JP2001502912A

JP2001502912A - ヒト腫瘍壊死因子レセプター―ライク２

Info

Publication number: JP2001502912A
Application number: JP10520413A
Authority: JP
Inventors: ニ，ジャン; ローゼン，クレイグ・エイ; ジェンツ，ライナー・エル; リン，サリー・ドリーン・パトリシア; ハール，マーク・ロバート
Original assignee: Human Genome Sciences Inc; SmithKline Beecham Corp
Current assignee: Human Genome Sciences Inc; SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1996-10-30
Filing date: 1996-10-30
Publication date: 2001-03-06
Also published as: WO1998018824A1; WO1998018824A9; CA2270913A1; CA2270913C; EP0961782A1; EP0961782A4

Abstract

(57)【要約】本発明は、レセプターの腫瘍壊死因子ファミリーの新たなメンバーに関する。本発明は、ヒトＴＲ２レセプターおよびその２つのスプライス変異体をコードする単離された核酸分子に関する。ＴＲ２ポリペプチドもまた提供され、ベクター、宿主細胞およびこれらの組換え製造もまた提供される。本発明はさらに、ＴＲ２レセプター活性のアゴニストおよびアンタゴニストを同定するスクリーニング方法に関する。また、ＴＲ２レセプターの異常発現に関連する病状を検出する診断方法も提供される。さらに、ＴＲ２レセプターを発現する細胞の増殖および分化の異常に関連する病状を治療する治療方法も提供される。

Description

【発明の詳細な説明】ヒト腫瘍壊死因子レセプター−ライク２発明の分野本発明は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプターファミリーの新規なメンバーに関する。より詳細には、ネズミ科ＣＤ４０に対してかなりの相同性を有する、ヒトＴＮＦ−レセプター−関連タンパク質（本明細書において図１Ａ−１ＢのＴＲ２レセプターを意味する）をコードする単離された核酸分子が提供される。ＴＲ２−ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２と称される、２種の異なるＴＲ２スプライス変異体もまた提供される。ヒトタイプ２ＴＮＦレセプター（ＴＮＦ−ＲＩＩ）に相同性のあるＴＲ２ポリペプチドもまた提供される。さらに、ベクター、宿主細胞およびこれらを製造するための組換え方法が提供される。本発明はまた、ＴＲ２レセプターポリペプチドの活性の阻害および増強の両方、ならびにＴＲ２レセプター遺伝子発現を検出するための診断法に関する。関連する分野ヒト腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）およびβ（ＴＮＦ−βまたはリンホトキシン）は、総じてサイトカインと称される、インターフェロン、インターロイキンおよび増殖因子を含む、ポリペプチドメディエーターの広義のクラスに関連するメンバーである(Beutler，B．and Cerami，A.，Annu．Rev．Immunol.，7:625-65 5(1985))。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β）は、もともとはその抗−腫瘍活性の結果として見出されたが、しかしながら、現在では宿主中で生物化学的プロセスおよび病理の重要な役割を担う多面発現性のサイトカインであると認識されている。現在までのところ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β(リンホトキシン−α)、ＬＴ−β、ＴＲＡＩＬおよび、Ｆａｓレセプター、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０および４−１ＢＢレセプターのリガンドの、１０個のＴＮＦ−関連サイトカインファミリーが知られる。これらのタンパク質は、保存されたＣ−末端配列、および、ＴＮＦ−βを除き、しばしば膜アンカーとして用いられる可変性Ｎ−末端配列を有する。ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βの両者は、ＴＮＦレセプターに結合すると、ホモトリマーとして機能する。ＴＮＦは、単核球、線維芽細胞、Ｔ−細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む多くの細胞タイプ、主に、活性化マクロファージにより産生される。ＴＮＦ −αは、腫瘍の迅速な壊死、免疫促進、自己免疫疾患、移植片拒絶反応、抗−ウイルス応答の産生、敗血症ショック、脳性マラリア、細胞毒性、化学療法の間に産生される電離性放射線の有害作用、例えば、酵素の変性、脂質過酸化およびＤＮＡ損傷などに対する防御(Nata et al.，J．Immunol．136(7):2483(1987))、増殖調節、血管内皮作用および代謝作用において役割を担うことが報告されている。ＴＮＦ−αはまた、内皮細胞を刺激し、ＰＡＩ−１、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−６を含む種々の因子を分泌させ、細胞増殖を促進する。加えて、ＴＮＦ−αは、Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１などの種々の細胞接着分子をアップレギュレーションする。ＴＮＦ−αおよびＦａｓリガンドはまた、プログラムされた細胞死を誘発することが示されている。ＴＮＦ−βは、抗ウイルス状態および腫瘍壊死の誘発、多形核白血球の活性化、内皮細胞上のクラスＩ主要組織適合遺伝子複合体抗原の誘発、内皮細胞上の付着分子の誘発および成長ホルモン刺激を含む、多くの活性を有する(Ruddle,N.an d Homer，R.，Prog．Allergy 40:162-182(1988))。ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βはどちらも増殖調節に関与し、分化のいくつかの段階で造血細胞と相互作用し、種々のタイプの前駆体細胞の増殖を阻害し、未分化の骨髄単核細胞の増殖を誘発する。Porter，A.，Tibtech 9:158-162(1991)。「ノックアウト」マウスを用いた最近の研究から、ＴＮＦ−β産生の欠損したマウスは、末梢リンパ器官の異常発達および脾臓構造における形態的変化を示すことが示されている(Aggarwal et al.，Eur Cytokine Netw，7(2):93-124（1996 ）に概説される)。リンパ器官に関して、膝窩、鼠蹊、傍大動脈、腸間膜、腋窩および脳リンパ節は、ＴＮＦ−β−／−マウスにおいて発達しなかった。加えて、ＴＮＦ−β−／−マウス由来の末梢血は、正常マウスと比較して含まれる白血球細胞が３培減少していた。しかしながら、ＴＮＦ−β−／−マウス由来の末梢血は、その正常対照と比較して４倍以上のＢ細胞を含有した。さらに、ＴＮＦ−βは、ＴＮＦ−αと対照的に、ＥＢＶ−感染Ｂ細胞の増殖を誘発することが示されている。これらの結果から、ＴＮＦ−βがリンパ球発達に関与することが示される。ＴＮＦ−αまたは−βにより媒介される種々の細胞性応答の誘発における第一段階は、特異的細胞表面または可溶性レセプターへのそれらの結合である。約５５−ＫＤａ（ＴＮＦ−ＲＩ）および７５−ＫＤａ（ＴＮＦ−ＲＩＩ）の２つの別個のＴＮＦレセプターが同定されており(Hohman et al.，J．Biol．Chem.，264: 14927-14934(1989))、両方のレセプタータイプに対応するヒトおよびマウスｃＤＮＡが単離され、解析されている(Loetscher et al.，Cell，61:351(1990))。両方のＴＮＦ−Ｒは、細胞外、膜貫通および細胞内領域を含む細胞表面レセプターの典型的な構造を共有する。これらの分子は、細胞結合形態のみならず、完全なレセプターの切断された細胞外ドメイン(Nophar et al.，EMBO Journal，9(10):3269-76(1990))、および、さもなければ膜貫通ドメインが欠損している完全なレセプターからなる可溶性形態でも存在する。ＴＮＦ−ＲＩおよびＴＮＦ−ＲＩＩの細胞外ドメインは、２８％の同一性を共有し、有意なサブユニット間の配列相同性を有する４回繰り返されるシステイン−リッチなモチーフにより特徴付けられる。細胞タイプおよび組織の大多数は、両方のＴＮＦレセプターを発現しているようであり、両方のレセプターは、シグナルトランスダクションにおいて活性であるが、しかしながら、異なる細胞性応答を媒介できる。さらに、ＴＮＦ−ＲＩＩは、ＰＣＴＷＯ９４／０９１３７において示されるように、ＴＮＦによりヒトＴ−細胞増殖を排他的に媒介することが示された。ＴＮＦ−ＲＩ依存応答には、Ｃ−ＦＯＳ、ＩＬ−６−およびマンガンスーパーオキシドジスムターゼｍＲＮＡの蓄積、プロスタグランジンＥ２合成、ＩＬ−２レセプターおよびＭＨＣクラスＩおよびＩＩ細胞表面抗原発現、増殖阻害、ならびに細胞毒性が包含される。ＴＮＦ−Ｒ１はまた、ホスホリパーゼＡ₂、プロテインキナーゼＣ、ホスファチジルコリン−特異的ホスホリパーゼＣおよびスフィンゴミエリナーゼなどのセカンドメッセンジャーシステムを刺激する(Pfefferk et al.，Cell，73:457-467(1993))。いくつかのインターフェロンおよび他の薬剤は、ＴＮＦレセプターの発現を調節することが示されている。例えば、レチノイン酸は、いくつかの細胞タイプにおいてＴＮＦレセプターの産生を誘発するが、他の細胞においては産生をダウンレギュレーションすることが示されている。加えて、ＴＮＦ−αは、両方のタイプのレセプターの局在化に作用することが示されている。ＴＮＦ−αは、ＴＮＦ −ＲＩのインターナリゼーションおよびＴＮＦ−ＲＩＩの分泌を誘発する(Aggar wal et al.，前掲にて概説される)。それゆえ、両方のＴＮＦ−Ｒの産生および局在化は、種々の薬剤により調節される。酵母ツーハイブリッドシステムならびに共同沈降および精製の両方が、両方のタイプのＴＮＦ−Ｒと結合するリガンドを同定するのに用いられている(Aggarwa l et al.，前掲およびVandenabeele et al.，Trends in Cell Biol.，5:392-399 (1995)に概説される)。ネズミ科ＴＮＦ−Ｒの細胞質ドメインと相互作用するいくつかのタンパク質が同定されている。これらのタンパク質のうちの２つが、アポトーシスのバキュロウイルス阻害剤に関連しているようであり、このことは、プログラムされた細胞死の調節におけるＴＮＦ−Ｒの直接的な役割を示唆する。発明の概要本発明は、図１Ａ−１Ｂ(配列番号２)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）および図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）に示されるアミノ酸配列、または、ＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８および９７０５７（１９９５年２月１３日）として細菌宿主中に入れて寄託されたＴＲ２レセプターをコードするｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する、ＴＲ２レセプターおよびそのスプライス変異体をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を包含する組換えベクター、該組換えベクターを含む宿主細胞、ならびに該ベクターおよび宿主細胞を作成する方法、および組換え技術によりＴＲ２ポリペプチドまたはペプチドを製造するためのそれらの使用方法に関する。本発明はさらに、本明細書に記載するポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列を有する単離されたＴＲ２ポリペプチドを提供する。本発明はまた、ＴＲ２レセプターにより誘発される細胞性応答を増強または阻害する能力を有する化合物を同定するためのスクリーニング方法であって、ＴＲ２レセプターを発現する細胞を候補化合物と接触させ、細胞性応答をアッセイし、標準細胞性応答と細胞性応答とを比較し、ここで標準は、接触を候補化合物の非存在下で行う；これにより、標準よりも増加した細胞性応答は、化合物がアゴニストであることを示し、標準よりも減少した細胞性応答は、化合物がアンタゴニストであることを示す方法を提供する。別の態様において、細胞リガンドのＴＲ２レセプターへの結合において候補化合物が有する作用を調べることを含む、アゴニストおよびアンタゴニストについてのスクリーニングアッセイが提供される。詳細には、該方法は、ＴＲ２レセプターをリガンドペプチドおよび候補化合物と接触させ、ＴＲ２レセプターへのリガンド結合が候補化合物の存在により増加または減少するかどうかを調べることを含む。本発明はさらに、ＴＲ２レセプター発現における変化による異常細胞増殖の結果として起こる病状の診断または予測に有用な診断方法を提供する。本発明のさらなる態様は、体内でのＴＲ２レセプター活性の増加したレベルを必要とする個体を治療する方法であって、該個体に、治療的に有効量の本発明の単離されたＴＲ２ポリペプチドまたはそのアゴニストを含む組成物を投与することを含む方法に関する。本発明のさらに別の態様は、体内でのＴＲ２レセプター活性の減少したレベルを必要とする個体を治療する方法であって、該個体に、治療的に有効量の本発明のＴＲ２レセプターアンタゴニストを含む組成物を投与することを含む方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリペプチドの可溶性形熊を提供する。可溶性ペプチドは、膜貫通ドメインを欠くポリペプチド配列を含む、アミノ酸配列により定義される。かかるＴＲ２レセプターの可溶性形態は、レセプターの膜結合形態のアンタゴニストとして有用である。図面の簡単な説明図１Ａ−図１Ｂは、ＴＲ２レセプターのヌクレオチド（配列番号１）および推定アミノ酸（配列番号２）配列を示す。タンパク質は、約３６アミノ酸残基（下線）(配列番号２のアミノ酸残基−３６〜−１)の予想されるリーダー配列を有し、推定分子量は約３０，４１７ｋＤａである。さらに、約３７〜約２００のアミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基１〜１６４）は、細胞外ドメインを構成；約２０１〜約２２５（配列番号２のアミノ酸残基１６５〜１８９）は、膜貫通ドメイン(下線)；約２２６〜約２８３（配列番号２のアミノ酸残基１９０〜２４７）は、細胞内ドメインを構成すると推定される。２つの潜在的なアスパラギン− 結合グリコシル化部位は、１１０および１７３のアミノ酸部位に位置する(配列番号２のアミノ酸残基７４〜１３７)。図２は、図１Ａ−図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質およびネズミ科ＣＤ４０タンパク質（配列番号３）のアミノ酸配列間の類似性の領域を示す。図３は、図１Ａ−図１ＢのＴＲ２レセプターアミノ酸配列の解析を示す。アルファ、ベータ、ターンおよびコイル領域；親水性および疎水性；両親媒性領域；可変領域；抗原インデックスおよび表面確率を示す。「Antigenic Index-Jameso n-Wolf」グラフにおいて、図１Ａ−１Ｂにおけるアミノ酸残基３９〜７０、１０６〜１２０、１４２〜１８９および２７６〜２８３（配列番号２のアミノ酸残基３〜３４、７０〜８４、１０６〜１５３および２４０〜２４７）は、ＴＲ２レセプタータンパク質の示された高い抗原性領域に対応する。図４Ａ−４Ｂは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプターのヌクレオチド（配列番号４）および推定アミノ酸（配列番号５）配列を示す。タンパク質は、約３６アミノ酸残基（下線）(配列番号５のアミノ酸残基−３６〜−１)の予想されるリーダー配列を有し、推定分子量は約１９．５ｋＤａである。図５は、全長ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質およびヒトタイプ２ＴＮＦレセプター（配列番号６）のアミノ酸配列間の類似性の領域を示す。図６は、ＴＲ２−ＳＶ１レセプターアミノ酸配列の解析を示す。アルファ、ベータ、ターンおよびコイル領域;親水性および疎水性;両親媒性領域;可変領域；抗原インデックスおよび表面確率を示す。「Antigenic Index-Jameson-Wolf」グラフにおいて、図４Ａ−４Ｂにおけるアミノ酸残基３９〜７０、９９〜１３６および１７１〜１８５（配列番号５のアミノ酸残基３〜３４、６３〜１００および１３５〜１４９）は、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質の示された高い抗原性領域に対応する。図７Ａ−７Ｂは、ＴＲ２−ＳＶ２レセプターのヌクレオチド（配列番号７）および推定アミノ酸（配列番号８）配列を示す。このタンパク質は、推定リーダー配列を欠き、推定分子量は約１４ｋＤａである。図８は、ＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質およびヒトタイプ２ＴＮＦレセプター（配列番号９）のアミノ酸配列間の類似性の領域を示す。図９は、ＴＲ２−ＳＶ２レセプターアミノ酸配列の解析を示す。アルファ、ベータ、ターンおよびコイル領域;親水性および疎水性;両親媒性領域;可変領域；抗原インデックスおよび表面確率を示す。「Antigenic Index-Jameson-Wolf」グラフにおいて、図７Ａ−７Ｂにおけるアミノ酸残基５６〜６８および９３〜１３６（配列番号８）は、ＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質の示された高い抗原性領域に対応する。図１０は、図１Ａ−１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質および図４Ａ−４ＢのＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質のアミノ酸配列間の類似性の領域を示す。図１１は、図１Ａ−１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質および図７Ａ−７ＢのＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列間の類似性の領域を示す。図１２は、ＴＲ２−ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列間の類似性の領域を示す。図１３Ａ−１３Ｃは、図１Ａ−１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質および図４Ａ−４ＢのＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質をコードするヌクレオチド配列間の類似性の領域を示す。図１４Ａ−１４Ｃは、図１Ａ−１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質および図７Ａ−７ＢのＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするヌクレオチド配列間の類似性の領域を示す。図１５Ａ−１５ＥはＴＲ２−ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするヌクレオチド配列間の類似性の領域を示す。図１６は、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）のＴＲ２レセプターと他のＴＮＦＲファミリーメンバーのアミノ酸配列の整列を示す。ＴＲ２のアミノ酸配列を、ＴＮＦＲ−１(配列番号１０)、ＴＮＦＲ−ＩＩ(配列番号１１)、ＣＤ４０（配列番号１２）および４−ＩＢＢ（配列番号１３）のものと、配列相同性および保存システイン残基に基づいて整列させた。好ましい具体例の詳細な説明本発明は、ＴＲ２ポリペプチド（図１Ａ−１Ｂ(配列番号２))およびそのスプライス変異体、アミノ酸配列がクローニングされたｃＤＮＡの配列決定により決定されたＴＲ２−ＳＶ１(図４Ａ−４Ｂ（配列番号５))およびＴＲ２−ＳＶ２(図７Ａ−７Ｂ(配列番号８))をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。図１Ａ−１Ｂに示されるＴＲ２タンパク質は、ネズミ科ＣＤ４０レセプター（図２(配列番号３)）と配列相同性を有する。１９９５年２月１３日に、American Type Culture Collection，12301 Parklawn Drive，Rockville ，Maryland 20852に、受託番号９７０５９として寄託した。図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示されるヌクレオチド配列は、ＡＴＣＣ受託番号９７０５９中のクローンと少し異なる同じアミノ酸をコードする配列を含むｃＤＮＡクローン（クローンＩＤＨＬＨＡＢ４９）を配列決定することによって得た。図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示されるｃＤＮＡ配列は、５’および３’非コーディングヌクレオチド配列および３つのヌクレオチドにおいて、ＡＴＣＣ受託のものと異なる。ＡＴＣＣ受託番号９７０５９で寄託されたクローンは、ＴＲ２開始コドンの５ ’ 側に８個のヌクレオチドおよびＴＲ２終止コドンの３’側に２１個のヌクレオチドを含む。対照的に、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示されるＨＬＨＡＢ４９のＴＲ２ｃＤＮＡ配列は、ＴＲ２コーディング配列の５’および３’末端の両方に、かなり長い非コーディングヌクレオチド配列を含む。さらに、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示されるＴＲ２レセプターヌクレオチド配列は、ヌクレオチド３１４にアデニン、ヌクレオチド３８６にシトシン、ヌクレオチド６２７にシトシンを含む。対照的に、ＡＴＣＣ受託番号９７０５９のクローンは、ヌクレオチド３１４にグアニン、ヌクレオチド３８６にチミン、ヌクレオチド６２７にチミンを含む。本発明のＴＲ２レセプターは、少なくともこれらの３つのヌクレオチドおよび２つのアミノ酸における変化を含む、いくつかの対立遺伝子変異体を包含する。同定されているヌクレオチド配列変異体は、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示す、ヌクレオチド３１４にグアニンまたはアデニン、ヌクレオチド３８６にチミンまたはシトシン、ヌクレオチド６２７にチミンまたはシトシンのいずれかを含む。ヌクレオチド６２７に同定された変化は、サイレントであるが、ヌクレオチド３８６における変化により、ヌクレオチド３８５〜３８７のコドンがセリンまたはフェニルアラニンのいずれかをコードし、ヌクレオチド３１４における変化により、ヌクレオチド３１３〜３１５のコドンがリジンまたはアルギニンをコードすることになる。図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）および図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示すヌクレオチド配列をまた、１９９５年２月１３日に、American Type Culture Collecti on，12301 Parklawn Drive，Rockville，Maryland 20852に、それぞれ受託番号９７０５８（ＴＲ２−ＳＶ１）および９７０５７（ＴＲ２−ＳＶ２）として寄託したｃＤＮＡクローンを配列決定することにより得た。寄託クローンは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（−）プラスミド（Stratagene，LaJolla，CA）中に含まれる。本明細書において用いる「スプライス変異体」なる用語は、はじめは同じゲノムＤＮＡ配列から転写され、異なるＲＮＡスプライシングを受けるＲＮＡ分子から産生されるｃＤＮＡ分子を意味する。異なるＲＮＡスプライシングは、１次ＲＮＡ転写物が、一般的にはイントロンの除去のためにスプライシングを受け、それぞれが異なるアミノ酸配列をコードする１より多くのｍＲＮＡが産生される場合に起こる。用語「スプライス変異体」はまた、上記のｃＤＮＡ分子によりコードされるタンパク質を意味する。本明細書において用いる「ＴＲ２タンパク質」、「ＴＲ２レセプター」、「ＴＲ２レセプタータンパク質」および「ＴＲ２ポリペプチド」は、アミノ酸配列同一性の領域を有し、図１Ａ−１Ｂ(配列番号２)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）または図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）に示されるタンパク質に対応するレセプター活性を有するタンパク質をコードするゲノムＤＮＡ配列の異なるスプライシングの結果の、すべてのタンパク質を意味する。図１Ａ−１Ｂに示されるＴＲ２タンパク質、図４Ａ−４Ｂに示されるＴＲ２−ＳＶ１タンパク質および図７Ａ−７Ｂに示されるＴＲ２−ＳＶ２タンパク質は、かかるレセプタータンパク質の例である。核酸分子特記しない限り、本明細書においてＤＮＡ分子の配列決定により決定されたすべてのヌクレオチド配列は、自動ＤＮＡシークエンサー(Applied Biosystems，I nc．のModel 373など)を用いて決定し、本明細書で決定されたＤＮＡ分子によりコードされるポリペプチドのすべてのアミノ酸配列は、上記のように決定したいずれかのＤＮＡ配列の翻訳により予測した。それゆえ、この自動化アプローチにより決定されるＤＮＡ配列について当該分野で知られるように、本明細書で決定されるいずれのヌクレオチド配列もいくつかの誤りを含み得る。自動化により決定されるヌクレオチド配列は、配列決定したＤＮＡ分子の実際のヌクレオチド配列と、典型的には少なくとも約９０％同一、より典型的には少なくとも約９５％〜少なくとも約９９．９％同一である。実際の配列を、当該分野で周知のマニュアルＤＮＡ配列決定法を含む他のアプローチによりより正確に決定できる。当該分野でまた知られるように、実際の配列と比べて決定されたヌクレオチド配列中の単一の挿入または欠失により、ヌクレオチド配列の翻訳においてフレームシフトが起こり、決定されたヌクレオチド配列によりコードされる予想されるアミノ酸配列が、かかる挿入または欠失の点から、配列決定されたＤＮＡ分子により実際にコードされるアミノ酸配列とまったく異なることとなる。図１Ａ−１Ｂ、図４Ａ−４Ｂまたは図７Ａ−７Ｂのヌクレオチド配列などの、本明細書において提供される情報を用い、出発物質としてｍＲＮＡを用いるｃＤＮＡのクローニングに用いられるものなどの、標準的なクローニングおよびスクリーニング法を用い、ＴＲ２ポリペプチドをコードする本発明の核酸分子を得ることができる。本発明の例として、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に記載される核酸分子は、活性化されたヒトＴ−リンパ球由来のｃＤＮＡライブラリー中に見出された。図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）および図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に記載される核酸分子は、それぞれ、ヒト胎児心臓およびヒト刺激された単球由来のｃＤＮＡライブラリー中に見出された。実施例６に記載されるように、ＴＲ２ｍＲＮＡは、肺、脾臓および胸腺を含む、多数の組織において検出され、ヒト細胞においてあらゆるところで発現されるようである。ＴＲ２ＲＮＡはまた、Ｂリンパ球(ＣＤ１９⁺)、ＣＤ４⁺（Ｔ_H1およびＴ_H2クローン）およびＣＤ８⁺Ｔリンパ球の両方、単球および内皮細胞において発現されることが見出された。実施例６においてまた示されるように、ＴＲ２ｍＲＮＡの産生は、ＴＮＦαによりＭＧ６３細胞において誘導可能であった。さらに、ＴＲ２ｍＲＮＡの蓄積が、ＰＭＡまたはＤＭＳＯ処理した際に、ＨＬ６０、Ｕ９３７およびＴＨＰ１細胞で観察された。ＰＭＡおよびＤＭＳＯは、これら３つの細胞種の分化を誘発することが知られる薬剤である。図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）のＴＲ２ｃＤＮＡの決定されたヌクレオチド配列は、約２８３アミノ酸残基の、約３６アミノ酸残基の予想されるリーダー配列を有し、推定分子量が約３０，４１７ｋＤａであるタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含む。予想される成熟ＴＲ２レセプターのアミノ酸配列は、図１Ａ−１Ｂのアミノ酸残基約３７〜約２８３（配列番号２のアミノ酸残基１〜２４７）に示される。実施例６において示されるように、リーダー配列切断部位の位置は、ＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質について確認され、図１Ａ−１Ｂに示されるアミノ酸３６および３７の間（配列番号２のアミノ酸残基−１〜１）であることが見出された。図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２タンパク質は、配列番号３に示されるネズミ科ＣＤ４０タンパク質と約２９％同一であり、約４７％類似する(図２参照)。同様に、ＴＲ２のＴＲ２−ＳＶ１スプライス変異体の決定されたｃＤＮＡヌクレオチド配列（図４Ａ−４Ｂ(配列番号４)）は、約１８５アミノ酸残基の、約３６アミノ酸残基の予想されるリーダー配列を有し、推定分子量が約１９．５ｋＤａであるタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含む。予想される成熟ＴＲ２−ＳＶ１レセプターのアミノ酸配列は、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）のアミノ酸残基約３７〜約１８５（配列番号５のアミノ酸残基１〜１４９）に示される。図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）に示されるＴＲ２−ＳＶ１タンパク質は、配列番号６に示されるヒトタイプ２ＴＮＦレセプタータンパク質と約２５％同一であり、約４８％類似する(図５参照)。ＴＲ２のＴＲ２−ＳＶ２スプライス変異体の決定されたｃＤＮＡヌクレオチド配列（図７Ａ−７Ｂ(配列番号７)）は、約１３６アミノ酸残基の、予想されるリーダー配列を有さない、推定分子量が約１４ｋＤａであるタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含む。予想されるＴＲ２−ＳＶ２レセプターのアミノ酸配列は、図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）のアミノ酸残基約１〜約１３６に示される。図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）に示されるＴＲ２−ＳＶ２タンパク質は、配列番号９に示されるヒトタイプ２ＴＮＦレセプタータンパク質と約２７％同一であり、約４５％類似する(図８参照)。図１Ａ−１Ｂ、図４Ａ−４Ｂおよび図７Ａ−７Ｂに示されるＴＲ２、ＴＲ２− ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質のヌクレオチドおよびアミノ酸配列の両方の比較は、いくつかの密接な同一の領域を示す。図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列は、図４Ａ− ４Ｂ（配列番号５）に示されるＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質と、約６０％同一であり、約７３％類似し、それぞれの配列のはじめの約１００アミノ酸において、２つのタンパク質は１つの位置において異なる(図１０)。同様に、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）のＴＲ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列は、図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）に示されるＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列と約６０％同一であり、約７１％類似する；しかしながら、２つのタンパク質は、ＴＲ２−ＳＶ２タンパク質の中心部分において６０アミノ酸長にわたって、ほとんど同一である(図１１)。対照的に、ＴＲ２−ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２タンパク質は、互いにアミノ酸レベルで、約２０％同一であり、約３８％類似するのみである。図１Ａ−１Ｂ (配列番号２)に示すＴＲ２タンパク質とこれらのタンパク質との比較と異なり、これらのタンパク質は、ＴＲ２−ＳＶ２タンパク質の全体の１３６アミノ酸配列にわたって、その相同性を有する(図１２)。開示されるＴＲ２タンパク質をコードするｃＤＮＡのそのヌクレオチド配列に関して、これらの配列の比較は、ＴＲ２ｃＤＮＡは核酸レベルで密接な同一性のある大きな領域を有することを示す(図１３Ａ−１３Ｃ、図１４Ａ−１４Ｃおよび図１５Ａ−１５Ｅ)。例えば、ＴＲ２およびＴＲ２−ＳＶ１タンパク質をコードするｃＤＮＡ配列は、そのヌクレオチド配列においてほぼ同一の大きな領域を有し、これは、それぞれのタンパク質のＮ末端およびその５’および３’非コーディング領域の両方をコードする(図１３Ａ−図１３Ｃ)。さらに、ＴＲ２−ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２タンパク質をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は、かなりの相同性を有するが、この同一性は、それぞれのコーディング配列を超えたその３’領域に限られる(図１５Ａ−１５Ｅ)。２つの異なるｃＤＮＡ配列間のかかるほぼ同一の領域は、配列の伸長された範囲上に維持される場合、それぞれの分子がもともと同一のゲノムＤＮＡ配列から転写されたことを当業者に示す。さらに、当業者は、１より多くのコドンが同じアミノ酸をコードできるので、アミノ酸レベルでの２つのタンパク質間の同一性は、そのタンパク質をコードするＤＮＡ配列が同一性の類似する領域を有することを必ずしも意味しないことを認識する。上記のデータは、本発明のＴＲ２レセプターは、単一のゲノムＤＮＡ配列から転写され、単一のはじめのＲＮＡ転写物の複数のスプライス変異体であることを示す。スプライス変異体と称する、別にスプライスされたＲＮＡから産生される関連するタンパク質は、当該分野で知られている。例えば、ｓｒｃ遺伝子の転写物は、異なるＲＮＡスプライシングを受け、細胞種特異的産物を産生する。ほとんどの細胞において、Ｓｒｃタンパク質は、５３３個のアミノ酸からなるが、神経細胞においては、さらに短いエキソンがｍＲＮＡ中に含まれ、５３９個のアミノ酸のタンパク質となる。Alberts，B．et al.，MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL(3r d Edition，Garland Publishing，Inc.，1994)，455参照のこと。同様に、性特異的ｍＲＮＡ転写物がドロソフィラ(Drosophila)中で同定されており、この場合、異なるｍＲＮＡスプライシングにより、オスでは長さ約５５０アミノ酸のおよびメスでは長さ約４３０アミノ酸のＤｓｘと呼ばれるタンパク質が得られる。これら２つのスプライス変異体タンパク質は、約４００アミノ酸の共通のコア配列を有する。同上457参照のこと。本発明において、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２レセプタータンパク質は、ＴＲ２レセプタータンパク質が翻訳されるＲＮＡによりコードされる全長ポリペプチドであると考えられる。図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）に示されるＴＲ２−ＳＶ１スプライス変異体をコードするＲＮＡは、図１Ａ−１Ｂに示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１０２をコードする領域中に挿入を含み、図１Ａ−１Ｂに示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１８４をコードする領域中に欠失を含むものと考えられる。図７Ａ−７Ｂに示されるＴＲ２−ＳＶ２スプライス変異体をコードするＲＮＡは、図１Ａ−１Ｂに示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１０２をコードするヌクレオチド配列で開始し、図１Ａ−１Ｂに示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１８４および２４３をコードする領域中に挿入を含むものと考えられる。示されるように、本発明はまた、本発明のＴＲ２レセプターの成熟形態を提供する。シグナル仮説によれば、哺乳同物細胞により分泌されるタンパク質は、シグナルまたは分泌性リーダー配列を有し、これは、一度、成長するタンパク質鎖が粗面小胞体から送り出され始めると、成熟タンパク質から切断される。ほとんどの哺乳動物細胞および昆虫細胞さえも、同じ特異性で分泌されたタンパク質を切断する。しかしながら、ある場合には、分泌されたタンパク質の切断は、完全に均一でなく、その結果、２またはそれ以上のタンパク質の成熟タイプが生じる。さらに、分泌されたタンパク質の切断特異性は、完全なタンパク質の一次構造により最終的に決定され、すなわち、ポリペプチドのアミノ酸配列に固有である。それゆえ、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号９７０５９および９７０５８として同定される宿主中に含まれるｃＤＮＡクローン、および、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）および図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）に示されるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を提供する。ＡＴＣＣ受託番号９７０５９および９７０５８として同定される宿主中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２ポリペプチドは、寄託された宿主中のベクターに含まれるクローンのヒトＤＮＡ配列によりコードされる完全なオープンリーディングフレームの哺乳動物細胞（例えば、以下に示すようなＣＯＳ細胞）における発現により産生されるＴＲ２レセプターの成熟形態を意味する。本発明はまたＡＴＣＣ受託番号９７０５７に含まれる、分泌性リーダー配列を含まない、ｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する、図７Ａ −７Ｂ（配列番号８）のＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードする核酸配列を提供する。タンパク質が分泌性リーダーならびにリーダ配列の切断ポイントを有するかどうかを予測する方法が利用可能である。例えば、McGeoch(Virus Res．3:271-286 (1985))およびvon Heinje(Nucleic Acids Res．14:4683-4690(1986))の方法を用いることができる。これらの方法のそれぞれの公知の哺乳動物分泌性タンパク質の切断ポイント予測の正確性は、７５〜８０％の範囲である。von Heinje、前掲。しかしながら、２つの方法は、所定のタンパク質について必ずしも同じ切断ポイントを予測するとは限らない。本発明の場合、アミノ酸配列に基づいてタンパク質の細胞内位置を予測するための優れたシステムであるコンピュータープログラム（「ＰＳＯＲＴ」）(K．Naka i and M．Kanehisa，Genomics 14:897-911(1992))により、図１Ａ−１Ｂ(配列番号２)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）および図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）に示される完全なＴＲ２ポリペプチドの予測されるアミノ酸配列を解析した。この局在化のコンピューター予測の一部として、McGeochおよびvon Heinjeの方法を取り入れる。ＰＳＯＲＴプログラムによる解析は、配列番号２および配列番号５のアミノ酸−１および１の間の切断部位を予測した。その後、完全なアミノ酸配列をさらに、von Heineの（−１，−３）ルールの単純な形態を適用して、視覚観察により解析した。von Heinje、前掲。かくして、配列番号２に示されるＴＲ２タンパク質およびＴＲ２−ＳＶ１タンパク質のリーダー配列は、配列番号２および配列番号５の両方のアミノ酸残基−３６〜−１からなると予測されるが、予測される成熟ＴＲ２タンパク質は、配列番号２に示されるＴＲ２タンパク質についてはアミノ酸残基１〜２４７からなり、配列番号５に示されるＴＲ２−ＳＶ１タンパク質については残基１〜１４９からなる。実施例６に示されるように、ＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質のリーダー配列の切断部位を、発現された融合タンパク質のアミノ酸解析を用いて確認した。この融合タンパク質は、配列番号２および配列番号５のアミノ酸１に対応するアミノ酸３７から始まることが見出され、これは、リーダー配列の切断部位がこのタンパク質のアミノ酸３６および３７間（配列番号２および配列番号５のアミノ酸残基 −１〜１に対応する）であることを示す。しかしながら、配列決定の誤りならびに異なる公知のタンパク質のリーダーの切断部位の多様性から、当業者は、ＡＴＣＣ受託番号９７０５９のｃＤＮＡによりコードされるＴＲ２レセプターポリペプチドは、約２８３個のアミノ酸を含むが、２５０〜３１６個のアミノ酸の範囲内のいずれでもよく；このタンパク質のリーダー配列は約３６個のアミノ酸であるが、約３０〜約４２個のアミノ酸の範囲内のいずれでもよいことを認識するであろう。同様に、ＡＴＣＣ受託番号９７０５８のｃＤＮＡによりコードされるＴＲ２−ＳＶ１レセプターポリペプチドは、約１８５個のアミノ酸を含むが、１６３〜２０７個のアミノ酸の範囲内のいずれでもよく；このタンパク質のリーダー配列は約３６個のアミノ酸であるが、約３０〜約４２個のアミノ酸の範囲内のいずれでもよい。さらに、ＡＴＣＣ受託番号９７０５７のｃＤＮＡによりコードされるＴＲ２−ＳＶ２レセプターポリペプチドは、約１３６個のアミノ酸を含むが、１２０〜１５２個のアミノ酸の範囲内のいずれでもよい。示されるように、本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡなどのＲＮＡの形態にあってもよく、例えばクローニングまたは合成して製造されたｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを含むＤＮＡの形態であってもよい。ＤＮＡは二本鎖でも一本鎖であってもよい。一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡは、センス鎖としても知られるコーディング鎖であってもよく、アンチセンス鎖としても知られる、非−コーディング鎖であってもよい。「単離された」核酸分子は、天然の環境から取り除かれた核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを意味する。例えば、ベクター中に含まれる組換えＤＮＡ分子は、本発明では単離されたと考える。さらに、単離されたＤＮＡ分子の例には、異種宿主細胞中に維持される組換えＤＮＡ分子または溶液中の（部分的にまたは実質的に）精製されたＤＮＡ分子が含まれる。単離されたＲＮＡ分子には、本発明のＤＮＡ分子のインビボまたはインビトロＲＮＡ転写物が包含される。本発明の単離された核酸分子にはさらに、合成されたかかる分子が包含される。本発明の単離された核酸分子には、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示されるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子；図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）(最後の２４７アミノ酸)に示される成熟ＴＲ２レセプターのコーディング配列を含むＤＮＡ分子；上記した配列と実質的に異なる配列を含むが、遺伝コードの縮重により、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２レセプタータンパク質をコードする、ＤＮＡ分子が含まれる。もちろん、遺伝コードは、当該分野で周知である。それゆえ、当業者にはかかる縮重変異を作成することは、慣用である。同様に、本発明の単離された核酸分子には、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）に示されるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子；図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）(最後の１４９アミノ酸)に示される成熟ＴＲ２−ＳＶ１レセプターのコーディング配列を含むＤＮＡ分子；上記した配列と実質的に異なる配列を含むが、遺伝コードの縮重により、ＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードする、ＤＮＡ分子が含まれる。さらに、本発明の単離された核酸分子には、図７Ａ１示されるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子、および、上記した配列と実質的に異なる配列を含むが、遺伝コードの縮重により、ＴＲ２−ＳＶ２レセプターをコードする、ＤＮＡ分子が含まれる。他の態様において、本発明は、それぞれ、１９９５年２月１３日にＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８および９７０５７として寄託されたプラスミド中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。さらなる具体例において、これらの核酸分子は、成熟ポリペプチドまたはＮ−末端メチオニンを欠く全長ポリペプチドをコードする。本発明はさらに、図１Ａ−１Ｂ(配列番号１)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）および図７Ａ −７Ｂ(配列番号７)に示されるヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子；上記の受託クローン中に含まれるｃＤＮＡのヌクレオチド配列；または上記の配列の一つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する。かかる単離された分子、特にＤＮＡ分子は、染色体を用いるインサイチューハイブリダイゼーションによる遺伝子マッピングのプローブとして、および、例えばノザンブロット解析により、ヒト組織における本発明のＴＲ２レセプター遺伝子の発現を検出するためのプローブとして、有用である。本発明はさらに、本明細書に記載する単離された核酸分子のフラグメントに関する。寄託されたｃＤＮＡのヌクレオチド配列または図１Ａ−１Ｂ(配列番号１) 、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）もしくは図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示されるヌクレオチド配列を有する、単離された核酸分子のフラグメントは、本明細書で述べるような診断プローブおよびプライマーとして有用な、少なくとも約１５ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約２０ヌクレオチド、よりさらに好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、それ以上に好ましくは、約４０ヌクレオチドの長さのフラグメントを意味する。もちろん、寄託されたｃＤＮＡまたは図１Ａ −１Ｂ(配列番号１)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）もしくは図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示されるヌクレオチド配列のすべてではないがほとんどに対応するフラグメントなどの５０〜４００ヌクレオチドの長さのより長いフラグメントもまた、本発明により有用である。例えば、少なくとも２０ヌクレオチドの長さのフラグメントは、寄託されたｃＤＮＡのヌクレオチド配列または図１Ａ−１Ｂ(配列番号１)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）および図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示されるヌクレオチド配列由来の２０またはそれ以上の連続する塩基を含むフラグメントを意味する。本発明の好ましい核酸フラグメントには、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）のＴＲ２レセプタータンパク質細胞外ドメイン（図１Ａ−１Ｂの約３７〜約２００のアミノ酸残基を構成すると予測される(配列番号２のアミノ酸残基１〜１６４)）を含むポリペプチド；ＴＲ２レセプター膜貫通ドメイン（図１Ａ−１Ｂのアミノ酸残基２０１〜２２５（配列番号２のアミノ酸残基１６５〜１８９）を含むポリペプチド；ＴＲ２レセプター細胞内ドメイン(図１Ａ−１Ｂのアミノ酸残基約２２６〜約２８３を構成すると予想される（配列番号２のアミノ酸残基１９０〜２４７)）を含むポリペプチド；膜貫通ドメインのすべてまたは一部が欠失した、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）のＴＲ２レセプタータンパク質細胞外および細胞内ドメインを含むポリペプチド、をコードする核酸分子が包含される。本発明の好ましい核酸フラグメントにはまた、成熟ＴＲ２−ＳＶ１レセプター（図４Ａ−４Ｂの約３７〜約１８５のアミノ酸残基を構成すると予想される(配列番号５のアミノ酸残基１〜１４９)）および完全なＴＲ２−ＳＶ２レセプター（図７Ａ−７Ｂの約１〜約１３６のアミノ酸残基を構成すると予想される(配列番号８)）を含むポリペプチドをコードする核酸分子が包含される。リーダー配列について上記したように、細胞外、膜貫通および細胞内ドメインを構成するアミノ酸残基をコンピューター解析により予測した。それにより、当業者は、これらのドメインを構成するアミノ酸残基は、各ドメインを決定するのに用いるクライテリアに応じてわずかに変わり得る（例えば、約１〜約１５のアミノ酸残基で）ことを認識するであろう。本発明の好ましい核酸フラグメントにはまた、ＴＲ２レセプタータンパク質のエピトープ−坦持部分をコードする核酸分子が包含される。特に、本発明のかかる核酸フラグメントには、図１Ａ−１Ｂの約３９〜約７０のアミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基３〜３４）含むポリペプチド；図１の約１０６〜約１２０のアミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基７０〜８４）を含むポリペプチド；図１Ａ−１Ｂの約１４２〜約１８９のアミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基１０６〜１５３）を含むポリペプチド；図１Ａ−１Ｂの約２７６〜約２８３のアミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基２４０〜２４７）を含むポリペプチド；図４Ａ−４Ｂの約３９〜約７０のアミノ酸残基（配列番号５のアミノ酸残基３〜３４）を含むポリペプチド；図４Ａ−４Ｂの約９９〜約１３６のアミノ酸残基( 配列番号５のアミノ酸残基６３〜１００);図４Ａ−４Ｂの約１７１〜約１８５のアミノ酸残基(配列番号５のアミノ酸残基１３５〜１４９)；図７Ａ−７Ｂの約５６〜約６８のアミノ酸残基(配列番号８)；図７Ａ−７Ｂの約９３〜約１３６のアミノ酸残基(配列番号８)、をコードする核酸分子が包含される。本発明者等は、上記ポリペプチドフラグメントがＴＲ２レセプターの抗原性領域であることを調べた。その他のＴＲ２タンパク質のかかるエピトープ坦持部分を決定する方法は、以下に詳細に記載する。別の態様において、本発明は、例えばＡＴＣＣ受託９７０５９、９７０５８および９７０５７中に含まれるｃＤＮＡクローンなどの上記した本発明の核酸分子の一つのポリヌクレオチドの一部分とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ( １５０ｍＭＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム)、５０ｍＭリン酸ナトリウム(ｐＨ７．６)、５×デンハート溶液、１０％硫酸デキストラン、２０ｇ／ｍｌ変性せん断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で４２℃にて一晩インキュベートし、ついでフィルターを０．１×ＳＳＣで約６５℃にて洗浄することを意味する。ポリヌクレオチドの「部分」とハイブリダイズするポリヌクレオチドとは対照ポリヌクレオチドの少なくとも約１５ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約２０ヌクレオチド、さらにより好ましくは約３０ヌクレオチド、よりさらに好ましくは約３０〜７０ヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を意味する。これらは、上記に記載したように、また以下により詳細に記載するように、診断用プローブおよびプライマーとして有用である。例えば、「少なくとも２０ヌクレオチドの長さ」のポリヌクレオチドの部分は、対照ポリヌクレオチド（例えば、寄託ｃＤＮＡまたは図１Ａ−１Ｂ(配列番号１) 、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）もしくは図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示されるヌクレオチド配列）のヌクレオチド配列由来の２０またはそれ以上の連続するヌクレオチドを意味する。もちろん、ポリＡ配列（例えば、図１Ａ−１Ｂ(配列番号１)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）もしくは図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示されるＴＲ２レセプターｃＤＮＡ配列の３’末端ポリ（Ａ）領域など）に、またはＴ（またはＵ）残基の相補的な伸長にのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、かかるポリヌクレオチドは、ポリ（Ａ）伸長を含む核酸分子またはこれと相補的な核酸分子(例えば、事実上いずれの二本鎖ｃＤＮＡクローン)のいずれともハイブリダイズするので、本発明の核酸の一部とハイブリダイズするのに用いる本発明のポリヌクレオチドに包含しない。記載したように、ＴＲ２ポリペプチドをコードする本発明の核酸分子には、限定するものではないが、成熟ポリペプチドそれ自体のアミノ酸配列をコードするもの；成熟ポリペプチドおよび、約３６アミノ酸のリーダーもしくは分泌配列、プレー、プローもしくはプレプロータンパク質配列などの付加的配列をコードする配列；上記した付加的コーディング配列を含むかまたは含まず、付加的な、非 −コーディング配列、例えば、限定するものではないが、イントロンおよび非− コーディング５’および３’配列、転写、ｍＲＮＡプロセシング（スプライシングおよびポリアデニル化シグナル、例えば−リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性などを含む）において役割を担う転写、非−翻訳配列などを含む、成熟ポリペプチドのコーディング配列；付加的機能を提供するアミノ酸などの付加的なアミノ酸をコードする付加的なコーディング配列、が包含される。それゆえ、ポリペプチドをコードする配列は、融合ポリペプチドの精製を促進するペプチドをコードする配列などのマーカー配列に融合させてもよい。本発明のこの態様の特定の好ましい具体例において、マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター(Qiagen，Inc.)中に提供されるｔａｇなどのヘキサ−ヒスチジンペプチドであり、多くのものが市販されている。Gentz et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:821-824(1989)に記載されるように、例えば、ヘキサ−ヒスチジンは融合タンパク質の簡便な精製を供給する。「ＨＡ」タグは、精製に有用な他のペプチドであり、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応し、Wi lson et al.，Cell 37:767(1984)に記載されている。以下に記載するように、他のかかる融合タンパク質には、Ｎ−またはＣ−末端にてＩｇＧ−Ｆｃに融合したＴＲ２レセプターが包含される。さらに、本発明は、ＴＲ２レセプターの部分、アナログまたは誘導体をコードする、本発明の核酸分子の変異体に関する。変異体は、天然の対立遺伝子変異体など、天然に起こり得る。「対立遺伝子変異体」は、生物の染色体上の所定の座を占める遺伝子のいくつかの異なる形態の一つを意味する。Genes II，Lewin，B .，ed.，John Wiley & Sons，New York(1985)。非天然の変異体は、当該分野で公知の変異誘発技術を用いて産生し得る。かかる変異体には、１またはそれ以上のヌクレオチドを含んでいてもよい、ヌクレオチド置換、欠失または付加により産生されるものが包含される。変異体は、コーディング領域、非−コーディング領域もしくはその両方で変化していてよい。コーディング領域の変化により、保存または非保存アミノ酸置換、欠失または付加が起こり得る。これらのうち特に好ましいものは、サイレント置換、付加および欠失であり、これらはＴＲ２レセプターまたはその部分の特性および活性を変化させない。この点において、保存置換もまた特に好ましい。本発明のさらなる具体例には、（ａ）図１Ａ−１Ｂ(配列番号２のアミノ酸残基−３６〜２４７)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５のアミノ酸残基−３６〜１４９）または図７Ａ−７Ｂ（配列番号８のアミノ酸残基１〜１３６）に示される完全なアミノ酸配列を有するＴＲ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｂ）図１Ａ−１Ｂ(配列番号２のアミノ酸残基−３５〜２４７)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５のアミノ酸残基−３５〜１４９）または図７Ａ−７Ｂ（配列番号８のアミノ酸残基２〜１３６）に示される完全であるがＮ−末端メチオニンを欠くアミノ酸配列をコードするヌクレオチド；（ｃ）図１Ａ−１Ｂの約３７〜約２８３の位置のアミノ酸配列(配列番号２のアミノ酸残基１〜２４７)、図４Ａ−４Ｂの約３７〜約１８５の位置のアミノ酸配列（配列番号５のアミノ酸残基１〜１４９）または図７Ａ−７Ｂの約１〜約１３６の位置のアミノ酸配列（配列番号８）を有する成熟ＴＲ２レセプター（いずれの付随するリーダー配列も除去された全長ポリペプチド）をコードするヌクレオチド配列；（ｄ）それぞれＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８および９７０５７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるリーダーを含む完全アミノ酸配列を有するＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）それぞれＡＴＣＣ受託番号９７０５９および９７０５８に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２またはＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＴＲ２またはＴＲ２−ＳＶ１レセプター細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｇ）ＴＲ２レセプター膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｈ）ＴＲ２レセプター細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｉ）膜貫通ドメインのすべてもしくは部分が除去されたＴＲ２レセプター細胞外および細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列；および（ｊ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）中のヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌクレオチド配列に、少なくとも９０％同一性、より好ましくは、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子が包含される。例えば、ＴＲ２ポリペプチドをコードする対照ヌクレオチド配列に少なくとも９５％「同一性」のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド配列がＴＲ２レセプターをコードする対照ヌクレオチド配列の１００ヌクレオチド当たり５個までの点突然変異を含んでいてもよい以外は、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、対照配列と同一であることを意味する。いいかえると、対照ヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一性のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るためには、対照配列中のヌクレオチドの５％までが、欠失されるか、他のヌクレオチドに置換されていてもよく、または、対照配列中の全ヌクレオチドの５％までの数のヌクレオチドが対照配列中に挿入されていてもよい。対照配列のこれらの変異は、対照ヌクレオチド配列の５’または３’末端部分で、またはこれらの末端部分間のいずれかの場所で起こってもよく、対照配列中のヌクレオチド間に個々に散在してもよく、または対照配列中の１またはそれ以上の隣接するグループ中にあってもよい。実際には、個々の核酸分子が、例えば、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示されるヌクレオチド配列またはそのタンパク質をコードする寄託ｃＤＮＡクローンのヌクレオチオド配列と、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するかどうかを、Bestfit program(Wisconsin Sequence A nalysis Package，Version 8 for Unix，Genetics Computer Group，Universty Reserch Park，575 Science Drive，Madison，WI 53711)などの公知のコンピュータープログラムを用いて慣用的に調べることができる。Bestfitは、Smith and Waterman，Advances in Applied Mathematics 2:482-489(1981)のローカルホモロジーアルゴリズムを用い、２つの配列間のホモロジーの最大のセグメントを見出す。個々の配列が、本発明の対照配列に対して９５％同一性を有するかどうかを調べるためにBestfitまたはいずれかの他の配列整列プログラムを用いる場合、当然、同一性のパーセンテージが対照ヌクレオチド配列の全長にわたって計算される、対照配列中の全ヌクレオチド数の５％までのホモロジーにおいてギャップが許容されるように、パラメーターをセットする。本発明は、ＴＲ２レセプター活性を有するポリペプチドをコードするかどうかに関係なく、図１Ａ−１Ｂ(配列番号1)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）または図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示される核酸配列、または、寄託ｃＤＮＡの核酸配列に、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性の核酸分子に、関する。なぜなら、特定の核酸分子がＴＲ２レセプター活性を有するポリペプチドをコードしていない場合であっても、当業者であれば、例えば、ハイブリダイゼーションプローブもしくはポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとして、核酸分子の使用方法を知っているからである。ＴＲ２レセプター活性を有するポリペプチドをコードしていない本発明の核酸分子の使用には、なかでも、（１）ｃＤＮＡライブラリー中のＴＲ２レセプター遺伝子または対立遺伝子もしくはスプライス変異体の単離；（２）Verma et al.，Human Chromosome s:A Manual of Basic Techniquies，Pergamon Press，New York(1988)に記載されるように、ＴＲ２レセプター遺伝子の正確な染色体位置を調べるための中期染色体伸長へのインサイチューハイブリダイゼーション(例えば「ＦＩＳＨ」)；（３）特異的組織中でのＴＲ２レセプターｍＲＮＡ発現を検出するためのノザンブロット解析、が包含される。しかしながら、図１Ａ−１Ｂ(配列番号１)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）または図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示される核酸配列、または、寄託ｃＤＮＡの核酸配列に、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性の配列を有し、実際にＴＲ２レセプター活性を有するポリペプチドをコードする核酸分子が好ましい。「ＴＲ２レセプター活性を有するポリペプチド」は、特定の生物学的アッセイで測定した場合、本発明のＴＲ２レセプター（全長タンパク質、スプライス変異体または好ましくは成熟タンパク質）の活性と、同一である必要はないが、類似する活性を示すポリペプチドを意味する。例えば、ＴＲ２レセプター活性を、実施例６において以下に記載するような、ポリペプチド− Ｆｃ融合タンパク質のリンパ球増殖を阻害する能力を調べることにより測定できる。ＴＲ２レセプター活性はまた、遊離もしくは細胞表面上に発現するコグネイトリガンドなどのポリペプチドのレセプターを発現する完全な細胞における増殖活性を付与する能力を調べることにより、測定してもよい。当然、遺伝コードの縮重性により、寄託ｃＤＮＡの核酸配列または図１Ａ−１Ｂ(配列番号1)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号４）または図７Ａ−７Ｂ（配列番号７）に示される核酸配列に、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性の配列を有する核酸分子の大多数が、「ＴＲ２レセプター活性を有する」ポリペプチドをコードすることが当業者に認識されるであろう。実際、これらのヌクレオチド配列の縮重変異体はすべて同じポリペプチドをコードするので、このことは上記した比較アッセイを行うことなくても、当業者には明確であろう。さらに、縮重変異体でない核酸分子についても、相当数がＴＲ２タンパク質活性を有するポリペプチドをコードすることが当業者に認識されるであろう。これは、タンパク質機能にほとんど影響しないかさほど影響しないアミノ酸置換について、当業者に知られていることによる（例えば、第１の脂肪族アミノ酸を第２の脂肪族アミノ酸に置換すること）。例えば、表現型にサイレントなアミノ酸置換の作成方法についてガイダンスは、Bowie，J．U．etal.，"Deciphering the Message in Protein Sequences:Tole rance to Amino Acid Substitutions"，Science 247:1306-1310(1999)に記載され、そこではタンパク質が驚くほどアミノ酸置換に寛容であることが著者により示される。ベクターおよび宿主細胞本発明は、本発明の単離されたＤＮＡ分子を含むベクター、組換えベクターで遺伝子操作された宿主細胞、および組換え技術によるＴＲ２ポリペプチドまたはそのフラグメントの製造にも関する。ポリヌクレオチドを宿主中における増殖用の選択マーカーを含むベクターに連結させてもよい。一般的に、プラスミドベクターを、リン酸カルシウム沈澱物などの沈殿物、またはチャージした脂質などとの複合中で導入する。ベクターがウイルスである場合、適切なパッケージング細胞系を用いてインビトロでパッケージし、ついで宿主細胞中に導入してもよい。ＤＮＡ挿入物は、例えば、ファージラムダＰＬプロモーター、イー．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃ、ｔｒｐおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０早期および後期プロモーターおよびレトロウイルスＬＴＲのプロモーターなどの適当なプロモーターと機能的に連結させるべきである。他の適当なプロモーターは当業者に知られている。さらに、発現構築物は、転写開始、終止の部位、および転写領域に翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物により発現される成熟転写物のコーディング部分は、好ましくは翻訳されるべきタンパク質の始まりの部分に開始コドンおよび末端の適当な部分に位置する終止コドン（ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含む。記載するように、発現ベクターは、好ましくは少なくとも一つの選択マーカーを含む。かかるマーカーには、真核細胞培養用にジヒドロフォレートレダクターゼまたはネオマイシン耐性、イー．コリおよび他の細菌の培養用にテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子が包含される。適当な異種宿主の代表例には、限定するものではないが、イー．コリ、ストレプトマイセス(Streptomyces)およびサルモネラ・チフィムリウム(Salmonella typhimurium)細胞などの細菌細胞；酵母細胞などの真菌細胞；ドロソフィラＳ２およびスポドプテラ(Spodoptera) Ｓｆ９細胞などの昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳおよびボーウェス（Bows）黒色種細胞などの動物細胞；および植物細胞が包含される。上記した宿主細胞に適した培養培地および条件は、当該分野で知られている。ベクターの中でも、細菌において用いるのに好ましいものは、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０およびｐＱＥ−９(Qiagenから入手可能)；ｐＢＳベクター、ファージスクリプトベクター、ブルースクリプトベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ(Stratageneから入手可能)；およびｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Pharmacia から入手可能）が包含される。真核細胞ベクターのうち好ましいものは、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ(Stratageneから入手可能)；およびｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ（Pharmacia から入手可能）が包含される。他の適当なベクターは、当業者に容易に認識されるであろう。構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、陽イオン脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、トランスダクション、感染または他の方法により行うことができる。かかる方法は、Davis et al.，Basic Methods In Mol ecular Biology(1986)などの、多くの標準的な実験マニュアルに記載される。ポリペプチドは、融合タンパク質などの修飾形態にて発現されてもよく、分泌シグナルのみならず、さらなる異種性機能的領域を含んでいてもよい。例えば、さらなるアミノ酸の領域、とくにチャージしたアミノ酸を、ポリペプチドのＮ− 末端に加えて、精製の間、またはその後の取り扱いおよび保存の間、宿種細胞における安定性および保持性を改良させてもよい。また、ペプチド部分をポリペプチドに加えて精製を促進してもよい。かかる領域は、ポリペプチドの最終的な製造の前に除去してもよい。ペプチド部分をポリペプチドに加えて、分泌および排出を生じさせること、安定性を改良すること、および精製を促進することは、なかでも当該分野でよく知られた常套技術である。好ましい融合タンパク質は、タンパク質の可溶化に有用な免疫グロブリン由来の異種領域が含まれる。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ４６４５３３（カナダ対応特許２０４５８６９）には、免疫グロブリン分子の定常部の種々の部分とともに別のヒトタンパク質またはその一部を含む融合タンパク質が開示される。多くの場合、融合タンパク質のＦｃ部分は、治療および診断において非常に有用であり、それゆえ、例えば、薬物動態学的特性を改良する(ＥＰ−Ａ０２３２２６２)。一方、いくつかの使用においては、融合タンパク質が、記載された有利な方法において発現され、検出され、精製された後に、Ｆｃ部分を削除できることが望ましい。これは、Ｆｃ領域が、例えば融合タンパク質が免疫化のための抗原として用いられる場合など、治療および診断における使用の障害となる場合である。薬剤の発見において、例えば、ヒトｈＩＬ−５レセプターなどのヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定する高処理スクリーニングアッセイの目的で、Ｆｃ部分と融合されている。D. Bennett et al.，Journal of Molecular Recognition，Vol．8:52-58(1995)およびK．Johanson et al.，The Journal of Biological Chemistry，Vol．270，No ．16:9459-9471(1995)参照。ＴＲ２レセプターを、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め、周知の方法により、組換え細胞培養物から回収および精製できる。高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を精製に用いるのが最も好ましい。本発明のポリペプチドには、天然のものを精製した産物、化学的合成法の産物、例えば、細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を含め、原核または真核細胞から組換え技術により産生された産物が包含される。組換え産生法において用いた宿主に応じ、本発明のポリペプチドは、グリコシル化されていてもよくグリコシル化されていなくてもよい。加えて、本発明のポリペプチドには、ある場合には宿主−媒介プロセスの結果として、初期修飾メチオニン残基を含んでいてもよい。ＴＲ２ポリペプチドおよびフラグメント本発明はさらに、寄託ｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列、または、図１Ａ−１Ｂ(配列番号２)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）および図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）のアミノ酸配列を有する単離されたＴＲ２ポリペプチド、または上記のポリペプチドの一部を含むペプチドもしくはポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドは、膜結合形態であってもよく、可溶性循環形態であってもよい。可溶性ペプチドは、配列が膜貫通ドメインを欠くポリペプチド配列を含む、アミノ酸配列により定義される。かかるＴＲ２レセプターの可溶性形態の一例は、分泌性リーダー配列を有するが、細胞内および膜貫通ドメインの両方を欠く、ＴＲ２−ＳＶ１スプライス変異体である。それゆえ、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質は、このタンパク質を発現する細胞から可溶性形態で分泌される。本発明のポリペプチドは、膜貫通領域、細胞内および細胞外領域を有する膜結合性レセプターとして存在してもよく、または、膜貫通ドメインを欠く可溶性形態で存在してもよい。ＴＲ２レセプターのかかる形態の一例は、リーダー配列に加えて、膜貫通、細胞内および細胞外ドメインを含む、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２レセプターである。かくして、ＴＲ２レセプターのこの形態は、このタンパク質を発現する細胞の細胞質膜中に局在する。当業者においては、ＴＲ２レセプターのいくつかのアミノ酸配列は、タンパク質の構造または機能に重大な影響なしに変え得ることが認識されるであろう。かかる配列中の差異を考える場合、活性を決定するタンパク質上の重要な領域が存在することを思い出さなくてはならない。それゆえ、本発明はさらに、実質的なＴＲ２レセプター活性を示すかまたは以下に記載するようなタンパク質部分などのＴＲ２タンパク質の領域を含む、ＴＲ２レセプターの変異体を包含する。かかる変異体には、欠失、挿入、逆位、繰り返し、および置換の種類が包含される。上記したように、どのアミノ酸変化が表現型にサイレントであるらしいかについてのガイダンスは、Bowie，J．U．et al.，"Deciphering the Message in Prote in Sequences:Tolerance to Amino Acid Substitutions"，Science 247:1306-13 10(1999)に記載される。それゆえ、図１Ａ−１Ｂ(配列番号２)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）および図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）のポリペプチドまたは寄託ｃＤＮＡにコードされるポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログは、（ｉ）１またはそれ以上のアミノ酸残基が、保存または非保存アミノ酸残基（好ましくは保存アミノ酸残基）で置換され、かかる置換アミノ酸残基が遺伝暗号によりコードされていてもコードされていなくてもよいもの、（ｉｉ）１またはそれ以上のアミノ酸残基が置換基を有するもの、（iii）成熟ポリペプチドが、ポリペプチドの半減期を増加させる化合物（例えばポリエチレングリコール）などの他の化合物と融合しているもの、または（ｉｖ）ＩｇＧＦｃ融合領域ペプチドまたはリーダーもしくは分泌性配列、または成熟ポリペプチドの精製に用いる配列、またはプロプロテイン配列などの、さらなるアミノ酸が成熟ポリペプチドに融合したものであってもよい。かかるフラグメント、誘導体およびアナログは、本明細書の教示から当業者の範囲内であると考えられる。特に重要なのは、チャージしたアミノ酸の他のチャージしたアミノ酸および中性または負にチャージしたアミノ酸との置換である。後者により、タンパク質中の正のチャージが減少し、ＴＲ２タンパク質の特徴が改良される結果となる。凝集の防御が特に望ましい。タンパク質の凝集は、活性の欠損だけでなく、これらが免疫源性であり得るるので、医薬製剤を調製する場合にも問題となり得る(Pin ckard et al.，Clin Exp．Immunol．2:331-340(1967);Robbins et al.，Diabete s 36:838-845(1987);Cleland et al.，Crit．Rev．Therapeutic Drug Carrier S ystems 10:307-377(1993))。アミノ酸の置換は、細胞表面レセプターへの結合選択性も変化させ得る。Osta de et al.，Nature 361:266-268(1993)には、ある変異により、ＴＮＦ−αがＴＮＦレセプターの２つの知られるタイプのうちの一つのみへ選択的に結合することになることが記載される。それゆえ、本発明のＴＲ２レセプターは、天然の変異またはヒトの操作のいずれかによる、１またはそれ以上のアミノ酸置換、欠失または付加を含んでいてもよい。記載するように、タンパク質の折りたたみまたは活性に重要な影響を与えない保存アミノ酸置換などの、小さな変化が好ましい(表１参照)。表１保存アミノ酸置換機能に必須な本発明のＴＲ２タンパク質におけるアミノ酸を、位置指定突然変異誘発またはアラニン−スキャンニング突然変異誘発(Cunningham and Wells，S cience 244:1081-1085(1989))などの当該分野で公知の方法により同定できる。後者の方法は、分子のそれぞれの残基にて単一のアラニン突然変異を導入する。得られる突然変異分子を、ついでレセプター結合、またはインビボもしくはインビトロ増殖活性などの生化学的活性について試験する。リガンド−レセプター結合に必須な部位を、結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識などの構造解析によっても決定できる(Smith et al.，J．Mol．Biol．224:899-904(1992)およびde V os et al.，Science 255:306-312(1992))。好ましくは、本発明のポリペプチドは、単離形態にて提供される。「単離されたポリペプチド」は、天然の環境から除去されたポリペプチドを意味する。それゆえ、組換え宿主細胞中で産生され含まれるポリペプチドは、本発明において「単離された」ものと考える。また、「単離されたポリペプチド」は、組換え宿主から部分的にまたは実質的に精製されたポリペプチドをも意味する。例えば、組換えにより産生されたＴＲ２レセプターは、Smith and Johnson,Gene 67:31-40(19 88)において記載される一工程法により実質的に精製できる。本発明のポリペプチドには、リーダーを含む寄託ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド；リーダーを含まない寄託ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド(すなわち、成熟タンパク質)；リーダーを含む図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）または図４Ａ−４ｂ（配列番号５）のポリペプチド；リーダーを含むがＮ−末端メチオニンを欠く、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）または図４Ａ−４ｂ（配列番号５）のポリペプチド；リーダーを欠く図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）または図４Ａ− ４Ｂ（配列番号５）のポリペプチド；図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）のポリペプチド；図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示すＴＲ２レセプターの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメイン；上記したポリペプチドに対して、少なくとも８０％同一性、より好ましくは少なくとも９０％もしくは９５％同一性、さらにより好ましくは、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有し、かかるポリペプチドの少なくとも３０個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも５０個のアミノ酸の部分を含む、ポリペプチドが包含される。ＴＲ２ポリペプチドの対照アミノ酸配列に対して、例えば少なくとも９５％「同一性」のアミノ酸配列を有するポリペプチドは、ポリペプチドのアミノ酸配列が、ポリペプチド配列が、ＴＲ２レセプターの対照アミノ酸の１００アミノ酸当たり５つまでのアミノ酸変化を含んでいてもよい他は、対照配列と同一であることを意味する。いいかえると、対照アミノ酸配列に少なくとも９５％同一性のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るためには、対照配列中のアミノ酸残基の５％までが、欠失されるか、他のアミノ酸に置換されていてもよく、または、対照配列中の全アミノ酸残基の５％までの数のアミノ酸が対照配列中に挿入されていてもよい。対照配列のこれらの変異は、対照アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端部分で、またはこれらの末端部分間のいずれかの場所で起こってもよく、対照配列中の残基間に個々に散在してもよく、または対照配列中の１またはそれ以上の隣接するグループ中にあってもよい。実際には、個々のポリペプチドがたとえば、図１Ａ−１Ｂ(配列番号２)、図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）または図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）に示されるアミノ酸配列または寄託ｃＤＮＡクローンの一つによりコードされるアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する 1かどうかを、Bestfit program(Wisconsin Sequence Analysis Package，Versio n 8 for Unix，Genetics Computer Group，Universty Reserch Park，575 Scien ce Drive，Madison，WI 53711)などの公知のコンピュータープログラムを用いて慣用的に調べることができる。例えば、個々の配列が、本発明の対照配列に対して９５％同一性を有するかどうかを調べるためにBestfitまたはいずれかの他の配列整列プログラムを用いる場合、当然、同一性のパーセンテージが対照アミノ酸配列の全長にわたって計算され、対照配列中の全アミノ酸残基数の５％までのホモロジーにおいてギャップが許容されるように、パラメーターをセットする。本発明のポリペプチドを、当業者に周知の方法を用いて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルまたはモレキュラーシーブゲル濾過カラム上で、分子量マーカーとして用いることができる。他の態様において、本発明は、本発明のポリペプチドのエピトープ−坦持部位を含むペプチドまたはポリペプチドを提供する。これらのポリペプチド部分のエピトープは、本明細書において記載するポリペプチドの免疫原性もしくは抗原性エピトープである。「免疫原性エピトープ」は、全タンパク質が免疫原である場合に抗体応答を誘発するタンパク質の一部として定義される。一方、抗体が結合できるタンパク質分子の領域は、「抗原性エピトープ」として定義される。一般に、タンパク質の免疫原性エピトープの数は、抗原性エピトープの数よりも少ない。例えば、Geysen et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 81：3998-4002(1983 )を参照。抗原性エピトープを坦持するペプチドまたはポリペプチド（すなわち、抗体が結合可能なタンパク質分子の領域を含むもの）の選択に関して、タンパク質配列の一部を模倣する比較的短い合成ペプチドが、慣用的に部分的に模倣したタンパク質と反応する抗血清を誘発できることが当該分野で周知である。例えば、Sutc liffe，J．G.，Shinnick．T．M.，Green，N．and Learner，R．A．(1983)Antibo dies that react with predetermined sites on proteins．Science 219:660-66 6を参照。タンパク質−反応性血清を誘発可能なペプチドは、しばしばタンパク質の一次配列中に示され、簡単な化学ルールのセットにより特徴付けることができ、完全なタンパク質の免疫決定領域（すなわち、免疫原性エピトープ）またはアミノもしくはカルボキシ末端のいずれにも制限されない。本発明の抗原性ペピトープ−坦持ペプチドおよびポリペプチドは、それゆえ、本発明のポリペプチドに特異的に結合する、モノクローナル抗体を含む抗体を産生するのに有用である。例えば、Wilson et al.，Cell37:767-778（1984）777参照。本発明の抗原性エピトープ−坦持ペプチドおよびポリペプチドは、本発明のポリペプチドのアミノ酸配列内に含まれる、好ましくは少なくとも７個、より好ましくは少なくとも９個、もっとも好ましくは、約１５〜約３０個の間のアミノ酸配列を含む。限定するものではないが、ＴＲ２レセプター−特異的抗体を産生するのに用いることができる抗原性ポリペプチドまたはペプチドの例には、図１の約３９〜約７０(配列番号２のアミノ酸残基３〜３４)のアミノ酸残基を含むポリペプチド；図１Ａ−１Ｂの約１０６〜約１２０（配列番号２のアミノ酸残基７０〜８４）のアミノ酸残基を含むポリペプチド；図１Ａ−１Ｂの約１４２〜約１８９（配列番号２のアミノ酸残基１０６〜１５３）のアミノ酸残基を含むポリペプチド；図１の約２７６〜約２８３（配列番号２のアミノ酸残基２４０〜２４７）のアミノ酸残基を含むポリペプチド；図４Ａ−４Ｂの約３９〜約７０（配列番号５のアミノ酸残基３〜３４）のアミノ酸残基を含むポリペプチド；図４Ａ−４Ｂの約９９〜約１３６（配列番号５のアミノ酸残基６３〜１００）のアミノ酸残基を含むポリペプチド；図４Ａ−４Ｂの約１７１〜約１８５（配列番号５のアミノ酸残基１３５〜１４９）のアミノ酸残基を含むポリペプチド；図７Ａ−７Ｂの約５６〜約６８（配列番号８）のアミノ酸残基を含むポリペプチド；図７Ａ−７Ｂの約９３〜約１３６（配列番号８）のアミノ酸残基を含むポリペプチド、が包含される。上記したように、本発明者等は上記のポリペプチドフラグメントがＴＲ２レセプタータンパク質の抗原性領域であることを決定している。本発明のエピトープ−坦持ペプチドおよびポリペプチドはまた、慣用手段により製造してもよい。Houghten，R．A．（1985）General method for the rapid s olid-phase synthesis of large numbers of peptides:specificity of antigen -antibody interaction at the level of individual amino acids．Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 82:5131-5135。この「Simultaneous Multiple Peptide Synth esis(SMPS)」プロセスは、さらに、Houghtenらの米国特許第４６３１２１１号（１９８６）に記載される。本発明のＴＲ２ポリペプチドおよび上記のそのエピトープ−坦持フラグメントを免疫グロブリン（ＩｇＧ）の定常ドメインの部分と組み合わせ、キメラポリペプチドとすることができることが、当業者に認識されるであろう。これらの融合タンパク質は、精製を促進し、インビボでの半減期を増加させる。このことは、例えば、ヒトＣＤ４−ポリペプチドのはじめの２つのドメイン、および哺乳動物免疫グロブリンの長鎖または短鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質について、示されている（ＥＰＡ３９４８２７；Traunecker at al.，N ature 331:84-86(1988))。ＩｇＧ部分によりジスルフィド結合二量体構造を有する融合タンパク質は、モノマーＴＲ２レセプタータンパク質またはタンパク質フラグメント単独よりも他の分子の結合および中和において効率的である(Fountou lakis et al.，J．Biochem 270:3958-3964(1995))。病状の検出ＴＮＦファミリーリガンドは、本発明のＴＲ２レセプターを含め、ＴＮＦ−ファミリーレセプターに結合することにより、様々な細胞性応答を誘発する。ＴＮＦレセプタータンパク質の強力なリガンドであるＴＮＦ−βは、リンパ球発達、腫瘍壊死、抗ウイルス状態の誘発、多形核白血球の活性化、内皮細胞上のクラスＩ主要組織適合遺伝子複合体抗原の誘発、内皮細胞上の接着分子の誘発および成長ホルモン刺激を含め、多くの生物化学的プロセスに関与することが知られる(R uddle and Homer，Prog．Allergy，40:162−182(1988))。また、ＴＮＦレセプタータンパク質のリガンドである、ＴＮＦ−αは、腫瘍の迅速な壊死、免疫刺激、自己免疫疾患、移植片拒絶反応、抗−ウイルス応答の産生、敗血症ショック、脳性マラリア、細胞毒性、化学療法の間に産生される電離性放射線の有害作用、例えば、酵素の変性、脂質過酸化およびＤＮＡ損傷などに対する防御(Nata et al. ，J．Immunol．136(7):2483(1987))、増殖調節、血管内皮作用および代謝作用において役割を担うことが報告されている。ＴＮＦ−αはまた、内皮細胞を刺激し、ＰＡＩ−１、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−６を含む種々の因子を分泌させ、細胞増殖を促進する。加えて、ＴＮＦ−αは、Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭ −１およびＶＣＡＭ−１などの種々の細胞接着分子をアップレギュレーションする。ＴＮＦ−αおよびＦａｓリガンドはまたプログラムされた細胞死を誘発することが示されている。ＴＲ２ポリペプチドを発現し、ＴＲ２レセプターリガンドに対して強力な細胞性応答を有すると考えられる細胞には、Ｂリンパ球(ＣＤ１９⁺)、ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺の両方のＴリンパ球、単球、内皮細胞、および、表２および３に示される他の細胞種が含まれる。「ＴＮＦ−ファミリーリガンドに対する細胞性応答」は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドにより誘発される、細胞、細胞系、組織、組織培養または患者に対する遺伝子型、表現型、および／または形態学的変化を意味する。記載するように、かかる細胞性応答には、正常なＴＮＦ−ファミリーリガンドに対する生理的な応答のみならず、アポトーシスの阻害などによる、細胞増殖の増加または細胞増殖の増加の阻害などに関連する疾患も包含される。アポトーシスープログラムされた細胞死は、免疫系の末梢Ｔリンパ球の欠失に関与する生理的なメカニズムであり、その異常調節により多くの異なる病原性プロセスが引き起こされ得る(Ameisen，J．C.，AIDS 8:1197−1213(1994);Krammer，P．H． et al.，Curr．Opin．Immunol．6:279-289(1994))。異常な細胞生存に関連する特定の病状の哺乳動物におけるある組織は、対応する「標準的な」哺乳動物、すなわち、病状を有さない同じ種の哺乳動物と比較する場合、ＴＲ２レセプタータンパク質およびＴＲ２レセプタータンパク質をコードするｍＲＮＡを有意に変化したレベルで発現すると考えられる。さらに、このタンパク質のある形態は分泌されるので、病状を有さない同じ種の哺乳動物由来の血清と比較した場合、ＴＲ２レセプタータンパク質の増強したレベルが、病状を有する哺乳動物由来の体液（例えば、血清、血漿、尿および脊髄液）中に検出可能であると考えられる。それゆえ、本発明は、病状の診断に有用な診断方法であって、哺乳動物細胞または体液中のＴＲ２レセプタータンパク質をコードする遺伝子の発現レベルをアッセイし、標準のＴＲ２レセプター遺伝子発現レベルと遺伝子発現レベルを比較し、それにより標準に対する遺伝子発現レベルの増加または減少が、異常細胞生存に関連するある病状を示すことを含む方法を提供する。本発明のＴＲ２レセプターが関与する病状の診断が従来法によりすでに行われている場合、本発明は、予後インジケーターとして有用であり、これにより有意に異常なＴＲ２レセプター遺伝子発現を示す患者が、より低いレベルで遺伝子を発現する患者と比較して、悪い臨床的結果となるであろう。「ＴＲ２レセプタータンパク質をコードする遺伝子の発現レベルをアッセイすること」は、直接的（例えば、絶対タンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベルを測定または概算することにより）または相対的（例えば、第２の生物学的サンプル中のＴＲ２レセプタータンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベルと比較することにより）のいずれかで、第１のサンプル中のＴＲ２レセプタータンパク質レベルまたはＴＲ２レセプタータンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを、定性的または定量的に測定または概算することを意味する。好ましくは、第１の生物化学的サンプル中のＴＲ２レセプタータンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベルを測定または概算し、病状を有さない個体から得られた第２の生物化学的サンプルから得られた標準のＴＲ２レセプタータンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベルと比較する。当該分野で認識されるように、一度標準のＴＲ２レセプタータンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベルがわかると、これを比較のための標準として繰り返し用いることができる。「生物化学的サンプル」は、ＴＲ２レセプタータンパク質またはｍＲＮＡを含む、個体、細胞系、組織培養または他の源から得られる生物化学的サンプルを意味する。生物化学的サンプルには、分泌された成熟ＴＲ２レセプタータンパク質を含む哺乳動物体液（血清、血漿、尿、滑液および脊髄液など）、胸腺、前立腺、心臓、胎盤、筋肉、肝臓、脾臓、肺、腎臓および他の組織が包含される。組織生検および体液を哺乳動物から得る方法は、当該分野で周知である。生物化学的サンプルがｍＲＮＡを包含する場合、組織生検が好ましい源である。細胞生存の増加またはアポトーシスの阻害に関連する疾患には、ガン(小胞リンパ腫、ｐ５３変異を有する癌腫、およびホルモン−依存性腫瘍など)；自己免疫疾患（全身性エリテマトーデス、および免疫−関連糸球体腎炎、慢性関節リウマチなど）およびウイルス感染症(ヘルペスウイルス、ポックスウイルスおよびアデノウイルスなど)、情報移植片対宿主疾患、急性移植片拒絶反応、および慢性移植片拒絶反応が包含される。細胞生存の減少またはアポトーシスの増加に関連する疾患には、ＡＩＤＳ；神経変性性疾患(アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性)；骨髄形成不良症候群(再生不良性貧血など)、虚血性傷害(心筋梗塞、発作および再灌流傷害により引き起こされるものなど)、毒素−誘発肝疾患(アルコールにより引き起こされるものなど )、敗血症ショック、カヘキシーおよび食欲不振が包含される。可溶性レセプターのレベルを検出するのに利用可能なアッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ、競合−結合アッセイ、ウエスタンブロット解析は、当業者に周知であり、好ましくはＥＬＩＳＡアッセイを用いてもよい。完全なＴＲ２レセプタータンパク質、またはアルブミンなどの担体タンパク質とともに、または十分に長い場合には（少なくとも約２５アミノ酸）担体なしに、動物系（ウサギまたはマウスなど）に提示してもよい、その抗原性ポリペプチドフラグメントに対して、ＴＲ２レセプター−タンパク質特異的抗体を作成可能である。本明細書で用いる場合、「抗体」(Ａｂ)または「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ )なる用語は、完全な分子ならびにＴＲ２レセプタータンパク質に特異的に結合可能な抗体フラグメント（例えば、ＦａｂおよびＦ(ａｂ')₂フラグメントなど）を包含する。ＦａｂおよびＦ(ａｂ')₂フラグメントは、完全な抗体のＦｃフラグメントを欠き、循環からより速く消失し、完全な抗体の非−特異的組織結合が少ない(Wahl et al.，J．Nucl．Med．24:316-325(1983))。それゆえ、これらのフラグメントが好ましい。本発明の抗体は、様々な方法のいずれかにより調製してもよい。例えば、ＴＲ２レセプタータンパク質またはその抗原性フラグメントを発現する細胞を、動物に投与し、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導することができる。好ましい方法において、ＴＲ２レセプタータンパク質の調製物は、調製され、精製され、実質的に天然の混合物を含まないようにする。ついで、かかる調製物を動物に導入し、より高い特異活性を有するポリクローナル抗血清を産生する。もっとも好ましい方法において、本発明の抗体はモノクローナル抗体（またはそのＴＲ２レセプタータンパク質結合フラグメント）である。かかるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術(Kohler et al.，Nature 256:495(1975);Kohle r et al.，Eur．J．Immunol．6:511(1976);Kohler et al.，Eur．J．Immunol．6 :292(1976);Hammerling et al.，In:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybrid omas，Elsevier，N．Y.，（1981）pp．563-681)を用いて調製できる。一般に、かかる方法は、ＴＲ２レセプタータンパク質抗原またはより好ましくはＴＲ２レセプタータンパク質−発現細胞で動物（好ましくはマウス）を免疫化することを含む。適当な細胞を、抗−ＴＲ２レセプタータンパク質抗体を結合する能力により認識できる。かかる細胞を、適当な組織培養培地中で培養してもよい；しかしながら、１０％ウシタ胎仔血清（５６℃にて不活化）および約１０ｇ／ｌの非必須アミノ酸、約１０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを加えたアールの修飾イーグル培地(Earle's modified Eagle' s medium)中で細胞を培養することが好ましい。かかるマウスの脾臓細胞を抽出し、適当な骨髄腫細胞系と融合する。本発明にしたがって、いずれかの適当な骨髄腫細胞系を用いてもよい；しかしながら、American Type Culture Collection ，Rockville，Marylandから利用可能な親骨髄腫細胞系（ＳＰ₂Ｏ）を用いることが好ましい。融合後、得られるハイブリドーマ細胞をＨＡＴ培地中で選択的に維持し、ついでWands et al．(Gastroenterology 80:225-262(1981))に記載されるような限定希釈によりクローニングする。かかる選択を通して得られたハイブリドーマ細胞を、ついでアッセイし、ＴＲ２レセプタータンパク質抗原を結合可能な抗体を分泌するクローンを同定する。ＴＲ２レセプター機能のアゴニストおよびアンタゴニスト一態様において、本発明は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドにより誘導されるＴＲ２の活性（例えば、細胞増殖、造血発達など）を阻害する方法であって、ＴＲ２ポリペプチドを発現する細胞に、ＴＲ２レセプター媒介シグナルを減少させることのできる、ＴＲ２レセプターリガンド、アナログまたはアンタゴニストの有効量を投与することを含む方法に関する。好ましくは、ＴＲ２レセプター媒介シグナルを増加させ、細胞増殖の増加を示す疾患を治療する。アンタゴニストには、ＴＲ２レセプターの可溶性形態およびＴＲ２レセプター媒介シグナルを遮断するＴＲ２ポリペプチドに対する抗体が包含できる。好ましくは、ＴＲ２レセプター媒介シグナルを減少させ、疾患を治療する。さらなる態様において、本発明は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドにより誘導される細胞増殖を増加させる方法であって、ＴＲ２ポリペプチドを発現する細胞に、ＴＲ２レセプター媒介シグナルを増加させることのできるアゴニストの有効量を投与することを含む方法に関する。好ましくは、ＴＲ２レセプター媒介シグナルを増加させ、細胞増殖の減少を示す疾患を治療する。本発明のアゴニストには、ＴＲ２レセプター媒介シグナルを刺激するＴＲ２ポリペプチドに対するモノクローナル抗体が包含される。好ましくは、ＴＲ２レセプター媒介シグナルを増加させ、疾患を治療する。「アゴニスト」は、ＴＲ２ポリペプチドにより媒介される細胞増殖および分化を増強することのできる天然および合成化合物を意味する。かかるアゴニストには、ＴＲ２レセプターの発現を増加するか、または発現されたレセプターの感受性を増加する薬剤が包含される。「アンタゴニスト」は、ＴＲ２媒介細胞増殖および分化を阻害することのできる天然および合成化合物を意味する。かかるアンタゴニストには、ＴＲ２レセプターの発現を減少させるか、または発現されたレセプターの感受性を減少させる薬剤が包含される。本発明の候補「アゴニスト」または「アンタゴニスト」が細胞増殖および分化を増強または阻害できるかどうかは、以下により詳細に記載するものを含め、当該分野で公知のＴＮＦ−ファミリーリガンド／レセプター細胞性応答アッセイを用いて調べることができる。かかるスクリーニング技術の一つは、例えば、Science 246:181-296(1989,10 月）に記載されるような、レセプター活性化により引き起こされる細胞外ｐＨ変化を測定するシステムにおいて、レセプターを発現する細胞（例えば、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞）の使用を含む。例えば、化合物を本発明のレセプターポリペプチドを発現する細胞と接触させ、セカンドメッセンジャー応答、例えばシグナルトランスダクションまたはｐＨ変化を測定し、潜在的な化合物がレセプターを活性化するか阻害するかを調べてもよい。かかるスクリーニング技術の別のものは、レセプターをコードするＲＮＡをアフリカツメガエル卵母細胞中に導入し、一時的にレセプターを発現させることを含む。レセプター卵母細胞を、ついでレセプターリガンドおよびスクリーニングする化合物と接触させ、その後、レセプターの活性を阻害すると考えられる化合物のスクリーニングの場合には、カルシウムシグナルの阻害または活性化を検出してもよい。他の方法は、表面上にレセプターを有する細胞への標識リガンドの結合の阻害を調べることによる、本発明のレセプターポリペプチドの活性を阻害する化合物、アンタゴニストのスクリーニングを含む。かかる方法は、真核細胞をレセプターをコードするＤＮＡでトランスフェクトして、その表面上にレセプターを発現するようにし、細胞を公知のリガンドの標識形態の存在下で化合物と接触させることを含む。リガンドを例えば放射活性により標識できる。レセプターに結合した標識リガンドの量を、例えばレセプターの放射活性を測定することにより、測定する。レセプターと結合する標識リガンドの減少により調べられるように化合物がレセプターに結合する場合、標識リガンドのレセプターへの結合は阻害される。本発明のポリペプチドの可溶性形態を上記したリガンド結合アッセイにおいて用いてもよい。ＴＲ２レセプターのこれらの形態は、それらが分泌された後、細胞外培地においてリガンドと接触する。ついで、分泌されたタンパク質がＴＲ２レセプターリガンドに結合するかどうかを調べる。本発明のアゴニストおよびアンタゴニストのさらなるスクリーニングアッセイは、Tartaglia．L．A.，and Goeddel，D．V.，J．Biol．Chem．267(7):4304-430 7(1992)に記載される。かくして、さらなる態様において、候補アゴニストまたはアンタゴニストがＴＮＦ−ファミリーリガンドに対する細胞性応答を増強または阻害可能であるかどうかを調べるためのスクリーニング方法が提供される。該方法は、ＴＲ２ポリペプチドを発現する細胞を候補化合物およびＴＮＦ−ファミリーリガンドに接触させ、細胞性応答をアッセイし、候補化合物の非存在下にリガンドと接触させてアッセイを行う、標準の細胞性応答とその細胞性応答を比較することを含み、それにより、標準に対して増加した細胞性応答は、候補化合物がリガンド／レセプターシグナル経路のアゴニストであることを示し、標準と比較して減少した細胞性応答は、候補化合物がリガンド／レセプターシグナル経路のアンタゴニストであることを示す。「細胞性応答をアッセイすること」は、候補化合物および／またはＴＮＦ−ファミリーリガンドに対する細胞性応答を定性的または定量的に測定すること（例えば、Ｔ細胞増殖またはトリチウム化チミジン標識における増加または減少を測定または概算すること）を意味する。本発明により、ＴＲ２ポリペプチドを発現する細胞を、内在性または外因性の投与されたＴＮＦ−ファミリーリガンドのいずれかと接触させることができる。さらなる態様において、胸腺増殖アッセイを用いて、リガンドおよび潜在的な薬物候補の両方を同定してもよい。例えば、胸腺細胞を組織から分け、培養培地中で増殖させる。³Ｈ−チミジンまたは５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）などのＤＮＡ前駆体の組み込みを、ＤＮＡ合成および細胞性増殖のパラメーターとしてモニターする。ＤＮＡ中に組み込まれたＢｒｄＵを有する細胞を、Ｂｒｄｌに対するモノクローナル抗体を用いて検出し、酵素または蛍光色素 −結合第２抗体により測定できる。反応を蛍光計または分光光度計により定量する。２つの対照ウェルおよび実験ウェルを上記のようにセットし、ＴＮＦ−βまたは結合リガンドをすべてのウェルに添加し、本発明の可溶性レセプターポリペプチドを、第２の対照ウェルに個々に添加し、実験ウェルにはスクリーニングすべき化合物を入れる。スクリーニングすべき化合物の上記の相互作用を刺激または阻害する能力をついで定量してもよい。本発明のアゴニストには、例えば、ＴＮＦ−ファミリーリガンドペプチドフラグメント、トランスフォーミング増殖因子βおよび神経伝達物質（グルタメート、ドーパミン、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルテートなど）などの化合物が包含される。好ましいアゴニストには、ＴＲ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに対して作成されたポリクローナルおよびモノクローナル抗体が包含される。ＴＮＦ −ファミリーレセプターに対して作成されるかかるアゴニスト抗体は、Tartagli a，L.A.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:9292-9296(1991)およびTartaglia，L ．A.,and Goeddel，D．V.，J．Biol．Chem．267(7):4304-4307(1992)に開示されている。また、ＰＣＴ出願ＷＯ９４／０９１３７を参照のこと。さらに好ましいアゴニストには、例えば、シスプラチン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、シトシン、アラビノサイド、ナイトロジェンマスタード、メトトレキセートおよびビンクリスチンなどの化学療法剤が包含される。他には、エタノールおよびβ− アミロイドペプチドが包含される(Science 267:1457−1458(1995))。本発明のアンタゴニストには、ＴＲ２レセプターの可溶性形態が包含される( 例えば、全長レセプターの細胞外領域由来のリガンド結合ドメインを含む、図１Ａ−１Ｂに示されるＴＲ２レセプターのフラグメントなど)。天然または合成されたものであってもよい、レセプターのかかる可溶性形態は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドへの結合を、レセプターの細胞表面結合形態と競合することにより、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１またはＴＲ２−ＳＶ２媒介シグナルをアンタゴナイズする。本発明のアンタゴニストには、ＴＮＦ−ファミリーリガンドに特異的な抗体および以下の実施例５および６に記載するようなＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質が包含される。「ＴＮＦ−ファミリーリガンド」は、ＴＮＦレセプターファミリー群に結合し、リガンド／レセプターシグナル経路を誘発する能力を有する、天然の、組換えのおよび合成のリガンドを意味する。ＴＮＦリガンドファミリー群には、限定するものでないが、ＴＮＦ−α、リンホトキシン−α(ＬＴ−α、ＴＮＦ−βとしても知られる)、ＬＴ−β(複合体ヘテロトリマ−ＬＴ−α２−β中に見られる)、ＦａｓＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−ＩＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌおよび神経成長因子（ＮＧＦ）が包含される。実施例６に示す実験は、本発明のＴＲ２レセプターがリンパ球の増殖を誘発できることを示す。さらに、かかる増殖は、Ｆｃ抗体フラグメントと融合したＴＲ２タンパク質フラグメントにより阻害できる。ＴＮＦαは、単純ヘルペスウイルスタイプ１（ＨＳＶ−１）の感染からマウスを防御することが示されている。Rossol-Voth，R et al.，Ｊ．Gen．Virol．72: 143-147(1991)。ＴＮＦαの防御作用のメカニズムは知られていないが、インターフェロン、ＮＫ細胞殺傷のいずれも関与していないようである。ＴＮＦＲファミリーの一つメンバーが、ＨＳＶ−１の細胞への侵入を媒介することが示されている。Montgomery，R．et al.，Eur．Cytokine Newt．7:159(1996)。さらに、このＴＮＦＲの細胞外ドメインに特異的な抗体は、ＨＳＶ−１の細胞への侵入を遮断する。それゆえ、本発明のＴＲ２レセプターには、ＴＮＦＲ媒介ウイルス細胞内侵入を防御できるＴＲ２アミノ酸配列および抗体の両方を包含する。かかる配列および抗体は、ウイルスへの結合を細胞表面局在ＴＮＦＲと競合することにより、または、ウイルスの細胞表面レセプターへの結合を直接遮断することのいずれかにより機能できる。本発明の抗体を、本発明のＴＲ２レセプター免疫原を用いる種々の方法のいずれかにより調製してもよい。かかるＴＲ２レセプター免疫原には、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２レセプタータンパク質、およびＴＲ２−ＳＶ１（図４Ａ−４Ｂ（配列番号５）およびＴＲ２−ＳＶ２（図７Ａ−７Ｂ（配列番号８）ポリペプチド（これらはいずれもリーダー配列を含んでいてもいなくてもよい）およびＴＲ２レセプターのリガンド結合、細胞外、膜貫通、細胞内ドメインまたはこれらのいずれかの組み合わせを含むレセプターのポリペプチドフラグメントが包含される。本発明のポリクローナルおよびモノクローナル抗体、アゴニストまたはアンタゴニストは、Tartag1ia and Goeddel，J．Biol．Chem．267(7):4304-4307(1992) ;Tartaglia et al.，Cell 73:213-216(1993)およびＰＣＴ出願ＷＯ９４／０９１３７に記載される方法にしたがって作成できる。本明細書で用いる、「抗体」（A ｂ）または「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）なる用語は、完全な分子ならびに抗原に結合可能なそのフラグメント（例えば、ＦａｂおよびＦ(ａｂ')₂フラグメントなど）を包含する。ＦａｂおよびＦ(ａｂ')₂フラグメントは、完全な抗体のＦｃフラグメントを欠き、循環からより速く消失し、完全な抗体の非−特異的組織結合が少ない(Wahl et al.，J．Nucl．Med．24:316-325(1983))。好ましい方法において、本発明の抗体はｍＡｂである。かかるｍＡｂは、ハイブリドーマ技術(Kohler and Millstein，Nature 256:495-497(1975)および米国特許第４３７６１１０号;Harlow et al.，Antibodies:A Laboratory Manual，Co ld Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1988;Monoclon al Antibodies and Hybridomas:A New Dimension in Biological Analyses，Ple num Press，New York，NY，1980;Campbell,"Monoclonal Antibody Technology" ，In:Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology，Volume 13(Burdon et al.，eds.)，Elsevier，Amsterdam(1984))を用いて調製できる。ＴＲ２レセプタードメインに結合するタンパク質および他の化合物もまた本発明の候補アゴニストおよびアンタゴニストである。かかる結合化合物は、酵母ツー−ハイブリッドシステム(Fields and Song，Nature 340:245-246(1989))を用いて、「検索(capture)」できる。酵母ツー−ハイブリッドシステムの変形バージョンが、Roger Brentおよび彼の共同研究者により記載されている(Gyuris，J．e t al.，Cell 75:791-803(1993)；Zervos，A．S．et al.，Cell 72:223-232(1993 ))。好ましくは、酵母ツー−ハイブリッドシステムを本発明にしたがって用い、ＴＲ２レセプターのリガンド結合、細胞外、細胞内および膜貫通ドメインに結合する化合物を検索する。かかる化合物は、本発明の優れた候補アゴニストおよびアンタゴニストである。上記したツー−ハイブリッドアッセイを用い、ＴＲ２レセプターの細胞内ドメインまたはその一部を用いて、インビボでレセプターと相互作用する細胞性タンパク質を同定してもよい。また、かかるアッセイを用いて、ＴＲ２レセプター機能の潜在的なアゴニストまたはアンタゴニスト活性を有するリガンドを同定してもよい。このスクリーニングアッセイは、これまで成熟ＴＮＦ−ＲＩＩの細胞質ドメインと相互作用するタンパク質を同定し、２つのレセプター結合タンパク質を同定するのに、用いられている。Rothe，M．et al.，Cell 78:681(1994)。ＴＲ２レセプターの細胞質ドメインと結合するかかるタンパク質およびアミノ酸配列は、本発明の優れた候補アゴニストおよびアンタゴニストである。他のスクリーニング技術は、例えば、Science 246:181-296（1989）に記載されるような、レセプター活性化により引き起こされる細胞外ｐＨ変化を測定するシステムにおいて、本発明のポリペプチドを発現する細胞（例えば、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞）の使用を含む。他の例では、潜在的なアゴニストまたはアンタゴニストを本発明のポリペプチドを発現する細胞と接触させ、セカンドメッセンジャー応答、例えばシグナルトランスダクションを測定し、潜在的なアンタゴニストまたはアゴニストが有効であるかどうかを調べてもよい。ＴＲ２レセプターアゴニストを用い、腫瘍増殖の阻害およびある転移可能な腫瘍の壊死などのリガンド活性を刺激できる。アゴニストを用い、例えば、Ｔ−細胞、線維芽細胞および造血細胞分化などの細胞分化を刺激することもできる。ＴＲ２レセプターに対するアゴニストもまた、微生物に対する宿主の防御においてＴＲ２の役割を増加させ、関連する疾患（リステリア・モノサイトゲン(Listeri a monosytogenes)からなどの感染症）およびクラミジアを防御する。アゴニストを用い、放射線治療の間に産生される電離性放射線の有害作用、例えば、酵素の変性、脂質過酸化およびＤＮＡ損傷に対して防御することもできる。本発明のレセプターポリペプチドに対するアゴニストを用い、微生物に対する宿主防御におけるＴＮＦの役割を増加させ、関連する疾患を防御できる。アゴニストを用い、放射線治療の間に産生される電離性放射線の有害作用、例えば、酵素の変性、脂質過酸化およびＤＮＡ損傷に対して防御することもできる。アゴニストを用い、リンパ球増殖および分化の速度を増加することにより、抗 −ウイルス応答を媒介、増殖を調節、免疫応答を媒介、ＨＩＶなどの疾患に関連する免疫不全を治療することもできる。本発明のポリペプチドに対するアンタゴニストを用い、腫瘍増殖の刺激およびある転移可能な腫瘍の壊死などのリガンド活性を阻害することができる。アンタゴニストを用い、例えば、Ｔ−細胞、線維芽細胞および造血細胞分化などの細胞性分化を阻害することもできる。アンタゴニストを用い、移植片対宿主拒絶反応、同種移植片拒絶反応、およびＡＩＤＳなどのＴ−細胞媒介自己免疫疾患を治療することもできる。Ｔ−細胞増殖がタイプ２ＴＮＦレセプターを介して刺激されることも示されている。したがって、レセプターをアンタゴナイズすることで、Ｔ−細胞の増殖を防御し、Ｔ−細胞媒介自己免疫疾患を治療できる。ＡＩＤＳとされる免疫不全の状態は、ＣＤ４⁺Ｔ−リンパ球の数および機能が減少する第２期である。最近の報告から、ＣＤ４⁺Ｔ−細胞の１日あたりの損失は、３．５×１０⁷および２×１０⁹細胞の間であると概算される(WeiX.，et al. ，Nature 373:117−122(1995))。ＨＩＶ感染症におけるＣＤ４⁺Ｔ−細胞減少の一つの原因は、ＨＩＶ−誘発アポトーシスであると考えられる。実際、ＨＩＶ− 誘発アポトーシス細胞死は、インビトロのみならず、より重要なことには、感染した個体においても示されている(Ameisen，J．C.，AIDS 8:1197-1213(1994);Fi nkel，T．H.，and Banda，N．K.，Curr．Opin．Immunol．6:605-615(1995);Muro -Cacho，C．A.，etal.，J．Immunol．154:5555-5566(1995))。さらに、アポトーシスおよびＣＤ４⁺Ｔ−リンパ球減少は、ＡＩＤＳの異なる動物モデルにおいても密接に関連しており(Brunner，T.，et al.，Nature 373:441-444(1995);Gouge on，M．L.，et al.，AIDS Res．Hum．Retroviruses 9:553-563(1993))、アポトーシスは、ウイルス複製がＡＩＤＳとなっていないこれらの動物モデルにおいては観察されない(Gougeon，M．L．et al.，AIDS Res．Hum．Retroviruses 9:553- 563(1993))。さらに、データは、非感染であるがプライムされるかまたは活性化されたＨＩＶ−感染個体由来のＴ−リンパ球は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドＦａｓＬと遭遇後にアポトーシスを受けることを示す。ＨＩＶ感染後に死ぬこととなる単球細胞系を用いて、Ｕ９３７細胞のＨＩＶによる感染により、ＦａｓＬのデノボ発現が起こり、ＦａｓＬがＨＩＶ−誘発アポトーシスを媒介することが示されている(Badley，A．D．et al.，J．Virol．70:199-206(1996))。さらに、ＴＮＦ−ファミリーリガンドは、非感染マクロファージにおいて検出可能であり、その発現はＨＩＶ感染後にアップレギュレートされ、その結果、非感染ＣＤ４⁺Ｔ−リンパ球が選択的に死ぬ結果となっていた(Badley，A．D．et al.，J．V irol．70:199-206(1996))。実施例６に示されるように、図１Ａ−１Ｂに示されるＴＲ２レセプターは、ＣＤ４⁺Ｔ−リンパ球において発現され、リンパ球増殖を誘導できる。それゆえ、本発明により、ＨＩＶ⁺個体を治療する方法であって、本発明のアゴニストを投与し、ＣＤ４⁺Ｔ−リンパ球の増殖および分化の速度を増加させることを含む方法が提供される。かかるアゴニストには、ＴＲ２レセプター（例えば、ＴＮＦα 、ＰＭＡおよびＤＭＳＯ）の発現を誘発できるか、または、リンパ球増殖および分化を誘発するかかるレセプターのシグナルを増強できる薬剤が包含される。投与の方法および投薬量は、以下に詳細に記載する。同種移植片の拒絶反応において、ほとんどの部分について免疫系は環境的抗原によりプライムされるのみであるため、受容動物の免疫系は応答するようにプライムされていない。同じ種の他のメンバーからの組織は、例えば、ウイルスおよびバクテリアが提示されるのと同じように提示されない。同種移植片拒絶反応の場合、免疫抑制管理が設計され、免疫系がエフェクター段階に到達するのを防ぐ。しかしながら、異種移植片拒絶反応の免疫プロフィールは、同種移植片拒絶反応よりも疾患再発に似ていることがある。疾患再発の場合、免疫系は、天然の島細胞の破壊により証拠付けられるように、すでに活性化されている。それゆえ、疾患再発において、免疫系はすでにエフェクター段階にある。本発明のアンタゴニストは、ＴＲ２媒介リンパ球増殖および分化の速度を減少させることにより、同種移植片および異種移植片の両方に対する免疫応答を抑制できる。かかるアンタゴニストには、実施例５および６において記載するＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質が包含される。かくして、本発明はさらに、免疫応答を抑制する方法を提供する。加えて、ＴＮＦαは、自己免疫から生じる糖尿病に罹患しやすい動物種において糖尿病を防御することが示されている。Porter，A.，Tibtech 9:158-162(1991 )を参照。かくして、本発明のアゴニストおよびアンタゴニストは、タイプＩ糖尿病などの自己免疫疾患の治療において有用であり得る。加えて、細胞増殖および分化においてＴＲ２レセプターにより担われる役割は、本発明のアゴニストまたはアンタゴニストがこれらのレセプターの異常な細胞性発現を含む病状を治療するのに用いることができることを示す。ある環境において、ＴＲ２レセプターは炎症応答を誘発でき、アンタゴニストはこの応答を遮断するのに有用な試薬となり得る。それゆえ、ＴＲ２レセプターアンタゴニスト（例えば、ＴＲ２レセプターの可溶性形態；中和化抗体）は、慢性関節リウマチ、骨関節炎、乾癖、敗血症および炎症性腸疾患などの炎症性疾患の治療に有用であり得る。ＴＲ２レセプターに対するアンタゴニストは、重大な臨床状態として残る、敗血症ショックを治療および／または予防するのに用いることができる。敗血症ショックは、病原体から直接的よりもむしろ、ＴＮＦおよびＩＬ−１などのタンパク質因子により媒介される過剰な宿主応答の結果として起こる。例えば、リポポリサッカライドは、ＴＮＦの放出を引き起こし、その血清濃度を強く一時的に増加させる。ＴＮＦは、過量で投与された場合、ショックおよび組織損傷を引き起こす。したがって、ＴＲ２レセプターに対するアンタゴニストは、ＴＮＦの作用を遮断し、敗血症ショックを治療／予防すると考えられる。これらのアンタゴニストは、ＴＮＦの高い血清レベルに関係する子供の髄膜炎菌血症を治療するのにも用いることができる。ＴＲ２レセプターに対するアンタゴニストにより治療できる他の疾患には、ＴＮＦレセプターリガンドにより媒介される炎症、細菌感染症、カヘキシーおよび脳性マラリアが包含される。ＴＲ２レセプターアンタゴニストは、ＴＮＦなどのレセプターに対するリガンドにより媒介される炎症を治療するのにも用いることができる。投与方法本明細書で記載するアゴニストまたはアンタゴニストを、インビトロ、エクスビボ、またはインビボで、本発明のレセプターを発現する細胞に投与できる。アゴニストまたはアンタゴニストの「有効量」の投与とは、ＴＮＦ−ファミリーリガンドに対する細胞性応答を増強または阻害するのに十分な量の化合物を意味し、ポリペプチドを含む。特に、アゴニストまたはアンタゴニストの「有効量」の投与とは、ＴＲ２レセプター媒介活性を増強または阻害するために有用な量を意味する。もちろん、細胞増殖および／または分化を増強する場合には、本発明のアゴニストをＴＮＦ−ファミリーリガンドとともに投与できる。当業者には、アゴニストまたはアンタゴニストの有効量を、経験的に決定でき、純粋な形態または医薬上許容される塩、エステルまたはプロドラッグの形態で用いることができることが認識されるであろう。アゴニストまたはアンタゴニストを、１またはそれ以上の医薬上許容される助剤と組み合わせて、組成物として投与できる。ヒト患者に投与する場合、本発明の化合物および組成物の一日全使用量は、医薬判断の範囲内でかかり付けの医師により決定されることが理解されるであろう。特定の患者に対する具体的な治療上の有効用量レベルは、医薬分野で周知の因子に依存する。一般的な計画として、用量当たりの非経口投与されるＴＲ２ポリペプチドの医薬的に効果的な全量は、患者体重１ｋｇあたり、約１μｇ／日〜１０ｍｇ／日の範囲内であるが、上記したように、治療的裁量にゆだねられる。より好ましくは、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日であり、もっとも好ましくは、ヒト用には、ホルモンについて約０．０１および１ｍｇ／ｋｇ／日の間である。連続的に投与される場合、ＴＲ２ポリペプチドは、典型的には、１日当たり１〜４回注射または連続的な皮下注入（例えばミニ−ポンプを用いて）のいずれかにより、約１ μｇ／ｋｇ／時間〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の用量速度で投与される。静脈バック溶液もまた用い得る。本発明のＴＲ２レセプターポリペプチドを含む医薬組成物は、経口、直腸、非経口、槽内、膣内、腹膜内、局所（粉末、軟膏、滴剤または経皮パッチによるなど）、口腔内投与、または経口もしくは鼻スプレーとして投与できる。「医薬上許容される担体」には、非−毒性固体、半固体または液体充填剤、希釈剤、被包化材料またはいずれかのタイプの処方助剤を意味する。本明細書で用いる「非経口」なる用語は、静脈内、筋肉内、腹膜内、胸骨内、皮下および関節内注射および注入を含む投与の形態を意味する。本発明を一般的に記載したが、以下の実施例を参考にして、本発明をより容易に理解できるであろう。この実施例は単に例示であって、本発明を限定するものではない。実施例１イー．コリ内でのＴＲ２の発現および精製この実施例において、細菌発現ベクターｐＱＥ６Ｏを細菌発現用に用いる。（ QIAGEN，Inc.，9259 Eton Avenue，Chatsworth，CA，91311）ｐＱＥは、アンピシリン抗生物質耐性(「Ａｍｐ^r」)をコードし、細菌の複製起点(「ｏｒｉ」)、ＩＰＴＧ誘導性プロモーター、リボソーム結合部位(「ＲＢＳ」)、QIAGEN，Inc.（前掲）から販売されるニッケル−ニトリロ−トリ酢酸(「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティ樹脂を用いるアフィニティ精製を可能とするヒスチジン残基をコードする６個のコドン、および適当な単一の制限酵素切断部位を含む。これらのエレメントは、ポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントが、ポリペプチドのカルボキシル末端に共有結合する６個のＨｉｓ残基（すなわち、「６×Ｈｉｓタグ」）を有するポリペプチドを産生するように挿入されるように、整列する。しかしながら、この実施例において、ポリペプチドコーディング配列を、６個のＨｉｓコドンの翻訳が妨害され、それゆえ、６×Ｈｉｓタグを有さないポリペプチドが産生されるように、導入する。疎水性のリーダー配列を欠くＴＲ２タンパク質の所望の部分をコードするＤＮＡ配列を、ＴＲ２タンパク質の所望の部分のアミノ末端配列および寄託構築物のｃＤＮＡコーディング配列の３’側の配列にアニールする、ＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、寄託ｃＤＮＡクローンから増幅する。ｐＱＥ６０ベクターにおけるクローニングを容易にするための制限部位を含むさらなるヌクレオチドを５’および３’配列のそれぞれに添加する。成熟タンパク質のクローニングのため、５’プライマーは、５’ＣＧＣＣＣＡＴＧＧＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＣＧＴＣＣＴ３’（配列番号１４）の、下線で示したＮｃｏＩ制限部位、それに続く図１Ａ−１Ｂ中の成熟ＴＲ２配列のアミノ末端コーディング配列に相補的な１８ヌクレオチドを含む配列を有する。当業者は、もちろん、５’プライマーが始まるタンパク質コーディング配列中のポイントを代えて、成熟形態よりも短いか長い完全なタンパク質の所望の部分を増幅できることを認識するであろう。３’プライマーは、５’ＣＧＣＡＡＧＣＴＴＡＴＴＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＣＣＣ３’（配列番号１５）の、下線で示したＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、それに続くＴＲ２レセプターの細胞外ドメインをコードする配列番号１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示すヌクレオチド配列の３’末端と相補的な１８ヌクレオチドを含む配列を有する。増幅したＴＲ２ＤＮＡフラグメントおよびベクターｐＱＥをＮｃｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し、ついで消化したＤＮＡをともにライゲートする。ＴＲ２ＤＮＡの制限されたｐＱＥベクターへの挿入により、その連結するストップコドンを含むＴＲ２タンパク質コーディング領域が、ＩＰＴＧ−誘導性プロモーターから下流および開始ＡＵＧとのフレーム中に置かれる。連結するストップコドンは、挿入ポイントの下流の６個のヒスチジンコドンの翻訳を妨げる。ライゲーション混合物で、コンピテントイー．コリ細胞を、Sambrook et al. ，Molecular Cloning:a Laboratory Manual，2nd Ed．;Cold Spring Harbor Lab oratory Press，Cold Spring Harbor，NY(1989)に記載されるものなどの標準的な方法を用いて、トランスフォームする。ｌａｃリプレッサーを発現し、カナマイシン耐性(「Ｋａｍ^r」)を授与する、プラスミドｐＲＥＰ４の多重コピーを含むイー．コリ株Ｍ１５／ｒｅｐ４を、本明細書で記載する実施例を行うために用いる。ＴＲ２タンパク質の発現に適する多くの株のうちの一つであるこの株は、QIAGEN，Inc．（前掲）から市販される。トランスフォーマントを、アンピシリンおよびカナマイシンの存在下でＬＢプレート上で生育する能力により同定する。プラスミドＤＮＡを耐性コロニーから単離し、クローニングしたＤＮＡの同定を、制限解析、ＰＣＲおよびＤＮＡ配列決定により確認した。所望の構築物を含むクローンをアンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）およびカナマイシン（２５μｇ／ｍｌ）の両方を含むＬＢ培地の液体培養物中で一晩(「Ｏ／ｎ」)生育させる。Ｏ／Ｎ培養物を用いて、約１：２５〜１：２５０の希釈で大きな培養物中に摂取する。細胞を、６００ｎｍでの光学密度(「ＯＤ６００」)が０．４および０．６の間にまで増殖させる。イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド(「ＩＰＴＧ」)をついで最終濃度１ｍＭにまで添加し、ｌａｃＩレプレッサーを不活化することにより、ｌａｃリプレッサー感受性プロモーターからの転写を誘発する。続けて、細胞をさらに３〜４時間培養する。ついで細胞を遠心分離により集める。ついで、細胞を６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８中で４℃にて３〜４時間、撹拌する。細胞破片を遠心分離により除去し、ＴＲ２を含む上澄を２００ｍＭのＮａＣｌを含む５０ｍＭのＮａ−酢酸緩衝液、ｐＨ６に対して透析する。別に、タンパク質をプロテアーゼ阻害剤を含む５００ｍＭＮａＣｌ、２０％グリセロール、２５ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４に対して透析することにより、うまく再生できる。復元後、タンパク質をイオン交換、疎水性相互作用およびサイズ排除クロマトグラフィーにより精製できる。別法として、抗体カラムなどのアフィニティクロマトグラフィー工程を用い、純粋なＴＲ２タンパク質を得ることができる。精製タンパク質を４℃にて保存するかまたは−８０℃にて凍結させる。実施例２実施例２(ａ)：バキュロウイルス発現系におけるＴＲ２タンパク質の可溶性フラグメントのクローニングおよび発現この実施例において、プラスミドシャトルベクターｐＡ２ＧＰを用い、天然に結合する分泌性シグナル（リーダー）配列を欠く、図１Ａ−１Ｂに示すＴＲ２レセプタータンパク質の成熟細胞外ドメインをコードするクローニングしたＤＮＡを、バキュロウイルス中に挿入した。このタンパク質を、バキュロウイルスリーダー、および、Summers et al.，A Manual of Methods for Baculovirus Vector s and Insect Cell Culture Procedures，Texas Agricultural Experimental St ation Bulltein No．1555(1987)に記載されるような標準的な方法を用いて発現させた。この発現ベクターは、オートグラハ・カリフォルニカ（Autographa cal ifornica）核多角体病ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）の強いポリヘドリンプロモーター、それに続くバキュロウイルスｇｐ６７タンパク質の分泌性シグナルペプチド（リーダー）およびＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８などの慣用の制限部位を含む。シミアンウイルス４０(「ＳＶ４０」)のポリアデニル化部位を効率的なポリアデニル化のために用いる。組換えウイルスを容易に選択するため、プラスミドは、同じ方向で、弱いドロソフィラプロモーターの制御下に、イー．コリ由来のベーターガラクトシダーゼ遺伝子、それに続くポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを含む。野生型ウイルスＤＮＡとの細胞−媒介相同性組換えのために、挿入された遺伝子の両側にウイルス性の配列を置き、クローニングされたポリヌクレオチドを発現する生存可能なウイルスを作成する。構築物が、シグナルペプチドを含む転写、翻訳分泌などのために適当に位置するシグナルを提供し、必要ならばＡＵＧのフレーム中にある限り、当業者であれば容易に認識できるように、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１およびｐＡｃＩＭ１などの他の多くのバキュロウイルスベクターを上記のベクターの代わりに用いることができる。かかるベクターは、例えば、Luckow et al.，Virology 170:31-39 に記載される。寄託クローン（ＡＴＣＣ受託番号９７０５９）中のＴＲ２レセプタータンパク質の成熟細胞外ドメイン（図１Ａ−１Ｂに示すアミノ酸３７〜２００）を本質的にコードするｃＤＮＡ配列を、遺伝子の関連する５’および３’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅した。上記の５’プライマーは、５’ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＣＧＧＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣＴＡＣ３’(配列番号１６) の、下線で示したＢａｍＨＩ制限酵素部位、Kozak，M.，J．Mol．Biol．196:947 -950(1987)に記載されるような真核細胞における翻訳開始のための効率的なシグナル、それに続く、図１Ａ−１Ｂに示す、ヌクレオチド３５４で始まる、ＴＲ２タンパク質のコーディング配列の１５塩基を含む、配列を有する。３’プライマーは、５’ＣＧＣＧＧＴＡＣＣＡＴＴＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＣＣＣ３ ’（配列番号１７）の、下線で示したＡｓｐ７１８制限部位、それに続く、図１Ａ−１Ｂのコーディング配列に相補的な１７ヌクレオチドを含む配列を有する。増幅したフラグメントを市販のキット(「Geneclean」BIO 101 Inc.，La Jolla， Ca.)を用いて、１％アガロースゲルから単離した。ついでフラグメントをＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、１％アガロースゲル上で精製した。このフラグメントを本明細書において「Ｆ１」と称する。プラスミドを、制限酵素ＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、子ウシ小腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化した。ついでＤＮＡを市販のキット(「Genecl ean」BIO 101 Inc.，La Jolla，Ca.)を用いて１％アガロースゲルから単離した。このベクターＤＮＡを本明細書において「ＶＩ」と称する。フラグメントＦ１および脱リン酸化プラスミドＶ１を、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いてともにライゲートした。大腸菌ＨＢ１０１細胞をライゲーション混合物でトランスフォームし、培養プレートに播いた。ＸＬ−１Ｂｌｕｅ(Stratagene Cloning Systems，La Jolla，CA)などの他の適当なイー．コリ宿主を用いてもよい。ＰＣＲ法を用いてヒトＴＲ２配列を有するプラスミドを含む細菌を同定した。このＰＣＲにおいて、遺伝子を増幅するのに用いたプライマーおよびセカンドプライマーの一つは、ベクター内からのものであり、ＴＲ２遺伝子フラグメントを含む細菌コロニーのみがＤＮＡの増幅を示すようにした。クローニングされたフラグメントの配列をＤＮＡ配列決定により確認した。該プラスミドを本明細書において「ｐＢａｃＴＲ２−Ｔ」と称する。 Felgner et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84:7413-7417(1987)に記載されるリポフェクチン法を用いて、５μｇのｐＢａｃＴＲ２−Ｔを、１．０μｇの市販の線状バキュロウイルスＤＮＡ(「BaculoGold^TMbaculovirus DNA」，Pharming en，San Diego，CA.)とともにトランスフェクトした。１μｇのBaculoGold^TMウイルスＤＮＡおよび５μｇのプラスミドｐＢａｃＴＲ２−Ｔを、５０μｌの血清不含グレースの培地(Life Technologies Inc.，Gaithersburg，MD)を含むマイクロタイタープレートの滅菌ウェル中で混合した。その後、１０μｌのリポフェクチン＋９０μｌのグレースの培地を添加し、混合し、室温にて１５分間インキュベートした。ついで、トランスフェクション混合物を、血清を含まない１ｍｌのグレースの培地を含む３５ｍｍの組織培養プレート中にまかれたＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ１７１１）に滴下した。プレートを前後に揺らし、新たに添加した溶液を混合した。ついでプレートを５時間２７℃にて培養した。５時間後、トランスフェクション溶液をプレートから除去し、１０％胎仔ウシ血清を含む１ｍｌのグレースの昆虫培地を添加した。プレートを培養器に戻し、培養を２７ ℃にて４日間続けた。４日後、上澄を回収し、Summers and Smith（前掲）により記載されるように、プラークアッセイを行った。「Blue Gal」(Life Technologies Inc.，Gaihersb urg)を含むアガロースゲルを用い、青色染色プラークを形成するｇａｌ−発現クローンの同定および単離を容易にした。(このタイプの「プラークアッセイ」の詳説は、Life Techonologies Inc.，Gaithersburg，p9-10により頒布される昆虫細胞培養およびバキュロウイルス学の使用者ガイド中に見ることができる。)適当なインキュベーション後、青色染色プラークをマイクロピペッター（例えば、エッペンドルフ）のチップで取った。ついで、組換えウイルスを含む寒天を２００μｌのグレースの培地を含むマイクロ遠心チューブ中で再懸濁し、組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を用いて、３５ｍｍ皿中に播いたＳｆ９細胞を感染させた。４日後、これらの培養皿の上澄を集め、ついでこれらを４℃にて保存した。組換えウイルスをＶ−ＴＲ２−Ｔと呼ぶ。用いた遺伝子の発現を確認するため、Ｓｆ９細胞を１０％加熱不活化ＦＢＳを含むグレースの培地中で増殖させた。細胞を、感染多重度(「ＭＯＩ」)２の組換えバキュロウイルスＶ−ＴＲ２−Ｔで感染させた。６時間後、培地を除去し、メチオニンおよびシステインを除いたＳＦ９００ＩＩ培地(Life Technologies Inc .，Rockville，MDより利用可能)で置き換えた。４２時間後、５μＣｉの³⁵Ｓ− メチオニンおよび５μＣｉの³⁵Ｓ−システイン(Amershamより利用可能)を添加しタンパク質を放射線標識した。さらに細胞を１６時間インキュベートし、ついで、遠心分離により集めた。上澄中のタンパク質ならびに細胞内タンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥついでオートラジオグラフィーにより解析した。精製したタンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列のマイクロシークエンシングを用い、成熟タンパク質の網の末端配列、および、分泌性シグナルペプチドの切断点および長さを決定した。実施例２(ｂ)：バキュロウイルス発現系におけるＴＲ２タンパク質のクローニングおよび発現実施例２(ａ)において記載したＴＲ２レセプターの末端切断バージョンのクローニングおよび発現と同様に、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示す全長ＴＲ２レセプタータンパク質を発現する組換えバキュロウイルスを作成した。この実施例において、プラスミドシャトルベクターｐＡ２を用い、天然に結合する分泌性シグナル（リーダー）配列を含む、完全なタンパク質をコードするクローニングしたＤＮＡをバキュロウイルスに挿入し、成熟ＴＲ２タンパク質を発現させた。ｐＡ２ベクターの他の特徴は、実施例２(ａ)において用いたｐＡ２ＧＰベクターについて記載したのと同様である。図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）に示すＡＵＧ開始コドンおよび天然に結合するリーダー配列を含む寄託クローン中の全長ＴＲ２タンパク質をコードするｃＤＮＡ配列を、遺伝子の５’および３’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅した。５’プライマーは、５’ＧＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧ３’（配列番号１８）の、下線で示したＢａｍＨＩ制限酵素部位、Kozak，M.，J．Mol．Biol．196:947 -950 (1987)に記載されるような真核細胞における翻訳開始のための効率的なシグナル、それに続く、図１Ａ−１Ｂに示す、ＡＵＧ開始コドンで始まる、完全なＴＲ２タンパク質の配列の２１塩基を含む配列を有する。３’プライマーは、５’ＧＣＧＣＧＧＴＡＣＣＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＡ３’( 配列番号１９) の、下線で示したＡｓｐ７１８制限部位、それに続く、図１Ａ−１Ｂの非コーディング配列に相補的な２１ヌクレオチドを含む配列を有する。増幅したフラグメントを単離し、実施例２(ａ)において記載したように制限酵素で消化し、プラスミドｐＢａｃＴＲ２を作成した。５μｇのｐＢａｃＴＲ２を、１μｇのBaculoGold^TM(Pharmingen)ウイルスＤＮＡおよび１０μｌのリポフェクチン^TM(Life Technologies，Inc.)とともに、全量２００μｌの血清不含培地中でトランスフェクトした。一次ウイルスを感染後 (pi)４〜５日で集め、プラークアッセイに用いた。プラーク精製ウイルスを、続けて、実施例２(ａ)において記載したように、増幅させ、凍結させた。発現したタンパク質を放射線標識するために、Ｓｆ９細胞を、０．５×１０⁶ 細胞／ｍｌを含む２．０ｍｌの細胞懸濁液を有する１２ウェル皿にまき、４時間付着させた。組換えバキュロウイルスを用い、１〜２のＭＯＩで細胞を感染させた。４時間後、培地を、１．０ｍｌのメチオニンおよびシステインを抜いた血清不含培地（−Ｍｅｔ／−Ｃｙｓ）で置き換えた。感染後３日に、培養基を［³⁵Ｓ］−Ｍｅｔおよび［³⁵Ｓ］−Ｃｙｓをそれぞれ２μＣｉ含む、０．５ｍｌの−Ｍｅｔ／−Ｃｙｓで置き換えた。細胞を１６時間標識し、その後、培養基を除去し、遠心分離により浄化した（上澄）。細胞を０．２ｍｌの溶解緩衝液（２０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．９；１３０ｍＭＮａＣｌ；０．２ｍＭＥＤＴＡ；０．５ｍＭＤＴＴおよび０．５％ｖｏｌ／ｖｏｌＮＰ−４０）を添加して皿中で溶解させ、ついで１．０ｍｌにまでｄＨ₂Ｏで希釈した(細胞抽出物)。３０μｌの上澄および細胞抽出物のそれぞれを、１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。タンパク質ゲルを染色し、脱染色し、増幅させ、乾燥させ、オートラジオグラフィーに付した。組換えタンパク質に対応する標識されたバンドは、暴露後１６〜７２時間後に可視化された。実施例３哺乳動物細胞におけるＴＲ２のクローニングおよび発現典型的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写開始を媒介するプロモーターエレメント、タンパク質コーディング配列、および転写の終止および転写物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。さらなるエレメントには、エンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列およびＲＮＡスプライシングのドナーおよびアクセプター部位が隣接する介在配列が包含される。ＳＶ４０からの早期および後期プロモーター、例えば、ＰＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩなどのレトロウイルスからのロング・ターミナル・リピート（ＬＴＲＳ）、および、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の早期プロモーターなどを用いて非常に効率的な転写を行うことができる。しかしながら、細胞性エレメントもまた用いることができる（例えば、ヒトアクチンプロモーター）。本発明を実行するのに用いる適当な発現ベクターには、例えば、ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ(Pharmacia，Uppsala，Sweden)、ｐＲＳＶｃａｔ( ＡＴＣＣ３７１５２)、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ３７１４６）およびｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ６７０１９）などのベクターが包含される。用いることのできる哺乳動物宿主細胞には、ヒトＨｅ１ａ２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１、Ｃｏｓ７およびＣＶ１、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が包含される。別法として、染色体中に組み込まれた遺伝子を含む安定な細胞系で、遺伝子を発現できる。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシンまたはヒグロマイシンなどの選択マーカーとともにトランスフェクションすることにより、トランスフェクトされた細胞の同定および単離が可能となる。トランスフェクトされた遺伝子を増幅させ、大量のコードされるタンパク質を発現させることもできる。ＤＨＦＲ（ジヒドロフォレートレダクターゼ）マーカーは、数百または数千コピーの目的の遺伝予を坦持する細胞系を確立するのに有用である。他の有用な選択マーカーは、酵素グルタミン合成酵素（ＧＳ）である (Murphy et al.，Biochem J．227:277-279(1991);Bebbington et al.，Bio/Tech nology 10:169-175(1992))。これらのマーカーを用いて、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖させ、最も高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞系は、染色体中に組み込まれた増幅遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞を、タンパク質の産生のためにしばしば用いる。発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力なプロモーター（ＬＴＲ）(Cullen et al.，Molecular and Cellular Biology，438-447(1985 ,３月))とＣＭＶ−エンハンサーのフラグメント(Boshart et al.，Cell 41:521- 530(1985))を含む。例えば、制限酵素切断部位、ＢａｍＨＩ、ＸｂａｌおよびＡｓｐ７１８を有する多重クローニング部位は、目的の遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターは、加えて、ラットプレプロインシュリン遺伝子の、３’イントロン、ポリアデニル化および終止シグナルを含む。実施例３(ａ)：ＣＯＳ細胞におけるクローニングおよび発現発現プラスミド、ｐＴＲ２ＨＡを、ＴＲ２をコードするｃＤＮＡを発現ベクタ −ｐｃＤＮＡＩ／ＡｍｐまたはｐｃＤＮＡＩＩＩ（Invitrogen，Inc．から入手可能）中にクローニングすることにより作成する。発現ベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐは:(１)イー．コリおよび他の原核細胞における増殖に有効なイー．コリ複製起点;(２)プラスミド−含有原核細胞の選択のためのアンピシリン耐性遺伝子;(３)真核細胞における増殖のためのＳＶ４０複製起点;(４)ＣＭＶプロモーター、ポリリンカー、ＳＶ４０イントロン;(５)ｃＤＮＡがＣＭＶプロモーターの発現制御下に適切に置かれ、ポリリンカーの制限部位によりＳＶ４０イントロンおよびポリアデニル化シグナルに機能的に連結するように整列した、血球凝集素フラグメントをコードするいくつかのコドン、それに続く終止コドンおよびポリアデニル化シグナル、を含む。ＨＡタグは、Wils on et al.，Cell 37:767(1984)により記載されるインフルエンザ血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する。ＨＡタグの標的タンパク質への融合により、ＨＡエピトープを認識する抗体を用いる組換えタンパク質の検出および回収が容易になる。ｐｃＤＮＡＩＩＩは、加えて、選択可能なネオマイシンマーカーを含む。ＴＲ２をコードするＤＮＡフラグメントをベクターのポリリンカー領域中にクローニングし、組換えタンパク質発現がＣＭＶプロモーターにより調節されるようにする。プラスミド構築方法は以下のとおりである。イー．コリにおけるＴＲ２の発現のためのベクターの構築についてほぼ上記したように、寄託クローンのＴＲ２ｃＤＮＡを便利な制限部位を含むプライマーを用いて増幅する。本実施例において用いる適当なプライマーは、以下のものを含む。下線で示したＢａｍＨＩ部位、Ｋｏｚａｋ配列、ＡＵＧ開始コドンおよび完全なＴＲ２の５’コーディング領域の６個のさらなるコドンを含む５’プライマーは、以下の配列：５’ＧＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧ３’(配列番号２０) を有する。下線で示したＸｂａＩ部位、終止コドン、ＨＡタグ、および３’コーディング配列の１９塩基対を含む３’プライマーは、以下の配列(３’末端に)：５’ＧＣＧＣＴＣＴＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＧＴＣＧＴＡＴＧＧＧＴＡＧＴＧＧＴＴＴＧＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣ３’(配列番号２１) を有する。ＰＣＲ増幅したＤＮＡフラグメントおよびベクター、ｐｃＤＮＡＩ／ＡｍｐをＢａｍＨＩおよびＸｂａＩで消化し、ついでライゲートする。ライゲーション混合物をイー．コリＳＵＲＥ株（Stratagene Coloning Systems，11099 North Tor rey Pines Road，La Jolla，CA 92037より利用可能）中にトランスフォームし、トランスフォームした培養物をアンピシリン培地プレート上に播いて、ついでこれをインキュベートしてアンピシリン耐性コロニーを増殖させる。プラスミドＤＮＡを耐性コロニーから単離し、ＴＲ２−コーディングフラグメントの存在について、制限解析または他の手段により調べる。組換えＴＲ２の発現のため、例えばSambrook et al.，Molecular Cloning:a L aboratory Manual，Cold Spring Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York (1989)に記載されるような、ＤＥＡＥ−ＤＥＸＴＲＡＮを用いて、上記した発現ベクターでＣＯＳ細胞をトランスフェクトする。細胞をベクターによるＴＲ２の発現用の条件下でインキュベートする。ＴＲ２−ＨＡ融合タンパク質の発現を、例えば、Harlow et al.，Antibodies: A Laboratory Manual，2nd Ed.;Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold S pring Harbor，New York(1988)に記載される方法を用いて、放射線標識および免疫沈降により検出する。この目的のため、トランスフェクションの２日後、細胞を、³⁵Ｓ−システインを含む培地中で８時間インキュベートすることにより標識する。Wilson et al．（上記に引用）に記載されるように、細胞および培地を回収し、細胞を洗浄し、界面活性剤含有ＲＩＰＡ緩衝液：１５０ｍＭＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．１％ＳＤＳ、０．５％ＤＯＣ、５０ｍＭＴＲＩＳ、ｐＨ７．５で溶解させる。ＨＡ−特異的モノクローナル抗体を用いて、細胞溶解物および培養基からタンパク質を沈澱させる。ついで、沈澱したタンパク質をＳＤＳ −ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーにより解析する。予想される大きさの発現産物が細胞溶解物中に見られ、これは、負の対照中には見られない。実施例３(ｂ)：ＣＨＯ細胞におけるクローニングおよび発現ベクターｐＣ４をＴＲ２タンパク質の発現用に用いる。プラスミドｐＣ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体である。該プラスミドは、ＳＶ４０初期プロモーターの調節下のマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。これらのプラスミドでトランスフェクトされた、ジヒドロホレート活性を欠くチャイニーズハムスター卵巣−または他の細胞を、化学療法剤メトトレキセートを含む選択培地(アルファマイナスＭＥＭ、Life Technologies)中で細胞を増殖させることにより選択できる。メトトレキセート（ＭＴＸ）に耐性な細胞におけるＤＨＦＲ遺伝子の増幅については、よく示されている(例えば、Alt．F ．W.，Kellems，R．M.，Bertino，J．R.，and Schimke，R．T.，1978，J．Biol ．Chem．253:1357-1370，Hamlin，J．L．and Ma，C．1990，Biochem．et Biophy s．Acta，1097:107-143，Page，M．J．and Sydenham，M．A．1991，Biotechnolo gy 9:61-68 を参照)。高い濃度のＭＴＸで増殖する細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結果として、標的酵素、ＤＨＦＲを過剰産生することにより、薬剤に対する耐性を確立する。第２の遺伝子がＤＨＦＲ遺伝子に連結する場合、これは、通常、ともに増幅し、過剰発現される。この方法を用いて、１０００コピー以上の増幅遺伝子を坦持する細胞系を確立できることが、当該分野で知られている。その後、メトトレキセートが回収されると、宿主細胞の１またはそれ以上の染色体中に組み込まれた増幅遺伝子を含む細胞系が得られる。プラスミドｐＣ４は、目的の遺伝子の発現用に、ラウス肉腫ウイルスのロング・ターミナル・リピート（ＬＴＲ）の強力なプロモーター(Cullen et al.，Mole cular and Cellular Biology，438-447(1985，３月))とヒトサイトメガロウイノレス（ＣＭＶ）の即時初期遺伝子のエンハンサーから単離されたフラグメント(B oshart et al.，Cell 41:521-530(1985))を含む。プロモーターの下流は、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８制限酵素切断部位であり、遺伝子の組み込みを可能とする。これらのコーディング配列の後ろに、プラスミドは、ラットプレプロインシュリン遺伝子の３’イントロンおよびポリアデニル化部位を含む。例えば、ヒトβアクチンプロモーター、ＳＶ４０初期もしくは後期プロモーター、またはＨＩＶおよびＨＴＬＶＩなどの他のレトロウイルス由来のロング・ターミナル・リピートなどの、他のきわめて有効なプロモーターもまた発現用に用いることができる。ClontechのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および類似の系を用いて、哺乳動物細胞において調節された方法でＴＲ２タンパク質を発現できる(Gossen，M.，& Bujard，H．1992，Proc．Natl．Acad．Sci，USA 89:5547-5551)。ｍＲＮＡのポリアデニル化のために、例えばヒト成長ホルモンまたはグロビン遺伝子由来の他のシグナルを用いることができる。染色体中に組み込まれた目的の遺伝子を坦持する安定な細胞系を、ｇｐｔ、Ｇ４１８またはヒグロマイシンなどの選択マーカーとともにトランスフェクションして選択することもできる。例えば、Ｇ４１８とメトトレキセートなど、はじめに１より多くの選択マーカーを用いることが有利である。プラスミドｐＣ４を、当該分野で公知の方法により、制限酵素ＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、ついで子ウシ小腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化する。ついで、ベクターを１％アガロースゲルから単離する。リーダー配列を含む完全なＴＲ２タンパク質をコードするＤＮＡ配列を、遺伝子の５’および３’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅する。５’プライマーは、５’ＧＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧ３’(配列番号２２) の、下線で示したＢａｍＨＩ制限酵素部位、それに続くKozak,M.,Ｊ.Mol.Biol.1 96:947-950(1987)に記載されるような、真核細胞における翻訳開始のための効果的なシグナル、および図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示すＴＲ２タンパク質のコーディング配列の２１塩基を含む配列を有する。３’プライマーは、５’ＧＣＧＣＧＧＴＡＣＣＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＡ３’(配列番号１９) の、下線で示したＡｓｐ７１８制限部位、それに続く、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示すＴＲ２遺伝子の非コーディング配列に相補的な２１ヌクレオチドを含む配列を有する。増幅したフラグメントを、エンドヌクレアーゼＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、ついで１％アガロースゲル上で精製する。単離したフラグメントおよび脱リン酸化ベクターを、ついでＴ４ＤＮＡリガーゼを用いてライゲートする。イー．コリＨＢ１０１またはＸＬ−１Ｂｌｕｅ細胞を、ついでトランスフォームし、例えば、制限酵素解析を用いてプラスミドｐＣ４中に挿入されたフラグメントを含む細菌を同定する。活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠くチャイニーズハムスター卵巣細胞をトランスフェクション用に用いる。５μｇの発現プラスミドｐＣ４をリポフェクチン(Felgner et al.，前掲)を用いて０．５μｇのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏとともにトランスフェクトする。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優勢な選択マーカー、Ｇ４１８を含む抗生物質の一群に対して耐性を与える酵素をコードするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。細胞を１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を含むアルファマイナスＭＥＭ中に播く。２日後、細胞をトリプシン処理し、１０、２５または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキセート＋１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を含むアルファマイナスＭＥＭのハイブリドーマクローニングプレート(Greiner,Germany)中に播く。１０〜１４日後、単一クローンをトリプシン処理し、ついで、６−ウェルペトリ皿または１０ｍｌフラスコ中に、異なる濃度のメトトレキセート（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を用いて、播く。最大濃度のメトトレキセートで増殖するクローンを、ついで、より高い濃度のメトトレキセート（１μＭ、２μＭ、５μＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含む新たな６−ウェルプレートに移す。同じ方法を１００−２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を、たとえば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットにより、または逆相ＨＰＬＣ解析により解析する。実施例４ＴＲ２ｍＲＮＡ発現の組織分布なかでも、Sambrook et al.(前掲)により記載される方法を用いて、ノザンブロット解析を行い、ヒト組織におけるＴＲ２遺伝子発現を調べる。ＴＲ２タンパク質（配列番号１）の全体のヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡプローブを、製造者の指示にしたがって、rediprime^TMＤＮＡ標識システム(Amersham Life Scienc e)を用いて、³²Ｐで標識する。標識後、プローブを製造者のプロトコール番号ＰＴ１２００−１にしたがって、CHROMA SPIN−100^TMカラム(Colntech Laboratori es,Inc.)を用いて、精製する。精製した標識プローブを、ついでＴＲ２ｍＲＮＡについて種々のヒト組織を調べるのに用いる。種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含むマルチプル組織ノザン（ＭＴＮ）ブロットをClonthechから入手し、製造者のプロトコール番号ＰＴ１１９０−１にしたがって、ExpressHyb^TMハイブリダイゼーション溶液(Clont ech)を用いて、標識プローブで調べる。ハイブリダイゼーションおよび洗浄に続けて、ブロットを固定し、−７０℃にて一晩フィルムに暴露し、標準的な方法にしたがってフィルムを確立する。実施例５実施例５(ａ)：ＴＲ２−Ｆｃ（ＴＲ２−Ｉｇ融合タンパク質）および切断されたＴＲ２の発現および精製翻訳されたＴＲ２レセプターの推定膜貫通ドメインを、非極性トランスバイレイヤーヘリックスを同定するための、Goldman et al．（Ann．Rev．of Biophys ．Biophys．Chem．15:321-353(1986))の方法を用いて、疎水性により調べた。推定リーダーペプチドおよび細胞外ドメインをコードするこの膜貫通ドメインの上流領域を、Ｆｃ融合タンパク質の製造のために選択した。ＢｇｌＩＩ部位(単一下線)、ファクターＸａプロテアーゼ部位およびＡｓｐ７１８Ｉ部位（二重下線）を３’末端に加えた、ＨＴＸＢＳ４０由来の対応するコーディング領域を有するプライマーを設計し、ＰＣＲに付した。ＴＲ２コーディング配列の１８ヌクレオチドを含む、このプライマー対（フォファード３５−ｍｅｒ：５’ＣＡＧＧＡＡＴＴＣＧＣＡＧＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＣＴＧ３’(配列番号２３)、リバースプライマー５３−ｍｅｒ：ＧＣＣＴＴＣＧＴＣＡＣＣＡＧＣＣＡＧＣ３’(配列番号２４)) によるＰＣＲにより、予想される大きさの一つのバンドが得られた。これをＣＯＳＦｃｌｉｎｋ中にクローニングし、ＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋプラスミドを得た。ＰＣＲ産物をＥｃｏＲＩおよびＡｓｐ７１８Ｉで消化し、ＣＯＳＦｃｌｉｎｋプラスミド(Johansen，et al.，J．Biol．Chem．270:9459-9471(1995))中にライゲートし、ＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋを作成した。ＣＯＳ細胞を一時的にＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋでトランスフェクトし、得られた上澄をタンパク質Ａアガロースで免疫沈降させた。ヤギ抗−ヒトＦｃ抗体を用いる免疫沈降物のウエスタンブロット解析により、グリコシル化ＴＲ２−Ｆｃについて予想される大きさ（４７．５ｋＤよりも大きい）と一致する強いバンドが示された。１５Ｌ−時ＣＯＳトランスフェクションを行い、得られた上澄を精製した(以下参照)。精製タンパク質を用い、マウスを免疫し、ついで、ｍＡｂの産生のためにＤＮＡを注射した。ＣＨＯ細胞をＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋでトランスフェクトし、安定な細胞系を作成した。５つの系を伸長についてドットブロット解析により選択し、振盪フラスコに入れた。最も高いレベルのＴＲ２−Ｆｃタンパク質発現を示す系をウエスタンブロット解析により同定した。この系の上澄より精製したＴＲ２−Ｆｃタンパク質を、完全なタンパク質としてまたはファクターＸａ切断およびビオチニル化後のいずれで、フローサイトメトリーにより細胞結合研究に用いた(以下参照)。クローンＨＴＸＢＳ４０は、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）に示す配列と、ＨＴＸＢＳ４０がヌクレオチド３１４にグアニン、ヌクレオチド３８６にチミン、ヌクレオチド６２７にシトシンを含む点で異なる、ＴＲ２の対立遺伝子変異体である。ＴＲ２の細胞外ドメインの発現に適したプラスミドを以下のように構築し、抗 −ＴＲ２ｍＡｂの作成用にマウスを免疫した。ＦｃフラグメントをＢｇｌＩＩ／ＸｂａＩ消化によりＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋから除去し、クレノウを用いて、突出部を埋めて、プラスミドの平滑末端を再度ライゲートした。得られるフレームシフトは、もともとはＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋ中に導入されていたアミノ酸のすぐ後に、ＢｇｌＩＩ部位の添加により、ストップコドンを導入した。それゆえ、ＴＲ２の細胞外ドメインのＣ−末端は、この構築物（ＴＲ２ｅｘｌｉｎｋ）中において２個のアミノ酸（ＲＳ）のみが続く。実施例５(ｂ)：ＣＨＯＥＩＡ条件培地からのＴＲ２−Ｆｃの精製、その後のＴＲ２の切断およびビオチニル化アッセイ精製を通しての生成物純度を、還元および非還元条件下で泳動させる１５％ＬａｅｍｍｌｉＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上でモニターした。タンパク質濃度をＡ₂₈₀ によりモニターし、配列から計算して、レセプターについて０．７の吸光率、キメラについて１．２８の吸光率と想定した。吸光率をＡＡＡにより確かめた。ＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質のプロテインＧクロマトグラフィー以下に記載するすべての工程を４℃にて行った。１５ＬのＣＨＯ条件培地（ＣＭ）（細胞培養中回収後、０．２μフィルターに付した）を１９９ｃｍ／時間の線計流速にて、プロテインＧの５×１０ｃｍカラムに付した。カラムを、サンプルの適用前に、１００ｍＭグリシン、ｐＨ２．５で洗浄し、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７で平衡化した。ＣＭをロード後、カラムを５カラム容積の２０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７で洗浄し、１００ｍＭグリシン、ｐＨ２．５で溶出した。４３５ｍｌの溶出物をすぐに３ＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．５で中和し、０．２μフィルターに付した。Ａ₂₈₀に基づき、吸光率１．２８、６５ｍｇのタンパク質が０．１５ｍｇ／ｍｌで回収された。濃縮／透析３８５ｍｌのプロテインＧ溶出物を、３０Ｋ膜に適合したＡｍｉｃｏｎ撹拌セル中で、最終濃度１．７の３４ｍ１にまで濃縮した。濃縮物を緩衝液に対して透析した。遊離レセプターを作成するためのファクターＸａ切断および精製６ｍｌ（１０．２ｍｇ）のＴＲ２−Ｆｃを５０μｇのファクターＸａに加え、１：２００のｅ：ｓ比とした。混合物を一晩４℃にてインキュベートした。遊離ＴＲ２レセプターのプロテインＧカラムクロマトグラフィープロテインＧの１ｍｌカラムを、重力流を用い、使い捨てカラム中で、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．５で平衡化した。切断したレセプターをカラムに３回通し、その後、カラムをＡ₂₈₀吸光度が見られなくなるまで、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．５で洗浄した。カラムを２．５ｍｌの１００ｍＭグリシン、ｐＨ２．５で溶出し、８３μｌの３ＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．５で中和した。ＴＲ２は、非結合フラクション中に溶出した。濃縮約１２ｍｌのプロテインＧカラムからの非結合フラクションを、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ１０Ｋセル(Amicon)中で約１ｍｌ、Ａ₂₈₀、吸光率０．７により３．５ｍｇ／ｍｌと評価される最終濃度にまで濃縮した。モノＳカラムクロマトグラフィー濃縮したサンプルを、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６で５ｍｌに希釈し、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６で平衡化した０．５×５ｃｍモノＳカラムに、３００ｃｍ／ｈの線形流速で付した。カラムを２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６で洗浄し、２０カラム容積の、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６〜２０ｍＭリン酸ナトリウム、１Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ６の線形勾配で溶出した。ＴＲ２タンパク質は、非結合フラクション中に溶出した。濃縮／透析モノＳカラムからの３ｍｌの非結合フラクションを、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ１０Ｋセルを用いて上記のように１ｍｌに濃縮し、２０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７に対して透析した。透析後の濃度は、２．１ｍｇ／ｍｌであった。ビオチニル化２．１ｍｇ／ｍｌのＴＲ２の０．５ｍｇを、１００ｍＭホウ酸塩、ｐＨ８．５に対して透析した。２０倍モル過量のＮＨＳ−ＬＣビオチンを添加し、混合物を回転装置上に一晩４℃で放置した。ビオチニル化ＴＲ２を２０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７に対して透析し、滅菌濾過し、−７０ ℃にて保存した。ビオチニル化をストレプトアビジンＨＲＰでプローブしたウェスタンブロット上で示し、続けてＥＣＬ試薬で確立した。実施例６ＴＲ２レセプターの膜結合形態は、リンパ球増殖および分化を誘発するＴＮＦＲである。腫瘍壊死因子（ＴＮＦＲ）／神経成長因子レセプター（ＮＧＦＲ）スーパーファミリーのメンバーは、分子の細胞外部分の約３０〜４０アミノ酸からなるシステインーリッチモチーフの３〜６回繰り返しの存在により特徴付けられる(Malle tt，S．and Barclay，A．N.，Immunol．Today 12:220(1991))。ＴＮＦＲ−Ｉの結晶構造は、システイン−リッチモチーフ（ＴＮＦＲドメイン）が、ジスルフィド結合のねじれラダーにより結合されている残基の３つの伸長した鎖からなっていることを示した(Banner，D．W．et al.，Cell 73:431(1993))。これらのレセプターは、システイン残基の欠失、およびセリン、スレオニンおよびプロリンの高い割合により特徴付けられ、Ｏ−結合した糖でグリコシル化されているらしい、膜貫通ドメインに直接隣接するヒンジ−様領域を含む。これらの分子の細胞質部分は、限定された配列相同性−異なる細胞性シグナルに対する根拠となるであろう知見を示す。現在までのところ、ヒト細胞から同定されているメンバーには、ＣＤ４０(Stamenkovic，I．et al.，EMBO J．8:1403(1989))、４−１ＢＢ(Kwo n，B．S．and Weissman，S．M.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:1963(1989)) 、ＯＸ−４０(Mallett，S．et al.，EMBO J．9:1063(1990))、ＴＮＦＲ−Ｉ(Loe tscher，H．et al.，Cell 61:351(1990);Schall，T．J．et al.，Cell 61:361(1 990))、ＴＮＦＲ−ＩＩ(Smith，C．A．etal.，Science 248:1019(1990))、ＣＤ２７(Van Lier，R．A．et al.，J．Immunol．139:1589(1987))、Ｆａｓ(Itoh，N ．et al.，Cell 66:233(1991))、ＮＧＦＲ(Johnson，D．et al.，Cell 47:545(1 986))、ＣＤ３０(Durkop，H．et al.，Cell 68:421(1992))およびＬＴＢＲ(Bean s，M．et al.，Genomics 16:214(1993))が包含される。ＳＦＶ−Ｔ２(Smith，C．A.，et al.，Science 248:1019(1990))、Ｖａ５３(How ard，S．T．et al.，Virology 180:633(1991))、Ｇ４ＲＧ(Hu，F.-Q．et al.，V irology 204:343(1994))およびｃｒｍＢ(Smith，G．L.，J．Gen．Viol．74:1725 (1993))などの可溶性ＴＮＦＲをコードするウイルス性オープンリーディングフレームもまた同定されている。最近の集中的な研究により、これらの分子が細胞増殖(Banchereau，J．et al. ，Science 251:70(1991);Pollok，K．E．et al.，J．Immunol．150:771(1993);B aum，P．R．et al.，EMBO J．13:3992(1994))、細胞生存(Grass，H．-J．et al. ，Blood 83:2045(1994);Torcia，M．et al.，Cell 85:345-356(1996))および細胞死(Tartaglia，L．A．et al.，Cell 74:845(1993);Gillette-Ferguson，I．an d Sidman，C．L.，Eur．J．Immunol．24:1181(1994);Krammer，P．H．et al.，C urr．Opin．Immunol．6:279(1994))を調節することにより、、免疫調節(Armitag e，R．J.，Curr．Opin．Immunol．6:407(1994);Smith，C．A．et al.，Cell 75: 959(1994))などの種々の生物学的活性に関与することが示されている。それらの生物学的重要性およびこのスーパーファミリーの種々のメンバーのため、本発明者等はスーパーファミリーのさらなるメンバーの存在を予想した。ＥＳＴ−データベースを調べることにより、本発明者等はＴＮＦＲスーパーファミリーの新たなメンバーを同定した。ここで、ＴＲ２と呼ぶ分子の初期解析について報告する。材料および方法ＴＮＦＲスーパーファミリーの新たなメンバーの同定およびクローニング５００以上の異なるｃＤＮＡライブラリーから得られた発現配列タグ(ＥＳＴ) ｃＤＮＡデータベース(Adams，M．D．et al.，Science 252:1651(1991);Adams， M．D．et al.，Nature 355:632(1992))を、ｂｌａｓｔｎおよびｔｂｌａｓｔｎアルゴリズム(Altschul，S．F．et al.，J．Mol．Biol．215:403(1990))を用いて、ＴＮＦＲスーパーファミリのシステインーリッチモチーフとの配列類似性についてスクリーニングした。ヒトＴ細胞系ライブラリーにおいて、アミノ酸レベルでＴＮＦＲ−ＩＩに対して有意な同一性を示す、一つのＥＳＴ（ＨＴＩＳＢ５２−ＡＴＣＣ受託番号９７０５９）を同定した。この配列を用いて、ヒトリンパ球の５’−ＲＡＣＥ−ｒｅａｄｙｃＤＮＡ(Clontech，PT1155-1．Cat．#7301- 1)を用いて、ＲＡＣＥ(rapid amplification of cDNA ends)により、欠損する５’末端をクローニングした。この配列は、４つのさらなるＥＳＴ（ＨＴＯＢＨ４２、ＨＴＯＡＵ６５、ＨＬＨＡ４９およびＨＴＸＢＳ４０）とマッチした。これらのおよび他のｃＤＮＡの完全な配列決定により、これらがＴＮＦＲスーパーファミリーと相同的な同一のオープン・リーディング・フレームを含むことが示され、これらをＴＲ２と名付けた。いくつかの他のＥＳＴおよびｃＤＮＡの解析により、いくつかのｃＤＮＡは、上記で同定したオープン・リーディング・フレーム中に挿入されたさらなる配列を有し、様々な部分的にスプライスされたｍＲＮＡを表すことが示された。細胞研究した骨髄およびＢ−細胞系は、分化経路の異なる段階で細胞タイプを示す。ＫＧ１ａおよびＰＬＢ９８５(Koeffler，H．et al.，Blood 56:265(1980);Tuc ker，K．et al.，Blood 70:372(1987))は、Phillip Koeffler(UCLA School of M edicine)から、ＢＪＡ−Ｂは、Z．Jonak(SmithKline Beecham)から入手し、および骨芽細胞の特徴を示すストロマ細胞系のＴＦ２７４は、健康な男性のドナーの骨髄から作成された(Tan&Jonak、発行されていない）。他のすべての細胞系は、 AmericanType Culture Collection(Rockville，MD)から入手した。単球は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の異なる遠心分離および組織培養皿への付着により調製した。ＣＤ１９⁺、ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺を、免疫磁気ビーズ（Dynal，Lake Suc cess，NY）によりＰＢＭＣから単離した。ヒト冠動脈からの内皮細胞をclonetic s(Clonetics，CA)から購入した。ＲＮＡおよびＤＮＡブロットハイブリダイゼーション成人組織の全ＲＮＡをClontech(Palo Alto，CA)から購入するか、TriReagent( Molecular Research Center，Inc.，Cincinnati，OH)で一次細胞および細胞系から抽出した。５〜７．５μｇの全ＲＮＡを記載されるように(Sambrook et al.， Molecular Cloning，Cold Spring Harbor(1989))、ホルムアミドを含む１％アガロースゲル中で分画し、Ｚｅｔａ−プローブナイロン膜(Biorad，Hercules，CA) に真空−ブロッティングにより、定量的に移した。ブロットを、³²Ｐ−標識したＴＲ２のＸｈｏＩ／ＥｃｏＲＩフラグメントまたはＯＸ−４０プローブでプレハイブリダイズ、ハイブリダイズし、ストリンジェントな条件下で洗浄し、Ｘ−線フィルムに暴露した。高分子量ヒトＤＮＡを種々の制限酵素で消化し、０．８％アガロースゲル中で分画した。ＤＮＡを変性し、中和し、ナイロン膜に移し、³²Ｐ−標識したＴＲ− ２またはその変異体ｃＤＮＡにハイブリダイズした。インサイチューハイブリダイゼーションおよびＦＩＳＨ検出インサイチューハイブリダイゼーションおよびヒト染色体中のＴＲ２位置のＦＩＳＨ検出をすでに記載されているように(Heng，H．H．Q．et al.，Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 89:9509(1992);Heng，H．H．Q．et al.，Human Molecular Ge netics 3:61(1994))行った。ＦＩＳＨシグナルおよびＤＡＰＩバンディングパターンを、写真を撮ることにより別々に記録し、染色体バンドとＦＩＳＨマッピングデータとの割り当てを、ＤＡＰＩバンドされた染色体でＦＩＳＨシグナルを重ね合わせることにより行った(Heng，H．H．Q．and Tsui，L．-C.，Chromosama， 102:325(1993))。組換えＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質の製造細胞外ドメインの全体の推定オープン・リーディング・フレームを含むＴＲ２の５'部分を、ポリメラーゼ鎖反応(Saiki，R．K．et al.，Science 239:487(198 8))により増幅した。正確な方向にクローニングするために、フォワードプライマーの５’末端上にＨｉｎｄＩＩＩ部位、およびリバースプライマーの５’末端上にＢｇｌＩＩ部位を作成した。ヒトＩｇＧ₁のＦｃ部分をＡＲＨ−７７（ＡＴＣＣ）細胞ＲＮＡからＰＣＲ−増幅し、ｐＧｅｍ７ベクター(Promega)のＳｍａＩ部位中にクローニングした。ヒンジ、ＣＨ₂およびＣＨ₃ドメイン配列を含むＦｃフラグメントは、その５’末端にＢｇｌＩＩ部位および３’末端にＸｈｏＩ部位を有する。ＴＲ２ｃＤＮＡのＨｉｎｄＩＩＩ−ＢｇｌＩＩフラグメントを、ヒトＩｇＧ₁Ｆｃの上流に挿入し、フレーム内の融合を配列決定により確認した。ＴＲ２ −ＦｃフラグメントをプラスミドをＨｉｎｄＩＩＩ−ＸｈｏＩで消化することにより放出させ、ｐｃＤＮＡ３発現プラスミド中にクローニングした。ＰｖｕＩで線状化したＴＲ２−Ｆｃプラスミドをリン酸カルシウム共沈法により、ＮＩＨ３Ｔ３中に移した。４００μｇ／ｍｌのＧ４１８中での選択後、ネオマイシン−耐性コロニーを取り上げ、広げた。抗−ヒトＩｇＧ₁を用いるＥＬＩＳＡおよび³²Ｐ−標識したＴＲ２プローブを用いるノザン解析を、上澄において高いレベルのＴＲ２−Ｆｃを産生するクローンを選択するのに用いた。いくつかの実験において、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中に産生されるわずかに異なって操作されたＴＲ２−Ｆｃを用いた。ＴＲ２−ＦｃをプロテインＧクロマトグラフィーにより精製し、ＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質のＮ−末端のアミノ酸配列を、自動ペプチド配列決定機（ＡＢＩ）により決定した。ＴＲ２−Ｆｃを用い、ポリクローナルウサギ抗−ＴＲ２抗体を産生した。ＭＬＡ−媒介ＰＢＭＣ増殖の遮断ＰＢＭＣを、３人の健康な成人ボランティアから、４００×ｇ、３０分間のＦｉｃｏｌｌ勾配遠心により単離した。ＰＢＭＣを回収し、１０％ＦＢＳ、３００ μｇ／ｍｌＬ−グルタミンおよび５０μｇ／ｍｌゲネトマイシンを含むＲＰＭ１１６４０（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）中で洗浄し、２つのドナーについては、１× １０⁶細胞／ｍｌに、３番目のドナーについては２×１０⁵細胞／ｍｌに調整した。５０μｌの各細胞懸濁液を、５０μｌのＴＲ２−Ｆｃ、ＩＬ−５Ｒ−Ｆｃ、抗 −ＣＤ４ｍＡｂまたは対照ｍＡｂとともに、９６ウェル(丸底)プレート(Falcon ，Franklin Lakes，NS)に加えた。プレートを３７℃にて５％ＣＯ₂中、９６時間インキュベートした。ついで、１μＣｉの[³Ｈ]−メチルチミジン(ICN Biomedic als，Costa Mesa，CA)をさらに１６時間添加した。細胞を回収し、放射活性を計測した。結果および考察ＴＲ２はＴＮＦＲスーパーファミリーの新たなメンバーである。図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）は、単離されたｃＤＮＡの１つ（ＨＬＨＡＢ４９）のもっとも長いオープン・リーディング・フレームから推定されたＴＲ２のアミノ酸配列を示す。データベースにおける他の配列決定されたｃＤＮＡおよびＥＳＴとの比較は、図１Ａ−１Ｂに示すタンパク質配列の位置１７（ＡｒｇまたはＬｙｓのいずれか）および４１（ＳｅｒまたはＰｈｅのいずれか）(配列番号２におけるアミノ酸残基−２０および５)にてアミノ酸変化を起こす、潜在的な対立遺伝子変異体を示した。オープン・リーディング・フレームは、分子量が３０，４１７と計算される、２８３アミノ酸をコードする。ＴＲ２タンパク質は、レセプターであると予想された。それゆえ、潜在的なシグナル配列および膜貫通ドメインを調べた。Ｃ末端側への２３アミノ酸の疎水性伸長（アミノ酸２０１〜２２５）(図１Ａ−１Ｂ)は、これが潜在的に単一のヘリカルスパンを作成するため、膜貫通ドメインであるとされたが、しかし、シグナル配列は明確ではなかった。潜在的な外のドメインＴＲ２をＦｃ−融合タンパク質としてＮＩＨ３Ｔ３およびＣＨＯ細胞中に発現させ、組換えＴＲ２−Ｆｃタンパク質のＮ−末端アミノ酸配列を、両方の場合で決定した。プロセスされた成熟ＴＲ２のＮ−末端配列は、アミノ酸３７で開始し、これは、はじめの３６アミノ酸がシグナル配列を形成することを示す(図１Ａ− １Ｂ)。ＴＲ２に対して作成されたポリクローナルウサギ抗体を用いて、天然のＴＲ２の分子サイズを、ウェスタン解析により３８ｋＤであると決定した。プロセスされたＴＲ２のタンパク質骨格は分子量２６，０００の２４７アミノ酸から構成されるので、このタンパク質は翻訳後修飾されなければならない。２つの潜在的なアスパラギン−結合グリコシル化部位が、アミノ酸位置１１０および１７３（図１Ａ−１Ｂ）に位置する。ＴＮＦＲファミリーの他のメンバーと同様に、ＴＲ２は、Ｘ−線結晶学(Banner，et al.，Cell 73:431(1993))により示される特徴的なシステイン−リッチモチーフを含み、繰り返し構造単位を示す(Banner，D．W ．et al.，Cell 73:431(1993))。図１６は、ＴＲ２(配列番号２)、ＴＮＦＲ−Ｉ (配列番号１０)、ＴＮＦＲ−ＩＩ(配列番号１１)、ＣＤ４０（配列番号１２）および４−１ＢＢ（配列番号１３）と整列した潜在的なＴＮＦＲドメインを示す。ＴＲ２は、２つの完全なＴＮＦＲドメインおよび２つの不完全なものを含んだ。ＴＲ２細胞質テイル（ＴＲ２ｃｙ）は、ＣＤ４０ｃｙおよび４−１Ｂｂｃｙのものとより密接に関連しているようであり、ＦａｓおよびＴＮＦＲ−Ｉ細胞内ドメインに見られる細胞死誘導領域を含まない。相同性は、中程度であるが、ＴＲ２のＴｈｒ²⁶⁶は、４−1ＢＢのＴｈｒ²³³およびＣＤ４０のＴｈｒ²⁵⁴と整列する。このことは、Inuiら（Inui，S et al.，Eur．J．Immunol．20:1747(1990)）が、Ｔｈｒ²⁵⁴がＣＤ４０シグナルトランスダクションに必須であり、ＣＤ４０のＴＨＲ²⁵⁴が変異すると、ＣＤ４０ｂｄはＣＤ４０ｃｙに結合しない(Hu，H．M． et al.，J．Biol．Chem．269:30069(1994))ことが見出されているため、重要である可能性がある。４−１ＢＢおよびＣＤ４０を介するシグナルは、それぞれＴ細胞およびＢ細胞をともに刺激することが見出されている(Banchereau，J and R ousset，F.，Nature 353:678(1991);Hurtaldo，J．et al.，J．Immunol．155:33 60(1995))。表２組織および細胞におけるＴＲ２およびＯＸ４０の遺伝子発現ＴＲ２ＲＮＡ発現ヒト組織ＲＮＡブロットを用いて、ＴＲ２ＲＮＡ発現の組織分布を調べた。ＴＲ２ＲＮＡを、いくつかの組織で検出し、肺、脾臓および胸腺では比較的高いレベル（表２）であったが、脳、肝臓または骨格筋ではこの方法では検出されなかった(表２)。ＴＲ−２はまた、単球、ＣＤ１９⁺Ｂ細胞、および休止またはＰＭＡ＋ＰＨＡ−処理ＣＤ４⁺またはＣＤ８⁺Ｔ細胞においても発現された。これは、骨髄および内皮細胞においては弱く発現されるのみであったが(表２および３)、発現は、造血細胞系ＫＧ１ａ（表２）においても観察された。比較のため、他のＴＮＦＦスーパーファミリーのメンバーであるＯＸ−４０の組織分布を調べた(表２)。ＴＲ２とは異なり、ＯＸ−４０は、試験したいずれの組織においても検出されず、活性化されたＴ−細胞およびＫＧ１ａにおいてのみ検出された。ＴＦ２７４(骨髄ストロマ)、ＭＧ６３およびＴＥ８５(骨肉腫)、ＲＬ９５−２( 子宮内膜肉腫)、ＭＣＦ−７およびＴ−４７Ｄ(胸癌細胞)、ＢＥ、ＨＴ２９(結腸癌細胞)、ＨＴＢ−１１およびＩＭＲ−３２（神経芽腫）を含め、いくつかの細胞系ではＴＲ２発現が見られなかったが、ＴＲ２は、横紋筋肉腫ＨＴＢ−８２において見られた(データは示さない)。いくつかの細胞系を、誘導性ＴＲ２発現について調べた。骨髄単球系統に属するＨＬ６０、Ｕ９３７およびＴＨＰ１はすべて、異なる薬剤ＰＭＡまたはＤＭＳＯに応答してＴＲ２発現を増加した。これらの薬剤に応答した発現の増加は、ＫＧ１ａおよびＪｕｒｋａｔ細胞において観察された。対照的に、ＰＭＡは、ＭＧ６３においてＴＲ２発現を誘発しなかったが、予期せぬことに、ＴＮＦ−αは誘発した。ほとんどすべての場合において、優勢なｍＲＮＡは約１．７ｋｂの大きさであるが、いくつかのより大きな分子量種がいくつかの組織中で検出できた。配列決定された多くのｃＤＮＡおよびＥＳＴは部分的なスプライシングを示唆するコーディング領域中の挿入を含むが、ウェスタンブロットでは１つの大きなタンパク質のみが検出され、このことは、これらが異なるタンパク質をコードする場合、我々が調べた細胞中にはこれらが明らかでないことを示唆した。より大きな分子量のｍＲＮＡが多いことは、ＴＲ２がｍＲＮＡ変異のレベルで部分的に調節されている可能性を示唆する。表３種々の組織および細胞種におけるＴＲ２ＲＮＡの相対数（ＲＡ）１Ｐ３６．２−Ｐ３６．３のＴＲ２マップＦＩＳＨマッピング方法を適用して、ＴＲ２遺伝子を特定のヒト染色体領域に局在させた。染色体１のショートアームへのハイブリダイゼーションシグナルの整列が、ＤＡＰＩバンディングの助けにより得られた。全部で１０のメタティックな形状(metatic figure)を写真に撮り、これは、ＴＲ２遺伝子が、染色体１のｐ３６．２〜ｐ３６．３の領域上に位置することを示した。ＴＲ２位置は、ＣＤ３０(Smith，C．A．et al.，Cell 73:1349-1360(1993)、４−１ＢＢ(Kwon，B．S ．et al.，J．Immunol．152:2256-2262(1994);Goodwin，R．G．et al.，Eur． J．Immunol．23:2631-2641(1993))、ＯＸ−４０(Birkeland，M．L．et al.，Eur ．J．Immunol．25:926-930(1995))、およびＴＮＦＲ−ＩＩ(Baker，E．et al.， Cytogenet．& Cell Genet．57:117-118(1991))と極めて近接しており、局在化遺伝子複製を通して発達したことが示唆される。興味深いことに、アポトーシスを刺激するＦａｓおよびＴＮＦＲ−１と対照的に、これらのすべてのレセプターは、同種のリガンド結合に応答してＴ細胞において刺激性の表現型を有している。このため、ＴＲ２がリンパ球刺激に関与するかどうかを調べることとした。ＴＲ２−Ｆｃは、ＰＢＭＣのＭＬＲ−媒介増殖と調和する。リンパ球増殖におけるそのリガンドとの細胞表面ＴＲ２の可能な関与を調べるために、同種のＭＬＲ増殖性応答を調べた。ＴＲ２−Ｆｃを培養物に添加すると、最大応答の有意な減少が観察された(ｐ＜０．０５)。１００μｇ／ｍｌでのＴＲ２−Ｆｃの添加は、増殖を５３％まで阻害した。対照のＩＬ−５Ｒ−Ｆｃでは、有意な増殖の阻害は観察されなかった。驚くべきことに、高濃度（１０〜１００μｇ／ｍｌ）のＩＬ−５Ｒ−Ｆｃは増殖を増強することが示された。アッセイした抗−ＣＤ４ｍＡｂは、ＭＬＲ−媒介増殖を同時に６０％まで阻害したが、対照の抗−ＩＬ−５ｍＡｂは、増殖を阻害しなかった。ＭＬＲ増殖応答の主な成分はＴ−細胞依存性であることは周知である；それゆえ、ＴＲ２のそのリガンドとの相互作用の阻害は、至適Ｔリンパ球活性化および増殖を妨げることは明らかである。１〜１００μｇ／ｍｌの濃度でのＴＲ２−ＦｃによるＭＬＲ増殖の阻害は、ＣＤ４０−Ｆｃなどの他のＴＮＦＲ−Ｆｃスーパーファミリーメンバーで見られる生物学的作用に比べて優れている(発行されていない結果、Jeremy Harrop) 。それゆえ、本発明者等は、Ｔ細胞刺激において直接役割を担うか、または、ＴＲ２を含んでもよい、１またはそれ以上のレセプターを介してＴ細胞増殖を刺激できるリガンドに結合する、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーのさらなるメンバーを同定した。ＴＲ２に対する直接の役割は、ＣＤ４０および４−１ＢＢとの細胞質ドメインの類似性と一致する。本発明者等は現在、その役割を明らかにするために、ＴＲ２が結合するこのリガンドの同定を試みている。本発明がこれまでの記載および実施例において特に記載したものと別の方法で実行できることは明らかであろう。本発明の多くの修飾および変形は、上記の技術に基づいて可能であり、それゆえ、添付する請求の範囲の範囲内である。本明細書で引用した、すべての刊行物（特許、特許出願、ジャーナル記事、実験室マニュアル、本、または他の文書を含む）は、出典明示により本明細書に含める。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (72)発明者ニ，ジャンアメリカ合衆国20853メリーランド州ロックビル、マナーフィールド・ロード5502 番 (72)発明者ローゼン，クレイグ・エイアメリカ合衆国20882メリーランド州レイトンズビル、ローリング・ヒル・ロード 22400番 (72)発明者ジェンツ，ライナー・エルアメリカ合衆国20904メリーランド州シルバー・スプリング、フェアランド・パーク・ドライブ13404番 (72)発明者リン，サリー・ドリーン・パトリシアアメリカ合衆国19380ペンシルベニア州ウエスト・チェスター、ハンプトン・コート 134―ビー番 (72)発明者ハール，マーク・ロバートアメリカ合衆国19403ペンシルベニア州ノリスタウン、ストーニーブルック・ドライブ105番

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）配列番号２の約−３６〜約２４７の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号２の約−３５〜約２４７の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２レセプターポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｃ）配列番号２の約１〜約２４７の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２レセプターポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５９中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ２レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５９中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＴＲ２細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｇ）ＴＲ２膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｈ）ＴＲ２細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｉ）配列番号５の約−３６〜約１４９の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２− ＳＶ１レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｊ）配列番号５の約−３５〜約１４９の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２− ＳＶ１レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｋ）配列番号５の約１〜約１４９の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｌ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５８中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｍ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５８中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｎ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ２レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｏ）配列番号８の約２〜約１３６の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ２レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｐ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５７中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ２レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｑ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）または（ｐ）のポリヌクレオチドのいずれかに相補的なヌクレオチド配列からなる群より選択される配列に対して少なくとも９５％同一性のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。２．ポリヌクレオチドが配列番号１、配列番号４または配列番号７のヌクレオチド配列を有する、請求項１記載の核酸分子。３．ポリヌクレオチドが、配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする配列番号１のヌクレオチド配列、配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする配列番号４のヌクレオチド配列、または、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする配列番号７のヌクレオチド配列を有する、請求項１記載の核酸分子。４．ポリヌクレオチドが、配列番号２のアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２レセプターをコードする配列番号１のヌクレオチド配列、または、配列番号５のアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードする配列番号４のヌクレオチド配列を有する、請求項１記載の核酸分子。５．ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８または９７０５７のいずれか１つに含まれるｃＤＮＡクローンの完全なヌクレオチド配列を有する、請求項１記載の核酸分子。６．ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８または９７０５７のいずれか１つに含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ２レセプターをコードするヌクレオチド配列を有する、請求項１記載の核酸分子。７．ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号９７０５９または９７０５８のいずれかに含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２レセプターをコードするヌクレオチド配列を有する、請求項１記載の核酸分子。８．請求項１記載の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）または（ｑ）のヌクレオチドと同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドに、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって、ハイブリダイズするポリヌクレオチドが、Ａ残基またはＴ残基のみからなるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズしない、ポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。９．請求項１記載の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）または（ｑ）のアミノ酸配列を有するＴＲ２レセプターのエピトープ−坦持部分のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子。１０．配列番号２の約３〜約３４のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２の約７０〜約８４のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２の約１０６〜約１５３のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２の約２４０〜約２４７のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号５の約３〜約３４のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号５の約６３〜約１００のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号５の約１３５〜約１４９のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号８の約５６〜約６８のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号８の約９３〜約１３６のアミノ酸残基を含むポリペプチドからなる群より選択されるＴＲ２レセプターのエピトープ−坦持部分をコードする、請求項９記載の単離された核酸分子。１１．ＴＲ２レセプター細胞外ドメインをコードする請求項１記載の単離された核酸分子。１２．ＴＲ２レセプター膜貫通ドメインをコードする請求項１記載の単離された核酸分子。１３．ＴＲ２レセプター細胞内ドメインをコードする請求項１記載の単離された核酸分子。１４．請求項１記載の単離された核酸分子をペクター中に挿入することを含む、組換えベクターの作成方法。１５．請求項１４の方法により製造された組換えベクター。１６．請求項１５記載の組換えベクターを宿主細胞中に導入することを含む、組換え宿主細胞の作成方法。１７．請求項１６記載の方法により製造された組換え宿主細胞。１８．請求項１７記載の組換え宿主細胞をポリペプチドが発現される条件下で培養し、該ポリペプチドを回収することを含む、ＴＲ２ポリペプチドを製造するための組換え方法。１９．ヌクレオチド３１４がグアニンまたはアデニンのいずれかであり、ヌクレオチド３８６がチミンまたはシトシンのいずれかであり、ヌクレオチド６２７がチミンまたはシトシンのいずれかである、配列番号１のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。２０．アミノ酸番号−２０がリジンまたはアルギニンのいずれかであり、アミノ酸番号５がセリンまたはフェニルアラニンのいずれかである、配列番号２のアミノ酸配列を有するＴＲ２レセプターをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。２１．（ａ）配列番号２の約−３６〜約２４７の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｂ）配列番号２の約−３５〜約２４７の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）配列番号２の約１〜約２４７の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５９中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ２ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５９中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｆ）ＴＲ２レセプター細胞外ドメインのアミノ酸配列；（ｇ）ＴＲ２レセプター膜貫通ドメインのアミノ酸配列；（ｈ）ＴＲ２レセプター細胞内ドメインのアミノ酸配列；（ｉ）配列番号５の約−３６〜約１４９の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２− ＳＶ１レセプターをコードするアミノ酸配列；（ｊ）配列番号５の約−３５〜約１４９の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２− ＳＶ１レセプターをコードするアミノ酸配列；（ｋ）配列番号５の約１〜約１４９の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードするアミノ酸配列；（ｌ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５８中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全なアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードするアミノ酸配列；（ｍ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５８中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２−ＳＶ１レセプターをコードするアミノ酸配列；（ｎ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ２レセプターをコードするアミノ酸配列；（ｏ）配列番号８の約２〜約１３６の位置のアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ２レセプターをコードするアミノ酸配列；（ｐ）ＡＴＣＣ受託番号９７０５７中に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ２−ＳＶ２レセプターをコードするアミノ酸配列；（ｑ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）または（ｐ）のポリペプチドのいずれか１つのエピトープ−坦持部分のアミノ酸配列からなる群より選択される配列に対して少なくとも９５％同一性のアミノ酸配列を有する単離されたＴＲ２ポリペプチド。２２．配列番号２の約３〜約３４のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２の約７０〜約８４のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２の約１０６〜約１５３のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２の約２４０〜約２４７のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号５の約３〜約３４のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号５の約６３〜約１００のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号５の約１３５〜約１４９のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号８の約５６〜約６８のアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号８の約９３〜約１３６のアミノ酸残基を含むポリペプチドからなる群より選択される、ＴＲ２レセプタータンパク質のエピトープ−坦持部分を含む単離されたポリペプチド。２３．請求項２１記載のＴＲ２レセプターポリペプチドに特異的に結合する単離された抗体。２４．単純ヘルペスウイルス感染症の治療方法であって、有効量のＴＲ２ポリペプチドの可溶性フラグメントを、医薬上許容される担体との混合物として、治療すべき個体に導入することを含む方法。２５．異常な細胞生存に関連する病状の治療方法であって、有効量のＴＲ２タンパク質、またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを、医薬上許容される担体との混合物として、治療すべき個体に導入することを含む方法。２６．ＴＲ２活性のアゴニストおよびアンタゴニストをスクリーニングする方法であって：（ａ）ＴＲ２ポリペプチドを発現する細胞を候補化合物と接触させ、（ｂ）細胞性応答をアッセイし、（ｃ）候補化合物の非存在下で作られる標準の細胞性応答と、該細胞性応答を比較し；それにより標準よりも増加した細胞性応答は、化合物がアゴニストであることを示し、標準よりも減少した細胞性応答は、化合物がアンタゴニストであることを示す、方法。