JP2003534234A

JP2003534234A - 生物学的な吸収により除去可能で多孔性不織体の形状をした活性成分マトリックス、その製造法及びそれの使用

Info

Publication number: JP2003534234A
Application number: JP2000586315A
Authority: JP
Inventors: ショールエドムント
Original assignee: アエスクラップアーゲーウントコーカーゲー
Priority date: 1998-12-09
Filing date: 1999-12-08
Publication date: 2003-11-18
Also published as: DE19856668A1; WO2000033822A1; EP1137405B1; EP1137405A1; DE59915145D1; ES2343606T3; WO2000033822A9

Abstract

(57)【要約】生物学的な吸収により除去可能で多孔性不織体の形状をした活性成分マトリックス、その製造法及びそれの使用である。生物学的な吸収により除去可能な形態で、凍結乾燥形態のコラーゲン原線維の多孔性不織体であり、活性成分の放出が遅延される。このマトリックスは、少なくとも１種の、均一に分散された、水および体液に難溶性の活性成分を含有する。その製造のために、難溶性で、細かく分割された活性成分がコラーゲン懸濁液に加えられ、特別な方法で調製される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は生物学的な吸収により除去可能な形態の活性成分マトリックスに関す
るもので、コラーゲン原線維の多孔性不織体は凍結乾燥された形態となっており
、この活性成分マトリックスの製造のための方法およびその使用に関する。

【０００２】ここ数年の間、再吸収性止血の必要性から、コラーゲンをベースとした製品が
開発されている。コラーゲンスポンジは多年にわたって臨床的に多数使用されて
いる。外科的使用の例としては次のものがある： −毛細血管溶血、 −実質性溶血、 −他の止血方法の補助手段。

【０００３】商業的に入手できるフィブリン付着システムと組み合わされたコラーゲンスポ
ンジは、溶血の拡散防止のため、特に実質性の器官における場合に、用いられて
いる。

【０００４】数年間の商業的に有用な製品はアミノグリコシドで満たされたコラーゲンから
なる。これらの製品は、溶解したコラーゲンと硫酸ゲンタマイシンの溶液が凍結
乾燥されたものである。この凍結乾燥品の欠点は、抗生物質を含有するコラーゲ
ンスポンジが移植された際、活性成分の作用が急速に減少することである。

【０００５】ドイツ特許ＤＥ３２１２４１２Ｃ２では、組織付着性のコラーゲン傷口被覆材
について述べている。分離されたウシの腱はホモジナイズされ、可溶性のコラー
ゲンがクエン酸溶液または酢酸ペプシン溶液により抽出される。この抽出され、
溶解されたコラーゲンは混合され、透析後、抗線維素溶解素および／または水溶
性抗生物質のような活性成分が対応して加えられ、その後凍結乾燥される。

【０００６】ドイツ特許ＤＥ３１２４９８１Ａ１では、活性成分含有コラーゲンが硬組織ま
たは軟組織への挿入体として挿入されることが述べられている。ここで、コラー
ゲンはウシの腱からのクエン酸抽出物から得られており、この抽出物は活性成分
も供給する。この抽出物は、溶解したコラーゲンおよび溶解した抗生物質からな
り、凍結乾燥されている。コラーゲン挿入体は例えば頸骨に導入され、それは３
週間以内に完全に吸収により除去され、この期間の間に抗生物質が放出される。

【０００７】ヨーロッパ特許ＥＰ３６０１８０Ｂ１では、連続片形態のコラーゲン発泡体を
製造するための方法を述べている。ここで再びコラーゲンは溶解され、分子間結
合の明白に確定した部分は開裂される。開裂はそのような方法により起こり、殆
どのコラーゲンは水溶化される。コラーゲンの分子内結合は攻撃されず、開裂は
そのような方法でコントロールされ、少しの比率の分子間結合が開裂され、量的
に多い高分子量の、水に不溶性のコラーゲン凝集物が得られ、これは水に分散さ
れている。コントロールされた分子間開裂を引き起こすための助けとなるものは
述べられていない。

【０００８】コラーゲンスポンジの製造のためのさらなる方法として、コラーゲン溶液の凍
結乾燥または分散が長い間知られている（例えば、ＥＰ２０９７２６，バウトラ
ー／エブリンガー／リンドナー；ＤＥ−ＯＳ３２０３９５７，エクメイヤー；Ｕ
Ｓ特許３１５７５２４，アルタンディ；ＤＥ−ＯＳ３３１５６７８，チオカおよ
びＤＥ１８１１２９０，シュヴァピル）。

【０００９】活性成分の作用がより長い期間存続する活性成分マトリックスの創作が必要と
される。これに加え、活性成分マトリックスは容易に製造され、生物学的に分解
可能で、活性成分または異なるタイプが組み合わされた活性成分の吸収が可能で
なければならない。

【００１０】本発明の目的は活性成分マトリックスであり、生物学的な吸収により除去可能
な形態で、凍結乾燥形態のコラーゲン原線維の多孔性不織体であり、活性成分の
放出が持続される。このマトリックスは、少なくとも１種の、均一に分散された
、水および体液に難溶性の活性成分を含有する。

【００１１】本発明による活性成分マトリックスは活性成分含有コラーゲンの移植目的に適
当であり、以下の必要性を果たしている。

【００１２】活性成分または担体マトリックスは滅菌が可能で、吸収による除去が可能であ
り、恒久的な組織に対する反応性を有さず、創傷の治療の妨げにならず、適用し
やすく、大きな領域の組織との接触が提供される。

【００１３】活性成分の放出は長引かされかつ完全である。それは高い局所組織レベルが可
能であり、低いシステム化濃度とリンクしている。

【００１４】本発明はコラーゲン懸濁液中に、水に難溶性な形態であり、特に医薬である活
性成分の混合を許容する方法をも提供する。そのような方法で混合することによ
り、活性成分の分散の均一性が保証される。

【００１５】本発明の目的は、非架橋の開放セル不織体の形態であり、吸収により除去可能
なコラーゲン原線維、好ましくはウシ由来である、生分解性の活性成分マトリッ
クスの製造のための方法であり、きれいにされ、脱脂され、乾燥された皮部分は
希釈液中で膨潤され、弾力のある物質が得られるまで有機酸中で膨潤され、膨潤
した小片は水性媒体により数回リンスされ、ｐＨ値の上昇に伴って、膨潤した小
片は機械的に分離され、コラーゲン原線維の懸濁液が形成できる線維になり、そ
の多孔性コラーゲン懸濁液は＞３．５から＜４．８のｐＨ値であり、少なくとも
１種の難溶性活性成分が細かく分散された形態に混合され、ホモジナイズされ、
活性成分含有懸濁液は不織体に凍結乾燥されることを特徴とする。

【００１６】好ましくは、雄ウシの皮が活性成分マトリックスの出発物質として用いられる
。皮は、膨潤された小片を得るために、好ましくは石灰の添加後および表皮と皮
下組織が取り除かれた後、細切片に細かく砕かれ、それはその後きれいにされ、
脱脂され、そして乾燥され、それによりそれらは膨潤に適した形態となる。

【００１７】本発明の活性成分マトリックスは層厚が０．５から１５ｍｍ、好ましくは２か
ら５ｍｍの層厚とするのが有利である。より低く、薄い領域のものは不織体を形
成することが出来る。上方の厚い領域では活性成分マトリックスの構造がスポン
ジと類似しており、それとして引用できる。不織体の密度は一般的に１２から１
８０ｍｇ／ｃｍ³、好ましくは４０から８０ｍｇ／ｃｍ³の間である。密度の高さ
、吸収時間が長いことは、活性成分の導出時間に影響する。

【００１８】凍結乾燥により製造されるため、本発明による活性成分マトリックスの孔容積
は非常に高く保つことができ、それは一般的に全容積の６０から８０％である。
平均孔サイズはおおよそ２０から１５０μｍの範囲である。コラーゲン不織体の
表面特性はブルナウワー、エメットおよびテラー（ＢＥＴ）の方法により測定さ
れ、一般的には１５０から３５０ｍ²／ｍ²である。これは高く、好ましい空気が
導入され、これは２５００から５０００ｍｌ／ｃｍ²／ｍｉｎ、好ましくは２７
００から３４００ｍｌ／ｃｍ²／ｍｉｎの空気透過性であり、層厚は４．２ｍｍ
である。

【００１９】体液に難溶性の活性成分とは、生理学的媒体における溶解度が１０ｍｇ／ｍｌ
より低く、これらの活性成分が１ｍｇ／ｍｌ以下の溶解度であることに付随して
、特に重要で且つ利点となることは、活性成分は通常の場合、医薬機能を有する
ことができる。しかしながら、他の物質も活性成分として用いることができ、例
えば診断剤などであり、長い期間をかけてゆっくりと放出されることが重要であ
るものに適用できる。

【００２０】以下の医薬は好適である：ステロイド抗生物質類から：フシジック酸；スルホンアミド類から：スルファジアジン銀；マクロライド抗生物質：エリスロマイシン、リファンピシン；アミノグリコシド抗生物質類から：パルミチン酸クリンダマイシン、塩酸・パ
ルミチン酸クリンダマイシン（Ｓｏｂｅｌｉｎ／Ｒ、ファルマシアアンドア
ップジョン）およびゲンタマイシン−クロベファット（Ｅ．メルク、Ｄａｒｍｓ
ｔａｄｔ、ＥＭＤ４６／２１７，ＥＰ１７３１８６Ａ１、実施例９）；グリコペプチド類から：バンコマイシン；キノロン類から：ナリジスク酸、シプロキサシン。

【００２１】活性成分マトリックス中の活性成分含有量は非常に広い限界範囲とすることが
可能である。それは一般的に３から３０重量％の範囲であり、凍結乾燥した活性
成分マトリックスの全重量を基準としており、好ましくは５から２０重量％の間
である。活性成分マトリックスの単位面積当たりの活性成分の重量は、層厚の機
能に応じて非常に広い範囲である。それは一般的に１から５０ｍｇ／ｃｍ²、好
ましくは１０から２０ｍｇ／ｃｍ²である。

【００２２】抗生物質医薬の中で、特に好適なものはアミノグリコシド抗生物質、パルミチ
ン酸クリンダマイシン、塩酸・パルミチン酸クリンダマイシン、これと同様にゲ
ンタマイシン−クロベファットである。本発明の活性成分マトリックスはいくつ
かの難溶性活性成分を含有することもでき、これらは特に異なるアクション指示
を有する。同様に、少なくとも１種の難溶性活性成分のほかに、１種またはそれ
以上の弱水溶性または易水溶性の活性成分を活性成分マトリックスに供給するこ
とも可能である。ここで異なるアクション指示を有する活性成分を供給すること
もまた可能である。優先されることは、一般的に同一のアクション指示を有する
活性成分の用意が行われることであるが、放出の迅速性を変えることでもよい。
例えば、抗生物質の場合、ゲンタマイシン−クロベファットのような放出が遅延
された抗生物質と、同一のアクション指示を有するが迅速放出性の硫酸ゲンタマ
イシンのような抗生物質とを組み合わせることが可能である。これにより、難溶
性抗生物質の長い終期の遅延された放出に伴って、抗生物質に関して所望の初期
の高濃度組織レベルを得ることが可能になる。本発明の活性成分マトリックスは
、その結果として、活性成分の遅延化された活性成分導出のための、移植可能で
かつ吸収による除去可能なデポとして著しく適当であり、付加的に活性成分を迅
速な活性成分導出性とすることもできる。

【００２３】本発明による活性成分マトリックスの製造の間、コラーゲン原線維懸濁液の取
り扱いにおいて、それは懸濁液中の分離された形態として多量に存在しているこ
とが認められ、もし懸濁液が＞３．５から＜４．８のｐＨ値の場合は、有意に単
純化される。このｐＨ範囲では、コラーゲン懸濁液は流動性であり、活性成分の
添加に続いて、懸濁液中に均一に分散されることが可能であるため、コラーゲン
原線維間に埋め込まれて、均一な形態の最終マトリックス中に提供される。それ
は本来適当なｐＨ値にセットすることが可能であり、引き続き、酸またはアルカ
リの添加により、原線維まで機械的に分別される。それはその方法および製品に
とって有利であり、膨潤プロセスの間、それに引き続く膨潤コラーゲン部分のリ
ンスの間、その後の線維であって、コラーゲン原線維になる部分への分離の間、
好ましい方法で酸濃度がセットされ、懸濁液は前記ｐＨ範囲で自動的に得られ、
る。ｐＨ範囲は４．０から４．５の間が好ましい。ｐＨ範囲は、リンス操作の回
数および付加的にはリンス液の量と関係する有機酸の濃度の選択により調整可能
であり、所望の結果を得るために、十分な変化の可能性がある。通常は、少なく
とも２回のリンス操作、好ましくは少なくとも５回のそのような操作が行われる
。リンスサイクルでは、リンス水は各リンス操作後に除去される。一般的に、リ
ンスおよび洗浄は脱ミネラル水によって行われる。もし活性成分が水性媒体、例
えば懸濁液中に加えられると、後者は、活性成分の添加による結果としてのｐＨ
値のシフトを避けるために、おおよそ同一のｐＨ値となるのが好ましい。実際、
リンスおよび洗浄の間、脱ミネラル水が使用され、リンス後ｐＨ値を調整する必
要がなく、活性成分マトリックス中に塩が導入されることは避けられる。そのた
め、後者には本質的に塩が含まれず、これは多くの場合に要求される。

【００２４】膨潤は５から６０時間好ましくは６から４８時間の期間で行われる。膨潤期間
は酸濃度およびコラーゲン物質の起源に依存する。膨潤プロセスの間の有機酸濃
度は０．０１から２Ｎ好ましくは０．０５から０．５Ｎ、一般的には０．１Ｎで
ある。適当な有機酸は酢酸である。他の有機酸は生物学的分解性を有しているも
のであれば使用可能であり、揮発性の酸は凍結乾燥の間に除去されるので特に好
ましい。

【００２５】皮部分の膨潤の結果として、上述したように、ウシ起源のものが望ましく、そ
れらの重量の３から１０倍好ましくは４から８倍の重量に膨潤する。予めきれい
にされ、乾燥された皮部分の大きさなどは、そのような方法で膨潤した後の片の
直径が約１ｃｍとなるように有利に選択される。この大きさは、取り扱いおよび
その後の原線維までの分離に都合がよい。膨潤操作に引き続いて、洗浄水が除か
れた後、膨潤コラーゲン顆粒はその後の原線維への分離の調製のため、脱ミネラ
ル水に入れられる。水分量は、乾燥コラーゲン物質に基づいて、好ましくは混合
物の０．１から１０％が得られるように選択される。原線維への分離は、好まし
くは分散によりおこない、攪拌に伴いコラーゲン構造が破壊され、コラーゲン原
線維が単離される。少なくとも１種の難溶性活性成分が添加された後、および更
に付加的に弱水溶性活性成分が懸濁液に添加され、さらにホモジナイズされ、こ
の懸濁液は凍結乾燥用に準備され、他にいかなる中間処理も必要としない。

【００２６】発明は好適実施例の説明により更に説明し、実行例と共に更に詳細な背景を明
らかにする。

【００２７】膨潤工程きれいにされた雄ウシ皮コラーゲンは最初の作業工程において、希酸好ましく
は０．１Ｎ酢酸により、６から４８時間、好ましくは１６時間の間膨潤される。
酸膨潤の結果、硬く、扱いにくい雄ウシ皮コラーゲンは弾性物質となり、その後
の工程で機械的プロセス（切断プロセス）の助けにより、コラーゲン原線維が単
離される。

【００２８】膨潤工程における酢酸の濃度は０．１Ｎが選ばれ、そのようにしてコラーゲン
懸濁液が製造される、第２工程のｐＨ値は４．０から４．５である。もし、コラ
ーゲン懸濁液のｐＨ値が第２工程におけるｐＨ４．８よりも高く調製された場合
には、コラーゲン原線維は懸濁液から沈殿してしまい、もはや均一溶液でなくな
る。もし、ｐＨ値が３．５よりも低い場合は、コラーゲン塊は粘着性となり、も
はや処理できなくなる。

【００２９】リンス工程２つの試験混合物を使用し、リンス水のｐＨ値および酢酸濃度のリンスサイク
ルにおける影響を試験した。

【００３０】ｐＨ値は電位差測定により決定した。リンス水中の酢酸濃度は酵素的に決定し
た。

【００３１】以下の測定値が得られた：表１：リンス溶液のｐＨ値と酢酸濃度溶液ｐＨ値ｐＨ値酢酸濃度酢酸濃度試験１試験２（ｍｇ／ｍｌ）（ｍｇ／ｍｌ）試験１試験２０．１Ｎ酢酸混合物２．８５２．８２６．３７６．４０コラーゲンと１６時間３．７８３．６９５．３５５．４７膨潤第１回リンス３．９０３．９４０．３６０．３３第２回リンス３．８５３．８５０．１６０．１２第３回リンス３．８８３．９５０．１２０．０７第４回リンス３．９３４．０００．１３０．０５第５回リンス３．９８４．０５０．０８０．０５表１からわかるように、５回のリンスは、リンス溶液のｐＨ値としておよそ４
．０とするのに十分である。

【００３２】既に述べたとおり、膨潤プロセスにおける酢酸濃度は０．１Ｎが選ばれ、その
ためコラーゲン懸濁液の調製の間、４．０から４．５のｐＨ値となっている。膨
潤プロセスの間、コラーゲン顆粒の重量は増加し、水分の吸収に対応して４から
８倍になる。それは柔らかく、柔軟で、弾性のある１×１×１ｃｍの寸法の物質
になる。

【００３３】機械的粉砕膨潤したコラーゲン顆粒に、０１．から１０％懸濁液が得られるのに十分な水
が加えられ、これは２から１５分間、高出力分散装置により４００から１２００
ｒ．ｐ．ｍ．でホモジナイズされる。成分の機械的な混合プロセスの結果、懸濁
された、広範囲なメッシュの線維ブレードが得られ、通常起こる、真皮中におけ
るコラーゲン原線維の生体内での配列変換は、いかなるポイントにおいても起こ
らない。生体内で強力なコラーゲン原線維はあらゆる方向にブレージングしてお
り、これが破壊され、そして、より短いフラグメントの形状のものが得られる。

【００３４】０．１Ｎ苛性ソーダ溶液または０．１Ｎ塩酸の添加による、コラーゲン懸濁液
のｐＨ値の変化は、懸濁液の軟度に対し、引き続く固体間変異を導くことがわか
る。

【００３５】コラーゲン懸濁液のコラーゲン懸濁液の軟度ｐＨ値セット３．０７ゲル、半流動体３．６０ゲル、半流動体４．０３流動性懸濁液４．３０流動性懸濁液＊４．５２流動性懸濁液５．０２非常に高い流動性、線維の凝集５．５５長コラーゲン原線維、線維と液体に分離＊懸濁液は酸と溶液の添加なしに調製された。

【００３６】コラーゲン懸濁液に対し異なるｐＨ値がセットされることにより、以下のよう
な観察が得られた。

【００３７】３．６のｐＨ値以下では、コラーゲン懸濁液は半流動体である。これは、線維
が線維束になる凝塊反応が起こらないからである。線維と液体との分離が生じな
い。

【００３８】ｐＨ値４．３とするために、コラーゲン懸濁液のｐＨ値３．６に対応する苛性
ソーダ溶液の量が添加されると、その後、粘性ゲルからもう一度高粘性流体が得
られる。さらに、ｐＨ値（５．０）が上昇すると、線維と液体との分離が生じ、
単一の線維が線維束に凝塊化する。

【００３９】この試験は好ましくは３．８から４．５のｐＨ範囲中で行われ、常に多孔性コ
ラーゲン懸濁液があり、困難なしでさらなる処理が可能である。

【００４０】ホモジナイズ化コラーゲン懸濁液に、これに対応する量の難溶性医薬が添加される。

【００４１】難溶性医薬の語は、ここでは特に、生理的媒体中に＜１ｍｇ／ｍｌの溶解度を
有する活性成分を含む。

【００４２】難溶性医薬の添加後、活性成分含有懸濁液は、電気攪拌機により２０から３０
０ｒ．ｐ．ｍ．で攪拌されることにより、５から３０分間ホモジナイズされる。
活性成分は、水性のスラリまたはパワーフォームの形態中に取り込まれる。

【００４３】医薬品の凍結乾燥は、不安定な医薬を、乾燥して、保存可能な形態とすること
を主な目的として、ここ数年行われており、これにより無菌の医薬を製造するこ
とが可能になる。

【００４４】凍結乾燥中、もっとも重要な工程は凍結相である。この凍結相中に結晶格子が
作られ、昇華が起こる。コラーゲン懸濁液は均一な溶液ではないが、固体成分を
伴う多物質システムの代わりとして、凍結パラメータを決定するために定型的試
験を行い、共晶点の決定、崩壊点の決定、低温領域におけるＤＳＣ測定、等が行
われ、共晶点のみが決定される。いくつかのコラーゲン懸濁液の試験では、いく
つかのコラーゲン顆粒のバッチにおいて、２重量％のコラーゲン濃度の懸濁液の
場合、凍結点の温度が−２から−４℃の範囲で低下する。好ましくは、コラーゲ
ン懸濁液と難溶性医薬との組み合わせの共晶点が、各分画毎に分けられて決定さ
れる。共晶点の決定により得られたデータは凍結乾燥のコントロールの基礎をな
す。活性成分含有コラーゲン懸濁液の補正凍結乾燥の前提条件は、共晶温度より
も低い温度の、透明なドロップ様である。

【００４５】コラーゲン懸濁液のｐＨ値を、苛性ソーダ溶液または塩酸の添加により変える
と、凍結乾燥された多孔性不織体の物理的安定性または完全に湿潤するために必
要な時間が変わる。

【００４６】表３：凍結乾燥されたコラーゲンマトリックスの物理的安定性、および水中への
浸漬後の完全膨潤時間における、コラーゲン懸濁液のｐＨ値の影響懸濁液セットｐＨ値完全膨潤時間凍結乾燥マトリックスの（ｓ）物理的安定性２．９８３０．２良３．４０４２．７良３．８７２７．６良４．３０１０．８良４．４５１２．８良４．９０７．０不良＊５．３４６．１不良＊＊不良の安定性とは、水中に置いた後凍結乾燥した繊維の網目が個々の線維ま
で破壊され、凝集することを意味する。

【００４７】この試験においては、良好な「濡れ」安定性のコラーゲン不織体が、３．８か
ら４．５のｐＨ範囲のコラーゲン懸濁液から、常に得られる。

【００４８】さらなる結論は次の通りである： −＜３．８のｐＨ値は、ｐＨ値＞３．８の不織体よりもよりゆっくりとした膨潤
可能性を与える； −ｐＨ値４．５にセットすると、生成された不織体の安定性が減少することが明
白である； −コラーゲン懸濁液の最適ｐＨ値の設定範囲は、３．８から４．５の間である；
−もし、コラーゲン懸濁液のｐＨ値が４．８を越えると、コラーゲン原線維はコ
ラーゲン懸濁液から沈殿し、もはや均一溶液でなくなる。

【００４９】雄ウシの皮から得られた活性成分含有コラーゲンマトリックスは、機械的およ
び化学的に広いメッシュの線維ブレード（光学顕微鏡による結果）を作り上げる
プロセスのマルチ工程の結果として与えられ、真皮中のコラーゲン原線維の生体
内配列変換は、もはやいずれのポイントにおいても一般的に起こらない。全ての
方向にブレージングしている、生体内−強力コラーゲン原線維は破壊され、より
短いフラグメントとして得られ、そのため、広い線維間ギャップのシステムが得
られる。凍結乾燥の間、粗い網目状の網目組織が得られ、それは空間と思われ、
自然のスポンジと比較できる。非常に大きく、内部表面積の増加したものが得ら
れ、それはコラーゲン原線維から形成されている。

【００５０】電子顕微鏡的切片の調製は、厚い束に変えられた形態のコラーゲン原線維のパ
ターンを明らかにし、それはスペースの全方向に走っている。こうして、コラー
ゲン原線維の縦方向、横方向および接線方向のセクションが存在する。縦方向の
線維は典型的な横方向の剥離を有する。凍結乾燥コラーゲン懸濁液の表面の起伏
は電子顕微鏡スキャンにより肉眼で見えるように表現され、これは特に強い印象
を与える。薄い線維は強力な線維束の両側に分岐している。いくつかの薄い線維
が合い、しばしば結び目のような肥厚が発生する。これに加え、強力なコラーゲ
ン原線維はロープのような方法でねじられている。

【００５１】各ケースにおいて、２つの異なるコラーゲン移植片から１ｃｍ²の片が切断さ
れる（パルミチン酸クリンダマイシンマトリックスおよび塩酸・パルミチン酸ク
リンダマイシンマトリックス）。各片の重量を測定し、重量値を記録した。その
後、活性成分含有移植片は試験管内に置かれ、各ケースとも５ｍｌの０．０６６
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）またはヒト血清が用いられ、水槽中において３７
℃で溶出した。２４時間後、移植片は取り出され、新しい緩衝液または新しい血
清の中に置かれる。総溶出時間は１０日間で、２４時間毎に緩衝液を交換した。
抗生物質の濃度の生物学的測定は、試験細菌の黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ６５３８
およびマイクロコッカスルテウスＤＳＭ３４８の阻止作用（阻止うん輪の径の
決定）である。サンプルの阻止作用は標準物質（ここでは、塩酸クリンダマイシ
ン）の段階的用量による阻止作用と比較される。サンプルおよび標準物質は、全
く同じ大きな阻止うん輪であり、同様の抗生物質濃度であることが結論づけられ
る。

【００５２】異なる移植片からの抗生物質の導出は、表４から知ることができる。

【００５３】表４：活性成分パルミチン酸クリンダマイシンの導出における機能としての溶出
時間日リン酸緩衝液中のリン酸緩衝液中の血清中のパルミチン酸クリ塩酸・パルミチン酸パルミチン酸クリンダマイシンクリンダマイシンンダマイシン（μｇ移植量）（μｇ移植量）（μｇ移植量）１１８．３１６．０８．０２４６．１２３．８２１．２３４６．１４６．１３４．７４５２．７３５．４２９．１５４６．１４６．１３６．１６６０．１４６．１３７．８７４６．１３５．４２２．１８１８．３２０．８１６．５９１２．３７．２１０．８１０１２．３５．５８．１二つの移植片からの抗生物質の導出は、１０日後も未だ終了していないことが
、表により明確に示されている。導出された抗生物質の量はパルミチン酸クリン
ダマイシンおよびフリーのパルミチン酸エステル共にほぼ同一の単位時間当たり
の量である。

【００５４】抗生物質の残りが担体物質上にずっとそのままになっているかどうかを調べる
ために、移植片は、１０日の溶出期間の後、黄色ブドウ状球菌またはマイクロコ
ッカスルテウスにより汚染された寒天表面上に置かれ、そして、３７℃でイン
キュベートされる。溶出期間後も抗生物質はコラーゲンスポンジ中に未だ検出さ
れる。

【００５５】移植片に傷ついた領域を、５から１０日間以上保護することができるじゅよう
があれば、ここで述べられた物質はこの保護を確実にするのに適当である。マト
リックスおよび活性成分の組み合わせは、活性成分を遅延形態および５から１５
日間以上適切な濃度で放出させる。これに加えて、完全に吸収されるまで、マト
リックスは細菌のコロニー形成に対し、粘着する抗生物質により阻止する。活性
成分、パルミチン酸クリンダマイシンおよび塩酸クリンダマイシンに関する研究
において、それは意外にも、書籍として出版された（抗微生物化学療法、デビッ
ドグリーンウッドにより出版、第３版、オクスフォード大学出版、１９９５
）結果と異なり、パルミチン酸によりクリンダマイシンがエステル化され、抗生
物質活性も明らかにされている。水性緩衝液系での溶出の場合、少なくとも１１
日の期間後も驚くほど抗生物質活性が検出された。パルミチン酸によるクリンダ
マイシンのＯＨ基のエステル化が、クリンダマイシンの溶解性を低下させること
は明白であるが（表５参照）、抗生物質活性に関しては、分子の不活性化はもた
らされない。これはパルミチン酸クリンダマイシンはエステラーゼにより活性な
クリンダマイシン分子に最初に分割される必要はないことを意味している。これ
は重要なことで、結果として、パルミチン酸クリンダマイシン含有コラーゲンマ
トリックスの使用は酵素の存在に依存しないからである。

【００５６】表５：リンコマイシンおよびクリンダマイシン＊のパルミチン酸エステルの変則的溶解挙動ｐＨ塩酸・パルミチン酸ｐＨ塩酸・パルミチン酸リンコマイシンクリンダマイシン（ｍｇ／ｍｌ）（ｇ／ｍｌ）２．３０．１２４３．７５３．２ − − ５．８＜０．００１７．７０．０２４９７．４＜０．００２文献：Ｅ．Ｌ．ロウ、ジャーナルオブファーマシューティカルｖｏｌ．６８、ｎｏ．１０（１９７９）ｐｐ１２９２−１２９６。

【００５７】実行例１．膨潤工程膨潤後、１８２３．１ｇのコラーゲン顆粒（水分１５．０％、平均顆粒サイズ
４から６ｍｍ）は３６ｌの０．１Ｎ酢酸で１６時間、５ｌの注射用水により５回
リンスされる。５回のリンス後、リンス溶液のｐＨ値は＞４．０でなければなら
ず、そうでない場合は、さらなるリンスが必要になる。

【００５８】２．機械的粉砕注射用水を加え、９０．０Ｋｇの総重量にし、その後の難溶性医薬の添加量が
考慮される。この懸濁液は高出力分散装置により、６８０ｒ．ｐ．ｍ．で２分間
ホモジナイズされる。ホモジナイズされた懸濁液のｐＨ値がチェックされる。

【００５９】３．ホモジナイズ化コラーゲン懸濁液に２２４．４８ｇの塩酸・パルミチン酸クリンダマイシン（
１３６．２６ｇのクリンダマイシン塩基に相当する）が今添加され、５ｌの０．
１Ｎ酢酸緩衝液中に３．６から３．８のｐＨ値において懸濁される。活性成分含
有懸濁液は再び電気攪拌機により１５０ｒ．ｐ．ｍ．で１５分間ホモジナイズさ
れる。活性成分含有懸濁液の全質量は今や９０．０Ｋｇである。

【００６０】４．凍結乾燥凍結乾燥皿（サイズ４５．６×４５．６ｃｍ）上の流動物重量を決定するため
に、不織体に対して必要な活性成分含有コラーゲン懸濁液量は凍結乾燥皿当たり
の有効表面積に関係する。

【００６１】凍結乾燥後のコラーゲン不織体のプラットサイズは４３．５ｃｍ×４３．５ｃ
ｍ＝１８９２．１５ｃｍ²である。活性成分含有コラーゲン不織体の大きさは５
×８ｃｍ＝４０．０ｃｍ²で、３５ｍｇのクリンダマイシンおよび４００ｍｇの
無水コラーゲンを含有する。

【００６２】クリンダマイシン−塩基／皿＝１８９２．２５ｃｍ ² ×０．０３５ｇ４０ｃｍ² ＝１．６５５７ｇ従って：１．６５５７ｇ×９００００．０ｇ＝１０９３．６ｇ１３６．２６ｇコラーゲン懸濁液は各凍結乾燥皿上で流動可能である。

【００６３】満たされた凍結乾燥皿は凍結乾燥プラントの中に挿入される。以下の詳細が凍
結乾燥工程に適用される：プラント温度：＋７℃ 凍結時の製品温度：＋７℃ −４５℃ 凍結時のチャンバ内圧：１０３ｍｂａｒ主乾燥の間の製品温度： −４５℃ ＋３８℃ 主乾燥の間のチャンバ内圧：０．９ｍｂａｒ再乾燥の間の製品温度：＋３８℃ ＋２１℃ 再乾燥時のチャンバ内圧：０．０３ｍｂａｒ５．滅菌滅菌は２５ｋＧｙの放射滅菌またはエチレンオキサイドにより行う。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年３月５日（２００１．３．５）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 7/04 Ａ６１Ｐ 31/04 31/04 41/00 41/00 Ａ６１Ｌ 15/04 Ｆターム(参考） 4C076 AA74 AA94 BB31 CC19 CC32 EE43A FF02 FF32 4C081 AA02 AA12 AA14 BA11 BB01 BB07 CD141 CE01 DA05 DA06 DB03 DC12 EA02 4C086 AA01 AA02 EA01 EA09 MA02 MA05 MA32 MA63 NA12 ZA53 ZB35 ZC75

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】生物学的な吸収により除去可能な形態の活性成分マトリック
スであって、凍結乾燥形態のコラーゲン原線維からなる多孔性不織体であり、活
性成分の放出が遅延され、少なくとも１種の均一に分散された活性成分であって
水および体液に難溶性の活性成分を含有する活性成分マトリックス。
【請求項２】層厚が０．５から１５ｍｍ、好ましくは２から５ｍｍである
、請求項１に記載の活性成分マトリックス。
【請求項３】密度が１２から１８０ｍｇ／ｃｍ³である、請求項１または
２に記載の活性成分マトリックス。
【請求項４】孔容積が全容積の６０から８０％である、請求項１から３に
記載の活性成分マトリックス。
【請求項５】平均孔サイズが２０から１５０μｍの範囲である、先行請求
のいずれかに記載の活性成分マトリックス。
【請求項６】空気透過率が２５００から５０００ｍｌ／ｃｍ²／ｍｉｎ、
好ましくは２７００から３４００ｍｌ／ｃｍ²／ｍｉｎであり、層厚が４．２ｍ
ｍである、先行請求項のいずれかに記載の活性成分マトリックス。
【請求項７】少なくとも１種の難溶性活性成分が医薬、好ましくは抗生物
質である、先行請求項のいずれかに記載の活性成分マトリックス。
【請求項８】抗生物質としてアミノグリコシド抗生物質、好ましくはパル
ミチン酸クリンダマイシン、塩酸パルミチン酸クリンダマイシンおよび／または
ゲンタマイシン−クロベファットが用いられる、請求項７に記載の活性成分マト
リックス。
【請求項９】少なくとも１種の難溶性活性成分が加えられたもので、それ
は少なくとも１種の弱水溶性のまたは易水溶性の活性成分を含有する、先行請求
項のいずれかに記載の活性成分マトリックス。
【請求項１０】担体構造としてのコラーゲン原線維と、少なくとも１種の
活性成分が本質的に他の成分から遊離している、先行請求項のいずれかに記載の
活性成分マトリックス。
【請求項１１】生物分解性の活性成分マトリックスであり、開放セル不織
体またはスポンジの形態で、非架橋の、吸収により除去可能なコラーゲン原線維
からなるものを製造するための方法で、好ましくは先行請求項のいずれかに記載
の活性成分マトリックスを製造するために、きれいにされ、脱脂され、乾燥され
た皮片は、希釈液、有機酸の水溶液中で、弾性物質が得られるまで膨潤され、膨
潤片は水性媒体、好ましくはｐＨ値が上昇するまで脱ミネラルされた水性媒体、
により数回リンスされ、リンスされた片は、コラーゲン原線維の懸濁液が形成さ
れるような線維まで機械的に分離され、流動性コラーゲン懸濁液は＞３．５から
＜４．８のｐＨ値で、少なくとも１種の難溶性活性成分が細かく分散された形態
に混合され、ホモジナイズされ、この活性成分含有懸濁液は不織体またはスポン
ジへと凍結乾燥されることを特徴とする方法。
【請求項１２】膨潤に用いられる有機酸の濃度およびリンス操作の回数は
選択され、このような方法でリンスと線維への分離がお互いにつり合わされ、ｐ
Ｈを予め調整することなく、コラーゲン懸濁液が＞３．５から＜４．８、好まし
くは４から４．５のｐＨ値で得られる請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】リンス操作が少なくとも２回、好ましくは少なくとも５回
のリンスサイクルである請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】リンスが５から６０時間、好ましくは６から４８時間行わ
れる請求項１１から１３に記載の方法。
【請求項１５】膨潤を目的として使用される酸溶液の酸濃度が０．０１か
ら２Ｎ、好ましくは０．０５から０．５Ｎである、請求項１１から１４に記載の
方法。
【請求項１６】皮部分が有機酸中でそれらの重量の３から１０倍、好まし
くは４から８倍膨潤される請求項１１から１５に記載の方法。
【請求項１７】リンスおよびリンス水の除去後、混合物の０．１から１０
％の水、これは乾燥コラーゲン物質の重量を基準とし、この水が加えられること
により膨潤したコラーゲン顆粒が変質される、そしてこの混合物はコラーゲン懸
濁液に分散されることによりホモジナイズされ、コラーゲン原線維の線維結合が
破壊される、請求項１１から１６に記載の方法。
【請求項１８】少なくとも１種の難溶性活性成分が加えられ、細かく分散
された形態で、好ましくは水性媒体中に懸濁される請求項１１から１７に記載の
方法。
【請求項１９】コラーゲン原線維の懸濁液に、少なくとも１種の難溶性活
性成分が加えられ、懸濁液中に少なくとも１種の活性成分が均一に分散するよう
ホモジナイズされる請求項１１から１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】少なくとも１種の難溶性活性成分とは別に、少なくとも１
種の弱水溶性活性成分、好ましくは同一のアクション指示を有するものが加えら
れる請求項１１から１９に記載の方法。
【請求項２１】ホモジナイズされた、活性成分−含有コラーゲン懸濁液は
凍結乾燥され、他のいかなる中間処理をすることなく、空気性不織体またはスポ
ンジとする請求項１１から２０に記載の方法。
【請求項２２】移植可能で、完全に吸収により除去可能な活性成分のデポ
であって、活性成分の導出が遅延された請求項１から１０のいずれかに記載の活
性成分マトリックスの使用。