FR2732219A1

FR2732219A1 - PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF MALARIA BASED ON A MEMBER OF THE CHONDROITINE-GLYCOSAMINOGLYCAN FAMILY

Info

Publication number: FR2732219A1
Application number: FR9503565A
Authority: FR
Inventors: Jurg Gysin; Bruno Pouvelle; Arthur Scherf
Original assignee: Institut Pasteur de Lille
Current assignee: Institut Pasteur de Lille
Priority date: 1995-03-27
Filing date: 1995-03-27
Publication date: 1996-10-04
Anticipated expiration: 2015-03-27
Also published as: AU5337596A; WO1996030026A1; FR2732219B1

Abstract

A pharmaceutical composition for treating or preventing malaria-related complications, characterised in that it contains a physiologically active agent consisting of chondroitin-4-sulphate.

Description

COMPOSITIONS PHARMACEUTIOUES POUR LA PREVENTION ET LE
TRAITEMENT DU PALUDISME. A BASE D'UN MEMBRE DE LA
FAMILLE DES CHONDRO#TINE-GLYCOSAMINOGLYCANES
La présente invention concerne le paludisme, notamment des moyens pour la thérapie ou la prévention du paludisme, et plus particulièrement lorsque l'agent étiologique responsable de la maladie est Plasmodium falciparum.PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR PREVENTION AND CONTROL
TREATMENT OF MALARIA. BASED ON A MEMBER OF THE
FAMILY OF CHONDRO # TINE-GLYCOSAMINOGLYCANES
The present invention relates to malaria, including means for the therapy or prevention of malaria, and more particularly when the etiological agent responsible for the disease is Plasmodium falciparum.

La séquestration des érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum dans le réseau microvasculaire des différents organes joue un rôle essentiel dans la pathogénicité des infections sévères par Plasmodium falciparum. ( I, 2, 3). Une étude histopathologique a, en effet, révélé que des séquestrations de Plasmodium falciparum étaient parfois observées dans la micro-vascularisation cérébrale chez
Saimiri sciures. I'un des primates utilisés de façon fréquente à titre de modèles animaux pour l'étude de l'évolution chez l'homme du paludisme, plus particulièrement des formes de cette maladie induites par des parasites du type
Plasmodium fålaparum. The sequestration of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes into the microvascular network of different organs plays an essential role in the pathogenicity of severe Plasmodium falciparum infections. (I, 2, 3). In fact, a histopathological study revealed that sequestrations of Plasmodium falciparum were sometimes observed in the cerebral microvasculature
Saimiri sawdust. One of the primates frequently used as animal models for the study of the evolution of malaria in man, more particularly the forms of this disease induced by parasites of the type
Plasmodium fålaparum.

fl a en effet été constaté que des complications neurologiques avec issue fatale peuvent se produire chez le primate Saimiri sciureus kariotype 14-7, parasité par différents isolats de P.falåparum et qu'elles peuvent survenir à différents moments de l'évolution parasitaire, sans apparente corrélation avec la durée ou le degré de parasitémie, ce qui est comparable aux observations faites chez l'homme, en particulier lorsque celui-ci est atteint de neuropaludisme ou sujet à des accès pernicieux. It has been found that neurological complications with fatal outcome can occur in the primate Saimiri sciureus kariotype 14-7, parasitized by different isolates of P.falåparum and that they can occur at different times in the parasite evolution, without apparent correlation with the duration or degree of parasitaemia, which is comparable to observations made in humans, particularly when the man is suffering from neuropaludism or subject to pernicious access.

Les études histopathologiques réalisées chez les Saimiri ayant succombé à un accès pernideux ont montré une grande similitude avec celles qui ont été décrites chez l'homme. Nos résultats montrent que les obstructions vasculaires au niveau des microvaisseaux du cerveau sont discontinues et que leur topographie est très variable chez cet hôte, ce qui est similaire aux observations plus récemment faites chez l'homme ayant succombé à un neuropaludisme et celles faites dans le modèle expérimental de paludisme cérébral Macaca mulatta / P.coatnevi.Chez le Saimiri comme chez l'homme, les obstructions vasculaires sont souvent plus importantes et parfois presque exclusivement localisées au niveau du cervelet, entraînant des gênes circulatoires du flux sanguin importantes, qui peuvent expliquer à elles seules l'état comateux et la mort du patient ou de ranimai.Histopathological studies performed in Saimiri having succumbed to pernidous access have shown a great similarity with those described in humans. Our results show that vascular obstructions in the microvessels of the brain are discontinuous and that their topography is highly variable in this host, which is similar to more recent observations in humans who have succumbed to cerebral malaria and those made in the model. cerebral malaria Macaca mulatta / P.coatnevi.In Saimiri, as in humans, vascular obstructions are often more important and sometimes almost exclusively localized in the cerebellum, leading to significant circulatory disorders of blood flow, which may explain they alone the comatose state and the death of the patient or of the animal.

La réactivité de divers types cellulaires avec des érythrocytes infectés par
Plasmodium fålåparum. et la capacité d'un certain nombre d'anticorps monoclonaux décrits dans la littérature (2,11) d'interférer avec cette réactivité, est à l'origine de l'hypothèse déjà formulée que ce processus serait médié, d'une part' par des ligands d'adhérence spécifiques présents à la surface de érytrocytes infectés et, d'autre part, par des récepteurs qui seraient exprimés à la surface des cellules endothéliales (2, 4, 5, 6, 7).The reactivity of various cell types with erythrocytes infected with
Plasmodium fålåparum. and the ability of a number of monoclonal antibodies described in the literature (2, 11) to interfere with this reactivity, is at the origin of the hypothesis already formulated that this process would be mediated, on the one hand by specific adhesion ligands present on the surface of infected erythrocytes and, on the other hand, by receptors that would be expressed on the surface of endothelial cells (2, 4, 5, 6, 7).

L'invention est basée sur l'identification d'un nouveau récepteur d'adhérence qui est exprimé à la surface des cellules endothéliales provenant de micro-vaisseaux de cerveaux de Saimiri et constitué notamment par de la chondroitine-4 sulfate. Dans le cours des expiences qui ont conduit à la présente invention, deux anticorps monoclonaux dirigés contre ce nouveau récepteur ont été développés. Ils se sont révélés capables de bloquer efficacement l'adhérence d'érythrocytes infectés par plusieurs souches du parasite à des cellules endothéliales, que celles-ci soient d'origine cérébrale de Saimiri ou pulmonaire humaine. La capacité de ces anticorps monoclonaux à s'attacher aux cellules endothéliales a également été inhibée de façon spécifique par la chondrnïtine4-sulfate (CSA).De meme, le prétraitement des cellules endothéliales avec la chondroitinase ABC et AC abolit la capacité des érythrocytes infectés à s'attacher à ces cellules endothéliales, d'où la conclusion à laquelle les inventeurs ont abouti, à savoir qu'un récepteur endothélial pour l'adI > ésion des érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum, contenait un membre de la famille des chondroïtine-glycosaminoglycanes, plus particulièrement la chondroïtine-4-sulfate (CSA). The invention is based on the identification of a novel adhesion receptor which is expressed on the surface of endothelial cells from Saimiri brains micro-vessels and consisting in particular of chondroitin-4 sulfate. In the course of the experiments which led to the present invention, two monoclonal antibodies directed against this new receptor have been developed. They have proved to be able to effectively block the adhesion of erythrocytes infected by several strains of the parasite to endothelial cells, whether they are of cerebral origin Saimiri or human lung. The ability of these monoclonal antibodies to attach to endothelial cells has also been specifically inhibited by chondroitin-4-sulfate (CSA). Similarly, pretreatment of endothelial cells with chondroitinase ABC and AC abolishes the ability of infected erythrocytes to to attach to these endothelial cells, hence the conclusion reached by the inventors, namely that an endothelial receptor for the adI> ization of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes, contained a member of the chondroitin-glycosaminoglycan family , more particularly chondroitin-4-sulfate (CSA).

De soit, les inventeurs ont montré que l'administration intramusculaire et orale de la
CSA au singe Saimiri inhibait complètement la cytoadhérence des érythrocytes infectés par Plasmodium falciparum aux cellules endothéliales du cerveau. Of course, the inventors have shown that intramuscular and oral administration of the
CSA in monkey Saimiri completely inhibited the cytoadherence of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes to brain endothelial cells.

L'invention a donc pour objet de disposer de compositions phannaceutiques capables d'inhiber l'adhésion d'érythrocytes infectés par des parasites malariques, plus particulièrement du type Plasmodium falciparum aux cellules endothéliales.The object of the invention is therefore to provide pharmaceutical compositions capable of inhibiting the adhesion of erythrocytes infected with malarial parasites, more particularly of the Plasmodium falciparum type to endothelial cells.

Une telle composition est caractérisée en ce qu'elle contient un agent physiologiquement actif qui entre en compétition avec un récepteur porté par les cellules endothéliales de l'hôte infectable par P.falcipamm et contenant un membre de la famille des chondroïtine-glycosaminoglycanes, notamment de la chondroïtin sulfate, ce récepteur permettant l'adhésion d'érythrocytes, lorsque ceux-ci sont infectés par Plasmodium falciparum, à ces cellules endothéliales.Such a composition is characterized in that it contains a physiologically active agent which competes with a receptor carried by the endothelial cells of the infectable host by P.falcipamm and containing a member of the chondroitin-glycosaminoglycan family, especially of chondroitin sulfate, this receptor allowing the adhesion of erythrocytes, when they are infected with Plasmodium falciparum, to these endothelial cells.

Selon un autre aspect de l'invention, la composition pharmaceutique est caractérisée en ce qu'elle contient un agent physiologiquement actif qui comprend une structure à base de chondroïtine-4-sulfate (CSA).According to another aspect of the invention, the pharmaceutical composition is characterized in that it contains a physiologically active agent which comprises a structure based on chondroitin-4-sulfate (CSA).

Il est entendu que l'expression "chondrnïtine4 sulfate", telle qu'elle est utilisée dans le présent texte, concerne à la fois l'acide chondroltine4 sulfurique sous ses formes acides que ses sels thérapeutiquement acceptables, notamment des sels alcalins ou alcalino-terreux. de cette forme acide.It is understood that the term "chondroitin 4 sulfate" as used herein includes both acidic chondrolinic acid sulfuric acid and its therapeutically acceptable salts, especially alkali or alkaline earth salts. . of this acid form.

Bien que la présence de CSA soit préférée, les inventeurs ont établi que l'inhibition de l'adhérence des érythrocytes infectés au récepteur endothélial est sans doute fonction de la charge de la molécule inhibitrice. Par conséquent, d'autres molécules fonctionnellement analogues à la CSA ayant une distribution de charge similaire au
CSA peuvent également être utilisées. Il va de soi que les groupes réactifs libres, notamment hydroxyle carboxyle libres portés par les motifs saccharidiques contenus dans le groupe chondroitine de ces chondro-ltine4 sulfates peuvent être substitués par des groupes chimiques particuliers, dès lors que ces groupes de substitution n'adhérent pas la capacité des chondroïtine-4 sulfates alors substituées à entrer en compétition avec le récepteur concerné des cellules endothéliales.Although the presence of CSA is preferred, the inventors have established that the inhibition of the adhesion of infected erythrocytes to the endothelial receptor is undoubtedly a function of the charge of the inhibitory molecule. As a result, other molecules functionally analogous to CSA have a similar charge distribution to the
CSA can also be used. It goes without saying that the free reactive groups, in particular the free hydroxyl carboxyl groups carried by the saccharide units contained in the chondroitin group of these chondroitin 4 sulphates, may be substituted by particular chemical groups, provided that these substitution groups do not adhere the ability of the then substituted 4-chondroitin sulfates to compete with the relevant endothelial cell receptor.

De manière préférée, I'agent actif de la composition selon l'invention est un oligomere contenant la structure:

le nombre de motifs monomères contenus dans cet oligomère etant suffisant pour empêcher la fixation de P.falciparum sur le récepteur cellulaire.In a preferred manner, the active agent of the composition according to the invention is an oligomer containing the structure:

the number of monomer units contained in this oligomer being sufficient to prevent the attachment of P. falciparum to the cellular receptor.

Sdon un autre mode particulier de réalisation de l'invention, la composition contient au moins 90 % de CSA des chondroitines sulfates présentes, voire même à l'état pratiquement pur. Mais cela ne constitue pas une condition essentielle. According to another particular embodiment of the invention, the composition contains at least 90% of CSA chondroitin sulphates present, or even in the substantially pure state. But this is not an essential condition.

On peut en effet également avoir recours, pour les applications thérapeutiques sus- indiquées, à des mélanges, par exemple naturels, de chondroîtine sulfates, dès lors qu'une partie au moins de ces chondroltine sulfates seraient constitués de chondroitine4 sulfate. On mentionnera, à titre d'exemples, la composition à base d'acide chondroïtine sulfurique (sel de sodium) commercialisée sous la marque STRUCIwUM (Dictionnaire VIDAL 1993, page 1333, Editions du VIDAL) et utilisée à ce jour en traitement d'appoint des douleurs arthrosiques.It is indeed possible, for the therapeutic applications mentioned above, to use, for example, natural mixtures of chondroitin sulphates, since at least part of these chondroitin sulphates would consist of chondroitin sulphate. By way of example, mention may be made of the composition based on chondroitin sulfuric acid (sodium salt) marketed under the tradename STRUCIwUM (VIDAL Dictionary 1993, page 1333, Editions du VIDAL) and used to date as an adjunct treatment. osteoarthritis pain.

L'invention vise également les compositions décrites cidessus pour le traitement ou la prévention du paludisme, plus particulièrement de complications du paludisme fraisant intervenir la séquestration des parasites du paludisme, notamment de Plasmodium falciparumn de manière encore plus ciblée pour le traitement ou la prévention des accidents pernicieux induits par Plasmodium falciparum, et mettant en jeu l'adhésion des érythrocytes infectés par ce parasite à des cellules endothéliales.On sait, en effet, que ce type d'accident résulte entre autres, de phénomènes qui se rapprochent de ceux caractéristiques des tromboses et cela, plus particulièrement, au niveau de la micro-vascularisation cérébrale ou pulmonaire. Ce même type d'accident est susceptible d'être observé en d'autres localisations, par exemple, au niveau de la micro-vascularisation cardiaque. The invention also relates to the compositions described above for the treatment or the prevention of malaria, more particularly of complications of malaria, which can intervene in the sequestration of malaria parasites, in particular Plasmodium falciparum, even more specifically for the treatment or prevention of accidents. pernicious induced by Plasmodium falciparum, and involving the adhesion of erythrocytes infected by this parasite to endothelial cells.It is known, in fact, that this type of accident results among other things, phenomena that are similar to those characteristic of thrombosis and this, more particularly, at the level of cerebral or pulmonary micro-vascularization. This same type of accident is likely to be observed in other locations, for example, in cardiac micro-vascularization.

II appartient naturellement au clinicien d'adapter en fonction du patient les doses efficaces du principe actif, en particulier de chondröïtineXsulfate, qui doivent lui être administrées soit à des fins de prévention, soit à des fins curatives. A titre d'illustration seulement, on mentionnera que des intervalles appropriés de doses actives calculées sur la base de la chondroltine-4-sulfate, administrables notamment par voie parentérale, sont de 1 à 100 mg/kg de corps, notamment de 5 à 10 mg/kg, par voie intramusculaire et ce à des fins curatives, ces doses pouvant etre de 5 à 10 fois plus faibles lorsqu'elles sont administrées à des fins de prévention.Dans le cas de radministration orale, les doses appropriées sont de l'ordre de 5 fois plus élevées que les doses correspondantes proposées cidessus pour les administrations par voie parentérale.It is of course the responsibility of the clinician to adapt, according to the patient, the effective doses of the active ingredient, in particular chondroitin sulfate, which must be administered to him either for the purpose of prevention or for curative purposes. By way of illustration only, it will be mentioned that appropriate ranges of active doses calculated on the basis of chondroitin-4-sulfate, which can be administered parenterally, are from 1 to 100 mg / kg of body, in particular from 5 to 10 mg / kg, intramuscularly for curative purposes, these doses may be 5 to 10 times lower when administered for prevention.In the case of oral administration, the appropriate doses are 5 times higher than the corresponding doses proposed above for parenteral administration.

D'autres caractéristiques de l'invention apparaitront encore, à l'occasion de la description des essais biologiques qui suivent.Other characteristics of the invention will appear again on the occasion of the description of the biological tests which follow.

Afin d'étudier l'effet des paramètres intervenant dans le phénomène de séquestration de Plasmodium falciparum dans le réseau microvasculaire du cerveau du singe
Saimiri sciureus kariotype 14-7, on a produit deux clones d'anticorps monoclonaux interférant avec la capacité d'érythrocytes infectés par P.fitlciparum à adhérer à civil clones de cellules endothéliales de microvaisseaux du cerveau de Saimiri (CECS), en mettant en oeuvre les techniques décrites dans l'état antérieur de la technique (12) (13).La capacité de ces anticorps monoclonaux, dénommés 1G1 1I1C7 et 4B211B4, et qui se sont révélés réagir de maniere spécifique avec la surface des CECS, a été abolie lorsqu'ils étaient mis en contact avec des cellules endothéliales, en présence de chondroïtine-4-sulfate. Ces anticorps ont la capacité d'inhiber l'adhérence des souches parasitaires de Plasmodium falciparum, Palo-Alto (FUP)1 et IPIJBRE 1 au clone de CECS Sc 1707 (93 à 97 % d'inhibition) et, certes de façon plus variable, (4 à 77 /.) avec d'autres isolats du parasite.To study the effect of the parameters involved in the Plasmodium falciparum sequestration phenomenon in the microvascular network of the monkey brain
Saimiri sciureus kariotype 14-7, two monoclonal antibody clones were produced that interfered with the ability of P. falciparum-infected erythrocytes to adhere to civilian clones of Saimiri brain microvessel endothelial cells (CECS), by implementing the techniques described in the prior art (12) (13). The capacity of these monoclonal antibodies, designated 1G1 1I1C7 and 4B211B4, which have been found to react specifically with the CECS surface, has been abolished when they were brought into contact with endothelial cells in the presence of chondroitin-4-sulphate. These antibodies have the ability to inhibit the adherence of parasitic strains of Plasmodium falciparum, Palo-Alto (FUP) 1 and IPIJBRE 1 to the CECS Sc 1707 clone (93-97% inhibition) and, of course, more variable , (4 to 77 /.) With other isolates of the parasite.

L'évaluation de l'adhérence des anticorps monoclonaux (ac.m) 1G11/1C7 (IgG1) et 4B2/1B4 (1gM) aux CECS a été mise en oeuvre par incubation des CECS confluantes sur lames (12 dots IFA slides) pendant 1 heure avec 1-10 pg(ml de chacun des anticorps monoclonaux. Bien que l'inhibition de I'adhérence des érythrocytes infectés en présence d'un des deux anticorps monoclonaux ait été très efficace, la dissociation des érythrocytes infectés attachés aux CECS n'était, en général, que partielle ( < 20 %), lorsqu'on les utilisait à des doses de 10 Rg d'anticorps monoclonaux (ac.m.yml. Evaluation of the adhesion of the monoclonal antibodies (ac.m) 1G11 / 1C7 (IgG1) and 4B2 / 1B4 (1gM) to the CECS was carried out by incubation of the confluent CECS on slides (12 dots IFA slides) during 1 hour with 1-10 μg (ml of each of the monoclonal antibodies) Although the inhibition of the adhesion of infected erythrocytes in the presence of one of the two monoclonal antibodies was very effective, the dissociation of infected erythrocytes attached to CECS did not occur. was, in general, only partial (<20%), when used at doses of 10 .mu.g of monoclonal antibodies (ac.m.yml.

La réactivité des ac.m. îGîîIîC7 et 4B211B4 avec les CECS a été déterminée par l'appareil "FACScan" commercialisé sous la marque BECKMAN. Les intensités relatives de fluorescence de chacun des clones incubés avec les 2 ac.m. ont été mesurées. L'immunomarquage de CECS par les 2 ac.m., révélés en microscopie électronique à transmission par de l'or collo-ldal, a permis de mettre en évidence la présence de leurs antigènes à la surface des membranes des cellules endothéliales, parmi les micro-villi et pseudopodes.Lorsque l'immunomarquage est pratiqué sur des CECS avec des érythrocytes infectés cytoadhérents, on observe des particules d'or exclusivement aux points de contact entre les membranes des cellules endothéliales et les protubérances (en anglais "knobs") portées par les érythrocytes.The reactivity of ac.m. ## EQU1 ## with CECS was determined by the "FACScan" apparatus marketed under the tradename BECKMAN. The relative fluorescence intensities of each of the clones incubated with the 2 ac.m. have been measured. Immunolabeling of CECS by the 2 ac.m., revealed by electron microscopy with colloidal gold transmission, revealed the presence of their antigens on the surface of endothelial cell membranes, among the micro-villi and pseudopodia.When immunostaining is performed on CECS with cytoadherent infected erythrocytes, gold particles are observed exclusively at the points of contact between the membranes of the endothelial cells and the protrusions (in English "knobs") carried by erythrocytes.

Afin d'analyser la nature du nouveau récepteur d'adhésion, cinq clones de CECS ont été traités avec la trypsine, mais ce traitement n'a pas aboli leur reconnaissance par lGl l/lC7 et 4B2/1B4 aux CECS. Cependant, le traitement de ces clones avec la chondroitinase ABC (lU/ml pendant 60 mn) ou la chondroitinase AC, mais pas avec la chondroitinase B, ont aboli l'adhérence des érythrocytes infectés par Palo
Alto (FUP)1 et IPL/BRE1 presque complètement (86-99 %). Ce résultat montre qu'un membre de la famille des chondroïtine-glycosaminoglycanes, en l'occurrence la chondroïtine4 sulfate (CSA), est impliquée dans l'adhésion des érythrocytes infectés aux cellules endothéliales. Il correspond au nouveau récepteur d'adhérence des érythrocytes infectés. La coincubation de 5x106 érythrocytes infectéslml avec 1 mg/ml de CSA (et pas avec d'autres chondroitine sulfates : CSB ou CSC) sur des
CECS confluantes entraînait environ 50 % d'inhibition d'adhérence des érythrocytes infectés soit par Palo-Alto (FUP)1 soit par IPliBREl, mais n'altérait pas significativement l'adhérence des érythrocytes infectés par le clone TM 284162 (Tableau 1). Des résultats semblables ont été obtenus avec des isolats dérivés des patients ayant un paludisme grave. Deux des six isolats montraient une cytoadhérence prononcée dépendante du CSA, de sorte qu'est établie la présence de la molécule adhérant aux CSA à la surface des érythrocytes infectés.La présence de
CSA sur les CECS a été confirmée par analyse dans rappareil "FACScan" en utilisant l'anticorps monoclonal de souris anti-chondroitine-4-sulfate (MAB 2030, commercialisé par Chemicon International Inc, Temecula, CA 92590) et un séum polytonal anti-chondro"rtine-sulfate de lapin (AB 1918, commercialisé par
Chemicon Inter ional Inc, Temecula, CA 92590).In order to analyze the nature of the new adhesion receptor, five CECS clones were treated with trypsin, but this treatment did not abolish their recognition by lGl 1 / lC7 and 4B2 / 1B4 at CECS. However, treatment of these clones with chondroitinase ABC (1U / ml for 60 min) or chondroitinase AC, but not with chondroitinase B, abolished adherence of Palo infected erythrocytes.
Alto (FUP) 1 and IPL / BRE1 almost completely (86-99%). This result shows that a member of the chondroitin-glycosaminoglycan family, in this case chondroitin sulfate (CSA), is involved in the adhesion of infected erythrocytes to endothelial cells. It corresponds to the new adhesion receptor of infected erythrocytes. The coincubation of 5x106 infected erythrocytes with 1 mg / ml of CSA (and not with other chondroitin sulphates: CSB or CSC) on
Confluent CECS resulted in approximately 50% inhibition of adhesion of infected erythrocytes either by Palo-Alto (FUP) 1 or by IPliBRE1, but did not significantly alter the adhesion of erythrocytes infected with clone TM 284162 (Table 1). Similar results were obtained with isolates derived from patients with severe malaria. Two of the six isolates showed pronounced cytoadherence dependent on CSA, so that the presence of the CSA-adhering molecule on the surface of infected erythrocytes is established.
CSA on CECS was confirmed by analysis in the "FACScan" protocol using mouse anti-chondroitin-4-sulfate monoclonal antibody (MAB 2030, available from Chemicon International Inc., Temecula, CA 92590) and an anti-chondroitin-4-sulfate mouse monoclonal antibody. chondroitin-rabbit sulphate (AB 1918, marketed by
Chemicon International Inc., Temecula, CA 92590).

Afin de déterminer que la CSA est la molécule cible des anticorps monoclonaux lG11/IC7 et 4B211B4, les inventeurs ont effectué des études d'inhibition. En incubant 10 pg de 1G11/1C7 ou 4B2/1B4 avec un excès de 2 mg/ml de CSA,
I'adhérence de ces anticorps à Sc 1707 (un clone de cellules endothéliales du réseau microvasculaire de cerveau de Saimiri qui n'exprimait aucun des récepteurs d'adhérence connus du parasite) était diminuée de manière significative. n se posait ensuite la question de savoir si ces résultats avec CECS pouvaient être étendus aux cellules endothéliales humaines. A cette fin, des cellules endothéliales primo explant ont été obtenues à partir des poumons humains (CEPH). Ces cellules réagissaient avec les ac.m. 1G11/1C7 et 4B2/1B4 et avec des anticorps anti-chondroitine-sulfilte (AB 1918).Enfin, il a été possible d'inhiber de la meme façon l'adhérence d'érythrocytes infectés avec Plasmodium falciparum (souches Palo-Alto/FUP1, IPLtBREI) à ces cellules par la CSA, et par traitement avec le médicament à base de chondroïtine-4-sulfate connu sous la marque STRUCTUM (environ 80 % d'inhibition en présence pour 1 mg/ml du médicament STRUCTUM). L'inoculation des singes avec 50 mg de CSA entraînait une biodisponibilité de CSA, pendant au moins 8 heures, permettant l'inhibition ( > 92 %) de l'adhérence des érythrocytes infectés aux CECS (tableaux 2 et 3).In order to determine that CSA is the target molecule of the monoclonal antibodies lG11 / IC7 and 4B211B4, the inventors have carried out inhibition studies. Incubating 10 μg of 1G11 / 1C7 or 4B2 / 1B4 with an excess of 2 mg / ml of CSA,
Adhesion of these antibodies to Sc 1707 (an endothelial cell clone of the Saimiri brain microvascular network that did not express any of the known adhesion receptors of the parasite) was significantly decreased. The question then arose as to whether these results with CECS could be extended to human endothelial cells. To this end, primo explant endothelial cells were obtained from human lungs (CEPH). These cells reacted with ac.m. 1G11 / 1C7 and 4B2 / 1B4 and with anti-chondroitin-sulfilide antibodies (AB 1918). Finally, it was possible to inhibit in the same way the adhesion of erythrocytes infected with Plasmodium falciparum (Palo-Alto strains / FUP1, IPLtBREI) to these cells by CSA, and by treatment with the drug chondroitin-4-sulfate known under the trademark STRUCTUM (about 80% inhibition in the presence for 1 mg / ml of STRUCTUM drug). Inoculation of monkeys with 50 mg of CSA resulted in CSA bioavailability for at least 8 hours, allowing inhibition (> 92%) of adhesion of infected erythrocytes to CECS (Tables 2 and 3).

L'invention permet ainsi l'obtention de médicaments particulièrement actifs pour prévenir ou traiter les complications neurologiques d'une infection à P.flilciparLmL
En particulier, elle s'adresse à la prévention ou au traitement des phénomènes biochimiques pathologiques qui semblent intervenir en cascade et probablement à la suite des obstructions vasculaires dues à des hématies parasitées séquestrées.The invention thus makes it possible to obtain particularly active medicaments for preventing or treating the neurological complications of a P. falciparum infection.
In particular, it is intended for the prevention or treatment of pathological biochemical phenomena that appear to occur in cascade and probably as a result of vascular obstructions due to sequestered parasitic red blood cells.

L'invention concerne encore des associations ou combinaisons médicamenteuses faisant intervenir le CSA d'une part, et un médicament antipaludique, telle que la quinine ou des médicaments connus sous les marques (à titre d'exemples) wCHLOROQtlINE", "MEFLOQUINE", "AMODIAQUINE", etc...The invention also relates to combinations or combinations of drugs involving CSA on the one hand, and an antimalarial drug, such as quinine or drugs known under the trademarks (as examples) wCHLOROQtlINE "," MEFLOQUINE "," AMODIAQUINE ", etc.

Dans le cas des combinaisons, il apparaîtra immédiatement aux personnes du métier, que les deux constituants peuvent être couplés entre eux, par exemple par l'intermédiaire d'une des fonctions réactives (groupes hydroxyle ou carboxyle) portées par les groupes saccharidiques inclus dans la chondroïtine-4 sulfate et des fonctions amines portees par les médicaments antiparasitaires, du moins lorsqu'ils en comportent. On appréciera que dans ces conditions, la partie du médicament antiparasitaire contribuera à tuer les parasites libérés dans la circulation sanguine, notamment à l'occasion de l'intervention de la partie chondroïtine-4 sulfite dans la compétition entre les érythrocytes infectés et les cellules endothéliales.In the case of combinations, it will immediately appear to those skilled in the art that the two constituents may be coupled together, for example by means of one of the reactive functions (hydroxyl or carboxyl groups) borne by the saccharide groups included in the present invention. chondroitin-4 sulfate and amine functions carried by the antiparasitic drugs, at least when they have them. It will be appreciated that under these conditions, the portion of the pest control drug will contribute to killing the released parasites in the bloodstream, in particular during the intervention of the chondroitin-4 sulfite part in the competition between infected erythrocytes and endothelial cells. .

L'invention n'est nullement limitée à la mise en oeuvre des compositions à base de chondröïtine4 sulfate, à des traitements in vivo. On peut également le mettre en oeuvre à l'extérieur du corps humain, notamment pour une purification extracorporelle du sang, pour le débarrasser des érythrocytes parasités. L'invention concerne donc également un procédé consistant à mettre en contact le sang ou un flux sanguin susceptible de contenir des érythrocytes parasités avec de la chondroïtine-4 sulfate, celle-ci étant de préférence fixée sur un support solide, telle qu'une résine appropriée, par exemple, d'une type commercialisé sous la marque
SEPHADEX.Cette fixation peut être réalisée de toute façon en soi comme, par exemple, par l'intermédiaire de liaisons covalentes entre la résine et la chondroïtine-4 sulfate, étant naturellement entendu que cette liaison doit être telle qu'elle n'interfere pas avec la capacité des groupes chondroïtine4 sulfate à fixer des erythrocytes parasités par P.fiåparum ou des parasites semblables. The invention is in no way limited to the use of compositions based on chondroitin sulfate, in vivo treatments. It can also be used outside the human body, especially for extracorporeal blood purification, to rid it of parasitized erythrocytes. The invention therefore also relates to a method comprising contacting the blood or a blood flow that may contain parasitized erythrocytes with chondroitin-4-sulphate, the latter being preferably fixed on a solid support, such as a resin appropriate, for example, of a type marketed under the brand name
SEPHADEX.This fixation can be carried out anyway in itself as, for example, via covalent bonds between the resin and chondroitin-4 sulfate, it being understood that this connection must be such that it does not interfere with the ability of chondroitin4 sulfate groups to fix erythrocytes parasitized by P.fiåparum or similar parasites.

Tableau I
Inhibition par le CSA de l'adhérence d'érythrocytes infectés par P.falciparum (IRBC) à des cellule, endothéliales de cerveau de Saimiri (SBEC) et de cellules endothéliales de poumon humain (HLEC) prétraitées ou non avec une chondroïtinase ABC

Table I
CSA inhibition of adhesion of P. falciparum-infected erythrocytes (IRBC) to Saimiri brain endothelial cells (SBEC) and human lung endothelial cells (HLEC) pretreated or not with ABC chondroitinase

<tb> <SEP> PRBC/mm2 <SEP> % <SEP> <SEP> inhibition <SEP> par
<tb> <SEP> témoin <SEP> CSA <SEP> Chondroitinsase <SEP> ABC
<tb> <SEP> IPL/BRE1
<tb> <SEP> Sc1707 <SEP> 1313 <SEP> 66 <SEP> + <SEP> 16 <SEP> 99 <SEP> + <SEP> 0
<tb> <SEP> Sc3A4 <SEP> 3859 <SEP> 61 <SEP> + <SEP> 21 <SEP> 98 <SEP> + <SEP> 1
<tb> <SEP> Sc1A4 <SEP> 3346 <SEP> 53+ <SEP> 8 <SEP> 91+4
<tb> <SEP> Sc1D <SEP> 4223 <SEP> 68+ <SEP> 6 <SEP> 92 <SEP> # <SEP> 7 <SEP>
<tb> <SEP> Sc93006/C2 <SEP> 2805 <SEP> 70 <SEP> # <SEP> 17 <SEP> <SEP> 98 <SEP> # <SEP> 1
<tb> <SEP> HLEC <SEP> 4691 <SEP> 94 <SEP> + <SEP> 5 <SEP> 97 <SEP> + <SEP> 1
<tb> <SEP> Palo-Alto(FUP)1
<tb> <SEP> Sc1707 <SEP> 943 <SEP> 82 <SEP> # <SEP> 10 <SEP> <SEP> 99 <SEP> # <SEP> 1
<tb> <SEP> Sc3A4 <SEP> 3105 <SEP> 67 <SEP> + <SEP> 22 <SEP> 94 <SEP> # <SEP> 4 <SEP>
<tb> Sc1A4 <SEP> 3661 <SEP> 58 <SEP> + <SEP> 12 <SEP> 91 <SEP> # <SEP> 3 <SEP>
<tb> <SEP> Sc1D <SEP> 2914 <SEP> 51 <SEP> # <SEP> 16 <SEP> <SEP> 91+4
<tb> <SEP> Sc93006/C2 <SEP> 2527 <SEP> 79+ <SEP> 6 <SEP> 85 <SEP> # <SEP> 4 <SEP>
<tb> <SEP> HLEC <SEP> 5288 <SEP> 95 <SEP> # <SEP> <SEP> 3 <SEP> 93 <SEP> # <SEP> 2
<tb> <SEP> TM284/62
<tb> <SEP> Sc1707 <SEP> 7 <SEP> 73 <SEP> # <SEP> 37 <SEP> 45 <SEP> # <SEP> 63
<tb> <SEP> Sc3A4 <SEP> 512 <SEP> 36+26 <SEP> 13 <SEP> # <SEP> 38 <SEP>
<tb> <SEP> Sc1A4 <SEP> 817 <SEP> 18 <SEP> # <SEP> 36 <SEP> <SEP> -25 <SEP> # <SEP> 55
<tb> <SEP> Sc1D <SEP> 1197 <SEP> 30 <SEP> + <SEP> 27 <SEP> -11 <SEP> + <SEP> 33
<tb> <SEP> Sc93006/C2 <SEP> 3559 <SEP> 20 <SEP> # <SEP> 27 <SEP> <SEP> 28 <SEP> # <SEP> 12
<tb> <SEP> HLEC <SEP> 4440 <SEP> -3 <SEP> # <SEP> 29 <SEP> <SEP> -11 <SEP> # <SEP> 19
<tb>
Inhibition de l'adhérence des IRBC à des SBEC et HLEC, quand ils sont co-incubes avec la CSA (1 g/ml) ou après pré-traitement des SBEC avec la chondroitinase
ABC (1U/ml pendant 60 minutes). Les résultats sont exprimés en % d'inhibition (essais en triple). L'adhérence des IRBC e l'absence de CSA ou de prétraitement avec la chrondroïtinase est exprimée en IRBC fixés/mm2 sur des SBEC confluentes. <tb><SEP> PRBC / mm2 <SEP>% <SEP><SEP> inhibition <SEP> by
<tb><SEP> control <SEP> CSA <SEP> Chondroitinsase <SEP> ABC
<tb><SEP> IPL / BRE1
<tb><SEP> Sc1707 <SEP> 1313 <SEP> 66 <SEP> + <SEP> 16 <SEP> 99 <SEP> + <SEP> 0
<tb><SEP> Sc3A4 <SEP> 3859 <SEP> 61 <SEP> + <SEP> 21 <SEP> 98 <SEP> + <SEP> 1
<tb><SEP> Sc1A4 <SEP> 3346 <SEP> 53+ <SEP> 8 <SEP> 91 + 4
<tb><SEP> Sc1D <SEP> 4223 <SEP> 68+ <SEP> 6 <SEP> 92 <SEP>#<SEP> 7 <SEP>
<tb><SEP> Sc93006 / C2 <SEP> 2805 <SEP> 70 <SEP>#<SEP> 17 <SEP><SEP> 98 <SEP>#<SEP> 1
<tb><SEP> HLEC <SEP> 4691 <SEP> 94 <SEP> + <SEP> 5 <SEP> 97 <SEP> + <SEP> 1
<tb><SEP> Palo-Alto (FUP) 1
<tb><SEP> Sc1707 <SEP> 943 <SEP> 82 <SEP>#<SEP> 10 <SEP><SEP> 99 <SEP>#<SEP> 1
<tb><SEP> Sc3A4 <SEP> 3105 <SEP> 67 <SEP> + <SEP> 22 <SEP> 94 <SEP>#<SEP> 4 <SEP>
<tb> Sc1A4 <SEP> 3661 <SEP> 58 <SEP> + <SEP> 12 <SEP> 91 <SEP>#<SEP> 3 <SEP>
<tb><SEP> Sc1D <SEP> 2914 <SEP> 51 <SEP>#<SEP> 16 <SEP><SEP> 91 + 4
<tb><SEP> Sc93006 / C2 <SEP> 2527 <SEP> 79+ <SEP> 6 <SEP> 85 <SEP>#<SEP> 4 <SEP>
<tb><SEP> HLEC <SEP> 5288 <SEP> 95 <SEP>#<SEP><SEP> 3 <SEP> 93 <SEP>#<SEP> 2
<tb><SEP> TM284 / 62
<tb><SEP> Sc1707 <SEP> 7 <SEP> 73 <SEP>#<SEP> 37 <SEP> 45 <SEP>#<SEP> 63
<tb><SEP> Sc3A4 <SEP> 512 <SEP> 36 + 26 <SEP> 13 <SEP>#<SEP> 38 <SEP>
<tb><SEP> Sc1A4 <SEP> 817 <SEP> 18 <SEP>#<SEP> 36 <SEP><SEP> -25 <SEP>#<SEP> 55
<tb><SEP> Sc1D <SEP> 1197 <SEP> 30 <SEP> + <SEP> 27 <SEP> -11 <SEP> + <SEP> 33
<tb><SEP> Sc93006 / C2 <SEP> 3559 <SEP> 20 <SEP>#<SEP> 27 <SEP><SEP> 28 <SEP>#<SEP> 12
<tb><SEP> HLEC <SEP> 4440 <SEP> -3 <SEP>#<SEP> 29 <SEP><SEP> -11 <SEP>#<SEP> 19
<Tb>
Inhibition of adherence of IRBCs to SBECs and HLECs, when they are co-incubated with CSA (1 g / ml) or after pre-treatment of SBEC with chondroitinase
ABC (1U / ml for 60 minutes). The results are expressed in% inhibition (triplicate tests). The adhesion of the IRBCs and the absence of CSA or pretreatment with the chrondroitinase is expressed in fixed IRBC / mm2 on confluent SBECs.

Tableau 2
Inhibition de la cytoadhérence d'érythrocytes parasités par P.falciparum (IRBC), par le médicament commercialisé sous la marque "STRUCTUM"
IRBC/mm2 - Inhibition par "Structum" en % par rapport à des témoins

Table 2
Inhibition of cytoadherence of parasitized erythrocytes by P.falciparum (IRBC), by the drug marketed under the trademark "STRUCTUM"
IRBC / mm2 - Inhibition by "Structum" in% relative to controls

<tb> Palo-Alto(FUP)1
<tb> <SEP> Sc3A4 <SEP> 5581 <SEP> 92+2 <SEP>
<tb> <SEP> Sc1D <SEP> 3771 <SEP> 78 <SEP> # <SEP> 6
<tb> <SEP> Sc930061 <SEP> 3510 <SEP> 77 <SEP> + <SEP> 7
<tb>
Tableau 3
Inhibition de la cytoadbérence d'érythrocytes parasités par P.falciparum (IRBC), par la CSA biodisponible dans des sérums de singes Saimiri

<tb> Palo-Alto (FUP) 1
<tb><SEP> Sc3A4 <SEP> 5581 <SEP> 92 + 2 <SEP>
<tb><SEP> Sc1D <SEP> 3771 <SEP> 78 <SEP>#<SEP> 6
<tb><SEP> Sc930061 <SEP> 3510 <SEP> 77 <SEP> + <SEP> 7
<Tb>
Table 3
Inhibition of cytoadherence of parasitized erythrocytes by P.falciparum (IRBC), by bioavailable CSA in sera of Saimiri monkeys

<tb> IRBC/mm2 <SEP> % <SEP> Inhibition <SEP> par <SEP> le <SEP> CSA
<tb> <SEP> Sc34A <SEP> Sc93006/C2 <SEP> Sc <SEP> 34A <SEP> Sc93006/C2
<tb> <SEP> TO <SEP> 4861 <SEP> + <SEP> 925 <SEP> 2671 <SEP> + <SEP> 423
<tb> <SEP> TO <SEP> + <SEP> 30' <SEP> 373 <SEP> # <SEP> 256 <SEP> <SEP> 121 <SEP> # <SEP> 54 <SEP> <SEP> 92 <SEP> 95
<tb> <SEP> TO <SEP> + <SEP> 1h <SEP> 342 <SEP> # <SEP> 235 <SEP> <SEP> 129 <SEP> # <SEP> 8 <SEP> <SEP> 93 <SEP> 95
<tb> <SEP> TO <SEP> + <SEP> 2h <SEP> 317 <SEP> # <SEP> 208 <SEP> <SEP> 94 <SEP> # <SEP> 27 <SEP> <SEP> 93 <SEP> 96
<tb> <SEP> TO <SEP> + <SEP> 4h <SEP> 291 <SEP> # <SEP> 31 <SEP> <SEP> 48 <SEP> # <SEP> 26 <SEP> <SEP> 94 <SEP> 98
<tb> <SEP> TO <SEP> + <SEP> 8h <SEP> 267 <SEP> # <SEP> <SEP> 144 <SEP> 40 <SEP> # <SEP> 10 <SEP> <SEP> 95 <SEP> 99
<tb>
REFERENCES 1. Aikawa, M. (1988). Cerebral malaria Am. J. Trop. Med. Hyg. 39, 3.<tb> IRBC / mm2 <SEP>% <SEP> Inhibition <SEP> by <SEP> the <SEP> CSA
<tb><SEP> Sc34A <SEP> Sc93006 / C2 <SEP> Sc <SEP> 34A <SEP> Sc93006 / C2
<tb><SEP> TO <SE> 4861 <SEP> + <SEP> 925 <SEP> 2671 <SEP> + <SEP> 423
<tb><SEP> TO <SEP> + <SEP> 30 '<SEP> 373 <SEP>#<SEP> 256 <SEP><SEP> 121 <SEP>#<SEP> 54 <SEP><SEP> 92 <SEP> 95
<tb><SEP> TO <SEP> + <SEP> 1h <SE> 342 <SEP>#<SEP> 235 <SEP><SEP> 129 <SEP>#<SEP> 8 <SEP><SEP> 93 <SEP> 95
<tb><SEP> TO <SEP> + <SEP> 2h <SEP> 317 <SEP>#<SEP> 208 <SEP><SEP> 94 <SEP>#<SEP> 27 <SEP><SEP> 93 <SEP> 96
<tb><SEP> TO <SEP> + <SEP> 4h <SEP> 291 <SEP>#<SEP> 31 <SEP><SEP> 48 <SEP>#<SEP> 26 <SEP><SEP> 94 <SEP> 98
<tb><SEP> TO <SEP> + <SEP> 8h <SEP> 267 <SEP>#<SEP><SEP> 144 <SEP> 40 <SEP>#<SEP> 10 <SEP><SEP> 95 <SEP> 99
<Tb>
REFERENCES 1. Aikawa, M. (1988). Cerebral malaria Am. J. Too. Med. Hyg. 39, 3.

2. Howard, RJ. and Gilladoga, A.D. (1989) Molecular studies related to flic
pathogenesis of cerebral malaria Blood. 74, 2603.2. Howard, RJ. and Gilladoga, AD (1989) Molecular studies related to cop
pathogenesis of cerebral malaria Blood. 74, 2603.

3. Sein, K.K., Brown, A.E., Maeno, Y., Smith, C.D. Corcoran, K.D.,
Hansukjariya, P., Webster, H.K. and Aikawa, M (1993b). Sequestration
pattern of parasifized erythrocytes in cerebrum, midbrain, and cerebellum of
Plasmodium coatneyi-infected rhesus monkeys (Macaca mulatta). Am. J.3. Breast, KK, Brown, AE, Maeno, Y., Smith, Corcoran CD, KD,
Hansukjariya, P., Webster, HK and Aikawa, M (1993b). Sequestration
pattern of parasifized erythrocytes in cerebrum, midbrain, and cerebellum of
Plasmodium coatneyi-infected rhesus monkeys (Macaca mulatta). Am. J.

Trop. Med. Hyg. 49, 513. Too much. Med. Hyg. 49, 513.

4. Sherwood, J.A., Roberts, D.D., Spitalnik, S.L., Marsh, K., Harvey, E.B.,
Miller, L.H. and Howard, R.J. (1989) Studies of the receptors on melanoma
cells for Plasmodium falciparum infected erythrocytes. Am. J. Trop. Med.4. Sherwood, JA, Roberts, DD, Spitalnik, SL, Marsh, K., Harvey, EB,
Miller, LH and Howard, RJ (1989) Studies of the receptors on melanoma
cells for Plasmodium falciparum infected erythrocytes. Am. J. Too. Med.

Hyg. 40, 119. Hyg. 40, 119.

5. Ockenhouse, C.F. and Chulay, J.D; 1988. Plasmodium falcipaum
sequestration. OKM5 antigen (CD36) mediates cytoadherence of parasitized
erythrocytes to a myelomonocytes cell line. J. Infect. Dis. 157.554- 6. Ockenhouse, C.F., Tegoshi, T. Meano, Y., Benjamin, C., Ho, M., Aikawa, M.5. Ockenhouse, CF and Chulay, JD; 1988. Plasmodium falcipaum
sequestration. OKM5 antigen (CD36) mediates cytoadherence of parasitized
erythrocytes to myelomonocytes cell line. J. Infect. Dis. 157.554-6. Ockenhouse, CF, Tegoshi, T. Meano, Y., Benjamin, C., Ho, M., Aikawa, M.

and Lobb, RR. (1992) Human vascular endothelial cell adhesion receptors for
Plasmodium falciparum-infected erythrocytes: roles of ELAM-1 and VCAM
1. J. Exp. Med. 176, 1183.and Lobb, RR. (1992) Human vascular endothelial cell adhesion receptors for
Plasmodium falciparum-infected erythrocytes: roles of ELAM-1 and VCAM
1. J. Exp. Med. 176, 1183.

7. Barnwell, J., Ockenhouse, C. and Knowles, D., (1985) Monoclonal antibody
OKM5 inhibits the in vitro binding of Plasmodium falciparum-infeded
erythrocytes to monocytes, endothelial celas and C32 melanoma cells. J.7. Barnwell, J., Ockenhouse, C. and Knowles, D., (1985) Monoclonal antibody
OKM5 inhibits the in vitro binding of Plasmodium falciparum-infeded
erythrocytes to monocytes, endothelial cells and C32 melanoma cells. J.

Immunol. 135,3494. Immunol. 135.3494.

8. Berendt, A.R, Simmons, D.L., Tansey, J., Newbold, C.I. and Marsh,
K(1989) Intercellular adhesion molecule-l is an endothélial cell adhesion
receptor for Plasmodium falciparum. Nature. 341, 57.8. Berendt, AR, Simmons, DL, Tansey, J., Newbold, CI and Marsh,
K (1989) Intercellular adhesion molecule-1 is an endothelial cell adhesion
receptor for Plasmodium falciparum. Nature. 341, 57.

9. Gareth, D., Turner, H., Morrison, H., Jones, M, Davis, T.ME.,
Looareesuwan, S., Buley, I.D., Gatter, K.C., Newbold, C.I., Pukritayakamee,
S., Nagachinta, B., White, N.J. and Berendt, A.R. (1994). An
immunohistochemical study of the pathology of fatal malaria. Evidence for
widespread endothelial activation and a potential role for intercelIlar
adhesion molecule-l in cerebral sequestration. Am. J. Pathol. 145, 1057.9. Gareth, D., Turner, H., Morrison, H., Jones, M, Davis, T.ME.,
Looareesuwan, S., Buley, ID, Gatter, KC, Newbold, CI, Pukritayakamee,
S., Nagachinta, B., White, NJ and Berendt, AR (1994). Year
immunohistochemical study of the pathology of fatal malaria. Evidence for
widespread endothelial activation and a potential role for intercelIlar
adhesion molecule-l in cerebral sequestration. Am. J. Pathol. 145, 1057.

10. Gysin, J., Aikawa, M., Tourneur, N. and Tegoshi, T. (1992) Experimental
Plasmodium falciparum cerebral malaria in the squirrel monkey Saimiri
sciureus. Exp. Parasitol. 75, 390.10. Gysin, J., Aikawa, M., Tourneur, N. and Tegoshi, T. (1992) Experimental
Plasmodium falciparum cerebral malaria in the squirrel monkey Saimiri
sciureus. Exp. Parasitol. 75, 390.

11. Gay, F., Robert, C. Pouvelle, B., Peyrol. S., Scherf, A and Gysin, J. (1995).11. Gay, F., Robert, C. Pouvelle, B., Peyrol. S., Scherf, A and Gysin, J. (1995).

Isolation and characterization of brain vasculature endothelial cells flom
Saimiri monkeys: an in vitro model for Plasmodium ciparwn-infected
erythrocytes cytoadherence. J. Imm. Meth. (in press).Isolation and characterization of brain vasculature endothelial cells flom
Saimiri monkeys: an in vitro model for Plasmodium ciparwn-infected
Cytoadherence erythrocytes. J. Imm. Meth. (in press).

12. Gysin, J., Hommes M. and Pereira da Silva, L. (1980) Experimental infection
of the squirrel monkey Saimiri sciureus with Plasmodium falcipum. J.12. Gysin, J., M. Men and Pereira da Silva, L. (1980) Experimental infection
of the squirrel monkey Saimiri sciureus with Plasmodium falcipum. J.

Parasitol. 66, 1003. Parasitol. 66, 1003.

13. Gysin, J. and Fandeur, T. (1983) Saimiri sciureus (Karyotype 14-7) an
alternative experimental model of Plasmodium falciparum.13. Gysin, J. and Fandeur, T. (1983) Saimiri sciureus (Karyotype 14-7) year
alternative experimental model of Plasmodium falciparum.

14. Gysin, J. (1991) Relevance ofthe squirrel monkey as a model for experimental
human malaria. Res. Immunol. Inst. Pasteur. 142, 649.14. Gysin, J. (1991) Relevance of the monkey as a model for experimental
human malaria. Res. Immunol. Inst. Pastor. 142, 649.

15. Muazza, K., Gay, F. Behr, C. and Scherf. A.. Prirnary culture of human lung
endothelial cells as an in vitro model for Plasmodium falciparum-infected
erythrocytes cytoadherence. Infec. Immun.15. Muazza, K., Gay, F. Behr, C. and Scherf. A .. Prirnary culture of human lung
endothelial cells as an in vitro model for Plasmodium falciparum-infected
Cytoadherence erythrocytes. Infec. Immun.

(soumis) (submitted)

Claims

A pharmaceutical composition containing at least one pharmaceutical carrier, characterized in that it contains a physiologically active agent which competes with a receptor carried by endothelial cells and containing a member of the chondroitin-glycosaminoglycan family, in particular chondroitin 4-sulfate, this receptor allowing adhesion to these endothelial cells of erythrocytes when they are infected with Plasmodium falciparum.

2. Pharmaceutical composition containing at least one pharmaceutical vehicle, characterized in that it contains a physiologically active agent which comprises a structure based on chondroitin-4-sulfate.

3. Composition according to claim 2, characterized in that the active agent contains an oligomer of the structure:

The number of monomer units contained in this oligomer is sufficient to allow binding to the above receptor.

4. Composition according to claim 2 or 3, characterized in that it contains at least 90% of chondroitin-4-sulfate relative to the chondroitin sulfates present.

5. The composition of any one of claims 2 to 4, characterized in that it contains chondroitin-4-sulfate in substantially pure form.

6. Composition according to any one of Claims 1 to 3, characterized in that the physiologically active agent consists of a mixture of natural chondroitin sulphate containing chondroitin-4-sulphate.

7. Composition according to any one of claims 1 to 6, characterized in that it also contains a separate antiparasitic drug, in combination or in combination with the constituents chondroitin-4 sulfate.

8. Composition according to claims 1 to 7 for the treatment or prevention of malaria, particularly complications of this disease that are neuropaludic.

9. The composition of claim 8 for preventing the sequestration of malaria parasites, including Plasmodium falciparum.

10. Composition according to claims 1 to 9, for the treatment or prevention of harmful accidents induced by malaria parasites, in particular by P. falciparum, and involving the adhesion of erythrocytes infected with this parasite to endothelial cells.

11. Use of a physiologically active agent as defined in revelations 1 to 9, for obtaining a medicament for therapeutic or preventive use of malaria.

12. Use according to claim 11, characterized in that the medicament is intended to prevent the sequestration of malaria parasites, including P. falciparum.

13. Use according to claim 11 or claim 12, characterized in that the medicament is intended to treat or prevent pernicious accidents or various complications induced by malaria parasites, in particular by P. falciparum. and involving the adhesion of erythrocytes infected with this parasite to endothelial cells.