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JP2001505194A - Branched peptide linker - Google Patents

Branched peptide linker

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JP2001505194A
JP2001505194A JP52160698A JP52160698A JP2001505194A JP 2001505194 A JP2001505194 A JP 2001505194A JP 52160698 A JP52160698 A JP 52160698A JP 52160698 A JP52160698 A JP 52160698A JP 2001505194 A JP2001505194 A JP 2001505194A
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JP52160698A
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Japanese (ja)
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キング，ダルトン
ファイアストーン，レイモンド・エイ
デゥボーチック，ジーン・エム
Original Assignee
ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、抗体などの標的リガンド、治療活性薬物および分枝ペプチド・リンカーを含有するコンジュゲートに関し、該分枝ペプチド・リンカーを提供する。本発明の分枝ペプチド・リンカーは、酵素切断部位を付与する２種以上のアミノ酸成分を含有する。該分枝リンカーに結合しうる薬物の数は、分枝の各世代に対して２の倍数で変化する。   (57) [Summary] The present invention relates to conjugates comprising a target ligand, such as an antibody, a therapeutically active drug and a branched peptide linker, and provides the branched peptide linker. The branched peptide linker of the invention contains two or more amino acid components that provide an enzyme cleavage site. The number of drugs that can be attached to the branching linker varies by a factor of two for each generation of branching.

Description

【発明の詳細な説明】 分枝ペプチド・リンカー 背景技術 細胞毒性試薬を抗体に連結させる二官能化合物（すなわち、“リンカー”）は 、当該分野で公知である。これらの化合物は特に、腫瘍関連抗原に対して向けら れる、免疫コンジュゲート（conjugate、抱合体）の形成に有用である。かかる 免疫コンジュゲートは、毒性薬物の腫瘍細胞への選択的輸送を可能ならしめる［ たとえば、ハーメンチン・アンド・セイラーの「Behring Insti．Mitl．」（８ ２：１９７〜２１５、１９８８年），“単一クローン抗体・薬物コンジュゲート に関する研究”；ガレゴらの「Int．J．Cancer」（３３：７３７〜７４４、１９ ８４年），抗腫瘍活性を持つ４種のダウノマイシン−単一クローン抗体７９１Ｔ ／３６コンジュゲートの製造”；アーノンらの「Immunological Rev．」（６２ ：５〜２７、１９８２年），“ダウノマイシンと抗腫瘍抗体のコンジュゲートの インビトロおよびインビボ効能”参照］。 グリーンフィールドらの特許文献に、アントラシクリン分子の１３−ケト位に 対しアシルヒドラゾン結合を介して結合したアシルヒドラジド含有の酸感受性免 疫コンジュゲートの形成、およびこのアントラシクリン誘導体の抗体分子への抱 合（conjugation）が記載されている［グリーンフィールドらのヨーロッパ特許 出願公開Ｎｏ.ＥＰ０３２８１４７（１９８９年８月１６日公開）、これはＵ.Ｓ .特許出願Ｎｏ.０７／２７０５０９（１９８８年１１月１６日出願）およびＵ. Ｓ.特許出願Ｎｏ．０７／１５５１８１ （１９８８年２月11日出願）に相当、 現在放棄］。また後者の文献には、特定のチオエーテル含有リンカーおよびコン ジュゲート（ヒドラヅン・チオエーテル含有の免疫コンジュゲートを包含）も開 示されている。 またカネコらのＵ.Ｓ.特許出願Ｎｏ.０７／５２２９９６（１９９０年５月１ ４日出願）（ヨーロッパ特許出願公開Ｎｏ.ＥＰ Ａ０４５７２５０、１９９１ 年１１月２１日公開に相当）には、アントラシクリン分子のＣ‐１３位のアシル ヒドラゾン結合によって、二官能リンカーに結合したアントラシクリン抗生物質 含有のコンジュゲートの形成が記載されている。彼らの発明において、リンカー は反応性のピリジニルジチオ基またはオルト‐ニトロフェニルジチオ基を含有し 、該基によって、リンカーは細胞反応性リガンドに結合した適当な基と反応して 、完全なコンジュゲートを形成する。 コンジュゲートは単純な酸加水分解に依存するため、早まって薬物を放出しう る。従って、活性薬物を部位特異性の高い方法で放出するコンジュゲートを有す ることが望まれる。ヨーロッパ特許出願公開Ｎｏ.９４ １０７５０１．２に、 腫瘍の部位で選択的に活性化することができる、リソソーム酵素‐開裂抗腫瘍薬 物コンジュゲートが開示されている。しかしながら、従来の免疫コンジュゲート の問題の１つは、目的を達成するのに薬物と標的リガンド（たとえば免疫グロブ リン）の割合が比較的に低いことである。腫瘍部位で活性化可能で、かつ薬物と 標的リガンドの割合を高くする免疫コンジュゲートの出現が多いに望まれている 。 発明の概要 本発明は、新規な分枝ペプチド・リンカー（branched peptide linkers）を提 供する。この新規リンカーを用いて、新しい薬物／リンカー分子を製造し、およ び標的リガンド（targeting ligand）、治療活性薬物および分枝ペプチド・リン カーから成る生物学的に活性なコンジュゲート（conjugates）を製造する。この 新しいコンジュゲートは、標的リガンドで認識される選定標的細胞母集団の部位 で選択的に活性化することができる。 本明細書で用いる、語句“薬物／リンカー”あるいは“リンカー／薬物”とは 、分枝ペプチド・リンカーが２つ以上の治療活性薬物分子とカップリングしたも のを指称し、また語句“コンジュゲート”とは、薬物／リンカー分子が標的リガ ンドとカップリングしたものを指称する。 本発明の分枝ペプチド・リンカーは、蛋白ペプチド・スペーサー（protein pe ptide spacer）を含有し、かつ該蛋白ペプチド配列と薬物に間隔をおく自己犠牲 （self‐immolating）スペーサーも含有しうる。本発明のリンカーは枝分かれし ているため、リンカー１つ当たり２つ以上の薬物分子が標的リガンドにカップリ ングする。各リンカーに結合する薬物の数は、枝分かれ（または分枝）の各世代 に対して２の倍数で変化する。このように、リンカー１分子当たりの薬物分子の 数は２、４、８、１６、３２、６４等となる。枝分かれのファクターは数学上、 ２n（ｎは正の整数）で表すことができる。１様に枝分かれするリンカーは、初 代の枝分かれまたは２1を有し、すなわち、潜在的にリンカー１つ当たり２つの 薬物分子を含有する。２様に枝分かれするリンカーは、第２世代の枝分かれまた は２2を有し、すなわち、潜在的にリンカー１つ当たり４つの薬物分子を含有す る。 ｎがｎ＝１から上昇するにつれ、免疫コンジュゲート（immunoconjugate）の 溶解性は減少する傾向にある。水溶性の高いペプチドを使用するか、または水可 溶化成分、たとえばポリエチレングリコールあるいはβ−アラニンなどの荷電種 を薬物に添加して、低ｐＨもしくはリポソーム環境の酵素により薬物から放出さ れるようにすることによって、溶解性を高めることができる。 本発明は、標的リガンドから派生するチオール基を２つ以上の薬物成分に連結 させる分枝ペプチド・リンカーに係り、該分枝ペプチド・リンカーは、標的リガ ンドから派生するチオール基（スルフヒドリル基とも称する）に結合するチオー ルアクセプターを含有する末端を持つ化合物から成り；多価原子（たとえば炭素 原子または窒素原子）である少なくとも１つの分枝点が、２n（ここで、ｎは正 の整数）の分枝度を考慮に入れ、分枝１つ当たりの少なくとも２つのアミノ酸成 分が、分枝１つ当たりの少なくとも１つの酵素部位を付与し、および他の少なく とも２つの末端が、薬物成分から派生する化学的反応性の官能基と共に共有結合 を形成しうる基を含有する。好ましくはｎは１、２、３または４、より好ましく は１、２または３、最も好ましくは１または２である。また標的リガンドは抗体 またはそのフラグメントであることが好ましい。 前のパラグラフで用いた、語句“標的リガンドから派生するチオール基”とは 、チオール基が既に標的リガンドに存在しているか、または標的リガンドが化学 的に変性されて、チオール基を含有する（該変性剤は、必要に応じて、標的リガ ンドとチオール基間にチオール・スペーサー基を包含してもよい）ことを意味す る。同様に、語旬“薬物成分から派生する化学的反応性の官能基”とは、化学的 反応性の官能基が既に薬物に存在しているか、または薬物が化学的に変性されて 、化学的反応性の官能基を含有することを意味する。かかる化学的反応性の官能 基は、リンカー末端と共有結合を形成しうる基である。化学的反応性の官能基の 具体例 としては、第１もしくは第２アミノ、ヒドロキシル、スルフヒドロキシル、カル ボキシル、アルデヒド、ケトン等が挙げられる。 また本発明は、リンカー、薬物／リンカー、および／またはコンジュゲートを 製造する中間体；並びに本発明のコンジュゲートを患者に投与することから成る 、選定した疾患状態の治療または予防方法を提供する。 標的リガンドによって認識される選定した標的細胞母集団は、好ましくは腫瘍 である。 本発明は１つの観点から、１つ以上の腫瘍関連酵素による薬物‐活性化酵素開 裂のための選択性の高い基質である、腫瘍特異的コンジュゲートを提供する。 本発明は他の観点から、活性化酵素が、腫瘍付近に細胞毒性レベルの遊離薬物 を発生させるのに十分な量で腫瘍に存在するものである、腫瘍特異的薬物コンジ ュゲートを提供する。 本発明は別の観点から、血中の外因性プロテアーゼに対し安定な、腫瘍特異的 薬物コンジュゲートを提供する。 さらに本発明は他の観点から、活性化された薬物より毒性がかなり少ない、先 行する観点の腫瘍特異的コンジュゲートを提供する。 さらに別の観点において、本発明は、生物学的プロセスの変異がたとえば癌な どの病気の治療に望まれる、当該コンジュゲートを標的細胞に輸送する方法を提 供する。 また本発明は、本発明に係るコンジュゲートを温血動物に投与することにより 、該温血動物の腫瘍細胞の部位に、活性抗腫瘍薬を輸送する方法を提供する。 本発明の上記および他の観点の目的は、抗腫瘍薬の薬理活性を抑制し、これに よって該抗腫瘍薬を薬理学的不活性なペプチジル誘導体コンジュゲートに変換す るため、適当な反応性部位において、蛋白ペプチド配列および自己犠牲スペーサ ーから構成される、ペプチド・リンカーを介してリガンドに連結される薬物（た とえば抗腫瘍薬）を誘導化することによって達成される。上記ペプチド・リンカ ーは、少なくとも２つのアミノ酸残基配列を有し、特にペプチジル誘導体を、１ つ以上のリソソームプロテアーゼ、たとえばカテプシンＢ，Ｃ，ＤまたはＬによ る薬物‐活性化酵素開裂のための選択的基質とするように適合されている。酵素 開裂反応は、薬物コンジュゲートからペプチド・リンカー成分を除去し、かつ腫 瘍部位において選択的に、薬理活性形態の抗腫瘍薬の放出をもたらす。薬物放出 のために単純な酸加水分解に依存するリガンド‐薬物リンカーと比較して、この 新しい方法は、血中の早発リンカー加水分解に基づき、全身毒性をかなり少なく することができ、この結果、多量の薬物が腫瘍部位に輸送され、そして該方法は より長い貯蔵寿命をもたらし、かつ該コンジュゲートの取扱条件を簡易化する。 本発明のコンジュゲートは、二分割（biparte）コンジュゲートおよび遊離薬 物と比べて、かなり低い全身毒性を示す。本発明のコンジュゲートは、選定した 標的細胞母集団の治療に対して特異性と治療薬活性の両方を保有する。かかるコ ンジュゲートは医薬組成物に使用することができ、該医薬組成物としては、たと えば医薬的有効量の後記式（III）の化合物、および医薬的に許容しうる担体、 希釈剤または賦形剤から成る。 本発明は、下記式（Ｉ）のリンカー分子に関係する。 ［式中、Ａはチオールアクセプター（thiol acceptor）； Ｗは橋部（bridging moiety）； ｃは０または１； ａは２〜１２の整数； ＱはＯ、ＮＨまたはＮ−低級アルキル； ｐは０または１； ｄは０または１； Ｅは多価原子； 各ｂは１〜１０の整数；および 各Ｘは式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇnの基、ここで Ｙは２つのＬ型アミノ酸残基、 Ｚは１または２つのアミノ酸残基、 ｍは０または１、 Ｇは自己犠牲スペーサー、および ｎは０または１、但し、Ｇが０のとき、−Ｙ−Ｚmはala‐leu‐ala‐leuまた はgly‐phe‐leu‐gly；または 各Ｘは式： の基、ここで 各Ｘ1は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇnの基、Ｙ，Ｚ，Ｑ，Ｅ，Ｇ，ｍ，ｄ，ｐ， ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、または 各Ｘ1は式： の基、各Ｘ2は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇnの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｑ，Ｅ，ｍ，ｄ， ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、あるいは各Ｘ2は式： の基、各Ｘ3は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇnの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｑ，Ｅ，ｍ，ｄ， ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、もしくは各Ｘ3は式： の基、各Ｘ4は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇnの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｑ，Ｅ，ｍ，ｄ， ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義である］ また本発明は、下記式（II）の薬物／リンカー分子に関係する。 ［式中、Ａはチオールアクセプター； Ｗは橋部； ｃは０または１； ａは２〜１２の整数； ＱはＯ、ＮＨまたはＮ−低級アルキル； ｐは０または１； ｄは０または１； Ｅは多価原子； 各ｂは１〜１０の整数；および 各Ｘは式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−ＧnＤの基、ここで Ｙは２つのＬ型アミノ酸残基、 Ｚは１または２つのアミノ酸残基、 ｍは０または１、 Ｇは自己犠牲スペーサー、 ｎは０または１、但し、Ｇが０のとき、−Ｙ−Ｚmはala‐leu‐ala‐leuまた はgly‐phe‐leu‐gly、および Ｄは主鎖と該主鎖にぶら下がった少なくとも１つの化学的反応性の官能基を有 する薬物成分であって、上記官能基は自己犠牲スペーサーまたは末端アミノ酸残 基に対し反応して、共有結合を形成し、かつ該官能基は第１もしくは第２アミノ 、ヒドロキシル、スルフヒドリル、カルボキシル、アルデヒドまたはケトンの群 から選ばれ；または 各Ｘは式： の基、ここで 各Ｘ1は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ，ｍ， ｄ，ｐおよびｎは前記と同意義、または 各Ｘ1は式： の基、各Ｘ2は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ， ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、あるいは各Ｘ2は式： の基、各Ｘ3は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ， ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、もしくは各Ｘ3は式：の基、各Ｘ4は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ， ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義である］ さらにまた、本発明は、下記式（III）のコンジュゲートに関係する。 ［式中、Ｌはリガンド； ｑは１〜１０の整数； Ａはチオールアクセプター； Ｗは橋部； ｃは０または１； ａは２〜１２の整数； ＱはＯ、ＮＨまたはＮ−低級アルキル； ｐは０または１； ｄは１または２； Ｅは多価原子； 各ｂは１〜１０の整数；および 各Ｘは式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、ここで Ｙは２つのＬ型アミノ酸残基、 Ｚは１または２つのアミノ酸残基、 ｍは０または１、 Ｇは自己犠牲スペーサー、および ｎは０または１、但し、Ｇが０のとき、−Ｙ−Ｚmはala‐leu‐ala‐leuまた はgly‐phe‐leu‐gly； Ｄは主鎖と該主鎖にぶら下がった少なくとも１つの化学的反応性の官能基を有 する薬物成分であって、上記官能基は自己犠牲スペーサーに対し反応して、共有 結合を形成し、かつ該官能基は第１もしくは第２アミノ、ヒドロキシル、カルボ キシル、スルフヒドリル、アルデヒドまたはケトンの群から選ばれ；または 各Ｘは式： の基、ここで 各Ｘ1は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ，ｍ， ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、または 各Ｘ1は式： の基、各Ｘ2は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ， ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、あるいは各Ｘ2は式： の基、各Ｘ3は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ， ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、もしくは各Ｘ3は式：の基、各Ｘ4は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚm−Ｇn−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ， ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義である］ 本明細書で用いる語句“低級アルキル”は、炭素数１〜３のアルキル基である 。多価原子は炭素または窒素が好ましい。 １つの具体例において、薬物成分はアントラシクリン抗生物質、および標的リ ガンドは抗体である。 好ましい具体例において、アントラシクリンは、アントリアシクリンのアミノ 糖基においてリンカーに結合している。糖成分はダウノサミンが好ましい。次に 抗体が、リンカーを介してアントラシクリン化合物に結合する。特に好ましい具 体例において、この結合は還元ジスルフィド基（すなわち、抗体の遊離スルフヒ ドリル基（−ＳＨ））を介して起こる。 最も好ましい具体例において、アントラシクリン薬物成分はドキソルビシン； チオールアクセプターはマイケル・アディション（Michael Addition）アクセ プター（該アクセプターからマイケル・アディション・アダクト（Michael Addi tion Adduct）が派生する）、より好ましくはマレイミド基；および抗体成分は キメラまたはヒト向きにした（humanized）抗体であって、リンカーの薬物への 結合点は、薬物の糖成分のアミノ基である。 本発明のコンジュゲートは、選定した標的細胞母集団の治療に対して特異性と 治療薬活性の両方を保有する。かかるコンジュゲートは医薬組成物に使用するこ とができ、該医薬組成物としては、たとえば医薬的有効量の後記式（III）の化 合物、および医薬的に許容しうる担体、希釈剤または賦形剤から成る。 発明の詳細な説明 本発明は、選定細胞母集団をターゲッティング（targeting）しうるリガンド （標的リガンド）、および分枝ペプチド・リンカーによってリガンドに接続した 薬物から成る、新規な薬物‐リンカー‐リガンド・コンジュゲートを提供する。 リンカーは、チオールアクセプター（たとえばマイケル・アディション・アクセ プター）、橋部、分枝点、およびカテプシンＢ，Ｃ，ＤまたはＬなどの酵素の酵 素切断部位を付与し、少なくとも２つのアミノ酸成分を含有する、各分枝当たり のペプチド配列を含有する。また分枝ペプチド・リンカーは自己犠牲スペーサー も含有でき、該スペーサーは薬物と蛋白ペプチド配列に間隔をおく。ペプチド配 列（すなわち、Ｙ−Ｚm）がala‐leu‐ala‐leuまたはgly‐phe‐leu‐glyのと き、自己犠牲スペーサーの存在は任意であることがわかった。これらのペプチド 配列に対して自己犠牲スペーサーを必要としない理由は、全く理解されないが、 これは種々の酵素に対する応答に基づくものと思われる。 標的リガンド分子は、抗体もしくはそのフラグメントなどの免疫反応性蛋白質 ；非免疫反応性蛋白質；ボンベシンなどペプチド・リガンド；レクチンなどの細 胞関連レセプターを認識する結合リガンド；または反応性スルフヒドリル基（− ＳＨ）を所有するか、あるいはかかるスルフヒドリル基を含有するように変性す ることができるいずれかの蛋白質もしくはペプチドであってよい。チオールアク セプター・カルボキシル化合物は、チオエーテル結合を介して、リガンドに連結 し、薬物は、第１もしくは第２アミノ、ヒドロキシル、スルフヒドリル、カルボ キシル、アルデヒドまたはケトンから選ばれる官能基を介してリンカーに連結す る。 本発明をより具体的に理解するため、薬物、リガンド、ペプチドおよびスペー サーについて個々に論じる。次に、コンジュゲートの合成について説明する。 以下の詳細な説明および添付の請求の範囲において、使用する略語や専門用語 がアミノ酸およびペプチド化学で一般的なものであること、および言及されるア ミノ酸の全てが、特別他に明記しない限り、Ｌ型であることが理解されよう。 本発明で用いるいくつかの略語は、特別他に指示がない限り、以下の通りであ る。 AcOH：酢酸、Alloc：アリルオキシ−カルボニル、Boc：ｔ−ブチルオキシカル ボニル、ＤＢＵ：ジアゾビシクロウンデセン、ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボ ジイミド、ＤＣＩ：直接化学的イオン化、ＤＣＵ：ジシクロヘキシルウレア、Ｄ ＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピ リジン、ＤＭＥ：１,２−ジメトキシエタン、ＤＯＸ：ドキソルビシン、ＤＴＴ ：ジチオトレイトール、ＥＥＤＱ：Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１ ,２−ジヒドロキノリン、EtOAc：酢酸エチル、ＦＡＢ：速原子衝撃、Fmoc：フル オレニルメトキシカルボニル、ＧＡＢＡ：γ−アミノ酪酸、ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒド ロキシベンゾトリアゾール、ＨＲＭＳ：高分解能マススペクトロスコピー、ＬＤ Ｌ：低比重リポ蛋白、ＭＣ：６−マレイミドカプロイル、ＭＰ：３−マレイミド プロピオニル、MPr−ＢＨＰ：マレイミドプロピル−ビス−ヒドロキシプロピル 、MPr−Mal：マレイミドプロピル−マロニル、MEt−ＩＢＨＥ：マレイミドエチ ル−イミノ−ビス−ヒドロキシエチル、ＭＭＡ：マイトマイシンＡ、ＭＭＣ：マ イトマイシンＣ、Mtr：４−メトキシトリチル、ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシ ンイミド、ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリジノン、ＰＡＢＣ：ｐ−アミノベンジルカ ルバモイル、ＰＡＢ−ＯＨ：ｐ−アミノベンジルアルコール、ＰＮＰ：ｐ−ニト ロフェノール、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン ペプチド残基（−Ｙ−Ｚm−） 本発明のペプチド・リンカーは、１つの分枝当たり２、３または４つのアミノ 酸残基を、存在する場合の、１以上の酵素切断部位を付与する自己犠牲スペーサ ーと共に含有する。アミノ酸成分は、集合してペプチド配列を形成する。 ペプチド残基を構成するアミノ酸残基は、それぞれ独立して、アミノ酸、好ま しくは天然産出アミノ酸の群から選ばれる。天然産出アミノ酸は、アラニン（Al a）、アルギニン（Arg）、アスパラギン（Asn）、アスパラギン酸（Asp）、シス テイン（Cys）、グルタミン酸（Glu）、グルタミン（Gln）、グリシン（Gly）、 ヒスチジン（His）、イソロイシン（Ile）、ロイシン（Leu）、リシン（Lys）、 メチオニン（Met）、オルニチン（Orn）、フェニルアラニン（Phe）、プロリン （Pro）、セリン（Ser）、トレオニン（Thr）、トリプトファン（Trp）、チロシ ン（Tyr）、およびバリン（Val）である。好ましい天然産出アミノ酸は、Ala、V al、Leu、Lys、Ile、Met、Phe、TrpおよびProである。また特定の非天然産出ア ミノ酸も、ペプチド残基の一部となりうる。かかる非天然産出アミノ酸としては 、シトルリン（Cit）、および保護されたア ミノ酸、たとえばアセチル、ホルミル、トシル、ニトロなどの基で保護された天 然産出アミノ酸が挙げられる。本明細書でペプチド配列の一部として特定のアミ ノ酸が示されているとき、それらは、特別他に明記しない限り、Ｌ型である。“ Ｙ”成分を構成するアミノ酸残基は、Ｌ型でなければならない。“Ｚ”成分を構 成するアミノ酸残基は、Ｌ型またはＤ型のいずれであってもよい。より好ましい アミノ酸としては、Lys、アセチルもしくはホルミルで保護されたLys、Arg、ト シルもしくはニトロ基で保護されたArg、His、Orn、アセチルもしくはホルミル で保護されたOrn、Phe、Val、AlaおよびCitを包含される。最も好ましいのはLys およびCitである。 アミノ酸残基配列は特に、生成するペプチジル誘導体薬物−コンジュゲートか ら、１つ以上の腫瘍関連プロテアーゼによって選択的に酵素開裂されるよう適合 されている。ペプチド・リンカーの各分枝のアミノ酸残基鎖長は、好ましくはジ ペプチドからテトラペプチドの鎖長まで変化する。 第１アミノ酸残基（すなわち、左から右へ読み取って、“Ｙ”を構成する最初 のアミノ酸）は、塩基性アミノ酸（たとえばLysまたはArg）であるか、あるいは 強い水素結合能力を有する（たとえばCit）ことが好ましい。第２アミノ酸残基 （すなわち、左から右へ読み取って、“Ｙ”を構成する２番目のアミノ酸）は、 疎水性側鎖を有する（たとえばPhe、Val、Ala、LeuまたはIle）ことが好ましい 。 本発明のコンジュゲートをさらに詳しく説明するために、具体的なペプチド・ リンカー基のグループを以下に例示する。 Phe−Lys、Val−Lys、Phe−Phe−Lys、Lys−Phe−Lys、Gly−Phe−Lys、Ala− Lys、Val−Cit、Phe−Cit、Leu−Cit、Ile−Cit、Trp−Cit、Phe−Ala、Gly−Ph e−Leu−Gly、Ala−Leu−Ala−Leu、Phe−Ng−トシル−Arg、Phe−Ng−ニトロ− Arg、Lys−Lys、Lys−Cit、およびCit−Cit。 ペプチド配列の特別な好ましい具体例としては、Phe−Lys、Val−Lys、Val−C itおよびＤ−Phe−Phe−Lysが挙げられる。 本発明での使用に好適な、特定のペプチド・リンカー分子の多数は、個々の腫 瘍関連プロテアーゼによる酵素開裂の選択性において、設計しおよび最大限に活 用（最適化）することができる。本発明で使用する好ましいペプチド・リンカー は、プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、ＤおよびＬに対し最適化されるものであ る。 スペーサー（“Ｇ”） 本発明による分子において、薬物成分と蛋白ペプチド成分に間隔をおき、かつ これらと共に共有結合する中間体の、自己犠牲スペーサー成分を使用しうる。自 己犠牲スペーサーは、二官能の化学成分として定義することができ、該成分は２ つの間隔をおいた化学成分と共に共有結合して、一般に安定なトリパルテート（ tripartate）分子とすることができ：該トリパルテート分子から酵素開裂によっ て、上記間隔をおく化学成分の一方を放出せしめ；次いで酵素開裂に伴って、自 動的に分子の残りから開裂して、上記間隔をおく化学成分の他方を放出せしめる 。本発明によれば、自己犠牲スペーサーは、その一端で蛋白ペプチド成分に共有 結合し、他端で薬物成分の誘導化によって薬理活性が抑制される化学反応部位に 共有結合することから、蛋白ペプチド成分と薬物成分に間隔をおき、かつこれら と共に共有結合して、標的酵素の非存在下で安定で薬理学的に不活性であるが、 スペーサー成分と蛋白ペプチド成分を連結させる共有結合において上記標的酵素 による酵素開裂が可能であるトリパルテート分子となし、これによってトリパル テート分子からの蛋白ペプチド成分の放出をもたらすようになっている。かかる 酵素開裂は順次、スペーサー成分の自己犠牲特性を活性化し、かつスペーサー成 分を薬物成分に連結させる共有結合の自然開裂を開始せしめ、これによって、薬 理活性形態の薬物の放出をもたらす。 上記式Ｉ、IIおよびIIIの分子において、 Ｇは、薬物成分とアミノ酸に間隔をおき、かつこれらと共に共有結合する自己 犠牲スペーサー成分であって、該スペーサーはＴ成分（以下に示す式において用 いる“Ｔ”は、薬物に既に含有さている求核性原子を表わす）を介して薬物成分 に結合し、かつ下記式（IV）、（Ｖ）、（VI）、（VII）または（VIII）の構造 で表わすことができる。 （式中、ＴはＯ、ＮまたはＳである） （式中、ＴはＯ、ＮまたはＳ、およびＲ1はＣ1−Ｃ5アルキルである） （J．Med．Chem．，２７：１４４７、１９８４年）（式中、ＴはＯ、Ｎまたは Ｓ、およびＲ2はＨまたはＣ1−Ｃ5アルキルである） （式中、ＴはＯ、ＮまたはＳである） または （式中、ＴはＯ、ＳまたはＮである） 本明細書で用いる“Ｃ1−Ｃ5アルキル”とは、他に特別な指摘がない限り、１ 〜５個の炭素原子を有する分枝または非分枝炭化水素鎖を包含することを意味し 、たとえば、これらに限定されるものでないが、メチル、エチル、イソプロピル 、ｎ−プロピル、sec‐ブチル、イソブチル、ｎ−ブチル等が挙げられる。 本発明での使用に好適な、好ましい自己犠牲スペーサー成分Ｇは、式（IVａ） ： で示されるＰＡＢＣである。 本発明での使用に好適な、他の好ましい自己犠牲スペーサー成分Ｇは、式（Ｖ ａ）： で示されるＧＡＢＡである。 本発明での使用に好適な、別の好ましい自己犠牲スペーサー成分Ｇは、式（Ｖ ｂ）： で示されるα,α−ジメチルＧＡＢＡである。 本発明での使用に好適な、さらに別の好ましい自己犠牲スペーサー成分Ｇは、 式（Ｖｃ）： で示されるβ,β−ジメチルＧＡＢＡである。チオールアクセプター 式Ｉ、IIおよびIIIの分子において、チオールアクセプター“Ａ”は、リガン ドから派生する硫黄原子を介してリガンドに結合する。チオールアクセプターは 、チオール基を介してリガンドに結合した後、チオエステル結合を経由してチオ ールアダクトとなる。チオールアクセプターは、たとえばα−置換アセチル基で あってよい。かかる基は、式： （式中、Ｙは脱離可能基である） で示される。脱離可能基の具体例としては、Cl、Br、Ｉ、メシレート、トシレー ト等が挙げられる。チオールアクセプターがα−置換アセチル基のとき、リガン ドへの結合後のチオールアダクトは−Ｓ−ＣＨ2−結合を形成する。 好ましくは、チオールアクセプターはマイケル・アディション・アクセプター である。 本発明の代表的なマイケル・アディション・アクセプターは、式： で示される。 リガンドのチオール基との結合後、マイケル・アディション・アクセプターは 、たとえば式Ａ： （式中、Ｌはリガンドである） のマイケル・アディション・アダクトとなる。橋部（“Ｗ”） 橋部は二官能化学成分であって、２つの間隔をおいた化学成分と共に共有結合 して、安定なトリパルテート分子となすことができる。橋部の具体例は、Ｓ.Ｓ. ウォングの「Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking（蛋白 質抱合および架橋の化学）」（ＣＲＣプレス、フロリダ、１９９１年）；および Ｇ.Ｅ.ミーンズおよびＲ.Ｅ.フィーニィの「Bioconjugate Chemistry」（vol. １、２〜１２頁、１９９０年）に記載されている。橋部“Ｗ”は明確に、チオー ルアクセプターと共有結合してケト成分に連結する。橋部の一例は、式： −(ＣＨ2)ｆ−(Ｚ)ｇ−(ＣＨ2)ｈ− で示され、ここで、 ｆは０〜１０の整数、 ｈは０〜１０の整数、 ｇは０または１、但し、ｇが０のとき、ｆ＋ｈは１〜１０、および ＺはＳ、Ｏ、ＮＨ、ＳＯ2、フェニル、ナフチル、ポリエチレングリコール、 炭素数３〜１０の脂環式炭化水素環、または３〜６個の炭素原子およびＯ、Ｎま たはＳから選ばれる１または２個のヘテロ原子を含有するヘテロ芳香族炭化水素 環である。 好ましい脂環式成分としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチ ル、シクロヘキシル等が挙げられる。好ましいヘテロ芳香族成分としては、ピリ ジル、ポリエチレングリコール（繰返し単位１〜２０）、フラニル、ピラニル、 ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、オキサジニル、ピロリル、チアゾリ ル、モルホリニル等が挙げられる。 橋部において、ｇが０のとき、ｆ＋hは２〜６、好ましくは２〜４、より好ま しくは２であることが好適である。ｇが１のとき、ｆは０、１または２およびｈ は０、１または２が好ましい。 チオールアクセプターにカップリングする好ましい橋部は、ピアス・カタログ （Pierce Catalog）のＥ−１２、Ｅ−１３、Ｅ−１４、Ｅ−１５、Ｅ−１６およ びＥ−１７頁（１９９２年）に示されている。薬物 本発明の薬物コンジュゲートは、対応する薬物が有効とされる通常の用途に対 して有効であり、かつ特に利益を有する所定の細胞に薬物を運搬する、リガンド に本来備わった能力のために、優れた薬効を有する。さらに、本発明のコンジュ ゲートは一定の生物学的応答を変性するのに使用できるので、従来の化学治療薬 に制限されるように解釈すべきでない。たとえば、薬物成分は所望の生物学的活 性を有する蛋白質またはポリペプチドであってよい。かかる蛋白質としては、た とえば腫瘍壊死因子などの蛋白質が包含される。 本発明で使用する好ましい薬物は、細胞毒性薬、特に癌療法に使用されるもの である。かかる薬物としては一般に、ＤＮＡ有害剤、代謝拮抗物質、天然物およ びこれらの類縁体が挙げられる。好ましい種類の細胞毒性薬としては、たとえば ジヒドロホレート・レダクターゼ抑制因子やチミジレート・シンターゼ抑制因子 などの酵素抑制因子、ＤＮＡインターキャレータ（intercalators）、ＤＮＡク リーバー（cleaver）、局所イソメラーゼ抑制因子、アントラシクリン科の薬物 、ビンカ（vinca）薬、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオチ ド、プテリジン科の薬物、ジイネン（diynenes）、ポドフィロトキシン、分化誘 発因子、およびタキサン（taxanes）が挙げられる。これらの種類の中で特に有 用なものの具体例としては、メトトレキサート、メトプテリン、ジクロロメトト レキサート、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシン・アラビ ノシド（アラビノシルシトシン）、メルファラン、ロイロシン（leurosine）、 ロイロシデイン（leurosideine）、アクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソ ルビシン、マイトマイシンＣ、マイトマイシンＡ、カルミノマイシン、アミノプ テリン、タリソマイシン（tallysomycin）、ポドフィロトキシンおよびポドフィ ロトキシン誘導体（たとえばエトポシドまたはエトポシドホスフェート）、ビン ブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン（vindesine）、タキソール、タキソ テレ（taxotere）、レチン酸、酪酸、Ｎ8−アセチルスペルミジン、カンプトテ シン、およびこれらの類縁体が挙げられる。 上述の如く、当業者であれば、本発明のコンジュゲートを製造する目的により かなった化合物の反応を行うため、所定化合物に化学的変性を行いうる。 式Ｉのコンジュゲートにおいて、 Ｄはその主鎖にぶら下がった化学的反応性の官能基を有する薬物成分であって 、該官能基によって薬物主鎖が蛋白ペプチド・リンカーに結合し、かつ該官能基 は第１もしくは第２アミノ、ヒドロキシル、スルフヒドリル、カルボキシル、ア ルデヒドまたはケトンの群から選ばれる。上記アミノ含有薬物の代表例は、マイ トマイシンＣ、マイトマイシンＡ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、アミノプ テリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノカンプトテシン、Ｎ8 −アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１,２−ジメタンスルホ ニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビンおよびこれらの誘導体である。上 記アルコール基含有薬物の代表例は、エトポシド、カンプトテンシン、タキソー ル、エスペラミシン、１,８−ジヒドロキシービシクロ［７.３.１］トリデカ− ４,９−ジエン−２,６−ジイン−１３−オン（Ｕ.Ｓ.特許No.５１９８５６０） 、ポ ドフィロトキシン、アンギジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン −ドキソルビシン、ｎ−（５,５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、 およびこれらの誘導体である。 上記スルフヒドリル含有薬物の代表例は、エスペラミシン、６−メルカプトブ リン、およびこれの誘導体である。 上記カルボキシル含有薬物の代表例は、メトトレキサート、カンプトテシン（ ラクトンの開環型）、酪酸、レチン酸、およびこれらの誘導体である。 上記アルデヒドおよびケトン含有薬物の代表例は、アンギジン、アントラシク リン（たとえばドキソルビシン）、およびこれらの誘導体である。 本発明の薬物として使用する、非常に好ましい群の細胞毒性薬としては、以下 に示す式の薬物が包含される。 式（１）のマイトマイシン群： （式中、Ｒ1は水素またはメチル； である） 式（２）のブレオマイシン群： （式中、Ｒ1はヒドロキシ、アミノ、Ｃ1−Ｃ3アルキルアミノ、ジ（Ｃ1−Ｃ3 アルキル）アミノ、Ｃ4−Ｃ6ポリメチレンアミノ、である） 式（３）のメトトレキサート群： （式中、Ｒ1はアミノまたはヒドロキシ； Ｒ2は水素またはメチル； Ｒ3は水素、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード； Ｒ4はヒドロキシ、またはカルボン酸の塩を形成する成分 である） 式（４）のメルファラン： 式（５）の６−メルカプトプリン： 式（６）のシトシン・アラビノシド： 式（７）のポドフィロトキシン類： （式中、Ｒ2は水素； Ｒ1は水素または Ｒ3はＮＨ2、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＮＨ（Ｃ1−Ｃ3アルキル）またはＮ(Ｃ1−Ｃ3ア ルキル)2； Ｒ4はＯＨまたはＮＨ2； Ｒ5はメチルまたはチエニル； Ｒ6は水素もしくはメチル、またはそのホスフェート塩であって、ここで使用 する“(Ｃ1−Ｃ3アルキル）”とは、１〜３個の炭素原子を有する直鎖または分 枝鎖の炭素鎖を意味し、たとえばメチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロ ピルが挙げられる） 式（８）のビンカ・アルカロイド群の薬物： （式中、Ｒ1はＨ、ＣＨ3またはＣＨＯ； Ｒ2とＲ3がそれぞれ独立しているとき、Ｒ3はＨで、Ｒ4とＲ2の一方がエチル 、他方がＨまたはＯＨ； Ｒ2とＲ3がそれらが結合する炭素と共に合するとき、Ｒ2およびＲ3はＲ4がエ チルの場合に、オキシラン環を形成； Ｒ5は水素、（Ｃ1−Ｃ3アルキル）−ＣＯ、またはクロロ置換（Ｃ1−Ｃ2アル キル）−ＣＯであって、ここで使用する“Ｃ1−Ｃ3アルキル”とは、１〜３個の 炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の炭素鎖を意味し、たとえばメチル、エチル 、ｎ−プロピルおよびイソプロピルが挙げられる） 式（９）のジフルオロヌクレオシド類； （式中、Ｒ1は式： の内１つの塩基； Ｒ2は水素、メチル、ブロモ、フルオロ、クロロまたはヨード； Ｒ3はＯＨまたはＮＨ2； Ｒ4は水素、ブロモ、クロロまたはヨード である） 式（１０）のタキソール類： （式中、Ｒ1はヒドロキシ； Ｒ2は水素またはヒドロキシ； Ｒ2’は水素、ヒドロキシまたはアセトキシ； Ｒ7は水素またはヒドロキシ； Ｒ3は水素、ヒドロキシまたはアセトキシ； Ｒ4はアリール、置換アリール、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アル キニルまたはｔ−ブトキシ； Ｒ5はＣ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、または−Ｚ−Ｒ6 ： Ｚは単結合、Ｃ1-6アルキルまたはＣ2-6アルケニル； Ｒ6はアリール、置換アリール、Ｃ3-6シクロアルキル、チエニルまたはフリル であって、ここで使用する“アルキル”とは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖 または分枝鎖の炭素鎖を意味し、たとえばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチ ル、ｓｅｃ−ブチル、イソペンチルおよびｎ−ヘキシルが挙げられ；“アルケニ ル”とは、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合および２〜６個の炭素原子を有 する直鎖または分枝鎖の炭素鎖を意味し、たとえばエテニル、プロペニル、イソ プロペニル、ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、およびヘキセニルが挙げら れ；“アルキニル”とは、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合および２〜６個 の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の炭素鎖を意味し、たとえばエチニル、プ ロピニル、ブチニルおよびヘキシニルが挙げられ；“アリール”とは、６〜１０ 個の炭素原子を有する芳香族炭化水素を意味し、たとえばフェニルおよびナフ チルが挙げられ；“置換アリール”とは、Ｃ1-6アルカノイルオキシ、ヒドロキ シ、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル、トリフルオロメチル、Ｃ1-6アルコキシ、アリー ル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ1-6アルカノイル、ニトロ、アミノおよびアミドから選 ばれた少なくとも１つの基で置換されたアリールを意味する） 式（１１）のアルギジン類： （式中、Ｒ1はＯＨまたはＯ； Ｒ2はＨまたはＯである） なお、アルギジンは、エステルまたはヒドラゾンとして、Ｃ−３、Ｃ−４、Ｃ −８またはＣ−１５位をターゲッティングすることができる。 フェニレンジアミンマスタード（１２）： Ｈ2Ｎ−Ｃ6Ｈ4−Ｎ(ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌ)2 式（１３）のアントラシクリン抗生物質： （式中、Ｒ1は−ＣＨ3、−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＣＯ(ＣＨ2)3ＣＨ3または −ＣＨ2ＯＣＯＣＨ(ＯＣ2Ｈ5)2； Ｒ2は−ＯＣＨ3−、−ＯＨまたは−Ｈ； Ｒ3は−ＮＨ2、−ＮＨＣＯＣＦ3、４−モルホリニル、３−シアノ−４−モル ホリニル、１−ピペリジニル、４−メトキシ−１−ピペリジニル、ベンジルアミ ン、ジベンジルアミン、シアノメチルアミン、１−シアノ−２−メトキシエチル アミン、またはＮＨ−(ＣＨ2)4−ＣＨ(ＯＡｃ)2； Ｒ4は−ＯＨ、−ＯＴＨＰ、または−Ｈ；および Ｒ5は−ＯＨまたは−Ｈ、但し、Ｒ4が−ＯＨまたは−ＯＴＨＰのとき、Ｒ5は −ＯＨでない） 当業者であれば、構造式（１３）には、薬物、または当該分野で種々の一般名 もしくは慣用名を取得した薬物の誘導体である化合物が包含されることを理解す る。下記の表Ｉに、本発明での使用に特に好ましい、幾つかのアントラシクリン 薬物およびその一般名または慣用名を示す。 表Ｉに示す化合物の中で、最も好ましい薬物はドキソルビシンである。ドキソ ルビシン（本明細書で“ＤＯＸ”とも称する）は、表Ｉの式においてＲ1が−Ｃ Ｈ2ＯＨ、Ｒ2が−ＯＣＨ3、Ｒ3が−ＮＨ2、Ｒ4が−ＯＨおよびＲ5が−Ｈである アントラシクリンである。 最も好ましい薬物は、上述のタキソール、マイトマイシンＣ、および式（１３ ）のアントラシクリン抗生物質である。 リガンド “リガンド”とは、その範囲内に、一定の標的細胞母集団に関連するレセプタ ーまたは他の受理性成分と特別に結合するか、または反応会合もしくは錯合する いずれの分子をも包含する。この細胞反応性分子（これに薬物試薬がコンジュゲ ートのリンカーを経由して結合）は、治療的または他の生物学的変性が求められ る細胞母集団と結合し、錯合しまたは反応するいずれの分子であってよく、また 遊離の反応性スルフヒドリル（−ＳＨ）基を有するか、あるいはかかるスルフヒ ドリル基を含有するように変性することができる。細胞反応性分子は、リガンド が反応する個々の標的細胞母集団に、治療上活性薬物成分を輸送する役割を果た す。かかる分子としては、これらに限定されるものでないが、たとえば抗体など の高分子量蛋白質、小分子量蛋白質、ポリペプチドもしくはペプチド・リガンド 、および非ペプチジル・リガンドが包含される。 本発明のコンジュゲート形成に使用できる非免疫反応性蛋白質、ポリペプチド またはペプチド・リガンドとしては、これらに限定されるものでないが、トラン スフェリン、表皮成長因子（“ＥＧＦ”）、ボンベシン、ガストリン、ガストリ ン放出ペプチド、血小板誘導成長因子、１Ｌ−２、１Ｌ−６、腫瘍成長因子（“ ＴＧＦ”）（たとえばＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）、ワクシニア成長因子（“ ＶＧＦ”）、インスリンおよびインスリン様成長因子ＩおよびIIが挙げられる。 非ペプチジル・リガンドとしては、たとえば炭水化物、レクチン、および低比重 リポ蛋白からのアポ蛋白が挙げられる。 免疫反応性リガンドは、抗原−認識免疫グロブリン（“抗体”とも称する）、 またはその抗原−認識フラグメントからなる。特に好ましい免疫グロブリンは、 腫瘍関連抗原を認識することができる免疫グロブリンである。使用する“免疫グ ロブリン”とは、承認された網もしくは亜網の免疫グロブリン、たとえばＩｇＧ 、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤまたはＩｇＥを指称しうる。好ましい免疫グロブリン は、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンに属するものである。免疫グロブリンは、い ずれめ種からも派生しうる。しかしながら、免疫グロブリンはヒト、ネズミまた はウ サギ源のものであることが好ましい。さらに免疫グロブリンは、多クローン性ま たは単一クローン性、好ましくは単一クローン性であってよい。 留意点として、当業者であれば、本発明はまた、抗原−認識免疫グロブリンフ ラグメントの使用も含むことが理解されよう。かかる免疫グロブリンフラグメン トとしては、たとえばＦａｂ’、Ｆ(ａｂ’)2、ＦｖもしくはＦａｂフラグメン ト、または他の抗原−認識免疫グロブリンフラグメントが挙げられる。かかる免 疫グロブリンフラグメントはたとえば、ペプシンもしくはパパイン消化、還元ア ルキル化などによる蛋白分解酵素消化または組換え技法によって製造することが できる。かかる免疫グロブリンフラグメントを製造するための材料および方法は 、当業者にとって周知である［概して、パーハム・Ｊ．の「Immunology」（１３ １、２８９５頁、１９８３年）；ラモイらの「J.Immunological Methods」（５ ６、２３５頁、１９８３年）；パーハムの「ｉｄ．」（５３、１３３頁、１９８ ２年）；およびマシューらの「ｉｄ．」（５０、２３９頁、１９８２年）参照］ 。 免疫グロブリンは“キメラ抗体”であってよく、この用語は当該分野で承認さ れている。また免疫グロブリンは、“二官能”または“ハイブリッド”の抗体、 すなわち、１つの抗原性部位、たとえば腫瘍関連抗原に特異性を持つ１つのアー ム（arm）を有しうる抗体であってもよい。なお、他のアームは別の標的、たと えばハプテンまたはこれに結合する、抗原−支持（bearing）腫瘍細胞に致命的 な作用物質を認識する。別法として、二官能抗体は、各アームが治療上または生 物学的に変性される細胞の腫瘍関連抗原の別のエピトープに特異性を持つもので あってもよい。いずれにしても、ハイブリッド抗体は二元特異性を持ち、好まし くは選択したハプテンに特異的な１以上の結合部位または標的抗原、たとえば腫 瘍、感染生体または他の疾患状態に関連する抗原に特異的な１以上の結合部位を 有する。 生物学的二官能抗体は、たとえば当業者が参考にするヨーロッパ特許出願公開 Ｎｏ．ＥＰＡ０１０５３６０に記載されている。かかるハイブリッドもしくは二 官能抗体は、注目されるように、生物学的に細胞融合法によって、あるいは化学 的に、特に架橋剤もしくはジスルフィド橋−形成試薬を用いることによって得る ことができ、かつ全抗体および／またはそのフラグメントで構成されてよい。か かるハイブリッド抗体を得る方法は、たとえばＰＣＴ特許出願公開Ｎｏ．ＷＯ８ ３／０３６７９（１９８３年１０月２７日公開）およびヨーロッパ特許出願公開 Ｎｏ．ＥＰＡ０２１７５７７（１９８７年４月８日公開）に開示されている。特 に好ましい二官能抗体は、“ポリドーマ(polydoma)”または“クォードローマ(q uadroma)”から生物学的に製造されるものであるか、あるいはビス−（マレイミ ド）−メチルエーテルなどの架橋剤もしくは当業者になじみのある他の架橋剤を 用いて合成される。 加えて、免疫グロブリンは単一鎖抗体（“ＳＣＡ”）であってよい。これらは 、可変ライト(variable light)（“ＶL”）および可変ヘビー(variable heavy) （“ＶH”）のドメインがペプチド橋またはジスルフィド結合によって結合して いる単一鎖のＦｖフラグメント（“ｓｃＦV”）から構成されてよい。また免疫 グロブリンは、抗原−結合活性を有する単一ＶHドメイン（ｄＡｂｓ）で構成さ れてもよい［たとえばＧ．ウインターおよびＣ．ミルステインの「Nature」（３ ４９、２９５頁、１９９１年）；Ｒ．グロックシュバーらの「Biochemislry」（ ２９、１３６２頁、１９９０年）；およびＥ．Ｓ．ワードらの「Nature」（３４ １、５４４頁、１９８９年）参照］。 本発明での使用に特に好ましいのは、キメラ単一クローン抗体、好ましくは腫 瘍関連抗原に対して特異性を持つキメラ抗体である。本明細書で用いる語句“キ メラ抗体”とは、通常組換えＤＮＡ技法によって製造される、１つの種源からの 可変部分、すなわち結合部分および別の種源から派生する定常部分の少なくとも 一部からなる単一クローン抗体を指称する。ネズミ可変部分およびヒト定常部分 からなるキメラ抗体は特に、本発明の一定用途、好ましくはヒト治療に好適であ るが、それはかかる抗体が容易に製造され、かつネズミ単独の単一クローン抗体 と比べて免疫性が少ないからである。かかるネズミ／ヒトキメラ抗体は、ネズミ 免疫グロブリン定常部分をコード化するＤＮＡセグメントからなる発現免疫グロ ブリン遺伝子の産物である。本発明によって含まれる他の形態のキメラ抗体は、 網もしくは亜網を元の抗体のそれから変性もしくは変化させたものである。かか る“キメラ”抗体を、“網スイッチド(class−switched)抗体”と称することも ある。キメラ抗体の生成方法は、通常の組換えＤＮＡと当該分野で周知の遺伝子 トランスフェクション法を要する［たとえばモリソン・Ｓ．Ｌ．らの「Proc．Na t'l Acad．Sci.」（８１、６８５１頁、１９８４年）参照］。 語句“キメラ抗体”は、“ヒト向きにした抗体”の概念、すなわち、基質また は相補性決定部分（“ＣＤＲ”）が、親免疫グロブリンと比べて、異なる特異性 を持つ免疫グロブリンのＣＤＲを包含するよう変性されている抗体を含むもので ある。好ましい具体例において、ネズミＣＤＲをヒト抗体の基質部分に移植して 、“ヒト向きにした抗体”を製造する［たとえば、Ｌ．リーチマンらの「Nature 」（３３２、３２３頁、１９８８年）；Ｍ．Ｓ．ニュベルガーらの「Nature」（ ３１４、２６８頁、１９８５年）参照］。特に好ましいＣＤＲは、キメラおよび 二官能抗体の上記抗原を認識する配列を示すものに相当する。ＣＤＲ変性抗体の 教示に対して、ＥＰＡ０２３９４００（１９８７年９月３０日公開）の教えを参 照。 当業者であれば、キメラまたはヒト向きにした抗体の低い免疫原性、並びに上 述の二官能抗体の特に治療処置に対する順応性という利点を有する二官能−キメ ラ抗体を製造できることが認められよう。かかる二官能−キメラ抗体は、たとえ ば、上記タイプの架橋剤および／または組換え法を用いる化学合成によって、合 成することができる。いずれにせよ、本発明は、二官能、キメラ、二官能−キメ ラ、ヒト向きにした、または抗原−認識フラグメントもしくはその誘導体のいず れにあっても、抗体の個々の生成方法によって、その技術的範囲が制限されると 理解すべきでない。 加えて、本発明はその技術的範囲内に、活性蛋白質、たとえばニュベルガーら のＰＣＴ特許出願公開Ｎｏ．ＷＯ８６／０１５３３（１９８６年３月１３日公開 ）に開示されたタイプの酵素が融合した、免疫グロブリン（上記の）または免疫 グロブリンフラグメントを含むものである。かかる生成物の開示を参考までに本 明細書に導入する。 留意点として、“二官能”、“融合した”、“キメラ”（ヒト向きも含む）、 および“二官能−キメラ”（ヒト向きも含む）の抗体構造としては、その個々の 文言の中に、抗原認識フラグメントからなる構造をも包含する。当業者によって 認識されるように、かかるフラグメントは、元のままの（intact）二官能、キメ ラ、ヒト向きにした、あるいは二官能−キメラの抗体の従来の酵素開裂によって 製造することができよう。しかしながら、元のままの抗体が問題の構造の性質の ために上記開裂の影響を受けやすくない場合、免疫グロブリンフラグメントを出 発物質として用いて、注目の構造を製造することができ；あるいは組換え技法を 用いる場合、発現(expressed)時に、化学的または生物学的手段によりインビボ またはインビトロで化合して、最終的所望の元のままの免疫グロブリン“フラグ メント”を製造することができる、所望の“フラグメント”をコード化するよう に、ＤＮＡ配列自体を適合させることができる。従って、この文脈において、語 句“フラグメント”を用いる。 さらに上述の如く、本発明で用いる免疫グロブリン（抗体）またはそのフラグ メントは、本質的に多クローン性または単一クローンであってよい。しかしなが ら、単一クローン抗体が好ましい免疫グロブリンである。かかる多クローン性ま たは単一クローン抗体は現在、当業者にとって周知であり、当業者であれば勿論 、本発明で使用できる有用な免疫グロフリンを十分に産生することができる［た とえばＧ．コーラーおよびＣ．ミルステインの「Nature」（２５６、４９５頁、 １９７５年）参照］。加えて、ハイブリドーマおよび／またはかかるハイブリド ーマによって産生されかつ本発明の実施に有用な単一クローン抗体は、アメリカ ン・タイプ・カルチャー・コレクション（“ＡＴＣＣ”）（メリーランド州２０ ８５２、ロックビル、パークラウン・ドライブ１２３０１）などの出所、または 商業的にはたとえばボアーリンガー−マンニヘイム・ビオケミカルズ（インディ アナ州４６２５０、インディアナポリス、ピー・オー・ボックス５０８１６）か ら一般に入手可能である。 本発明で使用する特に好ましい単一クローン抗体は、腫瘍関連抗原を認識する ものである。かかる単一クローン抗体としては、これらに限定されるものでない が、たとえば以下に示すものが包含される。 最も好ましい具体例において、リガンド含有コンジュゲートは、Ｕ．Ｓ．特許 出願Ｎｏ．０７／５４４２４６（１９９０年６月２６日出願）［ＰＣＴ特許出願 公開Ｎｏ．ＷＯ９１／００２９５（１９９１年１月１０日公開）に対応］に開示 の、キメラ抗体ＢＲ９６（“Chi ＢＲ９６”）から得られる。Chi ＢＲ９６は、 内在するネズミ／ヒトキメラ抗体であって、留意点として、乳房、肺、結腸およ び卵巣癌腫から派生するものなどのヒト癌腫細胞によって発現されるフコシル化 ルイス（Lewis）Ｙ抗原と反応する。ハイブリドーマ発現キメラＢＲ９６（Chi ＢＲ９６と同一）は、ブタペスト条約の条項において、１９９０年５月２３日に 、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（“ＡＴＣＣ”）（メリーラ ンド州２０８５２、ロックビル、パークラウン・ドライブ１２３０１）に寄託さ れた。このハイブリドーマのサンプルは、受託番号ＡＴＣＣ１０４６０の下で入 手可能である。Chi ＢＲ９６は、一部、その親ＢＲ９６出所から得られる。ハイ ブリドーマ発現ＢＲ９６は、ブタペスト条約の条項において、１９８９年２月２ １日にＡＴＣＣで寄託され、受託番号ＨＢ１００３６の下で入手可能である。所 望のハイブリドーマを培養し、当該分野で現在周知の標準法を用いて、生成する 抗体を細胞培養物の上澄み液から単離する［ハレル著“単一クローン・ハイブリ ドーマ抗体：技法と用途”（ＣＲＣプレス、１９８２年）参照］。 このように、使用する“免疫グロブリン”または“抗体”は、その意味におい て、上述の免疫グロブリン／抗体形態または構造の全てを含むものである。 本発明の各化合物の合成 本発明のリンカー、薬物／リンカー、およびコンジュゲートは、当該分野で公 知の本明細書に記載した技法により、または手引として本明細書に記載および／ または当該分野で公知の技法を用いる慣例実験を介して製造することができる。 薬物のリンカーへの結合は、薬物の求核性原子（Ｏ、ＮまたはＳ）を、自己犠牲 スペーサーまたはペプチドのカルボキシ末端に反応させることによって行なう。 この反応は、以下の通りに示される。 ここで、Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ、トシレート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドなどの 脱離可能基 ｙ＝ＯＨ、ＮＨ2、ＳＨ、ＮＨ−低級アルキルなどの求核性基 Ｒ＝リンカーの残基 アルデヒドまたはケトンへの結合は、エノールまたはＮ−低級アルキルエナミ ンの形状のアルデヒドまたはケトンを有することによって行うことができる。遊 離エナミンの除去（release）において、自発的にアルデヒドまたはケトンに加 水分解することが予期される。 以下に示す反応式は、製造方法の実例である（なお、化合物Ｎｏ．は実施例Ｎ ｏ．に対応する）。 反応式１ 反応式２ 反応式３（パートＩ） 反応式３（パートII） 反応式４（パートＩ） 反応式４（パートＩＩ） 反応式５ 反応式６ 反応式７ 反応式８ 反応式９（パートＩ） 反応式９（パートＩＩ） 反応式１０ 反応式１１ 反応式１２ 次に実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、これらの実施例に限定さ れると解釈すべきではない。 実施例１ Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）： 乾燥塩化メチレン（２５０ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ塩酸塩（２３．７８ｇ 、５６．４２ミリモル）の撹拌懸濁液をアルゴン下ｒｔ（室温）にて、トリメチ ルシリルクロリド（１５ｍｌ、２．１当量）およびＤＩＥＡ（１０．３ｍｌ、１ ．０５当量）で処理する。混合物を１ｈ（時間）加熱還流し、その間に、均質と なり、次いで０℃に冷却する。ＤＩＥＡ（３１ｍｌ、３．１当量）を加えた後、 ｐ−アニシルジフェニルメチルクロリド（１８．２９ｇ、１．０５当量）を加え る。反応液をｒｔで１４ｈ撹拌する。溶媒を蒸発し、残渣を酢酸エチルとｐＨ５ 緩衝剤（０．０５Ｍビフタレート）間に分配する。有機相をさらにｐＨ５緩衝剤 、水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発して淡黄色泡状物を得 る（３４．７１ｇ、９６％）。 ＨＲＭＳ 計算値：６４１．３０１５ 実測値：６４１．３００１ 実施例２ Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）： 塩化メチレン／アセトニトリル（１：１、８０ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（ Ｍｔｒ）１（５．２５ｇ、８．１９ミリモル）をｒｔにて、ジエチルアミン（８ ０ｍｌ）で処理する。１．５ｈ後、溶媒を蒸発する。残渣を６０℃にてアセトニ トリル（５０ｍｌ×２）でフラッシし、次いでエーテル（８０ｍｌ）と共にトリ チュレートする。得られる固体を濾取し、エーテルで洗い、次いで塩化メチレン ／メタノール（１：１）にできる限り溶解する。幾らかの副生物固体を濾去し、 濾液を減圧濃縮する。得られる明黄褐色固体を４ｈ減圧乾燥する（３．２ ２２１ｇ、９４％）。 実施例３ Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＯＳｕ： ＤＭＥ（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）2（５．５５６７ｇ、 ８．６７２ミリモル）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１．０９７８ｇ、 １．１当量）の撹拌溶液を０℃にて、０．５Ｍ−ＤＣＣ／塩化メチレン（１９． １ｍｌ、１．１当量）で処理する。混合物をｒｔまで徐々に加温する。１４ｈ後 、ＤＣＵ固体を濾去し、濾液を蒸発乾固する。粗活性エステルを、精製せずに用 いる。 実施例４ Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）： ＤＭＦ（７０ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＯＳｕ３（約８．６７ ２ミリモル）およびＬｙｓ（Ｍｔｒ）２（３．６２９４ｇ、１当量）の撹拌溶液 をｒｔにて、ＤＩＥＡ（４．５ｍｌ、３当量）で処理する。４ｈ後、混合物を酢 酸エチル（２５０ｍｌ）で希釈する。溶液をｐＨ４緩衝剤（０．０５Ｍビフタレ ート）（２回）、水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。 残渣を塩化メチレン（４００ｍｌ）でフラッシして、淡黄色泡状物を得、これを 精製せずに使用する。 実施例５ Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ： 塩化メチレン（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔ ｒ）４（約８．６７２ミリモル）およびジ−ｔ−ブチルジカーボネート（２．８ ３９０ｇ、１．５当量）の撹拌溶液をｒｔにて、ピリジン（０．７３６ｍｌ、１ ．０５当量）で処理する。２０分後、ｐ−アミノベンジルアルコール（１．６０ ２０ｇ、１．５当量）を加える。撹拌を１６ｈ続け、次いで溶媒を蒸発し、残渣 を２ｈ減圧乾燥する。粗生成物を精製せずに使用する。 元素分析（Ｃ74Ｈ75Ｎ5Ｏ7・２Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７５．１７、Ｈ６．７３、Ｎ５．９２ 実測値：Ｃ７４．８９、Ｈ６．３７、Ｎ５．７５ 実施例６ Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ： アセトニトリル（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＯＨ５（約８．６７２ミリモル）をｒｔにて、ジエチルアミン（ ７５ｍｌ）で処理する。２ｈ後、溶媒をロトバップ（rotovap、回転エバポレー タ）にて４０℃で除去し、残渣を１ｈ減圧乾燥し、次いで塩化メチレン（１５０ ｍｌ）にできる限り溶解する。固体を濾去し、濾液を減圧濃縮する。残渣をシリ カにて、１）２．５％、２）３％および３）３．５％メタノール／塩化メチレン で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物を無色泡状物で得る（２．８４ ０３ｇ、３５％（４ステップ））。 元素分析（Ｃ59Ｈ65Ｎ5Ｏ5・Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７５．２１、Ｈ７．１７、Ｎ７．４３ 実測値：Ｃ７５．３７、Ｈ６．９６、Ｎ７．２４ 実施例７ａ Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＳｕ： 塩化メチレン（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｐｈｅ（５．１０４３ｇ、１３． １７ミリモル）およびＮＨＳ（１．５９２ｇ、１．０５当量）を０℃にて、ＤＣ Ｃ（２．８５４ｇ、１．０５当量）で処理する。氷浴をｒｔまで加温せしめ、混 合物を１４ｈ撹拌する。ＤＣＵを濾去し、濾液を蒸発する。得られる無色ガラス 状物の粗生成物を精製せずに用いる。 実施例７ｂ Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＳｕ ７ｂ： これは、実施例７ａの記載に準じ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ（７．０２ｇ、２０．７ ミリモル）から製造した。 実施例７ｃ Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＳｕ： これは、実施例７ａの記載に準じ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ（５．０４１４ｇ、１５ ３１ミリモル）から製造した。 実施例８ａ Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）： 水（１００ｍｌ）およびＤＭＥ（５０ｍｌ）中のＬｙｓ（Ｍｔｒ）２（４．６ ８６ｇ、１１．２０ミリモル）およびＮａＨＣＯ3（９４１．０ｍｇ、１当量） の懸濁液を、ＤＭＥ（５０ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＳｕ ７ａ（１１． ２０ミリモル）の溶液で処理する。次いでＴＨＦ（２５ｍｌ）を加えて、溶解を 助ける。混合物をｒｔで２日間撹拌し、次いでできるだけ多くのＤＭＥをロトバ ップで除去する（浴温３０℃）。得られるゴム質懸濁液を酢酸エチルとｐＨ５緩 衝剤間に分配する。有機相を水および塩水で洗い、乾燥し、蒸発して淡黄色泡状 物を得る。これを塩化メチレン（１００ｍｌ）でフラッシする。ＴＬＣにより、 生成物が十分に純粋であることが認められ、これを精製せずに使用する（８．５ ５９ｇ、９７％）。 元素分析（Ｃ50Ｈ49Ｎ3Ｏ6・Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７４．５１、Ｈ６．３８、Ｎ５．２１ 実測値：Ｃ７４．１７、Ｈ６．５７、Ｎ５．４１ 実施例８ｂ Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）： これは、実施例８ａの記載に準じ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＳｕ ７ｂ（２０． ７ミリモル）およびＬｙｓ（Ｍｔｒ）２（９．０９ｇ、１．０５当量）から製造 した（１５．２８ｇ、１００％）。 ＨＲＭＳ 計算値：７４０．３７００ 実測値：７４０．３７１２ 実施例８ｃ Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）： ＤＭＥ（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＳｕ ７ｃ（１５．３１ミリ モル）の溶液を、水／ＤＭＥ（２：１、１５０ｍｌ）中のＬｙｓ（Ｍｔｒ）２（ ６．４０８０ｇ、１当量）および重炭酸カリウム（１．５３３１ｍｇ、１当量） の撹拌溶液に加える。１６ｈ後、ＤＭＥを減圧除去し、得られる懸濁液をクエン 酸（３．２２ｇ、１．１当量）／水（２５ｍｌ）で処理する。混合物を酢酸エチ ルで抽出する。有機相を水(2回）および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し 、減圧濃縮して黄色泡状物を得、これを精製せずに用いる。 実施例９ａ Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢ−ＯＨ： 塩化メチン（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）８ａ（７ ．７２８ｇ、９．８０８ミリモル）およびｐ−アミノベンジルアルコール（１． ４５０ｇ、１．２当量）の撹拌溶液をｒｔにて、ＥＥＤＱ（３．６４０ｇ、１． ５当量）で処理する。２０ｈ後、溶媒を蒸発する（水浴３０℃）。固体残渣をエ ーテル（２００ｍｌ）と共にトリチュレートし、得られる懸濁液を１５分間超音 波処理し、ｒｔで２ｈ静置する。得られる固体を濾取し、エーテルで十分に洗い 、減圧乾燥する（７．６１４０ｇ、８７％）。 元素分析（Ｃ57Ｈ56Ｎ4Ｏ6・Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７５．１４、Ｈ６．４２、Ｎ６．１５ 実測値：Ｃ７５．２５、Ｈ６．０２、Ｎ６．４９ 実施例９ｂ Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ： これは、実施例９ａの記載に準じ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）８ｂ（ １５．２８ｇ、２０．６５ミリモル）から製造した（１４．２４ｇ、８２％）。 元素分析（Ｃ53Ｈ56Ｎ4Ｏ6・０．５Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７３．７６、Ｈ６．７７、Ｎ６．４９ 実測値：Ｃ７４．０１、Ｈ６．６８、Ｎ６．６３ 実施例９ｃ Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ： これは、実施例９ａの記載に準じ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）８ｃ （１０．８９８５ｇ、１５．３１ミリモル）から製造した（１１．００７３ｇ、 ８８％）。 元素分析（Ｃ51Ｈ52Ｎ4Ｏ6・Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７３．３６、Ｈ６．５２、Ｎ６．７１ 実測値：Ｃ７３．０２、Ｈ６．７２、Ｎ６．５４ 実施例１０ａ Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢ−ＯＨ： 塩化メチレン（３５ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢ −ＯＨ９ａ（４．２８５７ｇ、４．８０ミリモル）をｒｔにて、ジエチルアミン （５０ｍｌ）で処理する。混合物を少しの間超音波処理し、ｒｔで４ｈ撹拌する 。その後、ＴＬＣによって出発物質は見られなかった。溶媒を蒸発し、残渣を塩 化メチレンでフラッシし、シリカにて、１）２％、２）３％および３）４％メタ ノール／塩化メチレンで溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物を無色泡 状物で得る（２．２３０ｇ、６９％）。 元素分析（Ｃ42Ｈ46Ｎ4Ｏ4・１／２Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７４．２０、Ｈ６．９７、Ｎ８．２４ 実測値：Ｃ７４．２８、Ｈ７．００、Ｎ８．３４ 実施例１０ｂ Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ： 塩化メチレン／メタノール（５：１、７５ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙ ａ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ ９ｂ（１３．９４ｇ、１６．５０ミリモル）の溶液 を、ジエチルアミン（１５０ｍｌ）で処理する。反応液を３０分間超音波処理し 、次いでｒｔで３ｈ静置する。溶媒を蒸発し、残渣を塩化メチレンでフラッシす る。残った物質をシリカにて、１）２％、２）３％、３）３．５％および４）４ ％メタノール／塩化メチレンで溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物を 無色泡状物で得る（６．２５１０ｇ、６１％）。 ＨＲＭＳ（Ｃ38Ｈ47Ｎ4Ｏ4として） 計算値：６２３．３５９８ 実測値：６２３．３６０６ 元素分析（Ｃ38Ｈ46Ｎ4Ｏ4・Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７１．２２、Ｈ７．５５、Ｎ８．７４ 実測値：Ｃ７１．４１、Ｈ７．５１、Ｎ８．６６ 実施例１０ｃ Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ： ＤＭＦ（５０ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ９ ｃ（１１．００７３ｇ、１３．４７ミリモル）の溶液をｒｔにて、ジエチルアミ ン（２５ｍｌ）で処理する。２．５ｈ後、混合物を高減圧下で濃縮し、残渣を塩 化メチレン（１００ｍｌ×２）、次いでトルエン（１５０ｍｌ）でフラッシする 。残った物質をシリカにて、塩化メチレン／（酢酸エチル／メタノール＝５：１ ）＝１）４：１、２）１：１、３）１：１．６および４）１：３で溶離す るクロマトグラフィーに付して、生成物を淡黄色泡状物で得る（５．７８１７ｇ 、７２％）。 実施例１１ Ｎ，Ｎ−ビス−カルボベンジルオキシエチレンジアミン： １Ｍ−ＮａＯＨ（３１０ｍｌ、１当量）中のエチレンジアミン（９．４ｍｌ、 ０．５当量）の強撹拌溶液に０℃にて、ベンジルクロロホルメート（４０ｍｌ、 ２８０ミリモル）を４５分にわたって滴下する。暗白色沈殿物が形成し、混合物 を滴下後４ｈ撹拌する。得られる固体生成物を濾取し、水、次いでヘキサンで洗 い、一夜風乾する（４６．１７ｇ、１００％）。 実施例１２ Ｎ−カルボベンジルオキシエチレンジアミン塩酸塩： 氷酢酸（１００ｍｌ）中のＮ，Ｎ−ビス−カルボベンジルオキシエチレンジア ミン１１（２３．９１ｇ、７２．８ミリモル）を、１２Ｍ−ＨＣｌ（１２．１ｍ ｌ、２当量）で処理する。撹拌混合物を、１ｈ加熱還流し、次いでｒｔにて一夜 静置する。少量の固体を濾去し、濾液をエーテル（７００ｍｌ）で希釈し、ｒｔ で２ｈ静置する。得られる白色固体生成物を濾取し、エーテルで繰返し洗い、減 圧デシケーターで一夜乾燥する（９．２４４０ｇ、５５％）。 実施例１３ Ｎ−カルボベンシルオキシ−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルエ チル）エチレンジアミン： メタノール／塩化メチレン（３：１、１００ｍｌ）中のＮ−カルボベンジルオ キシエチレンジアミン塩酸塩１２（５．０００９ｇ、２１．６８ミリモル）の撹 拌溶液をｒｔにて、ｔ−フチルアクリレート（６４ｍｌ、２０当量）およびトリ エチルアミン（３．３ｍｌ、１．１当量）で処理する。２日後、溶媒をロトバッ プで除去する。残渣を３０分間減圧乾燥し、次いで３０％酢酸エチル／エーテル と５０％飽和ＮａＨＣＯ3間に分配する。有機相を水および塩水で洗い、硫酸ナ トリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカにて、２０％酢酸エチル／ヘキサ ンで溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物をどろどろした無色油状物で 得る（９．３８０１ｇ、９６％）。 元素分析（Ｃ24Ｈ38Ｎ2Ｏ6・０．５Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ６２．７２、Ｈ８．５５、Ｎ６．０９ 実測値：Ｃ６２．５４、Ｈ８．２７、Ｎ５．９５ 実施例１４ Ｎ，Ｎ−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）エチレンジアミン・ジ塩酸 塩： Ｎ−カルボベンジルオキシ−Ｎ’，Ｎ’−ビス−ｔ−ブトキシプロピオニルエ チレンジアミン１３（１８．３６４０ｇ、４０．７６ミリモル）を、ガラス濾過 器内のラニー・ニッケル床に通す。濾液を窒素でガス抜きし、１０％Ｐｄ／Ｃ（ １ｇ）および１２Ｍ−ＨＣｌ（６．８ｍｌ、２当量）を加える。混合物をパール (Parr)振とう器で５０ｐｓｉにて１６ｈ水素添加し、もう一度窒素でガス抜きす る。触媒をセライト(celite)床で濾去する。濾液を減圧濃縮し、残渣を塩化メチ レン（２回）でフラッシして、オフホワイト泡状物を得る（１５．８６９６ｇ、 １００％）。 実施例１５ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）エチ レンジアミン： アセトニトリル（３０ｍｌ）中のＮ，Ｎ−ビス−ｔ−ブトキシプロピオニルエ チレンジアミン・ジ塩酸塩１４（５．３３６３ｇ、１３．７０ミリモル）の撹拌 溶液をアルゴン下０℃にて、ＤＩＥＡ（４．７７ｍｌ、２当量）および無水マレ イン酸（１．４１１１ｇ、１．０５当量）で処理する。反応液をｒｔまで徐々に 加温する。１６ｈ後、トリメチルシリルクロリド（５．２ｍｌ、３当量）および ＤＩＥＡ（７．２ｍｌ、３当量）を加える。混合物を４ｈ加熱還流する。冷却下 、溶媒を減圧除去し、残渣を酢酸エチルに溶かす。溶液を飽和ＮａＨＣＯ3、水 および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカにて、 へキサン／酢酸（２．５：１）で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物 を淡黄色油状物で得る（２．９９８６ｇ、５５％）。 元素分析（Ｃ20Ｈ32Ｎ2Ｏ6として） 計算値：Ｃ６０．５９、Ｈ８．１３、Ｎ７．０７ 実測値：Ｃ６０．６５、Ｈ７．９８、Ｎ６．８８ 実施例１６ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（カルボキシエチル）エチレンジアミン ・ｐ−トルエンスルホン酸： 塩化メチレン（１００ｍｌ）中のＮ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−ｔ−ブ トキシプロピオニルエチレンジアミン１５（３．９９３４ｇ、１０．０７ミリモ ル）をｒｔにて、ｐ−トルエンスルホン酸・モノ水和物（５．７５ｇ、３当量） で処理する。反応液をｒｔで一夜撹拌する。溶媒をｒｔで蒸発し、ゴム質残渣を ３ｈ減圧乾燥する。ＮＭＲにより、ｔ−ブチルエステルの完全損失のシグナルが 認められた。粗生成物を精製せずに使用する。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ （３当量のｐ−トルエンスルホン酸を含有）２．２９（ｓ，９Ｈ）、２．７６（ ｍ，４Ｈ）、３．３９（ｍ，６Ｈ）、３．８１（ｂｒｔ，２Ｈ）、７．１１（ｓ ，２Ｈ）、７．１７（ｄ，６Ｈ）、７．４９（ｄ，６Ｈ）、９．２７（ｂｒ，１ Ｈ） 実施例１７ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（スクシンイミジルオキシカルボニルエ チル）エチレンジアミン： アセトニトリル（９０ｍｌ）中のＮ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−プロピ オニルエチレンジアミン・ｐ−トルエンスルホネート１６（約１０．０７ミリモ ル、２過剰当量のｐ−トルエンスルホン酸を含有）、トリエチルアミン（４．４ ｍｌ、３．１当量）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２．５５０２ｇ、２ ．２当量）の撹拌溶液を０℃にて、０．５Ｍ−ＤＣＣ／塩化メチレン（４５．３ ｍｌ、２．２５当量）で処理する。１４ｈ後、反応液を減圧濃縮し、残渣を酢酸 エチルと水間に分配する。水性相を酢酸エチルで再抽出する。コンバインした有 機相を水（２回）および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残 渣をシリカにて、酢酸エチル／塩化メチレン（１：１）で溶離するクロマトグラ フィーに付して、生成物を淡黄色泡状物で得る（１．２０４３ｇ、２５％、２ス テップ）。 実施例１８ａ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2： ＤＭＥ（３０ｍｌ）中のＬｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ６ （２．０９０３ｇ、２．２６２ミリモル）およびＮ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’− ビス−スクシンイミジルオキシプロピオニルエチレンジアミン１７（５４１．０ ｍｇ、０．５当量）の溶液を、ｒｔで２日間撹拌する。反応液を３０℃で減圧濃 縮し、残渣を酢酸エチルに溶解する。溶液を水（２回）および塩水で洗い、硫酸 ナトリウム上で乾燥し、蒸発して生成物を無色ガラス状物で得る（２．３６２３ ｇ、９９％）。 実施例１８ｂ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2： ＤＭＥ（５０ｍｌ）中のＮ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（カルボキシエ チル）エチレンジアミン・ｐ−トルエンスルホン酸１６（１．０６４３ｇ、１． ６９６ミリモル）の撹拌混合物を０℃にて、トリエチルアミン（０．６ｍｌ、２ ５当量）、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ１０ａ（２．２７５０ｇ、２ 当量）、ＮＨＳ（４３９．０ｍｇ、２．２５当量）およびＤＣＣ（塩化メチレン 中０．５Ｍ、８．５ｍｌ、２．５当量）で処理する。反応液をｒｔまで徐々に加 温する。１６ｈ後、ＤＣＵ副生成物を濾去し、濾液を減圧濃縮する。残渣をエー テルと共にトリチュレートし、得られる固体を濾取し、エーテルで洗い、減圧乾 燥する（２．０４９４ｇ、７６％）。 実施例１８ｃ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2： これは、Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−スクシンイミジルオキシプロピ オニルエチレンジアミン１７から製造した。 ＨＲＭＳ（Ｃ84Ｈ96Ｎ10Ｏ12Ｎａとして） 計算値：１４５９．７１０７ 実測値：１４５９．７０７ 実施例１９ａ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ ）2： 乾燥塩化メチレン（６０ｍｌ）中のＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌ ｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2１８ａ（２．３６２３ｇ、１．１２７ミリモル ）およびビス−ｐ−ニトロフェニノレカーボネート（１．５４２４ｇ、４．５当 量）を、新たに活性化した４Å粉末シーブ（８．５ｇ）およびＤＩＥＡ（０．８ ８３ｍｌ、４．５当量）で処理する。混合物を１６ｈ撹拌し、次いで濾過する。 濾液を減圧濃縮して、黄色固体を得、これをエーテル（２００ｍｌ）にできるだ け溶解する。懸濁液を超音波処理し、ｒｔで一夜撹拌する。得られる白色固体を 濾取し、エーテルで繰返し洗い、減圧乾燥する（２．４０８４ｇ、８８％）。 元素分析（Ｃ144Ｈ148Ｎ14Ｏ22・２Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ７０．２３、Ｈ６．２２、Ｎ７．９６ 実測値：Ｃ７０．１１、Ｈ６．２２、Ｎ７．９６ 実施例１９ｂ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： これは、実施例１９ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2１８ｂ（５１７．８ｍｇ、０．３２６ミリモル）から製 造した（５０９．１ｍｇ、７４％）。 実施例１９ｃ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： これは、実施例１９ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＰＯ（Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2１８ｃ（６．２４ｇ、４．３４ミリモル）から製造した （６．００ｇ、７４％）。 実施例２０ａ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ ）2： ＤＭＦ（２５ｍｌ）中のＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｍｔ ｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2１９ａ（７５３．０ｍｇ、０．３１０３ミリモル） およびＤＯＸ塩酸塩（３７７．９ｍｇ、２．１当量）の撹拌溶液をｒｔにて、Ｄ ＩＥＡ（０．１１４ｍｌ、２．１当量）で処理する。３日後、混合物を酢酸エチ ル（２００ｍｌ）に注ぎ、溶液を水（４回）および塩水で洗い、硫酸ナトリウム 上で乾燥し、蒸発してオレンジ色ガラス状物を得る。これをエーテル（２００ｍ ｌ）と共にトリチュレートし、得られる固体を濾取し、次いでシリカにて、塩化 メチレン／メタノール（１６：１）で溶離するクロマトグラフィーに付して、生 成物をオレンジ色固体で得る（８０３．８ｍｇ、８０％）。 実施例２０ｂ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： これは、実施例２０ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2１９ｂ（３４０．８ｍｇ、０．１６１ミリモル） から製造した（４１１．２ｍｇ、９３％）。 実施例２０ｃ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： これは、実施例２０ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2１９ｃ（６．００ｇ、３．３９ミリモル）から製 造した（６２０ｍｇ、７％）。 実施例２１ａ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・５Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： 塩化メチレン（２１ｍｌ）中のＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ （Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2２０ａ（３１８．７ｍｇ、０．０９８５ミリ モル）の撹拌溶液をｒｔにて、アニソール（３．２ｍｌ、３００当量）およびジ クロロ酢酸（０．２４４ｍｌ、３０当量）で処理する。２．５ｈ後、酢酸エチル （５０ｍｌ）を加える。混合物を４℃で２ｈ貯蔵する。得られる固体を濾取し、 酢酸エチル、次いでエーテルで繰返し洗い、次いで風乾する（２７４．５ｍｇ、 ９９．８％）。 実施例２１ｂ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・３Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： これは、実施例２１ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2２０ｂ（２８０．０ｍｇ、０．１０３ミリモル） から製造した（２３７．１ｍｇ、９０％）。 実施例２１ｃ ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・３Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： これは、実施例２１ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＰ−（Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2２０ｃ（５６９ｍｇ、０．２４８ミリモル）から 製造した（４５５ｍｇ、８０％）。 実施例２２ Ｎ−カルボベンジルオキシ−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルメ チル）エチレンジアミン： ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＮ−カルボベンジルオキシエチレンジアミン塩酸塩 １２（１３．９５ｇ、６０．４８ミリモル）および重炭酸カリウム（２４．２２ ｇ、４当量）の撹拌混合物を０℃にて、ｔ−ブチルブロモアセテート（２２ｍｌ 、２．２５当量）で１０分にわたり滴下処理する。混合物をｒｔまで加温する。 撹拌を１２ｈ続け、次いで混合物をエーテル／酢酸エチル（３：１）と５０％飽 和重炭酸ナトリウム間に分配する。有機相を水（３回）、塩水で洗い、硫酸ナト リウム上で乾燥し、蒸発してどろどろした油状物を得る。これを６０℃にてヘプ タンで数回フラッシして、過剰のｔ−ブチルブロモアセテートを除去し、次いで シリカにて、１）ヘキサン、２）５％酢酸エチル／ヘキサン、および３）２５％ 酢酸エチル／ヘキサンで溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物をどろど ろした無色油状物で得る（１８．５３ｇ、７３％）。 実施例２３ Ｎ，Ｎ−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）エチレンジアミン・ジ塩酸 塩： エタノール（７５ｍｌ）中のＮ−カルボベンジルオキシ−Ｎ’，Ｎ’−ビス− （ｔ−ブトキシアヤチル）エチレンジアミン２２（１５．０２ｇ、３５．５４ミ リモル）の溶液を、ラニー・ニッケル床で濾過する。酢酸（６．１ｍｌ、３当量 ）を加え、混合物を実施例４の記載に準じ水素添加する。粗生成物を精製せずに 使用する。 実施例２４ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）エチ レンジアミン： ＣＨＣｌ3（１５０ｍｌ）中のＮ，Ｎ−ビス−（ｔ−ブトキシアセチル）エチ レンジアミン・ジ塩酸塩２３（約３５．５４ミリモル）をｒｔにて、無水マレイ ン酸（３．８３ｇ、１．１当量）で処理する。混合物を１４ｈ撹拌し、次いで溶 媒を蒸発する。残渣をＣＨＣｌ3（２００ｍｌ）でフラッシし、次いでアルゴン 下アセトニトリル（２００ｍｌ）に溶解する。撹拌混合物を０℃に冷却し、トリ メチルシリルクロリド（１８ｍｌ、４当量）およびトリエチルアミン（２０ｍｌ 、４当量）で処理する。氷浴を取除き、混合物を２．５ｈ加熱還流する。溶媒を 減 圧除去し、残渣をエーテルと３０％飽和重炭酸ナトリウム間に分配する。有機相 を水、塩水で洗い、乾燥し、蒸発する。残渣をシリカにて、ヘキサン／酢酸エチ ル（２．５：１）で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物をワックス状 固体で得る（８．２５ｇ、６３％、３ステップ）。 実施例２５ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（カルボキシメチル）エチレンジアミン ・ｐ−トルエンスルホン酸： 塩化メチレン（７０ｍｌ）中のＮ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブ トキシカルボニルメチル）エチレンジアミン２４（２．６７１８ｇ、７．２５ミ リモル）の撹拌溶液をｒｔにて、ｐ−トルエンスルホン酸・モノ水和物（４．１ ４００ｇ、３当量）で処理する。３０ｈ後、得られる白色固体を濾取し、塩化メ チレンおよびエーテルで繰返して洗い、次いで減圧乾燥する。ＮＭＲにより、生 成物１当量当り１．４〜１．５当量のｐ−トルエンスルホン酸が認められた（生 成物：３．７５３１ｇ、１００％）。 元素分析（Ｃ10Ｈ13Ｎ2Ｏ6・１．３Ｃ7Ｈ7Ｏ3Ｓ・２Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ４４．４８、Ｈ５．１０、Ｎ５．４３ 実測値：Ｃ４４．５１、Ｈ４．９６、Ｎ５．２０ 実施例２６ａ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2： ＤＭＥ（１５０ｍｌ）中のＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ１０ａ（２ ．５１７９ｇ、３．７５３ミリモル）、Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ カルボキシメチル）エチレンジアミン・ｐ−トルエンスルホン酸２５（８０４． ０ｍｇ、０．５当量）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（４７５．２ｍｇ、 １当量）の撹拌溶液を０℃にて、ＤＩＥＡ（０．３３ｍｌ、０．５当量）および ０． ５Ｍ−ＤＣＣ／塩化メチレン（９．０ｍｌ、１．２当量）で処理する。６ｈ後、 ＤＣＵを濾去し、濾液を減圧濃縮する。残渣を酢酸エチルと水間に分配する。有 機相を水（２回）および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧濃縮する 。残渣を塩化メチレン（１００ｍｌ）にできる限り溶解し、次いで混合物をエー テル（１００ｍｌ）で希釈する。一夜静置後、得られる固体を濾取し、風乾する （２．６２９５ｇ、９０％）。 実施例２６ｂ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2： これは、実施例２６ａの記載に準じ、Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ カルボキシメチル）エチレンジアミン・ｐ−トルエンスルホン酸２５（５００ｍ ｇ、１．１６ミリモル）およびＶａｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ１０ｂ（ １．４４ｇ、２当量）から製造した（１．６８ｇ、９５％）。 元素分析（Ｃ86Ｈ100Ｎ10Ｏ12・２Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ６８．７８、Ｈ６．９８、Ｎ９．３３ 実測値：Ｃ６８．８７、Ｈ７．５４、Ｎ９．４８ 実施例２７ａ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： 塩化メチレン（２５ｍｌ）中のＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ） −ＰＡＢＯＨ）2２６ａ（４７１．５ｍｇ、０．３１９ミリモル）およびビス− ｐ−ニトロフェニルカーボネート（９７１．０ｍｇ、１０当量）の撹拌懸濁液を アルゴン下ｒｔにて、ＤＩＥＡ（０．６１１ｍｌ、１１当量）で処理する。１６ ｈ後、溶媒を減圧除去し、残渣を３ｈ減圧乾燥する。残渣を塩化メチレン（１５ ｍｌ）に溶解し、これにゆっくり撹拌下、エーテル（３０ｍｌ）を加える。得ら れる懸濁液を一夜静置する。固体を濾取し、エーテル／塩化メチレン（２：１） で洗い、減圧乾燥する（４１１．５ｍｇ、６８％）。 実施例２７ｂ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： これは、実施例２７ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2２６ｂ（３００ｍｇ、０．２０５ミリモル）から製造し た（３４７．７ｍｇ）９４％）。 実施例２８ａ Ｍｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： ＮＭＰ（１０ｍｌ）中のＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡ ＢＣ−ＰＮＰ）2２７ａ（４１０．３ｍｇ、０．２１７ミリモル）およびドキソ ルビシン塩酸塩（２８３．０ｍｇ、２．２５当量）の溶液を、ＤＩＥＡ（０．０ ９４ｍｌ、２．５当量）で処理する。４８ｈ後、混合物を酢酸エチルに注ぐ。溶 液を水（３回）で洗い、減圧蒸発する。各場合、ＴＬＣにより生成物を含有する ことが認められる幾らかのオレンジ色固体が形成する。これを濾取し、その後で 有機可溶成分とコンバインしてから、クロマトグラフィーに付す。コンバインし た物質をシリカにて、塩化メチレン／（酢酸エチル／メタノール＝５：１）＝１ ）６：４、および２）１：１で溶離するクロマトグラフィーに付して，生成物 をオレンジ色固体で得る（３５１．８ｍｇ、６０％）。 実施例２８ｂ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： これは、実施例２８ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2２７ｂ（６．３５１ｇ、３．５３６ミリモル）か ら製造した（２．７９ｇ、３０％）。 実施例２９ａ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・２Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： 塩化メチレン(１５ｍｌ)中のＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）− ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2２８ａ（１９２．０ｍｇ、０．０７１ミリモル）の撹拌溶 液をｒｔにて、アニソール（１．５４ｍｌ、２００当量）およびジクロロ酢酸（ ０．１１７ｍｌ、２０当量）で処理する。１ｈ後、酢酸エチル（１５ｍｌ）を加 える。得られる固体を濾取し、酢酸エチルおよびエーテルで洗い、減圧乾燥する （１８１．０ｍｇ、１００％）。 実施例２９ｂ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・２Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： これは、実施例２９ａの記載に準じ、ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2２８ｂ（２３２ｍｇ、０．０８９１ミリモル）か ら製造した（１７１ｍｇ、７８％）。 実施例３０ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＭＭＣ）2： ＮＭＰ（６ｍｌ）中のＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢ Ｃ−ＰＮＰ）2２７ａ（１８３．８ｍｇ、０．０９７１ミリモル）、マイトマイ シンＣ（７３．１ｍｇ、２．２５当量）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール・ モノ水和物（１３１．３ｍｇ、１０当量）および新たに活性化した４Å粉末シー ブ（０．５ｇ）の撹拌混合物をアルゴン下ｒｔにて、ＤＩＥＡ（０．１７ｍｌ、 １０当量）で処理する。４０ｈ後、混合物を濾過し、濾液を酢酸エチル（８０ｍ ｌ）で希釈する。溶液を水（４回）、塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、 蒸発する。残渣をシリカにて、塩化メチレン／（酢酸エチル／メタノール＝５： １）＝２：１で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物を明紫色固体で得 る（２０１．７ｍｇ、９１％）。 実施例３１ Ｍｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＭＭＣ）2・２Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： 塩化メチレン（３ｍｌ）中のＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）− ＰＡＢＣ−ＭＭＣ）2３０（１３４．６ｍｇ、０．０５９０ミリモル）の溶液を 、アニソール（１．２８ｍｌ、２００当量）および１Ｍクロロ酢酸／塩化メチレ ン（１．１８ｍｌ、２０当量）で処理する。３．５ｈ後、酢酸エチル（３０ｍｌ ）を加える。得られる紫色固体を濾取し、酢酸エチルで洗い、風乾する（９７． ８ｍｇ、８２％）。ＨＰＬＣにより、生成物は、溶液中分解して１つの生成物と なっているようである。 実施例３２ ２’−メトキシトリチル−パクリタキセル： 塩化メチレン（１４ｍｌ）中のパクリタキセル（０．５１ｇ、０．５９７ミリ モル）およびｐ−メトキシトリチルクロリド（４．６３ｇ、２５当量）の撹拌溶 液を窒素下ｒｔにて、ピリジン（１．２３ｍｌ、２５当量）で処理する。ｒｔで １６ｈ後、溶媒を蒸発し、残渣を酢酸エチルに溶解する。溶液を冷ｐＨ５緩衝剤 （１００ｍｌ×２）、水および塩水で洗い、乾燥し、蒸発する。残渣をシリカに て、３％メタノール／塩化メチレンで溶離するクロマトグラフィーに付して、生 成物を白色固体で得る（４８２ｍｇ、７２％）。 実施例３３ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−７−パクリタキセ ル）2： 塩化メチレン（５ｍｌ）中のパクリタキセル−２’−Ｍｔｒ３２（７８９．３ ｍｇ、０．７０１ミリモル）の溶液をアルゴン下０℃にて、ＤＩＥＡ（０．１２ ２ｍｌ、１当量）、ピリジン（０．０５７ｍｌ、１当量）およびジホスゲン（０ ．０４３ｍｌ、０．５当量）で処理する。混合物をｒｔまで１．５ｈ加温し、次 いでこれを注射器で、ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯ Ｈ）2２６ａ（５４７．３ｍｇ、０．５当量）／塩化メチレン（５ｍｌ）および ＤＩＥＡ（０．１２２ｍｌ、１当量）の撹拌懸濁液にｒｔにて加える。１６ｈ後 、混合物を酢酸エチルで希釈し、ｐＨ５緩衝剤（０．５Ｍビフタレート）、水お よび塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧濃縮する。残渣をシリカにて 、塩化メチレン／（酢酸エチル／メタノール＝５：１）＝１）５：１および２） ３：１で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物を無色ガラス状物で得る （８５９．２ｍｇ、６３％）。また少量のモノタキソールアダクト（１７２．０ ｍｇ、１８％）を回収した。 実施例３４ ＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−７−パクリタキセル）2・２ ＣｌＣＨ2ＣＯ2Ｈ： 塩化メチレン（３ｍｌ）中のＭＥｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）− ＰＡＢＣ−７−パクリタキセル）2３３（３３３．０ｍｇ、０．０８６１ミリモ ル）を、アニソール（１．８７ｍｌ、２００当量）および１Ｍクロロ酢酸／塩化 メチレン（１．７２ｍｌ、２０当量）で処理する。４ｈ後、混合物をエーテル（ ３０ｍｌ）で希釈する。得られる懸濁液を数分間超音波処理し、次いで固体を濾 取し、エーテルで洗う（２５６．３ｍｇ、９７％）。生成物は溶液中でゆっくり 分解するのが認められる。 実施例３５ Ｎ−カルボベンジルオキシ−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルメ チル）プロピレンジアミン： これは、実施例２２の記載に準じ、Ｎ−カルボベンジルオキシプロピレンジア ミン塩酸塩（３．４６２４ｇ、１４．１５ミリモル）から製造した（５．３０１ ７ｇ、８６％）。 実施例３６ Ｎ，Ｎ−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）プロピレンジアミン・ジ酢 酸： エタノール（７５ｍｌ）中のＮ−カルボベンジルオキシ−Ｎ’，Ｎ’−ビス− （ｔ−ブトキシカルボニルメチル）プロピレンジアミン３５（５．３０１７ｇ、 １２．１４４ミリモル）の溶液を、ラニー・ニッケル床を介して、酢酸（２．１ ｍｌ、３当量）／エタノール（７５ｍｌ）の溶液に濾過する。濾液を窒素でガス 抜きし、１０％パラジウム／活性炭（０．４ｇ）で処理する。混合物をパール装 置にて５０ｐｓｉで１６ｈ水素添加し、次いでセライト床で触媒を濾去する。濾 液を減圧濃縮し、残渣をクロロホルム（１５０ｍｌ）でフラッシする。粗生成物 を精製せずに使用する。 実施例３７ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）プロ ピレンジアミン： これは、実施例２４の記載に準じ、Ｎ，Ｎ−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニル メチル）プロピレンジアミン・ジ酢酸３６（１２．１４ミリモル）から製造した 。粗生成物をシリカにて、ヘキサン／酢酸エチル（３：１）で溶離するクロマト グラフィーに付して、生成物を淡黄色油状物で得る（２．０６５３ｇ、４４％、 ３ステップ）。 実施例３８ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（カルボキシメチル）プロピレンジアミ ン・ｐ−トルエンスルホン酸： 塩化メチレン（２５ｍｌ）中のＮ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブ トキシカルボニルメチル）プロピレンジアミン３７（２．０６ｇ、５．３９ミリ モル）の攪拌溶液をｒｔにて、ｐ−トルエンスルホン酸・モノ水和物（３．０７ ｇ、３当量）で処理する。１６ｈ後、溶媒を減圧除去する。残渣をエーテルと共 に４回トリチュレートする（各回毎に、エーテルをデカント除去する）。得られ る半固体物質をクロロホルム（１５０ｍｌ×２）でフラッシする。ＮＭＲにより 、生成物１モル当り１．４〜１．５モルのｐ−トルエンスルホン酸が認められる （生成物：２．６８ｇ、９７％）。 実施例３９ ＭＰｒ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2： これは、実施例２６ａの記載に準じ、Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ カルボキシメチル）プロピレンジアミン−ｐ−トルエンスルホン酸３８（２．６ ８４２ｇ、５．２５ミリモル）およびＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ１ ０ａ（７．０４３２ｇ、２当量）から製造した。但し、粗生成物をシリカにて、 塩化メチレン／（酢酸エチル／メタノール＝５：１）＝１）２：１および２）１ ．５：１で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物を白色固体で得る（４ ．５２５３ｇ、５５％）。 実施例４０ ＭＰｒ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： これは、実施例２７ａの記載に準じ、ＭＰｒ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2３９（１．７９９３ｇ、１．１４３ミリモル）から製造 した（１．８９０９ｇ、８７％）。 実施例４１ ＭＰｒ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： これは、実施例２８ａの記載に準じ、ＭＰｒ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2４０（７２２．７ｍｇ、０．３７９ミリモル）か ら製造した。粗生成物をシリカにて、塩化メチレン／メタノール＝１）２０：１ および２）１５：１で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物をオレンジ 色固体で得る（８６９．４ｍｇ、８４％）。 実施例４２ ＭＰｒ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・２Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： これは、実施例２９ａの記載に準じ、ＭＰｒ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2４１（７１４．３ｍｇ、０．２６３ミリモル）か ら製造した（６４５．９ｍｇ、９６％）。 実施例４３ ジ−ｔ−ブチルイミノジアセテート： ＤＭＦ（４０ｍｌ）中のグリシン・ｔ−ブチルエステル塩酸塩（５．０８１１ ｇ、３０．３１ミリモル）および重炭酸カリウム（６．３７３０ｇ、２．１当量 ）の攪拌混合物を０℃にて、ｔ−ブチルブロモアセテート（４．９ｍｌ、１当量 ）で処理する。氷浴を取除き、混合物をｒｔで１４ｈ攪拌する。溶媒を30℃で減 圧除去し、残渣を酢酸エチルと５０％飽和重炭酸ナトリウム間に分配する。有機 相を水（３回）および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧濃縮する。 残渣をシリカにて、酢酸エチル／ヘキサン＝１）５％および２）２５％で溶 離するクロマトグラフィーに付して、生成物を無色油状物で得る（４．９３１０ ｇ、６６％）。 実施例４４ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）プロ ピオンアミド： 塩化メチレン（１２ｍｌ）中の２−マレイミドプロピオン酸（１．０００７ｇ 、５．９１６ミリモル）の懸濁液をｒｔにて、塩化オキサリル（１．２ｍｌ、２ ．１当量）およびＤＭＦ（１滴）で処理する。４ｈ後、溶媒を蒸発する。残渣を 乾燥塩化メチレン（２０ｍｌ×２）でフラッシし、塩化メチレン（２ｍｌ）に溶 解する。これに、塩化メチレン（６ｍｌ）中のジ−ｔ−ブチルイミノジアセテー ト４３（１．４５１０ｇ、１当量）およびＤＩＥＡ（１．２４ｍｌ、１．２当量 ）の溶液を１５分にわたって滴下する。１４ｈ後、混合物を酢酸エチルで希釈し 、１５％クエン酸、水および塩水で洗う、有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、 減圧濃縮して淡黄色ガラス状物を得、これはＮＭＲにより、次工程に用いるのに 十分純粋であった（２．３４４８ｇ、１００％）。 実施例４５ Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（カルボキシメチル）プロピオンアミド ： 塩化メチレン（４０ｍｌ）中のＮ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ｔ−ブ トキシカルボニルメチル）プロピオンアミド４４（１．９１００ｇ、４．８２ミ リモル）の攪拌混合物をｒｔにて、トリフルオロ酢酸（２０ｍｌ）で処理する。 混合物をｒｔで２０分間超音波処理し、次いで３．５ｈ静置する。反応液を減圧 濃縮し、残渣をクロロホルム（５０ｍｌ×２）でフラッシし、次いでエーテルと 共にトリチュレートする。得られる淡黄色固体を濾取し、エーテルで洗う（１． ２２７３ｇ、９０％）。 ＨＲＭＳ 計算値：２８５．０７２３ 実測値：２８５．０７１２ 実施例４６ ＭＰ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2： これは、実施例２６ａの記載に準じ、Ｎ−マレオイル−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（ カルボキシメチル）プロピオンアミド４５（１４２．１ｍｇ、０．５００ミリモ ル）およびＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ１０ａ（６７１．０ｍｇ）２ 当量）から製造した。但し、粗生成物をシリカにて、塩化メチレン／（酢酸エチ ル／メタノール＝５：１）＝１）２：１および２）１．５：１で溶離するクロマ トグラフィーに付して、生成物を白色固体で得る（３４９．７ｍｇ、４４％）。 実施例４７ ＭＰ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： これは、実施例２７ａの記載に準じ、ＭＰ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔ ｒ）−ＰＡＢＯＨ）2４６（２２５．４ｍｇ、０．１４２ミリモル）から製造し た（１９５．５ｍｇ、７２％）。 実施例４８ ＭＰ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： これは、実施例２８ａの記載に準じ、ＭＰ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔ ｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2４７（１９５．０ｍｇ、０．１０２ミリモル）から 製造した。粗生成物をシリカにて、塩化メチレン／メタノール＝１）２０：１お よび２）１５：１で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物をオレンジ色 固体で得る（１１７．７ｍｇ、４２％）。 実施例４９ ＭＰ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・２Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： これは、実施例２９ａの記載に準じ、ＭＰ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔ ｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2４８（９１．０ｍｇ、０．０３３ミリモル）から製 造した（７６．４ｍｇ、９４％）。 実施例５０ Ｚ−βＡｌａ： ２Ｍ−ＮａＯＨ（２８１ｍｌ）中のβ−アラニン（５０．１０ｇ、０．５６２ モル）の攪拌溶液を０℃にて、ベンジルクロロホルメート（８８ｍｌ、１．１当 量）で１ｈにわたり滴下処理する。攪拌を０℃で１．５ｈ、次いでｒｔで１．５ ｈ続行する。得られる混合物をエーテル（５００ｍｌ×４）で抽出する。水性相 を５Ｍ−ＨＣｌ（１２０ｍｌ）で酸性化する。得られる白色沈殿物を濾取し、水 洗し、塩化メチレンに溶解する。溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧濃縮 して白色固体を得る（１１４．９５ｇ、９２％）。 実施例５１ Ｚ−βＡｌａ−ＯＳｕ： 塩化メチレン（７００ｍｌ）中のＺ−βＡｌａ５０（３７．４２ｇ、０．１６ ８モル）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１９．３４ｇ、１当量）の混合 物を、０℃で攪拌し、ＤＣＣ（３４．６９ｇ、１当量）で処理する。反応液をｒ ｔまで加温する。１６ｈ後、ＤＣＵを濾去し、濾液を減圧濃縮して白色泡状物を 得る（５３．８０ｇ、１００％）。 実施例５２ Ｚ−βＡｌａ−ＩＤＡ： 水（２４０ｍｌ）中のイミノジ酢酸（１６．８４ｇ、８４．３２ミリモル）お よび水酸化リチウム・モノ水和物（１０．６２ｇ、２当量）の攪拌溶液を０℃に て、ＤＭＥ（１３０ｍｌ）中のＺ−βＡｌａ−ＯＳｕ５１（２７．０１ｇ、０． ６６７当量）の溶液で処理する。１５分後氷浴を取除き、反応液をｒｔで１６ｈ 攪拌する。混合物を回転エバポレータにて２００ｍｌ容量に濃縮する。得られる 懸濁液を酢酸エチル（２５０ｍｌ×２）で抽出し、次いで水性相を８５％リン酸 でｐＨ１〜２に酸性化する。混合物を１０％イソプロパノール／酢酸エチル（２ ００ｍｌ×３）で抽出する。コンバインした有機相を２％リン酸および塩水で洗 い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発して無色ガラス状物を得、クロロホルムで フラッシして、泡状物を得る（２１．３６ｇ、７５％）。 元素分析（Ｃ15Ｈ18Ｎ2Ｏ7・Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ５０．５６、Ｈ５．６６、Ｎ７．８６ 実測値：Ｃ５０．５６、Ｈ５．４５、Ｎ８．２１ 実施例５３ Ｚ−βＡｌａ−ＩＤＡ−（ＯＳｕ）2： これは、実施例５１の記載に準じ、Ｚ−βＡｌａ−ＩＤＡ５２（２１．３６ｇ 、６３．１２ミリモル）から製造した。 元素分析（Ｃ23Ｈ24Ｎ4Ｏ11・０．５Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ５１．０２、Ｈ４．６５、Ｎ１０．３５ 実測値：Ｃ５０．８３、Ｈ５．１３、Ｎ１０．７５ 実施例５４ Ｚ−βＡｌａ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2： ＤＭＥ（２５０ｍｌ）中のＺ−βＡｌａ−ＩＤＡ−（ＯＳｕ）2５３（約６３ ．１２ミリモル）およびβ−アラニン・ｔ−ブチルエステル塩酸塩（２５．８０ ｇ、２．２５当量）の攪拌懸濁液をｒｔにて、ＤＩＥＡ（２４．７ｍｌ、２．２ ５当量）で処理する。１２ｈ後溶媒を蒸発し、残渣を酢酸エチル（４００ｍｌ） および２％リン酸間に分配する。有機相を水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム 上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカにて、１）酢酸エチル、酢酸エチル／メタ ノール＝２）１５：１および３）１０：１で溶離するクロマトグラフィーに付し て、生成物をどろどろした無色油状物で得る（２６．５６ｇ、７１％）。 元素分析（Ｃ29Ｈ44Ｎ4Ｏ9・Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ５７．０４、Ｈ７．５９、Ｎ９．１７ 実測値：Ｃ５７．１５、Ｈ７．３６、Ｎ９．４６ 実施例５５ βＡｌａ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2： Ｚ−βＡｌａ−ＩＤＡ−（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2５４（１６．９３ｇ、２８．５６ ミリモル）／無水エタノール（１００ｍｌ）に、窒素を３０分間吹込んでガス抜 きする。１０％パラジウム／活性炭（１ｇ）を注意深く加え、混合物をパール装 置にて、５０ｐｓｉで１６ｈ水素添加する。次いで触媒をセライト床で濾去し、 濾液を減圧濃縮する。残渣を塩化メチレンでフラッシして、無色泡状物を得る（ １３．１１ｇ、１００％）。 元素分析（Ｃ21Ｈ38Ｎ4Ｏ7・２．５Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ５０．０９、Ｈ８．６１、Ｎ１１．１２ 実測値：Ｃ５０．１７、Ｈ８．６１、Ｎ１０．５１ 実施例５６ マレオイル−βＡｌａ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2： クロロホルム（１００ｍｌ）中のβＡｌａ−ＩＤＡ−（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2５５ （６．２０ｇ、１３．５ミリモル）の攪拌溶液を、無水マレイン酸（１．４６ｇ 、１．１当量）で処理する。１．５ｈ後、混合物を減圧濃縮する。残渣をヘキサ ンでフラッシし、精製せずに用いる。 実施例５７ ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2： アセトニトリル（１５０ｍｌ）中のマレオイル−βＡｌａ−ＩＤＡ−（βＡｌ ａ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2５６（７．５０ｇ、１３．５ミリモル）の溶液をアルゴン 下０℃にて、トリメチルシリルクロリド（８．６ｍｌ、５．０２当量）、次いで トリエチルアミン（９．４ｍｌ、５．０２当量）で処理する。混合物を４ｈ加熱 還流し、ｒｔに冷却し、次いで、−２０℃で一夜貯蔵する。得られるトリエチル アミン塩酸塩固体を濾去し、濾液を減圧濃縮する。残渣を酢酸エチルと水間に分 配する。水性相をさらに酢酸エチルで抽出する。コンバインした有機相を硫酸ナ トリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカにて、１）５％、２）７％および ３）１０％メタノール／塩化メチレンで溶離するクロマトグラフィーに付して、 生成物を淡黄色ゴム状物で得る（４．８３ｇ、６６％）。 元素分析（Ｃ25Ｈ38Ｎ4Ｏ7・１．５Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ５３．０９、Ｈ７．３０、Ｎ９．９１ 実測値：Ｃ５３．１３、Ｈ６．９８、Ｎ１０．０５ 実施例５８ ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ）2： 塩化メチレン（４０ｍｌ）中のＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ）2 ５７（３．５０ｇ、６．５０ミリモル）の溶液をｒｔにて、トリフルオロ酢酸（ ３Ｏｍｌ）で処理する。混合物を１０分間超音波処理し、次いで１ｈ静置する。 溶媒をロトバップで蒸発し、残渣をクロロホルム（３回）およびエーテル（４回 ）でフラッシする。粗生成物を精製せずに用いる。 元素分析（Ｃ17Ｈ22Ｎ4Ｏ9・３Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ４２．５０、Ｈ５．８７、Ｎ１１．６６ 実測値：Ｃ４２．４４、Ｈ５．９２、Ｎ１１．５４ 実施例５９ ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−ＯＳｕ）2： ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＭＰ−ＩＤＡ（βＡｌａ）2５８（１３６．０ｍｇ、０ ．３１９ミリモル）の攪拌溶液をｒｔにて、ＤＣＣ（２６５．０ｍｇ、４．０１ 当量）で処理する。混合物をｒｔで１６ｈ攪拌し、次いで生成物の単離をせずに 、そのまま次工程に用いる。 実施例６０ ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2： ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ）2５８（約０．３１９ミリモル）含有の粗反応混 合物をＤＭＦ（５ｍｌ）で希釈し、次いでＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯ Ｈ１０ａ（４２９．１ｍｇ、２．０当量）で処理する。ｒｔで５ｈ攪拌後、溶媒 を高減圧下で除去し、残渣をエーテルと共にトリチュレートする。得られる固体 を濾取し、次いでシリカにて、不純物を除去する５％メタノール／酢酸エチル、 および１０％メタノール／塩化メチレンで溶離するクロマトグラフィーに付して 、生成物を溶離する（２２０．１ｍｇ、４０％）。 実施例６１ ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2 ： ＤＭＦ／塩化メチレン（１：１、６ｍｌ）中のＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｐ ｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＯＨ）2６０（９５ｍｇ、０．０５４８ミリモ ル）の攪拌溶液をｒｔにて、ビス−ｐ−ニトロフェニルカーボネート（１００ｍ ｇ、６当量）およびＤＩＥＡ（０．０５７ｍｌ、６．０当量）で処理する。１６ ｈ後溶媒を高減圧下で除去し、残渣を塩化メチレン／エーテル（１：１）と共に 、それが固体となるまでトリチュレートする。この懸濁液を冷凍庫に１．５ｈ貯 蔵し、次いで固体を濾取し、エーテルで洗う（１０５ｍｇ、９５％）。 実施例６２ ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2 ： ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2 ６１（１．４４５ｇ、０．７０１ミリモル）およびドキソルビシン塩酸塩（１ ．０１０ｇ、２．４８当量）／ＤＭＦ（５５ｍｌ）を、ＤＩＥＡ（０．３１ｍｌ 、２．５０当量）で処理する。ｒｔで４０ｈ後、溶媒を高減圧下で蒸発し、残渣 を塩化メチレン／エーテル（１：１）と共にトリチュレートする。得られる懸濁 液を少しの間超音波処理し、次いで固体を濾取し、エーテルで洗う。固体を１０ ％メタノール／クロロホルム（１００ｍｌ）にできる限り溶解する。混合物を濾 過し、濾液をロトバップにて約５０ｍｌに濃縮する。クロロホルム（５０ｍｌ） を加え、さらに操作を２回繰返す。得られる固体を濾取し、クロロホルム、次い でエーテルで洗う（１．２２ｇ、６１％）。 実施例６３ ＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・２Ｃｌ2 ＣＨＣＯ2Ｈ： 塩化メチレン（８ｍｌ）中のＭＰ−ＩＤＡ−（βＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍ ｔｒ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2６２（１３２ｍｇ、０．０４５９ミリモル）の攪 拌懸濁液を、アニソール（１ｍｌ、２００当量）およびジクロロ酢酸（０．０７ ６ｍｌ、２０当量）で処理する。混合物は直ちに均質となる。５分後にオレンジ 色沈殿物が形成し始める。２ｈ後酢酸エチル（２５ｍｌ）を加え、懸濁液を３０ 分間攪拌する。固体を濾取し、酢酸エチル、次いでエーテルで洗う（８９ｍｇ、 ８０％）。 実施例６４ Ｍ−Ｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ＝β−Ａｌａ−ｍＴ ＥＧ）2： ＭＴＥＧ−β−Ａｌａ・ヒドラジド（２５４ｍｇ、８６６μモル）を、５０μ ｌのＴＦＡと共に１０ｍｌのメタノールに溶解する。この溶液を、Ｍ−Ｅｔ−Ｉ ＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2（２７６ｍｇ、１０８μモル） ／無水メタノール４０ｍｌの懸濁液に加える。反応液を室温（ｒｔ）で３．５ｈ 攪拌する。反応混合物を沈殿点まで回転蒸発し、次いで１ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2を加 えて再溶解する。これを２５０ｍｌのエーテルに滴下して、赤色固体を沈殿させ る。固体を濾別し、エーテルで洗い、高減圧下で乾燥してＭ−Ｅｔ−ＩＤＡ−（ Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ＝β−Ａｌａ−ｍＴＥＧ）2を得る（３００ ｍｇ、９０％）。 マススペクトル：ＦＡＢ １３５４．６（Ｍ＋２Ｈ）2+ 元素分析（Ｃ132Ｈ164Ｎ18Ｏ44・４．０Ｈ2Ｏ・３．０ＴＦＡとして） 計算値：Ｃ５３．１１、Ｈ５．６５、Ｎ８．０８ 実測値：Ｃ５２．９９、Ｈ５．９６、Ｎ８．６４ ＦＴＩＲ：３４１２、２９３８、１７０２、１６８１、１６１６、１５２０、 １４１２、８３２、６９６ｃｍ-1 実施例６５ Ｍ−Ｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ＝β−Ａｌａ）2： β−Ａｌａヒドラジド・トリフルオロアセテート（５７８ｍｇ、１．７５ミリ モル）を、５０μｌのＴＦＡと共に１０ｍｌのメタノールに溶解する。この溶液 を、Ｍ−Ｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2（１１１ｍｇ 、４３．６μモル）／無水メタノール１５ｍｌの懸濁液に加える。反応液をｒｔ で１．５ｈ攪拌する。反応混合物を３ｍｌ容量まで回転蒸発し、次いで２００ｍ ｌのアセトニトリルに滴下して、赤色固体を沈殿させる。固体を濾別し、アセト ニトリルで洗い、高減圧下で乾燥して、Ｍ−Ｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ− ＰＡＢＣ−ＤＯＸ＝β−Ａｌａ）2を得る（１１７ｍｇ、９９％）。 1Ｈ−ＮＭＲ（ｄ6−ＤＭＳＯ）：（選択ピーク）δ１．１３（ｄ，６Ｈ）、３ ．９５（ｓ，６Ｈ）、６．９６（ｓ，２Ｈ） 実施例６６ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−３−アミノプロパノール： 塩化メチレン（５０ｍｌ）中の３−アミノプロパノール（１５ｍｌ、０．２０ モル）の溶液をｒｔにて、ｔ−ブチルピロカーボネート（４２．０２ｇ、１当量 ）／塩化メチレン（２５ｍｌ）で２ｈにわたり滴下処理する。一夜攪拌後、混合 物を蒸発し、ヘプタン（３回）でフラッシし、減圧乾燥して生成物をどろどろし た油状物で得る（３４．３１ｇ、１００％）。 元素分析（Ｃ8Ｈ17ＮＯ3として） 計算値：Ｃ５４．８４、Ｈ９．７８、Ｎ７．９９ 実測値：Ｃ５４．８０、Ｈ９．８２、Ｎ７．９７ 実施例６７ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−３−アミノプロピルメシレート： 保護されたアミノアルコール６４（６．６０１ｇ、３７．６７ミリモル）／塩 化メチレン（４５ｍｌ）をアルゴン下０℃にて、メタンスルホニルクロリド（２ ．９２ｍｌ、１．０当量）およびトリエチルアミン（５．２５ｍｌ、１．０当量 ）で３０分にわたり滴下処理する。混合物を１６ｈ攪拌し、次いで溶媒を蒸発す る。 残渣をエーテル（２００ｍｌ）と水（２５０ｍｌ）間に分配し、有機相を１０％ クエン酸、水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣を シリカにて、２％メタノール／塩化メチレンで溶離するクロマトグラフィーに付 す。生成物はｒｔで長期間にわたり不安定であった（５．８００ｇ、６１％）。 実施例６８ ジエチル・２−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル）−マロネート ： 水素化ナトリウム（鉱油中６０％、１．８４ｇ、４６ミリモル）をアルゴン下 ０℃でＴＨＦ（２０ｍｌ）に懸濁したものを、ジエチルマロネート（７ｍｌ、１ ．０当量）で注意深く処理し、混合物をｒｔまで加温する。それが均質になった とき、メシレート６５（５．８４ｇ、０．５当量）／ＴＨＦ（１５ｍｌ）を一度 に加える。混合物を一夜加熱還流し、ヘキサン／酢酸エチル（１：１）で希釈し 、水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカに て、２５−３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するクロマトグラフィーに付す（ ５．７５１ｇ、７９％）。 元素分析（Ｃ15Ｈ27ＮＯ6として） 計算値：Ｃ５６．７７、Ｈ８．５７、Ｎ４．４１ 実測値：Ｃ５６．６５、Ｈ８．４５、Ｎ４．４２ 実施例６９ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−５−アミノ−２−ヒドロキシメチルペンタノー ル： ジエステル６６（４．９５７ｇ、１５．６２ミリモル）／エーテル（１００ｍ ｌ）をアルゴン下０℃にて、ホウ水素化リチウム（ＴＭＦ中２Ｍ、２４ｍｌ、３ 当量）、次いでメタノール（１．９ｍｌ、３当量）で処理する。混合物を２．５ ｈ加熱還流し、次いでメタノール（２５ｍｌ）を注意深く加えた後、ｒｔまで冷 却して酢酸（２．７ｍｌ、３当量）を加えて反応を抑える。混合物を蒸発し、塩 化メチレン（２回）でフラッシする。残渣をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し 、混合物を一夜加熱還流し、次いで蒸発する。得られる油状物を、超音波処理下 でクロロホルム（１００ｍｌ）にできる限り溶解し、次いで無機物固体を濾去す る。濾液を蒸発し、残渣をシリカにて、９％メタノール／塩化メチレンで溶離す るクロマトグラフィーに付して、生成物をどろどろした油状物で得る（２．７７ ０ｇ、７６％）。 元素分析（Ｃ11Ｈ23ＮＯ4として） 計算値：Ｃ５６．６３、Ｈ９．９４、Ｎ６．００ 実測値：Ｃ５６．１６、Ｈ９．８３、Ｎ５．９４ 実施例７０ ５−アミノ−２−ヒドロキシメチルペンタノール・ＣＦ3ＣＯ2Ｈ： ５０％ＴＦＡ／塩化メチレン（４ｍｌ）中の５％水の溶液を、ジオール６７（ ０．１４５ｇ、０．６２１ミリモル）に加え、混合物を１ｈ攪拌する。溶媒を蒸 発し、残渣を塩化メチレン（２回）でフラッシする（０．１５３ｇ、１００％） 。 実施例７１ ５−マレイミド−２−ヒドロキシメチルペンタノール： アミノジオール６８／乾燥アセトニトリルをアルゴン下０℃にて、無水マレイ ン酸（１当量）およびＤＩＥＡ（１当量）で処理する。混合物をｒｔで４ｈ攪拌 する。反応液を０℃に再冷却し、トリメチルシリルクロリド（３当量）およびＤ ＩＥＡ（３当量）で処理する。混合物を４ｈ加熱還流し、次いでｒｔまで冷却し てから、蒸発する。残渣を酢酸エチルと水間に分配する。有機相を１０％クエン 酸、水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカ ゲルにてクロマトグラフィーに付して、生成物を得る。 実施例７２ ５−マレイミド−２−ヒドロキシメチルペンタノール・ビス−クロロホルメー ト： ジオール６９／乾燥塩化メチレンの溶液を、１Ｍホスゲン／トルエン（２０当 量）の強攪拌溶液に０℃にて滴下する。滴下終了後、混合物をｒｔで１６ｈ攪拌 し、次いで溶媒を回転エバポレータにて除去する。残渣を乾燥塩化メチレンでフ ラッシし、減圧乾燥する。粗ビス−クロロホルメートを精製せずに用いる。 実施例７３ ＭＰｒ−ＢＨＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＯＨ）2： 乾燥塩化メチレン中の粗ビス−ホルメート７０の攪拌溶液に０℃にて、塩化メ チレン中のＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＯＨ１０ａ（２当量）およびＤＩ ＥＡ（２当量）の溶液を一度に加える。混合物をｒｔで１６ｈ攪拌し、次いで溶 媒を蒸発する。残渣を酢酸エチルと水間に分配する。有機相を塩水で洗い、硫酸 ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。生成物を、シリカゲルを用いるカラムクロマ トグラフィーで精製する。 実施例７４ ＭＰｒ−ＢＨＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： 乾燥塩化メチレン中の７１、ビス−ｐ−ニトロフェニルカーボネート（６当量 ）および新たに活性化した４Å粉末シーブの攪拌混合物をアルゴン下ｒｔにて、 ＤＩＥＡ（６当量）で処理する。攪拌を１６ｈ続行した後、混合物を濾過し、濾 液を蒸発する。残渣を数時間減圧乾燥し、次いで最小量の塩化メチレンに溶解す る。これに、２倍容量のエーテルを加える。得られる固体を濾取し、エーテル／ 塩化メチレン（２：１）で洗い、減圧乾燥する。 実施例７５ ＭＰｒ−ＢＨＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： ビス−ｐ−ニトロフェニルカーボネート７２およびＤＯＸ塩酸塩（１．１当量 ）／ＤＭＦの攪拌溶液を、ＤＩＥＡ（１．１当量）で処理する。２ｈ攪拌後、混 合物を酢酸エチルで希釈する。溶液を水（４回）および塩水で洗い、硫酸ナトリ ウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカゲルにてクロマトグラフィーに付し、 生成物を得る。 実施例７６ ＭＰｒ−ＢＨＰ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・２Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： 化合物７３／塩化メチレンの攪拌溶液を、アニソール（１００当量）、次いで ジクロロ酢酸（１０当量）で処理する。１．５ｈ後、混合物を酢酸エチルで希釈 する。得られる懸濁液をｒｔで１ｈ攪拌し、次いでオレンジ色固体生成物を濾取 し、酢酸エチルで洗い、減圧乾燥する。 実施例７７ Ｎ−Adpoc−３−ヒドロキシアミノプロパン： 水中の３−ヒドロキシアミノプロパンおよび重炭酸ナトリウム（１当量）の攪 拌溶液をｒｔにて、１−（１’−アダマンチル）−１−メチル−エトキシカルボ ニルクロリド（１当量）で処理する。６ｈ後、得られる固体生成物を濾取し、水 洗し、減圧下で凍結乾燥する。粗生成物を精製せずに用いる。 実施例７８ Ｎ−Adpoc−３−メタンスルホニルオキシアミノプロパン： アルコール７５／塩化メチレンの攪拌溶液に０℃にて、メタンスルホニルクロ リド（１．０５当量）、次いでトリエチルアミン（１．０５当量）を加える。混 合物をｒｔまで加温し、ｒｔで一夜攪拌する。溶媒を蒸発し、残渣を酢酸エチル とｐＨ５緩衝剤（ビフタレート）間に分配する。有機相を水および塩水で洗い、 硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発して生成物を得、これを精製せずに用いる。 実施例７９ ｔ−ブチル・Ｎ−adpoc−５−アミノ−２−ｔ−ブトキシカルボニル−ペンタ ノエート： 乾燥テトラヒドロフラン中の水素化ナトリウムの攪拌懸濁液をアルゴン下０℃ にて、ジ−ｔ−ブチルマロネート（１当量）で注意深く処理する。混合物をｒｔ まで徐々に加温する。混合物が均質になったとき、０℃に再冷却し、次いでメシ レート７６（０．８当量）／テトラヒドロフランの溶液で一度に処理する。混合 物をｒｔまで加温し、次いで１６ｈ加熱還流する。ｒｔに冷却して、混合物をエ ーテルで希釈し、溶液を飽和塩化アンモニウム、水および塩水で洗い、硫酸ナト リウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカゲルにてクロマトグラフィーに付し 、生成物を得る。 実施例８０ ｔ−ブチル・５−アミノ−２−ｔ−ブトキシカルボニル−ペンタノン： Adpoc物質７７を、アニソール（１００当量）含有の５％トリフルオロ酢酸／ 塩化メチレンに溶解する。３０分後、溶媒をｒｔにて高減圧下で除去し、残渣を 数時間減圧乾燥する。粗生成物を精製せずに直ちに用いる。 実施例８１ ｔ−ブチル・５−マレイミド−２−ｔ−ブトキシカルボニル−ペンタノエート ： アミノジエステル７８／乾燥アセトニトリルをアルゴン下０℃にて、無水マレ イン酸（１当量）で処理し、攪拌混合物をｒｔで４ｈ攪拌する。混合物を０℃に 再冷却し、トリメチルシリルクロリド（３当量）およびＤＩＥＡ（３当量）で処 理する。混合物を４ｈ加熱還流し、次いでｒｔに冷却してから、蒸発する。残渣 を酢酸エチルと水間に分配する。有機相を１０％クエン酸、水および塩水で洗い 、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカにてクロマトグラフィー に付し、生成物を得る。 実施例８２ ２−（３’−マレイミドプロピル）−マロン酸： ジ−ｔ−ブチルエステル７９を、２０％トリフルオロ酢酸に溶解し、混合物を ｒｔで５ｈ攪拌する。溶媒を蒸発し、残渣を塩化メチレンで数回フラッシする。 残渣をエーテルと共にトリチュレートし、得られる固体生成物を濾取し、エーテ ルで洗い、減圧乾燥する。 実施例８３ ＭＰｒ−Ｍａｌ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＯＨ）2： ジ酸８０／ジメトキシエタンの攪拌溶液を０℃にて、ｎ−ヒドロキシスクシン イミド（２．２当量）および０．５Ｍ−ＤＣＣ／塩化メチレン（２．２当量）で 処理する。混合物をｒｔまで加温する。４ｈ後、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−Ｐ ＡＢＯＨ１０ａ（２当量）／ジメトキシエタンの溶液を加え、混合物をｒｔで１ ６ｈ攪拌する。次いで混合物を濾過し、濾液を蒸発する。残渣を酢酸エチルと水 間に分配する。有機相を水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発 する。生成物をシリカゲルにてクロマトグラフィーで精製する。 実施例８４ ＭＰｒ−Ｍａｌ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： 乾燥塩化メチレン中の８１、ビス−ｐ−ニトロフェニルカーボネート（６当量 ）および新たに活性化した４Å粉末シーブの攪拌混合物をアルゴン下ｒｔにて、 ＤＩＥＡ（６当量）で処理する。攪拌を１６ｈ続行した後、混合物を濾過し、濾 液を蒸発する。残渣を数時間減圧乾燥し、次いで最小量の塩化メチレンに溶解す る。これに、２倍容量のエーテルを加える。得られる固体を濾取し、エーテル／ 塩化メチレン（２：１）で洗い、減圧乾燥する。 実施例８５ ＭＰｒ−Ｍａｌ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： ビス−ｐ−ニトロフェニルカーボネート８２およびＤＯＸ塩酸塩（１．１当量 ）／ＤＭＦの攪拌溶液を、ＤＩＥＡ（１．１当量）で処理する。２ｈの攪拌後、 混合物を酢酸エチルで希釈する。溶液を水（４回）および塩水で洗い、硫酸ナト リウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカゲルにてクロマトグラフィーに付し 、生成物を得る。 実施例８６ ＭＰｒ−Ｍａｌ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・２Ｃｌ2ＣＨＣＯ2 Ｈ： 化合物８３／塩化メチレンの攪拌溶液を、アニソール（１００当量）、次いで ジクロロ酢酸（１０当量）で処理する。１．５ｈ後、混合物を酢酸エチルで希釈 する。得られる懸濁液をｒｔで１ｈ攪拌し、次いでオレンジ色固体生成物を濾取 し、酢酸エチルで洗い、減圧乾燥する。 実施例８７ Ｎ−カルボベンジルオキシ−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（カルボキシメチル）エチレ ンジアミン： ジ−ｔ−ブチルエステル２２を２０％トリフルオロ酢酸に溶解し、混合物をｒ ｔで５ｈ攪拌する。溶媒を蒸発し、残渣を塩化メチレンで数回フラッシする。残 渣をエーテルと共にトリチュレートし、得られる固体生成物を濾取し、エーテル で洗い、減圧乾燥する。 実施例８８ Ｎ−カルボベンジルオキシ−Ｎ’，Ｎ’−ビス−（２−ヒドロキシエチル）エ チレンジアミン： ビス−カルボン酸８５／ジグリム（diglyme）の溶液を０℃にて、Ｎ−ヒドロ キシスクシンイミド（２．２当量）およびＤＣＣ（２．２当量）で処理する。混 合物をｒｔまで加温し、次いで１６ｈ攪拌する。得られる固体を濾去する。濾液 をアルゴン雰囲気下０℃に冷却し、次いで０．５Ｍホウ水素化ナトリウム／ジグ リムで処理する。混合物をｒｔまで１６ｈ加温し、次いで氷水に注ぐ。得られる 混合物を酢酸エチルで抽出する。有機相を水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム 上で乾燥し、蒸発して生成物を得、これを精製せずに用いる。 実施例８９ ビス−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン塩酸塩： ジオール８６および濃ＨＣｌ（１当量）／メタノールの溶液に、窒素を３０分 間吹込んでガス抜きする。これに、１０％パラジウム／活性炭（５重量％）を加 える。得られる混合物をパール装置にて、５０ｐｓｉの水素ガス下で１６ｈ振と うする。次いで混合物を濾過し、濾液を蒸発する。残渣をクロロホルムで数回フ ラッシして、痕跡量のメタノールを追い出す。粗生成物を精製せずに用いる。 実施例９０ ビス−（２−ヒドロキシエチル）−２’−マレイミドエチルアミン： アミノジオール８７／乾燥アセトニトリルをアルゴン下０℃にて、無水マレイ ン酸（１当量）およびＤＩＥＡ（１当量）で処理する。混合物をｒｔで４ｈ攪拌 する。混合物を０℃に再冷却し、トリメチルシリルクロリド（３当量）およびＤ ＩＥＡ（３当量）で処理する。反応液を４ｈ加熱還流し、次いでｒｔまで冷却し てから蒸発する。残渣を酢酸エチルと水間に分配する。有機相を１０％クエン酸 、水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカゲ ル にてクロマトグラフィーに付して、生成物を得る。 実施例９１ ビス−（２−クロロカルボニルオキシエチル）−２’−マレイミドエチルアミ ン： ジオール８８／乾燥塩化メチレンの溶液を、１Ｍホスゲン／トルエン（２０当 量）の強攪拌溶液に０℃にて滴下する。滴下終了後、混合物をｒｔで１６ｈ攪拌 し、次いで溶媒を回転エバポレータにて除去する。残渣を乾燥塩化メチレンでフ ラッシし、減圧乾燥する。粗ビス−クロロホルメートを精製せずに用いる。 実施例９２ ＭＥｔ−ＩＢＨＥ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＯＨ）2： 粗ビス−クロロホルメート８９／乾燥塩化メチレンの攪拌溶液に０℃にて、Ｐ ｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＯＨ１０ａ（２当量）およびＤＩＥＡ（２当量 ）／塩化メチレンの溶液を一度に加える。混合物をｒｔで１６ｈ攪拌し、次いで 溶媒を蒸発する。残渣を酢酸エチルと水間に分配する。有機相を塩水で洗い、硫 酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。生成物を、シリカゲルを用いるカラムクロ マトグラフィーで精製する。 実施例９３ ＭＥｔ−ＩＢＨＥ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ）2： 乾燥塩化メチレン中の９０、ビス−ｐ−ニトロフェニルカーボネート（６当量 ）および新たに活性化した４Å粉末シーブの攪拌混合物をアルゴン下ｒｔにて、 ＤＩＥＡ（６当量）で処理する。攪拌を１６ｈ続行した後、混合物を濾過し、濾 液を蒸発する。残渣を数時間減圧乾燥し、次いで最小量の塩化メチレンに溶解す る。これに、２倍容量のエーテルを加える。得られる固体を濾取し、エーテル／ 塩化メチレン（２：１）で洗い、減圧乾燥する。 実施例９４ ＭＥｔ−ＩＢＨＥ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＭＭＴ）−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2： ＤＭＦ中のビス−ｐ−ニトロフェニルカーボネート９１およびＤＯＸ塩酸塩（ １．１当量）の攪拌溶液を、ＤＩＥＡ（１．１当量）で処理する。２ｈの攪拌後 、混合物を酢酸エチルで希釈する。溶液を水（４回）および塩水で洗い、硫酸 ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカゲルにてクロマトグラフィーに 付し、生成物を得る。 実施例９５ ＭＥｔ−ＩＢＨＥ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ）2・２Ｃｌ2ＣＨＣ Ｏ2Ｈ： 化合物９２／塩化メチレンの攪拌溶液を、アニソール（１００当量）、次いで ジクロロ酢酸（１０当量）で処理する。１．５ｈ後混合物を酢酸エチルで希釈す る。得られる懸濁液をｒｔで１ｈ攪拌し、次いでオレンジ色固体生成物を濾取し 、酢酸エチルで洗い、減圧乾燥する。 実施例９６ １１４ （２５７ｍｇ、０．２５ミリモル）およびドキソルビシンＨＣｌ（３ ７７ｍｇ、０．６５ミリモル）を、２５ｍｌの乾燥メタノール中で２４ｈ攪拌す る。反応液を回転蒸発で４ｍｌに濃縮し、次いで二等分してセファデクス（Seph adex）ＬＨ−２０（１”×１８”）でメタノールを用いて精製する。純生成物含 有の画分をプールし、回転蒸発し、高減圧下で乾燥して、１１５を得る（２２２ ｍｇ、５０％）。 実施例９７ ＢＲ９６またはＩｇＧと分枝ペプチド・リンカーの抱合： チオール化： ＢＲ９６およびＩｇＧを、前に報告した方法1の変法でチオール化（還元）す る。典型的な具体例において、１．２７ｇのＢＲ９６（１０５．７μＭで７５ｍ ｌ、７．９３μモル）を、減圧とＡｒ雰囲気を交換するサイクルを数回行って脱 酸素化する。次いで、これを７．４ｍＭのＤＴＴ（Ａｒを吹き込んだＰＢＳ中６ ３．６μモル、８．６ｍｌ、ｐＨ７．０）で処理し、Ａｒ下３７℃で３ｈ攪拌す る。４℃のアミコン（Amicon）攪拌セル（cell）中ｐＨ６．０にてＰＢＳに対す る限外濾過によって、低分子量化合物の除去を行なう。４００ｍｌのアミコンセ ルにアミコンＹＭ３０フィルター（分子量カットオフ３００００）を取付け、Ａ ｒを４０ｐｓｉまで装填する。エルマン試薬2（Ellman's reagent）を用い、４ １２ｎｍの基線表示数値が得られるまでセル溶離剤のチオール分を監視する。 蛋白質およびチオール基の濃度を、前に報告した方法1に従って測定する。この 例では、１．１０ｇの還元ＢＲ９６（８０．８μＭ−ＭＡｂで８５ｍｌ、６１９ ．１μＭチオール）が、収率８７％およびチオール滴定量７．７モルチオール基 ／ＢＲ９６（モル）で得られた。 実施例９８ 抱合： ＢＲ９６とＭ−Ｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ＝β−Ａ ｌａ−ｍＴＥＧ）2の抱合（共役結合）のための以下に示す手順1は、β−Ａｌａ −ｍＴＥＧヒドラゾンまたはβ−Ａｌａヒドラゾンで変性される全ての分枝ペプ チド・リンカーの場合に用いる手順の典型例である。 還元したＢＲ９６（８３ｍｌ、６．７０μモルＭＡｂ、５１．６μモルチオー ル）に、Ａｒ下０℃にて、４．０ｍｌのＤＭＳＯ中のＭ−Ｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈ ｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−ＤＯＸ＝β−Ａｌａ−ｍＴＥＧ）2（２３９ｍｇ、７７ ．３μモル）の溶液を滴下する。３０分の攪拌後、反応液を０．２２μ殺菌フィ ルターで濾過する。コンジュゲートを４℃にて、１”×２４”のＢｉｏ−Beads カラム（初めにメタノール中で膨潤および充填して作成し、次いでＨ2Ｏ中で平 衡させ、最後にＰＢＳ、ｐＨ７．４）を介するパーコレーション（約２ｍｌ／分 ）で精製する。精製したコンジュゲートを再度、０．２２μ殺菌フィルターで濾 過して、９５ｍｌのＢＲ９６−Ｓ−Ｅｔ−ＩＤＡ−（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ −ＤＯＸ＝β−Ａｌａ−ｍＴＥＧ）2を得る（ＢＲ９６ ７６．１μＭ；ＤＯＸ １．１１ｍＭ；ＭＲ １４．６モルＤＯＸ／ＢＲ９６（モル）；収率１００％ ）。コンジュゲートを液体Ｎ2で凍結させ、−８０℃で貯蔵する。 さらに手引きとして、ウイルナー・Ｄ．、トレイル・Ｐ．Ａ．、ホフステッド ・Ｓ．Ｊ．、キング・Ｈ．Ｄ．、ラシュ・ブラスロウスキィ・Ｇ．Ｒ．、グリー ンフィールド・Ｒ．Ｓ．、カネコ・Ｔ．、ファイアストーン・Ｒ．Ａ．の「Bioc onjugate」（４５２１頁、１９９３年），“ドキソルビシンの（６−マレイミド カプロイル）ヒドラゾン：ドキソルビシンのイムノコンジュゲート製造のための 新しい誘導体”；およびリドレス・Ｐ．Ｗ．、ブレイクレイ・Ｒ．Ｌ．、ゼアナ ー．Ｂ．の「Anal．Biochem．」（９４、７５頁、１９７９年），“エル マン試薬：５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）−再試験”参照。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION                          Branched peptide linker Background art   Bifunctional compounds (ie, “linkers”) that link a cytotoxic reagent to an antibody are: Are known in the art. These compounds are particularly directed against tumor-associated antigens. Useful for the formation of immunoconjugates. Take Immunoconjugates enable selective delivery of toxic drugs to tumor cells [ For example, Harmentin & Sailor's "Behring Insti. Mitl." 2: 197-215, 1988), "Monoclonal antibody-drug conjugate. Research on Gallego et al., "Int. J. Cancer" (33: 737-744, 19). 1984), four daunomycin-monoclonal antibodies 791T with antitumor activity / 36 Conjugate Production "; Arnon et al.," Immunological Rev. "(62 : 5-27, 1982), "Conjugation of daunomycin and antitumor antibody. In Vitro and In Vivo Efficacy "].   Greenfield et al. Disclose at the 13-keto position of the anthracycline molecule. On the other hand, acid-sensitive immunity containing acylhydrazide bound via acylhydrazone bond Formation of epidemic conjugates and conjugation of this anthracycline derivative to antibody molecules European Patents by Greenfield et al. Application Publication No. EP 0328147 (published August 16, 1989), which is disclosed in US Pat. Patent application No. 07/270509 (filed on November 16, 1988) and U.S. Pat. S. Patent Application No. 07/155181 (filed on February 11, 1988), Abandoned now]. The latter references also include specific thioether-containing linkers and Conjugates (including immunoconjugates containing hydrazine thioether) are also available It is shown.   Also, U.S. Patent Application No. 07 / 522,996 (Kaneko et al., May 1, 1990) (Filed on April 4) (European Patent Application Publication No. EP A0457250, 1991) Corresponding to the publication on November 21, 2011) contains the acyl at the C-13 position of the anthracycline molecule. Anthracycline antibiotic linked to a bifunctional linker by hydrazone linkage The formation of the containing conjugate is described. In their invention, the linker Contains a reactive pyridinyldithio or ortho-nitrophenyldithio group The group allows the linker to react with the appropriate group attached to the cell-reactive ligand. To form a complete conjugate.   Conjugates rely on simple acid hydrolysis to release drug prematurely You. Therefore, it has conjugates that release the active drug in a highly site-specific manner Is desired. In European Patent Application Publication No. 94 107501.2, A lysosomal enzyme-cleaving antitumor drug that can be selectively activated at the site of a tumor Product conjugates are disclosed. However, conventional immunoconjugates One of the problems is that drugs and target ligands (eg, immunoglobulins) (Phosphorus) is relatively low. Can be activated at the tumor site and More demand for immunoconjugates that increase the proportion of target ligands .                                Summary of the Invention   The present invention provides novel branched peptide linkers. Offer. This new linker is used to produce new drug / linker molecules, and And targeting ligands, therapeutically active drugs and branched peptide phosphorus Manufacture biologically active conjugates consisting of Kerr. this The new conjugate is a site in the selected target cell population that is recognized by the target ligand Can be selectively activated.   As used herein, the phrase “drug / linker” or “linker / drug” The branched peptide linker is coupled to more than one therapeutically active drug molecule And the phrase "conjugate" refers to the drug / linker molecule And the one coupled with the command.   The branched peptide linker of the present invention is a protein peptide spacer (protein pe). ptide spacer) and self-sacrifice spacing between the protein peptide sequence and the drug (Self-immolating) spacers may also be included. The linker of the invention is branched Therefore, more than one drug molecule per linker is coupled to the target ligand. To run. The number of drugs attached to each linker depends on the number of branches (or branches) In multiples of two. Thus, the number of drug molecules per linker molecule The numbers would be 2, 4, 8, 16, 32, 64, etc. The branching factor is mathematically 2n(N is a positive integer). The first branching linker is the first Branching or two1Ie, potentially two per linker Contains drug molecules. The bi-branched linker is a second-generation branched or Is 2TwoIe, potentially containing 4 drug molecules per linker You.   As n rises from n = 1, the immunoconjugate Solubility tends to decrease. Use highly water-soluble peptides or Solubilizing components, for example charged species such as polyethylene glycol or β-alanine Is added to the drug and released from the drug by enzymes in a low pH or liposome environment. By doing so, the solubility can be increased.   The invention relates to linking a thiol group derived from a targeting ligand to two or more drug moieties. The branched peptide linker to be linked to the target peptide. A thiol group (also referred to as a sulfhydryl group) derived from Consisting of a compound having a terminal containing an acceptor; a polyvalent atom (eg, carbon Atom or nitrogen atom) is 2n(Where n is positive Taking into account the degree of branching of at least two amino acids per branch. The minutes provide at least one enzyme site per branch, and at least Both ends are covalently linked with chemically reactive functional groups derived from the drug component It contains a group capable of forming Preferably n is 1, 2, 3 or 4, more preferably Is 1, 2 or 3, most preferably 1 or 2. The target ligand is an antibody Or a fragment thereof.   As used in the previous paragraph, the phrase "thiol group derived from the target ligand" The thiol group is already present in the target ligand, or Is modified to contain a thiol group (if necessary, the denaturing agent A thiol spacer group between the thiol and thiol groups). You. Similarly, the phrase “a chemically reactive functional group derived from a drug component” refers to a chemical If a reactive functional group is already present on the drug or the drug is chemically modified , Containing chemically reactive functional groups. Such chemically reactive functionalities A group is a group that can form a covalent bond with the linker terminus. Of chemically reactive functional groups Concrete example As primary or secondary amino, hydroxyl, sulfhydroxyl, Boxyl, aldehyde, ketone and the like can be mentioned.   The present invention also provides a linker, drug / linker, and / or conjugate. An intermediate to be produced; and administering the conjugate of the invention to a patient. And methods for treating or preventing a selected disease state.   The selected target cell population recognized by the target ligand is preferably a tumor cell population. It is.   The present invention provides, in one aspect, drug-activated enzyme cleavage by one or more tumor-associated enzymes. Provide tumor-specific conjugates that are highly selective substrates for cleavage.   In another aspect, the present invention provides a method wherein the activating enzyme has a cytotoxic level of free drug near the tumor. Tumor-specific drug conduit that is present in the tumor in an amount sufficient to cause Provide a courier.   In another aspect, the present invention provides a tumor-specific, stable, Provide a drug conjugate.   Furthermore, the present invention, in other respects, is significantly less toxic than activated drugs. The present invention provides a tumor-specific conjugate of the present invention.   In yet another aspect, the present invention relates to a method wherein the mutation in a biological process is, for example, cancer. Provide a method to deliver the conjugate to target cells, which is desired for the treatment of any disease. Offer.   The present invention also provides a conjugate according to the present invention, which is administered to a warm-blooded animal. And a method for delivering an active antitumor agent to a site of a tumor cell of the warm-blooded animal.   An object of the above and other aspects of the present invention is to suppress the pharmacological activity of an antitumor drug, Thus, the antineoplastic agent is converted to a pharmacologically inactive peptidyl derivative conjugate Therefore, at an appropriate reactive site, a protein peptide sequence and a self-immolative spacer Drugs that are linked to ligands via peptide linkers (For example, an antitumor agent). The above peptide linker Has at least two amino acid residue sequences, in particular, a peptidyl derivative By one or more lysosomal proteases, such as cathepsins B, C, D or L It is adapted to be a selective substrate for drug-activated enzyme cleavage. enzyme The cleavage reaction removes the peptide linker component from the drug conjugate and Selectively at the site of the tumor, resulting in the release of a pharmacologically active form of the antineoplastic agent. Drug release Compared to a ligand-drug linker that relies on simple acid hydrolysis for The new method is based on premature linker hydrolysis in the blood, resulting in significantly lower systemic toxicity So that a large amount of the drug is transported to the tumor site, and the method comprises Produces a longer shelf life and simplifies the handling conditions of the conjugate.   The conjugate of the present invention comprises a biparte conjugate and a free drug. Shows much lower systemic toxicity compared to The conjugate of the invention was selected It possesses both specificity and therapeutic activity for treatment of a target cell population. Such a The conjugate can be used in a pharmaceutical composition, for example, For example, a pharmaceutically effective amount of a compound of formula (III) below, and a pharmaceutically acceptable carrier, Consists of a diluent or excipient.   The present invention relates to a linker molecule of formula (I):   [Wherein A is a thiol acceptor;   W is a bridging moiety;   c is 0 or 1;   a is an integer of 2 to 12;   Q is O, NH or N-lower alkyl;   p is 0 or 1;   d is 0 or 1;   E is a polyvalent atom;   Each b is an integer from 1 to 10;   Each X is a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn, where   Y is two L-type amino acid residues,   Z is one or two amino acid residues,   m is 0 or 1,   G is a self-immolative spacer, and   n is 0 or 1, provided that when G is 0, -Y-Zm is ala-leu-ala-leu or Is gly-phe-leu-gly; or   Each X is of the formula: The base of here   Each X1Is a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn, Y, Z, Q, E, G, m, d, p, a, b and n are as defined above, or   Each X1Is the formula: Group of each XTwoIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn, Y, Z, G, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above, or each XTwoIs the formula: Group of each XThreeIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn, Y, Z, G, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above, or each XThreeIs the formula: Group of each XFourIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn, Y, Z, G, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above.   The present invention also relates to drug / linker molecules of formula (II):   Wherein A is a thiol acceptor;   W is the bridge;   c is 0 or 1;   a is an integer of 2 to 12;   Q is O, NH or N-lower alkyl;   p is 0 or 1;   d is 0 or 1;   E is a polyvalent atom;   Each b is an integer from 1 to 10;   Each X is a group of the formula: -CO-Y-Zm-GnD, where   Y is two L-type amino acid residues,   Z is one or two amino acid residues,   m is 0 or 1,   G is a self-sacrifice spacer,   n is 0 or 1, provided that when G is 0, -Y-Zm is ala-leu-ala-leu or Is gly-phe-leu-gly, and   D has a main chain and at least one chemically reactive functional group hanging from the main chain. The functional group is a self-immolative spacer or a terminal amino acid residue. Reacts with a group to form a covalent bond and the functional group is a primary or secondary amino group. , Hydroxyl, sulfhydryl, carboxyl, aldehyde or ketone group Selected from; or   Each X is of the formula: The base of here   Each X1Is a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p and n are as defined above, or   Each X1Is the formula: Group of each XTwoIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above, or each XTwoIs the formula: Group of each XThreeIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above, or each XThreeIs the formula:Group of each XFourIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above.   Furthermore, the present invention relates to a conjugate of the following formula (III):   [Wherein L is a ligand;   q is an integer of 1 to 10;   A is a thiol acceptor;   W is the bridge;   c is 0 or 1;   a is an integer of 2 to 12;   Q is O, NH or N-lower alkyl;   p is 0 or 1;   d is 1 or 2;   E is a polyvalent atom;   Each b is an integer from 1 to 10;   Each X is a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, where   Y is two L-type amino acid residues,   Z is one or two amino acid residues,   m is 0 or 1,   G is a self-immolative spacer, and   n is 0 or 1, provided that when G is 0, -Y-Zm is ala-leu-ala-leu or Is gly-phe-leu-gly;   D has a main chain and at least one chemically reactive functional group hanging from the main chain. The functional group reacts with the self-immolative spacer and Form a bond and the functional group is a primary or secondary amino, hydroxyl, Selected from the group of xyl, sulfhydryl, aldehyde or ketone; or   Each X is of the formula: The base of here   Each X1Is a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above, or   Each X1Is the formula: Group of each XTwoIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above, or each XTwoIs the formula: Group of each XThreeIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above, or each XThreeIs the formula:Group of each XFourIs a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above.   The phrase "lower alkyl" as used herein is an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms. . The polyvalent atom is preferably carbon or nitrogen.   In one embodiment, the drug components are an anthracycline antibiotic, and a target drug. Gand is an antibody.   In a preferred embodiment, the anthracycline is the amino group of anthracycline. It is linked to the linker at the sugar group. The sugar component is preferably daunosamine. next The antibody binds to the anthracycline compound via the linker. Particularly preferred tool In one embodiment, the linkage is a reducing disulfide group (ie, the free sulfhydryl group of the antibody). Via the drill group (-SH)).   In a most preferred embodiment, the anthracycline drug component is doxorubicin; The thiol acceptor is the Michael Addition accessor. Puter (Michael Addition Adduct from the acceptor) Adduct) is derived), more preferably a maleimide group; and the antibody component is A chimeric or humanized antibody, wherein the linker The point of attachment is the amino group of the sugar component of the drug.   The conjugates of the invention have specificity for the treatment of a selected target cell population. Retains both therapeutic activity. Such conjugates can be used in pharmaceutical compositions. The pharmaceutical composition includes, for example, a pharmaceutically effective amount represented by the following formula (III): And a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient.                             Detailed description of the invention   The present invention relates to a ligand capable of targeting a selected cell population. (Target ligand), and connected to the ligand by a branched peptide linker A novel drug-linker-ligand conjugate comprising a drug is provided. The linker is a thiol acceptor (for example, Michael Addition Accessor). ), Bridges, branch points and enzymes of enzymes such as cathepsins B, C, D or L Per branch, providing a cleavage site and containing at least two amino acid components Of the peptide sequence. The branched peptide linker is a self-immolative spacer The spacer may also space the drug and protein peptide sequence. Peptide arrangement If the sequence (ie, YZm) is ala-leu-ala-leu or gly-phe-leu-gly The presence of the self-immolative spacer was found to be optional. These peptides The reason for not requiring a self-immolative spacer for the sequence is not fully understood, This appears to be based on responses to various enzymes.   The target ligand molecule is an immunoreactive protein such as an antibody or a fragment thereof. Non-immunoreactive proteins; peptide ligands such as bombesin; A binding ligand that recognizes a vesicle-related receptor; or a reactive sulfhydryl group (- SH) or modified to contain such sulfhydryl groups. It can be any protein or peptide that can be used. Thiolak Scepter-carboxyl compounds are linked to ligands via thioether bonds Drugs include primary or secondary amino, hydroxyl, sulfhydryl, carbohydrate Linked to a linker via a functional group selected from xyl, aldehyde or ketone You.   For a more specific understanding of the invention, drugs, ligands, peptides and Discuss sir individually. Next, the synthesis of the conjugate will be described.   Abbreviations and terminology used in the following detailed description and the appended claims. Is common in amino acid and peptide chemistry, and It will be understood that all of the amino acids are in the L-form unless otherwise specified.   Some abbreviations used in the present invention are as follows unless otherwise indicated. You.   AcOH: acetic acid, Alloc: allyloxy-carbonyl, Boc: t-butyloxycal Bonyl, DBU: diazobicycloundecene, DCC: dicyclohexylcarbo Diimide, DCI: direct chemical ionization, DCU: dicyclohexylurea, D IEA: diisopropylethylamine, DMAP: 4-dimethylaminopi Lysine, DME: 1,2-dimethoxyethane, DOX: doxorubicin, DTT : Dithiothreitol, EEDQ: N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1 , 2-Dihydroquinoline, EtOAc: ethyl acetate, FAB: fast atom bombardment, Fmoc: full Oleynylmethoxycarbonyl, GABA: γ-aminobutyric acid, HOBt: N-hydrido Roxybenzotriazole, HRMS: High resolution mass spectroscopy, LD L: low density lipoprotein, MC: 6-maleimidocaproyl, MP: 3-maleimide Propionyl, MPr-BHP: maleimidopropyl-bis-hydroxypropyl , MPr-Mal: maleimidopropyl-malonyl, MEt-IBHE: maleimidoethyl Ru-imino-bis-hydroxyethyl, MMA: mitomycin A, MMC: Itomycin C, Mtr: 4-methoxytrityl, NHS: N-hydroxysuccine Imido, NMP: N-methylpyrrolidinone, PABC: p-aminobenzylca Rubamoyl, PAB-OH: p-aminobenzyl alcohol, PNP: p-nit Rophenol, TFA: trifluoroacetic acid, THF: tetrahydrofuran   Peptide residue(-Y-Zm-)   The peptide linkers of the present invention have 2, 3 or 4 amino acids per branch Self-immolative spacer that provides one or more enzymatic cleavage sites, if present, for acid residues -Included with The amino acid components assemble to form a peptide sequence.   The amino acid residues constituting the peptide residues are each independently an amino acid, Or from the group of naturally occurring amino acids. Naturally occurring amino acids are alanine (Al a), arginine (Arg), asparagine (Asn), aspartic acid (Asp), cis Tein (Cys), glutamic acid (Glu), glutamine (Gln), glycine (Gly), Histidine (His), isoleucine (Ile), leucine (Leu), lysine (Lys), Methionine (Met), ornithine (Orn), phenylalanine (Phe), proline (Pro), Serine (Ser), Threonine (Thr), Tryptophan (Trp), Tyrosine (Tyr) and valine (Val). Preferred naturally occurring amino acids are Ala, V al, Leu, Lys, Ile, Met, Phe, Trp and Pro. Also, certain non-naturally occurring Mino acids can also be part of the peptide residues. Such non-naturally occurring amino acids include , Citrulline (Cit), and protected Amino acids such as acetyl, formyl, tosyl, nitro, etc. Naturally occurring amino acids are mentioned. Specific amino acids are used herein as part of the peptide sequence. When the acids are indicated, they are in the L-form unless otherwise specified. “ The amino acid residues that make up the “Y” component must be L-type. The amino acid residue to be formed may be either L-type or D-type. More preferred Amino acids include Lys, acetyl or formyl protected Lys, Arg, Arg, His, Orn, acetyl or formyl protected with a sil or nitro group Orn, Phe, Val, Ala and Cit protected by Most preferred is Lys And Cit.   The amino acid residue sequence may be a peptidyl derivative drug-conjugate to be formed. Adapted to be selectively enzymatically cleaved by one or more tumor-associated proteases Have been. The amino acid residue chain length of each branch of the peptide linker is preferably It varies from peptide to tetrapeptide chain length.   The first amino acid residue (ie, reading from left to right, the first Is a basic amino acid (eg, Lys or Arg); or Preferably, it has a strong hydrogen bonding ability (eg, Cit). Second amino acid residue (Ie, the second amino acid that, when read from left to right, constitutes "Y") Preferably having a hydrophobic side chain (eg Phe, Val, Ala, Leu or Ile) .   To further illustrate the conjugates of the present invention, specific peptides The groups of linker groups are exemplified below.   Phe-Lys, Val-Lys, Phe-Phe-Lys, Lys-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Ala- Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Ala, Gly-Ph e-Leu-Gly, Ala-Leu-Ala-Leu, Phe-Ng-tosyl-Arg, Phe-Ng-nitro- Arg, Lys-Lys, Lys-Cit, and Cit-Cit.   Specific preferred examples of peptide sequences include Phe-Lys, Val-Lys, Val-C it and D-Phe-Phe-Lys.   Many of the specific peptide linker molecules suitable for use in the present invention are Design and maximize the selectivity of enzyme cleavage by tumor-associated proteases Can be used (optimized). Preferred peptide linkers used in the present invention Is optimized for proteases, cathepsins B, C, D and L You.   spacer("G")   In the molecule according to the present invention, the drug component and the protein peptide component are spaced apart, and An intermediate, self-immolative spacer component covalently bonded with these may be used. Self Self-immolative spacers can be defined as bifunctional chemical components, which are bifunctional chemical components. Covalently bound with two spaced chemical components to form a generally stable tripartate ( tripartate) molecule: by enzymatic cleavage from the tripartate molecule. To release one of the spaced chemical components; then, following enzymatic cleavage, Dynamically cleaves from the rest of the molecule, releasing the other of the spaced chemical components . According to the present invention, the self-immolative spacer is shared at one end with the protein peptide component. Binds to the chemical reaction site where the pharmacological activity is suppressed by derivatization of the drug component at the other end Because of the covalent bond, the protein peptide component and the drug component Is covalently bound with and is stable and pharmacologically inactive in the absence of the target enzyme, The above-described target enzyme in a covalent bond linking a spacer component and a protein peptide component A tripartate molecule capable of enzymatic cleavage by The release of the protein peptide component from the tate molecule is effected. Take Enzymatic cleavage in turn activates the self-immolative properties of the spacer component and Initiates a spontaneous cleavage of the covalent bond linking the moiety to the drug component, This results in the release of the drug in a physiologically active form.   In the molecules of formulas I, II and III above,   G is the self-spaced and covalently linked drug component and amino acid A sacrificial spacer component, wherein the spacer is a T component (used in the formula shown below) "T" represents a nucleophilic atom already contained in the drug) And a structure of the following formula (IV), (V), (VI), (VII) or (VIII) Can be represented by  (Where T is O, N or S)   Where T is O, N or S, and R1Is C1-CFiveAlkyl)   (J. Med. Chem., 27: 1447, 1984) (where T is O, N or S and RTwoIs H or C1-CFiveAlkyl)   (Where T is O, N or S) Or   (Where T is O, S or N)   As used herein, "C1-CFive“Alkyl” means 1 unless stated otherwise. Meant to include branched or unbranched hydrocarbon chains having up to 5 carbon atoms. For example, but not limited to, methyl, ethyl, isopropyl , N-propyl, sec-butyl, isobutyl, n-butyl and the like.   Preferred self-immolative spacer components G suitable for use in the present invention are of the formula (IVa) : It is a PABC shown by.   Other preferred self-immolative spacer components G suitable for use in the present invention are of the formula (V a): Is a GABA represented by.   Another preferred self-immolative spacer component G suitable for use in the present invention is of the formula (V b): Is α, α-dimethyl GABA.   Yet another preferred self-immolative spacer component G suitable for use in the present invention is: Formula (Vc): Is β, β-dimethyl GABA.Thiol acceptor   In the molecules of formulas I, II and III, the thiol acceptor "A" is Binds to the ligand via a sulfur atom derived from the ligand. Thiol acceptors , After binding to a ligand via a thiol group, Rule adduct. Thiol acceptors are, for example, α-substituted acetyl groups. May be. Such a group has the formula:   (Wherein Y is a removable group) Indicated by Specific examples of the leaving group include Cl, Br, I, mesylate, and tosylate. And the like. When the thiol acceptor is an α-substituted acetyl group, After binding to the thiol adduct, -S-CHTwoForming a bond;   Preferably, the thiol acceptor is a Michael Addition acceptor It is.   A representative Michael Addition acceptor of the present invention has the formula: Indicated by   After binding to the thiol group of the ligand, the Michael Addition Acceptor For example, formula A:   Where L is a ligand Michael Addition Adduct.Bridge(“W”)   The bridge is a bifunctional chemical component that is covalently bonded with two spaced chemical components Thus, a stable tripartate molecule can be formed. A specific example of the bridge is SS Wong's “Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking” Conjugation and Crosslinking Chemistry) "(CRC Press, Florida, 1991); and GE Means and RE Finy's "Bioconjugate Chemistry" (vol. 1, pages 2-12, 1990). The bridge “W” is clearly And covalently binds to the keto component. One example of a bridge is the formula:       − (CHTwo) f- (Z) g- (CHTwo) h- Where:   f is an integer of 0 to 10,   h is an integer of 0 to 10,   g is 0 or 1, provided that when g is 0, f + h is 1 to 10, and   Z is S, O, NH, SOTwo, Phenyl, naphthyl, polyethylene glycol, An alicyclic hydrocarbon ring having 3 to 10 carbon atoms, or 3 to 6 carbon atoms and O, N or Or a heteroaromatic hydrocarbon containing one or two heteroatoms selected from S It is a ring.   Preferred alicyclic components include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentene And cyclohexyl. Preferred heteroaromatic components include Jill, polyethylene glycol (repeating unit 1 to 20), furanyl, pyranyl, Pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, oxazinyl, pyrrolyl, thiazolyl And morpholinyl.   In the bridge, when g is 0, f + h is 2 to 6, preferably 2 to 4, and more preferably. More preferably, it is 2. When g is 1, f is 0, 1 or 2 and h Is preferably 0, 1 or 2.   The preferred bridge to couple to thiol acceptors is the Pierce Catalog (Pierce Catalog) E-12, E-13, E-14, E-15, E-16 and And E-17 (1992).Drug   The drug conjugate of the present invention is suitable for ordinary uses where the corresponding drug is effective. Ligands that deliver drugs to certain cells that are effective and particularly beneficial It has excellent medicinal properties due to its inherent ability. Further, the conjugate of the present invention Because gates can be used to modify certain biological responses, Should not be construed as limited to For example, a drug component may have a desired biological activity. It may be a protein or polypeptide having the property. Such proteins include For example, proteins such as tumor necrosis factor are included.   Preferred drugs for use in the present invention are cytotoxic drugs, especially those used in cancer therapy It is. Such drugs generally include DNA toxicants, antimetabolites, natural products and And their analogs. Preferred types of cytotoxic drugs include, for example, Dihydrofolate reductase inhibitor and thymidylate synthase inhibitor Enzyme inhibitors such as DNA intercalators, DNA Cleaver, topical isomerase inhibitor, anthracycline drug , Vinca drugs, mitomycin, bleomycin, cytotoxic nucleoti , Pteridine family of drugs, diynenes, podophyllotoxin, Causative factors, and taxanes. Especially useful among these types Examples of useful substances include methotrexate, metopterin, and dichloromethotate. Lexate, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurine, cytosine arabi Noside (arabinosylcytosine), melphalan, leurosine, Leurosideine, actinomycin, daunorubicin, doxo Rubicin, mitomycin C, mitomycin A, carminomycin, aminop Terin, tallysomycin, podophyllotoxin and podophyll Rotoxin derivatives (eg etoposide or etoposide phosphate), bottles Blastin, vincristine, vindesine, taxol, taxo Tele (taxotere), retinoic acid, butyric acid, N8-Acetyl spermidine, camptothe Syn and their analogs.   As mentioned above, those skilled in the art will appreciate the To carry out the reaction of a good compound, a given compound can be chemically modified.   In the conjugate of formula I,   D is a drug component having a chemically reactive functional group hanging from its main chain, The functional group links the drug backbone to the protein peptide linker, and the functional group Is a primary or secondary amino, hydroxyl, sulfhydryl, carboxyl, It is selected from the group of aldehyde or ketone. A typical example of the amino-containing drug is my Tomycin C, Mitomycin A, Daunorubicin, Doxorubicin, Aminop Terin, actinomycin, bleomycin, 9-aminocamptothecin, N8 -Acetyl spermidine, 1- (2-chloroethyl) -1,2-dimethanesulfo Nylhydrazide, talisomycin, cytarabine and derivatives thereof. Up Representative examples of the alcohol-containing drug include etoposide, camptotensin, and taxo. Esperamicin, 1,8-dihydroxy-bicyclo [7.3.1] trideca- 4,9-diene-2,6-diyn-13-one (U.S. Patent No. 5198560) , Dofilotoxin, angudin, vincristine, vinblastine, morpholine -Doxorubicin, n- (5,5-diacetoxy-pentyl) doxorubicin, And derivatives thereof.   Representative examples of the sulfhydryl-containing drug include esperamicin, 6-mercaptob Phosphorus and its derivatives.   Representative examples of the carboxyl-containing drug include methotrexate, camptothecin ( Lactones), butyric acid, retinoic acid, and derivatives thereof.   Representative examples of the above aldehyde- and ketone-containing drugs are angidin, anthracic Phosphorus (eg, doxorubicin), and derivatives thereof.   A very preferred group of cytotoxic drugs for use as the drug of the present invention include: Embedded image   Mitomycin group of formula (1):  (Where R1Is hydrogen or methyl;   Is)   Bleomycin group of formula (2):   (Where R1Is hydroxy, amino, C1-CThreeAlkylamino, di (C1-CThree Alkyl) amino, CFour-C6Polymethyleneamino,Is)   Methotrexate group of formula (3):   (Where R1Is amino or hydroxy;   RTwoIs hydrogen or methyl;   RThreeIs hydrogen, fluoro, chloro, bromo or iodo;   RFourIs a component forming a hydroxy or carboxylic acid salt Is)   Melphalan of formula (4):   6-mercaptopurine of formula (5):  Cytosine arabinoside of formula (6):   Podophyllotoxins of formula (7):   (Where RTwoIs hydrogen;   R1Is hydrogen or  RThreeIs NHTwo, OH, OCHThree, NH (C1-CThreeAlkyl) or N (C1-CThreeA Lequil)Two;   RFourIs OH or NHTwo;   RFiveIs methyl or thienyl;   R6Is hydrogen or methyl, or a phosphate salt thereof, and is used herein. Do “(C1-CThreeAlkyl) "is a straight or branched chain having 1 to 3 carbon atoms. A branched carbon chain means, for example, methyl, ethyl, n-propyl and isopropyl. Pill)   Drugs of the Vinca alkaloid group of formula (8):   (Where R1Is H, CHThreeOr CHO;   RTwoAnd RThreeAre independent of each other, RThreeIs H and RFourAnd RTwoOne of them is ethyl The other is H or OH;   RTwoAnd RThreeTogether with the carbon to which they are attached, RTwoAnd RThreeIs RFourBut d Forms an oxirane ring in the case of tyl;   RFiveIs hydrogen, (C1-CThreeAlkyl) -CO or chloro-substituted (C1-CTwoAl Kill) -CO, which is used herein as "C1-CThree“Alkyl” means 1 to 3 Means a straight or branched carbon chain having carbon atoms, for example methyl, ethyl , N-propyl and isopropyl)   Difluoronucleosides of the formula (9);   (Where R1Is the formula: One base of:   RTwoIs hydrogen, methyl, bromo, fluoro, chloro or iodo;   RThreeIs OH or NHTwo;   RFourIs hydrogen, bromo, chloro or iodo Is)   Taxols of formula (10):  (Where R1Is hydroxy;   RTwoIs hydrogen or hydroxy;   RTwo'Is hydrogen, hydroxy or acetoxy;   R7Is hydrogen or hydroxy;   RThreeIs hydrogen, hydroxy or acetoxy;   RFourIs aryl, substituted aryl, C1-6Alkyl, C2-6Alkenyl, C2-6Al Quinyl or t-butoxy;   RFiveIs C1-6Alkyl, C2-6Alkenyl, C2-6Alkynyl, or -ZR6 :   Z is a single bond, C1-6Alkyl or C2-6Alkenyl;   R6Is aryl, substituted aryl, C3-6Cycloalkyl, thienyl or furyl Wherein "alkyl" as used herein refers to a straight chain having from 1 to 6 carbon atoms Or a branched carbon chain such as methyl, ethyl, n-propyl, iso- Propyl, n-butyl, sec-butyl, isobutyl, t-butyl, n-pliers Alkenyl, sec-butyl, isopentyl and n-hexyl; "" Has at least one carbon-carbon double bond and 2 to 6 carbon atoms. A straight or branched carbon chain, such as ethenyl, propenyl, And propenyl, butenyl, isobutenyl, pentenyl, and hexenyl, "Alkynyl" means at least one carbon-carbon triple bond and 2-6 Means a straight or branched carbon chain having carbon atoms of, for example, ethynyl, “Aryl” includes 6-10, lopinyl, butynyl and hexynyl. Means an aromatic hydrocarbon having two carbon atoms, such as phenyl and naph "Substituted aryl" refers to C1-6Alkanoyloxy, hydroxy Si, halogen, C1-6Alkyl, trifluoromethyl, C1-6Alkoxy, ally Le, C2-6Alkenyl, C1-6Choose from alkanoyl, nitro, amino and amide Means aryl substituted with at least one of the following groups:   Argidines of formula (11):   (Where R1Is OH or O;   RTwoIs H or O)   Argidine can be used as an ester or hydrazone as C-3, C-4, C-4 The -8 or C-15 position can be targeted.   Phenylenediamine mustard (12):     HTwoN-C6HFour-N (CHTwoCHTwoCl)Two   Anthracycline antibiotics of formula (13):   (Where R1Is -CHThree, -CHTwoOH, -CHTwoOCO (CHTwo)ThreeCHThreeOr -CHTwoOCOCH (OCTwoHFive)Two;   RTwoIs -OCHThree-, -OH or -H;   RThreeIs -NHTwo, -NHCOCFThree, 4-morpholinyl, 3-cyano-4-mol Folinyl, 1-piperidinyl, 4-methoxy-1-piperidinyl, benzylamido , Dibenzylamine, cyanomethylamine, 1-cyano-2-methoxyethyl Amine, or NH- (CHTwo)Four-CH (OAc)Two;   RFourIs -OH, -OTHP, or -H; and   RFiveIs -OH or -H, provided that RFourIs -OH or -OTHP, RFiveIs Not -OH)   Those skilled in the art will recognize that structural formula (13) may include a drug or various common names in the art. Understand that a compound that is a derivative of a drug with a common name is included. You. Table I below lists some anthracyclines that are particularly preferred for use in the present invention. Indicates the drug and its common or common name.   Among the compounds shown in Table I, the most preferred drug is doxorubicin. Doxo Rubicin (also referred to herein as "DOX") has the formula1Is -C HTwoOH, RTwoIs -OCHThree, RThreeIs -NHTwo, RFourIs -OH and RFiveIs -H Anthracycline.  The most preferred drugs are taxol, mitomycin C, and formula (13) as described above. A) anthracycline antibiotic.   Ligand   "Ligand" means within its scope a receptor associated with a given target cell population. Specially binds or reacts or associates with other or other acceptable components Includes any molecule. This cell-reactive molecule (to which a drug reagent Attached via a linker on the plate) requires therapeutic or other biological modification Can be any molecule that binds, complexes, or reacts with the cell population; Having a free reactive sulfhydryl (-SH) group, or It can be modified to contain a drill group. Cell-reactive molecules are ligands Plays a role in delivering therapeutically active drug components to individual target cell populations that respond You. Such molecules include, but are not limited to, for example, antibodies and the like. High molecular weight proteins, small molecular weight proteins, polypeptides or peptide ligands , And non-peptidyl ligands.   Non-immunoreactive proteins and polypeptides that can be used to form the conjugates of the present invention Alternatively, peptide ligands include, but are not limited to, Spherin, epidermal growth factor ("EGF"), bombesin, gastrin, gastrin Release peptide, platelet-derived growth factor, 1L-2, 1L-6, tumor growth factor (" TGF ") (eg, TGF-α and TGF-β), vaccinia growth factor (" VGF "), insulin and insulin-like growth factors I and II. Non-peptidyl ligands include, for example, carbohydrates, lectins, and low-density Apoproteins from lipoproteins.   Immunoreactive ligands include antigen-recognizing immunoglobulins (also referred to as "antibodies"), Or an antigen-recognition fragment thereof. Particularly preferred immunoglobulins are It is an immunoglobulin that can recognize tumor-associated antigens. "Immune group used "Robulin" is an approved reticulum or subretinal immunoglobulin, such as IgG. , IgA, IgM, IgD or IgE. Preferred immunoglobulins Belongs to the IgG class of immunoglobulins. Immunoglobulin It can also derive from shrimp species. However, immunoglobulins are not human, murine or murine. Ha It is preferably of the heron source. In addition, immunoglobulins are polyclonal Or it may be monoclonal, preferably monoclonal.   It should be noted that those skilled in the art will also appreciate that the invention It will be appreciated that this also includes the use of fragments. Such immunoglobulin fragments For example, Fab ', F (ab')Two, Fv or Fab fragment Or other antigen-recognizing immunoglobulin fragments. Such exemption Immunoglobulin fragments can be digested with pepsin or papain, Produced by proteolytic enzyme digestion such as it can. Materials and methods for producing such immunoglobulin fragments include [Generally, Parham J. et al. "Immunology" (13 1, 2895, 1983); Ramoi et al., "J. Immunological Methods" (5. 6, 235, 1983); Parham's "id." (53, 133, 198). 2 years); and Matthew et al., "Id." (50, 239, 1982)]. .   An immunoglobulin may be a "chimeric antibody," which term is art-recognized. Have been. Immunoglobulins are also “bifunctional” or “hybrid” antibodies, That is, one antigenic site, for example, one arc with specificity for a tumor-associated antigen The antibody may have an arm. The other arm is another target, For example, haptens or antigens that bind to them-lethal to bearing tumor cells Recognize active agents. Alternatively, bifunctional antibodies are used in which each arm is therapeutically or lively. Specific for another epitope of a tumor-associated antigen of a cell that is physically degenerated There may be. In any case, hybrid antibodies are bispecific and are preferred Or one or more binding sites or target antigens specific for the selected hapten, such as tumors One or more binding sites specific for an antigen associated with a tumor, infected organism or other disease state Have.   Biological bifunctional antibodies are described, for example, in European patent applications referenced by those skilled in the art. No. EPA 0105360. Such hybrid or two As noted, functional antibodies can be used biologically by cell fusion or by chemical Especially by using crosslinking agents or disulfide bridge-forming reagents And may be composed of whole antibodies and / or fragments thereof. Or A method for obtaining such a hybrid antibody is described in, for example, PCT Patent Application Publication No. WO8 3/03679 (published October 27, 1983) and European patent application published No. EPA 0217577 (published April 8, 1987). Special Preferred bifunctional antibodies for are "polydoma" or "quadroma (q uadroma) ”or biologically produced from bis- (maleimi) C) a cross-linking agent such as -methyl ether or other cross-linking agents familiar to those skilled in the art. And synthesized.   In addition, the immunoglobulin may be a single chain antibody ("SCA"). They are , Variable light (“VL”) And variable heavy ("VH") Domains are linked by peptide bridges or disulfide bonds Single-chain Fv fragment ("scFV”). Globulin is a single V with antigen-binding activityHDomain (dAbs) [G. Winter and C.I. Millstein's "Nature" (3 49, 295, 1991); "Biochemislry" by Glockschwaer et al. ( 29, 1362, 1990); S. Ward et al. “Nature” (34 1, 544, 1989)].   Particularly preferred for use in the present invention are chimeric monoclonal antibodies, preferably tumors. It is a chimeric antibody having specificity for a tumor-associated antigen. As used herein, the phrase "ki" "Mella antibody" refers to a protein derived from a single source, usually produced by recombinant DNA technology. At least the variable portion, i.e., the binding portion and the constant portion derived from another species source. Partial monoclonal antibody is designated. Murine variable and human constant parts Are particularly suitable for certain uses of the invention, preferably for human therapy. However, it is well known that such antibodies are easily produced and that murine alone monoclonal antibodies This is because the immunity is lower than that of Such a murine / human chimeric antibody is a murine Expression immunoglobulin comprising a DNA segment encoding an immunoglobulin constant portion It is the product of the Brin gene. Other forms of chimeric antibodies encompassed by the present invention include: A net or sub-net is denatured or altered from that of the original antibody. Heel Such "chimeric" antibodies are sometimes referred to as "class-switched" antibodies. is there. A method for producing a chimeric antibody is performed by using a conventional recombinant DNA and a gene known in the art. Requires transfection methods [eg, Morrison S. et al. L. "Proc. Na t'l Acad. Sci. "(81, p. 6851, 1984)].   The phrase “chimeric antibody” is used in the concept of “humanized antibody”, ie, a substrate or antibody. Indicates that the complementarity determining portion ("CDR") has a different specificity compared to the parent immunoglobulin Comprising an antibody that has been modified to include a CDR of an immunoglobulin having is there. In a preferred embodiment, the murine CDRs are implanted into the substrate portion of a human antibody. Manufactures “humanized antibodies” [see, eg, L. et al. Leachman's "Nature (332, 323, 1988); S. "Nature" by Nyberger et al. 314, 268, 1985)]. Particularly preferred CDRs are chimeras and This corresponds to a bifunctional antibody showing a sequence that recognizes the antigen. CDR modified antibody For teaching, refer to the teaching of EPA 0239400 (published September 30, 1987). Teru.   One of skill in the art will appreciate that the low immunogenicity of chimeric or human-directed antibodies, as well as Bifunctional-textures of the described bifunctional antibodies which have the advantage of being particularly adaptable to therapeutic treatment It will be appreciated that antibodies can be produced. Such bifunctional-chimeric antibodies are, for example, For example, by chemical synthesis using crosslinkers of the type described above and / or recombinant methods, Can be achieved. In any case, the present invention relates to bifunctional, chimeric, bifunctional-textured La, human-oriented, or antigen-recognition fragments or derivatives thereof. Nevertheless, if the technical scope is limited by the individual production method of the antibody, Should not be understood.   In addition, the present invention contemplates within its technical scope active proteins, such as Neuberger et al. PCT Patent Application Publication No. WO86 / 01533 (released on March 13, 1986) Immunoglobulin (as described above) or immunity fused with an enzyme of the type disclosed in It contains globulin fragments. The disclosure of such products is for reference only. Introduce in the specification.   Note that "bifunctional", "fused", "chimeric" (including human), And "bifunctional-chimeric" (including human) antibody structures include their individual The wording also includes a structure consisting of an antigen recognition fragment. By those skilled in the art As will be appreciated, such fragments are intact bifunctional, textured By conventional enzymatic cleavage of human or bifunctional-chimeric antibodies Could be manufactured. However, the intact antibody is of a structural nature in question. The immunoglobulin fragment if it is not susceptible to the cleavage Can be used as a source to produce the structure of interest; When used, when expressed, in vivo by chemical or biological means. Or combined in vitro to obtain the ultimately desired intact immunoglobulin "flag" To encode the desired “fragment” that can produce In addition, the DNA sequence itself can be adapted. Thus, in this context, the word Use the phrase "fragment".   Furthermore, as described above, the immunoglobulin (antibody) or its flag used in the present invention. The mention may be polyclonal or monoclonal in nature. But Thus, monoclonal antibodies are the preferred immunoglobulins. Such polyclonality Or monoclonal antibodies are now well known to those of skill in the art, and Can produce sufficient useful immunoglobulin that can be used in the present invention. For example, G. Kohler and C.I. Millstein's "Nature" (256, 495, 1975)]. In addition, hybridomas and / or such hybrids Monoclonal antibodies produced by humans and useful in the practice of the present invention are Type Culture Collection ("ATCC"), Maryland 20 852, Rockville, Percrow Drive 12301), or Commercially, for example, Boerlinger-Manniheim Biochemicals (Ind. Ana 46250, Indianapolis, P.O. Box 50816) Are generally available.   Particularly preferred monoclonal antibodies for use in the present invention recognize tumor-associated antigens Things. Such monoclonal antibodies are not limited to these. However, for example, the following are included.   In a most preferred embodiment, the ligand-containing conjugate is a U.S.A. S. Patent Application No. 07/544246 (filed on June 26, 1990) [PCT patent application Publication No. WO91 / 00295 (released January 10, 1991)] From a chimeric antibody BR96 ("Chi BR96"). Chi BR96, Endogenous murine / human chimeric antibodies that should be kept in mind for breast, lung, colon and Fucosylation expressed by human carcinoma cells, such as those derived from ovarian carcinoma Reacts with Lewis Y antigen. Hybridoma expression chimera BR96 (Chi (Same as BR96), on May 23, 1990 under the terms of the Budapest Treaty. , American Type Culture Collection ("ATCC") Deposited at 12301 Percrow Drive, Rockville, 20852, India Was. This hybridoma sample was deposited under accession number ATCC 10460. It is possible. Chi BR96 is obtained, in part, from its parent BR96 source. Yes BR96-expressed BR96 was found in the terms of the Budapest Treaty on February 2, 1989. It is deposited at the ATCC on the 1st and is available under accession number HB10036. Place The desired hybridoma is cultured and produced using standard methods currently known in the art. Antibodies are isolated from cell culture supernatants [Harrell, “Single Clone Hybridization”. Doma Antibodies: Techniques and Applications "(CRC Press, 1982)].   Thus, the term "immunoglobulin" or "antibody" as used herein has its meaning. And all of the immunoglobulin / antibody forms or structures described above.   Synthesis of each compound of the present invention   The linkers, drugs / linkers and conjugates of the present invention are publicly known in the art. It is described and / or described herein by techniques known in the art or as guidance. Alternatively, they can be prepared via routine experimentation using techniques known in the art. Attachment of the drug to the linker causes the nucleophilic atom (O, N or S) of the drug to be self-immolative. This is done by reacting with the carboxy terminus of the spacer or peptide. This reaction is shown as follows.  Here, X = Cl, Br, tosylate, N-hydroxysuccinimide, etc. Leavable group   y = OH, NHTwo, Nucleophilic groups such as SH and NH-lower alkyl   R = residue of linker   The bond to the aldehyde or ketone can be an enol or N-lower alkyl enantiomer. This can be done by having an aldehyde or ketone in the form of an olefin. Play Upon release of the released enamine, it spontaneously adds to the aldehyde or ketone. Expected to hydrolyze.   The reaction formulas shown below are examples of the production method (compound No. is Example N). o. Corresponding to).                                 Reaction formula 1                                Reaction formula 2                          Reaction Scheme 3 (Part I)                         Reaction formula 3 (Part II)                          Scheme 4 (Part I)                         Scheme 4 (Part II)                                Reaction formula 5                                Reaction formula 6                                Reaction formula 7                                Reaction formula 8                          Reaction Scheme 9 (Part I)                         Scheme 9 (Part II)                               Reaction formula 10                               Reaction formula 11                               Reaction formula 12  Next, the present invention will be described specifically with reference to examples, but is not limited to these examples. Should not be interpreted as   Example 1   Fmoc-Lys (Mtr):   Fmoc-Lys hydrochloride (23.78 g) in dry methylene chloride (250 ml) , 56.42 mmol) was stirred at rt (room temperature) under argon at room temperature. Lucylyl chloride (15 ml, 2.1 eq) and DIEA (10.3 ml, 1 . 05 equivalents). The mixture was heated to reflux for 1 h (hour), during which time it was And then cooled to 0 ° C. After adding DIEA (31 ml, 3.1 eq), Add p-anisyldiphenylmethyl chloride (18.29 g, 1.05 eq) You. The reaction is stirred at rt for 14 h. The solvent was evaporated and the residue was taken up in ethyl acetate and pH 5 Partition between buffer (0.05M biphthalate). Add organic phase to pH 5 buffer Wash with water and brine, dry over sodium sulfate and evaporate to give a pale yellow foam (34.71 g, 96%).   HRMS     Calculated value: 641.3015     Obtained: 641.3001   Example 2   Lys (Mtr):   Fmoc-Lys in methylene chloride / acetonitrile (1: 1, 80 ml) Mtr) 1 (5.25 g, 8.19 mmol) at RT with diethylamine (8 0 ml). After 1.5 h, the solvent is evaporated. The residue was acetonitrile at 60 ° C. Flush with tril (50 ml x 2), then triturate with ether (80 ml). To chelate. The solid obtained is filtered, washed with ether and then methylene chloride. / Methanol (1: 1) as much as possible. Filtering off some by-product solids, The filtrate is concentrated under reduced pressure. The light yellow-brown solid obtained is dried under reduced pressure for 4 h (3.2 221 g, 94%).   Example 3   Fmoc-Lys (Mtr) -OSu:   Fmoc-Lys (Mtr) in DME (100 ml)Two(5.5567 g, 8.672 mmol) and N-hydroxysuccinimide (1.0978 g, 1.1 eq.) At 0 ° C. with 0.5 M DCC / methylene chloride (19. (1 ml, 1.1 eq). The mixture is gradually warmed to rt. 14 hours later The DCU solids are filtered off and the filtrate is evaporated to dryness. Use crude active ester without purification I have.   Example 4   Fmoc-Lys (Mtr) -Lys (Mtr):   Fmoc-Lys (Mtr) -OSu3 (about 8.67) in DMF (70 ml) Stirred solution of Lys (Mtr) 2 (3.6294 g, 1 eq) Is treated with DIEA (4.5 ml, 3 eq) at rt. After 4 h, the mixture is vinegared Dilute with ethyl acid (250 ml). Transfer the solution to pH 4 buffer (0.05M biphthale Washed twice with water and brine, dried over sodium sulfate and evaporated. The residue was flushed with methylene chloride (400 ml) to give a pale yellow foam, which was Use without purification.   Example 5   Fmoc-Lys (Mtr) -Lys (Mtr) -PABOH:   Fmoc-Lys (Mtr) -Lys (Mt) in methylene chloride (100 ml) r) 4 (about 8.672 mmol) and di-t-butyl dicarbonate (2.8 A stirred solution of 390 g (1.5 eq) was stirred at rt with pyridine (0.736 ml, . 05 equivalents). After 20 minutes, p-aminobenzyl alcohol (1.60) 20 g, 1.5 equivalents). Stirring is continued for 16 h, then the solvent is evaporated and the residue Is dried under reduced pressure for 2 h. The crude product is used without purification.  Elemental analysis (C74H75NFiveO7・ 2HTwoAs O)   Calculated values: C75.17, H6.73, N5.92   Obtained: C74.89, H6.37, N5.75   Example 6   Lys (Mtr) -Lys (Mtr) -PABOH:   Fmoc-Lys (Mtr) -Lys (M in acetonitrile (100 ml) tr) -PABOH5 (about 8.672 mmol) at RT with diethylamine ( 75 ml). After 2 h, the solvent is rotovap (rotovap) At 40 ° C., and the residue was dried under reduced pressure for 1 h. ml) as much as possible. The solid is filtered off and the filtrate is concentrated under reduced pressure. Residue 1) 2.5%, 2) 3% and 3) 3.5% methanol / methylene chloride The product is obtained as a colorless foam by chromatography eluting with (2.84) 03g, 35% (4 steps)).   Elemental analysis (C59H65NFiveOFive・ HTwoAs O)   Calculated values: C75.21, H7.17, N7.43   Obtained: C75.37, H6.96, N7.24   Example 7a   Fmoc-Phe-OSu:   Fmoc-Phe (5.1033 g, 13.1 g) in methylene chloride (100 ml). 17 mmol) and NHS (1.592 g, 1.05 eq) at 0 ° C. with DC Treat with C (2.854 g, 1.05 eq). Let the ice bath warm to rt and mix. The mixture is stirred for 14 h. DCU is filtered off and the filtrate is evaporated. Colorless glass obtained The crude product is used without purification.   Example 7b   Fmoc-Val-OSu 7b:   This was performed according to the description in Example 7a, using Fmoc-Val (7.02 g, 20.7 g). Mmol).   Example 7c   Fmoc-Ala-OSu:   This was performed according to the description in Example 7a, using Fmoc-Ala (5.0414 g, 15 31 mmol).   Example 8a   Fmoc-Phe-Lys (Mtr):   Lys (Mtr) 2 (4.6 in water (100 ml) and DME (50 ml) 86 g, 11.20 mmol) and NaHCOThree(941.0 mg, 1 equivalent) Of Fmoc-Phe-OSu 7a in DME (50 ml) (11. (20 mmol). Then, THF (25 ml) was added to dissolve. help. The mixture is stirred at rt for 2 days, then as much DME as possible (Bath temperature 30 ° C). The resulting rubber suspension is diluted with ethyl acetate to pH 5 Partition between the powders. Wash the organic phase with water and brine, dry and evaporate to a pale yellow foam Get things. This is flushed with methylene chloride (100 ml). By TLC, The product was found to be sufficiently pure and was used without purification (8.5 59 g, 97%).   Elemental analysis (C50H49NThreeO6・ HTwoAs O)   Calculated values: C74.51, H6.38, N5.21   Obtained: C74.17, H6.57, N5.41   Example 8b   Fmoc-Val-Lys (Mtr):   This is based on Fmoc-Val-OSu 7b (20. Prepared from 7 mmol) and Lys (Mtr) 2 (9.09 g, 1.05 eq) (15.28 g, 100%).   HRMS     Calculated value: 740.3700     Obtained: 740.3712   Example 8c   Fmoc-Ala-Lys (Mtr):   Fmoc-Ala-OSu 7c (15.31 mm) in DME (100 ml) Mol) solution in water / DME (2: 1, 150 ml) with Lys (Mtr) 2 ( 6.4080 g, 1 eq) and potassium bicarbonate (1.5331 mg, 1 eq) To the stirred solution. After 16 h, the DME was removed under reduced pressure and the resulting suspension was quenched. Treat with acid (3.22 g, 1.1 eq) / water (25 ml). The mixture is treated with ethyl acetate Extract with Wash the organic phase with water (2 times) and brine, dry over sodium sulfate Concentrate in vacuo to give a yellow foam which is used without purification.   Example 9a   Fmoc-Phe-Lys (Mtr) -PAB-OH:   Fmoc-Phe-Lys (Mtr) 8a (7 in methine chloride (100 ml) . 728 g, 9.808 mmol) and p-aminobenzyl alcohol (1. A stirred solution of 450 g, 1.2 eq) was stirred at rt with EEDQ (3.640 g, 1. 5 equivalents). After 20 h, the solvent is evaporated (water bath 30 ° C.). Remove solid residue Triturate with water (200 ml) and sonicate the resulting suspension for 15 minutes Wave treatment and leave at rt for 2 h. The solid obtained is filtered and washed thoroughly with ether. And dried under reduced pressure (7.6140 g, 87%).   Elemental analysis (C57H56NFourO6・ HTwoAs O)   Calculated values: C75.14, H6.42, N6.15   Obtained: C75.25, H6.02, N6.49   Example 9b   Fmoc-Val-Lys (Mtr) -PABOH: This is based on Fmoc-Val-Lys (Mtr) 8b ( 15.28 g, 20.65 mmol) (14.24 g, 82%).   Elemental analysis (C53H56NFourO6・ 0.5HTwoAs O)   Calculated values: C73.76, H6.77, N6.49   Obtained: C74.01, H6.68, N6.63   Example 9c   Fmoc-Ala-Lys (Mtr) -PABOH:   This is based on the description in Example 9a, Fmoc-Ala-Lys (Mtr) 8c (1.0885 g, 15.31 mmol) (11.0073 g, 88%).   Elemental analysis (C51H52NFourO6・ HTwoAs O)   Calculated values: C73.36, H6.52, N6.71   Obtained: C73.02, H6.72, N6.54   Example 10a   Phe-Lys (Mtr) -PAB-OH:   Fmoc-Phe-Lys (Mtr) -PAB in methylene chloride (35 ml) -OH9a (4.2857 g, 4.80 mmol) was added at RT with diethylamine (50 ml). Sonicate the mixture briefly and stir at rt for 4 h . After that no starting material was seen by TLC. Evaporate the solvent and salt the residue Flash with methylene chloride and on silica 1) 2%, 2) 3% and 3) 4% meta Chromatography eluting with toluene / methylene chloride gave the product as a colorless foam. (2.230 g, 69%).   Elemental analysis (C42H46NFourOFour・ 1 / 2HTwoAs O)   Calculated values: C74.20, H6.97, N8.24   Found: C 74.28, H 7.00, N 8.34   Example 10b   Val-Lys (Mtr) -PABOH:   Fmoc-Val-Ly in methylene chloride / methanol (5: 1, 75 ml) Solution of a (Mtr) -PABOH 9b (13.94 g, 16.50 mmol) Is treated with diethylamine (150 ml). Sonicate the reaction for 30 minutes And then let stand at rt for 3 h. Evaporate the solvent and flush the residue with methylene chloride You. The remaining material was converted on silica to 1) 2%, 2) 3%, 3) 3.5% and 4) 4 The product was chromatographed eluting with Obtained as a colorless foam (6.2510 g, 61%).   HRMS (C38H47NFourOFourAs)     Calculated value: 623.3598     Obtained value: 623.3606   Elemental analysis (C38H46NFourOFour・ HTwoAs O)   Calculated values: C71.22, H7.55, N8.74   Found: C 71.41, H 7.51, N 8.66.   Example 10c   Ala-Lys (Mtr) -PABOH:   Fmoc-Ala-Lys (Mtr) -PABOH9 in DMF (50 ml) c (11.0073 g, 13.47 mmol) at RT with diethylamido. (25 ml). After 2.5 h, the mixture was concentrated under high vacuum and the residue was Flash with methylene chloride (100 ml x 2) and then with toluene (150 ml) . The remaining substance was purified on silica using methylene chloride / (ethyl acetate / methanol = 5: 1). ) = 1) 4: 1, 2) 1: 1, 3) 1: 1.6 and 4) 1: 3 The product is obtained as a pale yellow foam by chromatography (5.7817 g). , 72%).   Example 11   N, N-bis-carbobenzyloxyethylenediamine:   Ethylenediamine (9.4 ml, 1 M NaOH (310 ml, 1 equivalent) 0.5 eq.) At 0 ° C. in a strongly stirred solution of benzyl chloroformate (40 ml, (280 mmol) over 45 minutes. A dark white precipitate forms and the mixture Is stirred for 4 h after the dropwise addition. The solid product obtained is filtered off, washed with water and then with hexane. Air dry overnight (46.17 g, 100%).   Example 12   N-carbobenzyloxyethylenediamine hydrochloride:   N, N-bis-carbobenzyloxyethylenedia in glacial acetic acid (100 ml) Min 11 (23.91 g, 72.8 mmol) was added to 12M HCl (12.1 m 1, 2 equivalents). The stirred mixture was heated at reflux for 1 h, then at rt overnight Let stand still. A small amount of solid was filtered off, the filtrate was diluted with ether (700 ml) and rt And let stand for 2h. The white solid product obtained is filtered off, washed repeatedly with ether and reduced. Dry overnight in a pressure desiccator (9.2440 g, 55%).   Example 13   N-carbovenyloxy-N ', N'-bis- (t-butoxycarbonyl Chill) ethylenediamine:   N-carbobenzylo in methanol / methylene chloride (3: 1, 100 ml) Stirring of xyethylenediamine hydrochloride 12 (5.009 g, 21.68 mmol) Stir the stirred solution at rt with t-phthyl acrylate (64 ml, 20 eq.) Treat with ethylamine (3.3 ml, 1.1 eq). Two days later, remove the solvent Remove with a pump. The residue was dried under reduced pressure for 30 minutes and then 30% ethyl acetate / ether And 50% saturated NaHCOThreeDistribute between. Wash the organic phase with water and brine, add sodium sulfate Dry over thorium and evaporate. The residue is purified on silica with 20% ethyl acetate / hex Chromatography eluting the product with a thick colorless oil (9.3801 g, 96%).   Elemental analysis (Ctwenty fourH38NTwoO6・ 0.5HTwoAs O)   Calculated values: C 62.72, H 8.55, N 6.09   Obtained values: C62.54, H8.27, N5.95   Example 14   N, N-bis- (t-butoxycarbonylethyl) ethylenediamine dihydrochloride salt:   N-carbobenzyloxy-N ', N'-bis-t-butoxypropionyl Tilenediamine 13 (18.3640 g, 40.76 mmol) was filtered through glass. Pass through the Raney Nickel floor in the vessel. The filtrate was degassed with nitrogen and 10% Pd / C ( 1 g) and 12M HCl (6.8 ml, 2 equiv.). Pearl mixture (Parr) Hydrogenate with a shaker at 50 psi for 16 h and degas again with nitrogen You. The catalyst is filtered off on a celite bed. The filtrate was concentrated under reduced pressure, and the residue was treated with methyl chloride. Flash with ren (twice) to obtain an off-white foam (15.8696 g, 100%).  Example 15   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (t-butoxycarbonylethyl) ethyl Rangeamine:   N, N-bis-t-butoxypropionyl ether in acetonitrile (30 ml) Stirring of tylenediamine dihydrochloride 14 (5.3363 g, 13.70 mmol) The solution was treated with DIEA (4.77 ml, 2 eq.) And anhydrous Treat with formic acid (1.4111 g, 1.05 eq). Reaction solution slowly to rt Heat. After 16 h, trimethylsilyl chloride (5.2 ml, 3 eq) and Add DIEA (7.2 ml, 3 eq). The mixture is heated at reflux for 4 h. Under cooling The solvent is removed under reduced pressure and the residue is dissolved in ethyl acetate. The solution is saturated NaHCOThree,water And washed with brine, dried over sodium sulfate and evaporated. Residue on silica The product was chromatographed eluting with hexane / acetic acid (2.5: 1). As a pale yellow oil (2.9986 g, 55%).   Elemental analysis (C20H32NTwoO6As)   Calculated values: C60.59, H8.13, N7.07   Obtained values: C60.65, H7.98, N6.88   Example 16   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (carboxyethyl) ethylenediamine -P-toluenesulfonic acid:   N-Maleoyl-N ', N'-bis-t-butyl in methylene chloride (100 ml) Toxipropionyl ethylenediamine 15 (3.9934 g, 10.07 mmol G) at rt to give p-toluenesulfonic acid monohydrate (5.75 g, 3 equivalents) To process. Stir the reaction at rt overnight. Evaporate the solvent at rt and remove the rubbery residue Dry under reduced pressure for 3 h. By NMR the signal of the complete loss of t-butyl ester is Admitted. The crude product is used without purification.1H-NMR (DMSO-d6) Δ (Containing 3 equivalents of p-toluenesulfonic acid) 2.29 (s, 9H), 2.76 ( m, 4H), 3.39 (m, 6H), 3.81 (brt, 2H), 7.11 (s , 2H), 7.17 (d, 6H), 7.49 (d, 6H), 9.27 (br, 1 H)   Example 17   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (succinimidyloxycarbonyl Chill) ethylenediamine:   N-Maleoyl-N ', N'-bis-propyl in acetonitrile (90 ml) Onylethylenediamine / p-toluenesulfonate 16 (approx. Toluene, containing 2 equivalents of p-toluenesulfonic acid), triethylamine (4.4 ml, 3.1 equivalents) and N-hydroxysuccinimide (2.5502 g, 2 . (2 eq.) At 0 ° C. in 0.5 M DCC / methylene chloride (45.3). ml, 2.25 equivalents). After 14 hours, the reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was Partition between ethyl and water. The aqueous phase is re-extracted with ethyl acetate. Yu combined The phases are washed with water (twice) and brine, dried over sodium sulfate and evaporated. Remaining The residue was chromatographed on silica eluting with ethyl acetate / methylene chloride (1: 1). Filtration gives the product as a pale yellow foam (1.2043 g, 25%, 2 Tep).   Example 18a   MEt-IDP- (Lys (Mtr) -Lys (Mtr) -PABOH)Two:   Lys (Mtr) -Lys (Mtr) -PABOH6 in DME (30 ml) (2.0903 g, 2.262 mmol) and N-maleyl-N ', N'- Bis-succinimidyloxypropionylethylenediamine 17 (541.0 (0.5 mg, 0.5 eq) is stirred at rt for 2 days. The reaction solution was concentrated under reduced pressure at 30 ° C. And dissolve the residue in ethyl acetate. Wash the solution with water (twice) and brine and add sulfuric acid Dry over sodium and evaporate to give the product as a colorless glass (2.3623 g, 99%). Example 18b   MEt-IDP- (Phe-Lys (Mtr) -PABOH)Two:   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (carboxye) in DME (50 ml) Tyl) ethylenediamine / p-toluenesulfonic acid 16 (1.0643 g, 1. 696 mmol) at 0 ° C. with triethylamine (0.6 ml, 2 ml). 5 eq), Phe-Lys (Mtr) -PABOH10a (2.2750 g, 2 Eq), NHS (439.0 mg, 2.25 eq) and DCC (methylene chloride). 0.5 M, 8.5 ml, 2.5 eq.). Add the reaction solution slowly to rt Warm up. After 16 h, the DCU by-product is filtered off and the filtrate is concentrated under reduced pressure. A residue Triturate with tel, filter the resulting solid, wash with ether and dry under reduced pressure. Dry (2.0494 g, 76%).   Example 18c   MEt-IDP- (Ala-Lys (Mtr) -PABOH)Two:   This is N-maleoyl-N ', N'-bis-succinimidyloxypropyl Prepared from onylethylenediamine 17.   HRMS (C84H96NTenO12As Na)     Calculated value: 1459.7107     Obtained value: 1459.707   Example 19a   MEt-IDP- (Lys (Mtr) -Lys (Mtr) -PABC-PNP )Two:   MEt-IDP- (Lys (Mtr) -L in dry methylene chloride (60 ml) ys (Mtr) -PABOH)Two18a (2.3623 g, 1.127 mmol) ) And bis-p-nitrophenylenocarbonate (1.5424 g, 4.5 equivalents) Amount) with freshly activated 4% powdered sieve (8.5 g) and DIEA (0.8 g). 83 ml, 4.5 eq.). The mixture is stirred for 16 h and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure to give a yellow solid, which could be made up into ether (200 ml). Dissolve. The suspension is sonicated and stirred at rt overnight. The resulting white solid It is filtered off, washed repeatedly with ether and dried under reduced pressure (2.4084 g, 88%).   Elemental analysis (C144H148N14Otwenty two・ 2HTwoAs O)   Calculated values: C70.23, H6.22, N7.96   Obtained values: C70.11, H6.22, N7.96   Example 19b   MEt-IDP- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-PNP)Two:   This is based on the description of Example 19a, MEt-IDP- (Phe-Lys (M tr) -PABOH)TwoMade from 18b (517.8 mg, 0.326 mmol) (509.1 mg, 74%).   Example 19c   MEt-IDP- (Ala-Lys (Mtr) -PABC-PNP)Two:   This is based on the description of Example 19a, MEt-IDPO (Ala-Lys (M tr) -PABOH)TwoPrepared from 18c (6.24 g, 4.34 mmol) (6.00 g, 74%).   Example 20a   MEt-IDP- (Lys (Mtr) -Lys (Mtr) -PABC-DOX )Two:   MEt-IDP- (Lys (Mtr) -Lys (Mt) in DMF (25 ml) r) -PABC-PNP)Two19a (753.0 mg, 0.3103 mmol) And a stirred solution of DOX hydrochloride (377.9 mg, 2.1 eq.) At rt with D Treat with IEA (0.114 ml, 2.1 eq). After 3 days, the mixture was washed with ethyl acetate. (200 ml), wash the solution with water (4 times) and brine, and add sodium sulfate. Dry on top and evaporate to give an orange glass. This is ether (200m l) with trituration, the solid obtained is filtered off and then chlorided on silica. The crude product was chromatographed eluting with methylene / methanol (16: 1). The product is obtained as an orange solid (803.8 mg, 80%).   Example 20b   MEt-IDP- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-DOX)Two:   This is based on the description of Example 20a, MEt-IDP- (Phe-Lys (M tr) -PABC-PNP)Two19b (340.8 mg, 0.161 mmol) (411.2 mg, 93%).   Example 20c   MEt-IDP- (Ala-Lys (Mtr) -PABC-DOX)Two:   This is based on the description of Example 20a, MEt-IDP- (Ala-Lys (M tr) -PABC-PNP)TwoMade from 19c (6.00 g, 3.39 mmol) (620 mg, 7%).   Example 21a   MEt-IDP- (Lys-Lys-PABC-DOX)Two・ 5ClTwoCHCOTwo H:   MEt-IDP- (Lys (Mtr) -Lys in methylene chloride (21 ml) (Mtr) -PABC-DOX)Two20a (318.7 mg, 0.0985 mm Mol) at rt with anisole (3.2 ml, 300 eq.) Treat with chloroacetic acid (0.244 ml, 30 eq). After 2.5 h, ethyl acetate (50 ml). The mixture is stored at 4 ° C. for 2 h. The resulting solid is collected by filtration, Wash repeatedly with ethyl acetate and then ether, then air dry (274.5 mg, 99.8%).   Example 21b   MEt-IDP- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two・ 3ClTwoCHCOTwo H:   This is based on the description of Example 21a, MEt-IDP- (Phe-Lys (M tr) -PABC-DOX)Two20b (280.0 mg, 0.103 mmol) (237.1 mg, 90%).   Example 21c   MEt-IDP- (Ala-Lys-PABC-DOX)Two・ 3ClTwoCHCOTwo H:   This is based on the description of Example 21a, and MEt-IDP- (Ala-Lys (M tr) -PABC-DOX)TwoFrom 20c (569 mg, 0.248 mmol) Manufactured (455 mg, 80%).   Example 22   N-carbobenzyloxy-N ', N'-bis- (t-butoxycarbonyl Chill) ethylenediamine:   N-carbobenzyloxyethylenediamine hydrochloride in DMF (100 ml) 12 (13.95 g, 60.48 mmol) and potassium bicarbonate (24.22 g, 4 equiv.) at 0 ° C. with t-butyl bromoacetate (22 ml). , 2.25 equiv.) Over 10 minutes. Warm the mixture to rt. Stirring was continued for 12 h, then the mixture was 50% saturated with ether / ethyl acetate (3: 1). Partition between sodium bicarbonate. Wash the organic phase with water (3 times) and brine, and add sodium sulfate Dry over lium and evaporate to give a thick oil. Hep it at 60 ° C Flash several times with tan to remove excess t-butyl bromoacetate, then On silica, 1) hexane, 2) 5% ethyl acetate / hexane, and 3) 25% Purify the product by chromatography, eluting with ethyl acetate / hexane. Obtained as a filtered colorless oil (18.53 g, 73%).   Example 23   N, N-bis- (t-butoxycarbonylmethyl) ethylenediamine dihydrochloride salt:   N-carbobenzyloxy-N ', N'-bis- in ethanol (75 ml) (T-Butoxyacetyl) ethylenediamine 22 (15.02 g, 35.54 mi) ) Is filtered over a Raney nickel bed. Acetic acid (6.1 ml, 3 equivalents ) Is added and the mixture is hydrogenated as described in Example 4. Without purification of the crude product use.   Example 24   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (t-butoxycarbonylmethyl) ethyl Rangeamine:   CHClThreeN, N-bis- (t-butoxyacetyl) ethyl in (150 ml) Diamine 25 dihydrochloride 23 (about 35.54 mmol) was treated with anhydrous maleic acid at rt. Treat with acid (3.83 g, 1.1 eq). The mixture was stirred for 14 h and then dissolved. Evaporate the medium. The residue is CHClThree(200 ml), then flush with argon Dissolve in lower acetonitrile (200 ml). The stirred mixture was cooled to 0 ° C. Methylsilyl chloride (18 ml, 4 equivalents) and triethylamine (20 ml , 4 equivalents). Remove the ice bath and heat the mixture to reflux for 2.5 h. Solvent Decrease Remove the pressure and partition the residue between ether and 30% saturated sodium bicarbonate. Organic phase Is washed with water, brine, dried and evaporated. The residue is treated on silica with hexane / ethyl acetate. The product was waxy by chromatography eluting with Obtain as a solid (8.25 g, 63%, 3 steps).   Example 25   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (carboxymethyl) ethylenediamine -P-toluenesulfonic acid:   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (t-butyl) in methylene chloride (70 ml). (Toxicarbonylmethyl) ethylenediamine 24 (2.6718 g, 7.25 Of the stirred solution of p-toluenesulfonic acid monohydrate (4.1 (400 g, 3 equivalents). After 30 h, the resulting white solid was filtered and washed with methyl chloride. Wash repeatedly with styrene and ether, then dry under reduced pressure. By NMR, raw 1.4 to 1.5 equivalents of p-toluenesulfonic acid was observed per equivalent of the product (raw (Product: 3.7531 g, 100%).   Elemental analysis (CTenH13NTwoO6・ 1.3C7H7OThreeS ・ 2HTwoAs O)   Calculated values: C44.48, H5.10, N5.43   Obtained: C44.51, H4.96, N5.20   Example 26a   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABOH)Two:   Phe-Lys (Mtr) -PABOH10a (2 in DME (150 ml) . 5179 g, 3.753 mmol), N-maleoil-N ', N'-bis- ( Carboxymethyl) ethylenediamine / p-toluenesulfonic acid 25 (804. 0 mg, 0.5 eq) and N-hydroxysuccinimide (475.2 mg, 1 eq.) At 0 ° C. with DIEA (0.33 ml, 0.5 eq.) And 0. Treat with 5M DCC / methylene chloride (9.0 ml, 1.2 eq). Six hours later, The DCU is filtered off and the filtrate is concentrated under reduced pressure. The residue is partitioned between ethyl acetate and water. Yes The organic phase is washed with water (twice) and brine, dried over sodium sulfate and concentrated under reduced pressure . The residue is dissolved as much as possible in methylene chloride (100 ml) and the mixture is then eluted. Dilute with Tell (100 ml). After standing overnight, filter the resulting solid and air dry (2.6295 g, 90%).  Example 26b   MEt-IDA- (Val-Lys (Mtr) -PABOH)Two:   This was determined according to the description in Example 26a, using N-maleoil-N ', N'-bis- ( Carboxymethyl) ethylenediamine / p-toluenesulfonic acid 25 (500 m g, 1.16 mmol) and Val-Lys (Mtr) -PABOH10b ( 1.44 g, 2 equiv.) (1.68 g, 95%).   Elemental analysis (C86H100NTenO12・ 2HTwoAs O)   Calculated values: C68.78, H6.98, N9.33   Obtained: C 68.87, H 7.54, N 9.48   Example 27a   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-PNP)Two:   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr) in methylene chloride (25 ml) -PABOH)Two26a (471.5 mg, 0.319 mmol) and bis- A stirred suspension of p-nitrophenyl carbonate (971.0 mg, 10 equiv.) Treat with DIEA (0.611 ml, 11 eq) at rt under argon. 16 After h, the solvent is removed under reduced pressure and the residue is dried under reduced pressure for 3 h. The residue was treated with methylene chloride (15 ml), to which ether (30 ml) is added under slow stirring. Get Allow the suspension to stand overnight. The solid was collected by filtration and ether / methylene chloride (2: 1). And dried under reduced pressure (411.5 mg, 68%).  Example 27b   MEt-IDA- (Val-Lys (Mtr) -PABC-PNP)Two:   This is based on the description in Example 27a, MEt-IDA- (Val-Lys (M tr) -PABOH)TwoPrepared from 26b (300 mg, 0.205 mmol) (347.7 mg, 94%).   Example 28a   Met-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-DOX)Two:   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PA in NMP (10 ml) BC-PNP)Two27a (410.3 mg, 0.217 mmol) and doxo A solution of rubicin hydrochloride (283.0 mg, 2.25 eq) was added to DIEA (0.0 94 ml, 2.5 eq.). After 48 h, the mixture is poured into ethyl acetate. Dissolution Wash the solution with water (3 times) and evaporate under reduced pressure. In each case the product is contained by TLC Some orange solids are formed. This is filtered and then Combine with organic soluble components and then chromatograph. Combine The resulting substance was converted to methylene chloride / (ethyl acetate / methanol = 5: 1) = 1 on silica. ) 6: 4, and 2) chromatography, eluting 1: 1 with the product As an orange solid (351.8 mg, 60%).  Example 28b   MEt-IDA- (Val-Lys (Mtr) -PABC-DOX)Two:   This is based on the description of Example 28a, MEt-IDA- (Val-Lys (M tr) -PABC-PNP)Two27b (6.351 g, 3.536 mmol) (2.79 g, 30%).   Example 29a   MEt-IDA- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two・ 2ClTwoCHCOTwo H:   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr)-in methylene chloride (15 ml) PABC-DOX)Two28a (192.0 mg, 0.071 mmol) with stirring The solution was treated at rt with anisole (1.54 ml, 200 equivalents) and dichloroacetic acid ( 0.117 ml, 20 eq.). One hour later, ethyl acetate (15 ml) was added. I can. The resulting solid is collected by filtration, washed with ethyl acetate and ether, and dried under reduced pressure (181.0 mg, 100%).  Example 29b   MEt-IDA- (Val-Lys-PABC-DOX)Two・ 2ClTwoCHCOTwo H:   This is based on the description in Example 29a, MEt-IDA- (Val-Lys (M tr) -PABC-DOX)Two28b (232 mg, 0.0891 mmol) (171 mg, 78%).   Example 30   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-MMC)Two:   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PAB in NMP (6 ml) C-PNP)Two27a (183.8 mg, 0.0971 mmol), mitomai Syn-C (73.1 mg, 2.25 equivalents), N-hydroxybenzotriazole Monohydrate (131.3 mg, 10 eq) and freshly activated 4% powdered seed (0.5 g) in DIEA (0.17 ml, 10 equivalents). After 40 h, the mixture was filtered and the filtrate was ethyl acetate (80 m Dilute in 1). Wash the solution with water (4 times), brine, dry over sodium sulfate, Evaporate. The residue was purified on silica using methylene chloride / (ethyl acetate / methanol = 5: 1) Chromatography eluting with = 2: 1 to give the product as a light purple solid (201.7 mg, 91%).   Example 31   Met-IDA- (Phe-Lys-PABC-MMC)Two・ 2ClTwoCHCOTwo H:   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr)-in methylene chloride (3 ml) PABC-MMC)Two30 (134.6 mg, 0.0590 mmol) in solution , Anisole (1.28 ml, 200 equivalents) and 1M chloroacetic acid / methyl chloride (1.18 ml, 20 equivalents). After 3.5 h, ethyl acetate (30 ml ). The resulting purple solid is collected by filtration, washed with ethyl acetate and air-dried (97. 8 mg, 82%). By HPLC, the products are decomposed in solution to one product It seems to be.   Example 32   2'-methoxytrityl-paclitaxel:   Paclitaxel (0.51 g, 0.597 mm) in methylene chloride (14 ml) Mol) and p-methoxytrityl chloride (4.63 g, 25 equivalents) Treat the solution with pyridine (1.23 ml, 25 eq) at rt under nitrogen. at rt After 16 h, the solvent is evaporated and the residue is dissolved in ethyl acetate. Put the solution in cold pH5 buffer (100 ml × 2), wash with water and brine, dry and evaporate. Residue on silica And purified by chromatography eluting with 3% methanol / methylene chloride. The product is obtained as a white solid (482 mg, 72%).   Example 33   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-7-paclitaxe Le)Two:   Paclitaxel-2'-Mtr32 (789.3) in methylene chloride (5 ml). mg, 0.701 mmol) in DIEA (0.12 2 ml, 1 equivalent), pyridine (0.057 ml, 1 equivalent) and diphosgene (0 . 043 ml, 0.5 eq.). The mixture was warmed to rt for 1.5 h. Then, this was injected with a syringe into MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABO). H)Two26a (547.3 mg, 0.5 eq) / methylene chloride (5 ml) and Add to a stirred suspension of DIEA (0.122 ml, 1 eq) at rt. 16 hours later , The mixture was diluted with ethyl acetate, pH 5 buffer (0.5 M biphthalate), water and And brine, dried over sodium sulfate and concentrated in vacuo. Residue on silica Methylene chloride / (ethyl acetate / methanol = 5: 1) = 1) 5: 1 and 2) Chromatography eluting 3: 1 gives the product as a colorless glass (859.2 mg, 63%). A small amount of monotaxol adduct (172.0 mg, 18%).  Example 34   MEt-IDA- (Phe-Lys-PABC-7-paclitaxel)Two・ 2 ClCHTwoCOTwoH:   MEt-IDA- (Phe-Lys (Mtr)-in methylene chloride (3 ml) PABC-7-paclitaxel)Two33 (333.0 mg, 0.0861 mmol ) With anisole (1.87 ml, 200 equivalents) and 1 M chloroacetic acid / chloride Treat with methylene (1.72 ml, 20 eq). After 4 h, the mixture was washed with ether ( 30 ml). The resulting suspension is sonicated for a few minutes and then the solid is filtered. Take and wash with ether (256.3 mg, 97%). Product slowly in solution Decomposition is observed.   Example 35   N-carbobenzyloxy-N ', N'-bis- (t-butoxycarbonyl Chill) propylene diamine:   This was performed according to the description in Example 22 using N-carbobenzyloxypropylene diadia. Prepared from min hydrochloride (3.4624 g, 14.15 mmol) (5.301). 7 g, 86%).  Example 36   N, N-bis- (t-butoxycarbonylmethyl) propylenediamine / divinegar acid:   N-carbobenzyloxy-N ', N'-bis- in ethanol (75 ml) (T-butoxycarbonylmethyl) propylenediamine 35 (5.3017 g, 12.144 mmol) of acetic acid (2.14 mmol) via a Raney nickel bed. (3 ml) / ethanol (75 ml). Gas the filtrate with nitrogen Drain and treat with 10% palladium on activated carbon (0.4 g). Pearl dressing the mixture The catalyst is hydrogenated at 50 psi for 16 h and then filtered off through a bed of celite. Filtration The solution is concentrated under reduced pressure, and the residue is flushed with chloroform (150 ml). Crude product Used without purification.   Example 37   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (t-butoxycarbonylmethyl) pro Pyrene diamine:   This was performed according to the description in Example 24, using N, N-bis- (t-butoxycarbonyl). Methyl) Propylenediamine. Prepared from diacetic acid 36 (12.14 mmol). . Chromatography of the crude product on silica, eluting with hexane / ethyl acetate (3: 1) Upon chromatography, the product is obtained as a pale yellow oil (2.0653 g, 44%, 3 steps).   Example 38   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (carboxymethyl) propylene diamine N-p-toluenesulfonic acid:   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (t-butyl) in methylene chloride (25 ml) Toxicarbonylmethyl) propylenediamine 37 (2.06 g, 5.39 mm Mol) is stirred at rt to give p-toluenesulfonic acid monohydrate (3.07 g, 3 equivalents). After 16 h, the solvent is removed under reduced pressure. Residue with ether Triturate four times (each time decant the ether). Obtained The semi-solid material is flushed with chloroform (150 ml × 2). By NMR 1.4 to 1.5 moles of p-toluenesulfonic acid per mole of product (Product: 2.68 g, 97%).   Example 39   MPr-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABOH)Two:   This was determined according to the description in Example 26a, using N-maleoil-N ', N'-bis- ( (Carboxymethyl) propylenediamine-p-toluenesulfonic acid 38 (2.6 842 g, 5.25 mmol) and Phe-Lys (Mtr) -PABOH1 Oa (7.0432 g, 2 eq). However, the crude product is silica Methylene chloride / (ethyl acetate / methanol = 5: 1) = 1) 2: 1 and 2) 1 . Chromatography eluting with 5: 1 gives the product as a white solid (4 . 5253 g, 55%).   Example 40   MPr-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-PNP)Two:   This was performed according to the description in Example 27a, using MPr-IDA- (Phe-Lys (M tr) -PABOH)TwoPrepared from 39 (1.7793 g, 1.143 mmol) (1.8909 g, 87%).   Example 41   MPr-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-DOX)Two:   This is based on the description in Example 28a, MPr-IDA- (Phe-Lys (M tr) -PABC-PNP)Two40 (722.7 mg, 0.379 mmol) Manufactured. The crude product was purified on silica using methylene chloride / methanol = 1) 20: 1. And 2) Chromatography eluting 15: 1 to give the product as an orange Obtained as a colored solid (869.4 mg, 84%).   Example 42   MPr-IDA- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two・ 2ClTwoCHCOTwo H:   This is based on the description in Example 29a, MPr-IDA- (Phe-Lys (M tr) -PABC-DOX)Two41 (714.3 mg, 0.263 mmol) (645.9 mg, 96%).  Example 43   Di-t-butyliminodiacetate:   Glycine t-butyl ester hydrochloride (5.0811) in DMF (40 ml). g, 30.31 mmol) and potassium bicarbonate (6.3730 g, 2.1 equivalents) ) Was stirred at 0 ° C in t-butyl bromoacetate (4.9 ml, 1 equivalent) ). Remove the ice bath and stir the mixture at rt for 14 h. Reduce solvent at 30 ° C Remove the pressure and partition the residue between ethyl acetate and 50% saturated sodium bicarbonate. Organic The phases are washed with water (3 times) and brine, dried over sodium sulfate and concentrated in vacuo. The residue was dissolved in silica with ethyl acetate / hexane = 1) 5% and 2) 25%. Chromatography on separation gives the product as a colorless oil (4.9310). g, 66%).   Example 44   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (t-butoxycarbonylmethyl) pro Pionamide:   2-maleimidopropionic acid (1.007 g) in methylene chloride (12 ml) , 5.916 mmol) at rt with oxalyl chloride (1.2 ml, 2 ml). . (1 equivalent) and DMF (1 drop). After 4 h, the solvent is evaporated. The residue Flush with dry methylene chloride (20 ml x 2) and dissolve in methylene chloride (2 ml). Understand. To this was added di-tert-butyliminodiacetate in methylene chloride (6 ml). To 43 (1.4510 g, 1 eq) and DIEA (1.24 ml, 1.2 eq) ) Is added dropwise over 15 minutes. After 14 h, the mixture was diluted with ethyl acetate Wash with 15% citric acid, water and brine, dry the organic phase over sodium sulfate, Concentration under reduced pressure gave a pale yellow glass, which by NMR was used for the next step. Pure enough (2.3448 g, 100%).   Example 45   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (carboxymethyl) propionamide :   N-Maleoyl-N ', N'-bis- (t-butyl) in methylene chloride (40 ml) Toxicarbonylmethyl) propionamide 44 (1.9100 g, 4.82 mi) ) Is treated with trifluoroacetic acid (20 ml) at rt. The mixture is sonicated at rt for 20 minutes and then left for 3.5 h. Decompress the reaction solution Concentrate, flush the residue with chloroform (50 ml × 2), then add ether Triturate together. The resulting pale yellow solid is filtered and washed with ether (1. 2273 g, 90%).   HRMS     Calculated value: 285.0723     Obtained value: 285.0712   Example 46   MP-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABOH)Two:   This was determined according to the description in Example 26a, using N-maleoil-N ', N'-bis- ( Carboxymethyl) propionamide 45 (142.1 mg, 0.500 mmol ) And Phe-Lys (Mtr) -PABOH10a (671.0 mg) 2 Equivalent). However, the crude product was converted to methylene chloride / (ethyl acetate) using silica. / Methanol = 5: 1) = 1) 2: 1 and 2) Chromatography eluting with 1.5: 1 Upon chromatography, the product is obtained as a white solid (349.7 mg, 44%).   Example 47   MP-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-PNP)Two:   This is based on the description in Example 27a, MP-IDA- (Phe-Lys (Mt r) -PABOH)Two46 (225.4 mg, 0.142 mmol) (195.5 mg, 72%).   Example 48   MP-IDA- (Phe-Lys (Mtr) -PABC-DOX)Two:   This is based on MP-IDA- (Phe-Lys (Mt r) -PABC-PNP)Two47 (195.0 mg, 0.102 mmol) Manufactured. The crude product was purified on silica with methylene chloride / methanol = 1) 20: 1 and And 2) Chromatography eluting 15: 1 gives the product as an orange Obtained as a solid (117.7 mg, 42%).  Example 49   MP-IDA- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two・ 2ClTwoCHCOTwo H:   This is based on the description in Example 29a, MP-IDA- (Phe-Lys (Mt r) -PABC-DOX)Two48 (91.0 mg, 0.033 mmol) (76.4 mg, 94%).   Example 50   Z-βAla:   Β-alanine (50.10 g, 0.562) in 2M NaOH (281 ml) Mol) at 0 ° C. with benzyl chloroformate (88 ml, 1.1 equivalents). Volume) for 1 h. Stir at 0 ° C. for 1.5 h then at rt for 1.5 h. h Continue. The resulting mixture is extracted with ether (500ml x 4). Aqueous phase Is acidified with 5M HCl (120 ml). The resulting white precipitate is filtered off, Wash and dissolve in methylene chloride. Dry the solution over sodium sulfate and concentrate under reduced pressure To give a white solid (114.95 g, 92%).  Example 51   Z-βAla-OSu:   Z-βAla50 (37.42 g, 0.16 in methylene chloride (700 ml)) 8 mol) and N-hydroxysuccinimide (19.34 g, 1 equivalent) Stir at 0 ° C. and treat with DCC (34.69 g, 1 eq). The reaction solution Heat to t. After 16 h, the DCU was filtered off and the filtrate was concentrated in vacuo to remove a white foam. (53.80 g, 100%).   Example 52   Z-βAla-IDA:   Iminodiacetic acid (16.84 g, 84.32 mmol) and water (240 ml) And a stirred solution of lithium hydroxide monohydrate (10.62 g, 2 equivalents) at 0 ° C And Z-βAla-OSu51 (27.01 g, 0.1 mL) in DME (130 ml). 667 equivalents). After 15 minutes, the ice bath was removed and the reaction solution was left at rt for 16 hours. Stir. The mixture is concentrated on a rotary evaporator to a volume of 200 ml. can get The suspension was extracted with ethyl acetate (250 ml × 2), then the aqueous phase was extracted with 85% phosphoric acid And acidify to pH 1-2. The mixture was treated with 10% isopropanol / ethyl acetate (2 00 ml × 3). Wash the combined organic phases with 2% phosphoric acid and brine Dried over sodium sulfate and evaporated to give a colorless glass which was Flush to give a foam (21.36 g, 75%).  Elemental analysis (CFifteenH18NTwoO7・ HTwoAs O)   Calculated values: C50.56, H5.66, N7.86   Obtained values: C50.56, H5.45, N8.21   Example 53   Z-βAla-IDA- (OSu)Two:   This was performed according to the description in Example 51, using Z-βAla-IDA52 (21.36 g). , 63.12 mmol).   Elemental analysis (Ctwenty threeHtwenty fourNFourO11・ 0.5HTwoAs O)   Calculated values: C51.02, H4.65, N10.35   Obtained values: C50.83, H5.13, N10.75   Example 54   Z-βAla-IDA- (βAla-Ot-Bu)Two:   Z-βAla-IDA- (OSu) in DME (250 ml)Two53 (about 63 . 12 mmol) and β-alanine t-butyl ester hydrochloride (25.80) g, 2.25 eq) of the stirred suspension at rt with DIEA (24.7 ml, 2.2 5 equivalents). After 12 h the solvent was evaporated and the residue was ethyl acetate (400 ml) And 2% phosphoric acid. Wash the organic phase with water and brine, add sodium sulfate Dry on and evaporate. The residue was purified on silica. 1) Ethyl acetate, ethyl acetate / meta No. 2) 15: 1 and 3) 10: 1. To give the product as a thick colorless oil (26.56 g, 71%).  Elemental analysis (C29H44NFourO9・ HTwoAs O)   Calculated values: C57.04, H7.59, N9.17   Obtained: C57.15, H7.36, N9.46   Example 55   βAla-IDA- (βAla-Ot-Bu)Two:   Z-βAla-IDA- (Ot-Bu)Two54 (16.93 g, 28.56 (Mmol) / absolute ethanol (100 ml) by blowing nitrogen for 30 minutes To Carefully add 10% palladium / activated carbon (1 g) and mix the mixture with pearl And hydrogenate at 50 psi for 16 h. The catalyst is then filtered off on a bed of celite, The filtrate is concentrated under reduced pressure. The residue is flushed with methylene chloride to give a colorless foam ( 13.11 g, 100%).   Elemental analysis (Ctwenty oneH38NFourO7・ 2.5HTwoAs O)   Calculated values: C50.09, H8.61, N11.12.   Obtained values: C50.17, H8.61 and N10.51   Example 56   Maleoyl-βAla-IDA- (βAla-Ot-Bu)Two:   ΒAla-IDA- (Ot-Bu) in chloroform (100 ml)Two55 (6.20 g, 13.5 mmol) was added to a stirred solution of maleic anhydride (1.46 g). , 1.1 equivalents). After 1.5 h, the mixture is concentrated under reduced pressure. Hex residue Flash and use without purification.  Example 57   MP-IDA- (βAla-Ot-Bu)Two:   Maleoyl-βAla-IDA- (βAl in acetonitrile (150 ml) a-Ot-Bu)Two56 (7.50 g, 13.5 mmol) in solution with argon At 0 ° C. below, trimethylsilyl chloride (8.6 ml, 5.02 eq.) Followed by Treat with triethylamine (9.4 ml, 5.02 eq). Heat mixture for 4h Reflux, cool to rt, then store at -20 ° C overnight. Triethyl obtained The amine hydrochloride solid is removed by filtration, and the filtrate is concentrated under reduced pressure. The residue was partitioned between ethyl acetate and water. Distribute. The aqueous phase is further extracted with ethyl acetate. Combine the organic phase with sodium sulfate Dry over thorium and evaporate. Residue on silica 1) 5%, 2) 7% and 3) Chromatography eluting with 10% methanol / methylene chloride The product is obtained as a pale yellow gum (4.83 g, 66%).   Elemental analysis (Ctwenty fiveH38NFourO7・ 1.5HTwoAs O)   Calculated values: C53.09, H7.30, N9.91   Found: C 53.13, H 6.98, N 10.05   Example 58   MP-IDA- (βAla)Two:   MP-IDA- (βAla-Ot-Bu) in methylene chloride (40 ml)Two 57 (3.50 g, 6.50 mmol) at rt with trifluoroacetic acid ( 3Oml). The mixture is sonicated for 10 minutes and then left for 1 h. The solvent was evaporated on a rotovap and the residue was chloroform (3 times) and ether (4 times) ) To flash. The crude product is used without purification.   Elemental analysis (C17Htwenty twoNFourO9・ 3HTwoAs O)   Calculated values: C42.50, H5.87, N11.66   Found: C42.44, H5.92, N11.54   Example 59   MP-IDA- (βAla-OSu)Two:   MP-IDA (βAla) in DMF (2 ml)Two58 (136.0 mg, 0 . 319 mmol) was stirred at rt for DCC (265.0 mg, 4.01). (Equivalent). The mixture was stirred at rt for 16 h, then without isolation of the product Used in the next step as it is.   Example 60   MP-IDA- (βAla-Phe-Lys (Mtr) -PABOH)Two:   MP-IDA- (βAla)TwoCrude reaction mixture containing 58 (about 0.319 mmol) The mixture was diluted with DMF (5 ml) and then Phe-Lys (Mtr) -PABO Treat with H10a (429.1 mg, 2.0 eq). After stirring at rt for 5 h, the solvent Are removed under high vacuum and the residue is triturated with ether. The resulting solid Are filtered off and then on silica 5% methanol / ethyl acetate to remove impurities, And chromatographed eluting with 10% methanol / methylene chloride Elute the product (220.1 mg, 40%).   Example 61   MP-IDA- (βAla-Phe-Lys (Mtr) -PABC-PNP)Two :   MP-IDA- (βAla-P in DMF / methylene chloride (1: 1, 6 ml) he-Lys (Mtr) -PABOH)Two60 (95 mg, 0.0548 mmol) The stirred solution of bis-p-nitrophenyl carbonate (100 m g, 6 equiv.) and DIEA (0.057 ml, 6.0 equiv.). 16 After h the solvent is removed under high vacuum and the residue is taken up with methylene chloride / ether (1: 1) Triturate until it is solid. This suspension was stored in the freezer for 1.5 hours. The solid is then filtered off and washed with ether (105 mg, 95%).   Example 62   MP-IDA- (βAla-Phe-Lys (Mtr) -PABC-DOX)Two :   MP-IDA- (βAla-Phe-Lys (Mtr) -PABC-PNP)Two 61 (1.445 g, 0.701 mmol) and doxorubicin hydrochloride (1 . 010 g, 2.48 equivalents) / DMF (55 ml) was added to DIEA (0.31 ml , 2.50 equiv.). After 40 h at rt, the solvent was evaporated under high vacuum and the residue With methylene chloride / ether (1: 1). The resulting suspension The liquid is sonicated briefly, then the solid is filtered off and washed with ether. 10 solids Dissolve as much as possible in 100% methanol / chloroform (100 ml). Filter the mixture And the filtrate is concentrated on a rotovap to about 50 ml. Chloroform (50ml) And repeat the operation twice more. The resulting solid is collected by filtration, chloroform and then And wash with ether (1.22 g, 61%).  Example 63   MP-IDA- (βAla-Phe-Lys-PABC-DOX)Two・ 2ClTwo CHCOTwoH:   MP-IDA- (βAla-Phe-Lys (M) in methylene chloride (8 ml) tr) -PABC-DOX)Two62 (132 mg, 0.0459 mmol) The stirred suspension was mixed with anisole (1 ml, 200 equivalents) and dichloroacetic acid (0.07 6 ml, 20 eq.). The mixture becomes homogeneous immediately. Orange after 5 minutes A color precipitate begins to form. After 2 h, ethyl acetate (25 ml) was added and the suspension was Stir for a minute. The solid was collected by filtration and washed with ethyl acetate and then with ether (89 mg, 80%).   Example 64   M-Et-IDA- (Phe-Lys-PABC-DOX = β-Ala-mT EG)Two:   MTEG-β-Ala hydrazide (254 mg, 866 μmol) was added to 50 μL Dissolve in 10 ml of methanol with 1 TFA. This solution was added to M-Et-I DA- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two(276 mg, 108 μmol) / Suspended in 40 ml of anhydrous methanol. The reaction was allowed to proceed at room temperature (rt) for 3.5 h. Stir. The reaction mixture is rotary evaporated to the point of precipitation, then 1 ml CH 2TwoClTwoAdd And redissolve. This was added dropwise to 250 ml of ether to precipitate a red solid. You. The solid is filtered off, washed with ether and dried under high vacuum to give M-Et-IDA- ( (Phe-Lys-PABC-DOX = β-Ala-mTEG)Two(300 mg, 90%).   Mass spectrum: FAB 1354.6 (M + 2H)2+   Elemental analysis (C132H164N18O44・ 4.0HTwoO as 3.0 TFA)   Calculated values: C53.11, H5.65, N8.08   Obtained values: C52.99, H5.96, N8.64   FTIR: 3412, 2938, 1702, 1681, 1616, 1520, 1412, 832, 696cm-1   Example 65   M-Et-IDA- (Phe-Lys-PABC-DOX = β-Ala)Two:   β-Ala hydrazide trifluoroacetate (578 mg, 1.75 mm Is dissolved in 10 ml of methanol with 50 μl of TFA. This solution To M-Et-IDA- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two(111mg , 43.6 μmol) / 15 ml of anhydrous methanol. Reaction solution is rt And stir for 1.5 h. The reaction mixture was rotary evaporated to a volume of 3 ml and then 200 m A red solid precipitates by dropwise addition to 1 liter of acetonitrile. The solid is filtered off and It was washed with nitrile, dried under high vacuum, and treated with M-Et-IDA- (Phe-Lys- PABC-DOX = β-Ala)Two(117 mg, 99%).   1H-NMR (d6-DMSO): (selected peak) δ 1.13 (d, 6H), 3 . 95 (s, 6H), 6.96 (s, 2H)   Example 66   Nt-butoxycarbonyl-3-aminopropanol:   3-Aminopropanol (15 ml, 0.20 ml) in methylene chloride (50 ml) Mol) solution at rt in t-butyl pyrocarbonate (42.02 g, 1 equivalent ) / Methylene chloride (25 ml) dropwise over 2 h. After stirring overnight, mix Evaporate the material, flush with heptane (3 times), dry under reduced pressure and slurry the product Obtained as an oil (34.31 g, 100%).   Elemental analysis (C8H17NOThreeAs)   Calculated values: C54.84, H9.78, N7.99   Found: C54.80, H9.82, N7.97   Example 67   Nt-butoxycarbonyl-3-aminopropyl mesylate:   Protected amino alcohol 64 (6.601 g, 37.67 mmol) / salt Methylene chloride (45 ml) was treated with methanesulfonyl chloride (2 . 92 ml, 1.0 equivalent) and triethylamine (5.25 ml, 1.0 equivalent) ) For 30 minutes. The mixture is stirred for 16 h, then the solvent is evaporated You. The residue was partitioned between ether (200ml) and water (250ml) and the organic phase was 10% Wash with citric acid, water and brine, dry over sodium sulfate and evaporate. The residue Chromatography on silica eluting with 2% methanol / methylene chloride You. The product was unstable over time at rt (5.800 g, 61%).   Example 68   Diethyl 2- (Nt-butoxycarbonylaminopropyl) -malonate :   Sodium hydride (60% in mineral oil, 1.84 g, 46 mmol) was added under argon The suspension in THF (20 ml) at 0 ° C. was added to diethyl malonate (7 ml, 1 ml). . (0 eq) and warm the mixture to rt. It became homogeneous When the mesylate 65 (5.84 g, 0.5 equivalent) / THF (15 ml) is once Add to The mixture was heated at reflux overnight, diluted with hexane / ethyl acetate (1: 1). Wash with water, brine, dry over sodium sulfate and evaporate. Residue on silica And chromatographed eluting with 25-35% EtOAc / hexane ( 5.751 g, 79%).   Elemental analysis (CFifteenH27NO6As)   Calculated values: C56.77, H8.57, N4.41   Obtained: C56.65, H8.45, N4.42   Example 69   Nt-butoxycarbonyl-5-amino-2-hydroxymethylpentano Le:   Diester 66 (4.957 g, 15.62 mmol) / ether (100 m l) at 0 ° C under argon with lithium borohydride (2M in TMF, 24 ml, 3 ml) Eq.) Followed by methanol (1.9 ml, 3 eq.). Mix 2.5 h. Heat to reflux, then carefully add methanol (25 ml), then cool to rt Instead, add acetic acid (2.7 ml, 3 eq) to quench the reaction. Evaporate the mixture and salt Flush with methylene chloride (twice). Dissolve the residue in methanol (100 ml) The mixture is heated to reflux overnight and then evaporated. The resulting oil is sonicated Dissolve in chloroform (100 ml) as much as possible, then filter off inorganic solids You. The filtrate is evaporated and the residue is eluted on silica with 9% methanol / methylene chloride The product is obtained as a thick oil by chromatography (2.77). 0 g, 76%).   Elemental analysis (C11Htwenty threeNOFourAs)   Calculated values: C56.63, H9.94, N6.00   Obtained: C56.16, H9.83, N5.94   Example 70   5-amino-2-hydroxymethylpentanol / CFThreeCOTwoH:   A solution of 5% water in 50% TFA / methylene chloride (4 ml) was added to diol 67 ( 0.145 g, 0.621 mmol) and the mixture is stirred for 1 h. Steam solvent Emitted and flush the residue with methylene chloride (twice) (0.153 g, 100%) .   Example 71   5-maleimido-2-hydroxymethylpentanol:   Aminodiol 68 / dry acetonitrile was treated with anhydrous maleic acid at 0 ° C. under argon. Treat with acid (1 eq) and DIEA (1 eq). Stir the mixture at rt for 4 h I do. The reaction was recooled to 0 ° C. and trimethylsilyl chloride (3 equivalents) and D Treat with IEA (3 equivalents). The mixture was heated at reflux for 4 h, then cooled to rt And then evaporate. The residue is partitioned between ethyl acetate and water. 10% citrate organic phase Wash with acid, water and brine, dry over sodium sulfate and evaporate. Silica residue Chromatography on the gel gives the product.   Example 72   5-maleimido-2-hydroxymethylpentanol bis-chloroforme G:   A solution of diol 69 / dry methylene chloride was mixed with 1M phosgene / toluene (20 equivalents). ) At 0 ° C. After the addition, the mixture was stirred at rt for 16 h. Then, the solvent is removed by a rotary evaporator. The residue is washed with dry methylene chloride. Rush and dry under reduced pressure. The crude bis-chloroformate is used without purification.   Example 73   MPr-BHP- (Phe-Lys (MMT) -PABOH)Two:   A stirred solution of the crude bis-formate 70 in dry methylene chloride at 0 ° C. Phe-Lys (MMT) -PABOH10a (2 equivalents) in DI and DI A solution of EA (2 eq) is added all at once. The mixture was stirred at rt for 16 h, then Evaporate the medium. The residue is partitioned between ethyl acetate and water. Wash the organic phase with brine and add sulfuric acid Dry over sodium and evaporate. The product is analyzed by column chromatography using silica gel. Purify by chromatography.   Example 74   MPr-BHP- (Phe-Lys (MMT) -PABC-PNP)Two:   71, bis-p-nitrophenyl carbonate (6 equivalents) in dry methylene chloride ) And the freshly activated 4Å powdered sieve stirring mixture at rt under argon Treat with DIEA (6 equivalents). After stirring was continued for 16 h, the mixture was filtered and filtered. Evaporate the liquid. The residue is dried under reduced pressure for several hours and then dissolved in a minimum amount of methylene chloride. You. To this is added 2 volumes of ether. The solid obtained is filtered off and ether / Wash with methylene chloride (2: 1) and dry under reduced pressure.   Example 75   MPr-BHP- (Phe-Lys (MMT) -PABC-DOX)Two:   Bis-p-nitrophenyl carbonate 72 and DOX hydrochloride (1.1 equivalents ) / DMF is treated with DIEA (1.1 eq). After stirring for 2 h, mix The mixture is diluted with ethyl acetate. Wash the solution with water (4 times) and brine, add sodium sulfate Dry over um and evaporate. The residue was chromatographed on silica gel, Obtain the product.   Example 76   MPr-BHP- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two・ 2ClTwoCHCOTwo H:   A stirred solution of compound 73 / methylene chloride was added to anisole (100 equivalents) followed by Treat with dichloroacetic acid (10 equivalents). After 1.5 h, dilute the mixture with ethyl acetate I do. The resulting suspension was stirred at rt for 1 h, then the orange solid product was filtered off Wash with ethyl acetate and dry under reduced pressure.   Example 77   N-Adpoc-3-hydroxyaminopropane:   Of 3-hydroxyaminopropane and sodium bicarbonate (1 equivalent) in water The stirred solution was stirred at rt to give 1- (1'-adamantyl) -1-methyl-ethoxycarbo. Treat with nil chloride (1 equivalent). After 6 h, the resulting solid product is filtered off and washed with water Wash and lyophilize under reduced pressure. The crude product is used without purification.   Example 78   N-Adpoc-3-methanesulfonyloxyaminopropane:   Methanol sulfonyl chloride was added to a stirred solution of alcohol 75 / methylene chloride at 0 ° C Lido (1.05 eq) is added, followed by triethylamine (1.05 eq). Mixed The mixture is warmed to rt and stirred at rt overnight. Evaporate the solvent and elute the residue with ethyl acetate. And pH5 buffer (biphthalate). Wash the organic phase with water and brine, Dry over sodium sulfate and evaporate to give the product, which is used without purification.   Example 79   t-butyl-N-adpoc-5-amino-2-t-butoxycarbonyl-penta Noate:   A stirred suspension of sodium hydride in dry tetrahydrofuran at 0 ° C. under argon Carefully treat with di-t-butyl malonate (1 equivalent). Rt the mixture Warm up gradually. When the mixture is homogeneous, recool to 0 ° C and then Treat all at once with a solution of rate 76 (0.8 eq) / tetrahydrofuran. mixture Warm the material to rt and then heat to reflux for 16 h. Cool to rt and allow the mixture to And wash the solution with saturated ammonium chloride, water and brine, and add sodium sulfate. Dry over lium and evaporate. The residue was chromatographed on silica gel. , To obtain the product.   Example 80   t-butyl-5-amino-2-t-butoxycarbonyl-pentanone:   Adpoc substance 77 was treated with 5% trifluoroacetic acid / anisole (100 equivalents) Dissolve in methylene chloride. After 30 minutes, the solvent was removed under high vacuum at rt and the residue was removed. Dry under reduced pressure for several hours. The crude product is used immediately without purification.   Example 81   t-butyl-5-maleimido-2-t-butoxycarbonyl-pentanoate :   Amino diester 78 / dry acetonitrile was treated with anhydrous maleic acid at 0 ° C under argon. Treat with formic acid (1 equivalent) and stir the stirred mixture at rt for 4 h. Bring the mixture to 0 ° C Recool and treat with trimethylsilyl chloride (3 equivalents) and DIEA (3 equivalents). Manage. The mixture is heated at reflux for 4 h, then cooled to rt and evaporated. Residue Is partitioned between ethyl acetate and water. Wash the organic phase with 10% citric acid, water and brine , Dried over sodium sulfate and evaporated. The residue is chromatographed on silica. To give the product.   Example 82   2- (3'-maleimidopropyl) -malonic acid:   Di-t-butyl ester 79 is dissolved in 20% trifluoroacetic acid and the mixture is dissolved. Stir at rt for 5 h. The solvent is evaporated and the residue is flushed several times with methylene chloride. The residue was triturated with ether and the resulting solid product was filtered off and ether And dried under reduced pressure.   Example 83   MPr-Mal- (Phe-Lys (MMT) -PABOH)Two:   A stirred solution of diacid 80 / dimethoxyethane was added at 0 ° C to n-hydroxysuccinine. With imide (2.2 eq) and 0.5 M DCC / methylene chloride (2.2 eq) To process. Warm the mixture to rt. After 4 h, Phe-Lys (MMT) -P A solution of ABOH 10a (2 equivalents) / dimethoxyethane was added and the mixture was allowed to stand at rt for 1 hour. Stir for 6 h. Then the mixture is filtered and the filtrate is evaporated. Ethyl acetate and water Distribute between. Phase is washed with water and brine, dried over sodium sulfate and evaporated I do. The product is purified by chromatography on silica gel.   Example 84   MPr-Mal- (Phe-Lys (MMT) -PABC-PNP)Two:   81, bis-p-nitrophenyl carbonate (6 equivalents) in dry methylene chloride ) And the freshly activated 4Å powdered sieve stirring mixture at rt under argon Treat with DIEA (6 equivalents). After stirring was continued for 16 h, the mixture was filtered and filtered. Evaporate the liquid. The residue is dried under reduced pressure for several hours and then dissolved in a minimum amount of methylene chloride. You. To this is added 2 volumes of ether. The solid obtained is filtered off and ether / Wash with methylene chloride (2: 1) and dry under reduced pressure.   Example 85   MPr-Mal- (Phe-Lys (MMT) -PABC-DOX)Two:   Bis-p-nitrophenyl carbonate 82 and DOX hydrochloride (1.1 equivalents ) / DMF is treated with DIEA (1.1 eq). After 2h of stirring, Dilute the mixture with ethyl acetate. Wash the solution with water (4 times) and brine, add sodium sulfate Dry over lium and evaporate. The residue was chromatographed on silica gel. , To obtain the product.   Example 86   MPr-Mal- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two・ 2ClTwoCHCOTwo H:   A stirred solution of compound 83 / methylene chloride was added to anisole (100 equivalents) followed by Treat with dichloroacetic acid (10 equivalents). After 1.5 h, dilute the mixture with ethyl acetate I do. The resulting suspension was stirred at rt for 1 h, then the orange solid product was filtered off Wash with ethyl acetate and dry under reduced pressure.   Example 87   N-carbobenzyloxy-N ', N'-bis- (carboxymethyl) ethyl Diamine:   Di-t-butyl ester 22 was dissolved in 20% trifluoroacetic acid and the mixture was r Stir for 5 h at t. The solvent is evaporated and the residue is flushed several times with methylene chloride. Remaining The residue was triturated with ether, and the resulting solid product was collected by filtration and washed with ether. And dried under reduced pressure.   Example 88   N-carbobenzyloxy-N ', N'-bis- (2-hydroxyethyl) Tylenediamine:   A solution of bis-carboxylic acid 85 / diglyme at 0 ° C. Treat with xysuccinimide (2.2 eq) and DCC (2.2 eq). Mixed The mixture is warmed to rt and then stirred for 16 h. The solid obtained is filtered off. Filtrate Is cooled to 0 ° C. under an argon atmosphere and then 0.5M sodium borohydride / jig Process on the rim. The mixture is warmed to rt for 16 h, then poured into ice water. can get The mixture is extracted with ethyl acetate. Wash the organic phase with water and brine, add sodium sulfate Dry on top and evaporate to give the product, which is used without purification.   Example 89   Bis- (2-hydroxyethyl) ethylenediamine hydrochloride:   Nitrogen was added to a solution of diol 86 and concentrated HCl (1 equivalent) / methanol for 30 minutes. Degas by blowing for a while. To this, 10% palladium / activated carbon (5% by weight) was added. I can. The resulting mixture was shaken with a Parr apparatus under 50 psi of hydrogen gas for 16 h. Go ahead. Then the mixture is filtered and the filtrate is evaporated. The residue was washed several times with chloroform. Rush and drive off traces of methanol. The crude product is used without purification.   Example 90   Bis- (2-hydroxyethyl) -2'-maleimidoethylamine:   Aminodiol 87 / dry acetonitrile was treated with anhydrous maleic acid at 0 ° C. under argon. Treat with acid (1 eq) and DIEA (1 eq). Stir the mixture at rt for 4 h I do. The mixture was recooled to 0 ° C. and trimethylsilyl chloride (3 eq.) And D Treat with IEA (3 equivalents). Heat the reaction to reflux for 4 h, then cool to rt Then evaporate. The residue is partitioned between ethyl acetate and water. Organic phase is 10% citric acid Wash with water, brine, dry over sodium sulfate and evaporate. Silica gel residue Le To give the product.   Example 91   Bis- (2-chlorocarbonyloxyethyl) -2'-maleimidoethylamido N:   Diol 88 / dry methylene chloride solution was added to 1 M phosgene / toluene (20 equivalents). ) At 0 ° C. After the addition, the mixture was stirred at rt for 16 h. Then, the solvent is removed by a rotary evaporator. The residue is washed with dry methylene chloride. Rush and dry under reduced pressure. The crude bis-chloroformate is used without purification.   Example 92   MEt-IBHE- (Phe-Lys (MMT) -PABOH)Two:   A stirred solution of crude bis-chloroformate 89 / dry methylene chloride at 0 ° C. he-Lys (MMT) -PABOH10a (2 equivalents) and DIEA (2 equivalents) ) / Methylene chloride solution all at once. The mixture was stirred at rt for 16 h, then Evaporate the solvent. The residue is partitioned between ethyl acetate and water. Wash the organic phase with brine and Dry over sodium acid and evaporate. The product is purified by column chromatography using silica gel. Purify by chromatography.   Example 93   MEt-IBHE- (Phe-Lys (MMT) -PABC-PNP)Two:   90, bis-p-nitrophenyl carbonate (6 equivalents) in dry methylene chloride ) And the freshly activated 4Å powdered sieve stirring mixture at rt under argon Treat with DIEA (6 equivalents). After stirring was continued for 16 h, the mixture was filtered and filtered. Evaporate the liquid. The residue is dried under reduced pressure for several hours and then dissolved in a minimum amount of methylene chloride. You. To this is added 2 volumes of ether. The solid obtained is filtered off and ether / Wash with methylene chloride (2: 1) and dry under reduced pressure.   Example 94   MEt-IBHE- (Phe-Lys (MMT) -PABC-DOX)Two:   Bis-p-nitrophenyl carbonate 91 and DOX hydrochloride in DMF ( (1.1 eq.) Is treated with DIEA (1.1 eq.). After 2 hours of stirring The mixture is diluted with ethyl acetate. Wash the solution with water (4 times) and brine, add sulfuric acid Dry over sodium and evaporate. The residue is chromatographed on silica gel. To give the product.   Example 95   MEt-IBHE- (Phe-Lys-PABC-DOX)Two・ 2ClTwoCHC OTwoH:   A stirred solution of compound 92 / methylene chloride was added to anisole (100 equivalents) followed by Treat with dichloroacetic acid (10 equivalents). After 1.5 h, dilute the mixture with ethyl acetate You. The resulting suspension was stirred at rt for 1 h, then the orange solid product was filtered off , Washed with ethyl acetate and dried under reduced pressure.   Example 96   114  (257 mg, 0.25 mmol) and doxorubicin HCl (3 (77 mg, 0.65 mmol) in 25 ml of dry methanol for 24 h You. The reaction was concentrated to 4 ml by rotary evaporation and then bisected into Sephadex (Sephdex). adex) Purify with LH-20 (1 "x 18") using methanol. Including pure product The fractions with the pool are pooled, rotary evaporated and dried under high vacuum,115(222 mg, 50%).   Example 97   Conjugation of BR96 or IgG with a branched peptide linker:   Thiolation:   BR96 and IgG were previously reported1(Reduction) by a modified method of You. In a typical embodiment, 1.27 g of BR96 (75 m at 105.7 μM) 1, 7.93 μmol) by performing several cycles of exchanging the reduced pressure and the Ar atmosphere several times. Oxygenate. This was then combined with 7.4 mM DTT (6 in PBS with Ar blowing). (3.6 μmol, 8.6 ml, pH 7.0) and stirred under Ar at 37 ° C. for 3 h. You. Against PBS at pH 6.0 in an Amicon stirred cell at 4 ° C. The low molecular weight compounds are removed by ultrafiltration. 400 ml Amiconse Attach Amicon YM30 filter (Molecular weight cut-off 30000) Load r to 40 psi. Ellman's reagentTwo(Ellman's reagent) The thiol content of the cell eluent is monitored until a baseline reading of 12 nm is obtained. Protein and thiol group concentrations as previously reported1Measure according to this In the example, 1.10 g of reduced BR96 (85 ml with 80.8 μM MAb, 619 . 1 μM thiol) gave a 87% yield and a thiol titer of 7.7 mol thiol groups. / BR96 (mol).   Example 98   Conjugation:   BR96 and M-Et-IDA- (Phe-Lys-PABC-DOX = β-A la-mTEG)TwoProcedure for Conjugation (Conjugation)1Is β-Ala All branched peptides modified with mTEG hydrazone or β-Ala hydrazone It is a typical example of the procedure used in the case of the tide linker.   Reduced BR96 (83 ml, 6.70 μmol MAb, 51.6 μmol thiol At 0 ° C. under Ar at 0 ° C. in 4.0 ml of DMSO in M-Et-IDA- (Ph e-Lys-PABC-DOX = β-Ala-mTEG)Two(239 mg, 77 . (3 μmol) is added dropwise. After stirring for 30 minutes, the reaction solution was Filter on a filter. Conjugate at 4 ° C. with 1 ″ × 24 ″ Bio-Beads Columns (prepared by swelling and packing in methanol first, then HTwoFlat in O And finally percolation (approximately 2 ml / min) via PBS, pH 7.4 ). The purified conjugate is again filtered through a 0.22μ sterilizing filter. 95 ml of BR96-S-Et-IDA- (Phe-Lys-PABC -DOX = β-Ala-mTEG)Two(BR96 76.1 μM; DOX   1.11 mM; MR 14.6 mol DOX / BR96 (mol); 100% yield ). Conjugate with liquid NTwoAnd store at -80 ° C.   For further guidance, see Wilner D. , Trail P. A. , Hofstead ・ S. J. King H. D. , Rash Braslowski G. R. , Gree Infield R. S. , Kaneko T. , Firestone R. A. "Bioc onjugate "(p. 4521, 1993)," (6-maleimide of doxorubicin) Caproyl) hydrazone: for the production of immunoconjugates of doxorubicin New derivatives "; and Redres PW, Blakeley RL, Zeana -. B. "Anal. Biochem." (94, 75, 1979), "L. Mann's reagent: 5,5'-dithiobis (2-nitrobenzoic acid)-retest ".

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ｃ０７Ｋ 7/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｋ 37/02 43/00 １０５ 37/24 Ｃ０７Ｋ 5/00 37/36 7/00 37/54 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ， ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｇ Ｅ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 デゥボーチック，ジーン・エム アメリカ合衆国06455コネティカット州ミ ドルフィールド、スプリング・ストリート 65番──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) A61K 39/395 C07K 7/00 A61P 35/00 A61K 37/02 43/00 105 37/24 C07K 5/00 37/36 7/00 37/54 (81) Designated country EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE ), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AL, AM, AT, AU, AZ, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CZ, DE DK, EE, ES, FI, GB, GE, HU, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN , MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, UZ, VN (72) Gene M United States 06455 Spring Street 65, Middlefield, Connecticut

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．標的リガンドから派生するチオール基を２つ以上の薬物成分に連結させる 分枝ペプチド・リンカーであって、標的リガンドから派生するチオール基に結合 するチオールアクセプターを含有する末端を持つ化合物から成り；多価原子であ る少なくとも１つの分枝点が、２n（ここで、ｎは正の整数）の分枝度を考慮に 入れ、少なくとも２つのアミノ酸成分が、酵素切断部位を付与し、および他の少 なくとも２つの末端が、薬物成分から派生する化学的反応性の官能基と共に共有 結合を形成しうる基を含有することを特徴とする分枝ペプチド・リンカー。 ２．ｎが１、２、３または４である請求の範囲１に記載の分枝ペプチド・リン カー。 ３．ｎが１、２または３である請求の範囲１に記載の分枝ペプチド・リンカー 。 ４．ｎが１または２である請求の範囲１に記載の分枝ペプチド・リンカー。 ５．抗体またはそのフラグメントと連結する請求の範囲１に記載の分枝ペプチ ド・リンカー。 ６．多価原子が窒素または炭素である請求の範囲１に記載の分枝ペプチド・リ ンカー。 ７．多価原子が窒素である請求の範囲１に記載の分枝ペプチド・リンカー。 ８．多価原子が炭素である請求の範囲１に記載の分枝ペプチド・リンカー。 ９．アントラシクリンである薬物成分と連結する請求の範囲１に記載の分枝ペ プチド・リンカー。 10．ｎが１または２、標的リガンドが抗体またはそのフラグメント、多価原子 が窒素および薬物成分がアントラシクリンである請求の範囲１に記載の分枝ペプ チド・リンカー。 11．式： ［式中、Ａはチオールアクセプター； Ｗは橋部； ｃは０または１； ａは２〜１２の整数； ＱはＯ、ＮＨまたはＮ−低級アルキル； ｐは０または１； ｄは０または１； Ｅは多価原子； 各ｂは１〜１０の整数；および 各Ｘは式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、ここで Ｙは２つのＬ型アミノ酸残基、 Ｚは１または２つのアミノ酸残基、 ｍは０または１、 Ｇは自己犠牲スペーサー、および ｎは０または１、但し、Ｇが０のとき、−Ｙ−Ｚｍはａｌａ−ｌｅｕ−ａｌａ −ｌｅｕまたはｇｌｙ−ｐｈｅ−ｌｅｕ−ｇｌｙ；または 各Ｘは式： の基、ここで 各Ｘ1は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、Ｙ，Ｚ，Ｑ，Ｅ，Ｇ，ｍ，ｄ，ｐ ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、または 各Ｘ1は式：の基、各Ｘ2は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｑ，Ｅ，ｍ，ｄ ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、あるいは各Ｘ2は式： の基、各Ｘ3は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｑ，Ｅ，ｍ，ｄ ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、もしくは各Ｘ3は式： の基、各Ｘ4は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｑ，Ｅ，ｍ，ｄ ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義である］ で示される化合物。 12．各Ｘが式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、ここでＹ，ｍ，Ｚおよびｎが前 記と同意義である請求の範囲１１に記載の化合物。 13．各Ｘ1が式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、Ｙ，ｍ，Ｚおよびｎが前記と 同意義である請求の範囲１１に記載の化合物。 14．各Ｘ2が式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、Ｙ，ｍ，Ｚおよびｎが前記と 同意義である請求の範囲１１に記載の化合物。 15．各Ｘ3が式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎの基、Ｙ，ｍ，Ｚおよびｎが前記と 同意義である請求の範囲１１に記載に化合物。 16．−Ｙ−Ｚｍが、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン 、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、リシン、アセチルもしくはホ ルミルで保護されたリシン、アルギニン、トシルもしくはニトロ基で保護された アルギニン、ヒスチジン、オルニチン、アセチルもしくはホルミルで保護された オルニチン、およびシトルリンの群から選ばれるアミノ酸を含有する、ジペプチ ド、トリペプチドまたはテトラペプチドである請求の範囲１１に記載の化合物。 17．−Ｙ−Ｚｍ基がフェニルアラニン−リシンである請求の範囲１１に記載の 化合物。 18．−Ｙ−Ｚｍ基がバリン−シトルリンである請求の範囲１１に記載の化合物 。 19．−Ｙ−Ｚｍ基がバリン−リシンである請求の範囲１１に記載の化合物。 20．Ｅが窒素である請求の範囲１１に記載の化合物。 21．Ｅが炭素である請求の範囲１１に記載の化合物。 22．式： ［式中、Ａはチオールアクセプター； Ｗは橋部； ｃは０または１； ａは２〜１２の整数； ＱはＯ、ＮＨまたはＮ−低級アルキル； ｐは０または１； ｄは０または１； Ｅは多価原子； 各ｂは１〜１０の整数；および 各Ｘは式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−ＧｎＤの基、ここで Ｙは２つのＬ型アミノ酸残基、 Ｚは１または２つのアミノ酸残基、 ｍは０または１、 Ｇは自己犠牲スペーサー、 ｎは０または１、但し、Ｇが０のとき、−Ｙ−Ｚｍはａｌａ−ｌｅｕ−ａｌａ −ｌｅｕまたはｇｌｙ−ｐｈｅ−ｌｅｕ−ｇｌｙ、および Ｄは主鎖と該主鎖にぶら下がった少なくとも１つの化学的反応性の官能基を有 する薬物成分であって、上記官能基は自己犠牲スペーサーまたは末端アミノ酸残 基に対し反応して、共有結合を形成し、かつ該官能基は第１もしくは第２アミン 、ヒドロキシル、スルフヒドリル、カルボキシル、アルデヒドまたはケトンの群 から選ばれ；または 各Ｘは式： の基、ここで 各Ｘ1は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ，ｍ ， ｄ，ｐおよびｎは前記と同意義、または 各Ｘ1は式： の基、各Ｘ2は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ ，ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、あるいは各Ｘ2は式：の基、各Ｘ3は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ ，ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、もしくは各Ｘ3は式： の基、各Ｘ4は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ ，ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義である］ で示される化合物。 23．各Ｘが式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、ここでＹ，ｍ，Ｚ，ｎおよ びＤが前記と同意義である請求の範囲２２に記載の化合物。 24．各Ｘ1が式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，ｍ，Ｚ，ｎおよびＤ が前記と同意義である請求の範囲２２に記載の化合物。 25．各Ｘ2が式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，ｍ，Ｚ，ｎおよびＤ が前記と同意義である請求の範囲２２に記載の化合物。 26．各Ｘ3が式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，ｍ，Ｚ，ｎおよびＤ が前記と同意義である請求の範囲２２に記載に化合物。 27．−Ｙ−Ｚｍが、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン 、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、リシン、アセチルもしくはホ ルミルで保護されたリシン、アルギニン、トシルもしくはニトロ基で保護された アルギニン、ヒスチジン、オルニチン、アセチルもしくはホルミルで保護された オ ルニチン、およびシトルリンの群から選ばれるアミノ酸を含有する、ジペプチド 、トリペプチドまたはテトラペプチドである請求の範囲２２に記載の化合物。 28．−Ｙ−Ｚｍ基がフェニルアラニン−リシンである請求の範囲２２に記載の 化合物。 29．−Ｙ−Ｚｍ基がバリン−シトルリンである請求の範囲２２に記載の化合物 。 30．−Ｙ−Ｚｍ基がバリン−リシンである請求の範囲２２に記載の化合物。 31．Ｅが窒素である請求の範囲２２に記載の化合物。 32．Ｅが炭素である請求の範囲２２に記載の化合物。 33．Ｄがマイトマイシン−Ｃ、マイトマイシン−Ａ、ダウノルビシン、ドキソ ルビシン、Ｎ−（５，５−ジアセトキシペンチル）ドキソルビシン、アミノプテ リン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノカンプトテシン、Ｎ８− アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニ ルヒドラジド、タリソマイシン、およびこれらの誘導体の群から選ばれる、アミ ノ含有薬物成分である請求の範囲２２に記載の化合物。 34．Ｄがドキソルビシンである請求の範囲２２に記載の化合物。 35．Ｄがマイトマイシン−Ｃである請求の範囲２２に記載の化合物。 36．Ｄがマイトマイシン−Ａである請求の範囲２２に記載の化合物。 37．Ｄがタリソマイシンである請求の範囲２２に記載の化合物。 38．ＤがＮ−（５，５−ジアセトキシペンチル）ドキソルビシンである請求の 範囲２２に記載の化合物。 39．Ｄがエトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラミシン、１，８ −ジヒドロキシービシクロ［７．３．１］トリデカ−４−エン−２，６−ジイン −１３−オン、アンギジン、ドキソルビシン、モルホリン−ドキソルビシン、Ｎ −（５，５−ジアセトキシペンチル）ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブ ラスチン、およびこれらの誘導体の群から選ばれる、ヒドロキシル含有薬物成分 である請求の範囲２２に記載の化合物。 40．Ｄがエスペラミシン、６−メルカプトプリン、およびこれらの誘導体の群 から選ばれる、スルフヒドリル含有薬物成分である請求の範囲２２に記載の化合 物。 41．Ｄがメトトレキサート、カンプトテシン（ラクトンの開環型）、酪酸、レ チン酸、およびこれらの誘導体の群から選ばれる、カルボキシル含有薬物成分で ある請求の範囲２２に記載の化合物。 42．Ｄがアントラシクリンである請求の範囲２２に記載の化合物。 43．Ｇが である請求の範囲２２に記載の化合物。 44．Ｇがｐ−アミノベンジルカルボニルである請求の範囲２２に記載の化合物 。 45．Ｇが式： −ＨＮ−Ｒ1−ＣＯ− （式中、Ｒ1はＣ1−Ｃ5アルキル、ＴはＯ、ＮまたはＳである） で示される請求の範囲２２に記載の化合物。 46．Ｇが式： （式中、Ｒ2はＨまたはＣ1−Ｃ5アルキルである） で示される請求の範囲２２に記載の化合物。 47．Ｇが式： で示される請求の範囲２２に記載の化合物。 48．Ａが式：で示される請求の範囲２２に記載の化合物。 49．式： ［式中、Ｌはリガンド； ｑは１〜１０の整数； Ａはチオールアクセプター； Ｗは橋部； ｃは０または１； ａは２〜１２の整数； ＱはＯ、ＮＨまたはＮ−低級アルキル； ｐは０または１； ｄは１または２； Ｅは多価原子； 各ｂは１〜１０の整数；および 各Ｘは式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、ここで Ｙは２つのＬ型アミノ酸残基、 Ｚは１または２つのアミノ酸残基、 ｍは０または１、 Ｇは自己犠牲スペーサー、および ｎは０または１、但し、Ｇが０のとき、−Ｙ−Ｚｍはａｌａ−ｌｅｕ−ａｌａ −ｌｅｕまたはｇｌｙ−ｐｈｅ−ｌｅｕ−ｇｌｙ； Ｄは主鎖と該主鎖にぶら下がった化学的反応性の官能基を有する薬物成分であ って、上記官能基は自己犠牲スペーサーに対し反応して、共有結合を形成し、か つ該官能基は第１もしくは第２アミノ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルフヒ ドリル、アルデヒドまたはケトンの群から選ばれ；または 各Ｘは式： の基、ここで 各Ｘ1は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ，ｍ ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、または 各Ｘ1は式： の基、各Ｘ2は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ ，ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、あるいは各Ｘ2は式： の基、各Ｘ3は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ ，ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義、もしくは各Ｘ3は式： の基、各Ｘ4は式：−ＣＯ−Ｙ−Ｚｍ−Ｇｎ−Ｄの基、Ｙ，Ｚ，Ｇ，Ｄ，Ｑ，Ｅ ，ｍ，ｄ，ｐ，ａ，ｂおよびｎは前記と同意義である］ で示される化合物。 50．Ｌが免疫グロブリンまたはそのフラグメントである請求の範囲４９に記載 の化合物。 51．Ｌが、ＢＲ９６、ＢＲ６４、Ｌ６、緩和ＢＲ９６、緩和ＢＲ６４、キメラ Ｌ６、緩和キメラＢＲ９６、緩和キメラＢＲ６４、緩和キメラＬ６、およびこれ らのフラグメントの群から選ばれる免疫グロブリンである請求の範囲４９に記載 の化合物。 52．Ｌが、ボンベシン、ＥＤＧ、トランスフェリン、ガストリン、ガストリン 放出ペプチド、血小板誘導成長因子、ＩＬ−２、１１−６、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ −β、ＶＧＦ、インスリン、インスリン様成長因子ＩおよびII、炭水化物、レク チン、および低比重リポ蛋白からのアポ蛋白の群から選ばれるリガンドである請 求の範囲４９に記載の化合物。 53．請求の範囲４９に記載の化合物および医薬的に許容しうる担体から成る医 薬組成物。 54．望ましくない細胞の成長をコントロールする方法であって、かかる処置を 必要とする宿主に請求の範囲４９に記載の化合物を投与することから成る方法。 55．望ましくない細胞が癌細胞である請求の範囲５４に記載の方法。 56．温血動物に、腫瘍抑制に有効量の請求の範囲４９に記載の化合物を投与す ることから成る温血動物の治療方法。 57．医薬作用物質を宿主またはサンプルの所定部位にターゲッティングする方 法であって、請求の範囲４９に記載の化合物を宿主に投与するかまたはサンプル と接触させることから成る方法。[Claims] 1. A branched peptide linker linking a thiol group derived from a target ligand to two or more drug components, the compound comprising a compound having a terminus containing a thiol acceptor bound to the thiol group derived from the target ligand; At least one branch point that is a valence atom takes into account a degree of branching of 2 n, where n is a positive integer, at least two amino acid components provide an enzyme cleavage site, and other A branched peptide linker, characterized in that at least two termini contain a group capable of forming a covalent bond with chemically reactive functional groups derived from the drug component. 2. 2. The branched peptide linker according to claim 1, wherein n is 1, 2, 3 or 4. 3. 2. The branched peptide linker according to claim 1, wherein n is 1, 2 or 3. 4. 2. The branched peptide linker according to claim 1, wherein n is 1 or 2. 5. 2. The branched peptide linker according to claim 1, which is linked to an antibody or a fragment thereof. 6. 2. The branched peptide linker according to claim 1, wherein the polyvalent atom is nitrogen or carbon. 7. 2. The branched peptide linker according to claim 1, wherein the polyvalent atom is nitrogen. 8. 2. The branched peptide linker according to claim 1, wherein the polyvalent atom is carbon. 9. 2. The branched peptide linker of claim 1, which is linked to a drug component that is anthracycline. Ten. The branched peptide linker according to claim 1, wherein n is 1 or 2, the target ligand is an antibody or a fragment thereof, the polyvalent atom is nitrogen, and the drug component is anthracycline. 11． formula: Wherein A is a thiol acceptor; W is a bridge; c is 0 or 1; a is an integer of 2 to 12; Q is O, NH or N-lower alkyl; p is 0 or 1; 1; E is a polyvalent atom; each b is an integer from 1 to 10; and each X is a group of the formula -CO-Y-Zm-Gn, where Y is two L-amino acid residues, Z is 1 or Two amino acid residues, m is 0 or 1, G is a self-immolative spacer, and n is 0 or 1, provided that when G is 0, -Y-Zm is ala-leu-ala-leu or gly-phe- leu-gly; or each X is of the formula: Wherein each X 1 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn, Y, Z, Q, E, G, m, d, p, a, b and n are as defined above, or Each X 1 is of the formula: And each X 2 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn, Y, Z, G, Q, E, m, d, p, a, b, and n are as defined above, or each X 2 is the formula: And each X 3 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn, Y, Z, G, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above, or each X 3 is the formula: And each X 4 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn, and Y, Z, G, Q, E, m, d, p, a, b, and n are as defined above. The indicated compound. 12． 12. The compound according to claim 11, wherein each X is a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn, wherein Y, m, Z and n are as defined above. 13. 12. The compound according to claim 11, wherein each X 1 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn, and Y, m, Z and n are as defined above. 14. Each X 2 has the formula: -CO-Y-Zm-Gn group, Y, m, compounds described in the scope 11 according Z and n are as defined above. 15． Each X 3 has the formula: -CO-Y-Zm-Gn group, Y, m, as described in the scope 11 according Z and n are as defined above compound. 16． -YZm is alanine, valine, leucine, isoleucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, proline, lysine, lysine protected with acetyl or formyl, arginine, arginine protected with a tosyl or nitro group, histidine, ornithine, acetyl 12. The compound according to claim 11, which is a dipeptide, tripeptide or tetrapeptide containing an amino acid selected from the group of ornithine protected with formyl and citrulline. 17． 12. The compound according to claim 11, wherein the -Y-Zm group is phenylalanine-lysine. 18． 12. The compound according to claim 11, wherein the -YZM group is valine-citrulline. 19. 12. The compound according to claim 11, wherein the -Y-Zm group is valine-lysine. 20. 12. The compound according to claim 11, wherein E is nitrogen. twenty one. 12. The compound according to claim 11, wherein E is carbon. twenty two. formula: Wherein A is a thiol acceptor; W is a bridge; c is 0 or 1; a is an integer of 2 to 12; Q is O, NH or N-lower alkyl; p is 0 or 1; 1; E is a polyvalent atom; each b is an integer from 1 to 10; and each X is a group of the formula: -CO-Y-Zm-GnD, where Y is two L-amino acid residues, Z is 1 or Two amino acid residues, m is 0 or 1, G is a self-immolative spacer, n is 0 or 1, provided that when G is 0, -Y-Zm is ala-leu-ala-leu or gly-phe-leu -Gly and D are a drug component having a main chain and at least one chemically reactive functional group suspended from the main chain, wherein the functional group reacts with a self-immolative spacer or a terminal amino acid residue. Form a covalent bond, and the functional group is Or a secondary amine, hydroxyl, sulfhydryl, carboxyl, aldehyde or ketone; or each X is of the formula: Wherein each X 1 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn—D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p and n are as defined above, or Each X 1 is of the formula: And each X 2 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn—D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b, and n are as defined above. Or each X 2 is of the formula: And each X 3 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn—D, and Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b, and n are as defined above. Or each X 3 is of the formula: And each X 4 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn—D, and Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b, and n are as defined above. Is a compound represented by the formula: twenty three. 23. The compound according to claim 22, wherein each X is a group of the formula: -CO-Y-Zm-Gn-D, wherein Y, m, Z, n and D are as defined above. twenty four. Each X 1 has the formula: -CO-Y-Zm-Gn -D group, Y, m, Z, compounds described in the scope 22 of claims n and D are as defined above. twenty five. Each X 2 has the formula: -CO-Y-Zm-Gn -D group, Y, m, Z, compounds described in the scope 22 of claims n and D are as defined above. 26. Each X 3 has the formula: -CO-Y-Zm-Gn -D group, Y, m, Z, compound according to claim 22 of claim n and D are as defined above. 27. -YZm is alanine, valine, leucine, isoleucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, proline, lysine, lysine protected with acetyl or formyl, arginine, arginine protected with a tosyl or nitro group, histidine, ornithine, acetyl 23. The compound according to claim 22, which is a dipeptide, a tripeptide or a tetrapeptide containing an amino acid selected from the group of ornithine protected with formyl and citrulline. 28. 23. The compound according to claim 22, wherein the -Y-Zm group is phenylalanine-lysine. 29. 23. The compound according to claim 22, wherein the -Y-Zm group is valine-citrulline. 30. 23. The compound according to claim 22, wherein the -YZM group is valine-lysine. 31. 23. The compound according to claim 22, wherein E is nitrogen. 32. 23. The compound according to claim 22, wherein E is carbon. 33. D is mitomycin-C, mitomycin-A, daunorubicin, doxorubicin, N- (5,5-diacetoxypentyl) doxorubicin, aminopterin, actinomycin, bleomycin, 9-aminocamptothecin, N8-acetylspermidine, 1- (2- 23. The compound according to claim 22, which is an amino-containing drug component selected from the group consisting of (chloroethyl) -1,2-dimethanesulfonylhydrazide, talisomycin, and derivatives thereof. 34. 23. The compound according to claim 22, wherein D is doxorubicin. 35. 23. The compound according to claim 22, wherein D is mitomycin-C. 36. 23. The compound according to claim 22, wherein D is mitomycin-A. 37. 23. The compound according to claim 22, wherein D is talisomycin. 38. 23. The compound according to claim 22, wherein D is N- (5,5-diacetoxypentyl) doxorubicin. 39. D is etoposide, camptothecin, taxol, esperamicin, 1,8-dihydroxy-bicyclo [7.3.1] trideca-4-en-2,6-diyn-13-one, angidine, doxorubicin, morpholine-doxorubicin, N- 23. The compound according to claim 22, which is a hydroxyl-containing drug component selected from the group of (5,5-diacetoxypentyl) doxorubicin, vincristine, vinblastine, and derivatives thereof. 40. 23. The compound according to claim 22, wherein D is a sulfhydryl-containing drug component selected from the group of esperamicin, 6-mercaptopurine, and derivatives thereof. 41. 23. The compound according to claim 22, wherein D is a carboxyl-containing drug component selected from the group consisting of methotrexate, camptothecin (a ring-opened form of lactone), butyric acid, retinoic acid, and derivatives thereof. 42. 23. The compound according to claim 22, wherein D is anthracycline. 43. G is 23. The compound according to claim 22, which is 44. 23. The compound according to claim 22, wherein G is p-aminobenzylcarbonyl. 45. G has the formula: -HN-R 1 -CO- (wherein, R 1 is C 1 -C 5 alkyl, T is O, N or S) compound of according to claim 22 claims represented by. 46. G is the formula: (Wherein, R 2 is H or C 1 -C 5 alkyl) compounds described in the scope 22 of claims indicated by. 47. G is the formula: 23. The compound according to claim 22, which is represented by the formula: 48. A is the formula: 23. The compound according to claim 22, which is represented by the formula: 49. formula: [Wherein L is a ligand; q is an integer of 1 to 10; A is a thiol acceptor; W is a bridge; c is 0 or 1; a is an integer of 2 to 12; P is 0 or 1; d is 1 or 2; E is a polyvalent atom; each b is an integer from 1 to 10; and each X is a group of the formula -CO-Y-Zm-Gn-D, wherein Y is two L-type amino acid residues, Z is one or two amino acid residues, m is 0 or 1, G is a self-immolative spacer, and n is 0 or 1, provided that when G is 0, -Y- Zm is ala-leu-ala-leu or gly-phe-leu-gly; D is a drug component having a main chain and a chemically reactive functional group hanging from the main chain, wherein the functional group is self-immolative. Reacts with the spacer to form a covalent bond and the functional group is Ku second amino, hydroxyl, carboxyl, sulfhydryl, selected from the group consisting of aldehyde or ketone; or each X is the formula: Wherein each X 1 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn—D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b and n are as defined above. And each X 1 is a group of the formula: And each X 2 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn—D, Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b, and n are as defined above. Or each X 2 is of the formula: And each X 3 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn—D, and Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b, and n are as defined above. Or each X 3 is of the formula: And each X 4 is a group of the formula: —CO—Y—Zm—Gn—D, and Y, Z, G, D, Q, E, m, d, p, a, b, and n are as defined above. Is a compound represented by the formula: 50. 50. The compound according to claim 49, wherein L is an immunoglobulin or a fragment thereof. 51. 50. The immunoglobulin selected from the group consisting of BR96, BR64, L6, relaxed BR96, relaxed BR64, chimera L6, relaxed chimera BR96, relaxed chimera BR64, relaxed chimera L6, and fragments thereof, according to claim 49. Compound. 52. L is bombesin, EDG, transferrin, gastrin, gastrin releasing peptide, platelet derived growth factor, IL-2, 11-6, TGF-α, TGF-β, VGF, insulin, insulin-like growth factors I and II, carbohydrate, 50. The compound according to claim 49, which is a ligand selected from the group of lectins and apoproteins from low density lipoproteins. 53. 50. A pharmaceutical composition comprising the compound of claim 49 and a pharmaceutically acceptable carrier. 54. 50. A method for controlling undesired cell growth, comprising administering to a host in need of such treatment a compound as defined in claim 49. 55. 55. The method according to claim 54, wherein the undesired cells are cancer cells. 56. 50. A method for treating a warm-blooded animal, comprising administering to the warm-blooded animal a compound according to claim 49 in an amount effective for tumor suppression. 57. 50. A method of targeting a pharmaceutical agent to a host or a predetermined site of a sample, comprising administering to the host or contacting the compound of claim 49 with the sample.
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