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JP2002512628A - Novel heteroaryl compounds for regulating protein tyrosine enzyme-related cell signaling - Google Patents

Novel heteroaryl compounds for regulating protein tyrosine enzyme-related cell signaling

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Publication number
JP2002512628A
JP2002512628A JP50329999A JP50329999A JP2002512628A JP 2002512628 A JP2002512628 A JP 2002512628A JP 50329999 A JP50329999 A JP 50329999A JP 50329999 A JP50329999 A JP 50329999A JP 2002512628 A JP2002512628 A JP 2002512628A
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JP
Japan
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group
protein tyrosine
compound
compounds
cell
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Pending
Application number
JP50329999A
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Japanese (ja)
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タン，ぺン・チョー
マクマホン，ジェラルド
ラムファル，ジョン・ワイ
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Sugen LLC
Original Assignee
Sugen LLC
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】 本発明は新規ヘテロアリール化合物並びにそれらの生理学的に許容し得る塩及びプロドラッグに関し、これは細胞の信号伝達に関連するタンパク質チロシン酵素、特にはタンパク質チロシンホスファターゼの活性を調節することが期待され、したがって、異常なタンパク質チロシン酵素関連細胞信号伝達に関連する障害、例えば、癌及び糖尿病の予防及び治療において有用であるものと期待される。   (57) [Summary] The present invention relates to novel heteroaryl compounds and their physiologically acceptable salts and prodrugs, which are expected to modulate the activity of protein tyrosine enzymes, especially protein tyrosine phosphatases, which are involved in cell signaling, Thus, it is expected to be useful in the prevention and treatment of disorders associated with abnormal protein tyrosine enzyme-related cell signaling, such as cancer and diabetes.

Description

【発明の詳細な説明】 タンパク質チロシン酵素関連の細胞信号伝達を調節するための 新規ヘテロアリール化合物 関連出願 本願は１９９７年６月１３日付の仮出願第６０／０４９，５６０号に関連し、 かつその優先権を主張するものであり、この出願はあたかもここで完全に説明さ れるかの如く組み込まれる。 序 本発明は、一般には、有機化学、生化学、薬理学及び医薬に関する。特には、 細胞信号伝達に関連するタンパク質チロシン酵素の活性を調節し、したがって、 異常なタンパク質チロシン酵素関連細胞信号伝達に関連する障害に対して有益な 効果を示すことが期待される新規ヘテロアリール化合物並びにそれらの生理学的 に許容し得る塩及びプロドラッグに関する。 発明の背景 細胞信号伝達は、それによって多様な細胞プロセスを調節する外部の刺激が細 胞内部に関連付けられる基本的な機構である。細胞内で信号を伝達する生化学的 経路は、直接、もしくは機能的に接続する相互作用性タンパク質の回路網を含む 。信号伝達の鍵となる生化学的機構の１つは、タンパク質上のチロシン残基の可 逆的リン酸化に関与する。タンパク質のリン酸化状態はその立体配座及び／又は 酵素活性はもちろん、細胞でのその位置にも影響を及ぼし得る。タンパク質のリ ン酸化状態は、様々な特定のチロシン残基でのタンパク質チロシンキナーゼ（Ｐ ＴＫＳ）及びタンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰＳ）の相反性作用によ って変化する。 受容体が細胞の機能を調節する一般的な機構は、受容体に内在性の、又はその 受容体と会合する他のタンパク質によって付与される誘発性チロシンキナーゼ活 性によるものである（Darnellら,1994,Science,264:1415-1421；Heldin,1995, Cell ,80:212-223；Pawson,1995,Nature,373:573-580）。 タンパク質チロシンキナーゼは複数の機能的ドメインを有する膜貫通受容体及 び細胞内酵素の大集団を含む（Taylorら，1992，Ann ．Rev．Cell Biol. 8:429-6 2）。リガンドの結合が細胞膜を通して信号をアロステリックに伝達し、そこで ＰＴＫの細胞質部分が分子相互作用のカスケードを開始させ、これがその信号を 細胞全体及び核内に広める。多くの受容体タンパク質チロシンキナーゼ（ＲＰＴ Ｋ）、例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）及び血小板誘導成長因子受容体 （ＰＤＧＦＲ）はリガンド結合の際にオリゴマー化を受け、それらの受容体は細 胞質部分の特定のチロシン残基で（自己リン酸化（autophosphorylation）又は トランスリン酸化により）自己リン酸化（self-phosphorylate）する（Schlessi nger及びUllrich，1992，Neuron，9:383-91，Heldin，1995，Cell，80:213223） 。細胞質タンパク質チロシンキナーゼ（ＣＰＴＫ）、例えば、ヤヌス（Janus） キナーゼ（例えば、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＴＹＫ２）及びＳｒｃキナーゼ（例え ば、ｓｒｃ、ｌｃｋ、ｆｙｎ）はサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、 ＩＬ−６、エリスロポエチン）、インターフェロン及び抗原の受容体と会合する 。これらの受容体もまたオリゴマー化を受け、活性化の間にリン酸化するチロシ ン残基を有するが、受容体のポリペプチドそれ自体はキナーゼ活性を持たない。 ＰＴＫＳと同様に、タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰＳ）は、コン センサスモチーフ［Ｉ／Ｖ］ＩＨＣＸＡＧＸＸＲ［Ｓ／Ｔ］Ｇを伴う高度に保存 された活性部位を含む少なくとも約２３０アミノ酸触媒ドメインを有する、膜貫 通及び細胞質酵素の集団を含む。ＰＴＰの基質はホスホチロシン残基を有するＰ ＴＫ又はＰＴＫの基質であり得る（Hunter，1989，Cell，58:1013-16；Fischer ら，1991，Science，253:401-6；Saito & Streuli，1991，Cell Growth and Dif ferentiation ，2:59-65；Pot及びDixon，1992，Biochem ．Biophys．Acta，1136: 35-43）。 膜貫通又は受容体様ＰＴＰ（ＲＰＴＰＳ）は細胞外ドメイン、１つの膜貫通ド メイン、及び短い細胞質尾部を伴う１つもしくは２つの触媒ドメインを有する。 これらのＲＰＴＰの細胞外ドメインは高度に分岐し、小グリコシル化セグメント （例えば、ＲＰＴＰα、ＲＰＴＰε）、免疫グロブリン様及び／又はフィブロネ クチンIII型ドメインの縦列反復（例えば、ＬＡＲ）又は脱炭酸酵素様ドメイン （例えば、ＲＰＴＰα、ＲＰＴＰβ）を有する。これらの細胞外の特徴は、これ らのＲＰＴＰが細胞表面上の受容体として機能し、それらの酵素活性がリガンド によって調節されることを示唆するものであろう。細胞内又は細胞質ＰＴＰ（Ｃ ＰＴＰ）、例えば、ＰＴＰ１Ｃ及びＰＴＰ１Ｄは、典型的には、幾つかの型のモ ジュール式保存ドメインが隣接する１つの触媒ドメインを含む。例えば、ＰＴＰ １Ｃ造血細胞ＣＰＴＰは、ホスホチロシン（ｐＴｙｒ）を有する短いペプチドモ チーフを認識する２つのＳｒｃ相同２（ＳＨ２）ドメインを特徴とする。 一般には、これらのモジュール式保存ドメインはタンパク質の細胞内局在化に 影響を及ぼす。ＳＨ２含有タンパク質は活性化された受容体及び細胞質リンタン パク質内のｐＴｙｒ部位に結合することができる。ＳＨ３として知られる別の保 存ドメインはプロリンに富む領域を有するタンパク質に結合する。プレクストリ ン（pleckstrin）相同（ＰＨ）ドメインとして知られる第３の型も同定されてい る。これらのモジュール式ドメインはＣＰＴＫ及びＣＰＴＰの両者はもちろん、 信号伝達経路の構成成分間のタンパク質−タンパク質相互作用に介在する非触媒 性アダプター分子、例えばＧｒｂ（成長因子受容体結合）において見出されてい る（Skolnikら，1991，Cell，65:83-90；Pawson，1995，Nature，373:573-580） 。 受容体サブユニット、キナーゼ、ホスファターゼ及びアダプター分子を含む多 タンパク質情報伝達複合体が、細胞下区画において、これらのドメイン間の特異 的かつ動的相互作用により、それらの結合モチーフで組み立てられる。このよう な情報伝達複合体は細胞外信号をリガンド結合受容体に結び付け、その信号を細 胞内又は核内の別の位置にある他の下流情報伝達タンパク質又は複合体に中継す る（Kochら，1991，Science，252:668-674；Pawson，1994，Nature，373:573-58 0；Mauroら，1994，Trends Biochem ．Sci，19:151-155；Cohenら，1995，Cell， 80:237-248）。 正常細胞の成長及び分化に必要とされるチロシンのリン酸化の水準は、あらゆ る時点で、ＰＴＫ及びＰＴＰＳの配位作用によって達成される。細胞の状況に依 存して、これらの２つの型の酵素は信号伝達の間互いに拮抗し、又は協働する。 これらの酵素間の不均衡は正常な細胞機能を損なう可能性があり、これが代謝性 の障害及び細胞の変質につながる。 例えば、ＰＴＫであるインシュリン受容体に結合するインシュリンは様々な代 謝及び成長促進効果、例えば、グルコース輸送、グリコーゲン及び脂肪の生合成 、DNA合成、細胞分割及び分化を誘発する。インシュリン信号伝達の不足又は欠 如を特徴とする糖尿病は情報伝達経路に沿ったあらゆる工程のあらゆる異常によ って起こり得る。（Olefsky，1988，"Cecil Textbook of Medicine,"第18版，2: 1360-81）。 例えば、ＨＥＲ２のようなＰＴＫＳの過剰発現が癌の発生において決定的な役 割を果たすことがあり（Slamonら，1987，Science，235:77-82）、かつこの酵素 の活性を遮断することができる抗体が腫瘍の成長を抑止可能である（Drebinら， 1988，Oncogene，2:387-394）ことも公知である。Ｆｌｋ−１及びＰＤＧＦ受容 体のようなチロシンキナーゼの信号伝達能力を遮断することで、動物モデルにお ける腫瘍の成長を遮断することが示されている（Millauerら，1994，Nature，36 7:577；Uenoら，Science，252:844-848）。 信号伝達におけるチロシンホスファターゼの直接の役割に関しては比較的知ら れていない;ＰＴＰはヒトの疾患においてある役割を果たしている可能性がある 。例えば、ＲＰＴＰαの異所的発現は胚性線維芽細胞における表現型の変化を生 じ（Zhengら，Nature，359:336-339）、胚性カルチノーマ細胞におけるＲＰＴＰ αの過剰発現はそれらの細胞をニューロン表現型を有する細胞型に分化させる（ den Hertogら，EMBO Journal，12:3789-3798）。ヒトＲＰＴＰγの遺伝子は、腎 臓及び小肺カルチノーマにおいて頻繁に変化するセグメントである染色体３ｐ２ ｌに局在化している。ＲＰＴＰγの細胞外セグメントに突然変異が生じることが あり、それはＲＰＴＰをもはや外部信号に応答しないようにする（LaForgiaら， Waryら，1993，Cancer Res.，52:478-482）。ＰＴＰ１Ｃ（別名ＨＣＰ又はＳＨ Ｐ）をコードする遺伝子における突然変異は、重い免疫不全、及びマクロファー ジの過剰増殖を伴う全身性自己免疫疾患を患うマウスにおける古い表現型の原因 である（Schultzら，1993，Cell，73:1445-1454）。ＰＴＰ１Ｄ（別名Ｓｙｐ又 はＰＴＰ２Ｃ）はＳＨ２ドメインを介してＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲ及びインシュリ ン受容体基質１（ＩＲＳ−１）のリン酸化部位に結合することが示されて いる。抗ＰＴＰ１Ｄ抗体を微量注入することによってＰＴＰ１Ｄの活性を低下さ せることで、インシュリン又はＥＧＦ誘発有糸分裂が遮断されることが示されて いる（Xiaoら，1994，J ．Biol．Chem.，269:21244-21248）。 インシュリンの生物学的効果のうちの幾つかをバナジウム塩及びペルバナジウ ム塩のようなバナジウム塩によって模倣できることが報告されている。バナジウ ム塩及びペルバナジウム塩は非特異的ホスファターゼ阻害剤であることが知られ ている。しかしながら、このクラスの化合物は、各々の化合物が重金属を含むた め、毒性である（米国特許第5,155,031号；Fantusら，1989，Biochem.，28:8864 -71；Swarupら，1982，Biochem ．Biopys．Res．Commun.，107:1104-9）。 発明の要約 本発明は、一般には、タンパク質チロシン酵素の活性を調節する新規ヘテロア リール化合物に関し、このタンパク質チロシン酵素は細胞の信号伝達に関連する ；すなわち、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）及びタンパク質チロシンホ スファターゼ（ＰＴＰ）。特には、本発明の化合物はタンパク質チロシンホスフ ァターゼの活性を調節することが期待される。加えて、本発明は、癌及び糖尿病 を含むがこれらに限定されるものではない異常なタンパク質チロシン酵素関連細 胞信号伝達に関連する疾患を治療又は予防するための、開示される化合物並びに それらの生理学的に許容し得る塩及びプロドラッグの医薬組成物の調製及び使用 に関する。 “医薬組成物”は、ここに記述される１種類以上の化合物、又はそれらの生理 学的許容し得る塩もしくはプロドラッグと、他の化学成分、例えば、生理学的に 許容し得る担体及び賦形剤との混合物を指す。医薬組成物の目的は器官への化合 物の投与を容易にすることである。 “プロドラッグ”は、イン・ビボで親薬物に変換される薬剤を指す。プロドラ ッグは、幾つかの状況においては親薬物よりも投与が容易であり得るため、しば しば有用である。例えば、これらは、親薬物はそうではないのに、経口投与によ って生物学的に利用可能である。また、プロドラッグは、医薬組成物において、 溶解度が親薬物を上回って改善されていることもある。プロドラッグの例は、限 定するものではないが、細胞膜（こは水溶性が有益ではない）を横切る透過を容 易にするためにエステル（“プロドラッグ”）として投与されるものの、次に水 溶性が有益である細胞内部にひとたび入るとカルボン酸に代謝的に加水分解され る本発明の化合物である。 ここで用いられる場合、“エステル”は、Ｒ”が水素以外の列挙される基のい ずれかである、ここに定義されるＣ−カルボキシ基である。 ここで用いられる場合、“生理学的に許容し得る担体”は、生物体に著しい刺 激を与えることがなく、かつ投与した化合物の生物学的活性及び特性を抑止する ことがない担体又は希釈剤を指す。 “賦形剤”は、化合物の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加され る不活性物質を指す。賦形剤の例には、限定するものではないが、炭酸カルシウ ム、リン酸カルシウム、様々な糖及び様々な型のデンプン、セルロース誘導体、 ゼラチン、植物油並びにポリエチレングリコールが含まれる。 化合物 一般的な構造の特徴 側面の１つにおいて、本発明は式１に示される一般化学構造を有するヘテロア リール化合物に関する。 式１において、ｒ及びｓは独立に０又は１である。 ｒ又はｓが１である場合、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、及びＭは炭 素及び窒素からなる群より独立に選択され、そのようにして形成される６員窒素 ヘテロアリール環は化学技術分野において公知のものであることは理解され;Ａ 、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、又はＭが窒素である場合、それぞれＲ1、 Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9又はＲ10が存在しないことがさらに理 解される。 Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ又はＦのうちの少なくとも１つ及びＧ、Ｊ、Ｋ、Ｌ及びＭのう ちの少なくとも１つが窒素でなければならない。 ｒ又はｓが０である場合、Ａ、Ｂ、Ｄ、及びＦ又はＧ、Ｋ、Ｌ及びＭは、それ ぞれ、炭素、窒素、酸素及びイオウからなる群より独立に選択され、そのように して形成される５員ヘテロアリール環は化学技術分野において公知のものである ことは理解され；Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ又はＭが酸素もしくはイオウであ る場合、又はＡ、Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ又はＭが窒素であってその窒素がヘテ ロアリール環の二重結合に関与する場合、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8、Ｒ9 又はＲ10が存在しないことがさらに理解される。 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は、水素、アルキル 、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘ テロアリール、ヘテロ脂環、アルコキシ、アリールオキシ、チオアルコキシ、チ オアリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリシクロキシ、スルフィニ ル、スルホニル、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、トリハロメタンカ ルボニル、トリハロメタンスルホニル、カルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カル ボキシ、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド、Ｎ−アミド、ヒドラジノ、シアノ、ニト ロ、ハロ、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、ホスホニル 、Ｎ−チオカルバミル、グアニル、グアニジノ、ウレイド、アミノ、トリハロメ タンスルホンアミド、及び−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立に選択される。 Ｒ11及びＲ12は、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル 、アリール、カルボニル、Ｃ−カルボキシ、スルホニル、トリハロメタンスルホ ニル、トリハロメタンカルボニル及び、組み合わせて、５もしくは６員ヘテロ脂 環式環からなる群より独立に選択される。 ｒ又はｓが０であり、かつＡ、Ｂ、Ｄ、もしくはＦ；又はＧ、Ｋ、Ｌもしくは Ｍがそれぞれヘテロアリール環の二重結合に関与していない窒素原子である場合 、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は、水素、アルキル、シクロア ルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒ ドロキシ、アルコキシ、トリハロメタンカルボニル、スルホニル、トリハロメタ ンスルホニル、シアノ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−アミド、Ｃ−チ オアミド及びグアニルからなる群より独立に選択され； Ｑは、酸素、イオウ、スルフィニル、スルホニル及び−ＮＲ13からなる群より 選択される。 Ｒ13は、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリー ル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、シアノ、トリハロ メタンカルボニル、スルホニル、トリハロメタンスルホニル、Ｃ−カルボキシ、 Ｏ−カルボキシ、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド及びグアニルからなる群より選択 される。 ２つの隣接するＲ基が組み合わされて、それらのＲ基を最初から有する環に縮 合するさらなるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール又はヘテロ脂環式環 を形成してもよい。 ｒが０であり、Ａがイオウであり、Ｆが窒素であり、Ｑがイオウであり、かつ Ｒ2がニトロである場合、Ｇ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は 表１の化合物をもたらすように選択される。 ここに開示される化合物の生理学的に許容し得る塩及びプロドラッグは本発明 の範囲内にある。 ここで用いられる場合、窒素原子であるときのＡ、Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ及 びＭに関して、“ヘテロアリール環の二重結合に関与する”という句は、下記５ 員環ヘテロアリール基を含む２つの互変異構造にある正式な二重結合を指す。 “アルキル”基は、直鎖及び分岐鎖基を含む飽和脂肪族炭化水素を指す。好ま しくは、アルキル基は１ないし２０個の炭素原子（数値範囲；例えば“１−２０ ”がここで述べられるときにはいつでも、その基、この場合にはアルキル基、が １個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等、２０個を含めてそこまで の炭素原子を含み得ることを意味する）を有する。より好ましくは、１ないし１ ０個の炭素原子を有する中サイズのアルキルである。最も好ましくは、１ないし ４個の炭素原子を有する低級アルキルである。アルキル基は置換されていても、 非置換であってもよい。置換されている場合、その置換基（１つもしくは複数） は、好ましくは、トリハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリー ル、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオ キシ、ヘテロアリシクロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリール オキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロアリシクロキシ、シアノ、ハロ 、ニトロ、カルボニル、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ −チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド、Ｎ−ア ミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルフィニル、スルホニル、スルホン アミド、トリハロメタンスルホンアミド、トリハロメタンスルホニル、シリル、 グアニル、グアニジノ、ウレイド、ホスホニル、アミノ及び−ＮＲ11Ｒ12から個 別に選択される１つ以上であり、ここでＲ11及びＲ12は水素、アルキル、シクロ アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、カルボニル、Ｃ−カルボキシ、 スルホニル、トリハロメタンスルホニル、トリハロメタンカルボニル及び、組み 合わせて、５もしくは６員ヘテロ脂環式環からなる群より独立に選択される。 “シクロアルキル”は、１つ以上の環が完全に共役したπ電子系を持たない全 て炭素の単環又は縮合環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）を指す 。シクロアルキル基の例は、限定するものではないが、シクロプロパン、シクロ ブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエ ン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエン及びアダマンタンである。シクロア ルキル基は置換されていても、非置換であってもよい。置換されている場合、そ の置換基（１つもしくは複数）は、好ましくは、アルキル、アリール、ヘテロア リール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリー ルオ キシ、ヘテロアリシクロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリール オキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロアリシクロキシ、シアノ、ハロ 、ニトロ、カルボニル、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ −チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド、Ｎ−ア ミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、スルフィニル、スルホニル、スルホン アミド、トリハロメタンスルホンアミド、トリハロメタンスルホニル、シリル、 グアニル、グアニジノ、ウレイド、ホスホニル、アミノ及び−ＮＲ11Ｒ12から個 別に選択される１つ以上であり、Ｒ11及びＲ12は上に定義される通りである。 “アルケニル”基は、少なくとも２つの炭素原子及び少なくとも１つの炭素− 炭素二重結合からなる、ここで定義される通りのアルキル基を指す。 “アルキニル”基は、少なくとも２つの炭素原子及び少なくとも１つの炭素− 炭素三重結合からなる、ここで定義される通りのアルキル基を指す。 “アリール”基は、完全に共役したπ電子系を有する全て炭素の単環式又は縮 合環多環式（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を指す。アリール 基の例は、限定するものではないが、フェニル、ナフタレニル及びアントラセニ ルである。アリール基は置換されていても、非置換であってもよい。置換されて いる場合、その置換基（１つもしくは複数）は、好ましくは、アルキル、シクロ アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、 アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリシクロキシ、チオヒドロキ シ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘ テロアリシクロキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、カルボニル、チオカルボニル、Ｏ −カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ −アミド、Ｃ−チオアミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、ス ルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、トリハロメタンスルホンアミド、ト リハロメタンスルホニル、シリル、グアニル、グアニジノ、ウレイド、ホスホニ ル、アミノ及び−ＮＲ11Ｒ12から選択される１つ以上であり、Ｒ11及びＲ12は上 に定義される通りである。 ここで用いられる場合、“ヘテロアリール”基は、その環（１つもしくは複数 ）中に窒素、酸素及びイオウからなる群より選択される１つ以上の原子を有し、 加 えて、完全に共役したπ電子系を有する単環又は縮合環（すなわち、隣接する原 子対を共有する環）基を指す。ヘテロアリール基の例は、限定するものではない が、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール 、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、プリン及びカ ルバゾールである。ヘテロアリール基は置換されていても、非置換であってもよ い。置換されている場合、その置換基（１つもしくは複数）は、好ましくは、ア ルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ 、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリシクロキシ 、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリール オキシ、チオヘテロアリシクロキシ、シアノ、ハロ、カルボニル、チオカルボニ ル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミ ル、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキ シ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、ニトロ、トリハロメタンスル ホンアミド、トリハロメタンスルホニル、シリル、グアニル、グアニジノ、ウレ イド、ホスホニル、アミノ及び−ＮＲ11Ｒ12から選択される１つ以上であり、Ｒ11 及びＲ12は上に定義される通りである。 “ヘテロ脂環”基は、その環（１つもしくは複数）中に窒素、酸素及びイオウ からなる群より選択される１つ以上の原子を有する単環又は縮合環基を指す。こ れらの環は１つ以上の二重結合を有していてもよい。しかしながら、これらの環 は完全に共役したπ電子系は持たない。ヘテロ脂環式環は置換されていても、非 置換であってもよい。置換されている場合、その置換基（１つもしくは複数）は 、好ましくは、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ 脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテ ロアリシクロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チ オヘテロアリールオキシ、チオヘテロアリシクロキシ、シアノ、ハロ、カルボニ ル、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、 Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキ シ、Ｏ−カルボキシ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、ニトロ、ト リハロメタンスルホンアミド、トリハロメタンスルホニル、シリル、グアニル、 グア ニジノ、ウレイド、ホスホニル、アミノ及び−ＮＲ11Ｒ12から選択される１つ以 上であり、Ｒ11及びＲ12は上に定義される通りである。 “ヒドロキシ”基は−ＯＨ基を指す。 “アルコキシ”基は、ここで定義される通りの−Ｏ−アルキル及び−Ｏ−シク ロアルキル基の両者を指す。 “アリールオキシ”基は、ここで定義される通りの−Ｏ−アリール及び−Ｏ− ヘテロアリール基の両者を指す。 “ヘテロアリールオキシ”基はヘテロアリール−Ｏ基を指し、ヘテロアリール はここで定義される通りである。 “ヘテロアリシクロキシ”基はヘテロ脂環−Ｏ−基を指し、ヘテロ脂環はここ で定義される通りである。 “チオヒドロキシ”基は−ＳＨ基を指す。 “チオアルコキシ”基は、ここで定義される通りのＳ−アルキル及びＳ−シク ロアルキル基の両者を指す。 “チオアリールオキシ”基は、ここで定義される通りの−Ｓ−アリール及び− Ｓ−ヘテロアリール基の両者を指す。 “チオヘテロアリールオキシ”基はヘテロアリール−Ｓ−基を指し、ヘテロア リールはここで定義される通りである。 “チオヘテロアリシクロキシ”基はヘテロ脂環−Ｓ−基を指し、ヘテロ脂環は ここで定義される通りである。 “カルボニル”基は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ”基を指し、ここでＲ”は、各々ここで 定義される通りの、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル 、アリール、（環炭素を介して結合する）ヘテロアリール及び（環炭素を介して 結合する）ヘテロ脂環からなる群より選択される。 “アルデヒド”基は、Ｒ”が水素であるカルボニル基を指す。 “チオカルボニル”基は−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ”基を指し、Ｒ”はここで定義され る通りである。 “ケト”基は−ＣＣ（＝Ｏ）Ｃ基を指し、ここでＣ＝Ｏのいずれかもしくは両 方の側の炭素はアルキル、シクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールもし くはヘテロ脂環基の炭素であり得る。 “トリハロメタンカルボニル”基はＸ3ＣＣ（＝Ｏ）−基を指し、Ｘはここで 定義される通りである。 “Ｃ−カルボキシ”基は−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ”基を指し、Ｒ”はここで定義さ れる通りである。 “Ｏ−カルボキシ”基はＲ”Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−基を指し、Ｒ”はここで定義され る通りである。 “カルボン酸”基はＲ”が水素であるＣ−カルボキシ基を指す。 “ハロ”基はフッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。 “トリハロメタン”基は−ＣＸ3基を指し、ここでＸはここで定義される通り のハロ基である。 “トリハロメタンカルボニル”基はＸ3ＣＣ（＝Ｏ）−基を指し、Ｘは上に定 義される通りである。 “トリハロメタンスルホニル”基はＸ3ＣＳ（＝Ｏ）2−基を指し、Ｘは上に定 義される通りである。 “トリハロメタンスルホンアミド”基はＸ3ＣＳ（＝Ｏ）2ＮＲ13−基を指し、 Ｘ及びＲ13は上に定義される通りである。 “スルフィニル”基は−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ”基を指し、Ｒ”はここで定義される 通りであり、加えて、結合のみ；すなわち、−Ｓ（Ｏ）−である。 “スルホニル”基は−Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ”基を指し、Ｒ”はここで定義される通 りであり、加えて、結合のみ；すなわち、−Ｓ（Ｏ）−である。 “Ｓ−スルホンアミド”基は−Ｓ（＝Ｏ）2ＮＲ11Ｒ12を指し、Ｒ11及びＲ12 はここで定義される通りである。 “Ｎ−スルホンアミド”基はＲ11Ｓ（＝Ｏ）2ＮＲ12−基を指し、Ｒ11及びＲ1 2 はここで定義される通りである。 “Ｏ−カルバミル”基は−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ11Ｒ12基を指し、Ｒ11及びＲ12は ここで定義される通りである。 “Ｎ−カルバミル”基はＲ11ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ12−基を指し、Ｒ11及びＲ12は ここで定義される通りである。 “Ｏ−チオカルバミル”基は−ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ11Ｒ12基を指し、Ｒ11及びＲ12 はここで定義される通りである。 “Ｎ−チオカルバミル”基はＲ11ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ12−基を指し、Ｒ11及びＲ12 はここで定義される通りである。 “アミノ”基は−ＮＨ2基を指す。 “Ｃ−アミド”基は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ11Ｒ12基を指し、Ｒ11及びＲ12はここで 定義される通りである。 “Ｃ−チオアミド”基は−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ11Ｒ12基を指し、Ｒ11及びＲ12はこ こで定義される通りである。 “Ｎ−アミド”基はＲ11Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ12−基を指し、Ｒ11及びＲ12はここで 定義される通りである。 “ウレイド”基は−ＮＲ11Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ12Ｒ14基を指し、Ｒ11及びＲ12はこ こで定義される通りであり、かつＲ14はＲ11及びＲ12と同様に定義される。 “グアニジノ”基は−Ｒ11ＮＣ（＝Ｎ）ＮＲ12Ｒ14基を指し、Ｒ11、Ｒ12及び Ｒ14はここで定義される通りである。 “グアニル”基はＲ11Ｒ12ＮＣ（＝Ｎ）−基を指し、Ｒ11及びＲ12はここで定 義される通りである。 “シアノ”基は−Ｃ≡Ｎ基を指す。 “シリル”基は−Ｓｉ（Ｒ”）3を指し、Ｒ”はここで定義される通りである 。 “ホスホニル”基はＰ（＝Ｏ）（ＯＲ11）2を指し、Ｒ11はここで定義される 通りである。 “ヒドラジノ”基は−ＮＲ11ＮＲ12Ｒ14基を指し、Ｒ11、Ｒ12及びＲ14はここ で定義される通りである。 好ましい構造の特徴 本発明の好ましい構造の特徴は、ｒ及びｓが０であり、かつＱがイオウである ものである。 さらに好ましい構造の特徴はｒが１であり、かつｓが０であるものである。 別の好ましい構造の特徴は、ｒが０であり、Ａがイオウであり、Ｆが窒素であ り、Ｑがイオウであり、かつＲ2がニトロであるものである。 表１の化合物は本発明のさらなる好ましい構造の特徴を提供する。 生化学 本発明は、正常もしくは疾患細胞における信号の伝達を調節もしくは調整する ことが可能な化合物の使用に向けられている。また、本発明は、タンパク質チロ シン酵素、特にはタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）及びタンパク質チロシ ンホスファターゼ（ＰＴＰ）の活性を阻害することが可能な化合物を信号伝達の 調節又は誘発に用いることにも向けられている。本発明は、さらに、信号伝達に よって制御される細胞プロセスをこれらの化合物によるＰＴＫ及びＰＴＰの活性 の阻害で調節することに向けられている。本発明は、さらに、機能障害性の信号 伝達によって引き起こされる障害を有する被験者の治療におけるそのような化合 物の使用に対する備えがある。 本発明の一態様において、本発明の化合物は、膜貫通又は細胞内にあり、かつ １つ以上の特徴的な触媒性ドメインを有していてもよいタンパク質チロシンホス ファターゼの活性を阻害することが可能である。この触媒性ドメインにおけるＰ ＴＰのアミノ酸配列には［Ｉ／Ｖ］ＨＣＸＡＧＸＸＲ（Ｓ／Ｔ］Ｇ（一文字アミ ノ酸コード；Ｘはあらゆるアミノ酸である）が含まれ得るがこれに限定されるも のではない。加えて。ＰＴＰは１つ以上のモジュール式保存ドメインを有するこ とができ、これにはＳＨ２、ＳＨ３及びＰＨドメインが含まれるがこれらに限定 されるものではない。本発明の特定の態様においては、本発明の化合物をＰＴＰ １Ｂ（Charbonneauら，1989，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA，86:5252-5256）、 Ｔ細胞ＰＴＰ（Coolら，1989，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA，86:52575261）、 ＰＴＰ１Ｃ（Shenら，1991，Nature，352:736-739）、ＰＴＰ１Ｄ（Vogelら，19 93，Science，258:1611-1614）、ＲＰＴＰα、ＲＰＴＰβ、ＲＰＴＰγ（Kaplan ら，1990，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA，87:70007004）、ＲＰＴＰα（Yanら， 1993，J ．Biol．Chem.，268:24880-24886）、ＲＰＴＰκ（Jiangら，1993，Mol ．Cell Biol. ，13:2942-2951）及びＣＤ４５（Charbonneauら，1988，Proc ．Nat l．Acad．Sci．USA ，85:7182-7186）のホスファターゼ活性を阻害するのに用 いることができる。本発明において好ましいＰＴＫ及びＰＴＰはヒト起源のもの である。情報伝達経路における１つのＰＴＰ又は一組のＰＴＰに実質的に特異的 なホスファターゼ活性の阻害が好ましい。このホスファターゼ活性の阻害は本発 明の化合物の信号伝達を調節及び／又は調整する能力に関する作用機構であるも のと信じられるが、さらなる機構が認められていないわけではない。 “信号伝達”という用語は、ここで用いられる場合、膜を通過する情報伝達に 限定されるものではなく、細胞全体及び核内に枝分かれする複数の経路が含まれ る。このような情報伝達経路にはＲａｓ経路（Schlessinger，1994 Curr ．Opin ．Genet．Dev. ，4:25-30）、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路（Sadowskiら，1994，Scienc e ，261:1739-1744）、ホスホイノシチド３−キナーゼ経路及びホスホリパーゼＣ −γ経路が含まれ得るが、これらに限定されるものではない。ここで用いられる 場合、“調節”又は“調節する”という用語は情報伝達経路の上方調節又は下方 調節を意味する。信号伝達の制御下にある細胞プロセスには、特定の遺伝子の転 写；正常な細胞機能、例えば、代謝、増殖、分化、接着、アポトーシス及び生存 ；加えて異常なプロセス、例えば、変質、分化及び転移の遮断が含まれ得るが、 これらに限定されるものではない。 信号はリガンドが細胞表面上のその受容体に結合することによって誘発可能で あり、その信号は細胞内部に存在する様々な基質の特定のチロシン残基のリン酸 化又は脱リン酸化によって伝達及び伝搬される。ＰＴＫ、ＰＴＰ及びそれらの基 質間の特異的な相互作用は、原形質膜、又は核を含む他の細胞区画の内面での一 時的な、又は安定な多分子複合体の形成を含み得る。基質は、情報伝達経路にお いてＰＴＫ又はＰＴＰによってリン酸化又は脱リン酸化される１つ以上のチロシ ン残基を含み得る。このような基質には、受容体及びそのサブユニット、受容体 と会合し、又は受容体に集められる分子、例えば、細胞質キナーゼ、細胞質ホス ファターゼ、アダプター分予、細胞骨格タンパク質及び転写因子が含まれ得る。 受容体という用語には、ここで用いられる場合、インシュリン受容体、インシュ リン様成長因子受容体群、上皮成長因子受容体群、線維芽細胞成長因子受容体群 、肝細胞成長因子受容体群、血管内皮成長因子受容体群、ニューロトロフィン受 容体（ｔｒｋ）群のメンバー、Ｔ細胞受容体、Ｂ細胞受容体及びＩ−IV型サイト カ イン受容体群のメンバーが含まれ得る（Heldin，1995，Cell，80:213-223；Tani guchi，1995，Science，268:251-255）。基質であるアダプター分子には、Ｇｒ ｂタンパク質、ＩＲＳ−１,Ｚａｐ−７０及びＳｈｃが含まれ得る（Pawsonら，1 995，Nature，373:573-580）。アクチンのような細胞骨格タンパク質及びＳＴＡ Ｔタンパク質（Ihleら，Trends Biochem ．Sci.，19:222-227）のような転写因子 も基質としての機能を果たし得る。ここで用いられる場合、リガンドという用語 は細胞外情報伝達分子と同義であり、成長因子、例えば、インシュリン、ＥＧＦ 、ＰＤＧＦ、線維芽細胞成長因子、血管内皮成長因子、及びニューロトロフィン ；並びにサイトカイン、例えば、成長ホルモン、エリスロポエチン、腫瘍壊死因 子、インターロイキン及びインターフェロンが含まれるが、これらに限定される ものではない。リガンドという用語は可溶性分子に限定されるものではなく、例 えば、細胞外マトリックスタンパク質、細胞接着分子に加えて、抗原提示細胞の 表面上の主要組織適合複合体と会合する抗原性ペプチドが含まれる。 本発明の一態様においては、細胞における信号伝達を誘発又は上方調節して受 容体へのリガンドの結合を増強し、又はリガンドが存在しない場合にはそれを模 倣するのに本発明の化合物を用いることができる。これらの化合物は、通常は情 報伝達に対して負に作用する、情報伝達経路におけるホスファターゼの活性を阻 害又は減少させることにより効果を発揮する。ＰＴＰが信号の伝達を正常に下方 調節する機構の１つはＰＴＫ及びそれらの基質上の特定のホスホチロシン残基（ ｐＴｙｒ）の脱リン酸化を含み、これは、多くのＰＴＫが情報伝達経路において 最適に活性となるためにそれ自体のチロシン残基のうちの幾つかの脱リン酸化を 必要とするためである。本発明の化合物は、通常はリガンドが結合する際にリン 酸化され、それによりＰＴＫリン酸化の程度及び持続時間を増強する受容体又は それらのサブユニットのｐＴｙｒ残基の脱リン酸化を防止するのに用いることが できる。また、本発明の化合物はＰＴＫの脱リン酸化を防止するのにも用いるこ ともでき、ここではチロシン残基がその基本活性のために自己リン酸化又はトラ ンスリン酸化されるようになる。これらのＰＴＫにおいては、リガンドが存在し ない状態で信号を本発明の化合物によって誘発することができ、これは、構造性 のＰＴＰ活性がこれらの化合物によって阻害又は減少される場合には、ＰＴＫ の基本活性が信号を促進するのに十分なものであるためである。 本発明の好ましい態様は、活性化されたインシュリン受容体のｐＴｙｒ部位の 構造性の脱リン酸化を阻害することにより、インシュリン受容体の信号伝達を誘 発し、増強し、又は持続させる方法に向けられている。これはインシュリン受容 体がリン酸化されたままでいることを可能にし、したがってインシュリンの信号 を増強又は持続させる。さらに、インシュリンが存在しない状態でさえインシュ リン受容体が低水準でリン酸化されることが示されている（Goldstein，1992，J ，Cell Biol. ，48:33-42）ため、本発明の化合物は、例えインシュリンが存在し ない状態であっても、受容体上のチロシン残基を自己リン酸化させることによっ て信号を誘発するのに用いることができる。 ＰＴＰが情報伝達に対して負の効果を発揮し得る別の機構は、情報伝達の間に ＳＨ２含有分子が結合する特定のｐＴｙｒ部位を脱リン酸化することによるもの である。このようなｐＴｙｒ部位が存在しない状態は、ＳＨ２含有分子を特定の 細胞区画に集めてたタンパク質情報伝達複合体を形成するのを妨げ、それにより 、その信号のさらなる伝搬を妨げる、したがって、本発明の化合物は、情報伝達 を促進するＳＨ２含有タンパク質の結合部位としての役割を通常は果たす基質タ ンパク質上のｐＴｙｒ部位の脱リン酸化を防止することによって、信号伝達を上 方調節又は長期化するのに用いることができる。本発明の別の態様においては、 本発明の化合物を、信号の伝達又は伝搬に必須である、あらゆる基質上の特定の ｐＴｙｒ残基の脱リン酸化を防止するのに用いることができる。さらに、本発明 の化合物は、信号の伝達に対して阻害性である、あらゆる基質上の特定のｐＴｙ ｒ残基の脱リン酸化を防止するのに用いることができる。 また、本発明の化合物は、細胞における信号の伝達を抑制又は下方調節して、 受容体にリガンドが結合する効果を無効にし、又は減弱させるのにも用いること ができる。これらの化合物は、通常は情報伝達に対して正に作用する情報伝達経 路におけるホスファターゼを阻害することができる。例えば、ＰＴＰは、ＰＴＫ のＳｒｃ群のメンバーを活性化することによって情報伝達を促進する。Ｓｒｃ群 のＰＴＫは、脱リン酸化によってキナーゼ活性が活性化するリン酸化の阻害部位 をそれらのカルボキシ末端に有する。したがって、本発明の化合物は、通常は信 号の伝達を促進するように機能するキナーゼのカルボキシ末端における阻害性ｐ Ｔｙｒの脱リン酸化を防止するのに用いることができる。Ｓｒｃ群のＰＴＫには 、Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、Ｂｌｋ、Ｈｃｋ、Ｆｇｒ及びＹｒｋが含ま れ得る。ホスファターゼによって同様に調整され得る他のキナーゼにはＦａｋ及 びＣｓｋが含まれ得る（Taniguchi，1995，Science，268:251-255）。 薬理学的組成物及び治療用途 ここで用いられる場合、“薬学的に許容し得る塩”は、その化合物の生物学的 有効性及び特性を保持し、かつ塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタン スルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸のような 酸との反応によって得られる塩を指す。 上記化合物及びそれらの薬学的に許容し得る塩に加えて、本発明はさらに、適 用可能である場合、ホスファターゼ活性を調整及び／又は調節する能力を有する それらの化合物の溶媒和及び非溶媒和形態（例えば、水和形態）に向けられる。 上記化合物は、化学的に関連する化合物の調製に適用可能であることが知られ るあらゆる方法によって調製することができる。適切な方法は以下に提供される 代表例によって説明される。必要な出発物質は有機化学の標準的な手順によって 得ることができる。 医薬処方及び投与経路 本発明の化合物は、そのものとして、又は治療上有効な用量が適切な担体もし くは賦形剤（１種類もしくは複数種類）と混合されている医薬組成物の形態で、 カポジ肉腫、グリア芽細胞腫及び黒色腫並びに卵巣、肺、乳房、前立腺、膵臓、 結腸及び類表皮カルチノーマを含む固形細胞腫瘍の成長、糖尿病、糖尿病性網膜 症、血管腫及び関節リウマチを含む様々な障害を治療又は緩和する用量でヒト患 者に投与することができる。治療上有効な用量は、さらに、制御されていない血 管形成（vasculogenesisi and angiogenesis）の症状の緩和を生じるのに十分な 化合物の量を指す。本発明のもののような化合物を形成及び投与するための技術 は、"Remington's Pharmaceutical Science,"Mack Publishing Co.，Easton，PA ，最終版に見出すことができる。 本発明の処方は、通常、担体と混合され、又は担体で希釈され、又はカプセル 、サシェー、カシェー、紙もしくは他の容器の形態の摂取可能な担体により、あ るいはアンプルのような使い捨て容器により封入もしくはカプセル化されている 、少なくとも１種類の式Ｉの化合物からなる。担体又は希釈剤は固体、半固体又 は液体材料であり得、これらは活性治療物質のビヒクル、賦形剤又は媒体として の役目を果たす。 本発明の医薬組成物において用いることができる希釈剤又は担体の幾つかの例 は、乳糖、デキストロース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、プロピレン グリコール、液体パラフィン、白色軟パラフィン、カオリン、微結晶セルロース 、ケイ酸カルシウム、シリカポリビニルピロリドン、セトステアリルアルコール 、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、カカオ脂、テオブロマ（theobr oma）の油、ラッカセイ油、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、シロップ Ｂ．Ｐ.、メチルセルロース、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、 乳酸及びプロピルヒドロキシ安息香酸エチル、トリオレイン酸ソルビタン、セス キオレイン酸ソルビタン及びオレイルアルコールである。 投与経路 ここで用いられる場合、“投与する”又は“投与”は、異常なタンパク質チロ シン酵素関連細胞信号伝達に関連する障害を予防又は治療するために、本発明の 化合物、塩もしくはプロドラッグ又は本発明の化合物、塩もしくはプロドラッグ を含む医薬組成物を器官に送達することを指す。 ここで用いられる場合、“異常なタンパク質チロシン酵素関連細胞信号伝達に 関連する障害”は、タンパタ質チロシン酵素の一部に対する不適切な、すなわち 、過小もしくは、より一般的には、過剰触媒活性を特徴とする状態を指す。不適 切な触媒活性は、(１)通常はタンパク質チロシン酵素を発現しない細胞における タンパク質チロシン酵素の発現；(２)望ましくない細胞の増殖、分化及び／又は 成長につながるタンパタ質チロシン酵素発現の増加；又は（３）細胞の増殖、分 化及び／又は成長の望ましくない減少につながるタンパク質チロシン酵素発現の 減少のいずれかの結果として生じ得る。タンパク質チロシン酵素の過剰活性は、 特定のタンパク質チロシン酵素をコードする遺伝子の増幅、又は細胞の増殖、分 化 及び／又は成長障害と相関し得る（すなわち、タンパク質チロシン酵素の濃度が 増加するに伴い、細胞障害の１つ以上の症状の重篤性が増加する）水準のタンパ ク質チロシン酵素活性の生成のいずれかを指す。過小活性はもちろんその反対で あり、タンパク質チロシン酵素の濃度が減少するに従って細胞障害の１つ以上の 症状の重篤性が増加する。 ここで用いられる場合、“予防する”、“予防すること”及び“予防”という 用語は、生物体を、初めから、異常なタンパク質チロシン酵素関連細胞信号伝達 に関連する障害を獲得することから排除するための方法を指す。 ここで用いられる場合、“治療する”、“治療すること”及び“治療”という 用語は、異常なタンパク質チロシン酵素関連細胞信号伝達障害及び／又はその付 随症状を緩和又は抑制する方法を指す。特に癌に関しては、これらの用語は、単 に、癌に冒された個体の期待寿命を増加させること、又はその疾患の症状の１つ 以上を低減させることを意味する。 “生物体”という用語は、少なくとも１つの細胞を含んでなるあらゆる生活実 体を指す。生活生物体は、例えば、単一の真核細胞という簡単なものであっても 、ヒトを含む哺乳動物のような複雑なものであってもよい。 適切な投与経路には、限定するものではないが、経口、直腸、経粘膜、又は腸 管投与；筋肉内、皮下、髄内、くも膜下腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻 内、又は眼内注射；経皮、局所及び膣塗布等が含まれる。剤形には、錠剤、トロ ーチ、分散剤、懸濁液、座剤、溶液、カプセル、クリーム、パッチ、ミニポンプ 等が含まれるがこれらに限定されるものではない。 あるいは、化合物を全身様式ではなく局所様式で、例えば、その化合物を直接 固体腫瘍内に、しばしばデポーもしくは徐放性処方の形態で、注入することによ り投与することができる。 さらに、薬物を標的指向薬物送達システムで、例えば、腫瘍特異的抗体をコー トしたリポソームの形態で投与することができる。これらのリポソームは腫瘍を 標的とし、その腫瘍によって選択的に取り込まれる。 組成物／処方 本発明の医薬組成物は当該技術分野において公知の方法により、例えば、限定 するものではないが、通常の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、粉砕、乳化、カプ セル化、エントラッピング（entrapping）又は凍結乾燥法によって製造すること ができる。 したがって、本発明に従って用いる医薬組成物は、通常の方法で、賦形剤及び 薬学的に用いることができる調製品への活性化合物の加工を容易にする助剤を含 む１種類以上の生理学的に許容し得る担体を用いて処方することができる。適切 な処方は選択された投与経路に依存する。 注射については、本発明の薬剤を水溶液、好ましくは、生理学的に適合する緩 衝液、例えば、ハンクス液、リンゲル液、又は生理食塩緩衝液に処方することが できる。経粘膜投与については、透過させようとする障壁に適する浸透剤を処方 において用いることができる。このような浸透剤は当該技術分野において一般に 公知である。 経口投与については、活性化合物を当該技術分野において公知の薬学的に許容 し得る担体と組み合わせることにより、これらの化合物を容易に処方することが できる。このような担体は、本発明の化合物を、治療しようとする患者による経 口摂取のため、錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリ ー、懸濁液等として処方することを可能にする。経口用途のための医薬調製品は 、例えば、本発明の化合物を固体賦形剤に添加し、場合によっては得られた混合 物を粉砕して顆粒の混合物を加工し、所望であれば適切な助剤を添加した後、錠 剤又は糖衣錠の核を得ることにより調製することができる。適切な賦形剤は、と りわけ、充填剤、例えば、乳糖、ショ糖、マンニトール、又はソルビトールを含 む糖；セルロース調製品、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コ メデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロ ース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセル ロース、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望であれば、崩 壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、もしくはアルギン酸又はそれ らの塩、例えば、アルギン酸ナトリウムを添加することができる。 糖衣錠の核には適切なコーティングが施される。このために濃縮糖溶液を用い ることができ、これはアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポ ールゲル(carbopol gel)、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタンラ ッカー溶液、及び適切な有機溶媒又は溶媒混合液を含んでいてもよい。識別のた め、又は活性化合物の用量の異なる組み合わせを特徴付けるため、染料又は色素 を錠剤又は糖衣錠コーティングに添加することができる。 経口で用いることができる医薬調製品には、ゼラチン及び可塑剤、例えば、グ リセロール又はソルビトールで作製される軟密封カプセルに加えて、ゼラチンで 作製されるプッシュ・フィット（push-fit）カプセルが含まれる。このプッシュ ・フィットカプセルは、活性成分を、乳糖のような充填剤、デンプンのような結 合剤、及び／又はタルクもしくはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、及 び、場合によっては、安定化剤との混合物の形態で含むことができる。軟カプセ ルにおいては、活性化合物を適切な液体、例えば、脂肪油、液体パラフィン、又 は液体ポリエチレングリコールに溶解又は懸濁させることができる。加えて、安 定化剤を加えることができる。経口投与用の全ての処方はそのような投与に適す る投与量であるべきである。 頬投与については、組成物は通常の方法で処方された錠剤又はロゼンジの形態 をとることができる。吸入による投与については、本発明に従って用いる化合物 は、適切な噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメ タン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切な気体を用いて 、加圧パック又は噴霧器から送り出されるエアロゾル噴霧の形態で都合よく送達 される。加圧エアロゾルの場合には、投与単位は、秤量された量を送達するため の弁を備え付けることにより決定することができる。吸入器又は吹き入れ器にお いて用いるための、例えばゼラチンの、カプセル及びカートリッジは、化合物及 び適切な粉末基剤、例えば、乳糖又はデンプンの粉末混合物を含めて処方するこ とができる。 本発明の化合物は、注入による、例えば、大量瞬時注射又は連続注入による非 経口投与用に処方することができる。注射用処方は単位剤形で、例えば、保存剤 を添加してアンプル又は複数用量容器の形態で提示することができる。組成物は 、油性もしくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルジョンとしてそのよう な形態をとることができ、かつ処方用薬剤、例えば、懸濁剤、安定化剤及び／又 は 分散剤を含むことができる。 非経口投与用の医薬処方には水溶性形態にある活性化合物の水溶液が含まれる 。加えて、活性化合物の懸濁液を適切な油性注射用懸濁液として調製することが できる。適切な親油性溶媒又はビヒクルには、ゴマ油のような脂肪油、又はオレ イン酸エチルもしくはトリグリセリド、あるいはリポソームのような合成脂肪酸 エステルが含まれる。水性注射用懸濁液はその懸濁液の粘度を高める物質、例え ば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストラン を含むことができる。場合によっては、この懸濁液は、適切な安定化剤又はそれ らの化合物の溶解度を高めて高度に濃縮された溶液の調製を可能にする薬剤を含 んでいてもよい。 あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル、例えば、無菌の発熱物質非 含有水を用いて形成するための粉末形態であってもよい。 また、これらの化合物は、例えばカカオ脂又は他のグリセリドのような通常の 座剤の基剤を含む、座剤又は滞留浣腸のような直腸組成物に処方することもでき る。 前に記載される処方に加えて、これらの化合物はデポー調製品として処方する こともできる。このような長期間作用する処方は、（例えば、皮下又は筋肉内に ）移植することにより、又は筋肉内注射により投与することができる。したがっ て、例えば、これらの化合物は適切なポリマーもしくは疎水性物質（例えば、許 容し得る油中のエマルジョンとして）又はイオン交換樹脂を用いて、あるいは可 溶性に乏しい誘導体、例えば、可溶性に乏しい塩として処方することができる。 疎水性化合物のための医薬担体は、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、 水混和性有機ポリマー、及び水相を含む共溶媒系である。この共溶媒系はＶＰＤ 共溶媒系であり得る。ＶＰＤは、無水エタノール中にまとめ上げた、３％ｗ／ｖ ベンジルアルコール、８％ｗ／ｖ非極性界面活性剤ポリソルベート８０、及び６ ５％ｗ／ｖポリエチレングリコール３００の溶液である。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰ Ｄ：０５Ｗ）は５％デキストロース水溶液で１：１に希釈されたＶＰＤからなる 。この共溶媒系は疎水性化合物をも溶解し、全身投与の際に生じるそれ自体の毒 性は低い。もちろん、共溶媒系の比率はその溶解性及び毒性の特徴を壊すことな く 大きく変化させることができる。さらに、共溶媒成分の同一性を変化させること ができ、例えば、他の低毒性非極性界面活性剤をポリソルベート８０Rの代わり に用いることができる；ポリエチレングリコールの画分サイズを変化させること ができる；ポリエチレングリコールを他の生体適合性ポリマーで置き換えること ができる、例えば、ポリビニルピロリドン；及び他の糖又は多糖をデキストロー スの代わりに用いることができる。 あるいは、疎水性医薬化合物用の他の送達系を用いることができる。リポソー ム及びエマルジョンが疎水性薬物のための送達ビヒクル又は担体の公知の例であ る。ジメチルスルホキシドのような特定の有機溶媒も、通常はより高い毒性を犠 牲にするものの、用いることができる。加えて、これらの化合物は徐放性系、例 えば、療法剤を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを用いて送達する ことができる。多くの徐放性製品が当業者に公知である。徐放性カプセルは、そ れらの化学的性質に応じて、数週間から１００日を上回るまで化合物を放出する ことができる。療法剤の化学的性質及び生物学的安定性に応じて、タンパク質安 定化のさらなる方策を用いることができる。 また、医薬組成物は適切な固相又はゲル相担体又は賦形剤を含むことができる 。このような担体又は賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様 々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリマー、例えば、ポリ エチレングリコールが含まれるがこれらに限定されるものではない。 上述の一般的な剤形に加えて、本発明の化合物は制御放出手段及び／又はAlza Corporationから入手可能なAlzetR浸透圧ポンプを含む送達装置によって投与す ることもできる。適切な送達装置は米国特許第3,845,770号；第3,916,899号；第 3,536,809号；第3,598,123号；第3,944,064号及び第4,008,719号に記載されてお り、それらの開示は参照することによりそれらの全体がここに組み込まれる。 本発明のホスファターゼ調節化合物の多くは薬学的に適合し得る対イオンとの 塩として提供することができる。薬学的に適合し得る塩は、塩酸、硫酸、酢酸、 乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸糖を含むがこれらに限定されるものではない 多くの酸で形成することができる。塩は対応する遊離塩基形態よりも水性又は他 のプロトン性溶媒においてより可溶性の傾向にある。 投与量 本発明において用いるのに適する医薬組成物には、活性成分がその意図する目 的を達成するのに有効な量含有される組成物が含まれる。“治療上有効な量”と いう用語は、ここで用いられる場合、治療する障害の１つ以上の症状をある程度 まで軽減する、投与される化合物の量を指す。癌の治療に関しては、治療上有効 な量は、（１）腫瘍のサイズを減少させる；(２)腫瘍の転移を阻害する(すなわ ち、ある程度まで遅らせる、好ましくは停止させる)；(３)腫瘍の成長をある程 度まで阻害する(すなわち、ある程度まで遅らせる、好ましくは停止させる)；及 び／又は（４）癌に関連する症状の１つ以上をある程度まで軽減する（又は、好 ましくは除去する）効果を有する量を指す。本発明の化合物の治療上有効な量の 決定は、特にここに提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範 囲内にある。 治療上有効な量は最初に細胞培養検定から見積もることができる。例えば、細 胞培養物において決定されたＩＣ５０を含む循環濃度範囲（すなわち、ＰＴＰ活 性の半最大阻害を達成する試験化合物の濃度）が動物モデルにおいて達成される ように用量を系統立てることができる。このような情報をヒトにおける有用な用 量をより正確に決定するのに用いることができる。 このように、治療上有効な用量は、患者における症状の緩和又は患者の生存の 長期化を生じる化合物の量を指す。例えば、ＬＤ５０（その集団の５０％に対し て致死的な用量）及びＥＤ５０（その集団の５０％において治療上有効な用量） を決定するため、このような化合物の毒性及び治療効力を細胞培養物又は実験動 物において標準的な薬学的手順により決定することができる。毒性用量の治療上 有効な量に対する比、ＬＤ５０／ＥＤ５０が治療指数である。高い治療指数を示 す化合物が好ましい。細胞培養検定及び動物研究から得られるデータをヒトにお いて用いられる投与量範囲の系統立てにおいて用いることができる。投与量は、 好ましくは、ＥＤ５０を含み、かつ毒性をほとんど、もしくは全く示さない循環 濃度の範囲内にある。投与量は用いられる剤形及び利用される投与経路に応じて この範囲内を変化し得る。正確な処方、投与経路及び投与量は個々の医師が患者 の状態を考慮して選択することができる。(例えば、Finglら，1975，in "The Ph armacological Basis of Therapeutics"，Ch.1，p.1を参照)。 投与量及びその間隔は、最少有効濃度（ＭＥＣ）として知られる、チロシン酵 素調節効果を維持するのに十分である活性部分の血漿濃度をもたらすように個別 に調整することができる。ＭＥＣは各々の化合物で変化するが、イン・ビトロで のデータ；例えば、限定するものではないが、チロシン酵素の５０−９０％阻害 を達成するのに必要な濃度から、ここに記載される検定を用いて見積もることが できる。ＭＥＣを達成するのに必要な投与量は個々の特徴及び投与経路に依存す る。血漿濃度を決定するのにＨＰＬＣ検定又は生物検定を用いることができる。 投与間隔はまた、ＭＥＣ値を用いても決定できる。化合物は時間の１０−９０ ％、好適には３０−９０％、および最も好適には５０−９０％をＭＥＣより高い 血漿レベルを維持する投与計画を用いて投与されなければならない。 全身投与のための通常患者投与量は１から２０００ｍｇ／日、標準的には１か ら２５０ｍｇ／日、および典型的には１０から１５０ｍｇ／日である。患者体重 の点から述べると、通常用量範囲は０．０２から２５ｍｇ／ｋｇ／日、標準的に は０．０２から３ｍｇ／ｋｇ／日、典型的には０．２から１．５ｍｇ／ｋｇ／日 である。患者体表面面積の点から述べると、通常用量範囲は０．５から１２００ ｍｇ／ｍ2／日、標準的には０．５から１５０ｍｇ／ｍ2／日、典型的には５から １００ｍｇ／ｍ2／日である。通常平均血漿レベルは５０から５０００μｇ／ｍ ｌ、標準的には５０から１０００μｇ／ｍｌ、および典型的には１００から５０ ０μｇ／ｍｌに維持されるべきである。 局所投与または選択的取り込みの場合、薬剤の有効局所濃度は血漿濃度と相関 しないであろう。 投与された特定の化合物量は、もちろん処置されている患者、患者の体重、心 身苦悩の大きさ、投与様式および処方する医師の判断に依存するであろう。 望ましい血液レベルは化合物の連続的注入により維持されてもよい；血漿レベ ルはＨＰＬＣによりモニターできる。毒性または骨髄、肝臓または腎臓機能障害 のため、治療する医師はどのようにまたはいつ治療を終結、中断または低用量の 治療へ調節するかを知っておくべきである。逆に、治療する医者はまた、もし臨 床応答が十分でなくおよび毒性が問題でないならば、より高いレベルへ処置を調 節することも知っているであろう。 疾患の急性または慢性管理における化合物の予防的または治療的投与量は、処 置されている病状の重体度および投与経路で変化するであろう。再び、毒性また は骨髄、肝臓または腎臓機能障害のため臨床家または医師はいつ治療を中断およ び／または処置量を調節するかを知っておくべきである。投与量（および多分投 与頻度）は個々の患者の年齢、体重および応答に従っても変化するであろう。前 に議論したように一般に、本明細書に記載された障害の多くに対して化合物の総 日用量範囲は約０．０２から約２５ｍｇ／ｋｇ患者である。好適には日用量範囲 は約０．０２から約３ｍｇ／ｋｇの間であるべきであり、最も好適には日用量範 囲は１日当たり約０．２から約１．５ｍｇ／ｋｇの間であるべきである。幼児、 子供および６５歳以上の人および腎臓または肝臓機能に欠陥のある人は低用量で 始めること、およびそれらは個々の臨床応答および血中レベルに基づいて決定さ れることがさらに推奨される。ある場合には前記の範囲外の用量を使用すること が必要であるかもしれない；そのような決定を必要とする状況は当業者には明ら かであろう。包装 必要に応じ組成物は、活性成分を含んでいる一つまたはそれ以上の単一剤形を 含むＦＤＡ認可キットのようなパックまたはディスペンサーに存在する。パック は例えばブリスターパックのような金属またはプラスチックホイルから成ってい る。パックまたはディスペンサーには投与のための使用説明書が付随しているで あろう。パックまたはディスペンサーにはまた製造を統制している政府機関によ り規定された形式の容器、医薬の使用または販売に関連した注意が付随しており 、この注意は組成物またはヒトまたは獣医学的投与の形式の機関による認可を反 映している。そのような注意は、例えば、挿入された処方薬または認可された製 品の米国食品医薬品局により認可されたラベルであろう。適合医薬担体に処方さ れた本発明の化合物から成る組成物も製造され、適した容器に入れられ、および 示された状態の処置のためのラベルが付けられる。ラベル上の示された適した状 態には腫瘍の処置、血管新生の阻害、線維症の処置、糖尿病などが含まれるであ ろう。処置の方法 シグナリング経路のタンパク質チロシン酵素活性を阻害または減少させる本発 明の化合物は本発明の治療法に使用される。好適な態様において、化合物が細胞 中の他のチロシン酵素活性を含む他の酵素活性の機能を妨害しないように、化合 物の活性は特定のタンパク質チロシン酵素経路に十分に特異的である。 本発明の化合物および医薬組成物は糖尿病を処置するために使用できる。糖尿 病の病因には一般的にインシュリンシグナル伝達の不十分なまたは絶対的な欠乏 が含まれている。インシュリンシグナルの不足または不在は、インシュリンの欠 乏、結合親和性の損失、欠陥のあるレセプターまたはレセプターの過少発現のよ うな種々の因子により起こされる。インシュリンレセプター活性は本発明の化合 物を使用してシグナリングにおけるチロシンホスファターゼを阻害することによ り調節できる。インシュリンレセプターに基づいている現在利用可能な処置法と 異なり、インシュリンがたとえなくても脱リン酸化活性の阻害により細胞中にイ ンシュリンシグナルが復活または刺激される。糖尿病の例は本発明の化合物の治 療応用の原理を示しており、それはチロシン酵素、特にホスホチロシンホスファ ターゼによるシグナル伝達が関係あるとされている他の障害にも応用される。本 発明の化合物および医薬組成物は、サイトカインシグナル伝達に欠陥のある免疫 障害を処置するために使用される。サイトカインは造血ならびに協調する免疫お よび炎症応答に決定的な役割を果たしている。本化合物は造血細胞、ならびに抗 原刺激に応答したＢおよびＴ細胞の分化および増殖のシグナリングにおけるサイ トカインの活性を取り替えまたは促進するために使用され、それ故、貧血および 免疫不全の処置に有用である。本化合物はリウマチ様関節炎のような障害を処置 するための抗炎症薬としても使用される。本化合物はまた、ニューロトロフィン −仲介シグナル伝達により制御されている神経細胞の成長および分化を刺激する ことによる神経変性疾患の処置にも治療的に有用である。 本発明の別の態様では、本発明の化合物および医薬組成物は、増殖因子により 仲介されるシグナル伝達が制御されない結果として悪性腫瘍細胞が増殖および／ または転位する神経膠腫、メラノーマ、カポジ肉腫、血管腫、および乳、肺、肝 臓、前立腺、結腸および扁平上皮癌のような癌の治療にも使用される。例えば、 ＨＥＲ２のようなＰＴＫの過剰発現は腫瘍細胞の異常増殖特性と関連することが 示されている。腫瘍増殖を容易にする血管叢新生および／または血管新生もまた 本発明の化合物により阻害される。本化合物は正常増殖特性が復活するようにこ れらの腫瘍細胞のシグナル伝達を調節する。本化合物はまた、過度の表皮増殖因 子仲介シグナル伝達により起こされる乾癬の処置にも有用である。合成 本発明の化合物ならびに出発物質は化学の分野でよく知られている技術を用い て容易に合成される。本発明の化合物を形成するために他の合成経路が利用可能 であり、以下の実施例は本発明の化合物の製造に関しては決して方法を制限して いると考えてはならないことを当業者は理解するであろう。実施例１ ３−（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト−５−フェニル −１，２，４−トリアゾール（化合物１） 出発物質２−ブロモ−５−ニトロチアゾールは２−アミノ−５−ニトロチアゾ ール（Ａｌｄｒｉｃｈ）を亜硝酸ナトリウムおよび臭化水素で処理することによ り製造された（Ｆｒ．Ｄｅｍａｎｄｅ ２，０１５，４３４ １９７０）。３− フェニル−１，２，４−トリアゾール−５−チオン（Ｅ．Ｈｏｇａｒｔｈ，Ｊ． Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ（１９４９）１１６３）は最初に塩化ベンゾイルとチオセミカ ルバジドをピリジン中、０℃で反応させてベンゾイルチオセミカルバジドを得る ことにより製造された。ベンゾイルチオセミカルバジドをエタノール中、水酸化 カリウムで処理することにより３−フェニル−１，２，４−トリアゾール−５− チオンを得た。３−フェニル−１，２，４−トリアゾール−５−チオン（１．７ ７ｇ）は次に５０ｍＬのメタノールに溶解し、０．５７ｇのナトリウムメトキシ ド、続いて２−ブロモ−５−ニトロチアゾール（２．０９ｇ）で処理された。混 合物は室温で２時間撹拌し、沈殿した臭化ナトリウムは濾過して除いた。メタノ ールを蒸発させ、生成物をエタノールおよび水から結晶化させると１．５ｇの３ −［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−５−フェニル−１，２ ，４−トリアゾールが得られた、白色固形物、ＭＰ１５５−１５７℃。実施例２ ２−［（５−ニトローチアゾール−２−イル）メルカプト］−５−ｔ −ブチル−１，２，４−トリアゾール 表記化合物は実施例１に説明された方法で製造された。実施例１の塩化ベンゾ イルを塩化ピバロイルに置き換えるとピバロイルチオセミカルバジドおよび次に ３−ｔ−ブチル−１，２，４−トリアゾール−５−チオンが得られた。実施例１ のような１．７９ｇのチオンのナトリウム塩と２．０９ｇの２−ブロモ−５−ニ トロチアゾールの反応により１ｇの２−［（５−ニトローチアゾール−２−イル ）メルカプト］−５−ｔ−ブチル−１，２，４−トリアゾールが得られた、黄色 固形物、ＭＰ２１９−２２１℃。実施例３ ３−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−５−（チ エン−２−イル）−１，２，４−トリアゾール 表記化合物は実施例１に説明された方法で製造された。実施例１の塩化ベンゾ イルをチオフェン−２−カルボン酸の酸クロリド（酸および塩化オキサリルから 製造された）に置き換えるとチオフェン−２−カルボン酸のチオセミカルバジド および次に３−（チエン−２−イル）−１，２，４−トリアゾール−５−チオン が得られた。実施例１のような１．７３ｇのチオンのナトリウム塩と２．０９ｇ の２−ブロモ−５−ニトロチアゾールの反応により１ｇの３−［（５−ニトロチ アゾール−２−イル）メルカプト］−５−（チエン−２−イル）−１，２，４− トリアゾールが得られた、橙色固形物、ＭＰ１７９−１８１℃。実施例４ ３−（４−クロロフェニル）−５−［（５−ニトロチアゾール−２− イル）メルカプト］−１，２，４−トリアゾール 表記化合物は実施例１に説明された方法で製造された。実施例１の塩化ベンゾ イルを塩化４−クロロベンゾイルに置き換えると４−クロロベンゾイルチオセミ カルバジドおよび次に３−（４−クロロフェニル）−１，２，４−トリアゾール −５−チオンが得られた。実施例１のような２．３４ｇの３−（４−クロロフェ ニル）−１，２，４−トリアゾール−５−チオンのナトリウム塩と２．０９ｇの ２−ブロモ−５−ニトロチアゾールの反応により１．５ｇの３−（４−クロロフ ェニル）−５−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−１，２， ４−トリアゾールが得られた、薄い褐色の固形物、ＭＰ１８１−１８４１℃。実施例５ ３−ヒドロキシ−５−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカ プト］−４−フェニル−１，２，４−トリアゾール 表記化合物はＰｏｔｔｓ，Ｋ．Ｔ．，１９６１，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，６１： ８７、により説明されている一般法により製造された。４−フェニル−３−チオ セミカルバジド（４．１８ｇ）（Ａｌｄｒｉｃｈ）を５０ｍＬのピリジンに溶解 し、０℃にて２．７１ｇのエチルクロロホルメートで処理した。反応液は２時間 撹拌し、次に１８時間加熱環流した。溶媒を蒸発させ、水と摩砕すると２．５ｇ の３−ヒドロキシ−５−メルカプト−４−フェニル−１，２，４−トリアゾール が得られた。３−ヒドロキシ−５−メルカプト−４−フェニル−１，２，４−ト リアゾール（１．９３ｇ）を１０ｍＬのエタノールに溶解し、１．１当量の炭酸 カリウムをエタノール液（１０ｍＬ）を加えて１時間撹拌し、続いて実施例１の ように２．０９ｇの２−ブロモ−５−ニトロチアゾールと反応させた。エタノー ルおよび水から結晶化すると０．６ｇの３−ヒドロキシ−５−［（５−ニトロチ アゾール−２−イル）メルカプト］−４−フェニル−１，２，４−トリアゾール が得られた、黒ずんだ黄色固形物、Ｍ．Ｐ．１８８−１９０℃。実施例６ ４−シアノヘキシル−３−ヒドロキシ−５−［（５−ニトロチアゾー ル−２−イル）メルカプト］−１，２，４−トリアゾール 表記化合物は実施例５で説明された方法と類似の方法で製造された。ヒドラジ ン（０．８ｇ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）溶液へ３０分以上かけてシクロヘ キシルイソチオシアネート（３．５３ｇ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液を 加えた。反応液はさらに２時間撹拌し、蒸発乾固させると４．４ｇの４−シクロ ヘキシルカルボニル−３−チオセミカルバジドを得た。４−シクロヘキシルカル ボニル−３−チオセミカルバジド（２．０２ｇ）は実施例５のようにエチルクロ ロホルメート（１．０８ｇ）で処理した。反応生成物３−ヒドロキシ−５−メル カプト−４−シクロヘキシル−１，２，４−トリアゾール（１．０ｇ）は実施例 ５のように１．０５ｇの２−ブロモ−５−ニトロチアゾールと反応させた。エタ ノールおよび水から結晶化すると０．３ｇの３−ヒドロキシ−５−［（５−ニト ロチアゾール−２−イル）メルカプト］−４−シアノヘキシル−１，２，４−ト リアゾールを得た、黄色固形物、ＭＰ２３７−２３９℃。実施例７ ４−ベンジル−３−ヒドロキシ−５−［（５−ニトロチアゾール−２ −イル）メルカプト］−１，２，４−トリアゾール 表記化合物はベンジルイソチオシアネートから出発し実施例５で説明された方 法と類似の方法で製造された。中間体４−ベンジル−３−チオセミカルバジド( １．９１ｇ)は実施例５のようにエチルクロロホルメート（１．０９ｇ）で処理 した。反応生成物４−ベンジル−３−ヒドロキシ−５−メルカプト−１，２，４ −トリアゾール（１．０４ｇ）は実施例５のように１．０５ｇの２−ブロモ−５ −ニトロチアゾールと反応させた。エタノールおよび水から結晶化すると０．３ ｇの４−ベンジル−３−ヒドロキシ−５−［（５−ニトロチアゾール−２−イル ）メルカプト］−１，２，４−トリアゾールを得た、黄色固形物、ＭＰ２２１− ２２４℃。実施例８ ３−ヒドロキシ−５−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカ プト］−４−［（２−トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾ ール 表記化合物は２−（トリフルオロメチル）フェニルイソチオシアネートから出 発し実施例５で説明された方法と類似の方法で製造された。中間体４−［（２− トリフルオロメチル）フェニル］−３−チオセミカルバジド（２．０４ｇ）は実 施例５のようにエチルクロロホルメート（１．０９ｇ）で処理した。反応生成物 ３−ヒドロキシ−５−メルカプト−４−［（２−トリフルオロメチル）フェニル ］−１，２，４−トリアゾール（０．７８ｇ）は実施例５のように０．６３ｇの ２−ブロモ−５−ニトロチアゾールと反応させた。エタノールおよび水から結晶 化すると０．３ｇの３−ヒドロキシ−５−［（５−ニトロチアゾール−２−イル ）メルカプト］−４−［（２−トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４− トリアゾールを得た、黄色固形物、ＭＰ１８３−１８５℃。実施例９ ３−（１−エチル−３−メチルピラゾール−５−イル）−４−（３− メトキシ−ｎ−プロピル）−５−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカ プト］−１，２，４−トリアゾール 表記化合物は実施例１で説明された方法と類似の方法で合成された。３−メト キシ−ｎ−プロピルイソチオシアネートは３−メトキシ−ｎ−プロピルアミンお よびチオホスゲンから高温で製造され、続いてピリジン中でヒドラジンと反応さ せると中間体４−（３−メトキシ−ｎ−プロピル）−３−チオセミカルバジドを 得た。４−（３−メトキシ−ｎ−プロピル）−３−チオセミカルバジド（１．６ ４ｇ）を１−エチル−３−メチルピラゾール−５−カルボン酸クロリド（１．７ ３ｇ、酸および塩化オキサリルから製造された）と反応させると２ｇの１−エチ ル−３−メチルピラゾール−５−カルボニル）−４−（３−メトキシ−ｎ−プロ ピル）−３−チオセミカルバジドを得た。１−エチル−３−メチルピラゾール− ５−カルボニル）−４−（３−メトキシ−ｎ−プロピル）−３−チオセミカルバ ジドをエタノール中、水酸化カリウムで処理すると３−（１−エチル−３−メチ ルピラゾール−５−イル）−５−メルカプト−４−（３−メトキシ−ｎ−プロピ ル）−１，２，４−トリアゾールを得た。３−（１−エチル−３−メチルピラゾ ール−５−イル）−５−メルカプト−４−（３−メトキシ−ｎ−プロピル）−１ ，２，４−トリアゾールのナトリウム塩を２−ブロモ−５−ニトロチアゾール（ ０．５２ｇ）と実施例１のように反応させると粗３−（１−エチル−３−メチル ピラゾール−５−イル）−４−（３−メトキシ−ｎ−プロピル）−５−［（５− ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−１，２，４−トリアゾールが得ら れた。エタノールおよび水から結晶化すると０．３ｇの３−（１−エチル−３− メチルピラゾール−５−イル）−４−（３−メトキシ−ｎ−プロピル）−５−［ （５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−１，２，４−トリアゾール を得た、薄い褐色固形物、ＭＰ１１７−１１８℃。実施例１０ ３−（４−クロロフェニル）−５−［（５−ニトロチアゾール−２ −イル）アミノ］−１，２，４−トリアゾール 表記化合物は、３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−１，２，４−トリ アゾールと２−ブロモ−５−ニトロチアゾールを環流テトラヒドロフラン中で加 熱し、溶出液としてジクロロメタンおよびメタノールの混合物を用いるシリカゲ ルクロマトグラフィーにより３−（４−クロロフェニル）−５−［（５−ニトロ チアゾール−２−イル）アミノ］−１，２，４−トリアゾールを得ることによる 実施例１で説明された方法と類似の方法で合成された。実施例１１ ４−アリル−３−ヒドロキシ−５−［（５−ニトロチエン−２−イ ル）メルカプト］−１，２，４−トリアゾール 表記化合物はアリルイソチオシアネートから出発し実施例５で説明された方法 と類似の方法で製造された。４−アリル−３−ヒドロキシ−５−メルカプト−１ ，２，４−トリアゾールは実施例５のように２−ブロモ−５−ニトロチアゾール と反応させた。エタノールおよび水から結晶化すると４−アリル−３−ヒドロキ シ−５−［（５−ニトロチエン−２−イル）メルカプト］−１，２，４−トリア ゾールが黄色固形物として得られた。実施例１２ ３−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−４−（ ４−メトキシフェニル）−５−（チエン−２−イル）−１，２，４−トリアゾー ル２−ブロモ−５−ニトロチアゾール ７２．５ｇの２−アミノ−５−ニトロチアゾールを３００ｍＬの４８％臭化水 素酸および２００ｍＬの水に加えて撹拌しながら約−１０℃に冷却し、第一の滴 加ロートから８０ｍＬの水に溶解した５１．８ｇの亜硝酸ナトリウムおよび第二 の滴加ロートから２５０ｍＬのｎ−アミルアルコールを少しずつゆっくり加えた 。両方の溶液の添加には約３時間を必要とした。冷却浴を除き、混合物は一夜放 置して約１５℃まで温め、続いて室温で２時間撹拌した。吸引濾過して固形物を 集め、水蒸気蒸留すると６７ｇの粗生成物が得られた。粗生成物を熱エタノール から再結晶すると６１ｇ（６０％収率）の２−ブロモ−５−ニトロチアゾールが 黄色固形物として得られた。Ｎ１−（４−メトキシフェニルアミノチオカルボニル）−Ｎ２−（チエン−２− カルボニル）ヒドラジン チエン−２−カルボキシヒドラジド（２ｇ）および２．３ｇの４−メトキシフ ェニルイソチオシアネートのテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）溶液を一夜２５℃ で撹拌した。反応液を濃縮すると沈殿が得られ、それを吸引濾過して集めて乾燥 させると３．５ｇの表記化合物が灰色がかった白色固形物として得られた。（４−メトキシフェニル）−５−（チエン−２−イル）−１，２，４−トリアゾ ール−３−チオン Ｎ１−（４−メトキシフェニルアミノチオカルボニル）−Ｎ２−（チエン−２ −カルボニル）ヒドラジン（１ｇ）および０．２ｇのナトリウムエトキシドのエ タノール（１０ｍＬ）溶液を６時間環流した。混合物を冷却し、沈殿物を吸引濾 過して集め、乾燥させると０．６ｇの表記化合物が灰色がかった白色固形物とし て得られた。（４−メトキシフェニル）−５−（チエン−２−イル）−１，２， ４−トリアゾール−３−チオン（０．５ｇ）および０．４ｇの２−ブロモ−５− ニトロチアゾールのアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を６時間環流した。溶媒を 濃縮すると粗生成物が得られ、吸引濾過により集められた。粗生成物をエタノー ルから結晶化すると０．６ｇの所望のチアゾールが灰色がかった白色固形物とし て得られた。実施例１３ ３−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−４−メ チル−１，２，４−トリアゾール メチルアミノカルボニル−ヒドラジン 実施例１２における２ｇのチエン−２−カルボキシヒドラジドを１ｇのギ酸ヒ ドラジドおよび４−メトキシフェニルイソチオシアネートを１ｇのメチルイソチ オシアネートに置き換えることにより、１ｇの表記化合物が灰色がかった白色固 形物として得られる。実施例１４ ３−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−４−ブ チル−１，２，４−トリアゾール ブタノイルヒドラジド ブタノイルヒドラジドはＡ．Ｉ．Ｖｏｇｅｌ，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇａ ｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第３版，１９５６（Ｌｏｎｇｍａｎ Ｇｒｏｕｐ ，Ｌｏｎｄｏｎ）ｐ３９５の一般法に従って製造された。１０ｇのブタン酸エチ ルを１０ｍＬのヒドラジン水和物と１５分間環流した。無水エタノールを加え、 環流を３時間続けた後、エタノールを蒸留した。溶液を冷却し、結晶性ヒドラジ ン を吸引濾過で単離して乾燥させると８ｇのブタノイルヒドラジドが得られた。実 施例１３のギ酸ヒドラジドを１．７ｇのブタノイルヒドラジドに置き換えること により、０．６ｇの所望のトリアゾール化合物が灰色がかった白色固形物として 得られる。実施例１５ ５−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−１−（ ４−メトキシフェニル）テトラゾール ２−ブロモ−５−ニトロチアゾール ７２．５ｇの２−アミノ−５−ニトロチアゾールを３００ｍＬの４８％臭化水 素酸および２００ｍＬの水に加えて撹拌しながら約−１０℃に冷却し、第一の滴 加ロートから８０ｍＬの水に溶解した５１．８ｇの亜硝酸ナトリウムおよび第二 の滴加ロートから２５０ｍＬのｎ−アミルアルコールを少しずつゆっくり加えた 。両方の溶液の添加には約３時間を必要とした。冷却浴を除き、混合物は一夜放 置して約１５℃まで温め、続いて室温で２時間撹拌した。吸引濾過して固形物を 集め、水蒸気蒸留すると６７ｇの粗生成物が得られた。粗生成物を熱エタノール から再結晶すると６１ｇ（６０％収率）の２−ブロモ−５−ニトロチアゾールが 黄色固形物として得られた。１−（４−メトキシフェニル）テトラゾール−５−チオン ４−メトキシフェニルイソチオシアネート（２ｇ）および１ｇのアジ化ナトリ ウムのエタノール（５０ｍＬ）溶液を５時間環流し、冷却後に濃縮した（例えば 、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９５９， ｐ１０１を参照されたい）。沈殿を吸引濾過して集め、乾燥させると１．５ｇの １−（４−メトキシフェニル）テトラゾール−５−チオンが灰色がかった白色固 形物として得られる。 ２−ブロモ−５−ニトロチアゾール（１．１ｇ）および１ｇの１−（４−メト キシフェニル）テトラゾール−５−チオンのアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を ５時間環流した後、アセトニトリルを蒸発させる。残渣をエタノールから結晶化 させると１．２ｇの所望のテトラゾール化合物が灰色がかった白色固形物として 得られる。実施例１６ ２−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−５−メ チル−１，３，４−チアジアゾール ２−ブロモ−５−ニトロチアゾール ７２．５ｇの２−アミノ−５−ニトロチアゾールを３００ｍＬの４８％臭化水 素酸および２００ｍＬの水に加えて撹拌しながら約−１０℃に冷却し、第一の滴 加ロートから８０ｍＬの水に溶解した５１．８ｇの亜硝酸ナトリウムおよび第二 の滴加ロートから２５０ｍＬのｎ−アミルアルコールを少しずつゆっくり加えた 。両方の溶液の添加には約３時間を必要とした。冷却浴を除き、混合物は一夜放 置して約１５℃まで温め、続いて室温で２時間撹拌した。吸引濾過して固形物を 集め、水蒸気蒸留すると６７ｇの粗生成物が得られた。粗生成物を熱エタノール から再結晶すると６１ｇ（６０％収率）の２−ブロモ−５−ニトロチアゾールが 黄色固形物として得られた。２−メルカプト−５−メチル−１，３，４−チアジアゾール ２−メルカプト−５−メチル−１，３，４−チアジアゾールはＳ．Ｇ．Ｂｏｏ ｔｓおよびＣ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ，１９６７，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃ ｈｅｍｉｓｔｒｙ ，４：２７２−２８３に記載されている一般法に従って製造さ れた。酢酸ヒドラジド（７．４ｇ）のメタノール（１６０ｍＬ）溶液、５．０ｇ の水酸化カリウムペレットおよび１０ｍＬの二硫化炭素を室温で４時間撹拌する 。エーテル（４００ｍＬ）を加え、混合物を氷浴で冷却すると１０ｇの固形のア セチルジチオカルバゼート カリウム塩が得られ、吸引濾過で集め、乾燥させて すぐ使用する。３００ｍＬのジクロロメタンおよび５４ｍＬの三フッ化ホウ素エ ーテル溶液の混合物に粗アセチルジチオカルバゼート カリウム塩を加え、窒素 雰囲気下で１８時間撹拌する。オレンジ色の溶液を氷に注ぎ、エーテルで抽出す る。エーテル抽出物は１０％水酸化カリウム溶液で洗浄し、水相を１０％冷塩酸 でｐＨ２の酸性とする。沈殿を吸引濾過して集め、乾燥させると２．５ｇの表記 化合物がベージュ色の固形物として得られる。 ２−ブロモ−５−ニトロチアゾール（２．０９ｇ）および１．３２ｇの２−メ ルカプト−５−メチル−１，３，４−チアジアゾールのテトラヒドロフラン（１ ０ｍＬ）溶液を室温で一夜撹拌し、トリエチルアミンを加えて中和して撹拌を続 ける。沈殿した固形物はジクロロメタンに溶解し、水で洗浄し、有機層を蒸発さ せると粗生成物が得られる。粗生成物は酢酸エチル／ヘキサンから結晶化すると １ｇの所望のチアゾール−チアジアゾール化合物が灰色がかった白色固形物とし て得られる。 もしくは、２−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−５−メ チル−１，３，４−チアジアゾールはＪ．Ｂｏｕｒｄａｉｓ ｅｔ ａｌ．，１ ９８１，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｔｈｅｒ．，１６：２３３−２４０、の一般法 により製造される。２−ブロモ−５−ニトロチアゾール（２．０９ｇ）および１ ．３２ｇの２−メルカプト−５−メチル−１，３，４−チアジアゾールのエタノ ール（１０ｍＬ）および１Ｎ水酸化カリウム（１０ｍＬ）溶液を室温で一夜撹拌 する。沈殿した固形物を吸引濾過して集め、水で洗浄し、酢酸エチル／ヘキサン から結晶化すると１ｇの表記化合物が灰色がかった白色固形物として得られる。 もしくは、２−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−５−メ チル−１，３，４−チアジアゾールは２−メルカプト−５−メチル−１，３，４ −チアジアゾールのナトリウム塩を形成させて単離し、適当な不活性溶媒中、室 温で２−ブロモ−５−ニトロチアゾールと反応させ、前記のように生成物を単離 する。この方法の例としてはＭ．Ｆ．Ａｂｄｅｌ−ＬａｔｅｅｆおよびＺ．Ｅｃ ｋｓｔｅｉｎ，１９７２，Ｒｏｃｚ．Ｃｈｅｍ．，４５：１６４７−１６５８を 参照されたい。実施例１７ ２−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−５−プ ロピル−１，３，４−チアジアゾール プロパノイルヒドラジドはＡ．Ｉ．Ｖｏｇｅｌ，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇ ａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第３版，１９５６（Ｌｏｎｇｍａｎ Ｇｒｏｕ ｐ，Ｌｏｎｄｏｎ）ｐ３９５の一般法に従って製造された。１０ｇのブタン酸エ チルを１０ｍＬのヒドラジン水和物と１５分間環流した。無水エタノールを加え 、環流を３時間続けた後、エタノールを蒸留した。溶液を冷却し、結晶性ヒドラ ジンを吸引濾過で単離して乾燥させると８ｇのプロパノイルヒドラジドが得られ る。 実施例１６の酢酸ヒドラジドをプロパノイルヒドラジドに置き換えることにより ２−メルカプト−５−メチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりに２−メル カプト−５−プロピル−１，３，４−チアジアゾールが製造される。 実施例１７の２−メルカプト−５−メチル−１，３，４−チアジアゾールを２ −メルカプト−５−プロピル−１，３，４−チアジアゾールに置き換えることに より、２−［（５−ニトロチアゾール−２−イル）メルカプト］−５−プロピル −１，３，４−チアジアゾールが灰色がかった白色固形物として単離される。表の簡単な説明 表１は本発明の範囲内である好適な化学構造を示している。示された化合物は 決して本発明の範囲を制限すると解釈してはならない。生物学的評価 与えられた一連の化合物において、生物学的活性のスペクトルが観察されるこ とが理解されるであろう。好適な態様において、本発明は細胞シグナル伝達に関 連したタンパク質チロシン酵素、最も好適にはタンパク質チロシンホスファター ゼを調節する能力を示す新規ヘテロアリール化合物に関している。以下に説明さ れるアッセイは所望の活性の最適な度合いを示す化合物を選択するために用いら れる。 本明細書で使用される場合、句”所望の活性の最適な度合い”とは、特定の障 害を持っている患者（好適にはヒト）に最も低い可能な投与量で本発明の化合物 の治療有効量を提供するように、細胞シグナル伝達を仲介するおよび特定の障害 に関連するタンパク質チロシン酵素に対する最も高い、前に定義したような治療 係数を意味している。 阻害活性を決定するためのアッセイ 本分野で知られている種々の方法が本発明の化合物によるタンパク質チロシン 酵素、特にタンパク質チロシンホスファターゼ活性の阻害を同定、評価またはア ッセイするために使用されるであろう。例えば（制限するわけではない）、ホス ファターゼに関して、そのようなアッセイは培養標的細胞を化合物に暴露し、お よびａ）チロシンリン酸化タンパク質のレベルを評価および／または同定するた めに細胞溶解液を生化学的に分析し；またはｂ）試験基質へ暴露されていない対 照細胞と比較して処理細胞においての表現型または機能変化を評点する。 シグナル伝達レセプターの天然リガンドの模倣物が同定または評価されるべき 場合、細胞は本発明の化合物に暴露され、天然のリガンドのみに暴露された陽性 対照および化合物または天然のリガンドに暴露されなかった陰性対照と比較され る。インシュリンレセプターのような天然のリガンド不在下でも基礎レベルでリ ン酸化されることが知られているレセプターに対しては、アッセイはリガンド不 在下で実施される。阻害剤または促進剤誘導シグナル伝達が同定または評価され るべき場合、細胞は天然のリガンド存在下で本発明の化合物に暴露され、本発明 の化合物に暴露されない対照と比較される。 以下に説明されるアッセイは本発明の化合物のホスファターゼ活性を阻害する 能力を評価するための最初のスクリーニングとして使用される。アッセイはまた 濃度範囲（例えば、１００μＭから１ｐＭ）を試験し、リン酸化量またはシグナ ル伝達が対照と比較して５０％（ＩＣ５０）減少または増加する濃度を計算する ことにより化合物の相対的効力を評価するためにも使用される。生化学的アッセイ シグナル伝達間にチロシン残基上でリン酸化または脱リン酸化される基質分子 を持っている標的細胞は本発明の化合物および放射性標識リン酸に暴露され、そ の後問題とする基質を含んでいる細胞内容物を放出させるために溶解される。基 質は一次元または二次元のドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電 気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）技術を用いた細胞溶解物タンパク質成分の分離によ り分析し、Ｘ線フィルムへの暴露によりリン酸化タンパク質の存在を検出する。 放射活性標識を使用しない類似の技術において、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離さ れたタンパク質成分はニトロセルロース膜へ移され、ｐＴｙｒの存在は抗ホスホ チロシン（抗ｐＴｙｒ）抗体を用いて検出される。もしくは、問題とする基質は 最初に細胞溶解物と固形支持体に結合された基質特異的アンカー抗体とインキュ ベートされ、その後非結合細胞成分を洗い流し、抗ｐＴｙｒ抗体により固形支持 体上のｐＴｙｒの存在または不在を評価する。この好適な方法は自動化ロボット 系によるマイクロタイタープレート形式で容易に実施でき、多量の試料を適度に 短い時間枠内で試験することを可能にする。 抗ｐＴｙｒ抗体は、オートラジオグラフィーによる検出を容易にする放射活性 物質で標識することにより検出できる。もしくは、抗ｐＴｙｒ抗体は西洋ワサビ ペルオキシダーゼのような酵素と結合でき、酵素に適した基質を次に加えること により検出し、その選択は当業者には明らかであろう。さらに別の方法では、抗 ｐＴｙｒ抗体を認識する第二抗体と反応させることにより抗ｐＴｙｒ抗体を検出 し、第二抗体は前記のように放射活性物質かまたは酵素で標識されている。本分 野で既知の任意の抗体検出法が使用できる。 前記の方法はまた、シグナル伝達基質分子を含んでいる細胞溶解物およびホス ファターゼが本発明の化合物およびキナーゼと混合される細胞を含まない系で使 用してもよい。基質はアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を加えてキナーゼ反応を開 始させることによりリン酸化される。化合物の活性を評価するため、反応混合物 はＳＤＳ−ＰＡＧＥ技術で分析されるか、または固形支持体に結合されている基 質特異的アンカー抗体へ加えられ、ｐＴｙｒの存在または不在を評価するために 分離されたまたは捕捉された基質に対して前記のような検出法が実施される。結 果は化合物が加えられていない反応混合物で得られた結果と比較される。細胞を 含まない系は天然のリガンドまたはその同定の知識を必要としない。例えば、Ｐ ｏｓｎｅｒら（米国特許第５，１５５，０３１号）はＰＴＰ活性を阻害する過バ ナジン酸の能力を示すために、基質としてのインシュリンレセプターおよび標的 細胞としてのラット脂肪細胞の使用を記載している。Ｂｕｒｋｅら（Ｂｉｏｃｈ ｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ ．，１９９４，２０４：１２９−１３ ４）はホスホチロシル模倣物の阻害活性の評価における自己リン酸化インシュリ ンレセプターおよび組換えＰＴＰＩＢの使用を記載している。 基質タンパク質のリン酸化または脱リン酸化を測定することに加え、第二のメ ッセンジャー産生の活性化または調節、細胞イオンレベルの変化、シグナリング 分子の会合、解離または移動、遺伝子誘導または特定の遺伝子の転写または翻訳 もモニターされる。これらの生化学的アッセイは、これらの目的のために開発さ れた通常の技術を用いて実施される。生物学的アッセイ シグナル伝達を制御するＰＴＰ活性を調節する本発明の化合物の能力は、リガ ンド結合に付随する形態学的または機能的変化を評点することにより測定される 。本分野で知られている任意の定性または定量技術が、シグナリング経路のホス ファターゼの制御下にある細胞過程の観察および測定に応用できる。そのような 細胞過程には同化および異化過程、細胞増殖、細胞分化、細胞接着、細胞移動お よび細胞死が含まれるが、それらに制限されるわけではない。 ホスファターゼ阻害剤としてのバナジン酸塩の種々の生物学的効果を研究する ために使用された技術が本発明の化合物に適用される。例えば、バナジン酸塩は ラット脂肪細胞におけるグルコースおよびグルコース類似体のインシュリン感受 性助長輸送系を活性化することが示されている（Ｄｕｂｙａｋｒａ， １９８０ ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５６：５３０６−５３１２）。本発明の化合物 の活性は、化合物に暴露されたラット脂肪細胞中の２−デオキシ−3Ｈ−グルコ ースのような、グルコース類似体の輸送速度の増加を測定することにより評価で きる。バナジン酸塩はまたラット脂肪細胞中のグルコース酸化に対するインシュ リンの効果を模倣する（Ｓｈｅｃｈｔｅｒら，１９８０，Ｎａｔｕｒｅ，２８４ ：５５６−５５８）。本発明の化合物は14Ｃ−グルコースの14ＣＯ2への変換を 測定することによりグルコース酸化の刺激を試験できる。さらに、エリスロポエ チン仲介細胞増殖に対するオルトバナジン酸ナトリウムの効果が、ＤＮＡ合成間 のトリチウム化チミジン取り込みにより見積もられるような、ＤＮＡ含量に基づ いた細胞周期分析により測定されている（Ｓｐｉｖａｋｒａ，１９９２，Ｅｘｐ ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，２０：５００−５０４）。同様に、細胞増殖に役割を果た す ホスファターゼに対する本発明の化合物の活性は細胞周期分析により評価される であろう。 本発明の化合物の活性はまた、機能障害的シグナル伝達により起こされたまた は関連した障害の実験動物モデルを使用して動物でも評価できる。例えば、本発 明の化合物の活性は、非肥満糖尿病マウス（Ｌｕｎｄら，１９９０，Ｎａｔｕｒ ｅ ，３４５：７２７−７２９）、ＢＢウィスターラットおよびストレプトゾトシ ン誘導糖尿病ラット（Ｓｏｌｏｍｏｎら，１９８９，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ ．，２９７：３７２−３７６）におけるインシュリンレセプターシグナル伝達に 対する効果で試験される。本化合物の活性はまた、ホスファターゼが細胞性形質 転換を導く機能障害的シグナル伝達に重要な役割を果たしているので、動物発癌 実験でも評価される。例えば、オカダ酸（ホスファターゼ阻害剤）はマウス皮膚 上の腫瘍形成を促進することが示されている（Ｓｕｇａｎｕｍａら，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ．，８５：１７６８−１７７１）。 これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータはヒトにおける 使用のための用量範囲を決めるために使用される。本発明の化合物の投与量はほ とんどまたは全く毒性のない循環濃度の範囲内になければならない。投与量は用 いられた剤形および投与経路に依存してこの範囲内で変化するであろう。ホスファターゼ阻害 本発明はタンパク質チロシンホスファターゼの活性を阻害する（これに制限さ れるわけではない）ことによりシグナル伝達を調節および／または修飾できる化 合物を含んでいる。特に、本発明はタンパク質チロシンホスファターゼ活性を阻 害できる化合物を含んでいる。これらの化合物は本明細書において、シグナル伝 達により制御されている細胞過程をアップレギュレートするにせよまたはダウン レギュレートするにせよ、一般的に”ホスファターゼ阻害剤”と称される。ホスホチロシン酵素結合免疫吸着アッセイ このアッセイはインシュリンレセプター（ＩＲ）上のホスホチロシン（ｐｔｙ ｒ）残基の脱リン酸化を阻害する本発明の化合物の能力を試験するために使用さ れる。当業者は血小板由来増殖因子のような他の基質分子が、異なった標的細胞 およびアンカー抗体を用いることによりアッセイで使用されることを認識するで あろう。アッセイに異なった基質分子を用いることにより、異なったタンパク質 チロシン酵素に対する本発明の化合物の活性が評価される。ＩＲの場合、内因性 キナーゼ活性が低レベルのインシュリン結合または結合なしでも活性化される。 従って、ＩＲのリン酸化を刺激するにはインシュリンは必要とされない。即ち、 化合物暴露後、細胞溶解物が調製され、抗インシュリンレセプター抗体で被覆さ れたマイクロタイタープレートに加えられる。捕捉されたインスリンレセプター のリン酸化レベルは抗ｐＴｙｒ抗体および酵素結合第二抗体を用いて検出される 。材料および方法 １． ＩＲアッセイに使用された細胞株はヒトＩＲを過剰発現するように遺 伝子操作されたＮＩＨ３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５８）である（Ｈ２ ５細胞）。これらの細胞ための増殖培地は１０％ウシ胎児血清、１％Ｌ−グルタ ミンおよび２０ｍＭヘペスを含んでいるＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）である。 ２． 使用されたアンカー抗体はヒトＩＲの細胞外ドメインを認識するＢＢ Ｅ（Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｕｇｅｎ Ｉｎｃ． ）であった。 ３． ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）：ＫＨ2ＰＯ4（０．２０ｇ／ｌ）、Ｋ2ＨＰＯ4 （２．１６ｇ／ｌ）、ＫＣｌ（０．２０ｇ／ｌ）、ＮａＣｌ（８．０ｇ／ｌ）、 ｐＨ７．２。 ４． ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗体（抗ｐＴｙｒ、Ｅｎｚｙ ｍｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｕｇｅｎ Ｉｎｃ．）。 ５． ヤギ抗ウサギＩｇＧ ＰＯＤ結合体（Ｔａｇｏ，Ｂｕｒｌｉｎｂａｍ ｅ，ＣＡ、カタログ番号６４３０）が第二抗体として使用された。 ６． ＴＢＳＴ緩衝液：５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、 ０．１％トリトンＸ−１００、１０Ｎ ＨＣｌでｐＨ７．２に調整。 ７． 遮断緩衝液：ＰＢＳに５％ミルク（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ即席脱脂乾燥 ミルク）。 ８． ５Ｘ ＨＮＴＧ緩衝液：１００ｍＭヘペス、７５０ｍＭ ＮａＣｌ、 ５０％グリセロール、０．５％トリトンＸ−１００、ｐＨ７．５。 ９． ＡＢＴＳ溶液：１００ｍＭクエン酸、２５０ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4、０ ．５ｍｇ／ｍｌ ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリ ン）スルホン酸）、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ４．０に調整。 １０． 細胞溶解緩衝液：１ｍＭ Ｎａ3ＶＯ4（０．５Ｍ溶液、１００Ｘ保存 液として小分けして−８０℃に保つ）、５ｍＭ ＮａＰ2Ｏ7および５ｍＭ ＥＤ ＴＡを含んでいるＨＮＴＧ、用時調製して使用するまでは氷上に保つ。 １１． 過酸化水素：３０％溶液。アッセイプレートの調製 マイクロタイタープレート（９６ウェル、Ｅａｓｙ Ｗａｓｈ ＥＬＩＳＡプ レート、Ｃｏｒｎｉｎｇ２５８０５−９６）はアンカー抗体ＰＢＳ溶液１００μ ｌ（ウェル当たり０．５μｇ）で、室温で少なくとも２時間または４℃で一夜被 覆される。使用前に被覆緩衝液を１００μｌの遮断緩衝液で置き換え、前もって 被覆されているアッセイプレートは室温で３０分振盪した。溶解液を加える前に ウェルを水で３回およびＴＢＳＴ緩衝液で１回洗浄した。細胞播種 細胞は８０−９０％コンフルエントになるまで１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ） を含むＤＭＥＭ培地中、１５ｃｍ培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５０２０−１００） を用いて増殖させる。細胞はトリプシン−ＥＤＴＡ（０．２５％、０．５ｍｌ、 Ｇｉｂｃｏ）で採取し、１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミンおよびヘペスを含ん でいる新鮮培地に再懸濁し、２５，０００細胞／ウェル、１００μｌ／ウェルで 丸底９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５８０６−９６）に移す。 細胞は３７℃、５％ＣＯ2で２４時間インキュベートする。プレートを逆さまに し、０．５％ＦＢＳおよびヘペスを含むＤＭＥＭ培地を加えることにより培地を 交換する。細胞はさらに３７℃、５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。アッセイ法 アッセイは９６ウェル組織培養プレートで行われる。細胞に化合物を加える前 に、ウェル内の培地は無血清ＤＭＥＭ培地に置き換えられる（ウェル当たり９０ μｌ）。陽性対照ウェルには８０μｌのＤＭＥＭを加える。陰性対照ウェルには ９０μｌのＤＭＥＭを加える。試験化合物はＤＭＥＭで１：１０に希釈され、１ ０μｌ／ウェルの希釈試験物質をウェル中の細胞に加えて１：１００の最終希釈 を達成する。陽性および陰性対照ウェルには両方とも１０μｌ／ウェルのジメチ ルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を加えて１％の最終濃度とする。陽性対照ウェルに はさらに最終濃度が１０ｍＭになるように１０μｌ／ウェルの０．１Ｍ Ｎａ2 ＶＯ4を加える。組織培養プレートは３７℃、５％ＣＯ2でインキュベーションす る前に１分間振盪させる。９０分のインキュベーション後、プレートを逆さにす ることにより培地を除き、１００μｌ／ウェルの溶解緩衝液を加える。組織培養 プレートは５分間振盪させ、続いて氷上に１０分間置く。繰り返して吸引排出す ることにより細胞をホモジナイズし、溶解物は前もって被覆されたアッセイプレ ートの対応するウェルへ移す。 細胞溶解物中の物質は振盪しながら室温で１時間、アンカー抗体へ結合させる 。次に溶解物を除き、アッセイプレートを洗浄する。すべてのＥＬＩＳＡプレー ト洗浄は水で３回洗浄し、続いてＴＢＳＴで１回洗浄することにより行われた。 プレートはペーパータオル上で軽くたたくことにより乾燥させる。ホスホチロシ ンはＴＢＳＴで１：３０００に希釈された１００μｌ／ウェルの抗ｐＴｙｒ抗血 清をウェルに加え、室温で３０分振盪することにより検出される。結合されなか った過剰の抗ｐＴｙｒ抗血清を除き、アッセイプレートは前記のように洗浄する 。ＴＢＳＴで１：３０００に希釈した第二抗体をウェルに加え、振盪しながら室 温で３０分インキュベートする。次に第二抗体を除き、プレートを洗浄し、新し いＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2（０．５ｍｇ／ｍｌの２，２’−アジノビス（３−エチルベ ンゾチアゾリン）スルホン酸を１００ｍＭクエン酸、２５０ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4 、ｐＨ４．０に加えた溶液１０ｍｌに１．２μｌの３０％Ｈ2Ｏ2を加える）を加 えて発色を開始させる。１０分後に１００μｌ／ウェルの０．２Ｍ ＨＣｌを加 えて１分間振盪することにより反応を停止する。４１０ｎｍでの吸光度値をＥＬ Ｉ ＳＡプレートリーダー（Ｄｙｎａｔｅｃ ＭＲ５０００）を使用して測定した。グルコース輸送アッセイ このアッセイは脂肪細胞内へのインシュリン誘導グルコース輸送を調節するシ グナリング経路に含まれているホスファターゼ活性を阻害する本発明の化合物の 能力を評価するために使用される。単離された脂肪細胞とバナジン酸塩をインキ ュベートすると、グルコース取り込み速度の用量依存性増大が起こることが示さ れている。材料および方法 グルコース輸送アッセイに使用された細胞株は、インシュリンレセプターを過 剰発現する前脂肪細胞細胞株３Ｔ３−Ｌ１（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ ｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ＣＣＬ９２．１）である。３Ｔ３−Ｌ１細 胞は最初に、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含んでいるＤＭＥＭのコンフルエ ント増殖条件下、０．５ｍＭ ３−イソブチル−１−メチルキサンチン、５μｌ ／ｍｌブタインシュリンおよび２５０ｍＭデキサメタソンで細胞を２日間処理す ることにより分化させる。次に細胞を１０％ＦＢＳおよび５μｌ／ｍｌブタイン シュリンを含んでいるＤＭＥＭ中で２日間増殖させた後、細胞は１０％ＦＢＳの みを含むＤＭＥＭ中で培養する。 アッセイで使用された細胞は最初に１％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地中、３７℃ 、５％ＣＯ2で一夜増殖させる。使用２時間前、一夜培養培地を５ｍＭグルコー スを含む無血清ＤＭＥＭに置き換える。細胞をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で２回洗 浄後、ＤＭＥＭへ１：１００に連続希釈した試験化合物を０．５μＭから５００ μＭの最終濃度範囲になるようにウェルへ加える。陰性対照ウェルはＤＭＥＭの みを加える。細胞は試験化合物と３７℃、５％ＣＯ2で１−４時間インキュベー トする。選択された時間の１５分前、２−デオキシ−3Ｈ−グルコースが５０μ Ｍおよび０．５μＣｉ／ｍｌの最終濃度で加えられる。終了時、化合物を除き、 ウェルは１０ｍＭグルコースを含んでいるＰＢＳで２回洗浄する。細胞を５０μ ｌの０．５Ｎ ＮａＯＨで溶解し、細胞溶解物はシンチレーションバイアルに移 し て５．２μｌの氷酢酸と混合する。ウェルは２００μｌＰＢＳで各々洗浄し、対 応するシンチレーションバイアルへ移す。3Ｈ放射活性をＢｅｃｋｍａｎカウン ターで計数した。一次脂肪細胞グルコース取り込みアッセイ このアッセイは細胞によるグルコース取り込みで決定されるような、一次脂肪 細胞のインシュリン仲介シグナル伝達に対する本発明の化合物の効果を評価する ために使用される。材料および方法 試薬 以下の緩衝液および試薬が一次脂肪細胞グルコース取り込みアッセイで使用さ れる： 混合塩 ７６．７４ｇ ＮａＣｌ ３．５１ｇ ＫＣｌ ３．０６ｇ ＭｇＣｌ2 ３．６３ｇ ＣａＣｌ2・Ｈ2Ｏ（２．７４ｇ ＣａＣｌ2） 蒸留水で容量を１リットルとした。 ヘペス緩衝液 ２３．８ｇ ヘペス ３．４２ｇ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ（３．８７ｇ ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ ）を約６００ｍｌのＨ2Ｏに溶解した。溶液のｐＨは７．６に調整され、容量を 蒸留水で１リットルとした。 アルブミンコラゲナーゼ緩衝液 ４４．８ｍｌ 蒸留水 １０．０ｍｌ ヘペス緩衝液 １０．０ｍｌ 混合塩 ３５．０ｍｌ １０％ＢＳＡ ０．２ｍｌ グルコース（３００ｍＭ） １００ｍｇ コラゲナーゼ 輸送緩衝液 ４８ｍｌ 蒸留Ｈ2Ｏ ８ｍｌ 混合塩 ８ｍｌ ヘペス緩衝液 １６ｍｌ １０％ウシ血清アルブミン 精巣上体脂肪褥の切除 アッセイで使用された一次脂肪細胞は２００−２５０グラムの体重を持つ安楽 死させたオスのラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙまたは他の適した系統） から得られる。年をとったおよびより重いラットはインシュリンへ抵抗性であり 、および良好な応答を示さないので使用されなかった。各々の動物から１−１． ５ｇの脂肪が得られると期待される。４０の反応を行うには約２．５ｇの脂肪が 必要とされる、グルコース取り込みアッセイに２０試料および２０ＬＤＨ試料の 整合性の組。 無菌技術を用いて、皮膚、続いて腹膜の４−６ｃｍの切開による正中線切開が 行われた。精巣に隣接する脂肪体は精巣との血管の相違をたどることにより同定 される。脂肪褥は注意深く精巣上体および精巣、および神経支配血管から切り取 られる。切り出された脂肪褥は秤量し、細かく裁断して５ｍｌのコラゲナーゼ緩 衝液中、３７℃で１時間消化した。消化物質は２５０ミクロンナイロンメッシュ ふるいを通して濾された。上部に浮かんだ細胞を集め、輸送緩衝液で３回洗浄す る。細胞濃度は以下の方法の一つにより決定された： （１）溶液中のパーセントとしての細胞：細胞懸濁液をヘマトクリット管に入 れ、５００ｘｇで５−１０分間遠心分離する。液体の円柱の総計の長さおよび管 底部の”白色”細胞性物質の円柱の長さをミリメートルで測定する。細胞濃度は 総計の長さに対する細胞部分の長さのパーセントとして見積もられる。グルコー ス取り込みアッセイには、最終反応容量の約２−３％の細胞が使用された。５０ ０μｌの反応容量に対しては、脂肪細胞保存溶液が輸送緩衝液で２５％細胞まで 希釈され、各々の試料に５０μｌが加えられた。 （２）細胞数：脂肪細胞が懸濁液中で沈むように、細胞は最初にコリジン緩衝 液中で四酸化オスミウムにより固定された。固定化された細胞は四酸化オスミウ ムを除去するため遠心分離され、クールターカウンターで計数された。細胞数が 決定されたら、細胞濃度が調整され、細胞の５０μｌが各々の試料に加えられる 。 アッセイ ラットから集められた脂肪細胞は飽和レベルのインシュリン存在下または不在 下で試験化合物に暴露される。通常はインシュリン誘導機構を経て細胞に取り込 まれるであろう14Ｃ標識グルコースを細胞に加える。処理細胞により保持された 放射活性グルコースの量が決定され、試験化合物の活性を評価するために非処理 細胞と比較される。 典型的なアッセイは以下のように組み立てることができる： 適当な緩衝液および化合物を含んでいる反応バイアル（ポリエチレン シンチレ ーションバイアル １７ｍｍ）は細胞を調製している間に用意する。８０ｎＭイ ンシュリンの５０μｌ（飽和レベルを示している）を脂肪細胞添加直前に適切な 試料に加える。より低い濃度のインシュリンもまた本アッセイで使用できる。ジ メチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；０．５％以下）は本発明の化合物のための担体 として使用される。ＤＭＳＯの溶解度（約５０μＭ）に依存して、２００ｘで試 験化合物が使用される。脂肪細胞の５０μｌが反応バイアルに加えられ、３７℃ で３０分間、穏やかに振盪しながらインキュベートする。次に各々の試料に14Ｃ −グルコースが加えられ、さらに３０分間振盪しながらインキュベートする。 遠心分離により細胞を反応緩衝液から分離する。細胞により取り込まれたグル コース量は標準シンチレーション計数により決定される。細胞は（二重の）、１ ００μｌのジメチルシリコン液ＳＦ９６／５０を含んでいる狭い口径の微量遠心 管（５．８ｘ４７．５ｍｍ、０．４ｍｌ容量）により分離できる。各々の反応試 料は細胞の均一な分布を確かなものにするために攪拌し、２００μｌが狭い口径 の管に移される。混合物は１３０００ｒｐｍで１０分遠心分離する。遠心分離後 、上部に浮かんでいる細胞をシリコン液界面で分離する。上層を７−１０ｍｌの シンチレーション液とともにホウケイ酸バイアルに移し、約１０分間計数する。 ５０μｌの14Ｃが各々の反応の放射活性総量のための対照として使用された。細胞インシュリンレセプター活性化アッセイ このアッセイは９６ウェルＥＬＩＳＡ様式で、天然のままの細胞の触媒的イン シュリンレセプター活性を決定するための矛盾のない方法を提供するために使用 される。ＥＹ−２０ｍｅｒペプチドが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ ）でＩＲ活性化状態を決定するためのインビトロにおけるＩＲ基質として使用さ れる。 試薬および製造元： １） Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタロ グ番号２５９０５−９６） ２） ＰＢＳ（リン酸緩衝液） 処方：２．７ｍＭ ＫＣｌ １．１ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4 １．５ｍＭ ＭｇＣｌ2（無水） １３８ｍＭ ＮａＣｌ ８．１ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4 ３） ＨＮＴＧ溶解緩衝液 処方：２０ｍＭ ヘペス緩衝液ｐＨ７．５ １５０ｍＭ ＮａＣｌ ０．２％ トリトンＸ−１００ １０％ グリセロール ４） ＨＮＴＧ*処方： １Ｘ ＨＮＴＧ ５ｍＭ Ｎａ3Ｏ4 ２ｍＭ ＮａＰＰｉ ５ｍＭ ＥＤＴＡ ５） ＤＭＥＭ（ダルベッコ改良イーグル培地）、１Ｘ高グルコース、Ｌ−グ ルタミン（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９６５−０５０）を含む ６） ＦＢＳ（ウシ胎児血清）（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１６０００−０４４ ） ７） Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ保存溶液）（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１ ９６５−０５０） ８） 増殖培地：ＤＭＥＭ１０％（熱活性化）ＦＢＳ＋２ｍＭ Ｌ−グルタミ ン ９） 飢餓培地：ＤＭＥＭ １０）Ｈ２５細胞（ヒトインシュリンレセプターを発現するプラスミドでトラ ンスフェクトされたＮＩＨ３Ｔ３ｃ７細胞）５％ＣＯ2を含む増殖培地中、３７ ℃で増殖 １１）抗インシュリンレセプター抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃ ｈ）（ＳＣ−７１０またはＳＣ−０９） １２）ＥＹ−Ｔｉｄｅ：ビオチン結合ペプチド（配列 ビオチンＥＹＥＹＥＹ ＥＹＥＹＥＹＥＹＥＹＥＹＥＹ、ＭＷ＝３２８０．４）（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈ ｅｍｉｓｔｒｙ ｌａｂ ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ） １３）ＡＢＴＳ溶液： 処方：１００ｍＭクエン酸（無水）、２５０ｍＭ Ｎａ2 ＨＰＯ4、ｐＨ４．０、０．５ｍｇ／ｍｌ ＡＢＴＳ（２ ，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン）−６ −スルホン酸）（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ４−８８８） 、 使用するまで暗所で４℃に溶液を保つ １４）過酸化水素３０％：Ｆｉｓｈｅｒ（カタログ番号Ｈ３２５） １５）ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2： 処方：１５ｍＬ ＡＢＴＳ溶液 ２μＬ Ｈ2Ｏ2 １６）キナーゼ緩衝液 処方：２５ｍＭヘペス／ＣＬ、ｐＨ７．０ １５０ｍＭ ＮａＣｌ ０．１％ トリトンＸ−１００ １０ｍＭ ＭｎＣｌ2 １７）ＴＢＳＴ緩衝液（トリトンＸ０１９９を含むトリス緩衝化塩溶液） 処方：５０ｍＭ トリス、ｐＨ７．２ １５０ｍＭ ＮａＣｌ ０．１％ トリトンＸ−１００ １８）ポリプロピレン９６ウェルＶ底プレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎ ｔｉｆｉｃカタログ番号ＡＳ−７２０９２） １９）遮断緩衝液：５％粉末化脱脂ミルクのＰＢＳ溶液（ｗ／ｖ） ２０）ＡＢＣキット：アビジン−ＨＲＰ発色試薬：Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ（ カタログ番号ＰＫ−４０００） ２１）ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）：Ｓｉｇｍａ（カタログ番号Ｄ−８ ４１８） ２２）ＡＴＰ：Ｓｉｇｍａ（カタログ番号Ｄ−８４１８） ２３）４Ｇ１０：ホスホチロシン特異的モノクローナル抗体（ＵＢＩ） ２４）インシュリン、結晶、ウシ、亜鉛：Ｇｉｂｃｏカタログ番号１３００７ −０１８ アッセイ法 １） ９６ウェル組織培養プレートを用い、増殖培地中に１５，０００細胞／ ウェルでＨ２５細胞を播種 ２） ０．５μｇ／ウェルの抗インシュリンレセプター抗体ＰＢＳ溶液でＣｏ ｒｎｉｎｇＥＬＩＳＡプレートを被覆。ウェル当たりの最終容量は１００μｌで ある。一夜４℃で保存。 ３） 別のＣｏｒｎｉｎｇＥＬＩＳＡプレートを０．５μｇ／ウェルの４Ｇ１ ０抗体ＰＢＳ溶液で被覆。ウェル当たりの最終容量は１００μｌである。一夜４ ℃で保存。 ４） 増殖培地を除き、ＰＢＳで洗浄しおよび９０μｌの飢餓培地を加えるこ とによりアッセイ２時間前に細胞を飢餓させる。 ５） プレートを逆さにして液体を除くことにより抗インシュリンレセプター 抗体被覆プレートのウェルから非結合抗体を除く。ＴＢＳＴで３回洗浄する。 ６） ウェル当たり１５０μｌの遮断緩衝液でプレートを遮断。室温で３０分 間、マイクロタイタープレート振盪機上で振盪しながらインキュベートする。 ７） ポリプロピレンプレート上、化合物／抽出物およびＤＭＳＯ対照をＤＭ ＥＭに１：１０希釈。 ８） １：１０希釈した化合物／抽出物およびＤＭＳＯ対照を９６ウェルプレ ートに加える。インキュベーター中、３７℃および５％ＣＯ2で２０分間プレー トをインキュベートする。 ９） ２０分のインキュベーション後、陽性対照ウェルに０．２μＭインシュ リン１００μｌを加える。最終インシュリン濃度はウェル当たり０．１μＭとな る。インキュベーター中、３７℃および５％ＣＯ2で１０分間プレートをインキ ュベートする。 １０）液を除くためにプレートを逆さにすることにより細胞プレートから培地 を除く。ＰＢＳで１回洗浄し、１００μｌ／ウェルのＨＮＴＧ*を加える。プレ ートを５分間氷上に置く。 １１）遮断緩衝液を除き、抗インシュリンレセプター抗体被覆ＥＬＩＳＡプレ ートをＴＢＳＴで３回洗浄する。過剰の液体および泡を除くためにペーパータオ ル上で軽くたたく。 １２）プレートから細胞を剥がすために１２チャンネルピペッターを使用し、 吸引排出を繰り返すことにより溶解物を均一化する。溶解物を抗インシュリンレ セプター抗体被覆ＥＬＩＳＡプレートの対応するウェルに移す。室温で１時間、 マイクロタイタープレート振盪機上で振盪しながらインキュベートする。 １３）抗インシュリンレセプター抗体被覆ＥＬＩＳＡプレートを逆さにするこ とによりウェルから非結合タンパク質を除去する。ＴＢＳＴでプレートを３回洗 浄する。過剰の液体および泡を除くためにペーパータオル上で軽くたたく。 １４）６μＭペプチドおよび２μＭ ＡＴＰを含んでいるキナーゼ緩衝溶液を 調製する。各々のウェルに５０μｌの溶液を加える。ＥＬＩＳＡプレートをパラ フィルムで覆い、マイクロタイタープレート振盪機上で振盪しながら４℃で一夜 （約１５−１７時間）インキュベートする。 １５）次の朝、４Ｇ１０被覆プレートを各々のウェルに１００μｌの遮断緩衝 液を加えて遮断する。室温で３０分間、マイクロタイタープレート振盪機上で振 盪しながらインキュベートする。 １６）抗インシュリンレセプター抗体被覆プレートから４℃冷却培地を除き、 各々のウェルに５０μｌのキナーゼ緩衝液を加える。 １７）ＴＢＳＴでＵＢ４０被覆プレートを３回洗浄する。過剰の液体および泡 を除くためにペーパータオル上で軽くたたく。 １８）抗インシュリンレセプター抗体被覆プレートからキナーゼ緩衝液（ＥＹ ＴｉｄｅペプチドおよびＡＴＰを含んでいる）の８０μｌ／ウェルを４Ｇ１０被 覆プレートの対応するウェルに移す。室温で３０分間、マイタロタイタープレー ト振盪機上で振盪しながらインキュベートする。抗インシュリンレセプター抗体 被覆プレートを処分する。 １９）前記の工程の直後に１５ｍｌのＴＢＳＴ中のＡＢＣキット試薬をよく混 ぜ合わせる。ボルテックスし、ベンチトップで３０分間インキュベートする。 ２０）ＴＢＳＴでＵＢ４０被覆プレートを３回洗浄する。過剰の液体および泡 を除くためにペーパータオル上で軽くたたく。 ２１）前もって混合したＡＢＣ試薬の１００μｌ／ウェルをＵＢ４０プレート へ加える。室温で３０分間、マイクロタイタープレート振盪機上で振盪しながら インキュベートする。 ２２）ＴＢＳＴでＵＢ４０被覆プレートを３回洗浄する。過剰の液体および泡 を除くためにペーパータオル上で軽くたたく。 ２３）プレートから液体を除き、ＴＢＳＴで３回洗浄する。 ２４）１００μｌ／ウェルのＡＢＳＴ／Ｈ2Ｏ2溶液を加える。マイクロタイタ ープレート振盪機上で振盪しながら５分間インキュベートする。ＥＬＩＳＡプレ ートをＥＬＩＳＡプレートリーダーに置き、４１０ｎｍでの吸光度を決定する（ 対照６３０ｎｍ）。 結果はＩＣ５０として計算されている。結論 本発明の化合物、方法および医薬組成物は細胞シグナル伝達を仲介するタンパ ク質チロシン酵素、特にタンパク質チロシンホスファターゼの活性を調節するこ とが期待され、それ故、細胞シグナル伝達に関連するタンパク質チロシン酵素に 関係する障害に対する治療薬として有効であると期待されることが理解されるで あろう。 ある種の態様および実施例が本発明を説明するために使用されてきたが、示さ れた態様および実施例に対する変更が本発明の範囲および精神から離れることな く行えることは当業者には明らかであろう。 他の態様は以下の請求の範囲内にある。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION         To regulate cell signaling associated with protein tyrosine enzymes                         New heteroaryl compounds                                 Related application   This application is related to provisional application No. 60 / 049,560, filed June 13, 1997, This application claims that it is fully described here. It is incorporated as if it were.                                    Foreword   The present invention relates generally to organic chemistry, biochemistry, pharmacology and medicine. in particular, Regulates the activity of protein tyrosine enzymes involved in cell signaling, and therefore Beneficial for disorders associated with abnormal protein tyrosine enzyme-related cell signaling Novel heteroaryl compounds expected to show effects and their physiological properties And salts and prodrugs that are acceptable.                                Background of the Invention   Cell signaling involves external stimuli that regulate diverse cellular processes. It is a basic mechanism associated with the inside of the cell. Biochemical signaling in cells Pathways include a network of interacting proteins that connect directly or functionally . One of the key biochemical mechanisms of signal transduction is the possibility of tyrosine residues on proteins. Involved in reverse phosphorylation. The phosphorylation state of a protein depends on its conformation and / or Enzymatic activity can, of course, affect its location in the cell. Protein The oxidation state is determined by protein tyrosine kinase (P) at various specific tyrosine residues. TKS) and the reciprocal action of protein tyrosine phosphatase (PTPS) Change.   The general mechanism by which receptors regulate cell function is either intrinsic to the receptor, or its receptor. Inducible tyrosine kinase activity conferred by other proteins associated with the receptor (Darnell et al., 1994,Science, 264: 1415-1421; Heldin, 1995, Cell , 80: 212-223; Pawson, 1995,Nature, 373: 573-580).   Protein tyrosine kinase is a transmembrane receptor with multiple functional domains And a large population of intracellular enzymes (Taylor et al., 1992,Ann . Rev. Cell Biol. 8: 429-6 2). Ligand binding transmits signals allosterically through the cell membrane, where The cytoplasmic portion of PTK initiates a cascade of molecular interactions, which signal Spread throughout the cell and nucleus. Many receptor protein tyrosine kinases (RPT) K) eg epidermal growth factor receptor (EGFR) and platelet-derived growth factor receptor (PDGFR) undergo oligomerization upon ligand binding and their receptors are At specific tyrosine residues in the cytoplasmic portion (autophosphorylation or Self-phosphorylate (by transphosphorylation) (Schlessi nger and Ullrich, 1992,Neuron, 9: 383-91, Heldin, 1995,Cell, 80: 213223) . Cytoplasmic protein tyrosine kinase (CPTK), such as Janus Kinases (eg, JAK1, JAK2, TYK2) and Src kinases (eg, For example, src, lck, fyn) are cytokines (eg, IL-2, IL-3, IL-6, erythropoietin), interferons and associates with antigen receptors . These receptors also undergo oligomerization and phosphorylate during activation. However, the receptor polypeptide itself has no kinase activity.   Like PTKS, protein tyrosine phosphatase (PTPS) Highly conserved with census motif [I / V] IHCXAGXXR [S / T] G Transmembrane having at least about a 230 amino acid catalytic domain comprising a modified active site Includes populations of common and cytoplasmic enzymes. The substrate for PTP is P with a phosphotyrosine residue. It can be a substrate for TK or PTK (Hunter, 1989,Cell, 58: 1013-16; Fischer Et al., 1991,Science, 253: 401-6; Saito & Streuli, 1991,Cell Growth and Dif ferentiation , 2: 59-65; Pot and Dixon, 1992,Biochem . Biophys. Acta, 1136: 35-43).   Transmembrane or receptor-like PTP (RPTPS) is an extracellular domain, one transmembrane domain It has one or two catalytic domains with a main and a short cytoplasmic tail. The extracellular domains of these RPTPs are highly divergent, with small glycosylated segments (Eg, RPTPα, RPTPε), immunoglobulin-like and / or fibrone Tandem repeats (eg, LAR) or decarboxylase-like domains of the Kuching type III domain (For example, RPTPα, RPTPβ). These extracellular features These RPTPs function as receptors on the cell surface and their enzymatic activities Is suggested to be regulated by Intracellular or cytoplasmic PTP (C PTP), eg, PTP1C and PTP1D, are typically some type of model. The Joule-type conserved domain contains one adjacent catalytic domain. For example, PTP 1C hematopoietic cell CPTP is a short peptide model with phosphotyrosine (pTyr). It is characterized by two Src homology 2 (SH2) domains that recognize the chief.   In general, these modular conserved domains are responsible for subcellular localization of proteins. affect. SH2-containing proteins are activated receptors and cytoplasmic lintans It can bind to the pTyr site in the protein. Another security, known as SH3 The storage domain binds to a protein having a proline-rich region. Plextri A third type, known as the pleckstrin homology (PH) domain, has also been identified. You. These modular domains include both CPTK and CPTP, Non-catalytic mediation of protein-protein interactions between components of signaling pathways Sex adapter molecules, such as Grb (growth factor receptor binding) (Skolnik et al., 1991,Cell, 65: 83-90; Pawson, 1995,Nature, 373: 573-580) .   Multiplicity including receptor subunits, kinases, phosphatases and adapter molecules Protein signaling complexes identify specificities between these domains in the subcellular compartment Are assembled with their binding motifs by dynamic and dynamic interactions. like this Signaling complexes link extracellular signals to ligand-bound receptors and direct those signals Relay to other downstream signaling proteins or complexes located elsewhere in the cell or nucleus (Koch et al., 1991,Science, 252: 668-674; Pawson, 1994,Nature, 373: 573-58 0; Mauro et al., 1994,Trends Biochem . SciCohen et al., 1995, 19: 151-155.Cell, 80: 237-248).   The levels of tyrosine phosphorylation required for normal cell growth and differentiation are all At some point, it is achieved by the coordination of PTK and PTPS. Depends on cell conditions Still, these two types of enzymes antagonize or cooperate with each other during signaling. Imbalances between these enzymes can impair normal cell function, Damage and cell deterioration.   For example, insulin that binds to the insulin receptor, PTK, has a variety of Xe and growth promoting effects, such as glucose transport, glycogen and fat biosynthesis Induces DNA synthesis, cell division and differentiation. Lack or lack of insulin signaling Diabetes is characterized by any abnormalities in every step of the way Can happen. (Olefsky, 1988, "Cecil Textbook of Medicine," 18th edition, 2: 1360-81).   For example, overexpression of PTKS such as HER2 plays a critical role in the development of cancer (Slamon et al., 1987,Science, 235: 77-82) and this enzyme Can block tumor growth by antibodies that can block the activity of the drug (Drebin et al., 1988,Oncogene, 2: 387-394). Flk-1 and PDGF receptor By blocking the body's ability to transmit tyrosine kinase signaling, animal models can be used. Have been shown to block tumor growth in mice (Millauer et al., 1994,Nature, 36 7: 577; Ueno et al.,Science252: 844-848).   Relatively known about the direct role of tyrosine phosphatase in signal transduction Not; PTP may play a role in human disease . For example, ectopic expression of RPTPα results in phenotypic changes in embryonic fibroblasts. (Zheng et al.,Nature, 359: 336-339), RPTP in embryonic carcinoma cells Overexpression of α causes those cells to differentiate into cell types with a neuronal phenotype ( den Hertog et al.EMBO Journal, 12: 3789-3798). The gene for human RPTPγ is kidney Chromosome 3p2, a frequently changing segment in gut and small lung carcinomas l. Mutations in the extracellular segment of RPTPγ can occur And it makes RPTP no longer respond to external signals (LaForgia et al., Wary et al., 1993,Cancer Res., 52: 478-482). PTP1C (also known as HCP or SH Mutations in the gene encoding P) are associated with severe immunodeficiency and macrophages. Causes of an old phenotype in mice suffering from a systemic autoimmune disease with hyperproliferation of di (Schultz et al., 1993,Cell, 73: 1445-1454). PTP1D (also known as Syp or Is PTP2C) via the SH2 domain for PDGFR, EGFR and insulin. Has been shown to bind to phosphorylation sites on the receptor substrate 1 (IRS-1). I have. Reduced activity of PTP1D by microinjection of anti-PTP1D antibody Has been shown to block insulin or EGF-induced mitosis (Xiao et al., 1994,J . Biol. Chem., 269: 21244-21248).   Some of the biological effects of insulin are vanadium salts and pervanadium Can be mimicked by vanadium salts, such as sodium salts. Vanajiu And pervanadium salts are known to be non-specific phosphatase inhibitors ing. However, this class of compounds includes compounds in which each compound contains a heavy metal. Toxic (US Pat. No. 5,155,031; Fantus et al., 1989,Biochem., 28: 8864 -71; Swarup et al., 1982,Biochem . Biopys. Res. Commun., 107: 1104-9).                                Summary of the Invention   The present invention generally relates to novel heterozygotes that regulate the activity of protein tyrosine enzymes. Regarding reel compounds, this protein tyrosine enzyme is involved in cell signaling That is, protein tyrosine kinases (PTKs) and protein tyrosine kinases; Sphatases (PTP). In particular, the compounds of the present invention are protein tyrosine phosphine It is expected to regulate the activity of tatase. In addition, the invention relates to cancer and diabetes Aberrant protein tyrosine enzyme-related properties, including but not limited to For treating or preventing a disease associated with vesicle signaling, the disclosed compounds and Preparation and use of pharmaceutical compositions of their physiologically acceptable salts and prodrugs About.   “Pharmaceutical composition” refers to one or more of the compounds described herein, or their physiology. Biologically acceptable salts or prodrugs and other chemical components, e.g. Refers to a mixture with acceptable carriers and excipients. The purpose of a pharmaceutical composition is to The purpose is to facilitate the administration of an object.   "Prodrug" refers to an agent that is converted to the parent drug in vivo. Prodora Can be easier to administer than the parent drug in some situations, Often useful. For example, these may be due to oral administration, while the parent drug is not. Is biologically available. Further, the prodrug is used in a pharmaceutical composition, The solubility may be improved over the parent drug. Examples of prodrugs are limited Although not specified, it allows permeation across cell membranes, where water solubility is not beneficial. Administered as an ester ("prodrug") to facilitate Once inside a cell where solubility is beneficial, it is metabolically hydrolyzed to carboxylic acids Which is a compound of the present invention.   As used herein, "ester" refers to any of the listed groups wherein R "is other than hydrogen. A C-carboxy group as defined herein, which is   As used herein, a "physiologically acceptable carrier" refers to a substance that is significantly impinging on an organism. Non-violent and inhibits the biological activity and properties of the administered compound Refers to carriers or diluents that do not.   “Excipients” are added to pharmaceutical compositions to further facilitate administration of a compound. Inert substance. Examples of excipients include, but are not limited to, calcium carbonate Calcium, calcium phosphate, various sugars and various types of starch, cellulose derivatives, Gelatin, vegetable oils and polyethylene glycols are included. Compound   General structural features   In one aspect, the invention relates to heteroatoms having the general chemical structure shown in Formula 1. Reel compounds.   In Formula 1, r and s are independently 0 or 1.   When r or s is 1, A, B, D, E, F, G, J, K, L, and M are charcoal. 6-membered nitrogen independently selected from the group consisting of nitrogen and nitrogen, and thus formed It is understood that heteroaryl rings are well known in the chemical arts; , B, D, E, F, G, J, K, L, or M is nitrogen;1, RTwo, RThree, RFour, RFive, R6, R7, R8, R9Or RTenIt is more reasonable that Understood.   At least one of A, B, D, E or F and G, J, K, L and M At least one must be nitrogen.   When r or s is 0, A, B, D and F or G, K, L and M Each independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; The 5-membered heteroaryl ring formed is known in the chemical art. It is understood that A, B, D, F, G, K, L or M is oxygen or sulfur. Or A, B, D, F, G, K, L or M is nitrogen and the nitrogen is When participating in the double bond of the loaryl ring, R1, RTwo, RThree, RFive, R6, R8, R9 Or RTenIt is further understood that is not present.   R1, RTwo, RThree, RFour, RFive, R6, R7, R8, R9And RTenIs hydrogen, alkyl , Trihaloalkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, f Teloaryl, heteroalicyclic, alkoxy, aryloxy, thioalkoxy, thio Oaryloxy, heteroaryloxy, heteroalicycloxy, sulfini , Sulfonyl, S-sulfonamide, N-sulfonamide, trihalomethaneca Rubonyl, trihalomethanesulfonyl, carbonyl, C-carboxy, O-cal Boxoxy, C-amide, C-thioamide, N-amide, hydrazino, cyano, nitro B, halo, O-carbamyl, N-carbamyl, O-thiocarbamyl, phosphonyl , N-thiocarbamyl, guanyl, guanidino, ureido, amino, trihalome Tansulfonamide, and -NR11R12Independently selected from the group consisting of   R11And R12Is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl , Aryl, carbonyl, C-carboxy, sulfonyl, trihalomethanesulfo Nyl, trihalomethanecarbonyl and, in combination, 5- or 6-membered heterolipids Independently selected from the group consisting of cyclic rings.   r or s is 0 and A, B, D or F; or G, K, L or When M is a nitrogen atom not participating in the double bond of the heteroaryl ring , R1, RTwo, RThree, RFive, R6, R8, R9And RTenIs hydrogen, alkyl, cycloa Alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, heteroaryl, heteroalicyclic, ar Droxy, alkoxy, trihalomethanecarbonyl, sulfonyl, trihalometa Sulfonyl, cyano, C-carboxy, O-carboxy, C-amide, C-thio Independently selected from the group consisting of oamide and guanyl;   Q is oxygen, sulfur, sulfinyl, sulfonyl and -NR13From the group consisting of Selected.   R13Is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl , Heteroaryl, heteroalicyclic, hydroxy, alkoxy, cyano, trihalo Methanecarbonyl, sulfonyl, trihalomethanesulfonyl, C-carboxy, Selected from the group consisting of O-carboxy, C-amide, C-thioamide and guanyl Is done.   Two adjacent R groups are combined to form a ring having those R groups from the beginning. Additional aryl, cycloalkyl, heteroaryl or heteroalicyclic rings May be formed.   r is 0, A is sulfur, F is nitrogen, Q is sulfur, and RTwoIs nitro, G, J, K, L, M, R6, R7, R8, R9And RTenIs Selected to yield compounds of Table 1.   The physiologically acceptable salts and prodrugs of the compounds disclosed herein Within the range.   As used herein, A, B, D, F, G, K, L and For M and M, the phrase "involving the double bond of the heteroaryl ring" is described in 5 below. Refers to a formal double bond in two tautomeric forms including a membered heteroaryl group.   An “alkyl” group refers to a saturated aliphatic hydrocarbon, including straight and branched chain groups. Like Alternatively, the alkyl group has 1 to 20 carbon atoms (numeric range; for example, "1-20 Whenever "is mentioned herein, the group, in this case an alkyl group, is 1 carbon atom, 2 carbon atoms, 3 carbon atoms, etc. up to and including 20 Which means can include carbon atoms). More preferably, 1 to 1 Medium sized alkyl having 0 carbon atoms. Most preferably, 1 to Lower alkyl having 4 carbon atoms. Even if the alkyl group is substituted, It may be unsubstituted. If substituted, the substituent (s) Is preferably a trihaloalkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl , Heteroalicyclic, hydroxy, alkoxy, aryloxy, heteroaryl Xy, heteroalicycloxy, thiohydroxy, thioalkoxy, thioaryl Oxy, thioheteroaryloxy, thioheteroalicycloxy, cyano, halo , Nitro, carbonyl, thiocarbonyl, O-carbamyl, N-carbamyl, O -Thiocarbamyl, N-thiocarbamyl, C-amide, C-thioamide, N-amino Mid, C-carboxy, O-carboxy, sulfinyl, sulfonyl, sulfone Amide, trihalomethanesulfonamide, trihalomethanesulfonyl, silyl, Guanyl, guanidino, ureido, phosphonyl, amino and -NR11R12From One or more selected separately, where R11And R12Is hydrogen, alkyl, cyclo Alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, carbonyl, C-carboxy, Sulfonyl, trihalomethanesulfonyl, trihalomethanecarbonyl and Together, they are independently selected from the group consisting of 5- or 6-membered heteroalicyclic rings.   "Cycloalkyl" is a complete system in which one or more rings do not have a fully conjugated pi-electron system. Refers to a single or fused ring of carbons (ie, rings that share adjacent pairs of carbon atoms) . Examples of cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropane, cyclo Butane, cyclopentane, cyclopentene, cyclohexane, cyclohexadie , Cycloheptane, cycloheptatriene and adamantane. Cycloa Alkyl groups may be substituted or unsubstituted. If it has been replaced, Is preferably an alkyl, aryl, heteroaryl Reel, heteroalicyclic, hydroxy, alkoxy, aryloxy, heteroaryl Luo Xy, heteroalicycloxy, thiohydroxy, thioalkoxy, thioaryl Oxy, thioheteroaryloxy, thioheteroalicycloxy, cyano, halo , Nitro, carbonyl, thiocarbonyl, O-carbamyl, N-carbamyl, O -Thiocarbamyl, N-thiocarbamyl, C-amide, C-thioamide, N-amino Mid, C-carboxy, O-carboxy, sulfinyl, sulfonyl, sulfone Amide, trihalomethanesulfonamide, trihalomethanesulfonyl, silyl, Guanyl, guanidino, ureido, phosphonyl, amino and -NR11R12From One or more selected separately,11And R12Is as defined above.   An “alkenyl” group is at least two carbon atoms and at least one carbon- Refers to an alkyl group, as defined herein, consisting of a carbon double bond.   An “alkynyl” group is at least two carbon atoms and at least one carbon- Refers to an alkyl group, as defined herein, consisting of a carbon triple bond.   An “aryl” group is an all-carbon monocyclic or fused ring having a fully conjugated pi-electron system. Refers to fused ring polycyclic (ie, rings that share adjacent pairs of carbon atoms) groups. Aryl Examples of groups include, but are not limited to, phenyl, naphthalenyl and anthracenyl. It is. An aryl group can be substituted or unsubstituted. Replaced If present, the substituent (s) are preferably alkyl, cyclo Alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalicyclic, hydroxy, alkoxy, Aryloxy, heteroaryloxy, heteroalicycloxy, thiohydroxy Thioalkoxy, thioaryloxy, thioheteroaryloxy, thiohe Teloalicycloxy, cyano, halo, nitro, carbonyl, thiocarbonyl, O -Carbamyl, N-carbamyl, O-thiocarbamyl, N-thiocarbamyl, C -Amide, C-thioamide, N-amide, C-carboxy, O-carboxy, Rufinyl, sulfonyl, sulfonamide, trihalomethanesulfonamide, Lihalomethanesulfonyl, silyl, guanyl, guanidino, ureido, phosphoni , Amino and -NR11R12One or more selected from11And R12Is above As defined in   As used herein, a “heteroaryl” group refers to its ring (one or more). ) Has at least one atom selected from the group consisting of nitrogen, oxygen and sulfur; Addition Instead, a monocyclic or fused ring having a completely conjugated pi-electron system (ie, Refers to a ring) group that shares a child pair. Examples of heteroaryl groups are not limiting But pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole , Pyrazole, pyridine, pyrimidine, quinoline, isoquinoline, purine and mosquito Lubazole. Heteroaryl groups can be substituted or unsubstituted No. If substituted, the substituent (s) are preferably Alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, heteroalicyclic, hydroxy , Alkoxy, aryloxy, heteroaryloxy, heteroalicycloxy , Thiohydroxy, thioalkoxy, thioaryloxy, thioheteroaryl Oxy, thioheteroalicycloxy, cyano, halo, carbonyl, thiocarboni , O-carbamyl, N-carbamyl, O-thiocarbamyl, N-thiocarbami , C-amide, C-thioamide, N-amide, C-carboxy, O-carboxy Si, sulfinyl, sulfonyl, sulfonamide, nitro, trihalomethane sulf Honamide, trihalomethanesulfonyl, silyl, guanyl, guanidino, uree Id, phosphonyl, amino and -NR11R12One or more selected from11 And R12Is as defined above.   A "heteroalicyclic" group is a group in which one or more nitrogen, oxygen and sulfur A single or fused ring group having one or more atoms selected from the group consisting of This These rings may have one or more double bonds. However, these rings Does not have a completely conjugated pi-electron system. The heteroalicyclic ring may be substituted, It may be a substitution. When substituted, the substituent (s) are , Preferably alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, hetero Alicyclic, hydroxy, alkoxy, aryloxy, heteroaryloxy, hete Lower cyclooxy, thiohydroxy, thioalkoxy, thioaryloxy, thio Oheteroaryloxy, thioheteroalicycloxy, cyano, halo, carboni Thiocarbonyl, O-carbamyl, N-carbamyl, O-thiocarbamyl, N-thiocarbamyl, C-amide, C-thioamide, N-amide, C-carboxy , O-carboxy, sulfinyl, sulfonyl, sulfonamide, nitro, Rihalomethanesulfonamide, trihalomethanesulfonyl, silyl, guanyl, Gua Nidino, ureido, phosphonyl, amino and -NR11R12One or more selected from Above and R11And R12Is as defined above.   A “hydroxy” group refers to an —OH group.   An “alkoxy” group refers to an —O-alkyl and an —O-cyclo, as defined herein. Loalkyl group.   An "aryloxy" group refers to an -O-aryl and an -O- as defined herein. Refers to both heteroaryl groups.   A "heteroaryloxy" group refers to a heteroaryl-O group, Is as defined herein.   A "heteroalicycloxy" group refers to a heteroalicyclic -O- group, where a heteroalicyclic is As defined in   A “thiohydroxy” group refers to a —SH group.   "Thioalkoxy" groups include S-alkyl and S-cyclo, as defined herein. Loalkyl group.   A "thioaryloxy" group is an -S-aryl and-as defined herein. Refers to both S-heteroaryl groups.   A "thioheteroaryloxy" group refers to a heteroaryl-S- group, Reel is as defined herein.   A "thioheteroalicycloxy" group refers to a heteroalicyclic-S- group, where a heteroalicyclic is As defined here.   A “carbonyl” group refers to a —C (＝ O) —R ″ group, where R ″ is Hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl as defined , Aryl, heteroaryl (attached via a ring carbon) and (via a ring carbon) Selected from the group consisting of:   An "aldehyde" group refers to a carbonyl group where R "is hydrogen.   A "thiocarbonyl" group refers to a -C (= S) -R "group, with R" as defined herein. That's right.   A “keto” group refers to a —CC (＝ O) C group, where either or both of C ＝ O The other carbon may be an alkyl, cycloalkyl, aryl, or heteroaryl. Or a carbon of a heteroalicyclic group.   The "trihalomethanecarbonyl" group is XThreeX refers to the group CC (= O)-, where X is As defined.   A "C-carboxy" group refers to a -C (= O) OR "group, with R" as defined herein. It is as expected.   An "O-carboxy" group refers to an R "C (= O) O- group, with R" as defined herein. That's right.   A "carboxylic acid" group refers to a C-carboxy group where R "is hydrogen.   A “halo” group refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.   The “trihalomethane” group is —CXThreeRefers to a group, where X is as defined herein Is a halo group.   The "trihalomethanecarbonyl" group is XThreeRefers to the group CC (= O)-, where X is It is as defined.   The “trihalomethanesulfonyl” group is XThreeCS (= O)Two-Refers to a group, X is defined above It is as defined.   The “trihalomethanesulfonamide” group is XThreeCS (= O)TwoNR13-Refers to a group, X and R13Is as defined above.   A “sulfinyl” group refers to a —S (＝ O) —R ″ group, with R ″ defined herein. And, in addition, only a bond; ie, -S (O)-.   A “sulfonyl” group is —S (＝ O)TwoR ″ refers to a group, where R ″ is as defined herein. And, in addition, only a bond; that is, -S (O)-.   The “S-sulfonamido” group is —S (＝ O)TwoNR11R12And R11And R12 Is as defined herein.   The "N-sulfonamido" group is represented by R11S (= O)TwoNR12-Refers to the group, R11And R1 Two Is as defined herein.   An “O-carbamyl” group is —OC (＝ O) NR11R12Refers to the group, R11And R12Is As defined here.   The “N-carbamyl” group is R11OC (= O) NR12-Refers to the group, R11And R12Is As defined here.   An “O-thiocarbamyl” group is —OC (＝ S) NR11R12Refers to the group, R11And R12 Is as defined herein.   The "N-thiocarbamyl" group is represented by R11OC (= S) NR12-Refers to the group, R11And R12 Is as defined herein.   An "amino" group is -NHTwoRefers to the group.   A “C-amido” group is —C (＝ O) NR11R12Refers to the group, R11And R12Here As defined.   The “C-thioamido” group is —C (＝ S) NR11R12Refers to the group, R11And R12Hako As defined here.   The "N-amide" group is11C (= O) NR12-Refers to the group, R11And R12Here As defined.   An "ureido" group is -NR11C (= O) NR12R14Refers to the group, R11And R12Hako As defined herein, and R14Is R11And R12Is defined similarly.   The “guanidino” group is —R11NC (= N) NR12R14Refers to the group, R11, R12as well as R14Is as defined herein.   The “guanyl” group is R11R12NC (= N)-group;11And R12Is here It is as defined.   A “cyano” group refers to a —C≡N group.   The “silyl” group is —Si (R))ThreeAnd R "is as defined herein .   The “phosphonyl” group is P (＝ O) (OR11)TwoAnd R11Is defined here It is on the street.   The “hydrazino” group is —NR11NR12R14Refers to the group, R11, R12And R14Here As defined in Preferred structural features   A preferred feature of the structure according to the invention is that r and s are 0 and Q is sulfur. Things.   A more preferred feature of the structure is that r is 1 and s is 0.   Another preferred feature of the structure is that r is 0, A is sulfur, and F is nitrogen. Q is sulfur, and RTwoIs nitro.   The compounds in Table 1 provide further preferred structural features of the invention. Biochemistry   The present invention modulates or regulates signal transduction in normal or diseased cells It is directed to the use of possible compounds. The present invention also relates to a protein tyro. Syn enzymes, especially protein tyrosine kinase (PTK) and protein tyrosine Compounds capable of inhibiting the activity of phosphatase (PTP) It is also directed to use for modulation or provocation. The present invention further relates to signal transmission. The cellular processes controlled by these compounds are the activities of PTK and PTP. It is directed to modulating by inhibition of the. The present invention further provides a signal for dysfunction. Such compounds in the treatment of a subject with a disorder caused by transmission There is provision for the use of things.   In one aspect of the invention, the compound of the invention is transmembrane or intracellular, and Protein tyrosine phos which may have one or more characteristic catalytic domains It is possible to inhibit the activity of phatases. P in this catalytic domain The amino acid sequence of TP includes [I / V] HCXAGXXR (S / T) G (one letter amino acid X is any amino acid), but is not limited to Not. in addition. A PTP must have one or more modular storage domains. Including but not limited to SH2, SH3 and PH domains It is not something to be done. In a particular aspect of the invention, the compounds of the invention are PTP 1B (Charbonneau et al., 1989,Proc . Natl. Acad. Sci. USA, 86: 5252-5256), T cell PTP (Cool et al., 1989,Proc . Natl. Acad. Sci. USA86: 52575261), PTP1C (Shen et al., 1991,Nature, 352: 736-739), PTP1D (Vogel et al., 19). 93,Science, 258: 1611-1614), RPTPα, RPTPβ, RPTPγ (Kaplan Et al., 1990,Proc . Natl. Acad. Sci. USA, 87: 70007004), RPTPα (Yan et al., 1993,J . Biol. Chem., 268: 24880-24886), RPTPκ (Jiang et al., 1993,Mol . Cell Biol. , 13: 2942-2951) and CD45 (Charbonneau et al., 1988,Proc . Nat l. Acad. Sci. USA 85: 7182-7186) to inhibit phosphatase activity Can be. PTKs and PTPs preferred in the present invention are of human origin It is. Substantially specific for one PTP or set of PTPs in the signaling pathway Inhibition of phosphatase activity is preferred. Inhibition of this phosphatase activity Mechanism of action for the ability to modulate and / or modulate signal transduction of light compounds It is believed, however, that additional mechanisms have not been acknowledged.   The term "signaling" as used herein refers to the transmission of information through a membrane. Including but not limited to multiple pathways branching into whole cells and nuclei You. The Ras pathway (Schlessinger, 1994)Curr . Opin . Genet. Dev. , 4: 25-30), JAK / STAT pathway (Sadowski et al., 1994,Scienc e 261: 1739-1744), phosphoinositide 3-kinase pathway and phospholipase C -Gamma pathway may be included, but is not limited to. Used here In some cases, the term "modulate" or "modulate" refers to up-regulation or down-regulation of a signaling pathway. Means adjustment. Cell processes under the control of signal transduction involve the transfer of certain genes. Transcript; normal cell function, eg, metabolism, proliferation, differentiation, adhesion, apoptosis and survival May additionally include blocking abnormal processes, such as alteration, differentiation and metastasis; It is not limited to these.   The signal can be triggered by ligand binding to its receptor on the cell surface. Yes, the signal is the phosphorylation of specific tyrosine residues on various substrates present inside the cell. Transmitted and propagated by phosphorylation or dephosphorylation. PTK, PTP and their groups Specific interactions between the plasms are likely to occur at the inner surface of the plasma membrane or other cellular compartment containing the nucleus. It may involve the formation of a multi-molecular complex, either temporally or stable. Substrates are involved in signaling pathways. And one or more fossils phosphorylated or dephosphorylated by PTK or PTP May be included. Such substrates include receptors and their subunits, receptors Molecules associated with or assembled at the receptor, such as cytoplasmic kinases, cytosolic phos Phatase, adapter components, cytoskeletal proteins and transcription factors can be included. The term receptor, as used herein, refers to insulin receptor, insulin Phosphorus-like growth factor receptor group, epidermal growth factor receptor group, fibroblast growth factor receptor group , Hepatocyte growth factor receptor group, vascular endothelial growth factor receptor group, neurotrophin receptor Members of the trk group, T cell receptors, B cell receptors and type I-IV sites Mosquito Members of the in receptor group may be included (Heldin, 1995,Cell, 80: 213-223; Tani guchi, 1995,Science, 268: 251-255). The adapter molecules that are substrates are Gr b protein, IRS-1, Zap-70 and Shc (Pawson et al., 1). 995,Nature, 373: 573-580). Cytoskeletal proteins such as actin and STA T protein (Ihle et al.,Trends Biochem . Sci., 19: 222-227) Can also serve as a substrate. As used herein, the term ligand Is synonymous with an extracellular signaling molecule and is a growth factor such as insulin, EGF , PDGF, fibroblast growth factor, vascular endothelial growth factor, and neurotrophin And cytokines such as growth hormone, erythropoietin, tumor necrosis Offspring, interleukins and interferons, including but not limited to Not something. The term ligand is not limited to soluble molecules; For example, in addition to extracellular matrix proteins and cell adhesion molecules, Includes antigenic peptides that associate with the major histocompatibility complex on the surface.   In one aspect of the invention, signal transduction in a cell is induced or upregulated and received. Enhances the binding of the ligand to the receptor, or mimics the absence of the ligand The compounds of the invention can be used to mimic. These compounds are usually Blocks phosphatase activity in signaling pathways, which negatively affects signaling It works by harming or reducing it. PTP downs signal transmission normally One mechanism that regulates is the specific phosphotyrosine residues on PTKs and their substrates ( pTyr), which causes many PTKs to be involved in signaling pathways. Dephosphorylate some of its own tyrosine residues to be optimally active It is necessary. The compound of the present invention is usually phosphorylated when the ligand binds. A receptor that is oxidized, thereby enhancing the extent and duration of PTK phosphorylation or It can be used to prevent the dephosphorylation of pTyr residues in those subunits. it can. The compounds of the present invention can also be used to prevent dephosphorylation of PTKs. Where the tyrosine residue is either autophosphorylated or transated due to its basic activity. It becomes phosphorylated. In these PTKs, a ligand is present In the absence of a signal, a signal can be induced by the compounds of the invention, PTP activity is inhibited or reduced by these compounds, Is sufficient to promote the signal.   A preferred embodiment of the present invention provides for the activation of the pTyr site of the insulin receptor. Induces insulin receptor signaling by inhibiting structural dephosphorylation It is directed to a method of emitting, enhancing or sustaining. This is insulin acceptance Allows the body to remain phosphorylated, and thus the signal of insulin Is increased or maintained. In addition, even in the absence of insulin, Phosphorus receptors have been shown to be phosphorylated at low levels (Goldstein, 1992,J , Cell Biol. , 48: 33-42), the compound of the present invention may be, for example, in the presence of insulin. Even in the absence of this condition, autophosphorylation of tyrosine residues on the receptor Can be used to trigger a signal.   Another mechanism by which PTP can have a negative effect on information transmission is that By dephosphorylating specific pTyr sites to which SH2-containing molecules bind It is. The absence of such a pTyr site may render the SH2-containing molecule specific. Prevents the formation of assembled protein signaling complexes in the cell compartment, thereby Hinders the further propagation of its signal, thus the compounds of the invention Substrates that normally serve as binding sites for SH2-containing proteins that promote Prevents the dephosphorylation of pTyr sites on proteins, thereby improving signal transduction. Can be used to regulate or prolong. In another aspect of the invention, The compounds of the present invention may be used in particular on any substrate that is essential for signal transmission or propagation. It can be used to prevent dephosphorylation of pTyr residues. Furthermore, the present invention Are specific pTy on any substrate that is inhibitory to signal transmission It can be used to prevent dephosphorylation of the r residue.   Also, the compounds of the present invention suppress or down regulate signal transmission in cells, Also used to negate or attenuate the effect of ligand binding to the receptor Can be. These compounds usually have a positive effect on signaling. Phosphatase in the tract. For example, PTP is PTK Promotes signaling by activating members of the Src group. Src group PTK is a phosphorylation inhibition site where kinase activity is activated by dephosphorylation At their carboxy termini. Therefore, the compounds of the present invention are usually P at the carboxy terminus of a kinase that functions to promote signaling It can be used to prevent dephosphorylation of Tyr. PTK of Src group , Src, Fyn, Lck, Lyn, Blk, Hck, Fgr and Yrk Can be Other kinases that can also be regulated by phosphatases include Fak and And Csk may be included (Taniguchi, 1995,Science, 268: 251-255). Pharmaceutical compositions and therapeutic uses   As used herein, “pharmaceutically acceptable salt” refers to the biological form of the compound. Retains effectiveness and properties, and retains hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, methane Such as sulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, salicylic acid Refers to a salt obtained by reaction with an acid.   In addition to the compounds and their pharmaceutically acceptable salts, the present invention further provides suitable Has the ability to modulate and / or modulate phosphatase activity when available It is directed to solvated and unsolvated forms (eg, hydrated forms) of those compounds.   The above compounds are known to be applicable to the preparation of chemically related compounds. It can be prepared by any method. Appropriate methods are provided below This is illustrated by a representative example. The required starting materials are prepared according to standard organic chemistry procedures. Obtainable.   Pharmaceutical prescription and administration route   The compounds of the present invention can be administered per se or at a therapeutically effective dose to a suitable carrier. Or in the form of a pharmaceutical composition mixed with one or more excipients, Kaposi's sarcoma, glioblastoma and melanoma and ovaries, lungs, breast, prostate, pancreas, Growth of solid cell tumors including colon and epidermoid carcinoma, diabetes, diabetic retina Human disease at doses that treat or alleviate a variety of disorders, including disease, hemangiomas and rheumatoid arthritis Can be administered to an individual. A therapeutically effective dose can also be Sufficient to cause relief of the symptoms of vasculogenesis and angiogenesis Refers to the amount of the compound. Techniques for forming and administering compounds such as those of the present invention "Remington's Pharmaceutical Science," Mack Publishing Co., Easton, PA , Can be found in the final version.   The formulation of the present invention is usually mixed with a carrier, or diluted with a carrier, or a capsule. Ingestible carriers in the form of sachets, cachets, paper or other containers. Or encapsulated or encapsulated in a disposable container such as an ampoule , Consisting of at least one compound of formula I. The carrier or diluent can be solid, semi-solid or May be liquid materials, which may serve as vehicles, excipients or vehicles for the active therapeutic substance. Serve the role of.   Some examples of diluents or carriers that can be used in the pharmaceutical compositions of the present invention Is lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, propylene Glycol, liquid paraffin, white soft paraffin, kaolin, microcrystalline cellulose , Calcium silicate, silica polyvinylpyrrolidone, cetostearyl alcohol , Starch, gum arabic, calcium phosphate, cocoa butter, theobroma (theobr oma) oil, peanut oil, alginate, tragacanth, gelatin, syrup B. P., methyl cellulose, polyoxyethylene sorbitan monolaurate, Lactic acid and ethyl propylhydroxybenzoate, sorbitan trioleate, cess Sorbitan chioleate and oleyl alcohol.   Administration route   As used herein, “administering” or “administration” refers to abnormal protein tyro. The present invention relates to a method for preventing or treating disorders related to syn-enzyme-related cell signaling. Compound, salt or prodrug or compound, salt or prodrug of the present invention Refers to delivering a pharmaceutical composition comprising to the organ.   As used herein, "abnormal protein tyrosine enzyme-related cell signaling Related disorders "are inappropriate for some of the protein tyrosine enzymes, ie, , Under, or more generally, conditions characterized by excessive catalytic activity. Unsuitable The critical catalytic activity is (1) in cells that do not normally express protein tyrosine enzymes. Expression of protein tyrosine enzymes; (2) unwanted cell growth, differentiation and / or Increased expression of protein tyrosine enzymes leading to growth; or (3) cell proliferation, Of protein tyrosine enzyme expression leading to an undesirable decrease in Any reduction may occur as a result. The excess activity of the protein tyrosine enzyme is Amplification of a gene encoding a specific protein tyrosine enzyme, or cell growth, Conversion And / or may be correlated with growth disorders (ie, the concentration of the protein tyrosine enzyme is As the number increases, the severity of one or more symptoms of cytotoxicity increases). Refers to any of the production of enzymatic tyrosine enzyme activity. Underactivity is of course the opposite Yes, as the concentration of protein tyrosine enzyme decreases, one or more of Increased severity of symptoms.   As used herein, the terms "prevent," "preventing," and "prevention" The term refers to an organism that, from the beginning, aberrant protein tyrosine enzyme-related cell signaling Refers to a method for excluding from acquiring a disorder associated with   As used herein, "treat", "treating" and "treatment" The term refers to abnormal protein tyrosine enzyme-related impaired cell signaling and / or its attachment. Refers to a method of alleviating or suppressing any symptoms. Especially with regard to cancer, these terms are simply Increasing the life expectancy of an individual affected by cancer, or one of the symptoms of the disease This means reducing the above.   The term “organism” refers to any living organism comprising at least one cell. Refers to the body. Living organisms can be as simple as a single eukaryotic cell, for example. , And mammals including humans.   Suitable routes of administration include, but are not limited to, oral, rectal, transmucosal, or intestinal Intramuscular, subcutaneous, intramedullary, intrathecal, direct intraventricular, intravenous, intraperitoneal, nasal Intraoral or intraocular injection; transdermal, topical and vaginal applications and the like. Dosage forms include tablets, toro , Dispersants, suspensions, suppositories, solutions, capsules, creams, patches, minipumps And the like, but are not limited to these.   Alternatively, the compound can be administered in a local rather than a systemic manner, for example, directly administering the compound By injection into a solid tumor, often in the form of a depot or sustained release formulation Can be administered.   In addition, drug-targeting drug delivery systems, e.g., It can be administered in the form of a purified liposome. These liposomes can cause tumors Targeted and selectively taken up by the tumor.   Composition / Formulation   The pharmaceutical compositions of the present invention can be prepared by methods known in the art, for example, by limiting Although not intended to be used, normal mixing, dissolving, granulating, dragee-making, grinding, emulsifying, Manufactured by celling, entrapping or lyophilization Can be.   Accordingly, the pharmaceutical compositions used in accordance with the present invention comprise, in a conventional manner, excipients and Contains auxiliaries that facilitate the processing of the active compounds into pharmaceutically usable preparations It can be formulated with one or more physiologically acceptable carriers. Appropriate The exact formulation will depend on the route of administration chosen.   For injection, the agents of the invention are preferably formulated in aqueous solutions, preferably physiologically compatible buffers. Implants, such as Hanks's solution, Ringer's solution, or physiological saline buffer can be used. it can. For transmucosal administration, a penetrant appropriate for the barrier to be permeated is prescribed. Can be used. Such penetrants are commonly used in the art. It is known.   For oral administration, the active compound can be pharmaceutically acceptable, as known in the art. These compounds can be easily formulated by combining with a carrier that can it can. Such carriers enable the compounds of the present invention to be administered by the patient to be treated. Tablets, pills, dragees, capsules, liquids, gels, syrups, slurries for oral consumption , Suspensions and the like. Pharmaceutical preparations for oral use For example, adding a compound of the invention to a solid excipient and optionally mixing The mixture of granules is processed by grinding the product and, if desired, adding appropriate auxiliaries, It can be prepared by obtaining the core of a drug or dragee. Suitable excipients are Including fillers such as lactose, sucrose, mannitol, or sorbitol. Sugar; cellulose preparations such as corn starch, wheat starch, coconut Mestarch, potato starch, gelatin, tragacanth gum, methylcellulo Glucose, hydroxypropyl methylcellulose, sodium carboxymethyl cell Loin and / or polyvinylpyrrolidone (PVP). If desired, collapse Disintegrants, such as cross-linked polyvinyl pyrrolidone, agar, or alginic acid or Salts thereof, for example, sodium alginate, can be added.   Dragee cores are provided with suitable coatings. For this, a concentrated sugar solution is used Gum arabic, talc, polyvinylpyrrolidone, carbopo Gel (carbopol gel), polyethylene glycol and / or titanium dioxide It may contain a locker solution and a suitable organic solvent or solvent mixture. Identification Dyes or pigments, or to characterize different combinations of active compound doses Can be added to the tablets or dragee coatings.   Pharmaceutical preparations which can be used orally include gelatin and plasticizers, e.g. In addition to soft sealed capsules made of lyserol or sorbitol, A push-fit capsule to be made is included. This push Fit capsules combine active ingredients with fillers such as lactose and binders such as starch. Mixtures and / or lubricants such as talc or magnesium stearate, and And, optionally, in the form of a mixture with a stabilizer. Soft capse In active ingredients, the active compound may be converted to a suitable liquid, such as fatty oils, liquid paraffin, Can be dissolved or suspended in liquid polyethylene glycol. In addition, A stabilizing agent can be added. All formulations for oral administration are suitable for such administration Dosage should be   For buccal administration, the compositions may take the form of tablets or lozenges formulated in conventional manner Can be taken. For administration by inhalation, compounds used in accordance with the present invention Is a suitable propellant, for example, dichlorodifluoromethane, trichlorofluoromethane. Using tan, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide or other suitable gas Conveniently delivered in the form of an aerosol spray delivered from a pressurized pack or nebulizer Is done. In the case of a pressurized aerosol the dosage unit will be Can be determined by providing a valve. Inhaler or blower Capsules and cartridges, e.g., of gelatin, for use in And a suitable powder base such as lactose or a powder mixture of starch. Can be.   The compounds of the invention may be administered by infusion, for example, by bolus injection or continuous infusion. It can be formulated for oral administration. Formulations for injection may be in unit dosage form, for example, as a preservative. Can be added and presented in ampoule or multi-dose containers. The composition is Such as a suspension, solution or emulsion in an oily or aqueous vehicle. It can take any form and can contain prescription agents, such as suspending agents, stabilizers and / or Is A dispersant can be included.   Pharmaceutical formulations for parenteral administration include aqueous solutions of the active compounds in water-soluble form . Additionally, suspensions of the active compounds may be prepared as appropriate oily injection suspensions. it can. Suitable lipophilic solvents or vehicles include fatty oils such as sesame oil, Synthetic fatty acids such as ethyl formate or triglycerides or liposomes Esters are included. Aqueous injection suspensions are substances that increase the viscosity of the suspension, such as For example, sodium carboxymethylcellulose, sorbitol, or dextran Can be included. In some cases, the suspension may be treated with a suitable stabilizer or Includes agents that increase the solubility of these compounds and allow for the preparation of highly concentrated solutions You may go out.   Alternatively, the active ingredient may be mixed with a suitable vehicle, eg, sterile pyrogen, before use. It may be in the form of a powder to be formed using contained water.   Also, these compounds may be found in conventional compounds such as cocoa butter or other glycerides. It can also be formulated in rectal compositions such as suppositories or retention enemas, containing suppository bases. You.   In addition to the formulations described previously, these compounds are formulated as depot preparations You can also. Such long-acting formulations can be used (eg, subcutaneously or intramuscularly). )) It can be administered by implantation or by intramuscular injection. Accordingly For example, these compounds may be suitable polymers or hydrophobic materials (eg, Acceptable as an emulsion in oil) or using ion exchange resins, or It may be formulated as a poorly soluble derivative, for example, a poorly soluble salt.   Pharmaceutical carriers for hydrophobic compounds include benzyl alcohol, non-polar surfactant, A co-solvent system comprising a water-miscible organic polymer and an aqueous phase. This co-solvent system is VPD It may be a co-solvent system. VPD was 3% w / v assembled in absolute ethanol Benzyl alcohol, 8% w / v non-polar surfactant polysorbate 80, and 6 This is a solution of 5% w / v polyethylene glycol 300. VPD co-solvent system (VP D: 05W) consists of VPD diluted 1: 1 with 5% dextrose in water . This co-solvent system also dissolves hydrophobic compounds and produces its own poisons upon systemic administration. Sex is low. Of course, the proportions of a co-solvent system should not destroy its solubility and toxicity characteristics. K It can vary greatly. In addition, changing the identity of the co-solvent components For example, other low toxicity non-polar surfactants can be added to Polysorbate 80Rinstead of Can be used for changing the fraction size of polyethylene glycol Can replace polyethylene glycol with other biocompatible polymers For example, polyvinylpyrrolidone; and other sugars or polysaccharides as dextro Can be used instead of   Alternatively, other delivery systems for hydrophobic pharmaceutical compounds can be used. Liposo And emulsions are known examples of delivery vehicles or carriers for hydrophobic drugs. You. Certain organic solvents, such as dimethyl sulfoxide, also usually sacrifice higher toxicity. But can be used. In addition, these compounds are controlled release systems, e.g. For example, delivery using a semi-permeable matrix of a solid hydrophobic polymer containing a therapeutic agent be able to. Many sustained release products are known to those skilled in the art. Sustained-release capsules Release compounds from weeks to more than 100 days, depending on their chemistry be able to. Depending on the chemical nature and biological stability of the therapeutic agent, protein Further strategies of stabilization can be used.   Also, the pharmaceutical composition can include a suitable solid or gel phase carrier or excipient. . Examples of such carriers or excipients include calcium carbonate, calcium phosphate, and the like. Various sugars, starches, cellulose derivatives, gelatin, and polymers such as poly Including but not limited to ethylene glycol.   In addition to the common dosage forms set out above, the compounds of the present invention may also include controlled release means and / or Alza  Alzet available from CorporationRDosing by delivery device including osmotic pump You can also. Suitable delivery devices are described in U.S. Patent Nos. 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; 3,944,064 and 4,008,719 And their disclosures are hereby incorporated by reference in their entirety.   Many of the phosphatase modulatory compounds of the present invention have a pharmaceutically compatible counterion. It can be provided as a salt. Pharmaceutically compatible salts include hydrochloric, sulfuric, acetic, Including but not limited to lactic, tartaric, malic, and succinic sugars Can be formed with many acids. Salts are more aqueous or other than the corresponding free base form Tend to be more soluble in protic solvents.   Dose   Pharmaceutical compositions suitable for use in the present invention include those in which the active ingredient is intended for its intended purpose. Includes compositions contained in an amount effective to achieve the target. “Therapeutically effective amount” The term, as used herein, refers to one or more symptoms of the disorder being treated. Refers to the amount of the compound administered that is reduced to Therapeutically effective in treating cancer High amounts reduce (1) the size of the tumor; (2) inhibit the metastasis of the tumor (ie, (To some extent, preferably to a halt); (3) to some extent tumor growth Inhibit (ie, delay to some extent, preferably stop); and And / or (4) reduce (or favorably reduce) one or more of the symptoms associated with cancer. (Preferably remove) effect. A therapeutically effective amount of a compound of the present invention. The determination is well within the ability of those skilled in the art, especially in light of the detailed disclosure provided herein. In the enclosure.   A therapeutically effective amount can be estimated initially from cell culture assays. For example, Circulating concentration range including IC50 determined in cell culture (ie, PTP activity Test compound concentration that achieves half-maximal inhibition of The dose can be organized as follows. Use of such information in humans It can be used to determine the amount more accurately.   Thus, a therapeutically effective dose will either alleviate symptoms in a patient or increase the survival of a patient. Refers to the amount of compound that causes prolongation. For example, LD50 (for 50% of the population And ED50 (the dose that is therapeutically effective in 50% of the population) To determine the toxicity and therapeutic efficacy of such compounds, cell cultures or experimental The product can be determined by standard pharmaceutical procedures. Toxic dose therapeutic The ratio LD50 / ED50 to the effective amount is the therapeutic index. High therapeutic index Compounds are preferred. Data from cell culture assays and animal studies are available to humans. Can be used in formulating the dosage range used. The dose is Preferably, the circulating system contains ED50 and shows little or no toxicity Within the range of concentrations. The dosage depends on the dosage form used and the route of administration used. It can vary within this range. The exact prescription, route of administration and dosage will be determined by the individual physician. Can be selected in consideration of the state of (For example, Fingl et al., 1975, in "The Ph armacological Basis of Therapeutics ", Ch.1, p.1).   Dosage and intervals are controlled by the tyrosine enzyme known as the minimum effective concentration (MEC). Individual to provide plasma concentrations of the active moiety that are sufficient to maintain elemental regulatory effects Can be adjusted. The MEC changes with each compound, but in vitro Data; for example, but not limited to, 50-90% inhibition of the tyrosine enzyme Can be estimated using the assays described here from the concentrations needed to achieve it can. Dosages necessary to achieve the MEC will depend on individual characteristics and route of administration You. HPLC or bioassays can be used to determine plasma concentrations.   Dosage intervals can also be determined using MEC value. Compound is 10-90 of the time %, Preferably 30-90%, and most preferably 50-90% higher than MEC It must be administered using a regimen that maintains plasma levels.   The usual patient dose for systemic administration is 1 to 2000 mg / day, typically 1 From 250 mg / day, and typically from 10 to 150 mg / day. Patient weight In general, the dose range is from 0.02 to 25 mg / kg / day, typically Is 0.02 to 3 mg / kg / day, typically 0.2 to 1.5 mg / kg / day It is. Usually in terms of patient body surface area, the dose range is 0.5 to 1200. mg / mTwo/ Day, typically 0.5 to 150 mg / mTwo/ Day, typically from 5 100mg / mTwo/ Day. Usually the average plasma level is between 50 and 5000 μg / m l, typically 50 to 1000 μg / ml, and typically 100 to 50 It should be kept at 0 μg / ml.   For local administration or selective uptake, the effective local concentration of the drug correlates with plasma concentration Will not.   The amount of the particular compound administered will, of course, depend on the subject being treated, the patient's weight and heart rate. It will depend on the severity of the affliction, the mode of administration and the judgment of the prescribing physician.   Desirable blood levels may be maintained by continuous infusion of the compound; Can be monitored by HPLC. Toxic or bone marrow, liver or kidney dysfunction The treating physician should determine how or when to terminate, interrupt or You should know whether to adjust to treatment. Conversely, the treating physician should also If bed response is inadequate and toxicity is not an issue, adjust treatment to higher levels. You will also know that it will save.   The prophylactic or therapeutic dose of a compound in the acute or chronic management of disease It will vary with the severity of the condition present and the route of administration. Again, toxicity Clinician or physician may interrupt treatment due to bone marrow, liver or kidney dysfunction You should be aware of whether to adjust the treatment and / or treatment dose. Dose (and possibly Frequency will also vary according to the age, weight and response of the individual patient. Previous In general, the totality of compounds for many of the disorders described herein is discussed, as discussed in The daily dose range is from about 0.02 to about 25 mg / kg patient. Suitably daily dose range Should be between about 0.02 and about 3 mg / kg, most preferably the daily dose range The box should be between about 0.2 to about 1.5 mg / kg per day. Infant, Low doses for children and people over 65 and those with impaired kidney or liver function To begin, and they are determined based on individual clinical responses and blood levels It is further recommended that In some cases, use doses outside the above range May be necessary; situations requiring such a determination will be apparent to those skilled in the art. Or maybe.Packaging   Optionally, the composition can comprise one or more unit dosage forms containing the active ingredient. Included in packs or dispensers, such as FDA approved kits. pack Is made of metal or plastic foil, for example a blister pack You. The pack or dispenser is accompanied by instructions for administration. There will be. Packs or dispensers may also be manufactured by governmental agencies that control manufacturing. With precautions related to the use or sale of prescribed types of containers and medicines. This notice contradicts the approval of the composition or any agency in the form of human or veterinary administration. I am reflecting. Such precautions include, for example, the insertion of prescription drugs or approved It may be a label approved by the US Food and Drug Administration for the product. Formulated in a compatible pharmaceutical carrier A composition comprising the compound of the invention is also prepared, placed in a suitable container, and Labeled for treatment of indicated condition. Indicated suitable shape on label Conditions include treatment of tumors, inhibition of angiogenesis, treatment of fibrosis, diabetes, etc. Would.Treatment method   Primary inhibitor that inhibits or reduces protein tyrosine enzyme activity in the signaling pathway The disclosed compounds find use in the treatment methods of the invention. In a preferred embodiment, the compound is a cell Compounds so as not to interfere with the function of other enzyme activities, including other tyrosine enzyme activities in The activity of the product is sufficiently specific for a particular protein tyrosine enzymatic pathway.   The compounds and pharmaceutical compositions of the invention can be used to treat diabetes. Diabetes Insufficient or absolute lack of insulin signaling is commonly associated with the etiology of the disease It is included. Insufficient or absence of insulin signal indicates lack of insulin. Poor, loss of binding affinity, defective receptor or under-expression of receptor. Caused by various factors. Insulin receptor activity is By inhibiting tyrosine phosphatase in signaling Can be adjusted. Currently available treatments based on the insulin receptor and In contrast, inhibition of dephosphorylation activity, even in the absence of insulin, introduces cells into cells. The insulin signal is restored or stimulated. An example of diabetes is the cure of a compound of the invention. Illustrates the principles of therapeutic applications, which include tyrosine enzymes, especially phosphotyrosine phospha It also applies to other disorders implicated in signal transduction by the enzyme. Book Compounds and pharmaceutical compositions of the invention are useful in immunodeficiencies in cytokine signaling. Used to treat disorders. Cytokines contribute to hematopoiesis and coordinated immunity and And plays a crucial role in the inflammatory response. The compound is used in hematopoietic cells, Signaling of B and T cell differentiation and proliferation in response to a primary stimulus Used to replace or promote the activity of tocaine, and therefore anemia and Useful for treating immunodeficiency. The compound treats disorders such as rheumatoid arthritis It is also used as an anti-inflammatory drug. The compound is also a neurotrophin -Stimulates the growth and differentiation of neurons controlled by mediated signaling It is also therapeutically useful for treating neurodegenerative diseases.   In another aspect of the present invention, the compounds and pharmaceutical compositions of the present invention are provided by a growth factor. Unregulated mediated signaling results in malignant tumor cell proliferation and / or Glioma, melanoma, Kaposi's sarcoma, hemangiomas, and breast, lung, liver It is also used to treat cancers such as the liver, prostate, colon and squamous cell carcinoma. For example, Overexpression of PTKs like HER2 may be associated with abnormal growth properties of tumor cells It is shown. Angiogenesis and / or angiogenesis that facilitate tumor growth may also be Inhibited by compounds of the present invention. The compound helps restore normal growth characteristics. Regulates the signaling of these tumor cells. The compound also has an excessive epidermal growth factor It is also useful for treating psoriasis caused by offspring-mediated signaling.Synthesis   The compounds of the present invention and starting materials are prepared using techniques well known in the chemical arts. Easily synthesized. Other synthetic routes are available to form compounds of the present invention The following examples are in no way limiting with respect to the preparation of the compounds of the present invention. Those skilled in the art will understand that they should not be considered.Example 1 3- (5-nitrothiazol-2-yl) mercapto-5-phenyl -1,2,4-triazole (compound 1)   The starting material 2-bromo-5-nitrothiazole is 2-amino-5-nitrothiazo (Aldrich) with sodium nitrite and hydrogen bromide. (Fr. Demand 2,015,434 1970). 3- Phenyl-1,2,4-triazole-5-thione (E. Hogarth, J. Amer. Chem. Soc (1949) 1163) was first developed with benzoyl chloride and thiosemica. Reaction of ruvazide in pyridine at 0 ° C. to give benzoylthiosemicarbazide It was manufactured by. Benzoyl thiosemicarbazide hydroxylated in ethanol 3-phenyl-1,2,4-triazole-5 by treating with potassium I got Thion. 3-phenyl-1,2,4-triazole-5-thione (1.7 7g) is then dissolved in 50 mL of methanol and 0.57 g of sodium methoxy Treated with 2-bromo-5-nitrothiazole (2.09 g). Mixed The mixture was stirred at room temperature for 2 hours, and the precipitated sodium bromide was removed by filtration. Methano The product was evaporated and the product was crystallized from ethanol and water to give 1.5 g of 3 -[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -5-phenyl-1,2 , 4-Triazole was obtained, white solid, MP 155-157 ° C.Example 2 2-[(5-nitro-thiazol-2-yl) mercapto] -5-t -Butyl-1,2,4-triazole   The title compound was prepared by the method described in Example 1. Benzo chloride of Example 1 Replacing yl with pivaloyl chloride gives pivaloyl thiosemicarbazide and then 3-t-Butyl-1,2,4-triazole-5-thione was obtained. Example 1 1.79 g of the sodium salt of thione as described above and 2.09 g of 2-bromo-5-ni 1 g of 2-[(5-nitro-thiazol-2-yl) is reacted by trothiazole. ) Mercapto] -5-t-butyl-1,2,4-triazole was obtained, yellow Solid, MP 219-221 ° C.Example 3 3-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -5- (thio En-2-yl) -1,2,4-triazole   The title compound was prepared by the method described in Example 1. Benzo chloride of Example 1 Yl to thiophene-2-carboxylic acid chloride (from acid and oxalyl chloride) Thiosemicarbazide of thiophene-2-carboxylic acid And then 3- (thien-2-yl) -1,2,4-triazole-5-thione was gotten. 1.73 g of sodium salt of thione as in Example 1 and 2.09 g 1-g of 3-[(5-nitrothiazol) by the reaction of 2-bromo-5-nitrothiazole. Azol-2-yl) mercapto] -5- (thien-2-yl) -1,2,4- Triazole was obtained, orange solid, MP 179-181 ° C.Example 4 3- (4-chlorophenyl) -5-[(5-nitrothiazole-2- Yl) mercapto] -1,2,4-triazole   The title compound was prepared by the method described in Example 1. Benzo chloride of Example 1 Substituting 4-chlorobenzoyl chloride for 4-chlorobenzoyl thiosemi Carbazide and then 3- (4-chlorophenyl) -1,2,4-triazole -5-Thion was obtained. 2.34 g of 3- (4-chlorophene as in Example 1 Nyl) -1,2,4-triazole-5-thione sodium salt and 2.09 g of The reaction of 2-bromo-5-nitrothiazole gave 1.5 g of 3- (4-chlorophenyl). Enyl) -5-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -1,2,2. 4-Triazole was obtained, light brown solid, MP 181-1840C.Example 5 3-Hydroxy-5-[(5-nitrothiazol-2-yl) merca Pt] -4-phenyl-1,2,4-triazole   The title compound is described in Potts, K .; T. , 1961, Chem. Rev .. , 61: 87, manufactured by the general method described. 4-phenyl-3-thio Dissolve semicarbazide (4.18 g) (Aldrich) in 50 mL of pyridine And treated at 0 ° C. with 2.71 g of ethyl chloroformate. Reaction time is 2 hours Stir and then heat to reflux for 18 hours. Evaporate solvent and triturate with water 2.5g 3-hydroxy-5-mercapto-4-phenyl-1,2,4-triazole was gotten. 3-hydroxy-5-mercapto-4-phenyl-1,2,4-to Lyazol (1.93 g) is dissolved in 10 mL of ethanol, and 1.1 equivalent of carbonic acid is dissolved. Potassium was added with an ethanol solution (10 mL) and stirred for 1 hour. As above with 2.09 g of 2-bromo-5-nitrothiazole. Ethanor After crystallization from toluene and water, 0.6 g of 3-hydroxy-5-[(5-nitrothi Azol-2-yl) mercapto] -4-phenyl-1,2,4-triazole Was obtained, a dark yellow solid, M.P. P. 188-190 ° C.Example 6 4-cyanohexyl-3-hydroxy-5-[(5-nitrothiazolate) Ru-2-yl) mercapto] -1,2,4-triazole   The title compound was prepared in a manner analogous to that described in Example 5. Hydrazi Over 30 minutes to a solution of acetone (0.8 g) in acetonitrile (20 mL). A solution of xyl isothiocyanate (3.53 g) in acetonitrile (10 mL) was added. added. The reaction was stirred for an additional 2 hours and evaporated to dryness to give 4.4 g of 4-cyclohexane. Hexylcarbonyl-3-thiosemicarbazide was obtained. 4-cyclohexylcal Bonyl-3-thiosemicarbazide (2.02 g) was treated with ethyl chloride as in Example 5. Treated with chloroformate (1.08 g). Reaction product 3-hydroxy-5-mer Capto-4-cyclohexyl-1,2,4-triazole (1.0 g) was prepared in Example. Reaction with 1.05 g of 2-bromo-5-nitrothiazole as in 5. Eta After crystallization from ethanol and water, 0.3 g of 3-hydroxy-5-[(5-nitro Rothiazol-2-yl) mercapto] -4-cyanohexyl-1,2,4-to Liazol was obtained, yellow solid, MP 237-239 ° C.Example 7 4-benzyl-3-hydroxy-5-[(5-nitrothiazole-2) -Yl) mercapto] -1,2,4-triazole   The title compound was prepared from benzyl isothiocyanate as described in Example 5. Manufactured in a similar manner. Intermediate 4-benzyl-3-thiosemicarbazide ( 1.91 g) was treated with ethyl chloroformate (1.09 g) as in Example 5. did. Reaction product 4-benzyl-3-hydroxy-5-mercapto-1,2,4 -Triazole (1.04 g) was prepared as in Example 5 with 1.05 g of 2-bromo-5 -Reacted with nitrothiazole. 0.3 when crystallized from ethanol and water g of 4-benzyl-3-hydroxy-5-[(5-nitrothiazol-2-yl) ) Mercapto] -1,2,4-triazole, yellow solid, MP221- 224 ° C.Example 8 3-Hydroxy-5-[(5-nitrothiazol-2-yl) merca Pt] -4-[(2-trifluoromethyl) phenyl] -1,2,4-triazo Rule   The title compound is derived from 2- (trifluoromethyl) phenylisothiocyanate. It was produced in a manner similar to that described in Example 5. Intermediate 4-[(2- (Trifluoromethyl) phenyl] -3-thiosemicarbazide (2.04 g) Treated with ethyl chloroformate (1.09 g) as in Example 5. Reaction product 3-hydroxy-5-mercapto-4-[(2-trifluoromethyl) phenyl ] -1,2,4-triazole (0.78 g) as in Example 5 Reacted with 2-bromo-5-nitrothiazole. Crystal from ethanol and water When converted to 0.3 g of 3-hydroxy-5-[(5-nitrothiazol-2-yl) ) Mercapto] -4-[(2-trifluoromethyl) phenyl] -1,2,4- Triazole was obtained, yellow solid, MP 183-185 ° C.Example 9 3- (1-ethyl-3-methylpyrazol-5-yl) -4- (3- Methoxy-n-propyl) -5-[(5-nitrothiazol-2-yl) merca Pt] -1,2,4-triazole   The title compound was synthesized in a manner analogous to that described in Example 1. 3-meth Xy-n-propyl isothiocyanate is 3-methoxy-n-propylamine and From thiophosgene and thiophosgene followed by reaction with hydrazine in pyridine To give the intermediate 4- (3-methoxy-n-propyl) -3-thiosemicarbazide Obtained. 4- (3-methoxy-n-propyl) -3-thiosemicarbazide (1.6 4 g) was treated with 1-ethyl-3-methylpyrazole-5-carboxylic acid chloride (1.7). 3 g, prepared from acid and oxalyl chloride) to give 2 g of 1-ethyl. R-3-methylpyrazole-5-carbonyl) -4- (3-methoxy-n-pro Pyr) -3-thiosemicarbazide was obtained. 1-ethyl-3-methylpyrazole- 5-carbonyl) -4- (3-methoxy-n-propyl) -3-thiosemicarba Treatment of the zide with potassium hydroxide in ethanol gives 3- (1-ethyl-3-methyl). Lupyrazol-5-yl) -5-mercapto-4- (3-methoxy-n-propyl L) -1,2,4-triazole was obtained. 3- (1-ethyl-3-methylpyrazo Yl-5-yl) -5-mercapto-4- (3-methoxy-n-propyl) -1 The sodium salt of 2,2,4-triazole is converted to 2-bromo-5-nitrothiazole ( 0.52 g) and crude 3- (1-ethyl-3-methyl) as in Example 1. Pyrazol-5-yl) -4- (3-methoxy-n-propyl) -5-[(5- Nitrothiazol-2-yl) mercapto] -1,2,4-triazole was obtained. Was. Crystallization from ethanol and water gave 0.3 g of 3- (1-ethyl-3- Methylpyrazol-5-yl) -4- (3-methoxy-n-propyl) -5- [ (5-Nitrothiazol-2-yl) mercapto] -1,2,4-triazole To give a pale brown solid, MP 117-118 ° C.Example 10 3- (4-chlorophenyl) -5-[(5-nitrothiazole-2) -Yl) amino] -1,2,4-triazole   The title compound is 3-amino-5- (4-chlorophenyl) -1,2,4-tri Azole and 2-bromo-5-nitrothiazole are added in refluxing tetrahydrofuran. Heat silica gel using a mixture of dichloromethane and methanol as eluent 3- (4-chlorophenyl) -5-[(5-nitro Thiazol-2-yl) amino] -1,2,4-triazole Synthesized in a manner similar to that described in Example 1.Example 11 4-allyl-3-hydroxy-5-[(5-nitrothien-2-i Le) mercapto] -1,2,4-triazole   The title compound was prepared as described in Example 5 starting from allyl isothiocyanate. Manufactured in a similar manner. 4-allyl-3-hydroxy-5-mercapto-1 The 2,2,4-triazole was 2-bromo-5-nitrothiazole as in Example 5. And reacted. Crystallization from ethanol and water gives 4-allyl-3-hydroxy C-5-[(5-nitrothien-2-yl) mercapto] -1,2,4-tria The sol was obtained as a yellow solid.Example 12 3-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -4- ( 4-methoxyphenyl) -5- (thien-2-yl) -1,2,4-triazoe 2-bromo-5-nitrothiazole   72.5 g of 2-amino-5-nitrothiazole was added to 300 mL of 48% bromide water. Cool to about −10 ° C. with stirring and add to the acid 51.8 g of sodium nitrite dissolved in 80 mL of water from the addition funnel and second 250 mL of n-amyl alcohol was added slowly little by little from the dropping funnel of . The addition of both solutions required about 3 hours. Leave the mixture overnight, except for the cooling bath And warmed to about 15 ° C., followed by stirring at room temperature for 2 hours. Suction filtration to remove solids Collection and steam distillation yielded 67 g of crude product. Crude product in hot ethanol Recrystallization from yields 61 g (60% yield) of 2-bromo-5-nitrothiazole. Obtained as a yellow solid.N1- (4-methoxyphenylaminothiocarbonyl) -N2- (thien-2- Carbonyl) hydrazine   Thiene-2-carboxyhydrazide (2 g) and 2.3 g of 4-methoxyphenyl A solution of phenyl isothiocyanate in tetrahydrofuran (25 mL) was added at 25 ° C. overnight. And stirred. The reaction mixture was concentrated to give a precipitate, which was collected by suction filtration and dried. This gave 3.5 g of the title compound as an off-white solid.(4-methoxyphenyl) -5- (thien-2-yl) -1,2,4-triazo R-3-thione   N1- (4-methoxyphenylaminothiocarbonyl) -N2- (thien-2 -Carbonyl) hydrazine (1 g) and 0.2 g of sodium ethoxide The ethanol (10 mL) solution was refluxed for 6 hours. The mixture is cooled and the precipitate is filtered off with suction. Collected and dried to give 0.6 g of the title compound as an off-white solid. Obtained. (4-methoxyphenyl) -5- (thien-2-yl) -1,2,2 4-triazole-3-thione (0.5 g) and 0.4 g of 2-bromo-5 A solution of nitrothiazole in acetonitrile (50 mL) was refluxed for 6 hours. Solvent Concentration gave the crude product, which was collected by suction filtration. Crude product in ethanol Crystallization from toluene yields 0.6 g of the desired thiazole as an off-white solid. Obtained.Example 13 3-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -4-me Cyl-1,2,4-triazole Methylaminocarbonyl-hydrazine   2 g of thiene-2-carboxyhydrazide in Example 12 was replaced with 1 g of formic acid arsenate. Drazide and 4-methoxyphenyl isothiocyanate were added to 1 g of methyl isothiocyanate. By substituting with ocyanate, 1 g of the title compound was converted to an off-white solid. Obtained as a form.Example 14 3-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -4-bu Cyl-1,2,4-triazole Butanoyl hydrazide   Butanoyl hydrazide is A.I. I. Vogel, Practical Orange nic Chemistry, 3rd edition, 1956 (Longman Group , London) p395. 10 g of ethyl butanoate Was refluxed with 10 mL of hydrazine hydrate for 15 minutes. Add absolute ethanol, After refluxing for 3 hours, the ethanol was distilled off. Cool the solution and remove the crystalline hydrazide. N Was isolated by suction filtration and dried to give 8 g of butanoyl hydrazide. Real Replacing the formic hydrazide of Example 13 with 1.7 g of butanoyl hydrazide Yields 0.6 g of the desired triazole compound as an off-white solid can get.Example 15 5-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -1- ( 4-methoxyphenyl) tetrazole 2-bromo-5-nitrothiazole   72.5 g of 2-amino-5-nitrothiazole was added to 300 mL of 48% bromide water. Cool to about −10 ° C. with stirring and add to the acid 51.8 g of sodium nitrite dissolved in 80 mL of water from the addition funnel and second 250 mL of n-amyl alcohol was added slowly little by little from the dropping funnel of . The addition of both solutions required about 3 hours. Leave the mixture overnight, except for the cooling bath And warmed to about 15 ° C., followed by stirring at room temperature for 2 hours. Suction filtration to remove solids Collection and steam distillation yielded 67 g of crude product. Crude product in hot ethanol Recrystallization from yields 61 g (60% yield) of 2-bromo-5-nitrothiazole. Obtained as a yellow solid.1- (4-methoxyphenyl) tetrazole-5-thione   4-methoxyphenyl isothiocyanate (2 g) and 1 g of sodium azide Solution of ethanol (50 mL) was refluxed for 5 hours, concentrated after cooling (for example, , Canadian Journal of Chemistry 1959, See p101). The precipitate is collected by suction filtration and dried to give 1.5 g. 1- (4-methoxyphenyl) tetrazol-5-thione is an off-white solid Obtained as a form.   2-bromo-5-nitrothiazole (1.1 g) and 1 g of 1- (4-meth (Xiphenyl) tetrazole-5-thione in acetonitrile (50 mL) After refluxing for 5 hours, the acetonitrile is evaporated. The residue is crystallized from ethanol Then 1.2 g of the desired tetrazole compound is obtained as an off-white solid can get.Example 16 2-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -5-me Chill-1,3,4-thiadiazole 2-bromo-5-nitrothiazole   72.5 g of 2-amino-5-nitrothiazole was added to 300 mL of 48% bromide water. Cool to about −10 ° C. with stirring and add to the acid 51.8 g of sodium nitrite dissolved in 80 mL of water from the addition funnel and second 250 mL of n-amyl alcohol was added slowly little by little from the dropping funnel of . The addition of both solutions required about 3 hours. Leave the mixture overnight, except for the cooling bath And warmed to about 15 ° C., followed by stirring at room temperature for 2 hours. Suction filtration to remove solids Collection and steam distillation yielded 67 g of crude product. Crude product in hot ethanol Recrystallization from yields 61 g (60% yield) of 2-bromo-5-nitrothiazole. Obtained as a yellow solid.2-mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazole   2-Mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazole is S.P. G. FIG. Boo ts and C.I. C. Cheng, 1967,J. Heterocyclic C hemistry , 4: 272-283. Was. Acetic acid hydrazide (7.4 g) solution in methanol (160 mL), 5.0 g Of potassium hydroxide pellets and 10 mL of carbon disulfide for 4 hours at room temperature . Ether (400 mL) was added and the mixture was cooled in an ice bath to give 10 g of solid The cetyl dithiocarbazate potassium salt is obtained, collected by suction filtration and dried. Use immediately. 300 mL of dichloromethane and 54 mL of boron trifluoride The crude acetyldithiocarbazate potassium salt was added to the mixture of Stir for 18 hours under an atmosphere. Pour the orange solution onto ice and extract with ether You. The ether extract was washed with 10% potassium hydroxide solution and the aqueous phase was washed with 10% cold hydrochloric acid. To make the pH 2 acidic. The precipitate is collected by suction filtration and dried to indicate 2.5 g. The compound is obtained as a beige solid.   2-bromo-5-nitrothiazole (2.09 g) and 1.32 g of 2-meth Tetrahydrofuran of lucapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazole (1 0 mL) solution was stirred overnight at room temperature, neutralized by adding triethylamine and stirring was continued. I can. The precipitated solid is dissolved in dichloromethane, washed with water and the organic layer is evaporated. To give a crude product. The crude product is crystallized from ethyl acetate / hexane 1 g of the desired thiazole-thiadiazole compound as an off-white solid Obtained.   Or 2-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -5-me Cyl-1,3,4-thiadiazole is described in J. Am. Bourdais et al. , 1 981,Eur. J. Chem. Ther. , 16: 233-240. It is manufactured by 2-bromo-5-nitrothiazole (2.09 g) and 1 . 32 g of 2-mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazole ethano (10 mL) and 1 N potassium hydroxide (10 mL) solution are stirred at room temperature overnight I do. The precipitated solid was collected by suction filtration, washed with water, ethyl acetate / hexane Crystallization from affords 1 g of the title compound as an off-white solid.   Or 2-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -5-me Cyl-1,3,4-thiadiazole is 2-mercapto-5-methyl-1,3,4 Isolated by forming the sodium salt of thiadiazole, in a suitable inert solvent, Reaction with 2-bromo-5-nitrothiazole at room temperature and isolation of product as above I do. As an example of this method, M. F. Abdel-Lateef and Z.M. Ec kstein, 1972,Rocz. Chem. , 45: 1647-1658. Please refer to.Example 17 2-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -5-p Ropyr-1,3,4-thiadiazole   Propanoyl hydrazide is A.I. I. Vogel, Practical Org anic Chemistry, 3rd edition, 1956 (Longman Grou p, London) p395. 10 g of butanoic acid The chill was refluxed with 10 mL of hydrazine hydrate for 15 minutes. Add absolute ethanol After refluxing for 3 hours, the ethanol was distilled off. Cool the solution and remove the crystalline hydra The gin was isolated by suction filtration and dried to give 8 g of propanoyl hydrazide. You. By replacing the acetate hydrazide of Example 16 with propanoyl hydrazide 2-mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazole Capto-5-propyl-1,3,4-thiadiazole is produced.   The 2-mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazole of Example 17 was -To replace with mercapto-5-propyl-1,3,4-thiadiazole From 2-[(5-nitrothiazol-2-yl) mercapto] -5-propyl -1,3,4-thiadiazole is isolated as an off-white solid.A brief description of the table   Table 1 shows preferred chemical structures that are within the scope of the present invention. The indicated compound is It should in no way be construed as limiting the scope of the invention.Biological evaluation   For a given set of compounds, a spectrum of biological activities should be observed. It will be understood. In a preferred embodiment, the invention relates to cell signaling. Linked protein tyrosine enzymes, most preferably protein tyrosine phosphaters Novel heteroaryl compounds that exhibit the ability to modulate zeolites. Described below Assays are used to select compounds that exhibit the optimal degree of desired activity. It is.   As used herein, the phrase "optimal degree of desired activity" refers to a particular disorder. Compounds of the present invention at the lowest possible dose in a patient having harm (preferably a human) Mediate cell signaling and provide certain disorders to provide a therapeutically effective amount of Highest treatment for protein tyrosine enzymes associated with as defined above Means coefficient. Assays for determining inhibitory activity   Various methods known in the art may be used for protein tyrosine by the compounds of the present invention. Identify, evaluate or assess the inhibition of enzymes, especially protein tyrosine phosphatase activity. Will be used to essay. For example (but not limiting), For phatases, such assays expose cultured target cells to the compound and And a) assessing and / or identifying levels of tyrosine phosphorylated proteins Analyzing the cell lysate for biochemistry; or b) the pair not exposed to the test substrate A phenotypic or functional change in the treated cells compared to control cells is scored.   Mimetics of natural ligands for signaling receptors should be identified or evaluated If positive, cells were exposed to a compound of the invention and exposed only to the natural ligand Compared to controls and negative controls that were not exposed to compounds or natural ligands You. Even at the basal level in the absence of natural ligands such as the insulin receptor For receptors known to be oxidized, the assay is ligand-free. Implemented in the presence. Inhibitor or enhancer-induced signaling is identified or evaluated If so, the cells are exposed to a compound of the invention in the presence of a natural ligand and Are compared to controls not exposed to the compound.   The assays described below inhibit the phosphatase activity of the compounds of the invention Used as initial screening to assess performance. The assay also The concentration range (eg, 100 μM to 1 pM) is tested and the amount of phosphorylation or signal Calculate the concentration at which the transmission decreases or increases by 50% (IC50) compared to the control It is also used to assess the relative potency of compounds.Biochemical assays   Substrate molecule phosphorylated or dephosphorylated on tyrosine residues during signaling Target cells that are exposed to the compounds of the invention and radiolabeled phosphate Afterwards, it is lysed to release the cellular contents containing the substrate in question. Base The quality is one- or two-dimensional sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel. Separation of protein components of cell lysate using electrophoresis (SDS-PAGE) technology Analysis to detect the presence of phosphorylated proteins by exposure to X-ray film. In a similar technique without the use of radioactive labels, separation by SDS-PAGE The transferred protein component is transferred to a nitrocellulose membrane and the presence of pTyr is It is detected using a tyrosine (anti-pTyr) antibody. Or, the substrate in question First, a substrate-specific anchor antibody bound to the cell lysate and solid support And then wash off unbound cell components and solid support with anti-pTyr antibody Assess the presence or absence of pTyr on the body. This preferred method is an automated robot It can be easily carried out in a microtiter plate format by the system, and a large amount of Allows testing within a short time frame.   Anti-pTyr antibodies are radioactive that facilitate detection by autoradiography It can be detected by labeling with a substance. Alternatively, anti-pTyr antibody is horseradish Subsequent addition of a substrate that can bind to an enzyme such as peroxidase and is suitable for the enzyme And the selection will be apparent to those skilled in the art. In yet another method, Detection of anti-pTyr antibody by reacting with a second antibody that recognizes pTyr antibody The second antibody is labeled with a radioactive substance or an enzyme as described above. Real Any antibody detection method known in the art can be used.   The method also includes cell lysates and host cells containing signaling substrate molecules. Phatase is used in cell-free systems where it is mixed with the compounds and kinases of the present invention. May be used. The substrate adds adenosine triphosphate (ATP) to initiate the kinase reaction. It is phosphorylated by starting. Reaction mixture to assess compound activity Is the group that is analyzed by SDS-PAGE technique or attached to a solid support. To assess the presence or absence of pTyr added to the quality-specific anchor antibody The detection method as described above is performed on the separated or captured substrate. Conclusion The results are compared to those obtained with a reaction mixture to which no compound has been added. Cells Free systems do not require knowledge of the natural ligand or its identification. For example, P Osner et al. (US Pat. No. 5,155,031) disclose that superactivation inhibits PTP activity. Insulin receptors and targets as substrates to demonstrate the ability of nadic acid The use of rat adipocytes as cells is described. Burke et al. (Bioch em. Biophys. Res. Comm . , 1994, 204: 129-13. 4) Autophosphorylating insulin in the evaluation of the inhibitory activity of phosphotyrosyl mimetics And the use of recombinant PTPIB.   In addition to measuring the phosphorylation or dephosphorylation of the substrate protein, Activation or regulation of ssenger production, changes in cellular ion levels, signaling Molecular association, dissociation or transfer, gene induction or transcription or translation of specific genes Is also monitored. These biochemical assays have been developed for these purposes. It is carried out using standard techniques.Biological assays   The ability of the compounds of the invention to modulate PTP activity in controlling signal transduction is Measured by scoring for morphological or functional changes associated with . Any qualitative or quantitative technique known in the art may be used to host the signaling pathway. It can be applied to observation and measurement of cellular processes under the control of phatases. like that Cell processes include anabolic and catabolic processes, cell proliferation, cell differentiation, cell adhesion, cell migration and And cell death, but are not limited thereto.   Study various biological effects of vanadate as phosphatase inhibitor The techniques used to apply the compounds of the invention. For example, vanadate Insulin sensitivity of glucose and glucose analogs in rat adipocytes Have been shown to activate the sex-enhanced transport system (Dubyakra, 1980) ,J. Biol. Chem. , 256: 5306-5312). Compound of the invention Activity of 2-deoxy- in rat adipocytes exposed to the compoundThreeH-gluco By measuring the increase in the transport rate of glucose analogs, such as glucose Wear. Vanadate is also an inhibitor of glucose oxidation in rat adipocytes. Mimic the effect of phosphorus (Shechter et al., 1980,Nature, 284 : 556-558). The compounds of the present invention14C-glucose14COTwoConversion to By measuring, the stimulation of glucose oxidation can be tested. In addition, Erythropoe The effect of sodium orthovanadate on tin-mediated cell growth was observed during DNA synthesis. Based on DNA content, as estimated by tritiated thymidine incorporation Cell cycle analysis (Spivakra, 1992, Exp . Hematol. , 20: 500-504). Similarly played a role in cell proliferation You Activity of compounds of the invention on phosphatases is assessed by cell cycle analysis Will.   The activity of the compounds of the invention may also be caused by dysfunctional signaling. Can also be evaluated in animals using experimental animal models of the associated disorder. For example, The activity of the light compound was measured in non-obese diabetic mice (Lund et al., 1990,Natur e , 345: 727-729), BB Wistar rats and Streptozotoshi. Induced diabetic rats (Solomon et al., 1989,Am. J. Med. Sci . , 297: 372-376). Tested for effects on The activity of the compound also indicates that phosphatase is Animal carcinogenesis plays an important role in dysfunctional signaling leading to conversion It is also evaluated in experiments. For example, okadaic acid (a phosphatase inhibitor) is Have been shown to promote tumor formation (Suganuma et al., 1988,Proc. Natl. Acad. Sci . , 85: 1768-1771).   The data obtained from these cell culture assays and animal studies has Used to determine the dosage range for use. The dose of the compound of the present invention It must be within a range of circulating concentrations that are almost or completely non-toxic. Dosage is required It will vary within this range depending upon the dosage form employed and the route of administration.Phosphatase inhibition   The present invention inhibits the activity of protein tyrosine phosphatase (limited to this). Control and / or modification of signal transduction Contains compounds. In particular, the present invention inhibits protein tyrosine phosphatase activity. Contains harmful compounds. These compounds are referred to herein as signaling Up or down the cellular processes controlled by Although regulated, they are commonly referred to as "phosphatase inhibitors."Phosphotyrosine enzyme-linked immunosorbent assay   This assay uses phosphotyrosine (pty) on the insulin receptor (IR). r) used to test the ability of the compounds of the invention to inhibit dephosphorylation of residues It is. One skilled in the art will recognize that other substrate molecules such as platelet-derived And that it will be used in assays by using anchor antibodies. There will be. By using different substrate molecules in the assay, different protein The activity of the compounds of the invention on tyrosine enzymes is evaluated. In the case of IR, endogenous The kinase activity is activated with or without low levels of insulin binding. Therefore, insulin is not required to stimulate IR phosphorylation. That is, After compound exposure, cell lysates are prepared and coated with an anti-insulin receptor antibody. Microtiter plate. Captured insulin receptor Phosphorylation level is detected using an anti-pTyr antibody and an enzyme-linked second antibody .Materials and methods   1. The cell line used for the IR assay was found to overexpress human IR. Genetically engineered NIH3T3 cells (ATCC number CRL1658) (H2 5 cells). The growth medium for these cells was 10% fetal calf serum, 1% L-gluta DMEM (Gibco) containing Min and 20 mM Hepes.   2. The anchor antibody used was BB, which recognizes the extracellular domain of human IR. E (Enzymology Laboratories, Sugen Inc. )Met.   3. PBS (Gibco): KHTwoPOFour(0.20 g / l), KTwoHPOFour (2.16 g / l), KCl (0.20 g / l), NaCl (8.0 g / l), pH 7.2.   4. Rabbit polyclonal anti-phosphotyrosine antibody (anti-pTyr, Enzy Mobility Laboratories, Sugen Inc. ).   5. Goat anti-rabbit IgG POD conjugate (Tago, Burlinbam e, CA, catalog number 6430) was used as the second antibody.   6. TBST buffer: 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, Adjusted to pH 7.2 with 0.1% Triton X-100, 10N HCl.   7. Blocking buffer: 5% milk in PBS (Carnation instant skim drying) milk).   8. 5X HNTG buffer: 100 mM Hepes, 750 mM NaCl, 50% glycerol, 0.5% Triton X-100, pH 7.5.   9. ABTS solution: 100 mM citric acid, 250 mM NaHTwoPOFour, 0 . 5 mg / ml ABTS (2,2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoly B) Sulfonic acid) adjusted to pH 4.0 with 1N HCl.   10. Cell lysis buffer: 1 mM NaThreeVOFour(0.5M solution, 100X storage Aliquot as liquid and keep at -80 ° C) 5 mM NaPTwoO7And 5 mM ED HNTG containing TA, prepared at the time of use and kept on ice until use.   11. Hydrogen peroxide: 30% solution.Preparation of assay plate   Microtiter plate (96 well, Easy Wash ELISA plate) Rate, Corning 25805-96) is 100 μl of anchor antibody PBS solution. (0.5 μg per well) for at least 2 hours at room temperature or overnight at 4 ° C. Overturned. Replace the coating buffer with 100 μl of blocking buffer before use, The coated assay plate was shaken at room temperature for 30 minutes. Before adding lysate Wells were washed three times with water and once with TBST buffer.Cell seeding   Cells are 10% fetal bovine serum (FBS) until 80-90% confluent 15 cm culture dish (Corning 25020-100) in DMEM medium containing Propagate using Cells were trypsin-EDTA (0.25%, 0.5 ml, Gibco) and contains 10% FBS, 1% L-glutamine and Hepes Cells in 25,000 cells / well, 100 μl / well Transfer to round bottom 96 well tissue culture plates (Corning 25806-96). Cells are at 37 ° C, 5% COTwoAnd incubated for 24 hours. Plate upside down Medium by adding DMEM medium containing 0.5% FBS and Hepes. Exchange. Cells are further incubated at 37 ° C, 5% COTwoAnd incubate overnight.Assay method   Assays are performed in 96-well tissue culture plates. Before adding compound to cells The medium in the wells is replaced with serum-free DMEM medium (90 per well). μl). Add 80 μl DMEM to the positive control wells. Negative control wells Add 90 μl of DMEM. Test compounds were diluted 1:10 in DMEM and 1 0 μl / well of diluted test substance is added to the cells in the wells for a final dilution of 1: 100 To achieve. Both positive and negative control wells contain 10 μl / well dimethyl Lusulfoxide (DMSO) is added to a final concentration of 1%. In the positive control well Is further added to 10 μl / well of 0.1 M Na so that the final concentration is 10 mM.Two VOFourAdd. Tissue culture plate at 37 ° C, 5% COTwoIncubate with Shake for 1 minute before After 90 minutes incubation, invert the plate Remove the medium by adding 100 μl / well lysis buffer. Tissue culture The plate is shaken for 5 minutes, then placed on ice for 10 minutes. Repeat suction and discharge Homogenize the cells, and the lysate is washed with a pre-coated assay plate. Transfer to the corresponding well of the plate.   The material in the cell lysate is allowed to bind to the anchor antibody for 1 hour at room temperature with shaking . The lysate is then removed and the assay plate is washed. All ELISA play Washing was performed by washing three times with water, followed by one washing with TBST. The plate is dried by tapping on a paper towel. Phosphotyrosi 100 μl / well anti-pTyr anti-blood diluted 1: 3000 in TBST Wash is added to the wells and detected by shaking at room temperature for 30 minutes. Not combined Assay plates are washed as above, except for excess anti-pTyr antiserum . The second antibody diluted 1: 3000 in TBST was added to the wells and the chamber was shaken. Incubate for 30 minutes at warm. Then remove the second antibody, wash the plate and ABTS / HTwoOTwo(0.5 mg / ml of 2,2'-azinobis (3-ethylbenzene) Nzothiazoline) sulfonic acid was converted to 100 mM citric acid, 250 mM NaTwoHPOFour , 1.2 μl of 30% H in 10 ml of solution added to pH 4.0TwoOTwoAdd) To start coloring. After 10 minutes, 100 μl / well of 0.2 M HCl was added. Stop the reaction by shaking for 1 minute. The absorbance value at 410 nm is expressed as EL I The measurement was performed using an SA plate reader (Dynatec MR5000).Glucose transport assay   This assay regulates insulin-induced glucose transport into adipocytes. Compounds of the invention that inhibit phosphatase activity involved in the Used to evaluate competence. Ink isolated fat cells and vanadate Showed that dose-dependent increase in glucose uptake rate Have been.Materials and methods   The cell lines used in the glucose transport assay carry insulin receptors. Overexpressing preadipocyte cell line 3T3-L1 (American Type Cu lture Collection CCL 92.1). 3T3-L1 fine The vesicles were initially confluent in DMEM containing 10% fetal bovine serum (FBS). 0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine, 5 μl / Ml porcine insulin and 250 mM dexamethasone for 2 days To differentiate. The cells were then washed with 10% FBS and 5 μl / ml butain. After growing for 2 days in DMEM containing shulin, cells were grown in 10% FBS. Culture in DMEM containing only   The cells used in the assay were initially at 37 ° C. in DMEM medium containing 1% FBS. , 5% COTwoGrow overnight. Two hours before use, overnight culture medium is 5 mM glucose Replace with serum-free DMEM containing Wash cells twice with phosphate buffered saline (PBS) After purification, the test compound serially diluted 1: 100 in DMEM was added from 0.5 μM to 500 μM. Add to wells to a final concentration range of μM. Negative control wells contain DMEM Add only. Cells are incubated with test compound at 37 ° C, 5% COTwoIncubate for 1-4 hours To 15 minutes before the selected time, 2-deoxy-ThreeH-glucose is 50μ M and a final concentration of 0.5 μCi / ml. At the end, except for compounds, The wells are washed twice with PBS containing 10 mM glucose. 50μ cells lysate with 0.5 N NaOH and transfer the cell lysate to a scintillation vial. I And mix with 5.2 μl of glacial acetic acid. The wells were each washed with 200 μl PBS, Transfer to the corresponding scintillation vial.ThreeH radioactivity was measured by Beckman And counted.Primary adipocyte glucose uptake assay   This assay is based on primary fat as determined by glucose uptake by cells. Assess the effect of compounds of the invention on insulin-mediated signaling in cells Used forMaterials and methods reagent   The following buffers and reagents were used in the primary adipocyte glucose uptake assay. Is:   Mixed salt     76.74 g NaCl       3.51 g KCl       3.06 g MgClTwo       3.63 g CaClTwo・ HTwoO (2.74 g CaClTwo) The volume was made up to 1 liter with distilled water.   Hepes buffer     23.8g Hepes       3.42 g NaHTwoPOFour・ HTwoO (3.87 g NaHTwoPOFour・ 2HTwoO ) With about 600 ml of HTwoDissolved in O. The pH of the solution was adjusted to 7.6 and the volume was The volume was made up to 1 liter with distilled water.   Albumin collagenase buffer     44.8ml distilled water     10.0 ml Hepes buffer     10.0ml mixed salt     35.0 ml 10% BSA       0.2ml glucose (300mM)     100mg collagenase   Transport buffer     48ml distilled HTwoO       8ml mixed salt       8 ml Hepes buffer     16ml 10% bovine serum albumin   Resection of epididymal fat puerperium   The primary adipocytes used in the assay are comfortable with a weight of 200-250 grams Dead male rats (Sprague-Dawley or other suitable strain) Obtained from Aged and heavier rats are resistant to insulin , And was not used because it did not show a good response. From each animal 1-1. It is expected that 5 g of fat will be obtained. Approximately 2.5 g of fat is required to perform 40 reactions The required 20 samples and 20 LDH samples for the glucose uptake assay A set of integrity.   Using aseptic technique, a midline incision is made through the skin, followed by a 4-6 cm incision in the peritoneum. It was conducted. Fat pads adjacent to testis identified by following vascular differences from testis Is done. Carefully cut off the epididymis and testis, and the innervating vessels Can be The cut-out fat pad is weighed, cut into small pieces and relaxed with 5 ml of collagenase. Digestion was performed at 37 ° C. for 1 hour in the buffer. Digestion material is 250 micron nylon mesh Filtered through a sieve. Collect cells floating on top and wash three times with transport buffer You. Cell concentration was determined by one of the following methods:   (1) Cells as a percentage in solution: put cell suspension into hematocrit tube And centrifuge at 500 xg for 5-10 minutes. Liquid cylinder aggregate length and tube The length of the bottom column of "white" cellular material is measured in millimeters. Cell concentration It is estimated as a percentage of the length of the cell portion relative to the total length. Glucour Approximately 2-3% of the cells in the final reaction volume were used in the cell uptake assay. 50 For a reaction volume of 0 μl, the adipocyte stock solution is up to 25% cells in transport buffer. Diluted and added 50 μl to each sample.   (2) Cell number: cells are initially buffered with collidine so that adipocytes sink in suspension It was fixed by osmium tetroxide in the liquid. The immobilized cells are osmium tetroxide The cells were centrifuged to remove the cells and counted in a coulter counter. Cell count Once determined, the cell concentration is adjusted and 50 μl of cells are added to each sample .   Assay   Adipocytes collected from rats in the presence or absence of saturating levels of insulin Exposure to test compounds below. Normally taken up by cells via the insulin induction mechanism Will be14Add C-labeled glucose to the cells. Retained by treated cells The amount of radioactive glucose is determined and untreated to assess the activity of the test compound Compared to cells.   A typical assay can be assembled as follows: Reaction vials containing appropriate buffers and compounds (polyethylene scintillation) Solution vial (17 mm) is prepared while the cells are being prepared. 80 nM 50 μl of insulin (indicating saturation level) Add to sample. Lower concentrations of insulin can also be used in this assay. The Methyl sulfoxide (DMSO; 0.5% or less) is a carrier for the compound of the present invention. Used as At 200x, depending on the solubility of DMSO (about 50 μM). Test compounds are used. 50 μl of adipocytes are added to the reaction vial and For 30 minutes with gentle shaking. Next, for each sample14C -Glucose is added and incubated for another 30 minutes with shaking.   The cells are separated from the reaction buffer by centrifugation. Glue taken up by cells The course amount is determined by standard scintillation counting. Cells are (double), 1 Narrow caliber microcentrifuge containing 00 μl of dimethylsilicon liquid SF96 / 50 Separation is possible with a tube (5.8 x 47.5 mm, 0.4 ml volume). Each reaction test The mixture is agitated to ensure a uniform distribution of cells and 200 μl is Transferred to a tube. The mixture is centrifuged at 13000 rpm for 10 minutes. After centrifugation The cells floating on the top are separated at the silicon liquid interface. Top layer of 7-10ml Transfer to borosilicate vial with scintillation fluid and count for approximately 10 minutes. 50 μl14C was used as a control for total radioactivity in each reaction.Cellular insulin receptor activation assay   This assay uses a 96-well ELISA format to perform catalytic incorporation of intact cells. Used to provide a consistent method for determining insulin receptor activity Is done. The EY-20mer peptide was used in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). ) Used as an in vitro IR substrate to determine IR activation status It is.   Reagents and manufacturers:   1) Corning 96-well ELISA plate (Corning Cataro No. 25905-96)   2) PBS (phosphate buffer)             Formulation: 2.7 mM KCl                   1.1 mM KHTwoPOFour                   1.5 mM MgClTwo(anhydrous)                   138 mM NaCl                   8.1 mM NaTwoHPOFour   3) HNTG lysis buffer             Formulation: 20 mM Hepes buffer pH 7.5                   150 mM NaCl                   0.2% Triton X-100                   10% glycerol   4) HNTG*Prescription:                   1X HNTG                   5 mM NaThreeOFour                   2 mM NaPPi                   5 mM EDTA   5) DMEM (Dulbecco's improved Eagle medium), 1X high glucose, L-g Contains glutamine (Gibco catalog number 11965-050)   6) FBS (fetal calf serum) (Gibco cat. No. 16000-044) )   7) L-Glutamine (200 mM stock solution) (Gibco Catalog No. 11) 965-050)   8) Growth medium: DMEM 10% (heat activated) FBS + 2 mM L-glutami N   9) Starvation medium: DMEM   10) H25 cells (human insulin receptor expressing plasmid Transfected NIH3T3c7 cells) 5% COTwo37 in a growth medium containing Proliferate at ℃   11) Anti-insulin receptor antibody (Santa Cruz Biotec) h) (SC-710 or SC-09)   12) EY-Tide: biotin-binding peptide (sequence biotin EYEYEY EYEYEYEYEYEYEY, MW = 3280.4) (Protein ch emistry lab SUGEN, Inc)   13) ABTS solution:                     Formulation: 100 mM citric acid (anhydrous), 250 mM NaTwo                     HPOFour, PH 4.0, 0.5 mg / ml ABTS (2                     , 2'-Azinobis (3-ethylbenzothiazoline) -6                     -Sulfonic acid) (Sigma catalog number A4-888)                     ,                     Keep solution at 4 ° C in the dark until use   14) 30% hydrogen peroxide: Fisher (catalog number H325)   15) ABTS / HTwoOTwo:               Formulation: 15mL ABTS solution                     2 μL HTwoOTwo   16) Kinase buffer               Formulation: 25 mM Hepes / CL, pH 7.0                     150 mM NaCl                     0.1% Triton X-100                     10 mM MnClTwo   17) TBST buffer (Tris buffered salt solution containing Triton X0199)               Formulation: 50 mM Tris, pH 7.2                     150 mM NaCl                     0.1% Triton X-100   18) Polypropylene 96-well V-bottom plate (Applied Science) tic catalog number AS-72092)   19) Blocking buffer: 5% powdered skim milk in PBS (w / v)   20) ABC kit: Avidin-HRP coloring reagent: Vector Labs ( (Catalog number PK-4000)   21) DMSO (dimethyl sulfoxide): Sigma (catalog number D-8) 418)   22) ATP: Sigma (catalog number D-8418)   23) 4G10: phosphotyrosine specific monoclonal antibody (UBI)   24) Insulin, crystal, bovine, zinc: Gibco Catalog No. 13007 -018   Assay method   1) Using a 96-well tissue culture plate, 15,000 cells / Seeding H25 cells in wells   2) 0.5 μg / well of anti-insulin receptor antibody in PBS solution Cover the ring ELISA plate. 100 μl final volume per well is there. Store at 4 ° C overnight.   3) Add another Corning ELISA plate to 0.5 μg / well of 4G1 Coated with 0 antibody PBS solution. Final volume per well is 100 μl. Overnight 4 Store at ℃.   4) Remove growth medium, wash with PBS and add 90 μl starvation medium. Starve cells 2 hours before assay.   5) Invert the plate and remove the liquid to remove the anti-insulin receptor Remove unbound antibody from wells of antibody-coated plate. Wash three times with TBST.   6) Block plate with 150 μl blocking buffer per well. 30 minutes at room temperature While shaking on a microtiter plate shaker.   7) Compound / extract and DMSO control on polypropylene plate with DM 1:10 dilution in EM.   8) 96 well plates with 1:10 diluted compound / extract and DMSO control Add to the list. 37 ° C and 5% CO in an incubatorTwoPlay for 20 minutes Incubate the sample.   9) After 20 minutes incubation, add 0.2 μM insulin to the positive control wells. Add 100 μl of phosphorus. Final insulin concentration was 0.1 μM per well. You. 37 ° C and 5% CO in an incubatorTwoIncubate the plate for 10 minutes with Lab.   10) Medium from cell plate by inverting plate to remove fluid except for. Wash once with PBS, 100 μl / well HNTG*Add. Pre Place the plate on ice for 5 minutes.   11) Remove blocking buffer and remove anti-insulin receptor antibody-coated ELISA plate Wash the plate 3 times with TBST. Paper tao to remove excess liquid and foam Tap lightly on the   12) Use a 12 channel pipettor to detach cells from the plate, The melt is homogenized by repeating suction and discharge. Lysate anti-insulin Transfer to the corresponding well of the sceptor antibody coated ELISA plate. 1 hour at room temperature Incubate with shaking on a microtiter plate shaker.   13) Invert the ELISA plate coated with anti-insulin receptor antibody. To remove unbound protein from the wells. Wash plate 3 times with TBST Cleanse. Tap on a paper towel to remove excess liquid and foam.   14) Kinase buffer solution containing 6 μM peptide and 2 μM ATP Prepare. Add 50 μl of solution to each well. Remove the ELISA plate Cover with film and shake on a microtiter plate shaker at 4 ° C. overnight Incubate (about 15-17 hours).   15) The following morning, 4G10 coated plates were added to each well with 100 μl of blocking buffer Add liquid and shut off. Shake on a microtiter plate shaker for 30 minutes at room temperature. Incubate with shaking.   16) Remove the 4 ° C cooling medium from the anti-insulin receptor antibody coated plate, Add 50 μl of kinase buffer to each well.   17) Wash UB40 coated plate 3 times with TBST. Excess liquid and foam Tap on a paper towel to remove.   18) Kinase buffer (EY 80 μl / well containing the Tide peptide and ATP) Transfer to the corresponding wells of the overlay plate. Maitaro titer play for 30 minutes at room temperature Incubate with shaking on a shaker. Anti-insulin receptor antibody Discard the coated plate.   19) Immediately after the above steps, mix well the ABC kit reagent in 15 ml TBST. Combine. Vortex and incubate on the bench top for 30 minutes.   20) Wash UB40 coated plate 3 times with TBST. Excess liquid and foam Tap on a paper towel to remove.   21) 100 μl / well of pre-mixed ABC reagents in UB40 plate Add to While shaking on a microtiter plate shaker for 30 minutes at room temperature Incubate.   22) Wash UB40 coated plate 3 times with TBST. Excess liquid and foam Tap on a paper towel to remove.   23) Remove the liquid from the plate and wash 3 times with TBST.   24) 100 μl / well of ABST / HTwoOTwoAdd solution. Micro titer -Incubate for 5 minutes with shaking on a plate shaker. ELISA pre Place the plate on an ELISA plate reader and determine the absorbance at 410 nm ( Control 630 nm). The result is calculated as IC50.Conclusion   Compounds, Methods and Pharmaceutical Compositions of the Present Invention Regulates the activity of cytoplasmic tyrosine enzymes, especially protein tyrosine phosphatases; And therefore protein tyrosine enzymes involved in cell signaling It is understood that it is expected to be effective as a therapeutic drug for related disorders There will be.   While certain embodiments and examples have been used to illustrate the invention, Changes to the described aspects and embodiments do not depart from the scope and spirit of the present invention. It will be apparent to those skilled in the art that this can be done well.   Other embodiments are within the following claims.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/424 Ａ６１Ｋ 31/424 31/427 31/427 31/428 31/428 31/433 31/433 31/4436 31/4436 31/4439 31/4439 31/497 31/497 31/501 31/501 31/506 31/506 31/519 31/519 31/52 31/52 31/522 31/522 31/53 31/53 31/5377 31/5377 31/54 31/54 31/55 31/55 Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 3/10 9/00 9/00 19/02 19/02 29/00 １０１ 29/00 １０１ 35/00 35/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 277/58 Ｃ０７Ｄ 277/58 277/70 277/70 403/06 403/06 409/14 409/14 413/14 413/14 417/12 417/12 417/14 417/14 471/04 １０７ 471/04 １０７Ｚ 473/08 473/08 473/24 473/24 475/02 475/02 487/04 １４０ 487/04 １４０ １４７ １４７ 498/04 １０１ 498/04 １０１ //(Ｃ０７Ｄ 498/04 (Ｃ０７Ｄ 498/04 261:06 261:06 337:06） 337:06） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，Ｖ Ｎ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ラムファル，ジョン・ワイ アメリカ合衆国カリフォルニア州94545, ヘイワード，インダストリアル・ブールバ ード 25800，ナンバー・キュー2224──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme court ゛ (Reference) A61K 31/424 A61K 31/424 31/427 31/427 31/428 31/428 31/433 31/433 31 / 4436 31/4436 31/4439 31/4439 31/497 31/497 31/501 31/501 31/506 31/506 31/519 31/519 31/52 31/52 31/522 31/522 31/53 31/53 31/5377 31/5377 31/54 31/54 31/55 31/55 A61P 3/10 A61P 3/10 9/00 9/00 19/02 19/02 29/00 101 29/00 101 35 / 00 35/00 43/00 111 43/00 111 C07D 277/58 C07D 277/58 277/70 277/70 403/06 403/06 409/14 409/14 413/14 413/14 417/12 417 / 12 417/14 417/14 471/04 107 471/04 107Z 473/08 473/08 473/24 473/24 475/02 475/02 487/04 140 487/04 140 147 147 498/04 101 498/04 101 // (C07D 498/04 (C07D 498/04 261: 06 261: 06 337: 06) 337 : 06) (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), OA ( BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, GM, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW) , EA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, GH, GM, GW, HU, ID, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS , LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, UZ, VN, YU, ZW (72) Inventor Ramfar, John W. Hayward, Industrial 94945, California, United States 94545 • Boulevard 25800, Number Queue 2224

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １． 下記化学構造を有するヘテロアリール化合物並びに該化合物の生理学的に 許容し得る塩及びプロドラッグ。 （ここで、 ｒ及びｓは独立に０又は１であり； ｒ又はｓが１である場合、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、及びＭは 炭素及び窒素からなる群より独立に選択され、そのようにして形成される６員窒 素ヘテロアリール環は化学技術分野において公知のものであり；Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ 、Ｆ、Ｇ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、又はＭが窒素である場合、それぞれＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4 、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9又はＲ10が存在しないことはさらに理解され； Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ又はＦのうちの少なくとも１つ及びＧ、Ｊ、Ｋ、Ｌ及びＭ のうちの少なくとも１つは窒素でなければならず； ｒ又はｓが０である場合、Ａ、Ｂ、Ｄ、及びＦ又はＧ、Ｋ、Ｌ及びＭは、そ れぞれ、炭素、窒素、酸素及びイオウからなる群より独立に選択され、Ａ、Ｂ、 Ｄ、及びＦ並びにＧ、Ｋ、Ｌ及びＭの並置は化学技術分野において公知の５員ヘ テロアリール環に限定され、かつＡ、Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ又はＭが酸素もし くはイオウである場合、又はＡ、Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ又はＭが窒素であって その窒素がヘテロアリール環の二重結合に関与する場合、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、 Ｒ6、Ｒ8、Ｒ9及びＲ10が存在せず、かつ結合が存在しないことは理解され； Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は、水素、アルキル 、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘ テロアリール、ヘテロ脂環、アルコキシ、アリールオキシ、チオアルコキシ、チ オアリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリシクロキシ、スルフィニ ル、スルホニル、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、トリハロメタンカ ルボニル、トリハロメタンスルホニル、カルボニル、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カル ボキシ、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド、Ｎ−アミド、ヒドラジノ、シアノ、ニト ロ、ハロ、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、ホスホニル 、Ｎ−チオカルバミル、グアニル、グアニジノ、ウレイド、アミノ、トリハロメ タンスルホンアミド、及び−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立に選択され； Ｒ11及びＲ12は、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニ ル、アリール、カルボニル、Ｃ−カルボキシ、スルホニル、トリハロメタンスル ホニル、トリハロメタンカルボニル及び、組み合わせて、５もしくは６員ヘテロ 脂環式環からなる群より独立に選択され； ｒ又はｓが０であり、かつＡ、Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、ＬもしくはＭがそれぞれ ヘテロアリール環の二重結合に関与していない窒素原子である場合、Ｒ1、Ｒ2、 Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は、水素、アルキル、シクロアルキル、アル ケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、ア ルコキシ、トリハロメタンカルボニル、スルホニル、トリハロメタンスルホニル 、シアノ、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド及び グアニルからなる群より選択され； Ｑは、酸素、イオウ、スルフィニル、スルホニル及び−ＮＲ13からなる群より 選択され； Ｒ13は、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリ ール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、シアノ、トリハ ロメタンカルボニル、スルホニル、トリハロメタンスルホニル、Ｃ−カルボキシ 、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−アミド、Ｃ−チオアミド及びグアニルからなる群より選 択され； ２つの隣接するＲ基が組み合わされて、それらのＲ基を最初から有する環に縮 合するさらなるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール又はヘテロ脂環式環 を形成してもよい。） ２． Ｑがイオウ及び−ＮＲ13からなる群より選択される請求項１の化合物、塩 又はプロドラッグ。 ３． Ｒ13が水素及びアルキルからなる群より選択される請求項２の化合物、塩 又はプロドラッグ。 ４． ｒが０であり； ｓが０であり；及び Ｑがイオウである、 請求項１の化合物、塩又はプロドラッグ。 ５． ｒが０であり； ｓが０であり； Ｑ及びＳがイオウであり； Ｆが窒素であり；及び Ｒ2がニトロである、 請求項１の化合物、塩又はプロドラッグ。 ６． 請求項１、２、３、４又は５の化合物、塩又はプロドラッグの医薬組成物 。 ７． 細胞の信号伝達に関連するタンパク質チロシン酵素の活性を調節するため の方法であって、請求項１、２、３、４又は５のいずれかの化合物の１種類以上 を該タンパク質チロシン酵素に対して投与することを含む方法。 ８． タンパク質チロシン酵素がタンパク質チロシンホスファターゼを含む請求 項７の方法。 ９． タンパク質チロシン酵素がタンパク質チロシンキナーゼを含む請求項７の 方法。 １０． 異常なタンパク質チロシン酵素関連細胞信号伝達に関連する障害を治療 するための方法であって、該障害の患者に、治療上有効な量の請求項６の化合物 、塩又はプロドラッグの１種類以上を添加することを含む方法。 １１． タンパク質チロシン酵素がタンパク質チロシンホスファターゼである請 求項１０の方法。 １２． タンパク質チロシン酵素がタンパク質チロシンキナーゼである請求項１ ０の方法。 １３． 患者が哺乳動物である請求項１０の方法。 １４． 哺乳動物がヒトである請求項１３の方法。 １５． 異常なタンパク質チロシン酵素関連細胞信号伝達に関連する障害が、神 経膠腫、黒色腫、カポジ肉腫、血管腫、卵巣癌、乳癌、肺癌、膵臓癌、前立腺癌 、結腸癌及び上皮癌からなる群より選択される請求項１０の方法。 １６． 異常なタンパク質チロシン酵素関連細胞信号伝達に関連する障害が糖尿 病を含む請求項１０の方法。 １７． ｒ、ｓ、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3 、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10が表１に示される分子構造を形成 するように選択される請求項１の化合物。[Claims] 1. A heteroaryl compound having the following chemical structure and a physiologically Acceptable salts and prodrugs. (here,   r and s are independently 0 or 1;     When r or s is 1, A, B, D, E, F, G, J, K, L, and M are A 6-membered nitrogen so formed independently selected from the group consisting of carbon and nitrogen; Primary heteroaryl rings are known in the chemical arts; A, B, D, E , F, G, J, K, L or M is nitrogen, each R1, RTwo, RThree, RFour , RFive, R6, R7, R8, R9Or RTenIt is further understood that is not present;       At least one of A, B, D, E or F and G, J, K, L and M At least one of which must be nitrogen;     When r or s is 0, A, B, D, and F or G, K, L, and M are Each independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur, A, B, The juxtaposition of D, and F and G, K, L, and M is to a five member known in the chemical arts. Limited to teloaryl rings and A, B, D, F, G, K, L or M is oxygen Or A, B, D, F, G, K, L or M is nitrogen, When the nitrogen is involved in a double bond of a heteroaryl ring, R1, RTwo, RThree, RFive, R6, R8, R9And RTenIt is understood that is not present and there is no bond;   R1, RTwo, RThree, RFour, RFive, R6, R7, R8, R9And RTenIs hydrogen, alkyl , Trihaloalkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, f Teloaryl, heteroalicyclic, alkoxy, aryloxy, thioalkoxy, thio Oaryloxy, heteroaryloxy, heteroalicycloxy, sulfini , Sulfonyl, S-sulfonamide, N-sulfonamide, trihalomethaneca Rubonyl, trihalomethanesulfonyl, carbonyl, C-carboxy, O-cal Boxoxy, C-amide, C-thioamide, N-amide, hydrazino, cyano, nitro B, halo, O-carbamyl, N-carbamyl, O-thiocarbamyl, phosphonyl , N-thiocarbamyl, guanyl, guanidino, ureido, amino, trihalome Tansulfonamide, and -NR11R12Independently selected from the group consisting of:     R11And R12Is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl , Aryl, carbonyl, C-carboxy, sulfonyl, trihalomethanesulfur Honyl, trihalomethanecarbonyl and, in combination, 5- or 6-membered hetero Independently selected from the group consisting of alicyclic rings;   r or s is 0, and A, B, D, F, G, K, L or M are each When the nitrogen atom is not involved in the double bond of the heteroaryl ring, R1, RTwo, RThree, RFive, R6, R8, R9And RTenIs hydrogen, alkyl, cycloalkyl, alk Kenyl, alkynyl, aryl, heteroaryl, heteroalicyclic, hydroxy, a Lucoxy, trihalomethanecarbonyl, sulfonyl, trihalomethanesulfonyl , Cyano, C-carboxy, O-carboxy, C-amide, C-thioamide and Selected from the group consisting of guanyl;   Q is oxygen, sulfur, sulfinyl, sulfonyl and -NR13From the group consisting of Selected;     R13Is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, ant , Heteroaryl, heteroalicyclic, hydroxy, alkoxy, cyano, trihal Romethanecarbonyl, sulfonyl, trihalomethanesulfonyl, C-carboxy , O-carboxy, C-amide, C-thioamide and guanyl Selected;   Two adjacent R groups are combined to form a ring having those R groups from the beginning. Additional aryl, cycloalkyl, heteroaryl or heteroalicyclic rings May be formed. ) 2. Q is sulfur and -NR132. The compound or salt according to claim 1, which is selected from the group consisting of: Or a prodrug. 3. R133. The compound according to claim 2, wherein is selected from the group consisting of hydrogen and alkyl. Or a prodrug. 4. r is 0;       s is 0; and       Q is sulfur, A compound, salt or prodrug of claim 1. 5. r is 0;       s is 0;       Q and S are sulfur;       F is nitrogen; and       RTwoIs nitro, A compound, salt or prodrug of claim 1. 6. A pharmaceutical composition of a compound, salt or prodrug of claim 1, 2, 3, 4 or 5. . 7. To regulate the activity of protein tyrosine enzymes involved in cell signaling And at least one compound of any of claims 1, 2, 3, 4 or 5 Administering to the protein tyrosine enzyme. 8. Claims wherein the protein tyrosine enzyme comprises protein tyrosine phosphatase Item 7. The method of Item 7. 9. 8. The method of claim 7, wherein the protein tyrosine enzyme comprises a protein tyrosine kinase. Method. 10. Treat disorders associated with abnormal protein tyrosine enzyme-related cell signaling A method of treating a subject with the disorder in a therapeutically effective amount. , A salt or a prodrug. 11. The protein tyrosine enzyme is a protein tyrosine phosphatase; The method of claim 10. 12. The protein tyrosine enzyme is a protein tyrosine kinase. 0 method. 13. 11. The method of claim 10, wherein the patient is a mammal. 14． 14. The method of claim 13, wherein the mammal is a human. 15. Disorders related to abnormal protein tyrosine enzyme-related cell signaling are Gliomas, melanoma, Kaposi's sarcoma, hemangiomas, ovarian cancer, breast cancer, lung cancer, pancreatic cancer, prostate cancer 11. The method of claim 10, wherein the method is selected from the group consisting of: colon cancer and epithelial cancer. 16. Diabetes associated with aberrant protein tyrosine enzyme-related cell signaling 11. The method of claim 10, comprising a disease. 17． r, s, A, B, D, E, F, G, J, K, L, M, Q, R1, RTwo, RThree , RFour, RFive, R6, R7, R8, R9, And RTenForms the molecular structure shown in Table 1. 2. The compound of claim 1, which is selected to:
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