HUT68529A

HUT68529A - Use of il-4 to enhance immune response to immunogens in vaccines

Info

Publication number: HUT68529A
Application number: HU9301797A
Authority: HU
Inventors: Jerome Schwartz; Edward J Rozhon; John F O'connell; Stuart A Cox; Michael D Hayre
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 1990-12-19
Filing date: 1991-12-17
Publication date: 1995-06-28
Also published as: HU9301797D0; ATE129900T1; CA2098726A1; IL100402A0; CN1063227A; EP0563254A1; DE69114519T2; CZ119993A3; DE69114519D1; OA09863A; JPH06503830A; WO1992011030A1; ZA919907B; IE914436A1; DK0563254T3; SK59393A3; EP0563254B1; FI932759A0; PT99838A; GR3018820T3

Description

IL-4 alkalmazása immunválaszt fokozó gyógyszerkészítmények előállítására

SCHERING CORPORATION, KENILWORTH, New Jersey,

AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK

Feltalálók: ROZHON Edward J., VERNON, New Jersey,

0'CONNELL John F., MONTCLAIR, New Jersey,

COX Stuart A., ROSELLE PARK, New Jersey,

HAYRE Michael D., SCHWARTZ Jerome,

A bejelentés napja: 1991. 12.

Elsőbbsége: 1990. 12.

A nemzetközi bejelentés száma

A nemzetközi közzététel száma

NEW YORK, New York,

AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK

17.

19. (629,800)

AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK

PCT/US91/09167

WO 92/11030

A találmány tárgyát hatóanyagként interleukin-4-et (IL-4) tartalmazó gyógyszerkészítmények képezik, melyek fokozni képesek

- 2 emlősöknek vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakcióját. A találmány tárgya továbbá az interleukin-4 alkalmazása olyan gyógyszerkészítmények előállítási eljárása során, amelyek fokozni képesek emlősöknek vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakcióját; végül a találmány tárgyához tartoznak olyan eljárások is, melyek segítségével fokozható emlősöknek vakcinákban lévő immunogénekre adott, hatékony, elsődleges immunreakciója oly módon, hogy az illető emlősnek a vakcinával együtt hatékony mennyiségű interleukin-4-et is adagosak .

Az interleukin-4-et (a továbbiakban IL-4, más néven 1-es B-sejt serkentő faktor, Cell Stimulatory Factor 1 vagy BSF-1) eredetileg M. Howard és munkatársai írták le [J. Exp. Med. 155, 914-923 (1982)], mint olyan T-sejt eredetű növekedési faktort, amely különbözik az IL-2-től, és amely lehetővé teszi normál egér B-limfociták hosszan tartó szövettenyészetének létrehozását, és amely kölcsönhatásba lép az aktivált B-limfocitákkal, és ily módon pro^i4ff erációj ukat akár 4 hónapon keresztül is fenntartja. Bár a tenyésztés beindítására kevert B-limfocita explantátumokat használnak, úgy tűnik, hogy az éretlen fenotípusú B-limfocitákat az IL-4 különösen serkenti szövettenyészetben. [Lásd például:

C. Perchel és munkatársai, J. Immunoi. 142, 1558-1568 (1989)].

G. Trenn és munkatársai [J. Immunoi. 140, 1101-1106 (1988)] arról számoltak be továbbá, hogy az IL-4 serkenti citotoxikus Tsejteknek nyugvó egér T-limfociták Lyt-2+ szubpopulációjából való kifejlődését. H. Spits és munkatársai [J. Immunoi. 139, 11421147 (1987)] véleménye szerint az IL-4 az IL-2-től eltérő T-sejt növekedési faktorként képes hatni in vitro körülmények között emberi sejtekre.

Az egér IL-4 gént COS-7 sejtekben klónozták és fejezték ki [T. Otsuka és munkatársai, Nuc. Acids Rés. 15, 333-334 (1987)].

A klónozott faktor minden olyan tulajdonsággal (aktivitással) rendelkezett szövettenyészetben, amelyeket a T-sejttenyészet felülúszójából tisztított faktor esetében láthatunk. A humán IL-4 gén klónozását és kifejezését N. Arai és munkatársai [J. Immunoi. 142, 274-282 (1989)] és T. Yokota és munkatársai [Proc. Natl. Acad. Sci. 83, 5844-5848 (1986) ismertették, azzal a faktorral, melyet az eredeti molekuláéhoz hasonló aktivitású COS-7 sejtek termelnek, szövettenyészetben vizsgálva. Mivel az IL-4-et mind emberi, mind pedig egér sejtrendszerekben tanulmányozták, az alábbi in vitro jellegzetességeket sikerült még a molekulával kapcsolatban felfedezni: i) az IL-4 fontos szerepet játszik az IgE szintézis kiváltásában (indukciójában) és szabályozásában, abban a folyamatban, amely akkor megy végbe, amikor a B-limfociták szubpopulációinak proliferációját előidézzük (indukáljuk), [lásd: Pene, J. Proc. Natl. Acad. Sci. .85., 6880-6884 (1988)] ;

ii) az IL-4 alacsony affinitású Fce receptorokat (CD23) indukál szövettenyészetben, normál emberi B-limfocitákon [T. DeFrance et al., J. Exp. Med. 165, 1459-1467 (1987)]; iii) az IL-4 kölcsönhatásba lép egyéb limfokinekkel, nevezetesen a -interferonnal [R.L. Coffman et al., Immunoi. Rés. 102, 5-27 (1988) és S.

Romagnani et al., lásd fent] és T-sejtekkel [R.L. Coffman et al., lásd fent; S. Romagnani et al., lásd fent és M.D. Widmer et al., Natúré 326, 795-798 (1987)], B-sejt proliferáció és alteráció • ·

- 4 (módosítás) létrehozása céljából; iv) az IL-4 fokozza bizonyos specifikus antitest-típusok — például Ig-k — humán B-sejtek által történő szekretálását [lásd: J. B. Splawski et al., J. Immunoi. 142, 1569-1572 (1989)]; v) az IL-4 serkentő hatást fejt ki a T-sejtekre, a hízósejtekre és a makrofágokra [K.H. Grabstein et al., J. Immunoi. 139, 1148-1153 (1987); F. Lee et al., Proc. Natl. Acad. Sci 83, 2061 (1986); valamint A. Zlotnik et al., J. Immunoi. 138, 4275-4279 (1987)]; és végül vi) az IL-4 fokozza az MHC II osztályba tartozó antigén kifejeződését nyugvó B-sej teken [R. Noelle et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 6149-6153 (1984)]. T.R. Mosmann és munkatársai [J. Immunoi. 138, 1813-1816 (1987)] arról számolnak be, hogy az 1-90 és 129-149 aminosavszekvencia tekintetében 50 %-ban homológ humán és egér IL-4 faj specifikus.

Az 1990. március 21-én benyújtott, 07/496,832 sorozatszámú, közös tulajdonú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés, valamint az 1991. március 19-én benyújtott, a fentinek megfelelő, US-91/01733 számú PCT szabadalmi bejelentés ismerteti az IL-4 felhasználását bizonyos fertőző jellegű antigének hatására — például vírusok, baktériumok, gombák vagy protozuoonok okozta krónikus fertőzésekre — kialakuló immunválasz fokozására.

A találmány tárgya az IL-4 felhasználása olyan gyógyszerkészítmények előállítására, melyek fokozzák emlősöknek vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakcióját oly módon, hogy az illető emlősnek a vakcinával együtt hatékony mennyiségű IL-4-et is adagolunk.

A találmány tárgya továbbá olyan gyógyszerkészítmény, mely fokozza emlősöknek vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakcióját, és amely gyógyszerkészítmény az ilyenfajta fokozás szempontjából hatékony mennyiségű IL-4-et és egy gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagot tartalmaz.

A találmány tárgya továbbá eljárás emlősök vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakciójának fokozására, melynek során az illető emlősnek a vakcinával együtt a fenti célra hatékony mennyiségű lL-4-et adagolunk.

A találmány tárgya a fentieken kívül eljárás emlősök vírus-vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakciójának fokozására, melynek során az illető emlősnek a vakcinával együtt a fenti célra hatékony mennyiségű IL-4-et adagolunk.

A találmány eljárást ismertet továbbá emlősök tetanusz-toxoid-vakcinában lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakciójának fokozására, amelynek során az illető emlősnek a tetanusz-toxoid-vakcinával együtt a fenti célra hatékony mennyiségű IL-4-et adagolunk.

A találmány eljárást ismertet a fentieken kívül emlősök vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakciójának fokozására, azzal jellemezve, hogy az illető emlős elsődleges immunreakciója IL-4 hiányában nem elég erős vagy nem elég gyors ahhoz, hogy megakadályozza a betegség fellépését, mely eljárás során az illető emlősnek a vakcinával együtt a fenti célra hatékony mennyiségű IL-4-et adagolunk.

A találmány a fentieken kívül biztosít továbbá egy olyan készletet is, mely alkalmas emlősök vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakciójának a fokozására, és amely

készlet az alábbiakat tartalmazza: (1) IL-4-ből és valamilyen, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagból álló gyógyszerkészítményt tartalmazó tárolóedény; és (2) vakcinából és valamilyen, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagból álló gyógyszerkészítményt tartalmazó tárolóedény.

Az 1. ábra rekombináns humán IL-4 és tetanusz-toxoid-vakcina cynomolgus-majmoknak a találmány szerint történő adagolásával kiváltott immunválasz időbeli alakulását szemlélteti.

A 2-5. ábrák grafikusan szemléltetik a tetanusz-antitestek megjelenését a tetanusz-toxoid-vakcina beadásától számított idő függvényében, cynomolgus-májom modellben, 0,5 gg/kg és 20 μg/kg rekombináns humán IL-4 és tetanusz-toxoid vakcina találmány szerinti beadása után.

Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy rekombináns humán IL-4 (a továbbiakban rhIL-4) és tetanusz-toxoid vakcina egyidejű adagolása cynomolgus-majmoknak fokozott elsődleges immunválaszt eredményezett a majmoknál. Ez az eredmény azért különösen meglepő, mert amikor az rhIL-4-et rekombináns hepatitis-B-vírussal (rHBVax) végzett booster (emlékeztető) oltás során adagolták cynomolgus-majmoknak -körülbelül két hónapig az rHBVax-vakcina beadását követően-, valamint amikor az IL-4-et Salk inaktivált poliovirus-vakcinával végzett booster-oltás alatt adagolták cynomolgus-majmoknak -körülbelül egy hónapig a Salk inaktivált poliovirus-vakcina beadását követően-, nem volt megfigyelhető anamnesztikus, azaz másodlagos, illetve memória-válaszreakció. Az IL-4-nek egy vakcinával együtt történő adagolását biztosító találmány szerinti eljárásnak az alábbi előnyei vannak. Az ada7 golandó vakcina teljes antigén-terhelése csökkenthető, mivel IL-4 jelenlétében kevesebb antigén is kivált egy olyan immunválaszt, mely legalábbis egyenértékű a fenti vakcina adagolásával elérhető immunreakcióval. Mivel a találmány szerinti IL-4 adagolás következtében kevesebb antigénre van szükség a vakcinációhoz, csökken a jelenleg használatos vakcinák némelyike esetében tapasztalható, nemkívánatos mellékhatások fellépésének valószínűsége. Továbbá, mivel kevesebb immunogénre van szükség a hatékony védelem eléréséhez, az egy betegre jutó teljes költség is alacsonyabb. A találmány szerinti IL-4 adagolással fokozható az egyének bizonyos, a vakcinálásra gyengén reagáló típusának immunreakciója. Az ilyen típusú, a találmány szerinti eljárások révén előnyösebb helyzetbe kerülő egyének közé tartoznak (1) a csökkent immunválaszkészségű egyének, például bizonyos immunhiány-betegségekkel született gyermekek; (2) olyan, egészségesnek tűnő egyének, akik bizonyos vakcinákra nem reagálnak; (3) immunszupreszszív kezelésben — például besugárzásban, kortikoszteroid-kezelésben stb. — részesülő egyének.

Hatékony módszereket találtunk tehát (1) a hatékony elsődleges immunválasz fokozására ilyen — a vakcinában lévő immunogéneknek kitett — emlősök esetében; (2) az antitestek hatékony szintjének fokozására ilyen — a vakcinában lévő immunogéneknek kitett — emlősök esetében; és (3) az elsődleges immunválasz fokozására olyan — a vakcinában lévő immunogéneknek kitett — emlősök esetében, melyek immunreakciója IL-4 hiányában nem elég erős, illetve nem elég gyors ahhoz, hogy megakadályozhassa a betegség fellépését. Az ilyen emlősök immunreakciója IL-4 hiányé8 ···♦ bán ugyan nem elég erős, illetve nem elég gyors ahhoz, hogy megakadályozhassa ezen emlősöknél a betegség fellépését, de sikerült olyan hatékony módszereket találnunk, melyek során az ilyen emlősöknek az IL-4 — előnyösen a rekombináns humán IL-4 — valamennyi fent említett cél szempontjából hatékony mennyiségét adagoljuk.

A találmány értelmében felhasználható vakcinák közé tartoznak az alábbiak: bakteriális vakcinák, toxoid-vakcinák (inaktivált toxinok) és a vírus-vakcinák, valamint a fent említett vakcinák keverékét tartalmazó többszörös antigének (multiple antigens), melyeket az emberek aktív immunizálására használunk. Lásd például az Immunizáló ágensek című, 75. fejezetet (Immunizing Agents; in Remington's Pharmaceutical Sciences 14^ Edition, Mark Publishing Co. , 7.5, 1426-1441, 1990) és az FDA által jóváhagyott azon antitoxinokat, toxoidokat, vakcinákat és élő vakcinákat, melyeket a Physicians' Desk Reference (44^th Ed. 1990) 210. oldalán sorol fel (Product Category Index). Előnyösen alkalmazható bakteriális vakcinák közé sorolhatók az alábbi betegségek, illetve állapotok elleni bakteriális vakcinák: kolera, szamárköhögés, pestis, hastífusz, agyhártyagyulladás, pneumococcus okozta tüdőgyulladás, H. influenzáé B-típusa által okozott lepra, gonorrhea, B-csoportba tartozó meningococcus és B-csoportba tartozó streptococcus okozta fertőzések, Gram-negatív szepszis, E. coli okozta szepszis és Pseudomonas aeruginosa okozta fertőzések. Előnyös toxoidok a diftéria-toxoid, a botulizmus-toxoid és a tetanusz-toxoid. Előnyös vírus-vakcinák lehetnek a következő élő vagy inaktivált vírus-vakcinák, az

- 9 alábbi betegségekkel, illetve állapotokkal szemben: poliomyelitis (gyermekbénulás), kanyaró, rubeola, sárgaláz, mumpsz és Bvírus okozta máj gyulladás.

Az előnyös többszörös antigének közé sorolhatók a diftéria és tetanusz-toxoidok kombinációja, valamint egy háromszoros antigén-kombináció — a diftéria, szamárköhögés és a tetanusztoxoidok együttese —, melyek a Connaught Laboratories, Inc. cégtől szerezhetők be (Swiftevater, PA 18370) . A különböző országokban használt vírustörzsek és sejtszubsztrátumok széles skáláját, valamint az immunizáció lehetséges eljárásainak leírását az alábbi irodalmi közlemény ismerteti [D.O. White & F. Fenner, Medical Virology (1986) 3^r(^ Ed., Academic Press Inc. Orlando, Fia; Immunization Against Viral Diseases - Vírusbetegségekkel szembeni immunizálás -; 10, 4 (27. sor); 283-301; 10-6. és 10-7 táblázatok.]

A valamivel együtt kifejezés a találmány értelmében az IL-4-nek a vakcinával egyidejű, adagolása alatti, illetve közvetlenül előtte egy utána történő alkalmazását jelenti. Például az IL-4 adagolható 10-14 napig a megfelelő vakcina adagolása előtt vagy azt követően. Általában az IL-4-et a megfelelő vakcina adagolása előtt elég hosszú ideig adagoljuk ahhoz, hogy állandó IL-4-szinteket biztosítsunk az emlős nyirokszövetében. Az ilyen szintek meghatározása standard farmakokinetikai mérések segítségével történhet. Az IL-4 adagolását a vakcina beadását követően még azon periódus folyamán is végezzük, mialatt a vakcinában lévő immunogéneket az emlős immunrendszere feldolgozza, és elegendően hosszú ideig ahhoz, hogy biztosítsuk az IL-4 foko10 *·«· * ·

zott elsődleges immunválaszt kiváltó hatását. A vakcina adagolását az adott típus esetében ajánlott módon és erősségben végezzük .

A találmány szerint bármilyen előnyös IL-4 alkalmazható. Nemrégiben sikerült számos laboratóriumban az IL-4 komplementer DNS-ek (cDNS-k) klónozása és szekvenálása [például Yokota et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 5894-5898 (1986) (humán); Lee et al·., Proc. Natl. Acad. Sci. USA .83, 2061-2065 (1986) (egér); Noma et al., Natúré 319, 640-646 (1986) (egér); Genzyme Corporation, Boston, Massachusetts (humán és egér)]. Nem-rekombináns IL-4 tisztítása is sikerült továbbá különböző tenyészetek felülúszóiból [például Sanderson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 437-440 (1986) (egér); Grabstein et al., J. Exp. Med. 163, 14051413 (1985) (egér); Ohara et al., J. Immunoi. 135, 2518-2523 (1985) (egér BSF-1); Butler et al., J. Immunoi. 133, 251-255 (1984) (humán BCGF); valamint Farrar et al., J. Immunoi. 131, 1838-1842 (1983) (egér BCGF)]. A fenti cikkekben foglaltak a találmány szempontjából referenciaként takinthetők a DNS- és az aminosav-szekvenciákkal kapcsolatban, valamint azon módszerekre vonatkozó kitanítások tekintetében, amelyek segítségével előnyös, a találmány szerint felhasználható IL-4 hatóanyagok állíthatók elő.

A találmány szerinti eljárás során felhasznált IL-4 előnyösen humán IL-4, legelőnyösebben pedig az alábbi közlemények által ismertetett szekvenciájú humán változat: Yokota és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA .83, 5894-5898 (1986) és a 87/02990 számú, 1987. május 21-én nyilvánosságra hozott PCT sza··« badalmi bejelentés. Ezen IL-4 kifejezése és izolálása E. coliból történt (079.666 számú, 1987. július 29-én benyújtott amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés és a 194.799 számú,

1988. július 12-én benyújtott amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés). Az IL-4-nek CHO sejtekből történő előállítását az SN 386.937 számú, 1989. július 28-án benyújtott amerikai egyesült államokbeli, közös tulajdonú szabadalmi bejelentés ismerteti. E. coliból történő előállítását az SN 429.588 számú,

1989. október 31-én benyújtott amerikai egyesült államokbeli közös tulajdonú szabadalmi bejelentés ismerteti. A fenti cikkben, PCT szabadalmi bejelentésben és amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésekben foglaltak referenciaként tekintendők a találmányi leírásuk szempontjából.

A találmányi leírásban a hatékony mennyiség kifejezés — azaz a találmány értelmében adagolt hatékony IL-4 mennyiség — azt az IL-4 mennyiséget jelenti, mely elegendő mértékben emeli meg az antitestszintet ahhoz, hogy fokozott védelmet biztosítson a fertőző kórokozóval szemben. A pontosan megállapított antitestszint -növekedés — mely szignifikánsnak tekinthető —, akár csekély mértékű is lehet. Az adagolt IL-4 hatékony mennyisége előnyösen 0,25 és 15 pg — előnyösen E. coliból vagy CHO sejtekből előállított, rekombináns humán — IL-4 testtömegkilogrammonként naponta. Még előnyösebben az emlősöknek naponta testtömegkilogrammonként 0,25 és 5 μg rhIL-4-et adagolunk, legelőnyösebben pedig naponta testtömegkilogrammonként 0,25 és 1 mikrogramm hIL-4-et adunk az emlősöknek.

Az adagolás mennyisége, gyakorisága és időtartama különböző • · · · • · · · tényezőktől függ, például a specifikus antitest-titerek szintjétől, az indukálandó antitest-típustól (antitest-osztálytól), a vakcina típusától, valamint a teg életkorától, táláltságától, stb. Az IL-4 beadása kezdetben általában naponta történik, és periodikusan a beteg egész élete során folytatódhat. A beadott mennyiség nagysága és az adagolás gyakorisága oly módon határozható meg, hogy kezdetben gyakran ellenőrizzük a specifikus antitesttitereket és az IL-4-nek az antitestszintek növekedésére gyakorolt hatásának nagyságát.

A beadás módja lehet intravénás, intranazális, parenterális, perorális, szubkután, intramuszkuláris, helyi, bőrön keresztüli vagy pedig bármilyen egyéb elfogadható eljárás. A parenterális készítmények közé tartoznak a steril oldatok és a szuszpenziók. Az inhalációs adagolás végezhető nazális (orron keresztüli) vagy perorális (szájon keresztüli) permet vagy befúvás formájában. A helyi adagolási formák közé sorohatók a krémek, kenőcsök, oldatok, transzdermális eszközök (például a hagyományos tartály vagy a mátrix-tapasz) és hasonlók.

A fenti adagolási formákkal létrehozott gyógyszerkészítmények előállítása során bármilyen, hagyományosan alkalmazott, gyógyszerészeti szempontból elfogadható kötőanyag és segédanyag felhasználható, hagyományos eljárások alkalmazásával.

Jelenleg az IL-4-et előnyösen intravénásán alkalmazzuk. Az alkalmazandó oldatok lehetnek frissen feloldott liofilizált porok, amelyek tartalmazhatnak továbbá tartósító szereket, puftereket, diszpergáló szereket, stb. is.

Az IL-4 újraoldása előnyösen 10 millimólos citrát pufferrel és tartósító szertől mentes steril vízzel történik oly módon, hogy a maximális koncentráció ne lépje túl a 100 mikrogrammot milliliterenként, az adagolás pedig folyamatos intravénás infúzió vagy intravénás injekció formájában történik. Folyamatos infúzió esetében a napi dózist 5 ml normál sóoldathoz adhatjuk hozzá, az oldat infúziós formában történő bevitelét pedig mechanikus pumpa vagy a gravitáció segítségével biztosíthatjuk.

Az alábbi kísérletekben felhasznált humán rekombináns IL-4 CHO sejt-eredetű IL-4 volt, és előállítási eljárását az 1989. július 29-én benyújtott, SN 386,937 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés ismerteti.

Majmok

Felnőtt hím Cynomolgus-majmokat — melyek Délkelet-Ázsiából származtak — szereztünk be kereskedelmi forrásból (Hazelton and Charles River Laboratories). Valamennyi majmot legalább 90 napra karanténba zártuk a felhasználást megelőzően.

Tetanusz-toxoid és az állatok beoltása

A jelen kísérletben felhasznált tetanusz-toxoid vakcina Tetanus Toxoid Purgonated ^R tetanusz-toxoid folyadék volt, amelyet a Lederle Laboratories-tól szereztünk be (Pearl River, NY 10965) .

Tizenöt (15) felnőtt hím cynomolgus-majmot a vizsgálat megkezdése előtt megfertőztünk a főemlősöket megbetegítő citomegalovírussal (PCMV - primate cytomegalovirus). Ekkor valamennyi állatnál mérhető szintű PCMV antitest-titer volt megfigyelhető. Ezen belső kontroll beiktatásának az volt a célja, hogy megvizsgáljuk, vajon az IL-4 kezelés nem-specifikus módon befolyásolja-e • · · az antitestszinteket. Nem várhattuk, hogy az IL-4 fokozza a PCMVre keletkező antitestek szintjét, mivel nem adagoltunk PCMV vakcinát. Az antitest-válaszreakciók mérésére szolgáló standard eljárások között említhetjük a PCMV radioimmunassay-t és a szilárd fázisos radioimmunoassay-t [lásd Berzofasky, J.A. et al., Antigén-Antibody Interactions and Monoclonal Antibodies Antigén-antitest interakciók és monoklonális antitestek - in Fundamental Immunology 2nd Edition (W.E. Paul ed.), Raven Press N.Y., N.Y., 315-356, 1989], rHBVax és Salk inaktivált poliovirusvakcina esetében.

A PCMV és a tetanusz toxoid antitestek meghatározásához szükséges vérvételt hetente egyszer végeztük, kilenc héten keresztül (1. ábra 2-7.) az IL-4 adagolása előtt, majd a vizsgálat 22 hetén keresztül (8-30.) minden héten kétszer. Az rhIL-4 intravénás adagolását naponta kétszer végeztük, két dózissal (5,0 és 20,0 ^g/kg/nap, naponta kétszer); a fenti kezelést, illetve a placebo adagolását a 8. hét közpén kezdtük és a 12. hét közepéig folytattuk, összesen 25 napon keresztül. Tetanusz-toxoid vakcinát (0,5 ml 5 Lf egység tetanusz-toxoidot tartalmaz) adagoltunk intramuszkuláris injekció formájában a 15 majom mindegyikének az rhIL-4 adagolás 11. napján. A 2. ábra és az 1. táblázat a tetanusz antitesttiterek meghatározásával nyert eredményeket szemlélteti a három csoport esetében (csoportátlag-adatok). A 2. ábra grafikusan szemlélteti az 5 ^g/kg/nap dózissal kezelt csoport fokozott válaszreakcióját a kontroll, illetve a 20 μg/kg/nap dózissal kezelt csoporthoz képest. Az 5 μg/kg-os csoport válaszreakciója (a 2. és a 4. ábrán látható) statisztikailag szinifi kánsan különbözött a kontroll csoport (2. és 3. ábrán látható) válaszreakciój ától.

Az 1. táblázat azt mutatja be, hogy (1) a tetanusz-toxoid vakcinációt követő 4-6. héten az 5 Mg/kg IL-4-gyel kezelt csoport esetében statisztikailag szignifikánsan magasabb volt az antitesttiter, mint a placeboval kezelt kontroll csoportnál; (2) a vakcinációt követő 7-9. héten mindkét IL-4-gyel kezelt csoport (5,0 Mg/kg és 20 MU/kg IL-4 adagolás) esetében magasabb volt a tetanuszantitest-titer, mint a placeboval kezelt kontroll csoportnál .

1. táblázat

Antitest válaszreakció primer tetanusz vakcinára:

IL-4 hatása

Csoport	IL-4
dózis- szint (1)	11.	hét 12-13. hét	14-16. hét	17-19. hét
I	0	37121	⁽²⁾ 21271606 24561488 12231139
II	5	49130	21781529	53331697	39731631
III	20	46120	15601228	23551152	16771227

(1) - ^g/kg az állat testtömegére vonatkoztatva (2) - az értékek átlagos antitest-titereket jelentenek az adott időtartam alatt; N=5 majom csoportonként (± = S.E.M) • ·

- 16 A fenti kísérletek eredményeinek tükrében feltételezhető, hogy az IL-4 — előnyösen az rhIL-4 — fokozza az emlősök immunreakcióját valamely vakcinával történt elsődleges találkozás után, azzal jellemezve, hogy az illető emlős immunválasza IL-4 nélkül nem eléggé erős, illetve nem eléggé gyors ahhoz, hogy megakadályozhassa a betegség fellépését.

Hasonló eredmények várhatók bakteriális és vírus-vakcináknál is, valamint ezeknek toxoidokkal alkotott keverékeivel.

• « • · · · · • · · · · · · • · «· «·«» 4 ··*·

Claims

- 17 SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Az IL-4 felhasználása olyan gyógyszerkészítmény előállítása során, mely fokozza emlősök vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakcióját oly módon, hogy az illető emlősnek a vakcinával együtt hatékony mennyiségű IL-4-et adagolunk.
2. Gyógyszerkészítmény emlősök vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakciójának fokozására, mely gyógyszerkészítmény az ilyenfajta fokozás tekintetében hatékony menynyiségű IL-4-et és egy gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagot tartalmaz.
3. Eljárás emlősök vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakciójának fokozására, melynek során az illető emlősnek a vakcinával együtt a fenti célra hatékony mennyiségű IL-4-et adagolunk.
4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti felhasználás vagy gyógyszerkészítmény vagy eljárás, azzal jellemezve, hogy az IL-4-et az illető emlősnek a vakcinával egyidejűleg adagolják.
5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti felhasználás vagy gyógyszerkészítmény vagy eljárás, azzal jellemezve, hogy az IL-4-et parenterálisan adagolják.
6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti felhasználás vagy gyógyszerkészítmény vagy eljárás, azzal jellemezve, hogy a humán IL-4-et, előnyösen E. coliból származó, rekombináns humán IL-4-et adagolnak.
7. Az előző igénypontok bármelyike szerinti felhasználás vagy gyógyszerkészítmény vagy eljárás, azzal jellemezve, hogy az adagolt IL-4 mennyisége naponta testtömegkilogrammonként 0,25 és 15 mikrogramm közötti tartományban van.
8. Az előző igénypontok bármelyike szerinti felhasználás vagy gyógyszerkészítmény vagy eljárás, azzal jellemezve, hogy a vakcina valamilyen vírus-, baktérium- vagy toxoid-vakcina.
9. Az előző igénypontok bármelyike szerinti felhasználás vagy gyógyszerkészítmény vagy eljárás, azzal jellemezve, hogy a toxoid vakcina tetanusz-toxoid vakcina.
10. Készlet emlősök vakcinákban lévő immunogénekre adott, elsődleges immunreakciójának a fokozására, mely az alábbiakat tartalmazza: (1) IL-4-ből és valamilyen, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagból álló gyógyszerkészítményt tartalmazó tárolóedényt; és (2) vakcinából és valamilyen, gyógyszerészeti szempontból elfogadható vivőanyagból álló gyógyszerkészítményt tartalmazó tárolóedényt.

A meghatalmazott: