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ITCS20080020A1 - METHOD AND KIT FOR DETERMINING THE CONCENTRATION OF PEROXIDES IN AN ORGANIC LIQUID - Google Patents

METHOD AND KIT FOR DETERMINING THE CONCENTRATION OF PEROXIDES IN AN ORGANIC LIQUID

Info

Publication number
ITCS20080020A1
ITCS20080020A1 IT000020A ITCS20080020A ITCS20080020A1 IT CS20080020 A1 ITCS20080020 A1 IT CS20080020A1 IT 000020 A IT000020 A IT 000020A IT CS20080020 A ITCS20080020 A IT CS20080020A IT CS20080020 A1 ITCS20080020 A1 IT CS20080020A1
Authority
IT
Italy
Prior art keywords
solution
concentration
organic liquid
peroxides
sample
Prior art date
Application number
IT000020A
Other languages
Italian (it)
Inventor
Giancarlo Garofalo
Settimio Leonetti
Franco Marchese
Original Assignee
Garofalo Alessandro
Giancarlo Garofalo
Settimio Leonetti
Franco Marchese
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Garofalo Alessandro, Giancarlo Garofalo, Settimio Leonetti, Franco Marchese filed Critical Garofalo Alessandro
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Application granted granted Critical
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Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements

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Description

Metodo e Kit per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico Method and Kit for determining the concentration of peroxides in an organic liquid

Campo della tecnica dell’invenzione. Field of the technique of invention.

La presente invenzione riguarda un metodo ed un kit per determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico, quale per esempio il sangue, la saliva, l’urina ecc. Il kit à ̈ semplice da usare con l’attrezzatura di un normale laboratorio di analisi. The present invention relates to a method and a kit for determining the concentration of peroxides in an organic liquid, such as for example blood, saliva, urine, etc. The kit is simple to use with the equipment of a normal analysis laboratory.

Stato dell’arte State of the art

Il perossido di idrogeno (idroperossido) interviene in molte reazioni metaboliche ossigeno dipendendenti e funge da chiave di regolazione per una serie di processi ossidativi e stati connessi. Hydrogen peroxide (hydroperoxide) is involved in many oxygen-dependent metabolic reactions and acts as a regulatory key for a number of oxidative processes and related states.

Il funzionamento avviene attraverso NF-Kappa B e altri fattori. Operation occurs through NF-Kappa B and other factors.

I percorsi mediati dai perossidi sono stati collegati ad asma, artrite infiammatoria, arteriosclerosi, vasculopatia diabetica, osteoporosi, un certo numero di malattie neuro degenerative e la sindrome di Down. Peroxide-mediated pathways have been linked to asthma, inflammatory arthritis, arteriosclerosis, diabetic vasculopathy, osteoporosis, a number of neuro-degenerative diseases and Down's syndrome.

La determinazione dei perossidi à ̈ anche d’aiuto nella valutazione dei rischi di retinopatia diabetica e di qualche malattia infettiva cronica come l’epatite C, alti valori di perossidi sono stati riscontrati anche nel siero di donne che assumono contraccettivi orali. The determination of peroxides is also helpful in assessing the risks of diabetic retinopathy and some chronic infectious diseases such as hepatitis C, high peroxide values have also been found in the serum of women taking oral contraceptives.

La misurazione dei perossidi può concorrere a determinare il modo in cui lo stress ossidativo contribuisce a modulare svariate vie intracellulari. The measurement of peroxides can help determine how oxidative stress contributes to modulating various intracellular pathways.

Alcuni autori avendo verificato, in recenti studi, che i radicali liberi giocano un ruolo importante negli stati infiammatori nelle malattie post - ischemiche dell’apparato digerente, nelle alterazioni del sistema nervoso centrale risultante da disfunzioni vascolari e traumatiche,arteriosclerosi e complicazioni cardiache, malattie renali, artriti deformanti e reumatoidi, malattie provocate dall’alcohol, propongono di misurare le concentrazioni di radicali liberi. Some authors having verified, in recent studies, that free radicals play an important role in inflammatory states in post-ischemic diseases of the digestive system, in alterations of the central nervous system resulting from vascular and traumatic dysfunctions, atherosclerosis and cardiac complications, kidney, deforming and rheumatoid arthritis, diseases caused by alcohol, propose to measure the concentrations of free radicals.

In particolare US-B-6355489 propone di misurare i radicali liberi, purtroppo però i radicali liberi sono instabili e tendono a sottrarre elettroni ad altre molecole per trovare stabilità, la loro esistenza ha vita breve , dell’ordine di pochi secondi. Di conseguenza, la loro misura à ̈ difficile se non impossibile. In particular US-B-6355489 proposes to measure free radicals, unfortunately, however, free radicals are unstable and tend to steal electrons from other molecules to find stability, their existence is short-lived, of the order of a few seconds. Consequently, their measurement is difficult if not impossible.

Pertanto, il metodo proposto in US-B-6355489 mira a misurare i radicali liberio che sono altamente variabili in tempi molto ristretti. Therefore, the method proposed in US-B-6355489 aims to measure the liberium radicals which are highly variable in a very short time.

La presente invenzione si propone lo scopo di superare gli svantaggi e le difficoltà presenti nei metodi proposti dallo stato dell’arte. The present invention aims to overcome the disadvantages and difficulties present in the methods proposed by the state of the art.

Sommario della presente invenzione Summary of the present invention

La presente invenzione si propone, invece, di misurare la concentrazione di perossidi contenuti in un liquido organico attraverso il riferimento ad una soluzione standard costituita da una soluzione acquosa avente una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mgr di H2O2/dl The present invention, on the other hand, aims to measure the concentration of peroxides contained in an organic liquid by referring to a standard solution consisting of an aqueous solution having a peroxide concentration equal to 8.9 mgr of H2O2 / dl

Lo scopo principale della presente invenzione à ̈ conseguito per mezzo di un metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico caratterizzato dal fatto che si prepara una soluzione di lavoro mescolando una soluzione tampone avente pH 4,5 e un cromogeno indiluito, che si prepara una soluzione campione formata da un campione di liquido organico sciolto nella soluzione di lavoro in un rapporto volumetrico definito tra liquido organico e soluzione di lavoro, che viene utilizzata una soluzione standard formata da acqua ossigenata H2O2in acqua distillata, che viene determinata la densità ottica della soluzione campione e della soluzione standard, che la concentrazione di perossidi nel campione di liquido organico à ̈ data dal prodotto della concentrazione di perossidi contenuti nella soluzione standard per il rapporto tra la densità ottica della soluzione campione e di quella della soluzione standard. The main object of the present invention is achieved by means of a method for determining the concentration of peroxides in an organic liquid characterized in that a working solution is prepared by mixing a buffer solution having pH 4.5 and an undiluted chromogen, which a sample solution is prepared consisting of a sample of organic liquid dissolved in the working solution in a defined volumetric ratio between organic liquid and working solution, which is used a standard solution formed by hydrogen peroxide H2O2 in distilled water, which is determined the optical density of the sample solution and of the standard solution, that the concentration of peroxides in the sample of organic liquid is given by the product of the concentration of peroxides contained in the standard solution by the ratio between the optical density of the sample solution and that of the standard solution.

Altra caratteristica à ̈ data dal fatto che la soluzione tampone à ̈ costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata. Another feature is given by the fact that the buffer solution consists of 136 g of sodium acetate and 60 ml of acetic acid in 1,000 ml of distilled water.

Altra caratteristica à ̈ data dal fatto che la soluzione di lavoro à ̈ costituita da 1 parte di cromogeno e da 1000 a 6000 parti di soluzione tampone. Another feature is given by the fact that the working solution is made up of 1 part of chromogen and from 1000 to 6000 parts of buffer solution.

Altra caratteristica à ̈ data dal fatto che la soluzione campione à ̈ costituita da liquido organico sciolto nella soluzione di lavoro nel rapporto di 20µl di liquido organico in 1000 µl di soluzione di lavoro e che la soluzione standard, formata da acqua ossigenata H2O2 ,in acqua distillata ha una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mgr di H2O2/dl. Another feature is given by the fact that the sample solution consists of organic liquid dissolved in the working solution in the ratio of 20µl of organic liquid in 1000 µl of working solution and that the standard solution, formed by hydrogen peroxide H2O2, in water when distilled it has a peroxide concentration equal to 8.9 mgr of H2O2 / dl.

Altro obbiettivo principale dell’invenzione à ̈ di fornire un Kit per la esecuzione del metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico caratterizzato dal fatto che esso da à ̈ formato da tre reagenti, un reagente A formato dal cromogeno di sintesi indiluito N-N Dietil 1,4 phenilendiamina; da un reagente B formato da una soluzione tampone costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata e da un reagente C formato da H2O2, idroperossido, in acqua distillata avente una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mgr di H2O2/dl. Another main objective of the invention is to provide a kit for carrying out the method for determining the concentration of peroxides in an organic liquid characterized by the fact that it is formed by three reagents, a reagent A formed by the synthesis chromogen undiluted N-N Diethyl 1,4 phenylenediamine; a reagent B formed by a buffer solution consisting of 136 g of sodium acetate and 60 ml of acetic acid in 1,000 ml of distilled water and a reagent C formed of H2O2, hydroperoxide, in distilled water having a peroxide concentration equal to 8.9 mgr of H2O2 / dl.

Altre caratteristiche e vantaggi dell'invenzione appariranno chiari dalla descrizione di un modo di realizzazione dell’invenzione, qui appresso, dati a titolo d'esempio non limitativo. Other characteristics and advantages of the invention will become clear from the description of a way of carrying out the invention, hereinafter, given by way of non-limiting example.

Modo preferito di realizzazione dell’invenzione Preferred way of carrying out the invention

Un cromogeno di sintesi indiluito N-N Dietil 1,4 phenilendiamina mescolato con una soluzione tampone per formare una soluzione di lavoro. An undiluted synthetic chromogen N-N Diethyl 1,4 phenylenediamine mixed with a buffer solution to form a working solution.

Il cromogeno à ̈ costituito da N-N Dietil 1,4 phenilendiamina di sintesi indiluito. The chromogen is made up of N-N Diethyl 1,4 synthetic undiluted phenylenediamine.

La soluzione tampone à ̈ costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in acqua fino a 1.000 ml, la soluzione tampone ha un pH di circa 4,5. The buffer solution consists of 136 g of sodium acetate and 60 ml of acetic acid in water up to 1,000 ml, the buffer solution has a pH of about 4.5.

Per realizzare la soluzione di lavoro occorrono 1 parte di cromogeno e da 1000 a 6000 parti di soluzione tampone. To make the working solution, 1 part of chromogen and 1000 to 6000 parts of buffer solution are required.

Viene preparata la soluzione standard di H2O2alla concentrazione di 8,9 mgr di H2O2/dl e la soluzione con il campione costituita da 20µl di campione in 1000 µl di soluzione di lavoro. The standard solution of H2O2 is prepared at a concentration of 8.9 mgr of H2O2 / dl and the solution with the sample consisting of 20µl of sample in 1000 µl of working solution.

Viene misurata la densità ottica della soluzione standard e la densità ottica della soluzione con il campione. E, poiché si conosce la concentrazione di perossidi contenuta nella soluzione standard pari a 8,9 mgr di H2O2/dl, la concentrazione dei perossidi contenuti nella soluzione campione sarà pari a The optical density of the standard solution and the optical density of the solution with the sample are measured. And, since the peroxide concentration contained in the standard solution is known to be equal to 8.9 mgr of H2O2 / dl, the concentration of peroxides contained in the sample solution will be equal to

C<(perossidi in campione)>= C<(perossidi in sol.standard)>x D<(dens.ottica sol.campione)/>D<(dens.ottica sol.standard)>C <(peroxides in sample)> = C <(peroxides in standard sol)> x D <(optical density in sample sol) /> D <(optic density in standard sol)>

Il Kit per la determinazione della concentrazione di perossido in un liquido organico à ̈ costituito da tre reagenti: The kit for the determination of the peroxide concentration in an organic liquid consists of three reagents:

Reagente A cromogeno di sintesi indiluito N-N Dietil 1,4 phenilendiamina; Reagent A synthesis chromogen undiluted N-N Diethyl 1,4 phenylenediamine;

Reagente B: 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata; Reagent B: 136 g of sodium acetate and 60 ml of acetic acid in 1,000 ml of distilled water;

Reagente C: H2O2(idroperossido o acqua ossigenata) in acqua distillata alla concentrazione di 8,9 mg di H2O2/dl. Reagent C: H2O2 (hydroperoxide or hydrogen peroxide) in distilled water at a concentration of 8.9 mg of H2O2 / dl.

Il vantaggio del metodo e del Kit secondo la presente invenzione à ̈ di utilizzare un reagente di sintesi indiluito così come viene prodotto, di mescolarne una parte con 1000-6000 parti di una soluzione tampone, reagente B, facilmente preparabile e di ottenere una soluzione di lavoro e, quindi, mescolando 20µl di campione in 1000 µl di soluzione di lavoro, di ottenere la soluzione con il campione. Il passo finale à ̈ di misurare la densità ottica della soluzione standard, reagente C, e della soluzione con il campione, ottenendo la concentrazione di perossidi nel campione di liquido organico sapendo che le due densità ottiche sono proporzionali alle rispettive concentrazioni di perossidi. The advantage of the method and of the Kit according to the present invention is to use an undiluted synthesis reagent as it is produced, to mix a part of it with 1000-6000 parts of an easily prepared buffer solution, reagent B, and to obtain a solution of working and, therefore, mixing 20µl of sample in 1000 µl of working solution, to obtain the solution with the sample. The final step is to measure the optical density of the standard solution, reagent C, and of the solution with the sample, obtaining the peroxide concentration in the organic liquid sample knowing that the two optical densities are proportional to the respective peroxide concentrations.

Il presente metodo à ̈ preciso e consente di determinare in modo semplice la concentrazione di perossidi in qualsiasi liquido organico, non ci sono misurazioni o pesate complicate da eseguire. This method is precise and allows you to easily determine the concentration of peroxides in any organic liquid, there are no complicated measurements or weighings to perform.

Il trovato, bene inteso, non si limita alla rappresentazione data dal modo di realizzazione illustrato ma può ricevere perfezionamenti e modifiche dall'uomo del mestiere senza uscire peraltro dal quadro del brevetto. The invention, well understood, is not limited to the representation given by the embodiment illustrated but can receive improvements and modifications by the man of the art without departing from the framework of the patent.

La presente invenzione consente numerosi vantaggi e di superare difficoltà che non potevano essere vinte con i prodotti attualmente in commercio. The present invention allows numerous advantages and to overcome difficulties that could not be overcome with the products currently on the market.

Claims (5)

Rivendicazioni: 1. Metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico caratterizzato dal fatto che si prepara una soluzione di lavoro mescolando una soluzione tampone avente pH 4,5 e un cromogeno indiluito, che si prepara una soluzione campione formata da un campione di liquido organico sciolto nella soluzione di lavoro in un rapporto volumetrico definito tra liquido organico e soluzione di lavoro, che viene utilizzata una soluzione standard formata da acqua ossigenata H2O2in acqua distillata, che viene determinata la densità ottica della soluzione campione e della soluzione standard, che la concentrazione di perossidi nel campione di liquido organico à ̈ data dal prodotto della concentrazione di perossidi contenuti nella soluzione standard per il rapporto tra la densità ottica della soluzione campione e di quella della soluzione standard. Claims: 1. Method for determining the concentration of peroxides in an organic liquid characterized in that a working solution is prepared by mixing a buffer solution having pH 4.5 and an undiluted chromogen, which prepares a sample solution formed from a sample of liquid organic dissolved in the working solution in a defined volumetric ratio between organic liquid and working solution, which is used a standard solution formed by hydrogen peroxide H2O2 in distilled water, which is determined the optical density of the sample solution and the standard solution, which the concentration of peroxides in the sample of organic liquid is given by the product of the concentration of peroxides contained in the standard solution and the ratio between the optical density of the sample solution and that of the standard solution. 2. Metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico secondo la rivendicazione 1 la caratterizzato dal fatto che la soluzione tampone à ̈ costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata. 2. Method for determining the concentration of peroxides in an organic liquid according to claim 1, characterized in that the buffer solution consists of 136 g of sodium acetate and 60 ml of acetic acid in 1,000 ml of distilled water. 3. Metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico secondo la rivendicazione 2 la caratterizzato dal fatto che la soluzione di lavoro à ̈ costituita da 1 parte di cromogeno e da 1000 a 6000 parti di soluzione tampone. 3. Method for determining the concentration of peroxides in an organic liquid according to claim 2, characterized in that the working solution is constituted by 1 part of chromogen and from 1000 to 6000 parts of buffer solution. 4. Metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico secondo la rivendicazione 3 la caratterizzato dal fatto che la soluzione campione à ̈ costituita da liquido organico sciolto nella soluzione di lavoro nel rapporto di 20µl di liquido organico in 1000 µl di soluzione di lavoro e che la soluzione standard, formata da acqua ossigenata H2O2 ,in acqua distillata ha una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mg di H2O2/dl. 4. Method for determining the concentration of peroxides in an organic liquid according to claim 3 a characterized in that the sample solution consists of organic liquid dissolved in the working solution in the ratio of 20µl of organic liquid in 1000 µl of solution of work and that the standard solution, formed by hydrogen peroxide H2O2, in distilled water has a peroxide concentration equal to 8.9 mg of H2O2 / dl. 5. Kit per la esecuzione del metodo per la determinazione della concentrazione di perossidi in un liquido organico secondo le rivendicazioni 1, 2, 3 o 4 caratterizzato dal fatto che esso da à ̈ formato da tre reagenti, un reagente A formato dal cromogeno di sintesi indiluito N-N Dietil 1,4 phenilendiamina; da un reagente B formato da una soluzione tampone costituita da 136 gr di acetato di sodio e 60 ml di acido acetico in 1.000 ml di acqua distillata e da un reagente C formato da H2O2, idroperossido, in acqua distillata avente una concentrazione di perossidi pari a 8,9 mg di H2O2/dl.5. Kit for carrying out the method for determining the concentration of peroxides in an organic liquid according to claims 1, 2, 3 or 4 characterized in that it is formed by three reagents, a reagent A formed by the synthetic chromogen undiluted N-N Diethyl 1,4 phenylenediamine; a reagent B formed by a buffer solution consisting of 136 g of sodium acetate and 60 ml of acetic acid in 1,000 ml of distilled water and a reagent C formed of H2O2, hydroperoxide, in distilled water having a peroxide concentration equal to 8.9 mg of H2O2 / dl.
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