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FR2673292A1 - Method for immunofixing or for immunoelectrophoresis with the aid of an assembly of at least two different immune sera or two different immunoglobulin solutions, and kit for implementing such a method - Google Patents

Method for immunofixing or for immunoelectrophoresis with the aid of an assembly of at least two different immune sera or two different immunoglobulin solutions, and kit for implementing such a method Download PDF

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Publication number
FR2673292A1
FR2673292A1 FR9102276A FR9102276A FR2673292A1 FR 2673292 A1 FR2673292 A1 FR 2673292A1 FR 9102276 A FR9102276 A FR 9102276A FR 9102276 A FR9102276 A FR 9102276A FR 2673292 A1 FR2673292 A1 FR 2673292A1
Authority
FR
France
Prior art keywords
immunoglobulin
different
solutions
dyes
color
Prior art date
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Withdrawn
Application number
FR9102276A
Other languages
French (fr)
Inventor
Barouh Guy
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sebia SA
Original Assignee
Sebia SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sebia SA filed Critical Sebia SA
Priority to FR9102276A priority Critical patent/FR2673292A1/en
Publication of FR2673292A1 publication Critical patent/FR2673292A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

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Abstract

The subject of the invention is a method for immunofixing or for immunoelectrophoresis using immunological reactions with the aid of an assembly of immune sera or of solutions of immunoglobulins, which are all different from one another, characterised in that each immune serum or each solution of immunoglobulins used is coloured with the aid of a dye or of a mixture of dyes, the dye or the mixture having, in particular, the following properties: - it does not affect the quality of the immune serum or of the solution of immunoglobins, - it does not affect the immunological reaction, and - preferably, it does not affect the preservation of the immune serum or of the solution of immunoglobins, the assembly of immune sera or of the solutions of immunoglobulins being coloured by at least two dyes of different colour or by at least two mixtures of dyes of different colour. The invention also relates to the kits in which these immune sera or solutions of immunoglobulins are combined for implementing the abovementioned method.

Description

PROCEDE D'INMUNOFIXATION OU D'IZMUNOELECTROPHORESE A
L'AIDE D'UN ENSEMBLE D'AU NOIRS DEUX INNUNSERUNS
DIFFERENTS OU DEUX 80LUTIONS D'INXUNOGLOBULINES
DIFFERENTES ET KIT POUR LA MISE EN OEUVRE D'UN TEL
PROCEDE
L'invention a pour objet un procédé d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse mettant en oeuvre des réactions immunologiques, à l'aide d'un ensemble d'au moins deux immunsérums différents ou deux solutions d'immunoglobulines différentes et un kit (ou trousse) dans lequel ces immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont réunis, pour la mise en oeuvre d'un tel procédé.INMUNOFIXATION OR IZMUNOELECTROPHORESIS PROCESS
HELP FROM A SET OF BLACKS TWO INNUNSERUNS
DIFFERENT OR TWO 80LUTIONS OF INXUNOGLOBULINS
DIFFERENT AND KIT FOR IMPLEMENTING SUCH
PROCESS
The subject of the invention is a method of immunofixation or immunoelectrophoresis using immunological reactions, using a set of at least two different immune sera or two different immunoglobulin solutions and a kit (or kit). ) in which these immunsera or immunoglobulin solutions are combined, for the implementation of such a method.

L'immunofixation est un procédé destiné à la mise en évidence et à la caractérisation par exemple de paraprotéines (protéines sécrétées de façon anormale au cours de toute gammapathie bénigne ou maligne) de la famille des immunoglobulines, et ce procédé peut être effectué par exemple comme suit - on réalise sur une plaque d'électrophorèse plusieurs dépôts alignés (par exemple 6) d'un même échantillon, - on effectue une migration électrophorétique pour séparer les différentes espèces moléculaires de l'échantillon selon les six pistes, - une fois la migration terminée, on effectue, selon ces pistes, des dépôts parallèles des différents antisérums, chaque antisérum recouvrant l'ensemble d'une piste, ces antisérums étant par exemple de spécificité anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-kappa et anti-lambda, une des pistes étant fixée par un fixateur des protéines qui insolubilise l'ensemble des protéines dans la zone qu'il recouvre pour servir de témoin.  Immunofixation is a process intended to demonstrate and characterize, for example, paraproteins (proteins secreted abnormally during any benign or malignant gammopathy) of the immunoglobulin family, and this process can be carried out, for example, as follows - several aligned deposits (for example 6) of the same sample are made on an electrophoresis plate, - an electrophoretic migration is carried out to separate the different molecular species of the sample according to the six tracks, - once the migration finished, parallel deposition of the different antisera is carried out along these tracks, each antiserum covering an entire track, these antisera being for example of specific anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-kappa and anti-lambda, one of the tracks being fixed by a protein fixer which insolubilizes all of the proteins in the zone which it covers to serve as witness.

Après incubation, lavage et coloration, on peut déterminer en fonction des zones précipitées par les antisérums spécifiques qui sont situées au niveau de la paraprotéine visualisée sur le protéinogramme, le type de chaîne lourde (gamma, alpha et mu) et de chaîne légère (kappa ou lambda) de la paraprotéine concernée. After incubation, washing and staining, we can determine according to the areas precipitated by the specific antisera which are located at the level of the paraprotein visualized on the proteinogram, the type of heavy chain (gamma, alpha and mu) and light chain (kappa or lambda) of the paraprotein concerned.

L'invention a pour but de fournir un procédé d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse mettant en oeuvre des réactions immunologiques, à l'aide d'un ensemble d'immunsérums différents ou de solutions d'immunoglobulines différentes présentant l'avantage de permettre de contrôler que le bon immunsérum (ou la bonne solution d'immunoglobulines) soit utilisé, et notamment que le même immunsérum (ou la même solution d'immunoglobulines) ne soit pas utilisé plusieurs fois, alors qu'il (elle) ne devrait l'être qu'une fois. The object of the invention is to provide a method of immunofixation or immunoelectrophoresis implementing immunological reactions, using a set of different sera or different immunoglobulin solutions having the advantage of making it possible to check that the right immune system (or the right immunoglobulin solution) is used, and in particular that the same immune serum (or the same immunoglobulin solution) is not used several times, when he (she) should not to be only once.

L'invention a également pour but de proposer un procédé d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse mettant en oeuvre un ensemble d'immunsérums différents ou des solutions d'immunoglobulines différentes, présentant l'avantage de contrôler le dépôt et la qualité de la répartition des immunsérums sur la plaque d' immunofixation ou d'immunoélectrophorèse. The object of the invention is also to propose an immunofixation or immunoelectrophoresis method using a set of different sera or different immunoglobulin solutions, having the advantage of controlling the deposition and the quality of the distribution of immunsera on the immunofixation or immunoelectrophoresis plate.

L'invention a également pour but de proposer un procédé d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse mettant en oeuvre un ensemble d'immunsérums différents ou de solutions d'immunoglobulines différentes, présentant l'avantage de contrôler, après que la réaction immunologique a eu lieu, que le bon immunsérum ou la bonne solution d'immunoglobulines a été utilisé. Another object of the invention is to propose a method of immunofixation or immunoelectrophoresis using a set of different sera or solutions of different immunoglobulins, having the advantage of controlling, after the immunological reaction has taken place. , that the correct immune serum or immunoglobulin solution has been used.

L'invention concerne un procédé d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse mettant en oeuvre des réactions immunologiques, à l'aide d'un ensemble d'immunsérums ou de solutions d'immunoglobulines, tous différents les uns des autres, ce procédé étant caractérisé en ce que chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines utilisé est coloré à l'aide d'un colorant ou d'un mélange de colorants, le colorant ou le mélange présentant les propriétés suivantes - il garde une coloration appropriée dans l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la qualité de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la réaction immunologique et, - de préférence, il n'affecte pas la conservation de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, l'ensemble des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines étant coloré par au moins deux colorants de couleur différente ou d'intensité de couleur différente ou par au moins deux mélanges de colorants de couleur différente ou d'intensité de couleur différente. The invention relates to an immunofixation or immunoelectrophoresis method implementing immunological reactions, using a set of immunsera or immunoglobulin solutions, all different from each other, this method being characterized in that each immuniserum or each immunoglobulin solution used is colored using a dye or a mixture of dyes, the dye or the mixture having the following properties - it retains an appropriate coloration in the immuniser or immunoglobulin solution, - it does not affect the quality of the immuniserum or the immunoglobulin solution, - it does not affect the immunological reaction and, - preferably, it does not affect the conservation of the immunoglobulin or immunoglobulin solution, all the immunoglobulin or immunoglobulin solutions being colored by at least two dyes of different color or of different color intensity or by at least ins two mixtures of dyes of different color or different color intensity.

L'expression "l'immunsérum, ou la solution d'immunoglobulines, garde une coloration appropriée dans l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines" signifie d'une part que l'intensité de coloration évaluée par la mesure de la densité optique à la longueur d'onde correspondant à l'absorption maximum n'évolue pas au cours du temps et d'autre part que le spectre visible de cet immunsérum ou de cette solution d'immunoglobulines coloré reste inchangé au cours du temps. The expression "the immuniserum, or the immunoglobulin solution, retains an appropriate coloration in the immuniserum or the immunoglobulin solution" means on the one hand that the intensity of coloration evaluated by measuring the optical density at the wavelength corresponding to the maximum absorption does not change over time and on the other hand that the visible spectrum of this immuniser or of this colored immunoglobulin solution remains unchanged over time.

L'expression "l'immunsérum, ou la solution d'immunoglobulines, n'affecte pas la qualité de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines" implique qu'il n'entraîne pas de modification de la structure des fractions protéiques de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines et en particulier qu'il n'entraîne pas de précipitation de ces fractions protéiques qui pourraient se traduire par l'apparition d'un trouble.  The expression "the immuniserum, or the immunoglobulin solution, does not affect the quality of the immuniserum or the immunoglobulin solution" implies that it does not modify the structure of the protein fractions of the immuniserum or the immunoglobulin solution and in particular that it does not cause precipitation of these protein fractions which could result in the appearance of a disorder.

L'expression "l'immunsérum, ou la solution d'immunoglobulines, n'affecte pas la réaction immunologique" signifie que l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines coloré possède le même titre que l'immunsérum ou solution d'immunoglobulines avant coloration à la même dilution. The expression "the immuniserum, or the immunoglobulin solution, does not affect the immunological reaction" means that the immuniser or the colored immunoglobulin solution has the same title as the immuniser or immunoglobulin solution before staining at the same dilution.

L'expression "l'immunsérum, ou la solution d'immunoglobulines, n'affecte pas la conservation de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines" signifie que le titre de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines possède la même stabilité dans le temps que l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines non coloré et conservé dans les mêmes conditions. The expression "the immuniserum, or the immunoglobulin solution, does not affect the storage of the immuniserum or the immunoglobulin solution" means that the title of the immuniserum or the immunoglobulin solution has the same stability over time as the non-stained immunoglobulin or immunoglobulin solution stored under the same conditions.

Deux immunsérums ou deux solutions d'immunoglobulines ont une intensité de couleur différente, lorsque leur couleur est la même (même spectre d'adsorption dans le visible), mais qu'ils présentent une intensité de coloration différente, l'un des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines étant plus coloré que l'autre, ce qui se traduit par le fait que le rapport entre la densité optique (correspondant au maximum d'adsorption) de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines le plus coloré et la densité optique (correspondant au maximum d'adsorption) de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines le moins coloré est supérieur ou égal à 2. Two immune sera or two immunoglobulin solutions have a different intensity of color, when their color is the same (same adsorption spectrum in the visible), but they have a different intensity of staining, one of the immune sera or immunoglobulin solutions being more colored than the other, which results in the fact that the ratio between the optical density (corresponding to the maximum of adsorption) of the immuniser or the most colored immunoglobulin solution and the optical density (corresponding to the maximum adsorption) of the less colored immuniserum or immunoglobulin solution is greater than or equal to 2.

Le colorant (ou le mélange de colorants) utilisé est choisi parmi les colorants hydrosolubles, de nature ionique ou non ionique, dans la mesure où il presente les propriétés énonces ci-dessus. The dye (or mixture of dyes) used is chosen from water-soluble dyes, of ionic or nonionic nature, insofar as it has the properties stated above.

Le colorant ou le mélange de colorants doit être tel qu'il garde une coloration appropriée, c'est-à-dire suffisante pour pouvoir permettre de repérer sa présence dans l'immunsérum ou dans la solution d'immunoglobulines dans lequel il est mis. The dye or mixture of dyes must be such that it retains an appropriate coloration, that is to say sufficient to make it possible to identify its presence in the immune serum or in the immunoglobulin solution in which it is put.

Le colorant doit être également tel qu'il n'affecte pas la qualité de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, c'est-à-dire que les anticorps de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines ne perdent rien de leur propriété de participer à une réaction immunologique. The dye must also be such that it does not affect the quality of the immuniserum or the immunoglobulin solution, that is to say that the antibodies of the immuniserum or of the immunoglobulin solution do not lose nothing of their property to participate in an immunological reaction.

Le colorant ne doit pas affecter la réaction immunologique. The dye should not affect the immunological reaction.

De préférence, le colorant ne doit pas affecter la conservation de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, qui doit pouvoir être conservé pendant au moins environ 1 an et avantageusement environ 3 ans. Preferably, the dye should not affect the storage of the immuniserum or the immunoglobulin solution, which should be able to be stored for at least about 1 year and advantageously about 3 years.

Dans le cas où le colorant pourrait affecter la conservation de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, il conviendrait de ne l'introduire dans l'immunsérum ou dans la solution d'immunoglobulines qu'au moment de l'utilisation dudit immunsérum ou de ladite solution d'immunoglobulines sur la plaque d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse. In the event that the dye could affect the storage of the immuniserum or the immunoglobulin solution, it should not be introduced into the immuniserum or the immunoglobulin solution until the use of the said immuniserum. or said immunoglobulin solution on the immunofixation or immunoelectrophoresis plate.

Lorsque l'ensemble des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines est coloré par deux colorants ou deux mélanges de colorants de couleur différente, on obtient un ensemble bicolore d'immunsérums ou de solutions d'immunoglobulines. When all of the immunosera or immunoglobulin solutions are stained with two dyes or two mixtures of dyes of different color, a two-color set of immunsera or immunoglobulin solutions is obtained.

Selon un mode de réalisation avantageux du procédé de l'invention, chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines est coloré par un colorant ou par un mélange de colorants tel que tous les immunsérums ou toutes les solutions d'immunoglobulines sont de couleur différente ou d'intensité de couleur différente. According to an advantageous embodiment of the method of the invention, each immune serum or each immunoglobulin solution is colored by a dye or by a mixture of dyes such that all the immunsera or all the immunoglobulin solutions are of different color or d different color intensity.

Selon un autre procédé de l'invention au moins deux immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont colorés par un même colorant ou même mélange de colorants tels qu'au moins deux immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont de même couleur (même spectre d'adsorption dans le visible), mais présentent une intensité de coloration différente, l'un des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines étant plus coloré que l'autre, ce qui se traduit par le fait que le rapport entre la densité optique (correspondant au maximum d'adsorption) de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines le plus coloré et la densité optique (correspondant au maximum d'adsorption) de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines le moins coloré est supérieur ou égal à 2. According to another method of the invention at least two immune sera or solutions of immunoglobulins are colored by the same dye or the same mixture of dyes such that at least two immune sera or solutions of immunoglobulins are of the same color (same adsorption spectrum in the visible), but have a different intensity of coloration, one of the immunsera or immunoglobulin solutions being more colored than the other, which results in the fact that the ratio between the optical density (corresponding to the maximum adsorption) of the most colored immunoglobulin or immunoglobulin solution and the optical density (corresponding to the maximum adsorption) of the least colored immuniser or immunoglobulin solution is greater than or equal to 2 .

Selon un autre mode de réalisation du procédé de l'invention, on utilise cinq immunsérums différents colorés ou cinq solutions d'immunoglobulines différentes colorées, ces cinq immunsérums différents ou ces cinq solutions d'immunoglobulines différentes ayant une couleur ou une intensité de couleur différente, par exemple: - rose présentant un maximum d'absorption à 555 nm - bleu nuit " " " " 625 nm - kaki " " " " 480 nm - vert " " " " 427 nm - bleu clair " " " 625 nm ou par exemple cinq immunsérums différents ou solutions d'immunoglobulines différentes ayant chacun une couleur différente, par exemple:: - violet présentant un maximum d'absorption à 555 nm - vert " " " " 427 nm - bleu clair " " " " 625 nm - orange " " " " 480 nm - rouge " " " " 520 nm
Selon un autre mode de réalisation du procédé de l'invention, la quantité de colorant destinée à colorer chaque immunsérum ou solution d'immunoglobulines varie d'environ 0,1 mg/100 ml à environ 1 g/100 ml, avantageusement d'environ 0,5 mg/100 ml à environ 100 mg/100 ml.According to another embodiment of the method of the invention, five different colored immunums or five different colored immunoglobulin solutions are used, these five different immunums or these five different immunoglobulin solutions having a different color or color intensity, for example: - pink with a maximum absorption at 555 nm - night blue """" 625 nm - khaki """" 480 nm - green """" 427 nm - light blue """625 nm or for example five different sera or solutions of different immunoglobulins each having a different color, for example: - purple with a maximum absorption at 555 nm - green """" 427 nm - light blue """" 625 nm - orange """"480 nm - red""""520 nm
According to another embodiment of the process of the invention, the amount of dye intended to color each immuniserum or immunoglobulin solution varies from approximately 0.1 mg / 100 ml to approximately 1 g / 100 ml, advantageously approximately 0.5 mg / 100 ml to approximately 100 mg / 100 ml.

Selon un autre mode de réalisation du procédé de l'invention, la quantité de colorant destinée à colorer chaque immunsérum, ou chaque solution d'immunoglobulines, est telle que l'on obtienne une coloration visible d'une goutte d'immunsérum ou de solution d'immunoglobulines d'environ 80 Al répartis sur une surface d'environ 3,6 cm2. According to another embodiment of the method of the invention, the amount of dye intended to color each immuniserum, or each immunoglobulin solution, is such that a visible coloration of a drop of immuniserum or solution is obtained. immunoglobulins of approximately 80 Al distributed over an area of approximately 3.6 cm2.

Cela signifie que l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines coloré réparti sur cette surface de gel présente au maximum d'absorption de la solution colorée une densité optique supérieure ou égale à 0,015. This means that the colored serum or immunoglobulin solution distributed over this gel surface has, at the maximum absorption of the colored solution, an optical density greater than or equal to 0.015.

L'invention concerne également un kit (ou trousse) pour la mise en oeuvre d'un procédé d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse, comportant - un ensemble d'immunsérums ou de solutions d'immunoglobulines, - et au moins deux colorants de couleur différente ou deux mélanges de colorants de couleur différente, pour colorer les immunsérums ou les solutions d'immunoglobulines de façon telle que l'ensemble des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines soit coloré par au moins deux colorants de couleur différente ou d'intensité de couleur différente ou par au moins deux mélanges de colorants de couleur différente ou d'intensité de couleur différente, le colorant ou le mélange de colorants étant tel que - il garde une coloration appropriée dans l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la qualité de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la réaction immunologique, - de préférence il n'affecte pas la conservation des immunsérums ou de solutions d'immunoglobulines, ou - un ensemble d'immunsérums ou de solutions d'immunoglobulines coloré par au moins deux colorants de couleur différente ou par au moins deux mélanges de colorants de couleur différente, le colorant ou le mélange de colorants étant tel que - il garde une coloration appropriée dans l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la qualité de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la réaction immunologique, et - de préférence, il n'affecte pas la conservation des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines. The invention also relates to a kit (or kit) for implementing an immunofixation or immunoelectrophoresis method, comprising - a set of immunsera or immunoglobulin solutions, - and at least two color dyes different or two mixtures of dyes of different color, to stain the immune sera or immunoglobulin solutions in such a way that all of the immune sera or immunoglobulin solutions are stained with at least two dyes of different color or intensity different color or by at least two mixtures of dyes of different color or different color intensity, the dye or mixture of dyes being such that - it retains an appropriate coloration in the immuniserum or the immunoglobulin solution, - it does not affect the quality of the immune serum or immunoglobulin solution, - it does not affect the immunological reaction, - preferably it does not affect the c onservation of immunsera or immunoglobulin solutions, or - a set of immunsera or immunoglobulin solutions colored by at least two dyes of different color or by at least two mixtures of dyes of different color, the dye or the mixture of dyes being such that - it retains an appropriate coloration in the immuniserum or the immunoglobulin solution, - it does not affect the quality of the immuniserum or the immunoglobulin solution, - it does not affect the immunological reaction , and - preferably, it does not affect the preservation of the sera or of the immunoglobulin solutions.

Un kit avantageux est tel que chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines est coloré par un colorant ou par un mélange de colorants tel que tous les immunsérums ou les solutions d'immunoglobulines sont de couleur différente. An advantageous kit is such that each immune serum or each immunoglobulin solution is colored by a dye or by a mixture of dyes such that all of the immune sera or immunoglobulin solutions are of different color.

Dans un kit avantageux de l'invention, au moins deux immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont colorés par un même colorant ou même mélange de colorants tels qu'au moins deux immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont de même couleur (même spectre d'adsorption dans le visible), mais présentent une intensité de coloration différente, comme indiqué ci-dessus. In an advantageous kit of the invention, at least two immune sera or immunoglobulin solutions are stained with the same dye or the same mixture of dyes such that at least two immune sera or immunoglobulin solutions are of the same color (same spectrum of adsorption in the visible), but have a different intensity of coloring, as indicated above.

Un autre kit avantageux contient cinq immunsérums différents ou cinq solutions d'immunoglobulines différents, chacun de ces immunsérums ou de ces solutions d'immunoglobulines ayant une couleur ou une intensité de couleur différente, par exemple - le rose présentant un maximum d'absorption à 555 nm - le bleu nuit " " " " 625 nm - le kaki " " " " 480 nm - le vert " " " " 427 nm - le bleu clair " " " 625 nm ou par exemple cinq immunsérums différents ou solutions d'immunoglobulines différentes ayant chacun une couleur différente, par exemple - le violet présentant un maximum d'absorption à 555 nm - le vert " " 'I 11 427 nm - le bleu clair " " " IF 625 nm - l'orange " " " " 480 nm - le rouge " " " " 520 nm
Un autre kit avantageux est tel que la quantité de colorant destinée à colorer chaque immunsérum ou chaque solution dlimmunoglobulines varie d'environ 0,1 mg/100 ml à environ 1 g/100 ml, avantageusement d'environ 0,5 mg/100 ml à environ 100 mg/100 ml.Another advantageous kit contains five different immune sera or five different immunoglobulin solutions, each of these immunoglobulin solutions or solutions having a different color or color intensity, for example - pink with maximum absorption at 555 nm - night blue """" 625 nm - khaki """" 480 nm - green """" 427 nm - light blue """625 nm or for example five different sera or different immunoglobulin solutions each having a different color, for example - purple with a maximum absorption at 555 nm - green ""'I 11 427 nm - light blue """IF 625 nm - orange""""480 nm - red """" 520 nm
Another advantageous kit is such that the quantity of dye intended to color each immuniserum or each immunoglobulin solution varies from approximately 0.1 mg / 100 ml to approximately 1 g / 100 ml, advantageously approximately 0.5 mg / 100 ml at approximately 100 mg / 100 ml.

Un autre kit avantageux est tel que la quantité de colorant destinée à colorer chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines est telle que l'on obtienne une coloration visible d'une goutte d'immunsérum ou de solution d'immunoglobulines d'environ 80 pl répartis sur une surface d'environ 3,6 cm2. Another advantageous kit is such that the quantity of dye intended to color each immune serum or each immunoglobulin solution is such that a visible coloration of a drop of immune serum or immunoglobulin solution is obtained of approximately 80 μl. spread over an area of approximately 3.6 cm2.

Selon un mode de réalisation avantageux, le kit de l'invention est tel que les immunsérums colorés ou les solutions d'immunoglobulines colorées sont conditionnes dans des flacons portant des étiquettes de même couleur que celle de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines qu'ils contiennent respectivement. According to an advantageous embodiment, the kit of the invention is such that the colored immune sera or the colored immunoglobulin solutions are packaged in bottles bearing labels of the same color as that of the immuniser or the immunoglobulin solution. that they contain respectively.

EXEMPLES
Exemple 1
On a préparé un kit d'immunofixation destiné à l'identification de gammapathies du sérum humain dans lequel - l'immunsérum anti-IgG ou solution d'immunoglobulines anti-IgG est coloré en rose par un colorant classique connu de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 555 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 2,0; - l'immunsérum anti-IgA ou solution d'immunoglobulines anti-IgA est coloré en bleu nuit par un colorant classique connu de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 625 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 7,0;; - l'immunsérum anti-IgM ou solution d'immunoglobulines anti-IgM est coloré en kaki par un mélange de deux colorants classiques connus de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 480 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 6,8; - l'immunsérum anti-kappa en solution d'immunoglobulines anti-kappa est coloré en vert par un mélange de deux colorants classiques connus de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 427 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 2,0; - l'immunsérum anti-lambda ou solution d'immunoglobulines anti-lambda est coloré en bleu clair par un colorant classique connu de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 625 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 1,5.EXAMPLES
Example 1
An immunofixation kit has been prepared intended for the identification of gammopathies of human serum in which - the anti-IgG immune serum or anti-IgG immunoglobulin solution is colored in pink with a conventional dye known to man of the art and has a maximum absorption at about 555 nm and an optical density at this wavelength of about 2.0; - the anti-IgA immune serum or anti-IgA immunoglobulin solution is colored in dark blue with a conventional dye known to those skilled in the art and has a maximum absorption at around 625 nm and an optical density at this wavelength of about 7.0 ;; - the anti-IgM immune serum or anti-IgM immunoglobulin solution is colored in khaki with a mixture of two conventional dyes known to those skilled in the art and has a maximum absorption at around 480 nm and an optical density at this wavelength of about 6.8; - the anti-kappa immune serum in anti-kappa immunoglobulin solution is colored green by a mixture of two conventional dyes known to those skilled in the art and has a maximum absorption at around 427 nm and an optical density at this wavelength of about 2.0; - the anti-lambda immune serum or anti-lambda immunoglobulin solution is colored in light blue by a conventional dye known to those skilled in the art and has a maximum absorption at approximately 625 nm and an optical density at this wavelength of about 1.5.

Exemple 2
On a préparé un kit d'immunofixation destiné à l'identification des protéines de Bence Jones dans lequel - l'immunsérum trispécifique anti-IgG, -IgA, -IgM, ou solution d'immunoglobulines anti-IgG, -IgA, -IgM, est coloré en violet par un colorant classique connu de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 555 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 2,0; - l'immunsérum anti-kappa ou solution d'immunoglobulines anti-kappa est coloré en vert par un mélange de deux colorants classiques connus de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 427 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 2,0;; - l'immunsérum anti-lambda ou solution d'immunoglobulines anti-lambda est coloré en bleu clair par un colorant classique connu de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 625 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 1,5; - l'immunsérum anti-kappa libre ou solution d'immunoglobulines anti-kappa libre est coloré en orange par un colorant classique connu de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 480 nm et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 10,8; - l'immunsérum anti-lambda libre ou solution d'immunoglobulines anti-lambda libre est coloré en rouge par un colorant classique connu de l'homme de l'art et présente un maximum d'absorption à environ 520 mii et une densité optique à cette longueur d'onde d'environ 20,5.Example 2
An immunofixation kit has been prepared for the identification of Bence Jones proteins in which - the anti-IgG trispecific immune serum, -IgA, -IgM, or anti-IgG immunoglobulin solution, -IgA, -IgM, is colored purple by a conventional dye known to a person skilled in the art and has a maximum absorption at around 555 nm and an optical density at this wavelength of around 2.0; - the anti-kappa immune serum or anti-kappa immunoglobulin solution is colored green by a mixture of two conventional dyes known to those skilled in the art and has a maximum absorption at around 427 nm and an optical density at this wavelength of about 2.0 ;; - the anti-lambda immune serum or anti-lambda immunoglobulin solution is colored in light blue by a conventional dye known to those skilled in the art and has a maximum absorption at around 625 nm and an optical density at this wavelength of about 1.5; - the free anti-kappa immune serum or free anti-kappa immunoglobulin solution is colored orange by a conventional dye known to those skilled in the art and has a maximum absorption at approximately 480 nm and an optical density at this wavelength of about 10.8; - the free anti-lambda immune serum or free anti-lambda immunoglobulin solution is colored red with a conventional dye known to those skilled in the art and has a maximum absorption at approximately 520 mii and an optical density at this wavelength of about 20.5.

Exemple 3
on a préparé un kit destiné à l'immunoélectrophorèse avec les mêmes immunsérums colorés ou les mêmes solutions d'immunoglobulines colorées que ceux décrits à l'exemple 1. Example 3
a kit intended for immunoelectrophoresis was prepared with the same colored sera or the same colored immunoglobulin solutions as those described in Example 1.

Claims (13)

REVENDICATIONS 1. Procédé d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse mettant en oeuvre des réactions immunologiques à l'aide d'un ensemble d'immunserums ou de solutions d'immunoglobulines, tous différents les uns des autres, ce procédé étant caractérisé en ce que chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines utilisé est coloré à l'aide d'un colorant ou d'un mélange de colorants, le colorant ou le mélange présentant les propriétés suivantes - il garde une coloration appropriée dans l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la qualité de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la réaction immunologique et, - de préférence, il n'affecte pas la conservation de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, l'ensemble des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines étant coloré par au moins deux colorants de couleur différente ou d'intensité de couleur différente ou par au moins deux mélanges de colorants de couleur différente ou d'intensité de couleur différente. 1. Method of immunofixation or immunoelectrophoresis implementing immunological reactions using a set of immunsera or immunoglobulin solutions, all different from each other, this method being characterized in that each immuniser or each immunoglobulin solution used is colored using a dye or a mixture of dyes, the dye or the mixture having the following properties - it retains an appropriate coloration in the immuniserum or the immunoglobulin solution , - it does not affect the quality of the immuniserum or the immunoglobulin solution, - it does not affect the immunological reaction and, - preferably, it does not affect the preservation of the immuniserum or the immunoglobulin solution, all of the immunsera or immunoglobulin solutions being colored by at least two dyes of different color or of different color intensity or by at least two mixtures of co lorants of different color or of different color intensity. 2. Procédé, selon la revendication 1, dans lequel chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines est coloré par un colorant ou par un mélange de colorants tel que tous les immunsérums ou toutes les solutions d'immunoglobulines sont de couleur différente ou d'intensité de couleur différente. 2. Method according to claim 1, in which each immune serum or each immunoglobulin solution is colored by a dye or by a mixture of dyes such that all the immune sera or all the immunoglobulin solutions are of different color or intensity of different color. 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans lequel chaque immunsérum, ou chaque solution d'immunoglobulines, est coloré au moment de l'utilisation en vue de déterminer la formation éventuelle d'une réaction immunologique. 3. Method according to any one of claims 1 or 2, wherein each immuniserum, or each immunoglobulin solution, is colored at the time of use in order to determine the possible formation of an immunological reaction. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel au moins deux immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont colorés par un même colorant ou même mélange de colorants tels qu'au moins deux immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont de même couleur (même spectre d'adsorption dans le visible), mais présentent une intensité de coloration différente, l'un des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines etant plus coloré que l'autre, ce qui se traduit par le fait que le rapport entre la densité optique (correspondant au maximum d'adsorption) de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines le plus coloré et la densité optique (correspondant au maximum d'adsorption) de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines le moins coloré est supérieur ou égal à 2. 4. Method according to any one of claims 1 to 3, in which at least two immune sera or immunoglobulin solutions are stained with the same dye or the same mixture of dyes such that at least two immune sera or immunoglobulin solutions are same color (same adsorption spectrum in the visible), but have a different intensity of coloration, one of the immunsera or immunoglobulin solutions being more colorful than the other, which results in the fact that the ratio between the optical density (corresponding to the maximum adsorption) of the most colorful immunoglobulin or immunoglobulin solution and the optical density (corresponding to the maximum adsorption) of the immunoglobulin or the most immunoglobulin solution less colored is greater than or equal to 2. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel on utilise cinq immunsérums différents colorés ou cinq solutions d'immunoglobulines différentes colorées, ces cinq immunsérums différents ou ces cinq solutions d'immunoglobulines différentes ayant une couleur ou une intensité de couleur différente, par exemple: - rose présentant un maximum d'absorption à 555 nm - bleu nuit " " " " 625 nm - kaki " " " " 480 nm - vert " " " " 427 nm - bleu clair " " " 625 nm ou par exemple cinq immunsérums différents ou solutions d'immunoglobulines différentes ayant chacun une couleur différente, par exemple:: - violet présentant un maximum d'absorption à 555 nm - vert " " " " 427 nm - bleu clair " " " " 625 nm - orange " " " " 480 nm - rouge " " " " 520 nm 5. Method according to any one of claims 1 to 4, in which five different colored immunums or five different colored immunoglobulin solutions are used, these five different immunums or these five different immunoglobulin solutions having a color or an intensity of different color, for example: - pink with maximum absorption at 555 nm - night blue "" "" 625 nm - khaki "" "" 480 nm - green "" "" 427 nm - light blue "" "625 nm or for example five different sera or solutions of different immunoglobulins each having a different color, for example: - purple with a maximum absorption at 555 nm - green "" "" 427 nm - light blue "" "" 625 nm - orange "" "" 480 nm - red "" "" 520 nm 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel la quantité de colorant destinee à colorer chaque immunsérum ou solution d'immunoglobulines varie d'environ 0,1 mg/100 ml à environ 1 g/100 ml, avantageusement d'environ 0,5 mg/100 ml à environ 100 mg/100 ml. 6. Method according to any one of claims 1 to 5, in which the quantity of dye intended to color each immune serum or immunoglobulin solution varies from approximately 0.1 mg / 100 ml to approximately 1 g / 100 ml, advantageously from about 0.5 mg / 100 ml to about 100 mg / 100 ml. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel la quantité de colorant destinée à colorer chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines est telle que l'on obtienne une coloration visible d'une goutte d'immunsérum ou de solution d'immunoglobulines d'environ 80 pl répartis sur une surface d'environ 3,6 cm2. 7. Method according to any one of claims 1 to 5, in which the amount of dye intended to color each immuniserum or each immunoglobulin solution is such that a visible coloration of a drop of immuniserum or immunoglobulin solution of approximately 80 μl distributed over an area of approximately 3.6 cm2. 8. Kit (ou trousse) pour la mise en oeuvre d'un procédé d'immunofixation ou d'immunoélectrophorèse, comportant: - un ensemble d'immunsérums ou de solutions d' immunoglobulines, - et au moins deux colorants de couleur differente ou deux mélanges de colorants de couleur différente, pour colorer les immunsérums ou les solutions d'immunoglobulines de façon telle que l'ensemble des immunserums ou des solutions d'immunoglobulines soit coloré par au moins deux colorants de couleur différente ou d'intensité de couleur différente ou par au moins deux mélanges de colorants de couleur différente ou d'intensité de couleur différente, le colorant ou le mélange de colorants étant tel que - il garde une coloration appropriée dans l'immunsêrum ou la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la qualité de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la réaction immunologique, - de préférence il n'affecte pas la conservation des immunsérums ou de solutions d'immunoglobulines, ou - un ensemble d'immunsérums ou de solutions d'immunoglobulines coloré par au moins deux colorants de couleur différente ou par au moins deux mélanges de colorants de couleur différente, le colorant ou le mélange de colorants étant tel que - il garde une coloration appropriée dans l'immunsérum ou la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la qualité de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines, - il n'affecte pas la réaction immunologique, et - de préférence, il n'affecte pas la conservation des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines. 8. Kit (or kit) for implementing an immunofixation or immunoelectrophoresis process, comprising: - a set of immunsera or immunoglobulin solutions, - and at least two dyes of different color or two mixtures of dyes of different color, to stain the immune sera or immunoglobulin solutions in such a way that all of the immunsera or immunoglobulin solutions are stained with at least two dyes of different color or of different color intensity or by at least two mixtures of dyes of different color or of different color intensity, the dye or mixture of dyes being such that - it retains an appropriate coloration in the immune serum or the immunoglobulin solution, - it does not affect not the quality of the immuniserum or the immunoglobulin solution, - it does not affect the immunological reaction, - preferably it does not affect the preservation of the immune sera or immunoglobulin solutions, or - a set of immune sera or immunoglobulin solutions colored by at least two dyes of different color or by at least two mixtures of dyes of different color, the dye or mixture of dyes being such that - it retains an appropriate coloration in the immuniserum or the immunoglobulin solution, - it does not affect the quality of the immuniserum or the immunoglobulin solution, - it does not affect the immunological reaction, and - preferably , it does not affect the storage of immune sera or immunoglobulin solutions. 9. Kit selon la revendication 8, dans lequel chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines est coloré par un colorant ou par un mélange de colorants tel que tous les immunsérums ou les solutions d'immunoglobulines sont de couleur différente. 9. Kit according to claim 8, in which each immune serum or each immunoglobulin solution is colored by a dye or by a mixture of dyes such that all the immunsera or immunoglobulin solutions are of different color. 10. Kit selon l'une quelconque des revendications 8 ou 9, dans lequel au moins deux immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont colorés par un même colorant ou même mélange de colorants tels qu'au moins deux immunsérums ou solutions d'immunoglobulines sont de même couleur (même spectre d'adsorption dans le visible), mais présentent une intensité de coloration différente, l'un des immunsérums ou des solutions d'immunoglobulines étant plus coloré que l'autre, ce qui se traduit par le fait que le rapport entre la densité optique (correspondant au maximum d'adsorption) de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines le plus coloré et la densité optique (correspondant au maximum d'adsorption) de l'immunsérum ou de la solution d'immunoglobulines le moins colore est supérieur ou égal à 2. 10. Kit according to any one of claims 8 or 9, in which at least two immune sera or immunoglobulin solutions are stained with the same dye or the same mixture of dyes such that at least two immune sera or immunoglobulin solutions are same color (same adsorption spectrum in the visible), but have a different intensity of coloration, one of the immunsera or immunoglobulin solutions being more colored than the other, which results in the fact that the ratio between the optical density (corresponding to the maximum adsorption) of the most colorful immunoglobulin or immunoglobulin solution and the optical density (corresponding to the maximum adsorption) of the immunoglobulin or the most immunoglobulin solution less colored is greater than or equal to 2. 11. Kit selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, contenant cinq immunsérums différents ou cinq solutions d'immunoglobulines différentes, chacun de ces immunsérums ou de ces solutions d'immunoglobulines ayant une couleur ou une intensité de couleur différente, par exemple - le rose présentant un maximum d'absorption à 555 nm - le bleu nuit " " " " 625 nm - le kaki " " " " 480 nm - le vert " " " " 427 nm - le bleu clair " " " 625 nm ou par exemple cinq immunsérums différents ou solutions d'immunoglobulines différentes ayant chacun couleur différente, par exemple :: - le violet présentant un maximum d'absorption à 555 nm - le vert " " " " IF 427 nm - le bleu clair " " " " 625 nm - l'orange " " " " 480 nm - le rouge " " " " 520 nm 11. Kit according to any one of claims 8 to 10, containing five different immune sera or five different immunoglobulin solutions, each of these immune sera or these immunoglobulin solutions having a different color or color intensity, for example - pink with maximum absorption at 555 nm - night blue "" "" 625 nm - khaki "" "" 480 nm - green "" "" 427 nm - light blue "" "625 nm or by example five different sera or solutions of different immunoglobulins each having a different color, for example: - purple with a maximum absorption at 555 nm - green "" "" IF 427 nm - light blue "" "" 625 nm - orange "" "" 480 nm - red "" "" 520 nm 12. Kit selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, dans lequel la quantité de colorant destinée à colorer chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines varie d'environ 0,1 mg/100 ml à environ 1 g/100 ml, avantageusement d'environ 0,5 mg/100 ml à environ 100 mg/100 ml. 12. Kit according to any one of claims 8 to 11, in which the quantity of dye intended to color each immune serum or each immunoglobulin solution varies from approximately 0.1 mg / 100 ml to approximately 1 g / 100 ml, preferably from about 0.5 mg / 100 ml to about 100 mg / 100 ml. 13. Kit selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, dans lequel la quantité de colorant destinée à colorer chaque immunsérum ou chaque solution d'immunoglobulines est telle que l'on obtienne une coloration visible d'une goutte d'immunsérum ou de solution d'immunoglobulines d'environ 80 l répartis sur une surface d'environ 3,6 cm.  13. Kit according to any one of claims 8 to 11, in which the amount of dye intended to color each immuniserum or each immunoglobulin solution is such that a visible coloration of a drop of immuniserum or immunoglobulin solution of approximately 80 l distributed over an area of approximately 3.6 cm.
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