JP2001072607A - 新規血管内皮機能改善法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】高血圧、動脈硬化等の病態の成因は複雑であ
り、患者の病態や合併症に合わせて治療法が選択できる
よう、新しい作用メカニズムに基づく治療薬、予防薬の
開発が望まれている。 【解決手段】血管内皮機能の低下を伴う高血圧や動脈硬
化等の疾患を発症した動物モデルに対して、クロソ遺伝
子ｃＤＮＡを組み込んだ組換えベクターを投与すること
により、それらの疾患モデル動物の血管内皮機能、高血
圧、動脈硬化等を改善することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は血管内皮機能劣化に
よる病態を改善または、その状態に陥ることを予防する
ための方法、医薬組成物、およびそれらに用いる組換え
ベクターに関するものである。より詳細には、クロソ遺
伝子に代表される血管内皮機能改善のための遺伝子ＤＮ
Ａを含む発現ベクターを該病態を持つまたは該病態に陥
る可能性のある哺乳動物に投与し、該病態を改善（治
療）、またはその状態に陥ることを予防する方法、該方
法に用いる医薬組成物およびそれらに用いる組換えベク
ターに関する。

【０００２】

【従来の技術】クロソ遺伝子は、寿命の短縮、各種臓器
の石灰化、動脈硬化、生殖臓器の萎縮など、顕著かつ多
彩な早期老化症状を呈するトランスジェニックマウス
(クロソマウス)の外来遺伝子挿入部に存在し、その発現
が低下するとマウスに前記老化症状を引き起こす原因遺
伝子として同定された遺伝子である。クロソマウスは生
後３週目までは野生型のマウスと同様に生育するが、そ
の後は成長が止まり様々な老化の兆候を示す。６週齢に
なると、クロソマウスの活動性は野生型の５０％程度に
低下し、パーキンソン病様の歩行がみられる。性腺は萎
縮しており不妊である。骨粗鬆症が顕著となるほか、大
動脈弁、気管支、脳の脈絡叢に異所性の石灰化が生じ
る。動脈系では、血管内膜の肥厚や中膜の石灰化といっ
た加齢に特徴的なメンケベルグ型の動脈硬化所見を示
す。その他皮膚の萎縮や、肺気腫も観察されるようにな
る〔ＷＯ９８／２９５４４、Nature, 390, 45 (199
7)〕。クロソ遺伝子のcDNAの解析から、クロソ遺伝子は
スプライシングの違いにより2種類のmRNAが転写され、
該mRNAより2種類の蛋白が翻訳される（以下、これら蛋
白を含め、クロソ遺伝子にコードされる蛋白をクロソ蛋
白と呼ぶ）。

【０００３】上記2種類のmRNAにコードされるクロソ蛋
白の内、一方の蛋白はN末端のシグナル配列領域、細胞
外ドメイン領域およびC末端の膜貫通ドメイン領域を有
する構造を持つ1型膜蛋白（以下、膜結合型クロソ蛋白
と呼ぶ）であり、細胞外ドメインは細菌あるいは植物の
β−グルコシダーゼに相同性を持つ２つのドメイン（KL
1、KL2）より構成されている。これに対して、もう一方
の蛋白は、Ｎ末端のシグナル配列領域とKL1ドメイン領
域を有する分泌蛋白（以下、分泌型クロソ蛋白と呼ぶ）
であることが明らかにされた〔Biochem. Biophys. Res.
Commun., 242, 626 (1998)〕。

【０００４】クロソ遺伝子変異が様々な老化症状を引き
起こす機作や、クロソ蛋白の分子機能はまだ明らかにさ
れていない。クロソ遺伝子の発現は腎臓で高いが、激し
い老化症状は、肺、骨、胃壁、皮膚等を含む全身臓器に
及んでいる。このことから、その分子機能には何らかの
分泌性の因子が存在し、作用を発揮していることが推定
されている〔Nature, 390, 45 (1997)〕。

【０００５】クロソマウスとクロソ遺伝子発現トランス
ジェニックマウスとの交配実験および、膜結合型クロソ
遺伝子のcDNAを組み込んだアデノウイルスベクターを用
いてクロソマウス体内でクロソ蛋白を発現させる実験等
により、クロソマウスの老化症状発症の予防が達成され
たことから、クロソ蛋白の機能不全に由来する疾患の治
療は、何らかの手段を用いてクロソ遺伝子を増強するこ
とにより達成されることが示唆されている〔Nature, 39
0, 45 (1997)、WO98/29544〕。血管内皮細胞は、内皮依
存性血管弛緩因子や内皮依存性血管収縮因子を放出して
血管緊張を調節しているばかりでなく、血管内膜の透過
性や血小板凝集にも深く関与しており、血栓性動静脈疾
患の発症進展に重要な役割を演じている。血管内皮依存
性血管弛緩因子としては、一酸化窒素(NO)、プロスタグ
ランジンＩ₂、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド、アドレノ
メジュリン、血管内皮由来過分極因子などが挙げられ
る。一方、内皮依存性血管収縮因子としては、トロンボ
キサンＡ₂、アンジオテンシンII、エンドセリン、プロ
スタグランジンＨ₂等が知られている。

【０００６】ＮＯは、ウサギ動脈の摘出標本にアセチル
コリンを作用させると、内皮細胞を保持した標本での
み、特異的に弛緩反応が生じること〔Nature, 288:373
(1980)〕より血管内皮由来血管弛緩因子（ＥＤＲＦ）の
一つとして同定された。ＮＯは血管内皮に存在するＮＯ
合成酵素（ＮＯＳ）がＬ−アルギニンを酸化して遊離さ
れる。ＮＯは隣接する血管平滑筋細胞に達し、そのグア
ニル酸シクラーゼを活性化し、ｃＧＭＰを増加させ血管
弛緩に至る。ＮＯＳには、神経型ＮＯＳ（ｎＮＯＳ）、
内皮型ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）、および誘導型ＮＯＳ（ｉＮ
ＯＳ）の三種類のアイソフォームの存在が明らかにされ
ている。このうち、内皮型ＮＯＳの欠損マウスでは、内
皮依存性の血管拡張反応が欠如し、血圧も健常マウスよ
り２０ｍｍＨｇ高くなることから、血流や血圧の調節に
必須のＮＯ依存性の血管収縮調節機構が存在することが
示された〔Nature, 377, 239 (1995)〕。

【０００７】このように、血管内皮機能と内皮細胞の産
生するＮＯ量との間には密接な関係があり、ＮＯの産生
能を測定することは臨床上重要な問題である。しかしＮ
Ｏは微量しか存在しないうえに不安定であるので、ＮＯ
を直接測定しようという試みは臨床分野に応用されてい
ない。その結果、ＮＯの動態は一般的に血管内皮の機能
を測定することにより推定されている。血管内皮の機能
は一般的に内皮依存性の血管拡張反応を調べることによ
り行われている〔医学のあゆみ 189, 517 (1999)〕。こ
れは動脈にアセチルコリンのような内皮依存性血管拡張
薬を投与して、その際の血管拡張の程度により内皮のＮ
Ｏ分泌能を評価する方法である。クロソマウスにおい
て、血管内皮機能をアセチルコリンに対する血管内皮依
存性弛緩反応を指標に測定してみると、クロソ遺伝子の
発現が高い正常マウスに比べ、クロソマウスの動脈では
最大血管拡張反応が低下している。また、正常マウスに
比べクロソ遺伝子の発現が約半分に低下しているクロソ
ヘテロマウスでは、最大血管拡張反応がクロソマウス程
ではないが低下していることから、クロソ遺伝子の発現
量と血管内皮の機能との間には相関があることが示唆さ
れている。クロソマウスにおける血管機能障害には、血
管内皮細胞におけるNO産生障害が関わっていることが示
されている〔BBRC, 248, 324 (1998)〕。実際に、正常
マウスとクロソヘテロマウス個体を外科的手術により結
合させ、両者の間で体液の交換が行われるようにする
と、クロソヘテロマウスの血管内皮の機能が正常マウス
と同じ程度にまで回復する〔BBRC, 248, 324 (1998)〕
ことから、クロソ蛋白を増強すると血管内皮機能を改善
できることが期待される。しかし、血管内皮機能の低下
した疾患、例えば動脈硬化や高血圧等の疾患において外
部よりクロソ遺伝子、またはクロソ蛋白を投与してこの
ような疾患の治療あるいは予防を行ったとの報告はな
い。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】高血圧、動脈硬化等の
病態の成因は複雑であり、患者の病態や合併症に合わせ
て治療法が選択できるよう、新しい作用メカニズムに基
づく治療薬、予防薬の開発が望まれている。

【０００９】

【課題を解決するための手段】血管内皮機能の低下を伴
う高血圧や動脈硬化等の疾患を発症した動物モデルに対
して、クロソ遺伝子ｃＤＮＡを組み込んだ組換えベクタ
ーを投与することにより、それらの疾患モデル動物の血
管内皮機能、高血圧、動脈硬化の病態を改善することが
できることを見出し本発明を完成するに至った。

【００１０】本願発明は下記（１）〜（１０）に関す
る。 （１）クロソ遺伝子ｃＤＮＡを組み込んだ組換えベクタ
ーの有効量を含んでなる、哺乳動物の血管内皮機能劣化
による病態を改善または予防するための医薬組成物。 （２）クロソ遺伝子ｃＤＮＡがＷＯ９８／２９５４４に
記載の老化抑制遺伝子ｃＤＮＡである、１項記載の医薬
組成物。 （３）クロソ遺伝子ｃＤＮＡが配列番号１、２、３、４
および５で表される塩基配列から選ばれる塩基配列を有
するＤＮＡ、または該ＤＮＡとストリンジェントな条件
下でハイブリダイズするＤＮＡである１記載の医薬組成
物。 （４）血管内皮機能劣化による病態が、高血圧、動脈硬
化、高コレステロール血症、糖尿病、心筋梗塞および脳
梗塞からなる群から選ばれる疾患である１項記載の医薬
組成物。 （５）組換えベクターが、クロソ遺伝子ｃＤＮＡをプラ
スミドベクターおよびウイルスベクターから選ばれるベ
クターに組み込んだものである１項記載の医薬組成物。 （６）ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、
アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター
およびヘルペスウイルスベクターから選ばれる１項記載
の医薬組成物。 （７）クロソ遺伝子ｃＤＮＡをウイルスベクターに組み
込んだクロソ遺伝子組換えベクター。 （８）ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、
アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター
およびヘルペスウイルスベクターから選ばれる７項記載
のクロソ遺伝子組換えベクター。 （９）１〜６項のいずれかに記載の医薬組成物を、血管
内皮機能劣化による病態を持つ哺乳動物または該病態に
陥る可能性のある哺乳動物に、その有効量を投与するこ
とにより、該病態の治療または予防を行う方法。 （１０）血管内皮機能劣化による病態が、高血圧、動脈
硬化、高コレステロール血症、糖尿病、心筋梗塞および
脳梗塞からなる群から選ばれる疾患である９項記載の方
法。

【００１１】

【発明の実施の形態】本発明によれば、クロソ遺伝子ｃ
ＤＮＡを組み込んだ組換えベクターの有効量を含んでな
る、哺乳動物の血管内皮機能劣化による病態、例えば高
血圧、動脈硬化を改善または予防するための医薬組成物
を、血管内皮機能劣化による病態を持つ哺乳動物または
該病態に陥る可能性のある哺乳動物に投与することによ
り、該病態の治療または予防を行うことができる。

【００１２】組換えベクターは、クロソ遺伝子ｃＤＮＡ
をベクターに組み込むことにより得ることができる。組
換えベクター作製に用いるベクターとしては、プラスミ
ドベクターまたはウイルスのベクター（ウイルスベクタ
ー）を用いることができるが、クロソ遺伝子ｃＤＮＡを
哺乳動物に導入し効率良く発現させるために、ウイルス
ベクターを用いるのが好ましい。ウイルスベクターとし
ては、アデノウイルス科、レトロウイルス科、パルボウ
イルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、
パポーバウイルス科、ヘパドナウイルス科、トガウイル
ス科、フラビウイルス科、コロナウイルス科、ラブドウ
イルス科、パラミクソウイルス科、オルソミクソウイル
ス科、バンヤウイルス科、アレナウイルス科およびレオ
ウイルス科よりなる群のいずれかの科に属するウイルス
およびこれらのウイルスより由来するベクター、アデノ
ウイルスドデカヘドロンベクター〔Fender et al., Nat
ure Biotech. 15: 52 (1997)〕のようなウイルスタンパ
ク質から由来するベクター、ウイルスタンパク質をリポ
ソームに組み合わせたベクター（例えば、センダイウイ
ルスとリポソームベクター等）等が包含されるが、ヒト
アデノウイルスが好ましく用いられる。

【００１３】例えばアデノウイルスをベクターとして用
い、該病態を持つ患者の病態を改善する方法の具体例を
以下に示す。 (i) クロソ遺伝子ｃＤＮＡを含む組換えコスミドの構築 組換えコスミドはプロモーター、クロソ遺伝子ｃＤＮ
Ａ、およびポリＡ付加シグナルを含み、さらにＥ１Ａ、
Ｅ１Ｂ及びＥ３を欠失した5型アデノウイルスゲノムＤ
ＮＡを含むことが好ましい。

【００１４】クロソ遺伝子ｃＤＮＡを導入するためのコ
スミドとしてpAxCAwt〔Nucl. AcidsRes., 23, 3816 (19
95)〕等があげられる。クロソ遺伝子ｃＤＮＡとしては
ＷＯ９８／２９５４４に記載されたＤＮＡであれば何れ
も用いることができるが、これらに限定されるものでは
ない。具体的配列としては、配列番号１、２、３、４お
よび５で表される塩基配列から選ばれる塩基配列を有す
るＤＮＡ、または該ＤＮＡとストリンジェントな条件下
でハイブリダイズするＤＮＡ等があげられる。

【００１５】ここで、ストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズ可能なＤＮＡとは、配列番号１〜５のいずれ
かで表される塩基配列を有するＤＮＡをプローブとし
て、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・
ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイ
ブリダイゼーション法等を用いることにより得られるＤ
ＮＡを意味し、具体的には、コロニーあるいはプラーク
由来のＤＮＡを固定化したフィルターを用いて、０．７
〜１．０Ｍの塩化ナトリウム存在下、６５℃でハイブリ
ダイゼーションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ
溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶液の組成は、１５０ｍＭ塩化
ナトリウム、１５ｍＭクエン酸ナトリウムよりなる）を
用い、６５℃条件下でフィルターを洗浄することにより
同定できるＤＮＡをあげることができる。ハイブリダイ
ゼーションは、モレキュラー・クローニング第２版、カ
レント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオ
ロジー、DNA Cloning 1: Core Techniques, A Practica
l Approach, Second Edition, Oxford University (199
5)等に記載されている方法に準じて行うことができる。
ハイブリダイズ可能なＤＮＡとして具体的には、ＦＡＳ
Ｔを用いて計算したときに、配列番号１、２、３、４お
よび５で表される塩基配列と少なくとも６０％以上の相
同性を有するＤＮＡ、好ましくは８０％以上の相同性を
有するＤＮＡ、さらに好ましくは９５％以上の相同性を
有するＤＮＡをあげることができる。

【００１６】なお、ファージ、プラスミド、ＤＮＡ、各
種酵素、大腸菌、培養細胞などを取り扱う諸操作は、特
に断らない限り、Molecular Cloning, A Laboratory Ma
nual, T. Maniatisら編、第２版(１９８９)、Cold Spri
ng Harbor Laboratory（以下、モレキュラークロニング
第２版と略す）に記載の方法に準じて行った。常法によ
り、コスミドを適当な制限酵素、たとえばＳｗａＩ等で
切断し、クロソ遺伝子ｃＤＮＡを接続することにより組
換えコスミドを作製する。 (ii)クロソ遺伝子ｃＤＮＡを含む組換えアデノウイルス
の作製 組換えアデノウイルスの作製は、例えば三宅らの方法
〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 1320 (1996)〕で
作製することができる。

【００１７】具体的には(i)で作成したクロソ遺伝子ｃ
ＤＮＡを含む組換えコスミドと例えばＥｃｏＴ２２Ｉに
より切断されたＥ３、Ｅ１Ａ、Ｅ１Ｂを欠損した５型ア
デノウイルスAd5dIXＤＮＡ〔J. Virology, 54, 711 (19
85)〕とを混合し、例えばリン酸カルシウム法やリポフ
ェクション法〔特開平2-227075、実験医学別冊新遺伝子
工学ハンドブック 羊土社（１９９９６）〕を用いてＥ
１Ａ、Ｅ１Ｂ遺伝子を含む細胞株、例えばヒト胎児由来
２９３細胞〔J. Gen. Virol., 36, 59 (1977)〕に導入
する。細胞内でコスミドとアデノウイルスＤＮＡの組換
えが生じれば、組換えアデノウイルスが生成し、細胞の
死滅がおこるため、該細胞の死滅を指標にクロソ遺伝子
ｃＤＮＡを含む組換えアデノウイルスの生成を確認す
る。死滅した細胞を回収し、例えば凍結融解を繰返し行
ったり、細胞破砕機を使用することにより細胞を破砕し
てクロソ遺伝子ｃＤＮＡを含む組換えアデノウイルス溶
液を得る。

【００１８】得られた溶液から組換えアデノウイルスの
ＤＮＡを常法により抽出し、制限酵素、例えばＸｈｏＩ
で切断することによりその構造の確認を行う。 (iii) 組換えアデノウイルスの精製 得られた組換えアデノウイルスのＤＮＡは例えば鐘ケ江
らの方法〔Jpn. J. Med. Sci. Biol., 47, 157 (199
4)〕に従い、2回の塩化セシウム密度勾配により精製
し、１０％グリセロールを含むＰＢＳ、１０％グリセロ
ールを含むＨＥＰＥＳ−ＭｇＣｌ₂、１０%グリセロール
を含むＨＥＰＥＳ−ＥＤＴＡ等の溶液で懸濁後、−８０
℃に保存し、適宜使用することができる。 (iv) クロソ遺伝子ｃＤＮＡを含む組換えアデノウイル
スの病態モデルへの投与 (iii)で得られたクロソ遺伝子ｃＤＮＡを発現する組換
えウイルス溶液を透析処理してグリセロールを除去し、
生理食塩水を用いて適量に希釈して組換えウイルスを得
る。肥満、高インスリン血症を伴い高血圧及び高脂血症
を生じ、肥満型のヒトＮＩＤＤＭ（インスリン非依存型
糖尿病）に類似した病態を示すＯｔｓｕｋａ Ｌｏｎｇ
−Ｅｖａｎｓ Ｔｏｋｕｓｈｉｍａ Ｆａｔｔｙ（ＯＬＥ
ＴＦ）ラット〔Diabetes, 41, 1422 (1992)〕（３０週
齢）に筋注により、組換えウイルス５Ｘ１０⁸ｐｆｕを
週一回３週間投与し、投与後の経過において、病態モデ
ルの示す病態に改善があったかどうかを確認する。以上
は、アデノウイルスを用いる本発明方法の具体例を示し
たが、アデノウイルス以外でも本発明の目的を達するこ
とができればいずれのウイルスでも用いることができ
る。

【００１９】他のウイルスベクターを用いる組換えウイ
ルスベクターの作製は、ウイルスを構成するタンパク質
をコードするDNAに対し、一般的な組み換えDNA作成技術
（モレキュラークローニング第２版などを参照）を用い
てクロソタンパク質をコードするように該当するウイル
スタンパク質のコード領域を入れかえることによって行
なえる。コスミドの作製あるいはＤＮＡの抽出、その他
の遺伝子組換え技術については、例えば以下のような文
献に記載の方法により行うことができる。

【００２０】Wolff ed., Gene therapeutics: Methods
and applications of direct genetransfer. Birkhaeus
er, Boston, 1994; Kaplitt and Loewy eds., Viral v
ectors: Gene therapy and neuroscience application
s. Academic Press, San Diego, 1995; Liu et al. ed
s., DNA vaccines: A new era in vaccinology. Annals
of the New York Academy of Sciences vol. 772. The
New York Academy ofSciences, New York, 1995; Glu
zman and Hughes eds., Viral vectors: Current commu
nications in molecular biology Cold Spring Harbor
Laboratory,New York, 1988; Roth ed., Methods in
cell biology． vol. 43. Protein expression in anim
al cells. Academic Press, San Diego 1994. 組換えベクターを含有する医薬組成物は、該ベクター単
独でも可能ではあるが、通常は該ベクターを薬理学的に
許容される一つあるいはそれ以上の担体と一緒に混合
し、製剤学の技術分野において用いられる任意の方法に
より製造した医薬製剤として提供するのが望ましい。好
ましくは水、あるいは食塩、グリシン、グルコース、ヒ
トアルブミン等の水溶液等の水性担体に溶解した無菌的
な溶液が用いられる。また、製剤溶液を生理的条件に近
づけるための緩衝化剤や等張化剤のような、薬理学的に
許容される添加剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナト
リウム、乳酸ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナト
リウム等を添加することもできる。また、凍結乾燥して
貯蔵し、使用時に適当な溶媒に溶解させて用いることも
できる。

【００２１】投与経路は、治療に際して最も効果的なも
のを使用するのが望ましく、経口投与、または口腔内、
気道内、直腸内、皮下、筋肉内および静脈内等の非経口
投与をあげることができる。投与形態としては、噴霧
剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、座
剤、注射剤、軟膏、テープ剤等があげられる。経口投与
に適当な製剤としては、乳剤、シロップ剤、カプセル
剤、錠剤、散剤、顆粒剤等があげられる。例えば乳剤お
よびシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソ
ルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、
プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリ
ーブ油、大豆油などの油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エ
ステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパー
ミント等のフレーバー類等を添加剤として用いて製造で
きる。カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤等は、乳糖、ブ
ドウ糖、ショ糖、マンニトール等の賦形剤、デンプン、
アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネ
シウム、タルク等の滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒ
ドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、脂
肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等
を添加剤として用いて製造できる。

【００２２】非経口投与に適当な製剤としては、注射
剤、座剤、噴霧剤等があげられる。例えば、注射剤は、
塩溶液、ブドウ糖溶液、あるいは両者の混合物からなる
担体等を用いて調製する。座剤はカカオ脂、水素化脂肪
またはカルボン酸等の担体を用いて調製される。また、
噴霧剤は該ベクターそのもの、ないしは受容者の口腔お
よび気道粘膜を刺激せず、かつ該ベクターを微細な粒子
として分散させ吸収を容易にさせる担体等を用いて調製
する。担体として具体的には乳糖、グリセリン等が例示
される。該ベクターおよび用いる担体の性質により、エ
アロゾル、ドライパウダー等の製剤が可能である。ま
た、これらの非経口剤においても経口剤で添加剤として
例示した成分を添加することもできる。投与量または投
与回数は、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、
年齢、体重、ウイルスベクターの種類等により異なる
が、通常成人１回当たりウイルスベクターとして10³〜1
0¹⁵個を投与する。本発明においては、クロソ遺伝子ｃ
ＤＮＡを遺伝子治療の方法を用いて患者に投与すること
により疾患の治療を行うこともできる。以上の方法を用
いて、病態の治療を行った場合の効果は、血圧の低下、
血管内皮機能の改善を指標に評価する。血管内皮の機能
を測定する一般的方法としては、内皮依存性の血管拡張
反応を調べる方法があげられる。これは動脈にアセチル
コリンのような内皮依存性血管拡張薬を投与して、その
際の血管拡張の程度により内皮のＮＯ分泌能を評価する
方法である〔医学のあゆみ １８９、５１７（１９９
９）〕。

【００２３】以下、ウイルスベクターとしてヒト5型の
アデノウイルス（Ad5）を、組み込む遺伝子としてマウ
ス由来クロソ遺伝子ｃＤＮＡを用いて、肥満、高インス
リン血症を伴い、高血圧及び高脂血症を生じ、肥満型の
ヒトＮＩＤＤＭに類似した病態を示すＯｔｓｕｋａ Ｌ
ｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ Ｔｏｋｕｓｈｉｍａ Ｆａｔｔｙ
（ＯＬＥＴＦ）ラットの血管内皮機能を改善した例を用
いて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例
に限定されるものではない。

【００２４】

【実施例】実施例１：クロソ遺伝子ｃＤＮＡを含む組換
えアデノウイルス投与による血管機能改善。 (工程１)マウス由来クロソ遺伝子ｃＤＮＡを含む組換え
アデノウイルスの作製は基本的には三宅らの方法〔Pro
c. Natl Acad. Sci. USA., 93, 1320 (1996)〕に従っ
た。具体的にはマウス由来クロソ遺伝子ｃＤＮＡを含む
プラスミドｐＮＫＭ１０１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７６
５、ＷＯ９８／２９５４４）をＮｏｔＩおよびＸｂａＩ
で切断し、得られた該遺伝子を含む３．１ｋｂ断片をDN
A Blunting kit（宝酒造社製）により、両末端を平滑化
した。

【００２５】該断片３μｇとＥ３、Ｅ１Ａ、Ｅ１Ｂ領域
を欠失した5型アデノウイルスゲノムおよびサイトメガ
ロウイルスエンハンサー、チキンβアクチンプロモータ
ーのキメラプロモーター（ＣＡＧプロモーター）を含む
コスミドｐＡｘＣＡｗｔ〔鐘ケ江らNucl. Acids Res.,
23, 3816 (1995)〕のＳｗａＩ断片１μｇとをＴ４ＤＮ
Ａリガーゼ緩衝液２０μｌに溶解し、該溶液にＴ４ＤＮ
Ａリガーゼを１単位加え、１６℃で１８時間結合反応を
行った。

【００２６】該リガーゼ反応液及びGigapack II XL Pac
kaging Extract (Stratagene社製)を用いてインビトロ
パッケージング（in vitro packaging）を行い、得られ
たファージを大腸菌DH5α〔J. Bacteriology, 170, 611
(1988)〕へ感染させ、組換えコスミドを取得した。な
お、組換えコスミドでのマウス由来クロソ遺伝子ｃＤＮ
Ａのプロモーターに対する方向の確認は、コスミドをＢ
ａｍＨＩ で切断後、１．６ｋｂの断片を検出すること
により行った。

【００２７】このようにして得られたコスミド８μｇと
ＥｃｏＴ２２Ｉにより切断されたＥ３，E１Ａ，Ｅ１Ｂ
を欠損した５型アデノウイルスAd5dIXＤＮＡ〔J. Virol
ogy.,54 , 711 (1985)〕１μｇとを混合し、CellPhect
Transfection Kit (Pharmacia Biotech社製)を用い、リ
ン酸カルシウム法で、ヒト胎児由来２９３細胞へトラン
スフェクションを行った。以後は鐘ケ江らの方法〔バイ
オマニュアルシリーズ, 4, 43-58, 羊土社(1994)〕に従
い組換えウイルスを取得した。

【００２８】該組換えウイルスを、鐘ケ江らの方法〔Jp
n. J. Med. Sci. Biol., 47, 157 (1994)〕に従い２回
の塩化セシウム密度勾配により精製し、１０％グリセロ
ールを含むＰＢＳで懸濁後、−８０℃に保存し適宜使用
した。該組換えウイルス溶液のウイルス力価は鐘ケ江ら
の方法〔Jpn. J. Med. Sci.Biol., 47, 157 (1994)〕に
従い算定したところ、１Ｘ１０⁹ｐｆｕ／ｍｌのウイル
スを含んでいることがわかった。

【００２９】(工程２)工程１で得られた組換えウイルス
溶液を透析処理してグリセロールを除去し、生理食塩水
を用いて適量に希釈してマウス全長型クロソを発現する
組換えウイルスを得た。肥満、高インスリン血症を伴い
高血圧及び高脂血症を生じ、肥満型のヒトＮＩＤＤＭに
類似した病態をしめすＯｔｓｕｋａ Ｌｏｎｇ−Ｅｖａ
ｎｓ Ｔｏｋｕｓｈｉｍａ Ｆａｔｔｙ（ＯＬＥＴＦ）ラ
ット〔Diabetes, 41, 1422 (1992)〕（３０週齢）に筋
注により、組換えウイルス５Ｘ１０⁸ｐｆｕを週一回３
週間投与した。その結果、ラットの血圧は非投与群では
１５６．３±４ｍｍＨｇ（ｎ＝８）であったものが、投
与群に於いては１３９．４±７ｍｍＨｇ（ｎ＝５）に改
善された。

【００３０】(工程３)工程２で得られたＯＬＥＴＦラッ
トにナトリウムペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ）
を腹腔内投与して麻酔後、胸部を切開して胸部大動脈を
摘出する（３ｍｍ）。単離された胸部大動脈（大動脈リ
ング）を２本のスチールワイヤーの間にかけ、これを１
０ｍｌのＫｒｅｂｓ’ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ溶液
〔１２０ｍＭ ＮａＣｌ，５．２ｍＭ ＫＣｌ，２．４ｍ
ＭＣａＣｌ₂， １．２ｍＭ ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ，２５
ｍＭ ＮａＨＣＯ₃，０．０３ｍＭ Ｎａ₂−ＥＤＴＡ，１
１ｍＭ ｄｅｘｔｒｏｓｅ(ｐＨ７．４)〕に浸す。溶液
は９５％の酸素、５％二酸化炭素の気泡を通じて酸素を
飽和させてある。ワイヤーの一方の端は固定し、もう一
方の端にBiochem. Biophys. Res. Commun., 248, 324
(1998)に記載の方法に従い力学変換機に接続する。大動
脈リングに２．０ｇの重りを付加して張力を加え９０分
間放置した後、０．１μＭのノルエピネフリンを添加し
て収縮させる。内皮機能はこの溶液に最終濃度１０μＭ
のアセチルコリンを添加した時、収縮した長さの何％が
弛緩して回復したかで評価する。（ＯＬＥＴＦ）ラット
（３０週齢）に筋注により配列番号３で表される塩基配
列を有するＤＮＡでコードされるマウス全長型クロソを
発現するアデノウイルスを週一回３週間投与した後調製
した大動脈リングの弛緩率は８３±３％であった。これ
に対して無処置のOLETFラットでは６７±２％で明らか
な改善が見られた。

【００３１】

【発明の効果】本発明により、クロソ遺伝子に代表され
るような、動脈硬化、高血圧等の疾患の治療または予防
薬をコードする核酸配列を含む発現ベクターを宿主に投
与し、治療薬をコードする核酸配列をもつＤＮＡを宿主
に運び込むことにより、血管内皮機能を改善して、動脈
硬化、高血圧をはじめクロソ遺伝子が関与する病態の治
療、あるいは発症の予防が可能となることが示された。

【００３２】

【配列表】 Sequence Listing <110> KYOWA HAKKO KOGYO CO., LTD. <120> NOVEL METHOD OF IMPROVING ENDOTHELIAL FUNCTION <130> H11-127 <140> <141> <160> 5 <170> PatentIn Ver.2.0

【００３３】 <210> 1 <211> 3163 <212> DNA <1> Homo sapiens <220> <221> CDS <1> (9)...(3047) <400> 1 cgcgcagc atg ccc gcc agc gcc ccg ccg cgc cgc ccg cgg ccg ccg ccg 50 Met Pro Ala Ser Ala Pro Pro Arg Arg Pro Arg Pro Pro Pro 1 5 10 ccg tcg ctg tcg ctg ctg ctg gtg ctg ctg ggc ctg ggc ggc cgc cgc 98 Pro Ser Leu Ser Leu Leu Leu Val Leu Leu Gly Leu Gly Gly Arg Arg 15 20 25 30 ctg cgt gcg gag ccg ggc gac ggc gcg cag acc tgg gcc cgt gtc tcg 146 Leu Arg Ala Glu Pro Gly Asp Gly Ala Gln Thr Trp Ala Arg Val Ser 35 40 45 cgg cct cct gcc ccc gag gcc gcg ggc ctc ttc cag ggc acc ttc ccc 194 Arg Pro Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Leu Phe Gln Gly Thr Phe Pro 50 55 60 gac ggc ttc ctc tgg gcc gtg ggc agc gcc gcc tac cag acc gag ggc 242 Asp Gly Phe Leu Trp Ala Val GLyser Ala Ala Tyr Gln Thr Glu Gly 65 70 75 ggc tgg cag cag cac ggc aag ggt gcg tcc atc tgg gac acg ttc acc 290 Gly Trp Gln Gln His Gly Lys Gly Ala Ser Ile Trp Asp Thr Phe Thr 80 85 90 cac cac ccc ctg gca ccc ccg gga gac tcc cgg aac gcc agt ctg ccg 338 His His Pro Leu Ala Pro Pro Gly Asp Ser Arg Asn Ala Ser Leu Pro 95 100 105 110 ttg ggc gcc ccg tcg ccg ctg cag ccc gcc acc ggg gac gta gcc agc 386 Leu Gly Ala Pro Ser Pro Leu Gln Pro Ala Thr Gly Asp Val Ala Ser 115 120 125 gac agc tac aac aac gtc ttc cgc gac acg gag gcg ctg cgc gag ctc 434 Asp Ser Tyr Asn Asn Val Phe Arg Asp Thr Glu Ala Leu Arg Glu Leu 130 135 140 ggg gtc act cac tac cgc ttc tcc atc tcg tgg gcg cga gtg ctc ccc 482 Gly Val Thr His Tyr Arg Phe Ser Ile Ser Trp Ala Arg Val Leu Pro 145 150 155 aat ggc agc gcg ggc gtc ccc aac cgc gag ggg ctg cgc tac tac cgg 530 Asn Gly Ser Ala Gly Val Pro Asn Arg Glu Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg 160 165 170 cgc ctg ctg gag cgg ctg cgg gag ctg ggc gtg cag ccc gtg gtc acc 578 Arg Leu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Leu Gly Val Gln Pro Val Val Thr 175 180 185 190 ctg tac cac tgg gac ctg ccc cag cgc ctg cag gac gcc tac ggc ggc 626 Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Gln Arg Leu Gln Asp Ala Tyr Gly Gly 195 200 205 tgg gcc aac cgc gcc ctg gcc gac cac ttc agg gat tac gcg gag ctc 674 Trp Ala Asn Arg Ala Leu Ala Asp His Phe Arg Asp Tyr Ala Glu Leu 210 215 220 tgc ttc cgc cac ttc ggc ggt cag gtc aag tac tgg atc acc atc gac 722 Cys Phe Arg His Phe Gly Gly Gln Val Lys Tyr Trp Ile Thr Ile Asp 225 230 235 aac ccc tac gtg gtg gcc tgg cac ggc tac gcc acc ggg cgc ctg gcc 770 Asn Pro Tyr Val Val Ala Trp His Gly Tyr Ala Thr Gly Arg Leu Ala 240 245 250 ccc ggc atc cgg ggc agc ccg cgg ctc ggg tac ctg gtg gcg cac aac 818 Pro Gly Ile Arg Gly Ser Pro Arg Leu Gly Tyr Leu Val Ala His Asn 255 260 265 270 ctc ctc ctg gct cat gcc aaa gtc tgg cat ctc tac aat act tct ttc 866 Leu Leu Leu Ala His Ala Lys Val Trp His Leu Tyr Asn Thr Ser Phe 275 280 285 cgt ccc act cag gga ggt cag gtg tcc att gcc cta agc tct cac tgg 914 Arg Pro Thr Gln Gly Gly Gln Val Ser Ile Ala Leu Ser Ser His Trp 290 295 300 atc aat cct cga aga atg acc gac cac agc atc aaa gaa tgt caa aaa 962 Ile Asn Pro Arg Arg Met Thr Asp His Ser Ile Lys Glu Cys Gln Lys 305 310 315 tct ctg gac ttt gta cta ggt tgg ttt gcc aaa ccc gta ttt att gat 1010 Ser Leu Asp Phe Val Leu Gly Trp Phe Ala Lys Pro Val Phe Ile Asp 320 325 330 ggt gac tat ccc gag agc atg aag aat aac ctt tca tct att ctg cct 1058 Gly Asp Tyr Pro Glu Ser Met Lys Asn Asn Leu Ser Ser Ile Leu Pro 335 340 345 350 gat ttt act gaa tct gag aaa aag ttc atc aaa gga act gct gac ttt 1106 Asp Phe Thr Glu Ser Glu Lys Lys Phe Ile Lys Gly Thr Ala Asp Phe 355 360 365 ttt gct ctt tgc ttt gga ccc acc ttg agt ttt caa ctt ttg gac cct 1154 Phe Ala Leu Cys Phe Gly Pro Thr Leu Ser Phe Gln Leu Leu Asp Pro 370 375 380 cac atg aag ttc cgc caa ttg gaa tct ccc aac ctg agg caa ctg ctt 1202 His Met Lys Phe Arg Gln Leu Glu Ser Pro Asn Leu Arg Gln Leu Leu 385 390 395 tcc tgg att gac ctt gaa ttt aac cat cct caa ata ttt att gtg gaa 1250 Ser Trp Ile Asp Leu Glu Phe Asn His Pro Gln Ile Phe Ile Val Glu 400 405 410 aat ggc tgg ttt gtc tca ggg acc acc aag aga gat gat gcc aaa tat 1298 Asn Gly Trp Phe Val Ser Gly Thr Thr Lys Arg Asp Asp Ala Lys Tyr 415 420 425 430 atg tat tac ctc aaa aag ttc atc atg gaa acc tta aaa gcc atc aag 1346 Met Tyr Tyr Leu Lys Lys Phe Ile Met Glu Thr Leu Lys Ala Ile Lys 435 440 445 ctg gat ggg gtg gat gtc atc ggg tat acc gca tgg tcc ctc atg gat 1394 Leu Asp Gly Val Asp Val Ile Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Met Asp 450 455 460 ggt ttc gag tgg cac aga ggt tac agc atc agg cgt gga ctc ttc tat 1442 Gly Phe Glu Trp His Arg Gly Tyr Ser Ile Arg Arg Gly Leu Phe Tyr 465 470 475 gtt gac ttt cta agc cag gac aag atg ttg ttg cca aag tct tca gcc 1490 Val Asp Phe Leu Ser Gln Asp Lys Met Leu Leu Pro Lys Ser Ser Ala 480 485 490 ttg ttc tac caa aag ctg ata gag aaa aat ggc ttc cct cct tta cct 1538 Leu Phe Tyr Gln Lys Leu Ile Glu Lys Asn Gly Phe Pro Pro Leu Pro 495 500 505 510 gaa aat cag ccc cta gaa ggg aca ttt ccc tgt gac ttt gct tgg gga 1586 Glu Asn Gln Pro Leu Glu Gly Thr Phe Pro Cys Asp Phe Ala Trp Gly 515 520 525 gtt gtt gac aac tac att caa gta gat acc act ctg tct cag ttt acc 1634 Val Val Asp Asn Tyr Ile Gln VAlasp Thr Thr Leu Ser Gln Phe Thr 530 535 540 gac ctg aat gtt tac ctg tgg gat gtc cac cac agt aaa agg ctt att 1682 Asp Leu Asn Val Tyr Leu Trp Asp Val His His Ser Lys Arg Leu Ile 545 550 555 aaa gtg gat ggg gtt gtg acc aag aag agg aaa tcc tac tgt gtt gac 1730 Lys Val Asp Gly Val Val Thr Lys Lys ArGLys Ser Tyr Cys Val Asp 560 565 570 ttt gct gcc atc cag ccc cag atc gct tta ctc cag gaa atg cac gtt 1778 Phe Ala Ala Ile Gln Pro Gln Ile Ala Leu Leu Gln Glu Met His Val 575 580 585 590 aca cat ttt cgc ttc tcc ctg gac tgg gcc ctg att ctc cct ctg ggt 1826 Thr His Phe Arg Phe Ser Leu Asp Trp Ala Leu Ile Leu Pro Leu Gly 595 600 605 aac cag tcc cag gtg aac cac acc atc ctg cag tac tat cgc tgc atg 1874 Asn Gln Ser Gln Val Asn His Thr Ile Leu Gln Tyr Tyr Arg Cys Met 610 615 620 gcc agc gag ctt gtc cgt gtc aac atc acc cca gtg gtg gcc ctg tgg 1922 Ala Ser Glu Leu Val Arg Val Asn Ile Thr Pro Val Val Ala Leu Trp 625 630 635 cag cct atg gcc ccg aac caa gga ctg ccg cgc ctc ctg gcc agg cag 1970 Gln Pro Met Ala Pro Asn Gln Gly Leu Pro Arg Leu Leu Ala Arg Gln 640 645 650 ggc gcc tgg gag aac ccc tac act gcc ctg gcc ttt gca gag tat gcc 2018 Gly Ala Trp Glu Asn Pro Tyr Thr Ala Leu Ala Phe Ala Glu Tyr Ala 655 660 665 670 cga ctg tgc ttt caa gag ctc ggc cat cac gtc aag ctt tgg ata acg 2066 Arg Leu Cys Phe Gln Glu Leu Gly His His Val Lys Leu Trp Ile Thr 675 680 685 atg aat gag ccg tat aca agg aat atg aca tac agt gct ggc cac aac 2114 Met Asn Glu Pro Tyr Thr Arg Asn Met Thr Tyr Ser Ala Gly His Asn 690 695 700 ctt ctg aag gcc cat gcc ctg gct tgg cat gtg tac aat gaa aag ttt 2162 Leu Leu Lys Ala His Ala Leu Ala Trp His Val Tyr Asn Glu Lys Phe 705 710 715 agg cat gct cag aat ggg aaa ata tcc ata gcc ttg cag gct gat tgg 2210 Arg His Ala Gln Asn Gly Lys Ile Ser Ile Ala Leu Gln Ala Asp Trp 720 725 730 ata gaa cct gcc tgc cct ttc tcc caa aag gac aaa gag gtg gcc gag 2258 Ile Glu Pro Ala Cys Pro Phe Ser Gln Lys Asp Lys Glu Val Ala Glu 735 740 745 750 aga gtt ttg gaa ttt gac att ggc tgg ctg gct gag ccc att ttc ggc 2306 Arg Val Leu Glu Phe Asp Ile Gly Trp Leu Ala Glu Pro Ile Phe Gly 755 760 765 tct gga gat tat cca tgg gtg atg agg gac tgg ctg aac caa aga aac 2354 Ser Gly Asp Tyr Pro Trp Val Met Arg Asp Trp Leu Asn Gln Arg Asn 770 775 780 aat ttt ctt ctt cct tat ttc act gaa gat gaa aaa aag cta atc cag 2402 Asn Phe Leu Leu Pro Tyr Phe Thr Glu Asp Glu Lys Lys Leu Ile Gln 785 790 795 ggt acc ttt gac ttt ttg gct tta agc cat tat acc acc atc ctt gta 2450 Gly Thr Phe Asp Phe Leu Ala Leu Ser His Tyr Thr Thr Ile Leu Val 800 805 810 gac tca gaa aaa gaa gat cca ata aaa tac aat gat tac cta gaa gtg 2498 Asp Ser Glu Lys Glu Asp Pro Ile Lys Tyr Asn Asp Tyr Leu Glu Val 815 820 825 830 caa gaa atg acc gac atc acg tgg ctc aac tcc ccc agt cag gtg gcg 2546 Gln Glu Met Thr Asp Ile Thr Trp Leu Asn Ser Pro Ser Gln Val Ala 835 840 845 gta gtg ccc tgg ggg ttg cgc aaa gtg ctg aac tgg ctg aag ttc aag 2594 Val Val Pro Trp Gly Leu ArGLys Val Leu Asn Trp Leu Lys Phe Lys 850 855 860 tac gga gac ctc ccc atg tac ata ata tcc aac gga atc gat gac ggg 2642 Tyr Gly Asp Leu Pro Met Tyr Ile Ile Ser Asn Gly Ile Asp Asp Gly 865 870 875 ctg cat gct gag gac gac cag ctg agg gtg tat tat atg cag aat tac 2690 Leu His Ala Glu Asp Asp Gln Leu Arg Val Tyr Tyr Met Gln Asn Tyr 880 885 890 ata aac gaa gct ctc aaa gcc cac ata ctg gat ggt atc aat ctt tgc 2738 Ile Asn Glu Ala Leu Lys Ala His Ile Leu Asp Gly Ile Asn Leu Cys 895 900 905 910 gga tac ttt gct tat tcg ttt aac gac cgc aca gct ccg agg ttt ggc 2786 Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser Phe Asn Asp Arg Thr Ala Pro Arg Phe Gly 915 920 925 ctc tat cgt tat gct gca gat cag ttt gag ccc aag gca tcc atg aaa 2834 Leu Tyr Arg Tyr Ala Ala Asp Gln Phe Glu Pro Lys Ala Ser Met Lys 930 935 940 cat tac agg aaa att att gac agc aat ggt ttc ccg ggc cca gaa act 2882 His Tyr Arg Lys Ile Ile Asp Ser Asn Gly Phe Pro Gly Pro Glu Thr 945 950 955 ctg gaa aga ttt tgt cca gaa gaa ttc acc gtg tgt act gag tgc agt 2930 Leu Glu Arg Phe Cys Pro Glu Glu Phe Thr Val Cys Thr Glu Cys Ser 960 965 970 ttt ttt cac acc cga aag tct tta ctg gct ttc ata gct ttt cta ttt 2978 Phe Phe His Thr Arg Lys Ser Leu Leu Ala Phe Ile Ala Phe Leu Phe 975 980 985 990 ttt gct tct att att tct ctc tcc ctt ata ttt tac tac tcg aag aaa 3026 Phe Ala Ser Ile Ile Ser Leu Ser Leu Ile Phe Tyr Tyr Ser Lys Lys 995 1000 1005 ggc aga aga agt tac aaa tagttctgaa catttttcta ttcattcatt 3074 Gly Arg Arg Ser Tyr Lys 1010 ttgaaataat tatgcagaca catcagctgt taaccatttg cacctctaag tgttgtgaaa 3134 ctgtaaattt catacatttg acttctaga 3163

【００３４】 <210> 2 <211> 3435 <212> DNA <1> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (9)...(1655) <400> 2 cgcgcagc atg ccc gcc agc gcc ccg ccg cgc cgc ccg cgg ccg ccg ccg 50 Met Pro Ala Ser Ala Pro Pro Arg Arg Pro Arg Pro Pro Pro 1 5 10 ccg tcg ctg tcg ctg ctg ctg gtg ctg ctg ggc ctg ggc ggc cgc cgc 98 Pro Ser Leu Ser Leu Leu Leu Val Leu Leu Gly Leu Gly Gly Arg Arg 15 20 25 30 ctg cgt gcg gag ccg ggc gac ggc gcg cag acc tgg gcc cgt gtc tcg 146 Leu Arg Ala Glu Pro Gly Asp Gly Ala Gln Thr Trp Ala Arg Val Ser 35 40 45 cgg cct cct gcc ccc gag gcc gcg ggc ctc ttc cag ggc acc ttc ccc 194 Arg Pro Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Leu Phe Gln Gly Thr Phe Pro 50 55 60 gac ggc ttc ctc tgg gcc gtg ggc agc gcc gcc tac cag acc gag ggc 242 Asp Gly Phe Leu Trp Ala Val Gly Ser Ala Ala Tyr Gln Thr Glu Gly 65 70 75 ggc tgg cag cag cac ggc aag ggt gcg tcc atc tgg gac acg ttc acc 290 Gly Trp Gln Gln His Gly Lys Gly Ala Ser Ile Trp Asp Thr Phe Thr 80 85 90 cac cac ccc ctg gca ccc ccg gga gac tcc cgg aac gcc agt ctg ccg 338 His His Pro Leu Ala Pro Pro Gly Asp Ser Arg Asn Ala Ser Leu Pro 95 100 105 110 ttg ggc gcc ccg tcg ccg ctg cag ccc gcc acc ggg gac gta gcc agc 386 Leu Gly Ala Pro Ser Pro Leu Gln Pro Ala Thr Gly Asp Val Ala Ser 115 120 125 gac agc tac aac aac gtc ttc cgc gac acg gag gcg ctg cgc gag ctc 434 Asp Ser Tyr Asn Asn Val Phe Arg Asp Thr Glu Ala Leu Arg Glu Leu 130 135 140 ggg gtc act cac tac cgc ttc tcc atc tcg tgg gcg cga gtg ctc ccc 482 Gly Val Thr His Tyr Arg Phe Ser Ile Ser Trp Ala Arg Val Leu Pro 145 150 155 aat ggc agc gcg ggc gtc ccc aac cgc gag ggg ctg cgc tac tac cgg 530 Asn Gly Ser Ala Gly Val Pro Asn Arg Glu Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg 160 165 170 cgc ctg ctg gag cgg ctg cgg gag ctg ggc gtg cag ccc gtg gtc acc 578 Arg Leu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Leu Gly Val Gln Pro Val Val Thr 175 180 185 190 ctg tac cac tgg gac ctg ccc cag cgc ctg cag gac gcc tac ggc ggc 626 Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Gln Arg Leu Gln Asp Ala Tyr Gly Gly 195 200 205 tgg gcc aac cgc gcc ctg gcc gac cac ttc agg gat 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gcc aaa ccc gta ttt att gat 1010 Ser Leu Asp Phe Val Leu Gly Trp Phe Ala Lys Pro Val Phe Ile Asp 320 325 330 ggt gac tat ccc gag agc atg aag aat aac ctt tca tct att ctg cct 1058 Gly Asp Tyr Pro Glu Ser Met Lys Asn Asn Leu Ser Ser Ile Leu Pro 335 340 345 350 gat ttt act gaa tct gag aaa aag ttc atc aaa gga act gct gac ttt 1106 Asp Phe Thr Glu Ser Glu Lys Lys Phe Ile Lys Gly Thr Ala Asp Phe 355 360 365 ttt gct ctt tgc ttt gga ccc acc ttg agt ttt caa ctt ttg gac cct 1154 Phe Ala Leu Cys Phe Gly Pro Thr Leu Ser Phe Gln Leu Leu Asp Pro 370 375 380 cac atg aag ttc cgc caa ttg gaa tct ccc aac ctg agg caa ctg ctt 1202 His Met Lys Phe Arg Gln Leu Glu Ser Pro Asn Leu Arg Gln Leu Leu 385 390 395 tcc tgg att gac ctt gaa ttt aac cat cct caa ata ttt att gtg gaa 1250 Ser Trp Ile Asp Leu Glu Phe Asn His Pro Gln Ile Phe Ile Val Glu 400 405 410 aat ggc tgg ttt gtc tca ggg acc acc aag aga gat gat gcc aaa tat 1298 Asn Gly Trp Phe Val Ser Gly Thr Thr Lys Arg Asp Asp Ala Lys Tyr 415 420 425 430 atg tat tac ctc aaa aag ttc atc atg gaa acc tta aaa gcc atc aag 1346 Met Tyr Tyr Leu Lys Lys Phe Ile Met Glu Thr Leu Lys Ala Ile Lys 435 440 445 ctg gat ggg gtg gat gtc atc ggg tat acc gca tgg tcc ctc atg gat 1394 Leu Asp Gly Val Asp Val Ile Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Met Asp 450 455 460 ggt ttc gag tgg cac aga ggt tac agc atc agg cgt gga ctc ttc tat 1442 Gly Phe Glu Trp His Arg Gly Tyr Ser Ile Arg Arg Gly Leu Phe Tyr 465 470 475 gtt gac ttt cta agc cag gac aag atg ttg ttg cca aag tct tca gcc 1490 Val Asp Phe Leu Ser Gln Asp Lys Met Leu Leu Pro Lys Ser Ser Ala 480 485 490 ttg ttc tac caa aag ctg ata gag aaa aat ggc ttc cct cct tta cct 1538 Leu Phe Tyr Gln Lys Leu Ile Glu Lys Asn Gly Phe Pro Pro Leu Pro 495 500 505 510 gaa aat cag ccc cta gaa ggg aca ttt ccc tgt gac ttt gct tgg gga 1586 Glu Asn Gln Pro Leu Glu Gly Thr Phe Pro Cys Asp Phe Ala Trp Gly 515 520 525 gtt gtt gac aac tac att caa gta agt cag ctg aca aaa cca atc agc 1634 Val Val Asp Asn Tyr Ile Gln Val Ser Gln Leu Thr Lys Pro Ile Ser 530 535 540 agt ctc acc aag ccc tat cac tagtagatac cactctgtct cagtttaccg 1685 Ser Leu Thr Lys Pro Tyr His 545 acctgaatgt ttacctgtgg gatgtccacc acagtaaaag gcttattaaa gtggatgggg 1745 ttgtgaccaa gaagaggaaa tcctactgtg ttgactttgc tgccatccag ccccagatcg 1805 ctttactcca ggaaatgcac gttacacatt ttcgcttctc cctggactgg gccctgattc 1865 tccctctggg taaccagtcc caggtgaacc acaccatcct gcagtactat cgctgcatgg 1925 ccagcgagct tgtccgtgtc aacatcaccc cagtggtggc cctgtggcag cctatggccc 1985 cgaaccaagg actgccgcgc ctcctggcca ggcagggcgc ctgggagaac ccctacactg 2045 ccctggcctt tgcagagtat gcccgactgt gctttcaaga gctcggccat cacgtcaagc 2105 tttggataac gatgaatgag ccgtatacaa ggaatatgac atacagtgct ggccacaacc 2165 ttctgaaggc ccatgccctg gcttggcatg tgtacaatga aaagtttagg catgctcaga 2225 atgggaaaat atccatagcc ttgcaggctg attggataga acctgcctgc cctttctccc 2285 aaaaggacaa agaggtggcc gagagagttt tggaatttga cattggctgg ctggctgagc 2345 ccattttcgg ctctggagat tatccatggg tgatgaggga ctggctgaac caaagaaaca 2405 attttcttct tccttatttc actgaagatg aaaaaaagct aatccagggt acctttgact 2465 ttttggcttt aagccattat accaccatcc ttgtagactc agaaaaagaa gatccaataa 2525 aatacaatga ttacctagaa gtgcaagaaa tgaccgacat cacgtggctc aactccccca 2585 gtcaggtggc ggtagtgccc tgggggttgc gcaaagtgct gaactggctg aagttcaagt 2645 acggagacct ccccatgtac ataatatcca acggaatcga tgacgggctg catgctgagg 2705 acgaccagct gagggtgtat tatatgcaga attacataaa cgaagctctc aaagcccaca 2765 tactggatgg tatcaatctt tgcggatact ttgcttattc gtttaacgac cgcacagctc 2825 cgaggtttgg cctctatcgt tatgctgcag atcagtttga gcccaaggca tccatgaaac 2885 attacaggaa aattattgac agcaatggtt tcccgggccc agaaactctg gaaagatttt 2945 gtccagaaga attcaccgtg tgtactgagt gcagtttttt tcacacccga aagtctttac 3005 tggctttcat agcttttcta ttttttgctt ctattatttc tctctccctt atattttact 3065 actcgaagaa aggcagaaga agttacaaat agttctgaac atttttctat tcattcattt 3125 tgaaataatt atgcagacac atcagctgtt aaccatttgc acctctaagt gttgtgaaac 3185 tgtaaatttc atacatttga cttctagaaa acatttttgt ggcttatgac agaggttttg 3245 aaatgggcat aggtgatcgt aaaatattga ataatgcgaa tagtgcctga atttgttctc 3305 tttttgggtg attaaaaaac tgacaggcac tataatttct gtaacacact aacaaaagca 3365 tgaaaaatag gaaccacacc aatgcaacat ttgtgcagaa atttgaatga caagattagg 3425 aatattttct 3435

【００３５】 <210> 3 <211> 5032 <212> DNA <1> Mouse <220> <221> CDS <1> (19)...(3060) <400> 3 cctcccggct cccgcagc atg cta gcc cgc gcc cct cct cgc cgc ccg ccg 51 Met Leu Ala Arg Ala Pro Pro Arg Arg Pro Pro 1 5 10 cgg ctg gtg ctg ctc cgt ttg ctg ttg ctg cat ctg ctg ctg ctc gcc 99 Arg Leu Val Leu Leu Arg Leu Leu Leu Leu His Leu Leu Leu Leu Ala 15 20 25 ctg cgc gcc cgc tgc ctg agc gct gag ccg ggt cag ggc gcg cag acc 147 Leu Arg Ala Arg Cys Leu Ser Ala Glu Pro Gly Gln Gly Ala Gln Thr 30 35 40 tgg gct cgc ttc gcg cgc gct cct gcc cca gag gcc gct ggc ctc ctc 195 Trp Ala Arg Phe Ala Arg Ala Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Leu Leu 45 50 55 cac gac acc ttc ccc gac ggt ttc ctc tgg gcg gta ggc agc gcc gcc 243 His Asp Thr Phe Pro Asp Gly Phe Leu Trp Ala Val Gly Ser Ala Ala 60 65 70 75 tat cag acc gag ggc ggc tgg cga cag cac ggc aaa ggc gcg tcc atc 291 Tyr Gln Thr Glu Gly Gly Trp Arg Gln His Gly Lys Gly Ala Ser Ile 80 85 90 tgg gac act ttc acc cat cac tct ggg gcg gcc ccg tcc gac tcc ccg 339 Trp Asp Thr Phe Thr His His Ser Gly Ala Ala Pro Ser Asp Ser Pro 95 100 105 atc gtc gtg gcg ccg tcg ggt gcc ccg tcg cct ccc ctg tcc tcc act 387 Ile Val Val Ala Pro Ser Gly Ala Pro Ser Pro Pro Leu Ser Ser Thr 110 115 120 gga gat gtg gcc agc gat agt tac aac aac gtc tac cgc gac aca gag 435 Gly Asp Val Ala Ser Asp Ser Tyr Asn Asn Val Tyr Arg Asp Thr Glu 125 130 135 ggg ctg cgc gaa ctg ggg gtc acc cac tac cgc ttc tcc ata tcg tgg 483 Gly Leu Arg Glu Leu Gly Val Thr His Tyr Arg Phe Ser Ile Ser Trp 140 145 150 155 gcg cgg gtg ctc ccc aat ggc acc gcg ggc act ccc aac cgc gag ggg 531 Ala Arg Val Leu Pro Asn Gly Thr Ala Gly Thr Pro Asn Arg Glu Gly 160 165 170 ctg cgc tac tac cgg cgg ctg ctg gag cgg ctg cgg gag ctg ggc gtg 579 Leu Arg Tyr Tyr Arg Arg Leu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Leu Gly Val 175 180 185 cag ccg gtg gtt acc ctg tac cat tgg gac ctg cca cag cgc ctg cag 627 Gln Pro Val Val Thr Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Gln Arg Leu Gln 190 195 200 gac acc tat ggc gga tgg gcc aat cgc gcc ctg gcc gac cat ttc agg 675 Asp Thr Tyr Gly Gly Trp Ala Asn Arg Ala Leu Ala Asp His Phe Arg 205 210 215 gat tat gcc gag ctc tgc ttc cgc cac ttc ggt ggt cag gtc aag tac 723 Asp Tyr Ala Glu Leu Cys Phe Arg His Phe Gly Gly Gln Val Lys Tyr 220 225 230 235 tgg atc acc att gac aac ccc tac gtg gtg gcc tgg cac ggg tat gcc 771 Trp Ile Thr Ile Asp Asn Pro Tyr Val Val Ala Trp His Gly Tyr Ala 240 245 250 acc ggg cgc ctg gcc ccg ggc gtg agg ggc agc tcc agg ctc ggg tac 819 Thr Gly Arg Leu Ala Pro Gly Val Arg Gly Ser Ser Arg Leu Gly Tyr 255 260 265 ctg gtt gcc cac aac cta ctt ttg gct cat gcc aaa gtc tgg cat ctc 867 Leu Val Ala His Asn Leu Leu Leu Ala His Ala Lys Val Trp His Leu 270 275 280 tac aac acc tct ttc cgc ccc aca cag gga ggc cgg gtg tct atc gcc 915 Tyr Asn Thr Ser Phe Arg Pro Thr Gln Gly Gly Arg Val Ser Ile Ala 285 290 295 tta agc tcc cat tgg atc aat cct cga aga atg act gac tat aat atc 963 Leu Ser Ser His Trp Ile Asn Pro Arg Arg Met Thr Asp Tyr Asn Ile 300 305 310 315 aga gaa tgc cag aag tct ctt gac ttt gtg cta ggc tgg ttt gcc aaa 1011 Arg Glu Cys Gln Lys Ser Leu Asp Phe Val Leu Gly Trp Phe Ala Lys 320 325 330 ccc ata ttt att gat ggc gac tac cca gag agt atg aag aac aac ctc 1059 Pro Ile Phe Ile Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Ser Met Lys Asn Asn Leu 335 340 345 tcg tct ctt ctg cct gat ttt act gaa tct gag aag agg ctc atc aga 1107 Ser Ser Leu Leu Pro Asp Phe Thr Glu Ser Glu Lys Arg Leu Ile Arg 350 355 360 gga act gct gac ttt ttt gct ctc tcc ttc gga cca acc ttg agc ttt 1155 Gly Thr Ala Asp Phe Phe Ala Leu Ser Phe Gly Pro Thr Leu Ser Phe 365 370 375 cag cta ttg gac cct aac atg aag ttc cgc caa ttg gag tct ccc aac 1203 Gln Leu Leu Asp Pro Asn Met Lys Phe Arg Gln Leu Glu Ser Pro Asn 380 385 390 395 ctg agg cag ctt ctg tct tgg ata gat ctg gaa tat aac cac cct cca 1251 Leu Arg Gln Leu Leu Ser Trp Ile Asp Leu Glu Tyr Asn His Pro Pro 400 405 410 ata ttt att gtg gaa aat ggc tgg ttt gtc tcg gga acc acc aaa agg 1299 Ile Phe Ile Val Glu Asn Gly Trp Phe Val Ser Gly Thr Thr Lys Arg 415 420 425 gat gat gcc aaa tat atg tat tat ctc aag aag ttc ata atg gaa acc 1347 Asp Asp Ala Lys Tyr Met Tyr Tyr Leu Lys Lys Phe Ile Met Glu Thr 430 435 440 tta aaa gca atc aga ctg gat ggg gtc gac gtc att ggg tac acc gcg 1395 Leu Lys Ala Ile Arg Leu Asp Gly Val Asp Val Ile Gly Tyr Thr Ala 445 450 455 tgg tcg ctc atg gac ggt ttc gag tgg cat agg ggc tac agc atc cgg 1443 Trp Ser Leu Met Asp Gly Phe Glu Trp His Arg Gly Tyr Ser Ile Arg 460 465 470 475 cga gga ctc ttc tac gtt gac ttt ctg agt cag gac aag gag ctg ttg 1491 Arg Gly Leu Phe Tyr Val Asp Phe Leu Ser Gln Asp Lys Glu Leu Leu 480 485 490 cca aag tct tcg gcc ttg ttc tac caa aag ctg ata gag gac aat ggc 1539 Pro Lys Ser Ser Ala Leu Phe Tyr Gln Lys Leu Ile Glu Asp Asn Gly 495 500 505 ttt cct cct tta cct gaa aac cag ccc ctt gaa ggg aca ttt ccc tgt 1587 Phe Pro Pro Leu Pro Glu Asn Gln Pro Leu Glu Gly Thr Phe Pro Cys 510 515 520 gac ttt gct tgg gga gtt gtt gac aac tac gtt caa gtg gac act act 1635 Asp Phe Ala Trp Gly Val Val Asp Asn Tyr Val Gln Val Asp Thr Thr 525 530 535 ctc tct cag ttt act gac ccg aat gtc tat ctg tgg gat gtg cat cac 1683 Leu Ser Gln Phe Thr Asp Pro Asn Val Tyr Leu Trp Asp Val His His 540 545 550 555 agt aag agg ctt att aaa gta gac ggg gtt gta gcc aag aag aga aaa 1731 Ser Lys Arg Leu Ile Lys Val Asp Gly Val Val Ala Lys Lys Arg Lys 560 565 570 cct tac tgt gtt gat ttc tct gcc atc cgg cct cag ata acc tta ctt 1779 Pro Tyr Cys Val Asp Phe Ser Ala Ile Arg Pro Gln Ile Thr Leu Leu 575 580 585 cga gaa atg cgg gtc acc cac ttt cgc ttc tcc ctg gac tgg gcc ctg 1827 Arg Glu Met Arg Val Thr His Phe Arg Phe Ser Leu Asp Trp Ala Leu 590 595 600 atc ttg cct ctg ggt aac cag acc caa gtg aac cac acg gtt ctg cac 1875 Ile Leu Pro Leu Gly Asn Gln Thr Gln Val Asn His Thr Val Leu His 605 610 615 ttc tac cgc tgc atg atc agc gag ctg gtg cac gcc aac atc act cca 1923 Phe Tyr Arg Cys Met Ile Ser Glu Leu Val His Ala Asn Ile Thr Pro 620 625 630 635 gtg gtg gcc ctg tgg cag cca gca gcc ccg cac caa ggc ctg cca cat 1971 Val Val Ala Leu Trp Gln Pro Ala Ala Pro His Gln Gly Leu Pro His 640 645 650 gcc ctt gca aaa cat ggg gcc tgg gag aac ccg cac act gct ctg gcg 2019 Ala Leu Ala Lys His Gly Ala Trp Glu Asn Pro His Thr Ala Leu Ala 655 660 665 ttt gca gac tac gca aac ctg tgt ttt aaa gag ttg ggt cac tgg gtc 2067 Phe Ala Asp Tyr Ala Asn Leu Cys Phe Lys Glu Leu Gly His Trp Val 670 675 680 aat ctc tgg atc acc atg aac gag cca aac aca cgg aac atg acc tat 2115 Asn Leu Trp Ile Thr Met Asn Glu Pro Asn Thr Arg Asn Met Thr Tyr 685 690 695 cgt gcc ggg cac cac ctc ctg aga gcc cat gcc ttg gct tgg cat ctg 2163 Arg Ala Gly His His Leu Leu Arg Ala His Ala Leu Ala Trp His Leu 700 705 710 715 tac gat gac aag ttt agg gcg gct cag aaa ggc aaa ata tcc atc gcc 2211 Tyr Asp Asp Lys Phe Arg Ala Ala Gln Lys Gly Lys Ile Ser Ile Ala 720 725 730 ttg cag gct gac tgg ata gaa ccg gcc tgc cct ttc tct caa aat gac 2259 Leu Gln Ala Asp Trp Ile Glu Pro Ala Cys Pro Phe Ser Gln Asn Asp 735 740 745 aaa gaa gtg gcc gag aga gtt ttg gaa ttt gat ata ggc tgg ctg gca 2307 Lys Glu Val Ala Glu Arg Val Leu Glu Phe Asp Ile Gly Trp Leu Ala 750 755 760 gag cct att ttt ggt tcc gga gat tat cca cgt gtg atg agg gac tgg 2355 Glu Pro Ile Phe Gly Ser Gly Asp Tyr Pro Arg Val Met Arg Asp Trp 765 770 775 ctg aac caa aaa aac aat ttt ctt ttg ccc tat ttc acc gaa gat gaa 2403 Leu Asn Gln Lys Asn Asn Phe Leu Leu Pro Tyr Phe Thr Glu Asp Glu 780 785 790 795 aaa aag cta gtc cgg ggt tcc ttt gac ttc ctg gcg gtg agt cat tac 2451 Lys Lys Leu Val Arg Gly Ser Phe Asp Phe Leu Ala Val Ser His Tyr 800 805 810 acc acc att ctg gta gac tgg gaa aag gag gat ccg atg aaa tac aac 2499 Thr Thr Ile Leu Val Asp Trp Glu Lys Glu Asp Pro Met Lys Tyr Asn 815 820 825 gat tac ttg gag gta cag gag atg act gac atc aca tgg ctc aac tct 2547 Asp Tyr Leu Glu Val Gln Glu Met Thr Asp Ile Thr Trp Leu Asn Ser 830 835 840 ccc agt cag gtg gca gtg gtg cct tgg ggg ctg cgc aaa gtg ctc aac 2595 Pro Ser Gln Val Ala Val Val Pro Trp Gly Leu Arg Lys Val Leu Asn 845 850 855 tgg cta agg ttc aag tac gga gac ctc ccg atg tat gtg aca gcc aat 2643 Trp Leu Arg Phe Lys Tyr Gly Asp Leu Pro Met Tyr Val Thr Ala Asn 860 865 870 875 gga atc gat gat gac ccc cac gcc gag caa gac tca ctg agg atc tat 2691 Gly Ile Asp Asp Asp Pro His Ala Glu Gln Asp Ser Leu Arg Ile Tyr 880 885 890 tat att aag aat tat gtg aat gag gct ctg aaa gcc tac gtg ttg gac 2739 Tyr Ile Lys Asn Tyr Val Asn Glu Ala Leu Lys Ala Tyr Val Leu Asp 895 900 905 gac atc aac ctt tgt ggc tac ttt gcg tat tca ctt agt gat cgc tca 2787 Asp Ile Asn Leu Cys Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser Leu Ser Asp Arg Ser 910 915 920 gct ccc aag tct ggc ttt tat cga tat gct gcg aat cag ttt gag ccc 2835 Ala Pro Lys Ser Gly Phe Tyr Arg Tyr Ala Ala Asn Gln Phe Glu Pro 925 930 935 aaa cca tct atg aaa cat tac agg aga att att gac agc aat ggc ttc 2883 Lys Pro Ser Met Lys His Tyr Arg Arg Ile Ile Asp Ser Asn Gly Phe 940 945 950 955 ctg ggt tct gga aca ctg gga agg ttt tgt cca gaa gaa tac act gtg 2931 Leu Gly Ser Gly Thr Leu Gly Arg Phe Cys Pro Glu Glu Tyr Thr Val 960 965 970 tgc acc gaa tgt gga ttt ttt caa acc cgg aag tct ttg ctg gtc ttc 2979 Cys Thr Glu Cys Gly Phe Phe Gln Thr Arg Lys Ser Leu Leu Val Phe 975 980 985 atc tcg ttt ctt gtt ttt act ttt att att tct ctt gct ctc att ttt 3027 Ile Ser Phe Leu Val Phe Thr Phe Ile Ile Ser Leu Ala Leu Ile Phe 990 995 1000 cac tac tcc aag aaa ggc cag aga agt tat aag taatgtgaac gtctgcctgg 3080 His Tyr Ser Lys Lys Gly Gln Arg Ser Tyr Lys 1005 1010 ccattcgctt tgggatcaag atgtacacgc cgtcagccgt ttgcacctct ctgtgttgtg 3140 agccgcattc cacacatttc gattctagaa aacccttttt gtcatgggtg gtagaggttt 3200 taaacaggaa ttggtgagaa taaaatattg cagggtgaat ggtatctgaa tctgctctct 3260 ttggtggcaa ttacggaatt atactcacca cagtttctac agtgccccgg aatggaaggc 3320 atagaatacg gtagggataa cagtgccaag cagacagaag tttaaagaac aactttaggg 3380 acttgtttat ccatggccat ttttaaattc actcctgttg gggagtaaca ctctctcaat 3440 taccatctta acacctggac tttacctgat ccagttttac aaggtgaagt agaaaaatat 3500 ccagtaaagg tggccaagag ccctgagtcc agagcagccc attaagaagc actattccta 3560 ccaaatgctg ctaatgtcaa tttacaaata tacttagaaa gcacattatg gacatttgta 3620 ttcttgtgaa tgtttttgag gtgtgcccta aaccccagat ccttgagggc tttctcttac 3680 caactttcct ttcagagcct gcttgttgga gattcttccc cagccccctt cccctttccc 3740 tcttgctctg ccccacctcg ctccacccag cttgctccag cccaaagatt ctttatttgt 3800 ttctcattac cgaaggttgt gagccaccat gtggtttctg ggatttgaac tcatgacctc 3860 cggaggagct gtcatgctct taaccagccc atgttgaaga ttcttttgat aaatattcac 3920 aaaaaataaa gatgagccat gagctgttgg cctcttcgga agcggaaact gagtgatttg 3980 attgaacatc cttttatctt tgaccagacc ttggaatgaa tgcaatgacc tttcccacag 4040 gaagaaggag gagctctcag tcaaactgta aagaatgcct cttcagaata tgctgtcagt 4100 gcttggatgc catgatgttc aactttctta gtcgatccgg cagcaatcac agtgtgagca 4160 cactgggaac ctgtccttgc ggccgccgag atctaccgtg tgcttctgtg aagaggcttt 4220 gacgtagccc ctctttgagc tcttacacca tgctactgac ttctagaaag gctaattagg 4280 tcttcttcta cacctaatac cctaagtctt actgactctc acgggagaag tctctgtgct 4340 acacctgagt ggtcttattg ataaccctga taccagatca ggcaagataa atccgtcata 4400 gcaggcatgg ctacccttgc tgccacaggg tcacagcaca tagctcatca ccctgttatt 4460 cttcatcttg caatgtggta tggttttcct ggtgaatgat cagcttttgc tgtggtattc 4520 tttatacatc tggacttatt attgaaatca aatgctatag aatcaatagt ttattttatg 4580 tctatttttc ttgatcgcag agtaatatat attaattgta aaaaatttaa gaaacaaaaa 4640 ctatatgtaa agaaaaaatt ataatataat acagagatgc tgctgacagt tcctatgtgt 4700 tgtgttttgt atactgagat catgtgatac gtaggcatac atcttcttgg gtttttttgt 4760 ttttgttttt tgttttgttt tgttttgttt tggttttttg agatagggtt tctctgtata 4820 gccctggctg tcctggaact cactttgcag accaggctag cctcaaactc ttattcattt 4880 ttactgaagt aatttttctg tcattagtct tcaagagcaa aactttaata gttatggaga 4940 atattgccag aacagctcaa aactgtttta tttgttggtc caatttccca ttaattagtt 5000 caataataaa tatcatttag aaataaaaaa aa 5032

【００３６】 <210> 4 <211> 1650 <212> DNA <1> Mouse <220> <221> CDS <1> (1)...(1650) <400> 4 atg cta gcc cgc gcc cct cct cgc cgc ccg ccg cgg ctg gtg ctg ctc 48 Met Leu Ala Arg Ala Pro Pro Arg Arg Pro Pro Arg Leu Val Leu Leu 1 5 10 15 cgt ttg ctg ttg ctg cat ctg ctg ctg ctc gcc ctg cgc gcc cgc tgc 96 Arg Leu Leu Leu Leu His Leu Leu Leu Leu Ala Leu Arg Ala Arg Cys 20 25 30 ctg agc gct gag ccg ggt cag ggc gcg cag acc tgg gct cgc ttc gcg 144 Leu Ser Ala Glu Pro Gly Gln Gly Ala Gln Thr Trp Ala Arg Phe Ala 35 40 45 cgc gct cct gcc cca gag gcc gct ggc ctc ctc cac gac acc ttc ccc 192 Arg Ala Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Leu Leu His Asp Thr Phe Pro 50 55 60 gac ggt ttc ctc tgg gcg gta ggc agc gcc gcc tat cag acc gag ggc 240 Asp Gly Phe Leu Trp Ala Val Gly Ser Ala Ala Tyr Gln Thr Glu Gly 65 70 75 80 ggc tgg cga cag cac ggc aaa ggc gcg tcc atc tgg gac act ttc acc 288 Gly Trp Arg Gln His Gly Lys Gly Ala Ser Ile Trp Asp Thr Phe Thr 85 90 95 cat cac tct ggg gcg gcc ccg tcc gac tcc ccg atc gtc gtg gcg ccg 336 His His Ser Gly Ala Ala Pro Ser Asp Ser Pro Ile Val Val Ala Pro 100 105 110 tcg ggt gcc ccg tcg cct ccc ctg tcc tcc act gga gat gtg gcc agc 384 Ser Gly Ala Pro Ser Pro Pro Leu Ser Ser Thr Gly Asp Val Ala Ser 115 120 125 gat agt tac aac aac gtc tac cgc gac aca gag ggg ctg cgc gaa ctg 432 Asp Ser Tyr Asn Asn Val Tyr Arg Asp Thr Glu Gly Leu Arg Glu Leu 130 135 140 ggg gtc acc cac tac cgc ttc tcc ata tcg tgg gcg cgg gtg ctc ccc 480 Gly Val Thr His Tyr Arg Phe Ser Ile Ser Trp Ala Arg Val Leu Pro 145 150 155 160 aat ggc acc gcg ggc act ccc aac cgc gag ggg ctg cgc tac tac cgg 528 Asn Gly Thr Ala Gly Thr Pro Asn Arg Glu Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg 165 170 175 cgg ctg ctg gag cgg ctg cgg gag ctg ggc gtg cag ccg gtg gtt acc 576 Arg Leu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Leu Gly Val Gln Pro Val Val Thr 180 185 190 ctg tac cat tgg gac ctg cca cag cgc ctg cag gac acc tat ggc gga 624 Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Gln Arg Leu Gln Asp Thr Tyr Gly Gly 195 200 205 tgg gcc aat cgc gcc ctg gcc gac cat ttc agg gat tat gcc gag ctc 672 Trp Ala Asn Arg Ala Leu Ala Asp His Phe Arg Asp Tyr Ala Glu Leu 210 215 220 tgc ttc cgc cac ttc ggt ggt cag gtc aag tac tgg atc acc att gac 720 Cys Phe Arg His Phe Gly Gly Gln Val Lys Tyr Trp Ile Thr Ile Asp 225 230 235 240 aac ccc tac gtg gtg gcc tgg cac ggg tat gcc acc ggg cgc ctg gcc 768 Asn Pro Tyr Val Val Ala Trp His Gly Tyr Ala Thr Gly Arg Leu Ala 245 250 255 ccg ggc gtg agg ggc agc tcc agg ctc ggg tac ctg gtt gcc cac aac 816 Pro Gly Val Arg Gly Ser Ser Arg Leu Gly Tyr Leu Val Ala His Asn 260 265 270 cta ctt ttg gct cat gcc aaa gtc tgg cat ctc tac aac acc tct ttc 864 Leu Leu Leu Ala His Ala Lys Val Trp His Leu Tyr Asn Thr Ser Phe 275 280 285 cgc ccc aca cag gga ggc cgg gtg tct atc gcc tta agc tcc cat tgg 912 Arg Pro Thr Gln Gly Gly Arg Val Ser Ile Ala Leu Ser Ser His Trp 290 295 300 atc aat cct cga aga atg act gac tat aat atc aga gaa tgc cag aag 960 Ile Asn Pro Arg Arg Met Thr Asp Tyr Asn Ile Arg Glu Cys Gln Lys 305 310 315 320 tct ctt gac ttt gtg cta ggc tgg ttt gcc aaa ccc ata ttt att gat 1008 Ser Leu Asp Phe Val Leu Gly Trp Phe Ala Lys Pro Ile Phe Ile Asp 325 330 335 ggc gac tac cca gag agt atg aag aac aac ctc tcg tct ctt ctg cct 1056 Gly Asp Tyr Pro Glu Ser Met Lys Asn Asn Leu Ser Ser Leu Leu Pro 340 345 350 gat ttt act gaa tct gag aag agg ctc atc aga gga act gct gac ttt 1104 Asp Phe Thr Glu Ser Glu Lys Arg Leu Ile Arg Gly Thr Ala Asp Phe 355 360 365 ttt gct ctc tgc ttc gga cca acc ttg agc ttt cag cta ttg gac cct 1152 Phe Ala Leu Cys Phe Gly Pro Thr Leu Ser Phe Gln Leu Leu Asp Pro 370 375 380 aac atg aag ttc cgc caa ttg gag tct ccc aac ctg agg cag ctt cts 1200 Asn Met Lys Phe Arg Gln Leu Glu Ser Pro Asn Leu Arg Gln Leu Leu 385 390 395 400 tct tgg ata gat ctg gaa tat aac cac cct cca ata ttt att gtg gaa 1248 Ser Trp Ile Asp Leu Glu Tyr Asn His Pro Pro Ile Phe Ile Val Glu 405 410 415 aat ggc tgg ttt gtc tcg gga acc acc aaa agg gat gat gcc aaa tat 1296 Asn Gly Trp Phe Val Ser Gly Thr Thr Lys Arg Asp Asp Ala Lys Tyr 420 425 430 atg tat tat ctc aag aag ttc ata atg gaa acc tta aaa gca atc aga 1344 Met Tyr Tyr Leu Lys Lys Phe Ile Met Glu Thr Leu Lys Ala Ile Arg 435 440 445 ctg gat ggg gtc gac gtc att ggg tac acc gcg tgg tcg ctc atg gac 1392 Leu Asp Gly Val Asp Val Ile Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Met Asp 450 455 460 ggt ttc gag tgg cat agg ggc tac agc atc cgg cga gga ctc ttc tac 1440 Gly Phe Glu Trp His Arg Gly Tyr Ser Ile Arg Arg Gly Leu Phe Tyr 465 470 475 480 gtt gac ttt ctg agt cag gac aag gag ctg ttg cca aag tct tcg gcc 1488 Val Asp Phe Leu Ser Gln Asp Lys Glu Leu Leu Pro Lys Ser Ser Ala 485 490 495 ttg ttc tac caa aag ctg ata gag gac aat ggc ttt cct cct tta cct 1536 Leu Phe Tyr Gln Lys Leu Ile Glu Asp Asn Gly Phe Pro Pro Leu Pro 500 505 510 gaa aac cag ccc ctt gaa ggg aca ttt ccc tgt gac ttt gct tgg gga 1584 Glu Asn Gln Pro Leu Glu Gly Thr Phe Pro Cys Asp Phe Ala Trp Gly 515 520 525 gtt gtt gac aac tac gta caa gta agt cct ttg aca aaa ccc agt gtc 1632 Val Val Asp Asn Tyr Val Gln Val Ser Pro Leu Thr Lys Pro Ser Val 530 535 540 ggc ctc ttg ctt cct cac 1650 Gly Leu Leu Leu Pro His 545 550

【００３７】 <210> 5 <211> 3460 <212> DNA <1> Homo sapiens <220> <221> CDS <1> (60)...(3107) <400> 5 cagggaatga atggattttc ttcagcactg atgaaataac cacacgctat aggaataca 59 atg tcc aac ggg gga ttg caa aga tct gtc atc ctg tca gca ctt att 107 Met Ser Asn Gly Gly Leu Gln Arg Ser Val Ile Leu Ser Ala Leu Ile 1 5 10 15 ctg cta cga gct gtt act gga ttc tct gga gat gga aga gct ata tgg 155 Leu Leu Arg Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Arg Ala Ile Trp 20 25 30 tct aaa aat cct aat ttt act ccg gta aat gaa agt cag ctg ttt ctc 203 Ser Lys Asn Pro Asn Phe Thr Pro Val Asn Glu Ser Gln Leu Phe Leu 35 40 45 tat ggc act ttc cct aaa aac ttt ttc tgg ggt att ggg act gga gca 251 Tyr Gly Thr Phe Pro Lys Asn Phe Phe Trp Gly Ile Gly Thr Gly Ala 50 55 60 ttg caa gtg gaa ggg agt tgg aag aag gat gga aaa gga cct tct ata 299 Leu Gln Val Glu Gly Ser Trp Lys Lys Asp Gly Lys Gly Pro Ser Ile 65 70 75 80 tgg gat cat ttc atc cac aca cac ctt aaa aat gtc agc agc acg aat 347 Trp Asp His Phe Ile His Thr His Leu Lys Asn Val Ser Ser Thr Asn 85 90 95 ggt tcc agt gac agt tat att ttt ctg gaa aaa gac tta tca gcc ctg 395 Gly Ser Ser Asp Ser Tyr Ile Phe Leu Glu Lys Asp Leu Ser Ala Leu 100 105 110 gat ttt ata gga gtt tct ttt tat caa ttt tca att tcc tgg cca agg 443 Asp Phe Ile Gly Val Ser Phe Tyr Gln Phe Ser Ile Ser Trp Pro Arg 115 120 125 ctt ttc ccc gat gga ata gta aca gtt gcc aac gca aaa ggt ctg cag 491 Leu Phe Pro Asp Gly Ile Val Thr Val Ala Asn Ala Lys Gly Leu Gln 130 135 140 tac tac agt act ctt ctg gac gct cta gtg ctt aga aac att gaa cct 539 Tyr Tyr Ser Thr Leu Leu Asp Ala Leu Val Leu Arg Asn Ile Glu Pro 145 150 155 160 ata gtt act tta tac cac tgg gat ttg cct ttg gca cta caa gaa aaa 587 Ile Val Thr Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Ala Leu Gln Glu Lys 165 170 175 tat ggg ggg tgg aaa aat gat acc ata ata gat atc ttc aat gac tat 635 Tyr Gly Gly Trp Lys Asn Asp Thr Ile Ile Asp Ile Phe Asn Asp Tyr 180 185 190 gcc aca tac tgt ttc cag atg ttt ggg gac cgt gtc aaa tat tgg att 683 Ala Thr Tyr Cys Phe Gln Met Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp Ile 195 200 205 aca att cac aac cca tat cta gtg gct tgg cat ggg tat ggg aca ggt 731 Thr Ile His Asn Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Tyr Gly Thr Gly 210 215 220 atg cat gcc cct gga gag aag gga aat tta gca gct gtc tac act gtg 779 Met His Ala Pro Gly Glu Lys Gly Asn Leu Ala Ala Val Tyr Thr Val 225 230 235 240 gga cac aac ttg atc aag gct cac tcg aaa gtt tgg cat aac tac aac 827 Gly His Asn Leu Ile Lys Ala His Ser Lys Val Trp His Asn Tyr Asn 245 250 255 aca cat ttc cgc cca cat cag aag ggt tgg tta tcg atc acg ttg gga 875 Thr His Phe Arg Pro His Gln Lys Gly Trp Leu Ser Ile Thr Leu Gly 260 265 270 tct cat tgg atc gag cca aac cgg tcg gaa aac acg atg gat ata ttc 923 Ser His Trp Ile Glu Pro Asn Arg Ser Glu Asn Thr Met Asp Ile Phe 275 280 285 aaa tgt caa caa tcc atg gtt tct gtg ctt gga tgg ttt gcc aac cct 971 Lys Cys Gln Gln Ser Met Val Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro 290 295 300 atc cat ggg gat ggc gac tat cca gag ggg atg aga aag aag ttg ttc 1019 Ile His Gly Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Gly Met Arg Lys Lys Leu Phe 305 310 315 320 tcc gtt cta ccc att ttc tct gaa gca gag aag cat gag atg aga ggc 1067 Ser Val Leu Pro Ile Phe Ser Glu Ala Glu Lys His Glu Met Arg Gly 325 330 335 aca gct gat ttc ttt gcc ttt tct ttt gga ccc aac aac ttc aag ccc 1115 Thr Ala Asp Phe Phe Ala Phe Ser Phe Gly Pro Asn Asn Phe Lys Pro 340 345 350 cta aac acc atg gct aaa atg gga caa aat gtt tca ctt aat tta aga 1163 Leu Asn Thr Met Ala Lys Met Gly Gln Asn Val Ser Leu Asn Leu Arg 355 360 365 gaa gcg ctg aac tgg att aaa ctg gaa tac aac aac cct cga atc ttg 1211 Glu Ala Leu Asn Trp Ile Lys Leu Glu Tyr Asn Asn Pro Arg Ile Leu 370 375 380 att gct gag aat ggc tgg ttc aca gac agt cgt gtg aaa aca gaa gac 1259 Ile Ala Glu Asn Gly Trp Phe Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr Glu Asp 385 390 395 400 acc acg gcc atc tac atg atg aag aat ttc ctc agc cag gtg ctt caa 1307 Thr Thr Ala Ile Tyr Met Met Lys Asn Phe Leu Ser Gln Val Leu Gln 405 410 415 gca ata agg tta gat gaa ata cga gtg ttt ggt tat act gcc tgg tct 1355 Ala Ile Arg Leu Asp Glu Ile Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Ser 420 425 430 ctc ctg gat ggc ttt gaa tgg cag gat gct tac acc atc cgc cga gga 1403 Leu Leu Asp Gly Phe Glu Trp Gln Asp Ala Tyr Thr Ile Arg Arg Gly 435 440 445 tta ttt tat gtg gat ttt aac agt aaa cag aaa gag cgg aaa cct aag 1451 Leu Phe Tyr Val Asp Phe Asn Ser Lys Gln Lys Glu Arg Lys Pro Lys 450 455 460 tct tca gca cac tac tac aaa cag atc ata cga gaa aat ggt ttt tct 1499 Ser Ser Ala His Tyr Tyr Lys Gln Ile Ile Arg Glu Asn Gly Phe Ser 465 470 475 480 tta aaa gag tcc acg cca gat gtg cag ggc cag ttt ccc tgt gac ttc 1547 Leu Lys Glu Ser Thr Pro Asp Val Gln Gly Gln Phe Pro Cys Asp Phe 485 490 495 tcc tgg ggt gtc act gaa tct gtt ctt aag ccc gag tct gtg gct tcg 1595 Ser Trp Gly Val Thr Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu Ser Val Ala Ser 500 505 510 tcc cca cag ttc agc gat cct cat ctg tac gtg tgg aac gcc act ggc 1643 Ser Pro Gln Phe Ser Asp Pro His Leu Tyr Val Trp Asn Ala Thr Gly 515 520 525 aac aga ctg ttg cac cga gtg gaa ggg gtg agg ctg aaa aca cga ccc 1691 Asn Arg Leu Leu His Arg Val Glu Gly Val Arg Leu Lys Thr Arg Pro 530 535 540 gct caa tgc aca gat ttt gta aac atc aaa aaa caa ctt gag atg ttg 1739 Ala Gln Cys Thr Asp Phe Val Asn Ile Lys Lys Gln Leu Glu Met Leu 545 550 555 560 gca aga atg aaa gtc acc cac tac cgg ttt gct ctg gat tgg gcc tcg 1787 Ala Arg Met Lys Val Thr His Tyr Arg Phe Ala Leu Asp Trp Ala Ser 565 570 575 gtc ctt ccc act ggc aac ctg tcc gcg gtg aac cga cag gcc ctg agg 1835 Val Leu Pro Thr Gly Asn Leu Ser Ala Val Asn Arg Gln Ala Leu Arg 580 585 590 tac tac agg tgc gtg gtc agt gag ggg ctg aag ctt ggc atc tcc gcg 1883 Tyr Tyr Arg Cys Val Val Ser Glu Gly Leu Lys Leu Gly Ile Ser Ala 595 600 605 atg gtc acc ctg tat tat ccg acc cac gcc cac cta ggc ctc ccc gag 1931 Met Val Thr Leu Tyr Tyr Pro Thr His Ala His Leu Gly Leu Pro Glu 610 615 620 cct ctg ttg cat gcc gac ggg tgg ctg aac cca tcg acg gcc gag gcc 1979 Pro Leu Leu His Ala Asp Gly Trp Leu Asn Pro Ser Thr Ala Glu Ala 625 630 635 640 ttc cag gcc tac gct ggg ctg tgc ttc cag gag ctg ggg gac ctg gtg 2027 Phe Gln Ala Tyr Ala Gly Leu Cys Phe Gln Glu Leu Gly Asp Leu Val 645 650 655 aag ctc tgg atc acc atc aac gag cct aac cgg cta agt gac atc tac 2075 Lys Leu Trp Ile Thr Ile Asn Glu Pro Asn Arg Leu Ser Asp Ile Tyr 660 665 670 aac cgc tct ggc aac gac acc tac ggg gcg gcg cac aac ctg ctg gtg 2123 Asn Arg Ser Gly Asn Asp Thr Tyr Gly Ala Ala His Asn Leu Leu Val 675 680 685 gcc cac gcc ctg gcc tgg cgc ctc tac gac cag cag ttc agg ccg tca 2171 Ala His Ala Leu Ala Trp Arg Leu Tyr Asp Gln Gln Phe Arg Pro Ser 690 695 700 cag cgc ggg gcc gtg tcg ctg tcg ctg cac gcg gac tgg gcg gaa ccc 2219 Gln Arg Gly Ala Val Ser Leu Ser Leu His Ala Asp Trp Ala Glu Pro 705 710 715 720 gcc aac ccc tat gct gac tcg cac tgg agg gcg gcc gag cgc ttc ctg 2267 Ala Asn Pro Tyr Ala Asp Ser His Trp Arg Ala Ala Glu Arg Phe Leu 725 730 735 cag ttc gag atc gcc tgg ttc gcc gag ccg ctc ttc aag acc ggg gac 2315 Gln Phe Glu Ile Ala Trp Phe Ala Glu Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp 740 745 750 tac ccc gcg gcc atg agg gaa tac att gcc tcc aag cac cga cgg ggg 2363 Tyr Pro Ala Ala Met Arg Glu Tyr Ile Ala Ser Lys His Arg Arg Gly 755 760 765 ctt tcc agc tcg gcc ctg ccg cgc ctc acc gag gcc gaa agg agg ctg 2411 Leu Ser Ser Ser Ala Leu Pro Arg Leu Thr Glu Ala Glu Arg Arg Leu 770 775 780 ctc aag ggc acg gtc gac ttc tgc gcg ctc aac cac ttc acc act agg 2459 Leu Lys Gly Thr Val Asp Phe Cys Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg 785 790 795 800 ttc gtg atg cac gag cag ctg gcc ggc agc cgc tac gac tcg gac agg 2507 Phe Val Met His Glu Gln Leu Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ser Asp Arg 805 810 815 gac atc cag ttt ctg cag gac atc acc cgc ctg agc tcc ccc acg cgc 2555 Asp Ile Gln Phe Leu Gln Asp Ile Thr Arg Leu Ser Ser Pro Thr Arg 820 825 830 ctg gct gtg att ccc tgg ggg gtg cgc aag ctg ctg cgg tgg gtc cgg 2603 Leu Ala Val Ile Pro Trp Gly Val Arg Lys Leu Leu Arg Trp Val Arg 835 840 845 agg aac tac ggc gac atg gac att tac atc acc gcc agt ggc atc gac 2651 Arg Asn Tyr Gly Asp Met Asp Ile Tyr Ile Thr Ala Ser Gly Ile Asp 850 855 860 gac cag gct ctg gag gat gac cgg ctc cgg aag tac tac cta ggg aag 2699 Asp Gln Ala Leu Glu Asp Asp Arg Leu Arg Lys Tyr Tyr Leu Gly Lys 865 870 875 880 tac ctt cag gag gtg ctg aaa gca tac ctg att gat aaa gtc aga atc 2747 Tyr Leu Gln Glu Val Leu Lys Ala Tyr Leu Ile Asp Lys Val Arg Ile 885 890 895 aaa ggc tat tat gca ttc aaa ctg gct gaa gag aaa tct aaa ccc aga 2795 Lys Gly Tyr Tyr Ala Phe Lys Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg 900 905 910 ttt gga ttc ttc aca tct gat ttt aaa gct aaa tcc tca ata caa ttt 2843 Phe Gly Phe Phe Thr Ser Asp Phe Lys Ala Lys Ser Ser Ile Gln Phe 915 920 925 tac aac aaa gtg atc agc agc agg ggc ttc cct ttt gag aac agt agt 2891 Tyr Asn Lys Val Ile Ser Ser Arg Gly Phe Pro Phe Glu Asn Ser Ser 930 935 940 tct aga tgc agt cag acc caa gaa aat aca gag tgc act gtc tgc tta 2939 Ser Arg Cys Ser Gln Thr Gln Glu Asn Thr Glu Cys Thr Val Cys Leu 945 950 955 960 ttc ctt gtg cag aag aaa cca ctg ata ttc ctg ggt tgt tgc ttc ttc 2987 Phe Leu Val Gln Lys Lys Pro Leu Ile Phe Leu Gly Cys Cys Phe Phe 965 970 975 tcc acc ctg gtt cta ctc tta tca att gcc att ttt caa agg cag aag 3035 Ser Thr Leu Val Leu Leu Leu Ser Ile Ala Ile Phe Gln Arg Gln Lys 980 985 990 aga aga aag ttt tgg aaa gca aaa aac tta caa cac ata cca tta aag 3083 Arg Arg Lys Phe Trp Lys Ala Lys Asn Leu Gln His Ile Pro Leu Lys 995 1000 1005 aaa ggc aag aga gtt gtt agc taaactgatc tgtctgcatg atagacagtt 3134 Lys Gly Lys Arg Val Val Ser 1010 1015 taaaaattca tcccagttcc atatgctggt aacttacagg agatatacct gtattataga 3194 aagacaatct gagatacagc tgtaaccaag gtgatgacaa ttgtctctgc tgtgtggttc 3254 aaagaacatt cccttaggtg ttgacatcag tgaactcagt tcttggatgt aaacataaag 3314 gcttcatcct gacagtaagc tatgaggatt acatgctaca ttgcttctta aagtttcatc 3374 aactgtattc catcattctg ctttagcttt catctctacc aatagctact tgtggtacaa 3434 taaattattt ttaagaagaa aaaaaa 3460

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/10 １０１ Ａ６１Ｐ 9/10 １０１ 9/12 9/12 25/00 25/00 Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者 飯田 卓子 東京都町田市旭町３丁目６番６号 協和醗 酵工業株式会社東京研究所内 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA04 DA02 EA02 EA04 GA11 HA17 4C084 AA13 ZA362 ZA422 ZA452 ZC332 ZC352 ZC522 4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 ZA36 ZA42 ZA45 ZC33 ZC35 ZC52

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】クロソ遺伝子ｃＤＮＡを組み込んだ組換え
   ベクターの有効量を含んでなる、哺乳動物の血管内皮機
   能劣化による病態を改善または予防するための医薬組成
   物。
2. 【請求項２】クロソ遺伝子ｃＤＮＡがＷＯ９８／２９５
   ４４に記載の老化抑制遺伝子ｃＤＮＡである、請求項１
   記載の医薬組成物。
3. 【請求項３】クロソ遺伝子ｃＤＮＡが配列番号１、２、
   ３、４および５で表される塩基配列から選ばれる塩基配
   列を有するＤＮＡ、または該ＤＮＡとストリンジェント
   な条件下でハイブリダイズするＤＮＡである請求項１記
   載の医薬組成物。
4. 【請求項４】血管内皮機能劣化による病態が、高血圧、
   動脈硬化、高コレステロール血症、糖尿病、心筋梗塞お
   よび脳梗塞からなる群から選ばれる疾患である請求項１
   記載の医薬組成物。
5. 【請求項５】組換えベクターが、クロソ遺伝子ｃＤＮＡ
   をプラスミドベクターおよびウイルスベクターから選ば
   れるベクターに組み込んだものである請求項１記載の医
   薬組成物。
6. 【請求項６】ウイルスベクターが、レトロウイルスベク
   ター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベ
   クターおよびヘルペスウイルスベクターから選ばれる請
   求項１記載の医薬組成物。
7. 【請求項７】クロソ遺伝子ｃＤＮＡをウイルスベクター
   に組み込んだクロソ遺伝子組換えベクター。
8. 【請求項８】ウイルスベクターが、レトロウイルスベク
   ター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベ
   クターおよびヘルペスウイルスベクターから選ばれる請
   求項７記載のクロソ遺伝子組換えベクター。
9. 【請求項９】請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成
   物を、血管内皮機能劣化による病態を持つ哺乳動物また
   は該病態に陥る可能性のある哺乳動物に、その有効量を
   投与することにより、該病態の治療または予防を行う方
   法。
10. 【請求項１０】血管内皮機能劣化による病態が、高血
    圧、動脈硬化、高コレステロール血症、糖尿病、心筋梗
    塞および脳梗塞からなる群から選ばれる疾患である請求
    項９記載の方法。