FR3051794A1

FR3051794A1 - Anticorps pour le traitement de cancers

Info

Publication number: FR3051794A1
Application number: FR1654891A
Authority: FR
Inventors: Celine Monnet
Original assignee: LFB SA
Current assignee: LFB SA
Priority date: 2016-05-31
Filing date: 2016-05-31
Publication date: 2017-12-01
Also published as: WO2017207628A1; US20190218292A1; EP3464359A1; CA3026145A1

Abstract

La présente invention se rapporte à un anticorps inhibiteur d'au moins un point de contrôle immunitaire possédant une région Fc modifiée par rapport à celle de l'anticorps parent.

Description

Anticorps pour le traitement de cancers

La présente invention concerne l’immunothérapie de cancers.

Arrière-plan technologique de l’invention ; L’immunothérapie par administration à des patients d’anticorps exogènes, est aujourd’hui largement utilisée pour le traitement de diverses pathologies, notamment des cancers.

Au cours des dernières années, les connaissances concernant la biologie et l’immunologie des cancers n’ont cessé d’évoluer. Il est désormais reconnu que le système immunitaire est impliqué dans les réponses anti-tumorales notamment par reconnaissance des cellules cancéreuses par les cellules immunitaires. Cette reconnaissance peut avoir pour conséquence un contrôle, voire une élimination tumorale. Cependant, les cellules effectrices de l’immunité possèdent à leur surface des récepteurs appelés points de contrôle immunitaires. Ces récepteurs ont pour rôle de moduler (inhiber ou activer) la réponse immunitaire notamment, pour maintenir la tolérance du soi. Il est à présent connu que les cellules cancéreuses empruntent ce mécanisme d’échappement pour résister au système immunitaire, notamment en exprimant à leur surface des ligands desdits récepteurs points de contrôle immunitaires qui entraineront une inhibition de la réponse de la cellule effectrice immunitaire lors de leur reconnaissance par celle-ci (Pardoll et al., Nat. Rev. Cancer. 12 :252-264 (2012)). Une nouvelle approche de l’immunothérapie contre les cancers est alors née pour contre-attaquer ce phénomène d’échappement immunitaire en rétablissant la réponse immunitaire et donc le rejet tumoral. Ainsi, depuis quelques années, des anticorps dirigés contre ces points de contrôle immunitaires sont développés. Les principaux anticorps commercialisés ou en développement visent : le Cytotoxic T-Lymphocyte Associated antigen 4 (CTLA4) (e.g., Ipilimumab -Yervoy® Bristol Myers Squibb). Cet anticorps monoclonal entraine le blocage du récepteur CTLA4, point de contrôle immunitaire inhibiteur présent sur les lymphocytes T, et a ainsi pour conséquence l'activation de la réponse immunitaire dudit lymphocyte T. En d’autres termes, Tlpilimumab bloque la voie d’échappement immunitaire des cellules cancéreuses en supprimant leur action d’inhibition des lymphocytes T via leur stimulation du récepteur CTLA4. Une étude clinique a permis de mettre en évidence pour la première fois que des patients atteints de mélanomes métastatiques traités avec un anticorps anti-CTLA4 (Ipilimumab), voient leur durée de vie augmentée (Hodi et al., N Engl. J. Med., 363 :711-723 (2010) et 363 :1290 (2010) (eratum) ; Robert et al., N Engl. J. Med.,364 :2517-2526 (2011)) ; le Programmée! Death Cell 1 (PDI) (e.g., Nivolumab - Opdivo® Bristol Myers Squibb et Pembrolizumab - Keytruda® Merck). Cet anticorps monoclonal entraine le blocage du récepteur PDI, point de contrôle immunitaire inhibiteur présent sur les lymphocytes T, et a ainsi pour conséquence l'activation de la réponse immunitaire dudit lymphocyte T. En d’autres termes, le Nivolumab bloque la voie d’échappement immunitaire des cellules cancéreuses en supprimant leur action d’inhibition des lymphocytes T via leur stimulation du récepteur PD-1. Le Nivolumab semble notamment présenter une activité anti-tumorale chez des patients dans le cas de carcinomes à cellules rénales métastatiques (Motzer et al., American Society of Clinical Oncology 33 (13) : 1430-1437 (2014)) ; ou le lymphocyte Activation Gene 3 (LAG3) (e.g., BMS-986016). LAG3 est un point de contrôle immunitaire inhibiteur présent sur les lymphocytes T. C’est aujourd’hui la cible de développement d’inhibiteurs, notamment d’anticorps monoclonaux. De façon similaire à CTLA4 et PDI, le blocage de ce récepteur permettrait ainsi de bloquer son effet inhibiteur de la réponse des cellules effectrices, et ainsi activer la réponse immunitaire. 11 existe aujourd’hui un besoin d’optimiser ces anticorps dirigés contre un point de contrôle immunitaire, ceci notamment pour obtenir un effet clinique plus efficace ou moins toxique. En particulier, il existe un besoin d’obtenir des anticorps présentant une demi-vie améliorée dans l’organisme permettant un effet prolongé anti-tumoral, en étant bien tolérés par l’organisme, et/ou possédant avantageusement des propriétés effectrices améliorées. Résumé de l’invention :

La présente invention se rapporte ainsi à un anticorps, en particulier inhibiteur, ciblé contre au moins un point de contrôle immunitaire, possédant une région Ec modifiée par rapport à celle d’un anticorps parent. Un tel anticorps est adapté pour une utilisation dans le traitement d’un cancer. De préférence, l’anticorps selon l’invention a une affinité modifiée pour au moins un des récepteurs Fc (FcR) par rapport à la région Fc parente. L’invention se rapporte également à une composition pharmaceutique comprenant au moins un anticorps selon l’invention. Ladite composition peut convenir pour une utilisation dans le traitement de cancers.

De préférence, l’anticorps selon l’invention a une demi-vie prolongée et/ou une activité fonctionnelle modifiée, notamment diminuée. Légende de la figure :

La figure 1 montre des alignements de séquences d'IgGl humaine natif se référant aux positions 216 à 447 (selon l'indice UE) avec les séquences correspondantes d'IgG2 humaine (SEQ ID NO: 7), IgG3 humaine (SEQ ID NO: 8) et IgG4 humaine (SEQ ID NO: 9). Les séquences d'IgGl se réfèrent à l’allotype Glml,17 (SEQ ID NO: 6) et à l’allotype Glm3 (SEQ ID NO: 10). Le domaine "charnière inférieure CH2-CH3" de IgGl commence à la cystéine 226 (voir flèche). Le domaine CH2 est surligné en gris et le domaine CH3 est en italique.

Description détaillée

Caractéristique des anticorps

La présente invention se rapporte à un anticorps dirigé contre un point de contrôle immunitaire, possédant une région Ec modifiée par rapport à celle d’un anticorps parent.

Plus particulièrement, la présente invention se rapporte à un anticorps inhibiteur d’au moins un point de contrôle immunitaire, possédant une région Ec modifiée par rapport à celle d’un anticorps parent.

Par « anticorps » on entend un tétramère fait de deux chaînes lourdes de 50-70 kDa chacune (dites les chaînes H pour Heavy) et de deux chaînes légères d’environ 25 kDa chacune (dites les chaînes L pour Light) liées par des ponts disulfures intra et intercaténaires et identiques entre elles. Ce tétramère comprend au moins deux régions variables à l’extrémité N-terminale de chaque chaîne (dites VL pour les chaînes légères et VH pour les chaînes lourdes) et une région constante en extrémité C-terminale, constituée d’un seul domaine dit CL pour la chaîne légère et de trois ou quatre domaines pour la chaîne lourde appelés CHl, CH2, CH3 et éventuellement CH4.

Chaque domaine comprend environ 110 acides aminés et est structuré de manière comparable. Les 2 chaînes lourdes sont liées par des ponts disulfures au niveau des CH2 et chaque chaîne lourde est liée à une chaîne légère par un pont disulfure entre le CHl et le CL. La région qui détermine la spécificité de l’anticorps pour l’antigène est portée par les parties variables, ce sont ces parties qui sont responsables de la reconnaissance de l'antigène. Dans chaque région variable, trois boucles sont rassemblées pour former un site de liaison à l'antigène. Chacune des boucles est appelée une Région Déterminant la Complémentarité (ou CDR). Quant aux parties constantes des chaînes lourdes qui forment la région Fc, elles peuvent se lier aux récepteurs Fc (FcR) des cellules effectrices ou des molécules comme les protéines du complément pour induire différentes propriétés fonctionnelles. L’assemblage des chaînes qui composent un anticorps permet de définir une structure tridimensionnelle caractéristique en Y, où la base du Y correspond à la région constante Fc, ou fragment Fc : elle est reconnue par des protéines du complément et les récepteurs Fc afin de médier les fonctions effectrices de l’anticorps, et les extrémités des bras du Y correspondent à l’assemblage respectif de la région variable d’une chaîne légère et de la région variable d’une chaîne lourde, lesdites extrémités constituant la région Fab et déterminant la spécificité de l’anticorps pour l’antigène.

Il existe cinq types de chaînes lourdes (alpha, gamma, delta, epsilon, mu), qui déterminent les classes d'immunoglobulines (IgA, IgG, IgD, IgE, IgM). Le groupe de la chaîne légère comprend deux sous-types, lambda et kappa. Les chaînes légères kappa et lambda sont partagées par toutes les classes et sous-classes. Chez l’homme, la proportion de kappa et lambda produite se situe dans un rapport de 2 pour 1.

Les IgG sont les immunoglobulines les plus abondantes des anticorps circulants dans le sérum (75-80%). Elles sont présentes sous forme de monomères et présentent une demi-vie de 21 jours (supérieure aux autres immunoglobulines).

Il existe quatre types de chaînes lourdes gamma, ce qui détermine quatre sous-classes d’IgG (IgGl pour gammal, IgG2 pour gamma2, IgG3 pour gammaS et IgG4 pour gamma4). Ces quatre sous-classes diffèrent par des nombres et des positions variables des ponts disulfures {Basic and Clinical Immunology, Sème édition, Daniel P. Sûtes, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, Conn., 1994, page 71 et Chapitre 6).

Les quatre sous-classes des IgG humaines se distinguent également au niveau de leur activité biologique, malgré des structures très homologues (plus de 95% d’homologie de séquence pour les régions Fc).

Les anticorps comprennent notamment les immunoglobulines pleine longueur, les anticorps monoclonaux, les anticorps multi-spécifiques, les anticorps chimériques, les anticorps humanisés et les anticorps entièrement humains.

Le terme "Fc" ou "région Fc" ou "fragment Fc" désigne la région constante de la chaîne lourde d'un anticorps à l'exclusion du premier domaine de région constante d'immunoglobuline (CHl). Ainsi Fc fait référence aux deux derniers domaines (CH2 et CHS) de région constante d'IgG, et à la charnière flexible N-terminale de ces domaines. Pour une IgGl humaine, la région Fc comprend les domaines CH2 et CHS ainsi que la région charnière inférieure entre CHl et CH2. Ainsi, la région Fc correspond au résidu C226 jusqu’à son extrémité carboxy-terminale, soit les résidus de la position 226 à 447, où la numérotation est selon l’index EU ou équivalent dans Kabat. Les domaines analogues pour d’autres sous-classes d’IgG peuvent être déterminés à partir de l’alignement des séquences d’acides aminés des chaînes lourdes ou des fragments de chaînes lourdes des sous-classes d’IgG avec elle d’une IgGl humaine (Cf. figure 1). La région Fc utilisée peut comprendre en outre une partie de la région charnière supérieure, située entre les positions 216 à 226 selon l’index EU ou équivalent dans Kabat ; dans ce cas, la région Ec utilisée correspond aux résidus de la position 216 à 447, 217 à 447, 218 à 447, 219 à 447, 220 à 447, 221 à 447, 222 à 447, 223 à 447, 224 à 447 ou 225 à 447, où la numérotation est selon l’index EU ou équivalent dans Kabat. De préférence dans ce cas, la région Ec utilisée correspond aux résidus de la position 216 à 447, où la numérotation est selon l’index EU ou équivalent dans Kabat.

De préférence, la région Fc utilisée est choisie parmi les séquences SEQ ID NO : 1, 2, 3, 4 et 5. De préférence, la région Fc de l’anticorps parent a pour séquence SEQ ID NO : 1. Les séquences représentées en SEQ ID NO : 1, 2, 3, 4 et 5 sont exemptes de région charnière en N-terminal.

Les séquences représentées en SEQ ID NO : 6, 7, 8, 9 et 10 correspondent respectivement aux séquences représentées en SEQ ID NO : 1, 2, 3, 4 et 5 avec leurs régions charnières en N-terminal. Aussi, dans un mode de réalisation particulier, la région Fc de l’anticorps parent est choisie parmi les séquences SEQ ID NO : 6, 7, 8, 9 et 10.

De préférence, la région Fc de l’anticorps parent a une séquence correspondant aux positions 1-232, 2-232, 3-232, 4-232, 5-232, 6-232, 7-232, 8-232, 9-232, 10-232 ou 11-232 de la séquence SEQ ID NO : 6.

Par « position » on entend une position dans la séquence d’acides aminés. Pour la région Fc, les positions sont numérotées selon l'indice de l'UE ou équivalent dans Kabat.

Par «acide aminé» ou «résidu» on entend l’un des 20 acides aminés naturels ou des analogues naturels.

Les termes « points de contrôle immunitaires » se réfèrent à des récepteurs situés en surface des cellules effectrices de l’immunité capables d’inhiber (points de contrôle immunitaires inhibiteurs) ou de stimuler la réponse immunitaire (points de contrôle immunitaires activateurs) après engagement avec leurs ligands.

Par « récepteur activateur » on entend, dans la présente invention, un récepteur de surface qui, après interaction avec son ligand, entraîne le déclenchement d’une voie de signalisation conduisant à l’activation de la réponse immunitaire. Le point de contrôle immunitaire activateur est choisi de préférence parmi GITR et 0X40.

De préférence, le point de contrôle immunitaire cible des anticorps selon l’invention est un récepteur inhibiteur des cellules effectrices immunitaires.

Par « récepteur inhibiteur » on entend, dans la présente invention, un récepteur de surface qui, après interaction avec son ligand, entraîne le déclenchement d’une voie de signalisation conduisant à l’inactivation de la réponse immunitaire.

De préférence, le point de contrôle immunitaire inhibiteur est choisi parmi PDI, CTLA4, TM3, LAG3, KIR, BTLAl et a2AR. PDI, CTLA4, TIM3, LAG3, KIR, BTLAI et a2AR sont des récepteurs inhibiteurs des cellules effectrices immunitaires. PDI (Programmed cell Death factor 1) est un récepteur inhibiteur de la famille CD28 exprimé à la surface des lymphocytes T et B activés et des Natural Killer. Son rôle est de limiter l’activité des cellules effectrices dans les tissus lymphoïdes secondaires ou les tumeurs, lui conférant ainsi un mécanisme de résistance tumorale important. PDI inhibe les fonctions lymphocytaires lorsqu’il est engagé avec un de ses ligands (PDLl (ou B7-H1 ou CD274) et PDL2). PDLl est une molécule exprimée à la surface des cellules tumorales et des cellules myéloïdes. En cas d’exposition chronique au ligand PDLl (par exemple dans le cas de cancers), les lymphocytes portant PDI à leur surface sont inhibés dans leur fonction, ce qui entraîne alors un phénomène d’anergie. Les anticorps anti-PDl sont utilisés dans le traitement de cancers tels que les cancers du poumon, les cancers du poumon « non à petites cellules » (NSCLC), les mésothéliomes, les cancers de la vessie, les cancers colorectaux, les cancers colorectaux métastatiques, les cancers de la vessie, les cancers du sein, les cancers de la tête et du cou, les cancers des testicules, les cancers de l’endomètre, les cancers de l’œsophage, les cancers du thymus, les cancers hématologiques, les cancers hématologiques avancés tels que les lymphomes non-hodgkiniens, les lymphomes hodgkiniens, les leucémies lymphoïdes chroniques, les mélanomes multiples, les leucémies myéloïdes aiguës, les tumeurs du cerveau, les glioblastomes, les tumeurs solides, les adénocarcinomes gastriques, les tumeurs des cellules germinales, les carcinomes hépatocellulaires, les mélanomes, les mélanomes métastatiques, les lymphomes, les lymphomes diffus à grandes cellules B (LDGCB), les lymphomes folliculaires, les mélanomes non résécables ou métastatiques ou encore les carcinomes de cellules rénales avancés. CTLA4 (Cytotoxic T-lymphocyte-as sociated antigen 4) est un récepteur inhibiteur exprimé uniquement à la surface des lymphocytes T. Son rôle est de réguler les premières étapes d’activation des lymphocytes T. En effet, 48 heures après activation des lymphocytes T par l’intermédiaire de leur récepteur (TCR ou T Cell Receptor), CTLA4 s’engage avec ses ligands (CD80 ou CD86) qui sont exprimés à la surface des cellules présentatrices d’antigène (CPA) au niveau des ganglions lymphatiques et parfois des tumeurs. Ceci entraîne une cascade de signalisation conduisant à l’inhibition des lymphocytes T. Les anticorps anti-CTLA4 sont utilisés dans le traitement de cancers tels que le cancer du poumon, les cancers du poumon « à non petites cellules » (NSCLC), les carcinomes du poumon à petites cellules, les cancers du sein, les cancers du pancréas, les cancers de la prostate, les cancers gastriques, les cancers du rein, les cancers du cou et de la tête, les cancers du foie, les mélanomes métastatiques ou non résécables, les mélanomes cutanés avec atteinte des ganglions lymphatiques, les carcinomes rénaux, les myélomes, les lymphomes, les carcinomes hépatocellulaires, les métastases cérébrales, les tumeurs solides, mésothéliomes, les lymphomes ou encore les mélanomes. TIM3 (T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3) est un récepteur exprimé en surface des lymphocytes T sécréteurs d’IFN γ. Un de ses ligands est la galectine-9, qui est une protéine surexprimée dans les cellules tumorales. L’engagement de TIM3 avec la galectine-9 conduit à une inhibition de la réponse immunitaire. LAG3 (lymphocyte activation gene 3) aussi nommée CD223 est une molécule exprimée en surface des lymphocytes T. Son seul ligand connu est le Complexe Majeur d’Histocompatibilité de type II (CMH II) qui peut être exprimé par certaines cellules cancéreuses mais aussi par les cellules présentatrices d’antigène (CPA) (macrophages et cellules dendritiques) infiltrées au niveau des tumeurs. L’engagement de LAG3 avec son récepteur entraîne un phénomène d’anergie. KIR (Killer-cell immunoglobulin-like receptor) est une molécule exprimée en surface des Natural Killers, des lymphocytes T et des CPA. Lorsque KIR se lie à son ligand, le CMH de type I (CMH I), la réponse effectrice des Natural Killers est atténuée au niveau des tumeurs. BTLAl (B and T lymphocyte attenuator), aussi appelé CD272, est une molécule exprimée en surface des lymphocytes. Son ligand, la molécule HVEM (herpesvirus entry mediator), est exprimé dans certains types de tumeurs (notamment dans le cas des mélanomes).

Les a2AR sont exprimés dans différents types de cellules effectrices de l’immunité, notamment dans les lymphocytes T, ainsi que dans les cellules endothéliales. Lorsque l’a2AR se lie à son ligand, l’adénosine (qui s’accumule dans les tumeurs), les cellules CD4+ expriment FOXP3 et se différentient ainsi en cellules T régulatrices, ce qui a pour conséquence d’inhiber la réponse immunitaire.

Par « anticorps inhibiteur » on entend un anticorps capable de se lier à sa cible point de contrôle immunitaire inhibiteur pour empêcher sa liaison à son ligand endogène. Dans le contexte de la présente invention, un anticorps inhibiteur d’au moins un point de contrôle immunitaire inhibiteur est capable de se lier audit point de contrôle pour le neutraliser, et donc empêcher sa liaison avec son ligand et bloquer ainsi les voies de signalisation inhibitrices de la réponse immunitaire découlant de cette interaction.

Par « anticorps activateur » on entend un anticorps capable de se lier à sa cible point de contrôle immunitaire activateur et donc stimuler ainsi les voies de signalisation activatrices de la réponse immunitaire découlant de cette interaction. Par « anticorps activateur » on entend également un anticorps capable de se lier à sa cible qui est un ligand inhibiteur endogène d’un point de contrôle immunitaire activateur exprimé en surface des cellules cancéreuses. En se liant à l’inhibiteur endogène d’un point de contrôle immunitaire activateur exprimé en surface des cellules cancéreuses, ledit anticorps empêche sa liaison avec son récepteur et bloque ainsi l’inhibition de la réponse immunitaire découlant de cette interaction.

Le terme « anticorps parent » est utilisé pour définir l’anticorps de référence qui peut être d’origine naturelle ou synthétique. Dans le contexte de la présente invention, l’anticorps parent comprend une région Fc dite « région Fc parente ». Ladite région Fc parente est choisie parmi le groupe de régions Fc de type sauvage et leurs fragments. Par "type sauvage ou WT", on entend ici une séquence d'acides aminés ou une séquence nucléotidique que l'on trouve dans la nature c'est à dire qui est d'origine naturelle, y compris des variations alléliques, et qui n'a pas été intentionnellement modifiée par des techniques de biologie moléculaire telles que par mutagenèse. Par exemple, les régions Fc de « type sauvage » se réfèrent notamment à la région Fc de l'IgGl ayant la séquence SEQ ID NO :1 (allotype Glml,17), la région Fc d'IgG2 ayant la séquence SEQ ID NO : 2, la région Fc d'IgG3 ayant la séquence SEQ ID NO : 3, la région Ec d'IgG4 ayant la séquence SEQ ID NO : 4, et la région Fc d'IgGl ayant la séquence SEQ ID NO :5 (allotype Glm3). Les régions Fc de « type sauvage » se réfèrent également aux régions Fc correspondant aux séquences SEQ ID NO : 6 à SEQ ID NO : 10. De préférence, l’anticorps parent comprend une région Fc humaine, de préférence une région Fc d’une IgGl humaine. L’anticorps parent peut comprendre des modifications d'acides aminés préexistantes dans la région Fc (par exemple un mutant Fc) par rapport à des régions Fc de type sauvage.

Par « cellules effectrices immunitaires », on entend la sous-population de cellules effectrices qui exercent leurs fonctions par engagement des récepteurs Fc (FcR) qu’elles expriment. Sont considérées comme cellules effectrices les lymphocytes, les monocytes, les neutrophiles, les cellules Natural Killer (NK), les éosinophiles, les basophiles, les mastocytes, les cellules dendritiques, les cellules de Langerhans et les plaquettes.

De préférence, l’anticorps selon l’invention présente une région Fc modifiée lui conférant une affinité supérieure pour le récepteur FcRn.

Le récepteur FcRn correspondant au « néonatal Fc receptor » est une protéine composée d’une chaîne lourde codée par le gène FcRn (appelé FCGRT chez l’Homme) et d’une chaîne légère, la molécule de p2-microglobuline. Π peut lier la région Fc des IgG et a pour caractéristique d’augmenter la demi-vie des IgG qui s’y fixent. Le FcRn peut être retrouvé chez différents organismes y compris, sans s’y limiter, les humains, les souris, les rats, les lapins et les singes.

Par « affinité » on entend la capacité de fixation entre un ligand et son récepteur.

Par « affinité supérieure au FcRn » on entend l'augmentation de l'affinité de liaison, in vivo ou in vitro, de la région Fc mutée de l’invention pour le FcRn, par rapport à celle de l’anticorps parent. La capacité de la région Fc mutée de l’invention à se lier à un récepteur FcRn peut être évaluée in vitro par un test ELISA, comme décrit par exemple dans la demande de brevet W02010/106180. Selon un mode de réalisation particulier, les régions Fc utilisées selon l’invention présentent une affinité modifiée, avantageusement augmentée, au récepteur FcRn. Cette augmentation de la liaison au FcRn se traduit par une amélioration de la rétention de sérum in vivo et, par conséquent, une augmentation de la demi-vie.

Les anticorps selon l’invention peuvent être utilisés seuls ou en combinaison, par exemple plusieurs anticorps présentant des régions Fc différentes peuvent être administrés en combinaison ou co-administrés.

Selon un aspect de l’invention, la région Fc modifiée de l’anticorps selon l’invention comprend au moins une mutation par rapport à la région Fc d’un anticorps parent. Les mutations concernées ne sont pas les variations naturelles qui définissent l’isotype de l’immunoglobuline, mais des mutations artificielles, le procédé de production générant la région Fc portant la ou les mutations désirées.

De manière préférentielle, l’invention se rapporte à une composition comprenant un seul type d’anticorps comprenant une région Fc mutée. En d’autres termes, la composition comprend alors des molécules d’anticorps de séquence identique.

Par « mutation » on entend un changement d’au moins un acide aminé de la séquence d’un polypeptide, notamment un changement d’au moins un acide aminé dans la région Fc de l’anticorps parent. L’anticorps obtenu comprend alors une région Fc mutée par rapport à celle de l’anticorps parent. De préférence, la mutation est une substitution, une insertion ou une délétion d’au moins un acide aminé à une position particulière. Les régions Fc mutées peuvent présenter plusieurs mutations, touchant plusieurs acides aminés, de préférence de deux à dix. Par «substitution», on entend le remplacement d'un acide aminé par un autre acide aminé à une position particulière dans une séquence de l’anticorps parent. Par exemple, la substitution 434S se réfère à un anticorps variant (ou mutant), en l’occurrence un variant pour lequel un acide aminé à la position 434 est remplacé par la sérine. De préférence, le libellé suivant de mutation est utilisé: « 434S » ou « N434S », et signifie que l’anticorps parent comprend l'asparagine en position 434, qui est remplacé par la sérine dans le variant. Dans le cas d'une combinaison de substitutions, le format préféré est le suivant: « 2591/315D/434Y » ou « V259I/N315D/N434Y ». Cela signifie qu'il existe trois substitutions dans le variant, en positions 259, 315 et 434, et que l'acide aminé en position 259 de l’anticorps parent, à savoir la valine, est remplacé par l'isoleucine, que l'acide aminé en position 315 de l’anticorps parent, soit l'asparagine, est remplacé par l'acide aspartique et que l'acide aminé en position 434 de l’anticorps parent, soit l'asparagine, est remplacé par la tyrosine.

Par « délétion d'acides aminés» ou «délétion», on entend la suppression d'un acide aminé à une position particulière dans une séquence de l’anticorps parent. Par exemple, E294del ou 294del désigne la suppression de l'acide glutamique en position 294.

Par « insertion d'acide aminé » ou « insertion », on entend l'addition d'un acide aminé à une position particulière dans une séquence de l’anticorps parent. Par exemple, l’insertion G>235-236 désigne une insertion de glycine entre les positions 235 et 236.

Tout au long de la présente demande, la numérotation des résidus dans la région Fc est celle de la chaîne lourde d'immunoglobuline selon l'index EU ou équivalent dans Kabat et al. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5e éd. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, dans le Maryland, 1991). L’expression «index EU ou équivalent dans Kabat» fait référence à la numérotation EU des résidus de l'anticorps humain IgGl, IgG2, IgG3 ou IgG4. Cela est illustré sur le site IMGT (http://www.imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/Hu IGHGnber.html).

De préférence, la présente invention porte sur un anticorps pour lequel la région Fc modifiée a une affinité supérieure pour le récepteur FcRn par rapport à la région Fc d’un anticorps parent et comprend au moins deux mutations, lesdites mutations étant choisies parmi: (i) une modification choisie parmi 378V, 378T, 434Y et 434S et (ii) au moins une modification choisie parmi 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 378V, 378T, 389T, 389K, 434Y et 434S, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n’a pas lieu sur le même acide aminé que la mutation (ii).

De préférence, la présente invention se rapporte à un anticorps dont la région Fc comprend au moins une combinaison de mutations choisies parmi 226G/315D/434Y, 230S/315D/434Y, 230T/315D/434Y, 230T/264E/434S, 230T/389T/434S, 241L/264E/378V, 241L/264E/434S, 250A/389K/434Y, 2591/315D/434Y, 284E/378T/396L, 264E/378V/434Y, 345D/330V/434Y, 315D/382V/434Y et 378V/383N/434Y par rapport à la région Ec dudit anticorps parent, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat.

De préférence, la présente invention se rapporte à un anticorps dont la région Fc comprend au moins une mutation choisie parmi 226G, 227L, 230S, 230T, 230L, 23IT, 241L, 243L, 250A, 256N, 2591, 264E, 265G, 267R, 290E, 294del, 303A, 305A, 307P, 307A, 3081, 315D, 322R, 325S, 327V, 330V, 342R, 347R, 352S, 361D, 362R, 362E, 370R, 378V, 378T, 382V, 383N, 386R, 386K, 387T, 389T, 389K, 392R, 395A, 396L, 397M, 403T, 404L, 415N, 416K, 421T, 426T, 428L, 433R, 434Y, 434S et 439R par rapport à la région Fc dudit anticorps parent, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat.

De préférence, la présente invention se rapporte à un anticorps dont la région Fc comprend une combinaison de mutations choisies parmi 307A/315D/330V/382V/389T/434Y, 256N/378V/383N/434Y, 345D/330V/361D/378V/434Y, 2591/315D/434Y, 230S/315D/428L/434Y, 241L/264E/307P/378V/433R, 250A/389K/434Y, 305A/315D/330V/395A/343Y, 264E/386R/396L/434S/439R, 315D/330V/362R/434Y, 294deE307P434Y, 305A/315D/330V/389K/434Y, 315D/327V/330V/397M/434Y, 230T/241L/264E/265G/378V/421T, 264E/396L/415N/434S, 227L/264E/378V/434S, 264E/378T/396L, 230T/315D/362R/426T/434Y, 226G/315D/330V/434Y, 230L/241L/243L/264E/307P/378V, 250A/315D/325S/330V/434Y, 290E/315D/342R/382V/434Y, 241L/315D/330V/392R/434Y, 241L/264E/307P/378W/434S, 230T/264E/403T/434S, 264E/378V/416K, 230T/315D/362E/434Y, 226G/315D/434Y, 226G/315D/362R/434Y, 226G/264E/347R/370R/378V/434S, 3081/315D/330V/382V/434Y, 230T/264E/378V/434S, 231T/241L/264E/378T/397M/434S, 230L/264E/378W/434S, 230T/315D/330V/386K/434Y, 226G/315D/330V/389T/434Y, 267R/307P/378V/421T/434Y, 230S/315D/387T/434Y, 230S/264E/352S/378V/434S et 230T/303A/322R/389T/404L/434S par rapport audit anticorps parent, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat.

Dans un mode de réalisation préféré, les régions Fc portent une mutation sélectionnée dans le groupe consistant en une mutation à l’acide aminé 226, 227, 228, 230, 231, 233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320, 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355, 356, 359, 360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 ou 447, la numérotation des acides aminés de la région Fc se référant à celle de l’indice EU, ou l’équivalent dans Kabat.

Certaines positions d'acides aminés de la liste ci-dessus - à savoir 226, 230, 241, 256, 259, 264, 307, 315, 330, 342, 361, 362, 378, 382, 383, 389, 396, 397, 421, 428 et 434 - sont préférées. Notamment, les Fc mutés qui présentent une grande affinité de liaison pour le FcRn sont susceptibles de comprendre au moins une modification d'acide aminé au niveau de l’une desdites positions d'acides aminés. Parmi celles-ci, les positions 230, 264, 307, 315, 330, 378 et 434 sont préférées, de préférence encore les positions 264, 315, 378 et 434.

Dans un mode de réalisation particulier, au moins deux, voire trois, quatre, ou cinq mutations d'acides aminés peuvent améliorer sensiblement l'affinité de liaison pour le FcRn en comparaison avec le Fc parent.

Dans un mode de réalisation particulier, les mutations sont : (i) une ou deux mutations choisies dans le groupe constitué des positions 226, 230, 241, 264, 307, 315, 330, 342, 362, 378, 382, 389, 396, 397, 421, et 434 ; de préférence 230, 264, 307, 315, 330, 378 et 434, de préférence encore 264, 315, 378 et 434 ; et (ii) au moins une autre, différente, parmi les positions 226, 227, 228, 230, 231, 233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288, 289, 290, 291, 292,293, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320, 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355 356, 359, 360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 et 447, de préférence 226, 230, 241, 264, 307, 315, 330, 342, 362, 378, 382, 389, 396, 397, 421 et 434.

Dans un mode de réalisation préféré, au moins une des positions 378 et 434 est mutée; et éventuellement encore au moins une autre sélectionnée dans le groupe constitué de 226, 230, 241, 264, 307, 315, 330, 342, 362, 378, 382, 389, 396, 397, 421 et 434.

De préférence, les mutations sont 226G, 226Y, 227S, 227L, 228R, 228L, 230S, 230T, 230L, 230A, 230Q , 23IT, 231V, 233D, 234R, 239A, 241L, 241 Y, 241R, 243L, 246R, 250A, 252L, 256N, 2591, 264A, 264E, 264M, 265G, 265N, 267N, 267R, 269D, 269G, 270N, 270E, 276S, 284L, 285Y, 288R, 2891, 290R, 290E, 291S, 291Q 292W, 293del, 294del, 297D, 298G, 298N, 299M, 299A, 299K, 301C, 302A, 303A, 3031, 305A, 307P, 307A, 307N, 3081, 309P, 311R, 315D, 317R, 320T, 320E, 322R, 325S , 327V, 327T, 330V, 330T, 332V, 334E, 334R, 335A, 338R, 340E, 342R, 342E, 342K, 343S, 345Q, 345G, 347R, 350A, 352S, 354P, 355Q, 355G, 356N, 359A, 360N, 360R, 361D, 361S, 362R, 362E, 369A, 370R, 37ID, 375A, 375G, 378V, 378T, 378S, 380Q, 382V, 382G, 383R, 383N, 3841, 384T, 385R, 386R, 386K, 387S, 387T, 389T, 389K, 389R, 390S, 392E, 392R, 393N, 394A, 395A, 395S, 396S, 396L, 397A, 397M, 398P, 399N, 400P, 401A, 401G, 403T, 404L, 408T, 41 lA, 412A, 414R, 415D, 415N, 416K, 416G, 418R, 418K, 418E, 419H, 420R, 421T, 421S, 421D, 422A, 424L, 426T, 428L, 433R, 433P, 434Y, 434S, 434H, 438R, 439R, 440R, 440N, 443R, 444F, 444P, 445S, 446A, 447Net 447E, et sont décrites également dans la demande de brevet W02010/106180.

Dans un autre mode de réalisation, les régions Fc comprennent au moins une mutation choisie dans le groupe constitué de 226G, 227L, 230S, 230T, 230L, 23IT, 241L, 243L, 250A, 256N, 2591, 264E, 265G, 267R, 290E, 293del, 294del, 303A, 305A, 307P, 307A, 3081, 315D, 322R, 325S, 327V, 330V, 342R, 347R, 352S, 361D, 362R, 362E 370R, 378V, 378T, 382V, 383N, 386R, 386K, 387T, 389T, 389K, 392R, 395A, 396L, 397M, 403T, 404L, 415N, 416K, 421T, 426T, 428L, 433R, 434Y, 434S et 439R, de préférence 226G, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 342R, 362R, 362E, 378V, 378T, 382V, 389T, 389K, 396L, 397M, 421T, 434Y et 434S.

Des exemples de combinaisons de mutations particulières sont présentés ci-après : 226G/330V, 230L/264E, 230L/378V, 230S/315D, 230S/434Y, 230T/378V, 241L/434S, 250A/434Y, 264E/378T, 305A/315D, 305A/330V, 305A/434Y, 307P/434Y, 315D/389T, 330V/382V, 330V/389T, 378V/421T, 389K/434Y, 389T/434Y, 396L/434S, 230T/264E, 230T/315D, 230T/434S, 230T/434Y, 241L/307P, 264E/307P, 264E/396L, 315D/362R, 315D/382V, 362R/434Y, 378V/434Y, 382V/434Y, 226G/315D, 226G/434Y, 241L/378V, 307P/378V, 241L/264E, 378V/434S, 264E/378V, 264E/434S, 315D/330V, 330V/434Y et 315D / 434Y; ou encore 226G/315D/330V, 226G/315D/434Y, 226G/330V/434Y, 230L/264E/378V, 230T/264E/378V, 230T/264E/434S, 230S/315D/434Y, 230T/315D/434Y, 230T/389T/434S, 241L/264E/434S, 241L/264E/378V, 241L/264E/307P, 241L/307P/378V, 250A/389K/434Y, 256N/378V/434Y, 2591/315D/434Y, 264E/378T/396L, 264E/378V/416K, 294del/307P/434Y, 264E/307P/378V, 264E/396L/434S, 264E/378V/434S, 305A/315D/330V, 305A/315D/434Y, 305A/330V/434Y, 307P/378V/434Y, 315D/330V/382V, 315D/330V/389T, 315D/378V/434Y, 315D/389T/434Y, 315D/362R/434Y, 315D/382V/434Y, 315D/330V/434Y, 330V/382V/434Y, 330V/389T/434Y et 378V/383N/434Y.

Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, les régions Fc portent une combinaison de mutations choisie parmi 315D/330V/361D/378V/434Y, 230S/315D/428L/434Y, 307A/315D/330V/382V/389T/434Y, 2591/315D/434Y et 256N/378V/383N/434Y.

Dans un autre mode de réalisation, les régions Fc portent au moins une mutation choisie parmi : G316D, K326E, N315D, N361H, P396L, T350A, V284L, V323I, P352S, A378V, Y436H, V266M, N421T, G385R, K326T, H435R, K447N, N434K, K334N, V397M, E283G, A378T, F423L, A431V, F423S, N325S, P343S, K290E, S375R, F405V, K322E, K340E, N389S, F243I, T307P, N389T, S442F, K248E, Y349H, N286I, T359A, S383R, K334R, T394P, V259A, T393A, P352L, Q418P, V302A, L398P, F423P, S442P, V363I, S383N, S254F, K320E, G402D, I253F, V284A, A431T, N315H, Y319H, C226Y, F405L, T393I, N434S, R255W, A287T, N286Y, A231V, K274R, V308G, K414R, M428T, E345G, F243L, P247T, Q362R, S440N, Y278H, D312G, V262A, V305A, K246R, V308I, E380G, N276S, K439Q, S267G, F423Y, A231T, K320R, L410R, K320M, V412M, T307N, T366A, P230S, Y349S, A339T, K246E, K274E, A231P, I336T, S298N, L234P, S267N, V263A, E333G, V308A, K439R, K392R, S440G, V397I, I336V, Y373D, K288E, L309P, P227S, V379A, K288R, K320T, V282A, I377T, N421S et C261R, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat.

De préférence, les mutants utilisés sont choisis parmi N315D/A330V/N361D/A378V/N434Y, P230S/N315D/M428L/N434Y, E294del/T307P/N434Y, T307A/N315D/A330V/E382V/N389T/N434Y, V259EN315D/N434Y et T256N/A378V/S383N/N434Y.

Avantageusement, les mutations portées par la région Fc de l’anticorps selon l’invention lui confèrent une demi-vie augmentée, et permettent une efficacité améliorée du blocage des points de contrôle immunitaires.

De préférence, la présente invention se rapporte à un anticorps présentant une activité fonctionnelle médiée par la région Fc modifiée, en particulier diminuée, par rapport à celle de l’anticorps parent.

Par « activité fonctionnelle médiée par la région Fc » on entend les fonctions effectrices médiées par la région Fc. Sont comprises dans lesdites activités fonctionnelles médiées par la région Fc la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC), la cytotoxicité dépendante du complément (CDC), la phagocytose cellulaire dépendante des anticorps (ADCP), l’activité d’endocytose, la sécrétion de cytokines ou une combinaison d’au moins deux de ces activités. De préférence, l’activité fonctionnelle médiée par la région Fc considérée dans l’invention est choisie parmi l’ADCC, la CDC, l’ADCP et les combinaisons d’au moins deux de ces activités. Cette activité fonctionnelle peut être évaluée par des procédés bien connus de l’art antérieur. L’activité fonctionnelle médiée par la région Fc est modifiée, en particulier diminuée par rapport à celle de l’anticorps parent, d’un ratio au moins égal à 2, de préférence supérieur à 5, de préférence supérieur à 10, de préférence supérieur à 15, de préférence supérieur à 20, de préférence supérieur à 25, de préférence supérieur à 30.

De préférence, l’anticorps selon l’invention, qui comprend une région Fc modifiée, est tel qu’une mutation choisie parmi 294Del, 293Del et 293del/294del est introduite dans la région Fc de l’anticorps parent, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat. Cette délétion peut être l’unique mutation de la région Fc, ou s’accompagner d’autres mutations, en particulier parmi celles listées dans la présente demande. Ainsi, selon un mode de réalisation particulier, l’anticorps selon l’invention comprend une région Fc comprenant une unique mutation choisie parmi la délétion de l’acide aminé en position 294 (294Del), la délétion de l’acide aminé en position 293 (293Del), la double délétion des acides aminés 293 et 294.Cette seule mutation conduit à une glycosylation particulière de la région Fc, à savoir une hypersialylation, particulièrement avantageuse vis-à-vis de la demi-vie des glycoprotéines et des processus inflammatoires, sans altérer la liaison au FcRn et/ou la demi-vie protéique.

Selon un autre mode de réalisation particulier, les régions Fc mutées utilisées dans l’invention portent la délétion de l’acide aminé en position 293 ou 294, et portent en outre une ou plusieurs mutations à des positions sélectionnées dans la liste ci-après : 226, 230, 241, 256, 259, 264, 307, 315, 330, 342, 361, 362, 378, 382,383, 389, 396, 397, 421, 428 et/ou 434.

Par exemple, une région Fc préférée porte la combinaison des mutations 307P, 434Y, en association avec la délétion Del294.

De préférence, la présente invention se rapporte à un anticorps comprenant une région Fc mutée et présentant une activité fonctionnelle médiée par la région Fc modifiée par rapport à celle d’un anticorps parent, caractérisé en ce que ladite région Fc comprend au moins une combinaison de 2 mutations, ladite combinaison étant choisie parmi : (i) une mutation choisie parmi 307N, 326E, 326T, 334N, 334R, 352L, 378V, 378T, 394P, 396L, 397M et 42IT ; et (ii) au moins une mutation choisie parmi 226Y, 227S, 230S, 231V, 234P, 2431, 243L, 246R, 246E, 247T, 248E, 253E, 254E, 255W, 259A, 261R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 290E, 298N, 302A, 305A, 307P, 308A, 3081, 308G, 309P, 312G, 315D, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 325S, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A 352S, 359A, 361H, 362R, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 389T, 392R, 393A, 3931, 394P, 396L, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421T, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 439R, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n’a pas lieu sur le même acide aminé que la mutation (ii).

De préférence, les régions Fc mutées comprennent au moins une combinaison de 3 mutations, ladite combinaison comprenant : (i) une mutation choisie parmi 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334N, 334R, 307N et 394P ; et (ii) au moins 2 mutations choisies parmi 226Y, 227S, 230S, 231V, 234P, 2431, 243L, 246R, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 26IR, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 290E, 298N, 302A, 305A, 307P, 308A, 3081, 308G, 309P, 312G, 315D, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 325S, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A 352S, 359A, 361H, 362R, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 389T, 392R, 393A, 3931, 394P, 396L, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421T, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 439R, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n’a pas lieu sur le même acide aminé que la mutation (ii).

Avantageusement, les mutations portées par la région Fc de l’anticorps modifié modulent son activité fonctionnelle, permettant ainsi d’améliorer l’efficacité de l’anticorps décrit dans la présente invention.

La région Fc mutée de l’anticorps selon l’invention a une affinité modifiée pour au moins un des récepteurs de la région Fc (FcR) choisi parmi le complément Clq et les récepteurs FcgRIIIa (CD 16a), FcgRIIa (CD32a), et FcgRIIb (CD32b).

De préférence l’affinité de la région Fc mutée pour le complément Clq, pour les récepteurs FcgRIIIa (CD 16a) et FcgRIIa (CD32a) est diminuée, et l’affinité de la région Fc mutée pour FcgRIIb (CD32b) est augmentée.

Par « affinité modifiée pour au moins un des récepteurs de la région Fc (FcR) », on entend l'augmentation ou la diminution de l'affinité de liaison, in vivo ou in vitro, de la région Fc mutée de l’invention pour au moins l’une des molécules Clq, FcgRIIIa (CD16a), FcgRIIa (CD32a) et FcgRIIb (CD32b).

Les récepteurs de la région Fc impliqués dans la présente invention sont les récepteurs humains : - Clq qui est impliqué dans l’activité CDC, - le récepteur FcgRIIIa (CD 16a) qui est lui impliqué dans l’ADCC et présente un polymorphisme V/F en position 158, - le récepteur FcgRIIa (CD32a) qui est quant à lui impliqué dans l’activation plaquettaire et la phagocytose, il présente un polymorphisme H/R en position 131, et - le récepteur FcgRIIb (CD32b) qui est impliqué dans l’inhibition de l’activité cellulaire. L'affinité d’un anticorps pour un FcR peut être évaluée par des procédés bien connus de l'art antérieur. Par exemple, l'homme de l'art peut déterminer l’affinité (Kd) en utilisant la résonance plasmonique de surface (SPR). Alternativement, l'homme de l'art peut effectuer un test ELISA approprié. Un dosage ELISA approprié permet de comparer les forces de liaison du Ec parent et du Ec muté. Les signaux détectés spécifiques du Ec muté et du Ec parent sont comparés.

De préférence, la région Fc mutée de l’anticorps selon l’invention présente une affinité augmentée pour le récepteur FcgRIIb (CD32b), et comprend au moins une combinaison de 2 mutations, ladite combinaison comprenant : i) une mutation choisie parmi 326E, 326T, 378V, 397M, 352L, 394P, 396L et 421T ; et ii) au moins une mutation choisie parmi 316D, 334R, 248E, 334N, 418P, 231V, 320E, 402D, 359A, 383R, 421T et 361H, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n’a pas lieu sur le même acide aminé que la mutation (ii).

Plus préférentiellement, ladite région Fc mutée comprend au moins une combinaison de 3 mutations, ladite combinaison comprenant : (i) une mutation choisie parmi 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334N, 334R, 307N et 394P ; et (ii) au moins 2 mutations choisies parmi 226Y, 227S, 230S, 231V, 234P, 2431, 243L, 246R, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261 R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 290E, 298N, 302A, 305A, 307P, 308A, 3081, 308G, 309P, 312G, 315D, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 325S, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A 352S, 359A, 361H, 362R, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 389T, 392R, 393A, 3931, 394P, 396L, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421T, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 43IT, 434K, 434S, 435R, 436H, 439R, 440G, 440N, 442F, 442P, et 447N, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n’a pas lieu sur le même acide aminé que la mutation (ii).

De préférence, ladite région Fc mutée comprend une combinaison de 4 mutations, ladite combinaison comprenant au moins une mutation (i), et au moins 3 mutations (ii), et de préférence une combinaison de 5 mutations, ladite combinaison comprenant au moins une mutation (i), et au moins 4 mutations (ii).

Avantageusement, les mutations portées par la région Fc de l’anticorps modifié augmentent son affinité pour le récepteur inhibiteur FcgRIIb (CD32b) et diminuent son affinité pour les récepteurs Clq, FcgRIIIa (CD16a) et FcgRIIa (CD32a), permettant ainsi de diminuer son activité fonctionnelle. Cela permet ainsi d’améliorer son efficacité vis-à-vis des points de contrôle immunitaires et de diminuer un éventuel effet toxique de lyse des cellules effectrices du système immunitaire reconnues par les anticorps de l’invention.

La présente invention se rapporte préférentiellement à un anticorps pour lequel l’anticorps parent comprend une région Fc parente qui est une région Fc humaine, de préférence une région Fc d’une IgGl humaine ou d’une IgG2 humaine. L’invention se rapporte à une composition pharmaceutique comprenant (i) au moins un anticorps, et (ii) au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.

Par « composition pharmaceutique », on entend une composition possédant des propriétés curatives ou préventives à l’égard des maladies humaines ou animales.

Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend un unique anticorps. Par « comprend un unique anticorps », on entend la présence d’un ensemble d’anticorps tous dirigés contre la même cible et possédant exactement la même structure au niveau de la région Fc.

Dans un autre mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend deux anticorps combinés dirigés contre des récepteurs différents.

Par « comprend deux anticorps », on entend la présence d’anticorps dirigés contre deux cibles différentes et avec des structures de leur région Fc pouvant être différentes selon la cible de l’anticorps.

Dans un mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre CTLA4 est combiné à un anticorps dirigé contre PDI. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre CTLA4 est combiné à un anticorps dirigé contre TIM3. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps anti-CTLA4 est combiné à un anticorps dirigé contre LAG3. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre CTLA4 est combiné à un anticorps dirigé contre KIR. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre CTLA4 est combiné à un anticorps dirigé contre BTLAl. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre CTLA4 est combiné avec un anticorps dirigé contre a2AR. Dans un autre mode de réalisation, un anticorps dirigé contre PDI est combiné avec un anticorps dirigé contre TIM3. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre PDI est combiné avec un anticorps dirigé contre LAG3. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre PDI est combiné avec un anticorps dirigé contre KIR. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre PDI est combiné avec un anticorps dirigé contre BTLAl. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre PDI est combiné avec un anticorps dirigé contre a2AR. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre TIM3 est combiné avec un anticorps dirigé contre LAG3. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre TIM3 est combiné avec un anticorps dirigé contre KIR. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre TIM3 est combiné avec un anticorps dirigé contre BTLAl. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre TIM3 est combiné avec un anticorps dirigé contre a2AR. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre LAG3 est combiné avec un anticorps dirigé contre KIR. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre LAG3 est combiné avec un anticorps dirigé contre BTLAL Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre LAG3 est combiné avec un anticorps dirigé contre a2AR. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre KIR est combiné avec un anticorps dirigé contre BTLAL Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre KIR est combiné avec un anticorps dirigé contre a2AR. Dans un autre mode de réalisation particulier, un anticorps dirigé contre a2AR est combiné avec un anticorps dirigé contre BTLAL

Toute voie d’administration est envisagée, notamment des voies parentérales, telles que la voie intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, intradermique, topique, ou par voie mucosale, par exemple par inhalation. Les voies entérales (orale, rectale) et intrathécale sont également possibles. De préférence, la voie intraveineuse est utilisée.

Les anticorps selon l’invention sont généralement formulés au sein de compositions pharmaceutiques comprenant des excipients pharmaceutiquement acceptables.

Les compositions pharmaceutiques peuvent se présenter sous toute forme galénique adaptée en fonction de la voie d’administration choisie.

Les compositions pharmaceutiques utiles selon l’invention comprennent avantageusement un ou plusieurs excipients ou véhicules, acceptables sur le plan pharmaceutique. On peut citer par exemple des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l’homme du métier. Les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations (liquides et/ou injectables et/ou solides) sont notamment la méthylcellulose, l’hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, des huiles végétales, l’acacia, etc. Les compositions peuvent être formulées éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates ou des amidons.

Indications

Le système immunitaire reconnaît normalement les cellules tumorales comme des éléments étrangers, ce qui a pour conséquence d’entraîner une réponse immunitaire anti-tumorale. Cependant, il arrive que les cellules cancéreuses mettent en place des stratégies d’échappement au système immunitaire ; elles ne sont alors plus reconnues ou éliminées par le système immunitaire. Les points de contrôle immunitaires exprimés en surface des cellules effectrices de l’immunité constituent une voie importante de l’échappement tumoral. En effet, ces molécules lorsqu’elles sont inhibitrices (ce qui est le cas pour PDI, CTLA4, LAG3, TIM3, KIR, BTLAl et a2AR), ont pour fonction d’atténuer la réponse immunitaire lorsqu’elles sont engagées avec leur ligands qui sont souvent exprimés par les cellules tumorales.

La présente invention se rapporte plus particulièrement à une composition pharmaceutique pour son utilisation dans le traitement de cancers. Plus particulièrement, les cancers visés utilisent le mécanisme d’échappement tumoral décrit ci-avant.

Par « cancer » on entend toute condition physiologique caractérisée par une prolifération cellulaire anormale.

La composition pharmaceutique selon l’invention est ainsi utilisée pour traiter différents types de cancers. Des exemples de cancers incluent notamment des cancers du poumon « non à petites cellules » (NSCLC), des mélanomes non résécables ou métastatiques, des carcinomes des cellules rénales avancés, des cancers de la vessie, les cancers du rein, des mélanomes, des cancers du poumon, des lymphomes, des mésothéliomes, des cancers colorectaux, les cancers colorectaux métastatiques, des cancers du sein, des cancers gastriques, des cancer de la tête et du cou, des tumeurs du cerveau, des glioblastomes, des tumeurs solides, des cancers de l’endomètre, des cancers de l’œsophage, des adénocarcinomes gastriques, des tumeurs des cellules germinales, des cancers des testicules, des carcinomes hépatocellulaires, des cancers du thymus, des lymphomes diffus à grande cellules B (LDGCB), des cancers hématologiques, des cancers hématologiques avancés (tels que les lymphomes non hodgkiniens, les lymphomes hodgkiniens, les leucémies lymphoïdes chroniques, les mélanomes multiples, les leucémies myéloïdes aiguës), les astrocytomes, les mélanomes de l’uvée, les sarcomes solides, les cancers de l’épithélium ovarien, les cancers péritonéaux primaires, les cancers des trompes de Fallope, des cancers du col de l’utérus, des cancers de l’anus, des cancers ovariens, des cancers urogénitaux, des cancers urothéliaux, des cancers génito-urinaires, des néoplasmes urogénitaux, des tumeurs thoraciques, des carcinomes adrénocorticaux, des cancers biliaires, des lymphomes folliculaires, des cancers du pancréas, des cancers de la prostate, des métastases cérébrales, des cancers du foie, des adénocarcinomes cervical, des tumeurs stromales gastro-intestinales, des cancers du cerveau métastatiques, des carcinomes des cellules de Merkel, le sarcome synovial, cette liste n’étant pas exhaustive.

Dans un mode de réalisation, l’anticorps anti-PDl optimisé de l’invention est utilisé dans le traitement de cancers. Lorsqu’un antigène tumoral a déjà été présenté à un lymphocyte par l’intermédiaire d’une Celle Présentatrice d’Antigène (CPA), ledit lymphocyte acquiert la mémoire de l’antigène. Lorsque le lymphocyte mémoire rencontre ultérieurement l’antigène tumoral dans une métastase ganglionnaire, son activation est inhibée par l’engagement de PDI (exprimé en surface des lymphocytes) avec PDLl (exprimé en surface des cellules tumorales). Ainsi, les cellules cancéreuses sont capables d’échapper à la réponse immunitaire. Le blocage de PDI par un anticorps anti-PDl conduit à une ré-activation des lymphocytes présents dans les zones tumorales.

Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers du poumon. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers du poumon « non à petites cellules » (NSCLC). Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de mélanomes non résécables ou métastatiques. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de carcinomes des cellules rénales avancés. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers de la vessie. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de lymphomes. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de mésothéliomes. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers colorectaux. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers colorectaux métastatiques. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers du sein. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers gastriques. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers de la tête et du cou. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de tumeurs du cerveau. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de glioblastomes. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de tumeurs solides. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers de l’endomètre. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers de l’œsophage. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de tumeurs des cellules germinales. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers des testicules. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de carcinomes hépatocellulaires. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de mélanomes. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers du thymus. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de lymphomes diffus à grande cellules B (LDGCB). Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers hématologiques. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers hématologiques avancés tels que les lymphomes non hodgikinien, les lymphomes hodgkiniens, les leucémies lymphoïdes chroniques, les mélanomes multiples, les leucémies myéloïdes aiguës. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de lymphomes folliculaires. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement d’astrocytomes. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de mélanomes de l’uvée. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de sarcomes solides. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers de l’épithélium ovarien. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers péritonéaux primaires. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers des trompes de Fallope. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers du col de l’utérus. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers de l’anus. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers des ovaires. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancer urogénital. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers urothélial. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancers génito-urinaire. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de néoplasmes urogénitaux. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de tumeurs thoraciques. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de carcinome adrénocortical. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de cancer biliaire. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-PDl optimisé est utilisé dans le traitement de fibrosarcomes.

Dans un autre mode de réalisation, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé de l’invention est utilisé dans le traitement de cancers. Le récepteur CTLA4 a pour fonction d’inactiver les lymphocytes après présentation de leur antigène par des Cellules Présentatrices d’Antigène (CPA) pour moduler la réponse immunitaire. Ainsi, les antigènes des cellules cancéreuses sont apportés par les CPA dans le ganglion lymphatique et présentés aux lymphocytes naïfs circulant. Quand le lymphocyte naïf rencontre l’antigène dans la zone T-dépendante du ganglion, il est activé et sécrète alors des cytokines tout en acquérant une mémoire de l’antigène. CTLA4 apparaît à la surface du lymphocyte 24 à 48 heures après la rencontre avec l’antigène tumoral. En se fixant à B7-1 et B7-2 (molécules exprimées sur la CPA), il induit une inactivation lymphocytaire. Ainsi, les cellules cancéreuses sont capables d’échapper à la réponse immunitaire Le blocage de CTLA4 par un anticorps anti-CTLA4 conduit à une activation non spécifique du système immunitaire en freinant l’inhibition physiologique.

Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des mélanomes métastatiques ou non résécables. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des mélanomes. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des carcinomes rénaux. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des carcinomes du poumon « non à petites cellules ». Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de cancers du poumon. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de myélomes. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de lymphomes. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des carcinomes hépatocellulaires. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des cancers du sein. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des cancers du pancréas. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des cancers de la prostate. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des métastases cérébrales. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des tumeurs solides. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des cancers gastriques. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des cancers du rein. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des cancers du cou et de la tête. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des cancers du foie. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement des cancers du cerveau. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de leucémies myéloïde aiguës. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de leucémies lymphoïdes chroniques. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti- CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement d’adénocarcinome cervical. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de lymphome de Hodgkin. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de lymphome non-Hodgkinien. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de tumeurs stromales gastrointestinales. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de cancers du cerveau métastatique. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement du cancer des ovaires. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de lymphomes folliculaires. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de carcinomes des cellules de Merkel. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de mélanomes de l’uvée. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de sarcome synovial. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps anti-CTLA4 optimisé est utilisé dans le traitement de fibrosarcomes.

La composition pharmaceutique de la présente invention peut comprendre une combinaison de deux anticorps.

Dans un mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de cancers du poumon. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de cancers du poumon « non à petites cellules » (NSCLC). Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de carcinomes rénaux. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de mélanomes. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de glioblastomes. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de gliosarcomes. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti- CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de mélanome de l’uvée. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de carcinomes des ovaires. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de cancers des trompes de Fallope. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de carcinome péritonéal primaire. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de tumeurs solides. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de cancer du sein. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de lymphomes non-Hodgkiniens. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de lymphomes Hodgkiniens. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement myélomes multiples. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de cancers du rein. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de carcinome hépatocellulaire. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de mélanome métastatique ou non résécable. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de sarcomes. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de cancers de la prostate. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprenant l’anticorps anti-CTLA4 optimisé et l’anticorps anti-PDl combinés est utilisée dans le traitement de cancers de la vessie.

Exemple 1 : Effets des variants d’l2Gl optimisés anti-PDl sur le système immunitaire et la croissance tumorale

Dans cet exemple, un anticorps d’isotype IgG4 de spécificité anti-PDl été produit avec une séquence non mutée de Fc d’IgG4, telle que la séquence SEQ ID NO :9, pour servir de référence. 1) Obtention des anticorps

Les variants d’IgGl anti-PDl ont été obtenus selon la méthode décrite dans la demande WO 2010/106180 qui utilise le procédé de mutagenèse aléatoire MUTAGEN™ (WO 02/038756). Typiquement, cette méthode comprend les étapes suivantes : A/ Construction d’une banque de Fc

Le gène humain Ec codant pour les résidus 226 à 447 (selon l’index EU de Kabat et représenté en figure 1) dérivé de la chaîne lourde d’une IgGl humaine est cloné dans un vecteur approprié, tel que le vecteur phagemide pMG58 selon les protocoles standards bien connus de l’homme du métier. B/ Mutagenèse

Plusieurs banques sont ensuite générées, suivant la procédure décrite dans WO 02/038756, qui utilise des ADN polymérases humaines de faible fidélité dans le but d’introduire des mutations aléatoires de façon homogène sur la séquence cible entière. Plus précisément, trois mutases distinctes (pol β, η et i) ont été utilisées dans des conditions différentes pour créer des profils de mutations complémentaires. C/ Expression des banques de Fc par Phage-display et sélection des variants présentant une liaison améliorée au récepteur néonatal FcRn

Les banques de Fc sont exprimées en utilisant la technique du Phage-display selon des protocoles standards, pour servir à la sélection des fragments Fc. La sélection peut se faire conformément au protocole détaillé dans la demande brevet WO 2010/106180, notamment par sélection sur FcRn en phase solide ou liquide, puis la détermination des caractéristiques de liaisons des fragments au FcRn peut être réalisée par ELIS A. D/ Production des variants sous forme d’IgGl entière dans CHO et évaluation de leurs propriétés

Les variants Fc ont été préparés dans un format IgGl entière dans la lignée cellulaire CHO avec la spécificité anti-PDl. Les étapes de production par culture cellulaire et de purification des anticorps ont été réalisées selon des techniques courantes de l’art, en vue de leur caractérisation.

Plusieurs combinaisons de mutations ont été sélectionnées. Les combinaisons suivantes ont été sélectionnées :

Table 1 : Mutant d’IgGl anti-PDl sélectionnés selon la méthode décrite dans la demande WQ2010/106180 E/ Production des variants sous forme d’IgGl entière dans YB2/0 et évaluation de leurs propriétés

Par ailleurs, le mutant C6A_66 (E294del/T307P/N434Y) a été produit sous forme d’IgGl entière dans YB2/0 (ATCC, CRL-1662) avec la spécificité anti-PDl. Les étapes de production par culture cellulaire et de purification des anticorps ont été réalisées selon des techniques courantes de l’art, en vue de leur caractérisation. 2) Caractérisation de la liaison au FcRn et de la liaison antigénique:

Les tests de liaison au FcRn ont été réalisés selon les méthodes décrites dans la demande WO 2010/106180. Brièvement, la liaison à pH6 des IgGl ou IgG4 au FcRn et au ligand PDI ont été mesurées par un test ELISA classique. Pour cela des immunoplaques Maxisorp ont été revêtues avec des EcRn ou des antigènes PDI. Ensuite, les solutions d’IgG4 anti-PDl de référence, d’IgGl anti-PDl parent, d’IgGl C6A_78, T5A_74 et C6A_66 produits dans CHO d’une part, et les solutions d’IgG4 anti-PDl de référence, d’IgGl anti-PDl parent, et d’IgGl C6A_66 produits dans YB2/0 d’autre part, ont été ajoutées dans chaque puits avec une concentration finale de 0,5pg d’IgG/mL et ont été mis en contact avec des F(ab')2 d’IgG HRP de chèvre anti-humaine à la même concentration pendant 2 heures à température ambiante. Les IgG agrégées aux E(ab')2 ont ensuite été incubées sous agitation douce pendant I heure à 30°C sur les plaques ELISA saturées pour FcRn et PDI. Les plaques ont ensuite été révélées avec TMB (Pierce) et les absorbances ont été lues à 450 nm. Les résultats finaux indiquent que la liaison au FcRn de l’ensemble de ces mutants est améliorée et que la liaison à l’antigène PDI n’est pas altérée par rapport à un IgGl anti-PDl parent (Table 2A) ou à un IgG4 anti-PDl de référence (Table 2B), indépendamment du système cellulaire de production.

Table 2A : Résultats de la caractérisation de la liaison au FcRn et à l’antigène PDI des variants d’IgGl anti-PDl sélectionnés produits dans CHO ou YB2/0 (-H- : augmentation de la liaison au FcRn comparé à l’IgGl anti-PDl parent ; = : même affinité de liaison à l’antigène PDI comparé àl’lgGl anti-PDl parent)

Table 2B : Résultats de la caractérisation de la liaison au FcRn et à l’antigène PDI des variants d’IgGl anti-PDl sélectionnés produits dans CHO ou YB2/0 (-H- : augmentation de la liaison au FcRn comparé à l’IgG4 anti-PDl de référence; = : même affinité de liaison à l’antigène PDI comparé à l’IgG4 anti-PDl de référence)

3) Effet des anticorps IgGl anti-PDl sélectionnés sur la libération de cytokines Les lymphocytes T humains sont purifiés à partir de PBMC en utilisant une colonne d’enrichissement à lymphocytes T CD4+ (telle que celle développée par R&D Systems). Chaque puits de culture cellulaire contient 10*5 cellules T purifiées et 10*4 cellules dendritiques allogéniques pour un volume total de 200pL. Les anticorps anti-PDl (C6A_78, T5A_74, C6A_66, IgGl parent, IgG4, comme référence) sont ajoutés à différentes concentrations. Certains puits sont incubés avec des anticorps anti-CD3 (contrôle positif) ou avec des anticorps irrelevants (contrôle négatif). Les cellules sont mises en culture pendant 5 jours à 37°C. Au jour, lOOpL de milieu sont prélevés dans chacun des puits pour mesurer la quantité de cytokines sécrétées. Les taux de cytokines IFN-ganuna, TNF-alpha, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10 et IL-12 sont quantifiés par cytométrie en flux de perle Array (CBA) (BD

Biosciences). Les résultats indiquent que les traitements avec les variants anti-PDl entrainent une stimulation plus forte de la sécrétion de cytokines par les cellules par rapport au traitement avec l’IgG4 anti-PDl de référence, quel que soit le système de production cellulaire utilisé. 4) Effet anti-tumoral des IgGl anti-PDl sur les modèles in vivo Un modèle de tumeur in vivo est utilisé pour analyser l’effet des variants d’anticorps anti-PDl sur la croissance tumorale. Les souris knock-in PDI (telles que celles proposées par Isi Innovation), mâles et femelles âgées de 7 à 10 semaines réparties en 6 groupes, subissent des injections sous-cutanées de cellules de fibrosarcomes SAl/N à raison de 2*10^ cellules dissoutes dans 200pL de DMEM au jour 0. Pour étudier l’activité anti-tumorale des anticorps, les souris sont traitées avec du PBS (véhicule) ou avec lOmg/kg d’un anticorps irrelevant (contrôle négatif), d’IgG4 anti-PDl (référence) et avec les différents variants d’IgGl anti-PDl (C6A_78, T5A_74, C6A_66) à raison de 200pL par injection. Ces injections sont réalisées de manière intra-péritonéale aux jours 1, 4, 8 et 11. Chacun des groupes contient 10 animaux et les groupes consistent en : (i) un groupe véhicule, (ii) un contrôle négatif anticorps irrelevant, (iii) un groupe de référence IgG4 anti-PDl, (iv) un groupe IgGl anti-PDl C6A_78 (v) un groupe IgGl anti-PDl T5A_74, (vi) un groupe IgGl anti-PDl C6A_66. Les souris sont observées deux fois par semaine pour évaluer la croissance tumorale pendant environ 6 semaines. Les résultats indiquent que, avantageusement, les anti-PDl mutés selon l’invention conduisent à un effet d’inhibition de la croissance tumorale qui perdure plus longtemps que les anti-PDl parents, mais aussi que les IgG4 anti-PDl de référence. Cet effet peut être observé avec les IgGl anti-PDl mutés selon l’invention produits dans YB2/0 et avec les IgGl anti-PDl mutés selon l’invention produits dans CHO.

Exemple 2 ; Effets des variants d’IgGl optimisés anti-CTLA4 sur le système immunitaire et la croissance tumorale 1) Obtention des anticorps

Les variants d’IgGl anti-CTLA4 ont été obtenus selon la méthode décrite dans la demande WO 2010/106180 qui utilise le procédé de mutagenèse aléatoire MUTAGEN™ (WO 02/038756). Typiquement, cette méthode comprend les étapes suivantes : A/ Construction d’une banque de Fc

Le gène humain Fc codant pour les résidus 226 à 447 (selon l’index EU de Kabat et représenté en figure 1) dérivé de la chaîne lourde d’une IgGl humaine est cloné dans un vecteur approprié, tel que le vecteur phagemide pMG58 selon les protocoles standards bien connus de l’homme du métier. B/ Mutagenèse

Plusieurs banques sont ensuite générées, suivant la procédure décrite dans WO 02/038756, qui utilise des ADN polymérases humaines de faible fidélité dans le but d’introduire des mutations aléatoires de façon homogène sur la séquence cible entière. Plus précisément, trois mutases distinctes (pol β, η et l) ont été utilisées dans des conditions différentes pour créer des profils de mutations complémentaires. C/ Expression des banques de Fc par Phage-display et sélection des variants présentant une liaison améliorée au récepteur néonatal FcRn

Les banques de Fc sont exprimées en utilisant la technique du Phage-display selon des protocoles standards, pour servir à la sélection des fragments Fc. La sélection peut se faire conformément au protocole détaillé dans la demande brevet WO 2010/106180, notamment par sélection sur FcRn en phase solide ou liquide, puis la détermination des caractéristiques de liaisons des fragments au FcRn peut être réalisée par ELIS A. D/ Production des variants sous forme d’Ig entière et évaluation de leurs propriétés

Les variants Fc ont été préparés dans un format IgGl entière dans la lignée cellulaire YB2/0 (ATCC, CRL-1662) d’une part, et dans CHO d’autre part, avec la spécificité anti-CTLA4. Les étapes de production par culture cellulaire et de purification des anticorps ont été réalisées selon des techniques courantes de l’art, en vue de leur caractérisation.

Table 1 : Mutant d’IgGl anti-CTLA4 sélectionnés selon la méthode décrite dans la demande W02010/106180 2) Caractérisation de la liaison au FcRn et de la liaison antigénique:

Les tests de liaison au FcRn ont été réalisés selon les méthodes décrites dans la demande WO 2010/106180. Brièvement, la liaison des IgGl au FcRn à pH 6 et au ligand CTLA4 ont été mesurées par un test ELIS A classique. Pour cela des immunoplaques Maxisorp ont été revêtues avec des FcRn ou des antigènes CTLA4. Ensuite, les solutions d’IgGl anti-CTLA4 parent, Del294 et C6_A66 produits en CHO ou YB2/0 ont été ajoutés dans chaque puits avec une concentration finale de 0,5pg d’IgG/mL et ont été mis en contact avec des F(ab')2 d’IgG HRP de chèvre anti-humaine à la même concentration pendant 2 heures à température ambiante. Les IgG agrégées aux F(ab')2 ont ensuite été incubées sous agitation douce pendant 1 heure à 30°C sur les plaques ELISA saturées pour FcRn et CTLA4. Les plaques sont ensuite révélées avec TMB (Pierce) et les absorbances sont lues à 450 nm. Les résultats finaux indiquent que la liaison au FcRn du mutant Del294 n’est pas altérée et que celle du mutant C6A_66 est augmentée, quel que soit le système de production cellulaire utilisé. La liaison à l’antigène CTLA4 des deux mutants n’est pas altérée par rapport à un IgGl anti-CTLA4 parent de référence (Table 2).

Table 2 : Résultats de la caractérisation de la liaison au FcRn et à l’antigène CTLA4 des IgGl anti-CTLA4 variants sélectionnés (-H- : augmentation de la liaison au FcRn comparé à l’IgGl anti-CTLA4 parent ; = : même affinité de liaison à l’antigène CTLA4 comparé à l’IgGl anti-CTLA4 parent) 3) Tests de l’activité ADCC des mutants anti-CTLA4

Des cellules NK sont incubées avec des cellules eucaryotes cibles exprimant CTLA4, en présence de différentes concentrations (0.005 à 5000 ng/ml) d’IgGl anti-CTLA4 parent et de variants IgGl anti-CTLA4 294del et C6A_66 produits en YB2/0 ou en CHO. Le niveau de lactate déshydrogénase (LDH) intracellulaire libéré par les cellules cibles lysées est mesuré. Des cellules NK humaines ont été purifiées à partir de sang périphérique de donneurs volontaires sains par la technique de déplétion négative développée par Miltenyi. Le test ADCC comprend l'incubation de cellules NK avec des cellules eucaryotes cibles exprimant l'antigène CTLA4, en présence de différentes concentrations d'anticorps anti-CTLA4. Après 16 heures d'incubation, la cytotoxicité induite par les anticorps anti-CTLA4 a été mesurée en quantifiant dans les surnageants cellulaires la LDH intracellulaire libérée par les cellules cibles lysées. Les résultats indiquent que les variants d’IgGl anti-CTLA4 présentent une activité ADCC diminuée par rapport à l’IgGl anti-CTLA4 parent quel que soit le système de production cellulaire utilisé. 4) Effet des anticorps anti-CTLA4 sélectionnés sur la libération de cytokines

Les lymphocytes T humains sont purifiés à partir de PBMC en utilisant une colonne d’enrichissement à lymphocytes T CD4+ (telle que celle développée par R&D Systems). Chaque puits de culture cellulaire contient 10*5 cellules T purifiées et 10*4 cellules dendritiques allogéniques pour un volume total de 200pL. Les anticorps anti-CTLA4 (Del294, C6A_66, IgGl parent, comme référence) sont ajoutés à différentes concentrations. Certains puits sont incubés avec des anticorps anti-CD3 (contrôle positif) ou avec des anticorps irrelevants (contrôle négatif). Les cellules sont mises en culture pendant 5 jours à 37°C. Au jour, lOOpL de milieu sont prélevés dans chacun des puits pour mesurer la quantité de cytokines sécrétées. Les taux de cytokines IFN-gamma, TNF-alpha, IL-2, IL-4, lL-6, IL-10 et IL-12 ont été quantifiés par cytométrie en flux de perle Array (CBA) (BD Biosciences). Les résultats indiquent que les traitements avec les variants anti-CTLA4 entrainent une stimulation plus forte de la sécrétion de cytokines par les cellules par rapport au traitement avec l’IgGl anti-CTLA4 parent, quel que soit le système de production cellulaire utilisé. 5) Effet anti-tumoral des IgGl anti-CTLA4 sur les modèles in vivo

Un modèle de tumeur in vivo est utilisé pour analyser l’effet des variants d’anticorps anti-CTLA4 sur la croissance tumorale. Les souris knock-in CTLA4 (telles que celles proposées par Oncoimmune, Inc), mâles et femelles âgées de 7 à 10 semaines réparties en 5 groupes, subissent des injections sous-cutanées de cellules de fibrosarcomes SAl/N à raison de 2*10^ cellules dissoutes dans 200pL de DMEM au jour 0. Pour étudier l’activité anti-tumorale des anticorps, les souris sont traitées avec du PBS (véhicule) ou avec lOmg/kg d’un anticorps irrelevant (contrôle négatif), d’IgGl anti-CTLA4 parent (référence) et avec les différents variants IgGl (294del, C6A_66) produits dans CHO ou YB2/0 à raison de 200pL par injection. Ces injections sont réalisées de manière intra-péritonéale aux jours 1, 4, 8 et 11. Chacun des groupes contient 10 animaux et les groupes consistent en : (i) un groupe véhicule, (ii) un contrôle négatif irrelevant, (iii) un groupe de référence IgGl anti-CTLA4 parent, (iv) un groupe IgGl anti-CTLA4 294del et (v) un groupe IgGl anti-CTLA4 C6A_66. Les souris sont observées deux fois par semaine pour évaluer la croissance tumorale pendant environ 6 semaines. Les résultats indiquent que, avantageusement, les anti-CTLA4 mutés selon l’invention conduisent à un effet d’inhibition de la croissance tumorale qui perdure plus longtemps que les anti-CTLA4 parents. Cet effet peut être observé avec les anti-CTLA4 mutés selon l’invention produits dans YB2/0 et avec les anti-CTLA4 mutés selon l’invention produits dans CHO.

Claims

Revendications

1. Anticorps inhibiteur d’au moins un point de contrôle immunitaire, possédant une région Fc modifiée par rapport à celle d’un anticorps parent possédant une région Fc humaine de type sauvage, . ladite région Fc modifiée ayant une affinité supérieure pour le récepteur FcRn par rapport à celle de l’anticorps parent et comprenant au moins deux mutations, lesdites mutations étant choisies parmi: (i) une mutation choisie parmi 378V, 378T, 434Y et 434S et (ii) Au moins une mutation choisie parmi 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 378V, 378T, 389T, 389K, 434Y et 434S la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n’a pas lieu sur le même acide aminé que la mutation (ii).
2. Anticorps selon la revendication 1, caractérisé en ce que le point de contrôle immunitaire est un récepteur inhibiteur des cellules effectrices immunitaires.
3. Anticorps selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le point de contrôle immunitaire est choisi parmi PDI, CTLA4, TIM3, LAG3, KIR, BTLAl et a2AR.
4. Anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 3„ caractérisé en ce que la région Fc comprend au moins une combinaison de mutations choisies parmi 226G/315D/434Y, 230S/315D/434Y, 230T/315D/434Y, 230T/264E/434S, 230T/389T/434S, 241L/264E/378V, 241L/264E/434S, 250A/389K/434Y, 2591/315D/434Y, 284E/378T/396L, 264E/378V/434Y, 345D/330V/434Y, 315D/382V/434Y et 378V/383N/434Y par rapport à la région Fc dudit anticorps parent, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat.
5. Anticorps selon la revendication 4, caractérisé en ce que la région Fc comprend en outre au moins une mutation choisie parmi 226G, 227L, 230S, 230T, 230L, 231T, 241L, 243L, 250A, 256N, 2591, 264E, 265G, 267R, 290E, 294del, 303A, 305A, 307P, 307A, 3081, 315D, 322R, 325S, 327V, 330V, 342R, 347R, 352S, 361D, 362R, 362E, 370R, 378V, 378T, 382V, 383N, 386R, 386K, 387T, 389T, 389K, 392R, 395A, 396L, 397M, 403T, 404L, 415N, 416K, 421T, 426T, 428L, 433R, 434Y, 434S et 439R par rapport à la région Fc dudit anticorps parent, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat.
6. Anticorps selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la région Fc comprend une combinaison de mutations choisies parmi 307A/315D/330V/382V/389T/434Y, 256N/378V/383N/434Y, 345D/330V/361D/378V/434Y, 2591/315D/434Y, 230S/315D/428L/434Y, 241L/264E/307P/378V/433R, 250A/389K/434Y, 305A/315D/330V/395A/343Y, 264E/386R/396L/434S/439R, 315D/330V/362R/434Y, 294del/307P434Y, 305A/315D/330V/389K/434Y, 315D/327V/330V/397M/434Y, 230T/241L/264E/265G/378V/421T, 264E/396L/415N/434S, 227L/264E/378V/434S, 264E/378T/396L, 230T/315D/362R/426T/434Y, 226G/315D/330V/434Y, 230L/241L/243L/264E/307P/378V, 250A/315D/325S/330V/434Y, 290E/315D/342R/382V/434Y, 241L/315D/330V/392R/434Y, 241L/264E/307P/378W/434S, 230T/264E/403T/434S, 264E/378V/416K, 230T/315D/362E/434Y, 226G/315D/434Y, 226G/315D/362R/434Y, 226G/264E/347R/370R/378V/434S, 3081/315D/330V/382V/434Y, 230T/264E/378V/434S, 231T/241L/264E/378T/397M/434S, 230L/264E/378W/434S, 230T/315D/330V/386K/434Y, 226G/315D/330V/389T/434Y, 267R/307P/378V/421T/434Y, 230S/315D/387T/434Y, 230S/264E/352S/378V/434S et 230T/303A/322R/389T/404L/434S par rapport à la région Fc dudit anticorps parent, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat.
7. Anticorps selon l’une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu’il présente une activité fonctionnelle médiée par la région Fc modifiée, en particulier diminuée, par rapport à celle de l’anticorps parent.
8. Anticorps selon la revendication 7, caractérisé en ce qu’il présente une activité fonctionnelle médiée par la région Fc modifiée, en particulier diminuée par rapport à celle de l’anticorps parent, d’un ratio au moins égal à 2, de préférence supérieur à 5, de préférence supérieur à 10, de préférence supérieur à 15, de préférence supérieur à 20, de préférence supérieur à 25, de préférence supérieur à 30.
9. Anticorps selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que ladite activité fonctionnelle médiée par la région Fc est choisie parmi la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC), la cytotoxicité dépendante du complément (CDC), la phagoc5l:ose cellulaire dépendante des anticorps (ADCP), et une combinaison d’au moins deux de ces activités.
10. Anticorps selon l’une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu’une mutation choisie parmi 294Del, 293Del et 293del/294del est introduite dans la région Fc de l’anticorps parent, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat.
11. Anticorps selon l’une des revendications 1 à 11, présentant une activité fonctionnelle médiée par la région Fc modifiée par rapport à celle d’un anticorps parent, caractérisé en ce que ladite région Fc comprend au moins une combinaison de 2 mutations, ladite combinaison étant choisie parmi : (i) une mutation choisie parmi 307N, 326E, 326T, 334N, 334R, 352L, 378V, 378T, 394P, 396L, 397M et 421T ; et (ii) au moins une mutation choisie parmi 226Y, 227S, 230S, 231V, 234P, 2431, 243L, 246R, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 290E, 298N, 302A, 305A, 307P, 308A, 3081, 308G, 309P, 312G, 315D, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 325S, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A 352S, 359A, 361H, 362R, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 389T, 392R, 393A, 3931, 394P, 396L, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421T, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 439R, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N, la numérotation étant celle de l’index EU ou équivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n’a pas lieu sur le même acide aminé que la mutation (ii).
12. Anticorps selon l’une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que ladite région Fc modifiée a une affinité modifiée pour au moins un des récepteurs de la région Fc (FcR) choisi parmi le complément Clq et les récepteurs FcgRIIIa (CD16a), FcgRIIa (CD32a), et FcgRIIb (CD32b).
13. Anticorps selon la revendication 12, caractérisé en ce que ladite région Fc modifiée a une affinité augmentée pour le récepteur FcgRIIb (CD32b), et comprend au moins une combinaison de 2 mutations, ladite combinaison comprenant : ί) une mutation choisie parmi 326E, 326T, 378V, 397M, 352L, 394P, 396L et 421T ; et ii) au moins une mutation choisie parmi 316D, 334R, 248E, 334N, 418P, 23IV, 320E, 402D, 359A, 383R, 421T et 361H, la numérotation étant cellii de l’index EU ou équivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n’a pas lieu sur le même acide aminé que la mutation (ii).
14. Anticorps selon l’une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que l’anticoips parent comprend une région Fc parente qui est une région Fc humaine, de préférence une région Fc d’une IgGl humaine ou d’une IgG2 humaine.
15. Composition pharmaceutique comprenant (i) au moins un anticorps selon l’une des revendications 1 à 14, et (ii) au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
16. Anticorps selon l’une des revendications 1 à 14 ou composition pharmaceutique selon la revendication 15, pour son utilisation dans le traitement de cancers.