＴ７Ｔ０２２　のコード領域が存在することが判明した。常法によりクローニングしたＤＮＡ断片をシークエンサー（パーキンエルマー社）により塩基配列を調べた結果、ラットＯＴ７Ｔ０２２の３’　側　エクソン（０．９　ｋｂｐ）と９４％の相同性を有する断片であり、マウスＯＴ７Ｔ０２２ゲノム　ＤＮＡであることを確認した。さらにＯＴ７Ｔ０２２をコードするＢａｍ　ＨＩ　断片の５’側３．８　ｋｂｐおよび３’側５．５　ｋｂｐのＢａｍ　ＨＩ　断片をクローニングした。サザン解析により３’　側　エクソンから１．８　ｋｂｐ以上はなれた上流に一つのエクソンが存在することがわかった（配列番号：２８または配列番号：３２）。
マウスＯＴ７Ｔ０２２ゲノム　ＤＮＡの断片を大腸菌ＪＭ１０９株に形質転換し、形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐＫＳ−ＯＴ７Ｔ０２２１、形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐＫＳ−ＯＴ７Ｔ０２２２、形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐＫＳ−ＯＴ７Ｔ０２２３、形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐＫＳ−ＯＴ７Ｔ０２２４を取得した。
【００９１】
実施例２　ターゲッティングベクターの構築およびＥＳ相同組み換えの作製
ＯＴ７Ｔ０２２ターゲッティングベクターの構築は、　３’　側　エクソンの５’　側　Ｓａｃ　Ｉ−Ｂａｍ　ＨＩ断片（３．２　ｋｂｐ）、３’　側ＢｓｔＥＩＩ−Ｘｈｏ　Ｉ断片（５．２　ｋｂｐ）、ネオマイシン耐性遺伝子およびジフテリアトキシン遺伝子を用いて行い、３’　側　エクソン１．２　ｋｂｐを欠失させた　ＯＴ７Ｔ０２２　ターゲッティングベクターｐ０２２Ｔｇｖ−２の構築を終了した（図１）。ＯＴ７Ｔ０２２　ターゲッティングベクターｐ０２２Ｔｇｖ−２を大腸菌ＪＭ１０９株に形質転換し、形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９／ｐ０２２Ｔｇｖ−２を取得した。ＯＴ７Ｔ０２２ターゲッティングベクターをマウス１２９ＳｖＥｖ系統由来ＥＳ　細胞（ＡＢ２．２系統）にエレクトロポレーションにより導入した。エレクトロポレーションはジーンパルサーエレクトロポレーションシステム（バイオラッド社製）を用いて電圧　２３０　Ｖ，　抵抗値５００　μＦ，　ＤＮＡ溶液濃度３０　μｇ／ｍｌの条件を設定して行った。
遺伝子導入実験は３回行い、それぞれ１０００株以上のネオマイシン耐性株を得ることができた。ターゲティングベクターｐ０２２Ｔｇｖ−２によって得られた７３９株のネオマイシン耐性株を２４ウェルプレートで培養し、−７０℃凍結融解、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　Ｋ処理後、エタノール沈殿によりＤＮＡを抽出した。
そのうち５９５株のゲノムに対して５’側のＢａｍＨＩ−Ｘｈｏ　Ｉ　６００　ｂｐ断片（ターゲティングベクターに用いたゲノムの外側の領域）をプローブとし、サザンハイブリダイゼーションを行った。その結果、６株に相同組換え体と推定される５．４　ｋｂのバンドがみられた（野生型３．８ｋｂ）。
相同組換え体と考えられるＤＮＡ　断片が検出された６種のＥＳ細胞株（Ｎｏ．　１２６，　１３０，　２８３，　４９１，　５３２，　５４５）　について、再確認のためサザン解析を行った。凍結保存しておいた各細胞を培養後、ＤＮＡ　を抽出し、Ｂａｍ　ＨＩ−Ｘｈｏ　Ｉ切断後、上記６００　ｂｐ断片をプローブとし、サザンハイブリダイゼーションを行った。その結果、全ての細胞において５．４　ｋｂ断片（野生型は３．８　ｋｂ断片のみが観察される）が再確認できた。また、プローブをネオマイシン耐性遺伝子としてサザンハイブリダイゼーションを行った結果、２　ｋｂ付近に野生型、組換え体共通に見られるバンドがあったが、組換え体のみに５．４　ｋｂのバンドが確認でき、６種のＥＳ細胞すべてが相同組換え体であることが確認できた。
これら６系統の相同組換え体のうち増殖が良好であった３系統の相同組換え体細胞株（Ｎｏ．１３０，　２８３，　５３２）について核型分析のためフィーダー細胞存在下、ＥＳ細胞を２５ｃｍ２フラスコにコンフルエントになるまで培養し、コルセミドを添加（最終細胞密度０．１μｇ／ｍｌ）し、３７℃、２時間培養した。ＰＢＳで洗浄後、トリプシン処理し、遠心１０００ｒｐｍ、５分した。ペレットに０．０７５Ｍ　ＫＣｌ　４ｍｌを添加し室温で２０分放置後、細胞浮遊液にカルノア液（酢酸：メタノール比＝１：３）を１滴添加後穏やかに懸濁した。室温放置６０分させ、遠心し、ペレットをカルノア液４ｍｌで穏やかに懸濁し、さらに室温放置した。３０分５回程度繰り返した。遠心後ペレットにカルノア液２〜３ｍｌを加え適度な濃度に調製し、スライドグラス上に細胞浮遊液を２〜３滴　滴下した。風乾後、３％ギムザ溶液で染色し、顕微鏡下で分裂期中期の染色体観察を行った。結果、正常核型を有する細胞の割合は６１〜６９％であった。３系統の相同組換え体細胞株の核型異常がみられなかったので、増殖性の良好な細胞株Ｎｏ．　２８３を選抜した。
【００９２】
実施例３　ノックアウトマウスの作製
相同組み換え細胞株Ｎｏ．　２８３をＣ５７ＢＬ／６系統マウス胚盤胞へのインジェクションを常法により行った。インジェクションされた胚盤胞は別途精管結紮マウスと交配することによって得られた偽妊娠マウス卵管に移植することによって妊娠させた。２８３株については移植胚の約半分が産仔として生まれ、７５％がキメラマウスであった。雄キメラマウスはＣ５７ＢＬ／６系統雌マウスと交配し、産仔での生殖系列移行およびヘテロマウスの取得をおこなった。
キメラとＣ５７ＢＬ　系統マウスとの交配によって５１　匹のＥＳ細胞　由来マウスが得られた。マウス尾よりゲノム　ＤＮＡを精製し、まずＰＣＲ　による遺伝子型判定の条件を検討した。検討の結果プライマーはターゲティングした領域の３’側　（ＡＧＧＴＧＣＴＣＡＧＴＧＴＧＴＡＧＡＡＧＴＧＧ（配列癌号：２９））を共通とし、また５’側は野生型検出用として、欠損させた領域内の終止コドン付近配列（ＡＴＣＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＣＡＴＴＴＴＧＡＧＧ（配列番号：３０））、変異型検出用としてネオマイシン耐性遺伝子内配列　（ＴＣＡＴＡＧＣＣＧＡＡＴＡＣＧＧＴＣＴＣＣＡＣ（配列番号：３１））とし、ポリメラーゼはＫＯＤ−ｐｌｕｓ−（東洋紡株式会社製）を用いた。野生型は３００　ｂｐ断片のみを検出し、ヘテロ欠損個体であれば、３００　ｂｐ　および　６００　ｂｐ断片を検出できるように設計されたＰＣＲ　による遺伝子判定の結果、ヘテロ欠損マウスを得ることができた。次に、サザンハイブリダイゼーションを行って、遺伝子欠損の確認を行った。
【００９３】
実施例４　臓器重量の変化
雄ホモ欠損マウスの生後８週齢個体を頸椎脱臼により屠殺し、解剖を行った。各主要臓器を取り出して重量測定を行った。その結果、臓器重量においては野生型マウスとホモ欠損マウスに差異は認められなかった。生後１３週齢の臓器重量測定の結果では、胸腺において野生型マウスに比べ、ホモ欠損マウスで有意な増加がみられた。
【００９４】
実施例５　体重、飲水量、摂食量
ホモ欠損マウスの体重、摂餌量および飲水量について経時的変化を調べた。離乳後雄ホモ欠損マウスの体重変化は、野生型マウスに比べ差異はみられなかった。摂餌量および飲水量の経時的変化において雄雌性ホモ欠損マウスとも野生型マウスと差異はみられなかった。
【００９５】
実施例６　行動異常
日常行動および外見観察はＩｒｗｉｎ　（１９６８）の方法に準拠して行った。その結果、生後６ヶ月齢のホモ欠損マウス（雄性２例中、２例）において異常歩行が観察された。別ロットのホモ欠損マウス（７週齢）の中に後退歩行がみられ、後肢を引きずるような歩行異常も観察された。さらに振戦あるいは痙攣などを示す個体がみられたが、その程度は個体間差異がみられた。これら行動異常はＣ５７ＢＬ／６Ｊおよび１２９ＳｖＥｖ系統の雑種において観察された。
【００９６】
実施例７　侵害刺激に対する反応
侵害刺激に対する反応について評価するためマウスで用いられている方法（Ｗｉｌｓｏｎ　ＳＧ，　Ｍｏｇｉｌ　ＪＳ．　Ｂｅｈａｖ　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ　１２５：６５−７３，　２００１）のなかで熱侵害刺激に対する反応性を評価するためホットプレート試験（熱板法とも呼ぶ）を行った。
ホットプレート試験は市販のホットプレート式鎮痛効果測定装置を用いて行った。最初、５５℃に熱したホットプレート上に直径１５ｃｍ高さ２０ｃｍのガラス製円筒を置き、マウスをその円筒内にいれ、マウスが後肢を舐めるあるいは跳躍などの行動が現れるまでの時間を測定した。その結果、雄ホモ欠損マウスにおいて後肢を舐めるあるいは跳躍時間が有意に遅延した。
【００９７】
実施例８　攻撃行動
雄ホモ欠損マウスの行動観察を行ったところ、野生型マウスよりも他の雌雄マウスに対する攻撃性が観察された。さらに一部のマウスにおいてはハンドリング時にｔａｉｌ　ｒａｔｔｌｉｎｇ　が観察され、飼育時においても軽微な挙尾反応が観察された。観察用ケージに雄マウスを２個体入れて相互の攻撃行動を観察する方法（Ｎａｔｕｒｅ３７８：３８３−３８６，　１９９５）および（Ｎａｔｕｒｅ　２６５：１８７５−１８７８，　１９９４）によりホモ欠損マウスの攻撃反応潜時を測定した。その結果、攻撃行動までの潜時がホモ欠損マウスで有意に短かった。これらの行動はＣ５７ＢＬ／６Ｊおよび１２９ＳｖＥｖ系統の雑種において観察された。
【００９８】
実施例９　モルヒネ投与試験
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊコンジェニック系統１１週齢の雄ホモ欠損マウスを用いて５２℃湯の入った水槽に尾先端から３ｃｍのところまで浸漬して尾が水槽から出るまでの時間を熱侵害刺激に対する応答性として評価した（ｔａｉｌ　ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ　ｔｅｓｔ、温湯法とも呼ぶ）。
実験の最大時間（ｃｕｔ　ｏｆｆ　ｔｉｍｅ）は２０秒とした。ホモ欠損マウスおよびＣ５７ＢＬ／６Ｊコンジェニック系統１１週齢の野生型マウスはそれぞれｖｅｈｉｃｌｅ投与群およびモルヒネ投与群に分けて実験を行った。投与前に上記のｔａｉｌ　ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ　ｔｅｓｔを行った結果、すべての群における反応平均時間に有意差はみられなかった。次にモルヒネ（ｋｇ　体重当たり５ｍｇ）あるいはｖｅｈｉｃｌｅを腹腔内投与後、１５分後、３０分後に同じ方法でｔａｉｌ　ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ　ｔｅｓｔを実施した。モルヒネ投与雄ホモ欠損マウス群の反応時間は、その他の群より長くなった。モルヒネ投与前のｔａｉｌ　ｉｍｍｅｒｓｉｏｎｔｅｓｔには野生型マウスとホモ欠損マウスの反応ｌａｔｅｎｃｙに差異はあったが、モルヒネ投与した野生型マウスは１５分および３０分後、ｌａｔｅｎｃｙは投与前に比べて有意に延長したのに対してモルヒネ投与したホモ欠損マウスにおいてはモルヒネ投与後も熱刺激に対する反応のｌａｔｅｎｃｙはモルヒネ投与前と変わらなかった。
【００９９】
【発明の効果】
ＲＦＲＰおよびＯＴ７Ｔ０２２またはそれらをコードするＤＮＡは、筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下などの予防・治療・改善薬として有用である。
また、Ｏ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト動物は、上記疾患の予防・治療・改善薬のスクリーニングに有用である。
【０１００】
【配列表】

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【図面の簡単な説明】
【図１】ＯＴ７Ｔ０２２ターゲティングベクターの概略図を示す。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel use of RFRP and OT7T022, a receptor protein of RFRP.
Furthermore, the present invention provides embryonic stem cells of a non-human mammal in which the OT7T022 gene has been inactivated, a non-human mammal deficient in OT7T022 gene expression, a screening method using the same, and a prophylactic, therapeutic, or ameliorating agent obtainable by the screening. About.
[0002]
[Prior art]
A novel receptor OT7T022 and a peptide (RFRP-1, RFRP-2, RFRP-3) having a C-terminal binding to the LPL RFamide, LPL RS amid, LPQ RF amid or LPL RLamide have been reported. (Patent Document 1).
It has been reported that OT7T022 and RFRP-1, RFRP-2, and RFRP-3 are involved in prolactin secretion (Patent Document 2).
It is described that NPSF corresponding to RFRP-1 and NPVF corresponding to RFRP-3 bind to OT7T022 and are involved in anti-opioids (Non-patent Document 1).
However, there are many points left to be elucidated further about the functions and action mechanisms of RFRP and OT7T022 in vivo.
[0003]
[Patent Document 1]
WO00 / 29441
[Patent Document 2]
WO01 / 66134
[Non-patent document 1]
The Journal of Biological Chemistry, vol. 276, No. 40, p36961-36969, 2001
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
If the non-human animal ES cells in which the OT7T022 gene has been inactivated are successfully produced, a non-human animal lacking the OT7T022 gene expression can be produced. Since the obtained non-human animal lacking OT7T022 gene expression lacks various biological activities that can be induced by OT7T022, it serves as a model for diseases caused by inactivation of the biological activities of OT7T022, and causes these diseases. Investigation and treatment methods can be studied.
An object of the present invention is to elucidate further functions of RFRP and OT7T022, and to provide a new medicine.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
In view of the above problems, the present inventors have conducted intensive studies and, as a result, succeeded in producing a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression. Increase in weight, increase in absolute thymus weight, decrease in white blood cell count, decrease in platelet count, increase in spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), induction of aggressive behavior, regressive walking, decreased muscle strength, etc. I found it. The present inventors have further studied based on these findings, and have completed the present invention.
[0006]
That is, the present invention
[1] a muscle disease, adrenal gland containing a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof Dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nighttime self-issued movement) or preventive / treatment / improvement of muscle weakness,
[2] The above-mentioned [1], wherein the polypeptide is a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 ] Described agents,
[3] the partial peptide is
(I) It contains the 88th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and has, on the N-terminal side of the amino acid sequence, SEQ ID NO: : A peptide comprising an amino acid sequence to which 1 to 87 amino acids counting from the C-terminal of the first (Met) to 87th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by 1 or 3 may be added (Human RFRP-1),
(Ii) It contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and has the SEQ ID NO: A peptide comprising an amino acid sequence to which 1 to 100 amino acids may be added, counting from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by 1 or 3 (Human RFRP-2),
(Iii) It contains the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and the N-terminal of the amino acid sequence has SEQ ID NO: : A peptide comprising an amino acid sequence to which 1 to 126 amino acids counted from the C-terminus of the amino acid sequence from the first (Met) to the 126th (Asn) of the amino acid sequence represented by 1 or 3 may be added (Human RFRP-3),
(Iv) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 which contains the 88th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5; A peptide (bovine RFRP-1) consisting of an amino acid sequence to which 1 to 87 amino acids counting from the C-terminal of the first (Met) to 87th (Lys) amino acid sequence may be added,
(V) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 which contains the 101st (Ser) to 112th (Leu) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and A peptide (bovine RFRP-2) consisting of an amino acid sequence to which 1 to 100 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence may be added,
(Vi) containing the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and the amino acid represented by SEQ ID NO: 5 at the N-terminal side of the amino acid sequence A peptide (bovine RFRP-3) consisting of an amino acid sequence to which 1 to 126 amino acids counted from the C-terminus of the first (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence may be added,
(Vii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 containing the 90th (Leu) to 94th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9; A peptide (mouse RFRP-1) comprising an amino acid sequence to which 1 to 89 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence may be added,
(Viii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 which contains the 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9; A peptide (mouse RFRP-3) consisting of an amino acid sequence to which 1 to 120 amino acids counting from the C-terminal of the first (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence may be added,
(Ix) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 which contains the 90th amino acid sequence (Leu) to 94th amino acid sequence (Phe); A peptide consisting of an amino acid sequence to which 1 to 89 amino acids counting from the C-terminal of the first (Met) to 89th (Val) amino acid sequence represented by No. 22 may be added (rat RFRP -1),
(X) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 which contains the 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence, and N-terminal of the amino acid sequence has SEQ ID NO: 7 or A peptide (rat RFRP) comprising an amino acid sequence to which 1 to 120 amino acids counting from the C-terminus of the amino acid sequence of the first (Met) to 120th (Ser) of the amino acid sequence represented by 22 may be added; -3),
(Xi) a peptide consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xii) a peptide having an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiii) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x), or
(Xiv) the agent according to the above [1], which is a peptide consisting of an amino acid sequence obtained by combining addition, insertion and substitution of the above (xi) to (xiii);
[4] the partial peptide is
(I) The 56th position (Ser) to the 92nd position (Phe), the 70th position (Met) to the 92nd position (Phe), and the 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3 ( A peptide (human RFRP-1) consisting of the amino acid sequence from Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe);
(Ii) a peptide (human RFRP-2) consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3,
(Iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th (As) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3. Asn) to 131st (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) ) Or a peptide consisting of the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence (human RFRP-3);
(Iv) 58th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Lys) to 92nd (Phe), 73rd (Met) to 92nd of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Phe), a peptide consisting of the 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe) amino acid sequence (bovine RFRP-1);
(V) a peptide (bovine RFRP-2) consisting of the 101st (Ser) to 112th (Leu) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5,
(Vi) The 101st (Ser) to 131st (Phe), the 104th (Ala) to the 131st (Phe), and the 115th (Asn) to 131st of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) or 127th A peptide consisting of the amino acid sequence of (Leu) to 131st (Phe) (bovine RFRP-3);
(Vii) the 58th position (Ser) to the 94th position (Phe), the 72nd position (Val) to the 94th position (Phe), and the 75th position (Met) to the 94th position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (Phe), a peptide consisting of the 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence (mouse RFRP-1);
(Viii) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 125th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A peptide (mouse RFRP-3) consisting of the amino acid sequence of the (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe);
(Ix) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Asp) to 94th (Phe), 75th (Met) to 75th (She) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence (rat RFRP-1);
(X) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 120th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 125th (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence (rat RFRP-3);
(Xi) a peptide (deletion type) consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the above peptides (i) to (x) are deleted,
(Xii) a peptide (addition type) consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiii) a peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x) (insertion type),
(Xiv) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the above peptides (i) to (x) (substitution type), or
(Xv) the agent of the above-mentioned [1], which is a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution of the above (xi) to (xiv);
[5] muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions containing a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof, Aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (especially nighttime self-issued movement) or muscle weakness prevention / treatment / improvement agent,
[6] DNA is a DNA encoding a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 The agent according to the above [5],
[7] DNA is
(I) The 56th position (Ser) to the 92nd position (Phe), the 70th position (Met) to the 92nd position (Phe), and the 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3 ( A peptide (human RFRP-1) consisting of the amino acid sequence from Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe);
(Ii) a peptide (human RFRP-2) consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3,
(Iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th (As) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3. Asn) to 131st (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) ) Or a peptide consisting of the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence (human RFRP-3);
(Iv) 58th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Lys) to 92nd (Phe), 73rd (Met) to 92nd of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Phe), a peptide consisting of the 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe) amino acid sequence (bovine RFRP-1);
(V) a peptide (bovine RFRP-2) consisting of the 101st (Ser) to 112th (Leu) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5,
(Vi) The 101st (Ser) to 131st (Phe), the 104th (Ala) to the 131st (Phe), and the 115th (Asn) to 131st of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) or 127th A peptide consisting of the amino acid sequence of (Leu) to 131st (Phe) (bovine RFRP-3);
(Vii) the 58th position (Ser) to the 94th position (Phe), the 72nd position (Val) to the 94th position (Phe), and the 75th position (Met) to the 94th position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (Phe), a peptide consisting of the 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence (mouse RFRP-1);
(Viii) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 125th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A peptide (mouse RFRP-3) consisting of the amino acid sequence of the (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe);
(Ix) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Asp) to 94th (Phe), 75th (Met) to 75th (She) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence (rat RFRP-1);
(X) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 120th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 125th (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence (rat RFRP-3);
(Xi) a peptide (deletion type) consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the above peptides (i) to (x) are deleted,
(Xii) a peptide (addition type) consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiii) a peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x) (insertion type),
(Xiv) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the above peptides (i) to (x) (substitution type), or
(Xv) a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution of the above (xi) to (xiv);
The agent according to the above [5], which is a DNA encoding
[8] muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions containing a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof, Diagnostic agent for aggressive behavior, abnormal gait, change in body temperature, change in white blood cell count, change in platelet count, change in spontaneous movement (particularly nighttime self-issued movement) or change in muscle strength,
[9] A muscular disease comprising an antibody to a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof , A preventive, therapeutic or ameliorating agent for adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement (particularly nighttime spontaneous movement),
[10] A muscular disease comprising an antibody against a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof , Diagnostic agents for adrenal insufficiency, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, changes in body temperature, changes in white blood cell count, changes in platelet count, changes in spontaneous movement (particularly nighttime self-issue movement),
[11] an antiserum containing a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the polypeptide or the partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a part thereof; A preventive, therapeutic, or ameliorating agent for a muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, or decreased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) comprising sense DNA;
[12] a muscle disease containing a compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, A preventive, therapeutic or ameliorating agent for adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelets, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or decreased muscle strength;
[13] a muscle disease containing a compound or a salt thereof that reduces the expression level of a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, An agent for preventing, treating, or improving adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement (particularly nighttime spontaneous movement),
[14] A muscular disease, adrenal dysfunction, convulsion comprising a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide or a salt thereof, Aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (especially nighttime self-issued movement) or muscle weakness prevention / treatment / improvement agent,
[15] the agent of the above-mentioned [14], wherein OT7T022 is a receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11,
[16] Muscle disease, adrenal dysfunction, or convulsion comprising a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 , Aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or preventive / treatment / improvement of muscle weakness,
[17] the agent of the above-mentioned [16], wherein the DNA is a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11;
[18] a muscular disease, an adrenal dysfunction, or a convulsion comprising a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Diagnostic agents for aggressive behavior, abnormal gait, changes in body temperature, changes in white blood cell counts, changes in platelet counts, changes in spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or changes in muscle strength,
[19] a muscular disease, an adrenal dysfunction comprising a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or an antibody thereof, A preventive, therapeutic or ameliorating agent for decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous activity (particularly nighttime issuance);
[20] a muscular disease, an adrenal dysfunction disorder comprising a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or an antibody thereof, Diagnostic agent for convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, changes in body temperature, changes in white blood cell count, changes in platelet count, changes in spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or changes in muscle strength;
[21] contains a nucleotide sequence complementary to a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof or a part thereof which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 An agent for preventing, treating, or improving muscle disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement (particularly nighttime self-issued movement) comprising antisense DNA;
[22] a muscular disease, an adrenal dysfunction disorder comprising a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or an agonist thereof, Agents for preventing / treating / improving convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nighttime self-issued movement) or muscle weakness;
[23] a muscular disease, an adrenal dysfunction disorder comprising a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or an antagonist thereof, A preventive, therapeutic or ameliorating agent for decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous activity (particularly nighttime issuance);
[24] A muscular disease comprising a compound that increases the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or a salt thereof , Adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (especially nighttime spontaneous movement) or an agent for preventing, treating or improving muscle weakness,
[25] A muscular disease comprising a compound or a salt thereof that reduces the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 , A preventive, therapeutic or ameliorating agent for adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement (particularly nighttime spontaneous movement),
[26] For mammals,
(I) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;
(Ii) a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof,
(Iii) a compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1,
(Iv) a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof,
(V) a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11;
(Vi) an agonist for a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof, or
(Vii) administering an effective amount of a compound or a salt thereof that increases the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Prevention of muscular disease, adrenal insufficiency, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or muscle weakness characterized by Treatment / improvement methods,
[27] For mammals,
(I) an antibody against a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;
(Ii) an antiserum containing a base sequence complementary to a DNA encoding a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof or a part thereof; Sense DNA,
(Iii) a compound or a salt thereof that reduces the expression level of a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof,
(Iv) an antibody against the receptor protein OT7T022, which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof,
(V) contains a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof, or a part thereof, having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Antisense DNA,
(Vi) an antagonist to the receptor protein OT7T022, a partial peptide thereof or a salt thereof, comprising the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or
(Vii) administering an effective amount of a compound or a salt thereof that reduces the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 A method for preventing, treating, or improving muscle disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement (particularly nighttime self-issued movement), characterized by:
[28] Prevention / treatment of muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or decreased muscle strength .For producing improvers
(I) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;
(Ii) a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof,
(Iii) a compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1,
(Iv) a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof,
(V) a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11;
(Vi) an agonist for a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof, or
(Vii) Use of a compound or a salt thereof that increases the expression level of receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11,
[29] for the manufacture of a preventive, therapeutic or ameliorating agent for muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement)
(I) an antibody against a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;
(Ii) an antiserum containing a base sequence complementary to a DNA encoding a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof or a part thereof; Sense DNA,
(Iii) a compound or a salt thereof that reduces the expression level of a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof,
(Iv) an antibody against the receptor protein OT7T022, which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof,
(V) contains a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof, or a part thereof, having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Antisense DNA,
(Vi) an antagonist to the receptor protein OT7T022, a partial peptide thereof or a salt thereof, comprising the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or
(Vii) use of a compound or a salt thereof that decreases the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11,
[30] a mammalian embryonic stem cell in which the OT7T022 gene has been inactivated,
[31] the embryonic stem cell according to [30], which is drug-resistant;
[32] the embryonic stem cell according to the above [29], wherein the drug is neomycin,
[33] the embryonic stem cell according to [30], wherein the OT7T022 gene has been inactivated by insertion of a reporter gene;
[34] the embryonic stem cell according to [33], wherein the reporter gene is a lacZ gene;
[35] the embryonic stem cell according to [30], wherein the mammal is a mouse;
[36] The embryonic stem cell according to the above [30], wherein the OT7T022 gene is a gene containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, or SEQ ID NO: 32.
[37] a non-human mammal deficient in OT7T022 gene expression,
[38] the animal of the above-mentioned [37], wherein the OT7T022 gene has been inactivated by insertion of a reporter gene;
[39] the animal of the above-mentioned [37], wherein the non-human mammal is a mouse;
[40] the animal of the above-mentioned [37], wherein the OT7T022 gene is a gene containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 28 or SEQ ID NO: 32;
[41] the animal of the above-mentioned [37], which has a delayed thymic retraction compared to a wild-type non-human mammal;
[42] the animal of the above-mentioned [37], wherein retreating walking is observed as compared to a wild-type non-human mammal;
[43] the animal of the above-mentioned [37], wherein the animal is more blunt to noxious stimuli (eg, heat noxious stimuli) than a wild-type non-human mammal;
[44] the animal of the above-mentioned [37], which has more aggressive behavior than a wild-type non-human mammal;
[45] the animal of the above-mentioned [37], wherein the absolute weight of the kidney or the absolute weight of the thymus is reduced as compared to a wild-type non-human mammal;
[46] the animal of the above-mentioned [37], wherein a decrease in white blood cell count or platelet count is observed, as compared to a wild-type non-human mammal;
[47] the animal of the above-mentioned [37], which has reduced muscular strength compared to a wild-type non-human mammal;
[48] A pain disorder, an eye disease, a pituitary disease, a muscular disease, a heart disease, a blood disease, a kidney disease, an immunity, which comprises using the animal or the tissue thereof or the cell derived therefrom according to the above [37]. Disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, platelets Decrease, increase in self-issue volume (especially nightly self-issue volume) or screening for drugs to prevent, treat or improve muscle weakness,
[49] the screening method of [48], wherein a test compound is administered to the animal or the tissue thereof or a cell derived therefrom according to the above [37];
[50] Pain disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, obtained by the screening method according to the above [48]. Affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, self-issued momentum (particularly at night To prevent, treat or improve muscle weakness,
[51] Pain disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, renal disease, immune disease, comprising a prophylactic, therapeutic or ameliorating agent obtained by the screening method of the above [48]. Adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count , An agent for preventing / treating / improving an increase in the amount of self-issued (particularly night-time issued amount) or muscle weakness,
[52] A disease model animal produced by crossing the animal according to the above [37] with another disease model animal,
[53] a disease model animal produced by drug induction or stress load on the animal according to the above [37],
[54] A disease model animal produced by drug induction or stress load on the animal according to [52],
[55] a pain sensation disorder, an eye disease, a pituitary disease, a muscular disease, or a heart disease, wherein the animal according to any of the above [52] to [54] or a tissue thereof or a cell derived therefrom is used; , Blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, Screening methods for prevention / treatment / improvement drugs for increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or muscle weakness,
[56] administering a test compound to the animal according to any one of the above [52] to [54] or a tissue thereof or a cell derived therefrom, wherein the compound is a pain sensation disorder, an eye disease, a pituitary disease, or a muscle. Disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior Gait abnormalities, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or methods for screening for drugs for preventing, treating or improving muscle weakness,
[57] Pain disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating obtained by the screening method according to the above [55] or [56]. Disorders, obesity, affective disorders, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, , Nighttime self-issued locomotor activity) or muscle weakness prevention / treatment / improvement drug,
[58] Pain disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, renal disease comprising the prophylactic, therapeutic or ameliorating agent obtained by the screening method according to the above [55] or [56]. , Immune disorders, adrenal dysfunction, eating disorders, obesity, affective disorders, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count , A preventive, therapeutic or ameliorating agent for decreased platelet count, increased spontaneous movement volume (especially nighttime spontaneous movement volume) or muscle weakness,
[59] a method for screening a compound or a salt thereof that promotes or inhibits the promoter activity of the OT7T022 gene, comprising administering a test compound to the animal according to [38] and detecting the expression of a reporter gene;
[60] a compound or a salt thereof that promotes or inhibits the promoter activity of the OT7T022 gene obtainable by the screening method according to the above [59],
[61] a pain disorder, an eye disease, a pituitary disease, a muscular disease, a heart disease, or a blood disease comprising a compound or a salt thereof that promotes the promoter activity of the OT7T022 gene obtainable by the screening method of the above [59]. , Renal disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, A preventive, therapeutic or ameliorating agent for decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nighttime spontaneous movement) or decreased muscle strength;
[62] A muscle disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, or a muscle disease comprising a compound or a salt thereof that inhibits the promoter activity of the OT7T022 gene obtainable by the screening method according to [59]. A preventive, therapeutic, or ameliorating agent for a decrease in spontaneous issuance (particularly nighttime issuance), an analgesic, a morphine analgesic enhancer, a morphine tolerance avoidant or a morphine-dependent avoidant,
[63] a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, its partial peptide or its amide or its ester or its salt, and / or SEQ ID NO: 11 A muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, gait characterized by using a receptor protein OT7T022 containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by: Abnormality, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (especially night-time spontaneous movement), decreased muscle strength, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or spontaneous movement (especially night-time spontaneous movement) Screening method for a preventive, therapeutic, or ameliorating agent for a decrease in the amount of
[64] a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof or a salt thereof, and / or SEQ ID NO: 11 A receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by the following, a muscular disease comprising the partial peptide or a salt thereof, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, Increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (especially nighttime self-issued movement), decreased muscle strength, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or spontaneous movement (particularly nighttime self-issued movement) Provided is a kit for screening for a preventive, therapeutic, or ameliorating agent for the reduction of thyroid.
[0007]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
RFRP used in the present invention is a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (hereinafter sometimes referred to as RFRP), and is a human or a warm-blooded animal. (Eg, guinea pig, rat, mouse, chicken, rabbit, pig, sheep, cow, monkey, etc.) cells (eg, retinal cells, hepatocytes, splenocytes, nerve cells, glial cells, pancreatic β cells, bone marrow cells, mesangial cells) Cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fiber cells, muscle cells, adipocytes, immune cells (eg, macrophages, T cells, B cells, natural killer cells, mast cells, neutrophils Basophils, eosinophils, monocytes), megakaryocytes, synovial cells, chondrocytes, osteocytes, osteoblasts, osteoclasts, breast cells, hepatocytes or stromal cells Or any tissue in which these cells are present, such as the brain, various parts of the brain (eg, retina, olfactory bulb, amygdala, basal sphere, hippocampus, thalamus, thalamus) Lower, cerebral cortex, medulla, cerebellum), spinal cord, pituitary, stomach, pancreas, kidney, liver, gonads, thyroid, gall bladder, bone marrow, adrenal gland, skin, muscle, lung, digestive tract (eg, large intestine, small intestine), blood vessels , Heart, thymus, spleen, submandibular gland, peripheral blood, prostate, testis, ovary, placenta, uterus, bone, joint, skeletal muscle, etc., or cells of blood cells or their cultured cells (eg, MEL, M1, CTLL- 2, HT-2, WEHI-3, HL-60, JOSK-1, K562, ML-1, MOLT-3, MOLT-4, MOLT-10, CCRF-CEM, TALL-1, Jurkat, CCRT-HSB- 2, KE-37, SKW-3, HUT-78, HUT-102, H9, U937, THP-1, HEL, JK-1, CMK, KO-812, MEG-01). Or a synthetic polypeptide.
As the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, about 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, More preferably, an amino acid sequence having about 95% or more homology is exemplified.
The homology of amino acid sequences was determined using the homology calculation algorithm NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool) under the following conditions (expected value = 10; gap allowed; matrix = BLOSUM62; filtering = BLOSUM62). Can be calculated. For example, the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 includes an amino acid sequence having the 22nd to 180th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or SEQ ID NO: 3 , SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22.
[0008]
Specifically, the RFRP used in the present invention is a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (for example, The amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22) and substantially consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. It is a polypeptide having the same prolactin secretion promoting activity.
The term “substantially the same” indicates that the prolactin secretion promoting activity and the like are qualitatively (eg, physiochemically or pharmacologically) the same. Therefore, it is preferable that the prolactin secretion promoting activities are equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.5 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Quantitative factors such as degree and molecular weight of the polypeptide may vary.
The prolactin secretion promoting activity can be measured according to a method known per se, for example, according to Example 1 of WO 01/66134.
Examples of RFRP include: (1) 1 to 20 of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22. (Preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, and more preferably 1 to 3) amino acid sequences, (2) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, The amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 has 1 to 20 amino acids (preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, and more preferably (3) amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 1 to 20 (preferably, Amino acid sequence having 15, more preferably 1-5, and more preferably 1-3 amino acids, (4) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, sequence 1 to 20 (preferably 1 to 15, more preferably 1 to 5, and more preferably 1 to 3) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 And (5) a polypeptide having an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion and substitution thereof.
When the amino acid sequence is deleted, added, inserted or substituted as described above, the position of the deletion, addition, insertion or substitution is not particularly limited.
[0009]
In the polypeptide of the present specification, the left end is the N-terminus (amino terminus) and the right end is the C-terminus (carboxyl terminus) according to the convention of peptide labeling. RFRP including human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 has a carboxyl group (-COOH) and a carboxylate (-COO) − ), Amide (-CONH 2 )) Or an ester (—COOR).
Here, R in the ester is, for example, C, such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl or n-butyl. 1-6 Alkyl groups such as C, cyclopentyl, cyclohexyl, etc. 3-8 Cycloalkyl groups such as phenyl, α-naphthyl and the like; 6-12 Aryl groups, for example phenyl-C such as benzyl, phenethyl, etc. 1-2 An alkyl group or α-naphthyl-C such as α-naphthylmethyl 1-2 C such as an alkyl group 7-14 In addition to aralkyl groups, pivaloyloxymethyl groups commonly used as oral esters are used.
When the RFRP has a carboxyl group (or carboxylate) other than the C-terminus, those in which the carboxyl group is amidated or esterified are also included in the scope of the RFRP referred to in the present invention. As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
Further, in the RFRP, the amino group of the N-terminal amino acid residue (eg, methionine residue) has a protecting group (for example, C-formyl group, acetyl group, etc.). 1-6 C such as alkanoyl 1-6 Acyl group), N-terminal glutamyl group generated by cleavage in vivo, pyroglutamine oxidation, substituent on the side chain of amino acid in the molecule (for example, -OH, -SH, An amino group, an imidazole group, an indole group, a guanidino group, etc. are suitable protecting groups (for example, C, such as formyl group and acetyl group). 1-6 C such as alkanoyl group 1-6 (Eg, an acyl group), or a complex protein such as a so-called glycoprotein to which a sugar chain is bound. Hereinafter, these polypeptides may be abbreviated as RFRP.
[0010]
Specific examples of the RFRP used in the present invention include, for example, human RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, human RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, and amino acid represented by SEQ ID NO: 5. A bovine RFRP consisting of the sequence, a rat RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, a mouse RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, a rat RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22, and the like are used. For example, human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, and bovine RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 are preferably used.
[0011]
The partial peptide of RFRP (hereinafter, sometimes referred to as RFRP partial peptide) is the above-mentioned partial peptide of RFRP, and is OT7T022 described below (identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11). Any of those having the ability to bind to a receptor protein containing the amino acid sequence of
The RFRP partial peptide has 1 to 5 amino acids in its amino acid sequence (preferably, 1 to 3 amino acids are deleted, or 1 to 5 amino acids in its amino acid sequence (preferably, 1 to 3 amino acids). Or 1 to 5 (preferably, 1 to 3 amino acids are inserted into the amino acid sequence, or 1 to 5 (preferably, 1 to 3 It may be composed of an amino acid sequence in which an amino acid is substituted with another amino acid, or may be composed of an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion, and substitution thereof.
The RFRP partial peptide has a carboxyl group (—COOH) and a carboxylate (—COO) at the C-terminus. − ), Amide (-CONH 2 ) Or ester (-COOR) (R is as defined above). Among them, the C-terminal is amide (-CONH 2 ) Are preferred.
When the RFRP partial peptide has a carboxyl group (or carboxylate) other than the C-terminus, those in which the carboxyl group is amidated or esterified are also included in the RFRP partial peptide referred to in the present invention. As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
Further, the RFRP partial peptide has a N-terminal amino acid residue (eg, a methionine residue) whose amino group is protected with a protecting group, and an N-terminal side which is cleaved in vivo as in the above-described RFRP. Glutamyl groups are pyroglutamine-oxidized, those in which the substituents on the side chains of the amino acids in the molecule are protected with appropriate protecting groups, and those in which sugar chains are bonded, such as so-called glycopeptides, are also included. . Hereinafter, these partial peptides are sometimes abbreviated as RFRP partial peptides.
The RFRP partial peptide is preferably a peptide having an RFamide, RSamide or RLamide structure, more preferably a peptide having an RFamide or RSamide structure, and particularly preferably a peptide having RFamide. The RFamide structure means that the C-terminus of the peptide is Arginine (Arginine) -Phenylalanine (Phenylalanine) -NH 2 RSamide structure means that the C-terminus of the peptide is Arginine (arginine) -Serine (serine) -NH 2 It means that the peptide has a structure, and the RLamide structure means that the C-terminus of the peptide is Arginine (arginine) -Leucine (leucine) -NH 2 It means that it has a structure.
[0012]
Among the RFRP partial peptides, for example,
(I) It contains the 88th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and has, on the N-terminal side of the amino acid sequence, SEQ ID NO: : 1 or an amino acid sequence which may have 1 to 87 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 87th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 A human RFRP-1, consisting of
(Ii) It contains the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and is located at the N-terminal side of the amino acid sequence. Even if 1 to 100 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3 are added. Human RFRP-2 consisting of a good amino acid sequence,
(Iii) It contains the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, and the N-terminal of the amino acid sequence has SEQ ID NO: : 1 or an amino acid sequence which may have 1 to 126 amino acids counted from the C-terminal of the 1st (Met) to 126th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 A human RFRP-3 consisting of
(Iv) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 which contains the 88th (Leu) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5; Bovine RFRP-1 consisting of an amino acid sequence to which 1 to 87 amino acids counted from the C-terminus of the first (Met) to 87th (Asn) amino acid sequence may be added,
(V) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 which contains the 101st (Ser) to 112th (Leu) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and Bovine RFRP-2 consisting of an amino acid sequence to which 1 to 100 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 100th (Arg) amino acid sequence may be added,
(Vi) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 which contains the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5; A bovine RFRP-3 comprising an amino acid sequence to which 1 to 126 amino acids counted from the C-terminal of the amino acid sequence from the first (Met) to the 126th (Asn) may be added;
(Vii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 containing the 90th (Leu) to 94th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9; A mouse RFRP-1 consisting of an amino acid sequence to which 1 to 89 amino acids counted from the C-terminus of the first (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence may be added,
(Viii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 which contains the 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9; A mouse RFRP-3 consisting of an amino acid sequence having 1 to 120 amino acids counted from the C-terminus of the 1st (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence,
(Ix) It contains the amino acid sequence from the 90th (Leu) to the 94th (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22, and has, on the N-terminal side of the amino acid sequence, SEQ ID NO: 7 or 22 Rat RFRP-1 consisting of an amino acid sequence which may have 1 to 89 amino acids counted from the C-terminal of the first (Met) to 89th (Asn) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by:
(X) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 which contains the 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence, and N-terminal of the amino acid sequence, SEQ ID NO: 7 or 22 A rat RFRP-3 consisting of an amino acid sequence which may have 1 to 120 amino acids counted from the C-terminus of the first (Met) to 120th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by:
(Xi) a peptide consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xii) a peptide having an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiii) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x), or
(Xiv) Peptides comprising an amino acid sequence obtained by combining the addition, insertion and substitution of the above (xi) to (xiii) are used.
[0013]
Among these RFRP partial peptides,
(I) The 56th position (Ser) to the 92nd position (Phe), the 70th position (Met) to the 92nd position (Phe), and the 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3 ( Met) to the 92nd (Phe), the 81st (Met) to the 92nd (Phe) or the 84th (Ser) to human RFRP-1 consisting of the 92nd (Phe) amino acid sequence,
(Ii) human RFRP-2 consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3,
(Iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th (As) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3. Asn) to 131st (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) ) Or human RFRP-3 consisting of the 127th (Leu) -131st (Phe) amino acid sequence;
(Iv) 58th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Lys) to 92nd (Phe), 73rd (Met) to 92nd of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A bovine RFRP-1 comprising an amino acid sequence of the (Phe), the 81st (Met) to the 92nd (Phe) or the 84th (Ser) to the 92nd (Phe);
(V) bovine RFRP-2 consisting of the 101st (Ser) to 112th (Leu) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5,
(Vi) The 101st (Ser) to 131st (Phe), the 104th (Ala) to the 131st (Phe), and the 115th (Asn) to 131st of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) or 127th Bovine RFRP-3 consisting of the amino acid sequence from (Leu) to 131st (Phe);
(Vii) the 58th position (Ser) to the 94th position (Phe), the 72nd position (Val) to the 94th position (Phe), and the 75th position (Met) to the 94th position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A mouse RFRP-1 comprising an amino acid sequence of the (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe);
(Viii) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 125th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A mouse RFRP-3 consisting of the amino acid sequence of the (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe);
(Ix) 58th (Ser) -94th (Phe), 72nd (Asp) -94th (Phe), 75th (Met)-of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 Rat RFRP-1 consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequences;
(X) 118th (Phe) -125th (Phe), 119th (Pro) -125th (Phe), 120th (Ser)-of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 Rat RFRP-3 consisting of the 125th (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence;
(Xi) a deletion peptide comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the above-mentioned peptides (i) to (x) have been deleted;
(Xii) an addition peptide consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiii) an insertion peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x) above,
(Xiv) a substituted peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x), or
(Xv) Peptides having an amino acid sequence obtained by combining deletion, addition, insertion and substitution of the above (xi) to (xiv) are preferably used.
[0014]
In particular, the amide form of these peptides (preferably, the carboxyl group (-COOH) at the C-terminus of these peptides is amidated (-CONH 2 ) Peptide) is preferred.
Specifically, the C-terminal of the peptide represented by the 81st (Met) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is amidated (-CONH 2 ) The C-terminal of the peptide represented by the amino acid sequence of the 101st (Ser) to 112th (Ser) of the amino acid sequence represented by the peptide (SEQ ID NO: 13) and SEQ ID NO: 1 was amidated (- CONH 2 ) The C-terminal of the peptide represented by the amino acid sequence at positions 124 (Val) to 131 (Phe) of the amino acid sequence represented by the peptide (SEQ ID NO: 15) and SEQ ID NO: 1 was amidated (- CONH 2 ) Peptide (SEQ ID NO: 14) and the like.
[0015]
As salts of RFRP or RFRP partial peptides, salts with physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids, organic acids) and bases (eg, alkali metal salts) are used, and especially physiologically acceptable. Acid addition salts are preferred. Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid) Acids, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid) and the like are used.
RFRP or a salt thereof or an RFRP partial peptide or a salt thereof can be produced according to the method described in WO00 / 29441, WO01 / 66134 and the like.
[0016]
Any DNA may be used as the DNA encoding RFRP as long as it contains the above-described base sequence encoding RFRP. Further, any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the above-mentioned cells / tissues, cDNA library derived from the aforementioned cells / tissues, and synthetic DNA may be used.
The vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. Alternatively, amplification can be performed directly by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using a total RNA or mRNA fraction prepared from the above-described cells / tissues.
[0017]
Examples of the DNA encoding RFRP include a DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23, or It has a nucleotide sequence that hybridizes under high stringent conditions to the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 , SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22 Any DNA may be used as long as it encodes DNA.
Examples of DNAs that can hybridize with the base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 23 under high stringent conditions include And about 70% or more, preferably about 80% or more of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23, respectively. Preferably, a DNA containing a base sequence having a homology of about 90% or more, more preferably about 95% or more is used.
The homology of the nucleotide sequences was determined using the homology calculation algorithm NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool) under the following conditions (expected value = 10; gap allowed; filtering = ON; match score = 1; Mismatch score = −3).
Hybridization can be performed according to a method known per se or a method analogous thereto, for example, a method described in Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). . When a commercially available library is used, it can be performed according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be performed under high stringent conditions.
The high stringent conditions are, for example, conditions in which the sodium concentration is about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 20 mM, and the temperature is about 50 to 70 ° C, preferably about 60 to 65 ° C. In particular, the case where the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about 65 ° C. is most preferable.
[0018]
More specifically, as the DNA encoding human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 or the like is used. As the DNA encoding human RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 4 and the like are used. As the DNA encoding bovine RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 6 and the like are used. As the DNA encoding rat RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 8 and the like are used. As the DNA encoding mouse RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 10 is used. As the DNA encoding the rat RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22, a DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 23 or the like is used.
[0019]
The DNA encoding the RFRP partial peptide may be any DNA as long as it contains the base sequence encoding the RFRP partial peptide described above. Further, any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the above-mentioned cells / tissues, cDNA library derived from the aforementioned cells / tissues, and synthetic DNA may be used.
As the DNA encoding the RFRP partial peptide, for example, a DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 Or a DNA having the partial nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 23 and highly stringent conditions And a nucleotide sequence that hybridizes with the RFRP consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22. For example, a DNA having a partial base sequence of a DNA encoding a polypeptide having the same activity can be used.
DNAs capable of hybridizing with the base sequence represented by SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 23 have the same significance as described above.
The homology of the nucleotide sequence can be calculated under the same conditions using the homology calculation algorithm NCBI BLAST described above.
The same hybridization method and high stringency conditions as described above are used.
[0020]
More specifically, as the DNA encoding the RFRP partial peptide, the DNA encoding the specific RFRP partial peptide described above is used. For example,
(I) The 56th position (Ser) to the 92nd position (Phe), the 70th position (Met) to the 92nd position (Phe), and the 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3 ( DNA encoding human RFRP-1 consisting of the amino acid sequence of Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe) 166th to 276th, 208th to 276th, 217th to 276th, 241st to 276th of the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4, respectively. Or a DNA consisting of the 250th to 276th base sequences,
(Ii) DNAs encoding human RFRP-2 comprising the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3, respectively; : DNA consisting of the 301st to 336th nucleotide sequence of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4;
(Iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th (As) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3. Asn) to 131st (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) ) Or the DNA encoding human RFRP-3 consisting of the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequences is the 301st nucleotide of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 4, respectively. 393rd, 310th to 393rd, 343rd to 393rd, 370th to 393rd, 373th to 393rd , DNA consisting of the 376 th to 393 th or 379 th to 393 th nucleotide sequence,
(Iv) 58th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Lys) to 92nd (Phe), 73rd (Met) to 92nd of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 The DNA encoding bovine RFRP-1 consisting of the amino acid sequence of the (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe) is SEQ ID NO: : 172nd to 276th, 208th to 276th, 217th to 276th, 241st to 276th or 250th to 276th base sequence of the base sequence represented by 6 DNA consisting of
(V) As the DNA encoding bovine RFRP-2 consisting of the 101st (Ser) to 112th (Leu) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, the base represented by SEQ ID NO: 6 DNA consisting of the 301st to 336th base sequence of the sequence,
(Vi) The 101st (Ser) to 131st (Phe), the 104th (Ala) to the 131st (Phe), and the 115th (Asn) to 131st of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) or 127th The DNA encoding bovine RFRP-3 consisting of the (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence includes nucleotides 301 to 393 and 310 to 393 of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 6. , 343rd to 393rd, 370th to 393rd, 373rd to 393rd, 376th to 393rd or 379th DNA consisting of the 393 th base sequence,
(Vii) the 58th position (Ser) to the 94th position (Phe), the 72nd position (Val) to the 94th position (Phe), and the 75th position (Met) to the 94th position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 The DNA encoding mouse RFRP-1 consisting of the amino acid sequence of the (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) is SEQ ID NO: 172nd to 282nd, 214th to 282nd, 223rd to 282nd, 247th to 282nd or 250th to 282nd base sequences of the base sequence represented by: 10 DNA consisting of
(Viii) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 125th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 The DNA encoding mouse RFRP-3 consisting of the (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence includes the 352nd to 375th of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 10. , A DNA consisting of the 356th to 375th, the 358th to 375th or the 361st to 375th base sequence;
(Ix) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Asp) to 94th (Phe), 75th (Met) to 75th (She) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 DNAs encoding rat RFRP-1 consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequences include: The 172nd to 282nd, the 214th to 282nd, the 223rd to 282nd, the 247th to 282nd or the 250th to 250th of the base sequence represented by SEQ ID NO: 8 or 51, respectively. A DNA consisting of the 282nd nucleotide sequence,
(X) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 120th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 The DNA encoding rat RFRP-3 consisting of the 125th (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence includes the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 8 or 51, respectively. DNA consisting of the 352nd to 375th, the 355th to 375th, the 358th to 375th or the 361st to 375th base sequence is used.
[0021]
Cloning of a DNA that completely encodes RFRP or a partial peptide thereof can be performed according to the method described in WO00 / 29441, WO01 / 66134, or the like.
When RFRP or its partial peptide is produced from DNA encoding RFRP or its partial peptide, it can be produced according to the method described in WO00 / 29441, WO01 / 66134 and the like.
RFRP or its partial peptide, OT7T022 or its partial peptide described later, and the DNA encoding them may be labeled by a method known per se, and specifically, isotope-labeled one, or fluorescently-labeled one. (Eg, fluorescent labeling with fluorescein or the like), biotinylated one, or enzyme-labeled one.
[0022]
Receptor protein OT7T022 (hereinafter abbreviated as OT7T022) for RFRP or its amide or its ester or its salt, RFRP partial peptide or its amide or its ester or its salt includes, for example, an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; Receptor proteins containing identical or substantially identical amino acid sequences are used.
[0023]
OT7T022 is, for example, a mammalian (eg, human, guinea pig, rat, mouse, rabbit, pig, sheep, cow, monkey, etc.) cell (eg, spleen cell, nerve cell, glial cell, pancreatic β cell, bone marrow cell) , Mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fiber cells, muscle cells, fat cells, immune cells (eg, macrophages, T cells, B cells, natural killer cells, mast cells, Neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes), megakaryocytes, synovial cells, chondrocytes, osteocytes, osteoblasts, osteoclasts, mammary cells, hepatocytes or stromal cells, or of these cells. Progenitor cells, stem cells or cancer cells, etc.) or cells of the blood cell lineage, or any tissue in which these cells are present, such as the brain, various parts of the brain (eg, olfactory bulb, squamous nucleus, basal cerebrum) , Hippocampus, thalamus, hypothalamus, hypothalamic nucleus, cerebral cortex, medulla, cerebellum, occipital lobe, frontal lobe, temporal lobe, putamen, caudate nucleus, brain stain, substantia nigra), spinal cord, pituitary, stomach, pancreas , Kidney, liver, gonad, thyroid, gall bladder, bone marrow, adrenal gland, skin, muscle, lung, digestive tract (eg, large intestine, small intestine), blood vessels, heart, thymus, spleen, submandibular gland, peripheral blood, peripheral blood cells, prostate It may be a protein derived from the testis, testis, ovary, placenta, uterus, bone, joint, skeletal muscle, etc. (particularly, brain or various parts of the brain), or may be a synthetic protein.
As the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, for example, about 50% or more, preferably about 70% or more, more preferably about 80% Above, more preferably about 90% or more, most preferably about 95% or more amino acid sequence having homology.
[0024]
Examples of the protein having an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 include, for example, a protein having the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11; A receptor protein having substantially the same activity as OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by No. 11 is preferable, and specific examples thereof include a receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24.
The homology of amino acid sequences was determined using the homology calculation algorithm NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool) under the following conditions (expected value = 10; gap allowed; matrix = BLOSUM62; filtering = BLOSUM62). Can be calculated. The substantially equivalent activity includes, for example, ligand binding activity or signal transduction. Substantially the same indicates that their activities are the same in nature. Therefore, the activities such as the ligand binding activity and the signal transduction activity are equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably about 0.5 to 20 times, more preferably about 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
The measurement of the activity such as the ligand binding activity or the signal information transduction action can be performed according to a method known per se. For example, the activity can be measured according to a ligand determination method or a screening method described later.
OT7T022 includes (1) one or two or more amino acids in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 24 (preferably, about 1 to 30, more preferably about 1 to 10, Preferably, an amino acid sequence in which several (1 or 2) amino acids have been deleted; (2) one or more (preferably 1 to 30) amino acid sequences represented by SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 24; About 3, more preferably about 1 to 10, more preferably several (one or two) amino acids; (3) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 24 One or more (preferably about 1 to 30, more preferably about 1 to 10, and still more preferably several (1 or 2)) amino acids Substituted amino acid sequence, or ▲ 4 ▼ well as their receptor protein consisting of deletion, addition and substitution of combined amino acid sequences used.
[0025]
OT7T022 in the present specification has an N-terminus (amino terminus) at the left end and a C-terminus (carboxyl terminus) at the right end according to the convention of peptide designation. OT7T022 including OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 has a carboxyl group (-COOH) and a carboxylate (-COO) − ), Amide (-CONH 2 ) Or an ester (—COOR).
Here, R in the ester is, for example, C, such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl or n-butyl. 1-6 Alkyl groups such as C, cyclopentyl, cyclohexyl, etc. 3-8 Cycloalkyl groups such as phenyl, α-naphthyl and the like; 6-12 Aryl groups, for example phenyl-C such as benzyl, phenethyl, etc. 1-2 An alkyl group or α-naphthyl-C such as α-naphthylmethyl 1-2 C such as an alkyl group 7-14 In addition to aralkyl groups, pivaloyloxymethyl groups commonly used as oral esters are used.
[0026]
When OT7T022 has a carboxyl group (or carboxylate) other than the C-terminus, OT7T022 includes a carboxyl group amidated or esterified. As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
Further, in OT7T022, the amino group of the methionine residue at the N-terminus in OT7T022 described above is a protecting group (for example, a formyl group, C 2-6 C such as alkanoyl group 1-6 Acyl group), a glutamyl group formed by cleavage of the N-terminal side in vivo and pyroglutamine oxidation, a substituent on the side chain of an amino acid in the molecule (for example, -OH, -SH, An amino group, an imidazole group, an indole group, a guanidino group, etc. are suitable protecting groups (for example, formyl group, C 2-6 C such as alkanoyl group 1-6 (Eg, an acyl group), or a complex protein such as a so-called glycoprotein to which a sugar chain is bound.
Specific examples of OT7T022 include, for example, rat OT7T022 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, human OT7T022 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24, and the like.
[0027]
The partial peptide of OT7T022 may be any partial peptide of OT7T022 as described above. For example, in the OT7T022 protein molecule, it is a site exposed outside the cell membrane and has a receptor binding activity. And the like are used.
Specifically, the partial peptide of OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 24 was analyzed as an extracellular region (hydrophilic site) in hydrophobicity plot analysis. Peptide containing a moiety. Further, a peptide partially containing a hydrophobic (Hydrophobic) site can also be used. A peptide containing individual domains may be used, but a peptide containing a plurality of domains at the same time may be used.
The number of amino acids in the partial peptide of OT7T022 is preferably a peptide having at least 20 or more, preferably 50 or more, more preferably 100 or more amino acids in the above-mentioned constituent amino acid sequence of OT7T022.
In the partial peptide of OT7T022, one or more (preferably about 1 to 10, more preferably several (1 or 2)) amino acids in the above amino acid sequence are deleted, or One or two or more (preferably about 1 to 20, more preferably about 1 to 10, and more preferably several (1 or 2)) amino acids are added to the amino acid sequence, or the amino acid sequence thereof One or two or more (preferably about 1 to 10, more preferably several (1 or 2)) amino acids therein may be substituted with another amino acid.
The partial peptide of OT7T022 has a carboxyl group (—COOH) and a carboxylate (—COO) at the C-terminus. − ), Amide (-CONH 2 ) Or ester (-COOR) (R is as defined above).
When the partial peptide of OT7T022 has a carboxyl group (or carboxylate) other than the C-terminus, those in which the carboxyl group is amidated or esterified are also included in the scope of OT7T022. As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester and the like are used.
Further, similar to OT7T022, the partial peptide of OT7T022 has an amino group of a methionine residue at the N-terminal protected by a protecting group, and a glutamyl group formed by cleavage of the N-terminal side in a living body with pyroglutamic acid. Also included are those in which the substituent on the side chain of the amino acid in the molecule is protected by an appropriate protecting group, or those in which a sugar chain is bonded, such as a so-called glycopeptide.
As a salt of OT7T022 or a partial peptide thereof, a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable. Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid) And tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid and benzenesulfonic acid).
OT7T022 or a salt thereof, and cells expressing OT7T022 or a cell membrane fraction thereof can be produced according to the methods described in WO00 / 29441, WO01 / 66134 and the like.
[0028]
The polynucleotide encoding OT7T022 may be any polynucleotide as long as it contains a nucleotide sequence (DNA or RNA, preferably DNA) encoding OT7T022. The polynucleotide is RNA such as DNA or mRNA encoding OT7T022, and may be double-stranded or single-stranded. In the case of double-stranded, it may be double-stranded DNA, double-stranded RNA or DNA: RNA hybrid. In the case of a single strand, it may be a sense strand (ie, a coding strand) or an antisense strand (ie, a non-coding strand).
Using the polynucleotide encoding OT7T022, the mRNA of OT7T022 can be quantified, for example, by the method described in the well-known experimental medicine special edition “New PCR and its Applications” 15 (7), 1997 or a method analogous thereto.
The DNA encoding OT7T022 may be any of a genomic DNA, a genomic DNA library, the above-described cell / tissue-derived cDNA, the above-described cell / tissue-derived cDNA library, and synthetic DNA. The vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. Alternatively, amplification can be performed directly by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using a total RNA or mRNA fraction prepared from the above-described cells / tissues.
[0029]
Specifically, the DNA encoding OT7T022 includes, for example, a DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 26, or SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25 or It has a nucleotide sequence that hybridizes with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 26 under high stringent conditions, and is substantially the same as OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 24. Any DNA may be used as long as it encodes a receptor protein having an activity (eg, ligand binding activity, signal transduction action, etc.).
Examples of the DNA that can hybridize with the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 26 include, for example, the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 26. DNA containing a base sequence having a homology of 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more is used.
The homology of the nucleotide sequences was determined using the homology calculation algorithm NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool) under the following conditions (expected value = 10; gap allowed; filtering = ON; match score = 1; Mismatch score = −3).
Hybridization can be performed according to a method known per se or a method analogous thereto, for example, a method described in Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). . When a commercially available library is used, it can be performed according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be performed under high stringent conditions.
The high stringent conditions are, for example, conditions in which the sodium concentration is about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 20 mM, and the temperature is about 50 to 70 ° C, preferably about 60 to 65 ° C. In particular, the case where the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about 65 ° C. is most preferable.
More specifically, as the DNA encoding rat OT7T022 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a DNA comprising the base sequence represented by SEQ ID NO: 12 or the like is used. As the DNA encoding human OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24, DNA consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 26 is used.
[0030]
The DNA encoding the partial peptide of OT7T022 may be any DNA as long as it contains the base sequence encoding the partial peptide of OT7T022 described above. In addition, any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the aforementioned cells / tissues, cDNA library derived from the aforementioned cells / tissues, and synthetic DNA may be used. The vector used for the library may be any of bacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. Alternatively, the mRNA fraction can be directly amplified by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using an mRNA fraction prepared from the above-described cells and tissues.
Specifically, the DNA encoding the partial peptide of OT7T022 includes, for example, (1) DNA having a partial base sequence of DNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 26 Or (2) a nucleotide sequence which hybridizes under high stringent conditions to the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25 or SEQ ID NO: 26, and has SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 24 A DNA having a partial base sequence of a DNA encoding a receptor protein having substantially the same activity (eg, ligand binding activity or signal transduction activity) as OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by is used.
When OT7T022 or its partial peptide is produced from DNA encoding OT7T022 or its partial peptide, OT7T022 or its partial peptide can be produced according to the method described in WO00 / 29441, WO01 / 66134 and the like.
[0031]
An antibody against RFRP, its partial peptide, or its amide or its ester or its salt can be produced and used according to a method known per se, for example, the method described in WO00 / 29441, WO01 / 66134 and the like.
An antibody against OT7T022, a partial peptide thereof or a salt thereof can be produced and used according to a method known per se, for example, the method described in WO00 / 29441, WO01 / 66134, or the like.
[0032]
Part of the nucleotide sequence of the DNA encoding RFRP or OT7T022, or the polynucleotide containing a part of the nucleotide sequence complementary to the DNA, includes the DNA encoding the partial peptide of RFRP or OT7T022 described above. It is used to include not only RNA but also RNA.
According to the present invention, an antisense polynucleotide (nucleic acid) capable of inhibiting the replication or expression of the RFRP gene or the OT7T022 gene has been cloned or determined. The nucleotide sequence information of the DNA encoding the RFRP or OT7T022 has been determined. Can be designed and synthesized based on Such a polynucleotide (nucleic acid) can hybridize to the RNA of the RFRP gene or the OT7T022 gene, inhibit the synthesis or function of the RNA, or inhibit the interaction with the RFRP gene or the OT7T022-related RNA. The expression of the RFRP gene or the OT7T022 gene can be regulated and controlled through the above. A polynucleotide that is complementary to a selected sequence of an RFRP-related RNA or OT7T022-related RNA, and a polynucleotide that can specifically hybridize with an RFRP-related RNA or an OT7T022-related RNA, is an in vivo and in vitro RFRP gene or It is useful for regulating and controlling the expression of the OT7T022 gene, and is also useful for treating or diagnosing diseases and the like. The term “corresponding” means having homology or being complementary to a specific sequence of nucleotides, base sequences or nucleic acids including genes. "Corresponding" between a nucleotide, base sequence or nucleic acid and a peptide (protein) usually refers to the amino acid of the peptide (protein) as directed by the nucleotide (nucleic acid) sequence or its complement. . 5′-end hairpin loop, 5′-end 6-base pair repeat, 5′-end untranslated region, polypeptide translation initiation codon, protein coding region, ORF translation initiation codon, 3′-end untranslated region, 3 ′ end of OT7T022 gene The terminal palindrome region and the 3′-end hairpin loop may be selected as preferred regions of interest, but any region within the RFRP gene or OT7T022 gene may be selected as the target.
[0033]
The relationship between the target nucleic acid and the polynucleotide that is complementary to at least a part of the target region and can hybridize can be said to be “antisense” with the target. Antisense polynucleotides include polydeoxyribonucleotides containing 2-deoxy-D-ribose, polyribonucleotides containing D-ribose, N-glycosides of purine or pyrimidine bases and other types of polynucleotides. Other polymers with nucleotides or non-nucleotide backbones (eg, commercially available protein nucleic acids and synthetic sequence-specific nucleic acid polymers) or other polymers containing special bonds, provided that the polymers are found in DNA or RNA Base pairs and nucleotides having a configuration that allows base attachment). They can be double-stranded DNA, single-stranded DNA, double-stranded RNA, single-stranded RNA, and also DNA: RNA hybrids, and can be unmodified polynucleotides (or unmodified oligonucleotides), or even known. Such as labeled, capped, methylated, one or more naturally-occurring nucleotides replaced by analogs, intramolecular nucleotides Modified, such as those having uncharged bonds (eg, methylphosphonates, phosphotriesters, phosphoramidates, carbamates, etc.), charged or sulfur-containing bonds (eg, phosphorothioates, phosphorodithioates, etc.) ), Such as proteins (nucleases, nuclease inhibitors, toxic , Antibodies, signal peptides, poly-L-lysine, etc.) or sugars (for example, monosaccharides) having side chain groups, interacting compounds (for example, acridine, psoralen, etc.), chelates Those containing compounds (eg, metals, radioactive metals, boron, oxidizing metals, etc.), those containing alkylating agents, those having modified bonds (eg, α-anomeric nucleic acids, etc.) It may be. Here, "nucleoside", "nucleotide", and "nucleic acid" may include not only those containing purine and pyrimidine bases but also those having other modified heterocyclic bases. Such modifications may include methylated purines and pyrimidines, acylated purines and pyrimidines, or other heterocycles. Modified nucleotides and modified nucleotides may also be modified at the sugar moiety, e.g., where one or more hydroxyl groups have been replaced by halogens, aliphatic groups, etc., or by functional groups such as ethers, amines, etc. It may have been converted.
[0034]
The antisense polynucleotide (nucleic acid) of the present invention is RNA, DNA, or a modified nucleic acid (RNA, DNA). Specific examples of the modified nucleic acid include, but are not limited to, sulfur derivatives and thiophosphate derivatives of nucleic acids, and those that are resistant to degradation of polynucleoside amides and oligonucleoside amides. The antisense nucleic acid of the present invention can be preferably designed according to the following policy. That is, to make the antisense nucleic acid more stable in the cell, to make the antisense nucleic acid more cell permeable, to have a greater affinity for the target sense strand, and to be more toxic if it is toxic. Minimize the toxicity of sense nucleic acids.
Thus, many modifications are known in the art, for example, Kawakami et al. , Pharm Tech Japan, Vol. 8, pp. 247, 1992; Vol. 8, pp. 395, 1992; T. Crooke et al. ed. , Antisense Research and Applications, CRC Press, 1993.
The antisense nucleic acid of the present invention may contain altered or modified sugars, bases or bonds, may be provided in a special form such as liposomes or microspheres, may be applied by gene therapy, It could be provided in an added form. Thus, in the form of addition, polycations such as polylysine which acts to neutralize the charge of the phosphate skeleton, lipids which enhance the interaction with the cell membrane or increase the uptake of nucleic acids ( For example, crude water-based substances such as phospholipid and cholesterol can be used. Preferred lipids for addition include cholesterol and its derivatives (eg, cholesteryl chloroformate, cholic acid, etc.). These can be attached to the 3 'end or 5' end of the nucleic acid, and can be attached via a base, sugar, or intramolecular nucleoside bond. Other groups include cap groups specifically arranged at the 3 ′ end or 5 ′ end of a nucleic acid for preventing degradation by nucleases such as exonuclease and RNase. Such capping groups include, but are not limited to, hydroxyl-protecting groups known in the art, including glycols such as polyethylene glycol and tetraethylene glycol.
The inhibitory activity of an antisense nucleic acid can be examined using the transformant of the present invention, the in vivo or in vitro gene expression system of the present invention, or the in vivo or in vitro translation system of a G protein-coupled receptor protein. it can. The nucleic acid can be applied to cells by various methods known per se.
[0035]
The siRNA against the polynucleotide encoding RFRP or OT7T022 (hereinafter, the siRNA of the present invention) is a double-stranded RNA containing a part of the RNA encoding RFRP or OT7T022 and the RNA complementary thereto.
The siRNA can be designed and manufactured based on the sequence of the polynucleotide of the present invention according to a known method (eg, Nature, 411, 494, 2001).
The ribozyme containing a part of the RNA encoding RFRP or OT7T022 can be prepared based on the sequence of the polynucleotide of the present invention according to a known method (eg, TRENDS in Molecular Medicine, 7, 221, 2001). Can be designed and manufactured. For example, it can be produced by substituting a part of a known ribozyme sequence with a part of RNA encoding RFRP or OT7T022. Examples of a part of the RNA encoding RFRP or OT7T022 include a sequence near a consensus sequence NUX (where N represents all bases and X represents a base other than G) which can be cleaved by a known ribozyme. Can be
[0036]
As described below, from the phenotype of a non-human mammal deficient in OT7T022, RFRP and OT7T022 include, for example, pain sensation, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, Adrenal dysfunction, eating disorder, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous Increased locomotor activity (especially nocturnal spontaneous movement), muscle weakness, etc., especially muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous locomotion (especially , Nighttime self-issue volume) or muscle weakness. Therefore, (1) RFRP, its partial peptide, or its amide or its ester or its salt (hereinafter abbreviated as RFRP), (2) DNA encoding RFRP, (3) antibody against RFRP, (4) RFRP Antisense DNA against DNA to encode, (5) OT7T022, partial peptide or salt thereof (abbreviated as OT7T022), (6) DNA encoding OT7T022, (7) Antibody to OT7T022, (8) DNA encoding OT7T022 Has the following uses.
[0037]
(1) An agent for preventing, treating, or improving a disease associated with RFRP dysfunction
a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7T022 or d) DNA encoding OT7T022 can be used as a medicament such as an agent for preventing, treating, or ameliorating a disease associated with dysfunction of RFRP or OT7T022. it can.
For example, when RFRP or OT7T022 is reduced in vivo and there is a patient who cannot expect the function of RFRP or OT7T022, a) administering RFRP to the patient to supplement the amount of RFRP, or b) (A) DNA encoding RFRP or DNA encoding OT7T022 is administered to the patient for expression, or (B) DNA encoding RFRP or DNA encoding OT7T022 is inserted into a target cell and expressed. After that, the amount of RFRP or OT7T022 in the body of the patient can be increased by transplanting the cells into the patient, and the function of RFRP or OT7T022 can be sufficiently exerted. That is, DNA encoding RFRP or DNA encoding OT7T022 is useful as a safe and low-toxicity agent for preventing and / or treating a disease associated with dysfunction of RFRP or OT7T022.
Specifically, a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7T022 or d) DNA encoding OT7T022 include, for example, nociceptive disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, and blood disease , Renal disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, Decreased leukocyte count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (especially nocturnal spontaneous movement), decreased muscle strength, etc., especially muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count It can be used as a preventive, therapeutic or ameliorating agent for platelet count reduction, increase in spontaneous movement (particularly at night, self-issued movement) or muscle weakness.
When RFRP or OT7T022 is used as the prophylactic, therapeutic or ameliorating agent, it can be formulated according to conventional means.
On the other hand, when DNA encoding RFRP or DNA encoding OT7T022 is used as the above-mentioned preventive, therapeutic or ameliorating agent, these DNAs may be used alone or in a suitable form such as a retrovirus vector, adenovirus vector, adenovirus associated virus vector or the like. After insertion into the vector, it can be carried out according to conventional means. The DNA can be administered as it is or together with an auxiliary for promoting uptake, using a gene gun or a catheter such as a hydrogel catheter.
For example, a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7T022 or d) DNA encoding OT7T022 can be orally administered as sugar-coated tablets, capsules, elixirs, microcapsules and the like, if necessary. Or parenterally in the form of injections, such as sterile solutions or suspensions in water or other pharmaceutically acceptable liquids. For example, a) RFRP, b) DNA encoding RFRP, c) OT7T022 or d) DNA encoding OT7T022 known physiologically acceptable carriers, flavors, excipients, vehicles, preservatives, stabilizers, It can be manufactured by mixing with a binder and the like in a unit dosage form generally required for the practice of the preparation. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
[0038]
Examples of additives that can be incorporated into tablets, capsules, and the like include binders such as gelatin, corn starch, tragacanth, and acacia, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, and alginic acid. Useful bulking agents, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, flavoring agents such as peppermint, reddish oil or cherry and the like are used. When the unit dosage form is a capsule, a liquid carrier such as oils and fats can be further contained in the above-mentioned type of material. Sterile compositions for injection can be formulated according to normal pharmaceutical practice such as dissolving or suspending the active substance in vehicles such as water for injection, and naturally occurring vegetable oils such as sesame oil, coconut oil and the like. As the aqueous solution for injection, for example, physiological saline, isotonic solution containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.) and the like are used. For example, alcohol (eg, ethanol), polyalcohol (eg, propylene glycol, polyethylene glycol), nonionic surfactant (eg, polysorbate 80) TM , HCO-50) and the like. As the oily liquid, for example, sesame oil, soybean oil and the like are used, and they may be used in combination with solubilizers such as benzyl benzoate and benzyl alcohol.
[0039]
In addition, the prophylactic, therapeutic and ameliorating agents include, for example, buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer), soothing agents (eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride, etc.), stabilizers (eg, , Human serum albumin, polyethylene glycol, etc.), preservatives (eg, benzyl alcohol, phenol, etc.), antioxidants and the like. The prepared injection solution is usually filled in a suitable ampoule.
The preparations obtained in this way are safe and have low toxicity, and should be administered to humans and mammals (eg, rats, mice, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, etc.). Can be.
The dose of RFRP varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, and the like. In the case of oral administration, for example, in a patient with a pain sensation disorder (assuming a body weight of 60 kg), the dose is preferably about 0.1 mg / day. The amount is 1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg. When administered parenterally, the single dose varies depending on the administration subject, target organ, condition, administration method, and the like. For example, in the case of an injection, it is usually used, for example, in a patient with analgesia (with a body weight of 60 kg). It is convenient to administer about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 10 mg per day by intravenous injection. In the case of other animals, the amount can be administered in terms of the weight per 60 kg.
The dose of DNA varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, and the like. However, in the case of oral administration, for example, in a patient with a pain sensation disorder (with a body weight of 60 kg), about 0. The amount is 1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg. When administered parenterally, the single dose varies depending on the administration subject, target organ, condition, administration method, and the like. For example, in the case of an injection, it is usually used, for example, in a patient with analgesia (with a body weight of 60 kg). It is convenient to administer about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 10 mg per day by intravenous injection. In the case of other animals, the amount can be administered in terms of the weight per 60 kg.
[0040]
(2) Gene diagnostic agent
The DNA encoding RFRP, the DNA encoding OT7T022, or the antisense DNA to these DNAs can be used as a probe to produce human or mammal (eg, rat, mouse, rabbit, sheep, pig, cow, cat, dog) , Monkeys, etc.) can detect abnormalities (genetic abnormalities) in DNA or mRNA encoding RFRP or OT7T022, for example, damage, mutation, or reduced expression of the DNA or mRNA, or increase in the DNA or mRNA. Alternatively, it is useful as a diagnostic agent for genes such as overexpression.
The above-described genetic diagnosis using DNA or antisense DNA can be performed, for example, by the known Northern hybridization or PCR-SSCP method (Genomics, Vol. 5, pp. 874-879 (1989), Processings of Procedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 86, pp. 2766-2770 (1989), and the like, which can be carried out by the National Academy of Sciences of USA (Procedings of the National Academy of Sciences of the United States of America), Vol. 86, pp. 2766-2770. .
For example, if Northern hybridization detects reduced or over-expressed RFRP or OT7T022, for example, it is likely to be a disease associated with dysfunction or over-expression of RFRP or OT7T022, or may be affected in the future. It can be diagnosed as high.
Diseases associated with dysfunction or overexpression of RFRP or OT7T022 include, for example, nociception disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder , Obesity, affective disorders, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, changes in body temperature, changes in white blood cell counts, changes in platelet counts, Changes in night-time voluntary movement, muscle strength, etc., especially muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal walking, body temperature change, white blood cell count change, platelet count change, self-issued momentum (particularly nighttime self-issued momentum) ) Change or muscular strength change.
In particular, diseases associated with dysfunction of RFRP or OT7T022 include, for example, pain sensation, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, Obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, gait abnormalities, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous movement (especially at night Increase in spontaneous movement), muscle weakness, etc., especially muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous movement (particularly nocturnal movement at night) Increase and muscle weakness.
On the other hand, diseases associated with overexpression of RFRP or OT7T022 include, for example, muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, decreased spontaneous movement (particularly night movement), pain And morphine resistance, particularly muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, decreased spontaneous movement (particularly nighttime self-issue movement).
[0041]
(3) A medicine containing a compound that changes the expression level of RFRP or OT7T022 or a salt thereof
The DNA encoding RFRP or OT7T022 can be used as a probe to screen for a compound that changes the expression level of RFRP or OT7T022 or a salt thereof.
That is, the present invention relates to, for example, RFRP or (RP) contained in (a) blood of a non-human mammal, b) a specific organ, c) a tissue or cell isolated from an organ, or (ii) a transformant or the like. A method for screening a compound or a salt thereof that changes the expression level of RFRP or OT7T022 by measuring the amount of OT7T022 mRNA is provided.
[0042]
The measurement of the amount of mRNA of RFRP or OT7T022 is specifically performed as follows.
(I) For normal or disease model non-human mammals (eg, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, etc., more specifically, immunodeficient model rats, mice, rabbits, etc.) After applying a drug (eg, an immunomodulator) or a physical stress (eg, immersion stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.), and after a certain period of time, blood or a specific organ (eg, brain, Liver, kidney, etc.), or tissues or cells isolated from an organ.
The mRNA of RFRP or OT7T022 contained in the obtained cells can be quantified by, for example, extracting mRNA from cells or the like by an ordinary method and using, for example, a technique such as TaqMan PCR, and by a method known per se. Analysis can also be performed by performing Northern blot.
(Ii) A transformant expressing RFRP or OT7T022 is prepared according to the method described in WO00 / 29441 or WO01 / 66134, and the mRNA of RFRP or OT7T022 contained in the transformant is quantified and analyzed in the same manner. be able to.
[0043]
Screening for a compound or a salt thereof that alters the expression level of RFRP or OT7T022 comprises:
(I) A given time (30 minutes to 24 hours, preferably 30 minutes to 12 hours, more preferably 1 hour) before giving a drug or physical stress to a normal or disease model non-human mammal Before or after 6 hours) or after a certain time (after 30 minutes to 3 days, preferably after 1 hour to 2 days, more preferably after 1 hour to 24 hours), or simultaneously with the drug or physical stress. After a certain period of time after the administration (30 minutes to 3 days, preferably 1 hour to 2 days, more preferably 1 hour to 24 hours), the amount of mRNA of RFRP or OT7T022 contained in the cells is determined. , Can be done by analyzing,
(Ii) When culturing the transformant according to a conventional method, the test compound is mixed in a medium, and after culturing for a certain period of time (1 to 7 days, preferably 1 to 3 days, more preferably 2 to 3 days) ), Quantifying and analyzing the amount of mRNA of RFRP or OT7T022 contained in the transformant.
As test compounds, for example, peptides, proteins, non-peptidic compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, plasma, etc. are used, and these compounds are novel compounds. Or a known compound.
The test compound may form a salt, and as a salt of the test compound, a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid or the like) or a base (eg, an organic acid or the like) is used, Particularly preferred are physiologically acceptable acid addition salts. Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, For example, salts with succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, and the like are used.
[0044]
The compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is a compound or a salt thereof having an action of changing the expression level of RFRP or OT7T022. Specifically, (a) the expression level of RFRP or OT7T022 is By increasing it, the cell stimulating activity via OT7T022 (eg, arachidonic acid release, acetylcholine release, intracellular Ca 2+ Activity to promote release, intracellular cAMP production, intracellular cAMP production inhibition, intracellular cGMP production, inositol phosphate production, cell membrane potential fluctuation, intracellular protein phosphorylation, c-fos activation, pH reduction, etc. (B) a compound or a salt thereof, which reduces the cell stimulating activity by decreasing the expression level of RFRP.
Compounds obtained using the screening method of the present invention include peptides, proteins, non-peptide compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, plasma, and the like. The compound may be a novel compound or a known compound.
As the salt of the compound, those similar to the aforementioned salts of RFRP are used.
Compounds or salts thereof that increase the expression level of RFRP or OT7T022 obtained by the above screening method include, for example, pain sensation, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal function Disorder, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, temperature change, leukocyte count change, platelet count change, spontaneous Changes in the amount of behavior (especially nighttime self-issued movement), changes in muscle strength, etc., preferably muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, body temperature change, white blood cell count change, platelet count change, spontaneous movement ( In particular, nocturnal spontaneous movement) or changes in muscle strength, especially muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous movement (particularly, Increase between spontaneous behavior amount) it can be used as a safe and low toxic prophylactic or therapeutic or improving agent for muscle weakness.
Compounds or salts thereof that decrease the expression level of RFRP or OT7T022 obtained by the above screening method include, for example, muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, or spontaneous movement (particularly at night ) Can be used as safe, low-toxic preventive, therapeutic and ameliorating agents, analgesics, morphine analgesic promoting agents, morphine tolerance avoidance agents, morphine dependence avoidance agents and the like.
[0045]
When a compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is used as a pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned preventive, therapeutic and ameliorating agents containing RFRP.
Since the resulting preparation is safe and has low toxicity, it can be administered to, for example, humans and mammals (eg, rats, mice, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, etc.).
The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, the target organ, the condition, the administration method, and the like. In the case of oral administration, for example, in a patient with analgesia (with a body weight of 60 kg), one day About 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg of a compound or a salt thereof that increases the expression level of RFRP or OT7T022. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method and the like. For example, in the case of an injection, usually, for example, a patient with pain disorder (with a body weight of 60 kg) In a vein, about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 10 mg of a compound or a salt thereof that increases the expression level of RFRP or OT7T022 per day is administered intravenously. It is convenient to administer by injection. In the case of other animals, the amount can be administered in terms of the weight per 60 kg.
[0046]
(4) Diagnostic method using antibodies
Since an antibody against RFRP or OT7T022 (hereinafter, abbreviated as the antibody of the present invention) can specifically recognize RFRP or OT7T022, it can be used for detection or neutralization of RFRP or OT7T022 in a test solution. it can.
That is, the present invention
(I) reacting the antibody of the present invention with a test solution and labeled RFRP or OT7T022 competitively, and measuring the ratio of labeled RFRP or OT7T022 bound to the antibody; A method for quantifying RFRP or OT7T022 in a test solution, and
(Ii) After reacting a test solution with the antibody of the present invention immobilized on a carrier and another labeled antibody of the present invention simultaneously or continuously, the activity of the labeling agent on the insolubilized carrier is measured. And a method for quantifying RFRP or OT7T022 in a test solution.
[0047]
In the quantification method (ii), it is preferable that one antibody is an antibody that recognizes the N-terminal of RFRP or OT7T022 and the other antibody is an antibody that reacts with the C-terminal of RFRP or OT7T022.
In addition, RFRP or OT7T022 can be quantified using a monoclonal antibody against RFRP or OT7T022 (hereinafter, the monoclonal antibody of the present invention), and can also be detected by tissue staining or the like. For these purposes, the antibody molecule itself may be used, and the F (ab ') 2 , Fab ′ or Fab fraction may be used.
The method for quantifying RFRP or OT7T022 using the antibody of the present invention is not particularly limited, and may be an antibody, antigen or antibody-antigen complex corresponding to the amount of antigen (eg, the amount of RFRP or OT7T022) in the test solution. Any measurement method may be used as long as the amount of the body is detected by chemical or physical means, and the amount is calculated from a standard curve prepared using a standard solution containing a known amount of antigen. For example, nephelometry, competition method, immunometric method and sandwich method are suitably used, but it is particularly preferable to use the sandwich method described later in terms of sensitivity and specificity.
[0048]
As a labeling agent used in a measuring method using a labeling substance, for example, a radioisotope, an enzyme, a fluorescent substance, a luminescent substance and the like are used. As the radioisotope, for example, [ 125 I], [ 131 I], [ 3 H], [ 14 C] is used. As the above-mentioned enzyme, a stable enzyme having a large specific activity is preferable. For example, β-galactosidase, β-glucosidase, alkaline phosphatase, peroxidase, malate dehydrogenase and the like are used. As the fluorescent substance, for example, fluorescamine, fluorescein isothiocyanate and the like are used. As the luminescent substance, for example, luminol, a luminol derivative, luciferin, lucigenin and the like are used. Further, a biotin-avidin system can be used for binding the antibody or antigen to the labeling agent.
For the insolubilization of the antigen or antibody, physical adsorption may be used, or a method using a chemical bond usually used for insolubilizing and immobilizing enzymes and the like may be used. Examples of the carrier include insoluble polysaccharides such as agarose, dextran, and cellulose; synthetic resins such as polystyrene, polyacrylamide, and silicon; and glass.
In the sandwich method, the test solution is reacted with the insolubilized monoclonal antibody of the present invention (primary reaction), and further reacted with another labeled monoclonal antibody of the present invention (secondary reaction). By measuring the activity of the labeling agent, the amount of RFRP in the test solution can be determined. The primary reaction and the secondary reaction may be performed in the reverse order, may be performed simultaneously, or may be performed at staggered times. The labeling agent and the method of insolubilization can be in accordance with those described above. In addition, in the immunoassay by the sandwich method, the antibody used for the solid phase antibody or the labeling antibody is not necessarily one kind, and a mixture of two or more kinds of antibodies is used for the purpose of improving measurement sensitivity and the like. You may.
[0049]
In the method for measuring RFRP or OT7T022 by the sandwich method of the present invention, the monoclonal antibody of the present invention used in the primary reaction and the secondary reaction is preferably an antibody having different binding sites for RFRP or OT7T022. That is, the antibody used in the primary reaction and the secondary reaction is, for example, when the antibody used in the secondary reaction recognizes RFRP or the C-terminal of OT7T022, the antibody used in the primary reaction is preferably C For example, an antibody that recognizes an N-terminal other than the end is used.
The monoclonal antibody of the present invention can be used in a measurement system other than the sandwich method, for example, a competition method, an immunometric method, a nephrometry, or the like.
In the competition method, after the antigen in the test solution and the labeled antigen are allowed to react competitively with the antibody, the unreacted labeled antigen (F) and the labeled antigen (B) bound to the antibody are separated. (B / F separation), the amount of any of B and F is measured, and the amount of antigen in the test solution is quantified. In this reaction method, a soluble antibody is used as the antibody, B / F separation is performed using polyethylene glycol, a liquid phase method using a second antibody against the antibody, or a solid phase antibody is used as the first antibody. A solid-phase method using a soluble antibody as the first antibody and using a solid-phased antibody as the second antibody is used.
In the immunometric method, an antigen in a test solution and a solid-phased antigen are allowed to compete with each other for a fixed amount of a labeled antibody, and then the solid phase and the liquid phase are separated, or The antigen is allowed to react with an excessive amount of the labeled antibody, and then the immobilized antigen is added to bind the unreacted labeled antibody to the solid phase. Next, the amount of label in any phase is measured to determine the amount of antigen in the test solution.
In nephelometry, the amount of insoluble sediment produced as a result of an antigen-antibody reaction in a gel or in a solution is measured. Even when the amount of antigen in the test solution is small and only a small amount of sediment is obtained, laser nephrometry utilizing laser scattering is preferably used.
In applying these individual immunological measurement methods to the quantification method of the present invention, no special conditions, operations, and the like need to be set. A measurement system of RFRP or OT7T022 may be constructed by adding ordinary technical considerations of those skilled in the art to ordinary conditions and operation methods in each method. For details of these general technical means, reference can be made to reviews, books, and the like.
For example, Hiroe Irie, "Radio Immunoassay" (Kodansha, published in 1974), Hiroshi Irie, "Radio Immunoassay" (Kodansha, published in 1974), Eiji Ishikawa et al., "Enzyme Immunoassay" (Medical Shoin, Showa Ed. Ishikawa et al., “Enzyme Immunoassay” (2nd edition) (Issue Shoin, 1982), Eiji Ishikawa et al. “Enzyme Immunoassay” (Third Edition), 3rd edition (Medical Shoin, Showa) 62)), "Methods in ENZYMOLOGY" Vol. 70 (Immunochemical Techniques (Part A)), ibid., Vol. 73 (Immunochemical Technologies (Part B)), ibid., Vol. 74 (Immunochemical Technologies (Part C)), ibid., Vol. 84 (Immunochemical Technologies (Part D: Selected Immunoassays)), ibid., Vol. 92 (Immunochemical Technologies (Part E: Monoclonal Antibodies and General Immunoassay Methods)), ibid., Vol. 121 (Immunochemical Techniques (Part I: Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies)) (all published by Academic Press) can be referred to.
As described above, RFRP or OT7T022 can be quantified with high sensitivity by using the antibody of the present invention.
[0050]
Furthermore, when a decrease in the concentration of RFRP or OT7T022 is detected by quantifying the concentration of RFRP or OT7T022 using the antibody of the present invention, for example, pain sensation disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, etc. Disease, blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait , Increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), decreased muscle strength, etc., especially muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal walking, increased body temperature, It can be diagnosed as a disease such as a decrease in the number of white blood cells, a decrease in the number of platelets, an increase in the amount of spontaneous movement (particularly the amount of nighttime issuance), or a decrease in muscle strength, or a high possibility of contracting in the future.
In addition, when an increase in the concentration of RFRP or OT7T022 is detected, for example, muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, or decreased spontaneous movement (particularly nighttime movement). It can be diagnosed as a disease, such as pain, morphine resistance, or likely to be affected in the future.
[0051]
(5) A method for screening a compound or a salt thereof (such as an agonist or an antagonist) that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, and a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022. Medicine
By using OT7T022 or constructing a recombinant OT7T022 expression system and using a receptor binding assay system using the expression system, for example, pain sensation disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, Blood disease, renal disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal walking, body temperature Increase, decrease in white blood cell count, decrease in platelet count, increase in spontaneous movement (especially night movement), decrease in muscle strength, decrease in body temperature, increase in white blood cell count, increase in platelet count, movement in spontaneous movement (especially night movement) Compounds that alter the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, which are useful as preventive, therapeutic, and ameliorating agents for reduction, pain, morphine tolerance, etc. (eg, peptides, proteins, non-peptides) Plastid compounds, synthetic compounds, fermentation products) or a salt thereof efficiently screened.
Such compounds include (a) cell stimulating activities (eg, arachidonic acid release, acetylcholine release, intracellular Ca) through OT7T022. 2+ Activity to promote release, intracellular cAMP production, intracellular cAMP production inhibition, intracellular cGMP production, inositol phosphate production, cell membrane potential fluctuation, intracellular protein phosphorylation, c-fos activation, pH reduction, etc. (B) a compound that inhibits OT7T022-mediated cell stimulating activity (a so-called OT7T022 antagonist), (c) a compound that enhances the binding force between RFRP and OT7T022, Or (d) a compound that decreases the binding force between RFRP and OT7T022.
That is, the present invention
(1) Pain disorder, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity characterized by using RFRP and / or OT7T022 , Emotional disorders, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous movement (particularly at night Activity), muscle weakness, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, decreased spontaneous movement (especially nocturnal spontaneous movement), pain, morphine tolerance, etc., especially pain disorders, adrenal dysfunction, convulsions, etc. Aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), decreased muscular strength, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, increased spontaneous movement ( Especially at night The screening method of preventive and therapeutic and improving agents, such as reduction of issuance rotation amount),
(2) A comparison between (i) the case where RFRP is brought into contact with OT7T022 and (ii) the case where RFRP is brought into contact with OT7T022 and a test compound, wherein pain sensation disorder, eye disease and pituitary disease are characterized. , Muscular disease, heart disease, blood disease, renal disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, attack Sexual behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), decreased muscle strength, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, increased spontaneous movement , Decrease in nocturnal self-issue volume, pain, morphine tolerance, etc., especially pain disorders, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous Increase in momentum), muscle weakness, body temperature decrease, leukocytosis, platelet count increased spontaneous behavior amount (in particular, provides methods of screening for preventive and therapeutic and improving agents for reduction of nocturnal spontaneous behavior amount).
Pain disorders, eye disorders, pituitary disorders, muscular disorders, heart disorders, blood disorders, kidney disorders, immune disorders, adrenal dysfunction, eating disorders, obesity, affective disorders, schizophrenia, depression, anxiety, sexual function Disability, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), decreased muscle strength, decreased body temperature, increased white blood cell count, Prevention, treatment and amelioration of platelet count increase, spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), pain and morphine tolerance are compounds or salts thereof that alter the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022. is there.
The screening method of the present invention is characterized in that, for example, the amount of RFRP binding to OT7T022, the cell stimulating activity, and the like in the cases (i) and (ii) are measured and compared.
[0052]
More specifically, the present invention provides
a) measuring and comparing the amount of labeled RFRP bound to OT7T022 when the labeled RFRP is brought into contact with OT7T022 and when the labeled RFRP and a test compound are brought into contact with OT7T022, and comparing the measured amounts; Screening method for a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between OT7T022 and OT7T022,
b) When the labeled RFRP was brought into contact with the cells containing OT7T022 or the membrane fraction of the cells, and when the labeled RFRP and the test compound were brought into contact with the cells containing OT7T022 or the membrane fraction of the cells. Measuring the amount of binding of the labeled RFRP to the cell or the membrane fraction and comparing the compound or the salt thereof, which alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022,
c) When the labeled RFRP is brought into contact with OT7T022 expressed on the cell membrane by culturing a transformant containing the DNA encoding OT7T022, and when the labeled RFRP and the test compound contain the DNA encoding OT7T022. The binding or signal between RFRP and OT7T022, wherein the amount of labeled RFRP bound to OT7T022 is measured and compared when the transformant is brought into contact with OT7T022 expressed on the cell membrane by culturing. A method of screening for a compound that alters transmission or a salt thereof,
[0053]
d) When a compound or a salt thereof that activates RFRP (eg, RFRP) is brought into contact with OT7T022-containing cells, and when a compound that activates RFRP or a salt thereof and a test compound are brought into contact with OT7T022-containing cells. Measuring the OT7T022-mediated cell stimulating activity in the case of allowing the compound to bind, or a method for screening a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, and
e) When a compound or a salt thereof that activates RFRP (eg, RFRP) is brought into contact with OT7T022 expressed on a cell membrane by culturing a transformant containing DNA encoding OT7T022, When a compound to be converted or a salt thereof and a test compound are brought into contact with OT7T022 expressed on a cell membrane by culturing a transformant containing DNA encoding OT7T022, cell-stimulating activity via a receptor is measured and compared. And a method for screening a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022.
In the screening method of the present invention, a compound that changes the binding property between RFRP and OT7T022 or a salt thereof can be used instead of RFRP. The compound that changes the binding property between RFRP and OT7T022 or a salt thereof can be obtained by performing the scooning method of the present invention using RFRP.
[0054]
The specific description of the screening method of the present invention is as follows.
First, as the OT7T022 used in the screening method of the present invention, a cell membrane fraction of a mammalian organ containing OT7T022 is suitable. However, since it is extremely difficult to obtain human-derived organs, human-derived OT7T022 and the like, which are expressed in large amounts using recombinants, are suitable for screening.
The method described in WO 00/29441 or WO 01/66134 is used to produce OT7T022, but it is preferably carried out by expressing the DNA encoding OT7T022 in mammalian cells or insect cells. A complementary DNA is used as the DNA fragment encoding the target protein portion, but is not necessarily limited thereto. For example, a gene fragment or a synthetic DNA may be used. In order to introduce a DNA fragment encoding OT7T022 into host animal cells and express them efficiently, the DNA fragment must be isolated from a nuclear polyhedrosis virus (NPV) belonging to a baculovirus using an insect as a host. It is preferable to incorporate the gene into the downstream of a polyhedrin promoter, an SV40-derived promoter, a retrovirus promoter, a metallothionein promoter, a human heat shock promoter, a cytomegalovirus promoter, and an SRα promoter. The quantity and quality of the expressed receptor can be examined by a method known per se. For example, the literature [Nambi, P .; Et al., The Journal of Biological Chemistry (J. Biol. Chem.), 267, 19555-19559, 1992].
Therefore, in the screening method of the present invention, OT7T022-containing cells may be OT7T022 purified according to a method known per se, OT7T022-containing cells, or OT7T022-containing cells. May be used.
[0055]
When cells containing OT7T022 are used in the screening method of the present invention, the cells may be immobilized with glutaraldehyde, formalin, or the like. The immobilization method can be performed according to a method known per se.
The cell containing OT7T022 refers to a host cell expressing OT7T022, and the host cell is preferably Escherichia coli, Bacillus subtilis, yeast, insect cells, animal cells and the like.
The cell membrane fraction refers to a fraction abundant in cell membrane obtained by disrupting cells and then obtained by a method known per se. As a method for crushing the cells, a method of crushing the cells with a Potter-Elvehjem type homogenizer, crushing with a Waring blender or a polytron (manufactured by Kinematica), crushing with an ultrasonic wave, ejection of the cells from a thin nozzle while applying pressure by a French press or the like. Crushing and the like. For fractionation of cell membranes, fractionation by centrifugal force such as fractionation centrifugation or density gradient centrifugation is mainly used. For example, the cell lysate is centrifuged at a low speed (500-3000 rpm) for a short time (usually about 1 to 10 minutes), and the supernatant is further centrifuged at a high speed (15000 to 30000 rpm) for usually 30 minutes to 2 hours. Is the membrane fraction. The membrane fraction is rich in expressed OT7T022 and membrane components such as cell-derived phospholipids and membrane proteins.
The amount of OT7T022 in cells containing OT7T022 and in the membrane fraction was 10 per cell. 3 -10 8 Preferably a molecule 5 -10 7 Preferably it is a molecule. The higher the expression level, the higher the OT7T022 binding activity (specific activity) per membrane fraction, which makes it possible not only to construct a highly sensitive screening system, but also to measure a large number of samples in the same lot. .
[0056]
In order to carry out the above a) to c) for screening for a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, for example, an appropriate OT7T022 fraction and a labeled RFRP are required. .
As the OT7T022 fraction, a natural OT7T022 fraction or a recombinant OT7T022 fraction having an activity equivalent thereto is desirable. Here, “equivalent activity” refers to equivalent ligand binding activity, signal transduction action, and the like.
As the labeled RFRP, a labeled RFRP, a labeled RFRP analog compound, or the like is used. For example, [ 3 H], [ 125 I], [ 14 C], [ 35 S] or the like is used.
Specifically, to screen for a compound that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, cells containing OT7T022 or a membrane fraction of the cells are first suspended in a buffer suitable for screening. To prepare an OT7T022 sample. Any buffer may be used as long as it does not inhibit the binding between RFRP and OT7T022, such as a phosphate buffer having a pH of 4 to 10 (preferably pH 6 to 8) and a Tris-HCl buffer. Further, in order to reduce non-specific binding, CHAPS, Tween-80 are used. TM Surfactants such as (Kao-Atlas), digitonin and deoxycholate can also be added to the buffer. Furthermore, a protease inhibitor such as PMSF, leupeptin, E-64 (manufactured by Peptide Research Laboratories), and pepstatin can be added for the purpose of suppressing degradation of OT7T022 or RFRP by a protease. To 0.01 to 10 ml of the receptor solution, a fixed amount (5000 to 500000 cpm) of labeled RFRP is added, and -4 M-10 -10 M test compounds are allowed to coexist. A reaction tube containing a large excess of unlabeled RFRP is also prepared to determine the non-specific binding amount (NSB). The reaction is carried out at about 0 to 50 ° C, preferably about 4 to 37 ° C, for about 20 minutes to 24 hours, preferably for about 30 minutes to 3 hours. After the reaction, the mixture is filtered through a glass fiber filter or the like, washed with an appropriate amount of the same buffer, and the radioactivity remaining on the glass fiber filter is measured with a liquid scintillation counter or a γ-counter. Count when there is no antagonist (B 0 ) Minus the amount of non-specific binding (NSB) (B 0 -NSB) as 100%, a test compound having a specific binding amount (B-NSB) of, for example, 50% or less can be selected as a candidate substance having competitive inhibitory ability.
[0057]
In order to carry out the above-mentioned methods d) to e) of screening for a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, for example, the cell stimulating activity via OT7T022 is known in the art or commercially available. Can be measured using the measurement kit described in (1).
Specifically, cells containing OT7T022 are first cultured in a multiwell plate or the like. Before performing screening, the cells were exchanged with a fresh medium or an appropriate buffer that was not toxic to cells, and a test compound was added and incubated for a certain period of time. The product is quantified according to the respective method. When the production of a substance (for example, arachidonic acid) as an indicator of cell stimulating activity is difficult due to a degrading enzyme contained in a cell, an assay may be performed by adding an inhibitor to the degrading enzyme. In addition, the activity such as cAMP production suppression can be detected as a production suppression effect on cells whose basic production amount has been increased by forskolin or the like.
In order to perform screening by measuring cell stimulating activity, cells expressing appropriate OT7T022 are required. As the cells expressing OT7T022, a cell line having natural OT7T022, a cell line expressing the above-mentioned recombinant OT7T022, and the like are preferable.
As the test compound, the same compounds as described above are used.
As the test compound, a compound designed to bind to the ligand binding pocket based on the atomic coordinates of the active site of OT7T022 and the position of the ligand binding pocket is preferably used. The measurement of the atomic coordinates of the active site of OT7T022 and the position of the ligand binding pocket can be performed using a known method or a method analogous thereto.
[0058]
Kits for screening a compound or a salt thereof that alters the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022 include those containing RFRP, cells containing OT7T022 or cell membrane fractions thereof.
Examples of the screening kit of the present invention include the following.
1. Screening reagent
a) Measurement buffer and washing buffer
Hanks' Balanced Salt Solution (manufactured by Gibco) plus 0.05% bovine serum albumin (manufactured by Sigma).
The solution may be sterilized by filtration through a filter having a pore size of 0.45 μm and stored at 4 ° C., or may be prepared at use.
b) OT7T022 standard
CHO cells expressing OT7T022 were placed in a 12-well plate at 5 × 10 5 5 Passage at 37 ° C, 5% CO 2 , Cultured at 95% air for 2 days.
c) Labeled RFRP
Commercially available [ 3 H], [ 125 I], [ 14 C], [ 35 RFRP labeled with [S]
The aqueous solution is stored at 4 ° C. or −20 ° C., and diluted to 1 μM with a measuring buffer before use.
d) RFRP standard solution
RFRP is dissolved to a concentration of 1 mM in PBS containing 0.1% bovine serum albumin (manufactured by Sigma) and stored at -20 ° C.
[0059]
2. Measurement method
a) OT7T022-expressing CHO cells cultured on a 12-well tissue culture plate are washed twice with 1 ml of the measurement buffer, and 490 μl of the measurement buffer is added to each well.
b) 10 -3 -10 -10 After adding 5 μl of M test compound solution, 5 μl of labeled RFRP is added, and the mixture is reacted at room temperature for 1 hour. To determine the amount of non-specific binding, 10 -3 Add 5 μl of M RFRP.
c) Remove the reaction solution and wash three times with 1 ml of washing buffer. The labeled RFRP bound to the cells is dissolved in 0.2N NaOH-1% SDS, and mixed with 4 ml of liquid scintillator A (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).
d) Radioactivity is measured using a liquid scintillation counter (manufactured by Beckman), and Percent Maximum Binding (PMB) is determined by the following equation.
PMB = [(B-NSB) / (B 0 −NSB)] × 100
PMB: Percent Maximum Binding
B: Value when the sample was added
NSB: Non-specific Binding (Non-specific binding amount)
B 0 : Maximum binding amount
[0060]
Compounds obtained using the screening method or screening kit of the present invention include peptides, proteins, non-peptide compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, plasma, and the like. And these compounds may be novel compounds or known compounds.
As the salt of the compound obtained by the above screening method, the same salt as the above-mentioned salt of RFRP is used.
The compound or a salt thereof obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention is a compound or a salt thereof having an action of changing the binding or signal transduction between RFRP and OT7T022, and specifically, (A ) A compound having a cell stimulating activity via OT7T022 or a salt thereof (a so-called OT7T022 agonist), (b) a compound having no cell stimulating activity or a salt thereof (a so-called OT7T022 antagonist), A compound or a salt thereof that enhances the binding force, or (d) a compound or a salt thereof that decreases the binding force between RFRP and OT7T022.
A specific method for evaluating whether the compound is an OT7T022 agonist or antagonist may be in accordance with the following (i) and (ii).
(I) For example, after performing a binding assay shown in the screening methods a) to c) above to obtain a compound or a salt thereof that alters (particularly, inhibits the binding) the binding between RFRP and OT7T022, It is determined whether the compound or a salt thereof has the above-described OT7T022-mediated cell stimulating activity. A compound having a cell stimulating activity or a salt thereof is an OT7T022 agonist, and a compound having no such activity or a salt thereof is an OT7T022 antagonist.
(Ii) (a) The test compound is brought into contact with OT7T022-containing cells, and the OT7T022-mediated cell stimulating activity is measured. The compound having a cell stimulating activity or a salt thereof is an OT7T022 agonist.
(B) when a compound that activates OT7T022 (for example, RFRP) is brought into contact with cells containing OT7T022, and when a compound that activates OT7T022 and a test compound are brought into contact with cells that contain OT7T022, OT7T022-mediated cell stimulating activity is measured and compared. A compound or a salt thereof capable of reducing the cell stimulating activity of a compound that activates OT7T022 is an OT7T022 antagonist.
The OT7T022 agonist has the same action as the physiological activity of RFRP and is useful as a safe and low-toxic drug.
Since the OT7T022 antagonist can suppress the biological activity of RFRP, it is useful as a safe and low-toxic drug for suppressing the biological activity of RFRP.
A compound or a salt thereof that enhances the binding strength between RFRP and OT7T022 can enhance the physiological activity of RFRP and is therefore useful as a safe and low-toxic drug.
A compound or a salt thereof that reduces the binding strength between RFRP and OT7T022 can reduce the physiological activity of RFRP, and is therefore useful as a safe and low-toxic drug for suppressing the biological activity of RFRP.
[0061]
Specifically, OT7T022 agonists obtained using the screening method or screening kit of the present invention, and compounds or salts thereof that enhance the binding strength between RFRP and OT7T022 include, for example, pain disorders, eye diseases, pituitary diseases, Muscular disease, heart disease, blood disease, renal disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggression Behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), decreased muscle strength, etc., especially muscular diseases, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal walking It is useful as a preventive, therapeutic or ameliorating agent for increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or decreased muscle strength.
On the other hand, OT7T022 antagonists obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention, and compounds or salts thereof that decrease the binding strength between RFRP and OT7T022 include, for example, muscle diseases, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count. It is useful as a preventive, therapeutic or ameliorating agent for an increase in platelet count or decrease in spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), an analgesic, a morphine analgesic enhancer, a morphine tolerance avoidant, a morphine dependence avoidant, etc. is there.
When the compound or a salt thereof obtained by using the screening method or the screening kit of the present invention is used as the above-mentioned pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned preventive, therapeutic and ameliorating agents containing RFRP.
Since the resulting preparation is safe and has low toxicity, it can be administered to, for example, humans and mammals (eg, rats, mice, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, etc.).
The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, the target organ, the condition, the administration method, and the like. In the case of oral administration, for example, in a patient with analgesia (with a body weight of 60 kg), one day OT7T022 agonist is about 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg. When administered parenterally, the single dose varies depending on the administration subject, target organ, condition, administration method, and the like. For example, in the case of an injection, it is usually used, for example, in a patient with analgesia (with a body weight of 60 kg). It is advantageous to administer about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 10 mg of OT7T022 agonist per day by intravenous injection. In the case of other animals, the amount can be administered in terms of the weight per 60 kg.
[0062]
(6) A medicine containing a compound that changes the amount of OT7T022 in a cell membrane or a salt thereof
Since an antibody against OT7T022 can specifically recognize OT7T022, it can be used for screening a compound or a salt thereof that changes the amount of OT7T022 in a cell membrane.
That is, the present invention, for example,
(I) After a) blood of a non-human mammal, b) a specific organ, c) tissue or cells isolated from an organ are destroyed, a cell membrane fraction is isolated, and OT7T022 contained in the cell membrane fraction is determined. A method for screening a compound or a salt thereof, which alters the amount of OT7T022 in the cell membrane,
(Ii) After disrupting a transformant or the like expressing OT7T022, isolating the cell membrane fraction and quantifying OT7T022 contained in the cell membrane fraction, thereby screening for a compound or a salt thereof that changes the amount of OT7T022 in the cell membrane. Method,
(Iii) a) the blood of a non-human mammal, b) a specific organ, c) a tissue or a cell isolated from the organ, and then use the immunostaining method to obtain the receptor on the cell surface. Provided is a method for screening a compound or a salt thereof, which changes the amount of OT7T022 in a cell membrane by confirming the protein on the cell membrane by quantifying the degree of staining of the protein.
(Iv) Transformants or the like expressing OT7T022 are sectioned, and the degree of staining of the receptor protein on the cell surface is quantified by immunostaining to confirm the protein on the cell membrane. A method for screening a compound or a salt thereof that alters the amount of OT7T022 in the cell membrane.
[0063]
The quantification of OT7T022 contained in the cell membrane fraction is specifically performed as follows.
(I) For normal or disease model non-human mammals (eg, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, etc., more specifically, immunodeficient rats, mice, rabbits, etc.) After applying a drug (eg, an immunomodulator) or a physical stress (eg, immersion stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.), and after a certain period of time, blood or a specific organ (eg, brain, Liver, kidney, etc.), or tissues or cells isolated from an organ. The obtained organ, tissue or cell is suspended in, for example, an appropriate buffer (eg, Tris-HCl buffer, phosphate buffer, Hepes buffer, etc.), and the organ, tissue or cell is destroyed. Activator (eg, Triton X100 TM , Tween 20 TM And the like, and further using a method such as centrifugation, filtration, or column fractionation to obtain a cell membrane fraction.
The cell membrane fraction refers to a fraction abundant in cell membrane obtained by disrupting cells and then obtained by a method known per se. As a method for crushing the cells, a method of crushing the cells with a Potter-Elvehjem type homogenizer, crushing with a Waring blender or a polytron (manufactured by Kinematica), crushing with an ultrasonic wave, or ejecting the cells from a thin nozzle while applying pressure by a French press or the like. Crushing and the like. For fractionation of cell membranes, fractionation by centrifugal force such as fractionation centrifugation or density gradient centrifugation is mainly used. For example, the cell lysate is centrifuged at a low speed (500 to 3000 rpm) for a short time (generally about 1 minute to 10 minutes), and the supernatant is further centrifuged at a high speed (15000 to 30000 rpm) for usually 30 minutes to 2 hours. The precipitate is the membrane fraction. The membrane fraction is rich in expressed OT7T022 and membrane components such as cell-derived phospholipids and membrane proteins.
OT7T022 contained in the cell membrane fraction can be quantified by, for example, sandwich immunoassay using the antibody of the present invention, Western blot analysis, or the like.
Such a sandwich immunoassay can be performed in the same manner as described above, and the Western blot can be performed by a means known per se.
(Ii) A transformant expressing OT7T022 is prepared according to the method described above, and OT7T022 contained in the cell membrane fraction can be quantified.
[0064]
Screening for a compound or a salt thereof that alters the amount of OT7T022 in the cell membrane comprises:
(I) A given time (30 minutes to 24 hours, preferably 30 minutes to 12 hours, more preferably 1 hour) before giving a drug or physical stress to a normal or disease model non-human mammal Before or after 6 hours) or after a certain time (after 30 minutes to 3 days, preferably after 1 hour to 2 days, more preferably after 1 hour to 24 hours), or simultaneously with the drug or physical stress. After a certain period of time after administration (30 minutes to 3 days, preferably 1 hour to 2 days, more preferably 1 hour to 24 hours), the amount of OT7T022 in the cell membrane is determined. Can be
(Ii) When culturing the transformant according to a conventional method, the test compound is mixed in a medium, and after culturing for a certain period of time (1 to 7 days, preferably 1 to 3 days, more preferably 2 to 3 days) ), By quantifying the amount of RFRP in the cell membrane.
Confirmation of OT7T022 contained in the cell membrane fraction is specifically performed as follows.
(Iii) For normal or disease model non-human mammals (eg, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, cattle, cats, dogs, monkeys, etc., more specifically, immunodeficient model rats, mice, rabbits, etc.) After applying a drug (eg, an immunomodulator) or a physical stress (eg, immersion stress, electric shock, light / dark, low temperature, etc.), and after a certain period of time, blood or a specific organ (eg, brain, Liver, kidney, etc.), or tissues or cells isolated from an organ. The obtained organ, tissue or cell is cut into a tissue section according to a conventional method, and immunostaining is performed using the antibody of the present invention. By quantifying the degree of staining of the receptor protein on the cell surface, and confirming the protein on the cell membrane, the amount of OT7T022 in the cell membrane can be quantitatively or qualitatively confirmed.
(Iv) It can also be confirmed by using a OT7T022-expressing transformant or the like and performing the same procedure.
As the test compound, the same compounds as described above are used.
[0065]
The compound obtained by using the screening method of the present invention is a compound having an action of changing the amount of OT7T022 in the cell membrane. Specifically, (a) increasing the amount of OT7T022 in the cell membrane allows the compound to be mediated by OT7T022. A compound that enhances the cell stimulating activity, and (b) a compound that reduces the cell stimulating activity by decreasing the amount of OT7T022 in the cell membrane.
As the salt of the compound obtained by the above screening method, the same salt as the above-mentioned salt of RFRP is used.
Compounds or salts thereof that enhance cell stimulating activity by increasing the amount of OT7T022 in the cell membrane include, for example, pain sensation, eye disease, pituitary disease, muscular disease, heart disease, blood disease, kidney disease, immune disease, Adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count , Increase in spontaneous movement (especially nocturnal movement), muscle weakness, etc., especially muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous movement It is useful as a safe, low-toxicity preventive, therapeutic and ameliorating agent for increasing (especially nighttime motor activity) or muscle weakness.
Compounds or salts thereof that attenuate the cell stimulating activity by reducing the amount of OT7T022 in the cell membrane include, for example, muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or spontaneous movement (particularly at night. It is useful as a safe, low-toxicity preventive, therapeutic, or ameliorating agent for reducing the self-issued dose, an analgesic, a morphine analgesic promoting agent, a morphine tolerance avoidant, a morphine-dependent avoidant, and the like.
When a compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is used as a pharmaceutical composition, it can be formulated according to a conventional method. Specifically, it can be produced in the same manner as the above-mentioned preventive, therapeutic and ameliorating agents containing RFRP.
Since the resulting preparation is safe and has low toxicity, it can be administered to, for example, humans and mammals (eg, rats, mice, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, etc.).
The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, the target organ, the condition, the administration method, and the like. About 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg of a compound or a salt thereof that increases the amount of OT7T022 per day. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method and the like. For example, in the case of an injection, usually, for example, a patient with pain disorder (with a body weight of 60 kg) Intravenous injection of about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, and more preferably about 0.1 to 10 mg of a compound or a salt thereof that increases the amount of OT7T022 in the cell membrane per day It is convenient to administer by In the case of other animals, the amount can be administered in terms of the weight per 60 kg.
[0066]
(7) A medicine containing an antibody against RFRP or OT7T022
Antibodies to RFRP or OT7T022 (particularly neutralizing antibodies) can inactivate signaling involving RFRP or OT7T022, eg, cell stimulating activity via OT7T022.
Therefore, an antibody against RFRP or OT7T022 may be used as a prophylactic, therapeutic, or ameliorating agent for, for example, muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, or decreased spontaneous movement (particularly nighttime spontaneous movement). It can be used as an analgesic, a morphine analgesic accelerator, a morphine tolerance avoidant, a morphine-dependent avoidant, and the like.
The prophylactic, therapeutic and ameliorating agents can be produced and used in the same manner as the above-mentioned RFRP-containing drug.
[0067]
(8) Drug containing antisense DNA or siRNA
Antisense DNA against DNA encoding RFRP or antisense DNA against DNA encoding OT7T022 (hereinafter abbreviated as antisense DNA) or siRNA of the present invention may be, for example, muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, leukocyte count. Used as a preventive, therapeutic or ameliorating agent for an increase, increase in platelet count or decrease in spontaneous motility (particularly nocturnal spontaneous motility), analgesic, morphine analgesic enhancer, morphine tolerance avoidant, morphine dependence avoidant, etc. be able to.
For example, when using the antisense DNA or siRNA, the antisense DNA or siRNA is used alone or inserted into an appropriate vector such as a retrovirus vector, an adenovirus vector, an adenovirus associated virus vector, and the like, followed by a conventional method. be able to. The antisense DNA or siRNA can be administered as it is or in the form of a formulation together with a physiologically acceptable carrier such as an adjuvant for promoting uptake, and administered with a gene gun or a catheter such as a hydrogel catheter.
Furthermore, the antisense DNA can also be used as a diagnostic oligonucleotide probe for examining the presence of DNA encoding RFRP or OT7T022 in tissues or cells and the state of its expression.
[0068]
(9) OT7T022 knockout animal
[OT7T022 gene expression inactive mammalian ES cells]
A mammalian ES cell in which the OT7T022 gene has been inactivated refers to a gene that is artificially mutated to the OT7T022 gene of the mammalian ES cell to suppress the gene expression ability or encode the gene. By substantially losing the activity of OT7T022, a mammalian ES cell in which the gene is substantially inactivated and not capable of expressing OT7T022 (hereinafter sometimes referred to as a knockout gene of the present invention) can be obtained. Say.
As the OT7T022 gene, a DNA encoding the above-mentioned OT7T022 is used. Specifically, as the mouse OT7T022 gene, a partial protein of the mouse OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 is encoded. : 32 or a gene (genomic DNA) consisting of the base sequence represented by SEQ ID NO: 28 or the like is used.
As the rat OT7T022 gene, a gene encoding the OT7T022 consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 and containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 12 or the like is used.
In the present specification, examples of mammals used as ES cell materials include humans, cows, pigs, sheep, goats, rabbits, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, mice, rats, and the like.
In the present specification, the non-human animal may be any animal other than a human having the OT7T022 gene, but a non-human mammal is preferred. As the non-human mammal, for example, cow, pig, sheep, goat, rabbit, dog, cat, guinea pig, hamster, mouse, rat and the like are used. Among non-human mammals, rodents, which are relatively short in ontogeny and biological cycle in terms of preparation of diseased animal model systems and are easy to breed, especially mice (for example, C57BL / 6 strain and DBA2 strain as pure strains) For example, B6C3F1 line, BDF1 line, B6D2F1 line, BALB / c line, ICR line, etc. (preferably, pure line, C57BL / 6 line, etc., and hybrid line, BDF1 line or ICR line, etc.) Or rats (eg, Wistar strain, SD strain, etc.) are particularly preferred.
[0069]
Examples of a method for artificially adding a mutation to the OT7T022 gene include deletion of part or all of the gene sequence by genetic engineering techniques, or insertion or substitution of another gene. With these mutations, the knockout gene of the present invention can be prepared, for example, by shifting the codon reading frame or disrupting the function of the promoter or exon.
Specific examples of mammalian (preferably non-human mammal) ES cells in which the OT7T022 gene has been inactivated (hereinafter abbreviated as OT7T022 gene-inactivated ES cells or knockout ES cells) include, for example, drug resistance genes (Eg, a neomycin resistance gene, a hygromycin resistance gene or a zeocin resistance gene, preferably a neomycin resistance gene), or a reporter gene (eg, lacZ (Escherichia coli β-galactosidase gene), cat (chloramphenicol acetyltransferase gene) ), GUS (β-glucuronidase gene), luciferase gene, aequorin gene, taumarin gene, GFP (Green Fluorescent Protein) gene, and the like. ) To disrupt the exon function of the OT7T022 gene, or insert a DNA sequence (for example, a polyA addition signal) that terminates gene transcription into the introns between exons to synthesize complete mRNA. By making it impossible, a DNA vector (hereinafter abbreviated as a targeting vector) having a DNA sequence constructed so as to eventually destroy the gene is prepared. When a reporter gene is inserted to disrupt the function of an exon, the reporter gene is preferably inserted so as to be expressed under the control of the OT7T022 promoter.
The “drug resistance gene” refers to a gene involved in drug resistance of antibiotics and the like, and is used as a marker for selecting whether or not the introduced gene has been expressed in cells.
The term "reporter gene" refers to a group of genes that serve as indicators of gene expression. Usually, structural genes of enzymes that catalyze a luminescence reaction or a color reaction are often used. (2) High sensitivity method capable of quantitatively expressing gene, (3) Low effect on transformed cells, (4) Localization of expression site And the like are preferably used (Plant Cell Engineering, Vol. 2, pp. 721, 1990). In addition, the above-mentioned "drug resistance gene" and the like are used for the same purpose, but the "reporter gene" is used to examine not only whether the introduced gene is expressed in cells but also in which tissue and when it is expressed And the expression level can be quantitatively and accurately examined.
Further, a targeting vector is introduced into the chromosome of the animal by, for example, homologous recombination, and the obtained ES cells are subjected to Southern hybridization analysis using the DNA sequence on or near the OT7T022 gene as a probe or DNA on the targeting vector. The knockout ES cell of the present invention can be obtained by analyzing the sequence and the DNA sequence of the neighboring region other than the OT7T022 gene used for the preparation of the targeting vector by PCR using primers, and selecting the knockout ES cells of the present invention.
Examples of the targeting vector include plasmids derived from E. coli (eg, pBR322, pBR325, pUC12, pUC13, etc.), plasmids derived from Bacillus subtilis (eg, pUB110, pTB5, pC194, etc.), and plasmids derived from yeast (eg, pSH19) PSH15), bacteriophages such as phage lambda, retroviruses such as Moloney leukemia virus, vaccinia virus or adenovirus vectors, baculovirus, bovine papillomavirus, viruses from the group of herpes viruses, or Epstein-Barr virus. Animal viruses and the like are used.
[0070]
As the original ES cells for inactivating the OT7T022 gene by the homologous recombination method or the like, for example, those already established as described above may be used, or according to the known Evans and Kaufman method. It may be a newly established one. For example, in the case of mouse ES cells, currently, 129 lines of ES cells are generally used, but since the immunological background is not clear, an alternative pure immunological and genetic background is used. For example, for the purpose of obtaining ES cells in which C57BL / 6 strains and DBA / 2 strains are crossed, BDF1 strain mice (F1 of C57BL / 6 strains and DBA / 2 strains) are used for the purpose of obtaining ES cells in which It can also be used favorably. The BDF1 strain mouse has the advantage that the number of eggs collected is large and the eggs are operative, and in addition, the C57BL / 6 strain mouse has a genetic background. When a mouse is created, it can be advantageously used in that the genetic background can be returned to the C57BL / 6 strain by backcrossing with a C57BL / 6 strain mouse.
In addition, when ES cells are established, blastocysts 3.5 days after fertilization are generally used. In addition, 8-cell stage embryos (8-cell stage embryos about 2.5 days after fertilization are preferable) ), A large number of early embryos can be obtained efficiently by culturing and using blastocysts.
[0071]
The secondary selection can be performed by karyotype analysis using G-banding method or the like. The number of chromosomes in the obtained ES cells is desirably 100% of the normal number. However, when it is difficult due to physical operations at the time of establishment, after knocking out the gene of the ES cells, normal cells (for example, the number of chromosomes in mice) are knocked out. Is preferably 2n = 40).
The ES cell line obtained in this way usually has very good growth properties, but it must be carefully subcultured because it tends to lose its ability to regenerate ontogenously. For example, on a suitable feeder cell such as STO fibroblast in the presence of LIF (1 to 10,000 U / ml) in a carbon dioxide incubator (preferably 5% carbon dioxide, 95% air or 5% oxygen, 5% The cells are cultured by a method such as culturing at about 37 ° C. in carbon dioxide gas and 90% air. At the time of subculture, for example, trypsin / EDTA solution (usually 0.001 to 0.5% trypsin / 0.1 to 5 mM EDTA, Preferably, a method is used in which cells are made into single cells by treatment with about 0.1% trypsin / 1 mM EDTA and seeded on freshly prepared feeder cells. Such passage is usually performed every 1 to 3 days. At this time, cells are observed, and if morphologically abnormal cells are found, it is desired that the cultured cells be discarded.
ES cells are differentiated into various types of cells, such as parietal muscle, visceral muscle, and cardiac muscle, by monolayer culture up to high density or suspension culture until cell clumps are formed under appropriate conditions. [M. J. Evans and M.E. H. Kaufman, Nature, 292, 154, 1981; R. Martin Proc. Of National Academy of Sciences USA (Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 78, 7634, 1981; C. Doetschman et al., Journal of Embryology and Experimental Morphology, vol. 87, p. 27, 1985], that the OT7T022 gene-deficient cells obtained by differentiating the ES cells of the present invention are obtained in vitro. Useful in cell biological studies of OT7T022.
When storing ES cells, use an appropriate freezing medium (eg, Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) containing 10% DMSO and 10% fetal bovine serum) at about -80 ° C or lower. save.
[0072]
The OT7T022 gene-deficient non-human animal of the present invention (hereinafter sometimes referred to as a gene expression-deficient non-human animal) may be, for example, a cell derived from a mammalian ES cell in which the OT7T022 gene has been inactivated. It is created by genetic engineering, and is, for example, a non-human animal in which the inactivated OT7T022 gene sequence is introduced into germ cells and somatic cells at an early stage of embryogenesis.
As the non-human animal, the same one as described above is used.
To knock out the OT7T022 gene, the above-mentioned targeting vector can be transferred to a non-human animal ES cell or a non-human animal egg cell by a known method (for example, electroporation, microinjection, calcium phosphate method, lipofection, aggregation, particle gun). , A DEAE-dextran method, etc. (preferred introduction methods include an electroporation method when introduced into ES cells and a microinjection method when introduced into egg cells). The inactivated OT7T022 gene sequence can be replaced by homologous recombination with the OT7T022 gene on the chromosome of a non-human animal ES cell or a non-human animal egg cell. The cells in which the OT7T022 gene was knocked out were subjected to Southern hybridization analysis using the DNA sequence on or near the OT7T022 gene as a probe or the DNA sequence on the targeting vector, and the neighboring region other than the mouse-derived OT7T022 gene used for the targeting vector. It can be determined by analysis by PCR using the DNA sequence as a primer.
When non-human animal ES cells are used, a cell line in which the OT7T022 gene has been inactivated is cloned by homologous recombination, and the cells are cloned at an appropriate time in the early stage of embryogenesis, for example, at the 8-cell stage. A chimeric embryo prepared by injecting into an animal embryo or blastocyst (injection method) or inserting the ES cell mass in which the OT7T022 gene is inactivated between two 8-cell stage embryos (assembly chimera method) Implantation into the uterus of the pregnant non-human animal.
The produced animal is a chimeric animal composed of both cells having a normal OT7T022 locus and cells having an artificially mutated OT7T022 locus.
When a part of the germ cells of the chimeric animal has a mutated OT7T022 locus, all the tissues were artificially mutated from a population obtained by crossing such a chimeric individual with a normal individual. It is obtained by selecting individuals composed of cells having the OT7T022 locus, for example, by judging coat color or the like. The individuals obtained in this manner are usually OT7T022 heterozygous expression-deficient individuals, and OT7T022 heteroexpression-deficient individuals are crossed with each other, and OT7T022 homoexpression-deficient individuals can be obtained from their offspring.
When using an egg cell, for example, a transgenic non-human animal having a targeting vector introduced into a chromosome can be obtained by injecting a gene solution into a nucleus of an egg cell by a microinjection method, and these transgenic non-human animals can be obtained. Can be obtained by selecting those having a mutation in the OT7T022 locus by homologous recombination.
A non-human animal deficient in OT7T022 gene expression can be distinguished from a normal animal by measuring the mRNA level of the animal using a known method and indirectly comparing the expression level.
[0073]
In this way, the individual in which the OT7T022 gene is knocked out can be bred in an ordinary breeding environment after confirming that the gene has been knocked out in the animal individual obtained by mating.
Furthermore, the germline can be obtained and maintained according to a conventional method. That is, by mating male and female animals having the inactivated gene sequence, a homozygous animal having the inactivated gene sequence on both homologous chromosomes can be obtained. The obtained homozygous animal can be efficiently obtained by rearing the mother animal in such a manner that there are one normal animal and one homozygote. By mating male and female heterozygous animals, homozygous and heterozygous animals having the inactivated gene sequence can be bred and subcultured. The progeny of the animal having the inactivated gene sequence thus obtained is also included in the OT7T022 gene-deficient non-human animal of the present invention.
The non-human animal deficient in OT7T022 gene expression of the present invention (particularly, OT7T022 homo-deficient non-human animal, preferably OT7T022 homo-deficient mouse) has the following properties.
(1) The weight of the thymus increases after the age of maturity as compared with the wild type animal.
(2) Compared to wild-type animals, gait abnormalities characterized mainly by backward walking may further show tremors or convulsions.
(3) The responsiveness to noxious stimuli (eg, heat noxious stimuli) is reduced compared to wild-type animals.
(4) More aggressive behavior than wild type animals.
(5) The absolute weight of the kidney or thymus is reduced as compared to the wild type animal.
(6) The leukocyte count or platelet count is decreased as compared with the wild type animal.
(7) Muscle strength is lower than that of wild-type animals.
[0074]
Such a mammalian ES cell in which the OT7T022 gene has been inactivated is very useful for producing a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression. A non-human animal deficient in OT7T022 gene expression; a disease model animal caused by drug induction or stress load on the animal; a better disease model animal produced by crossing a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression with another disease model animal; OT7T022 gene A disease model animal caused by drug induction or stress load on a disease model animal caused by crossing a non-human animal expression deficient animal with another disease model animal, and a bone marrow transplant animal using a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression and another disease model animal , Or their tissues or cells derived therefrom, are due to diseases resulting from OT7T022 deficiency, such as the inactivation of OT7T022 biological activity based on the loss of various biological activities that can be induced by OT7T022. Diseases (eg, pain disorders, eye disorders, pituitary disorders, muscular disorders, heart disorders, blood disorders, renal disorders, immune disorders, adrenal dysfunction, eating disorders, obesity, affective disorders, schizophrenia, depression, anxiety Dysfunction, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), muscle weakness, etc. Can be a better model of disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or weakness Therefore, it is useful for investigating the causes of these diseases and examining treatment methods. Here, as another disease state model animal, for example, a model mouse using bone marrow transplantation limited to deficiency or elevation of gene expression only on the blood cell side is also mentioned [Linton, M. et al. F. , Et al. , Science 267: 1034-1037 (1995)]. Bone marrow transplanted mice have the potential to become more suitable disease models because of limited changes in gene function. For example, a mouse transplanted into another recipient animal whose bone marrow was collected and bone marrow was previously destroyed by irradiation, or a pathological model animal obtained from the above-described OT7T022 gene expression deficient non-human animal as a donor animal, or Bone marrow transplanted mice transplanted as recipient animals with pathological model animals obtained from OT7T022 gene expression deficient non-human animals whose bone marrow has been previously destroyed by irradiation with other pathological model animals as donor animals included.
Thus, a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression of the present invention, a pathological model animal caused by drug induction or stress load on the animal, a pathological model animal resulting from crossing of a non-human animal OT7T022 gene expression non-human animal with another pathological model animal A disease model animal caused by drug induction or stress load on a disease model animal caused by crossing a non-human animal lacking OT7T022 gene expression with another disease model animal; a disease model animal obtained from a non-human animal lacking OT7T022 gene expression; The pathological model animals obtained by bone marrow transplantation using the pathological model animals described above, or their tissues or cells derived therefrom, can be used for screening for preventive, therapeutic and ameliorating drugs for the diseases. Here, examples of the above-mentioned tissue and cells derived therefrom include measuring specific activity using a homogenate such as liver or kidney, or measuring the activity or production amount of a specific product using peritoneal macrophages. It can be used for screening.
[0075]
[Screening method A of the present invention]
The present invention uses a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression of the present invention or a tissue thereof or a cell derived therefrom, comprising: a pain sensation disorder, an eye disease, a pituitary disease, a muscular disease, a heart disease, a blood disease, Renal disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, leukocytes Decreased number, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength, especially painfulness, muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, decreased spontaneous movement To provide a method for screening for a preventive, therapeutic, or ameliorating agent for increased or decreased muscle strength.
Non-human animal deficient in OT7T022 gene expression used in the screening method of the present invention, a disease model animal caused by drug induction or stress load of the animal, a disease model produced by mating a non-human animal lacking OT7T022 gene expression with another disease model animal Animal, a disease model animal caused by drug induction or stress load on a disease model animal caused by mating of a non-human animal lacking OT7T022 gene expression with another disease model animal, and a disease model animal obtained from a non-human animal lacking OT7T022 gene expression. The disease model animals obtained by bone marrow transplantation using other disease model animals, or their tissues or cells derived therefrom, include the same ones as described above.
As the test compound, the same compounds as described above are used.
Specifically, a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression of the present invention, a pathological model animal caused by drug induction or stress load of the animal, a pathological model generated by mating a non-human animal OT7T022 gene-deficient non-human animal with another pathological model animal An animal, a pathological model animal caused by drug induction or stress load on a pathological model animal caused by mating a non-human animal with OT7T022 gene expression deficiency with another pathological model animal, and a pathological model animal obtained from a non-human animal with OT7T022 gene expression deficient expression. A pathological model animal obtained by bone marrow transplantation using another pathological model animal (hereinafter, may be referred to as a OT7T022 gene expression-deficient non-human animal or the like), or their tissues or cells derived therefrom, is used as a test compound. Processed and untreated control Changes in the organs, tissues, cells, symptoms of disease, etc. of the animal, especially pain disorders, eye diseases, pituitary diseases, muscular diseases, heart diseases, blood diseases, kidney diseases, immune diseases, adrenal dysfunction in comparison with , Eating disorders, obesity, affective disorders, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, self-issue movement Increased volume (especially nocturnal spontaneous movement), muscle weakness, etc., especially muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous movement The preventive, therapeutic, and ameliorating effects of the test compound can be tested by using the increase in the amount of nighttime issuance (motor activity at night) or the effect of improving muscle weakness as an index.
[0076]
As a method of treating a test animal (a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression or the like) with a test compound, for example, oral administration, intravenous injection, or the like is used, and the method is appropriately selected according to the symptoms of the test animal, properties of the test compound, and the like. be able to. The dose of the test compound can be appropriately selected according to the administration method, the properties of the test compound, and the like.
For example, when screening for an agent for preventing, treating or ameliorating obesity, a cholesterol-loading treatment is performed on a non-human animal or the like deficient in OT7T022 gene expression of the present invention, and a test compound is administered before or after the cholesterol-loading treatment. Screening can be performed by measuring blood cholesterol levels, changes in body weight, and the like over time. Further, a drug such as STZ or alloxan is administered to a non-human animal or the like deficient in OT7T022 gene expression of the present invention, and a test compound is administered before or after the glucose tolerance treatment, and the blood glucose level and weight change of the animal are monitored with time. Screening can be performed by measurement.
For example, in the screening method, when a test compound is administered to a test animal, if the body weight of the test animal decreases by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more, the test compound is It can be selected as a substance having a therapeutic / preventive effect on obesity.
Further, when screening for a preventive, therapeutic or ameliorating drug for pain sensation, a test compound is administered to a non-human animal or the like deficient in OT7T022 gene expression of the present invention, and the animal's pain protective behavior (eg, licking action, squatting action, scratching action) (E.g., behavior) can be screened by measuring over time. Furthermore, after administering an analgesic such as morphine to a non-human animal or the like deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention, a test compound is administered to the animal to prevent pain (eg, licking, flapping, scratching). And the like can be screened by measuring over time.
For example, in the screening method, when a test compound is administered to a test animal, the pain-protecting behavior of the test animal increases by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more. The compound can be selected as a substance having a therapeutic / preventive effect on painful disorders.
[0077]
The preventive / therapeutic / ameliorating agent obtained by using the screening method of the present invention contains a compound selected from the above-mentioned test compounds or a salt thereof, and has the effect of preventing / treating / ameliorating a disease caused by OT7T022 deficiency. It is useful as a medicament such as a safe and low toxic therapeutic / prophylactic agent for diseases caused by OT7T022 deficiency. Further, a compound derived from the compound can be used in the same manner.
Examples of the salt of the compound obtained by the screening method include pharmaceutical salts such as salts with inorganic bases, salts with organic bases, salts with inorganic acids, salts with organic acids, and salts with basic or acidic amino acids. And the like.
Preferable examples of the salt with an inorganic base include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt, and aluminum salt and ammonium salt.
Preferred examples of the salt with an organic base include, for example, trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, 2,6-lutidine, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, cyclohexylamine, dicyclohexylamine, N, N′-dibenzylethylenediamine And salt.
Preferable examples of the salt with an inorganic acid include, for example, salts with hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like.
Preferred examples of salts with organic acids include, for example, formic acid, acetic acid, propionic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, benzoic acid And the like.
Preferable examples of the salt with a basic amino acid include, for example, salts with arginine, lysine, ortin and the like, and preferable examples of the salt with an acidic amino acid include, for example, salts with aspartic acid, glutamic acid, and the like.
[0078]
When the compound or a salt thereof obtained by using the screening method of the present invention is used as the above-mentioned therapeutic / prophylactic agent, it can be carried out according to conventional means, for example, a sugar-coated tablet or capsule, if necessary, It can be used orally as elixirs, microcapsules and the like, or parenterally in the form of injections such as sterile solutions or suspensions with water or other pharmaceutically acceptable liquids. For example, the compound or a salt thereof is admixed with pharmaceutically acceptable carriers, flavoring agents, excipients, vehicles, preservatives, stabilizers, binders, and the like in unit dosage form generally required for accepted pharmaceutical practice. Can be manufactured. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
Examples of additives that can be mixed with tablets, capsules and the like include binders such as gelatin, corn starch, tragacanth gum, gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, alginic acid and the like. Useful bulking agents, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, flavoring agents such as peppermint, reddish oil or cherry and the like are used. When the preparation unit form is a capsule, a liquid carrier such as oil and fat can be further contained in the above-mentioned type of material. Sterile compositions for injection can be formulated according to normal pharmaceutical practice such as dissolving or suspending the active substance in vehicles such as water for injection, and naturally occurring vegetable oils such as sesame oil, coconut oil and the like.
[0079]
Examples of aqueous solutions for injection include physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.), and suitable solubilizing agents, For example, alcohols (eg, ethanol, etc.), polyalcohols (eg, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), nonionic surfactants (eg, polysorbate 80) TM , HCO-50, etc.). Examples of the oily liquid include sesame oil and soybean oil, and may be used in combination with solubilizers such as benzyl benzoate and benzyl alcohol. Also, buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer, etc.), soothing agents (eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride, etc.), stabilizers (eg, human serum albumin, polyethylene glycol, etc.), You may mix | blend with a preservative (for example, benzyl alcohol, phenol etc.), an antioxidant, etc. The prepared injection solution is usually filled in a suitable ampoule.
The preparations obtained in this way are safe and low toxic, for example, human or warm-blooded animals (eg, mouse, rat, rabbit, sheep, pig, cow, horse, bird, cat, dog, monkey, chimpanzee, etc.) ) Can be administered.
The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the symptoms and the like. However, in the case of oral administration, generally, in anorexia nervosa patients of an adult (with a body weight of 60 kg), about 0.1 to 100 mg per day is preferable. Is about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg. In the case of parenteral administration, the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptoms, administration method, and the like. It is convenient to administer about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 10 mg per day by intravenous injection. In the case of other animals, the amount can be administered in terms of the weight per 60 kg.
[0080]
[Screening method B of the present invention]
The present invention relates to a compound which promotes or inhibits the activity of a promoter for the gene of the present invention, which comprises administering a test compound to a non-human animal deficient in OT7T022 gene expression of the present invention and detecting the expression of a reporter gene, or a compound thereof. A method for screening a salt is provided.
In the above-described screening method, the non-human animal deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention may be the non-human animal deficient in expression of the OT7T022 gene of the present invention, wherein the OT7T022 gene is inactivated by introducing a reporter gene, A gene that can be expressed under the control of a promoter for the OT7T022 gene is used.
Examples of the test compound include the same compounds as described above.
As the reporter gene, the same one as described above is used, and a β-galactosidase gene (lacZ), a soluble alkaline phosphatase gene, a luciferase gene and the like are preferable.
In a OT7T022 gene-deficient non-human animal of the present invention in which the OT7T022 gene has been replaced with a reporter gene, since the reporter gene is under the control of a promoter for the OT7T022 gene, by tracing the expression of the substance encoded by the reporter gene, The activity of the promoter can be detected.
[0081]
For example, when a part of the OT7T022 gene region is replaced with a β-galactosidase gene (lacZ) derived from Escherichia coli, β-galactosidase is originally expressed instead of OT7T022 in a tissue that expresses the OT7T022 gene. Therefore, for example, by staining with a reagent serving as a substrate of β-galactosidase such as 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-galactopyranoside (X-gal), OT7T022 can be easily prepared. The expression state in the animal body can be observed. Specifically, an OT7T022 gene-deficient mouse or a tissue section thereof is fixed with glutaraldehyde or the like, washed with phosphate buffered saline (PBS), and then stained with X-gal at room temperature or at around 37 ° C. After reacting for about 30 minutes to 1 hour, the β-galactosidase reaction may be stopped by washing the tissue sample with a 1 mM EDTA / PBS solution, and coloration may be observed. Further, mRNA encoding lacZ may be detected according to a conventional method.
For example, in the screening method, when a test compound is administered to a test animal and the expression of the reporter protein increases by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more, the test compound is OT7T022. It can be selected as a compound or a salt thereof that promotes the promoter activity for the gene. When the test compound is administered to a test animal, the expression of the reporter protein is reduced by about 10% or more, preferably about 30% or more, more preferably about 50% or more. In this case, the test compound can be selected as a compound that inhibits the promoter activity for the OT7T022 gene or a salt thereof.
The compound or its salt obtained by using the above-mentioned screening method is a substance selected from the above-mentioned test compounds, and is a compound or its salt that promotes or inhibits the promoter activity for the OT7T022 gene.
As a salt of the compound obtained by the screening method, a salt with a physiologically acceptable acid (eg, an inorganic acid or the like) or a base (eg, an organic acid or the like) is used. Acid addition salts are preferred. Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, For example, salts with succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, and the like are used.
[0082]
A compound or a salt thereof that promotes the promoter activity of the OT7T022 gene can promote the expression of OT7T022 and promote the function of OT7T022, and thus, for example, a pain sensation disorder, an eye disease, a pituitary disease, a muscular disease, a heart disease, Blood disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal walking, increased body temperature, Decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), decreased muscle strength, especially muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, It can be used as a medicament such as an agent for preventing, treating or ameliorating diseases such as a decrease in platelet count, an increase in spontaneous movement (particularly at night) or a decrease in muscle strength.
On the other hand, a compound or a salt thereof that inhibits the promoter activity of the OT7T022 gene inhibits the expression of OT7T022 and can inhibit the function of OT7T022. Therefore, for example, muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, Use as a medicament such as an agent for preventing / treating / improving platelet count increase or decrease in spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement), analgesic, morphine analgesic, morphine tolerance avoidant, morphine dependence avoidant can do.
Furthermore, compounds derived from the compounds obtained by the above screening can be used in the same manner.
[0083]
A drug containing the compound or its salt obtained by the screening method can be produced in the same manner as the drug containing the compound or its salt obtained by the above-mentioned screening method A.
The preparation obtained in this way is safe and low toxic, and thus can be used, for example, in humans or mammals (eg, rat, mouse, guinea pig, rabbit, sheep, pig, cow, horse, cat, dog, monkey, etc.). Can be administered.
The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the target disease, the subject of administration, the administration route, and the like. For example, when a substance that promotes the promoter activity of the OT7T022 gene for the purpose of treating painful disorders is orally administered, it is generally used. For an adult patient (assuming a body weight of 60 kg), the compound or a salt thereof is administered in an amount of about 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1.0 to 20 mg per day. When administered parenterally, the single dose of the compound or a salt thereof varies depending on the administration subject, the target disease, and the like. For example, a compound or a compound thereof that promotes a promoter activity for the OT7T022 gene for the purpose of treating a pain sensation disorder. When the salt is usually administered to an adult patient (with a body weight of 60 kg) in the form of an injection, the substance is administered in an amount of about 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 20 mg per day. It is convenient to administer about 1 to 10 mg by intravenous injection. In the case of other animals, the amount can be administered in terms of the weight per 60 kg.
[0084]
As described above, the non-human animal deficient in OT7T022 gene expression of the present invention is extremely useful for screening for a compound or a salt thereof that promotes or inhibits the activity of the OT7T022 gene promoter, and various diseases caused by OT7T022 gene expression deficiency. Can greatly contribute to the investigation of the cause or development of preventive, therapeutic and ameliorating drugs.
Further, using a DNA containing the promoter region of the OT7T022 gene, genes encoding various proteins are ligated downstream thereof and injected into egg cells of an animal to produce a so-called transgenic animal (transgenic animal). For example, it is possible to specifically synthesize the peptide and examine its action in a living body. Furthermore, by binding an appropriate reporter gene to the above promoter portion and establishing a cell line that expresses the reporter gene, a search system for a low-molecular compound having an action of specifically promoting or suppressing the production ability of OT7T022 itself in the body. Can be used as
[0085]
(10) Elucidation of the mechanism of action of various drugs
By using OT7T022, it is possible to confirm whether or not various drugs exert a pharmacological effect via OT7T022.
That is, the present invention
(1) A pain disorder, an eye disorder, a pituitary disorder, a muscular disorder, a heart disorder, a blood disorder, a renal disorder, an immune disorder, an adrenal dysfunction disorder, an eating disorder, obesity, an affective disorder, characterized by using OT7T022. Schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, self-issued movement (particularly nocturnal movement) Prevention / treatment / improvement, analgesic, morphine analgesic, morphine tolerance avoidance for increase, decrease in muscle strength, decrease in body temperature, increase in white blood cell count, increase in platelet count or decrease in spontaneous movement (particularly nighttime spontaneous movement) A method for confirming that a drug or the like binds to OT7T022,
(2) a pain disorder, an eye disorder, a pituitary disorder, a muscular disorder, a heart disorder, a blood disorder, a kidney disorder, an immune disorder, an adrenal dysfunction disorder, an eating disorder, obesity, an affective disorder, characterized by using OT7T022. Schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, self-issued movement (particularly nocturnal movement) Increased muscle strength, especially muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement (particularly nocturnal spontaneous movement) or weakness A method for confirming that a prophylactic, therapeutic, or ameliorating drug is an agonist for OT7T022,
(3) A preventive, therapeutic or ameliorating drug for muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement (particularly nighttime self-issued movement) characterized by using OT7T022. A method for confirming that an analgesic, a morphine analgesic action promoter, a morphine tolerance avoidance drug, etc. are antagonists to OT7T022,
(4) The screening method according to any one of (1) to (3), wherein the amount of each drug and OT7T022 is measured when the drug is brought into contact with OT7T022.
This confirmation method can be performed by using the above-mentioned drug in place of the test compound in the above-mentioned method for screening a compound or a salt thereof that alters the binding between RFRP and OT7T022.
The kit for a confirmation method of the present invention is a kit for screening a compound that alters the binding property between RFRP and OT7T022, and contains the above drug in place of the test compound.
As described above, by using the confirmation method of the present invention, it can be confirmed that various drugs that are commercially available or under development are exhibiting pharmacological effects via OT7T022.
[0086]
In the present specification and drawings, bases, amino acids, and the like are indicated by abbreviations based on the abbreviations by IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature or abbreviations commonly used in the art, and examples thereof are described below. When an amino acid can have an optical isomer, the L-form is indicated unless otherwise specified.
DNA: deoxyribonucleic acid
cDNA: complementary deoxyribonucleic acid
A: Adenine
T: Thymine
G: Guanine
C: Cytosine
I: Inosine
R: adenine (A) or guanine (G)
Y: thymine (T) or cytosine (C)
M: adenine (A) or cytosine (C)
K: guanine (G) or thymine (T)
S: guanine (G) or cytosine (C)
W: adenine (A) or thymine (T)
B: guanine (G), guanine (G) or thymine (T)
D: adenine (A), guanine (G) or thymine (T)
V: adenine (A), guanine (G) or cytosine (C)
N: adenine (A), guanine (G), cytosine (C) or thymine (T) or unknown or other base
RNA: ribonucleic acid
mRNA: messenger ribonucleic acid
dATP: deoxyadenosine triphosphate
dTTP: deoxythymidine triphosphate
dGTP: deoxyguanosine triphosphate
dCTP: deoxycytidine triphosphate
ATP: Adenosine triphosphate
EDTA: Ethylenediaminetetraacetic acid
SDS: Sodium dodecyl sulfate
BHA: Benzhydrylamine
pMBHA: p-methylbenzhydrylamine
Tos: p-toluenesulfonyl
Bzl: benzyl
Bom: benzyloxymethyl
Boc: t-butyloxycarbonyl
DCM: dichloromethane
HOBt: 1-hydroxybenztriazole
DCC: N, N'-dicyclohexylcarbodiimide
TFA: trifluoroacetic acid
DIEA: diisopropylethylamine
Gly: glycine
Ala or A: Alanine
Val or V: Valine
Leu or L: Leucine
Ile or I: isoleucine
Ser or S: Serine
Thr or T: threonine
Cys or C: cysteine
Met or M: methionine
Glu or E: glutamic acid
Asp or D: aspartic acid
Lys or K: lysine
Arg or R: arginine
His or H: histidine
Phe or F: phenylalanine
Tyr or Y: Tyrosine
Trp or W: tryptophan
Pro or P: Proline
Asn or N: asparagine
Gln or Q: glutamine
pGlu: pyroglutamic acid
[0087]
The sequence numbers in the sequence listing in the present specification indicate the following sequences.
[SEQ ID NO: 1]
1 shows the amino acid sequence (human type) of RFRP.
[SEQ ID NO: 2]
This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
[SEQ ID NO: 3]
1 shows the amino acid sequence (human type) of RFRP.
[SEQ ID NO: 4]
This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3.
[SEQ ID NO: 5]
2 shows the amino acid sequence (bovine type) of RFRP.
[SEQ ID NO: 6]
This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5.
[SEQ ID NO: 7]
2 shows the amino acid sequence (rat type) of RFRP (before recloning).
[SEQ ID NO: 8]
This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7.
[SEQ ID NO: 9]
2 shows the amino acid sequence (mouse type) of RFRP.
[SEQ ID NO: 10]
This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9.
[SEQ ID NO: 11]
2 shows the amino acid sequence of rat-derived G protein-coupled receptor protein rOT7T022.
[SEQ ID NO: 12]
1 shows the nucleotide sequence of cDNA encoding rat-derived G protein-coupled receptor protein rOT7T022.
[SEQ ID NO: 13]
2 shows the amino acid sequence of an RFRP partial peptide.
[SEQ ID NO: 14]
2 shows the amino acid sequence of an RFRP partial peptide.
[SEQ ID NO: 15]
2 shows the amino acid sequence of an RFRP partial peptide.
[SEQ ID NO: 16]
This shows a base sequence encoding a peptide containing the 81st (Met) to 92nd (Phe) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
[SEQ ID NO: 17]
This shows a base sequence encoding a peptide containing the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
[SEQ ID NO: 18]
This shows a base sequence encoding a peptide containing the amino acid sequence from position 124 (Val) to position 131 (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
[SEQ ID NO: 19]
This shows a base sequence encoding a peptide containing the 1st (Met) to 92nd (Phe) amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
[SEQ ID NO: 20]
This shows the base sequence encoding the peptide containing the 1st (Met) -112nd (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
[SEQ ID NO: 21]
This shows the base sequence encoding the peptide containing the 1st (Met) to 131st (Phe) amino acid sequences of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
[SEQ ID NO: 22]
2 shows the amino acid sequence (rat type) of RFRP (after recloning).
[SEQ ID NO: 23]
This shows the base sequence of DNA encoding RFRP having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22.
[SEQ ID NO: 24]
1 shows an amino acid sequence encoding human-derived G protein-coupled receptor protein hOT7T022.
[SEQ ID NO: 25]
This shows the base sequence of DNA encoding hOT7T022 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24.
[SEQ ID NO: 26]
This shows the base sequence of DNA encoding hOT7T022 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24.
[SEQ ID NO: 27]
2 shows a partial amino acid sequence of mouse-derived G protein-coupled receptor protein OT7T022.
[SEQ ID NO: 28]
This shows the base sequence of genomic DNA encoding mouse-derived OT7T022 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27.
[SEQ ID NO: 29]
3 shows the nucleotide sequence of a primer used in Example 3.
[SEQ ID NO: 30]
3 shows the nucleotide sequence of a primer used in Example 3.
[SEQ ID NO: 31]
3 shows the nucleotide sequence of a primer used in Example 3.
[SEQ ID NO: 32]
This shows the base sequence of genomic DNA encoding mouse-derived OT7T022 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27. This is a sequence specifying n in the base sequence represented by SEQ ID NO: 28.
[0088]
The transformant Escherichia coli JM109 / pKS-OT7T0221, which was obtained in Example 1 described below, is an independent administrative corporation of 1-1, Higashi 1-1, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture since October 17, 2002 (zip code 305-8566). Deposited at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Patent Organism Depositary under the deposit number FERM BP-8210.
The transformant Escherichia coli JM109 / pKS-OT7T0222 obtained in Example 1 described below is an independent administrative corporation of Chuo No. 6 (Zip code 305-8566), 1-1-1, Higashi, Tsukuba, Ibaraki, Japan since October 17, 2002. Deposited at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary under the deposit number FERM BP-8211.
The transformant Escherichia coli JM109 / pKS-OT7T0223 obtained in Example 1 described below is an independent administrative corporation of 1-1, Higashi 1-1-chome, Tsukuba, Ibaraki, Japan since October 17, 2002 (postal code 305-8566). Deposited at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary under the deposit number FERM BP-8212.
The transformant Escherichia coli JM109 / pKS-OT7T0224 obtained in Example 1 described below is an independent administrative corporation of Chuo No. 6 (Zip code 305-8566), 1-1 1-1 Higashi, Tsukuba-shi, Ibaraki Prefecture from October 17, 2002. Deposited at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Patent Organism Depositary under the deposit number FERM BP-8213.
The transformant Escherichia coli JM109 / p022Tgv-2 obtained in Example 2 to be described later is an independent administrative corporation of Chuo No. 6 (Postal code 305-8566), 1-1 1-1 Higashi, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture since October 17, 2002. Deposited at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary under the deposit number FERM BP-8214.
[0089]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to Examples, but the present invention is not limited thereto. In addition, the genetic manipulation method using Escherichia coli followed the method described in Molecular cloning.
[0090]
Example 1 Cloning of mouse OT7T022
Rat OT7T022 cDNA (SEQ ID NO: 12, WO00 / 29441) was used as a probe. A 580-1170 bp DNA fragment of rat cDNA was prepared as a probe (PCR-DIG probe synthesis kit, Roche Diagnostics). As a result of performing 1st plaque hybridization on a mouse 129SvJ lambda genomic library (Stratagene) using the probe, 6 positive plaques were obtained. Six positive plaques obtained by the first plaque hybridization were subjected to 2nd plaque hybridization to isolate two positive clones.
As a result of Southern hybridization, it was found that the coding region of OT7T022 was present in a BamHI fragment of about 4.5 kbp. The nucleotide sequence of the DNA fragment cloned by a conventional method was examined by a sequencer (Perkin Elmer), and as a result, it was a fragment having 94% homology to the 3 ′ exon (0.9 kbp) of rat OT7T022, It was confirmed to be DNA. Further, a 3.8 kbp 5 'side and a 5.5 kbp 3' side of the Bam HI fragment encoding OT7T022 were cloned. Southern analysis revealed that there was one exon upstream from the 3 'exon by more than 1.8 kbp (SEQ ID NO: 28 or SEQ ID NO: 32).
The mouse OT7T022 genomic DNA fragment was transformed into Escherichia coli JM109 strain, and the transformant Escherichia coli JM109 / pKS-OT7T0221, the transformant Escherichia coli JM109 / pKS-OT7T0222, the transformant EscherichiaTJK02T02K2 The body Escherichia coli JM109 / pKS-OT7T0224 was obtained.
[0091]
Example 2 Construction of targeting vector and production of ES homologous recombination
The construction of the OT7T022 targeting vector is as follows: 3 ′ exon 5 ′ Sac I-Bam HI fragment (3.2 kbp), 3 ′ BstEII-Xho I fragment (5.2 kbp), neomycin resistance gene and diphtheria toxin gene To complete the construction of the OT7T022 targeting vector p022Tgv-2 in which 1.2 kbp of the 3 ′ exon was deleted (FIG. 1). The OT7T022 targeting vector p022Tgv-2 was transformed into Escherichia coli JM109 strain to obtain a transformant Escherichia coli JM109 / p022Tgv-2. The OT7T022 targeting vector was introduced into ES cells derived from mouse 129SvEv line (AB2.2 line) by electroporation. Electroporation was performed using a Gene Pulser electroporation system (manufactured by Bio-Rad) under the conditions of a voltage of 230 V, a resistance of 500 μF, and a DNA solution concentration of 30 μg / ml.
The gene transfer experiment was performed three times, and 1000 or more neomycin-resistant strains were obtained in each case. The neomycin-resistant 739 strains obtained by the targeting vector p022Tgv-2 were cultured in a 24-well plate, frozen and thawed at -70 ° C, treated with Proteinase K, and then DNA was extracted by ethanol precipitation.
Among them, the BamHI-XhoI 600 bp fragment (region outside the genome used for the targeting vector) 5 ′ to the genome of the 595 strain was used as a probe, and Southern hybridization was performed. As a result, a 5.4 kb band presumed to be a homologous recombinant was observed in 6 strains (wild-type 3.8 kb).
For the six ES cell lines (Nos. 126, 130, 283, 491, 532, and 545) in which DNA fragments considered to be homologous recombinants were detected, Southern analysis was performed for reconfirmation. After culturing each cryopreserved cell, DNA was extracted, and after BamHI-XhoI digestion, Southern hybridization was carried out using the above 600 bp fragment as a probe. As a result, a 5.4 kb fragment (only a 3.8 kb fragment was observed in the wild type) was reconfirmed in all cells. In addition, as a result of Southern hybridization using the neomycin resistance gene as a probe, a band common to the wild type and the recombinant was found around 2 kb, but a 5.4 kb band was confirmed only in the recombinant. And that all six ES cells were homologous recombinants.
Of the six homologous recombinants, the three homologous recombinant cell lines (Nos. 130, 283, and 532) which had good growth were used for karyotype analysis. 2 The cells were cultured until confluent in a flask, to which colcemide was added (final cell density: 0.1 μg / ml), and cultured at 37 ° C. for 2 hours. After washing with PBS, the cells were trypsinized and centrifuged at 1,000 rpm for 5 minutes. After adding 4 ml of 0.075 M KCl to the pellet and leaving it at room temperature for 20 minutes, a drop of Carnoy's solution (acetic acid: methanol ratio = 1: 3) was added to the cell suspension, followed by gentle suspension. The mixture was allowed to stand at room temperature for 60 minutes, centrifuged, and the pellet was gently suspended with 4 ml of Carnoy's solution, followed by standing at room temperature. This was repeated about 5 times for 30 minutes. After centrifugation, 2-3 ml of Carnoy's solution was added to the pellet to adjust to an appropriate concentration, and 2-3 drops of the cell suspension were dropped on a slide glass. After air-drying, the cells were stained with a 3% Giemsa solution, and chromosomes in the metaphase were observed under a microscope. As a result, the ratio of cells having a normal karyotype was 61 to 69%. Since no karyotype abnormality was observed in the three homologous recombinant cell lines, the cell line No. 283 were selected.
[0092]
Example 3 Preparation of knockout mouse
Homologous recombinant cell line No. 283 was injected into a C57BL / 6 strain mouse blastocyst by a conventional method. The injected blastocysts were transferred to pseudopregnant mouse oviducts obtained by crossing with vasectomized mice separately to make them pregnant. For the 283 strain, about half of the transplanted embryos were born as pups, and 75% were chimeric mice. Male chimeric mice were bred to C57BL / 6 strain female mice to transfer to germ line in offspring and to obtain heterozygous mice.
By crossing the chimera with the C57BL strain mouse, 51 ES cell-derived mice were obtained. Genomic DNA was purified from the mouse tail, and the conditions for genotyping by PCR were examined first. As a result of the examination, the primers share the 3 'side of the targeted region (AGGTGCTCAGTGTGTAGAAGTGGG (Sequence Cancer No .: 29)), and the 5' side is used for wild-type detection. SEQ ID NO: 30)), the neomycin resistance gene internal sequence (TCATAGCCGAATACGGTCTCCCAC (SEQ ID NO: 31)) for detecting mutants, and KOD-plus- (manufactured by Toyobo Co., Ltd.) was used as the polymerase. For the wild type, only the 300 bp fragment was detected, and in the case of a hetero-deficient individual, the gene was determined by PCR designed to detect the 300 bp and 600 bp fragments. As a result, a hetero-deficient mouse could be obtained. Next, Southern hybridization was performed to confirm gene deletion.
[0093]
Example 4 Changes in organ weight
Eight-week-old male homozygous mice were sacrificed by cervical dislocation and dissected. Each major organ was removed and weighed. As a result, no difference was observed in organ weight between wild-type mice and homo-deficient mice. As a result of organ weight measurement at 13 weeks of age, a significant increase was observed in homozygous mice in thymus compared to wild type mice.
[0094]
Example 5 Body weight, water consumption, food intake
Changes over time were examined for body weight, food consumption and water consumption of homo-deficient mice. After weaning, the change in body weight of male homo-deficient mice was not different from that of wild-type mice. There was no difference between the wild-type and male / female homo-deficient mice in the time course of food consumption and water consumption.
[0095]
Example 6 Abnormal behavior
Daily activities and appearance observations were performed according to the method of Irwin (1968). As a result, abnormal walking was observed in 6-month-old homozygous mice (2 out of 2 males). In another lot of homo-deficient mice (7 weeks old), backward walking was observed, and walking abnormalities such as dragging the hind limbs were also observed. Some individuals showed tremor or convulsions, but the degree varied between individuals. These behavioral abnormalities were observed in hybrids of the C57BL / 6J and 129SvEv lines.
[0096]
Example 7 Response to noxious stimuli
A hot plate test (e.g., Wilson SG, Mogil JS. Behav Brain Res 125: 65-73, 2001) used to evaluate the response to a noxious stimulus in mice is used to evaluate the response to a noxious stimulus. Hot plate method).
The hot plate test was performed using a commercially available hot plate type analgesic effect measuring device. First, a glass cylinder having a diameter of 15 cm and a height of 20 cm was placed on a hot plate heated to 55 ° C., the mouse was placed in the cylinder, and the time required for the mouse to lick its hind limbs or to exhibit behavior such as jumping was measured. As a result, licking or jumping time of hind limbs was significantly delayed in male homo-deficient mice.
[0097]
Example 8 Attack behavior
When the behavior of male homo-deficient mice was observed, aggressiveness to other male and female mice was observed compared to wild-type mice. Further, in some mice, tail rattling was observed during handling, and a slight tailing reaction was also observed during rearing. The attack response latency of homo-deficient mice was measured by a method in which two male mice were placed in an observation cage to observe mutual aggressive behavior (Nature 378: 383-386, 1995) and (Nature 265: 1875-1878, 1994). did. As a result, the latency to aggressive behavior was significantly shorter in homo-deficient mice. These behaviors were observed in hybrids of the C57BL / 6J and 129SvEv lines.
[0098]
Example 9 Morphine administration test
Using C57BL / 6J congenic strain 11-week-old male homo-deficient mouse, immersed in a water bath containing 52 ° C. water to a position 3 cm from the tail tip and measured the time until the tail came out of the water bath. (Tail immersion test, also called hot water method).
The cut off time of the experiment was 20 seconds. The homo-deficient mice and the C57BL / 6J congenic strain 11-week-old wild-type mice were divided into a vehicle-administered group and a morphine-administered group, respectively. As a result of performing the above-mentioned tail immersion test before administration, there was no significant difference in the average response time in all groups. Next, after 15 minutes and 30 minutes after intraperitoneal administration of morphine (5 mg per kg body weight) or vehicle, a tail immersion test was performed by the same method. The reaction time of the morphine-treated male homo-deficient mouse group was longer than that of the other groups. There was a difference in the response latency between wild-type mice and homo-deficient mice in the tail immersion test before morphine administration, but the latency significantly increased after 15 and 30 minutes in wild-type mice administered with morphine compared to before administration. On the other hand, in the homo-deficient mice to which morphine was administered, the latency of the response to the heat stimulus after administration of morphine was not different from that before administration of morphine.
[0099]
【The invention's effect】
RFRP and OT7T022 or DNAs encoding them can be used to prevent muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. It is useful as a therapeutic / improving drug.
Further, non-human animals deficient in O7T022 gene expression are useful for screening for preventive, therapeutic and ameliorating drugs for the above-mentioned diseases.
[0100]
[Sequence list]
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[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows a schematic diagram of the OT7T022 targeting vector.

Claims (56)

配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤。A polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof or a salt thereof, a muscular disease, an adrenal dysfunction, Agent for preventing, treating or improving convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. ポリペプチドが配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドである請求項１記載の剤。The agent according to claim 1, wherein the polypeptide is a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, or SEQ ID NO: 22. . 部分ペプチドが、
（ｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第５６番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｌｙｓ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｌｅｕ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｌａ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ａｓｐ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｖ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、または
（ｘｖ）上記（ｘｉ）〜（ｘｉｖ）の欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチドである請求項１記載の剤。The partial peptide is
(I) The 56th position (Ser) to the 92nd position (Phe), the 70th position (Met) to the 92nd position (Phe), and the 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3 ( A peptide comprising an amino acid sequence of Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe);
(Ii) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3,
(Iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th (As) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3. Asn) to 131st (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) ) Or a peptide consisting of the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence;
(Iv) 58th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Lys) to 92nd (Phe), 73rd (Met) to 92nd of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A peptide having an amino acid sequence of the (Phe), the 81st (Met) to the 92nd (Phe) or the 84th (Ser) to the 92nd (Phe);
(V) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Leu) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5,
(Vi) The 101st (Ser) to 131st (Phe), the 104th (Ala) to the 131st (Phe), and the 115th (Asn) to 131st of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) or 127th A peptide consisting of the amino acid sequence of (Leu) to 131st (Phe);
(Vii) the 58th position (Ser) to the 94th position (Phe), the 72nd position (Val) to the 94th position (Phe), and the 75th position (Met) to the 94th position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A peptide having an amino acid sequence of the (Phe), the 83rd (Val) to the 94th (Phe) or the 84th (Pro) to the 94th (Phe);
(Viii) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 125th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A peptide consisting of the amino acid sequence of the (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe);
(Ix) 58th (Ser) to 94th (Phe), 72nd (Asp) to 94th (Phe), 75th (Met) to 75th (She) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence;
(X) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 120th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 125th (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence;
(Xi) a peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x) are deleted,
(Xii) a peptide consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiii) a peptide having an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiv) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x), or (xv) deletion of (xi) to (xiv). The agent according to claim 1, which is a peptide comprising an amino acid sequence obtained by combining addition, insertion and substitution. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤。Muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior comprising a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a DNA encoding a partial peptide thereof An agent for preventing, treating or improving gait abnormalities, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. ＤＮＡが配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９または配列番号：２２で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするＤＮＡである請求項４記載の剤。The DNA encoding a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 22. Agents as described. ＤＮＡが、
（ｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第５６番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｓｅｒ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉｉ）配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７０番目（Ｌｙｓ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第７３番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）、第８１番目（Ｍｅｔ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｓｅｒ）〜第９２番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１１２番目（Ｌｅｕ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）配列番号：５で表わされるアミノ酸配列の第１０１番目（Ｓｅｒ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１０４番目（Ａｌａ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１１５番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２４番目（Ｖａｌ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２５番目（Ｐｒｏ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）、第１２６番目（Ａｓｎ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）または第１２７番目（Ｌｅｕ）〜第１３１番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉｉｉ）配列番号：９で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第５８番目（Ｓｅｒ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７２番目（Ａｓｐ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第７５番目（Ｍｅｔ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）、第８３番目（Ｖａｌ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）または第８４番目（Ｐｒｏ）〜第９４番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘ）配列番号：７または２２で表わされるアミノ酸配列の第１１８番目（Ｐｈｅ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１１９番目（Ｐｒｏ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）、第１２０番目（Ｓｅｒ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）または第１２１番目（Ｌｅｕ）〜第１２５番目（Ｐｈｅ）のアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｉｉ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｘｉｖ）上記（ｉ）〜（ｘ）のペプチドのアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、または
（ｘｖ）上記（ｘｉ）〜（ｘｉｖ）の欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチド、
をコードするＤＮＡである請求項４記載の剤。DNA is
(I) The 56th position (Ser) to the 92nd position (Phe), the 70th position (Met) to the 92nd position (Phe), and the 73rd position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3 ( A peptide comprising an amino acid sequence of Met) to 92nd (Phe), 81st (Met) to 92nd (Phe) or 84th (Ser) to 92nd (Phe);
(Ii) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Ser) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3,
(Iii) 101st (Asn) to 131st (Phe), 104th (Asn) to 131st (Phe), 115th (As) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3. Asn) to 131st (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) ) Or a peptide consisting of the 127th (Leu) to 131st (Phe) amino acid sequence;
(Iv) 58th (Ser) to 92nd (Phe), 70th (Lys) to 92nd (Phe), 73rd (Met) to 92nd of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A peptide having an amino acid sequence of the (Phe), the 81st (Met) to the 92nd (Phe) or the 84th (Ser) to the 92nd (Phe);
(V) a peptide consisting of the 101st (Ser) to 112th (Leu) amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5,
(Vi) The 101st (Ser) to 131st (Phe), the 104th (Ala) to the 131st (Phe), and the 115th (Asn) to 131st of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Phe), 124th (Val) to 131st (Phe), 125th (Pro) to 131st (Phe), 126th (Asn) to 131st (Phe) or 127th A peptide consisting of the amino acid sequence of (Leu) to 131st (Phe);
(Vii) the 58th position (Ser) to the 94th position (Phe), the 72nd position (Val) to the 94th position (Phe), and the 75th position (Met) to the 94th position of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A peptide having an amino acid sequence of the (Phe), the 83rd (Val) to the 94th (Phe) or the 84th (Pro) to the 94th (Phe);
(Viii) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 125th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A peptide consisting of the amino acid sequence of the (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe);
(Ix) 58th (Ser) -94th (Phe), 72nd (Asp) -94th (Phe), 75th (Met)-of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 94th (Phe), 83rd (Val) to 94th (Phe) or 84th (Pro) to 94th (Phe) amino acid sequence;
(X) 118th (Phe) to 125th (Phe), 119th (Pro) to 125th (Phe), 120th (Ser) to 120th (Phe) of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or 22 A peptide consisting of the 125th (Phe) or 121st (Leu) to 125th (Phe) amino acid sequence;
(Xi) a peptide consisting of an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the peptides (i) to (x) have been deleted,
(Xii) a peptide consisting of an amino acid sequence obtained by adding 1 to 5 amino acids to the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiii) a peptide comprising an amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids have been inserted into the amino acid sequence of the peptide of (i) to (x),
(Xiv) a peptide consisting of an amino acid sequence substituted with 1 to 5 amino acids in the amino acid sequence of the above-mentioned peptide (i) to (x), or (xv) deletion of the above (xi) to (xiv) A peptide consisting of an amino acid sequence combining addition, insertion and substitution,
5. The agent according to claim 4, which is a DNA encoding 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量の変化または筋力変化の診断剤。Muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior comprising a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a DNA encoding a partial peptide thereof Diagnostic agent for abnormalities in walking, abnormalities in body temperature, changes in white blood cell count, changes in platelet count, changes in spontaneous movement or changes in muscle strength. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善剤。Muscle disease and adrenal function containing an antibody against a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof or a salt thereof An agent for preventing, treating, or ameliorating disorders, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, or decreased spontaneous movement. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量の変化、筋力変化の診断剤。Muscle disease and adrenal function containing an antibody against a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof or a salt thereof Diagnostic agent for disorders, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, changes in body temperature, changes in white blood cell count, changes in platelet count, changes in spontaneous movement, and changes in muscle strength. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善剤。An antisense DNA containing a nucleotide sequence complementary to a DNA encoding a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof, or a part thereof, A preventive, therapeutic or ameliorating agent for muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous motor activity. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤。Muscle disease or adrenal dysfunction comprising a compound having an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a compound thereof or a salt thereof, which increases the expression level of a partial peptide thereof An agent for preventing, treating or improving convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelets, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善剤。Muscle disease or adrenal dysfunction containing a compound or a salt thereof that decreases the expression level of a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof , A preventive, therapeutic or ameliorating agent for decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤。Muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior containing the receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide or its salt An agent for preventing, treating or improving gait abnormalities, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. ＯＴ７Ｔ０２２が配列番号：１１または配列番号：２４で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質である請求項１３記載の剤。14. The agent according to claim 13, wherein OT7T022 is a receptor protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 24. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤。Muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressiveness containing DNA encoding receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 An agent for preventing, treating, or improving behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. ＤＮＡが配列番号：１１または配列番号：２４で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡである請求項１５記載の剤。16. The agent according to claim 15, wherein the DNA is a DNA encoding a receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 24. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量の変化または筋力変化の診断剤。Muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressiveness containing DNA encoding receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Diagnostic agent for behavior, abnormal gait, change in body temperature, change in white blood cell count, change in platelet count, change in spontaneous movement or change in muscle strength. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善剤。A muscular disease, an adrenal dysfunction, a decrease in body temperature comprising an antibody against the receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide or a salt thereof, An agent for preventing, treating or improving white blood cell count, platelet count or spontaneous movement. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温変化、白血球数変化、血小板数変化、自発行動量の変化または筋力変化の診断剤。Muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, and attack comprising an antibody against the receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof. A diagnostic agent for sexual behavior, abnormal gait, changes in body temperature, changes in white blood cell count, changes in platelet count, changes in spontaneous movement or changes in muscle strength. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善剤。Antisense DNA containing a base sequence complementary to DNA encoding receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, or a part thereof A preventive, therapeutic or ameliorating agent for muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement, comprising 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニストを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤。Muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, attack comprising a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or an agonist thereof. Agent for preventing, treating or improving sexual behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善剤。A muscular disease, an adrenal dysfunction, a decrease in body temperature comprising an antagonist to the receptor protein OT7T022 having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof, An agent for preventing, treating or improving white blood cell count, platelet count or spontaneous movement. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤。Muscle disease or adrenal function containing a compound or a salt thereof that increases the expression level of receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 An agent for preventing, treating, or improving disorders, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. 配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善剤。Muscle disease or adrenal function comprising a compound or a salt thereof that reduces the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 An agent for preventing, treating, or ameliorating disorders, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count, or decreased spontaneous movement. 哺乳動物に対して、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩、
（ｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善方法。For mammals,
(I) a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;
(Ii) a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof,
(Iii) a compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1,
(Iv) a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof,
(V) a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11;
(Vi) a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, an agonist for a partial peptide thereof or a salt thereof, or (vii) represented by SEQ ID NO: 11 Muscular disease and adrenal dysfunction characterized by administering an effective amount of a compound or a salt thereof that increases the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence , Convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. 哺乳動物に対して、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（ｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善方法。For mammals,
(I) an antibody against a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;
(Ii) an antiserum containing a base sequence complementary to a DNA encoding a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof or a part thereof; Sense DNA,
(Iii) a compound or a salt thereof that reduces the expression level of a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof,
(Iv) an antibody against the receptor protein OT7T022, which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof,
(V) contains a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof, or a part thereof, having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Antisense DNA,
(Vi) an antagonist to the receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide or its salt, or (vii) represented by SEQ ID NO: 11 Muscular disease, adrenal dysfunction characterized by administering an effective amount of a compound or a salt thereof that reduces the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence , A method for preventing, treating, or improving a decrease in body temperature, an increase in the number of white blood cells, an increase in the number of platelets, or a decrease in the amount of self-issue. 筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善剤を製造するための
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩、
（ｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用。(I) for producing an agent for preventing, treating or improving muscle disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. A polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof;
(Ii) a DNA encoding a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, (iii) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 A compound or a salt thereof that increases the expression level of a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof,
(Iv) a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof or a salt thereof,
(V) a DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11;
(Vi) a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, an agonist for a partial peptide thereof or a salt thereof, or (vii) represented by SEQ ID NO: 11 Use of a compound or a salt thereof that increases the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence. 筋疾患、副腎機能障害、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善剤を製造するための
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（ｖ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用。(I) identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 for the manufacture of a prophylactic, therapeutic, or ameliorating agent for muscular disease, adrenal dysfunction, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement Or an antibody against a polypeptide containing a substantially identical amino acid sequence, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof,
(Ii) an antiserum containing a base sequence complementary to a DNA encoding a polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof or a part thereof; Sense DNA,
(Iii) a compound or a salt thereof that reduces the expression level of a polypeptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof,
(Iv) an antibody against the receptor protein OT7T022, which has the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, a partial peptide thereof, or a salt thereof,
(V) contains a nucleotide sequence complementary to the DNA encoding the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof, or a part thereof, having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 Antisense DNA,
(Vi) an antagonist to the receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, its partial peptide or its salt, or (vii) represented by SEQ ID NO: 11 Use of a compound or a salt thereof that reduces the expression level of the receptor protein OT7T022 or a partial peptide thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence. ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された哺乳動物胚幹細胞。A mammalian embryonic stem cell in which the OT7T022 gene has been inactivated. 薬剤耐性である請求項２９記載の胚幹細胞。30. The embryonic stem cell according to claim 29, which is drug resistant. 薬剤がネオマイシンである請求項２９記載の胚幹細胞。30. The embryonic stem cell according to claim 29, wherein the drug is neomycin. レポーター遺伝子の挿入によりＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された請求項２９記載の胚幹細胞。30. The embryonic stem cell according to claim 29, wherein the OT7T022 gene has been inactivated by insertion of the reporter gene. レポーター遺伝子がｌａｃＺ遺伝子である請求項３２記載の胚幹細胞。33. The embryonic stem cell according to claim 32, wherein the reporter gene is a lacZ gene. 哺乳動物がマウスである請求項２９記載の胚幹細胞。30. The embryonic stem cell according to claim 29, wherein the mammal is a mouse. ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が配列番号：１２、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２８または配列番号：３２で表わされる塩基配列を含有する遺伝子である請求項２９記載の胚幹細胞。30. The embryonic stem cell according to claim 29, wherein the OT7T022 gene is a gene containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28 or SEQ ID NO: 32. ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子発現不全非ヒト哺乳動物。A non-human mammal deficient in OT7T022 gene expression. レポーター遺伝子の挿入によりＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が不活性化された請求項３６記載の動物。The animal according to claim 36, wherein the OT7T022 gene has been inactivated by the insertion of the reporter gene. 非ヒト哺乳動物がマウスである請求項３６記載の動物。The animal according to claim 36, wherein the non-human mammal is a mouse. ＯＴ７Ｔ０２２遺伝子が配列番号：１２、配列番号：２８または配列番号：３２で表わされる塩基配列を含有する遺伝子である請求項３６記載の動物。The animal according to claim 36, wherein the OT7T022 gene is a gene containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 28 or SEQ ID NO: 32. 野生型非ヒト哺乳動物に比べて、胸腺退縮遅延がみられる請求項３６記載の動物。37. The animal of claim 36, wherein thymic retraction is delayed as compared to a wild-type non-human mammal. 野生型非ヒト哺乳動物に比べて、後退歩行がみられる請求項３６記載の動物。37. The animal of claim 36, wherein the animal has a regression gait as compared to a wild-type non-human mammal. 野生型非ヒト哺乳動物に比べて、侵害刺激に対して鈍麻がみられる請求項３６記載の動物。37. The animal of claim 36, wherein the animal is desensitized to noxious stimuli as compared to a wild-type non-human mammal. 野生型非ヒト哺乳動物に比べて、攻撃的行動が多い請求項３６記載の動物。37. The animal of claim 36, wherein the animal has more aggressive behavior than a wild-type non-human mammal. 野生型非ヒト哺乳動物に比べて、腎臓絶対重量または胸腺絶対重量の低下がみられる請求項３６記載の動物。The animal according to claim 36, wherein the absolute weight of the kidney or the absolute weight of the thymus is reduced as compared to a wild-type non-human mammal. 野生型非ヒト哺乳動物に比べて、白血球数または血小板数の減少がみられる請求項３６記載の動物。37. The animal according to claim 36, wherein the number of white blood cells or platelets is reduced as compared to a wild-type non-human mammal. 野生型非ヒト哺乳動物に比べて、筋力が低下している請求項３６記載の動物。37. The animal of claim 36, wherein the muscle strength is reduced as compared to a wild-type non-human mammal. 請求項３６記載の動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞を用いることを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法。37. Use of the animal according to claim 36 or a tissue thereof or a cell derived therefrom, comprising: a pain disorder, an eye disease, a pituitary disease, a muscular disease, a heart disease, a blood disease, a kidney disease, an immune disease, and an adrenal function. Disorder, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, decreased white blood cell count, decreased platelet count, spontaneous A method for screening a drug for preventing, treating, or ameliorating an increase in the amount of behavior or muscle weakness. 請求項３６記載の動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞に試験化合物を投与することを特徴とする請求項４７記載のスクリーニング方法。The screening method according to claim 47, wherein a test compound is administered to the animal according to claim 36, a tissue thereof, or a cell derived therefrom. 請求項３６記載の動物と他の病態モデル動物との交配によって生じる病態モデル動物。A disease model animal produced by crossing the animal according to claim 36 with another disease model animal. 請求項３６記載の動物に対する薬剤誘発またはストレス負荷によって生じる病態モデル動物。A disease model animal caused by drug induction or stress load on the animal according to claim 36. 請求項４９記載の動物に対する薬剤誘発またはストレス負荷によって生じる病体モデル動物。50. A disease model animal produced by drug induction or stress load on the animal according to claim 49. 請求項４９〜５１のいずれかに記載の動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞を用いることを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法。55. An animal or a tissue thereof according to any one of claims 49 to 51, or a cell derived therefrom, characterized by a pain disorder, an eye disease, a pituitary disease, a muscular disease, a heart disease, a blood disease, and a kidney disease. , Immune disorders, adrenal dysfunction, eating disorders, obesity, affective disorders, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal gait, elevated body temperature, decreased white blood cell count , A method for screening for a preventive, therapeutic or ameliorating drug for a decrease in platelet count, an increase in spontaneous movement or a decrease in muscle strength. 請求項４９〜５１のいずれかに記載の動物もしくはその組織またはそれらに由来する細胞に試験化合物を投与することを特徴とする、痛覚障害、眼疾患、下垂体疾患、筋疾患、心疾患、血液疾患、腎疾患、免疫疾患、副腎機能障害、摂食障害、肥満、情動障害、精神分裂病、うつ病、不安症、性機能障害、肥満、痙攣、てんかん、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加または筋力低下の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法。53. A pain disorder, an eye disease, a pituitary disease, a muscular disease, a heart disease, a blood, comprising administering a test compound to the animal according to any one of claims 49 to 51 or a tissue thereof or a cell derived therefrom. Disease, kidney disease, immune disease, adrenal dysfunction, eating disorder, obesity, affective disorder, schizophrenia, depression, anxiety, sexual dysfunction, obesity, convulsions, epilepsy, aggressive behavior, abnormal walking, elevated body temperature , A method for screening for a preventive, therapeutic, or ameliorating drug for decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement or decreased muscle strength. 請求項３７記載の動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とするＯＴ７Ｔ０２２遺伝子に対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。38. A method for screening a compound or a salt thereof that promotes or inhibits promoter activity for the OT7T022 gene, comprising administering a test compound to the animal according to claim 37 and detecting expression of a reporter gene. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善薬のスクリーニング方法。A polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof; and / or SEQ ID NO: 11. Disease, adrenal insufficiency, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, body temperature characterized by using a receptor protein OT7T022 containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence, or a partial peptide or a salt thereof. A method for screening a preventive, therapeutic, or ameliorating drug for elevation, decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement, decreased muscle strength, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチド、その部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）配列番号：１１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質ＯＴ７Ｔ０２２、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる筋疾患、副腎機能障害、痙攣、攻撃性行動、歩行異常、体温上昇、白血球数減少、血小板数減少、自発行動量の増加、筋力低下、体温減少、白血球数増加、血小板数増加または自発行動量の減少の予防・治療・改善薬のスクリーニング用キット。A polypeptide having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a partial peptide thereof, an amide thereof, an ester thereof, or a salt thereof; and / or SEQ ID NO: 11. OT7T022, a receptor protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence, a partial peptide or a salt thereof, a muscular disease, adrenal dysfunction, convulsions, aggressive behavior, abnormal gait, increased body temperature, A kit for screening for a preventive, therapeutic, or ameliorating drug for decreased white blood cell count, decreased platelet count, increased spontaneous movement, decreased muscle strength, decreased body temperature, increased white blood cell count, increased platelet count or decreased spontaneous movement.
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JP2012521391A (en) * 2009-03-26 2012-09-13 インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー Vaccines to protect against various serotypes of Streptococcus bacterium

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