JP2003503446A

JP2003503446A - 体重増加の処置方法および／または抑制方法

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Publication number: JP2003503446A
Application number: JP2001507463A
Authority: JP
Inventors: ラブリー，フェルナンド; デシャイエ，イブ; リチャード，デニス; マーテル，セリーヌ
Original assignee: Endorecherche Inc
Current assignee: Endorecherche Inc
Priority date: 1999-07-06
Filing date: 2000-07-05
Publication date: 2003-01-28
Anticipated expiration: 2020-07-05
Also published as: ZA200200085B; US8609695B2; AU5957500A; WO2001001969A3; PL352993A1; KR20020020776A; DE60043305D1; TR200403328T2; US6710059B1; WO2001001969A2; AU2005229713A1; IL195860A; JP4790178B2; PL208972B1; NO329614B1; EP1196163A2; NO20020037D0; RU2008101793A; IL147485A0; NO20020037L

Abstract

(57)【要約】ヒトを含む感受性温血動物における肥満、腹部脂肪およびインスリン抵抗性の医学的な処置および／または防止に対する新規な方法は、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）を投与することを伴う。ＳＥＲＭと、所定量のエストロゲンまたは性ステロイド前駆体（性ステロイド前駆体は、デヒドロエピアンドステロン、硫酸デヒドロエピアンドステロン、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオール、および前記前駆体のいずれかまたはエストロゲンに生体内で変換される化合物からなる群から選択される）との組合せもまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本出願は、米国仮特許出願第６０／１４２，４０７号（１９９９年７月６日出
願）の優先権を主張する。

【０００２】

【発明の属する技術分野】

本発明は、肥満（特に腹部の肥満）を処置し、かつ／または防止するための方
法に関し、そしてヒトを含む感受性温血動物における異常なインスリン抵抗性の
獲得を処置するか、または抑制することに関する。本発明の方法は、下記の一般
式Ｉの化合物またはその薬学的組成物を投与することを伴う。他の実施形態にお
いて、本発明の方法は、選択的エストロゲン受容体調節剤（「ＳＥＲＭ」）を性
ステロイド前駆体と組み合わせて投与することを伴う。

【０００３】

【従来の技術】

過剰な体脂肪を特徴とする状態である肥満は、心臓血管疾患、高血圧、糖尿病
および乳ガンなどの多くの疾患に対するよく知られた危険因子である。さらに、
個人的な外見は、ほとんどの人々の全体的な幸福において重要な役割を果たして
いる。

【０００４】様々な食餌療法（食物を制限する食事療法を含む）、体重減少プログラムおよ
び運動などの肥満の一般的な処置は、多くの人々に対して様々な程度で成功をも
たらしている。しかし、先行技術を用いて十分な結果が得られない人々に対する
他の技術、あるいは従来技術に対する補足法として使用される技術が依然として
求められている。

【０００５】最近、エストロゲンのアゴニスト／アンタゴニストのいくつかが肥満の処置ま
たは防止のために開示された：欧州特許出願番号ＥＰ０６５９４２３Ａ１におけ
るラロキシフェンおよび関連化合物；欧州特許出願番号ＥＰ０７１６８５５Ａ２
におけるベンゾチオフェン核を有するエストロゲンアゴニスト；国際特許出願番
号ＰＣＴ／ＤＫ９６／０００１１における３，４−ジフェニルクロマン化合物；
国際特許出願番号ＰＣＴ／ＩＢ９５／００２８６におけるナフチルエストロゲン
のアゴニスト／アンタゴニスト。

【０００６】エストロゲンの別のアゴニスト／アンタゴニストであるタモキシフェンによっ
て雌性ラットにおけるスルピリド誘導体重増加が防止されることもまた報告され
た（Ｂａｐｔｉｓｔａ他、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．
（１９９７）、５７（１／２）、２１５〜２２２）。タモキシフェンが、ラット
における食物摂取、体重増加および身体組成に対するエストラジオールの作用を
模倣することもまた報告されている（Ｗａｄｅ他、ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒ
ｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ１９９３、３３（６）、Ｒ１２１９〜１
２２３）。

【０００７】ＤＨＥＡは、肥満の処置および／または防止において有益な作用をも有する。
老齢のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいて、Ｓｃｈｗａｒｔｚ（Ｋｅ
ｎｔにおいて、Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ３７：１５７〜１６０、１９８２）は、
体重が、ＤＨＥＡにより、食物摂取量に影響を及ぼすことなく６００ｇから５５
０ｇに減少したことを観測している。Ｓｃｈｗａｒｔｚ（Ｃａｎｃｅｒ３９：
１１２９〜１１３２、１９７９）は、ＤＨＥＡ（４５０ｍｇ／ｋｇ、３回／週
）が与えられたＣ３Ｈマウスは、コントロール動物よりも著しく少ない体重増加
を示し、長寿命であり、そして体脂肪が少なく、活動的であったことを認めた。
体重増加の減少が、食欲の喪失または食物制限を伴うことなく達成された。さら
に、ＤＨＥＡは、成体になってから肥満になるように育種された動物における体
重増加を防止し得る。

【０００８】痩せたＺｕｃｋｅｒラットに対するＤＨＥＡの投与は、増大した食物摂取にも
関わらず、体重増加を減少させた。処置された動物は、脂肪パッドが小さくなっ
ていた。従って、このことは、全体的に見れば、ＤＨＥＡは食物代謝を増大させ
、これにより体重増加および脂肪蓄積の低下を生じさせていることを示唆してい
る（Ｓｖｅｃ他、Ｐｒｏｖ．２ｎｄＩｎｔ．Ｃｏｎｆ．Ｃｏｒｔｉｓｏｌ．ａ
ｎｄＡｎｔｉ−Ｃｏｒｔｉｓｏｌｓ、ＬａｓＶｅｇａｓ、Ｎｅｖａｄａ、米
国、アブストラクト：５６頁、１９９７年）。

【０００９】肥満がＡｖｙ変異体マウス（Ｙｅｎ他、Ｌｉｐｉｄｓ、１２：４０９〜４１３
、１９７７）およびＺｕｃｋｅｒラット（ＣｌｅａｒｙおよびＺｉｓｋ、Ｆｅｄ
．Ｐｒｏｃ．４２：５３６、１９８３）において改善されたことが見出された。
ＤＨＥＡで処理されたＣ３Ｈマウスはコントロールよりも若い外見を有した（Ｓ
ｃｈｗａｒｔｚ、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．３９：１１２９〜１１３２、１９７９
）。

【００１０】腹部の脂肪は、冠状動脈胸部疾患に対する代謝的危険因子に関連している（Ｉｍｂａｕｌｔ他、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ１９９９、４８（３）、３５５〜
６２；Ｌｅｄｏｕｘ他、ＣＭＡＪ１９９７、１５７Ｓｕｐｐｌ．１：４６〜５
３）。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】

従って、脂肪組織（特に、腹部の脂肪）を低下させることは本発明の目的であ
る。

【００１２】

【課題を解決するための手段】

肥満または過剰な脂肪組織がその危険因子である冠状動脈心臓疾患および他の
疾患または状態の危険性を低下させることは、本発明の別の目的である。

【００１３】１つの実施形態において、本発明は、ヒトを含む感受性温血動物における体重
増加を処置するか、または抑制するための新規な方法を提供することである。こ
の方法は、そのような処置または抑制を必要とする対象体に、薬学的な希釈剤、
賦形剤またはキャリアとともに、あるいは薬学的な希釈剤、賦形剤またはキャリ
アを伴うことなく、下記の一般式Ｉの化合物の少なくとも１つの治療有効量を投
与することを含む：

【化１１】式中、Ｒ１およびＲ２は独立して、水素、ヒドロキシル、−ＯＭ（Ｍは、直鎖状
または分枝状のＣ１〜Ｃ４アルキル、直鎖状または分枝状のＣ３〜Ｃ４アルケニ
ル、直鎖状または分枝状のＣ３〜Ｃ４アルキニルからなる群から選択される）、
および生体内でヒドロキシルに変換され得る基からなる群から選択され；Ｇは−Ｈまたは−ＣＨ３であり；そしてＲ３は、ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノおよびＮＲａＲｂ（Ｒａおよ
びＲｂは独立して、水素、直鎖状または分枝状のＣ１〜Ｃ６アルキル、直鎖状ま
たは分枝状のＣ３〜Ｃ６アルケニル、および直鎖状または分枝状のＣ３〜Ｃ６ア
ルキニルである）からなる群から選択される化学種である。本発明は、肥満の発
症を処置するか、または低下させる方法を提供する。この方法は、そのような処
置または低下を必要とする対象体に、下記一般式の化合物またはその薬学的に受
容可能な塩の治療有効量を投与することを含む：

【化１２】式中、Ｒ_１およびＲ_２は独立して、水素、ヒドロキシル、−ＯＭ（Ｍは、直鎖状
または分枝状のＣ_１〜Ｃ_４アルキル、直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_４アルケニ
ル、直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_４アルキニルからなる群から選択される）、
および生体内でヒドロキシルに変換され得る基からなる群から選択され；Ｇは−Ｈまたは−ＣＨ_３であり；そしてＲ３は、ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノおよびＮＲａＲｂ（Ｒａおよ
びＲｂは独立して、水素、直鎖状または分枝状のＣ_１〜Ｃ_６アルキル、直鎖状ま
たは分枝状のＣ_３〜Ｃ_６アルケニル、および直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_６ア
ルキニルである）からなる群から選択される化学種であり；Ｒ_１またはＲ_２はピバロイルオキシ基ではない。

【００１４】別の実施形態において、選択的エストロゲン受容体調節剤またはその薬学的に
受容可能な塩が、腹部脂肪を減少させるために、あるいは腹部脂肪の蓄積を低下
させるために投与される。

【００１５】別の実施形態において、性ステロイド前駆体（例えば、デヒドロエピアンドロ
ステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３ｂ
，１７ｂ−ジオール）が、肥満を処置するために、あるいは体重増加を抑制する
ために、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）に加えて添加される。５
０歳以上の年齢のヒトは、おそらくは前駆体のレベルが年齢とともに望ましくな
いほど低下しやすいために、混合療法に十分に応答すると考えられる。

【００１６】従って、そのような局面において、本発明は、肥満の処置または体重増加の抑
制に対する方法を提供する。この方法は、そのような抑制または処置を必要とす
る対象体に、薬学的な希釈剤またはキャリアとともに、あるいは薬学的な希釈剤
またはキャリアを伴うことなく、少なくとも１つのＳＥＲＭの治療有効量と、デ
ヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロス
ト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオール、および生体内で前記の前駆体のいずれ
かに変換される化合物からなる群から選択される少なくとも１つの性ステロイド
前駆体の有効量とを投与することを含む。

【００１７】別の局面において、本発明は、インスリン抵抗性を発症させる危険性を処置す
るか、または低下させるための方法を提供する。この方法は、そのような処置ま
た低下を必要とする対象体に少なくとも１つのＳＥＲＭの治療有効量を投与する
ことを含む。いくつかの実施形態において、デヒドロエピアンドロステロン、硫
酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジ
オール、および生体内でいずれかに変換される化合物からなる群から選択される
少なくとも１つの性ステロイド前駆体の有効量が、混合療法の一部として同様に
投与される。

【００１８】別の局面において、本発明は、肥満を処置するためのキットを提供する。この
キットは、少なくとも１つのＳＥＲＭを含む第１の容器と、デヒドロエピアンド
ロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３
ｂ，１７ｂ−ジオール、および生体内でいずれかに変換される化合物からなる群
から選択される少なくとも１つの性ステロイド前駆体を含む第２の容器とを有す
る。

【００１９】薬学的な賦形剤、キャリアまたは希釈剤もまた、前記容器の１つまたは複数に
おいて提供され得る。薬学的な賦形剤、キャリアまたは希釈剤は、この分野で知
られている保存剤および他の添加剤を含み得る。薬学的な賦形剤、キャリアまた
は希釈剤はまた、本明細書中に記載されている様々な発明のいずれかの実施形態
において使用されるいずれかの有効成分とともに含まれ得る。

【００２０】本明細書中で使用されているように、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥ
ＲＭ）は、直接的に、あるいはその活性な代謝体を介して、乳組織においてエス
トロゲン受容体アンタゴニスト（「抗エストロゲン」）として機能する化合物で
あるが、それにもかかわらず、（すなわち、血清コレステロールを減少させるこ
とによって）体脂肪、骨組織および血清コレステロールレベルに対するエストロ
ゲン様作用をもたらす化合物である。インビトロにおいて、あるいはヒトまたは
ラットの乳組織においてエストロゲン受容体アンタゴニストとして機能する非ス
テロイド化合物は、（特に、化合物がヒト乳ガン細胞に対する抗エストロゲンと
して作用する場合には）ＳＥＲＭとして機能することが考えられる。本発明者ら
によって試験され、ＳＥＲＭとして機能することを見出された非ステロイド抗エ
ストロゲンには、ＥＭ−８００、ＥＭ−６５２、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ（ＥＭ−
０１５３８）、ラロキシフェン、タモキシフェン、イドキシフェン、トリメフェ
ン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ３３５５６３、ＧＷ５６３８およびドロロキシフェ
ンが含まれる（これらは下記においてより詳しく記載される）。ＳＥＲＭは、本
発明のいずれかの実施形態に従って、好ましくは、これらの化合物が抗エストロ
ゲンとして使用されるときにこの分野で知られているのと同じ投薬量で投与され
る。

【００２１】理論によりとらわれることを意図しないが、ＳＥＲＭは、その多くが１つまた
は複数の炭素原子により連結された２つの芳香族環を好ましくは有しているが、
受容体により最もよく認識される分子の前記部分によってエストロゲン受容体と
相互作用するものと考えられる。そのようなＳＥＲＭはまた、乳組織または子宮
内膜組織におけるアンタゴニスト的性質を、他の組織（特に、骨）における著し
いアンタゴニスト的性質を有することなく選択的に生じさせ得る側鎖を有する。
従って、そのようなＳＥＲＭは、望ましいことに、乳組織および子宮内膜におけ
る抗エストロゲンとして機能し得る一方で、驚くべきことに、そして望ましいこ
とに、体脂肪に対するエストロゲン様活性を有する。

【００２２】本発明はまた、望ましいことにさらなる体重増加を抑制すること、または正常
な体重が達成されない場合でさえ、望ましいことに体重減少を提供することを含
む。

【００２３】本明細書中で使用されているように、肥満の用語は、体重増加をもたらす過剰
な脂肪組織を意味する。本発明の防止方法および処置方法は、体重増加の阻害お
よび体重減少の誘導を含む。本発明は、その体重を正常値にまで減少させること
（および体重を正常値で維持すること）によって肥満のヒトを処置することを含
む。本発明はまた、そのような疾患にかかりやすい人に対する肥満の防止をも含
む。本明細書中における本発明を必要とする患者には、（標準と医学的に認識さ
れる場合と比較して）太りすぎている患者、または体重過多になる危険性を有す
る患者が含まれる。

【００２４】ＳＥＲＭはまた、本発明に従って血中トリグリセリドレベルを低下させるため
に使用することができる。例えば、ＥＭ−８００（これは本明細書中に記載され
ている）は、この目的に対して効果的であると考えられる。

【００２５】別の実施形態において、本発明を実施するための新規な化合物および薬学的組
成物が提供される。

【００２６】そのような処置を必要とするか、あるいは特定の疾患または状態が発症する危
険性を低下させることを必要とする患者は、そのような疾患と診断されている患
者、またはそのような疾患にかかりやすい患者のいずれかである。本発明は、遺
伝、環境的要因または他の認識されている危険因子のために、本発明が関連する
状態にかかる危険性が一般的な人々よりも高い人に対して特に有用である。

【００２７】別途言及されている場合を除き、本発明の有効成分の好ましい投薬量は、治療
目的および予防目的の両方について同一である。本明細書中で議論されている各
有効成分の投薬量は、処置（または防止）されている疾患にかかわらず同じであ
る。

【００２８】２つ以上の異なる活性な薬剤（例えば、酵素阻害剤および抗アンドロゲン）が
本明細書中において混合療法の一部として議論されている場合、多数の活性を有
する１つの化合物よりもむしろ、多数の異なる化合物が投与される。

【００２９】別途示されている場合を除き、用語「化合物」および任意の関連する分子構造
には、ラセミ混合物の形態または光学活性形態におけるその任意の可能な立体異
性体が含まれ得る。

【００３０】別途言及されている場合、または内容から明らかである場合を除き、本明細書
中における投薬量は、薬学的な賦形剤、希釈剤、キャリアまたは他の成分によっ
て影響されない活性化合物の重量をいう：しかし、本明細書中の実施例に示され
ているように、そのようなさらなる成分を含むことは望ましいことである。製薬
業界において広く使用されている任意の投薬形態（カプセル剤、錠剤、注射など
）は、本明細書中における使用に適切であり、「賦形剤」、「希釈剤」または「
キャリア」の各用語には、この業界においてそのような投薬形態物に有効成分と
ともに典型的に含まれるような非活性成分が含まれる。例えば、典型的なカプセ
ル、ピル、腸溶コーティング物、固体または液体の希釈剤または賦形剤、香料、
保存剤などが含まれる。

【００３１】いくつかの実施形態では、本明細書中で議論されている有効成分のプロドラッ
グ（すなわち、生体内で有効成分に変換される化合物）が使用される。本明細書
中で議論されている活性な化合物の官能基に生体内で変換される多くの官能基が
製薬業界では知られている。例えば、「ＤｅｓｉｇｎａｎｄＡｐｐｌｉｃａ
ｔｉｏｎｏｆＰｒｏｄｒｕｇｓ」の第５章、ＡＴｅｘｔｂｏｏｋｏｆ
ＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ＆ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＢｕｎｄｇａａｄ＆Ｌ
ａｒｓｅｎ編、ＨａｒｗｏｏｄＡｃａｄｅｍｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓＧ
ｍｂＨ（Ｃｈｕｒ、スイス、１９９１年）を参照のこと。プロドラッグは、しば
しば、対応する活性な化合物よりも良好な生物利用性、貯蔵安定性および／また
は製造の容易さを提供し得る。

【００３２】本明細書中で議論されている治療のいずれかにおいて使用される有効成分はす
べて、１つまたは複数の他の有効成分もまた含む薬学的組成物に配合され得る。
あるいは、有効成分はそれぞれ、別々に、しかし時間的に十分に同時に投与する
ことができ、その結果、患者は最終的には、有効成分の血中レベルを上昇させ、
あるいはそうでなければ有効成分（または方法）のそれぞれの利益を同時に享受
する。本発明のいくつかの好ましい実施形態において、例えば、１つまたは複数
の有効成分が１つの薬学的配合物に配合され得る。本発明の他の実施形態におい
て、少なくとも２つの別個の容器を含むキットが提供される。この場合、少なく
とも２つの別個の容器において、少なくとも１つの容器の内容物は、容器に含ま
れる有効成分に関して、すべてまたは一部が少なくとも１つの他の容器の内容物
と異なる。２つ以上の異なる容器が本発明の混合療法において使用される。本明
細書中で議論されている混合治療もまた、問題としている疾患の処置（または防
止）に必要な医薬品を製造することにおいて組合せの１つの有効成分を使用する
ことを含む。この場合、処置または防止は組合せの別の有効成分または方法をさ
らに含む。

【００３３】腹部の脂肪は、全身的な体肥満とは異なると考えられ、従って全身的な体肥満
がない場合でも生じ得る。腹部の脂肪はまた、さらには心臓疾患における危険因
子であると考えられている。腹部の脂肪は、本発明に都合よく応答する。

【００３４】本発明の好ましいＳＥＲＭ（例えば、上記の式１のＳＥＲＭ）は、子宮内膜に
おける望ましくないエストロゲン作用を有していない。これは、いくつかの先行
技術の方法において利用されているＳＥＲＭ治療に対する非常に重要な改善であ
る。

【００３５】本発明において使用されているＳＥＲＭは、血中トリグリセリド、そしてまた
インスリン抵抗性を低下させるのに有益であると考えられる。

【００３６】本明細書中で議論されている好ましい実施形態において、ＳＥＲＭの作用は、
ＤＨＥＡまたは類似する性ステロイド前駆体によって増強される。

【００３７】理論によりとらわれることを意図しないが、ＳＥＲＭおよび前駆体を組み合わ
せることによって得られる相乗作用の１つの説明は、それらの作用機構が少なく
とも部分的に異なり得るということである。ＤＨＥＡは、例えば、食欲を抑制す
ることなく食物代謝を増大させるようである。ＳＥＲＭであるＥＭ−６５２．Ｈ
Ｃｌは食物摂取量を抑制するようである。

【００３８】

【発明の実施の形態】

薬学的に受容可能な賦形剤、希釈剤またはキャリアと、治療有効量の選択的エ
ストロゲン受容体調節剤で、下記一般式Ｉ：

【化１３】（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して、水素、ヒドロキシル、−ＯＭ（Ｍは、直鎖
状または分枝状のＣ１〜Ｃ４アルキル、直鎖状または分枝状のＣ３〜Ｃ４アルケ
ニル、直鎖状または分枝状のＣ３〜Ｃ４アルキニルからなる群から選択される）
、および生体内でヒドロキシルに変換され得る基からなる群から選択され；Ｇは−Ｈまたは−ＣＨ３であり；Ｒ３は、ピロリジニル、ピペリジノ、モルホ
リノおよびＮＲａＲｂ（ＲａおよびＲｂは独立して、水素、直鎖状または分枝状
のＣ１〜Ｃ６アルキル、直鎖状または分枝状のＣ３〜Ｃ６アルケニル、および直
鎖状または分枝状のＣ３〜Ｃ６アルキニルである）からなる群から選択される化
学種である）を有する選択的エストロゲン受容体調節剤と、デヒドロエピアンドロステロン、
硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−
ジオール、および生体内でいずれかに変換される化合物からなる群から選択され
る性ステロイド前駆体とを含む薬学的組成物を投与することが好ましい。

【００３９】上記式ＩによるＳＥＲＭは、先行技術で知られているＳＥＲＭとは異なり、子
宮内膜に対するエストロゲン様作用をほとんど有していないという予想外の利点
を提供する。

【００４０】本発明のＳＥＲＭは光学活性であり、そして２位の炭素においてＳの絶対配置
を有する立体異性体を５０％よりも多く有することが好ましい。

【００４１】また、安定性および水溶性（生物利用性）の理由より、本発明のＳＥＲＭが、
式Ｉの化合物と、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファ
ースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロ
クロロチアジド酸、ヒドロキシナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン
酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバ
ル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−ト
ルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸との塩であることは
好ましい。

【００４２】本発明の１つの好ましい化合物は、ＰＣＴ／ＣＡ９６／０００９７（ＷＯ９６
／２６２０１）に報告されているＥＭ−８００である。ＥＭ−８００の分子構造
を下記に示す：

【化１４】

【００４３】本発明の別のさらに好ましい化合物はＥＭ−６５２．ＨＣｌである（これはＥ
Ｍ−０１５３８とも呼ばれる）：

【化１５】

【００４４】ＥＭ−６５２．ＨＣｌは、血清カルニチンレベルを低下させる危険性を増強し
得るピバロイル基を含有しないので、ＥＭ−８００などの他のＳＥＲＭを上回る
さらなる利点を提供する。

【００４５】本発明の他の好ましいＳＥＲＭには下記が含まれる：タモキシフェン（（Ｚ）
−２−［４−（１，２−ジフェニル−１−ブテニル）］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタ
ンアミン）（Ｚｅｎｅｃａ（英国）から入手可能）、トレミフェン（Ｏｒｉｏｎ
−ＦａｒｍｏｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｌａ（フィンランド）またはＳｃｈ
ｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ社から入手可能）、ドロロキシフェンおよびＣＰ−３
３６（ｃｉｓ−１Ｒ−［４’−ピロリジノ−エトキシフェニル］−２Ｓ−フェニ
ル−６−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレンＤ−（−）−酒
石酸塩（ＰｆｉｚｅｒＩｎｃ．（米国）、米国特許第５，８８９，０４２号に
記載される）（これはラソホキシフェンとも呼ばれる）、ラロキシフェン（Ｅｌ
ｉＬｉｌｌｙａｎｄＣｏ．（米国））、ＬＹ３３５５６３およびＬＹ３５
３３８１（ＥｌｉＬｉｌｌｙａｎｄＣｏ．（米国）、ＷＯ９８／４５２８７
、ＷＯ９８／４５２８８およびＷＯ９８／４５２８６に記載される）、イドキシ
フェン（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅＢｅｅｃｈａｍ（米国））、レボルメロキシフ
ェン（３，４−ｔｒａｎｓ−２，２−ジメチル−３−フェニル−４−［４−（２
−（２−（ピロリジンン−１−イル）エトキシ）フェニル］−７−メトキシクロ
マン）（ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ，Ａ／Ｓ（デンマーク））（これは、Ｓｈａ
ｌｍｉ他のＷＯ９７／２５０３４、ＷＯ９７／２５０３５、ＷＯ９７／２５０３
７、ＷＯ９７／２５０３８に、そしてＫｏｒｓｇａａｒｄ他のＷＯ９７／２５０
３６に開示される）、ＧＷ５６３８（Ｗｉｌｌｓｏｎ他（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
ｏｇｙ、１３０（９）、３９０１〜３９１１、１９９７）によって記載される）
およびインドール誘導体（Ｍｉｌｌｅｒ他（ＥＰ０８０２１８３Ａ１）によって
開示される）およびＴＳＥ４２４、ならびにＥＲＡ９２３（ＷｙｅｔｈＡｙｅ
ｒｓｔ（米国）によって開発され、ＪＰ１００３６３４７（Ａｍｅｒｉｃａｎ
ｈｏｍｅｐｒｏｄｕｃｔｓｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に開示される）、およ
びＷＯ９７／３２８３７に記載される非ステロイドエストロゲン誘導体。本発明
の他のＳＥＲＭは、ＷＯ９９／０７３７７；ＷＯ９８／４８８０６；ＥＰ０８２
３４３７Ａ２；ＥＰ０８３８４６４Ａ１；ＥＰ０８３５８６７Ａ１、ＥＰ０８３
５８６８Ａ１；ＥＰ０７９２６４１Ａ１；ＥＰ０８７３９９２Ａ１およびＥＰ０
８９５９８９Ａ１に開示されている。

【００４６】（骨粗鬆症または乳ガンの処置および／または防止のために製造者により推奨
されているような）効能のために必要とされるように使用されるＳＥＲＭはどれ
も使用することができる。適切な投薬量はこの分野で知られている。市販されて
いる他の非ステロイド抗エストロゲンはどれも本発明に従って使用することがで
きる。ＳＥＲＭに類似する活性を有する任意の化合物（例えば、ラロキシフェン
を使用することができる）。

【００４７】本発明に従って投与されるＳＥＲＭは、好ましくは、経口投与される場合には
１日あたり０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは、０．０
５ｍｇ／ｋｇ〜１．０ｍｇ／ｋｇ）の投薬量範囲で投与され、平均的な体重の人
に対しては６０ｍｇ／日（特に、２０ｍｇ／日）が好ましく、あるいは非経口投
与（すなわち、筋肉内投与、皮下投与または経皮投与）の場合には１日あたり０
．００３ｍｇ／ｋｇ体重〜３．０ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは、０．０１５ｍｇ
／ｋｇ〜０．３ｍｇ／ｋｇ）の投薬量範囲で投与され、平均的な体重の人に対し
ては２０ｍｇ／日（特に、１０ｍｇ／日）が好ましい。好ましくは、ＳＥＲＭは
、下記に記載されているように薬学的に受容可能な希釈剤またはキャリアととも
に投与される。

【００４８】好ましい性ステロイド前駆体は、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）
（ＤｉｏｓｙｎｔｈＩｎｃ．（Ｃｈｉｃａｇｏ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ、米国）か
ら入手可能）、そのプロドラッグ（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ（Ｗｉｌｔｏｎ、Ｎｅｗ
Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ、米国）から入手可能）、５−アンドロステン−３ｂ，１７
ｂ−ジオールおよびそのプロドラッグのアンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ
−ジオール３−アセタートおよびアンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオ
ールジヘミスクシナート（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ（Ｗｉｌｔｏｎ、ＮｅｗＨａｍｐ
ｓｈｉｒｅ、米国）から入手可能）である。

【表１】

【００４９】性ステロイド前駆体は、２．０％〜１０％のカプリル酸−カプリン酸トリグリ
セリド（ＮｏｅｂｅｅＭ−５）；１０％〜２０％のヘキシレングリコール：２
．０％〜１０％のジエチレングリコールモノメチルエーテル（Ｔｒａｎｓｕｔｏ
ｌ）；２．０％〜１０％のシクロメチコーン（ＤｏｗＣｏｒｎｉｎｇ３４５
）；１．０％〜２％のベンジルアルコールおよび１．０％〜５．０％のヒドロキ
シプロピルセルロース（ＫｌｕｃｅｌＨＦ）を含有するアルコール性ゲルとし
て配合され得る。

【００５０】キャリア（ＳＥＲＭまたは前駆体のいずれかに対して）はまた、製薬業界にお
いて一般に使用されている様々な添加剤を含むことができる。例えば、芳香剤、
抗酸化剤、香料、ゲル化剤、増粘剤（カルボキシメチルセルロースなど）、界面
活性剤、安定化剤、皮膚軟化剤、着色剤および他の類似する薬剤が存在してもよ
い。有効成分が経皮投与される場合、皮膚上の塗布部位は、有効成分の過度な局
所的濃度、ならびに性ステロイド前駆体のアンドロゲン生成代謝による皮膚皮お
よび脂腺の考えられる過度な刺激を避けるために変えることが望ましい。

【００５１】経口投与される薬学的組成物において、ＤＨＥＡまたは他の前駆体は、好まし
くは、組成物の総重量に対して５重量％〜９８重量％の濃度で存在し、より好ま
しくは５０％〜９８％の濃度で存在し、特に８０量％〜９８％の濃度で存在する
。ＤＨＥＡなどの単一前駆体は唯一の有効成分であり得るか、あるいは多数の前
駆体および／またはそれらのアナログを使用することができる（例えば、ＤＨＥ
Ａ、ＤＨＥＡ−Ｓ、５−ジオールの組合せ、あるいはＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ−Ｓま
たは５−ジオールに生体内で変換される２つ以上の化合物の組合せ、あるいはＤ
ＨＥＡまたは５−ジオールと、ＤＨＥＡまたは５−ジオールに生体内で変換され
るそれらの１つまたは複数のアナログとの組合せなど）。ＤＨＥＡの血中レベル
は、吸収および代謝における個体変動が考慮されている、十分な投薬量の最終的
な判断規準である。

【００５２】好ましくは、主治医は、特に処置を開始する時に、個々の患者の全体的な応答
および（上記に議論された好ましい血清濃度と比較して）ＤＨＥＡの血清レベル
をモニターし、そして処置に対する患者の全体的な応答をモニターし、これによ
り、処置に対する特定の患者の代謝または反応が非定型である場合には必要なよ
うに投薬量を調節する。

【００５３】本発明による処置は、期限を定めずに継続することに好適である。ＤＨＥＡお
よび／または５−ジオールまたは他の前駆体、処置により、ＤＨＥＡレベルが、
更年期前の女性に通常存在する範囲（４マイクログラム／リットル〜１０マイク
ログラム／リットルの血清濃度）に類似するか、または若い成人男性に通常存在
する範囲（４マイクログラム／リットル〜１０マイクログラム／リットルの血清
濃度）に類似する範囲内に単に維持されることが期待される。

【００５４】ＳＥＲＭ化合物および／または性ステロイド前駆体はまた、経口経路によって
投与することができ、また従来の薬学的賦形剤（例えば、噴霧乾燥されるラクト
ース、微結晶セルロース、およびステアリン酸マグネシウム）を用いて、経口投
与用の錠剤またはカプセル剤に配合することができる。

【００５５】活性な物質は、固体の粉末キャリア物質（クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウ
ムまたはリン酸二カルシウムなど）および結合剤（ポリビニルピロリドン、ゼラ
チンまたはセルロース誘導体など）と混合することによって、可能であれば、滑
剤（ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、「Ｃａｒｂｏｗａｘ
」またはポリエチレングリコールなど）をも加えることによって錠剤または糖衣
剤コアに加工することができる。当然のことではあるが、味覚改善物質を、経口
投与形態物の場合には加えることができる。

【００５６】さらなる形態として、例えば、硬ゼラチンのプラグカプセルを、軟化剤または
可塑剤（例えば、グリセリン）を含む密閉された軟ゼラチンカプセルと同様に使
用することができる。プラグカプセルは、好ましくは、例えば、充填剤（ラクト
ース、サッカロース、マンニトール、デンプン（ジャガイモデンプンまたはアミ
ロペクチンなど）、セルロース誘導体、または高分散化ケイ酸など）と混合され
た顆粒の形態で活性な化合物を含有する。軟ゼラチンカプセルにおいて、活性な
物質は、好ましくは、植物油または液状ポリエチレングリコールなどの好適な液
体に溶解または懸濁される。

【００５７】ローション、軟膏、ゲルまたはクリームの形態が可能であり、過剰な部分が明
らかに認められないように皮膚に十分に塗り込まれることが望ましく、そして皮
膚は、経皮的な浸透の大部分が生じるまで、好ましくは少なくとも４時間、より
好ましくは少なくとも６時間、その領域を洗浄すべきではない。

【００５８】知られている技術に従って、経皮パッチを使用して、前駆体またはＳＥＲＭを
送達することができる。経皮パッチは、典型的にははるかに長い時間（例えば、
１日間〜４日間）にわたって適用されるが、典型的には有効成分をより小さな表
面領域に接触させ、それにより有効成分のゆっくりした一定割合での送達を可能
にする。

【００５９】開発され、そして現在使用されている多数の経皮的な薬物送達システムは、本
発明の有効成分を送達するために好適である。放出速度は、典型的には、マトリ
ックスの拡散によって制御されるか、あるいは有効成分は制御用膜を通り抜ける
ことによって制御される。

【００６０】開発され、そして現在使用されている多数の経皮的な薬物送達システムは、本
発明の有効成分を送達するために好適である。放出速度は、典型的には、マトリ
ックスの拡散によって制御されるか、あるいは有効成分は制御用膜を通り抜ける
ことによって制御される。

【００６１】経皮的なデバイスの機構的局面は、ラットにおいて十分に知られており、例え
ば、米国特許第５，１６２，０３７号、同第５，１５４，９２２号、同第５，１
３５，４８０号、同第４，６６６，４４１号、同第４，６２４，６６５号、同第
３，７４２，９５１号、同第３，７９７，４４４号、同第４，５６８，３４３号
、同第５，０６４，６５４号、同第５，０７１，６４４号、同第５，０７１，６
５７号に説明されている（これらの開示は参考として本明細書中に組み込まれる
）。さらなる背景が、欧州特許第０２７９９８２号および英国特許出願第２１８
５１８７号によって提供されている。

【００６２】デバイスは、接着性マトリックス型またはリザーバー型の経皮送達デバイスを
含むこの分野で知られている一般的なタイプのいずれかであり得る。このような
デバイスは、有効成分および／またはキャリアを吸収する繊維が配合された薬物
含有マトリックスを含む。リザーバー型デバイスにおいて、リザーバーは、キャ
リアおよび有効成分に対して不透過性であるポリマー膜によって規定され得る。

【００６３】経皮的なデバイスでは、デバイス自体により、有効成分が所望する局在化され
た皮膚表面との接触状態で維持される。そのようなデバイスにおいては、有効成
分に対するキャリアの粘度は、クリームまたはゲルの場合よりも重要ではない。
経皮的デバイスに対する溶媒システムは、例えば、オレイン酸、直鎖アルコール
ラクタートおよびジプロピレングリコール、またはこの分野で知られている他の
溶媒システムを含み得る。有効成分はキャリアに溶解または懸濁され得る。

【００６４】皮膚に付着させるために、経皮パッチは、孔が中央部に開けられている手術用
の接着テープで固定することができる。接着部は、好ましくは、使用前に、接着
部を保護するために剥離ライナーによって覆われる。剥離に好適な典型的な材料
には、除去を容易にするためにシリコーンコーティングされていることが好まし
いポリエチレンおよびポリエチレンコーティング紙が含まれる。デバイスを貼り
付けるために、剥離ライナーは単に剥がされ、そして接着部が患者の皮膚に付け
られる。米国特許第５，１３５，４８０号（その開示は参考として組み込まれる
）において、Ｂａｎｎｏｎ他は、デバイスを皮膚を固定するための非接着性手段
を有する代わりのデバイスを記載している。

【００６５】本発明の経皮的または経粘膜的な送達システムもまた、肥満の防止および／ま
たは処置に対する新規な改善された送達システムとして使用することができる。

【００６６】本発明の方法の有効性の例実施例３卵巣摘出ラットにおける体脂肪および体重パラメーターに対するＥＭ−６５２．
ＨＣｌによる２０日間の処置の効果

【００６７】材料および方法動物および処置処置開始時において体重が約２００ｇ〜２２５ｇである８週齢〜１０週齢の雌
性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）Ｂｒ）（Ｃｈａ
ｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｓｔ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ、カ
ナダ）を使用した。実験を開始する１週間前から動物を環境条件（温度：２２±
３℃；１０時間照明−１４時間消灯のサイクル、０６：００時に点灯）に順応さ
せた。動物を従来型のステンレススチール製ケージに１匹づつ入れて、飲み水と
、トウモロコシデンプン（３１．２）；デキストロース（３１．２）；カゼイン
（２０．０）；トウモロコシ油（６．４）；ｄｌ−メチオニン（０．３）；ビタ
ミン混合物（１．０）；ＡＩＮ−７６ミネラル混合物（４．９）および繊維（５
．０）（ｇ／１００ｇ）から構成される高炭水化物混合飼料とを自由に摂取させ
た。実験を、カナダ動物管理委員会（ＣａｎａｄａＣｏｕｎｃｉｌｏｎＡ
ｎｉｍａｌＣａｒｅ）承認施設において、実験動物の管理および使用に関する
ＣＣＡＣ指針に従って行った。

【００６８】４０匹のラットを、下記のように、それぞれが１０匹からなる４つの群に無作
為に分けた：１）無傷コントロール；２）ＯＶＸコントロール；３）ＯＶＸ＋Ｅ
Ｍ−６５２．ＨＣｌ（０．５ｍｇ／ラット、約２．５ｍｇ／ｋｇ）；４）ＯＶＸ
＋エストラジオール（Ｅ２、インプラント）。研究の１日目に、適切な群の動物
は、イソフラン麻酔のもとで両側の卵巣摘出が行われた。エストラジオールのＳ
ｉｌａｓｔｉｃインプラント（Ｅ２）を第４群の各動物の背側領域の皮下に１個
挿入した。Ｅ２の生理学的レベルをもたらす予備実験で選ばれたこのインプラン
トは下記のステロイド濃度およびサイズを有していた：Ｅ２：コレステロール（
１：５０、ｗ：ｗ）、０．５ｃｍ（ｓｉｌａｓｔｉｃ管材で希釈されたステロイ
ドの長さ）、０．１２５インチ（ｓｉｌａｓｔｉｃ管材の外径）および０．０６
２インチ（ｓｉｌａｓｔｉｃ管材の内径）。エストラジオールのインプラントは
、動物内へのその皮下挿入の前に３７℃で０．９％ＮａＣｌに一晩浸けられた。
ＥＭ−６５２．ＨＣｌまたはビヒクル単独（０．４％メチルセルロースを含む水
）による処置を研究の２日目に開始した。化合物またはビヒクルは、経口胃管栄
養補給によって０．５ｍｌ／ラットで２０日間にわたって１日に１回投与された
。

【００６９】最後の投与を行った約２４時間後、一晩絶食させた動物をケタミン−キシラジ
ンで麻酔し、血液を心臓穿刺により抜き取った。血液は、白色脂肪組織および褐
色脂肪組織と同様に採取された。

【００７０】体重、食物摂取量、ならびにエネルギー、脂肪およびタンパク質における体重
増加の測定体重、食物摂取量、ならびにエネルギー、脂肪およびタンパク質における体重
増加を、Ｄｅｓｈａｉｅｓ他、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１９９７；２７３
、Ｅ３５５〜Ｅ３６２（１９９７）に従って測定した。

【００７１】結果図５Ａに示されているように、Ｏ_ＶＸ動物におけるインスリン抵抗性の発症が
、空腹時の高インスリン血症（これは、通常、インスリン抵抗性の程度と比例す
る）および空腹時の高血糖（これは、正常なレベルの血中グルコースを維持する
ためのインスリンの有効性が喪失していることを反映するものである）の存在に
よって確認された。エストラジオールおよびＥＭ−６５２．ＨＣｌはともに、Ｏ
_ＶＸによって誘導されるインスリン抵抗性を防止した。

【００７２】図６Ａおよび図６Ｃは、ＯＶＸにより、総体脂肪の観測された変化を代表する
鼠蹊部脂肪組織および後腹膜脂肪組織の質量（量）が増大したことを示している
。この増大は、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ処置によって完全に抑えられた。エストラ
ジオールの場合、その効果はそれほど大きくなかった。同じパターンが、リポタ
ンパク質リパーゼ活性が報告されている図６Ｂおよび図６Ｄに示されている。こ
の酵素は、トリグリセリドの筋肉内での加水分解を調節し、それにより脂肪貯蔵
部への脂肪酸の進入を調節している。

【００７３】褐色脂肪組織は、齧歯類における主要な熱発生エフェクターである。卵巣摘出
は、肩甲骨褐色脂肪細胞において、白色脂肪細胞の場合とは異なるパターンを示
した。褐色脂肪組織の重量は、白色脂肪細胞で観測されたように２倍増大した（
図７Ａ）。しかし、タンパク質含有量（図７ｂ）およびリポタンパク質活性（図
７Ｃ）は、ＯＶＸ後、それぞれ３３％および３０％低下した。これらの３つのパ
ラメーターに基づき、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ処置により、卵巣摘出の作用は完全
に打ち消された。

【００７４】ひらめ筋の重量は、通常、生物のタンパク質量の状態の良好な指標である。予
想されるように、ひらめ筋の重量は、図８に示されているように、Ｏ_ＶＸによっ
て増大した（食物摂取量の増大は、脂肪として、そしてタンパク質としての両方
でエネルギー堆積の増大をもたらす）。エストラジオール処置およびＥＭ−６５
２．ＨＣｌ処置はともに筋肉重量の増大を防止した。筋肉におけるリポタンパク
質リパーゼは、多くの場合、インスリン感受性との正の関連性を有している（感
受性が良好なほど、筋肉内のリポタンパク質リパーゼが多くなる）。Ｏ_ＶＸは、
ひらめ筋におけるリポタンパク質リパーゼ活性を低下させた。これは、筋肉にお
けるインスリン抵抗性の発症を示す間接的な証拠である。エストラジオール処置
およびＥＭ−６５２．ＨＣｌ処置はともに筋肉リポタンパク質リパーゼの低下を
防止した。

【００７５】

【表２】

【００７６】消化エネルギー摂取量は、（繊維などの非消化性物を考慮に入れた）２０日間
の処置のときに摂取されたエネルギーの総量である。

【００７７】エネルギー獲得は、２０日間の処置を通じて、脂肪＋タンパク質として蓄積し
たキロジュール量である。

【００７８】見かけのエネルギー消費は、（エネルギー摂取量およびエネルギー獲得から計
算される）代謝必要量および運動のために消費されたエネルギー量である。これ
は、（Ｏ_ＶＸ動物などのように）非脂肪量が多くなると、大きくなることが予想
される。

【００７９】食物効率は、摂取されたエネルギーが脂肪およびタンパク質として蓄積する効
率である（摂取された１００ｋＪあたりの蓄積したｋＪ数）。

【００８０】実施例４本発明の好ましい化合物の合成例（Ｓ）−（＋）−７−ヒドロキシ−３−（４’−ヒドロキシフェニル）−４−
メチル−２−（４’’−（２’’’−ピペリジノ−エトキシ）フェニル）−２Ｈ
−１−ベンゾピラン塩酸塩ＥＭ−０１５３８（ＥＭ−６５２．ＨＣｌ）

【化１６】工程Ａ：ＢＦ３．Ｅｔ２０、トルエン；１００℃；１時間。工程Ｃ：３，４−ジヒドロピラン、ｐ−トルエンスルホン酸−水和物、酢酸エ
チル；窒素下で２５℃、１６時間、その後、イソプロパノールで結晶化。工程Ｄ、ＥおよびＦ：（１）ピペリジン、トルエン、Ｄｅａｎ＆Ｓｔａｒｋ装置、窒素下で還流；（２）１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ−７−エン、ＤＭＦ、３
時間の還流；（３）ＣＨ３ＭｇＣｌ、ＴＨＦ、−２０℃〜０℃、その後、室温で２４時間；工程Ｇ、Ｈ：（１Ｓ）−（＋）−１０−カンファースルホン酸、アセトン、水
、トルエン、室温で４８時間。工程ＨＨ：９５％エタノール、７０℃、その後、室温で３日間。工程ＨＨＲ：工程ＨＨの母液および洗浄液の再使用、（Ｓ）−（＋）−１０−
カンファースルホン酸、還流；３６時間、その後、室温で１６時間。工程Ｉ：（１）ＤＭＦａｑ．、Ｎａ２ＣＯ３、酢酸エチル；（２）エタノール、希ＨＣｌ；（３）水。

【００８１】２−テトラヒドロピラニルオキシ−４−ヒドロキシ−２’−（４’’−テトラ
ヒドロピラニルオキシフェニル）アセトフェノン（４）の合成２，４−ジヒドロキシ−２’−（４’’−ヒドロキシフェニル）アセトフェノ
ン３（９７．６ｇ、０．４ｍｏｌ）（ＣｈｅｍｓｙｎＳｃｉｅｎｃｅＬａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌｅｎｅｘａ、Ｋａｎｓａｓ）から入手可能）を３，４−
ジヒドロピラン（２１８ｍｌ、３．３９ｍｏｌ）および酢酸エチル（５２０ｍｌ
）に懸濁させた懸濁物をｐ−トルエンスルホン酸−水和物（０．０３ｇ、０．１
５８ｍｍｏｌ）で約２５℃で処理した。反応混合物を、窒素下、外部からの加熱
を行うことなく約１６時間攪拌した。その後、混合物を、重炭酸ナトリウム（１
ｇ）および塩化ナトリウム（５ｇ）を含む水溶液（１００ｍｌ）で洗浄した。相
を分離して、有機相をブライン（２０ｍｌ）で洗浄した。それぞれの洗浄液を５
０ｍｌの酢酸エチルで逆抽出した。すべての有機相を一緒にし、硫酸ナトリウム
に通してろ過した。

【００８２】溶媒（約６００ｍｌ）を大気圧下での蒸留によって除き、イソプロパノール（
２５０ｍｌ）を加えた。さらなる溶媒（約３００ｍｌ）を大気圧下で蒸留して、
イソプロパノール（２５０ｍｌ）を加えた。さらなる溶媒（約２７５ｍｌ）を大
気圧下で蒸留して、イソプロパノール（２５０ｍｌ）を加えた。溶液を攪拌しな
がら約２５℃で冷却した。約１２時間後、結晶の固体をろ過し、イソプロパノー
ルで洗浄して、乾燥した（１１６．５ｇ、７０％）。

【００８３】４−ヒドロキシ−４−メチル−２−（４’−［２’’−ピペリジノ］エトキシ
）−３−（４’’’−テトラヒドロピラニルオキシ）フェニル−７−テトラヒド
ロピラニルオキシクロマン（１０）の合成２−テトラヒドロピラニルオキシ−４−ヒドロキシ−２’−（４’’−テトラ
ヒドロピラニルオキシフェニル）アセトフェノン４（１ｋｇ、２．４２ｍｏｌ）
、４−［２−（１−ピペリジノ）エトキシ］ベンズアルデヒド５（５９４ｇ、２
．５５ｍｏｌ）（ＣｈｅｍｓｙｎＳｃｉｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（Ｌｅｎｅｘａ、Ｋａｎｓａｓ）から入手可能）およびピペリジン（８２．４ｇ
、０．９７ｍｏｌ）（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙＩ
ｎｃ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）から入手可能）をトルエン（８Ｌ）
に溶解した溶液を、１当量の水（４４ｍｌ）が回収されるまで、Ｄｅａｎ＆Ｓｔ
ａｒｋ装置を用いて窒素下で還流した。

【００８４】トルエン（６．５Ｌ）を大気圧下での蒸留によって溶液から除いた。ジメチル
ホルムアミド（６．５Ｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデ
カ−７−エン（１１０．５ｇ、０．７２６ｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で約８
時間攪拌して、カルコン８をクロマノン９に異性化させ、その後、水および氷（
８Ｌ）およびトルエン（４Ｌ）の混合物に加えた。相を分離し、トルエン層を水
（５Ｌ）で洗浄した。水性洗浄液を一緒にして、トルエンで抽出した（３ｘ４Ｌ
）。トルエン抽出物を一緒にし、ブライン（３ｘ４Ｌ）で最終的に洗浄し、大気
圧下で濃縮して５．５Ｌにし、その後、−１０℃に冷却した。

【００８５】外部からの冷却および攪拌を窒素下で続け、そして温度を０℃未満で維持しな
がら、塩化メチルマグネシウムのＴＨＦにおける３Ｍ溶液（２．５Ｌ、７．５ｍ
ｏｌ）（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙＩｎｃ．（Ｍｉ
ｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）から入手可能）を加えた。すべてのグリニャール試
薬を加えた後、外部からの冷却を除き、混合物を室温に暖めた。混合物をこの温
度で約２４時間攪拌した。

【００８６】混合物を約−２０℃に再び冷却し、そして外部からの冷却および攪拌を続け、
温度を２０℃未満で維持しながら、飽和塩化アンモニウム溶液（２００ｍｌ）を
ゆっくり加えた。混合物を２時間攪拌し、その後、飽和塩化アンモニウム溶液（
２Ｌ）およびトルエン（４Ｌ）を加えて、５分間攪拌した。相を分離し、水層を
トルエンで抽出した（２ｘ４Ｌ）。トルエン抽出物を一緒にして、溶液が均一に
なるまで希塩酸で洗浄し、次いでブライン（３ｘ４Ｌ）で洗浄した。最後に、ト
ルエン溶液を大気圧下で濃縮して２Ｌにした。この溶液をそのまま次工程で使用
した。

【００８７】（２Ｒ，Ｓ）−７−ヒドロキシ−３−（４’−ヒドロキシフェニル）−４−メ
チル−２−（４’’−［２’’’−ピペリジノ］エトキシ）フェニル）−２Ｈ−
１−ベンゾピラン（１Ｓ）−１０−カンファースルホン酸塩（±１２）の合成４−ヒドロキシ−４−メチル−２−（４’−［−２’’ピペリジノ］エトキシ
）フェニル−３−（４’’’−テトラヒドロピラニルオキシ）フェニル−７−テ
トラヒドロピラニルオキシクロマン（１０）のトルエン溶液に、アセトン（６Ｌ
）、水（０．３Ｌ）および（Ｓ）−１０−カンファースルホン酸（５６１ｇ、２
．４２ｍｏｌ）（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙＩｎｃ
．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）から入手可能）を加えた。混合物を窒素下
で４８時間攪拌し、その後、固体の（２Ｒ，Ｓ）−７−ヒドロキシ−３−（４’
−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−２−（４’’−［２’’’−ピペリジノ
］エトキシ）フェニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン（１Ｓ）−１０−カンファー
スルホン酸塩（１２）をろ過し、アセトンで洗浄し、乾燥した（８８３ｇ）。こ
の物質を、さらに精製することなく次の（ＨＨ）工程で使用した。

【００８８】（２Ｓ）−７−ヒドロキシ−３−（４’−ヒドロキシフェニル）−４−メチル
−２−（４’’−［２’’’−ピペリジノ］エトキシ）フェニル）−２Ｈ−１−
ベンゾピラン（１Ｓ）−１０−カンファースルホン酸塩（１３、（＋）−ＥＭ−
６５２（１Ｓ）−ＣＳＡ塩）の合成（２Ｒ，Ｓ）−７−ヒドロキシ−３−（４’−ヒドロキシフェニル）−４−メ
チル−２−（４’’−［２’’’−ピペリジノ］エトキシ）フェニル）−２Ｈ−
１−ベンゾピラン（１Ｓ）−１０−カンファースルホン酸塩（±１２）（７５９
ｇ）を９５％エタノールに懸濁させた懸濁物を、固体が溶解するまで攪拌しなが
ら約７０℃に加熱した。溶液を攪拌しながら室温に冷却し、その後、（２Ｒ）−
７−ヒドロキシ−３−（４’−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−２−（４’
’−［２’’’−ピペリジノ］エトキシ）フェニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン
（１Ｓ）−１０−カンファースルホン酸塩１３の数粒の結晶を接種した。溶液を
室温において合計で約３日間攪拌した。結晶をろ過し、９５％エタノールで洗浄
し、乾燥した（２９１ｇ、７６％）。生成物のｄｅは９４．２％であり、純度は
９８．８％であった。

【００８９】（Ｓ）−（＋）−７−ヒドロキシ−３−（４’−ヒドロキシフェニル）−４−
メチル−２−（４’’−［２’’’−ピペリジノ］エトキシ）フェニル）−２Ｈ
−１−ベンゾピラン塩酸塩ＥＭ−０１５３８（ＥＭ−６５２．ＨＣｌ）の合成化合物１３（ＥＭ−６５２−（＋）−ＣＳＡ塩、５００ｍｇ、０．７２６ｍｏ
ｌ）をジメチルホルムアミド（１１μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）に懸濁させた懸濁
物を０．５Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（７．０ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）で処理し、
１５分間攪拌した。この懸濁物を酢酸エチル（７．０ｍＬ）で処理し、４時間攪
拌した。その後、有機相を飽和炭酸ナトリウム水溶液（２ｘ５ｍｌ）およびブラ
イン（１ｘ５ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。得られた
ピンク色泡状物（ＥＭ−６５２）をエタノール（２ｍＬ）に溶解した溶液を２Ｎ
塩酸（４００μＬ、０．８０ｍｍｏｌ）で処理し、１時間攪拌し、蒸留水（５ｍ
Ｌ）で処理し、３０分間攪拌した。得られた懸濁物をろ過し、蒸留水（５ｍＬ）
で洗浄し、空気中、高真空下で乾燥（６５℃）して、クリーム状粉末が得られた
（２７６ｍｇ、７７％）：淡灰色の微粉末；走査熱測定：２１９℃で始まる融解
ピーク、ＤＨ＝８３Ｊ／ｇ；［ａ］２４Ｄ＝１５４°（メタノール中、１０ｍｇ
／ｍｌ）；１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３０Ｄ）ｄ（ｐｐｍ）１．６（ｂ
ｒｏａｄ、２Ｈ、Ｈ−４’’’）、１．８５（ｂｒｏａｄ、４Ｈ、Ｈ−３’’’
’および５’’’’）、２．０３（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．０および３．４５
（ｂｒｏａｄ、４Ｈ、Ｈ−２’’’’および６’’’’）、３．４７（ｔ、Ｊ＝
４．９Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−３’’’）、４．２６（ｔ、Ｊ＝４．９Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ
−２’’’）、５．８２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）、６．１０（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ
、１Ｈ、Ｈ−８）、６．３５（ｄｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２．４３Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ
−６）、６．７０（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−３’およびＨ−５’）、６
．８３（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−３’’およびＨ−５’’）、７．０１
（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−２’およびＨ−６’）、７．１２（ｄ、Ｊ＝
８．４Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−５）、７．２４（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−２’
’およびＨ−６’’）；１３Ｃ−ＲＭＮ（ＣＤ３０Ｄ、７５ＭＨｚ）ｄ（ｐｐｍ
）１４，８４、２２．５０、２３．９９、５４．７８、５７．０３、６２．９７
、８１．２２、１０４．３８、１０９．１１、１１５．３５、１１６．０１、１
１８．６８、１２５．７８、１２６．３３、１３０．２６、１３０．７２、１３
１．２９、１３１．５９、１３４．２６、１５４．４２、１５７．５６、１５８
．９６、１５９．３３。元素組成：Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｃｌ：理論値；７０．５１、６
．５３、２．８４、７．１８％、実測値；７０．３１、６．７５、２．６５、６
．８９％。

【００９０】実施例５には、ＬＨＲＨ−Ａによって誘導された脂肪増大が、無傷の雌性ラッ
トにおいて、本発明の化合物であるＥＭ−６５２．ＨＣｌの単独で、または性ホ
ルモン前駆体であるＤＨＥＡとの組合せで防止されることが示されている。６ヶ
月のＬＨＲＨ−Ａ処置は、無傷の雌性ラットの体脂肪の割合を有意に５８％増大
させるが、ＥＭ−６５２．ＨＣｌまたはＤＨＥＡの同時投与により、この増大は
それぞれ３５％および１９％にすぎなかったことが理解され得る。両方の薬物を
組み合わせた場合、脂肪の増大は、ＬＨＲＨ−Ａ処置の後では認められなかった
。

【００９１】実施例６には、２０日間の期間にわたる雌性ラットにおける肥満の防止が示さ
れている。卵巣摘出は、総体脂肪の割合および後腹膜脂肪組織の重量をそれぞれ
２０％および６８％増大させる。ＥＭ−６５２．ＨＣｌ、エストラジオール、Ｄ
ＨＥＡ、ＥＭ−６５２．ＨＣｌとＤＨＥＡとの組合せ、またはＥＭ−６５２．Ｈ
Ｃｌとエストラジオールとの組合せを投与することによって、これらの増大は防
止され、そして体脂肪および後腹膜脂肪組織は、体脂肪についてはそれぞれ、４
６％、４６％、５９％、５６％および４５％低下し、後腹膜脂肪組織については
それぞれ、５９％、７８％、７５％、６９％および６８％低下している。類似す
る実験が実施例７において示される。この場合、肥満の防止が３４週間続き、そ
の後、体脂肪および後腹膜脂肪組織の割合は卵巣摘出により約６０％増大してい
る。この増大は、エチニルエストラジオール、ラロキシフェン（ＥＭ−１１０５
）、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ（ＥＭ−１５３８）、ＤＨＥＡ、またはＥＭ−６５２
．ＨＣｌとＤＨＥＡとの組合せを投与することによって防止されている。

【００９２】実施例８Ａ（オス）および実施例８Ｂ（メス）には、肥満の防止ならびに処置
における本発明の有効性のデータが報告されている。痩身および肥満のＺｕｃｋ
ｅｒ雄性ラットおよび雌性ラットに、２．５ｍｇ／ｋｇ／日のＥＭ−６５２．Ｈ
Ｃｌが２０日間にわたって投与された。防止モデルは痩身ラットによって表され
、一方、肥満の処置モデルは、既に肥満のラットによって表される。体重増加、
白色後腹膜脂肪組織およびひらめ筋におけるリポタンパク質リパーゼ活性、なら
びにインスリン、グルコール、総コレステロールおよびトリグリセリドの血清濃
度に対するデータが、オスの動物については表７に、メスの動物については表８
に報告されている（これらのパラメーターの意味については実施例３を参照のこ
と）。

【００９３】抗エストロゲンＥＭ−６５２．ＨＣｌは、体重増加を、痩身の雄性ラットにつ
いては３８％、肥満の雄性ラットについては３５％と著しく減少させ、一方、白
色後腹膜脂肪組織およびひらめ筋におけるリポタンパク質リパーゼ活性はオスお
よびメスとも変化していない。血漿インスリンは、痩身のオス、肥満のオスおよ
び痩身のメスにおいてそれぞれ、３５％、５７％および４８％低下し、一方、非
常に高レベルのインスリンを示す肥満のメスにおいては、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ
は著しい効果を有していない。肥満群の方が大きい血漿コレステロールもまた、
ＥＭ−６５２．ＨＣｌの投与により低下している。血清グルコースは、ＥＭ−６
５２．ＨＣｌの投与による影響を受けていない。

【００９４】実施例９には、スクロースおよび脂肪が多い餌が与えられている無傷なラット
または卵巣摘出雌性ラットに対するＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＤＨＥＡ、または両
方の組合せの効果が、総体重、鼠蹊部および後腹膜の白色脂肪組織の重量および
リポタンパク質リパーゼ活性、褐色脂肪組織の重量およびリポタンパク質リパー
ゼ活性、ひらめ筋および外側広筋（ＶＬＭ）の重量およびリポタンパク質リパー
ゼ活性について報告されている。血漿中のインスリン、グルコース、総コレステ
ロール、トリグリセリドおよびレプチン、ならびに肝臓のコレステロールおよび
トリグリセリドもまた報告されている。

【００９５】実施例１０には、文献に記載されている種々の選択的エストロゲン受容体調節
剤（ＴＳＥ４２４、ラソホキシフェン、ＬＹ３５３３８１およびラロキシフェン
）による処置を行った後のラットにおける体重増加および脂質−リポタンパク質
代謝に対する効果が、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ（本発明の好ましい化合物）による
処置と同様に報告されている。試験化合物は、経口胃管栄養補給によって、０．
４％メチルセルロースにおいて２０日間にわたって卵巣摘出雌性ラットに投与さ
れた（各化合物について０．５ｍｇ／ラット）。無傷のコントロール、卵巣摘出
（ＯＶＸ）コントロール、および１７−エストラジオール（Ｅ２）で処置された
ＯＶＸラットを参照として使用した。卵巣摘出により増大する体重および食物消
費は、これらの試験化合物を用いた処置により、無傷のコントロールで認められ
たレベルで著しく低下する。鼠蹊部および後腹膜の白色脂肪組織の重量およびリ
ポタンパク質リパーゼ活性は上記の処置により低下している（ただし、鼠蹊部の
白色脂肪組織に対するＴＳＥ４２４およびＬＹ３５３３８１、ならびに鼠蹊部組
織のリポタンパク質リパーゼ活性に対するＴＳＥ４２４およびラソホキシフェン
を除く）。一方、褐色脂肪組織および筋肉は顕著な影響を受けていないようであ
る。試験したすべての化合物はコレステロールおよびトリグリセリドの血漿濃度
を著しく低下させたが、グルコールレベルに対する作用を有していないことが理
解され得る。血漿インスリンは、ＯＶＸラットをＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＴＳＥ
４２４、ラソホキシフェン、ＬＹ３５３３８１およびラロキシフェンで処置する
ことにより低下した。

【００９６】実施例１１および実施例１２には、知られている抗エストロゲンおよび本発明
の化合物のエストロゲン依存性細胞株におけるインビトロ効力が報告されている
。ヒト子宮内膜腺ガンのＩｓｈｉｋａｗａ細胞におけるアルカリホスファターゼ
活性に対する抗エストロゲンの作用が実施例１０の表１１に示されている。抗エ
ストロゲン様活性が、１ｎＭのＥ２で刺激されたアルカリホスファターゼの阻害
の、ｎＭで表されるＩＣ５０として最後の列に報告されており、同時に、試験化
合物の固有的なエストロゲン様活性が、アルカリホスファターゼ活性の１ｎＭの
Ｅ２刺激の割合として、最後から２番目の列に報告されている。最も活性な抗エ
ストロゲンは、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＬＹ３５３３８１、ラロキシフェン、ラ
ソホキシフェンおよびＴＳＥ４２４であることが理解され得る。それ以外は少な
くとも１／１０の活性である。しかし、最も良好な活性化合物の中には、著しい
残留した望ましくないエストロゲン様活性を有しているものがある：ＬＹ３５３
３８１（１６％）、ラソホキシフェン（１８％）およびラロキシフェン（１３％
）。従って、現在のデータは、ＥＭ−６５２．ＨＣｌおよびＴＳＥ４２４の化合
物はＩｓｈｉｋａｗａ細胞において著しいエストロゲン様活性を示さないことを
示している。実施例１２には、ヒト乳ガンＭＣＦ−７細胞におけるＥＭ−６５２
．ＨＣｌ（本発明者らの好ましい化合物）とＴＳＥ４２４との比較により、ＥＭ
−６５２．ＨＣｌの利点が示されている。従って、ＥＭ−６５２．ＨＣｌは、抗
エストロゲンとして、ＴＳＥ４２４よりも４倍以上活性である（阻害のＩＣ５０
が３．７ｎＭに対して０．８ｎＭである）（表１２）。

【００９７】実施例１３では、体重、後腹膜脂肪組織、子宮重量およびコレステロールレベ
ルに対するＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＴＳＥ４２４またはラソホキシフェンによる
２０日間の処置の効果が、市販の齧歯類用飼料を与えた卵巣摘出雌性ラットにお
いて評価された。卵巣摘出は総体重および後腹膜脂肪組織重量をそれぞれ１７％
および１９％増大させたが、０．５ｍｇのＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＴＳＥ４２４
またはラソホキシフェンの投与は、体重増加をそれぞれ６４％、５９％および１
２７％防止し、そして脂肪組織重量値を、調べたすべての化合物について無傷の
コントロール動物で観測された脂肪組織重量値よりも小さくした。ＥＭ−６５２
．ＨＣｌおよびＴＳＥ４２４の投与は、ＯＶＸコントロール動物と比較した場合
、子宮重量に対する作用を有していなかった。しかし、０．５ｍｇのラソホキシ
フェンの投与は、２．５ｍｇのＥＭ−６５２．ＨＣｌを同時に投与することによ
り完全に打ち消される子宮重量の６２％の増大（ｐ＞０．０１）をもたらした。
従って、このことは、ラソホキシフェンのエストロゲン様活性を示唆している。
最後に、総血清コレステロールレベルにおけるＯＶＸにより誘導される増大は、
ＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＴＳＥ４２４およびラソホキシフェンの投与により完全
に防止され、そしてコレステロール値を無傷のコントロール動物で観測されたコ
レステロール値よりも箸しい小さくした。

【００９８】実施例８Ａ痩身および肥満のＺｕｃｋｅｒ雄性ラットにおけるエネルギー収支および脂質−
リポタンパク質代謝に対するＥＭ−６５２．ＨＣｌの効果ＵＲＭＡ−ｒ−６１−９９この研究の目的は、痩身および肥満のＺｕｃｋｅｒ雄性ラットにおけるエネル
ギー収支および脂質−リポタンパク質代謝に対するＥＭ−６５２．ＨＣｌの効果
を明らかにすることであった。この目的のために、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ（２．
５ｍｇ／ｋｇ）が無傷の痩身および肥満のＺｕｃｋｅｒ雄性ラットに１４日間に
わたって１日に１回経口（胃管栄養補給）投与された。

【００９９】試験動物：種：ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）系統：Ｚｕｃｋｅｒ性別：オス体重：投与開始時において、体重は下記の通りであった：痩身ラット：１７５±１５ｇ；肥満ラット：２３５±１５ｇ

【０１００】順応ラットを実験開始の少なくとも５日前から実験室条件に順応させた。

【０１０１】飼育および管理ａ）飼育：ラットは、順応期間中および研究期間中、従来型のステンレススチ
ール製ケージに１匹ずつ入れられた。ｂ）温度：ラット室の温度は１日１回記録された。目標温度は２２±３℃であ
った。ｃ）明暗周期：光周期は１０時間の照明および１４時間の消灯であった。照明
は０７：００につけられ、１７ｈ００に消された。ｄ）餌：順応期間中、ラットには、市販の齧歯類用餌（Ｐｕｒｉｎａ、＃５０
７５）および飲み水が自由に与えられる。研究期間中、ラットには、下記の餌（
餌＃３）が与えられる：デンプン（３１．２）；デキストロース（３１．２）；
カゼイン（２０．０）；トウモロコシ油（６．４）；ｄｌ−メチオニン（０．３
）；ビタミン混合物（１．０）；ＡＩＮ−７６ミネラル混合物（４．９）；繊維
（５．０）（ｇ／１００ｇ）から構成される餌。ラットはその解剖日の朝の０７ｈ００頃から絶食させた（水だけが与えられた
）。

【０１０２】ランダム化：投与初日の前日に、ラットは、等しい平均体重を有する群にする
ために重量測定され、それぞれの群にわりふられた。

【０１０３】方法および実験計画試験群：１６匹の痩身の無傷雄性ラットおよび１６匹の肥満の無傷雄性ラット
を、下記に概略される研究を行うために、８匹のラットからなる４つの群にわり
ふった。

【表３】

【０１０４】投与：試験化合物またはビヒクルの投与を研究の１日目に開始した。試験化合物ＥＭ
−６５２．ＨＣｌを、０．４％メチルセルロースにおける懸濁物として、１４日
間にわたって１日に１回、経口胃管栄養補給（０．５ｍｌ／胃管栄養補給／ラッ
ト）によって投与した。コントロール群のラットには、ビヒクル単独（０．５ｍ
ｌ／胃管栄養補給／ラット）が同じ期間にわたって投与された。

【０１０５】体重順応期間中、動物を、ランダム化のために投与開始前日に重量測定した。その
後、ラットは、投与初日およびその後の２日毎に、そして解剖当日に重量測定さ
れた。体重は１ｇの精度で記録された。

【０１０６】食物消費：食物消費を研究期間中２日毎に評価した。

【０１０７】屠殺方法：約６時間の絶食期間後、動物を、（最後の投与を行った約３０時間後に）解剖
した。動物をケタミン−キシラジンで麻酔し、血液を心臓穿刺により抜き取った
。

【０１０８】血液サンプル：血中の脂質（総コレステロール（ＣＨＯＬ）およびトリグリセリド（ＴＧ））
およびグルコースを、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍＤｉａｇｎｏ
ｓｔｉｃＨｉｔａｃｈｉ９１１Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
ＭａｎｎｈｅｉｍＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｙｓｔ
ｅｍｓ）を使用して凍結血漿サンプルで測定した。循環しているホルモンおよび
物質（レプチン、インスリン）を、下記のキットを用いて凍結血漿サンプルで測
定した：レプチン：ＬｉｎｃｏＲＩＡキットインスリン：ＬｉｎｃｏＲＩＡキット

【０１０９】採取された器官および組織肝臓片（約１ｇ）を、ＴＧおよびＣＨＯＬ含有量のさらなる測定（Ｆｏｌｃｈ
法）のために液体窒素で凍結した。後腹膜脂肪組織およびひらめ筋を、リポタン
パク質リパーゼ（ＬＰＬ）活性のさらなる測定のために採取して、液体窒素で凍
結した。前部前立腺、精巣および精嚢を採取した。前立腺、精巣（左右一緒に）
および右側精嚢（流体を含まない）を重量測定した。右側精嚢は廃棄した。

【表４】

【０１１０】実施例８Ｂ痩身および肥満のＺｕｃｋｅｒ雌性ラットにおけるエネルギー収支および脂質−
リポタンパク質代謝に対するＥＭ−６５２．ＨＣｌの効果ＵＲＭＡ−ｒ−４７−９９この研究の目的は、痩身および肥満のＺｕｃｋｅｒ雌性ラットにおけるエネル
ギー収支および脂質−リポタンパク質代謝に対するＥＭ−６５２．ＨＣｌの効果
を明らかにすることであった。この目的のために、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ（２．
５ｍｇ／ｋｇ）が無傷の痩身および肥満のＺｕｃｋｅｒ雌性ラットに１４日間に
わたって１日に１回経口（胃管栄養補給）投与された。

【０１１１】試験動物の仕様：種：ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）系統：Ｚｕｃｋｅｒ性別：メス体重：投与開始時において、体重は下記の通りであった：痩身ラット：１１４±２ｇ；肥満ラット：１８２±６ｇ

【０１１２】順応：ラットを実験開始の少なくとも５日前から実験室条件に順応させた。

【０１１３】飼育および管理ａ）飼育：ラットは、順応期間中および研究期間中、従来型のステンレススチール製ケー
ジに１匹ずつ入れられた。ｂ）温度：ラット室の温度は１日１回記録された。目標温度は２２？３？Ｃであった。ｃ）明暗周期：光周期は１０時間の照明および１４時間の消灯であった。照明は０７：００に
つけられ、１７ｈ００に消された。ｄ）餌：順応期間中、ラットには、市販の齧歯類用餌（Ｐｕｒｉｎａ、＃５０７５）お
よび飲み水が自由に与えられる。研究期間中、ラットには、下記の餌（餌＃３）
が与えられる：デンプン（３１．２）；デキストロース（３１．２）；カゼイン
（２０．０）；トウモロコシ油（６．４）；ｄｌ−メチオニン（０．３）；ビタ
ミン混合物（１．０）；ＡＩＮ−７６ミネラル混合物（４．９）；繊維（５．０
）（ｇ／１００ｇ）から構成される餌。ラットはその解剖日の朝の０７ｈ００頃
から絶食させた（水だけが与えられた）。

【０１１４】ランダム化：投与初日の２日前に、ラットは、等しい平均体重を有する群にするために重量
測定され、それぞれの群にわりふられた。

【０１１５】方法および実験計画試験群：１６匹の痩身の無傷雌性ラットおよび１６匹の肥満の無傷雌性ラットを、下記
に概略される研究を行うために、８匹のラットからなる４つの群にわりふった。

【表５】

【０１１６】投与：試験化合物またはビヒクルの投与を研究の１日目に開始した。試験化合物ＥＭ
−６５２．ＨＣｌを、０．４％メチルセルロースにおける懸濁物として、１４日
間にわたって１日に１回、経口胃管栄養補給（０．５ｍｌ／胃管栄養補給／ラッ
ト）によって投与した。コントロール群のラットには、ビヒクル単独（０．５ｍ
ｌ／胃管栄養補給／ラット）が同じ期間にわたって投与された。

【０１１７】体重：順応期間中、動物を、ランダム化のために投与開始の２日前に重量測定した。
その後、ラットは、投与初日およびその後の２日毎に、そして解剖当日に重量測
定された。体重は１ｇの精度で記録された。

【０１１８】食物消費食物消費を研究期間中２日毎に評価した。

【０１１９】屠殺方法約６時間の絶食期間後、動物を、（最後の投与を行った約３０時間後に）解剖
した。動物をケタミン−キシラジンで麻酔し、血液を心臓穿刺により抜き取った
。

【０１２０】血液サンプル血中の脂質（総コレステロール（ＣＨＯＬ）およびトリグリセリド（ＴＧ））
およびグルコースを、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍＤｉａｇｎｏ
ｓｔｉｃＨｉｔａｃｈｉ９１１Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
ＭａｎｎｈｅｉｍＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｙｓｔ
ｅｍｓ）を使用して凍結血漿サンプルで測定した。循環しているホルモンおよび
物質（レプチン、インスリン、コルチコステロン）を、下記のキットを用いて凍
結血漿サンプルで測定した：レプチン：ＬｉｎｃｏＲＩＡキットインスリン：ＬｉｎｃｏＲＩＡキット

【０１２１】採取された器官および組織肝臓を採取して、重量測定した。肝臓片（約１ｇ）を、ＴＧおよびＣＨＯＬ含
有量のさらなる測定（Ｆｏｌｃｈ法）のために液体窒素で凍結した。副腎を採取
し、（左右一緒に）重量測定して、廃棄した。子宮および卵巣を採取して、重量
測定し、そしてさらなる組織学的検査のために１０％緩衝化ホルマリン中に保存
した。左側および右側の卵巣（卵管を含まない）を一緒に重量測定した。

【表６】

【０１２２】実施例９ラットにおけるエネルギー収支および脂質−リポタンパク質代謝に対する、単独
または組合せで投与されたＥＭ−６５２．ＨＣｌおよびＤＨＥＡの効果ＵＲＭＡ−ｒ−０３−９９この研究の目的は、ラットにおけるエネルギー収支および脂質−リポタンパク
質代謝に対する、単独または組合せで投与されたＥＭ−６５２．ＨＣｌおよびＤ
ＨＥＡの効果を明らかにすることであった。処置の効果が、高スクロース−高脂
肪餌を与えた無傷（ＩＮＴ）雌性ラットおよび卵巣摘出（ＯＶＸ）雌性ラットに
ＥＭ−６５２．ＨＣｌ（０．５ｍｇ／ラット、約２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）およ
びＤＨＥＡ（２０ｍｇ／ラット、約１００ｍｇ／ｋｇ、局所適用）を単独または
組合せで投与する２０日間の処置を行った後において多くのパラメーターについ
て評価された。比較のために、１つの無傷コントロール群および１つの卵巣摘出
コントロール群には強化飼料が与えられ、一方、他のコントロール動物（無傷お
よびＯＶＸ）には市販の齧歯類用飼料が与えられる。

【０１２３】試験動物：種：ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）系統：Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ
）ＢＲＶＡＦ／ＰｌｕｓＴＭ）性別：メス体重：投与開始時において、体重は約１９０ｇ〜２２０ｇであった。

【０１２４】順応：ラットを実験開始の少なくとも５日前から実験室条件に順応させた。

【０１２５】飼育および管理ａ）飼育ラットは、順応期間中および研究期間中、従来型のステンレススチール製ケー
ジに１匹ずつ入れられた。ｂ）温度：ラット室の温度は１日１回記録された。目標温度は２２±３℃であった。ｃ）明暗周期：光周期は１０時間の照明および１４時間の消灯であった。照明は０６：００に
つけられ、１６ｈ００に消された。ｄ）餌：順応期間中、ラットには、市販の齧歯類用餌（Ｐｕｒｉｎａ、＃５０７５）お
よび飲み水が自由に与えられる。研究期間中、群１＆群２には市販飼料が引き続
き与えられ、一方、群３〜群１０には、スクロース（４５）；トウモロコシ油（
１０）；ラード（１０）；カゼイン（２２．５）；ｄｌ−メチオニン（０．３）
；ビタミン混合物（１．２）；ＡＩＮ−７６ミネラル混合物（５．５）；繊維（
５．５）（ｇ／１００ｇ）から構成される高スクロース−高脂肪飼料が与えられ
る。ラットはその解剖日前夜の２２ｈ００頃から絶食させた（水だけが与えられた
）。

【０１２６】ランダム化：ラットが到着した数日後に、ラットは、等しい平均体重を有する群にするため
に重量測定され、それぞれの群にわりふられた。

【０１２７】方法および実験計画試験群：８０匹のラットを、下記に概略される研究を行うために、８匹のラットからな
る１０群にわりふった。

【表７】 ^１：市販の齧歯類用飼料^２：高スクロース＋高脂肪飼料

【０１２８】動物の準備：研究の０日目に、適切な群のラットをイソフラン麻酔下で（両脇腹切開により
）卵巣摘出した。無傷なラットには偽手術を行った。

【０１２９】投与：試験化合物またはビヒクルの投与を卵巣摘出の翌日（１日目）に開始した。試
験化合物ＥＭ−６５２．ＨＣｌは、０．４％メチルセルロースにおける懸濁物と
して、２０日間にわたって１日に１回、経口胃管栄養補給（０．５ｍｌ／胃管栄
養補給／ラット）によって投与され、一方、ＤＨＥＡは、同じ期間にわたって１
日に１回、背側皮膚に局所適用された（０．５ｍｌ／適用／ラット）。コントロ
ール群のラットには、ビヒクル単独が（経口的および局所的に）投与された。ラ
ットは、最後の投与を行った約２４時間後の研究の２１日目に屠殺された。

【０１３０】体重ラットは、０日目（手術）および研究期間中の２日毎に、そして解剖当日に重
量測定された。体重は１．０ｇの精度で記録された。

【０１３１】食物消費食物消費は研究期間中２日毎に評価される。

【０１３２】屠殺方法研究の２１日目に、一晩絶食させたラットを、最後の投与を行った約２４時間
後に屠殺した。動物をケタミン−キシラジンで麻酔し、血液を心臓穿刺により抜
き取った。

【０１３３】血液サンプル血中の脂質（総コレステロールおよびトリグリセリド）を、Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒＭａｎｎｈｅｉｍＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＨｉｔａｃｈｉ９１１Ａ
ｎａｌｙｚｅｒ（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍＤｉａｇｎｏｓｔ
ｉｃＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｙｓｔｅｍｓ）を使用して凍結血清サンプルで
測定した。循環しているホルモンおよび物質（インスリン、レプチン、グルコー
ス）を、下記のように血清サンプルで測定した：インスリン：ＬｉｎｃｏＲＩＡキットグルコース：Ｂｅｃｋｍａｎｎ自動グルコース分析計レプチン：ＬｉｎｃｏＲＩＡキット

【０１３４】採取された器官および組織すべての動物について、下記の組織を採取して、重量測定した筋肉（ひらめ筋およびＶＬＭ）、脂肪（後腹膜および鼠蹊部）心臓、褐色脂肪
組織。脳もまた採取される。肝臓片を、ＴＧおよびＣＨＯＬ含有量のその後の測定（Ｆｏｌｃｈｉｓ法）の
ために凍結した。それ以外の組織は、ＬＰＬ活性を測定するために処理された。
子宮（および無傷群における卵巣）を取り出し、残存する脂肪を取り除き、重量
測定して、１０％緩衝化ホルマリン中に保存した。

【０１３５】結果

【表８】

【０１３６】実施例１０卵巣摘出雌性ラットにおけるエネルギー収支および脂質−リポタンパク質代謝に
対する、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＴＳＥ４２４、ラソホキシフェン、ＬＹ３５３
３８１およびラロキシフェンの効果ＵＲＭＡ−ｒ−４５−００この研究の目的は、文献に記載されている種々の選択的エストロゲン受容体調
節剤による処置を行った後のラットにおけるエネルギー収支および脂質−リポタ
ンパク質代謝に対する効果を明らかにすること、および得られた結果をＥＭ−６
５２．ＨＣｌの結果と比較することであった。この目的のために、試験化合物が
、卵巣摘出雌性ラットに、０．４％メチルセルロースにおいて２０日間にわたっ
て経口胃管栄養補給によって投与された（それぞれの化合物について０．５ｍｇ
／ラット；０．５ｍｌ／ラット）。無傷のコントロール、卵巣摘出（ＯＶＸ）コ
ントロール、および１７−エストラジオール（Ｅ２）で処置されたＯＶＸラット
を参照として使用した。

【０１３７】試験動物：種：ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）系統：Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ
）ＢＲＶＡＦ／ＰｌｕｓＴＭ）性別：メス体重：投与開始時において、体重は約２００ｇ〜２２５ｇであった。

【０１３８】飼育および管理ａ）飼育：ラットは、順応期間中および研究期間中、従来型のステンレススチール製ケー
ジに１匹ずつ入れられた。ｂ）温度ラット室の環境条件（温度、湿度）は、コンピューター処理された自動化シス
テムを使用して連続的に記録された。目標条件は２２±３℃および５０±２０％
の相対湿度であった。ｃ）明暗周期：光周期は１０時間の照明および１４時間の消灯であった。照明は０７：１５に
つけられ、１７ｈ１５に消された。ｄ）餌：順応期間中、ラットには、証明書付きの齧歯類用飼料（ＬａｂＤｉｅｔ＃
５００２、ペレット）および飲み水が自由に与えられたが、研究期間中は、高炭
水化物飼料（飼料＃３）および飲み水が自由に与えられた。飼料は、トウモロコ
シデンプン（３１．２）；デキストロース（３１．２）；カゼイン（２０．０）
；トウモロコシ油（６．４）；ｄｌ−メチオニン（０．３）；ビタミン混合物（
１．０）；ＡＩＮ−７６ミネラル混合物（４．９）；繊維（５．０）（ｇ／１０
０ｇ）から構成された。ラットはその解剖日の朝の０７ｈ００頃から絶食させた
（水だけが与えられた）。

【０１３９】ランダム化：ラットは、等しい平均体重を有する群にするために、それぞれの群にわりふら
れた。

【０１４０】方法および実験計画試験群：７７匹のラットを、下記に概略される研究を行うために、９匹〜１０匹のラッ
トからなる８群にわりふった。

【表９】

【０１４１】動物の準備：研究の０日目に、群２〜群８のラットをイソフラン麻酔下で（両脇腹切開によ
り）卵巣摘出した。群１のラットには偽手術を行った。

【０１４２】体重ラットは、０日目（手術）、その後、研究期間中の２日毎に、そして解剖当日
に重量測定された。

【０１４３】食物消費食物消費を２日毎に評価した。

【０１４４】体組成（脂肪割合）脂肪割合に対する処置の効果を明らかにするために、体組成を、二重エネルギ
ーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ；ＱＤＲ４５００Ａ、Ｈｏｌｏｇｉｃ、Ｗａｌｔｈ
ａｍ、ＭＡ）を使用して研究の１７日目に測定した。

【０１４５】屠殺方法研究の２１日目に、最後の投与を行った約２４時間後で、６時間の絶食後、動
物をケタミン−キシラジン麻酔のもとで腹部大動脈において失血死させた。

【０１４６】血液サンプル血中の脂質（総コレステロールおよびトリグリセリド）およびグルコースを、
ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＨｉｔａｃ
ｈｉ９１１Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ
ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｙｓｔｅｍｓ）を使用して凍
結血清サンプルで測定した。循環しているホルモンおよび物質（インスリンおよ
びレプチン）を、下記のキットを使用して血清サンプルで測定した：インスリン：ＬｉｎｃｏＲＩＡキットレプチン：ＬｉｎｃｏＲＩＡキット

【０１４７】採取された器官および組織下記の組織を採取して、重量測定した：筋肉（右側ひらめ筋および右側ＶＬＭ）、脂肪（右側後腹膜および右側鼠蹊部
）、褐色脂肪組織、心臓、肝臓、子宮および膣。

【０１４８】肝臓片（約０．５ｇ）を、ＴＧおよびＣＨＯＬ含有量のその後の測定（Ｆｏｌ
ｃｈ法）のために液体窒素で凍結した。すべての組織の約０．１ｇ片（子宮およ
び膣を除く）を、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）活性を測定するために液体
窒素で凍結して、−８０℃で保存した。子宮および膣は、さらなる組織学的検査
のために１０％緩衝化ホルマリン中に保存された。動物の屠体は金属ボックスに
入れられ、エネルギー収支を測定するまで−２０℃で保存された。

【０１４９】結果

【表１０】

【０１５０】実施例１１ヒト子宮内膜腺ガンのＩｓｈｉｋａｗａ細胞におけるアルカリホスファターゼ活
性に対する、本発明の化合物ならびに先行技術の化合物の効果材料保存用細胞培養物の維持十分に分化した子宮内膜腺ガンに由来するヒトＩｓｈｉｋａｗａ細胞株はＥｒ
ｌｉｏＧｕｒｐｉｄｅ博士（ＴｈｅＭｏｕｎｔＳｉｎａｉＭｅｄｉｃａ
ｌＣｅｎｔｅｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＮＹ）により快く分与された。Ｉｓｈｉ
ｋａｗａ細胞は、５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ＦＢＳを含有し、かつ１００Ｕ／ｍｌ
ペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、０．１ｍＭ非必須アミノ酸
溶液が補充されたイーグル最少必須培地（ＭＥＭ）において日常的に維持された
。細胞は、３７℃で、ＦａｌｃｏｎＴ７５フラスコに１．５ｘ１０６細胞の密
度で置床された。

【０１５１】細胞培養実験実験を開始する２４時間前に、コンフルエンスに近いＩｓｈｉｋａｗａ細胞の
培地を、フェノールレッド非含有ハムＦ−１２培地およびダルベッコ改変イーグ
ル培地（ＤＭＥＭ）の１：１（ｖ：ｖ）混合物からなり、１００Ｕ／ｍＬペニシ
リン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２ｍＭグルタミン、および内在性
ステロイドを除くためにデキストランコーティング活性炭で２回処理された５％
ＦＢＳが補充された新しいエストロゲン非含有基本培地（ＥＦＢＭ）で取り換え
た。その後、細胞を、０．１％パンクレアチン（Ｓｉｇｍａ）および０．２５ｍ
ＭのＨＥＰＥＳによって集めて、ＥＦＢＭに再懸濁し、そして１００μｌの容量
でＦａｌｃｏｎ９６ウエルの平底マイクロタイタープレートに２．２ｘ１０４
細胞／ウエルの密度で置床して、プレート表面への接着を２４時間行わせた。そ
の後、培地を、２００μｌの最終容量で、示された濃度の化合物を含有する新し
いＥＦＢＭで取り換えた。４８時間後に培地交換して、細胞を５日間インキュベ
ーションした。

【０１５２】アルカリホスファターゼアッセイインキュベーション期間が終了したとき、マイクロタイタープレートをひっく
り返して、増殖培地を捨てた。プレートを２００μＬのＰＢＳ（０．１５ＭＮ
ａＣｌ、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４）でウエル毎に洗浄した。その
後、注意して少量のＰＢＳを残留させながらＰＢＳをプレートから除いた。この
洗浄手順をもう一度繰り返した。その後、緩衝化生理食塩水を捨て、逆さにした
プレートをペーパータオルの上で静かにふき取った。カバーを置いた後、プレー
トを−８０℃に１５分間置き、その後、室温で１０分間解凍した。次いで、プレ
ートを氷上に置き、５ｍＭのｐ−ニトロフェニルホスフェート、０．２４ｍＭの
ＭｇＣｌ２および１Ｍジエタノールアミン（ｐＨ９．８）を含有する氷冷した溶
液の５０μＬを加えた。その後、プレートを室温に加温して、ｐ−ニトロフェニ
ルが産生することに由来する黄色を発色させた（８分）。プレートを酵素結合免
疫吸着アッセイプレート読み取り装置（ＢＩＯ−ＲＡＤ、モデル２５５０ＥＩ
ＡＲｅａｄｅｒ）において４０５ｎｍでモニターした。

【０１５３】計算用量応答曲線ならびにＩＣ５０値を、加重反復非線形二乗回帰を使用して計算
した。

【０１５４】

【表１１】

【０１５５】実施例１２ヒト乳ガンＭＣＦ−７細胞株の増殖に対するＥＭ−６５２．ＨＣｌおよびＦＣＥ
４２４の効果方法保存用細胞培養物の維持ＭＣＦ−７ヒト乳ガン細胞をＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ＃ＨＴＢ２２から継代数１４７で得た。細胞は、フェ
ノールレッド非含有ダルベッコ改変イーグル−ハムＦ１２培地、上記に述べられ
た補充物および５％ＦＢＳにおいて日常的に生育させた。ＭＣＦ−７ヒト乳腺ガ
ン細胞株は、６９歳の白人女性患者の胸膜滲出液に由来した。ＭＣＦ−７細胞は
、継代数が１４８〜１６５の間で使用され、毎週継代培養された。

【０１５６】細胞増殖実験その後期対数増殖期にある細胞を、０．１％パンクレアチン（Ｓｉｇｍａ）を
用いて集めて、５０ｎｇ／ｍｌのウシインスリンと、内在性ステロイドを除くた
めにデキストランコーティング活性炭で２回処理されたＦＢＳの５％（ｖ／ｖ）
とを含有する適切な培地で再懸濁した。細胞を、示された密度で２４ウエルのＦ
ａｌｃｏｎプラスチック培養プレート（２ｃｍ２／ウエル）に置床して、プレー
ト表面への接着を７２時間行わせた。その後、培地を、９９％再蒸留エタノール
における１０００ｘ保存用溶液から希釈された指示濃度の化合物を含有するＥ２
存在またはＥ２非存在の新しい培地で取り換えた。コントロール細胞は、エタノ
ール性ビヒクル（０．１％ＥｔＯＨ、ｖ／ｖ）のみが与えられた。細胞を、２日
または３日の間隔で培地交換しながら指定された時間間隔でインキュベーション
した。細胞数を、ＤＮＡ含有量を測定することによって求めた。

【０１５７】計算および統計分析用量応答曲線ならびにＩＣ５０値を、加重反復非線形最小二乗回帰を使用して
計算した。すべての結果は平均±ＳＥＭとして表される。

【０１５８】

【表１２】

【０１５９】実施例１３卵巣摘出雌性ラットに、単独で、またはＥＭ−６５２．ＨＣｌと組み合わせて投
与されたＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＴＳＥ４２４およびラソホキシフェンの子宮重
量、脂肪および脂質に対する効果の比較ＵＲＭＡ−ｒ−４４−００この研究の目的は、卵巣摘出雌性ラットに、単独で、またはＥＭ−６５２．Ｈ
Ｃｌと組み合わせて投与されたＥＭ−６５２．ＨＣｌ、ＴＳＥ４２４およびラソ
ホキシフェンによる処置を行った後における子宮および膣の組織学に対する効果
を比較することである。この目的のために、それぞれの化合物が、卵巣摘出雌性
ラットに２０日間にわたって経口投与され、そして処置期間が終了したとき、子
宮および脂肪を採取して、重量測定した。

【０１６０】試験動物の仕様：種：ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）系統：Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ
）ＢＲＶＡＦ／ＰｌｕｓＴＭ）性別：メス体重：投与開始時において、体重は約２２５ｇ〜２５０ｇであった。

【０１６１】飼育および管理ａ）飼育：ラットは、順応期間中および研究期間中、従来型のステンレススチール製ケー
ジに１匹ずつ入れられた。ｂ）温度および湿度：ラット室の環境条件（温度、湿度）は、コンピューター処理された自動化シス
テムを使用して連続的に記録された。目標条件は２２±３℃および５０±２０％
の相対湿度であった。ｃ）明暗周期：光周期は１２時間の照明および１２時間の消灯であった。これらのパラメータ
ーは、確認されたコンピューター処理の自動化システムを使用して連続的に記録
された。照明は０７：１５から１９：１５まで点灯された。ｄ）餌：証明書付きの齧歯類用飼料（ＬａｂＤｉｅｔ＃５００２、ペレット）およ
び飲み水が自由に与えられた。

【０１６２】ランダム化：ラットは、卵巣摘出のときに無作為にそれぞれの群にわりふられた。

【０１６３】試験群：７０匹のラットを、下記に概略される研究を行うために、９匹〜１１匹の動物
からなる７群に分けられた。

【表１３】

【０１６４】動物の準備：群２〜群９のラットは、研究の１日目に、イソフラン誘導麻酔のもとで卵巣摘
出された。

【０１６５】投与：ビヒクルまたは試験化合物を、０．４％メチルセルロースにおける懸濁物とし
て経口胃管栄養補給（０．５ｍｌ／胃管栄養補給／ラット）によって研究の２日
目から２１日目まで投与した。

【０１６６】体重ラットは、研究の１日目および解剖当日（研究の２２日目）に重量測定された
。

【０１６７】屠殺方法最後の投与を行った約２４時間後、一晩絶食させたラットをイソフラン誘導麻
酔のもとで腹部大動脈において失血死させた。

【０１６８】採取された器官および組織子宮および後腹膜脂肪組織を取り出し、重量測定した：

【０１６９】

【表１４】

【０１７０】薬学的組成物の例好ましい活性なＳＥＲＭのＥＭ−８００またはＥＭ−６５２．ＨＣｌが単独で
利用されるか、あるいは好ましい活性な性ステロイド前駆体のＤＨＥＡ、アンド
ロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオール３−アセタートまたはアンドロスト
−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオールジヘミスクシナートのいずれかと組み合わ
せて利用されるいくつかの薬学的組成物が、限定としてではなく、例として下記
に示される。本発明の他の化合物またはその組合せは、ＥＭ−８００またはＥＭ
−６５２．ＨＣｌ、ＤＨＥＡ、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオー
ル３−アセタートまたはアンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオールジヘ
ミスクシナートの代わりに使用することができる（あるいはそれらに加えて使用
することができる）。有効成分の濃度は、本明細書中で議論されているように広
い範囲にわたって変化させることができる。含まれ得る他の成分の量およびタイ
プはこの分野で十分に知られている。

【０１７１】例Ａ本発明の好ましいＳＥＲＭは経口投与される。

【表１５】

【０１７２】例Ｂ

【表１６】

【０１７３】混合療法用の薬学的組成物例Ｃ

【表１７】

【０１７４】例Ｄ

【表１８】

【０１７５】キットの例好ましい活性なＳＥＲＭのＥＭ−８００またはＥＭ−６５２．ＨＣｌと、好ま
しい活性な性ステロイド前駆体のＤＨＥＡ、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１
７ｂ−ジオール３−アセタートまたはアンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−
ジオールジヘミスクシナートとを利用するいくつかのキットが、限定としてでは
なく、例として下記に示される。

【０１７６】本発明の他の化合物またはその組合せは、ＥＭ−８００またはＥＭ−６５２．
ＨＣｌ、ＤＨＥＡ、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオール３−アセ
タートまたはアンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオールジヘミスクシナ
ートの代わりに使用することができる（あるいはそれらに加えて使用することが
できる）。有効成分の濃度は、本明細書中で議論されているように広い範囲にわ
たって変化させることができる。含まれ得る他の成分の量およびタイプはこの分
野で十分に知られている。

【０１７７】例ＡＳＥＲＭは経口投与されるが、性ステロイド前駆体は経皮投与される。

【表１９】

【表２０】

【０１７８】例ＢＳＥＲＭおよび性ステロイド前駆体は経口投与される。経口投与される非ステロイド抗エストロゲン組成物（カプセル剤）

【表２１】経口投与される性ステロイド前駆体組成物（ゼラチンカプセル剤）

【表２２】

【０１７９】他のＳＥＲＭを上記に配合物においてＥＭ−８００またはＥＭ−６５２．ＨＣ
ｌの代わりに使用することができ、同様に他の性ステロイド阻害剤を、ＤＨＥＡ
、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオール３−アセタートまたはアン
ドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオールジヘミスクシナートの代わりに使
用することができる。２つ以上のＳＥＲＭまたは２つ以上の前駆体を含めること
ができる。その場合、組み合わせた重量パーセントは、好ましくは、上記の例に
示されている１個の前駆体または１個のＳＥＲＭに対する重量パーセントである
。

【０１８０】本発明が好ましい実施形態および例に関して記載されているが、本発明はそれ
らによって限定されない。当業者は、添付された請求項のみによって限定される
本発明のより広い適用性および範囲を容易に認識する。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、卵巣摘出ラットにおける総体脂肪に対する、ＳＥＲＭのＥＭ−８００
、ラロキシフェン、タモキシフェンおよび不活性なエナンチオマーのＥＭ−７７
６（ＥＭ−８００のエナンチオマー）を増大させた用量（０．０１ｍｇ／ｋｇ、
０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、経
口、１日に１回）による３５週間の処置の結果を示す。データは、平均±ＳＥＭ
として表されている。^＊＊：ｐ＜０．０１、実験群対それぞれのコントロール。

【図２】図２は、無傷のラット、卵巣摘出ラット、およびＳＥＲＭのＥＭ−６５２．Ｈ
Ｃｌまたはエストラジオールで処置された卵巣摘出ラットにおける、体重増加（
Ａ）、タンパク質増加（Ｂ）および脂肪増加（Ｃ）に対する２０日間の処置の結
果を示す。データは、平均±ＳＥＭとしてグラム（ｇ）で表されている。^＊ｐ＜
０．０５（対無傷群）；†ｐ＜０．０５（対ＯＶＸ＋Ｅ２群、ＥＭ−６５２．Ｈ
Ｃｌ群のみについて）。

【図３】図３は、無傷のラット、卵巣摘出ラット、およびＥＭ−６５２．ＨＣｌまたは
エストラジオールで処置された卵巣摘出ラットにおける累積食物摂取量に対する
２０日間の処置の結果を示す。データは、グラム（ｇ）で表されている。

【図４】図４は、無傷のラット、卵巣摘出ラット、およびＥＭ−６５２．ＨＣｌまたは
エストラジオールで処置された卵巣摘出ラットにおける、タンパク質としての体
エネルギー（Ａ）および脂肪としての体エネルギー（Ｂ）に対する２０日間の処
置の結果を示す。データは、平均±ＳＥＭとしてキロジュール（ｋＪ）で表され
ている。^＊ｐ＜０．０５（対無傷群）；†ｐ＜０．０５（対ＯＶＸ＋Ｅ２群、Ｅ
Ｍ−６５２．ＨＣｌ群のみについて）。

【図５】図５は、無傷のラット、卵巣摘出ラット、およびＥＭ−６５２．ＨＣｌまたは
エストラジオールで処置された卵巣摘出ラットにおける血清インスリンレベルお
よび血清グルコースレベルに対する２０日間の処置の結果を示す。データは、平
均±ＳＥＭとしてｎｍｏｌ／Ｌで表されている。^＊ｐ＜０．０５（対無傷群）。

【図６】図６は、無傷のラット、卵巣摘出ラット、およびＥＭ−６５２．ＨＣｌまたは
エストラジオールで処置された卵巣摘出ラットにおける白色脂肪組織パラメータ
ーに対する２０日間の処置の結果を示す：鼠蹊部（Ａ）および後腹膜（Ｃ）の脂
肪組織重量（データは平均±ＳＥＭとしてグラム（ｇ）で表されている）、鼠蹊
部（Ｂ）および後腹膜（Ｄ）の白色脂肪組織リポタンパク質リパーゼ活性（デー
タは平均±ＳＥＭとして？Ｕ／ｇタンパク質で表されている；^＊ｐ＜０．０５（
対無傷群）；†ｐ＜０．０５（対ＯＶＸ＋Ｅ２群、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ群のみ
について））。

【図７】図７は、肩甲骨褐色脂肪組織パラメーターに対する２０日間の処置の結果を示
す：（Ａ）褐色脂肪組織重量（データは平均±ＳＥＭとしてグラム（ｇ）で表さ
れている、^＊ｐ＜０．０５（対無傷群）；†ｐ＜０．０５（対ＯＶＸ＋Ｅ２群、
ＥＭ−６５２．ＨＣｌ群のみについて））；（Ｂ）タンパク質含有量（データは
平均±ＳＥＭとして組織重量の％で表されている、^＊ｐ＜０．０５（対無傷群）
；†ｐ＜０．０５（対ＯＶＸ＋Ｅ２群、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ群のみについて）
）、（Ｃ）リポタンパク質リパーゼ活性（データは？Ｕ／ｇタンパク質で表され
る）。

【図８】図８は、無傷のラット、卵巣摘出ラット、ならびにエストラジオールおよびＥ
Ｍ−６５２．ＨＣｌで処置された卵巣摘出ラットにおけるひらめ筋の重量（デー
タは平均±ＳＥＭとしてグラム（ｇ）で表されている）およびリポタンパク質リ
パーゼ（データは平均±ＳＥＭとして？Ｕ／ｇタンパク質で表されている；^＊ｐ
＜０．０５（対無傷群））に対する２０日間の処置の結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者デシャイエ，イブカナダ、ジィ・７・エイ３・ワイ・３ケベック州、サン−ニコラ、リュ・ベルベデール、930 (72)発明者リチャード，デニスカナダ、ジィ・１・エス１・アール・４ケベック州、ケベック・シティ、リュ・フラゼ、474 (72)発明者マーテル，セリーヌカナダ、ジィ・２・ジィ２・エイチ・５ケベック州、サン−フォワ、デ・ゴダールビル、1561 Ｆターム(参考） 4C086 AA02 BC21 DA08 GA02 MA02 MA03 MA05 ZA70

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】薬学的に受容可能な希釈剤またはキャリア、治療的に受容可能な量の選択的エストロゲン受容体調節剤で、下記の一般式【化１】（式中、Ｒ_１およびＲ_２は独立して、水素、ヒドロキシル、−ＯＭ（Ｍは、直鎖
状または分枝状のＣ_１〜Ｃ_４アルキル、直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_４アルケ
ニル、直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_４アルキニルからなる群から選択される）
、および生体内でヒドロキシルに変換され得る基からなる群から選択され；Ｇは−Ｈまたは−ＣＨ３であり；Ｒ_３は、ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノおよびＮＲａＲｂ（Ｒａおよ
びＲｂは独立して、水素、直鎖状または分枝状のＣ_１〜Ｃ_６アルキル、直鎖状ま
たは分枝状のＣ_３〜Ｃ_６アルケニル、および直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_６ア
ルキニルである）からなる群から選択される化学種である）を有する選択的エストロゲン受容体調節剤、および任意のエストロゲンを含む薬学的組成物であって、Ｒ_１またはＲ_２はピバロイルオキシ基ではなく、前記化合物または塩は実質的に（２Ｒ）エナンチオマーを有しない薬学的組成物。
【請求項２】薬学的に受容可能な賦形剤、希釈剤またはキャリア、治療的に受容可能な量の選択的エストロゲン受容体調節剤で、ＥＭ−６５２．ＨＣｌ：【化２】からなる群から選択される選択的エストロゲン受容体調節剤、および任意のエストロゲンを含む薬学的組成物。
【請求項３】薬学的に受容可能な賦形剤、希釈剤またはキャリア、治療的に有効で受容可能な量の選択的エストロゲン受容体調節剤で、ＥＭ−０１７３２：【化３】ＥＭ−０１８７２−Ｂ：【化４】ＥＭ−０１９００−Ｂ：【化５】ＥＭ−０１９０３−Ｃ：【化６】からなる群から選択される選択的エストロゲン受容体調節剤、ならびにエストラジオールおよびプレマリンまたは性ステロイド前駆体（性ステロイド
前駆体は、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン
、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオール、および生体内でいずれか
に変換される化合物からなる群から選択される）からなる群から選択されるエス
トロゲンを含む薬学的組成物。
【請求項４】インスリン抵抗性を発症する危険性を処置するか、または低
下させる方法であって、そのような処置または低下を必要とする対象体に、治療
有効量の選択的エストロゲン受容体調節剤で、下記の一般式：【化７】（式中、Ｒ_１およびＲ_２は独立して、水素、ヒドロキシル、−ＯＭ（Ｍは、直鎖
状または分枝状のＣ_１〜Ｃ_４アルキル、直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_４アルケ
ニル、直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_４アルキニルからなる群から選択される）
、および生体内でヒドロキシルに変換され得る基からなる群から選択され；Ｇは−ＣＨ_３であり；そしてＲ_３は、ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノおよびＮＲａＲｂ（Ｒａおよ
びＲｂは独立して、水素、直鎖状または分枝状のＣ_１〜Ｃ_６アルキル、直鎖状ま
たは分枝状のＣ_３〜Ｃ_６アルケニル、および直鎖状または分枝状のＣ_３〜Ｃ_６ア
ルキニルである）からなる群から選択される化学種である）を有する選択的エストロゲン受容体調節剤を投与することを含む方法。
【請求項５】エストラジオールおよびプレマリンまたは性ステロイド前駆
体（性ステロイド前駆体は、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピ
アンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３ｂ，１７ｂ−ジオール、および
生体内でいずれかに変換される化合物からなる群から選択される）からなる群か
ら選択されるエストロゲンの治療有効量を投与することをさらに含む、請求項４
に記載の方法。
【請求項６】前記選択的エストロゲン受容体はＥＭ−６５２．ＨＣｌ【化８】である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】下記の分子構造を有する化合物：ＥＭ−６５２．ＨＣｌ【化９】
【請求項８】薬学的な賦形剤、希釈剤またはキャリアと、治療有効量のＥＭ−６５２．ＨＣｌ【化１０】とを含む薬学的組成物。