FR2994656A1 - FLAX EXTRACT AND COSMETIC COMPOSITION COMPRISING SAID EXTRACT FOR INCREASING THE INTRACELLULAR Q10 COENZYME LEVEL - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne un extrait de lin (Linum) provenant de l'hydrolyse des protéines du lin et une composition cosmétique le comprenant. L'invention est également relative à une composition cosmétique synergique, comprenant un extrait de lin en tant que premier principe actif, et du coenzyme Q10 en tant que deuxième principe actif. L'invention porte encore sur l'utilisation d'une composition cosmétique destinée à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et retarder l'apparition des manifestations du vieillissement cutané.The present invention relates to a flax extract (Linum) derived from the hydrolysis of flax proteins and a cosmetic composition comprising it. The invention also relates to a synergistic cosmetic composition, comprising a linseed extract as the first active ingredient, and coenzyme Q10 as the second active ingredient. The invention also relates to the use of a cosmetic composition intended to protect the skin and the integuments from external aggressions and to delay the appearance of the manifestations of skin aging.
Description
EXTRAIT DE LIN ET COMPOSITION COSMETIQUE COMPRENANT LEDIT EXTRAIT POUR AUGMENTER LE NIVEAU DE COENZYME Q10 INTRACELLULAIRE La présente invention se situe dans le domaine cosmétique. La présente invention concerne un extrait de lin (Linum) provenant de l'hydrolyse des protéines extraites du lin et une composition cosmétique le comprenant. L'invention est également relative à une composition cosmétique synergique, comprenant un extrait de lin en tant que premier principe actif, et du coenzyme Q10 en tant que deuxième principe actif. L'invention porte encore sur l'utilisation d'une composition cosmétique pour augmenter le taux d'expression d'enzyme transprényl transférase et/ou augmenter la concentration de la Coenzyme Q10 Binding protéine et/ou augmenter la concentration de coenzyme Q10 dans les cellules de la peau, destinée à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et retarder l'apparition des manifestations du vieillissement cutané. Le terme « phanères » selon l'invention englobe l'ensemble des annexes kératiniques présentes à la surface du corps, en particulier les poils, les cils, les sourcils, les ongles et les cheveux. Le vieillissement et l'apparence de la peau sont au coeur de la recherche dans le domaine cosmétique et plus particulièrement dans le domaine des soins cosmétiques de la peau. En effet, la peau est la première barrière de protection de l'organisme et détermine l'aspect extérieur des individus. La peau est impliquée notamment dans le maintien de la température corporelle, la protection des tissus et des organes de la plupart des agressions extérieures, la perception, et l'immunité. La peau, comme les autres organes, est constamment soumise aux agressions par divers types de stress oxydatifs qui, au fil du temps, amplifient le phénomène de vieillissement chronologique et génétique intrinsèque.FLAX EXTRACT AND COSMETIC COMPOSITION COMPRISING SAID EXTRACT FOR INCREASING THE INTRACELLULAR Q10 COENZYME LEVEL The present invention is in the field of cosmetics. The present invention relates to a flax extract (Linum) derived from the hydrolysis of proteins extracted from flax and a cosmetic composition comprising it. The invention also relates to a synergistic cosmetic composition, comprising a linseed extract as the first active ingredient, and coenzyme Q10 as the second active ingredient. The invention further relates to the use of a cosmetic composition for increasing the level of transprenyl transferase enzyme expression and / or increasing the concentration of Coenzyme Q10 Binding protein and / or increasing the concentration of Coenzyme Q10 in cells. of the skin, intended to protect the skin and integuments of external aggressions and delay the appearance of the manifestations of skin aging. The term "superficial body growths" according to the invention encompasses all the keratinous appendages present on the surface of the body, in particular the hairs, the eyelashes, the eyebrows, the nails and the hair. Aging and the appearance of the skin are at the heart of research in the field of cosmetics and more particularly in the field of cosmetic skin care. Indeed, the skin is the first protective barrier of the body and determines the external appearance of individuals. The skin is involved especially in maintaining body temperature, protecting tissues and organs from most external aggressions, perception, and immunity. The skin, like the other organs, is constantly subjected to the aggressions by various types of oxidative stress which, over time, amplify the phenomenon of chronological and intrinsic genetic aging.
Les dommages oxydatifs sont provoqués par les radicaux libres, des espèces chimiquement instables et très réactives, générées par le métabolisme intracellulaire ou les agressions extérieures. Parmi ces agressions extérieures, on peut citer : les rayonnements UV, les toxines, les polluants atmosphériques, les oxydants alimentaires. Dans la peau, on observe un vieillissement prématuré survenant dans les zones exposées aux rayonnements, caractérisé par des phénomènes d'altérations des macromolécules (péroxydation lipidique, carbonylation des protéines) touchant en particulier l'élastine, le collagène ou la fibronectine. L'organisme possède des mécanismes de défense antioxydants, capables de piéger ou de transformer les radicaux libres tels que les enzymes, le glutathion, les vitamines A et E, le 5 coenzyme Q10, etc. Le Coenzyme Q10 est un dérivé benzoquinonique flanqué d'une longue chaîne latérale isoprénique composée, le plus souvent, de dix unités isoprénoïdes (d'où le nom de Coenzyme Q10). La biosynthèse du Coenzyme Q10 se fait à partir de la tyrosine pour le noyau quinone, et à partir du farnesyl pyrophosphate pour la chaîne latérale. L'enzyme 10 responsable de cette dernière réaction, qui est une étape essentielle dans la biosynthèse du coenzyme Q10, est la transprényl transférase (ou polyprenyltransférase, désignée par la suite par « PDSS1/2 ») composée de deux sous unités : PDSS1 et PDSS2. Plus précisément, le Coenzyme Q10 (ou ubiquinone) est un antioxydant lipophile, endogène, naturel, présent dans toutes les membranes lipidiques, comme la membrane 15 interne de la mitochondrie, où il peut diffuser librement parmi les phospholipides membranaires. La chaine respiratoire mitochondriale est composée de quatre complexes qui, à partir des métabolites générés par le cycle de Krebs, par le catabolisme du pyruvate, des acides aminés et des acides gras, permettent de synthétiser l'ATP. L'ATP, ou adénosine triphosphate, a pour rôle principal de fournir l'énergie nécessaire aux réactions chimiques 20 des cellules, car il possède des liaisons riches en énergie. Des transporteurs lipophiles permettent le transport des électrons entre les différents complexes mitochondriaux. Plus particulièrement, le coenzyme Q10 est le transporteur des électrons entre les complexes I et II et les complexes III des chaines respiratoires mitochondriales, et par conséquent, il est impliqué dans la phosphorylation oxydative conduisant à la production d'ATP. 25 Une protéine est particulièrement importante pour un fonctionnement correct du coenzyme Q10 dans la chaine respiratoire mitochondriale : la protéine de liaison du Coenzyme Q10 (désignée par la suite par « CoQ10BP ») localisée dans la membrane interne de la mitochondrie. Cette protéine se lie au Coenzyme Q10 de manière analogue à une protéine chaperonne, et est impliquée dans le transport du Coenzyme Q10, de son site de 30 synthèse aux complexes respiratoires. La localisation de CoQ10BP est corrélée avec la présence du Coenzyme Q10 (Cui and Kawamukai, 2009). Une autre propriété fondamentale du coenzyme Q10 est d'être un antioxydant, neutralisant les radicaux libres. En effet, le Coenzyme Q10 peut exister sous trois états d'oxydation : une forme réduite (CoQH2 ou UQH2), une forme oxydée (CoQ10), et une forme intermédiaire le radical ubisemiquinone (Q°). Le coenzyme Q10, présent dans la peau, protège la stabilité des membranes cellulaires, protège l'ADN des dommages oxydatifs induits par les radicaux libres, et recycle et régénère d'autres antioxydants tels que le tocophérol ou l'ascorbate (Crane, 1984, 2001). Par conséquent, le coenzyme Q10 stimule les fonctions naturelles des cellules et agit en défenseur vis-à-vis des agressions extérieures. Dans ce contexte, les propriétés antioxydantes et énergisantes du coenzyme Q10 apparaissent comme particulièrement intéressantes pour retarder les manifestations du vieillissement de la peau.Oxidative damage is caused by free radicals, chemically unstable and highly reactive species, generated by intracellular metabolism or external aggression. These external aggressions include: UV radiation, toxins, air pollutants, food oxidants. In the skin, there is premature aging occurring in the areas exposed to radiation, characterized by phenomena of alterations of macromolecules (lipid peroxidation, carbonylation of proteins) affecting in particular elastin, collagen or fibronectin. The body has antioxidant defense mechanisms, capable of trapping or transforming free radicals such as enzymes, glutathione, vitamins A and E, coenzyme Q10, etc. Coenzyme Q10 is a benzoquinone derivative flanked by a long isoprene side chain, most often composed of ten isoprenoid units (hence the name Coenzyme Q10). The biosynthesis of Coenzyme Q10 is made from tyrosine for the quinone nucleus, and from farnesyl pyrophosphate for the side chain. The enzyme responsible for this last reaction, which is an essential step in the biosynthesis of coenzyme Q10, is transprenyl transferase (or polyprenyltransferase, hereinafter referred to as "PDSS1 / 2") composed of two subunits: PDSS1 and PDSS2 . More specifically, Coenzyme Q10 (or ubiquinone) is an endogenous, naturally occurring, lipophilic antioxidant present in all lipid membranes, such as the inner mitochondrial membrane, where it can diffuse freely among membrane phospholipids. The mitochondrial respiratory chain is composed of four complexes that, based on the metabolites generated by the Krebs cycle, the catabolism of pyruvate, amino acids and fatty acids, make it possible to synthesize ATP. ATP, or adenosine triphosphate, has the main role of providing the energy required for the chemical reactions of the cells because it has energy-rich bonds. Lipophilic transporters allow the transport of electrons between different mitochondrial complexes. More particularly, coenzyme Q10 is the electron carrier between complexes I and II and III complexes of mitochondrial respiratory chains, and therefore it is involved in oxidative phosphorylation leading to the production of ATP. A protein is particularly important for proper functioning of coenzyme Q10 in the mitochondrial respiratory chain: the Coenzyme Q10 binding protein (hereinafter referred to as "CoQ10BP") located in the internal membrane of the mitochondria. This protein binds to Coenzyme Q10 analogously to a chaperone protein, and is involved in the transport of Coenzyme Q10 from its synthetic site to the respiratory complexes. The localization of CoQ10BP is correlated with the presence of Coenzyme Q10 (Cui and Kawamukai, 2009). Another fundamental property of Coenzyme Q10 is to be an antioxidant, neutralizing free radicals. Indeed, Coenzyme Q10 can exist under three oxidation states: a reduced form (CoQH2 or UQH2), an oxidized form (CoQ10), and an intermediate form the radical ubisemiquinone (Q °). Coenzyme Q10, present in the skin, protects the stability of cell membranes, protects DNA from oxidative damage induced by free radicals, and recycles and regenerates other antioxidants such as tocopherol or ascorbate (Crane, 1984, 2001). Therefore, coenzyme Q10 stimulates the natural functions of cells and acts as a defender against external aggressions. In this context, the antioxidant and energizing properties of coenzyme Q10 appear to be particularly interesting for delaying the manifestations of aging of the skin.
Une des solutions proposées est une supplémentation en coenzyme Q10. Par exemple, l'utilisation du coenzyme Q10 comme supplément alimentaire, dans les boissons ou la nourriture pour ses propriétés d'énergisant cellulaires et d'antioxydant a été décrite. Une autre solution proposée dans l'art antérieur est un apport direct de coenzyme Q10 à 15 la peau, par application de compositions cosmétiques comprenant du Coenzyme Q10 pour ses effets comme antioxydant, réparateur de la peau ainsi que pour ses propriétés anti-âge et antirides (Hojerovà and coll., 2006). Cependant, l'inconvénient des solutions connues est une faible efficacité pour protéger la peau des agressions extérieures et pour retarder l'apparition des manifestations du 20 vieillissement de la peau. En effet, le coenzyme Q10 est une grande molécule thermolabile et lipophile donc sa biodisponibilité par un apport topique est faible. De plus, le coenzyme Q10 exogène se trouve toujours sous forme oxydée, ce qui l'empêche de jouer son rôle d'antioxydant (Katawan and coll., 2007). La présente invention a pour objectif de résoudre tout ou partie des inconvénients cités 25 précédemment. Les inventeurs ont mis en évidence une activité cosmétique, d'un extrait de lin particulier, décrit dans la présente invention. Il a notamment été mis en évidence que cet extrait de lin, lorsqu'il est appliqué sur la peau, a une forte activité protectrice vis-à-vis des agressions subies par la peau, responsables de l'apparition des signes du vieillissement. Ce nouveau principe actif, capable d'augmenter l'énergie cellulaire et de protéger la 30 peau des dommages oxydatifs, favorise de façon importante la synthèse d'ATP, ainsi que l'expression de l'enzyme PDSS1/2 et/ou de la CoQ10BP et/ou du coenzyme Q10 et permet ainsi d'ouvrir de nouvelles perspectives cosmétiques.One of the proposed solutions is coenzyme Q10 supplementation. For example, the use of coenzyme Q10 as a dietary supplement, in beverages or food for its cellular energizing and antioxidant properties has been described. Another solution proposed in the prior art is a direct supply of coenzyme Q10 to the skin, by application of cosmetic compositions comprising Coenzyme Q10 for its effects as an antioxidant, skin repairing as well as for its anti-aging and anti-wrinkle properties (Hojerovà et al., 2006). However, the disadvantage of the known solutions is a low efficiency to protect the skin from external aggressions and to delay the onset of the manifestations of aging of the skin. Indeed, coenzyme Q10 is a large molecule thermolabile and lipophilic so its bioavailability by a topical intake is low. In addition, the exogenous coenzyme Q10 is still in oxidized form, which prevents it from acting as an antioxidant (Katawan et al., 2007). The present invention aims to solve all or part of the disadvantages mentioned above. The inventors have demonstrated a cosmetic activity of a particular linen extract described in the present invention. In particular, it has been demonstrated that this flaxseed extract, when applied to the skin, has a strong protective activity vis-à-vis the aggressions suffered by the skin, responsible for the appearance of the signs of aging. This new active ingredient, capable of increasing cell energy and protecting the skin from oxidative damage, significantly promotes ATP synthesis, as well as the expression of the PDSS1 / 2 enzyme and / or CoQ10BP and / or coenzyme Q10 and thus opens up new cosmetic perspectives.
Selon un premier aspect, la présente invention concerne un extrait de lin provenant de l'hydrolyse des protéines du lin (Linum), caractérisé en ce qu'il contient au moins 0,1 à 5 g/1 de composés de nature peptidique en poids d'extrait sec, 0,1 à 2 g/1 de sucres en poids d'extrait sec et comprend essentiellement des composés peptidiques de poids moléculaire inférieur à 5 kDa, de préférence de poids moléculaire inférieur à 2,5 kDa. L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description. L'invention s'adresse aux mammifères en général, et plus particulièrement, aux êtres humains.According to a first aspect, the present invention relates to a flax extract derived from the hydrolysis of proteins of flax (Linum), characterized in that it contains at least 0.1 to 5 g / l of peptide-like compounds by weight. of dry extract, 0.1 to 2 g / l of sugar by weight of dry extract and essentially comprises peptide compounds with a molecular weight of less than 5 kDa, preferably with a molecular weight of less than 2.5 kDa. The invention and the advantages thereof will be better understood from reading the description. The invention is directed to mammals in general, and more particularly to humans.
Le terme « peptide » désigne un enchaînement de deux ou plusieurs acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques ou par des liaisons peptidiques modifiées ; le terme « polypeptide » désignant un peptide de taille plus importante ; le terme de « composés peptidiques » désignant les fragments de protéines, les peptides et les acides aminés libres présents dans le mélange.The term "peptide" refers to a sequence of two or more amino acids linked together by peptide bonds or modified peptide bonds; the term "polypeptide" designating a peptide of larger size; the term "peptide compounds" designating the protein fragments, peptides and free amino acids present in the mixture.
Le terme « hydrolysat ou issu de l'hydrolyse » désigne toute substance ou mélange de substances, ou préparation isolée, obtenue après hydrolyse de matière végétale. Pour réaliser l'extraction, on peut utiliser la plante entière, ou une partie spécifique de la plante (feuille, graine, etc.). Plus particulièrement selon l'invention, on utilise une des nombreuses plantes de la famille des linacées, du genre Linum (lin). Le genre Linum compte près de 200 espèces poussant sur tout l'hémisphère nord. Ce sont des plantes herbacées à tiges fibreuses, à feuilles simples, aux fleurs à 5 pétales. Préférentiellement selon l'invention, on utilise l'espèce cultivée Linum usitatissimum L. L'extrait de lin (Linum) selon l'invention est préférentiellement un extrait peptidique provenant de l'hydrolyse des protéines extraites des graines de lin et préférentiellement la graine débarrassée de son enveloppe par une étape de décorticage. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée afin de préparer l'extrait de lin selon l'invention. Préférentiellement, l'extrait de lin est obtenu par un procédé qui comprend : - une étape d'extraction des protéines d'origine végétale, - une étape d'hydrolyse contrôlée qui libère des composés peptidiques biologiquement actifs.The term "hydrolyzate or derived from hydrolysis" refers to any substance or mixture of substances, or isolated preparation, obtained after hydrolysis of plant material. To carry out the extraction, one can use the whole plant, or a specific part of the plant (leaf, seed, etc.). More particularly according to the invention, one of the many plants of the linaceae family, of the genus Linum (flax), is used. The genus Linum has nearly 200 species growing throughout the northern hemisphere. They are herbaceous plants with fibrous stems, single leaves, flowers with 5 petals. Preferably, according to the invention, the cultivated species Linum usitatissimum L. is used. The flaxseed extract (Linum) according to the invention is preferably a peptide extract originating from the hydrolysis of the proteins extracted from flax seeds and preferably from the freed seed. of its envelope by a step of dehulling. Any method of extraction or purification known to those skilled in the art can be used to prepare the flax extract according to the invention. Preferably, the flax extract is obtained by a process which comprises: a step of extraction of the proteins of plant origin; a controlled hydrolysis step which releases biologically active peptide compounds.
De très nombreuses protéines trouvées dans les plantes sont susceptibles de contenir des composés peptidiques biologiquement actifs au sein de leurs structures. L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces composés peptidiques. Il est possible, mais non nécessaire pour réaliser l'invention, d'extraire soit les protéines concernées d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier les composés peptidiques ensuite. Un mode particulier de mise en oeuvre du procédé d'obtention de l'extrait de lin selon l'invention est décrit ci-dessous. Dans une première étape, la plante est broyée à l'aide d'un broyeur à plantes. La poudre ainsi obtenue peut ultérieurement être "délipidée" à l'aide d'un solvant organique classique (comme par exemple un alcool, l'hexane ou de l'acétone). Dans une deuxième étape on réalise l'extraction des protéines de la plante suivant un procédé classique. Le broyat de plante est mis en suspension dans une solution alcaline contenant un produit adsorbant de type polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) insoluble (0,01 - 20 %) ; en effet il a été observé que les opérations d'hydrolyses et de purifications ultérieures étaient facilitées par ce moyen. La concentration des substances de type phénoliques, interagissant avec les protéines, se trouve ainsi réduite. La fraction soluble est recueillie après des étapes de centrifugation et de filtration, cette solution brute constituant alors une première forme de l'extrait comprenant les protéines, les glucides et éventuellement des lipides. Selon un mode particulier de mise en oeuvre du procédé, les protéines peuvent être ensuite précipitées en faisant varier la force ionique en acidifiant le milieu, ce qui permet d'éliminer les composants solubles. Le précipité est ensuite lavé à l'aide d'un solvant organique tel que, par exemple, l'éthanol ou le butanol puis le solvant est évaporé par séchage sous vide. Le précipité riche en protéines est remis en solution dans l'eau ou un autre solvant et constitue alors une forme plus purifiée de l'hydrolysat. L'étape d'extraction des protéines de la plante peut également être réalisée en milieu neutre ou acide toujours en présence de polyvinylpolypyrrolidone. Après une étape de filtration, une étape de précipitation peut être effectuée dans un mode particulier de mise en oeuvre, à l'aide d'un agent classique de précipitation tel que les sels (chlorure de sodium, sulfate d'ammonium) ou un solvant organique (alcool, acétone). Le précipité obtenu peut être séparé des agents de précipitation par dialyse après remise en solution dans de l'eau ou un autre solvant.Many proteins found in plants are likely to contain biologically active peptide compounds within their structures. The controlled hydrolysis makes it possible to release these peptide compounds. It is possible, but not necessary to carry out the invention, to extract either the proteins concerned first and then hydrolyze them, or to carry out the hydrolysis first on a crude extract and then to purify the peptide compounds. . A particular embodiment of the process for obtaining the flax extract according to the invention is described below. In a first step, the plant is ground using a plant grinder. The powder thus obtained may subsequently be "delipidated" with the aid of a conventional organic solvent (for example an alcohol, hexane or acetone). In a second step, the proteins of the plant are extracted according to a conventional method. The plant meal is suspended in an alkaline solution containing an insoluble polyvinylpolypyrrolidone adsorbent material (PVPP) (0.01-20%); in fact, it has been observed that the hydrolysis and subsequent purification operations are facilitated by this means. The concentration of phenolic-type substances interacting with proteins is thus reduced. The soluble fraction is collected after centrifugation and filtration steps, this crude solution then constituting a first form of the extract comprising proteins, carbohydrates and optionally lipids. According to a particular mode of implementation of the process, the proteins can then be precipitated by varying the ionic strength by acidifying the medium, which makes it possible to eliminate the soluble components. The precipitate is then washed with an organic solvent such as, for example, ethanol or butanol and the solvent is evaporated by drying in vacuo. The protein-rich precipitate is dissolved in water or other solvent and is then a more purified form of the hydrolyzate. The protein extraction step of the plant can also be carried out in neutral or acidic medium always in the presence of polyvinylpolypyrrolidone. After a filtration step, a precipitation step may be carried out in a particular embodiment, using a conventional precipitation agent such as salts (sodium chloride, ammonium sulfate) or a solvent organic (alcohol, acetone). The precipitate obtained can be separated from the precipitating agents by dialysis after redissolving in water or another solvent.
La fraction soluble, comprenant les protéines, des glucides et éventuellement des lipides, est recueillie après des étapes de centrifugation et de filtration. Cette solution brute est ensuite hydrolysée dans des conditions ménagées pour générer des composés peptidiques, des polypeptides et des peptides solubles. L'hydrolyse se définit comme étant une réaction chimique impliquant le clivage d'une molécule par de l'eau, cette réaction pouvant se faire en milieu neutre, acide ou basique. Selon l'invention, l'hydrolyse est réalisée par voie chimique et/ou de façon avantageuse par des enzymes protéolytiques. Selon des caractéristiques particulières, l'hydrolyse est réalisée par une protéase ou un mélange de protéases et/ou une cellulase ou un mélange de cellulases.The soluble fraction, comprising proteins, carbohydrates and optionally lipids, is collected after centrifugation and filtration steps. This crude solution is then hydrolyzed under mild conditions to generate peptidic compounds, polypeptides and soluble peptides. Hydrolysis is defined as a chemical reaction involving the cleavage of a molecule by water, this reaction being possible in a neutral, acidic or basic medium. According to the invention, the hydrolysis is carried out chemically and / or advantageously by proteolytic enzymes. According to particular characteristics, the hydrolysis is carried out by a protease or a mixture of proteases and / or a cellulase or a mixture of cellulases.
Selon des caractéristiques préférées, on utilise un mélange d'enzymes comprenant : - des endoprotéases d'origine végétale (par exemple papaïne, bromelaïne, ficine, etc.) et/ou issues de micro-organismes (Aspergillus, Rhizopus, Bacillus, Alcalase® etc.), - et/ou une cellulase ou un mélange de cellulases (par exemple Celluclast® CL). Avantageusement les cellulases permettent une meilleure hydrolyse de la paroi cellulaire du lin ce qui augmente l'accessibilité aux protéines et facilite la filtration. En effet, les cellulases permettent l'hydrolyse des parois cellulaires en oligosaccharides de petites tailles. L'action conjointe des cellulases et de protéases conduit alors à l'obtention de polypeptides de faibles poids moléculaires inférieurs à 5 kDa et plus particulièrement une fraction importante inférieure à 2,5 kDa. Une fois ces différentes hydrolyses effectuées, une étape de désactivation thermique est nécessaire pour inactiver ces enzymes. Pour les mêmes raisons que précédemment, c'est-à-dire l'élimination des substances polyphénoliques, une quantité de polyvinylpolypyrrolidone est additionnée au milieu réactionnel lors de cette étape d'hydrolyse ménagée. Après filtration, la solution obtenue constitue une première forme avantageuse d'extrait peptidique de lin selon l'invention. L'extrait peptidique de lin peut être encore purifié afin de sélectionner les poids moléculaires et la nature des peptides générés. Le fractionnement peut s'effectuer avantageusement par ultrafiltration et/ou par une méthode de type chromatographique. L'utilisation d'extraits peptidiques, et en particulier d'extraits peptidiques de bas poids 30 moléculaires, présente de nombreux avantages en cosmétique. Outre le fait de générer des composés peptidiques qui ne préexistaient pas dans le mélange protéique de départ, l'hydrolyse et la purification permettent d'obtenir un mélange de composés peptidiques plus stables, de composition plus facilement reproductible et ne provoquant pas de réactions allergiques en cosmétique. Selon des caractéristiques particulières, l'extrait de lin selon l'invention comprend essentiellement des composés peptidiques de bas poids moléculaires. Préférentiellement, l'extrait peptidique de lin selon l'invention comprend essentiellement des composés peptidiques de poids moléculaire inférieur à 2,5 kDa. L'une quelconque des formes plus ou moins purifiées de l'hydrolysat est alors solubilisée dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de l'eau, puis stérilisée par ultrafiltration.According to preferred characteristics, a mixture of enzymes is used comprising: endoproteases of plant origin (for example papain, bromelain, ficin, etc.) and / or derived from microorganisms (Aspergillus, Rhizopus, Bacillus, Alcalase®) etc.), and / or a cellulase or a mixture of cellulases (eg Celluclast® CL). Advantageously, cellulases allow better hydrolysis of the cell wall of flax which increases the accessibility to proteins and facilitates filtration. Indeed, cellulases allow the hydrolysis of cell walls into oligosaccharides of small sizes. The joint action of cellulases and proteases then leads to the production of polypeptides of low molecular weight less than 5 kDa and more particularly a significant fraction less than 2.5 kDa. Once these different hydrolyses have been performed, a thermal deactivation step is necessary to inactivate these enzymes. For the same reasons as above, that is to say the removal of the polyphenol substances, an amount of polyvinylpolypyrrolidone is added to the reaction medium during this mild hydrolysis step. After filtration, the solution obtained constitutes a first advantageous form of peptide extract of flax according to the invention. The peptide extract of flax can be further purified in order to select the molecular weights and the nature of the peptides generated. The fractionation can advantageously be carried out by ultrafiltration and / or by a chromatographic type method. The use of peptide extracts, and in particular peptide extracts of low molecular weight, has many advantages in cosmetics. In addition to generating peptide compounds that did not previously exist in the starting protein mixture, hydrolysis and purification make it possible to obtain a more stable mixture of peptide compounds with a composition that is more easily reproducible and does not cause allergic reactions. cosmetic. According to particular features, the flax extract according to the invention essentially comprises peptide compounds of low molecular weight. Preferably, the peptide extract of flax according to the invention essentially comprises peptide compounds with a molecular weight of less than 2.5 kDa. Any of the more or less purified forms of the hydrolyzate is then solubilized in water or in any mixture containing water, and then sterilized by ultrafiltration.
L'extrait de lin, obtenu selon l'invention, est analysé qualitativement et quantitativement pour ses caractéristiques physico-chimiques et sa teneur en composés peptidiques. On entend par composés peptidiques, les fragments de protéines, les peptides et les acides aminés libres présents dans le mélange. Les peptides, acides aminés et fragments de protéines sont dosés selon les techniques classiques, bien connues de l'homme du métier.The flaxseed extract obtained according to the invention is analyzed qualitatively and quantitatively for its physico-chemical characteristics and its content of peptide compounds. The term "peptide compounds" means the protein fragments, the peptides and the free amino acids present in the mixture. The peptides, amino acids and protein fragments are determined according to conventional techniques, which are well known to those skilled in the art.
Ainsi, selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait de lin a un pH compris entre 4 et 5, et préférentiellement, entre 4 et 4,5. Avantageusement ce pH acide favorise la dissolution des protéines dans l'eau et stabilise les protéines. L'extrait de lin selon l'invention a un poids sec titrant entre 0,1 et 8 g/1, et de manière préférée entre 0,1 et 5 g/1, et comprend : - entre 0,1 et 5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec, - et entre 0,1 et 2 g/1 de sucres en poids d'extrait sec. L'extrait est alors dilué dans de l'eau ou dans tout mélange de solvant contenant de l'eau, puis stérilisée par filtration stérilisante (0,2 gm). Selon des caractéristiques particulières, l'extrait est dilué dans un ou plusieurs solvants physiologiquement adaptés, tels que l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques ou tout mélange de ces solvants. On entend par «physiologiquement adapté» que le solvant choisi est approprié pour entrer en contact avec la peau sans provoquer de réactions de toxicité ou d'intolérance.Thus, according to an advantageous embodiment of the invention, the flax extract has a pH of between 4 and 5, and preferably between 4 and 4.5. Advantageously, this acidic pH promotes dissolution of the proteins in the water and stabilizes the proteins. The flax extract according to the invention has a dry weight of between 0.1 and 8 g / l, and preferably between 0.1 and 5 g / l, and comprises: between 0.1 and 5 g / l; 1 of peptide compounds by weight of dry extract, and between 0.1 and 2 g / l of sugar by weight of dry extract. The extract is then diluted in water or in any solvent mixture containing water, then sterilized by sterilizing filtration (0.2 gm). According to particular characteristics, the extract is diluted in one or more physiologically adapted solvents, such as water, glycerol, ethanol, propanediol, butylene glycol, dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols, polyols cyclic or any mixture of these solvents. "Physiologically suitable" means that the chosen solvent is suitable for coming into contact with the skin without causing toxicity or intolerance reactions.
Préférentiellement, après dilution l'extrait de lin selon comprend : entre 1,5 et 3,5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec, - et environ 0,3 g/1 de sucres en poids d'extrait sec.Preferably, after dilution, the flax extract according to comprises: between 1.5 and 3.5 g / l of peptide compounds by weight of dry extract, and about 0.3 g / l of sugars by weight of dry extract .
La teneur en sucres est encore plus préférentiellement inférieure à 0,3 g/1 dans l'extrait de lin selon l'invention. Après cette étape de dilution, l'extrait peut être encapsulé ou inclus dans un vecteur cosmétique tels que les liposomes ou toutes autres microcapsules utilisées dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur physiologiquement adapté. Selon un deuxième aspect, l'invention concerne une composition cosmétique comprenant un extrait de lin selon l'invention. La composition cosmétique selon l'invention comprend une quantité d'extrait de lin nécessaire afin d'obtenir le résultat recherché, à savoir : augmenter les niveaux intracellulaires de coenzyme Q10 et/ou de coenzyme Q10 Binding Protein et/ou l'expression de l'enzyme transprényl transférase, et plus généralement, protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et retarder l'apparition des manifestations du vieillissement cutané. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait de lin selon l'invention est présent dans la composition à une concentration comprise entre 0,0001 % à 20 % environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,05 % et 5 % environ, encore plus préférentiellement à une concentration comprise entre 1 % et 3 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Les compositions selon l'invention peuvent être appliquées par toute voie appropriée, notamment orale, parentérale ou topique externe, et leurs formulations sont adaptées par l'homme du métier, en particulier pour des compositions cosmétiques.The sugar content is even more preferably less than 0.3 g / l in the flax extract according to the invention. After this dilution step, the extract may be encapsulated or included in a cosmetic vector such as liposomes or any other microcapsules used in the field of cosmetics or adsorbed on powdery organic polymers, mineral supports such as talcs and bentonites, and more generally solubilized in, or attached to, any physiologically adapted vector. According to a second aspect, the invention relates to a cosmetic composition comprising a flax extract according to the invention. The cosmetic composition according to the invention comprises a quantity of linseed extract necessary in order to obtain the desired result, namely: increasing the intracellular levels of coenzyme Q10 and / or coenzyme Q10 Binding Protein and / or the expression of the transprenyl transferase enzyme, and more generally, protect the skin and integuments of external aggressions and delay the onset of manifestations of skin aging. According to an advantageous embodiment of the invention, the flax extract according to the invention is present in the composition at a concentration of between 0.0001% to 20% approximately, and preferably at a concentration of between 0.05%. and about 5%, even more preferably at a concentration of between about 1% and 3% relative to the total weight of the final composition. The compositions according to the invention may be applied by any appropriate route, in particular oral, parenteral or external topical, and their formulations are adapted by those skilled in the art, in particular for cosmetic compositions.
Avantageusement, les compositions selon l'invention sont destinées à une administration par voie topique cutanée, sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps. La composition cosmétique selon l'invention peut être utilisée comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. Ces compositions doivent donc contenir un milieu physiologiquement adapté selon l'invention, c'est-à-dire un milieu qui convient à une utilisation en contact avec la peau ou les phanères humains, sans risque par exemple de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité, ou encore de réponse allergique. De manière préférée, la composition selon l'invention destinée à être appliquée de façon topique sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps se présente sous forme d'une solution aqueuse, hydro-alcoolique ou huileuse, émulsion huile-dans-eau, ou eaudans-huile ou émulsion multiple, solution, suspension, microémulsion, gel aqueux ou anhydre, sérum, ou encore de dispersion de vésicules, de colloïde. Ces compositions peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'une crème, d'une pâte, d'un onguent, ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick, un patch, ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol ou de spray. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. Ces compositions peuvent également être adaptées à des applications sur le cuir chevelu et/ou les cheveux, et notamment un shampooing, un après-shampooing, une lotion de mise en plis, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une lotion pour les cheveux, un masque, etc. La composition cosmétique selon l'invention peut être utilisée notamment dans les traitements mettant en oeuvre une application qui est suivie ou non suivie d'un rinçage, ou encore sous forme de shampooing. Elle peut également se présenter sous forme de teinture ou de mascara à appliquer au pinceau ou au peigne, en particulier sur les cils, les sourcils ou les cheveux. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des co-solvants (éthanol, glycérol, alcool benzylique, humectant...), des épaississants, des diluants, des émulsionnants, des anti-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des oligo-éléments, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants ou des eaux thermales etc. On peut, par exemple, citer des polymères hydrosolubles de type polymère naturel, tels que les polysaccharides, ou polypeptides, des dérivés cellulosiques de type méthylcellulose ou hydroxypropylcellulose, ou encore des polymères synthétiques, polaxamères, carbomères, siloxanes, PVA ou PVP, et notamment les polymères vendus par la société Ashland. Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 30 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 10 % en poids, par rapport au poids total de la composition. Il est bien entendu que le principe actif selon l'invention peut être utilisé seul ou bien en association avec au moins un autre principe actif, dans une composition cosmétique. Avantageusement, les compositions utilisables selon l'invention peuvent comprendre en outre divers principes actifs destinés, notamment, à la prévention et/ou au traitement des désordres liés au photo-vieillissement. Ainsi, la composition selon l'invention peut associer, au principe actif selon l'invention, d'autres principes actifs favorisant son action. Par exemple, il peut être ajouté des principes actifs ayant une action anti-radicalaire ou antioxydante, choisis parmi la vitamine C, la vitamine E, le coenzyme Q10 et les extraits polyphénoliques de plantes.Advantageously, the compositions according to the invention are intended for administration topically cutaneous, on at least a portion of the skin of the face or body. The cosmetic composition according to the invention can be used as a care product and / or as a makeup product for the skin. These compositions must therefore contain a physiologically adapted medium according to the invention, that is to say a medium which is suitable for use in contact with the skin or the human integuments, without risk for example of toxicity, incompatibility, d instability, or allergic response. Preferably, the composition according to the invention intended to be applied topically to at least a part of the skin of the face or the body is in the form of an aqueous, hydro-alcoholic or oily solution, an oil-in-oil emulsion. water, or water-oil or multiple emulsion, solution, suspension, microemulsion, aqueous or anhydrous gel, serum, or dispersion of vesicles, colloid. These compositions may also be in the form of creams, suspensions or powders, suitable for application to the skin, mucous membranes, lips and / or integuments. These compositions may be more or less fluid and have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a serum, an ointment, a cream, a paste, a an ointment, or foam. They can also be in solid form, such as a stick, a patch, or applied to the skin in the form of an aerosol or spray. They can be used as a care product and / or as a make-up product for the skin. These compositions may also be adapted to applications on the scalp and / or the hair, and in particular a shampoo, a conditioner, a styling lotion, a treatment lotion, a cream or a styling gel, a lotion for hair, a mask, etc. The cosmetic composition according to the invention can be used in particular in treatments using an application that is followed or not followed by rinsing, or in the form of shampoo. It can also be in the form of dye or mascara to be applied with a brush or a comb, in particular on eyelashes, eyebrows or hair. These compositions additionally comprise any additive commonly used in the field of application envisaged as well as the adjuvants necessary for their formulation, such as co-solvents (ethanol, glycerol, benzyl alcohol, humectant, etc.), thickeners, diluents, emulsifiers, antioxidants, dyes, sunscreens, pigments, fillers, preservatives, perfumes, odor absorbers, essential oils, trace elements, essential fatty acids, surfactants, film-forming polymers, chemical or mineral filters, moisturizing agents or thermal waters, etc. It is possible, for example, to mention water-soluble polymers of the natural polymer type, such as polysaccharides, or polypeptides, cellulose derivatives of the methylcellulose or hydroxypropylcellulose type, or also synthetic polymers, polaxamers, carbomers, siloxanes, PVAs or PVPs, and in particular polymers sold by Ashland. In all cases, those skilled in the art will ensure that these adjuvants and their proportions are chosen so as not to adversely affect the desirable properties of the composition according to the invention. These adjuvants may, for example, correspond to 0.01 to 20% of the total weight of the composition. When the composition of the invention is an emulsion, the fatty phase can represent from 5 to 80% by weight and preferably from 5 to 30% by weight relative to the total weight of the composition. The emulsifiers and co-emulsifiers used in the composition will be chosen from those conventionally used in the field under consideration. For example, they can be used in a proportion ranging from 0.3 to 10% by weight, relative to the total weight of the composition. It is understood that the active ingredient according to the invention can be used alone or in combination with at least one other active ingredient in a cosmetic composition. Advantageously, the compositions that may be used according to the invention may furthermore comprise various active principles intended, in particular, for the prevention and / or treatment of disorders associated with photoaging. Thus, the composition according to the invention can associate, with the active principle according to the invention, other active ingredients promoting its action. For example, it may be added active ingredients having an anti-radical or antioxidant action, selected from vitamin C, vitamin E, coenzyme Q10 and polyphenolic extracts of plants.
On peut citer, de manière non limitative, les classes d'ingrédients suivantes : d'autres principes actifs peptidiques, des extraits de végétaux, des agents cicatrisants, anti-âge, antirides, apaisants, anti-radicalaires, anti-UV, des agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques ou le métabolisme énergétique, des agents hydratants, antibactériens, antifongiques, anti-inflammatoires, anesthésiques, des agents modulants la différenciation, la pigmentation ou la dépigmentation cutanée, des agents stimulants la pousse des ongles ou des cheveux etc. Préférentiellement, on utilisera un agent présentant une activité dans le domaine des antirides, tel qu'un agent anti-radicalaire ou antioxydant, ou un agent stimulant la synthèse de macromolécules dermiques, ou encore un agent stimulant le métabolisme énergétique. Plus particulièrement, le principe actif est choisi parmi les vitamines, les phytostérols, les flavonoïdes, la DHEA et/ou un de ses précurseurs ou un de ses dérivés chimiques ou biologiques, un inhibiteur de métalloprotéinase, ou un rétinoïde. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, l'invention a pour objet une 30 composition cosmétique synergique, comprenant un extrait peptidique de lin en tant que premier principe actif, et du coenzyme Q10 en tant que deuxième principe actif. Avantageusement, les inventeurs ont mis en évidence que l'emploi simultané dans une composition de coenzyme Q10 associé à l'extrait de lin selon l'invention permet une augmentation significativement plus importante du niveau de coenzyme Q10 dans les cellules, comparé à l'emploi du coenzyme Q10 seul ou de l'extrait de lin selon l'invention. Cet effet synergique est particulièrement avantageux dans une composition cosmétique. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait de lin selon l'invention est présent dans la composition synergique selon l'invention à une concentration comprise entre 0,0001 % à 20 % environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,05 % et 5 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, le coenzyme Q10 est présent dans la composition synergique selon l'invention à une concentration comprise entre 0,0001 % à 5 % environ par rapport au poids total de la composition finale, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 % et 0,3 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Un troisième aspect de l'invention concerne l'utilisation d'un extrait de lin tel que décrit précédemment, ou d'une composition le comprenant, pour augmenter l'activité ou la synthèse d'enzyme transprényl transférase et/ou augmenter la concentration de la Coenzyme Q10 Binding protéine et/ou augmenter la concentration de coenzyme Q10 dans les cellules de la peau. Dans un mode de réalisation particulier, l'extrait de lin selon l'invention pourra être 20 utilisé avantageusement dans une composition cosmétique destinée à retarder l'apparition des manifestations du vieillissement cutané et, plus spécifiquement, afin de retarder l'apparition des manifestations du vieillissement photo-induit (photo-vieillissement). Par « manifestations cutanées du vieillissement », on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les 25 rides et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, la peau terne et sans éclat ou les taches de pigmentation de la peau, la décoloration des cheveux ou les taches sur les ongles, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, toute dégradation interne de la peau consécutive à une exposition aux 30 rayonnements ultraviolets (UV). L'extrait de lin selon l'invention, ou la composition le comprenant, permettra de lutter, en particulier, contre la perte d'élasticité et de fermeté de la peau.There may be mentioned, in a non-limiting manner, the following classes of ingredients: other peptide active ingredients, plant extracts, cicatrizing, anti-aging, anti-wrinkle, soothing, anti-radical, anti-UV, agents stimulating the synthesis of dermal macromolecules or energy metabolism, moisturizing, antibacterial, antifungal, anti-inflammatory, anesthetic agents, modulating agents differentiation, pigmentation or skin depigmentation, stimulating agents the growth of nails or hair etc. Preferably, use will be made of an agent having an activity in the field of anti-wrinkles, such as an anti-radical agent or antioxidant, or an agent stimulating the synthesis of dermal macromolecules, or an agent stimulating energy metabolism. More particularly, the active ingredient is chosen from vitamins, phytosterols, flavonoids, DHEA and / or one of its precursors or one of its chemical or biological derivatives, a metalloproteinase inhibitor, or a retinoid. In a particularly preferred embodiment, the invention relates to a synergistic cosmetic composition, comprising a peptide extract of flax as the first active ingredient, and coenzyme Q10 as the second active ingredient. Advantageously, the inventors have demonstrated that the simultaneous use in a coenzyme Q10 composition associated with the flax extract according to the invention allows a significantly greater increase in the level of coenzyme Q10 in the cells, compared to the use of Coenzyme Q10 alone or linseed extract according to the invention. This synergistic effect is particularly advantageous in a cosmetic composition. According to an advantageous embodiment of the invention, the flax extract according to the invention is present in the synergistic composition according to the invention at a concentration of between about 0.0001% and about 20%, and preferably at a concentration of between between about 0.05% and 5% relative to the total weight of the final composition. According to a particularly advantageous embodiment of the invention, the coenzyme Q10 is present in the synergistic composition according to the invention at a concentration of between 0.0001% and about 5% relative to the total weight of the final composition, and preferentially at a concentration of between 0.01% and 0.3% relative to the total weight of the final composition. A third aspect of the invention relates to the use of a flax extract as described above, or a composition comprising it, for increasing the activity or synthesis of transprenyl transferase enzyme and / or increasing the concentration of Coenzyme Q10 Binding protein and / or increase the concentration of coenzyme Q10 in skin cells. In a particular embodiment, the flax extract according to the invention may advantageously be used in a cosmetic composition intended to delay the onset of the manifestations of cutaneous aging and, more specifically, in order to delay the onset of the manifestations of skin aging. photo-induced aging (photo-aging). By "cutaneous manifestations of aging" is meant any changes in the external appearance of the skin and skin appendages due to aging, such as, for example, fine lines and wrinkles, wilted skin, soft skin, thinned skin, lack of elasticity and / or tone of the skin, dull and lackluster skin or spots of skin pigmentation, discoloration of the hair or spots on the nails, but also any internal change in the skin that does not This does not necessarily translate into a modified external appearance, such as, for example, any internal degradation of the skin as a result of exposure to ultraviolet (UV) radiation. The flax extract according to the invention, or the composition comprising it, will make it possible, in particular, to combat the loss of elasticity and firmness of the skin.
L'extrait de lin selon l'invention permet de protéger la peau et les phanères contre tous types d'agressions extérieures. L'utilisation de l'extrait de lin, ou d'une composition le comprenant, va permettre à la peau et aux phanères d'être protégés et de mieux résister aux stress environnementaux.The flax extract according to the invention makes it possible to protect the skin and integuments against all types of external aggressions. The use of the flax extract, or a composition comprising it, will allow the skin and the integuments to be protected and to better withstand environmental stresses.
On entend, par l'expression « agression extérieure », les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums. Par pollution, on entend aussi bien la pollution « extérieure », due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution « intérieure » qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldehyde), ou bien encore la fumée de cigarette. L'invention se rapporte encore à l'utilisation dans une composition cosmétique, d'un extrait de lin tel que décrit précédemment, l'extrait de lin, ou la composition le comprenant, étant destiné à augmenter la synthèse d'ATP intracellulaire des cellules de la peau. L'invention a également pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique, d'un extrait de lin tel que décrit précédemment, l'extrait de lin, ou la composition le comprenant, étant destiné à prévenir les dommages causés à la peau par une exposition au soleil. L'invention se rapporte encore à l'utilisation dans une composition cosmétique, d'un extrait de lin tel que décrit précédemment, l'extrait de lin, ou la composition le comprenant, étant destiné à protéger la peau des dommages causés par les radicaux libres. Selon un quatrième aspect, l'invention consiste encore en un procédé de traitement cosmétique, destiné à stimuler les défenses et à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à retarder l'apparition des manifestations du vieillissement cutané, caractérisé par l'application sur la peau ou les phanères à traiter d'un extrait de lin selon l'invention, ou d'une composition le comprenant. L'invention consiste encore en un procédé de traitement cosmétique destiné à donner un aspect plus sain à la peau et à améliorer l'éclat et la radiance du teint, caractérisé par l'application sur la peau à traiter d'un extrait de lin selon l'invention, ou d'une composition 30 le comprenant. Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif.The expression "external aggression" means the aggressions that the environment can produce. By way of example, mention may be made of aggressions such as pollution, UV, or irritating products such as surfactants, preservatives or perfumes. Pollution is understood to mean both "external" pollution, due for example to diesel particles, ozone or heavy metals, and "internal" pollution, which may be due in particular to the solvent emissions of paints, glues , or wallpaper (such as toluene, styrene, xylene or benzaldehyde), or even cigarette smoke. The invention also relates to the use in a cosmetic composition of a flax extract as described above, the flax extract, or the composition comprising it, being intended to increase the synthesis of intracellular ATP of the cells. skin. The subject of the invention is also the use in a cosmetic composition of a linen extract as described above, the flax extract, or the composition comprising it, being intended to prevent damage to the skin caused by Sun exposure. The invention also relates to the use in a cosmetic composition of a linen extract as described above, the flax extract, or the composition comprising it, being intended to protect the skin from damage caused by the radicals. free. According to a fourth aspect, the invention also consists of a cosmetic treatment method, intended to stimulate the defenses and to protect the skin and the integuments from external aggressions and to delay the appearance of the manifestations of skin aging, characterized by the application on the skin or integuments to be treated with a flax extract according to the invention, or a composition comprising it. The invention also consists of a cosmetic treatment method intended to give a healthier appearance to the skin and to improve the radiance and radiance of the complexion, characterized by the application on the skin to be treated of a linen extract according to the invention, or a composition comprising it. Particular embodiments of this cosmetic treatment method also result from the foregoing description. Other advantages and characteristics of the invention will appear better on reading the examples given by way of illustration and not limitation.
Exemple 1 : Préparation de principe actif à partir de lin (Linum usitatissimum L) Dans une première étape, 1 kg de graines de lin (Linum usitatissimum L.) décortiquées sont broyées dans un broyeur à céréales. La farine obtenue (1 kg) est mise en présence de 10 litres d'hexane. Le mélange est ensuite agité 2 heures à température ambiance afin de procéder à une délipidation de la matière première. Après filtration et séchage sous vide, la poudre obtenue est mise en suspension dans 800 ml d'une solution aqueuse alcaline (dilution au 1/10) pH 10 contenant 1 % de polyvinylpolypyrrolidone ( Polyclar V ISP). Ce mélange est maintenu sous agitation pendant 2 heures à température ambiante pour permettre la solubilisation des fractions solubles. Après cette phase d'extraction le milieu est clarifié par centrifugation puis filtré sur filtre à plaque. Ce filtrat qui contient les fractions solubles du lin est ensuite soumis à une précipitation des protéines en faisant varier la force ionique en milieu neutre ou acide, ce qui permet d'éliminer les composants glucidiques solubles, les lipides et les acides nucléiques le milieu est amené à pH 3,5. Le surnageant est éliminé et le précipité est ensuite lavé à l'aide d'éthanol puis le solvant est évaporé par séchage sous vide. A ce stade, on obtient environ 50 grammes de poudre de couleur jaune clair d'extrait protéique brut contenant : - Protéines : 78 % - Glucides : 20 % - Lipides < 2 % Le précipité riche en protéines est remis en solution dans 500 grammes d'eau. L'extrait protéique brut est alors soumis à une série d'hydrolyses enzymatiques ménagées et sélectives en présence de 0,5 % de PVPP (Polyclar V) et d'endopeptidases à cystéine (2 g/1 bromélaine et 2 g/1 alcalase). Après 2 heures de réaction à 50°C puis désactivation du cocktail enzymatique pendant 2 heures à 80°C, l'hydrolysat est filtré sur plaques de porosité décroissante puis sur cartouche stérilisante (0,2 pm). On obtient alors un hydrolysat de couleur claire, titrant de 15 à 30 g/1 d'extrait sec, qui est alors dilué de telle sorte que la concentration en composés peptidiques déterminée par la méthode de Lowry, soit comprise entre 0,1 et 5 g/1 et préférentiellement entre 1,5 et 3,5 g/l.Example 1 Preparation of Active Ingredient from Flax (Linum usitatissimum L) In a first step, 1 kg of peeled linseed (Linum usitatissimum L.) is crushed in a cereal mill. The flour obtained (1 kg) is brought into contact with 10 liters of hexane. The mixture is then stirred for 2 hours at room temperature in order to proceed to delipidation of the raw material. After filtration and drying under vacuum, the powder obtained is suspended in 800 ml of an aqueous alkaline solution (dilution 1/10) pH 10 containing 1% polyvinylpolypyrrolidone (Polyclar V ISP). This mixture is stirred for 2 hours at room temperature to allow the solubilization of the soluble fractions. After this extraction phase, the medium is clarified by centrifugation and then filtered through a plate filter. This filtrate which contains the soluble fractions of flax is then subjected to protein precipitation by varying the ionic strength in neutral or acidic medium, which eliminates soluble carbohydrate components, lipids and nucleic acids. at pH 3.5. The supernatant is removed and the precipitate is then washed with ethanol and the solvent is evaporated by drying in vacuo. At this stage, about 50 grams of light yellow powder of crude protein extract containing: - Proteins: 78% - Carbohydrates: 20% - Lipids <2% The precipitate rich in proteins is dissolved in 500 grams of protein. 'water. The crude protein extract is then subjected to a series of controlled and selective enzyme hydrolyses in the presence of 0.5% PVPP (Polyclar V) and cysteine endopeptidases (2 g / l bromelain and 2 g / 1 alkalase). . After 2 hours of reaction at 50 ° C and then deactivation of the enzyme cocktail for 2 hours at 80 ° C., the hydrolyzate is filtered on plates of decreasing porosity then on sterilizing cartridge (0.2 μm). A light-colored hydrolyzate, titrating with 15 to 30 g / l of dry extract, is then obtained, which is then diluted so that the concentration of peptide compounds determined by the Lowry method is between 0.1 and 5. g / 1 and preferably between 1.5 and 3.5 g / l.
L'analyse physico-chimique de l'hydrolysat végétal, qui constitue le principe actif, montre que son pH est compris entre 4 et 5, et préférentiellement entre 4 et 4,5. L'extrait de lin selon l'invention a un extrait sec titrant entre 1 et 8 g/1, et de manière préférée entre 0,1 et 5 g/1, et comprend entre 0,1 et 5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec et entre 0,1 et 2 g/1 de sucres en poids d'extrait sec, préférentiellement l'extrait de lin selon l'invention est dilué pour contenir entre 1,5 et 3,5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec et entre 0,1 et 0,3 g/1 de sucres en poids d'extrait sec. Exemple 2 : Analyse des composés peptidiques de l'extrait de lin selon l'exemple 1 Les poids moléculaires des composés peptidiques de l'extrait obtenu selon l'exemple 1 ont été évalués par Chromatographie d'Exclusion Stérique. Protocole : Un extrait de lin obtenu selon l'exemple 1 est analysé par chromatographie liquide 10 Agilent HP1200 pilotée par ChemStation. Le tableau suivant détaille les caractéristiques de cette analyse : Colonne TOSOH BIOSCIENCE TSKGEL SuperSW 2000 Phase stationnaire Gel de silice greffé avec des groupements hydrophiles Taille de la colonne 4.6 mm I.D x 30 cm Taille des particules 4 gm Taille des pores 125 À Phase mobile 0.1 mol/L Na2SO4 +0.05 % NaN3 dans 0.1 M de tampon phosphate pH= 6.7 Détection UV 280 nm Débit de la phase mobile 0.175 mL/min Solution de lavage 0.5 mol/L Na2SO4, pH = 2.7 Température 25°C Volume d'injection 10 g., 15 Résultats : On observe que les poids moléculaires sont les suivants : 75.1 % des composés peptidiques de l'extrait de lin ont un poids moléculaire compris entre 1,5 et 2,5 kDa. 20 % des composés peptidiques de l'extrait de lin ont un poids moléculaire inférieur à 1,5 kDa. Conclusion : L'extrait de lin selon l'exemple 1 est composé de peptides de faible poids moléculaire essentiellement inférieur à 2,5 kDa. Exemple 3 : Mise en évidence de l'effet activateur de l'extrait de lin selon l'exemple 1 sur l'expression du coenzyme 010 Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'extrait de lin selon l'exemple 1 sur l'expression du Coenzyme Q10. Pour cela, le taux intracellulaire de Coenzyme Q10 a 15 été évalué par Chromatographie Liquide Haute Performance (CLHP). Protocole : Des cellules HaCaT (Human adult low Calcium Temperature keratinocytes) sont traitées deux fois par jour avec l'extrait de lin selon l'exemple 1 à 1 % pendant 24 heures. Les 20 cellules sont ensuite lavées trois fois avec du PBS et détachées du support de culture au moyen de 200 mg/L de trypsine -EDTA pendant 10 minutes à 37°C et 5 % CO2. La trypsine est neutralisée avec du milieu de culture et la suspension cellulaire est centrifugée deux fois à 9168 RCF à 4°C pendant 10 minutes. Le culot cellulaire est alors dissout dans 700 d'un mélange hexane/ alcool isopropylique (5:2) et subit trois cycles de : 25 congélation/décongélation, sonication (10 secondes, 130 Watt, 20 KHz) et centrifugation à 9168 RCF à 4°C pendant 10 minutes. Le surnageant est récupéré puis évaporé. Après évaporation totale, 200 itL d'alcool isopropylique sont ajoutés et l'échantillon est analysé en CLHP. Un calibrage est réalisé en utilisant du Coenzyme Q10 commercial dissout dans de l'alcool isopropylique (Prolab). 30 Résultats : On observe une nette augmentation de 40 % du taux de Coenzyme Q10 dans les cellules traitées par l'extrait de lin selon l'exemple 1 pendant 24 heures.The physicochemical analysis of the vegetable hydrolyzate, which constitutes the active ingredient, shows that its pH is between 4 and 5, and preferably between 4 and 4.5. The flax extract according to the invention has a solids content of between 1 and 8 g / l, and preferably between 0.1 and 5 g / l, and comprises between 0.1 and 5 g / l of peptide compounds. by weight of dry extract and between 0.1 and 2 g / l of sugars by weight of solids, preferably the flax extract according to the invention is diluted to contain between 1.5 and 3.5 g / 1 of peptide compounds by weight of solids and between 0.1 and 0.3 g / 1 of sugars by weight of solids. EXAMPLE 2 Analysis of the Peptide Compounds of the Linseed Extract According to Example 1 The molecular weights of the peptide compounds of the extract obtained according to Example 1 were evaluated by Steric Exclusion Chromatography. Protocol: A flax extract obtained according to Example 1 is analyzed by Agilent HP1200 liquid chromatography driven by ChemStation. The following table details the characteristics of this analysis: Column TOSOH BIOSCIENCE TSKGEL SuperSW 2000 Stationary phase Silica gel grafted with hydrophilic groups Column size 4.6 mm ID x 30 cm Particle size 4 gm Pore size 125 At Mobile phase 0.1 mol / L Na2SO4 +0.05% NaN3 in 0.1 M phosphate buffer pH = 6.7 UV detection 280 nm Flow rate of the mobile phase 0.175 mL / min Wash solution 0.5 mol / L Na2SO4, pH = 2.7 Temperature 25 ° C Injection volume 10 Results: It is observed that the molecular weights are as follows: 75.1% of the peptide compounds of the flax extract have a molecular weight of between 1.5 and 2.5 kDa. 20% of the peptide compounds of the flax extract have a molecular weight of less than 1.5 kDa. Conclusion: The flaxseed extract according to Example 1 is composed of peptides of low molecular weight essentially less than 2.5 kDa. EXAMPLE 3 Demonstration of the Activating Effect of Linseed Extract According to Example 1 on the Expression of Coenzyme 010 The aim of this study is to determine the influence of linseed extract according to the example 1 on the expression of Coenzyme Q10. For this, the intracellular level of Coenzyme Q10 was evaluated by high performance liquid chromatography (HPLC). Protocol: HaCaT (Human adult low calcium temperature keratinocytes) cells are treated twice daily with the flaxseed extract according to Example 1 at 1% for 24 hours. The cells are then washed three times with PBS and detached from the culture medium using 200 mg / L trypsin-EDTA for 10 minutes at 37 ° C and 5% CO 2. The trypsin is neutralized with culture medium and the cell suspension is centrifuged twice at 9168 RCF at 4 ° C for 10 minutes. The cell pellet is then dissolved in 700 of hexane / isopropyl alcohol (5: 2) and undergoes three cycles of: freezing / thawing, sonication (10 seconds, 130 Watt, 20 KHz) and centrifugation at 9168 RCF at 4 ° C for 10 minutes. The supernatant is recovered and then evaporated. After total evaporation, 200 μl of isopropyl alcohol are added and the sample is analyzed by HPLC. Calibration is performed using commercial Coenzyme Q10 dissolved in isopropyl alcohol (Prolab). Results: A marked 40% increase in Coenzyme Q10 level was observed in cells treated with linseed extract according to Example 1 for 24 hours.
Conclusions : L'extrait de lin selon l'exemple 1 stimule l'augmentation du niveau de coenzyme Q10 dans les cellules de la peau. Exemple 4: Mise en évidence de l'effet activateur de l'extrait de lin selon l'exemple 1 sur l'expression de la protéine de liaison du coenzyme Q10 Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'extrait de lin selon l'exemple 1 sur l'expression de la protéine de liaison du Coenzyme Q10. Pour cela, le taux d'expression de la protéine de liaison du Coenzyme Q10 a été évalué par immuno-cytochimie sur des kératinocytes traités pendant 48 heures avec l'extrait de lin selon l'exemple 1 à 1 %, ou sans traitement (contrôle) et inclus en paraffine. Protocole : Des cellules NHK (kératinocytes humains primaires normaux) sont fixées avec du formol à 10 % puis incluses dans de la paraffine. Le bloc cellulaire est ensuite coupé en sections de 4 itm d'épaisseur avec un microtome qui sont ensuite transférées sur une lame. Les coupes sont déparaffinées dans du xylène 100 %, puis réhydratées dans des bains d'alcool successifs : 2 bains d'éthanol (EtOH) 100 % pendant 1 minute, 1 bain d'EtOH 95 % pendant 1 minute, 1 bain d'Et0H 90 % pendant 1 minute et 1 bain d'H20 pendant 5 minutes. Les lames sont plongées dans un tampon d'acide citrique à 0.01 M pH 6 et 20 chauffées dans un four à micro-ondes à 600 Watts, jusqu'à légère ébullition afin de faciliter l'accès de l'anticorps à la protéine d'intérêt. Les coupes sont incubées avec 5 % de BSA pendant 30 minutes, puis avec l'anticorps primaire, un anticorps polyclonal de lapin antiCoenzyme Q10 binding protein B (Abcam ab41997, Cambridge, UK) dilué au 1/200° dans du PBS pendant 1 heure et demie sous agitation et à température ambiante. Après plusieurs 25 lavages au PBS, les coupes sont incubées avec l'anticorps secondaire fluorescent, un anticorps Alexa Fluor 488 anti-lapin (Invitrogen A21206, Fisher) dilué au 1/1000 dans du PBS pendant 1 heure à température ambiante. Les noyaux cellulaires sont marqués avec 0.3 1.IM de 4',6'-diamidino-2-phénylindole (DAPI) (Molecular Probes). Les coupes sont rincées pendant 5 minutes dans du PBS. L'expression de la protéine de liaison du Coenzyme Q10 30 est détectée au moyen d'un microscope à fluorescence (objectif x40).Conclusions: The flax extract according to Example 1 stimulates the increase of the level of coenzyme Q10 in the cells of the skin. EXAMPLE 4 Demonstration of the Activating Effect of the Linseed Extract According to Example 1 on the Expression of the Coenzyme Q10 Binding Protein The aim of this study is to determine the influence of the extract of lin according to Example 1 on the expression of the Coenzyme Q10 binding protein. For this, the expression level of the Coenzyme Q10 binding protein was evaluated by immuno-cytochemistry on keratinocytes treated for 48 hours with the flax extract according to Example 1 at 1%, or without treatment (control ) and included in paraffin. Protocol: NHK cells (normal primary human keratinocytes) are fixed with 10% formalin and then embedded in paraffin. The cell block is then cut into 4-μm thick sections with a microtome which are then transferred to a slide. The sections are deparaffinized in 100% xylene and then rehydrated in successive alcohol baths: 2 100% ethanol (EtOH) baths for 1 minute, 1 95% EtOH bath for 1 minute, 1 EtOH bath. 90% for 1 minute and 1 H 2 O bath for 5 minutes. The slides are immersed in 0.01 M pH 6 citric acid buffer and heated in a 600 Watt microwave oven until light boiling to facilitate access of the antibody to the protein. interest. The sections are incubated with 5% BSA for 30 minutes, then with the primary antibody, a rabbit polyclonal anti-Coenzyme Q10 binding protein B (Abcam ab41997, Cambridge, UK) diluted 1: 200 in PBS for 1 hour. and half with stirring and at room temperature. After several PBS washes, the sections were incubated with the fluorescent secondary antibody, an Alexa Fluor 488 anti-rabbit antibody (Invitrogen A21206, Fisher) diluted 1/1000 in PBS for 1 hour at room temperature. The cell nuclei are labeled with 0.3 μM of 4 ', 6'-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (Molecular Probes). The sections are rinsed for 5 minutes in PBS. Expression of the Coenzyme Q10 binding protein is detected by means of a fluorescence microscope (x40 objective).
Résultats : Les résultats montrent qu'il y a une augmentation de 68.4 % de l'expression de la protéine de liaison du Coenzyme Q10 dans des kératinocytes traités avec l'extrait de lin selon l'exemple 1 à 1 % après 48 heures, en comparaison à des kératinocytes non traités.Results: The results show that there is a 68.4% increase in the expression of the Coenzyme Q10 binding protein in keratinocytes treated with flaxseed extract according to Example 1 at 1% after 48 hours. compared to untreated keratinocytes.
Conclusion : L'extrait de lin selon l'exemple 1 stimule l'expression de la quantité de la protéine de liaison du Coenzyme Q10. Exemple 5 : Mise en évidence de l'effet activateur de l'extrait de lin selon l'exemple 1 sur le taux d'expression des ARN messagers de la transprénvl transférase Le but de cette étude est de déterminer l'influence de l'extrait de lin selon l'exemple 1 sur l'expression de la transprényl transférase (PDSS1/2), qui est l'enzyme principale dans la biosynthèse du Coenzyme Q10 (composée de deux sous unités : PDSS1 et PDSS2). Dans ce but on évalue le taux d'expression de l'ARN messager de PDSS1, par une PCR en temps réel a été réalisée. Protocole : Des cellules NHK sont traitées avec l'extrait de lin à 1 % selon l'exemple 1, deux fois par jour, durant 24 heures ou ne sont pas traitées (contrôle). Afin d'évaluer le taux d'expression de l'ARN messager de PDSS1, il faut isoler les ARNs totaux des kératinocytes en culture, traités ou non par l'extrait de lin selon l'exemple 1. Les ARNs totaux sont ensuite transformés en ADN complémentaires par l'action d'une enzyme transcriptase inverse. Une quantification des ADN complémentaires est ensuite réalisée par PCR en temps réel à l'aide d'un thermocycleur StepOnePlusTm (Applied Biosystems). Cette quantification permet de déterminer le taux d'expression des ARNs messagers de PDSS1. Résultats : On observe une augmentation de 33 % du taux d'expression de l'ARN messager de PDSS1 dans les cellules après 24 heures de traitement avec l'extrait de lin selon l'exemple 1, en comparaison avec les cellules non traitées.Conclusion: The flaxseed extract according to Example 1 stimulates the expression of the amount of the Coenzyme Q10 binding protein. EXAMPLE 5 Demonstration of the Activating Effect of the Linseed Extract According to Example 1 on the Expression Level of the Transprénvl Transferase MRNAs The aim of this study is to determine the influence of the extract of flax according to Example 1 on the expression of transprenyl transferase (PDSS1 / 2), which is the main enzyme in the biosynthesis of Coenzyme Q10 (composed of two subunits: PDSS1 and PDSS2). For this purpose, the expression level of the PDSS1 messenger RNA is evaluated by real-time PCR. Protocol: NHK cells are treated with 1% flaxseed extract according to Example 1, twice daily, for 24 hours or untreated (control). In order to evaluate the level of expression of the PDSS1 messenger RNA, it is necessary to isolate the total RNAs from the keratinocytes in culture, treated or not treated with the flax extract according to Example 1. The total RNAs are then transformed into Complementary DNAs by the action of a reverse transcriptase enzyme. Quantification of the complementary DNAs is then performed by real-time PCR using a StepOnePlusTm thermocycler (Applied Biosystems). This quantification makes it possible to determine the level of expression of the messenger RNAs of PDSS1. Results: A 33% increase in the level of PDSS1 messenger RNA expression was observed in the cells after 24 hours of treatment with the flax extract according to Example 1, in comparison with the untreated cells.
Conclusion : L'extrait de lin selon l'exemple 1 stimule le taux d'expression de l'ARN messager codant pour PDSS1, dans des kératinocytes humains normaux. Exemple 6 : Evaluation de l'effet protecteur de l'extrait de lin selon l'exemple 1 vis- à-vis des dommages oxydatifs Le but de cette étude est de déterminer l'effet protecteur de l'extrait de lin selon l'exemple 1 vis-à-vis de cellules NHK soumises à un stress oxydatif provoqué par de l'eau oxygénée (H202) à 2 mM, par des rayonnements UVB ou par un agent chimique, la Roténone à liaM. Pour évaluer les dommages oxydatifs subis par les cellules, une quantification du taux d'ions superoxyde est réalisée. Pour cela, le réactif MitoSOXTM Red mitochondrial superoxide indicator (Invitrogen) est utilisé en tant que dérivé cationique de dihydroéthidium conçu pour la détection des ions superoxydes dans les mitochondries des cellules vivantes.Conclusion: The flaxseed extract according to Example 1 stimulates the level of expression of the messenger RNA coding for PDSS1 in normal human keratinocytes. Example 6 Evaluation of the Protective Effect of Linseed Extract According to Example 1 with Respect to Oxidative Damage The aim of this study is to determine the protective effect of flaxseed extract according to the example 1 against NHK cells subjected to oxidative stress caused by 2 mM oxygenated water (H 2 O 2), UVB radiation or a chemical agent, Rotinone at 1M. To evaluate the oxidative damage to the cells, a quantification of the superoxide ion level is performed. For this, the MitoSOXTM Red mitochondrial superoxide indicator reagent (Invitrogen) is used as a cationic derivative of dihydroethidium designed for the detection of superoxide ions in the mitochondria of living cells.
Protocole : Des NHK en culture ont été mis en présence de l'extrait de lin selon l'exemple 1 à 1 %, pendant 24 heures. Les cellules sont ensuite soumises à différents stress oxydatifs : - Les NHK sont mis en contact avec une solution d' H202 à 2 mM pendant 30 minutes. - Ou les NHK sont irradiés avec des rayonnements UVB à 75 mJ/cm2 dans du PBS. - Ou les NHK sont mis en contact avec une solution de Roténone à 1 MM pendant 4 heures. Après chaque stress, les cellules sont incubées à 37°C et 5 % CO2 pendant 1 heure avec du milieu de culture. Des contrôles non traités et non soumis au stress oxydatif sont réalisés. La solution de MitoSOXTM Red mitochondrial superoxide indicator à 5g1VI est appliquée sur les cellules pendant 10 minutes à 37°C. Les cellules sont lavées trois fois avec du PBS et fixées avec du formaldéhyde à 3,7 % (Sigma Aldrich, USA) pendant 10 minutes à température ambiante sous agitation douce et à l'abri de la lumière. Les noyaux cellulaires sont marqués avec 0.3 11M de 4',6'-diamidino-2-phénylindole (DAPI) (Molecular Probes). Les cellules sont rinçées pendant 5 minutes dans du PBS. Le taux d'ions superoxydes est détecté par immuno-fluorescence au moyen d'un microscope (objectif 40x), puis quantifié.30 Résultats : Un traitement préalable avec l'extrait de lin à 1 % selon l'exemple diminue la production d'ions superoxydes après un stress oxydatif (diminution de 38,2 % après un stress H202, 36,1 % après un stress aux rayonnements UVB et 62,7 % après un stress à la Roténone). Conclusion : L'extrait de lin selon l'exemple 1 protège efficacement les cellules cutanées contre les dommages oxydatifs provoqués par de l'eau oxygénée, des rayonnements UVB ou par le 10 produit chimique Roténone. Exemple 7 : Evaluation de l'effet synergique de l'extrait de lin selon l'exemple 1 avec le Coenzyme 010 Le but de cette étude est de déterminer l'effet synergique de l'extrait de lin selon l'exemple 1, avec le Coenzyme Q10 vis-à-vis de la quantité intracellulaire de protéine de 15 liaison du Coenzyme Q10. Protocole : Des biopsies de peau humaine sont maintenues en culture ex vivo, puis traitées, une fois par jour pendant 24 heures, avec 20 !il d'une solution à 1 % de l'extrait de lin selon 20 l'exemple 1 et/ou 20 Ill d'une solution à 1 p,M de Coenzyme Q10 purifié (Sigma), ou non traitées. Les biopsies de peau sont ensuite fixées puis inclues en paraffine après passage dans un automate Shandon Hypercenter XP (Shandon, UK). Les biopsies de peau inclues en paraffine sont ensuite coupées en sections de 4 iim d'épaisseur avec un microtome et sont 25 ensuite transférées sur une lame. Les coupes sont déparaffinées dans du xylène 100 %, puis réhydratées dans des bains d'alcool successifs: Deux bains d'éthanol (EtOH) 100 % pendant 1 minute, 1 bain d'EtOH 95 % pendant 1 minute, 1 bain d'EtOH 90 % pendant 1 minute et 1 bain d'H20 pendant 5 minutes. Les lames sont plongées dans un tampon d'acide citrique à 0,01 M pH 6 et chauffées jusqu'à légère ébullition afin de faciliter l'accès de 30 l'anticorps à la protéine d'intérêt. Les coupes sont incubées avec 5 % de BSA pendant 30 minutes, puis avec l'anticorps primaire, un anticorps polyclonal de lapin anti-Coenzyme Q10 binding protein B (Abcam ab41997, Cambridge, UK) dilué au 1/200 dans du PBS pendant 1 heure et demie sous agitation et à température ambiante. Après plusieurs lavages au PBS, les coupes sont incubées avec l'anticorps secondaire fluorescent, un anticorps Alexa Fluor 488 anti-lapin (Invitrogen A21206, Fisher) dilué au 1/1000 dans du PBS pendant 1 heure à température ambiante. Les noyaux cellulaires sont marqués avec 0,3 1.1M de 4',6'-diamidino-2-phénylindole (DAPI) (Molecular Probes). Les lames sont rincées pendant 5 minutes dans du PBS. L'expression de la protéine de liaison du Coenzyme Q10 est évaluée au moyen d'un microscope à fluorescence (objectif 20x). Les images obtenues sont converties en niveaux de gris puis analysées par le logiciel Image-Pro Analyzer 6.3 (MediaCybernetics, Inc.) en termes d'intensité et nombre de pixels. Enfin l'analyse est complétée par des analyses statistiques. Résultats : La quantification de la fluorescence présente sur les coupes de peau montre que les biopsies de peau traitées avec l'association de l'extrait de lin selon l'exemple 1 et du Coenzyme Q10 présentent un taux de fluorescence supérieur (+77 %), très significatif statistiquement, en comparaison avec les biopsies de peau non traitées. De plus, l'augmentation obtenue avec l'association de l'extrait de lin et du Coenzyme Q10 est plus élevée que la somme de l'augmentation de l'expression de la protéine de liaison du Coenzyme Q10 par un traitement avec l'extrait de lin selon l'exemple 20 1 seul (+47 %) ou par le Coenzyme Q10 purifié seul (+9 %). Conclusion : Un effet synergique sur l'expression de la protéine de liaison du Coenzyme Q10 est obtenu en associant l'extrait de lin selon l'exemple 1 avec le coenzyme Q10 purifié sur des 25 biopsies de peau humaine.Protocol: NHK in culture were brought into contact with the extract of flax according to Example 1 at 1% for 24 hours. The cells are then subjected to various oxidative stresses: The NHKs are brought into contact with a solution of H 2 O 2 at 2 mM for 30 minutes. Or NHKs are irradiated with UVB radiation at 75 mJ / cm 2 in PBS. Or NHKs are contacted with a 1M Rotenone solution for 4 hours. After each stress, the cells are incubated at 37 ° C. and 5% CO 2 for 1 hour with culture medium. Untreated and non-oxidative stress controls are performed. The MitoSOXTM Red mitochondrial superoxide indicator solution at 5g1VI is applied to the cells for 10 minutes at 37 ° C. The cells are washed three times with PBS and fixed with 3.7% formaldehyde (Sigma Aldrich, USA) for 10 minutes at room temperature with gentle shaking and protected from light. The cell nuclei are labeled with 0.3 μM 4 ', 6'-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (Molecular Probes). The cells are rinsed for 5 minutes in PBS. The level of superoxide ions is detected by immunofluorescence by means of a microscope (objective 40x), then quantified. Results: Pretreatment with 1% linseed extract according to the example decreases the production of superoxide ions after oxidative stress (38.2% decrease after H202 stress, 36.1% after UVB radiation stress and 62.7% after Rotenone stress). Conclusion: The flaxseed extract according to Example 1 effectively protects the skin cells against oxidative damage caused by oxygenated water, UVB radiation or by the chemical Rotenone. EXAMPLE 7 Evaluation of the Synergistic Effect of the Linseed Extract According to Example 1 with Coenzyme 010 The aim of this study is to determine the synergistic effect of the flax extract according to Example 1, with the Coenzyme Q10 with respect to the intracellular amount of Coenzyme Q10 binding protein. Protocol: Human skin biopsies are maintained in culture ex vivo, then treated, once a day for 24 hours, with 20 μl of a 1% solution of the flax extract according to Example 1 and / or 20 μl of a 1 μM solution of purified Coenzyme Q10 (Sigma), or untreated. Skin biopsies are then fixed and then paraffin-embedded after passage through a Shandon Hypercenter XP (Shandon, UK). The paraffin-embedded skin biopsies are then cut into 4 micron thick sections with a microtome and then transferred to a slide. The sections are deparaffinized in 100% xylene and then rehydrated in successive alcohol baths: two 100% ethanol (EtOH) baths for 1 minute, 1 95% EtOH bath for 1 minute, 1 EtOH bath 90% for 1 minute and 1 H 2 O bath for 5 minutes. The slides are immersed in 0.01 M pH 6 citric acid buffer and heated to gentle boiling to facilitate access of the antibody to the protein of interest. The sections are incubated with 5% BSA for 30 minutes and then with the primary antibody, a polyclonal rabbit anti-Coenzyme Q10 binding protein B (Abcam ab41997, Cambridge, UK) diluted 1/200 in PBS for 1 hour. 1.5 hours with stirring and at room temperature. After several washings with PBS, the sections are incubated with the fluorescent secondary antibody, an Alexa Fluor 488 anti-rabbit antibody (Invitrogen A21206, Fisher) diluted 1/1000 in PBS for 1 hour at room temperature. The cell nuclei are labeled with 0.3 μM of 4 ', 6'-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (Molecular Probes). The slides are rinsed for 5 minutes in PBS. The expression of the Coenzyme Q10 binding protein is evaluated by means of a fluorescence microscope (20x objective). The resulting images are converted to grayscale and analyzed by the Image-Pro Analyzer software 6.3 (MediaCybernetics, Inc.) in terms of intensity and number of pixels. Finally, the analysis is completed by statistical analyzes. Results: The quantification of the fluorescence present on the skin sections shows that the skin biopsies treated with the combination of the flax extract according to Example 1 and Coenzyme Q10 exhibit a higher fluorescence level (+77%). , very significantly statistically, in comparison with untreated skin biopsies. In addition, the increase obtained with the combination of linseed extract and Coenzyme Q10 is greater than the sum of the increased expression of Coenzyme Q10 binding protein by treatment with the extract. of linseed according to Example 1 alone (+47%) or by purified Coenzyme Q10 alone (+ 9%). Conclusion: A synergistic effect on the expression of the Coenzyme Q10 binding protein is obtained by combining the flax extract according to Example 1 with purified coenzyme Q10 on human skin biopsies.
Exemples: Préparation de compositions 1 - Crème protection solaire: Noms commerciaux I Noms INCI I % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) Qsp 100 Pemulen TR1 Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer 0,40 Glycerine Glycerin 3,00 ROKONSAL MEP Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparaben 1 PHASE B Escalol® 557 Ethylhexyl Methoxycinnamate 7,50 Escalol® 567 Benzophenone-3 3,00 Escalol® 517 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2,00 Myritol 318 Caprylic/Capric Triglyceride 4,00 Emulgade SEV Hydrogenated Palm Glycerides (and) Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol 5,00 Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1,00 PHASE C TEA I Triethanolamine 0,20 I PHASE D Extrait de lin selon l'exemple 1 0,5 Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément entre 70°C et 75°C. La phase B est émulsionnée dans la phase A sous agitation. La phase C est ajoutée, à 45°C, en augmentant l'agitation. La phase D est ensuite additionnée lorsque la température se situe en dessous de 40°C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C sous vive agitation. 2 -Lait après-soleil : Noms commerciaux I Noms INCI I % massique PHASE A Montanov L C14-22 Alcohols (and) C12-20 Alkyl Glucoside 3,00 Waglinol 2559 Cetearyl Isononanoate 4,00 Tegosoft TN C12-15 Alkyl Benzoate 3,00 Huile de Noyaux d'Abricot Prunus Armeniaca (Apricot) Kernel Oil 2,00 Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,00 Abil 350 Dimethicone 1,00 PHASE B Eau déminéralisée I Aqua (Water) I Qsp 100 PHASE C Simulgel EG Sodium 0,4 Acrylate/Acryloyldimethyl Taurate Copolymer (and) Isohexadecane (and) Polysorbate 80 Copolymer (and) Polysorbate 80 PHASE D ROKONSAL MEP Phenoxyethanol (and) 1 Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparaben Germall 115 Imidazolidinyl Urea 0,20 PHASE E Extrait de lin selon l'exemple 1 1 Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément entre 70°C et 75°C. La phase A est émulsionnée dans la phase B sous agitation. La phase C est ajoutée, à 45°C, en augmentant l'agitation. Les phases D et E sont ensuite additionnées lorsque la température se situe en dessous de 40°C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C sous vive agitation. 3 -Crème anti-âge : Noms Noms INCI % commerciaux massique Phase A Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6,00 Squalane Squalane 3,00 Refined Shea Butter Butyrospermum Parkii ( Shea Butter) 2,00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3,00 Amerchol L- 101 Minerai Oil (and) Lanolin Alcohol 2,00 Abil 350 Dimethicone 1,50 BHT BHT 0,01 Phase B Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,25 ROKONSAL MEP Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparaben 1 Phase C Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Glucam E 1 0 Methyl Gluceth-10 1,00 Allantoin Allantoin 0,15 Noms Noms INCI % commerciaux massique Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0,20 Phase D TEA I Triethanolamine I 0,18 Phase E Extrait de lin selon l' exemple 1 1 Coenzyme Q10 0,15 GP4G Water (and) Artemia Extract 1,50 Collaxyl Water (and) Butylene Glycol (and) Hexapeptide-9 3,00 Phase F Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Préparer et fondre la phase A à 65-70°C. Chauffer la phase C à 65-70°C. La phase B est ajoutée à la phase A juste avant d'émulsionner A+B dans C. A environ 45°C, le carbomer est neutralisé par addition de la phase D. La phase E est ensuite additionnée sous légère agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C. La phase F est alors additionnée si souhaité. 4 -Crème protectrice de jour : Noms commerciaux Noms INCI % massique Phase A Emulium Delta Cetyl alcohol (and) Glyceryl Stearate (and) PEG-75 Stearate (and) Ceteth-20 (and) Steareth-20 4,00 Lanette O Cetearyl Alcohol 1,50 D C 200 Fluid/100cs Dimethicone 1,00 DUB 810C Coco Caprylate/Caprate 1,00 DPPG Propylene Glycol Dipelargonate 3,00 DUB DPHCC Dipentaerythrityl Hexacaprylate/Hexacaprate 1,50 Cegesoft PS6 Vegetable Oil 1,00 Vitamine E Tocopherol 0,30 Phase B Eau déminéralisée Aqua qsp 100 Glycerine Glycerin 2,00 Carbopol EDT 2020 Acrylates/C10-30Alkyl Acrylate Crosspolymer 0,15 Keltrol BT Xanthan Gum 0,30 Phase C Sodium Hydroxide (sol.à 10 %) I Sodium Hydroxide I 0,30 Phase D Eau déminéralisée Aqua 5,00 Stay-C 50 Sodium Ascorbyl Phosphate 0,50 Phase E Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 ROKONSAL MEP Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparaben 1 Dekaben CP Chlorphenesin 0,20 Phase F GP4G Water (and) Artemia Extract 1,00 Extrait de lin selon l'exemple 1 1,5 Préparer la phase A et chauffer à 75°C. Préparer la phase B en dispersant le carbopol, puis la gomme xanthane sous agitation. Laisser reposer jusqu'à parfaite homogénéité. Chauffer B à 75°C. A 75°C, émulsionner A dans B sous agitation rotor-stator. Neutraliser avec la phase C sous agitation rapide. Après refroidissement à 40°C, additionner la phase D limpide, puis la phase E (préchaufée à 40°C et homogénéisée jusqu'à parfaite limpidité). Le refroidissement est poursuivi sous agitation légère jusqu'à 25°C et la phase F rajoutée.Examples: Preparation of compositions 1 - Sun protection cream: Trade names I INCI names I% mass PHASE A Demineralised water Aqua (Water) Qs 100 Pemulen TR1 Acrylates / C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer 0.40 Glycerin Glycerin 3.00 ROKONSAL MEP Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparaben 1 PHASE B Escalol® 557 Ethylhexyl Methoxycinnamate 7.50 Escalol® 567 Benzophenone-3 3.00 Escalol® 517 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2.00 Myritol 318 Caprylic / Capric Triglyceride 4.00 Emulgade SEV Hydrogenated Palm Glycerides (and) Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol 5.00 Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1.00 PHASE C TEA I Triethanolamine 0.20 I PHASE D Flaxseed extract Example 1 0.5 Perfume Fragrance qsp Colorant qsp The constituents of phase A and phase B are heated separately between 70 ° C and 75 ° C. Phase B is emulsified in phase A with stirring. Phase C is added at 45 ° C, increasing stirring. Phase D is then added when the temperature is below 40 ° C. Cooling is continued up to 25 ° C with vigorous stirring. 2 -Sun-Sun Milk: Trade Names I INCI Names I% Mass PHASE A Montanov L C14-22 Alcohols (and) C12-20 Alkyl Glucoside 3.00 Waglinol 2559 Cetearyl Isononanoate 4.00 Tegosoft TN C12-15 Alkyl Benzoate 3, 00 Prunus Armeniaca Apricot Kernel Oil (Apricot) Kernel Oil 2.00 Avocado Oil Persea Gratissima (Avocado) Oil 1.00 Abil 350 Dimethicone 1.00 PHASE B Demineralized Water I Aqua (Water) I Qsp 100 PHASE C Simulgel EG Sodium 0.4 Acrylate / Acryloyldimethyl Taurate Copolymer (and) Isohexadecane (and) Polysorbate 80 Copolymer (and) Polysorbate 80 PHASE D ROKONSAL MEP Phenoxyethanol (and) 1 Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparaben Germall 115 Imidazolidinyl Urea 0, PHASE E Flax extract according to Example 1 The constituents of phase A and phase B are separately heated between 70 ° C and 75 ° C. Phase A is emulsified in phase B with stirring. Phase C is added at 45 ° C, increasing stirring. Phases D and E are then added when the temperature is below 40 ° C. Cooling is continued up to 25 ° C with vigorous stirring. 3 -Anti-age Cream: Names INCI Names% commercial mass A Phase Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6.00 Squalane Squalane 3.00 Refined Shea Butter Butyrospermum Parkii (Shea Butter) 2.00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3, 00 Amerchol L- 101 Ore Oil (and) Lanolin Alcohol 2.00 Abil 350 Dimethicone 1.50 BHT BHT 0.01 Phase B Avocado Oil Persea Gratissima (Avocado) Oil 1.25 ROKONSAL MEP Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) ) Ethylparaben (and) Propylparaben 1 Phase C Demineralized water Aqua (Water) qsp Butylene Glycol Butylene Glycol 2.00 Glucam E 1 0 Methyl Gluceth-10 1.00 Allantoin Allantoin 0.15 Names INCI% commercial mass Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0 , Phase D TEA I Triethanolamine I 0.18 Phase E Flax extract according to Example 1 1 Coenzyme Q10 0.15 GP4G Water (and) Artemia Extract 1.50 Collaxyl Water (and) Butylene Glycol (and) Hexapeptide-9 3.00 Phase F Perfume Perfume (Fragrance) qsp Colorant qsp Prepare and melt phase A at 65-70 ° C. Heat phase C at 65-70 ° C. Phase B is added to phase A just before emulsifying A + B in C. At about 45 ° C, the carbomer is neutralized by addition of phase D. Phase E is then added with gentle stirring and cooling is continued up to 25 ° C. Phase F is then added if desired. 4 -Ward Protective Cream: Trade Names INCI Names% by mass Phase A Emulium Delta Cetyl alcohol (and) Glyceryl Stearate (and) PEG-75 Stearate (and) Ceteth-20 (and) Steareth-20 4.00 Lanette O Cetearyl Alcohol 1.50 DC 200 Fluid / 100cms Dimethicone 1.00 DUB 810C Coco Caprylate / Caprate 1.00 DPPG Propylene Glycol Dipelargonate 3.00 DUB DPHCC Dipentaerythrityl Hexacaprylate / Hexacaprate 1.50 Cegesoft PS6 Vegetable Oil 1.00 Vitamin E Tocopherol 0.30 Phase B Demineralized Water Aqua qs 100 Glycerin Glycerin 2.00 Carbopol EDT 2020 Acrylates / C10-30Alkyl Acrylate Crosspolymer 0.15 Keltrol BT Xanthan Gum 0.30 Phase C Sodium Hydroxide (10% sol) I Sodium Hydroxide I 0.30 Phase D Demineralized Water Aqua 5.00 Stay-C 50 Sodium Ascorbyl Phosphate 0.50 Phase E Butylene Glycol Butylene Glycol 2.00 ROKONSAL MEP Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Propylparaben 1 Dekaben CP Chlorphenesin 0.20 Phase GP4G Water (and) Artemia Extract 1.00 Flax extract according to the example 1 1.5 Prepare phase A and heat to 75 ° C. Prepare phase B by dispersing the carbopol, then the xanthan gum with stirring. Let stand until perfectly homogeneous. Heat B at 75 ° C. At 75 ° C., emulsify A in B with rotor-stator stirring. Neutralize with phase C with rapid stirring. After cooling to 40 ° C, add the clear D phase, then the E phase (preheated to 40 ° C and homogenized to perfect clarity). The cooling is continued with gentle stirring to 25 ° C and the F phase added.
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