JP2000247992A - New saccharide chain primer - Google Patents
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、糖鎖生合成に使用
しうる新規糖鎖プライマーに関する。The present invention relates to a novel sugar chain primer that can be used for sugar chain biosynthesis.
【０００２】[0002]
【従来の技術】真核細胞の表面は、通常様々の糖により
修飾されたり、被覆されている。これらの糖は、膜タン
パク質や脂質との共有結合により形成された糖タンパク
質や糖脂質のオリゴ糖側鎖として、あるいはプロテオグ
リカン分子の中の多糖側鎖として存在する。オリゴ糖側
鎖の糖の配列は非常に多様であり、多様に枝別れし、共
有結合して、互いにつながりあっている。そしてこれら
の糖鎖は、細胞の認識・接着、情報伝達、及び細胞機能
の制御に重要な役割を果たしている。このためこれらの
糖鎖の機能の研究のためには、上記のように多様な配列
を有する糖鎖を得る必要がある。糖鎖を得る方法として
は従来、化学的に合成する方法；分解酵素による方法；
そして糖転移酵素を用いる方法などがあるが、化学的に
合成する方法では、何段階もの工程が必要であり、収量
が低く、合成工程の設計が複雑であるなどの欠点があ
る。分解酵素による方法では、使用できる酵素が限られ
ているうえ、糖の供与体が限られているという欠点があ
る。また糖転移酵素を用いる方法では、使用できる転移
酵素が少なく、出発原料として使用する糖−ヌクレオチ
ドが高価であるなどの欠点がある。2. Description of the Related Art The surface of eukaryotic cells is usually modified or coated with various sugars. These sugars exist as oligosaccharide side chains of glycoproteins and glycolipids formed by covalent bonds with membrane proteins and lipids, or as polysaccharide side chains in proteoglycan molecules. The sequences of the sugars in the oligosaccharide side chains are very diverse and are branched and covalently linked to each other. These sugar chains play important roles in cell recognition / adhesion, information transmission, and control of cell functions. Therefore, in order to study the functions of these sugar chains, it is necessary to obtain sugar chains having various sequences as described above. Conventionally, as a method for obtaining a sugar chain, a method of chemically synthesizing;
Although there is a method using a glycosyltransferase, etc., a method of chemically synthesizing requires several steps, has drawbacks such as a low yield and a complicated design of the synthesis step. The method using a decomposing enzyme has the drawbacks that the enzymes that can be used are limited and that the sugar donor is limited. In addition, the method using a glycosyltransferase has the drawbacks that few transferases can be used and that a sugar-nucleotide used as a starting material is expensive.
【０００３】一方、ラクトシドプライマーをＢ１６マウ
スメラノーマ細胞やラットＰＣ１２細胞に与えると、内
因性のグリコスフィンゴ脂質の生合成が阻害されるとと
もに、細胞がそのプライマーに糖を付加する（グリコシ
ル化する）ことは、Biochem.Biophys. Res. Comm. 241,
698-703 (1997) (Miura, Y., et al.) 及びJ. Bioche
m. 124, 148-156 (1998) (Nakajima, H., et al.) に記
載されているが、その付加効率や糖鎖生合成におけるそ
の用途についてはあまり検討されていない。On the other hand, when a lactoside primer is given to B16 mouse melanoma cells or rat PC12 cells, the biosynthesis of endogenous glycosphingolipids is inhibited, and the cells add sugars (glycosylate) to the primers. That is, Biochem. Biophys. Res. Comm. 241,
698-703 (1997) (Miura, Y., et al.) And J. Bioche
m. 124, 148-156 (1998) (Nakajima, H., et al.), but its addition efficiency and its use in sugar chain biosynthesis have not been studied much.
【０００４】上記のような理由から、従来の方法では、
目的とする糖鎖を効率よく合成することが困難であり、
所望の糖を所望の位置に含む糖鎖を、比較的簡単な工程
により好収量で合成することができる方法が求められて
いた。[0004] For the above reasons, in the conventional method,
It is difficult to efficiently synthesize the target sugar chain,
There has been a demand for a method capable of synthesizing a sugar chain containing a desired saccharide at a desired position by a relatively simple process in a high yield.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、従来の
方法に比較して、比較的簡単な工程により好収量で所望
の糖を所望の位置に含む糖鎖を合成することができる方
法を求めて鋭意研究を行った結果、特定の官能基をその
末端に有していてもよいアルキル鎖をオリゴ糖鎖に結合
させた化合物を糖鎖プライマーとしてある種の細胞に与
えると、細胞がこれを細胞内に取り込んで、オリゴ糖鎖
の部分に更に糖を付加（グリコシル化）し、付加生成物
を細胞内に蓄積せずに細胞外に分泌すること、また糖鎖
プライマーを与える細胞の種類によって、付加される糖
の種類が異なることが見出され、糖鎖プライマーの糖鎖
の種類、そして糖鎖プライマーを与える細胞の種類を組
み合わせることによって、所望の構造の糖鎖を細胞に生
合成させることができることを見出して、本発明を完成
させた。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have developed a method for synthesizing a sugar chain containing a desired sugar at a desired position in a relatively high yield by a relatively simple process as compared with the conventional method. As a result of intensive research for the compound, when a compound in which an alkyl chain optionally having a specific functional group at its terminal is bonded to an oligosaccharide chain is given to a certain cell as a sugar chain primer, the cell This is taken into the cell, the sugar is further added to the oligosaccharide chain (glycosylation), the addition product is secreted out of the cell without accumulating in the cell, and the sugar chain is given to the cell that gives the sugar chain primer. It has been found that the type of sugar to be added differs depending on the type. By combining the type of sugar chain of the sugar chain primer and the type of cell to which the sugar chain primer is to be applied, a sugar chain having a desired structure is produced in the cell. Can be synthesized And it found that the wear, has led to the completion of the present invention.
【０００６】[0006]
本発明は、式（Ｉ）：（Ｇ1)x（Ｇ2)y（Ｇ3)z−Ｌ−Ｘ 〔式中、Ｇ1、Ｇ2及びＧ3は、それぞれ独立して環状構
造の単糖残基又はその誘導体であり；Ｌは、−Ｏ−（Ｃ
Ｈ2)n−、−Ｓ−（ＣＨ2)n−、及び−ＮＨ−（ＣＨ2)n
−から選択される連結基であり；Ｘは、−Ｎ3、−Ｎ
Ｈ2、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、及び−Ｃ1-Ｃ4アルキルから
選択される基であり；ｘ、ｙ、及びｚは、それぞれ独立
して０〜１０の整数であり；ｎは、８〜２０の整数であ
る。ただしｘ、ｙ及びｚの全てが同時に０であることは
ない〕で示される化合物に関する。The present invention relates to a compound represented by the formula (I): (G 1 ) x (G 2 ) y (G 3 ) z -L X wherein G 1 , G 2 and G 3 each independently represent a single ring structure. L is a sugar residue or a derivative thereof;
H 2) n -, - S- (CH 2) n -, and -NH- (CH 2) n
X is -N 3 , -N
H 2, -OH, a group selected -COOH, and from -C 1 -C 4 alkyl; x, y, and z are each independently an integer of 0; n is 8 to It is an integer of 20. However, all of x, y and z are not 0 at the same time].
【０００７】[0007]
【発明の実施の形態】本発明の式（Ｉ）の化合物におい
て、Ｇ1、Ｇ2及びＧ3は、それぞれ独立して環状構造の
単糖残基又はその誘導体である。単糖としては、いかな
る単糖を使用することもできるが、なかでもペントース
及びヘキソースを使用するのが好ましい。またアルドー
ス、ケトースのいずれも使用することができる。具体的
には、Ｄ−グルコース（Ｇｌｃ）、Ｄ−及びＬ−ガラク
トース（Ｇａｌ）、Ｄ−マンノース（Ｍａｎ）、Ｄ−タ
ロース（Ｔａｌ）などのアルドヘキソース；Ｄ−及びＬ
−アラビノース（Ａｒａ）、Ｄ−キシロース（Ｘｙ
ｌ）、Ｄ−及びＬ−リキソース（Ｌｙｘ）、Ｄ−リボー
ス（Ｒｉｂ）などのアルドペントース；Ｄ−フルクトー
ス（Ｆｒｕ）、Ｄ−プシコース、Ｌ−ソルボース、Ｄ−
タガトースなどのケトヘキソース；並びにＤ−リブロー
ス、Ｄ−及びＬ−キシルロースなどのケトペントース、
更にはＬ−フコース（Ｆｕｃ）、及びシアル酸（Ｓｉ
ａ）を使用することができる。なかでもＤ−グルコー
ス、Ｄ−及びＬ−ガラクトース、Ｄ−マンノース、Ｄ−
キシロースを挙げることができる。またその誘導体とし
ては、上記の単糖のＮ−アシルアミノ糖（特にＮ−アセ
チルアミノ糖）、Ｏ−アシル糖（特にＯ−アセチル
糖）、デオキシ糖、ウロン酸などを使用することができ
る。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION In the compound of formula (I) of the present invention, G 1 , G 2 and G 3 are each independently a monosaccharide residue having a cyclic structure or a derivative thereof. As the monosaccharide, any monosaccharide can be used, and among them, pentose and hexose are preferable. Either aldose or ketose can be used. Specifically, aldohexoses such as D-glucose (Glc), D- and L-galactose (Gal), D-mannose (Man), D-talose (Tal); D- and L-
-Arabinose (Ara), D-xylose (Xy
l), aldopentoses such as D- and L-lyxose (Lyx), D-ribose (Rib); D-fructose (Fru), D-psicose, L-sorbose, D-
Ketohexoses such as tagatose; and ketopentoses such as D-ribulose, D- and L-xylulose,
Further, L-fucose (Fuc) and sialic acid (Si)
a) can be used. Among them, D-glucose, D- and L-galactose, D-mannose, D-
Xylose can be mentioned. As the derivatives thereof, the above-mentioned monosaccharides such as N-acylamino sugar (especially N-acetylamino sugar), O-acyl sugar (especially O-acetyl sugar), deoxy sugar, uronic acid and the like can be used.
【０００８】また、（Ｇ1)x（Ｇ2)y（Ｇ3)zのｘ、ｙ及
びｚは、それぞれ独立して０〜１０の整数である。ｘ、
ｙ及びｚは、それぞれ独立して、好ましくは０〜５、更
に好ましくは０〜３、更に特に好ましくは０〜２であ
る。ただしｘ、ｙ及びｚの全てが同時に０であることは
ない。 Further, (G 1) x (G 2) y (G 3) z in x, y and z are each independently 0 integer. x,
y and z are each independently preferably 0 to 5, more preferably 0 to 3, and particularly preferably 0 to 2. However, all of x, y, and z are not simultaneously 0.
【０００９】（Ｇ1)x（Ｇ2)y（Ｇ3)zの好ましい例とし
ては、（Ｇｌｃ)2；（Ｍａｎ)2；（Ｇｌｃ)1−（Ｍａ
ｎ)1；（Ｇａｌ)1−（Ｇｌｃ)1；（Ｇａｌ)1；（Ｇｌ
ｃ)1；（Ｍａｎ)1；及び（Ｘｙｌ)1などを挙げることが
できる。なかでも特に好ましいのは、（Ｇ1)x（Ｇ2)
y（Ｇ3)zが、Ｄ−Ｇａｌ−Ｄ−Ｇｌｃ、つまりラクトー
ス基である式（Ｉ）の化合物である。Preferred examples of (G 1 ) x (G 2 ) y (G 3 ) z include (Glc) 2 ; (Man) 2 ; (Glc) 1- (Ma)
n) 1 ; (Gal) 1- (Glc) 1 ; (Gal) 1 ; (Gl
c) 1 ; (Man) 1 ; and (Xyl) 1 . Particularly preferred are (G 1 ) x (G 2 )
y (G 3) z is a compound of formula (I) wherein D-Gal-D-Glc, i.e. lactose group.
【００１０】式（Ｉ）の化合物において、Ｌは、−Ｏ−
（ＣＨ2)n−、−Ｓ−（ＣＨ2)n−、及び−ＮＨ−（ＣＨ
2)n−から選択される連結基であり、−Ｌ−は、好まし
くは−Ｏ−（ＣＨ2)n−である。ここで、ｎは、８〜２
０の整数であり、ｎは、好ましくは８〜１６、特に好ま
しくは１２である。ｎが、８未満である場合、又は２０
を越える場合には、式（Ｉ）の化合物を糖鎖プライマー
として細胞に与えても、糖鎖プライマーに対する細胞の
糖付加能は低い。In the compound of formula (I), L is -O-
(CH 2) n -, - S- (CH 2) n -, and -NH- (CH
2) n - it is a linking group selected from,-L-is preferably -O- (CH 2) n - is. Here, n is 8 to 2
It is an integer of 0, and n is preferably 8 to 16, and particularly preferably 12. n is less than 8, or 20
In the case of exceeding the above, even if the compound of the formula (I) is given to a cell as a sugar chain primer, the ability of the cell to add sugar to the sugar chain primer is low.
【００１１】式（Ｉ）の化合物において、Ｘは、−
Ｎ3、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、及び−Ｃ1-Ｃ4ア
ルキルから選択される基である。Ｃ1-Ｃ4アルキルとし
ては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、
ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、tert−ブチルなどが挙げられ
るが、メチルであるのが好ましい。なかでもＸは、−Ｎ
3、−ＮＨ2、−ＯＨ、又は−ＣＯＯＨであるのが好まし
く、−Ｎ3又は−ＮＨ2であるのが特に好ましく、−Ｎ3
であるのが更に特に好ましい。In the compound of formula (I), X is-
N 3, -NH 2, a group selected -OH, -COOH, and from -C 1 -C 4 alkyl. As C 1 -C 4 alkyl, methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl,
Examples include n-butyl, i-butyl, tert-butyl and the like, with methyl being preferred. X is -N
3, -NH 2, -OH, or is preferably from -COOH, particularly preferably in the range of -N 3 or -NH 2, -N 3
Is more particularly preferred.
【００１２】上記の式（Ｉ）の化合物としては、以下の
化合物を好ましい化合物として挙げることができる。Ｇ
ａｌβ１−４Ｇｌｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇａｌ
β１−３ＧｌｃＮＡｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌ
ｃＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ
3；Ｇｌｃα１−２Ｇｌｃα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇ
ｌｃα１−３Ｇｌｃα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃ
α１−４Ｇｌｃα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃα１
−６Ｇｌｃα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃα１−２
Ｇｌｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃα１−３Ｇｌ
ｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃα１−４Ｇｌｃβ
−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃα１−６Ｇｌｃβ−Ｏ
−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃβ１−２Ｇｌｃβ−Ｏ−
（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃβ１−３Ｇｌｃβ−Ｏ−（Ｃ
Ｈ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃβ１−４Ｇｌｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1
2−Ｎ3；Ｇｌｃβ１−６Ｇｌｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ
3；ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−
Ｎ3；Ｍａｎα１−２Ｍａｎα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；
Ｍａｎα１−３Ｍａｎα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｍａ
ｎα１−６Ｍａｎα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；ＧｌｃＮ
Ａｃβ１−２Ｍａｎα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃ
ＮＡｃβ１−４Ｍａｎα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌ
ｃＮＡｃβ１−６Ｍａｎα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇ
ａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；
ＧａｌＮＡｃα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇａｌβ−Ｏ
−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇａｌα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；
ＧａｌＮＡｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｇｌｃβ−Ｏ
−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；ＧｌｃＮＡｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2
−Ｎ3；ＧｌｃＮＡｃα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｍａｎ
β−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3；Ｍａｎα−Ｏ−（ＣＨ2)1 2
−Ｎ3；及びＸｙｌβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3 As the compounds of the above formula (I), the following compounds can be mentioned as preferred compounds. G
alβ1-4Glcβ-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Gal
β1-3GlcNAcβ-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Gl
cNAcβ1-4GlcNAcβ-O- (CH 2) 1 2 -N
3; Glcα1-2Glcα-O- (CH 2 ) 1 2 -N 3; G
lcα1-3Glcα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Glc
α1-4Glcα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Glcα1
-6Glcα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Glcα1-2
Glcβ-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Glcα1-3Gl
cβ-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Glcα1-4Glcβ
-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Glcα1-6Glcβ-O
- (CH 2) 1 2 -N 3; Glcβ1-2Glcβ-O-
(CH 2) 1 2 -N 3 ; Glcβ1-3Glcβ-O- (C
H 2) 1 2 -N 3; Glcβ1-4Glcβ-O- (CH 2) 1
2 -N 3; Glcβ1-6Glcβ-O- ( CH 2) 1 2 -N
3; GlcNAcβ1-3Galβ-O- (CH 2 ) 1 2 -
N 3; Manα1-2Manα-O- (CH 2) 1 2 -N 3;
Manα1-3Manα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Ma
nα1-6Manα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; GlcN
Acβ1-2Manα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Glc
NAcβ1-4Manα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Gl
cNAcβ1-6Manα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; G
alβ1-4GlcNAcβ-O- (CH 2) 1 2 -N 3;
GalNAcα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Galβ-O
- (CH 2) 1 2 -N 3; Galα-O- (CH 2) 1 2 -N 3;
GalNAcβ-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Glcβ-O
- (CH 2) 1 2 -N 3; GlcNAcβ-O- (CH 2) 1 2
-N 3; GlcNAcα-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Man
β-O- (CH 2) 1 2 -N 3; Manα-O- (CH 2) 1 2
-N 3; and Xylβ-O- (CH 2) 1 2 -N 3
【００１３】上記の式（Ｉ）の化合物のうち、以下の
式：Among the compounds of the above formula (I), the following formula:
【００１４】[0014]
【化１】 Embedded image
【００１５】で示されるＤ−Ｇａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌ
ｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3が、特に好ましい式（Ｉ）
の化合物である。D-Galβ1-4-D-Gl represented by
cβ-O- (CH 2) is 1 2 -N 3, particularly preferred compounds of formula (I)
Is a compound of
【００１６】本発明はまた、上記の式（Ｉ）で示される
化合物の製造方法であって、式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′は、それぞれ上記に記載
の定義を有するＧ1、Ｇ2、Ｇ3のヒドロキシル基が保護
された基であり、ｘ、ｙ、及びｚは、上記に記載のとお
りである）で示される化合物を臭素化して、−（Ｇ3′)
zの末端の単糖のアノマー炭素に結合するヒドロキシル
基が臭素化されている化合物である、式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z−Ｂｒ （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′、ｘ、ｙ、及びｚは、上
記に記載のとおりである）で示される化合物を得；得ら
れた化合物を、テトラヒドロフランなどの溶媒中、Ｈｇ
Ｂｒ2−Ｈｇ（ＣＨ)2又は銀トリフラートなどの存在下
で、式：Ｈ−Ｌ−Ｘ′（式中、Ｌは、上記に記載のとお
りであり、Ｘ′は、−ＯＨ又は−Ｃ1-Ｃ4アルキルであ
る）で示される化合物と反応させて、保護基を有する式
（Ｉ）の化合物（ここで、Ｘは、−ＯＨ又は−Ｃ1-Ｃ4
アルキルである）である式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z−Ｌ−Ｘ′ （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′、ｘ、ｙ、ｚ、Ｌ、及び
Ｘ′は、上記に記載のとおりである）で示される化合物
を得；得られた化合物のうちＸ′が−ＯＨである化合物
を、ピリジンなどの溶媒中、塩化メシルなどのメシル化
剤と反応させることによってメシル化して、式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z−Ｌ−ＯＭｓ （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′、ｘ、ｙ、ｚ、及びＬ
は、上記に記載のとおりであり、Ｍｓは、メシル基であ
る）で示される化合物を得；得られた化合物を、ジメチ
ルフランなどの溶媒中、アジ化ナトリウムなどのアジド
化剤と反応させることによってアジド化して、保護基を
有する式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｘは、−Ｎ3であ
る）である式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z−Ｌ−Ｎ3 （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′、ｘ、ｙ、ｚ、及びＬ
は、上記に記載のとおりである）で示される化合物を
得；こうして得られた保護基を有する式（Ｉ）の化合物
（ここで、Ｘは、−ＯＨ、−Ｃ1-Ｃ4アルキル、又は−
Ｎ3である）から、ナトリウムメチラート−メタノール
などの存在下で保護基を除去して、式（Ｉ）の化合物
（ここで、Ｘは、−ＯＨ、−Ｃ1-Ｃ4アルキル、又は−
Ｎ3である）を得；更に式（Ｉ）の化合物の基：Ｘを、
−ＮＨ2又は−ＣＯＯＨに変換することを含む方法に関
する。The present invention also provides a process for producing the compound represented by the above formula (I), which comprises the following formula: (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z 1 ′, G 2 ′ and G 3 ′ are groups in which the hydroxyl groups of G 1 , G 2 and G 3 each have the definition described above are protected, and x, y and z are as defined above. Is brominated to give-(G 3 ')
A compound wherein the hydroxyl group attached to the anomeric carbon of the terminal monosaccharide at z is brominated, having the formula: (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z -Br (wherein G 1 ′, G 2 ′, G 3 ′, x, y, and z are as described above); the obtained compound is treated with Hg in a solvent such as tetrahydrofuran.
In the presence of Br 2 —Hg (CH) 2 or silver triflate or the like, the formula: HLX ′ (where L is as described above and X ′ is —OH or —C 1 -C 4 alkyl) to react with a compound of formula (I) having a protecting group, wherein X is -OH or -C 1 -C 4
Which is alkyl) (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z −L−X ′ (where G 1 ′, G 2 ′, G 3 ′, x, y , Z, L, and X ′ are as described above); of the resulting compound, X ′ is —OH in a solvent such as pyridine, and mesyl chloride and the like. (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z -L-OMs (wherein G 1 ′, G 2 ′, G 3 ', x, y, z, and L
Is as described above, and Ms is a mesyl group); reacting the obtained compound with an azidating agent such as sodium azide in a solvent such as dimethylfuran. (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z which is a compound of formula (I) having a protecting group, wherein X is —N 3 , -L-N 3 (where G 1 ′, G 2 ′, G 3 ′, x, y, z, and L
Is as described above); thus obtained compound of formula (I) having a protecting group, wherein X is -OH, -C 1 -C 4 alkyl, or −
N 3 ), the protecting group is removed in the presence of sodium methylate-methanol or the like to form a compound of formula (I) wherein X is -OH, -C 1 -C 4 alkyl, or-
N 3 ); furthermore, the group of the compound of formula (I): X
It said method comprising converting the -NH 2 or -COOH.
【００１７】本方法において出発化合物として使用する
式：（Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)zで示される化合物
は、公知の方法で合成することのできる式：（Ｇ1)
x（Ｇ2)y（Ｇ3)zで示される化合物のヒドロキシル基
を、例えばベンジル基などの保護基で保護することによ
って合成することができる。ベンジル基で保護する場合
には、式：（Ｇ1)x（Ｇ2)y（Ｇ3)zで示される化合物
を、ピリジンなどの溶媒中、塩化ベンジルなどのベンジ
ル化剤と反応させる。The compound represented by the formula (G 1 ') x (G 2 ') y (G 3 ') z used as a starting compound in this method can be synthesized by a known method: (G 1 )
It can be synthesized by protecting the hydroxyl group of the compound represented by x (G 2 ) y (G 3 ) z with a protecting group such as a benzyl group. When protecting with a benzyl group, the compound represented by the formula: (G 1 ) x (G 2 ) y (G 3 ) z is reacted with a benzylating agent such as benzyl chloride in a solvent such as pyridine.
【００１８】また本方法においては、Ｘが、−ＮＨ2で
ある式（Ｉ）の化合物は、上記で得られたＸが−Ｎ3で
ある式（Ｉ）の化合物から、当業者には公知の方法、例
えばリンドラー触媒などを用いる接触還元により調製す
ることができる。また、Ｘが、−ＣＯＯＨである式
（Ｉ）の化合物は、上記のように合成したＸが−ＯＨで
ある式（Ｉ）の化合物から、当業者には公知の方法、例
えばＸが−ＯＨである式（Ｉ）の化合物をシアン化ナト
リウム、トリフェニルホスフィン、ＣＣｌ4と反応させ
て得られた対応するニトリル化合物を加水分解する方
法；あるいはＸが−ＯＨである式（Ｉ）の化合物をハロ
ゲン化水素などのハロゲン化剤によりハロゲン化し、グ
リニャール反応によりカルボキシル基を導入する方法で
合成することができる。In the present method, the compound of the formula (I) wherein X is --NH 2 is known to those skilled in the art from the compound of the formula (I) wherein X is --N 3 obtained above. , For example, by catalytic reduction using a Lindlar catalyst or the like. Further, the compound of the formula (I) in which X is -COOH can be obtained from the compound of the formula (I) in which X is -OH synthesized as described above by a method known to those skilled in the art, for example, X is -OH Reacting a compound of formula (I) with sodium cyanide, triphenylphosphine, CCl 4 to hydrolyze the corresponding nitrile compound obtained; or a compound of formula (I) wherein X is —OH It can be synthesized by a method of halogenating with a halogenating agent such as hydrogen halide and introducing a carboxyl group by a Grignard reaction.
【００１９】上記の方法で得られた本発明の式（Ｉ）の
化合物を糖鎖生合成用プライマーとして各種細胞の培地
に添加して細胞を培養すると、細胞は、式（Ｉ）の化合
物を取り込み、ゴルジ体において、式（Ｉ）の化合物の
糖鎖部分に更に糖を付加してグリコシル化し、その糖付
加生成物を細胞内には蓄積せずに細胞外に分泌する。細
胞により付加される糖は、細胞により異なり、例えば、
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に式（Ｉ）の化合物を与え
ると、ノイラミン酸のアシル誘導体であるシアル酸（Ｓ
Ａ）が付加され、ラットＰＣ１２細胞に投与すると、ガ
ラクトースが付加される。したがって、所望の糖を付加
する細胞に、所望の糖鎖を有する式（Ｉ）の化合物を糖
鎖プライマーとして与えることによって、所望の糖鎖を
有する糖付加生成物を得、更に必要に応じてこの工程を
繰り返すことによって、多様な糖鎖を有する糖付加生成
物を合成することができる。このようにして多様な糖鎖
を有する糖鎖ライブラリーを構築することも可能であ
る。また糖付加生成物は、細胞内に蓄積されずに細胞外
に分泌されるので、培地から容易に回収することができ
る。したがって、本発明の式（Ｉ）の化合物を糖鎖生合
成用プライマーとして使用することによって、従来の方
法に比較して、工程が比較的簡単で、効率的に高収量
で、所望の糖を所望の位置に含む糖鎖を合成することが
できる。When the compound of the formula (I) of the present invention obtained by the above method is added as a primer for sugar chain biosynthesis to a medium of various cells and the cells are cultured, the cells are converted to the compound of the formula (I). Incorporation into the Golgi apparatus results in glycosylation by adding a sugar to the sugar chain portion of the compound of formula (I), and secretes the sugar addition product outside the cell without accumulating in the cell. The sugar added by a cell varies from cell to cell, for example,
When a compound of formula (I) is given to B16 mouse melanoma cells, sialic acid (S
When A) is added and administered to rat PC12 cells, galactose is added. Therefore, by giving a compound of the formula (I) having a desired sugar chain as a sugar chain primer to a cell to which a desired sugar is added, a sugar addition product having a desired sugar chain is obtained. By repeating this process, sugar addition products having various sugar chains can be synthesized. In this way, it is also possible to construct a sugar chain library having various sugar chains. In addition, since the sugar addition product is secreted out of the cells without being accumulated in the cells, it can be easily recovered from the medium. Therefore, by using the compound of the formula (I) of the present invention as a primer for sugar chain biosynthesis, the desired sugar can be efficiently synthesized with a high yield in a relatively simple step as compared with the conventional method. A sugar chain containing a desired position can be synthesized.
【００２０】上記のようにして細胞から得られた、糖の
付加されたグリコシル化生成物は、付加された糖鎖に応
じて、各種の用途に使用することができる。例えば用い
た細胞が付加する糖鎖に特異的親和性を有するウイルス
やタンパク質の中和に用いることができる。Ｂ１６マウ
スメラノーマ細胞を用いた場合に得られるシアル酸付加
生成物は、インフルエンザウイルスを中和することがで
き、ラットＰＣ１２細胞を用いた場合に得られるガラク
トース付加生成物は、病原性大腸菌のＯ−１５７毒素や
ボツリヌス毒素を中和することができる。これら以外に
も、付加する糖鎖に応じて、マウスＮｅｕｒｏ２ａ細胞
ではコレラ毒素、ラットＲＢＬ−２Ｈ３細胞では破傷風
毒素、ヒトＭＯＬＴ−４細胞では腸炎ビブリオの中和に
使用できる糖付加生成物を得ることができる可能性があ
り、またヒトＨＬ−６０細胞を用いた場合は、抗炎症効
果を有する糖付加生成物を得ることができる可能性があ
る。糖の付加されたグリコシル化生成物の可能性のある
用途としては、上記のほか、生体防御系刺激剤製造のた
めの用途、各種医薬品（抗炎症剤、抗菌剤、抗腫瘍転移
剤、診断薬など）又は細胞培養基材の製造のための用
途、及び標的細胞ターゲッティング性を利用した生体内
薬物運搬体の製造のための用途を挙げることができる。
また上述のように多様な糖鎖を有する糖鎖ライブラリー
を構築することも可能であるため、糖鎖の機能研究など
広範囲の研究に使用することができる。The glycosylated glycosylated product obtained from the cells as described above can be used for various applications depending on the sugar chain added. For example, it can be used for neutralizing viruses or proteins having specific affinity for the sugar chains added by the cells used. The sialic acid addition product obtained using B16 mouse melanoma cells can neutralize influenza virus, and the galactose addition product obtained using rat PC12 cells is O- 157 and botulinum toxin can be neutralized. In addition to these, depending on the sugar chain to be added, a sugar addition product that can be used for neutralizing cholera toxin in mouse Neuro2a cells, tetanus toxin in rat RBL-2H3 cells, and neutralizing Vibrio parahaemolyticus in human MOLT-4 cells is obtained. In the case where human HL-60 cells are used, a sugar addition product having an anti-inflammatory effect may be obtained. Potential uses of glycosylated products with added sugars include those mentioned above, for use in the manufacture of biological defense stimulants, various pharmaceuticals (anti-inflammatory agents, antibacterial agents, anti-tumor metastatic agents, diagnostic agents) And the like, or for the production of a cell culture substrate, and for the production of an in vivo drug carrier utilizing the target cell targeting property.
In addition, since a sugar chain library having various sugar chains can be constructed as described above, it can be used for a wide range of research such as sugar chain function studies.
【００２１】したがって本発明は、式（Ｉ）で示される
化合物を含む、糖鎖生合成用プライマー、及び該糖鎖生
合成用プライマーの、ウイルス又は細菌毒素の中和物
質、生体防御系刺激剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗腫瘍転移
剤、診断薬、細胞培養基材あるいは生体内薬物運搬体の
製造のための用途にも関する。Therefore, the present invention provides a primer for sugar chain biosynthesis containing the compound represented by the formula (I), a neutralizing substance of virus or bacterial toxin, and a biological defense system stimulant of the primer for sugar chain biosynthesis. It also relates to uses for the manufacture of anti-inflammatory agents, antibacterial agents, anti-tumor metastatic agents, diagnostic agents, cell culture substrates or drug carriers in vivo.
【００２２】本発明は、また細胞を用いて糖鎖を生合成
する方法に関し、本方法は、上述したように、特定の官
能基をその末端に有していてもよいアルキル鎖をオリゴ
糖鎖に結合させた化合物、特に式（Ｉ）で示される化合
物を含む糖鎖生合成用プライマーの存在下で細胞を培養
することによって、細胞に式（Ｉ）で示される化合物の
糖鎖部分に糖を付加させてグリコシル化させ、培養培地
から糖付加生成物を回収し、必要に応じて精製すること
を含む。そして本方法に使用することができる細胞とし
ては、上述したＢ１６マウスメラノーマ細胞、ラットＰ
Ｃ１２細胞、マウスＮｅｕｒｏ２ａ細胞、ラットＲＢＬ
−２Ｈ３細胞、ヒトＭＯＬＴ−４細胞、及びヒトＨＬ−
６０細胞を挙げることができる。The present invention also relates to a method for biosynthesizing a sugar chain using a cell. The method comprises, as described above, an oligosaccharide chain having an alkyl chain optionally having a specific functional group at its terminal. By culturing the cells in the presence of a compound bound to the compound, in particular, a sugar chain biosynthesis primer containing the compound represented by the formula (I), the sugar chain portion of the compound represented by the formula (I) is added to the cells. And glycosylation, recovering the glycosylated product from the culture medium and, if necessary, purifying. The cells that can be used in the present method include the B16 mouse melanoma cells and rat P
C12 cells, mouse Neuro2a cells, rat RBL
-2H3 cells, human MOLT-4 cells, and human HL-
60 cells can be mentioned.
【００２３】本発明の式（Ｉ）の化合物を糖鎖生合成用
プライマーとして用いて得られる糖付加生成物のうち、
そのアルキル鎖の末端に−ＣＨ3などのＣ1-Ｃ4アルキル
を有する化合物は、エンドグリコセラミダーゼ又はセラ
ミドグリカナーゼなどの酵素により切断してオリゴ糖鎖
のみとすることができ、各種用途に用いることができ
る。また、そのアルキル鎖の末端に−Ｎ3、−ＮＨ2、−
ＯＨ又は−ＣＯＯＨを有する糖付加生成物は、用途に応
じて還元などの化学反応に付して、重合反応による糖鎖
の高分子化や、その他の化合物との反応など広範囲の用
途に使用することができる。Among the sugar addition products obtained by using the compound of the formula (I) of the present invention as a primer for sugar chain biosynthesis,
Compounds having a C 1 -C 4 alkyl such as —CH 3 at the terminal of the alkyl chain can be cleaved by an enzyme such as endoglycoceramidase or ceramide glycanase to form only an oligosaccharide chain and used for various purposes. be able to. In addition, -N 3 , -NH 2 ,-
The sugar addition product having OH or -COOH is subjected to a chemical reaction such as reduction depending on the use, and is used for a wide range of uses such as polymerization of a sugar chain by a polymerization reaction and reaction with other compounds. be able to.
【００２４】[0024]
【実施例】以下に記載する実施例及び試験例により本発
明を詳細に説明する。 実施例１ Ｄ−Ｇａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−
ＯＨの調製 工程１ ラクトースを無水ピリジンに懸濁し、次に塩化ベンジル
を滴下により加えた。混合物を室温で１時間、次いで６
０℃で５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、氷水を加
え、溶媒を留去してシロップ状の生成物を得、これをア
セトン／メタノール（１：３）から結晶化して、式
（ａ）：The present invention will be described in detail with reference to the following examples and test examples. Example 1 D-Galβ1-4-D-Glcβ -O- (CH 2) 1 2 -
Preparation of OH Step 1 Lactose was suspended in anhydrous pyridine, then benzyl chloride was added dropwise. The mixture is left at room temperature for 1 hour, then
Stirred at 0 ° C. for 5 hours. The reaction mixture is cooled, ice water is added and the solvent is distilled off to give a syrupy product, which is crystallized from acetone / methanol (1: 3) to give the formula (a):
【００２５】[0025]
【化２】 Embedded image
【００２６】で示されるベンジル基を有するラクトース
を白色結晶として得た。α：β＝２：１であった。収量
は、約９０％であった。Lactose having a benzyl group represented by the following formula was obtained as white crystals. α: β = 2: 1. The yield was about 90%.
【００２７】工程２ 前の工程で得られたベンジル基を有するラクトースを酢
酸中、臭化水素により、室温で２〜３時間処理した。混
合物をＣＨ2Ｃｌ2で希釈し、水及びＮａＨＣＯ3水溶液
で洗浄し、乾燥し、溶媒を留去して、式（ｂ）：Step 2 Lactose having a benzyl group obtained in the previous step was treated with hydrogen bromide in acetic acid at room temperature for 2 to 3 hours. The mixture is diluted with CH 2 Cl 2 , washed with water and aqueous NaHCO 3 , dried and evaporated to give a compound of formula (b):
【００２８】[0028]
【化３】 Embedded image
【００２９】で示される、グルコースのアノマー炭素に
結合するヒドロキシル基が臭素化されている化合物を、
無色のシロップ状物質として得た。H-1:δ ６．８，
Ｊ１ ， ２＝４．２ Ｈｚ（α異性体のみ）。A compound represented by the formula wherein the hydroxyl group bonded to the anomeric carbon of glucose is brominated,
Obtained as a colorless syrup. H-1: δ 6.8,
J 1, 2 = 4.2 Hz ( α isomer only).
【００３０】工程３ 前の工程で得た化合物を、テトラヒドロフラン中、Ｈｇ
Ｂｒ２及びＨｇ（ＣＮ)2 １．２当量の存在下、ＨＯ
（ＣＨ2)1 2ＯＨ ３〜４当量と、反応をＴＬＣで観察し
ながら反応させ、反応終了後、通常の処理を行い、カラ
ムクロマトグラフィーで精製して、式（ｃ）：Step 3 The compound obtained in the previous step is treated with Hg in tetrahydrofuran.
HO in the presence of 1.2 equivalents of Br 2 and Hg (CN) 2
(CH 2) 1 2 OH 3~4 equivalents, the reaction is reacted while observing by TLC, after completion of the reaction, the normal processing, and purified by column chromatography, the formula (c):
【００３１】[0031]
【化４】 Embedded image
【００３２】で示される化合物を得た。収量は、５０〜
８０％であった。The compound represented by the following formula was obtained. The yield is 50-
80%.
【００３３】工程４ 前の工程で得た化合物を、ＭｅＯＮａ−ＭｅＯＨの存在
下で脱ベンジル化して、式：Step 4 The compound obtained in the previous step is debenzylated in the presence of MeONa-MeOH to give the compound of the formula:
【００３４】[0034]
【化５】 Embedded image
【００３５】で示されるＤ−Ｇａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌ
ｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−ＯＨを得た。D-Galβ1-4-D-Gl represented by
cβ-O- (CH 2) to give a 1 2 -OH.
【００３６】実施例２ Ｄ−Ｇａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−
Ｎ3の調製 工程１〜３ 実施例１と同様の操作を行って、上記の式（ｃ）で示さ
れる化合物を得た。 工程４ 前の工程で得た化合物を、ピリジンに溶解し、塩化メシ
ル ２当量を加え、室温で反応混合物を撹拌した。通常
の処理後、カラムクロマトグラフィーで精製して、式
（ｄ）：[0036] EXAMPLE 2 D-Galβ1-4-D-Glcβ -O- (CH 2) 1 2 -
Preparation of N 3 Steps 1 to 3 The same operation as in Example 1 was performed to obtain a compound represented by the above formula (c). Step 4 The compound obtained in the previous step was dissolved in pyridine, 2 equivalents of mesyl chloride were added, and the reaction mixture was stirred at room temperature. After the usual treatment, the product is purified by column chromatography to obtain the compound of formula (d):
【００３７】[0037]
【化６】 Embedded image
【００３８】で示される化合物を得た。The compound represented by the formula was obtained.
【００３９】工程５ 前の工程で得た化合物を、ジメチルフラン中、６０℃
で、反応が終了するまで、ＮａＮ3 ２当量と反応させ
た。通常の処理後、クロマトグラフィーで精製して、式
（ｅ）：Step 5 The compound obtained in the previous step was dissolved in dimethylfuran at 60 ° C.
Until the reaction was completed with 2 equivalents of NaN 3 . After the usual treatment, purification by chromatography yields the formula (e):
【００４０】[0040]
【化７】 Embedded image
【００４１】で示される化合物を得た。The compound shown in the above was obtained.
【００４２】工程６ 前の工程で得た化合物を、ＭｅＯＮａ−ＭｅＯＨの存在
下で脱ベンジル化して、式：Step 6 The compound obtained in the previous step is debenzylated in the presence of MeONa-MeOH to give the compound of the formula:
【００４３】[0043]
【化８】 Embedded image
【００４４】で示されるＤ−Ｇａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌ
ｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3を得た。得られた化合物の
物性値は、以下のとおりである。 融点： 182.2〜182.5℃ 元素分析（Ｃ2 4Ｈ4 5Ｎ3Ｏ1 1）： 計算値： Ｃ 52.26; Ｈ 8.22; Ｎ 7.62; Ｏ 31.90 実測値： Ｃ 51.99; Ｈ 8.08; Ｎ 7.38 ＭＳ： 552 (Ｍ+Ｈ)+ 赤外スペクトル： 3,234cm- 1 (ＯＨ); 2,915cm- 1 (Ｃ
Ｈ対称); 2,846cm- 1(ＣＨ逆対称); 2,088cm- 1 (Ｎ3);
1,720cm- 1 (Ｃ＝Ｏ伸縮); 1,552cm- 1 1 Ｈ ＮＭＲ： Ｇｌｃ Ｈ−１：4.15ppm (7.6Hz)
(β); Ｇａｌ Ｈ−１：4.18ppm (7.6Hz) (β); (ＣＨ2)
n：1.08-1.35ppm広域シグナルD-Galβ1-4-D-Gl represented by
cβ-O- (CH 2) to give a 1 2 -N 3. The physical properties of the obtained compound are as follows. Mp: 182.2 to 182.5 ° C. Elemental analysis (C 2 4 H 4 5 N 3 O 1 1): Calculated: C 52.26; H 8.22; N 7.62; O 31.90 Found: C 51.99; H 8.08; N 7.38 MS: 552 (M + H) + infrared spectrum: 3,234 cm - 1 (OH); 2,915 cm - 1 (C
H symmetric); 2,846cm - 1 (CH antisymmetric); 2,088cm - 1 (N 3 );
1,720cm - 1 (C = O stretching); 1,552cm - 1 1 H NMR : Glc H-1: 4.15ppm (7.6Hz)
(β); Gal H-1: 4.18 ppm (7.6 Hz) (β); (CH 2 )
n : 1.08-1.35ppm wide area signal
【００４５】試験例１ Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（理研細胞銀行）を１０％
ＦＢＳ（GIBCO BRL）含有ＤＭＥＭ（大日本製薬株式会
社）（ペニシリンＧカリウム１００U/ml、ストレプトマ
イシン０．１g/l、ＮａＨＣＯ3３．７g/l添加）中で培
養し、コンフレントになったら継代した。本発明の式
（Ｉ）の化合物のプライマー溶液調製のために、式：Test Example 1 10% B16 mouse melanoma cells (RIKEN Cell Bank)
The cells were cultured in DMEM (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) containing FBS (GIBCO BRL) (penicillin G potassium 100 U / ml, streptomycin 0.1 g / l, and NaHCO 3 3.7 g / l). . For the preparation of a primer solution of the compound of formula (I) according to the present invention, the formula:
【００４６】[0046]
【化９】 Embedded image
【００４７】で示されるＤ−Ｇａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌ
ｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3 ０．００７０ｇをＤＭＳ
Ｏ１２７μlに溶解して、１００mMのプライマー溶液を
得た。実験用培地としては、フェノールレッドの入って
いない液体培地であるＤ−ＭＥＭ／Ｆ−１２（ＨＥＰＥ
Ｓ１５mM含有、GIBCO BRL）にインスリン５mg/ml（和光
純薬）、トランスフェリン５mg/ml（和光純薬）及びＳ
ｅＯ2 ５０μlを添加してＴＩ／ＤＦ培地を得た。調製
しておいた１００mMＤ−Ｇａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌｃβ
−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3のＤＭＳＯ溶液を培地に加え
て、最終濃度が５０μMとなるように調整した。コント
ロール用培地としては、プライマーを含有しないＴＩ／
ＤＦ培地を用いた。１００mmψのシャーレに実験用培地
５mlを入れ、４．０×１０6個のＢ１６マウスメラノー
マ細胞を蒔き、シャーレを５％ＣＯ2インキュベーター
に入れ、３７℃で２４時間又は４８時間培養した。所定
時間の経過後、氷上で反応を停止させ、培養上清をパス
ツールピペットで回収し（培地画分）、細胞層を冷ＰＢ
Ｓ２mlで２回洗浄し、洗浄液は、培地画分に含めた。細
胞が残っているシャーレに０．２５％ＥＤＴＡ／ＰＢＳ
２mlを入れ、インキュベーター(３７℃)に２分間入れて
細胞をはがしたのち、細胞懸濁液を１５ml遠心分離管に
入れた。シャーレを冷ＰＢＳ２mlで２回洗浄し、洗浄液
を細胞懸濁液の入っている遠心分離管に入れ、１，００
０rpmで５分間遠心分離した。上清を培地画分として回
収した。ペレットに冷ＰＢＳ２．１mlを入れてよく懸濁
し、エッペンドルフチューブに入れて、２，５００rpm
で５分間遠心分離した。上清を培地画分として回収し、
残りを細胞画分として得た。D-Galβ1-4-D-Gl represented by
cβ-O- (CH 2) DMS to 1 2 -N 3 0.0070 g
It was dissolved in 127 μl of O to obtain a 100 mM primer solution. As an experimental medium, D-MEM / F-12 (HEPE, a liquid medium containing no phenol red) was used.
S15mM, GIBCO BRL) insulin 5mg / ml (Wako Pure Chemical), transferrin 5mg / ml (Wako Pure Chemical) and S
50 μl of eO 2 was added to obtain a TI / DF medium. 100 mM D-Galβ1-4-D-Glcβ prepared
-O- (CH 2) added to the culture medium of DMSO solution of 1 2 -N 3, final concentration was adjusted to 50 [mu] M. As the control medium, TI /
DF medium was used. 5 ml of the experimental medium was placed in a 100 mm 2 dish, 4.0 × 10 6 B16 mouse melanoma cells were sown, and the dish was placed in a 5% CO 2 incubator and cultured at 37 ° C. for 24 hours or 48 hours. After a predetermined time, the reaction was stopped on ice, the culture supernatant was collected with a Pasteur pipette (medium fraction), and the cell layer was cooled with cold PB.
After washing twice with 2 ml of S, the washing solution was included in the medium fraction. 0.25% EDTA / PBS in Petri dish where cells remain
After placing 2 ml, placing the cells in an incubator (37 ° C.) for 2 minutes to detach the cells, the cell suspension was placed in a 15 ml centrifuge tube. The Petri dish was washed twice with 2 ml of cold PBS, and the washing solution was placed in a centrifuge tube containing the cell suspension, and the suspension was placed in a centrifuge tube for 1,000 hours.
Centrifuged at 0 rpm for 5 minutes. The supernatant was collected as a medium fraction. The pellet was well suspended in 2.1 ml of cold PBS, placed in an Eppendorf tube, and 2,500 rpm.
For 5 minutes. Collecting the supernatant as a media fraction,
The rest was obtained as the cell fraction.
【００４８】培地画分からの糖脂質の抽出 ＳｅｐＰａｋＣ−１８カラム（Waters）にメタノール１
０mlを通し、更にmilliＱ超純水１０mlを通して平衡化
した。インターナルマーカーとして１００mMｎ−オクチ
ル−β−Ｄ−グルコピラノシドのmilliＱ超純水溶液
２．５μlを培地画分試料に加え、試料をカラムに通し
た。メタノール２ml、次いでクロロホルム／メタノール
（２／１）３mlで糖脂質を溶出し、溶出液を窒素ガス気
流中で乾燥させた。 Extraction of Glycolipid from Medium Fraction Methanol 1 was added to a SepPak C-18 column (Waters).
The mixture was passed through 0 ml and equilibrated with 10 ml of milliQ ultrapure water. 2.5 μl of a milliQ ultrapure aqueous solution of 100 mM n-octyl-β-D-glucopyranoside as an internal marker was added to the medium fraction sample, and the sample was passed through the column. The glycolipid was eluted with 2 ml of methanol and then with 3 ml of chloroform / methanol (2/1), and the eluate was dried in a stream of nitrogen gas.
【００４９】細胞画分からの糖脂質の抽出 インターナルマーカーとして１００μMｎ−オクチル−
β−Ｄ−グルコピラノシドのメタノール溶液３００μl
を各細胞画分試料に加え、クロロホルム６６６μl、メ
タノール３４μlを入れ、vortexで振とう撹拌し、更に
ソニケーターに３０分間かけて糖脂質を抽出し、１５，
０００rpmで２５分間遠心分離した。上清をエッペンド
ルフチューブに回収し、窒素ガス気流中で乾燥した。細
胞ペレットに、クロロホルム／メタノール／水（４／８
／３）１mlを加え、vortexで振とう撹拌し、ソニケータ
ーに３０分間かけて糖脂質を抽出し、１５，０００rpm
で２５分間遠心分離した。上清をエッペンドルフチュー
ブを用いて回収し、窒素ガス気流中で乾燥した。 Extraction of glycolipids from cell fraction 100 μM n-octyl- as internal marker
300 μl of methanol solution of β-D-glucopyranoside
Was added to each cell fraction sample, 666 μl of chloroform and 34 μl of methanol were added, and the mixture was shaken and shaken with a vortex. Further, glycolipids were extracted in a sonicator for 30 minutes.
Centrifuged at 000 rpm for 25 minutes. The supernatant was collected in an Eppendorf tube and dried in a stream of nitrogen gas. Add chloroform / methanol / water (4/8) to the cell pellet.
/ 3) Add 1 ml, shake with vortex and stir, extract glycolipid in sonicator for 30 minutes, 15,000 rpm
For 25 minutes. The supernatant was collected using an Eppendorf tube and dried in a stream of nitrogen gas.
【００５０】培地画分及び細胞画分中の糖脂質の分離、
同定 乾燥しておいた培地画分をクロロホルム／メタノール
（２／１）で溶解し、ＨＰＴＬＣプレートに載せた。一
方、乾燥しておいた細胞画分は、クロロホルム／メタノ
ール（２／１）に溶解し、やはりＨＰＴＬＣプレートに
載せた。展開溶媒としては、クロロホルム／メタノール
／０．２％ＣａＣｌ2水溶液（６０／３５／８）又はク
ロロホルム／メタノール／０．２５％ＫＣｌ（水溶液）
（６０／３５／８）を使用した。各プレートには、検量
線作成のために、ＧＭ３（Ｎｅｕ−Ａｃα２−３ラクト
シルセラミド）、プライマー、及びオクチルグルコシド
を所定の濃度で載せた。 Separation of glycolipids in the medium fraction and the cell fraction,
The identified and dried medium fraction was dissolved in chloroform / methanol (2/1) and mounted on an HPTLC plate. On the other hand, the dried cell fraction was dissolved in chloroform / methanol (2/1) and again placed on an HPTLC plate. As a developing solvent, chloroform / methanol / 0.2% CaCl 2 aqueous solution (60/35/8) or chloroform / methanol / 0.25% KCl (aqueous solution)
(60/35/8) was used. Each plate was loaded with GM3 (Neu-Acα2-3 lactosylceramide), a primer, and octylglucoside at predetermined concentrations to prepare a calibration curve.
【００５１】プライマーに付加されたシアル酸の発色の
ためには、レゾルシノール／塩酸試薬（１０mlの水にレ
ゾルシノール２００mgを溶解し、塩酸８０mlと０．１M
硫酸銅０．２５mlを加え、水を加えて１００mlとした溶
液）を用い、１１０℃のオーブンに２０〜３０分間入れ
て発色させた。また糖脂質の定量のためには、デンシト
メーター（Bio 1D イメージアナライザー、Vilber Lour
mat）を用い、ＧＭ３の検量線よりシアル酸付加生成物
量とＧＭ３量、プライマーの検量線よりプライマー量、
そしてオクチルグルコシドの検量線よりオクチルグルコ
シド量を算出した。For coloring of the sialic acid added to the primer, a resorcinol / hydrochloric acid reagent (dissolve 200 mg of resorcinol in 10 ml of water, add 80 ml of hydrochloric acid and 0.1 M
A solution (0.25 ml of copper sulfate was added and water was added to make 100 ml) was placed in a 110 ° C. oven for 20 to 30 minutes to develop color. For quantification of glycolipids, use a densitometer (Bio 1D Image Analyzer, Vilber Lour
mat), the amount of sialic acid addition product and the amount of GM3 from the GM3 calibration curve, the amount of primer from the primer calibration curve,
Then, the amount of octyl glucoside was calculated from the calibration curve of octyl glucoside.
【００５２】また瀧らのＴＬＣブロッティング法（Tak
i, T., et al. Anal. Biochem. 225,24-27, 1995）によ
りシアル酸付加生成物と思われるバンドをＰＶＤＦ膜に
移し、質量スペクトルにより分析した。また培地画分を
ＨＰＴＬＣプレート上で展開し、ニンヒドリン試薬によ
りアミンの検出を行った。Also, Taki et al.'S TLC blotting method (Tak
i, T., et al. Anal. Biochem. 225, 24-27, 1995), a band presumed to be a sialic acid addition product was transferred to a PVDF membrane, and analyzed by mass spectrum. The medium fraction was developed on an HPTLC plate, and amine was detected with a ninhydrin reagent.
【００５３】分析結果 本発明の式（Ｉ）の化合物のプライマーの存在下でＢ１
６マウスメラノーマ細胞の培養を行った培地画分をＨＰ
ＴＬＣにより分析したところ、本発明化合物のプライマ
ーはＢ１６マウスメラノーマ細胞によりシアル酸でグリ
コシル化されることが認められた。一方、プライマーの
存在下で培養を行った細胞画分を分析したところ、細胞
画分には、シアル酸でグリコシル化されたプライマーは
検出されず、シアル酸でグリコシル化されたプライマー
は、細胞内には蓄積されずに、培地中に分泌されること
が示された。 Analysis Results B1 in the presence of the primer of the compound of formula (I) of the present invention
The medium fraction obtained by culturing 6 mouse melanoma cells was HP
Analysis by TLC showed that the primer of the compound of the present invention was glycosylated with sialic acid by B16 mouse melanoma cells. On the other hand, when the cell fraction cultured in the presence of the primer was analyzed, no primer glycated with sialic acid was detected in the cell fraction, and the primer glycosylated with sialic acid was not detected in the cell. Was secreted into the medium without accumulation.
【００５４】図１に示すように、質量分析によっても、
予想生成物である、シアル酸でグリコシル化された化合
物であるＳＡ−Ｄ−Ｇａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌｃβ−Ｏ
−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3の分子量８４２．８８とほぼ同じ分
子量の位置（８４２．９２）にメインピークが現れたた
め、本発明化合物のプライマーであるＤ−Ｇａｌβ１−
４−Ｄ−Ｇｌｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3は、Ｂ１６マ
ウスメラノーマ細胞によりシアル酸でグリコシル化され
ることが認められた。As shown in FIG. 1, mass spectrometry also
The expected product, the sialic acid glycosylated compound SA-D-Galβ1-4-D-Glcβ-O
- (CH 2) Since the main peak appears in position substantially the same molecular weight as the molecular weight 842.88 of 1 2 -N 3 (842.92), D-Galβ1- a primer of the present invention compounds
4-D-Glcβ-O- ( CH 2) 1 2 -N 3 were found to be glycosylated in sialic acid by B16 mouse melanoma cells.
【００５５】また図２に示すように、培地画分のＨＴＰ
ＬＣによる分析により、２４時間及び４８時間の培養後
で、培地に添加された本発明化合物のプライマーのうち
２４時間後では４．８％、４８時間後では９．０％がシ
アル酸でグリコシル化されたことが認められた。Further, as shown in FIG.
According to the analysis by LC, after 24 hours and 48 hours of culture, 4.8% of the primers of the compound of the present invention added to the medium after 24 hours and 9.0% after 48 hours were glycosylated with sialic acid. It was acknowledged that it was done.
【００５６】また、図３に示すように、４８時間培養後
の培地画分には、培地に添加された本発明化合物のプラ
イマーのうち７８％が未変化体のまま残留しており、本
発明化合物のプライマーが、安定であることが示され
た。この結果により、本発明化合物のプライマーの存在
下で４８時間以上培養することによって、本発明化合物
のプライマーが更にシアル酸でグリコシル化されて、グ
リコシル化率が更に上昇する可能性が示された。As shown in FIG. 3, 78% of the primer of the compound of the present invention added to the medium remained unchanged in the medium fraction after culturing for 48 hours. Compound primers were shown to be stable. The results indicated that the culture of the primer of the present invention was further glycosylated with sialic acid by culturing for 48 hours or more in the presence of the primer of the present compound, and the glycosylation rate was further increased.
【００５７】またニンヒドリン試薬によりアミンの検出
を試みたところ、陰性であり、本発明のプライマーで
は、シアル酸によりグリコシル化された後でも、そのア
ルキル鎖末端の−Ｎ3は、還元されていないことが認め
られた。Further, the detection of an amine with a ninhydrin reagent was negative. In the primer of the present invention, -N 3 at the alkyl chain end was not reduced even after glycosylation with sialic acid. Was observed.
【００５８】更に図４に示すように、プライマーの存在
下で培養することによって、Ｂ１６マウスメラノーマ細
胞自体のシアル酸付加能が上昇することが認められた。Further, as shown in FIG. 4, it was confirmed that culturing in the presence of the primer increased the sialic acid addition ability of B16 mouse melanoma cells themselves.
【００５９】[0059]
【発明の効果】上記の結果より、本発明の式（Ｉ）の化
合物のプライマーは、高いグリコシル化率を有し、また
安定であるために更に多量のグリコシル体を生成する可
能性を有し、更に細胞のグリコシル化能を高めることが
認められた。またアルキル鎖の末端に−Ｎ3、−ＮＨ2、
−ＯＨ又は−ＣＯＯＨを有する本発明の式（Ｉ）のプラ
イマーは、グリコシル化後の生成物が、重合反応による
糖鎖の高分子化や、その他の化合物との反応など広範囲
の用途に使用することができるなどの利点を有すること
が示された。From the above results, it can be seen that the primer of the compound of the formula (I) of the present invention has a high glycosylation rate and has a possibility of producing a larger amount of glycosyl form because it is stable. It was also found that the glycosylation ability of the cells was further increased. Further, -N 3 , -NH 2 ,
The primer of the formula (I) of the present invention having -OH or -COOH is used for a wide range of applications such that the product after glycosylation is used for polymerization of sugar chains by polymerization reaction or reaction with other compounds. Has been shown to have such advantages.
【図１】図１は、シアル酸でグリコシル化されたＤ−Ｇ
ａｌβ１−４−Ｄ−Ｇｌｃβ−Ｏ−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3化
合物であると予想される化合物の質量スペクトルを示
す。FIG. 1 shows DG glycosylated with sialic acid.
alβ1-4-D-Glcβ-O- ( CH 2) shows the mass spectrum of the expected compound to be 1 2 -N 3 compound.
【図２】図２は、２４時間及び４８時間の培養後のプラ
イマーのグリコシル化率を示す。FIG. 2 shows the glycosylation rates of primers after 24 and 48 hours of culture.
【図３】図３は、４８時間培養後の培地画分中のプライ
マー及びグリコシル化されたプライマーの存在比を示
す。FIG. 3 shows the abundance ratio of a primer and a glycosylated primer in a medium fraction after culturing for 48 hours.
【図４】図４は、プライマーの存在下での細胞のシアル
酸付加能を示す。FIG. 4 shows the ability of cells to add sialic acid in the presence of primers.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/04 Ａ６１Ｋ 31/00 ６３５Ｂ 37/04 ６３７Ｃ Ａ６１Ｋ 31/7028 31/70 ６０７ (72)発明者 ヤン チャン リー アメリカ合衆国、メリーランド 21093、 ティモニウム、サボ・コート 1824 (72)発明者 ライ−ジー ワン アメリカ合衆国、マサチューセッツ 02148、マルデン、フローレンス・ストリ ート 99、アパートメント 914 (72)発明者 三浦 嘉晃 アメリカ合衆国、カリフォルニア 92122、 サン・ディエゴ、カミノ・ノグエラ 7831 (72)発明者 中島 英規 神奈川県相模原市上鶴間４−９−10 (72)発明者 三ツ木 元章 神奈川県横浜市青葉区荏田町353−１−Ａ −809 Ｆターム(参考） 4C057 BB03 BB04 DD01 JJ07 JJ09 4C086 AA01 AA03 AA04 EA05 NA20 ZB26 ZB33 ZB35 ZC78 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) A61P 35/04 A61K 31/00 635B 37/04 637C A61K 31/7028 31/70 607 (72) Inventor Yang Chan Lee 21093, Maryland, United States 21093, Timonium, Sabo Court 1824 (72) Inventor Lizzie One United States, Massachusetts 02148, Malden, Florence Street 99, Apartment 914 (72) Inventor Yoshiaki Miura United States, California 92122, San Diego, Camino Noguera 7831 (72) Inventor Hidenori Nakajima 4-9-10 Kamizuruma, Sagamihara City, Kanagawa Prefecture (72) Inventor Motoaki Mitsuki 353-1-A-A, Edacho, Aoba-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Prefecture 809 F-term ) 4C057 BB03 BB04 DD01 JJ07 JJ09 4C086 AA01 AA03 AA04 EA05 NA20 ZB26 ZB33 ZB35 ZC78
Claims (11)
−Ｘ 〔式中、Ｇ1、Ｇ2及びＧ3は、それぞれ独立して環状構
造の単糖残基又はその誘導体であり；Ｌは、−Ｏ−（Ｃ
Ｈ2)n−、−Ｓ−（ＣＨ2)n−、及び−ＮＨ−（ＣＨ2)n
−から選択される連結基であり；Ｘは、−Ｎ3、−Ｎ
Ｈ2、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、及び−Ｃ1-Ｃ4アルキルから
選択される基であり；ｘ、ｙ、及びｚは、それぞれ独立
して０〜１０の整数であり；ｎは、８〜２０の整数であ
る。ただしｘ、ｙ及びｚの全てが同時に０であることは
ない〕で示される化合物。1. Formula (I): (G 1 ) x (G 2 ) y (G 3 ) z -L
-X wherein G 1 , G 2 and G 3 are each independently a monosaccharide residue having a cyclic structure or a derivative thereof; L is -O- (C
H 2) n -, - S- (CH 2) n -, and -NH- (CH 2) n
X is -N 3 , -N
H 2, -OH, a group selected -COOH, and from -C 1 -C 4 alkyl; x, y, and z are each independently an integer of 0; n is 8 to It is an integer of 20. However, all of x, y and z are not 0 at the same time].
化合物。2. The compound according to claim 1, wherein n is 8-16.
物。3. The compound according to claim 2, wherein n is 12.
−Ｄ−Ｇｌｃである、請求項１〜３のいずれか１項記載
の化合物。4. (G 1 ) x (G 2 ) y (G 3 ) z is D-Gal
The compound according to any one of claims 1 to 3, which is -D-Glc.
ずれか１項記載の化合物。5. X is -N 3, a compound of any of claims 1-4.
項１〜５のいずれか１項記載の化合物。6. L is, -O- (CH 2) n - in which, any one compound according to claims 1-5.
Ｄ−Ｇｌｃであり、Ｌが−Ｏ−（ＣＨ2)n−であり、Ｘ
が−Ｃ1-Ｃ4アルキルである式（Ｉ）の化合物を除く、
請求項１〜６記載の化合物。7. (G 1 ) x (G 2 ) y (G 3 ) z is D-Gal-
A D-Glc, L is -O- (CH 2) n - and is, X
With the exception of compounds of formula (I) wherein is -C 1 -C 4 alkyl,
The compound according to claim 1.
−（ＣＨ2)1 2−Ｎ3の化合物。8. D-Galβ1-4-D-Glcβ-O
- (CH 2) a compound of 1 2 -N 3.
物の製造方法であって、式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′は、それぞれ請求項１に
記載の定義を有するＧ1、Ｇ2、Ｇ3のヒドロキシル基が
保護された基であり、ｘ、ｙ、及びｚは、請求項１に記
載のとおりである）で示される化合物を臭素化して、−
（Ｇ3′)zの末端の単糖のアノマー炭素に結合するヒド
ロキシル基が臭素化されている化合物である、式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z−Ｂｒ （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′、ｘ、ｙ、及びｚは、上
記に記載のとおりである）で示される化合物を得；得ら
れた化合物を、式：Ｈ−Ｌ−Ｘ′（式中、Ｌは、請求項
１に記載のとおりであり、Ｘ′は、−ＯＨ又は−Ｃ1-Ｃ
4アルキルである）で示される化合物と反応させて、保
護基を有する式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｘは、−ＯＨ
又は−Ｃ1-Ｃ4アルキルである）である式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z−Ｌ−Ｘ′ （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′、ｘ、ｙ、ｚ、Ｌ、及び
Ｘ′は、上記に記載のとおりである）で示される化合物
を得；得られた化合物のうちＸ′が−ＯＨである化合物
をメシル化して、式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z−Ｌ−ＯＭｓ （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′、ｘ、ｙ、ｚ、及びＬ
は、上記に記載のとおりであり、Ｍｓは、メシル基であ
る）で示される化合物を得；得られた化合物をアジド化
して、保護基を有する式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｘ
は、−Ｎ3である）である式： （Ｇ1′)x（Ｇ2′)y（Ｇ3′)z−Ｌ−Ｎ3 （式中、Ｇ1′、Ｇ2′、Ｇ3′、ｘ、ｙ、ｚ、及びＬ
は、上記に記載のとおりである）で示される化合物を
得；こうして得られた保護基を有する式（Ｉ）の化合物
（ここで、Ｘは、−ＯＨ、−Ｃ1-Ｃ4アルキル、又は−
Ｎ3である）から保護基を除去して、式（Ｉ）の化合物
（ここで、Ｘは、−ＯＨ、−Ｃ1-Ｃ4アルキル、又は−
Ｎ3である）を得；更に式（Ｉ）の化合物の基：Ｘを、
−ＮＨ2又は−ＣＯＯＨに変換することを含む方法。9. The method for producing a compound represented by the formula (I) according to claim 1, wherein the compound has the formula: (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z 1 ', G 2', G 3 ' is G 1, G 2, G 3 group where the hydroxyl group is protected, which have the definitions set forth in each claim 1, x, y, and z, wherein The compound represented by the formula (1) is brominated to form-
A compound in which the hydroxyl group bonded to the anomeric carbon of the monosaccharide at the terminal of (G 3 ′) z is brominated. The formula: (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z − Br (wherein G 1 ', G 2 ', G 3 ', x, y, and z are as described above); and the resulting compound is represented by the formula: H- L-X '(wherein L is as defined in claim 1 and X' is -OH or -C 1 -C
4 alkyl is) represented by is reacted with a compound with a compound of formula (I) having a protecting group (where, X is, -OH
Or (C 1 -C 4 alkyl): (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z -LX ′ (where G 1 ′, G 2 ′, G 3 ', x, y, z, L and X' are as described above); of the resulting compounds wherein X 'is -OH, , Formula: (G 1 ′) x (G 2 ′) y (G 3 ′) z -L-OMs (where G 1 ′, G 2 ′, G 3 ′, x, y, z, and L
Is as described above and Ms is a mesyl group); the resulting compound is azidated to give a compound of formula (I) having a protecting group, wherein X
Is -N is 3) the formula: (G 1 ') x ( G 2') y (G 3 ') in z -L-N 3 (wherein, G 1', G 2 ' , G 3' , X, y, z, and L
Is as described above); thus obtained compound of formula (I) having a protecting group, wherein X is -OH, -C 1 -C 4 alkyl, or −
Removing the protecting group from N 3 ), the compound of formula (I) wherein X is —OH, —C 1 -C 4 alkyl, or —
N 3 ); furthermore, the group of the compound of formula (I): X
The method comprising converting the -NH 2 or -COOH.
合物を含む、糖鎖生合成用プライマー。10. A primer for biosynthesis of a sugar chain, comprising the compound represented by the formula (I) according to claim 1.
ーの、ウイルス又は細菌毒素の中和物質、生体防御系刺
激剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗腫瘍転移剤、診断薬、細胞
培養基材、あるいは生体内薬物運搬体の製造のための用
途。11. The sugar chain biosynthesis primer according to claim 10, which is a virus or bacterial toxin neutralizing substance, a biological defense system stimulant, an anti-inflammatory agent, an antibacterial agent, an antitumor metastatic agent, a diagnostic agent, or a cell culture medium. Material or for the production of in vivo drug carriers.
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