JP2002348234A

JP2002348234A - 薬物封入無機物微粒子、その製造法及び薬物封入無機物微粒子製剤

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Publication number: JP2002348234A
Application number: JP2001158429A
Authority: JP
Inventors: Yutaka Mizushima; 裕水島; Yukie Takagi; 幸江高木; Megumi Higaki; 恵檜垣; Toshisato Igarashi; 理慧五十嵐; Yoko Yamaguchi; 葉子山口; Michio Kimura; 道夫木村
Original assignee: PUROTEKKU KK; LTT Institute Co Ltd
Current assignee: PUROTEKKU KK; LTT Institute Co Ltd
Priority date: 2001-05-28
Filing date: 2001-05-28
Publication date: 2002-12-04
Also published as: US20040185113A1; EP1398025A1; WO2002096396A1

Abstract

(57)【要約】【課題】製剤作製方法が簡単で、刺激性がなく、多く
の薬効を有するタンパク質、薬効を有する低分子化合
物、遺伝子に応用出来、かつ当該薬効を有するタンパク
質、薬効を有する低分子化合物、遺伝子を安定させるこ
とが出来、そして優れた徐放効果、ターゲット効果の得
られる薬物封入無機物微粒子、その製造法及び薬物封入
無機物微粒子製剤を提供すること。【解決手段】カルシウム含有水難溶性無機物微粒子
と、当該微粒子の内部に封入された生物学的活性物質
と、からなる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、薬効を有するタン
パク質、薬効を有する低分子化合物、遺伝子を封入せし
めたカルシウム含有水難溶性無機物微粒子、その製造法
及びそのカルシウム含有水難溶性無機物微粒子を用いた
薬物封入無機物微粒子製剤、詳しくは薬効を有するタン
パク質、抗原、遺伝子、薬効を有する低分子化合物を封
入せしめたカルシウム含有水難溶性無機物微粒子を用い
た徐放製剤、ターゲット徐放製剤、及びその製造法に関
する。さらに同微粒子を再生医学に用いる乳酸重合体な
どからなるマトリックスに封入した製剤に関する。

【０００２】従来の技術としてカルシウム含有無機物質
を薬物の担体として用いた報告はあり、ハイドロオキシ
アパタイトの微細結晶の表面に抗癌剤などを担持させ、
動物に注射する方法は考案されている。このほか、多孔
性のアパタイトを用いた徐放製剤も考えられている。し
かし、リン酸カルシウム以外のカルシウム含有水難溶性
無機物微粒子を用いた報告や特許は炭酸カルシウムを用
いた点鼻薬としての特許(特開平07-165613,特開平08-02
7031)があるのみである。

【０００３】又微粒子の表面に薬物をつけるということ
は行われていたがカルシウム含有水難溶性無機物微粒子
の内部に薬物を封入するということは行われていなかっ
た。

【０００４】即ち、カルシウム含有水難溶性無機物微粒
子を形成する際に生物学的活性物質を共存させて、無機
物微粒子が形成されると同時に生物学的活性物質をその
無機物微粒子中に封入せしめたという技術は行われてい
なかった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】近年、バイオ技術の進
歩によりタンパク医薬品は多くなった。しかしタンパク
医薬品は注射によらなければ投与できず、また半減期の
短いものが多い。従って、簡単な方法により半減期を長
くする工夫が必要となってくる。

【０００６】またマクロフアージ、網内系組織、好中
球、血管内皮細胞、ガン細胞、炎症部位、感染部位、ガ
ン組織、動脈硬化壁への主として低分子薬物、活性蛋
白、ワクチン、遺伝子のターゲットは今後ますます重要
な課題となってくる。

【０００７】そこで、本発明は、製剤作製方法が簡単
で、刺激性がなく、多くの薬効を有するタンパク質、薬
効を有する低分子化合物、遺伝子に応用出来、かつ当該
薬効を有するタンパク質、薬効を有する低分子化合物、
遺伝子を安定させることが出来、そして優れた徐放効
果、ターゲット効果の得られる薬物封入無機物微粒子、
その製造法及び薬物封入無機物微粒子製剤を提供するこ
とを目的とするものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】前記目的を達成するた
め、本発明の薬物封入無機物微粒子はカルシウム含有水
難溶性無機物微粒子と、当該微粒子の内部に封入された
生物学的活性物質と、からなる。

【０００９】カルシウム含有水難溶性無機物微粒子の内
部に生物学的活性物質を封入した微粒子は製造が簡単
で、刺激性がなく、又生物学的活性物質としては薬効を
有するタンパク質、薬効を有する低分子化合物又は遺伝
子が用いられるが、これらの薬効を有するタンパク質
等、特に薬効を有するタンパク質を安定させることが出
来る。

【００１０】カルシウム含有水難溶性無機物微粒子を形
成する際に、生物学的活性物質を共存させてから無機物
微粒子を形成させ、当該微粒子の内部に生物学的活性物
質が結合していることを本発明においては封入といい、
無機物微粒子を形成させた後に薬物を混和することによ
り無機物微粒子薬物を担持させる方法よりも薬物の封入
率が高くかつ薬物の溶出が緩徐であるという効果を生じ
るものである。

【００１１】薬効を有するタンパク質としては、エリス
ロポエチン(EPO)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、
顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)、ト
ロンボポエチン、インターフェロンα、インターフェロ
ンβ、インターフェロンγ、ウロキナーゼ、組織プラス
ミノーゲンアクチベーター(t-PA)、インターロイキン-1
1(IL-11)、エンブレル、繊維芽細胞増殖因子(FGF)、上
皮増殖因子(EGF)、肝細胞増殖因子(HGF)、脳由来神経栄
養因子(BDNF)、神経成長因子(NGF)、レプチン、ニュー
トロフィン−３（NT-3）、スーパーオキシドジスムター
ゼ(SOD)、インスリン、ヒト成長ホルモン、抗体および
抗原などが挙げられる。特にEPO、G-CSF、インターフェ
ロンα、FGF、EGF、HGF、BDNF、NGF、レプチン、NT-3な
どが望ましい。

【００１２】又、生物学的活性物質が前記カルシウム含
有水難溶性無機物に対し0.0001〜10重量%含有されてい
ることが望ましい。さらに生物学的活性物質がカルシウ
ムに結合性のある薬物が良く、一般的にはカルシウムが
陽性のチャージをもっているので陰性のチャージをもっ
たものが好ましい。

【００１３】薬効を有する低分子化合物としては、非抗
炎症性ステロイドホルモン、ヒドロコルチゾン類などの
抗炎症薬、抗微生物薬、抗ガン剤、プロスタグランジン
などの血管作動薬、抗動脈硬化薬、免疫抑制剤、カルシ
トニン、黄体形成ホルモン放出ホルモン(LHRH)誘導体、
他の脳下垂体ペプチドホルモン、バンコマイシン、ティ
コプラニン、副甲状腺ホルモン(PTH)などが挙げられ
る。特に、抗菌剤、抗カビ剤などの抗微生物薬、抗炎症
剤、抗ガン剤、血管作動薬などが望ましい。又カルシウ
ム結合性の低い低分子薬物の場合は残基にリン酸などカ
ルシウム結合性の高い結合物をエステル結合などで共有
結合させた低分子薬物を用いると良い。

【００１４】カルシウム含有水難溶性無機物としては、
炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（アパタイト、ハイ
ドロオキシアパタイトなど）、シュウ酸カルシウム、尿
酸カルシウムなどが望ましい。

【００１５】本発明者らは、カルシウム含有無機物が水
難溶性の微粒子であることに着目し、その微粒子内部に
薬物を封入し、注射することにより病巣部へのターゲッ
ト効果と体内で少しずつ薬物が放出される徐放効果を狙
ったものである。即ち、炎症部位、感染部位、ガン組
織、動脈硬化壁などでは血管壁に数10から数100nmのギ
ャップがあり、本発明の微粒子のうち10nm〜1,000nm好
ましくは10nm〜500nmの大きさの微粒子はそのギャップ
を通り病巣に蓄積されることになるので、ターゲット効
果を生じさせ、かつマクロファージなどの炎症細胞やガ
ン細胞に貪食されるという二重のターゲット効果、また
徐放効果を生じさせることが出来るのである。

【００１６】又、当該微粒子の大きさが直径100nm〜200
μmの場合は徐放製剤として皮下注射又は筋肉内注射に
おいて有用である。

【００１７】さらに、近年進歩の著しい再生医療に用い
る成長因子の徐放にも大きな威力を発揮するものであ
る。又再生医療に用いる場合は、微粒子がやや大きめの
粒子をそのまま使う他、乳酸重合体（PLA）などからな
るマトリックスに封入することが望ましい。

【００１８】最終製剤の作製は、得られた薬物封入無機
物微粒子に製剤学的に受容可能な添加物、即ちヒト血清
アルブミン（HSA）などのタンパク質、酸性ムコ多糖
体、乳酸グリコール酸重合体（PLGA）、乳酸重合体、界
面活性剤、マンニトールなどの分散剤、安定化剤、防腐
剤を入れ、乾燥または凍結乾燥により最終製剤を作る。
これを等張になるように水または緩衝溶液などで懸濁し
ヒトに投与する。また疼痛などを防ぐ意味、また分散を
さらに優れたものにするためヒアルロン酸などに懸濁し
て用いることも可能である。あるいは分散剤などを入れ
た懸濁液をそのまま最終製剤にすることも可能である。

【００１９】又当該最終製剤は皮下注射、筋肉内注射、
血管内注射に適した形態のものである。

【００２０】本発明の薬物封入無機物微粒子の製造方法
は、（１）塩化カルシウム、臭化カルシウム、酢酸カル
シウム等のカルシウム塩の水溶液を準備し、（２）この
溶液に、生物学的活性物質水溶液を添加混合し、次いで
（３）炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の炭酸塩、リン
酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸カリウム
等のリン酸塩、シュウ酸ナトリウム、シュウ酸カリウム
等のシュウ酸塩、または尿酸ナトリウム、尿酸カリウム
等の尿酸塩の水溶液を添加混合することにより生物学的
活性物質をカルシウム含有水難溶性無機物微粒子に封入
せしめることである。

【００２１】又、（１）炭酸塩、リン酸塩、シュウ酸塩
または尿酸塩の水溶液を準備し、（２）この溶液に、生
物学的活性物質水溶液を添加混合し、次いで（３）塩化
カルシウム、臭化カルシウム、酢酸カルシウム等のカル
シウム塩の水溶液を添加混合することにより生物学的活
性物質をカルシウム含有水難溶性無機物微粒子に封入せ
しめることである。

【００２２】さらに、生物学的活性物質を封入せしめた
カルシウム含有水難溶性無機物微粒子が生成中に凝集す
ることを防止するため、反応液にタンパク質、酸性ムコ
多糖体、界面活性剤、マンニトールを添加すること、
又、生物学的活性物質を封入せしめたカルシウム含有水
難溶性無機物微粒子が生体内で凝集することを防止する
ため、また生体内での貪食作用を回避するため、薬物封
入無機物微粒子にタンパク質、酸性ムコ多糖体、乳酸グ
リコール酸重合体、乳酸重合体を添加することが望まし
い。

【００２３】なお、製造法において、二つまたはそれ以
上の無機物を混合する場合は、pH7前後で攪拌しながら
混和することが好ましく、無機物濃度、薬物濃度、攪拌
スピード、作用時間、温度により粒子サイズを調整させ
ることができる。スターラーによる通常の攪拌では1μm
〜100μmの微粒子しかできないが、ボルテックス、ポリ
トロン、超音波などによりさらに攪拌力を増す事によ
り、10nm〜100μmの微粒子を作ることも出来る。又、水
溶液はできるだけ中性とし、イオン強度をできるだけ低
くし、カルシウムと結合しない緩衝液を使用することが
望ましい。

【００２４】

【実施例】以下に本発明の実施例、試験例について記述
する。（実施例1）5M CaCl₂（和光）650μlと1mg/ml EPO（中
外製薬）125μlを攪拌を行いながら混和した。そこに1M
Na₂CO₃（和光）2.5mlを添加し攪拌を10分行ってCaCO₃
粒子を生成させ、CaCO₃粒子内部にEPOを封入せしめた。
これにH₂0 5mlを加えて、2,000rpm，5minの遠心をか
け、上清を除去した。得られた沈渣にH₂0 6.25ml加え
て、1.5ml試験管に1mlずつ4本に分注した。4本を2,000r
pm，5minの遠心にかけ、上清を取り除いた。うち2本はC
aCO₃粒子に封入されているEPOを定量するためELISA測定
に供した。残りの2本を1M Na₂CO_{3 0.}9ml加えて、攪拌を
行い、静置し、表面に結合しているEPOを遊離させた。1
0分間静置した後に遠心をかけ、上清を除去した。再
度、同様の作業を行い、Na₂CO₃処理で遊離したEPOを遠
心にて除去した。残った沈渣をELISA測定用とした。CaC
O₃粒子中に封入されたEPOは、CaCO₃粒子を塩酸で溶解
し、EPOを遊離させELISAを用いて測定した。

【００２５】（試験例１）5M CaCl₂650μlと1M Na₂CO
₃2.5mlを先に混和してCaCO₃粒子を作製し、H₂0にて洗
浄を行った後に1mg/ml EPO 125μ1加えサンプルを調製
した。これにH₂0 5mlを加えて、2,000rpm，5minの遠心
をかけ、上清を除去した。以下実施例１と全く同じ操作
を行いCaCO₃粒子表面に存在するEPOを測定した。結果は
図1に示したように、試験例１の粒子表面にEPOを結合さ
せたサンプルとは異なり、本発明方法に基づく実施例１
の封入法による微粒子サンプルではNa₂CO₃処理でEPOは
ほとんど遊離せず、粒子内にほぼ全て封入されているこ
とが明らかになった。

【００２６】（実施例2）5M CaCl₂650μlと500μg/ml
G−CSF（中外製薬）250μlを攪拌を行いながら混和し
た。そこに1M Na₂CO₃2.5mlを添加し攪拌を10分行ってC
aCO₃粒子を調製した。これにH₂0 5mlを加えて、2,000rp
m，5minの遠心をかけ、上清を除去した。沈渣にH₂O 6.2
5ml加えて、1．5ml試験管に1mlずつ4本に分注した。4本
を2,000rpm，5minの遠心にかけ、上清を取り除いた。う
ち2本はCaCO₃粒子に封入されているG−CSFを定量するた
めELISA測定に供した。残りの2本を1M Na₂CO₃0.9ml加
えて、攪拌を行い、静置し、表面に結合しているG−CSF
を遊離させる作業を行った。10分間静置した後に遠心を
かけ、上清を除去した。再度、同様の作業を行い、Na₂C
O₃処理で遊離したG−CSFを遠心にて除去した。残った沈
渣をELISA測定用とした。CaCO₃粒子中に封入されたG−C
SFはCaCO₃粒子を塩酸にて溶解し、遊離したG−CSFをG−
CSF ELISA（IBL社）を用いて測定した。

【００２７】（試験例２）5M CaCl₂650μlと1M Na₂CO
₃2.5mlを先に混和してCaCO₃粒子を作製し、H₂Oにて洗
浄を行った後に500μg/ml G-CSF 250μl加えたサンプル
を調製した。これにH₂0 5mlを加えて、2,000rpm，5min
の遠心をかけ、上清中のG-CSFを除去した。以下実施例
２と全く同じ操作を行いCaCO₃粒子に存在するG-CSFを測
定した。結果は図2に示したように、試験例２の粒子表
面にG-CSFを結合させたサンプルとは異なり、実施例２
の封入法によるサンプルではNa₂CO₃処理でG−CSFは多少
は遊離するもののかなりの量は粒子内に封入されている
ことが証明された。

【００２８】（実施例3）5M CaCl₂650μlと5％のリン酸
ヒドロコルチゾン[HyC（Phos．）]を含有する製剤（水
溶性ハイドロコートン、萬有製薬）375μlをボルテック
スにて攪拌を行いながら混和した。そこに1M Na₂CO₃2.5
mlを添加し攪拌を10分行ってCaCO₃粒子を調製した。こ
れにH₂O 5mlを加えて、2,000rpm，5minの遠心をかけ、C
aCO₃粒子に封入されていないHyC（Phos.）を除去した。
この一部をELISA測定用とした。また、沈渣にH₂O 6.25m
l加えて、その1mlを1.5ml試験管に移した。これに塩酸
を加えてCaCO₃粒子を完全に溶かし、ELISA測定用とし
た。ELISA測定前に、マウスの肝臓ホモジネート液を1：
1の割合で混和し、37℃で2時間インキュベートしてHyC
（Phos．）の加水分解を行いフリーのHyCとし、測定に
供した。肝臓ホモジネート液は、マウスより肝臓を採取
し一個体分に対してH₂O 5mlを加えて、ポリトロンでホ
モジネートした。15,000rpm，5minの遠心をかけ、その
上清を回収し、これを肝臓ホモジネート液とした。

【００２９】（試験例３）5M CaCl₂650μlと1M Na₂CO
₃2.5mlを先に混和してCaCO₃粒子を作製し、H₂Oにて洗
浄を行った後にHyC（Phos.）375μl加えサンプルを調製
した。これにH₂O 5mlを加えて2,000rpm，5minの遠心を
かけ、CaCO₃粒子に結合していないHyC（Phos.）を除去
した。以下実施例３と全く同じ操作を行いCaCO₃粒子に
存在するHyCを測定した。結果は図3に示したごとく、懸
濁液中の総HyC量のうち粒子に結合ないし封入されてい
るHyC量は、実施例３のサンプルが70％以上、試験例３
のサンプルが20％程度であり、低分子薬剤もCaCO₃粒子
中に封入されることが証明された。

【００３０】（実施例4）5M CaCl₂650μlと500μg/ml G
−CSF 250μlを攪拌を行いながら混和した。そこに1M N
a₂CO₃2.5mlを添加し攪拌を10分行ってCaCO₃粒子を調製
した。 H₂O 5mlを加えて2,000rpm，5minの遠心をかけ、
上清を除去した。沈渣にH₂O 12.5ml加えて、1mlを2.0ml
試験管に移した。これに2,000rpm，5minの遠心をかけ、
上清をELISA測定用とした。沈渣に1％BSA/Tris−HCl（p
H7．2）を1ml加えて室温で振とうした。24時間ごとに2,
000rpm，5min.の遠心をかけ上清を回収、沈渣に再び1％
BSA/Tris−HCl（pH7．2）を1ml加えてこの作業を7日間
行った。最後の沈渣は塩酸にて溶解させてELISA測定用
とした。G−CSFの測定にはIBL社のELISA Kitを使用し、
G−CSFが封入された CaCO₃製剤から放出されるG−CSF量
を総和（累積）で示した。また、対照として、同時に10
0μg/ml G−CSF 30μ1と1％BSA/Tris−HCl（pH7．2）5m
lを試験管内で混和し、室温で振とうした。24時間ごと
に一部を採取し、G−CSFの量をELISAにて測定し、室温
でのG−CSFの安定性を検討した。結果を図4に示した。G
−CSFのCaCO₃粒子からの放出試験で、７日以上に亘りG-
CSFが徐々に放出されることが明らかとなった。7日後の
沈査のG−CSF量を合計すると0．7μgとなり使用したG−
CSF量(10μg)と比べかなり低いがこれは緩衝溶液中に溶
出したG−CSFの不安定性に基づくものと思われる。緩衝
溶液中のG−CSFの不安定性はフリーのG−CSF溶液を室温
で放置した時の失活曲線（白丸、破線）からも明らかで
ある。CaCO₃粒子中のG−CSFの方が溶液中のG−CSFより
もはるかに安定していることが明らかとなった。

【００３１】（実施例5）5M CaCl₂650μlと1mg/mlEPO 1
25μ1を攪拌を行いながら混和した。そこに1M Na₂CO
₃2.5mlを添加し攪拌を10分行ってCaCO₃粒子を調製し
た。H₂O 5mlを加えて、2,000rpm，5minの遠心をかけ、
上清中のEPOを除去した。沈渣にH₂O 3ml加えて、1mlを
1.5ml試験管に移した。2,000rpm，5minの遠心をかけ、
上清を完全に取り除いた。2％コンドロイチン硫酸Aナト
リウム（CS-A，和光）0.3mlと5%Mannitol（和光）2.1ml
を加えて攪拌を行いサンプルを調整した。コントロール
として1mg/ml EPO 30μlと5％Mannitol 1.77mlを混和さ
せたサンプルも調製した。これらを5ケ月齢オスのC3H/H
eマウスの筋肉に200μl投与し、投与後4時間、1，2，
3，4日ごとに眼窩採血を行い、EPOの血中濃度をELISAに
て測定を行った。結果は図5に示したが、凝集や組織結
合を防ぐ意味でCS−Aを作用させたEPO-CaCO₃製剤を筋注
した場合、in vivoでは徐放効果が得られた。

【００３２】（実施例6）5M CaCl₂650μlと5%のHyC（Ph
os．）を含有する製剤375μlを攪拌を行いながら混和し
た。そこに1M Na₂CO₃2.5mlを加え攪拌を行ってCaCO₃粒
子を調製した。作製されたCaCO₃粒子どうしで結合する
のを防ぐために、2%CS-Aを3.525ml加え、10分攪拌を行
った。H₂O 5mlを加えて、2,000rpm，5minの遠心をか
け、CaCO₃粒子に結合していないHyC（Phos．）を除去し
た。沈渣に1%CS-A/5% Mannitolを1.397ml加えてラット
投与用とした。またコントロールとして、HyC（Pho
s．）300μlと0.1%Tween80/0.5%BSA/5%Mannitol 818μl
を混和して調整し500μlを10周齢オスのWistarラットに
静脈内投与した。投与後10分および１時間後にマウスか
ら血液を、48時間後に脾臓を採取した。なお血液はリン
酸エステルのまま残っているHyC（Phos．）をHyCに分解
するためにマウス肝臓ホモジネート液を37℃，2時間作
用させた。脾臓は十分ホモジネートし、細胞を破砕する
作業を行ったのち、マウス肝臓ホモジネート液を作用さ
せ、その後DMSOで抽出してELISA測定を行った。未投与
のラットの値を引きHyC量とした。ELISAはCortisolEIA
（IBL社）を使用した。結果は図６に示したように、CaC
O₃粒子製剤の場合は、炎症巣やガン組織と同様血管壁に
ギャップのある脾臓にHyCが多くターゲットされること
がわかった。

【００３３】（実施例7）5M CaCl₂650μlと5%のHyC（Ph
os．）を含有する製剤375μlを攪拌を行いながら混和し
た。そこに1M Na₂CO₃2.5mlを加え攪拌を行ってCaCO₃粒
子を調製した。作製されたCaCO₃粒子どうしで結合する
のを防ぐために、2%CS-Aを3.525ml加え、10分攪拌を行
った。H₂O 5mlを加えて、2,000rpm，5minの遠心をか
け、CaCO₃粒子に結合していないHyC（Phos．）を除去し
た。沈渣に1%CS-A/5%Mannitolを12.5ml加えてサンプル
を調整した。マウスの腹腔内に10%プロテオースペプト
ン2.0ml注射し、3日後に浸出腹腔マクロファージを採取
した。5X10⁵cells/mlに調整し、この細胞懸濁液0.1mlを
カバーグラスを入れた24wellsプレートに入れ培養し、
マクロファージを付着させた。付着しない細胞を除去し
培養液を入れ換えた後に、HyC（Phos．）封入CaCO₃0.3
75.mlを加えて、37℃でインキュベートした。24時間
後、カバーグラスを取り風乾後にギムザ染色して、CaCO
₃粒子の貪食の様子を顕微鏡で観察した。結果が図7に示
したように、マクロファージ内に明らかにHyC（Pho
s．）封入CaCO₃粒子が貪食している像が認められた。

【００３４】（実施例8）5M CaCl₂2.6mlと500μg/ml G-
CSF1mlを攪拌しながら混和した。そこに1M Na₂CO₃10ml
を添加し攪拌を10分行ってCaCO₃粒子を調製した。H₂O 2
0mlを加えて、2,000rpm，5minの遠心をかけ、上清中のG
-CSFを除去した。これにH₂O 3mlを加え、バイアル管に
移した。これを凍結乾燥にかけ粉末を調整した。G-CSF
封入CaCO₃粒子50mg、PLGA2.61g、ジクロロメタン3mlを
混和した。これを0.1%ポリビニルアルコール/0.7%酢酸
亜鉛溶液に攪拌しながら混和した。3時間攪拌後、1,000
rpmの遠心にかけ沈渣を得た。H₂Oで洗浄後250μmのフィ
ルターを通し、20% Mannitol 0.7μlを加え乾燥凍結し
徐放性製剤を得た。

【図面の簡単な説明】

【図1】実施例１と試験例１の組成物中のEPO量を示す図
である。

【図2】実施例２と試験例２の組成物中のG-CSF量を示す
図である。

【図3】実施例３と試験例３の組成物中のHyC（Phos.）
量を示す図である。

【図4】実施例４の組成物からのG-CSFの放出性を示した
図であり、対照とした緩衝液中のG-CSFの安定性を合わ
せ示す図である。

【図5】実施例５の製剤のマウス筋注後のEPO血中濃度推
移を示す図である。

【図6】実施例６の製剤が、マウス静注後、コントロー
ルに比し、脾臓に有意に移行することを示す図である。

【図7】実施例７の製剤が、マクロファージに取り込ま
れていることを観察した図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 5/06 Ａ６１Ｐ 5/10 5/10 5/18 5/18 9/00 9/00 9/10 １０１ 9/10 １０１ 29/00 29/00 31/00 31/00 35/00 35/00 37/06 37/06 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 14/505 14/505 14/535 14/535 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者檜垣恵東京都世田谷区上北沢１−28−24−305 (72)発明者五十嵐理慧神奈川県川崎市多摩区南生田５−８−２ (72)発明者山口葉子神奈川県足柄上郡松田町松田惣領1759−１アンソレイユ202 (72)発明者木村道夫神奈川県茅ヶ崎市鶴が台９番８−304 Ｆターム(参考） 4C076 AA64 AA65 AA67 BB11 CC04 CC07 CC11 CC27 CC29 CC30 CC31 DD01 DD25 DD26 DD38 DD42 DD60 DD65H EE24 EE30 EE41 FF22 FF31 FF36 GG21 4C084 AA03 AA13 AA16 AA27 BA44 CA62 DA12 DA19 DA22 DA23 DA24 DA44 DB09 DB20 DB22 DB34 DB53 DB54 DB56 DB59 DC05 DC21 DC24 MA38 MA66 NA03 NA12 ZA362 ZA452 ZB082 ZB112 ZB262 ZB322 4H045 AA20 AA30 CA40 DA11 DA13 EA20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】カルシウム含有水難溶性無機物微粒子
と、当該微粒子の内部に封入された生物学的活性物質
と、からなる薬物封入無機物微粒子。
【請求項２】前記生物学的活性物質が薬効を有するタ
ンパク質、薬効を有する低分子化合物または遺伝子であ
ることを特徴とする請求項１記載の薬物封入無機物微粒
子。
【請求項３】前記生物学的活性物質が前記カルシウム
含有水難溶性無機物に対し0.0001〜10重量%含有されて
いることを特徴とする請求項１記載の薬物封入無機物微
粒子。
【請求項４】前記薬効を有するタンパク質が、EPO、G
-CSF、GM-CSF、トロンボポエチン、インターフェロン
α、インターフェロンβ、インターフェロンγ、ウロキ
ナーゼ、ｔ-PA、IL-11、エンブレル、FGF、EGF、HGF、B
DNF、NGF、レプチン、NT-3、SOD、インスリン、ヒト成
長ホルモン、抗体および抗原であることを特徴とする請
求項１記載の薬物封入無機物微粒子。
【請求項５】前記薬効を有する低分子化合物が、非抗
炎症性ステロイドホルモン、ヒドロコルチゾン類などの
抗炎症薬、抗微生物薬、抗ガン剤、プロスタグランジン
などの血管作動薬、抗動脈硬化薬、免疫抑制剤、カルシ
トニン、LHRH誘導体、他の脳下垂体ペプチドホルモン、
バンコマイシン、ティコプラニン、PTHであることを特
徴とする請求項１記載の薬物封入無機物微粒子。
【請求項６】前記カルシウム含有水難溶性無機物が、
炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、シュウ酸カルシウ
ム、尿酸カルシウムであることを特徴とする請求項１記
載の薬物封入無機物微粒子。
【請求項７】前記カルシウム含有水難溶性無機物微粒
子が、直径100nm〜200μmの微粒子であることを特徴と
する請求項１記載の薬物封入無機物微粒子。
【請求項８】前記カルシウム含有水難溶性無機物微粒
子が、直径10nm〜1,000nmの微粒子であることを特徴と
する請求項１記載の薬物封入無機物微粒子。
【請求項９】請求項１記載の薬物封入無機物微粒子
に、製剤学的に受容可能な添加物を加えたことから成る
ことを特徴とする薬物封入無機物微粒子製剤。
【請求項１０】前記製剤学的に受容可能な添加物がタ
ンパク質、酸性ムコ多糖体、乳酸グリコール酸重合体、
乳酸重合体、界面活性剤、マンニトール、防腐剤、安定
化剤であることを特徴とする請求項９記載の薬物封入無
機物微粒子製剤。
【請求項１１】請求項９記載の薬物封入無機物微粒子
製剤が皮下注射、筋肉内注射、血管内注射に適した形態
であることを特徴とする請求項９または請求項１０記載
の薬物封入無機物微粒子製剤。
【請求項１２】（１）カルシウム塩水溶液を準備し、
（２）この溶液に、生物学的活性物質水溶液を添加混合
し、次いで（３）炭酸塩、リン酸塩、シュウ酸塩または
尿酸塩水溶液を添加混合することにより生物学的活性物
質をカルシウム含有水難溶性無機物微粒子に封入せしめ
ることを特徴とする薬物封入無機物微粒子の製造法。
【請求項１３】（１）炭酸塩、リン酸塩、シュウ酸塩
または尿酸塩の水溶液を準備し、（２）この溶液に、生
物学的活性物質水溶液を添加混合し、次いで（３）カル
シウム塩水溶液を添加混合することにより生物学的活性
物質をカルシウム含有水難溶性無機物微粒子に封入せし
めることを特徴とする薬物封入無機物微粒子の製造法。
【請求項１４】前記生物学的活性物質を封入せしめた
カルシウム含有水難溶性無機物微粒子が生成中に凝集す
ることを防止するため、反応液にタンパク質、酸性ムコ
多糖体、界面活性剤、マンニトールを添加することを特
徴とする請求項１２または請求項１３に記載の薬物封入
無機物微粒子の製造法。